KR102683218B1 - 천연물 유래 나노소포체를 포함하는 미백용 조성물 - Google Patents
천연물 유래 나노소포체를 포함하는 미백용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 천연물 유래 나노소포체를 포함하는 미백용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 마, 근대, 및 초가송이버섯으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 천연물 유래 나노소포체를 유효성분으로 함유하는, 피부 미백용 화장료 조성물, 건강기능식품 조성물 및 멜라닌 과다 생성에 따른 피부 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
상기 나노소포체는 천연물에서 분리되어 독성에 안전하고, 우수한 미백 효과를 가지는 바, 이를 이용하여 다양한 형태의 기능성 미백 소재를 개발할 수 있다.
상기 나노소포체는 천연물에서 분리되어 독성에 안전하고, 우수한 미백 효과를 가지는 바, 이를 이용하여 다양한 형태의 기능성 미백 소재를 개발할 수 있다.
Description
본 발명은 천연물 유래 나노소포체를 포함하는 미백용 조성물에 관한 것이다.
현대에 깨끗하고 하얀 피부는 아름다움의 척도가 되었다. 특히 생활수준의 향상과 수명의 연장으로 피부 미용에 대한 관심이 증가하였고, 환경오염에 따른 자외선 노출증가로 인해 피부 미백에 대한 관심이 더욱 고조되었다. 이에 따라 피부에 안정적이고 자극이 없는 미백 소재를 찾는 연구가 활발하게 진행되고 있다.
피부 미백에 관한 연구는 티로시나제(tyrosinase)의 활성 억제, 3,4-디하이드록시페닐알라닌(3,4-dihydroxyphenylalanine, DOPA) 산화 억제, 자외선 차단 등에 대해서 행해지고 있는데, 각질형성세포(keratinocyte)에 있는 멜라닌의 양과 분포에 따라 피부색 및 색소 침착이 결정되기 때문에 미백 효과를 검증하기 위해서는 멜라닌 형성을 억제하는지를 확인하는 것이 중요하다.
사람의 피부색을 결정하는 가장 중요한 요인인 멜라닌(melanin)은 자연계에 널리 분포하는 페놀류의 고분자 물질로서 단백질과 검은 색소의 복합체이며, 피부의 광노화나 일광각화증을 억제할 뿐만 아니라 인체 내에서 독성물질을 제거하여 세포를 보호한다. 하지만, 과잉 생산 시, 기미, 주근깨, 검버섯 등의 부분적인 과색소침착(hyperpigmentation)을 일으키고 피부 노화를 촉진시키며 피부암을 유발하는 것으로도 알려져 있다.
멜라닌은 표피 기저층에 존재하는 멜라노사이트(melanocyte) 내의 소기관인 멜라노솜(melanosome)에서 생합성되며, 멜라노사이트의 수지상 돌기를 통하여 주위의 각질형성세포로 전달되고, 피부의 각질층으로 이행한다. 멜라노솜 내에서의 멜라닌 생성과정은 티로신(tyrosine)이 티로시나제의 작용에 의해 도파(DOPA), 도파퀴논(DOPA quinone)으로 산화되고, 이들은 효소의 작용 및 자동산화 반응에 의해 도파크롬(DOPA chrome), 인돌카르복시산(indole carboxylic acid), 인돌퀴논( indole quinone)류 등으로 대사되어 최종적으로 멜라닌을 합성한다. 상기의 색소 침착을 치유하기 위해 멜라닌 생성을 억제하는 하이드로퀴논(hydroquinone), 레조르시놀(resorcinol) 등의 페놀 유도체나, L-아스코르브산(L-ascorbic acid)과 그 유도체 및 코직산(kojic acid), 알부틴(arbutin), 락틱산(lactic acid), 글루코사민(glucosamin), 튜니카마이신(tunicamycin) 등이 개발되었으나, 피부 저자극성이나 안정성에 문제가 있어 극히 제한된 양만 사용되고 있다. 이에 따라 멜라닌의 생합성을 억제하는 물질을 찾아내어 미백효과 등의 효능을 확인하는데 적용시킬 수 있다.
세포외 소포체(Extracellular Vesicles, EVs)는 세포 활동 중에 나오는 물질로, 109분의 1m 크기를 가진 나노소포체라고도 한다. 세포외 소포체는 엑소좀(exosomes), 미세소포(microvesicles), 세포 자살체(apoptotic bodies)로 3가지 군으로 구분된다. 엑소좀의 기원은 내포작용 경로(endocytic pathway)로, 크기는 30-100 nm이며, 다세포 진핵 생명체의 혈액, 오줌 등 체액과 진핵세포를 배양한 배양액에서 관찰할 수 있다. 미세소포의 기원은 원형질막(plasma membrane)으로, 크기는 50-1,000 nm이다. 세포 자살체의 기원도 원형질막이며, 크기는 500-2,000 nm 크기이다. 이러한 나노소포체를 통해 질병의 진단, 예후, 치료 등 다양한 임상 연구가 진행되고 있다.
최근 식품에서 50~300 nm 전후로 분비되는 나노소포체 및 이의 생리활성에 관해 보고되고 있으며, 현재 약물을 전달할 수 있는 천연 리포좀으로 임상적용 가능성 또한 증가하고 있으나, 아직까지 우수한 미백 효과를 가진 식품 유래 나노소포체에 대해서는 거의 보고된 바 없다.
본 발명의 목적은 독성으로부터 안전하고 우수한 미백 효과를 가진 천연물 유래 물질을 포함하는 미백용 조성물을 제공하는 데에 있다.
상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 마, 근대, 및 초가송이버섯으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 천연물 유래 나노소포체를 유효성분으로 함유하는, 피부 미백용 화장료 조성물, 이너뷰티(inner beauty)용 조성물, 및 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 마, 근대, 및 초가송이버섯으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 천연물 유래 나노소포체를 유효성분으로 함유하는, 멜라닌 과다 생성에 따른 피부 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 마 유래 나노소포체, 근대 유래 나노소포체, 및 초가송이버섯 유래 나노소포체는 천연물에서 분리되어 독성에 안전하고, 우수한 미백 효과를 가지는 바, 피부 미백 또는 멜라민 과다 생성에 따른 피부 질환의 치료 또는 개선에 활용할 수 있다.
또한, 상기 천연물 유래 나노소포체를 이용하여 다양한 형태의 기능성 미백 소재로 개발할 수 있어, 농업 경제 발전에도 기여할 수 있다.
도 1a는 본 발명의 일 실시예에 따른 마 유래 나노소포체(Y-EVs)를 제조하는 방법, 도 1b는 본 발명의 다른 실시예에 따른 근대 유래 나노소포체(BV-EVs)를 제조하는 방법, 도 1c는 본 발명의 또 다른 실시예에 따른 초가송이버섯 유래 나노소포체(초가송이-EVs)를 제조하는 방법을 개략적으로 나타낸 것이다.
도 2는 실시예 1에 따른 다양한 식물 유래 나노소포체 처리에 따른 흑색종 세포의 멜라닌 합성 억제 효과를 확인한 결과이다.
도 3은 실시예 1에 따른 다양한 식물 유래 나노소포체 처리에 따른 티로시나제 활성 억제 효과를 확인한 결과이다.
