CN100415874C - 具有产生l-氨基酸能力的埃希氏菌属细菌以及生产l-氨基酸的方法 - Google Patents

具有产生l-氨基酸能力的埃希氏菌属细菌以及生产l-氨基酸的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN100415874C
CN100415874C CNB2005101036124A CN200510103612A CN100415874C CN 100415874 C CN100415874 C CN 100415874C CN B2005101036124 A CNB2005101036124 A CN B2005101036124A CN 200510103612 A CN200510103612 A CN 200510103612A CN 100415874 C CN100415874 C CN 100415874C
Authority
CN
China
Prior art keywords
amino acid
bacterium
dna
bacterial strain
gene
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
CNB2005101036124A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1737121A (zh
Inventor
V·A·利夫希茨
N·P·扎卡塔瓦
中西一夫
V·V·阿列申
P·V·特罗申
I·L·托克马科瓦
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ajinomoto Co Inc
Original Assignee
Ajinomoto Co Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26653994&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CN100415874(C) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from RU98124016/13A external-priority patent/RU98124016A/ru
Application filed by Ajinomoto Co Inc filed Critical Ajinomoto Co Inc
Publication of CN1737121A publication Critical patent/CN1737121A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN100415874C publication Critical patent/CN100415874C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/24—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
    • C07K14/245—Escherichia (G)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/08—Lysine; Diaminopimelic acid; Threonine; Valine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/10—Citrulline; Arginine; Ornithine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/14—Glutamic acid; Glutamine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/24—Proline; Hydroxyproline; Histidine

