CN104326912B - 一种烟叶有效成分的分离方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种烟叶有效成分的分离方法，其步骤包括：将烟叶烘干粉碎后，用超声波进行提取得到两相混合液；分液，取上层有机相皂化并中和，再进行纯化可以得到茄尼醇；取上述下层水相，加入蛋白沉淀剂并调节pH值得到固体蛋白质沉淀和澄清液体；向澄清液体中加入乙醇后进行醇沉，静置后所述固体沉淀为水溶性糖；取上述澄清液体，除去乙醇后加入酸，调节pH值后萃取，将有机相纯化后得到绿原酸；将上述水相调节pH值后，进行水蒸气蒸馏，用酸性溶液吸收馏出液，浓缩吸收液，再加碱调节pH值，最后用氯仿萃取，蒸发除去氯仿即得烟碱。本发明实现了烟草多种有效成分的同时提取及分离，大大提高了烟草原料的利用率，具有很强的实用性。
Description
技术领域
本发明涉及一种烟叶的分离方法，具体地说是一种烟叶中多种有效成分的分离方法。
背景技术
烟草是一种高产的植物资源，近年来人们研究发现其所含有益于人体健康的有效成分众多，如能合理的开发利用，烟草在药食方面潜在经济效益并不比作为卷烟所起的作用逊色。烟草中除了人们所熟知的茄尼醇和烟碱是具有重要药用价值的成分外，还有绿原酸、蛋白质和多糖等多种可开发利用的成分。茄尼醇是一种高附加值的药用成分，具有抗菌、消炎和止血等药理作用，同时也是合成维生素K2和辅酶Q10的必要原料。辅酶Q10在治疗心血管疾病方面有独特的疗效，在治疗坏血病、十二指肠溃疡及胃溃疡、坏死性牙周炎、病毒性肝炎方面有显著疗效，而最近更发现它对艾滋病有显著的辅助疗效。因此作为辅酶Q10必需合成原料的茄尼醇的提取、纯化也越来越引起人们的关注。烟碱是烟叶中一种生物碱，无色、无味，常温为液体。烟碱应用非常广泛，其用途主要包括农药和医药两大方面。烟碱系列农药属植物杀虫剂，具有蒸薰、胃毒、触杀功能和迅速降解无残留的特点，广泛用作粮食、油料、蔬菜、水果、牧草等农作物的杀虫剂，是理想的高效绿色杀虫剂和生物性农药。另外，高纯度烟碱是医药工业上研制治疗心血管、皮肤、蛇虫咬伤等疾患药物的特种原料。绿原酸是一种重要的生物活性物质，具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等作用。绿原酸还可通过降低致癌物的利用率及其在肝脏中的运输来达到防癌、抗癌的效果。绿原酸对大肠癌、肝癌和喉癌具有显著的抑制作用，被认为是癌症的有效化学防护剂。烟叶蛋白含18种氨基酸，包括8种人体必需氨基酸，与联合国粮农组织推荐的成人氨基酸模式基本相符，特别是赖氨酸含量较高。烟草中水溶性总糖和还原糖的含量范围分别为干重的为9％～27％和8％～25％，还原糖在水溶性糖中占的比例平均为90％。
虽然烟草中所含有效成分众多，但每种成分含量都不高，如何将它们进行系统地提取分离出来，加以综合利用是目前迫切需要解决的问题。已有一些对烟草成分进行提取利用的报道，如专利CN1087076公开了一种用烟末提取茄尼醇的工艺；专利CN1118775公开了一种烟草茄尼醇的生产方法；专利CN1810747公开了一种提取制备茄尼醇的方法；专利CN1064680公开了一种烟碱盐类和纯烟碱产品的生产工艺；专利CN101050212A公开了一种从废次烟草中同时提取高纯天然烟碱和茄尼醇的方法；文献(安徽农业科学2008，36(35):15287-15288)报道了废次烟草中茄尼醇提取条件的研究；文献(福州大学学报2008，36(2):308-312)报道了废次烟叶中烟碱与茄尼醇的提取与纯化研究。这些公开的专利及文献涉及的提取种类单一，如只能获得茄尼醇或烟碱，均不能实现烟草多种有效成分的同时提取及分离，烟草原料利用率较低。
