BR112020015985A2 - Composto, composição farmacêutica e kit - Google Patents

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fapi
alkyl
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cancer
fap
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BR112020015985-9A
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Uwe Haberkorn
Anastasia Loktev
Thomas Lindner
Walter Mier
Frederik Giesel
Clemens KRATOCHWIL
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Universität Heidelberg
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Abstract

a presente invenção refere-se a um composto de fórmula (i), uma composição farmacêutica compreendendo ou consistindo no referido composto, um kit compreendendo ou consistindo no referido composto ou composição farmacêutica e uso do composto ou composição farmacêutica no diagnóstico ou tratamento de uma doença caracterizada pela superexpressão de proteína ativadora de fibroblastos (fap).

Description

“COMPOSTO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA E KIT”
[001] A presente invenção refere-se a um composto, uma composição farmacêutica compreendendo ou consistindo no referido composto, um kit compreendendo ou consistindo no referido composto ou composição farmacêutica e uso do composto ou composição farmacêutica no diagnóstico ou tratamento de uma doença caracterizada pela superexpressão de proteína ativadora de fibroblastos (FAP).
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[002] O crescimento e a propagação do tumor não são determinados apenas pelas células cancerígenas, mas também pelos constituintes não malignos da lesão maligna, que são incluídos no termo estroma. O estroma pode representar mais de 90% da massa tumoral em tumores com reação desmoplásica tais como carcinoma de mama, cólon e pancreático. Particularmente, sabe-se que uma subpopulação de fibroblastos denominada fibroblastos associados ao câncer (CAFs) está envolvida no crescimento, migração e progressão do tumor. Portanto, essas células representam um alvo atraente para diagnóstico e terapia antitumoral.
[003] Uma característica distintiva dos CAFs é a expressão de seprase ou proteína ativadora de fibroblasto α (FAP-α), uma glicoproteína ligada à membrana do tipo II pertencente à família dipeptidil peptidase 4 (DPP4). A FAP-α possui atividade de dipeptidil peptidase e endopeptidase. A atividade da endopeptidase distingue FAP-α dos outros membros da família DPP4. Os substratos identificados para a atividade da endopeptidase até agora são o colágeno Tipo I desnaturado, α 1-antitripsina e vários neuropeptídeos. A FAP-α tem um papel nos processos normais de desenvolvimento durante a embriogênese e na modelagem de tecidos. Não é, ou apenas em níveis insignificantes, expressa em tecidos normais de adultos. No entanto, ocorre alta expressão na cicatrização de feridas, artrite, placas arteroscleróticas,
fibrose e em mais de 90% dos carcinomas epiteliais.
[004] O aparecimento de FAP-α nos CAFs em muitos tumores epiteliais e o fato de a superexpressão estar associada a um pior prognóstico em pacientes com câncer levaram à hipótese de que a atividade da FAP-α esteja envolvida no desenvolvimento do câncer, bem como na migração e propagação de células cancerígenas. Portanto, o direcionamento dessa enzima para imagiologia e endorradioterapia pode ser considerado como uma estratégia promissora para a detecção e tratamento de tumores malignos. Os presentes inventores desenvolveram uma molécula pequena baseada em um inibidor específico de FAP-α e foram capazes de mostrar captação específica, internalização rápida e imagiologia bem-sucedida de tumores em modelos animais, bem como em pacientes com tumor. Uma comparação com o rastreador radioativo 18F-fluorodeoxiglucose comumente usado (18F-FDG) revelou uma clara superioridade do novo ligante FAP-α em pacientes com adenocarcinoma pulmonar localmente avançado. Assim, a presente invenção fornece, entre outros: (i) detecção de tumores primários menores e, portanto, a possibilidade de diagnóstico precoce, (ii) detecção de metástases menores e, portanto, uma melhor avaliação do estágio do tumor, (iii) orientação intra- operativa precisa facilitando a remoção cirúrgica completa do tecido tumoral, (iv) melhor diferenciação entre inflamação e tecido tumoral, (v) estadiamento mais preciso dos pacientes com tumores, (vi) melhor acompanhamento das lesões tumorais após terapia antitumoral, (vii) a oportunidade de usar as moléculas como agentes teranósticos para diagnóstico e terapia. Além disso, as moléculas podem ser usadas para o diagnóstico e tratamento de doenças não malignas, tais como inflamação crônica, aterosclerose, fibrose, remodelação de tecidos e distúrbios quelóides.
DESCRIÇÃO RESUMIDA DA INVENÇÃO
[005] Em um primeiro aspecto, a presente invenção fornece um composto de Fórmula (I)
(I), em que
Q, R, U, V, W, Y, Z estão individualmente presentes ou ausentes,
desde que pelo menos três de Q, R, U, V, W, Y, Z estejam presentes;
Q, R, U, V, W, Y, Z são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em O, CH2, NR4, C=O, C=S, C=NR4, HCR4 e R4CR4,
com a condição de que dois O não sejam diretamente adjacentes um ao outro;
R1 e R2 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em -H, -OH, halo, alquila C1-6, -O-alquila C1-6, S-alquila C1-6;
R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em -H, -CN, -
B(OH)2, -C(O)-alquila, -C(O)-arila-, -C=C-C(O)-arila, -C=C-S(O)2-arila, -CO2H, -
SO3H, -SO2NH2, -PO3H2 e 5-tetrazolila;
R4 é selecionado a partir do grupo que consiste em -H, -alquila C1-
6, -O-alquila C1-6, -S-alquila C1-6, arila e -aralquila C1-6, cada uma das referidas -
alquila C1-6 sendo opcionalmente substituída com 1 a 3 substituintes selecionados a partir de -OH, oxo, halo e opcionalmente conectada a Q, R, U,
V, W, Y ou Z;
R5 é selecionado a partir do grupo que consiste em -H, halo e alquila C1-6;
R6 e R7 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em –H,
e , desde que R6 e R7 não sejam ao mesmo tempo H,
em que L é um ligante,
em que D, A, E e B estão individualmente presentes ou ausentes,
de preferência em que pelo menos A, E e B estão presentes, em que quando presentes:
D é um ligante;
A é selecionado a partir do grupo que consiste em NR4, O, S e
CH2;
E é selecionado a partir do grupo que consiste em alquila C1-6,
, ,
e ; em que i é 1, 2 ou 3;
em que j é 1, 2 ou 3;
em que k é 1, 2 ou 3;
em que m é 1, 2 ou 3;
A e E, juntos, formam um grupo selecionado a partir de uma cicloalquila, heterocicloalquila, arila e heteroarila, em que A e E podem ser mono-, bi- e multicíclicos, de preferência monocíclicos.
Cada A e E sendo opcionalmente substituído por 1 a 4 resíduos do grupo que consiste em -H, -
alquila C1-6, -O-alquila C1-6, -S-alquila C1-6, alquenila, heteroalquenila,
cicloalquenila, ciclo-heteroalquenila, alquinila, arila e -aralquila C1-6, sendo cada uma das referidas -alquila C1-6 opcionalmente substituída com 1 a 3 substituintes selecionados a partir de -OH, oxo, halo; e opcionalmente conectada a A, B, D, E ou
; B é selecionado a partir do grupo que consiste em S, NR 4, NR4-O, NR4-alquila C1-6, NR4-alquila C1-6-NR4 e um heterociclo mono- ou bicíclico aromático ou não aromático contendo N de 5 a 10 membros, preferencialmente compreendendo ainda 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S, preferencialmente compreendendo ainda 1 ou 2 átomos de nitrogênio, de preferência em que NR4-alquila C1-6-NR4 e o heterociclo contendo N são substituídos com 1 a 3 substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em alquila C1-6, arila, aralquila C1-6; e R8 é selecionado a partir do grupo que consiste em porção radioativa, agente quelante, corante fluorescente, um agente de contraste e combinações dos mesmos; é uma porção 1-naftila ou um heterociclo mono- ou bicíclico aromático ou não-aromático contendo N de 5 a 10 membros, em que existem 2 átomos do anel entre o átomo de N e X; o referido heterociclo compreendendo ainda, opcionalmente, 1, 2 ou 3 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S; e X é um átomo de C; ou um tautômero, racemato, hidrato, solvato ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[006] Em um segundo aspecto, a presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica compreendendo ou consistindo em pelo menos um composto do primeiro aspecto e, opcionalmente, um veículo e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
[007] Em um terceiro aspecto, a presente invenção refere-se ao composto do primeiro aspecto ou à composição farmacêutica do segundo aspecto para uso no diagnóstico ou tratamento de uma doença caracterizada pela superexpressão de proteína ativadora de fibroblastos (FAP) em um animal ou ser humano.
[008] Em um quarto aspecto, a presente invenção refere-se a um kit que compreende ou consiste no composto do primeiro aspecto ou na composição farmacêutica do segundo aspecto e instruções para o diagnóstico ou tratamento de uma doença.
LISTA DE FIGURAS
[009] A seguir, é descrito o conteúdo das figuras compreendidas nesta especificação. Neste contexto, consulte também a descrição detalhada da invenção acima e/ou abaixo.
[010] Figura 1: Caracterização in vitro de 125I-FAPI-01 e 177Lu- FAPI-02: A. Ligação de FAPI-01 e FAPI-02 radiomarcadas a diferentes linhagens celulares de câncer humano, bem como linhagens celulares transfectadas com FAP-α humana (HT-1080-FAP), FAP-α murina (HEK- muFAP) e CD26 humano (HEK-CD26) após 60 minutos de incubação. B.
Internalização de FAPI-01 e FAPI-02 radiomarcadas em células HT-1080-FAP após incubação por 10 minutos a 24 horas. A proporção internalizada é mostrada em cinza e preto, respectivamente; a fração ligada extracelularmente é indicada pelas barras brancas. C. Ligação competitiva de FAPI-01 e FAPI-02 radiomarcadas a células HT-1080-FAP após adição de concentrações crescentes de FAPI-01 e Lu-FAPI-02 não marcadas. D. Internalização de FAPI- 02 em linhagens celulares positivas e negativas de FAP-α. Azul: DAPI; verde: FAPI-02-Atto488. E+F. Cinética de efluxo de FAPI-01 e FAPI-02 após 1 hora de incubação de células HT-1080-FAP com compostos radiomarcados, seguida de incubação com meio livre de composto por 1 a 24 horas. Todos os valores são dados como porcentagem da dose total aplicada normalizada para 1 milhão de células (% ID/ 1 milhão de células).
[011] Figura 2: Especificidade de ligação e taxas relativas de internalização de derivados de FAPI: A-C. Taxas de ligação e internalização de FAPI-03 a FAPI-15 em relação a FAPI-02 (definido como 100%). As taxas de internalização após 1, 4 e 24 horas de incubação são representadas em cinza; a fração ligada extracelular é representada pelas barras brancas. D. Ligação de derivados de FAPI selecionados a células HEK que expressam FAP-α murina e CD26 humano após 60 minutos de incubação. Lado direito: Razão de ligação de muFAP a CD26. E. Ligação competitiva de derivados de FAPI selecionados a células HT-1080-FAP após adição de concentrações crescentes de composto não marcado.
[012] Figura 3: Imagiologia de FAPI-02 e -04 em camundongos possuindo xenoenxertos de tumor humano positivo para FAP (HT-1080-FAP) e negativo (Capan-2, SK-LMS-1): A+C, E+G. A imagiologia PET de pequenos animais foi realizada após administração intravenosa de 4 nmol de 68Ga-FAPI-02 e -04 (10 MBq resp.) nos tempos indicados. O rastreador radioativo fica rapidamente enriquecido dentro do tumor (indicado pela seta vermelha) enquanto não se acumula no tecido não canceroso. Além disso, é observada uma rápida eliminação através dos rins e da bexiga. B+D, F+H. A quantificação das imagens PET demonstra uma depuração (clearance) sólida de 68Ga-FAPI-02 e -04 do sistema cardiovascular e uma captação constante no tumor.
[013] Figura 4: Experimentos de bloqueio para análise da especificidade de ligação in vivo: A+D. Bloqueio do acúmulo de tumor 68Ga-FAPI-02 e -04 por co- administração de composto não marcado de 30 nmol em camundongos possuindo tumor HT-1080-FAP. B+C, E+F. Curvas de tempo-atividade de 68Ga- FAPI-02 e -04 em órgãos selecionados após administração intravenosa com e sem composto não marcado como competidor.
[014] Figura 5: Distribuição dos órgãos de 177Lu-FAPI-02 e -04 em camundongos nus possuindo tumor HT-1080-FAP: A-C. A biodistribuição de 177Lu-FAPI-02 e -04 foi medida ex vivo nos tempos indicados após administração intravenosa de 1 MBq a camundongos possuindo xenoenxertos de tumor HT-1080 humano positivo para FAP; n=3 para cada instante. Os valores indicados são expressos como porcentagem de dose injetada por grama de tecido (% ID/g). Demonstrou-se que os rastreadores radioativos se acumulam dentro do tumor que expressa FAP, mostrando o maior enriquecimento após 1 hora para FAPI-02 (4,5% ID/g) e 2 horas para FAPI-04 (5,4% ID/g). D-F. Razões de tecido tumoral/ normal de 177Lu-FAPI-02 e -04 1, 4 e 24 horas após administração intravenosa.
[015] Figuras 6-9: Imagiologia PET/CT de FAPI-02 em pacientes com câncer: 6A-C. Projeções de intensidade máxima (MIP) de varreduras de PET/CT em um paciente que sofre de câncer de mama metastizado. D.
Captação máxima de tecido de 68Ga-FAPI-02 10 minutos, 1 hora e 3 horas após administração intravenosa a uma paciente com câncer de mama metastizado;
7. MIP de varreduras de PET/CT em pacientes com câncer de pâncreas, câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) e carcinoma de esôfago e reto 1 hora após a administração de 68Ga-FAPI-02;
8. MIP de varreduras de PET/CT em pacientes com carcinoma de nasofaringe e laringe 1 hora após a administração de 68Ga-FAPI-02; 9A+B. Imagiologia PET/CT (MIP) de corpo inteiro 1 hora após a administração de 18F-FDG e 68Ga-FAPI-02 a um paciente com adenocarcinoma pulmonar localmente avançado. C+D. Visão transaxial do paciente com adenocarcinoma pulmonar 1 hora após a administração de 18F-FDG e 68Ga-
FAPI-02. O FAPI-02 é acumulado seletivamente no tecido que expressa FAP-α e mostra uma captação significativamente maior nas lesões malignas em comparação com o 18F-FDG.
[016] Figuras 10-16: Imagiologia PET/CT de FAPI-04 em pacientes com câncer:
10. Projeções de intensidade máxima (MIP) de varreduras de PET/CT em um paciente que sofre de câncer de mama metastizado 10 minutos, 1 e 3 horas após a administração de 68Ga-FAPI-04;
11. MIP de varreduras de PET/CT em pacientes com carcinoma sigma, carcinoma de hipofaringe, tumores neuroendócrinos, colangio, carcinoma de ovário e intestino delgado 1 hora após a administração de 68Ga- FAPI-04;
12. MIP de varreduras de PET/CT em um paciente com câncer de pulmão 1 hora após a administração de 68Ga-FAPI-04;
13. MIP de varreduras de PET/CT em um paciente com raquitismo oncogênico 1 hora após a administração de 68Ga-FAPI-04;
14. Imagiologia comparativa de um paciente com câncer de próstata metastizado. MIP de varreduras de PET/CT 1 hora após a aplicação de DOTATOC, PSMA e FAPI-04 radiomarcados;
15. Projeção de intensidade máxima (MIP) e curvas de tempo- atividade de uma varredura dinâmica de 68Ga-FAPI-04 PET/CT em um paciente com câncer de pâncreas;
16. Taxas de ligação relativas de derivados de FAPI marcados com Lu-177 em comparação com FAPI-04 (fixado em 100%) após incubação por 1, 4 e 24 horas em células HT-1080 que expressam FAP; n = 3.
[017] Figura 17: Ligação competitiva de derivados de FAPI selecionados a células HT-1080-FAP após adição de concentrações crescentes de composto não marcado (10-10 a 10-5 M, incubação por 60 minutos, n = 3).
[018] Figura 18: Ligação de derivados de FAPI a células HEK que expressam FAP murina e CD26 humano após 60 minutos de incubação, n = 3. Os valores são expressos como porcentagem de dose aplicada (% ID) por 1 milhão de células.
[019] Figura 19: Biodistribuição de derivados de FAPI selecionados em xenotransplantes HT-1080-FAP 1, 4 e 24 horas após administração intravenosa dos rastreadores radioativos, n = 3. Os valores são expressos como porcentagem de dose injetada por grama de tecido (% ID/g).
[020] Figura 20: Razão tumor/ sangue de derivados de FAPI selecionados em xenotransplantes HT-1080-FAP 1, 4 e 24 horas após administração intravenosa dos rastreadores radioativos, n = 3.
[021] Figura 21: Imagiologia PET de FAPI-21 e FAPI-46 marcadas com Ga-68 em camundongos possuindo tumor HT-1080-FAP; n = 1.
[022] Figura 22: Valores máximos de captação padronizados (SUV) de derivados de FAPI selecionados em camundongos possuindo tumor HT-1080-FAP; n = 1.
[023] Figura 23: Valores de captação padronizados máximos (SUV máx, Figura 23 A) e médios (SUV médio, Figura 23 B) de FAPI-02 e FAPI-04 marcadas com Ga-68 em pacientes com câncer; n = 25.
[024] Figura 24: Comparação intraindividual de 6 pacientes com 6 diferentes entidades tumorais submetidas a imagiologia FDG-PET e FAPI- PET dentro de <9 dias.
[025] Figura 25: Imagiologia PET/CT de FAPI-04 marcada com Ga-68 em pacientes com peritonite carcinomatosa (A), miocardite (B) e artrose da articulação do quadril (C) 1 hora p.i.
[026] Figura 26: Imagiologia PET/CT de FAPI-21 marcada com Ga-68 em pacientes com câncer 1 hora p.i.
[027] Figura 27: Imagiologia PET/CT de FAPI-46 marcada com Ga-68 1 hora p.i. e imagiologia intraterapêutica de FAPI-46 marcada com Sm- 153 30 minutos p.i. em pacientes com câncer.
[028] Figura 28: Imagiologia intraterapêutica de FAPI-46 marcada com Sm-153 até 20 horas p.i.
[029] Figura 29: A. Projeção de intensidade máxima (MIP) 1 hora após a administração intravenosa de 68Ga‐FAPI‐46 a um paciente com carcinoma colorretal metastizado. B. Imagiologia de Bremsstrahlung 2 horas após o tratamento terapêutico com 90Y-FAPI-46 do mesmo paciente.
[030] Figura 30: Imagiologia PET/CT de FAPI-46 marcada com Ga-68 1 hora p.i. em pacientes com câncer de pulmão com fibrose pulmonar idiopática. A, B. A captação máxima do rastreador no tecido tumoral é significativamente maior do que nas lesões fibróticas não exacerbadas. C. A captação máxima do rastreador no tecido tumoral é ligeiramente menor do que no tecido fibrótico exacerbado.
[031] Figura 31: A. Ligação de FAPI-19 marcada com Tc-99m a células HT-1080-FAP, n = 3. B. Ligação competitiva de FAPI-19 marcada com Tc-99m a células HT-1080-FAP após adição de concentrações crescentes de composto não marcado (10-10 a 10-5 M, incubação por 60 minutos, n = 3). C.
Cintilografia de FAPI-19 marcada com Tc-99m em xenotransplantes HT-1080- FAP, n = 1.
[032] Figura 32: A. Ligação de FAPI-34 marcada com Tc-99m a células HT-1080-FAP, n = 3. B. Cintilografia de FAPI-34 marcada com Tc-99m em xenotransplantes HT-1080-FAP, n = 1.
[033] Figura 33: Cintilografia de FAPI-34 marcada com Tc-99m em um paciente com carcinoma de pâncreas metastizado.
[034] Figura 34: A. Ligação de derivados de FAPI marcados com Pb-203 a células HT-1080-FAP, n = 3. B. Cinética de efluxo de derivados de
FAPI marcados com Pb-203 após incubação de células HT-1080-FAP com composto radiomarcado por 60 minutos e consequente incubação com meio não radioativo por 1 a 24 horas, n = 3. C. Ligação competitiva de FAPIs marcadas com Pb-203 a células HT-1080-FAP após adição de concentrações crescentes de composto não marcado (10-10 a 10-5 M, incubação por 60 minutos, n = 3).
[035] Figura 35: Cintilografia de FAPI-04 e FAPI-46 marcadas com Pb-203 em xenotransplantes HT-1080-FAP, n = 1.
[036] Figura 36: Biodistribuição de FAPI-04 e FAPI-46 marcadas com Pb-203 em xenotransplantes HT-1080-FAP 1, 4, 6 e 24 horas após administração intravenosa dos rastreadores radioativos, n = 3. Os valores são expressos como porcentagem de dose injetada por grama de tecido (% ID/g).
[037] Figura 37: A. Ligação de FAPI-42 e FAPI-52 marcadas com Cu-64 a células HT-1080-FAP, n = 3. B. Ligação competitiva de FAPI-42 e FAPI-52 marcadas com Cu-64 a células HT-1080-FAP após adição de concentrações crescentes de composto não marcado (10 -10 a 10-5 M, incubação por 60 minutos, n = 3). C. Cinética do efluxo de FAPI-42 e FAPI-52 marcadas com Cu-64 após incubação de células HT-1080-FAP com composto radiomarcado por 60 minutos e consequente incubação com meio não radioativo por 1 a 24 horas, n = 3.
[038] Figura 38: Imagiologia PET de FAPI-42 e FAPI-52 marcadas com Cu-64 em camundongos possuindo tumor HT-1080-FAP; n = 1.
[039] Figura 39: Imagiologia PET de FAPI-42 e FAPI-52 marcadas com AlF-18 em camundongos possuindo tumor HT-1080-FAP; n = 1.
[040] Figura 40: a. Imagiologia PET de pequeno animal de FAPI- 02 marcada com 68Ga em camundongos nus possuindo tumor U87MG até 140 minutos após administração intravenosa do rastreador radioativo. O tumor é indicado pela seta vermelha. b. Biodistribuição de FAPI-02 e FAPI-04 marcadas com 177Lu em camundongos nus possuindo tumor U87MG 1, 4 e 24 horas após administração intravenosa dos rastreadores radioativos; n = 3.
[041] Figura 41: Razões tumor-órgão de FAPI-02 e -04 marcadas com 177Lu em camundongos possuindo tumor U87MG 1, 4 e 24 horas após administração intravenosa.
[042] Figura 42: Projeção de intensidade máxima (MIP) de varreduras de PET/CT em um paciente com glioblastoma 10 minutos, 1 e 3 horas após a administração de 68Ga-FAPI-02.
[043] Figura 43: Imagens exemplificativas (MRI ponderada em T1 com contraste aumentado, FAPI-PET e imagens fundidas de ambas as formas de realização) de IDH de glioblastomas em peso, gliomas com IDH-mutante OMS grau II e glioblastomas com IDH-mutante.
[044] Figura 44: Valores absolutos de SUVmáx de todos os 18 gliomas.
[045] Figura 45: Análise estatística dos valores de SUVmáx/ BG.
Boxplots de valores SUVmáx/ BG e curvas ROC correspondentes em GBM versus sem GBM (a, b), IDH-mutante versus gliomas de IDH tipo selvagem (c, d) e gliomas grau II versus gliomas grau III/ IV (e, f).
[046] Figura 46: Inibição dependente da dose de atividade enzimática de FAP por FAPI-04 e Talabostat. Ao contrário do Talabostat, um potente inibidor de DPP4 com atividade marginal de FAP, o FAPI-04 demonstra uma inibição de FAP robusta e dependente da dose.
[047] Figura 47: Recaptação de FAPI-04 e FAPI-46 marcadas com 177Lu em células HT-1080-FAP. Após a incubação das células com os rastreadores radioativos por 60 minutos a 37 °C, os compostos são removidos e o meio não radioativo com (+ Comp.) e sem (- Comp.) composto não marcado é adicionado e incubado por 10 minutos a 6 horas. Já nos primeiros dez minutos de incubação, ocorre uma nova captação dos derivados não marcados de FAPI, deslocando partes da fração radiomarcada, o que resulta em valores de radioatividade significativamente mais baixos em comparação ao meio puro sem competidor. Após 6 horas de incubação, ocorreu um deslocamento quase completo das FAPIs radiomarcadas. Esses achados indicam uma recaptação contínua de moléculas FAP intactas de volta à membrana celular após a internalização inicial, permitindo a ligação e a internalização renovadas dos ligantes de FAP.
[048] Figura 48: Distribuição de órgãos da FAPI-04 marcada com 177Lu após injeção única e múltipla em camundongos nus possuindo tumor HT- 1080-FAP. A administração de duas doses iguais de 177Lu-FAPI-04 em intervalos de 4 horas resulta em atividades de órgãos totais aumentadas, incluindo o tumor, medidas 8 e 24 horas após a primeira injeção. Por outro lado, a administração de três doses (dose inicial mais alta, doses subsequentes mais baixas) não revela alterações nas atividades gerais de órgãos.
[049] Figura 49: Ligação de derivados de F-18-FAPI a células HT1080 que expressam FAP humana após 10, 30, 60 e 90 minutos de incubação, n = 3. Os valores são expressos como porcentagem de dose aplicada (% ID) por 1 milhão de células.
[050] Figura 50: Imagiologia PET de FAPI-74 e FAPI-52 marcadas com AlF-18 em camundongos possuindo tumor HT-1080-FAP; n = 1.
[051] Figura 51: Biodistribuição de FAPI-75 em xenotransplantes HT-1080-FAP 1, 4 e 24 horas após administração intravenosa do rastreador radioativo, n = 3. Os valores são expressos como porcentagem de dose injetada por grama de tecido (% ID/g).
[052] Figura 52: Imagiologia PET de paciente com câncer de pulmão de células não pequenas: Acúmulo robusto de FAPI-74 marcada com F18 em várias metástases.
[053] Figura 53: Curvas de tempo-atividade da região cardíaca
(SUVmédio) para FAPI-04 e -46 como ilustração da rápida depuração da mistura (pool) de sangue.
[054] Figura 54: FAPI-02 e FAPI-04 nos diferentes momentos da imagiologia (10 minutos, 1 horas e 3 horas p.i.) em dois pacientes com câncer de mama metastizado. O direcionamento rápido do tumor e a rápida depuração do sangue são seguidos por uma longa fase de platô sem alteração relevante no contraste da imagem (parte superior). Em comparação com a FAPI-02, o ligante FAPI-04 é caracterizado por um tempo prolongado de retenção do tumor (parte inferior).
[055] Figura 55: A dose eficaz de FAPI-02 foi de 1,80E-02 mSv/ MBq calculada com OLINDA (1,82E-02 com IDAC1/ ICRP60, 1,79E-02 com IDAC2/ ICRP103). A dose eficaz para FAPI-04 PET/CT foi de 1,64E-02 mSv/ MBq calculada com OLINDA (1,66E-02 com IDAC1/ ICRP60, 1,35E-02 com IDAC2/ ICRP103). Se a varredura atrasada às 3 horas p.i. fosse omitida na prática clínica, a atividade de rotina para um exame FAPI poderia ser reduzida para 200 MBq 68Ga; consecutivamente, a dose de radiação dessa varredura FAPI-PET/CT seria de 3-4 mSv.
[056] Figura 56: A) 68Ga-FAPI-04 após 1 hora pós injeção em diferentes entidades tumorais em PET/CT. O SUVmáx médio mais alto (> 12) foi encontrado no sarcoma, câncer de esôfago, mama, carcinoma colangiocelular e câncer de pulmão. A menor captação de FAPI (SUVmáx médio <6) foi observada em carcinoma de células renais, diferenciado de tireóide, adenoide-cística, carcinoma gástrico e feocromocitoma. O SUVmáx médio de carcinoma hepatocelular, carcinoma colorretal, câncer de cabeça- pescoço, carcinoma ovariano e carcinoma pancreático foi intermediário (SUV 6<x<12). Dentro de todas as entidades tumorais, foi observada uma alta variação interindividual. Devido à baixa atividade de fundo (SUV 2), as razões tumor/ fundo são > 2 vezes no intermediário e > 4 vezes no grupo de captação de alta intensidade. B) Entidades tumorais primárias apresentaram absorção SUV semelhante em comparação com entidades tumorais usando FAPI-04.
[057] Figura 57: Imagens PET exemplificativas de diferentes entidades tumorais que foram usadas para as quantificações mostradas na Figura 56 A-B.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[058] Antes de a presente invenção ser descrita em detalhes abaixo, deve ser entendido que esta invenção não está limitada à metodologia, protocolos e reagentes específicos aqui descritos, pois estes podem variar.
Também deve ser entendido que a terminologia usada neste documento tem o objetivo de descrever formas de realização particulares somente, e não se destina a limitar o escopo da presente invenção que será limitado apenas pelas reivindicações anexas. A menos que definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos usados neste documento têm os mesmos significados que são comumente entendidos por um técnico no assunto.
