KR101731152B1 - 다래순 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항당뇨 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 다래순(Actinidia arguta) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항당뇨 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 유기용매를 첨가하여 가용 추출한 다래순 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 및 당뇨병 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 항당뇨 조성물은 천연식물인 다래에서 식품등급인 다래의 어린잎을 주원료로 함유함으로써, 부작용의 위험이 낮으면서도 α-글루코시다아제 저해 활성이 우수하여 당뇨병을 예방, 개선 또는 치료할 수 있는 특징이 있다.

Description

다래순 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항당뇨 조성물 {ANTI-DIABETIC COMPOSITION CONTAINING THE EXTRACT OF ACTINIDIA ARGUTA LEAVES OR FRACTIONS THEREOF}

본 발명은 다래의 어린잎인 다래순의 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항당뇨용 조성물에 관한 것이다.

당뇨병은 탄수화물의 신진대사 장애로 혈당수치가 높고, 소변으로 포도당이 배설되는 상태로 인슐린의 생산, 분비 혹은 이용의 이상으로 발생하는 질병이다. 우리가 섭취하는 음식물의 대부분은 소화액에 의하여 포도당이라고 불리는 당으로 분해되는데, 포도당은 혈관으로 이동되고 우리 몸의 세포로 들어가 성장과 에너지원으로 사용된다. 포도당이 세포 내로 들어갈 때 인슐린이 있어야 하며 인슐린은 위 뒷편의 췌장에서 생산된다. 우리가 음식물을 먹을 때 췌장은 포도당을 혈액에서 세포로 이동시키기 위해 적당한 양의 인슐린을 자동적으로 생산하게 되는데, 당뇨병환자는 췌장이 인슐린을 거의 생산하지 못하거나 세포가 인슐린에 반응하지 않아 포도당이 세포로 들어가지 못하고 혈액에 남아 소변으로 배출되어 혈액에는 포도당이 많으나 신체가 이를 이용하지 못해 여러 가지 이상 증상이 나타나게 된다.

당뇨병 치료에 있어서 궁극적인 목적은 혈당을 정상적으로 유지하도록 관리하면서 합병증을 예방하는데 있다고 할 수 있다. 당뇨병 환자의 건강 관리법은 크게 식이요법, 운동요법, 약물요법의 3가지로 나눌 수 있는데 식이요법은 저염식, 저지방식, 음주의 절제를 통해 알맞은 양을 다양한 음식으로 골고루 및 일정시간에 규칙적으로 섭취해야 하며, 운동요법은 인슐린에 대한 저항성을 완화하여 혈당을 감소시켜 주고, 지질대사를 원활하게 하여 동맥경화증을 예방하기 위해 환자의 상태에 따른 요법으로 건강을 관리할 수 있다. 약물요법은 크게 경구용 혈당강하제와 인슐린요법이 있으며 정기적인 혈당검사를 하면서 용량, 약제를 변경하여야 하며 부작용, 합병증의 발생여부를 잘 살펴야 한다.

그러나 현재 당뇨병 치료를 위해 사용되고 있는 약물의 경우, 지속적인 약효가 미비하고, 체내에서 각종 부작용을 일으키는 문제점이 있으며, 특히 많은 치료제들이 신장독성 및 간독성을 유발시키는 문제점이 있다.

따라서 이러한 부작용을 줄이면서 동시에 우수한 항당뇨 약리효과를 가지는 천연물질의 개발이 시급한 실정이다(한국공개특허공보 10-2015-0078773호 참조).

이에 본 발명자들은 천연물질인 다래(Actinidia arguta)의 식용부위인 어린잎(순)이 우수한 항당뇨 활성을 나타낸다는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명의 목적은 다래순(Actinidia arguta) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 당뇨병 예방, 개선 또는 치료용 약학적 조성물, 및 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.

그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 다래순(Actinidia arguta) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는, 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 다래순(Actinidia arguta) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는, 당뇨병 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 α-글루코시다아제(α-glucosidase) 저해 활성을 가지는 것일 수 있다.