发明内容
本发明的目的是根据现有技术的不足提供一种烟叶有效成分的分离方法，本发明的方法可以同时分离烟叶中包括茄尼醇、烟碱、绿原酸、蛋白质和水溶性糖在内的多种有效成分，操作简单，而且原料利用率高。
本发明是通过如下技术方案实现的：一种烟叶有效成分的分离方法，其步骤包括：(1)将烟叶烘干粉碎后，加入酸性水溶液和有机溶剂两相混合溶剂，用超声波进行提取得到两相混合液；(2)将上述两相混合液分液得到上层有机相和下层水相后，取上层有机相皂化并中和，再进行纯化可以得到茄尼醇；(3)取上述步骤(2)中的下层水相，加入蛋白沉淀剂并调节pH值为4-5，静置并固液分离得到固体沉淀和澄清液体，所述固体沉淀为蛋白质；(4)向上述步骤(3)中的澄清液体中加入乙醇后进行醇降，静置并固液分离得到固体沉淀和澄清液体，所述固体沉淀为水溶性糖；(5)取上述步骤(4)中的澄清液体，除去乙醇后加入酸，调节调节pH值为2-3后萃取得到有机相和水相，将有机相纯化后得到绿原酸；(6)将上述步骤(5)中的水相pH值调节为11-12后，进行水蒸气蒸馏，用酸性溶液吸收馏出液，蒸馏结束后浓缩吸收液，再加碱调节pH值为11，最后用氯仿萃取，蒸发除去氯仿即得烟碱。
优选的，所述步骤(1)中两相混合溶剂中有机溶剂为石油醚或正己烷，水溶液为醋酸、柠檬酸或磷酸水溶液，pH值为4-5，所述烟叶与两相混合溶剂的料液比g:mL为1:10-20。
优选的，所述步骤(1)中烟叶粉碎为20目，所述超声波提取的超声波功率为100-300W，超声提取时间为30-60min，提取温度为50-60℃。
优选的，所述步骤(2)是先将上层有机相浓缩后，加入碱性乙醇溶液进行皂化，再中和浓缩，加入石油醚和水进行萃取，取石油醚相浓缩，浓缩所得物用硅胶柱层析进行纯化，最后将柱层析所得粗品茄尼醇用乙醇重结晶，得到茄尼醇。
更优选的，所述步骤(2)中碱性乙醇溶液为摩尔浓度为0.2mol/L的NaOH或KOH乙醇溶液，用量为浓缩后的有机相质量的10-20倍；所述皂化温度为60℃，时间为2小时；所述皂化后的浓缩物均匀滴加到100-200目硅胶柱上再进行洗脱；所述乙醇重结晶温度为-15℃，过滤得到的茄尼醇真空干燥的温度为20℃。
优选的，所述步骤(3)中是将步骤(2)中的下层水相浓缩，然后加入蛋白沉淀剂，加酸调节pH为4-5，置于4℃下静置4-5小时，然后离心，虹吸分离出上层澄清液体，而固体沉淀用无水乙醇洗涤若干次，低温干燥即得蛋白质；所述蛋白质沉淀剂为羧甲基壳聚糖，分子量为50000-100000；所述调节pH值的酸为醋酸或磷酸。
优选的，所述步骤(4)中是向步骤(3)中的澄清液体中加入体积为澄清液体积3倍的乙醇，进行醇沉，静置2-3小时后离心，虹吸分离出上层澄清液体，固体沉淀用无水乙醇洗涤后，低温干燥即得所述水溶性糖。
优选的，所述步骤(5)中是将步骤(3)中的澄清液体进行浓缩，除去有机溶剂乙醇后，然后调节pH为2-3，用乙酸乙酯对酸性水溶液进行萃取，将乙酸乙酯层浓缩后，配成浓度为浓度为9mg/mL的绿原酸水溶液进行聚酰胺柱层析纯化即得绿原酸；所述聚酰胺柱层析分离所用聚酰胺为80-100目，绿原酸水溶液的上样量为5倍柱体积，上样流速为每小时4倍柱体积，洗脱剂为30％的乙醇水溶液，洗脱流速为每小时4倍柱体积。