[059] De preferência, os termos aqui utilizados são definidos como descrito em “A multilingual glossary of biotechnological terms: (IUPAC Recommendations)”, Leuenberger, H.G.W, Nagel, B. e Klbl, H. eds. (1995), Helvetica Chimica Acta, CH-4010 Basel, Suíça).
[060] Ao longo deste relatório descritivo e das reivindicações a seguir, a menos que o contexto exija de outra forma, a palavra “compreender” e variações tais como “compreende” e “compreendendo” serão entendidas como implicando a inclusão de um número inteiro declarado, etapa ou grupo de números inteiros ou etapas, mas não a exclusão de qualquer outro número inteiro ou etapa ou grupo de números inteiros ou etapas. Nas passagens seguintes, diferentes aspectos da invenção são definidos em mais detalhes. Cada aspecto assim definido pode ser combinado com qualquer outro aspecto ou aspectos, a menos que seja claramente indicado o contrário. Em particular, qualquer característica indicada como sendo opcional, preferida ou vantajosa pode ser combinada com qualquer outra característica ou características indicadas como sendo opcionais, preferidas ou vantajosas.
[061] Vários documentos são citados ao longo do texto deste relatório descritivo. Cada um dos documentos citados aqui (incluindo todas as patentes, pedidos de patentes, publicações científicas, especificações de fabricante, instruções etc.), supra ou infra, são aqui incorporados por referência em sua totalidade. Nada neste documento deve ser interpretado como uma admissão de que a invenção não tem o direito de anteceder tal divulgação em virtude da invenção anterior. Alguns dos documentos citados aqui são caracterizados como sendo “incorporados por referência”. No caso de um conflito entre as definições ou ensinamentos de tais referências incorporadas e definições ou ensinamentos citados no presente relatório descritivo, o texto do presente relatório descritivo tem prioridade.
[062] A seguir, os elementos da presente invenção serão descritos.
Esses elementos são listados com formas de realização específicas, no entanto, deve-se entender que eles podem ser combinados de qualquer maneira e em qualquer número para criar formas de realização adicionais. Os exemplos descritos de várias maneiras e formas de realização preferidas não devem ser interpretados como limitando a presente invenção apenas às formas de realização explicitamente descritas. Esta descrição deve ser entendida para dar suporte e abranger formas de realização que combinam as formas de realização explicitamente descritas com qualquer número dos elementos revelados e/ou preferidos. Além disso, quaisquer permutações e combinações de todos os elementos descritos neste pedido devem ser consideradas reveladas pela descrição do presente pedido, a menos que o contexto indique o contrário.
DEFINIÇÕES
[063] A seguir, são fornecidas algumas definições de termos frequentemente usados neste relatório descritivo. Esses termos terão, em cada caso de seu uso no restante do relatório descritivo, o significado definido respectivamente e os significados preferidos.
[064] Conforme usado neste relatório descritivo e nas reivindicações anexas, as formas singulares “um”, “uma” e “o”, “a” incluem referentes plurais, a menos que o conteúdo indique claramente o contrário.
[065] Nas seguintes definições dos termos: alquila, heteroalquila, cicloalquila, heterocicloalquila, arila, aralquila, heteroarila, heteroaralquila, alquenila e alquinila são fornecidos. Esses termos, em cada caso de seu uso no restante do relatório descritivo, terão o significado definido respectivamente e os significados preferidos.
[066] O termo “alquila” refere-se a uma cadeia de carbono linear ou ramificada saturada. De preferência, a cadeia compreende de 1 a 10 átomos de carbono, isto é, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, por exemplo, metila, etil metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, terc-butila, pentila, hexila, pentila ou octila. Grupos alquila são opcionalmente substituídos.
[067] O termo “heteroalquila” refere-se a uma cadeia de carbono linear ou ramificada saturada. De preferência, a cadeia compreende de 1 a 9 átomos de carbono, isto é, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, por exemplo, metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, sec-butila, terc-butila, pentila, hexila, pentila, octila, que é interrompida uma ou mais vezes, por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, com os mesmos ou diferentes heteroátomos. Preferencialmente, os heteroátomos são selecionados a partir de O, S e N, por exemplo, -O-CH3, -S-CH3, -CH2-O- CH3, -CH2-O-C2H5, -CH2-S-CH3, -CH2-S-C2H5, -C2H4-O-CH3, -C2H4-O-C2H5, - C2H4-S-CH3, -C2H4-S-C2H5 etc. Os grupos heteroalquila são opcionalmente substituídos.
[068] Os termos “cicloalquila” e “heterocicloalquila”, por si ou em combinação com outros termos, representam, salvo indicação em contrário,
versões cíclicas de “alquila” e “heteroalquila”, respectivamente, de preferência com 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 átomos formando um anel, por exemplo ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-heptila, ciclo-octila etc.
Os termos “cicloalquila” e “heterocicloalquila” também devem incluir suas versões bicíclicas, tricíclicas e policíclicas. O termo “heterocicloalquila” refere- se, preferencialmente, a um anel saturado com cinco membros dos quais pelo menos um membro é um átomo de N, O ou S e que, opcionalmente, contém um O adicional ou um N adicional; um anel saturado com seis membros dos quais pelo menos um membro é um átomo de N, O ou S e que, opcionalmente, contém um O adicional ou um N adicional ou dois átomos de N adicionais; ou um anel bicíclico saturado com nove ou dez membros dos quais pelo menos um membro é um átomo de N, O ou S e que, opcionalmente, contém um, dois ou três átomos de N adicionais. Os grupos “cicloalquila” e “heterocicloalquila” são opcionalmente substituídos. Além disso, para heterocicloalquila, um heteroátomo pode ocupar a posição na qual o heterociclo está ligado ao restante da molécula. Exemplos de cicloalquila incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, 1-ciclo-hexenila, 3-ciclo-hexenila, ciclo-heptila, espiro[3,3]heptila, espiro[3,4]octila, espiro[4,3]octila, espiro[3,5]nonila, espiro[5,3]nonila, espiro[3,6]decila, espiro[6,3]decila, espiro[4,5]decila, espiro [5,4]decila, biciclo[2.2.1]heptila, biciclo[2.2.2]octila, adamantila e similares.
Exemplos de heterocicloalquila incluem 1-(1,2,5,6-tetra-hidropiridila), 1- piperidinila, 2-piperidinila, 3-piperidinila, 4-morfolinila, 3-morfolinila, 1,8 diazo- espiro-[4,5]decila, 1,7 diazo-espiro-[4,5] decila, 1,6 diazo-espiro-[4,5] decila, 2,8 diazo-espiro[4,5] decila, 2,7 diazo-espiro[4,5] decila, 2,6 diazo-espiro[4,5] decila, 1,8 diazo-espiro-[5,4] decila, 1,7 diazo-espiro-[5,4] decila, 2,8 diazo- espiro-[5,4] decila, 2,7 diazo-espiro[5,4] decila, 3,8 diazo-espiro[5,4] decila, 3,7 diazo-espiro[5,4] decila, 1-azo-7,11-dioxo-espiro[5,5] undecila, 1,4-diazabiciclo [2.2.2]oct-2-ila, tetra-hidrofuran-2-ila, tetra-hidrofuran-3-ila, tetra-hidrotien-2-ila,
tetra-hidrotien-3-ila, 1-piperazinila, 2-piperazinila e semelhantes.
[069] O termo “arila” refere-se preferencialmente a um anel monocíclico aromático contendo 6 átomos de carbono, um sistema de anel bicíclico aromático contendo 10 átomos de carbono ou um sistema de anel tricíclico aromático contendo 14 átomos de carbono. Exemplos são fenila, naftila ou antracenila. O grupo arila é opcionalmente substituído.
[070] O termo “aralquila” refere-se a uma porção alquila, que é substituída por arila, em que alquila e arila têm o significado descrito acima. Um exemplo é o radical benzila. De preferência, neste contexto, a cadeia alquila compreende de 1 a 8 átomos de carbono, isto é, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8, por exemplo, metila, etila, metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, sec- butenila, terc-butila, pentila, hexila, pentila, octila. O grupo aralquila é opcionalmente substituído na parte alquila e/ ou arila do grupo.
[071] O termo “heteroarila” refere-se preferencialmente a um anel monocíclico aromático de cinco ou seis membros, em que pelo menos um dos átomos de carbono é substituído por 1, 2, 3 ou 4 (para o anel de cinco membros) ou 1, 2, 3, 4 ou 5 (para o anel de seis membros) do mesmo ou de heteroátomos diferentes, preferencialmente selecionados a partir de O, N e S; um sistema de anel bicíclico aromático em que 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 átomos de carbono dos 8, 9, 10, 11 ou 12 átomos de carbono foram substituídos com os mesmos ou diferentes heteroátomos, de preferência selecionados a partir de O, N e S; ou um sistema de anel tricíclico aromático em que 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 átomos de carbono dos 13, 14, 15 ou 16 átomos de carbono foram substituídos com os mesmos ou diferentes heteroátomos, de preferência selecionados a partir de O, N e S. Exemplos são oxazolila, isoxazolila, 1,2,5-oxadiazolila, 1,2,3- oxadiazolila, pirrolila, imidazolila, pirazolila, 1,2,3-triazolila, tiazolila, isotiazolila, 1,2,3-tiadiazolila 1,2,5-tiadiazolila, piridinila, pirimidinila, pirazinila, 1,2,3- triazinila, 1,2,4-triazinila, 1,3,5-triazinila, 1-benzofuranila, 2-benzofuranila,
indoila, isoindoila, benzotiofenila, 2-benzotiofenila, 1H-indazolila, benzimidazolila, benzoxazolila, indoxazinila, 2,1-benzosoxazoila, benzotiazolila, 1,2-benzisotiazolila, 2,1-benzisotiazolila, benzotriazolila, quinolinila, isoquinolinila, quinoxalinila, quinazolinila, quinolinila, 1,2,3-benzotriazinila ou 1,2,4-benzotriazinila.
[072] O termo “heteroaralquila” refere-se a uma porção alquila, que é substituída por heteroarila, em que alquila e heteroarila têm o significado descrito acima. Um exemplo é a 2-alquilpiridinila, 3-alquilpiridinila ou 2- metilpiridinila. De preferência, neste contexto, a cadeia alquila compreende de 1 a 8 átomos de carbono, isto é, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8, por exemplo, metila, etil metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, sec-butenila, terc-butila, pentila, hexila, pentila, octila. O grupo heteroaralquila é opcionalmente substituído na parte alquila e/ou heteroarila do grupo.
[073] Os termos “alquenila” e “cicloalquenila” se referem a átomos de carbono insaturados olefínicos contendo cadeias ou anéis com uma ou mais ligações duplas. Exemplos são propenila e ciclohexenila. De preferência, a cadeia alquenila compreende de 2 a 8 átomos de carbono, isto é, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8, por exemplo, etenila, 1-propenila, 2-propenila, iso- propenila, 1-butenila, 2-butenila, 3-butenila, iso-butenila, sec-butenila, 1- pentenila, 2-pentenila, 3-pentenila, 4-pentenila, hexenila, pentenila, octenila. De preferência, o anel cicloalquenila compreende de 3 a 8 átomos de carbono, isto é, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8, por exemplo, 1-ciclopropenila, 2-ciclopropenila, 1- ciclobutenila, 2-cilcobutenila, 1-ciclopentenila, 2-ciclopentenila, 3-ciclopentenila, ciclo-hexenila, ciclopentenila, ciclooctenila.
[074] O termo “alquinila” refere-se a átomos de carbono insaturados contendo cadeias ou anéis com uma ou mais ligações triplas. Um exemplo é o radical propargila. De preferência, a cadeia alquinila compreende de 2 a 8 átomos de carbono, isto é, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8, por exemplo, etinila, 1-
propinila, 2-propinila, 1-butinila, 2-butinila, 3-butinila, 1-pentinila, 2-pentinila, 3- pentinila, 4-pentinila, hexinila, pentinila, octinila.
[075] Em uma forma de realização, os átomos de carbono ou átomos de hidrogênio nos radicais alquila, heteroalquila, cicloalquila, arila, aralquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila podem ser substituídos independentemente um do outro com um ou mais elementos selecionados a partir do grupo que consiste em O, S, N ou com grupos contendo um ou mais elementos selecionados a partir do grupo que consiste em O, S, N.
[076] Formas de realização incluem radicais alcoxi, cicloalcoxi, aricoxi, aralcoxi, alqueniloxi, cicloalqueniloxi, alquiniloxi, alquiltio, cicloalquiltio, ariltio, aralquiltio, alqueniltio, cicloalqueniltio, alquiniltio, alquilamino, cicloalquilamino, arilamino, aralquilamino, alquenilamino, cicloalquenilamino, alquinilamino.
[077] Outras formas de realização incluem radicais hidroxialquila, hidroxicicloalquila, hidroxiarila, hidroxiaralquila, hidroxialquenila, hidroxicicloalquenila, hidroxialinila, mercaptoalquila, mercaptocicloalquila, mercaptoarila, mercaptoaralquila, mercaptoalquenila, mercaptocicloalquenila, mercaptoalquinila, aminoalquila, aminocicloalquila, aminoarila, aminoaralquila, aminoalquenila, aminocicloalquenila, aminoalquinila.
[078] Em outra forma de realização, os átomos de hidrogênio em radicais alquila, heteroalquila, cicloalquila, arila, aralquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila podem ser substituídos independentemente um do outro com um ou mais átomos de halogênio. Um radical é o radical trifluorometila.
[079] Se dois ou mais radicais ou dois ou mais resíduos puderem ser selecionados independentemente um do outro, então o termo “independentemente” significa que os radicais ou os resíduos podem ser iguais ou diferentes.
[080] Como aqui utilizado, uma formulação que define os limites de um intervalo de comprimento, tal como, por exemplo, “de 1 a 6” significa qualquer número inteiro de 1 a 6, isto é, 1, 2, 3, 4, 5 e 6. Em outras palavras, qualquer intervalo definido por dois números inteiros mencionados explicitamente pretende compreender e revelar qualquer número inteiro que defina os referidos limites e qualquer número inteiro compreendido no referido intervalo.
[081] O termo “halo”, conforme aqui utilizado, refere-se a um resíduo de halogênio selecionado a partir do grupo que consiste em F, Br, I e Cl. De preferência, o halogênio é F.
[082] O termo “ligante”, conforme aqui utilizado, refere-se a qualquer ligante quimicamente adequado. De preferência, o ligante não é ou é apenas lentamente clivado sob condições fisiológicas. Assim, é preferido que o ligante não compreenda sequências de reconhecimento para proteases ou estruturas de reconhecimento para outras enzimas degradantes. Uma vez que é preferido que os compostos da invenção sejam administrados sistemicamente para permitir amplo acesso a todos os compartimentos do corpo e subsequentemente enriquecimento dos compostos da invenção em qualquer parte do corpo em que o tumor esteja localizado, é preferível que o ligante seja escolhido em de modo que não é ou é apenas lentamente clivado no sangue. A clivagem é considerada lentamente, se menos de 50% dos ligantes são clivados 2 horas após a administração do composto a um paciente humano. Os ligantes adequados, por exemplo, compreendem ou consistem em alquila opcionalmente substituída, heteroalquila, cicloalquila, ciclo-heteroalquila, arila, heteroarila, aralquila, heteroaralila, alquenila, heteroalquenila, cicloalquenila, ciclo-heteroalquenila, alquinila, sulfonila, aminas, éteres, tioéteres fosfinas, fosforamidatos, carboxamidas, ésteres, imidoésteres, amidinas, tioésteres, sulfonamidas, 3-tiopirrolidina-2,5-dion, carbamatos,
ureias, guanidinas, tioureias, dissulfetos, oximas, hidrazinas, hidrazidas, hidrazonas, ligações de diaza, triazóis, triazolinas, tetrazinas, complexos de platina e aminoácidos, ou combinações dos mesmos. De preferência, o ligante compreende ou consiste em 1,4-piperazina, 1,3-propano e um éter fenólico ou combinações dos mesmos.
[083] A expressão “opcionalmente substituído” refere-se a um grupo no qual um, dois, três ou mais átomos de hidrogênio podem ter sido substituídos independentemente um do outro pelos respectivos substituintes.
[084] Como aqui utilizado, o termo “aminoácido” refere-se a qualquer ácido orgânico contendo um ou mais substituintes amino, por exemplo, a-, β- ou γ-amino, derivados de ácidos carboxílicos alifáticos. Na notação polipeptídica aqui utilizada, por exemplo, Xaa5, isto é, Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5, em que Xaa1 a Xaa5 são cada um e independentemente selecionados a partir de aminoácidos, conforme definido, a direção à esquerda é a direção do terminal amino e a direção à direita é a direção do terminal carboxi, de acordo com o uso e convenção padrão.
[085] O termo “aminoácido convencional” refere-se aos vinte aminoácidos de ocorrência natural e abrange todas as isoformas estereoisoméricas, isto é, aminoácidos D,L, D e L dos mesmos. Esses aminoácidos convencionais também podem ser aqui referidos por suas abreviações convencionais de três letras ou uma letra e suas abreviações seguem o uso convencional (ver, por exemplo, Immunology — A Synthesis, 2ª Edição, E. S. Golub e D. R. Gren, Eds., Sinauer Associates, Sunderland Mass.
(1991)).
[086] O termo “aminoácido não convencional” refere-se a aminoácidos não naturais ou análogos químicos de aminoácidos, por exemplo, aminoácidos α,α-dissubstituídos, aminoácidos N-alquila, homo-aminoácidos, desidroaminoácidos, aminoácidos aromáticos (exceto fenilalanina, tirosina e triptofano) e ácido orto-, meta- ou para-aminobenzóico.
Os aminoácidos não convencionais também incluem compostos que possuem um grupo funcional amina e carboxila separado em um padrão de substituição 1,3 ou maior, tal como β-alanina, ácido γ-amino butírico, lactama de Freidinger, o dipeptídeo bicíclico (BTD), ácido amino-metil benzóico e outros bem conhecidos na técnica.
Também podem ser utilizados isósteros do tipo estatina, isósteros de hidroxietileno, isósteros de ligação amida reduzida, isósteros de tioamida,
isósteros de ureia, isósteros de carbamato, isósteros de tioéteres, isósteros de vinila e outros isósteros de ligação amida conhecidos na técnica.
A utilização de análogos ou aminoácidos não convencionais pode melhorar a estabilidade e a meia-vida biológica do peptídeo adicionado, uma vez que são mais resistentes à degradação em condições fisiológicas.
O técnico no assunto estará ciente dos tipos semelhantes de substituição que podem ser feitos.
Uma lista não limitativa de aminoácidos não convencionais que podem ser usados como blocos de construção adequados para um peptídeo e suas abreviações padrão (entre parênteses) é a seguinte: ácido α-aminobutírico (Abu), L-N-
metilalanina (Nmala), α-amino-α-metilbutirato (Mgabu), L-N-metilarginina
(Nmarg), aminociclopropano (Cpro), L-N-metilasparagina (Nmasn), ácido carboxilato L-N-metil-aspártico (Nmasp), ácido aniinoisobutírico (Aib), L-N-
metilcisteína (Nmcys), aminonorbornila (Norb), L-N-metilglutamina (Nmgln),
ácido carboxilato L-N-metilglutâmico (Nmglu), ciclo-hexilalanina (Chexa), L-N-
metil-histidina (Nmhis), ciclopentilalanina (Cpen), L-N-metilisoleucina (Nmile), L-
N-metilleucina (Nmleu), L-N-metillisina (Nmlys), L-N-metilmetionina (Nmmet), L-
N-metilnorleucina (Nmnle), L-N-metilnorvalina (Nmnva), L-N-metilornitina
(Nmorn), L-N-metilfenilalanina (Nmphe), L-N-metilprolina (Nmpro), L-N-
metilserina (Nmser), L-N-metiltreonina (Nmthr), L-N-metiltriptofano (Nmtrp), D- ornitina (Dorn), L-N-metiltirosina (Nmtyr), L-N-metilvalina (Nmval), L-N-
metiletilglicina (Nmetg), L-N-metil-t-butilglicina (Nmtbug), L-norleucina (NIe), L-
norvalina (Nva), α-metil-aminoisobutirato (Maib), α-metil-γ-aminobutirato
(Mgabu), D-α-metilalanina (Dmala), α-metilciclo-hexilalanina (Mchexa), D-α-
metilarginina (Dmarg), α-metilciclopentilalanina (Mcpen), D-α-metilasparagina
(Dmasn), α-metil-α-naftilalanina (Manap), D-α-metilaspartato (Dmasp), α-
metilpenicilamina (Mpen), D-α-metilcisteína (Dmcys), N-(4-aminobutil)glicina
(NgIu), D-α-metilglutamina (Dmgln), N-(2-aminoetil)glicina (Naeg), D-α-metil-
histidina (Dmhis), N-(3-aminopropil)glicina (Norn), D-α-metilisoleucina (Dmile),
N-amino-α-metilbutirato (Nmaabu), D-α-metilleucina (Dmleu), α-naftilalanina
(Anap), D-α-metillisina (Dmlys), N-benzilglicina (Nphe), D-α-metilmetionina
(Dmmet), N-(2-carbamiletil)glicina (NgIn), D-α-metilornitina (Dmorn), N-
(carbamilmetil)glicina (Nasn), D-α-metilfenilalanina (Dmphe), N-(2-carboxietil)
glicina (NgIu), D-α-metilprolina (Dmpro), N-(carboximetil)glicina (Nasp), D-α-
metilserina (Dmser), N-ciclobutilglicina (Ncbut), D-α-metil-treonina (Dmthr), N-
ciclo-heptilglicina (Nchep), D-α-metiltriptofano (Dmtrp), N-ciclo-hexilglicina
(Nchex), D-α-metiltirosina (Dmty), N-ciclo-decilglicina (Ncdec), D-α-metilvalina
(Dmval), N-cilcododecilglicina (Ncdod), D-N-metilalanina (Dnmala), N-
ciclooctilglicina (Ncoct), D-N-metilarginina (Dnmarg), N-ciclopropilglicina
(Ncpro), D-N-metilasparagina (Dnmasn), N-cicloundecilglicina (Ncund), D-N-
metilaspartato (Dnmasp), N-(2,2-difeniletil)glicina (Nbhm), D-N-metilcisteína
(Dnmcys), N-(3,3-difenilpropil)glicina (Nbhe), D-N-metilglutamina (Dnmgln), N-
(3-guanidinopropil)glicina (Narg), D-N-metilglutamato (Dnmglu), N-(1-hidroxietil)
glicina (Ntbx), D-N-metil-histidina (Dnmhis), N-(hidroxietil)glicina (Nser), D-N-
metilisoleucina (Dnmile), N-(imidazoliletil)glicina (Nhis), D-N-metilleucina
(Dnmleu), N-(3-indolilietil)glicina (Nhtrp), D-N-metillisina (Dnnilys), N-metil-γ-
aminobutirato (Nmgabu), N-metilciclo-hexilalanina (Nmchexa), D-N-metil-
metionina (Dnmmet), D-N-metilornitina (Dnmorn), N-metilciclopentilalanina (Nmcpen), N-metilglicina (NaIa), D-N-metilfenilalanina (Dnmphe), N-
metilaminoisobutirato (Nmaib), D-N-metilprolina (Dnmpro), N-(1-metilpropil)
glicina(Nile), D-N-metilserina (Dnmser), N-(2-metilpropil)glicina (Nleu), D-N- metil-treonina (Dnmthr), D-N-metiltriptofano (Dnmtrp), N-(1-metiletil)glicina (Nval), D-N-metiltirosina (Dnmtyr), N-metila-naptilalanina (Nmanap), D-N- metilvalina (Dnmval), N-metilpenicilamina (Nmpen), ácido γ-aminobutírico (Gabu), N-(p-hidroxifenil)glicina (Nhtyr), L-/-butilglicina (Tbug), N-(tiometil) glicina (Ncys), L-etilglicina (Etg), penicilamina (Pen), L-homofenilalanina (Hphe), L-α-metilalanina (Mala), L-α-metilarginina (Marg), L-α-metilasparagina (Masn), L-α-metilaspartato (Masp), L-α-metil-t-butilglicina (Mtbug), L-α- metilcisteína (Mcys), L-metiletilglicina (Metg), L-α-metilglutamina (MgIn), L-α- metilglutamato (MgIu), L-α-metil-histidina (Mhis), L-α-metil-homofenilalanina (Mhphe), L-α-metilisoleucina (Mile), N-(2-metiltioetil)glicina (Nmet), L-α- metilleucina (Mleu), L-α-metillisina (Mlys), L-α-metilmetionina (Mmet), L-α- metilnorleucina (MnIe), L-α-metilnorvalina (Mnva), L-α-metilornitina (Morn), L-α- metilfenilalanina (Mphe), L-α-metilprolina (Mpro), L-α-metilserina (Mser), L-α- metiltreonina (Mthr), L-α-metiltriptofano (Mtrp), L-α-metiltirosina (Mtyr), L-α- metilvalina (Mval), L-N-metil-homofenilalanina (Nmhphe), N-(N-(2,2-difeniletil) carbamilmetil)glicina (Nnbhm), N-(N-(3,3-difenilpropil)-carbamilmetil)glicina (Nnbhe), 1-carboxi-1-(2,2-difenil-etilamino)ciclo-propano (Nmbc), L-O-metil serina (Omser), L-O-metil homoserina (Omhser).
[087] O termo “heterociclo mono ou bicíclico aromático ou não aromático contendo N”, conforme aqui utilizado, refere-se a um composto hidrocarboneto cíclico saturado ou insaturado que contém pelo menos um átomo de nitrogênio como constituinte da cadeia cíclica.
[088] O termo “porção radioativa”, conforme aqui utilizado, refere- se a um conjunto molecular que transporta um nuclídeo radioativo. O nuclídeo é ligado por ligações covalentes ou coordenadas que permanecem estáveis sob condições fisiológicas. Exemplos são ácido [131I]-3-iodobenzóico ou 68Ga- DOTA.
[089] Um “isótopo fluorescente”, conforme aqui utilizado, emite radiação eletromagnética após excitação por radiação eletromagnética de um comprimento de onda mais curto.
[090] Um “radioisótopo”, como aqui utilizado, é um isótopo radioativo de um elemento (incluído pelo termo “nuclídeo radioativo”) que emite radioação α, β e/ ou γ.
[091] O termo “droga radioativa” é usado no contexto da presente invenção para se referir a um composto ativo biológico que é modificado por um radioisótopo. Substâncias especialmente intercalantes podem ser usadas para fornecer a radioatividade para a proximidade direta do DNA (por exemplo, um derivado de Hoechst-33258 que contem 131I).
[092] O termo “agente quelante” ou “quelato” é usado de forma intercambiável no contexto da presente invenção e se refere a uma molécula, muitas vezes orgânica, e muitas vezes uma base de Lewis, com dois ou mais pares de elétrons não compartilhados disponíveis para doação a um íon metálico. O íon metálico é geralmente coordenado por dois ou mais pares de elétrons para o agente quelante. Os termos “agente quelante bidentado”, “agente quelante tridentado” e “agente quelante tetradentado” referem-se a agentes quelantes tendo, respectivamente, dois, três e quatro pares de elétrons prontamente disponíveis para doação simultânea a um íon metálico coordenado pelo agente quelante. Geralmente, os pares de elétrons de um agente quelante formam ligações coordenadas com um único íon metálico; no entanto, em certos exemplos, um agente quelante pode formar ligações coordenadas com mais de um íon metálico, sendo possível uma variedade de modos de ligação.
[093] O termo “corante fluorescente” é usado no contexto da presente invenção para se referir a um composto que emite luz visível ou infravermelha após excitação por radiação eletromagnética de comprimento de onda mais curto e adequado. É entendido pelo técnico no assunto que cada corante fluorescente tem um comprimento de onda de excitação predeterminado.
[094] O termo “agente de contraste” é usado no contexto da presente invenção para se referir a um composto que aumenta o contraste de estruturas ou fluidos em imagiologia médica. O aprimoramento é obtido absorvendo a radiação eletromagnética ou alterando os campos eletromagnéticos.
[095] O termo “paramagnético”, conforme aqui utilizado, refere-se ao paramagnetismo induzido por elétrons não emparelhados em um meio. Uma substância paramagnética induz um campo magnético se um campo magnético externo for aplicado. Diferentemente do diamagnetismo, a direção do campo induzido é a mesma do campo externo e, diferentemente do ferromagnetismo, o campo não é mantido na ausência de um campo externo.
[096] O termo “nanopartícula”, conforme aqui utilizado, refere-se a partículas preferencialmente de forma esférica, com diâmetros de tamanhos entre 1 e 100 nanômetros. Dependendo da composição, as nanopartículas podem possuir qualidades magnéticas, ópticas ou físico-químicas que podem ser avaliadas. Além disso, a modificação da superfície é possível para muitos tipos de nanopartículas.
