CN101686728B - 含有人参浆果提取物的皮肤外用组合物 - Google Patents

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Abstract

本文公开了含有人参浆果提取物的皮肤外用组合物。尤其是，公开了皮肤外用组合物，该组合物含有作为活性成分的、在人参地上部分的、具有特定组分和组成的人参浆果提取物，该组合物由于具有抗氧化剂作用和DNA损伤的保护作用从而能够促进皮肤胶原蛋白的产生，并显示了MMP-1的抑制作用，同时还具有皮肤老化的抑制作用和减少皱纹的作用。还公开了皮肤外用组合物，该组合物含有作为活性成分的人参浆果提取物，该组合物由于能够抑制UV辐射引起的黑色素产生和减少色素沉着作用，而具有皮肤增白作用；由于能够通过诱导和保持皮肤角质形成细胞的正常分化而具有抑制皮肤干燥症状和过敏症状的作用；由于能够通过添加皮脂的分泌和消炎作用而具有减轻痤疮和皮肤病的作用；由于能够通过改善全身血液循环使皮肤清洁清爽而使肤色变红润。还公开了用于减轻和预防肥胖的食品组合物，该食品组合物含有作为活性成分的人参浆果提取物，该食品组合物能够增加肉毒碱棕榈酰转移酶-1(CPT-1)基因的表达，可用于在脂肪酸氧化时将脂肪酸输送到线粒体内并促进脂肪的氧化。

Description

含有人参浆果提取物的皮肤外用组合物
技术领域
本发明涉及含有人参果(或人参浆果)提取物的皮肤外用组合物，尤其是涉及含有作为活性成分的、在人参地上部分中的、具有特定成分和组成的人参浆果提取物的皮肤外用组合物，该组合物由于具有抗氧化剂作用和DNA损坏的保护作用，因此促进了皮肤中胶原蛋白的产生，显示出MMP-1的抑制作用，并同时具有抑制皮肤老化和减少皱纹的作用。
此外，本发明涉及含有作为活性成分的人参浆果提取物的皮肤外用组合物，该组合物具有由抑制黑色素产生和减少由UV辐射引起的色素沉着而产生的增白作用、通过诱导并保持皮肤角质形成细胞的正常变异而减轻皮肤干燥症状和过敏反应症状的作用、通过调节皮脂分泌来减轻痤疮和皮肤病的作用以及消炎作用，并通过改善周边血液循环使皮肤清洁和清爽，而使面色红润。
另外，本发明提供了用于减轻和预防肥胖的食品组合物，该组合物含有作为活性成分的人参浆果提取物，该组合物增强了肉毒碱棕榈酰转移酶-1(CPT-1)基因的表达，所述肉毒碱棕榈酰转移酶-1用于在脂肪酸氧化时将脂肪酸输送到线粒体内并促进脂肪氧化。
背景技术
人参属人参C.A.Meyer是属于五加科、人参属的植物，而且是在韩国、中国、日本等国为防止疾病并延年益寿在约2000年前已使用的草药。迄今为止，人参的作用包括：对于中枢神经系统的作用、防癌作用(anti-carcinogenic action)、抗癌活性(anticancer activity)、免疫功能调节作用、抗糖尿病作用、改善肝功能作用、缓解心血管疾病和抗动脉粥样硬化作用、控制血压作用、减轻更年期失调和骨质疏松、减压及抗疲劳作用、抗氧化剂活性和老化抑制作用(Korean Ginseng，″components and effects″，theKorea Ginseng Research Institute，56-112，1996)。
已知人参皂苷是典型的人参的生理学活性成分，它均匀分布在人参的地上和地下部分，并且人参皂苷的含量和组成随包括人参根部、人参叶子和人参浆果的人参的部分而改变(Attele AS et al，Biochem Pharmacol，58；1685-1693，1999)。特别是，据报道，由于人参浆果的成分和含量与人参根部不同，因此其显示出比人参根部更好的作用(Dey L.et al.，Phytomedicine，10；600-605，2003)。
最近，随着用户对天然化妆品产品兴趣的增加、而且许多含有中药物质的化妆品产品已上市，也研究了人参作为具有对皮肤有重要作用的化妆品的植物原料。然而，大多数这种研究涉及人参根部提取物或者人参皂苷与人参多糖的应用，还没有研究人参浆果成分对于抑制皮肤老化和减少皱纹的作用。
而且，人们认为人参浆果比人参更有价值，而且已选择性地收获以得到种子。在栽培人参的过程中，仅仅从4年的人参植物上才能收获一次人参种子，而且如果3年收获的话，则很难产生良好的幼苗，因为收获的种子太小。如果可以收集5年或5年以上的人参植物的人参种子，那么收获的种子很饱满很好，但抑制了人参根部的生长，且根部组织不密集，因此由根部制成的红参的品质会很大地降低。另外，如果在栽培人参的过程中，收获两次或更多次人参种子，红参的产量和质量都会大大降低(Korean Ginseng，″Cultivation″，the Korea Ginseng Research Institute，130-131，1996)。
美国专利No.6524626公开了一种化妆品组合物，该组合物含有冻干的人参浆果汁，并公开了人参浆果汁与其它天然物质的组合显示出增湿或软化皮肤的作用。然而，该专利中公开的该作用很清楚地有别于本发明人参浆果提取物的皮肤老化抑制作用和减少皱纹作用。
由于各种内部和外部因素，人体皮肤经历了随年龄的变化。关于内在因素，调节代谢的各种激素的分泌降低，而且免疫细胞的功能和细胞的活性降低，因此降低了在生物体内所需要的免疫蛋白和生物蛋白的生物合成。关于外在因素，因为由臭氧层空洞而达到地球表面的紫外光量增加、以及环境污染变得更为严重，因此自由基和活性氧簇的增加导致了各种变化，包括皮肤厚度增加、皱纹增加、弹性降低、肤色变暗、皮肤病频繁出现，并增加了黑斑病、雀斑和老年斑。
随着老化的发展，发生了诸如胶原蛋白、弹性蛋白、透明质酸和糖蛋白在内的皮肤成分的含量和配置改变或降低的症状，而且通过自由基和活性氧簇使皮肤受到了氧化应激。已知，随着老化的发展或通过紫外光，在构成皮肤的大多数细胞中，已知会引起炎症的能够产生促炎症反应细胞因子(cytokines)的环氧合酶-2(Cox-2)的生物合成增加；由于这些炎症因子间质金属蛋白(MMP)的生物合成增加；并且由可诱导的氮氧化物合酶(iNOS)产生的氮氧化物(NO)的产生增加。也就是说，由于由自然发展的内在老化引起细胞活性的降低，因此间质金属蛋白(MMP)的生物合成降低，而且由于由各种有害的环境引起的诸如应激的增加和活性氧簇的增加在内的外在因素，因此加速了微炎症反应(microinflammation)、降解和退化，使得皮肤基体被破坏而且变薄，同时出现各种皮肤老化症状。因此，已进行了许多对于能预防并减轻这种老化现象的活性成分的研究。
多种因素都与人皮肤颜色的确定有关，其中，产生黑色素的黑色素细胞的活性、血管的分布、皮肤的厚度、以及在人体中存在或不存在诸如类胡萝卜素和胆红素在内的色素是很重要的。
其中，最重要的因素是由如人体黑色素细胞中酪氨酸酶在内的各种酶的作用而产生的黑颜色的黑色素。黑色素的产生受以下因素的影响：遗传因素、与激素的分泌和应激有关的生理因素、以及诸如紫外线辐射的环境因素。
人体黑色素细胞产生的黑色素是黑颜色的色素/蛋白质复合物形式的酚聚合物，并通过阻挡紫外线辐射而具有保护真皮下的皮肤组织不受太阳损害的有益功能以及从皮肤中捕获自由基的功能，因此保护了皮肤中的蛋白质和基因。
由于如上所述的内在和外在应激反应的原因而在皮肤内产生的黑色素是稳定的物质，即使当应激反应消失时，黑色素在通过皮肤角质化而释放到外部之前是不会出现的。然而，如果黑色素的产生比需要的更多，那么就诱导了诸如雀斑和斑点在内的色素沉着过多(hyperpigmentation)，导致在美丽的方面很不利的结果。
目前，东方国家的妇女喜欢像白色宝石一样的白色清洁的皮肤，并将这种皮肤作为很重要的美丽的标准。为此原因，解决色素沉着过多的治疗和化妆问题的要求日益增加。
为了满足这种要求，已将维生素C、曲酸、熊果苷、氢醌、谷胱甘肽、它们的衍生物、或具有酪氨酸酶抑制活性的物质用于化妆品或药物。然而，在将它们加入到化妆产品中时，由于增白效果不足、皮肤安全性问题、以及制剂和稳定性问题，它们的应用受到了限制。
皮肤最外层表皮的最重要的功能是保护皮肤不受各种外界刺激(物理和化学刺激，如化学品、污染物、干燥的环境和紫外光)的影响，并防止水分通过皮肤的过度损失。只有正常形成构成角化细胞的角质层(角质层)时，才能保持这种保护功能。处于表皮最外层的角质层由角质形成细胞形成，并由通过脂质层围绕的末端分化型角质形成细胞(keratinocyte)构成(J.Invest.Dermatol.，1983；80：44-49)。角质形成细胞是在如下的过程中产生的细胞：在表皮的最低层中连续增殖的基底细胞(basal cell)向皮肤表面的移动，同时它们经历了一系列的结构和功能的变化。一段时间以后，旧的角质形成细胞从皮肤上脱落，并由新的角质形成细胞代替。这种重复的过程称为“表皮细胞的分化”或“角质化”。在角质化过程中，角质形成细胞形成了角质层，同时它们产生了天然的增湿因子(NMFs)和细胞内脂质(神经酰胺、胆固醇和脂肪)，使得角质层具有作为皮肤阻挡层的稳固性或柔软性。
