BRPI0108957B1 - inibidores da atividade da a-amilase - Google Patents

Abstract

"inibidores da atividade da <244>-amilase". um inibidor da atividade da <244>-amilase contendo como componente ativo polifenóis que são obtidos pela extração de folhas de goiaba e/ou frutos com um ou mais solventes selecionados entre água e solventes hidrofílicos, eliminando materiais que apresentam um peso molecular menor que 5.000 por ultrafiltração, utilizando cromatografia hidrofóbica com o uso de butila de suporte acondicionada como a fase sólida, eluindo sob gradiente de concentração em etapas de uma solução aquosa 0,02 mol/1 de diidrogeniofosfato monossódico e uma solução aquosa 0,02 mol/1 de fosfato trissódico com taxa de fluxo de 1 ml/min e então coletar uma fração reconhecida como o terceiro pico simples no caso de medição da absorbância a 260 nm; um inibidor da atividade da <244>-amilase contendo como componente ativo polifenóis que apresentam propriedades físico-químicas específicas; e alimentos e bebidas, etc., contendo o mesmo.

Description

"INIBIDORES DA ATIVIDADE DA Ct-AMILASE" CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção está relacionada a um inibidor da atividade da α-amilase contendo como um componente ativo poiifenóis provenientes da goiaba (Psidim gua.ja.va Linn. ) (na presente invenção também denominada "poiifenóis da goiaba"), e para alimentos e bebidas contendo o inibidor.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Atualmente, consumidores se tornaram mais conscientes da limitação da ingestão de calorias, porque a ingestão de calorias em excesso é uma causa importante de doenças em adultos atribuíveis a hábitos não saudáveis. Entretanto, se existem substâncias que podem inibir, ou suprimir, a conversão do alimento ingerido em energia no corpo humano, tais substâncias podem ser úteis para as pessoas que precisam fazer dieta, porque as mesmas podem permitir que as pessoas não precisem reduzir a ingestão de alimentos. Particularmente, a digestão inibida de carboídratos pelo amido é considerada eficaz para a prevenção e terapia da obesidade, e, portanto, recentemente, as substâncias que inibem a atividade da α-amilase, uma enzima digestiva para amido, se tornaram interessantes. A goiaba é um arbusto proveniente da América Central e seus frutos, raízes e folhas são utilizados como remédios populares para o tratamento da diabetes e diarréia. De acordo com estudos recentes, um extrato obtido da extração das folhas de goiaba com agua ou um solvente hidrofílico inibe a atividade da α-amilase. A Publicação da Patente Ja- ponesa (kokuku) No. 60-36746 descreve que o extrato pode ser utilizado como um componente de bebidas saudáveis e a Exposição do Pedido de Patente Japonesa (Kokai) No. 7-59539 descreve que o extrato pode ser utilizado como um componente de alimentos e bebidas dietéticas.

Entretanto, extratos convencionais de goiaba também contêm sesquíterpeno, tanino e outros componentes e, além disso, sua atividade inibidora da α-amilase não é necessariamente satisfatória para o objetivo de se obter o efeito dietético desejado.

Desta forma, um objetivo da presente invenção é isolar a partir de extrato de goiaba, um componente que apresente uma atividade inibidora da α-amilase particularmente e, conseqüentemente, garanta fornecer um efeito dietê-tico mais eficaz. Outro objetivo da presente invenção é fornecer alimentos e bebidas contendo o componente.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS A Fig. 1 é uma representação do espectro de absorção de raios infravermelhos dos polifenóis de goiaba. A Fig. 2 é uma representação do espectro da rotação da polarização cruzada com ângulo mágico (CP-MAS) dos polifenóis de goiaba. A Fig. 3 é uma representação da curva de eluição dos polifenóis de goiaba purificados. A Fig. 4 é uma representação dos resultados obtidos pela análise da cromatografia liquida dos polifenóis de goiaba.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