[097] O termo “sal farmaceuticamente aceitável” refere-se a um sal do composto da presente invenção. Os sais farmaceuticamente aceitáveis adequados do composto da presente invenção incluem sais de adição de ácido que podem, por exemplo, ser formados misturando uma solução de colina ou derivado da mesma com uma solução de um ácido farmaceuticamente aceitável, tal como ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido succínico, ácido acético, ácido benzóico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido carbônico ou ácido fosfórico. Além disso, onde o composto da invenção possui uma porção ácida, os sais farmaceuticamente aceitáveis adequados do mesmo podem incluir sais de metais alcalinos (por exemplo, sais de sódio ou potássio); sais de metais alcalino-terrosos (por exemplo, sais de cálcio ou magnésio); e sais formados com ligantes orgânicos adequados (por exemplo, amônio, amônio quaternário e cátions amina formados usando contra-íons como haleto, hidróxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato,
alquilsulfonato e arilsulfonato). Exemplos ilustrativos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados a: acetato, adipato, alginato,
ascorbato, aspartato, benzenossulfonato, benzoato, bicarbonato, bissulfato,
bitartarato, borato, brometo, butirato, edetato de cálcio, canforato,
canforsulfonato, camsilato, carbonato, cloreto, citrato, clavulanato,
ciclopentanopropionato, digluconato, di-cloridrato, dodecilsulfato, edetato,
edisilato, estolato, esilato, etanossulfonato, formiato, fumarato, gluceptato,
gluco-heptonato, gluconato, glutamato, glicerofosfato, glicolilarsanilato,
hemissulfato, heptanoato, hexanoato, hexilresorcinato, hidrabamina,
bromidrato, cloridrato, iodidrato, 2-hidroxi-etanossulfonato, hidroxinaftoato,
iodeto, isotionato, lactato, lactobionato, laurato, lauril sulfato, malato, maleato,
malonato, mandelato, mesilato, metanossulfonato, metilsulfato, mucato, 2-
naftalenosulfonato, napsilato, nicotinato, nitrato, sal de N-metilglucamina amônio, oleato, oxalato, pamoato (embonato), palmitato, pantotenato,
pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato/ difosfato, picrato, pivalato,
poligalacturonato, propionato, salicilato, estearato, sulfato, subacetato,
succinato, tanato, tartarato, teoclato, tosilato, trietiodeto, undecanoato, valerato e similares (ver, por exemplo, Berge, S.
M., et al., “Pharmaceutical Salts”,
Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19). Certos compostos específicos da presente invenção contêm funcionalidades básicas e ácidas que permitem que os compostos sejam convertidos em sais de adição de base ou de ácido.
[098] As formas neutras dos compostos podem ser regeneradas colocando em contato o sal com uma base ou ácido e isolando o composto parental da maneira convencional. A forma parental do composto difere das várias formas de sal em certas propriedades físicas, tais como solubilidade em solventes polares, mas, de outro modo, os sais são equivalentes à forma parental do composto para os fins da presente invenção.
[099] Além das formas de sal, a presente invenção fornece compostos que estão na forma de um pró-fármaco. Os pró-fármacos dos compostos aqui descritos são aqueles compostos que sofrem facilmente alterações químicas sob condições fisiológicas para proporcionar um composto de fórmula (I). Um pró-fármaco é um composto ativo ou inativo que é modificado quimicamente por ação fisiológica in vivo, tal como hidrólise, metabolismo e similares, em um composto desta invenção após a administração do pró-fármaco a um paciente. Além disso, os pró-fármacos podem ser convertidos nos compostos da presente invenção por métodos químicos ou bioquímicos em um ambiente ex vivo. Por exemplo, os pró- fármacos podem ser convertidos lentamente nos compostos da presente invenção quando colocados em um reservatório de adesivo transdérmico com uma enzima adequada. A adequação e as técnicas envolvidas na fabricação e no uso de pró-fármacos são bem conhecidas pelos técnicos no assunto. Para uma discussão geral dos pró-fármacos envolvendo ésteres, ver Svensson e Tunek, Drug Metabolism Reviews 16.5 (1988) e Bundgaard, Design of Prodrugs, Elsevier (1985). Exemplos de um ânion de carboxilato mascarado incluem uma variedade de ésteres, tais como alquila (por exemplo, metila, etila), cicloalquila (por exemplo, ciclo-hexila), aralquila (por exemplo, benzila, p- metoxibenzila) e alquilcarboniloxialquila (por exemplo, pivaloiloximetila). As aminas foram mascaradas como derivados substituídos de arilcarboniloximetila que são clivados por esterases in vivo liberando a droga livre e formaldeído
(Bungaard J. Med. Chem. 2503 (1989)). Além disso, drogas contendo um grupo NH ácido, tal como imidazol, imida, indol e similares, foram mascaradas com grupos N-aciloximetila (Bundgaard Design of Prodrugs, Elsevier (1985)). Os grupos hidroxila foram mascarados como ésteres e éteres. O documento EP 0 039 051 (Sloan e Little, 11 de Abril de 1981) revela pró-fármacos de ácido hidroxâmico à base de Mannich, a sua preparação e utilização.
[0100] Os compostos de acordo com a invenção podem ser sintetizados de acordo com um ou mais dos seguintes métodos. Deve-se notar que os procedimentos gerais são mostrados no que se refere à preparação de compostos com estereoquímica não especificada. No entanto, esses procedimentos são geralmente aplicáveis aos compostos de uma estereoquímica específica, por exemplo, onde a estereoquímica sobre um grupo é (S) ou (R). Além disso, os compostos com uma estereoquímica (por exemplo, (R)) podem ser frequentemente utilizados para produzir aqueles com estereoquímica oposta (isto é, (S)) usando métodos bem conhecidos, por exemplo, por inversão.
[0101] Certos compostos da presente invenção podem existir em formas não solvatadas, bem como em formas solvatadas, incluindo formas hidratadas. Em geral, as formas solvatadas são equivalentes às formas não solvatadas e pretendem ser abrangidas pelo escopo da presente invenção.
Certos compostos da presente invenção podem existir em múltiplas formas cristalinas ou amorfas. Em geral, todas as formas físicas são equivalentes às utilizações contempladas pela presente invenção e devem estar dentro do escopo da presente invenção.
[0102] Certos compostos da presente invenção possuem átomos de carbono assimétricos (centros ópticos) ou ligações duplas; os racematos, diastereômeros, isômeros geométricos e isômeros individuais devem ser todos abrangidos pelo escopo da presente invenção.
[0103] Os compostos da presente invenção também podem conter proporções não naturais de isótopos atômicos em um ou mais dos átomos que constituem tais compostos. Por exemplo, os compostos podem ser radiomarcados com isótopos radioativos, tais como por exemplo trítio (3H), iodo- 125 (125I) ou carbono-14 (14C). Todas as variações isotópicas dos compostos da presente invenção, sejam elas radioativas ou não, devem ser incluídas no escopo da presente invenção.
[0104] O termo “composição farmacêutica”, conforme usado no presente pedido, refere-se a uma substância e/ou uma combinação de substâncias sendo usadas para a identificação, prevenção ou tratamento de uma condição ou doença de um tecido. A composição farmacêutica é formulada para ser adequada para administração a um paciente, a fim de prevenir e/ou tratar doenças. Além disso, uma composição farmacêutica refere-se à combinação de um agente ativo com um veículo, inerte ou ativo, tornando a composição adequada para uso terapêutico. As composições farmacêuticas podem ser formuladas para vias de aplicação oral, parenteral, tópica, inalatória, retal, sublingual, transdérmica, subcutânea ou vaginal, de acordo com suas propriedades químicas e físicas. As composições farmacêuticas compreendem sistemas terapêuticos transdérmicos (TTS) sólidos, semi-sólidos, líquidos. As composições sólidas são selecionadas a partir do grupo que consiste em comprimidos, comprimidos revestidos, pó, granulado, péletes, cápsulas, comprimidos efervescentes ou sistemas terapêuticos transdérmicos. Também estão compreendidas composições líquidas, selecionadas a partir do grupo que consiste em soluções, xaropes, infusões, extratos, soluções para aplicação intravenosa, soluções para infusão ou soluções dos sistemas transportadores da presente invenção. As composições semi-sólidas que podem ser utilizadas no contexto da invenção compreendem emulsão, suspensão, cremes, loções, géis, glóbulos, comprimidos bucais e supositórios.
[0105] “Farmaceuticamente aceitável” significa aprovado por uma agência reguladora do governo federal ou estadual ou listado na Farmacopeia dos EUA ou em outra farmacopeia geralmente reconhecida para uso em animais e, mais particularmente, em seres humanos.
[0106] O termo “veículo”, como aqui utilizado, refere-se a um diluente, adjuvante, excipiente ou carreador com o qual o agente terapêutico é administrado. Esses veículos farmacêuticos podem ser líquidos estéreis, como soluções salinas em água e óleos, incluindo aqueles de petróleo, de origem animal, vegetal ou sintética, tais como óleo de amendoim, óleo de soja, óleo mineral, óleo de gergelim e similares. Uma solução salina é um veículo preferido quando a composição farmacêutica é administrada por via intravenosa. Soluções salinas e soluções aquosas de dextrose e glicerol também podem ser empregadas como veículos líquidos, particularmente para soluções injetáveis.
Excipientes farmacêuticos adequados incluem amido, glicose, lactose, sacarose, gelatina, malte, arroz, farinha, giz, sílica gel, estearato de sódio, monoestearato de glicerol, talco, cloreto de sódio, leite desnatado seco, glicerol, propileno, glicol, água, etanol e similares. A composição, se desejado, também pode conter pequenas quantidades de agentes umectantes ou emulsificantes ou agentes tamponantes de pH. Exemplos de veículos farmacêuticos adequados são descritos em “Remington's Pharmaceutical Sciences” por E. W. Martin.
[0107] O termo “proteína ativadora de fibroblastos (FAP)”, conforme aqui utilizado, também é conhecido sob o termo “seprase”. Ambos os termos podem ser usados aqui de forma intercambiável. A proteína ativadora de fibroblastos é uma proteína integral homodimérica com dobra do tipo dipeptidil peptidase IV (DPPIV), apresentando um domínio alfa/ beta-hidrolase e um domínio de hélice beta de oito lâminas.
FORMAS DE REALIZAÇÃO
[0108] A seguir, os aspectos diferentes da invenção são definidos em mais detalhes. Cada aspecto assim definido pode ser combinado com qualquer outro aspecto ou aspectos, a menos que seja claramente indicado o contrário. Em particular, qualquer característica indicada como sendo preferida ou vantajosa pode ser combinada com qualquer outra característica ou características indicadas como sendo preferidas ou vantajosas.
[0109] Em um primeiro aspecto, a presente invenção fornece um composto de Fórmula (I) (I), em que Q, R, U, V, W, Y, Z estão individualmente presentes ou ausentes, desde que pelo menos três de Q, R, U, V, W, Y, Z estejam presentes; Q, R, U, V, W, Y, Z são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em O, CH2, NR4, C=O, C=S, C=NR4, HCR4 e R4CR4, com a condição de que dois O não sejam diretamente adjacentes um ao outro; de preferência, dentre os seis, quatro grupos estão presentes, dos quais dois são C=O, um é CH2 e um é NH; mais preferencialmente, estão presentes quatro grupos, dos quais dois são C=O, um é CH2 e um é NH; mais preferencialmente, V, W, Y e Z estão presentes, dos quais V e Z são C=O e W e Y são selecionados independentemente a partir de CH2 e NH; R1 e R2 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em -H, -OH, halo, alquila C1-6, -O-alquila C1-6, S-alquila C1-6; R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em -H, -CN, - B(OH)2, -C(O)-alquila, -C(O)-arila-, -C=C-C(O)-arila, -C=C-S(O)2-arila, -CO2H, - SO3H, -SO2NH2, -PO3H2 e 5-tetrazolila; R4 é selecionado a partir do grupo que consiste em -H, -alquila C1-
6, -O-alquila C1-6, -S-alquila C1-6, alquenila, heteroalquenila, cicloalquenila,
cicloheteroalquenila, alquinila, arila e -aralquila C1-6, cada uma das referidas -
alquila C1-6 sendo opcionalmente substituída com 1 a 3 substituintes selecionados a partir de -OH, oxo, halo e opcionalmente conectada a Q, R, U,
V, W, Y ou Z;
R5 é selecionado a partir do grupo que consiste em -H, halo e alquila C1-6;
R6 e R7 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em –H,
e , desde que R6 e R7 não sejam ao mesmo tempo H; preferencialmente, R6 está ligado à posição 7- ou 8-quinolila e R7 está ligado à posição 5- ou 6- quinolila; mais preferencialmente, R6 está ligado à posição 7-quinolila e R7 está ligado à posição 6-quinolila,
em que L é um ligante,
em que D, A, E e B estão individualmente presentes ou ausentes,
de preferência em que pelo menos A, E e B estão presentes, em que quando presentes:
D é um ligante;
A é selecionado a partir do grupo que consiste em NR 4, O, S e
CH2;
E é selecionado a partir do grupo que consiste em alquila C1-6,
, ,
e ; em que i é 1, 2 ou 3;
em que j é 1, 2 ou 3;
em que k é 1, 2 ou 3;
em que m é 1, 2 ou 3;
mais preferencialmente, E é alquila C1-6, mais preferencialmente,
E é alquila C3 ou C4;
A e E, juntos, formam um grupo selecionado a partir de: uma cicloalquila, heterocicloalquila, arila e heteroarila, preferencialmente heterocicloalquila, em que A e E podem ser mono-, bi- e multicíclicos, de preferência monocíclicos.
Cada A e E sendo opcionalmente substituído com 1 a 4 substituintes selecionados a partir de -H, -alquila C1-6, -O-alquila C1-6, -S-
alquila C1-6, alquenila, heteroalquenila, cicloalquenila, ciclo-heteroalquenila,
alquinila, arila e -aralquila C1-6, sendo cada uma das referidas -alquila C1-6 opcionalmente substituída com 1 a 3 substituintes selecionados a partir de -OH,
oxo, halo; e opcionalmente conectada a A, B, D, E ou
; B é selecionado a partir do grupo que consiste em S, NR 4, NR4-O,
NR4-alquila C1-6, NR4-alquila C1-6-NR4 e um heterociclo mono- ou bicíclico aromático ou não aromático contendo N de 5 a 10 membros, preferencialmente compreendendo ainda 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S,
preferencialmente compreendendo ainda 1 ou 2 átomos de nitrogênio, de preferência em que NR4-alquila C1-6-NR4 e o heterociclo contendo N são substituídos com 1 a 3 substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em alquila C1-6, arila, aralquila C1-6; e
R8 é selecionado a partir do grupo que consiste em porção radioativa, agente quelante, corante fluorescente, um agente de contraste e combinações dos mesmos; é uma porção 1-naftila ou um heterociclo mono- ou bicíclico aromático ou não-aromático contendo N de 5 a 10 membros, em que existem 2 átomos do anel entre o átomo de N e X; o referido heterociclo compreendendo ainda, opcionalmente, 1, 2 ou 3 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S; e X é um átomo de C; ou um tautômero, racemato, hidrato, solvato ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila.
[0110] Em uma forma de realização preferida, A e E, juntos, formam um grupo selecionado a partir do grupo que consiste em uma heterocicloalquila monocíclica C3, C4, C5, C6, C7 e C8, preferencialmente monocíclica C5 ou C6 ou bicíclica C7, C8, C9, C10, C11 ou C12, preferencialmente bicíclica C7, C8, C9 e C10, compreendendo 1, 2, 3 ou 4, preferencialmente 1 ou 2 heteroátomos selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em N, O e S, preferencialmente N e O, mais preferencialmente 1 ou 2 N.
[0111] Em uma forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, um composto de Fórmula (I) é fornecido: (I), em que Q, R, U, V, W, Y, Z estão individualmente presentes ou ausentes,
desde que pelo menos três de Q, R, U, V, W, Y, Z estejam presentes;
Q, R, U, V, W, Y, Z são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em O, CH2, NR4, C=O, C=S, C=NR4, HCR4 e R4CR4,
com a condição de que dois O não sejam diretamente adjacentes um ao outro;
de preferência, dentre os seis, quatro grupos estão presentes, dos quais dois são C=O, um é CH2 e um é NH; mais preferencialmente, estão presentes quatro grupos, dos quais dois são C=O, um é CH2 e um é NH; mais preferencialmente, V, W, Y e Z estão presentes, dos quais V e Z são C=O e W e Y são selecionados independentemente a partir de CH2 e NH;
R1 e R2 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em -H, -OH, halo, alquila C1-6, -O-alquila C1-6, S-alquila C1-6;
R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em -H, -CN, -
B(OH)2, -C(O)-alquila, -C(O)-arila-, -C=C-C(O)-arila, -C=C-S(O)2-arila, -CO2H, -
SO3H, -SO2NH2, -PO3H2 e 5-tetrazolila;
R4 é selecionado a partir do grupo que consiste em -H, -alquila C1-
6, -O-alquila C1-6, -S-alquila C1-6, alquenila, heteroalquenila, cicloalquenila,
cicloheteroalquenila, alquinila, arila e -aralquila C1-6, cada uma das referidas -
alquila C1-6 sendo opcionalmente substituída com 1 a 3 substituintes selecionados a partir de -OH, oxo, halo e opcionalmente conectada a Q, R, U,
V, W, Y ou Z;
R5 é selecionado a partir do grupo que consiste em -H, halo e alquila C1-6;
R6 e R7 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em –H,
e , desde que R6 e R7 não sejam ao mesmo tempo H; preferencialmente, R6 está ligado à posição 7- ou 8-quinolila e R7 está ligado à posição 5- ou 6- quinolila; mais preferencialmente, R6 está ligado à posição 7-quinolila e R7 está ligado à posição 6-quinolila,
em que L é um ligante,
em que D, A, E e B estão individualmente presentes ou ausentes,
de preferência em que pelo menos A, E e B estão presentes, em que quando presentes:
D é um ligante;
A é selecionado a partir do grupo que consiste em NR 4, O, S e
CH2;
E é selecionado a partir do grupo que consiste em alquila C1-6,
, ,
e ; em que i é 1, 2 ou 3;
em que j é 1, 2 ou 3;
em que k é 1, 2 ou 3;
em que m é 1, 2 ou 3;
mais preferencialmente, E é alquila C1-6, mais preferencialmente,
E é alquila C3 ou C4;
B é selecionado a partir do grupo que consiste em S, NR 4, NR4-O,
NR4-alquila C1-6, NR4-alquila C1-6-NR4 e um heterociclo mono- ou bicíclico aromático ou não aromático contendo N de 5 a 10 membros, preferencialmente compreendendo ainda 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S, preferencialmente compreendendo ainda 1 ou 2 átomos de nitrogênio, de preferência em que NR4-alquila C1-6-NR4 e o heterociclo contendo N são substituídos com 1 a 3 substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em alquila C1-6, arila, aralquila C1-6; e R8 é selecionado a partir do grupo que consiste em porção radioativa, agente quelante, corante fluorescente, um agente de contraste e combinações dos mesmos; é uma porção 1-naftila ou um heterociclo mono- ou bicíclico aromático ou não-aromático contendo N de 5 a 10 membros, em que existem 2 átomos do anel entre o átomo de N e X; o referido heterociclo compreendendo ainda, opcionalmente, 1, 2 ou 3 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S; e X é um átomo de C; ou um tautômero, racemato, hidrato, solvato ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila.
[0112] Em outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção A e E, juntos, formam um grupo que consiste em uma heterocicloalquila monocíclica C3, C4, C5, C6, C7 e C8, preferencialmente monocíclica C5 ou C6 ou bicíclica C7, C8, C9, C10, C11 ou C12, preferencialmente bicíclica C7, C8, C9 e C10, compreendendo preferencialmente 1, 2, 3 ou 4, mais preferencialmente 1 ou 2 heteroátomos selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em N, O e S, preferencialmente N e O, mais preferencialmente 1 ou 2 N. As heterocicloalquilas monocíclicas preferidas são selecionadas a partir do grupo que consiste em pirrolidinila, piperidinila, imidazolidinila, 1,2-diazaciclohexanila, 1,3-diazaciclohexanila, piperazinila, 1- oxo-2-azaciclohexanila, 1-oxo-3-azaciclo-hexanila ou morfolinila, preferencialmente piperidinila, piperazinila e pirrolidinila. As heterocicloalquilas bicíclicas preferidas são selecionadas a partir do grupo que consiste em biciclo
[2.2.1] 2,5-diaza-heptanila, 3,6-diazabiciclo[3.2.1]octanila, 3,6-diazabiciclo [3.2.2]nonila, octa-hidropirrolo[2,3-b]pirrolila, octa-hidropirrolo[3,2-b]pirrolila, octa-hidropirrolo[3,4-b]pirrolila, octa-hidropirrolo[3,4-c]pirrolila, 9-metil-3,7,9- triazabiciclo[3.3.1]nonanila.
[0113] A ligação entre o heterociclo formado por A e E e B, por um lado, e/ou R6 ou R7, por outro, é preferencialmente através do heteroátomo, preferencialmente através de N.
[0114] Particularmente, exemplos preferidos do heterociclo formado por A e E são selecionados a partir do grupo que consiste em , , , ,e .
[0115] Em uma forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, Q, R, U são CH2 e estão individualmente presentes ou ausentes; de preferência, Q e R estão ausentes; V é CH2, C=O, C=S ou C=NR4; de preferência, V é C=O; W é NR4; de preferência, W é NH; Y é HCR4; de preferência, Y é CH2; e Z é C=O, C=S ou C=NR4, de preferência, Z é C=O.
[0116] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, Q, R, U estão ausentes; V é CH2; W é NH; Y é CH2; e
Z é C=O.
[0117] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, R1 e R2 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em -H e halo; de preferência, R1 e R2 são halo; mais preferencialmente, R1 e R2 são F; R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em -H, -CN e - B(OH)2; de preferência, R3 é -CN ou -B(OH)2; mais preferencialmente, R3 é – CN; R4 é selecionado a partir do grupo que consiste em -H e -alquila C1-6, em que a -alquila C1-6 é opcionalmente substituída com de 1 a 3 substituintes selecionados a partir de –OH. Preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila.
[0118] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, Q, R, U estão ausentes; V é CH2; W é NH; Y é CH2; Z é C=O; R1 e R2 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em -H e halo; de preferência, R1 e R2 são halo; mais preferencialmente, R1 e R2 são F; R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em -H, -CN e - B(OH)2; de preferência, R3 é -CN ou -B(OH)2; mais preferencialmente, R3 é – CN; R4 é selecionado a partir do grupo que consiste em -H e -alquila
C1-6, em que a -alquila C1-6 é opcionalmente substituída com de 1 a 3 substituintes selecionados a partir de –OH. Preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila.
[0119] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, Q, R, U estão ausentes; V é CH2; W é CH2; Y é NH; Z é C=O; R1 e R2 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em -H e halo; de preferência, R1 e R2 são halo; mais preferencialmente, R1 e R2 são F; R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em -H, -CN e - B(OH)2; de preferência, R3 é -CN ou -B(OH)2; mais preferencialmente, R3 é – CN; R4 é selecionado a partir do grupo que consiste em -H e -alquila C1-6, em que a -alquila C1-6 é opcionalmente substituída com de 1 a 3 substituintes selecionados a partir de –OH. Preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila.
[0120] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, é selecionado a partir do grupo que consiste em,
, , , e , opcionalmente, compreendendo ainda 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S.
[0121] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, é , opcionalmente compreendendo ainda 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S.
[0122] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, é selecionado a partir do grupo que consiste em , , , , , , , , , , , , ,
, , , , , , e ; R6 e R7 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em –H e , desde que R6 e R7 não sejam ao mesmo tempo H e, de preferência, R6 e R7 estejam ligados nas posições 5, 6 ou 7.
[0123] Em uma forma de realização preferida, é selecionado a partir do grupo que consiste em , , e .
[0124] Em outra forma de realização preferida é .
[0125] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, R5 e R6 são H; R7 é , de preferência, R7 está ligado à posição 5- ou 6- quinolila; mais preferencialmente, R7 está ligado à posição 6-quinolila, em que
D está ausente; A é O, S, CH2, NH, NCH3; E é alquila C1-6 ou , em que m é 1, 2 ou 3; preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila; mais preferencialmente, E é alquila C1-6, mais preferencialmente, E é alquila C3 ou C4; ou A e E, juntos, formam um grupo selecionado a partir de: , , , , ; B é NR4-alquila C1-6 ou um heterociclo mono- ou bicíclico aromático ou não-aromático contendo N de 5 a 10 membros, de preferência compreendendo ainda 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S, de preferência compreendendo ainda 1 ou 2 átomos de nitrogênio, de preferência em que o heterociclo contendo N é substituído com 1 a 3 substituintes selecionados do grupo que consiste em alquila C1-6, arila, aralquila C1-6. Preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila.
[0126] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, R5 e R6 são H; R7 é ,
de preferência, R7 está ligado à posição 5- ou 6- quinolila; mais preferencialmente, R7 está ligado à posição 6-quinolila, em que D está ausente; A é O; E é alquila C1-6 ou , em que m é 1, 2 ou 3; preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila; mais preferencialmente, E é alquila C1-6, mais preferencialmente, E é alquila C3 ou C4; B é NR4-alquila C1-6 ou um heterociclo mono- ou bicíclico aromático ou não-aromático contendo N de 5 a 10 membros, de preferência compreendendo ainda 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S, de preferência compreendendo ainda 1 ou 2 átomos de nitrogênio, preferencialmente em que o heterociclo contendo N é substituído com 1 a 3 substituintes selecionados do grupo que consiste em alquila C1-6, arila, aralquila C1-6. Preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila.
[0127] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, R5 e R6 são H; R7 é , de preferência, R7 está ligado à posição 5- ou 6- quinolila; mais preferencialmente, R7 está ligado à posição 6-quinolila, em que D está ausente; A é S;
E é alquila C1-6 ou , em que m é 1, 2 ou 3; preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila; mais preferencialmente, E é alquila C1-6, mais preferencialmente, E é alquila C3 ou C4; B é NR4-alquila C1-6 ou um heterociclo mono- ou bicíclico aromático ou não-aromático contendo N de 5 a 10 membros, de preferência compreendendo ainda 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S, de preferência compreendendo ainda 1 ou 2 átomos de nitrogênio, preferencialmente em que o heterociclo contendo N é substituído com 1 a 3 substituintes selecionados do grupo que consiste em alquila C1-6, arila, aralquila C1-6. Preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila.
[0128] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, R5 e R6 são H; R7 é , de preferência, R7 está ligado à posição 5- ou 6- quinolila; mais preferencialmente, R7 está ligado à posição 6-quinolila, em que D está ausente; A é CH2; E é alquila C1-6 ou , em que m é 1, 2 ou 3; preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila,
butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila; mais preferencialmente, E é alquila C1-6, mais preferencialmente, E é alquila C3 ou C4; B é NR4-alquila C1-6 ou um heterociclo mono- ou bicíclico aromático ou não-aromático contendo N de 5 a 10 membros, de preferência compreendendo ainda 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S, de preferência compreendendo ainda 1 ou 2 átomos de nitrogênio, de preferência em que o heterociclo contendo N é substituído com 1 a 3 substituintes selecionados do grupo que consiste em alquila C1-6, arila, aralquila C1-6. Preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila.
[0129] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, R5 e R6 são H; R7 é , de preferência, R7 está ligado à posição 5- ou 6- quinolila; mais preferencialmente, R7 está ligado à posição 6-quinolila, em que D está ausente; A é NH; E é alquila C1-6 ou , em que m é 1, 2 ou 3; preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila; mais preferencialmente, E é alquila C1-6, mais preferencialmente, E é alquila C3 ou C4; B é NR4-alquila C1-6 ou um heterociclo mono- ou bicíclico aromático ou não-aromático contendo N de 5 a 10 membros, de preferência compreendendo ainda 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S, de preferência compreendendo ainda 1 ou 2 átomos de nitrogênio, de preferência em que o heterociclo contendo N é substituído com 1 a 3 substituintes selecionados do grupo que consiste em alquila C1-6, arila, aralquila C1-6. Preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila.
[0130] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, R5 e R6 são H; R7 é , de preferência, R7 está ligado à posição 5- ou 6- quinolila; mais preferencialmente, R7 está ligado à posição 6-quinolila, em que D é um aminoácido, de preferência contendo uma cadeia lateral carregada; A é O; E é alquila C1-6 ou , em que m é 1, 2 ou 3; preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila; mais preferencialmente, E é alquila C1-6, mais preferencialmente, E é alquila C3 ou C4; B é NR4-alquila C1-6 ou um heterociclo mono- ou bicíclico aromático ou não-aromático contendo N de 5 a 10 membros, de preferência compreendendo ainda 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S, de preferência compreendendo ainda 1 ou 2 átomos de nitrogênio, de preferência em que o heterociclo contendo N é substituído com 1 a 3 substituintes selecionados do grupo que consiste em alquila C1-6, arila, aralquila C1-6. Preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila.