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

本发明涉及具有产生L-氨基酸能力的埃希氏菌属细菌和使用该细菌生产L-氨基酸的方法，其中所述细菌产生L-氨基酸的能力通过增加L-氨基酸分泌蛋白的表达量得以提高。

Description

具有产生L-氨基酸能力的埃希氏菌属细菌以及生产L-氨基酸的方法
本申请是申请号为99127522.5、申请日为1999年12月30日、发明名称为“生产L-氨基酸的方法”的发明专利申请的分案申请。
本发明涉及生产氨基酸的方法。具体而言，本发明涉及属于埃希氏菌属的产L-氨基酸细菌和使用该细菌生产L-氨基酸的方法，更具体而言是生产L-谷氨酸、L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-丙氨酸、L-组氨酸、L-脯氨酸、L-精氨酸、L-缬氨酸和L-异亮氨酸的方法。
为了通过发酵生产L-氨基酸，使用了分离自自然界的菌株或该菌株的人工突变体来提高产量。例如，在生产L-赖氨酸时，已知有多种产L-赖氨酸的人工突变体，其中大多数是S-2-氨乙基半胱氨酸(AEC)抗性突变体，属于短杆菌属、棒杆菌属、芽孢杆菌属或埃希氏菌属。而且，已提出了一些增加氨基酸产量的途径，如使用通过重组DNA法获得的转化体(美国专利4,278,765)。
这些途径多数基于提高参与氨基酸生物合成途径的酶的活性，使该酶转变成对抑制不敏感等(关于埃希氏菌属细菌，参见日本专利申请公开号56-18596(1981)和国际公开WO 95/16042)。
另一方面，作为通过增加氨基酸分泌蛋白而提高氨基酸产率的例子，已知有一种属于棒杆菌属的细菌，其中L-赖氨酸分泌蛋白基因LysE被增加。然而，对于属于埃希氏菌的细菌，甚至还不知道是否存在L-氨基酸分泌蛋白。因此，使用埃希氏菌属细菌时，不知道增加L-氨基酸分泌蛋白对L-氨基酸生产是否有效。
尽管属于埃希氏菌属的大肠杆菌K-12菌株的全部核苷酸序列已经确定(Science，277，1453-1474，1997)，但其中有大量蛋白的功能还不知道。
本发明的目的是获得参与L-氨基酸分泌的蛋白，从而提供L-氨基酸产率提高的菌株和通过发酵生产L-氨基酸的改良方法。
发明人已对参与L-氨基酸分泌的蛋白进行了筛选。结果，发明人发现当增强一种特定基因时，基于消耗的糖的L-氨基酸产量增加了。基于这一发现完成了本发明。
因此，本发明提供了具有产生L-氨基酸能力的埃希氏菌属细菌，其中产L-氨基酸的能力通过增加至少一种选自以下(A)到(H)的蛋白的表达量而得到提高(以下称为“本发明的细菌”)：
(A)具有序列表中SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列的蛋白；
(B)具有在序列表中SEQ ID NO：10所示氨基酸序列中有一个或几个氨基酸缺失、置换、插入、增加或倒位的氨基酸序列的蛋白，该蛋白具有增加含该蛋白的细菌产生L-氨基酸的能力的活性；
(C)具有序列表中SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列的蛋白；
(D)具有在序列表中SEQ ID NO：12所示氨基酸序列中有一个或几个氨基酸缺失，置换、插入，增加或倒位的氨基酸序列的蛋白，该蛋白具有增加含该蛋白的细菌产生L-氨基酸的能力的活性；
(E)具有序列表中SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列的蛋白；
(F)具有在序列表中SEQ ID NO：14所示氨基酸序列中有一个或几个氨基酸缺失、置换、插入、增加或倒位的氨基酸序列的蛋白，该蛋白具有增加含该蛋白的细菌产生L-氨基酸的能力的活性；
(G)具有序列表中SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列的蛋白；或
(H)具有在序列表中SEQ ID NO：16所示氨基酸序列中有一个或几个氨基酸缺失、置换、插入、增加或倒位的氨基酸序列的蛋白，该蛋白具有增加含该蛋白的细菌产生L-氨基酸的能力的活性。
本发明的细菌优选一种产L-赖氨酸细菌，其中选自(A)到(D)，(G)和(H)的至少一种蛋白的表达量增加；一种产L-谷氨酸细菌，其中选自(A)到(H)的至少一种蛋白的表达量增加；一种产L-丙氨酸细菌，其中选自(C)和(D)的至少一种蛋白的表达量增加；一种产L-缬氨酸细菌，其中选自(C)和(D)的至少一种蛋白的表达量增加；一种产L-组氨酸细菌，其中选自(C)到(F)的至少一种蛋白的表达量增加；一种产L-脯氨酸细菌，其中选自(A)到(F)的至少一种蛋白的表达量增加；一种产L-苏氨酸细菌，其中选自(E)和(F)的至少一种蛋白的表达量增加；一种产L-精氨酸细菌，其中选自(G)和(H)的至少一种蛋白的表达量增加；或一种产L-异亮氨酸细菌，其中选自(C)和(D)的至少一种蛋白的表达量增加。
优选，本发明的细菌中编码细胞中所述蛋白的DNA的拷贝数量增加。该DNA优选携带于细胞中的多拷贝质粒或转座子上。
本发明还提供了生产L-氨基酸的方法，包括以下步骤：
在培养基中培养本发明的细菌，在培养基中产生和积累L-氨基酸；
由培养基中回收L-氨基酸(以下也称为“本发明的细菌”)。
本发明的方法优选一种使用产L-赖氨酸细菌生产L-赖氨酸的方法，所述细菌中选自(A)到(D)，(G)和(H)的至少一种蛋白的表达量增加；一种使用产L-谷氨酸细菌生产L-谷氨酸的方法，所述细菌中选自(A)到(H)的至少一种蛋白的表达量增加；一种使用产L-丙氨酸细菌生产L-丙氨酸的方法，所述细菌中选自(C)和(D)的至少一种蛋白的表达量增加；一种使用产L-缬氨酸细菌生产L-缬氨酸的方法，所述细菌中选自(C)和(D)的至少一种蛋白的表达量增加；一种使用产L-组氨酸细菌生产L-组氨酸的方法，所述细菌中选自(C)到(F)的至少一种蛋白的表达量增加；一种使用产L-脯氨酸细菌生产L-脯氨酸的方法，所述细菌中选自(A)到(F)的至少一种蛋白的表达量增加；一种使用产L-苏氨酸细菌生产L-苏氨酸的方法，所述细菌中选自(E)和(F)的至少一种蛋白的表达量增加；一种使用产L-精氨酸细菌生产L-精氨酸的方法，所述细菌中选自(G)和(H)的至少一种蛋白的表达量增加；或一种使用产L-异亮氨酸细菌生产L-异亮氨酸的方法，所述细菌中选自(C)和(D)的至少一种蛋白的表达量增加。
优选，本发明的方法中编码细菌细胞中所述蛋白的DNA的拷贝数量增加。该DNA优选携带于细胞中的多拷贝质粒或转座子上。
根据本发明，埃希氏菌属细菌产L-氨基酸的能力可以被提高。生产L-氨基酸的方法的L-氨基酸的产率也可以被提高。
以下详述本发明。以下除非另外说明氨基酸指L-构型。
(1)本发明的细菌
本发明的细菌是具有产生氨基酸能力的埃希氏菌属细菌，其中产生氨基酸的能力通过增加一种蛋白的表达量得以提高，所述蛋白具有增加所述细菌产生氨基酸能力的活性，或增加对氨基酸或氨基酸类似物的抗性的活性。以下，为方便起见该蛋白被称为“氨基酸分泌蛋白”。但使用该术语并不意味着该蛋白的功能仅限于氨基酸分泌。
氨基酸分泌蛋白的实例包括具有SEQ ID NO：10所示氨基酸序列的蛋白，具有SEQ ID NO：12所示氨基酸序列的蛋白，具有SEQ ID NO：14所示氨基酸序列的蛋白，具有SEQ ID NO：16所示氨基酸序列的蛋白。
氨基酸分泌蛋白对氨基酸可以具有选择性。适合于每一种氨基酸的氨基酸分泌蛋白可以通过以下方法确定：让氨基酸分泌蛋白在属于埃希氏菌属并具有产氨基酸能力的细菌中表达，测定氨基酸产量的增加或者氨基酸或氨基酸类似物的最小抑制浓度(MIC)的增加。
例如，在氨基酸为赖氨酸时，具有SEQ ID NO：10，12或16所示氨基酸序列的蛋白是有效的；在氨基酸为谷氨酸时，具有SEQ IDNO：10，12，14或16所示氨基酸序列的蛋白是有效的；在氨基酸为丙氨酸时，具有SEQ ID NO：12所示氨基酸序列的蛋白是有效的；在氨基酸为缬氨酸时，具有SEQ ID NO：12所示氨基酸序列的蛋白是有效的；在氨基酸为组氨酸时，具有SEQ ID NO：12或14所示氨基酸序列的蛋白是有效的；在氨基酸为脯氨酸时，具有SEQ ID NO：10，12或14所示氨基酸序列的蛋白是有效的；在氨基酸为苏氨酸时，具有SEQ ID NO：14所示氨基酸序列的蛋白是有效的；在氨基酸为精氨酸时，具有SEQ ID NO：16所示氨基酸序列的蛋白是有效的；在氨基酸为异亮氨酸时，具有SEQ ID NO：12所示氨基酸序列的蛋白是有效的。
本文中术语“表达量增加”通常是指表达量大于大肠杆菌野生型菌株如MG1655或W3110的表达量。该术语也包括当通过遗传工程技术等手段修饰得到一种菌株时，表达量大于修饰前。氨基酸分泌蛋白的表达量可通过测定氨基酸分泌蛋白直接确定，或通过测定氨基酸或氨基酸类似物的MIC，或者属于埃希氏菌属并具有氨基酸分泌蛋白的细菌的氨基酸产量间接确定。
增加氨基酸分泌蛋白表达量的方法的实例可以是增加细菌细胞中编码氨基酸分泌蛋白的DNA的拷贝数。
为了增加细胞中的拷贝数，编码氨基酸分泌蛋白的DNA片段可以与在埃希氏菌属细菌中有功能的载体连接，产生重组DNA，将其导入宿主中使宿主转化。转化菌株的细胞中编码氨基酸分泌蛋白的基因(氨基酸分泌蛋白基因)的拷贝数增加，从而增加氨基酸分泌蛋白的表达量。该载体优选为多拷贝载体。
在细胞中增加拷贝数可以通过允许宿主染色体DNA上存在氨基酸分泌蛋白基因的多个拷贝实现。向埃希氏菌属细菌染色体DNA上引入氨基酸分泌蛋白基因的多个拷贝可以通过同源重组实现，使用在染色体DNA上有多个拷贝的序列作为靶。在染色体DNA上有多个拷贝的序列可以使用转座因子末端存在的重复DNA和倒转重复。或者，优选如日本专利申请公开号2-109985(1990)中公开的，多个拷贝可以通过以下方法引入染色体DNA：使氨基酸分泌蛋白基因携带于转座子上，让转座子转座。根据上述任一种方法，在转化体菌株中氨基酸分泌蛋白基因的拷贝数增加，从而增加氨基酸分泌蛋白的表达量。
多拷贝载体的实例可以是pBR322，pMW118，pUC19等质粒载体和λ1059，λBF101.M13mp9等噬菌体载体。转座子的实例可以是Mu，Tn10，Tn5等。
向埃希氏菌属细菌引入DNA可以通过以下方法进行：D.M.Morrison(酶学方法68，326，1979)的方法，或受体细菌细胞用氯化钙处理以增加DNA的通透性的方法(Mandel，M.&Higa，A.，J.Mol.Biol.，53，159，1970)等。
除了上述基因扩增方法，增加氨基酸分泌蛋白的表达量也可以通过用作用较强的表达调节序列取代氨基酸分泌蛋白基因的启动子等表达调节序列来实现(参见日本专利申请公开号1-215280(1989))。例如，已知lac启动子、trp启动子、tac启动子、λ噬菌体PR启动子和PL启动子等为强启动子。取代启动子提高了氨基酸分泌蛋白的表达，从而增加了氨基酸分泌蛋白的表达量。表达调节序列的增强可以与增加氨基酸分泌蛋白基因的拷贝数联合使用。
在本发明的细菌中，多种氨基酸分泌蛋白的表达量可以增加。
氨基酸分泌蛋白已知由yahN基因、yeaS基因、yfiK基因和yggA基因编码，其功能还不清楚。因此，编码氨基酸分泌蛋白的DNA可以通过以下方法获得：根据已知序列(例如大肠杆菌K-12菌株的全部核苷酸序列已经确定(Science，277，1453-1474(1997)))合成引物，使用埃希氏菌属细菌的染色体DNA作为模板进行PCR扩增。目标DNA片段也可以根据已知序列制备探针，再通过杂交从埃希氏菌属细菌的染色体DNA文库中选择。或者，编码氨基酸分泌蛋白的DNA可根据已知序列合成。编码氨基酸分泌蛋白的DNA的核苷酸序列的实例见序列表中SEQ ID NO：9，11，13或15。
制备染色体DNA、制备染色体DNA文库、杂交、PCR、制备质粒DNA、消化和连接DNA、转化、选择作为引物的寡核苷酸等的方法可以是本领域技术人员熟知的普通方法。这些方法可参见Sambrook，J.，Fritsch，E.F.，&Maniatis，T。《分子克隆：实验室指南》第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)等。
氨基酸分泌蛋白可以在一个或多个位置有一个或几个氨基酸的置换、缺失、插入、增加或倒位，只要增加属于埃希氏菌属并含有该蛋白的细菌产氨基酸能力的活性未被破坏即可。“几个”取决于蛋白立体结构中的位置和氨基酸残基的种类可以有所变化。这是因为有些氨基酸如异亮氨酸和缬氨酸彼此高度类似，这些氨基酸之间的差异不会明显影响蛋白的立体结构。
编码作为上述氨基酸分泌蛋白的基本相同蛋白的DNA可以通过以下方法获得：例如利用定点诱变修饰核苷酸序列使得特定位点的一个或多个氨基酸残基发生置换、缺失、插入、增加或倒位。如上修饰的DNA可以通过常规的已知突变处理获得。突变处理包括用羟胺体外处理编码氨基酸分泌蛋白的DNA的方法，和用紫外辐射或N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(NG)和亚硝酸等常用于诱变处理的诱变剂处理携带有编码氨基酸分泌蛋白的DNA的微生物的方法，所述微生物如埃希氏菌属细菌。
一个或几个氨基酸残基的置换、缺失、插入、增加或倒位包括天然产生的突变或变异，它是由具有氨基酸分泌蛋白的单个微生物之间和种、菌株等之间的差异产生的。
编码作为氨基酸分泌蛋白的基本相同蛋白的DNA可以通过以下方法获得：让具有上述突变的DNA在属于埃希氏菌属的合适细菌细胞中表达，确定细胞中氨基酸产量的增加。