优选的，所述步骤(6)中是将上述步骤(5)中的水相pH值调节为11-12后，进行水蒸气蒸馏，用酸性溶液吸收馏出液，蒸馏结束后浓缩吸收液至原体积的1/4-1/5，再加碱调节pH值为11，最后用氯仿萃取，蒸发除去氯仿即得烟碱；所述水蒸气蒸馏时用稀酸吸收冷凝液并控制接收液pH小于3，当馏出液用1％硅钨酸检测无沉淀物产生时停止蒸馏。
本发明通过液-液萃取、浓缩、醇沉、柱层析、水蒸气蒸馏等方法将提取液中所含的茄尼醇、蛋白质、水溶性糖、绿原酸、烟碱等一一分离出来，实现了烟草多种有效成分的同时提取及分离，大大提高了烟草原料的利用率。此方法比现有提取技术高效多产，实现了对烟草资源的充分利用，同时减少了烟草废弃物的排放，是一种环境友好的绿色生产技术。同时本发明工艺过程简单，适用于工业化生产，具有很强的实用性。
具体实施方式
以下通过具体实施例来进一步说明本发明：
实施例1
(1)超声波辅助两相混合溶剂提取多种有效成分：100g烟叶原料烘干粉碎后(20目)，加入循环式超声波提取器，然后加入1000mL石油醚和1000mL的磷酸水溶液(pH为4)作为两相混合萃取溶剂，在50℃，超声波功率100W的条件下超声循环提取45min，过滤得到两相混合提取液。
(2)两相混合提取液分离：将两相混合提取液倒入分液罐中，静置分层，分段放出富含烟碱、绿原酸、蛋白质和水溶性糖的水溶液下相，以及富含茄尼醇的石油醚上相。
(3)茄尼醇的分离纯化：将石油醚相浓缩至10mL，然后加入100mL0.2mol/l的NaOH乙醇溶液，在60℃进行皂化反应2小时，然后加入稀盐酸中和至中性，浓缩除去乙醇，加入150mL水,再用石油醚萃取3次，每次70mL，合并石油醚相并浓缩至5ml，将浓缩物，均匀滴加到(100-200目)硅胶柱上，用(石油醚：乙酸乙酯＝9:1)洗脱剂进行洗脱。并通过薄层层析法(TLC)定性分析各个不同时间段收集到的洗脱液中茄尼醇含量，将主要含茄尼醇的部分合并，浓缩，然后加入(乙醇)结晶溶剂，在-15℃下结晶，过滤得到的晶体在室温真空干燥(20℃)，即得精制茄尼醇0.64g，纯度测定为92％，得率70％。
(4)蛋白质的分离：将磷酸水溶液下相1000mL浓缩至250mL，然后加入浓度为0.2％分子量为50000的羧甲基壳聚糖水溶液10mL，置于4℃下静置4小时，然后离心，虹吸分离出上层清液，沉淀用无水乙醇洗涤若干次，低温干燥即得蛋白质4.5g,纯度为71％，得率52％。
(5)水溶性糖的分离：将蛋白提取后的上层清液加入800mL的乙醇，进行醇沉，静置2小时后离心，虹吸分离出上层清液，沉淀用无水乙醇洗涤若干次，低温干燥即得水溶性糖7.5g，纯度85％，得率70％。
(6)绿原酸的分离：将水溶性糖提取后的上层清液低温(60℃)真空浓缩，除去有机溶剂乙醇，然后加磷酸，调节pH为2，用240mL乙酸乙酯对酸性水溶液萃取3次，每次80mL,合并乙酸乙酯层并浓缩为浸膏，然后加入蒸馏水配成9mg/mL的水溶液进行聚酰胺柱层析分离，上样量为5倍柱体积,上样流速为每小时4倍柱体积，洗脱剂为30％的乙醇水溶液，洗脱流速为每小时4倍柱体积，总共洗脱6倍柱体积，以1/2倍柱体积为接收单位，收集绿原酸含量较高的流分，减压浓缩真空低温干燥即得绿原酸0.68g，纯度46％，得率41％。
(7)烟碱的分离：将绿原酸萃取后的水溶液加碱调节pH为11，然后进行水蒸气蒸馏，用柠檬酸吸收冷凝液并始终控制接收液pH小于3，当溜出液用1％硅钨酸检测无沉淀物产生时停止蒸馏。然后将溜出液真空浓缩到80mL，加入NaOH调节pH值至11左右，用氯仿萃取两次，每次80mL，合并氯仿并用无水硫酸钠干燥，最后减压蒸馏除去氯仿即得高纯度烟碱1.68g，纯度测定为98％，得率82％。
实施例2
