BR112016017808B1

BR112016017808B1 - Composto ou sal farmaceuticamente aceitável, uso de um composto e composição para a inibição de um efeito betaamilóide numa célula neuronal

Info

Publication number: BR112016017808B1
Application number: BR112016017808-4A
Authority: BR
Inventors: Gilbert Rishton; Susan M. Catalano; Gary C. Look
Original assignee: Cognition Therapeutics, Inc
Priority date: 2014-01-31
Filing date: 2015-01-30
Publication date: 2022-07-12
Also published as: RU2016134677A3; NZ722599A; EP3498692B1; US20180086703A1; DK3498692T3; BR112016017808A8; ES2915833T3; KR20160108564A; RU2692258C2; JP6517827B2; AU2015210852B2; HK1225651A1; BR112016017808A2; US10207991B2; CN106163516A; US10611728B2; CN106163516B; CA2938212C; EP3099296A1; DK3099296T3

Abstract

COMPOSIÇÕES DE ISOINDOLINA E MÉTODOS PARA O TRATAMENTO DE DOENÇA NEURODEGENERATIVA. Compostos isoindolina antagonistas do receptor 2-sigma, composições farmacêuticas compreendendo tais compostos, e métodos para inibir a perda de sinapse associada a Abeta ou disfunção sináptica em células neuronais, modulação uma mudança de tráfico de membrana associada a Abeta em células neuronais, e tratamento do declínio cognitivo relacionado à patologia Abeta são providos.

Description

[001] Este pedido é depositado como um pedido internacional PCT em 30 de Janeiro de 2015, e reivindica o benefício de prioridade para o pedido provisório de aplicação No. 61/934.528, depositado em 31 de janeiro de 2014, que é aqui incorporado por referência na sua totalidade.

CAMPO

[002] Os novos compostos de isoindolina que se ligam ao receptor sigma- 2, composições farmacêuticas compreendendo tais compostos, e métodos para a inibição ou restaurar a perda de sinapse em células neuronais, modulando uma mudança de tráfico de membrana em células neuronais e tratar o declínio cognitivo e doenças neurodegenerativas e distúrbios são fornecidos.

FUNDAMENTOS

[003] Existem apenas cinco medicamentos atualmente aprovados pela FDA para o tratamento da Doença de Alzheimer (DA). Quatro são inibidores da colinesterase: tacrina (COGNEX®; Sciele), donepezil (ARICEPT®; Pfizer), rivastigmina (EXELON®; Novartis) e galantamina (RAZADYNE®; Ortho-McNeil- Janssen). Donepezil, rivastigmina e galantamina são sucessores da tacrina, um composto de primeira geração raramente prescrito por causa do potencial de hepatotoxicidade; eles são mais ou menos igualmente eficazes em proporcionar melhora sintomática da cognição e função em todas as fases da doença de Alzheimer. O quinta medicamento aprovado é memantina (NAMENDA®; Forest), um antagonista de receptor de glutamato de N-metil-D-aspartato de baixa afinidade dependente de uso que oferece benefícios semelhantes, mas apenas em doença de Alzheimer moderada a grave. Os efeitos clínicos destes compostos são pequenos e impermanentes, e atualmente os dados disponíveis são inconclusivos para apoiar a sua utilização como agentes modificadores da doença. Ver, por exemplo, Kerchner et al, 2010, Bapineuzumab, Expert Opin Biol Ther., 10(7):1121-1130. Claramente, abordagens alternativas para o tratamento da doença de Alzheimer são necessárias.

[004] Certos compostos de isoindolina são fornecidos que atuam como antagonistas funcionais de receptores sigma-2 e inibem os efeitos deletérios de oligômeros de Aβ solúveis. Em algumas modalidades, compostos de antagonista do receptor sigma-2 de isoindolina e as composições são utilizados para tratar ou prevenir a disfunção sináptica num sujeito.

SUMÁRIO

[005] Os novos compostos de isoindolina que se ligam ao receptor sigma- 2, composições farmacêuticas compreendendo tais compostos, e métodos para a inibição ou restaurar a perda de sinapse em células neuronais, modulando uma mudança de tráfico de membrana em células neuronais e tratar o declínio cognitivo e doenças neurodegenerativas e distúrbios são fornecidos.

[006] Em algumas modalidades, os compostos de isoindolina e seus sais farmaceuticamente aceitáveis de acordo com a Fórmula I e/ou Fórmula II, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, exibem atividade de antagonista de receptor sigma-2, e exibem também outros aspectos de um fenótipo terapêutico particular e, assim, inibem efeitos deletérios de peptídeos e oligômeros de beta-amiloide solúvel ("Abeta", "Aβ") e outras espécies solúveis dos mesmos em células neuronais, como a seguir definidos, e, consequentemente, podem ser utilizados para tratar condições, incluindo doenças e distúrbios associados, com patologia induzida por oligômero de Abeta, tal como a doença de Alzheimer.

[007] Oligômeros solúveis de Abeta se comportam como ligantes farmacológicos reversíveis que se ligam a receptores específicos e interferem com vias de sinalização importantes para a plasticidade sináptica normal, resultando em perda de coluna vertebral e sinapses. Foi descoberto que os compostos de isoindolina de acordo com a Fórmula I, como aqui fornecidos, que se ligam ao receptor sigma-2 e que se comportam como antagonistas funcionais neuronais exibem competição farmacológica com oligômeros de Abeta. Compostos de antagonista de sigma-2 de isoindolina como aqui descritos, podem, assim, diminuir ou impedir efeitos de oligômeros de Abeta, tais como toxicidade celular induzida por Abeta. Excluem-se determinados compostos da técnica anterior. São também proporcionados métodos para inibir efeitos de oligômeros de Abeta ou outras espécies de Abeta solúveis sobre uma célula neuronal e mais geralmente patologias de amiloide beta, compreendendo o contato da célula com um antagonista de sigma-2 de acordo com a Fórmula I e/ou Fórmula II, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, são proporcionados métodos para o tratamento de estádios iniciais da doença de Alzheimer compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um antagonista funcional de sigma-2 de acordo com a Fórmula I e/ou Fórmula II, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

[008] Numa modalidade, um composto isolado, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, é fornecido de acordo com a Fórmula I:

em que: R1 e R2 são cada um independentemente selecionados a partir de H, C1- C6alquil, ou CH2OR'; em que R '= H ou C1-C6 alquil; R3, R4, R5e R6 são cada um selecionados independentemente de H, C1- C6 alquil, OH, OCH3, OCH (CH3)2, OCH2CH (CH3)2, OC(CH3)3, O(C1- C6 alquil), OCF3, OCH2CH2OH, O(C1- C6 alquil)OH, O(C1- C6 haloalquil) , F, Cl, Br, I, CF3, CN, NO2, NH2, C1- C6 haloalquil, C1- C6 hidroxialquil, C1-6 alcoxi C1-6alquil, aril, heteroaril, C37 cicloalquil, heterocicloalquil, alquilaril, heteroaril, CO2R’, C(O)R’, NH(C1-4 alquil), N(C1-4 alquil)2, NH(C3-7 cicloalquil), NHC(O)(C1-4 alquil), CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)O(C1-4 alquil), OC(O)N(R’)2, C(O) (C1-4 alquil) e C(O)NH(C1-4 alquil); onde n = 0, 1 ou 2; R' são, cada um de forma independente, H, CH3, CH2CH3, C3- C6 alquil C1- C6 haloalquil; ou aril, alquilaril, piperazin-1-il, piperidin-1-il, morfolinil, heterocicloalquil, heteroaril, C1-6 alcoxi, NH(C1-4 alquil) ou NH(C1-4 alquil)2 opcionalmente substituídos, onde o grupo opcionalmente substituído é selecionado de C1-C6 alquil ou C2-C7 acil; ou R3 e R4, Em conjunto com o átomo de C ao qual eles estão ligados formam uma forma de um cicloalquil, aril, heteroaril, ou heterocicloalquil de 4-, 5-, 6- 7- ou 8- membros, que é opcionalmente substituído com 1, 2, 3, 4, ou 5 substituintes selecionados de forma independente a partir de OH, amino, halo, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcoxi, aril, arilalquil, heteroaril, heteroarilalquil, cicloalquil e heterocicloalquil e R3 e R4, ou R4 e R5, são cada um selecionado independentemente dentre uma ligação, C, N, S, e O; ou R3 e R4 estão ligados entre si para formar um grupo -O-C1-2 metileno-O-; ou R4 e R5, Em conjunto com o átomo de C ao qual eles estão ligados formam uma forma de um cicloalquil, aril, heteroaril, ou heterocicloalquil de 4-, 5-, 6- 7- ou 8- membros, que é opcionalmente substituído com 1, 2, 3, 4, ou 5 substituintes selecionados de forma independente a partir de OH, amino, halo, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcoxi, aril, arilalquil, heteroaril, heteroarilalquil, cicloalquil e heterocicloalquil e R3 e R4, ou R4 e R5, São cada um selecionado independentemente dentre uma ligação, C, N, S, e O; ou R4 e R5 estão ligados entre si para formar um grupo -O-C1-2 metileno-O-; R7, R8, R9, R10 e R11 são cada selecionados independentemente de H, C1-C6 alquil, OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, O(C1-C6 alquil), OCF3, OCH2CH2OH, O(C1-C6 alquil)OH, O(C1-C6 haloalquil), O(CO)R’, F, Cl, Br, I, CF3, CN, NO2, NH2, C1-C6 haloalquil, C1-C6 hidroxialquil, C1-6 alcoxi C1-6alquil, aril, heteroaril, C3-7 cicloalquil, heterocicloalquil, alquilaril, heteroaril, CO2R’, C(O)R’, NH(C1-4 alquil), N(C1-4 alquil)2, NH(C3-7 cicloalquil), NHC(O)(C1-4 alquil), CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)O(C1-4 alquil), OC(O)N(R’)2, C(O) (C14 alquil), e C(O)NH(C1-4 alquil); onde n= 0, 1 ou 2; R' são cada um independentemente H, CH3, CH2CH3, C3-C6 alquil, C1-C6 haloalquil, aril, alquilaril, piperazin-1-il, piperidin-1-il, morfolinil, heterocicloalquil, heteroaril, C1-6 alcoxi, NH(C1-4 alquil) ou NH(C1-4 alquil)2; ou R7 e R8, em conjunto com o átomo de C ou N ao qual eles estão ligados formam uma forma de um grupo cicloalquil, aril, heteroaril, ou heterocicloalquil de 4-, 5-, 6- 7- ou 8- membros, que é opcionalmente substituído com 1, 2, 3, 4, ou 5 substituintes selecionados de forma independente a partir de OH, amino, halo, C16 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcoxi, aril, arilalquil, heteroaril, heteroarilalquil, cicloalquil e heterocicloalquil e R9 e R10 , são cada um selecionado independentemente dentre uma ligação, C, N, S, e O; ou R7e R8 estão ligados entre si para formar um grupo -O-C1-2 metileno-O-; ou R8 e R9, em conjunto com o átomo de C ou N ao qual eles estão ligados formam uma forma de um grupo cicloalquil, aril, heteroaril, ou heterocicloalquil de 4-, 5-, 6- 7- ou 8- membros, que é opcionalmente substituído com 1, 2, 3, 4, ou 5 substituintes selecionados de forma independente a partir de OH, amino, halo, C16 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcoxi, aril, arilalquil, heteroaril, heteroarilalquil, cicloalquil e heterocicloalquil e R9 e R10, são cada um selecionado independentemente dentre uma ligação, C, N, S, e O; ou R8 e R9 estão ligados entre si para formar um grupo -O-C1-2 metileno-O-, em que cada um dentre O, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, heteroaril, aril, heteroaril, heterocicloalquil, e cicloalquil é, opcionalmente, independentemente substituído com 1, 2, 3, 4, ou 5 substituintes selecionados de forma independente a partir de OH, amino, halo, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcoxi, C1-6 haloalcoxi, aril, arilalquil, heteroaril, heteroarilalquilo, cicloalquil e heterocicloalquil; com a condição de que os seguintes compostos estão excluídos:

[009] Em outra modalidade, um composto, ou sal farmaceuticamente aceitável respectivo, é fornecido de acordo com a fórmula I, onde R1 e R2 são ambos independentemente selecionados de H ou CH3; R3, R4, R5e R6 são cada selecionados independentemente de H, C1- C6 alquil, OH, OCH3, O (C1- C6 alquil), O(C1- C6 haloalquil), F, Cl, CF3, aril, heteroaril, C3-7 cicloalquil, CO2R’, C(O)R’, OC(O)N(R’)2, CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR'; onde n = 0, 1 ou 2; R' são, cada um de forma independente, H, CH3, CH2CH3, C3- C6 alquil C1- C6 haloalquil; ou opcionalmente substituídos piperazin-1-il, piperidin-1-il, morfolinil, heterocicloalquil ou aril, em que o grupo opcionalmente substituído é selecionado de C1- C6 alquil ou C2- C7 acil; ou R3 e R4, juntamente com o átomo de C ao qual estão ligados, formam um C3-7cicloalquil de 5 ou 6 membros ou aril; ou R4 e R5, juntamente com o átomo de C ao qual estão ligados, formam um C3-7C cicloalquil, ou um aril de 5 ou 6 membros; ou R3 e R4 estão ligados entre si para formar um grupo -O-C1-2metileno-O-; ou R4 e R5 estão ligados entre si para formar um grupo - O-C1-2metileno-O-; e R7, R8, R9, R10e R-11 são cada um independentemente selecionados de H, OH, CH3, CH2CH3, F, Cl, CF3, OCF3, C1-C6 haloalquil, OCH3, O(C1-C6 alquil), OCH2CH2OH, O(C1-C6 alquil)OH, aril, heteroaril, C3-7 cicloalquil, alquilaril, CO2R’, CONR'2, S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)O(C1-4 alquil), OC(O)N(R’)2 e C(O)NH(C1-4 alquil); onde n = 0, 1 ou 2; R' são, cada um de forma independente, H, C1-C6 alquil, C1-C6 haloalquil, aril, alquilaril ou C1-6 alcoxi.

[010] Numa outra modalidade, um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, é fornecido de acordo com a Fórmula I, em que R7, R10, R11 são cada um H; R3 e R4 são cada um independentemente selecionados a partir de H, F, Cl, S(O)nR ', C(O)R', em que n = 2, e R' é selecionado a partir de CH3, piperazin-1-il, piperidin-1-il, morfolinil; R8 é selecionado a partir de OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, ou OC(CH3)3; e R9 é OH.

[011] Numa outra modalidade, um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, é fornecido selecionado a partir do grupo consistindo de:

[012] Numa outra modalidade, um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, é fornecido de acordo com a Fórmula II:

em que R3, R4, R5 e R6 são cada um independentemente selecionados de H, Cl, F, OH, CH3, C1-6 alquil, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, OC1-6 alquil, aril, heteroaril, heterocicloalquil, CO2R’, CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)R’, OC(O)N(R’)2 ou C(O)NH(C1-4 alquil), onde n = 0, 1 ou 2; e R' são, cada um de forma independente, H, C1- C6 alquil, C1- C6 haloalquil; ou opcionalmente substituídos aril, alquilaril, piperazin-1-il, piperidin-1-il, morfolinil, heterocicloalquil, heteroaril, C1-6 alcoxi, NH(C1-4 alquil) ou NH(C1-4 alquil)2, em que o grupo opcionalmente substituído é selecionado de C1- C6 alquil ou C2- C7 acil; ou R3 e R4, em conjunto com o átomo de C ao qual eles estão ligados, formam um aril de 6 membros; ou R3 e R4 estão ligados entre si para formar um grupo O-C1-2 metileno-O-; ou R4 e R5, em conjunto com o átomo de C ao qual eles estão ligados, formam um aril de 6 membros; ou R4 e R5 estão ligados entre si para formar um grupo O-C1-2 metileno-O-; e R8 e R9 são cada um independentemente selecionados a partir de H, Cl, F, OH, CH3, C1-6alquil, OCH3, OCH (CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, O(CO)R’, OC1- 6 alquil, aril, heteroaril, heterocicloalquil, CO2R', CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, (SO)nR', OC(O)N(R')2, ou C(O)NH(C1-4 alquil); ou R8 e R9, em conjunto com o átomo de C ou N ao qual eles estão ligados formam uma forma de um grupo cicloalquil, aril, heteroaril, ou heterocicloalquil de 4-, 5-, 6- 7- ou 8- membros, que é opcionalmente substituído com 1, 2, 3, 4, ou 5 substituintes selecionados de forma independente a partir de OH, amino, halo, C16 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcoxi, aril, arilalquil, heteroaril, heteroarilalquil, cicloalquil e heterocicloalquil e R9 e R10, são cada um selecionado independentemente dentre uma ligação, C, N, S, e O; ou R8 e R9 estão ligados entre si para formar um grupo -O-C1-2 metileno-O-;

[013] Numa outra modalidade, um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, é fornecido de acordo com Fórmula II, em que pelo menos um de R3, R4,R5 e R6 não é H; e pelo menos um de R8 e R9 não é H.

[014] Numa outra modalidade, um composto ou sal farmaceuticamente aceitável de acordo com a fórmula II é fornecido, em que R7, R10, R11 são cada um H; R3 e R4 são cada um independentemente selecionados a partir de H, F, Cl, S(O)nR ', C(O)R', em que n = 2, e R 'é selecionado a partir de CH3 ou opcionalmente substituídos piperazin-1-il, piperidin-1-il, ou morfolinil, em que o grupo opcionalmente substituído é selecionado a partir de C1-C6 alquil ou C2-C7 acil; R8 é selecionado de OH, Cl, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH (CH3)2 ou OC(CH3)3; e R9 é OH ou Cl.

[015] Numa outra modalidade, um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, é fornecido de acordo com a Fórmula II, em que R3 e R4 são cada um independentemente selecionados a partir de H, F, Cl, S(O)nR’, C(O)R’, em que n = 2, e R' é selecionado a partir de CH3, piperazin-1-il, piperidin-1-il, morfolinil; R5 e R6 ambos H; R8 é selecionado a partir de OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, ou OC(CH3)3; e R9 é OH.

[016] Numa outra modalidade, um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, é selecionado dentre o grupo consistindo em

[017] Numa outra modalidade, um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, é fornecido selecionado a partir do grupo consistindo de:

[018] Numa outra modalidade, um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, é fornecido selecionado a partir do grupo consistindo de:

[019] Numa outra modalidade, é proporcionada uma composição para a inibição de um efeito de beta-amiloide numa célula neuronal compreendendo um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com a Fórmula I:

em que: R1 e R2 são cada um independentemente selecionados a partir de H, C1- C6alquil, ou CH2OR'; em que R '= H ou C1-C6 alquil; R3, R4, R5 e R6 são cada selecionados independentemente de H, C1-C6 alquil, OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, O(C1-C6 alquil), OCF3, OCH2CH2OH, O(C1-C6 alquil)OH, O(C1-C6 haloalquil), F, Cl, Br, I, CF3, CN, NO2, NH2, C1-C6 haloalquil, C1-C6 hidroxialquil, C1-6 alcoxi C1-6alquil, aril, heteroaril, C3-7 cicloalquil, heterocicloalquil, alquilaril, heteroaril, CO2R’, C(O)R’, NH(C1-4 alquil), N(C1-4 alquil)2, NH(C3-7 cicloalquil), NHC(O)(C1-4 alquil), CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)R’, C(O)O(C1-4 alquil), OC(O)N(R’)2, C(O) (C1-4 alquil) e C(O)NH(C1-4 alquil); onde n= 0, 1 ou 2; R' são cada selecionados independentemente de H, CH3, CH2CH3, C3-C6 alquil, C1-C6 haloalquil; ou opcionalmente substituídos aril, alquilaril, piperazin-1-il, piperidin-1-il, morfolinil, heterocicloalquil, heteroaril, C1-6 alcoxi, NH(C1-4 alquil) ou NH(C1-4 alquil)2, em que o grupo opcionalmente substituído é selecionado de C1-C6 alquil ou C2-C7 acil; ou R3 e R4, Em conjunto com o átomo de C ao qual eles estão ligados formam uma forma de um cicloalquil, aril, heteroaril, ou heterocicloalquil de 4-, 5-, 6- 7- ou 8- membros, que é opcionalmente substituído com 1, 2, 3, 4, ou 5 substituintes selecionados de forma independente a partir de OH, amino, halo, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcoxi, aril, arilalquil, heteroaril, heteroarilalquil, cicloalquil e heterocicloalquil e R3 e R4, ou R4 e R5, são cada um selecionado independentemente dentre uma ligação, C, N, S, e O; ou R3 e R4 estão ligados entre si para formar um grupo -O-C1-2 metileno-O-; ou R4 e R5, Em conjunto com o átomo de C ao qual eles estão ligados formam uma forma de um cicloalquil, aril, heteroaril, ou heterocicloalquil de 4-, 5-, 6- 7- ou 8- membros, que é opcionalmente substituído com 1, 2, 3, 4, ou 5 substituintes selecionados de forma independente a partir de OH, amino, halo, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcoxi, aril, arilalquil, heteroaril, heteroarilalquil, cicloalquil e heterocicloalquil e R3 e R4, ou R4 e R5, São cada um selecionado independentemente dentre uma ligação, C, N, S, e O; ou R4 e R5 estão ligados entre si para formar um grupo -O-C1-2 metileno-O-; R7, R8, R9, R10, e R11 são cada selecionados independentemente de H, C1C6 alquil, OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, O(C1-C6 alquil), OCF3, OCH2CH2OH, O(C1-C6 alquil)OH, O(C1-C6 haloalquil), F, Cl, Br, I, CF3, CN, NO2, NH2, C1-C6 haloalquil, C1-C6 hidroxialquil, C1-6 alcoxi C1-6alquil, aril, heteroaril, C3-7 cicloalquil, heterocicloalquil, alquilaril, heteroaril, CO2R’, C(O)R’, NH(C1-4 alquil), N(C1-4 alquil)2, NH(C3-7 cicloalquil), NHC(O)(C1-4 alquil), CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)O(C1-4 alquil), OC(O)N(R’)2, C(O) (C1-4 alquil), e C(O)NH(C1-4 alquil); onde n= 0, 1, ou 2; R' são cada independentemente H, CH3, CH2CH3, C3-C6 alquil, C1-C6 haloalquil, aril, alquilaril, piperazin-1-il, piperidin-1-il, morfolinil, heterocicloalquil, heteroaril, C1-6 alcoxi, NH(C1-4 alquil) ou NH(C1-4 alquil)2; ou R7 e R8, em conjunto com o átomo de C ou N ao qual eles estão ligados formam uma forma de um grupo cicloalquil, aril, heteroaril, ou heterocicloalquil de 4-, 5-, 6- 7- ou 8- membros, que é opcionalmente substituído com 1, 2, 3, 4, ou 5 substituintes selecionados de forma independente a partir de OH, amino, halo, C16 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcoxi, aril, arilalquil, heteroaril, heteroarilalquil, cicloalquil e heterocicloalquil e R9 e R10, são cada um selecionado independentemente dentre uma ligação, C, N, S, e O; ou R7 e R8 estão ligados entre si para formar um grupo -O-C1-2 metileno-O-; ou R8 e R9, em conjunto com o átomo de C ou N ao qual eles estão ligados formam uma forma de um grupo cicloalquil, aril, heteroaril, ou heterocicloalquil de 4-, 5-, 6- 7- ou 8- membros, que é opcionalmente substituído com 1, 2, 3, 4, ou 5 substituintes selecionados de forma independente a partir de OH, amino, halo, C16 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcoxi, aril, arilalquil, heteroaril, heteroarilalquil, cicloalquil e heterocicloalquil e R9 e R10, são cada um selecionado independentemente dentre uma ligação, C, N, S, e O; ou R8 e R9 estão ligados entre si para formar um grupo -O-C1-2 metileno-O-; em que cada um dentre O, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, heteroaril, aril, heteroaril, heterocicloalquil, e cicloalquil é, opcionalmente, independentemente substituído com 1, 2, 3, 4, ou 5 substituintes selecionados de forma independente a partir de OH, amino, halo, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcoxi, C1-6 haloalcoxi, aril, arilalquil, heteroaril, heteroarilalquilo, cicloalquil e heterocicloalquil; com a condição de que os seguintes compostos estão excluídos:

em que o composto ou sal respectivo está presente na composição numa quantidade eficaz para inibir a ligação de oligômero de beta amiloide na referida célula; e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[020] Numa outra modalidade, é proporcionada uma composição para a inibição de um efeito de beta-amiloide numa célula neuronal compreendendo um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com a Fórmula I:

em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 e R11 são como aqui definidos, com a condição de que quando R1, R3, R6, R7, R10 e R11 são cada um H; R2 é CH3; R8 é OCH3 ou Cl; e R9 é OH ou Cl; então R4 não é Cl ou CF3 e R5 não é Cl ou CF3, e em que o composto ou sal respectivo está presente na composição numa quantidade eficaz para inibir a ligação de oligômero de beta amiloide na referida célula; e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[021] Numa outra modalidade, é proporcionada uma composição compreendendo um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com a Fórmula I, em que R1 e R2 são cada um independentemente selecionados dentre H ou CH3; R3, R4, R5, e R6 são cada um independentemente selecionados a partir de H, C1-C6 alquil, OH, OCH3, O(C1-C6 alquil), O(C1-C6 haloalquil), F, Cl, CF3, aril, heteroaril, C3-7 cicloalquil, CO2R’, C(O)R’, OC(O)N(R’)2, CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR'; em que n= 0, 1, ou 2; R' são cada um, independentemente H, CH3, CH2CH3, C3-C6 alquil, C1-C6 haloalquil; ou piperazina- 1-il, piperidina-1-il, morfolinil, heterocicloalquil, ou aril; ou R3 e R4, em conjunto com o átomo de C ao qual eles estão ligados, formam um aril de 5-, ou 6- membros C3-7cicloalquil, ou aril; ou R4 e R5, em conjunto com o átomo de C ao qual eles estão ligados, formam um C3-7cicloalquil, ou um aril de 5 ou 6 membros; ou R3 e R4 estão ligados entre si para formar um grupo -OC1-2 metileno-O-; ou R4 e R5 estão ligados entre si para formar um grupo -OC1-2 metileno-O-; e R7, R8, R9, R10, E R11 são cada um independentemente selecionados a partir de H, OH, CH3, CH2CH3, F, Cl, CF3, OCF3, C1-C6 haloalquil, OCH3, O (C1-C6 alquil), OCH2CH2OH, O (C1-C6 alquil) OH, aril, heteroaril, C3-7 cicloalquil, alquilaril, CO2R ', CONR'2, S(O)nNR '2, S(O)nR ', C (O) O (C1-4 alquil), OC (O) N (R ')2, E C (O) NH (C14 alquil); em que n = 0, 1, ou 2; R 'são cada um independentemente H, C1-C6 alquil, C1-C6 haloalquil, aril, alquilaril, ou C1-6 alcóxi; e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[022] Numa outra modalidade, é proporcionada uma composição compreendendo um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com a Fórmula I, e um carreador farmaceuticamente aceitável, em que R7, R10, R11 são cada um H; R3 e R4 são cada um independentemente selecionados a partir de H, F, Cl, S(O)nR’, C(O)R’, em que n = 2, e R' é selecionado a partir de CH3, piperazin-1-il, piperidin-1-il, morfolinil; R8 é selecionado a partir de OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2 ou OC(CH3)3; e R9 é OH; e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[023] Numa outra modalidade, é proporcionada uma composição compreendendo um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com a Fórmula I, e um carreador farmaceuticamente aceitável, em que o composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, é selecionado dentre o grupo consistindo de:

[024] Numa outra modalidade, é proporcionada uma composição compreendendo um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, de acordo a Fórmula II:

em que R3, R4, R5, e R6 são cada um independentemente selecionados a partir de H, Cl, F, OH, CH3, C1-6 alquil, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, OC1-6 alquil, aril, heteroaril, heterocicloalquil, CO2R’, CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)R’, OC(O)N(R’)2 ou C(O)NH(C1-4 alquil), em que n= 0, 1 ou 2; e R' são cada um independentemente selecionados a partir de H, C1C6 alquil, C1-C6 haloalquil ou opcionalmente substituídos aril, alquilaril, piperazin-1- il, piperidin-1-il, morfolinil, heterocicloalquil, heteroaril, C1-6 alcoxi, NH(C1-4 alquil) ou NH(C1-4 alquil)2, em que o grupo opcionalmente substituído é selecionado de C1-C6 alquil ou C2-C7 acil; ou R3 e R4, em conjunto com o átomo de C ao qual eles estão ligados, formam um aril de 6 membros; ou R3 e R4 estão ligados entre si para formar um grupo O-C1-2 metileno-O-; ou R4 e R5, em conjunto com o átomo de C ao qual eles estão ligados, formam um aril de 6 membros; ou R4 e R5 estão ligados entre si para formar um grupo O-C1-2 metileno-O-; e R8 e R9 são cada um independentemente selecionados a partir de H, Cl, F, OH, CH3, C1-6 alquil, OCH3, OCH (CH3)2, OCH2CH (CH3)2, OC (CH3)3, OC1-6 alquil, aril, heteroaril, heterocicloalquil, CO2R ', CONR'2, NC (O) R ', NS (O)nR ', S (O)nNR '2, (SO)nR ', OC (O) N (R')2, ou C (O) NH (C1-4 alquil); e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[025] Numa outra modalidade, uma composição é fornecida que compreende um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com a Fórmula II, em que R3 e R4 são cada um independentemente selecionados a partir de H, F, Cl, S(O)nR’, C(O)R’, em que n = 2, e R' é selecionado a partir de CH3, piperazin-1-il, piperidin-1-il ou morfolinil; R5 e R6 são cada um H; R8 é selecionado a partir de OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, ou OC(CH3)3; e R9 é OH; e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[026] Numa outra modalidade, é proporcionada uma composição compreendendo um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, e um carreador farmaceuticamente aceitável, em que o composto ou sal é selecionado a partir do grupo consistindo de:

[027] Numa outra modalidade, é proporcionada uma composição compreendendo um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, e um carreador farmaceuticamente aceitável, em que o composto ou sal é selecionado a partir do grupo consistindo de:

[028] Numa outra modalidade, é proporcionada uma composição compreendendo um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, e um carreador farmaceuticamente aceitável, em que o composto ou sal é selecionado a partir do grupo consistindo de:

[029] Numa modalidade, um método/utilização é fornecido para inibir um efeito de beta-amiloide numa célula neuronal que compreende a administração de uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo um composto de antagonista de receptor de sigma-2 seletivo, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com a fórmula I:

em que: R1 e R2 são cada um independentemente selecionados a partir de H, C1- C6alquil, ou CH2OR'; em que R '= H ou C1-C6 alquil; R3, R4, R5 e R6 são cada selecionados independentemente de H, C1-C6 alquil, OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, O(C1-C6 alquil), OCF3, OCH2CH2OH, O(C1-C6 alquil)OH, O(C1-C6 haloalquil), F, Cl, Br, I, CF3, CN, NO2, NH2, C1-C6 haloalquil, C1-C6 hidroxialquil, C1-6 alcoxi C1-6alquil, aril, heteroaril, C3-7 cicloalquil, heterocicloalquil, alquilaril, heteroaril, CO2R’, C(O)R’, NH(C1-4 alquil), N(C1-4 alquil)2, NH(C3-7 cicloalquil), NHC(O)(C1-4 alquil), CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)R’, C(O)O(C1-4 alquil), OC(O)N(R’)2, C(O) (C1-4 alquil) e C(O)NH(C1-4 alquil); onde n= 0, 1 ou 2; R' são cada selecionados independentemente de H, CH3, CH2CH3, C3-C6 alquil, C1-C6 haloalquil; ou opcionalmente substituídos aril, alquilaril, piperazin-1-il, piperidin-1-il, morfolinil, heterocicloalquil, heteroaril, C1-6 alcoxi, NH(C1-4 alquil) ou NH(C1-4 alquil)2, em que o grupo opcionalmente substituído é selecionado de C1-C6 alquil ou C2-C7 acil; ou R3 e R4, Em conjunto com o átomo de C ao qual eles estão ligados formam uma forma de um cicloalquil, aril, heteroaril, ou heterocicloalquil de 4-, 5-, 6- 7- ou 8- membros, que é opcionalmente substituído com 1, 2, 3, 4, ou 5 substituintes selecionados de forma independente a partir de OH, amino, halo, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcoxi, aril, arilalquil, heteroaril, heteroarilalquil, cicloalquil e heterocicloalquil e R3 e R4, ou R4 e R5, são cada um selecionado independentemente dentre uma ligação, C, N, S, e O; ou R3 e R4 estão ligados entre si para formar um grupo -O-C1-2 metileno-O-; ou R4 e R5, Em conjunto com o átomo de C ao qual eles estão ligados formam uma forma de um cicloalquil, aril, heteroaril, ou heterocicloalquil de 4-, 5-, 6- 7- ou 8- membros, que é opcionalmente substituído com 1, 2, 3, 4, ou 5 substituintes selecionados de forma independente a partir de OH, amino, halo, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcoxi, aril, arilalquil, heteroaril, heteroarilalquil, cicloalquil e heterocicloalquil e R3 e R4, ou R4 e R5, São cada um selecionado independentemente dentre uma ligação, C, N, S, e O; ou R4 e R5 estão ligados entre si para formar um grupo -O-C1-2 metileno-O-; R7, R8, R9, R10 e R11 são cada um independentemente selecionados de H, C1-C6 alquil, OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, O(C1-C6 alquil), OCF3, OCH2CH2OH, O(C1-C6 alquil)OH, O(C1-C6 haloalquil), F, Cl, Br, I, CF3, CN, NO2, NH2, C1-C6 haloalquil, C1-C6 hidroxialquil, C1-6 alcoxi C1-6alquil, aril, heteroaril, C3-7 cicloalquil, heterocicloalquil, alquilaril, heteroaril, CO2R’, C(O)R’, NH(C1-4 alquil), N(C1-4 alquil)2, NH(C3-7 cicloalquil), NHC(O)(C1-4 alquil), CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)O(C1-4 alquil), OC(O)N(R’)2, C(O) (C1-4 alquil), e C(O)NH(C1-4 alquil); onde n= 0, 1, ou 2; R' são cada independentemente selecionados de H, CH3, CH2CH3, C3-C6 alquil, C1-C6 haloalquil; ou aril, alquilaril, piperazin-1-il, piperidin-1-il, morfolinil, heterocicloalquil, heteroaril, C1-6 alcoxi, NH(C1-4 alquil), ou NH(C1-4 alquil)2 opcionalmente substituídos, onde o grupo opcionalmente substituído é selecionado de C1-C6 alquil ou C2-C7 acil; ou R7 e R8, em conjunto com o átomo de C ou N ao qual eles estão ligados formam uma forma de um grupo cicloalquil, aril, heteroaril, ou heterocicloalquil de 4-, 5-, 6- 7- ou 8- membros, que é opcionalmente substituído com 1, 2, 3, 4, ou 5 substituintes selecionados de forma independente a partir de OH, amino, halo, C16 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcoxi, aril, arilalquil, heteroaril, heteroarilalquil, cicloalquil e heterocicloalquil e R9 e R10, são cada um selecionado independentemente dentre uma ligação, C, N, S, e O; ou R7 e R8 estão ligados entre si para formar um grupo -O-C1-2 metileno-O-; ou R8 e R9, em conjunto com o átomo de C ou N ao qual eles estão ligados formam uma forma de um grupo cicloalquil, aril, heteroaril, ou heterocicloalquil de 4-, 5-, 6- 7- ou 8- membros, que é opcionalmente substituído com 1, 2, 3, 4, ou 5 substituintes selecionados de forma independente a partir de OH, amino, halo, C16 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcoxi, aril, arilalquil, heteroaril, heteroarilalquil, cicloalquil e heterocicloalquil e R9 e R10, são cada um selecionado independentemente dentre uma ligação, C, N, S, e O; ou R8 e R9 estão ligados entre si para formar um grupo -O-C1-2 metileno-O-, em que cada um dentre O, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, heteroaril, aril, heteroaril, heterocicloalquil, e cicloalquil é, opcionalmente, independentemente substituído com 1, 2, 3, 4, ou 5 substituintes selecionados de forma independente a partir de OH, amino, halo, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcoxi, C1-6 haloalcoxi, aril, arilalquil, heteroaril, heteroarilalquilo, cicloalquil e heterocicloalquil; com a condição de que os seguintes compostos estão excluídos:

em que o composto ou seu sal farmaceuticamente aceitável está presente numa quantidade eficaz para impedir que o oligômero beta amiloide se ligue na dita célula; e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[030] Numa outra modalidade, um método/utilização é fornecido para inibir um efeito de beta-amiloide numa célula neuronal que compreende a administração de uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo um composto de antagonista do receptor de sigma-2 seletivo, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com a fórmula I, em que o composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, é administrado numa quantidade igualmente eficaz para inibir défices de tráfico de membranana referida célula, os referidos efeitos de tráfico de membrana sendo associados com a exposição da referida célula a oligômeros de beta amiloide solúveis.

[031] Numa outra modalidade, um método/utilização é fornecido para inibir um efeito de beta-amiloide numa célula neuronal que compreende a administração de uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo um composto de antagonista de receptor de sigma-2 seletivo, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com a fórmula I, em que o composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, é administrado numa quantidade eficaz para inibir tanto a ligação de oligômero e a perda de sinapse associada com a exposição da célula a oligômero de amiloide beta solúvel na referida célula.

[032] Numa outra modalidade, um método/utilização é fornecido para inibir um efeito de beta-amiloide numa célula neuronal que compreende a administração de uma composição compreendendo uma quantidade eficaz de um composto de acordo com a fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e um carreador farmaceuticamente aceitável, em que o composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, é administrado numa quantidade eficaz para inibir um efeito cognitivo de beta-amiloide mediado por oligômero solúvel. Num aspecto, o efeito cognitivo é declínio cognitivo como testado num modelo animal de declínio cognitivo. Num outro aspecto, o declínio cognitivo é um declínio na aprendizagem como testado por um ensaio de condicionamento de medo. Num aspecto adicional, o declínio cognitivo é um declínio na aprendizagem espacial e na memória como testado por um teste do labirinto de água de Morris. Num outro aspecto, o declínio cognitivo é de declínio da memória e aprendizagem espacial baseado em hipocampo como testado em um modelo de animal transgênico da doença de Alzheimer.

[033] Numa outra modalidade, um método/utilização é fornecido para inibir um efeito de beta-amiloide numa célula neuronal que compreende a administração de uma composição compreendendo uma quantidade eficaz de um composto de acordo com a fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que: R1 e R2 são cada um independentemente selecionados dentre H ou CH3; R3, R4, R5, e R6 são cada um independentemente selecionados a partir de H, C1-C6 alquil, OH, OCH3, O(C1-C6 alquil), O(C1-C6 haloalquil), F, Cl, CF3, aril, heteroaril, C3-7 cicloalquil, CO2R’, C(O)R’, OC(O)N(R’)2, CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR'; em que n= 0, 1, ou 2; R' são cada um, independentemente H, CH3, CH2CH3, C3-C6 alquil, C1-C6 haloalquil; ou piperazina- 1-il, piperidina-1-il, morfolinil, heterocicloalquil, ou aril; ou R3 e R4, em conjunto com o átomo de C ao qual eles estão ligados, formam um aril de 5-, ou 6- membros C3-7cicloalquil, ou aril; ou R4 e R5, em conjunto com o átomo de C ao qual eles estão ligados, formam um C3-7cicloalquil, ou um aril de 5 ou 6 membros; ou R3 e R4 estão ligados entre si para formar um grupo -O-C1- 2 metileno-O-; ou R4 e R5 estão ligados entre si para formar um grupo -O-C1-2 metileno-O-; e R7, R8, R9, R10 e R11 são cada um independentemente selecionados de H, OH, CH3, CH2CH3, F, Cl, CF3, OCF3, C1-C6 haloalquil, OCH3, O(C1-C6 alquil), OCH2CH2OH, O(C1-C6 alquil)OH, aril, heteroaril, C3-7 cicloalquil, alquilaril, CO2R’, CONR'2, S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)O(C1-4 alquil), OC(O)N(R’)2, e C(O)NH(C1-4 alquil); em que n= 0, 1 ou 2; R' são cada um independentemente H, C1-C6 alquil, C1-C6 haloalquil, aril, alquilaril, ou C1-6 alcoxi; e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[034] Numa outra modalidade, um método/utilização é fornecido para inibir um efeito de beta-amiloide numa célula neuronal que compreende a administração de uma composição compreendendo uma quantidade eficaz de um composto de acordo com a fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R7, R10, R11 são cada um H; R3 e R4 são cada um independentemente selecionados a partir de H, F, Cl, S(O)nR ', C(O)R', em que n = 2, e R 'é selecionado a partir de CH3 ou opcionalmente substituídos piperazin-1-il, piperidin-1-il, ou morfolinil, em que o grupo opcionalmente substituído é selecionado a partir de C1-C6 alquil ou C2-C7 acil; R8 é selecionado a partir de OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2 ou OC(CH3)3; e R9 é OH; e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[035] Numa outra modalidade, um método/utilização é fornecido para inibir um efeito de beta-amiloide numa célula neuronal que compreende a administração de uma composição compreendendo uma quantidade eficaz de um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, selecionado a partir do grupo consistindo de:

[036] Numa outra modalidade, um método/utilização é fornecido para inibir um efeito de beta-amiloide numa célula neuronal que compreende a administração de uma composição compreendendo uma quantidade eficaz de um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com a fórmula II:

em que R3, R4, R5, e R6 são cada um independentemente selecionados a partir de H, Cl, F, OH, CH3, C1-6 alquil, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, OC1-6 alquil, aril, heteroaril, heterocicloalquil, CO2R’, CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)R’, OC(O)N(R’)2 ou C(O)NH(C1-4 alquil), em que n= 0, 1 ou 2; e R' são cada um independentemente selecionados a partir de H, C1C6 alquil, C1-C6 haloalquil ou opcionalmente substituídos aril, alquilaril, piperazin-1- il, piperidin-1-il, morfolinil, heterocicloalquil, heteroaril, C1-6 alcoxi, NH(C1-4 alquil) ou NH(C1-4 alquil)2, em que o grupo opcionalmente substituído é selecionado de C1-C6 alquil ou C2-C7 acil; ou R3 e R4, em conjunto com o átomo de C ao qual eles estão ligados, formam um aril de 6 membros; ou R3 e R4 estão ligados entre si para formar um grupo O-C1-2 metileno-O-; ou R4 e R5, em conjunto com o átomo de C ao qual eles estão ligados, formam um aril de 6 membros; ou R4 e R5 estão ligados entre si para formar um grupo O-C1-2 metileno-O-; e R8 e R9 são cada um independentemente selecionados a partir de H, Cl, F, OH, CH3, C1-6 alquil, OCH3, OCH (CH3)2, OCH2CH (CH3)2, OC (CH3)3, OC1-6 alquil, aril, heteroaril, heterocicloalquil, CO2R ', CONR'2, NC (O) R ', NS (O)nR', S (O)nNR '2, (SO)nR ', OC (O) N (R')2, ou C (O) NH (C1-4 alquil); e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[037] Numa outra modalidade, um método/utilização é fornecido para inibir um efeito de beta-amiloide numa célula neuronal que compreende a administração de uma composição compreendendo uma quantidade eficaz de um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com a fórmula II, em que pelo menos um de R3, R4, R5e R6 não é H; e pelo menos um de R8 e R9 não é H.

[038] Numa outra modalidade, um método/utilização é fornecido para inibir um efeito de beta-amiloide numa célula neuronal que compreende a administração de uma composição compreendendo uma quantidade eficaz de um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com a fórmula II, em que R3 e R4 são cada um independentemente selecionados a partir de H, F, Cl, S(O)nR', C(O) R', em que n = 2, e R' é selecionado a partir de CH3, piperazin-1-il, piperidin-1-il ou morfolinil; R5 e R6 são cada um H; R8 é selecionado a partir de OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2 ou OC(CH3)3; e R9 é OH.

[039] Numa outra modalidade, um método/utilização é fornecido para inibir um efeito de beta-amiloide numa célula neuronal que compreende a administração de uma composição compreendendo uma quantidade eficaz de um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável; e um carreador farmaceuticamente aceitável, em que o composto ou um seu sal é selecionado dentre o grupo consistindo de:

[040] Numa outra modalidade, um método/utilização é fornecido para inibir um efeito de beta-amiloide numa célula neuronal que compreende a administração de uma composição compreendendo uma quantidade eficaz de um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável; e um carreador farmaceuticamente aceitável, em que o composto ou um seu sal é selecionado dentre o grupo consistindo de:

[041] Numa outra modalidade, um método/utilização é fornecido para inibir um efeito de beta-amiloide numa célula neuronal que compreende a administração de uma composição compreendendo uma quantidade eficaz de um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável; e um carreador farmaceuticamente aceitável,em que o composto ou um seu sal é selecionado dentre o grupo consistindo de:

[042] Numa outra modalidade, um método/utilização é fornecido para inibir a supressão da potenciação a longo prazo num sujeito com necessidade, compreendendo a administração ao sujeito de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição compreendendo um composto de antagonista de receptor de sigma-2, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com a Fórmula I e/ou de Fórmula II; e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[043] Numa outra modalidade, um método/utilização é fornecido para inibir o declínio cognitivo em um sujeito exibindo ou em risco de apresentar declínio cognitivo, compreendendo a administração ao sujeito de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição compreendendo um composto de antagonista do receptor de sigma-2, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com a Fórmula I e/ou a Fórmula II; e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[044] Numa outra modalidade, um método/utilização é fornecido para inibir o declínio cognitivo em um sujeito associado a um efeito de oligômero de beta- amiloide em neurônios centrais, compreendendo a administração ao sujeito afligido com o referida declínio cognitivo de uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição compreendendo um composto de antagonista de receptor sigma-2, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com a Fórmula I e/ou de Fórmula II; e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[045] Numa outra modalidade, um método/utilização é fornecido para o tratamento de transtorno cognitivo leve na doença de Alzheimer num sujeito em necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao sujeito de uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição compreendendo um composto de antagonista do receptor de sigma-2, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com a Fórmula I e/ou de Fórmula II; e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[046] Numa outra modalidade, os compostos de isoindolina são fornecidos de acordo com a fórmula I e/ou fórmula II, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, que atuam como antagonistas de sigma 2 por ligação a um receptor de sigma-2 e inibem a ligação de oligômeros Aβ para os neurônios, e em particular para as sinapses. Em algumas modalidades, o antagonista de sigma-2 compete com oligômero Aβ em ligação a neurônios e especificamente sinapses, ou de outra forma rompe a capacidade de um oligômero de Aβ se ligar aos neurónios, tal como interferindo com formação de oligômero Aβ ou de se ligar a um oligômero Aβ ou possivelmente interferindo com a capacidade de um oligômero Aβ para pôr em movimento os mecanismos de transdução atendentes à sua ligação a neurónios. Em certas modalidades, os antagonistas de sigma-2 inibem assim um efeito patológico não-letal de Aβ ("patologia não-letal de Aβ" ou "patologia não-letal de beta amiloide), incluindo um defeito no tráfico de membrana, disfunção sináptica, um defeito de memória e aprendizagem num animal, redução no número de sinapses, alteração no comprimento dendrítico da coluna ou morfologia da coluna, ou um defeito no longo prazo de potenciação (LTP), entre outros.

[047] Em outras modalidades, antagonistas de sigma-2 de isoindolina aqui proporcionados que são ativos noutros ensaios, tal como aqui ilustrados, possuem uma capacidade de restaurar neurónios para um estado normal ou interferir co disfunção sináptica induzida por oligômero Aβ. Sem estar limitado pela teoria, os antagonistas de sigma-2 aqui proporcionados interferem com uma ou mais dentre estrutura de oligômero Aβ, oligômero Aβ se ligando a neurónios ou mecanismos moleculares de sinalização induzida por oligômero Aβ que é útil para neutralizar os efeitos não letais de oligômeros Aβ e no tratamento da fase inicial de patologias associadas a oligômero solúvel Aβ.

[048] Numa modalidade, antagonistas de sigma-2 são fornecidos de acordo com a fórmula I e/ou fórmula II, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, que são antagonistas neuronais funcionais e são usados num método de inibição da perda de sinapse em uma célula neuronal, a perda sendo associada com a exposição da célula a um ou mais oligômeros de Abeta ou outros complexos de Abeta ou, mais geralmente, espécies de Abeta incluindo peptídeos de Abeta em forma complexada solúvel ou monomérica ou oligomérica (como definido abaixo), o método compreendendo o contato da referida célula com uma quantidade de um ou mais antagonistas de sigma-2 numa quantidade eficaz para evitar ou reduzir a referida perda ou para restaurar parcialmente ou completamente o número de sinapses na referida célula para níveis pré-exposição.

[049] Numa outra modalidade, é proporcionado um método para modular uma mudança de tráfico de membrana de uma célula neuronal, sendo a referida mudança associada com a exposição da referida célula com uma ou mais espécies de Abeta, compreendendo o método o contato da referida célula com uma quantidade de um ou mais antagonistas de sigma-2 de acordo com a fórmula I e/ou fórmula II, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, numa quantidade eficaz para evitar ou reduzir a referida mudança de tráfico de membrana, ou fazê-la permanecer em ou mais perto de níveis observados antes da exposição da referida célula às referidas espécies de Abeta.

[050] Numa outra modalidade, antagonistas de sigma-2 são fornecidos de acordo com a fórmula I e/ou fórmula II, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, que são utilizados num método para tratar o declínio cognitivo que compreende a administração a um sujeito de um ou mais dos antagonistas de sigma-2 da divulgação.

[051] Numa outra modalidade, é proporcionado um método para tratar o declínio cognitivo em um sujeito em necessidade do mesmo que compreende administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um ou mais antagonistas de sigma- 2 de acordo com a fórmula I e/ou fórmula II, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

[052] Em ainda outra modalidade, os antagonistas de sigma-2 de acordo com a fórmula I e/ou fórmula II, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, são antagonistas funcionais neuronais de sigma-2 utilizados num método para o tratamento de um declínio cognitivo ou de doenças neurodegenerativas ou um defeito na função e/ou número de sinapse que compreende a administração a um sujeito de um ou mais dos antagonistas de sigma-2 da presente descrição.

[053] Em ainda outra modalidade, é proporcionado um método para o tratamento de um declínio cognitivo ou de doenças neurodegenerativas ou um defeito na função e/ou número de sinapse de um sujeito que compreende a administração a um sujeito de um ou mais dos antagonistas de sigma-2 de acordo com a fórmula I e/ou de fórmula II, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, que são antagonistas funcionais neuronais de sigma-2.

[054] Em outras modalidades, são proporcionados métodos compreendendo a administração de um ou mais antagonistas de receptores sigma- 2 de acordo com a fórmula I e/ou fórmula II, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, a um sujeito em necessidade do mesmo numa quantidade eficaz para inibir a disfunção sináptica induzida por oligômero de beta amiloide de uma célula neuronal; e/ou para inibir a supressão da potenciação do hipocampo a longo prazo, causada pela exposição de neurónios a oligômeros de Abeta.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[055] Antes de compostos, composições e métodos serem descritos em detalhe, deve ser entendido que esta divulgação não se limita a processos particulares, composições, ou metodologias descritas, uma vez que estes podem variar. Deve também ser entendido que a terminologia usada na descrição é para finalidade de descrever as modalidades ou versões específicas apenas, e não pretende-se limitar o escopo da divulgação, a qual será limitado somente pelas reivindicações anexas. A menos que definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos usados aqui têm o mesmo significado como comumente entendido por uma pessoa versada na técnica. Apesar dos métodos e materiais semelhantes ou equivalentes àqueles descritos neste documento poderem ser usados na prática ou no teste de modalidades da divulgação, os métodos, dispositivos e materiais preferenciais são descritos abaixo.

[056] É reconhecido ainda que determinadas características da divulgação, que são, para clareza, descritas no contexto de modalidades separadas, também podem ser fornecidas em combinação em uma única modalidade. Por outro lado, várias características da divulgação que são, por concisão, descritas no contexto de uma única modalidade, também podem ser fornecidas separadamente ou em qualquer subcombinação adequada.

