CN101928273A - 从大豆中提取分离异黄酮的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种大豆异黄酮的提取和分离方法，首先将大豆制成大豆粉后，用乙醇提取2～3次，即得异黄酮粗品溶液，其中，料液比为1∶22；调配异黄酮粗品溶液的浓度为0.15mg/mL，pH值为4.5～5.5，接着，将该异黄酮粗品溶液添加至吸附剂内，其中，异黄酮粗品溶液的上样量为4.5BV，吸附流速为1.5mL/min；再接着，添加体积分数为80％的乙醇溶液，其中，乙醇溶液的上样量为3.0BV，解吸流速为1.5mL/min，最后收取滤液；将滤液用乙酸乙酯萃取2～3，其中，滤液与乙酸乙酯的比例为1∶1.4；重结晶后，即得大豆异黄酮。

Description

从大豆中提取分离异黄酮的方法

【技术领域】

本发明属于植物有效性成分提取、分离工艺技术领域，特别涉及一种从大豆中提取分离异黄酮的方法。

【背景技术】

大豆异黄酮是从大豆的成熟种子或其加工副产品中提取、分离出一组异黄酮类化合物，具有抑制癌细胞生长，诱发癌细胞凋亡，降低心血管疾病，预防和治疗骨质疏松、动脉粥样硬化以及改善和治疗妇女更年期综合症等多种生理保健功能。因其独特的药用价值和生物学活性为大豆的开发应用展示了广阔的前景。

大豆异黄酮的提取工艺主要包括如下四种类型：

其一、中国专利第00105543.7号公开了一种大豆异黄酮的提取工艺，其主要依靠有机溶剂的溶解从大豆中提取大豆异黄酮。

其二、中国专利第02114991号公开了一种大豆异黄酮的提取工艺，其主要依靠有机溶剂的萃取从大豆中提取大豆异黄酮。

其三、中国专利第200510110740号公开了一种大豆异黄酮的提取工艺，其从豆制品加工过程中排放的黄浆废液中提取大豆异黄酮。

其四、中国专利第200810040456.5号公开了一种大豆异黄酮的提取工艺，其依靠大豆的组织培养并提取大豆异黄酮。

上述所述的工艺虽然能够提取出大豆异黄酮，但是，其工艺周期长，且操作非常复杂。

【发明内容】

本发明所要解决的技术问题是提供一种从大豆中提取分离大豆异黄酮的方法，该方法简单、耗能低，周期短，且收率高。

为实现上述目的，本发明提供了一种从大豆中提取分离大豆异黄酮的方法：包括以下步骤：

(1)将大豆制成大豆粉；

(2)将1g大豆粉用22ml的乙醇水溶液提取2～3次，即得异黄酮粗品溶液；

(3)调配步骤(2)得到的异黄酮粗品溶液，使其浓度为0.15mg/mL，pH值为4.5～5.5，接着，将该异黄酮粗品溶液添加至吸附剂内，其中，异黄酮粗品溶液的上样量为4.5BV，吸附流速为1.5mL/min；再接着，添加体积分数为80％的乙醇水溶液，其中，乙醇水溶液的上样量为3.0BV，解吸流速为1.5mL/min，最后收取滤液；

