CN101772580A - 专能细胞群的生产和使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明针对复能、多能和/或自我更新细胞的生成，它们能够在培养物中开始分化为多种细胞类型，并且能够在活体内进一步分化。本发明也针对可移植到患者的所要的、分化细胞群的生成，内源性细胞的基因修饰，以及患有通过这些方法可能减轻的疾病的患者的治疗。本发明也为预防、治疗或延缓免疫缺陷病毒(如HIV-1、HIV-2、SIV、FIV等)感染有关的疾病的方法。

Description

专能细胞群的生产和使用方法
相关申请的交叉引用
35 U.S.C.§371之下的该国内阶段申请是2008年5月28日提交的国际申请PCT/US2008/065007的35 USC§120的延续，并且在35 U.S.C.§119下对2007年5月29日提交的美国临时申请系列编号60/932,020、2007年6月5日提交的美国临时申请系列编号60/933,133、2007年6月8日提交的美国临时申请系列编号60/933,670、2008年1月14日提交的美国临时申请系列编号61/006,449，以及2008年3月25日提交的美国临时申请系列编号61/064,761要求权利，以上申请的全部内容以全文引用的方式并入本申请中。
发明背景
在二十一世纪，医学上的卓越挑战将是更换损坏、破旧或遗传受损的细胞。特异性结合到DNA上的转录因子在调控基因表达上发挥十分重要的作用。  正是单个细胞内的转录因子特殊补充决定了哪些细胞程序是活跃的，哪些是关闭的。  在这种能力中，转录因子在决定和维持细胞身份，以及决定细胞易损性发挥决定性作用。
发明摘要
由其他非多能、非自我更新细胞衍生的增殖、自我更新、专能和多能细胞群的能力可能会对利用细胞疗法的所有领域有重大积极的影响。  这些领域包括骨髓移植、输血医学和基因治疗，并使患者特异性的干细胞和其他所需的细胞类型的生产成为可能。  同样，能够启动细胞分化为神经、肌肉，以及其他各种细胞群的能力对并且将对涉及动物的医学和商业过程有重要价值。相应地，本发明提供了专能细胞群、多能细胞群、神经细胞群、肌肉细胞群和其他所所需的细胞群(如抗HIV细胞群)的遗传生产以及使用的方法。
本发明认为，特异性转录因子单独或与其他细胞命运决定子(如Notch、Numb和Numblike)的组合的高效导入和过表达，能启动被认为暂时的(专能、多能和/或自我更新)或固定的(分化的或体细胞的)细胞表型相互转换。可靠地诱导表型转换或细胞重编程的能力使得与各个患者相匹配的干细胞、替代细胞、组织和器官得以生产。与基因治疗技术和细胞培养技术联合使用，细胞类型相互转换也提供了适于移植的抗病和基因修复的细胞的生产。
本发明的一个目的是，提供在不使用致癌基因的情况下从分裂或非分裂细胞中产生增殖、自我更新、专能和/或多能细胞群以及其他所需细胞群的多种方式。分化细胞群由表达与特异性细胞类型分类相关的某些标记物，但不是所有标记物的细胞组成。本申请在此披露结合了其他转基因(特别是转录因子)的Numb亚型的适当表达，启动分裂、多能细胞群或分化细胞群的生产。另外，本发明的遗传载体可用于产生基因修饰(如患者基因产物表达不足)和瞬时或永久地进行内源性细胞增殖、自我更新、或干/祖细胞的细胞行为的活体诱导，特别是那些在组织中发现的通常不表现或不再表现此类行为的细胞。最后，本发明的其他遗传载体可用于产生基因修饰和/或在异常表现此类行为的细胞(如癌细胞)中阻断增殖、自我更新、或干/祖细胞行为。本发明的另一个目的是，提供能够表达预知可以减轻疾病过程的合成寡核苷酸序列的治疗载体和细胞。例如，本发明披露，使用合成寡核苷酸以减少危重HIV和其他免疫缺陷病毒感染、增殖和传播的基因表达。
本发明可用于一切合适的细胞，包括脊椎动物细胞，并且包括鱼类、哺乳动物、鸟类、两栖类和爬虫类细胞。
附图说明
图1.实施例13的载体序列对应的载体图谱示意图。
详细说明
本申请引用的所有专利、专利申请和出版物以全文的方式并入本文。正如本文所讨论的，“DNA”是指脱氧核糖核酸，“RNA”是指核糖核酸。正如本文所讨论的，“cDNA”是指互补DNA；“mRNA”是指信使RNA；“siRNA”是指小型干扰RNA；“shRNA”是指小型发卡RNA；“miRNA”是指微型RNA，例如单链RNA分子，长度通常为20-30个核苷酸，它们可以调控基因表达；“诱饵”和“诱饵RNA”和“核糖核酸诱饵”是指一个模仿的配体自然结合结构域的RNA分子。
正如本文所使用的，术语“改善”的含义包括减轻某种效果，或减少损害，或者尽量减少作用、活性或功能的效果或影响，以及包括，例如，减轻某种疾病或病症的有害作用。
正如本文所使用的，术语“延缓”的含义包括减缓或减轻某种效果或作用的进展，以及包括，例如，减缓疾病的进展，减缓感染率，或以其他方式减缓或减少某种疾病或病症的进展。
正如本文所使用的，“诱导剂”是帮助或单独促进某种作用的试剂。例如，影响启动子的某种外源性试剂(例如，通过启动或加强其活性，并且因此影响到启动子控制下某个基因的表达)，可以被称为诱导剂。例如，四环素可作为一种诱导剂，而强力霉素也可作为一种诱导剂。
当第一个核酸序列位于与第二个核酸序列功能关系时，核酸序列(例如，编码多肽的核酸序列)在术语上被称为“有表达关联性地连接”到另一个核酸序列(例如，启动子)。例如，如果启动子影响编码序列的转录或表达，那么启动子是有表达关联性地连接到一个编码序列。正如本文所使用的，术语“被驱动”是指有表达关联性地连接到一个启动子序列的基因或编码序列，而且启动子序列影响编码序列的转录或表达。
正如本文所使用的，“标记物”是一种分子，它可检测，或编码可检测分子，或作用于其他分子，使得标记物的存在可检测。“标记物蛋白”或“标记物多肽”是一种在实验室或临床环境中可检测，以及在具体实施方案中肉眼可检测的蛋白质或多肽。“标记物基因”编码标记物蛋白或标记物多肽。
正如本文所使用的，“HIV”是指人类免疫缺陷病毒，包括变体，如HIV-1、HIV-2。其他免疫缺陷病毒包括猴免疫缺陷病毒(SIV)和猫免疫缺陷病毒(FIV)。HIV有关的酶在术语上可被称为“艾滋病毒酶”，包括例如，整合酶、蛋白酶、逆转录酶和反式调节蛋白(TAT)。HIV感染被认为涉及在术语上被称为“HIV受体”的受体。可能存在多种此类受体，其中一些在术语上可被称为“HIV共受体”。正如本文所讨论的，HIV共受体包括CXCR4和CCR5。
本文描述了发明的具体实施方式的理论基础，然而，这种讨论不以任何方式对本发明进行约束或限制。所属领域的技术人员将了解本发明的各种具体实施方式可不考虑用于描述本发明理论基础的模型而进行实际操作。
在一个优选具体实施方式中，细胞“选自”可得到的、分裂或非分裂细胞群，用于生成所需的a)增殖、专能或多能细胞群，分化b)神经细胞群c)肌细胞，d)和/或任何其他所需的细胞群；另外，所需的细胞群能够在活体外、活体内进一步分化，和/或在活体内进行组织适合和局部适合的分化。
本发明所所选的细胞来源：所选的细胞可能包括在本发明中任何可操作的细胞。本发明所所选的细胞(本文在术语上称为“所选的细胞”)可能源于患者的内源性细胞——包括衍生自其他器官系统的细胞；或为外源(来源包括细胞系，冻存源、库存源和供体)。细胞也可能选自用合成或自然核酸序列进行基因修饰的细胞。本文所使用的术语“所选的细胞”不包括人胚胎干细胞。
在本发明的具体实施方式中，为了不使用侵入性程序将它们分离，所选的细胞将优选方便易得的细胞(如外周白细胞、循环造血干细胞、上皮细胞(如口腔面颊的细胞(如Michalczyk等，2004))、脂肪组织(如Gimble等，2007；Ma等，2007)、脐带血细胞(如Zhao等，2006；Tian等，2007)等)。然而，本发明也涉及了骨髓干细胞、精原细胞(如Guan等，2006；Takahashi等，2007)、原始生殖细胞(PGCs)、从羊膜分离的干细胞(如Ilancheran等，2007)、羊水(如De Coppi等，2007)，以及从皮肤分离的细胞(如Tumbar，2006；Dunnwald等，2001；Szudal′tseva等，2007)等。此类细胞可以以该项技术中已知的一切方式从其所在的组织中分离。
精原细胞可根据Percoll分离法用两步酶消化进行分离。然后，细胞可以重悬于最低必需培养基(MEM)，该培养基补充牛血清白蛋白直到终浓度为106/mL。详细说明：用手术取得精细管碎片并把它们撕碎，然后用1毫克/毫升胰蛋白酶、透明质酸酶和胶原酶，再在含0.10％碳酸氢钠、4mM L-谷氨酰胺、非必需氨基酸、40微克/毫升庆大霉素、100KJ至100微克/毫升青霉素、链霉素和15mM羟乙基哌嗪乙磺酸的最低必需培养基(MEM)中用1毫克/毫升透明质酸酶和胶原酶进行处理。精原细胞在30倍重力下离心与精细管碎片进一步分离。用77和/或55微米孔径的尼龙过滤器过滤收集细胞并装入不连续的Percoll密度梯度之上。洗涤并重悬纯度大于40％的祖细胞/干细胞/精原细胞的部分直到浓度相当于每毫升10个祖细胞/干细胞/精原细胞。然后，通过该项技术中的已知冻存技术收集和/或保存细胞。
所选的细胞可能是基因修饰的细胞，尤其已经用该项技术中的已知一切方式进行基因修饰的细胞，以编码治疗或商业用途的脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)序列。
根据本发明的一方面，提供了一种从所选的细胞中生产所要的细胞群的方法(如多能、神经、肌肉等)。
获得专能、多能和/或自我更新细胞群：
为了获得a)增殖、自我更新多能细胞，所选的细胞和/或其子代用核苷酸序列(包括编码哺乳动物的Numb基因的“长”(PRR插入+)亚型的那些核苷酸序列)转染。大约在同一时间，所选的细胞也可以用靶向短Numb亚型和Numblike的合成寡核苷酸转染，然后在促进所选的细胞以最佳的生长速率生长的条件下培养。所选的细胞在以上条件下培养足够的时间以得到所要的细胞数。这些细胞通过用白血病抑制因子(LIF)、干细胞因子和/或等效浓度的I1-6、超IL-6、IL-7、制瘤素-M和/或心肌营养素-1孵育所达到的(最佳)生长速率下生长；或其他生长增强细胞因子存在的情况下所达到的生长速率(如所描述的培养多能细胞的那些条件，如Guan等，2006)。生长速率是由所选细胞在所述的生长培养基中的倍增时间所决定的。同样，如在美国专利643271 1和5453357中所描述的培养条件也适于用长(PRR+)Numb亚型转染的细胞以最佳的生长速率增殖和扩展。其他适当的协议和参考细胞因子浓度已由Koshimizu等，1996；Keller等，1996；Piquet-Pellorce，1994；Rose et等，1994；Park和Han，2000；Guan等，2006；Dykstra等，2006；Zhang等，2007等学说中获得参考)。然而，本发明的实践不限于这些学说的细节。
在一个优选具体实施方式中，所选的细胞在标准生长培养基(如含有或不含有补充物(如谷氨酸和β-巯基乙醇)的最低必需培养基)中培养。培养基可能包含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、干细胞因子、白血病抑制因子(LIF)，和/或有白血病抑制因子活性的因子(如白血病抑制因子、白血病抑制因子受体(LIFR)、睫状神经营养因子(CNTF)、抑瘤素M(OSM)、抑瘤素M受体(OSMR)、心肌营养素、白细胞介素(IL)如IL-6、超IL-6、GP130等)以及马血清。白血病抑制因子(LIF)，以及其他有白血病抑制因子活性的因子阻止细胞的自发分化。在上述条件下，用PRR+Numb亚型和其子代转染所选的细胞有望可以获得专能性、多能性和/或自我更新。
在一个优选具体实施方式中，用编码“长”(PRR插入+)Numb亚型的核苷酸序列以及编码其他转基因的序列转染所选的细胞和/或其子代。下面列出了许多此类转基因，带有它们在NCBI序列数据库中的相应识别编号(登记编号)。
在另一个优选具体实施方式中，用编码“长”(PRR插入+)Numb亚型的核苷酸序列以及编码其他转基因的序列转染所选的细胞和/或其子代。下面列出了许多此类转基因，带有它们在NCBI序列数据库中的相应识别编号(登记编号)。在一个优选具体实施方式中，用长(PRR+)Numb亚型编码序列以及编码其他转基因(包括白血病抑制因子)的序列转染所选的细胞和/或其子代。
在一个优选具体实施方式中，用长(PRR+)Numb亚型编码序列以及编码其他转基因(包括有白血病抑制因子活性的转基因)的序列转染所选的细胞和/或其子代。在一个优选具体实施方式中，用长(PRR+)Numb亚型编码序列以及编码其他转基因(包括白血病抑制因子受体)的序列转染所选的细胞和/或其子代。
在一个优选具体实施方式中，用长(PRR+)Numb亚型编码序列以及编码其他转基因(包括抑瘤素M(OSM))的序列转染所选的细胞和/或其子代。
在一个优选具体实施方式中，用长(PRR+)Numb亚型编码序列以及编码其他转基因(包括抑瘤素M受体(OSMR))的序列转染所选的细胞和/或其子代。在一个优选具体实施方式中，用长(PRR+)Numb亚型编码序列以及编码其他转基因(包括心肌营养素-1)的序列转染所选的细胞和/或其子代。
在一个优选具体实施方式中，用长(PRR+)Numb亚型编码序列以及编码其他转基因(包括睫状神经营养因子(CNTF))的序列转染所选的细胞和/或其子代。
在一个优选具体实施方式中，用长(PRR+)Numb亚型编码序列以及编码其他转基因(包括OCT3/4和SOX2)的序列转染所选的细胞和/或其子代。
在一个优选具体实施方式中，用长(PRR+)Numb亚型编码序列以及编码其他转基因(包括NANOG、OCT3/4和SOX2)的序列转染所选的细胞和/或其子代。
在一个优选具体实施方式中，用长(PRR+)Numb亚型编码序列以及编码其他转基因(包括OCT3/4和SOX2以及一个有白血病抑制因子活性的转基因)的序列转染所选的细胞和/或其子代。在一个优选具体实施方式中，用编码编码其他转基因(包括OCT3/4和SOX2以及一个有白血病抑制因子活性的转基因)的序列转染所选的细胞和/或其子代。
在一个优选具体实施方式中，用长(PRR+)Numb亚型编码序列以及编码其他转基因(包括Notch(如Gaiano等，2000)的序列转染所选的细胞和/或其子代。
在一个优选具体实施方式中，用长(PRR+)Numb亚型编码序列以及编码其他转基因(包括OCT3/4、SOX2和Notch(如Notch 1和/或Notch 2)的序列转染所选的细胞和/或其子代。
在一个优选具体实施方式中，用长(PRR+)Numb亚型编码序列以及编码其他转基因(包括OCT3/4、SOX2、NANOG和Notch)的序列转染所选的细胞和/或其子代。
在一个优选具体实施方式中，用长(PRR+)Numb亚型编码序列以及编码其他转基因(包括OCT3/4、SOX2、NANOG和一个有白血病抑制因子活性的转基因)的序列转染所选的细胞和/或其子代。在一个优选具体实施方式中，用长(PRR+)Numb亚型编码序列以及编码其他转基因(包括OCT3/4、SOX2、NANOG和多个有白血病抑制因子活性的转基因)的序列转染所选的细胞和/或其子代。
在一个优选具体实施方式中，用长(PRR+)Numb亚型编码序列以及编码其他转基因(包括OCT3/4、Notch、HOXB4和SOX2)的序列转染所选的细胞和/或其子代。
与本文所述的有差异的其他基因组合可能被描述或发现，随着时间的推移，能够导致细胞变成多能、多能、能，能够自我更新，或开始分化。然而，本专利申请涉及了利用核酸或蛋白质电穿孔(参见Gagne等，1991；Saito等，2001；Yuan，2008；Huang等，2007；Xia和Zhang，2007；Cemazar和Sersa 2007；Isaka和Imai，2007；Luxembourg等，2007；VanTendeloos，2007；Takahashi，2007等)的一切有核细胞、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体等(参见Goldberg等，2007；Li等，2007)的此类“基因重编程”，和/或其他避免病毒整合或其他细胞基因组的随机改变的手段，因为此类手段提高了安全性和效率。当然，从随机改变的类别中排除涉及基因打靶和定点的手段，此类手段设计用于在基因组中导入或移除特定位置的DNA。
同样，本专利申请涉及了利用核酸或蛋白质电穿孔的一切有核细胞、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体等的此类“基因重编程”，和/或避免细胞基因组逆转录/慢病毒整合或其他的随机改变的其他手段，因为此类手段提高了安全性和效率。此类手段和方法包括该项技术中的已知手段和方法，并且在本发明中有可操作性。
在一个优选具体实施方式中，单个基因或其一部分所对应的核酸或蛋白(特别是本文所述的、根据本文所述的方法发现的、根据其他公开的方法发现的；或已知具有专能性、多能性或自我更新诱导)仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白。在一个优选具体实施方式中，单个基因或其一部分所对应的核酸或蛋白(特别是本文写出名称、根据本文所述的方法发现的、根据其他公开的方法发现的；或已知具有专能性、多能性或自我更新诱导)仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或避免细胞基因组逆转录/慢病毒整合或其他的随机改变的其他手段。
在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与单个基因或其一部分所对应的核酸或蛋白配合利用(特别是本文写出名称、根据本文所述的方法发现的、根据其他公开的方法发现的那些；或已知具有多能性、多能性或自我更新诱导)，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的。
在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与单个基因或其一部分所对应的核酸或蛋白配合利用(特别是本文写出名称、根据本文所述的方法发现的、根据其他公开的方法发现的；或已知具有专能性、多能性或自我更新诱导)，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的，并且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组逆转录/慢病毒整合或其他随机改变的手段。
在一个优选具体实施方式中，Nanog所对应的核酸或蛋白仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组逆转录/慢病毒整合或其他随机改变的手段。
在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与Nanog所对应的核酸或蛋白配合利用，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组病毒整合或其他随机改变的手段。
在一个单独的优选具体实施方式中，Oct4和Sox2所对应的核酸或蛋白仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组病毒整合或其他随机改变的手段。
在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与Oct4/Sox2所对应的核酸或蛋白配合利用，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组病毒整合或其他随机改变的手段。
在一个单独的优选具体实施方式中，长(PRR+)Numb亚型所对应的核酸或蛋白仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组病毒整合或其他随机改变的手段。
在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与长(PRR+)Numb亚型所对应的核酸或蛋白配合利用，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或避免细胞基因组病毒整合或其他的随机改变的其他手段。
在一个优选具体实施方式中，Nanog所对应的核酸或蛋白仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白。
在一个优选具体实施方式中，Nanog所对应的核酸或蛋白仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组逆转录/慢病毒整合或其他随机改变的手段。
在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与Nanog所对应的核酸或蛋白配合利用，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的。在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与Nanog所对应的核酸或蛋白配合利用，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组病毒整合或其他的随机改变手段。
在一个优选具体实施方式中，一个有白血病抑制因子活性的基因所对应的核酸或蛋白仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白。
在一个优选具体实施方式中，一个有白血病抑制因子活性的基因所对应的核酸或蛋白仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组逆转录/慢病毒整合或其他随机改变的手段。
在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与一个有白血病抑制因子活性的基因所对应的核酸或蛋白配合利用，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的。
在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与一个有白血病抑制因子活性的基因所对应的核酸或蛋白配合利用，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组病毒整合或其他随机改变的手段。
在一个优选具体实施方式中，Oct4所对应的核酸或蛋白仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白。
在一个优选具体实施方式中，Oct4所对应的核酸或蛋白仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组逆转录/慢病毒整合或其他随机改变的其他手段。
在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与Oct4所对应的核酸或蛋白配合利用，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的。
在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与Oct4所对应的核酸或蛋白配合利用，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组逆转录/慢病毒整合或其他随机改变的手段
在一个优选具体实施方式中，Sox2所对应的核酸或蛋白仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白。
在一个优选具体实施方式中，Sox2所对应的核酸或蛋白仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组逆转录/慢病毒整合或其他随机改变的手段。
在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与Sox2所对应的核酸或蛋白配合利用，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的。
在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与Sox2所对应的核酸或蛋白配合利用，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组病毒整合或其他随机改变的手段。
在一个优选具体实施方式中，Iin28所对应的核酸或蛋白仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白。
在一个优选具体实施方式中，Iin28所对应的核酸或蛋白仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生多能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组逆转录/慢病毒整合或其他随机改变的手段。
在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与Iin28所对应的核酸或蛋白配合利用，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组病毒整合或其他随机改变的手段。
在一个优选具体实施方式中，c-myc所对应的核酸或蛋白仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白。在一个优选具体实施方式中，c-myc所对应的核酸或蛋白仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组逆转录/慢病毒整合或其他随机改变的手段。在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与c-myc所对应的核酸或蛋白配合利用，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的。
在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与c-myc所对应的核酸或蛋白配合利用，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组病毒整合或其他随机改变的手段。在一个单独的优选具体实施方式中，Oct4和Sox2所对应的核酸或蛋白仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白。
在一个单独的优选具体实施方式中，Oct4和Sox2所对应的核酸或蛋白仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组逆转录/慢病毒整合或其他随机改变的手段。
在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与Oct4和Sox2所对应的核酸或蛋白配合利用，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的。
在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与Oct4和Sox2所对应的核酸或蛋白配合利用，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组逆转录/慢病毒整合或其他随机改变的手段。
在一个单独的优选具体实施方式中，长(PRR+)Numb亚型所对应的核酸或蛋白仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白。
在一个单独的优选具体实施方式中，长(PRR+)Numb亚型所对应的核酸或蛋白仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组逆转录/慢病毒整合或其他随机改变的手段。
在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与长(PRR+)Numb亚型所对应的核酸或蛋白配合利用，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的。
在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与长(PRR+)Numb亚型所对应的核酸或蛋白配合利用，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组逆转录/慢病毒整合或其他随机改变的手段。
在一个单独的优选具体实施方式中，Oct4、Sox2和Nanog所对应的核酸或蛋白仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白。
在一个单独的优选具体实施方式中，Oct4、Sox2和Nanog所对应的核酸或蛋白仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组逆转录/慢病毒整合或其他随机改变的手段。
在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与Oct4、Sox2和Nanog所对应的核酸或蛋白配合利用，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的。
在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与Oct4、Sox2和Nanog所对应的核酸或蛋白配合利用，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或另一种避免细胞基因组逆转录/慢病毒整合或其他随机改变的手段。
在一个单独的优选具体实施方式中，长(PRR+)Numb亚型所对应的核酸或蛋白仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白。
在一个单独的优选具体实施方式中，长(PRR+)Numb亚型所对应的核酸或蛋白仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以产生专能、多能和/或自我更新的细胞的核酸或蛋白，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或避免细胞基因组逆转录/慢病毒整合或其他的随机改变的其他手段。
在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与长(PRR+)Numb亚型所对应的核酸或蛋白配合利用，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的。
在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与长(PRR+)Numb亚型所对应的核酸或蛋白配合利用，只要专能、多能和/或自我更新的细胞群是由所选的细胞中产生的，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或避免细胞基因组逆转录/慢病毒整合或其他的随机改变的其他手段。
应了解，本文所述的核酸或蛋白序列的任何组合在获得所要的细胞群或完成其行为时可以通过排除Numb和/或Numblike所对应的序列进行修饰。
相似地，应了解，本文所述的启动分化的方法适用于一切诱导的或非诱导的专能、多能或自我更新的干细胞、其他祖细胞，或其他所选的细胞，不止是如本文所述的方式获得的细胞。应了解，本文所述的核酸或蛋白序列的任何组合在获得所要的细胞群时可以通过排除Numb和/或Numblike的核酸序列或蛋白进行修饰。
在另一个具体实施方式中，本文所述的多种核酸或蛋白组合排除Numb和/或Numblike亚型所对应的核酸或蛋白使用。
在一个优选具体实施方式中，所选细胞和/或其子代是事先已经进行基因修饰的细胞。
在一个优选具体实施方式中，本文所述的转染步骤表示瞬时转染。在一个进一步优选具体实施方式中，这种瞬时转染是通过未整合到宿主基因组中的病毒载体完成的。
在另一个具体实施方式中，这种瞬时转染是通过标准转染技术(电穿孔、化学介导转染、融合或非融合脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体)完成的。随着时间的推移，与本文所述的有差异的其他基因组合可能被描述或发现，能够导致细胞变成专能、多能、能，能够自我更新，或开始分化。然而，本专利申请也涉及了利用核酸或蛋白质电穿孔的一切有核细胞(如方法参见Gagne等，1991；Saito等，2001；Yuan，2008；Huang等，2007；Xia和Zhang，2007；Cemazar和Sersa 2007；Isaka和Imai，2007；Luxembourg等，2007；Van Tendeloos，2007；Takahashi，2007等)电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体的“基因重编程”，和/或其他避免病毒整合或其他细胞基因组的随机改变的手段，因为此类手段提高了安全性和效率。
在另一个优选具体实施方式中，用长(PRR+)Numb亚型编码序列进行的转染(和/或靶向Numblike和短Numb亚型的合成寡核苷酸)是伴随着其他序列瞬时或永久的转染或由此类转染所取代，此类序列包括选自编码人类白血病抑制因子(如Du和Shi，1996年)、抑瘤素-M、心肌营养素-1、IL-11、IL-6、IL6R、超IL-6和LIFR、gp130、OCT3(OCT4)、Nanog、SOX2和/或FGF-4。用以上列出的这些不同的转基因序列的任何子集的同步转染可以通过该项技术中的已知一切方式完成，包括使用单基因载体、多基因载体、连续转染和基于不同的标记物蛋白和/或抗生素耐药性的选择。
在另一个优选具体实施方式中，用长(PRR+)Numb亚型转染的细胞置于促进最佳生长速率的细胞培养物中培养，如上所述，而且包括EGF、bFGF、抑瘤素、人类白血病抑制因子(如Du和Shi，1996年)、干细胞因子、IL-11、心肌营养素-1、IL-6、超IL-6、CNTF和/或可溶性gp130。
潜能和分化的评估
专能性和多能性可以通过该项技术的已知一切方式评估，包括1)移植，2)在促进促进胚体形成的条件下培养，3)细胞注射入后来发育的动物囊胚期胚胎，4)对分化、专能性、多能性等相关的基因表达的RNA表达分析(如RT-PCR和基于分析的微阵列)(参见Guan等，2006年)，5)集落形成，以及胚胎干样形态。本文所披露的在所选的细胞和/或其子代检测多能性的一种手段涉及了用一个由Nanog启动子有表达关联性地连接到一个荧光蛋白基因组成的报告基因进行的转染。这使得使用荧光活化细胞分选(FACS)等技术对Nanog表达细胞进行鉴定和富集成为可能。
在一个优选具体实施方式中，单独用编码长(PRR+)Numb亚型的基因载体或与本文所述的其他转基因合用在活体内转染内源性细胞(如烧伤或损伤部位周围的细胞)以瞬时促进更新或增加的细胞增殖。这种手段也可以在临床上用于发育不全的组织，干/祖细胞异常枯竭的疾病，以及该手段可证明是有益的其他疾病。
获得分化细胞群
为了获得b)神经c)肌肉d)和能够在活体内进一步进行受环境调调控的分化的其他细胞群，所选的细胞和/或其子代可选用长(PRR+)Numb亚型序列和/或合成寡核苷酸序列转染，并通过在体外生长足够长的时间进行扩增以达到所要的细胞子代数(如上所述)。在该可选步骤之后，所选的细胞和/或其子代用不含细胞因子和扩增/最佳生长培养基的试剂洗涤，然后可选用编码Numblike基因和/或“短”(PRR-)Numb亚型的核苷酸序列和/或靶向长(PRR+)亚型的合成寡核苷酸转染(如Zaehres等，2005)，然后在促进所选的细胞向所要的细胞类型分化的条件下培养。
在大多数情况下，细胞然后在存在5-10％胎牛血清和促进所选的细胞和/或其子代向所要的细胞群分化的试剂下培养。胎牛血清和试剂的存在为生长或增殖提供的速率小于最佳(或扩增)生长速率，而且有利于细胞向所要的细胞群分化。根据如下所述的所要的细胞群选择试剂和精确的培养条件。
获得神经元或神经细胞群
当所要的细胞群是神经细胞群时，成功转染的细胞在小于最佳(或扩展)生长速率的促进生长的速率的条件下和促进细胞向神经细胞分化的试剂存在的情况下培养。促进细胞向神经元分化的条件已经在大量的出版物中有描述，包括(Benninger等，2003；Chung等，2005；Harkany等，2004；Ikeda等，2004；Ikeda等，2005；Wernig等，2002；和Wernig等，2004)。另外，视黄酸暴露结合额外的细胞因子的存在有利于特定的神经元细胞类型在活体外分化(如Soundararajan等，2006；Soundararajan等，2007；美国专利6432711)。
在一个优选具体实施方式中，神经元或神经细胞在活体外的分化发生在50ng/mL神经生长因子(NGF)存在的情况下。
在一个优选具体实施方式中，当一个神经元群是所要的神经元群时，用编码短Numb亚型(和/或Numblike)的序列转染是伴随着其他序列瞬时或永久的转染或由此类转染所取代，这些序列选自编码Nurr1、REN、Neurogenin1、Neurogenin2、Neurogenin3、Mash1、Phox2b、Phox2a、dHand、Gata3、Shh、FGF8、Lmx1b、Nkx2.2、Pet1、Lbx1和/或Rnx其中。
在另一个优选具体实施方式中，当多巴胺能神经元是所要的神经元群时，用编码短Numb亚型(和/或Numblike)的序列转染是伴随着其他序列瞬时或永久的的转染或由此类转染所取代，这些序列选自编码Mash1、Ngn2、Nurr1、Lmx1b和/或Ptx-3。
在另一个优选具体实施方式中，当5-羟色胺能神经元是所要的神经元群时，用编码短Numb亚型(和/或Numblike)的序列转染是伴随着其他序列瞬时或永久的转染或由此类转染所取代，这些序列选自编码Mash1、Phox2b、Lmx1b、Nkx2.2、Gata2、Gata3和/或Pet1。
在另一个优选具体实施方式中，当胆碱能神经元是所要的神经元群时，用编码短Numb亚型(和/或Numblike)的序列转染是伴随着其他序列瞬时或永久的转染或由此类转染所取代，这些序列选自编码MASH1、Phox2a和/或RKST4。
在另一个优选具体实施方式中，当GABA能神经元是所要的神经元群时，用编码短Numb亚型(和/或Numblike)的序列转染是伴随着其他序列瞬时或永久的转染或由此类转染所取代，这些序列选自编码MASH1、Phox2a和/或RKST4，然后可选择在补充有白血病抑制因子、神经营养因子3(NT3)和/或神经生长因子(NGF)的培养基中培养。
在另一个优选具体实施方式中，当去甲肾上腺素能神经元是所要的神经元群时，用编码短Numb亚型(和/或Numblike)的序列转染是伴随着其他序列瞬时或永久的转染或由此类转染所取代，这些序列选自编码Mash1、dHand、Phox2a、Phox2b、Gata2和/或Gata3。
在另一个优选具体实施方式中，当GABA能神经元是所要的神经元群时，用编码短Numb亚型(和/或Numblike)的序列转染是伴随着其他序列瞬时或永久的转染或由此类转染所取代，这些序列选自编码P1TX2、D1x2、D1x5、反义Hes1 RNA和/或其他靶向HES1的合成寡核甘酸。
在另一个优选具体实施方式中，当GABA能神经元是所要的细胞群时，用编码短(PRR-)Numb亚型(和/或Numblike)的序列转染的细胞在促进分化的细胞培养基中培养，例如上文所述，并且包含以下试剂中的一种或多种：视黄酸、NT3、神经生长因子、胶质细胞源性生长因子(GDNF)和干扰素-γ(IFN-γ)。
获得肌细胞群
当所要的细胞群是肌细胞群时，成功转染的细胞在促进细胞向肌细胞分化的试剂中培养，并以小于最佳生长速率的速率生长。促进向肌细胞分化的条件也在先前有描述(Nakamura等，2003；Pal和Khanna，2005；Pipes等，2005；Albilez等，2006年；Pal和Khanna，2007年；Behfar等，2007；美国专利6432711)。另外，所选的细胞和/或它们的后代暴露于含细胞因子的六亚甲基双丙烯酰胺或二甲基亚砜溶液中有利于启动活体外肌肉类型分化。
在另一个优选具体实施方式中，当心肌细胞群是所要的细胞群时，用短(PRR-)Numb亚型(和/或Numblike)转染的细胞在促进向心肌细胞分化的细胞培养基中培养(He等，2003；Guan等，2007等)，或包括促进心肌细胞分化的浓度的特定试剂(如0.75％-1％二甲基亚砜(DMSO)，20％正常牛血清(NBS)，10(-7)mM维甲酸(RA)和20％心肌细胞调整的培养基(Hua等，2006)。
在另一个优选具体实施方式中，当心肌细胞群是所要的细胞群时，细胞也可用核苷酸序列转染，这些序列选自编码Gata 4、Gata 5和Gata 6。
在一个优选具体实施方式中，当肌细胞群是所要的细胞群时，用编码短Numb亚型(和/或Numblike)的序列转染是伴随着其他序列瞬时或永久的转染或由此类转染所取代，这些序列选自编码肌肉类型特异性bHLH编码序列、MyoD、肌细胞生成素、Myf5、Myf6、MEF2、心肌蛋白、Ifrd1和/或其他肌肉转录因子。
在另一个优选具体实施方式中，当平滑肌细胞群是所要的细胞群时，用编码短Numb亚型(和/或Numblike)的序列转染是伴随着其他序列瞬时或永久的转染或由此类染所取代，这些序列选自编码肌肉类型特异性心肌蛋白核苷酸序列。
在另一个优选具体实施方式中，当骨骼肌细胞群是所要的细胞群时，用编码短Numb亚型(和/或Numblike)的序列转染是伴随着其他序列瞬时或永久的转染或由此类转染所取代，这些序列选自编码肌肉类型特异性MyoD和肌细胞生成素核苷酸序列。
在另一个优选具体实施方式中，当Oligodensrocyte细胞群是所要的细胞群时，用编码短Numb亚型(和/或Numblike)的序列转染是伴随着其他序列瞬时或永久的转染或由此类转染所取代，这些序列选自编码Oligodensrocyte特异性OLIG1、OLIG2和Zfp488核苷酸序列。
用以上列出的这些不同的转基因序列的一切子集的同步转染可以通过该项技术中的已知任何方式完成，包括使多基因载体、序列转染和基于不同的标记物蛋白和/或抗生素耐药性的选择。当所要的细胞群是造血细胞群时，分化培养基包括促进向造血祖细胞分化的浓度的特异性试剂(如血管内皮生长因子(VEGF)、血小板等(如Ohmizono，1997；Wang等，2005；Srivastava等，2007；Gupta等，2007)，或分化的造血细胞类型(根据该项技术中的已知方法从未分化的或多能细胞中提供分化的造血细胞类型)。
当所要的细胞群是精细胞群时，分化培养基包括促进向精细胞分化的浓度的特异性试剂(如Nayernia等，2006a，2006b)。
在一个优选具体实施方式中，所选的细胞和/或其子代的分化可能发生在不存在用Numblike、短Numb亚型或其他转基因的转染的分化培养基中，尽管分化培养基可能未改变。
在具体实施方式中，在可调控的启动子(如四环素调节的启动子)调控下将使用到单个载体，该载体控制编码哺乳动物的Numb基因(和/或靶向Numblike和短Numb亚型的合成寡核苷酸)的“长”(PRR+)亚型的核苷酸序列表达，而Numblike和短Numb亚型(和/或靶向长(PRR+)亚型的合成寡核苷酸)在另一个不同的，但也是可调节的启动子的控制下表达。因此，当所选的细胞将要扩增并且生长培养基中添加了一种诱导剂(四环素)时，长(PRR+)亚型可以得到表达(和/或短亚型得到表达)；然后，当分化将要进行时，Numblike和短亚型可以得到表达(和/或长(PRR+)亚型得到表达)。
或者，本文所列的Numb亚型、Notch、OCT3/4、SOX2和其他DNA序列所对应的蛋白和多肽可能以和所选的细胞和/或它们的后代相类似的方式通过电穿孔(如Koken等，1994；Ritchie和Gilroy，1998)，使用纳米颗粒、阳离子脂质、融合脂质体(如Yoshikawa等，2005；2007)等以代替，或与基因转染结合应用于所选的细胞和/或其子代。通常电穿孔可以得到高转染效率(和所要的细胞高效生产)而不带将转基因整合到基因组上，并且因此可导致安全性增加。编码促进所选的细胞的增殖、专能性、多能性或分化的蛋白或多肽的DNA或RNA可以根据标准基因工程技术分离(如从特定细胞系的cDNA文库分离此类DNA)，并将其放入一个合适的表达载体，然后将其转染到所选的细胞。在另一个优选具体实施方式中，当内胚层和胰岛细胞群是所要的细胞群时，而且用编码短Numb亚型(和/或Numblike)的序列转染是伴随着其他序列瞬时或永久的转染或由此类转染所取代，这些序列选自编码Foxa2、Sox17、HLXB和/或Pdx1。
在另一个优选具体实施方式中，肝细胞群是所要的细胞群，而且用编码短Numb亚型(和/或)的序列转染是伴随着其他序列瞬时或永久的转染或由此类转染所取代，这些序列包括选自编码肝细胞核因子(HNF)-1、IINF-3、IINF-4、HNF-6和结合蛋白其中之一。
在另一个优选具体实施方式中，造血细胞群是所要的细胞群，而且用编码短Numb亚型(和/或Numblike)的序列转染是伴随着其他序列瞬时或永久的转染或由此类转染所取代，这些序列选自编码Runx1/AML1和NOV(CCN3)结合蛋白，和/或所要的细胞群特异性集落刺激因子存在的细胞培养物。当需要植入时，导入Runx1/AML1，当需要分化时，导入b亚型(Creemers等，2006)。
在另一个优选具体实施方式中，软骨细胞群是所要的细胞群，而且用编码短Numb亚型(和/或Numblike)的序列转染是伴随着其他序列瞬时或永久的转染或由此类转染所取代，这些序列选自编码Sox9、CREB结合蛋白、Gataó和/或Runx2。
在另一个优选具体实施方式中，骨细胞(尤其是成骨细胞)群是所要的细胞群，而且用编码短Numb亚型(和/或Numblike)的序列转染是伴随着其他序列瞬时或永久的转染或由此类转染所取代，这些序列包括编码Runx2。
在一个优选具体实施方式中，编码长Numb亚型(如上所述的那些)的基因载体瞬时导入或在以可调节的启动子的控制下在活体内导入内源性细胞，以造成那些细胞瞬时增殖。
在一个优选具体实施方式中，单独用编码最短的Numb亚型或Numblike蛋白的基因载体或与本文所述的其他转基因合用在活体内转染内源性细胞(如中枢神经系统的室管膜区细胞)，以瞬时或永久地促进更新或增加分化(特别是神经元分化)和中枢神经系统中的祖细胞/室管膜细胞迁移)。根据表明与分化相关的标记物起始表达的细胞数，对这种更新或增加进行测定。这可通过使用该用途适合的方法将遗传载体导入到器官系统中来完成(参见实例)。在一个优选具体实施方式中，用编码长Numb亚型的基因载体或与本文所述的其他转基因在活体内转染内源性细胞(如中枢神经系统的室管膜区细胞)，以瞬时或永久地促进更新或增加干细胞增殖(附带随后子代细胞的分化)。从表明与分裂祖细胞相关的标记物新发表达的细胞数出发，测定更新或增加。这可能通过使用该用途适合的方法将遗传载体导入到器官系统中来完成(参见实施例)。
同样，这种手段也适用于在其他组织(如皮肤等)的其他干细胞群中诱导更新或增加的分化。这种手段可以在临床上用于，例如，中枢神经系统损伤，正常分化或迁移不足造成的其他组织的疾病，这种手段有益的发育不良症和其他疾病。
在一个优选具体实施方式中，单个基因或其一部分所对应的核酸或蛋白(特别是本文所述的、根据本文所述的方法发现的、根据其他公开的方法发现的那些；和/或已知能够启动所要的分化方式)仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以启动所选的细胞分化的核酸或蛋白。
在一个优选具体实施方式中，单个基因或其一部分所对应的核酸或蛋白(特别是本文所述的、根据本文所述的方法发现的、根据其他公开的方法发现的那些；和/或已知能够启动所要的分化方式)仅是来自所选的细胞中过表达和/或导入以启动所选的细胞分化的核酸或蛋白，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或避免细胞基因组病毒整合或其他的随机改变的其他手段。在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与单个基因或其一部分所对应的核酸或蛋白配合利用(特别是本文写出名称、根据本文所述的方法发现的、根据其他公开的方法发现的那些；和/或已知能够启动所要的分化方式)，只要分化细胞群是由所选的细胞中产生的。
在一个单独的优选具体实施方式中，其他核酸或蛋白可以与单个基因或其一部分所对应的核酸或蛋白配合利用(特别是本文写出名称、根据本文所述的方法发现的、根据其他公开的方法发现的那些；和/或已知能够启动所要的分化方式)，只要分化细胞群是由所选的细胞中产生的，而且所使用的方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或避免细胞基因组逆转录/慢病毒整合或其他的随机改变的其他手段。
应了解，本文所述的核酸或蛋白序列的任何组合可以排除Numb和/或Numblike修饰的那些，只要获得所要的细胞群或行为。
相似地，应了解，本文(或其他任何地方)所述的启动分化的方法适用于一切诱导的或非诱导的多能、多能或自我更新的干细胞，或其他所选的细胞，不止如本文所述的方式获得的那些。所选细胞来源所选的细胞群可能衍生自多种干细胞、祖细胞和体细胞。然而，特别排除缺乏细胞核的体细胞(如成熟的人红细胞)。所选的细胞群可能衍生自现有的细胞系或分离自储存、库存或冻存源。干细胞的典型来源包括骨髓、外周血、胎盘血、羊水(如De Coppi等，2007)、脐带血(如Zhao等，2006；Tian等，2007)、脂肪组织(如Gimble等，2007；Ma等，2007)和非人类胚胎等。循环白细胞和其他非干细胞同样可能被选中并在如上所述的相同培养条件下培养，因此它们有效地获得专能性、多能性和/或自我更新。本发明中有用的其他可获得的体细胞的实施例包括淋巴细胞和上皮(如脸颊)细胞。本发明中所选用的细胞的分离和收集可通过该项技术中的已知一切方法进行。
在涉及动物的具体实施方式中，也披露了从前列腺、睾丸，胚胎大脑和肠分离得到的干细胞作为所选的细胞的优选来源。
在一个优选具体实施方式中，所选的细胞和/或其子代以三维形式培养。
本发明的进一步目的是为患者兼容和患者特异性组织和器官的生产提供细胞，以对被视为需要此类器官或组织的患者进行移植。本文披露由本文所述的方法(或类似方法)所提供的多能、专能和/或分化细胞可以和旨在此类器官和/或组织的生产的技术一同使用(如Boland等，2006；Xu等，2006；Campbell和Weiss，2007)。本发明专门涉及了此类利用。例如，根据本文所述的方法(或其他公开的方法)生产或处理的多能、专能和/或分化细胞可与三维或二维支架相关联生长，此类支架设计成用来复制正常组织结构和/或器官结构。(Yarlagada等，2005；Kim等，1998；WO/2003/070084；EP1482871；WO03070084；美国专利2395698；7297540；6995013；6800753；Isenberg等，2006)。相似地，将被多能、专能和/或分化细胞占据的支架可能衍生自尸体器官或组织，这发生在尸体的器官或组织(如骨骼、心脏、肾、肝、肺等)可能被以如下的方式处理之后：宿主免疫细胞存在于该组织，并且除去其他不需要的或附属宿主细胞(如通过电离辐射、灭菌(如Mroz等，2006)，和/或不同的脱细胞方法(美国专利6734018；6962814；6479064；6376244；美国专利编号5032508；4902508；4956178；5281422，5554389；6099567；和6206931；4361552和6576618；6753181；美国申请系列编号11/162,715；WO/2001/048153；WO/2002/024244；WO003002165；WO/2001/049210；WO/2007/025233；欧洲专利EP1482871；EP1246903；EP1244396；EP0987998；EP1244396；EP1333870；Rieder等，2004；Ott等，2008；Taylor等，1998))。
同样，可以预计本发明的多能、专能和/或分化细胞可用于利用喷墨风格打印进行组织工程(如Boland等，2006；Xu等，2006；Campbell等，2007)的应用中。因此，涉及了根据本文所述的方法生产或处理的细胞的此类用途。
在另一个优选具体实施方式中，所选的细胞和/或其子代以悬滴法培养。
根据本发明的另一方面，所选的细胞可事先进行基因修饰。根据本发明的另一方面，所选的细胞可用编码促进细胞向所要的细胞群分化的蛋白或多肽的DNA或RNA进行修饰。
筛选细胞群
在一个具体实施方式中，本发明的方法包括筛选来自细胞系、供体来源、脐带血、和自体或供体骨髓、血液、精原细胞、原始生殖细胞、面颊细胞，或本发明有效的任何其他细胞来源的细胞。可以筛选所选的细胞以确定用有益的序列或治疗载体的成功转染以及该项技术中的已知任何方法分化的成功启动(Guan等，2006；美国专利6,432,711)。在一些具体实施方式中，通过标准PCR和基于核酸杂交的方法或使用快速分型法筛选所选的细胞。在具体实施方式中，根据报告基因的表达筛选细胞。在一些具体实施方式中，通过转基因表达载体(例如，抗生素耐药性基因或荧光蛋白(如GFP)基因)编码的标记基因的表达筛选细胞。
治疗载体和有益序列细胞的筛选可以在有益序列和治疗载体存在的情况下，使用该项技术中的任何已知特异性序列检测的方法筛选。每一个细胞样本可以用多种序列同时筛选。或者，可以同时筛选多个样本。
可以通过多种方法监测细胞分化：包括：(1)形态评估，(2)利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Northern杂交，或微阵列技术以监测基因表达的变化，(3)分析特异性标记物的细胞表达，如β微管蛋白III(对神经元)等(Ozawa等，1985)。在一些具体实施方式中，使用基于细胞类型特异性标记物或转基因标记物的表达(如抗生素耐药性或荧光蛋白的表达)的荧光活化细胞(FACS)分选筛选细胞，筛选这些细胞用于进行成功的分化启动，这是在细胞类型特异性启动子的控制下完成的，例如，肌细胞中的肌球蛋白启动子；人心脏α肌动蛋白中的心肌细胞启动子；胰岛素生成细胞中的胰岛素启动子；用于神经元分化的神经元特异性烯醇化酶(NSE)，或神经递质有关的启动子，如在多巴胺能神经元中的酪氨酸羟化酶启动子等)。在一些具体实施方式中，通过标准PCR和基于核酸杂交的方法筛选所选的细胞。在一个特别优选的具体实施方式中，通过快速分型法筛选所选的细胞。筛选人类白细胞抗原(HLA)类型
在某些具体实施方式中，根据相容的HLA分型选择所选的细胞。所属领域的技术人员已知的任何方式确定HLA基因型。
用于筛选的细胞可能包括直接从供体身上采集的细胞，或来自供体细胞建立的细胞系或其他可行的细胞来源。可以针对有益序列，和/或治疗载体和HLA类型一次性或分开筛选细胞。成功转染上有益序列并表现出恰当的HLA基因型的细胞，可对其进行制备用于移植到患者体内。
在某些具体实施方式中，转染的细胞被移植，而不进行HLA分型。在其他具体实施方式中，细胞进行HLA分型以确定相容性。
筛选促进细胞表现型的试剂
本发明也提供了筛选蛋白和试剂的方法，以确定它们诱导所选的细胞和/或其子代表现型变化或向所要的细胞群分化的能力。简而言之，将合适的cDNA文库中编码互补DNA(cDNA)的载体转染到所选的细胞和/或其子代中。一旦识别出诱导分化或其他表现型变化的特异性cDNA，该cDNA可以分离并且克隆到合适的表达载体中，以在活体外在合适的细胞(如COS细胞)中产生蛋白。然后，含有上清的蛋白可以应用于所选的细胞培养物中，以确定是否有从此类细胞中分泌出任何蛋白诱导分化。或者，候选试剂可以应用于所选的细胞培养物中，以确定是否有从此类细胞中分泌任何蛋白诱导分化(参见美国专利6432711)。本发明也提供了筛选核酸的方法，以确定它们诱导专能性、多能性和/或自我更新，或启动所选的细胞和/或其子代分化的能力。在这些方法中，使用电穿孔、纳米胶囊、纳米穹隆体、脂质体、逆转录病毒、慢病毒，和/或任何其他可行的转染方法将编码所选cDNA(或来自合适的cDNA文库或其他序列的cDNA)的载体导入到所选的细胞和/或其子代。一旦识别出诱导基因型变化、专能性、多能性和/或自我更新的特异性cDNA，该cDNA可能分离并且克隆到一个合适的表达载体上。确定此类变化的分析方法包括在本文别处所述的内容。同样，被识别出的cDNA所对应的蛋白可能在活体外在合适的细胞(如COS细胞)中产生，以确定含有上清的蛋白是否能用于所选的细胞培养物，并且诱导所要的变化。
最后，可能使用电穿孔、纳米胶囊、纳米穹隆体、脂质体、逆转录病毒、慢病毒，和/或任何其他可行的转染方法将蛋白导入到所选的细胞和/或其子代，并且如本文所述评估所生成细胞的专能性、多能性、自我更新或分化启动。
将细胞移植到患者体内
筛选之后，所选的细胞和/或其子代可进行冻存，作为细胞系进行保持培养，或可施用于患者。所选的细胞可以用该项技术中的已知任何方式进行冻存或保持培养中，并保存以备用于未来的移植程序。
待筛选的细胞更倾向于取自便于收集的可获得来源。
关于生产耐HIV细胞：本发明的目标体细胞和干细胞可以是任何类型的能分化为可被HIV感染、可保持HIV的转录和/或复制、可改变HIV免疫应答或可延缓AIDS病进展的细胞。此类干细胞包括但不仅限于，衍生自精原细胞、原始生殖细胞、造血干细胞、外周血细胞、胎盘血细胞、羊水细胞、脐血细胞、面颊细胞、脂肪组织细胞(包括由那些组织衍生的干细胞)、重编程细胞、受诱导的专能细胞、受诱导的多能细胞等、非人类胚胎，和/或可形成血细胞和免疫细胞任何其他细胞类型、HIV靶细胞和其他细胞的多能细胞。