도 4는 도 1a에 따라 제조된 마 유래 나노소포체의 크기를 확인한 결과이다.
도 5는 상기 마 유래 나노소포체 처리에 따른 흑색종 세포의 세포 생존율을 확인한 결과로, 값은 평균±SE (n=4)이며, 알부틴의 농도는 0.1 mg/mL, 마 유래 나노소포체(Y-EVs)의 농도는 각각 1, 5 및 10 μg/mL이다.
도 6은 상기 마 유래 나노소포체 처리에 따른 흑색종 세포의 멜라닌 합성 억제 효과를 확인한 결과로, 값은 평균±SE (n=3)이며, 다른 글자의 막대는 던컨의 다중검정(Duncan's multiple range test)에 의해 p＜0.05에서 유의한 차이가 있음을 의미한다. 알부틴의 농도는 0.1 mg/mL, 마 유래 나노소포체(Y-EVs)의 농도는 10 μg/mL이다.
도 7은 상기 마 유래 나노소포체 처리에 따른 티로시나제 활성 억제 효과를 확인한 결과로, 각각의 농도 및 값에 대한 사항은 도 6과 동일하다.
도 8은 도 1b에 따라 제조된 근대 유래 나노소포체의 크기를 확인한 결과이다.
도 9는 상기 근대 유래 나노소포체 처리에 따른 흑색종 세포의 세포 생존율을 확인한 결과로, 값은 평균±SE (n=4)이며, 다른 글자의 막대는 던컨의 다중검정에 의해 p＜0.05에서 유의한 차이가 있음을 의미한다. 알부틴의 농도는 0.1 mg/mL, 근대 유래 나노소포체(BV-EVs)의 농도는 10 μg/mL이다.
도 10은 상기 근대 유래 나노소포체 처리에 따른 흑색종 세포의 멜라닌 합성 억제 효과를 확인한 결과로, 값은 평균±SE (n=3)이며, 그 외는 조건은 도 9와 동일하다.
도 11은 상기 근대 유래 나노소포체 처리에 따른 티로시나제 활성 억제 효과를 확인한 결과로, 상세 조건은 도 10과 동일하다.
도 12는 도 1c에 따라 제조된 초가송이버섯 유래 나노소포체의 크기를 확인한 결과이다.
도 13은 상기 초가송이버섯 유래 나노소포체 처리에 따른 흑색종 세포의 세포 생존율을 확인한 결과로, 값은 평균±SE (n=4)이며, 다른 글자의 막대는 던컨의 다중검정에 의해 p＜0.05에서 유의한 차이가 있음을 의미한다. 알부틴의 농도는 0.1 mg/mL, 초가송이버섯 유래 나노소포체(초가송이-EVs)의 농도는 0.5, 1, 5 및 10 μg/mL이다.
도 14는 상기 초가송이버섯 유래 나노소포체 처리에 따른 흑색종 세포의 멜라닌 합성 억제 효과를 확인한 결과로, 값은 평균±SE (n=3)이며, 그 외는 조건은 도 13과 동일하다.
도 15는 상기 초가송이버섯 유래 나노소포체 처리에 따른 티로시나제 활성 억제 효과를 확인한 결과로, 상세 조건은 도 14와 동일하다.
도 2는 실시예 1에 따른 다양한 식물 유래 나노소포체 처리에 따른 흑색종 세포의 멜라닌 합성 억제 효과를 확인한 결과이다.
도 3은 실시예 1에 따른 다양한 식물 유래 나노소포체 처리에 따른 티로시나제 활성 억제 효과를 확인한 결과이다.
도 4는 도 1a에 따라 제조된 마 유래 나노소포체의 크기를 확인한 결과이다.
도 5는 상기 마 유래 나노소포체 처리에 따른 흑색종 세포의 세포 생존율을 확인한 결과로, 값은 평균±SE (n=4)이며, 알부틴의 농도는 0.1 mg/mL, 마 유래 나노소포체(Y-EVs)의 농도는 각각 1, 5 및 10 μg/mL이다.
도 6은 상기 마 유래 나노소포체 처리에 따른 흑색종 세포의 멜라닌 합성 억제 효과를 확인한 결과로, 값은 평균±SE (n=3)이며, 다른 글자의 막대는 던컨의 다중검정(Duncan's multiple range test)에 의해 p＜0.05에서 유의한 차이가 있음을 의미한다. 알부틴의 농도는 0.1 mg/mL, 마 유래 나노소포체(Y-EVs)의 농도는 10 μg/mL이다.
도 7은 상기 마 유래 나노소포체 처리에 따른 티로시나제 활성 억제 효과를 확인한 결과로, 각각의 농도 및 값에 대한 사항은 도 6과 동일하다.
도 8은 도 1b에 따라 제조된 근대 유래 나노소포체의 크기를 확인한 결과이다.
도 9는 상기 근대 유래 나노소포체 처리에 따른 흑색종 세포의 세포 생존율을 확인한 결과로, 값은 평균±SE (n=4)이며, 다른 글자의 막대는 던컨의 다중검정에 의해 p＜0.05에서 유의한 차이가 있음을 의미한다. 알부틴의 농도는 0.1 mg/mL, 근대 유래 나노소포체(BV-EVs)의 농도는 10 μg/mL이다.
도 10은 상기 근대 유래 나노소포체 처리에 따른 흑색종 세포의 멜라닌 합성 억제 효과를 확인한 결과로, 값은 평균±SE (n=3)이며, 그 외는 조건은 도 9와 동일하다.
도 11은 상기 근대 유래 나노소포체 처리에 따른 티로시나제 활성 억제 효과를 확인한 결과로, 상세 조건은 도 10과 동일하다.
도 12는 도 1c에 따라 제조된 초가송이버섯 유래 나노소포체의 크기를 확인한 결과이다.
도 13은 상기 초가송이버섯 유래 나노소포체 처리에 따른 흑색종 세포의 세포 생존율을 확인한 결과로, 값은 평균±SE (n=4)이며, 다른 글자의 막대는 던컨의 다중검정에 의해 p＜0.05에서 유의한 차이가 있음을 의미한다. 알부틴의 농도는 0.1 mg/mL, 초가송이버섯 유래 나노소포체(초가송이-EVs)의 농도는 0.5, 1, 5 및 10 μg/mL이다.
도 14는 상기 초가송이버섯 유래 나노소포체 처리에 따른 흑색종 세포의 멜라닌 합성 억제 효과를 확인한 결과로, 값은 평균±SE (n=3)이며, 그 외는 조건은 도 13과 동일하다.
도 15는 상기 초가송이버섯 유래 나노소포체 처리에 따른 티로시나제 활성 억제 효과를 확인한 결과로, 상세 조건은 도 14와 동일하다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명하기로 한다.
본 발명자는 다양한 식물에서 분리한 안전한 상태의 나노소포체를 이용해서 피부미용 기능성 식품, 약품 및 피부미용 화장품 소재로서의 활용가능성 등을 탐색하던 중, 특히 마, 근대, 초가송이버섯 유래 나노소포체에서 우수한 미백 효과를 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 마, 근대, 및 초가송이버섯으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 천연물 유래 나노소포체를 유효성분으로 함유하는, 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.
