CN110831614A - 用于递送Na/K ATP酶/Src受体复合物拮抗剂的表达载体和相关方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了包含编码Na/K ATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂的核酸序列的表达载体。所述编码多肽拮抗剂的核酸被可操作连接到用于在特定细胞或组织中表达所述多肽拮抗剂的启动子。本发明还提供了病毒粒子、靶细胞和药物组合物，并且它们包含所述表达载体。本发明还提供了治疗Src相关疾病的方法，所述方法包括向需要的对象给药所述编码Na/K ATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂的表达载体。

Description

用于递送Na/K ATP酶/Src受体复合物拮抗剂的表达载体和相 关方法

相关申请

本申请要求2017年5月26日提交的美国临时申请系列号62/511,541的优先权，所述美国临时申请的全部公开内容通过引用并入本文。

技术领域

本公开的主题内容涉及用于递送Na/K ATP酶/Src受体复合物拮抗剂的表达载体和方法。具体来说，本发明的某些实施方式涉及用于将Na/K ATP酶/Src受体复合物拮抗剂递送到特定细胞和组织的表达载体和相关方法，以及使用这些载体治疗Src相关疾病的方法。

背景技术

Na/K-ATP酶在大多数真核细胞中遍在表达，并通过将Na⁺泵出细胞并将K⁺泵入细胞来帮助维持跨膜离子梯度。Na/K-ATP酶通过至少两个结合基序与Src直接相互作用：一个在α1亚基的CD2与Src SH2之间，另一个涉及第三胞质结构域(CD3)和Src激酶结构域。这种Na/K-ATP酶与Src的复合物的形成充当乌本苷的受体，以唤起蛋白激酶级联。具体来说，乌本苷与Na/K-ATP酶的结合破坏后者的相互作用，然后引起不同途径包括ERK级联、PLC/PKC途径和ROS生产的组装和激活。此外，这种相互作用将Src保持在无活性状态。因此，Na/K-ATP酶起到内源Src负调控物的作用。还参见国际专利申请号WO 2008/054792和WO 2010/071767，两者都通过引用并入本文。

这些信号传导途径的激活最终导致心和肾功能的改变，刺激细胞增殖和组织纤维化，保护组织免于缺血/再灌注损伤，抑制癌细胞生长等。Src和ROS也与VEGF表达的诱导有关。尽管开发的许多已知Src和Src家族激酶的抑制剂是与ATP竞争与这些激酶的结合的ATP类似物，但这类Src抑制剂缺少途径特异性。因此，用于靶向细胞和组织以用于与Na/K-ATP酶-Src相互作用相关的广泛种类病症的改进治疗的组合物和方法，将是非常需要和有益的。

发明内容

正如对本领域普通技术人员来说在研究了本文件中提供的信息后将变得显而易见的，本公开的主题内容满足了一些或所有上述需求。本概述描述了本公开主题内容的几种实施方式，并且在许多情况下列出了这些实施方式的变化和排列。

本概述仅仅是众多且变化的实施方式的示例。提到的给定实施方式的一个或多个代表性特征同样是示例性的。这样的实施方式通常可以在具有或没有所述提到的特征的情况下存在；同样地，那些特征可以应用于本公开主题内容的其他实施方式，而不管是否在本概述中列出。为了避免过多重复，本概述没有列出或建议这些特征的所有可能组合。

本公开的主题内容包括用于递送Na/K ATP酶/Src受体复合物拮抗剂的表达载体和方法。具体来说，本发明的某些实施方式涉及用于将Na/K ATP酶/Src受体复合物拮抗剂递送到特定细胞和组织的表达载体和相关方法，以及使用这些载体治疗Src相关疾病的方法。在某些实施方式中，提供了一种表达载体，其包含编码Na/K ATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂的核酸序列。在某些实施方式中，所述编码多肽拮抗剂的核酸被可操作连接到用于在特定细胞或组织中表达所述多肽拮抗剂的启动子。在某些实施方式中，所述多肽拮抗剂包含SEQ ID NO：1的序列或其片段和/或变体。在某些实施方式中，所述编码多肽拮抗剂的核酸包含SEQ ID NO：5的序列或其片段和/或变体。在某些实施方式中，所述启动子选自脂联素启动子、白蛋白启动子、黑色素启动子、血管假性血友病因子启动子(vonWillebrandfactor promoter)、α肌球蛋白重链启动子、SGLT2启动子、MyoD启动子、神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)启动子和突触蛋白1(SYN1)启动子。在某些实施方式中，所述启动子是肝特异性、内皮细胞特异性或脂肪细胞特异性的。

在本公开主题内容的某些实施方式中，所述表达载体采取病毒载体的形式，例如在某些实施方式中采取慢病毒载体的形式。就此而言，在某些实施方式中，还提供了包含本文中描述的表达载体的病毒粒子以及包含本公开主题内容的表达载体的靶细胞。在某些实施方式中，所述靶细胞是哺乳动物细胞，例如小鼠细胞或人类细胞。在某些实施方式中，所述靶细胞是脂肪细胞、肝细胞或内皮细胞。

在某些实施方式中，还提供了药物组合物。在某些实施方式中，提供了一种药物组合物，其包含本公开主题内容的表达载体和可药用媒剂、载剂或赋形剂。

在某些实施方式中，还提供了治疗Src相关疾病的方法。在某些实施方式中，提供了一种治疗Src相关疾病的方法，所述方法包括向需要的对象给药本公开主题内容的表达载体。在某些实施方式中，所述Src相关疾病选自血管疾病、心血管疾病、心脏病、前列腺癌、乳腺癌、成神经细胞瘤、心脏肥大、组织纤维化、充血性心力衰竭、缺血/再灌注损伤、骨质疏松症、视网膜病和肥胖症。在某些实施方式中，所述Src相关疾病是心血管疾病，并且所述心血管疾病是尿毒症心肌病。在某些实施方式中，所述Src相关疾病是肥胖症。

对于本领域普通技术人员来说，在研究了本文件中的描述、附图和非限制性实例后，本公开主题内容的其他特征和优点将变得显而易见。

附图说明

图1是示出了根据本公开的主题内容制造，并编码在脂联素启动子控制之下的Na/K ATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂(NaKtide；SEQ ID NO：1)的慢病毒表达载体的示意图。

图2是示出了根据本公开的主题内容制造，并编码在脂联素启动子控制之下的增强绿色荧光蛋白(eGFP)的另一种慢病毒表达载体的示意图。

图3包括了用图1和2中示出的表达载体以逐渐增加的感染复数(MOI)转导的3T3-L1细胞的荧光显微术图像。

图4包括的图像和图表显示了用图1和2中示出的表达载体以逐渐增加的感染复数(MOI)转导的3T3-L1细胞中的油红O染色。

图5A-5D包括用图1和2中示出的表达载体给药的C57Bl6小鼠中脂肪组织(图5A)、肝组织(图5B)、心脏组织(图5C)和肾组织(图5D)的免疫荧光染色。

图6是示出了根据本公开的主题内容制造，并编码在白蛋白启动子控制之下的Na/K ATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂(NaKtide；SEQ ID NO：1)的慢病毒表达载体的示意图。

图7是示出了根据本公开的主题内容制造，并编码在脂联素启动子控制之下的增强绿色荧光蛋白(eGFP)的另一种慢病毒表达载体的示意图。

图8A-8B包括的图像显示了用图6和7中示出的表达载体给药的C57Bl6小鼠的肝组织(图8A)和脂肪组织(图8B)的免疫组织化学染色。

图9包括的图像和图表示出了慢病毒转染的NaKtide(SEQ ID NO：1和6)对喂食高脂肪饮食的小鼠的体重的影响，其中通过慢病毒给药的NaKtide引起喂食高脂肪饮食的C57Bl6小鼠与它们的对照鼠粮对应者相比体重增加量的显著减少，其中在喂食西式饮食12周的小鼠中在第0周和第2周进行注射，并且其中在各组之间没有食物摄取量的显著变化(结果是平均值±SE，每组n＝12至14只；*相比于对照P<0.05，#相比于对照+GFP+NaKtide P<0.05，+相比于西式饮食P<0.05，&相比于西式饮食Diet+GFP P<0.05)。

图10A-10B包括的图像和图表示出了慢病毒转染的NaKtide对喂食西式饮食(WD)12周的C57Bl6小鼠中内脏和皮下脂肪含量的影响，其中所述小鼠在第0周和第2周用NaKtide注射，并且其中向喂食高脂肪饮食的小鼠给药NaKtide与高脂肪饮食喂食的动物相比显著降低内脏(图10B)和皮下(图10A)脂肪含量(结果是平均值±SE，每组n＝12至14只；*相比于对照P<0.05，#相比于对照+GFP+NaKtide P<0.05，+相比于西式饮食P<0.05，&相比于西式饮食Diet+GFP P<0.05)。

图11A-11D包括的图表示出了慢病毒转染的NaKtide对喂食西式饮食的小鼠中代谢和炎性细胞因子的影响，其中喂食西式饮食(WD)12周的C57Bl6小鼠在第0和2周用NaKtide注射，其中向喂食高脂肪饮食的小鼠给药NaKtide显著减少了口服葡萄糖耐量试验的变化(GTT；图11A)，并且其中与未治疗的喂食西式饮食的小鼠相比，在给药NaKtide的小鼠中炎性标志物TNFα(图11B)、IL-6(图11D)和MCP-1(图11C)也显示出显著降低(结果是平均值±SE，每组n＝12至14只；*相比于对照P<0.05，#相比于对照+GFP+NaKtide P<0.05，+相比于西式饮食P<0.05，&相比于西式饮食Diet+GFP P<0.05)。

图12A-12E包括的图表示出了在喂食西式饮食的小鼠中脂肪细胞特异性NaKtide表达对瘦蛋白(图12A)、收缩压(图12B)、耗氧量(图12C)、活动(图12D)和能量消耗(图12E)的影响，其中通过慢病毒给药的NaKtide引起喂食西式饮食的小鼠的血浆瘦蛋白浓度的显著提高，其在用慢病毒-脂联素-NaKtide治疗后降低，其中喂食西式饮食的小鼠显示出收缩压的显著增加，其被慢病毒-脂联素-NaKtide缓解，并且其中与喂食西式饮食的动物相比，使用慢病毒-脂联素-NaKtide治疗的小鼠中耗氧量、活动和能量消耗均显著增加(结果是平均值±SE，每组n＝12至14只；*相比于对照P<0.05，#相比于对照+GFP+NaKtide P<0.05，+相比于西式饮食P<0.05，&相比于西式饮食Diet+GFP P<0.05)。

图13A-13D包括的图像和图表示出了脂肪细胞特异性NaKtide表达对喂食西式饮食的小鼠中脂肪生成相关蛋白(图13A)、Na/K-ATP酶信号传导标志物(图13B)和棕色脂肪标志物PGC1α(图13C)的影响，其中通过慢病毒给药的NaKtide引起与脂肪生成相关的标志物和磷酸化Src的显著增加，其中Na/K-ATP酶的α1亚基的表达在喂食西式饮食的小鼠中降低，并且在用慢病毒-脂联素-NaKtide治疗的小鼠中提高，其中棕色脂肪标志物PGC1a在喂食西式饮食的小鼠中显著降低，并且在用慢病毒-脂联素-NaKtide治疗的小鼠的内脏脂肪中增加，并且其中蛋白质羰基化(图13D)在喂食西式饮食的小鼠中增加，并在用慢病毒-脂联素-NaKtide治疗的小鼠中减弱(结果是平均值±SE，每组n＝12至14只；*相比于对照P<0.05，#相比于对照+GFP+NaKtide P<0.05，+相比于西式饮食P<0.05，&相比于西式饮食Diet+GFP P<0.05)。

图14包括的图像和图表显示了脂肪细胞特异性NaKtide表达对喂食西式饮食的小鼠中内脏脂肪中脂肪细胞的尺寸和数目的影响，其中喂食西式饮食的小鼠与对照动物相比在内脏脂肪中具有明显更少的脂肪细胞，并且存在细胞的面积显著增加，并且其中慢病毒-脂联素-NaKtide降低脂肪细胞的面积并提高存在的细胞的量(结果是平均值±SE，每组n＝12至14只；*相比于对照P<0.05，#相比于对照+GFP+NaKtide P<0.05，+相比于西式饮食P<0.05，&相比于西式饮食Diet+GFP P<0.05)。

图15A-15G包括的图像和图表示出了NaKtide在C57BL6 PNx模型中的有效性(图15A)，其利用脂肪和肝组织中NaKtide的免疫荧光染色，使用TBARS评估的氧化胁迫(图15B)，葡萄糖耐量试验(图15C)，细胞因子IL-6和MCP-1的各自水平(图15D-15E)，以及PGC1α和Sirt3表达的各自RT-PCR分析(图15F-15G)(**相比于假手术组p<0.01；##相比于PNx p<0.01；(n＝6))。

图16A-16E包括的图像和图表显示了NaKtide对(图16A)HW/BW比率、(图16B)使用天狼猩红染色测量的心肌纤维化、(图16C)血细胞比容水平、(图16D)血浆肌酐水平和(图16E)使用经胸超声心动图测量值评估的心脏肥大的影响，所述测量值包括：LVM，左心室质量；EF，射血分数；MPI，心肌性能指数；RWT，相对室壁厚度(值是平均值±SEM。**相比于假手术组p<0.01；##相比于PNx p<0.01；++相比于PNx+WD p<0.01；(n＝6))。

图17A-17D包括的图表示出了慢病毒-脂联素-NaKtide在C57BL6PNx模型中的有效性，并包括炎性和凋亡标志物的RT-PCR分析，(图17A)TNF-α，(图17B)IL-6，(图17C)Casp7和(图17D)Bax(值是平均值±SEM。**相比于假手术组p<0.01；##相比于假手术组+WD p<0.01；++相比于PNx+WD p<0.01；$$相比于PNx p<0.01(n＝6))。

图18A-18D包括的图表示出了慢病毒-脂联素-NaKtide在C57BL6PNx模型中的有效性，并包括线粒体生物发生的标志物的RT-PCR分析，(图18A)瘦蛋白，(图18B)F4/80，(图18C)Sirt3和(图18D)PGC1α，其中值是平均值±SEM。**相比于假手术组p<0.01；##相比于假手术组+WD p<0.01；++相比于PNx+WD p<0.01；$$相比于PNx p<0.01(n＝6)。

图19是示出了根据本公开的主题内容制造，并编码在α肌球蛋白重链启动子控制之下的Na/K ATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂(NaKtide；SEQ ID NO：1)的慢病毒表达载体的示意图。

图20是示出了根据本公开的主题内容制造，并编码在SGLT2启动子控制之下的Na/K ATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂(NaKtide；SEQ ID NO：1)的慢病毒表达载体的示意图。

图21是示出了根据本公开的主题内容制造，并编码在MyoD启动子控制之下的Na/KATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂(NaKtide；SEQ ID NO：1)的慢病毒表达载体的示意图。

图22是示出了根据本公开的主题内容制造，并编码在神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)启动子控制之下的Na/K ATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂(pNaKtide；SEQ IDNO：5)的慢病毒表达载体的示意图。

图23是示出了根据本公开的主题内容制造，并编码在突触蛋白I(SYN1)启动子控制之下的Na/K ATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂(pNaKtide；SEQ ID NO：5)的慢病毒表达载体的示意图。

序列表说明

下面是附于本发明并通过引用以整体并入本文的序列表的简要描述。

SEQ ID NO：1是编码根据本公开主题内容的多肽的实施方式(NaKtide)的氨基酸序列；

SEQ ID NO：2是编码TAT细胞穿透肽的氨基酸序列；

SEQ ID NO：3是编码穿膜肽(AP)细胞穿透肽的氨基酸序列；并且

SEQ ID NO：4是编码Na/K-ATP酶的α1亚基的N-端聚赖氨酸结构域(A1N)的氨基酸序列。

SEQ ID NO：5是另一个根据本公开主题内容的多肽的实施方式(pNaKtide)的氨基酸序列。

SEQ ID NO：6是慢病毒基因表达载体的核酸序列，其编码绿色荧光蛋白(GFP)和可操作连接到脂联素启动子(核苷酸位置1959-7367)的Na/K ATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂(核苷酸位置7398-7460；NaKtide；SEQ ID NO：1)。

SEQ ID NO：7是慢病毒基因表达载体的核酸序列，其编码绿色荧光蛋白(GFP)和可操作连接到白蛋白启动子(核苷酸位置1959-4294)的Na/K ATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂(核苷酸位置4325-4387；NaKtide；SEQ ID NO：1)。

SEQ ID NO：8是慢病毒基因表达载体的核酸序列，其编码绿色荧光蛋白(GFP)和可操作连接到α肌球蛋白重链启动子(7453-7515)的Na/K ATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂(核苷酸位置7453-7515；NaKtide；SEQ ID NO：1)。

SEQ ID NO：9是慢病毒基因表达载体的核酸序列，其编码绿色荧光蛋白(GFP)和可操作连接到SGLT2启动子(核苷酸位置1959-4595)的Na/K ATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂(核苷酸位置4626-4688；NaKtide；SEQ ID NO：1)。

SEQ ID NO：10是慢病毒基因表达载体的核酸序列，其编码绿色荧光蛋白(GFP)和可操作连接到MyoD启动子(核苷酸位置1959-8029)的Na/K ATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂(核苷酸位置8060-8122；NaKtide；SEQ ID NO：1)。

SEQ ID NO：11是慢病毒基因表达载体的核酸序列，其编码绿色荧光蛋白(GFP)和可操作连接到神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)启动子(核苷酸位置1959-4136)的Na/K ATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂(核苷酸位置4167-4268，pNaKtide；SEQ ID NO：5)。

SEQ ID NO：12是慢病毒基因表达载体的核酸序列，其编码绿色荧光蛋白(GFP)和可操作连接到突触蛋白1(SYN1)启动子(核苷酸位置1959-2427)的Na/K ATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂(核苷酸位置2458-2559，pNaKtide；SEQ ID NO：5)。

示例性实施方式的描述

在本文件中阐述了本公开主题内容的一个或多个实施方式的详细情况。对于本领域普通技术人员来说，在研究了本文件中提供的信息后，本文件中描述的实施方式的修改和其他实施方式将显而易见。本文件中提供的信息、特别是所描述的示例性实施方式的具体详情，主要是为了理解清晰而提供，并且不应该从其理解不必要的限制。

此外，尽管本文中使用的术语据信将被本领域普通技术人员很好地理解，但阐述了定义以便于本公开主题内容的解释。除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本公开主题内容所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。尽管与本文中描述的相似或等同的许多方法、装置和材料可用于本公开主题内容的实践或试验，但现在描述代表性的方法、装置和材料。

此外，遵循长久以来的专利法惯例，当在本申请包括权利要求书中使用时，没有具体数量的指称是指“一个或多个”。因此，例如，对“多肽”的指称包括多个这样的多肽，等等。除非另有指明，否则在本说明书和权利要求书中使用的表示成分的量、性质例如反应条件等的所有数字，在所有情况下都应被理解为被术语“约”修饰。因此，除非有相反的指示，否则在本说明书和权利要求书中提出的数值参数都是近似值，其可以根据试图通过本公开的主题内容获得的所需性质而变。

当在本文中使用时，术语“约”当指称质量、重量、时间、体积、浓度或百分率的值或量时，旨在涵盖在某些实施方式中偏离指定量±20％、在某些实施方式中±10％、在某些实施方式中±5％、在某些实施方式中±1％、在某些实施方式中±0.5％、并且在某些实施方式中±0.1％的变化，因为这样的变化适合于执行所公开的方法。还应该理解，本文中公开了许多值，并且每个值除了所述值本身之外，在本文中也被公开为“约”该特定值。例如，如果值“10”被公开，则“约10”也被公开。还应该理解，两个特定单元之间的每个单元也被公开。例如，如果10和15被公开，则11、12、13和14也被公开。

本公开的主题内容包括用于将Na/K ATP酶/Src受体复合物拮抗剂靶向递送到特定细胞和组织的表达载体和相关方法，以及使用这些载体治疗Src相关疾病的方法。

在本公开主题内容的某些实施方式中，提供了一种表达载体，其包含编码Na/KATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂的核酸序列。术语“载体”在本文中用于指称能够将核酸序列转移到另一个细胞中的任何运载工具。例如，根据本公开的主题内容可以使用的载体包括但不限于质粒、粘粒、噬菌体或病毒，它们可以通过引入本公开主题内容的核酸序列而被转化。在某些实施方式中，本公开主题内容的载体是病毒载体，例如在某些实施方式中是慢病毒载体。

在某些实施方式中，包含在所述载体中的核酸序列被可操作连接到表达盒。术语“与……相关联”、“可操作连接”和“操作性连接”是指物理上或功能上相关的两个核酸序列。例如，如果启动子或调控DNA序列和编码RNA或多肽的DNA序列被放置成使得所述调控DNA序列将影响所述编码或结构DNA序列的表达水平，那么所述调控DNA序列被称为与所述编码或结构DNA序列“相关联”或“可操作连接”。