본 발명의 다른 실시예에 있어서, 상기 추출물은 물 또는 유기용매를 첨가하여 가용 추출한 용매추출물일 수 있다.

본 발명의 또 다른 실시예에 있어서, 상기 유기용매는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올, 아세톤, 에테르, 벤젠, 클로로포름, 에틸아세테이트, 및 메틸렌클로라이드로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.

본 발명의 또 다른 실시예에 있어서, 상기 에탄올은 50% 또는 100% 에탄올일 수 있다.

본 발명의 또 다른 실시예에 있어서, 상기 약학적 조성물은 연고, 겔, 크림, 패취 및 분무제로 이루어진 군으로부터 선택되는 제형을 가지는 것일 수 있다.

본 발명의 또 다른 실시예에 있어서, 상기 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료의 형태일 수 있다.

또한, 본 발명은 당뇨병 치료를 필요로 하는 개체에 다래순(Actinidia arguta) 추출물 또는 이의 분획물을 투여하는 단계를 포함하는 당뇨병 치료방법을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 투여는 경구 투여, 정맥 주사, 복강 주사, 근육 주사, 동맥 주사 또는 피하 주사를 통해 이루어지는 것일 수 있다.

본 발명의 다른 실시예에 있어서, 상기 개체는 인간을 포함한 포유동물일 수 있다.

본 발명에 따른 항당뇨용 조성물은 천연물질인 다래, 특히, 식용부위인 다래의 어린잎을 주원료로 함유함으로써, 부작용의 위험이 낮으면서도 α-글루코시다아제 저해 활성이 우수하여 당뇨병을 예방, 개선 또는 치료할 수 있는 장점이 있다.

도 1은 본 발명에 따른 다래순 50% 에탄올 추출물을 부분 정제하여 α-글루코시다아제 저해 활성을 나타내는 분획물을 동정하는 과정을 나타낸 개요도이다.
도 2는 역상 크로마토그래피 방법으로 분석한 다래순 추출물 및 이의 분획물들의 HPLC 크로마토그램을 나타낸 것이다.
도 3은 다양한 용매를 이용하여 추출한 다래순 추출물들의 α-글루코시다아제 저해 활성을 양성 대조군인 아카보즈(acarbose)와 비교하여 나타낸 것이다.
도 4는 액체크로마토그래피를 이용하여 부분 정제된 다래순 분획물들의 α-글루코시다아제 저해 활성을 비교한 것이다.

본 발명은 다래순(Actinidia arguta) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는, 당뇨병의 예방, 개선 또는 치료용 약학적 조성물, 및 건강기능식품 조성물을 제공함에 그 특징이 있다.

본 발명에서는 항당뇨 효과가 우수한 천연물질로서 다래순을 사용하였는데, 다래는 우리나라 각처의 산에서 자라는 낙엽 덩굴나무이다. 잎은 넓은 난형과 타원형으로 가장자리에 가늘고 날카로운 톱니가 있고, 꽃은 흰색으로 암수 딴그루이며 3~10송이 가량이 아래로 향해 핀다. 특히, 어린잎인 다래순은 나물 등의 식용으로 널리 쓰이는 부분이다. 최근 건강과 장수에 대한 관심이 증대됨에 따라 안전한 먹거리 확보에 대한 관심이 고조되고 있기 때문에, 유용 생리 활성을 가지면서 부작용이 없는 천연물의 활성물질 탐색에 연구가 집중되고 있는 가운데, 특히, 식용으로 사용되는 부분인 경우 보다 안전한 장점이 있다.

따라서 본 발명에 따른 다래순 추출물 또는 이의 분획물은 우수한 항당뇨 활성을 가지고 있을 뿐 아니라 식용 부분으로서, 보다 안전하게 약학적 용도 및 식품학적 용도로 사용할 수 있다.