본 명세서에서, "마 또는 참마(Dioscorea japonica Thunb)"는 한국, 일본, 타이완, 중국 등에 분포하는 외떡잎식물 백합목 마과의 덩굴성 여러해살이풀로, 산에서 자생하거나 약초로 재배되며, 덩이뿌리를 한방에서는 산약이라고 한다. 마의 주성분은 아밀로오스(amylose) 30%, 단백질 2.5~3.0%, 디오스신(dioscin), 그라실린(gracillin), 트릴린(trillin), 토코로게닌(tokorogenin), 요노게닌(yonogenin), 뮤신(mucin) 등으로 구성되어 있으며, 약용성분으로는 아밀로오스, 콜린(choline), 사포닌(saponin) 등을 함유하고 있어 한방에서는 신체허약, 야뇨증, 정력부족, 폐결핵, 지사제, 당뇨병 등의 치료제로 사용된다고 알려져 있다.
본 명세서에서, "근대(Beta vulgaris var. cicla)"는 원산지가 유럽 남부인 이년생 초본으로, 쌍떡잎식물 중심자목 명아주과에 속한다. 근대의 잎에는 수용성 섬유질과 비타민(엽산, 비타민 A, 비타민 C, 비타민 B3) 및 무기질(요오드, 철분, 마그네슘, 나트륨)이 풍부하며, 포화지방산과 콜레스테롤 함량이 낮다. 근대의 잎은 당뇨 개선에 우수한 효능이 있다고 알려져 있고, 그 외에 간 보호에도 효능이 있다고 보고되었으나, 미백 효과에 대한 연구는 미비한 실정이다.
상기 근대는 적근대를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서, "초가송이버섯"은 KS11로 분류되는 표고버섯(Lentinus edodes)의 개량종이다. 표고와 송이의 맛을 동시에 느낄 수 있는 장점을 가졌지만 기능성과 생리활성 연구는 전무한 실정이다.
본 명세서에서, "나노소포체(extracellular vesicle, EV)"는 다양한 세포들로부터 분비되는 막 구조의 작은 소낭으로, 다낭체와 원형질막의 융합이 일어나 세포 밖 환경으로 방출되는 소낭을 의미한다.
본 발명에 있어서, 상기 나노소포체는 초원심분리(ultracentrifugation), 밀도구배원심분리(density gradient centrifugation), 초미세여과(ultrafiltration), 사이즈 배제 크로마토그래피(size exclusion chromatography), 이온 교환 크로마토그래피(ion exchange chromatography), 면역친화성 분리(immunoaffinity capture), 미세유체기술 분리(microfluidics-based isolation), 침전(exosome precipitation), 총 엑소좀 추출 키트(total exosome isolation kit), 또는 폴리머 기반 침전(polymer based precipitation) 등의 방법을 사용하여 상기 천연물로부터 분리된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
보다 상세하게는, 상기 천연물 유래 나노소포체는 마, 근대 또는 초가송이버섯을 각각 1회 이상 원심분리하여 얻은 것일 수 있으며, 바람직하게는, 상기 나노소포체는 마 분쇄물, 근대 분쇄물 또는 초가송이버섯의 분쇄물을 250 내지 750 g에서 5 내지 15분간, 보다 바람직하게는 500 g에서 10분간 1차 원심분리하고, 상기 1차 원심분리로 수득한 상층액을 1,000 내지 3,000 g에서 10 내지 30분간, 보다 바람직하게는 2000 g에서 20분간 2차 원심분리하며, 상기 2차 원심분리로 수득한 상층액을 5,000 내지 15,000 g에서 15 내지 45분간, 보다 바람직하게는 10,000 g에서 30분간 3차 원심분리하고, 상기 3차 원심분리로 수득한 상층액을 50,000 내지 150,000 g에서 1 내지 3시간, 보다 바람직하게는 100,000 g에서 2시간 4차 원심분리하여 수득한 것으로, 상기 4차 원심분리하여 수득한 원심분리물 중 상층액을 제외한 펠렛일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 마, 근대 또는 초가송이버섯 분쇄물은 마, 근대 또는 초가송이버섯에서 선택되는 하나 이상의 천연물을 인산완충용액(PBS)에 넣어 분쇄한 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않고, 상기 천연물의 착즙물, 추출물 등으로 직접 제조한 것일 수 있으며, 또는 상업적으로 판매하는 마 분쇄물, 근대 분쇄물 또는 초가송이버섯 분쇄물, 이의 착즙물 또는 추출물 등을 구매한 것일 수 있다.
상기 나노소포체는 평균 입경이 50 내지 300 nm일 수 있으며, 바람직하게는 평균 입경이 100 내지 200 nm인 나노소포체 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 상기 천연물 유래 나노소포체를 포함하는 조성물은 멜라닌 합성을 억제하고, 티로시나제의 활성을 저해하여 우수한 미백 효과를 가지는 바, 피부 미백을 위한 화장료 조성물로 활용할 수 있다.
본 명세서에서, "미백"은 멜라닌 색소 등의 과다 침착을 억제, 저해, 또는 완화시켜, 상기 색소 침착으로 야기되는 피부의 흑화를 방지하여 피부 트러블을 개선하는 작용을 의미한다.
본 명세서에서, "화장료"란, 피부 색소 침착 등의 예방 또는 개선의 효과를 가지는 기능성 화장료를 포함할 수 있고, 상기 기능성 화장료는 일반 화장료와 달리 생리활성적인 효능, 효과가 강조된 전문적인 기능성을 갖는 것으로, 화장품법에 정의된 바에 따라 피부 미백 등 특정 효능과 효과가 강조된 화장료를 의미한다.
본 발명에 따른 피부 미백용 화장료 조성물에 있어서, 상기 나노소포체는 전체 화장료 100 중량부에 대하여 0.001 내지 50 중량부로 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 식품 의약품 안전청에 등록된 화장품 원료 리스트 및 ICID(국제화장품 원료집)에 등재되어 있는 성분 중에서 1종 이상을 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 화장료 조성물은 유기 용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 방향제, 계면활성제, 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제, 방부제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 염료 및 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 하나 이상 더 포함할 수 있다.
상기 비타민은 수용성 또는 유용성 비타민을 포함할 수 있고, 상기 수용성 비타민은 수용성 비타민으로서 화장품에 배합 가능한 것으로, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 보다 바람직하게는 콜라겐 합성이 도움을 주는 비타민 C를 포함할 수 있다. 또한, 그들의 염 (티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체(아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 포함될 수 있고, 상기 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득될 수 있다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들어, 화장수, 유액, 로션, 크림, 페이스트, 젤, 용액, 현탁액, 오일, 왁스, 팩, 파우더, 파운데이션, 스프레이, 계면활성제-함유 클렌징 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
더욱 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 수렴 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 밀크 로션, 파우더, 에센스, 아이 크림, 선로션, 선크림, 메이크업 프라이머, 메이크업 베이스, 비비크림, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징 워터, 비누, 팩, 스틱상 제품, 밤(Balm) 타입 제품, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명에 따른 화장료 조성물이 크림 또는 젤 제형인 경우에는 담체 성분으로 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등을 더 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물이 용액 또는 유탁액 제형인 경우에는 용매, 용매화제 또는 유탁화제로, 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸카보네이트, 에틸아세테이트, 벤질알코올, 프로필렌글리콜, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등을 더 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물이 현탁액 제형인 경우에는 담체 성분으로 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등을 더 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물이 파우더 또는 스프레이 제형인 경우에는 담체 성분으로 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더를 더 포함할 수 있고, 특히 스프레이 제형인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 더 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물이 계면활성제-함유 클렌징 제형인 경우에는 담체 성분으로 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등을 더 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 단독 또는 중복으로 도포하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복 도포하여 사용할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.