因此，术语“表达盒”或“表达载体”是指能够指导特定核苷酸序列在适合的宿主细胞中的表达的核酸分子，其包含操作性连接到感兴趣的核苷酸序列的启动子，所述核苷酸序列被操作性连接到终止信号。它通常还包含所述核苷酸序列的正确翻译所需的序列。所述编码区通常编码感兴趣的多肽，但是也可以在正义或反义方向上编码感兴趣的功能性RNA，例如反义RNA或非翻译RNA。所述包含感兴趣的核苷酸序列的表达盒可以是嵌合的，意味着它的组分中的至少一者对于它的其他组分中的至少一者来说是异源的。所述表达盒也可以是天然存在的、但以可用于异源表达的重组形式获得的表达盒。

在某些实施方式中，提供了一种表达盒，其包含用于指导本公开主题内容的核酸序列在特定细胞或组织中的表达的启动子。例如，在某些实施方式中，脂联素启动子被包含在表达盒中，用于指导感兴趣的特定核酸在脂肪细胞或组织中的表达(参见例如SEQ IDNO：6，其包含慢病毒基因表达载体的核酸序列，所述载体包括可操作连接到脂联素启动子的本公开主题内容的多肽拮抗剂)。在某些实施方式中，所述启动子可以是白蛋白启动子，用于指导核酸序列在肝细胞中的表达(参见例如SEQ ID NO：7，其包含慢病毒基因表达载体的核酸序列，所述载体包括连接到白蛋白启动子的本公开主题内容的多肽拮抗剂)。在某些实施方式中，所述启动子可以是α肌球蛋白重链(αMHC)启动子，用于指导核酸序列在心肌细胞中的表达(参见例如SEQ ID NO：8其包含慢病毒基因表达载体的核酸序列，所述载体包括连接到αMHC启动子的本公开主题内容的多肽拮抗剂)。在某些实施方式中，所述启动子可以是SGLT2启动子，用于指导核酸序列在肾脏近端小管中的表达(参见例如SEQ ID NO：9，其包含慢病毒基因表达载体的核酸序列，所述载体包括连接到SGLT2启动子的本公开主题内容的多肽拮抗剂)。在某些实施方式中，所述启动子可以是MyoD启动子，用于指导核酸序列在骨骼肌中的表达(参见例如SEQ ID NO：10，其包含慢病毒基因表达载体的核酸序列，所述载体包括连接到MyoD启动子的本公开主题内容的多肽拮抗剂)。在某些实施方式中，所述启动子可以是神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)启动子，用于指导核酸序列在脑中、包括星形细胞中的表达(参见例如SEQ ID NO：11，其包含慢病毒基因表达载体的核酸序列，所述载体包括连接到GFAP启动子的本公开主题内容的多肽拮抗剂)。在某些实施方式中，所述启动子可以是突触蛋白1(SYN1)启动子，用于指导核酸序列在脑组织包括成熟神经元中的表达(参见例如SEQ ID NO：12，其包含慢病毒基因表达载体的核酸序列，所述载体包括连接到SYN1启动子的本公开主题内容的多肽拮抗剂)。在某些其他实施方式中，所述启动子可以是黑色素启动子，用于指导核酸序列在黑素瘤组织中的表达，或者是血管假性血友病因子启动子，用于指导核酸序列在内皮细胞中的表达。当然，本领域技术人员已知的大量其他启动子也可以被选择并用于指导核酸序列在特定细胞或组织中的表达，而不背离本文描述的主题内容的精神和范围。

对于包含在本文描述的表达载体中的核酸序列来说，在某些实施方式中，所述表达载体包含编码SEQ ID NO：1(在本文中被称为“NaKtide”)、SEQ ID NO：5(在本文中被称为“pNaKtide”)的序列的多肽或其片段和/或变体的核酸序列。在某些实施方式中，所述多肽由SEQ ID NO：1(NaKtide)的序列或其片段和/或变体构成。

术语“多肽”、“蛋白质”和“肽”在本文中可互换使用，是指蛋白质氨基酸的聚合物，而不论其尺寸或功能如何。术语“蛋白质”、“多肽”和“肽”在本文中可互换使用，也指称基因产物、同源物、直系同源物、旁系同源物、片段、任何蛋白酶衍生的肽(片段)和其他等同物、变体以及氨基酸的聚合物的类似物。当参照这种参比多肽使用术语“多肽片段”或“片段”时，是指其中与所述参比多肽本身相比缺失氨基酸残基，但剩余氨基酸序列通常与所述参比多肽中的相应位置一致的多肽。这种缺失可能发生在所述参比多肽的氨基端、所述参比多肽的羧基端或两者处。多肽片段也可以包括“功能性片段”，在这种情况下所述片段保留所述参比多肽的一些或所有的活性。

当在本文中使用时，术语“变体”是指与所述参比多肽相差一个或多个氨基酸的氨基酸序列。在某些实施方式中，变体多肽可以与参比多肽相差一个或多个氨基酸替换。例如，NaKtide多肽变体可以与SEQ ID NO：1的NaKtide多肽相差一个或多个氨基酸替换，即突变。就此而言，包含两个或更多个突变的组合的多肽变体可以被相应地称为双突变体、三突变体等等。应该认识到，某些突变可以引起多肽功能的显著变化，而其他突变引起所述多肽功能的很少至没有显著的变化。

在某些实施方式中，本发明的多肽包括与SEQ ID NO：1的NaKtide多肽享有至少75％同源性的多肽。在某些实施方式中，所述多肽与SEQ ID NO：1的NaKtide多肽享有至少85％的同源性。在某些实施方式中，所述多肽与SEQ ID NO：1的NaKtide多肽享有至少90％的同源性。在某些实施方式中，所述多肽与SEQ ID NO：1的NaKtide多肽享有至少95％的同源性。

“百分同一性”或“百分同源性”当在本文中用于相对于参比序列描述氨基酸序列或核酸序列时，可以使用由Karlin和Altschul描述的公式(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:2264-2268,1990，在Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5873-5877,1993中改良)来确定。这个公式被合并到Altschul等人(J.Mol.Biol.215:403-410,1990)的基本局部比对搜索工具(BLAST)程序中。

在本公开的多肽的某些实施方式中，所述多肽还包含一种或多种前导序列，并且在某些实施方式中，前导序列包括但不限于细胞穿透肽(CPP)。术语“细胞穿透肽”(CPP)在本文中用于总体指称在细胞中发现的促进分子货物跨细胞质膜的运输的短肽。在某些情况下，所述分子货物包括另一种多肽，例如本文中描述的多肽。当然，所述细胞穿透肽可以通过任意数目的手段包括共价键和/或非共价键，偶联到所述分子货物(例如多肽)。然而，在许多情况下，这些细胞穿透肽通常包括相对高浓度的带正电荷的氨基酸例如赖氨酸和精氨酸，并且具有含有带电荷(极性)和不带电荷的氨基酸的交替模式的序列。

在本公开主题内容的某些实施方式中，示例性的前导序列或细胞穿透肽可以包括反式激活性转录激活物(TAT)细胞穿透肽，其由SEQ ID NO：2的序列(GRKKRRQRRRPPQ)表示。另一个示例性的前导序列包括穿膜肽(AP)，其由SEQ ID NO：3的序列(RQIKIWFQNRRMKWKK)表示。另一个示例性的前导序列包括编码Na/K-ATP酶的α1亚基的N-端聚赖氨酸结构域(A1N)的氨基酸序列，其由SEQ ID NO：4的序列(KKGKKGKK)表示。普通技术人员将会认识到，尽管如此，其他前导序列、包括其他细胞穿透肽，也可以与本公开的多肽联合使用。在某些实施方式中，包括附连到SEQ ID NO：1的NaKtide序列的前导序列例如细胞穿透肽的多肽，在本文中被称为pNaKtide(例如SEQ ID NO：5；GRKKRRQRRRPPQSATWLALSRIAGLCNRAVFQ，其包括融合到SEQ ID NO：1的NaKtide序列的SEQ ID NO：2的TAT细胞穿透肽)。

在本公开主题内容的某些实施方式中，还提供了用本文中公开的载体转化的靶细胞。在某些实施方式中，所述靶细胞是哺乳动物细胞，例如在某些实施方式中是小鼠细胞或人类细胞。在某些实施方式中，所述靶细胞来自于特定组织，例如在某些实施方式中是脂肪细胞、肝细胞、黑素瘤细胞或内皮细胞等。

术语“转化的”、“转基因的”和“重组的”在本文中用于指称其中已导入异源核酸分子的宿主生物体例如哺乳动物的细胞。所述核酸分子可以被稳定地整合到所述细胞的基因组中，或者所述核酸分子也可以作为染色体外分子存在。这种染色体外分子可以自我复制。转化的细胞、组织或对象被理解为不仅涵盖转化过程的最终产物，而且涵盖其转基因后代。

术语“异源的”、“重组的”和“外源的”当在本文中用于指称核酸序列(例如DNA序列)或基因时，是指源自于特定宿主细胞之外的来源，或者如果来自于同一来源，则从其原始形式经过修饰的序列。因此，宿主细胞中的异源基因包括对特定宿主细胞来说内源的，但已通过例如使用定点突变或其他重组技术进行修饰的基因。所述术语还包括天然存在的DNA序列的非天然存在的多个拷贝。因此，所述术语是指对所述细胞来说外来或异源的DNA区段，或者对所述细胞来说同源但在所述宿主细胞内处于所述元件通常不被发现的位置或形式的DNA区段。同样地，当在多肽或氨基酸序列的情形中使用时，外源多肽或氨基酸序列是源自于特定宿主细胞之外的来源，或者如果来自于同一来源，则从其原始形式经过修饰的多肽或氨基酸序列。因此，可以表达外源DNA区段以产生外源多肽。这些本公开主题内容的核酸(例如并入到适合的载体中的核酸)向植物细胞中的导入，可以通过本领域普通技术人员已知的各种不同方法来进行。

本公开的主题内容还包括并利用包含本文中描述的载体以及可药用媒剂、载剂或赋形剂的药物组合物。事实上，当提到本文中的某些实施方式时，术语“载体”和/或“组合物”可能用于或可能不用于指称包括所述载体的药物组合物。在某些实施方式中，所述药物组合物是在人类中可药用的。此外，正如在下文进一步描述的，在某些实施方式中，所述药物组合物可以被配制成用于递送到对象的治疗性组合物。

本文中所描述的药物组合物优选地包含包括制药载剂的组合物，所述制药载剂例如水性和非水性无菌注射溶液，其可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、杀细菌抗生素和赋予所述剂型以与目标受体的体液等渗的溶质，以及水性和非水性无菌悬液，其可以包含悬浮剂和增稠剂。使用的药物组合物可以采取例如在油性或水性媒剂中的悬液、溶液或乳液的形式，并且可以含有配制剂例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。此外，所述剂型可以存在于单剂或多剂容器例如密封的安瓿和小瓶中，并且可以储存在冷冻或冷冻干燥或室温(冻干)条件下，只需在即将使用前添加无菌液体载剂。

在某些实施方式中，用于口服给药的组合物的固体剂型可以含有适合的载剂或赋形剂，例如玉米淀粉、明胶、乳糖、阿拉伯胶、蔗糖、微晶纤维素、高岭土、甘露糖醇、磷酸二钙、碳酸钙、氯化钠或海藻酸。可以使用的崩解剂包括但不限于微晶纤维素、玉米淀粉、羟基乙酸淀粉钠和海藻酸。可以使用的片剂粘合剂包括阿拉伯胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素、蔗糖、淀粉和乙基纤维素。可以使用的润滑剂包括硬脂酸镁、硬脂酸、硅油、滑石、蜡、油和胶体二氧化硅。此外，固体剂型可以是未包衣的，或者它们可以通过已知技术包衣，以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，从而在更长的时间段内提供持续/延长的作用。例如，可以使用单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯来提供持续/延长释放剂型。用于配制持续释放制剂的大量技术对于本领域普通技术人员来说是已知的，并且可以根据本发明使用，包括在下述参考文献中描述的技术：美国专利号4,891,223，6,004,582，5,397,574，5,419,917，5,458,005，5,458,887，5,458,888，5,472,708，6,106,862，6,103,263，6,099,862，6,099,859，6,096,340，6,077,541，5,916,595，5,837,379，5,834,023，5,885,616，5,456,921，5,603,956，5,512,297，5,399,362，5,399,359，5,399,358，5,725,883，5,773,025，6,110,498，5,952,004，5,912,013，5,897,876，5,824,638，5,464,633，5,422,123和4,839,177，以及WO 98/47491，其各自通过引用并入本文。

用于口服给药的液体制剂可以采取例如溶液、糖浆或悬液的形式，或者它们可以以干燥产品的形式提供，用于在使用前用水或其他合适的媒剂构造。此类液体制剂可以通过常规技术，使用可药用的添加剂例如悬浮剂(例如山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化可食用脂肪)、乳化剂(例如卵磷脂或阿拉伯胶)、非水性媒剂(例如杏仁油、油性酯、乙醇或分馏植物油)和防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)来制备。这些制剂还可以适当地含有缓冲盐、调味剂、着色剂和甜味剂。用于口服给药的制剂可以被适合地配制，以提供活性化合物的受控释放。对于颊给药来说，所述组合物可以采取以常规方式配制的胶囊、片剂或锭剂的形式。

用于吸入到待治疗对象的肺中或用于鼻内给药到待治疗对象的鼻和鼻窦腔中的各种不同的液体和粉末剂型，也可以通过常规方法制备。例如，所述组合物可以使用合适的推进剂例如二氯二氟甲烷、三氯一氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体，以气溶胶喷雾呈递的形式从加压包装或喷雾器方便地递送。可以配制用于吸入器或吹入器的例如明胶的胶囊和药筒，其含有所需化合物和适合的粉末基料例如乳糖或淀粉的粉末混合物。

所述组合物也可以配制成用于植入或注射的制剂。因此，例如，所述组合物可以用合适的聚合或疏水材料(例如作为在可接受的油中的乳液)或离子交换树脂配制，或配制成微溶的衍生物(例如作为微溶的盐)。

所述组合物的可注射剂型可以含有各种不同载剂，例如植物油、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、乳酸乙酯、碳酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、乙醇、多元醇(甘油、丙二醇、液态聚乙二醇)等。对于静脉内注射来说，所述组合物的水溶性形式可以通过滴注法给药，由此输注包括本公开主题内容的药物组合物和生理学上可接受的赋形剂的剂型。生理上可接受的赋形剂可以包括例如5％右旋糖、0.9％盐水、林格氏溶液或其他适合的赋形剂。肌肉内制剂例如所述化合物的适合的可溶性盐形式的无菌剂型，可以溶解在药物赋形剂如注射用水、0.9％盐水或5％右旋糖溶液中并给药。所述组合物的适合的不溶形式可以制备成在水性基料或可药用油性基料例如长链脂肪酸的酯(例如油酸乙酯)中的悬液并给药。

除了上述剂型之外，本公开主题内容的组合物还可以配制成直肠组合物例如栓剂或保留灌肠剂，例如含有常规栓剂基料如可可脂或其他甘油酯。此外，还可以通过将所述组合物与适合的聚合或疏水性材料(例如作为在可接受的油中的乳液)或离子交换树脂组合或作为微溶性衍生物例如作为微溶性盐，将所述组合物配制成储库型制剂。

正如上文指出的，本公开的主题内容包括使用带有特异性启动子的载体，用于递送Na/K ATP酶/Src受体复合物的拮抗剂(例如SEQ ID NO：1(NaKtide)或SEQ ID NO：5(pNaKtide)的多肽)。在某些实施方式中，所述载体将pNaKtide或NaKtide靶向表达到特定组织，并因此避免所述NaKtide或pNaKtide的脱靶效应，就此而言，本公开的主题内容还提供了用于治疗Src相关疾病的方法。在某些实施方式中，用于治疗Src相关疾病的方法包括向有需要的对象给药本文中描述的表达载体。

当在本文中使用时，术语“治疗”涉及感兴趣的病症(例如癌症)的任何治疗，包括但不限于预防性治疗和治疗性治疗。因此，术语“治疗”包括但不限于在对象中：阻止感兴趣的病症或感兴趣的病症的发生；抑制感兴趣的病症的进展；停止或阻止感兴趣的病症的进一步发展；减轻感兴趣的病症的严重性；改善或缓解与感兴趣的病症相关的症状；以及引起感兴趣的病症或与感兴趣的病症相关的一种或多种症状的消退。

当在本文中使用时，术语“对象”包括人类和动物对象两者。因此，根据本公开的主题内容，提供了兽医治疗用途。因此，本公开的主题内容提供了哺乳动物的治疗，所述哺乳动物例如人类，以及由于濒临灭绝而重要的哺乳动物例如西伯利亚虎，具有经济重要性的动物例如在农场饲养供人类食用的动物，和/或对人类具有社会重要性的动物例如作为宠物或在动物园中饲养的动物。这些动物的实例包括但不限于：食肉动物，例如猫和狗；猪类，包括猪、阉猪和野猪；反刍动物和/或有蹄类动物，例如牛、公牛、绵羊、长颈鹿、鹿、山羊、野牛和骆驼；以及马。还提供了鸟类的治疗，包括对濒临灭绝的和/或在动物园中饲养的鸟类，以及禽类、特别是驯养禽类即家禽，例如火鸡、鸡、鸭、鹅、珍珠鸡等的治疗，因为它们对人类也具有经济重要性。因此，还提供了对牲畜的治疗，包括但不限于驯养的猪、反刍动物、有蹄类动物、马(包括赛马)、家禽等。

在某些实施方式中，所述Src相关疾病选自癌症、血管疾病、心血管疾病、组织纤维化和骨质疏松症。在某些实施方式中，所述Src相关疾病选自血管疾病、心血管疾病、心脏病、前列腺癌、乳腺癌、成神经细胞瘤、心脏肥大、组织纤维化、充血性心力衰竭、缺血/再灌注损伤、骨质疏松症、视网膜病和肥胖症。

在某些实施方式中，所述Src相关疾病是癌症。在某些实施方式中，治疗癌症可以包括但不限于杀死癌细胞、抑制癌细胞的发育、诱导癌细胞的凋亡、降低癌细胞的生长速率、减少转移的发生率或数目、减小肿瘤尺寸、抑制肿瘤生长、减少可用于肿瘤或癌细胞的血液供应、促进针对肿瘤或癌细胞的免疫应答、减少或抑制癌症的起始或进展或增加患有癌症的对象的寿命。

当在本文中使用时，术语“癌症”是指在动物中发现的所有类型的癌症或赘生物或恶性肿瘤，包括白血病、上皮癌、黑素瘤和肉瘤。“白血病”广泛意味着造血器官的进行性恶性疾病，并且通常以血液和骨髓中白细胞及其前体的扭曲的增殖和发育为特征。白血病疾病包括例如急性非淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病，急性早幼粒细胞性白血病、成年T细胞白血病、非白血性白血病、白细胞不增多性白血病、嗜碱细胞性白血病、胚细胞性白血病、牛白血病、慢性粒细胞性白血病、皮肤白血病、胚胎性白血病、嗜酸性粒细胞性白血病，格罗斯氏白血病、毛细胞白血病、成血性白血病、成血细胞性白血病、组织细胞性白血病、干细胞白血病、急性单核细胞性白血病、白细胞减少性白血病、淋巴性白血病(lymphatic leukemia)、成淋巴细胞性白血病、淋巴细胞性白血病、成淋巴性白血病、淋巴性白血病(lymphoid leukemia)、淋巴肉瘤细胞白血病、肥大细胞白血病、巨核细胞白血病、微成髓细胞性白血病、单核细胞白血病、成髓细胞性白血病、髓细胞性白血病、髓系粒细胞性白血病、髓单核细胞性白血病、内格利型白血病、浆细胞白血病、浆细胞性白血病、早幼粒细胞性白血病、里德尔细胞白血病、席林氏白血病、干细胞白血病、亚白血性白血病和未分化细胞白血病。

术语“上皮癌”是指由上皮细胞构成的恶性新生长，其倾向于浸润周围组织并引起转移。示例性上皮癌包括例如腺泡癌、腺泡状癌、腺样囊性癌、腺囊癌、腺癌(carcinomaadenomatosum)、肾上腺皮质癌、肺泡癌、肺泡细胞癌、基底细胞癌、基底样细胞瘤、基底样癌、基底鳞状细胞癌、细支气管肺泡癌、细支气管癌、支气管癌、脑样癌、胆管细胞癌、绒膜上皮癌、胶样癌、粉刺状癌、子宫体癌、筛状癌、铠甲状癌、皮肤癌、柱状癌、柱状细胞癌、导管癌、硬癌、胚胎性癌、髓样癌、表皮样癌、腺样上皮细胞癌、外植癌、溃疡性癌、纤维癌、明胶样癌、胶状癌、巨大细胞癌、巨细胞癌、腺癌(glandular carcinoma)、粒层细胞癌、发母质癌、多血癌、肝细胞癌、许特耳氏细胞癌、玻璃样癌、高肾盂癌、婴儿胚胎癌、原位癌、表皮内癌、上皮内癌、克罗姆佩切氏癌、库尔奇基细胞癌、大细胞癌、豆状癌(lenticularcarcinioma)、豆状癌(carcinioma lenticulare)、脂肪瘤癌、淋巴上皮癌、髓质癌、髓样癌、黑色素癌、软癌、粘液性癌、粘液癌(carcinoma muciparum)、粘液细胞癌、粘液表皮样癌、粘液癌(carcinoma mucosum)、粘液癌(mucous carcinoma)、粘液瘤样癌、鼻咽癌、燕麦细胞癌、骨化癌、骨样癌、乳头状癌、门脉周癌、浸润前癌、皮刺细胞癌、软糊状癌、肾的肾细胞癌、储备细胞癌、肉瘤样癌、施奈德癌、硬化癌、阴囊癌、印戒细胞癌、单纯性癌、小细胞癌、马铃薯状癌、球状细胞癌、纺锤状细胞癌、海绵状癌、鳞状上皮癌、鳞状细胞癌，弦状癌、血管扩张性癌、毛细血管扩张性癌、过渡细胞癌、结节性癌(carcinoma tuberosum)、结节性癌(tuberous carcinoma)、疣状癌和绒毛状癌。