Em virtude do descrito acima, os presentes inventores desenvolveram estudos extensos sobre componentes altamente moleculares de um extrato de goiaba e descobriram que uma classe específica de polifenóis, obtida através de um processo conforme definido na presente invenção, exibe uma alta atividade inibidora da α-amilase. Resumidamente, de acordo com o processo da presente invenção, um extrato aquo-so de folhas ou frutos da goiaba é submetido a ultrafiltra-ção e frações que apresentam um peso molecular de 5.000 ou mais são submetidas ao fracionamento através de cromatogra-fia hidrofóbica específica. A presente invenção foi desenvolvida baseada nesta descoberta.

Desta forma, a presente invenção fornece um inibidor da atividade da α-amilase compreendendo como um componente eficaz, polifenóis obtidos através do seguinte processo.· folhas e/ou frutos da goiaba são submetidos à extração com um ou mais solventes selecionados entre água e solventes hidrofilicos; o extrato resultante é submetido à ultrafil-tração, para dessa forma remover substâncias que apresentam um peso molecular menor do que 5,000,- a fração remanescente é aplicada a uma coluna de cromatografia hidrofóbica com suporte de butila e a eluiçao é realizada utilizando uma solução aquosa de diidrogenofosfato de sódio {0,02 mol/1) (taxa de fluxo: 1 ml/minuto) sob um gradiente de pH entre as duas soluções; e é recuperada uma fração da substância eluída, cuja fração corresponde ao terceiro pico simples de uma cur- va de eluição obtida guando a absorbância da substância é medida com 260 nm. A presente invenção também fornece um inibidor da atividade da α-amilase compreendendo, como um componente eficaz, polifenóis que apresentam as seguintes propriedades fisicoquímicas: (a) conter carbono (49,6%), hidrogênio (4,6%) e nitrogênio (0,6%); (b) apresentar um peso molecular de 5.000 100.000; (c) exibir intensa absorção de raios infravermelhos próximo de 3.428 cm"1, 1.705 cm'1, 1.615 cm'1 e 1.220 cm'1; (d) exibir espectro de ressonância magnética nu- clear de carbono sólido correspondente a um sinal de açúcar (próximo a 76 ppm) , um sinal aromático (próximo a 115,0 ppm), um sinal de fenol (próximo a 144 e 156 ppm) e um sinal de éster de carbonila (próximo a 168 ppm); e (e) exibir um pico único em cerca de 10 minutos quando submetido â cromatografia liquida sob as seguintes condições: coluna: uma coluna preenchida com gel de distribuição da fase reversa tipo polímero sintético duro na qual grupos butila são ligados quimicamente (modelo: Shodex Asahipak C4P-50 4D (produto da Showa Denko), diâmetro interno: 4,6 mm, comprimento: 150 mm) , ou uma coluna similar a esta); taxa de fluxo: 1,5 ml/minuto; temperatura da coluna: uma temperatura específica em torno de 4 0°C; detector: absorciômetro (comprimento de onda: 260 nm) ; fase móvel: solução A: uma mistura de solução de acetoric tr ila contendo NaH2P04 (0,02 mol/1) e água (15:85 (v/v) ) (pH = 4,6), e solução B: uma mistura de solução de acetonitrila contendo Na3P04 (0,02 mol/1) e água (15:85 (v/v)) (pH = 11,4), e método de análise: uma análise de gradiente da etapa realizada com base nos dados listados na tabela abaixo .

Tabela 1 ____Tempo de análise (min)______Solução A (%) Solução B (%) 0 (a 4) 100 0 4 (a 8) 65 35 8 (a 12) 0 100 ___________12 (a 20)__________________100______________0_______ A presente invenção também fornece alimentos e bebidas contendo σ inibidor da atividade da a-amilase. A presente invenção também fornece o uso de poli-fenõis para produção de alimentos e bebidas dietéticas.

