CN103204765B - 一种从废次烟叶中提取茄尼醇和绿原酸的方法 - Google Patents

Abstract

一种从废次烟叶中提取茄尼醇和绿原酸的方法，将废次烟叶于35℃～40℃用90～97%的乙醇水溶液回流提取后采用陶瓷膜过滤；（2）将提取液于38℃～42℃下减压浓缩得到干燥物；（3）干燥物用水溶解陶瓷膜过滤处理，滤液减压浓缩得到浓缩液，滤渣备用；（4）滤渣采用乙酸乙酯溶解，陶瓷膜过滤，上硅胶柱层析分离，用无水乙醇洗脱；洗脱液经浓缩至后结晶得到茄尼醇；（5）(3)步所得浓缩液上大孔树脂层析分离，采用55～65%的乙醇水溶液洗脱，洗脱液经浓缩后将pH值调至3-3.5，结晶即得。本发明工艺简单操作方便，有效提高废次烟叶利用率，降低了绿原酸和茄尼醇生产成本，还具有较高的收率，并可有效确保规模化生产。

Description

一种从废次烟叶中提取茄尼醇和绿原酸的方法

技术领域

本发明属于天然产物加工领域，涉及了一种提取茄尼醇和绿原酸的方法，更具体地说是涉及了一种从废次烟叶中同时提取茄尼醇和绿原酸的方法。

背景技术

烟草(Nicotiana tobacum L)为茄科烟草属一年生或多年生植物，单叶互生，常有粘质柔毛，原产南美洲。我国引种烟草很早，与其他国家一样种植的烟草主要用作卷烟。目前我国是世界产烟大国之一，其种植面积和产量均居世界首位，种植面积约130万公顷，每年产量有450～500万吨，其中约有近25%的烟叶、烟末等下脚料被废弃，不能用于卷烟生产。我国主要种植地区有云南、贵州、四川、湖南、河南、福建、陕西、山东、安徽、广东、广西、江西、辽宁、吉林和黑龙江等地区。

我国的湖南、河南、云南、贵州、福建等省都有大面积的烟田、众多的卷烟厂和复烤烟叶厂，每年产生大量的废烟叶、烟灰、烟杆。这些下脚料由于没有很好的利用而被烧掉，既浪费资源，又造成环境污染。如何将这些烟草废弃物加以合理的综合利用，是摆在人们面前一个迫切的课题。

烟叶中含有3000多种化合物，包括生物碱、蛋白质、氨基酸、甙类(芸香甙、R谷甾醇)、糖类、有机酸等物质。它们中许多都是重要的生化医药原料，如绿原酸、烟碱、茄尼醇、VE等，都具有广泛的用途和较高的经济价值。我们对其可以采用一系列的化学方法，对这些活性物质进行提取、分离，作为原料或产品应用于医药、化工等行业，其重要活性物质茄尼醇因其广泛的医学用途而倍受人们关注。

人们对茄尼醇的研究起初集中在烟草燃烧过程中产生的烟气中茄尼醇所发生的变化以及对生物体的影响，最初是基于其对烟气香味的影响。尽管没有足够的证据表明类茄尼醇物质的含量对烟叶的质量产生影响，但通过对茄尼醇的裂解反应进行研究，发现烟气中的二异戊二烯部分是由茄尼醇分解而来的，并且二异戊二烯是影响烟气香味的主要成分，因此可以说茄尼醇间接影响着烟气的香味。此外，茄尼醇还是烟气中多核芳烃(PAH)的前体，而PAH具有强烈的致癌作用。后来进一步的研究发现茄尼醇本身具有抗溃疡作用，为此很多专利报道了多种茄尼醇衍生物的合成，以探索合成新药的可能性。此后对茄尼醇的研究就主要集中在其药用价值上。目前，茄尼醇已主要应用于合成维生素K2和辅酶Q10，其中辅酶Q10的合成最具有应用和商业价值。