术语“肉瘤”通常是指由类似于胚胎结缔组织的物质构成的肿瘤，并且通常由包埋在纤维状或均质物质中的紧密堆积的细胞组成。肉瘤包括例如软骨肉瘤、纤维肉瘤、淋巴肉瘤、黑素肉瘤、粘液肉瘤、骨肉瘤、艾伯内西氏肉瘤、脂肪肉瘤、脂肉瘤、腺泡状软组织肉瘤、成釉细胞肉瘤、葡萄状肉瘤、绿色瘤肉瘤、绒毛膜癌、胚胎肉瘤、维尔姆斯瘤肉瘤、子宫内膜肉瘤、间质肉瘤、尤因氏肉瘤、筋膜肉瘤、成纤维细胞肉瘤、巨细胞肉瘤、粒细胞肉瘤、霍奇金肉瘤、特发性多色性出血性肉瘤、B细胞的成免疫细胞肉瘤、淋巴瘤、T细胞的成免疫细胞肉瘤、詹恩逊氏肉瘤、卡波西氏肉瘤、库普弗细胞肉瘤、血管肉瘤、白细胞肉瘤、恶性间皮瘤肉瘤、骨旁骨肉瘤、网状细胞肉瘤、劳斯肉瘤、浆液囊性肉瘤、滑膜肉瘤和毛细血管扩张性肉瘤。

术语“黑素瘤”是指源自于皮肤和其他器官的黑素细胞系统的肿瘤。黑素瘤包括例如肢端雀斑样黑素瘤、无黑色素黑素瘤、良性青少年黑素瘤、Cloudman黑素瘤、S91黑素瘤、Harding-Passey黑素瘤、青少年黑素瘤、恶性雀斑样痣黑素瘤、恶性黑素瘤，结节性黑素瘤、甲下黑素瘤和表浅扩散型黑素瘤。

其他癌症包括例如霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、成神经细胞瘤、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、横纹肌肉瘤、原发性血小板增多症、原发性巨球蛋白血症、小细胞肺肿瘤、原发性脑肿瘤、胃癌、结肠癌、恶性胰腺胰岛素瘤、恶性类癌、恶变前皮肤病变、睾丸癌、淋巴瘤、甲状腺癌、成神经细胞瘤、食道癌、泌尿生殖道癌、恶性高钙血症、宫颈癌、子宫内膜癌和肾上腺皮质癌。在某些实施方式中，所述癌症选自前列腺癌、乳腺癌和成神经细胞瘤。

在某些实施方式中，所述Src相关疾病是心血管疾病，在某些实施方式中包括尿毒症心肌病。在某些实施方式中，治疗心血管疾病可以包括但不限于降低氧化胁迫，减少炎性细胞因子的量，减少心肌纤维化和/或减弱舒张期功能障碍、心脏肥大、血浆肌酐水平和贫血症的发生。

在某些实施方式中，所述Src相关疾病是肥胖症。在某些实施方式中，治疗肥胖症包括但不限于减少皮下和/或内脏脂肪的量，降低体重的量，减少炎性细胞因子的量，增加耗氧量和/或能量消耗的量，减少瘦蛋白的量，和减少脂肪细胞的量。

对于本文公开的治疗性组合物的给药来说，可以使用将小鼠剂量转换成人类剂量的转换因子，来进行在给药到鼠类动物模型的剂量的基础上外推人类剂量的常规方法：每kg的人类剂量＝每kg的小鼠剂量/12(Freireich等，(1966)Cancer Chemother Rep.50:219-244)。剂量也可以以每平方米身体表面积的毫克数为单位提供，因为是这种方法而不是体重获得与某些代谢和排泄功能的良好相关性。此外，身体表面积可用作成人和儿童中以及不同动物物种中药物剂量的公用分母，正如Freireich等(Freireich等，(1966)CancerChemother Rep.50:219-244)所描述。简单来说，为了将任何给定物种中的mg/kg剂量表示成等同的mg/sq m剂量，将所述剂量乘以适合的kg系数。在成年人中，100mg/kg等同于100mg/kg x 37kg/sq m＝3700mg/m2。

根据本公开主题内容的方法，用于给药治疗性组合物的适合方法包括但不限于系统性给药、肠胃外给药(包括血管内、肌肉内和/或动脉内给药)、口服递送、颊递送、直肠递送、皮下给药、腹膜内给药、吸入、经真皮(例如局部施用)、气管内滴注、手术植入、透皮递送、局部注射、鼻内递送和超高速注射/轰击。在适用情况下，连续输注可以增强药物在靶位点的积累(参见例如美国专利号6,180,082)。在本文描述的治疗方法的某些实施方式中，将所述治疗性组合物口服、静脉内、鼻内或腹膜内给药，由此治疗疾病或障碍。

不论使用何种给药途径，本公开主题内容的组合物通常不仅包括有效量的治疗剂，而且通常以有效实现所需反应的量给药。因此，术语“有效量”在本文中用于指称足以产生可测量的生物反应(例如Src抑制的提高)的治疗性组合物(例如载体和可药用媒剂、载剂或赋形剂)的量。本发明的治疗性组合物中活性成分的实际剂量水平可以改变，以便给药所述活性化合物的对于特定对象和/或应用来说有效实现所需治疗反应的量。当然，在任何特定情况下，所述有效量取决于各种不同因素，包括治疗性组合物的活性、剂型、给药途径、与其他药物或治疗的组合、待治疗的病症的严重性和待治疗对象的身体状况和既往医疗史。优选地，给药最低剂量，并在不存在限制剂量的毒性的情况下将所述剂量递增到最低有效量。治疗有效量的确定和调整，以及何时和如何做出此类调整的评估，对于本领域普通技术人员来说是已知的。

关于剂型和剂量的其他指导，参见美国专利号5,326,902、5,234,933；PCT国际公布号WO 93/25521；Berkow等(1997)，《Merck医学信息手册》(The Merck Manual ofMedical Information)，Home主编，Merck Research Laboratories,Whitehouse Station,New Jersey；Goodman等(1996)，《Goodman和Gilman的治疗剂的药理学基础》(Goodman&Gilman's the Pharmacological Basis of Therapeutics)，第9版，McGraw-Hill HealthProfessions Division,New York；Ebadi(1998)，《CRC临床药理学桌面参考》(CRC DeskReference of Clinical Pharmacology)，CRC Press,Boca Raton,Florida；Katzung,(2001)《基础和临床药理学》(Basic&Clinical Pharmacology)，第8版，Lange MedicalBooks/McGraw-Hill Medical Pub.Division,New York；Remington等(1975)，《Remington制药学》(Remington's Pharmaceutical Sciences)，第15版，Mack Pub.Co.,Easton,Pennsylvania；和Speight等(1997)，《Avery药物治疗：疾病管理中药物的性质、选择、治疗性用途和经济价值的指导》(Avery's Drug Treatment:A Guide to the Properties,Choice,Therapeutic Use and Economic Value of Drugs in Disease Management)，第4版，Adis International,Auckland/Philadelphia；Duch等(1998)，Toxicol.Lett.100-101:255-263。

除非另有指明，否则本公开主题内容的实践可以利用在本领域技术范围之内的细胞生物学、细胞培养、分子生物学、转基因生物学、微生物学、重组DNA和免疫学的常规技术。这些技术在文献中被充分解释。参见例如《分子克隆实验指南》(Molecular Cloning ALaboratory Manual)(1989)，第2版，Sambrook、Fritsch和Maniatis主编，Cold SpringHarbor Laboratory Press，第16和17章；美国专利号4,683,195；《DNA克隆》(DNACloning)，第I和II卷，Glover主编，1985；《寡核苷酸合成》(Oligonucleotide Synthesis)，M.J.Gait主编，1984；《核酸杂交》(Nucleic Acid Hybridization)，D.Hames&S.J.Higgins主编，1984；《转录和翻译》(Transcription and Translation)，B.D.Hames&S.J.Higgins主编，1984；《动物细胞的培养》(Culture Of Animal Cells)，R.I.Freshney,Alan R.Liss,Inc.,1987；《固定化细胞和酶》(Immobilized Cells And Enzymes)，IRL Press,1986；Perbal(1984)，《分子克隆实用指南》(A Practical Guide To Molecular Cloning)；参见《酶学方法》(Methods In Enzymology)(Academic Press,Inc.,N.Y.)；《用于哺乳动物细胞的基因转移载体》(Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells)，J.H.Miller和M.P.Calos主编，Cold Spring Harbor Laboratory,1987；《酶学方法》(Methods InEnzymology),Vols.154and 155,Wu等主编，Academic Press Inc.,N.Y.；《细胞和分子生物学中的免疫化学方法》(Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology)，Mayer和Walker主编，Academic Press,London,1987；《实验免疫学手册》(Handbook OfExperimental Immunology)，第I-IV卷，D.M.Weir和C.C.Blackwell主编，1986。

本公开的主题内容通过下述具体但非限制性实施例进行进一步说明。所述实施例可以包括在与本公开主题内容相关的开发和实验过程中的各个时间收集的代表性数据的数据汇编。

实施例

实施例1：带有脂联素启动子的慢病毒的体外转导

为了将NaKtide的表达靶向到脂肪组织，构建了在脂联素启动子控制之下表达eGFP或eGFP-NaKtide cDNA的慢病毒载体，以实现NaKtide在脂肪细胞中的特异性表达。使用3T3-L1前脂肪细胞(ATCC，VA)来评估功能性转入基因表达。然后将细胞用带有在脂联素启动子(Cyagen Biosciences,CA)控制之下的GFP-NaKtide(图1；SEQ ID NO：6)或GFP(图2)构建物的慢病毒载体(2μl的10⁹TU/ml)感染。通过以50、100或200MOI(感染复数)感染细胞进行浓度曲线制作。3T3-L1细胞中慢病毒-脂联素-eGFP-NaKtide转导对脂肪生成的影响，使用油红O染色来评估。GFP表达使用共聚焦激光扫描(Olympus Fluoview FV300)显微镜来确认，并且进行免疫荧光以检测NaKtide表达。

如图3中所示，荧光显微术显示出在慢病毒-GFP和慢病毒-GFP-NaKtide脂肪细胞两者中可容易地检测的GFP表达，因为在两个组中GFP荧光是明显的，从而证实了在3T3-L1细胞中慢病毒-脂联素-eGFP转导的有效性。此外，在两个组中增加MOI表现出增加的GFP荧光，表明使用增加的MOI时被转导的细胞增加。

用增加的MOI的慢病毒-脂联素-eGFP-NaKtide或慢病毒-脂联素-eGFP感染的3T3-L1细胞，还在7天后用对脂质染色的油红O染色，以确定NaKtide表达是否对脂肪生成有影响(图4)。与对照和MOI 50相比，使用100和200MOI的慢病毒-脂联素-eGFP-NaKtide的感染显著减少(p<0.05)油红O染色。然而，在用100和200MOI感染之间没有差异。不论MOI如何，与对照细胞相比用慢病毒-脂联素-eGFP转导没有显示出对脂肪生成的影响。

实施例2：使用脂联素启动子的慢病毒介导的NaKtide在C57BL/6小鼠中的递送

为了评估由脂联素启动子驱动的慢病毒构建物的体内导入和由此得到的NaKtide在脂肪组织中的特异性表达，使用了C57BL/6雄性小鼠(4-6周)。将带有由脂联素启动子驱动的小鼠NaKtide的慢病毒构建物(图1和2)用于小鼠中，以实现NaKtide在脂肪组织中的特异性表达。将带有由脂联素启动子驱动的NaKtide的慢病毒(100μl，2x10⁹TU/ml，在盐水中)及其对应物慢病毒-eGFP通过腹膜内注射注入到小鼠中。两周后，提供另一次腹膜内注射(75μl 1x10⁹ TU/ml)。

使用免疫荧光来探究C57BL/6小鼠中慢病毒-脂联素-eGFP基因靶向的有效性。从用慢病毒-脂联素-eGFP和慢病毒-脂联素-eGFP-NaKtide注射的小鼠收获脂肪、肝脏和心脏组织。荧光显微术在两种脂肪切片(慢病毒-脂联素-eGFP和慢病毒-脂联素-eGFP-NaKtide)中显示出可容易地检测的GFP表达(图5A)并且在肝脏(图5B)、心脏(图5C)和肾脏(图5D)组织中没有可检测的表达，表明脂联素启动子有效驱动慢病毒在脂肪组织中的选择性表达。还使用NaKtide多克隆第一抗体和Alexa Fluor 555多克隆第二抗体对所有组织切片进行了免疫荧光。这个免疫荧光染色证实了仅在慢病毒-脂联素-eGFP-NaKtide注射的小鼠的脂肪组织中检测到NaKtide(图5A)。NaKtide基因仅在慢病毒-脂联素-NaKtide小鼠的脂肪组织中过表达，显示出所述慢病毒-脂联素-NaKtide启动子在这些小鼠中的有效性和特异性。

实施例3：慢病毒介导的NaKtide在活体动物中的递送

为了评估慢病毒介导的NaKtide在活体动物中的递送，再次使用了C57BL/6雄性小鼠(4-6周)。构建了具有由白蛋白启动子驱动的小鼠NaKtide的慢病毒构建物，以实现NaKtide在肝脏中的特异性表达。这种干预模式被用于获得长时间的NaKtide表达。将具有由白蛋白启动子驱动的eGFP-NaKtide(图6；SEQ ID NO：7)及其对应物慢病毒-eGFP(图7)的慢病毒(100μl，2x10⁹ TU/ml，在盐水中)通过腹膜内注射注入到小鼠中。两周后，提供另一次注射(75μl，1x10⁹ TU/ml，i.p.)。

在从用慢病毒-Alb-eGFP和慢病毒-Alb-eGFP-NaKtide注射的小鼠收获肝脏和脂肪组织后，荧光显微术显示出在两种肝脏切片(慢病毒-Alb-eGFP和慢病毒-Alb-eGFP-NaKtide)中可容易地检测的GFP表达，并且在脂肪组织中没有可检测的表达，表明白蛋白启动子有效驱动慢病毒在肝组织中的选择性表达(图8A和8B)。还使用NaKtide多克隆第一抗体和Alexa Fluor 555多克隆第二抗体对肝脏和脂肪组织切片进行了免疫组织化学(IHC)。这种免疫组织化学(IHC)染色证实了NaKtide仅在慢病毒-Alb-eGFP-NaKtide注射的小鼠的肝脏中被检测到。

实施例4-靶向到脂肪细胞的NaKtide在喂食西式饮食的小鼠中通过重编程脂肪细 胞表型减弱脂肪过多和系统性氧化胁迫

为了确定脂肪细胞特异性NaKtide表达对脂肪过多和系统性氧化胁迫的影响，动物研究首先由马歇尔大学动物护理和使用委员会(Marshall University Animal Careand Use Committee)根据美国国立卫生研究院(NIH)《实验动物的护理和使用指南》(National Institutes of Health(NIH)Guide for the Care and Use of LaboratoryAnimals)批准。C57Bl6小鼠(6至8周龄，雄性)购自Hilltop Lab Animals。在到达RobertC.Byrd生物技术科学中心动物资源部门(ARF)后，将小鼠置于笼子中，喂食正常鼠粮并随意取用水。含有果糖的西式饮食(WD)是饮食诱导的肥胖症的公知的模型。WD从Envigo(Indianapolis,IN)商购。WD含有42％脂肪、42.7％糖类和15.2％蛋白质，产生4.5KJ/g。果糖从Alfa Aesar(Ward Hill,MA)商购。果糖以42g/L的浓度制备，产生0.168KJ/mL。WD小鼠被提供WD鼠粮并随意取用高果糖水。将动物随机分成5组：1)正常鼠粮，2)正常鼠粮+慢病毒-GFP-NaKtide(SEQ ID NO：6)，3)WD，4)WD+慢病毒-GFP，和5)WD+慢病毒-GFP-NaKtide(每组n＝12至14只)，并提供它们相应的饮食。将带有由脂联素启动子驱动的小鼠NaKtide的慢病毒构建物用于小鼠中，以实现NaKtide在脂肪组织中的特异性表达。将带有由脂联素启动子驱动的NaKtide的慢病毒(100μl，2x10⁹ TU/ml，在盐水中)及其对应物慢病毒-eGFP腹膜内注射到小鼠中。两周后，提供另一次注射(75μl，1x10⁹ TU/ml，i.p.)。在第0周，然后在第2周再次，第2和5组被提供慢病毒-adipo-NaKtide的注射，第4组被提供慢病毒-adipo-GFP的注射。每周测量体重以及食物和水摄取量。在处死时，测量所有小鼠的体重和内脏和皮下脂肪含量。收集血样，用于确定炎性细胞因子水平。将组织在液氮中快速冷冻并维持在-80℃下。

为了评估间接热量测量和自主活动，在12周的实验期结束时，使用八区室CLAM(Columbus Instruments,Columbus,OH,USA)测量能量消耗和自主活动。在这个系统中，测量总耗氧量(VO₂)和二氧化碳产量(VCO₂)，并通过Columbus软件将VO₂转变成个体热量产生(kcal/小时)。这个软件通过用热值CV＝3.815+(1.232×RER)乘以观察到的VO₂来计算热量产生(热量＝CV×VO₂)。然后将能量消耗计算为产生的热量除以体重的比率。红外光束系统检测动物在CLAMS中的运动，并且自主活动被测定为步行计数，不同光束在时间间隔期间在x或y轴上被中断的次数。使所有小鼠适应监测笼子24小时，然后在规则的12小时光暗周期下记录另外48小时。

对于葡萄糖耐量试验来说，在实验结束之前使用腹膜内葡萄糖耐量试验来确定葡萄糖清除率。将小鼠禁食8小时，然后将葡萄糖溶液(2g/kg，作为10％溶液注射)注射到腹膜腔中。在葡萄糖注射后0、30、60和120分钟从尾静脉采集样品。使用Accutrend Sensor血糖仪测量血液葡萄糖。

对于细胞因子测量来说，IL-6、MCP-1和TNFα细胞因子测量使用ELISA测定试剂盒，按照制造商的说明书(Abcam)来进行。

为了测量c-Src磷酸化，使用RIPA缓冲液从内脏脂肪组织制备全细胞裂解液，并如以前所述确定c-Src的活化。在对磷酸化c-Src进行免疫印迹后，将同一膜剥离并进行免疫印迹以检测总c-Src。c-Src的活化被表示为磷酸化c-Src/总Src之比，并且对于对照样品，将测量值归一化到1.0。

为了评估蛋白质羰基化，使用RIPA缓冲液从内脏脂肪组织制备全细胞裂解液，并进行蛋白质印迹分析以测定蛋白质羰基化。将对照样品的信号密度值以考马斯蓝染色作为上样对照归一化到1.0。

对于蛋白质印迹分析来说，将内脏脂肪组织用液氮粉碎并置于匀浆缓冲液中。将匀浆物离心，分离上清液，并进行免疫印迹。如以前所报道的将所述上清液用于确定FAS、PPARy、MEST和PGC1α。使用GAPDH来控制载样条件。

对于苏木精和曙红染色来说，将储存在OCT中的主动脉切成6μm切片并用苏木精和曙红染色，用于组织学分析。

在上述方法中，实验组之间的统计学显著性通过多重比较的Tukey事后分析方法确定(P<0.05)。对于治疗组之间的比较来说，通过单向方差分析(ANOVA)检验零假设。数据被呈现为平均值±SE。

在获得实验结果后，首先检查了在喂食西式饮食的小鼠中脂肪细胞特异性NaKtide表达对体重以及内脏和皮下脂肪含量的影响。与喂食正常鼠粮饮食的小鼠相比，喂食西式饮食的小鼠在12周时间内表现出体重增加。与喂食西式饮食的小鼠相比，用脂联素-NaKtide转导的小鼠在12周的时期内显示出体重增加的显著减少(图9)。用单独的GFP处理的组与相应的对照组相比没有显示出差异。与喂食西式饮食的小鼠相比，接受脂联素-NaKtide并喂食西式饮食的小鼠也显示出皮下和内脏脂肪两者的明显减少(图10A-10B)。这些观察支持使用慢病毒构建物的脂肪细胞特异性靶向NaKtide可以减弱脂肪过多这一假说。