表达“有益序列”的治疗载体的用途是降低转染或感染细胞保持HIV复制和转录的能力。在本文中，表达“有益序列”的基因载体以及任何衍生自此类基因载体的任何病毒在术语上被称为“治疗载体”。
筛选过后，用所要的治疗载体和表达有益序列(带或不带相容的HLA表现型)转染的细胞可使用标准方法在活体外扩增以培养分裂细胞，并作为稳定的细胞系进行保持(美国专利6432711和5453357以引用的方式并入本文)。或者，这些细胞可以施用于患者并在活体内扩增。
所选的细胞可以用该项技术中的已知任何方式被冻存并保存以备用于未来的移植程序。
移植所要的细胞群到患者体内
在某些具体实施方式中，在移植之前要浓缩细胞群以得到干细胞。多种选取干细胞的方法是在该领域已为人熟知。例如，可以通过使用荧光标记单克隆抗体富集细胞样本，该单抗识别未分化的造血干细胞(如CD34、CD59、Thyl、CD38 low、C-kit low、lin-minus)细胞表面的标记用于进行荧光活化细胞分选(FACS)。在其他具体实施方式中，所选的细胞的一个样本未经富集而进行了移植。
在一些具体实施方式中，在移植治疗干细胞之前，骨髓内源性干细胞被消除或减少。治疗干细胞被定义为含有有益序列或治疗载体的那些干细胞。在一些具体实施方式中，移植过程可能涉及以下阶段：
(1)调整，(2)干细胞注入，(3)中性粒细胞阶段，(4)移植阶段，以及(5)植入后阶段。
在一些具体实施方式中，在移植之前，消除或减少正常产生所要的细胞(如骨髓干细胞)的内源性干细胞。化疗、放疗等，和/或类似于在美国专利6,217,867中所述的那些方法可用于调整骨髓以进行恰当的移植。最后，治疗干细胞可使用该项技术中的已知任何方法移植到患者中。
Numb/Numblike和其他转基因的编码载体的设计
在一个具体实施方式中，用编码Numblike/Numb亚型的核酸序列的转染是通过病毒转染完成的。术语“编码Numb/Numblike的载体”是指整合到编码Numblike/Numb亚型的核酸序列和靶向Numblike和短Numb亚型的合成寡核苷酸，和任何其他转基因序列、合成寡核苷酸等的载体，以及整合到这些载体序列上的任何相关的病毒上清。
编码Numb/Numblike的载体可能包括一个表达载体。合适的表达载体是可用于转染DNA或RNA到真核细胞的一类载体。此类载体包括但不仅限于，原核载体，如细菌载体；真核载体，如，酵母载体和真菌载体；以及病毒载体，例如，但不仅限于腺病毒载体、腺相关病毒载体和逆转录病毒载体。可应用的逆转录病毒载体的实施例包括但不仅限于，衍生自鼠白血病病毒、鼠类肉瘤病毒和劳斯肉瘤病毒、猫免疫缺陷病毒(FIV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)，猴免疫缺陷病毒(SIV)和杂合载体。
本文披露Numb/Numblike编码载体可用于在活体外和/或活体内转染细胞。可以通过该项技术中的已知任何方法进行转染，尤其是通过由病毒包装细胞产生的病毒。该病毒可进行壳体包裹，使其能够感染多种细胞类型。然而，任何使所选的细胞类型和/或其子代得以感染的壳体包裹技术在本发明的情况下是可行的。
人类免疫缺陷病毒(HIV)基因治疗载体的设计
“治疗载体”可整合一个表达载体。合适的表达载体是可用于转染DNA或RNA到白细胞的那些载体。此类载体包括但不仅限于，原核载体，如细菌载体；真核载体，如，酵母载体和真菌载体；以及病毒载体，例如，但不仅限于腺病毒载体、腺相关病毒载体和逆转录病毒载体。可应用的逆转录病毒载体的实施例包括但不仅限于，由鼠白血病病毒、鼠类肉瘤病毒和劳斯肉瘤病毒、猫免疫缺陷病毒(FIV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)，猴免疫缺陷病毒(SIV)和杂合载体。
本文披露治疗载体可用于在活体外和/或活体内转染靶细胞。可以通过该项技术中的已知任何方法进行转染，尤其是通过由病毒包装细胞中生产的病毒。该病毒可能进行壳体包裹，使其能够感染CD34+细胞和/或CD4+细胞。然而，在一些情况下，其他细胞类型则通过不涉及CD4或CD34蛋白的方式进行转染。然而，本发明的披露可能因此包括使这些细胞类型感染的任何壳体包裹技术。
不同的包膜蛋白假分型扩大了病毒载体和治疗载体可转导的宿主细胞范围，并使该病毒将集中在高滴度，尤其是当用水泡性口炎病毒包膜糖蛋白(VSV-G)(Li等，1998；Reiser等，2000)进行假分型时。
载体构建
本发明所利用的病毒载体可有多种类型，包括杂合载体。例如，载体可能是只含有一个非常小的原生基因组(Zufferey等，1998)片段的第三代慢病毒载体。转基因编码载体的产生可能也涉及自身失活型转移载体(Zufferey等，1998；Miyoshi等，1998)，消除了在感染靶细胞之后全长载体RNA的生产。
可利用由于表达复制所需的某些病毒蛋白失败造成的复制无能的病毒载体。然而，辅助病毒可能活化治疗病毒复制。使用自身失活型载体可降低这种可能性。
在一个优选具体实施方式中，转基因序列是由泛素启动子、U6启动子、EF1α启动子、CMV启动子、可调节的启动子和/或所需要的细胞类型特异性启动子所驱动的。
病毒嗜性
在一个优选具体实施方式中，衍生自Numb亚型/Numblike编码载体、治疗载体和/或本发明的其他转基因载体的病毒用水泡性口炎病毒包膜糖蛋白假分型，使病毒的浓度到达高滴度而且便于CD34+细胞的感染。
序列选择
本发明涉及了与被称为NUMB或Numblike序列(可在Entrez-Pubmed数据库中搜索到)的任何序列有70％或更高的同一性(或互补性)的任何序列，如果它以在本发明所述的方式使用。
本发明也部分涉及一个遗传载体，它包含了能够显著降低哺乳动物细胞对HIV 1和HIV-2(在本文中一起被称作HIV)造成的感染的易感性的序列。
本发明披露了合成寡核苷酸的新型组合，以降低HIV/AIDS疾病过程至关重要的基因表达。
本文所提出的结合合成寡核苷酸以影响共受体“敲除”TAR和RRE诱饵序列表达的可行性，同时结合多种基因治疗手段，针对1)HIV感染，2)HIV转录，和3)HIV在个体细胞的复制很可能产生比单独使用这些手段任何之一更好的疗效。
表达“有益序列”的治疗载体的用途是降低转染或感染细胞的保持HIV复制和转录的能力。在本文中，表达“有益序列”的基因载体以及任何衍生自该基因载体的任何病毒在术语上被称为“治疗载体”。本发明部分针对易受HIV感染或能够增殖HIV的细胞的基因修饰。在本文中，此类细胞在术语上被称为“靶细胞”。
本发明提供了一种使用治疗病毒载体降低成熟或未成熟靶细胞、白细胞、血细胞、任何干/祖细胞和/或其子代受HIV感染的易感性的组合物和方法。
然后，本发明也提供了一种使用治疗病毒载体降低重编程细胞、受诱导的专能细胞、受诱导的多能细胞和/或其子代受HIV感染的易感性的组合物和方法。
本发明的进一步目的是降低成熟或未成熟靶细胞、干/祖细胞，(包括重编程细胞、受诱导的专能细胞、受诱导的多能细胞)和/或其子代保持免疫缺陷病毒复制和转录的能力。
本发明的另一个目的是获得成熟或未成熟的靶细胞、其他静止细胞、干/祖细胞和/或其子代中治疗序列的高效、长期表达。
一方面，本发明提供了一种预防或治疗HIV感染的方法。该方法涉及将治疗载体或序列转染的干细胞移植到HIV感染患者体内。
有益序列可能是这样的序列：降低HIV感染细胞、转录病毒DNA、或在受感染的细胞中复制的能力，或增强细胞中和HIV感染的能力。
在某些具体实施方式中，有益序列表示干扰HIV进入的合成寡核苷酸，它们包括针对任何HIV共受体(包括但不仅限于，CXCR4、CCR5、CCR2b、CCR3和CCR1)的siRNΛ、shRNA、反义RNA或miRNA。
在一个优选具体实施方式中，治疗载体包括靶向一个或多个HIV共受体(包括CXCR4、CCR5、CCR1、CCR2、CCR3、CXCR6和/或BOB)的合成寡核苷酸。
在另一个优选具体实施方式中，治疗载体包括靶向HIV的主要共受体CXCR4和CCR5的合成寡核苷酸。
在一个进一步的优选具体实施方式中，治疗载体包括靶向一个或多个HIV酶(例如，HIV反转录酶、整合酶和蛋白酶)的合成寡核苷酸。
合成寡核苷酸合适的序列是1)通过计算机算法可预测的能有效减少靶序列，以及2)能够在标准的定量RNA分析和酶活性分析中成功地将靶酶的量减少＞70％或减少到达到治疗效果的数目。
短语“靶序列”表示有一个与病毒基因组核苷酸序列或其互补序列(如与该病毒基因组序列相同或互补)，或是一个对应的RNA序列至少有70％同一性的核苷酸碱基序列的一个特殊序列。在本发明的特殊具体实施方式中，该术语表示该序列与一个特殊病毒的病毒基因组序列或其互补序列至少有70％同一性，寡核苷酸针对该病毒。任一多种类型的合成寡核苷酸可通过治疗载体转染表达，而且本发明针对此类寡核苷酸所有可能的组合。
在一个优选具体实施方式中，合成寡核苷酸序列是由靶细胞特异性启动子驱动的。在另一个优选具体实施方式中，合成寡核苷酸序列是由U6启动子驱动的。
出于同样原因，合成寡核苷酸可能包含于含有诱饵RNA的相同治疗载体中。
诱饵RNA
诱饵RNA是有效结合某些蛋白并且抑制它们的功能的RNA序列。
在一个优选具体实施方式中，治疗载体包括多个诱饵RNA序列。
在一个进一步的优选具体实施方式中，被序列在两侧包围的诱饵RNA序列为诱饵序列提供了稳定性。
在另一个优选具体实施方式中，诱饵RNA是RRE和/或TAR诱饵序列。
在一个优选具体实施方式中，RRE和TAR诱饵序列是HIV-2衍生的RRE和TAR诱饵序列。在另一个优选具体实施方式中，诱饵序列也包括诱饵序列Psi元件。
在一个优选具体实施方式中，诱饵序列各自由一个U6启动子驱动的。
在另一个优选具体实施方式中，诱饵序列是由靶细胞特异性启动子驱动的。在另一个优选具体实施方式中，治疗载体通过编码合成核苷酸序列与HIV-2TAR和/或RRE诱饵序列组合靶向HIV生命周期的多个阶段。
在另一个优选具体实施方式中，载体包括miRNA寡核苷酸序列。
在另一个优选具体实施方式中，载体包括shRNA寡核苷酸序列。
在另一个优选具体实施方式中，载体包括siRNA寡核苷酸序列。在另一个优选具体实施方式中，载体包括RNAi寡核苷酸序列。
在另一个优选具体实施方式中，载体包括核酶序列。
在另一个优选具体实施方式中，载体包括合成寡核苷酸类的组合。在一个进一步的具体实施方式中，合成核苷酸序列靶向HIV共受体，例如CCR5、CXCR4等。
在一个进一步的具体实施方式中，合成核苷酸序列靶向HIV酶，例如整合酶、蛋白酶、逆转录酶、TAT等。
在一个进一步的具体实施方式中，核酶序列靶向HIV共受体，例如CCR5、CXCR4等，或HIV酶，例如整合酶、蛋白酶、逆转录酶、TAT等。
在一个优选具体实施方式中，病毒是使用治疗载体生成的，而且病毒进行假分型。
在一个优选具体实施方式中，病毒是使用治疗载体生成的，而且病毒未经假分型，病毒显示原生HIV嗜性。
在一个优选具体实施方式中，治疗载体是一个病毒载体。在一个优选具体实施方式中，治疗载体是一个慢病毒载体。
在一个优选具体实施方式中，治疗载体是一个第三代慢病毒载体。在一个优选具体实施方式中，治疗载体包括合成寡核苷酸类的组合。
在一个优选具体实施方式中，合成核苷酸序列表达是由EF-1α启动子或其他靶细胞合适的启动子驱动的。
在一个优选具体实施方式中，合成核苷酸序列表达是由U6启动子或其他靶细胞合适的启动子驱动的。
在一个优选具体实施方式中，合成核苷酸序列表达是由EF-1α和U6，或其他靶细胞合适的启动子的组合驱动的。在一个优选具体实施方式中，EF-1α驱动miRNA表达，而U6启动子驱动RNA诱饵表达。
在一个优选具体实施方式中，EF-1α驱动siRNA表达，而U6启动子驱动RNA诱饵表达。
在一个优选具体实施方式中，EF-1α驱动shRNA表达，而U6启动子驱动RNA诱饵表达。
在一个优选具体实施方式中，治疗载体包括针对CXCR4的多个miRNA序列、针对CCR5的多个miRNA序列、一个HIV-2RRE诱饵序列和一个HIV-2TAR诱饵序列，而且载体是一个病毒载体。在一个优选具体实施方式中，涉及治疗载体的治疗是组合抗逆转录病毒疗法的其他方式，包括药物疗法。适合与治疗载体组合的抗逆转录病毒疗法是与治疗载体组合的有相加或协同效应的一类疗法。
HIV基因疗法的目标细胞可能包括，但无需仅限于，成熟外周血T淋巴细胞、单核细胞、组织巨噬细胞、T细胞祖细胞、巨噬细胞-单核细胞祖细胞，和/或多能造血干细胞，例如发现于脐带血、外周血并占据骨髓空间的一类细胞。
本发明也涉及了CD4+T细胞、巨噬细胞、T细胞祖细胞、巨噬细胞-单核细胞祖细胞、CD 34+干/祖细胞和/或任何其他静止细胞、分裂细胞，能在活体外或活体内分化为HIV靶细胞、CD4+T细胞、巨噬细胞、T细胞祖细胞，巨噬细胞-单核细胞祖细胞，和/或CD 34+干/祖细胞的干细胞或祖细胞的转染。因此，转染的细胞可以是原位内源性细胞，或衍生自其他身体部位或其他个别供体的外源性细胞。在本文中，把出于该用途而选定的细胞在术语上被称为“所选的细胞”。
出于相同的原因，自我更新、专能和/或多能干细胞(包括重编程和诱导的多能细胞)代表另一个HIV基因疗法逻辑靶物，而且本发明尤其涉及了它们的使用。在该过程的一个具体实施方式中，所选的细胞(如造血干细胞、皮肤干细胞、脐带细胞、原始生殖细胞(PGC)、精原细胞、任何可获得的体细胞等)是1)使用一个或多个细胞因子(例如，干细胞因子、白血病、抑制因子(LIF)，心肌营养素1、IL-11、IL-6、IL-6R、GP-130、CNTF、IGF-1、bFGF，和/或抑瘤-M)进行增殖培养，和2)在分化之前，采用该项技术中的已知任何方法(如以引用的方式并入本文的美国专利5677139中所述的方法，或类似于美国专利5677139关于其他靶细胞的方法)使用治疗载体或有益序列转染。
在单独的具体实施方式中，这对于在转染之前进行多种步骤是可取的。在单独的具体实施方式中，出于生成多能干细胞群的目的，这对于只进行以上培育步骤是可取的。
用于干/祖细胞增殖/扩增的LIF和干细胞因子的合适浓度以及其他细胞培养条件先前已有描述(如以引用的方式并入本文的美国专利6432711和5453357)。其他合适的协议和参考文献细胞因子浓度已经由Koshimizu等，1996；Keller等，1996；Piquet-Pellorce，1994；Rose et等，1994；Park和Han，2000；Guan等，2006；Dykstra等，2006获得参考)。
靶细胞群可能包括体细胞、干细胞和祖细胞。干细胞可能衍生自现有的细胞系或分离自保存、库存或冻存源。干细胞的典型来源包括骨髓、外周血、胎盘血、羊水、脐带血、脂肪组织和非人类胚胎等。
体细胞，尤其是循环白细胞和其他非祖细胞/干细胞可同样在上述对干/祖细胞有效的相同培养条件下培养，因此获得干/祖细胞特性。
本发明也披露了从干/祖细胞中产生靶细胞(如美国专利申请20030099621)，此类靶细胞会制成对HIV感染和/或HIV复制相对有抵抗力。
然而，应了解，只要产生了对HIV感染和/或HIV复制和/或HIV转录相对有抵抗力的功能性靶细胞，分化先前增殖的干/祖细胞/白细胞为所要的靶细胞的任何方法可应用于发明的范围之内。
在一个优选具体实施方式中，治疗病毒载体是用来自原生HIV病毒的一个或多个包膜蛋白包装，赋予治疗病毒感染原生HIV株能够感染的任何细胞的能力。
本发明所选使用的细胞将在一些情形下可获得(如脐带干细胞、骨髓干细胞、精原细胞和睾丸的原始生殖细胞、从羊水干分离出来的干细胞、从皮肤分离出来的干细胞等)。此类细胞可以从组织中分离，它们以该项技术中的已知任何方式存在于组织中。
其他所选的细胞可能包括重编程细胞、受诱导的多能细胞、受诱导的复能细胞等。
根据本发明的一方面，提供了一种从所选的细胞中生产所要的细胞群的方法。通常来说，该方法包括在以最佳生长速率促进所选的细胞生长的条件下培养所选的细胞和/或其子代。然后，所生成的细胞群在以通常小于最佳速率的速率促进细胞生长的条件下培养，这种条件存在促进细胞向所要的细胞系、细胞类型或细胞分类(如CD4+T细胞)分化的试剂。本发明也披露了通过该项技术中的已知任何方式用治疗载体转染前后所选的细胞和/或其子代在培养物中的增殖(如美国专利申请20060099177)。此类方法也包括白血病抑制因子(LIF)、Steel因子、IL-6、IL-7、瘤素M和/或心肌营养素1和其他生长增强细胞因子等。本发明进一步披露了在含有合适的细胞因子和生长因子，例如，集落刺激因子(如M-CSF(CSF-1)、GM-CSF)、IL-7、任何促进CD4+T分化的细胞因子等的培养基中进一步孵育，用治疗载体转染的细胞定向分化为所要的细胞类型。
转染
无论所选的细胞和靶细胞是外源性细胞或内源性细胞，它们的基因修饰可以根据该项技术中的已知任何公开或未公开的方法(如美国专利编号6,432,711、美国05,593,875、美国05,783,566、美国5,928,944、美国05,910,488、美国05,824,547等)或其他通常认可的方式进行。转化宿主细胞合适的方法可以在Sambrook等(《分子克隆：实验室手册》，第二版，冷泉港实验室出版社(1989)(Molecular Cloning：A Laboratory Manual，2ndEdition，Cold Spring Harbor Laboratory press(1989))和其他的实验室教材找到。
除了RNA表达分析和形态分析之外，成功转染的细胞可以通过涉及标记物(例如，抗生素耐药性)的协议选择进行识别。可以用冷存法(利用该项技术中的已知任何合适的冷存法)在合适的水平表达合适的外源性DNA的来自成功转染细胞的克隆。
可选择的标记物(如抗生素耐药性基因)可能包括赋予药物(如G418、潮霉素、氨苄西林和灭瘟素等)耐药性的那些标记物。含有目的基因的细胞可以通过药物筛选识别，在药物筛选中已整合了可选择的标记物基因的细胞存活，而其他细胞死亡。
本文描述了发明的具体实施方式的理论基础，然而，这种讨论不以任何方式对本发明进行约束或限制。所属领域的技术人员明白本发明的各种具体实施方式可用于实际操作，无论用于描述发明的理论基础的模型。
本发明将针对以下实施例进行描述和说明；然而，本发明的范围并不仅限于那些实施例。
实施例1：本发明合适使用的转基因载体的构建。
合适的EGFP-Numb和HGFP-Numblike，以及EGFP-X慢病毒载体(其中X是本文所述的任何转基因)可以通过克隆到一个合适的病毒载体(如二基因HIV-EGFP-HSA载体(Reiser等，2000))进行生产。可以为Numblike和Numb亚型cDNA的PCR扩增和克隆到基因载体选择接头引物。在准备克隆期间，用酶消化基因载体。随后，每个转基因的cDNA被插入到先前被HSA cDNA占据的nef编码区域。先前已经插入病毒编码区得EGFP(增强型绿色荧光蛋白)和一个细胞群合适的启动子(如巨细胞病毒即早期(CMV ie)或EF1α)。基因构建物可能包括一个载体骨架和一个反式激活因子，反式激活因子调控有表达关联性连接到外源核酸序列的启动子。
可能应用的逆转录病毒载体的实施例包括但不仅限于，由鼠白血病病毒、鼠类肉瘤病毒和劳斯肉瘤病毒、猫免疫缺陷病毒(FIV)和人类免疫缺陷病毒(HIV)。合适的表达载体是可能用于转染DNA或RNA到白细胞的那些载体。此类载体包括但不仅限于，原核表达载体，如细菌载体；真核表达载体，如，酵母媒介和真菌载体；以及病毒载体，例如，但不仅限于慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体和逆转录病毒载体。复制缺陷pcDNA 6.2/EmGFP-Bsd/V5-DEST是一个合适的表达载体(Invitrogen)的例子，而且使由能够剪切靶序列的pcDNA 6.2GW/miR载体转染的合成寡核苷酸(如miRNA)得以表达。这些载体包括来自外源性miRNA的侧翼和环状序列，以定位来自较长的Pol II转录本(miRNA前体)改造的miRNA的切除。
组合针对特异性内源性RNA的多个miRNA序列增加降低靶序列表达成功的可能性。miRNA序列可能有表达关联性连接到可调控的或组织特异性的启动子。
通过利用用于基因表达的慢病毒载体产生的本发明的Numb/Numblike编码载体和/或其他转基因载体变得能够稳定地转导分裂和非分裂细胞类型。
在一个优选具体实施方式中，产生的本发明的Numb/Numblike编码载体和/或其他转基因载体包含多个由一个或多个启动子驱动的合成寡核苷酸序列，以降低特异性Numb亚型和/或Numblike的表达。实施例2：一种合适的载体的另一个实施例是一个逆转录病毒载体。逆转录病毒是含有一个RNA基因组的RNA病毒。Gag、pol和env基因被长末端重复(LTR)的序列侧翼包围。5′和3′LTR序列促进mRNA序列的转录和聚腺苷酸化。
逆转录病毒载体可能提供一个可调控的反式激活元件、一个内部核糖体进入位点(IRES)、一个选择标记物和一个被可调控的启动子控制的靶外源基因。
或者，可能在多个启动子的控制下表达多个序列。最后，逆转录病毒载体可能包含逆转录和整合所需的顺式作用序列。在感染时，RNA被反转录到高效整合到宿主基因组中的DNA。本发明的重组逆转录病毒以如下的方式被基因修饰：原生病毒的一些逆转录病毒、感染的基因已被除去，并在某些情况下用细胞基因修饰的靶核酸序列替代。这些序列在性质上可能是外源性DNA或RNA或由其改变的。实施例3：本发明的Numb/Numblike编码载体和/或其他转基因载体生成德示例方法。
本发明的Numb/Numblike编码载体和/或其他转基因载体的生成方法包括Invitrogen病毒力慢病毒表达系统手册(Invitrogen′s Viral Power LentiviralExpression Systems Manual，2007)教授的那些方法。简而言之，EmGFP-bsd盒作为一个Pm1I-B1pI片段克隆到pLenti6/R4R2/V5-DEST载体中，而miR长(PRR+)Numb亚型或miR短Numb亚型/Numblike盒通过BP反应同时转染到pDONR221中。然后，可调控的启动子和miR亚型盒通过多位点LR穿越进入被修饰的pLenti6/EmGFP-bsd/R4R2-DEST载体。可以以此方式生成多个载体，组成合成寡核苷酸和转基因盒的不同组合。
pLenti6/R4R2/V5-DEST载体序列：(SEQ ID NO：1)：
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实施例4：治疗载体生成的其他方法。
由人和/或动物成纤维细胞系衍生的“包装细胞系”是由gag、pol和env结构性基因转染或感染正常细胞系产生的。从另一方面来说，包装细胞系产生缺乏psi序列的RNA，使得由包装细胞产生的病毒颗粒不含gag、pol和env基因。在通过转染或感染的方式将含有psi序列(随同治疗基因)的治疗载体的DNA导入包装细胞之后，包装细胞可能会产生能够传递治疗RNA到最终靶细胞(如CD4+细胞)的病毒粒子。
治疗载体的“感染范围”取决于包装细胞系。许多包装细胞系可用于适合感染许多人类细胞类型的病毒的生产。然而，这些包装细胞系通常能够包覆由在性质上通常感染不同动物物种衍生的病毒载体。例如，由猴免疫缺陷病毒(SIV)或鼠白血病病毒(MMLV)衍生的载体可被GP 120包覆细胞系包装。用于生产一种治疗病毒上清的实施例方案如下：
1.轻拍一个含有0.8-1毫升的乙磺酸缓冲盐溶液(pH＝7.05)的1.5毫升塑料管，将20微克的逆转录病毒载体与2-3微克含有可选择的标记物基因(如抗生素耐药性基因)的病毒DNA混合。2.通过重复轻拍将70毫升的2M CaCl添加到混合物中。
3.当试管中首次开始出现蓝色沉淀物时，产物应轻轻地应用到包装细胞(来自任何数量的商业供应商)的30％汇合层。DNA混合物应仅在首次从包装细胞中除去培养基之后应用。
4.将包装细胞转移回36-38摄氏度的培养箱中孵育3.5小时之前，设定在室温下(25摄氏度)孵育20-30分钟。
5.添加3.5-4毫升含有15％甘油的的乙磺酸缓冲盐溶液3分钟，然后用Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)+10％FBS x2洗涤。
6.加回DMEM+10％FBS，并且在37摄氏度下孵育细胞20小时。
7.除去并过滤含有治疗病毒颗粒的培养基。
立即保存过剩的病毒上清或浓缩并在-80摄氏度下保存)。上清可能与5-8毫升的聚凝胺保存，以增加靶细胞的感染效率。否则，可能排除聚凝胺或在感染前添加。
8.可以通过1比20，或1比40分裂包装细胞系，随后在含有选择性药物的培养基(如转染的耐药性基因对应的某些抗生素)中孵育这些细胞最多10天(每3天更换培养基)，建立稳定的生产细胞系。
9.10天之后，分拣分离的集落，等分生长并冷冻保存。
逆转录病毒感染性/滴定分析是通过确定体积的病毒上清的应用实现的，该病毒上清应用到汇合层“测试”细胞，例如在20％汇合度时涂板的NIH 3T3细胞。在2-3次细胞分裂(NIH 3T3细胞24-36小时)之后，计算在37度下、在含有抗生素的培养基中孵育的“测试”细胞的集落。用以下的公式从这些集落数目估计上清的滴度：
集落形成单位/毫升＝识别的集落X 0.5(分割因子)/病毒体积(ml)
这种估计的准确度是通过在许多“测试”细胞培养板上测试大量体积的上清来提高。
治疗载体上清到靶细胞的应用可能通过适合临床状况的多种方式完成。
实施例5：所选的细胞的生长培养基
所选的细胞可以在补充谷氨酰胺、β-巯基乙醇、10％(体积比)马血清，以及重组人白血病抑制因子(LIF)的Dulbecco改良的最低必需培养基(DMEM)中扩展/生长。白血病抑制因子(LIF)取代了保持细胞饲养层上的细胞的需要(它可能会被应用)，而且对保持所选的细胞在未分化、多能或复能的状态至关重要，此类细胞可以在补充谷氨酰胺、β-巯基乙醇、10％(体积比)马血清，以及重组人白血病抑制因子(LIF)的Dulbecco改良的最低必需培养基(DMEM)中得到保持。白血病抑制因子(LIF)取代了保持细胞饲养层上的细胞的需要(它可能会被应用)，而且对保持所选的细胞在未分化的状态至关重要(根据美国专利6432711)。
为了启动所选的细胞分化为神经元细胞，用胰酶消化细胞，用不含白血病抑制因子的溶液洗涤，并将细胞置于补充10％胎牛血清(FBS)的Dulbecco改良的最低必需培养基(DMEM)中。在Dulbecco改良的最低必需培养基(DMEM)和10％胎牛血清(FBS)中重悬之后，在5毫升DMEM、10％FBS、0.5mM维甲酸的1X106细胞在60毫米的Fisher细菌学级皮氏培养皿进行涂板，预期细胞在培养皿中形成小团块。聚集有助于正确的细胞分化。DMEM、FBS和维甲酸涂板前后可以发生用合适的神经元转录因子进行高效转染。(参见美国专利6432711和5453357以了解更多详情)。
实施例6：HLA配型。所选的细胞(如来自何其他合适的来源和/或其子代的脐带血液或细胞)可以被筛选、基因改造(可选)、扩展和诱导开始分化为所要的细胞类型(可选)。然后，根据标准的干细胞移植方案来移植细胞。在某些情况下，细胞可能会移植到患者，而不进行HLA配型。
实施例7：在某些罕见情况下，为了在活体内刺激或抑制细胞分裂或细胞分化，将转基因编码载体导入到患者可能是种适当的做法。
实施例8：所选细胞的基因修饰。
外源性细胞或患者的内源性细胞的或体外基因修饰可以根据该项技术中的已知任何公开或未公开的方法(如美国专利编号6,432,711、美国05,593,875、美国05,783,566、美国5,928,944、美国05,910,488、美国05,824,547等)或其他通常认可的方式进行。转化宿主细胞合适的方法可以在Sambrook等(《分子克隆：实验室手册》，第二版，冷泉港实验室出版社(1989)(Molecular Cloning：A Laboratory Manual，2nd Edition，Cold SpringHarbor Laboratory press(1989))和其他的实验室教材找到。除了RNA表达分析和形态分析之外，成功转染的细胞是通过涉及标记物(例如，抗生素耐药性)的协议选择进行识别。可以用冷存法(利用该项技术中的已知任何合适的冷存法)在合适的水平表达合适的外源性DNA的来自成功转染细胞的克隆。
可选择的标记物(如抗生素耐药性基因)可能包括赋予药物(如G418、潮霉素、氨苄西林和灭瘟素等)耐药性的那些标记物。含有目的基因的细胞可以通过药物筛选识别，在药物筛选中已整合了可选择的标记物基因的细胞存活，而其他细胞死亡。
本发明披露了作为本发明的“所选的细胞”的基因修饰细胞的选择。术语“基因修饰”是指细胞表现型的改变，这通过以该项技术中的已知任何方式导入自然或合成核酸到所选的细胞和/或其子代或永生化细胞系和/或其子代中实现的。或者，在本文中，诱导基因表达方式永久改变的培养条件被认为代表了基因修饰。无论干细胞是由宿主脑部、内源性供体来源、外源性供体来源或细胞系衍生的，干细胞的修饰代表了一种治疗某些人类疾病(尤其是人类神经系统的那些疾病)的可行手段。
本文披露部分涉及的基因修饰包括，但不仅限于：在活体内进行的基因修饰；改变代谢酶的活性或量的修饰，代谢酶是由内源性或外源性所选的细胞和/或其子代表达的；改变细胞蛋白的活性、量或抗原性的修饰；改变参与信号转导途径的蛋白的活性或量的修饰；改变HLA类型的修饰；改变细胞分化的修饰；改变肿瘤潜能的修饰；改变细胞分化的修饰；改变结构蛋白的活性或量的修饰；改变膜相关蛋白(结构或酶)的活性或量的修饰；改变参与DNA修复和染色体维护的蛋白的活性或量的修饰；改变参与细胞运输的蛋白的活性或量的修饰；改变酶的活性或量；改变参与突触形成和维护的蛋白的活性或量的修饰；改变参与神经突起或轴突的形成的蛋白的活性或量的修饰；改变细胞内抗氧化物生成酶的活性或量的修饰；造成改变细胞蛋白翻译后修饰的修饰；改变参与细胞修复的其他方面和增加细胞(如端粒酶的生产)寿命的改变的蛋白的活性或量的修饰。如上所述的那些此类蛋白可能是由人类基因组或其他动物、植物、病毒或细菌的基因组衍生的DNA或RNA编码的。本发明也涉及了从头设计的序列。
另外，本发明涉及所选的细胞和/或其子代细胞的原位基因修饰，以进行疾病的治疗。外源性干细胞可能在原位被修饰，这通过DNA或RNA载体(包括病毒、逆转录病毒、脂质体等)直接注射或应用到组织的物质或到脑的脑室系统的合适部分中。从1992年起，我们已经用这种方式修饰了几千个干/祖细胞和成千上万的子代细胞。我们的数据显示，修饰祖细胞的这种方式会产生在神经系统内无数多种被修饰的细胞类型，并且从来不会产生副作用。
实施例9：基因载体导入宿主
在一个优选具体实施方式中，通过治疗载体导入宿主血液、神经系统、骨髓等在活体内用载体(如本文上述的那些载体)转染内源性细胞。通过修饰大量的内源性靶细胞可以获得最大的益处。可以一种大小合适的导管样装置或针将治疗载体注射到静脉或动脉循环、到一个特定组织(如肌肉组织)，或到神经系统中来达到这一目标。在一个优选具体实施方式中，用VSV-G包膜糖蛋白和原生HIV-1包膜蛋白对病毒假分型。
实施例10：注射到神经系统
所选细胞的移植到(从生长或是分化培养基)胎儿的神经系统或利用基因载体对内源性胎儿细胞的基因修饰可以用下列方式完成：在无菌的条件下，子宫和胎儿用超声或其他放射指导进行可视化处理。或者，子宫可以通过手术暴露，以便于胎儿颅骨标志的直接识别。然后，通过注射(使用一个大小合适的导管或针)到脑室系统、胚区或到神经系统的物质导入所选的细胞。在某些情况下，可能通过母亲的腹壁、子宫壁和胎膜进入胎儿进行注射。通过直接观察、超声、对比度，或放射同位素的方法，或以该项技术的已知任何其他方式监测注射的准确度。
在合适的无菌条件下，可视化，以及通过物理检查和触诊立体定向和放射指导完成胎儿颅骨标志的直接识别。细胞培养之后，通过注射或其他方式将适量的所选或分化细胞然后导入脑室系统、生发区，或进入神经系统的物质。通过直接观察、超声或其他放射指导监测注射的准确度。
在某些情况下，成人神经系统的神经系统疾病(如亨廷顿氏病和帕金森氏症)，大脑的特定部分的细胞被选择性地影响。在帕金森氏症的情况下，这部分细胞是黑质的多巴胺能神经细胞。在这些影响成人的区域特异性疾病中，细胞的局部移植可能通过在无菌条件下分化细胞的放射引导移植来完成。放射指导可能包括CT和/或MRI的使用，并且可能利用对比度或同位素的方法监测注入的材料。
在某些神经系统疾病，如一些代谢贮存紊乱，细胞在神经系统的多个部位受到影响，而且基因修饰内源性细胞或将本发明所选的细胞(无论是从生长培养基或分化培养基)以弥漫性的方式导入大量组织中可能会获得最大的益处。在神经系统中，对于这些疾病，通过脑室注射(使用一个大小合适的导管样装置或针)(特别是在发育的初期阶段)，使内源性细胞修饰扩散或从生长和/或分化培养基中分离的所选的细胞扩散可能是最好的手段。然而，也涉及了出于相同的用途而将细胞注射到循环系统中。然而，对于弥散性地影响多种器官或全身的任何疾病(如溶酶体贮积病、血红蛋白病、肌肉萎缩症)，也可以采用内镜指导和使用任何大小合适的导管样装置将从生长和/或分化培养基中分离的所选的细胞优先地直接导入循环和/或内脏器官(如肝、肾、肠、脾、肾上腺、胰腺、肺、胸腺)，让细胞移植弥散整个身体，以及细胞的特异性导入和浸润到选定的器官
实施例11：通过注射到循环流和器官输送细胞。
一个器官系统的疾病可以用来自一个单独的器官系统的基因修饰的细胞来治疗。此外，在某些情况下，很明显在生长和/或分化培养基培养之后，如果所选的细胞被注入血流(无论动脉、静脉或肝)，它们可以在活体内自行整合和分化到足够数量。本发明也涉及了这种手段。例如，弥漫性肌肉(如肌肉营养不良)、器官、组织，或血液疾病(如遗传性球形红细胞增多症、镰状细胞性贫血和其他血红蛋白病等)的治疗可能涉及从生长和/或分化培养基中分离的所选的细胞注射到患者，尤其是病人的循环系统。这种手段也被认为减轻缺血性损伤，如心肌梗死、中风等，以及脑和其他组织创伤。用针或导管将本发明生产的此类细胞直接注射到循环系统中，从而使细胞骨髓、肌肉、肾脏、肺和/或任何其他器官系统“为家”，以及直接注射到骨髓的空间，这是适合本发明的做法。同样，用或不用放射、超声或荧光镜指导将细胞直接注射到病变部位也是适合本发明的做法。
本发明有用的分离所选的细胞的方法包括由Zhao等，2006所述的那些方法。
在一个优选具体实施方式中，编码Numb和/或Numblike亚型的基因载体包括表达关联性地连接到Numb或Numblike转基因的可调控的启动子。
在另一个优选具体实施方式中，转染模式可能选自为Numb和Numblike亚型提供瞬时而非永久的表达的那些转染模式。
实施例12：示例性基因修饰
本发明的方法据认为，能够治疗和/或减轻数以百计的疾病及临床病症，包括但不仅限于，绵状脑白质营养不良(Canavan′s disease，ASP)；戴撒氏病(Tay-Sach′s disease，HEXA)；莱施-尼汉综合征(Lesch-Nyhan syndrome，HRPT)；亨廷顿氏症(HTT)；史莱氏症(Sly syndrome)；A型和B型尼曼-匹克病(Niemann-Pick disease)；德霍夫氏病(Sandhoff s disease，HEXB)；法布里病(Fabry′s disease，GLA)；C型尼曼-匹克病(NPC1)；高雪氏病(Gaucher′sdisease，GBA)；帕金森氏病(PARK2等)；冯希佩尔林道病(Von HippelLindau′s disease)；镰状细胞性贫血(HBB)和其他地中海贫血及类似疾病。这些转基因可能代表正常细胞的编码区或编码区的部分。然而，应了解，本发明的范围并不仅限于上述的特定的具体实施方式和实施例。本发明可能会用不是特别描述仍然在所附的权利要求的范围之内进行实际操作。
实施例13：在四环素敏感的启动子控制下，能够赋予细胞复能并表达长Numb亚型、Oct-4、Sox-2和EmGFP核酸序列的载体的一个示例性序列是(SEQ ID NO：2)：
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以上载体序列对应的示意图如图1所示。
可以完全通过从头基因合成，或部分通过Numb、Sox和OCT3/4cDNA序列克隆将载体构建到Invitrogen pcDNA4tolacZ载体的LacZ基因占据的位置。类似地，可以在Invitrogen pcDNA6/TR载体上找到tetR基因。参照基因的编码序列也适合于克隆到pcDNA41acZ载体中。
或者，可以利用pcDNA6/TR载体组合一个包含该序列的载体减去tetR基因及其PCMV启动子单独转染tetR基因到靶细胞。
同样，只要存在以上序列包括的元件相似的元件，可以使用多个载体。这可能会降低启动子竞争的可能性。应了解，其他符合条件的启动子元件可替代四环素敏感的启动子元件。
实施例14。预计一次或多次静脉施用和其他方式施用根据本文所述的方法(或其他公开的方法)生产的复能干细胞可以提供人体更换细胞，而且这种施用方法可能有助于罹患年龄有关的衰老患者延长寿命或改善健康。
实施例15。生殖细胞的生产。
本发明涉及了从根据本文所述的方法(或根据其他公开的方法)生产的多能、复能，和/或自我更新的干细胞衍生生殖细胞。此类生殖细胞的生产可能适合治疗不孕症和活体外生产胚胎(如Hubner等，2003；Kehler等，2005；Nayernia等，2006a；Nayernia等，2006b；Drusenheimer等，2007；Moore等，2007等)。
实施例16：转基因动物的生成。
本发明涉及了转基因动物的生成。与其他复能细胞一样，根据本文所述的方法(或其他公开的方法)生产的复能细胞可用于用该项技术中的已知生产转基因动物。
实施例17：治疗载体构建
可能应用的逆转录病毒载体的实施例包括但不仅限于，由鼠白血病病毒、鼠类肉瘤病毒和劳斯肉瘤病毒、猫免疫缺陷病毒(FIV)和人类免疫缺陷病毒(HIV)。合适的表达载体是可能用于转染DNA或RNA到白细胞的载体。此类载体包括但不仅限于，原核表达载体，如细菌载体；真核表达载体，如，酵母媒介和真菌载体；以及病毒载体，例如，但不仅限于慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体和逆转录病毒载体。
复制缺陷pcDNA 6.2GW/miR和pcDNA 6.2/EmGFP-Bsd/V5-DEST是合适的表达载体(Invitrogen)的例子，而且使能够剪切靶序列的合成寡核苷酸(如miRNA)得以表达。这些载体包括来自外源性miRNA的侧翼和环状序列，以定位来自较长的Pol II转录本(miRNA前体)改造的miRNA的切除。
或者，包含了HIV psi序列可以让治疗载体与原生HIV基因组竞争包装到病毒颗粒，和抑制HIV传播。
组合针对单个靶物的多个miRNA增加了降低靶序列表达的成功的可能性。miRNA序列可能会有表达关联性地连接到EF-1α启动子、任何T细胞特异性启动子，或巨噬细胞特异性启动子，以确保在所要的细胞类型中的表达。
通过利用基因表达的Invitrogen慢病毒目标(DEST)载体，生成的治疗载体会变得能够稳定地转导分裂和非分裂细胞类型。
在一个优选具体实施方式中，治疗载体包含由一个或多个启动子所驱动的多个合成寡核苷酸序列，以降低靶细胞中CXCR4、CCR5，和/或作为HIV感染的共受体的任何其他已知的细胞蛋白的表达，在一个治疗载体(构建于2006年)，靶向CXCR4和CCR5共受体的四个miRNA序列伴随着靶向HIV-2TAR和RRE的诱饵RNA序列被克隆到pcDNA 6.2GW/miR载体中。
基因构建物可能包括一个载体骨架和一个反式激活因子，反式激活因子调控有表达关联性连接到外源核酸序列的启动子。
一种合适的载体的另一个实施例是一个逆转录病毒载体。逆转录病毒是含有一个RNA基因组的RNA病毒。Gag、pol和env基因被长末端重复(LTR)的序列两侧包围。5′和3′LTR序列促进mRNA序列的转录和聚腺苷酸化。
逆转录病毒载体可能提供一个可调控的反式激活元件、一个内部核糖体进入位点(IRES)、一个选择标记物和一个被可调控的启动子控制的靶外源基因。
或者，可能在多个启动子的控制下表达多个序列。最后，逆转录病毒载体可能包含逆转录和整合所需的顺式作用序列。在感染时，RNA被反转录到高效整合到宿主基因组中的DNA。本发明的重组逆转录病毒以如下的方式被基因修饰：原生病毒的一些逆转录病毒、感染的基因被除去，并在一些具体实施方式中用细胞基因修饰的靶核酸序列替代。这些序列在性质上可能是外源性DNA或RNA或由其改变的。
实施例18：治疗载体生成的示例性方法。
治疗载体生成的方法包括包括Invitrogen病毒力慢病毒表达系统手册(Invitrogen′s Viral Power Lentiviral Expression Systems Manual，2007)(以引用的方式并入本文)教授的那些方法。简而言之，EmGFP-bsd盒作为一个Pm1I-B1pI片段克隆到pLenti6/R4R2/V5-DEST载体中，而miR诱饵盒通过BP反应同时转染到pDONR221中。然后，EF1α启动子和miR诱饵通过多位点LR穿越进入被修饰的pLenti6/EmGFP-bsd/R4R2-DEST载体。
pLenti6/R4R2/V5-DEST载体序列：
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gttlacacctataaaagagagagccgtt
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tctgctgtcagataaagtctcccgtgaa
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gcagaggccgaggccgcctcggcctct
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cccaacagttgcgcagcctgaatggcgaatgggacgcgccctgtagcggcgcattaagcgcggcgggtgtggtgg
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tctttaatagtggactcttgttccaaactggaacaacactcaaccctatctcggtctattcttttgatttataagggattttgcc
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ctgatttaacaaaaatttaacgcgaattttaacaaaatattaacgcttacaatttaggtggcacttttcggggaaatgtgcg
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cggtattatcccgtattgacgccgggca
agagcaactcggtcgccgcatacactattctcagaatgacttggttgagtactcaccagtcacagaaaagcatcttacg
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gtgctgccataaccatgagtgataacactgcggccaacttacttctgacaacgatcggaggaccgaaggagctaacc
gcttttttgcacaacatgggggatcatgt
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gcaatggcaacaacgttgcgcaaactat
taactggcgaactacttactctagcttcccggcaacaattaatagactggatggaggcggataaagttgcaggaccact
tctgcgctcggcccttccggctggctg
gtttattgctgataaatctggagccggtgagcgtgggtctcgcggtatcattgcagcactggggccagatggtaagcc
ctcccgtatcgtagttatctacacgacgg
ggagtcaggcaactatggatgaacgaaatagacagatcgctgagataggtgcctcactgattaagcattggtaactgt
cagaccaagtttactcatatatactttaga
ttgatttaaaacttcatttttaatttaaaaggatctaggtgaagatcctuttgataatctcatgaccaaaatcccttaacgtga
gttttcgttccactgagcgtcagacccc
gtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttctgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgcta
ccagcggtggtttgtttgccggatcaag
agctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgttcttctagtgtagccgtagt
taggccaccacttcaagaactctgtagc
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gggagcttccagggggaaacgcctgg
tatctttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcggagcctat
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tacggttcctggccttttgctggccttttgctcacatgttctttcctgcgttatcccctgattctgtggataaccgtattaccg
cctttgagtgagctgataccgctcgccg
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cccgcgcgttggccgattcattaatgca
gctggcacgacaggtttcccgactggaaagcgggcagtgagcgcaacgcaattaatgtgagttagctcactcattag
gcaccccaggctttacactttatgcttcc
ggctcgtatgttgtgtggaattgtgagc ggataacaatttcacacaggaaacagctatgaccatgattacgccaagcgc
gcaattaaccctcactaaagggaacaaaagctggagctgcaagctt
gtcgaccagtggatcctggaggcttgctgaaggctgtatgctgatcgggtgtaaactgagcttggttttggccactgac
tgaccaagctcattacacccgatcagga
cacaaggcctgttactagcactcacatggaacaaatggcccagatcctggaggcttgctgaaggctgtatgctgatac
caggcaggataaggccagttttggcca
ctgactgactggccttactgcctggtatcaggacacaaggcctgttactagcactcacatggaacaaatggcccagat
cctggaggcttgctgaaggctgtatgct
gtgaccaggatgaccaatccatgttttggccactgactgacatggattgcatcctggtcacaggacacaaggcctgtta
ctagcactcacatggaacaaatggccc
agatcctggaggcttgctgaaggctgtatgctgatagcttggtccaacctgttagttttggccactgactgactaacagg
tgaccaagctatcaggacacaaggcct
gttactagcactcacatggaacaaatggcccagatctccccagtggaaagacgcgcaggcaaaacgcaccacgtga
cggagcgtgaccgcgcgccgagcgc
gcgccaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagaga
gataattagaattaatttgactgtaaacac
aaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatgg
actatcatatgcttaccgtaacttgaaagt
atttcgatttcttgggtttatatatcttgtggaaaggacggtgctcgcttcggcagcacgtcgtgctagggttcttgggtttt
ctcgcaacagcaggttctgcaatgggc
gcggcgtccctgaccgtgtcggctcagtcccggactttactggccgggatagtgcagcaacagcaacagctgttgga
cgtggtcaagagacaacaagaactgtt
gcgactgaccgtctggggaacgaaaaacctccaggcaagagtcactgctatagagaagtacctacaggaccaggc
gcggctaaattcatggggatgtctagac
ctagagcggacttcggtccgctttttccccagtggaaagacgcgcaggcaaaacgcaccacgtgacggagcgtgac
cgcgcgccgagcgcgcgccaaggtc
gggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaatt
aatttgactgtaaacacaaagatattagt
acaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgct
taccgtaacttgaaagtatttcgatttctt
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agccctgggaggttctctccagcactag
caggtagagcctgggtgttccctgctagactctcaccagtgcttggccggcactgggcagacggctccacgcttgctt
gcttaaagacctcttaataaagctgctctagacctagagcggacttcggtccgcttttttacgtactcgag
Example miR-decoy cassette sequence：(SEQ ID NO：3)：
gtcgaccagtggatcctggaggcttgctgaaggctgtatgctgatcgggtgtaaactgagcttggttttggccactgac
tgaccaagctcattacacccgatcagga
cacaaggcctgttactagcactcacatggaacaaatggcccagatcctggaggcttgctgaaggctgtatgctgatac
caggcaggataaggccagttttggcca
ctgactgactggccttactgcctggtatcaggacacaaggcctgttactagcactcacatggaacaaatggcccagat
cctggaggcttgctgaaggctgtatgct
gtgaccaggatgaccaatccatgttttggccactgactgacatggattgcatcctggtcacaggacacaaggcctgtta
ctagcactcacatggaacaaatggccc
agatcctggaggcttgctgaaggctgtatgctgatagcttggtccaacctgttagttttggccactgactgactaacagg
tgaccaagctatcaggacacaaggcct
gttactagcactcacatggaacaaatggcccagatctccccagtggaaagacgcgcaggcaaaacgcaccacgtga
cggagcgtgaccgcgcgccgagcgc
gcgccaaggtcgggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatac gatacaaggctgttagaga
gataattagaattaatttgactgtaaacac
aaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatgg
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atttcgatttcttgggtttatatatcttgtggaaaggacggtgctcgcttcggcagcacgtcgtgctagggttcttgggtttt
ctcgcaacagcaggttctgcaatgggc
gcggcgtccctgaccgtgtcggctcagtcccggactttactggccgggatagtgcagcaacagcaacagctgttgga
cgtggtcaagagacaacaagaactgtt
gcgactgaccgtctggggaacgaaaaacctccaggcaagagtcactgctatagagaagtacctacaggaccaggc
gcggctaaattcatggggatgtctagac
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cgcgcgccgagcgcgcgccaaggtc
gggcaggaagagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattagaatt
aatttgactgtaaacacaaagatattagt
acaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgct
taccgtaacttgaaagtatttcgatttctt
gggtttatatatcttgtggaaaggacggtgctcgcttcggcagcacgtcggtcgctctgcggagaggctggcagattg
agccctgggaggttctctccagcactag
caggtagagcctgggtgttccctgctagactctcaccagtgcttggccggcactgggcagacggctccacgcttgctt
gcttaaagacctcttaataaagctgctct agacctagagcggacttcggtccgcttttttacgtactcgag
实施例19：在活体内增殖/扩增干/祖细胞的方法。
为了获得大量的对1)HIV感染和/或2)HIV复制和/或3)HIV转录相对有抵抗力的靶细胞，祖细胞/干细胞可以在补充谷氨酰胺、β-巯基乙醇、10％(体积比)马血清，以及重组人白血病抑制因子(LIF)的Dulbecco改良的最低必需培养基(DMEM)中生长，。白血病抑制因子(LIF)取代了保持细胞饲养层上的祖细胞/干细胞的需要(它可能会被应用)，而且对保持祖细胞/干细胞在未分化的状态至关重要。
实施例20：干细胞是从个体收集到得，用治疗载体转染细胞，然后在进行或不进行HLA分型和配型的情况下用标准方法准备移植。
实施例21：脐带血样本是从脐带血库中获得的。然后，用有益序列的治疗载体转染细胞，然后在进行或不进行HLA分型和配型的情况下用标准方法准备移植。实施例22：适合包含在治疗载体中的合成寡核甘酸序列的例子。
本发明涉及了成功地将靶序列蛋白表达减少＞70％的任何合成寡核甘酸序列。
本发明也涉及了成功地将靶细胞保持HIV复制的能力减少＞70％或减少但在治疗程度上，或将HIV减少＞70％或减少但在治疗程度上的任何合成寡核甘酸序列。
miRNA序列的例子包括由IVGN算法(Invitrogen)衍生的miRNA序列。靶向CXCR4基因的miRNA序列包括上游链：5′-TGCTGATACCAGGCΛGGATAAGGCCΛGTTTTGGCCACTGΛCTGACTGG
CCTTACTGCCT GGTAT-3′和下游链：
5′-
CCTGATΛCCAGGCAGTAAGGCCAGTCAGTCAGTGGCCAAAACTGGCCT
TATCCTGCCTG GTATC-3′；以及上游链：
5′-
TGCTGTGACCAGGATGACCAATCCΛTGTTTTGGCCACTGACTGΛCATG
GATTGCATCCTG GTCA-3
′和下游链：5′-
CCTGTGACCAGGATGCAATCCΛTGTCAGTCΛGTGGCCΛAAACΛTGGAT
TGGTCATCCTG GTCAC-3′
类似地，靶向CCR5基因的miRNA序列包括上游链：5′-
TGCTGATCGGG
TGTAAACTGAGCTTGGTTTTGGCCACTGACTGACCAAGCTCATT
ACACCCGAT-3′和下游链：
5′-
CCTGATCGGGTGTAATGAGCTTGGTCAGTCAGTGGCCAAACCAAGCT
CAGTTT
ACACCCGATC-3；以及上游链
5′-
TGCTGATAGCTTGGTCCAACCTGTTAGTTTTGGCCACTGACTGACTAAC
AGGTGACCAAGCTAT-3；和下游链：
5′-
CCTGATAGCTTGGTCACCTGTTAGTCAGTCAGTGGCCAAAACTAACAG
GTTGGACCAAGCTATC-3′.
实施例23：适合包含在治疗载体中的诱饵RNA的例子。本发明也涉及了成功地将靶细胞保持HIV复制的能力减少＞70％或减少但在治疗程度上，或将HIV减少＞70％或减少但在治疗程度上的任何诱饵序列。
一个示例性TAR诱饵序列是
gtcgctctgcggagaggctggcagattgagccctgggaggttctctccagcactagcaggtagagcctgggtgttcc
ctgctagact
ctcaccagtgcttggccggcactgggcagacggctccacgcttgcttgcttaaagacctcttaataaagctgc
(Browning等，1999)
一个示例性RRE诱饵序列是
tgctagggttcttgggttttctcgcaacagcaggttctgcaatgggcgcggcgtccctgaccgtgtcggctcagtcccg
gactttactg