본 발명은 마, 근대, 및 초가송이버섯으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 천연물 유래 나노소포체를 유효성분으로 함유하는, 피부 미백용 이너뷰티(inner beauty)용 조성물을 제공한다.
본 명세서에서, "이너뷰티(inner beauty)"란, 먹는 화장품을 의미하는 것으로, 화장품을 바르는 등 인위적인 방법으로 피부 표면만을 일시적으로 좋게 만드는 것이 아니라, 식품 등을 통해 피부 속, 내부에서부터 건강한 피부를 가꾸는 것을 의미한다.
본 발명에 따른 이너뷰티용 조성물은 연화제, 항산화제, 현탁화제, 발포제, 계면활성제, 정제수, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제 중에서 선택된 어느 하나 이상의 보조제를 추가로 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않고, 화장품학적으로 허용가능한 화장품 보조제, 약학적으로 허용가능한 약학 보조제, 식품학적으로 허용가능한 식품 보조제, 생물학적 활성 화합물, 흡수성 물질, 퍼스널 케어 화합물(personal care compound), 활성 성분, 미용 보조제 중 어느 하나 또는 이들의 조합을 더 포함할 수 있다.
상기 조성물은 구강 점막용 필름, 정제, 시럽, 캡슐, 환제, 과립, 분말, 에어로졸 중에서 선택된 어느 하나 이상의 제형으로 이루어질 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
이에 상응하는 특징들은 상술된 부분에서 대신할 수 있다.
본 발명은 마, 근대, 및 초가송이버섯으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 천연물 유래 나노소포체를 유효성분으로 함유하는, 피부 미백용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
상기 조성물은 멜라닌 합성을 억제하고, 티로시나제의 활성을 저해하여 우수한 미백 효과를 가지는 바, 피부 미백을 위한 건강기능식품 조성물로 활용할 수 있다.
이에 상응하는 특징들은 상술된 부분에서 대신할 수 있다.
본 발명에 따른 건강기능식품 조성물에 있어서, 상기 건강기능식품은 분말, 과립, 정제, 캡슐, 시럽 또는 음료 등으로 제조될 수 있고, 상기 건강기능식품이 취할 수 있는 형태에는 제한이 없으며, 통상적인 의미의 식품을 모두 포함할 수 있다. 예를 들어, 음료 및 각종 드링크, 과실 및 그의 가공식품(과일통조림, 잼 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(햄, 베이컨 등), 빵류 및 면류, 쿠키 및 스낵류, 유제품(버터, 치즈 등) 등이 가능하며, 통상적인 의미에서의 기능성 식품을 모두 포함할 수 있다. 또한, 동물을 위한 사료로 이용되는 식품도 포함할 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물은 당업계에서 통상적으로 사용되는 식품학적으로 허용 가능한 식품 첨가제 및 적절한 기타 보조 성분을 더 포함하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 향미제, 천연 탄수화물, 감미제, 비타민, 전해질, 착색제, 펙트산, 알긴산, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산화제 등을 추가로 함유할 수 있다.
특히, 상기 천연 탄수화물로는 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 수크로오스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜을 사용할 수 있으며, 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 건강기능식품에 함유된 상기 나노소포체의 유효 용량은 피부 미백 목적에 따라 적절하게 조절될 수 있다. 상기 조성물은 천연물 및 식품을 원료로 하여 일반 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나, 피부 미백을 위한 보조제로 섭취될 수 있다.
본 발명은 마, 근대, 및 초가송이버섯으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 천연물 유래 나노소포체를 유효성분으로 함유하는, 멜라닌 과다 생성에 따른 피부 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
상기 나노소포체를 포함하는 조성물은 멜라닌 합성을 억제하고, 티로시나제의 활성을 저해하는 효과가 우수하여, 멜라닌 과다 생성에 따른 피부 질환을 예방 또는 치료할 수 있다.
이에 상응하는 특징들은 상술된 부분에서 대신할 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물에 있어서, 상기 멜라닌 과다 생성에 따른 피부 질환은 기미, 주근깨, 잡티, 검버섯 및 오타모반으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 색소 질환일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서, "기미(melasma)"는 불규칙한 모양, 다양한 크기의 갈색 점이 노출부위, 특히 얼굴에 발생하는 색소성 질환으로, 태양 광선에 대한 노출 등에 의해 악화될 수 있다. 주로 좌우 대칭적으로 뺨과 이마, 눈 밑에 멜라닌 색소가 침착된다.
본 명세서에서, "주근깨(freckle)"는 햇빛에 노출된 부위의 피부에 주로 생기는 황갈색의 작은 색소성 반점으로, 원인은 정확하게 밝혀져 있지 않으나, 멜라노코르틴-1-수용체(melanocortin-1-receptor)의 유전자 변이와 관련이 있으며, 자외선에 의해 피부 멜라닌 세포가 자극을 받아 멜라닌 색소의 합성이 증가하여 발생할 수 있는 것으로 알려져 있다.
본 명세서에서, "검버섯(liver spot, age spot)"은 노화 및 햇빛의 자외선 노출에 의해 형성된 피부 상의 얼룩으로, 일광흑색점(햇빛흑색점, 일광흑자, solar lentigo) 또는 간반이라고도 한다.
본 명세서에서, "오타모반(nevus of Ota)"은 눈 주위의 피부와 눈, 점막 등에 잘 발생하는 갈색 내지 푸른 색조를 띠는 반점을 말한다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 약학적 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 상기 약학 조성물은 제형에 따라 약학적으로 허용가능한 적절한 담체와 배합될 수 있고, 필요에 따라, 부형제, 희석제, 분산제, 유화제, 완충제, 안정제, 결합제, 붕해제, 용제 등을 더 포함하여 제조될 수 있다. 상기 적절한 담체 등은 본 발명에 따른 천연물 유래 나노소포체의 활성 또는 특성을 저해하지 않는 것으로, 투여 형태 및 제형에 따라 달리 선택될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 어떠한 제형으로도 적용될 수 있고, 보다 상세하게는 통상의 방법에 따라 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 비경구형 제형으로 제형화하여 사용될 수 있다.
상기 경구형 제형 중 고형 제형은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등의 형태로, 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로스, 락토오스, 솔비톨, 만니톨, 셀룰로오스, 젤라틴 등을 섞어 조제할 수 있고, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 포함될 수 있다. 또한, 캡술제형의 경우 상기 언급한 물질 외에도 지방유와 같은 액체 담체를 더 포함할 수 있다.
