CN110540532B - 一种从豆浆水一级浮渣中提取大豆异黄酮的方法 - Google Patents

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Abstract

本公开提供了一种从豆浆水一级浮渣中提取大豆异黄酮的方法，该方法为：豆浆水一级浮渣经无水乙醇提取、正己烷除油、乙酸乙酯纯化得大豆异黄酮；或，豆浆水一级浮渣经乙醇提取、精馏、大孔树脂吸附洗脱、干燥得大豆异黄酮结晶。本公开能够从豆浆水一级浮渣中提取大豆异黄酮。

Description

一种从豆浆水一级浮渣中提取大豆异黄酮的方法
技术领域
本公开涉及一种从豆浆水一级浮渣中提取大豆异黄酮的方法。
背景技术
这里的陈述仅提供与本公开有关的背景信息，而不必然构成现有技术。
大豆属双子叶植物纲、豆目、蝶形花科，含蛋白质十分丰富，干豆为40％左右，其中富含人体不能合成的8种氨基酸。近年来的很多研究表明，大豆异黄酮具有多种生理功能，因而对于大豆异黄酮的需求逐渐升高。大豆异黄酮在通常情况下为固体，熔点大都100℃以上，常温下其性质稳定，呈黄白色、粉末状、无毒，有轻微苦涩味，在醇类、酯类和酮类溶剂中有一定溶解度，不溶于冷水，易溶于热水，难溶于石油醚、正己烷等。大豆异黄酮主要分布于大豆种子的子叶和胚轴中，种皮含量极少。80％～90％存在于子叶中，浓度为0.1％～0.3％。胚轴中所含异黄酮种类较多且浓度较高，为1％～2％。
大豆分离蛋白生产方法主要由三种：碱溶酸沉法、超滤法、离子交换法。离子交换法生产大豆分离蛋白具有生产周期过长、技术不成熟等缺点，难以实际应用。企业采用超滤膜法生产大豆分离蛋白时，由于超滤膜污染会导致膜通量下降，造成分离性能发生变化从而使生产能力下降，及连续性不能解决等原因往往而放弃。目前，国内外绝大多数企业生产大豆蛋白所采用的是碱溶酸沉工艺，即用稀碱溶液使低温脱脂大豆粕中蛋白质溶解出来，然后离心去除不溶性纤维及固体残渣，澄清蛋白液，再用酸将浸出液pH值调至大豆蛋白质等电点4.5左右使蛋白质凝集沉淀，然后用离心机把沉析蛋白质凝胶分离，再经洗涤、中和、灭菌和喷雾干燥即得粉状大豆分离蛋白。离心机将蛋白质凝胶分离后剩余的废水为豆浆水，豆浆水作为工厂废水处理时，用聚合氯化铝和聚丙烯酰胺絮凝、鼓气成泡沫，进行三级成沫处理，然后捕沫和板框过滤。
发明内容
本公开发明人研究发现用聚合氯化铝和聚丙烯酰胺絮凝、鼓气成泡沫，进行三级成沫处理后，一级浮沫黄色含大豆异黄酮，二、三级白色不含大豆异黄酮。因而一级浮沫干燥后的一级浮渣可以作为提取大豆异黄酮的材料。然而，一级浮渣中含有部分油脂、多糖、蛋白、聚合氯化铝等无机物、聚丙烯酰胺、大豆异黄酮、酚类、脂肪酸、多肽、氨基酸、核苷酸及核苷、磷脂、鞣质、消泡剂等许许多多的成分。从中提取出高纯度大豆异黄酮并非易事。
因而，本公开的目的是提供一种从豆浆水一级浮渣中提取大豆异黄酮的方法。从豆浆水的一级浮渣中提取大豆异黄酮是豆浆水废物综合利用的一环。
为了实现上述目的，本公开的技术方案为：
一方面，一种从豆浆水一级浮渣中提取大豆异黄酮的方法，将豆浆水一级浮渣与无水乙醇进行混合，采用胶体磨进行研磨提取，将研磨提取后的混合物料去除固体后获得液体物料，将液体物料除去溶剂获得膏状物，将膏状物采用正己烷除油获得除油渣，将除油渣采用乙酸乙酯进行纯化获得大豆异黄酮，所述豆浆水一级浮渣为豆浆水经聚合氯化铝和聚丙烯酰胺絮凝、鼓气捕沫、干燥得到的一级浮渣，所述豆浆水为碱溶酸沉法制备大豆蛋白质工艺中排出的水。