gccgggatagtgcagcaacagcaacagctgttggacgtggtcaagagacaacaagaactgttgcgactgaccgtct
ggggaacga
aaaacctccaggcaagagtcactgctatagagaagtacctacaggaccaggcgcggctaaattcatggggatg
(Dillon等，1990)。
实施例24：为RNA诱饵提供稳定性的侧翼序列。RNA诱饵适合的侧翼序列例子如下：
GUGCUCGCUUCGGCAGCACGTCGAC    -TAR    DECOY    SEQ-
UCUAGAGCGGΛCUUCGGUCCGCUUUU
GUGCUCGCUUCGGCAGCACGTCGAC    -RRE    DECOY    SEQ-
UCUAGAGCGGACUUCGGUCCGCUUUU
先前已经证明诱饵序列在任何一段被发卡序列侧翼包围，U6RNA的19个核苷酸(ntds)在5′端以及一个3′主干紧接着一个POEIII的聚U终止子，表现出更高的稳定性。这种排列预计能保护3′-5′核酸外切酶的攻击，并减少了3′末端干扰插入子RNA折叠的机会。因为只有首个3/4的tRNA序列存在，插入子的5′端应得到保护，而且应防止从细胞核中输出(Good等，1997)。
实施例25：治疗载体导入宿主
在一个优选具体实施方式中，通过将治疗载体导入宿主血液、组织或骨髓等在活体内用治疗载体(相关的治疗病毒)转染血液干/祖细胞和靶细胞。通过修饰大量的内源性靶细胞和干/祖细胞可以获得最大的益处。可以使用一种大小合适的导管样装置或针将治疗载体注射到静脉或动脉循环来达到这一目标。在一个优选具体实施方式中，用VSV-G包膜糖蛋白和原生HIV-1包膜蛋白对病毒假分型。
实施例26：基因修饰的细胞导入宿主
血细胞，例如成熟的外周血T淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、T细胞祖细胞、巨噬细胞-单核细胞祖细胞，和/或复能造血干细胞(如在脐带血中发现的和占据骨髓空间的那些)，以及其他干/祖细胞可以用治疗载体在活体外转染。治疗载体的合适浓度可能是与Browning等，1999一致的那些浓度。随后，细胞在活体外扩展(增殖)，然后使用一个静脉针或导管将细胞导入到静脉或动脉循环以将细胞转染到宿主中。随后，用治疗载体转染的细胞能够以骨髓和其他组织“为家”。
应了解，本文所述的实施例和具体实施方式仅作为说明用途，而且对其进行的各种修改或更改将为所属领域的技术人员提供建议，并被纳入本申请的精神和范围及所附的权利要求的范围之内。本文所引用的所有出版物、专利和专利申请以全文引用的方式并入本文，以用于所有的用途。
实施例27：本发明利用的表达的或靶转基因的例子。
有效满足本发明的任何转基因序列适用于本发明。只要获得所要的细胞或行为，可以从任何种类中抽取合适的核苷酸序列。同样，命名此类序列的方法，在本文中无论是小写或大写字母，并不意味着某一特殊种类。NCBI数据库(根据登记编号列出)保存的以下序列代表了本申请以上参照的序列的例子。它们也是适用于本发明的特异性转基因编码序列(cds)的例子，但不以任何方式限制发明的实施：心肌营养素
cardiotrophin1：U43030(SEQ ID NO：18)：
atgagccggagggagggaagtctggaagacccccagactgattcctcagtctcacttcttccccacttggaggccaa
gatccgtcagacacacagccttgcgca
cctcctcaccaaatacgctgagcagctgctccaggaatatgtgcagctccagggagaccccttcgggctgcccagct
tctcgccgccgcggctgccggtggcc
30
ggcctgagcgccccggctccgagccacgcggggctgccagtgcacgagcggctgcggctggacgcggcggcg
ctggccgcgctgcccccgctgctggac
gcagtgtgtcgccgccaggccgagctgaacccgcgcgcgccgcgcctgctgcgccgcctggaggacgcggcgc
gccaggcccgggccctgggcgccgc
cgtggaggccttgctggccgcgctgggcgccgccaaccgcgggccccgggccgagccccccgccgccaccgcc
tcagccgcctccgccaccggggtcttc
cccgccaaggtgctggggctccgcgtttgcggcctctaccgcgagtggctgagccgcaccgagggcgacctgggc
cagctgctgcccgggggctcggcctg
a；NM_001330；NM_013246；BC064416；BC036787；BC049822.
CNTF：BC074964(SEQ ID NO：19)：
atggctttcacagagcattcaccgctgacccctcaccgtcgggacctctgtagccgctctatctggctagcaaggaag
attcgttcagacctgactgctcttacgga
5
atcctatgtgaagcatcagggcctgaacaagaacatcaacctggactctgcggatgggatgccagtggcaagcactg
atcagtggagtgagctgaccgaggca
gagcgactccaagagaaccttcaagcttatcgtaccttccatgttttgttggccaggctcttagaagaccagcaggtgc
attttaccccaaccgaaggtgacttccat
caagctatacatacccttcttctccaagtcgctgcctttgcataccagatagaggagttaatgatactcctggaatacaag
atcccccgcaatgaggctgatgggatg
cctattaatgttggagatggtggtctctttgagaagaagctgtggggcctaaaggtgctgcaggagctttcacagtgga
cagtaaggtccatccatgaccttcgtttc
atttcttctcatcagactgggatcccagcacgtgggagccattatattgctaacaacaagaaaatgtag；
NM_000614；NM_147164；
10
NM_001842.
GP130：NM_175767(SEQ ID NO：20)：
atgttgacgttgcagacttggctagtgcaagccttgtttattttcctcaccactgaatctacaggtgaacttctagatccatg
tggttatatcagtcctgaatctccagttgt
acaacttcattctaatttcactgcagtttgtgtgctaaaggaaaaatgtatggattattttcatgtaaatgctaattacattgtc
tggaaaacaaaccattttactattcctaa
ggagcaatatactatcataaacagaacagcatccagtgtcacctttacagatatagcttcattaaatattcagctcacttg
caacattcttacattcggacagcttgaac
15
agaatgtttatggaatcacaataatttcaggcttgcctccagaaaaacctaaaaatttgagttgcattgtgaacgagggg
aagaaaatgaggtgtgagtgggatggt
ggaagggaaacacacttggagacaaacttcactttaaaatctgaatgggcaacacacaagtttgctgattgcaaagca
aaacgtgacacccccacctcatgcact
gttgattattctactgtgtattttgtcaacattgaagtctgggtagaagcagagaatgcccttgggaaggttacatcagatc
atatcaattttgatcctgtatataaagtga
agcccaatccgccacataatttatcagtgatcaactcagaggaactgtctagtatcttaaaattgacatggaccaaccca
agtattaagagtgttataatactaaaatat
aacattcaatataggaccaaagatgcctcaacttggagccagattcctcctgaagacacagcatccacccgatcttcat
tcactgtccaagaccttaaaccttttaca
20
gaatatgtgtttaggattcgctgtatgaaggaagatggtaagggatactggagtgactggagtgaagaagcaagtggg
atcacctatgaagataacattgcctcctt
ttga；NM_002184；EF442778.
IL6：BC015511(SEQ ID NO：21)：
atgaactccttctccacaagcgccttcggtccagttgccttctccctggggctgctcctggtgttgcctgctgccttccct
gccccagtacccccaggagaagattcc
aaagatgtagccgccccacacagacagccactcacctcttcagaacgaattgacaaacaaattcggtacatcctcgac
ggcatctcagccctgagaaaggagac
25
atgtaacaagagtaacatgtgtgaaagcagcaaagaggcactggcagaaaacaacctgaaccttccaaagatggct
gaaaaagatggatgcttccaatctggatt
caatgaggagacttgcctggtgaaaatcatcactggtcttttggagtttgaggtatacctagagtacctccagaacagat
ttgagagtagtgaggaacaagccaga
gctgtgcagatgagtacaaaagtcctgatccagttcctgcagaaaaaggcaaagaatctagatgcaataaccacccct
gacccaaccacaaatgccagcctgctg
acgaagctgcaggcacagaaccagtggctgcaggacatgacaactcatctcattctgcgcagctttaaggagttcctg
cagtccagcctgagggctcttcggcaa
atgtag；AB 107656.
30
HOXB4：NM_024015(SEQ ID NO：22)：
atggctatgagttcttttttgatcaactcaaactatgtcgaccccaagttccctccatgcgaggaatattcacagagcgatt
acctacccagcgaccactcgcccggg
tactacgccggcggccagaggcgagagagcagcttccagccggaggcgggcttcgggcggcgcgcggcgtgca
ccgtgcagcgctacgcggcctgccgg
gaccctgggcccccgccgcctccgccaccacccccgccgcccccgccaccgcccggtctgtcccctcgggctcct
gcgccgccacccgccggggccctcct
cccggagcccggccagcgctgcgaggcggtcagcagcagccccccgccgcctccctgcgcccagaaccccctg
caccccagcccgtcccactccgcgtgc
35
aaagagcccgtcgtctacccctggatgcgcaaagttcacgtgagcacggtaaaccccaattacgccggcggggagc
ccaagcgctctcggaccgcctacacg
cgccagcaggtcttggagctggagaaggaatttcactacaaccgctacctgacacggcgccggagggtggagatc
gcccacgcgctctgcctctccgagcgc
cagatcaagatctggttccagaaccggcgcatgaagtggaaaaaagaccacaagttgcccaacaccaagatccgct
cgggtggtgcggcaggctcagccgga
gggccccctggccggcccaatggaggcccccgcgcgctctag；NM_010459.
IL6R：NM_000565(SEQ ID NO：23)：
atgctggccgtcggctgcgcgctgctggctgccctgctggccgcgccgggagcggcgctggccccaaggcgctg
ccctgcgcaggaggtggcgagaggcg
tgctgaccagtctgccaggagacagcgtgactctgacctgcccgggggtagagccggaagacaatgccactgttca
ctgggtgctcaggaagccggctgcag
gctcccaccccagcagatgggctggcatgggaaggaggctgctgctgaggtcggtgcagctccacgactctggaa
actattcatgctaccgggccggccgccc 
5                                                                                                                                                                                                                                                           
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15
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IL11：NM_133519(SEQ ID NO：24)：
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NM_008350.
LIF：NM_002309(SEQ ID NO：25)：
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25
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30
BB235045.
LIFR：NM_002310(SEQ ID NO：26)：
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25
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10
NUMB：AF171938(SEQ ID NO：28)：
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30
AF171939(SEQ ID NO：29)：
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10
AF171940(SEQ ID NO：30)：
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30
AF171941(SEQ ID NO：31)：
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ggcaccacaatctcctaccttccaaggg
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NM_010949；NM_133287；
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Numblike：NM_00475(SEQ ID NO：32)：
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20
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ccacgctgcagcgccgcactgacttcc
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cgccagcaccagggccaccacctgccacaacagggacttctgcctggggtgagccctccgtgccccctgcagctg
ccttccagcctgggcacaagcggacac
cttcagaggctgagcgatggctggaggaggtgtcacaggtggccaaggcccagcagcagcagcagcagcaacag
caacagcagcagcagcagcagcagc
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25
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cgggtgcccgtggtgggcatcacacc
ctcacagatggtggcaaacgccttctgctcagccgcccagctccagcctcagcctgccactctgcttgggaaagctg
gggccttcccgccccctgccatacccag
tgcccctgggagccaggcccgccctcgccccaatggggccccctggccccctgagccagcgcctgccccagctcc
agagttggacccctttgaggcccagtg
ggcggcattagaaggcaaagccactgtagagaaaccctccaaccccttttctggcgacctgcaaaagacattcgaga
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30
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atttgtgggcctgaagaaaactatccat
ccttgcaaatgtcttctgctgagatgcctcacacggagactgtctctcctcttccttcctccatggatctgcttattcagga
cagccctgattcttccaccagtcccaaa
ggcaaacaacccacttctgcagagaagagtgtcgcaaaaaaggaagacaaggtcccggtcaagaaacagaagac
cagaactgtgttctcttccacccagctgt
gtgtactcaatgatagatttcagagacagaaatacctcagcctccagcagatgcaagaactctccaacatcctgaacct
cagctacaaacaggtgaagacctggtt
35
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ggcctcagcacctacctaccccagcctt
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tcaacctggagcaaccagacccagaa
catccagtcctggagcaaccactcctggaacactcagacctggtgcacccaatcctggaacaatcaggcctggaaca
gtcccttctataactgtggagaggaatct
ctgcagtcctgcatgcagttccagccaaattctcctgccagtgacttggaggctgccttggaagctgctggggaaggc
cttaatgtaatacagcagaccactaggt
attttagtactccacaaaccatggatttattcctaaactactccatgaacatgcaacctgaagacgtgtga；
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atgggggtactgctcacacagaggacgctgctcagtctggtccttgcactcctgtttccaagcatggcgagcatggcg
gctataggcagctgctcgaaagagtac
cgcgtgctccttggccagctccagaagcagacagatctcatgcaggacaccagcagactcctggacccctatatacg
tatccaaggcctggatgttcctaaactg
5
agagagcactgcagggagcgccccggggccttccccagtgaggagaccctgagggggctgggcaggcggggct
tcctgcagaccctcaatgccacactgg
gctgcgtcctgcacagactggccgacttagagcagcgcctccccaaggcccaggatttggagaggtctgggctgaa
catcgaggacttggagaagctgcagat
ggcgaggccgaacatcctcgggctcaggaacaacatctactgcatggcccagctgctggacaactcagacacggct
gagcccacgaaggctggccgggggg
cctctcagccgcccacccccacccctgcctcggatgcttttcagcgcaagctggagggctgcaggttcctgcatggct
accatcgcttcatgcactcagtggggc
gggtcttcagcaagtggggggagagcccgaaccggagccggagacacagcccccaccaggccctgaggaagg
gggtgcgcaggaccagaccctccagg
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atggctctatttgcagtctttcagacaacattcttcttaacattgctgtccttgaggacttaccagagtgaagtcttggctga
acgtttaccattgactcctgtatcacttaa
agtttccaccaattctacgcgtcagagtttgcacttacaatggactgtccacaaccttccttatcatcaggaattgaaaatg
gtatttcagatccagatcagtaggattg
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15
ctttgtaagaataaagagtttggtggacgatgccaagttccctgagccaaatttctggagcaactggagttcctgggag
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ggacaaatatctattgtgaggcaagtcaa
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cttgggatcctgggacggacactgccttggggtggtctaaacaaccttcccaaagctacactttatttgaatcattttctg
gggaaaagaaactttgtacacacaaaa
20
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actccataaggaataatttcacatatttgt
gtcagattgaactccatggtgaaggaaaaatgatgcaatacaatgtttccatcaaggtgaacggtgagtacttcttaagt
gaactggaacctgccacagagtacatg
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gctgctccctcagaggcccctgatgtct
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aaagatcctgttctataatgtagttgtaga
25
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gtgttcctaccaaatctgcgtcatagcca
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gaattgcaggcacagagggtggattctc
tctgtcttggaaaccccaacctggagatgttataggctatgttgtggactggtgtgaccatacccaggatgtgctcggtg
atttccagtggaagaatgtaggtcccaa
taccacaagcacagtcattagcacagatgcttttaggccaggagttcgatatgacttcagaatttatgggttatctacaaa
aaggattgcttgtttattagagaaaaaaa
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30
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caaaattgacaacccggaagaaaaggcattgattgtggacaacctaaagccagaatccttctatgagtttttcatcactc
cattcactagtgctggtgaaggccccag
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cttgctcatcatggtcatgtgctacttgaa
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aggagaaccctcacctaataataatgaa
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gaagtcactcacagaaaccgagttgact
35
aagcctaactacctttatctccttccaacagaaaagaatcactctggccctggcccctgcatctgttttgagaacttgacc
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ctagaaaaaaactacatgaactccctgg
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cccaacaaacccagtagaggcaccac
actgttcagagtataaaatgcaaatggcagtctccctgcgtcttgccttgcctcccccgaccgagaatagcagcctctc
ctcaattacccttttagatccaggtgaaca
ctactgctaa；NP_003990.t
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gtgtttatgttcttacaagtcttctgcctttt
aaaatccagtcccaggacatcaaagctctgcagaaagaactcgagcaatttgccaagctcctgaagcagaagaggat
caccctgggatatacacaggccgatgt
ggggctcaccctgggggttctatttgggaaggtattcagccaaacgaccatctgccgctttgaggctctgcagcttagc
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5
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tcgagaaccgagtgagaggcaacctggagaatttgttcctgcagtgcccgaaacccacactgcagcagatcagcca
catcgcccagcagcttgggctcgagaa
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ggattttgaggctgctgggtctcctttctc
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actgtactcctcggtccctttccctgagg
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10
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agccgggctgggttgatcctcggacct
ggctaagcttccaaggccctcctggagggccaggaatcgggccgggggttgggccaggctctgaggtgtggggg
attcccccatgccccccgccgtatgagtt
ctgtggggggatggcgtactgtgggccccaggttggagtggggctagtgccccaaggcggcttggagacctctcag
cctgagggcgaagcaggagtcgggg
tggagagcaactccgatggggcctccccggagccctgcaccgtcacccctggtgccgtgaagctggagaaggaga
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15
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atacacaggccgatgtggggctcaccct
gggggttctatttgggaaggtattcagccaaacgaccatctgccgctttgaggctctgcagcttagcttcaagaacatgt
gtaagctgcggcccttgctgcagaagt
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gaaagcgaaccagtatcgagaaccga
gtgagaggcaacctggagaatttgttcctgcagtgcccgaaacccacactgcagcagatcagccacatcgcccagc
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gagtgtggttctgtaaccggcgccagaagggcaagcgatcaagcagcgactatgcacaacgagaggattttgaggc
tgctgggtctcctttctcagggggacca
20
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caccgcggcggcggccggcggcaac
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25
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cgctgcccggcgggctgctggccccc
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agttacgcgcacatgaacggctggagc
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ctccttcccaacaactacaacgcctacg
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caccatgaaggtcacccacttcctccc
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5
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10
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tccaccccggaggcttcctggggggac
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ccctgtctgcaacgcctgtggcctctact
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ccggactcttcccccccagcagcctgct
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ccaatggggaccctgtctgcaatgcctg
tgggctctactacaagcttcacaatattaacagacccctgactatgaagaaggaaggcatccagaccagaaacc gaa
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aaaagtgcatgactcactggaggacttccccaagaacagctcgtttaacccggccgccctctccagacacatgtcctc
cctgagccacatctcgcccttcagccac
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gcctggcgtccccagtgtgccctgggc
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cgagcccccaggctggcctcaggggggctctgcgccaagaggcctggtgtgcgctggccttggcctag；
BC105654.
25
Gata6：NM_005257(SEQ ID NO：44)：
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gcctgcagagccgcgccggagcccc
gctcccggtgccccggggtcccagtgcagacctgctggaggacctgtccgagagccgcgagtgcgtgaactgcgg
ctccatccagacgccgctgtggcggc
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tcaagccgcagaagcgcgtgccttcat
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cccgtgtgcaatgcttgtggactctacat
gaaactccatggggtgcccagaccacttgctatgaaaaaagagggaattcaaaccaggaaacgaaaacctaagaac
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tagcaataattccattcccatgactccaacttccacctcttctaactcagatgattgcagcaaaaatacttcccccacaac
acaacctacagcctcaggggcgggtgc
cccggtgatgactggtgcgggagagagcaccaatcccgagaacagcgagctcaagtattcgggtcaagatgggct
ctacataggcgtcagtctcgcctcgccg
gccgaagtcacgtcctccgtgcgaccggattcctggtgcgccctggccctggcctga；AF 179425；
EF444980；NM_005257；
5
NP_005248.
HNF1：NM_000458(SEQ ID NO：45)：
atggtgtccaagctcacgtcgctccagcaagaactcctgagcgccctgctgagctccggggtcaccaaggaggtgct
ggttcaggccttggaggagttgctgcc
atccccgaacttcggggtgaagctggagacgctgcccctgtcccctggcagcggggccgagcccgacaccaagcc
ggtcttccatactctcaccaacggccac
gccaagggccgcttgtccggcgacgagggctccgaggacggcgacgactatgacacacctcccatcctcaaggag
ctgcaggcgctcaacaccgaggagg
10
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cccagaagcgtgccgctctgtacacctg
gtacgtcagaaagcaacgagagatcctccgacaattcaaccagacagtccagagttctggaaatatgacagacaaaa
gcagtcaggatcagctgctgtttctcttt
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gccgcaaccggttcaaatgggggccc
gcgtcccagcaaatcttgtaccaggcctacgatcggcaaaagaaccccagcaaggaagagagagaggccttagtg
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15
cagcgaggggtgtccccctccaaagcccacggcctgggctccaacttggtcactgaggtccgtgtctacaactggttt
gcaaaccgcaggaaggaggaggcatt
ccggcaaaagctggccatggacgcctatagctccaaccagactcacagcctgaaccctctgctctcccacggctccc
cccaccaccagcccagctcctctcctc
caaacaagctgtcaggagtgcgctacagccagcagggaaacaatgagatcacttcctcctcaacaatcagtcaccat
ggcaacagcgccatggtgaccagcca
gtcggttttacagcaagtctccccagccagcctggacccaggccacaatctcctctcacctgatggtaaaatgatctca
gtctcaggaggaggtttgcccccagtca
gcaccttgacgaatatccacagcctctcccaccataatccccagcaatctcaaaacctcatcatgacacccctctctgg
agtcatggcaattgcacaaagcctcaac
20
acctcccaagcacagagtgtccctgtcatcaacagtgtggccggcagcctggcagccctgcagcccgtccagttctc
ccagcagctgcacagccctcaccagca
gcccctcatgcagcagagcccaggcagccacatggcccagcagcccttcatggcagctgtgactcagctgcagaa
ctcacacatgtacgcacacaagcagga
acccccccagtattcccacacctcccggtttccatctgcaatggtggtcacagataccagcagcatcagtacactcacc
aacatgtcttcaagtaaacagtgtcctct
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NM_012669(SEQ ID NO：46)：
25
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atccaggctctgggggagcccgggcc
ctacctgatggttggagatggtcccctggacaagggggagtcctgcggtgggactcgaggggacctgaccgagctg
cccaatggcctgggggagacgcgtg
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cagaggaggcagcccaccagaaagcc
gtggtggagtcacttcttcaggaggacccatggcgcgtggcaaagatggtcaagtcgtacctgcagcaacacaacat
cccccagcgggaggtggtggacacta
cgggtctcaaccagtcccacctgtcccagcacctcaacaagggcacccccatgaagacgcagaagcgggccgcg
ctgtacacctggtacgtccgcaagcagc
30
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ccaaaaaggggcggaggaaccggtt
caagtggggccccgcatcccagcagatcctgttccaggcttacgagaggcagaagaaccccagcaaggaagagc
gagagaccttggtggaggagtgcaata
gggcggagtgcatccagagaggggtgtcaccatcgcaggcccaggggctaggctccaaccttgtcaccgaggtgc
gtgtctacaactggtttgccaaccggcg
caaggaagaagcctttcggcataagctggccatggacacgtataacgggcctccacccgggccaggccccggccc
tgcgctacctgcccacagttccccggg
cctgcccacaaccaccctctctcccagtaaggtccacggtgtgcggtatggacagtctgcaaccagcgaggcagctg
aggtgccctccagcagcggaggtccc
35
ttagtcacagtgtctgcggccttacaccaagtgtcccccacaggcttggagcccagcagcctgctgagcaccgaggc
caagctggtctcagccacggggggtc
ccctgcctcccgtcagcaccctgacagcactgcacagcttggagcagacgtctccaggtctcaaccagcagccgca
gaaccttatcatggcctcgctgcctggg 
gtcatgaccatcggcccaggggagcccgcctccctgggtcccacgttcactaacacgggtgcctctaccctggtcatt
ggtctggcctccacacaggcacagag
cgtgccagtcatcaacagcatggggagcagcctgaccaccctgcagccggtccagttttcccagccactgcaccctt
cctatcagcagcctctcatgccccctgta
cagagccacgtggcccagagtcccttcatggcaaccatggcccagctgcagagcccccacgccctgtacagccac
aagcctgaggtggcccagtacacgcat
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aggtcttcacctcagacacagaggcctc
cagtgagcctgggcttcatgagccgtcgtctccagccacaaccattcacatccccagccaggacccgtcaaacatcc
agcacctgcagcctgctcaccggctca
gcaccagtcccacagtgtcctccagcagcctggtgttgtaccagagttctgactccaacgggcacagccacctgctg
ccatccaaccacggtgtcatcgagacttt
tatctccacccagatggcctcctcctcccagtaa；NM_009330.
HNF3：X74936(SEQ ID NO：47)：
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tactcctctgtccctgtcagcaacatga
actccggcctgggctctatgaactccatgaacacctacatgaccatgaacaccatgaccacgagcggcaacatgacc
ccggcttccttcaacatgtcctacgcca
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gcatgactgcggcgggcgtcacggcc
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ccctacgccgccgccatgaacccgtg
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ttcaagcgcagctaccctcacgccaag
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ctaccagtggatcatggacctcttcccct
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cacgatccccagacaagccaggcaag
ggctcctactggacgctgcacccggactccggcaacatgttcgagaacggctgctacttgcgccgccaaaagcgctt
caagtgtgagaagcagccgggggcc
ggaggtgggagtgggggcggcggctccaaagggggcccagaaagtcgcaaggacccctcaggcccggggaac
cccagcgccgagtcaccccttcattgg
15
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gggcgcttcggagttgaagtctccagcgtcttcatctgcgccccccataagctccgggccaggggcgctggcatctg
tacccccctctcacccggctcacggcct
ggcaccccacgaatctcagctgcatctgaaaggggatccccactactcctttaatcaccccttctccatcaacaacctc
atgtcctcctccgagcaacagcacaagc
tggacttcaaggcatacgagcaggcgctgcagtactctccttatggcgctaccttgcccgccagtctgccccttggca
gcgcctcagtggccacgaggagcccc
atcgagccctcagccctggagccagcctactaccaaggtgtgtattccagacccgtgctaaatacttcctag
20
HNF3gammaX74938M (SEQ ID NO：48)：
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ctccagtgaatcctgtgcccaccatggc
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cactgcgcccttggggcccaccttcccaagcttgggcactggtggcagcaccggaggcagtgcttccgggtatgtag
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ggctattcagcaggctccaggcaagat
gctgaccctgagtgaaatctaccaatggatcatggacctcttcccgtactaccgggagaaccagcaacgttggcaga
actccatccggcattcgctgtccttcaatg
actgcttcgtcaaggtggcacgctccccagacaagccaggcaaaggctcctactgggccttgcatcccagctctggg
aacatgtttgagaacggatgctatctcc
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tactgcggggtcagccacctctgccac
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ctcacctccttcgtccacaccttatttcagcggcctggagctcccgggggaactaaagttggatgcgccctataacttca
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tcagaacagacatcgacaccttccaaactggatgtggggtttgggggctacggggctgagagtggggagcctggag
tctactaccagagcctctattcccgctct
ctgcttaatgcatcctag
HNF3betaX74937(SEQ ID NO：49)：
35
atgctgggagccgtgaagatggaagggctcgagccatccgactggagcagctactacgcggagcccgagggcta
ctcttccgtgagcaacatgaacgccggc
ctggggatgaatggcatgaacacatacatgagcatgtccgcggctgccatgggcggcggttccggcaacatgagcg
cgggctccatgaacatgtcatcctatgt
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ccggggcggccggcgtggcgggcat
gggacctcacctgagtccgagtctgagcccgctcgggggacaggcggccggggccatgggtggccttgcccccta
cgccaacatgaactcgatgagccccat
gtacgggcaggccggcctgagccgcgctcgggaccccaagacataccgacgcagctacacacacgccaaacctc
cctactcgtacatctcgctcatcaccatg
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cggcagaaccagcagcgctggcagaa
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ccgcgggtgcggccagtagcggagg
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ggcgggcaccgagtccccccattcca
5
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tcccgagccggcgccctcgcctgggc
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cccgagcaccattacgccttcaaccacc
ccttctctatcaacaacctcatgtcgtccgagcagcaacatcaccacagccaccaccaccatcagccccacaaaatgg
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atgcctcgcccctggctgcagacacttc
ctactaccaaggagtgtactccaggcctattatgaactcatcctaa
10
HNF3G：AH008133(SEQ ID NO：50)：
atgctgggctcagtgaagatggaggcccatgacctggccgagtggagctactacccggaggcgggcgaggtctac
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gcccccctcaactcctacatgaccctgaatcctctaagctctccctatccccctggggggctccctgcctccccactgc
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cgggtcctgggctggtgcacgggaag
15
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cattcgccactcgctgtctttcaacgact
gcttcgtcaaggtggcgcgttccccagacaagcctggcaagggctcctactgggccctacaccccagctcagggaa
catgtttgagaatggctgctacctgcgc
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ggacagggtctgctgcctcgaccacca
cccccgcggccacagtcacctccccgccccagcccccgcctccagcccctgagcctgaggcccagggcggggaa
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agaacagacaccagcacctcccaaactggacgtggggtttgggggctacggggctgaaggtggggagcctggagt
ctactaccagggcctctattcccgctctt
tgcttaatgcatcctag
HNF3A：AH008132(SEQ ID NO：51)：
25
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tactcctcggtcccggtcagcaacatga
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ccggcgtccttcaacatgtcctatgcca
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ccatgggtacggcgctgagcccgagcggcatgggcgccatgggtgcgcagcaggcggcctccatgatgaatggc
ctgggcccctacgcggccgccatgaac
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30
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tcccctattaccggcagaaccagcagcgctggcagaactccatccgccactcgctgtccttcaatgactgcttcgtcaa
ggtggcacgctccccggacaagccgg
gcaagggctcctactggacgctgcacccggactccggcaacatgttcgagaacggctgctacttgcgccgccagaa
gcgcttcaagtgcgagaagcagccgg
gggccggcggcgggggcgggagcggaagcgggggcagcggcgccaagggcggccctgagagccgcaagga
cccctctggcgcctctaaccccagcgc
cgactcgcccctccatcggggtgtgcacgggaagaccggccagctagagggcgcgccggccccgggcccggcc
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35
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gcccggggcgctggcctctgtgcccgc
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gcccgccagcctgcctctaggcagcg
cctcggtgaccaccaggagccccatcgagccctcagccctggagccggcgtactaccaaggtgtgtattccagacc
cgtcctaaacacttcctag
HNF4alpha：NM_008261(SEQ ID NO：52)：
atgcgactctctaaaacccttgccggcatggatatggccgactacagcgctgccctggacccagcctacaccaccct
ggagtttgaaaatgtgcaggtgttgacc
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catctgtggcgaccgggccaccggcaa
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tgcaggtttagccgacaatgtgtggtag
5
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gatcacctctcccatctctgggatcaatg
gcgacattcgggcaaagaagattgccaacatcacagacgtgtgtgagtctatgaaggagcagctgctggtcctggtc
gagtgggccaagtacatcccggccttct
gcgaactccttctggatgaccaggtggcgctgctcagggcccacgccggtgagcatctgctgcttggagccaccaa
gaggtccatggtgtttaaggacgtgctg
ctcctaggcaatgactacatcgtccctcggcactgtccagagctagcggagatgagccgtgtgtccatccgcatcctc