상기 경구형 제형 중 액상 제형은 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
상기 비경구 제형은 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. 이에 제한되지 않고, 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제를 모두 사용 가능하다.
또한, 본 발명에 따른 약학 조성물은 치료 효능의 증진을 위해 칼슘이나 비타민 D3 등을 더 첨가할 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있다.
본 명세서에서, "약학적으로 유효한 양"이란, 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미한다.
상기 약학 조성물의 유효 용량 수준은 사용 목적, 환자의 연령, 성별, 체중 및 건강 상태, 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 달리 결정될 수 있다. 예를 들어, 일정하지는 않지만 일반적으로 0.001 내지 100mg/kg으로, 바람직하게는 0.01 내지 10mg/kg을 일일 1회 내지 수회 투여될 수 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 제제 형태에 따른 적당한 투여 경로로 투여될 수 있고, 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있다. 투여 방법은 특히 한정할 필요 없이, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피부 도포, 피하, 호흡기내 흡입, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracere-broventricular) 주사 등의 통상적인 방법으로 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 멜라닌 과다 생성에 따른 피부 질환의 예방 또는 치료를 위하여 단독으로 사용될 수 있고, 수술 또는 다른 약물 치료 등과 병용하여 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 마, 근대, 및 초가송이버섯으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 천연물 유래 나노소포체를 유효성분으로 함유하는, 멜라닌 과다 생성에 따른 피부 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
이에 상응하는 특징들은 상술된 부분에서 대신할 수 있다.
또한, 본 발명은 마, 근대, 및 초가송이버섯으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 천연물 유래 나노소포체를 유효성분으로 함유하는, 티로시나제 활성 저해용 시약 조성물을 제공할 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
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실시예
1> 다양한 식물 유래
나노소포체
제조
사과, 감자, 양배추, 상추, 근대, 적근대, 고구마는 모두 안동에서 재배하여 수확된 것으로, 안동 농협에서 구입을 했으며 석류는 고흥에서 구입을 하였다. 사과, 석류, 감자, 양배추, 상추, 근대, 적근대, 고구마 모두 깨끗한 물로 흙이 없도록 세척한 다음, 각각의 식물 150 g과 iced 1X PBS (phosphate buffer saline) 500 mL을 믹서기에 넣고 5분 동안 분쇄하였다. 50 mL 코니컬 튜브(conical tube)에 앞서 분쇄한 식물의 분쇄물을 50 mL씩 담아주었다. 무게를 일정하게 맞춘 후 원심분리기를 이용하여 500 g에서 10분 동안 1회 원심분리한 후 상층액을 새 50 mL 코니컬 튜브로 옮겨 2,000 g에서 20분 동안 1회 원심분리하였다. 원심분리 후 다시 상층액을 새 50 mL 코니컬 튜브에 옮겨 담아준 다음 10,000 g에서 30분으로 2회 원심분리하였다. 그 후 원심분리기를 돌리기 위해 100,000 g 튜브에 상층액을 담고 100,000 g로 2시간 원심분리한 후 상층액을 버리고 남은 나노소포체 펠렛(pellet)을 건조시킨 뒤 1 mL의 1X PBS를 넣어서 녹여주었다.
<
실시예
2> 마 유래
나노소포체
(Y-
EVs
) 제조
실험에 사용된 마는 경상북도 안동에서 수확한 참마로, 안동 농협에서 구입하였다. 마로부터 나노소포체를 분리하는 방법은 도 1a와 같다.
구입한 마는 깨끗한 물로 흙이 없도록 세척한 후 마의 껍질을 제거한 다음, 마 150 g과 iced 1X PBS (phosphate buffer saline) 500 mL을 믹서기에 넣고 5분 동안 분쇄하였다. 이하 과정은 상기 실시예 1의 과정과 동일하게 제조되었다.
<
실시예
3> 근대 유래
나노소포체
(
BV
-
EVs
) 제조
실험에 사용된 근대는 경기도 이천에서 재배하여 수확된 것으로, (주)홈플러스에서 구입하였다. 근대로부터 나노소포체를 분리하는 방법은 도 1b에 나타난 바와 같으며, 구체적으로는 상기 실시예 1의 과정과 동일하게 제조되었다.
<
실시예
4>
초가송이버섯
유래
나노소포체
(
초가송이
-
EVs
) 제조
실험에 사용된 초가송이버섯은 경북 안동에서 재배하여 수확된 것으로, (주)홈플러스에서 구입하였다. 초가송이버섯으로부터 나노소포체를 분리하는 방법은 도 1c에 나타난 바와 같으며, 구체적으로는 상기 실시예 1의 과정과 동일하게 제조되었다.
<실험방법>
1. 나노 입자 추적 분석(
NTA
)
Malvern의 NanoSight를 이용하여 상기 실시예들에 따라 분리된 나노소포체를 분석하였다. 나노 입자 추적 분석(NTA)은 현탁액(liquid suspension) 내 직경 50 nm ~ 1000 nm 범위의 특정의 나노소포체의 크기 및 농도를 측정하였다.
2.
나노소포체
단백질 정량
상기 실시예들에 따라 분리된 나노소포체 단백질은 1X RIPA 용액을 넣어서 파쇄한 후, 비신코닌산 (bicinchoninic acid, BCA, Termo Fishers)법으로 단백질을 정량하였다.
3. 마우스 흑색종
B16F10
세포배양
마우스 흑색종 세포주인 B16F10 세포는 American Type Culture Collection (ATCC; Manassas, VA, USA, CRL-6475)로부터 분양받아 사용하였다. 세포는 1% 페니실린(penicillin)/스트렙토마이신(streptomycin) (PS; Gibco, Grand Island, NY, USA)과 10% 소태아혈청 (FBS; Gibco)을 첨가한 둘베코 수정 이글 배지(Dulbecco’s modified eagle’s medium, DMEM; Gibco)로 37℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다.
4. 세포 증식 분석 (
MTT
assay)
96 웰 플레이트에 B16F10 세포를 1.0×104 cells/well로 분주하여 24시간 배양 후, 실험군은 시료를 10μg/mL 농도로, 대조군은 시료와 동량의 증류수로 처리하였다. 48시간 후 5 mg/mL 농도로 제조한 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide (MTT; Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA) 용액 0.01 mL을 첨가하여 4시간 배양한 후 배양액을 제거하고, 각 웰 당 디메틸설폭사이드(dimethyl sulfoxide, DMSO; Sigma-Aldrich Co.) 0.1 mL을 가하여 실온에서 30분간 반응시킨 뒤 ELISA reader로 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포 생존율 측정은 대조군의 흡광도에 대한 시료 용액 첨가군 흡광도의 비율로 나타내었다.