본 발명에서 상기 다래순 추출물은 용매추출물로, 당업계에 공지된 천연으로부터 추출물을 수득하는 방법이라면 모두 사용할 수 있으며, 바람직하게는 물 또는 유기용매를 첨가하여 가용 추출하는 방법을 통해 수득할 수 있다.

본 발명에 따른 다래순으로부터 α-글루코시다아제(α-glucosidase) 저해 활성을 가지는 추출물을 얻는 과정을 보다 상세히 살펴보면 다음과 같다.

먼저, 다래순을 저온건조 또는 동결건조하여 건조 중량에 대해 약 10배 내지 300배, 바람직하게는 약 100배 내지 300배의 용매를 이용하여 당업계에 공지된 용매 추출 방법을 통해 다래순 추출물을 수득할 수 있다.

본 발명의 일실시예에서는 다래순을 건조한 다음, 물, 50%에탄올 또는 100%에탄올을 첨가하여 상온에서 12시간 동안 추출하였다. 이후 추출된 다래순 추출물은 원심분리, 여과 및 농축 과정을 거쳐 농축된 다래순 추출물의 형태로 제조하였으며, 제조한 추출물은 동결건조하여 -80℃에 보관하였다.

상기에서 건조된 다래순은 건조 전 또는 용매를 이용하여 추출하기 이전에 분쇄하여 사용할 수 있으며, 상기 분쇄는 수작업 또는 기계적 장치를 이용하여 수행할 수 있다.

또한, 본 발명에서 “동결건조”란 수용액이나 다량의 수분을 함유한 재료를 동결시키고 감압함으로써 얼음을 승화시켜 수분을 제거하여 건조물을 얻는 방법을 말한다. 즉, 시료를 동결시키고 온도와 압력이 낮은 3중점(三重點, 0.01℃. 0.6113kPa)이하에서 동결상태의 얼음을 승화시켜 건조제품을 얻는 방법이다. 본 발명에서 채용하는 동결건조를 위하여 사용할 수 있는 동결건조기는 동결건조를 위해 승화열을 공급하는 가열판, 건조 중에 생성된 수증기를 얼음으로 응축시키는 응축기, 진공실 및 진공펌프로 구성되어 있는 건조기라면 특별히 제한되지 않는다.

상기 다래순에 물이나 유기용매를 첨가하여 추출하는 과정은 교반 또는 방치 등의 방법으로 수행될 수 있는데, 용매 추출 방법으로는 이에 제한되지는 않으나, 열수 추출법, 냉침 추출법, 환류 냉각 추출법 또는 초음파 추출법 등을 1회 또는 수회 반복하여 추출할 수 있다. 이때 첨가할 수 있는 상기 유기용매로는 이에 제한되지는 않으나, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올, 아세톤, 에테르, 벤젠, 클로로포름, 에틸아세테이트, 또는 메틸렌클로라이드 등을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 에탄올일 수 있고, 가장 바람직하게는 50% 에탄올일 수 있다.

본 발명자들은 상기 본 발명의 다래순 추출물이 항당뇨 활성이 있는지 알아보기 위해, 혈당 상승을 유발하는 α-글루코시다아제 저해활성을 측정한 결과, 다래순 추출물이 모두 α-글루코시다아제의 활성을 저해하는 것으로 나타났으며, 특히, 50% 에탄올을 용매로 한 다래순 추출물의 경우, 0.23 mg/mL 농도에서 양성 대조군인 아카보즈(acarbose)만큼 우수한 α-글루코시다아제 저해활성을 나타낸다는 것을 알 수 있었다(실시예 2 참조).

또한, 본 발명자들은 다래순 추출물의 부분 정제를 통해 추출물을 분획화(fractionation)하여 분획물들의 α-글루코시다아제의 활성을 측정한 결과, 분획물(3-1 소분획물)이 우수한 α-글루코시다아제 저해활성을 나타냄을 확인하였다(실시예 3 참조).

따라서 상기 결과를 통해 본 발명자들은 다래순 에탄올 추출물 또는 이의 분획물이 α-글루코시다아제의 활성을 억제함으로써 항당뇨 활성을 갖는다는 사실을 확인하였다.