A presente invenção também fornece um método die-tético que compreende a ingestão de alimentos e bebidas. MELHOR FORMA PARA REALIZAR A IHVENCÃQ

Os polifenõis da presente invenção podem ser produzidos através das etapas 1-3 descritas abaixo. 1) ETAPA 1 Folhas e frutos da goiaba são submetidos à extração com um ou mais solventes selecionados entre água e solventes hidrofílicos, para desta forma se obter um extrato de goiaba. A goiaba empregada na presente invenção é Peidium guajava Linn. , e a região em que a goiaba se desenvolve não é particularmente limitada. Na presente invenção, a goiaba que ocorre naturalmente ou é cultivada em zonas tropicais ou subtropicais do sudeste da Ásia, sul da Ásia, América do Sul ou América do Norte pode ser empregada. Na presente invenção, as folhas ou frutos da goiaba podem ser empregados. Goiaba bruta, semi-seca ou seca pode ser empregada, mas preferencialmente, folhas de goiaba secas em particular são empregadas. Quando o fruto da goiaba é empregado, o fruto verde é preferencialmente utilizado. Tais folhas ou frutos da goiaba, utilizados como material bruto, são preferencialmente pulverizadas antes do uso. Por exemplo, quando folhas de goiaba são utilizadas, as folhas são preferencialmente cortadas em pedaços que apresentam o tamanho de cerca de 3-5 mm. Entretanto, a goiaba que é seca e então torrada pode ser utilizada para melhorar o sabor.

Um ou mais solventes selecionados entre água e solventes hidrofí.licos são utilizados como solvente de extração. Exemplos dos solventes hidrofílicos incluem metanol, etanol, álcool n-propílico, acetona e propilenoglicol, Estes solventes podem ser utilizados combinados com duas ou mais espécies. Alternativamente, estes solventes podem ser misturados com água com uma taxa arbitraria para uso na forma de solvente contendo água. Para facilitar a operação e melhorar a segurança, a água é mais preferencialmente empregada como o solvente de extração. A quantidade dc solvente de extração empregado não é particularmente limitada. Entretanto, quando as folhas de goiaba são empregadas, a proporção do peso das folhas em relação ao solvente é preferencialmente de 1:20. Quando o fruto da goiaba verde é empregado, o peso do solvente é preferencialmente cerca de 10 vezes o peso do fruto.

Quando as folhas de goiaba são submetidas à extração, as condições da extração variam de acordo com o tipo do solvente que é empregado. Quando a água é utilizada como o solvente, a extração é realizada à temperatura de 50~100°C, preferencialmente â temperatura de 80-100°C, por 5-60 minutos, preferencialmente 5-25 minutos.

Quando o fruto da goiaba verde é utilizado, a extração é realizada preferencíalmente à temperatura de 60-100°C por 10-60 minutos.

Quando a extração é realizada, um ãlcali, tal como bicarbonato de sódio, pode ser adicionado ao solvente de extração, para desse modo aumentar o pH do solvente. Alternativamente, um ácido mineral diluído (por exemplo, ácido clorídrico diluído) ou um ácido orgânico (por exemplo, ácido succínico, ácido cítrico, ácido láctico, ácido mãlico ou ácido tartãrico) pode ser adicionado ao solvente de extração, tornando o solvente fracamente ácido.

Apõs o término da fase de extração, preferencialmente, o extrato resultante ê resfriado e então submetido à centrifugação, removendo impurezas do extrato. O extrato de goiaba obtido então pode ser concentrado ou diluído para se obter uma concentração apropriada. 2} ETAPA 2 O extrato de goiaba obtido através da etapa 1 é submetido â ultraf iltração, para com isso remover as substâncias de baixo peso molecular que apresentam um peso molecular menor do que 5.000.

Para a ultrafiltração do extrato de goiaba, pode ser utilizado um método que emprega um sistema de filtração tipo prensa, diãlise, centrifugação, etc. Estes métodos e técnicas podem ser utilizados em combinação.