gatgagctggtcctgcccttccaagagc
10
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gggcaagatcaagcggctgcggtcaca
ggtgcaagtgagcctggaggattacatcaacgaccggcagtacgactctcggggccgctttggagagctgctgctg
ctgttgcccacgctgcagagcatcacct
ggcagatgatcgaacagatccagttcatcaagctcttcggcatggccaagattgacaacctgctgcaggagatgcttc
tcggagggtctgccagtgatgcacccc
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ctcacctcagcaatggacagatgtgtga
gtggccccgacccagggggcaggcagccactcccgagactccacagccatcaccaccaagtggctcgggatctg
aatcctacaagctcctgccaggagccat
15
caccaccatcgtcaagcctccctctgccattccccagccaacgatcaccaagcaagaagccatctag
HNF4a：NM_022180(SEQ ID NO：53)：
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atgggcaatgacacatccccatctgaag
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20
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caaagataagaggaaccagtgtcgttac
tgcaggctcaagaagtgcttccgggctggcatgaagaaagaagccgtccaaaatgagc gggatcggatcagcacg
cggaggtcaagctacgaggacagcag
cctaccctccattaatgcgctcctgcaggcagaggtcctgtctcagcagatcacctcccccatctctgggatcaatggc
gacattcgggccaagaagattgccaac
atcacggatgtgtgtgagtctatgaaggagcagctgctggttctggtcgaatgggccaagtacatcccggccttctgtg
aacttcttctggatgaccaggtggcgct
gctcagagcccacgctggtgagcacctgctgcttggagccaccaagaggtccatggtgttcaaggatgtgctgctcct
aggcaatgactacatcgtccctcggca
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aagccatcatcttctttgacccagatgccaaggggctgagtgacccaggcaagatcaagcggctgcggtcacaggtg
caggtgagcctggaggattacatcaac
gaccggcagtatgactctcggggtcgttttggagagctgctgctgctcctgcccactctgcagagcattacctggcag
atgatcgagcagatccagttcatcaagc
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caccaccccctgcaccctcacctgatgc
aagaacacatgggcaccaatgtcatagttgccaacacgatgccctctcacctcagcaatggacagatgtgtgagtgg
ccccggcccagggggcaggcagccac
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ccctgagactccacagccatcaccaccaagtggctctggatctgaatcctacaagctcctgccaggagccatcacca
ccatcgtcaagcctccctctgccatcccc
cagccaacgatcaccaagcaggaagccatctag
HNF6：U95945(SEQ ID NO：54)：
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accaccaccaccaccgcgcccctgagcacagcttggctggccccctgcaccccaccatgaccatggcctgtgaaac
tcccccaggtatgagcatgcccaccac
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caccatcaccaccaccacccacaccac
caccagcgcctggcgggcaacgtgagcggtagtttcacacttatgcgggatgagcgcgggctggcctctatgaataa
cctctataccccctaccacaaggacgt
ggctggcatgggccagagcctctcgcccctctctggctccggtctgggcagcattcacaactcccagcaaggacttc
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cacctcacgcccacctcggccggcat
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gccctggagcaaactcaagtcgggtcg
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ctgcaaacggaaagagcaagaacatg
ggaaggacagaggcaacacccccaaaaagcccaggctggtcttcacagacgtccaacgtcgaactctacatgcaat
attcaaggaaaataagcgtccgtccaa
agaattacaaatcaccatctcccagcagctggggttggagctgagcactgtcagcaacttcttcatgaatgccagaag
gaggagtctggacaagtggcaggacg
agggcggctccaactcaggcagttcatcgtcctcatcgagcacttgtaccaaagcatga
HLXB9：NM_001096823(SEQ ID NO：55)：
atggagaagtccaagaatttcaggattgacgctctcctggcgatagatccccccaaggctcagacctccccattggct
ctggtcacctcgctgtcctcctcgtctctc
tccgggagccccccgtccgagcacactgacagcctcaggactgactccccctcccctccaaggacttgtggactggt
ccctaaaccaggtttcctgagcagcca
ccagcaccccccaaacatgatgtcattgcacccccaggctgctccagggatcccccctcaggccctgtatggacacc
cgatgtacagctacttggcagcggggc
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agcgctggcaccttccaactggaccag
tggctcagagcctccactgccggcatgatgctgcccaaaatggcagactttaactcccaggcccaatccaacctgctg
ggaaagtgcagaagaccaaggacag
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cgtttaccagtcagcagctgttggaactggagcaccaattcaagctgaacaagtacctctccaggccgaaacgctttg
aagtggccacttccctgatgctcactga
gacgcaggtgaagatctggttccagaacaggcgcatgaaatggaagaggagtaagaaagccaaggagcaggcgg
cgcaggactcagcagagaaacagca
gagggcaggcaagggcagcagcgaggagaagtgctcggatgagctgcaggaagagaagaaatcctaccatctcc
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aacggccgcctgcagcccagagactatacagacagcgaagaggacgaggaggaggacagggaagaggaggaa
gaggaagatcacagaggggagggga
agcggttttaccatcattcttctgactgcacatccgaggaagaggagaacagccacaataagcagagcggccactga；
NM_019944.
20
(SEQ ID NO：56)
atggaaaaatccaaaaatttccgcatcgacgccctgctggccgtggatcccccgcgagccgcctccacgcagagcg
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tgcgcaccctgccgaccccatcaagct
gggtgccagcaccttccaactggaccagtggctgcgcgcgtctactgcgggcatgatcctgcccaagatgccggac
ttcagctgtcaggcgcagtcgaacctct
tggggaagtgccgaaggcctcgcacggccttcaccagccagcagctgttggagctggaacaccagttcaagctcaa
caagtacctgtctcgacccaagcgtttt
gaggtggctacctcgctcatgctcaccgagactcaggtgaagatttggttccagaaccgccgaatgaaatggaaacg
cagcaaaaaggccaaagagcaggctg
30
cgcaggaggcggagaagcagaagggcggcggcgggggcaccggcaaaggcggcagtgaggagaagacgga
agaggagctgatggggcctccggtttc
gggggacaaggcaagcggccgtcgcctgcgggacttgcgggacagtgaccctgatgaggacgaggatgatgaag
aagaggacaacttcccgtacagcaatg
gtgccggtgcccatgctgcctcatccgactgctcatctgaggacgactcgcctcctccaagactaggcgggcctgga
caccaacctctgccccagtag
NM_005515(SEQ ID NO：57)：
35
atggaaaaatccaaaaatttccgcatcgacgccctgctggccgtggatcccccgcgagccgcctccacgcagagcg
cgcctctggccttggtcacttccctcgc
gactacagtatctggtcccggccgcggcggcagcggcggcggggggaccagtagcggggcgagccgtagctgc
agtcccgcatcctcggaggccactgca
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aagcccggattcctgggcgccggagg
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tgccgctgccgctgccgcggctgccg
gtggcctggcactggggctgcacccggggggcgcacagggcggcgcgggcctccctgcacaggcggctctctat
ggacacccggtctacagttattcggcag
cagctgcagcggccgcgctagctggccagcacccggcgctttcctactcataccctcaggtgcagggcgcgcaccc
tgcgcaccctgccgaccccatcaagct 
gggtgccagcaccttccaactggaccagtggctgcgcgcgtctactgcgggcatgatcctgcccaagatgccggac
ttcagctgtcaggcgcagtcgaacctct
tggggaagtgccgaaggcctcgcacggccttcaccagccagcagctgttggagctggaacaccagttcaagctcaa
caagtacctgtctcgacccaagcgtttt
gaggtggctacctcgctcatgctcaccgagactcaggtgaagatttggttccagaaccgccgaatgaaatggaaacg
cagcaaaaaggccaaagagcaggctg
cgcaggaggcggagaagcagaagggcggcggcgggggcaccggcaaaggcggcagtgaggagaagacgga
agaggagctgatggggcctccggtttc
gggggacaaggcaagcggccgtcgcctgcgggacttgcgggacagtgaccctgatgaggacgaggatgatgaag
aagaggacaacttcccgtacagcaatg
gtgccggtgcccatgctgcctcatccgactgctcatctgaggacgactcgcctcctccaagactaggcgggcctgga
caccaacctctgccccagtag
Lbx1：NM_006562(SEQ ID NO：58)：
atgacttccaaggaggacggcaaggcggcgccgggggaggagcggcggcgcagcccgctggaccacctgcctc
cgcctgccaactccaacaagccactga
cgccgttcagcatcgaggacatcctcaacaagccgtctgtgcggagaagttactcgctgtgcggggcggcgcacct
gctggccgccgcggacaagcacgcgc
agggcggcttgcccctggcgggccgcgcgctgctctcgcagacctcgccgctgtgcgcgctggaggagctcgcca
gcaagacgtttaaggggctggaggtc
agcgttctgcaggcagccgaaggccgcgacggtatgaccatctttgggcagcggcagacccctaagaagcggcga
aagtcgcgcacggccttcaccaaccac
cagatctatgaattggaaaagcgctttctataccagaagtacctgtcccccgccgatcgcgaccaaatcgcgcagcag
ctgggcctcaccaacgcgcaagtcatc
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aaactgggccccagcgggcagatgg
acatcgtggcgctggccgaactcgagcagaactcggaggccacagccggcggtggcggcggctgcggcagggc
caagtcgaggcccggctctccggtcct
ccccccaggcgccccgaaggccccgggcgctggcgccctgcagctctcgcctgcctctccgctcacggaccagcc
ggccagcagccaggactgctcggag
gacgaggaagacgaagagatcgacgtggacgattga；NM_010691.
Lmx1b(SEQ ID NO：59)：
atgttggacggcatcaagatggaggagcacgccctgcgccccgggcccgccactctgggggtgctgctgggctcc
gactgcccgcatcccgccgtctgcgag
ggctgccagcggcccatctccgaccgcttcctgatgcgagtcaacgagtcgtcctggcacgaggagtgtttgcagtg
cgcggcgtgtcagcaagccctcaccac
cagctgctacttccgggatcggaaactgtactgcaaacaagactaccaacagctcttcgcggccaagtgcagcggct
gcatggagaagatcgcccccaccgagt
tcgtgatgcgggcgctggagtgcgtgtaccacctgggctgcttctgctgctgcgtgtgtgaacggcagctacgcaag
ggcgacgaattcgtgctcaaggagggc
cagctgctgtgcaagggtgactacgagaaggagaaggacctgctcagctccgtgagccccgacgagtccgactcc
gtgaagagcgaggatgaagatgggga
25
catgaagccggccaaggggcagggcagtcagagcaagggcagcggggatgacgggaaggacccgcggaggc
ccaagcgaccccggaccatcctcacca
cgcagcagcgaagagccttcaaggcctccttcgaggtctcgtcgaagccttgccgaaaggtccgagagacactggc
agctgagacgggcctcagtgtgcgcgt
ggtccaggtctggtttcagaaccaaagagcaaagatgaagaagctggcgcggcggcaccagcagcagcaggagc
agcagaactcccagcggctgggccag
gaggtcctgtccagccgcatggagggcatgatggcttcctacacgccgctggccccaccacagcagcagatcgtgg
ccatggaacagagcccctacggcagc
agcgaccccttccagcagggcctcacgccgccccaaatgccagggaacgactccatcttccatgacatcgacagcg
atacctccttaaccagcctcagcgactg
30
cttcctcggctcctcagacgtgggctccctgcaggcccgcgtggggaaccccatcgaccggctctactccatgcaga
gttcctacttcgcctcctga；
NM_010725
Neurogenin(NEUROG1)：NM_006161(SEQ ID NO：60)：
atgccagcccgccttgagacctgcatctccgacctcgactgcgccagcagcagcggcagtgacctatccggcttcct
caccgacgaggaagactgtgccagact
ccaacaggcagcctccgcttcggggccgcccgcgccggcccgcaggggcgcgcccaatatctcccgggcgtctg
aggttccaggggcacaggacgacgag
35
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cggcgcgtcaaggccaacgatcgcga
gcgcaaccgcatgcacaacttgaacgcggccctggacgcactgcgcagcgtgctgccctcgttccccgacgacac
caagctcaccaaaatcgagacgctgcg
cttcgcctacaactacatctgggctctggccgagacactgcgcctggcggatcaagggctgcccggaggcggtgcc
cgggagcgcctcctgccgccgcagtg
cgtcccctgcctgcccggtcccccaagccccgccagcgacgcggagtcctggggctcaggtgccgccgccgcctc
cccgctctctgaccccagtagcccagc
cgcctccgaagacttcacctaccgccccggcgaccctgttttctccttcccaagcctgcccaaagacttgctccacaca
acgccctgtttcattccttaccactag；
BQ169355.
Neurogenin2(NEUROG2)：NM_024019(SEQ ID NO：61)：
atgttcgtcaaatccgagaccttggagttgaaggaggaagaggacgtgttagtgctgctcggatcggcctcccccgc
cttggcggccctgaccccgctgtcatcc
agcgccgacgaagaagaggaggaggagccgggcgcgtcaggcggggcgcgtcggcagcgcggggctgaggc
cgggcagggggcgcggggcggcgt
ggctgcgggtgcggagggctgccggcccgcacggctgctgggtctggtacacgattgcaaacggcgcccttcccg
ggcgcgggccgtctcccgaggcgcca
agacggccgagacggtgcagcgcatcaagaagacccgtagactgaaggccaacaaccgcgagcgaaaccgcat
gcacaacctcaacgcggcactggacgc
gctgcgcgaggtgctccccacgttccccgaggacgccaagctcaccaagatcgagaccctgcgcttcgcccacaac
tacatctgggcactcaccgagaccctg
cgcctggcggatcactgcgggggcggcggcgggggcctgccgggggcgctcttctccgaggcagtgttgctgag
cccgggaggcgccagcgccgccctga
gcagcagcggagacagcccctcgcccgcctccacgtggagttgcaccaacagccccgcgccgtcctcctccgtgt
cctccaattccacctccccctacagctgc
actttatcgcccgccagcccggccgggtcagacatggactattggcagcccccacctcccgacaagcaccgctatg
cacctcacctccccatagccagggattg
tatctag；DR001447.
Neurogenin3(NEUROG3)(SEQ ID NO：62)：
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aagacgaagtgacctgccccacgtccg
ccccgcccagccccactcgcacacgggggaactgcgcagaggcggaagagggaggctgccgaggggccccga
ggaagctccgggcacggcgcggggg
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gagcgcaatcgaatgcacaacctcaac
tcggcactggacgccctgcgcggtgtcctgcccaccttcccagacgacgcgaagctcaccaagatcgagacgctgc
gcttcgcccacaactacatctgggcgct
gactcaaacgctgcgcatagcggaccacagcttgtacgcgctggagccgccggcgccgcactgcggggagctgg
gcagcccaggcggttcccccggggac
tgggggtccctctactccccagtctcccaggctggcagcctgagtcccgccgcgtcgctggaggagcgacccggg
ctgctgggggccaccttttccgcctgctt
gagcccaggcagtctggctttctcagattttctgtga；NM_009719.
MASH1：NM_004316(SEQ ID NO：63)：
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gccgcccgcagcctgtttctttgccacg
gccgcagccgcggcggccgcagccgccgcagcggcagcgcagagcgcgcagcagcagcagcagcagcagca
gcagcagcagcaggcgccgcagctg
agaccggcggccgacggccagccctcagggggcggtcacaagtcagcgcccaagcaagtcaagcgacagcgct
cgtcttcgcccgaactgatgcgctgcaa
acgccggctcaacttcagcggctttggctacagcctgccgcagcagcagccggccgccgtggcgcgccgcaacga
gcgcgagcgcaaccgcgtcaagttgg
tcaacctgggctttgccacccttcgggagcacgtccccaacggcgcggccaacaagaagatgagtaaggtggaga
cactgcgctcggcggtcgagtacatcc
gcgcgctgcagcagctgctggacgagcatgacgcggtgagcgccgccttccaggcaggcgtcctgtcgcccacca
tctcccccaactactccaacgacttgaa
ctccatggccggctcgccggtctcatcctactcgtcggacgagggctcttacgacccgctcagccccgaggagcag
gagcttctcgacttcaccaactggttctg
a；NM_008553.
MyoD：NM_010866(SEQ IDNO：64)：
atggagcttctatcgccgccactccgggacatagacttgacaggccccgacggctctctctgctcctttgagacagca
gacgacttctatgatgacccgtgtttcga
ctcaccagacctgcgcttttttgaggacctggacccgcgcctggtgcacatgggagccctcctgaaaccggaggagc
acgcacacttccctactgcggtgcacc
caggcccaggcgctcgtgaggatgagcatgtgcgcgcgcccagcgggcaccaccaggcgggtcgctgcttgctgt
gggcctgcaaggcgtgcaagcgcaa
gaccaccaacgctgatcgccgcaaggccgccaccatgcgcgagcgccgccgcctgagcaaagtgaatgaggcct
tcgagacgctcaagcgctgcacgtcca
gcaacccgaaccagcggctacccaaggtggagatcctgcgcaacgccatccgctacatcgaaggtctgcaggctct
gctgcgcgaccaggacgccgcgccc
cctggcgccgctgccttctacgcacctggaccgctgcccccaggccgtggcagcgagcactacagtggcgactca
gatgcatccagcccgcgctccaactgct
ctgatggcatgatggattacagcggccccccaagcggcccccggcggcagaatggctacgacaccgcctactaca
gtgaggcggcgcgcgagtccaggcca
gggaagagtgcggctgtgtcgagcctcgactgcctgtccagcatagtggagcgcatctccacagacagccccgctg
cgcctgcgctgcttttggcagatgcacc
accagagtcgcctccgggtccgccagagggggcatccctaagcgacacagaacagggaacccagaccccgtctc
ccgacgccgcccctcagtgtcctgcag
gctcaaaccccaatgcgatttatcaggtgctttga；NM_002478(SEQ ID NO：65)：
atggagctactgtcgccaccgctccgcgacgtagacctgacggcccccgacggctctctctgctcctttgccacaac
ggacgacttctatgacgacccgtgtttcg
5
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gcactcgcacttccccgcggcggtgca
cccggccccgggcgcacgtgaggacgagcatgtgcgcgcgcccagcgggcaccaccaggcgggccgctgccta
ctgtgggcctgcaaggcgtgcaagcg
caagaccaccaacgccgaccgccgcaaggccgccaccatgcgcgagcggcgccgcctgagcaaagtaaatgag
gcctttgagacactcaagcgctgcacgt
cgagcaatccaaaccagcggttgcccaaggtggagatcctgcgcaacgccatccgctatatcgagggcctgcaggc
tctgctgcgcgaccaggacgccgcgc
cccctggcgccgcagccgccttctatgcgccgggcccgctgcccccgggccgcggcggc gagcactacagcggc
gactccgacgcgtccagcccgcgctc
10
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cccaggcccgggaagagtgcggcggtgtcgagcctagactgcctgtccagcatcgtggagcgcatctccaccgag
agccctgcggcgcccgccctcctgctg
gcggacgtgccttctgagtcgcctccgcgcaggcaagaggctgccgcccccagcgagggagagagcagcggcg
accccacccagtcaccggacgccgcc
ccgcagtgccctgcgggtgcgaaccccaacccgatataccaggtgctctga.
Myf5：NM_005593(SEQ ID NO：66)：
15
atggacgtgatggatggctgccagttctcaccttctgagtacttctacgacggctcctgcataccgtcccccgagggtg
aatttggggacgagtttgtgccgcgagt
ggctgccttcggagcgcacaaagcagagctgcagggctcagatgaggacgagcacgtgcgagcgcctaccggcc
accaccaggctggtcactgcctcatgt
gggcctgcaaagcctgcaagaggaagtccaccaccatggatcggcggaaggcagccactatgcgcgagcggag
gcgcctgaagaaggtcaaccaggctttc
gaaaccctcaagaggtgtaccacgaccaaccccaaccagaggctgcccaaggtggagatcctcaggaatgccatc
cgctacatcgagagcctgcaggagttg
ctgagagagcaggtggagaactactatagcctgccgggacagagctgctcggagcccaccagccccacctccaac
tgctctgatggcatgcccgaatgtaaca
20
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acatagtggaccggatcacctcctcagagcaacctgggttgcctctccaggatctggcttctctctctccagttgccag
caccgattcacagcctgcaactccaggg
gcttctagttccaggcttatctatcatgtgctatga；NM_131576；NM_008656.
Myf6：NM_002469(SEQ ID NO：67)：
atgatgatggacctttttgaaactggctcctatttcttctacttggatggggaaaatgttactctgcagccattagaagtgg
cagaaggctctcctttgtatccagggag
25
tgatggtaccttgtccccctgccaggaccaaatgcccccggaagcggggagcgacagcagcggagaggaacatgt
cctggcgcccccgggcctgcagcctc
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agccgccaccctgcgcgaaaggagga
ggctaaagaaaatcaacgaggccttcgaggcactgaagcggcgaactgtggccaaccccaaccagaggctgccca
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gctatattgagcggctgcaggacctgctgcaccggctggatcagcaggagaagatgcaggagctgggggtggacc
ccttcagctacagacccaaacaagaaa
atcttgagggtgcggatttcctgcgcacctgcagctcccagtggccaagtgtttccgatcattccagggggctcgtgat
aacggctaaggaaggaggagcaagta
30
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gcgtggaggaagtggtggagaagtaa
NM_008657；NM_008657；NM_013172.
Ifrd1：NM_001007245(SEQ ID NO：68)：
atgccgaagaacaagaagcggaacactccccaccgcggtagcagtgctggcggcggcgggtcaggagcagccg
cagcgacggcggcgacagcaggtgg
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35
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gtttggaaaatatcttcactaaatcctatctcaaagagaaagacactactgttatttgcagcactcctaatacagtgcttcat
atcagctctcttcttgcatggacactact
gctgaccatatgcccaatcaatgaagtgaagaaaaagcttgagatgcatttccataagcttccaagcctcctctcttgtg
atgatgtaaacatgagaatagctgctgg
tgaatctttggcacttctctttgaattggccagaggaatagagagtgactttttttatgaagacatggagtccttgacgcag
atgcttagggccttggcaacagatgga
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cgggattttccaacagaaaccattaaatt
tggtcctgaacgcatgtatattgattgctgggtaaaaaaacacacctatgacacctttaaggaggttcttggatcaggga
tgcagtaccacttgcagtcaaatgaattc
cttcgaaatgtatttgaacttggacccccagtgatgcttgatgctgcaacgcttaaaacgatgaagatttctcgtttcgaa
aggcatttatataactctgcagccttcaaa
gctcgaaccaaagctagaagcaaatgtcgagataagagagcagatgttggagaattcttctag.
Mef2A：NM_013172(SEQ ID NO：69)：
atggggcggaagaaaatacaaatcacacgcataatggatgaaaggaaccgacaggtcacttttacaaagagaaagtt
tggattaatgaagaaagcctatgaactt
agtgtgctctgtgactgtgaaatagcactcatcattttcaacagctctaacaaactgtttcaatatgctagcactgatatgg
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actccacatacagaagaaaaatataaaaaaattaatgaggaatttgataatatgatgcggaatcataaaatcgcacctg
gtctgccacctcagaacttttcaatgtctg
tcacagttccagtgaccagccccaatgctttgtcctacactaacccagggagttcactggtgtccccatctttggcagcc
agctcaacgttaacagattcaagcatgc
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tgggatgttgagcactacagacctcaca
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ctggtgcaaatagcttaggcaaagtcat
gcctacaaagtctccccctccaccaggtggtggtaatcttggaatgaacagtaggaaaccagatcttcgagttgtcatc
cccccttcaagcaagggcatgatgcctc
cactatcggaggaagaggaattggagttgaacacccaaaggatcagtagttctcaagccactcaacctcttgctaccc
cagtcgtgtctgtgacaaccccaagctt
gcctccgcaaggacttgtgtactcagcaatgccgactgcctacaacactgattattcactgaccagcgctgacctgtca
gcccttcaaggcttcaactcgccagga
20
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ccattaataccaaccaaaacatcagcatcaagtccgaaccgatttcacctcctcgggatcgtatgaccccatcgggctt
ccagcagcagcagcagcagcagcag
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cgctcccctgtggacagtctgagcagct
ctagtagctcctatgatggcagtgatcgggaggatccacggggcgacttccattctccaattgtgcttggccgaccccc
aaacactgaggacagagaaagccctt
ctgtaaagcgaatgaggatggacgcgtgggtgacctaa.
25
Myogenin：NM_002479(SEQ ID NO：70)：
Atggagctgtatgagacatccccctacttctaccaggaaccccgcttctatgatggggaaaactacctgcctgtccac
ctccagggcttcgaaccaccaggctac
gagcggacggagctcaccctgagccccgaggccccagggccccttgaggacaaggggctggggacccccgagc
actgtccaggccagtgcctgccgtgg
gcgtgtaaggtgtgtaagaggaagtcggtgtccgtggaccggcggcgggcggccacactgagggagaagcgcag
gctcaagaaggtgaatgaggccttcga
30
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gtacatcgagcgcctccaggccctgct
cagctccctcaaccaggaggagcgtgacctccgctaccggggcgggggcgggccccagccaggggtgcccagc
gaatgcagctctcacagcgcctcctgc
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cccacaacctgcactccctcacctccat
cgtggacagcatcacagtggaagatgtgtctgtggccttcccagatgaaaccatgcccaactga；BC053899；
BC068019；AB257560.
Nkx2.2：NM_002509(SEQ ID NO：71)：
35
atgtcgctgaccaacacaaagacggggttttcggtcaaggacatcttagacctgccggacaccaacgatgaggagg
gctctgtggccgaaggtccggaggaag
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ctgcccctgaagaaccccttctacgaca
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gggcgccccctcaggactcaagctcca
agtccccggagccctcggccgacgagtcaccggacaatgacaaggagaccccgggcggcgggggggacgccg
gcaagaagcgaaagcggcgagtgcttt
tctccaaggcgcagacctacgagctggagcggcgctttcggcagcagcggtacctgtcggcgcccgagcgcgaac
acctggccagcctcatccgcctcacgc
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tgacgcccctgccctcgccgcgccgg
gtggccgtgcccgtcttggtcagggacggcaaaccatgtcacgcgctcaaagcccaggacctggcagccgccacc
ttccaggcgggcattcccttttctgccta
cagcgcgcagtcgctgcagcacatgcagtacaacgcccagtacagctcggccagcaccccccagtacccgacagc
acaccccctggtccaggcccagcagt
ggacttggtga；NM_001077632；NM_010919.
Notch
Notch1：NM_017617(SEQ ID NO：72)：
atgccgccgctcctggcgcccctgctctgcctggcgctgctgcccgcgctcgccgcacgaggcccgcgatgctccc
agcccggtgagacctgcctgaatggc
gggaagtgtgaagcggccaatggcacggaggcctgcgtctgtggcggggccttcgtgggcccgcgatgccagga
ccccaacccgtgcctcagcaccccctg
caagaacgccgggacatgccacgtggtggaccgcagaggcgtggcagactatgcctgcagctgtgccctgggctt
ctctgggcccctctgcctgacacccctg
gacaatgcctgcctcaccaacccctgccgcaacgggggcacctgcgacctgctcacgctgacggagtacaagtgc
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tcgtgccagcaggctgacccgtgcgcctccaacccctgcgccaacggtggccagtgcctgcccttcgaggcctcct
acatctgccactgcccacccagcttccat
ggccccacctgccggcaggatgtcaacgagtgtggccagaagcccgggctttgccgccacggaggcacctgcca
caacgaggtcggctcctaccgctgcgtc
tgccgcgccacccacactggccccaactgcgagcggccctacgtgccctgcagcccctcgccctgccagaacggg
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gcgagaacattgatgactgtgccagcg
ccgcctgcttccacggcgccacctgccatgaccgtgtggcctccttctactgcgagtgtccccatggccgcacaggtc
tgctgtgccacctcaacgacgcatgca
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cgcctgctgctggccgggctgcccctgctcgccgccgcgcccggctccgtgttgctggcgcccggcgccgtagga
ccccccgacgcgctgcgccccgccaa
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ctgggggcaccgtgtcctcgtccaccccgagtgactgcccgccggagctgagcgccgagctgcgcggcgctatgg
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gccggagttcagcgccagcccccctgc
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tcagcctatgctgacttcagttcctgcag
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ccctcagcctcagagtcagatgcagga
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aaaaaaaaaggagggactatggcatca
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ccctccagcagcctgcagcccggcaa
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attctgctgagctccggaatgcctctgct
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cagcgacccaatggcgtgtaactcgccgcagtctccagcggtgtgggagccccagggctcgtcccgctcgctcagc
caccaccctcatgcccaccctccgacc
tccaaccagtccccagcgtccagctacctggagaactctgcatcctggtacacaagtgcagccagctcaatcaattcc
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aaaccaaagacagcatctgagcacag
aaagtcatcaaagcctattatggagaaaagacgaagagcaagaataaatgaaagtctgagccagctgaaaacactga
ttttggatgctctgaagaaagatagctc
gcggcattccaagctggagaaggcggacattctggaaatgacagtgaagcacctccggaacctgcagcgggcgca
gatgacggctgcgctgagcacagacc
caagtgtgctggggaagtaccgagccggcttcagcgagtgcatgaacgaggtgacccgcttcctgtccacgtgcga
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gctgctcggccacctggccaactgcatgacccagatcaatgccatgacctaccccgggcagccgcaccccgccttg
caggcgccgccaccgcccccaccgg
gacccggcggcccccagcacgcgccgttcgcgccgccgccgccactcgtgcccatccccgggggcgcggcgcc
ccctcccggcggcgccccctgcaagct
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tcctcattcccaacggggccttcgcgc
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cagagttcgagtccgaggagccgaga
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tcacggagattgtgctggagaacaacta
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caagacgcggcagcaccagcgtgag
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cgcccttcacgcgcagcctgcgcggca
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ctgtcaccatccccagccgttagccatg
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cttcgggccgcagttcaatgggctcatg
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accaagagcttccccttcttcaactctat
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20
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cagcgccaataaagatcccgctccaga
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gaatctgaagagcagtttgtgcatcaca
tccggattcacagcgctaagaagttctttgtggaggaaagtgcagagaaacaggccaaagcctgggagtcggggtc
gtctccggccgaagagggcgagttctc
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caggaaagtctacacctgcagcaagtg
caactacttctcagacagaaaaaataactacgttcagcacgtgcgaactcacacaggagaacgcccgtataaatgtga
actttgtccttactcaagctctcagaaga
ctcatctaacgcgacacatgcggactcattcagagtgtgatctagctgggtga.
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acagttcaagcccagccacagattgcca
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caggcggcccagccatcagttattcagtctccacaagtccaaacagttcagtcttcctgtaaggacttaaaaagactttt
ctccggaacacagatttcaactattgcag
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Rnx
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atttggtccaaaagacagtgaagattcc
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gatgatccttccttcccatatgagagcttc
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tatcttcatcttggaggagatgaggttga
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aatcatacaggtgtggcgagaggatat
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gaaccgtatatcctatggccctgactgg
aaggatttctacgtagtggaacccctggcatttgaaggtacccctgagcagaaggctctggtgattggtggagaggct
tgtatgtggggagaatatgtggacaaca
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atgctgaggatttggaaagggtgtttatt
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gcaggatggtcgaacgtggaatagct
gcacaacctctttatgctggatattgtaaccatgagaacatgtaa.
galactosidase，alpha(GLA)：NM_000169(SEQ ID NO：105)：
atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatcc
ctggggctagagcactggacaatggat
10
tggcaaggacgcctaccatgggctggctgcactgggagcgcttcatgtgcaaccttgactgccaggaagagccaga
ttcctgcatcagtgagaagctcttcatgg
agatggcagagctcatggtctcagaaggctggaaggatgcaggttatgagtacctctgcattgatgactgttggatgg
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ctctttatatgtggccctttcaaaagccc
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ccttgggcaagcaagggtaccagcttagacagggagacaactttgaagtgtgggaacgacctctctcaggcttagcc
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aatgcagatgtcattaaaagacttacttta
aglucosidase_beta_acid(GBA)：NM_000157(SEQ ID NO：106)：
atggagttttcaagtccttccagagaggaatgtcccaagcctttgagtagggtaagcatcatggctggcagcctcacag
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ccatccgcacctacacctatgcagacac
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atggcattgctgtacattggtacctgga
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35
tgaaccccgaaggaggacccaattgggtgcgtaactttgtcgacagtcccatcattgtagacatcaccaaggacacgt
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tacctgtggcgtcgccagtga；NM_008094.
von_Hippel_Lindau_tumor_suppressor(VHL)：NM_000551(SEQ ID NO：107)：
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Beta_globin(HBB)：NM_000518(SEQ ID NO：108)：
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tggcccacaagtatcactaa.
PARK2：NM_013988(SEQ ID NO：109)：
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catgcacatgaagtgtccgcagccccagtgcaggctcgagtggtgctggaactgtggctgcgagtggaaccgcgtc
tgcatgggggaccactggttcgacgtgt
ag；NM_004562；NM_020093.
所有用括号引用的出版物和以下美国专利的内容都被记录而且以全文引用的方式并入本文：7211247、5677139、6432711和5453357、美国05,593,875、美国05,783,566、美国5,928,944、美国05,910,488、美国05,824,547
序列表
<110>克里斯多佛.B.里德
 