绿原酸，又名咖啡鞣酸，是由咖啡酸与奎尼酸形成的缩酸，属于苯丙素类化合物，是细胞自身产生的天然抗氧化剂，是细胞代谢的激活剂，能够提高机体的免疫力。近年来有研究表明，绿原酸对对消化系统、血液系统和生殖系统均有药理作用,具有较广泛的的抗菌消炎、利胆、止血及增高白血球数量的作用。对金黄葡萄球菌、溶血性链球菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌有显著的抑制作用；对由放疗、化疗所致的白细胞养活症有显著疗效；口服绿原酸可显著刺激胆汁的分泌，具有利胆功效；对急性咽喉炎症及脓皮肤病有显著疗效；对月经过多，子宫功能性出血也有良好的止血效果。绿原酸具有抗艾滋病病毒HIV活性，对胃溃疡也有显著的抑制作用。因此对绿原酸的提取和纯化也越来越引起人们的关注。绿原酸在植物中广泛存在，只在几种植物中含量较多，如金银花、如葵花籽、金银花叶、咖啡豆、元宝枫叶、牛蒡叶、红薯叶中，其含量在1%~8%干基左右，不同产地其含量也不一样，而且来自不同植物的绿原酸的药理作用也不一样。

公开号为CN1616403的中国专利介绍了从金银花中提取制备绿原酸的工艺：金银花加水或乙醇进行回流提取，过滤，收集滤液并回收溶剂，加乙醇沉淀杂质，过夜，过滤，减压回收溶剂，加水适量，静置过夜，过滤，滤液上大孔树脂柱，用洗脱剂浓缩，收集含有绿原酸的组分，上聚酰胺柱，用洗脱剂洗脱，收集含有绿原酸的组分，浓缩，精制得到含量大于95％的绿原酸。

公开号为CN1398845的中国专利介绍了大孔树脂吸附提取高含量绿原酸的工艺方法：由金银花粉碎、绿原酸水提取液提取及大孔树脂吸附高含量绿原酸的分离工艺组成，其特征是后者通过绿原酸提液加入大孔树脂柱中进行饱和吸附，低浓度乙醇洗涤溶解树脂柱中的绿原酸，使其与柱分离成为绿原酸洗脱液，再回收其中乙醇，将余下的无乙醇绿原酸洗脱液浓缩，然后喷雾干燥可得高于40％绿原酸含量的成品干粉；用高浓度甲醇洗涤溶解树脂柱中的异绿原酸，使其与柱分离成为异绿酸洗脱液，回收其中甲醇后将洗脱液浓缩、喷雾干燥可得异绿原酸成品干粉。

公开号为CN101985421A的中国专利介绍了一种从金银花中同时制备绿原酸和木犀草苷的方法：公开了一种从金银花中同时制备绿原酸和木犀草苷的方法，其包括乙醇提取、D101型大孔树脂富集、硅胶柱、聚酰胺柱分离纯化和重结晶等步骤。

公开号为CN102001946A的中国专利介绍了一种同时提取和分离金银花中绿原酸与金银花精油的新方法：采用高频振动破壁粉碎机破壁处理后超声波水提过滤，过滤液静置冷藏后离心滤过得到油水混合物，油水混合物再次高速离心，将水相超滤后用乙酸乙酯萃取，分离浓缩干燥，获得高纯度绿原酸，而油相通过分子蒸馏制备出高品质的金银花精油。

公开号为CN102001947A的中国专利介绍了一种金银花绿原酸的制备方法：采用金银花及其枝叶为原料，水提后用水溶性有机溶剂与盐溶液和水溶性复合物按比例组成双水相体系，然后把总提取物浸膏溶解在双水相体系中进行分配，使之达到浸膏在两相中的平均浓度为30～50％的分配平衡，再用与两水相不相溶的萃取剂进行萃取，分出萃取液，先把极性小于绿原酸的杂质去掉，余下双水相再用另一萃取剂进行萃取的三相萃取方法，选择性地直接富集和分离纯化得到绿原酸初产品，后经过脱色、结晶和干燥得到质量分数为95％绿原酸产品。

公开号为CN101851163A的中国专利介绍了一种从金银花中提取高纯度绿原酸的方法：将金银花物料用低温超音速气流粉碎，得到细胞级金银花微粉；经酶化，超声波处理，水提过滤，得到绿原酸初液，再经絮凝，脱色、纯化、浓缩干燥，即得高纯度绿原酸。