[0131] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, R5 e R6 são H; R7 é , de preferência, R7 está ligado à posição 5- ou 6- quinolila; mais preferencialmente, R7 está ligado à posição 6-quinolila, em que D é um aminoácido, de preferência contendo uma cadeia lateral carregada; A é S; E é alquila C1-6 ou , em que m é 1, 2 ou 3; preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila; mais preferencialmente, E é alquila C1-6, mais preferencialmente, E é alquila C3 ou C4; B é NR4-alquila C1-6 ou um heterociclo mono- ou bicíclico aromático ou não-aromático contendo N de 5 a 10 membros, de preferência compreendendo ainda 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S, de preferência compreendendo ainda 1 ou 2 átomos de nitrogênio, de preferência em que o heterociclo contendo N é substituído com 1 a 3 substituintes selecionados do grupo que consiste em alquila C1-6, arila, aralquila C1-6. Preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila.
[0132] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, R5 e R6 são H; R7 é , de preferência, R7 está ligado à posição 5- ou 6- quinolila; mais preferencialmente, R7 está ligado à posição 6-quinolila, em que D é um aminoácido, de preferência contendo uma cadeia lateral carregada; A é CH2; E é alquila C1-6 ou , em que m é 1, 2 ou 3; Preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila; mais preferencialmente, E é alquila C1-6, mais preferencialmente, E é alquila C3 ou C4; B é NR4-alquila C1-6 ou um heterociclo mono- ou bicíclico aromático ou não-aromático contendo N de 5 a 10 membros, de preferência compreendendo ainda 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S, de preferência compreendendo ainda 1 ou 2 átomos de nitrogênio, de preferência em que o heterociclo contendo N é substituído com 1 a 3 substituintes selecionados do grupo que consiste em alquila C1-6, arila, aralquila C1-6. Preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila.
[0133] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção,
R5 e R6 são H; R7 é , de preferência, R7 está ligado à posição 5- ou 6- quinolila; mais preferencialmente, R7 está ligado à posição 6-quinolila, em que D é um aminoácido, de preferência contendo uma cadeia lateral carregada; A é NH; E é alquila C1-6 ou , em que m é 1, 2 ou 3; preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila; mais preferencialmente, E é alquila C1-6, mais preferencialmente, E é alquila C3 ou C4; B é NR4-alquila C1-6 ou um heterociclo mono- ou bicíclico aromático ou não-aromático contendo N de 5 a 10 membros, de preferência compreendendo ainda 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S, de preferência compreendendo ainda 1 ou 2 átomos de nitrogênio, de preferência em que o heterociclo contendo N é substituído com 1 a 3 substituintes selecionados do grupo que consiste em alquila C1-6, arila, aralquila C1-6. Preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila.
[0134] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, R5 e R6 são H; R7 é ,
de preferência, R7 está ligado à posição 5- ou 6- quinolila; mais preferencialmente, R7 está ligado à posição 6-quinolila, em que D está ausente; A é O; E é alquila C1-6 ou , em que m é 1, 2 ou 3; preferencialmente, E é alquila C1-6 e alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i- propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila; mais preferencialmente, E é alquila C1-6, mais preferencialmente, E é alquila C3 ou C4; B é um heterociclo mono- ou bicíclico aromático ou não aromático contendo N de 5 a 10 membros, preferencialmente compreendendo ainda 1 ou 2 átomos de nitrogênio.
[0135] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, R5 e R6 são H; R7 é , de preferência, R7 está ligado à posição 5- ou 6- quinolila; mais preferencialmente, R7 está ligado à posição 6-quinolila, em que D está ausente; A é O; E é alquila C3 ou C4; mais preferencialmente, E é propila ou butila; B é um heterociclo mono- ou bicíclico aromático ou não aromático contendo N de 5 a 10 membros, preferencialmente compreendendo ainda 1 ou 2 átomos de nitrogênio.
[0136] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, o heterociclo contendo N compreendido em B é um heterociclo monocíclico aromático ou não aromático: , em que o heterociclo compreende ainda, opcionalmente, 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S, opcionalmente compreende ainda 1 nitrogênio; está ligado à posição 1, 2 ou 3, de preferência na posição 2; l é 1 ou 2.
[0137] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, o heterociclo contendo N compreendido em B é um heterociclo monocíclico aromático ou não aromático: , em que o heterociclo compreende ainda, opcionalmente, 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S, opcionalmente compreende ainda 1 nitrogênio; está ligado à posição 1, 2 ou 3, de preferência na posição 2; l é 1 ou 2; em que o heterociclo contendo N é substituído com uma alquila C1-6.
[0138] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, o heterociclo contendo N compreendido em B é selecionado a partir do grupo que consiste em: , , , , ,
, , , ,
, , , e
, em que o heterociclo contendo N é substituído com uma alquila
C1-6 em que se o heterociclo contendo N compreendido em B for
, o heterociclo compreende ainda, opcionalmente, 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S, opcionalmente compreende ainda 1 nitrogênio, compreende opcionalmente uma ou mais cadeias laterais (por exemplo, derivadas de aminoácidos);
está ligado à posição 1, 2 ou 3, de preferência na posição 2; o é 1 ou 2;
preferencialmente, se o heterociclo contendo N compreendido em
B for
, o heterociclo contendo N compreendido em B é selecionado a partir do grupo que consiste em
, e ; mais preferencialmente, se o heterociclo contendo N compreendido em B for
, o heterociclo contendo N compreendido em B é ou .
[0139] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, o heterociclo contendo N compreendido em B é selecionado a partir do grupo que consiste em: , , , , , , , , , , , , e , em que se o heterociclo contendo N compreendido em B for , o heterociclo compreende ainda, opcionalmente, 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S, opcionalmente compreende ainda 1 nitrogênio, compreende opcionalmente uma ou mais cadeias laterais (por exemplo, derivadas de aminoácidos); está ligado à posição 1, 2 ou 3, de preferência na posição 2; o é 1 ou 2; preferencialmente, se o heterociclo contendo N compreendido em B for
, o heterociclo contendo N compreendido em B é selecionado a partir do grupo que consiste em , e ; mais preferencialmente, se o heterociclo contendo N compreendido em B for , o heterociclo contendo N compreendido em B é ou .
[0140] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, o heterociclo contendo N compreendido em B é selecionado a partir do grupo que consiste em: , e .
[0141] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, o heterociclo contendo N compreendido em B é selecionado a partir do grupo que consiste em: , e , em que B é substituído com uma alquila C1-3.
[0142] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, R5 e R6 são H; R7 é , de preferência, R7 está ligado à posição 6-quinolila, em que
D está ausente; A é O; E é propila ou butila; Bé ou .
[0143] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, Q, R, U estão ausentes; V é C=O; W é NH; Y é CH2; Z é C=O; R1 e R2 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em -H e halo; de preferência, R1 e R2 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em -H e F; mais preferencialmente, R1 e R2 são iguais e são selecionados a partir do grupo que consiste em -H e F; R3 é -CN; R5 e R6 são H; R7 é , de preferência, R7 está ligado à posição 6-quinolila, em que D está ausente; A é O; E é alquila C1-6 ou , em que m é 1, 2 ou 3; de preferência, E é alquila C1-6; preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila; mais preferencialmente, E é alquila C1-6, mais preferencialmente, E é alquila C3 ou C4; B é NH-alquila C1-6, , , ou ; preferencialmente, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila; de preferência B é ;e é .
[0144] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, Q, R, U estão ausentes; V é C=O; W é NH; Y é CH2; Z é C=O; R1 e R2 são iguais e são selecionados a partir do grupo que consiste em -H e F; R3 é -CN; R5 e R6 são H; R7 é ,
de preferência, R7 está ligado à posição 6-quinolila, em que D está ausente; A é O, S, CH2, NH, NCH3; E é metila, etila, propila ou butila; A e E, juntos, formam um grupo selecionado a partir de: , , , , ; B é , , ou , opcionalmente, B é substituído com uma alquila C1-3; de preferência B é ;e é .
[0145] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, Q, R, U estão ausentes; V é C=O; W é NH; Y é CH2; Z é C=O; R1 e R2 são iguais e são selecionados a partir do grupo que consiste em -H e F; R3 é -CN; R5 e R6 são H; R7 é , de preferência, R7 está ligado à posição 6-quinolila, em que D está ausente; A é O; E é metila, etila, propila ou butila; B é , , ou ; de preferência B é ;e é .
[0146] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, Q, R, U estão ausentes; V é C=O; W é NH; Y é CH2; Z é C=O; R1 e R2 são iguais e são selecionados a partir do grupo que consiste em -H e F; R3 é -CN; R5 e R6 são H;
R7 é , R7 está ligado à posição 6-quinolila, em que D está ausente; A é O; E é metila, etila, propila ou butila; B é , , ou ; de preferência B é ;e é .
[0147] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila.
[0148] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, alquila C1-3 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila e i-propila.
[0149] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, aralquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em benzila, fenil-etila, fenil-propila e fenil-butila.
[0150] Em uma forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, o composto do primeiro aspecto da invenção é selecionado a partir dos compostos da Tabela 1. Mais preferencialmente, o composto do primeiro aspecto da invenção é selecionado a partir dos compostos da Tabela 2. Mais preferencialmente, o composto do primeiro aspecto da invenção é selecionado a partir do grupo que consiste em FAPI-02 e FAPI-04.
[0151] Em uma forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, o composto do primeiro aspecto da invenção é selecionado a partir dos compostos da Tabela 1 e/ou Tabela 3. Mais preferencialmente, o composto do primeiro aspecto da invenção é selecionado a partir dos compostos da Tabela 2 e/ou Tabela 4. Mais preferencialmente, o composto do primeiro aspecto da invenção é selecionado a partir do grupo que consiste em FAPI-02, FAPI-04, FAPI-46, FAPI-34, FAPI-42, FAPI-52, FAPI-69, FAPI-70, FAPI-71, FAPI-72 e FAPI-73.
TABELA 1: COMPOSTOS PREFERIDOS DO PRIMEIRO ASPECTO DA INVENÇÃO.
[0152] § compostos fluorescentes; $ quelantes de 99mTc; * quelantes de Pb; R1 e R2 estão localizados na posição 4-pirrolidina; Q, R, U estão ausentes; é , R5 é H; R6 está ligado à posição 7-quinolila; R7 está ligado à posição 6-quinolila; ‘-’ indica que R6 ou R7 são H; ‘+’ Indica R6 ou R7 sendo ; V é C=O; W é NH; Y é CH2; Z é C=O; R3 é –CN; A é O (exceto FAPI-01: A está ausente, R7 está ligado à posição 5-quinolila). Nome R1/R R R R8 D B E 2 6 7 FAPI-01 H/H - + I - - - FAPI-02 H/H - + - n-C3H6
Nome R1/R R R R8 D B E 2 6 7
FAPI-02 atto H/H - + - n-C3H6 488§
FAPI-02 H/H - + - n-C3H6 dy800CW§
FAPI-03 H/H - + - n-C4H8
FAPI-04 F/F - + - n-C3H6
FAPI-04 atto F/F - + - n-C3H6 488§
FAPI-05 F/F - + - n-C4H8
FAPI-06 H/H - + - NH n-C3H6
FAPI-07 F/F - + - NH n-C3H6
FAPI-08 H/H + - - n-C3H6
FAPI-09 F/F + - - n-C3H6
Nome R1/R R R R8 D B E 2 6 7
FAPI-10 F/F - + n-C3H6
FAPI-11 F/F - + - CH2
FAPI-12 F/F - + - n-C2H4
FAPI-13 F/F - + - n-C3H6
FAPI-14 F/F - + - n-C4H8
FAPI-15 F/F - + - (C2H4O)2C2 H4
FAPI-16 F/F - + - n-C3H6
FAPI-17 F/F - + n-C3H6
FAPI-18 F/F - + n-C3H6
FAPI-19$ F/F - + - n-C3H6
Nome R1/R R R R8 D B E 2 6 7
FAPI-20 F/F - + - n-C3H6
FAPI-21 F/F - + - n-C3H6
FAPI-22 F/F - + - n-C3H6
FAPI-23 F/F - + - n-C3H6
FAPI-24 F/F - + - (C2H4O)3C2 H4
FAPI-25 F/F - + n-C3H6
FAPI-26 F/F - + - (C2H4O)2C2 H4
FAPI-27$ F/F - + - n-C3H6
FAPI-28$ F/F - + - n-C3H6
FAPI-29$ F/F - + - n-C3H6
Nome R1/R R R R8 D B E 2 6 7 FAPI-30 F/F - + - n-C3H6 FAPI-31 F/F - + - n-C3H6 FAPI-32* F/F - + - n-C3H6 FAPI-33$ F/F - + - (C2H4O)2C2 H4 FAPI-34$ F/F - + - n-C3H6 FAPI-35 F/F - + - n-C3H6 FAPI-36 F/F - + - n-C3H6 FAPI-37 F/F - + n-C3H6 - FAPI-38 F/F - + D-Arg n-C3H6 TABELA 2: COMPOSTOS DE INTERESSE ESPECIAL.
[0153] Q, R, U, D estão ausentes; R1 e R2 estão localizados na posição 4-pirrolidina; é , R5, R6 são H; R7 está ligado à posição 6-quinolila; V é C=O; W é NH; Y é CH2; Z é C=O; R3 é –CN; B é 1,4-
piperazina; E é 1,3-propano; A é O.
Nome Finalidade R1/R2 R8 68Ga-FAPI-02 PET H/H
68Ga-FAPI-04 PET F/F
Gd-FAPI-04 MRI (agente de contraste) F/F
90Y-FAPI-04 Radioterapia (β‾) F/F
99mTc-FAPI-29 SPECT F/F
203Pb-FAPI-32 SPECT F/F
18F-FAPI-n.a.
PET F/F
Nome Finalidade R1/R2 R8 188Re-FAPI-60 Radioterapia (β‾) F/F Al18F-FAPI-42 PET F/F 18F-FAPI-72 PET F/F TABELA 3: OUTROS COMPOSTOS PREFERIDOS DO PRIMEIRO ASPECTO DA INVENÇÃO.
[0154] § compostos fluorescentes; $ quelantes de 99mTc; * precursores para marcação 18F; Q, R, U estão ausentes; R1 e R2 estão localizados na posição 4-pirrolidina; é , R5 e R6 são H; R7 está ligado à posição 6-quinolila e é ; V é C=O; W é NH; Y é CH2; Z é C=O; R3 é –CN. Nome R1/R R8 D B E A 2 FAPI-39 F/F - n- CH2 C3H6 FAPI-40 F/F - n- S C3H6 FAPI-41 F/F - n- NH C3H6
Nome R1/R R8 D B E A 2
FAPI-42 F/F - n- O C3H6
FAPI-43$ F/F - n- O C3H6
FAPI-44$ F/F - n- O C3H6
FAPI-45$ F/F - n- O C3H6
FAPI-46 F/F - n- NM C3H6 e
FAPI-47 F/F - n- O C3H6
FAPI-48 F/F - n- O C3H6
FAPI-49 F/F - n- O C3H6
FAPI-50 F/F - n- O C3H6
Nome R1/R R8 D B E A 2
FAPI-51 F/F - n- O C3H6
FAPI-52 F/F - n- NM C3H6 e
FAPI-53 F/F - n- NM C3H6 e
FAPI-54 F/F -
FAPI-55 F/F - n- NM C3H6 e
FAPI-56 F/F -
FAPI-57 F/F -
FAPI-58 F/F - n- NM C3H6 e
FAPI-59 F/F - n- NM C3H6 e
FAPI-60$ F/F - n- O C3H6
Nome R1/R R8 D B E A 2
FAPI-61$ F/F - n- O C3H6
FAPI-62$ F/F - n- NM C3H6 e
FAPI-63 F/F -
FAPI-64 F/F -
FAPI-65 F/F -
FAPI-66 F/F -
FAPI-67 F/F -
FAPI-68 F/F -
FAPI-69$ F/F - n- NM C3H6 e
FAPI-70$ F/F - n- NM C3H6 e
Nome R1/R R8 D B E A 2
FAPI-71$ F/F - n- NM C3H6 e
FAPI-72* F/F - n- NM C3H6 e
FAPI-73* F/F - n- O C3H6
FAPI-74 H/H - n- O C3H6
FAPI-75 F/F n- O C3H6
FAPI-76 F/F - n- O C3H6
FAPI-77 F/F n- O C3H6
FAPI-77 F/F n- O protegido C3H6
FAPI-78 F/F n- O C3H6
FAPI-78 F/F n- O protegido C3H6
Nome R1/R R8 D B E A 2 FAPI-79 F/F n- O C3H6 FAPI-80 F/F n- NM C3H6 e TABELA 4: COMPOSTOS DE INTERESSE ESPECIAL.
[0155] Q, R, U, D estão ausentes; R1 e R2 são átomos de flúor localizados na posição 4-pirrolidina; é , R5, R6 são H; R7 está ligado à posição 6-quinolila; V é C=O; W é NH; Y é CH2; Z é C=O; R3 é –CN; B é 1,4-piperazina; E é 1,3-propano; A é O. Nome Finalidade R8 188Re-FAPI-60 Radioterapia (β‾) Al18F-FAPI-42 PET 18F-FAPI-73 PET TABELA 5: PRECURSORES PREFERIDOS PARA MARCAÇÃO RADIOATIVA COM § F-18; $ CU-64; € GA-68; £ TC-99M, RE-188; * Y-90, SM-153, LU-177. FAPI- 02€,*
FAPI- 04€,*
FAPI-34£
FAPI- 42§,$,€
FAPI- 46€,*
FAPI- 52§,$,€
FAPI-69£
FAPI-70£
FAPI-71£ FAPI-72§ FAPI-73§ FAPI- 74§,$,€ FAPI- 75§,$,€
[0156] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, R8 é uma porção radioativa, em que a porção radioativa é um isótopo fluorescente, um radioisótopo, uma droga radioativa ou combinações dos mesmos. De preferência, a porção radioativa é selecionada a partir do grupo que consiste em isótopos emissores de radiação alfa, isótopos emissores de radiação beta, isótopos emissores de radiação gama, isótopos emissores de elétrons Auger, isótopos emissores de raios X, isótopos emissores de fluorescência, tais como 11C, 18F, 51Cr, 67Ga, 68Ga, 111In, 99mTc, 186Re, 188Re, 139La, 140La, 175Yb, 153Sm, 166Ho, 88Y, 90Y, 149Pm, 165Dy, 169Er, 177Lu, 47Sc, 142Pr, 159Gd, 212Bi, 213Bi, 72As, 72Se, 97Ru, 109Pd, 105Rh, 101mRh, 119Sb, 128Ba, 123I, 124I, 131I, 197Hg, 211At, 151Eu, 153Eu, 169Eu, 201Tl, 203Pb, 212Pb, 64Cu, 67Cu, 188Re, 186Re, 198Au, 225Ac, 227Th e 199Ag. De preferência 18F, 64Cu,
68Ga, 90Y, 99mTc, 153Sm, 177Lu, 188Re.
[0157] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, R8 é um corante fluorescente selecionado a partir do grupo que consiste nas seguintes classes de corantes fluorescentes: xantenos, acridinas, oxazinas, cininas, corantes de stirila, cumarinas, porfinas, complexos ligante-metal, proteínas fluorescentes, nanocristais, perilenos, boro- dipirometenos e ftalocianinas, bem como conjugados e combinações dessas classes de corantes.
[0158] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, R8 é um agente quelante que forma um complexo com cátions metálicos divalentes ou trivalentes. De preferência, o agente quelante é selecionado a partir do grupo que consiste em ácido 1,4,7,10-tetraazaciclododecano-N,N’,N,N’-tetraacético (DOTA), ácido etilenodiaminotetraacético (EDTA), ácido 1,4,7-triazaciclononano-1,4,7- triacético (NOTA), trietilenotetramina (TETA), ácido iminodiacético, ácido dietilenotriamina-N,N,N’,N’,N”-pentaacético (DTPA), bis-(carboximetilimidazol) glicina e ácido 6-hidrazinopiridina-3-carboxílico (HYNIC).
[0159] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da presente invenção, R8 é um agente de contraste que compreende ou consiste em um agente paramagnético, de preferência, em que o agente paramagnético compreende ou consiste em nanopartículas paramagnéticas.
[0160] Em uma outra forma de realização preferida do primeiro aspecto da invenção, R8 é selecionado a partir de qualquer R8 das Tabelas 1 a
5.
[0161] Em um segundo aspecto, a presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica compreendendo ou consistindo em pelo menos um composto do primeiro aspecto e, opcionalmente, um veículo e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
[0162] Em um terceiro aspecto, a presente invenção refere-se ao composto do primeiro aspecto ou à composição farmacêutica do segundo aspecto para uso no diagnóstico ou tratamento de uma doença caracterizada pela superexpressão da proteína ativadora de fibroblastos (FAP) em um animal ou ser humano. De preferência, a doença caracterizada por superexpressão da proteína ativadora de fibroblastos (FAP) é selecionada a partir do grupo que consiste em câncer, inflamação crônica, aterosclerose, fibrose, remodelação de tecidos e distúrbio quelóide.
[0163] De preferência, se a doença caracterizada pela superexpressão da proteína ativadora de fibroblastos (FAP) for câncer, o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em câncer de mama, câncer de pâncreas, câncer de intestino delgado, câncer de cólon, câncer retal, câncer de pulmão, câncer de cabeça e pescoço, câncer de ovário, carcinoma hepatocelular, câncer de esôfago, câncer de hipofaringe, câncer de nasofaringe, câncer de laringe, células de mieloma, câncer de bexiga, carcinoma colangiocelular, carcinoma renal de células claras, tumor neuroendócrino, osteomalácia oncogênica, sarcoma, CUP (carcinoma de primário oculto), carcinoma do timo, tumores desmóide, glioma, astrocitoma, carcinoma do colo do útero e câncer de próstata. De preferência, o câncer é glioma, câncer de mama, câncer de cólon, câncer de pulmão, câncer de cabeça e pescoço, câncer de fígado ou câncer de pâncreas. Mais preferencialmente, o câncer é glioma.
[0164] De preferência, se a doença caracterizada pela superexpressão da proteína ativadora de fibroblastos (FAP) for inflamação crônica, a inflamação crônica é selecionada a partir do grupo que consiste em artrite reumatóide, osteoartrite e doença de Crohn. De preferência, a inflamação crônica é artrite reumatóide.
[0165] De preferência, se a doença caracterizada por superexpressão da proteína ativadora de fibroblastos (FAP) for fibrose, a fibrose é selecionada a partir do grupo que consiste em fibrose pulmonar, como fibrose pulmonar idiopática e cirrose hepática.
[0166] De preferência, se a doença caracterizada por superexpressão da proteína ativadora de fibroblastos (PAF) for a remodelação de tecidos, a remodelação de tecidos ocorrerá após o infarto do miocárdio.
[0167] De preferência, se a doença caracterizada por superexpressão da proteína ativadora de fibroblastos (FAP) for um distúrbio quelóide, o distúrbio quelóide é selecionado a partir do grupo que consiste em formação de cicatriz, tumores quelóides e cicatriz quelóide.
[0168] Em um quarto aspecto, a presente invenção refere-se a um kit que compreende ou consiste no composto do primeiro aspecto ou na composição farmacêutica do segundo aspecto e instruções para o diagnóstico ou tratamento de uma doença. De preferência, a doença é uma doença como especificada acima.
EXEMPLOS EXEMPLO 1: SÍNTESE DE COMPOSTOS E RADIOQUÍMICA
[0169] Com base em um inibidor específico da FAP-α (Jansen et al., ACS Med Chem Lett, 2013), dois rastreadores radioativos foram sintetizados. A FAPI-01 marcada com radioiodo foi obtida por meio de um precursor estanilado por organotina, que foi preparado através de troca de bromo/ estanho catalisada por paládio. A FAPI-02 é um precursor para a quelação de radio-metais, que foi sintetizada em cinco etapas. Por aplicação dos mesmos procedimentos ou procedimentos ligeiramente modificados, foram preparados compostos adicionais. As estruturas destes compostos estão listadas nas Tabelas 1 e 2. As radioiodinações do precursor estanilado foram realizadas com ácido peracético. Para quelação com Lu-177 e Ga-68, o pH da mistura de reação foi ajustado com acetato de sódio e aquecido a 95 °C por 10 minutos. A estabilidade no soro humano foi analisada por precipitação e análise por radio-HPLC do sobrenadante.
REAGENTES
[0170] Todos os solventes e reagentes não radioativos foram obtidos em grau reagente da ABCR (Karlsruhe, Alemanha), Sigma-Aldrich (München, Alemanha), Acros Organics (Geel, Bélgica) ou VWR (Bruchsal, Alemanha) e foram utilizados sem purificação adicional. O Atto 488 NHS-éster foi obtido da AttoTec (Siegen, Alemanha). O ácido 2,2’,2’’-(10-(2-(4-nitrofenil) oxi)-2-oxoetil)-1,4,7,10-tetraazaciclo-dodecano-1,4,7-triil)triacético (DOTA-PNP) foi sintetizado seguindo o protocolo de Mier et al. (Mier et al., Bioconjug Chem, 2005). Os intermediários ácido 6-metoxiquinolina-4-carboxílico (7), ácido 5- bromoquinolina-4-carboxílico (3) e (S)-1-(2-aminoacetil)pirrolidina-2-carbonitrila 4-metilbenzenossulfonato foram sintetizados seguindo os protocolos de Jansen et al. (Jansen et al., ACS Med Chem Lett, 2013). A substância (S)-N-(2-(2- cianopirrolidin-1-il)-2-oxoetil)-5-bromoquinolina carboxamida foi sintetizada por um protocolo de amidação de HBTU modificado.
SÍNTESE DO COMPOSTO
[0171] O Esquema 1 representa a síntese inicial de FAPI-01 que foi alcançada realizando uma troca Br/Li com n-butil-lítio em ácido 5- bromoquinolina-4-carboxílico (3) e extinguindo (quenching) com iodo elementar para obter iodoquinolina 4. Este composto foi acoplado ao fragmento Gly-Pro- CN por ativação de HBTU/HOBt para fornecer material de referência não radioativo de FAPI-01 (1).
[0172] Esquema 1. Síntese de FAPI-01 não radioativa. i) nBuLi, depois I2, THF; ii) HBTU/HOBt, DIPEA, H-Gly-Pro-CN, DMF.
[0173] Para a síntese de FAPI-01 radioativa (1*), o precursor estanilado 6 foi obtido por estanilação catalisada por paládio do inibidor 5 em dioxano a 80 °C (Esquema 2).
[0174] Esquema 2. Síntese de FAPI-1 radioativa através do precursor estanilado 4. i) (Me 3Sn)2; (PPh3)2PdCl2; dioxano 80 °C; ii) I-125 ou I-131; AcOOH; HCl 1 M; MeOH.
[0175] Para permitir a marcação radioativa por incorporação de radio-metais, o quelante DOTA foi quimicamente ligado ao suporte básico do inibidor de FAP. Como mostrado em Jansen et al. (Jansen et al., ACS Med Chem Lett, 2013), modificações na posição 6 do ácido quinolino-4- carboxílico são bem toleradas sem prejudicar a afinidade e especificidade alvo. Portanto, um ligante bifuncional foi anexado ao grupo hidroxila de 8 por meio de uma ligação éter, levando à síntese mostrada no Esquema 3. O 1- bromo-3-cloropropano pronto disponível foi escolhido para criar um espaçador, que é ileso durante a saponificação da ligação éster formada simultaneamente no final do processo de um pote. O composto 9 foi convertido no ácido quinolino-carboxílico 10 protegido por N-Boc, o qual foi ainda acoplado a H-Gly-Pro-CN por HBTU. Devido à alta higroscopicidade da amina livre, o composto 11 foi convertido diretamente em FAPI-02 (2) após a remoção de Boc, troca de solvente e neutralização do excesso de ácido p-toluenossulfônico.
[0176] Esquema 3. Síntese química de FAPI-02. i) HBr 48% aquoso, 130 °C; ii) 1-bromo-3-cloropropano, Cs2CO3, DMF, depois NaOH 6 M; iii) 1-Boc-piperazina, KI, DMF; iv) HBTU/HOBt, DIPEA, H-Gly-Pro-CN, DMF; v) TosOH, MeCN, depois DOTA-PNP, DIPEA, DMF.
[0177] No caso de compostos que incorporam o grupo A ≠ O, os intermediários do ácido quinolino-4-carboxílico foram sintetizados por um esquema de reação diferente. A etapa principal desta abordagem é uma reação de acoplamento catalisada por paládio (por exemplo, acoplamento cruzado Buchwald-Hartwig), que requer proteção adicional antes e desproteção da função do ácido carboxílico após a reação de acoplamento cruzado (esquema 4).
[0178] Esquema 4. Síntese do bloco de construção ácido 6-(3-(4- Boc-piperazin-1-il)propil-1-(metil)amino)quinolina-4-carboxílico para a síntese de FAPI-46. i) DCC, tBuOH, CuCl; ii) 3-metilamino-1-propanol, Cs2CO3, Pd2(dba)3, BINAP; iii) MsCl, NEt3, DCM e depois 1-Boc-piperazina, KI, DMF; iv) TFA depois Boc2O, NEt3, DMF.
