JP4302188B2 - 胃粘膜下組織由来組織移植片 - Google Patents

Description

発明の分野
本発明は組織移植片組成物およびその製法および使用に関するものである。より詳細には、本発明は胃粘膜下組織を含む非免疫原性組織移植片組成物、および内因性組織増殖を促進するための前記組成物の使用に関するものである。
発明の背景および概要
温血脊椎動物の腸粘膜下層を含む組成物は組織移植片材料として好都合に使用できることは公知である。米国特許第４,９０２,５０８号および第５,２８１,４２２号を参照されたい。これらの特許に記載されている組織移植片組成物は、高破裂圧力点等の優れた機械的特性およびこのような組成物を血管移植片および結合組織移植片構成物として好適に使用できる有効多孔度指数等を特徴とする。このような用途に用いる際、この移植片構成物は、それによって置換された組織を再増殖させる基質として役立つだけでなく、内因性組織のそのような再増殖を促進または誘発する。この再造形プロセスの共通の事象は、広範囲の非常に速い血管新生、顆粒間葉細胞の増殖、移植された腸粘膜下組織材料の生体内分解／吸収、および免疫拒絶反応がないこと等である。
腸粘膜下組織は、その明らかなバイオトロピック特性を損失せずに、粉砕および／または酵素消化による流動化が可能であり、侵襲性のより小さい投与方法（注入または局所的適用等）によって修復を必要とするホスト組織に使用できることも公知である。米国特許第５,２７５,８２６号を参照されたい。
組織移植片として使用するために必要な特性を有するその他の天然および合成材料を見いだすために、更に多くの研究努力が払われてきた。驚くべきことに、温血脊椎動物の胃組織の剥離によって調製される胃粘膜下組織が、腸粘膜下組織で報告されたものと同様な機械的およびバイオトロピック特性を示すことが判明した。それはこれまでの腸粘膜下組織で報告された全部ではないが、大部分の用途において腸粘膜下組織に代わり得る。
本発明の組織移植片組成物は温血脊椎動物の胃組織由来の胃粘膜下組織を含んでなる。胃壁は下記の層、すなわち、粘膜（上皮層、細網状または微細疎性組織からなる固有層、および腺層を含む）、粘膜下層（疎性組織からなり、腺は欠如）、筋層（３層の筋肉からなる）、および漿膜（筋層を覆う疎性結合組織の外側の中皮層）からなる。血管、リンパ組織および神経学的組織も粘膜下層を含む胃組織に広がっている。
本発明による胃粘膜下組織は筋層の腺部分と、外筋（muscularis externa）の平滑筋層とから剥離された胃粘膜下組織を含んでなる。上記組成物は米国特許第５,２７５,８２６号に記載されている腸粘膜下組織に非常に似た様式で結合組織再造形および創傷治癒を誘発する能力を有することが証明された。より詳細には、胃粘膜下組織組成物はin vitroで細胞増殖をおこし、増殖基質材料として用いる際には細胞増殖を助け、異種ホスト種に移植する際、アキレス腱等の結合組織構造の形成および修復を誘発する。胃粘膜下組織は非抗原性であるようにみえ、創傷治癒の成分とみなされるin vivo反応、例えば血管新生、細胞侵潤、細胞外基質の付着、および最後にはホスト組織による移植材料の分解および置換等を引き起こす。本発明の移植片組成物は脊椎動物ホストに移植または注入した時には損傷組織または欠陥組織の修復または置換を誘発し得る。
発明の詳細な説明
本発明による組織移植片組成物は隣接する胃組織層から剥離した温血脊椎動物の胃粘膜下組織を含む。従って、本発明の組織移植片組成物は、温血脊椎動物の胃部分の外筋の平滑筋層と粘膜層の少なくとも管腔部分とから剥離された胃粘膜下組織を含む。一実施態様において、胃粘膜下組織組成物は温血脊椎動物の胃の粘膜下層と粘膜層の基底部分とを含む。一般的には下記の剥離法によって実質上胃粘膜下組織からなる組織組成物が提供される。これらの組成物を本明細書では一般に胃粘膜下組織と呼ぶ。
