KR102331422B1 - 아이소인돌린 조성물 및 신경퇴행성 질환을 치료하는 방법 - Google Patents

아이소인돌린 조성물 및 신경퇴행성 질환을 치료하는 방법 Download PDF

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Abstract

아이소인돌린 시그마-2 수용체 길항제 화합물, 이러한 화합물을 포함하는 약제학적 조성물, 및 뉴런 세포에서 A베타 관련 시냅스 손실 또는 시냅스 기능이상을 저해하고, 뉴런 세포에서 A베타 관련 막 수송 변화를 조절하고, A베타 병리학과 연관된 인지 감소를 치료하기 위한 방법이 제공된다.

Description

아이소인돌린 조성물 및 신경퇴행성 질환을 치료하는 방법{ISOINDOLINE COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING NEURODEGENERATIVE DISEASE}
본원은 2015년 1월 30일자에 PCT 국제 출원으로서 출원되고, 2014년 1월 31일에 출원된 미국 가출원 제61/934,528호(전문이 본 명세서에 참고로 인용됨)의 우선권을 주장한다.
기술분야
시그마-2 수용체에 결합하는 신규한 아이소인돌린 화합물, 이러한 화합물을 포함하는 약제학적 조성물, 및 뉴런 세포에서 시냅스 손실을 저해하거나 복원하고, 뉴런 세포에서의 막 수송 변화를 조절하고, 인지 감소 및 신경퇴행성 질환 및 장애를 치료하는 방법이 제공된다.
알츠하이머병(Alzheimer's Disease: AD)의 치료를 위해 현재 FDA 승인된 약제는 불과 5개이다. 4개는 콜린에스터라제 저해제: 타크린(COGNEX(등록상표); 사이엘(Sciele)), 도네페질(ARICEPT(등록상표); 화이자(Pfizer)), 리바스티그민(EXELON(등록상표); 노바티스(Novartis)) 및 갈란타민(RAZADYNE(등록상표); 오르토-맥네일-얀센(Ortho-McNeil-Janssen))이다. 도네페질, 리바스티그민 및 갈란타민은 간독성의 가능성으로 인해 좀처럼 처방되지 않는 제1 세대 화합물인 타크린의 계승물질이고; 이것은 AD의 모든 단계에서의 인지 및 기능의 대증적 개선을 제공하는 데 있어서 거의 동등하게 효과적이다. 5번째로 승인받은 약제는 메만틴(NAMENDA(등록상표); 포레스트(Forest))이고, 저친화도이고, 보통 내지는 중증의 AD에서긴 하지만 유사한 이점을 제공하는 의존적 N-메틸-D-아스파르테이트 글루타메이트 수용체 길항제를 사용한다. 이 화합물의 임상 효과는 적고 영구적이 아니고, 현재 이용 가능한 데이터는 질환 개선 물질로서의 이의 사용을 지지하기에 결정적이 아니다. 예를 들어, 문헌[Kerchner et al, 2010, Bapineuzumab, Expert Opin Biol Ther., 10(7):1121-1130]을 참조한다. 명확히, AD의 치료에 대한 대안적인 접근법이 필요하다.
시그마-2 수용체 기능성 길항제로서 작용하고 가용성 Aβ 올리고머의 해로운 효과를 저해하는 소정의 아이소인돌린 화합물이 제공된다. 몇몇 실시형태에서, 아이소인돌린 시그마-2 수용체 길항제 화합물 및 조성물은 대상체에서의 시냅스 기능이상을 치료하거나 예방하기 위해 사용된다.
시그마-2 수용체에 결합하는 신규한 아이소인돌린 화합물, 이러한 화합물을 포함하는 약제학적 조성물, 및 뉴런 세포에서 시냅스 손실을 저해하거나 복원하고, 뉴런 세포에서의 막 수송 변화를 조절하고, 인지 감소 및 신경퇴행성 질환 및 장애를 치료하는 방법이 제공된다.