CABOXAMIDA DE (S)-N-(2-(2-CIANOPIRROLIDIN-1-IL)-2-OXOETIL)-5- TRIMETILESTANILQUINOLINA (6)
[0179] 3,88 mg (10,0 µmol) de (S)-N-(2-(2-cianopirrolidin-1-il)-2- oxoetil)-5-bromoquinolina-caboxamida, 20 µL (32 mg; 96 µmol) de hexametilditina e 0,75 mg (1,07 µmol) de dicloreto de bis(trifenilfosfina)paládio (II) em 1 mL de dioxano seco são agitados a 80 °C de um dia para outro sob uma atmosfera inerte. Os voláteis são removidos e o resíduo é retomado em 2 mL de acetonitrila a 50%/ água e filtrado através de um cartucho leve C18 antes da purificação por HPLC. 2,78 mg (5,90 µmol; 59%) do produto são obtidos após criodessecação.
[0180] LC-MS Rt 14,77 minutos, m/z 473.0786 [M(120Sn)+H]+ ÁCIDO 5-IODOQUINOLINA-4-CARBOXÍLICO (4)
[0181] 5,42 mg (136 µmol) de suspensão de hidreto de sódio (60% em óleo mineral) são adicionados a uma solução de 30,27 mg (120 µmol) de ácido 5-bromoquinolina-4-carboxílico (3) em 3 mL de THF seco sob Ar a 0 °C. O banho de gelo é removido e a mistura de reação é resfriada a -78 °C antes de serem adicionados, gota a gota, 100 µL (160 µmol) nBuLi (1,6 m em hexanos). Após 15 minutos, adicionam-se gota a gota 64,71 mg (254 µmol) de iodo em 2 mL de THF e a reação é agitada por 30 minutos a -78 °C antes de atingir a temperatura ambiente. Após 1 hora, a reação é extinta pela adição de 1 mL de NaHCO3 0,5 M e cerca de 30 mg (170 µmol) de ditionito de sódio para remover o excesso de iodo. Após a remoção do THF sob pressão reduzida, a mistura é acidificada para pH 2 e extraída três vezes com acetato de etila (25 mL). As fases orgânicas combinadas são evaporadas até à secura e purificadas por HPLC. 18,14 mg (60,7 µmol; 45%) do composto do título são obtidos após criodessecação.
[0182] RMN de 1H (500 MHz, DMSO-d6) 13,95 (br, 0,3H), 8,93 (s, 1H), 8,34 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 8,12 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,52 (t, J = 7,9 Hz, 1H); RMN de 13C (125 MHz, DMSO-d6) 168,8, 150,3, 148,8, 141,3, 130,6, 121,0, 109,5; LC-MS Rt 8,65 minutos, m/z 299.9383 [M+H]+ CABOXAMIDA DE (S)-N-(2-(2-CIANOPIRROLIDIN-1-IL)-2-OXOETIL)-5- TRIMETILESTANILQUINOLINA (1; FAPI-01)
[0183] 9,07 mg (23,9 µmol) de HBTU em 50 µL de DMF são adicionados a uma solução de 6,21 mg (20,8 µmol) de ácido 5-iodoquinolina-4- carboxílico, 7,45 mg (55,2 µmol) de HOBt e 10 µL de DIPEA em 50 µL de DMF.
Após 15 minutos, (29,9 µmol) de 4-metilbenzenossulfonato de (S)-1-(2- aminoacetil)pirrolidina-2-carbonitrila em 50 µL de DMF são adicionados. A reação é extinta com 850 µL de água e purificada por HPLC. A criodessecação fornece 6,86 mg (15,8 µmol; 76%) do produto.
[0184] RMN de 1H (600 MHz, DMSO-d6) 9,06, 8,97, 8,33, 8,13, 7,56, 7,51, 4,81, 4,34, 4,06, 3,74, 3,56, 2,21, 2,17, 2,09, 2,05; RMN de 13C (150
MHz, DMSO-d6) 167,1, 150,2, 148,8, 145,3, 141,5, 130,7, 125,3, 121,9, 119,3, 92,0, 46,3, 45,4, 42,1, 29,5, 24,9; LC-MS Rt 11,95 minutos, m/z 435.0102 [M+H]+ ÁCIDO 6-HIDROXIQUINOLINA-4-CARBOXÍLICO (8)
[0185] 105 mg (477 µmol) de ácido 6-metoxiquinolina-4- carboxílico bruto (7) são dissolvidos em 3 mL de ácido bromídrico a 48% em água. A solução é aquecida a 130 °C por 4 horas. A solução é levada a um pH ligeiramente básico com NaOH 6 M após atingir a temperatura ambiente. 79,2 mg (419 µmol; 88%) do produto são obtidos após purificação por HPLC e liofilização.
[0186] RMN de 1H (500 MHz, DMSO-d6) 13,65 (br, 0,6H) 10,24 (s, 1H), 8,78 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 8,06 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 7,37 (dd, J = 9,1, 2,6 Hz, 1H), RMN de 13C (125 MHz, DMSO-d6) 167,7, 156,9, 146,5, 144,1, 133,4, 131,2, 126,2, 122,3, 122,6, 106,5; LC-MS Rt 6,66 minutos, m/z 190.0415 [M+H]+ 6-BROMOQUINOLINA-4-CARBOXILATO DE TERC-BUTILA
[0187] 98,3 mg (390 µmol) de ácido 6-bromoquinolina-4- carboxílico (bruto) foram suspensos em 5 mL de tetra-hidrofurano e 25,0 µL (18,3 mg; 181 µmol) de trietilamina e adicionados a O-terc-butil-N,N’-diciclo- hexilisoureia (preparado no dia anterior a partir de 426 mg (2,07 mmol) de diciclo-hexilcarbodiimida pura, 173 mg (2,33 mmol) de terc-butanol e 10,2 mg (103 µmol) de cloreto de cobre (I)). A mistura foi aquecida a 50 °C de um dia para outro. A mistura foi filtrada, os solventes evaporados e o produto isolado por HPLC. Obtiveram-se 49,7 mg (161 µmol; 41%) do composto do título após criodessecação.
[0188] LC-MS Rt 20,40 minutos, m/z 251.9642 [M-tBu]+ ÁCIDO 6-(3-CLORO-1-PROPOXI)QUINOLINA-4-CARBOXÍLICO (9)
[0189] 42,4 µl (67,4 mg; 430 µmol) de 1-bromo-1-cloropropano são adicionados a uma suspensão de 23,2 mg (123 µmol) de ácido 6- hidroxiquinolina-4-carboxílico (8) e 190 mg (1,38 µmol) de carbonato de potássio em 250 µL de DMF e aquecido a 60 °C de um dia para outro. A mistura de reação é resfriada à temperatura ambiente, diluída com 500 µL de água e 500 µL de acetonitrila antes da adição de 100 µL de NaOH 6 M. A mistura de reação é purificada diretamente por HPLC (5-40%) após a hidrólise completa do éster ser realizada. 26,45 mg (99,4 µmol; 81%) do produto são obtidos após liofilização.
[0190] RMN de 1H (500 MHz, DMSO-d6) 13,75 (br, 0,4H), 8,88 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,04 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 7,52 (dd, J = 9,2, 2,0 Hz, 1H), 4,24 (t, J = 5,95 Hz, 2H), 3,85 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 2,27 (m, 2H); RMN de 13C (125 MHz, DMSO-d6) 167,6, 157,5, 147,6, 144,8, 134,0, 131,2, 125,9, 122,7, 122,2, 104,5, 64,7, 41,9, 31,6; LC-MS Rt 11,46 minutos, m/z 266.0461 [M+H]+ 6-(3-HIDROXIPROPILMETILAMINO)QUINOLINA-4-CARBOXILATO DE TERC-BUTILA
[0191] 204,6 mg (664 µmol) de 6-bromoquinolina-4-carboxilato de terc-butila, 34,10 mg (54,7 µmol) de BINAP, 21,51 mg (23,5 µmol) de Pd 2(dba)3 e 480,3 mg (1,47 mmol) de carbonato de césio foram dissolvidos em 6 mL de tolueno, e foram adicionados 128,0 µL (118 mg; 1,32 mmol) de N-metil-1,3- propanolamina. A mistura foi agitada a 90 °C de um dia para outro antes da remoção dos solventes, o resíduo foi suspenso em água/ acetonitrila 1:1 e filtrado antes da purificação por HPLC. 172,7 mg (547 µmol; 82%) do composto do título foram obtidos após criodessecação.
[0192] LC-MS Rt 13,41 minutos, m/z 261.1213 [M-tBu+H]+ 6-(3-(4-BOC-PIPERAZIN-1-IL)PROPIL-1-(METIL)AMINO)QUINOLINA-4-CARBOXILATO DE TERC-BUTILA
[0193] 62,8 mg (199 µmol) de 6-(3-hidroxipropilmetilamino) quinolina-4-carboxilato de terc-butila foram dissolvidos em 5 mL de diclorometano e 90,0 µL (66,6 mg; 659 µmol) de trietilamina. 20,0 µL (29,6 mg; 258 µmol) de cloreto de metanossulfonila foram adicionados a 0 °C e a mistura reagiu por 60 minutos. 194,6 mg (1,05 mmol) de 1-Boc-piperazina foram adicionados antes da remoção dos voláteis. Foram adicionados ao resíduo 500 µL de dimetilformamida e 47,4 mg (286 µmol) de iodeto de potássio. A mistura foi agitada a 60 °C por 120 minutos antes do produto ser isolado por HPLC.
81,05 mg (167 µmol; 84%) do composto do título foram obtidos após criodessecação.
[0194] LC-MS Rt 13,99 minutos, m/z 485.3086 [M+H]+
ÁCIDO 6-(3-(4-TERC-BUTOXICARBONILPIPERAZIN-1-IL)-1-PROPOXI)QUINOLINA-4- CARBOXÍLICO (10)
[0195] 15,13 mg (56,9 µmol) de ácido 6-(3-cloro-1-propoxi) quinolina-4-carboxílico (9), 55,43 mg (298 µmol) de N-terc- butoxicarbonilpiperazina e 51,05 mg (30,8 µmol) de iodeto de potássio são dissolvidos em 250 µL de DMF. A reação é agitada a 60 °C de um dia para outro. A suspensão resultante é diluída com 750 µL de água antes de o produto ser purificado por HPLC. Após criodessecação, obtêm-se 28,73 mg (54,3 µmol; 95%) do produto como o sal TFA correspondente.
[0196] RMN de 1H (500 MHz, D2O) 8,93 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,17 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,79 (dd, J = 9,3, 2,5 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 4,36 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 4,27 (d, J = 13,55 Hz, 2H), 3,67 (d, J = 11,95 Hz), 3,47 (t, J = 15,5 Hz, 2 H), 3,27 (t, J = 12,7 Hz), 3,12 (td, J = 12,2, 2,65 Hz), 2,37 (m, 2 H), 1,47 (s, 9H); RMN de 13C (125 MHz, D2O) 155,5, 153,5, 149,0, 141,4, 134,4, 127,9, 126,6, 122,3, 118,4, 110,0, 105,1, 82,8, 65,5, 54,3, 51,5, 48,6, 40,7, 29,6, 27,4; LC-MS Rt 10,62 minutos, m/z 416.1997 [M+H]+ ÁCIDO 6-(3-(4-BOC-PIPERAZIN-1-IL)PROPIL-1-(METIL)AMINO)QUINOLINA-4-
CARBOXÍLICO
[0197] 100,12 mg (206 µmol) de 6-(3-(4-Boc-piperazin-1-il)propil- 1-(metil)amino)quinolina-4-carboxilato de terc-butila foram tratados com 900 µL de ácido trifluoroacético, 25 µL de triisopropilsilano, 25 µL de água e 50 µL de ácido trifluorometanossulfônico por 60 minutos. O composto desprotegido foi precipitado com éter dietílico, seco e reagido com 60,83 mg (279 µmol) de di- terc-butildicarbonato e 50,0 µL (36,5 mg; 361 µmol) de trietilamina em 1 mL de dimetilformamida por mais 60 minutos. Foram obtidos 55,42 mg (129 µmol;
65% em 2 etapas) após purificação por HPLC e criodessecação.
[0198] LC-MS Rt 10,52 minutos, m/z 429.2463 [M+H]+ (S)-N-(2-(2-CIANOPIRROLIDIN-1-IL)-2-OXOETIL)-6-(3-(4-TERC- BUTOXICARBONILPIPERAZIN-1-IL)-1-PROPOXI)QUINOLINA-4-CARBOXAMIDA (11)
[0199] 9,43 mg (24,9 µmol) de HBTU em 50 µL de DMF são adicionados a uma solução de 10,56 mg (19,9 µmol) de ácido 6-(3-(4-terc- butoxicarbonilpiperazin-1-il)-1-propoxi)quinolina-4-carboxílico (10), 5,38 mg (39,8 µmol) de HOBt e 10 µL de DIPEA em 50 µL de DMF. Após 15 minutos, (29,9 µmol) de 4-metilbenzenossulfonato de (S)-1-(2-aminoacetil)pirrolidina-2- carbonitrila em 50 µL de DMF são adicionados. A reação é extinta com 850 µL de água e purificada por HPLC. A criodessecação fornece 12,88 mg (19,4 µmol; 97%) do composto do título.
[0200] RMN de 1H (500 MHz, DMSO-d6) 9,04 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,24 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 8,10 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,89 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,85 (dd, J = 9,6, 2,3 Hz, 1H), 4,84 (t, J = 6 Hz, 1 H), 4,46–4,36 (m, 4H), 4,26 (d, J = 12,0 Hz, 2H), 3,83 (m, 1H), 3,67 (m, 3H), 3,47 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 3,27 (br, 2H), 3,11 (t, J = 11,5 Hz), 2,37 (m, 4H), 2,22 (m, 2H), 1,46 (s, 9H); RMN de 13C (125 MHz, DMSO-d6) 168,6, 168,0, 159,4, 155,5, 147,7, 141,8, 135,1, 128,2, 127,5, 123,1, 120,0, 119,1, 104,7, 82,9, 66,0, 54,3, 51,5, 47,0, 46,3, 42,3, 29,4, 27,4, 24,7, 23,1; LC-MS Rt 11,81 minutos, m/z 551.2736 [M+H]+
(S)-N-(2-(2-CIANO-4,4-DIFLUOROPIRROLIDIN-1-IL)-2-OXOETIL)-6-(3-(4-TERC- BUTOXICARBONIL-PIPERAZIN-1-IL)-1-PROPOXI)QUINOLINA-4-CARBOXAMIDA
[0201] 13,2 mg (22,4 µmol; 75%) foram obtidos seguindo o protocolo anterior.
[0202] LC-MS Rt 11,84 minutos, m/z 605.2610 [M+H]+ N-(2-(2-CIANO-4,4-DIFLUOROPIRROLIDIN-1-IL)-2-OXOETIL)-6-(3-(4-BOC-PIPERAZIN- 1-IL)PROPIL-1-(METIL)AMINO)QUINOLINA-4-CARBOXAMIDA
[0203] 1,17 mg (1,95 µmol; 92%) foram obtidos seguindo o protocolo anterior.
[0204] LC-MS Rt 12,66 minutos, m/z 600.3057 [M+H]+ FAPI-02 (2)
[0205] 4,85 mg (8,80 mmol) de (S)-N-(2-(2-cianopirrolidin-1-il)-2- oxoetil)-6-(3-(4-terc-butoxicarbonil-piperazin-1-il)-1-propoxi)quinolina-4- carboxamida (11) são dissolvidos em 1 mL de acetonitrila e 4,2 mg (22,0 µmol) de ácido 4-metilbenzenossulfônico monohidratado são adicionados. A reação é agitada a 45 °C de um dia para outro, antes os voláteis de são removidos sob pressão reduzida. O resíduo é retomado em 190 µL de dimetilformamida e 10 µL (7,3 mg; 72 µmol) de trietilamina antes de serem adicionados 6,77 mg (12,9 mmol) de éster de DOTA-p-nitrofenol. A mistura de reação é diluída com 1 mL de água e purificada por HPLC após agitação por duas horas. 5,04 mg (6,02 µmol; 68%) são obtidos após criodessecação.
[0206] RMN de 1H (600 MHz, D2O) 9,02, 8,23, 8,07, 7,87, 7,83, 4,85, 4,45, 4,41, 4,40, 4,39, 3,83, 3,67, 3,50, 3,49, 2,40, 2,38, 2,36, 2,26, 2,22; 2,16; RMN de 13C (150 MHz, D2O) 167,9, 159,1, 147,2, 141,8, 135,4, 127,9, 127,2, 119,8, 119,0, 104,5, 65,8, 54,1, 46,8, 46,1, 42,1, 29,2, 24,5, 23,0: LC-MS Rt 8,37 minutos, m/z 837.3872 [M+H]+ FAPI-04
[0207] Foram obtidos 3,97 mg (4,55 µmol; 57%) seguindo o protocolo anterior.
[0208] LC-MS Rt 8,80 minutos, m/z 873.3664 [M+H]+ FAPI-42
[0209] Foram obtidos 1,91 mg (2,47 µmol; 88%) seguindo o protocolo anterior.
[0210] LC-MS Rt 9,37 minutos, m/z 386.6807 [M+2H]2+
FAPI-46
[0211] Foram obtidos 39,21 mg (44,3 µmol; 85%) seguindo o protocolo anterior.
[0212] LC-MS Rt 9,03 minutos, m/z 443.7196 [M+2H]2+ FAPI-19
[0213] 1,09 mg (1,86 µmol) de (S)-N-(2-(2-ciano-4,4- difluoropirrolidin-1-il)-2-oxoetil)-6-(3-(4-terc-butoxicarbonilpiperazin-1)-il)-1- propoxi)quinolina-4-carboxamida foram desprotegidas por Boc pelo método aplicado para FAPI-02 e reagiram com 2,74 mg (5,91 µmol) de bis((1-(2-(terc- butoxi)-2-oxoetil)-1H-imidazol-2-il)metil)glicina, que foram pré-ativados com 2,13 mg (5,62 µmol) de HBTU e 2,50 µL (1,85 mg; 14,3 µmol) de DIPEA. Após purificação por HPLC e remoção do solvente, o resíduo foi tratado com 200 µL de ácido trifluorometanossulfônico a 2,5% em acetonitrila/ ácido trifluoroacético 1:1. Após precipitação com éter dietílico e purificação por HPLC, foram obtidos 1,06 mg (1,29 µmol; 70%) do composto do título.
[0214] LC-MS Rt 8,91 minutos, m/z 820.2933 [M+H]+
FAPI-28
[0215] 1,00 µL (0,74 mg; 5,73 µmol) de DIPEA foi adicionado a uma solução de 0,95 mg (1,16 µmol) de FAPI-19, 0,42 mg (3,14 µmol) de HOBt e 1,10 mg (2,89 µmol) de HBTU em 50 µL de DMF. Após 10 minutos, foram adicionados 2,30 mg (5,34 µmol) de H-Asn(Trt)-OtBu e reagidos por 120 minutos. Os grupos protetores terc-butila foram removidos por TfOH a 2,5% em TFA/acetonitrila 8:2. Após purificação por HPLC e criodessecação, foram obtidos 0,79 mg (0,75 µmol; 65%) do composto do título.
[0216] LC-MS Rt 9,23 minutos, m/z 524.7100 [M+2H]2+ FAPI-34
[0217] 1,01 mg (0,87 µmol; 52%) foram obtidos seguindo o protocolo anterior.
[0218] LC-MS Rt 8,87 minutos, m/z 583.6988 [M+2H]2+ FAPI-60
[0219] 3,91 mg (6,66 µmol) de (S)-N-(2-(2-ciano-4,4- difluoropirrolidin-1-il)-2-oxoetil)-6-(3-(4-terc-butoxicarbonilpiperazin-1)-il)-1- propoxi)quinolina-4-carboxamida foram desprotegidos por 30 minutos por 50 µL de acetonitrila e 100 µL de ácido trifluoroacético. Após evaporação dos solventes e lavagem com éter dietílico, uma mistura pré-incubada por 10 minutos de 8,02 mg (9,27 µmol) de acetil-Cys(Trt)-Gly-Cys(Trt)-Gly-OH, 4,31 mg (31,9 µmol) de HOBt e 4,47 mg (11,8 µmol) de HBTU em 150 µL de dimetilformamida e 2,50 µL (1,85 mg; 14,3 µmol) de DIPEA foi adicionada ao resíduo e reagida por 120 minutos. 4,66 mg (3,49 µmol; 52%) do composto do título protegido com S-tritila foram obtidos após purificação por HPLC e criodessecação.
[0220] 3,36 mg (2,52 µmol) do composto protegido com tritila foram dissolvidos em 50 µL de acetonitrila. Foram adicionados 3 µL de trietilsilano e 100 µL de ácido trifluoroacético e reagidos durante 30 minutos.
Foram obtidos 2,01 mg (2,36 µmol; 94%; 49% em duas etapas) do composto do título após a purificação por HPLC e a criodessecação.
[0221] LC-MS Rt 10,26 minutos, m/z 871.2703 [M+Na]+ FAPI-69
[0222] 0,59 mg (0,60 µmol; 39%) foram obtidos seguindo o protocolo anterior.
[0223] LC-MS Rt 10,25 minutos, m/z 991.3490 [M+H]+ FAPI-70
[0224] 0,61 mg (0,54 µmol; 33%) foram obtidos seguindo o protocolo anterior.
[0225] LC-MS Rt 10,14 minutos, m/z 1120.3884 [M+H]+ FAPI-71
[0226] 0,79 mg (0,66 µmol; 34%) foram obtidos seguindo o protocolo anterior.
[0227] LC-MS Rt 10,17 minutos, m/z 596.7075 [M+2H]2+ ATTO488-FAPI-02 (14)
[0228] 0,66 mg (1,20 µmol) de 11 são tratados com 1,33 mg (6,96 µmol) de ácido 4-metilbenzenossulfônico monohidratado em 250 µL de acetonitrila a 45 °C por 4 horas. Após remoção do solvente, o resíduo é dissolvido em 95 µL de dimetilformamida e 5 µL (3,65 mg; 36,1 µmol) de trietilamina. Foram adicionados 0,54 mg (0,55 µmol) de Atto 488 NHS-éster em 25 µL de DMSO. Após 60 minutos, 0,49 mg (0,43 µmol; 78%) do composto do título foram isolados por HPLC e criodessecação.
[0229] LC-MS Rt 10,19 minutos, m/z 1022.2706 [M]+ FAPI-73
[0230] 10,95 mg (18,7 µmol) de (S)-N-(2-(2-ciano-4,4- difluoropirrolidin-1-il)-2-oxoetil)-6-(3-(4-terc-butoxicarbonilpiperazin-1-il)-1-
propoxi)quinolina-4-carboxamida foram desprotegidos durante 30 minutos por 100 µL de acetonitrila e 200 µL de ácido trifluoroacético. Após evaporação dos solventes e lavagem com éter dietílico, foram adicionados 15,02 mg (9,27 µmol) de cloreto de N,N,N-trimetil-5-((2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)-carbonil)piridina- 2-amínio e a mistura foi dissolvida em 200 µL de dimetilformamida e 10,0 µL (7,30 mg; 72,3 µmol) de trietilamina. Após 120 minutos, a mistura foi purificada por HPLC e 11,24 mg (14,7 µmol; 79%) do composto do título foram obtidos por criodessecação.
[0231] LC-MS Rt 9,37 minutos, m/z 649.2892 [M-CF3CO2]+ FAPI-72
[0232] 9,80 mg (12,6 µmol; 70%) foram obtidos seguindo o protocolo anterior.
[0233] LC-MS Rt 9,28 minutos, m/z 662.3237 [M-CF3CO2]+ LIGAÇÃO GERAL DE FMOC-AMINOÁCIDOS PROTEGIDOS POR CADEIA LATERAL (S)-N-(2-(2-CIANO-4,4-DIFLUOROPIRROLIDIN-1-IL)-2-OXOETIL)-6-(3-(4-(Γ, Γ-DI-TERC- BUTIL)-L-CARBOXI-GLUTAMILPIPERAZIN-1-IL)-1-PROPOXI)QUINOLINA-4-CARBOXAMIDA
[0234] 14,04 mg (23,9 µmol) de (S)-N-(2-(2-ciano-4,4-difluoro pirrolidin-1-il)-2-oxoetil)-6-(3-(1-terc-butoxicarbonil-piperidin)-4-il)-1-propoxi) quinolina-4-carboxamida foram dissolvidos em 50 µL de acetonitrila e 100 µL de ácido trifluoroacético. Após 10 minutos, os voláteis foram removidos; o resíduo foi lavado com éter dietílico. Uma solução de 14,95 mg (28,4 µmol) de
Fmoc-L-Gla(tBu)2-OH, 7,74 mg (57,4 µmol) de HOBt, 13,46 mg (35,5 µmol) de HBTU e 20,0 µL (14,8 mg; 115 µmol) de DIPEA em 200 µL de dimetilformamida foi adicionada ao resíduo seco. Após 60 minutos, foram adicionados 50,0 µL (50,4 mg; 578 µmol) de morfolina e o produto foi isolado por HPLC após 30 minutos. Obteve-se 15,95 mg (20,7 µmol; 86%) do composto do título após criodessecação.
[0235] LC-MS Rt 12,85 minutos, m/z 772.3643 [M+H]+ FAPI-75
[0236] 3,37 mg (4,37 µmol) de (S)-N-(2-(2-ciano-4,4- difluoropirrolidin-1-il)-2-oxoetil)-6-(3-(4-(γ,γ-di-terc-butil)-L-carboxiglutamil piperazin-1-il)-1-propoxi)quinolina-4-carboxamida e 4,52 mg (10,7 µmol) de NOTA-p-nitrofenol foram dissolvidos em 100 µL de dimetilformamida e 10,0 µL (7,30 mg 72,3 µmol) de trietilamina. Após purificação por HPLC e criodessecação, o composto intermediário foi desprotegido por uma incubação de 60 minutos em uma solução de 50 µL de acetonitrila, 100 µL de ácido trifluoroacético, 2,5 µL de triisopropilsilano e 2,5 µL de água. Foram obtidos 2,62 mg (2,77 µmol; 63%) após purificação por HPLC e criodessecação.
[0237] LC-MS Rt 9,38 minutos, m/z 945.3668 [M+H]+ PRECURSOR FAPI-77
[0238] Foram obtidos 3,23 mg (3,06 µmol; 73%) seguindo o protocolo geral de modificação de éster ativo. Nota: Os grupos protetores de terc-butila foram removidos após radiofluoração, purificação por HPLC e evaporação de solventes por tratamento com TFA puro a 95 °C por 3 minutos, seguido pelo tratamento com SPE.
[0239] LC-MS Rt 16,02 minutos, m/z 1219.5858 [M+H]+ ÁCIDO 2-(2-(4,7,10-TRIS (2-(TERC-BUTOXI)-2-OXOETIL)-1,4,7,10- TETRAAZACICLODODECAN-1-IL)ACETOXI)ACÉTICO
[0240] 28,99 mg (50,6 µmol) de tris-tBu-DOTA, 90,65 (278 µmol) de carbonato de césio e 10,28 µL (15,0 mg; 65,5 µmol) de 2-bromoacetato de benzila foram suspensos em 300 µL de dimetilformamida e agitados por 2 horas. O produto foi isolado por HPLC, criodessecado e dissolvido em 25 ml de ácido acético a 10% em metanol. Foram adicionados 50 mg de Pd/C a 10% e hidrogênio (pressão ambiente). Após 2 horas. Os solventes foram removidos e o composto do título isolado por HPLC. Após criodessecação, foram obtidos 25,19 mg (39,9 µmol; 79%) do composto do título.
[0241] LC-MS Rt 14,14 minutos, m/z 631.4784 [M+H]+ TBU-FAPI-79
[0242] 2,00 mg (3,41 µmol) de (S)-N-(2-(2-ciano-4,4- difluoropirrolidin-1-il)-2-oxoetil)-6-(3-(1-terc-butoxicarbonil-piperidin-4-il)-1- propoxi)quinolina-4-carboxamida foram dissolvidos em 50 µL de acetonitrila e 100 µL de ácido trifluoroacético. Após 10 minutos, os voláteis foram removidos;
o resíduo foi lavado com éter dietílico. 4,20 mg (6,60 µmol) de ácido 2-(2- (4,7,10-tris(2-(terc-butoxi)-2-oxoetil)-1,4,7,10-tetraazaciclododecan-1-il)acetoxi) acético e 3,35 mg (8,84 µmol) de HBTU dissolvidos em 100 µL de dimetilformamida e 10,0 µL (7,40 mg; 57,4 µmol) de DIPEA foram adicionados ao resíduo seco e reagiram por 60 minutos. Foram obtidos 2,26 mg (2,06 µmol; 60%) do composto do título após purificação por HPLC e criodessecação.
[0243] LC-MS Rt 12,98 minutos, m/z 1099.7481 [M+H]+ FAPI-79
[0244] 2,26 mg (2,06 µmol) de tBu-FAPI-79 foram dissolvidos em 25 µL de acetonitrila e 100 µL de ácido trifluoroacético e agitados a 35 °C por 30 minutos. Após evaporação dos solventes, o produto foi isolado por HPLC.
