BRPI0621470A2

BRPI0621470A2 - agente terapêutico para artrite degenerativa

Info

Publication number: BRPI0621470A2
Application number: BRPI0621470-3A
Authority: BR
Inventors: Akira Asari
Original assignee: Glycoscience Lab Inc
Priority date: 2006-12-05
Filing date: 2006-12-05
Publication date: 2011-12-13
Also published as: EP1994934A1; CN101389342A; CN101389342B; EP1994934A4; US20100234322A1; WO2008068854A1; US8153614B2; CA2641571C; CA2641571A1

Abstract

AGENTE TERAPêUTICO PARA ARTRITE DEGENERATIVA. Pretende-se apresentar um agente terapêutico para a artrite degenerativa. Ele é um hialuronano como um ingrediente ativo, O hialuronano, de preferência, é o tetra- sacarídeo (HA4) contendo duas unidades de ácido D-glucurónico-<225>-1 ,3-D-N-acetilglucosamina-<225>-1 4-.

Description

"AGENTE TERAPÊUTICO PARA ARTRITE DEGENERATIVA"

Campo técnico

A invenção atual refere-se a um agente terapêutico para osteoartrite, composto de hialuronano como um ingrediente ativo.

Antecedentes da arte

O hialuronano é um polissacarídeo de cadeia longa composto de repetições de sa- carídeo do ácido D-glucurônico e N- acetíl-D-glucosamina, e ele é também conhecido como um oligossacarídeo. O hialuronano é produzido a partir de um extrato de tecido do corpo, como a crista do galo, cordão umbilical, pele, ou fluido sinovial, através de fermentação, uti- lizando a bactéria do gênero Streptococcus, ou semelhante. Como não existe nenhum efeito toxicológico ou imunológico, o hialuronano é utilizado em fármacos ou cosméticos. Por e- xemplo, é bem conhecido o tratamento de artrite utilizando uma injeção intra-articular de hialuronano. Na descrição que se segue, o HA4 representa um hialuronano tetra-sacarídeo.

Tem sido relatado que o HA4 tem efeitos de conservar órgãos e tratar/suprimir he- patopatias e úlceras do estômago (documento 1 da patente). Além disso, o HA4 é também conhecido como tendo a ação de aumentar a expressão das proteínas do estresse e inibir a morte de células (documento 1 não pertencente à patente).

A osteoartrite é uma doença de juntas associada com a artrite crônica, na qual a degeneração de componentes da junta leva à destruição da cartilagem e à alteração prolife- rativa do osso e da cartilagem.

Além disso, a artrite (sinovite) ocorre secundariamente devido à alteração mencio- nada acima. Em um estado inicial, ocorre dor após o uso demasiado de uma junta e é alivi- ada com o descanso. Quando a doença progride, ocorre a dor, mesmo durante um exercício leve ou no descanso, e com freqüência, é notada durante a noite. Uma dobra ou extensão forte ou exercício da junta faz um ruído de batida, e pode também ocorrer uma acumulação do fluido sinovial, devido à junta artrítica inchada.

Alem da degeneração dos componentes da junta (alterados com o envelhecimen- to), fatores genéticos, envelhecimento, obesidade, instabilidade da junta, sub-luxação e lu- xação repetidas, cargas excessivas das juntas devido ao trabalho, esportes de lazer, e se- melhantes, e assim por diante, são associados com a progressão da doença.

Os tratamentos iniciais incluem a administração de antiinflamatórios ou fármacos analgésicos e a aplicação de um cataplasma ou uma tira contendo um analgésico para alivi- ar a dor. O exercício para fortificar o quadricepis femoris é efetivo para o tratamento dos joelhos. Exercícios para a abducção (abaixar e levantar uma perna) é efetivo para o trata- mento das juntas do quadril. O uso de uma bengala é também efetivo para a osteoartrite nas juntas do joelho ou do quadril, porque reduz a carga sobre as juntas. A injeção intra-articular de um fármaco de proteção de junta é também efetiva. A terapia da injeção esteróide intra- articular deve ser executada com cuidado porque ela poderá acelerar a destruição da junta, se for em excesso. Quando a dor ou a degeneração é severa, operações cirúrgicas, tais como a osteotomia e a substituição por uma junta artificial são indicadas para o tratamento do joelho ou da junta do quadril.