然而，由于生活方式因素(如过多地洗脸或洗澡)、环境因素(如干燥的空气或污染物)和内部疾病(如过敏性皮肤或衰老的皮肤)。事实上，由于最近增加的各种因素，患有皮肤干燥症和因此引起的各种失调的人在逐渐增加。因此，为保持皮肤水分处于合适的水平，进行了着眼于供给外部水分或防止水分从身体中流失的许多研究。实际上，已开发出各种具有水分保持性能的增湿剂的种类，并主要应用于化妆品领域。
然而，当生活环境中对人有害的因素逐渐增加且老龄化的人口迅速增加时，角质层的转换速度变得很慢，而且角质形成细胞的脂质合成能力降低，或者表皮中细胞的分裂、生长和分化不平稳。因此，皮肤中增湿因子和脂类的量减少从而不能保持角质层的功能(即不能保持皮肤阻挡层功能)的人逐渐增加。
由于表皮细胞的异常分裂和分化，各种皮肤疾病(包括皮肤干燥症、过敏症和牛皮癣)就会发生。使用常规的仅具有水分保持能力的增湿剂，这些疾病会轻微地减轻，但很难期望这些疾病得到根本治愈。
在包括头皮和面部的皮肤中，皮脂一般会起到保持皮肤水分并防止微生物侵入的作用。然而，如果过度分泌皮脂，会刺激脱发、痤疮恶化、促使卵泡囊扩大，而且产生溢脂性皮炎。
这种过度的皮脂分泌是由多种因素引起的，关于最重要的因素，皮脂腺细胞是通过二氢睾酮(DHT)(它是涉及促进皮脂分泌的激素)的量来活化的，因此过多地分泌了皮脂。也就是说，在脱发中，睾酮(T)通过细胞中的5-α-还原酶2型而转化为二氢睾酮，同时结合到细胞质中的受体并进入细胞核，因此引起脱发。然而，在皮肤或皮脂腺中，睾酮通过5-α-还原酶1型转化为二氢睾酮，以活化皮脂腺细胞并刺激细胞分化，因此皮脂腺中的浆液被过度分泌，因此产生痤疮(J.Invest Dermatol 105：209-214Diane etc)。
除了单纯的皮脂过度分泌，还有由皮肤上细小炎症反应而恶化的皮肤病如痤疮和脱发。在痤疮产生的过程中，过度的皮脂堆积在毛囊内，活化了短小棒状杆菌(Propionibacterium acnes)并引起炎症。
因为本发明的人参浆果提取物具有消炎作用以及优异的抗氧化作用，因此在细胞炎症反应中它抑制了前列腺素类(尤其是前列腺素(PGE2))的产生，并通过iNOS抑制了促炎症反应因子NO(氮氧化物)的产生，因此减轻了由皮脂过度分泌产生的如痤疮的皮肤病。
然而，这种从根本上减少了皮脂的分泌、并且同时减轻了炎症作用的对皮肤安全的天然物质并不丰富。
同时，肥胖涉及基于遗传因素或生活方式因素的能量摄入和消耗保持平衡的条件，过多的能量堆积成脂肪，由此引起异常增加的体脂肪并引起异常的代谢。肥胖不仅在西欧(在那里将肉作为基本食物)是严重的健康问题，在韩国也是，并且肥胖在社会层面或精神方面对个体有影响，此外，它是增加高血压、高血脂、动脉硬化、心脏病、糖尿病等风险的主要因素。已知30-40％的现代人患有肥胖，并且在发达国家，总健康经费的2-7％都归于超重和肥胖。在韩国，在健康护理系统内外的肥胖的社会经济学费用，在1998年为约1,001,700,000,000圆(韩国货币)，并增长至约1,800,000,000,000圆(韩国货币)。如果保持肥胖的现有增加速度，则预期肥胖的社会经济学费用会持续增加。
根据来自2005年Korean National Health and Nutrition Survey(韩国国家健康和营养调查)的数据，肥胖的流行(超过20岁)占总数的31.8％，男性35.2％，女性28.3％。比较1998和2001年的数据它是增长的，而且认为该增长主要归于饮食习惯的西方化(脂肪能量的比例超过20％)，酒精消费的增加，生活方式改变，如不吃早餐等(Korea Food and Drug Administration(韩国食品药品管理局)，2005年Korean National Health and Nutrition Survey，Nutrition Survey，“韩国人吃什么食物、吃多少、怎样吃”)。
在各国家已经积极研究治疗和预防肥胖的各种方法，这些方法包括通过抑制食物摄入(饮食限制治疗、低能量饮食治疗、非常低能量的饮食治疗以及禁食治疗)而减少能量消耗的饮食治疗、通过锻炼而消耗能量的锻炼治疗、心理治疗(Behavior Modification Therapy(行为矫正治疗)和认知行为治疗)、使用能量代谢促进剂的药物治疗、食欲抑制药、消化和吸收抑制药等、以及外科手术治疗(如切除部分器官或吸脂术)。其中，饮食治疗和锻炼治疗都是治疗肥胖的根本方法。而且，在肥胖的饮食治疗中，认为优选使用低能量饮食、确保蛋白质需求、脂质最小化、剩余的是碳水化合物，而且优选低GI的碳水化合物。
涉及肥胖的现有专利申请的数量是按以下顺序排列的，抑制糖类吸收的(调节消化)发明、调节身体内堆积的体脂肪代谢(抑制体脂肪)的发明、抑制脂肪吸收的发明、以及控制食欲的发明。其中，抑制糖类吸收(调节消化)发明的例子是PCT国际申请No.PCT/US01/31860，标题为“用于治疗2型糖尿病和肥胖的人参浆果提取物和来自人参浆果的药物组合物”。然而，抑制糖类吸收的该方法存在一个问题，即，停止该方法时，就会出现体重再次增加的反弹现象。因此，急迫地需要开发促使体重降低的方法。
因此，考虑到由肥胖引起的各种疾病，减少脂肪体比简单降低体重更重要。当考虑到优选找到能降低摄入脂肪的堆积并活化脂肪氧化的方法时，研究能增加脂肪酸β氧化的方法是治疗肥胖的良好目标。尤其是，脂肪酸代谢可以通过调节CPT-1的表达来促进，CPT-1是决定脂肪酸β氧化速率的主要的酶(McCarty，Medical Hypotheses 57(3)：324-336，2001)。
因此，需要开发新型的中性物质，它具有降低体脂肪的优异效果、还可有效地降低体重。
发明内容
因此，本发明的发明人使用具有人参地上部分的人参浆果研究了对皮肤有作用的化妆品产品，结果发明人发现，由于其成分和组成不同于一般的人参和红参，因此来自人参浆果的提取物对皮肤有作用，由此完成了本发明。
另外，本发明进行了研究以寻找能够增加CPT-1基因表达的天然物质，使用了人参地上部分的人参浆果、还使用了人参地下部分的人参根部，所述CPT-1基因是决定脂肪酸氧化速率的酶，结果发明人发现，由于其成分和组成不同于一般的人参和红参，因此来自人参浆果的提取物对降低体脂肪有作用，由此完成了本发明。
因此，本发明的目的是从人参浆果中制备得到具有抗氧化作用、促进胶原蛋白产生作用和MMP-1抑制作用的人参浆果提取物，并提供用于抑制皮肤老化并减少皮肤皱纹的皮肤外用组合物，该组合物含有所制得的提取物作为活性成分。
本发明的另一个目的是提供用于皮肤增白的外用组合物，该组合物含有人参浆果提取物作为活性成分，并因此通过抑制黑色素的产生并降低色素沉着而显示出皮肤增白作用。
本发明的另一个目的是提供用于使皮肤增湿或减少过敏症状的皮肤外用组合物，该组合物含有人参浆果提取物作为活性成分，并因此通过诱导和保持表皮角质形成细胞的正常分化而具有能够使皮肤增湿和减少过敏症状的作用。
本发明的另一个目的是提供用于消炎的皮肤外用组合物，该组合物含有人参浆果提取物作为活性成分，并因此通过显示出皮脂调整作用和消炎作用(即通过抑制炎症因素的产生)，来减轻包括痤疮在内的皮肤病。
本发明的另一个目的是提供改善皮肤肤色的皮肤外用组合物，该组合物含有人参浆果提取物作为活性成分，并因此显示出改善皮肤血管舒张和血液循环的作用、而且使皮肤干净、清爽。
本发明的另一个目的是提供健康的功能食品组合物，该组合物可以增加CPT-1基因的表达，以刺激体脂肪的降解代谢并防止和减轻肥胖，该CPT-1基因是决定脂肪氧化速率的酶的基因。
为了达到上述目的，在一方面，本发明提供了用于抑制皮肤老化和减少皱纹的皮肤外用组合物，该组合物含有人参浆果提取物作为活性组分。
在另一方面，本发明提供了用于增白的皮肤外用组合物，该组合物含有人参浆果作为活性成分，并通过抑制黑色素产生和减少色素沉着获得增白作用。
在另一方面，本发明提供了用于使皮肤增湿并减轻过敏症状的皮肤外用组合物，该组合物含有人参浆果提取物作为活性成分，并因此通过保持表皮角质形成细胞的正常分化而显示出使皮肤增湿并减轻过敏症状的作用。
在另一方面，本发明提供了用于消炎的皮肤外用组合物，该组合物含有人参浆果提取物作为活性成分，且因此具有通过调节炎症反应而调节皮脂的作用和减轻痤疮和皮肤病的作用。
在另一方面，本发明提供了用于改善皮肤肤色的皮肤外用组合物，该组合物含有人参浆果提取物作为活性成分，且因此刺激了周边血液循环而改善了皮肤的血液流动，因此使皮肤肤色红润。