Foram obtidos 1,58 mg (1,70 µmol; 82%) do composto do título após criodessecação.
[0245] LC-MS Rt 8,84 minutos, m/z 466.2737 [M+2H]2+
ANÁLISE DO COMPOSTO
[0246] A cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (RP-HPLC) foi realizada usando gradientes lineares de acetonitrila em água (0- 100% de acetonitrila em 5 minutos; 0,1% de TFA; taxa de fluxo de 2 ml/min) em uma coluna Chromolith Performance RP-18e (100×3 mm; Merck KGaA Darmstadt, Alemanha). A absorbância UV foi detectada a 214 nm. Um detector y adicional foi utilizado para a análise por HPLC de compostos radioativos. A caracterização por HPLC-MS foi realizada em um espectrômetro de massas ESI (Exactive, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EUA) conectado a um sistema Agilent 1200 HPLC com uma coluna Hypersil Gold C18 1,9 μm (200 ×
2,1 mm; 0-100% de acetonitrila em 20 minutos; taxa de fluxo de 200 µl/min). O Radio-HPLC analítico foi realizado usando uma coluna Chromolith Performance RP-18e (100 × 3mm; Merck; 0-30% de acetonitrila em 10 minutos; taxa de fluxo de 2 ml/min). As purificações por HPLC foram realizadas em um sistema LaPrep P110 (Knauer, Berlim, Alemanha) e uma coluna Reprosil Pur 120 (C18- aq 5 µm 250 × 25 mm; Dr. Maisch, Ammerbuch-Entringen, Alemanha). O gradiente água/ acetonitrila (15 ou 25 minutos; TFA a 0,1%; taxa de fluxo 20 ml/min) foi modificado para os produtos individuais.
RADIOQUÍMICA
[0247] O radioiodo (I-125) foi adquirido da Hartmann Analytik (Göttingen, Alemanha); o lutécio radioativo (Lu-177) foi obtido da ITG (München, Alemanha); o gálio radioativo (Ga-68) foi eluído de um gerador Ge- 68/Ga-68 adquirido da Themba Labs (Somerset West, África do Sul). O Tc-99m foi eluído de um gerador Mo-99/Tc-99m (Curium Pharma, Berlim, Alemanha). O Cu-64 foi fornecido pela UKT Tübingen (Tübingen, Alemanha). O Sm-153 foi fornecido pela DSD Pharma (Purkersdorf, Áustria). O Pb-203 foi fornecido pela Lantheus (N. Billerica MA, EUA). O F-18-FDG e fluoreto F-18 foram fornecidos pela ZAG Zyklotron AG (Eggenstein, Alemanha). O kit CRS para tricarbonila foi obtido do Paul Scherrer Institut (Villingen-PSI, Suíça).
[0248] Para iodinações, 10 µL do precursor de organotina de FAPI-01 (1 µmol/ml em etanol) foram diluídos com 10 µL de HCl 1 M e 10 µL de água antes de serem adicionados 1-20 MBq de iodo-125 em NaOH 0,05 M.
A reação foi iniciada pela adição de 5 µL de uma solução fresca de ácido peracético a 1,9% em ácido acético glacial. Após 60 segundos, foram adicionados 15 µL de NaOH 1 M e a reação foi extinta pela adição de 5 µL de ácido ascórbico a 5% em água antes da purificação por HPLC. A solução obtida foi usada diretamente em experimentos in vitro ou evaporada até a secura sob pressão reduzida e retomada em NaCl a 0,9% (Braun, Melsungen,
Alemanha) no caso de estudos em animais.
[0249] A marcação com Cu-64, Lu-177 e Pb-203 dos compostos DOTA foi realizada pela adição de 5 MBq do nuclídeo radioativo a 100 µL de uma solução 10 µM do precursor individual em NaOAc 0,1 M (pH 5) e incubação a 95 °C por 10 minutos. A solução é usada diretamente em experimentos in vitro ou diluída com NaCl a 0,9% (Braun, Melsungen, Alemanha) no caso de estudos de biodistribuição. Para estudos de imagem em camundongos (cintilografia, PET), o rastreador radioativo foi processado por extração em fase sólida (sep-pak light C18, Waters).
[0250] A marcação com TC(I) foi precedida pela adição de 1 mL de Tc-99m-pertecnetato em solução salina a 0,9% a um Kit CRS e incubação por 20 minutos. Após o resfriamento até a temperatura ambiente, foi adicionada uma mistura de 25,0 µL do precursor (1 mM em água), 150 µL de tampão fosfato (0,4 M, pH 7,4) e 240 µL de ácido clorídrico (1,0 M) e a mistura final ajustada para pH 5, se necessário. A reação foi realizada a 95 °C por 20 minutos e processada por extração em fase sólida (sep-pak light C18, Waters).
Para experimentos in vivo e estudos com animais, a marcação foi realizada com um quinto dos reagentes e 200 µL da solução CRS Kit após a redução de TC(VII).
[0251] A marcação com TC(V) foi precedida pela incubação de 30 µL de solução de SnCl2 contendo glucoheptonato 200 mM com 200 µL de Tc- 99m-pertecnetato em solução salina a 0,9% por 10 minutos à temperatura ambiente. Foram adicionados 5,00 µL do precursor (1 mM em água) e 3,75 µL de solução de hidróxido de sódio (0,1 M em água) e a mistura final foi reagida a 95 °C por 20 minutos. Para estudos de imagem em camundongos (cintilografia), o rastreador radioativo foi processado por extração em fase sólida (sep-pak light C18, Waters).
[0252] A marcação com Ga-68 para estudos em animais foi realizada através da incubação de 255 µl de eluato gerador (HCl 0,6 M; aproximadamente 230 MBq) com uma mistura de 1 nmol de precursor de DOTA, 1 µL de ácido ascórbico a 20% em água e 72 µL de NaOAc (2,5 M) a 95 °C por 10 minutos. A radioatividade livre restante foi removida por diluição com 2 mL de água, extração em fase sólida (sep-pak light C18, Waters), lavagem com 2 mL de água e eluição do produto com 1 mL de água/ etanol 1:1. A solução obtida foi evaporada até à secura sob pressão reduzida e o resíduo retomado em NaCl a 0,9% (Braun).
[0253] Para a formação dos complexos AlF-NOTA, o fluoreto F-18 foi retido em um Sep-Pak QMA com cartucho leve da Waters (46 mg de adsorvente; pré-condicionado com NaOAc 0,5 M, pH 3,9), lavado com água e eluído com 500 µL de NaOAc 0,1 M (pH 3,9). Para estudos em animais, 150 µL do eluato foram pré-incubados com 2 µL de uma solução de AlCl3 (10 mM em água) e 50 µL de DMSO. Após 5 minutos, a mistura foi adicionada a 40 nmol de precursor de NOTA (10 µL de uma solução 4 mM em água) e 1 µL de ácido ascórbico a 20% em água. A solução foi reagida a 95 °C por 15 minutos. O produto foi isolado por HPLC (0-20% de acetonitrila em 10 minutos), livre de solventes e retomado em solução salina a 0,9% antes da injeção.
[0254] Para a formação de 6-fluoronicotinamidas, o fluoreto F-18 foi retido em um Sep-Pak QMA com cartucho leve da Waters (46 mg de adsorvente; pré-condicionado com KHCO3 0,5 M), lavado com água, seco e eluído com uma mistura de 7,50 mg (19,9 µmol) de criptofix 222, 1,99 mg (1,99 µmol) de KHCO3 em 450 µL de acetonitrila e 50 µL de água. Após remoção do solvente, o resíduo foi seco por destilação azeotrópica com 3x1 mL de acetonitrila. O resíduo foi retomado em 100 µL de terc-butanol/ acetonitril 1:1 e adicionado a 1 mg (cerca de 1,3 µmol) de um precursor de trimetilpiridin-2- amínio. A solução foi reagida a 75 °C por 10 minutos. O produto foi isolado por HPLC (0-30% de acetonitrila em 10 minutos), livre de solventes e retomado em solução salina a 0,9% antes da injeção.
[0255] Alternativamente, 6-fluoronicotinamidas foram sintetizadas retendo o fluoreto F-18 em um Sep-Pak QMA com cartucho leve da Waters (46 mg de adsorvente; pré-condicionado com KHCO3 0,5 M), lavado com acetonitrila, seco e eluído com 0,5 mg (cerca de 0,4 - 0,6 µmol) do precursor de FAPI (protegido) em 0,5 mL de metanol. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo retomado em 100 µL de acetonitrila/ terc-butanol 1:4. Após 20 minutos a 70 °C, a mistura de reação foi diluída com água e os intermediários protegidos processados por extração em fase sólida (sep-pak light C18, Waters). Os solventes foram removidos e 200 µL de ácido trifluoroacético foram adicionados ao resíduo. A mistura foi aquecida a 95°C por 3 minutos, seca sob vácuo e diluída com água antes do produto ser isolado por HPLC, o qual foi realizado diretamente com a mistura de reação diluída no caso de compostos sem grupos protetores. Os produtos foram libertados de solventes e retomados em solução salina a 0,9% antes da injeção, no caso de estudos em animais.
(Rendimento radioquímico não corrigido, aproximadamente 25%).
[0256] Para determinação da estabilidade no soro humano, os compostos radiomarcados (aproximadamente 2,5 MBq para I-125 ou 15 MBq para Lu-177) foram purificados (HPLC ou extração em fase sólida) e liberados do solvente. Os resíduos foram retomados em 250 µL de soro humano (Sigma- Aldrich) e incubados a 37 °C. As amostras foram precipitadas com 30 µL de acetonitrila e analisadas por HPLC (0-30% de acetonitrila em 10 minutos).
EXEMPLO 2: CARACTERIZAÇÃO IN VITRO DE DERIVADOS DE FAPI
[0257] Os estudos de ligação in vitro foram realizados usando as linhagens de células tumorais humanas BxPC3, Capan-2, MCF-7 (adquiridas da Sigma Aldrich Chemie GmbH) e SK-LMS-1 (adquiridas da ATCC), bem como as linhagens de células FAP transfectadas de forma estável HT-1080- FAP, HEK-muFAP e a linhagem celular que expressa CD26 HEK-CD26 (obtida de Stefan Bauer, NCT Heidelberg). Todas as células foram cultivadas em meio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) contendo 10% de soro fetal de vitelo a 37 °C/ 5% de dióxido de carbono. Para experimentos de internalização por fluorescência, as células foram semeadas em lamínulas e coradas com FAPI- 02-Atto488 e DAPI para coloração do núcleo celular. As imagens foram obtidas em um microscópio confocal de varredura a laser usando uma objetiva de imersão em óleo de 63x. Os estudos de ligação ao radioligante foram realizados usando células HT-1080-FAP. O composto radiomarcado foi adicionado à cultura celular e incubado por diferentes intervalos de tempo, variando de 10 minutos a 24 horas. Os experimentos de competição foram realizados por exposição simultânea a composto não marcado (10-5 M a 10-9 M) e composto radiomarcado por 60 minutos. Para experimentos de efluxo, o meio radioativo foi removido após incubação por 60 minutos e substituído por meio não radioativo por intervalos de tempo variando de 1 a 24 horas. Para experimentos de internalização, a atividade ligada à superfície foi removida incubando as células com tampão glicina-HCl 1 M por 10 minutos. A radioatividade foi medida usando um contador γ, normalizado para 1 milhão de células e calculado como porcentagem de dose aplicada (% ID).
COLORAÇÃO CELULAR E MICROSCOPIA
[0258] Para experimentos de internalização, as células HT-1080- FAP e HEK muFAP foram semeadas em lamínulas não revestidas em uma placa de 24 poços e cultivadas em meio de cultura contendo 10% de soro fetal de vitelo até uma confluência final de aproximadamente 80-90%. O meio foi removido e as células foram lavadas com 0,5 mL de PBS pH 7,4 por 2 vezes.
FAPI-02-Atto488 (20 µM em DMEM) foi adicionado às células e incubado por 2 horas a 37 °C. As células foram lavadas com 0,5 mL de PBS pH 7,4 por 3 vezes e fixadas com paraformaldeído (2% em PBS) por 15 minutos. As lamínulas cobertas foram colocadas em lâminas de microscópio usando meio de montagem contendo DAPI para coloração do núcleo celular (Fluoroshield, Sigma-Aldrich). As imagens foram adquiridas em um microscópio confocal de varredura a laser (Zeiss LSM 700; Zeiss, Oberkochen, Alemanha) usando a objetiva de imersão Zeiss Plan-Apochromat 63x/1,4 Oil DIC III em configurações de pixels xy de 0,099 x 0,099 µm e 1 tamanho de orifício de unidade de Airy para cada fluoróforo utilizado (488 nm para FAPI-02-Atto488, 405 nm para DAPI). As imagens foram processadas de forma consistente usando o software ZEN 2008 e o ImageJ.
ESTUDOS DE LIGAÇÃO DE RADIOLIGANTES
[0259] Para estudos de ligação de radioligante, as células foram semeadas em placas de 6 poços e cultivadas por 48 horas até uma confluência final de aproximadamente 80-90% (1,2 - 2 milhões de células/ poço). O meio foi substituído por 1 mL de meio fresco sem soro fetal de vitelo. O composto radiomarcado foi adicionado à cultura celular e incubado por diferentes intervalos de tempo, variando de 10 minutos a 24 horas. Os experimentos de competição foram realizados por exposição simultânea a composto não marcado (10-5 M a 10-9 M) e composto radiomarcado por 60 minutos. Para experimentos de efluxo, o meio radioativo foi removido após incubação por 60 minutos e substituído por meio não radioativo por intervalos de tempo variando de 1 a 24 horas. Em todos os experimentos, as células foram lavadas com 1 mL de solução salina tamponada com fosfato pH 7,4 por 2 vezes e, subsequentemente, lisadas com 1,4 mL de tampão de lise (NaOH 0,3 M, SDS a 0,2%). A radioatividade foi determinada em um contador γ (Cobra II, Packard), normalizada para 1 milhão de células e calculada como porcentagem da dose aplicada (% ID). Cada experimento foi realizado 3 vezes e foram adquiridas 3 repetições por experimento independente.
[0260] Para experimentos de internalização, as células foram incubadas com o composto radiomarcado por 60 minutos a 37 °C e 4 °C. A captação celular foi terminada removendo o meio das células e lavando 2 vezes com 1 mL de PBS. Posteriormente, as células foram incubadas com 1 mL de glicina-HCl (1 M em PBS, pH 2,2) por 10 minutos à temperatura ambiente para remover a atividade ligada à superfície. As células foram lavadas com 2 mL de PBS gelado e lisadas com 1,4 mL de tampão de lise para determinar a fração internalizada. Para as células incubadas a 4 °C, todas as etapas de lavagem e eluição foram realizadas usando tampões gelados. A radioatividade foi medida usando um contador γ, normalizada para 1 milhão de células e calculada como porcentagem da dose aplicada (% ID).
A FAPI-01 TEM COMO ALVO SELETIVO A FAP-Α HUMANA E MURINA.
[0261] A fim de analisar as propriedades de ligação da FAPI-01 à sua proteína alvo, foram realizados ensaios de ligação de radioligante usando diferentes linhagens celulares de câncer e linhagens celulares transfectadas com FAP humana e murina, bem como a proteína de membrana CD26 intimamente relacionada, também conhecida como DPPIV. Tanto a FAP murina quanto a CD26 mostram uma alta homologia com a FAP-α humana (muFAP: 90% de identidade e 94% de similaridade no nível de aminoácidos; CD26: 52% de identidade e 71% de similaridade com alta semelhança estrutural) (Kelly T., Drug Resist Updat, 2005).
[0262] Como mostrado na Figura 1A, a FAPI-01 não mostra ligação significativa às linhagens celulares de câncer negativas para FAP, enquanto tem como alvo células que expressam FAP-α humana e murina com alta afinidade (IC50 FAP-α humana = 39,4 nM). Além disso, não foi observada ligação substancial às células que expressam CD26 (0,05 ± 0,01%), provando que a FAPI-01 está visando seletivamente a FAP-α. Isso é de particular importância, pois a CD26 é altamente expressa em uma variedade de tecidos normais, incluindo os rins, o fígado e o intestino delgado. Para evitar um alto sinal de fundo devido à ligação inespecífica à CD26, a alta seletividade do ligante à FAP-α é de grande vantagem, resultando em ótima qualidade de imagem.
A FAPI-01 INTERNALIZA RAPIDAMENTE EM CÉLULAS POSITIVAS PARA FAP, MAS MOSTRA EFLUXO DEPENDENTE DO TEMPO E DESIODINAÇÃO ROBUSTA.
[0263] Os ensaios de internalização baseados em células demonstram uma rápida captação de FAPI-01 nas células (Figura 1B). Após 10 minutos de incubação, 95% da fração total ligada está localizada intracelularmente (total 19,70 ± 0,28%). Ao longo de 4 horas, apenas uma diminuição marginal da atividade é observada (total de 17,00 ± 0,40%, dos quais internalizados 94%).
[0264] Os compostos marcados com iodo geralmente mostram uma desiodinação enzimática dependente do tempo. Isso também foi observado para FAPI-01, resultando em baixa radioatividade intracelular deste composto após tempos de incubação mais longos (3,25 ± 0,29% após 24 horas). A desiodinação pode ser minimizada pela redução da atividade da desiodinase após abaixar a temperatura para 4 °C, resultando em uma radioatividade aumentada de 26,66 ± 1,59% após 24 horas.
A FAPI-02 MOSTRA LIGAÇÃO E CAPTAÇÃO APRIMORADAS PARA FAP-Α HUMANA EM COMPARAÇÃO COM A FAPI-01.
[0265] Para evitar a rápida perda de atividade da FAPI-01 devido à desiodinação enzimática, o derivado não halogênio FAPI-02 foi projetado no qual a fração de ligação à FAP é quimicamente ligada ao quelante DOTA. Além da estabilidade aprimorada resultante, essa modificação oferece a possibilidade de incorporar facilmente nuclídeos radioativos de diagnóstico ou terapêuticos, permitindo que a FAPI-02 seja usada como um composto teranóstico. Semelhante ao seu análogo iodado, a FAPI-02 se liga especificamente a células que expressam FAP-α humana e murina (IC50 FAP-α humana = 21 nM) sem abordar CD26 (% ID = 0,13 ± 0,01%; Figura 1A). A
FAPI-02 internaliza rapidamente nas células que expressam FAP-α (20,15 ± 1,74% de ID após 60 minutos, das quais 96% internalizadas; Figura 1B), mostrando taxas de captação mais estáveis e mais altas ao longo do tempo.
Comparado com a ligação de FAPI-01 após 10 minutos de incubação, apenas 5% da atividade permanece após 24 horas. Em contraste, 34% da radioatividade inicial de FAPI-02 é detectada após 24 horas de incubação.
Experimentos de efluxo demonstram que a FAPI-02 é eliminada significativamente mais lentamente que a FAPI-01, mostrando retenção de 12% da radioatividade originalmente acumulada após 24 horas (ID de FAPI-01 1,1% após 24 horas; Figura 1E).
[0266] A internalização robusta de FAPI-02 em células que expressam FAP-α humanas e murinas foi confirmada por microscopia de varredura a laser de fluorescência. Para este fim, as células HT-1080-FAP e HEK-muFAP foram coradas com um derivado de FAPI-02 marcado de maneira fluorescente (FAPI-02-Atto488) por 1 a 2 horas. Como mostrado na Figura 1D, o composto fica completamente internalizado e se acumula no interior das células que expressam FAP-α, enquanto nenhuma captação é detectável nas células HEK-CD26 negativas para FAP-α.
PROJETO DE DERIVADOS DE FAPI COM PROPRIEDADES DE LIGAÇÃO E FARMACOCINÉTICA APRIMORADAS
[0267] Outras variantes de FAPI-02 foram projetadas para aumentar o tempo de retenção do tumor, visando o desenvolvimento de um agente alvo de FAP teranóstica. As variantes FAPI-03 a FAPI-15 foram caracterizadas em relação à ligação ao alvo, taxa de internalização e especificidade do alvo. Os resultados são mostrados na Figura 2.
EXEMPLO 3: IMAGIOLOGIA PET E ANÁLISE DE BIODISTRIBUIÇÃO EM CAMUNDONGOS
[0268] Todos os experimentos foram realizadas de acordo com as leis alemãs de proteção animal e em conformidade com os regulamentos da
Comissão Europeia para o cuidado e uso de animais de laboratório. Os camundongos foram anestesiados usando inalação de isoflurano.
[0269] Para experimentos in vivo, camundongos BALB/c nu/nu com 8 semanas de idade (Charles River) foram inoculados subcutaneamente no tronco direito com 5x106 com células HT-1080-FAP, Capan-2 ou SK-LMS-1, respectivamente. Quando o tamanho do tumor atingiu aproximadamente 1 cm 3, o composto radiomarcado foi injetado pela veia da cauda (~ 10 MBq para imagiologia PET de pequenos animais; ~ 1 MBq para distribuição de órgãos). A imagiologia PET foi realizada até 140 minutos após a injeção intravenosa de 1 MBq de composto marcado com Ga-68 por camundongo usando o scanner PET para animais pequenos Inveon PET (Siemens). As imagens foram reconstruídas iterativamente usando o método 3D-OSEM+MAP e foram convertidas em imagens de valor de captação padronizado (SUV). A quantificação foi realizada usando uma técnica de ROI e expressa como SUV médio. Para a distribuição de órgãos do composto marcado com Lu-177 (aproximadamente 10 MBq por camundongo), os animais (n = 3 para cada instante) foram sacrificados após os instantes indicados (de 30 minutos a 24 horas). A radioatividade distribuída foi medida em todos os órgãos dissecados e no sangue usando um contador γ (Cobra Autogamma, Packard). Os valores são expressos como porcentagem de dose injetada por grama de tecido (% ID/g).
[0270] Para modelagem farmacocinética, a constante de transporte K1 e as constantes de velocidade k2 – k4 foram calculadas usando um modelo de compartimento de dois tecidos implementado no software PMOD [4], levando em consideração a fração vascular (vB) que é associada ao volume de sangue trocando com tecido em um VOI. As constantes de velocidade que descrevem os fluxos compartimentais incluem k1 (ligação ao receptor), k2 (desprendimento), bem como k3 (internalização) e k4 (efluxo) no tecido tumoral. Neste modelo, o volume fracionário de distribuição (DV = K1/ k2) é a proporção da região de interesse na qual a água marcada com 15O é distribuída.
AS VARIANTES DE FAPI ACUMULAM-SE EM XENOENXERTOS HUMANOS QUE EXPRESSAM FAP, BEM COMO EM XENOENXERTOS SEM EXPRESSÃO DE FAP POR RECRUTAMENTO E ATIVAÇÃO DE FIBROBLASTOS DE CAMUNDONGO.
[0271] A acumulação tumoral de FAPI-02 e -04 foi avaliada por imagiologia PET de pequenos animais de camundongos possuindo xenoenxertos de células tumorais humanas positivas e negativas para FAP. Em ambos os casos, o rastreador radioativo é rapidamente enriquecido dentro do tumor e é mantido por pelo menos 140 minutos (Figura 3A, C, E, G). Ao mesmo tempo, FAPI-02 e -04 mostram uma ligação inespecífica insignificante e baixa e são rapidamente eliminados do sangue predominantemente através dos rins e da bexiga, resultando em um baixo fundo e em razões benéficas de tumor para órgão. A administração simultânea de composto não marcado como competidor resultou em uma completa ausência de radioatividade no tumor, demonstrando a especificidade do rastreador radioativo para sua proteína alvo (Figura 4). Curiosamente, foi observada uma alta captação tumoral de FAPI-02 em camundongos possuindo linhagens de células tumorais positivas para FAP- α (HT-1080-FAP) e também negativas para FAP-α (Capan-2) devido ao recrutamento e ativação de fibroblastos de camundongos ativados. As características farmacocinéticas do rastreador radioativo, calculadas a partir de dados de PET, utilizando um modelo de compartimento de dois tecidos de acordo com Burger et al., Nucl Med, 1997, são apresentadas na Tabela 6.
ANÁLISE FARMACOCINÉTICA DE FAPI-02 Unidade Capan-2 HT-1080-FAP HT-1080-FAP - comp. - comp. + comp. vB l/l 0,08 0,04 0,04 k1 ml/ccm/min 0,08 0,07 0,10 k2 l/min 0,16 0,13 0,32
Unidade Capan-2 HT-1080-FAP HT-1080-FAP - comp. - comp. + comp. k3 l/min 0,08 0,10 0,04 k4 l/min 0,05 0,02 0,07 Vs ml/ccm 0,93 2,31 0,18 Vt ml/ccm 1,44 0,87 0,48 Fluxo ml/ccm/min 0,03 0,03 0,01 Chi2 ---- 0,10 0,11 0,26
[0272] Tabela 6. Características farmacocinéticas de 68Ga-FAPI- 02, calculadas a partir de dados dinâmicos de PET, usando um modelo de compartimento de dois tecidos de acordo com Burger et al., Nucl Med, 1997.
vB: fração vascular, associada ao volume de troca sanguínea com tecido em um VOI (volume de interesse); k1-k4: constantes de velocidade calculadas; Vs: razão de concentração de ligação específica para o progenitor total em equilíbrio; Vt: volume total de distribuição.
[0273] Essas observações foram confirmadas usando 177Lu-FAPI- 02 e -04 em um estudo de biodistribuição, provando um rápido acúmulo de tumores em tumores humanos positivos e negativos de FAP-α com atividade muito baixa em todos os outros órgãos (valores de captação quantificados, veja a Tabela 7), resultando em razões benéficas de tumor para órgão (Figura 5D- F). Resultados semelhantes foram obtidos para 177Lu-FAPI-04 em camundongos possuindo tumor HT-1080-FAP. Comparado à FAPI-02, a FAPI- 04 mostra uma maior captação tumoral, especialmente após 24 horas (Figura 5C). Um cálculo da área sob a curva (AUC) é mostrado na Tabela 8. FAPI-02 FAPI-02 FAPI-04 (Capan-2) (HT-1080-FAP) (HT-1080-FAP) Sangue 0,83 ± 0,127 1,20 ± 0,178 1,70 ± 0,206 Cérebro 0,05 ± 0,010 0,06 ± 0,006 0,08 ± 0,010 Coração 0,37 ± 0,031 0,56 ± 0,085 0,80 ± 0,089 Intestinos 0,30 ± 0,064 0,37 ± 0,046 0,66 ± 0,196 Rins 1,45 ± 0,106 1,60 ± 0,075 2,28 ± 0,477 Fígado 0,36 ± 0,015 0,45 ± 0,074 0,73 ± 0,118 Pulmões 0,72 ± 0,021 1,02 ± 0,152 1,50 ± 0,151 Músculo 0,94 ± 0,168 1,17 ± 0,332 0,92 ± 0,020 Baço 0,25 ± 0,015 0,38 ± 0,051 0,48 ± 0,072 Tumor 3,82 ± 0,390 4,51 ± 0,816 4,89 ± 0,817
[0274] Tabela 7. Quantificação de dados de biodistribuição 1 hora após administração intravenosa de FAPI-02 e -04 marcadas com Lu-177 em camundongos nus Balb/c possuindo tumor; n = 3; valores relatados como % média de ID/g ± DP. %ID/g 1h 4h 24 h AUC FAPI-02 4,5 ± 0,82 4,0 ± 0,56 1,12 ± 0,13 64,0 FAPI-04 4,9 ± 0,82 5,4 ± 1,51 3,0 ± 0,23 99,4 FAPI-05 6,0 ± 0,90 5,8 ± 0,60 2,8 ± 0,40 103,3 FAPI-10 3,2 ± 0,72 2,9 ± 0,12 1,1 ± 0,04 49,3 FAPI-13 6,3 ± 0,57 8,7 ± 0,77 4,8 ± 1,71 157,5 FAPI-15 3,4 ± 1,13 4,6 ± 0,32 1,1 ± 0,25 68,0
[0275] Tabela 8. Captação tumoral de derivados de FAPI selecionados em camundongos nus possuindo tumor HT-1080-FAP, n = 3. Os valores são relatados como ID/g médio ± DP).
EXEMPLO 4: ESTUDOS CLÍNICOS DE PET/CT.
[0276] A imagiologia diagnóstica de mais de 100 pacientes foi realizada nas condições da declaração atualizada de Helsinque, § 37 (Intervenções não comprovadas na prática clínica) e de acordo com a Lei Farmacêutica Alemã §13 (2b) por razões médicas, usando 68Ga-FAPI-02 ou - 04, que foi aplicado por via intravenosa (20 nmol, 122-336 MBq), 10 minutos, 1 e 3 horas após a administração do rastreador. A variação da atividade do rastreador radioativo injetado é devida à curta meia-vida de 68Ga e às eficiências variáveis de eluição obtidas durante a vida útil do gerador 68Ge/ 68Ga. A imagiologia FDG de um paciente foi realizada 1 hora após a injeção intravenosa de 358 MBq de 18F-FDG. As varreduras PET/CT foram realizadas com um scanner PET/CT Biograph mCT Flow™ (Siemens Medical Solution) usando os seguintes parâmetros: espessura da fatia de 5 mm, incremento de 3-4 mm, núcleo de reconstrução de tecidos moles, dose de cuidado.