编码作为氨基酸分泌蛋白的基本相同蛋白的DNA也可以通过以下方法获得：由编码具有突变的氨基酸分泌蛋白的DNA或含所述DNA的细胞中，分离在严紧条件下与具有序列表中SEQ ID NO：9、11、13或15所示核苷酸序列的DNA杂交的DNA，该DNA编码具有增加埃希氏菌属细菌产氨基酸能力的活性的蛋白。本文中“严紧条件”指形成特异杂交体而不形成非特异杂交体的条件。该条件难以用数值明确地表示。但是，严紧条件包括例如彼此具有高同源性的DNA可杂交而低于该同源性的DNA不能杂交的条件，所述高同源性DNA如同源性不低于70％，或相当于普通Southern杂交洗涤条件的60℃，1×SSC，0.1％SDS，优选0.1×SSC，0.1％SDS的盐浓度的条件。
尽管在上述条件下杂交的基因中可能存在终止密码子位于中间的基因，或编码由于活性中心突变而失去活性的蛋白的基因，但这些基因通过以下方法易于消除：将基因与市售活性表达载体连接，确定增加上述埃希氏菌属细菌产生氨基酸能力的活性。
本文中“编码蛋白的DNA”是指双链DNA中一条链编码该蛋白的DNA。
通过在上述属于埃希氏菌属、产氨基酸的细菌中增加氨基酸分泌蛋白的表达量，可增加氨基酸的产生量。作为其中氨基酸分泌蛋白的表达量待增加的埃希氏菌属细菌，使用具有产生所需氨基酸能力(氨基酸生产力)的菌株。此外，可以将产生某种氨基酸的能力赋予其中氨基酸分泌蛋白表达量已增加的细菌。属于埃希氏菌属的产氨基酸细菌的实例包括大肠杆菌AJ13199(法国专利2747689)和可从已知材料获得的菌株(例如以下实施例中所述的大肠杆菌W3110(tyrA)/pCABD2，大肠杆菌VL614，大肠杆菌VL2054，大肠杆菌VL2160，大肠杆菌VL2151，大肠杆菌W3350 argE::Tn10/pKA10)。
作为参考，本发明的氨基酸分泌蛋白如下文所述首次进行鉴定。
发明人鉴定了埃希氏菌属细菌的rhtB和rhtC作为苏氨酸分泌蛋白基因。发明人根据氨基酸分泌蛋白可能具有共同的结构这一设想进行了检索。即对GenBank CDS，PDB，SWISS-PROT，Spupdate和PIR进行了rhtB编码蛋白同源性的BLAST和PSI-BLAST检索(Altschul，S.F.et al.，Nucleic Acid Res.，25，3389-3402(1997))。对未完成的微生物基因组进行了Tblastn检索。对SWALL数据库进行了BLITZ检索(Sturrock，S.S.&Collins，J.F.，Mpsch版本1.3.生物计算机研究小组，爱丁堡大学，英国，1993).对翻译本和SWISS-PROT数据库进行了SMART检索(Ogiwara，I.et al.，Protein Sci.，5，1991-1999，1996)。从找到的60多个序列样品中，YeaS(相当于GenBank入藏号AE000274的f212)，YahN(相当于GenBank入藏号AE000140的f223)，YfiK(相当于GenBank入藏号AE000344的o195)，YggA(相当于GenBank入藏号AE000375的f211)在来自大肠杆菌的蛋白中为与RhtB功能类似的蛋白。由于这些基因的功能均为未知，实际获得这些基因，其对氨基酸和氨基酸类似物的MIC和氨基酸产生的影响通过提高其活性进行研究.结果，发现YeaS，YfiK，YahN和YggA增加某些氨基酸和类似物的MIC。进一步研究证实，这些基因编码的蛋白具有增加氨基酸积累的作用，但它们可能具有某些氨基酸选择性。
(2)本发明的方法
本发明的方法包括在培养基中培养本发明的细菌，在培养基中产生和积累氨基酸，由培养基中回收氨基酸.
合适的氨基酸包括赖氨酸、谷氨酸、丙氨酸、缬氨酸、高丝氨酸、脯氨酸和苏氨酸。
本发明的方法中，培养埃希氏菌属细菌、由液体培养基中收集和纯化氨基酸可以按照与使用细菌通过发酵生产氨基酸的常规方法类似的方式进行。培养中使用的培养基可以是合成培养基或天然培养基，只要培养基包括所用的细菌生长必需的适量碳源、氮源和矿物质，必要时含有营养素。碳源可以包括葡萄糖和蔗糖等碳水化合物和各种有机酸.根据所用的细菌的同化能力，包括乙醇和甘油的醇类也可以使用。氮源可以使用氨、硫酸铵等铵盐、胺等含氮化合物、蛋白胨、大豆水解物和消化的发酵微生物等天然氮源。矿物质可以使用磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钠、硫酸亚铁、硫酸锰、碳酸钙。
培养优选在好气条件下进行，如振荡培养、通气培养和搅动培养。培养温度通常为20到40℃，优选30到38℃。培养pH通常为5到9，优选6.5到7.2.培养液的pH可以用氨、碳酸钙、各种酸、各种碱和缓冲剂调节。通常，培养1到3天可在培养基中积累目标氨基酸。
回收氨基酸可按以下方法进行：培养后通过离心或膜过滤除去细胞等固体物质，然后通过离子交换、浓缩和结晶分级等方法收集和纯化目标氨基酸.
以下参考实施例更具体地解释本发明.
实施例1制备编码氨基酸分泌蛋白的DNA片段
大肠杆菌K-12菌株染色体的全部核苷酸序列已经确定(Science，277，1453-1474，1997)。根据报导的核苷酸序列，合成引物，通过PCR扩增yahN，yfiK，yeaS和yggA基因。
(1)使用大肠杆菌MG1655菌株染色体DNA作为模板
通过常规方法制备染色体DNA(Sambrook，J.，Fritsch E.F.&Maniatis T.(1989)《分子克隆：实验室指南》第2版，Cold SpringHarbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.)。在PCR反应中，使用文献中所述的标准条件(《PCR操作：方法和应用》White，B.A编辑，Humana Press，Totowa，New Jersey，1993)。所得的PCR产物如下所述通过常规方法纯化和用限制酶消化。
使用引物1和引物2扩增yahN基因。
引物1：gtgtggaaccgacgccggat(互补于GenBank入藏号AE000140的登记核苷酸序列1885到1904号碱基，SEQ ID NO：17)，引物2：tgttgtatggtacggggttcgag(上述序列中223到245号碱基，SEQ ID NO：18).纯化后所得的PCR产物用限制酶PstI和StuI消化，使用连接试剂盒与PstI和EcoRV消化的载体pUC21连接(Vieira，Messing，Gene，100，189-194，1991).然后用产物转化大肠杆菌TG1感受态细胞(Sambrook，J.，Fritsch E.F.&Maniatis T.(1989)《分子克隆：实验室指南》第2版，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，Cold Spring Harbor，N.Y.)，将细胞涂布于含有10mg/mlIPTG(异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷)和40mg/ml X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)以及100mg/ml氨苄西林的L培养基(10g/l细菌用胰胨，5g/l酵母提取物，5g/l NaCl，15g/l琼脂，pH7.0)，培养过夜。挑取出现的白色菌落，进行单菌落分离以获得转化子。使用碱抽提法由转化子提取质粒，命名为pYAHN。
使用引物3和引物4扩增yeaS基因
引物3：ctttgccaatcccgtctccc(互补于GenBank入藏号AE000274的登记核苷酸序列7683到7702号碱基，SEQ ID NO：19)；引物4：gccccatgcataacggaaag(上述序列中5542到5561号碱基，SEQ ID NO：19)。纯化后所得的PCR产物用限制酶AvaI消化，并与载体pUC19连接。同上转化大肠杆菌TG1后，获得称为pYEAS的质粒。
使用引物5和引物6扩增yfiK基因
引物5：gaagatcttgtaggccggataaggcg(GenBank入藏号AE000344的登记核苷酸序列4155到4177号碱基，在其5’端加上了限制酶BglII位点，SEQ ID NO：21)
引物6：tggttttaccaattggccgc(互补于上述序列的6307到6326号碱基，SEQ ID NO：22)。
纯化后获得的PCR产物用限制酶BglII和MunI消化，并与限制酶BglII和EcoRI消化的载体pUC21连接。同上转化大肠杆菌TG1后，获得称为pYFIK的质粒。
使用引物7和引物8扩增yggA基因
引物7：acttctcccgcgagccagttc(互补于GenBank入藏号AE000375的登记核苷酸序列9606到9626号碱基，SEQ ID NO：23)。
引物8：ggcaagcttagcgcctctgtt(上述序列的8478到8498号碱基，SEQ ID NO：24)。
纯化后获得的PCR产物用限制酶HindIII和ClaI消化，与用同样限制酶消化的载体pOK12连接(Vieira，Messing，Gene，100，189-194，1991)。同上转化大肠杆菌TG1，获得称为pYGGA的质粒。
(2)用大肠杆菌W3110菌株的染色体DNA作为模板
使用引物9(SEQ ID NO：1)和引物10(SEQ ID NO：2)扩增yahN基因。
使用引物11(SEQ ID NO：3)和引物12(SEQ ID NO：4)扩增yeaS基因。
使用引物13(SEQ ID NO：5)和引物14(SEQ ID NO：6)扩增yfiK基因。
使用引物15(SEQ ID NO：7)和引物16(SEQ ID NO：8)扩增yggA基因。
纯化所获得的PCR产物，用限制酶SacI和XbaI(yggA则为EcoRI和PstI)消化，并与质粒pMW118连接(Nippon Gene)。插入了序列与报导的序列相同的DNA片段的质粒称为：
携带yahN：pMW118::yahN
携带yeaS：pMW118::yeaS
携带yfiK：pMW118::yfiK
携带yggA：pMW118::yggA
实施例2某些氨基酸和氨基酸类似物抗性的大肠杆菌中yahN，yeaS，yfiK和yggA DNA片段扩增的作用
yahN，yeaS，yfiK和yggA基因产物与谷氨酸棒杆菌赖氨酸转运者LysE(Vrljic et al.，Mol.Microbiol.，22，815-826，1996)和参与高丝氨酸分泌的RhtB蛋白的同源性，表明这些蛋白的功能类似。已知增加与抗生素和重金属外排有关的基因的表达导致对药物的抗性增加(Nikaido，H.J.Bacteriology，178，5853-5859，1996)。因此，测试了pYEAS，pYAHN，pYFIK和pYGGA质粒对TG1菌株对某些氨基酸和氨基酸类似物敏感性的作用。大肠杆菌TG1/pYEAS，TG1/pYAHN，TG1/pYFIK，TG1/pYGGA和对照菌株TG1/pUC21，TG1/pUC19和TG1/pOK12在含有合适抗生素的M9基本培养基中在摇床上过夜培养(109cfu/ml)，用M9基本培养基1∶100稀释，在同一培养基中再培养5小时。这样获得的对数期培养物稀释，大约104活细胞涂布于含双倍量氨基酸或类似物的M9琼脂的干的测试平板上。获得这些化合物的最小抑制浓度(MIC)。
结果示于表1由表1可见，多个拷贝的yfiK基因使得对脯氨酸、高丝氨酸、组氨酸、苏氨酸、谷氨酸、赖氨酸、α-氨基-β-羟基戊酸(AHVA)、S-(2-氨乙基)-L-半胱氨酸(AEC)和α-氨基丁酸的抗性增加；多个拷贝的yahN基因使得对脯氨酸的抗性增加；多个拷贝的yeaS基因使得对苏氨酸、高丝氨酸、赖氨酸、谷氨酸、组氨酸、脯氨酸和α-氨基丁酸的抗性增加；多个拷贝的yggA基因使得对S-(2-氨乙基)-L-半胱氨酸(AEC)、赖氨酸和精氨酸的抗性增加。这些结果表明，除了YahN，每一种推定的转运者均对几种底物(氨基酸和氨基酸类似物)有特异性，或由于扩增显示非特异性作用。
表1
Figure C20051010361200141
实施例3yeaS，yahN和yfiK DNA片段扩增对谷氨酸生成的影响
大肠杆菌AJ13199菌株(法国专利2747689)用载体pUC21和质粒pYAHN，pYEAS和pYFIK分别转化.获得菌株AJ13199/pUC21(VKPMB-7728)，AJ13199/pYAHN(VKPM B-7729)，AJ13199/pYEAS(VKPMB-7731)和AJ13199/pYFIK(VKPM B-7730)，
这些菌株在37℃分别于含有100mg/l氨苄西林的营养肉汤中培养18小时，0.3ml所得的培养物接种20×200mm试管中的3ml含有100mg/l氨苄西林的发酵培养基，37℃振荡培养48小时。培养后，通过已知方法确定培养基中积累的谷氨酸量。
发酵培养基的组成(g/l)：
葡萄糖        80
硫酸铵        22
磷酸氢二钾    2
氯化钠        0.8
七水硫酸镁    0.8
七水硫酸亚铁  0.02
五水硫酸锰   0.02
盐酸硫胺素   0.0002
酵母提取物   1.0
碳酸钙       30.0
180℃干热灭菌2小时，葡萄糖和磷酸氢二钾单独灭菌。
所得结果示于表2。如表2所示，菌株AJ13199/pYAHN，AJ13199/pYEAS和AJ13199/pYFIK积累的谷氨酸较氨基酸分泌蛋白的表达量未提高的AJ13199/pUC21更高。
表2
  菌株   谷氨酸，g/l
  AJ13199/pUC21   21.9
  AJ13199/pYAHN   27.9
  AJ13199/pYEAS   29.7