몇몇 실시형태에서, 화학식 I 및/또는 화학식 II에 따른 아이소인돌린 화합물 및 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 시그마-2 수용체 길항제 활성을 나타내고, 또한 특정한 치료학적 표현형의 다른 양상을 나타내고, 따라서 하기 기재된 바대로 뉴런 세포에 대한 가용성 아밀로이드-베타("A베타", "Aβ") 펩타이드 및 올리고머 및 이의 다른 가용성 종의 해로운 효과를 저해하고, 결과적으로, A베타 올리고머 유도 병리학과 연관된 질환 및 장애, 예컨대 알츠하이머병을 포함하는 병태를 치료하기 위해 사용될 수 있다.
가용성 A베타 올리고머는 특이적 수용체에 결합하고 정상 시냅스 가소성에 중요한 신호전달 경로를 방해하여서, 궁극적으로 척수 및 시냅스 손실을 야기하는 가역적 약역학적 리간드와 같이 작용한다. 시그마-2 수용체에 결합하고 기능적 뉴런 길항제로서 작용하는, 본 명세서에 제공된 바와 같은, 화학식 I에 따른 아이소인돌린 화합물이 A베타 올리고머와의 약역학적 경쟁을 나타내는 것이 발견되었다. 본 명세서에 기재된 아이소인돌린 시그마-2 길항제 화합물은 따라서 A베타 올리고머 효과, 예컨대 A베타 유도 세포 독성을 감소시키거나 예방할 수 있다. 선행 기술의 소정의 화합물이 배제된다. 세포를 화학식 I 및/또는 화학식 II에 따른 시그마-2 길항제, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염과 접촉시키는 단계를 포함하는, 뉴런 세포 및 더 일반적으로 아밀로이드 베타 병리학에 대한 A베타 올리고머 또는 다른 가용성 A베타 종의 효과를 저해하는 방법이 또한 제공된다. 몇몇 실시형태에서, 치료학적 유효량의 화학식 I 및/또는 화학식 II에 따른 시그마-2 기능성 길항제, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 알츠하이머병의 초기 단계를 치료하는 방법이 제공되다.
일 실시형태에서, 단리된 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 하기 화학식 I에 따라 제공된다:
Figure 112016084530517-pct00001
식 중,
R1 및 R2는 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 또는 CH2OR'로부터 선택되고; R'는 H 또는 C1-C6 알킬이며;
R3, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬, OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, O(C1-C6 알킬), OCF3, OCH2CH2OH, O(C1-C6 알킬)OH, O(C1-C6 할로알킬), F, Cl, Br, I, CF3, CN, NO2, NH2, C1-C6 할로알킬, C1-C6 하이드록시알킬, C1 -6 알콕시 C1 -6 알킬, 아릴, 헤테로아릴, C3 -7 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 알킬아릴, 헤테로아릴, CO2R', C(O)R', NH(C1 -4 알킬), N(C1 -4 알킬)2, NH(C3 -7 사이클로알킬), NHC(O)(C1-4 알킬), CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)O(C1-4 알킬), OC(O)N(R')2, C(O)(C1 -4 알킬) 및 C(O)NH(C1-4 알킬)로부터 선택되고; n은 0, 1 또는 2이며; R'는 각각 독립적으로 H, CH3, CH2CH3, C3-C6 알킬, C1-C6 할로알킬; 또는 임의로 치환된 아릴, 알킬아릴, 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일, 몰폴리닐, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아릴, C1 -6 알콕시, NH(C1 -4 알킬) 또는 NH(C1-4 알킬)2이고, 임의로 치환된 기는 C1-C6 알킬 또는 C2-C7 아실로부터 선택되거나;
R3과 R4는, 이들이 부착된 C 원자와 함께, OH, 아미노, 할로, C1 -6 알킬, C1 -6 할로알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 할로알콕시, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환기에 의해 임의로 치환된 4원, 5원, 6원, 7원 또는 8원 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬을 형성하며, R3 및 R4, 또는 R4 및 R5는 각각 독립적으로 결합, C, N, S 및 O로부터 선택되거나; R3과 R4는 함께 연결되어 -O-C1 -2 메틸렌-O-기를 형성하거나;