在另一方面，本发明提供了用于预防并减轻肥胖的食品组合物，该组合物含有人参浆果提取物作为活性成分。
在另一方面，本发明提供了用于促进脂肪细胞内的中性脂肪降解的食品组合物，该组合物含有人参浆果提取物作为活性成分。
根据本发明，可以提供皮肤外用组合物，该组合物含有作为活性成分的人参浆果提取物，该提取物具有与人参根部不同的成分和组成，且因此具有抑制皮肤老化、减少皱纹、增白、使皮肤增湿、减轻过敏症状和减轻痤疮和皮肤病的作用。
另外，本发明的用于预防和减轻肥胖的食品组合物增加了L-肉毒碱棕榈酰转移酶(CPT-1)基因的表达，该CPT-1基因是脂肪酸降解途径的主要的酶，而且在脂肪酸氧化时它起到输送脂肪酸至线粒体内的作用、并促进了脂肪酸的氧化。因此，它具有抑制和预防肥胖的优良作用。
附图说明
图1为显示了实施例1的人参浆果提取物和对比例1的人参提取物的人参皂苷分析结果的图。
图2为显示了测试物质的活性氧簇去除活性(removal activity)的图。
图3为显示了实施例1的人参浆果提取物产生胶原蛋白的测量结果的图。
图4为显示了实施例1的人参浆果提取物的MMP-1生物合成抑制作用的测量结果的图。
图5为显示了比较实施例1的人参浆果提取物与红参提取物之间的一氧化氮抑制作用的图。
图6为显示了通过实施例1的人参浆果提取物而产生NO的图。
图7为显示了通过红参提取物产生NO的图。
图8为显示了实施例1的人参浆果提取物与对比例2的红参提取物的分解脂肪作用的图。
图9为显示了在摄入人参浆果提取物或红参提取物以及高脂肪饮食8周的过程中重量变化的图。
图10为显示了在摄入人参浆果提取物或红参提取物以及高脂肪饮食8周后所提取的附睾脂肪重量的图。
图11显示了在摄入人参浆果提取物或红参提取物以及高脂肪饮食8周后进行的RT-PCR以检验肝内CPT-1表达的结果。
图12为显示了对图11的结果进行光密度计量定量化的结果的图。
具体实施方式
下文中，将进一步详细描述本发明。
通过在日光下或热空气中干燥去籽的人参浆果的果肉和果皮，然后用水或乙醇萃取干燥后的物质，来制备用于本发明的人参浆果提取物。尤其是，可以通过但不限于下列的步骤来制备人参浆果提取物：
1)干燥人参浆果的果肉和果皮；以及
2)向步骤1)中得到的干燥后的物质中添加水或乙醇，在回流下萃取溶液，过滤萃取物并在减压下浓缩滤液。
在本发明中，根据皮肤外用组合物剂型，基于皮肤外用组合物的总重量，所述人参浆果提取物的添加量可以为0.001-50重量％。优选地，考虑其效果，所述人参浆果提取物的添加量超过0.001重量％，且考虑到皮肤外用组合物的剂型，所述人参浆果提取物的添加量不超过50重量％。
本发明的化妆品组合物含有化妆品上或皮肤病学上可接受的基质或基体。所述化妆品组合物可以为适合于局部使用的剂型，例如溶液剂(solution)、凝胶剂(gels)、固体剂(solids)、膏剂(pastes)、通过将油相分散到水相中获得的乳液剂、悬浮剂(suspensions)、微乳剂(microemulsions)、微囊剂(microcapsules)或微颗粒剂(microgranules)、离子(脂质体)和非离子分散液或霜剂、润肤液(skin lotion)、粉末剂(powder)、软膏(ointment)、粉末(powder)、喷雾剂(spray)或贴剂(stick)。这些组合物可以根据任何本领域已知的常规方法来制备。本发明的组合物还可以以泡沫的形式或还含有压缩的推进剂的气溶胶组合物的形式来使用。
本发明的化妆品组合物可以含有常规用于化妆品或皮肤病学领域的添加剂，包括脂肪物质、有机溶剂、增溶剂、浓缩剂、胶凝剂、软化剂、抗氧化剂、悬浮剂、稳定剂、发泡剂、芳香剂、表面活性剂、水、离子或非离子乳化剂、填料、掩蔽剂(sequestering agent)、螯合剂、防腐剂、维生素、阻滞剂、湿润剂、香精油(essential oil)、染料、颜料、亲水或亲脂的活化剂、脂囊泡(lipoid vesicle)、或常规用于化妆品产品的其它成分。以一般用于化妆品或皮肤病学领域的量来加入添加剂。
在含有人参浆果提取物的本发明皮肤外用组合物剂型上没有限定具体的配方，该组合物可以配制成化妆品产品，例如润肤液(skin lotion)、收敛水(astringent lotion)、乳液(milk lotion)、营养霜(nourishing cream)、按摩霜(message cream)、精华素(essence)、眼霜(eye cream)、眼部精华素(eye essence)、清洁霜(cleaning cream)、清洁泡沫(cleansing foam)、清洁水(cleansing water)、涂敷剂(pack)、粉末(powder)、身体乳液(body lotion)、身体霜(body cream)、身体油(body oil)或身体精华素(body essence)。
由于由摄取营养不均衡引起未消耗热量的堆积，由能量代谢不均衡产生的肠道酶分解脂肪能力的降低，作为体脂肪降解酶的瘦蛋白(leptin)分泌的减少，涉及身体内堆积脂肪的氧化的肾上腺素受体的缺乏，以及由遗传因素和结构引起体脂肪的堆积，而产生肥胖。
作为进入细胞的脂肪结构组分的脂肪酸(在细胞中经受β氧化、TCA循环和氧化磷酸化作用)，消耗大量的氧产生ATP，并转变成容易用作能量的形式。然而，因为脂肪酸是大分子，因此它不能通过线粒体膜。当长链脂肪酸进行下列三个连续的生化酶反应时，虽然进入血液细胞溶质中的长链脂肪酸不能通过线粒体膜，但却能进入线粒体：
(1)存在于细胞溶质中的长链脂肪酸通过存在于线粒体外膜的酰基辅酶A合成酶，在脂肪酸的羧基与辅酶A的硫羟基之间形成硫羟酸酯键(thiolester linkage)。产生的脂肪酰基辅酶A具有作为乙酰辅酶A的高能量化合物的性质。
(2)在线粒体外膜形成的脂肪酰基辅酶A酯，不能通过线粒体内膜。为了输送脂肪酸至线粒体，存在于线粒体内膜外表面的CPT-1，催化了辅酶A的脂肪酰基向肉毒碱的酯基转移作用。所产生的脂肪酰基肉毒碱通过酰基肉毒碱/肉毒碱转运载体(transporter)，由于促进扩散(facilitated diffusion)穿过线粒体内膜而进入基质。
(3)通过肉毒碱酰基转移酶II，将脂肪酰基肉毒碱转化为脂肪酰基辅酶。
通过该三个步骤进入的脂肪酸，通过β氧化被转化为乙酰辅酶A，并且乙酰辅酶A被转化为作为最终产物的电子和CO2，其中，所产生的电子通过呼吸链过程产生ATP(Lehninger et al.，Principles of Biochemistry：479-505，1993)。
用于本发明的人参浆果提取物起到增加CTP-1基因表达以促进脂肪氧化代谢的作用。
根据本发明的用于预防和减轻肥胖的食品组合物的剂型，该组合物可以含有基于该组合物总重量0.01-100重量％的人参浆果提取物。
本发明的用于预防和减少肥胖的食品组合物，其含有人参浆果提取物，该组合物在脂肪酸降解途径中增加了用作主要酶的肉毒碱棕榈酰转移酶-1(CPT-1)基因的表达。
而且，本发明的含有人参浆果提取物的食品组合物在脂肪酸氧化中起到将脂肪酸输送至线粒体内的作用，并促进中性脂肪的氧化。
下文中，将参考实施例和对比例，进一步详细地描述本发明的构成和效果。然而，可以理解的是，这些实施例和对比例都仅仅是说明的，本发明的范围不受其限制。
实施例1：人参浆果提取物的制备
1)人参浆果的预处理
收获原料人参浆果，并分离去除其中的种子。接着，在阳光或热空气中将人参浆果的果肉和果皮干燥，由此制备干燥的人参浆果物质。
2)人参浆果提取物的制备
将1kg上述干燥的人参浆果加入3L水中并在回流下萃取。接着，过滤该萃取物，在减压下40-45℃下浓缩，由此获得300g人参浆果提取物。
对比例1：人参根部提取物的制备
按照实施例1中描述的方法来制备人参根部提取物，不同的是，使用相同量的人参根部代替人参浆果。
对比例2：白参提取物的制备
为了与人参浆果提取物比较其效果而制备白参提取物。将1kg白参或白参粉末添加至3L水或乙醇中、并在回流下萃取3次。接着，按照常规方法过滤该萃取物、并在减压下浓缩，由此得到约250g的白参提取物。
对比例3：红参提取物的制备
为了与人参浆果提取物的效果进行比较而制备红参提取物。将1kg红参(含水量：14％)或红参粉末加入3L水或乙醇中、并在回流下萃取3次。按照常规方法过滤该萃取物、并在减压下浓缩，由此得到约250g的红参提取物。
试验例1：人参浆果提取物的成分的比较
<分析人参浆果和人参根部的人参皂苷(人参皂苷类)>