胃粘膜下組織のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）含有量を分析した。胃粘膜下組織で確認されたＧＡＧの種類は、ヘパリン、コンドロイチン硫酸Ａ、コンドロイチン硫酸Ｂ、およびヒアルロン酸を含む。腸粘膜下組織とは対照的に、ヘパリン硫酸は胃粘膜下組織には見いだされなかった。
胃粘膜下組織のサンプルに存在する水分含有量は組織の剥離後に用いる処理段階によって変化する。ある処理法によると、材料を固体表面に１０分間置くことによって水を自然に「抜いた」。次に、その材料の重量を測定し、材料を絞り機にかけて過剰な水分を除去し、凍結乾燥した。２つの別々の標本で反復測定した結果、水分含量は約８０％から約９４％の範囲であることがわかった。変動の程度は明らかに最初の「湿重量」測定の変動によるものである。しかし胃粘膜下組織の水分含量は８０から９５％の間にあると言ってよい。
本発明の胃粘膜下組織は一般的にはブタ、ウシおよびヒツジを含む食肉生産用に飼育される動物、またはその他の温血脊椎動物から摘出した胃組織から調製される。この組織は普通は食肉加工の副産物として廃棄されるものである。従って、本発明による組織組成物の調製に用いる胃組織の市場における源は安価である。
胃の部分からの胃粘膜下組織の調製は米国特許第４,９０２,５０８号に記載の腸粘膜下組織の製法に類似であり、この開示を本明細書に明白に引用して援用する。胃組織の部分をまず縦方向にふき取ることで剥離し、外側層（特に平滑筋層）および粘膜層の管腔部分を除去する。得られた粘膜下組織は約１００から約２００μｍの厚さを有し、主として（９８％より多くが）無細胞性、好酸性で染まる（Ｈ＆Ｅ染色）細胞外基質材料からなる。血管、および線維細胞と一致する紡錘細胞が組織全体に無秩序に散在することがある。典型的には、粘膜下組織を約２時間水ですすぎ、任意に凍結水和状態で下記のようにして使用するまで保存する。外筋と、粘膜下層の少なくとも管腔部分との両方から粘膜下組織を剥離し、その粘膜下組織をすすぐと、無細胞の胃粘膜下組織基質が得られる。
流動化胃粘膜下組織は米国特許第５,２７５,８２６号に記載される流動化腸粘膜下組織の調製と同様な方法で調製することができ、この開示を本明細書に明白に引用して援用する。粘膜下組織を引裂、切断、摩砕、および剪断などによって粉砕する。凍結または凍結乾燥状態の粘膜下組織を摩砕するのが好ましいが、粘膜下組織片の懸濁液を高速（高剪断）ミキサーで処理し、遠心分離によって脱水し、過剰の水をデカントするという方法によっても同様な好結果が得られる。その上、トリプシンやペプシン等のプロテアーゼ、またはコラゲナーゼまたはグリコサミノグリカナーゼ等のその他の適切な酵素の使用、または酵素混合物の使用を含む胃粘膜下組織の酵素消化を、組織を可溶化し、実質上均質な溶液を形成するのに十分な時間行うという方法で、粉砕した流動化組織を可溶化することができる。
本発明は粉末型胃粘膜下組織の使用も考慮する。一実施態様において、粉末型胃粘膜下組織は、胃粘膜下組織を液体窒素下で粉末化し、０．１から１ｍｍ²の寸法の粒子を形成することによって調製される。次に、その粒子組成物を一晩凍結乾燥し、滅菌して、固体状の実質上無水の粒子組成物を形成する。或いは、粉末型の胃粘膜下組織は、流動化粘膜下組織から、粉砕および／または一部消化された胃粘膜下組織の懸濁液または溶液を乾燥することによって調製することができる。
本発明の胃粘膜下組織組成物は、血管および結合組織の修復等の損傷組織の修復または置換に関する様々な外科的用途に役立つ。本発明の目的の結合組織は、骨、軟骨、筋肉、腱、靭帯、および、皮膚の真皮層を含む線維組織等である。
本発明によると、胃粘膜下組織を用いて、温血脊椎動物の所望部位の内因性組織形成の誘発に役立つ組織移植片組成物が調製される。胃粘膜下組織を含んでなる組成物を脊椎動物ホストに、ホストにおいて損傷組織または疾患組織が存在するために内因性組織増殖を必要とする場所に有効に内因性組織を増殖を誘発させる量を投与することができる。胃粘膜下組織組成物をホストに対して固体またはシート型で、外科的移植のみによって、またはその他の当業者に公知の移植組成物と組み合わせて投与することができ、または流動型にして注入によって投与することができる。