(4)将步骤(3)收取的滤液用乙酸乙酯萃取2～3次，其中，滤液与乙酸乙酯的体积比例为1∶1.4；

(5)重结晶后，即得大豆异黄酮。

由本发明方法提取分离出来的大豆异黄酮，收率高达90％，提取工艺简单，且整个工艺周期仅2小时，相较于传统的工艺周期4～5小时而言，缩短了一半多。

【附图说明】

图1是本发明得到的大豆异黄酮的标准曲线；

图2是由本发明分离出来的大豆黄素的HPLC谱图；

图3是由本发明分离出来的大豆黄素的紫外吸收谱图；

图4是由本发明分离出来的大豆苷元糖苷的HPLC谱图；

图5是由本发明分离出来的大豆苷元糖苷的紫外吸收谱图；

图6是由本发明分离出来的染料木素的HPLC谱图；

图7是由本发明分离出来的染料木素的紫外吸收谱图；

图8是由本发明分离出来的染料木素糖苷的HPLC谱图；

图9是由本发明分离出来的染料木素糖苷的紫外吸收谱图。

【具体实施方式】

本发明从大豆中提取分离大豆异黄酮的方法，包括以下步骤：

(1)取大豆制成大豆粉后，过60目筛；

(2)取1g步骤(1)得到的大豆粉，在80℃的温度下溶解于22ml体积分数为70％的乙醇水溶液中；

(3)将步骤(2)的大豆粉和乙醇水溶液搅拌均匀后，冷凝回流2.5小时，过滤后，收取滤液A；

(4)在步骤(3)得到的滤液A中，加入体积分数为70％的乙醇水溶液，

其中滤液A与乙醇水溶液的体积比为1∶22；

(5)将步骤(4)的滤液A和乙醇水溶液的混合物重复步骤(3)，收取滤液B，得到异黄酮粗品溶液，其中，异黄酮的含量为0.45％；

(6)调节步骤(5)得到的异黄酮粗品溶液的浓度为0.15mg/mL，pH值为4.5～5.5；

(7)以HPD-600树脂为吸附剂，将步骤(6)得到的异黄酮粗品溶液添加至吸附剂内，其中，异黄酮粗品溶液的上样量为4.5BV，吸附流速为1.5mL/min；接着，添加体积分数为80％的乙醇水溶液，其中，乙醇水溶液的上样量为3.0BV，解吸流速为1.5mL/min，最后收取滤液C；

(8)将步骤(7)得到的滤液C用乙酸乙酯萃取2次，其中，滤液C∶乙酸乙酯的体积比例为1∶1.4，收取上清液；

(9)向步骤(8)得到的上清液中加入上清液体积1.2倍的分析纯甲醇，静置3小时，收取滤液，即得纯度为90％的大豆异黄酮；

(10)将步骤(9)得到的大豆异黄酮以硅胶柱为柱子，以氯仿和甲醇的混合物为洗脱剂进行梯度洗脱，刚开始时，氯仿与甲醇的体积比为3∶7，最终氯仿和甲醇的体积比为6∶4，从而，分离出化合物A、化合物B、化合物C和化合物D；

(11)分别将步骤(10)分离出来的化合物A、化合物B、化合物C和化合物D以聚酰胺柱为柱子，以无水乙醇为洗脱剂再次洗脱，从而得到初步纯化的化合物A1、化合物B1、化合物C1和化合物D1；

(12)分别将步骤(11)得到的化合物A1、化合物B1、化合物C1和化合物D1重复步骤(11)，从而得到化合物A2、化合物B2、化合物C2和化合物D2；

(13)分别将步骤(12)得到的化合物A2、化合物B2、化合物C2和化合物D2重结晶后，自制薄层色谱板，点样分离纯化，从而，得到四种异黄酮单体，分别为大豆黄素(daidzein)、大豆苷元糖酐(daidzin)、染料木素(genistein)和染料木素糖酐(genistin)，其中，上述四种异黄酮单体的收率为1854～2105μg/g，纯度为99.9％。

上述得到的大豆黄素的分子结构式为：

上述得到的大豆苷元糖酐的分子结构式为：

上述得到的染料木素的分子结构式为：

上述得到的染料木素糖酐的分子结构式为：

以上所述仅为本发明的一种实施方式，不是全部或唯一的实施方式，本领域普通技术人员通过阅读本发明说明书而对本发明技术方案采取的任何等效的变换，均为本发明的权利要求所涵盖。

Claims (7)

1.一种大豆异黄酮的提取和分离方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)将大豆制成大豆粉；

(2)将1g大豆粉用22ml的乙醇水溶液提取2～3次，即得异黄酮粗品溶液；

(3)调配步骤(2)得到的异黄酮粗品溶液，使其浓度为0.15mg/mL，pH值为4.5～5.5，接着，将该异黄酮粗品溶液添加至吸附剂内，其中，异黄酮粗品溶液的上样量为4.5BV，吸附流速为1.5mL/min；再接着，添加体积分数为80％的乙醇水溶液，其中，乙醇水溶液的上样量为3.0BV，解吸流速为1.5mL/min，最后收取滤液；

(4)将步骤(3)收取的滤液用乙酸乙酯萃取2～3次，其中，滤液与乙酸乙酯的体积比例为1∶1.4；

(5)重结晶后，即得大豆异黄酮。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：进一步包括步骤(5)：将步骤(4)得到的大豆异黄酮以硅胶柱为柱子，以氯仿和甲醇的混合物为洗脱剂进行梯度洗脱，最后，分别得到大豆黄素、大豆苷元糖酐、染料木素和染料木素糖酐。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：在步骤(5)进行梯度洗脱时，刚开始时，氯仿和甲醇的体积比为3∶7，最终时，氯仿和甲醇的体积比为6∶4。

4.如权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于：进一步包括步骤(6)：分别对大豆黄素、大豆苷元糖酐、染料木素和染料木素糖酐进行二次洗脱，二次梯度洗脱时，以聚酰胺柱为柱子，以无水乙醇为洗脱剂。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于：进一步包括步骤(7)：分别对二次洗脱后的大豆黄素、大豆苷元糖酐、染料木素和染料木素糖酐进行三次梯度洗脱，即重复步骤(6)。

6.如权利要求1至5中任意一项所述的制备方法，其特征在于：所述吸附剂为HPD-600树脂。

7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(5)中的重结晶指常温下静置3小时。

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