本公开的该方法以无水乙醇作为提取豆浆水一级浮渣中大豆异黄酮的溶剂，与其他溶剂相比，采用无水乙醇用量更少。同时采用胶体磨进行研磨处理，能够进一步降低无水乙醇的使用量，且提取时间短、易操作、提取效率高。以豆浆水一级浮渣作为原料，其中含有油脂、多糖、蛋白、聚合氯化铝等无机物、聚丙烯酰胺、酚类、脂肪酸、多肽、氨基酸、核苷酸及核苷、磷脂、鞣质、消泡剂等许许多多的杂质成分，为了更好的去除杂质成分，本公开采用无水乙醇能够避免多糖、聚合氯化铝等成分混杂至提取液中，再采用正己烷进行除油，能够去除油脂、蛋白质等杂质，然后采用乙酸乙酯能够获得纯净的大豆异黄酮。
另一方面，一种从豆浆水一级浮渣中提取大豆异黄酮的方法，将豆浆水一级浮渣与乙醇水溶液混合，采用胶体磨加热后进行研磨提取，将研磨提取后的混合物料去除固体后获得液体物料，将液体物料除去溶剂获得膏状物，将膏状物进行精馏获得精馏滤液，再将精馏滤液采用大孔树脂进行吸附洗脱获得洗脱液，精馏及吸附洗脱采用的溶剂均为乙醇水溶液，将洗脱液中的溶剂去除获得大豆异黄酮，所述豆浆水一级浮渣为豆浆水经聚合氯化铝和聚丙烯酰胺絮凝、鼓气捕沫、干燥得到的一级浮渣，所述豆浆水为碱溶酸沉法制备大豆蛋白质工艺中排出的水。
由于无水乙醇易吸水，导致存储较为麻烦，而乙醇含有水分会导致无法去除多糖、聚合氯化铝等成分，因而本公开拟以乙醇水溶液作为提取剂获得纯的更高的大豆异黄酮。本公开经实验发现，经过将乙醇水溶液提取后的物料依次进行精馏、大孔树脂吸附洗脱，能够更好的去除大豆异黄酮中的杂质，然后通过乙酸乙酯的进一步提取，能够获得更为纯净的大豆异黄酮，采用该方法获得的大豆异黄酮的纯度可达95％以上。
第三方面，一种上述方法在处理碱溶酸沉法制备大豆蛋白质工艺排出水中的应用。
本公开的有益效果为：
1.本公开发明人经研究发现碱提酸沉工艺生产大豆蛋白的豆浆水经聚合氯化铝和聚丙烯酰胺絮凝、捕沫、干燥所制备的一级浮渣粉含有大豆异黄酮成分，约每公斤3g以上。经实验表明采用搅拌提取、超声等方法，采用溶剂过多。本公开以无水乙醇作为溶剂，能够降低溶剂的使用量，采用胶体磨磨细过程实现提取，进一步降低溶剂的使用量，同时胶体磨磨细的提取时间短、易操作、提取效率高。
2.由于以无水乙醇为提取剂的方法中，存在无水乙醇要求较高，且在后续过程中采用了其他溶剂(正己烷、乙酸乙酯)，为了去除其他溶剂(正己烷、乙酸乙酯)的毒性，需要将其他溶剂(正己烷、乙酸乙酯)完全去除，增加工艺成本。为此，本公开又采用乙醇水溶液进行提取，解决无水乙醇要求较高的问题，依次采用精馏、大孔树脂吸附洗脱，能够更好的去除大豆异黄酮中的杂质，从而提高大豆异黄酮的纯度。同时，该方法仅采用乙醇水溶液一种溶剂，减少疏水性和和两性溶剂的毒性，工艺简单、投资少、生产省时省力、无毒、无污染。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本公开提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本公开的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
本公开提出了一种从豆浆水一级浮渣中提取大豆异黄酮的方法。
本公开的一种典型实施方式，提供了一种从豆浆水一级浮渣中提取大豆异黄酮的方法，将豆浆水一级浮渣与无水乙醇进行混合，采用胶体磨进行研磨提取，将研磨提取后的混合物料去除固体后获得液体物料，将液体物料除去溶剂获得膏状物，将膏状物采用正己烷除油获得除油渣，将除油渣采用乙酸乙酯进行纯化获得大豆异黄酮，所述豆浆水一级浮渣为豆浆水经聚合氯化铝和聚丙烯酰胺絮凝、鼓气捕沫、干燥得到的一级浮渣，所述豆浆水为碱溶酸沉法制备大豆蛋白质工艺中排出的水。