(1)超声波辅助两相混合溶剂提取多种有效成分：150g烟叶原料烘干粉碎后(20目)，加入循环式超声波提取器，然后加入2000mL石油醚和2000mL的醋酸水溶液(pH为4)作为两相混合萃取溶剂，在50℃，超声波功率200W的条件下超声循环提取30min，过滤得到两相混合提取液。
(2)两相混合提取液分离：将两相混合提取液倒入分液罐中，静置分层，分段放出富含烟碱、绿原酸、蛋白质和水溶性糖的水溶液下相，以及富含茄尼醇的石油醚上相。
(3)茄尼醇的分离纯化：将石油醚相浓缩至10mL，然后加入150mL0.2mol/l的NaOH乙醇溶液，在60℃进行皂化反应2小时，然后加入稀盐酸中和至中性，浓缩除去乙醇，加入150mL水,再用石油醚萃取3次，每次70mL，合并石油醚相并浓缩至5ml，将浓缩物，均匀滴加到(100-200目)硅胶柱上，用(石油醚：乙酸乙酯＝9:1)洗脱剂进行洗脱。并通过薄层层析法(TLC)定性分析各个不同时间段收集到的洗脱液中茄尼醇含量，将主要含茄尼醇的部分合并，浓缩，然后加入(乙醇)结晶溶剂，在-15℃下结晶，过滤得到的晶体在室温真空干燥(20℃)，即得精制茄尼醇0.94g，纯度测定为90％，得率71％。
(4)蛋白质的分离：将磷酸水溶液下相2000mL浓缩至400mL，然后加入浓度为0.2％分子量为50000的羧甲基壳聚糖水溶液20mL，置于4℃下静置4小时，然后离心，虹吸分离出上层清液，沉淀用无水乙醇洗涤若干次，低温干燥即得蛋白质5.9g,纯度为70％，得率49％。
(5)水溶性糖的分离：将蛋白提取后的上层清液加入900mL的乙醇，进行醇沉，静置2小时后离心，虹吸分离出上层清液，沉淀用无水乙醇洗涤若干次，低温干燥即得水溶性糖10.5g，纯度85％，得率71％。
(6)绿原酸的分离：将水溶性糖提取后的上层清液低温(60℃)真空浓缩，除去有机溶剂乙醇，然后加磷酸，调节pH为2，用360mL乙酸乙酯对酸性水溶液萃取3次，每次120mL,合并乙酸乙酯层并浓缩为浸膏，然后加入蒸馏水配成9mg/mL的水溶液进行聚酰胺柱层析分离，上样量为5倍柱体积,上样流速为每小时4倍柱体积，洗脱剂为30％的乙醇水溶液，洗脱流速为每小时4倍柱体积，总共洗脱6倍柱体积，以1/2倍柱体积为接收单位，收集绿原酸含量较高的流分，减压浓缩真空低温干燥即得绿原酸0.88g，纯度46％，得率39％。
(7)烟碱的分离：将绿原酸萃取后的水溶液加碱调节pH为11，然后进行水蒸气蒸馏，用柠檬酸吸收冷凝液并始终控制接收液pH小于3，当溜出液用1％硅钨酸检测无沉淀物产生时停止蒸馏。然后将溜出液真空浓缩到100mL，加入NaOH调节pH值至11左右，用氯仿萃取两次，每次80mL，合并氯仿并用无水硫酸钠干燥，最后减压蒸馏除去氯仿即得高纯度烟碱2.28g，纯度测定为98％，得率80％。
实施例3
(1)超声波辅助两相混合溶剂提取多种有效成分：100g烟叶原料烘干粉碎后(20目)，加入循环式超声波提取器，然后加入2000mL石油醚和2000mL的柠檬酸水溶液(pH为5)作为两相混合萃取溶剂，在60℃，超声波功率100W的条件下超声循环提取60min，过滤得到两相混合提取液。
(2)两相混合提取液分离：将两相混合提取液倒入分液罐中，静置分层，分段放出富含烟碱、绿原酸、蛋白质和水溶性糖的水溶液下相，以及富含茄尼醇的石油醚上相。