[ Documento 1 da patente] W02002/004471

[Documento 1 não pertencente à patente] Xu H, Ito T, Tawada A, Maeda H, Yama- nokuchi H, Isahara K, Yoshida K, Uchiyama Y, Asari A. Efeito dos oligossacarídeos de hialu- ronano sobre a expressão da proteína de choque térmico 72. J. Biol. Chem. 2002 10; 277 (19): 17308- 14.

Apresentação da invenção

Um objetivo da invenção atual é apresentar um agente terapêutico para o tratamen- to da osteoartrite.

O agente terapêutico parado tratamento das osteoartrite da invenção atual, que al- cança o objetivo mencionado acima, inclui o hialuronano como o ingrediente ativo.

Como o fármaco da invenção atual inclui hialuronano como o ingrediente ativo, ele tem a vantagem de poder ser produzido facilmente em massa, com custos relativamente baixos. Além disso, como o hialuronano não tem virtualmente nenhuma toxidez ou anti- genicidade e aumenta as ações terapêuticas e de prevenção da doença originalmente apre- sentadas no organismo, ele é considerado como um agente terapêutico que tem reações adversas mínimas do fármaco. Assim sendo, de acordo com a invenção atual, pode ser a- presentado um fármaco novo que é efetivo para o tratamento da osteoartrite.

Melhor forma de se executar a invenção

Daqui por diante, a invenção atual será explicada em detalhes. Na explicação que se segue, o agente terapêutico da invenção atual será simplesmente referido como o fárma- co. É suficiente que o hialuronano contido no fármaco da invenção atual seja uma dissacarí- deo ou um sacarídeo maior, basicamente contendo pelo menos uma unidade de dissacarí- deo sendo o ácido /ff-D-glucurônico na primeira posição e /ff-D-N-acetilglucosamina na tercei- ra posição ligados um com o outro, e composto basicamente de ácido yS-D-glucurônico e β- D-N-acetilglucosamina. O hialuronano poderá também ser um sacarídeo contendo estes elementos ligados a uma ou mais unidades de dissacarídeo ou um derivado do mesmo. Por exemplo, o hialuronano tendo um grupo de proteção hidrolisável como um grupo acila e se- melhante, também pode ser utilizado. Este sacarídeo poderá ser um sacarídeo insaturado, e exemplos de sacarídeo insaturado incluem sacarídeos com um terminal não redutor, o ácido glucurônico usualmente com insaturação entre carbonos nas quarta e quinta posições, e assim por diante. Especificamente, como o hialuronano utilizado na invenção atual, aqueles extraídos de produtos naturais, como de animais, obtidos pela cultura de microorganismos, sintetizados quimicamente ou enzimaticamente, e assim por diante, podem ser utilizado. Por exemplo, ele pode ser obtido de tecidos do corpo, tais como a crista do galo, o cordão umbi- lical, e o fluido sinovial, através de métodos de extração e purificação conhecidos. Além dis- so, ele também pode ser produzido por fermentação, utilizando-se bactérias do gênero S- treptococcus.

Na invenção atual, os oligossacarídeos de hialuronano também são incluídos no escopo do hialuronano, e os hialuronanos daqueles tendo um baixo peso molecular, tais como o dissacarídeo mencionado acima, incluindo uma unidade de dissacarídeo e deriva- dos da mesma, até hialuronanos com peso molecular elevado, tendo um peso molecular médio de 4 milhões, podem ser utilizados. Exemplos preferidos dos mesmos incluem hialu- ronanos tendo um peso molecular médio em torno de 380 a 900.000, que são excelentes na permeabilidade em tecidos e semelhantes, e os hialuronanos compostos de cerca de 2 a 20 unidades de sacarídeos são os mais preferidos.