  AJ13199/pYFIK   28.4
实施例4yeaS，yahN和yfiK DNA片段扩增对赖氨酸生成的影响
(1)作为产赖氨酸的埃希氏菌属细菌，使用引入了质粒pCABD2(国际公开WO 95/16042)的大肠杆菌W3110(TyrA)(欧洲专利公开号488424)。具体而言，质粒pCABD2和pMW118::yahN，pMW118::yeaS，pMW118::yfi K和pMW118分别引入大肠杆菌菌株W3110(TyrA)以获得下列菌株：
W3110(tyrA)/pCABD2+pMW118::yahN
W3110(tyrA)/pCABD2+pMW118::yeaS
W3110(tyrA)/pCABD2+pMW118::yfiK
W3110(tyrA)/pCABD2+pMW118
这些菌株的赖氨酸生产力通过培养估计.所用的培养基的组成如下(g/l)
葡萄糖        40.0
七水硫酸镁    1.0
硫酸铵        16.0
磷酸氢二钾    1.0
七水硫酸亚铁       0.01
七水硫酸锰         0.01
酵母提取物(Difco)  2.0
酪氨酸             0.1
调pH为7.0，115℃高压灭菌10分钟。(葡萄糖和七水硫酸镁单独灭菌)
药用级碳酸钙       25g/l(180℃干热灭菌2小时
根据质粒的种类，加入20mg/l链霉素和50mg/l氨苄西林。在37℃以115rpm振荡培养30小时。结果示于表3。
表3
  菌株   赖氨酸(g/l)   产量(％)
  W3110(tyrA)   0.08   0.2
  W3110(tyrA)/pCABD2+pMW118   12.2   30.5
  W3110(tyrA)/pCABD2+pMW118::yahN   13.8   34.5
  W3110(tyrA)/pCABD2+pMW118::yeaS   12.7   31.8
  W3110(tyrA)/pCABD2+pMW118::yfiK   12.2   30.5
表3结果表明，由于YahN和YeaS增强，赖氨酸的产生量和基于消耗的糖的产量增加了。
(2)作为产赖氨酸的埃希氏菌属细菌，使用大肠杆菌VL614。该菌株是已知的大肠杆菌VL613(SU Patent No.1354458)的衍生菌株。菌株VL613从已知菌株Gif102(Theze，J.&Saint Girons.J.Bacteriol.，118，990-998，1974)分三步获得：
第一步，选择对2mg/ml S-(2-氨乙基)-L-半胱氨酸有抗性的突变体，其中发现菌株VL611能产生L-赖氨酸。
第二步，利用噬菌体P1介导的转导将参与蔗糖利用。定位于转座子Tn2555(Doroshenko et al.，Mol.Biologiya，22，645-658，1988)的基因引入VL611，获得菌株VL612。
第三步，来自菌株VKPM B-3996的突变rhtA23赋予对苏氨酸和高丝氨酸的抗性(美国专利5,175,107)，通过噬菌体P1转导将其引入VL612，获得菌株VL613。
大肠杆菌菌株VL614通过将来自大肠杆菌菌株VKPM B-6204(MG1655zbi3058::Tn10)rhtA基因的野生型等位基因转导进入VL613获得。转导子在含有10mg/l四环素的L-培养基中选择，其中发现有对10g/l高丝氨酸敏感的菌株VL614(rhtA+)
菌株VL614用pYGGA质粒或pOK12载体转化，获得菌株VL614/pYGGA(VKPM B-7719)和VL614/pOK12(VKPM B-7722).
这些菌株在37℃分别于含50mg/l卡那霉素的营养肉汤中培养18小时，0.3ml所得的培养物接种20×200mm试管中的3ml含有0.3g/l苏氨酸、0.3g/l甲硫氨酸和50mg/l卡那霉素的发酵培养基(实施例3)，37℃振荡培养48小时。培养后，通过已知方法确定培养基中积累的赖氨酸和谷氨酸量。
结果示于表4。
表4
  菌株   赖氨酸(g/l)   谷氨酸(g/l)
  VL614/pOK12   2.6   0.8
  VL614/pYGGA   3.6   2.2
如表4所示，菌株VL614/pYGGA较yggA基因未增强的菌株VL614/pOK12积累的赖氨酸更多。此外，菌株VL614/pYGGA较菌株VL614/pOK12积累的谷氨酸更多。
实施例5yeaS，yahN和yfiK DNA片段扩增对苏氨酸、丙氨酸、缬氨酸和异亮氨酸生成的影响
作为产苏氨酸的埃希氏菌属细菌，使用大肠杆菌菌株VL2054。该菌株按如下方法由已知的大肠杆菌菌株VKPM B-3996(美国专利5,175,107)衍生。
最初，新的受体菌株由几个步骤构建：
●菌株VKPM B-3996的无质粒衍生物在自发消除pVIC40质粒后选择。
●来自大肠杆菌菌株VKPM B-6204(MG1655 zbi3058::Tn10)的rhtA基因的野生型等位基因通过实施例4中的噬菌体P1介导的转导引入所得的菌株。
●在NG诱变和选择仍能不降解苏氨酸的卡那霉素敏感细胞后，获得插入tdh基因中的Tn5转座子中kan基因灭活的突变。因而获得VL2053菌株。
另一方面，来自pVIC40的苏氨酸操纵子被克隆进入λ噬菌体的PR启动子控制下的整合Mud载体。此外，赋予对氯霉素抗性的Tn9的cat基因被克隆进同一载体。由此获得的构建物通过已知方法(美国专利5,595,889)插入大肠杆菌C600菌株的染色体，并由所获得的菌株转导进入VL2053，得到新的无质粒产苏氨酸菌株VL2054。该菌株也在培养液中积累丙氨酸、缬氨酸和异亮氨酸。
菌株VL2054用质粒pYEAS，pYFIK和载体pUC21分别转化，获得大肠杆菌菌株VL2054/pYEAS(VKPM B-7707)，VL2054/pYFIK(VKPMB-7712)和VL2054/pUC21(VKPM B-7708)。
这些菌株分别在37℃于含有100mg/l氨苄西林的营养肉汤中培养18小时，0.3ml所得的培养物接种20×200mm试管中含100mg/l氨苄西林的3ml发酵培养基(实施例3)，37℃振荡培养48小时。培养后，培养基中积累的苏氨酸、丙氨酸、缬氨酸和异亮氨酸量通过已知方法确定。
结果示于表5。
如表5所示，菌株VL2054/pYFIK积累的苏氨酸较yfiK基因未被增强的菌株VL2054/pUC21更多。此外，菌株VL2054/pYEAS积累的丙氨酸。缬氨酸和并亮氨酸较yeaS基因未被增强的菌株VL2054/pUC21更多。
表5
Figure C20051010361200181
实施例6yeaS和yfiK DNA片段扩增对组氨酸生成的影响
作为产组氨酸的埃希氏菌属细菌，使用大肠杆菌菌株VL2160。该菌株是通过噬菌体P1介导将hisGR突变自菌株CC46转导至已知菌株NK5526hisG::Tn10(VKPM B-3384)获得，所述突变使ATP磷酸核糖基转移酶脱敏(Astvatsaturianzet al.，Genetika，24，1928-1934，1988)。大肠杆菌菌株VL2160用质粒pYEAS，pYFIK和载体pUC21分别转化获得大肠杆菌菌株VL2160/pYEAS(VKPM B-7753)，VL2160/pYFIK(VKPM B-7754)和VL2160/pUC21(VKPM B-7752)。
这些菌株分别在37℃于含有100mg/l氨苄西林的营养肉汤中培养18小时，0.3ml所得的培养物接种20×200mm试管中含有浓度提高的酵母提取物(3g/l)和100mg/l氨苄西林的3ml发酵培养基(实施例3)，34℃振荡培养68小时。
培养后，培养基中组氨酸的积累量通过已知方法确定。结果示于表6。
表6
  菌株   组氨酸，g/l
  VL2160/pUC21   1.2
  VL2160/pYEAS   1.8
  VL2160/pYFIK   1.4
如表6所示，大肠杆菌菌株VL2160/pYEAS和VL2160/pYFIK积累的组氨酸较yeaS和yfiK基因未被增强的菌株VL2160/pUC21更多。
实施例7yahN，yeaS和yfiK DNA片段扩增对脯氨酸生成的影响
作为产脯氨酸的埃希氏菌属细菌，使用大肠杆菌菌株VL2151(W3350proB*ΔputAP Tn10)。该菌株通过以下方法获得：将与Tn10连锁的ΔputAP突变转导进入W3350，选择不能利用脯氨酸作为唯一碳源的四环素抗性转导子。将所获得的菌株W3350ΔputAP Tn10用NG诱变，选择对20mg/l 3，4-脱氢-DL-脯氨酸有抗性的突变体。其中，发现菌株VL2151(W3350proB*ΔputAP Tn10)能够产生脯氨酸.
大肠杆菌菌株VL2151用质粒pYEAS，pYFIK，pYAHN和载体pUC21分别转化获得大肠杆菌菌株VL2151/pYEAS(VKPM B-7714)，VL2151/pYFIK(VKPM B-7713)，VL2151/pYAHN(VKPM B-7748)和VL2151/pUC21(VKPM B-7715)。
这些菌株分别在37℃于含有100mg/l氨苄西林的营养肉汤中培养18小时，0.3ml所得的培养物接种20×200mm试管中含有100mg/l氨苄西林的3ml发酵培养基(实施例3)，37℃振荡培养48小时。培养后培养基中脯氨酸的积累量通过已知方法确定。结果示于表7。
表7
  菌株   脯氨酸，g/l
  VL2151/pUC21   1.8
  VL2151/pYAHN   2.2
  VL2151/pYEAS   2.1
  VL2151/pYFIK   2.5
如表7所示，大肠杆菌菌株VL2151/pYFIK、VL2151/pYAHN和VL2151/pYEAS积累的脯氨酸较yfiK，yahN和yeaS基因未被增强的菌株VL2151/pUC21更多。yfiK基因的扩增效果最明显。
实施例8yggA DNA片段扩增对精氨酸生成的影响
作为产精氨酸的埃希氏菌属细菌，使用大肠杆菌菌株W3350argE::Tn 10/pKA10。该菌株携带质粒pKA10，其中含有来自黄色棒杆菌(短杆菌)的DNA区，它至少与受体菌株大肠杆菌K12中的argA和argE突变互补(Kharitonov A.&Tarasov A.P.MolecularGenetics，Microbiology and Virology，No.9，29-33，1986)。
大肠杆菌菌株W3350argE::Tn10/pKA10用质粒pYGGA或载体pOK12分别转化获得大肠杆菌菌株W3350argE::Tn10/pKA10，pYGGA(VKPM B-7716)和W3350argE::Tn10/pKA10，pOK12(VKPM B-7718)。
所得的转化子分别在37℃于含有100mg/l氨苄西林和50mg/l卡那霉素的营养肉汤中培养18小时，0.3ml所得的培养物接种20×200mm试管中含有100mg/l氨苄西林和50mg/l卡那霉素的3ml发酵培养基(实施例3)，37℃振荡培养48小时。培养后，培养基中精氨酸的积累量通过已知方法确定。
结果示于表8。
表8
  菌株   精氨酸，g/l
  W3350argE::Tn10/pKA10，pOK12   0.11
  W3350argE::Tn10/pKA10，pYGGA   0.46
如表7所示，大肠杆菌菌株W3350argE::Tn10/pKA10，pYGGA积累的精氨酸较yggA基因未被增强的菌株W3350argE::Tn10/pKA10，pUC21更多。
根据国际保藏的布达佩斯条约，下列大肠杆菌菌株于1998年11月29日保藏在俄罗斯国立工业微生物保藏中心(VKPM)，括号中为保藏号。
AJ13199/pUC21(VKPM B-7728)
AJ13199/pYAHN(VKPM B-7729)
AJ13199/pYEAS(VKPM B-7731)
AJ13199/pYFIK(VKPM B-7730)
VL614/pYGGA(VKPM B-7719)
VL614/pOK12(VKPM B-7722)
VL2054/pYEAS(VKPM B-7707)
VL2054/pYFIK(VKPM B7712)
VL2054/pUC21(VKPM B7708)
VL2160/pYEAS(VKPM B-7753)
VL2160/pYFIK(VKPM B-7754)
VL2160/pUC21(VKPM B-7752)
VL2151/pYFIK(VKPM B-7713)
VL2151/pYEAS(VKPM B-7714)
VL2151/pYAHN(VKPM B-7748)
VL2151/pUC21(VKPM B-7715)
W3350argE::Tn10/pKA10，pYGGA(VKPM B-7716)
W3350argE::Tn10/pKA10，pOK12(VKPM B-7718)
Figure C20051010361200221
Figure C20051010361200231
Figure C20051010361200251
Figure C20051010361200261
Figure C20051010361200271
Figure C20051010361200281
Figure C20051010361200291
Figure C20051010361200301
Figure C20051010361200311
Figure C20051010361200321
Figure C20051010361200341
Figure C20051010361200361