<120>专能细胞群的生产和使用方法
 
<130>CBR-002PCT
 
<140>PCT/US2008/065007
<141>2008-05-28
 
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<150>60/932,020
<151>2007-05-29
 
<160>109
 
<170>PatentIn版本3.3
 
<210>1
<211>8069
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成多核苷酸
 
<400>1
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ccaggcttta cactttatgc ttccggctcg tatgttgtgt ggaattgtga gcggataaca 7980
atttcacaca ggaaacagct atgaccatga ttacgccaag cgcgcaatta accctcacta 8040
aagggaacaa aagctggagc tgcaagctt                                   8069
<210>2
<211>22460
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成多核苷酸
 
<400>2
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tgccttacaa ggagagaaaa agcaccgtgc atgccgattg gtggaagtaa ggtggtacga 120
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taactagaga tccctcagac ccttttagtc agtgtggaaa atctctagca gtggcgcccg 420
aacagggact tgaaagcgaa agggaaacca gaggagctct ctcgacgcag gactcggctt 480
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actagcggag gctagaagga gagagatggg tgcgagagcg tcagtattaa gcgggggaga 600
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acccaccaag gcaaagagaa gagtggtgca gagagaaaaa agagcagtgg gaataggagc 1080
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ttggctgtgg tatataaaat tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat 1620
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gatataaata tcaatatatt aaattagatt ttgcataaaa aacagactac ataatactgt 1920
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tgcagaagtg ggtggaggaa gctgacaaca atgaaaatct tcaggagata tgcaaagcag 3660
aaaccctcgt gcaggcccga aagagaaagc gaaccagtat cgagaaccga gtgagaggca 3720
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gttttctgtc agtcattcat tgtaagtagc acattgcaac aacaatcatg cttatgacca 12420
atacagtcac taggttgtag ttttttttaa ataaaggaaa agcagtattg tcctggtttt 12480
aaacctatga tggaattcta atgtcattat tttaatggaa tcaatcgaaa tatgctctat 12540
agagaatata tcttttatat attgctgcag tttccttatg ttaatccttt aacactaagg 12600
taacatgaca taatcatacc atagaaggga acacaggtta ccatattggt ttgtaatatg 12660
ggtcttggtg ggttttgttt tatcctttaa attttgttcc catgagtttt gtggggatgg 12720
ggattctggt tttattagct ttgtgtgtgt cctcttcccc caaaccccct tttggtgaga 12780
acatcccctt gacagttgca gcctcttgac ctcggataac aataagagag ctcatctcat 12840
ttttactttt gaacgttggc cttacaatca aatgtaagtt atatatattt gtactgatga 12900
aaatttataa tctgctttaa caaaaataaa tgttcatggt agaagctttt aaaaaaaaaa 12960
aaacctcgac tgtgccttct agttgccagc catctgttgt ttgcccctcc cccgtgcctt 13020
ccttgaccct ggaaggtgcc actcccactg tcctttccta ataaaatgag gaaattgcat 13080
cgcattgtct gagtaggtgt cattctattc tggggggtgg ggtggggcag gacagcaagg 13140
gggaggattg ggaagacaat agcaggcatg ctggggatgc ggtgggctct atgggacgga 13200
tcgggagatc tcccgatccc ctatggtgca ctctcagtac aatctgctct gatgccgcat 13260
agttaagcca gtatctgctc cctgcttgtg tgttggaggt cgctgagtag tgcgcgagca 13320
aaatttaagc tacaacaagg caaggcttga ccgacaattg catgaagaat ctgcttaggg 13380
ttaggcgttt tgcgctgctt cgcgatgtac gggccagata tacgcgttga cattgattat 13440
tgactagtta ttaatagtaa tcaattacgg ggtcattagt tcatagccca tatatggagt 13500
tccgcgttac ataacttacg gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc 13560
cattgacgtc aataatgacg tatgttccca tagtaacgcc aatagggact ttccattgac 13620
gtcaatgggt ggagtattta cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata 13680
tgccaagtac gccccctatt gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc 13740
agtacatgac cttatgggac tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta 13800
ttaccatggt gatgcggttt tggcagtaca tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac 13860
ggggatttcc aagtctccac cccattgacg tcaatgggag tttgttttgg aaccaaaatc 13920
aacgggactt tccaaaatgt cgtaacaact ccgccccatt gacgcaaatg ggcggtaggc 13980
gtgtacggtg ggaggtctat ataagcagag ctctccctat cagtgataga gatctcccta 14040
tcagtgatag agatcgtcga cgagctcgtt tagtgaaccg tcagatcgcc tggagacgcc 14100
atccacgctg ttttgacctc catagaagac accgggaccg atccagcctc cggactctag 14160
cgtttaaact taagcttacc atggtgagca agggcgagga gctgttcacc ggggtggtgc 14220
ccatcctggt cgagctggac ggcgacgtaa acggccacaa gttcagcgtg tccggcgagg 14280
gcgagggcga tgccacctac ggcaagctga ccctgaagtt catctgcacc accggcaagc 14340
tgcccgtgcc ctggcccacc ctcgtgacca ccttcaccta cggcgtgcag tgcttcgccc 14400
gctaccccga ccacatgaag cagcacgact tcttcaagtc cgccatgccc gaaggctacg 14460
tccaggagcg caccatcttc ttcaaggacg acggcaacta caagacccgc gccgaggtga 14520
agttcgaggg cgacaccctg gtgaaccgca tcgagctgaa gggcatcgac ttcaaggagg 14580
acggcaacat cctggggcac aagctggagt acaactacaa cagccacaag gtctatatca 14640
ccgccgacaa gcagaagaac ggcatcaagg tgaacttcaa gacccgccac aacatcgagg 14700
acggcagcgt gcagctcgcc gaccactacc agcagaacac ccccatcggc gacggccccg 14760
tgctgctgcc cgacaaccac tacctgagca cccagtccgc cctgagcaaa gaccccaacg 14820
agaagcgcga tcacatggtc ctgctggagt tcgtgaccgc cgccgggatc actctcggca 14880
tggacgagct gtacaagtaa cctcgactgt gccttctagt tgccagccat ctgttgtttg 14940
cccctccccc gtgccttcct tgaccctgga aggtgccact cccactgtcc tttcctaata 15000
aaatgaggaa attgcatcgc attgtctgag taggtgtcat tctattctgg ggggtggggt 15060
ggggcaggac agcaaggggg aggattggga agacaatagc aggcatgctg gggatgcggt 15120
gggctctatg ggacggatcg ggagatctcc cgatccccta tggtgcactc tcagtacaat 15180
ctgctctgat gccgcatagt taagccagta tctgctccct gcttgtgtgt tggaggtcgc 15240
tgagtagtgc gcgagcaaaa tttaagctac aacaaggcaa ggcttgaccg acaattgcat 15300
gaagaatctg cttagggtta ggcgttttgc gctgcttcgc gatgtacggg ccagatatac 15360
gcgttgacat tgattattga ctagttatta atagtaatca attacggggt cattagttca 15420
tagcccatat atggagttcc gcgttacata acttacggta aatggcccgc ctggctgacc 15480
gcccaacgac ccccgcccat tgacgtcaat aatgacgtat gttcccatag taacgccaat 15540
agggactttc cattgacgtc aatgggtgga gtatttacgg taaactgccc acttggcagt 15600
acatcaagtg tatcatatgc caagtacgcc ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc 15660
cgcctggcat tatgcccagt acatgacctt atgggacttt cctacttggc agtacatcta 15720
cgtattagtc atcgctatta ccatggtgat gcggttttgg cagtacatca atgggcgtgg 15780
atagcggttt gactcacggg gatttccaag tctccacccc attgacgtca atgggagttt 15840
gttttggaac caaaatcaac gggactttcc aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac 15900
gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata agcagagctc gtgagtttgg 15960
ggacccttga ttgttctttc tttttcgcta ttgtaaaatt catgttatat ggagggggca 16020
aagttttcag ggtgttgttt agaatgggaa gatgtccctt gtatcaccat ggaccctcat 16080
gataattttg tttctttcac tttctactct gttgacaacc attgtctcct cttattttct 16140
tttcattttc tgtaactttt tcgttaaact ttagcttgca tttgtaacga atttttaaat 16200
tcacttttgt ttatttgtca gattgtaagt actttctcta atcacttttt tttcaaggca 16260
atcagggtat attatattgt acttcagcac agttttagag aacaattgtt ataattaaat 16320
gataaggtag aatatttctg catataaatt ctggctggcg tggaaatatt cttattggta 16380
gaaacaacta catcctggtc atcatcctgc ctttctcttt atggttacaa tgatatacac 16440
tgtttgagat gaggataaaa tactctgagt ccaaaccggg cccctctgct aaccatgttc 16500
atgccttctt ctttttccta cagctcctgg gcaacgtgct ggttattgtg ctgtctcatc 16560
attttggcaa agaattgtaa tacgactcac tatagggcga attgatatgt ctagattaga 16620
taaaagtaaa gtgattaaca gcgcattaga gctgcatgtc tagattagat aaaagtaaag 16680
tgattaacag cgcattagag ctgcttaatg aggtcggaat cgaaggttta acaacccgta 16740
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gggctttgct cgacgcctta gccattgaga tgttagatag gcaccatact cacttttgcc 16860
ctttagaagg ggaaagctgg caagattttt tacgtaataa cgctaaaagt tttagatgtg 16920
ctttactaag tcatcgcgat ggagcaaaag tacatttagg tacacggcct acagaaaaac 16980
agtatgaaac tctcgaaaat caattagcct ttttatgcca acaaggtttt tcactagaga 17040
atgcattata tgcactcagc gctgtggggc attttacttt aggttgcgta ttggaagatc 17100
aagagcatca agtcgctaaa gaagaaaggg aaacacctac tactgatagt atgccgccat 17160
tattacgaca agctatcgaa ttatttgatc accaaggtgc agagccagcc ttcttattcg 17220
gccttgaatt gatcatatgc ggattagaaa aacaacttaa atgtgaaagt gggtccgcgt 17280
acagcggatc ccgggaattc agatcttatt aaagcagaac ttgtttattg cagcttataa 17340
tggttacaaa taaagcaata gcatcacaaa tttcacaaat aaagcatttt tttcactgca 17400
ttctagttgt ggtttgtcca aactcatcaa tgtatcttat catgtctggt caatgtgtgt 17460
cagttagggt gtggaaagtc cccaggctcc ccagcaggca gaagtatgca aagcatgcat 17520
ctcaattagt cagcaaccag gtgtggaaag tccccaggct ccccagcagg cagaagtatg 17580
caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc atagtcccgc ccctaactcc gcccatcccg 17640
cccctaactc cgcccagttc cgcccattct ccgccccatg gctgactaat tttttttatt 17700
tatgcagagg ccgaggccgc ctctgcctct gagctattcc agaagtagtg aggaggcttt 17760
tttggaggcc taggcttttg caaaaagctc cccatagtga ctggatatgt tgtgttttac 17820
agtattatgt agtctgtttt ttatgcaaaa tctaatttaa tatattgata tttatatcat 17880
tttacgtttc tcgttcagct ttcttgtaca aagtggttga tatccagcac agtggcggcc 17940
gctcgagtct agagggcccg cggttcgaag gtaagcctat ccctaaccct ctcctcggtc 18000
tcgattctac gcgtaccggt tagtaatgag tttggaatta attctgtgga atgtgtgtca 18060
gttagggtgt ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa gcatgcatct 18120
caattagtca gcaaccaggt gtggaaagtc cccaggctcc ccagcaggca gaagtatgca 18180
aagcatgcat ctcaattagt cagcaaccat agtcccgccc ctaactccgc ccatcccgcc 18240
cctaactccg cccagttccg cccattctcc gccccatggc tgactaattt tttttattta 18300
tgcagaggcc gaggccgcct ctgcctctga gctattccag aagtagtgag gaggcttttt 18360
tggaggccta ggcttttgca aaaagctccc gggagcttgt atatccattt tcggatctga 18420
tcagcacgtg ttgacaatta atcatcggca tagtatatcg gcatagtata atacgacaag 18480
gtgaggaact aaaccatggc caagcctttg tctcaagaag aatccaccct cattgaaaga 18540
gcaacggcta caatcaacag catccccatc tctgaagact acagcgtcgc cagcgcagct 18600
ctctctagcg acggccgcat cttcactggt gtcaatgtat atcattttac tgggggacct 18660
tgtgcagaac tcgtggtgct gggcactgct gctgctgcgg cagctggcaa cctgacttgt 18720
atcgtcgcga tcggaaatga gaacaggggc atcttgagcc cctgcggacg gtgccgacag 18780
gtgcttctcg atctgcatcc tgggatcaaa gccatagtga aggacagtga tggacagccg 18840
acggcagttg ggattcgtga attgctgccc tctggttatg tgtgggaggg ctaagcacaa 18900
ttcgagctcg gtacctttaa gaccaatgac ttacaaggca gctgtagatc ttagccactt 18960
tttaaaagaa aaggggggac tggaagggct aattcactcc caacgaagac aagatctgct 19020
ttttgcttgt actgggtctc tctggttaga ccagatctga gcctgggagc tctctggcta 19080
actagggaac ccactgctta agcctcaata aagcttgcct tgagtgcttc aagtagtgtg 19140
tgcccgtctg ttgtgtgact ctggtaacta gagatccctc agaccctttt agtcagtgtg 19200
gaaaatctct agcagtagta gttcatgtca tcttattatt cagtatttat aacttgcaaa 19260
gaaatgaata tcagagagtg agaggaactt gtttattgca gcttataatg gttacaaata 19320
aagcaatagc atcacaaatt tcacaaataa agcatttttt tcactgcatt ctagttgtgg 19380
tttgtccaaa ctcatcaatg tatcttatca tgtctggctc tagctatccc gcccctaact 19440
ccgcccatcc cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt ctccgcccca tggctgacta 19500
atttttttta tttatgcaga ggccgaggcc gcctcggcct ctgagctatt ccagaagtag 19560
tgaggaggct tttttggagg cctagggacg tacccaattc gccctatagt gagtcgtatt 19620
acgcgcgctc actggccgtc gttttacaac gtcgtgactg ggaaaaccct ggcgttaccc 19680
aacttaatcg ccttgcagca catccccctt tcgccagctg gcgtaatagc gaagaggccc 19740
gcaccgatcg cccttcccaa cagttgcgca gcctgaatgg cgaatgggac gcgccctgta 19800
gcggcgcatt aagcgcggcg ggtgtggtgg ttacgcgcag cgtgaccgct acacttgcca 19860
gcgccctagc gcccgctcct ttcgctttct tcccttcctt tctcgccacg ttcgccggct 19920
ttccccgtca agctctaaat cgggggctcc ctttagggtt ccgatttagt gctttacggc 19980
acctcgaccc caaaaaactt gattagggtg atggttcacg tagtgggcca tcgccctgat 20040
agacggtttt tcgccctttg acgttggagt ccacgttctt taatagtgga ctcttgttcc 20100
aaactggaac aacactcaac cctatctcgg tctattcttt tgatttataa gggattttgc 20160
cgatttcggc ctattggtta aaaaatgagc tgatttaaca aaaatttaac gcgaatttta 20220
acaaaatatt aacgcttaca atttaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc gcggaacccc 20280
tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac aataaccctg 20340
ataaatgctt caataatatt gaaaaaggaa gagtatgagt attcaacatt tccgtgtcgc 20400
ccttattccc ttttttgcgg cattttgcct tcctgttttt gctcacccag aaacgctggt 20460
gaaagtaaaa gatgctgaag atcagttggg tgcacgagtg ggttacatcg aactggatct 20520
caacagcggt aagatccttg agagttttcg ccccgaagaa cgttttccaa tgatgagcac 20580
ttttaaagtt ctgctatgtg gcgcggtatt atcccgtatt gacgccgggc aagagcaact 20640
cggtcgccgc atacactatt ctcagaatga cttggttgag tactcaccag tcacagaaaa 20700
gcatcttacg gatggcatga cagtaagaga attatgcagt gctgccataa ccatgagtga 20760
taacactgcg gccaacttac ttctgacaac gatcggagga ccgaaggagc taaccgcttt 20820
tttgcacaac atgggggatc atgtaactcg ccttgatcgt tgggaaccgg agctgaatga 20880
agccatacca aacgacgagc gtgacaccac gatgcctgta gcaatggcaa caacgttgcg 20940
caaactatta actggcgaac tacttactct agcttcccgg caacaattaa tagactggat 21000
ggaggcggat aaagttgcag gaccacttct gcgctcggcc cttccggctg gctggtttat 21060
tgctgataaa tctggagccg gtgagcgtgg gtctcgcggt atcattgcag cactggggcc 21120
agatggtaag ccctcccgta tcgtagttat ctacacgacg gggagtcagg caactatgga 21180
tgaacgaaat agacagatcg ctgagatagg tgcctcactg attaagcatt ggtaactgtc 21240
agaccaagtt tactcatata tactttagat tgatttaaaa cttcattttt aatttaaaag 21300
gatctaggtg aagatccttt ttgataatct catgaccaaa atcccttaac gtgagttttc 21360
gttccactga gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag atcctttttt 21420
tctgcgcgta atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt 21480
gccggatcaa gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca gagcgcagat 21540
accaaatact gttcttctag tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga actctgtagc 21600
accgcctaca tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa 21660
gtcgtgtctt accgggttgg actcaagacg atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg 21720
ctgaacgggg ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga acgacctaca ccgaactgag 21780
atacctacag cgtgagctat gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag 21840
gtatccggta agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa 21900
cgcctggtat ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc gtcgattttt 21960
gtgatgctcg tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg 22020
gttcctggcc ttttgctggc cttttgctca catgttcttt cctgcgttat cccctgattc 22080
tgtggataac cgtattaccg cctttgagtg agctgatacc gctcgccgca gccgaacgac 22140
cgagcgcagc gagtcagtga gcgaggaagc ggaagagcgc ccaatacgca aaccgcctct 22200
ccccgcgcgt tggccgattc attaatgcag ctggcacgac aggtttcccg actggaaagc 22260
gggcagtgag cgcaacgcaa ttaatgtgag ttagctcact cattaggcac cccaggcttt 22320
acactttatg cttccggctc gtatgttgtg tggaattgtg agcggataac aatttcacac 22380
aggaaacagc tatgaccatg attacgccaa gcgcgcaatt aaccctcact aaagggaaca 22440
aaagctggag ctgcaagctt                                             22460
 