分别在实施例1和对比例1中制备了人参浆果提取物和人参根部提取物。用醚来处理这些提取物以除去油溶性成分，接着用丁醇(BuOH)提取粗的皂苷并浓缩。通过HPLC来分析浓缩物质的人参皂苷，分析结果示于图1和表1中。
表1
  实施例1   对比例1
  粗皂苷含量(干重)   33.42％   16.70％
  PD/PT比例   0.73   3.23
实施例1制备的人参浆果提取物所具有的粗皂苷的含量约比对比例1中制备的人参根部提取物的高2倍。当人参皂苷被分成PD(原人参萜二醇)类——“人参皂苷Rb1、Rb2、Rc和Rd”、和PT(原人参萜三醇)类——“人参皂苷Re、Rg1和Rg2”，该提取物的PD/PT比例分别为0.73和3.23，表明人参浆果提取物与人参根部提取物在它们的组成上互相显然不同。
<分析人参浆果提取物的矿物质成分>
为了检验实施例1制备的人参浆果提取物是否具有不同于人参的浆果性质，进行了包括维生素在内的矿物质分析。分析结果示于表2中。
表2
  成分   含量   成分   含量
  钾(mg/100g)   5865.57   镁(mg/100g)   354.38
  钙(mg/100g)   819.26   锌(mg/100g)   178.49
  铁(mg/100g)   59.31   维生素A(μg/100g，RE)   213.11
  磷(mg/100g)   187.17   维生素B1(mg/100g)   12.29
  维生素B2(mg/100g)   8.45   维生素B6(mg/100g)   10.50
  维生素C(mg/100g)   4.91   维生素E(mg/100g，α-TE)   23.61
  维生素K(μg/100g)   232.12   烟酸(mg/100g，NE)   5.76
  泛酸(mg/100g)   5.87   叶酸(μg/100g)   349.97
如上所述，可以看到用于本发明的人参浆果提取物含有人参皂苷的量比人参根部提取物的多，而且它们所含的皂苷的性质互相相反。此外，可以发现，与人参根部提取物相比，人参浆果提取物富含维生素和16种矿物质。基于这些结论，进行下列测试来检验人参浆果提取物对皮肤的作用。
试验例2：抑制皮肤老化和减少皮肤皱纹的作用
1)人参浆果提取物的抗氧化作用
通过比较它们去除活性氧簇(ROS)的能力来检验人参浆果提取物的抗氧化剂作用，该活性氧簇通常由UV辐射产生。作为阳性对照组，使用通常用于比较抗氧化剂作用的水溶性维生素E，并与白参提取物和红参提取物比较(图2)。此外，使用未用测试物质处理过的组作为对照组。
在图2所示的结果中，与对照组相比，本发明实施例1的人参浆果提取物显示出显著的除去活性氧簇的作用，该活性氧簇是在人体的人永生化表皮细胞(HaCaT)角质形成细胞的单层细胞培养系统中由UV辐射产生的。该活性是与用作抗氧化剂物质活性指数的水溶性维生素E相似的优良性能，并与无明显去除活性的白参提取物和红参提取物相对照。尤其是，发现本发明实施例1制备的人参浆果提取物通过明显去除产生皮肤老化的活性氧簇而具有抑制皱纹形成、抑制皮肤弹性降低和色素沉着的作用。
2)通过单细胞凝胶电泳(SCGE，Comet测定)分析对损害DNA的氧化的抑制活性
培养人正常成纤维细胞24小时，并用变化浓度的实施例1的人参浆果提取物和维生素E来处理。12小时后，用阳性对照的H2O2(最终浓度：10-3M)来处理该细胞，接着通过电泳来染色。用荧光显微镜来观察染色的细胞。此处使用图像分析仪KOMET 3.1(Kinetic Imaging，England)来分析由25个细胞中的每个细胞中DNA消化所产生的尾长(tail length)(μm)，分析结果示于下表3中。
表3
人参浆果提取物和维生素E对损害DNA的氧化的抑制作用
  测试物质   尾长(μm)   抑制(％)
  H2O2   115.6   -
  H2O2+实施例1(10ppm)   75.8   34.4
  H2O2+实施例1(50ppm)   65.7   43.2
  H2O2+实施例1(100ppm)   52.1   54.9
  H2O2+维生素E(10ppm)   70.6   38.9
在表3的结果中，细胞凝胶电泳的结果显示了实施例1的人参浆果提取物具有明显的对损害DNA的氧化的抑制活性，表明本发明的人参浆果提取物可以作为损害DNA的氧化的抑制剂，它抑制了由羟基自由基(-OH)引起的单链断裂。
3)I型原骨胶原分析
以105个细胞/孔的浓度在12孔培养板中培养人成纤维细胞，然后将培养介质替换为含有1ppm和10ppm的实施例1的人参浆果提取物的培养基。培养3天后，收获该细胞并使用ELISA方法量化所产生的I型原骨胶原的量。相对于不含实施例1人参浆果提取物的对照组的100，来计算测量结果，且TGF-b用作阳性对照组。此外，将该测量结果与白参根部和红参根部提取物进行比较。
在正常成纤维细胞单层细胞培养系统中，与对照组相比，实施例1的人参浆果提取物显示出显著促进I型原骨胶原产生的作用。也就是说，实施例1的人参浆果提取物能抑制由人皮肤老化产生的胶原蛋白产物的减少、并显示出减少皮肤皱纹的作用(图3)。
4)抑制MMP-1表达的分析
以105个细胞/孔的浓度在12孔培养板中培养人成纤维细胞，然后用40mJ/cm2的UVB来照射。接着，将培养介质替换为含有1ppm和10ppm的实施例1的人参浆果提取物的培养基。培养2天后收获该细胞，并使用ELISA方法来量化所产生的MMP-1(间质金属蛋白酶I)的量。相对于不含测试物质的UV对照组的100，来计算测量结果，且TGF-b用作阳性对照组。此外，将该测量结果与白参根部和红参根部提取物进行比较。
在正常的人成纤维细胞单层细胞培养系统中，本发明实施例1的人参浆果提取物显著抑制了由40mJ/cm2UVB诱导的MMP-1的表达。这提示出本发明实施例1的人参浆果提取物通过抑制皮肤组织降解酶MMP-1的生物合成，而具有抑制皮肤老化和减少皱纹的作用(图4)，该MMP-1由内部老化和外部环境因素产生。
5)对由UV辐射产生的环氧合酶-2(COX-2)生物合成的抑制作用
以105个细胞/孔的浓度在12孔培养板中培养人成纤维细胞，然后用15J/cm2的UVA来照射。接着，将培养介质替换为各含有0.1ppm、1ppm和10ppm的实施例1的人参浆果提取物和对比例1的人参根部提取物的培养基。培养2天后收获该细胞，并使用蛋白质印迹(Western blot)方法在密度计量上量化所产生的环氧合酶-2(COX-2)的量。相对于不含测试物质的UV对照组的100，来计算测量结果。测量结果示于下表4中。
表4
Figure G2008800182623D00181
从上表4的结果可以看出，实施例1的人参浆果提取物与浓度相关地降低了由UV辐射而产生的环氧合酶-2的合成，并防止了由COX-2的产物前列腺素E2(PGE2)引起的皮肤组织降解。
6)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)生物合成的抑制作用
以105个细胞/孔的浓度在12孔培养板中培养人角质形成细胞，然后用30mJ/cm2的UVB来照射。接着，将培养介质替换为各含有0.1ppm、1ppm和10ppm的实施例1的人参浆果提取物和对比例1的人参根部提取物的培养基。培养6-24小时后收获该细胞，并使用ELISA(Pharmingen 555212)方法量化所产生的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的量。相对于未用测试物质处理的UV对照组的100，来计算测量结果。计算结果示于下表5中。
表5
Figure G2008800182623D00191
从表5的结果可以发现，本发明实施例1的人参浆提取物与浓度相关地降低了由UV辐射引起的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的生物合成，并因此能防止由(TNF-α)的生物合成产生的皮肤老化。
7)减少人皮肤皱纹的作用
制备具有表6所示的组成并含有实施例1的人参浆果提取物的实施例2的营养霜，并制备不含有人参浆果提取物的对比例2的营养霜。将所制备的霜剂应用于40个30-50岁的受试者，比较性地评价该霜剂对减少皮肤皱纹的作用(单位：重量％)。
表6
  成分   实施例2   对比例2
  人参浆果提取物   0.1   -
  蜂蜡   10   10
  聚山梨醇酯60   1.5   1.5
  PEG 60氢化的蓖麻油   2   2
  失水山梨醇倍半油酸酯   0.5   0.5
  液体石蜡   10   10
  角鲨烷   5   5