Quando a diãlise é realizada, c extrato de goiaba é colocado em um tubo de diãlise formado por uma membrana semipermeãvel que pode ser permeada por uma substância que apresenta um peso molecular menor do que 5.000, a membrana sendo formada a partir de um material, tal como éster de celulose ou celofane. Subsequentemente, o extrato de goiaba é dialisado contra água ou um tampão diluído (na presente invenção denominado como dialisado) por um a sete dias, preferencialmente dois a três dias, enquanto o dialisado é trocado periodicamente por um dialisado fresca ou água, o fluxo induzido constantemente. Através do procedimento acima, as substâncias de baixo peso molecular são difundidas no diali-sado para remover as substâncias do extrato de goiaba. 3) ETAPA 3 Uma fração que apresenta um peso molecular de 5.000 ou mais obtida através da etapa 2 é submetida a croma-tografia hidrofõbíca com suporte de butila. O material foi aplicado à coluna e a eluição (taxa de fluxo: 1 ml/min) da amostra foi realizada com o gradiente do pH a partir da solução de diidrogenofosfato (0,02 mol/1) para solução de fosfato de sódio (0,02 mol/1). O preenchedor empregado na cromatografia hidrofõ-bica como uma fase estacionária, não é particularmente limitado, a medida que a carga suporta grupos butila como grupos funcionais e apresentam força mecânica satisfatória. Exemplos de preencbedores incluem poliestireno, poliestireno carboxilado, poli(acrilato de metila), e derivados de celulose .

Uma solução aquosa de diidrogenofosfato de sódio (0,02 mol/1) e uma solução aquosa de fosfato de sódio (0,02 mol/1) são empregadas como uma fase móvel, e a eluição é realizada sob um gradiente de concentração entre as duas soluções .

Os solventes são passados através da coluna (taxa de fluxo: 1 ml/min) e o padrão de separação da substância eluída é obtido medindo a absorbância da substância eluída a 260 nm. Subsequentemente, uma fração que corresponde ao terceiro pico simples do padrão é recuperada e a fração re- cuperada é seca a vácuo ou seca por congelamento, para com isso se obter os polifenóis da presente invenção.

As propriedades fisico-químicas da fração solúvel em água obtidas conforme descrito acima serão descritas posteriormente .

ANÁLISE ELEMENTAR

As análises elementares são realizadas através de um método de rotina. Os resultados estão apresentados na Tabela 2 .

Tabela 2 Resultados da análise elementar Em virtude do teor muito baixo de nitrogênio, considera-se que a fração não contém proteína.

PESO MOLECULAR O peso molecular da fração foi determinado através de GPC-HPLC pela ajuda de um detector de dispersão de luz muiti-angular de acordo com um método habitual. O peso molecular da fração foi considerado como sendo de 5.000 - 100.000 e o peso médio molecular foi considerado com sendo de 70.000.

ANÁLISE DOS COMPONENTES O teor de açúcar da fração foi obtido conforme abaixo: uma amostra foi aquecida e decomposta em ácido tri- fluoracético à temperatura de 100°C por duas horas; um derivado do acetato de nitrila aldônico foi formado de acordo com um método de rotina; e então o teor de açúcar foi calculado através da análise de cromatografia gasosa. Os resultados: glicose (2,1%), arabinose (2,0%), galactose (1,3%), manose (0,4%), ramnose (0,3%) e xílose (0,3%).