<210>3
<211>1751
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成多核苷酸
 
<400>3
gtcgaccagt ggatcctgga ggcttgctga aggctgtatg ctgatcgggt gtaaactgag 60
cttggttttg gccactgact gaccaagctc attacacccg atcaggacac aaggcctgtt 120
actagcactc acatggaaca aatggcccag atcctggagg cttgctgaag gctgtatgct 180
gataccaggc aggataaggc cagttttggc cactgactga ctggccttac tgcctggtat 240
caggacacaa ggcctgttac tagcactcac atggaacaaa tggcccagat cctggaggct 300
tgctgaaggc tgtatgctgt gaccaggatg accaatccat gttttggcca ctgactgaca 360
tggattgcat cctggtcaca ggacacaagg cctgttacta gcactcacat ggaacaaatg 420
gcccagatcc tggaggcttg ctgaaggctg tatgctgata gcttggtcca acctgttagt 480
tttggccact gactgactaa caggtgacca agctatcagg acacaaggcc tgttactagc 540
actcacatgg aacaaatggc ccagatctcc ccagtggaaa gacgcgcagg caaaacgcac 600
cacgtgacgg agcgtgaccg cgcgccgagc gcgcgccaag gtcgggcagg aagagggcct 660
atttcccatg attccttcat atttgcatat acgatacaag gctgttagag agataattag 720
aattaatttg actgtaaaca caaagatatt agtacaaaat acgtgacgta gaaagtaata 780
atttcttggg tagtttgcag ttttaaaatt atgttttaaa atggactatc atatgcttac 840
cgtaacttga aagtatttcg atttcttggg tttatatatc ttgtggaaag gacggtgctc 900
gcttcggcag cacgtcgtgc tagggttctt gggttttctc gcaacagcag gttctgcaat 960
gggcgcggcg tccctgaccg tgtcggctca gtcccggact ttactggccg ggatagtgca 1020
gcaacagcaa cagctgttgg acgtggtcaa gagacaacaa gaactgttgc gactgaccgt 1080
ctggggaacg aaaaacctcc aggcaagagt cactgctata gagaagtacc tacaggacca 1140
ggcgcggcta aattcatggg gatgtctaga cctagagcgg acttcggtcc gctttttccc 1200
cagtggaaag acgcgcaggc aaaacgcacc acgtgacgga gcgtgaccgc gcgccgagcg 1260
cgcgccaagg tcgggcagga agagggccta tttcccatga ttccttcata tttgcatata 1320
cgatacaagg ctgttagaga gataattaga attaatttga ctgtaaacac aaagatatta 1380
gtacaaaata cgtgacgtag aaagtaataa tttcttgggt agtttgcagt tttaaaatta 1440
tgttttaaaa tggactatca tatgcttacc gtaacttgaa agtatttcga tttcttgggt 1500
ttatatatct tgtggaaagg acggtgctcg cttcggcagc acgtcggtcg ctctgcggag 1560
aggctggcag attgagccct gggaggttct ctccagcact agcaggtaga gcctgggtgt 1620
tccctgctag actctcacca gtgcttggcc ggcactgggc agacggctcc acgcttgctt 1680
gcttaaagac ctcttaataa agctgctcta gacctagagc ggacttcggt ccgctttttt 1740
acgtactcga g                                                      1751
 
<210>4
<211>64
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成寡核苷酸
 
<400>4
tgctgatacc aggcaggata aggccagttt tggccactga ctgactggcc ttactgcctg 60
gtat                                                              64
<210>5
<211>64
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成寡核苷酸
 
<400>5
cctgatacca ggcagtaagg ccagtcagtc agtggccaaa actggcctta tcctgcctgg 60
tatc                                                              64
 
<210>6
<211>64
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成寡核苷酸
 
<400>6
tgctgtgacc aggatgacca atccatgttt tggccactga ctgacatgga ttgcatcctg 60
gtca                                                              64
 
<210>7
<211>64
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成寡核苷酸
 
<400>7
cctgtgacca ggatgcaatc catgtcagtc agtggccaaa acatggattg gtcatcctgg 60
tcac                                                              64
<210>8
<211>64
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成寡核苷酸
 
<400>8
tgctgatcgg gtgtaaactg agcttggttt tggccactga ctgaccaagc tcattacacc 60
cgat                                                              64
 
<210>9
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<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成寡核苷酸
 
<400>9
cctgatcggg tgtaatgagc ttggtcagtc agtggccaaa accaagctca gtttacaccc 60
gatc                                                              64
 
<210>10
<211>64
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成寡核苷酸
 
<400>10
tgctgatagc ttggtccaac ctgttagttt tggccactga ctgactaaca ggtgaccaag 60
ctat                                                              64
 
<210>11
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<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成寡核苷酸
 
<400>11
cctgatagct tggtcacctg ttagtcagtc agtggccaaa actaacaggt tggaccaagc 60
tatc                                                              64
 
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<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成多核苷酸
 
<400>12
gtcgctctgc ggagaggctg gcagattgag ccctgggagg ttctctccag cactagcagg 60
tagagcctgg gtgttccctg ctagactctc accagtgctt ggccggcact gggcagacgg 120
ctccacgctt gcttgcttaa agacctctta ataaagctgc                       160
 
<210>13
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<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成多核苷酸
 
<400>13
tgctagggtt cttgggtttt ctcgcaacag caggttctgc aatgggcgcg gcgtccctga 60
ccgtgtcggc tcagtcccgg actttactgg ccgggatagt gcagcaacag caacagctgt 120
tggacgtggt caagagacaa caagaactgt tgcgactgac cgtctgggga acgaaaaacc 180
tccaggcaag agtcactgct atagagaagt acctacagga ccaggcgcgg ctaaattcat 240
ggggatg                                                           247
<210>14
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>组合的DNA/RNA分子的描述：合成寡核苷酸
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成寡核苷酸
 
<400>14
gugcucgcuu cggcagcacg tcgac    25
 
<210>15
<211>26
<212>RNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成寡核苷酸
 
<400>15
ucuagagcgg acuucggucc gcuuuu    26
 
<210>16
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>组合的DNA/RNA分子的描述：合成寡核苷酸
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成寡核苷酸
 
<400>16
gugcucgcuu cggcagcacg tcgac                                    25
 
<210>17
<211>26
<212>RNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成寡核苷酸
 
<400>17
ucuagagcgg acuucggucc gcuuuu                                     26
 
<210>18
<211>606
<212>DNA
<213>人类
 
<400>18
atgagccgga gggagggaag tctggaagac ccccagactg attcctcagt ctcacttctt 60
ccccacttgg aggccaagat ccgtcagaca cacagccttg cgcacctcct caccaaatac 120
gctgagcagc tgctccagga atatgtgcag ctccagggag accccttcgg gctgcccagc 180
ttctcgccgc cgcggctgcc ggtggccggc ctgagcgccc cggctccgag ccacgcgggg 240
ctgccagtgc acgagcggct gcggctggac gcggcggcgc tggccgcgct gcccccgctg 300
ctggacgcag tgtgtcgccg ccaggccgag ctgaacccgc gcgcgccgcg cctgctgcgc 360
cgcctggagg acgcggcgcg ccaggcccgg gccctgggcg ccgccgtgga ggccttgctg 420
gccgcgctgg gcgccgccaa ccgcgggccc cgggccgagc cccccgccgc caccgcctca 480
gccgcctccg ccaccggggt cttccccgcc aaggtgctgg ggctccgcgt ttgcggcctc 540
taccgcgagt ggctgagccg caccgagggc gacctgggcc agctgctgcc cgggggctcg 600
gcctga                                                            606
 
<210>19
<211>603
<212>DNA
<213>人类
 
<400>19
atggctttca cagagcattc accgctgacc cctcaccgtc gggacctctg tagccgctct 60
atctggctag caaggaagat tcgttcagac ctgactgctc ttacggaatc ctatgtgaag 120
catcagggcc tgaacaagaa catcaacctg gactctgcgg atgggatgcc agtggcaagc 180
actgatcagt ggagtgagct gaccgaggca gagcgactcc aagagaacct tcaagcttat 240
cgtaccttcc atgttttgtt ggccaggctc ttagaagacc agcaggtgca ttttacccca 300
accgaaggtg acttccatca agctatacat acccttcttc tccaagtcgc tgcctttgca 360
taccagatag aggagttaat gatactcctg gaatacaaga tcccccgcaa tgaggctgat 420
gggatgccta ttaatgttgg agatggtggt ctctttgaga agaagctgtg gggcctaaag 480
gtgctgcagg agctttcaca gtggacagta aggtccatcc atgaccttcg tttcatttct 540
tctcatcaga ctgggatccc agcacgtggg agccattata ttgctaacaa caagaaaatg 600
tag                                                               603
 
<210>20
<211>990
<212>DNA
<213>人类
 
<400>20
atgttgacgt tgcagacttg gctagtgcaa gccttgttta ttttcctcac cactgaatct 60
acaggtgaac ttctagatcc atgtggttat atcagtcctg aatctccagt tgtacaactt 120
cattctaatt tcactgcagt ttgtgtgcta aaggaaaaat gtatggatta ttttcatgta 180
aatgctaatt acattgtctg gaaaacaaac cattttacta ttcctaagga gcaatatact 240
atcataaaca gaacagcatc cagtgtcacc tttacagata tagcttcatt aaatattcag 300
ctcacttgca acattcttac attcggacag cttgaacaga atgtttatgg aatcacaata 360
atttcaggct tgcctccaga aaaacctaaa aatttgagtt gcattgtgaa cgaggggaag 420
aaaatgaggt gtgagtggga tggtggaagg gaaacacact tggagacaaa cttcacttta 480
aaatctgaat gggcaacaca caagtttgct gattgcaaag caaaacgtga cacccccacc 540
tcatgcactg ttgattattc tactgtgtat tttgtcaaca ttgaagtctg ggtagaagca 600
gagaatgccc ttgggaaggt tacatcagat catatcaatt ttgatcctgt atataaagtg 660
aagcccaatc cgccacataa tttatcagtg atcaactcag aggaactgtc tagtatctta 720
aaattgacat ggaccaaccc aagtattaag agtgttataa tactaaaata taacattcaa 780
tataggacca aagatgcctc aacttggagc cagattcctc ctgaagacac agcatccacc 840
cgatcttcat tcactgtcca agaccttaaa ccttttacag aatatgtgtt taggattcgc 900
tgtatgaagg aagatggtaa gggatactgg agtgactgga gtgaagaagc aagtgggatc 960
acctatgaag ataacattgc ctccttttga                                  990
 
<210>21
<211>639
<212>DNA
<213>人类
 
<400>21
atgaactcct tctccacaag cgccttcggt ccagttgcct tctccctggg gctgctcctg 60
gtgttgcctg ctgccttccc tgccccagta cccccaggag aagattccaa agatgtagcc 120
gccccacaca gacagccact cacctcttca gaacgaattg acaaacaaat tcggtacatc 180
ctcgacggca tctcagccct gagaaaggag acatgtaaca agagtaacat gtgtgaaagc 240
agcaaagagg cactggcaga aaacaacctg aaccttccaa agatggctga aaaagatgga 300
tgcttccaat ctggattcaa tgaggagact tgcctggtga aaatcatcac tggtcttttg 360
gagtttgagg tatacctaga gtacctccag aacagatttg agagtagtga ggaacaagcc 420
agagctgtgc agatgagtac aaaagtcctg atccagttcc tgcagaaaaa ggcaaagaat 480
ctagatgcaa taaccacccc tgacccaacc acaaatgcca gcctgctgac gaagctgcag 540
gcacagaacc agtggctgca ggacatgaca actcatctca ttctgcgcag ctttaaggag 600
ttcctgcagt ccagcctgag ggctcttcgg caaatgtag                        639
 
<210>22
<211>756
<212>DNA
<213>人类
 
<400>22
atggctatga gttctttttt gatcaactca aactatgtcg accccaagtt ccctccatgc 60
gaggaatatt cacagagcga ttacctaccc agcgaccact cgcccgggta ctacgccggc 120
ggccagaggc gagagagcag cttccagccg gaggcgggct tcgggcggcg cgcggcgtgc 180
accgtgcagc gctacgcggc ctgccgggac cctgggcccc cgccgcctcc gccaccaccc 240
ccgccgcccc cgccaccgcc cggtctgtcc cctcgggctc ctgcgccgcc acccgccggg 300
gccctcctcc cggagcccgg ccagcgctgc gaggcggtca gcagcagccc cccgccgcct 360
ccctgcgccc agaaccccct gcaccccagc ccgtcccact ccgcgtgcaa agagcccgtc 420
gtctacccct ggatgcgcaa agttcacgtg agcacggtaa accccaatta cgccggcggg 480
gagcccaagc gctctcggac cgcctacacg cgccagcagg tcttggagct ggagaaggaa 540
tttcactaca accgctacct gacacggcgc cggagggtgg agatcgccca cgcgctctgc 600
ctctccgagc gccagatcaa gatctggttc cagaaccggc gcatgaagtg gaaaaaagac 660
cacaagttgc ccaacaccaa gatccgctcg ggtggtgcgg caggctcagc cggagggccc 720
cctggccggc ccaatggagg cccccgcgcg ctctag                           756
 
<210>23
<211>1407
<212>DNA
<213>人类
 
<400>23
atgctggccg tcggctgcgc gctgctggct gccctgctgg ccgcgccggg agcggcgctg 60
gccccaaggc gctgccctgc gcaggaggtg gcgagaggcg tgctgaccag tctgccagga 120
gacagcgtga ctctgacctg cccgggggta gagccggaag acaatgccac tgttcactgg 180
gtgctcagga agccggctgc aggctcccac cccagcagat gggctggcat gggaaggagg 240
ctgctgctga ggtcggtgca gctccacgac tctggaaact attcatgcta ccgggccggc 300
cgcccagctg ggactgtgca cttgctggtg gatgttcccc ccgaggagcc ccagctctcc 360
tgcttccgga agagccccct cagcaatgtt gtttgtgagt ggggtcctcg gagcacccca 420
tccctgacga caaaggctgt gctcttggtg aggaagtttc agaacagtcc ggccgaagac 480
ttccaggagc cgtgccagta ttcccaggag tcccagaagt tctcctgcca gttagcagtc 540
ccggagggag acagctcttt ctacatagtg tccatgtgcg tcgccagtag tgtcgggagc 600
aagttcagca aaactcaaac ctttcagggt tgtggaatct tgcagcctga tccgcctgcc 660
aacatcacag tcactgccgt ggccagaaac ccccgctggc tcagtgtcac ctggcaagac 720
ccccactcct ggaactcatc tttctacaga ctacggtttg agctcagata tcgggctgaa 780
cggtcaaaga cattcacaac atggatggtc aaggacctcc agcatcactg tgtcatccac 840
gacgcctgga gcggcctgag gcacgtggtg cagcttcgtg cccaggagga gttcgggcaa 900
ggcgagtgga gcgagtggag cccggaggcc atgggcacgc cttggacaga atccaggagt 960
cctccagctg agaacgaggt gtccaccccc atgcaggcac ttactactaa taaagacgat 1020
gataatattc tcttcagaga ttctgcaaat gcgacaagcc tcccagtgca agattcttct 1080
tcagtaccac tgcccacatt cctggttgct ggagggagcc tggccttcgg aacgctcctc 1140
tgcattgcca ttgttctgag gttcaagaag acgtggaagc tgcgggctct gaaggaaggc 1200
aagacaagca tgcatccgcc gtactctttg gggcagctgg tcccggagag gcctcgaccc 1260
accccagtgc ttgttcctct catctcccca ccggtgtccc ccagcagcct ggggtctgac 1320
aatacctcga gccacaaccg accagatgcc agggacccac ggagccctta tgacatcagc 1380
aatacagact acttcttccc cagatag                                     1407
 
<210>24
<211>600
<212>DNA
<213>褐鼠
 
<400>24
atgaactgtg tttgtcgcct ggtcctggtg gtgctgagcc tctggccaga tagagtcgtt 60
gcccctgggc caccagctgg ctcccctcga gtgtcttcag accctcgtgc agatctggat 120
agcgctgtcc tcttgaccag gtccctcctg gcagacacac ggcaactagc tgcacagatg 180
agagacaaat tcccagctga tggagaccac aatctggact ccctacctac cttggccatg 240
agcgctggga cactgggatc tttgcagctt cctggagtgc tgacaaggct tcgagtagac 300
ttaatgtcct acttccgaca tgtacagtgg ttgcgccggg cagctggtcc ttccctaaag 360
actctggagc cagagctggg tgccctgcaa gcccgactgg aacggctact tcgtcgctta 420
cagctcttga tgtctcgcct agccttgccc caggcagccc cggaccaacc tgcggtccct 480
ctgggccctc ctgcctcggc ctggggaagc atccgggcag ctcatgccat cctaggaggg 540
ctgcacctga ccttggactg ggccgtgcgg ggcctgctgt tgttaaagac tcggctgtaa 600
 
<210>25
<211>609
<212>DNA
<213>人类
 
<400>25
atgaaggtct tggcggcagg agttgtgccc ctgctgttgg ttctgcactg gaaacatggg 60
gcggggagcc ccctccccat cacccctgtc aacgccacct gtgccatacg ccacccatgt 120
cacaacaacc tcatgaacca gatcaggagc caactggcac agctcaatgg cagtgccaat 180
gccctcttta ttctctatta cacagcccag ggggagccgt tccccaacaa cctggacaag 240
ctatgtggcc ccaacgtgac ggacttcccg cccttccacg ccaacggcac ggagaaggcc 300
aagctggtgg agctgtaccg catagtcgtg taccttggca cctccctggg caacatcacc 360
cgggaccaga agatcctcaa ccccagtgcc ctcagcctcc acagcaagct caacgccacc 420
gccgacatcc tgcgaggcct ccttagcaac gtgctgtgcc gcctgtgcag caagtaccac 480
gtgggccatg tggacgtgac ctacggccct gacacctcgg gtaaggatgt cttccagaag 540
aagaagctgg gctgtcaact cctggggaag tataagcaga tcatcgccgt gttggcccag 600
gccttctag                                                         609
 
<210>26
<211>3294
<212>DNA
<213>人类
 
<400>26
atgatggata tttacgtatg tttgaaacga ccatcctgga tggtggacaa taaaagaatg 60
aggactgctt caaatttcca gtggctgtta tcaacattta ttcttctata tctaatgaat 120
caagtaaata gccagaaaaa gggggctcct catgatttga agtgtgtaac taacaatttg 180
caagtgtgga actgttcttg gaaagcaccc tctggaacag gccgtggtac tgattatgaa 240
gtttgcattg aaaacaggtc ccgttcttgt tatcagttgg agaaaaccag tattaaaatt 300
ccagctcttt cacatggtga ttatgaaata acaataaatt ctctacatga ttttggaagt 360
tctacaagta aattcacact aaatgaacaa aacgtttcct taattccaga tactccagag 420
atcttgaatt tgtctgctga tttctcaacc tctacattat acctaaagtg gaacgacagg 480
ggttcagttt ttccacaccg ctcaaatgtt atctgggaaa ttaaagttct acgtaaagag 540
agtatggagc tcgtaaaatt agtgacccac aacacaactc tgaatggcaa agatacactt 600
catcactgga gttgggcctc agatatgccc ttggaatgtg ccattcattt tgtggaaatt 660
agatgctaca ttgacaatct tcatttttct ggtctcgaag agtggagtga ctggagccct 720
gtgaagaaca tttcttggat acctgattct cagactaagg tttttcctca agataaagtg 780
atacttgtag gctcagacat aacattttgt tgtgtgagtc aagaaaaagt gttatcagca 840
ctgattggcc atacaaactg ccccttgatc catcttgatg gggaaaatgt tgcaatcaag 900
attcgtaata tttctgtttc tgcaagtagt ggaacaaatg tagtttttac aaccgaagat 960
aacatatttg gaaccgttat ttttgctgga tatccaccag atactcctca acaactgaat 1020
tgtgagacac atgatttaaa agaaattata tgtagttgga atccaggaag ggtgacagcg 1080
ttggtgggcc cacgtgctac aagctacact ttagttgaaa gtttttcagg aaaatatgtt 1140
agacttaaaa gagctgaagc acctacaaac gaaagctatc aattattatt tcaaatgctt 1200
ccaaatcaag aaatatataa ttttactttg aatgctcaca atccgctggg tcgatcacaa 1260
tcaacaattt tagttaatat aactgaaaaa gtttatcccc atactcctac ttcattcaaa 1320
gtgaaggata ttaattcaac agctgttaaa ctttcttggc atttaccagg caactttgca 1380
aagattaatt ttttatgtga aattgaaatt aagaaatcta attcagtaca agagcagcgg 1440
aatgtcacaa tcaaaggagt agaaaattca agttatcttg ttgctctgga caagttaaat 1500
ccatacactc tatatacttt tcggattcgt tgttctactg aaactttctg gaaatggagc 1560
aaatggagca ataaaaaaca acatttaaca acagaagcca gtccttcaaa ggggcctgat 1620
acttggagag agtggagttc tgatggaaaa aatttaataa tctattggaa gcctttaccc 1680
attaatgaag ctaatggaaa aatactttcc tacaatgtat cgtgttcatc agatgaggaa 1740
acacagtccc tttctgaaat ccctgatcct cagcacaaag cagagatacg acttgataag 1800
aatgactaca tcatcagcgt agtggctaaa aattctgtgg gctcatcacc accttccaaa 1860
atagcgagta tggaaattcc aaatgatgat ctcaaaatag aacaagttgt tgggatggga 1920
aaggggattc tcctcacctg gcattacgac cccaacatga cttgcgacta cgtcattaag 1980
tggtgtaact cgtctcggtc ggaaccatgc cttatggact ggagaaaagt tccctcaaac 2040
agcactgaaa ctgtaataga atctgatgag tttcgaccag gtataagata taattttttc 2100
ctgtatggat gcagaaatca aggatatcaa ttattacgct ccatgattgg atatatagaa 2160
gaattggctc ccattgttgc accaaatttt actgttgagg atacttctgc agattcgata 2220
ttagtaaaat gggaagacat tcctgtggaa gaacttagag gctttttaag aggatatttg 2280
ttttactttg gaaaaggaga aagagacaca tctaagatga gggttttaga atcaggtcgt 2340
tctgacataa aagttaagaa tattactgac atatcccaga agacactgag aattgctgat 2400
cttcaaggta aaacaagtta ccacctggtc ttgcgagcct atacagatgg tggagtgggc 2460
ccggagaaga gtatgtatgt ggtgacaaag gaaaattctg tgggattaat tattgccatt 2520
ctcatcccag tggcagtggc tgtcattgtt ggagtggtga caagtatcct ttgctatcgg 2580
aaacgagaat ggattaaaga aaccttctac cctgatattc caaatccaga aaactgtaaa 2640
gcattacagt ttcaaaagag tgtctgtgag ggaagcagtg ctcttaaaac attggaaatg 2700
aatccttgta ccccaaataa tgttgaggtt ctggaaactc gatcagcatt tcctaaaata 2760
gaagatacag aaataatttc cccagtagct gagcgtcctg aagatcgctc tgatgcagag 2820
cctgaaaacc atgtggttgt gtcctattgt ccacccatca ttgaggaaga aataccaaac 2880
ccagccgcag atgaagctgg agggactgca caggttattt acattgatgt tcagtcgatg 2940
tatcagcctc aagcaaaacc agaagaagaa caagaaaatg accctgtagg aggggcaggc 3000
tataagccac agatgcacct ccccattaat tctactgtgg aagatatagc tgcagaagag 3060
gacttagata aaactgcggg ttacagacct caggccaatg taaatacatg gaatttagtg 3120
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gtgttctctt ccacccagct gtgtgtactc aatgatagat ttcagagaca gaaatacctc 360
agcctccagc agatgcaaga actctccaac atcctgaacc tcagctacaa acaggtgaag 420
acctggttcc agaaccagag aatgaaatct aagaggtgg cagaaaaacaa ctggccgaag 480
aatagcaatg gtgtgacgca gaaggcctca gcacctacct accccagcct ttactcttcc 540
taccaccagg gatgcctggt gaacccgact gggaaccttc caatgtggag caaccagacc 600
tggaacaatt caacctggag caaccagacc cagaacatcc agtcctggag caaccactcc 660
tggaacactc agacctggtg cacccaatcc tggaacaatc aggcctggaa cagtcccttc 720
tataactgtg gagaggaatc tctgcagtcc tgcatgcagt tccagccaaa ttctcctgcc 780
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<210>34
<211>759
<212>DNA
<213>人类
 
<400>34
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ttcatgcact cagtggggcg ggtcttcagc aagtgggggg agagcccgaa ccggagccgg 660
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<210>35
<211>2940
<212>DNA
<213>人类
 
<400>35
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taccagagtg aagtcttggc tgaacgttta ccattgactc ctgtatcact taaagtttcc 120
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tttgaaaatg taaatgccac aaatgccatc atgacctgga aggtgcactc cataaggaat 1080
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<210>36
<211>798
<212>DNA
<213>人类
 
<400>36
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<210>37
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<212>DNA
<213>人类
 
<400>37
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tga                                                               1083
 
<210>38
<211>953
<212>DNA
<213>人类
 
<400>38
tgtacaacat gatggagacg gagctgaagc cgccgggccc gcagcaaact tcggggggcg 60
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<210>39
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<212>DNA
<213>人类
 
<400>39
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<210>40
<211>1443
<212>DNA
<213>人类
 
<400>40
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tag                                                               1443
 
<210>41
<211>1335
<212>DNA
<213>人类
 
<400>41
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<210>42
<211>1329
<212>DNA
<213>人类
 
<400>42
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ccctacccgg cttacatggc cgacgtgggc gcgtcctggg ccgcagccgc cgccgcctcc 540
gccggcccct tcgacagccc ggtcctgcac agcctgcccg gccgggccaa cccggccgcc 600
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ggggctatgt ccaccccgct ctggaggcga gatgggacgg gtcactatct gtgcaacgcc 720
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actgcgtaa                                                         1329
 
<210>43
<211>1194
<212>DNA
<213>人类
 
<400>43
atgtaccaga gcctggcgct ggccgcgagc ccccgccagg ccgcctacgc cgactcgggc 60
tccttcctgc acgctccggg cgccggctct ccgatgtttg tgccgccggc gcgcgtcccc 120
tcgatgctgt cctacctgtc cgggtgtgag ccgagcccgc agccccccga gctcgctgcg 180
cgccccggct gggcgcagac agccaccgcg gattcgtcgg ccttcggccc gggcagtccg 240
caccccccag ccgcgcaccc gcccggggcc accgccttcc ctttcgcgca cagcccctcg 300
gggcccggca gcggcggcag cgcggggggc cgagacggca gtgcctacca gggcgcgctg 360
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acctacccgg cctacgtgag ccccgacgtg gcccagtcct ggactgccgg gcccttcgat 480
ggcagcgtcc tgcacggcct cccaggccgc aggcccacct tcgtgtccga cttcttggag 540
gagttcccgg gtgagggtcg tgagtgtgtc aactgcgggg ccctgtccac accgctgtgg 600
cgccgagatg gcaccggcca ctacctgtgc aatgcctgcg gcctctacca caagatgaat 660
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<210>44
<211>1788
<212>DNA
<213>人类
 
<400>44
atggccttga ctgacggcgg ctggtgcttg ccgaagcgct tcggggccgc gggtgcggac 60
gccagcgact ccagagcctt tccagcgcgg gagccctcca cgccgccttc ccccatctct 120
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acgtcctccg tgcgaccgga ttcctggtgc gccctggccc tggcctga              1788
 
<210>45
<211>1674
<212>DNA
<213>人类
 
<400>45
atggtgtcca agctcacgtc gctccagcaa gaactcctga gcgccctgct gagctccggg 60
gtcaccaagg aggtgctggt tcaggccttg gaggagttgc tgccatcccc gaacttcggg 120
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gtcttccata ctctcaccaa cggccacgcc aagggccgct tgtccggcga cgagggctcc 240
gaggacggcg acgactatga cacacctccc atcctcaagg agctgcaggc gctcaacacc 300
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gatgcctgct ctgagcccac caacaagaag atgcgccgca accggttcaa atgggggccc 720
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tcctctcctc caaacaagct gtcaggagtg cgctacagcc agcagggaaa caatgagatc 1080
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cctcaccagc agcccctcat gcagcagagc ccaggcagcc acatggccca gcagcccttc 1500
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<210>46
<211>1887
<212>DNA
<213>褐鼠
 
<400>46
atggtttcta agttgagcca gctgcagacg gagctcctgg ctgctctgct cgagtcgggc 60
ctgagcaaag aggctctgat ccaggctctg ggggagcccg ggccctacct gatggttgga 120
gatggtcccc tggacaaggg ggagtcctgc ggtgggactc gaggggacct gaccgagctg 180
cccaatggcc tgggggagac gcgtggctcg gaagatgaca cggatgacga tggggaagac 240
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tcgtacctgc agcaacacaa catcccccag cgggaggtgg tggacactac gggtctcaac 420
cagtcccacc tgtcccagca cctcaacaag ggcaccccca tgaagacgca gaagcgggcc 480
gcgctgtaca cctggtacgt ccgcaagcag cgagaggtgg ctcagcaatt cacccacgcg 540
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cagaagaacc ccagcaagga agagcgagag accttggtgg aggagtgcaa tagggcggag 720
tgcatccaga gaggggtgtc accatcgcag gcccaggggc taggctccaa ccttgtcacc 780
gaggtgcgtg tctacaactg gtttgccaac cggcgcaagg aagaagcctt tcggcataag 840
ctggccatgg acacgtataa cgggcctcca cccgggccag gccccggccc tgcgctacct 900
gcccacagtt ccccgggcct gcccacaacc accctctctc ccagtaaggt ccacggtgtg 960
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ttcacctcag acacagaggc ctccagtgag cctgggcttc atgagccgtc gtctccagcc 1680
acaaccattc acatccccag ccaggacccg tcaaacatcc agcacctgca gcctgctcac 1740
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tccaacgggc acagccacct gctgccatcc aaccacggtg tcatcgagac ttttatctcc 1860
acccagatgg cctcctcctc ccagtaa                                     1887
 