  辛酸/癸酸甘油三酯(Estasan：Uniqema)   5   5
  甘油   5   5
  丁二醇   3   3
  丙二醇   3   3
  三乙醇胺   0.2   0.2
  防腐剂、颜料和芳香剂   足量(q.s)   足量(q.s)
  纯净水   余量   余量
将实施例2的营养霜涂覆在受试者左侧面部，并使用3个月，将对比例1的营养霜涂覆在右侧面部，并使用3个月。在敷用该霜剂之前先检测面部两侧的状况，敷用该霜剂3个月后，再次检测相同部分的状况，由此检测皮肤皱纹的变化。在24℃的温度和40％相对湿度的恒温恒湿房间中，用复制物来再生眼角外部的皱纹，并用能见度仪(C+K Inc.)来检测面部皱纹。根据下面的等式1来计算皮肤皱纹的变化。
等式1
变化(Δ％)＝(Tdi-Tdo)/Tdo x 100
其中，“Tdi”为在D90时测量的值，“Tdo”为在D0时测量的值。
在根据等式1计算的结果中，用对比例2的营养霜涂覆的部分的皮肤皱纹显示出降低6.5±4％(平均值±标准偏差)，而用实施例2的营养霜涂覆的部分的皮肤皱纹显示出降低39±11％，表明实施例2显示出优异的减少皮肤皱纹的作用。
8)改善人体皮肤弹性的作用
测量具有表6所示组成的实施例2和对比例1的营养霜的皮肤弹性改善作用
将40位30岁以上的妇女分成2组。在各组受试者的面部敷用实施例2和对比例2的营养霜，每天2次共12周，然后使用Cutometer SEM 575(C+KElectronic Co.，Germany)测量面部皮肤弹性。测量结果示于下表7中。表7的结果显示出由Cutometer测量的粘弹性(viscoelasticity)。
表7
  测试物质   皮肤弹性作用
  实施例2   0.46±0.12
  对比例2   0.29±0.09
从表7的结果可以看出，使用含有实施例1人参浆果提取物的实施例2的营养霜显示出约150％的皮肤弹性改善作用。
试验例3：皮肤增白作用
1)使用小鼠黑色素细胞分析黑色素产生抑制作用
使用小鼠黑色素细胞来检验实施例1人参浆果提取物的黑色素产生抑制作用。
首先，37℃和5％CO2的条件下，在含有10％胎牛血清、10nM 2-O-十四烷酰佛波醇-13-醋酸酯和1nM霍乱毒素的DMEM(Dulbeccos改良Eagles培养基)中，培养C57BL/6小鼠黑色素细胞(Mel-Ab细胞)(Dooley，T.P.et al，Skin pharmacol，7，pp 188-200)。用0.25％胰酶蛋白-EDTA分离培养的Mel-Ab细胞，并以105个细胞/孔的浓度在12孔培养板中培养。接着，在培养2天后，各自连续添加1ppm和10ppm的人参浆果提取物，并培养3天。此处，用红参提取物和氢醌作为阳性对照组。然后，除去培养基，用PBS洗涤该细胞，并用氢氧化钠溶解细胞。在400nm下测量溶解的细胞的吸光度，并根据下面的等式2来计算对黑色素产生的抑制。计算结果示于表8中(Dooley方法)。
等式2
黑色素产生的抑制(％)＝100-(各测试物质的吸光度/对照组的吸光度×100)
表8
  测试物质   黑色素产生的抑制(％)
  实施例1(1ppm)   14.0
  实施例1(10ppm)   34.4
  红参提取物(10ppm)   5.3
  氢醌(对照)   41.1
如上表8所示，发现本发明实施例1的人参浆果提取物显示出其黑色素产生的抑制率比红参提取物的抑制率高、与氢醌的相近。这表面本发明实施例1的人参浆果提取物显示出优异的增白作用。
2)对人皮肤的增白作用
为了检验实施例1人参浆果提取物对人皮肤的增白作用，进行下列测试。
首先，将1.5cm穿孔的不透明带子贴在12位健康男性受试者的上臂部分，以约最小红斑剂量1.5-2倍的剂量，对各受试者用UVB照射附着部分、以导致皮肤变暗。
在UV照射后，各将实施例1的人参浆果提取物(测试物质)和氢醌涂覆在经UV照射的部分，与未涂覆任何物质的对照部分比较，观察10周后涂覆部分状态的变化。以1周的间隔，用色度计CR2002(日本，Minolta)测量皮肤颜色。
接着，根据下面的等式3，来计算各测试物质在使用初始与使用结束后的皮肤颜色的差值(ΔL*)，计算结果示于下表9中。同时，通过测量样品涂覆部分与对照部分之间的ΔL*值，来评价增白作用。ΔL*值约为2，说明色素沉着明显减轻，如果该值超过1.5则可以判断有增白作用。
等式3
ΔL*＝在使用初始的L*-在使用结束后的L*
表9
  测试物质   肤色亮度(ΔL*)
  实施例1   1.76±0.21
  氢醌(阳性对照组)   1.90±0.13
  赋形物(阴性对照组)   0.50±0.16
如上表9所示，本发明实施例1的人参浆果提取物显示出与氢醌相似的肤色亮度。这是因为人参浆果提取物改善了由UV光产生的色素沉着，使皮肤颜色变亮。
实施例4：使皮肤增湿和减轻过敏症状的作用
1)诱导人角质形成细胞的分化
通过测量角质形成细胞和人角质形成细胞的细胞系(HaCaT)过程中产生的CE(角质化包膜)的量，来检验本发明实施例1人参浆果提取物对细胞分化的促进作用。
起初将培养的人角质形成细胞放入培养瓶中，并使其附着在培养瓶的水平底部，然后将下表10中显示的测试物质以变化的浓度添加至培养基中。培养该细胞5天至汇合度(confluency)约70-80％。收获培养的细胞、用PBS(磷酸盐缓冲盐水)洗涤，然后将含有2％SDS(十二烷基硫酸钠)和20mMDTT(二硫苏糖醇)的1ml 10mM Tris-HCl缓冲液(pH 7.4)加入该细胞中。将该细胞溶液进行声波处理、煮沸并离心，将得到的沉淀悬浮在1ml PBS中并在340nm下测量吸光度。同时，取经声波处理后的部分溶液，并测量其蛋白质含量，该测量值用作评价细胞分化的标准。分别将低钙(0.03mM)处理组和高钙(1.2mM)处理组作为阴性对照组和阳性对照组。测试结果示于下表10中。
表10
Figure G2008800182623D00241
从表10的结果可以看出，本发明实施例1的人参浆果提取物刺激了角质形成细胞的分化。
2、表达人皮肤细胞系中转谷氨酰胺酶的作用
以5×104个细胞/孔的浓度，将人皮肤细胞放入96孔板中并附着到该板上24小时。用测试物质处理该附着的皮肤细胞，2天后除去该介质，将该细胞储存在-20℃下的冷冻箱中。冻结细胞，并解冻两次，用丙酮∶乙醇(1∶1，v/v)分裂并处理，在-20℃下储存。将处理后的细胞放置在4℃下30分钟以固定细胞。接着，将细胞放置在室温下，以蒸发有机溶剂并用1％牛血清白蛋白阻断。使阻断的细胞与转谷氨酰胺酶抗体(第一抗体)、HRP抗鼠抗体(第二抗体)反应，通过添加OPD(邻苯二胺)进行细胞的显色。通过在490nm下测量的吸光度来测量细胞内转谷氨酰胺酶的表达程度，并通过在630nm下测量本底来进行校正。分别将低钙(0.03mM)处理组和高钙(1.2mM)处理组作为阴性对照组和阳性对照组，测试结果示于下表11中。
表11
从表11的结果可以看出，相对于对照组，本发明实施例1的人参浆果提取物显示出2倍增加的转谷氨酰胺酶的表达。这表明本发明实施例1的人参浆果提取物增加了转谷氨酰胺酶的表达。
3)增加人皮肤的表皮脂质(全部的神经酰胺)的作用
为了评价实施例1的人参浆果提取物对增加人皮肤脂质合成的作用，使用0.5重量％的Carbopol ETD 2020、0.45重量％的TEA、5重量％的测试物质和余量的去离子水。对12个成年男性和女性，在胳膊上标记相应于聚丙烯圆锥管直径的区域，每天两次用20μl各对照组和实施例1的人参浆果提取物涂敷。受试者被分为两组，通过在3天和11天提取脂质，以下列方式来分析涂敷区域中脂质的产生。特别地，用家庭用水洗涤胳膊，然后用Scotch810Magic带子，进行带子剥离。接着，使用切下的50ml聚丙烯圆锥管作为储集器将1ml环己烷/乙醇(4∶1)的混合物添加到该带子上，并搅拌约1分钟，将该溶液移入新的试管中。然后，以与上述相同的方式用1ml环己烷/乙醇(1∶1)的混合物处理该带子，在试管中收集该溶液。接着，在50℃下用氮气干燥该溶液，并溶解在500μl氯仿/甲醇(2∶1)中。接着，使用Automated TLC取样器-4(CAMAG Inc.)，将各测试物质滴加至二氧化硅凝胶TLC(薄层色谱法)板中，并使用AMD(自动多次显影仪)、用具有表12中显示的组成比例的显影溶剂来显影。
表12
  氯仿   甲醇   水   乙酸   己烷   二乙醚   石油醚   溶剂移动距离(cm)
  第一次   40   10   1   3.0
  第二次   190   9   1   6.5
  第三次   2   12   3   7.5
  第四次   100   顶部