5. 멜라닌생성(
melanogenesis
) 억제 활성 측정
B16F10 세포를 12 웰 플레이트에 1.0×105 cells/well로 분주 후 37℃, 5% CO2 세포배양기에서 24시간 배양 후 실험에 사용하였다. 멜라닌생성(melanogenesis)을 유도하기 위해 0.1μM의 멜라닌 자극 호르몬(melanin stimulating hormone, α-MSH, Sigma-Aldrich Co.)을 모든 실험군에 처리하고, 양성 대조군(positive control)으로 100μg/mL의 알부틴(arbutin)을 72시간 동안 처리하였다. 동시에 상기 실시예들에 따라 분리한 나노소포체를 각각 처리하여 72시간 배양한 후, 인산 완충 용액(phosphate buffered saline, PBS)으로 2회 세척 후, 용해 완충액(lysis buffer, 0.1 M sodium phosphate buffer, 1% triton X-100, 0.2 mMPMSF)을 이용하여 용해(lysis) 하였다. 셀 스크래퍼(cell scraper)를 이용하여 세포를 긁어낸 후, 원심 분리하여 세포 침전물을 만들었다, 4℃에서 15,000 rpm로 20분 원심분리하였다. 분리된 세포 침전물과 10% DMSO가 함유된 1 N NaOH 100μL을 80℃ 항온수조에서 1시간 동안 반응시킨 후, 마이크로플레이트 리더기(microplate reader)를 사용하여 405 nm에서 흡광도를 측정하였다.
6. 세포 내
티로시나제
(intracellular
tyrosinase
) 저해 활성 측정
B16F10 세포를 12 웰 플레이트에 1.0×105 cells/well로 분주하여 37℃, 5% CO2 세포배양기에서 24시간 배양 후, α-MSH (100 nM)와 시료를 동시 처리하여 72시간 배양하였다. 이후 용해 완충액 (0.1 M sodium phosphate buffer, 1% triton X-100, 0.2 mMPMSF)을 처리하여 용해시킨 후, 원심분리 (15,000 rpm, 20분, 4℃)하여 상등액을 분리하였다.
티로시나제 저해 활성 측정을 위한 상등액은 0.1 M 인산나트륨 완충액(sodium phosphate buffer, pH 6.8) 1 mL에 10 mM의 L-3,4-디하이드록시페닐-알라닌(L-3,4-dihydroxyphenyl-alanine, L-DOPA)을 녹인 기질액 140μL 및 상등액 60μL의 혼합액을 37℃에서 1시간 반응시켜 반응액 중에 생성된 도파 크롬(DOPA chrome)을 475 nm에서 측정하였다. BCA 단백질 분석 키트 (Thermo Scientific,USA)를 이용하여 상등액의 단백질을 정량하였다. 멜라닌 생성을 유도한 대조구를 기준으로 시료 처리구의 상대적 티로시나제 활성을 나타내었다.
7. 통계처리
실험을 통하여 얻은 결과는 SPSS/Windows 22.0(statistical package for thesocial sciences, SPSS Inc., Chicago, IL, USA) 프로그램을 이용하여 평균과 표준오차로 나타내었다. 실험군 간 평균값의 통계적 유의성은 p < 0.05 수준에서 나타내었으며, 던컨의 다중검정(Duncan's multiple range test)에 의해 사후검정하였다.
<실험결과>
<실험예 1> 다양한 식물 유래 나노소포체의 특성 확인
1-1. 다양한 식물 유래
나노소포체가
B16F10
세포의 멜라닌생성(melanogenesis) 억제에 미치는 영향 확인
사과, 석류, 감자, 양배추, 상추, 근대, 적근대, 고구마 유래 나노소포체의 천연 미백 효과를 확인하기 위하여 흑색종 (melanoma) 세포에서의 멜라닌 생합성을 측정한 결과, 도 2 에 나타난 바와 같이, 멜라닌 생합성을 촉진하는 α-MSH 처리군의 멜라닌 생합성량을 100%로 보았을 때, 양배추, 근대, 고구마는 멜라닌 생합성을 유의적으로 억제하는 것을 확인할 수 있었다.
따라서, 양배추, 근대, 고구마의 미백에 우수한 효능이 있는 것으로 사료된다.
1-2. 다양한 식물 유래
나노소포체가
B16F10
세포의
티로시나제
활성 저해에 미치는 영향 확인
티로시나제(tyrosinase)는 Cu와 결합한 효소로 동·식물, 미생물 및 사람 등에 널리 분포되어 있는 폴리페놀 산화효소(polyphenol oxidase)이며, 멜라닌 합성 과정에서 속도를 제한하는 등 멜라닌 합성의 주요한 속도 조절 효소이다.
이러한 멜라닌 생합성에 관여하는 주요 효소인 티로시나제에 대한 영향을 측정한 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, 사과, 석류, 상추, 근대, 고구마에서 티로시나아제의 억제 효과를 보여주었다.
따라서, 다양한 식물 유래 나노소포체는 티로시나제 활성을 억제함으로써 멜라닌 생합성을 감소시키고 피부 색소 침착 등을 차단할 수 있는 미백 기능성 천연 소재로써 피부 미용 기능성 식품, 약품 및 피부미용 화장품 소재로서의 활용 가능성이 높을 것으로 사료된다.
<
실험예
2> 마 유래
나노소포체(Y-EVs)의
특성 확인
2-1. 마에서 분리된
나노소포체의
물리적 특성 확인
분리한 마의 나노소포체를 ice 1X PBS에 녹인 후 세포 크기를 나노 입자 추적 분석(NTA)을 통해 확인한 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 마 나노소포체 현탁액(liquid suspension) 내 직경 147 nm 나노소포체를 확인할 수 있었다.
2-2. 마
나노소포체가
B16F10
세포 생존에 미치는 영향 확인
마 나노소포체가 B16F10 세포 생존에 미치는 영향을 확인하기 위하여 MTT assay를 실시한 결과, 도 5에 나타난 바와 같이, 마 나노소포체(Y-EVs)를 1, 5 및 10μg/mL로 72시간 처리하였을 때 세포 생존율은 각각 99.54, 100.11, 100.92%로 α-MSH를 처리한 대조군(100%)과 같은 세포 생존율을 나타내었다.
따라서, 마 나노소포체는 B16F10 세포의 생존율에 영향을 주지 않으므로 세포독성이 없는 안전한 소재임을 확인하였다.
2-3. 마
나노소포체가
B16F10
세포의 멜라닌생성 억제에 미치는 영향 확인
마 나노소포체의 천연 미백 효과를 확인하기 위하여 흑색종 세포에서의 멜라닌 생합성을 측정한 결과, 도 6에 나타난 바와 같이, 멜라닌 생합성을 촉진하는 α-MSH 처리군의 멜라닌 생합성량을 100%로 보았을 때, 마 나노소포체(10μg/mL) 처리군의 멜라닌 생합성량은 69.33% 수준으로 멜라닌 생합성을 유의적으로 억제하는 것을 확인할 수 있었다. 특히, 유의적 차이는 없었으나 미백 고시형 소재인 알부틴 처리군(76.67%)과 α-MSH 무처리군(74.00%)보다 더 낮은 값을 보였으며 미백 고시형 소재인 알부틴 처리군과 같은 수준으로 멜라닌 합성을 억제하는 것으로 나타나 미백에 우수한 효능이 있는 것으로 사료된다.