Imediatamente após a varredura CT, um PET de corpo inteiro foi adquirido em 3D (matriz 200x200) no FlowMotion™ com 0,7 cm/ min. Os dados de emissão foram corrigidos para aleatório, dispersão e decaimento. A reconstrução foi realizads com um algoritmo de maximização de expectativa de subconjunto ordenado (OSEM) com 2 iterações/ 21 subconjuntos e filtrado por Gauss até uma resolução transaxial de 5 mm na largura total na metade do máximo (FWHM). A correção da atenuação foi realizada usando os dados de CT de dose baixa e sem melhora. A avaliação quantitativa dos valores de captação padronizados (SUV) foi realizada usando uma técnica de região de interesse.
FAPI-02 E -04 ACUMULAM-SE RAPIDAMENTE EM METÁSTASES DE CÂNCER DE MAMA, PÂNCREAS, PULMÃO, HNO, INTESTINO DELGADO E DE OVÁRIO EM HUMANOS.
[0277] As varreduras PET/CT diagnósticas foram realizadas 1 hora após a administração intravenosa de 68Ga-FAPI-02 e -04 em pacientes com câncer de mama, pulmão, pâncreas, HNO, intestino delgado e de ovário metastizado. Em todos os pacientes, foi observado um acúmulo robusto do rastreador no tumor primário, bem como em metástases linfonodais e ósseas com valores máximos de SUV de 48,0. Por outro lado, a captação do rastreador no tecido normal era muito baixa (Figuras 6-14). A radioatividade foi eliminada rapidamente da corrente sanguínea e excretada predominantemente pelos rins, resultando em imagens de alto contraste. A imagiologia comparativa em um paciente com adenocarcinoma pulmonar localmente avançado revelou uma vantagem óbvia da FAPI-02 em comparação ao rastreador PET comumente usado 18F-FDG. Conforme mostrado na Figura 9, a FAPI-02 mostra uma maior captação com menor atividade de fundo, levando a um maior contraste com melhor visibilidade das lesões metastáticas. Em contraste com o FDG, que se acumula altamente em células com alto consumo de glicose, por exemplo, o cérebro, a FAPI-02 visa seletivamente os tecidos onde a FAP-α é expressa. A imagiologia comparativa em um paciente com câncer de próstata revelou uma vantagem óbvia da FAPI-04 em comparação com os rastreadores PET comumente usados 68Ga-DOTATOC e 68Ga-PSMA, permitindo a detecção de lesões tumorais menores com acúmulo reduzido de rastreador nos rins (Figura 14).
DISCUSSÃO
[0278] O diagnóstico confiável de tumores primários, lesões metastáticas e linfonodos afetados é de extrema importância para permitir um planejamento terapêutico eficaz e adequado, incluindo estadiamento do tumor e escolha do tratamento. Para esse fim, as técnicas de imagem representam ferramentas indispensáveis para a avaliação de muitos tipos de câncer. Devido à sua alta precisão diagnóstica e à possibilidade de avaliar detalhes anatômicos e fisiológicos, o PET/CT combinado é o método de escolha para o diagnóstico tumoral moderno. Ao contrário das técnicas de imagem não invasivas, tais como MRT ou CT isoladas, a PET/CT combinado, no entanto, requer o uso de rastreadores radioativos com alta afinidade para atingir estruturas com expressão melhorada em tumores em comparação com tecidos normais. Um rastreador ideal deve se ligar especificamente à sua proteína-alvo para garantir uma diferenciação confiável de tecidos cancerígenos e saudáveis, bem como baixos sinais de fundo, resultando em imagens de alto contraste. A afinidade e a especificidade se tornam ainda mais importantes se o rastreador radioativo representar um composto teranóstico, isto é, oferece a possibilidade de ser carregado com nuclídeos de diagnóstico ou terapêuticos, o que facilita e melhora o tratamento direcionado e personalizado. Em relação a uma aplicação potencial do rastreador para fins terapêuticos, a alta especificidade do alvo garante efeitos colaterais reduzidos, o que é especialmente importante para a proteção de tecidos sensíveis à radiação, tais como medula óssea, órgãos reprodutivos e digestivos.
[0279] Com isso em mente, os inventores desenvolveram um rastreador teranóstico visando fibroblastos associados ao câncer, que formam um componente principal do estroma do tumor. Eles são conhecidos por desempenhar um papel crítico no crescimento, migração e progressão do tumor e são geneticamente mais estáveis que as células cancerígenas, portanto, são menos suscetíveis ao desenvolvimento de resistência à terapia.
Ao contrário dos fibroblastos normais, os CAFs expressam proteínas particulares que podem ser usadas como marcadores específicos de tumores.
Entre elas está a proteína de membrana FAP-α, que é amplamente expressa no microambiente de uma variedade de tumores e, portanto, permite o direcionamento de diferentes entidades tumorais, incluindo câncer de pâncreas, mama e pulmão, que representam uma grande parte da totalidade dos tumores sólidos.
[0280] Com base em um inibidor de enzima de molécula pequena, com alta afinidade com a sua proteína-alvo, desenvolvemos os rastreadores radioativos FAPI-01 a FAPI-73 por modificação química focada. Todos os compostos mostram ligação específica à FAP-α humana e murina com uma internalização rápida e quase completa sem abordar a proteína CD26/ DPP4 intimamente relacionada. Uma vez que as moléculas iodadas sofrem uma desiodinação enzimática com efluxo de iodo livre, tempos de incubação mais longos resultam em uma baixa radioatividade intracelular. Por esse motivo, o FAPI-02 e os compostos subsequentes foram projetados com a porção de ligação à FAP sendo quimicamente ligada ao quelante DOTA. Isso resulta em um conjunto de compostos teranósticos com propriedades farmacocinéticas e bioquímicas favoráveis, dos quais FAPI-02, FAPI-04, FAPI-46, FAPI-34, FAPI- 42, FAPI-52, FAPI-69, FAPI-70, FAPI-71, FAPI-72 e FAPI-73 representam os ligantes mais favorecidos. O FAPI-02 e o FAPI-04 são eliminados significativamente mais lentamente que o FAPI-01, com retenção de 12% (FAPI-02) e 49% (FAPI-04) da radioatividade originalmente acumulada após 24 horas (FAPI-01 1,1%) com os outros compostos favorecidos possuindo uma ligação ainda mais forte (figura 16). Eles internalizam rapidamente nas células que expressam FAP-α e mostram altas taxas de captação tumoral em camundongos possuindo tumor e pacientes com carcinomas epiteliais metastizados. Por outro lado, não há acúmulo em tecido normal e rápida depuração do sistema sanguíneo, resultando em imagens de alto contraste. A internalização robusta em células humanas e murinas que expressam FAP-α foi confirmada por microscopia confocal usando FAPI-02 marcado com fluorescência. Em contraste com o anticorpo FAP de primeira geração F19, que possui alta afinidade com sua proteína alvo sem ser internalizado, o FAPI-02 mostra captação intracelular completa após 1 hora de incubação. O mecanismo de internalização após a ligação à FAP foi estudado por Fischer et al. usando fragmentos de anticorpo FAP (Fabs) e um anticorpo anti-camundongo DyLight 549 em células SK-Mel-187. A incubação a 37 °C levou à internalização dos complexos FAP-anticorpo. Como em nossa molécula pequena, o processo de internalização ocorreu rapidamente com uma internalização quase completa. A colocalização dos Fabs com um marcador para endossomos precoces foi observada após 20 minutos e com um marcador para endossomos tardios e lisossomos após 40 minutos. A internalização de FAP-α mediada por Fab foi suprimida por um inibidor da endocitose dependente de dinamina, indicando que a endocitose ocorre por um mecanismo dependente de dinamina.
[0281] FAPI-02 e -04 são rapidamente eliminados do organismo pela depuração renal sem serem retidos no parênquima renal. Ao contrário do 18F-FDG, que se acumula altamente em células com alto consumo de glicose, incluindo tecido inflamatório ou no cérebro, o FAPI-02 é enriquecido seletivamente em tecidos onde sua proteína alvo é expressa. Isso abre novas perspectivas para a detecção de lesões malignas nessas regiões. Além disso, também foi demonstrado que a FAP-α é expressa por sinoviócitos reumatóides semelhantes a miofibroblastos em pacientes com artrite reumatóide e osteoartrite, aterosclerose, fibrose, bem como em tecido isquêmico do coração após infarto do miocárdio. Essas observações sugerem a aplicação de FAPI-02 e -04 como rastreadores de imagens para outras indicações.
[0282] O fator limitante para a detecção de lesões tumorais é o grau de expressão de FAP-α dentro do tumor. Isso depende em grande parte do número de fibroblastos ativados, isto é, a porcentagem do conteúdo estromal e/ou o número de moléculas de FAP-α por fibroblasto que pode ser determinado pelo microambiente. Como o crescimento de tumores que excede um tamanho de 1 a 2 mm requer essencialmente a formação de um estroma de suporte, a visualização de pequenas lesões na faixa de 3-5 mm deve ser possível usando FAPI-PET/CT.
[0283] Como em qualquer outra abordagem direcionada, os derivados de FAPI só alcançam resultados ótimos em tecidos com expressão de FAP-α suficientemente alta, que é conhecida por ser bastante heterogênea em diferentes tipos de câncer e pacientes. Além do câncer de mama, cólon e pâncreas, que são excelentes candidatos à imagiologia de FAPI, outras análises precisam explorar se outras entidades tumorais, tais como câncer de pulmão, câncer de cabeça e pescoço, câncer de ovário ou hepatomas, representam alvos favoráveis.
[0284] Além disso, a expressão de FAP-α foi demonstrada na cicatrização de feridas e no tecido fibrótico, que deve ser lembrado ao interpretar os achados radiológicos. Esses fatos enfatizam a necessidade de avaliar adequadamente quais pacientes provavelmente se beneficiarão de uma terapia potencial de FAPI. Dada a capacidade de usar nuclídeos de diagnóstico ou terapêuticos, FAPI-02 e -04 permitem a estratificação simples da coorte apropriada do paciente. De qualquer maneira, já está claro que os dois rastreadores de FAPI representam candidatos ideais para o desenvolvimento de um radiofármaco direcionado. Devido à sua alta afinidade por alvo, rápida internalização do tumor e rápida depuração do corpo, eles já são idealmente adequados para imagiologia de tumores.
EXEMPLO 5: CARACTERIZAÇÃO DE FAPI IN VITRO E IN VIVO
PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS E AVALIAÇÃO CLÍNICA
[0285] Todos os experimentos in vitro e in vivo, bem como a avaliação clínica dos derivados de FAPI, foram realizados conforme descrito acima e de acordo com Loktev et al.1 e Lindner et al.2 Uma estimativa de dosimetria preliminar para FAPI-02 e FAPI-04 foi baseada em dois pacientes examinados em 0,2 horas, 1 hora e 3 horas após a injeção do rastreador, usando o software de dosimetria QDOSE. Foram adquiridas varreduras PET/CT adicionais de pacientes com tumor 1 hora após a injeção de FAPI-02 (n = 25) ou FAPI-04 (n = 25); para 6 pacientes, uma varredura FDG relacionada intra-indivíduo (também adquirida 1 hora p.i.) estava disponível. Para o tecido normal de 16 órgãos, um VOI esférico de 2 cm foi colocado no parênquima; para lesões tumorais, um VOI segmentado limiar foi usado para quantificar SUVmédio/max3.
CARACTERIZAÇÃO IN VITRO DE DERIVADOS DE DOTA-FAPI
[0286] Para avaliar a taxa de ligação e internalização alvo dos derivados de DOTA-FAPI em comparação com FAPI-04, os compostos marcados com Lu-177 foram incubados com células HT-1080 que expressam FAP por 1, 4 e 24 horas, respectivamente (figura 16). A fração ligada à membrana foi removida por eluição ácida usando glicina-HCl, pH 2,2, seguida por lise celular alcalina para determinar a fração internalizada. Como mostrado na Figura 16, todos os derivados demonstram maior ligação celular em comparação com FAPI-04 com valores de ligação de até 500% do composto principal após 1 hora de incubação (até 750% após 4 horas).
[0287] Para avaliar a afinidade e especificidade alvo, foram realizados ensaios de ligação competitiva usando concentrações crescentes de composto não marcado como competidor do composto marcado com Lu-177
(Figura 17; respectivos valores de IC50 listados na Tabela 9). A especificidade da ligação também foi confirmada em um ensaio de ligação de radioligante usando células HEK que expressam FAP e CD26 de murino (Figura 18). Composto IC50 (nM) Composto IC50 (nM) FAPI-04 6,5 FAPI-39 11,3 FAPI-05 17,2 FAPI-40 12,7 FAPI-10 19,9 FAPI-41 8,3 FAPI-13 4,5 FAPI-46 13,5 FAPI-15 9,1 FAPI-47 42,0 FAPI-20 7,2 FAPI-48 26,3
[0288] Tabela 9. Valores de IC 50 de derivados de FAPI selecionados, conforme determinado por ensaios de ligação competitiva.
DISTRIBUIÇÃO DE ÓRGÃOS DE DERIVADOS DE DOTA-FAPI EM CAMUNDONGOS POSSUINDO TUMOR
[0289] Para análise do perfil farmacocinético, bem como da captação tumoral in vivo, derivados de DOTA-FAPI marcados com Lu foram administrados por via intravenosa para camundongos possuindo tumor HT- 1080-FAP. A distribuição de órgãos dos compostos radiomarcados foi determinada ex vivo no sangue, em tecidos saudáveis e no tumor. Como mostrado na Figura 19, a maioria dos compostos demonstra taxas mais altas de captação tumoral em comparação com FAPI-02 e FAPI-04, notavelmente 24 horas após a administração. Devido à lipofilicidade aumentada, alguns dos rastreadores radioativos mostram atividades sanguíneas mais altas, além de uma retenção aumentada nos rins. A determinação de razões tumor-sangue revela ainda uma clara vantagem dos compostos FAPI-21 e FAPI-46, os quais demonstram razões significativamente mais altas que FAPI-04 em todos os momentos examinados (Figura 20).
IMAGIOLOGIA EM PEQUENOS ANIMAIS DE DERIVADOS DE DOTA-FAPI EM CAMUNDONGOS POSSUINDO TUMOR
[0290] Com base nessas descobertas, a imagiologia PET de pequenos animais foi realizada usando derivados de DOTA-FAPI marcados com Ga-68 até 140 minutos após a administração por via intravenosa dos rastreadores radioativos em camundongos possuindo tumor HT-1080-FAP.
As razões benéficas tumor-sangue de FAPI-21 e FAPI-46 resultam em imagens de alto contraste, permitindo excelente visualização dos tumores positivos para FAP (Figura 21). Uma análise quantitativa do acúmulo de rastreadores no tumor, nos rins, no fígado e no tecido muscular (dados como valores máximos de SUV) revela atividades musculares, renais e hepáticas ligeiramente mais baixas do FAPI-46 em comparação ao FAPI-21 (Figura 22).
ESTIMATIVA DE BIODISTRIBUIÇÃO E DOSIMETRIA DE FAPI-02 E FAPI-04 EM
COMPARAÇÃO COM FDG EM PACIENTES COM CÂNCER
[0291] Muito semelhante aos valores da literatura para F-18- FDG, Ga-68-DOTATATE ou Ga-68-PSMA-11, um exame com 200 MBq de Ga-68-FAPI-02 e -04 corresponde a uma dose equivalente de aproximadamente 3-4 mSv. Após uma rápida depuração através dos rins, os órgãos normais mostram uma baixa captação do rastreador, com apenas alterações mínimas entre 10 minutos e 3 horas p.i. Em FAPI-02, a captação do tumor de 1 hora a 3 horas p.i. diminui em 75%, enquanto a retenção do tumor é ligeiramente prolongada com o FAPI-04 (lavagem (washout) de 50%). Às 1 horas p.i. ambos os rastreadores FAPI têm desempenho igual (Figura 23). Em comparação ao FDG, a captação do tumor é quase igual (SUV médio máximo de FDG 7,41; SUV máximo FAPI-02 7,37; n.s.); a captação de fundo no cérebro (11,01 vs 0,32), fígado (2,77 vs 1,69) e mucosa oral/faríngea (4,88 vs 2,57) é significativamente menor com o FAPI- 02; outros órgãos não foram significativamente diferentes entre FDG e FAPI- 02 (Figura 24). Para informações e resultados detalhados, consulte Giesel et al.3 que é incorporado por referência a este documento.
IMAGIOLOGIA PET DE FAPI-04 EM PACIENTES COM VÁRIOS TIPOS DE CÂNCER, BEM COMO MALIGNIDADES NÃO-CANCERÍGENAS
[0292] Além de uma rápida captação do FAPI-04 marcado com Ga-68 em diferentes tipos de câncer, incluindo tumores de mama, pâncreas, ovário e HNO, o acúmulo de rastreadores também foi demonstrado na peritonite carcinomatosa (Figura 25A), além de várias malignidades inflamatórias, tais como miocardite (Figura 25B) e artrose (Figura 25C). Estes resultados indicam uma aplicação potencial de FAPIs marcados com Ga-68 para a detecção de malignidades não cancerígenas que são caracterizadas por um processo de inflamação crônica envolvendo recrutamento de fibroblastos ativados.
IMAGIOLOGIA PET DE FAPI-21 E FAPI-46 EM PACIENTES COM VÁRIOS TIPOS DE
CÂNCER
[0293] Como mostrado na Figura 26, foi observado acúmulo robusto de FAPI-21 marcado com Ga-68 em diferentes cânceres, incluindo carcinoma ovariano, retal e mucoepidermóide. Foi demonstrada captação tumoral semelhante para o FAPI-46 marcado com Ga-68, que se acumulou rapidamente em carcinoma colangiocelular e colorretal, câncer de pulmão e sarcoma fibroso solitário (Figura 27). Após o exame de PET/CT usando FAPI- 46 marcado com Ga-68, uma primeira abordagem terapêutica usando o rastreador radioativo marcado com Sm-153 foi realizada em dois pacientes com câncer. Como mostrado na Figura 28, o acúmulo robusto de tumor do rastreador é detectável até 20 horas após a administração.
[0294] A imagiologia de FAPI-46-PET/CT de três pacientes com câncer de pulmão com fibrose pulmonar idiopática revelou uma clara diferença de acúmulo de rastreadores nas lesões cancerígenas versus fibróticas. Como mostrado na Figura 30, a captação tumoral de FAPI-46 marcado com Ga-68 foi significativamente maior em dois pacientes (A, B), mas ligeiramente menor em um paciente (C), em comparação com a atividade medida no tecido fibrótico. O paciente mostrado na Figura C sofria de fibrose pulmonar exacerbada em comparação com os dois casos não exacerbados. Portanto, o rastreador é possivelmente útil para a diferenciação entre pacientes com fibrose com mau prognóstico e pacientes com bom prognóstico.
DERIVADOS DE FAPI PARA RADIOMARCAÇÃO COM NUCLÍDEOS RADIOATIVOS ALTERNATIVOS, POR EXEMPLO, TC-99M, PB-203, CU-64 E F18
[0295] Para permitir o uso de nuclídeos radioativos alternativos, uma série de derivados de FAPI foi projetada e caracterizada em relação à afinidade, especificidade e farmacocinética alvo. Em alguns desses compostos, o quelante original DOTA foi substituído por diferentes porções quelantes, as quais são idealmente adequadas para a incorporação de Tc-99m (FAPI-19, - 27, -28, -29, -33, -34, - 43, -44, -45, -60, -61, -62). A afinidade de FAP in vitro e a biodistribuição em camundongos xenoenxertados HT-1080-FAP são mostradas de forma exemplificativa para FAPI-19 e FAPI-34. Ambos os compostos demonstram uma ligação robusta à FAP humana in vitro (IC50 FAPI- 19: 6,4 nM). Em contraste com o FAPI-19, que mostra captação insuficiente de tumor in vivo, bem como um rápido acúmulo no fígado devido a uma mudança renal para a eliminação hepática, o FAPI-34 é continuamente enriquecido no tumor e demonstra uma captação hepática significativamente menor (Figuras 31, 32). Uma primeira aplicação diagnóstica de FAPI-34 marcado com Tc-99m em um paciente com câncer de pâncreas com metástases hepáticas mostra um acúmulo tumoral estável do rastreador até 4 horas após a administração.
Além disso, a atividade de fundo geral é comparativamente baixa, resultando em imagens de alto contraste (Figura 33). Isso oferece uma ampla aplicação para diagnóstico por cintilografia e terapia após a marcação com Re-188.
[0296] Os derivados de FAPI radiomarcados com Pb-203 (FAPI- 04, -32, -46 e FAPI-04tcmc) mostram ligação celular comparável às células HT-
1080-FAP com FAPI-32 e FAPI-04tcmc atingindo os mais altos valores de ligação após 60 minutos de incubação (26,93 ± 0,846 e 21,62 ± 0,61% de ID/ 1 milhão de células, Figura 34A). Embora o FAPI-32 seja rapidamente eliminado das células tumorais após a ligação inicial (t½ = 2 h), o FAPI-04tcmc demonstra um efluxo celular consideravelmente mais lento (t½ = 7 h), mas também a menor afinidade por FAP, como mostrado no ensaio de competição (IC50 = 5,7 µM, Figura 34C). Por esse motivo, FAPI-04 e FAPI-46, caracterizados por meias-vidas e valores de IC50 ideais, foram selecionados para análises posteriores in vivo. Como mostrado na Figura 35, ambos os compostos são continuamente enriquecidos dentro do tumor, mostrando apenas uma ligação insignificantemente baixa a tecidos saudáveis. Os achados cintilográficos são confirmados em um estudo de biodistribuição, em que ambos os rastreadores radioativos demonstram uma captação robusta de tumores, atividades de órgãos baixas gerais e rápida excreção renal (Figura 36).
[0297] Para habilitar a marcação radioativa usando Cu-64, os derivados NOTA FAPI-42 e FAPI-52 foram desenvolvidos e caracterizados em relação à afinidade, especificidade e farmacocinética do alvo. Como mostrado na Figura 37, ambos os rastreadores mostram uma ligação robusta às células HT-1080-FAP até 24 horas de incubação com valores de IC50 semelhantes na faixa nanomolar mais baixa (Figura 37A, B). No entanto, o FAPI-42 é eliminado significativamente mais lentamente que o FAPI-52, resultando em uma meia- vida in vitro calculada de 12 horas (Figura 37C). Estes resultados são confirmados por imagiologia de pequenos animais de camundongos xenoenxertados HT-1080-FAP. Como mostrado na Figura 38, ambos os compostos demonstram uma captação tumoral robusta, bem como uma rápida depuração da corrente sanguínea in vivo. Notavelmente, a excreção renal de FAPI-42 ocorre significativamente mais rapidamente em comparação com FAPI-52, enquanto sua atividade tumoral permanece um pouco maior no decorrer de 2 a 24 horas após a administração.
[0298] Os derivados NOTA FAPI-42 e FAPI-52 foram implantados para a formação de complexos de fluoreto de alumínio para permitir imagens com F-18. Como mostrado na Figura 39, ambos os compostos demonstram uma rápida captação tumoral em imagiologia de pequenos animais de camundongos xenoenxertados HT-1080-FAP. Embora ambos os compostos sejam principalmente excretados pela via renal, também é observada uma eliminação biliar. Embora a excreção renal seja mais rápida para o FAPI-52, o maior acúmulo de tumor, maior retenção do tumor e menor proporção da via biliar são a favor do FAPI-42.
REFERÊNCIAS
[0299] 1 Loktev, A. et al. A new method for tumor imaging by targeting cancer associated fibroblasts. Journal of nuclear medicine: publicação oficial, Society of Nuclear Medicine, doi:10.2967/jnumed.118.210435 (2018).
[0300] 2 Lindner, T. et al. Development of quinoline based theranostic ligands for the targeting of fibroblast activation protein. Journal of nuclear medicine: publicação oficial, Society of Nuclear Medicine, doi:10.2967/jnumed.118.210443 (2018).
[0301] 3 Giesel, F. et al. FAPI-PET/CT: biodistribution and preliminary dosimetry estimate of two DOTA-containing FAP-targeting agents in patients with various cancers. Journal of nuclear medicine: publicação oficial, Society of Nuclear Medicine, doi:10.2967/jnumed.118.215913 (2018).
EXEMPLO 6: CARACTERIZAÇÃO DE FAPI IN VITRO E IN VIVO DADOS PRÉ-CLÍNICOS
[0302] Com o objetivo de atingir seletivamente tumores cerebrais positivos para FAP, foram realizados experimentos iniciais em camundongos possuindo tumor usando o modelo de xenoenxerto de glioblastoma humano U87MG. O acúmulo de tumor e a distribuição de órgãos de FAPI-02 e -04 radiomarcados foram analisados por imagiologia PET de pequenos animais, bem como em um estudo de biodistribuição. Como mostrado nas Figuras 40 e 41, ambos os FAPI-02 e -04 demonstram rápida captação tumoral e atividades insignificantemente baixas em órgãos saudáveis e no sangue.
DADOS CLÍNICOS
[0303] De acordo com a classificação da OMS de 2016, os gliomas são subdivididos em gliomas IDH do tipo selvagem da OMS grau I-IV e gliomas IDH mutante da OMS grau II-IV. Os gliomas grau IV mais freqüentes da OMS são os glioblastomas.
[0304] A imagiologia PET clínica foi realizada em 18 pacientes com glioma (5 gliomas IDH mutante, 13 glioblastomas IDH do tipo selvagem; consulte a Tabela 10). Conforme mostrado nas Figuras 42-44, os glioblastomas IDH do tipo selvagem e os gliomas IDH mutante de grau III/ IV, mas não os de grau II, apresentaram captação de rastreador elevada. Nos glioblastomas, foram observados pontos com maior captação de projeção em áreas de aumento de contraste.
CONCLUSÃO
[0305] A captação aumentada de rastreadores em glioblastomas IDH do tipo selvagem e nos astrocitomas IDH mutante de alto grau, mas não em astrocitomas difusos, pode permitir uma distinção não invasiva entre gliomas IDH mutante de baixo grau e gliomas de alto grau e ser útil para estudos de acompanhamento. A captação heterogênea de rastreadores em glioblastomas pode ser útil no planejamento da biópsia.
TABELA 10: CARACTERÍSTICAS DO PACIENTE Pré- Número do Idade Grau Biópsia tratament paciente (anos) Status IDH Diagnóstico OMS Localização Cirurgia o tipo Glioblastom Radioquim 1 57 IV parietal direita Biópsia selvagem a ioterapia tipo Glioblastom 2 65 IV bifrontal Biópsia nenhum selvagem a
Pré- Número do Idade Grau Biópsia tratament paciente (anos) Status IDH Diagnóstico OMS Localização Cirurgia o tipo Glioblastom parieto-temporal 3 66 IV Biópsia nenhum selvagem a esquerda tipo Glioblastom Ressecçã Radioquim 4 64 IV temporal direita selvagem a o ioterapia tipo Glioblastom 5 58 IV Esplênio Biópsia nenhum selvagem a tipo Glioblastom fronto-temporo- Ressecçã Radioquim 6 48 IV selvagem a parietal esquerda o ioterapia tipo Glioblastom Tálamo / temporal 7 20 IV Biópsia nenhum selvagem a direita tipo Glioblastom temporal Ressecçã 8 54 IV nenhum selvagem a esquerda o tipo Glioblastom Ressecçã 9 56 IV gânglios basais nenhum selvagem a o parcial tipo Glioblastom Ressecçã 10 61 IV temporal direita nenhum selvagem a o tipo Glioblastom Corona radiata Quimioter 11 86 IV Biópsia selvagem a esquerda apia tipo Glioblastom 12 68 IV Corpo caloso Biópsia nenhum selvagem a tipo Glioblastom temporal 13 71 IV Biópsia nenhum selvagem a esquerda Mutação Glioblastom temporo-parietal Ressecçã 14 29 IDH1 IV nenhum a direita o R132H Mutação Astrocitoma Ressecçã 15 47 IDH1 III frontal direita nenhum anaplásico o R132H Mutação Astrocitoma 16 47 IDH1 II parietal esquerda Biópsia nenhum difuso R132H Mutação Astrocitoma Ressecçã 17 47 IDH1 II frontal direita nenhum difuso o R132C Mutação Astrocitoma fronto-temporal Quimioter 18 43 IDH1 II Biópsia difuso esquerda apia R132H EXEMPLO 7: CARACTERIZAÇÃO DA FAPI IN VITRO E IN VIVO
EXPERIMENTOS DE RECAPTAÇÃO
[0306] Para experimentos de recaptação, foram adicionados FAPI- 04 e -46 marcados com 177Lu (5 MBq/ nmol em DMEM) a células HT-1080-FAP e incubados por 60 minutos a 4 e 37 °C, respectivamente. O meio radioativo foi removido e as células foram lavadas duas vezes com solução salina tamponada com fosfato (PBS) pH 7,4. Posteriormente, meio não radioativo com e sem FAPI não marcado (1 µM) foi adicionado em intervalos de tempo variando de 10 minutos a 6 horas. As células foram lavadas duas vezes com PBS pH 7,4. Para remover a atividade ligada à superfície, as células foram incubadas com glicina-HCl (1 M em PBS, pH 2,2) por 10 minutos à temperatura ambiente. Após lavagem duas vezes com PBS gelado, as células foram lisadas com 1,4 mL de tampão de lise (NaOH 0,3 M, SDS a 0,2%) para determinar a fração internalizada. Para as células incubadas a 4 °C, todas as etapas de lavagem e eluição foram realizadas usando tampões gelados. A radioatividade foi medida usando um contador γ (Packard Cobra II), normalizado para 1 milhão de células e calculado como porcentagem da dose aplicada (% AD; ver Figura 47).