Claims (7)

1. 生产L-氨基酸的方法，包括下列步骤：
在培养基中培养一种细菌，以便在培养基中产生和积累L-氨基酸，和
从培养基中回收L-氨基酸，
其中所述细菌是具有产生L-氨基酸能力的埃希氏菌属细菌，其中产生L-氨基酸能力通过增加序列表中SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列的蛋白的表达量得到提高。
2. 权利要求1的方法，其中所述L-氨基酸是L-赖氨酸。
3. 权利要求1的方法，其中所述L-氨基酸为L-谷氨酸。
4. 权利要求1的方法，其中所述L-氨基酸为L-精氨酸。
5. 权利要求1到4任一项的方法，其中所述细菌细胞中编码所述蛋白的DNA的拷贝数增加。
6. 权利要求5的方法，其中所述DNA携带在细胞中的多拷贝载体上。
7. 权利要求5的方法，其中所述DNA携带在细胞中的转座子上。
CNB2005101036124A 1998-12-30 1999-12-30 具有产生l-氨基酸能力的埃希氏菌属细菌以及生产l-氨基酸的方法 Expired - Lifetime CN100415874C (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU98124016 1998-12-30
RU98124016/13A RU98124016A (ru) 1998-12-30 Фрагменты днк, определяющие повышенную устойчивость бактерий escherichia coli к аминокислотам или их аналогам, и способ получения l-аминокислот
RU99104431/13A RU2175351C2 (ru) 1998-12-30 1999-03-09 Фрагмент днк из escherichia coli, определяющий повышенную продукцию l-аминокислот (варианты), и способ получения l-аминокислот
RU99104431 1999-03-09