2-4. 마
나노소포체가
B16F10
세포의
티로시나제
활성 저해에 미치는 영향 확인
멜라닌 생합성에 관여하는 주요 효소인 티로시나제에 대한 영향을 측정한 결과, 도 7에 나타난 바와 같이, 마 나노소포체(10μg/mL) 처리군의 티로시나제 활성은 78.63%로 멜라닌 생합성을 촉진하는 α-MSH를 처리한 대조군의 티로시나제 활성 100%보다 유의적으로 감소하였다. 또한, 미백 고시형 소재인 알부틴 처리군(83.52%)보다 낮은 활성을 나타내어 마 나노소포체가 흑색종(melanoma) 세포에서의 티로시나제 저해 활성이 우수함을 확인할 수 있었다.
따라서, 마 나노소포체는 티로시나제 활성을 억제함으로써 멜라닌 생합성을 감소시키고 피부 색소 침착 등을 차단할 수 있는 미백 기능성 천연 소재로써 피부 미용 기능성 식품, 약품 및 피부미용 화장품 소재로서의 활용 가능성이 높을 것으로 사료된다.
<
실험예
3> 근대 유래
나노소포체(BV-EVs)의
특성 확인
3-1. 근대에서 분리된
나노소포체의
물리적 특성 확인
분리한 근대의 나노소포체를 ice 1X PBS에 녹인 후 세포 크기를 나노 입자 추적 분석(NTA)을 통해 확인한 결과, 도 8에 나타난 바와 같이, 근대 유래 나노소포체 현탁액(liquid suspension) 내 직경 130 nm 나노소포체를 확인할 수 있었다.
3-2. 근대
나노소포체가
B16F10
세포 생존에 미치는 영향 확인
근대 나노소포체가 B16F10 세포 생존에 미치는 영향을 확인하기 위하여 MTT assay를 실시한 결과, 도 9에 나타난 바와 같이, 근대 나노소포체(BV-EVs)를 10μg/mL로 72시간 처리하였을 때 세포 생존율은 각각 98.142%로, 미백 고시형 소재인 알부틴 처리군(108.23%)과 α-MSH 무처리군(102.96%) 보다 낮은 값을 보였지만, α-MSH를 처리한 대조군(100%)과 유의적으로 같은 세포 생존율을 나타내었다.
따라서, 근대 나노소포체는 B16F10 세포의 생존율에 영향을 주지 않으므로 세포독성이 없는 안전한 소재임을 확인하였다.
3-3. 근대
나노소포체가
B16F10
세포의 멜라닌생성 억제에 미치는 영향 확인
근대 나노소포체의 천연 미백 효과를 확인하기 위하여 흑색종 세포에서의 멜라닌 생합성을 측정한 결과, 도 10에 나타난 바와 같이, 멜라닌 생합성을 촉진하는 α-MSH 처리군의 멜라닌 생합성량을 100%로 보았을 때, α-MSH 무처리군(22.67%)에서 가장 낮은 값을 보였으며, 근대 나노소포체(10μg/mL) 처리군의 멜라닌 생합성량은 37.33% 수준으로 멜라닌 생합성을 유의적으로 억제하는 것을 확인할 수 있었다. 본 실험예에 따르면, 근대 나노소포체(10μg/mL) 처리군은 미백 고시형 소재인 알부틴을 100μg/mL 처리한 군(62.33%) 보다 유의적으로 멜라닌 생합성을 억제하는 것으로 나타나 미백에 우수한 효능이 있는 것으로 사료된다.
3-4. 근대
나노소포체가
B16F10
세포의
티로시나제
활성 저해에 미치는 영향 확인
근대 나노소포체의 흑색종 B16F10 세포에서의 티로시나제 저해 활성을 측정한 결과, 도 11에 나타난 바와 같이, 근대 나노소포체(10μg/mL) 처리군의 티로시나제 활성은 34.67%로 멜라닌 생합성을 촉진하는 α-MSH를 처리한 대조군의 티로시나제 활성 100%보다 유의적으로 감소하였다. 또한, 미백 고시형 소재인 알부틴 처리군(83.67%)과 α-MSH 무처리군(75.00%)보다 유의적으로 낮은 활성을 나타내어 근대 나노소포체가 흑색종 세포에서의 티로시나제 저해 활성이 우수함을 확인할 수 있었다.
따라서, 근대 나노소포체는 티로시나제 활성을 유의적으로 저해함으로써 멜라닌 생합성을 감소시키고 피부 색소 침착 등을 차단할 수 있는 미백 기능성 천연 소재로써 피부미용 기능성 식품, 약품 및 피부미용 화장품 소재로서의 활용 가능성이 높을 것으로 사료된다.
<
실험예
4>
초가송이버섯
유래
나노소포체(초가송이-EVs)의
특성 확인
4-1.
초가송이버섯에서
분리된
나노소포체의
물리적 특성 확인
분리한 초가송이버섯의 나노소포체를 ice 1X PBS에 녹인 후 세포 크기를 나노 입자 추적 분석(NTA)을 통해 확인한 결과, 도 12에 나타난 바와 같이, 근대 유래 나노소포체 현탁액(liquid suspension) 내 직경 102 nm 나노소포체를 확인할 수 있었다.
4-2.
초가송이버섯
나노소포체가
B16F10
세포 생존에 미치는 영향 확인
초가송이버섯 나노소포체가 B16F10 세포 생존에 미치는 영향을 확인하기 위하여 MTT assay를 실시한 결과, 도 13에 나타난 바와 같이, 초가송이버섯 나노소포체(초가송이-EVs)를 0.5, 1, 5 및 10μg/mL로 72시간 처리하였을 때 세포 생존율은 농도의존적으로 감소하였다. 초가송이버섯 나노소포체 0.5 내지 5μg/mL 처리군은 α-MSH를 처리한 대조군(100%)과 미백 고시형 소재인 알부틴 처리군(103.50%)과 유의적으로 같은 세포 생존율을 보였으나, 초가송이버섯 나노소포체 10μg/mL 처리군(92.00%)은 α-MSH 무처리군(96.07%)과 유의적으로 같은 수준의 세포 생존율을 나타내었다.
따라서, 초가송이버섯 나노소포체는 B16F10 세포의 생존율에 영향을 주지 않으므로 세포독성이 없는 안전한 소재임을 확인하였다.
4-3.
초가송이버섯
나노소포체가
B16F10
세포의 멜라닌생성 억제에 미치는 영향 확인
초가송이버섯 나노소포체의 천연 미백 효과를 확인하기 위하여 흑색종(melanoma) 세포에서의 멜라닌 생합성을 측정한 결과, 도 14에 나타난 바와 같이, 멜라닌 생합성을 촉진하는 α-MSH 처리군의 멜라닌 생합성량을 100%로 보았을 때, α-MSH 무처리군(22.67%)에서 가장 낮은 값을 보였으며, 초가송이버섯 나노소포체(10μg/mL) 처리군의 멜라닌 생합성량은 44.00% 수준으로 멜라닌 생합성을 유의적으로 억제하는 것을 확인할 수 있었다. 본 실험예에 따르면, 초가송이버섯 나노소포체(10μg/mL) 처리군은 미백 고시형 소재인 알부틴을 100μg/mL 처리한 군(62.33%) 보다 유의적으로 멜라닌 생합성을 억제하는 것으로 나타나 미백에 우수한 효능이 있는 것으로 사료된다.