Entre os hialuronanos, de preferência, são produzidos aqueles tendo um peso mo- lecular baixo, especificamente, através de métodos para a redução do peso molecular do hialuronano por técnicas conhecidas, tais como a degradação enzimática, a degradação alcalina, tratamento térmico, e ultrasonicação (Biochem., 33 (1994) ρ 6503 - 6507), método de síntese química ou enzimática (Glycoconjugate J., (1993) pp. 435 - 439; WO 93/20827), e semelhantes. Exemplos de técnicas de degradação enzimática, incluem métodos para a produção de oligossacarídeos de hialuronano por enzimas de atuação que degradam o hia- luronano, como as enzimas de degradação de hialuronano ( hialuronidase derivada do testí- culo, hialuronidase derivada de Streptomyces, hialuronidase SD, etc.),condroitinase AC, condroitinase ACII1 condroitinase ACIII, e condroitinase ABC sobre o hialuronano (referência à "New Biochemistry Experiment Lecture Carbohydrate II: proteoglycan and glycosaminogly- can," pp. 244 - 248, 1991, Tokyo Kagaku-dojin Publishing Company, Inc.), e assim por dian- te.

Além disso, exemplos da técnica de degradação alcalina incluem um método para a obtenção de hialuronano tendo um baixo peso molecular, que é composto das etapas de adição de uma base, como cerca de hidróxido de sódio 1N em uma solução de hialuronano, o aquecimento da mistura durante várias horas para reduzir o peso molecular, e a adição de uma ácido como o ácido clorídrico, para neutralizar a mistura, e assim por diante. O hialuro- nano utilizado na invenção atual inclui a forma de um sal, e sais farmacologicamente aceitá- veis do mesmo podem ser utilizados, se necessário, para a formulação. Por exemplo, sais alcalino metálicos, tais como sais de sódio e sais de potássio, sais alcalino terroso metáli- cos, tais como sais de cálcio e sais de magnésio, sais de amina, tais como sais de tri(n-butil) amina, e sais de trietilamina, sais de piridina, e sais de aminoácido, e assim por diante.

O fármaco da invenção atual não é especialmente limitado, e o hialuronano tendo um certo peso molecular pode ser usado sozinho, ou hialuronanos tendo pesos moleculares diversos, poderão ser utilizados em combinações.

O fármaco da invenção atual é composto de hialuronano como o ingrediente ativo, e a osteoartrite pode ser melhorada pela administração de uma quantidade efetiva do mes- mo a mamíferos, incluindo seres humanos, sem efeitos adversos sobre o organismo.

O fármaco da invenção atual pode ser preparado utilizando-se hialuronano ou um sal do mesmo como é ou com veículos, excipientes, e outros aditivos, se necessário, como um fármaco para a administração oral ou parenteral (administração intersticial, como intra- articular, intravenosa, íntramuscular, ou administração subcutânea (injeção) administração enteral, administração percutânea, etc.) em uma forma de dosagem escolhida livremente, e de preferência, é administrada a um paciente através de um método livremente escolhido. É especialmente preferível que se prepare o fármaco da invenção atual como uma formulação oral.

Exemplos da formulação oral incluem formulações sólidas, tais como pós, grânulos, cápsulas, e tabletes, e formulações líquidas, tais como xaropes, elixires e emulsões. Pode ser obtido um pó misturando-se o mesmo, por exemplo, com um excipiente como lactose, amido, celulose cristalina, Iactato de cálcio, fosfato de hidrogênio e cálcio, aluminometasili- cato de magnésio, ou ácido silícico anidro. Pode ser obtido um granulo adicionando-se ain- da, por exemplo, um aglutinante, como sacarose, hidroxipropil- celulose, ou polivinilpirrolido- na, um aglutinante como carboximetilcelulose ou cálcio carboximetilcelulose, e um agente desintegrador, como carboximetilcelulose ou carboximetilcelulose de cálcio, conforme seja requerido, além dos excipientes mencionados acima, e granulando-se a mistura através de um processo úmido ou seco. Pode ser obtido um tablete produzindo-se tabletes com o pó ou grânulos mencionados acima no estado, ou adicionando-se um lubrificante, como estearato de magnésio ou talco e produzindo-se tabletes com a mistura. Além disso, o tablete ou grâ- nulo mencionado acima pode ser revestido com um veículo entérico, como ftalato de hidro- xipropilmetilcelulose, copolímeros de metacrilato de metila, ou etil celulose, ou cera de car- naúba, óleo hidrogenado, ou semelhantes, para a obtenção de uma formulação entérica ou de ação prolongada. Uma cápsula rígida pode ser obtida enchendo-se o pó ou grânulos mencionados acima em uma cápsula rígida. Pode ser obtida uma cápsula macia misturan- do-se o hialuronano ou um sal do mesmo com glicerina, polietileno glicol, óleo de sésamo, azeite, ou semelhantes, e revestindo-se a mistura com um filme de gelatina. Pode ser obtido um xarope dissolvendo-se um adoçante como sacarose, sorbitol, ou glicerina e hialuronano ou um sal do mesmo em água. Além disso, além de um adoçante e de água, pode ser adi- cionado um óleo essencial, etanol, ou semelhantes, para a obtenção de um elixir, ou goma arábica, tragacanto, polisorbato 80, carboximetilcelulose de sódio, ou semelhantes, para a obtenção de uma emulsão ou uma suspensão. Além disso, podem ser adicionados agentes de sabor, materiais corantes, conservantes, e semelhantes, nestas formulações líquidas, conforme seja requerido.