本公开的该方法以无水乙醇作为提取豆浆水一级浮渣中大豆异黄酮的溶剂，与其他溶剂相比，采用无水乙醇用量更少。同时采用胶体磨进行研磨处理，能够进一步降低无水乙醇的使用量，且提取时间短、易操作、提取效率高。以豆浆水一级浮渣作为原料，其中含有油脂、多糖、蛋白、聚合氯化铝等无机物、聚丙烯酰胺、酚类、脂肪酸、多肽、氨基酸、核苷酸及核苷、磷脂、鞣剂、消泡剂等许许多多的杂质成分，为了更好的去除杂质成分，本公开采用无水乙醇能够避免多糖、聚合氯化铝等成分混杂至提取液中，再采用正己烷进行除油，能够去除油脂、蛋白质等杂质，然后采用乙酸乙酯能够获得纯净的大豆异黄酮。
该实施方式的一种或多种实施例中，研磨提取的过程为：将豆浆水一级浮渣与无水乙醇放入至胶体磨进行一次研磨，一次研磨后采用无水乙醇进行冲洗、过滤，过滤后获得一次滤液和滤渣，将滤渣与无水乙醇放入至胶体磨进行二次研磨，二次研磨后采用无水乙醇进行冲洗、过滤，过滤后获得二次滤液。
该系列实施例中，将一次滤液和二次滤液合并后去除溶剂获得膏状物。
该系列实施例中，一次研磨前，豆浆水一级浮渣与无水乙醇的加入比为100:700～1000，g：mL。
该系列实施例中，一次研磨的时间为15～20min。
该系列实施例中，一次研磨后，冲洗加入无水乙醇的量为300～500mL/100g豆浆水一级浮渣。
该系列实施例中，二次研磨前，滤渣与无水乙醇的加入比为100:700～1000，g：mL。
该系列实施例中，二次研磨的时间为0.9～1.1h。
该实施方式的一种或多种实施例中，将液体物料除去溶剂的方式为加热蒸发。
该实施方式的一种或多种实施例中，膏状物与正己烷的加入比为2.50～2.85:5～30，g：mL。
该实施方式的一种或多种实施例中，除油条件为：涡旋提取20～30min。
该实施方式的一种或多种实施例中，采用正己烷除油经过离心分离获得除油渣。离心分离的条件为：1000～2000r/min离心5～10min。
该实施方式的一种或多种实施例中，乙酸乙酯的加入量为25～30mL/100g豆浆水一级浮渣。
该实施方式的一种或多种实施例中，采用乙酸乙酯进行纯化的步骤为：向除油渣加入乙酸乙酯进行漩涡提取，然后进行离心分离，将分离后的液体去除溶剂获得大豆异黄酮。
该系列实施例中，纯化中，漩涡提取的时间为20～30min，离心分离转速为1000～2000r/min，离心分离时间为10～20min。
本公开的另一种实施方式，提供了一种从豆浆水一级浮渣中提取大豆异黄酮的方法，将豆浆水一级浮渣与乙醇水溶液混合，采用胶体磨加热后进行研磨提取，将研磨提取后的混合物料去除固体后获得液体物料，将液体物料除去溶剂获得膏状物，将膏状物进行精馏获得精馏滤液，再将精馏滤液采用大孔树脂进行吸附洗脱获得洗脱液，精馏及吸附洗脱采用的溶剂均为乙醇水溶液，将洗脱液中的溶剂去除获得大豆异黄酮，所述豆浆水一级浮渣为豆浆水经聚合氯化铝和聚丙烯酰胺絮凝、鼓气捕沫、干燥得到的一级浮渣，所述豆浆水为碱溶酸沉法制备大豆蛋白质工艺中排出的水。
由于无水乙醇易吸水，导致存储较为麻烦，而乙醇含有水分会导致无法去除多糖、聚合氯化铝等成分，因而本公开拟以乙醇水溶液作为提取剂获得纯的更高的大豆异黄酮。本公开经实验发现，经过将乙醇水溶液提取后的物料依次进行精馏、大孔树脂吸附洗脱，能够更好的去除大豆异黄酮中的杂质，然后通过乙酸乙酯的进一步提取，能够获得更为纯净的大豆异黄酮，采用该方法获得的大豆异黄酮的纯度可达95％以上。