Definições

[057] As formas singulares "uma", "um" e "a/o" incluem referências no plural, a menos que o contexto claramente dite de outra forma. Assim, por exemplo, a referência a uma "célula" é uma referência a uma ou mais células e seus equivalentes conhecidos por aqueles versados na técnica, e assim por diante.

[058] Tal como aqui utilizado, o termo "cerca de" significa mais ou menos 10% de um dado valor. Por exemplo, "cerca de 50%" significa na gama de 45% - 55%.

[059] "Ligante de Sigma-2 " refere-se a um composto que se liga a um receptor sigma-2 e inclui agonistas, antagonistas, agonistas parciais, agonistas inversos e simplesmente concorrentes para outros ligantes deste receptor ou proteína.

[060] O termo "agonista" refere-se a um composto, a presença do qual resulta numa atividade biológica de um receptor que é a mesma que a atividade biológica resultante da presença de um ligante que ocorre naturalmente para o receptor.

[061] O termo "agonista parcial" refere-se a um composto cuja presença resulta numa atividade biológica de um receptor que é do mesmo tipo que a que resulta da presença de um ligante que ocorre naturalmente para o receptor, mas de uma magnitude inferior.

[062] O termo "antagonista" refere-se a uma entidade, por exemplo, um composto, ou um fragmento de anticorpo, a presença do qual resulta numa redução na magnitude de uma atividade biológica de um receptor. Em certas modalidades, a presença de um antagonista resulta na completa inibição de uma atividade biológica de um receptor. Tal como aqui utilizado, o termo "antagonista do receptor Sigma-2" é usado para descrever um composto que atua como um "antagonista funcional" no receptor Sigma-2 em que a disfunção sináptica bloqueia efeitos de Abeta, por exemplo, induzida por oligômero de Abeta, por exemplo, como visto num ensaio in vitro, tal como um ensaio de transporte de membrana, ou um ensaio de perda de sinapse, ou ativação do receptor sigma-2 mediada por oligômero de Abeta de caspase-3, ou num ensaio de comportamento, ou num doente em necessidade respectiva. O antagonista funcional pode atuar diretamente através da inibição da ligação de, por exemplo, um oligômero de Abeta a um receptor sigma-2, ou indiretamente, por interferir com a resultante de sinalização a jusante de oligômero de Abeta que se liga ao receptor sigma-2.

[063] O termo "composto de antagonista de receptor sigma-2" refere-se a uma molécula que se liga a um receptor sigma-2 em uma quantidade mensurável e atua como um antagonista funcional no que diz respeito a efeitos de disfunção sináptica induzida por oligômero de Abeta resultantes de ligação do receptor sigma- 2.

[064] O termo "seletividade" ou "seletivo" refere-se a uma diferença na afinidade de ligação de um composto (Ki) Para um receptor sigma, por exemplo, um receptor sigma-2, em comparação com um receptor não-sigma. Os antagonistas de sigma-2 possuem uma elevada seletividade para receptores sigma em neurónios sinápticos. A Ki para um receptor sigma-2, ou ambos um sigma-2 e um receptor de sigma-1 é comparada com a Ki para um receptor não-sigma. Em algumas modalidades, o antagonista seletivo do receptor sigma-2, ou ligante do receptor sigma-1, tem, pelo menos, 10 vezes, 20 vezes, 30 vezes, 50 vezes, 70 vezes, 100 vezes ou 500 vezes uma afinidade mais elevada, ou mais, para a ligação a um receptor sigma em relação a um receptor não-sigma como avaliado pela comparação de valores de Ki de constante de dissociação de ligação, ou valores IC50, ou constante de ligação, em receptores diferentes. Qualquer protocolo de ensaio conhecido pode ser utilizado para avaliar os valores de Ki ou IC50 nos receptores diferentes, por exemplo, por monitorização do deslocamento competitivo de receptores de um composto radiomarcado com uma constante de dissociação conhecida, por exemplo, pelo método de Cheng e Prusoff (1973) (Biochem. Pharmacol. 22, 3099-3108), ou especificamente como aqui fornecido. Em algumas modalidades, o composto de antagonista de sigma-2 é um anticorpo, ou fragmento de ligação ativo respectivo, específico para a ligação a um receptor sigma-2 em relação a um receptor não-sigma. No caso de um anticorpo, ou fragmento, constantes de ligação a um receptor sigma-2, ou fragmento, podem ser calculadas e comparadas com as constantes de ligação a um receptor não-sigma por quaisquer meios conhecidos na técnica, por exemplo, pelo método de Beatty et al., 1987, J Immunol Meth, 100(1-2):173-179, ou o método de Chalquest, 1988, J. Clin. Microbiol. 26(12): 2561-2563. O receptor não-sigma é, por exemplo, selecionado a partir de um receptor M1-M4 muscarínico, receptor de serotonina (5- HT), receptor adrenérgico alfa, receptor adrenérgico beta, receptor de opióide, transportador de serotonina, transportador de dopamina, transportador adrenérgico, receptor de dopamina ou receptor de NMDA.

[065] No presente pedido, o termo "afinidade elevada" pretende significar um composto que exibe um valor de Ki inferior a 600 nM, 500 nM, 400 nM, 300 nM, 200 nM, inferior a 150 nM, inferior a 100 nM, menos do que 80 nM, menos do que 60 nM, ou preferivelmente inferior a 50 nM em um ensaio de ligação de receptor sigma, por exemplo, contra [3H]-DTG, tal como descrito por Weber et al., Proc. Natl. Acad. Sci (USA) 83: 8784-8788 (1986), aqui incorporado por referência, que mede a afinidade de ligação dos compostos em relação a ambos os locais de receptores sigma-1 e sigma-2. Ligantes de sigma especialmente preferenciais exibem valores de Ki de menos do que cerca de 150 nM, de preferência menos do que 100 nM, menos do que cerca de 60 nM, menos do que cerca de 10 nM, ou inferior a cerca de 1 nM contra [3H]-DTG.

[066] O termo "fenótipo terapêutico" é utilizado para descrever um padrão de atividade para os compostos nos ensaios in vitro que é indicativo de eficácia comportamental. Diz-se que um composto que (1) se liga seletivamente com elevada afinidade a um receptor sigma-2, e (2) atua como um antagonista funcional no que diz respeito a efeitos induzidos por oligômero de Abeta em um neurónio, tem o "fenótipo terapêutico" se (i) que bloqueia ou reduz défices de tráfico de membrana induzidos por Aβ; (ii) que bloqueia ou reduz perda sináptica induzida por Aβ e (iii) que não afeta o tráfico ou o número de sinapses na ausência de oligômero de Abeta. Este padrão de atividade nos ensaios in vitro é denominado "fenótipo terapêutico" e é preditivo da eficácia comportamental.

[067] O termo "perfil terapêutico" é utilizado para descrever um composto que se encontra com o fenótipo terapêutico, e também tem boa penetrabilidade do cérebro (a capacidade de atravessar a barreira hematoencefálica), boa estabilidade no plasma e uma boa estabilidade metabólica.

[068] O termo "propriedades medicamentosas" é aqui utilizado para descrever as características farmacocinéticas e de estabilidade dos ligantes de receptores sigma-2 após a administração; incluindo penetrabilidade do cérebro, a estabilidade metabólica e/ou a estabilidade do plasma.

[069] "Espécies de Abeta" ou "Aβ" deverão incluir composições compreendendo componentes contendo peptídeos de amiloide solúvel, tais como monómeros de Abeta, oligômeros de Abeta, ou complexos de peptídeo de Abeta (na forma monomérica, dimérica ou polimérica), com outros peptídeos solúveis ou proteínas, bem como outros conjuntos de Abeta solúveis, incluindo qualquer produto processado da proteína precursora da amiloide. oligômeros solúveis de β são conhecidos por serem neurotóxicos. Mesmo dímeros de Aβ1-42 são conhecidos por afetar plasticidade sináptica em fatias de hipocampo de rato. Em uma teoria conhecida na técnica, monômeros nativos de Aβ1-42 são considerados neuroprotetores e auto-associação de monómeros Aβ em oligômeros Abeta solúveis é necessária para a neurotoxicidade. No entanto, alguns monómeros de Aβ mutantes (mutação ártica (E22G) são relatados associando-se com a DA familiar. Ver, por exemplo, Giuffrida et al., β-Amyloid monomers are neuroprotective. J. Neurosci. 2009 29(34):10582-10587. Exemplos não limitativos das preparações compreendendo espécies de Abeta são divulgados no pedido de patente U.S. de número de série 13/021.872; Publicação de Patente U.S. 2010/0240868; Pedido de Patente Internacional WO/2004/067561; Pedido de Patente Internacional WO/2010/011947; Publicação de Patente U.S. 20070098721; Publicação de Patente U.S. 20100209346; Pedido de Patente Internacional WO/2007/005359; Publicação de Patente U.S. 20080044356; Publicação de Patente U.S. 20070218491; WO/2007/126473; Publicação de Patente U.S. 20050074763; Pedido Internacional de Patente WO/2007/126473, Pedido de Patente Internacional WO/2009/048631, e na Publicação de Patente U.S. 20080044406, cada um dos quais é aqui incorporado por referência.

[070] "Administrar", quando utilizado em conjunto com os compostos da presente descrição, significa administrar diretamente um composto no interior ou sobre um tecido-alvo ou administrar um composto sistemicamente ou localmente a um paciente ou outro sujeito.

[071] O termo "animal" tal como aqui utilizado, inclui, mas não se limita aos seres humanos e vertebrados não humanos, tais como animais selvagens, experimentais, domésticos e de fazenda e animais de estimação.

[072] Tal como aqui utilizados, os termos "sujeito", "indivíduo" e "paciente," são utilizados indiferentemente e referem-se a qualquer animal, incluindo mamíferos, camundongos, ratos, outros roedores, coelhos, cães, gatos, suínos, bovinos, ovinos, cavalos, primatas, primatas não humanos, seres humanos, e outros semelhantes.

[073] Tal como aqui utilizado, o termo "contatar" refere-se a trazer em conjunto ou combinar moléculas (ou de uma molécula com uma estrutura de ordem superior, tais como uma membrana celular ou uma célula) de tal modo que elas estão dentro de uma distância que permite interações intermoleculares tais como a interação não-covalente entre dois peptídeos ou uma proteína e outra proteína ou outra molécula, tal como uma pequena molécula. Em algumas modalidades, o contato ocorre em uma solução na qual as moléculas combinadas ou contatadas são misturadas num solvente comum e estão autorizadas a associarem-se livremente. Em algumas modalidades, o contato pode ocorrer a ou de outra forma dentro de uma célula ou num ambiente isento de células. Em algumas modalidades, o meio isento de células é o lixado produzido a partir de uma célula. Em algumas modalidades, um lixado celular pode ser um lixado de células inteiras, lixado nuclear, lixado de citoplasma, e suas combinações. Em algumas modalidades, o lixado livre de células é lixado obtido a partir de uma extração e isolamento nuclear, em que os núcleos de uma população de células são removidos das células e, em seguida, lixados. Em algumas modalidades, os núcleos não são lixados mas ainda são considerados como sendo um ambiente isento de células. As moléculas podem ser reunidas por misturas tais como vórtice, agitação e semelhantes.

[074] O termo "melhora" é utilizado para transmitir que a divulgação muda tanto as características e/ou os atributos físicos do tecido a que está sendo fornecida, aplicada ou administrada. O termo "melhora" pode também ser utilizado em conjunto com um estado de doença de tal modo que quando um estado de doença é "melhorado" os sintomas ou as características físicas associadas com o estado de doença são diminuídos, reduzidos, eliminados, atrasados ou evitados.

[075] O termo "inibir" inclui o bloqueio, a aversão de um determinado resultado ou processo, ou o restabelecimento do resultado inverso ou processo. Em termos de profilaxia ou tratamento por administração de um composto da divulgação, "inibir" inclui proteger contra (parcialmente ou totalmente) ou atrasar o aparecimento de sintomas, aliviar os sintomas, ou proteger contra, diminuir ou eliminar a doença, condição ou distúrbio.

[076] O termo "défices de tráfico de inibição" refere-se à capacidade de bloquear os défices de tráfico de membrana induzido por oligômero de A solúvel em uma célula, preferencialmente uma célula neuronal. Um composto capaz de inibir défices de tráfico tem um EC50 <20 μM, menos de 15 μM, menos do que 10 μM, menos do que 5 μM, e de preferência menos do que 1μM no ensaio de transporte de membrana, e ainda é capaz de pelo menos 50%, de preferência pelo menos 60%, e mais preferencialmente pelo menos 70% de inibição máxima dos efeitos de oligômero de Abeta de défices de tráfico de membrana induzidos por oligômeros de Abeta solúveis, por exemplo, tal como descrito no exemplo 6.

[077] O termo "log P" refere-se ao coeficiente de partição de um composto. O coeficiente de partição é a razão entre as concentrações de composto não ionizado em cada uma das duas fases da solução, por exemplo, octano e água. Para medir o coeficiente de partição de compostos solutos ionizáveis, o pH da fase aquosa é ajustado de tal modo que a forma predominante do composto é não ionizada. O logaritmo da razão de concentrações do composto de soluto não ionizado nos solventes é chamado de log P. O log P é uma medida da lipofílica. Por exemplo:

[078] Em vários lugares no presente relatório descritivo, os substituintes de compostos da divulgação são divulgados em grupos ou em intervalos. Pretende-se especificamente que modalidades da divulgação inclua toda e qualquer subcombinação individual dos membros desses grupos e intervalos. Por exemplo, o termo "C1-6 alquil "destina-se especificamente a divulgar individualmente por exemplo metil(C1 alquil), etil(C2 alquil), C3 alquil, C4 alquil, C5 alquil, e C6 alquil, assim como, por exemplo, C1-C2 alquil, C1-C3 alquil, C1-C4 alquil, C2-C3 alquil, C2-C4 alquil, C3-C6 alquil, C4-C5 alquil, e C5-C6 alquil.

[079] Para os compostos da divulgação nos quais aparece uma variável mais de uma vez, cada variável pode ser uma fração diferente selecionada do grupo Marrâkush que define a variável. Por exemplo, se uma estrutura for descrita como tendo dois grupos R que estão simultaneamente presentes no mesmo composto, então os dois grupos R podem representar frações diferentes selecionadas a partir do grupo Marrâkush definido para R.

[080] O termo "de n membros", onde n é um número inteiro, normalmente descreve o número de átomos formadores do anel em uma fração, onde o número de átomos formados do anel é n. Por exemplo, piridina é um exemplo de um anel heteroaril de 6 membros e tiofeno é um exemplo de um grupo heteroaril de 5 membros.

[081] Tal como aqui utilizado, o termo "alquil" pretende referir-se a um grupo hidrocarboneto saturado que é de cadeia linear ou ramificada. Exemplos de grupos alquil incluem, mas não estão limitados a metil (Me), etilo (Et), propila (por exemplo, N-propila e isotropia), butilo (por exemplo, N-butilo, isobutil, t-butilo), pentil (por exemplo, n-pentil, isopentil, neopentil) e semelhantes. Um grupo alquil pode conter de 1 a cerca de 20, de 2 a cerca de 20, de 1 a cerca de 10, de 1 a cerca de 8, de 1 a cerca de 6, de 1 a cerca de 4, ou de 1 a cerca de 3 átomos de carbono. O termo "alquileno" refere-se a um grupo ligante de alquil divalente. Um exemplo de alquileno é metileno (CH2).

[082] Tal como aqui utilizado, "alquenil" refere-se a um grupo alquil possuindo uma ou mais ligações duplas carbono-carbono. Exemplos de grupos alquenil incluem, mas não estão limitados a etenil, propenil, ciclo-hexenil e semelhantes. O termo "alquenilenil" refere-se a um grupo alquenil de ligação divalente.

[083] Tal como aqui utilizado, "alquinil" refere-se a um grupo alquil possuindo uma ou mais ligações carbono-carbono triplas. Grupos alquinil de exemplo incluem, mas não estão limitados a etinil, propinil e similares. O termo "alquinilenil" refere-se a um grupo alquinil divalente ligante.

[084] Tal como aqui utilizado, "haloalquil" refere-se a um grupo alquil possuindo um ou mais substituintes de halogênio selecionados a partir de F, Cl, Br, e/ou I. Exemplos de grupos haloalquil incluem mas não estão limitados a CF3, C2F5, CHF2, CCl3, CHCl2, C2Cl5, CH2CF3 e similares.

[085] Tal como aqui utilizado, "aril" refere-se a hidrocarbonetos monocíclicos ou policíclicos (por exemplo, tendo dois, três ou quatro anéis fundidos) aromáticos tais como, por exemplo, fenil, naftil, antracenil, fenantrenil, indanil, indenil e similares. Em algumas modalidades, os grupos aril têm de 6 a cerca de 20 átomos de carbono. Em algumas modalidades, os grupos aril têm de 6 a cerca de 10 átomos de carbono.

[086] Conforme usado neste documento, “cicloalquil” significa hidrocarbonetos cíclicos não-aromáticos, incluindo grupos alquil, alquenil e alquinil em ciclos que contêm até 20 átomos de carbono formadores de anel. Os grupos cicloalquil podem incluir sistemas de anéis mono- ou policíclicos (por exemplo, tendo 2, 3 ou 4 anéis fundidos), assim como sistemas de anel espiro. Um grupo cicloalquil pode conter de 3 a cerca de 15, de 3 a cerca de 10, de 3 a cerca de 8, de 3 a cerca de 6, de 4 a cerca de 6, de 3 a cerca de 5, ou de 5 a cerca de 6 átomos de carbono que formam anel. Os átomos de carbono formadores de anel de um grupo cicloalquil podem ser opcionalmente substituídos por oxo ou sulfido. Exemplos de grupos cicloalquil incluem, mas não estão limitados a, ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil, cicloheptil, ciclopentenil, ciclohexenil, ciclohexadienil, cicloheptatrienil, norbornil, norpinil, norcarnil, adamantil e similares. Também estão incluídas na definição de cicloalquil frações que têm um ou mais anéis aromáticos fundidos (isto é, possuindo uma ligação em comum com) ao anel cicloalquil, por exemplo, benzo ou tienil derivados de pentano, penteno, hexano e semelhantes ( por exemplo, 2,3-di-hidro-1H-indeno-1-il ou 1H-inden-2(3H)-ona-1- il). Preferivelmente, "cicloalquil" refere-se a grupos alquil ciclizados que contêm até 20 átomos de carbono que formam o anel. Exemplos de cicloalquil incluem, de preferência, ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclo-hexil, ciclo-heptil, adamantil e similares

[087] Conforme usado neste documento, grupos "heteroaril" significam um heterociclo aromático tendo até 20 átomos formadores de anel e tendo pelo menos um membro de anel de heteroátomo (átomo formador de anel), tal como enxofre, oxigênio ou nitrogênio. Em algumas modalidades, o grupo heteroaril tem pelo menos um ou mais átomos formadores de anel de heteroátomo, cada um, independentemente, selecionado de enxofre, oxigênio e nitrogênio. Os grupos heteroaril incluem sistemas monocíclicos e policíclicos (por exemplo, tende 2, 3 ou 4 anéis fundidos). Exemplos de grupos heteroaril incluem, sem limitação, piridil, pirimidinil, pirazinil, piridazinil, triazinil, furil, quinolil, isoquinolil, tienil, imidazolil, tiazolil, indolil, pirril, oxazolil, benzofuril, benzotienil, benzotiazolil, isoxazolil, pirazolil, triazolil, tetrazolil, indazolil, 1,2,4-tiadiazolil, isotiazolil, benzotienil, purinil, carbazolil, benzimidazolil, indolinil e semelhantes. Em algumas modalidades, o grupo heteroaril tem desde 1 até cerca de 20 átomos de carbono, e em outras modalidades de cerca de 1 a cerca de 5, desde cerca de 1 até cerca de 4, a partir de cerca de 1 a cerca de 3, de cerca de 1 a cerca de 2, átomos de carbono como átomos que formam o anel. Em algumas modalidades, o grupo heteroaril contém de 3 a cerca de 14, 3 até cerca de 7, ou 5 a 6 átomos que formam o anel. Em algumas modalidades, o grupo heteroaril tem 1 a cerca de 4, 1 a cerca de 3, ou 1 a 2 heteroátomos.

[088] Conforme usado neste documento, "heterocicloalquil" significa heterociclos não-aromáticos tendo até 20 átomos formadores de anel, incluindo grupos alquil, alquenil e alquinil em ciclos, onde um ou mais dos átomos formadores de anel são substituídos por um heteroátomo, tal como um átomo de O, N ou S. Os grupos heterocicloalquil podem ser mono ou policíclicos (por exemplo, ambos os sistemas fundidos e espiro). Exemplos de grupos "heterocicloalquil" incluem morfolino, tiomorfolino, piperazinil, tetra-hidrofuranil, tetra-hidrotienil, 2,3-di- hidrobenzofuril, 1,3-benzodioxol, benzo-1,4-dioxano, piperidinil, pirrolidinil, isoxazolidinil, isotiazolidinil, pirazolidinil, oxazolidinil, tiazolidinil, imidazolidinil, pirrolidin-2-ona-3-il, e semelhantes. Os átomos de carbono e heteroátomos formadores de anel do grupo heterocicloalquil podem ser opcionalmente substituídos por oxo ou sulfido. Por exemplo, um átomo de S formador de anel pode ser substituído por 1 ou 2 oxo [ou seja, forma um S(O) ou S(O)2]. Por outro exemplo, um átomo de C formador de anel pode ser substituído por oxo (ou seja, forma carbonil). Também estão incluídos na definição de heterocicloalquil radicais que têm um ou mais anéis aromáticos fundidos (isto é, possuindo uma ligação em comum com) ao anel heterocíclico não aromático, por exemplo piridinil, tiofenil, ftalimidil, naftalimidil e derivados de benzo de heterociclos tais como indolina, isoindolina, isoindolin-1-ona-3-il, 4,5,6,7-tetra-hidrotieno[2,3-c]piridina-5-il, 5,6-di- hidrotieno[2,3-c]piridin-7(4H)-ona-5-il, e grupos 3,4-di-hidroisoquinolin-1(2H)-ona- 3-il. Os átomos de carbono e heteroátomos formadores de anel do grupo heterocicloalquil podem ser opcionalmente substituídos por oxo ou sulfido. Em algumas modalidades, o grupo heterocicloalquil tem desde 1 até cerca de 20 átomos de carbono, e em outras modalidades de cerca de 3 a cerca de 20 átomos de carbono. Em algumas modalidades, o grupo heterocicloalquil contém de 3 a cerca de 14, 3 até cerca de 7, ou 5 a 6 átomos que formam o anel. Em algumas modalidades, o grupo heterocicloalquil tem 1 a cerca de 4, 1 a cerca de 3, ou 1 a 2 heteroátomos. Em algumas modalidades, o grupo heterocicloalquil contém de 0 a 3 ligações duplas. Em algumas modalidades, o grupo heterocicloalquil contém de 0 a 2 ligações triplas.

[089] Tal como aqui usado, "halo" ou "halogênio" inclui flúor, cloro, bromo, e iodo.

[090] Tal como aqui utilizado, "alcoxi" refere-se a um grupo -O-alquil. Exemplos de grupos alcóci incluem metóxi, etóxi, propóxi (por exemplo, propóxi e isopropóxi), t-butóxi e semelhantes.

[091] Tal como aqui utilizado, "haloalcoxi" refere-se a um grupo -O- haloalquil. Um grupo haloalcoxi exemplificativo é OCF3. Tal como aqui utilizado, "halometoxi" refere-se a um grupo metoxi tendo três substituintes de halogênio. Exemplos de grupos trihalometoxil incluem, mas não estão limitados a -OCF3, - OCClF2, -OCCl3, e similares.

[092] Tal como aqui utilizado, "arilalquil" refere-se a um C1-6 alquil substituído com aril e "cicloalquilalquil" refere-se a C1-6 alquil substituído por cicloalquil.

[093] Tal como aqui utilizado, "heteroarilalquil" refere-se a um grupo C1-6 alquil substituído por um grupo heteroaril e "heterocicloalquilalquil" refere-se a um C1-6 alquil substituído por heterocicloalquil.

[094] Tal como aqui utilizado, "amino" refere-se a NH2.

[095] Tal como aqui utilizado, "alquilamino" refere-se a um grupo amino substituído por um grupo alquil.

[096] Tal como aqui utilizado, "dialquilamino" refere-se a um grupo amino substituído com dois grupos alquil.

[097] Como utilizado aqui, C(O) refere-se a C(=O).

[098] Conforme usado neste documento, o termo "opcionalmente substituído" significa que a substituição é opcional e, portanto, inclui ambos os átomos e frações substituídas e não-substituídas. Um átomo ou fração "substituída" indica que qualquer hidrogênio no átomo ou fração designada pode ser substituído por uma seleção dos grupos substituintes indicados, desde que a valência normal do átomo ou fração designada não seja excedida, e que a substituição resulte em um composto estável. Por exemplo, se um grupo metiI (isto é, CH3) é opcionalmente substituído, então 3 átomos de hidrogénio sobre o átomo de carbono podem ser substituídos com grupos substituintes, em indicado.

[099] Tal como aqui utilizado, um "efeito de beta-amiloide", por exemplo, um "efeito de beta-amiloide não-letal" ou "efeito de oligômero de Abeta", refere-se a um efeito, particularmente um efeito não-letal, em uma célula que está em contato com uma espécie de Abeta. Por exemplo, verificou-se que, quando uma célula neuronal é contatado com um oligômero de beta-amiloide solúvel ( "Abeta"), os oligômeros se ligam a um subconjunto de sinapses em um subconjunto de células neuronais in vitro. Esta ligação pode ser quantificada num ensaio medindo ligação de oligômero de Abeta in vitro, por exemplo. Outro efeito documentado de espécies de Abeta é uma redução no número de sinapses, que tem sido indicada como sendo cerca de 18% no hipocampo humano (Scheff et al, 2007) e pode ser quantificada (por exemplo, em um ensaio que mede o número de sinapses). Como outro exemplo, verificou-se que, quando uma célula neuronal é contatada com um oligômero de beta-amiloide ("Abeta"), o tráfico de membrana é modulado e alteração de tráfico membrana segue. Esta anomalia pode ser visualizada com diversos ensaios, incluindo mas não se limitando a um ensaio MTT. Por exemplo, sais de tetrazólio amarelo sofrem endocitose por células e os sais são reduzidos a formazan púrpura insolúvel por enzimas situadas no interior de vesículas na via endossomal. O nível de formazan púrpura é um reflexo do número das células que metabolizam ativamente na cultura, e a redução na quantidade de formazan é tomada como uma medida da morte celular ou toxicidade metabólica na cultura. Quando as células que são contatadas com um sal de tetrazólio amarelo são observadas através de um microscópio o formazan púrpura é primeiro visível em vesículas intracelulares que enchem a célula. Ao longo do tempo, as vesículas são exocitosadas e o formazano precipita na forma de cristais em forma de agulha sobre a superfície externa da membrana do plasma como o formazano insolúvel é exposto ao ambiente de meios aquosos. Ainda outros efeitos de espécies de Abeta incluem declínio cognitivo, tal como um declínio na capacidade de formar novas memórias e perda de memória que pode ser medida em ensaios utilizando modelos animais in vivo. Em algumas modalidades, um efeito de Abeta é selecionado a partir de disfunção sináptica induzida por oligômero de Abeta, por exemplo, como visto num ensaio in vitro, tal como um ensaio de transporte de membrana, ou um ensaio de perda de sinapse, ou ativação do receptor de Sigma-2 mediada por oligômero de Abeta de caspase-3, ou disfunção neuronal induzida por Abeta, diminuição na potenciação a longo prazo (LTP) mediada por Abeta, ou em declínio cognitivo em um ensaio comportamental, ou num paciente em necessidade do mesmo.

[0100] Em algumas modalidades, um composto de teste é dito eficaz para tratar o declínio cognitivo ou uma doença associada com o mesmo quando ele pode inibir um efeito relacionado com espécies oligoméricas de Abeta solúveis em uma célula neuronal por mais do que cerca de 10%, de preferência mais do que 15%, e de preferência mais do que 20% em comparação com um controle negativo. Em algumas modalidades, um agente de teste é dito ser eficaz quando pode inibir um produto processado do efeito mediado por proteína precursora de amiloide por mais do que cerca de 10%, de preferência mais do que 15%, e de preferência mais do que 20% em comparação com um controle positivo . Por exemplo, como mostrado nos Exemplos adiante, a inibição da ligação de oligômero de Abeta por apenas 18% inibe completamente a redução de sinapse. Por exemplo, ver Figuras 3C e 3D. Embora a especificação atual centre-se na inibição de efeitos não letais das espécies de Abeta, tais como anormalidades no metabolismo neuronal e redução do número de sinapse, estas são mostradas correlacionando-se com função cognitiva e são além disso esperadas, ao longo do tempo, por resultar em redução (em comparação com indivíduos não tratados) dos sintomas mensuráveis a jusante da patologia amiloide, nomeadamente os sintomas clínicos tais como 1) acumulação de fibrila ou placa medida por agentes de imagiologia de amiloide tais como fluorbetapir, PittB ou qualquer outro agente da imagiologia, 2) perda de sinapse ou morte celular medida pelo hipometabolismo de glicose detectado com FDG-PET, ou 3) mudanças na expressão da proteína ou quantidade de metabólito no cérebro ou corpo detectáveis por detecção de imagem ou proteína/metabólito no líquido cefalorraquidiano, biópsias cerebrais ou plasma obtidos de pacientes por ELISA (tais como alterações nos níveis e/ou razões de Abeta 42 , tau fosforilado, tau total medido por ELISA ou padrões de mudanças de expressão de proteínas detectáveis em um painel de ELISA (ver referência: Wyss-Coray T. et al. Modeling of pathological traits in Alzheimer's disease based on systemic extracellular signaling proteome. Mol Cell Proteomics 2011 08 de julho, que é aqui incorporado por referência na sua totalidade), 4) anormalidades vasculares cerebrais tal como medidas pela presença de edema vascular ou microhemorragias detectáveis por ressonância magnética e quaisquer outros sintomas detectáveis por técnicas de imagem, e 5) a perda cognitiva tal como medida por qualquer teste cognitivo administrado como ADAS-Cog, MMSE, CBIC ou qualquer outro instrumento de teste cognitivo.

[0101] Tal como aqui utilizado, o termo "uma célula neuronal" pode ser usado para se referir a uma única célula ou de uma população de células. Em algumas modalidades, a célula neuronal é uma célula neuronal primária. Em algumas modalidades, a célula neuronal é uma célula neuronal imortalizada ou transformada ou uma célula estaminal. Uma célula neuronal primária é uma célula neuronal que não pode diferenciar-se em outros tipos de células neuronais, tais como células da glia. Uma célula-tronco é uma que pode diferenciar-se em neurónios e outros tipos de células neuronais, tais como células gliais. Em algumas modalidades, os ensaios utilizam uma composição que compreende pelo menos uma célula neuronal que é livre de células gliais. Em algumas modalidades, a composição compreende menos do que cerca de 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, ou 1% de células gliais, que são conhecidos por internalizar e acumular Abeta. A célula neuronal primária pode ser derivada a partir de qualquer área do cérebro de um animal. Em algumas modalidades, a célula é uma célula neuronal do hipocampo ou cortical. A presença de células de glia pode ser determinada por qualquer método. Em algumas modalidades, as células de glia são detectadas pela presença de GFAP e os neurónios podem ser detectados por coloração positiva com anticorpos dirigidos contra MAP2.

[0102] A frase "farmaceuticamente aceitável" refere-se a entidades moleculares e composições que são geralmente consideradas como seguras e não tóxicas. Em particular, os carreadores farmaceuticamente aceitáveis, diluentes ou outros excipientes utilizados nas composições farmacêuticas da presente memória descritiva são fisiologicamente toleráveis, compatíveis com outros ingredientes, e tipicamente não produzem uma reação desfavorável alérgica ou semelhante (por exemplo, perturbação gástrica, tonturas e similares ) quando administrados a um paciente. De um modo preferencial, como aqui utilizado, o termo "farmaceuticamente aceitável" significa aprovado por uma agência reguladora do governo federal ou de um governo estatal ou listado na Farmacopeia dos EUA ou outras farmacopeias geralmente reconhecidas para uso em animais, e mais particularmente em seres humanos. A frase "sal(is) farmaceuticamente aceitável(is)", tal como aqui utilizada, inclui os sais de compostos da divulgação que são seguros e eficazes para utilização em mamíferos, e que possuem a atividade biológica desejada. Os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de grupos acídicos ou básicos presentes nos compostos da divulgação ou em compostos identificados de acordo com os métodos da divulgação. Os sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados a sais de cloridrato, bromidrato, iodidrato, nitrato, sulfato, bissulfato, fosfato, fosfato ácido, isonicotinato, acetato, lactato, salicilato, citrato, tartarato, pantotenato, bitartarato, ascorbato, succinato, maleato, gentisinato, fumarato, gluconato, glucaronato, sacarato, formato, benzoato, glutamato, metanossulfonato, etanossulfonato, benzenossulfonato, p-toluenossulfonato e pamoato (isto é, 1,1'-metileno-bis-(2- hidroxi-3-naftoato)). Certos compostos da invenção podem formar sais farmaceuticamente aceitáveis com vários aminoácidos. Os sais de bases adequados incluem, mas não estão limitados a sais de alumínio, cálcio, lítio, magnésio, potássio, sódio, zinco, ferro e de dietanolamina. Os sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis também são formados com aminas, tais como aminas orgânicas. Exemplos de aminas adequadas são N,N'- dibenziletilenodiamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, diciclo-hexilamina, etilenodiamina, N-metilglucamina e procaína.

[0103] Tal como aqui utilizado, o termo "terapêutico" significa um agente utilizado para tratar, combater, atenuar, melhorar ou proteger contra uma condição indesejável ou doença de um sujeito.

[0104] Tal como aqui utilizado, o termo "quantidade eficaz" refere-se a uma quantidade que resulta na inibição mensurável de pelo menos um sintoma ou parâmetro de um distúrbio específico ou processo patológico. Por exemplo, uma quantidade de um ligante de sigma-2 da divulgação que proporciona uma redução de sinapse mensuravelmente inferior na presença de oligômero de Abeta qualifica- se como uma quantidade eficaz, pois reduz um processo patológico, mesmo que não apresente sintomas clínicos de patologia de amiloide alterados, ao menos imediatamente.

[0105] Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" ou "quantidade eficaz" de um composto ou composição da divulgação é uma quantidade pré- determinada, que confere um efeito terapêutico no indivíduo tratado, com uma razão benefício/risco razoável aplicável a qualquer tratamento médico. O efeito terapêutico pode ser objetivo (isto é, mensurável por algum teste ou marcador) ou subjetivo (isto é, o sujeito dá uma indicação ou sente um efeito ou o médico observa uma mudança). Uma quantidade eficaz de um composto da divulgação pode em geral variar de cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 500 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 400 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a cerca de 300 mg/kg, sobre de 0,05 a cerca de 20 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 10 mg/kg, ou cerca de 10 mg/kg a cerca de 100 mg/kg. O efeito aqui contemplado inclui a terapêutica médica e/ou tratamento profiláctico, como apropriado. A dose específica de um composto administrado de acordo com esta divulgação para se obter efeitos terapêutico e/ou profiláticos irá, evidentemente, ser determinada pelas circunstâncias particulares em torno do caso, incluindo, por exemplo, o composto administrado, a via de administração, a coadministração de outros ingredientes ativos, a condição a ser tratada, a atividade do composto específico empregue, a composição específica empregue, a idade, peso corporal, saúde geral, sexo e dieta do paciente; o tempo de administração, via de administração, e taxa de excreção do composto específico utilizado e a duração do tratamento ; A quantidade efetiva administrada será determinada pelo médico à luz das circunstâncias relevantes que precedem e o exercício de uma avaliação médica idônea. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente divulgação é tipicamente uma quantidade tal que quando administrada numa composição fisiologicamente tolerável de excipiente é suficiente para atingir uma concentração sistêmica eficaz ou concentração local no tecido. A dose diária total dos compostos desta divulgação administrada a um humano ou outro animal em única ou em doses divididas pode ser em quantidades, por exemplo, a partir de 0,01 mg/kg a cerca de 500 mg/kg, cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 400 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a cerca de 300 mg/kg, cerca de 10 mg/kg a cerca de 100 mg/kg, ou mais usualmente de 0,1 a 25 mg/kg de peso corporal por dia. As composições de dose única podem conter tais quantidades ou seus submúltiplos para perfazer a dose diária. Em geral, os regimes de tratamento de acordo com a divulgação compreendem a administração a um paciente com necessidade de um tal tratamento inclui, normalmente, desde cerca de 1 mg a cerca de 5000 mg, 10 mg a cerca de 2000 mg do composto(s), 20 a 1000 mg, de preferência 20 a 500 mg e mais preferencialmente cerca de 50 mg, de um composto de acordo com a Fórmula I, e/ou Fórmula II, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável por dia em doses únicas ou múltiplas.

[0106] Os termos "tratar", "tratado" ou "tratamento" como aqui utilizados referem-se tanto a tratamento terapêutico como a medidas profiláticas ou preventivas, em que o objetivo é o de proteger contra (parcialmente ou totalmente) ou abrandar (por exemplo, diminuir ou adiar a aparecimento de) uma indesejável condição fisiológica, distúrbio ou doença, ou para obter resultados clínicos benéficos ou desejados, tais como restabelecimento parcial ou total ou de inibição em declínio de um parâmetro, valor ou a função de resultado que se tornou ou que se tornará anormal. Para os fins desta descrição, os resultados clínicos benéficos ou desejados incluem, mas não estão limitados a alívio de sintomas; diminuição da extensão ou vigor ou a taxa de desenvolvimento da condição, distúrbio ou doença; estabilização (ou seja, sem piorar) do estado da doença, distúrbio ou doença; atraso no aparecimento ou abrandamento da progressão da doença, distúrbio ou doença; melhoramento da condição, distúrbio ou estado de doença; e remissão (parcial ou total), se ou não traduz a diminuição imediata dos sintomas clínicos reais, ou a valorização ou a melhoria da condição, distúrbio ou doença. Tratamento pretende suscitar uma resposta clinicamente significativa, sem níveis excessivos de efeitos secundários. Tratamento também inclui o prolongamento da sobrevida, em comparação à sobrevida esperada se não receber tratamento.

[0107] De um modo geral, o termo "tecido" refere-se a qualquer agregação de células similarmente especializadas que estão unidas no desempenho de uma função particular.

[0108] Tal como aqui utilizado, "declínio cognitivo" pode ser qualquer variação negativa na função cognitiva de um animal. Por exemplo, declínio cognitivo inclui mas não está limitado a perda de memória (por exemplo, perda de memória comportamental), a incapacidade de adquirir novas memórias, confusão, julgamento deficiente, alterações de personalidade, desorientação, ou qualquer combinação dos mesmos. Um composto que é eficaz para tratar o declínio cognitivo pode ser, assim, eficaz, restaurando a potenciação de longo prazo neuronal (LTP) ou depressão a longo termo neuronal (LTD) ou um equilíbrio de plasticidade sináptica medido eletrofisiologicamente; por inibir, tratar, e/ou reduzir a neurodegeneração; por inibir, tratar, e/ou reduzir a amiloidose geral; inibição, tratamento, redução de uma ou mais dentre a produção de amiloide, montagem de amiloide, agregação de amiloide, e ligação de oligômero de amiloide; por inibir, tratar, e/ou reduzir um efeito não-letal de uma ou mais espécies de Abeta em uma célula neuronal (tais como perda de sinapse ou disfunção e tráfico de membrana anormal); e qualquer combinação dos mesmos. Para além disso, o composto também pode ser eficaz no tratamento de doenças neurodegenerativas relacionadas a Abeta e distúrbios incluindo, mas não se limitando a demência, incluindo mas não se limitando a Doença de Alzheimer (AD), incluindo a doença de Alzheimer leve, síndrome de Down, demência vascular (angiopatia amiloide cerebral e enfarte ), a demência com corpos de Lewy, demência de HIV, comprometimento cognitivo leve (MCI); comprometimento cognitivo relacionado à idade (AAMI); declínio cognitivo relacionado à idade (DCRI), doença pré-clínica de Alzheimer (PCAD); e comprometimento cognitivo sem demência (CIND).

[0109] Tal como aqui utilizado, o termo "ligante natural" refere-se a um ligante presente num sujeito que se pode ligar a uma proteína, receptor, lipídios de membrana ou outro parceiro de ligação in vivo ou que é replicado in vitro. O ligante natural pode ser de origem sintética, mas deve também estar presente naturalmente e sem a intervenção humana no sujeito. Por exemplo, oligômeros de Abeta são conhecidos em seres humanos. Por conseguinte, os oligômeros de Abeta encontrados num indivíduo seriam considerados ligantes naturais. A ligação de oligômeros de Abeta a um parceiro de ligação podem ser replicadas in vitro usando técnicas recombinantes ou sintéticas, mas o oligômero de Abeta ainda seria considerado um ligante natural independentemente da forma como o oligômero de Abeta é preparado ou fabricado. Uma pequena molécula sintética que pode também ligar-se ao mesmo parceiro de ligação não é um ligante natural, se ela não existe num sujeito. Por exemplo, os compostos de isoindolina que são aqui descritos não estão normalmente presentes num sujeito, e, portanto, não seriam considerados ligantes naturais.

[0110] Beta-amiloide humana

[0111] Superprodução e acúmulo de beta-amiloide é uma característica patológica da doença de Alzheimer. Beta-amiloide humana (Abeta) é o principal componente de placas-depósitos de amiloide insolúveis encontradas no cérebro de pacientes com a doença de Alzheimer. As placas são compostas por agregados fibrilares de Abeta. Fibrilas de beta-amiloide têm sido associadas com os estágios avançados da doença de Alzheimer.

[0112] A marca cognitiva precoce da doença de Alzheimer (DA) é uma incapacidade extraordinária de formar novas memórias. Perda de memória precoce é considerada uma falha de sinapse causada por oligômeros solúveis de Aβ. Estes oligômeros bloqueiam potenciação a longo prazo, um paradigma experimental clássico para a plasticidade sináptica, e eles são surpreendentemente elevados em tecido de cérebro de DA e modelos transgênicos de DA. Postula-se que a perda de memória cedo decorre de falha de sinapse antes de morte neuronal e que a falha de sinapse decorre das ações de oligômeros solúveis de Aβ em vez de fibrilas. Lacor et al., Synaptic targeting by Alzheimer’s-related amyloid β oligomers, J. Neurosci. 2004, 24(45):10191-10200.

[0113] Abeta é um produto de clivagem de uma proteína de membrana integral, proteína precursora de amiloide (APP), encontrado concentrado nas sinapses dos neurônios. As formas solúveis de Abeta estão presentes no cérebro e nos tecidos dos pacientes de Alzheimer, e a sua presença correlaciona-se com a progressão da doença. Yu et al., 2009, Structural characterization of a soluble amyloid beta-peptide oligomer, Biochemistry, 48(9):1870-1877. Oligômeros solúveis de β amiloide foram demonstrados induzindo mudanças em sinapses neuronais que bloqueiam a aprendizagem e a memória.

[0114] Oligômeros Aβ menores, solúveis interferem com um número de vias de sinalização importantes para a plasticidade sináptica normal, resultando na perda de coluna vertebral e sinapses. Selkoe et al., 2008, Soluble oligomers of the amyloid beta-protein impair synaptic plasticity and behavior, Behav Brain Res 192(1): 106-113. Alzheimer começa e persiste como uma doença de plasticidade sináptica.

[0115] A presença de um oligômeros de Aβ solúveis se acredita ser a responsável pelo declínio cognitivo no início do cérebro doente pré-Alzheimer. Sabe-se que oligômeros de beta amiloide se ligam nas sinapses neuronais e que os receptores sigma-2 estão presentes em quantidades significativas nos neurônios e células de glia.

[0116] Receptores Sigma-2

[0117] Os receptores sigma são proteínas adaptador/chaperone multifuncionais que participam de vários complexos de sinalização de proteínas distintos em uma maneira relacionada a tecido e estado. O receptor Sigma-2 é expressado no cérebro e tecidos periféricos diferentes em níveis baixos. (Walker et al., 1990 Sigma receptors: biology and function. Pharmacol. Rev. 42:355-402). Os receptores sigma-2 estão presentes no hipocampo e no córtex humano. O receptor sigma-2 também foi previamente validado como um biomarcador para a proliferação de células tumorais. (Mach et al., Sigma-2 receptors as potential biomarkers of proliferation in breast cancer. Cancer Res. 57:156-161, 1997).

[0118] Receptores sigma-2 estão implicados em muitas vias de sinalização, tais como ligação de heme, metabolismo do Citocromo P450, síntese de colesterol, sinalização de progesterona, apoptose e tráfico de membrana. Apenas um subconjunto de sítios de ligação ao receptor sigma/vias de sinalização são relevantes para sinalização de oligômero em DA. Nenhum knockout de receptor sigma-2 está atualmente disponível e mutações humanas em sequência sigma-2 não foram estudadas em um contexto de neurodegeneração.

[0119] Um receptor sigma-2 foi recentemente identificado como o componente de membrana do receptor de progesterona 1 (PGRMC1) no fígado de rato por utilização de uma sonda de fotoafinidade WC-21, que irreversivelmente rotula os receptores sigma-2 em fígado de rato. Xu et al. Identification of the PGRMC1 protein complex as the putative sigma-2 receptor binding site. Nature Communications 2, artigo número 380, 5 de julho de 2011, aqui incorporado por referência. PGRMC1 (componente de membrana do receptor de progesterona 1) foi identificado como o componente crítico de 25 kDa de atividade de receptorsigma2 em agosto de 2011 por Xu et al. PGRMC1 é uma proteína transmembranar única com homologia com proteína de sigma-1; membros da família incluem PGRMC2 e neudesina. PGRMC1 contém um domínio de ligação a heme citocromo b5. PGRMC1 é uma única proteína transmembranar com homologia com nenhuma proteína S1; membros da família incluem PGRMC2 e neudesina. PGRMC1 contém um domínio de ligação a heme citocromo b5. Ligantes PGRMC1 endógena inclui progesterona/esteroides, metabólitos de colesterol, os glicocorticoides, e heme. PGRMC1 funciona como acompanhante/adaptador associado a diferentes complexos de proteínas em diferentes localizações subcelulares (Cahill 2007. Progesterone receptor membrane component 1: an integrative review. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 105:16-36). PGRMC1 liga heme com atividade em redução, complexos com proteínas CYP450 (reações redox reguladas), associa com PAIRBP1 e medeia apoptose de bloco de progesterona , e associa com Insig-1 e SCAP para induzir a transcrição de genes relacionados com SRE em resposta ao colesterol baixo. O homólogo de C. elegans VEM1 se associa com UNC-40/DCC para mediar a orientação do axônio. PGRMC1 contém duas sequências SH2-alvo, uma sequência SH3 alvo, um sítio de tirosina quinase, dois sítios de quinase acidófila (CK2), e os sítios de ligação de consenso para ERK1 e PDK1. PGRMC1 contém várias sequências ITAM envolvidas no tráfico de membrana (transporte de vesícula, endocitose dependente de clatrina de poços contendo calveolina).

[0120] Terapêuticas de receptores sigma-2 atingiram Fase II de ensaios clínicos humanos para indicações de SNC outras, mas não para o tratamento da DA. Muitos dos ligantes do receptor sigma-2 não são muito seletivos e têm elevada afinidade para outros receptores de SNC não-sigma. Por exemplo, Cyr-101/210 (MT-Cyrenaic Pharmaceuticals; Mitsubishi) é um antagonista do receptor Sigma-2 na Fase II de ensaios clínicos para a esquizofrenia, mas tem múltiplas outras interações com os receptores, incluindo em 5HT2a, ADRA1, e H1 histamina. Siramesina (Lundbeck, Floresta Lu28179) é um agonista do receptor sigma-2, que anteriormente estava em ensaios clínicos para a ansiedade, mas foi descontinuado. Ligantes do receptor de Sigma-1 estão em ensaios clínicos para indicações do SNC diferentes. Dicloridrato de cutamesina (AGY SA4503, M’s Science Corp.) é um agonista do receptor sigma-1 que estava em fase II de testes clínicos para o enfarte e nos ensaios de fase II para a depressão. Anavex 2-73 é um agonista do receptor de Sigma-1, que também atua como nos receptores colinérgicos muscarínicos como antagonista de M2/3, agonista de M1, e é um antagonista em relação aos vários canais de íons (NMDAR, Na+, Ca++). Anavex 2-73 entrou fase IIa de ensaios clínicos em pacientes com DA e comprometimento cognitivo leve. Não há ensaios clínicos anteriores com terapêutica de ligante de receptor sigma-2 altamente seletiva em DA.

[0121] Antagonistas de Sigma-2

[0122] Embora não se estando limitado pela teoria, é proposto que o receptor sigma-2 é um receptor para oligômero de Abeta em neurónios. Vários receptores têm sido propostos na literatura para oligômeros de Abeta solúveis incluindo a proteína príon, receptor de insulina, receptor adrenérgico beta e RAGE (receptor para produtos finais de glicação avançada). Laurén, J. et al, 2009, Nature, 457(7233): 1128-1132; Townsend, M. et al, J. Biol. Chem. 2007, 282:33305-33312; Sturchler, E. et al, 2008, J. Neurosci. 28(20):5149-5158. Na verdade muitos investigadores acreditam que oligômero de Abeta pode ligar-se a mais do que uma proteína do receptor. Sem estar limitado pela teoria, com base em provas aqui apresentadas, os presentes inventores postulam um receptor adicional para oligômero de Abeta localizado (não necessariamente de forma exclusiva) em neurónios.

[0123] Sem se estar limitado pela teoria, oligômeros de Abeta são agonistas do receptor sigma que se ligam a complexos de proteína sigma e causam tráfico aberrante e perda de sinapses. Demonstrou-se aqui que ligantes de alta afinidade de sigma-2 que antagonizam esta interação e/ou função de receptores sigma em neurónios irá competir ou de outro modo interferir com oligômeros de Abeta e fazer retornar respostas neuronais ao normal. Tais ligantes são considerados antagonistas de receptores sigma-2 funcionais e são referidos como tal ou, mais simplesmente, como antagonistas de receptores sigma-2 ou como antagonistas de sigma-2.

[0124] Em algumas modalidades, o antagonista do receptor de sigma- 2 de acordo com a Fórmula I e/ou Fórmula II, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, atua como um antagonista funcional numa célula neuronal no que diz respeito à inibição de perda de sinapse induzida por oligômero solúvel de Aβ, e inibir défices induzidos por oligômero solúvel de Aβ em um ensaio de tráfico de membrana; exibindo elevada afinidade em um receptor sigma-2; bem como possuindo elevada seletividade para um ou mais receptores sigma em comparação com qualquer outro receptor não-sigma; e exibindo boas propriedades medicamentosas.

[0125] Em algumas modalidades, um antagonista de receptor sigma- 2 funcional que atende certos critérios de ensaio in vitro aqui detalhados exibirá eficácia comportamental, ou ser previsto por ter eficácia comportamental, em um ou mais modelos animais comportamentais relevantes, como revelado na presente especificação. Em algumas modalidades, a eficácia comportamental é determinada em 10 mg/kg p.o., ou menos.

[0126] Em algumas modalidades, a invenção proporciona um ensaio in vitro preditivo de plataforma de eficácia comportamental para os ligantes de receptores sigma-2 de elevada afinidade. Em conformidade com a plataforma de ensaio in vitro, o ligante liga-se com elevada afinidade a um receptor sigma-2; atua como um antagonista funcional no que diz respeito a efeitos induzidos por oligômero de Abeta em um neurónio; inibe perda sináptica induzida por oligômero de Abeta em um neurônio central ou reduz ligação de oligômero de Abeta a neurónios para inibir a perda de sinapse; e não afeta o tráfico ou o número de sinapses, na ausência de oligômero de Abeta. Este padrão de atividade nos ensaios in vitro é denominado o "fenótipo terapêutico". A capacidade de um antagonista do receptor de sigma-2 para bloquear os efeitos de oligômeros Abeta em neurônios maduros, sem afetar a função normal na ausência de oligômeros Abeta atende um critério para o fenótipo terapêutico. É agora descrito que um antagonista seletivo de sigma-2 possuindo um fenótipo terapêutico pode bloquear a disfunção sináptica induzida por oligômero de Abeta.