公开号为CN101830804A的中国专利介绍了一种采用复合酶法提取金银花中绿原酸的方法：采用纤维素酶与果胶酶复合酶法提取金银花中主要药用有效成分绿原酸的新工艺，通过单因素试验和正交试验，优化出复合酶法提取金银花中绿原酸的最佳工艺条件：酶解温度45℃，pH4.5，纤维素酶与果胶酶复合比为1.0∶0.3，酶解时间1.5小时。

公开号为CN101602668的中国专利介绍了一种绿原酸提取的方法：将大孔树脂富集、乙酸乙酯萃取、混合溶剂分相法相结合，实现绿原酸分步梯度纯化，从而获得纯度较高的绿原酸产品。本发明工艺包括水提、过柱、萃取、分相和重结晶。本发明工艺中过柱采用的大孔树脂选择306型或XAD系列树脂；分相法采用的分相剂为石油醚或氯仿或者石油醚、氯仿混合物。

公开号为CN101503357的中国专利介绍了一种金银花中绿原酸的萃取方法：将粉碎的金银花用石油醚进行动态浸提，提取液经过滤回收石油醚后，浓缩获得金银花香浸膏；石油醚浸提后的金银花，再以乙酸乙酯进行回流提取，提取液经过滤后回收乙酸乙酯，浓缩获金银花总黄酮；乙酸乙酯回流提取后的金银花，加水，动态提取，提取液经过滤、减压、浓缩、醇沉、脱色、纯化、浓缩、干燥，即得金银花绿原酸。

公开号为CN102134192A的中国专利介绍了一种金银花提取绿原酸的制备方法和金银花提取物的应用：取金银花药材，加8～20倍体积的水提取2～4次，每次0.5～1.5小时，调节提取液的pH值为1～6，上大孔吸附树脂柱，先用水洗脱杂质，再用10～70％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，调节浓缩液pH值为1～6，加乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，浓缩，干燥。

公开号为CN1793105的中国专利介绍了一种金银花高纯度绿原酸提取工艺：(1)是通过加入NaHSO3、收率促进剂和澄清剂，板框压滤，再通过大孔吸附树脂柱上柱，得浓缩液，喷雾干燥得口服液绿原酸；(2)是通过加入乙醇沉淀，再加水水沉，二次澄清处理得澄清液，经活性炭处理，减压浓缩，喷雾干燥得注射用金银花提取物；(3)将所述澄清液加入β-CD络合反应，再加入环己酮解络、转型得绿原酸浓缩液，真空干燥得含量90％左右的绿原酸，环己酮免回收，套用于下一批次；(4)是将(3)所述的浓缩液，用乙醇溶解，上硅胶层析柱，分段解析，用薄层层析，测定，合并相同部分，减压干燥，结晶，得含量≥95％绿原酸。

公开号为CN1746149的中国专利介绍了一种由金银花粗提物制备高纯度绿原酸的方法：将金银花粗提物用去离子水溶解、充分搅拌，配制成金银花粗提物的水溶液，再加入乙醇进行醇沉，再过滤；将过滤液加热蒸去乙醇，剩余溶液将pH值调节至1～4，然后用含乙酸乙酯的混合溶剂进行多级逆流萃取；合并萃取液并浓缩回收乙酸乙酯，得到浓缩液S1；将浓缩液S1加水配制成水相；柱析步骤：将上述水相流过层析柱，随后用洗脱液进行洗脱，分段收集解吸液；将分段收集到的解吸液浓缩、结晶、干燥后得到绿原酸含量50～92％的产品。

国外从烟叶中提取茄尼醇的技术中，工艺较为成熟的是日本的两项专利，均以优质的黄种烟叶为原料，用高纯度的正己烷作为提取溶剂，加热搅拌抽提2~3次，经过滤，滤液浓缩得茄尼醇粗品，再经皂化（KOH～MeOH）、离心液～液层析（正己烷为固定相，10%乙醇为流动相）及HPLC制备色谱精制，最终得到高纯度的茄尼醇，该技术存在原料来源困难、成本高、周期长和三废排放严重等问题。

针对上述技术存在的问题，我国学者张德玉发明了用霉烟或碎烟末制备茄尼醇的新工艺，采用低纯度的工业正己烷作抽提溶剂，解决了原料来源困难问题，也在一定程度上降低了成本。另外，姚文等提出采用SOT溶液体系萃取烟渣中的茄尼醇，岑波等研究了用价格远比正己烷便宜的PE溶液提取废次烟叶中的茄尼醇。