该实施方式的一种或多种实施例中，研磨提取中的乙醇水溶液为55～65％乙醇。乙醇中的百分数为体积百分数。
该实施方式的一种或多种实施例中，研磨提取的过程为：将豆浆水一级浮渣与乙醇水溶液放入至胶体磨，加热后进行一次研磨，一次研磨后进行过滤，过滤后获得一次研磨滤液和研磨滤渣，将研磨滤渣与乙醇水溶液放入至胶体磨进行二次研磨，二次研磨后进行过滤，过滤后获得二次研磨滤液。
该系列实施例中，将一次研磨滤液和二次研磨滤液合并后去除溶剂获得膏状物。
该系列实施例中，一次研磨前，豆浆水一级浮渣与乙醇水溶液的加入比为100:500～600，g：mL。
该系列实施例中，一次研磨的条件为：加热至50～60℃，研磨时间为40～60min。
该系列实施例中，二次研磨前，滤渣与乙醇水溶液的加入比为100:500～600，g：mL。
该系列实施例中，二次研磨的条件为：加热至50～60℃，研磨时间为40～60min。
该实施方式的一种或多种实施例中，精馏的过程为：向膏状物中加入磷酸三钙、碳酸氢钙和94～96％乙醇，进行一次回流，一次回流后进行过滤获得一次精馏滤液和精馏滤渣，向精馏滤渣加入94～96％乙醇，进行二次回流，二次回流后进行过滤获得二次精馏滤液。本公开所述的回流是指将体系进行加热，使体系中的溶剂蒸发，蒸发的溶剂经冷凝流回至体系的过程。
该系列实施例中，一次精馏滤液和二次精馏滤液合并后采用大孔树脂进行吸附洗脱。
该系列实施例中，一次回流前，膏状物、磷酸三钙、碳酸氢钙和94～96％乙醇的加入比例为10～12:8～12:8～10:250，g：g：g：mL。
该系列实施例中，一次回流的时间为1～1.5h。
该系列实施例中，二次回流的时间为1～1.5h。
该实施方式的一种或多种实施例中，精馏滤液先经过浓缩后，再采用大孔树脂进行吸附洗脱。
该实施方式的一种或多种实施例中，进行吸附洗脱的过程为：采用95～99％乙醇将大孔树脂浸泡，将浸泡后的大孔树脂湿法装柱，依次用95％乙醇、水冲洗，将精馏滤液加在大孔树脂柱床面，依次用水、95％乙醇冲洗，收取95％乙醇冲洗液。
为了获取更纯净的大豆异黄酮，将收取95％乙醇冲洗液再进行一次吸附洗脱。能够使获得的大豆异黄酮纯度达到95％以上。
该系列实施例中，95％乙醇冲洗添加的体积为精馏滤液的2～12倍。
该系列实施例中，水冲洗添加的体积为精馏滤液的2～12倍。
为了降低水中杂质对大豆异黄酮的影响，本公开中水为去离子水。
由于本公开采用的原料是豆浆水一级浮渣，豆浆水一级浮渣来自碱溶酸沉法制备大豆蛋白质工艺中排出的水，因而本公开的上述方法可以用于处理豆浆水；因而本公开的第三种实施方式，提供了一种上述方法在处理碱溶酸沉法制备大豆蛋白质工艺排出水中的应用。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本公开的技术方案，以下将结合具体的实施例与对比例详细说明本公开的技术方案。
实施例和对比例中分析检测方法如下：
1.将大豆素、大豆素苷、染料木素、染料木苷、黄豆黄素、黄豆黄苷6个标准品分别配成1mg/mL的6个标准品溶液。
2.将各实施例对比例制备的样品分别用10mL乙酸乙酯溶解作为样品液。
3.用活化后的硅胶GF254高效薄层板(HPTLC)10cm*20cm，对步骤1的6个标准液的每个分别取1μL、2μL、3μL、4μL、5μL制作出6个标准曲线，相应的得6个标准曲线方程，RSD<3％。