[0127] Em algumas modalidades, antagonistas de sigma-2 seletivos são fornecidos com o fenótipo terapêutico que também possuem as características seguintes que são adequados como candidatos terapêuticos para o tratamento da disfunção sináptica induzida por oligômero de Abeta num paciente em necessidade do mesmo: afinidade elevada nos receptores sigma; seletividade elevada para os receptores sigma, em comparação com outros receptores do SNC não-sigma; maior afinidade para um receptor sigma-2, ou de afinidades comparáveis, por exemplo, dentro de uma ordem de grandeza, em receptores sigma-2 e sigma-1; seletividade para os receptores sigma, em oposição a outros receptores relevantes no sistema nervoso central e boas propriedades medicamentosas. Propriedades medicamentosas incluem penetrabilidade cerebral aceitável (a capacidade de atravessar a barreira hematoencefálica), boa estabilidade no plasma e uma boa estabilidade metabólica, por exemplo, como medido por exposição a microssomas hepáticos. Sem se estar limitado pela teoria, os antagonistas de receptores sigma- 2 de alta afinidade competem com oligômeros de Abeta, e/ou param a sinalização do receptor sigma patológica, que leva à doença de Alzheimer.

[0128] Em algumas modalidades, o antagonista da divulgação pode ligar-se com maior afinidade para o receptor sigma-1 do que para um receptor sigma-2, mas ainda tem de se comportar como um antagonista neuronal funcional no que diz respeito ao bloqueio ou inibição de um efeito induzido por oligômero de Abeta (efeito Abeta).

[0129] Em algumas modalidades, um antagonista de sigma-2 possuindo o fenótipo terapêutico que também possui as seguintes características é adequado como um candidato terapêutico para o tratamento de disfunção sináptica induzida por oligômero de Abeta num paciente em necessidade do mesmo: afinidade elevada para os receptores sigma; seletividade elevada para os receptores sigma, em comparação com outros receptores de SNC não-sigma; alta afinidade para um receptor sigma-2, ou afinidade comparável em receptores sigma- 2 e sigma-1; e boas propriedades medicamentosas. propriedades medicamentosas incluem alta penetrabilidade cerebral, a estabilidade do plasma, e estabilidade metabólica.

[0130] Em algumas modalidades, nos estudos de atividade de ligação, um valor de IC50 ou valor de Ki de no máximo cerca de 600 nM, 500 nM, 400 nM, 300 nM, 200 nM, 150 nM, 100 nM, preferivelmente no máximo cerca de 75 nM, preferivelmente no máximo cerca de 60 nM, preferivelmente no máximo cerca de 40 nM, mais de preferência no máximo de 10 nM, mais preferencialmente no máximo de 1 nM indica uma elevada afinidade de ligação em relação aos sítios de ligação de receptor sigma.

[0131] Em algumas modalidades, um antagonista de receptor sigma- 2 com elevada afinidade (de preferência com Ki menos do que cerca de 600 nM, 500 nM, 400 nM, 300 nM, 200 nM, 150 nM, 100 nM, 70 nM, 60 nM, 50 nM, 30 nM ou 10 nM) em receptores sigma-2 que têm seletividade maior do que cerca de 20 vezes, 30 vezes, 50 vezes, 70 vezes, ou de preferência maior do que 100 vezes para receptores sigma em comparação a outros não-sigma CNS ou receptores alvo, tem boas propriedades semelhantes à fármacos, incluindo penetrabilidade do cérebro e boa estabilidade metabólica e/ou do plasma, e que possuem o fenótipo terapêutico, estão previstos para terem eficácia comportamental e podem ser utilizados para tratar a disfunção sináptica induzida por oligômero de Abeta em um paciente com necessidade do mesmo.

[0132] Tal como aqui utilizado, o termo "penetrabilidade cerebral" refere-se à capacidade de uma droga, anticorpo ou fragmento de atravessar a barreira sangue-cérebro. Em algumas modalidades, um estudo farmacocinético de animais (PK), por exemplo, um estudo farmacocinético barreira/sangue-cérebro do camundongo pode ser utilizado para determinar ou prever penetrabilidade do cérebro. Em algumas modalidades várias concentrações de drogas podem ser administradas, por exemplo, a 3, 10 e 30 mg/kg, por exemplo p.o. durante 5 dias e várias propriedades de pK são medidas, por exemplo, num modelo animal. Em algumas modalidades, os níveis plasmáticos e no cérebro relacionados com a dose são determinados. Em algumas modalidades, Cmax do cérebro > 100, 300, 600, 1000, 1300, 1600, ou 1900 ng/ml. Em algumas modalidades boa penetração cerebral é definida como a razão cérebro/plasma> 0,1,> 0,3,> 0,5,> 0,7,> 0,8,> 0,9, de preferência> 1, e mais de preferência> 2, > 5 ou> 10. Em outras modalidades, boa penetrabilidade do cérebro é definida como superior a cerca de 0,1%, 1%, 5%, maior do que cerca de 10%, e preferivelmente maior do que cerca de 15% de uma dose administrada que atravessa a BBB após um período de tempo predeterminado. Em certas modalidades, a dose é administrada por via oral (p.o.). Em outras modalidades, a dose é administrada por via intravenosa (IV), antes de medir as propriedades de pK. Ensaios farmacocinéticos e penetrabilidade do cérebro são descritos no Exemplo 7.

[0133] Tal como aqui utilizado, o termo "estabilidade de plasma" refere-se à degradação de compostos no plasma, por exemplo, por enzimas tais como hidrolases e esterases. Qualquer uma de uma variedade de ensaios in vitro pode ser empregue. As drogas são incubadas em plasma durante vários períodos de tempo. O composto de origem porcento (analito) restante em cada ponto de tempo reflete a estabilidade do plasma. Características de estabilidade pobres podem tendem a ter baixa biodisponibilidade. Boa estabilidade no plasma pode ser definida como superior a 50% analito restante após 30 min, superior a 50% analito restante após 45 minutos, e de preferência maior do que 50% analito restante após 60 minutos.

[0134] Tal como aqui utilizado, o termo "estabilidade metabólica" refere-se à capacidade do composto para sobreviver primeira passagem de metabolismo (degradação intestinal e hepática ou conjugação de uma droga administrada por via oral). Isto pode ser avaliado, por exemplo, in vitro, por exposição dos compostos a camundongo ou microssomas hepáticos humanos. Em algumas modalidades, uma boa estabilidade metabólica refere-se a t 1/2 > 5 min,> 10 min,> 15 minutos,> 20 minutos, e de preferência> 30 min após a exposição de um composto a microssomas de camundongo ou hepáticos humanos. Em algumas modalidades, uma boa estabilidade metabólica refere-se a uma taxa de depuração intrínseca (Clint) de <300 uL/min/mg, de preferência < 200 uL/min/mg, e mais preferencialmente < 100 uL/min/mg.

[0135] Em algumas modalidades, são excluídos determinados compostos da técnica anterior. Em algumas modalidades, os compostos descritos na Tabela 1 são divulgados na WO2013/029057 e/ou WO2013/029060, cada um dos quais é aqui incorporado por referência, e são rejeitadas no que diz respeito às composições ou métodos aqui proporcionados.

[0136] Tabela 1. COMPOSTOS REJEITADOS

[0137] Compostos de isoindolina aqui proporcionados atuam como antagonistas funcionais de sigma-2 seletivos e de alta afinidade possuindo o fenótipo terapêutico, e boas propriedades medicamentosas, e, assim, pode ser utilizado para tratar a disfunção sináptica induzida por oligômero de Abeta.

[0138] Em certas modalidades, as composições são fornecidas compreendendo compostos de isoindolina de Fórmula I como antagonistas funcionais de sigma-2 seletivos que possuem elevada afinidade de ligação para os receptores sigma. Em algumas modalidades, os receptores sigma incluem tanto os subtipos sigma-1 e sigma-2. Ver Hellewell, S. B. e Bowen, W. D., Brain Res. 527: 224-253 (1990); e Wu, X.-Z. e col., J. Pharmacol. Exp. Ther. 257: 351-359 (1991). Um ensaio de ligação de receptor sigma que quantifica a afinidade de ligação de um ligante putativo para ambos os sítios sigma (contra 3H-DTG, que marca ambos os locais com afinidade aproximadamente igual) é descrito por Weber et al., Proc. Natl. Acad. Sci (USA) 83: 8784-8788 (1986). Alternativamente, [3H]pentozocina pode ser utilizada para marcar seletivamente o sítio de ligação sigma-1 num ensaio de ligação. Uma mistura de [3H]DTG e (+)pentazocina não marcada é utilizado para marcar seletivamente o sítio de sigma-2 num ensaio de ligação. A divulgação também é dirigida a composições compreendendo certos ligantes que são seletivos para os receptores sigma-1 e sigma-2 e atuam como antagonistas de sigma-2 funcionais, bem como a utilização destas composições para tratar a disfunção sináptica induzida por oligômero de Abeta. A descoberta de tais ligantes que são seletivos para um dos dois subtipos de receptores sigma pode ser um fator importante na identificação de compostos que são eficazes no tratamento de distúrbios do sistema nervoso central com efeitos colaterais mínimos.

[0139] Em algumas modalidades, os compostos de isoindolina de atividade de Fórmula (I) exibem antagonista de sigma-2, afinidade elevada para o receptor sigma-2, e a capacidade para bloquear a ligação de oligômero de Abeta solúvel ou disfunção sináptica induzida por oligômero de Abeta.

[0140] Em algumas modalidades, os antagonistas de sigma-2 são concebidos para melhorar a capacidade de atravessar a barreira sangue-cérebro.

[0141] Em algumas modalidades, o composto de antagonista de receptor sigma-2 bloqueia ligação específica entre oligômeros solúveis de Abeta e um receptor sigma-2.

[0142] Em algumas modalidades, o composto de antagonista de sigma-2 exibe uma elevada afinidade para o receptor sigma-2.

[0143] Ligantes de Receptor Sigma-2 Para Seleção Como Antagonistas dos Receptores Sigma-2

[0144] Em algumas modalidades, os antagonistas de receptores sigma-2 para utilização na presente invenção são selecionados dentre compostos de ligantes de receptores sigma-2 que também satisfazem os critérios de seleção adicionais. Os critérios adicionais são usados para selecionar antagonistas de receptores sigma-2 para o uso na presente divulgação dentre os ligantes de receptores sigma-2. Critérios de seleção adicionais incluem: agir como um antagonista funcional numa célula neuronal no que diz respeito à perda de sinapse induzida por inibição de oligômero solúvel de Aβ, e inibindo défices induzidos por oligômero solúvel de Aβ em um ensaio de tráfico de membrana; possuindo elevada seletividade para um ou mais receptores sigma em comparação com qualquer outro receptor não-sigma; exibindo elevada afinidade a um receptor sigma-2; e exibindo boas propriedades medicamentosas, incluindo boa penetração de cérebro, boa estabilidade metabólica e boa estabilidade plasma. Em algumas modalidades, o antagonista do receptor de Sigma-2 é adicionalmente selecionado com base em apresentar uma ou mais das propriedades adicionais seguintes: não afeta o tráfego ou o número de sinapses, na ausência de oligômero Abeta; não induz a atividade da caspase-3 em uma célula neuronal; inibe a indução de atividade caspase-3 por um agonista do receptor de sigma-2; e/ou diminui ou protege contra a toxicidade neuronal numa célula neuronal provocada por um agonista do receptor de sigma- 2.

[0145] Em algumas modalidades, certos compostos de ligantes de receptores sigma-2 sujeitos a outros critérios de seleção são selecionados a partir de compostos aqui descritos e podem ser sintetizados de acordo com os métodos aqui descritos ou em WO 2011/014880 (Pedido No. PCT/US2010/044136), WO 2010/118055 (Pedido No. PCT/US2010/030130), Pedido No. PCT/US2011/026530, WO 2012/106426 (Pedido No. PCT/US2012/023483), WO 2013/029057 (Pedido No. PCT/US2012/052572), e WO 2013/029060 (Pedido No. PCT/US2012/052578), cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade. Opções adicionais para a preparação destes compostos são discutidas em detalhe abaixo.

[0146] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 compreende um composto de Fórmula I:

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que: R1 e R2 são cada um independentemente selecionados a partir de H, C1- C6alquil, ou CH2OR'; em que R '= H ou C1-C6 alquil; R3, R4, R5, and R6 são cada um independentemente selecionados de H, C1C6 alquil, OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, O(C1-C6 alquil), OCF3, OCH2CH2OH, O(C1-C6 alquil)OH, O(C1-C6 haloalquil), F, Cl, Br, I, CF3, CN, NO2, NH2, C1-C6 haloalquil, C1-C6 hidroxialquil, C1-6 alcoxi C1-6alquil, aril, heteroaril, C3-7 cicloalquil, heterocicloalquil, alquilaril, heteroaril, CO2R’, C(O)R’, NH(C1-4 alquil), N(C1-4 alquil)2, NH(C3-7 cicloalquil), NHC(O)(C1-4 alquil), CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)O(C1-4 alquil), OC(O)N(R’)2, C(O) (C1-4 alquil), e C(O)NH(C1-4 alquil); onde n= 0, 1, ou 2; R' são cada um independentemente H, CH3, CH2CH3, C3-C6 alquil, C1-C6 haloalquil; ou opcionalmente substituído aril, alquilaril, piperazin-1-il, piperidin-1-il, morfolinil, heterocicloalquil, heteroaril, C1-6 alcoxi, NH(C1-4 alquil), ou NH(C1-4 alquil)2, em que o grupo substituído opcional é selecionado deC1-C6 alquil ou C2-C7 acil; ou R3 e R4, Em conjunto com o átomo de C ao qual eles estão ligados formam uma forma de um cicloalquil, aril, heteroaril, ou heterocicloalquil de 4-, 5-, 6- 7- ou 8- membros, que é opcionalmente substituído com 1, 2, 3, 4, ou 5 substituintes selecionados de forma independente a partir de OH, amino, halo, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcoxi, aril, arilalquil, heteroaril, heteroarilalquil, cicloalquil e heterocicloalquil e R3 e R4, ou R4 e R5, são cada um selecionado independentemente dentre uma ligação, C, N, S, e O; ou R3 e R4 estão ligados entre si para formar um grupo -O-C1-2 metileno-O-; ou R4 e R5, Em conjunto com o átomo de C ao qual eles estão ligados formam uma forma de um cicloalquil, aril, heteroaril, ou heterocicloalquil de 4-, 5-, 6- 7- ou 8- membros, que é opcionalmente substituído com 1, 2, 3, 4, ou 5 substituintes selecionados de forma independente a partir de OH, amino, halo, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcoxi, aril, arilalquil, heteroaril, heteroarilalquil, cicloalquil e heterocicloalquil e R3 e R4, ou R4 e R5, São cada um selecionado independentemente dentre uma ligação, C, N, S, e O; ou R4 e R5 estão ligados entre si para formar um grupo -O-C1-2 metileno-O-; R7, R8, R9, R10, and R11 são cada selecionados independentemente de H, C1-C6 alquil, OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, O(C1-C6 alquil), OCF3, OCH2CH2OH, O(C1-C6 alquil)OH, O(C1-C6 haloalquil), F, Cl, Br, I, CF3, CN, NO2, NH2, C1-C6 haloalquil, C1-C6 hidroxialquil, C1-6 alcoxi C1-6alquil, aril, heteroaril, C3-7 cicloalquil, heterocicloalquil, alquilaril, heteroaril, CO2R’, C(O)R’, NH(C1-4 alquil), N(C1-4 alquil)2, NH(C3-7 cicloalquil), NHC(O)(C1-4 alquil), CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)O(C1-4 alquil), OC(O)N(R’)2, C(O) (C1-4 alquil), e C(O)NH(C1-4 alquil); onde n= 0, 1, ou 2; R' são cada independentemente H, CH3, CH2CH3, C3-C6 alquil, C1-C6 haloalquil, aril, alquilaril, piperazin-1-il, piperidin-1-il, morfolinil, heterocicloalquil, heteroaril, C1-6 alcoxi, NH(C1-4 alquil) ou NH(C1-4 alquil)2; ou R7 e R8, em conjunto com o átomo de C ou N ao qual eles estão ligados formam uma forma de um grupo cicloalquil, aril, heteroaril, ou heterocicloalquil de 4-, 5-, 6- 7- ou 8- membros, que é opcionalmente substituído com 1, 2, 3, 4, ou 5 substituintes selecionados de forma independente a partir de OH, amino, halo, C16 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcoxi, aril, arilalquil, heteroaril, heteroarilalquil, cicloalquil e heterocicloalquil e R9 e R10, são cada um selecionado independentemente dentre uma ligação, C, N, S, e O; ou R7 e R8 estão ligados entre si para formar um grupo -O-C1-2 metileno-O-; ou R8 e R9, em conjunto com o átomo de C ou N ao qual eles estão ligados formam uma forma de um grupo cicloalquil, aril, heteroaril, ou heterocicloalquil de 4-, 5-, 6- 7- ou 8- membros, que é opcionalmente substituído com 1, 2, 3, 4, ou 5 substituintes selecionados de forma independente a partir de OH, amino, halo, C16 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcóxi, C1-6 haloalcoxi, aril, arilalquil, heteroaril, heteroarilalquil, cicloalquil e heterocicloalquil e R9 e R10, são cada um selecionado independentemente dentre uma ligação, C, N, S, e O; ou R8 e R9 estão ligados entre si para formar um grupo -O-C1-2 metileno-O-; em que cada um dentre O, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, heteroaril, aril, heteroaril, heterocicloalquil, e cicloalquil é, opcionalmente, independentemente substituído com 1, 2, 3, 4, ou 5 substituintes selecionados de forma independente a partir de OH, amino, halo, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcoxi, C1-6 haloalcoxi, aril, arilalquil, heteroaril, heteroarilalquilo, cicloalquil e heterocicloalquil; com a condição de que os seguintes compostos estão excluídos:

[0147] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 compreende uma mistura racêmica ou um enantiômero do composto de Fórmula I, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, e R11 são como descritos acima.

[0148] Em algumas modalidades, um composto isolado é fornecido de acordo com a Fórmula I:

ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 e R11 são como aqui definidos, com a condição de que quando R1, R3, R6, R7, R10 e R11 são cada um H; R2 é CH3; R8 é OCH3 ou Cl; e R9 é OH ou Cl; então R4 não é Cl ou CF3 e R5 não é Cl ou CF3.

[0149] Em outras modalidades, um composto isolado, ou uma sua composição ou método que compreende a administração de, é fornecido de acordo com a Fórmula I:

ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, e R11 são como aqui definidos, com a condição de que um composto de acordo com a Fórmula I em que R1, R3, R6, R7, R10 e R11 são cada um H; R2 é CH3; R8 é OCH3 ou Cl; e R9 é OH ou Cl; R4 é Cl ou CF3, e R5 é Cl ou CF3, não é um composto preferencial.

[0150] Numa outra modalidade, é proporcionada uma composição farmacêutica para a inibição de um efeito de beta-amiloide numa célula neuronal compreendendo um composto de acordo com a Fórmula I:

ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e um carreador farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, e R11 são como aqui definidos, com a condição de que quando R1, R3, R6, R7, R10 e R11 são cada um H; R2 é CH3; R8 é OCH3 ou Cl; e R9 é OH ou Cl; então R4 não é Cl ou CF3, e R5 não é Cl ou CF3.

[0151] Numa outra modalidade, um método/utilização é fornecido para inibir um efeito de beta-amiloide numa célula neuronal que compreende a administração de uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo um composto de antagonista de receptor de sigma-2 seletivo de acordo com a fórmula I:

ou um sal farmaceuticamente aceitável respectivo, e um carreador farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 e R11 são como aqui definidos, com a condição de que quando R1, R3, R6, R7, R10 e R11 são cada um H; R2 é CH3; R8 é OCH3 ou Cl; e R9 é OH ou Cl; então R4 não é Cl ou CF3 e R5 não é Cl ou CF3, e em que o composto ou sal respectivo está presente na composição numa quantidade eficaz para inibir a ligação de oligômero de beta amiloide na referida célula; e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[0152] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 compreende uma mistura racêmica ou um enantiômero do composto de Fórmula II:

em que R3, R4, R5, R6, R8, e R9 são tal como aqui descritos.

[0153] Numa outra modalidade, um composto, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, é fornecido de acordo com a Fórmula III, em que R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 e R11 são como fornecidos aqui e em que — são cada um selecionados independentemente dentre uma ligação simples, dupla ou tripla.

[0154] Em alguns aspectos, um composto de acordo com a Fórmula III é selecionado dentre:

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0155] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 compreende uma mistura racêmica ou um enantiômero de um composto de Fórmula I, em que R3, R4, R5, R6, R8, e R9 são tal como aqui descritos.

[0156] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 é um composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável de Fórmula I, em que R8 e R9 são independentemente selecionados dentre OH, C1-6 alcoxi, hidroxi e C1-6 alcoxi.

[0157] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 é um composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável de Fórmula I, em que R8 e R9 são independentemente selecionados dentre OH e NH(C1-4 alquil).

[0158] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 é um composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável de Fórmula I, em que R8 e R9 são selecionados independentemente a partir de H, halo, C1-6 halogenoalquil, e C1-6 haloalcoxi.

[0159] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 é um composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável de Fórmula I, em que R8 e R9 são cada um independentemente selecionados dentre OH, halo, C1-6 alcoxi e C1-6 haloalcoxi e R1 e R2 são cada um independentemente C1-6 alquil.

[0160] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 é um composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável de Fórmula I, em que R1 e R2 são cada um metil.

[0161] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 é um composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável de Fórmula I, em que um de R1 e R2 é metil e o outro é H.

[0162] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 é um composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável de Fórmula I, em que R8 e R9 são cada um independentemente selecionados dentre OH e C1-6 alcoxi e R1 e R2 são cada um independentemente metil.

[0163] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 é um composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável de Fórmula I, em que R8 e R9 são selecionados independentemente a partir de H, halo, C1-6 haloalquil, e R1 e R2 são cada um metil.

[0164] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 é um composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável de Fórmula I, em que R8 e R9 são selecionados independentemente a partir de H, halo e C1- 6 haloalquil.

[0165] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 é um composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável de Fórmula I, em que R7 e R11 são cada um H.

[0166] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 é um composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável de Fórmula I, em que R3, R4, R5, e R6 são cada um independentemente selecionados a partir de H, halo, C1- 6 alquil, C1- 6 haloalquil e C1-6 alcoxi.

[0167] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 é um composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável de Fórmula I, em que R3, R4 e R5 são cada um independentemente selecionados a partir de H, halo, C1- 6 alquil, C1- 6 haloalquil e C1-6 alcoxi.

[0168] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 é um composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável de Fórmula I, em que R3, R4, R5, e R6 são cada um independentemente selecionados a partir de H, halo, S(O)nR', C(O)OR', C(O)N(R')2, e C(O)R '; em que n = 2; R' são cada um independentemente H, CH3, CH2CH3, C3-C6 alquil, C1-C6 haloalquil, ou, opcionalmente, C1-C6 alquil ou C2-C7 acil, aril substituído, alquilaril, piperazinil, piperidinil, morfolinil, heterocicloalquil e heteroaril.

[0169] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 é um composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável de Fórmula I, em que R3, R4 e R5 são cada um independentemente selecionados a partir de H, halo, S(O)nR' e C(O)R'; em que n = 2; R' são cada um, independentemente, CH3, CH2CH3, C3-C6 alquil, aril, piperazin-1-il, piperidin-1-il e morfolinil-4-il.

[0170] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 é um composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável de Fórmula I, em que R3, R4 e R5 são cada um independentemente selecionados a partir de H, halo, S(O)nR 'e C(O)R'; em que n = 2; R' são cada um, independentemente, CH3, CH2CH3, C3-C6 alquil, aril, piperazin-1-il, piperidin-1-il, e morfolinil-4-il; R8 e R9 são cada um independentemente selecionados dentre OH, halo, C1-6 alcoxi e C1-6 haloalcoxi; e R1 e R2 são cada um metil.

[0171] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 é um composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável de Fórmula I, em que R3 e R4 ou R4 e R5 em conjunto com o átomo de C ao qual eles estão ligados formam um cicloalquil de 6 membros, ou um anel heterocicloalquil, aril ou heteroaril.

[0172] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 é um composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável de Fórmula I, em que R3 e R4 ou R4 e R5 são O, e estão ligados entre si para formar um grupo -O-C1-2 metileno-O-.

[0173] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 é um composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável de Fórmula I, em que R2 e R3 são independentemente selecionados de H, OH, halo, C1-6 alcoxi e C1-6 haloalquil.

[0174] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 é um composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável de Fórmula II, em que R3 e R4 são selecionados independentemente a partir de H, Cl, F, -OMe, -CF3, S(O)nR' e C(O)R'; em que n = 2; R' são cada um independentemente H, CH3, CH2CH3, C3-C6 alquil, aril, piperazin-1-il, piperidin-1-il, e morfolinil-4-il; R8 e R9 são cada um independentemente selecionados dentre OH e C1-6 alcoxi.

[0175] Em algumas modalidades, o ligante de sigma-2 é um composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável de Fórmula I, em que R2 e R3 são selecionados independentemente a partir de H, OH, Cl, F, -OMe, e -CF3, em que R7 e R8 são cada um independentemente selecionados dentre H e C1-6 alquil, em que R9 é H, e em que R5 e R6 são cada um independentemente selecionados dentre H e C1-6 halogenoalquil.

[0176] Os sais preferidos para utilização na invenção incluem os sais de cloridrato dos compostos anteriores.

[0177] Estes foram sintetizados de acordo com métodos gerais aqui proporcionados e exemplos sintéticos específicos com quaisquer passos adicionais estando adequadamente dentro da perícia daqueles versados na técnica. Vários destes compostos foram testados em vários ensaios, tal como aqui descritos, e verificou-se serem ativos. Compostos testados também exibem biodisponibilidade aumentada por referência a compostos descritos no documento WO 2010/110855.

[0178] Em algumas modalidades, cada uma das fórmulas gerais acima pode incluir uma condição para remover um ou mais dos seguintes compostos:

[0179] Compostos de acordo com a Fórmula I e/ou Fórmula II foram sintetizados de acordo com métodos gerais aqui proporcionados e exemplos sintéticos específicos com quaisquer passos adicionais sendo bem dentro da perícia daqueles versados na técnica. Vários destes compostos foram testados em vários ensaios, tal como aqui descritos, e verificou-se serem ativos. Compostos testados também exibem biodisponibilidade aumentada por referência a compostos descritos no documento WO 2010/110855, incorporado aqui por referência.

[0180] Como usado aqui, o termo "grupo receptor de ligação de hidrogênio" refere-se a um grupo capaz de aceitar uma ligação de hidrogênio. Exemplos de grupos receptores de ligações de hidrogénio são conhecidos e incluem, mas não estão limitados a grupos alcoxi, grupos oxazolidin-2-ona, -O-C (O) -N-; -C (O) -N-; -O-; o heteroátomo (por exemplo oxigénio) em um ciclo- heteroalquil; -N-SO2- e similares. Os grupos podem ser ligados em ambas as direções e podem ser ligados a outro carbono ou heteroátomo. Um grupo receptor de ligação de hidrogénio também pode estar presente em ou perto de um grupo alifático hidrofóbico. Por exemplo, um grupo tetra-hidrofurano compreende tanto um grupo receptor de ligação de hidrogénio e um grupo alifático hidrofóbico. O oxigênio presente no anel tetra-hidrofurano age como um receptor de ligação de hidrogênio e os carbonos anel de tetra-hidrofurano agem como o grupo alifático hidrofóbico.

[0181] Como usado aqui, o termo "grupo alifático hidrofóbico" refere- se a uma cadeia de carbono ou um anel de carbono. A cadeia de carbono pode estar presente em um ciclo-heteroalquil, mas o grupo alifático hidrofóbico não inclui o heteroátomo. O exemplo de tetra-hidrofurano fornecido acima é um exemplo, mas há muitos outros. Em algumas modalidades, o grupo hidrofóbico alifático é um C1-C6 alquil opcionalmente substituído, cicloalquil ou carbonos C1-C6 de um heterocicloalquil. Um "grupo alifático hidrofóbico" não é um grupo aromático hidrofóbico.

[0182] Como usado aqui, o termo "grupo ionizável positivo" refere-se a um átomo ou um grupo de átomos presentes numa estrutura que pode ser carregado positivamente, sob certas condições, tais como condições biológicas presentes em solução ou em uma célula. Em algumas modalidades, o grupo ionizável positivo é um nitrogênio. Em algumas modalidades, o grupo ionizável positivo é um nitrogênio presente em um anel de ciclo-heteroalquil. Por exemplo, em um grupo piperazina, os dois nitrogênios seriam considerados dois grupos ionizáveis positivos. No entanto, em algumas modalidades, os átomos de carbono ligados a um grupo ionizável positivo não são considerados um grupo alifático hidrofóbico. Em algumas modalidades, o grupo ionizável positivo é um anel contendo nitrogênio. Exemplos de anéis contendo nitrogênio incluem, mas não estão limitados a piperazina, piperadina, triazinana, tetrazinana, e semelhantes. Em algumas modalidades com respeito ao grupo ionizável positivo, um anel contendo nitrogênio compreende 1, 2, 3, ou 4 átomos de nitrogênio. Em algumas modalidades, o grupo ionizável positivo não é o nitrogênio presente no grupo a-N- SO2-

[0183] Em algumas modalidades um grupo compreende tanto um receptor de ligação de hidrogénio e um grupo ionizável positivo. Por exemplo, um grupo morfolina compreende tanto um receptor de ligação de hidrogénio no grupo de oxigénio e um grupo ionizável positivo no nitrogênio.

[0184] Tal como se utiliza aqui, o termo "doador de ligação de hidrogénio" refere-se a um grupo que é capaz de doar uma ligação de hidrogénio. Exemplos de um grupo doador de ligação de hidrogénio incluem, mas não estão limitados a, -OH, e semelhantes.Sais, solvatos, estereoisômeros, pró-drogas, derivados e metabolitos ativos dos compostos novos.

[0185] A divulgação inclui ainda sais, solvatos, estereoisômeros, pró- drogas e metabolitos ativos dos compostos de qualquer uma das fórmulas acima.

[0186] O termo "sais" pode incluir sais de adição de ácido ou sais de adição de bases livres. De um modo preferido, os sais são farmaceuticamente aceitáveis. Exemplos de ácidos que podem ser empregues para formar sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitável incluem, mas não estão limitados a sais derivados de ácidos inorgânicos não tóxicos tais como nítrico, fosfórico, sulfúrico, ou ácido bromídrico, iodídrico, fluorídrico, fosforoso, bem como sais derivados a partir de ácidos orgânicos não tóxicos tais como ácidos alifáticos mono e dicarboxílicos, ácidos alcanóicos substituídos por fenil, ácidos alcanóicos de hidroxil, ácidos alcanodióicos, ácidos aromáticos, ácidos sulfônicos alifáticos e aromáticos, e ácidos acético, maleico, succínico ou ácido cítrico. Exemplos não limitativos de tais sais incluem napadisilato, besilato, sulfato, pirossulfato, bissulfato, sulfito, bissulfito, nitrato, fosfato, mono-hidrogenofosfato, di-hidrogenofosfato, metafosfato, pirofosfato, cloreto, brometo, iodeto, acetato, trifluoroacetato, propionato, caprilato, isobutirato, oxalato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato, maleato, mandelato, benzoato, clorobenzoato, metilbenzoato, dinitrobenzoato, ftalato, benzenossulfonato, toluenossulfonato, fenilacetato, citrato, lactato, maleato, tartarato, metanossulfonato, e outros semelhantes. Também estão contemplados os sais de aminoácidos tais como arginato e semelhantes e gluconato, galacturonato (ver, por exemplo, Berge, et al. “Pharmaceutical Salts,” J. Pharma. Sci. 1977;66:1).

[0187] Os sais de adição de ácido dos compostos de qualquer das fórmulas acima podem ser preparados por contato da forma de base livre com uma quantidade suficiente do ácido desejado para produzir o sal de modo convencional. A forma de base livre pode ser regenerada por contato da forma de sal com uma base e isolando a base livre da forma convencional. As formas de base livre diferem das suas respectivas formas salinas um pouco em certas propriedades físicas tais como solubilidade em solventes polares, mas de resto os sais são equivalentes à sua respectiva base livre para propósitos da presente descrição.

[0188] Também estão incluídos os sais tanto totais e parciais, ou seja sais com 1, 2 ou 3, de preferência 2, equivalentes de base por mole de ácido de um, por exemplo, composto de fórmula I ou um seu sal, com 1, 2 ou 3 equivalentes, de preferência 1 equivalente, de ácido por mole de base de uma qualquer das fórmulas acima indicadas de composto.

[0189] Para efeitos de isolamento ou purificação é também possível utilizar sais farmaceuticamente inaceitáveis. No entanto, apenas os sais farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos são utilizados terapeuticamente e eles são portanto preferidos.

[0190] Os sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis são formados com metais ou aminas, tais como metais alcalinos e alcalino-terrosos ou aminas orgânicas. Exemplos de metais utilizados como cátions são o sódio, potássio, magnésio, cálcio, e outros semelhantes. Exemplos de aminas adequadas são N,N'-dibenziletilenodiamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, diciclo- hexilamina, etilenodiamina, N-metilglucamina e procaína.

[0191] Os sais de adição de base dos referidos compostos acídicos são preparados por contato da forma de ácido livre com uma quantidade suficiente da base desejada para produzir o sal de modo convencional. A forma de ácido livre pode ser regenerada por contato da forma de sal com um ácido e isolando o ácido livre.

[0192] Os compostos da presente descrição podem ter tanto uma base e um centro acídico e podem por conseguinte estar na forma de íons anfotéricos ou os sais internos.

[0193] Tipicamente, um sal farmaceuticamente aceitável de um composto de qualquer uma das fórmulas acima pode ser facilmente preparado por utilização de um ácido ou base desejado, conforme apropriado. O sal pode precipitar da solução e ser recolhido por filtração ou pode ser recuperado por evaporação do solvente. Por exemplo, uma solução aquosa de um ácido tal como ácido clorídrico pode ser adicionada a uma suspensão aquosa de um composto de qualquer uma das fórmulas acima e a mistura resultante evaporada até à secura (liofilizada) para se obter o sal de adição de ácido na forma de um sólido. Alternativamente, um composto de qualquer das fórmulas acima pode ser dissolvido num solvente adequado, por exemplo um álcool tal como isopropanol, e o ácido pode ser adicionado no mesmo solvente ou noutro solvente adequado. O sal de adição de ácido resultante pode em seguida ser precipitado diretamente, ou por adição de um solvente menos polar tal como éter diisopropílico ou hexano, e isolado por filtração.

[0194] Aqueles versados na técnica de química orgânica apreciarão que muitos compostos orgânicos podem formar complexos com solventes nos quais são reagidos ou a partir dos quais eles são precipitados ou cristalizados. Estes complexos são conhecidos como "solvatos". Por exemplo, um complexo com água é conhecido como um "hidrato". Os solvatos do composto da divulgação estão dentro do âmbito da divulgação. Os sais do composto de qualquer das fórmulas acima podem formar solvatos (por exemplo, hidratos) e a memória descritiva também inclui todos esses solvatos. O significado da palavra "solvato" é bem conhecido daqueles versados na técnica como um composto formado pela interação de um solvente e de um soluto (por exemplo, solvatação). As técnicas para a preparação de solvatos estão bem estabelecidas na técnica (ver, por exemplo, Brittain. Polymorphism in Pharmaceutical solids. Marcel Decker, New York, 1999.).

[0195] A divulgação também abrange N-óxidos dos compostos de fórmulas I. O termo "N-óxido" significa que para os heterociclos contendo um de outra forma não substituído átomo de sp2 N, o átomo de N pode conter um átomo de O ligado de forma covalente, isto é, -N^O. Os exemplos de tais heterociclos substituídos de N-óxido incluem piridil N-óxidos, pirimidil N-óxidos, pirazinil N- óxidos e pirazolil N-óxidos.

[0196] Os compostos de qualquer das fórmulas acima podem ter um ou mais centros quirais e, dependendo da natureza de substituintes individuais, eles podem também ter isômeros geométricos. Os isómeros que diferem no arranjo dos seus átomos no espaço são denominados "estereoisômeros". Os estereoisômeros que não são imagens no espelho um do outro são denominados "diastereômeros" e aqueles que são imagens de espelho não sobreponíveis um do outro são denominados "enantiômeros". Quando um composto tem um centro quiral, um par de enantiômeros é possível. Um enantiômero pode ser caracterizado pela configuração absoluta de seu centro assimétrico e é descrito pelas regras de sequenciamento R- e S- de Cahn e Prelog, ou pela forma em que a molécula gira o plano da luz polarizada e designada como dextrógiro ou levógiro (ou seja,, como (+) ou (-)-isômeros respectivamente). Um composto quiral pode existir como um enantiômero individual ou como uma mistura deles. Uma mistura contendo proporções iguais dos enantiômeros é denominada uma "mistura racêmica". Uma mistura contendo porções desiguais de enantiômeros é descrita como tendo um "excesso enantiomérico" (ee), quer do composto R ou S. O excesso de um enantiômero na mistura é geralmente descrito com um valor de excesso enantiomérico % (% de ee) determinado pela fórmula:% ee = (R) - (S)/(R) + (S)

[0197] A proporção de enantiômeros também pode ser definida por "pureza óptica" em que o grau em que a mistura de enantiômeros gira luz plano- polarizada é comparado com os compostos opticamente puros individuais R e S. A pureza óptica pode ser determinada utilizando a seguinte fórmula:pureza óptica = enant.principal/(enant.principal + enant.menor)

[0198] Os compostos também podem ser um substancialmente enantiômeros puros (+) ou (-) dos compostos aqui descritos. Em algumas modalidades, uma composição que compreende um enantiômero substancialmente puro compreende pelo menos 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, ou 99% de um enantiômero. Em algumas modalidades, uma composição que compreende um enantiômero substancialmente puro seja pelo menos 99,5% de um enantiômero. Em algumas modalidades, a composição compreende apenas um enantiômero de um composto aqui descrito.

[0199] A divulgação engloba todos os isômeros individuais dos compostos de qualquer uma das fórmulas acima. A descrição ou denominação de um composto particular na memória descritiva e reivindicações destina-se a incluir tanto os enantiômeros individuais e misturas, racêmicas ou outras, respectivas. Os métodos para a determinação da estereoquímica e a resolução ou síntese estereotáxica de estereoisômeros são bem conhecidos na técnica. Especificamente, há um centro quiral mostrado nos compostos de qualquer das fórmulas acima, que dá origem a um conjunto de enantiômeros. Centros quirais adicionais podem estar presentes, dependendo dos substituintes.

[0200] Para muitas aplicações, prefere-se levar a cabo as sínteses estereo-seletivas e/ou sujeitar o produto de reação para os passos de purificação apropriados de modo a produzir materiais substancialmente opticamente puros. Processos sintéticos estereo-seletivos apropriados para a produção de materiais opticamente puros são bem conhecidos na técnica, como são os procedimentos para purificar misturas racêmicas em fracções opticamente puras. Aqueles versados na técnica reconhecerão ainda que os compostos de divulgação podem existir em formas polimórficas em que um composto é capaz de cristalizar em diferentes formas. Os métodos adequados para identificar e separar polimorfismos são conhecidos na técnica.

[0201] Os diastereômeros diferem em ambas as propriedades físicas e reatividade química. Uma mistura de diastereômeros pode ser separada em pares enantioméricos com base na solubilidade, cristalização fraccionada ou propriedades cromatográficas, por exemplo, cromatografia em camada fina, cromatografia em coluna ou HPLC.

[0202] A purificação de misturas complexas de diastereômeros em enantiômeros tipicamente requer dois passos. Num primeiro passo, a mistura de diastereômeros é resolvida nos pares enantioméricos, como descrito acima. Numa segunda fase, os pares enantioméricos são ainda purificados em composições enriquecidas em um ou outro enantiômero ou, mais preferivelmente, resolvidos em composições compreendendo enantiômeros puros. Resolução de enantiômeros tipicamente requer reação ou interação molecular com um agente quiral, por exemplo, matriz de solvente ou coluna. A resolução pode ser conseguida, por exemplo, convertendo a mistura de enantiômeros, por exemplo, uma mistura racémica, em uma mistura de diastereômeros por reação com um enantiômero puro de um segundo agente, isto é, um agente de resolução. Os dois produtos diastereoméricos resultantes podem então ser separados. Os diastereômeros separados são, em seguida, reconvertidos para os enantiômeros puros, invertendo a transformação química inicial.

[0203] Resolução de enantiômeros pode também ser conseguida por diferenças na sua ligação não-covalente a uma substância quiral, por exemplo, por cromatografia sobre adsorventes homoquirais. A ligação não-covalente entre enantiômeros e o adsorvente cromatográfico estabelece complexos diastereoméricos, levando ao diferencial de particionamento nos estados móveis e ligados no sistema cromatográfico. Os dois enantiômeros, por conseguinte, movem-se através do sistema de cromatografia, por exemplo, coluna, a taxas diferentes, permitindo a sua separação.

[0204] Colunas de resolução quiral são bem conhecidas na técnica e são disponibilizadas comercialmente (por exemplo, pela MetaChem Technologies Inc., uma divisão da ANSYS Technologies, Inc., Lake Forest, CA). Os enantiômeros podem ser analisados e purificados utilizando, por exemplo, fases estacionárias quirais (CSPs) para a HPLC. Colunas de HPLC quiral contêm tipicamente uma forma de um composto enantiomérico imobilizado na superfície de um material de embalagem de sílica.

[0205] D-fenilglicina e L-leucina são exemplos do Tipo I CSPs e utilizam combinações de interações π-π, ligações de hidrogênio, interações dipolo- dipolo e interações estéricas para conseguir o reconhecimento quiral. Para ser resolvido numa coluna de Tipo I, enantiômeros analitos devem conter funcionalidade complementar à do CSP de modo que o analito é submetido a interações essenciais com o CSP. A amostra deve de preferência conter um dos seguintes grupos funcionais: ácida π ou base π, doador de ligação de hidrogênio e/ou receptor, ou um dipolo amida. Derivatização às vezes é usada para adicionar os sítios interativos para aqueles compostos que carecem deles. Os derivados mais comuns envolvem a formação de amidas a partir de aminas e ácidos carboxílicos.

[0206] O MetaChiral ODM™ é um exemplo de um tipo II CSP. Os mecanismos principais para a formação de complexos de soluto-CSP é através de interações atrativas, mas os complexos de inclusão também desempenham um papel importante. Ligação de hidrogênio, interações π - π, e empilhamento de dipolo são importantes para a resolução quiral no MetaChiral™ ODM. A derivatização talvez necessária quando a molécula de soluto não contém os grupos necessários para as interações de coluna soluta. A derivatização, geralmente para benzilamidas, pode ser necessária para algumas moléculas fortemente polares como aminas e ácidos carboxílicos, que de outra forma interagem fortemente com a fase estacionária através de interações estéreo não especifica.

[0207] Se for caso disso, os compostos de qualquer das fórmulas acima podem ser separados em pares diastemoméricos por, por exemplo, a separação por cromatografia em coluna ou TLC em gel de sílica. Estes pares diastereoméricos são aqui referidos como diastereoisômeros superiores com TLC Rf; e diastereoisômeros com menor Rf em TLC. Os diastereômeros podem ser ainda mais enriquecidos por um enantiômero particular ou resolvidos para um único enantiômero usando métodos bem conhecidos na técnica, tais como os aqui descritos.

[0208] A configuração relativa dos pares diastereoméricos pode ser deduzida através da aplicação de modelos teóricos ou de regras (por exemplo, A regra de Cram, o modelo de Felkin-Ahn) ou utilizando modelos tridimensionais mais fidedignos gerados por programas de química computacional. Em muitos casos, estes métodos são capazes de prever que o produto diastereômero é energeticamente favorecido de uma transformação química. Como uma alternativa, a configuração relativa dos pares diastereoméricos pode ser indiretamente determinada por descobrir as configurações absolutas de um único enantiômero de um (ou ambos) do(s) par(es) diastereomérico(s).

[0209] A configuração absoluta dos estereocentros pode ser determinada pelo método bem conhecido dos versados na técnica (por exemplo, difração de raios X, dicroísmo circular). A determinação da configuração absoluta pode ser útil também para confirmar a previsibilidade de modelos teóricos e pode ser útil para prolongar a utilização destes modelos para moléculas semelhantes preparadas por reações com mecanismos análogos (por exemplo, redução de cetonas, e aminação redutora de cetonas por hidretos).

[0210] A divulgação também podem englobar os estereoisômeros do tipo Z-E, e suas misturas, devido a substituintes R2-R3 à ligação dupla não diretamente ligada ao anel. Estereoisômeros adicionais Z-E são encontrados quando m não é 1 e m e n são diferentes. As regras de prioridade de Cahn-Ingold- Prelog são utilizadas para determinar se os estereoisômeros devido à respectiva posição no plano da ligação dupla do que os substituintes estão ligados duplamente Z ou E. O estereoisômero é designado como Z (zusammen = juntos) se os 2 grupos de maior prioridade está no mesmo lado de um plano de referência que passa através da ligação C=C. O outro é designado como estereoisômero E (entgegen = oposto).

[0211] Mistura de estereoisômeros de tipo E-Z pode ser separada (e/ou caracterizado) nos seus componentes utilizando o método clássico de purificação que se baseiam nas diferentes propriedades físico-químicas destes compostos. Entre estes métodos estão a cristalização fracionada, cromatografia levada a cabo por meio de técnicas de pressão alta, baixa, média ou destilação fracionada e qualquer outro método bem conhecido pelos versados na técnica.

[0212] A divulgação também abrange pró-fármacos dos compostos de qualquer das fórmulas acima indicadas, isto é, compostos que libertam um medicamento ativo de acordo com qualquer uma das fórmulas acima indicadas in vivo quando administrado a um sujeito mamífero. Um pró-fármaco é um composto farmacologicamente ativo ou mais tipicamente inativo que é convertido num agente farmacologicamente ativo por uma transformação metabólica. Os pró-fármacos de um composto de qualquer uma das fórmulas acima, são preparados por modificação dos grupos funcionais presentes no composto de qualquer uma das fórmulas acima, de tal maneira que as modificações podem ser clivadas in vivo para libertar o composto principal. In vivo, um pró-fármaco sofre facilmente alterações químicas sob condições fisiológicas (por exemplo, são hidrolisados ou atuado pela enzima que ocorre naturalmente (s)), resultando na libertação do agente farmacologicamente ativo. Os pró-fármacos incluem compostos de qualquer uma das fórmulas acima, em que um grupo hidroxi, amino ou grupo carboxil está ligado a qualquer grupo que pode ser clivado in vivo para regenerar o grupo hidroxil livre, amino ou carboxi, respectivamente. Exemplos de pró-fármacos incluem, mas não se limitam a ésteres (por exemplo, acetato, formato, e derivados de benzoato) de compostos de qualquer das fórmulas acima indicadas ou qualquer outro derivado que, ao ser trazido ao pH fisiológico ou através da ação de enzima é convertida para o fármaco ativo. Os procedimentos convencionais para a seleção e preparação de derivados pró-fármacos adequados são descritos na técnica (ver, por exemplo, Bundgaard. Design of Prodrugs. Elsevier, 1985).

[0213] Os pró-fármacos podem ser administrados sob a mesma forma que o ingrediente ativo a que se convertem ou podem ser apresentados sob uma forma de reservatório, por exemplo, um emplastro transdérmico ou outro reservatório, que está adaptado para permitir (por fornecimento de uma enzima ou outro reagente apropriado) a conversão de um pró-fármaco do ingrediente ativo lentamente ao longo do tempo, e entrega do ingrediente ativo ao paciente.

[0214] A menos que especificamente indicado, o termo "ingrediente ativo" deve ser entendido como se referindo a um composto de qualquer uma das fórmulas acima, tal como aqui definido.

[0215] A divulgação também abrange metabolitos. "Metabolito" de um composto aqui divulgado é um derivado de um composto que é formado quando o composto é metabolizado. O termo "metabolito ativo" se refere a um derivado biologicamente ativo de um composto que é formado quando o composto é metabolizado. O termo "metabolizado" refere-se à soma dos processos pelos quais uma substância em particular é alterada no corpo vivo. Em resumo, todos os compostos presentes no corpo são manipulados por enzimas dentro do corpo, a fim de obter energia e/ou para removê-los do corpo. Enzimas específicas produzem alterações estruturais específicas para o composto. Por exemplo, o citocromo P450 catalisa uma variedade de reações oxidativas e redutivas, enquanto glucuroniltransferase difosfato de uridina catalisam a transferência de uma molécula de ácido glucurônico ativada de álcoois aromáticos, álcoois alifáticos, ácidos carboxílicos, aminas e grupos sulfidril livres. Informação adicional sobre o metabolismo pode ser obtida a partir de The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th Edition, McGraw-Hill (1996), pages 11-17. Os metabolitos dos compostos aqui divulgados podem ser identificados quer pela administração de compostos a um hospedeiro e análise das amostras de tecido do hospedeiro, ou pela incubação dos compostos com células hepáticas in vitro e análise dos compostos resultantes. Ambos os métodos são bem conhecidos na técnica.

Uso dos antagonistas dos receptores de Sigma-2

[0216] Em algumas modalidades, a invenção proporciona métodos de inibição do declínio número de sinapses ou das anormalidades de tráfico de membrana associadas com a exposição de uma célula neuronal para espécies Abeta pela administração de um antagonista do receptor de sigma-2. A invenção também proporciona métodos para tratar o declínio cognitivo e/ou uma doença neurodegenerativa, por exemplo, da doença ou insuficiência cognitiva ligeira (MCI) num doente compreendendo a administração ao paciente de um antagonista de sigma-2 aqui descrito, por exemplo Alzheimer, aqueles englobados por qualquer uma das fórmulas aqui descritas, ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, o método de inibir ou tratar, declínio cognitivo e/ou uma doença neurodegenerativa, por exemplo, doença de Alzheimer compreende inibir ou tratar um ou mais sintomas de declínio cognitivo selecionado a partir do grupo que consiste em perda de memória, confusão, julgamento deficiente, alterações de personalidade, desorientação, e a perda de competências linguísticas. Em algumas modalidades, o método compreende inibir ou tratar, doenças ou distúrbios ou patologias mediadas por ou associadas com oligômeros Abeta (ver parágrafo 002). Em algumas modalidades, o método de inibir ou tratar, declínio cognitivo e/ou uma doença neurodegenerativa, por exemplo, doença de Alzheimer, compreende um ou mais dos seguintes: (i) a restauração da potenciação a longo termo (LTP), a depressão de longo prazo (LTD) ou plasticidade sináptica detectável através de medições eletrofisiológicas ou qualquer das outras alterações negativas na função cognitiva, como mencionado na definição do termo acima; e/ou (ii) inibir ou tratar, a neurodegeneração; e/ou (iii) inibir, ou tratar, a amiloidose geral; e/ou (iv) inibir ou tratar, uma ou mais da produção de amiloide, montagem amiloide, a agregação de amiloide, e oligômero amiloide de ligação, e a deposição de amiloide; e/ou (v) inibir, tratar, e/ou diminuir um efeito, nomeadamente, um efeito não-letal, de um ou mais oligômeros de Abeta em uma célula neuronal. Em algumas modalidades, o método de inibir, tratar, e/ou diminuir o declínio cognitivo e/ou uma doença neurodegenerativa, por exemplo, doença de Alzheimer compreende inibir, tratar, e/ou diminuir uma ou mais da produção de amiloide, montagem de amiloide, a atividade/efeito de um ou mais oligômeros de Abeta em uma célula neuronal, a agregação de amiloide, amiloide de ligação, e a deposição amiloide. Em algumas modalidades, o método de inibir, tratar, e/ou diminuir o declínio cognitivo e/ou uma doença neurodegenerativa, por exemplo, doença de Alzheimer compreende inibir, tratar, e/ou diminuir uma ou mais da atividade/efeito de um ou mais oligômeros de Abeta em uma célula neuronal.