高纯度绿原酸为针状结晶，110℃变为无水化合物，熔点208℃,旋光度为-35.2（浓度为2.8%）。25℃时在水中溶解度约仅为4%，易溶于酸溶液、醇和丙酮，微溶于乙酸乙脂。高纯度的茄尼醇为白色或浅黄色固体粉末，通常因含有少量杂质而呈淡黄色，弱极性，易溶于正己烷、乙醚、丙酮及汽油等有机溶剂，难溶于水，其对紫外光呈非选择性吸收，无光学活性。因此，对废次烟叶进行有效利用时，完全可以生产出绿原酸、茄尼醇这两种物质，也有利于降低生产成本，提高烟农的收入。但同时，发明人也研究发现在提取过程中绿原酸易氧化，茄尼醇也易分解，若分离处理不当，不仅会降低两种有效成分的收率，也会增加整个生产成本。

发明内容

本发明的目的在于针对目前废次烟叶利用率不高，高纯度绿原酸和茄尼醇作为工业原料价格偏高，造成下游产品成本增加，提出了一种利用同步提取、分步纯化从废次烟叶规模化生产绿原酸和茄尼醇，整个工艺简单操作控制方便，有效提高废次烟叶的利用率，在降低了绿原酸和茄尼醇生产成本的同时，还可使得两种有效成分具有较高的收率，并可有效确保规模化生产绿原酸和茄尼醇。

本发明的技术方案是：

一种从废次烟叶中提取茄尼醇和绿原酸的方法，其特征在于包括以下制备步骤：

（1）将废次烟叶粉碎后于35℃～40℃用质量百分比浓度为90～97%的乙醇水溶液进行回流提取2～3次，每次2.5～5小时；提取后采用陶瓷膜过滤，合并提取液；

（2）将（1）步所得的提取液于38℃～42℃下减压浓缩得到干燥物；

（3）将所述的干燥物用水溶解后采用陶瓷膜过滤处理2次，合并两次滤液并于38℃～42℃下减压浓缩得到为原有滤液体积的1/3～1/5浓缩液，所得的滤渣备用；

（4）将经（3）步处理滤渣采用乙酸乙酯溶解，陶瓷膜过滤1次去除不溶物，上硅胶柱进行层析分离，采用无水乙醇进行洗脱；洗脱液经浓缩至原体积的1/3～1/8后结晶得到茄尼醇；

（5）将(3)步所得浓缩液上大孔树脂进行层析分离，采用质量百分比浓度为55～65%的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱液经浓缩至原体积的1/2～1/4后并将溶液pH值调至3-3.5，结晶得到绿原酸；

上述的陶瓷膜的孔径在0.2-0.3微米之间。

因此，本发明提供一种从废次烟叶提取绿原酸和茄尼醇的方法，其具体步骤如下：

(1)将废次烟叶进行粉碎后与95%乙醇溶液进行混合提取，在35℃～40℃下回流提取4h后陶瓷膜过滤1次；所得提取残渣再与乙醇溶液在上述相同条件下进行混合提取，陶瓷膜过滤1次，合并两次提取液；

(2)将步骤(1)所得提取液进行在38℃～42℃下减压浓缩获得干燥物；

(3)将干燥物用水进行溶解，陶瓷膜过滤1次得滤液，滤渣再用相同水量溶解后陶瓷膜过滤1次得滤液，合并两次滤液并进行在38℃～42℃℃下减压浓缩至原有滤液体积的1/3-1/5；

(4)将滤渣用乙酸乙酯溶解，陶瓷膜过滤1次去除不溶物，上硅胶柱进行层析分离，用（优选三倍柱体积）无水乙醇进行洗脱；将洗脱液经浓缩至原有体积的1/3-1/8，室温过夜结晶得到茄尼醇；

(5)将步骤(3)所得浓缩液上（NKA-9）大孔树脂进行层析分离，用（优选三倍柱体积）乙醇水溶液进行洗脱；将洗脱液经浓缩至原有体积的1/2-1/4，溶液pH值调至3-3.5，室温过夜结晶得到绿原酸。