接下来，检查了在喂食西式饮食的小鼠中脂肪细胞特异性NaKtide表达对葡萄糖耐量试验和炎性细胞因子的影响。喂食西式饮食的小鼠与喂食正常鼠粮饮食的小鼠相比表现出葡萄糖耐量的降低。与喂食西式饮食的小鼠相比，接受慢病毒-脂联素-NaKtide并喂食西式饮食的小鼠显示出葡萄糖耐量的提高(图11A)。用单独的GFP处理的组与相应的对照组相比没有显示出差异。

与对照组相比，喂食西式饮食的小鼠显示出更高水平的这些细胞因子。与喂食西式饮食的小鼠相比，在喂食西式饮食的小鼠中给药慢病毒-脂联素-NaKtide显示出明显更低水平的炎性细胞因子TNFα和MCP-1(图11B-11D)。用单独的GFP处理的组与相应的对照组相比没有显示出差异。

还分析了在喂食西式饮食的小鼠中脂肪细胞特异性NaKtide表达对瘦蛋白、收缩压、耗氧量、活动和能量消耗的影响。喂食西式饮食的小鼠与喂食正常鼠粮饮食的小鼠相比表现出显著提高的血清瘦蛋白浓度，这在慢病毒-脂联素-NaKtide治疗的小鼠中得到改善(图12A)。西式饮食小鼠的收缩压也显著高于它们的对照对应物和WD NaKtide治疗的小鼠(图12B)。

当置于CLAMS笼子中时，发现喂食西式饮食的小鼠与对照组相比显示出降低的耗氧量、活动和能量消耗。与单独的西式饮食相比，接受慢病毒-脂联素-NaKtide的小鼠具有耗氧量、活动和能量消耗的提高(图12C-12E)。

进一步确定了在喂食西式饮食的小鼠中脂肪细胞特异性NaKtide表达对脂肪生成相关蛋白、Na/K-ATP酶信号传导标志物和棕色脂肪标志物PGC1α的影响。喂食西式饮食的小鼠表现出FAS、PPARγ和MEST的提高的表达(图13A)。脂肪酸合酶(FAS)和过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)参与脂肪细胞生长和发育，并且中胚层特异性转录本(MEST)是脂肪细胞大小的标志物。与西式饮食喂食的动物相比，慢病毒-脂联素-NaKtide治疗的小鼠具有较低的蛋白质表达水平。Src的磷酸化(Na/K-ATP酶信号传导的下游靶点)在喂食西式饮食的小鼠中增加，并且在用慢病毒-脂联素-NaKtide治疗的小鼠中减少(图13B)。Na/K-ATP酶的α1亚基的表达在西式饮食喂食的小鼠中显著降低，并在用慢病毒-脂联素-NaKtide治疗的小鼠中被挽救(图13B)。Na/K-ATP酶的α1亚基的羰基化(氧化胁迫的标志物)在喂食西式饮食的小鼠中增加，并在慢病毒-脂联素-NaKtide治疗的小鼠中减少(图13D)。

PGC1α是一种与线粒体生物发生和产热调控相关的蛋白质。在用西式饮食喂食的小鼠的内脏脂肪中，PGC1α表达显著降低。与喂食WD的小鼠相比，用慢病毒-脂联素-NaKtide治疗提高PGC1α的表达(图13C)。

在检查脂肪细胞特异性NaKtide表达对喂食西式饮食的小鼠的内脏脂肪中脂肪细胞的尺寸和数目的影响中，观察到喂食西式饮食的小鼠与对照动物相比显示出脂肪组织的面积的显著增加和细胞数目的显著减少，正如通过H&E染色所显示的。用慢病毒-脂联素-NaKtide治疗增加细胞计数并减少细胞的总面积(图14)。

实施例5–在鼠类PNx模型中，脂肪细胞中的Na/K-ATP酶信号传导在尿毒症心肌病 的发生和发展中的作用

为了进行评估脂肪细胞中的Na/K-ATP酶信号传导在尿毒症心肌病的发生和发展中的作用的实验，动物研究由马歇尔大学动物护理和使用委员会(Marshall UniversityAnimal Care and Use Committee)根据美国国立卫生研究院(NIH)《实验动物的护理和使用指南》(National Institutes of Health(NIH)Guide for the Care and Use ofLaboratory Animals)批准。C57Bl6小鼠(6至8周龄，雄性)购自Hilltop Lab Animals。在到达Robert C.Byrd生物技术科学中心动物资源部门(ARF)后，将小鼠置于含有11％脂肪、62％糖类和27.0％蛋白质并具有12.6KJ/g的总热量的正常鼠粮饮食下并自由取用水，或者将小鼠置于含有42％脂肪、42.7％糖类和15.2％蛋白质且产生4.5KJ/g的西式饮食(WD)下并自由取用产生0.168KJ/mL的高果糖溶液(42g/L)。为了模拟尿毒症心肌病，使用了购自Jackson Laboratories的5/6-肾切除术(PNx)小鼠模型，C57Bl6雄性小鼠(10-12周龄)。PNx手术如以前所述来进行。简单来说，PNx模型使用两步手术方法。第一步是手术结扎左肾的上极和下极，使左肾物质只有1/2起作用。第二步是在结扎后7天摘除右肾。对于假手术组对照来说，重复所述手术步骤但不摘除肾脏。使用用于本研究的LentiMaxTM系统将含有eGFP和NaKtide(Na/K-ATP酶/Src信号传导途径的拮抗剂)或相应的对照eGFP的慢病毒载体注入到C57BL/6小鼠中。所述eGFP-NaKtide或eGFP对照在脂联素、α-MHC、SGLT2或MyoD特异性启动子的控制之下，以分别靶向脂肪细胞、心肌细胞、肾顶侧近端小管细胞和骨骼肌(图1和19-21，以及分别地SEQ ID NO：6、8、9和10)。将慢病毒(100μl，2x10⁹ TU/ml，在盐水中)i.p.注入到C57BL/6小鼠中。根据IACUC规则和规定进行适当的术前和术后护理。小鼠每周称重，并在即将手术之前然后是手术后每4周通过尾袖法确定血压。在牺牲时，测量所有小鼠的体重和内脏和皮下脂肪含量。收集血样用于确定炎性细胞因子水平。将组织在液氮中快速冷冻并维持在-80℃下。

对于葡萄糖耐量试验来说，在实验结束之前使用腹膜内葡萄糖耐量试验来确定葡萄糖清除率。将小鼠禁食8小时，然后将葡萄糖溶液(2g/kg，作为10％溶液注射)注射到腹膜腔中。在葡萄糖注射后0、30、60和120分钟从尾静脉采集样品。使用Accutrend Sensor血糖仪测量血液葡萄糖。

对于这些实验中的细胞因子测量来说，MCP-1和TNFα细胞因子测量使用ELISA测定试剂盒，按照制造商的说明书(Abcam)来进行。

对于TBARS测量来说，TBARS测量使用TBARS参数测定试剂盒(R&D Systems)，按照制造商的流程来进行。

对于RT-PCR来说，使用miRNeasy SerumPlasma试剂盒(Qiagen,Hilden,Germany)进行RNA提取。按照制造商的方案从血清样品提取RNA，并使用NanoDrop分析仪(ThermoScientific)通过260:280比率进一步分析所述RNA的数量和质量。在RNA提取后，将miRCURYLNA Universal RT microRNA PCR试剂盒(Exiqon,Vedbaek,Denmark)用于RT反应以制备cDNA，每个反应使用50ng总RNA。此外，将miRNA特异性引物与SYBR绿主混合物合并，用于执行RT-PCR反应。每个样品使用三个技术平行样，允许在7500Fast实时PCR系统(AppliedBiosystems)上运行的最终qRT-PCR扩增的数据更加精确。

为了评估心功能，使用在多达8只小鼠中同时测量血压的CODA8-通道高通量非侵入性血压系统(Kent Scientific Corporation)测量小鼠中的收缩压/舒张压。进行经胸超声心动图(TTE)，用于通过测量左心室质量、射血分数、心肌性能指数和相对室壁厚度来评估心脏肥大。

在用于本实施例的上述实验中，实验组之间的统计学显著性通过多重比较的Tukey事后分析方法确定(P<0.05)。对于治疗组之间的比较来说，通过单向方差分析(ANOVA)检验零假设。数据被呈现为平均值±SE。

在分析所述结果后，观察到特异性靶向脂肪细胞的慢病毒-脂联素-NaKtide在鼠类实验性尿毒症心肌病模型中减弱氧化胁迫，改善代谢情况、线粒体生物发生和适应性产热。为了评估慢病毒基因靶向的有效性和特异性，从用慢病毒-脂联素-eGFP和慢病毒-脂联素-eGFP-NaKtide注射的C57BL/6小鼠收获脂肪和肝组织(图15A)。免疫荧光染色证实了脂肪切片中可容易地检测的GFP和NaKtide表达，而在肝组织中没有注意到可检测的表达。在所述研究中，将小鼠如上所述用慢病毒-脂联素-GFP-NaKtide注射，然后在同一天进行部分肾切除术(PNx)，以建立实验性尿毒症心肌病的模型。结果显示，慢病毒-脂联素-NaKtide在C57BL/6PNx模型中改善氧化胁迫、葡萄糖耐量，并显著降低细胞因子水平(图15B-15E)。PGC-1α和Sirt3是介导线粒体生物发生和引起白色脂肪变棕(生热脂肪)的非常确实的标志物。RT-PCR分析显示慢病毒-脂联素-NaKtide显著提高PGC-1α和Sirt3表达，表明线粒体生物发生的提高和产热功能的恢复(图15F-15G)。

接下来评估慢病毒-脂联素-NaKtide构建物特异性靶向脂肪细胞和减弱尿毒症心肌病的能力。除了对心肌纤维化的效应之外，特异性靶向脂肪细胞的NaKtide还在小鼠中减弱伴随着实验性肾衰竭看到的舒张期功能障碍(使用回波心动图测量来评估)、心脏肥大(通过心脏重量/体重的比率以及回波心动图上的LVMI和室壁厚度来评估)、血浆肌酐水平和贫血的发生(图16A-16E)。NaKtide的BP效应极小，因为所述C57BL/6PNx模型不产生显著高血压。

特异性靶向脂肪细胞的慢病毒-脂联素-NaKtide还在鼠类实验性尿毒症心肌病模型的脂肪组织中减弱炎性、凋亡和线粒体生物发生基因表达。RT-PCR分析证实，特异性靶向脂肪细胞的慢病毒-脂联素-NaKtide减弱脂肪组织中炎性(TNF-α和IL-6)和凋亡标志物(Casp7和Bax)的基因表达(图17A-17D)。除了对炎性和凋亡的效应之外，靶向脂肪细胞的NaKtide还改善参与线粒体调控和线粒体生物发生的标志物的被改变的水平(瘦蛋白、F4/80、PGC-1α和Sirt3；图18A-18D)。

应该理解，本公开主题内容的各种细节可以被改变而不背离本文公开的主题内容的范围。此外，本文中提供的描述仅仅是出于说明的目的而不是限制的目的。

在整个本文件中提到了各种不同的参考文献。所有这些参考文献都通过引用并入本文，包括在下述列表中列出的参考文献：

参考文献

1.国际专利申请公布号WO 2008/054792，Xie，题为“Src和Src家族激酶的Na/K-ATP酶特异性肽抑制剂/激活剂”(Na/K-ATPase-Specific Peptide Inhibitors/Activators of Src and Src Family Kinases)。

2.国际专利申请公布号WO 2010/071767，Xie，题为“Na/K-ATP酶衍生的Src抑制剂和乌本苷拮抗剂及其用途”(Na/K-ATPase-Derived Src Inhibitors and OuabainAntagonists and Uses Thereof)。

3.Wang等，“在LLC-PK1细胞中Na/K-ATP酶参与过氧化氢诱导的Src/ERK途径的激活”(Involvement of Na/K-ATPase in hydrogen peroxide-induced activation of theSrc/ERK pathway in LLC-PK1 cells)，Free Radical Biology and Medicine.2014,71:415-426.

4.Yan等，“反应性氧物质参与Na/K-ATP酶介导的信号转导的前馈机制”(Involvement of Reactive Oxygen Species in a Feed-forward Mechanism of Na/K-ATPase-mediated Signaling Transduction)，Journal of Biological Chemistry.2013,288:34249-34258

序列表

<110> 马歇尔大学科研协会（Marshall University Research Corporation）

<120> 用于递送Na/K ATP酶/Src受体复合物拮抗剂的表达载体和相关方法

<130> MA408/0MA48

<150> 62/511,541

<151> 2017-05-26

<160> 12

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 20

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 1

Ser Ala Thr Trp Leu Ala Leu Ser Arg Ile Ala Gly Leu Cys Asn Arg

1 5 10 15

Ala Val Phe Gln

20

<210> 2

<211> 13

<212> PRT

<213> 人免疫缺陷病毒

<400> 2

Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Pro Pro Gln

1 5 10

<210> 3

<211> 16

<212> PRT

<213> 黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）

<400> 3

Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys

1 5 10 15

<210> 4

<211> 8

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 4

Lys Lys Gly Lys Lys Gly Lys Lys

1 5

<210> 5

<211> 33

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> TAT NaKtide融合蛋白（pNaKtide）

<400> 5

Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Pro Pro Gln Ser Ala Thr

1 5 10 15

Trp Leu Ala Leu Ser Arg Ile Ala Gly Leu Cys Asn Arg Ala Val Phe

20 25 30

Gln

<210> 6

<211> 12432

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 慢病毒-NaKtide-脂联素启动子

<400> 6

aatgtagtct tatgcaatac tcttgtagtc ttgcaacatg gtaacgatga gttagcaaca 60

tgccttacaa ggagagaaaa agcaccgtgc atgccgattg gtggaagtaa ggtggtacga 120

tcgtgcctta ttaggaaggc aacagacggg tctgacatgg attggacgaa ccactgaatt 180

gccgcattgc agagatattg tatttaagtg cctagctcga tacataaacg ggtctctctg 240

gttagaccag atctgagcct gggagctctc tggctaacta gggaacccac tgcttaagcc 300

tcaataaagc ttgccttgag tgcttcaagt agtgtgtgcc cgtctgttgt gtgactctgg 360

taactagaga tccctcagac ccttttagtc agtgtggaaa atctctagca gtggcgcccg 420

aacagggact tgaaagcgaa agggaaacca gaggagctct ctcgacgcag gactcggctt 480

gctgaagcgc gcacggcaag aggcgagggg cggcgactgg tgagtacgcc aaaaattttg 540

actagcggag gctagaagga gagagatggg tgcgagagcg tcagtattaa gcgggggaga 600

attagatcgc gatgggaaaa aattcggtta aggccagggg gaaagaaaaa atataaatta 660

aaacatatag tatgggcaag cagggagcta gaacgattcg cagttaatcc tggcctgtta 720

gaaacatcag aaggctgtag acaaatactg ggacagctac aaccatccct tcagacagga 780

tcagaagaac ttagatcatt atataataca gtagcaaccc tctattgtgt gcatcaaagg 840

atagagataa aagacaccaa ggaagcttta gacaagatag aggaagagca aaacaaaagt 900

aagaccaccg cacagcaagc ggccgctgat cttcagacct ggaggaggag atatgaggga 960

caattggaga agtgaattat ataaatataa agtagtaaaa attgaaccat taggagtagc 1020

acccaccaag gcaaagagaa gagtggtgca gagagaaaaa agagcagtgg gaataggagc 1080

tttgttcctt gggttcttgg gagcagcagg aagcactatg ggcgcagcgt caatgacgct 1140

gacggtacag gccagacaat tattgtctgg tatagtgcag cagcagaaca atttgctgag 1200

ggctattgag gcgcaacagc atctgttgca actcacagtc tggggcatca agcagctcca 1260

ggcaagaatc ctggctgtgg aaagatacct aaaggatcaa cagctcctgg ggatttgggg 1320

ttgctctgga aaactcattt gcaccactgc tgtgccttgg aatgctagtt ggagtaataa 1380

atctctggaa cagatttgga atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa 1440

ttacacaagc ttaatacact ccttaattga agaatcgcaa aaccagcaag aaaagaatga 1500

acaagaatta ttggaattag ataaatgggc aagtttgtgg aattggttta acataacaaa 1560

ttggctgtgg tatataaaat tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat 1620

agtttttgct gtactttcta tagtgaatag agttaggcag ggatattcac cattatcgtt 1680

tcagacccac ctcccaaccc cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg 1740

tggagagaga gacagagaca gatccattcg attagtgaac ggatctcgac ggtatcgcta 1800

gcttttaaaa gaaaaggggg gattgggggg tacagtgcag gggaaagaat agtagacata 1860

atagcaacag acatacaaac taaagaatta caaaaacaaa ttacaaaaat tcaaaatttt 1920

actagtgatt atcggatcaa ctttgtatag aaaagttgct tgctagtgta tgcaatggtg 1980

tcagcgtttg gaagctgatt atgggatgga tccctggata tggcaatcac tagatggtct 2040

atccttttgt cacagctcca aattttgtct ctgtaactcc ttccatgggt gttttgttcc 2100

catttctaag aaggggcaaa gtgtccacac tttggtcttt gttcttcttg agtttcatgc 2160

gtttagcaaa ttgtatctta tatcttgggt attctaaatg tctgggctaa tatccactta 2220

tcagtgagta catattgtgt gagttccttt gtgattgggt tacctcactc aggatgatgc 2280

cctccaggtc tatccatttg cctaggaatt tcataaattc attcttttta atagctgagt 2340

agtactccat tgtgtaaatg taccacattt ctgtatccat tcctctgttg aggggcatct 2400

gggttctttc cagcttctgg ctattataaa taaggctgct atgaacatag tggagcatgt 2460

gtccttctta ctggttggga catcttctgg atatatgccc aggagaggta ttgtgggatc 2520

ctccggtagt actatgtcca attttctgag gaaccgccag actgatttcc agagtggttg 2580

tacaagcttg caatcccacc aacaatggag gagtattcct ctttctccac atcctcgcca 2640

gcatctgctg tcacctgaat ttttgatctt agccattctg actggtgtga ggtggaatct 2700

cagggttgtt ttgatttgca tttccctgaa ggtccctact atttatctaa cattttgaat 2760

gcaacattct ttcctttgta catagtcata tgccatgtgc attagtaatc tgctataata 2820

cagacccaac gatgagacga ctcagacaaa agagtgtatt tgtatctctt gtgacatcta 2880

ggatataggg gaagaaacac tccacacagt tatgcagggc tctctgtttt gttttgtttt 2940

taaagattta ttttatttca tttattttat gtatataaaa tacatgaaat gagtacactg 3000

tagctatact gatggttgtg agccatcatg tggtttctgg gaattagaat tcagggcctc 3060

tgcttgctct agttggctcc agttgctcca gtctaaagat ttatttatta ttagatctaa 3120

gtacattgta gctgtcttca aacacaccag aagagggcat aggatcccat tacagatggt 3180

tgtgagccac catgtggttg ctgggatttg aactcaggac ctctggaaga gcagtcagtg 3240

ctcttaactg ctgagccatc tctccagccc ttagcctgct ctcttatatc atctatgagc 3300

acctgtctat ggtaacagca ccacaatggg ctggacctta cctcctcaat catcaagcaa 3360

gaaaacgtcc cataggcttg cccacagggc agtctggtgg gagcatttcc ccaactgatg 3420

ttctctcccc aaatgactta tctgatacac tggccttcgg agaaaagcaa gtcaacacct 3480

cattgtgatc ccattttacc cagtcagaat gtcataagaa aacaaataac attttcataa 3540

gaaaataaac aacaatacat tctgtcaagg atgtagacag atgggatgca cttgattcac 3600

tgctggtggg aatgataact agtccaatct cagtggaagt cagtctggag tgttctcaga 3660

aaatgaaaaa atagctgggc agtggtggca gatgccttta atcccagcac ttgggaggca 3720

gaggcaggtg gatttctgag tttgaggcca gccttgtcta cagagtgagt tccaggacag 3780

ccaaggctac acagagaaac cctgtctcaa aaaaccaaaa aaaagccgga cgtggtggcg 3840

cacgccttta atcccagcac tcgggaggca gaggcaggcg gatttctgag ttcgaggcca 3900

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aaaaccaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa ggaagtgaag aatagctgtg gataacacag 4020

cttttctttt ctttatattt caggcatcag ggatagaggt caggtgtcaa tgtaaatcac 4080

tctaccactg agttacactt ctaaattaaa gacatttttc ctttcttgaa tgcccaaaaa 4140

tttggagtac tgcaggacag gctcactctt ctgcagttag tgttatgtct caaaatttga 4200

tttgaggttt agttgtttca gtaaattgtc tttttaaagt catgactaaa caataatata 4260

cagtgaaatt taaccacatt caggaaacac tgaggaaact caggcctgtg gggaaatctg 4320

gccttttgtt taagtatctc acttcgcatg taggcgagaa ttgagatgtg aacatgagct 4380

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tccagggcca tggggtcaca actaacagcc cttggaaatg agcttgtgtc cttaatcttc 5520