[0217] Em algumas modalidades, a atividade/efeito de um ou mais oligômeros de Abeta em uma célula neuronal, agregação amiloide e ligação amiloide é o efeito dos oligômeros de Abeta no tráfego de membrana ou o número de sinapses. Em algumas modalidades, o antagonista de sigma-2 inibe o efeito oligômero Abeta no tráfico de membrana ou o número de sinapses ou ligação de oligômero Abeta.

[0218] Em algumas modalidades, a invenção proporciona métodos de tratamento de uma doença protopática associada com toxicidade oligômero Abeta, os efeitos de oligômero Abeta não letais especificamente. Em algumas modalidades, o método compreende o contato de um sujeito com uma tal doença protopática com um antagonista de sigma-2 da divulgação ou uma composição contendo o mesmo que se liga ao receptor sigma-2.

[0219] Em algumas modalidades, a doença protopática é uma protopática do SNC, caracterizada por um aumento da proteína de Abeta, tais como MCI, Síndrome de Down, a degeneração macular ou a doença de Alzheimer, e semelhantes.

[0220] Em algumas modalidades, a invenção proporciona métodos de tratamento de um ou mais comprometimento cognitivo leve (MCI), demência ou por administração de um antagonista de sigma-2, de acordo com a divulgação. Em algumas modalidades, a invenção proporciona métodos de tratamento de MCI, e demência.

[0221] Em algumas modalidades, a invenção proporciona métodos de tratamento de um indivíduo com um antagonista de sigma-2 de acordo com a divulgação de restabelecer, parcialmente ou totalmente, as células do sujeito com um fenótipo normal nos termos das funções afetadas adversamente pelas espécies de Abeta, tais como oligômeros de Abeta. Exemplos são redução do número de sinapses e anormalidades tráfico de membrana, o que pode ser medido por vários métodos, incluindo os ensaios aqui descritos. O fenótipo normal pode ser, por exemplo, transporte de membrana normal. Em algumas modalidades, o fenótipo normal é a capacidade cognitiva normal. O fenótipo "normal" pode ser determinado por comparação dos resultados de um sujeito com uma amostra de indivíduos normais. A amostra pode ser tão pequena quanto um sujeito ou uma amostra, ou pode ser mais do que 10 amostras ou sujeitos e a norma é uma média que é calculada com base numa pluralidade de indivíduos.

[0222] Em algumas modalidades, o método compreende a administração a um sujeito afligido com declínio cognitivo ou com uma doença neurodegenerativa de um composto ou composição que se liga a uma proteína sigma-2 e inibe uma patologia da amiloide beta. Em algumas modalidades, a patologia amiloide beta é um defeito de transporte de membrana, uma diminuição no número de sinapses, uma diminuição no número de espinha dendrítica, uma alteração na morfologia da espinha dendrítica, uma mudança de LTP, uma mudança de LTD, um defeito de medidas de memória e aprendizagem, num animal, ou qualquer combinação dos mesmos, e semelhantes. O precedente utiliza resultado de provas apresentadas pelos inventores da seguinte forma:

[0223] Avaliação da eficácia comportamental: Déficits de memória induzida pelo oligômero Abeta no camundongo com medo condicionado é um modelo estabelecido no laboratório do Dr. Ottavio Arancio of Columbia University (Puzzo 2008). Várias empresas farmacêuticas utilizam este mesmo modelo em seus esforços de descoberta. O condicionamento contextual é um modelo aceitável de formação da memória associativa que se correlaciona com a função cognitiva humana e, especificamente, a criação de novas memórias (Delgado 2006). oligômeros Abeta são injetados no hipocampo de animais de tipo selvagem imediatamente antes do treino condicionado e memória é avaliado por meio do comportamento de congelamento após 24 horas. Este sistema modelo foi escolhido porque a administração intra-hipocampal de oligômeros permite a avaliação comparativa rápida da atividade do composto e fora do alvo de toxicidade.

[0224] Os compostos também podem ser testados in vivo em modelos de dois transgênicos de Alzheimer para mostrar o efeito do composto para inverter a perda de memória associada ao oligômero Abeta. Estes estudos comportamentais demonstram coletivamente que os compostos antagonistas de sigma-2 causam melhoria na aprendizagem e memória em duas tarefas comportamentais diferentes, com dois modelos diferentes de doença de Alzheimer, em ambos os sexos e a seguir à administração a curto ou longo prazo e demonstram que os ensaios in vitro correlacionam com atividade in vivo.

[0225] Tal como aqui discutido, as evidências sugerem que a redução mediada pelo oligômero Abeta na expressão do receptor de superfície neuronal mediada pelo tráfico de membrana são a base para a inibição de oligômero das medidas eletrofisiológicas de plasticidade sináptica (LTP) e de aprendizagem e de memória (Ver Kamenetz F, Tomita T, Hsieh H, Seabrook G, Borchelt D, Iwatsubo T, Sisodia S, Malinow R. APP processing and synaptic function. Neuron. 2003 Mar 27;37(6):925-37; and Hsieh H, Boehm J, Sato C, Iwatsubo T, Tomita T, Sisodia S, Malinow R. AMPAR removal underlies Abeta oligomer-induced synaptic depression and dendritic spine loss. Neuron. 2006 Dec 7;52(5):831-43). Membrana medindo as mudanças de taxa de tráfego induzidas por oligômeros através das mudanças morfológicas de formazano foi utilizado nas linhas de células para descobrir drogas de bloqueio de oligômeros Abeta [Maezawa I, Hong HS, Wu HC, Battina SK, Rana S, Iwamoto T, Radke GA, Pettersson E, Martin GM, Hua DH, Jin LW. Um novo composto tricíclico pirona melhora a morte celular associada com os complexos oligoméricos amiloide beta intracelulares. J Neurochem. 2006 Jul;98(1):57-67; Liu Y, Schubert D. Peptídeos amiloides citotóxicos inibem a redução celular 3- (4,5- dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolio (MTT),redução do MTT, aumentando formazano exocitose. J Neurochem. 1997 Dec;69(6):2285-93; Liu Y, Dargusch R, Banh C, Miller CA, Schubert D. Detecting bioactive amyloid beta peptide species in Alzheimer's disease. J Neurochem. 2004 Nov;91(3):648-56; Liu Y, Schubert D. O tratamento da doença de Alzheimer pelo peptídeo amiloide beta bioativo de inativação. Curr Alzheimer Res. 2006 Apr;3(2):129-35; Rana S, Hong HS, Barrigan L, Jin LW, Hua DH. Sínteses de pironas e piridinonas tricíclicos e proteção da Abeta-peptídeo induzida pela morte celular neuronal MC65. Bioorg Med Chem Lett. 2009 Feb 1;19(3):670-4. Epub 2008 Dec 24; and Hong HS, Maezawa I, Budamagunta M, Rana S, Shi A, Vassar R, Liu R, Lam KS, Cheng RH, Hua DH, Voss JC, Jin LW. Compostos fluoreno anti-Abeta candidatos selecionados a partir dos análogos de agentes de imagiologia amiloide. Neurobiol Aging. 2008 Nov 18. (Publicação eletrônica antes da cópia)] que reduzem os níveis cerebrais Abeta em roedores in vivo [Hong SH, Rana S, Barrigan L, Shi A, Zhang Y, Zhou F, Jin LW, Hua DH. A inibição da toxicidade amiloide de Alzheimer com uma molécula pirona tricíclica in vitro e in vivo. J Neurochem. 2009 Feb;108(4):1097-1108]. Assim, os testes anteriores estabeleceram relevância na identificação de compostos para o tratamento precoce da doença de Alzheimer e comprometimento cognitivo leve.

[0226] Em algumas modalidades, um composto de qualquer uma das fórmulas acima tem um valor de IC50 valor menor que 100 μM, 50 μM, 20 μM, 15 μM, 10 μM, 5 μM, 1 μM, 500 nM, 100 nM, 50 nM, ou 10 nM em relação à inibição de um ou mais do efeito de oligômeros Abeta nos neurônios (como os neurônios no cérebro), montagem de amiloide ou interrupção do mesmo, e ligação de amiloides (incluindo oligômero amiloide), e de deposição amiloide. Em algumas modalidades, o composto possui um IC50 valor menor que 100 μM, 50 μM, 20 μM, 15 μM, 10 μM, 5 μM, 1 μM, 500 nM, 100 nM, 50 nM, ou 10 nM em relação à inibição da atividade/efeito de espécies Abeta tal como oligômeros em neurônios (tais como os neurônios do sistema nervoso central).

[0227] Em algumas modalidades, porcentagem de inibição pelo composto da divulgação de um ou mais dos efeitos das espécies de Abeta, tais como oligômeros em neurônios (tais como os neurônios no cérebro), tais como a amiloide (incluindo oligômero amiloide) ligação às sinapses, e anormalidades no transporte de membrana mediada pelo oligômero Abeta foi medida a uma concentração de 10 nM a 10 μM. Em algumas modalidades, a porcentagem de inibição medida é de cerca de 1% a cerca de 20%, cerca de 20% a cerca de 50%, cerca de 1% a cerca de 50%, ou cerca de 1% a cerca de 80%. A inibição pode ser avaliada por exemplo, por quantificação de número de sinapses de um neurônio, antes e após a exposição a uma espécie amiloide beta ou quantificar o número de sinapses na presença de ambos, de um antagonista de sigma-2 e as espécies de Abeta, em que o antagonista de sigma-2 é simultâneo com, ou precede ou segue, a exposição de espécies de Abeta. Como outro exemplo, a inibição pode ser avaliada determinando o tráfego de membrana e comparando um ou mais parâmetros que medem a taxa de exocitose e extensão, a taxa de endocitose e a extensão, ou outros indicadores de metabolismo celular na presença e na ausência de uma espécie Abeta e na presença e ausência de um antagonista de sigma-2 de acordo com a divulgação. Os presentes inventores fizeram prova de ensaio bioquímico que os compostos da divulgação também inibem a agregação de amiloide (dados não mostrados).

[0228] Em algumas modalidades, os compostos aqui descritos se ligam especificamente a um receptor sigma-2. Um composto que se liga especificamente a um receptor específico se refere a um composto que tem uma preferência por um receptor em relação a outro. Por exemplo, embora um composto pode ser capaz de se ligar tanto a receptores sigma-1 e sigma-2, um composto pode ser referido para ser específico para um receptor sigma-2, quando ele se liga com uma afinidade de ligação que é pelo menos 10% maior do que ao receptor sigma-1. Em algumas modalidades, a especificidade é de pelo menos 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, ou 1000% maior para um parceiro de ligação (por exemplo, receptor) de um segundo parceiro de ligação.

[0229] Em algumas modalidades, a invenção proporciona métodos de medição do declínio cognitivo associado a amiloide beta num animal utilizando um ligante marcado do sigma-2. Em algumas modalidades, o método compreende colocar em contato o animal com um ligante marcado de sigma-2 de acordo com a divulgação e medindo a atividade ou expressão de sigma-2. Em algumas modalidades, o método compreende comparar a atividade ou a expressão de sigma-2 no animal com um animal conhecido por ter amiloide beta induzido no declínio cognitivo. Se a atividade ou a expressão é a mesma que do animal conhecido por ter amiloide beta induzida no declínio cognitivo o animal é referido por ter o mesmo nível do declínio cognitivo. Os animais podem ser classificados de acordo com as similaridades na atividade conhecida ou expressão de vários estágios de amiloide beta induzida do declínio cognitivo. Qualquer um dos ligantes de sigma-2 aqui descritos podem ser marcados de modo a que o ligante marcado de sigma-2 pode ser utilizado in vivo.

[0230] Para determinar se um composto de qualquer uma das fórmulas acima e outros compostos descritos como antagonistas de sigma-2 acima, é eficaz no tratamento das várias condições descritas aqui, in vitro os ensaios podem ser usados. Os ensaios in vitro foram correlacionados com um efeito in vivo usando o Composto II Por exemplo, se um composto de fórmulas gerais III-IV que tem semelhança estrutural com o composto II é ativo, por exemplo, nos ensaios in vitro aqui descritos, também podem ser utilizados in vivo para tratar ou melhorar as condições aqui descritas, incluindo a inibição ou restaurar a perda de sinapse, modulando uma mudança no tráfego de membrana nas células neuronais, protegendo contra ou restaurando a perda de memória, e o tratamento de condições do declínio cognitivo, doenças e distúrbios tais como MCI e doença de Alzheimer. Os ensaios se baseiam, em parte, sobre os oligômeros de amiloide beta e da sua função na ligação a neurônios nas sinapses e o efeito que oligômeros de amiloide betas têm nos neurônios in vitro. Em algumas modalidades, um receptor de oligômero de Abeta nos neurônios que os presentes inventores acreditam que inclui uma proteína sigma-2 é posto em contato com um conjunto de amiloide beta, tal como aqui descrito e um composto de acordo com a Fórmula I, II, ou III que se liga à proteína sigma-2 inibirá a ligação do conjunto de amiloide beta para o receptor. Nos ensaios de ligação de radioligantes competitivos os presentes inventores demonstraram que os compostos da presente invenção são específicos para o receptor sigma-2. Os inventores também demonstraram que os compostos da invenção inibem a ligação de oligômeros Abeta ao seu receptor até agora não identificado na superfície de neurônios. Em algumas modalidades, são proporcionados métodos para determinar a eficácia de um composto de qualquer ligante da fórmula sigma-2 na sinalização neuronal. Em algumas modalidades, o método compreende o contato de uma célula, tal como, mas não limitado a um neurônio primário, com um ligante de sigma-2 e medindo a função neuronal. Em algumas modalidades, a célula é posta em contato in vitro. Em algumas modalidades, a célula é contactadain vivo. A atividade neuronal pode ser a atividade de sinalização, a atividade elétrica, a produção ou a libertação de proteínas sinápticas, e semelhantes. Um antagonista de sigma-2, que aumenta ou restabelece a sinalização é identificado como um composto que é eficaz na modulação da atividade neuronal. Em algumas modalidades, a célula é derivada de uma amostra patológica. Em algumas modalidades, a célula é derivada de um paciente transportador de uma doença neurodegenerativa. Em algumas modalidades, a doença neurodegenerativa é a MCI ou a doença de Alzheimer, doença de Alzheimer especialmente leve.

Ensaios de Ligação do Receptor e Rastreio do Composto

[0231] Em algumas modalidades, um composto de teste é colocado em com a membrana celular ou da célula para determinar se o composto de teste pode se ligar ao receptor sigma-2. Em algumas modalidades, o composto de teste é dissolvido num transportador ou veículo, tal como, mas não limitados ao sulfóxido de dimetil. Em algumas modalidades, as células são cultivadas até à confluência. Em algumas modalidades, sobre a confluência, as células podem ser separadas pela raspagem suave. Em algumas modalidades, as células são separadas por tripsinização, ou qualquer outro meio adequado descolamento.

[0232] Em algumas modalidades, a ligação do composto de teste ao receptor sigma-2 pode ser determinada por, por exemplo, um ensaio de ligação do radioligante competitivo. Ensaios de ligação de radioligantes podem ser realizados em células intactas que expressam de forma estável receptores humanos ou de uma fonte de tecido. As células ou os tecidos isolados podem, por exemplo, ser lavadas, centrifugadas, e/ou ressuspensa num tampão. O composto de teste pode ser marcado radioativamente de acordo com qualquer método incluindo, mas não limitado aos descritos aqui. O radioligante pode ser utilizado a uma concentração fixa de 0,1 μCi na ausência e na presença de várias concentrações (a gama pode ser, por exemplo, 1010-103M OU 1011-104M de drogas concorrentes. As drogas podem ser adicionadas ao tecido ou células (~ por exemplo, 50.000 células) em um tampão e deixado incubar. A ligação não específica pode ser determinada na presença de ativadores de largo espectro ou inibidores ou agonistas ou antagonistas funcionais para cada subtipo de receptor (por exemplo, para os receptores de sigma, na presença de, por exemplo, 10 μM de um ligante apropriado para cada receptor). As reações podem ser terminadas pela filtração rápida, o que pode ser seguido por lavagens com tampão arrefecido em gelo duas vezes. A radioatividade dos discos de filtração foi seca podendo ser medida utilizando qualquer método, incluindo, mas não limitado a um analisador de cintilação líquida. As curvas de deslocamento podem ser traçadas e os valores de Ki dos ligantes de ensaio para os subtipos de receptores podem ser determinados utilizando, por exemplo, o GraphPad Prism (GraphPad Software Inc., San Diego, CA). A porcentagem de ligação específica pode ser determinada dividindo a diferença entre a ligação total (desintegrações por minuto) e ligações não específicas (desintegrações por minuto) por ligação total (desintegrações por minuto).

[0233] Em algumas modalidades, para estudos de ligação em linhagens de células ou fontes de tecidos, variando as concentrações de cada droga foram adicionados em duplicado dentro de cada experiência, e os valores individuais IC50 foram determinados utilizando, por exemplo, o software GraphPad Prism. O valor de Ki de cada ligante pode ser determinado de acordo com a equação descrita por Cheng e Prusoff (1973), e os dados finais podem ser apresentados como pKi ± S.E.M., onde, em algumas modalidades, o número de testes é de cerca de 1-6.

[0234] Em algumas modalidades, o método compreende ainda determinar se um composto que se liga a um ato de receptores sigma-2, como um antagonista funcional a um receptor de sigma-2 pela inibição solúvel do oligômero Aβ induzido por neurotoxicidade diz respeito à inibição solúvel do oligômero Aβ induzido pela perda de sinapse, e inibição solúvel do oligômero Aβ induzido pelos déficits em um ensaio de tráfego da membrana. Em algumas modalidades o método de determinação ainda que o antagonista do receptor de Sigma-2 não afeta o tráfego ou o número de sinapses, na ausência de oligômero Abeta; não induz a atividade da caspase-3 em uma célula neuronal; inibe a indução de atividade caspase-3 por um agonista do receptor de sigma-2; e/ou diminui ou protege contra a toxicidade neuronal numa célula neuronal provocada por um agonista do receptor de sigma-2.

[0235] O teste também pode incluir um ensaio funcional para determinar o efeito do composto de teste em função do parceiro de ligação, que pode ser, mas não se limita ao receptor de sigma-2. Uma variedade de tecnologias de ensaio padrão pode ser usado. Por exemplo, os métodos podem ser utilizados para medir a atividade do tipo agonista ou antagonista do tipo funcional dos compostos nas células ou tecidos vivos. Os métodos incluem, mas não estão limitados a, TR-FRET para determinar a concentração de cAMP e níveis de IP1, fluorescência em tempo real para monitorizar o fluxo de cálcio, espectroscopia dielétrica celular para medir a impedância de modulação, a contração do íleo, ou apoptose de células tumorais. A especificidade do composto de teste pode também ser determinada por, por exemplo, determinando se o composto se liga ao receptor de Sigma-1, receptor de Sigma-2, nenhum ou ambos. Um método para determinar se um composto de teste se liga a um receptor de Sigma-1 é descrito em Ganapathy, M.E. et al. (1999) J. Pharmacol. Exp. Ther., 289: 251-260, que é incorporado a este instrumento por referência, na sua totalidade. Um método para determinar se um composto de teste se liga a um receptor de Sigma-1 é descrito em Bowen, W.D et al.(1993) Mol. Neuropharmacol., 3: 117-126, que é aqui incorporado por referência na sua totalidade, e também Xu, J. et al, Nature Communications, 2011, 2:380 DOI: 10.1038/ncomms 1386 que também é por este meio incorporado por referência aqui na sua totalidade.

[0236] Em várias modalidades, a invenção proporciona os protocolos de ensaio para a identificação de um ligante seletivo de alta afinidade do receptor de sigma-2 que pode atuar como um antagonista funcional a um receptor de sigma- 2 pela inibição de neurotoxicidade induzida por oligômero Aβ solúvel diz respeito à inibição do oligômero Aβ solúvel induzido pela perda de sinapses, que inibe défices induzidos pelo oligômero solúvel Aβ num ensaio de tráfego da membrana, que não afeta o tráfego ou o número de sinapses, na ausência de oligômero Abeta; e que apresenta uma boa droga como propriedades, como aqui descrito de tal modo que o receptor de sigma-2 do composto antagonista seletivo de alta afinidade, assim identificados podem ser utilizados para tratar disfunção sináptica induzida por oligômero de Aβ solúvel in vivo.

[0237] Em algumas modalidades, a invenção proporciona métodos para determinar se um indivíduo deve ser tratado com um antagonista de sigma-2, em que o sujeito é suspeito de ter declínio cognitivo ou uma doença neurodegenerativa ou outra condição, distúrbio ou doença aqui descrita. Em algumas modalidades, o método compreende o contato de uma amostra derivada a partir do paciente com um antagonista de sigma-2 e a determinação se o composto de modulação de sigma-2 inibe ou melhora uma patologia de amiloide beta presente na amostra, em que uma amostra que mostra a inibição ou melhoria da patologia de amiloide beta presente na amostra indica que o indivíduo deve ser tratado com um antagonista de sigma-2.

[0238] Além disso, a divulgação inclui métodos para identificar antagonistas de sigma-2 que inibem uma redução induzido pelo oligômero Aβ no número de sinapses, e semelhantes. Em algumas modalidades, os métodos podem ser usados para identificar antagonistas de sigma-2 para o tratamento de uma patologia da amiloide beta. Em algumas modalidades, os métodos são usados para determinar a eficácia de um tratamento para tratar uma patologia da amiloide beta. Em algumas modalidades, a patologia amiloide beta é um defeito no tráfego da membrana, disfunção sináptica, memória e defeito de aprendizagem num animal, redução no número de sinapses, alteração no comprimento da coluna dendrítica ou morfologia da coluna, um defeito em LTP, ou um aumento a fosforilação da proteína Tau.

Beta amieloide como usado na divulgação Presente

[0239] β Amiloide humano é o produto de clivagem de uma proteína de membrana integral, proteína precursora de amiloide (APP), encontra-se concentrada nas sinapses dos neurônios. βamieloide auto-associadas para formar conjuntos oligoméricos, metaestáveis. Em concentrações mais elevadas, Abeta irá polimerizar e montar em forma de fibrilas lineares, facilitada pelo pH mais baixo. Atualmente não é claro se fibrilas são formadas a partir de oligômeros. Oligômeros β Amiloide foram demonstrados para causar a doença de Alzheimer em modelos animais induzindo alterações nas sinapses neuronais que bloqueiam a aprendizagem e a memória, e fibrilhas β amiloide têm sido associadas com os estágios avançados da doença de Alzheimer em animais e seres humanos. Na verdade, a hipótese de trabalho moderno para a doença de Alzheimer, e que ganhou um monte de apoio, é que os conjuntos Abeta e oligômeros Abeta nomeadamente estão no centro de patologia inicial associada com a doença de Alzheimer, bem como de patologias associadas com menos demências graves, tais como MCI e AD leve. Cleary, James P. et al. “Natural oligomers of the amyloid-β protein specifically disrupt cognitive function.” Nature Neuroscience Vol. 8 (2005): 79 - 84; Klyubin, I. etal. “Amyloid beta protein dimer-containing human CSF disrupts synaptic plasticity: prevention by systemic passive immunization.” J Neurosci. Vol. 28 (2008): 4231-4237. No entanto, muito pouco se sabe sobre como formar oligômeros e do estado estrutural do oligômero. Por exemplo, o número de subunidades β amieloide que se associa para formar o oligômero é atualmente desconhecido, como é a forma estrutural dos oligômeros, ou que resíduos estão expostos. Existem evidências que sugerem mais de um estado estrutural do oligômero é neuroativo. Reed, Jess D. et al. “MALDI-TOF mass spectrometry of oligomeric food polyphenols.” Phytochemistry 66:18 (September 2005): 2248-2263; Cleary, James P. et al. “Natural oligomers of the amyloid-β protein specifically disrupt cognitive function.” Nature Neuroscience Vol. 8 (2005): 79-84.

[0240] B amiloide tem afinidade para muitas proteínas encontradas no cérebro, incluindo ApoE e ApoJ. No entanto, não é claro se as chaperonas ou outras proteínas formam associações com a proteína, que podem afetar o seu estado estrutural final e/ou a sua atividade neural.

[0241] Peptídeo Abeta solúvel é susceptível de desempenhar um papel fundamental durante as fases iniciais da doença de Alzheimer através da perturbação disfunção sináptica e processos cognitivos. Por exemplo, Origlia et al. mostrou que Abeta solúvel (Abeta 42) prejudica a potenciação de longa duração (LTP) no córtex entorrinal através do receptor neuronal de produtos de glicação avançada (RAGE) ativação mediada de p38MAPK. Origlia et al. 2008, Receptor para o final de glicação avançada dependente da ativação do produto de proteína quinase ativada por p38 mitógeno contribui para a disfunção sináptica cortical mediada por beta amieloide. J. Neuroscience 28(13):3521-3530, aqui incorporada por referência.

[0242] Disfunção sináptica está envolvida nas fases iniciais da doença de Alzheimer. Peptídeos beta amieloide têm sido mostrados para alterar a função sináptica. Puzzo et al relatou que uma forma fibrilar sintética de Abeta prejudica a fase dependente da síntese de proteína tardia da LTP, sem afetar a síntese de proteínas de fase precoce. O relatório é consistente com relatórios anteriores que oligômeros Abeta são altamente tóxicos para as células e envolvidos na disfunção sináptica. Puzzo et al., 2006, Curr Alzheimer’s Res 3(3):179-183, que é incorporado aqui por referência. Abeta tem sido encontrada para prejudicar significativamente a potenciação a longo prazo do hipocampo (LTP) por várias cascatas de segundo mensageiro, incluindo uma cascata de óxido nítrico. NO/cGMP/cGK/CREB. Puzzo et al., J Neurosci. 2005, Em algumas modalidades, a invenção proporciona composições e métodos que compreendem antagonistas de receptores de sigma- 2 para a inibição de disfunção sináptica induzida por um oligômero de beta amieloide de células neuronais; e inibindo a supressão de potenciação do hipocampo a longo prazo, causada pela exposição de neurônios a oligômeros Abeta.

[0243] Qualquer forma de β amiloide pode ser utilizada na prática dos métodos de rastreio e dos ensaios de acordo com a invenção, incluindo monômeros, oligómeros, fibrilas β amiloide, bem como β amiloide associado a proteínas ("complexos de proteínas") e mais geralmente montagens β amiloides . Por exemplo, métodos de rastreio podem empregar várias formas de oligômeros β amiloide solúvel, como divulgado, por exemplo, no número de série do pedido de patente US 13/021,872; U.S. Publicação de Patente 2010/0240868; Pedido de Patente Internacional WO/2004/067561; Pedido de Patente Internacional WO/2010/011947; U.S. Publicação de Patente 20070098721; U.S. Publicação de Patente 20100209346; Pedido de Patente Internacional WO/2007/005359; U.S. Publicação de Patente 20080044356; U.S. Publicação de Patente 20070218491; WO/2007/126473; U.S. Publicação de Patente 20050074763; Pedido Internacional de Patente WO/2007/126473, Pedido de Patente Internacional WO/2009/048631, e em U.S. Publicação de Patente 20080044406, U.S. Patente No. 7902328 e U.S. Patente No. 6.218.506, cada uma das quais é aqui incorporada por referência.

[0244] Formas β amiloide, incluindo monômeros ou oligômeros β amieloide podem ser obtidos a partir de qualquer fonte. Por exemplo, em algumas modalidades, disponível comercialmente monômeros de β amieloide e/ou oligômeros de β amieloide podem ser utilizados na solução aquosa, e em outras modalidades, monômeros de β amieloide e/ou oligômeros de β amieloide que são utilizados na solução aquosa de proteína pode ser isolado e purificado por um especialista na matéria utilizando qualquer número de técnicas conhecidas. Em geral, o monômeros de β amieloide e/ou oligômeros de β amieloide utilizados na preparação da solução aquosa de proteínas e β amieloide de várias modalidades pode ser solúvel na solução aquosa. Por conseguinte, tanto as proteínas da solução aquosa e o β amieloide podem ser solúveis.

[0245] O β amieloide adicional pode ser de qualquer isoforma. Por exemplo, em algumas modalidades, os monômeros de β amieloide podem ser β amieloide 1-42, e em outras modalidades os monômeros de β amieloide podem ser β amieloide 1-40. Em ainda outras modalidades, o β amieloide pode ser β amieloide 1-39 ou β amieloide 1-41. Assim, o β amieloide de diversas modalidades podem incluir qualquer isoforma do terminal C do β amieloide. No entanto, outras modalidades incluem β amieloide no qual o terminal N foi gasto, e em algumas modalidades, a extremidade do terminal N de quaisquer isômeros do terminal C do β amieloide descritos acima podem ser aminoácido-2, 3, 4, 5, ou 6. Por exemplo, β amieloide 1-42 pode englobar β amieloide 2-42, β amieloide 3-42, β amieloide 442, ou β amieloide 5-42 e suas misturas, e de forma semelhante, β amieloide 1-40 pode englobar β amieloide 2-40, β amieloide 3-40, β amieloide 4-40, ou β amieloide 5-40.

[0246] As formas de β amieloide utilizadas em várias modalidades podem ser do tipo selvagem, ou seja, ter uma sequência de aminoácidos que é idêntica à sequência de aminoácidos de β amieloide sintetizado in vivo pela maioria da população, ou em algumas modalidades, o β amieloide pode ser um β amieloide mutante. As modalidades não estão limitadas a qualquer variedade particular do mutante β amieloide. Por exemplo, em algumas modalidades, o β amieloide introduzido na solução aquosa pode incluir uma mutação conhecida, tal como, por exemplo, β amieloide tendo a mutação "Dutch" (E22Q) ou a mutação "Arctic" (E22G). Tais monômeros mutantes podem incluir mutações que ocorrem naturalmente, tais como, por exemplo, formas de β amieloide isoladas a partir das populações de indivíduos que têm predisposição para, por exemplo, doença de Alzheimer, formas familiares de β amiloide. Em outras modalidades, monômeros de amiloide β mutante pode ser produzido sinteticamente utilizando técnicas de biologia molecular para produzir um β amieloide mutante com uma mutação específica. Em ainda outras modalidades, monômeros de β amieloide mutante podem incluir mutações anteriormente não identificadas, tais como, por exemplo, os mutantes encontrados em β amiloide mutantes gerados aleatoriamente. O termo "β amiloide", tal como aqui utilizado pretende englobar ambas as formas do tipo selvagem de β amieloide bem como qualquer uma das formas mutantes de β amiloide.

[0247] Em algumas modalidades, o β amieloide na solução aquosa de proteína pode ser de uma isoforma única. Em outras modalidades, diferentes isoformas dos terminais C de β amieloi de e/ou várias isoformas dos terminais N de β amieloide podem ser combinados para formar misturas de β amieloide que podem ser fornecidas na solução aquosa de proteína. Em ainda outras modalidades, o β amieloide pode ser derivado de proteína precursora de amiloide (APP), que é adicionado à solução aquosa contendo a proteína e é clivada in situ, e tais modalidades, diferentes isoformas de β amieloide podem ser contidas dentro da solução. Esgarçadura do terminal N e/ou remoção de aminoácidos do terminal C pode ocorrer dentro da solução aquosa após a β amieloide ter sido adicionada. Por conseguinte, as soluções aquosas preparadas tal como aqui descritas podem incluir uma variedade de isoformas de β amieloide mesmo quando uma única isoforma é inicialmente adicionada à solução.

[0248] Os monômeros de β amiloide adicionados à solução aquosa podem ser isolados a partir de uma fonte natural, tal como o tecido vivo, e em outras modalidades, o β amieloide pode ser derivado de uma fonte sintética, tais como camundongos transgênicos ou células cultivadas. Em algumas modalidades, as formas β amieloide , incluindo monômeros, oligômeros ou suas combinações, são isolados a partir de indivíduos normais e/ou doentes que foram diagnosticados com declínio cognitivo ou doenças que lhe estão associadas, tais como, mas não se limitando a doença de Alzheimer. Em algumas modalidades, os monômeros de β amieloide, oligômeros ou suas combinações, são conjuntos de Abeta que foram isolados a partir de indivíduos normais ou pacientes doentes. Em algumas modalidades, os conjuntos de Abeta são de elevado peso molecular, por exemplo, maior do que 100 kDa. Em algumas modalidades, os conjuntos Abeta são de peso molecular intermediário, por exemplo. 10 a 100 kDa. Em algumas modalidades, os conjuntos de Abeta são menos do que 10 kDa.

[0249] Os oligômeros de β amieloide de algumas modalidades podem ser constituídos por qualquer número de monômeros de β amieloide consistentes com a definição vulgarmente utilizada de "oligômero". Por exemplo, em algumas modalidades, oligômeros de β amieloide podem incluir desde cerca de 2 a cerca de 300, cerca de 2 a cerca de 250, cerca de 2 a cerca de 200 monômeros de β amieloide , e em outras modalidades, oligômeros de β amieloide podem ser compostos a partir de cerca de 2 a cerca de 150, cerca de 2 a cerca de 100, cerca de 2 a cerca de 50, ou cerca de 2 a cerca de 25, monômeros de β amieloide. Em algumas modalidades, os oligômeros de β amiloide podem incluir 2 ou mais monômeros. Os oligômeros de β amiloide de várias modalidades podem ser distinguidos de fibrilas β amieloide e protofibrilas β amieloide com base na confirmação dos monômeros. Em particular, os monômeros de β amiloide de oligômeros de β amiloide são geralmente globulares consistindo folhas plissadas β, enquanto que a estrutura secundária dos monômeros de β amiloides de fibrilas e protofibrilas é de folhas paralelas β.

Identificação de sujeitos com, ou em risco de ter a Doença de Alzheimer

[0250] Doença de Alzheimer (AD) é definida histologicamente pela presença de placas de amiloide β extracelular (Aβ) e emaranhados neurofibrilares intraneuronais no córtex cerebral. Vários biomarcadores de diagnóstico e de prognóstico são conhecidos na técnica, tais como imagiologia por ressonância magnética, tomografia de emissão de fóton único, FDG PET, PiB PET, tau CSF e análise de Abeta, bem como os dados disponíveis sobre a sua precisão de diagnóstico são discutidos em Alves et al., 2012, Alzheimer’s disease: a clinical practice-oriented review, Frontiers in Neurology, April, 2012, vol 3, Article 63, 1-20, que é aqui incorporada por referência.

[0251] O diagnóstico de demência, juntamente com a previsão de que irá desenvolver demência, foi assistida por tomografia de emissão de pósitron e imagiologia por ressonância magnética (PET) usando [(18)F] fluorodesoxiglucose (FDG). Estas técnicas não são específicas para a AD. Ver, por exemplo,Vallabhajosula S. Radiofármacos de tomografia por emissão de pósitron de imagem cerebral Amiloide beta. Semin Nucl Med. 2011 Jul;41(4):283-99. Outro ligante de PET recentemente aprovado pela FDA para imagiologia moderada a placas neuríticas amiloides frequente em pacientes com comprometimento cognitivo é injeção Florbetapir F 18, (4-((1E)-2-(6-{2-(2-(2-(18F)fluoroetoxi)etoxi)etoxi}piridin-3-il)etenil)-N-metilbenzenamina, AMYVID®,Lilly). Florbetapir se liga especificamente a Abeta fibrilares, mas não a emaranhados neurofibrilares. Ver, por exemplo, Choi SR, et al., Correlation of amyloid PET ligand florbetapir F 18 binding with Aβ aggregation and neuritic plaque deposition in postmortem brain tissue. Alzheimer Dis Assoc Disord. 2012 Jan;26(1):8-16. O ligante de PET florbetapir sofre de baixa especificidade com respeito a avaliação visual qualitativa dos exames de PET. Camus et al., 2012, Eur J Nucl Med Mol Imaging 39:621-631. No entanto, muitas pessoas com placas neuríticas parecem cognitivamente normais.

[0252] Marcadores CSF para a doença de Alzheimer incluem tau, fósforo-tau total e Abeta42. Ver, por exemplo, Andreasen , Sjogren and Blennow, World J Biol Psyciatry, 2003, 4(4): 147-155, que é aqui incorporado por referência. Níveis CSF reduzidos de forma de 42 aminoácidos de Abeta (Abeta42) e o aumento dos níveis de CSF total de tau na AD têm sido encontrados em numerosos estudos. Além disso, não são conhecidos os marcadores genéticos de mutações no gene de APP útil na identificação de indivíduos em risco de desenvolver AD. Ver, por exemplo, Goate et al., Segregation of a missense mutation in the amyloid precursor protein gene with familial Alzheimer’s disease, Nature, 349, 704-706, 1991, que é aqui incorporado por referência. Em modalidades, qualquer método diagnóstico ou prognóstico conhecido pode ser empregue para identificar um sujeito que tem ou está em risco de ter a doença de Alzheimer. Composições Farmaceuticas Compreendendo um Receptor Antagonista de Sigma-2

[0253] Os compostos antagonistas do receptor de sigma-2 aqui proporcionados podem ser administrados na forma de composições farmacêuticas. Estas composições podem ser preparadas de um modo bem conhecido na técnica farmacêutica, e podem ser administrados por uma variedade de vias, dependendo de se o tratamento local ou sistêmico desejado está sobre a área a ser tratada.

[0254] Assim, uma outra modalidade da invenção compreende composições farmacêuticas compreendendo um excipiente ou diluente farmaceuticamente aceitável e uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto antagonista do receptor de Sigma-2 da divulgação, incluindo um enantiômero, diastereoisômetro, N-óxido ou seu sal farmaceuticamente aceitável.

[0255] Embora seja possível que um composto pode ser administrado como a substância a granel, é preferível apresentar o ingrediente ativo numa formulação farmacêutica, por exemplo, em que o agente ativo é misturado com um veículo farmaceuticamente aceitável selecionado com respeito à via de administração pretendida e a prática farmacêutica padrão.

[0256] Por conseguinte, num aspecto, a invenção proporciona uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um composto, ou um fragmento de anticorpo, de qualquer uma das fórmulas acima e outros compostos descritos como antagonistas do receptor de sigma-2 acima descrito, ou um derivado farmaceuticamente aceitável deste (por exemplo, um sal ou solvato) do mesmo, e, opcionalmente, um transportador farmaceuticamente aceitável. Em particular, a divulgação proporciona uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um composto de qualquer uma das fórmulas anteriores ou um derivado farmaceuticamente aceitável deste, e, opcionalmente, umtransportador farmaceuticamente aceitável .

Combinações

[0257] Para as composições e métodos da divulgação, um composto de qualquer uma das fórmulas acima e outros compostos descritos como antagonistas do receptor de sigma-2 acima descritos podem ser utilizados em combinação com outras terapias e/ou agentes ativos.

[0258] Em algumas modalidade, o composto antagonista de sigma-2 pode ser combinado com um ou mais de um inibidor de colinesterase, uma N-metil- D-aspartato (NMDA), antagonista do receptor de glutamato, um anticorpo específico de beta amieloide, um inibidor beta-secretase 1 ( BACE1, sítio de beta amieloide da proteína precursora da enzima de clivagem 1), um modulador do fator alfa de necrose tumoral (TNFalfa), uma imunoglobulina intravenosa (IVIG), ou um antagonista da proteína do prião. Em algumas modalidades o antagonista do receptor de Sigma-2 é combinado com um inibidor de colinesterase selecionado de tacrina (COGNEX®; Sciele), donepezil (ARICEPT®; Pfizer), rivastigmina (EXELON®; Novartis), ou a galantamina (RAZADYNE®; Ortho-McNeil -Janssen). Em algumas modalidades, o antagonista do receptor de Sigma-2 são combinados com um modulador do TNFalfa que é etanercept peri-espinhal (ENBREL®, Amgen/Pfizer). Em algumas modalidades, o antagonista do receptor de Sigma-2 é combinado com um anticorpo beta amieloide específico selecionado a partir de bapineuzumab (Pfizer), solanezumab (Lilly), PF-04360365 (Pfizer), GSK933776 (GlaxoSmithKline), Gammagard (Baxter) ou Octagam ( Octapharma). Em algumas modalidades, o antagonista do receptor de Sigma-2 é combinado com um antagonista do receptor de NMDA que é memantina (NAMENDA®; Forest). Em algumas modalidades, o inibidor de BACE1 é MK-8931 (Merck). Em algumas modalidades, o antagonista do receptor de Sigma-2 é combinado com IVIG como descrito no Vism et al., J Neuroinflam 2010, 7:90, Human intravenous immunoglobulin provides protection against Ab toxicity by multiple mechanisms in a mouse model of Alzheimer’s disease, and Whaley et al., 2011, Human Vaccines 7:3, 349-356, Emerging antibody products and Nicotiana manufacturing; cada um dos quais é aqui incorporado por referência. Em algumas modalidades, o antagonista do receptor de Sigma-2 é combinado com um antagonista da proteína do prião como divulgado na Strittmatter et al., US 2010/0291090, que é aqui incorporado por referência.

[0259] Por conseguinte, a invenção proporciona, num aspecto adicional, uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um composto de qualquer uma das fórmulas acima ou seu derivado farmaceuticamente aceitável, um segundo agente ativo, e, opcionalmente, um veículo farmaceuticamente aceitável.

[0260] Quando combinados na mesma formulação será apreciado que os dois ou mais compostos devem ser estáveis e compatíveis um com o outro e os outros componentes da formulação. Quando formulados separadamente eles podem ser proporcionados em qualquer formulação conveniente, convenientemente, de tal maneira como são conhecidos para tais compostos na técnica.

[0261] Conservantes, estabilizantes, corantes e mesmo agentes aromatizantes podem ser fornecidos na composição farmacêutica. Exemplos de conservantes incluem benzoato de sódio, ácido ascórbico e ésteres de ácido p- hidroxibenzoico. Antioxidantes e agentes de suspensão também podem ser usados.

[0262] No que diz respeito às combinações incluindo agentes biológicos, tais como anticorpos monoclonais ou seus fragmentos, os excipientes adequados serão utilizados para prevenir a agregação e estabilizar o anticorpo ou fragmento em solução com baixa endotoxina, em geral, para administração parentérica, por exemplo, por via intravenosa, administração. Por exemplo, veja Formulation and Delivery Issues for Monoclonal Antibody Therapeutics, Daugherty et al., in Current Trends in Monoclonal Antibody Development and Manufacturing, Part 4, 2010, Springer, New York pp 103-129.

[0263] Oscompostos da divulgaçãopodem ser moídos usando procedimentos de moagem conhecidos tais como moagem a úmido para se obter um tamanho de partícula apropriado para a formação de comprimidos e para outros tipos de formulação. As preparações finamente divididas (nanoparticuladas) dos compostos da divulgação podem ser preparadas pelos processos conhecidos na técnica, por exemplo, ver o documento WO 02/00196 (SmithKline Beecham).

Rotas da Unidade de Administração e Formas de Dosagem

[0264] As rotas de administração (entrega) incluem, mas não estão limitados a um ou mais dos seguintes: oral (por exemplo, como um comprimido, cápsula ou como solução ingerível), tópica, mucosa (por exemplo, como um spray nasal ou aerossol para inalação), parentérica (por exemplo, por uma forma injetável), gastrointestinal, intra-espinal, intraperitoneal, intramuscular, intravenosa, intracerebroventricular, ou outra administração de depósito, etc. A administração de um anticorpo ou fragmento será geralmente por via parentérica.

[0265] Portanto, as composições da invenção incluem aquelas numa forma especialmente formulada, do modo de administração. Em certas modalidades, as composições farmacêuticas da presente descrição são formuladas numa forma que é adequada para entrega oral. Por exemplo, o composto CB e o composto CF são compostos antagonistas do receptor de sigma-2 que são biodisponíveis por via oral em modelos animais e foram administrados oralmente uma vez por dia e mostraram eficácia num modelo de condicionamento do medo, ver por exemplo os compostos biodisponíveis por via oral da Figura 12B, tal como aqui descrito pode ser preparado numa formulação oral. Em algumas modalidades, o composto antagonista de sigma-2 é um composto biodisponível por via oral, adequado para administração oral. Em outras modalidades, as composições farmacêuticas da invenção são formuladas de uma forma que seja adequada para administração parentérica de entrega. Em algumas modalidades, o composto antagonista do receptor de Sigma-2 é um anticorpo ou um fragmento deste, em que o anticorpo ou fragmento é formulado numa composição parentérica. Por exemplo, um anticorpo anti-receptor de sigma-2, tal como um anticorpo anti-PGRMC1 que bloqueia a ligação de oligômeros Abeta ao receptor de sigma-2 pode ser formulado para administração parentérica.

[0266] Os compostos da divulgação podem ser formulados para administração em qualquer forma conveniente para uso em medicina humana ou veterinária, e, por conseguinte, a divulgação inclui dentro do seu âmbito composições farmacêuticas compreendendo um composto da divulgação adaptado para uso em medicina humana ou veterinária. Tais composições podem ser apresentadas para uso de uma maneira convencional com a ajuda de um ou mais transportadores adequados. Transportadoras Aceitáveis para utilização terapêutica são bem conhecidas na técnica farmacêutica, e são descritos, por exemplo, em Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro edit. 1985). A escolha dos transportadoresfarmacêuticos pode ser selecionada tendo em vista a via de administração pretendida e a prática farmacêutica padrão. As composições farmacêuticas podem compreender como, para além de qualquer transportador ligante adequado (s), lubrificante (s), agente de suspensão (s), agente (s) de revestimento, e/ou um agente solubilizante (s).

[0267] Pode haver diferentes requisitos de composição/formulação dependendo dos diferentes sistemas de entrega. É para ser entendido que nem todos os compostos necessitam de ser administrados pela mesma rota. Da mesma forma, se a composição compreende mais do que um componente ativo, então aqueles componentes podem ser administrados por diferentes rotas. A título de exemplo, a composição farmacêutica da presente divulgação pode ser formulada para ser entregue usando uma minibomba ou por uma rota mucosal, por exemplo, como um spray nasal ou aerossol para inalação ou solução ingerível, ou parentericamente em que a composição está formulada por uma forma injetável, para entrega, por, por exemplo, uma rota intravenosa, intramuscular ou subcutânea. Alternativamente, a formulação pode ser desenhada para ser entregue por diversas rotas.

[0268] A combinação de um composto aqui proporcionada e uma molécula de anticorpo ou fragmento de anticorpo pode ser formulada e administrada por qualquer de um número de rotas e são administrados a uma concentração que é terapeuticamente eficaz na indicação ou para a finalidade requerida. Para alcançar este objetivo, os anticorpos podem ser formulados usando uma variedade de excipientes aceitáveis, conhecidos na técnica. Tipicamente, os anticorpos são administrados por injeção, por exemplo, injeção intravenosa. Métodos para realizar esta administração são conhecidos dos versados na técnica. Por exemplo, Gokarn et al., 2008, J Pharm Sci 97(8):3051-3066, aqui incorporado por referência, descrevem vários anticorpos de concentração elevada de formulações auto tamponadas. Por exemplo, os anticorpos monoclonais em formulação auto tamponada em, por exemplo, 50 mg/mL de mAb em 5,25% de sorbitol, pH 5,0 ou 60 mg/mL de mAb em 5% de sorbitol, 0,01% de polissorbato 20, pH 5,2; ou formulações tamponadas convencionais, por exemplo, 50 mg/mL mAb1 em 5,25% de sorbitol, acetato de 25 ou 50 mM, glutamato ou succinato, a um pH de 5,0; ou 60 mg/mL em 10 mM de acetato ou glutamato, 5,25% de sorbitol, 0,01% de polissorbato 20, pH 5,2; outras formulações de concentração mais baixas podem ser utilizadas como é conhecido na técnica.

[0269] Porque os compostos antagonistas do receptor de sigma-2 preferidos da divulgação cruza a barreira hematoencefálica podem ser administrados em uma variedade de métodos, incluindo, por exemplo, sistêmica (por exemplo, por via intravenosa, SC, oral, mucosa, via transdérmica) ou métodos localizados (por exemplo, , intracraniana). Quando o composto da divulgação é para ser entregue mucosamente através da mucosa gastrointestinal, ele deverá ser capaz de permanecer estável durante o trânsito que o trato gastrointestinal; por exemplo, deverá ser resistente à degradação proteolítica, estável ao pH ácido e resistente aos efeitos detergentes da bílis. Por exemplo, os compostos antagonistas de sigma-2 selecionados a partir dos ligantes de sigma 2-e preparados para administração por via oral acima descrito podem ser revestidos com uma camada de revestimento entérico. O material da camada de revestimento entérico pode ser disperso ou dissolvido em água ou num solvente orgânico adequado. Como polímeros da camada de revestimento entérico, um ou mais, separadamente ou em combinação, dos seguintes podem ser utilizados; por exemplo, soluções ou dispersões de copolímeros do ácido metacrílico, ftalato de acetato de celulose, butirato de acetato de celulose, ftalato de hidroxipropilmetilcelulose, acetato succinato de hidroxipropil metilcelulose, ftalato de acetato polivinílico, trimelitato de acetato de celulose, carboximetiletilcelulose, goma-laca ou outro polímero (s) de camada de revestimento entérico adequado. Por razões ambientais, um processo de revestimento aquoso pode ser preferido. Nesses processos aquosos copolímeros de ácido metacrílico são os mais preferidos.

[0270] Onde apropriado, as composições farmacêuticas podem ser administradas por inalação, por utilização de um adesivo para a pele, oralmente na forma de comprimidos contendo excipientes tais como amido ou lactose, ou em cápsulas ou óvulos quer isoladamente quer em mistura com excipientes, ou sob a forma de elixires, soluções ou suspensões contendo agentes de aromatização ou de coloração, ou eles podem ser injetados parentericamente, por exemplo intravenosamente, intramuscularmente ou subcutaneamente. Para administração bucal ou sublingual as composições podem ser administradas na forma de comprimidos ou pastilhas, que podem ser formuladas de uma maneira convencional.

[0271] Quando a composição da revelação é para ser administrada parentericamente, tal administração inclui, sem limitação: por via intravenosa, intraarterial, intratecal, intraventricular, intracraniana, intramuscular ou subcutânea, administração do composto da divulgação; e/ou usando técnicas de infusão. Os anticorpos ou fragmentos são tipicamente administrados parentericamente, por exemplo, por via intravenosa.

[0272] As composições farmacêuticas adequadas para injeção ou infusão podem estar na forma de uma solução estéril aquosa, uma dispersão ou de um pó estéril que contém o ingrediente ativo, ajustado, se necessário, para a preparação de uma tal solução estéril ou dispersão adequada para infusão ou injeção. Esta preparação pode opcionalmente ser encapsulada em lipossomas. Em todos os casos, a preparação final deve ser estéril, líquida e estável sob as condições de produção e armazenamento. Para melhorar a estabilidade de armazenamento, tais preparações também podem conter um conservante para evitar o crescimento de micro-organismos. A prevenção da ação de micro-organismos pode ser conseguida através da adição de vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabeno, clorobutanol, ou ácido ascórbico. Em muitos casos, as substâncias isotônicas são recomendadas, por exemplo, açúcares, tampões e o cloreto de sódio para garantir a pressão osmótica semelhante aos dos fluidos corporais, particularmente sangue. A absorção prolongada de tais misturas injetáveis pode ser conseguida pela introdução de agentes de retardamento da absorção, tais como monoestearato de alumínio ou gelatina.

[0273] As dispersões podem ser preparadas de um veículo líquido ou intermediário, tal como a glicerina, glicóis de polietileno líquidos, óleos de triacetina, e suas misturas. O veículo líquido ou intermediário pode ser um meio solvente ou de dispersão líquida que contém, por exemplo, água, etanol, um poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol ou outros semelhantes), óleos vegetais, ésteres de glicerina não-tóxicos e suas misturas adequadas. Fluidez adequada pode ser mantida, por geração de lipossomas, a administração de um tamanho de partícula adequada no caso de dispersões, ou pela adição de agentes tensioativos.