TEOR DO ÁCIDO GÁLICO. TEOR DO ÁCIDO ELÁGICQ E TEOR DE PRÓ-ANTOCIANIDINA O teor do ácido gálico e o teor do ácido elágico da amostra foram determinados pelo aquecimento da amostra em uma mistura de butanol-ácido clorídrico (95:5 v/v) contendo sulfato férrico de amônio (III) , à temperatura de 100°C por 24 horas para com isso decompor a amostra; e analisar a amostra decomposta através de HPLC. O teor de ácido gálico e do ácido elãgíco foram considerados como sendo de 0,6% e 5,2%, respectivamente. O teor de pró-antocianidina da amostra foi determinado pelo aquecimento da amostra pelo uso do mesmo reagente à temperatura de 95°C por 4 0 minutos para depois disso decompor a amostra e calcular o teor a partir da absorbância da solução decomposta. O teor da pró- antocianidina conforme reduzido para cianidina foi considerado como sendo de 6,8%.

ESPECTRO DE ABSORÇÃO DE INFRAVERMELHO A amostra foi colocada entre cristais de BaF2 e laminada sob pressão. A medição foi realizada através do método de transmissão. No espectro de absorção de IV obtido, picos intensos de absorção atribuídos à fração foram confirmados com aproximadamente 3428 cm"1, 1705 cm"1, 1615 cm'1 e 1220 cm'1. O espectro de absorção no IV é apresentado na Fig. 1.

Espectro da ressonância magnética nuclear do carbono sólido (RMM13C sólido) Um método de rotina, especificamente, rotação de ângulo mágico com polarização cruzada (CP-MAS) foi utilizado. No espectro CP-MAS obtido, sinais atribuídos às substâncias, tais como açúcar, aromáticos, fenol e éster de carbonila foram observados. O espectro confirmou que a fração era formada de predominantemente polifenois contendo um grupo de elagitaninas. O espectro CP-MAS é apresentado na Fig. 2 .

Os polifenois de goiaba supramencionados exibem, conforme descrito nos exemplos abaixo, uma atividade excelente inibidora da α-amilase e também uma atividade inibido-ra da α-glicosidase. Desta forma, quando o alimento onde os polifenois foram incorporados é ingerido, a degradação do amido em dextrina e maltose é evitada eficazmente e também, a degradação dos dissacarídeos {maltose, isomaltose, sucro-se) em glicose ê também evitada. Consequentemente, a incorporação dos polifenois pode fornecer alimentos e bebidas que apresentam o efeito de prevenir a elevação do teor de açúcar no sangue e um efeito anti-obesidade.

Exemplos de formas de alimentos e bebidas de acordo com a presente invenção incluem alimentos sólidos, alimentos semi - sólidos, alimento na forma de gel e bebidas. Exemplos específicos incluem comprimidos, produtos encapsu-lados e grânulos; doces, tais como biscoitos, geléias e ali- mentos instantâneos,· condimentos granulados, pão e massas; e bebidas, tais como refrigerantes, sucos e bebidas preparados pelo uso de bactérias do ácido lãctico.

Além dos polifenóis da presente invenção, uma variedade de materiais, que são geralmente adicionados ao alimento, podem ser também incorporados nos alimentos mencionados acima e nas bebidas. Exemplos específicos dos materiais incluem ãlcoois com açúcar, tais como glicose, sacarose, frutose, sorbitol, xilitol, eritritol, lactitol e palatinit; emulsificantes, tais como ésteres de ácido graxo de sacarose, ésteres de ácido graxo de poliglicerina e lecitina; e estabilizantes, tais como pectina, carboximetilcelulose, po-lissacarídeos de soja aquosos, goma de gelatina, goma arábica, goma xantano, carragenina e goma guar. Outros exemplos de materiais que podem ser incorporados incluem vitaminas, tais como vitamina A, vitamina B, vitamina C e vitamina E; componentes minerais, tais como lactato de cálcio, gluconato de cálcio, pantotenato de cálcio, compostos de magnésio e zinco; e extrato de ervas.

Quando os polifenóis da presente invenção são incorporados nos alimentos e bebidas, a quantidade total dos polifenóis, que pode variar dependendo da forma do alimento ou bebidas, é preferencialmente de 0,005-0,5% em peso. A quantidade de tal alimento e bebida a ser ingerida por dia é preferencialmente de 5-500 mg conforme reduzida para os po-lifenõis, de preferência particularmente entre 10-100 mg.