그러므로 본 발명은 다래순 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 항당뇨 조성물을 제공할 수 있으며, 상기 조성물은 당뇨병의 예방 및 치료를 위한 약학적 조성물로 사용될 수 있고, 상기 약학적 조성물은 당뇨병 증상의 예방 또는 치료를 위한 약제로 제조될 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물에 있어서, 다래순 추출물 또는 이의 분획물은 조성물 총 중량에 대해 0.1 내지 50 중량%로 포함할 수 있으며, 상기 당뇨병은 제2형 당뇨일 수 있다.

본 발명에 따른 상기 약학적 조성물은, 약학적으로 유효한 양의 다래순 추출물 또는 이의 분획물을 단독으로 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기에서 “약학적으로 유효한 양”이란 당뇨병 증상을 예방 또는 치료하기에 충분한 양을 말한다.

본 발명에 따른 다래순 추출물 또는 이의 분획물의 약학적으로 유효한 양은 0.5 ~ 100 mg/day/체중kg, 바람직하게는 0.5 ~ 5 mg/day/체중kg이다. 그러나 상기 약학적으로 유효한 양은 당뇨 증상의 정도, 환자의 연령, 체중, 건강상태, 성별, 투여 경로 및 치료기간 등에 따라 적절히 변화될 수 있다.

또한, 상기에서 “약학적으로 허용되는”이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다. 상기 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 또한, 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 인간을 포함하는 당뇨병 치료를 필요로하는 개체에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제형화될 수 있다. 제형은 분말, 과립, 정제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캡슐, 멸균 주사용액, 멸균 분말일 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있으며, 활성 성분의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 환자의 중증도 등의 여러 인자에 따라 적절히 선택될 수 있다. 또한, 당뇨 증상을 예방 또는 개선하는 효과를 가지는 공지의 화합물과 병행하여 투여할 수 있다.

나아가 본 발명에 따른 다래순 추출물 또는 이의 분획물은 우수한 항당뇨 효과를 통해 당뇨 증상을 완화시키는 효과를 제공할 뿐만 아니라, 본 발명에서 사용한 추출물의 원료가 되는 다래순은 식품 등급으로 사용할 수 있는 천연식물이므로 체내에서 매우 안정한 특징이 있는 바, 독성 및 부작용 없이 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있는 장점이 있다.

따라서 본 발명의 다래순 추출물 또는 이의 분획물은 당뇨병의 예방 또는 개선을 목적으로 하는 식품에 첨가하여, 당뇨병 증상을 예방 또는 개선하기 위한 식품용 조성물로도 사용할 수 있다.

그러므로 본 발명에 따른 다래순 추출물 또는 이의 분획물은 당뇨병의 예방 및 개선에 효과가 있는 식품, 예컨대, 식품의 주원료, 부원료, 식품 첨가제, 기능성 식품 또는 음료의 제조에 용이하게 활용할 수 있다.

상기에서 “식품”이란, 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하고, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서 식품, 식품 첨가제, 기능성 식품 및 음료를 모두 포함하는 것을 말한다.

본원발명에 따른 다래순 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 기능성 식품 등이 있다. 추가로, 상기 식품에는 특수영양식품(예, 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 빵류, 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스넥류), 캔디류, 쵸코렛류, 껌류, 아이스크림류, 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실 음료, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면 스프 등)가 포함되나 이에 한정되는 것은 아니며, 상기 식품, 음료 또는 식품첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.

또한, 상기 “기능성 식품”이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미하며, 바람직하게는 건강기능식품일 수 있다. 상기 기능성 식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.