[0274] Para administração parentérica, o composto é melhor usado na forma de uma solução aquosa estéril que pode conter outras substâncias, por exemplo, sais ou glucose suficientes para tornar a solução isotônica com o sangue. As soluções aquosas devem ser adequadamente tamponadas (preferencialmente a um pH de 3 até 9), se necessário. A preparação de formulações parentéricas adequadas sob condições estéreis é prontamente realizada por técnicas farmacêuticas padrão bem-conhecidas daqueles versados na técnica.

[0275] As soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas por mistura de um composto das fórmulas I, com um solvente adequado e um ou mais dos transportadores anteriormente mencionados, seguido por filtração estéril. No caso de pós estéreis adequados para utilização na preparação de soluções injetáveis estéreis, os métodos de preparação preferidos incluem a secagem em vácuo e liofilização, que fornecem misturas pulverulentas dos antagonistas de receptores de sigma-2 e excipientes desejados para a subsequente preparação de soluções estéreis.

[0276] Os compostos de acordo com a divulgação podem ser formulados para uso em medicina humana ou veterinária por injeção (por exemplo, por injeção intravenosa ou infusão de bolus ou por via intramuscular, subcutânea ou intratecal) e podem ser apresentadas em forma de dose unitária, em ampolas, ou outros recipientes de dose unitária, ou em recipientes de dosagens múltiplas, se necessário com um conservante adicionado. As composições para injeção podem estar na forma de suspensões, soluções ou emulsões, em veículos oleosos ou aquosos, e podem conter agentes de formulação tais como suspensão, estabilização, solubilização e/ou agentes dispersantes. Alternativamente, o ingrediente ativo pode estar na forma de pó estéril para a reconstituição antes do uso com um veículo adequado, por exemplo, água estéril livre de pirogênio.

[0277] Os compostos da invenção podem ser administrados sob a forma de comprimidos, cápsulas, trociscos, óvulos, elixires, soluções ou suspensões, para pedidos de libertação imediata, retardada, modificada, sustentada, pulsada, ou controlada.

[0278] Os compostos da presente memória descritiva também podem ser apresentados para uso humano ou veterinário numa forma adequada para administração oral ou bucal, por exemplo na forma de soluções, géis, xaropes, ou suspensões, ou de um pó seco para reconstituição com água ou outro veículo adequado antes de usar. Composições sólidas tais como comprimidos, cápsulas, pastilhas, trociscos, pastilhas, pílulas, pílulas grandes, pó, pastas, grânulos, balas ou preparações de pré-mistura podem ser usadas. As composições sólidas e líquidas para uso oral podem ser preparadas de acordo com métodos bem conhecidos na técnica. Tais composições podem também conter um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis e excipientes que podem estar em forma sólida ou líquida.

[0279] Os comprimidos podem conter excipientes tais como celulose microcristalina, lactose, citrato de sódio, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio dibásico e glicina, desintegrantes tais como amido (preferivelmente amido de milho, batata ou amido de tapioca), glicolato de amido de sódio, croscarmelose de sódio e certos silicatos complexos, e ligantes de granulação tais como polivinilpirrolidona, hidroxipropilmetilcelulose (HPMC), hidroxipropilcelulose (HPC), sacarose, gelatina e acácia.

[0280] Adicionalmente, agentes de lubrificação tais como estearato de magnésio, ácido esteárico, beenato de gliceril e talco podem ser incluídos.

[0281] As composições podem ser administradas por via oral, sob a forma de comprimidos de libertação rápida ou controlada, micropartículas, mini- comprimidos, cápsulas, saquetas, e soluções ou suspensões orais, ou pós para a sua preparação. As preparações orais podem opcionalmente incluir vários veículos farmacêuticos convencionais e excipientes, tais como aglutinantes, preenchimentos, lubrificantes, tampões, agentes de deslizamento, corantes, desintegrantes, aromatizantes, adoçantes, agentes tensioativos, agentes de libertação de molde, agentes anti-adesivos e revestimentos. Alguns excipientes podem ter múltiplas funções nas composições, por exemplo, atuar como ambos os ligantes e os desintegrantes.

[0282] Exemplos de desintegrantes farmaceuticamente aceitáveis para composições orais, úteis na invenção incluem, mas não estão limitados ao amido, amido pré-gelatinizado, glicolato de amido de sódio, carboximetilcelulose de sódio, croscarmelose de sódio, celulose microcristalina, alginatos, resinas, agentes tensioativos, composições efervescentes, aquoso silicatos de alumínio e polivinilpirrolidona reticulada.

[0283] Exemplos de ligantes farmaceuticamente aceitáveis para composições orais úteis para esta invenção incluem, mas não estão limitados a acácia; derivados de celulose, tais como metilcelulose, carboximetilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, hidroxipropilcelulose ou a hidroxietilcelulose; gelatina, glucose, dextrose, xilitol, polimetacrilatos, polivinilpirrolidona, sorbitol, amido, amido pré-gelatinizado, goma de tragacanto, resina de xantina, alginatos, silicato de magnésio-alumínio, polietileno glicol ou bentonita.

[0284] Exemplos de agentes de preenchimento farmaceuticamente aceitáveis para composições orais incluem, mas não estão limitados a lactose, anidroglucose, mono-hidrato de lactose, sacarose, dextrose, manitol, sorbitol, amido, celulose (celulose microcristalina particularmente), fosfato de hidro- ou anidro-cálcio, carbonato de cálcio e sulfato de cálcio.

[0285] Exemplos de lubrificantes farmaceuticamente aceitáveis úteis nas composições da invenção incluem, mas não estão limitados ao estearato de magnésio, talco, polietilenoglicol, polímeros de óxido de etileno, laurilsulfato de sódio, laurilsulfato de magnésio, oleato de sódio, fumarato de estearil de sódio, e coloidal dióxido de silício.

[0286] Exemplos de odorantes farmaceuticamente aceitáveis adequados para as composições orais incluem, mas não estão limitados a aromas sintéticos e óleos aromáticos naturais, tais como extratos de óleos, flores, frutos (por exemplo, banana, maçã, cereja ácida, pêssego) e combinações dos mesmos, e aromas semelhantes. A sua utilização depende de muitos fatores, sendo o mais importante a aceitabilidade organoléptica para a população que vai tomar as composições farmacêuticas.

[0287] Exemplos de corantes adequados farmaceuticamente aceitáveis para as composições orais incluem, mas não estão limitados a, corantes naturais e sintéticos, tais como dióxido de titânio, beta-caroteno e extratos de casca de toranja.

[0288] Exemplos de revestimentos farmaceuticamente útieis aceitáveis para as composições orais, tipicamente utilizados para facilitar a deglutição, modificam as propriedades de libertação, melhoram a aparência e/ou mascaram o sabor das composições incluem, mas não estão limitados a hidroxipropilmetilcelulose, hidroxipropilcelulose e copolímeros de acrilato- metacrilato .

[0289] Os exemplos adequados de adoçantes farmaceuticamente aceitáveis para as composições orais incluem, mas não estão limitados ao aspartame, sacarina, sacarina de sódio, ciclamato de sódio, xilitol, manitol, sorbitol, lactose e sacarose.

[0290] Os exemplos adequados de tampões farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados ao ácido cítrico, citrato de sódio, bicarbonato de sódio, fosfato de sódio dibásico, óxido de magnésio, carbonato de cálcio e hidróxido de magnésio.

[0291] Os exemplos adequados de surfactantes farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados a lauril sulfato de sódio e polissorbatos.

[0292] As composições sólidas de um tipo semelhante podem também ser empregues como agentes de preenchimento em cápsulas de gelatina. Excipientes preferidos a este respeito incluem lactose, amido, uma celulose, açúcar do leite ou polietileno glicóis de elevado peso molecular. Para suspensões aquosas e/ou elixires, o agente pode ser combinado com vários agentes adoçantes ou aromatizantes, matéria corante ou corantes, com agentes emulsionantes e/ou agentes de suspensão e com diluentes tais como água, etanol, propileno glicol e glicerina, e suas combinações.

[0293] Como indicado, os compostos da invenção podem ser administrados por via intranasal ou por inalação e é convenientemente entregue na forma de um inalador de pó seco ou uma apresentação de spray aerossol a partir de um recipiente pressurizado, bomba, pulverizador ou nebulizador com a utilização de um propulsor adequado, por exemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, um hidrofluoroalcano tal como 1,1,1,2- tetrafluoroetano (HFA 134AT) ou 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropano (HFA 227EA), dióxido de carbono ou outro adequado gás. No caso de um aerossol pressurizado, a unidade de dosagem pode ser determinada fornecendo uma válvula para entregar uma quantidade doseada. O contêiner pressurizado, bomba, pulverizador ou nebulizador pode conter uma solução ou suspensão do composto ativo, por exemplo, utilizando uma mistura de etanol e o propulsor como solvente, que pode adicionalmente conter um lubrificante, por exemplo, trioleato de sorbitano.

[0294] As cápsulas e cartuchos (feitos, por exemplo, a partir de gelatina) para uso num inalador ou insuflador podem ser formulados para conter uma mistura em pó do composto e uma base em pó adequada tal como lactose ou amido.

[0295] Para administração tópica por inalação os compostos de acordo com a divulgação podem ser entregues para uso em medicina humana ou veterinária através de um nebulizador.

[0296] As composições farmacêuticas da presente descrição pode conter 0,01-99% de peso por volume do material ativo. Para a administração tópica, por exemplo, a composição conterá geralmente 0,01-10%, mais preferivelmente 0,01-1% do material ativo.

[0297] Os compostos podem ser administrados na forma de sistemas de entrega de lipossoma, tais como pequenas vesículas unilamelares, grandes vesículas unilamelares e vesículas multilamelares. Os lipossomas podem ser formados a partir de uma variedade de fosfolípidos, tais como colesterol, estearilamina ou fosfatidilcolinas.

[0298] A forma de dosagem de composição farmacêutica ou unidade da divulgação podem ser administradas de acordo com um regime de dosagem e administração definido por testes de rotina à luz das orientações dadas acima para obter uma atividade ótima, enquanto minimiza os efeitos secundários de toxicidade ou para um paciente em particular. No entanto, tal ajuste fino do regime terapêutico é rotina em função das orientações dadas aqui.

[0299] A dosagem dos compostos da presente descrição podem variar de acordo com uma variedade de fatores, tais como condições de doença subjacente, a condição do indivíduo, peso, sexo e idade, e o modo de administração. Uma quantidade eficaz para tratar um distúrbio pode ser facilmente determinada por métodos empíricos conhecidos dos versados na técnica, por exemplo através do estabelecimento de uma matriz de dosagens e frequências de administração e comparando um grupo de unidades experimentais ou sujeitos a cada ponto na matriz. A quantidade exata a ser administrada a um paciente variará dependendo do estado e gravidade da doença e a condição física do paciente. Uma melhoria mensurável de qualquer sintoma ou parâmetro pode ser determinada por uma pessoa versada na técnica ou relatada pelo paciente para o médico. Será entendido que qualquer atenuação clinicamente ou estatisticamente significativa ou melhoria de qualquer sintoma ou parâmetro de perturbações do trato urinário está dentro do âmbito da divulgação. Clinicamente atenuação ou melhoria significativa significa que é perceptível ao paciente e/ou ao médico.

[0300] A quantidade do composto a ser administrada pode variar entre cerca de 0,01 e cerca de 25 mg/kg/dia, usualmente entre cerca de 0,1 e cerca de 10 mg/kg/dia e mais frequentemente entre 0,2 e cerca de 5 mg/kg/dia. Será entendido que as formulações farmacêuticas da presente descrição não tem necessariamente de conter toda a quantidade do composto que é eficaz para tratar o distúrbio, tais como as quantidades eficazes podem ser alcançadas por administração de uma pluralidade de doses divididas de tais formulações farmacêuticas.

[0301] Numa modalidade preferida da divulgação, os compostos I são formulados em cápsulas ou comprimidos, contendo usualmente 10 a 200 mg dos compostos da divulgação, e são de preferência administrados a um doente a uma dose diária total de 10 a 300 mg, de preferência 20 a 150 mg e mais preferencialmente cerca de 50 mg.

[0302] Uma composição farmacêutica para administração parentérica contém entre cerca de 0,01% a cerca de 100%, em peso, do composto ativo da divulgação, com base em 100% em peso da composição farmacêutica total.

[0303] Geralmente, as formas de dosagem transdérmica contêm de cerca de 0,01% a cerca de 100% em peso do composto ativo em relação a 100% do peso total da forma de dosagem.

[0304] A forma de dosagem de composição ou unidade farmacêutica pode ser administrada em uma única dose diária, ou a dosagem diária total pode ser administrada em doses divididas. Além disso, a co-administração ou administração sequencial de outro composto para o tratamento da doença pode ser desejável. Para esta finalidade, os princípios ativos combinados são formulados numa unidade de dosagem simples.

Síntese dos Compostos

[0305] Os compostos de fórmulas I e II e enantiômeros,diastereoisômetros, N-óxidos, e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, podem ser preparados pelos métodos gerais delineados em, por exemplo, WO2013/029057, aqui incorporados por referência, ou como descrito a seguir, os referidos métodos que constituem um outro aspecto da divulgação.

[0306] Será apreciado por aqueles versados na técnica que pode ser desejável utilizar derivados protegidos de intermediários usados na preparação dos compostos. Grupos funcionais de proteção e desproteção podem ser realizados por métodos conhecidos na técnica (ver, por exemplo, Green and Wuts Protective Groups in Organic Synthesis. John Wiley and Sons, New York, 1999.). Hidroxi ou grupos amino podem ser protegidos com qualquer grupo de proteção de hidroxil ou amino. Os grupos de proteção amino podem ser removidos por técnicas convencionais. Por exemplo, grupos acil, tais como os grupos alcanoíl, alcoxicarbonil e aroil, podem ser removidos por solvólise, por exemplo, por hidrólise sob condições ácidas ou básicas. Grupos arilmetoxicarbonil (por exemplo, Benziloxicarbonil) pode ser clivado por hidrogenólise na presença de um catalisador tal como paládio-em-carvão.

[0307] A síntese dos compostos alvo é completada pela remoção de quaisquer grupos protetores que possam estar presentes nos penúltimos intermediários utilizando técnicas convencionais, que são bem conhecidos dos versados na técnica. Os produtos finais desprotegidos são, em seguida, purificados, como necessário, utilizando técnicas convencionais, tais como cromatografia em sílica gel, por HPLC sobre gel de sílica e semelhantes, ou por recristalização.

EXEMPLOS DE SÍNTESE E TRABALHO

[0308] Exemplos 1 e 2 descrevem preparações de oligômeros Abeta que poderiam ser utilizados para fins experimentais, tais como aqueles aqui descritos. As preparações particulares utilizadas no tráfego de membrana e ensaios de redução da ligação de oligômero/sinapse, bem como os utilizados nos ensaios in vivo descritos abaixo são cada um deles descritos no exemplo ao qual eles pertencem.

Exemplo 1: Preparação dos Oligômeros de Amiloide β

[0309] As condições em que amiloide β podem oligomerizar no tecido nervoso, um meio aquoso de proteínas solúveis com a qual possa associar, foram re-criadas para identificar o estado estrutural da doença mais relevante de oligômeros de beta amieloide e fibrilas. Proteínas solúveis aquosas foram preparadas a partir de cérebro de camundongo por ultracentrifugação. Especificamente, 5 volumes de tampão TBS (20 mM Tris-HCL, pH 7,5, NaCl a 34 mm e um coquetel de inibidor de protease completa (Santa Cruz) por grama de tecido cerebral foi adicionado ao tecido de cérebro de camundongo em gelo. Homogeneização de Dounce foi então levada a cabo com um pilão de ajuste apertado. Os tecidos cerebrais homogeneizados foram então centrifugados a 150.000 xg durante 1 hora a 4°C (40.000 rpm Ty65). O infranadante (entre mielina flutuante e um meio centímetros acima da pelete) foi então removido e as alíquotas foram congeladas a -75 °C. Os sedimentos foram então ressuspensos em TBS para o volume original, e congelado em alíquotas a -75° C. Sintético, amiloide humana monomérico β 1-42 foi adicionado a esta mistura para proporcionar uma concentração final de 1.5uM de amiloide β, e a solução foi incubada durante 24 horas a 4 °C. A centrifugação da mistura a 5,800g durante 10 minutos, foi realizada para remover conjuntos fibrilares e, em seguida, a imunoprecipitação foi realizada utilizando colunas de centrifugação de agarose conjugadas 6E10 (Pierce Chemical Company) durante 24 horas a 4° C. Os oligômeros de beta amieloide eluídos foram então sujeitos a análise por espectroscopia de massa MALDI -Tof para identificar o conteúdo da amostra.

[0310] O amiloide β auto-associado na proteína que contém a soluçãode modo a formar conjuntos de subunidade de 22.599 Da, e 5 pentâmeros da subunidade 31950 Da, 7, 7mers subunidade. Outro pico a 49291 Da pode representar 12 subunidade, 12mers, embora isto não pareça ser um peso molecular preciso para 12mers de beta amieloide. Notavelmente, não existem picos observados em cada 4518 Da ou 9036 Da o que representaria monômeros beta amieloide e dímeros. No entanto, picos em 9882 Da e 14731 Da poderiam representar dímeros amiloide β associados com um 786 Da (ou 2 x 393 Da) lipídios ou proteínas e trímeros amiloides β associados com 3 x 393 lipídios ou proteínas Da, respectivamente. Além disso, a presença de um pico a 19.686 Da é indicativo de um estado de montagem, possivelmente envolvendo um complexo de trímero e um fragmento do β amiloide de camundongo de 4954 Da. Consequentemente estes dados podem refletir a associação de pequenos lipídios ou proteínas com dímeros e trímeros de β-amiloide que pode direcionar a montagem de estados conformacionais únicas para sistemas fisiológicos.

Exemplo 2: Preparação dos oligômeros de beta amieloide

[0311] Uma solução de 1.5uM humana monomérica amiloide β 1-42 em uma mistura das proteínas solúveis do cérebro de camundongo foram incubadas durante 24 horas a 4°C como descrito no Exemplo 1. Esta solução foi então tratada com tri-fluoro etanol (TFE) antes de tomar os espectros. Em TFE, estruturas de proteínas montadas e complexos proteicos não covalentemente ligados dissociam nas proteínas desnaturadas, e os picos associados com oligômeros montados são esperados a desaparecer. A maioria dos picos de proteína observada no Exemplo 1 desapareceu incluindo a 9822 Da, 14731 Da, 31950 Da, e 49,291 Da picos identificados acima. No entanto, um pico abundante é observado a 4518 Da, que representa pico do monômero β amiloide. Um pico a 4954,7 é aparente que pode representar um fragmento mais abeta semelhante ao amiloide β 1-46. Um pico adicional é observado a 7086 Da, que não estava presente na preparação descrita no Exemplo 1, o que pode representar monômeros de beta amieloide associados com uma proteína ligada covalentemente 2550 Da.

Exemplo 3: Isolamento de oligômeros de beta amieloide de tecido cerebral humano AD.

[0312] Extratos solúveis em TBS: As amostras de tecido cerebral post-mortem de pacientes humanos caracterizados através de análise histopatológica como Fase Braak V/VI doença de Alzheimer (AD) foram obtidas a partir de um banco de tecidos do cérebro do hospital. Espécimes de tecidos normais e AD correspondido a idade e sexo foram diluídas para tecido 0.15gm/ml em 20 mM Tris-HCl, 137 mM de NaCl, pH 7,6 contendo 1 mM de EDTA e 1 mg/ml de coquetel inibidor de protease completo (Sigma P8340) e homogeneizado. Ultracentrifugação dos homogenatos de tecido foi realizada a 105,000g durante 1 hora numa Ultracentrífuga Beckman Optima XL-80K. As frações solúveis em TBS resultantes foram imunoempobrecida utilizando colunas de agarose proteína A e proteína G (Pierce Chemical) e, em seguida, fracionada por tamanhos com 3, 10 & 100 kDa NMWCO filtros Amicon Ultra (Millipore Corporation).

[0313] Imunoprecipitação: Extratos solúveis em TBS imunoempobrecido e tamanho fracionados foram concentrados para cerca de 200 ul nos filtros Amicon Ultra NMWCO adequados. Os extratos solúveis em TBS concentrados foram diluídos até 400ul com tampão de amostra TBS (Pierce Chemical) e centrifugado durante 10 minutos a 5.800 g para remover as fibrilas. O sobrenadante resultante foi então imunoprecipitado com grânulos de agarose conjugados com 6E10 durante a noite a 4°C, seguido de eluição de antígeno usando eluição de tampões Gentle de força osmótica elevada (Pierce Chemical) para isolar espécies contendo proteína Abeta.

[0314] Espectrometria de massa MALDI-: Beta amieloide imunoisolado foi sujeito a análise por espectroscopia de massa usando um instrumento Applied Biosystems (ABI) Voyager DE-Pro MALDI-TOF. As amostras foram analisadas usando vários tipos de matriz, tais como α-Ciano-4- hidroxicinâmico (CHCA), ácido sinápico (SA), ou 6-aza-2-tiotimina (ATT), dependendo da gama de pesos moleculares alvo da análise. O instrumento foi executado em um modo de íon linear positivo juntamente com um atraso de extração variável. Espectros não acumulados representaram 100 tiros de um "ponto quente" por aquisição, enquanto espectros acumulados foram representados por 12 áreas separadas de cada local com 200 disparos de laser por aquisição.

[0315] Análises de dados: Aquisição e análise de dados foi realizada usando o pacote de software Voyager Data Explorer. O processamento padrão do espectro de massa incluído no alisamento das funções de espectro e subtração da linha de base, além de variações na relação sinal-ruído.

[0316] ELISA para quantificação Ab: As frações solúveis em imunoprecipitados TBS foram analisados tanto para a concentração "total" Abeta e ololigômero Abeta utilizando uma técnica de ELISA sanduíche modificada. Resumidamente, 6E10 e 4G8 revestidos por placas de 96 poços Nunc MaxiSorp foram incubados com amostras contendo Abeta e depois sondados com um anticorpo biotinilado de detecção de 4G8. A incubação com Estreptavidina-HRP (Rockland) seguida pelo desenvolvimento de um substrato de Tetrametil benzidina (TMB) permitiu a detecção colorimétrica (OD 450) de abeta em um leitor de placas Biotek Synergy HT. Abeta Monomérica 1-42 foi usada para a geração de uma curva padrão e, juntamente com o software GEN 5 permitido para a quantificação dos níveis de Abeta nas amostras precipitadas imunologicamente.

Exemplo 4: Ensaios De Ligação do Receptor

[0317] Certos compostos são testados quanto à interação com vários receptores, bloqueando a ligação de ação ou de seus agonistas ou antagonistas. Alguns compostos são testados para ver se eles interagem diretamente com o receptor celular conhecido ou proteínas de sinalização. Os compostos podem ser testados quanto à capacidade de deslocar a ligação de agonistas ou antagonistas conhecidas de um determinado receptor humano que foi sobre-expresso nas linhas celulares ou isolado a partir de tecido. Os compostos também podem ser testados quanto à capacidade para bloquear a sinalização a jusante induzidos por agonistas ou antagonistas de um determinado receptor humano. Os compostos podem ser testados para ação em 100 receptores conhecidos, e é desejável que a atividade específica ocorrerá em apenas um pequeno subconjunto de receptores do SNC relevantes. Os compostos que se ligam a receptores de sigma-2 com a afinidade mais elevada em relação a outros receptores, são identificados como ligantes seletivos do receptor de sigma-2.

[0318] Usando o mesmo protocolo, alguns compostos para os quais os dados de tráfego de membrana são dados na Tabela 2 são testados para o reconhecimento dos receptores de sigma-2. Certos compostos de Fórmula I preferidos são ligantes seletivos do receptor de sigma-2, isto é, se ligam preferencialmente ao receptor de sigma-2.

[0319] O Ensaio De Ligação do Radioligante Competitivo.

[0320] Ensaios de ligação de radioligantes para os receptores de Sigma-1 e os receptores de sigma-2 foram levados a cabo por uma organização de pesquisa de contrato comercial. Para ligação de Sigma-1, várias concentrações de compostos de teste a partir de 100 μM a 1 nM foram usadas para deslocar 8 nM [3H] (+) pentazocina de receptores endógenos nas membranas das células de Jurkat (Ganapathy ME et al. 1991, J Pharmacol. Exp. Ther. 289:251-260). 10 μM de haloperidol foi utilizada para definir a ligação não específica. Para concentrações de vários receptores de sigma-2 de compostos de teste a partir de 100 μM a 1 nM foram usadas para deslocar 5 nM de [3H] 1,3-di- (2-tolil)guanidina a partir de receptores endógenos sobre membranas de córtex cerebral do camundongo, na presença de 300 nM de (+) pentazocina para mascarar receptores de Sigma-1. (Bowen WD, et al. 1993, Mol. Neuropharmcol 3:117-126). 10 μM de haloperidol foi utilizada para definir a ligação não específica. As reações foram terminadas por filtração rápida através de filtros Whatman GF/C usando um colhedor de células Brandel 12R seguido por duas lavagens com tampão arrefecido em gelo. A radioatividade dos discos de filtração seca foi medida utilizando um analisador de cintilação líquida (Tri-Carb 2900TR; PerkinElmer Life and Analytical Sciences). As curvas de deslocamento foram traçadas e os valores de Ki dos ligantes de ensaio para os subtipos de receptores foramr determinados utilizando o GraphPad Prism (GraphPad Software Inc., San Diego, CA). A porcentagem de ligação específica foi determinada dividindo a diferença entre a ligação total (desintegrações por minuto) e ligações não específicas (desintegrações por minuto) por ligação total (desintegrações por minuto).

[0321] Os receptores de afinidades de Sigma-1 e Sigma-2 são tipicamente obtidos a partir de estudos publicados utilizando homogenatos do tecido cerebral com [3H] (+) pentazocina para medir o deslocamento de receptores de Sigma-1 e [3H] 1,3-di- (2-tolil) guanidina na presença de 300 nM (+) pentazocina para medir o deslocamento de receptores de sigma-2.

[0322] O Ensaio De Ligação Do Radioligante Competitivo 2.

[0323] A afinidade dos compostos ligantes dos candidatos de sigma- 2 a sigma-1 e os receptores de sigma-2 também foi determinado pelo deslocamento de diferentes ligantes marcados de sigma-2 ou sigma-1 conhecidos. Os ensaios de filtração foram conduzidos de acordo com o procedimento previamente publicada (Xu et al., 2005). Os compostos de teste foram dissolvidos em N,N- Dimetilformamida (DMF), sulfóxido de dimetil (DMSO) ou etanol e, em seguida, diluído em 50 mM de Tris-HCl pH 7,4 contendo tampão 150 mM de NaCl e 100 mM de EDTA. Homogeneizados de membrana foram feitos a partir cérebro de cobaia para ensaio de ligação de sigma-1 e fígado de camundongos do ensaio de ligação para sigma-2. Os homogenatos da membrana foram diluídos com tampão 50 mM de Tris-HCl, pH 8,0 e incubado a 25°C, num volume total de 150 uL em placas de 96 poços com os compostos de ensaio de radioligante e com concentrações que variam de 0,1 nM a 10 nM. Após a incubação estar completa, as reações foram terminadas pela adição de 150 uL de tampão de lavagem arrefecido com gelo (10 mM de Tris HCI, 150 mM de NaCl, pH 7,4) utilizando uma transferência de pipeta de 96 canais (Fisher Scientific, Pittsburgh, PA) e as amostras colhidas e filtradas rapidamente através de placa de 96 poços de filtro de fibra de vidro (Millipore, Billerica, MA) que haviam sido pré-embebidas com 100 uL de 50 mM de tampão Tris-HCI. Cada filtro foi lavado quatro vezes com 200 uL de tampão de lavagem arrefecido com gelo (10 mM de Tris-HCl, 150 mM de NaCl, pH 7,4). Um contador de cintilação líquida Wallac MicroBeta 1450 (Perkin Elmer, Boston, MA) foi utilizado para quantificar a radioatividade ligada.

[0324] Os ensaios de ligação do receptor de Sigma-1 foram conduzidos usando homogenatos de membrana do cérebro da cobaia (proteína ~ 300 ug) e ~ 5 nM de [3H] (+) - pentazocina (34,9 Ci/mmol, Perkin Elmer, Boston, MA), o tempo de incubação foi de 90 min à temperatura ambiente. A ligação não específica foi determinada a partir de amostras que continham 10 μM de haloperidol frio.

[0325] Os ensaios de ligação do receptor de Sigma-2 foram realizados utilizando homogenatos de membranas de fígado de camundongo (~ 300 ug de proteína) e ~ 2 nM do radioligante altamente seletivo de sigma-2 [3H] RHM-1 apenas (sem outros bloqueadores) (America Radiolabeled Chemicals Inc. St. Louis, MO), ~10 nM [3H]DTG (58.1 Ci/mmol, Perkin Elmer, Boston, MA) or ~10 nM [3H]Haloperidol (America Radiolabeled Chemicals Inc., St. Louis, MO) na presença de 1uM (+)-pentazocina para bloquear sítios de sigma-1, tempos de incubação de 6 minutos para [3H] RHM-1, 120 min para [3H] DTG e [3H]haloperidol à temperatura ambiente. A ligação não específica foi determinada a partir de amostras que continham 10uM de haloperidol frio.

[0326] Os dados das experiências de inibição competitivas foram modelados utilizando análise de regressão não-linear para determinar a concentração do inibidor que inibe 50% da ligação específica do radioligante (valor IC50). A afinidade de ligação, valores Ki foi calculado utilizando o método de Cheng e Prusoff. O valor de Kd utilizado para [3H] (+)- pentazocina no cérebro da cobaia foi 7,89 nM, para [3H]RHM-1 e [3H]DTG no fígado de camundongo foram de 0,66 nM e 30,73 nM respectivamente. O composto padrão haloperidol foi usado para a garantia de qualidade. Dados de afinidade do receptor de Sigma-2 para os compostos exemplares dos Exemplos 1-118 são apresentados na Tabela 2.

[0327] Em algumas modalidades, os compostos de isoindolina de acordo com a fórmula I e/ou fórmula II, como aqui proporcionado, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, exibem sigma-2 de afinidade de ligação ao receptor Ki não superior a 1000 nM, não superior a 750 nM, não superior a 500 nM não superior a 250 nM não superior a 100 nM não superior a 50 nM não superior a 25 nM, ou não mais do que 10 nM, quando testado de acordo com um protocolo de ensaio de ligação ao receptor de sigma-2 aqui fornecido.

Exemplo 5: Perda de memória em camundongos transgênicos: Teste de Morris Swim

[0328] Os compostos selecionados foram testados para determinar a capacidade de reverter a perda de memória observados em modelos antigos de camundongo transgênicos de doença de Alzheimer, em que oligômeros se constroem com a idade. Para este estudo foram escolhidos camundongos Happ expressando mutações APP751 humanas Suecas (670/671) e Londres (717) sob o controle do promotor murino Thy-1. Estes camundongos exibem um aumento dependente da idade na quantidade de Abeta, com placas desenvolvendo o início em 3-6 meses e déficits cognitivos de exposição estabelecida em 8 meses de idade. Neste estudo, em vez de impedir que ocorra défices, os défices que já foram estabelecidos foram tratados. Estes estudos foram realizados em conformidade com um contrato de serviço por cientistas que estavam cegos para as condições experimentais. O composto de teste é infundida a 0,5 e 0,1 mg/kg/dia durante um mês em camundongos fêmeas de 8 meses de idade através da minibomba subcutânea e o desempenho cognitivo é testado no labirinto de água de Morris, um teste de aprendizagem espacial baseado no hipocampo e memória. Este modelo de camundongo não apresenta perda neuronal de modo que o restabelecimento da memória não pode ser atribuído a aversão de apoptose.

[0329] A velocidade de natação é analisada como parte das medidas de Morris para determinar se havia alguma anormalidade motora ou motivacional. O veículo é um 5% de DMSO/5% de Solutol, 90% da mistura salina. Os animais transgênicos são tratados com uma dose baixa (por exemplo, 0,1 mg/kg/dia) e uma dose elevada (por exemplo., 0,5 mg/kg/dia) de compostos. A média de três ensaios diários em cada um dos quatro dias consecutivos são determinados. Normalmente, nenhum dos déficits motores significativos ou comportamentos anormais são observados durante o curso dos níveis de mortalidade do estudo abaixo esperados nesta idade. Além disso, um grupo de guarda de animais é mantido que tinha sangue periódico desenha para monitorar os níveis plasmáticos de composto.

[0330] Medidas de latência escapam do teste de água Morris são tomadas. Tipicamente, no segundo dia de teste de uma diferença significativa entre o tipo selvagem e animais transgênicos é observado, com o do tipo selvagem de aprendizagem mais rápido do que os transgênicos. Tipicamente, se neste dia se observa uma melhoria significativa no desempenho transgênico com a dose de composto maior comparativamente com o veículo, então concluiu-se que o composto administrado na dose mais elevada de, por exemplo, 0,5 mg/kg/dia é capaz de melhorar o desempenho cognitivo em modelos transgênicos de AD.

[0331] Normalmente, oligômeros Abeta 42 causam cerca de uma redução de 18% no número de sinapses; 100% desta perda pode ser eliminado pelos compostos do teste preferidos. Outros antagonistas dos receptores de sigma- 2 também bloqueiam a perda de sinapse. Conhecido da técnica anterior dos ligantes do receptor de Sigma-2 NE-100 e perda de sinapse completamente eliminada de haloperidol, enquanto SM-21, um ligante seletivo de Sigma-1 foi apenas fracamente ativo na eliminação de perda de sinapse (recuperação de 20%).

[0332] Os compostos Testes também podem ser testados utilizando um ensaio semelhante. O composto (por exemplo, 1 mg/kg/dia, N=8 ou 10 mg/kg/dia, N=8) ou de veículo (5% de DMSO/5% de Solutol/90% de salina, N=15) pode ser administrada sistemicamente por meio da administração por via subcutânea (Alzet minibomba) para, por exemplo, camundongos transgênicos hAPPSL do sexo masculino com 9 meses de idade (por exemplo, N=8) ou da mesma ninhada não transgênicas (por exemplo, N=6) por 20 dias e a aprendizagem espacial e a memória destes camundongos pode ser avaliada no labirinto de água de Morris. Durante os últimos quatro dias de tratamento, os camundongos são testados para encontrar a plataforma escondida em três ensaios/dia. Um sistema de rastreamento informatizado quantifica automaticamente a latência de escape, ou comprimento do mergulho.

[0333] Não há nenhuma diferença significativa no desempenho de animais transgênicos versus animais não transgênicos em qualquer dia do teste (análise restrita a estes 2 grupos; bidirecional (genótipo e tempo) ANOVA com medidas repetidas seguida pelo teste post-hoc de Bonferroni). Uma análise semelhante, quando se está limitado aos grupos transgênicos (tratamento e tempo), com animais transgênicos tratados com 10 mg/kg/dia de um Composto de Ensaio, se espera mostrar os animais tratados num desempenho significativamente melhor do que os animais transgênicos tratados com veículo, após o primeiro dia de teste, quando analisados, por exemplo, pelo teste t de Student. Espera-se que os animais tratados com os compostos de teste irá apresentar um melhor desempenho animal transgênico em comparação com tratamento com veículo durante o período de teste.

[0334] Compostos de ensaio bem sucedidos são capazes de reverter os défices comportamentais estabelecidos na aprendizagem e memória em animais transgênico com idade de um modo dependente da dose.

Exemplo 6: A inibição do Efeito Oligômero de Abeta sobre as Células Neuronais no Ensaio de Tráfego da Membrana

[0335] Ligantes de Sigma-2 aqui fornecidos foram testados quanto à sua capacidade para inibir um efeito beta amieloide nas células. Os ligantes de sigma-2 geralmente foram capazes de inibir o efeito de beta amieloide tal como medido por um ensaio de exocitose/ tráfego da membrana (ensaio MTT). Os resultados são indicados nas tabelas 2. A base racional para este ensaio foi como se segue:

[0336] Desde a morte celular generalizada sináptica e déficits de memória, e não, predominam nos primeiros estágios da doença de Alzheimer, os ensaios que medem essas mudanças são particularmente adequados para a descoberta de pequenas moléculas inibidoras da atividade de oligômero. O ensaio de MTT é frequentemente usado como uma medida de toxicidade em culturas. Sais de tetrazólio amarelo sofrem endocitose por células e reduzido a formazano púrpura insolúvel na via endossomal. O nível de formazan púrpura é um reflexo do número das células que metabolizam ativamente na cultura, e a redução na quantidade de formazano é tomada como uma medida da morte celular ou toxicidade metabólica na cultura. Quando observados através de um microscópio, o formazan púrpura é primeiro visível em vesículas intracelulares que preenchem a célula. Ao longo do tempo, as vesículas são exocitosadas e o formazano precipita na forma de cristais em forma de agulha sobre a superfície externa da membrana do plasma como o formazano insolúvel é exposto ao ambiente de meios aquosos. Liu e Schubert ('97) descobriram que as células respondem a níveis sub-letais de oligômeros de Abeta, acelerando seletivamente a taxa de exocitose de formazano reduzido, enquanto deixam inalterados a taxa de endocitose. Os inventores replicados destas observações em neurônios primários maduros na cultura e quantificado nessas mudanças morfológicas por microscopia automatizada e processamento de imagem. Nestas circunstâncias, não existe qualquer alteração global na quantidade total de formazano reduzido, simplesmente uma mudança na sua morfologia refletora de alterações na taxa da sua formação e/ou de afastamento a partir da célula. Os inventores confirmaram descobertas anteriores de que este ensaio é sensível a baixos níveis de oligômeros que não causam a morte celular (Liu and Schubert ’04, Hong et al., ’07). Com efeito, pequenas quantidades de oligômeros que levam à inibição da LTP não conduzem à morte celular (Tong et al., ‘04) e não se espera que altere quantidades totais de formazano em cultura (ou em fatias de cérebro).

[0337] Provas produzidas por outros investigadores sugerem que a redução de oligômero Abeta mediado na expressão de receptores de superfície neuronal mediada pelo tráfego da membrana é a base para a inibição de oligômero das medidas eletrofisiológicas de plasticidade sináptica (LTP) e assim, aprendizagem e memória, (Kamenetz et al., ‘03, Hseih et al., ’06). Membrana medindo as mudanças de taxa de tráfego induzidas por oligômeros através de mudanças morfológicas de formazano foi utilizado nas linhas das células para descobrir fármacos oligômeros de bloqueio Abeta (Maezawa et al., ’06, Liu and Schubert ’97, ’04,’06, Rana et al., ’09, Hong et al., ’08) que reduzem os níveis cerebrais de Abeta em roedores in vivo (Hong et al., ’09). Procedimentos semelhantes para ensaios de MTT/ensaios de exocitose podem ser encontrados na literatura. Consulte, por exemplo, Liu Y, et. al., Detecting bioactive amyloid beta peptide species in Alzheimer's disease. J Neurochem. 2004 Nov;91(3):648-56; Liu Y, e Schubert D. "Peptídeos amiloides citotóxicos inibem a redução celular 3- (4,5- dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolio (MTT),redução do MTT, aumentando formazano exocitose." J Neurochem. 1997 Dec;69(6):2285-93; e Liu Y, e Schubert D. “Treating Alzheimer's disease by inactivating bioactive amyloid beta peptide” Curr. Alzheimer Res. 2006 Apr;3(2):129-35. Por conseguinte, a abordagem é válida.

[0338] O ensaio de exocitose presente foi adaptado para utilização com culturas neuronais primárias maduras cultivadas durante 3 semanas in vitro. Veja WO 2011/106785, o qual é aqui incorporado por referência na sua totalidade. Oligômeros Abeta causam uma diminuição dependente da dose na quantidade de vesículas intracelulares (pontos lacrimais) preenchida com formazano púrpura reduzido como medido por meio de processamento de imagem utilizando um sistema automatizado de microscopia Cellomics VTI. Fotomicrografias para uma célula neuronal cultivada expostas ao veículo por si só mostram vesículas preenchidas por formazano; em que uma fotomicrografia de uma célula neuronal exposta ao veículo mais oligômero Abeta mostra consideravelmente menos vesículas preenchidas com formazano e em vez disso mostra formazano exocitosado que, quando se deparam com o ambiente extracelular, precipita em cristais. Aumentando a quantidade de oligômeros de Abeta, eventualmente, resulta em toxicidade evidente. Assim, a concentração de oligômeros Abeta neuroativos utilizados no ensaio é muito menor do que causando a morte celular. Os inventores confirmaram que o ensaio é operativo, mostrando que os efeitos de oligômero Abeta são bloqueados por adição de anticorpo anti-Abeta mas anticorpo sozinho não tem qualquer efeito por si próprio (dados não mostrados). Quando configurado desta maneira, o ensaio é capaz de detectar compostos que inibem os efeitos não letais de oligômero Abeta se estes compostos atuam através da interrupção dos oligômeros, de inibição da ligação de oligômero a neurônios, ou neutralização dos mecanismos de transdução de sinal de ação iniciadas pela ligação de oligômero.

[0339] Os métodos utilizados para gerar os resultados foram como se segue no ensaio de tráfego da membrana/exocitose (MTT).

[0340] Neurônios do hipocampo primários a partir de embriões de camundongos E18 Sprague-Dawley foram plaqueados em concentrações optimizadas nas placas de 384 cavidades em meio NB (Invitrogen). Neurônios foram mantidos nas culturas por 3 semanas, com o dobro de alimentação semanal de média RN com suplemento N2 (Invitrogen). Esses neurônios expressam o conjunto completo de proteínas sinápticas características dos neurônios no cérebro maduro, e exibem uma complexa rede de sinalização elétrica dependente de atividade. Neurônios e glia em tais culturas têm redes de sinalização molecular que exibem um excelente registro com circuitos do cérebro intacto, e por esta razão têm sido utilizados por mais de duas décadas como um sistema modelo para a aprendizagem e memória (Ver, por exemplo, Kaech S, Banker G. Cultura de neurônios do hipocampo. Nat Protoc. 2006;1(5):2406-15. Epub 2007 Jan 11; Ver também Craig AM, Graf ER, Linhoff MW. How to build a central synapse: clues from cell culture. Trends Neurosci. 2006 Jan;29(1):8-20. Epub 2005 Dec 7. Review).

[0341] Um composto de teste foi adicionado às células a concentrações que variam de 100uM a 0,001 nM, seguido pela adição de veículo ou preparações de oligômeros Abeta (3 μM de concentração de proteína total de Abeta), e incubado durante 1 a 24 h a 37 oC em 5% de CO2. Reagente MTT (brometo de 3- (4,5-dimetilthizaol-2-il) -2,5difenil tetrazólio) (Roche Molecular Biochemicals) foi reconstituído na solução salina tamponada com fosfato a 5 mg/mL. 10 μl de reagente de marcação de MTT são adicionados a cada poço e incubado a 37 oC durante 1 h, em seguida, as imagens A exocitose foi avaliada por microscopia de processamento de imagem automatizada e para quantificar a quantidade de endocitose e formazano exocitosado.

[0342] Cada placa de ensaio foi formatado de modo a que os compostos são testados com e sem oligômero Abeta em cada placa. Este desenho elimina os compostos tóxicos ou metabolicamente ativos no início da cascata de rastreio (no nível da tela primária). Redução de formazano foi primeiro visível nas vesículas intracelulares. Exocitose de formazano eventual foi acelerada através oligômeros Abeta. A Figura 1A e 1B são exemplos de fotomicrografias de neurônios, a primeira das vesículas intracelulares, onde formazano é primeiro visto e o segundo de um neurônio coberto com corante púrpura insolúvel que foi extrudado através de exocitose. O corante precipitado no meio aquoso de cultura e cristais em forma de agulha formada na superfície do neurônio.

[0343] Na presença de uma concentração eficaz de composto de ensaio ativo, as alterações de tráfego da membrana são bloqueadas e a célula é indistinguível de um neurônio tratado com veículo. Além disso, em alguns casos, o efeito do composto de ensaio parece ser independente do fato do composto de teste ser adicionado antes ou após a exposição das células ao oligômero Abeta, o que indica um terapêutico, bem como um efeito profilático. Concentração adequada do efeito do tráfego da membrana de bloqueio do Composto de Ensaio ativo do oligômero Abeta visto neste ensaio. Doses ascendentes do composto antagonista do receptor seletivo de sigma-2 de alta afinidade param efeitos de oligômeros e fazem as culturas parecem mais com as culturas tratadas com o veículo.

[0344] Com base nestes resultados, compostos antagonistas do receptor de sigma-2 seletivo, de alta afinidade tais como aqui descritos são eficazes para a inibição da toxicidade do oligômero Abeta são promissores como terapêuticos e (em fases muito precoces) modalidades profiláticas para toxicidade de oligômero de beta amieloide relacionado ao declínio cognitivo tal como a visto na doença de Alzheimer.

[0345] Oligômeros abeta sintéticos foram doseados no ensaio de transporte de membrana, onde apresentou um EC50 de 820 nM. Cada concentração de Abeta foi testada contra várias concentrações de cada Composto de Ensaio antagonista do receptor de sigma-2 de elevada afinidade seletiva. Os compostos ativos causaram um desvio para a direita no EC50 por quase duas ordens de grandeza. Quando os dados foram ajustados para modelos clássicos linear e não linear, os dados foram lineares com uma análise de Schild (inclinação nH de 1), o que indica que os compostos dos compostos de receptores de sigma-2 exibem competição farmacológica verdadeira entre oligômeros e compostos para alvos que medeam o tráfego de membrana.

[0346] Oligômeros Abeta derivados dos cérebros dos pacientes com Alzheimer pode ser dosado contra compostos em teste, e uma mudança para a direita também é esperada para ser exibida pela exposição do composto. Especificamente, em doses eficazes, os ativos compostos de teste exibem competição farmacológica com ambos oligômeros derivados sintéticos e humano no paciente com Alzheimer. Das drogas candidatas do composto antagonista do receptor de sigma-2 de alta afinidade seletiva efetivamente fazem os oligômeros Abeta menos sinapses tóxicas. Sem estar limitado pela teoria, o mecanismo de ação possível mais simples é que os compostos de receptores de sigma-2 atuam como antagonistas do receptor competitivo.

Controles experimentais:

[0347] Oligômeros Abeta 1-42 feitos de acordo com métodos publicados foram utilizados como controles positivos. [Ver por exemplo, Dahlgren et al., “Oligomeric and fibrillar species of amyloid-beta peptides differentially affect neuronal viability” J Biol Chem. 2002 Aug 30;277(35):32046-53. Epub 2002 Jun 10.; LeVine H 3rd. “Alzheimer's beta-peptide oligomer formation at physiologic concentrations” Anal Biochem. 2004 Dec 1;335(1):81-90; Shrestha et.al, ”Amyloid beta peptide adversely affects spine number and motility in hippocampal neurons” Mol Cell Neurosci. 2006 Nov;33(3):274-82. Epub 2006 Sep 8; Puzzo et al., “Amyloid-beta peptide inhibits activation of the nitric oxide/cGMP/cAMP-responsive element-binding protein pathway during hippocampal synaptic plasticity” J Neurosci. 2005 Jul 20;25(29):6887-97; Barghorn et al., “Globular amyloid beta-peptide oligomer - a homogenous and stable neuropathological protein in Alzheimer's disease” J Neurochem. 2005 Nov;95(3):834-47. Epub 2005 Aug 31; Johansson et al., Physiochemical characterization of the Alzheimer's disease-related peptides A beta 1-42 Arctic and A beta 1-42wt. FEBS J. 2006 Jun;2 73(12):2618-30] bem como oligômeros Abeta derivados do cérebro (ver, por exemplo Walsh et al., Oligômeros naturalmente secretados da proteína beta amieloide inibem de forma potente a potenciação do hipocampo a longo prazo in vivo. Nature (2002). 416, 535-539; Lesne et al., A specific amyloid-beta protein assembly in the brain impairs memory. Nature. 2006 Mar 16;440(7082):352-7; Shankar et al, Amyloid-beta protein dimers isolated directly from Alzheimer's brains impair synaptic plasticity and memory. Nat Med. 2008 Aug;14(8):837-42. Epub 2008 Jun 22). Deve se notar que qualquer preparação do oligômero de Abeta pode ser utilizada neste ensaio, ou como um controle, incluindo preparações descritas na literatura de patentes, citadas acima e incorporadas por referência na sua totalidade.

[0348] Várias preparações de oligômeros Abeta diferentes foram demonstrados para causar um efeito de Abeta no ensaio de transporte de membrana, incluindo a preparação de oligômeros nomeadamente isolados a partir do cérebro de pacientes com doença de Alzheimer.

[0349] Os oligômeros foram isolados a partir de hipocampo humano post-mortem ou córtex pré-frontal, sem a utilização de detergentes e tráfego da membrana inibida de um modo dependente da dose com um Kd de 6 pMolar. Paciente humano com Doença de Alzheimer derivado oligômeros Abeta (137 pM, segundo bar Fig. 1J) produzem uma inibição estatisticamente significativa do tráfego da membrana comparado com o veículo (primeira bar, a Fig. 1J). O composto II (terceira barra) elimina os défices de tráfico de membrana induzidas por oligômeros Abeta AD derivado do cérebro, mas não afeta o tráfego quando administrado na ausência de Abeta (quarto, eclodido, bar). Os dados são a média de 3 experiências (n = 3).

[0350] Embora as potências de várias preparações de oligômeros Abeta diferem (por exemplo, isolados de Alzheimer nativos são mais potentes do que qualquer uma das preparações sintéticas dos dados testados não mostrados), os resultados são qualitativamente o mesmo: patologias mediadas por oligômeros são contrariadas pelas composições da presente descrição compreendem um composto antagonista do receptor de sigma-2.

Culturas neuronais primárias

[0351] Densidade celular iptima é determinada com base na resposta celular a oligômeros Abeta utilizando o ensaio de exocitose como uma leitura, e a análise imuno-histoquímica da proporção relativa das células de glia para os neurônios nas culturas. As culturas são monitorizadas numa base semanal com imuno-histoquímica e quantificação de imagem à base de processamento para controlar a porcentagem das culturas que são neurônios contra as células da glia (células gliais). As culturas que contêm mais do que 20% de células gliais (positivo para GFAP) versus neurônios (corados positivamente com anticorpos (policlonal de frango) (Millipore) direcionados contra a MAP2 1:5000 (concentração variável)) com a idade de 21 dias de rastreio in vitro (21 DIV) são rejeitadas.

Preparações de Oligômero Abeta

[0352] Péptido amiloide 1-42 humano foi obtido a partir de uma série de fornecedores comerciais, tais como a California Peptide, com grande escolha de contingente na análise de controle de qualidade. Controles de qualidade das preparações de oligômero consistem em Westerns para determinar as faixas de tamanho de oligômeros e concentrações relativas, e o ensaio MTT para confirmar a aceleração de exocitose sem toxicidade. A toxicidade foi monitorizada em cada ensaio com base na imagem por meio de quantificação da morfologia nuclear visualizada com ligação de DNA de corante azul DAPI (Invitrogen). Os núcleos que são fragmentados são considerados em fase tardia de apoptose (Majno e Joris '95) e o teste seria rejeitado. Muitos peptídeos produzindo faixas de tamanho de peptídeos incomuns ou toxicidade significativa a uma concentração de 1,5 μM padrão em neurônios também seriam rejeitadas.

[0353] O controle baseado na placa - O ensaio de optimização foi considerado completo quando placas reformatadas atingem um mínimo de separação de duas vezes estatisticamente significativas entre veículo e neurônios tratados com oligômeros Abeta (p <0,01, teste t de Student, variância desigual) numa base de rotina, com não mais que 10% de CV entre as placas.