一実施態様によって、本発明のシート型胃粘膜下組織組成物を用いて血管移植片を調製することができる。その移植片の直径はレシピエント血管の直径とほぼ同じであるべきである。これは胃粘膜下組織を操作し、レシピエント血管の直径とほぼ同じ直径を有する円柱の輪郭を作り、その組織移植片を縦方向に縫合または他の方法で固定し、血管移植片を形成することによって実現する。例えば、血管移植片は、レシピエント血管の直径と等しい外側直径を有する滅菌ガラス棒を選択し、そのガラス棒の周囲に胃粘膜下組織シートを巻き付け、過剰な組織はひだを寄せるという方法によって調製することができる。所望する管腔直径を得るためには移植片の長さに沿って縫合するか（例えば２本の連続縫合線または単純な断続縫合線を用いる）、または技術的に公知なその他の組織固定技術を用いる。その血管移植片を標準的血管外科技術を用いて損傷血管または疾患血管に外科的に置換する。
血管移植片材料としての胃粘膜下組織の使用と同様に、胃粘膜下組織は、低多孔度指数および高破裂圧点等の腸粘膜下組織の機械的特性と類似であり、組織移植片材料にとって非常に好ましい機械的特性を有する。当業者は、血管移植片材料が手術中の出血を予防するためには多孔度が十分に低く、しかも、新たに形成される脈管の血管が移植片材料を通して伸びて、管腔表面に栄養を与えるためには十分に多孔度が高くなければならないことを理解するだろう。
この胃粘膜下組織断片を本発明により、米国特許第５,２８１,４２２号および第５,３５２,４６３号に腸粘膜下組織使用に関して記載されている方法と同じ方法を用いて、結合組織の修復または置換に使用する組織移植片構成物として使用することもでき、その開示を本明細書に明白に引用して援用する。胃粘膜下組織組成物は、剥離した自然のままのシート型、またはそれを縦方向または横方向に切断して細長い組織断片に形成することができる。そのような断片は中間部分と、外科的に容認される技術を用いて既存の生理的構造に外科的に結合するように形成された向かい合う末端部分および向かい合う側方部分を有する。
本発明により調製されて、使用される移植片は、移植時に生物学的再造形を受ける。それらは新しい内因性結合組織の支持および増殖のための高速に血管化する基質として役立つ。組織移植片材料として用いる時、胃粘膜下組織はそれが移植環境において付着またはその他の方法で結合するホスト組織のための栄養となることがわかった。移植片材料は再造形されて（吸収され、自原的分化組織で置換される）、移植部位においてそれが結合している組織の特異的特徴を示す。
本出願人は、腸粘膜下組織に関してこれまでに報告したように、胃粘膜下組織も腱および靭帯置換および修復のために用いることができることを期待する。さらに、腱および靭帯置換の用途およびその他の結合組織修復の用途に用いるために、胃粘膜下組織材料は米国特許第５,２７５,８２６号に記載されているように（この開示を本明細書に明白に引用して援用する）、一般的にはその胃粘膜下組織の粘弾性を変化させ、最初に分離したときと比べてその胃粘膜下組織の伸び歪み(strain)を減少させるように調整する。ここに用いる用語「伸び歪み(strain)」とは、組織を負荷をかけて引張ったときに、その組織が破損する前の組織の最大伸び歪み（strain）を言う。それは負荷をかける前の組織の長さのパーセントとして表される。一実施態様によると、温血脊椎動物の粘膜層の管腔部分と外筋の平滑筋層とから剥離された胃粘膜下組織は、たかだか２０％の伸び歪み（strain)を有するように調整される。粘膜下組織は伸長、化学的処理、酵素的処理またはその組織をその他の環境因子に曝すことによって調整される。
一実施態様において、胃粘膜下組織のストリップは、その粘膜下組織を縦方向に伸長して移植片構成物を作成した胃粘膜下組織の長さより長い長さを有する移植片構成物を作成することによって、より詳細には、腸粘膜下組織のストリップが、たかだか２０％の伸び歪み（strain）を有するように縦方向または横方向に引っ張ることによって調整される。