上述的陶瓷膜的孔径在0.2-0.3微米之间。

在一个具体实施方案中，步骤(1)中所加入乙醇溶液的量，按体积(L)/废次烟叶重量(kg)比为3-6:1。

在一个具体实施方案中，优选步骤(3)中所述加入一定量的水，按体积(L)/干燥物重量(kg)比为2-3:1。

在一个具体实施方案中，步骤(4)中所述加入乙酸乙酯的量，按体积(L)/滤渣重量(kg)比为2-5:1。

在一个具体实施方案中，步骤(5)中所述乙醇溶液为60%乙醇，并且乙醇水溶液中含有0.01mol/L盐酸。

本发明优点：

1、本发明方法中所用的原料、设备均为常见的普通原料、设备，避免了工业化生产过程中对于昂贵原材料、仪器的依赖，大大地降低了生产成本，改变了传统的生产工艺。

2、废次烟叶每年产量很大，后续资源有保障，充分利用了废次烟叶，提高了烟农的收益，大大提高了废次烟叶的综合利用效率，同时也增加了废次烟叶的附加值。

3、本发明方法纯化工艺操作简单，仅使用萃取、树脂层析过滤、结晶再结晶技术，也不需要精密仪器或自动化设备，极大地降低了绿原酸和茄尼醇的生产成本，简化了生产过程，确保规模化生产绿原酸和茄尼醇。

4、本发明所用的试剂均为无毒、廉价、量产的化学试剂，整个过程中可利用成熟的试剂回收的常规技术，这极大地降低了向环境排放废弃物的风险。

具体实施方式：

用本发明的实施实例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限制本发明。

实施例1

(1)将含水量为7.5%的废次烟叶100kg，进行粉碎后与500L的95%乙醇溶液进行混合提取，在38℃下回流提取4h后陶瓷膜过滤1次；(2)将步骤(1)所得提取残渣再与乙醇溶液在相同条件下进行混合提取，陶瓷膜过滤1次，合并两次提取液；(3)将步骤(2)所得提取液进行在40℃下减压浓缩获得干燥物25.8kg；(4)将干燥物用60L的水进行溶解，陶瓷膜过滤1次得滤液，滤渣再用60L的水溶解后陶瓷膜过滤1次得滤液，合并两次滤液并进行在40℃下减压浓缩至30L；(5)将16.5kg滤渣用35L的乙酸乙酯溶解，陶瓷膜过滤1次去除不溶物，上硅胶柱进行层析分离，用三倍硅胶柱体积的无水乙醇进行洗脱；(6)将洗脱液经浓缩至原有体积的1/3-1/8，室温过夜结晶得到6.51kg茄尼醇产品；(7)将步骤(4)所得浓缩液上NKA-9大孔树脂进行层析分离，用三倍柱体积的含有0.01mol/L盐酸的60%乙醇溶液进行洗脱；(8)将洗脱液经浓缩至原有体积的1/2-1/4，溶液pH值调至3-3.5，室温过夜结晶得到11.45kg绿原酸产品。检测设备为Agilent1100高效液相色谱仪，色谱柱为HypersilODS(150mm×4.6mm，5μ)，检测条件∶流动相为甲醇-2%醋酸水溶液(12∶88，V/V)、检测波长为327nm、流速1.0mL/min、柱温30℃、进样量为20μL，检测结晶样品的含量为98.27%的绿原酸。色谱柱：KromasiLODS1（250mm×4.6mm，5μ），流动相为甲醇-乙醇（1:1,v/v）、检测波长为215nm、柱温30℃、流速1mL/min进样量为20μL，检测结晶样品的含量为97.68%的茄尼醇。