Exemplos de formulação parenteral incluem injeção, injeção intraretal, pessário, agente tópico transdérmico, inalante, aerossol, gotas para os olhos, e assim por diante. Uma formulação de injeção pode ser preparada adicionando-se um modificador de pH como áci- do clorídrico, hidróxido de sódio, ácido lático, Iactato de sódio, fosfato de hidrogênio monos- sódico, ou fosfato de diidrogênio sódico; um agente de isotonização como cloreto de sódio ou glicose; e água destilada para injeção no hialuronano ou em um sal do mesmo, a esterili- zação da mistura através de filtração, e o enchimento da mistura em uma ampola. Além dis- so, pode ser obtida uma injeção a ser dissolvida antes da utilização através da adição ainda de manitol, dextrina, ciclodextrina, gelatina, ou semelhantes, e a secagem por congelamento a vácuo da mistura. Além disso, também pode ser obtida uma emulsão para injeção, através da adição de um emulsificante como lecitina, polisorbato 80, ou óleo de rícino hidrogenado polioxietileno no hialuronano ou em um sal do mesmo e emulsificando-se a mistura em á- gua.Uma injeção intraretal pode ser obtida adicionando-se um veículo para um supositório como mono-, di-, ou triglicerídeo de ácido graxo de cacau ou polietileno glicol no hialuronano ou em um sal do mesmo, e então dissolvendo-se com aquecimento, colocando-se a mistura em um molde, e resfriando-se a mesma, ou misturando-se o hialuronano ou um sal do mesmo com polietileno glicol, óleo de soja, ou semelhante, e então revestindo-se a mistura com um filme de gelatina. Um agente transdérmico tópico pode ser obtido adicionando-se vaselina branca, cera de abelha, parafina líquida, polietileno glicol, ou semelhantes no hialu- ronano ou em um sal do mesmo, aquecendo-se a mistura, se necessário, e triturando- se a mistura. Pode ser obtida uma fita, triturando-se o hialuronano ou um sal do mesmo com um aglutinante como breu ou um polímero de éster alquil acrilato e espalhando-se a mistura sobre um tecido não tecido ou semelhante. Pode ser obtido um inalante dissolvendo-se ou dispersando-se o hialuronano ou um sal do mesmo, por exemplo, em um propelente, como um gás inerte farmaceuticamente aceitável e enchendo-se a mistura em um recipiente resis- tente à pressão.

Método de administração

O método de administração do fármaco da invenção atual composto de hialuronano como um ingrediente ativo não é especialmente limitado, e exemplos do mesmo incluem a administração intravenosa, a administração oral, e a administração intra-articular.

Dosagem

A dosagem é adequadamente determinada, dependendo da doença a ser tratada, em função da idade do paciente, das condições de saúde, e do peso do corpo, e semelhan- tes, e uma dose diária comum é de 0,05 a 50 mg/kg que é tomada de uma vez ou é dividida em mais de uma dose.