4.大豆异黄酮苷(大豆素苷，染料木苷，黄豆黄苷)的检测：对步骤1的三种标准品液(大豆素苷，染料木苷，黄豆黄苷)各5μL，取步骤2制备的样品液5μL。点在GF254 HPTLC板上，自然晾干。在双槽的玻璃展开缸展开。加20mL展开剂。展开剂配方：二氯甲烷：甲醇：乙酸＝10:2:0.1，HPTLC板放入展开缸后加盖饱和10分钟后始展开，展开距：13厘米。展毕取出。晾干后在365nm紫外灯下观察。
5.在薄层扫描仪TLC scanner III带有WINcats1.4.1软件(瑞士CAMAG公司)扫描，扫描条件：扫描速度80nm/s，分辨率200μm/step，照射灯D2灯，波长260nm，扫描宽度6.00mm*0.90mm。大豆素苷Rf＝0.41，染料木苷Rf＝0.52，黄豆黄苷Rf＝0.50。
6.大豆异黄酮苷元(大豆素，染料木素，黄豆黄素)的检测：对步骤1的三种标准品液(大豆素，染料木素，黄豆黄素)各5μL，取步骤2制备的样品液5μL。点在GF254 HPTLC板上，自然晾干。在双槽的玻璃展开缸展开。加20ml展开剂。展开剂配方：三氯甲烷：甲醇：乙酸＝9:1:0.15，HPTLC板放入展开缸后加盖饱和10分钟后始展开。展开距：10厘米。展毕取出。晾干后在365nm紫外灯下观察。
7.在薄层扫描仪TLC scanner III带有WINcats1.4.1软件(瑞士CAMAG公司)扫描，扫描条件：扫描速度80nm/s，分辨率200μm/step，照射灯D2灯，波长260nm，扫描宽度6.00mm*0.90mm。大豆苷元Rf＝0.50，染料木素Rf＝0.67，黄豆黄素Rf＝0.62。
实施例1
1)取100g一级浮渣粉加无水乙醇至700mL，胶体磨磨细提15min，冲洗胶体磨300mL。过滤液900mL，滤渣加无水乙醇至700mL，胶体磨磨细40min，冲洗胶体磨300mL，滤液900mL。
2)将两次滤液合并，旋蒸干得2.5g膏状物，向该膏状物中加25mL正己烷，涡旋提取30min，1500r/min离心8min，除去上清液得渣。
3)向渣中加入乙酸乙酯30mL，涡旋提取30min，1500r/min离心15min，取上清，旋蒸干后得大豆异黄酮326.9mg，纯度为94.5％。
实施例2
1)取100g一级浮渣粉加无水乙醇至1000mL，胶体磨磨细提20min，冲洗胶体磨500mL。过滤液1300mL，滤渣加无水乙醇至1000mL，胶体磨磨细80min，冲洗胶体磨500mL，滤液1300mL。
2)将两次滤液合并，旋蒸干得2.85g膏状物，向该膏状物中加30mL正己烷，涡旋提取30min，2000r/min离心5min，除去上清液得渣。
3)向渣中加入乙酸乙酯30mL，涡旋提取20min，2000r/min离心10min，取上清，旋蒸干后得大豆异黄酮335.2mg，纯度为93.9％。
实施例3
1)取100g一级浮渣粉加无水乙醇至800mL，胶体磨磨细提20min，冲洗胶体磨500mL。过滤液1100mL，滤渣加无水乙醇至800mL，胶体磨磨细60min，冲洗胶体磨600mL，滤液1200mL。
2)将两次滤液合并，旋蒸干得2.83g膏状物，向该膏状物中加30mL正己烷，涡旋提取20min，1000r/min离心10min，除去上清液得渣。
3)向渣中加入乙酸乙酯25mL，涡旋提取325min，1000r/min离心20min，取上清，旋蒸干后得大豆异黄酮331.8mg，纯度为94.3％。
实施例4
1)豆浆水经聚合氯化铝和聚丙烯酰胺絮凝、鼓气捕沫、干燥得到的一级浮渣经粉碎后为一级浮渣干粉。取100g干粉加550mL 60％乙醇，在50℃下胶体磨磨细提取50min，放出料液后清洗液和料液合并，粗滤得粗滤液400mL，渣重复以上过程一次。将两次的滤液合并，旋蒸干得12g膏状物。