<210>47
<211>1407
<212>DNA
<213>小家鼠
 
<400>47
atgttaggga ctgtgaagat ggaagggcat gagagcaacg actggaacag ctactacgcg 60
gacacgcagg aggcctactc ctctgtccct gtcagcaaca tgaactccgg cctgggctct 120
atgaactcca tgaacaccta catgaccatg aacaccatga ccacgagcgg caacatgacc 180
ccggcttcct tcaacatgtc ctacgccaac acgggcttag gggccggcct gagtcccggt 240
gctgtggctg gcatgccagg ggcctctgca ggcgccatga acagcatgac tgcggcgggc 300
gtcacggcca tgggtacggc gctgagcccg ggaggcatgg gctccatggg cgcgcagccc 360
gtcacctcca tgaacggcct gggtccctac gccgccgcca tgaacccgtg catgagtccc 420
atggcgtacg cgccgtccaa cctgggccgc agccgcgcgg ggggcggcgg cgacgccaag 480
acattcaagc gcagctaccc tcacgccaag ccgccttact cctacatctc gctcatcacg 540
atggccatcc agcaggcgcc cagcaagatg ctcacgctga gcgagatcta ccagtggatc 600
atggacctct tcccctatta ccgccagaac cagcagcgct ggcagaactc catccgccac 660
tcgctgtcct tcaacgattg tttcgtcaag gtggcacgat ccccagacaa gccaggcaag 720
ggctcctact ggacgctgca cccggactcc ggcaacatgt tcgagaacgg ctgctacttg 780
cgccgccaaa agcgcttcaa gtgtgagaag cagccggggg ccggaggtgg gagtgggggc 840
ggcggctcca aagggggccc agaaagtcgc aaggacccct caggcccggg gaaccccagc 900
gccgagtcac cccttcattg gggtgtgcac ggaaaggcta gccagctaga gggcgcgccg 960
gcccccgggc ccgccgccag cccccagact ctggaccaca gcggggccac ggcgacaggg 1020
ggcgcttcgg agttgaagtc tccagcgtct tcatctgcgc cccccataag ctccgggcca 1080
ggggcgctgg catctgtacc cccctctcac ccggctcacg gcctggcacc ccacgaatct 1140
cagctgcatc tgaaagggga tccccactac tcctttaatc accccttctc catcaacaac 1200
ctcatgtcct cctccgagca acagcacaag ctggacttca aggcatacga gcaggcgctg 1260
cagtactctc cttatggcgc taccttgccc gccagtctgc cccttggcag cgcctcagtg 1320
gccacgagga gccccatcga gccctcagcc ctggagccag cctactacca aggtgtgtat 1380
tccagacccg tgctaaatac ttcctag                                     1407
 
<210>48
<211>1062
<212>DNA
<213>小家鼠
 
<400>48
atgctgggct cagtgaagat ggaggctcat gacctggccg agtggagcta ctacccggag 60
gcgggcgagg tgtattctcc agtgaatcct gtgcccacca tggcccctct caactcctac 120
atgaccttga acccactcag ctctccctac cctcccggag ggcttcaggc ctccccactg 180
cctacaggac ccctggcacc cccagccccc actgcgccct tggggcccac cttcccaagc 240
ttgggcactg gtggcagcac cggaggcagt gcttccgggt atgtagcccc agggcccggg 300
cttgtacatg gaaaagagat ggcaaagggg taccggcggc cactggccca cgccaaacca 360
ccatattcct acatctctct cataaccatg gctattcagc aggctccagg caagatgctg 420
accctgagtg aaatctacca atggatcatg gacctcttcc cgtactaccg ggagaaccag 480
caacgttggc agaactccat ccggcattcg ctgtccttca atgactgctt cgtcaaggtg 540
gcacgctccc cagacaagcc aggcaaaggc tcctactggg ccttgcatcc cagctctggg 600
aacatgtttg agaacggatg ctatctccgc cggcagaagc gcttcaagct ggaggagaag 660
gcaaagaaag gaaacagcgc cacatcggcc agcaggaatg gtactgcggg gtcagccacc 720
tctgccacca ctacagctgc cactgcagtc acctccccgg ctcagcccca gcctacgcca 780
tctgagcccg aggcccagag tggggatgat gtggggggtc tggactgcgc ctcacctcct 840
tcgtccacac cttatttcag cggcctggag ctcccggggg aactaaagtt ggatgcgccc 900
tataacttca accacccttt ctctatcaac aacctgatgt cagaacagac atcgacacct 960
tccaaactgg atgtggggtt tgggggctac ggggctgaga gtggggagcc tggagtctac 1020
taccagagcc tctattcccg ctctctgctt aatgcatcct ag                    1062
 
<210>49
<211>1380
<212>DNA
<213>小家鼠
 
<400>49
atgctgggag ccgtgaagat ggaagggctc gagccatccg actggagcag ctactacgcg 60
gagcccgagg gctactcttc cgtgagcaac atgaacgccg gcctggggat gaatggcatg 120
aacacataca tgagcatgtc cgcggctgcc atgggcggcg gttccggcaa catgagcgcg 180
ggctccatga acatgtcatc ctatgtgggc gctggaatga gcccgtcgct agctggcatg 240
tccccgggcg ccggcgccat ggcgggcatg agcggctcag ccggggcggc cggcgtggcg 300
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atgggtggcc ttgcccccta cgccaacatg aactcgatga gccccatgta cgggcaggcc 420
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ccctactcgt acatctcgct catcaccatg gccatccagc agagccccaa caagatgctg 540
acgctgagcg agatctatca gtggatcatg gacctcttcc ctttctaccg gcagaaccag 600
cagcgctggc agaactccat ccgccactct ctctccttca acgactgctt tctcaaggtg 660
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aacatgttcg agaacggctg ctacctgcgc cgccagaagc gcttcaagtg tgagaagcaa 780
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gggcagcagc agcaggctgc agcccacctg ctgggcccac ctcaccaccc aggcctgcca 1080
ccagaggccc acctgaagcc cgagcaccat tacgccttca accacccctt ctctatcaac 1140
aacctcatgt cgtccgagca gcaacatcac cacagccacc accaccatca gccccacaaa 1200
atggacctca aggcctacga acaggtcatg cactacccag ggggctatgg ttcccccatg 1260
ccaggcagct tggccatggg cccagtcacg aacaaagcgg gcctggatgc ctcgcccctg 1320
gctgcagaca cttcctacta ccaaggagtg tactccaggc ctattatgaa ctcatcctaa 1380
 
<210>50
<211>1053
<212>DNA
<213>人类
 
<400>50
atgctgggct cagtgaagat ggaggcccat gacctggccg agtggagcta ctacccggag 60
gcgggcgagg tctactcgcc ggtgacccca gtgcccacca tggcccccct caactcctac 120
atgaccctga atcctctaag ctctccctat ccccctgggg ggctccctgc ctccccactg 180
ccctcaggac ccctggcacc cccagcacct gcagcccccc tggggcccac tttcccaggc 240
ctgggtgtca gcggtggcag cagcagctcc gggtacgggg ccccgggtcc tgggctggtg 300
cacgggaagg agatgccgaa ggggtatcgg cggcccctgg cacacgccaa gccaccgtat 360
tcctatatct cactcatcac catggccatc cagcaggcgc cgggcaagat gctgaccttg 420
agtgaaatct accagtggat catggacctc ttcccttact accgggagaa tcagcagcgc 480
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accacccccg cggccacagt cacctccccg ccccagcccc cgcctccagc ccctgagcct 780
gaggcccagg gcggggaaga tgtgggggct ctggactgtg gctcacccgc ttcctccaca 840
ccctatttca ctggcctgga gctcccaggg gagctgaagc tggacgcgcc ctacaacttc 900
aaccaccctt tctccatcaa caacctaatg tcagaacaga caccagcacc tcccaaactg 960
gacgtggggt ttgggggcta cggggctgaa ggtggggagc ctggagtcta ctaccagggc 1020
ctctattccc gctctttgct taatgcatcc tag                              1053
 
<210>51
<211>1422
<212>DNA
<213>人类
 
<400>51
atgttaggaa ctgtgaagat ggaagggcat gaaaccagcg actggaacag ctactacgca 60
gacacgcagg aggcctactc ctcggtcccg gtcagcaaca tgaactcagg cctgggctcc 120
atgaactcca tgaacaccta catgaccatg aacaccatga ctacgagcgg caacatgacc 180
ccggcgtcct tcaacatgtc ctatgccaac ccggccttag gggccggcct gagtcccggc 240
gcagtagccg gcatgccggg gggctcggcg ggcgccatga acagcatgac tgcggccggc 300
gtgacggcca tgggtacggc gctgagcccg agcggcatgg gcgccatggg tgcgcagcag 360
gcggcctcca tgatgaatgg cctgggcccc tacgcggccg ccatgaaccc gtgcatgagc 420
cccatggcgt acgcgccgtc caacctgggc cgcagccgcg cgggcggcgg cggcgacgcc 480
aagacgttca agcgcagtta cccgcacgcc aagccgccct actcgtacat ctcgctcatc 540
accatggcca tccagcgggc gcccagcaag atgctcacgc tgagcgagat ctaccagtgg 600
atcatggacc tcttccccta ttaccggcag aaccagcagc gctggcagaa ctccatccgc 660
cactcgctgt ccttcaatga ctgcttcgtc aaggtggcac gctccccgga caagccgggc 720
aagggctcct actggacgct gcacccggac tccggcaaca tgttcgagaa cggctgctac 780
ttgcgccgcc agaagcgctt caagtgcgag aagcagccgg gggccggcgg cgggggcggg 840
agcggaagcg ggggcagcgg cgccaagggc ggccctgaga gccgcaagga cccctctggc 900
gcctctaacc ccagcgccga ctcgcccctc catcggggtg tgcacgggaa gaccggccag 960
ctagagggcg cgccggcccc gggcccggcc gccagccccc agactctgga ccacagtggg 1020
gcgacggcga cagggggcgc ctcggagttg aagactccag cctcctcaac tgcgcccccc 1080
ataagctccg ggcccggggc gctggcctct gtgcccgcct ctcacccggc acacggcttg 1140
gcaccccacg agtcccagct gcacctgaaa ggggaccccc actactcctt caaccacccg 1200
ttctccatca acaacctcat gtcctcctcg gagcagcagc ataagctgga cttcaaggca 1260
tacgaacagg cactgcaata ctcgccttac ggctctacgt tgcccgccag cctgcctcta 1320
ggcagcgcct cggtgaccac caggagcccc atcgagccct cagccctgga gccggcgtac 1380
taccaaggtg tgtattccag acccgtccta aacacttcct ag                    1422
 
<210>52
<211>1425
<212>DNA
<213>小家鼠
 
<400>52
atgcgactct ctaaaaccct tgccggcatg gatatggccg actacagcgc tgccctggac 60
ccagcctaca ccaccctgga gtttgaaaat gtgcaggtgt tgaccatggg caatgacacg 120
tccccatctg aaggtgccaa cctcaattca tccaacagcc tgggcgtcag tgccctgtgc 180
gccatctgtg gcgaccgggc caccggcaaa cactacggag cctcgagctg tgacggctgc 240
aaggggttct tcaggaggag cgtgaggaag aaccacatgt actcctgcag gtttagccga 300
caatgtgtgg tagacaaaga taagaggaac cagtgtcgtt actgcaggct taagaagtgc 360
ttccgggctg gcatgaagaa ggaagctgtc caaaatgagc gggaccggat cagcacgcgg 420
aggtcaagct acgaggacag cagcctgccc tccatcaacg cgctcctgca ggcagaggtt 480
ctgtcccagc agatcacctc tcccatctct gggatcaatg gcgacattcg ggcaaagaag 540
attgccaaca tcacagacgt gtgtgagtct atgaaggagc agctgctggt cctggtcgag 600
tgggccaagt acatcccggc cttctgcgaa ctccttctgg atgaccaggt ggcgctgctc 660
agggcccacg ccggtgagca tctgctgctt ggagccacca agaggtccat ggtgtttaag 720
gacgtgctgc tcctaggcaa tgactacatc gtccctcggc actgtccaga gctagcggag 780
atgagccgtg tgtccatccg catcctcgat gagctggtcc tgcccttcca agagctgcag 840
attgatgaca atgaatatgc ctgcctcaaa gccatcatct tctttgatcc agatgccaag 900
gggctgagtg acccgggcaa gatcaagcgg ctgcggtcac aggtgcaagt gagcctggag 960
gattacatca acgaccggca gtacgactct cggggccgct ttggagagct gctgctgctg 1020
ttgcccacgc tgcagagcat cacctggcag atgatcgaac agatccagtt catcaagctc 1080
ttcggcatgg ccaagattga caacctgctg caggagatgc ttctcggagg gtctgccagt 1140
gatgcacccc acacccacca ccccctgcac cctcacctga tgcaagaaca catgggcacc 1200
aatgtcattg ttgctaacac gatgccctct cacctcagca atggacagat gtgtgagtgg 1260
ccccgaccca gggggcaggc agccactccc gagactccac agccatcacc accaagtggc 1320
tcgggatctg aatcctacaa gctcctgcca ggagccatca ccaccatcgt caagcctccc 1380
tctgccattc cccagccaac gatcaccaag caagaagcca tctag                 1425
 
<210>53
<211>1398
<212>DNA
<213>褐鼠
 
<400>53
atggacatgg ctgactacag tgctgccttg gacccagcct acaccaccct ggagtttgaa 60
aatgtgcagg tgttgaccat gggcaatgac acatccccat ctgaaggtgc caacctcaac 120
tcatccaaca gcctgggtgt cagtgccctg tgtgccatct gtggcgatcg ggccactggc 180
aaacactacg gagcctcaag ctgtgacggc tgcaagggat tcttcaggag gagcgtgagg 240
aagaaccaca tgtactcctg caggtttagc aggcagtgcg tggtagacaa agataagagg 300
aaccagtgtc gttactgcag gctcaagaag tgcttccggg ctggcatgaa gaaagaagcc 360
gtccaaaatg agcgggatcg gatcagcacg cggaggtcaa gctacgagga cagcagccta 420
ccctccatta atgcgctcct gcaggcagag gtcctgtctc agcagatcac ctcccccatc 480
tctgggatca atggcgacat tcgggccaag aagattgcca acatcacgga tgtgtgtgag 540
tctatgaagg agcagctgct ggttctggtc gaatgggcca agtacatccc ggccttctgt 600
gaacttcttc tggatgacca ggtggcgctg ctcagagccc acgctggtga gcacctgctg 660
cttggagcca ccaagaggtc catggtgttc aaggatgtgc tgctcctagg caatgactac 720
atcgtccctc ggcactgtcc agagctagca gagatgagcc gtgtgtccat tcgcatcctc 780
gatgagctgg tcttgccctt ccaagagctg cagatcgatg ataatgaata cgcctgcctc 840
aaagccatca tcttctttga cccagatgcc aaggggctga gtgacccagg caagatcaag 900
cggctgcggt cacaggtgca ggtgagcctg gaggattaca tcaacgaccg gcagtatgac 960
tctcggggtc gttttggaga gctgctgctg ctcctgccca ctctgcagag cattacctgg 1020
cagatgatcg agcagatcca gttcatcaag ctctttggca tggccaagat tgacaacctg 1080
ctgcaggaga tgctgcttgg agggtctgcc agtgacgcgc cccacgccca ccaccccctg 1140
caccctcacc tgatgcaaga acacatgggc accaatgtca tagttgccaa cacgatgccc 1200
tctcacctca gcaatggaca gatgtgtgag tggccccggc ccagggggca ggcagccacc 1260
cctgagactc cacagccatc accaccaagt ggctctggat ctgaatccta caagctcctg 1320
ccaggagcca tcaccaccat cgtcaagcct ccctctgcca tcccccagcc aacgatcacc 1380
aagcaggaag ccatctag                                               1398
 
<210>54
<211>1398
<212>DNA
<213>小家鼠
 
<400>54
atgaacgcac agctgaccat ggaggcgatc ggcgagctgc acggggtgag ccatgagccg 60
gtgcccgccc ctgctgacct gctgggcggc agccctcacg cgcgcagctc cgtgggacac 120
cgcggcagcc acctgcctcc cgcgcacccg cgttccatgg gcatggcgtc cctgctggac 180
ggcggcagcg gaggcagcga ttaccaccac caccaccgcg cccctgagca cagcttggct 240
ggccccctgc accccaccat gaccatggcc tgtgaaactc ccccaggtat gagcatgccc 300
accacctaca ctaccttaac ccctctgcag ccgctgccgc ccatctccac cgtgtccgac 360
aagttccctc accatcatca ccaccaccat caccaccacc acccacacca ccaccagcgc 420
ctggcgggca acgtgagcgg tagtttcaca cttatgcggg atgagcgcgg gctggcctct 480
atgaataacc tctatacccc ctaccacaag gacgtggctg gcatgggcca gagcctctcg 540
cccctctctg gctccggtct gggcagcatt cacaactccc agcaaggact tccccactat 600
gctcatcccg gcgcggctat gcccaccgac aagatgctca ccccaaatgg ctttgaagcc 660
caccaccctg ccatgctcgg tcgccacggg gagcagcacc tcacgcccac ctcggccggc 720
atggtaccca tcaacggcct tcctccgcac catcctcatg cccacctgaa tgcccagggc 780
cacggacagc tcctgggcac agcccgagag cccaaccctt cggtgaccgg cgcgcaggtc 840
agcaatggaa gtaattcagg gcagatggaa gagatcaata ccaaagaggt ggcgcagcgt 900
atcaccaccg agctcaaacg ttacagcatc ccacaggcca tcttcgcgca gagggtgctc 960
tgccgttccc aggggaccct ttcggacctg ctgcgaaacc ccaagccctg gagcaaactc 1020
aagtcgggtc gggagacctt ccggaggatg tggaagtggc tgcaggagcc ggagttccag 1080
cgcatgtcgg cgctccgctt agcagcctgc aaacggaaag agcaagaaca tgggaaggac 1140
agaggcaaca cccccaaaaa gcccaggctg gtcttcacag acgtccaacg tcgaactcta 1200
catgcaatat tcaaggaaaa taagcgtccg tccaaagaat tacaaatcac catctcccag 1260
cagctggggt tggagctgag cactgtcagc aacttcttca tgaatgccag aaggaggagt 1320
ctggacaagt ggcaggacga gggcggctcc aactcaggca gttcatcgtc ctcatcgagc 1380
acttgtacca aagcatga                                               1398
 
<210>55
<211>1002
<212>DNA
<213>爪蟾
 
<400>55
atggagaagt ccaagaattt caggattgac gctctcctgg cgatagatcc ccccaaggct 60
cagacctccc cattggctct ggtcacctcg ctgtcctcct cgtctctctc cgggagcccc 120
ccgtccgagc acactgacag cctcaggact gactccccct cccctccaag gacttgtgga 180
ctggtcccta aaccaggttt cctgagcagc caccagcacc ccccaaacat gatgtcattg 240
cacccccagg ctgctccagg gatcccccct caggccctgt atggacaccc gatgtacagc 300
tacttggcag cggggcagca cccagctctg tcctacccct actcccagat gcagagcagc 360
caccaccccc accccatgga ccccatcaag atcagcgctg gcaccttcca actggaccag 420
tggctcagag cctccactgc cggcatgatg ctgcccaaaa tggcagactt taactcccag 480
gcccaatcca acctgctggg aaagtgcaga agaccaagga cagcgtttac cagtcagcag 540
ctgttggaac tggagcacca attcaagctg aacaagtacc tctccaggcc gaaacgcttt 600
gaagtggcca cttccctgat gctcactgag acgcaggtga agatctggtt ccagaacagg 660
cgcatgaaat ggaagaggag taagaaagcc aaggagcagg cggcgcagga ctcagcagag 720
aaacagcaga gggcaggcaa gggcagcagc gaggagaagt gctcggatga gctgcaggaa 780
gagaagaaat cctaccatct ccatcccagg ggggagccca tcaaagggaa cggccgcctg 840
cagcccagag actatacaga cagcgaagag gacgaggagg aggacaggga agaggaggaa 900
gaggaagatc acagagggga ggggaagcgg ttttaccatc attcttctga ctgcacatcc 960
gaggaagagg agaacagcca caataagcag agcggccact ga                    1002
 
<210>56
<211>1215
<212>DNA
<213>小家鼠
 
<400>56
atggaaaaat ccaaaaattt ccgcatcgac gccctgctgg ccgtggatcc cccgcgagcc 60
gcctccacgc agagcgcgcc tctggccttg gtcacttccc tcgcgactac agtatctggt 120
cccggccgcg gcggcagcgg cggcgggggg accagtagcg gggcgagccg tagctgcagt 180
cccgcatcct cggaggccac tgcagcgccc ggtgaccggc tgagagctga gagcccgtcg 240
cccccacgct tgctggctgc acactgcgcg ctgctgccca agcccggatt cctgggcgcc 300
ggaggaggcg gcggcgcggc gggtgggccg ggcactcccc accaccacgc gcaccctggt 360
gcagcagccg ccgcggctgc cgctgccgct gccgcggctg ccggtggcct ggcactgggg 420
ctgcacccgg ggggcgcaca gggcggcgcg ggcctccctg cacaggcggc tctctatgga 480
cacccggtct acagttattc ggcagcagct gcagcggccg cgctagctgg ccagcacccg 540
gcgctttcct actcataccc tcaggtgcag ggcgcgcacc ctgcgcaccc tgccgacccc 600
atcaagctgg gtgccagcac cttccaactg gaccagtggc tgcgcgcgtc tactgcgggc 660
atgatcctgc ccaagatgcc ggacttcagc tgtcaggcgc agtcgaacct cttggggaag 720
tgccgaaggc ctcgcacggc cttcaccagc cagcagctgt tggagctgga acaccagttc 780
aagctcaaca agtacctgtc tcgacccaag cgttttgagg tggctacctc gctcatgctc 840
accgagactc aggtgaagat ttggttccag aaccgccgaa tgaaatggaa acgcagcaaa 900
aaggccaaag agcaggctgc gcaggaggcg gagaagcaga agggcggcgg cgggggcacc 960
ggcaaaggcg gcagtgagga gaagacggaa gaggagctga tggggcctcc ggtttcgggg 1020
gacaaggcaa gcggccgtcg cctgcgggac ttgcgggaca gtgaccctga tgaggacgag 1080
gatgatgaag aagaggacaa cttcccgtac agcaatggtg ccggtgccca tgctgcctca 1140
tccgactgct catctgagga cgactcgcct cctccaagac taggcgggcc tggacaccaa 1200
cctctgcccc agtag                                                  1215
 
<210>57
<211>1215
<212>DNA
<213>人类
 
<400>57
atggaaaaat ccaaaaattt ccgcatcgac gccctgctgg ccgtggatcc cccgcgagcc 60
gcctccacgc agagcgcgcc tctggccttg gtcacttccc tcgcgactac agtatctggt 120
cccggccgcg gcggcagcgg cggcgggggg accagtagcg gggcgagccg tagctgcagt 180
cccgcatcct cggaggccac tgcagcgccc ggtgaccggc tgagagctga gagcccgtcg 240
cccccacgct tgctggctgc acactgcgcg ctgctgccca agcccggatt cctgggcgcc 300
ggaggaggcg gcggcgcggc gggtgggccg ggcactcccc accaccacgc gcaccctggt 360
gcagcagccg ccgcggctgc cgctgccgct gccgcggctg ccggtggcct ggcactgggg 420
ctgcacccgg ggggcgcaca gggcggcgcg ggcctccctg cacaggcggc tctctatgga 480
cacccggtct acagttattc ggcagcagct gcagcggccg cgctagctgg ccagcacccg 540
gcgctttcct actcataccc tcaggtgcag ggcgcgcacc ctgcgcaccc tgccgacccc 600
atcaagctgg gtgccagcac cttccaactg gaccagtggc tgcgcgcgtc tactgcgggc 660
atgatcctgc ccaagatgcc ggacttcagc tgtcaggcgc agtcgaacct cttggggaag 720
tgccgaaggc ctcgcacggc cttcaccagc cagcagctgt tggagctgga acaccagttc 780
aagctcaaca agtacctgtc tcgacccaag cgttttgagg tggctacctc gctcatgctc 840
accgagactc aggtgaagat ttggttccag aaccgccgaa tgaaatggaa acgcagcaaa 900
aaggccaaag agcaggctgc gcaggaggcg gagaagcaga agggcggcgg cgggggcacc 960
ggcaaaggcg gcagtgagga gaagacggaa gaggagctga tggggcctcc ggtttcgggg 1020
gacaaggcaa gcggccgtcg cctgcgggac ttgcgggaca gtgaccctga tgaggacgag 1080
gatgatgaag aagaggacaa cttcccgtac agcaatggtg ccggtgccca tgctgcctca 1140
tccgactgct catctgagga cgactcgcct cctccaagac taggcgggcc tggacaccaa 1200
cctctgcccc agtag                                                  1215
 
<210>58
<211>846
<212>DNA
<213>人类
 
<400>58
atgacttcca aggaggacgg caaggcggcg ccgggggagg agcggcggcg cagcccgctg 60
gaccacctgc ctccgcctgc caactccaac aagccactga cgccgttcag catcgaggac 120
atcctcaaca agccgtctgt gcggagaagt tactcgctgt gcggggcggc gcacctgctg 180
gccgccgcgg acaagcacgc gcagggcggc ttgcccctgg cgggccgcgc gctgctctcg 240
cagacctcgc cgctgtgcgc gctggaggag ctcgccagca agacgtttaa ggggctggag 300
gtcagcgttc tgcaggcagc cgaaggccgc gacggtatga ccatctttgg gcagcggcag 360
acccctaaga agcggcgaaa gtcgcgcacg gccttcacca accaccagat ctatgaattg 420
gaaaagcgct ttctatacca gaagtacctg tcccccgccg atcgcgacca aatcgcgcag 480
cagctgggcc tcaccaacgc gcaagtcatc acctggttcc agaatcggcg cgctaagctc 540
aagcgggacc tggaggagat gaaggccgac gtagagtccg ccaagaaact gggccccagc 600
gggcagatgg acatcgtggc gctggccgaa ctcgagcaga actcggaggc cacagccggc 660
ggtggcggcg gctgcggcag ggccaagtcg aggcccggct ctccggtcct ccccccaggc 720
gccccgaagg ccccgggcgc tggcgccctg cagctctcgc ctgcctctcc gctcacggac 780
cagccggcca gcagccagga ctgctcggag gacgaggaag acgaagagat cgacgtggac 840
gattga                                                            846
<210>59
<211>1119
<212>DNA
<213>小家鼠
 
<400>59
atgttggacg gcatcaagat ggaggagcac gccctgcgcc ccgggcccgc cactctgggg 60
gtgctgctgg gctccgactg cccgcatccc gccgtctgcg agggctgcca gcggcccatc 120
tccgaccgct tcctgatgcg agtcaacgag tcgtcctggc acgaggagtg tttgcagtgc 180
gcggcgtgtc agcaagccct caccaccagc tgctacttcc gggatcggaa actgtactgc 240
aaacaagact accaacagct cttcgcggcc aagtgcagcg gctgcatgga gaagatcgcc 300
cccaccgagt tcgtgatgcg ggcgctggag tgcgtgtacc acctgggctg cttctgctgc 360
tgcgtgtgtg aacggcagct acgcaagggc gacgaattcg tgctcaagga gggccagctg 420
ctgtgcaagg gtgactacga gaaggagaag gacctgctca gctccgtgag ccccgacgag 480
tccgactccg tgaagagcga ggatgaagat ggggacatga agccggccaa ggggcagggc 540
agtcagagca agggcagcgg ggatgacggg aaggacccgc ggaggcccaa gcgaccccgg 600
accatcctca ccacgcagca gcgaagagcc ttcaaggcct ccttcgaggt ctcgtcgaag 660
ccttgccgaa aggtccgaga gacactggca gctgagacgg gcctcagtgt gcgcgtggtc 720
caggtctggt ttcagaacca aagagcaaag atgaagaagc tggcgcggcg gcaccagcag 780
cagcaggagc agcagaactc ccagcggctg ggccaggagg tcctgtccag ccgcatggag 840
ggcatgatgg cttcctacac gccgctggcc ccaccacagc agcagatcgt ggccatggaa 900
cagagcccct acggcagcag cgaccccttc cagcagggcc tcacgccgcc ccaaatgcca 960
gggaacgact ccatcttcca tgacatcgac agcgatacct ccttaaccag cctcagcgac 1020
tgcttcctcg gctcctcaga cgtgggctcc ctgcaggccc gcgtggggaa ccccatcgac 1080
cggctctact ccatgcagag ttcctacttc gcctcctga                        1119
 
<210>60
<211>714
<212>DNA
<213>人类
 
<400>60
atgccagccc gccttgagac ctgcatctcc gacctcgact gcgccagcag cagcggcagt 60
gacctatccg gcttcctcac cgacgaggaa gactgtgcca gactccaaca ggcagcctcc 120
gcttcggggc cgcccgcgcc ggcccgcagg ggcgcgccca atatctcccg ggcgtctgag 180
gttccagggg cacaggacga cgagcaggag aggcggcggc gccgcggccg gacgcgggtc 240
cgctccgagg cgctgctgca ctcgctgcgc aggagccggc gcgtcaaggc caacgatcgc 300
gagcgcaacc gcatgcacaa cttgaacgcg gccctggacg cactgcgcag cgtgctgccc 360
tcgttccccg acgacaccaa gctcaccaaa atcgagacgc tgcgcttcgc ctacaactac 420
atctgggctc tggccgagac actgcgcctg gcggatcaag ggctgcccgg aggcggtgcc 480
cgggagcgcc tcctgccgcc gcagtgcgtc ccctgcctgc ccggtccccc aagccccgcc 540
agcgacgcgg agtcctgggg ctcaggtgcc gccgccgcct ccccgctctc tgaccccagt 600
agcccagccg cctccgaaga cttcacctac cgccccggcg accctgtttt ctccttccca 660
agcctgccca aagacttgct ccacacaacg ccctgtttca ttccttacca ctag       714
 
<210>61
<211>819
<212>DNA
<213>人类
 
<400>61
atgttcgtca aatccgagac cttggagttg aaggaggaag aggacgtgtt agtgctgctc 60
ggatcggcct cccccgcctt ggcggccctg accccgctgt catccagcgc cgacgaagaa 120
gaggaggagg agccgggcgc gtcaggcggg gcgcgtcggc agcgcggggc tgaggccggg 180
cagggggcgc ggggcggcgt ggctgcgggt gcggagggct gccggcccgc acggctgctg 240
ggtctggtac acgattgcaa acggcgccct tcccgggcgc gggccgtctc ccgaggcgcc 300
aagacggccg agacggtgca gcgcatcaag aagacccgta gactgaaggc caacaaccgc 360
gagcgaaacc gcatgcacaa cctcaacgcg gcactggacg cgctgcgcga ggtgctcccc 420
acgttccccg aggacgccaa gctcaccaag atcgagaccc tgcgcttcgc ccacaactac 480
atctgggcac tcaccgagac cctgcgcctg gcggatcact gcgggggcgg cggcgggggc 540
ctgccggggg cgctcttctc cgaggcagtg ttgctgagcc cgggaggcgc cagcgccgcc 600
ctgagcagca gcggagacag cccctcgccc gcctccacgt ggagttgcac caacagcccc 660
gcgccgtcct cctccgtgtc ctccaattcc acctccccct acagctgcac tttatcgccc 720
gccagcccgg ccgggtcaga catggactat tggcagcccc cacctcccga caagcaccgc 780
tatgcacctc acctccccat agccagggat tgtatctag                        819
 
<210>62
<211>645
<212>DNA
<213>小家鼠
 
<400>62
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ttccccagag cctcggaaga cgaagtgacc tgccccacgt ccgccccgcc cagccccact 120
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cgacggagtc ggcgaaagaa ggccaacgac cgcgagcgca atcgaatgca caacctcaac 300
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<210>63
<211>711
<212>DNA
<213>人类
 
<400>63
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<210>64
<211>957
<212>DNA
<213>小家鼠
 
<400>64
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<210>65
<211>963
<212>DNA
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<400>65
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<210>66
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<212>DNA
<213>人类
 
<400>66
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<211>729
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<400>67
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<210>68
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<212>DNA
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<400>68
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<210>69
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<212>DNA
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<400>69
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<210>70
<211>675
<212>DNA
<213>人类
 
<400>70
atggagctgt atgagacatc cccctacttc taccaggaac cccgcttcta tgatggggaa 60
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<210>71
<211>822
<212>DNA
<213>人类
 
<400>71
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<210>72
<211>7668
<212>DNA
<213>人类
 
<400>72
atgccgccgc tcctggcgcc cctgctctgc ctggcgctgc tgcccgcgct cgccgcacga 60
ggcccgcgat gctcccagcc cggtgagacc tgcctgaatg gcgggaagtg tgaagcggcc 120
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cacgagtgtg cctgcctgcc aggcttcacc ggccagaact gtgaggaaaa tatcgacgat 780
tgtccaggaa acaactgcaa gaacgggggt gcctgtgtgg acggcgtgaa cacctacaac 840
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agcgccgcct gcttccacgg cgccacctgc catgaccgtg tggcctcctt ctactgcgag 1080
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gccaagtgcc tggacggacc caacacttac acctgtgtgt gcacggaagg gtacacgggg 1680
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<210>73
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<212>DNA
<213>人类
 
<400>73
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<212>DNA
<213>人类
<400>74
atgccttgtg ttcaggcgca gtatgggtcc tcgcctcaag gagccagccc cgcttctcag 60
agctacagtt accactcttc gggagaatac agctccgatt tcttaactcc agagtttgtc 120
aagtttagca tggacctcac caacactgaa atcactgcca ccacttctct ccccagcttc 180
agtaccttta tggacaacta cagcacaggc tacgacgtca agccaccttg cttgtaccaa 240
atgcccctgt ccggacagca gtcctccatt aaggtagaag acattcagat gcacaactac 300
cagcaacaca gccacctgcc cccccagtct gaggagatga tgccgcactc cgggtcggtt 360
tactacaagc cctcctcgcc cccgacgccc accaccccgg gcttccaggt gcagcacagc 420
cccatgtggg acgacccggg atctctccac aacttccacc agaactacgt ggccactacg 480
cacatgatcg agcagaggaa aacgccagtc tcccgcctct ccctcttctc ctttaagcaa 540
tcgccccctg gcaccccggt gtctagttgc cagatgcgct tcgacgggcc cctgcacgtc 600
cccatgaacc cggagcccgc cggcagccac cacgtggtgg acgggcagac cttcgctgtg 660
cccaacccca ttcgcaagcc cgcgtccatg ggcttcccgg gcctgcagat cggccacgcg 720
tctcagctgc tcgacacgca ggtgccctca ccgccgtcgc ggggctcccc ctccaacgag 780
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gagggctgca aaggcttctt taagcgcaca gtgcaaaaaa atgcaaaata cgtgtgttta 900
gcaaataaaa actgcccagt ggacaagcgt cgccggaatc gctgtcagta ctgccgattt 960
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agcctggact attccaggtt ccaggcgaac cctgactatc aaatgagtgg agatgacacc 1200
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gcagagaaga tccctggctt cgcagacctg cccaaagccg accaagacct gctttttgaa 1320
tcagctttct tagaactgtt tgtccttcga ttagcataca ggtccaaccc agtggagggt 1380
aaactcatct tttgcaatgg ggtggtcttg cacaggttgc aatgcgttcg tggctttggg 1440
gaatggattg attccattgt tgaattctcc tccaacttgc agaatatgaa catcgacatt 1500
tctgccttct cctgcattgc tgccctggct atggtcacag agagacacgg gctcaaggaa 1560
cccaagagag tggaagaact gcaaaacaag attgtaaatt gtctcaaaga ccacgtgact 1620
ttcaacaatg gggggttgaa ccgccccaat tatttgtcca aactgttggg gaagctccca 1680
gaacttcgta ccctttgcac acaggggcta cagcgcattt tctacctgaa attggaagac 1740
ttggtgccac cgccagcaat aattgacaaa cttttcctgg acactttacc tttctaa    1797
 