Software e Análise Estatística:

[0354] Manipulação e análise de dados foram realizadas por software de análise de imagem Cellomics VTI e software de banco de dados STORE automatizado. Devido à baixa gama dinâmica e variabilidade neuronal poço-a-poço após três semanas em cultura, as comparações estatísticas foram efetuadas através de análise Tukey-Kramer de pares para determinar a significância da separação entre composto + oligômeros Abeta a partir de Abeta única, e entre o composto único do veículo. A capacidade dos neurônios primários maduros a aproximarem mais da rede de transdução de sinal mediado eletrofisiologicamente do cérebro adulto justifica esta estratégia de rastreio. Análise de energia foi definida para um número de poços de triagem replicadas que minimizaram falsos negativos (por exemplo. N=4). Os compostos de teste da divulgação reverteram significativamente os efeitos de oligômeros Abeta sobre o tráfego da membrana, mas não afetam o metabolismo neuronal deste.

[0355] Os compostos selecionados de acordo com a Fórmula I e/ou Fórmula II, foram doseados no ensaio de MTT descrito aqui antes da adição de oligômero Abeta e foram mostrados para bloquear os défices de tráfego da membrana induzida por oligômeros Abeta com o indicado EC50. Especificamente, estes resultados indicam que os compostos de bloco/diminui a atividade/efeito de oligômero Abeta no tráfego da membrana das células neuronais a concentrações micromolares.

[0356] Resultados combinados para os compostos da Fórmula I e Fórmula II, ou no que diz respeito ao log P, psa (A2), tráfego da membrana (uM), afinidade para o receptor de sigma-2, estabilidade microssomal em microssomas de fígado de camundongo (MLM) (t1/2, min), canal toxicidade de potássio hERG in vitro (IC50, nM), e fenótipo neuronal são fornecidos na Tabela 2.

[0357] Tabela 2: Ligantes do Receptor de Sigma-2: lipofilicidade, a capacidade de inibir os efeitos amiloide oligoméricos sobre o tráfico de membrana, ligação a Receptores de sigma-2 de Estabilidade microsomal e na toxicidade in vitro.

[0358] Certos compostos da Tabela 2 foram mostrados para bloquear a aceleração induzida por oligômero Abeta de exocitose com o indicado EC50. Por conseguinte, os compostos na Tabela 2 bloquearam significativamente as alterações mediadas por oligômeros Abeta no tráfego da membrana. Estes resultados indicam que os compostos de bloqueio/diminuem a atividade/efeito de oligômero Abeta nas células neuronais e que ligantes de sigma-2 podem ser utilizados para bloquear o oligômero Abeta induzido nas anormalidades do tráfego da membrana.

[0359] Os compostos selecionados da Tabela 2 foram doseados no ensaio de transporte de membrana e foram mostrados para bloquear as anormalidades do tráfego de membrana induzida por oligômeros Abeta com o indicado EC50. Por conseguinte, os compostos na Tabela 2 bloquearam significativamente as alterações mediadas por oligômeros Abeta no tráfego da membrana. Estes resultados indicam que os compostos de bloqueio/diminuem a atividade/efeito de oligômero Abeta nas células neuronais e que os receptores ligantes de sigma-2 podem ser utilizados como compostos candidatos para bloquear os oligômeros Abeta induzidos nas anormalidades de tráfego de membrana.

[0360] Em algumas modalidades, os compostos de isoindolina de acordo com a fórmula I e/ou fórmula II, como aqui proporcionado, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, inibem défices de tráfego de membrana induzida por oligômeros Abeta, com um EC50 não superior a 20 uM, não superior a 15 uM, não superior a 10 uM, não superior a 5 uM, não superior a 1 uM, e não mais de 0,5 uM, quando testado de acordo com o protocolo do ensaio do tráfego da membrana aqui fornecida.

[0361] Tal como os compostos abrangidos pelas fórmulas acima são esperados ser também ligantes de sigma-2 e, por conseguinte, também serão úteis no bloqueio do oligômero Abeta induzido na aceleração de exocitose.

Exemplo 7. Estudos de Estabilidade Metabólicos e Farmacocinéticos.

[0362] Um primeiro estudo farmacocinético foi realizado em microssomas de microssomas de fígado de camundongos murganhos, MLM) por uma organização de pesquisa de contrato comercial. Os estudos foram realizados de acordo com Obach, R.S. et al. (1997) J. Pharmacol. Exp. Ther., 283: 46-58, que é aqui incorporado por referência. A meia-vida (t1/2) dos compostos no ensaio MLM é mostrado na Tabela 2, e variaram de 3-617 minutos.

[0363] Em algumas modalidades, os compostos de isoindolina de acordo com a fórmula I e/ou fórmula II, como aqui proporcionado, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, exibem uma meia-vida (t1/2) num ensaio de microssoma de fígado de camundongo (MLM), tal como aqui proporcionado, de pelo menos 5 minutos, pelo menos 10 minutos, pelo menos 25 minutos, pelo menos 50 minutos, pelo menos de 100 minutos, ou pelo menos 200 minutos.

[0364] Os resultados indicam que vários dos compostos testados tinham uma semi-vida substancialmente mais longa em microssomas de fígado de camundongo. Este resultado prenuncia maior biodisponibilidade após a administração oral para estes compostos. Os mesmos compostos foram testados pelo ensaio de tráfego da membrana acima descrita e a sua atividade conforme referida na presente memória descritiva.

[0365] Se a taxa de depuração intrínseca do composto de teste foi rápida, é sugestivo do metabolismo de primeira passagem significativa. A fim de melhorar as propriedades farmacocinéticas, os compostos foram concebidos para aumentar a estabilidade metabólica e melhorar propriedades medicamentosas. Experiências de estabilidade de microssomas e as experiências de estabilidade de plasma foram realizadas para determinar a estabilidade metabólica e hepática dos compostos dos candidatos. Em algumas modalidades, a estabilidade in vitro foi normalizada para composto padrão microssomal CT010914.

[0366] Um segundo estudo PK pode ser realizado in vivo e envolve a medição dos níveis do plasma e os níveis cerebrais de compostos de ensaio administrados por várias vias e de uma maneira aguda ou crônica, como se segue:

Otimização HPLC-MS

[0367] Uma solução de cada composto de teste é preparada e infundida na fonte do espectrômetro TSQ Quantum (Fisher Thermo Scientific) através da bomba de seringa a uma taxa constante. Análise de verificação completa do MS (espectroscopia de massa) é conduzida e cromatograma iônico total atual e os espectros de massa correspondente são gerados para cada composto de teste, em ambos os modos de ionização positivo e negativo. Os íons precursores para o MS/MS são selecionados a partir de qualquer espectro de massa positivo ou negativo, como uma função do respectivo íon abundante. Além disso, análise do íon do produto MS/MS é efetuada em ordem para determinar a reação de fragmentação selecionada adequada para uso em análise quantitativa. Os parâmetros de monitorização de reação final são escolhidos para maximizar a capacidade de quantificar o composto de teste quando presente dentro de uma mistura complexa de componentes. Após a identificação da transição SRM específica a ser utilizada para cada composto de teste, os parâmetros de detecção são otimizados utilizando o protocolo automatizado no espaço de trabalho do Composto Quantum TSQ de otimização. Finalmente, as condições cromatográficas para serem utilizadas para análise de LC-MS são identificadas pela injeção e separação do analito numa coluna de LC adequada e o ajuste das condições gradiente é realizado como necessário.

Formulação de dosagem IV:

[0368] A solubilidade do composto de teste em solução salina tamponada com fosfato, pH 7,4 (PBS) é avaliada primeiro por inspeção visual. PBS é utilizado como veículo, se o composto é solúvel na concentração alvo. (Outros veículos que são compatíveis com a administração IV pode ser avaliado se o composto não é completamente solúvel em PBS. Tais veículos incluem DMSO, polietileno glicol (PEG 400), o Solutol HS 15, Cremophor EL e entre outros). Nas experiências relatadas aqui um bólus único, 10 mg/kg, do composto de teste é administrado IV.

[0369] Formulação de dosagem PO: A solubilidade do composto de teste em PBS é avaliada em primeiro lugar. PBS é utilizado como veículo, se o composto é solúvel na concentração alvo. (DMSO/Solutol HS 15/PBS (5/5/90, v/v/v), ou DMSO/1% de metilcelulose (5/95, v/v) pode ser utilizado se o composto de teste não é completamente solúvel em PBS na respectiva concentração.)

Linearidade no plasma

[0370] Alíquotas de plasma são adicionadas com os compostos de teste nas concentrações especificadas. As amostras enriquecidas são processadas utilizando precipitação com acetonitrilo e analisados por HPLC-MS ou HPLC- MS/MS. Uma curva de calibração da área do pico em função da concentração é construída. A gama linear de trabalho do ensaio é determinada, junto com o limite inferior de quantificação (LLQ).

Bioanálise Quantitativa das Amostras de Plasma

[0371] As amostras de plasmas são processadas utilizando precipitação com acetonitrilo e analisados por HPLC-MS ou HPLC-MS/MS. Uma curva de calibração de plasma foi gerada. Alíquotas de plasma isenta de droga são inoculadas com o composto de teste a níveis de concentração especificadas. As amostras de plasma enriquecidas são processadas em conjunto com as amostras de plasma desconhecidas utilizando o mesmo procedimento. As amostras de plasma tratadas (extratos secos) são normalmente armazenados congelados (-20°C) até que a análise por HPLC-MS ou HPLC-MS/MS. Os extratos secos são reconstituídos em um solvente adequado, e após centrifugação foram analisados por HPLC-MS ou HPLC-MS/MS. As áreas de pico são registadas, e as concentrações do composto teste nas amostras de plasma desconhecidas são determinadas utilizando a respectiva curva de calibração. A gama linear de trabalho do ensaio é determinada, junto com o limite inferior de quantificação (LLQ).

[0372] Animais utilizados no estudo são geralmente camundongos do sexo masculino C57BL/6 pesando 20-30 g cada um ou camundongos Sprague- Dawley machos pesando 180-250 g. Três animais são tratados, para cada condição de administração e cada ponto de tempo, de modo que cada animal é sujeito a uma única colheita de sangue. Administração do composto por via subcutânea foi realizada por injeção intraperitoneal. Por administração oral é realizado pela gavagem gástrica. A administração intravenosa é realizada através de cateter jugular.

[0373] Após a administração do composto a várias concentrações, as amostras de plasma são recolhidas em, por exemplo, 10, 30, 60, 120, 240, 360, 480 e 1440 min.

Coleta de Amostras de Plasma de Camundongos e Ratos

[0374] Os animais são sedados sob anestesia inalatória geral (3% de isoflurano) para coleta de sangue por punção cardíaca (camundongos) ou cateter jugular (ratos). Alíquotas de sangue (300-400 μl) são recolhidas em tubos revestidos com heparina de lítio, suavemente misturadas, e são mantidas em gelo e centrifugadas a 2500 xg durante 15 minutos a 4 °C, no prazo de 1 hora após a colheita. O plasma é então colhido e mantido congelado a -20°C até o processamento posterior. Design de Dosagem Animal - In vivo PK - Não canulado, animais sem jejum Grupo 1: SC, n=3 animais por ponto de tempo (24 animais no total) ou IV, n=3 animais por ponto de tempo (24 animais no total) Grupo 2: PO, n=3 animais por ponto de tempo (24 animais no total) Grupo 3: Os animais de controle (por sangue livre de drogas), n = 5 camundongos Cada animal está sujeito a uma coleta de sangue e uma coleção de cérebro.

[0375] Coleta de amostras do cérebro de animais

[0376] Imediatamente após a amostragem do sangue, os animais são decapitados e os cérebros inteiros são rapidamente removidos, lavados com solução salina fria (0,9% de NaCl, g/ml), superfície de vasculatura quebrada, secos com papel absorvente com gaze, ponderado, mantidos em gelo até o processamento adicional dentro de uma hora da coleta. Cada cérebro é homogeneizado em 1,5 mL de fosfato frio de soro fisiológico tamponado, pH 7,4 (= 1,5 mL camundongos, ratos =), durante 10 segundos em gelo usando a Energia Gen 125. O homogenato do cérebro de cada cérebro é em seguida armazenado a -20 °C até o processamento posterior.

Linearidade nas Amostras do Cérebro

[0377] Aliquotas de homogenato do cérebro são inoculadas com o composto de teste nas concentrações especificadas. A cada alíquota do cérebro um volume igual de Dextrano neutros gelados de 26% (g/mL) (Peso molecular médio 65,000-85,000 da Sigma, número de catálogo D-1390) é adicionado uma solução para obter uma concentração final de Dextrano de 13 %. O homogenato é centrifugado a 54000 xg durante 15 minutos a 4 °C. Os sobrenadantes são subsequentemente processados utilizando precipitação com acetonitrilo e analisados por HPLC-MS/MS. Uma curva de calibração do pico em função da concentração é construída. A gama linear de trabalho do ensaio é determinada, junto com o limite inferior de quantificação (LLQ).

[0378] Análise Quantitativa das Amostras do Cérebro

[0379] A cada alíquota homogeneizada do cérebro um volume igual de Dextrano neutros gelados de 26% (g/mL) (Peso molecular médio 65,000-85,000 da Sigma, número de catálogo D-1390) é adicionado uma solução para obter uma concentração final de Dextrano de 13 %. O homogenato é centrifugado a 54000 xg durante 15 minutos a 4 °C. Os sobrenadantes são subsequentemente processados utilizando precipitação com acetonitrilo e analisados por HPLC-MS/MS. Uma curva de calibração do cérebro é gerada. Aliquotas homogeneizada do cérebro sem droga são inoculadas com o composto de teste a níveis de concentração especificadas. As amostras homogeneizadas do cérebro cravadas são processadas em conjunto com as amostras homogeneizadas do cérebro desconhecidas utilizando o mesmo procedimento. As amostras de cérebro processadas são armazenadas a -20°C até que a análise por LC-MS/MS, em que foram registradas as áreas dos picos de tempo, e as concentrações do composto de teste nas amostras de cérebro desconhecidas foram determinadas utilizando a respectiva curva de calibração. A gama linear de trabalho do ensaio foi determinada, junto com o limite inferior de quantificação (LLQ).

Capacidade de penetração do cérebro

[0380] As concentrações do composto de teste no cérebro (tecido ng/g) e no plasma (ng/mL), bem como a razão entre a concentração no cérebro e a concentração no plasma em cada ponto de tempo são determinados por LC- MS/MS e avaliado como descrito acima.

Farmacocinética

[0381] A parcela de concentração de plasma do composto em função do tempo são construídas. Os parâmetros farmacocinéticos fundamentais de composto após a administração oral e SC (AUClast, AUCinf, T1/2, Tmax, e Cmax) são obtidos a partir da análise não comportamental (NCA) dos dados de plasma, utilizando WinNonlin (Pharsight). Análise não comportamental não requer a assunção de um modelo comportamental específico para uma ou outra droga ou metabolito. NCA permite que a aplicação da regra trapezoidal para as medições da área sob o tempo da curva da concentração plasmática (Gabrielsson, J. e Weiner, D. Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Data Analysis: Concepts and Applications. Swedish Pharmaceutical Press. 1997).

Definições dos termos reportados

[0382] Área Sob a Curva (AUC) - Medida da quantidade total do fármaco inalterado que alcança a circulação sistêmica. A área sob a curva é uma medida geométrica que foi calculada representando graficamente a concentração em função do tempo e somando as áreas elementares de cada trapézio.

[0383] WinNonlin tem dois métodos computacionais para cálculo da área: o método trapezoidal linear e o método trapezoidal log-linear. Porque o método trapezoidal linear pode dar resultados enviesados na parte descendente do tempo da curva de concentração e sobrestimar o AUC, WinNonlin fornece a opção de log-linear para cálculo da AUC. Por defeito, o método trapezoidal log-linear é usado para medir a área de pós-Tmax para o restante do tempo da curva de concentração do plasma.

[0384] AUClast: área sob a curva desde o tempo de dosagem para o tempo de observação de que a última foi maior do que o limite de quantificação.

[0385] AUCINF: Área sob a curva desde o tempo de dosage extrapolada até ao infinito.

[0386] Cmax - Concentração máxima de droga no plasma obtidos após a administração oral ou não-IV de um medicamento entre o momento de o fazer e o ponto de tempo final observado.

[0387] Tmax - Momento em concentração plasmática maxima observada (Cmax) observou em minutos após a administração da droga.

[0388] T1/2 - Eliminação terminal de meia-vida de ambas dosagens IV e não IV .

[0389] onde Z lambda (z) é a constante de velocidade de primeira ordem associada com a porção do terminal (log-linear) do tempo da curva de concentração plasmática. Z é estimada por regressão linear do tempo versus log da concentração.

[0390] Os resultados são esperados para mostrar que certos compostos de teste exibem uma boa biodisponibilidade e boa penetração no cérebro quando administrados em doses que variam de 0,1 a 0,5 mg/kg de forma aguda ou cronicamente (diariamente, durante 5 dias). Compostos de ensaio selecionados são avaliados quanto à biodisponibilidade oral desta maneira.

Exemplo 8: Ligação de Oligômero de Abeta 1-42 e Ensaios da Perda de Sinapse

[0391] Neste ensaio, os oligômeros de Abeta são apresentados em contato com neurônios primários maduros em cultura e a sua ligação foi determinada por imuno-histoquímica (anticorpo anti-Abeta) e quantificado pelo processamento de imagem. A quantidade de Abeta nos dendrites neuronais é avaliada pela contagem do número de pontos lacrimais marcado na neurite. Oligômeros Abeta são conhecidos por se ligarem, saturavelmente (Kd de aproximadamente 400 nM; Laurén 2009) e com alta afinidade a um subconjunto de neurônios pós-sinápticos presente em uma porcentagem significativa (30-50%) de neurônios do hipocampo em culturas primárias (Lacor et al, 2004 ; Lambert et al, 2007) e isto se correlaciona bem com as observações de Abeta obrigatórias nos cérebros de pacientes com Alzheimer (Lambert et al, 2007). Esta marcação está associada com sinapses, co-localizando com a proteína de andaime pós-sináptica PSD-95 (Lacor et al., ’04). Oligômeros Abeta são também conhecidos por mediarem a perda de sinapse, classificado como 18% em neurônios do hipocampo humanos em fatias de cérebro (Schef et al, 2007) e para inibir a potenciação de longo prazo (LTP). O número de sinapses pode também ser quantificada neste ensaio por imunofluoroquímicos. Procedimentos semelhantes para os ensaios de ligação podem ser encontrados na literatura. Ver por exemplo, Veja GC, et. al. Discovery of ADDL--targeting small molecule drugs for Alzheimer's disease. Curr Alzheimer Res. 2007 Dec;4(5):562-7. Revisão.

[0392] Medição da quantidade de Abeta ligado à superfície de neurônios pode ser usada como uma tela secundária para identificar compostos que atuam através de um ou mais dos seguintes mecanismos: bloqueando efeitos Abeta por interferência com oligômero Abeta de ligação à superfície neuronal ou efetuando alterações aos próprios (agonismo inverso ou dissociação de oligômero) oligômeros ou alteração dos receptores de superfície que os oligômeros se ligam a (modulação alostérica ou antagonismo receptor clássico) também pode distinguir estes compostos a partir de compostos que atuam sobre os eventos de sinalização a jusante. Assim, este ensaio é relevante para estados de doença caracterizados pelos efeitos não letais do oligômero Abeta em neurônios e faz parte de uma cascata de escrutínio utilizado pelos presentes inventores para identificar compostos clinicamente relevantes. Compostos de ensaio selecionados que são ativos no ensaio de transporte de membrana e perda neste ensaio de ligação/sinapse podem ser testados quanto à atividade em dois modelos diferentes transgênicos para a doença de Alzheimer e no modelo induzido assim. Por conseguinte, este, bem como o ensaio do tráfego da membrana é útil na identificação de compostos clinicamente relevantes e parece ter valor preditivo para os resultados in vivo. A validade preditiva deste ensaio está a ser confirmada, demonstrando a sua capacidade para prever propriedades de compostos usando compostos fora do âmbito da divulgação.

[0393] Cultura primária do hipocampo neuronal é estabelecida como no ensaio do tráfego da membrana acima. O composto de teste (em concentrações de 10-8 a 30 micromolar) é adicionado à placa seguida por uma adição do oligômero Abeta 1-42 contendo preparação numa concentração para atingir a saturação de ligação. O pré-tratamento com compostos de teste durante 1 hora e adição de oligômeros Abeta ou nenhum oligômero (veículo sozinho) é seguido por incubação durante mais 23 horas.

[0394] As placas são fixadas com 3,7% de paraformaldeido em salina tamponado com fosfato durante 15 min. As placas são então lavadas 3x com PBS durante 5 minutos cada. As placas são bloqueadas à TA durante 1 h em soro de cabra a 5% e 0,5% de Triton X-100 em PBS. Os anticorpos primários (anti-MAP 2 policlonal, Millipore #AB5622 e monoclonal anti-beta amieloide 6E10, Covance #SIG-39300, em 1 micrograma/ml, e anticorpos policlonais de coelho anti- sinaptofisina, Anaspec, a 0,2 micrograma/ml) foram diluídos 1:1000 em 5% de soro de cabra com PBS. Os anticorpos primários são incubados durante a noite a 4 ° C. As placas são então lavadas 3x com PBS durante 5 minutos cada. Anticorpos secundários (Alex Flor 488 policlonais, Invitrogen # A11008 e Alexa 647 Flor monoclonais, Invitrogen # A21235) são diluídos 1: 1000 em soro de cabra a 5% com PBS. Os anticorpos secundários foram incubados à temperatura ambiente durante 1 h. As placas são lavadas uma vez com PBS. DAPI (4', 6-diamidino-2- fenilindole, Invitrogen) é então aplicada a 0,03 ug/ul e incubada à temperatura ambiente durante 5 min, em seguida, lavadas com PBS.

[0395] Os resultados são esperados para mostrar que oligômero Abeta, preparado tal como detalhado abaixo e administrado em doses de 3 ou 1 μM dependendo da preparação utilizada, ligado aos neurônios em sinapses, é revelado por um corante vermelho. Nos seres humanos com doença de Alzheimer precoce, o número de sinapses no hipocampo foi mostrado para ser reduzido por 18% em comparação com indivíduos cognitivamente normais de idade (Scheff et al., '07) e este resultado também pode ser visualizado neste ensaio por regressão de 20% dos pontos lacrimais fluorescentes e, portanto, do número de sinapses. Na co-presença do composto de teste selecionado, a ligação de Abeta é esperada para ser reduzida para níveis de controle essencialmente, e a fluorescência verde não é afetada, indicando um número de sinapses intactas. Oligômeros Abeta 42 se ligam a espinhas pós-sinápticas; e são rotuladas com sinaptofisina em espinhas pós- sinápticas de neurônios primários e sinapses são esperadas a serem mostradas essencialmente em níveis de controle quando uma quantidade eficaz de composto de teste preferido é adicionado à cultura. Oligômeros Abeta 42 adicionado sozinho causam uma diminuição de 20% na densidade de pontos lacrimais de sinaptofisina após 24 horas quando comparados com o veículo sozinho. Esta perda é invertida por uma quantidade eficaz de um composto de teste preferido. Na ausência de oligômero Abeta, o composto de teste preferido não tem influência no número sináptico e se mantém em níveis comparáveis aos de controle (veículo sozinho). Espera-se que a intensidade de ligação Abeta tal como calculada pelos pontos lacrimais de Abeta irá ser reduzida em cerca de 18%, na presença de uma quantidade eficaz de um composto de teste, no entanto, esta diminuição é suficiente para permitir a contagem de sinapse para atingir níveis de controle na presença deste composto.

[0396] Além disso, é esperado que a ligação de oligômero Abeta sináptica ponteada ao ser reduzida em cerca de 38% na presença de certos compostos de teste num modo dependente da concentração. Um histograma de intensidade de pontos lacrimais revela que a população de ligação normal bimodal (neurônios com pontos lacrimais brilhantes e uma população com menos pontos lacrimais brilhante) é deixado-deslocado na presença do fármaco (dados não mostrados). A inibição parcial da ligação de oligômero Abeta tem sido relatada para restaurar 100% da função LTP (Strittmatter SM et al., Cellular Prion Protein Mediates Impairment of Synaptic Plasticity by Amyloid-Beta Oligomers Nature (2009) 457 (7233:1128-32)).

[0397] Oligômero Abeta causa uma diminuição de 20% na densidade de pontos lacrimais sinaptofisina após 24 horas em comparação com tratado com veículo (primeira bar), o qual é invertido por uma quantidade eficaz de composto de teste. Ver, por exemplo, WO2013/029060, o qual é aqui incorporado por referência.

[0398] É desejável que, na ausência de Abeta, o composto de teste não tenha influência no número sináptico. Oligômeros Abeta causam uma diminuição de 18,2% no número de sinapses; 100% desta perda é eliminada por uma quantidade eficaz de um composto de teste preferido.

[0399] Núcleos, visualizados com DAPI, exibem uma morfologia normal, indicando uma ausência de neurodegeneração. O procedimento é realizado com os compostos de teste selecionado de entre os abrangidos pela Fórmula I e/ou II.

Preparações de Oligômero Abeta:

[0400] Peptídeo amiloide humana 1-42 é obtido a partir de California Peptide, com escolha de muito contingente em análises de controle de qualidade. Oligômeros Abeta 1-42 são feitos de acordo com métodos publicados tal como descrito acima. [Ver por exemplo, Dahlgren et al., “Oligomeric and fibrillar species of amyloid-beta peptides differentially affect neuronal viability” J Biol Chem. 2002 Aug 30;277(35):32046-53. Epub 2002 Jun 10.; LeVine H 3rd. “Alzheimer's beta-peptide oligomer formation at physiologic concentrations” Anal Biochem. 2004 Dec 1;335(1):81-90; Shrestha et.al, ”Amyloid beta peptide adversely affects spine number and motility in hippocampal neurons” Mol Cell Neurosci. 2006 Nov;33(3):274-82. Epub 2006 Sep 8; Puzzo et al., “Amyloid-beta peptide inhibits activation of the nitric oxide/cGMP/cAMP-responsive element-binding protein pathway during hippocampal synaptic plasticity” J Neurosci. 2005 Jul 20;25(29):6887-97; Barghorn et al., “Globular amyloid beta-peptide oligomer - a homogenous and stable neuropathological protein in Alzheimer's disease” J Neurochem. 2005 Nov;95(3):834-47. Epub 2005 Aug 31; Johansson et al., Physiochemical characterization of the Alzheimer's disease-related peptides A beta 1-42 Arctic and A beta 1-42wt. FEBS J. 2006 Jun;2 73(12):2618-30] bem como oligômeros Abeta derivados do cérebro (ver, por exemplo Walsh et al., Oligômeros naturalmente secretados da proteína beta amieloide inibem de forma potente a potenciação do hipocampo a longo prazo in vivo. Nature (2002). 416, 535-539; Lesne et al., A specific amyloid-beta protein assembly in the brain impairs memory. Nature. 2006 Mar 16;440(7082):352-7; Shankar et al, Amyloid-beta protein dimers isolated directly from Alzheimer's brains impair synaptic plasticity and memory. Nat Med. 2008 Aug;14(8):837-42. Epub 2008 Jun 22). Controles de qualidade das preparações de oligômero consistem em Westerns para determinar as faixas de tamanho de oligômeros e concentrações relativas, e o ensaio MTT para confirmar a aceleração de exocitose sem toxicidade. A toxicidade é monitorizada em cada ensaio com base na imagem por meio de quantificação da morfologia nuclear visualizada com ligação de DNA de corante DAPI (Invitrogen). Os núcleos que são fragmentados são considerados em apoptose de fase tardia e o teste rejeitado (Majno e Joris apoptose, oncose, e necrose. Uma visão geral sobre a morte celular. Am J Pathol 1995;146:3-16). Muitos peptídeos produzindo faixas de tamanho de peptídeos incomuns ou toxicidade significativa a concentrações padrão em neurônios seriam rejeitadas.

Controles

[0401] Pré-adsorção do anticorpo 6E10 anti-Abeta com preparação de oligômero inibe a sinapse de ligação de um modo dependente da dose (em 7,84 x 10-6) e é usado como um controle positivo. O anticorpo é utilizado a 1:1000 (1 micrograma/mL). Para o ensaio de perda de sinapse, o dizocilpina antagonista de NMDA (MK-801) é utilizado como controle positivo a 80 uM.

Processamento de Imagem

[0402] As imagens são capturadas e analisadas com a plataforma de microscópio automatizado Cellomics VTI, usando o algoritmo Neuronal de Perfilagem. Para análise estatística, uma comparação de pares de Tukey-Kramer com variância desigual é usada.

Western blots

[0403] As amostras contendo Abeta 1-42 são diluídas (1:5) em tampão de amostra do marcador de pista não redutora (Pierce #1859594). Uma amostra de 30 microlitros (μl) é carregada sobre um gel de Tris-HCl a dezoito poços prefabricados de 4-15% (BIORAD #345-0028). A eletroforese é efetuada num sistema de gel pré-moldado de Critério BIO-RAD utilizando tampão Tris-Glicina a 125 volts (V), durante 90 minutos. Os géis são transferidos para membranas de nitrocelulose de 0,2 μM em Tris-Glicina/10% do tampão de metanol de 30V durante 120 minutos. As membranas são fervidas durante 5 minutos numa solução de PBS e bloqueadas durante a noite com uma solução de leite de 5%/TBS a 4°C. A membrana é sondada com 6E10-HRP (Covance #SIG-39345) diluída a 10 μg/mL na solução de leite a 1%/TBS durante uma hora à temperatura ambiente. Membrana é lavada três vezes durante 40 minutos cada uma com uma solução de TBS/0,05% de Tween-20 e desenvolvida com reagente de ECL (BIO-RAD #162- 0112) durante 5 minutos. Aquisição da imagem é realizada em um sistema de imagem quantitativa Alpha Innotech FluorChem Q e analisadas com software Alphaview Q.

Atividade

[0404] Compostos de ensaio preferidos são esperados para serem mostrados para bloquear parcialmente a ligação do ligante ao oligômero Abeta para neurônios por cerca de 25% de acordo com o ensaio de ligação (utilizando o algoritmo de processamento de imagem).

Exemplo 9: Ensaio do Condicionamento do Medo

[0405] Compostos de teste selecionados são testados em um modelo animal de uma tarefa comportamental dependente da memória conhecida como o condicionamento do medo. O protocolo do estudo foi concebido com base em protocolos publicados (ver, por exemplo Puzzo D, Privitera L, Leznik E, Fà M, Staniszewski A, Palmeri A, Arancio O. Picomolar amyloid-beta positively modulates synaptic plasticity and memory in hippocampus. J Neurosci. 2008 Dec 31;28(53):14537-45.). A formação de memórias contextuais é dependente da integridade das estruturas do lobo temporal medial, tais como o hipocampo. Neste ensaio os camundongos são treinados para lembrar que um contexto particular saliente (estímulo condicionado; CS) está associado com um evento aversivo, neste caso, um choque nas patas leve (o estímulo não condicionado, EUA). Os animais que apresentam boa aprendizagem irão expressar um aumento no comportamento de congelamento quando colocado de volta no mesmo contexto. Esta congelação está ausente num contexto novo. Aumento de congelação no contexto indica forte formação da memória dependente do hipocampo em animais. Memória testada no condicionamento do medo é sensível às elevações de Aβ solúvel. Composto II foi eficaz em parar efeitos de oligômero Abeta mediados sobre o tráfego da membrana. Quando administrado a animais antes da administração do oligômero Abeta, um composto de teste preferido é esperado para bloquear os efeitos de oligômero na memória de uma forma dependente da dose.

[0406] Certos compostos de ensaio preferenciais são aqueles capazes de eliminar os défices induzidos pelo oligômero Abeta na memória, mas não vai afetar a memória quando administrado isoladamente. Esta eficácia comportamental demonstra que o ensaio do tráfego da membrana é capaz de prever que os compostos vão ser eficazes no tratamento da perda de memória comportamental provocada pelos oligômeros. O modelo de condição do medo da memória foi realizado como aqui descrito. É desejável que não existam mudanças comportamentais adversas observadas em qualquer dose. Por conseguinte, existe uma correlação entre o desempenho deste composto no ensaio de transporte da membrana ou o seu desempenho no ensaio de condicionamento de medo, o último sendo um indicador da perda de memória. Prevê-se que os compostos de isoindolina aqui proporcionados serão ativos no ensaio de condicionamento de medo e, por conseguinte, vai ser demonstrado ser eficaz no tratamento de perda de memória. A correlação entre o desempenho de um composto no modelo de condição de medo e a sua utilidade no tratamento de perda de memória tem sido estabelecida na literatura. (Delgado MR, Olsson A, Phelps EA. “Extending animal models of fear conditioning to humans” Biol. Psychol. 2006 julho; 73 (1): 39-48).

Exemplo 10. Estudos de Autorradiografia com amostras de cérebro de Rato, Macaco rhesus e Humano.

[0407] Estudos de imagem Autorradiografia para a caracterização farmacológica e neurológica dos ligandos do receptor sigma-2 e sigma-1 são realizados por uma modificação do protocolo descrito anteriormente por Xu et al., 2010. Xu, J., Hassanzadeh B, Chu W, Tu Z, Vangveravong S, .Tones LA, Leudtke RR, Perlmutter JS, Mintun MA, Mach RH. [3H]4-(Dimethylamino)-N-[4-(4-(2- methoxyphenyl)piperazin- 1-yl)butyl]benzamide, a selective radioligand for dopamine D(3) receptors. II. Quantitative analysis of dopamine D3 and D2 receptor density ratio in the caudate-putamen. Sinapse 64: 449-459(2010), que é aqui incorporado por referência. RHM-1 marcado foi obtido pelo método de Xu J, Z Tu, Jones LA, Wheeler KT, Mach RH. [3H]N-[4-(3,4-dihydro-6,7-dimethoxyisoquinolin- 2(1 H)-yl)butyl]-2-methoxy-5-methylbenzamide: a Novel Sigma-2 Receptor Probe. Eur. J. Pharmacol. 525: 8-17 (2005), que é aqui incorporado por referência.

[0408] Secções do cérebro em 20 μM de espessura de cérebro de ratos, macacos rhesus e humano post-mortem são cortados utilizando um Criótomo microm e montado sobre lâminas de vidro superfrost plus (Fisher Scientific, Pittsburgh, PA)., e secções em série através das regiões cerebrais do córtex cerebral e hipocampo são utilizadas neste estudo. Secções do cérebro são incubadas com 5 nM de [3H] (+)-Pentazocina para caracterização de receptores sigma-1, 4 nM de [3H]RHM-1 apenas para a caracterização de receptores sigma-2, 10 nM de [3H]DTG e [3H]Haloperidol na presença de bloqueio de receptor de sigma- l (+)-Pentazocina para espelhar a distribuição de receptores sigma-2; após incubação com os radioligandos durante 30 minutos, as secções do cérebro que contêm lâminas de vidro são lavadas 5 vezes em um minuto de cada vez, com tampão gelado.

[0409] As lâminas são secas e tornadas condutivas por revestimento com uma fita de folha de cobre, no lado livre e, em seguida, colocadas na câmara de gás [mistura de árgon e trietilamina (Sigma-Aldrich, EUA)] de um detector gasoso, o Imageador Beta 2000Z Sistema de Imageamento Digital (Biospace, França). Depois que o gás é bem misturado e um estado homogêneo é atingido, ainda mais a exposição durante 24 horas a 48 horas até que imagens de alta qualidade são observadas. [3H]Microescala (American Radiolabeled Chemicals, Inc., St. Louis, MO) é contado ao mesmo tempo como uma referência para a análise quantitativa da radioatividade total, ou seja, converter o cpm/mm2 a nCi/mg tecido. A análise quantitativa é realizada com o programa Beta-Imagem Plus (Biospace, França) para as regiões anatômicas de interesse (ROI), ou seja, para obter a captação de radioatividade quantitativa (cpm/nlln2) nas regiões do córtex e hipocampo. A densidade de ligação é normalizada para fmol/mg de tecido com base nas atividades específicas dos radioligandos correspondentes e curva de calibração do padrão [3H]Microescala. Uma série de diluições dos compostos de teste (10 nM, 100 nM, 1000 nM e 10000 nM) é testada para competir pelos sítios de ligação utilizando a Autorradiografia quantitativa, para os quatro radioligandos, [3H](+)-Pentazocina, [3H]RHM-1, [3H]DTG e [3H]Haloperidol, em seguida, a ligação (% de controle) específica é analisada para deduzir a afinidade de ligação nas regiões do córtex e do hipocampo (giro dentado, hipocampo CAI e CA3).

[0410] Autorradiografia em receptores de sigma-1 e sigma-2 com [3H]- (+)-Pentazocina (um ligando do receptor sigma-1) e/ou [125I]-RHM-4, ou [3H]-RHM- 1, (ligandos de receptores sigma-2) em, por exemplo, ligação específica de fatias de córtex frontal humanos de pacientes normais, pacientes com demência por corpos de Lewy (DLB), ou pacientes com a doença de Alzheimer (AD) é realizada e comparada com o controle. Os receptores sigma-1 são estatisticamente regulados negativamente na doença de Alzheimer e possivelmente DLB em comparação com o controle normal, por exemplo, Mishina et al. relataram baixa densidade de receptores sigma-1 no início da doença de Alzheimer. Mishina et al., 2008, Low density of sigma1 receptors in early Alzheimer’s disease. Ann. Nucl Med 22: 151-156. Contudo; receptores sigma-2 não são estatisticamente reprimidos na AD. Autorradiografia é utilizada para mostrar o deslocamento de, por exemplo, 18,4 nM de [3H]-RHM-1 em córtex frontal de macaco, hipocampo de macaco ou córtex temporal humano pelo composto de teste de ligandos de sigma-2. Siramesine, um ligando de receptor de sigma-2 conhecido, e os compostos de teste são esperados para deslocar parcialmente [3H]-RHM-1 nos tecidos alvo.

Exemplo 11. Ensaio MTS: Determinação da atividade agonista ou antagonista de vários ligandos de sigma-2.

[0411] A citotoxicidade de compostos de teste é determinada utilizando o ensaio CellTiter96 Aqueous One Solution Assay (Promega, Madison, WI). Resumidamente, células MDA-MB-435 ou MDA-MB231or SKOV-3 foram semeadas numa placa de 96 poços a uma densidade de 2000 células/poço no dia antes do tratamento com ligandos seletivos do receptor sigma-2. Após um tratamento de 24 horas, o CellTiter 96 AQueous One Solution Reagent é adicionado a cada poço e a placa foi incubada durante 2 horas a 37 °C. A placa é lida a 490 nm num leitor de placas Victor3 (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Shelton, CT). O valor EC50, definido como a concentração do ligando sigma necessária para inibir a viabilidade celular em 50% em relação às células não tratadas, é determinado a partir da curva de resposta à dose para cada linha celular. Siramesine é aceito como um agonista. Os agonistas e antagonistas dos ligandos de sigma 2-são definidos como a seguir: Se os EC50s de um composto de teste ligando sigma-2 é menos do que 2 vezes superior a EC50 de siramesine, este composto teste sigma-2 modificado é considerado como um agonista. Se o valor de EC50 de um ligando de sigma-2 é entre 2 e 10 vezes superior a EC50 de siramesine, este ligando de sigma-2 é considerado como um agonista parcial. Se o valor de EC50 de um ligando de sigma-2 é maior do que 10 vezes superior de EC50 de siramesine, este ligando de sigma-2 é considerado como um antagonista. Os compostos padrão de ligandos de sigma-2 utilizados para os estudos são os seguintes: agonistas (siramesine e SV 119), agonista parcial (WC26), e antagonistas (RHM-1). Os resultados para padrões são mostrados na Tabela 3.

[0412] Tabela 3. Valores IC50 para o ensaio de Viabilidade TumorCell.

[0413] Culturas neuronais são tratadas com várias concentrações de compostos sigma durante 24 horas e intensidade nuclear em comparação com o veículo é medida. Agonistas sigma-2 (siramesine, SV-119, WC-26) causam morfologia nuclear anormal significativa nos neurônios; em contraste com os antagonistas sigma-2 (RHM-1), que não diminuem a intensidade nuclear nas concentrações de teste. Ver, por exemplo, WO2013/029060, FIG 9B, aqui incorporada por referência, em que os agonistas de receptores sigma-2, revelaram ser citotóxicos para as células neuronais e de câncer; no entanto os antagonistas de receptores sigma-2 não eram tóxicos e ainda bloquearam a citotoxicidade causada pelos agonistas do receptor sigma-2. Compostos de teste de isoindolina da presente invenção são analisados neste ensaio para ajudar a determinar o fenótipo neuronal, os resultados são apresentados na Tabela 2.

Exemplo 12. Ensaios de caspase-3. Determinação da atividade agonista ou antagonista de ligandos de sigma-2.

[0414] Tal como aqui descrito, Xu et al. identificou complexo de proteína PGRMC1 como o sítio de ligação putativo do receptor sigma-2. Xu et al., 2011. Nature Commun. 2, artigo número 380, aqui incorporado por referência. Agonistas do receptor de Sigma-2 podem induzir a morte celular dependente de caspase-3. Xu et al 2011 descreve ensaios funcionais para examinar a capacidade do PGRMC1 para regular a ativação da caspase-3 pelo agonista do receptor de sigma-2 WC-26.

[0415] Oligômeros Abeta causam baixos níveis de ativação de caspase-3 e levam a LTD. Os níveis elevados de oligômeros Abeta e ativação de caspase-3 levam a morte celular. Li et al., 2010; Olsen e Sheng 2012. Foi demonstrado em WO2013/029060, aqui incorporada por referência, que os agonistas de receptores sigma-2 (SV-119, siramesine) ativam a caspase-3 em células tumorais e neurônios; ver, por exemplo, as FIGs. 10A e 10B. Antagonista do receptor de sigma-2 RHM-1 inibe a ativação em células de tumor (FIG 10A), mas não foi capaz de bloquear a ativação pelo agonista SV-119 em neurônios neste experimento (FIG 10B). Os compostos de teste que são antagonistas de receptores sigma 2 são capazes de inibir a ativação de caspase-3 em células tumorais e bloqueiam ativação do agonista do receptor sigma-2 SV-119 de caspase-3 em neurônios. Por conseguinte, certos compostos de teste são testados para o comportamento antagonista do receptor de sigma 2 em ensaios de caspase-3 de células tumorais e neurônios, tal como demonstrado no presente exemplo.

[0416] A ativação de caspase-3 endógena, através de ligandos do receptor sigma-2 é medida utilizando Kit de Ensaio de Atividade Colorimétrico de Caspase-3 (Milipore, Billerica, MA) de acordo com o protocolo do fabricante. Resumidamente, as células MDA-MB 435 ou MDA-MB23I foram plaqueadas num prato de 0,5 x 106 células 100 mm. 24 horas após o plaqueamento, ligandos de sigma-2 são adicionados aos pratos de cultura para induzir a ativação de caspase 3. A concentração final do ligando sigma-2 é o seu EC50. 24 horas após o tratamento, as células são colhidas, lisadas em 300 uL de Tampão de Lise Celular, e centrifugado durante 5 minutos a 10.000 x g. O sobrenadante foi recolhido e incubado com substrato de caspase-3, DEVD-pNA, durante 2 horas a 37°C. A concentração de proteína é determinada utilizando o kit de ensaio de proteína Dc (Bio-Rad, Hercules, CAI. A pNA livre resultante é medida utilizando um leitor de microplacas Victor3 (PerkinEliner Life and Analytical Sciences, Shelton, CT) a 405 nm. Os ligandos testados incluem agonistas sigma-2 padrão (siramesine, SV119, WC26), e antagonista sigma-2, RHMWU-I-102 (RHM-1), e os compostos de teste Os ligandos que ativam a caspase 3 são considerados como agonistas, enquanto que o ligantes que não ativam caspase 3 são considerados antagonistas. Como mostrado em-WO2013/029060, FIG. 10A, o agonista siramesine sigma-2 induz a atividade da caspase-3, enquanto que os antagonistas de sigma-2, como por exemplo, RHM-1, e os compostos de teste que são antagonistas de sigma-2 não induzem a atividade da caspase-3 em ambas as células de câncer e neurônios.

Exemplo 13. Fenótipo Terapêutico.

[0417] O fenótipo terapêutico para um Composto de Teste é determinada por uma plataforma de ensaio in vitro e é preditivo da eficácia comportamental. Um composto que (1) liga-se seletivamente com elevada afinidade a um receptor sigma-2; e (2) atua como um antagonista funcional num neurônio, é previsível que tenha uma eficácia comportamental se: bloqueia déficits de tráfico de membrana induzidos por Aβ; bloqueia perda de sinapses induzida por Aβ e não afeta o tráfico ou o número de sinapses, na ausência de oligômero Abeta. Este padrão de atividade nos ensaios in vitro é denominado o "fenótipo terapêutico". A capacidade de um antagonista do receptor de sigma-2 para bloquear os efeitos de oligômeros Abeta em neurônios maduros, sem afetar a função normal na ausência de oligômeros Abeta é um critério para o fenótipo terapêutico. Os compostos que afetam o tráfico ou o número de sinapses, na ausência de oligômeros não são eficazes comportamentalmente. Apenas os compostos que bloqueiam seletivamente oligômeros sem afetar o tráfico normal ou alterando o número de sinapses são comportamentalmente eficazes na prevenção e tratamento de perda de memória induzida por oligômero Abeta. Numa modalidade, a plataforma de ensaio in vitro pode prever a eficácia comportamental. Este padrão de atividade nos ensaios de plataforma é, por conseguinte, um fenótipo terapêutico.

[0418] Em suma; antagonistas de sigma-2 com elevada afinidade (de preferência com Ki menos do que cerca de 600 nM, 500 nM, 400 nM, 300 nM, 200 nM, 150 nM, 100 nM, ou 70 nM) em receptores sigma-2 que têm seletividade maior do que cerca de 20 vezes, 30 vezes, 50 vezes, 70 vezes, ou de preferência maior do que 100 vezes para receptores sigma em comparação a outros não-sigma CNS ou receptores alvo, tem boas propriedades semelhantes à fármacos, incluindo penetrabilidade do cérebro e boa estabilidade metabólica e/ou do plasma, e que possuem o fenótipo terapêutico, estão previstos para terem eficácia comportamental e podem ser utilizados para tratar a disfunção sináptica induzida por oligômero Abeta em um paciente com necessidade do mesmo.

[0419] Fenótipo neuronal funcional para vários compostos de isoindolina de acordo com a fórmula I e/ou fórmula II, previsto para ter biodisponibilidade oral, com a caracterização de ensaio in vitro, estão apresentados na Tabela 2.

Fenótipo Terapêutico

[0420] Vários ligandos sigma-2 se dividem em três fenótipos neuronais funcionais: antagonistas (bloqueiam sinalização Abeta); agonistas (bloqueiam sinalização Abeta com a curva em forma de U de dose-resposta e toxicidade em doses elevadas, e inativa (sem efeito em culturas neuronais). Os ligandos de receptores de sigma-1 da técnica anteriormente conhecida caem em duas categorias: antagonistas (bloqueiam sinalização Abeta) e inativa (sem efeito em culturas neuronais). A maioria dos compostos da técnica anterior sofrem de baixa seletividade, em que eles têm afinidade significativa para outros, receptores não-sigma. Vários compostos da técnica anterior podem não ser capazes de penetrar a barreira hematoencefálica (BHE) e são substratos suscetíveis para metabolismo oxidativo, e, portanto, não se encaixam no perfil terapêutico.

[0421] Embora vários compostos clínicos tenham o fenótipo funcional desejado, eles não preenchem o perfil terapêutico desejado. Compostos conhecidos da técnica anterior com o fenótipo neuronal funcional antagonista desejado, mas que não satisfazem os critérios de perfil terapêutico, quer por serem não-seletivos, ou ao não atravessarem a BBB, ou por estarem previstos para serem um substrato oxidativo e tendo instabilidade metabólica, são mostrados em WO2013/029060, Tabelas 11C e 11D, a qual é aqui incorporada por referência.

Exemplo 14: Toxicidade in vitro.

[0422] Compostos de teste antagonistas sigma-2 representativos não induzem toxicidade neuronal ou glial com a dosagem aguda ou crônica in vitro. Os antagonistas de receptores sigma-2 eliminam ou reduzem as alterações induzidas por oligômeros Abeta em tráfico de membrana. Nenhum efeito significativo de compostos sobre o tráfico de membrana ocorre quando administrado sem oligômeros. Não há nenhuma toxicidade em relação ao número de neurônios, número glial, tamanho nuclear, morfologia nuclear, comprimento de neurites, morfologia do citoesqueleto quando testadas até 10 vezes a concentração de EC50 para três dias. Ver, por exemplo, WO2013/029060, Tabela 12, a qual é aqui incorporada por referência.

[0423] Toxicidade in vitro para Compostos de Teste é testada em um número de ensaios padrão. De preferência, estudos toxicológicos de teste in vitro revelam que não há genotoxicidade em 10 μM (AMES, micronúcleos, citotoxidade bacteriana); toxicidade HepG2 a 100 vezes acima de afinidade a receptores sigma- 2, numa linha celular de tumor HepG2; inibição de CYP 450 enzimas 2D6, 3A4 e 2C19 a 10 uM; e inibição hERG. Os resultados para os compostos de teste para inibição de hERG (IC50, nM) são mostrados na Tabela 2.

[0424] Em algumas modalidades, compostos de isoindolina de acordo com a fórmula I ou fórmula II, como aqui fornecido, ou sais farmaceuticamente aceitáveis das mesmas, exibem uma inibição mínima de hERG, com uma IC50 superior a 300 nM, mais do que 500 nM, maior do que 1.000 nM, mais de 3.000 nm, maior do que 5.000 nM, maior do que 10.000, ou maior do que 20.000 nM. Em modalidades particulares, compostos de isoindolina de acordo com a fórmula I ou fórmula II, como aqui fornecido, ou sais farmaceuticamente aceitáveis das mesmas, exibem uma inibição mínima de hERG, e exibem uma IC50 superior a 5.000 nM, maior do que 10.000, ou maior do que 20.000 nM.

Exemplo 15:Separação e Atividades de Enantiômeros do Composto II no Ensaio de Tráfico de Membrana.

[0425] Em algumas modalidades, a síntese é realizada de forma assimétrica, a fim de produzir um enantiômero substancialmente puro ou puro de um de um análogo. Em alguns casos, os compostos quirais são resolvidos de uma mistura racêmica por qualquer técnica conhecida na técnica.

[0426] Em alguns casos, os compostos quirais são separados em (+) e (-) enantiômeros por cromatografia quiral. A mistura racêmica pode ser aplicada a uma coluna quiral CHIRALPAK AD-H (tris(3,5-dimetilfenilcarbamato) de amilose revestida em sílica-gel; 4,6x250mm) por técnicas conhecidas; por exemplo, WO2013/029060, Exemplo 15, o qual é aqui incorporado por referência. Após eluição da coluna, a rotação específica para cada um dos (+) enantiômeros e (-) enantiômero é determinada. Os enantiômeros resolvidos são testados individualmente, por exemplo, no ensaio de tráfico de membrana

Exemplo 16. Eficácia Comportamental de Melhoras em Compostos Orais Disponíveis de Déficits de Memória em Modelos Transgênicos de Alzheimer em Camundongos.

[0427] Camundongos machos hAPP/Ldn transgênicos (Tg) são utilizados como um modelo TG de AD. Os camundongos transgênicos que são tratados com veículo, ou 10 ou 30 mg/k/dia de composto de teste por via oral, durante um período de tempo específico, assim como da mesma ninhada não transgênica tratados com veículo são submetidos a um paradigma de condicionamento de medo padrão. Camundongos hAPP Swe/Ldn transgênicos (Tg) machos de 9 meses de idade tratados com veículo que são tratados p.o. para o mesmo período de tempo com veículo exibiram déficits de memória significativos contra ninhadas não transgênicas tratadas com o veículo em condicionamento de medo contextual.

[0428] Quando os animais são testados para a memória associativa 24 horas após a formação, em dois sentidos (genótipo e tempo) ANOVA com medições repetidas é utilizada para detectar qualquer diferença significativa no tempo total de congelamento entre camundongos transgênicos e não transgênicos tratados com veículo. Razões entre(de) cérebro/conc. plasmática mínima e cérebro/conc. plasmática máxima para compostos por via oral disponíveis são determinadas. Estudos subsequentes podem ser utilizados para determinar a dose mínima eficaz de um composto de teste preferido.