伸長によって組織を「調整」する一方法は、胃粘膜下組織に所定の負荷を３から５サイクルかけることを含む。各サイクルは負荷を移植片材料に５秒間かけた後、１０秒間緩和することからなる。３から５サイクルで、伸び歪み（ｓｔｒａｉｎ）が低下した伸長調整した移植片材料が形成されるだろう。その移植片材料は元の寸法には戻らず、「伸長した」寸法を維持する。例えば、胃粘膜下組織断片をその断片から重りを十分な時間吊るすことによって、２０％未満の伸び歪み（strain）、例えば約１０から約２０％の伸び歪み（strain）を有する組織を形成するように調整することができる。任意に、移植片材料の横方向に伸長することによって予備調整することができる。この移植片材料は縦方向および横方向に同様な粘弾性を示す。
移植片断片は一実施態様により、種々の形状および形態に形成され、例えば靭帯または腱の置換物、または破壊されるか切断された腱または靭帯のための貼剤として役立つ。断片は少なくとも向かい合う末端部分および／または向かい合う側方部分が、骨、腱、靭帯、軟骨および筋肉等への生理的構造付着を補強するために移植片材料の複数の層をもつように、層状または多層形態を有するように形造られ、成形されることができる。靭帯置換に用いる場合には、向かい合う両端を標準的外科的技術を用いて第一および第二の骨にそれぞれ付着させることができる。それらの骨は一般的には膝関節のように関節でつながっている。
胃粘膜下組織組成物の末端部分は、付着点で移植片が引裂かれる可能性が減少するような方法で成形され、処理され、或いは骨構造等に結合するように形造られる。その材料は折り返して、または部分的に反転して、例えばスパイクワッシャー（spiked washer）またはステープルで掴むための多層を提供することができる。
或いは、胃粘膜下組織組成物自体を折り返して両端部分を合わせて、例えば第一の骨に結合させるための第一の結合部分を作り、中間部分にある曲がり目が第一の骨と関節でつながる第二の骨に結合する第二の結合部分を作ることができる。例えば、末端部分の１つは大腿骨のトンネルを通して引張り、そこに付着させてもよく、一方の末端部分は脛骨のトンネルを通して引張り、そこに付着させ、自然の十字靭帯の代替物としてもよい。その断片はトンネル間で張力下に置かれ、靭帯機能、すなわち正常靭帯によってもたらされる引張機能および保持機能を提供する。
胃粘膜下組織の複数のストリップ／細片を重ね合わせ、組織を脱水させるような条件下で加圧して胃粘膜下組織のストリップ／細片を融合し、単一の多層構成物にすることができる。米特許出願０８／４１８,５１５（この開示は本明細書に明白に引用して援用する）に記載の腸粘膜下構成物の作成プロセスが胃粘膜下組織にも適用でき、このプロセスを用いて胃粘膜下組織の多層構成物が作成できると期待される。
本発明の胃粘膜下組織組成物は、グルタルアルデヒドなめし、酸性ｐＨにおけるホルムアルデヒドなめし、エチレンオキシド処理、プロピレンオキシド処理、ガスプラズマ滅菌、ガンマ照射および過酢酸滅菌等の従来の滅菌技術を用いて滅菌できる。移植片の機械的強度、およびバイオトロピック特性を著しく弱めない滅菌技術が好ましい。例えば、強力なガンマ照射は移植片材料の強度低下をおこすと考えられている。胃粘膜下組織から形成される移植片構成物の最も魅力的な特徴の一つはそれらがホスト−再造形反応を誘発する可能性であるから、その特性を弱める滅菌法を用いないことが好ましい。好適滅菌技術は移植片を過酢酸、少量のガンマ照射（≦２．５ｍＲａｄ）およびガスプラズマ滅菌に曝すことを含み、過酢酸滅菌が最も好適な方法である。一般的には組織移植片組成物を滅菌した後、その組成物を無孔性プラスチックラップに包み、再びエチレンオキシドまたはガンマ照射滅菌技術を用いて滅菌する。