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caatcatttt acttgaggat aattttcatt gcactcagaa acatgctgaa ttattgtcct 6660

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gtcttaaggc agctgccagg agcaaggggc ccactcattg gctattggcc ttgactgggt 6840

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gaacaattct atattctcgg ctggctgggt atgaatgcag aatcccactt gggctgtgtt 7020

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gcactgacaa ttccgtggtg ttgtcgggga agctgacgtc ctttccatgg ctgctcgcct 8700

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gtactgggtc tctctggtta gaccagatct gagcctggga gctctctggc taactaggga 9060

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ctagcagtag tagttcatgt catcttatta ttcagtattt ataacttgca aagaaatgaa 9240

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caagctctaa atcgggggct ccctttaggg ttccgattta gtgctttacg gcacctcgac 9960

cccaaaaaac ttgattaggg tgatggttca cgtagtgggc catcgccctg atagacggtt 10020

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gcctattggt taaaaaatga gctgatttaa caaaaattta acgcgaattt taacaaaata 10200

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gtaagatcct tgagagtttt cgccccgaag aacgttttcc aatgatgagc acttttaaag 10560

ttctgctatg tggcgcggta ttatcccgta ttgacgccgg gcaagagcaa ctcggtcgcc 10620

gcatacacta ttctcagaat gacttggttg agtactcacc agtcacagaa aagcatctta 10680

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atagacagat cgctgagata ggtgcctcac tgattaagca ttggtaactg tcagaccaag 11220

tttactcata tatactttag attgatttaa aacttcattt ttaatttaaa aggatctagg 11280

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aagagctacc aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata 11520

ctgttcttct agtgtagccg tagttaggcc accacttcaa gaactctgta gcaccgccta 11580

catacctcgc tctgctaatc ctgttaccag tggctgctgc cagtggcgat aagtcgtgtc 11640

ttaccgggtt ggactcaaga cgatagttac cggataaggc gcagcggtcg ggctgaacgg 11700

ggggttcgtg cacacagccc agcttggagc gaacgaccta caccgaactg agatacctac 11760

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cgtcaggggg gcggagccta tggaaaaacg ccagcaacgc ggccttttta cggttcctgg 12000

ccttttgctg gccttttgct cacatgttct ttcctgcgtt atcccctgat tctgtggata 12060

accgtattac cgcctttgag tgagctgata ccgctcgccg cagccgaacg accgagcgca 12120

gcgagtcagt gagcgaggaa gcggaagagc gcccaatacg caaaccgcct ctccccgcgc 12180

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tgcttccggc tcgtatgttg tgtggaattg tgagcggata acaatttcac acaggaaaca 12360

gctatgacca tgattacgcc aagcgcgcaa ttaaccctca ctaaagggaa caaaagctgg 12420

agctgcaagc tt 12432

<210> 7

<211> 10695

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 慢病毒-NaKtide-白蛋白启动子

<400> 7

aatgtagtct tatgcaatac tcttgtagtc ttgcaacatg gtaacgatga gttagcaaca 60

tgccttacaa ggagagaaaa agcaccgtgc atgccgattg gtggaagtaa ggtggtacga 120

tcgtgcctta ttaggaaggc aacagacggg tctgacatgg attggacgaa ccactgaatt 180

gccgcattgc agagatattg tatttaagtg cctagctcga tacataaacg ggtctctctg 240

gttagaccag atctgagcct gggagctctc tggctaacta gggaacccac tgcttaagcc 300

tcaataaagc ttgccttgag tgcttcaagt agtgtgtgcc cgtctgttgt gtgactctgg 360

taactagaga tccctcagac ccttttagtc agtgtggaaa atctctagca gtggcgcccg 420

aacagggact tgaaagcgaa agggaaacca gaggagctct ctcgacgcag gactcggctt 480

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aaacatatag tatgggcaag cagggagcta gaacgattcg cagttaatcc tggcctgtta 720

gaaacatcag aaggctgtag acaaatactg ggacagctac aaccatccct tcagacagga 780

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atagagataa aagacaccaa ggaagcttta gacaagatag aggaagagca aaacaaaagt 900

aagaccaccg cacagcaagc ggccgctgat cttcagacct ggaggaggag atatgaggga 960

caattggaga agtgaattat ataaatataa agtagtaaaa attgaaccat taggagtagc 1020

acccaccaag gcaaagagaa gagtggtgca gagagaaaaa agagcagtgg gaataggagc 1080

tttgttcctt gggttcttgg gagcagcagg aagcactatg ggcgcagcgt caatgacgct 1140

gacggtacag gccagacaat tattgtctgg tatagtgcag cagcagaaca atttgctgag 1200

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cagctgaccc tgccccctac caacattgct ccacaagcac aaattcatcc agagaaaata 2160

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tcagatgctc catttctcac tgtaatacca tttatagtta cttgcaaaac taactggaat 3180

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actgaaacca agagattata aaacaataaa ttctaaagtt ttagaagtga tcataatcaa 3300

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tagctttggc tgtcctggac cttgctctgt agaccaggtt ggtcttgaac tcagagatct 3480

gcttgcctct gccttgcaag tgctaggatt aaaagcatgt gccaccactg cctggctaca 3540

atctatgttt tataagagat tataaagctc tggctttgtg acattaatct ttcagataat 3600

aagtcttttg gattgtgtct ggagaacata cagactgtga gcagatgttc agaggtatat 3660

ttgcttaggg gtgaattcaa tctgcagcaa taattatgag cagaattact gacacttcca 3720

ttttatacat tctacttgct gatctatgaa acatagataa gcatgcaggc attcatcata 3780

gttttcttta tctggaaaaa cattaaatat gaaagaagca ctttattaat acagtttaga 3840

tgtgttttgc catcttttaa tttcttaaga aatactaagc tgatgcagag tgaagagtgt 3900

gtgaaaagca gtggtgcagc ttggcttgaa ctcgttctcc agcttgggat cgacctgcag 3960

gcatgcttcc atgccaaggc ccacactgaa atgctcaaat gggagacaaa gagattaagc 4020

tcttatgtaa aatttgctgt tttacataac tttaatgaat ggacaaagtc ttgtgcatgg 4080

gggtgggggt ggggttagag gggaacagct ccagatggca aacatacgca agggatttag 4140

tcaaacaact ttttggcaaa gatggtatga ttttgtaatg gggtaggaac caatgaaatg 4200

cgaggtaagt atggttaatg atctacagtt attggttaaa gaagtatatt agagcgagtc 4260

tttctgcaca cagatcacct ttcctatcaa cccccaagtt tgtacaaaaa agcaggctgc 4320

caccatgagc gccacctggc tggccctgag caggatcgcc ggtctttgca acagggccgt 4380

gttccaggcc acgaacttct ctctgttaaa gcaagcagga gatgttgaag aaaaccccgg 4440

gcctatggtg agcaagggcg aggagctgtt caccggggtg gtgcccatcc tggtcgagct 4500

ggacggcgac gtaaacggcc acaagttcag cgtgtccggc gagggcgagg gcgatgccac 4560

ctacggcaag ctgaccctga agttcatctg caccaccggc aagctgcccg tgccctggcc 4620

caccctcgtg accaccctga cctacggcgt gcagtgcttc agccgctacc ccgaccacat 4680

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cttcttcaag gacgacggca actacaagac ccgcgccgag gtgaagttcg agggcgacac 4800

cctggtgaac cgcatcgagc tgaagggcat cgacttcaag gaggacggca acatcctggg 4860

gcacaagctg gagtacaact acaacagcca caacgtctat atcatggccg acaagcagaa 4920

gaacggcatc aaggtgaact tcaagatccg ccacaacatc gaggacggca gcgtgcagct 4980

cgccgaccac taccagcaga acacccccat cggcgacggc cccgtgctgc tgcccgacaa 5040

ccactacctg agcacccagt ccgccctgag caaagacccc aacgagaagc gcgatcacat 5100

ggtcctgctg gagttcgtga ccgccgccgg gatcactctc ggcatggacg agctgtacaa 5160

gtaaacccag ctttcttgta caaagtggtg ataatcgaat tccgataatc aacctctgga 5220

ttacaaaatt tgtgaaagat tgactggtat tcttaactat gttgctcctt ttacgctatg 5280

tggatacgct gctttaatgc ctttgtatca tgctattgct tcccgtatgg ctttcatttt 5340

ctcctccttg tataaatcct ggttgctgtc tctttatgag gagttgtggc ccgttgtcag 5400

gcaacgtggc gtggtgtgca ctgtgtttgc tgacgcaacc cccactggtt ggggcattgc 5460

caccacctgt cagctccttt ccgggacttt cgctttcccc ctccctattg ccacggcgga 5520

actcatcgcc gcctgccttg cccgctgctg gacaggggct cggctgttgg gcactgacaa 5580

ttccgtggtg ttgtcgggga agctgacgtc ctttccatgg ctgctcgcct gtgttgccac 5640

ctggattctg cgcgggacgt ccttctgcta cgtcccttcg gccctcaatc cagcggacct 5700

tccttcccgc ggcctgctgc cggctctgcg gcctcttccg cgtcttcgcc ttcgccctca 5760

gacgagtcgg atctcccttt gggccgcctc cccgcatcgg gaattcccgc ggttcgaatt 5820

ctaccgggta ggggaggcgc ttttcccaag gcagtctgga gcatgcgctt tagcagcccc 5880

gctgggcact tggcgctaca caagtggcct ctggcctcgc acacattcca catccaccgg 5940

taggcgccaa ccggctccgt tctttggtgg ccccttcgcg ccaccttcta ctcctcccct 6000

agtcaggaag ttcccccccg ccccgcagct cgcgtcgtgc aggacgtgac aaatggaagt 6060

agcacgtctc actagtctcg tgcagatgga cagcaccgct gagcaatgga agcgggtagg 6120

cctttggggc agcggccaat agcagctttg ctccttcgct ttctgggctc agaggctggg 6180

aaggggtggg tccgggggcg ggctcagggg cgggctcagg ggcggggcgg gcgcccgaag 6240

gtcctccgga ggcccggcat tctgcacgct tcaaaagcgc acgtctgccg cgctgttctc 6300

ctcttcctca tctccgggcc tttcgacctc acgtgcgcat gattgaacaa gatggattgc 6360

acgcaggttc tccggccgct tgggtggaga ggctattcgg ctatgactgg gcacaacaga 6420

caatcggctg ctctgatgcc gccgtgttcc ggctgtcagc gcaggggcgc ccggttcttt 6480

ttgtcaagac cgacctgtcc ggtgccctga atgaactgca agacgaggca gcgcggctat 6540

cgtggctggc cacgacgggc gttccttgcg cagctgtgct cgacgttgtc actgaagcgg 6600

gaagggactg gctgctattg ggcgaagtgc cggggcagga tctcctgtca tctcaccttg 6660

ctcctgccga gaaagtatcc atcatggctg atgcaatgcg gcggctgcat acgcttgatc 6720

cggctacctg cccattcgac caccaagcga aacatcgcat cgagcgagca cgtactcgga 6780

tggaagccgg tcttgtcgat caggatgatc tggacgaaga gcatcagggg ctcgcgccag 6840

ccgaactgtt cgccaggctc aaggcgagca tgcccgacgg cgaggatctc gtcgtgaccc 6900

atggcgatgc ctgcttgccg aatatcatgg tggaaaatgg ccgcttttct ggattcatcg 6960

actgtggccg gctgggtgtg gcggaccgct atcaggacat agcgttggct acccgtgata 7020

ttgctgaaga gcttggcggc gaatgggctg accgcttcct cgtgctttac ggtatcgccg 7080

ctcccgattc gcagcgcatc gccttctatc gccttcttga cgagttcttc tgagcgggac 7140

tctgggtacc tttaagacca atgacttaca aggcagctgt agatcttagc cactttttaa 7200

aagaaaaggg gggactggaa gggctaattc actcccaacg aagacaagat ctgctttttg 7260

cttgtactgg gtctctctgg ttagaccaga tctgagcctg ggagctctct ggctaactag 7320

ggaacccact gcttaagcct caataaagct tgccttgagt gcttcaagta gtgtgtgccc 7380

gtctgttgtg tgactctggt aactagagat ccctcagacc cttttagtca gtgtggaaaa 7440

tctctagcag tagtagttca tgtcatctta ttattcagta tttataactt gcaaagaaat 7500

gaatatcaga gagtgagagg aacttgttta ttgcagctta taatggttac aaataaagca 7560

atagcatcac aaatttcaca aataaagcat ttttttcact gcattctagt tgtggtttgt 7620

ccaaactcat caatgtatct tatcatgtct ggctctagct atcccgcccc taactccgcc 7680

catcccgccc ctaactccgc ccagttccgc ccattctccg ccccatggct gactaatttt 7740

ttttatttat gcagaggccg aggccgcctc ggcctctgag ctattccaga agtagtgagg 7800

aggctttttt ggaggcctag ggacgtaccc aattcgccct atagtgagtc gtattacgcg 7860

cgctcactgg ccgtcgtttt acaacgtcgt gactgggaaa accctggcgt tacccaactt 7920

aatcgccttg cagcacatcc ccctttcgcc agctggcgta atagcgaaga ggcccgcacc 7980

gatcgccctt cccaacagtt gcgcagcctg aatggcgaat gggacgcgcc ctgtagcggc 8040

gcattaagcg cggcgggtgt ggtggttacg cgcagcgtga ccgctacact tgccagcgcc 8100

ctagcgcccg ctcctttcgc tttcttccct tcctttctcg ccacgttcgc cggctttccc 8160

cgtcaagctc taaatcgggg gctcccttta gggttccgat ttagtgcttt acggcacctc 8220

gaccccaaaa aacttgatta gggtgatggt tcacgtagtg ggccatcgcc ctgatagacg 8280

gtttttcgcc ctttgacgtt ggagtccacg ttctttaata gtggactctt gttccaaact 8340

ggaacaacac tcaaccctat ctcggtctat tcttttgatt tataagggat tttgccgatt 8400

tcggcctatt ggttaaaaaa tgagctgatt taacaaaaat ttaacgcgaa ttttaacaaa 8460

atattaacgc ttacaattta ggtggcactt ttcggggaaa tgtgcgcgga acccctattt 8520

gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt atccgctcat gagacaataa ccctgataaa 8580

tgcttcaata atattgaaaa aggaagagta tgagtattca acatttccgt gtcgccctta 8640

ttcccttttt tgcggcattt tgccttcctg tttttgctca cccagaaacg ctggtgaaag 8700

taaaagatgc tgaagatcag ttgggtgcac gagtgggtta catcgaactg gatctcaaca 8760

gcggtaagat ccttgagagt tttcgccccg aagaacgttt tccaatgatg agcactttta 8820

aagttctgct atgtggcgcg gtattatccc gtattgacgc cgggcaagag caactcggtc 8880

gccgcataca ctattctcag aatgacttgg ttgagtactc accagtcaca gaaaagcatc 8940

ttacggatgg catgacagta agagaattat gcagtgctgc cataaccatg agtgataaca 9000

ctgcggccaa cttacttctg acaacgatcg gaggaccgaa ggagctaacc gcttttttgc 9060

acaacatggg ggatcatgta actcgccttg atcgttggga accggagctg aatgaagcca 9120

taccaaacga cgagcgtgac accacgatgc ctgtagcaat ggcaacaacg ttgcgcaaac 9180

tattaactgg cgaactactt actctagctt cccggcaaca attaatagac tggatggagg 9240

cggataaagt tgcaggacca cttctgcgct cggcccttcc ggctggctgg tttattgctg 9300

ataaatctgg agccggtgag cgtgggtctc gcggtatcat tgcagcactg gggccagatg 9360

gtaagccctc ccgtatcgta gttatctaca cgacggggag tcaggcaact atggatgaac 9420

gaaatagaca gatcgctgag ataggtgcct cactgattaa gcattggtaa ctgtcagacc 9480

aagtttactc atatatactt tagattgatt taaaacttca tttttaattt aaaaggatct 9540

aggtgaagat cctttttgat aatctcatga ccaaaatccc ttaacgtgag ttttcgttcc 9600

actgagcgtc agaccccgta gaaaagatca aaggatcttc ttgagatcct ttttttctgc 9660

gcgtaatctg ctgcttgcaa acaaaaaaac caccgctacc agcggtggtt tgtttgccgg 9720

atcaagagct accaactctt tttccgaagg taactggctt cagcagagcg cagataccaa 9780

atactgttct tctagtgtag ccgtagttag gccaccactt caagaactct gtagcaccgc 9840

ctacatacct cgctctgcta atcctgttac cagtggctgc tgccagtggc gataagtcgt 9900

gtcttaccgg gttggactca agacgatagt taccggataa ggcgcagcgg tcgggctgaa 9960

cggggggttc gtgcacacag cccagcttgg agcgaacgac ctacaccgaa ctgagatacc 10020

tacagcgtga gctatgagaa agcgccacgc ttcccgaagg gagaaaggcg gacaggtatc 10080

cggtaagcgg cagggtcgga acaggagagc gcacgaggga gcttccaggg ggaaacgcct 10140

ggtatcttta tagtcctgtc gggtttcgcc acctctgact tgagcgtcga tttttgtgat 10200

gctcgtcagg ggggcggagc ctatggaaaa acgccagcaa cgcggccttt ttacggttcc 10260

tggccttttg ctggcctttt gctcacatgt tctttcctgc gttatcccct gattctgtgg 10320

ataaccgtat taccgccttt gagtgagctg ataccgctcg ccgcagccga acgaccgagc 10380

gcagcgagtc agtgagcgag gaagcggaag agcgcccaat acgcaaaccg cctctccccg 10440

cgcgttggcc gattcattaa tgcagctggc acgacaggtt tcccgactgg aaagcgggca 10500

gtgagcgcaa cgcaattaat gtgagttagc tcactcatta ggcaccccag gctttacact 10560

ttatgcttcc ggctcgtatg ttgtgtggaa ttgtgagcgg ataacaattt cacacaggaa 10620

acagctatga ccatgattac gccaagcgcg caattaaccc tcactaaagg gaacaaaagc 10680

tggagctgca agctt 10695

<210> 8

<211> 12496

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 慢病毒-NaKtide-αMHC启动子

<400> 8

aatgtagtct tatgcaatac tcttgtagtc ttgcaacatg gtaacgatga gttagcaaca 60

tgccttacaa ggagagaaaa agcaccgtgc atgccgattg gtggaagtaa ggtggtacga 120

tcgtgcctta ttaggaaggc aacagacggg tctgacatgg attggacgaa ccactgaatt 180

gccgcattgc agagatattg tatttaagtg cctagctcga tacataaacg ggtctctctg 240

gttagaccag atctgagcct gggagctctc tggctaacta gggaacccac tgcttaagcc 300

tcaataaagc ttgccttgag tgcttcaagt agtgtgtgcc cgtctgttgt gtgactctgg 360

taactagaga tccctcagac ccttttagtc agtgtggaaa atctctagca gtggcgcccg 420

aacagggact tgaaagcgaa agggaaacca gaggagctct ctcgacgcag gactcggctt 480

gctgaagcgc gcacggcaag aggcgagggg cggcgactgg tgagtacgcc aaaaattttg 540

actagcggag gctagaagga gagagatggg tgcgagagcg tcagtattaa gcgggggaga 600

attagatcgc gatgggaaaa aattcggtta aggccagggg gaaagaaaaa atataaatta 660

aaacatatag tatgggcaag cagggagcta gaacgattcg cagttaatcc tggcctgtta 720

gaaacatcag aaggctgtag acaaatactg ggacagctac aaccatccct tcagacagga 780

tcagaagaac ttagatcatt atataataca gtagcaaccc tctattgtgt gcatcaaagg 840

atagagataa aagacaccaa ggaagcttta gacaagatag aggaagagca aaacaaaagt 900

aagaccaccg cacagcaagc ggccgctgat cttcagacct ggaggaggag atatgaggga 960

caattggaga agtgaattat ataaatataa agtagtaaaa attgaaccat taggagtagc 1020

acccaccaag gcaaagagaa gagtggtgca gagagaaaaa agagcagtgg gaataggagc 1080

tttgttcctt gggttcttgg gagcagcagg aagcactatg ggcgcagcgt caatgacgct 1140

gacggtacag gccagacaat tattgtctgg tatagtgcag cagcagaaca atttgctgag 1200

ggctattgag gcgcaacagc atctgttgca actcacagtc tggggcatca agcagctcca 1260

ggcaagaatc ctggctgtgg aaagatacct aaaggatcaa cagctcctgg ggatttgggg 1320

ttgctctgga aaactcattt gcaccactgc tgtgccttgg aatgctagtt ggagtaataa 1380

atctctggaa cagatttgga atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa 1440

ttacacaagc ttaatacact ccttaattga agaatcgcaa aaccagcaag aaaagaatga 1500

acaagaatta ttggaattag ataaatgggc aagtttgtgg aattggttta acataacaaa 1560

ttggctgtgg tatataaaat tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat 1620

agtttttgct gtactttcta tagtgaatag agttaggcag ggatattcac cattatcgtt 1680

tcagacccac ctcccaaccc cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg 1740