2)向膏状物中加入12g磷酸三钙和10g碳酸氢钙，同时加250mL 95％乙醇回流1h，过滤得滤液。向渣中再加250mL 95％乙醇回流1h，过滤得滤液，将两次滤液合并，旋蒸至40mL。
3)将大孔树脂加入到工业乙醇浸泡24h，然后湿法装柱，装柱体积约40mL左右，用3倍95％乙醇冲洗，用3倍去离子水冲洗，将旋蒸液40mL加在大孔树脂柱床面上，打开底下阀门使样品液进入柱床内部后，用8倍去离子水冲洗，然后用8倍95％乙醇冲洗，接95％乙醇冲洗液后60℃下旋蒸干，得黄色大豆异黄酮结晶313.2mg，纯度为95.3％。
4)将所得黄色大豆异黄酮结晶溶解于去离子水，采用步骤3)的方法再次用大孔树脂吸附洗脱，制备的含大豆异黄酮的95％乙醇溶液在60℃下旋蒸干，可得纯度为98.7％的大豆异黄酮结晶。
实施例5
1)豆浆水经聚合氯化铝和聚丙烯酰胺絮凝、鼓气捕沫、干燥得到的一级浮渣经粉碎后为一级浮渣干粉。取100g干粉加600mL 60％乙醇，在60℃下胶体磨磨细提取60min，放出料液后清洗液和料液合并，粗滤得粗滤液450mL，渣重复以上过程一次。将两次的滤液合并，旋蒸干得11g膏状物。
2)向膏状物中加入10g磷酸三钙和9g碳酸氢钙，同时加250mL 95％乙醇回流1.5h，过滤得滤液。向渣中再加250mL 95％乙醇回流1.5h，过滤得滤液，将两次滤液合并，旋蒸至35mL。
3)将大孔树脂加入到工业乙醇浸泡24h，然后湿法装柱，装柱体积约40mL左右，用3倍95％乙醇冲洗，用3倍去离子水冲洗，将旋蒸液35mL加在大孔树脂柱床面上，打开底下阀门使样品液进入柱床内部后，用12倍去离子水冲洗，然后用12倍95％乙醇冲洗，接95％乙醇冲洗液后55℃下旋蒸干，得黄色大豆异黄酮结晶312.6mg，纯度为95.5％。
4)将所得黄色大豆异黄酮结晶溶解于去离子水，采用步骤3)的方法再次用大孔树脂吸附洗脱，制备的含大豆异黄酮的95％乙醇溶液在55℃下旋蒸干，可得纯度为98.3％的大豆异黄酮结晶。
实施例6
1)豆浆水经聚合氯化铝和聚丙烯酰胺絮凝、鼓气捕沫、干燥得到的一级浮渣经粉碎后为一级浮渣干粉。取100g干粉加500mL 60％乙醇，在55℃下胶体磨磨细提取40min，放出料液后清洗液和料液合并，粗滤得粗滤液350mL，渣重复以上过程一次。将两次的滤液合并，旋蒸干得10g膏状物。
2)向膏状物中加入8g磷酸三钙和8g碳酸氢钙，同时加250mL 95％乙醇回流1.5h，过滤得滤液。向渣中再加250mL 95％乙醇回流1.5h，过滤得滤液，将两次滤液合并，旋蒸至30mL。
3)将大孔树脂加入到工业乙醇浸泡24h，然后湿法装柱，装柱体积约40mL左右，用2倍95％乙醇冲洗，用2倍去离子水冲洗，将旋蒸液30mL加在大孔树脂柱床面上，打开底下阀门使样品液进入柱床内部后，用2倍去离子水冲洗，然后用2倍95％乙醇冲洗，接95％乙醇冲洗液后57℃下旋蒸干，得黄色大豆异黄酮结晶317.1mg，纯度为95.1％。
4)将所得黄色大豆异黄酮结晶溶解于去离子水，采用步骤3)的方法再次用大孔树脂吸附洗脱，制备的含大豆异黄酮的95％乙醇溶液在57℃下旋蒸干，可得纯度为98.5％的的大豆异黄酮结晶。
对比例1
1)取100g一级浮渣粉加无水乙醇至800mL，搅拌15min，冲洗容器300mL。过滤液1000mL，滤渣加无水乙醇至800mL，搅拌提取40min，冲洗容器300mL，滤液1000mL。
其他步骤与实施例1相同。
获得大豆异黄酮313.4mg，纯度86.2％。