本発明の胃粘膜下組織組成物は、本発明によってin vitroにて培養した真核細胞の増殖を補助し、分化を誘発するための方法および組成物にも用いることができる。細胞のin vitro培養のために粘膜下組織を用いる方法は米国特許出願第０８／３８６，４５２に記載されており、その開示を本明細書に明白に引用して援用する。一般に、その方法はin vitroで真核細胞と脊椎動物の胃粘膜下組織由来基質とを、真核細胞増殖に導く条件下で接触させる段階を含む。
一実施態様においては真核細胞培養基質を粘膜下組織を含めて調製する。その粘膜下組織と、当業者には細胞培養に重要であることが公知である種々の栄養素、増殖因子、ミネラルおよび塩類とを組み合わせることができる。細胞培養に関してここに用いる用語「接触」とは、粘膜下組織と培養細胞の直接的および間接的接触、例えば液体連通等、を両方含むものとする。ここに用いる用語「真核細胞増殖に導く条件」とは、現在使用できる細胞培養法で真核細胞増殖のために最適と考えられる滅菌技術、温度および栄養供給等の環境的条件を指す。真核細胞培養に用いられる最適細胞培養条件はある程度は特定の細胞型に依存するとはいえ、一般的に細胞増殖条件は技術的にはよく知られている。
更に、胃粘膜下組織を現在使用できる細胞培養培地と組み合わせて、種々の細胞型の成長、増殖および分化を誘発するこのような培地の効果を向上させることができる。
例１
胃粘膜下組織の作成
本発明の組織移植片材料は下記の段階によって作成される。
まず、胃を胃の入口および出口点でそれぞれ食道および小腸を切断することによって動物源から切り離す。過剰の腸間膜組織または脂肪を胃から除去し、胃の内容物を排出し、流水（水道水）ですすいで胃の内側から残りの残留物を全て除去する。次に、胃を反転して胃の内側層を露出させる。胃の入口または出口点を形成し始める胃の部分を除去する。一般的には胃を全体のままにしておくが、不要組織を除去する前に切断したり平らにすることもできる。
胃の管腔表面を鋏または止血鉗子のハンドル部分を用いて剥離し、粘膜層の少なくとも管腔部分を含む胃の内層をこすり落とす。この時点で薄い残留層が残る。組織を全体のままにしておいた場合、胃組織を再び反転させ、胃の管腔表面を移植片構成物の内側に戻す。次に、外側筋肉線維層に小さい切りこみを作成した後、筋肉層を鋏または止血鉗子を用いて膜下組織から剥離し、筋肉の切りこみを広げ、筋肉層をこすり落とす。残存する組織を再び反転させ、管腔側を組織移植片の外側にする。管腔表面をこすり落とし、茶色を帯びた残りの内側残留物を除去する。その胃組織を桃白色になるまでこすり落とす。
この胃組織の作成中は、その組織に水を定期的に加えて、組織水分を保持するように留意する。胃粘膜下組織を流水（水道水）で約２時間すすぎ、全ての血液または組織剥離物を除去し、残存する細胞を溶解させる。すすいだ後、組織は白色に見えるはずであり、組織が桃色を帯びている場合、組織が白く見えるまで組織をこする。すすぎ終わった後、その組織を手で、または機械的リンガー（ringer）を用いて過剰の水を除去し、その組織を−８０℃の液体窒素中に保存する。
例２
胃粘膜下組織の機械的特性
胃粘膜下組織生体材料の機械的特性を次の２種類のベンチトップ試験を用いて評価した（「ウェットダイヤフラム破裂試験」および「球破裂試験」）。
ウェットダイヤフラム破裂試験は、材料を開口部に置き、周囲の環によって保持された粘膜下組織からなる「ダイヤフラム」を作成することを含んでなる。材料の一端に水圧を破損点までかける。各材料の１０個の別々の試験サンプルから集積したデータを表１に示し、腸粘膜下組織、膀胱粘膜下組織および胃粘膜下組織のウェットダイヤフラム破裂試験結果を比較する。表中、用語「培地中（in medium）」および「凍結状態（Frozen）」は、材料を摘出後、試験前まで保存した方法を示す。

胃粘膜下組織移植片の強度は材料試験装置（ＭＴＳ）引張試験器を用いて測定することもできる。胃粘膜下組織シートは円形クランプ（標本クランプ）内に、組織シート全体に圧力が均一に分散するように固定される。クランプの押さえる部分が試験標本を受け取ることができるように標本クランプのハンドルをその最上部の位置まで上げる。標本クランプに適合するように粘膜下組織構成物を切断する。クランプの開口部の直径は１と9/16インチ（４ｃｍ）である。十分なクランプ留め領域を確保するためには過剰材料の約１.３−１.５ｃｍが試験標本周囲に含まなければならない。粘膜下組織はクランプの押さえる部分に固定され、クランプの力は最上部のクランプに位置するつまみ手段で制御される。