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB991275225A Division CN1228445C (zh) 1998-12-30 1999-12-30 生产l－氨基酸的细菌及方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1737121A CN1737121A (zh) 2006-02-22
CN100415874C true CN100415874C (zh) 2008-09-03

Family

ID=26653994

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB2005101036105A Expired - Lifetime CN1332021C (zh) 1998-12-30 1999-12-30 具有产生l－氨基酸能力的埃希氏菌属细菌以及生产l－氨基酸的方法
CNB2005101036124A Expired - Lifetime CN100415874C (zh) 1998-12-30 1999-12-30 具有产生l-氨基酸能力的埃希氏菌属细菌以及生产l-氨基酸的方法
CNB200510103611XA Expired - Lifetime CN100410366C (zh) 1998-12-30 1999-12-30 具有产生l-氨基酸能力的埃希氏菌属细菌以及生产l-氨基酸的方法
CNB991275225A Expired - Lifetime CN1228445C (zh) 1998-12-30 1999-12-30 生产l－氨基酸的细菌及方法

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB2005101036105A Expired - Lifetime CN1332021C (zh) 1998-12-30 1999-12-30 具有产生l－氨基酸能力的埃希氏菌属细菌以及生产l－氨基酸的方法

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB200510103611XA Expired - Lifetime CN100410366C (zh) 1998-12-30 1999-12-30 具有产生l-氨基酸能力的埃希氏菌属细菌以及生产l-氨基酸的方法
CNB991275225A Expired - Lifetime CN1228445C (zh) 1998-12-30 1999-12-30 生产l－氨基酸的细菌及方法

Country Status (15)

Country Link
US (5) US6979560B1 (zh)
EP (4) EP1598416A1 (zh)
JP (1) JP4221862B2 (zh)
KR (4) KR20000048465A (zh)
CN (4) CN1332021C (zh)
AT (3) ATE456648T1 (zh)
AU (1) AU764189B2 (zh)
BR (3) BR9906287B1 (zh)
CA (1) CA2291895A1 (zh)
DE (3) DE69942140D1 (zh)
ID (1) ID24398A (zh)
MX (1) MXPA00000177A (zh)
RU (1) RU2175351C2 (zh)
SK (1) SK187099A3 (zh)
ZA (1) ZA997767B (zh)