对比例2
1)取100g一级浮渣粉加丙酮至900mL，胶体磨磨细提15min，冲洗胶体磨300mL。过滤液1100mL，滤渣加丙酮至900mL，胶体磨磨细提40min，冲洗胶体磨300mL，滤液1100mL。
其他步骤与实施例1相同。
获得大豆异黄酮323.7mg，纯度88.1％。
对比例3
2)将两次滤液合并，旋蒸干得2.5g膏状物，向该膏状物中加25mL正戊烷，涡旋提取30min，1500r/min离心8min，除去上清液得渣。
其他步骤与实施例1相同。
获得大豆异黄酮354.2mg，纯度90.6％。
对比例4
3)向渣中加入乙醚30mL，涡旋提取30min，1500r/min离心15min，取上清，旋蒸干。
其他步骤与实施例1相同。
获得大豆异黄酮306.4mg，纯度87.3％。
对比例5
1)取100g一级浮渣粉加60％乙醇至700mL，胶体磨磨细提15min，冲洗胶体磨300mL。过滤液900mL，滤渣加60％乙醇至700mL，胶体磨磨细40min，冲洗胶体磨300mL，滤液900mL。
其他步骤与实施例1相同。
获得大豆异黄酮364.6mg，纯度86.5％。
对比例6
1)豆浆水经聚合氯化铝和聚丙烯酰胺絮凝、鼓气捕沫、干燥得到的一级浮渣经粉碎后为一级浮渣干粉。取100g干粉加550mL 70％乙醇，在50℃下胶体磨磨细提取50min，放出料液后清洗液和料液合并，粗滤得粗滤液400mL，渣重复以上过程一次。将两次的滤液合并，旋蒸干得g膏状物。
其他步骤与实施例4相同。
步骤3)获得大豆异黄酮323.7mg，纯度92.5％。
步骤4)获得大豆异黄酮的纯度为95.4％。
对比例7
1)豆浆水经聚合氯化铝和聚丙烯酰胺絮凝、鼓气捕沫、干燥得到的一级浮渣经粉碎后为一级浮渣干粉。取100g干粉加550mL 50％乙醇，在50℃下胶体磨磨细提取50min，放出料液后清洗液和料液合并，粗滤得粗滤液400mL，渣重复以上过程一次。将两次的滤液合并，旋蒸干得g膏状物。
其他步骤与实施例4相同。
步骤3)获得大豆异黄酮305.4mg，纯度93.1％。
步骤4)获得大豆异黄酮的纯度为95.6％。
对比例8
2)向膏状物中加入12g Ca3(PO4)2和10g Ca(HCO3)2，同时加250mL 80％乙醇回流1h，过滤得滤液。向渣中再加250mL 80％乙醇回流1h，过滤得滤液，将两次滤液合并，旋蒸至40mL。
其他步骤与实施例4相同。
步骤3)获得大豆异黄酮334.6mg，纯度92.3％。
步骤4)获得大豆异黄酮的纯度为94.9％。
对比例9
3)将大孔树脂加入到工业乙醇浸泡24h，然后湿法装柱，装柱体积约40mL左右，用3倍80％乙醇冲洗，用3倍去离子水冲洗，将旋蒸液40mL加在大孔树脂柱床面上，打开底下阀门使样品液进入柱床内部后，用8倍去离子水冲洗，然后用8倍80％乙醇冲洗，接80％乙醇冲洗液后60℃下旋蒸干。
其他步骤与实施例4相同。
步骤3)获得大豆异黄酮341.3mg，纯度91.4％。
步骤4)获得大豆异黄酮的纯度为94.6％。
实施例1～3、对比例1～5制备的大豆异黄酮的质量和纯度如表1所示。
表1实施例1～3、对比例1～5制备的大豆异黄酮的质量和纯度
质量(mg) 纯度(％)
实施例1 326.9 94.5
实施例2 335.2 93.9
实施例3 331.8 94.3
对比例1 313.4 86.2
对比例2 323.7 88.1
对比例3 354.2 90.6
对比例4 306.4 87.3
对比例5 364.6 86.5