4-4.
초가송이버섯
나노소포체가
B16F10
세포의
티로시나제
활성 저해에 미치는 영향 확인
초가송이버섯 나노소포체의 흑색종 B16F10 세포에서의 티로시나제 저해 활성을 측정한 결과, 도 15에 나타난 바와 같이, 초가송이버섯 나노소포체(10μg/mL) 처리군의 티로시나제 활성은 64.67%로 멜라닌 생합성을 촉진하는 α-MSH를 처리한 대조군의 티로시나제 활성 100%보다 유의적으로 감소하였다. 또한, 미백 고시형 소재인 알부틴 처리군(83.67%)과 α-MSH 무처리군(75.00%)보다 유의적으로 낮은 활성을 나타내어 초가송이버섯 나노소포체가 흑색종 세포에서의 티로시나제 저해 활성이 우수함을 확인할 수 있었다.
따라서, 초가송이버섯 나노소포체는 티로시나제 활성을 유의적으로 저해함으로써 멜라닌 생합성을 감소시키고 피부 색소 침착 등을 차단할 수 있는 미백 기능성 천연 소재로써 피부미용 기능성 식품, 약품 및 피부미용 화장품 소재로서의 활용 가능성이 높을 것으로 사료된다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 즉, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다.
Claims (10)
- 마, 근대, 및 초가송이버섯으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 천연물 유래 나노소포체를 유효성분으로 함유하며,
상기 나노소포체는 상기 천연물의 분쇄물을 250 내지 750 g의 속도로 5 내지 15분간 1차 원심분리하고, 상기 1차 원심분리로 수득한 상층액을 1,000 내지 3,000 g 속도로 10 내지 30분간 2차 원심분리한 다음, 상기 2차 원심분리로 수득한 상층액을 5,000 내지 15,000 g 속도로 15 내지 45분간 3차 원심분리하고, 상기 3차 원심분리로 수득한 상층액을 50,000 내지 150,000 g 속도로 1 내지 3시간 동안 4차 원심분리하여 수득한 원심분리물 중 상층액을 제외한 펠렛인 것을 특징으로 하는, 피부 미백용 화장료 조성물. - 제 1 항에 있어서,
상기 나노소포체는,
평균 입경이 50 내지 300 nm인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물. - 제 1 항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
멜라닌 합성을 억제하고, 티로시나제의 활성을 저해하는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물. - 마, 근대, 및 초가송이버섯으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 천연물 유래 나노소포체를 유효성분으로 함유하며,
상기 나노소포체는 상기 천연물의 분쇄물을 250 내지 750 g의 속도로 5 내지 15분간 1차 원심분리하고, 상기 1차 원심분리로 수득한 상층액을 1,000 내지 3,000 g 속도로 10 내지 30분간 2차 원심분리한 다음, 상기 2차 원심분리로 수득한 상층액을 5,000 내지 15,000 g 속도로 15 내지 45분간 3차 원심분리하고, 상기 3차 원심분리로 수득한 상층액을 50,000 내지 150,000 g 속도로 1 내지 3시간 동안 4차 원심분리하여 수득한 원심분리물 중 상층액을 제외한 펠렛인 것을 특징으로 하는, 피부 미백용 이너뷰티(inner beauty)용 조성물. - 제 4 항에 있어서,
상기 이너뷰티용 조성물은,
구강 점막용 필름, 정제, 시럽, 캡슐, 환제, 과립, 분말, 에어로졸 중에서 선택된 어느 하나 이상의 제형으로 이루어지는 것을 특징으로 하는, 이너뷰티(inner beauty)용 조성물. - 마, 근대, 및 초가송이버섯으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 천연물 유래 나노소포체를 유효성분으로 함유하며,
상기 나노소포체는 상기 천연물의 분쇄물을 250 내지 750 g의 속도로 5 내지 15분간 1차 원심분리하고, 상기 1차 원심분리로 수득한 상층액을 1,000 내지 3,000 g 속도로 10 내지 30분간 2차 원심분리한 다음, 상기 2차 원심분리로 수득한 상층액을 5,000 내지 15,000 g 속도로 15 내지 45분간 3차 원심분리하고, 상기 3차 원심분리로 수득한 상층액을 50,000 내지 150,000 g 속도로 1 내지 3시간 동안 4차 원심분리하여 수득한 원심분리물 중 상층액을 제외한 펠렛인 것을 특징으로 하는, 피부 미백용 건강기능식품 조성물. - 마, 근대, 및 초가송이버섯으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 천연물 유래 나노소포체를 유효성분으로 함유하며,
상기 나노소포체는 상기 천연물의 분쇄물을 250 내지 750 g의 속도로 5 내지 15분간 1차 원심분리하고, 상기 1차 원심분리로 수득한 상층액을 1,000 내지 3,000 g 속도로 10 내지 30분간 2차 원심분리한 다음, 상기 2차 원심분리로 수득한 상층액을 5,000 내지 15,000 g 속도로 15 내지 45분간 3차 원심분리하고, 상기 3차 원심분리로 수득한 상층액을 50,000 내지 150,000 g 속도로 1 내지 3시간 동안 4차 원심분리하여 수득한 원심분리물 중 상층액을 제외한 펠렛인 것을 특징으로 하는, 멜라닌 과다 생성에 따른 피부 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물. - 제 7 항에 있어서,
상기 피부 질환은,
기미, 주근깨, 잡티, 검버섯 및 오타모반으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 색소 질환인 것을 특징으로 하는, 약학 조성물. - 마, 근대, 및 초가송이버섯으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 천연물 유래 나노소포체를 유효성분으로 함유하며,
상기 나노소포체는 상기 천연물의 분쇄물을 250 내지 750 g의 속도로 5 내지 15분간 1차 원심분리하고, 상기 1차 원심분리로 수득한 상층액을 1,000 내지 3,000 g 속도로 10 내지 30분간 2차 원심분리한 다음, 상기 2차 원심분리로 수득한 상층액을 5,000 내지 15,000 g 속도로 15 내지 45분간 3차 원심분리하고, 상기 3차 원심분리로 수득한 상층액을 50,000 내지 150,000 g 속도로 1 내지 3시간 동안 4차 원심분리하여 수득한 원심분리물 중 상층액을 제외한 펠렛인 것을 특징으로 하는, 멜라닌 과다 생성에 따른 피부 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물. - 삭제
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020210108030A KR102683218B1 (ko) | 2021-08-17 | 천연물 유래 나노소포체를 포함하는 미백용 조성물 |
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|---|---|---|---|
| KR1020210108030A KR102683218B1 (ko) | 2021-08-17 | 천연물 유래 나노소포체를 포함하는 미백용 조성물 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20230026580A KR20230026580A (ko) | 2023-02-27 |
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Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015086187A (ja) * | 2013-10-31 | 2015-05-07 | 株式会社トロピカルテクノセンター | チロシナーゼ活性阻害剤及び美白用皮膚外用剤 |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015086187A (ja) * | 2013-10-31 | 2015-05-07 | 株式会社トロピカルテクノセンター | チロシナーゼ活性阻害剤及び美白用皮膚外用剤 |
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