R4와 R5는, 이들이 부착된 C 원자와 함께, OH, 아미노, 할로, C1 -6 알킬, C1 -6 할로알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 할로알콕시, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환기에 의해 임의로 치환된 4원, 5원, 6원, 7원 또는 8원 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬을 형성하고, R3 및 R4, 또는 R4 및 R5는 각각 독립적으로 결합, C, N, S 및 O로부터 선택되거나; R4와 R5는 함께 연결되어 -O-C1-2 메틸렌-O-기를 형성하며;
R7, R8, R9, R10 및 R11은 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬, OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, O(C1-C6 알킬), OCF3, OCH2CH2OH, O(C1-C6 알킬)OH, O(C1-C6 할로알킬), O(CO)R', F, Cl, Br, I, CF3, CN, NO2, NH2, C1-C6 할로알킬, C1-C6 하이드록시알킬, C1 -6 알콕시 C1-6 알킬, 아릴, 헤테로아릴, C3 -7 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 알킬아릴, 헤테로아릴, CO2R', C(O)R', NH(C1 -4 알킬), N(C1 -4 알킬)2, NH(C3 -7 사이클로알킬), NHC(O)(C1-4 알킬), CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)O(C1-4 알킬), OC(O)N(R')2, C(O)(C1-4 알킬) 및 C(O)NH(C1-4 알킬)로부터 선택되고; n은 0, 1 또는 2이며; R'는 각각 독립적으로 H, CH3, CH2CH3, C3-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, 아릴, 알킬아릴, 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일, 몰폴리닐, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아릴, C1 -6 알콕시, NH(C1 -4 알킬) 또는 NH(C1 -4 알킬)2이거나;
R7과 R8은, 이들이 부착된 N 또는 C 원자와 함께, OH, 아미노, 할로, C1 -6 알킬, C1 -6 할로알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 할로알콕시, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환기에 의해 임의로 치환된 4원, 5원, 6원, 7원 또는 8원 사이클로알킬, 아릴, 헤테로사이클로알킬 또는 헤테로아릴기를 형성하고, R9 및 R10은 각각 독립적으로 결합, C, N, S 및 O로부터 선택되거나; R7과 R8은 함께 연결되어 -O-C1 -2 메틸렌-O-기를 형성하거나;
R8과 R9는, 이들이 부착된 N 또는 C 원자와 함께, OH, 아미노, 할로, C1 -6 알킬, C1-6 할로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환기에 의해 임의로 치환된 4원, 5원, 6원, 7원 또는 8원 사이클로알킬, 아릴, 헤테로사이클로알킬 또는 헤테로아릴기를 형성하며, R9 및 R10은 각각 독립적으로 결합, C, N, S 및 O로부터 선택되거나; R8과 R9는 함께 연결되어 -O-C1-2 메틸렌-O-기를 형성하고,
O, C1 -6 알킬, C1 -6 할로알킬, 헤테로아릴, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬 및 사이클로알킬의 각각은 OH, 아미노, 할로, C1 -6 알킬, C1 -6 할로알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 할로알콕시, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환기에 의해 임의로 독립적으로 치환되며;
단, 하기 화합물은 배제된다:
Figure 112016084530517-pct00002
Figure 112016084530517-pct00003
Figure 112016084530517-pct00004
Figure 112016084530517-pct00005
.