EXEMPLOS A presente invenção será descrita posteriormente com mais detalhes através de exemplos, os quais não devem também ser considerados como limitante da invenção.

Exemplo 1 Preparação do extrato de goiaba (1) Folhas de goiaba (produzidas na República Popular da China, Kuanhsi) foram secas, torradas à temperatura de 121°C por 15 minutos, e cortadas minuciosamente em pedaços de cerca de 5 mm. As folhas partidas obtidas então (100 kg) foram imersas em água quente (80°C, 2000 kg) , para com isso realizar a extração por 25 minutos. O extrato resultante foi resfriado à temperatura de 30°C ou menor e centrifugado a 1500 rpm por 10 minutos para clarear a solução, produzindo com isso extrato de folha de goiaba. (2) Extrato de fruto de goiaba verde foi preparado submetendo o fruto da goiaba verde (1 parte por peso) à extração pelo uso de um solvente (aproximadamente 10 partes por peso) â temperatura de 90°C por 25 minutos. (3) O extrato da fruta da goiaba verde foi adicionado ao extrato de folha de goiaba obtido em uma quantidade de aproximadamente 0,1-0,2%, desta forma preparando o extrato de goiaba.

EXEMPLO 2 PREPARAÇÃO DOS PQLIFENQIS DE GOIABA O extrato de goiaba que foi preparado no Exemplo 1 foi filtrado através de um ultrafiltro (para fracionamento do peso molecular de 5000), para, desta forma obter uma fração de peso molecular de 5000 ou mais. A fração obtida foi dialisada contra uma membrana de diálise (para fracionamento de peso molecular de 6000-8000) e o líquido interno separado foi resfriado a seco para com isso preparar polifenóis brutos. Os polifenóis brutos foram dissolvidos em uma solução aquosa 0,02 ml/1 de diidrogenofosfato de sódio e a solução resultante foi purificada através de cromatografia hidrofó-bica {coluna macro-prep. contendo um preenchedor ligado a um grupo butila). Especificamente, após o preenchedor ser lavado com uma solução aquosa 0,02 mol/1 de diidrogenofosfato de sódio em um volume duas vezes o volume da coluna, a eluição foi realizada pelo uso de uma mistura, em um volume duas vezes maior do que o volume da coluna, contendo uma solução aquosa 0,02 mol/1 de fosfato trissõdico sob um gradiente de concentração (isto é, alteração proporcional na concentração) entre as duas soluções. Subseqüentemente, uma solução aquosa 0,02 mol/1 de fosfato trissódico foi aplicada à coluna. A absorbância da fração resultante foi medida a 260 nm, para dessa forma elaborar uma curva de eluição e a atividade inibidora da amilase foi pesquisada (Fig. 3). Como estã claro pelas curvas na Fig. 3, o pico final simples da eluição sobrepôs o pico da atividade inibidora. Uma fração correspondente aquele pico foi coletada e submetida à eletrodiãli-se, seguido por secagem por resfriamento, para dessa forma se obter um produto atuando como polifenóis de goiaba purificados .

Os polifenóis de goiaba purificados obtidos foram analisados cromatograficamente sob as condições de medição supramencionadas (e) . Os resultados foram apresentados na Fig. 4. Como estã claro a partir da Fig. 4, os polifenóis de goiaba purificados da presente invenção exibem um único pico no cromatograma medido sob as condições acima.