最初の取り付け具のレベルは、鋼製の球の最上部が試験標本の面の真下にくるように設定される。その金属球を、クランプ留めされている粘膜下組織に対し、制御された速度で押し上げ、引張試験器ソフトウェアインターフェースを用いて試験標本にかかる力を制御し、測定した。標本の破損が起きるまでその力を増加させる。破損は、目で確認して標本面が不自然に切れて、球が最初に現れた時の最大負荷と定義される。破損前に取り付け具の最上部の位置に到達した場合は、ソフトウェア制限が作動して試験を中止する。マイクロプロファイラー（Microprofiler）４５８.０１に示されるピーク負荷値を記録し、標本を取り外す。表２は球破裂試験の集積データについて、３種類の粘膜下組織原料、すなわち腸粘膜下組織、膀胱粘膜下組織および胃粘膜下組織を比較したものである。これらの結果は、胃粘膜下組織がこれら３種類の生体材料の中で最も強度が高いことを示す。

例３
In vivo再造形
犬の切除した膀胱部分を置換するために胃粘膜下組織断片を支持体として用いて２つの実験を行った。１匹の動物は３週間後に殺し、他の動物は６週間後に殺した。再造形組織の形態学的評価により、移行性上皮が胃粘膜下組織支持体表面全体に成長し、生体支持体内に平滑筋細胞が存在することが判明した。残存する胃粘膜下組織の有無を確認する確定的方法がなかったため、胃粘膜下組織分解の程度および／または範囲をこれらの実験から決定することはできない。
例４
胃粘膜下組織のin vitro細胞増殖性
胃粘膜下組織が細胞外基質としてin vitro細胞増殖を補助する能力を、標準的細胞培養条件下で胃粘膜下組織表面に数種類の細胞型を適用することによって試験した。
試験した細胞型は３Ｔ３線維芽細胞、腸上皮細胞およびＦＲ（ラット胎児）間葉細胞を含んだ。全ての３種類の細胞型は、プラスチック表面で増殖する場合には必要と思われる補助剤を添加しなくても、この細胞外基質上で容易に増殖する能力を示した。従って、その材料は細胞増殖を補助するための細胞培養基質として役立つ必要な構造および組成物「栄養素」を含むと結論づけることができる。

Claims (13)

1. 温血脊椎動物の胃の粘膜層の管腔部分と外筋の平滑筋層との両方から剥離された胃粘膜下組織含む組成物。
2. 前記胃粘膜下組織が流動化された請求項１記載の組成物。
3. 前記胃粘膜下組織が可溶化され、実質上均質な溶液を作るために十分な時間、酵素で消化された請求項１記載の組成物。
4. 前記胃粘膜下組織が乾燥され、粉末型である請求項２記載の組成物。
5. 所定の管腔直径を有する円柱に成形され、前記円柱の長さに沿って縫合された請求項１記載の組成物。
6. 結合組織置換物として使用するために前記分離した胃粘膜下組織の前述の伸び歪み（strain）を低減するように調整した請求項１記載の組成物。
7. 前記胃粘膜下組織を引張り、少なくとも一方向においては元の胃粘膜下組織より長い移植片構成物が生成するように調整した請求項６記載の組成物。
8. 温血脊椎動物に移植した際に内因性組織増殖の誘発に役立つ組織移植片構成物を調製するための、温血脊椎動物の胃の粘膜層の管腔部分と外筋の平滑筋層との両方から剥離した胃粘膜下組織の使用。
9. 前記胃粘膜下組織が流動型である請求項８記載の使用。
10. 前記胃粘膜下組織が粉末型である請求項８記載の使用。
11. 温血脊椎動物の内因性組織増殖を必要とする部位に内因性組織の形成を誘発するための組織移植片構成物を調製するための、胃粘膜下組織を含む組成物の使用。
12. 前記胃粘膜下組織が流動化され、注入によって前記温血脊椎動物に投与される請求項１１記載の使用。
13. 前記胃粘膜下組織が前記温血脊椎動物に外科的に移植されることによって投与される請求項１２記載の使用。