또 다른 실시형태에서, 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 화학식 I에 따라 제공되고, 여기서 R1 및 R2는 각각 독립적으로 H 또는 CH3으로부터 선택되고; R3, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬, OH, OCH3, O(C1-C6 알킬), O(C1-C6 할로알킬), F, Cl, CF3, 아릴, 헤테로아릴, C3-7 사이클로알킬, CO2R', C(O)R', OC(O)N(R')2, CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR'로부터 선택되며; n은 0, 1 또는 2이고; R'는 각각 독립적으로 H, CH3, CH2CH3, C3-C6 알킬, C1-C6 할로알킬; 또는 임의로 치환된 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일, 몰폴리닐, 헤테로사이클로알킬 또는 아릴이며, 임의로 치환된 기는 C1-C6 알킬 또는 C2-C7 아실로부터 선택되거나; R3과 R4는, 이들이 부착된 C 원자와 함께, 5원 또는 6원 C3-7 사이클로알킬 또는 아릴을 형성하거나; R4와 R5는, 이들이 부착된 C 원자와 함께, C3-7 사이클로알킬, 또는 5원 또는 6원 아릴을 형성하거나; R3과 R4는 함께 연결되어 -O-C1-2 메틸렌-O-기를 형성하거나; R4와 R5는 함께 연결되어 -O-C1-2 메틸렌-O-기를 형성하고; R7, R8, R9, R10 및 R11은 각각 독립적으로 H, OH, CH3, CH2CH3, F, Cl, CF3, OCF3, C1-C6 할로알킬, OCH3, O(C1-C6 알킬), OCH2CH2OH, O(C1-C6 알킬)OH, 아릴, 헤테로아릴, C3 -7 사이클로알킬, 알킬아릴, CO2R', CONR'2, S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)O(C1-4 알킬), OC(O)N(R')2 및 C(O)NH(C1-4 알킬)로부터 선택되며; n은 0, 1 또는 2이고; R'는 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, 아릴, 알킬아릴 또는 C1-6 알콕시이다.
추가의 실시형태에서, 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 화학식 I에 따라 제공되고, 여기서 R7, R10, R11은 각각 H이고; R3 및 R4는 각각 독립적으로 H, F, Cl, S(O)nR', C(O)R'로부터 선택되며, n은 2이고, R'는 CH3, 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일, 몰폴리닐로부터 선택되고; R8은 OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2 또는 OC(CH3)3로부터 선택되며; R9는 OH이다.
또 다른 실시형태에서, 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure 112016084530517-pct00006
Figure 112016084530517-pct00007
Figure 112016084530517-pct00008
Figure 112016084530517-pct00009
Figure 112016084530517-pct00010
.
추가의 실시형태에서, 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 하기 화학식 II에 따라 제공된다:
Figure 112016084530517-pct00011
식 중, R3, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 H, Cl, F, OH, CH3, C1-6 알킬, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, OC1-6 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬, CO2R', CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)R', OC(O)N(R')2 또는 C(O)NH(C1 -4 알킬)로부터 선택되고, n은 0, 1 또는 2이며; R'는 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬; 또는 임의로 치환된 아릴, 알킬아릴, 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일, 몰폴리닐, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아릴, C1 -6 알콕시, NH(C1 -4 알킬) 또는 NH(C1 -4 알킬)2이고, 임의로 치환된 기는 C1-C6 알킬 또는 C2-C7 아실로부터 선택되거나;
R3과 R4는, 이들이 부착된 C 원자와 함께, 6원 아릴을 형성하거나; R3과 R4는 함께 연결되어 -O-C1 -2 메틸렌-O-기를 형성하거나; R4와 R5는, 이들이 부착된 C 원자와 함께, 6원 아릴을 형성하거나; R4와 R5는 함께 연결되어 -O-C1 -2 메틸렌-O-기를 형성하며;
R8 및 R9는 각각 독립적으로 H, Cl, F, OH, CH3, C1 -6 알킬, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, O(CO)R', OC1 -6 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬, CO2R', CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', OC(O)N(R')2 또는 C(O)NH(C1-4 알킬)로부터 선택되거나;
R8과 R9는, 이들이 부착된 N 또는 C 원자와 함께, OH, 아미노, 할로, C1 -6 알킬, C1 -6 할로알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 할로알콕시, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환기에 의해 임의로 치환된 4원, 5원, 6원, 7원 또는 8원 사이클로알킬, 아릴, 헤테로사이클로알킬 또는 헤테로아릴기를 형성하고, R9 및 R10은 각각 독립적으로 결합, C, N, S 및 O로부터 선택되거나; R8과 R9는 함께 연결되어 -O-C1 -2 메틸렌-O-기를 형성한다.