EXEMPLO 3 ATIVIDADE INIBIDORA DA tx-AMILASE

Os efeitos, na oc-amilase, do extrato de goiaba e os polifenóis de goiaba purificados obtidos nos exemplos 1 e 2, respectivamente, foram pesquisados. A atividade inibidora da a-amilase foi medida através de um método de rotina. Especificamente, a a-amilase derivada do suco pancreãtico de porcos, foi misturada com um tampãc de fosfato de sódio 0,02 M(pH 6,5), para desta forma, preparar uma solução de amilase. Uma solução do substrato foi preparada a partir de amido solúvel 8% e um tampão de fosfato de sódio 0,08M (pH 6,5) . As misturas enzimãticas, solução do substrato e uma solução teste ou uma mistura da enzima, solução do substrato e água servindo como um controle, foram deixadas reagir à temperatura de 37°C por sete minutos. A reação foi finalizada à temperatura de 100°C. A maltose formada foi determinada através de HPLC pelo uso da arabinose como uma substância interna padrão. A atrvidade inibidora foi calculada pela seguinte equação. Os resultados foram apresentados na Tabela 3.

Atividade inibidora (%) - [1- (quantidade de maltose formada na amostra teste) /(quantidade da maltose formada na amostra controle)] x 100 Tabela 3 Conforme apresentado na Tabela 3, os polifenóis de goiaba purificados da presente invenção, exibiram uma atividade inibidora maior (aproximadamente 30% maior) quando comparados com o extrato de goiaba.

Exemplo 4 Atividade inibidora da a-glicosidase Os efeitos, na maltase - um tipo de a-glicosidase - do extrato de goiaba e os polifenóis de goiaba purificados obtidos nos Exemplos 1 e 2, respectivamente, foram pesquisados . A atividade inibidora da maltase foi medida através de um método de rotina. Especificamente, uma solução de maltase bruta foi preparada pela homogeneização do pó de acetona intestinal de ratos (SIGMA) com um tampão de maleato 56 mM (pH 6,0) em uma quantidade nove vezes maior do pó e coletando o sobrenadante centrifugado. Uma solução do substrato foi preparada pelo uso de um tampão de maleato 224 mM (pH 6,0) tal que a concentração de maltose atingí.u 1%. Misturas da enzima, solução do substrato e uma solução teste, ou uma mistura da enzima, solução do substrato e agua servindo com um controle, foram deixadas reagir à temperatura de 37°C por cinco minutos. A reação foi finalizada à temperatura de 100°C. A glicose formada foi determinada através de HPLC pelo uso da arabinose como uma substância padrão interna. A atividade inibidora foi calculada pela seguinte equação. Os resultados são apresentados na Tabela 4.

[1- (quantidade de glicose formada na amostra teste) /(quantidade de glicose formada na amostra controle)] x 100 Tabela 4 Exemplo 5 Utilizando os polifenõis de goiaba purificados que foram preparados no Exemplo 2, o pão foi produzido com base na seguinte fórmula: ___________________________________________(partes por peso) Fórmula: farinha de trigo 52 açúcar refinado 3 leite condensado 4 manteiga sem sal 3 ovo 3 sal refinado 1 levedura fresca 1,5 água 31,5 _________________polifenóis de goiaba_______________1_________ Após assar, o pão apresenta um sabor característico de ervas e bom sabor e foi comparável com o sabor dos produtos derivados do pão convenientemente disponíveis no mercado.

APLICABILIDADE INDUSTRIAL O inibidor da atividade da α-amilase da presente invenção exibe uma atividade inibidora da α-amilase notavelmente excelente quando comparado com o extrato de goiaba e também exibe uma atividade inibidora de α-glicosidase. Desta forma, pela incorporação dos polifenois nos alimentos e bebidas, aqueles que apresentam um efeito de reduzir o nível sanguíneo do açúcar e um efeito anti-obesidade, podem ser fornecidos. Mais especificarr.ente, pela incorporação dos po-lifenóis nos alimentos contendo mais amido, tais como farinha de condimentos, massas, pães e biscoitos, alimentos e bebidas dietéticos adequados para pessoas com alto nível de açúcar no sangue ou hiperlipidemia, podem ser fornecidos.