实施例2

(1)将含水量为6.8%的废次烟叶200kg，进行粉碎后与800L的95%乙醇溶液进行混合提取，在38℃下回流提取4h后陶瓷膜过滤1次；(2)将步骤(1)所得提取残渣再与乙醇溶液在相同条件下进行混合提取，陶瓷膜过滤1次，合并两次提取液；(3)将步骤(2)所得提取液进行在40℃下减压浓缩获得干燥物63.65kg；(4)将干燥物用150L的水进行溶解，陶瓷膜过滤1次得滤液，滤渣再用150L的水溶解后陶瓷膜过滤1次得滤液，合并两次滤液并进行在40℃下减压浓缩至70L；(5)将34.8kg滤渣用80L的乙酸乙酯溶解，陶瓷膜过滤1次去除不溶物，上硅胶柱进行层析分离，用三倍硅胶柱体积的无水乙醇进行洗脱；(6)将洗脱液经浓缩至原有体积的1/3-1/8，室温过夜结晶得到14.06kg茄尼醇产品；(7)将步骤(4)所得浓缩液上NKA-9大孔树脂进行层析分离，用三倍柱体积的含有0.01mol/L盐酸的60%乙醇溶液进行洗脱；(8)将洗脱液经浓缩至原有体积的1/2-1/4，溶液pH值调至3-3.5，室温过夜结晶得到24.09kg绿原酸产品。按实施例1的方法进行含量检测，检测绿原酸结晶样品的含量为98.49%的绿原酸，检测茄尼醇结晶样品的含量为98.15%的茄尼醇。

实施例3

(1)将含水量为8.4%的废次烟叶500kg，进行粉碎后与1800L的95%乙醇溶液进行混合提取，在38℃下回流提取4h后陶瓷膜过滤1次；(2)将步骤(1)所得提取残渣再与乙醇溶液在相同条件下进行混合提取，陶瓷膜过滤1次，合并两次提取液；(3)将步骤(2)所得提取液进行在40℃下减压浓缩获得干燥物143.5kg；(4)将干燥物用300L的水进行溶解，陶瓷膜过滤1次得滤液，滤渣再用300L的水溶解后陶瓷膜过滤1次得滤液，合并两次滤液并进行在40℃下减压浓缩至100L；(5)将81.2kg滤渣用180L的乙酸乙酯溶解，陶瓷膜过滤1次去除不溶物，上硅胶柱进行层析分离，用三倍硅胶柱体积的无水乙醇进行洗脱；(6)将洗脱液经浓缩至原有体积的1/3-1/8，室温过夜结晶得到32.08kg茄尼醇产品；(7)将步骤(4)所得浓缩液上NKA-9大孔树脂进行层析分离，用三倍柱体积的含有0.01mol/L盐酸的60%乙醇溶液进行洗脱；(8)将洗脱液经浓缩至原有体积的1/2-1/4，溶液pH值调至3-3.5，室温过夜结晶得到58.6kg绿原酸产品。按实施例1的方法进行含量检测，检测绿原酸结晶样品的含量为98.85%的绿原酸，检测茄尼醇结晶样品的含量为98.78%的茄尼醇。

Claims (6)

1.一种从废次烟叶中提取茄尼醇和绿原酸的方法，其特征在于包括以下制备步骤：

（1）将废次烟叶粉碎后于35℃～40℃用质量百分比浓度为90～97%的乙醇水溶液进行回流提取2～3次，每次2.5～5小时；提取后采用陶瓷膜过滤，合并提取液；

（2）将（1）步所得的提取液于38℃～42℃下减压浓缩得到干燥物；

（3）将所述的干燥物用水溶解后采用陶瓷膜过滤处理2次，合并两次滤液并于38℃～42℃下减压浓缩得到为原有滤液体积的1/3～1/5浓缩液，所得的滤渣备用；

（4）将经（3）步处理滤渣采用乙酸乙酯溶解，陶瓷膜过滤1次去除不溶物，上硅胶柱进行层析分离，采用无水乙醇进行洗脱；洗脱液经浓缩至原体积的1/3～1/8后结晶得到茄尼醇；

（5）将 (3) 步所得浓缩液上大孔树脂进行层析分离，采用质量百分比浓度为55～65%的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱液经浓缩至原体积的1/2～1/4后并将溶液pH值调至3-3.5，结晶得到绿原酸；

上述的陶瓷膜的孔径在0.2-0.3微米之间。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，按体积L/废次烟叶重量kg比为3～6:1加入乙醇水溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，（3）步中按体积L/干燥物重量kg比为2～3:1加水溶解。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，(4)步中按体积L/滤渣重量kg比为2-5:1加入乙酸乙酯溶解。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，（4）步中在室温下过夜结晶得到茄尼醇；（5）步中在室温下过夜结晶得到绿原酸。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，（5）步中55～65%的乙醇水溶液中含有0.01mol/L盐酸。