추가의 실시형태에서, 화합물, 또는 약제학적으로 허용 가능한 염은 화학식 II에 따라 제공되고, 여기서 R3, R4, R5 및 R6 중 적어도 하나는 H가 아니고; R8 및 R9 중 적어도 하나는 H가 아니다.
또 다른 실시형태에서, 화학식 II에 따라 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공되고, 여기서 R7, R10, R11은 각각 H이고; R3 및 R4는 각각 독립적으로 H, F, Cl, S(O)nR', C(O)R'로부터 선택되며, n은 2이고, R'는 CH3, 또는 임의로 치환된 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일 또는 몰폴리닐로부터 선택되며, 임의로 치환된 기는 C1-C6 알킬 또는 C2-C7 아실로부터 선택되고; R8은 OH, Cl, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2 또는 OC(CH3)3로부터 선택되고; R9는 OH 또는 Cl이다.
추가의 실시형태에서, 화합물, 또는 약제학적으로 허용 가능한 염은 화학식 II에 따라 제공되고, 여기서 R3 및 R4는 각각 독립적으로 H, F, Cl, S(O)nR', C(O)R'로부터 선택되고, n은 2이며, R'는 CH3, 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일 또는 몰폴리닐로부터 선택되고; R5 및 R6은 각각 H이며; R8은 OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2 또는 OC(CH3)3로부터 선택되고; R9는 OH이다.
추가의 실시형태에서, 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure 112016084530517-pct00012
Figure 112016084530517-pct00013
Figure 112016084530517-pct00014
Figure 112016084530517-pct00015
Figure 112016084530517-pct00016
Figure 112016084530517-pct00017
Figure 112016084530517-pct00018
Figure 112016084530517-pct00019
Figure 112016084530517-pct00020
Figure 112016084530517-pct00021
.
추가의 실시형태에서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:
Figure 112016084530517-pct00022
Figure 112016084530517-pct00023
.
추가의 실시형태에서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:
Figure 112016084530517-pct00024
.
또 다른 실시형태에서, 하기 화학식 I에 따른 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 뉴런 세포에 대한 아밀로이드 베타 효과를 저해하기 위한 조성물이 제공되고, 여기서 화합물 또는 이의 염은 상기 세포에서 아밀로이드 베타 올리고머 결합을 저해하기에 효과적인 양으로 조성물 중에 존재한다:
Figure 112016084530517-pct00025
식 중,
R1 및 R2는 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬 또는 CH2OR'로부터 선택되고; R'는 H 또는 C1-C6 알킬이며;
R3, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬, OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, O(C1-C6 알킬), OCF3, OCH2CH2OH, O(C1-C6 알킬)OH, O(C1-C6 할로알킬), F, Cl, Br, I, CF3, CN, NO2, NH2, C1-C6 할로알킬, C1-C6 하이드록시알킬, C1 -6 알콕시 C1 -6 알킬, 아릴, 헤테로아릴, C3 -7 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 알킬아릴, 헤테로아릴, CO2R', C(O)R', NH(C1 -4 알킬), N(C1 -4 알킬)2, NH(C3 -7 사이클로알킬), NHC(O)(C1 -4 알킬), CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)R', C(O)O(C1-4 알킬), OC(O)N(R')2, C(O)(C1-4 알킬) 및 C(O)NH(C1-4 알킬)로부터 선택되고; n은 0, 1 또는 2이며; R'는 각각 독립적으로 H, CH3, CH2CH3, C3-C6 알킬, C1-C6 할로알킬; 또는 임의로 치환된 아릴, 알킬아릴, 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일, 몰폴리닐, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아릴, C1 -6 알콕시, NH(C1 -4 알킬) 또는 NH(C1 -4 알킬)2이고, 임의로 치환된 기는 C1-C6 알킬 또는 C2-C7 아실로부터 선택되거나;