tggagagaga gacagagaca gatccattcg attagtgaac ggatctcgac ggtatcgcta 1800

gcttttaaaa gaaaaggggg gattgggggg tacagtgcag gggaaagaat agtagacata 1860

atagcaacag acatacaaac taaagaatta caaaaacaaa ttacaaaaat tcaaaatttt 1920

actagtgatt atcggatcaa ctttgtatag aaaagttggg taccggatcc tgcaaggtca 1980

cacaagggtc tccacccacc aggtgcccta gtctcaattt cagtttccat gccttgttct 2040

cacaatgctg gcctccccag agctaatttg gactttgttt ttatttcaaa agggcctgaa 2100

tgaggagtag atcttgtgct acccagctct aagggtgccc gtgaagccct cagacctgga 2160

gcctttgcaa cagcccttta ggtggaagca gaataaagca attttcctta aagccaaaat 2220

cctgcctcta gactcttctt ctctgacctc ggtccctggg ctctagggtg gggaggtggg 2280

gcttggaaga agaaggtggg gaagtggcaa aagccgatcc ctagggccct gtgaagttcg 2340

gagccttccc tgtacagcac tggctcatag atcctcctcc agccaaacat agcaagaagt 2400

gatacctcct ttgtgacttc cccaggccca gtacctgtca ggttgaaaca ggatttagag 2460

aagcctctga actcacctga actctgaagc tcatccacca agcaagcacc taggtgccac 2520

tgctagttag tatcctacgc tgataatatg cagagctggg ccacagaagt cctggggtgt 2580

aggaactgac cagtgacttt tcagtcggca aaggtatgac cccctcagca gatgtagtaa 2640

tgtcccctta gatcccatcc caggcaggtc tctaagagga catgggatga gagatgtagt 2700

catgtggcat tccaaacaca gctatccaca gtgtcccttg ccccttccac ttagccagga 2760

ggacagtaac cttagcctat ctttcttcct ccccatcctc ccaggacaca ccccctggtc 2820

tgcagtattc atttcttcct tcacgtcccc tctgtgactt ccatttgcaa ggcttttgac 2880

ctctgcagct gctggaagat agagtttggc cctaggtgtg gcaagccatc tcaagagaaa 2940

gcagacaaca gggggaccag attttggaag gatcaggaac taaatcactg gcgggcctgg 3000

gggtagaaaa aagagtgagt gagtccgctc cagctaagcc aagctagtcc ccgagatact 3060

ctgccacagc tgggctgctc ggggtagctt taggaatgtg ggtctgaaag acaatgggat 3120

tggaagacat ctctttgagt ctcccctcaa ccccacctac agacacactc gtgtgtggcc 3180

agactcctgt tcaacagccc tctgtgttct gaccactgag ctaggcaacc agagcatggg 3240

ccctgtgctg aggatgaaga gttggttacc aatagcaaaa acagcagggg agggagaaca 3300

gagaacgaaa taaggaagga agaaggaaag gccagtcaat cagatgcagt cagaagagat 3360

gggaagccaa cacacagctt gagcagagga aacagaaaag ggagagattc tgggcataag 3420

gaggccacag aaagaagagc ccaggccccc caagtctcct ctttataccc tcatcccgtc 3480

tcccaattaa gcccactctt cttcctagat cagacctgag ctgcagcgaa gagacccgta 3540

gggaggatca cactggatga aggagatgtg tggagaagtc cagggaacct aagagccaga 3600

gcctaaaaga gcaagagata aaggtgcttc aaaggtggcc aggctgtgca cacagagggt 3660

cgaggactgg tggtagagcc tcaagataag gatgatgctc agaatgggcg ggggggggga 3720

ttctgggggg gggagagaga aggtgagaag gagcctggaa cagagaatct ggaagcgctg 3780

gaaacgatac cataaaggga agaacccagg ctacctttag atgtaaatca tgaaagacag 3840

ggagaaggga agctggagag agtagaagga ccccggggca agacattgaa gcaaggacaa 3900

gccaggttga gcgctccgtg aaatcagcct gctgaaggca gagccctggt atgagcacca 3960

gaacagcaga ggctagggtt aatgtcgaga cagggaacag aaggtagaca caggaacaga 4020

cagagacggg ggagccaggt aacaaaggaa tggtccttct cacctgtggc cagagcgtcc 4080

atctgtgtcc acatactcta gaatgttcat cagactgcag ggctggcttg ggaggcagct 4140

ggaaagagta tgtgagagcc aggggagaca agggggccta ggaaaggaag aagagggcaa 4200

accaggccac acaagagggc agagcccaga actgagttaa ctccttcctt gttgcatctt 4260

ccataggagg cagtgggaac tctgtgacca ccatccccca tgagccccca ctacccatac 4320

caagtttggc ctgagtggca ttctaggttc cctgaggaca gagcctggcc tttgtctctt 4380

ggacctgacc caagctgacc caatgttctc agtaccttat catgccctca agagcttgag 4440

aaccaggcag tgacatatta ggccatgggc taaccctgga gcttgcacac aggagcctca 4500

agtgacctcc agggacacag ctgcagacag gtggccttta tccccaaaga gcaaccattt 4560

ggcataggtg gctgcaaatg ggaatgcaag gttgaatcag gtcccttcaa gaatactgca 4620

tgcaagacct aagacccctg gagagagggg tatgctcctg cccccaccca ccataagggg 4680

agtgaactat cctagggggc tggcgacctt ggggagacac cacattactg agagtgctga 4740

gcccagaaaa actgaccgcc ctgtgtcctg cccacctcca cactctagag ctatattgag 4800

aggtgacagt agatagggtg ggagctggta gcagggagag tgttcctggg tgtgagggtg 4860

taggggaaag ccagagcagg ggagtctggc tttgtctcct gaacacaatg tctacttagt 4920

tataacaggc atgacctgct aaagacccaa catctacgac ctctgaaaag acagcagccc 4980

tggaggacag gggttgtctc tgagccttgg gtgcttgatg gtgccacaaa ggagggcatg 5040

agtgtgagta taaggcccca ggagcgttag agaagggcac ttgggaaggg gtcagtctgc 5100

agagccccta tccatggaat ctggagcctg gggccaactg gtgtaaatct ctgggcctgc 5160

caggcattca aagcagcacc tgcatcctct ggcagcctgg ggaggcggaa gggagcaacc 5220

ccccacttat accctttctc cctcagcccc aggattaaca cctctggcct tcccccttcc 5280

cacctcccat caggagtgga gggttgcaga gggagggtaa aaacctacat gtccaaacat 5340

catggtgcac gatatatgga tcagtatgtg tagaggcaag aaaggaaatc tgcaggctta 5400

actgggttaa tgtgtaaagt ctgtgtgcat gtgtgtgtgt ctgactgaaa acgggcatgg 5460

ctgtgcagct gttcagttct gtgcgtgagg ttaccagact gcaggtttgt gtgtaaattg 5520

cccaaggcaa agtgggtgaa tcccttccat ggtttaaaga gattggatga tggcctgcat 5580

ctcaaggacc atggaaaata gaatggacac tctatatgtg tctctaagct aaggtagcaa 5640

ggtctttgga ggacacctgt ctagagatgt gggcaacaga gactacagac agtatctgta 5700

cagagtaagg agagagagga gggggtgtag aattctctta ctatcaaagg gaaactgagt 5760

cgtgcacctg caaagtggat gctctcccta gacatcatga ctttgtctct ggggagccag 5820

cactgtggaa cttcaggtct gagagagtag gaggctcccc tcagcctgaa gctatgcaga 5880

tagccagggt tgaaaggggg aagggagagc ctgggatggg agcttgtgtg ttggaggcag 5940

gggacagata ttaagcctgg aagagaaggt gacccttacc cagttgttca actcaccctt 6000

cagattaaaa ataactgagg taagggcctg ggtaggggag gtggtgtgag acgctcctgt 6060

ctctcctcta tctgcccatc ggccctttgg ggaggaggaa tgtgcccaag gactaaaaaa 6120

aggccatgga gccagagggg cgagggcaac agacctttca tgggcaaacc ttggggccct 6180

gctgtcctcc tgtcacctcc agagccaagg gatcaaagga ggaggagcca ggacaggagg 6240

gaagtgggag ggagggtccc agcagaggac tccaaattta ggcagcaggc atatgggatg 6300

ggatataaag gggctggagc actgagagct gtcagagatt tctccaaccc aggtaagagg 6360

gagtttcggg tgggggctct tcacccacac cagacctctc cccacctaga aggaaactgc 6420

ctttcctgga agtggggttc aggccggtca gagatctgac agggtggcct tccaccagcc 6480

tgggaagttc tcagtggcag gaggtttcca caagaaacac tggatgcccc ttcccttacg 6540

ctgtcttctc catcttcctc ctggggatgc tcctccccgt cttggtttat cttggctctt 6600

cgtcttcagc aagatttgcc ctgtgctgtc cactccatct ttctctactg tctccgtgcc 6660

ttgccttgcc ttcttgcgtg tccttccttt ccacccattt ctcacttcac cttttctccc 6720

cttctcattt gtattcatcc ttccttcctt ccttccttcc ttccttcctt ccttccttcc 6780

ttcctttctc ccttccttcc ttccttcctt ccttccttcc ttccttcctt cctgtgtcag 6840

agtgctgaga atcacacctg gggttcccac ccttatgtaa acaatcttcc agtgagccac 6900

agcttcagtg ctgctgggtg ctctcttacc ttcctcaccc cctggcttgt cctgttccat 6960

cctggtcagg atctctagat tggtctccca gcctctgcta ctcctcttcc tgcctgttcc 7020

tctctctgtc cagctgcgcc actgtggtgc ctcgttccag ctgtggtcca cattcttcag 7080

gattctctga aaagttaacc aggtgagaat gtttcccctg tagacagcag atcacgattc 7140

tcccggaagt caggcttcca gccctctctt tctctgccca gctgcccggc actcttagca 7200

aacctcaggc acccttaccc cacatagacc tctgacagag aagcaggcac tttacatgga 7260

gtcctggtgg gagagccata ggctacggtg taaaagaggc agggaagtgg tggtgtagga 7320

aagtcaggac ttcacataga agcctagccc acaccagaaa tgacagacag atccctccta 7380

tctcccccat aagagtttga gtcgacccgc ggccccgaat tgcaagtttg tacaaaaaag 7440

caggctgcca ccatgagcgc cacctggctg gccctgagca ggatcgccgg tctttgcaac 7500

agggccgtgt tccagggaag cggagagggc aggggaagtc ttctaacatg cggggacgtg 7560

gaggaaaatc ccggccccat ggtgagcaag ggcgaggagc tgttcaccgg ggtggtgccc 7620

atcctggtcg agctggacgg cgacgtaaac ggccacaagt tcagcgtgtc cggcgagggc 7680

gagggcgatg ccacctacgg caagctgacc ctgaagttca tctgcaccac cggcaagctg 7740

cccgtgccct ggcccaccct cgtgaccacc ctgacctacg gcgtgcagtg cttcagccgc 7800

taccccgacc acatgaagca gcacgacttc ttcaagtccg ccatgcccga aggctacgtc 7860

caggagcgca ccatcttctt caaggacgac ggcaactaca agacccgcgc cgaggtgaag 7920

ttcgagggcg acaccctggt gaaccgcatc gagctgaagg gcatcgactt caaggaggac 7980

ggcaacatcc tggggcacaa gctggagtac aactacaaca gccacaacgt ctatatcatg 8040

gccgacaagc agaagaacgg catcaaggtg aacttcaaga tccgccacaa catcgaggac 8100

ggcagcgtgc agctcgccga ccactaccag cagaacaccc ccatcggcga cggccccgtg 8160

ctgctgcccg acaaccacta cctgagcacc cagtccgccc tgagcaaaga ccccaacgag 8220

aagcgcgatc acatggtcct gctggagttc gtgaccgccg ccgggatcac tctcggcatg 8280

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<400> 10

aatgtagtct tatgcaatac tcttgtagtc ttgcaacatg gtaacgatga gttagcaaca 60

tgccttacaa ggagagaaaa agcaccgtgc atgccgattg gtggaagtaa ggtggtacga 120

tcgtgcctta ttaggaaggc aacagacggg tctgacatgg attggacgaa ccactgaatt 180

gccgcattgc agagatattg tatttaagtg cctagctcga tacataaacg ggtctctctg 240

gttagaccag atctgagcct gggagctctc tggctaacta gggaacccac tgcttaagcc 300

tcaataaagc ttgccttgag tgcttcaagt agtgtgtgcc cgtctgttgt gtgactctgg 360

taactagaga tccctcagac ccttttagtc agtgtggaaa atctctagca gtggcgcccg 420

aacagggact tgaaagcgaa agggaaacca gaggagctct ctcgacgcag gactcggctt 480

gctgaagcgc gcacggcaag aggcgagggg cggcgactgg tgagtacgcc aaaaattttg 540

actagcggag gctagaagga gagagatggg tgcgagagcg tcagtattaa gcgggggaga 600

attagatcgc gatgggaaaa aattcggtta aggccagggg gaaagaaaaa atataaatta 660

aaacatatag tatgggcaag cagggagcta gaacgattcg cagttaatcc tggcctgtta 720

gaaacatcag aaggctgtag acaaatactg ggacagctac aaccatccct tcagacagga 780

tcagaagaac ttagatcatt atataataca gtagcaaccc tctattgtgt gcatcaaagg 840

atagagataa aagacaccaa ggaagcttta gacaagatag aggaagagca aaacaaaagt 900

aagaccaccg cacagcaagc ggccgctgat cttcagacct ggaggaggag atatgaggga 960

caattggaga agtgaattat ataaatataa agtagtaaaa attgaaccat taggagtagc 1020

acccaccaag gcaaagagaa gagtggtgca gagagaaaaa agagcagtgg gaataggagc 1080

tttgttcctt gggttcttgg gagcagcagg aagcactatg ggcgcagcgt caatgacgct 1140

gacggtacag gccagacaat tattgtctgg tatagtgcag cagcagaaca atttgctgag 1200

ggctattgag gcgcaacagc atctgttgca actcacagtc tggggcatca agcagctcca 1260

ggcaagaatc ctggctgtgg aaagatacct aaaggatcaa cagctcctgg ggatttgggg 1320

ttgctctgga aaactcattt gcaccactgc tgtgccttgg aatgctagtt ggagtaataa 1380

atctctggaa cagatttgga atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa 1440

ttacacaagc ttaatacact ccttaattga agaatcgcaa aaccagcaag aaaagaatga 1500

acaagaatta ttggaattag ataaatgggc aagtttgtgg aattggttta acataacaaa 1560

ttggctgtgg tatataaaat tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat 1620

agtttttgct gtactttcta tagtgaatag agttaggcag ggatattcac cattatcgtt 1680

tcagacccac ctcccaaccc cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg 1740