在使TLC板显影后，使用TLC扫描仪-II(CAMAG；光密度计)在570nm波长下测量各带的尺寸。在下表13中示出相对于未处理组的100％表达的各处理组中神经酰胺的产生。
表13
Figure G2008800182623D00261
如上表13所示，处理3天后，用实施例1的人参浆果提取物处理的组显示出比阴性对照组(未处理的/赋形物)脂质产生增加约5-8％，并显示出比阳性对照组(甘油)增加约6％。处理11天后，用实施例1的人参浆果提取物处理的组显示出比阴性对照组(未处理的/赋形物)脂质产生增加约16％，并显示出比阳性对照组(甘油)增加约22％。这表明本发明实施例1的人参浆果提取物增加了神经酰胺的产生。
4)增加人体皮肤保湿能力
将有皮肤干燥的50位50-60岁的男性和女性分成两组，每天各用实施例2和对比例2的营养霜涂敷各组的受试者的面部，共4周。开始涂敷前，在开始涂敷后1周、2周和4周以及涂敷结束后2周(总共6周)，在恒温恒湿条件(24℃和40％相对湿度)下，用测角仪(koniometer)测量受试者皮肤的含水量，测量结果示于表14中。测试结果表示为涂敷后测量的值相对于开始涂敷前测量的测角仪值增加的百分比。
表14
Figure G2008800182623D00271
测角仪是通过测量表皮电导率来测量皮肤含水量的设备。如表14所示，用含有实施例1人参浆果提取物的实施例2的营养霜涂敷的组显示出比用对比例2涂敷的对照组皮肤的含水量有增加。而且，涂敷实施例2营养霜终止(总共6周后)后2周时，测量的皮肤水分值与开始涂敷该营养霜后1-2周所测量的皮肤水分值相近。这表明，即使在一段时间内不再涂敷实施例2的营养霜，涂敷本发明的人参浆果提取物后，仍可以保持皮肤水含量一段时间。
5)减轻过敏皮炎的作用
用下列方法来测量减轻过敏症状的作用。将50位10-50岁的诊断为过敏症状(痒、糜烂或严重干燥症)或目视观察显示与过敏相似症状的人分为2组。分别将实施例2和对比例2的营养霜提供给这两组，每天2次，将实施例2和对比例2的营养霜涂敷在受试者显示过敏症状的部分，共12周。为了评价该测试物质的作用，在12周后通过调查所评论的人来主观地评价减轻程度。在调查中，过敏皮炎症状被分为“痒”、“干燥症”、“角质化”、“鳞屑”、“红斑”、“肿胀”、“皮肤裂纹”和“渗液(oozing)和湿疹”，如果受试者说出症状，则评价各症状的减轻程度。平均该评价的得分，并分别评价过敏症状的减轻作用。评价结果示于下表15中。
表15
Figure G2008800182623D00281
如上表15所示，用含有实施例1人参浆果提取物制剂涂敷的组一般比对照组的减轻了。
试验例5：痤疮和皮肤病的减轻
1)皮脂调节作用：对5-α-还原酶活性的抑制作用
用二乙醚处死成年SD(Spraque-Dawley)雄性大鼠(7-8周)，提取腹部前列腺，并除去连接的组织。将前列腺组织精细地切在缓冲液(0.32M的蔗糖、0.1mM的二硫苏糖醇和20mM的醋酸钠)中，然后用搅拌器悬浮。将悬浮液离心，收集上清液。从该上清液中部分提纯5-α-还原酶以得到其活性。
取部分以上收集的上清液，并放入到含有0.2M一元酸和0.2M二元酸的缓冲液中。接着，使该溶液与3H-结合的底物(睾酮)反应，测量产物二氢睾酮的产生。
该反应溶液含有1mM的二硫苏糖醇、40mM的磷酸钠(pH 6.5)、50μM的NADPH、[1，2，6，7-3H]睾酮/睾酮(2.2×109摩尔)、0.8mg酶悬浮液和565μl蛋白质。
将实施例1的人参浆果提取物溶解在10％的乙醇中，并以每次反应100μg提取物/10μl 10％乙醇的量添加。作为对照组，使用相同体积的溶剂，作为阳性对照组，使用核黄素。
在添加酶悬浮液的同时开始该反应，并在37℃下进行30分钟，然后用1ml乙酸乙酯萃取该反应物料。使用醋酸酯-环己烷(1∶1)作为显影溶剂体系，在二氧化硅塑料板硅胶60 F254上使100μl乙酸乙酯相显影。
在空气中干燥该塑料板，使用VAS系统来测量同位素。特别是，将干燥的塑料板与X射线膜放入VAS暗盒中，1周后，测量保留在该膜上睾酮和二氢睾酮同位素的量。测量结果示于下表16中。
表16
Figure G2008800182623D00291
从上表16的结果可以看出，人参浆果提取物具有抑制5-α-还原酶的作用。
2)抑制脂肪生成的作用
通过由量化脂肪生成所需要的碳吸收，来评价抑制脂肪形成来评价皮脂腺中脂肪形成的程度。
特别是，活组织检查具有丰富皮脂腺的仓鼠耳组织，通过使用放射性测量仪在由C14标记的培养基中比较性地量化对照组和测试物质，以评价6小时内的脂肪形成的程度。在测试物质组中，使用仓鼠右耳组织、并将0.01％的测试物质溶液添加至该培养基中，在对照组中，使用仓鼠左耳组织，并将0.01％的盐水添加至该培养基中。测试结果示于下表17中。
同时，根据下面的等式4来计算表17中的抑制率(％)，并表示为4只仓鼠的平均值。
等式4
抑制率(％)＝测试组/对照组×100
表17
  测试物质   抑制率(％)
  实施例1   47
  阳性对照组(视黄酸)   52
从上表17的结果可以看出，本发明实施例1的人参浆果提取物具有抑制脂肪形成的作用。
3)减少粉刺的作用
为了确认减少粉刺的作用，将用于本发明实施例1的人参浆果提取物溶解于1，3-丁二醇中，以形成1％的溶液，该溶液用作使用兔子的临床试验中的测试物质。
在早晨将作为粉刺诱导物的0.2ml 50％油酸/石蜡油涂敷在白兔的耳朵上，并用棉签摩擦。一天涂敷2次，共1个月。特别是，在早晨涂敷50％油酸/石蜡，在下午涂敷测试物质。从涂敷粉刺诱导物后约10天长出粉刺，下午涂敷实施例1的人参浆果提取物从涂敷2周后导致粉刺的数量和大小逐渐降低。
活组织检查耳组织，除去其中的角质。然后，在显微镜下观察组织中粉刺的大小，观察结果示于下表18中。
表18
  测试物质   所测量粉刺大小的平均值(0.1mm)N＝3
  对照组(未处理的)   1.78
  油酸(OA)   3.5
  油酸(OA)+实施例1   2.3
从上表18的结果可以看出，用本发明实施例1人参浆果提取物处理的兔子中，粉刺明显减少。也就是说，由于实施例1的人参浆果提取物，显示出皮脂减少，其结果是，减少了皮肤的角化过度，导致粉刺减少。
4)抑制皮脂分泌的作用
为了测量减轻油性皮肤的作用，将实施例2的营养霜(含有人参浆果提取物)一天两次(早晨和下午)涂敷在20个20-45岁老年妇女的前额上，并以同样方式将对比例2的营养霜涂敷在另外10个20-45岁老年妇女的前额上。在涂敷后1周、2周、3周和4周，用Sebumeter SM810测量皮肤的皮脂分泌。在20℃和20％的相对湿度下进行试验，测量结果示于表19中。该结果表示为10个受试者的平均值。在表19中，超过220的数值表明油性皮肤，100-220的数值表明正常皮肤。
表19、皮脂分泌的抑制作用
  测试物质   涂敷前   1周后   2周后   3周后   4周后
  对比例2   245   240   239   235   230
  实施例2   245   236   231   218   209
从上表19的结果可以看出，含有本发明实施例1人参浆果提取物的营养霜显示出抑制皮脂过度分泌的作用，表明它具有皮脂调节的作用。
5)消炎作用：对前列腺素E2(PGE2)形成的作用
为了检验本发明人参浆果提取物的前列腺素E2(PGE2)形成的抑制作用，进行下列测试(文献：Jeffrey，K.H.，Anglea，S.W.，Zoe，S.，and Rhia C.M.Intracellular Measurement of Prostaglandin E2：Effect of Anti-inflammatoryDrugs on Cyclooxygenase Activity and Prostanoid Expression，AnalyticalBiochemistry，1999，271，18-28)。
首先，将从人表皮组织中分离的成纤维细胞培养在CO2孵育器中24小时，并将培养基替换成含有FBS(胎牛血清)的培养基。接着，将细胞培养2小时，然后各自用1μg/mL、10μg/mL、100μg/mL的实施例1人参浆果提取物与蒸馏水的混合物处理。接着，在37℃和5％(v/v)条件下，在CO2孵育器中培养细胞2小时。
然后，用50μM钙离子载体A23187与花生四烯酸的混合物作为前列腺素E2刺激物来处理细胞5分钟。接着，将该细胞进行细胞溶解，并使用ELISA读出器在450nm下测量吸光度，分析结果示于表20中。在表20中，基于未用实施例1人参浆果提取物处理的皮肤成纤维细胞与用实施例1人参浆果提取物处理的皮肤成纤维细胞之间前列腺素E2形成的差值来计算抑制率(％)，并表示为5个测量的平均值。