ENSAIO DE INIBIÇÃO ENZIMÁTICA
[0307] Para determinar os potenciais efeitos inibitórios de FAPI-04 na atividade enzimática da FAP, foram realizados ensaios de inibição enzimática utilizando a proteína FAP humana recombinante (1 pmol/ poço) em uma placa de 48 poços. Após a incubação de FAPI-04 ou Talabostat (0 - 1000 nM/ poço) com FAP humana por 30 minutos a 37 °C, o substrato fluorogênico de FAP Z-GP-AMC foi adicionado a uma concentração final de 0 - 200 µM/ poço e incubado por 60 minutos a 37 °C. A atividade enzimática de FAP foi determinada medindo a intensidade de fluorescência do produto de reação AMC a 360/460 nm usando o Leitor de Placas SpectraMax M2 (Molecular Devices, San José, EUA) (ver Figura 46).
ADMINISTRAÇÃO MÚLTIPLA DE FAPI-04 A CAMUNDONGOS POSSUINDO TUMOR HT- 1080-FAP
[0308] Para experimentos de biodistribuição, camundongos BALB/c nu/nu com 8 semanas de idade (Charles River) foram inoculados subcutaneamente no tronco direito com 5 milhões de células HT-1080-FAP,
respectivamente. Quando o tamanho do tumor atingiu aproximadamente 1 cm 3, o composto radiomarcado foi injetado pela veia da cauda. Ao primeiro grupo de animais foi administrada uma dose única de 177Lu-FAPI-04 (2 MBq por animal), enquanto o segundo grupo recebeu duas doses de 1 MBq cada, com a segunda dose administrada 4 horas após a primeira injeção. O terceiro grupo recebeu três doses no total, com uma dose inicial de 1 MBq por camundongo, seguida de 0,5 MBq 2 horas e 0,5 MBq adicional 4 horas após a primeira injeção. Os animais (n = 3 para cada instante) foram sacrificados 8 e 24 horas após a primeira injeção. A radioatividade distribuída foi medida em todos os órgãos dissecados e no sangue usando um contador γ (Cobra Autogamma, Packard). Os valores são expressos como porcentagem da dose injetada por grama de tecido (%ID/g) (ver Figura 48).
EXEMPLO 8: CARACTERIZAÇÃO DE FAPI IN VITRO E IN VIVO
PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS E AVALIAÇÃO CLÍNICA
[0309] Todos os experimentos in vitro e in vivo, bem como a avaliação clínica dos derivados de FAPI, foram realizados conforme descrito no documento inicial e de acordo com Loktev et al. 1 e Lindner et al. 2
RESULTADOS CARACTERIZAÇÃO IN VITRO DE DERIVADOS F-18-FAPI
[0310] Todos os experimentos foram realizados de forma análoga à FAPI-42 (marcação com AlF-18) ou FAPI-72 (marcação com nicotinamida F- 18). Composto IC50 (nM) Composto IC50 (nM) FAPI-72 2,4 FAPI-74 9,2 FAPI-73 5,4 FAPI-75 2,9
[0311] Tabela 11. Valores de EC50 de derivados de FAPI selecionados, conforme determinado por ensaios de ligação competitiva.
DETERMINAÇÃO DA DEPURAÇÃO DA MISTURA DE SANGUE
[0312] Para estimar a taxa de depuração do composto, os tempos de meia-vida foram calculados por um decaimento exponencial em duas fases presumido a partir dos valores SUVmédios (0,375-60 min) do coração como representação da mistura de sangue. Todos os compostos selecionados foram limpos muito rapidamente com tempos de meia-vida abaixo de 10 minutos. Os valores de platô calculados, que foram mais altos para FAPI-13, -21, -36 marcados com Ga-68 e FAPI-74 marcado com AIF-18 correspondem teoricamente a uma fração mais alta do composto que não é limpa devido à ligação inespecífica ou permanecendo em circulação (Tabela 12). Como um exemplo para a depuração rápida, as curvas de atividade/tempo para FAPI-04 e -46 entre 0 e 15 min são mostradas na Figura 53. Composto Depuração da mistura de Valor do platô (SUVmédio) sangue (T1/2 [min]) FAPI-04 7,1 0,21 FAPI-13 5,5 0,27 FAPI-21 5,1 0,31 FAPI-36 5,0 0,58 FAPI-46 5,3 0,19 FAPI-74 2,4 0,32
[0313] Tabela 12. Meia-vida da mistura de sangue e o valor hipotético de platô de derivados de FAPI selecionados, calculados a partir dos valores SUVmédio por um decaimento exponencial em duas fases presumido.
Para maior clareza, apenas a taxa que determina os valores de meia-vida é listada.
IMAGIOLOGIA DE PEQUENOS ANIMAIS DE DERIVADOS F-18-FAPI EM CAMUNDONGOS
POSSUINDO TUMOR
[0314] Com base nesses achados, a imagiologia PET de pequenos animais foi realizada usando derivados de NOTA marcados com F- 18 e derivados de FAPI marcados com nicotinamida F-18 até 140 minutos após a administração intravenosa dos rastreadores radioativos em camundongos possuindo tumor HT-1080-FAP. Os derivados F-18-nicotinamida FAPI-72, -73 e -77 mostraram um acúmulo desfavorável no fígado, bem como uma excreção biliar, enquanto o FAPI-78 foi excretado renalmente, mas não mostrou captação tumoral. No caso dos derivados de NOTA marcados com AlF-18, FAPI-74 e -75, foi observada uma alta especificidade alvo e rápida depuração, resultando em imagens de alto contraste, que permitem excelente visualização dos tumores positivos para FAP (Figura 50).
DISTRIBUIÇÃO DE ÓRGÃOS DE DERIVADOS F-18-FAPI EM CAMUNDONGOS
POSSUINDO TUMOR
[0315] Para análise do perfil farmacocinético, bem como da captação tumoral in vivo, FAPI-75 marcado com AlF-18 foi administrado por via intravenosa a camundongos possuindo tumor HT-1080-FAP. A distribuição de órgãos do composto radiomarcado foi determinada ex vivo no sangue, em tecidos saudáveis e no tumor. Como mostrado na Figura 51, os compostos demonstram alta captação tumoral, embora em comparação aos derivados de DOTA marcados com Ga-68 seja observada uma maior acumulação no tecido saudável, enquanto o desempenho na imagiologia PET foi igual.
ITENS
[0316] Os itens a seguir representam formas de realização preferidas da presente invenção.
[0317] 1. Um composto de Fórmula (I) (I), em que Q, R, U, V, W, Y, Z estão individualmente presentes ou ausentes, desde que pelo menos três de Q, R, U, V, W, Y, Z estejam presentes; Q, R, U, V, W, Y, Z são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em O, CH2, NR4, C=O, C=S, C=NR4, HCR4 e R4CR4,
com a condição de que dois O não sejam diretamente adjacentes um ao outro;
R1 e R2 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em -H, -OH, halo, alquila C1-6, -O-alquila C1-6, S-alquila C1-6;
R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em -H, -CN, -
B(OH)2, -C(O)-alquila, -C(O)-arila-, -C=C-C(O)-arila, -C=C-S(O)2-arila, -CO2H, -
SO3H, -SO2NH2, -PO3H2 e 5-tetrazolila;
R4 é selecionado a partir do grupo que consiste em -H, -alquila C1-
6, -O-alquila C1-6, -S-alquila C1-6, alquenila, heteroalquenila, cicloalquenila,
cicloheteroalquenila, alquinila, arila e -aralquila C1-6, cada uma das referidas -
alquila C1-6 sendo opcionalmente substituída com 1 a 3 substituintes selecionados a partir de -OH, oxo, halo e opcionalmente conectada a Q, R, U,
V, W, Y ou Z;
R5 é selecionado a partir do grupo que consiste em -H, halo e alquila C1-6;
R6 e R7 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em –H,
e , desde que R6 e R7 não sejam ao mesmo tempo H, em que L é um ligante,
em que D, A, E e B estão individualmente presentes ou ausentes,
de preferência em que pelo menos A, E e B estão presentes, em que quando presentes:
D é um ligante;
A é selecionado a partir do grupo que consiste em NR4, O, S e
CH2; E é selecionado a partir do grupo que consiste em alquila C1-6,
, ,
e ; em que i é 1, 2 ou 3;
em que j é 1, 2 ou 3;
em que k é 1, 2 ou 3;
em que m é 1, 2 ou 3;
A e E, juntos, formam um grupo selecionado a partir de: uma cicloalquila, heterocicloalquila, arila e heteroarila, preferencialmente heterocicloalquila, em que A e E podem ser mono-, bi- e multicíclicos, de preferência monocíclicos; cada A e E sendo opcionalmente substituído com 1 a
4 substituintes selecionados a partir de -H, -alquila C1-6, -O-alquila C1-6, -S-
alquila C1-6, alquenila, heteroalquenila, cicloalquenila, ciclo-heteroalquenila,
alquinila, arila e -aralquila C1-6, sendo cada uma das referidas -alquila C1-6 opcionalmente substituída com 1 a 3 substituintes selecionados a partir de -OH,
oxo, halo; e opcionalmente conectada a A, B, D, E ou
; B é selecionado a partir do grupo que consiste em S, NR4, NR4-O,
NR4-alquila C1-6, NR4-alquila C1-6-NR4 e um heterociclo mono- ou bicíclico aromático ou não aromático contendo N de 5 a 10 membros, preferencialmente compreendendo ainda 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S,
preferencialmente compreendendo ainda 1 ou 2 átomos de nitrogênio, de preferência em que NR4-alquila C1-6-NR4 e o heterociclo contendo N são substituídos com 1 a 3 substituintes selecionados do grupo que consiste em alquila C1-6, arila, aralquila C1-6; e R8 é selecionado a partir do grupo que consiste em porção radioativa, agente quelante, corante fluorescente, um agente de contraste e combinações dos mesmos; é uma porção 1-naftila ou um heterociclo mono- ou bicíclico aromático ou não-aromático contendo N de 5 a 10 membros, em que existem 2 átomos do anel entre o átomo de N e X; o referido heterociclo compreendendo ainda, opcionalmente, 1, 2 ou 3 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S; e X é um átomo de C; ou um tautômero, racemato, hidrato, solvato ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0318] 2. O composto do item 1, em que (i) Q, R, U são CH2 e estão individualmente presentes ou ausentes; V é CH2, C=O, C=S ou C=NR4; W é NR4; Y é HCR4; e Z é C=O, C=S ou C=NR4; e/ou (ii) Q e R estão ausentes; U é CH2 e está presente ou ausente; R1 e R2 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em -H e halo; R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em -H, -CN e - B(OH)2; R4 é selecionado a partir do grupo que consiste em -H e -alquila C1-6, em que a -alquila C1-6 é, opcionalmente, substituída com de 1 a 3 substituintes selecionados a partir de -OH.
[0319] 3. O composto do item 1 ou 2, em que é selecionado a partir do grupo que consiste em , , , e , opcionalmente, compreendendo ainda 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S.
[0320] 4. O composto de qualquer um dos itens anteriores, em que é selecionado a partir do grupo que consiste em , , , , , , , , , , , , , , , , , , , e .
[0321] 5. O composto de qualquer um dos itens anteriores, em que R5 e R6 são H; R7 é , em que D está ausente; A é O, S, CH2, NH, NCH3; E é alquila C1-6 ou , em que m é 1, 2 ou 3; A e E, juntos, formam um grupo selecionado a partir de: , , , , ; B é NR4-alquila C1-6 ou um heterociclo mono- ou bicíclico aromático ou não-aromático contendo N de 5 a 10 membros, de preferência compreendendo ainda 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S, de preferência compreendendo ainda 1 ou 2 átomos de nitrogênio, de preferência em que o heterociclo contendo N é substituído com 1 a 3 substituintes selecionados do grupo que consiste em alquila C1-6, arila, aralquila C1-6.
[0322] 6. O composto de qualquer um dos itens anteriores, em que (i) o heterociclo contendo N compreendido em B é um heterociclo monocíclico aromático ou não aromático:
, em que o heterociclo compreende ainda, opcionalmente, 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S, compreende ainda,
opcionalmente, 1 nitrogênio;
está ligado à posição 1, 2 ou 3, de preferência na posição 2; l é 1 ou 2;
opcionalmente, em que o heterociclo contendo N é substituído com uma alquila C1-6; e/ ou
(ii) o heterociclo contendo N compreendido em B é selecionado a partir do grupo que consiste em:
, , , , ,
, , , ,
, , , e
, opcionalmente, em que o heterociclo contendo N é substituído com uma alquila C1-6;
em que se o heterociclo contendo N compreendido em B for
, o heterociclo compreende ainda, opcionalmente, 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S, compreende ainda,
opcionalmente, 1 nitrogênio, compreende opcionalmente uma ou mais cadeias laterais (por exemplo, derivadas de aminoácidos); está ligado à posição 1, 2 ou 3, de preferência na posição 2; o é 1 ou 2, de preferência, se o heterociclo contendo N compreendido em B for , o heterociclo contendo N compreendido em B é , ou ; mais preferencialmente, se o heterociclo contendo N compreendido em B for , o heterociclo contendo N compreendido em B é ou .
[0323] 7. O composto de qualquer um dos itens anteriores, em que Q, R, U estão ausentes; V é C=O; W é NH; Y é CH2; Z é C=O; R1 e R2 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em -H e halo; R3 é -CN; R5 e R6 são H; R7 é , em que D está ausente; A é O, S, CH2, NH, NCH3; E é alquila C1-6 ou , em que m é 1, 2 ou 3; ou A e E, juntos, formam um grupo selecionado a partir de: , , , , ; B é NH-alquila C1-6, , , ou ; opcionalmente, B é substituído com uma alquila C1-3; e é .
[0324] 8. O composto de qualquer um dos itens anteriores, em que alquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc-butila, pentila e hexila, e/ ou em que aralquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em benzila, fenil-etila, fenil-propila e fenil-butila.
[0325] 9. O composto de qualquer um dos itens anteriores, em que R8 é uma porção radioativa, em que a porção radioativa é um isótopo fluorescente, um radioisótopo, uma droga radioativa ou combinações dos mesmos, de preferência em que a porção radioativa é selecionada a partir do grupo que consiste em isótopos emissores de radiação alfa, isótopos emissores de radiação beta, isótopos emissores de radiação gama, isótopos emissores de elétrons Auger, isótopos emissores de raios X, isótopos emissores de fluorescência, tais como 11C, 18F, 51Cr, 67Ga, 68Ga, 111In, 99mTc, 186Re, 188Re, 139La, 140La, 175Yb, 153Sm, 166Ho, 88Y, 90Y, 149Pm, 165Dy, 169Er, 177Lu, 47Sc, 142Pr, 159Gd, 212Bi, 213Bi, 72As, 72Se, 97Ru, 109Pd, 105Rh, 101mRh, 119Sb, 128Ba, 123I, 124I, 131I, 197Hg, 211At, 151Eu, 153Eu, 169Eu, 201Tl, 203Pb, 212Pb, 64Cu, 67Cu, 188Re, 186Re, 198Au, 225Ac, 227Th e 199Ag, de preferência 18F, 64Cu, 68Ga, 90Y, 99mTc, 153Sm, 177Lu, 188Re.
[0326] 10. O composto de qualquer um dos itens 1 a 8, em que R8 é um corante fluorescente selecionado a partir do grupo que consiste nas seguintes classes de corantes fluorescentes: xantenos, acridinas, oxazinas, cininas, corantes de stirila, cumarinas, porfinas, complexos ligante-metal, proteínas fluorescentes, nanocristais, perilenos, boro-dipirometenos e ftalocianinas, bem como conjugados e combinações dessas classes de corantes.
[0327] 11. O composto de qualquer um dos itens 1 a 8, em que R8 é um agente quelante que forma um complexo com cátions metálicos divalentes ou trivalentes, de preferência em que o agente quelante é selecionado a partir do grupo que consiste em ácido 1,4,7,10-tetraazaciclododecano-N,N’,N,N’- tetraacético (DOTA), ácido etilenodiaminotetraacético (EDTA), ácido 1,4,7- triazaciclononano-1,4,7-triacético (NOTA), trietilenotetramina (TETA), ácido iminodiacético, ácido dietilenotriamina-N,N,N’,N’,N”-pentaacético (DTPA), bis- (carboximetilimidazol) glicina e ácido 6-hidrazinopiridina-3-carboxílico (HYNIC).
[0328] 12. O composto de qualquer um dos itens 1 a 8, em que R8 é um agente de contraste que compreende ou consiste em um agente paramagnético, de preferência, em que o agente paramagnético compreende ou consiste em nanopartículas paramagnéticas.
[0329] 13. Composição farmacêutica compreendendo ou consistindo em pelo menos um composto de acordo com qualquer um dos itens 1 a 12; e, opcionalmente, um veículo e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
[0330] 14. Composto de qualquer um dos itens 1 a 12 ou a composição farmacêutica da reivindicação 13, para uso no diagnóstico ou tratamento de uma doença caracterizada pela superexpressão de proteína ativadora de fibroblastos (FAP) em um animal ou um ser humano, de preferência em que a doença caracterizada pela superexpressão de proteína ativadora de fibroblastos (FAP) é selecionada a partir do grupo que consiste em câncer, inflamação crônica, aterosclerose, fibrose, remodelação de tecidos e distúrbio quelóide, de preferência em que o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em câncer de mama, câncer de pâncreas, câncer de intestino delgado, câncer de cólon, câncer retal, câncer de pulmão, câncer de cabeça e pescoço, câncer de ovário, carcinoma hepatocelular, câncer de esôfago, câncer de hipofaringe, câncer de nasofaringe, câncer de laringe, células de mieloma, câncer de bexiga, carcinoma colangiocelular, carcinoma renal de células claras, tumor neuroendócrino, osteomalácia oncogênica, sarcoma, CUP (carcinoma de primário oculto), carcinoma do timo, tumores desmóide, glioma, astrocitoma, carcinoma do colo do útero e câncer de próstata.
[0331] 15. Kit que compreende ou consiste no composto de qualquer um dos itens 1 a 12 ou na composição farmacêutica da reivindicação 13 e instruções para o diagnóstico ou tratamento de uma doença.

Claims (15)

REIVINDICAÇÕES
1. COMPOSTO, caracterizado por ser de fórmula (I) (I), em que Q, R, U, V, W, Y, Z estão individualmente presentes ou ausentes, desde que pelo menos três de Q, R, U, V, W, Y, Z estejam presentes; Q, R, U, V, W, Y, Z são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em O, CH2, NR4, C=O, C=S, C=NR4, HCR4 e R4CR4, com a condição de que dois O não sejam diretamente adjacentes um ao outro; R1 e R2 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em -H, -OH, halo, alquila C1-6, -O-alquila C1-6, S-alquila C1-6; R3 é selecionado a partir do grupo que consiste em -H, -CN, - B(OH)2, -C(O)-alquila, -C(O)-arila-, -C=C-C(O)-arila, -C=C-S(O)2-arila, -CO2H, - SO3H, -SO2NH2, -PO3H2 e 5-tetrazolila; R4 é selecionado a partir do grupo que consiste em -H, -alquila C1- 6, -O-alquila C1-6, -S-alquila C1-6, alquenila, heteroalquenila, cicloalquenila, cicloheteroalquenila, alquinila, arila e -aralquila C1-6, cada uma das referidas - alquila C1-6 sendo opcionalmente substituída com 1 a 3 substituintes selecionados a partir de -OH, oxo, halo e opcionalmente conectada a Q, R, U, V, W, Y ou Z; R5 é selecionado a partir do grupo que consiste em -H, halo e alquila C1-6; R6 e R7 são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em –H,
e , desde que R6 e R7 não sejam ao mesmo tempo H, em que L é um ligante,
em que D, A, E e B estão individualmente presentes ou ausentes,
de preferência em que pelo menos A, E e B estão presentes, em que quando presentes:
D é um ligante;
A é selecionado a partir do grupo que consiste em NR4, O, S e
CH2;
E é selecionado a partir do grupo que consiste em alquila C1-6,
, ,
e ; em que i é 1, 2 ou 3;
em que j é 1, 2 ou 3;
em que k é 1, 2 ou 3;
em que m é 1, 2 ou 3;
B é selecionado a partir do grupo que consiste em S, NR4, NR4-O,
NR4-alquila C1-6, NR4-alquila C1-6-NR4 e um heterociclo mono- ou bicíclico aromático ou não aromático contendo N de 5 a 10 membros, preferencialmente compreendendo ainda 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S,
preferencialmente compreendendo ainda 1 ou 2 átomos de nitrogênio, de preferência em que NR4-alquila C1-6-NR4 e o heterociclo contendo N são substituídos com 1 a 3 substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em alquila C1-6, arila, aralquila C1-6; e R8 é selecionado a partir do grupo que consiste em porção radioativa, agente quelante, corante fluorescente, um agente de contraste e combinações dos mesmos; é uma porção 1-naftila ou um heterociclo mono- ou bicíclico aromático ou não-aromático contendo N de 5 a 10 membros, em que existem 2 átomos do anel entre o átomo de N e X; o referido heterociclo compreendendo ainda, opcionalmente, 1, 2 ou 3 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S; e X é um átomo de C; ou um tautômero, racemato, hidrato, solvato ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
2. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por (i) Q, R, U serem CH2 e estarem individualmente presentes ou ausentes; V ser CH2, C=O, C=S ou C=NR4; W ser NR4; Y ser HCR4; e Z ser C=O, C=S ou C=NR4; e/ou (ii) Q e R estarem ausentes; U ser CH2 e estar presente ou ausente; R1 e R2 serem selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em -H e halo; R3 ser selecionado a partir do grupo que consiste em -H, -CN e - B(OH)2; R4 ser selecionado a partir do grupo que consiste em -H e -alquila C1-6, em que a -alquila C1-6 é, opcionalmente, substituída com de 1 a 3 substituintes selecionados a partir de -OH.
3. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizado por ser selecionado a partir do grupo que consiste em , , , e , opcionalmente, compreendendo ainda 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S.
4. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado por ser selecionado a partir do grupo que consiste em , , , , , , , , , , , , , ,
, , , , , e .
5. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado por R5 e R6 serem H; R7 ser , em que D está ausente; A é O; E é alquila C1-6 ou , em que m é 1, 2 ou 3; B é NR4-alquila C1-6 ou um heterociclo mono- ou bicíclico aromático ou não-aromático contendo N de 5 a 10 membros, de preferência compreendendo ainda 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S, de preferência compreendendo ainda 1 ou 2 átomos de nitrogênio, preferencialmente em que o heterociclo contendo N é substituído com 1 a 3 substituintes selecionados do grupo que consiste em alquila C1-6, arila, aralquila C1-6.
6. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado por (i) o heterociclo contendo N compreendido em B ser um heterociclo monocíclico aromático ou não aromático: , em que o heterociclo compreende ainda, opcionalmente, 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S, compreende ainda,
opcionalmente, 1 nitrogênio;
está ligado à posição 1, 2 ou 3, de preferência na posição 2; l é 1 ou 2; e/ou
(ii) o heterociclo contendo N compreendido em B ser selecionado a partir do grupo que consiste em:
, , , , ,
, , , ,
, , , e
, em que se o heterociclo contendo N compreendido em B for
, o heterociclo compreende ainda, opcionalmente, 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de O, N e S, compreende ainda,
opcionalmente, 1 nitrogênio, compreende opcionalmente uma ou mais cadeias laterais (por exemplo, derivadas de aminoácidos);
está ligado à posição 1, 2 ou 3, de preferência na posição 2; o é 1 ou 2,
de preferência, se o heterociclo contendo N compreendido em B for
, o heterociclo contendo N compreendido em B é , ou ; mais preferencialmente, se o heterociclo contendo N compreendido em B for , o heterociclo contendo N compreendido em B é ou .
7. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado por Q, R, U estarem ausentes; V ser C=O; W ser NH; Y ser CH2; Z ser C=O; R1 e R2 serem selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em -H e halo; R3 ser -CN; R5 e R6 serem H; R7 ser , em que D está ausente; A é O;
E é alquila C1-6 ou , em que m é 1, 2 ou 3; B é NH-alquila C1-6, , , ou ;e é .
8. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado por alquila C1-6 ser selecionada a partir do grupo que consiste em metila, etila, propila, i-propila, butila, sec-butila, terc- butila, pentila e hexila, e/ou em que aralquila C1-6 é selecionada a partir do grupo que consiste em benzila, fenil-etila, fenil-propila e fenil-butila.
9. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado por R8 ser uma porção radioativa, em que a porção radioativa é um isótopo fluorescente, um radioisótopo, uma droga radioativa ou combinações dos mesmos, de preferência em que a porção radioativa é selecionada a partir do grupo que consiste em isótopos emissores de radiação alfa, isótopos emissores de radiação beta, isótopos emissores de radiação gama, isótopos emissores de elétrons Auger, isótopos emissores de raios X, isótopos emissores de fluorescência, tais como 18F, 51Cr, 67Ga, 68Ga, 111In, 99mTc, 186Re, 188Re, 139La, 140La, 175Yb, 153Sm, 166Ho, 88Y, 90Y, 149Pm, 165Dy, 169Er, 177Lu, 47Sc, 142Pr, 159Gd, 212Bi, 213Bi, 72As, 72Se, 97Ru, 109Pd, 105Rh, 101mRh, 119Sb, 128Ba, 123I, 124I, 131I, 197Hg, 211At, 151Eu, 153Eu, 169Eu, 201Tl, 203Pb, 212Pb, 64Cu, 67Cu, 188Re, 186Re, 198Au, 225Ac, 227Th e 199Ag.
10. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado por R8 ser um corante fluorescente selecionado a partir do grupo que consiste nas seguintes classes de corantes fluorescentes: xantenos, acridinas, oxazinas, cininas, corantes de stirila, cumarinas, porfinas, complexos ligante-metal, proteínas fluorescentes, nanocristais, perilenos, boro-dipirometenos e ftalocianinas, bem como conjugados e combinações dessas classes de corantes.
11. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado por R8 ser um agente quelante que forma um complexo com cátions metálicos divalentes ou trivalentes, de preferência em que o agente quelante é selecionado a partir do grupo que consiste em ácido 1,4,7,10-tetraazaciclododecano-N,N’,N,N’-tetraacético (DOTA), ácido etilenodiaminotetraacético (EDTA), ácido 1,4,7-triazaciclononano-1,4,7- triacético (NOTA), trietilenotetramina (TETA), ácido iminodiacético, ácido dietilenotriamina-N,N,N’,N’,N”-pentaacético (DTPA), bis-(carboximetilimidazol) glicina e ácido 6-hidrazinopiridina-3-carboxílico (HYNIC).
12. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado por R8 ser um agente de contraste que compreende ou consiste em um agente paramagnético, de preferência, em que o agente paramagnético compreende ou consiste em nanopartículas paramagnéticas.
13. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, caracterizada por compreender ou consistir em pelo menos um composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 12, e, opcionalmente, um veículo e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
14. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, ou composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado por ser para uso no diagnóstico ou tratamento de uma doença que superexpressa proteína ativadora de fibroblastos (FAP) em um animal ou um ser humano, de preferência em que a doença que superexpressa proteína ativadora de fibroblastos (FAP) é selecionada a partir do grupo que consiste em câncer, inflamação crônica, aterosclerose, fibrose, remodelação de tecidos e distúrbio quelóide, de preferência em que o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em câncer de mama, câncer de pâncreas, câncer de intestino delgado, câncer de cólon, câncer retal, câncer de pulmão, câncer de cabeça e pescoço, câncer de ovário, carcinoma hepatocelular, câncer de esôfago, câncer de hipofaringe, câncer de nasofaringe, câncer de laringe, células de mieloma, câncer de bexiga, carcinoma colangiocelular, carcinoma renal de células claras, tumor neuroendócrino, osteomalácia oncogênica, sarcoma, CUP (carcinoma de primário oculto), carcinoma do timo, tumores desmóide, glioma, astrocitoma, carcinoma do colo do útero e câncer de próstata.
15. KIT, caracterizado por compreender ou consistir no composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 12, ou na composição farmacêutica, conforme definida na reivindicação 13, e instruções para o diagnóstico de uma doença.
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