实施例4～6、对比例6～9制备的大豆异黄酮的质量和纯度如表2所示。
表2实施例4～6、对比例6～9制备的大豆异黄酮的质量和纯度
质量(mg)<sup>a</sup> 纯度(％)<sup>a</sup> 纯度(％)<sup>b</sup>
实施例4 313.2 95.3 98.7
实施例5 312.6 95.5 98.3
实施例6 317.1 95.1 98.5
对比例6 323.7 92.5 95.4
对比例7 305.4 93.1 95.6
对比例8 334.6 92.3 94.9
对比例9 341.3 91.4 94.6
其中，a为步骤3)获得的大豆异黄酮；
b为步骤4)获得的大豆异黄酮。
以上所述仅为本公开的优选实施例而已，并不用于限制本公开，对于本领域的技术人员来说，本公开可以有各种更改和变化。凡在本公开的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本公开的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种从豆浆水一级浮渣中提取大豆异黄酮的方法，其特征是，将豆浆水一级浮渣与无水乙醇进行混合，采用胶体磨进行研磨提取，将研磨提取后的混合物料去除固体后获得液体物料，将液体物料除去溶剂获得膏状物，将膏状物采用正己烷除油获得除油渣，将除油渣采用乙酸乙酯进行纯化获得大豆异黄酮，所述豆浆水一级浮渣为豆浆水经聚合氯化铝和聚丙烯酰胺絮凝、鼓气捕沫、干燥得到的一级浮渣，所述豆浆水为碱溶酸沉法制备大豆蛋白质工艺中排出的水；
研磨提取的过程为：将豆浆水一级浮渣与无水乙醇放入至胶体磨进行一次研磨，一次研磨后采用无水乙醇进行冲洗、过滤，过滤后获得一次滤液和滤渣，将滤渣与无水乙醇放入至胶体磨进行二次研磨，二次研磨后采用无水乙醇进行冲洗、过滤，过滤后获得二次滤液；
将一次滤液和二次滤液合并后去除溶剂获得膏状物；
一次研磨前，豆浆水一级浮渣与无水乙醇的加入比为100:700~1000，g：mL；
一次研磨的时间为15~20min；
一次研磨后，冲洗加入无水乙醇的量为300~500mL/100g豆浆水一级浮渣；
二次研磨前，滤渣与无水乙醇的加入比为100:700~1000，g：mL；
二次研磨的时间为0.9~1.1h。
2.如权利要求1所述的从豆浆水一级浮渣中提取大豆异黄酮的方法，其特征是，将液体物料除去溶剂的方式为加热蒸发；
或，膏状物与正己烷的加入比为2.50~2.85:5~30，g：mL；
或，除油条件为：涡旋提取20~30 min；
或，采用正己烷除油经过离心分离获得除油渣；
或，乙酸乙酯的加入量为25~30 mL/100g豆浆水一级浮渣。
3.如权利要求2所述的从豆浆水一级浮渣中提取大豆异黄酮的方法，其特征是，离心分离的条件为：1000~2000 r/min离心5~10 min。
4.如权利要求1所述的从豆浆水一级浮渣中提取大豆异黄酮的方法，其特征是，采用乙酸乙酯进行纯化的步骤为：向除油渣加入乙酸乙酯进行漩涡提取，然后进行离心分离，将分离后的液体去除溶剂获得大豆异黄酮。
5.如权利要求4所述的从豆浆水一级浮渣中提取大豆异黄酮的方法，其特征是，纯化中，漩涡提取的时间为20~30 min，离心分离转速为1000~2000 r/min，离心分离时间为10~20 min。
6.一种权利要求1~5任一所述的从豆浆水一级浮渣中提取大豆异黄酮的方法在处理碱溶酸沉法制备大豆蛋白质工艺排出水中的应用。
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