表20
Figure G2008800182623D00321
从表20的结果可以看出，本发明实施例1的人参浆果提取物可以抑制由刺激引起的前列腺素E2形成。
6)消炎作用：抑制由LPS(脂多糖)诱导的环氧合酶-2(COX-2)生物合成的作用
以105个细胞/孔的浓度在12孔培养板中培养人成纤维细胞，并用LPS处理。接着，将培养介质替换为各自含有1ppm、10ppm和100ppm的实施例1的人参浆果提取物的培养基。培养2天后收获该细胞，并使用蛋白质印迹(Western blot)方法用光密度测量法量化所产生的细胞中环氧合酶-2(COX-2)的量。将测量结果对于对照组相对于100来表示，并示于下表21中。此处，对照组为未用实施例1人参浆果提取物处理而培养的未处理组。
表21
从表21的结果可以看出，本发明实施例1的人参浆果提取物显示出与浓度相关地降低了由炎症LPS诱导的环氧合酶-2生物合成，以具有抑制炎症反应的作用，因此减轻了皮肤病。
7)消炎作用：抑制由LPS(脂多糖)诱导的肿瘤坏死因子-α生物合成的作用
以105个细胞/孔的浓度在12孔板中培养人角质形成细胞，并用LPS处理，接着，将培养介质替换为各自含有1ppm、10ppm和100ppm的实施例1的人参浆果提取物的培养基。培养6-24小时后收获该细胞，并使用ELISA(Pharmingen 555212)方法量化细胞中肿瘤坏死因子-α的产生。相对于对照组的100来表示测量结果，并示于表22中。此处，对照组为未用实施例1人参浆果提取物处理而培养的未处理组。
表22
从表22的结果可以看出，本发明实施例1的人参浆果提取物可以与浓度相关地降低了由炎症LPS诱导的肿瘤坏死因子(TNF-α)的生物合成，以抑制可以由于肿瘤坏死因子(TNF-α)生物合成而发生的炎症反应，由此缓解了皮肤病。
8)对巨噬细胞中LPS诱导的NO(一氧化氮)的抑制作用
为了检验本发明人参浆果提取物的消炎作用，进行了对巨噬细胞的LPS诱导的NO(一氧化氮)的抑制测试。
在5％CO2条件下，将巨噬细胞(未加工的264.7细胞)培养在10％含血清的培养基中。在96孔板中将该细胞培养成2×105个细胞的浓度，用LPS(1μg/ml)处理，然后各用实施例1的人参浆果提取物和红参提取物处理。将处理后的细胞在37℃下储存1小时，并测量该细胞中产生的NO以比较对LPS诱导的NO的抑制作用。使用Griess反应方法(Minghetti，L.et al.，1991，Glia 19.152-160)进行NO产生的测量，测量结果示于图5中。
从图5的结果可以看出，本发明实施例1的人参浆果提取物有效地抑制作为炎症因子(细胞因子)的NO产生，并且与红参提取物相比其作用显著优异。因此，通过调节炎症反应，期望本发明实施例1的人参浆果提取物可以治愈由皮肤病引起的创伤，并抑制皱纹的形成。
9)减轻痤疮和皮肤病的作用
在恒温恒湿的房间内对脸上有包括痤疮的皮肤病的10个女人的脸进行清洗，并适应30分钟。计数痤疮损伤和炎症痤疮损伤的数量以测量皮肤病的程度。
各用实施例2和对比例2的营养霜涂敷测试受试者，然后对比实施例2和对比例2之间痤疮和皮肤病的程度。测试结果示于下表23中。
表23
  实施例1(5个人)   对比例1(5个人)
  皮肤病的减轻   80％   20％
从表23的结果可以看出，当涂敷含有本发明实施例1人参浆果提取物的实施例2营养霜后4周时，痤疮损伤的数量减少，而且炎症问题减轻。
试验例6：改善皮肤肤色的作用
1)在HUVEC(脐带静脉内皮细胞)中人参浆果提取物的NO产生能力
人血管内皮细胞含有eNOS(内皮的一氧化氮合酶)，它产生NO(一氧化氮)来扩大血管并促进血液循环。培养人血管内皮细胞，分别用人参浆果提取物(图6)和一般的红参提取物(图7)来处理培养介质。比较两种提取物之间细胞内NO的产生。特别是，以2.5×104个细胞/孔的浓度将血管内皮细胞附着到明胶涂覆的24孔板中，并在培养基中培养24小时。分别用本发明实施例1的人参浆果提取物、红参提取物和对照组预处理该血管内皮细胞12小时。在37℃下，在无FBS的M199培养基中用10μmol/L DAF-FM二醋酸盐(Molecular Probe，OR)处理该内皮细胞30分钟。用无FBS的M199培养基清洗该血管内皮细胞三次，然后将该细胞放入平行板流动室中并用来自汞灯发出的光激发。激发的波长为488nm，NO结合的DAF指示在515nm的荧光。用共焦激光显微镜(Atto Bioscience，USA)拍照该细胞，用Image-ProPlus v4.5软件(Media Cybernetics，San Diego，CA，USA)分析荧光强度。基于所测量的荧光强度，将测试组中NO的产生与对照组相比较。测试结果示于图6和图7。
从图6和7的结果可以看出，本发明实施例1的人参浆果提取物显示出相对于对照组的500-1300％的NO产生，并且一般红参提取物与对照组相比显示出100-200％的NO产生(以相同的浓度50-100μg/ml)。因此，本发明实施例1的人参浆果提取物与红参提取物相比显示出在血管内皮细胞中显著优异的NO产生率。由于实施例1人参浆果提取物的该优异的NO(一氧化氮)产生率，人参浆果提取物扩大了毛细血管并促进了血液循环，因此它可以确保平稳地向皮肤供给营养，抑制皮肤老化并改善皮肤肤色。
2)改善人皮肤(面部)肤色的作用
为了评价本发明人参浆果提取物对促进皮肤血液循环的作用，使用LDPI(激光多普勒血流成像仪)测量皮肤的血液循环。LDPI是公知的测量皮肤内血液循环的设备，并且是非常灵敏的设备，它不仅能测量皮肤毛细血管内血流的速率和流量，而且能测量小动脉和小静脉的血流。
在恒温恒湿的房间内用肥皂清洗测试受试者的面部，并适应30分钟。使用LDPI和作为皮肤温度测量设备的IR(下文)照相机测量初始值。测试受试者由20位手脚冷的妇女组成，用LDPI测量下部额头部分的血流，并使用IR照相机测量额头、眼睛下面部分和脸颊的初始皮肤温度。
将实施例2的营养霜涂敷在测试受试者，使用1周，用初始测量值比较受试者的血流和皮肤温度。测量结果示于下表24和25中。
表24、涂敷前和涂敷后的LDPI结果
  面部   涂敷前   涂敷1周后
  平均值   0.952   1.169
表25、涂敷前和涂敷后的IR结果
  前额   眼睛下面   脸颊
  涂敷前   32.26   32.02   30.44
  涂敷1周后   33.87   33.69   33.57
从表24和25的结果可以看出，当涂敷含有本发明人参浆果提取物的实施例2的营养霜时，由于改善了全身的血液循环，因此改善了受试者面部的肤色。这表明，当涂敷本发明的人参浆果提取物时，可以向皮肤有效供给营养并可以延缓皮肤老化。
参考例1：分离附睾脂肪组织
分离Sprague-Dawley(下文称为“SD”)雄性白鼠的附睾脂肪组织，并用剪刀细切，向其中添加没有酚红的DMEM中0.1％的胶原酶。接着在37℃下将该组织培养2小时并过滤，由此获得脂肪细胞。
试验例7：促进雄性SD鼠中性脂肪降解的作用
为了评价促进雄性SD白鼠脂肪细胞中的中性脂肪降解的作用，使用参考例1分离的脂肪细胞进行试验。
将含有0.5％BAS(牛血清白蛋白，BAS)的无脂肪酸的DMEM(Dulbeco’s改良eagles培养基)加入到用于实验的脂肪细胞中。根据显色法使用GPO-Trinder试剂盒(Sigma，St.Louis，Mo，USA)进行甘油的量化，并使用ELISA读出器测量在540nm的吸光度。
作为对照组，使用不含测试物质或对比物质的对照组。各以10ppm、100ppm和200ppm的浓度将实施例1人参浆果提取物和红参提取物添加至培养基中。由于脂肪水解时被降解为脂肪酸和甘油，因此通过测量从脂肪细胞释放到培养基中甘油的浓度来测定脂类分解的程度。相对于对照组的100来表示该测量结果，并示于图8中。
从图8可以看出，用变化浓度的人参浆果提取物来处理细胞时，用10ppm人参浆果提取物处理的组显示出的分解脂肪作用比对照组高约1.3倍。而且，用100ppm人参浆果提取物处理的组显示出的分解脂肪作用比对照组高约3倍，用200ppm人参浆果提取物处理的组显示出的分解脂肪作用比对照组高约3.3倍。另外，用人参浆果提取物处理的组显示出的分解脂肪作用比用红参提取物处理的组高。
试验例8：动物体内脂类代谢的作用
为了检验本发明组合物对由高脂肪饮食所致的肥胖动物体内脂类代谢的作用，选择雄性SD白鼠作为模型并用于试验。