(3)茄尼醇的分离纯化：将石油醚相浓缩至10mL，然后加入100mL0.2mol/l的NaOH乙醇溶液，在60℃进行皂化反应2小时，然后加入稀盐酸中和至中性，浓缩除去乙醇，加入150mL水,再用石油醚萃取3次，每次70mL，合并石油醚相并浓缩至5ml，将浓缩物，均匀滴加到(100-200目)硅胶柱上，用(石油醚：乙酸乙酯＝9:1)洗脱剂进行洗脱。并通过薄层层析法(TLC)定性分析各个不同时间段收集到的洗脱液中茄尼醇含量，将主要含茄尼醇的部分合并，浓缩，然后加入(乙醇)结晶溶剂，在-15℃下结晶，过滤得到的晶体在室温真空干燥(20℃)，即得精制茄尼醇0.71g，纯度测定为91％，得率75％。
(4)蛋白质的分离：将磷酸水溶液下相2000mL浓缩至200mL，然后加入浓度为0.2％分子量为50000的羧甲基壳聚糖水溶液10mL，置于4℃下静置4小时，然后离心，虹吸分离出上层清液，沉淀用无水乙醇洗涤若干次，低温干燥即得蛋白质5.1g,纯度为72％，得率56％。
(5)水溶性糖的分离：将蛋白提取后的上层清液加入800mL的乙醇，进行醇沉，静置2小时后离心，虹吸分离出上层清液，沉淀用无水乙醇洗涤若干次，低温干燥即得水溶性糖8.5g，纯度85％，得率78％。
(6)绿原酸的分离：将水溶性糖提取后的上层清液低温(60℃)真空浓缩，除去有机溶剂乙醇，然后加磷酸，调节pH为2，用240mL乙酸乙酯对酸性水溶液萃取3次，每次80mL,合并乙酸乙酯层并浓缩为浸膏，然后加入蒸馏水配成9mg/mL的水溶液进行聚酰胺柱层析分离，上样量为5倍柱体积,上样流速为每小时4倍柱体积，洗脱剂为30％的乙醇水溶液，洗脱流速为每小时4倍柱体积，总共洗脱6倍柱体积，以1/2倍柱体积为接收单位，收集绿原酸含量较高的流分，减压浓缩真空低温干燥即得绿原酸0.71g，纯度47％，得率45％。
(7)烟碱的分离：将绿原酸萃取后的水溶液加碱调节pH为11，然后进行水蒸气蒸馏，用柠檬酸吸收冷凝液并始终控制接收液pH小于3，当溜出液用1％硅钨酸检测无沉淀物产生时停止蒸馏。然后将溜出液真空浓缩到80mL，加入NaOH调节pH值至11左右，用氯仿萃取两次，每次80mL，合并氯仿并用无水硫酸钠干燥，最后减压蒸馏除去氯仿即得高纯度烟碱1.75g，纯度测定为98％，得率85％。
上述实施例中茄尼醇、烟碱和绿原酸均采用高效液相色谱法测定最终产品纯度，蛋白质纯度用微量凯式定氮法测定，水溶性糖用苯酚-硫酸法测定其纯度。
茄尼醇的高效液相色谱测试参数：
色谱柱：AgilentZORBAXEclipsePlusC18反相柱(250mmx4.6mm，5μm)
流动相：异丙醇：乙腈＝50％：50％(体积比)
流速：1mL/min
紫外检测波长：210nm
柱温：25℃
进样量：10μL
烟碱的高效液相色谱测试参数：
色谱柱：AgilentZORBAXEclipsePlusC18反相柱(250mmx4.6mm，5μm)
流动相：甲醇：磷酸缓冲溶液＝60％：40％(体积比)
磷酸缓冲溶液配制：2.420g磷酸氢二钠，3.5mL磷酸和6.5mL三乙胺，加水定容至1000mL。
流速：1mL/mim
紫外检测波长：259nm
柱温：30℃
进样量：10μL
绿原酸的高效液相色谱测试参数：
色谱柱：AgilentZORBAXEclipsePlusC18反相柱(250mmx4.6mm，5μm)
流动相：乙腈：2％乙酸＝13％：87％(体积比)
流速：1mL/min
紫外检测波长：328nm
柱温：25℃
进样量：10μL。
Claims (7)