또한, 본원발명에서 상기 “음료”란 갈증을 해소하거나 맛을 즐기기 위하여 마시는 것의 총칭을 의미하며 기능성 음료를 포함한다. 상기 음료는 필수 성분으로서 당뇨 증상의 예방 또는 개선을 위한 다래순 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 조성물을 포함하는 것 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

이에 더하여, 상기 기술한 것 이외에 본원발명의 조성물을 함유하는 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있으며, 상기 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 식품용 조성물을 함유하는 식품에 있어서, 상기 다래순 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 조성물의 양은 전체 식품 중량의 0.001 중량% 내지 90 중량%로 포함할 수 있으며, 바람직하게는 0.1 중량% 내지 40 중량%로 포함할 수 있고, 음료의 경우, 100ml를 기준으로 0.001g 내지 2g, 바람직하게는 0.01g 내지 0.1g의 비율로 포함할 수 있으며, 장기간 섭취 용도일 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으나, 유효성분이 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있으므로 상기 범위에 한정되는 것은 아니다.

그러므로 본 발명은 다래순(Actinidia arguta) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 당뇨병 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공할 수 있으며, 상기 식품의 형태는 이에 제한되지는 않으나, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료 형태일 수 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

다래순 추출물의 제조

다래(Actinidia arguta)의 어린잎인 다래순 추출물을 제조하기 위해, 건조한 다래순 1g을 용매 200mL로 추출하였다. 이때, 용매로 물(증류수), 50%에탄올 또는 100% 에탄올을 사용하였으며, 용매와 다래순을 혼합하고 실온에서 12시간동안 방치한 다음 7,000g로 5분간 원심분리(Hanil combi-514R, Korea)하여 상층액(용액)만 취하였다. 이후 상기 상층액을 필터(Whatman No. 1 paper, GE Healthcare, UK)로 여과하고, 여과액을 회전증발농축기(rotary evaporator; Eyela, Japan)을 이용하여 농축함으로써 다래순 추출물을 수득하였으며, 수득한 다래순 추출물은 동결건조하여 실험 전까지 -80℃에 보관하였다.

다래순 추출물의 α- 글루코시다아제 (α- glucosidase ) 저해 활성 측정

상기 실시예 1과 같이 3가지 용매로 분획하여 동결건조한 다래순 추출물을 0.23 및 0.92 mg/mL의 농도가 되도록 증류수로 용해시키고, Watanabe et al. (1997) 방법을 변형하여 시험관 내(in vitro)에서 α-글루코시다아제(α-glucosidase) 저해 활성을 평가하였다. 보다 상세하게는, Yeast α-glucosidase 0.7 unit/mL 및 p-nitrophenyl-α-D-glucopyranoside (Sigma Co., USA) 5 mM을 각각 potassium phosphate buffer (50 mM, pH 6.8)에 녹여서 효소액(enzyme solution) 및 기질액(substrate solution)으로 사용하였으며, 효소액 50 μL와 희석한 다래순 추출물 10 μL을 혼합한 후 25℃에 5분간 전배양(pre-incubation)하였다. 그 다음 기질액 50 μL을 첨가하고 5분간 다시 반응시킨 뒤 마이크로플레이트리더기(SpectraMax 190, Molecular Devices, USA)로 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 저해활성은 음성대조군(blank control)에 대한 퍼센트로 계산하였다.

그 결과, 3가지 용매(물, 50% 에탄올 및 100% 에탄올) 추출물 가운데 50% 에탄올 추출물 0.92 mg/mL 농도에서 61.6 ± 5.51%로 α-글루코시다아제에 대해 가장 높은 저해활성을 나타냈으며, 동일 농도에서 물 추출물은 9.5 ± 1.90%, 100% 에탄올 추출물은 17.97 ± 3.16%의 저해활성을 나타내는 것을 확인하고, 50% 에탄올이 가장 효과적인 추출 용매임을 알 수 있었다.

또한, 도 3에 나타낸 바와 같이, 0.23 mg/mL 농도에서 50% 에탄올 추출물의 저해활성은 32.6 ± 5.77%로, 양성 대조군인 아카보즈(30.0 ± 1.10%)와 유사한 수치를 나타냄을 확인하였다.

상기 결과는 다래순이 항당뇨 활성을 가지는 천연 자원임을 의미하며, 특히 50%에탄올을 이용하여 추출한 다래순 추출물이 시판중인 당뇨 치료제만큼 탁월한 효과를 나타낼 수 있음을 알 수 있다.