Families Citing this family (99)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2175351C2 (ru) 1998-12-30 2001-10-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") Фрагмент днк из escherichia coli, определяющий повышенную продукцию l-аминокислот (варианты), и способ получения l-аминокислот
BRPI0016995B1 (pt) 2000-01-21 2016-03-08 Ajinomoto Kk bactéria escherichia coli geneticamente modificada, e, método para produzir l-lisina
RU2212447C2 (ru) * 2000-04-26 2003-09-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Штамм escherichia coli - продуцент аминокислоты (варианты) и способ получения аминокислот (варианты)
CN101597589B (zh) * 2001-02-13 2011-08-24 味之素株式会社 通过埃希氏菌属细菌生产l-氨基酸的方法
BR0200350B1 (pt) * 2001-02-13 2014-10-14 Ajinomoto Kk Bactéria transgênica produtora de l-aminoácido pertencente ao gênero escherichia, e, método para produzir l-aminoácido
DE60232120D1 (de) 2001-06-12 2009-06-10 Ajinomoto Kk Verfahren zur Herstellung von L-Lysin oder L-Arginin unter Verwendung methanolassimilierender Bakterien
US7252978B2 (en) 2001-07-25 2007-08-07 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing L-arginine
RU2229513C2 (ru) 2001-11-23 2004-05-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Способ получения l-аминокислот, штамм escherichia coli - продуцент l-аминокислоты (варианты)
CN1615359B (zh) 2001-11-23 2010-04-28 味之素株式会社 利用埃希杆菌属细菌生产l-氨基酸的方法
AU2003205041A1 (en) 2002-07-12 2004-01-29 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing target substance by fermentation
DE10232930A1 (de) * 2002-07-19 2004-02-05 Consortium für elektrochemische Industrie GmbH Verfahren zur fermentativen Herstellung von Aminosäuren und Aminosäure-Derivaten der Phosphoglycerat-Familie
JP4120364B2 (ja) 2002-11-20 2008-07-16 味の素株式会社 メタノール資化性菌を用いたｌ−リジンまたはｌ−アルギニンの製造法
JP2004166592A (ja) 2002-11-20 2004-06-17 Ajinomoto Co Inc メチロトローフを用いたｌ−アミノ酸の製造法
RU2276687C2 (ru) 2003-07-16 2006-05-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Бактерия, принадлежащая к роду escherichia, - продуцент l-гистидина и способ получения l-гистидина
JP4380305B2 (ja) * 2003-11-21 2009-12-09 味の素株式会社 発酵法によるｌ−アミノ酸の製造法
PL1664318T3 (pl) 2004-01-30 2010-03-31 Ajinomoto Kk Mikroorganizm wytwarzający L-aminokwas i sposób wytwarzania L-aminokwasu
JP4665537B2 (ja) * 2004-01-30 2011-04-06 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造法
JP4665558B2 (ja) * 2004-03-04 2011-04-06 味の素株式会社 Ｌ−グルタミン酸生産微生物及びｌ−グルタミン酸の製造法
JP4836440B2 (ja) * 2004-03-10 2011-12-14 センター・フォー・ディーエヌエイ・フィンガープリンティング・アンド・ダイアグノスティックス 微生物を用いたアルギニン産生の方法
US8003367B2 (en) 2004-03-16 2011-08-23 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing L-amino acids by fermentation using bacteria having enhanced expression of xylose utilization genes
BRPI0509056A (pt) * 2004-03-31 2007-08-21 Ajinomoto Kk bactéria pertencendo ao gênero bacillus ou ao gênero escherichia, e, métodos para produzir um nucleosìdeo de purina, para produzir um nucleotìdeo de purina e para produzir ácido 5'-guanìlico
US20070004014A1 (en) * 2005-06-29 2007-01-04 Yuichiro Tsuji Method for producing l-threonine
RU2333950C2 (ru) * 2005-12-27 2008-09-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПРОДУКЦИИ АРОМАТИЧЕСКИХ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, ПРИНАДЛЕЖАЩЕЙ К РОДУ Methylophilus
EP1979486B1 (en) 2006-01-30 2013-04-17 Ajinomoto Co., Inc. L-amino acid producing bacterium and method of producing l-amino acid
JP2009089603A (ja) 2006-02-02 2009-04-30 Ajinomoto Co Inc メタノール資化性細菌を用いたｌ−リジンの製造法
JP2009118740A (ja) 2006-03-03 2009-06-04 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
WO2007119574A2 (en) 2006-03-23 2007-10-25 Ajinomoto Co., Inc. A method for producing an l-amino acid using bacterium of the enterobacteriaceae family with attenuated expression of a gene coding for small rna
JP2009165355A (ja) 2006-04-28 2009-07-30 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸を生産する微生物及びｌ−アミノ酸の製造法
JP2010017082A (ja) 2006-10-10 2010-01-28 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
JP2010041920A (ja) 2006-12-19 2010-02-25 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
RU2365622C2 (ru) * 2006-12-22 2009-08-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПРОДУКЦИИ ПУРИНОВЫХ НУКЛЕОЗИДОВ И НУКЛЕОТИДОВ МЕТОДОМ ФЕРМЕНТАЦИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИЙ, ПРИНАДЛЕЖАЩИХ К РОДУ Escherichia ИЛИ Bacillus
BRPI0703692B1 (pt) * 2006-12-25 2016-12-27 Ajinomoto Kk método para se obter os cristais de um hidrocloreto de aminoácido básico compreendendo gerar um aminoácido básico usando células microbianas por fermentação em um caldo de fermentação ou por um método enzimático em uma solução de reação de enzima usando as células como catalisadores
CN101627110B (zh) 2007-01-22 2014-08-13 味之素株式会社 生产l-氨基酸的微生物和l-氨基酸的生产方法
JP2010088301A (ja) 2007-02-01 2010-04-22 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
JP2010110216A (ja) 2007-02-20 2010-05-20 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸または核酸の製造方法
JP2010110217A (ja) 2007-02-22 2010-05-20 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造法
US20100099628A1 (en) * 2007-03-02 2010-04-22 Zyto-Protec Gmbh Carbohydrate-based peritoneal dialysis fluid comprising glutamine residue
WO2008133161A1 (ja) 2007-04-17 2008-11-06 Ajinomoto Co., Inc. カルボキシル基を有する酸性物質の製造法
RU2392322C2 (ru) * 2007-08-14 2010-06-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-ТРЕОНИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, ПРИНАДЛЕЖАЩЕЙ К РОДУ Escherichia, В КОТОРОЙ ИНАКТИВИРОВАН ГЕН yahN
CN101939412B (zh) 2007-09-04 2016-01-20 味之素株式会社 生产氨基酸的微生物以及氨基酸的生产方法
RU2396336C2 (ru) 2007-09-27 2010-08-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, ПРИНАДЛЕЖАЩЕЙ К РОДУ Escherichia
JP2011067095A (ja) 2008-01-10 2011-04-07 Ajinomoto Co Inc 発酵法による目的物質の製造法
EP2248906A4 (en) 2008-01-23 2012-07-11 Ajinomoto Kk PROCESS FOR THE PREPARATION OF L-AMINO ACID
RU2008105793A (ru) 2008-02-19 2009-08-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Способ конструирования оперонов, содержащих трансляционно сопряженные гены, бактерия, содержащая такой оперон, способ продукции полезного метаболита и способ мониторинга экспрессии гена
EP2336347B1 (en) 2008-09-08 2017-03-15 Ajinomoto Co., Inc. An l-amino acid-producing microorganism and a method for producing an l-amino acid
JP2012029565A (ja) 2008-11-27 2012-02-16 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
WO2010068953A2 (en) 2008-12-12 2010-06-17 Metabolix Inc. Green process and compositions for producing poly(5hv) and 5 carbon chemicals
JP2010142200A (ja) 2008-12-22 2010-07-01 Ajinomoto Co Inc Ｌ−リジンの製造法
BRPI1007069A2 (pt) 2009-01-23 2015-08-25 Ajinomoto Kk Método para produzir um l-aminoácido.
JP5521347B2 (ja) 2009-02-16 2014-06-11 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造法
JP5359409B2 (ja) 2009-03-12 2013-12-04 味の素株式会社 Ｌ−システイン生産菌及びｌ−システインの製造法
JPWO2011013707A1 (ja) 2009-07-29 2013-01-10 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸の製造法
JP2012223092A (ja) 2009-08-28 2012-11-15 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
JP2013013329A (ja) 2009-11-06 2013-01-24 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
JP5817529B2 (ja) 2009-11-30 2015-11-18 味の素株式会社 Ｌ−システイン生産菌及びｌ−システインの製造法
RU2460793C2 (ru) * 2010-01-15 2012-09-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) Способ получения l-аминокислот с использованием бактерий семейства enterobacteriaceae
JP2013074795A (ja) 2010-02-08 2013-04-25 Ajinomoto Co Inc 変異型ｒｐｓＡ遺伝子及びＬ−アミノ酸の製造法
RU2471868C2 (ru) 2010-02-18 2013-01-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) Мутантная аденилатциклаза, днк, кодирующая ее, бактерия семейства enterobacteriaceae, содержащая указанную днк, и способ получения l-аминокислот
RU2482188C2 (ru) 2010-07-21 2013-05-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АРГИНИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИЙ РОДА Escherichia, В КОТОРОЙ ИНАКТИВИРОВАН ОПЕРОН astCADBE
RU2501858C2 (ru) 2010-07-21 2013-12-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae
BR112013006031A2 (pt) 2010-09-14 2016-06-07 Ajinomoto Kk bactéria,e, método para produzir um aminoácido contendo enxofre, uma substância relacionada ao mesmo, ou uma mnistura dos mesmos.
JP2014036576A (ja) 2010-12-10 2014-02-27 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
JP2014087259A (ja) 2011-02-22 2014-05-15 Ajinomoto Co Inc Ｌ−システイン生産菌及びｌ−システインの製造法
WO2012137689A1 (ja) 2011-04-01 2012-10-11 味の素株式会社 Ｌ－システインの製造法
JPWO2012157699A1 (ja) 2011-05-18 2014-07-31 味の素株式会社 動物用免疫賦活剤、それを含む飼料及びその製造方法
RU2011134436A (ru) 2011-08-18 2013-10-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") Способ получения l-аминокислоты с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae, обладающей повышенной экспрессией генов каскада образования флагелл и клеточной подвижности
RU2012112651A (ru) 2012-04-02 2013-10-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") САМОИНДУЦИРУЕМАЯ ЭКСПРЕССИОННАЯ СИСТЕМА И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛЕЗНЫХ МЕТАБОЛИТОВ С ПОМОЩЬЮ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae
RU2013118637A (ru) 2013-04-23 2014-10-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ РАЗРЕГУЛИРОВАН ГЕН yjjK
RU2013140115A (ru) 2013-08-30 2015-03-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ НАРУШЕНА ЭКСПРЕССИЯ КЛАСТЕРА ГЕНОВ znuACB
JP2016192903A (ja) 2013-09-17 2016-11-17 味の素株式会社 海藻由来バイオマスからのｌ−アミノ酸の製造方法
JP5958653B2 (ja) 2013-10-02 2016-08-02 味の素株式会社 アンモニア制御装置およびアンモニア制御方法
RU2013144250A (ru) 2013-10-02 2015-04-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА, КОДИРУЮЩЕГО ФОСФАТНЫЙ ТРАНСПОРТЕР
JP6459962B2 (ja) 2013-10-21 2019-01-30 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸の製造法
JP6519476B2 (ja) 2013-10-23 2019-05-29 味の素株式会社 目的物質の製造法
RU2014105547A (ru) 2014-02-14 2015-08-20 Адзиномото Ко., Инк. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, ИМЕЮЩЕЙ СВЕРХЭКСПРЕССИРУЕМЫЙ ГЕН yajL
RU2571157C2 (ru) * 2014-03-11 2015-12-20 Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук Защитная среда высушивания для получения симбиотического препарата
KR101599800B1 (ko) * 2014-03-21 2016-03-04 씨제이제일제당 주식회사 Ｌ-아미노산의 생산능이 향상된 미생물 및 이를 이용하여 ｌ-아미노산을 생산하는 방법
RU2015120052A (ru) 2015-05-28 2016-12-20 Аджиномото Ко., Инк. Способ получения L-аминокислоты с использованием бактерии семейства Enterobacteriaceae, в которой ослаблена экспрессия гена gshA
US10400256B2 (en) 2015-06-04 2019-09-03 Cj Cheiljedang Corporation Polypeptide having the activity of exporting O-acetyl-homoserine
BR112018017227A2 (pt) 2016-02-25 2019-02-05 Ajinomoto Kk método para produzir um l-aminoácido
JP7066977B2 (ja) 2017-04-03 2022-05-16 味の素株式会社 Ｌ－アミノ酸の製造法
KR101968317B1 (ko) 2018-02-23 2019-04-11 씨제이제일제당 주식회사 신규 l-트립토판 배출 단백질 및 이를 이용한 l-트립토판을 생산하는 방법
WO2020071538A1 (en) 2018-10-05 2020-04-09 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing target substance by bacterial fermentation
US20220064681A1 (en) 2018-12-26 2022-03-03 Daesang Corporation E. coli variant strain or corynebacterium glutamicum variant strain producing l-amino acids, and method for producing l-amino acids using same
WO2020138178A1 (en) 2018-12-27 2020-07-02 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing basic l-amino acids or salts thereof by fermentation of an enterobacteriaceae bacterium
BR112021014194A2 (pt) 2019-02-22 2021-12-28 Ajinomoto Kk Método para a produção de um l-aminoácido
BR112021017870A2 (pt) 2019-04-05 2021-12-07 Ajinomoto Kk Método para produzir um l-aminoácido
KR102205717B1 (ko) 2019-04-05 2021-01-22 씨제이제일제당 주식회사 신규 l-트립토판 배출 단백질 변이체 및 이를 이용한 l-트립토판을 생산하는 방법
US20220411835A1 (en) 2019-09-03 2022-12-29 Ningxia Eppen Biotech Co., Ltd Application of transport carrier gene which improves l-tryptophan production efficiency in escherichia coli
KR102183209B1 (ko) 2019-09-09 2020-11-26 씨제이제일제당 주식회사 L-쓰레오닌 배출 단백질의 변이체 및 이를 이용한 l-쓰레오닌 생산 방법
JP2022550084A (ja) 2019-09-25 2022-11-30 味の素株式会社 細菌の発酵によるｌ－アミノ酸の製造方法
KR102139806B1 (ko) * 2020-02-13 2020-07-30 씨제이제일제당 (주) 변이형 LysE를 포함하는 미생물, 및 이를 이용한 L-아미노산 생산 방법
KR102647745B1 (ko) 2020-05-27 2024-03-14 씨제이제일제당 주식회사 신규 l-타이로신 배출 단백질 변이체 및 이를 이용한 l-타이로신을 생산하는 방법
KR102617168B1 (ko) * 2020-12-09 2023-12-21 씨제이제일제당 (주) 쉬와넬라 오네이덴시스 유래 단백질을 발현하는 미생물, 및 이를 이용한 l-아미노산 생산 방법
CN112662605B (zh) * 2020-12-30 2022-09-06 宁夏伊品生物科技股份有限公司 Yh66_10715基因改造的生产l-异亮氨酸的菌株及其构建方法和应用
CN113788881B (zh) * 2021-11-15 2022-02-11 中国科学院天津工业生物技术研究所 半胱氨酸转运蛋白突变体及其在生产l-半胱氨酸中的应用
KR20230131653A (ko) 2022-03-07 2023-09-14 씨제이제일제당 (주) 변이형 l-쓰레오닌 배출 단백질 및 이를 이용한 l-쓰레오닌 생산 방법
KR20230131654A (ko) 2022-03-07 2023-09-14 씨제이제일제당 (주) 변이형 l-쓰레오닌 배출 단백질 및 이를 이용한 l-쓰레오닌 생산 방법
CN117510598B (zh) * 2023-11-07 2024-06-21 苏州华赛生物工程技术有限公司 转运蛋白YahN在L-肌肽生产中的应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1182133A (zh) * 1996-10-15 1998-05-20 味之素株式会社 发酵生产l－氨基酸的方法