Exemplos Sintéticos

[0429] Os compostos aqui fornecidos podem ser sintetizados através de qualquer via de síntese; por exemplo, ver WO2013/029060, WO2013/029067, cada uma das quais é aqui incorporada por referência.

Exemplo 17: Síntese de intermediários amina gem-dimetil.

[0430] Exemplo 17A ilustra a preparação de um gem-dimetil exemplar amina intermediária como se mostra no Esquema 1

[0431] Esquema 1. Preparação da amina gem-dimetil intermediária 4-(3-(terc-butoxi)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)fenil)-2-metilbutan-2-amina.

[0432] O esquema 1 ilustra um procedimento para a preparação de uma amina gem-dimetil intermediária, o composto 11; 4-(3-(terc-butoxi)-4-((terc- butildimetilsilil)oxi)fenil)-2-metilbutan-2-amina.

[0433] Preparação do composto 3; 3-(terc-butoxi)-4- hidroxibenzaldeído (Esquema 1): A uma solução agitada de 3,4-di- hidroxibenzaldeído 1 (2,0 g, 14,5 mmol) em DCM (30 mL) foi adicionado con. H2SO4 (0,1 mL) e borbulhou-se isobutileno durante 3 h. Trietilamina (2 mL) foi adicionada e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo, o qual foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (PE: EA = 5: 1) para dar o composto 3 (1,01 g, 35%).

[0434] Preparação do composto 5, (E)-4-(3-(terc-butoxi)-4- hidroxifenil)but-3-en-2-ona (Esquema 1): A uma solução agitada de 3 (0,8 g, 4,1 mmol) em acetona (10 mL) foi adicionada solução aquosa a 10% de NaOH (0,5 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 12 h, e vertida sobre água gelada, a qual foi extraída com acetato de etila (3 x 20 mL). A fase aquosa foi acidificada com 1N HCI até pH 6 ser alcançado. A reação foi extraída com EtOAc (3 x 30 mL), e as camadas orgânicas foram lavadas com solução salina, e água, seca sobre sulfato de sódio, filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer um resíduo, o qual foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (PE: EA = 3:1) para dar o composto em epígrafe 5 (0,5 g, 50%).

[0435] Preparação do composto 7, (E)-4-(3-(terc-butoxi)-4-((terc- butildimetilsilil)oxi)fenil)but-3-en-2-ona (Esquema 1): A uma solução agitada de 5 (0,22 g, 0,9 mmol) em DCM (40 mL) adicionou-se TBSCI (0,28 g, 1,8 mmol) e imidazol (0,14 g, 2 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 8 h, concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo, o qual foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (PE: EA = 10: 1) para dar o composto em epígrafe 7 (0,22 g, 67%).

[0436] Preparação do composto 8, 4-(3-(terc-butoxi)-4-((terc- butildimetilsilil)oxi)fenil)butan-2-ona (Esquema 1): A uma solução agitada de 7 (0,22 g, 0,6 mmol) em EA (10 ml) foi adicionado Pd/C a 10% (0,02 g). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 12 h, e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer um resíduo, o qual foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (PE: EA = 10:1) para dar o composto em epígrafe 8 (0,6 g, 0,4 mmol, 68%).

[0437] Preparação do composto 9, (R,E)-N-(4-(3-(terc-butoxi)-4- ((terc-butildimetilsilil)oxi)fenil)butan-2-ilideno)-2-metilpropano-2-sulfinamida (Esquema 1): A uma solução agitada de 8 (2,6 g, 7,4 mmol, 1 eq) em THF (30 mL) foi adicionado (R)-(+)-t-butilsulfinamida (1,0 g, 8,14 mmol, 1,1 eq) e Ti(OEt)4 (3,2 g, 14,8 mmol, 2,0 eq). A mistura foi agitada a 70 °C durante a noite. A reação foi extinta com água gelada e filtrada. O filtrado foi extraído com acetato de etila. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, concentrada para obter o produto em bruto 9 (2,7 g, 80%), que foi utilizado diretamente na etapa seguinte.

[0438] Preparação do composto 10, (R)-N-(4-(3-(terc-butoxi)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)fenil)-2-metilbutan-2-il)-2-metilpropano-2- sulfinamida (Esquema 1): A uma solução agitada de 9 (2,7 g, 5,9 mmol, 1 eq) em éter (30 mL) a 0 °C foi adicionado brometo de metilmagnésio (10 mL, 30 mmol, 5 eq). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 4h. A reação foi extinta com água gelada, extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo, o qual foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (PE:EA = 10:1) para dar o composto 10 (1,6 g, 57% ).

[0439] Preparação do composto 11; 4-(3-(terc-butoxi)-4-((terc- butildimetilsilil) oxi)fenil)-2-metilbutan-2-amina (Esquema 1): A uma solução agitada de 10 (1,2 g, 2,55 mmol, 1 eq) em EA (30 ml) foi adicionada EA (HCl) (10 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2h, e concentrada sob pressão reduzida para dar 11 (1,3 g, 100%) como um óleo amarelo. Vias sintéticas análogas podem ser empregues para preparar intermediários amina gem- dimetil para utilização na síntese de isoindolinas de Fórmula I e/ou II O t- butildimetilsilil oxi substituinte, e/ou terc-butoxi substituinte pode ser substituído com substituintes alternativos, ou grupos R1 adicionais também podem ser utilizados para produzir outros análogos.

[0440] Exemplo 17B ilustra a preparação geral de gem-dimetil amina intermediária como se mostra no Esquema 3.

[0441] Esquema 3: Preparação geral de gem-dimetilaminas

[0442] Preparação do composto 2; (E)-4-(4-fluorofenil)but-3-en-2-ona, (Esquema 3): A uma solução agitada de 1, 4-fluorobenzaldeído, (100 g, 805,7 mmol, 1 eq) em acetona (1000 mL) foi adicionada solução aquosa a 10% de NaOH (100 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 12 h e depois vertida em água gelada, a qual foi extraída com EtOAc (3x300 mL). A camada orgânica foi lavada com solução salina, água, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer um resíduo, o qual foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (PE:EA = 10:1) para se obter o composto em epígrafe 2; (E)-4-(4-fluorofenil)but-3-en-2-ona (110 g, 85%).

[0443] Preparação do composto 3; 4-(4-fluorofenil)butan-2-ona (Esquema 3):A uma solução agitada de 2 (50 g, 304,5 mmol) em MeOH (40 mL) foi adicionado Pd/C (10%, 5 g). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h, e depois filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para dar o composto 3; 4-(4-fluorofenil)butan-2-ona (50 g, 300,9 mmol, 99%), que foi utilizado diretamente na etapa seguinte.

[0444] Preparação do composto 4; (R, E)-N-(4-(4- fluorofenil)butan-2-ilideno)-2-metilpropano-2-sulfinamida (Esquema 3):A uma solução agitada de 3 (50 g, 300,9 mmol, 1 eq) em THF (30 mL) foi adicionada (R)- (+)-t-butilsulfinamida (40,4 g, 331 mmol, 1,1 eq) e Ti(OEt)4(136,8 g, 600,2 mmol, 2 eq). A mistura foi agitada a 70 °C durante a noite e extinta com água gelada, filtrada e lavada por EA. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, concentrada para obter o produto em bruto 4 (65 g, 80%), que foi utilizado diretamente na etapa seguinte.

[0445] Preparação do composto 5; (R)-N-(4-(4-fluorofenil)-2- metilbutan-2-il)-2-metilpropano-2-sulfinamida (Esquema 3): A uma solução agitada de 4 (30 g, 111,4 mmol, 1,0 eq) em éter (30 mL) foi adicionado MeMgBr (111 ml, 333 mmol, 3,0 eq) a 0 °C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h. A reação foi extinta por meio de água gelada, extraída por EA. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo, o qual foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (PE:EA = 10:1) para dar o composto em epígrafe 5 (28,6 g, 90% ).

[0446] Preparação do composto 6; 4-(4-fluorofenil)-2-metilbutan- 2-amina (Esquema 3): A uma solução agitada de 5 (28,6 g, 100 mmol, 1 eq) em EA (150 mL) adicionou-se EA (HCl) (200 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h, concentrada sob pressão reduzida para dar 6 (18 g, 100%) como um óleo amarelo.

[0447] Exemplo 17C ilustra a preparação geral de gem-dimetil amina intermediário cloridrato 4-(3-amino-3-metilbutil)-2-(trifluorometoxi)fenol como mostrado no Esquema 7.

[0448] Esquema 7: Preparação da amina gem-dimetil intermediária cloridrato de 4-(3-amino-3-metilbutil)-2-(trifluorometoxi)fenol.

[0449] Preparação do Composto 2 (Esquema 7): A uma solução agitada de 2-trifluorometoxilfenol 1 (40,0 g, 0,224 mol, 1 eq) em ácido trifluoroacético (400 mL) foi adicionado hexametilenotetramina (188,7 g, 1,35 mol, 6 eq). A mistura foi agitada a 70 °C durante 12 h. Depois de ser concentrada sob vácuo, a mistura de reação foi diluída com 2N HCl, extraída com EA (3x 400 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina, secas sobre Na2SO4 e concentrada sob vácuo para fornecer um óleo cor de laranja. O produto em bruto foi submetido a cromatografia em coluna (PE:EA = 5: 1) para dar o composto em epígrafe 2 (30,0 g, 65%).

[0450] Preparação do composto 3 (Esquema 7): A uma solução agitada de 4-Hidroxi-3-trifluorometoxi-benzaldeído (30,0 g, 145,5 mmol, 1,0 eq) em acetona (300 mL) foi adicionada solução aquosa a 10% de NaOH (150 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 12 h e vertida em água gelada. A reação foi extraída com EtOAc (3 x 20 mL). A fase aquosa foi acidificada com 1N HCl até pH 6 ser alcançado. A reação foi extraída com EtOAc (3 x 100 mL). A camada orgânica foi lavada com solução salina, e água, e seca sobre sulfato de sódio, filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer um resíduo, o qual foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (PE:EA = 3:1) para dar o composto em epígrafe 3 (30.1 g, 84%).

[0451] Preparação do composto 4 (Esquema 7): A uma solução de 4-(4-hidroxi-3-trifluorometoxi-fenil)-but-3-en-2-ona (12 g, 47,5 mmol) em metanol (100 mL) foi adicionado 10% de Pd/C (1 g). A solução resultante foi agitada sob atmosfera de H2 durante 8 h. A solução foi filtrada através de uma almofada de Celite, concentrada para dar o produto bruto 4-(4-hidroxi-3-trifluorometoxi- fenil)butan-2-ona (11 g, 94%).

[0452] Preparação do composto 5 (Esquema 7): A uma solução de 4-(4-hidroxi-3-trifluorometoxi-fenil)-butan-2-ona (11 g, 44,3 mmol) em THF (100 mL) foi adicionada (R)-(+)-t-butilsulfinamida (7,0 g, 58 mmol) e Ti(OEt)4 (22,0 g, 96,7 mmol). A solução resultante foi agitada durante a noite. A reação foi extinta com água gelada, filtrada. O filtrado foi extraído com acetato de etila. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, concentrada para obter o produto em bruto 5 (11,2 g, 78%), que foi utilizado na etapa seguinte.

[0453] Preparação do composto 6 (Esquema 7): A uma solução agitada de 5 (23 g, 49,4 mmol, 1 eq) em éter (120 mL) foi adicionado MeMgBr (82 mL, 247 mmol, 5 eq) a 0 °. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h. A reação foi extinta com água gelada, extraída com EA. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo, o qual foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (PE:EA = 10:1) para dar o composto em epígrafe 6 (16,7 g, 70%).

[0454] Preparação do composto 7 (Esquema 7): A uma solução agitada de 6 (1,0 g, 2,08 mmol, 1 eq) em acetato de etila (5 mL) foi adicionado HCl saturado em acetato (5 mL) a 0 oC. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2h, e concentrada sob pressão reduzida para dar o composto 7 (0,85 g, 100%) como um óleo amarelo.

[0455] Exemplo 17D ilustra a preparação geral de amina gem-dimetil intermediário 4-(4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-3-(trifluorometoxi)fenil)-2-metilbutan-2- amina, como mostrado no Esquema 8.

[0456] Esquema 8: Preparação de gem-dimetilamina 4-(4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-3-(trifluorometoxi)fenil)-2-metilbutan-2-amina.

[0457] Preparação do composto 5 (Esquema 8):A uma solução agitada de 4 (18 g, 72,5 mmol, 1 eq) em DCM (200 mL) adicionou-se TBSCI (16,4 g, 108,8 mmol, 1,5 eq) e imidazol (9,9 g, 145 mmol, 2,0 eq). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 8 h, concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo, o qual foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (PE:EA = 10: 1) para dar o composto em epígrafe 5 (19 g, 73%).

[0458] Preparação do composto 6 (Esquema 8): A uma solução agitada de 5 (1,2 g, 3,3 mmol, 1 eq) em THF (20 mL) foi adicionado (R)-(+)-t- butilsulfinamida (0,4 g, 3,6 mmol, 1,1 eq) e Ti(OEt)4 (1,5 g, 6,6 mmol, 2 eq). A mistura foi agitada a 70 °C durante a noite. A reação foi extinta com água gelada, filtrada e extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, concentrada para obter o produto em bruto 6 (1,6 g, 97%), que foi utilizado diretamente na etapa seguinte.

[0459] Preparação do composto 7 (Esquema 8): A uma solução agitada de 6 (1,6 g, 3,4 mmol, 1,0 eq) em éter (30 mL) a 0 °C foi adicionado MeMgBr (5 mL, 17 mmol, 5,0 eq). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h. A reação foi extinta com água gelada, extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo, o qual foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (PE:EA = 10:1) para dar o composto em epígrafe 7 (0,6 g, 37% ).

[0460] Preparação do composto 8 (Esquema 8): A uma solução agitada de 7 (3,0 g, 6,2 mmol, 1 eq) em acetato de etila (30 mL) foi adicionado HCl saturado em acetato (10 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2h, e concentrada sob pressão reduzida para dar o composto 8 4-(4-((terc- butildimetilsilil)oxi)-3-(trifluorometoxi)fenil)-2-metilbutan-2-amina (2,6 g, 100%) como um óleo amarelo.

[0461] Exemplo 17E ilustra a preparação geral de gem-dimetil amina intermediário cloridrato de di-metilcarbamato 4-(3-amino-3-metilbutil)-2-(trifluorometoxi)fenil como mostrado no Esquema 11.

[0462] Esquema 11: Preparação de gem-dimetilamina cloridrato de di-metilcarbamato 4-(3-amino-3-metilbutil)-2-(trifluorometoxi)fenil.

[0463] Preparação do composto 8c (Esquema 11): A uma solução de 7c (5,0 g, 13,6 mmol, 1,0 eq) e cloreto de dimetilcarbamil (3,0 g, 27,8 mmol, 2,2 eq) em DCM (100 ml) foram adicionados DMAP (0,25 g,% 5 mol), TEA (2,9 g, 22,6 mmol, 2,0 eq). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 12 h, Depois de ser concentrada sob vácuo, o produto em bruto foi submetido a cromatografia em coluna (20%-30% de EtOAc/hexanos) para fornecer o produto 8c (4,8 g, 48%).

[0464] Preparação do composto 8d; cloridrato de di- metilcarbamato 4-(3-amino-3-metilbutil)-2-(trifluorometoxi)fenil (Esquema 11):A uma solução agitada de 8c (4,8 g, 11,0 mmol, 1 eq) em EA (30 mL) a 0 ° foi adicionado EA (HCl) (30 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h, concentrada sob pressão reduzida para dar 8d (4,1 g, 100%) como um óleo amarelo.

Exemplo 18: Preparação geral dos intermediários de amina quiral.

[0465] Exemplo 18A ilustra um exemplar de preparação de um intermediário amina quiral (R)-4-(3-aminobutil)-2-isopropoxifenol como mostrado no Esquema 2.

[0466] Esquema 2: Uma preparação geral de quiral intermediário amina (R)-4-(3-aminobutil)-2-isopropoxifenol.

[0467] Preparação do composto 2; (R)-N-((R)-4-(4-hidroxi-3- isopropoxifenil) butan-2-il)-2-metilpropano-2-sulfinamida (Esquema 2): A uma solução agitada de 1; (R, E)-N-(4-(4-hidroxi-3-isopropoxifenil)butan-2-ilideno)-2- metilpropano-2-sulfinamida (20 g, 61,4 mmol, 1 eq) em THF (200 mL) foi adicionado DABAL-H (180 mL, 180 mmol, 3 eq) a -78 °C. A mistura foi agitada a -78 °C durante 4 h, em seguida extinta com água gelada (20 mL), filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer um resíduo, o qual foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (PE: EA = 5:1) para dar o composto em epígrafe 2 (17,1 g, 52,2 mmol, 85%).

[0468] Preparação do composto 3; (R)-4-(3-aminobutil)-2- isopropoxifenol (Esquema 2): A uma solução agitada de 2 (17,1 g, 52,2 mmol, 1 eq) em EA (50 mL) foi adicionado EA (HCl) (50 mL, 100 mmol, 2 eq, 2 N) a 0 °C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h e concentrada sob pressão reduzida para dar o composto 3 (11,6 g, 100%) como um óleo amarelo.

[0469] Exemplo 18B ilustra a preparação do intermediário quiral amina (R)-4-(3,4-diisopropoxifenil)butan-2-amina a partir de material de partida 3,4- benzaldeído como se mostra no Esquema 4.

[0470] Esquema 4: A preparação geral de amina quiral (R)-4-(3,4-diisopropoxifenil)butan-2-amina.

[0471] Preparação do composto 1 (Esquema 4): Uma mistura de 3,4-di-hidroxi-benzaldeído 1a (30,0 g, 65,7 mmol, 1 eq) e 2-bromo propano (18,4 g, 131.4mmol, 2 eq) e NaH (5,4 g, 60% em óleo, 130 mmol) em DMF (300 mL) foi agitada a 70 oC durante 12 h. Depois de ser concentrada sob vácuo, a mistura foi diluída com 2N HCl, extraída com acetato de etila (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina, secas sobre Na2SO4 e concentradas sob vácuo para fornecer um óleo cor de laranja. O produto em bruto foi submetido a cromatografia em coluna (20% -30% de EtOAc/hexanos) para fornecer o produto 1; 3,4-diisopropoxibenzaldeído (10,1 g, 30%).

[0472] Preparação do composto 2 (Esquema 4): Composto 1 (20 g, 90 mmol) foi dissolvido em acetona (80 mL). Para o recipiente foi, em seguida, adicionado etanol (8 mL), NaOH a 10% (80 mL) e água (200 mL). A solução resultante foi agitada durante 8 h. extraída com EA (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina, secas sobre Na2SO4 e concentradas sob vácuo para fornecer um óleo cor de laranja. O produto em bruto foi submetido a cromatografia em coluna para se obter o composto 2; (E)-4-(3,4- diisopropoxifenil)but-3-en-2-ona (12 g, 98%).

[0473] Preparação do composto 3 (Esquema 4): A uma solução agitada do composto 2 (30,0 g, 114 mmol, 1 eq) em MeOH (300 mL) foi adicionado 10% de Pd/C (3 g). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 12 horas, e filtrada através de uma almofada de Celite. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer um resíduo, o qual foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (PE: EA = 5: 1) para dar o composto em epígrafe 3; 4- (3,4-diisopropoxifenil)butan-2-ona (11,4 g, 38%).

[0474] Preparação do composto 4 (Esquema 4): A uma solução agitada do composto 3 (11,4 g, 43,1 mmol, 1,0 eq) em THF (100 mL) foi adicionado (R)-(+)-t-butilsulfinamida (5,7 g, 47,4 mmol, 1,1 eq) e Ti(OEt)4 (19,7 g, 86,2 mmol, 2,0 eq). A mistura foi agitada a 70 °C durante a noite. A reação foi extinta com água gelada, filtrada e extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, concentrada para obter o produto em bruto 4 (15 g, 95%), que foi utilizado diretamente na etapa seguinte.

[0475] Preparação do composto 5 (Esquema 4): A uma solução agitada de 4 (6,3 g, 17,1 mmol, 1 eq) em THF (50 mL) a -78 ° C foi adicionado DABAL-H (34 mL, 34 mmol, 2,0 eq). A mistura foi agitada a -78 oC durante 4 horas, e extinta com água gelada (20 mL), filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer um resíduo, o qual foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (PE:EA = 5:1) para dar o composto em epígrafe 5; (R)-N- ((R)-4-(3,4-diisopropoxifenil)butan-2-il)-2-metilpropano-2-sulfinamida (2,5 g, 40%).

[0476] Preparação do composto 6 (Esquema 4): A uma solução agitada de 5 (2,5 g, 6,8 mmol, 1,0 eq) em EA (30 mL) foi adicionado HCl saturado em acetato de etila (10 mL) a 0 ° C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2h, e concentrada sob pressão reduzida para dar o composto 6; (R)-4-(3,4- diisopropoxifenil)butan-2-amina (2,1 g, 100%) como um óleo amarelo.

[0477] Exemplo 18C ilustra a preparação de uma amina quiral intermediária (R)-2-(4-(3-aminobutil)-2-metoxifenoxi)etan-1-ol como mostrado no Esquema 5.Preparação geral de aminas quirais

[0478] Esquema 5: Preparação da amina quiral intermediária (R)-2- (4-(3-aminobutil)-2-metoxifenoxi)etan-1-ol.

[0479] Preparação do composto 2; (R)-N-((R)-4-(4-(2-hidroxietoxi)- 3-metoxifenil)butan-2-il)-2-metilpropano-2-sulfinamida (Esquema 5): A uma solução agitada de composto 1; (R)-N-((R)-4-(4-hidroxi-3-metoxifenil)butan-2-il)-2- metilpropano-2-sulfinamida (4,3 g, 14,4 mmol, 1,0 eq) em DMF (50 mL) adicionou- se K2CO3 (4,0 g, 28,8 mmol, 2,0 eq) e 2-bromoetanol (1,5 g, 13,6 mmol, 1,2 eq). A mistura foi agitada a 80 °C durante 8 horas, e extinta com água gelada (100 ml), extraída com EA (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina, secas sobre Na2SO4 e concentradas sob vácuo para fornecer um óleo cor de laranja. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (PE:EA = 5:1) para dar o composto em epígrafe 2 (3,1 g, 63%).

[0480] Preparação do composto 3; (R)-2-(4-(3-aminobutil)-2- metoxifenoxi) etan-1-ol (Esquema 5): A uma solução agitada de 2 (3,1 g, 9,0 mmol, 1,0 eq) em EA (30 mL) foi adicionado HCl-EA (10 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h e concentrada sob pressão reduzida para dar 3 (2,1 g, 100%) como um óleo amarelo.

[0481] Exemplo 18D ilustra a preparação de uma amina quiral intermediária (S)-4-(3,4-diclorofenil)-1-methoxibutan-2-amina, como mostrado no Esquema 6.

[0482] Esquema 6: Preparação de amina quiral intermediária, (S)-4- (3,4-diclorofenil)-1-metoxibutan-2-amina.

[0483] Preparação do composto 2; 3-(terc-butil) 4-metil (R)-2,2- dimetiloxazolidino-3,4-dicarboxilato de dimetil (Esquema 6): A uma solução do composto 1; metil N-(terc-butoxicarbonil)-D-serina (13 g, 59,2 mmol) em DCM (150 mL) à temperatura ambiente adicionou-se tolueno-4-sulfônico mono-hidrato de ácido (2,0 g, 10,3 mmol) e 2,2-dimetoxipropano ( 18,5 g, 177,6 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 48 h, e concentrada para obter um resíduo, que foi purificado por cromatografia flash em coluna (PE: EA=4: 1) para dar o composto 2 (13 g, 84%) como um óleo amarelo.

[0484] Preparação do composto 3 (Esquema 6): Uma mistura de LiAlH4 (2,85 g, 75 mmol) em THF (200 mL) a 0 °C sob N2 foi agitada durante 20 min. Para a mistura a 0 °C foi adicionado o composto 2 (13,0 g, 50,1 mmol) gota a gota. A mistura foi agitada durante 30 min, e extinta com Na2SO4.10H2O, e filtrada. O filtrado foi concentrado para se obter um resíduo, o qual foi purificado por FCC (PE: EA = 4:1) para se obter o composto 3 (10,3 g, 89%) como um óleo amarelo.

[0485] Preparação do composto 4 (Esquema 6): A uma solução pré- arrefecida de cloreto de oxalil (7,6 g, 60,1 mmol) em cloreto de metileno (200 ml) a -78 °C foi adicionado DMSO (9,3 g, 120,21 mmol) em cloreto de metileno (20 mL). A mistura foi agitada durante 30 min. Para a mistura a -78 °C foi adicionado o composto 3 (10,3 g, 44,5 mmol) em cloreto de metileno (30 mL). A mistura de reação foi agitada a -78 °C durante 2 h, altura em que se trietilamina (18,0 g, 178,13) foi adicionada. A solução resultante foi aquecida a 0 °C, extinta com solução salina (30 mL), e extraída com éter dietílico (2 x 300 mL). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada para se obter o composto 4 (9,0 g, 85%) como um óleo.

[0486] Preparação do composto 6 (Esquema 6): A uma solução do composto 5 (285 mg, 0,56 mmol) em THF (15 ml) sob N2 a -78 oC foi adicionado n- BuLi (0,3 mL, 2,5 M). Após 10 min, a mistura de reação foi aquecida até -40 °C até que o precipitado desapareceu. A mistura de reação foi arrefecida até -78 °C, composto 4 (130 mg, 0,56 mmol) em THF (5 mL) foi adicionado gota a gota a -78 °C. A solução resultante foi aquecida até à temperatura ambiente, e agitada durante a noite antes de ser extinta com metanol (2 mL). Depois de ser agitada durante 30 min, a mistura foi concentrada até obter um resíduo, que foi purificado por cromatografia flash em coluna (PE:EA= 4:1) para dar o composto 6 (200 mg, 90%) como um óleo amarelo.

[0487] Preparação do composto 7 (Esquema 6): A uma solução do composto 6 (2,6 g, 6,98 mmol) em metanol (50 mL) foi adicionado Pd/C (2,0 g) à temperatura ambiente sob balão de H2 . A mistura foi agitada durante 12 h, filtrada, concentrada para obter um resíduo, o qual foi purificado por FCC (PE) para se obter o composto 7 (2,0 g, 77%) como um óleo amarelo.

[0488] Preparação do composto 8 (Esquema 6): A uma solução do composto 7 (500 mg, 1,34 mmol) em THF (20 mL) foi adicionado 0,5 M HCL (1 mL) à temperatura ambiente. A reação foi agitada durante 12 h, seca sobre Mg2SO4, e filtrada. O filtrado foi concentrado para se obter um resíduo, o qual foi purificado por FCC (PE) para obter 7 (400 mg, 90%) como um óleo amarelo.

[0489] Preparação do composto 9 (Esquema 6): A uma solução do composto 8 (140 mg, 0,42 mmol) em acetonitril (10 mL) adicionou-se Ag2O (200 mg, 0,87 mmol), seguido de iodeto de metil (0,15 mL, 2,4 mmole) .A mistura foi agitada durante 24 h, e filtrada através de uma almofada de Celite. O filtrado foi concentrado para se obter um resíduo, o qual foi purificado por meio de Prep-HPLC para se obter o composto 9 (70 mg, 48%) como um óleo amarelo.

[0490] Preparação do composto 10 (Esquema 6): A uma solução do composto 9 (70 mg, 0,20 mmol) em DCM (2 mL) foi adicionado TFA (1 mL). A mistura foi agitada durante 24 h, e concentrada para se obter o composto 10; (S)- 4-(3,4-diclorofenil)-1-metoxibutan-2-amina (50 mg, 100%) como um óleo.

[0491] Exemplo 18E ilustra a preparação de uma amina quiral intermediária (R)-4-(3-aminobutil)-2-(trifluorometoxi)fenol como mostrado no Esquema 9.

[0492] Esquema 9: Preparação da amina quiral (R)-4-(3-aminobutil)- 2-(trifluorometoxi)fenol.

[0493] Preparação do composto 6 (Esquema 9): Composto 5 (11 g, 31,3 mmol) foi dissolvido em THF (100 mL) e arrefecido para -78 oC. Para o recipiente foi, em seguida, adicionado DIBAL-H (60 mL, 1,5 M em THF, 90 mmol), e a solução resultante foi agitada durante 3 h. Análise da mistura da reação por TLC mostrou o consumo completo da imina de partida para dar o composto sulfinamida 5. A solução foi, em seguida, extinta por meio de água e extraída por EA (3 x 500 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina, secas por Na2SO4 e concentradas sob vácuo para fornecer óleo cor de laranja. O produto em bruto foi submetido a cromatografia em coluna (50%-75% de EtOAc/hexanos) para obter o produto 6 (6 g, 55%).

[0494] Preparação do composto 7; (R)-4-(3-aminobutil)-2- (trifluorometoxi)fenol (Esquema 9): Composto 6 (7 g, 15 mmol) foi dissolvido em EA (20 mL). Para o recipiente foi, em seguida, adicionado EA-HCl (20 mL, 1,5 M, 30 mmol), e a solução resultante foi agitada durante 2 h à temperatura ambiente. A solução foi extraída por H2O (50 mL por 3 vezes). A camada aquosa combinada, pH ajustado a 10 por Na saturado2CO3, extraída por EA (50 ml por 3 vezes), seca por Na2SO4 e concentrada sob vácuo para se obter o produto 7 (5 g, 95%).

[0495] Exemplo 18F ilustra a preparação de uma amina quiral intermediária (R)-4-(3-aminobutil)-2-(trifluorometoxi)fenil, como mostrado no Esquema 10.

[0496] Esquema 10: Preparação da amina quiral di-metilcarbamato (R)-4-(3-aminobutil)-2-(trifluorometoxi) fenil.

[0497] Preparação do composto 6b (Esquema 10): A uma solução agitada de 6 (4 g, 11,3 mmol, 1,0 eq) em DCM (50 mL) foi adicionado DMAP (0,2 g, 5 mol%), TEA (2,3 g, 22,6 mmol, 2,0 eq) e cloreto de dimetilcarbamil 5 (1,5 g, 13,6 mmol, 1,2 eq). A mistura foi agitada a 40 °C durante 4 horas, e extinta com água gelada (20 mL). A mistura foi extraída com DCM (3x50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina, secas sobre Na2SO4 e concentradas sob vácuo para fornecer óleo cor de laranja. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (PE:EA = 5:1) para dar o composto em epígrafe 6b (2.8 g, 58%).

[0498] Preparação do composto 7b (Esquema 10):A uma solução agitada de 6b (3 g, 7,1 mmol, 1 eq) em EA (30 mL) a 0 °C foi adicionado EA (HCl) (10 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h, concentrada sob pressão reduzida para dar 7d (1,8 g, 100%) como um óleo amarelo.

[0499] Exemplo 18G ilustra a preparação de uma amina quiral intermediária (R)-2-(4-(3-aminobutil)-2-(trifluorometoxi)fenoxi)etan-1-ol, como se mostra no Esquema 12.

[0500] Esquema 12: Preparação da amina quiral (R)-2-(4-(3-aminobutil)-2-(trifluorometoxi)fenoxi)etan-1-ol.

[0501] Preparação do composto 2 (Esquema 12): A uma solução agitada de 1 (0,7 g, 2 mmol, 1,0 eq) em DMF (10 mL) adicionou-se K2CO3 (0,55 g, 4 mmol, 2,0 eq) e 2-bromoetanol (0,3 g, 2,4 mmol, 1,2 eq). A mistura foi agitada a 80 °C durante 8 horas, depois extinta com água gelada (30 mL), extraída por EA (20 mL por 3 vezes). A camada orgânica combinada foi lavada com solução salina, seca por Na2SO4 e concentrada sob vácuo para fornecer óleo cor de laranja. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (PE:EA = 5:1) para dar o composto em epígrafe 2 (0.66 g, 83%).

[0502] Preparação do composto 3 (Esquema 12): A uma solução agitada de 2 (0,9 g, 2,3 mmol, 1 eq) em EA (30 mL) foi adicionado EA (HCl) (10 mL) a 0°C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h, concentrada sob pressão reduzida para dar 3 (0,75 g, 100%) como um óleo amarelo.

Exemplo 19: A preparação geral de isoindolinas a partir de intermediários de amina quirais ou intermediários amina gem-dimetil.

[0503] Exemplo 19A ilustra a preparação de isoindolina de composto 56, ácido 2-(4-(4-hidroxi-3-(trifluorometoxi)fenil)-2-metilbutan-2-il)isoindolina-4- carboxílico, a partir da amina intermediária gem-dimetil, como mostrado no Esquema 13.

[0504] Esquema 13: Preparação de isoindolina ácido 2-(4-(4-hidroxi-3-(trifluorometoxi)fenil)-2-metilbutan-2-il)isoindolina-4-carboxílico (EXEMPLO 56).

[0505] Preparação do composto 2 (Esquema 13): A uma solução de ácido 1; 2,3- dimetilbenzóico (2,0 g, 13,3 mmol, 1,0 eq) em MeOH (30 mL) foi adicionado cloreto de tionil (1,5 mL) e agitada ao refluxo durante 3 h. A mistura foi concentrada, extraída com EA (30 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com água (2 x 30 mL), secas sobre Na2SO4, concentradas para dar o produto desejado 2 sem purificação adicional (2,1 g, 98%).

[0506] Preparação do composto 3 (Esquema 13): A uma solução de 2 (2,1 g, 13,3 mmol, 1,0 eq) em CCl4 (30 mL) foi adicionado NBS (4,7 g, 26,6 mmol, 2,0 eq) e BPO (0,2 g). A mistura foi aquecida a refluxo durante 4 h. A reação foi diluída com DCM (30 mL), lavada com água (2 x 30 mL), seca sobre Na2SO4, concentrada para dar um produto em bruto, o qual foi purificado por cromatografia em coluna para dar o composto 3; metil 2,3-bis(bromometil)benzoato de metil (4,0 g, 94%).

[0507] Preparação do composto 5 (Esquema 13): A uma solução de 3 (0,3 g, 0,93 mmol, 1,0 eq) em THF (10 mL) foi adicionado de Na2CO3 (0,2 g, 1,9 mmol, 2,0 eq). A mistura foi agitada em refluxo por 4h. A mistura resultado foi diluída com EA, lavada com solução salina, concentrada para obter o produto em bruto 5 sem purificação adicional (300 mg, 82%).

[0508] Preparação do composto 6 (Esquema 13): A uma solução de 5 (0,3 g, 0,56 mmol, 1,0 eq) em THF (5 mL) foi adicionado 10 N NaOH (5 mL). A mistura foi agitada a 55 °C durante 4 h. A mistura resultado foi concentrada e ajustada a pH 5 com 6N HCl. A mistura foi extraída com EA. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, e concentrada para dar um resíduo, que foi purificado por meio de prep-HPLC para dar o produto desejado, ácido 2-(4-(4-hidroxi-3- (trifluorometoxi)fenil)-2-metilbutan-2-il)isoindolina-4-carboxílico (Composto do exemplo 56) como um sólido branco (86 mg, 37%). 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8,04 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,54 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,14 (s, 1H), 7,10 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,10-4,70 (m, 4H), 2,73-2,69 (m, 2H), 2,10-2,06 (m, 2H), 1,56 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 410,15. LC-MS: 410.1 (M+1)+.

[0509] Exemplo 19B ilustra a preparação do composto representativo substituído isoindolina-sulfona, cloridrato de 2-metoxi-4-(3-metil-3-(4- (metilsulfonil)isoindolina-2-il)butil)fenol, a partir da amina intermediária gem-dimetil,como mostrado no Esquema 14.

[0510] Esquema 14: Procedimento geral para a preparação de sulfona substituída cloridrato de isoindolina-2-metoxi-4-(3-metil-3-(4- (metilsulfonil)isoindolina-2-il)butil)fenol (Composto Exemplo 64).

[0511] Preparação do composto 2 (Esquema 14): A uma solução agitada de 1 (12,0 g, 64,8 mmol, 1 eq) em THF (150 mL) foi adicionada n-BuLi (30 mL, 2,5 M) a -75 °C. A mistura foi agitada a -75 oC durante 1 h, e, em seguida, adicionado dissulfureto de dimetil (7,2 g, 76,4 mmol) gota a gota. A mistura foi agitada a -75 °C durante 4 h, e extinta com solução saturada de NH4Cl , extraída com acetato de etila, seca sobre Na2SO4, concentrada sob pressão reduzida para originar o produto em bruto 2 (12 g, 100%). 1-Bromo-2,3-dimetilbenzeno foi adquirido a partir de Shangai RuiDing Chemical Co. Ltd.

[0512] Preparação do composto 3 (Esquema 14): A uma solução agitada de 2 (12,0 g, 78,8 mmol, 1 eq) em DCM (200 mL) foi adicionada m-CPBA (30 g, 173,8 mmol) a 0 oC. A mistura foi agitada a 10 oC durante 2 h e extinta com 10% de Na2SO3. A solução aquosa foi ajustada a pH 10 com NaOH a 10%, extraída com DCM, seca sobre Na2SO4, concentrada sob pressão reduzida para originar o produto em bruto, que foi purificado com cromatografia de coluna (PE:EA = 5:1) para se obter o composto em epígrafe 3 (9,0 g, 62%). Ácido 3-cloroperbenzóico foi adquirido a partir deShanghai DeMo Chemical Co. Ltd.

[0513] Preparação do composto 4 (Esquema 14): A uma solução agitada de 3 (1,0 g, 5,42 mmol) em CCl4 (15 mL) foi adicionado NBS (2,22 g, 12,4 mmol, 1,2 eq) e AIBN (400 mg, 2,43 mmol). A mistura foi agitada a 70 °C durante 6 h, arrefecida, concentrada in vacuo, purificada por cromatografia de coluna (PE:EA = 3:1) para se obter o composto em epígrafe 4 (1,4 g, 75%). N-bromossuccinimida foi adquirida a partir de Shanghai JingChun Chemical Co. Ltd. Azobisisobutironitril foi adquirido a partir de Shanghai GuoYao Chemical Co. Ltd.

[0514] Preparação do composto 6 (Esquema 14):A uma solução de 6 (4,0 g, 1,2 mol) em EA (100 mL), HCl/EA (1,2 g, 2 M, 200 mol) foi adicionado. A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A reação foi concentrada para obter o produto em bruto 7 (2,8 g, 99%), o qual foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional.

[0515] Preparação do composto 7 (Esquema 14): A uma solução de 6 (280 mg, 1,20 mmol) em THF (10 mL), 4 (410 mg, 1,2 mmol) e K2CO3 foi adicionado (330 mg, 2,4 mmol. A solução resultante foi agitada a 70 oC durante 12 h. A mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite, lavada com EA, e o filtrado foi concentrado para se obter o produto em bruto 7 (500 mg, 100%), que foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional.

[0516] Preparação do composto 8 (Esquema 14): A uma solução de 7 (500 mg, bruto) em THF (10 mL), TBAF (1,2 mL, 1M) foi adicionado. A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A mistura de reação foi concentrada para obter o resíduo, o qual foi purificado por HPLC preparativa para obter 8 (120 mg, 20% ao longo de duas etapas).

[0517] Preparação do composto 9; cloridrato de 2-metoxi-4-(3- metil-3-(4-(metilsulfonil)isoindolina-2-il)butil)fenol (Exemplo Composto 64) (Esquema 14): A uma solução de 8 (120 mg, 0,30 mol) em EA (10 mL), HCl/EA (1,2 g, 2 M, 2 mmol) foi adicionado. A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A reação foi concentrada para obter o produto 9 (90 mg, 75%). 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7,97 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,78-7,68 (m, 2H), 6,88 (s, 1H), 6,72 (s, 2H), 5,09 (s, 2H), 4,85 (s, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,20 (s, 3H), 2,732,70 (m, 2H), 2,13-2,10 (m, 2H), 1,58 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 390,15.

[0518] Exemplo 19C ilustra a preparação do composto representativo substituído isoindolina-sulfona, cloridrato de 2-metoxi-4-(3-metil-3-(5- (metilsulfonil)isoindolina-2-il)butil)fenol, a partir da amina intermediária gem-dimetil, como mostrado no Esquema 15.

[0519] Esquema 15: Procedimento geral para a preparação de indolina sulfona-substituída 2-metoxi-4-(3-metil-3-(5-(metilsulfonil)isoindolina-2-il)butil)fenol.

[0520] Preparação do composto 2a (Esquema 15): Para a solução de 1 (50 g, 0,47 mol, 1,00 eq) em CHCl3 (500 mL) foi adicionado HSO3Cl (75,5 mL, 0,95 mol, 2,00 eq) gota a gota sob banho de arrefecimento com gelo. Depois de se completar a adição, aqueceu-se a mistura até à temperatura ambiente, e agitou-se durante 1 h. A mistura resultante foi vertida em gelo-água e depois extraída com DCM (500 mL) por 3 vezes. A camada orgânica combinada foi lavada com água, solução salina, seca sobre Na2SO4, concentrada in vacuo para se obter o produto sólido branco 2a (76,5 g, 79,3%). 1,2-Dimetilbenzeno foi adquirido a partir de Shanghai GuoYao Chemical Co. Ltd. Ácido clorossulfônico foi comprada a partir de Shanghai AoYue Chemical Co. Ltd.

[0521] Preparação do composto 3a (Esquema 15): A uma suspensão de 2 (77 g, 0,38 mol, 1.00eq) em sat. Na2SO3 (118 g, 0.94 mol, 2.50 eq), solução de 32% NaOH (30 g, 0.75 mol, 2.00 eq) foi adicionada. Após agitação durante 3 h à temperatura ambiente, a reação foi acidificada para pH = 1 com solução de HCl a 25% sob banho de arrefecimento com gelo. O precipitado é o produto em bruto 3a (59,75g, 93,8%), que foi utilizado sem purificação adicional.

[0522] Preparação do composto 4a (Esquema 15): Num tubo de vidro selado, a uma suspensão de 3 (20 g, 0,12 mol, 1.00eq) numa mistura de H2O (50 mL) e solução de MeOH (67,5mL), iodo metil (20 g, 0,14 mol, 1,15 eq) e solução de 32% de NaOH (47 g, 1,2 mol, 10,00 eq) foram adicionadas. A reação foi aquecida a 90 °C e agitada durante a noite. Depois da reação estar concluída, o metanol foi removido sob pressão reduzida, e extraída com EA, concentrada para se obter o produto 4a (8,33g, 38,5%). O iodeto de metil foi adquirido a partir de Shanghai AoYue Chemical Co. Ltd.

[0523] Preparação do composto 5a (Esquema 15): A uma solução do composto 4 (9,5 g, 51,6 mmol, 1,00 eq) em CCl4, NBS (18,3 g, 103 mmol, 2,00 eq) e BPO (1,0 g, 5,2 mmol, 0,10 eq) foram adicionados. A reação foi aquecida a refluxo durante 6 h. Depois da reação estar completa, o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi diluído com PE e H2O. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4 e concentrada para fornecer o produto em bruto, o qual foi purificado por FCC (PE:EA = 10:1 ~ 3:1) para se obter sulfona intermediária 5a; 1,2-bis (bromometil) -4-(metilsulfonil)benzeno.

[0524] Preparação do composto 9a, cloridrato de 2-metoxi-4-(3-metil- 3-(5-(metilsulfonil)isoindolina-2-il)butil)fenol, foi realizada a partir do intermediário 5a, pelas técnicas descritas no Exemplo 19B.

Exemplo 20: Preparação de 4-(3-(4-Fluoroisoindolin-2-il)-3-metilbutil)-2- isopropoxifenol, Exemplo Composto 28

[0525] Exemplo 20 ilustra a preparação representativa de 4-(3-(4- Fluoroisoindolin-2-il)-3-metilbutil)-2-isopropoxifenol, Composto Exemplo 28, como mostrado no Esquema 16.

[0526] Esquema 16: Preparação de 4-(3-(4-Fluoroisoindolin-2-il)-3- metilbutil)-2-isopropoxifenol, Exemplo Composto 28.

[0527] Preparação do Composto 2 (Esquema 16): A uma suspensão de 1-fluoro-2,3-dimetilbenzeno (100 g, 0,81 mmol) em tetracloreto de carbono (1,5 L) foram adicionados N-bromossuccinimida (288 g, 1,62 mmol), peróxido de benzoil (10 g). A mistura foi aquecida a 70 °C. Depois de se agitar durante 15 h, a mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente, vertida em água (1 L) e extraída com DCM (3x1L). As camadas orgânicas combinadas foram purificadas por cromatografia de flash em coluna com éter de petróleo para dar o produto 2 (161 g, 70%) como um sólido branco.TLC: PE/EA = 10/1; Rf (Composto 1) = 1; Rf (Composto 2) = 0,8

[0528] Preparação do Composto 3 (Esquema 16): A uma mistura de 1,1-dimetilpropargilamina (20 g, 240 mmol, 1,0 eq) em THF (900 mL) foi adicionado o composto 2 (70,7 g, 253 mmol, 1,05 eq) e trietilamina (73 g, 720 mmol, 3 eq). A reação foi agitada a 60 oC durante 12 h. A mistura foi filtrada através de uma almofada de Celite, e a almofada foi lavada com acetato de etila. O filtrado foi concentrado in vacuo para dar um óleo cor de laranja. O resíduo foi purificado por cromatografia de flash em coluna (PE/EA, 10/1) para se obter composto 3 (30 g, 61%) como um sólido amarelo. TLC: PE/EA = 10/1; Rf (Composto 2) = 0,8; Rf (Composto 3) = 0,5.

[0529] Preparação do composto 5 (Esquema 16): A uma solução de 2-isopropoxi-fenol (100 g, 0,66 mol, 1,0 eq) em metanol (700 mL) foi adicionado hidróxido de sódio (39,4 g, 1,0 mol, 1,5 eq) e iodeto de potássio (114,5 g, 0,69 mol, 1,05 eq). A reação foi agitada à temperatura ambiente. À mistura de reação foi adicionado hipoclorito de sódio (978 g, 1,31 mol, 2,0 eq) gota a gota. Quando LCMS indicou que o material de partida tinha desaparecido, concentrado de HCl foi adicionado até pH 1. Foi adicionado sulfito de sódio (56 g, 445 mmol, 1,0 eq). A mistura foi extraída com acetato de etila (3 x 500 mL), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina, secas sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada in vacuo para dar o composto 5 (175 g, 96%) como um sólido branco. TLC: PE/EA =10/1; Rf (Composto 4) = 0,4; Rf (Composto 5) = 0,4

[0530] Preparação do composto 6 (Esquema 16): A uma solução do composto 5 (350 g, 1,26 mol, 1,0 eq) em DMF (2 L) foi adicionado hidreto de sódio (65,4 g, 1,64 mol, 1,3 eq) a 0 °C sob nitrogênio. Depois de se agitar durante 0,5 h, éter metílico de clorometil (131,7 g, 1,64 mmol, 1,3 eq) foi lentamente adicionado. A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2h. A reação foi extinta com água (4 L) e extraída com acetato de etila (3 x 1 L). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas in vacuo para originar o produto em bruto. O resíduo foi purificado por cromatografia de flash em coluna (PE/EA, 10/1) para se obter composto 6 (300 g, 74%) como um sólido branco. TLC: PE/EA =10/1; Rf (Composto 5) = 0,4; Rf (Composto 6) = 0,6

[0531] Preparação do composto 7 (Esquema 16): A uma solução do composto 6 (56,2 g, 174 mmol, 1,0 eq) em acetonitril (600 mL) foi adicionado o composto 3 (39 g, 192 mmol, 1,1 eq) e X-Phos (4,16 g, 9,0 mmol, 0,05 eq) seguido por carbonato de césio (56,9 g, 174 mmol, 1,0 eq) e diacetato de paládio (1,2 g, 5,23 mmol, 0,03 eq). A reação foi agitada a 60 °C durante 12h. A reação extinta com água gelada (1 L), seguido por extração com acetato de etila (3 x 500 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas in vacuo para originar o produto em bruto. O resíduo foi purificado por cromatografia de flash em coluna (PE/EA, 10/1) para se obter composto 6 (48,5 g, 70%) como um sólido castanho. TLC: PE/EA = 10/1; Rf (Composto 6) = 0,6; Rf (Composto 7) = 0,3.

[0532] Preparação do Composto 28 (Esquema 16): A uma solução do composto 7 (72 g, 181 mmol, 1,0 eq) em metanol (1,4 L) foi adicionado HCl concentrado (36 mL, 360 mmol, 2,0 eq) e paládio a 10% sobre carvão ativado (14 g). A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h sob balão de hidrogênio. A mistura foi filtrada através de uma almofada de Celite, e a almofada foi lavada com metanol. O filtrado foi concentrado in vacuo para se obter um óleo cor de laranja pálido. O resíduo foi diluído com éter, agitada à temperatura ambiente e foi formado um sólido. O sólido foi filtrado e lavado com etanol para dar Exemplo 28 Composto (60 g, 93%) como um sólido branco. TLC: PE/EA =3/1; Rf (Composto 7) = 0,6; Rf (Produto do composto exemplo 28) = 0,3. LC-MS: 358.2 (M+1)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,17 (s, 1H), δ 8,59 (s, 1H), δ 7,43 (m, 1H), δ 7,21 (m, 2H), δ 6,80 (s, 1H), 6,71 - 6,63 (m, 2H), 4,88 - 4,79 (m, 2H), δ 4,66 (m, 2H), δ 4,47 (m, 2H), δ 2,53 (m, 2H), δ 1,97 (m, 2H), δ 1,43 (s, 6H), δ 1,22 (s, 6H).

Exemplo 21: Preparação de 2-(Terc-butoxi)-4-(3-metil-3-(5-(metilsulfonil)isoindolina-2-il)butil)fenol, Composto Exemplo 62.

[0533] Exemplo 21 ilustra a preparação representativa de 2-(Terc- butoxi)-4-(3-metil-3-(5-(metilsulfonil)isoindolina-2-il)butil)fenol, Composto Exemplo 62, como mostrado no Esquema 17.

[0534] Esquema 17: Processo para preparação de 2-(Terc-butoxi)-4- (3-metil-3-(5-(metilsulfonil)isoindolina-2-il)butil)fenol, Composto Exemplo 62.

[0535] Preparação do composto 1 (Esquema 17): Para um frasco de vidro de pressão a -30 °C contendo uma mistura de catecol (50,0 g, 454 mmol, 1,0 eq), ácido sulfúrico concentrado (0,3 mL) em diclorometano (200 mL), isobuteno (152,6 g, 2,72 mol, 6,0 eq) foi condensado. Depois de selar a garrafa de pressão com uma tampa de Teflon com ponta roscada com um O-anel de borracha protegida com Teflon, a mistura foi aquecida a 35 °C durante 3 h até que se obteve uma solução clara. Após arrefecimento (-30 °C), trietilamina (1,5 mL, 10,8 mmol) foi adicionada e a mistura foi concentrada. O resíduo foi suspenso em NaOH 0,5 M (1 L) e agitado durante 10 min. A solução de cor verde-escura foi lavada com éter de petróleo (2 x 100 mL) e as camadas de lavagem foram re-extraídas com NaOH 0,5 M (3x100 mL). As camadas aquosas combinadas foram trazidas para pH 7-8 com 2N HCl (400 mL), e extraídas com acetato de etila (2x1 L), secas sobre sulfato de sódio e concentradas para se obter o produto 1 (67,7 g, 90%) como um óleo incolor, o qual foi utilizado diretamente para a etapa seguinte sem purificação adicional. TLC: PE/EA = 50/1; Rf (Catecol) = 0,1; Rf (Composto 1) = 0,6.