제조용 액체크로마토그래피를 이용한 다래순 추출물의 부분 정제

상기 실시예 2를 통해 가장 우수한 저해활성을 나타내는 것을 확인한 다래순의 50% 에탄올 추출물을 in vitro 효소 분석 방법으로 도 1의 개요도에 나타낸 바와 같이 부분 정제(Partial purification)하였다. 이를 위해, 이중 플런저 펌프(double plunger pump) 및 UV 검출기(200-400 nm)를 갖춘 제조용 액체크로마토그래피(preparative liquid chromatography; LC-Forte/R, YMC, Japan)를 이용하여 분획하였다. 분획(부분분리) 공정은 상이한 기울기 농도의 아세토니트릴을 이용하여 역상 액체크로마토그래피(YMC-DispoPack AT C18, 50 μm; C18 column, 20 μm, 15 × 250 mm, YMC, Japan) 방법으로 수행하였다.

역상 액체크로마토그래피로 물에 부유하는 50% 에탄올 추출물을 1 내지 4 분획물(fractions)로 나누고 α-글루코시다아제 저해 활성을 측정한 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 0.09 mg/mL 농도에서 분획물 1 내지 4의 α-글루코시다아제 저해 활성은 각각 10.6 ± 4.1%, 80.8 ± 3.4%, 29.7 ± 2.9%, 16.6 ± 0.7%인 것으로 나타나, 활성 분획물(active fraction)인 분획물 2를 더 정제하였다. 즉, 32~50%의 아세토니트릴 기울기 용매를 이용하여 분획물 2를 다시 2-1 내지 2-4 분획물로 나누고 α-글루코시다아제 저해 활성을 측정한 결과, 각 분획물이 4.4 ± 2.1%, 59.1 ± 3.9%, 63.2 ± 1.0%, 26.5 ± 4.1%의 α-글루코시다아제 저해 활성을 나타남에 따라, 활성 분획물인 2-2(23~28%의 아세토니트릴로 용리) 및 2-3(28~37%의 아세토니트릴로 용리)을 혼합하여 다시 1 내지 5 소분획물(subfractions)로 정제하였다. 그리고 소분획물의 α-글루코시다아제 저해 활성을 측정한 결과, 소분획물 3이 58.0 ± 3.1% 로 가장 우수한 저해활성을 나타냄에 따라, 소분획물 3을 다시 3-1 내지 3-4 소분획물로 나누었다. 3-1 내지 3-4 소분획물의 α-글루코시다아제 저해 활성은 각각 82.5 ± 4.6%, 73.9 ± 5.9%, 34.3 ± 9.0%, 0.1 ± 1.7%인 것을 확인하고, 최종 α-글루코시다아제 저해 활성 분획물로 3-1 소분획물을 수집하였다.

또한, 다래순 추출물로부터 분획한 모든 시료들을 HPLC로 분석한 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 정제 단계에 따라 피크의 수는 줄어들고 세기는 증가하는 것으로 나타났으며, 최종 분획물(3-1 소분획물)의 주요 피크(major peak)는 5~6분에 비교적 높은 세기를 나타냄을 확인하였다.

상기 결과로부터 3-1 소분획물이 항당뇨 효과를 얻을 수 있는 활성 성분을 함유하는 분획물임을 알 수 있다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해되어야 한다.

Claims (8)

1. 다래순(Actinidia arguta) 50% 에탄올 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
2. 다래순(Actinidia arguta) 50% 에탄올 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 당뇨병 개선용 건강기능식품 조성물.
   
3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
   상기 조성물은 α-글루코시다아제(α-glucosidase) 저해 활성을 가지는 것을 특징으로 하는, 조성물.
   
4. 삭제
5. 삭제
6. 삭제
7. 삭제
8. 제2항에 있어서,
   상기 조성물은 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료의 형태인 것을 특징으로 하는, 조성물.

Images