Claims (5)

1. Método para obtenção de polifenóis que inibem a atividade da α-amilase, CARACTERIZADO pelo fato de compreender as seguintes etapas: submeter folhas e/ou frutos da goiaba à extração com um ou mais solventes selecionados entre água e solventes hidrofilicos; submeter o extrato resultante à ultrafiltração, para dessa forma remover substâncias que apresentam um peso molecular menor do que 5.000; aplicar a fração remanescente a uma coluna de cromatografia hidrofóbica com suporte de butila e realizar a eluição utilizando uma solução aquosa de diidrogenofosfato de sódio (0,02 mol/1) e uma solução aquosa de fosfato de sódio (0,02 mol/1) (taxa de fluxo: 1 ml/minuto) sob um gradiente de pH entre as duas soluções; e recuperar uma fração da substância eluida, cuja fração corresponde ao terceiro pico simples de uma curva de eluição obtida quando a absorbância da substância é medida em 260 nm; em que o solvente hidrofilico inclui metanol, etanol, álcool n-propilico, acetona e propilenoglicol; em que quando as folhas de goiaba são empregadas, a proporção do peso das folhas em relação ao solvente é preferencialmente de 1:20 e quando o fruto da goiaba verde é empregado, o peso do solvente é preferencialmente 10 vezes o peso do fruto; em que quando folhas de goiaba são submetidas à extração e água é utilizada como solvente, a extração é realizada à temperatura de 50 - 100 °C, preferencialmente à temperatura de 80 - 100 °C, por 5-60 minutos, preferivelmente 5-25 minutos; e quando o fruto da goiaba verde é utilizado, a extração é realizada preferencialmente à temperatura de 100 °C por 10 - 60 minutos.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato dos polifenóis apresentarem as seguintes propriedades fisicoquimicas: (a) conter carbono (49,6%), hidrogênio (4,6%) e nitrogênio (0,6%); (b) apresentar um peso molecular de 5.000 - 100.000; (c) exibir intensa absorção de raios infravermelhos próximo de 3.4 28 cm-1, 1.7 05 cm-1, 1.615 cm-1 e 1.22 0 cm-1; (d) exibir espectro de ressonância nuclear magnética de carbono sólido correspondente a um sinal de açúcar (próximo a 7 6 ppm) , um sinal aromático (próximo a 115 ppm) , um sinal de fenol (próximo a 144 e 156 ppm) e um sinal de éster de carbonila (próximo a 168 ppm); e (e) exibir um pico único em cerca de 10 minutos quando submetido à cromatografia liquida sob as seguintes condições: coluna: uma coluna preenchida com gel de distribuição da fase reversa tipo polímero sintético duro na qual grupos butila são ligados quimicamente (modelo: Shodex Asahipak C4P- 50 4D (produto da Showa Denko), diâmetro interno: 4,6 mm, comprimento: 150 mm), ou uma coluna similar a esta); taxa de fluxo: 1,5 ml/minuto; temperatura da coluna: uma temperatura especifica em torno de 40°C; detector: absorciômetro de UV (comprimento de onda: 260 nm); fase móvel: solução A: uma mistura de solução de acetonitrila contendo NafbPCq (0,02 mol/1) e água (15:85 (v/v)) (pH = 4,6), e solução B: uma mistura de solução de acetonitrila contendo Na3P04 (0,02 mol/1) e água (15:85 (v/v)) (pH = 11,4), e método de análise: uma análise de gradiente da etapa realizada com base nos dados listados na tabela abaixo. Tabela 1

3. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 2, CARACTERIZADO pelo fato de que o polifenol obtido apresenta atividade inibidora sobre a a-glicosidase.

4. Alimentos e bebidas, CARACTERIZADOS pelo fato de conter um inibidor da α-amilase obtido por método conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3.

5. Uso de polifenóis, obtidos por método conforme definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 2, CARACTERIZADO pelo fato de ser para produção de alimentos e bebidas dietéticas.