[0536] Preparação do composto 2 (Esquema 17): A uma solução agitada do composto 1 (112,2 g, 676 mmol, 1,2 eq) e iodeto de potássio (112,2 g, 676 mmol, 1,0 eq) em metanol (2 L) a 0 °C foi adicionado lentamente hidróxido de sódio (27,0 g, 676 mmol, 1,0 eq), seguido com clorito de sódio aquoso (7% aq., 718,8 mL, 710 mmol, 1,05 eq) gota a gota durante 3 h mantendo a reação abaixo de 0 °C. A mistura foi agitada a 0 °C durante mais 30 min e neutralizada por adição de 2N HCI a 0 °C até um pH 7, extraída com DCM (2 x 1 L). As camadas orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas para fornecer o produto 2 (179,8 g, 91%). TLC: PE/EA = 50/1; Rf (Composto 1) = 0,6 ; Rf (Composto 2) = 0,6.

[0537] Preparação do composto 3 (Esquema 17): A uma solução agitada do composto 2 (179,8 g, 616 mmol, 1,0 eq) e trietilamina (186,6 g, 1,85 mol, 3,0 eq) em diclorometano (2 L) a 0 °C foi lentamente adicionado cloreto de acetil (53,2 g, 677 mmol, 1,1 eq). A mistura foi agitada a 0 °C durante mais 30 min, e aquecida até à temperatura ambiente, e agitada à temperatura ambiente durante 3 h, água (1 L) foi adicionada à mistura de reação e a camada orgânica foi lavada com solução salina, seca sobre sulfato de sódio e concentrada para se obter o produto 3 (206 g, 100%), que foi utilizada diretamente para a etapa seguinte sem purificação adicional. TLC: PE/EA = 50/1; Rf (Composto 2) = 0,6; Rf (Composto 3) = 0,5.

[0538] Preparação do composto 4 (Esquema 17): A uma solução agitada do composto 3 (206 g, 616 mmol, 1,0 eq) em trietilamina (4,0 L) foi adicionado 2-metilbut-3-in-2-amina (102,5 g, 1,23 mol, 2,0 eq), Pd (PPh3)2Cl2 (15,1 g, 18,5 mmol, 0,03 eq) e iodeto de cobre (I) (5,9 g, 31 mmol, 0,05 eq) e mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 17 h. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica para se obter o composto em epígrafe 4 (132,7 g, 74%). TLC: PE/EA = 1/1; Rf (Composto 3) = 0,9; Rf (Composto 4) = 0,3.

[0539] Preparação do composto 5 (Esquema 17): A uma solução agitada do composto 4 (104,5 g, 0,36 mol) em etanol (1,5 L) adicionou-se Pd/C (10% em peso, 10,5 g). A mistura foi agitada sob hidrogênio (balão) durante a noite, e filtrada. O filtrado foi evaporado até à secura para dar o composto 5 (106,3 g, 100%), que foi utilizado diretamente para a etapa seguinte sem purificação adicional. TLC: PE/EA = 1/1; Rf (Composto 4) = 0,3 ; Rf (Composto 5) = 0,3.

[0540] Preparação do composto 6 (Esquema 17): A uma solução de o-xileno (115,7 g, 1,09 mol, 1,0 eq) em clorofórmio (1,0 L) a 0 °C foi adicionado CLSO3H (254 g, 2,18 mol, 2,0 eq) gota a gota. Após a adição, a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 dias, e vertida em gelo. A mistura em bruto foi extraída com diclorometano (3 x 1,0 L). As camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre sulfato de sódio anidro, concentradas para se obter o composto em bruto 6 (161,5 g, 80%) como um sólido branco, que foi utilizado diretamente para a etapa seguinte sem purificação adicional. TLC: PE/EA = 5/1; Rf (Composto 6) = 0,7.

[0541] Processo geral para a preparação do composto 7 (Esquema 17): A uma solução agitada do composto 6 (161,5 g, 0,87 mol, 1,0 eq) em solução de sulfito de sódio saturado (273 g, 2,17 mol, 2,5 eq, em 2,0 L de água) foi adicionado gota a gota 32% de NaOH (69,4 g, 1,73 mol, 2,0 eq) até a solução atingir pH 9. Após agitação à temperatura ambiente durante a noite, a mistura de reação foi acidificada com conc. HCl em banho de arrefecimento com gelo até pH 1. O precipitado foi filtrado, e lavado com gelo-água (2x), seco in vacuo para se obter o produto em bruto 7 (131 g, 88%), que foi utilizado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional. TLC: PE/EA = 5/1; Rf (Composto 6) = 0,7; Rf (Composto 7) = 0,6.

[0542] Preparação do composto 8 (Esquema 17): A uma solução agitada do composto 7 (130 g, 0,76 mol, 1,0 eq) e carbonato de potássio (211 g, 1,53 mol, 2,0 eq) em DMF (300 mL) foi adicionado iodometano (96 mL, 1,53 mol, 2,0 eq). A reação foi agitada a 40 °C durante a noite. A mistura de reação foi evaporada até à secura, extraída com acetato de etila. As camadas orgânicas foram lavadas com água e solução salina, secas sobre sulfato de sódio e concentradas, purificadas por cromatografia flash em coluna (PE: EA,10: 1 ~ 5:1) para dar o composto 8 (85,2 g, 61%). TLC: PE/EA = 5/1; Rf (Composto 7) = 0,6; Rf (Composto 8) = 0,3.

[0543] Preparação do composto 9 (Esquema 17):A uma solução agitada do composto 8 (78,2 g, 424 mmol, 1,0 eq) em 1,2-dicloroetano (1,2 L), foram adicionados N-bromossuccinimida (166 g, 934 mmol, 2,2 eq) e AIBN (6,9 g, 42,4 mmol, 0,1 eq). A reação foi agitada a refluxo durante a noite. A reação foi diluída com água e diclorometano. A camada orgânica foi recolhida, e seca sobre sulfato de sódio e concentrada, purificada por cromatografia em coluna flash para dar o composto 9, o qual foi ainda recristalizado a partir de metanol quente para se obter o produto puro 8 (75 g, 52%). TLC: PE/EA = 5/1; Rf (Composto 8) = 0,3; Rf (Composto 9) = 0,2.

[0544] Preparação do composto 10 (Esquema 17):A uma solução agitada do composto 5 (46 g, 157 mmol, 1,0 eq) e o composto 9 (53,5 g, 157 mmol, 1,0 eq) em THF (460 mL) foi adicionado trietilamina (47,7 g, 472 mmol, 3,0 eq). A reação foi agitada a 40 °C durante a noite, filtrada e o filtrado foi evaporado até à secura e purificado por cromatografia em coluna flash para dar o composto 10 (45 g, 63%). TLC: PE/EA = 1/1; Rf (Composto 5) = 0,3; Rf (Composto 9) = 1,0; Rf (Composto 10) = 0,4.

[0545] Preparação do Composto 62 (Esquema 17):A uma solução agitada do composto 10 (45 g, 98,4 mmol) em metanol (300 mL) foi adicionado metóxido de sódio (844 mg, 15,6 mmol, 0,16 eq) em uma porção. A solução foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Água (250 mL) foi adicionada gota a gota à mistura de reação durante 1 h, a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h, e filtrada. O sólido branco foi recolhido e seco durante a noite no vácuo para fornecer o exemplo puro Composto 62 base (38 g, 89%). TLC: PE/EA = 1/1; Rf (Composto 10) = 0,4; Rf (Composto 62) = 0,4; ESI-MS: 432 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,80-7,78 (m, 2H). 7,40-7,38 (m, 1H), 6,87-6,79 (m, 3H), 5,58 (s, 1H), 4,11 (s, 4H), 3,05 (s, 3H), 2,61-2,57 (m, 2H), 1,76-1,72 (m, 2H), 1,48 (s, 9H), 1,18 (s, 6H).

Exemplo 22: Preparação de (2-(4-(4-Hidroxi-3-metoxifenil)-2-metilbutan- 2-il)isoindolin-4-il)(piperazin-1-il)metanona, Composto Exemplo 76.

[0546] Exemplo 22 ilustra a preparação representativa de (2-(4-(4- hidroxi-3-metoxifenil)-2-metilbutan-2-il)isoindolin-4-il)(piperazin-1-il)metanona,Exemplo Composto 76, como mostrado no Esquema 18.

[0547] Esquema 18: Processo para preparação de (2-(4-(4-Hidroxi-3-metoxifenil)-2-metilbutan-2-il)isoindolin-4-il)(piperazin-1-il)metanona, Composto Exemplo 76.

[0548] Preparação do Composto 2 (Esquema 18):A uma solução de ácido 2,3-dimetilbenzóico (60 g, 0,399 mol) em metanol a 0 oC foi adicionado cloreto de tionil (20 mL). A mistura de reação foi aquecida a 60 °C. Depois de se agitar durante a noite, a reação foi arrefecida e concentrada para dar éster de metil em bruto (65 g, 0,396 mol). A uma suspensão do éster de metil em bruto (65 g, 0,396 mol) em tetracloreto de carbono (500 mL) foram adicionados N-bromossuccinimida (142,2 g, 0,798 mmol), peróxido de benzoil (6 g, 24,8 mmol). A mistura foi aquecida a 70 oC. Depois de se agitar durante 15 h, a mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente, vertida em água (250 mL) e extraída com diclorometano (3 x 250 mL). As camadas orgânicas combinadas foram purificadas por cromatografia de flash em coluna com éter de petróleo para dar o produto 2 (120 g, 94%) como um sólido branco. TLC: PE/EA = 10/1; Rf (éster de metil do composto 1) = 0,8; Rf (Composto 2) = 0,7.

[0549] Preparação do composto 3 (Esquema 18): A uma mistura de 1,1-dimetilpropargilamina (11,4 g, 0,14 mol, 1,0 eq) em THF (500 mL) foi adicionado metil 2,3-bis(bromometil)benzoato (40,0 g, 0,125 mol, 1,1 eq) e trietilamina ( 50,5 g, 0,50 mol, 4,0 eq). A reação foi agitada a 60 °C durante 12 h. A mistura foi filtrada através de uma almofada de Celite, e a almofada foi lavada com acetato de etila. O filtrado foi concentrado in vacuo para dar um óleo cor de laranja. O resíduo foi purificado por cromatografia de flash em coluna (PE/EA: 10/1) para se obter composto 3 (19 g, 62%) como um sólido amarelo. TLC: PE/EA = 10/1; Rf (Composto 2) = 0,8; Rf (Composto 3) = 0,5.

[0550] Preparação do Composto 5 (Esquema 18): A uma solução de 2-metoxifenol (100 g, 0,81 mol, 1,0 eq) em metanol (1 L) foi adicionado hidróxido de sódio (48,3 g, 1,21 mol, 1,5 eq) e iodeto de potássio (140,4 g, 0,84 mol, 1,05 eq) . A reação foi agitada à temperatura ambiente. À mistura de reação foi adicionado hipoclorito de sódio (1199 g, 1,61 mol, 2,0 eq) gota a gota. Quando LCMS indicou que o material de partida tinha desaparecido. Concentrado de HCl foi adicionado até pH 1. Foi adicionado sulfito de sódio (56 g, 0,44 mol, 0,54 eq). A mistura foi extraída com acetato de etila (3 x 500 mL), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas in vacuo para dar o composto 5 (160 g, 79%) como um óleo amarelo. TLC: PE/EA =10/1; Rf (Composto 4) = 0,4; Rf (Composto 5) = 0,4.

[0551] Preparação do Composto 6 (Esquema 18):A uma solução do composto 5 (31,4 g, 125,8 mmol, 1,0 eq) em DMF (200 mL) foi adicionado hidreto de potássio (6,54 g, 163,6 mmol, 1,3 eq) a 0 °C sob atmosfera de nitrogênio. Após 0,5 h, éter clorometil de metil (13,2 g, 163,6 mmol, 1,3 eq) foi lentamente adicionado. A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2h. A reação extinta com água (400 mL) e extraída com acetato de etila (3 x 200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas in vacuo para originar o produto em bruto. O resíduo foi purificado por cromatografia de flash em coluna (PE/EA, 10/1) para se obter composto 6 (30 g, 74%) como um óleo amarelo. TLC: PE/EA =10/1; Rf (Composto 5) = 0,4; Rf (Composto 6) = 0,6.

[0552] Preparação do composto 7 (Esquema 18): A uma solução do composto 6 (10,2 g, 34,5 mmol, 1,2 eq) em acetonitril (120 mL) foi adicionado o composto 3 (7,00 g, 28,7 mmol, 1,0 eq) e X-Phos (624 mg, 1,30 mmol, 0,05 eq) seguido por carbonato de césio (9,38 g, 28,7 mmol, 1,0 eq) e diacetato de paládio (168 mg, 0,74 mmol, 0,03 eq). A solução foi agitada a 60 oC durante 12 h. A reação foi extinta com água gelada (100 mL) e extraída com acetato de etila (3 x 300mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas in vacuo para originar o produto em bruto. O resíduo foi purificado por cromatografia de flash em coluna (PE/EA, 10/1) para se obter composto 6 (9,4 g, 79%) como um sólido castanho. TLC: PE/EA = 01/10; Rf (Composto 6) = 0,6; Rf (Composto 7) = 0,3.

[0553] Preparação do Composto 8 (Esquema 18): A uma solução do composto 7 (3,81 g, 9,31 mmol, 1,0 eq) em metanol (220 mL) foi adicionado HCl concentrado (2 mL) e paládio sobre carvão ativado (1,8 g, 10%). A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h sob atmosfera de hidrogênio. A mistura foi filtrada através de uma almofada de Celite, e a almofada foi lavada com metanol. O filtrado foi concentrado in vacuo para se obter um óleo cor de laranja pálido. O resíduo foi diluído com éter, agitado à temperatura ambiente e foi formado um sólido. O sólido foi filtrado e lavado com etanol para dar 8 (4,8 g, 100%) como um sólido amarelo. TLC: PE/EA =3/1; Rf (Composto 7) = 0,6; Rf (Produto 8) = 0,3.

[0554] Preparação do Composto 9 (Esquema 18): A uma solução do composto 8 (4,80 g, 13,0 mmol, 1,0 eq) em metanol (100 mL) foi adicionado hidróxido de sódio (2,0 g, 50 mmol) e água (15 mL). A reação foi agitada a 40 °C durante 6 h. Depois de arrefecida até à temperatura ambiente, a reação foi ajustada a pH 7 com 6N HCl, extraída com (DCM/MeOH, 10/1; 3 x 100 mL). A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada in vacuo para se obter um produto em bruto, o qual foi triturado com acetato de etila, para se obter 9 (2,8 g, 60%) como um solid.TLC azul: PE/EA =2/1; Rf (Composto 8) = 0,6; Rf (Produto 9) = 0,05.

[0555] Preparação do Composto 76 (Esquema 18): A uma mistura de 9 (2,8 g, 7,87 mmol, 1,0 eq) em DMF (50 mL) foi adicionado 1-(terc- butoxicarbonil)piperazina (1,54 g, 8,26 mmol, 1,04 eq), EDCI (1,81 g, 9,44 mmol, 1,2 eq), HOBT (615 mg, 4,55 mmol, 0,57 eq) e trietilamina (1,74 g, 17,2 mmol, 2,18 eq) subsequentemente. A reação foi agitada a 25 oC durante 36 h. A mistura foi filtrada através de uma almofada de Celite, e a almofada foi lavada com acetato de etila. O filtrado foi concentrado in vacuo para dar um óleo cor de laranja. O resíduo foi purificado por meio de HPLC prep para fornecer composto 10 (2,0 g) como um sólido branco. O composto 10 (2,0 g) foi tratado com HCl em acetato de etila (3,5 M, 15 mL). Depois de se agitar a 25 oC durante 1 h, foi adicionado éter de petróleo (100 ml). O sólido branco resultante foi filtrado, lavado com éter e seco ao ar para dar o Composto Exemplo 76 (1,6 g, 41%, duas etapas) como um sólido branco. TLC: DCM/MeOH =10/1; Rf (Composto 9) = 0,3; Rf (Produto 10) = 0,35; LC-MS: 424,70 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,55-7,48 (m, 3H), 6,87 (s, 1H), 6,72-6,70 (m, 2H), 4,95-4,79 (m, 4H) 3,90-3,80 (m, 7H), 3,35-3,30 (m, 4H), 2,72-2,69 (m, 2H), 2,12-2,08 (m, 2H), 1,56 (s, 6H).

Exemplo 23: Os dados analíticos para espécies de composto de isoindolina.

[0556] Exemplo 23 fornece os dados analíticos para os compostos preparados de um modo análogo aos descritos acima.

[0557] COMPOSTO DE EXEMPLO 1: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.45 (br. s, 1H), 8.76 (br. s, 1H), 7.48-7.41 (m, 3H), 6.82 (s, 1H), 6.69 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.53 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.80-4.50 (m, 4H), 3.75 (s, 3H), 3.53-3.50 (m, 1H), 2.70-2.65 (m, 1H), 2.12-2.10 (m, 1H), 1.83-1.80 (m, 1H), 1.36 (d, J = 6.0 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ =332.05.

[0558] COMPOSTO DE EXEMPLO 2: 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.75-7.45 (m, 4H), 6.85-6.60 (m, 5H), 5.71 (br. s, 2H), 4.14-3.75 (m, 7H), 2.90-2.50 (m, 5H), 1.78-1.20 (m, 8H0, 1.26-1.23 (m, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 366.10.

[0559] COMPOSTO DE EXEMPLO 3: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.57 (br. s, 1H), 8.80 (br. s, 1H), 7.66 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 6.79 (s, 1H), 6.68 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 7.2 Hz, 1H) 3.74 (s, 3H), 3.53-3.50 (m, 1H), 2.70-2.60 (m, 1H), 2.12-2.10 (m, 1H), 1.83-1.80 (m, 1H), 1.36 (d, J = 6.0 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 366.20.

[0560] COMPOSTO DE EXEMPLO 4: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ7.75-7.72 (m, 2H), 7.61 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.51-7.45 (m, 2H), 7.24 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 5.05-4.90 (m, 2H), 4.75-4.65 (m, 2H), 3.69-3.64 (m, 1H), 2.89-2.82 (m, 1H), 2.73-2.67 (m, 1H), 2.27-2.22 (m, 1H), 1.98-193 (m, 1H), 1.52 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 388.10.

[0561] COMPOSTO DE EXEMPLO 5: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.61 (br, s. 2H), 7.49-7.45 (m, 2H), 7.22 (dd, J1 = 8.4 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 4.804.20 (m, 4H), 3.66-3.62 (m, 1H), 2.89-2.80 (m, 1H), 2.75-2.65 (m, 1H), 2.25-2.20 (m, 1H), 1.98-1.90 (m, 1H), 1.52 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 390.00.

[0562] COMPOSTO DE EXEMPLO 6: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 6.84 (s, 2H), 6.74-6.68 (m, 2H), 5.99 (s, 2H), 4.74-4.65 (m, 2H), 4.47-4.41 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.60-3.55 (m, 1H), 2.80-2.70 (m, 1H), 2.65-2.55 (m, 1H), 2.25-2.15 (m, 1H), 1.98-1.90 (m, 1H), 1.46 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 342.05.

[0563] COMPOSTO DE EXEMPLO 7: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.61 (s, 1H), 6.83 (s, 2H), 6.74 (s, 1H), 6.65 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.80 (s, 4H), 3.69 (s, 6H), 3.60-3.55 (m, 1H), 2.85-2.80 (m, 1H), 2.75-2.70 (m, 1H), 1.82-1.75 (m, 1H), 1.60-1.55 (m, 1H), 1.06 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 358.25.

[0564] COMPOSTO DE EXEMPLO 8: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.20 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.44-7.40 (m, 1H), 7.24-7.19 (m, 2H), 6.84 (s, 1H), 6.70 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.65 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.85-4.57 (m, 4H), 3.52-3.48 (m, 1H), 2.71-2.64 (m, 1H), 2.20-2.17 (m, 1H), 1.97-1.84 (m, 1H), 1.40-1.38 (m, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 316.10.

[0565] COMPOSTO DE EXEMPLO 9: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.60 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.48-7.43 (m, 2H), 7.24 (dd, J1 = 8.8 Hz, J2 - 2.0 Hz, 2H), 7.15 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 4.90-4.70 (m, 4H), 3.70-3.60 (m, 1H), 2.90-2.80 (m, 1H), 2.30-2.20 (m, 1H), 2.00-1.80 (m, 1H), 1.51 (d, J = 6.8 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 338.10.

[0566] COMPOSTO DE EXEMPLO 10: 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6): δ 11.90 (s, 1H), 7.58 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.28 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.65-4.50 (m, 2H), 4.48-4.35 (m, 2H), 3.55-3.45 (m, 1H), 2.82-2.78 (m, 1H), 2.65-2.55(m, 1H), 2.15-2.05 (m, 1H), 1.90-1.80 (m, 1H), 1.35 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 364.10.

[0567] COMPOSTO DE EXEMPLO 11: 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6): δ 11.96 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.29 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.66-4.55 (m, 2H), 4.48-4.35 (m, 2H), 3.74 (s, 6H), 3.55-3.45 (m, 1H), 2.82-2.78 (m, 1H), 2.65-2.55(m, 1H), 2.20-2.10 (m, 1H), 1.95-1.80 (m, 1H), 1.37 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 380.15.

[0568] COMPOSTO DE EXEMPLO 12: 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6): δ 7.58 d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.41-7.38 (m, 1H), 7.28 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 7.24-7.16 (m, 3H), 4.73-4.62 (m, 2H), 4.58-4.45 (m, 2H), 3.55-3.45 (m, 1H), 2.82-2.78 (m, 1H), 2.65-2.55(m, 1H), 2.20-2.10 (m, 1H), 1.95-1.80 (m, 1H), 1.37 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 338.10.

[0569] COMPOSTO DE EXEMPLO 13: 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6): δ 7.58 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.28 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 7.22 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 3.2 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 4.734.61 (m, 2H), 4.54-4.45 (m, 2H), 3.52-3.49 (m, 1H), 2.80-2.75 (m, 1H), 2.65-2.59 (m, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.16-2.14 (m, 1H), 1.90-1.85 (m, 1H), 1.35 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 334.15.

[0570] COMPOSTO DE EXEMPLO 14: 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6): δ 7.41-7.38 9m, 1H), 7.25-7.15 (m, 2H), 6.80 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 6.68 (d, 8.0 Hz, 1H), 6.62 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 4.77-4.63 (m, 2H), 4.59-4.44 (m, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.51-3.48 (m, 1H), 2.70-2.62 (m, 1H), 2.52-2.44 (m, 1H), 2.142.11 (m, 1H), 1.90-1.85 (m, 1H), 1.35 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 316.60.

[0571] COMPOSTO DE EXEMPLO 15: 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6): δ 11.60 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.29-7.24 (m, 2H), 6.936.90 (m, 2H), 4.75-4.58 (m, 2H), 4.58-4.44 (m, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.52-3.50 (m, 1H), 2.81-2.74 (m, 1H), 2.65-2.57 (m, 1H), 2.20-2.10 (m, 1H), 1.90-1.80 (m, 1H), 1.36 (d, J = 6.0 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 350.15.

[0572] COMPOSTO DE EXEMPLO 16: 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6): δ 12.32 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.56-7.54 (m, 1H), 7.44-7.28 (m, 4H), 4.86-4.40 (m, 4H), 3.60-3.50 (m, 1H), 2.83-2.75 (m, 1H), 2.65-2.59 (m, 1H), 2.30-2.15 (m, 1H), 1.95-1.82 (m, 1H), 1.17-1.13 (m, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 356.15.

[0573] COMPOSTO DE EXEMPLO 17: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.93 (dd, J1 = 11.6 Hz, J2 = 8.4 Hz, 2H), 7.82 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.63-7.54 (m, 2H), 7.48 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 6.92-6.86 (m, 1H), 6.78-6.70 (m, 2H), 5.22-4.76 (m, 4H), 3.85 (s, 3H), 3.75-3.65 (m, 1H), 2.83-2.77 (m, 1H), 2.68-2.60 (m, 1H), 2.402.30 (m, 1H), 2.10-1.95 (m, 1H), 1.58-1.50 (m, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 348.65.

[0574] COMPOSTO DE EXEMPLO 18: 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6): δ 12.06 (s, 1H), 7.95-7.87 (m, 4H), 7.62-7.50 (m, 4H), 7.31 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.98-4.85 (m, 2H), 4.73-4.63 (m, 2H), 3.59-3.55 (m, 1H), 2.86-2.78 (m, 1H), 2.682.60 (m, 1H), 2.25-2.20 (m, 1H), 2.00-1.90 (m, 1H), 1.43 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 370.20.

[0575] COMPOSTO DE EXEMPLO 19: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.94 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 7.83 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.64-7.43 (m, 5H), 7.40-7.30 (m, 1H), 5.34-4.80 (m, 4H), 3.80-3.70 (m, 1H), 2.90-2.80 (m, 1H), 2.80-2.70 (m, 1H), 2.40-2.30 (m, 1H), 2.10-2.00 (m, 1H), 1.60-1.55 (m, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 370.10.

[0576] COMPOSTO DE EXEMPLO 20: 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6): δ 11.62 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.56 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.94 (s, 2H), 4.68-5.55 (m, 2H), 4.49-4.40 (m, 2H), 3.73 (s, 6H), 3.55-3.48 (m, 1H), 2.82-2.78 (m, 1H), 2.65-2.57 (m, 1H), 2.20-2.08 (m, 1H), 1.90-1.80 (m, 1H), 1.36 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 380.10.

[0577] COMPOSTO DE EXEMPLO 21: 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6): δ 12.20 (s, 1H), 7.42 (dd, J1 = 12.8 Hz, J2 = 8.0 Hz, 1H), 7.33-7.30 (m, 2H), 7.23-7.18 (m, 2H), 7.15-7.05 (m, 2H), 4.88-4.72 (m, 2H), 4.70-4.55 (m, 2H), 3.603.50 (m, 1H), 2.80-2.70 (m, 1H), 2.65-2.52 (m, 1H), 2.22-2.10 (m, 1H), 1.90-1.82 (m, 1H), 1.42-1.35 (m, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 288.15.

[0578] COMPOSTO DE EXEMPLO 22: 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6): δ 12.05 (s, 1H), 7.40-7.09 (m, 7H), 4.76-4.65 (m, 2H), 4.60-4.45 (m, 2H), 3.553.48 (m, 1H), 2.80-2.70 (m, 1H), 2.62-2.52 (m, 1H), 2.20-2.08 (m, 1H), 1.90-1.82 (m, 1H), 1.37 (d, J = 6.0 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 288.15.

[0579] COMPOSTO DE EXEMPLO 23: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.29 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 - 6.4 Hz, 2H), 7.03 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 6.85 (s, 2H), 6.00 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 4.75-4.67 (m, 2H), 4.51-4.44 (m, 2H), 3.60-3.55 (m, 1H), 2.83- 2.79 (m, 1H), 2.72-2.67 (m, 1H), 2.22-2.18 (m, 1H), 1.93-1.89 (m, 1H), 1.47 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 314.20.

[0580] COMPOSTO DE EXEMPLO 24: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.12 (s, 1H), 7.08 (dd, J1 = 8.4 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 6.90 (d, 8.4 Hz, 1H), 6.84 (s, 2H), 6.00 (s, 2H), 4.75-4.50 (m, 4H), 3.58-3.53 (m, 1H), 2.81-2.73 (m, 1H), 2.652.58 (m, 1H), 2.22-2.18 (m, 1H), 1.93-1.82 (m, 1H), 1.45 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 396.15.

[0581] COMPOSTO DE EXEMPLO 25: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 6.91 (br. s, 3H), 6.81 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.06 (d, J = 2.8 Hz, 2H), 4.82-4.72 (m, 2H), 4.68-4.61 (m, 1H), 4.55-4.48 (m, 2H), 3.62-3.57 (, 1H), 2.86-2.78 (m, 1H), 2.68-2.60 (m, 1H), 2.26-2.22 (m, 1H), 1.97-1.91 (m, 1H), 1.52 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.38 (d, J = 6.0 Hz, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 370.20.

[0582] COMPOSTO DE EXEMPLO 26: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.45-7.41 (m, 1H), 7.21 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.17-7.11 (m, 1H), 6.84 (s, 1H), 6.74 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.69 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.82-4.50 (m, 5H), 3.61-3.56 (, 1H), 2.80-2.70 (m, 1H), 2.62-2.55 (m, 1H), 2.25-2.18 (m, 1H), 1.95-1.85 (m, 1H), 1.48 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.30 (d, J = 6.0 Hz, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 370.20.

[0583] COMPOSTO DE EXEMPLO 27: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.41 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 4.8 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.16-7.14 (m, 1H), 6.84 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.71 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 1.6 Hz, 1H), 4.82-4.62 (m, 4H), 4.58-4.55 (m, 1H), 2.67-2.63 (m, 2H), 2.05-2.00 (m, 2H), 1.52 (s, 6H), 1.30 (d, J = 6.0 Hz, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 358.15.

[0584] COMPOSTO DE EXEMPLO 28: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.49-7.43 (m, 1H), 7.24 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.16 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.74 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.71 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 1.6 Hz, 1H), 4.87-4.79 (m, 4H), 4.58-4.56 (m, 1H), 2.67-2.63 (m, 2H), 2.07-2.03 (m, 2H), 1.54 (s, 6H), 1.30 (d, J = 6.0 Hz, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 358.25.

[0585] COMPOSTO DE EXEMPLO 29: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 6.84 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.83 (s, 2H), 6.73 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.70 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.98 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 4.68-4.54 (m, 5H), 2.66-2.62 (m, 2H), 2.04-2.00 (m, 2H), 1.50 (s, 6H), 1.30 (d, J = 6.0 Hz, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 384.25.

[0586] COMPOSTO DE EXEMPLO 30: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.40 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 4.8 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.15-7.12 (m, 1H), 6.92-6.90 (m, 2H), 6.80 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 4.85-4.52 (m, 4H), 4.02-4.00 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.85-3.82 (m, 2H), 3.61-3.55 (m, 1H), 2.84-2.77 (m, 1H), 2.67-2.59 (m, 1H), 2.24-2.18 (m, 1H), 1.94-1.88 (m, 1H), 1.48 (d, J = 6.4 Hz,3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 360.20.

[0587] COMPOSTO DE EXEMPLO 31: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.38-7.34 (m, 1H), 7.14-7.08 (m, 3H), 7.04 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.86-4.73 (m, 2H), 4.60-4.48 (m, 2H), 3.60-3.53 (m, 1H), 2.76- 2.69 (m, 1H), 2.61-2.53 (m, 1H), 2.16-2.12 (m, 1H), 1.86-1.82 (m, 1H), 1.42 (d, J = 6.8 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 370.10.

[0588] COMPOSTO DE EXEMPLO 32: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.42-7.38 (m, 1H), 7.24-7.11 (m, 5H), 4.92-4.80 (m, 2H), 4.68-4.55 (m, 2H), 4.10- 4.07 (m, 2H), 3.88-3.86 (m, 2H), 6.64-3.60 (m, 1H), 2.85-2.75 (m, 1H), 2.72-2.60 (m, 1H), 2.24-2.18 (m, 1H), 1.98-1.88 (m, 1H), 1.49 (d, J = 6.0 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 414.20.

[0589] COMPOSTO DE EXEMPLO 33: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.46-7.41 (m, 1H), 7.32-7.29 (m, 2H), 7.23 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.13 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.01 (t, 8.8 Hz, 2H), 4.86-4.80 (m, 4H), 2.78-2.73 (m, 2H), 2.12-2.08 (m, 2H), 1.56 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 302.10.

[0590] COMPOSTO DE EXEMPLO 34: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.31-7.27 (m, 2H), 7.03 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 6.98 (s, 2H), 4.72 (d, J = 13.6 Hz, 2H), 4.61 (d, J = 13.6 Hz, 2H), 3.83 (6H), 2.81-2.72 (m, 2H), 2.07-1.98 (m, 2H), 1.56 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 344.20.

[0591] COMPOSTO DE EXEMPLO 35: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.43-7.40 (m, 2H), 7.32-7.27 (m, 2H), 7.20-7.14 (m, 2H), 7.03 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 4.85-4.70 (m, 4H), 2.77-2.72 (m, 2H), 2.08-2.03 (m, 2H), 1.54 (s, 6H); m/z (ESI+)(M+H)+ = 302.20.

[0592] COMPOSTO DE EXEMPLO 36: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.29 (dd, J1 = 8.4 Hz, J2 = 5.6 Hz, 2H), 7.01 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 6.83 (s, 2H), 4.67 (d, J = 14.0 Hz, 2H), 4.58 (d, J = 14.0 Hz, 2H), 2.78-2.71 (m, 2H), 2.07-2.03 (m, 2H),1.53 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 328.10.

[0593] COMPOSTO DE EXEMPLO 37: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.38 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 4.4 Hz, 1H), 7.16-7.10 (m, 2H), 6.86 (s, 1H), 6.75 (d, J = 8.0 HZ, 1H), 6.70 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.93-4.76 (m, 2H), 4.62-4.50 (m, 3H), 3.603.52 (m, 1H), 2.78-2.70 (m, 1H), 2.62-2.55(m, 1H), 2.25-2.15 (m, 1H), 1.95-1.85 (m, 1H), 1.47 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.30 (d, J =6.4 Hz, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 344.15.

[0594] COMPOSTO DE EXEMPLO 38: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.39 (dd, J1 = 8.4 Hz, J2 = 4.8 Hz, 1H), 7.17-7.10 (m, 2H), 6.89(s, 1H), 6.88 (d, J = 8.4 HZ, 1H), 6.81 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.92-4.83 (m, 2H), 4.58-4.42 (m, 4H), 3.603.55 (m, 1H), 2.80-2.70 (m, 1H), 2.65-2.55(m, 1H), 2.25-2.15 (m, 1H), 1.95-1.85 (m, 1H), 1.47 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.30-1.25 (m, 12H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 386.25.

[0595] COMPOSTO DE EXEMPLO 39: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.46-7.40 (m, 1H), 7.22 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.12 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 6.90(s, 1H), 6.89 (d, J = 8.4 HZ, 1H), 6.82 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 4.95-4.85 (m, 2H), 4.70-4.62 (m, 2H), 4.60-4.52 (m, 1H), 4.50-4.42 (m, 1H), 3.60-3.52 (m, 1H), 2.822.72 (m, 1H), 2.65-2.55(m, 1H), 2.28-2.18 (m, 1H), 1.95-1.88 (m, 1H), 1.49 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.30-1.25 (m, 12H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 386.70.

[0596] COMPOSTO DE EXEMPLO 40: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.26 (s, 1H), 6.84 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.72-6.65 (m, 4H), 6.00 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.96-4.87 (m, 2H), 4.50-4.41 (m, 2H), 4.18-4.10 (m, 2H), 3.42-3.36(m, 1H), 2.77- 2.74(m, 1H), 2.58-2.50 (m, 1H), 2.18-2.10 (m, 1H), 1.92-1.86 (m, 1H), 1.42 (d, J = 5.6 Hz, 3H), 1.30-1.25 (m, 12H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 412.30.

[0597] COMPOSTO DE EXEMPLO 41: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.47-7.42 (m, 1H), 7.35-7.30 (m, 2H), 7.25-7.22 (m, 2H), 7.13 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 5.01-4.91 (m, 2H), 4.72-4.65 (m, 2H), 3.72-3.65 (m, 1H), 3.12 (s, 3H), 2.98 (s, 3H), 2.92-2.85 (m, 1H), 2.80-2.70 (m, 1H), 2.30-2.20 (m, 1H), 2.02-1.95 (m, 1H), 1.52 (d, J = 4.0 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 441.20.

[0598] COMPOSTO DE EXEMPLO 42: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.43-7.40 (m, 1H), 7.19-7.16 (m, 2H), 6.89-6.87 (m, 2H), 6.82 (dd, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 4.84-4.67 (m, 4H), 4.55-4.45 (m, 2H), 2.71-2.66 (m, 2H), 2.08-2.03 (m, 2H), 1.53 (s, 6H), 1.30-1.26 (m, 12H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 400.25.

[0599] COMPOSTO DE EXEMPLO 43: H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.46-7.38 (m, 1H), 7.36-7.32 (m, 2H), 7.26-7.22 (m, 1H), 7.20-7.12(m, 2H), 4.904.80 (m, 2H), 4.70-4.55 (m, 2H), 3.70-3.60 (m, 1H), 3.12 (s, 3H), 2.99 (s, 3H), 2.952.85 (m, 1H), 2.80-2.70 (m, 1H), 2.30-2.20 (m, 1H), 2.00-1.90 (m, 1H), 1.50 (d, J =6.0 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 441.15.

[0600] COMPOSTO DE EXEMPLO 44: 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6): δ 12.15 (s, 1H), 7.44-7.42 (m, 1H), 7.24-7.21 (m, 2H), 6.88-6.86 (m, 2H), 6.776.75 (m, 1H), 4.88-4.79 (m, 2H), 4.71-4.66 (m, 2H), 3.93-3.90 (m, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.69-3.66 (m, 2H), 2.63-2.58 (m, 2H), 2.05-2.00 (m, 2H), 1.45 (s, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 347.15.

[0601] COMPOSTO DE EXEMPLO 45: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.43-7.39 (m, 1H), 7.18-7.12 (m, 2H), 6.92-6.88 (m, 2H), 6.82-6.80 (m, 1H), 4.854.70 (m, 4H), 4.02-3.99 (m, 2H), 3.85-3.82 (m, 5H), 2.73-2.69 (m, 2H), 2.10-2.05 (m, 2H), 1.54 (s, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 374.15.

[0602] COMPOSTO DE EXEMPLO 46: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.48 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.44-7.38 (m, 1H), 7.23 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 2.0 hz, 1H), 7.20-7.12 (m, 2H), 4.85-4.55 (m, 4H), 3.86-3.75 (m, 2H),3.72-3.65 (m, 1H), 3.46 (s, 3H), 2.85-2.70 (m, 2H), 2.18-2.12 (m, 2H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 368.05.

[0603] COMPOSTO DE EXEMPLO 47: 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6): δ 6.90-6.86 (m, 4H), 6.74 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.04 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.63 (dd,J1 = 14.0 Hz, J2 = 6.4 Hz, 2H), 4.46 (dd, J1 = 14.0 Hz, J2 = 6.4 Hz, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.69-3.67 (m, 2H), 2.62-2.57 (m, 2H), 1.99-1.96 (m, 2H), 1.42 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 400.15.

[0604] COMPOSTO DE EXEMPLO 48: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 6.99 (br. s, 2H), 6.92-6.89 (m, 2H), 6.81 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.72 (d, J = 11.6 Hz, 2H), 4.62 (d, J = 11.6 Hz, 2H), 4.02-4.00 (m, 2H), 3.86-3.82 (m, 11 H), 2.73-2.68 (m, 2H), 2.09-2.05 (m, 2H), 1.53 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 416.20.

[0605] COMPOSTO DE EXEMPLO 49: 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6): δ 12.22 (br. s, 1H), 7.46-7.41 (m, 1H), 7.24-7.20 (m, 2H), 7.01 (s, 1H), 6.96 (d, J = 8.0 HZ, 1H), 6.82 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.92-4.80 (m, 2H), 4.72-4.69 (m, 2H), 3.02 (s, 3H), 2.88 (s, 3H), 2.70-2.66 (m, 2H), 2.09-2.05 (m, 2H), 1.47 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 401.20.

[0606] COMPOSTO DE EXEMPLO 50: 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6): δ 12.07 (br. s, 1H), 7.42-7.39 (m, 1H), 7.24-7.18 (m, 2H), 7.01-6.95 (m, 2H), 6.82 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.82-4.60 (m, 4H), 3.02 (s, 3H), 2.88 (s, 3H), 2.70-2.65 (m, 2H), 2.07-2.04 (m, 2H), 1.44 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 401.15.

[0607] COMPOSTO DE EXEMPLO 51: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.48-7.42 (m, 1H), 7.23 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.14 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 6.90 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.01-4.89 (m, 2H), 4.69-4.63 (m, 2H), 4.03-4.00 (m, 2H), 3.86-3.83 (m, 5H), 3.64-3.60 (m, 1H), 2.86-2.78 (m, 1H), 2.67-2.60 (m, 1H), 2.30-2.20 (m, 1H), 1.98-1.90 (m, 1H), 1.50 (d, J = 6.0 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 360.15.

[0608] COMPOSTO DE EXEMPLO 52: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 6.91 (s, 1H), 6.90 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.83 (s, 2H), 6.79 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.98 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 4.75-4.66 (m, 2H), 4.49-4.42 (m, 2H), 4.02-3.99 (m, 2H), 3.863.79 (m, 5H), 3.50-3.44 (m, 1H), 2.82-2.75 (m, 1H), 2.66-2.58 (m, 1H), 2.25-2.18 (m, 1H), 1.95-1.86(m, 1H), 1.46 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 386.20.

[0609] COMPOSTO DE EXEMPLO 53: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.40-7.36 (m, 1H), 7.18 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.08 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 6.86 (s, 1H), 6.73 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.68 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.58 (br. s, 4H), 4.81-4.75 (m, 3H), 3.82 (s, 3H), 2.67-2.63 (m, 2H), 2.10-2.06 (m, 2H), 1.52 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 330.10.

[0610] COMPOSTO DE EXEMPLO 54: 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6): δ 10.04 (s, 1H), 7.46-7.40 (m, 1H), 7.23-7.18 (m, 3H), 7.10 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.85-4.78 (m, 2H), 4.69-4.66 (m, 2H), 2.63-2.59 (m, 2H), 2.03-1.98 (m, 2H), 1.46 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 384.15.

[0611] COMPOSTO DE EXEMPLO 55: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.20 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 7.15 (s, 1H), 7.11 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.90-4.86 (m, 4H), 2.73-2.68 (m, 2H), 2.10-2.06 (m, 2H), 1.54 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 402.15.

[0612] COMPOSTO DE EXEMPLO 56: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.04 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.54 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.14 (s, 1H), 7.10 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.10-4.70 (m, 4H), 2.73-2.69 (m, 2H), 2.10-2.06 (m, 2H), 1.56 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 410.15.

[0613] COMPOSTO DE EXEMPLO 57: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.48-7.38 (m, 3H), 7.12 (s, 1H), 7.10 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.81-4.71 (m, 4H), 3.09 9s, 3H), 209 (s, 3H), 2.71-2.66 (m, 2H), 2.07-2.03 (m, 2H), 1.62 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 437.25.

[0614] COMPOSTO DE EXEMPLO 58: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.07-8.05 (m, 1H), 7.66-7.54 (m, 2H), 6.90-6.78 (m, 3H), 5.20-4.80 (m, 4H), 2.672.60 (m, 2H), 2.07-2.00 (m, 2H), 1.55 (s, 6H), 1.35 (s, 9H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 398.25.

[0615] COMPOSTO DE EXEMPLO 59: 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6): δ 11.32 (s, 1H), 7.44-7.37 (m, 3H), 6.83-6.74 (m, 3H), 4.81-4.56 (m, 4H), 3.00 (s, 3H), 2.91 (s, 3H), 2.60-2.50 (m, 2H), 2.00-1.90 (m, 2H), 1.43 (s, 6H), 1.28 (s, 9H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 425.35.

[0616] COMPOSTO DE EXEMPLO 60A: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.19 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 6.90 (s, 1H), 6.85 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.86-4.80 (m, 4H), 3.65-3.60 (m, 1H), 2.80-2.70 (m, 1H), 2.62-2.52 (m, 1H), 2.25-2.15 (m, 2H), 1.95-1.85 (m, 1H), 1.48 (d, J =6.0 Hz, 3H), 1.36 (s, 9H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 376.25.

[0617] COMPOSTO DE EXEMPLO 60B: 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.18-7.15 (m, 1H), 6.98 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.88-6.80 (m, 4H), 4.04-4.00 (m, 4H), 2.80-2.72 (m, 1H), 2.70-2.62 (m, 1H), 2.60-2.50 (m, 1H), 1.95-1.88 (m, 1H), 1.761.70 (m, 1H), 1.42 (s, 9H), 1.20 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 358.25.

[0618] COMPOSTO DE EXEMPLO 61: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.95 (br. s, 1H), 10.00 (br. s, 1H), 7.93 (s, 2H), 7.65-7.64 (m, 1), 7.22-7.09 (m, 2H), 6.92-6.90 (m, 1H), 4.85-4.75 (m, 4H), 3.23 (s, 3H), 2.65-2.60 (m, 2H), 2.021.95 (m, 2H), 1.45 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 444.20.

[0619] COMPOSTO DE EXEMPLO 62: 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.80-7.78 (m, 2H), 7.40-7.38 (m, 1H), 6.87-6.78 (m, 3H), 4.18-4.10 (m, 4H), 3.02 (s, 3H), 2.62-2.56 (m, 2H), 1.80-1.60 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.20 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 432.25.

[0620] COMPOSTO DE EXEMPLO 63: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.98-7.95 (m, 1H), 7.63 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.90 (s, 1H), 6.85 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.79 (d, J =8.0 Hz, 1H), 4.90-4.80 (m, 4H), 3.66-3.60 (m, 1H), 3.12 (s, 3H), 2.802.72 (m, 1H), 2.65-2.55 (m, 1H), 2.25-2.15 (m, 1H), 1.95-1.85 (m, 1H), 1.47 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.36 (s, 9H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 418.20.

[0621] COMPOSTO DE EXEMPLO 64: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.97 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.78-7.68 (m, 2H), 6.88 (s, 1H), 6.72 (s, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.85 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.20 (s, 3H), 2.73-2.70 (m, 2H), 2.13-2.10 (m, 2H), 1.58 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 390.15.

[0622] COMPOSTO DE EXEMPLO 65: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.75 (s, 1H), 7.85 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.70 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.05-4.60 (m, 4H), 3.76 (s, 3H), 3.60-3.50 (m, 1H), 3.40-3.30 (m, 2H), 2.72-2.65 (m, 1H), 2.202.10 (m, 1H), 1.90-1.80 (m, 1H), 1.45-1.40 (m, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 376.10.

[0623] COMPOSTO DE EXEMPLO 66: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.55 (br. s, 1H), 7.86 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.74-7.67 (m, 2H), 6.83-6.77 (m, 3H), 4.93 (s, 2H), 4.81-4.73 (m, 2H), 3.28 (s, 3H), 2.60-2.55 (m, 2H), 2.02-1.98 (m, 2H), 1.48-1.46 (m, 6H), 1.28 (s, 9H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 432.30.

[0624] COMPOSTO DE EXEMPLO 67: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.93 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.76-7.66 (m, 2H), 7.15 (s, 1H), 7.11 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.05 (s, 2H), 4.82 (s, 2H), 3.20 (s, 3H), 2.75-2.70 (m, 2H), 2.30-2.00 (m, 2H), 1.57-1.56 (m, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 444.15.

[0625] COMPOSTO DE EXEMPLO 68: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.98 (s, 2H), 7.66-7.63 (m, 1H), 6.84 (s, 1H), 6.75-6.69 (m, 2H), 4.83 (s, 4H), 3.85 (s, 3H), 3.63-3.59 (m, 1H), 3.13 (s, 3H), 2.82-2.76 (m, 1H), 2.66-2.58 (m, 1H), 2.24-2.21 (m, 1H), 1.96-1.91 (m, 1H), 1.49 (d, J =6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 376.15.

[0626] COMPOSTO DE EXEMPLO 69: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.99 (s, 2H), 7.64 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.75 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.71 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.84 (s, 4H), 4.60-4.55 (m, 1H), 3.60-3.56 (m, 1H), 3.13 (s, 3H), 2.78-2.73 (m, 1H), 2.62-2.58 (m, 1H), 2.22-2.18 (m, 1H), 1.93-1.89 (m, 1H), 1.48 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.31 (d, J = 6.0 Hz, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 404.20.

[0627] COMPOSTO DE EXEMPLO 70: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.01 (s, 2H), 7.67 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.78-6.70 (m, 2H), 4.84 (s, 4H), 4.60-4.56 (m, 1H), 3.13 (s, 3H), 2.70-2.66 (m, 2H), 2.08-2.04 (m, 2H), 1.55 (s, 6H), 1.31 (d, J = 6.0 Hz, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 418.25.

[0628] COMPOSTO DE EXEMPLO 71: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.99-7.91 (m, 4H), 7.62-7.54 (m, 4H), 6.83 (s, 1H), 6.72-6.68 (m, 2H), 4.82 (s, 4H), 3.81 (s, 3H), 2.70-2.65 (m, 2H), 2.08-2.02 (m, 2H), 1.51 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 452.00.

[0629] COMPOSTO DE EXEMPLO 72: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.00 (s, 1H), 7.86 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.74-6.70 (m, 2H), 4.85 (s, 4H), 3.85 (s, 3H), 3.13 (s, 3H), 2.72-2.68 (m, 2H), 2.10-2.06 (m, 2H), 1.56 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 390.15.

COMPOSTO DE EXEMPLO 73.

[0630] COMPOSTO DE EXEMPLO 74: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.03-6.99 (m, 2H), 6.88-6.83 (m, 2H), 6.78-6.75(m, 1H), 4.80-4.65 (m, 4H), 2.65-2.60 (m, 2H), 2.03-1.99 (m, 2H), 1.52 (s, 6H), 1.40 (s, 9H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 390.20.

[0631] COMPOSTO DE EXEMPLO 75: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.07-8.05 (m, 1H), 7.66-7.54 (m, 2H), 6.90-6.78 (m, 3H), 5.20-4.80 (m, 4H), 2.672.60 (m, 2H), 2.07-2.00 (m, 2H), 1.55 (s, 6H), 1.35 (s, 9H); m/z (ESI+) (M+H)+ =398.25.

[0632] COMPOSTO DE EXEMPLO 76: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.55-7.48 (m, 3H), 6.87 (s, 1H), 6.72-6.70 (m, 2H), 4.95-4.79 (m, 4H) 3.90-3.80 (m, 7H), 3.35-3.30 (m, 4H), 2.72-2.69 (m, 2H), 2.12-2.08 (m, 2H), 1.56 (s, 6H). LC-MS: 424.70 (M+1)+.

[0633] Compostos adicionais foram preparados de um modo análogo aos fornecidos acima e estrutura para cada foi confirmada por 1H-NMR e MS, como mostrado na Tabela 4.

[0634] Tabela 4. Compostos Adicionais de Isoindolina.

[0635] Todas as características descritas no relatório descritivo, incluindo o resumo e os desenhos, e em todas as etapas de qualquer método ou processo divulgado, podem ser combinadas em qualquer combinação, exceto combinações onde pelo menos algumas de tais características e/ou etapas sejam mutuamente exclusivas. Cada característica divulgada no relatório descritivo, incluindo resumo e desenhos, pode ser substituída por características alternativas que sirvam o mesmo, ou equivalente semelhante finalidade, a menos que expressamente indicado de outra forma. Assim, a menos que expressamente indicado em contrário, cada característica divulgada é apenas um exemplo de uma série genérica de características equivalentes ou semelhantes. Várias modificações da divulgação, além daquelas descritas aqui, estarão evidentes para aqueles versados na técnica a partir da descrição anterior. Tais modificações destinam-se também a estar no escopo das reivindicações em anexo.

[0636] Todas as publicações aqui mencionadas são aqui incorporadas por referência na sua totalidade. Nada aqui deve ser interpretado como uma admissão de que a divulgação não é intitulada para antecipar tal divulgação em virtude de uma divulgação anterior.

Claims

1. Composto, caracterizado pelo fato de ser da fórmula:

ou um sa| farmaceuticamente aceitável desta.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o sal farmaceuticamente aceitável é selecionado do grupo consistindo em cloridrato, hidrobrometo, hidroiodeto, nitrato, sulfato, bissulfato, fosfato, fosfato ácido, isonicotinato, acetato, lactato, salicilato, citrato, tartrato, pantotenato, bitartrato, ascorbato, sucinato, maleato, gentisinato, fumarato, gluconato, glucaronato, sacarato, formato, benzoato, glutamato, metanossulfato, etanossulfonato, benzenossulfonato, p-toluenossulfonato e sais de pamoato.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o sal farmaceuticamente aceitável é o sal de fumarato.

4. Composição, caracterizada pelo fato de compreender um composto, conforme definido na reivindicação 1, e um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

5. Uso de um composto, conforme definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para inibir um efeito beta-amiloide em uma célula neuronal em um indivíduo que precise do mesmo.

6. Uso de um composto, conforme definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para tratar a doença de Alzheimer a um indivíduo que tenha tal doença.