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0746994B2 (ja) * 1984-10-04 1995-05-24 味の素株式会社 発酵法によるｌ−アミノ酸の製造法
US5705371A (en) 1990-06-12 1998-01-06 Ajinomoto Co., Inc. Bacterial strain of escherichia coli BKIIM B-3996 as the producer of L-threonine
WO1990004636A1 (en) 1988-10-25 1990-05-03 Vsesojuzny Nauchno-Issledovatelsky Institut Genetiki I Selektsii Promyshlennykh Mikroorganizmov (Vniigenetika) Strain of bacteria escherichia coli, producer of l-threonine
US5976843A (en) * 1992-04-22 1999-11-02 Ajinomoto Co., Inc. Bacterial strain of Escherichia coli BKIIM B-3996 as the producer of L-threonine
US5534421A (en) 1991-05-30 1996-07-09 Ajinomoto Co., Inc. Production of isoleucine by escherichia coli having isoleucine auxotrophy and no negative feedback inhibition of isoleucine production
US6132999A (en) * 1992-09-21 2000-10-17 Ajinomoto Co., Inc. L-threonine-producing microbacteria and a method for the production of L-threonine
JPH07155184A (ja) * 1993-12-08 1995-06-20 Ajinomoto Co Inc 発酵法によるｌ−リジンの製造法
CA2114677C (en) * 1994-02-01 1997-12-30 Horacio Correia Block for constructing retaining wall
US5998178A (en) * 1994-05-30 1999-12-07 Ajinomoto Co., Ltd. L-isoleucine-producing bacterium and method for preparing L-isoleucine through fermentation
DE19548222A1 (de) 1995-12-22 1997-06-26 Forschungszentrum Juelich Gmbh Verfahren zur mikrobiellen Herstellung von Aminosäuren durch gesteigerte Aktivität von Exportcarriern
RU2144564C1 (ru) * 1998-10-13 2000-01-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" ФРАГМЕНТ ДНК rhtB, КОДИРУЮЩИЙ СИНТЕЗ БЕЛКА RhtB, ПРИДАЮЩЕГО УСТОЙЧИВОСТЬ К L-ГОМОСЕРИНУ БАКТЕРИЯМ ESCHERICHIA COLI, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ
US20060040364A1 (en) 1998-10-13 2006-02-23 Livshits Vitaly A DNA coding for a protein which imparts L-homoserine resistance to Escherichia coli bacterium, and a method for producing L-amino acids
RU2148642C1 (ru) 1998-12-23 2000-05-10 ЗАО "Научно-исследовательский институт АДЖИНОМОТО-Генетика" (ЗАО "АГРИ") Фрагмент днк rhtc, кодирующий синтез белка rhtc, придающего повышенную устойчивость к l-треонину бактериям escherichia coli, и способ получения l-аминокислоты
RU2175351C2 (ru) 1998-12-30 2001-10-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") Фрагмент днк из escherichia coli, определяющий повышенную продукцию l-аминокислот (варианты), и способ получения l-аминокислот
RU2207376C2 (ru) * 1999-10-14 2003-06-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Способ получения l-аминокислоты методом ферментации, штамм бактерии escherichia coli - продуцент l-аминокислоты (варианты)
RU2209246C2 (ru) * 2000-01-26 2003-07-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Малая субъединица изозима iii и изозим iii синтетазы ацетогидроксикислот из escherichia coli, фрагмент днк (варианты), штамм бактерии escherichia coli - продуцент l-валина (варианты) и способ получения l-валина
RU2212447C2 (ru) * 2000-04-26 2003-09-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Штамм escherichia coli - продуцент аминокислоты (варианты) и способ получения аминокислот (варианты)
JP4380029B2 (ja) * 2000-07-05 2009-12-09 味の素株式会社 微生物を利用した物質の製造法
BR0200350B1 (pt) * 2001-02-13 2014-10-14 Ajinomoto Kk Bactéria transgênica produtora de l-aminoácido pertencente ao gênero escherichia, e, método para produzir l-aminoácido
RU2229513C2 (ru) * 2001-11-23 2004-05-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Способ получения l-аминокислот, штамм escherichia coli - продуцент l-аминокислоты (варианты)
RU2333950C2 (ru) 2005-12-27 2008-09-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПРОДУКЦИИ АРОМАТИЧЕСКИХ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, ПРИНАДЛЕЖАЩЕЙ К РОДУ Methylophilus

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1182133A (zh) * 1996-10-15 1998-05-20 味之素株式会社 发酵生产l－氨基酸的方法

Also Published As

Publication number Publication date
ATE456648T1 (de) 2010-02-15
ID24398A (id) 2000-07-13
KR20070034024A (ko) 2007-03-27
EP1016710A2 (en) 2000-07-05
JP4221862B2 (ja) 2009-02-12
DE69942160D1 (de) 2010-04-29
EP1589096B1 (en) 2010-03-17
AU6449399A (en) 2000-07-06
EP1589096A1 (en) 2005-10-26
EP1016710B1 (en) 2010-03-17
US7527950B2 (en) 2009-05-05
US6979560B1 (en) 2005-12-27
ZA997767B (en) 2000-06-30
RU2175351C2 (ru) 2001-10-27
DE69942140D1 (de) 2010-04-29
DE69941991D1 (de) 2010-03-18
EP1016710A3 (en) 2000-09-06
KR20070034023A (ko) 2007-03-27
CN1261626A (zh) 2000-08-02
EP1580262B1 (en) 2010-01-27
US20080050784A1 (en) 2008-02-28
CA2291895A1 (en) 2000-06-30
ATE461270T1 (de) 2010-04-15
US20080050785A1 (en) 2008-02-28
CN100410366C (zh) 2008-08-13
MXPA00000177A (es) 2005-07-29
CN1228445C (zh) 2005-11-23
CN1737119A (zh) 2006-02-22
EP1580262A1 (en) 2005-09-28
SK187099A3 (en) 2000-08-14
CN1332021C (zh) 2007-08-15
AU764189B2 (en) 2003-08-14
JP2000189180A (ja) 2000-07-11
BR9917719B1 (pt) 2012-08-07
ATE461271T1 (de) 2010-04-15
CN1737121A (zh) 2006-02-22
BRPI9917718B8 (pt) 2016-09-13
KR20000048465A (ko) 2000-07-25
KR20070034022A (ko) 2007-03-27
BR9906287A (pt) 2001-01-23
US7399617B1 (en) 2008-07-15
EP1598416A1 (en) 2005-11-23
US20050202543A1 (en) 2005-09-15
CN1737120A (zh) 2006-02-22
BR9906287B1 (pt) 2011-09-06
BRPI9917718B1 (pt) 2015-05-26
US7524656B2 (en) 2009-04-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN100415874C (zh) 具有产生l-氨基酸能力的埃希氏菌属细菌以及生产l-氨基酸的方法
CN100577794C (zh) 生产l-赖氨酸的方法
US7179623B2 (en) Method of producing amino acids using E. coli transformed with sucrose PTS genes
CN100529057C (zh) 通过埃希氏菌属细菌生产l-氨基酸的方法
EP1217076B1 (en) Method of producing a target substance by fermentation
US20050181488A1 (en) Method for producing L-threonine using bacteria belonging to the genus Escherichia
KR20020013777A (ko) 트레오닌 및 이소류신의 제조방법
US20040229320A1 (en) Method for procucing L-amino acid using bacterium, belonging to the genus Escherichia, lacking active mlc gene
CN100366750C (zh) 通过发酵生产靶物质的方法
JP2002330763A (ja) 発酵法による目的物質の製造法
US20070166807A1 (en) Method for Producing Aromatic L-Amino Acid Using Bacterium Belonging to the Genus Methylophilus
CN1997747B (zh) 使用属于埃希氏菌属的细菌产生l-苏氨酸的方法
CN101597589A (zh) 通过埃希氏菌属细菌生产l-氨基酸的方法
CN101824392B (zh) 生产l-赖氨酸的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CX01 Expiry of patent term

Granted publication date: 20080903

CX01 Expiry of patent term