Toxidez O hialuronano utilizado na invenção atual não mostrou nenhuma ou quase nenhu- ma citotoxidez em doses nas quais foi observada a atividade biológica como um medica- mento.

Exemplos

O fármaco da invenção atual será explicado mais especificamente com referência aos exemplos seguintes. No entanto, o escopo técnico da invenção atual não é limitado a estes exemplos.

Exemplo 1

Neste exemplo, o HA4 foi administrado a camundongos C57BL/6, que desenvolve- ram espontaneamente osteoartrite, para o exame dos efeitos nos mesmos.

Modelo de osteoartrite em animal

Foram comprados camundongos machos C 57BL/6 com 20 semanas de idade, da Charles River Laboratories Japan, Inc., e foram utilizados os animais que desenvolveram osteoartrite. Os animais foram divididos no grupo de controle negativo (tratados com solução salina fisiológica) e no grupo tratado com HA4 oral (100 mg/10 ml/kg).

Administração da substância de teste

Neste exemplo, foram preparados 10 mg/ml de HA4.

Especificamente, o HA4 foi preparado pelo método de Tawada etal. (Tawada A, Masa T, Oonuki Y1 Watanabe A, Matsuzaki Y1 Asari A. Preparação em grande escala, purifi- cação e caracterização dos oligossacarídeos de hialuronano a partir de 4-mers a 52-mers. "Glycobiology", 2002; 12 (7): 421 - 6.), e a concentração foi ajustada com solução salina fisi- ológica. Além disso, a solução salina fisiológica foi preparada como um controle.

Neste exemplo, a substância de teste ou solução salina fisiológica foi administrada oralmente aos camundongos que desenvolveram osteoartrite utilizando-se uma sonda oral uma vez, diariamente, durante duas semanas.

Exame macroscópico

Os efeitos da cura da osteoartrite foram determinados macroscopicamente. Especi- ficamente, foi aplicada tinta índia na superfície da cartilagem da junta do joelho (osso dian- teiro e osso traseiro) em todos os animais em cada grupo e esfregado com uma gaze. A tinta índia que permaneceu no local envolvido foi examinada macroscopicamente utilizando- se uma avaliação entre nada e 5 (tabela 1). Para este método de avaliação, referir-se à Chang DG, Iverson EP, Schinagl RM1 Sonoda M1 Amiel D1 Coutts RD1 Sah RL. Quantifica- ção e localização da degeneração da cartilagem após a indução da osteoartrite no joelho de coelhos. Osteoarthritis Cartilage, setembro de 1997; 5(5): 357 - 72.

Tabela 1

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Resultados

Os resultados do exame macroscópico de osteoartrite são mostrados na tabela 2.

Tabela 2

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Como resultado deste exemplo, foram confirmados os efeitos terapêuticos contra a osteoartrite no grupo tratado com HA4. este resultado demonstrou que um fármaco compos- to de hialuronano como O ingrediente ativo elimina a osteoartrite.

Claims

1. Agente terapêutico para o tratamento de osteoartrite, CARACTERIZADO pelo fa- to de ser composto de hialuronano como um ingrediente ativo.

2. Agente terapêutico para o tratamento de osteoartrite, de acordo com a reivindica- ção 1, CARACTERIZADO pelo fato do hialuronano ser um tetrassacarídeo contendo duas unidades, com uma só unidade sendo ácido glucurônico-D-/?-1,3-D-N- acetilglucosamina-/?- -1,4-.

3. Agente terapêutico para o tratamento de osteoartrite, de acordo com a reivindica- ção 1, CARACTERIZADO pelo fato de ser uma formulação oral.

4. Método para o tratamento de osteoartrite, CARACTERIZADO pelo fato de ser composto de uma etapa de administração de uma quantidade efetiva de hialuronano a um indivíduo necessitando de tal tratamento.

5. Método de acordo com a reivindicação 4, CARACTERIZADO pelo fato do hialu- ronano ser um tetrassacarídeo contendo duas unidades, com uma só unidade sendo ácido glucurônico-D-β-1,3-D-N-acetilglucosamina-β-1,4-.

6. Método de acordo com a reivindicação 4, CARACTERIZADO pelo fato do hialu- ronano ser administrado oralmente.