<210>75
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<212>DNA
<213>人类
 
<400>75
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ctgcttctcc atctcctggg acaggtcgct gcgactcagc gctgccctcc ccagtgcccg 120
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<210>76
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<212>DNA
<213>人类
 
<400>76
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<210>77
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<212>DNA
<213>人类
 
<400>77
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<210>78
<211>852
<212>DNA
<213>人类
 
<400>78
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<210>79
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<212>DNA
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<400>79
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<210>80
<211>855
<212>DNA
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<400>80
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<210>81
<211>945
<212>DNA
<213>人类
<400>81
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<210>82
<211>876
<212>DNA
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<400>82
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<210>83
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<212>DNA
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<400>83
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<210>84
<211>1362
<212>DNA
<213>人类
 
<400>84
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atgtcggcca tgggctcggc cacgcgctac cacacctacc tgccgccgcc ctaccccggc 1080
tcgtcgcaag cgcagggagg cccgttccaa gccagctcgc cctcctacca cctgtactac 1140
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<210>85
<211>1704
<212>DNA
<213>人类
 
<400>85
atgcttcatt cgcctcacaa acaaccacag aaccacaagt gcggtgcaaa ctttctccag 60
gaggacagca agaagtctct ggtttttaaa tggttaatct ccgcaggtca ctaccagcca 120
ccgagaccaa cagagtcatt taaggctgca agcagtattt acaacagagg gtacaagttc 180
tatctgaaaa aaaaaggagg gactatggca tcaaacagcc tcttcagcac agtgacacca 240
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agcctgcagc ccggcaaaat gagcgacgtg agcccggtgg tggctgcgca acagcagcag 360
caacagcagc agcagcaaca gcagcagcag cagcagcaac agcagcagca gcagcaggag 420
gcggcggcgg cggctgcggc ggcggcggcg gctgcggcgg cggcagctgc agtgccccgg 480
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<210>87
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<400>89
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<210>91
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<212>DNA
<213>人类
 
<400>91
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<212>DNA
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<210>93
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<212>DNA
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<400>93
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<210>94
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<213>小家鼠
 
<400>94
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<210>95
<211>1025
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<213>人类
 
<400>95
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cagtatattg ccattaccca gggaggagca atacagctgg ctaacaatgg taccgatggg 600
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caaaacaaga cattgattga ggagctaaaa gcacttaagg acctttactg ccacaaatca 1020
gatta                                                             1025
 
<210>96
<211>963
<212>DNA
<213>小家鼠
 
<400>96
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ggacctcgct cttataccat cgcagttgct tccctgggta aaggagtggc ctgtaatcct 1140
gcctgcttca tcacacagct cctccctgtg aaaaggaagc tagggttcta tgaatggact 1200
tcaaggttaa gaagtcacat aaatcccaca ggcactgttt tgcttcagct agaaaataca 1260
atgcagatgt cattaaaaga cttactttaa                                  1290
 
<210>106
<211>1611
<212>DNA
<213>人类
 
<400>106
atggagtttt caagtccttc cagagaggaa tgtcccaagc ctttgagtag ggtaagcatc 60
atggctggca gcctcacagg attgcttcta cttcaggcag tgtcgtgggc atcaggtgcc 120
cgcccctgca tccctaaaag cttcggctac agctcggtgg tgtgtgtctg caatgccaca 180
tactgtgact cctttgaccc cccgaccttt cctgcccttg gtaccttcag ccgctatgag 240
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ggaggggcca tgacagatgc tgctgctctc aacatccttg ccctgtcacc ccctgcccaa 420
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ggagacatct accaccagac ctgggccaga tactttgtga agttcctgga tgcctatgct 780
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tgtgtgggct ccaagttctg ggagcagagt gtgcggctag gctcctggga tcgagggatg 1200
cagtacagcc acagcatcat cacgaacctc ctgtaccatg tggtcggctg gaccgactgg 1260
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cacttcagca agttcattcc tgagggctcc cagagagtgg ggctggttgc cagtcagaag 1440
aacgacctgg acgcagtggc actgatgcat cccgatggct ctgctgttgt ggtcgtgcta 1500
aaccgctcct ctaaggatgt gcctcttacc atcaaggatc ctgctgtggg cttcctggag 1560
acaatctcac ctggctactc cattcacacc tacctgtggc gtcgccagtg a          1611
 
<210>107
<211>642
<212>DNA
<213>人类
 
<400>107
atgccccgga gggcggagaa ctgggacgag gccgaggtag gcgcggagga ggcaggcgtc 60
gaagagtacg gccctgaaga agacggcggg gaggagtcgg gcgccgagga gtccggcccg 120
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cccgtgctgc gctcggtgaa ctcgcgcgag ccctcccagg tcatcttctg caatcgcagt 240
ccgcgcgtcg tgctgcccgt atggctcaac ttcgacggcg agccgcagcc ctacccaacg 300
ctgccgcctg gcacgggccg ccgcatccac agctaccgag gtcacctttg gctcttcaga 360
gatgcaggga cacacgatgg gcttctggtt aaccaaactg aattatttgt gccatctctc 420
aatgttgacg gacagcctat ttttgccaat atcacactgc cagtgtatac tctgaaagag 480
cgatgcctcc aggttgtccg gagcctagtc aagcctgaga attacaggag actggacatc 540
gtcaggtcgc tctacgaaga tctggaagac cacccaaatg tgcagaaaga cctggagcgg 600
ctgacacagg agcgcattgc acatcaacgg atgggagatt ga                    642
 
<210>108
<211>444
<212>DNA
<213>人类
 
<400>108
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gtgaaggctc atggcaagaa agtgctcggt gcctttagtg atggcctggc tcacctggac 240
aacctcaagg gcacctttgc cacactgagt gagctgcact gtgacaagct gcacgtggat 300
cctgagaact tcaggctcct gggcaacgtg ctggtctgtg tgctggccca tcactttggc 360
aaagaattca ccccaccagt gcaggctgcc tatcagaaag tggtggctgg tgtggctaat 420
gccctggccc acaagtatca ctaa                                        444
 
<210>109
<211>951
<212>DNA
<213>人类
 
<400>109
atgatagtgt ttgtcaggtt caactccagc catggtttcc cagtggaggt cgattctgac 60
accagcatct tccagctcaa ggaggtggtt gctaagcgac agggggttcc ggctgaccag 120
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gttttccagt gcaactcccg ccacgtgatt tgcttagact gtttccactt atactgtgtg 360
acaagactca atgatcggca gtttgttcac gaccctcaac ttggctactc cctgccttgt 420
gtggctggct gtcccaactc cttgattaaa gagctccatc acttcaggat tctgggagaa 480
gagcagtaca accggtacca gcagtatggt gcagaggagt gtgtcctgca gatggggggc 540
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ggctgcatgc acatgaagtg tccgcagccc cagtgcaggc tcgagtggtg ctggaactgt 900
ggctgcgagt ggaaccgcgt ctgcatgggg gaccactggt tcgacgtgta g          951

Claims (134)

1.一个能够延缓HIV-1和/或HIV-2感染的载体，它包括诱饵、合成寡核甘酸序列和针对一个HIV共受体的合成寡核甘酸。
2.根据权利要求1所述的载体，其中合成寡核苷酸包括选自siRNA、miRNA和shRNA序列的寡核苷酸。
3.根据权利要求1所述的载体，其中载体包括一个合成寡核甘酸类别的组合。
4.根据权利要求1所述的载体，其中载体是一个病毒载体。
5.根据权利要求1所述的载体，其中合成寡核甘酸也靶向一个HIV酶。
6.根据权利要求1所述的载体，其中合成寡核甘酸是由一个在靶细胞中活跃的启动子驱动的。
7.根据权利要求1所述的载体，其中合成寡核甘酸是由EF-1α启动子驱动的。
8.根据权利要求1所述的载体，其中载体包括标记物基因，例如，编码抗生素耐药性蛋白或荧光蛋白的那些标记物基因。
9.一个能够延缓HIV-1和/或HIV-2感染的载体，它包括诱饵合成寡核甘酸序列和针对HIV共受体的合成寡核甘酸，其中诱饵序列包括HIV RRE和/或TAR诱饵序列。
10.根据权利要求9所述的载体，其中合成寡核甘酸包括siRNA、miRNA或shRNA序列。
11.根据权利要求9所述的载体，其中载体包括一个合成寡核甘酸类别的组合。
12.根据权利要求9所述的载体，其中载体是一个病毒载体。
13.根据权利要求9所述的载体，其中合成寡核甘酸也靶向一个HIV酶。
14.根据权利要求9所述的载体，其中合成寡核甘酸是由一个在靶细胞中活跃的启动子驱动的。
15.根据权利要求9所述的载体，其中合成寡核甘酸是由EF-1α启动子驱动的。
16.根据权利要求9所述的载体，其中载体包括标记物基因，例如，编码抗生素耐药性蛋白或荧光蛋白的那些标记物基因。
17.一个能够延缓HIV-1和/或HIV-2感染的载体，其中诱饵序列代表了HIV-1和HIV-2诱饵序列的一个组合。
18.根据权利要求17所述的载体，其中合成寡核甘酸包括siRNA、miRNA或shRNA序列。
19.根据权利要求17所述的载体，其中载体包括一个合成寡核甘酸类别的组合。
20.根据权利要求17所述的载体，其中载体是一个病毒载体。
21.根据权利要求17所述的载体，其中合成寡核甘酸也靶向一个HIV酶。
22.根据权利要求17所述的载体，其中合成寡核甘酸是由在靶细胞中活跃的启动子驱动的。
23.根据权利要求17所述的载体，其中合成寡核甘酸是由EF-1α启动子驱动的。
24.根据权利要求17所述的载体，其中载体包括标记物基因，例如，编码抗生素耐药性蛋白或荧光蛋白的那些标记物基因。
25.一个能够延缓HIV-1和/或HIV-2感染的载体，它包括诱饵合成寡核甘酸序列和针对HIV共受体的合成寡核甘酸，其中诱饵序列包括HIV-2RRE和HIV-2 TAR诱饵序列。
26.根据权利要求25所述的载体，其中合成寡核甘酸包括siRNA、miRNA或shRNA序列。
27.根据权利要求25所述的载体，其中载体包括一个合成寡核甘酸类别的组合。
28.根据权利要求25所述的载体，其中载体是一个病毒载体。
29.根据权利要求25所述的载体，其中合成寡核甘酸也靶向一个HIV酶。
30.根据权利要求25所述的载体，其中合成寡核甘酸是由在靶细胞中活跃的启动子驱动的。
31.根据权利要求25所述的载体，其中合成寡核甘酸是由EF-1α启动子驱动的。
32.根据权利要求25所述的载体，其中载体包括标记物基因，例如，编码抗生素耐药性蛋白或荧光蛋白的那些标记物基因。
33.一个能够延缓HIV-1和/或HIV-2感染的载体，它包括针对HIV共受体的合成寡核甘酸，以及HIV-2 RRE和HIV-2 TAR诱饵序列。
34.根据权利要求33所述的载体，其中合成寡核甘酸包括siRNA、miRNA或shRNA序列。
35.根据权利要求34所述的载体，其中载体包括一个合成寡核甘酸类别的组合。
36.根据权利要求34所述的载体，其中载体是一个病毒载体。
37.根据权利要求34所述的载体，其中合成寡核甘酸也靶向一个HIV酶。
38.根据权利要求34所述的载体，其中合成寡核甘酸是由在靶细胞中活跃的启动子驱动的。
39.根据权利要求34所述的载体，其中合成寡核甘酸是由EF-1α启动子驱动的。
40.根据权利要求34所述的载体，其中载体包括标记物基因，例如，编码抗生素耐药性蛋白或荧光蛋白的那些标记物基因。
41.一个能够延缓HIV-1和/或HIV-2感染的载体，它包括针对HIV共受体的合成寡核甘酸，而且其中多个合成寡核甘酸针对单个HIV共受体。
42.根据权利要求41所述的载体，其中合成寡核甘酸包括siRNA、miRNA或shRNA序列。
43.根据权利要求41所述的载体，其中载体包括一个合成寡核甘酸类别的组合。
44.根据权利要求41所述的载体，其中载体是一个病毒载体。
45.根据权利要求41所述的载体，其中合成寡核甘酸也靶向一个HIV酶。
46.根据权利要求41所述的载体，其中合成寡核甘酸是由一个在靶细胞中活跃的启动子驱动的。
47.根据权利要求41所述的载体，其中合成寡核甘酸是由EF-1α启动子驱动的。
48.根据权利要求41所述的载体，其中载体包括标记物基因，例如，编码抗生素耐药性蛋白或荧光蛋白的那些标记物基因。
49.一个能够延缓HIV-1和/或HIV-2感染的载体，它包括针对HIV共受体(包括CXCR4和CCR5)的合成寡核甘酸。
50.根据权利要求49所述的载体，其中合成寡核甘酸包括siRNA、miRNA或shRNA序列。
51.根据权利要求49所述的载体，其中载体包括一个合成寡核甘酸类别的组合。
52.根据权利要求49所述的载体，其中载体是一个病毒载体。
53.根据权利要求49所述的载体，其中合成寡核甘酸也靶向一个HIV酶。
54.根据权利要求49所述的载体，其中合成寡核甘酸是由一个在靶细胞中活跃的启动子驱动的。
55.根据权利要求49所述的载体，其中合成寡核甘酸是由EF-1α启动子驱动的。
56.根据权利要求49所述的载体，其中载体包括标记物基因，例如，编码抗生素耐药性蛋白或荧光蛋白的那些标记物基因。
57.一个能够延缓HIV-1和/或HIV-2感染的载体，它包括针对HIV共受体的合成寡核甘酸，而且其中针对HIV共受体的合成寡核甘酸是miRNA序列。
58.根据权利要求57所述的载体，其中合成寡核甘酸包括siRNA、miRNA或shRNA序列。
59.根据权利要求57所述的载体，其中载体包括一个合成寡核甘酸类别的组合。
60.根据权利要求57所述的载体，其中载体是一个病毒载体。
61.根据权利要求57所述的载体，其中合成寡核甘酸也靶向一个HIV酶。
62.根据权利要求57所述的载体，其中合成寡核甘酸是由一个在靶细胞中活跃的启动子驱动的。
63.根据权利要求57所述的载体，其中合成寡核甘酸是由EF-1α启动子驱动的。
64.根据权利要求57所述的载体，其中载体包括标记物基因，例如，编码抗生素耐药性蛋白或荧光蛋白的那些标记物基因。
65.一个能够延缓HIV-1和/或HIV-2感染的载体，它包括诱饵合成寡核甘酸序列和针对HIV共受体的合成寡核甘酸，而且其中针对HIV共受体的合成寡核甘酸是miRNA序列。
66.根据权利要求65所述的载体，其中合成寡核甘酸包括siRNA、miRNA或shRNA序列。
67.根据权利要求65所述的载体，其中载体包括一个合成寡核甘酸类别的组合。
68.根据权利要求65所述的载体，其中载体是一个病毒载体。
69.根据权利要求65所述的载体，其中合成寡核甘酸也靶向一个HIV酶。
70.根据权利要求65所述的载体，其中合成寡核甘酸是由一个在靶细胞中活跃的启动子驱动的。
71.根据权利要求65所述的载体，其中合成寡核甘酸是由EF-1α启动子驱动的。
72.根据权利要求65所述的载体，其中载体包括标记物基因，例如，编码抗生素耐药性蛋白或荧光蛋白的那些标记物基因。
73.一个能够延缓HIV-1和/或HIV-2感染的载体，它包括针对CXCR4的多个miRNA序列、针对CCR5的多个miRNA序列、一个HIV-2RRE诱饵序列和一个HIV-2TAR诱饵序列，而且其中载体是一个病毒载体。
74.根据权利要求73所述的载体，其中合成寡核甘酸包括siRNA、miRNA或shRNA序列。
75.根据权利要求73所述的载体，其中载体包括一个合成寡核甘酸类别的组合。
76.根据权利要求73所述的载体，其中载体是一个病毒载体。
77.根据权利要求73所述的载体，其中合成寡核甘酸也靶向一个HIV酶。
78.根据权利要求73所述的载体，其中合成寡核甘酸是由一个在靶细胞中活跃的启动子驱动的。
79.根据权利要求73所述的载体，其中合成寡核甘酸是由EF-1α启动子驱动的。
80.根据权利要求73所述的载体，其中载体包括标记物基因，例如，编码抗生素耐药性蛋白或荧光蛋白的那些标记物基因。
81.一个能够延缓免疫缺陷病毒感染的载体，它包括HIV-2RRE诱饵序列和/或HIV-2TAR诱饵序列。
82.根据权利要求81所述的载体，其中合成寡核甘酸包括siRNA、miRNA或shRNA序列。
83.根据权利要求81所述的载体，其中载体包括一个合成寡核甘酸类别的组合。
84.根据权利要求81所述的载体，其中载体是一个病毒载体。
85.根据权利要求81所述的载体，其中合成寡核甘酸也靶向一个HIV酶。
86.根据权利要求81所述的载体，其中合成寡核甘酸是由一个在靶细胞中活跃的启动子驱动的。
87.根据权利要求81所述的载体，其中合成寡核甘酸是由EF-1α启动子驱动的。
88.根据权利要求81所述的载体，其中载体包括标记物基因，例如，编码抗生素耐药性蛋白或荧光蛋白的那些标记物基因。
89.一种减轻患者感染的方法，包括1)生成一个能够延缓免疫缺陷病毒感染的载体，2)转移选自脐带血细胞、造血细胞、外周血、骨髓、精原细胞、原始生殖细胞、CD4+T细胞、巨噬细胞、T细胞祖细胞、巨噬细胞-单核细胞祖细胞、CD 34+干/祖细胞和/或能够分化的细胞的自体或供体干/祖细胞在活体外或活体内到HIV靶细胞中，以及3)导入转染的细胞到患者的循环系统或骨髓。
90.根据权利要求89所述的方法，其中干/祖细胞在导入患者的循环系统之前在生长增强型培养基中培养以扩展细胞。
91.根据权利要求89所述的方法，其中通过一种标记物蛋白的表达监测成功的转染。
92.根据权利要求89所述的方法，其中所选的干/祖细胞是供体脐带祖细胞。
93.根据权利要求89所述的方法，其中所选的干/祖细胞是自体外周血干/祖细胞。
94.根据权利要求89所述的方法，其中所选的干/祖细胞是自体衍生、诱导或重编程的多能或复能干细胞。
95.一种在患者中延缓HIV感染的方法，包括生成病毒载体和导入从载体生成的病毒到患者的循环系统中。
96.一个能够延缓免疫缺陷病毒感染的载体，它包括诱饵合成寡核甘酸序列和针对HIV共受体的合成寡核甘酸，其中诱饵序列包括HIV RRE和/或TAR诱饵序列，而且其中载体也包括了针对HIV-1和HIV-2序列的核酶序列。
97.一个能够延缓免疫缺陷病毒感染的载体，它包括诱饵合成寡核甘酸序列和针对HIV共受体的合成寡核甘酸，其中诱饵序列包括HIV RRE和/或TAR诱饵序列，而且其中诱饵序列是由U6启动子驱动的。
98.一个基因载体，包括编码哺乳动物的Numb蛋白的“长”(PRR插入子+)亚型的核苷酸序列以及额外的核苷酸序列，包括选自编码Sox2蛋白、Oct4蛋白、NANOG蛋白、HOXB4蛋白、FGF4蛋白、有白血病抑制因子活性的蛋白和有Notch活性的蛋白的那些序列。
99.根据权利要求98所述的载体，其中载体也整合了靶向短Numb亚型和Numblike的合成寡核苷酸。
100.根据权利要求98所述的载体，其中编码哺乳动物的Numb蛋白的“长”(PRR插入子+)亚型的核苷酸序列以及额外的核苷酸序列，包括选自编码Nanog、Oct3/4、Sox2、Hoxb4、FGF-4、白血病抑制因子受体(LIFR)、睫状神经营养因子(CNTF)、抑瘤素M(OSM)、抑瘤素M受体(OSMR)、心肌营养素-1、IL-6、IL6R、超IL-6、IL-11、gp130、其他有白血病抑制因子活性的蛋白，和/或有Notch活性的蛋白的那些序列，有条件地表达并且被一个符合条件的启动子(如四环素敏感的启动子)驱动。
101.一种从所选的细胞中生产多能、复能和/或自我更新的细胞的方法，包括：从干细胞/祖细胞和体细胞类型中选择细胞，例如，那些由骨髓、外周血、胎盘血、羊水、脐带血液、皮肤、脂肪组织、非人类胚胎、造血细胞、精原细胞、睾丸的原始生殖细胞、上皮细胞、循环白细胞、单核细胞-巨噬细胞、其他体细胞、基因修饰的脐带血细胞、基因修饰的羊水干细胞、基因修饰的骨髓细胞、基因修饰的外周血细胞、基因修饰的脂肪细胞、基因修饰的胎盘细胞、基因修饰的造血细胞、基因修饰的皮肤细胞、基因修饰的精原细胞、基因修饰的睾丸的原始生殖细胞、基因修饰的外周血造血干细胞、基因修饰的上皮细胞、基因修饰的白细胞、基因修饰的非人类胚胎细胞，其他基因修饰的干/祖细胞和体细胞衍生的细胞来提供所选的细胞；
用编码哺乳动物的Numb蛋白的“长”(PRR插入子+)亚型的核苷酸序列以及额外的核苷酸序列转染所选的细胞，核苷酸序列选自编码Sox2蛋白、Oct4蛋白、NANOG蛋白、HOXB4蛋白、FGF4蛋白、有白血病抑制因子活性的蛋白和有Notch活性的蛋白的那些核苷酸序列；
所选的细胞在生长培养基中生长，生长培养基包括选自FiGF、bFGF、白血病抑制因子(LIF)、Steel因子、IL-6、超IL-6、IL-7、抑瘤素M、心肌营养素-1，以及其他生长增强细胞因子的细胞因子，这些细胞因子对所选的细胞在某一速率下生长有效，其中所述的速率取决于在所述的生长培养基中所选的细胞的倍增时间；
以及在这些培养条件保持细胞直到到达所要的细胞数。
102.根据权利要求101所述的方法，其中生长培养基进一步包括了一种诱导剂，以诱导符合条件的转基因表达。
103.一种提供了一个能够在活体内进一步分化的所要的分化细胞群，其中所述的所要的细胞包括分化造血细胞、神经细胞、多巴胺能神经元、5-羟色胺能神经元、胆碱能神经元、去甲肾上腺素能神经元、GABA能神经元、肌细胞、心肌细胞、内胚层和胰岛细胞、生殖细胞或其他所要的细胞，所述的方法包括：
从干细胞/祖细胞和体细胞类型中选择细胞，例如，那些由骨髓、外周血、胎盘血、羊水、脐带血液、皮肤、脂肪组织、非人类胚胎、造血细胞、精原细胞、睾丸的原始生殖细胞、上皮细胞、循环白细胞、单核细胞-巨噬细胞、其他体细胞、基因修饰的脐带血细胞、基因修饰的羊水干细胞、基因修饰的骨髓细胞、基因修饰的外周血细胞、基因修饰的脂肪细胞、基因修饰的胎盘细胞、基因修饰的造血细胞、基因修饰的皮肤细胞、基因修饰的精原细胞、基因修饰的睾丸的原始生殖细胞、基因修饰的外周血造血干细胞、基因修饰的上皮细胞、基因修饰的白细胞、基因修饰的非人类胚胎细胞，其他基因修饰的干/祖细胞和体细胞衍生的细胞来提供所选的细胞；
用编码哺乳动物的Numb蛋白的“长”(PRR插入子+)亚型的核苷酸序列以及额外的核苷酸序列转染所选的细胞，核苷酸序列选自编码Sox2蛋白、Oct4蛋白、NANOG蛋白、HOXB4蛋白、FGF4蛋白、有白血病抑制因子活性的蛋白和有Notch活性的蛋白的那些核苷酸序列；
所选的细胞在生长培养基中生长，生长培养基对所选的细胞在某一速率下生长有效，其中所述的速率取决于在所述的生长培养基中所选的细胞的倍增时间；
在这些培养条件保持细胞直到到达所要的细胞数。
在一个分化培养基中培养所述的所选的细胞，这对所选的细胞在第二生长速率下生长有效，其中所述的第二生长速率取决于在所述的分化培养基中所选细胞的倍增时间，而且所述的所述的第二生长速率是介于所述的第一速率的大约10％和大约90％之间的一个生长速率；分化培养基包括至少一种能有效促进所述的细胞分化或修饰为所要的分化细胞的分化剂；并且
其中分化剂选自维甲酸、神经生长因子、二甲基亚砜和六亚甲基双丙烯酰胺或其他适合所要的细胞类型的分化剂。
104.根据权利要求103所述的方法，进一步包括一个或多个以下步骤：
1)用核苷酸序列(尤其是转录因子)转染细胞，促进一些细胞开始分化为所要的细胞；
2)用编码最短的(Prr-/PTB-)Numb亚型或Numblike的核苷酸序列转染细胞；以及
3)用靶向PRR+Numb亚型的合成寡核苷酸序列转染细胞。
105.根据权利要求103所述的方法，其中所要的细胞是心肌细胞并且在含有二甲基亚砜、NBS，维甲酸和/或心肌细胞调整的分化培养基中培养。
106.根据权利要求103所述的方法，其中所要的细胞是神经细胞并且在含有选自神经生长因子和维甲酸的一种分化剂的分化培养基中培养。
107.根据权利要求103所述的方法，其中所要的细胞是肌细胞并且在含有六亚甲基双丙烯酰胺或二甲基亚砜的分化培养基中培养。
108.一种提供能够在活体内进一步分化的所要的细胞群的方法，包括：
从干细胞/祖细胞和体细胞类型中选择细胞，例如，那些由骨髓、外周血、胎盘血、羊水、脐带血液、皮肤、脂肪组织、非人类胚胎、造血细胞、精原细胞、睾丸的原始生殖细胞、上皮细胞、循环白细胞、单核细胞-巨噬细胞、其他体细胞、基因修饰的脐带血细胞、基因修饰的羊水干细胞、基因修饰的骨髓细胞、基因修饰的外周血细胞、基因修饰的脂肪细胞、基因修饰的胎盘细胞、基因修饰的造血细胞、基因修饰的皮肤细胞、基因修饰的精原细胞、基因修饰的睾丸的原始生殖细胞、基因修饰的外周血造血干细胞、基因修饰的上皮细胞、基因修饰的白细胞、基因修饰的非人类胚胎细胞，其他基因修饰的干/祖细胞和体细胞衍生的细胞来提供所选的细胞；
在生长培养基中保持细胞直到到达所要的细胞数。
用核苷酸序列(尤其是转录因子)转染细胞，促进细胞开始分化为所要的细胞；
用编码最短的(Prr-/PTB-)Numb亚型或Numblike的核苷酸序列转染细胞；
在一个所述的分化培养基中培养所述的所选的细胞，分化培养基包括至少一种能有效促进所述的细胞分化或修饰为所要的分化细胞的分化剂；并且
其中分化剂选自维甲酸、神经生长因子、二甲基亚砜和六亚甲基双丙烯酰胺或其他适合所要的细胞类型的分化剂。
109.根据权利要求108所述的方法，其中没有用编码最短的(Prr-/PTB-)Numb亚型或Numblike的核苷酸序列转染细胞。
110.根据权利要求108所述的方法，其中所要的细胞是肌细胞而且用转录因子转染细胞，转录因子包括选自MyoD、肌细胞生成素、心肌蛋白、Myf 5、Myf 6、Mef2A、Gata 4、Gata 5和Gata 6的那些，取决于所要的肌细胞是骨骼肌细胞、平滑肌细胞或心肌细胞。
111.根据权利要求108所述的方法，其中多巴胺能神经元是所要的细胞，而且在分化培养基培养之前用转录因子转染细胞，转录因子包括选自Mash1、Ngn2、Nurr1、Lmx1b和/或Ptx-3的那些。
112.根据权利要求108所述的方法，其中5-羟色胺能神经元是所要的细胞，而且在分化培养基培养之前用转录因子转染细胞。
113.根据权利要求112所述的方法，其中转录因子包括一个选自Mash1、Phox2b、Nkx2.2、Gata2、Gata3和/或Pet1的一个转录因子。
114.根据权利要求108所述的方法，其中5-羟色胺能神经元是所要的细胞，而且在分化培养基培养之前用转录因子转染细胞，转录因子包括选自Mash1、Phox2a和REST4的那些。
115.根据权利要求108所述的方法，其中GA3A能神经元是所要的细胞，而且在含有取自LIF、NT3和NGF的分化剂的分化培养基培养之前用转录因子转染细胞，转录因子包括选自Mash1、Phox2a和REST4的那些。
116.根据权利要求108所述的方法，其中去甲肾上腺素能神经元是所要的细胞，而且用转录因子转染细胞，转录因子包括选自Mash1、dHand(HAND2)、Phox2a，Phox2b、Gata2和Gata3的那些。
117.根据权利要求108所述的方法，其中GABA能神经元是所要的细胞，而且用转录因子转染细胞，转录因子包括选自PITX2、D1x2、D1x5和靶向Hes1的RNA的那些。
118.根据权利要求108所述的方法，其中GABA能神经元是所要的细胞，而且用转录因子转染细胞，转录因子包括选自PITX2、D1x2、D1x5、Nurr1、REN、神经元素1、神经元素2、神经元素3、Mash 1、Phox2b、Phox2a、dHand、Gata3、Shh、FGF8、Lmx1b、Nkx2.2、Pet1、Lbx1、Rnx、和/或反义Hes1RNA的那些。
119.根据权利要求108所述的方法，其中胰岛细胞或胚层细胞是所要的细胞，而且用转录因子转染细胞，转录因子包括选自Foxa2、Sox17、HLXB9和Pdx1的那些；而且其中额外的分化剂选自丁酸钠、激活素A、视黄酸、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、Noggin、胰岛素样生长因子II和烟酰胺。
120.根据权利要求108所述的方法，其中所要的细胞是造血细胞，而且用编码Runx1/AML的核苷酸序列转染细胞，而且其中额外的分化剂选自血管内皮生长因子(VEGF)、血小板生成素和适合分化到所要的细胞类型的集落刺激因子。
121.一种治疗患有内脏器官、肌肉系统、心脏、中枢神经系统、血液或其他组织的疾病并且需要治疗的患者的方法，包括：
从干细胞/祖细胞和体细胞类型中选择细胞，例如，那些由骨髓、外周血、胎盘血、羊水、脐带血液、皮肤、脂肪组织、非人类胚胎、造血细胞、精原细胞、睾丸的原始生殖细胞、上皮细胞、循环白细胞、单核细胞-巨噬细胞、其他体细胞、基因修饰的脐带血细胞、基因修饰的羊水干细胞、基因修饰的骨髓细胞、基因修饰的外周血细胞、基因修饰的脂肪细胞、基因修饰的胎盘细胞、基因修饰的造血细胞、基因修饰的皮肤细胞、基因修饰的精原细胞、基因修饰的睾丸的原始生殖细胞、基因修饰的外周血造血干细胞、基因修饰的上皮细胞、基因修饰的白细胞、基因修饰的非人类胚胎细胞，其他基因修饰的干/祖细胞和体细胞衍生的细胞来提供所选的细胞；
用编码哺乳动物的Numb蛋白的“长”(PRR插入子+)亚型的核苷酸序列以及额外的核苷酸序列转染所选的细胞，核苷酸序列包括选自Nanog、Oct3/4、Sox2、Hoxb4、FGF-4、白血病抑制因子受体(LIFR)、睫状神经营养因子(CNTF)、抑瘤素、、心肌营养素-1、IL-6、IL6R、超IL-6、IL-11、gp130、其他有白血病抑制因子活性的蛋白，和/或有Notch活性的蛋白的那些序列；
所选的细胞在生长培养基中生长，生长培养基对所选的细胞在某一速率下生长有效，其中所述的速率取决于在所述的生长培养基中所选的细胞的倍增时间；
在一个分化培养基中培养所述的所选的细胞，这对所选的细胞在第二生长速率下生长有效，其中所述的第二生长速率取决于在所述的分化培养基中所选细胞的倍增时间，而且所述的所述的第二生长速率是介于所述的第一速率的大约10％和大约90％之间的一个生长速率；分化培养基包括至少一种能有效促进所述的细胞分化或修饰为分化细胞的分化剂，分化剂选自二甲基亚砜和六亚甲基双丙烯酰胺；并且
注射所述的分化细胞到患者的循环系统、器官、神经系统或其他组织，在那里所述的疾病得到减轻或治疗。
122.根据权利要求121所述的方法，进一步包括了选自如下的一个步骤：
用核苷酸序列(尤其是转录因子)转染细胞，促进细胞开始分化为所要的细胞；并且
用编码最短的(Prr-/PTB-)Numb亚型或Numblike或靶向PRR+numb的序列的核苷酸序列转染细胞。
123.根据权利要求121所述的方法，在获得所要的细胞数之后从生长中分离所选的细胞，并将其注射到患者的循环系统、器官、神经系统或其他组织，在那里所述的疾病得到减轻或治疗。
124.一种获得自我更新、多能和/或复能细胞群的方法，其中核酸或蛋白被过表达或被导入到所选的细胞中，而且其中那些核酸或蛋白包括选自那些编码“长”(Prr+)Numb亚型、Nanog、Oct3/4、Sox2、有Notch活性的转基因、Hoxb4、FGF-4、白血病抑制因子(LIF)、白血病抑制因子受体(LIFR)、睫状神经营养因子(CNTF)、抑瘤素、抑瘤素受体、心肌营养素-1、IL-6、IL6R、超IL-6、IL-11、gp130、其他有白血病抑制因子活性的转基因。
125.根据权利要求124所述的方法，所利用的转染方法是
电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或避免细胞基因组逆转录/慢病毒整合或其他的随机改变的其他手段。
126.一种获得自我更新、多能和/或复能细胞群的方法，其中单个基因或其一部分所对应的核酸或蛋白被过表达或被导入到所选的细胞中，而且其中那些核酸或蛋白对应包括选自那些编码“长”(Prr+)Numb亚型、Nanog、Oct3/4、Sox2、有Notch活性的转基因、Hoxb4、FGF-4、白血病抑制因子(LIF)、白血病抑制因子受体(LIFR)、睫状神经营养因子(CNTF)、抑瘤素、抑瘤素受体、心肌营养素-1、IL-6、IL6R、超IL-6、IL-1、gp130、其他有白血病抑制因子活性的转基因的其中之一。
127.根据权利要求121所述的方法，其中所利用的转染方法是电穿孔、脂质体、纳米胶囊、纳米穹隆体，和/或避免细胞基因组逆转录/慢病毒整合或其他的随机改变的其他手段。
128.根据权利要求121所述的方法，其中基因生产的自我更新、多能、复能和/或分化细胞在一个具有组织工程用途的三维或二维支架中培养。
129.根据权利要求121所述的方法，其中基因生产的自我更新、多能、复能和/或分化细胞在一个具有组织工程用途的去细胞化的器官或去细胞化的组织中培养。
130.根据权利要求121所述的方法，其中基因生产的自我更新、多能、复能和/或分化细胞连同具有组织工程用途的喷墨打印技术使用。
131.根据权利要求121所述的方法，其中基因生产的自我更新、多能、复能和/或分化细胞在悬滴中培养。
132.根据权利要求121所述的方法，其中生殖细胞是从基因生产的自我更新、多能和/或复能细胞产生的。
133.根据权利要求121所述的方法，筛选核酸其诱导多能性、复能性、自我更新核酸和/或启动分化的能力，其中序列使用电穿孔、纳米胶囊或纳米穹隆体导入到所选的细胞中。
134.一种根据权利要求108所述的方法，筛选核酸其诱导多能性、复能性、自我更新核酸和/或启动分化的能力，其中序列使用电穿孔、纳米胶囊或纳米穹隆体导入到所选的细胞中。
131.根据权利要求121所述的方法，其中分化细胞是所要的而且是由基因生产的自我更新、多能和/复能细胞产生的，通过过表达或导入正常存在于所要的分化细胞中的一个或多个转录因子所对应的核酸或蛋白。
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