为了检测人参浆果提取物怎样对由高脂肪饮食所致的肥胖起作用，使6周鼠龄的小鼠适应1周，并随机分成几个测试组，每组由10个动物组成。特别是，由下表26所示，动物被分成正常脂肪饮食组、高脂肪饮食组、高脂肪饮食+0.5％人参浆果提取物组、高脂肪饮食+1％人参浆果提取物组和高脂肪饮食+1.5％人参浆果提取物组。另外，以此方式将用红参提取物喂养的动物作为对照组来分组。
表26
  1   正常饮食(C)   5   高脂肪饮食(HF)+1.0％人参浆果提取物(GB)
  2   高脂肪饮食(HF)   6   高脂肪饮食(HF)+1.0％红参提取物(RG)
  3   高脂肪饮食(HF)+0.5％人参浆果提取物(GB)   7   高脂肪饮食(HF)+1.5％人参浆果提取物(GB)
  4   高脂肪饮食(HF)+0.5％红参提取物(RG)   8   高脂肪饮食(HF)+1.5％红参提取物(RG)
喂养试验饮食8周，该饮食按照下表27所示的组成来制备。此处，基于AIN-93G提纯的饮食来制备试验饮食，使得脂肪占总热量(基于饮食的18％)的36％，并制备正常脂肪饮食，使脂肪占总热量(基于饮食的7％)的17％。
表27、各测试组的饲料组成比例
Figure G2008800182623D00391
在喂养试验饮食期间，一周测量三次饮食摄取和重量，完成喂养试验饮食后，测量最终重量。测量结果示于表28和图9中。
表28、各组之间重量的差异和饲料摄取
  测试组   摄取的饮食   试验前的重量(g)   饲料摄取(g/天)
  1   正常饮食(C)   178.6±10.1   27.2±3.5
  2   高脂肪饮食(HF)   176.9±14.2   26.5±5.4
  3   高脂肪饮食(HF)+0.5％人参浆果提取物(GB)   174.5±17.2   28.3±8.4
  4   高脂肪饮食(HF)+0.5％红参提取物(RG)   172.2±16.2   27.4±7.4
  5   高脂肪饮食(HF)+1.0％人参浆果提取物(GB)   176.1±20.8   26.4±3.2
  6   高脂肪饮食(HF)+1.0％红参提取物(RG)   178.6±17.6   26.8±5.1
  7   高脂肪饮食(HF)+1.5％人参浆果提取物(GB)1.5％   177.2±19.1   26.8±6.1
  8   高脂肪饮食(HF)+1.5％红参提取物(RG)   175.8±18.4   27.1±4.2
如上表28所示，开始试验前，测试组之间重量没有差异，此外，在测试组之间饮食摄取没有明显差异。然而，如图9所示，饮食摄取后的重量对正常饮食组为408.2±20.1，对高脂肪饮食组(对照组)为557.2±17.5，其重量与正常饮食组相比增加了。而且，用0.5％、1.0％和1.5％的人参浆果提取物喂养的组的重量分别为512.3±20.4、475.2±10.7和420.9±16.8，表明人参浆果提取物饮食组的重量增长以取决于人参浆果提取物浓度的方式被显著抑制(P＜0.05)。同样，用0.5％、1.0％和1.5％的红参提取物喂养的组的重量分别为539.7±15.2、502.1±16.8和465.1±17.2，这比高脂肪饮食组的低、但比人参浆果提取物饮食组的高。这表明人参浆果提取物能够比红参提取物更有效地抑制重量增长，而且人参浆果提取物可以协助预防和减轻肥胖。
试验例9：测量附睾脂肪组织重量
在喂养试验例8中测试组1-8饮食后，处死动物并分离动物的附睾脂肪组织。用生理盐水清洗所分离的附睾脂肪组织，并通过过滤纸过滤以除去水。接着，测量附睾脂肪组织的重量，且测试结果示于图10中。
从图10的结果可以看出，在试验期间，与高脂肪饮食相比，用人参浆果提取物喂养的饮食组显示出附睾脂肪组织重量降低。另外，人参浆果提取物饮食组的附睾脂肪组织重量以依赖于人参浆果提取物浓度的方式降低，而且与红参提取物相比，人参浆果提取物对抑制体脂肪增长具有优异作用。
试验例10：CPT-1表达的测量
在喂养试验例8中测试组1-8饮食后，处死动物并分离动物的肝。均质化所分离的肝组织，然后用含有酚与异硫氰酸胍混合物的TRIZOL(LifeTechnologies
Figure G2008800182623D00401
，Grand Island，NYU，USA)提取肝组织的总RNA。从提取的总RNA中，通过RT-PCR来检测CPT-1mRNA的表达，检测结果用光密度测定法来量化，并示于图11和12中。
如图12所示，在人参浆果提取物饮食组中CPT-1的表达比高脂肪饮食组的高，因此人参浆果提取物饮食组的光密度比高脂肪饮食组的高。另外，CPT-1的表达显然以依赖于人参浆果提取物浓度的方式增加。
下文中，将描述本发明组合物的剂型实施例，但这些剂型实施例仅仅是说明性的，本发明的范围不受其限制。
剂型实施例1：润肤液
表29
  成分   含量(重量％)
  纯净水   余量
  实施例1的人参浆果提取物   0.1
  丁二醇   2.0
  丙二醇   2.0
  羧乙烯聚合物   0.1
  PEG-12壬基苯基醚   0.2
  聚山梨醇酯80   0.4
  乙醇   10.0
  三乙醇胺   0.1
  防腐剂、颜料和芳香剂   足量
剂型实施例2：乳液
表30
  成分   含量(重量％)
  纯净水   余量
  实施例1的人参浆果提取物   0.1
  蜂蜡   4.0
  聚山梨醇酯60   1.5
  失水山梨醇倍半油酸酯   1.5
  液体石蜡   0.5
  Montana 202(由Seppic制造)   5.0
  甘油   3.0
  丁二醇   3.0
  丙二醇   3.0
  羧乙烯聚合物   0.1
  三乙醇胺   0.2
  防腐剂、颜料和芳香剂   足量
剂型实施例3：按摩霜
表31
  成分   含量(重量％)
  纯净水   余量
  实施例1的人参浆果提取物   0.1
  蜂蜡   10.0
  聚山梨醇酯60   1.5
  PEG 60氢化的蓖麻油   2.0
  失水山梨醇倍半油酸酯   0.8
  液体石蜡   40.0
  角鲨烷   5.0
  Montana 202(由Seppic制造)   4.0
  甘油   5.0
  丁二醇   3.0
  丙二醇   3.0
  三乙醇胺   0.2
  防腐剂、颜料和芳香剂   足量
剂型实施例4：涂敷剂
表32
  成分   含量(重量％)
  纯净水   余量
  实施例1的人参浆果提取物   0.1
  聚乙烯醇   13.0
  羧甲基纤维素钠   0.2
  甘油   5.0
  尿囊素   0.1
  乙醇   6.0
  PEG-12壬基苯基醚   0.3
  聚山梨醇酯60   0.3
  防腐剂、颜料和芳香剂   足量
剂型实施例5：可注射剂型
将50mg实施例1的人参浆果提取物、适量用于注射的无菌蒸馏水和适量pH调节剂互相混合在一起。按照常规的制备可注射剂型的方法，将混合物以2ml/安瓿(ampoule)的量放入安瓿中。
剂型实施例6：液体剂型
将100mg实施例1的人参浆果提取物、10g适量高果糖谷物糖浆、5g甘露糖醇和适量纯净水互相混合在一起。将柠檬香料加入该混合物中，接着加入纯净水使总体积为100ml。然后，将混合物装满棕色小瓶中，由此制备液体剂型。
剂型实施例7：软胶囊
将50mg实施例1的人参浆果提取物、80-140mg L-肉毒碱、180mg大豆油、2mg棕桐油、8mg氢化菜油、4mg黄蜡和6mg卵磷脂互相混合在一起。将混合物以400mg/胶囊的量充填入胶囊，由此制备软胶囊。
剂型实施例8：片剂
将50mg实施例1的人参浆果提取物、200mg低聚半乳糖、60mg乳糖和140mg麦芽糖互相混合在一起。使用流化床干燥机将该混合物造粒，并加入6mg糖酯。使用压片机将颗粒制片，由此制备片剂。
剂型实施例9：颗粒
将50mg实施例1的人参浆果提取物、250mg无水晶体葡萄糖和550mg淀粉互相混合在一起。使用流化床造粒机使该混合物形成颗粒，然后包装。
剂型实施例10：饮料
将50mg实施例1的人参浆果提取物、10g葡萄糖、0.6g柠檬酸和25g液体低聚糖互相混合在一起，然后加入300ml纯净水。将混合物以200ml/瓶的量装入瓶子中。然后，在130℃下将瓶子灭菌4-5秒，由此制备饮料。

Claims (1)

1.人参浆果提取物在制备增湿用皮肤外用组合物中的用途，其中，所述人参浆果提取物的制备方法包括以下步骤：
1）干燥人参浆果的果肉和果皮；以及
2）向步骤1）中得到的干燥后的物质中添加水，在回流下萃取溶液，过滤萃取物并在减压下浓缩滤液。
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