tggagagaga gacagagaca gatccattcg attagtgaac ggatctcgac ggtatcgcta 1800

gcttttaaaa gaaaaggggg gattgggggg tacagtgcag gggaaagaat agtagacata 1860

atagcaacag acatacaaac taaagaatta caaaaacaaa ttacaaaaat tcaaaatttt 1920

actagtgatt atcggatcaa ctttgtatag aaaagttggg gcccagccac aggatggtat 1980

agtatagaat agattttatt tagagcatag ggaggggagt caagagggca gtagaggcaa 2040

agaaaggaag agagaggggg agagaagaga agtagaggtg tagaggctgg ccttggagca 2100

cgtggagaga gcagggggaa aggaatgggg agagagggga gaattggaaa cagagaaaga 2160

gcaagagagg atcaagagag caaggagggg ggcaagcagc cccttttata gtgagtcagg 2220

cacacctggt tgttgccagg taactgtggg gcggggctta gacacaaagc taaaaacatc 2280

caccacctag ttcatctgcc agactctcaa ggtcctgcac ataccagagc ctgggggaat 2340

cccagaggga gacatgtgaa ggctccctgg gaccctggtc aggaccagga ccatgtctgt 2400

gcccagccag agttcctcta ggtcagccta aattggccag atctacactt ggtggcaggt 2460

agtttcaggc tttctgggaa gcaaaactgg cagagaacag agcaggatcc ttgagttggg 2520

aaaggaaagt ctagggccag agactgaacc tggggctggt cctgttccac ctgtcctccc 2580

cgtggtttca tcctccagtc cttcagcccc ctagacccaa gccagccatg cagcccgcag 2640

tagcaaagta agaggccaca ggtccagact gggtagggca gaggtgcctg aggcttgggg 2700

caggtgctag ttggatccgg tttccagagg ctatatatat ataaaggctg ctgtttcccc 2760

atggtgcaac accccagagg cctagccaga ccaacattcc tgcccaaaag ccagctctcc 2820

atttatagca ccttggaaga ctagccaagg gagctgaaat gcaaggcctg gaaaggacag 2880

ggggaaatca aaggggccac ctatggcggc aggagaactg agcctcagga tgagctgtgt 2940

gcttctccag gtcagtgggc ctacagccta agaggccctg cattgagggg acaatgcctc 3000

agcccagagc caatggcacg ctccagaagg ggtggctggg ggaagtttta gtgaccataa 3060

aataaaaagc aaggttgcaa tcacttagac tcagcataaa atttatttcg gtttttgtta 3120

tttgtgtgct tgctttgctt tgctttgttt gctcgggttt gagataagag agagagagag 3180

agagagagag agagagagag ggaaggaggg agggagggag ggagggaggg agggaggaag 3240

gaaggaagga aggaaggaag gaagaaagaa agaaagaaag aaagaaagaa agaaagaaag 3300

aaagaaagaa agaaactaga tttgcacaag tggtttgaag tgcttccttg gagacaccag 3360

ggcactgcat aatgaaacag acttgctcat tcatccgcca aggaatattt gtggtgcacc 3420

tagtgtgtgc tgagcatatt cagctgaggt tccaaaaagg aggaagcaat agcttccatc 3480

gaaatcatta ctaacgacaa ttacatccat ccctcactgt agatttaagt caaatgaaag 3540

agcacttatg atgaacccca catccatcgg cagcatactg ttggaatgtt gcaaccgacc 3600

aatgggagag agcacgtccc aggcaaacca gcctctgctt tgcctgggca gaggcagcgt 3660

gagagcttgt atgagtaagt acctacatag agcccaggtt tgctggaata gaatgacttg 3720

tagcacattt tgctaaattc aagtataagg atagaaatca aaagagccca agactgttca 3780

ttcactcgct tgacacttaa accactgtgc ccgccgtggg atcactgctg cagtggcttc 3840

cggagacgcc atggtgagca aagtactcct atccatggta tgctggtctt cgtgtccctc 3900

ggtgaataac tgacaagatc attctcgagg aaaggctgtg tgacattccc caagcctggg 3960

agacatctat ctgggaggaa atggccagag acatcccaaa aatgactttg gagttgagat 4020

ctgagacctg aaaagctgcc agtcacaggc aggaccaggg gagagggcag caggcttggg 4080

acagcaggca cgagacatca tggctctgaa ggaggctgtg cagggctgaa cgaagggaag 4140

gtggctaacc agaatagggc tatctgaggg gacagtgtct ccaggtgaca ttgtggagac 4200

agggtgagta gggttcctga atggccacct agttggagaa ggacacgagg tttgcatctg 4260

gcccaatggg aagcaccagg accgccatca ttccctgagg ctgccgtgca gggactgggt 4320

tccaggaggg acaaatgtgc tagagagtgt cctacccatt cctctccccc tccccctggc 4380

tcctcctccc ttgaggcatg atcagaccag aggcccgaga agggaaatgg aggcaggaac 4440

agatggaggt gatggggacc tcaagtggtg ggtgagcgca gcaagagaca gacttctgtg 4500

gaggcaggct tcagtggaca gctcctttaa ctgaattaaa gggtgtttag atttggaggt 4560

gagtggaggc tatggggtga gtggacacca ctggcctggg ccagggtgct ggtgctctta 4620

tgcctcattt gcacaaagat gaatggcagg tgctgcagga tgagacatga ccttataagg 4680

agaaagtaga aggctgtctg gctatctgac ctcctctgct ggggcatagg tgggggcatg 4740

gatctatatg ccctgggaca tccaggccca gggcaagagg tggggaggag tcctattcct 4800

gccggtttca ggatgagatt ttcagggttt ggaaacactt tgacccgact cttgctccag 4860

gcctactctc tgtggctctg tggttcccct ggccccacaa gagagggtaa aagacagaat 4920

tagtggggcc atctaagtca gcaaatggca ggagttagca tagtctggat ggtgacctta 4980

gaaatggcag accttggagg tgtcttacag gaacagtagg caggacttca tcatgcccag 5040

ccttcccctc gggacctctg gccacatgaa tcccactcag gctttacact tccacctgaa 5100

tgtttattgt gaatttcaaa ttttgctcaa actggatctt tgatctgata ctcacagacc 5160

cactatgccc cagccccttt catccaaaag cgatctttaa tgtccctctt gtccctgtgt 5220

ccacatccaa tcataaagaa atcttgtttg ctccatctct acttttaaag atttaaaagt 5280

ttttatgtac gtgcgtgctt tgcccgcatg taagtttgtg acgcacaaag gtcagagagg 5340

gcatcaggtc cctagagctg gggttacagg aagttgtgaa caaccatgca ggcactggga 5400

atcaaaccca ggccctctgc aagagcagtg ggtgccctta actgttgagc catctcacct 5460

ctccgagccc acccaacccc atcttgagag catacctgca actgaactac ttctcaccag 5520

attctctttg cctcccaatg ctaaacaacc atctgagtgg ccatgagcac ccatttggac 5580

tgtggcagtg ccctccaaat ggatcacctt tctgtcctta ccttccacgt acctgtaaaa 5640

tcccaagctg agacctgata cagccaatcc tagggcaagt tcaggaaaga ggactaaagc 5700

tgagagcagc gagataactc tgaggctgaa tccctgttta gtgttacagg aagaggagaa 5760

agagggggaa gaagaagagg aggagggggg aggaggagga gaactggaag aaaaaactag 5820

aatggagcca ttaagaagaa tggtggctct cagtcaagct gggggggcac aagctgagtt 5880

tgagtctact tgctgtgcat taaagcagtc aagcacagtc ctgtcccagg acctttgcac 5940

atgtttgccc ttctctctaa ctctaaatac ctgctagaag tagcttctgt ctcccttcat 6000

ccagggcact acacgaacac aaccatccca gaggaacctt ccctgattgc tggaatagag 6060

attattattt ttttttgctt tgttttgttt tattttattt tatttcattt cattcatttc 6120

gtttcgtttt gtggaatttg taaatctctg acaccacaaa gttccttgct tgattgacct 6180

acctataatt caactatgtg catagggcct tggttgcgct tactgctggg ttcccaatac 6240

ctggaccagt agctggtctg tgatagataa gccatggtga atgctgaatg aataaacaaa 6300

gtgaaaccat ggtgtaaagt gtaagcactt catgatgggg tctatcagca ccgccagtat 6360

cagagacaaa aaccgttgga cttcaaaaga ggttcctggg tgagtctgat ggatagagag 6420

ggctttccag tttgtaaaaa ggaacagtta aaatggcttc cagaagttag tgggaaagac 6480

acctacgtca cccttgcttg gattcctggc atccgggaga gaagacatag caaaagtcca 6540

tagccaagga aggcttctag ccagagcccc ccaaaagcat gaacatccca gggttggggt 6600

gtgttgggat gtgtaggaga gccagagatc ccacaaggtg gctccttcct tttgatctta 6660

cctccccagt tagcctgctg gaagagaccc agctgaagtc tccagaagaa cagagccaga 6720

gcccccagag ccctctgcca gatctcagtg ctgcaggcaa agccagagaa ggttgctggt 6780

tatgctatgc aagcgggcag gcaggtgctg gaaacagaag caagtctccc acctccactg 6840

acatttccac atccatccct ggtttggatt ctcacccatc accacagtta ccccctggac 6900

attgtcattg ttcctggata tgaagtggat acagacttgg gaagaggtca tctcaacaaa 6960

gttatgccga ctctaccaac tctacagtag gtgaggttgt caggccaggt tccagccatc 7020

acgatcctta agaaaggcat ttcccagggt tcactcagag caagatggca caaacccata 7080

gcaaacaggt tttcttcttc tcggtagaaa cagatcaacc tagaccccca tgggtctcta 7140

gacactcaca gaaagtaagt tggagggagc ctccctctct ctccctccct cttttccttg 7200

gactgtccac ccggagtttg agcagaatgg cttgaagttt taatgatgat tcccactacg 7260

catgcaagga cagcgctggg gttctaagct tcccgtggaa gaacagatat tctctgagcc 7320

attcccagat ggagaatgac caaatagcac tgccaccgat tcatttgtgc caggcttgct 7380

cacctagacc ttctgagtct cactgtctct tgcccacttt gtccttggct caacttctct 7440

gggtgtgtca tcatttctcc actcttctct agaactttca ttgtcccgta gccttgagtc 7500

tctctccaaa cctcctgcaa tctgatttct aactcctatg ctttgcctgg tctccagagt 7560

ggagtccgag gtcagctccg aagtgagcac tgaggtcagt acaggctgga ggagtagaca 7620

ctggagaggc ttgggcaggc tgcaccagat agccaagtgc taccgcgtat ggctgccagt 7680

ctctctgccc tccttcctag ctaggcagct gccccagcac agagtcgcgg gagggggcac 7740

tccctggccc cagtggctac cctggggacc ccaagctccg ccctactaca ctcctattgg 7800

cttgaggcgc ccccgccccc agcctccctt tccagctccc gggcttttag gctaccctgg 7860

ataaatagcc cagggcgcct ggcgcgaagc taggggccag gacgccccag gacacgactg 7920

ctttcttcac cactcctctg acaggacagg acagggagga ggggtagagg acagccggtg 7980

tgcattccaa cccacagaac ctttgtcatt gtactgttgg ggttccggac aagtttgtac 8040

aaaaaagcag gctgccacca tgagcgccac ctggctggcc ctgagcagga tcgccggtct 8100

ttgcaacagg gccgtgttcc agggaagcgg agagggcagg ggaagtcttc taacatgcgg 8160

ggacgtggag gaaaatcccg gccccatggt gagcaagggc gaggagctgt tcaccggggt 8220

ggtgcccatc ctggtcgagc tggacggcga cgtaaacggc cacaagttca gcgtgtccgg 8280

cgagggcgag ggcgatgcca cctacggcaa gctgaccctg aagttcatct gcaccaccgg 8340

caagctgccc gtgccctggc ccaccctcgt gaccaccctg acctacggcg tgcagtgctt 8400

cagccgctac cccgaccaca tgaagcagca cgacttcttc aagtccgcca tgcccgaagg 8460

ctacgtccag gagcgcacca tcttcttcaa ggacgacggc aactacaaga cccgcgccga 8520

ggtgaagttc gagggcgaca ccctggtgaa ccgcatcgag ctgaagggca tcgacttcaa 8580

ggaggacggc aacatcctgg ggcacaagct ggagtacaac tacaacagcc acaacgtcta 8640

tatcatggcc gacaagcaga agaacggcat caaggtgaac ttcaagatcc gccacaacat 8700

cgaggacggc agcgtgcagc tcgccgacca ctaccagcag aacaccccca tcggcgacgg 8760

ccccgtgctg ctgcccgaca accactacct gagcacccag tccgccctga gcaaagaccc 8820

caacgagaag cgcgatcaca tggtcctgct ggagttcgtg accgccgccg ggatcactct 8880

cggcatggac gagctgtaca agtaaaccca gctttcttgt acaaagtggt gataatcgaa 8940

ttccgataat caacctctgg attacaaaat ttgtgaaaga ttgactggta ttcttaacta 9000

tgttgctcct tttacgctat gtggatacgc tgctttaatg cctttgtatc atgctattgc 9060

ttcccgtatg gctttcattt tctcctcctt gtataaatcc tggttgctgt ctctttatga 9120

ggagttgtgg cccgttgtca ggcaacgtgg cgtggtgtgc actgtgtttg ctgacgcaac 9180

ccccactggt tggggcattg ccaccacctg tcagctcctt tccgggactt tcgctttccc 9240

cctccctatt gccacggcgg aactcatcgc cgcctgcctt gcccgctgct ggacaggggc 9300

tcggctgttg ggcactgaca attccgtggt gttgtcgggg aagctgacgt cctttccatg 9360

gctgctcgcc tgtgttgcca cctggattct gcgcgggacg tccttctgct acgtcccttc 9420

ggccctcaat ccagcggacc ttccttcccg cggcctgctg ccggctctgc ggcctcttcc 9480

gcgtcttcgc cttcgccctc agacgagtcg gatctccctt tgggccgcct ccccgcatcg 9540

ggaattcccg cggttcgctt taagaccaat gacttacaag gcagctgtag atcttagcca 9600

ctttttaaaa gaaaaggggg gactggaagg gctaattcac tcccaacgaa gacaagatct 9660

gctttttgct tgtactgggt ctctctggtt agaccagatc tgagcctggg agctctctgg 9720

ctaactaggg aacccactgc ttaagcctca ataaagcttg ccttgagtgc ttcaagtagt 9780

gtgtgcccgt ctgttgtgtg actctggtaa ctagagatcc ctcagaccct tttagtcagt 9840

gtggaaaatc tctagcagta gtagttcatg tcatcttatt attcagtatt tataacttgc 9900

aaagaaatga atatcagaga gtgagaggaa cttgtttatt gcagcttata atggttacaa 9960

ataaagcaat agcatcacaa atttcacaaa taaagcattt ttttcactgc attctagttg 10020

tggtttgtcc aaactcatca atgtatctta tcatgtctgg ctctagctat cccgccccta 10080

actccgccca tcccgcccct aactccgccc agttccgccc attctccgcc ccatggctga 10140

ctaatttttt ttatttatgc agaggccgag gccgcctcgg cctctgagct attccagaag 10200

tagtgaggag gcttttttgg aggcctaggg acgtacccaa ttcgccctat agtgagtcgt 10260

attacgcgcg ctcactggcc gtcgttttac aacgtcgtga ctgggaaaac cctggcgtta 10320

cccaacttaa tcgccttgca gcacatcccc ctttcgccag ctggcgtaat agcgaagagg 10380

cccgcaccga tcgcccttcc caacagttgc gcagcctgaa tggcgaatgg gacgcgccct 10440

gtagcggcgc attaagcgcg gcgggtgtgg tggttacgcg cagcgtgacc gctacacttg 10500

ccagcgccct agcgcccgct cctttcgctt tcttcccttc ctttctcgcc acgttcgccg 10560

gctttccccg tcaagctcta aatcgggggc tccctttagg gttccgattt agtgctttac 10620

ggcacctcga ccccaaaaaa cttgattagg gtgatggttc acgtagtggg ccatcgccct 10680

gatagacggt ttttcgccct ttgacgttgg agtccacgtt ctttaatagt ggactcttgt 10740

tccaaactgg aacaacactc aaccctatct cggtctattc ttttgattta taagggattt 10800

tgccgatttc ggcctattgg ttaaaaaatg agctgattta acaaaaattt aacgcgaatt 10860

ttaacaaaat attaacgctt acaatttagg tggcactttt cggggaaatg tgcgcggaac 10920

ccctatttgt ttatttttct aaatacattc aaatatgtat ccgctcatga gacaataacc 10980

ctgataaatg cttcaataat attgaaaaag gaagagtatg agtattcaac atttccgtgt 11040

cgcccttatt cccttttttg cggcattttg ccttcctgtt tttgctcacc cagaaacgct 11100

ggtgaaagta aaagatgctg aagatcagtt gggtgcacga gtgggttaca tcgaactgga 11160

tctcaacagc ggtaagatcc ttgagagttt tcgccccgaa gaacgttttc caatgatgag 11220

cacttttaaa gttctgctat gtggcgcggt attatcccgt attgacgccg ggcaagagca 11280

actcggtcgc cgcatacact attctcagaa tgacttggtt gagtactcac cagtcacaga 11340

aaagcatctt acggatggca tgacagtaag agaattatgc agtgctgcca taaccatgag 11400

tgataacact gcggccaact tacttctgac aacgatcgga ggaccgaagg agctaaccgc 11460

ttttttgcac aacatggggg atcatgtaac tcgccttgat cgttgggaac cggagctgaa 11520

tgaagccata ccaaacgacg agcgtgacac cacgatgcct gtagcaatgg caacaacgtt 11580

gcgcaaacta ttaactggcg aactacttac tctagcttcc cggcaacaat taatagactg 11640

gatggaggcg gataaagttg caggaccact tctgcgctcg gcccttccgg ctggctggtt 11700

tattgctgat aaatctggag ccggtgagcg tgggtctcgc ggtatcattg cagcactggg 11760

gccagatggt aagccctccc gtatcgtagt tatctacacg acggggagtc aggcaactat 11820

ggatgaacga aatagacaga tcgctgagat aggtgcctca ctgattaagc attggtaact 11880

gtcagaccaa gtttactcat atatacttta gattgattta aaacttcatt tttaatttaa 11940

aaggatctag gtgaagatcc tttttgataa tctcatgacc aaaatccctt aacgtgagtt 12000

ttcgttccac tgagcgtcag accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt 12060

ttttctgcgc gtaatctgct gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttg 12120

tttgccggat caagagctac caactctttt tccgaaggta actggcttca gcagagcgca 12180

gataccaaat actgttcttc tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca agaactctgt 12240

agcaccgcct acatacctcg ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga 12300

taagtcgtgt cttaccgggt tggactcaag acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc 12360

gggctgaacg gggggttcgt gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct acaccgaact 12420

gagataccta cagcgtgagc tatgagaaag cgccacgctt cccgaagaga gaaaggcgga 12480

caggtatccg gtaagcggca gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg 12540

aaacgcctgg tatctttata gtcctgtcgg gtttcgccac ctctgacttg agcgtcgatt 12600

tttgtgatgc tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg cggccttttt 12660

acggttcctg gccttttgct ggccttttgc tcacatgttc tttcctgcgt tatcccctga 12720

ttctgtggat aaccgtatta ccgcctttga gtgagctgat accgctcgcc gcagccgaac 12780

gaccgagcgc agcgagtcag tgagcgagga agcggaagag cgcccaatac gcaaaccgcc 12840

tctccccgcg cgttggccga ttcattaatg cagctggcac gacaggtttc ccgactggaa 12900

agcgggcagt gagcgcaacg caattaatgt gagttagctc actcattagg caccccaggc 12960

tttacacttt atgcttccgg ctcgtatgtt gtgtggaatt gtgagcggat aacaatttca 13020

cacaggaaac agctatgacc atgattacgc caagcgcgca attaaccctc actaaaggga 13080

acaaaagctg gagctgcaag ctt 13103

<210> 11

<211> 9249

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 慢病毒-pNaKtide-GFAP启动子

<400> 11

aatgtagtct tatgcaatac tcttgtagtc ttgcaacatg gtaacgatga gttagcaaca 60

tgccttacaa ggagagaaaa agcaccgtgc atgccgattg gtggaagtaa ggtggtacga 120

tcgtgcctta ttaggaaggc aacagacggg tctgacatgg attggacgaa ccactgaatt 180

gccgcattgc agagatattg tatttaagtg cctagctcga tacataaacg ggtctctctg 240

gttagaccag atctgagcct gggagctctc tggctaacta gggaacccac tgcttaagcc 300

tcaataaagc ttgccttgag tgcttcaagt agtgtgtgcc cgtctgttgt gtgactctgg 360

taactagaga tccctcagac ccttttagtc agtgtggaaa atctctagca gtggcgcccg 420

aacagggact tgaaagcgaa agggaaacca gaggagctct ctcgacgcag gactcggctt 480

gctgaagcgc gcacggcaag aggcgagggg cggcgactgg tgagtacgcc aaaaattttg 540

actagcggag gctagaagga gagagatggg tgcgagagcg tcagtattaa gcgggggaga 600

attagatcgc gatgggaaaa aattcggtta aggccagggg gaaagaaaaa atataaatta 660

aaacatatag tatgggcaag cagggagcta gaacgattcg cagttaatcc tggcctgtta 720

gaaacatcag aaggctgtag acaaatactg ggacagctac aaccatccct tcagacagga 780

tcagaagaac ttagatcatt atataataca gtagcaaccc tctattgtgt gcatcaaagg 840

atagagataa aagacaccaa ggaagcttta gacaagatag aggaagagca aaacaaaagt 900

aagaccaccg cacagcaagc ggccgctgat cttcagacct ggaggaggag atatgaggga 960

caattggaga agtgaattat ataaatataa agtagtaaaa attgaaccat taggagtagc 1020

acccaccaag gcaaagagaa gagtggtgca gagagaaaaa agagcagtgg gaataggagc 1080

tttgttcctt gggttcttgg gagcagcagg aagcactatg ggcgcagcgt caatgacgct 1140

gacggtacag gccagacaat tattgtctgg tatagtgcag cagcagaaca atttgctgag 1200

ggctattgag gcgcaacagc atctgttgca actcacagtc tggggcatca agcagctcca 1260

ggcaagaatc ctggctgtgg aaagatacct aaaggatcaa cagctcctgg ggatttgggg 1320

ttgctctgga aaactcattt gcaccactgc tgtgccttgg aatgctagtt ggagtaataa 1380

atctctggaa cagatttgga atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa 1440

ttacacaagc ttaatacact ccttaattga agaatcgcaa aaccagcaag aaaagaatga 1500

acaagaatta ttggaattag ataaatgggc aagtttgtgg aattggttta acataacaaa 1560

ttggctgtgg tatataaaat tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat 1620

agtttttgct gtactttcta tagtgaatag agttaggcag ggatattcac cattatcgtt 1680

tcagacccac ctcccaaccc cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg 1740

tggagagaga gacagagaca gatccattcg attagtgaac ggatctcgac ggtatcgcta 1800

gcttttaaaa gaaaaggggg gattgggggg tacagtgcag gggaaagaat agtagacata 1860

atagcaacag acatacaaac taaagaatta caaaaacaaa ttacaaaaat tcaaaatttt 1920

actagtgatt atcggatcaa ctttgtatag aaaagttgga gctcccacct ccctctctgt 1980

gctgggactc acagagggag acctcaggag gcagtctgtc catcacatgt ccaaatgcag 2040

agcataccct gggctgggcg cagtggcgca caactgtaat tccagcactt tgggaggctg 2100

atgtggaagg atcacttgag cccagaagtt ctagaccagc ctgggcaaca tggcaagacc 2160

ctatctctac aaaaaaagtt aaaaaatcag ccacgtgtgg tgacacacac ctgtagtccc 2220

agctattcag gaggctgagg tgaggggatc acttaaggct gggaggttga ggctgcagtg 2280

agtcgtggtt gcgccactgc actccagcct gggcaacagt gagaccctgt ctcaaaagac 2340

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aagaacatat cctggtgtgg agtaggggac gctgctctga 2400

cagaggctcg ggggcctgag ctggctctgt gagctgggga ggaggcagac agccaggcct 2460

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ccagtgaatg actcaccttg gcacagacac aatgttcggg gtgggcacag tgcctgcttc 2580