1.一种烟叶有效成分的分离方法，其步骤包括：(1)将烟叶烘干粉碎后，加入酸性水溶液和有机溶剂两相混合溶剂，用超声波进行提取得到两相混合液；(2)将上述两相混合液分液得到上层有机相和下层水相后，取上层有机相皂化并中和，再进行纯化可以得到茄尼醇；(3)取上述步骤(2)中的下层水相，加入蛋白沉淀剂并调节pH值为4-5，静置并固液分离得到固体沉淀和澄清液体，所述固体沉淀为蛋白质；(4)向上述步骤(3)中的澄清液体中加入乙醇后进行醇沉，静置并固液分离得到固体沉淀和澄清液体，所述固体沉淀为水溶性糖；(5)取上述步骤(4)中的澄清液体，除去乙醇后加入酸，调节pH值为2-3后萃取得到有机相和水相，将有机相纯化后得到绿原酸；(6)将上述步骤(5)中的水相pH值调节为11-12后，进行水蒸气蒸馏，用酸性溶液吸收馏出液，蒸馏结束后浓缩吸收液，再加碱调节pH值为11，最后用氯仿萃取，蒸发除去氯仿即得烟碱；所述步骤(1)中两相混合溶剂中有机溶剂为石油醚或正己烷，水溶液为醋酸、柠檬酸或磷酸水溶液，pH值为4-5，所述烟叶与两相混合溶剂的料液比g:mL为1:10-20；所述步骤(3)中是将步骤(2)中的下层水相浓缩，然后加入蛋白沉淀剂，加酸调节pH为4-5，置于4℃下静置4-5小时，然后离心，虹吸分离出上层澄清液体，而固体沉淀用无水乙醇洗涤若干次，低温干燥即得蛋白质；所述蛋白沉淀剂为羧甲基壳聚糖，分子量为50000-100000；所述调节pH值的酸为醋酸或磷酸。
2.根据权利要求1所述烟叶有效成分的分离方法，其特征在于：所述步骤(1)中烟叶粉碎为20目，所述超声波提取的超声波功率为100-300W，超声提取时间为30-60min，提取温度为50-60℃。
3.根据权利要求1所述烟叶有效成分的分离方法，其特征在于：所述步骤(2)是先将上层有机相浓缩后，加入碱性乙醇溶液进行皂化，再中和浓缩，加入石油醚和水进行萃取，取石油醚相浓缩，浓缩所得物用硅胶柱层析进行纯化，最后将柱层析所得粗品茄尼醇用乙醇重结晶，得到茄尼醇。
4.根据权利要求3所述烟叶有效成分的分离方法，其特征在于：所述步骤(2)中碱性乙醇溶液为摩尔浓度为0.2mol/L的NaOH或KOH乙醇溶液，用量为浓缩后的有机相质量的10-20倍；所述皂化温度为60℃，时间为2小时；所述皂化后的浓缩物均匀滴加到100-200目硅胶柱上再进行洗脱；所述乙醇重结晶温度为-15℃，过滤得到的茄尼醇真空干燥的温度为20℃。
5.根据权利要求1所述烟叶有效成分的分离方法，其特征在于：所述步骤(4)中是向步骤(3)中的澄清液体中加入体积为澄清液体体积3倍的乙醇，进行醇沉，静置2-3小时后离心，虹吸分离出上层澄清液体，固体沉淀用无水乙醇洗涤后，低温干燥即得所述水溶性糖。
6.根据权利要求1所述烟叶有效成分的分离方法，其特征在于：所述步骤(5)中是将步骤(4)中的澄清液体进行浓缩，除去有机溶剂乙醇后，然后调节pH为2-3，用乙酸乙酯对酸性水溶液进行萃取，将乙酸乙酯层浓缩后，配成浓度为9mg/mL的绿原酸水溶液进行聚酰胺柱层析纯化即得绿原酸；所述聚酰胺柱层析分离所用聚酰胺为80-100目，绿原酸水溶液的上样量为5倍柱体积，上样流速为每小时4倍柱体积，洗脱剂为30％的乙醇水溶液，洗脱流速为每小时4倍柱体积。
7.根据权利要求1所述烟叶有效成分的分离方法，其特征在于：所述步骤(6)中是将上述步骤(5)中的水相pH值调节为11-12后，进行水蒸气蒸馏，用酸性溶液吸收馏出液，蒸馏结束后浓缩吸收液至原体积的1/4-1/5，再加碱调节pH值为11，最后用氯仿萃取，蒸发除去氯仿即得烟碱；所述水蒸气蒸馏时用稀酸吸收冷凝液并控制接收液pH小于3，当馏出液用1％硅钨酸检测无沉淀物产生时停止蒸馏。
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