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aggaaagggg atcaggggat gcccaggcat ggacagtggg tggcaggggg ggagaggagg 2820

gctgtctgct tcccagaagt ccaaggacac aaatgggtga ggggactggg cagggttctg 2880

accctgtggg accagagtgg agggcgtaga tggacctgaa gtctccaggg acaacagggc 2940

ccaggtctca ggctcctagt tgggcccagt ggctccagcg tttccaaacc catccatccc 3000

cagaggttct tcccatctct ccaggctgat gtgtgggaac tcgaggaaat aaatctccag 3060

tgggagacgg aggggtggcc agggaaacgg ggcgctgcag gaataaagac gagccagcac 3120

agccagctca tgcgtaacgg ctttgtggag ctgtcaaggc ctggtctctg ggagagaggc 3180

acagggaggc cagacaagga aggggtgacc tggagggaca gatccagggg ctaaagtcct 3240

gataaggcaa gagagtgccg gccccctctt gccctatcag gacctccact gccacataga 3300

ggccatgatt gacccttaga caaagggctg gtgtccaatc ccagccccca gccccagaac 3360

tccagggaat gaatgggcag agagcaggaa tgtgggacat ctgtgttcaa gggaaggact 3420

ccaggagtct gctgggaatg aggcctagta ggaaatgagg tggcccttga gggtacagaa 3480

caggttcatt cttcgccaaa ttcccagcac cttgcaggca cttacagctg agtgagataa 3540

tgcctgggtt atgaaatcaa aaagttggaa agcaggtcag aggtcatctg gtacagccct 3600

tccttccctt tttttttttt tttttttttg tgagacaagg tctctctctg ttgcccaggc 3660

tggagtggcg caaacacagc tcactgcagc ctcaacctac tgggctcaag caatcctcca 3720

gcctcagcct cccaaagtgc tgggattaca agcatgagcc accccactca gccctttcct 3780

tcctttttaa ttgatgcata ataattgtaa gtattcatca tggtccaacc aaccctttct 3840

tgacccacct tcctagagag agggtcctct tgcttcagcg gtcagggccc cagacccatg 3900

gtctggctcc aggtaccacc tgcctcatgc aggagttggc gtgcccagga agctctgcct 3960

ctgggcacag tgacctcagt ggggtgaggg gagctctccc catagctggg ctgcggccca 4020

accccacccc ctcaggctat gccagggggt gttgccaggg gcacccgggc atcgccagtc 4080

tagcccactc cttcataaag ccctcgcatc ccaggagcga gcagagccag agcaggcaag 4140

tttgtacaaa aaagcaggct gccaccatgg gcaggaagaa gaggaggcag aggaggaggc 4200

ctcctcagag cgccacctgg ctggccctga gcaggatcgc cggcctgtgc aacagggccg 4260

tgttccaggg aagcggagag ggcaggggaa gtcttctaac atgcggggac gtggaggaaa 4320

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tcgagctgga cggcgacgta aacggccaca agttcagcgt gtccggcgag ggcgagggcg 4440

atgccaccta cggcaagctg accctgaagt tcatctgcac caccggcaag ctgcccgtgc 4500

cctggcccac cctcgtgacc accctgacct acggcgtgca gtgcttcagc cgctaccccg 4560

accacatgaa gcagcacgac ttcttcaagt ccgccatgcc cgaaggctac gtccaggagc 4620

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gcgacaccct ggtgaaccgc atcgagctga agggcatcga cttcaaggag gacggcaaca 4740

tcctggggca caagctggag tacaactaca acagccacaa cgtctatatc atggccgaca 4800

agcagaagaa cggcatcaag gtgaacttca agatccgcca caacatcgag gacggcagcg 4860

tgcagctcgc cgaccactac cagcagaaca cccccatcgg cgacggcccc gtgctgctgc 4920

ccgacaacca ctacctgagc acccagtccg ccctgagcaa agaccccaac gagaagcgcg 4980

atcacatggt cctgctggag ttcgtgaccg ccgccgggat cactctcggc atggacgagc 5040

tgtacaagta aacccagctt tcttgtacaa agtggtgata atcgaattcc gataatcaac 5100

ctctggatta caaaatttgt gaaagattga ctggtattct taactatgtt gctcctttta 5160

cgctatgtgg atacgctgct ttaatgcctt tgtatcatgc tattgcttcc cgtatggctt 5220

tcattttctc ctccttgtat aaatcctggt tgctgtctct ttatgaggag ttgtggcccg 5280

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cggcggaact catcgccgcc tgccttgccc gctgctggac aggggctcgg ctgttgggca 5460

ctgacaattc cgtggtgttg tcggggaagc tgacgtcctt tccatggctg ctcgcctgtg 5520

ttgccacctg gattctgcgc gggacgtcct tctgctacgt cccttcggcc ctcaatccag 5580

cggaccttcc ttcccgcggc ctgctgccgg ctctgcggcc tcttccgcgt cttcgccttc 5640

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tcgctttaag accaatgact tacaaggcag ctgtagatct tagccacttt ttaaaagaaa 5760

aggggggact ggaagggcta attcactccc aacgaagaca agatctgctt tttgcttgta 5820

ctgggtctct ctggttagac cagatctgag cctgggagct ctctggctaa ctagggaacc 5880

cactgcttaa gcctcaataa agcttgcctt gagtgcttca agtagtgtgt gcccgtctgt 5940

tgtgtgactc tggtaactag agatccctca gaccctttta gtcagtgtgg aaaatctcta 6000

gcagtagtag ttcatgtcat cttattattc agtatttata acttgcaaag aaatgaatat 6060

cagagagtga gaggaacttg tttattgcag cttataatgg ttacaaataa agcaatagca 6120

tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt cactgcattc tagttgtggt ttgtccaaac 6180

tcatcaatgt atcttatcat gtctggctct agctatcccg cccctaactc cgcccatccc 6240

gcccctaact ccgcccagtt ccgcccattc tccgccccat ggctgactaa ttttttttat 6300

ttatgcagag gccgaggccg cctcggcctc tgagctattc cagaagtagt gaggaggctt 6360

ttttggaggc ctagggacgt acccaattcg ccctatagtg agtcgtatta cgcgcgctca 6420

ctggccgtcg ttttacaacg tcgtgactgg gaaaaccctg gcgttaccca acttaatcgc 6480

cttgcagcac atcccccttt cgccagctgg cgtaatagcg aagaggcccg caccgatcgc 6540

ccttcccaac agttgcgcag cctgaatggc gaatgggacg cgccctgtag cggcgcatta 6600

agcgcggcgg gtgtggtggt tacgcgcagc gtgaccgcta cacttgccag cgccctagcg 6660

cccgctcctt tcgctttctt cccttccttt ctcgccacgt tcgccggctt tccccgtcaa 6720

gctctaaatc gggggctccc tttagggttc cgatttagtg ctttacggca cctcgacccc 6780

aaaaaacttg attagggtga tggttcacgt agtgggccat cgccctgata gacggttttt 6840

cgccctttga cgttggagtc cacgttcttt aatagtggac tcttgttcca aactggaaca 6900

acactcaacc ctatctcggt ctattctttt gatttataag ggattttgcc gatttcggcc 6960

tattggttaa aaaatgagct gatttaacaa aaatttaacg cgaattttaa caaaatatta 7020

acgcttacaa tttaggtggc acttttcggg gaaatgtgcg cggaacccct atttgtttat 7080

ttttctaaat acattcaaat atgtatccgc tcatgagaca ataaccctga taaatgcttc 7140

aataatattg aaaaaggaag agtatgagta ttcaacattt ccgtgtcgcc cttattccct 7200

tttttgcggc attttgcctt cctgtttttg ctcacccaga aacgctggtg aaagtaaaag 7260

atgctgaaga tcagttgggt gcacgagtgg gttacatcga actggatctc aacagcggta 7320

agatccttga gagttttcgc cccgaagaac gttttccaat gatgagcact tttaaagttc 7380

tgctatgtgg cgcggtatta tcccgtattg acgccgggca agagcaactc ggtcgccgca 7440

tacactattc tcagaatgac ttggttgagt actcaccagt cacagaaaag catcttacgg 7500

atggcatgac agtaagagaa ttatgcagtg ctgccataac catgagtgat aacactgcgg 7560

ccaacttact tctgacaacg atcggaggac cgaaggagct aaccgctttt ttgcacaaca 7620

tgggggatca tgtaactcgc cttgatcgtt gggaaccgga gctgaatgaa gccataccaa 7680

acgacgagcg tgacaccacg atgcctgtag caatggcaac aacgttgcgc aaactattaa 7740

ctggcgaact acttactcta gcttcccggc aacaattaat agactggatg gaggcggata 7800

aagttgcagg accacttctg cgctcggccc ttccggctgg ctggtttatt gctgataaat 7860

ctggagccgg tgagcgtggg tctcgcggta tcattgcagc actggggcca gatggtaagc 7920

cctcccgtat cgtagttatc tacacgacgg ggagtcaggc aactatggat gaacgaaata 7980

gacagatcgc tgagataggt gcctcactga ttaagcattg gtaactgtca gaccaagttt 8040

actcatatat actttagatt gatttaaaac ttcattttta atttaaaagg atctaggtga 8100

agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag 8160

cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt ctgcgcgtaa 8220

tctgctgctt gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg ccggatcaag 8280

agctaccaac tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata ccaaatactg 8340

ttcttctagt gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat 8400

acctcgctct gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta 8460

ccgggttgga ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc tgaacggggg 8520

gttcgtgcac acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga tacctacagc 8580

gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg aagagagaaa ggcggacagg tatccggtaa 8640

gcggcagggt cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac gcctggtatc 8700

tttatagtcc tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt 8760

caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct 8820

tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc 8880

gtattaccgc ctttgagtga gctgataccg ctcgccgcag ccgaacgacc gagcgcagcg 8940

agtcagtgag cgaggaagcg gaagagcgcc caatacgcaa accgcctctc cccgcgcgtt 9000

ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg ggcagtgagc 9060

gcaacgcaat taatgtgagt tagctcactc attaggcacc ccaggcttta cactttatgc 9120

ttccggctcg tatgttgtgt ggaattgtga gcggataaca atttcacaca ggaaacagct 9180

atgaccatga ttacgccaag cgcgcaatta accctcacta aagggaacaa aagctggagc 9240

tgcaagctt 9249

<210> 12

<211> 7540

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 慢病毒-pNaKtide-SYN1启动子

<400> 12

aatgtagtct tatgcaatac tcttgtagtc ttgcaacatg gtaacgatga gttagcaaca 60

tgccttacaa ggagagaaaa agcaccgtgc atgccgattg gtggaagtaa ggtggtacga 120

tcgtgcctta ttaggaaggc aacagacggg tctgacatgg attggacgaa ccactgaatt 180

gccgcattgc agagatattg tatttaagtg cctagctcga tacataaacg ggtctctctg 240

gttagaccag atctgagcct gggagctctc tggctaacta gggaacccac tgcttaagcc 300

tcaataaagc ttgccttgag tgcttcaagt agtgtgtgcc cgtctgttgt gtgactctgg 360

taactagaga tccctcagac ccttttagtc agtgtggaaa atctctagca gtggcgcccg 420

aacagggact tgaaagcgaa agggaaacca gaggagctct ctcgacgcag gactcggctt 480

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actagcggag gctagaagga gagagatggg tgcgagagcg tcagtattaa gcgggggaga 600

attagatcgc gatgggaaaa aattcggtta aggccagggg gaaagaaaaa atataaatta 660

aaacatatag tatgggcaag cagggagcta gaacgattcg cagttaatcc tggcctgtta 720

gaaacatcag aaggctgtag acaaatactg ggacagctac aaccatccct tcagacagga 780

tcagaagaac ttagatcatt atataataca gtagcaaccc tctattgtgt gcatcaaagg 840

atagagataa aagacaccaa ggaagcttta gacaagatag aggaagagca aaacaaaagt 900

aagaccaccg cacagcaagc ggccgctgat cttcagacct ggaggaggag atatgaggga 960

caattggaga agtgaattat ataaatataa agtagtaaaa attgaaccat taggagtagc 1020

acccaccaag gcaaagagaa gagtggtgca gagagaaaaa agagcagtgg gaataggagc 1080

tttgttcctt gggttcttgg gagcagcagg aagcactatg ggcgcagcgt caatgacgct 1140

gacggtacag gccagacaat tattgtctgg tatagtgcag cagcagaaca atttgctgag 1200

ggctattgag gcgcaacagc atctgttgca actcacagtc tggggcatca agcagctcca 1260

ggcaagaatc ctggctgtgg aaagatacct aaaggatcaa cagctcctgg ggatttgggg 1320

ttgctctgga aaactcattt gcaccactgc tgtgccttgg aatgctagtt ggagtaataa 1380

atctctggaa cagatttgga atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa 1440

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gtgcaagtgg gttttaggac caggatgagg cggggtgggg gtgcctacct gacgaccgac 2040

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gaccatctgc gctgcggcgc cggcgactca gcgctgcctc agtctgcggt gggcagcgga 2400

ggagtcgtgt cgtgcctgag agcgcagcaa gtttgtacaa aaaagcaggc tgccaccatg 2460

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agcaggatcg ccggcctgtg caacagggcc gtgttccagg gaagcggaga gggcagggga 2580

agtcttctaa catgcgggga cgtggaggaa aatcccggcc ccatggtgag caagggcgag 2640

gagctgttca ccggggtggt gcccatcctg gtcgagctgg acggcgacgt aaacggccac 2700

aagttcagcg tgtccggcga gggcgagggc gatgccacct acggcaagct gaccctgaag 2760

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tacaagaccc gcgccgaggt gaagttcgag ggcgacaccc tggtgaaccg catcgagctg 3000

aagggcatcg acttcaagga ggacggcaac atcctggggc acaagctgga gtacaactac 3060

aacagccaca acgtctatat catggccgac aagcagaaga acggcatcaa ggtgaacttc 3120

aagatccgcc acaacatcga ggacggcagc gtgcagctcg ccgaccacta ccagcagaac 3180

acccccatcg gcgacggccc cgtgctgctg cccgacaacc actacctgag cacccagtcc 3240

gccctgagca aagaccccaa cgagaagcgc gatcacatgg tcctgctgga gttcgtgacc 3300

gccgccggga tcactctcgg catggacgag ctgtacaagt aaacccagct ttcttgtaca 3360

aagtggtgat aatcgaattc cgataatcaa cctctggatt acaaaatttg tgaaagattg 3420

actggtattc ttaactatgt tgctcctttt acgctatgtg gatacgctgc tttaatgcct 3480

ttgtatcatg ctattgcttc ccgtatggct ttcattttct cctccttgta taaatcctgg 3540

ttgctgtctc tttatgagga gttgtggccc gttgtcaggc aacgtggcgt ggtgtgcact 3600

gtgtttgctg acgcaacccc cactggttgg ggcattgcca ccacctgtca gctcctttcc 3660

gggactttcg ctttccccct ccctattgcc acggcggaac tcatcgccgc ctgccttgcc 3720

cgctgctgga caggggctcg gctgttgggc actgacaatt ccgtggtgtt gtcggggaag 3780

ctgacgtcct ttccatggct gctcgcctgt gttgccacct ggattctgcg cgggacgtcc 3840

ttctgctacg tcccttcggc cctcaatcca gcggaccttc cttcccgcgg cctgctgccg 3900

gctctgcggc ctcttccgcg tcttcgcctt cgccctcaga cgagtcggat ctccctttgg 3960

gccgcctccc cgcatcggga attcccgcgg ttcgctttaa gaccaatgac ttacaaggca 4020

gctgtagatc ttagccactt tttaaaagaa aaggggggac tggaagggct aattcactcc 4080

caacgaagac aagatctgct ttttgcttgt actgggtctc tctggttaga ccagatctga 4140

gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta agcctcaata aagcttgcct 4200

tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact ctggtaacta gagatccctc 4260

agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtagta gttcatgtca tcttattatt 4320

cagtatttat aacttgcaaa gaaatgaata tcagagagtg agaggaactt gtttattgca 4380

gcttataatg gttacaaata aagcaatagc atcacaaatt tcacaaataa agcatttttt 4440

tcactgcatt ctagttgtgg tttgtccaaa ctcatcaatg tatcttatca tgtctggctc 4500

tagctatccc gcccctaact ccgcccatcc cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt 4560

ctccgcccca tggctgacta atttttttta tttatgcaga ggccgaggcc gcctcggcct 4620

ctgagctatt ccagaagtag tgaggaggct tttttggagg cctagggacg tacccaattc 4680

gccctatagt gagtcgtatt acgcgcgctc actggccgtc gttttacaac gtcgtgactg 4740

ggaaaaccct ggcgttaccc aacttaatcg ccttgcagca catccccctt tcgccagctg 4800

gcgtaatagc gaagaggccc gcaccgatcg cccttcccaa cagttgcgca gcctgaatgg 4860

cgaatgggac gcgccctgta gcggcgcatt aagcgcggcg ggtgtggtgg ttacgcgcag 4920

cgtgaccgct acacttgcca gcgccctagc gcccgctcct ttcgctttct tcccttcctt 4980

tctcgccacg ttcgccggct ttccccgtca agctctaaat cgggggctcc ctttagggtt 5040

ccgatttagt gctttacggc acctcgaccc caaaaaactt gattagggtg atggttcacg 5100

tagtgggcca tcgccctgat agacggtttt tcgccctttg acgttggagt ccacgttctt 5160

taatagtgga ctcttgttcc aaactggaac aacactcaac cctatctcgg tctattcttt 5220

tgatttataa gggattttgc cgatttcggc ctattggtta aaaaatgagc tgatttaaca 5280

aaaatttaac gcgaatttta acaaaatatt aacgcttaca atttaggtgg cacttttcgg 5340

ggaaatgtgc gcggaacccc tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg 5400

ctcatgagac aataaccctg ataaatgctt caataatatt gaaaaaggaa gagtatgagt 5460

attcaacatt tccgtgtcgc ccttattccc ttttttgcgg cattttgcct tcctgttttt 5520

gctcacccag aaacgctggt gaaagtaaaa gatgctgaag atcagttggg tgcacgagtg 5580

ggttacatcg aactggatct caacagcggt aagatccttg agagttttcg ccccgaagaa 5640

cgttttccaa tgatgagcac ttttaaagtt ctgctatgtg gcgcggtatt atcccgtatt 5700

gacgccgggc aagagcaact cggtcgccgc atacactatt ctcagaatga cttggttgag 5760

tactcaccag tcacagaaaa gcatcttacg gatggcatga cagtaagaga attatgcagt 5820

gctgccataa ccatgagtga taacactgcg gccaacttac ttctgacaac gatcggagga 5880

ccgaaggagc taaccgcttt tttgcacaac atgggggatc atgtaactcg ccttgatcgt 5940

tgggaaccgg agctgaatga agccatacca aacgacgagc gtgacaccac gatgcctgta 6000

gcaatggcaa caacgttgcg caaactatta actggcgaac tacttactct agcttcccgg 6060

caacaattaa tagactggat ggaggcggat aaagttgcag gaccacttct gcgctcggcc 6120

cttccggctg gctggtttat tgctgataaa tctggagccg gtgagcgtgg gtctcgcggt 6180

atcattgcag cactggggcc agatggtaag ccctcccgta tcgtagttat ctacacgacg 6240

gggagtcagg caactatgga tgaacgaaat agacagatcg ctgagatagg tgcctcactg 6300

attaagcatt ggtaactgtc agaccaagtt tactcatata tactttagat tgatttaaaa 6360

cttcattttt aatttaaaag gatctaggtg aagatccttt ttgataatct catgaccaaa 6420

atcccttaac gtgagttttc gttccactga gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga 6480

tcttcttgag atcctttttt tctgcgcgta atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg 6540

ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact 6600

ggcttcagca gagcgcagat accaaatact gttcttctag tgtagccgta gttaggccac 6660

cacttcaaga actctgtagc accgcctaca tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg 6720

gctgctgcca gtggcgataa gtcgtgtctt accgggttgg actcaagacg atagttaccg 6780

gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga 6840

acgacctaca ccgaactgag atacctacag cgtgagctat gagaaagcgc cacgcttccc 6900

gaagagagaa aggcggacag gtatccggta agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg 6960

agggagcttc cagggggaaa cgcctggtat ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc 7020

tgacttgagc gtcgattttt gtgatgctcg tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc 7080

agcaacgcgg cctttttacg gttcctggcc ttttgctggc cttttgctca catgttcttt 7140

cctgcgttat cccctgattc tgtggataac cgtattaccg cctttgagtg agctgatacc 7200

gctcgccgca gccgaacgac cgagcgcagc gagtcagtga gcgaggaagc ggaagagcgc 7260

ccaatacgca aaccgcctct ccccgcgcgt tggccgattc attaatgcag ctggcacgac 7320

aggtttcccg actggaaagc gggcagtgag cgcaacgcaa ttaatgtgag ttagctcact 7380

cattaggcac cccaggcttt acactttatg cttccggctc gtatgttgtg tggaattgtg 7440

agcggataac aatttcacac aggaaacagc tatgaccatg attacgccaa gcgcgcaatt 7500

aaccctcact aaagggaaca aaagctggag ctgcaagctt 7540

Claims (20)

1.一种表达载体，其包含编码Na/K ATP酶/Src受体复合物的多肽拮抗剂的核酸序列，所述编码多肽拮抗剂的核酸可操作连接到用于在特定细胞或组织中表达所述多肽拮抗剂的启动子。

2.权利要求1的表达载体，其中所述多肽拮抗剂包含SEQ ID NO：1的序列或其片段和/或变体。

3.权利要求1的表达载体，其中所述编码多肽拮抗剂的核酸包含SEQ ID NO：5的序列或其片段和/或变体。

4.权利要求1的表达载体，其中所述启动子选自脂联素启动子、白蛋白启动子、黑色素启动子、血管假性血友病因子启动子、α肌球蛋白重链启动子、SGLT2启动子、MyoD启动子、神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)启动子和突触蛋白I(SYN1)启动子。

5.权利要求1的表达载体，其中所述启动子是肝特异性、内皮细胞特异性或脂肪细胞特异性的。

6.权利要求1的表达载体，其中所述表达载体是慢病毒载体。

7.一种病毒粒子，其包含权利要求1的表达载体。

8.一种靶细胞，其包含权利要求1的表达载体。

9.权利要求8的靶细胞，其中所述靶细胞是哺乳动物细胞。

10.权利要求8的靶细胞，其中所述细胞是小鼠细胞或人类细胞。

11.权利要求8的靶细胞，其中所述靶细胞是脂肪细胞、肝细胞或内皮细胞。

12.一种药物组合物，其包含权利要求1的载体和可药用媒剂、载剂或赋形剂。

13.一种治疗Src相关疾病的方法，所述方法包括向需要的对象给药权利要求1的表达载体。

14.权利要求13的方法，其中所述Src相关疾病选自血管疾病、心血管疾病、前列腺癌、乳腺癌、成神经细胞瘤、组织纤维化、缺血/再灌注损伤、骨质疏松症、视网膜病和肥胖症。

15.权利要求14的方法，其中所述Src相关疾病是心血管疾病，并且其中所述心血管疾病是尿毒症心肌病。

16.权利要求14的方法，其中所述Src相关疾病是肥胖症。

17.权利要求13的方法，其中所述多肽拮抗剂包含SEQ ID NO：1的序列或其片段和/或变体。

18.权利要求17的方法，其中所述编码多肽拮抗剂的核酸包含SEQ ID NO：5的序列或其片段和/或变体。

19.权利要求13的方法，其中所述启动子选自脂联素启动子、白蛋白启动子、黑色素启动子、血管假性血友病因子启动子、α肌球蛋白重链启动子、SGLT2启动子、MyoD启动子、神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)启动子和突触蛋白I(SYN1)启动子。

20.权利要求13的方法，其中所述表达载体是慢病毒载体。

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