R3과 R4는, 이들이 부착된 C 원자와 함께, OH, 아미노, 할로, C1 -6 알킬, C1 -6 할로알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 할로알콕시, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환기에 의해 임의로 치환된 4원, 5원, 6원, 7원 또는 8원 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬을 형성하며, R3 및 R4, 또는 R4 및 R5는 각각 독립적으로 결합, C, N, S 및 O로부터 선택되거나; R3과 R4는 함께 연결되어 -O-C1-2 메틸렌-O-기를 형성하거나;
R4와 R5는, 이들이 부착된 C 원자와 함께, OH, 아미노, 할로, C1 -6 알킬, C1 -6 할로알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 할로알콕시, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환기에 의해 임의로 치환된 4원, 5원, 6원, 7원 또는 8원 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬을 형성하고, R3 및 R4, 또는 R4 및 R5는, 각각 독립적으로 결합, C, N, S 및 O로부터 선택되거나; R4와 R5는 함께 연결되어 -O-C1-2 메틸렌-O-기를 형성하며;
R7, R8, R9, R10 및 R11은 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬, OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, O(C1-C6 알킬), OCF3, OCH2CH2OH, O(C1-C6 알킬)OH, O(C1-C6 할로알킬), F, Cl, Br, I, CF3, CN, NO2, NH2, C1-C6 할로알킬, C1-C6 하이드록시알킬, C1 -6 알콕시 C1 -6 알킬, 아릴, 헤테로아릴, C3 -7 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 알킬아릴, 헤테로아릴, CO2R', C(O)R', NH(C1 -4 알킬), N(C1 -4 알킬)2, NH(C3-7 사이클로알킬), NHC(O)(C1-4 알킬), CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)O(C1-4 알킬), OC(O)N(R')2, C(O)(C1 -4 알킬) 및 C(O)NH(C1-4 알킬)로부터 선택되고; n은 0, 1 또는 2이며; R'는 각각 독립적으로 H, CH3, CH2CH3, C3-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, 아릴, 알킬아릴, 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일, 몰폴리닐, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아릴, C1-6 알콕시, NH(C1-4 알킬) 또는 NH(C1-4 알킬)2이거나;
R7과 R8은, 이들이 부착된 N 또는 C 원자와 함께, OH, 아미노, 할로, C1 -6 알킬, C1 -6 할로알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 할로알콕시, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환기에 의해 임의로 치환된 4원, 5원, 6원, 7원 또는 8원 사이클로알킬, 아릴, 헤테로사이클로알킬 또는 헤테로아릴기를 형성하고, R9 및 R10은 각각 독립적으로 결합, C, N, S 및 O로부터 선택되거나; R7과 R8은 함께 연결되어 -O-C1 -2 메틸렌-O-기를 형성하거나;
R8과 R9는, 이들이 부착된 N 또는 C 원자와 함께, OH, 아미노, 할로, C1 -6 알킬, C1 -6 할로알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 할로알콕시, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환기에 의해 임의로 치환된 4원, 5원, 6원, 7원 또는 8원 사이클로알킬, 아릴, 헤테로사이클로알킬 또는 헤테로아릴기를 형성하며, R9 및 R10은 각각 독립적으로 결합, C, N, S 및 O로부터 선택되거나; R8 및 R9는 함께 연결되어 -O-C1 -2 메틸렌-O-기를 형성하고;
O, C1 -6 알킬, C1 -6 할로알킬, 헤테로아릴, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬 및 사이클로알킬의 각각은 OH, 아미노, 할로, C1 -6 알킬, C1 -6 할로알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 할로알콕시, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환기에 의해 임의로 독립적으로 치환되며;
단, 하기 화합물은 배제된다:
Figure 112016084530517-pct00026
Figure 112016084530517-pct00027
Figure 112016084530517-pct00028
Figure 112016084530517-pct00029
.
또 다른 실시형태에서, 하기 화학식 I에 따른 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 뉴런 세포에 대한 아밀로이드 베타 효과를 저해하기 위한 조성물이 제공되고, 여기서 화합물 또는 이의 염은 상기 세포에서 아밀로이드 베타 올리고머 결합을 저해하기에 효과적인 양으로 조성물 중에 존재한다:
Figure 112016084530517-pct00030
식 중, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11은 본 명세서에 정의된 바와 같고, 단, R1, R3, R6, R7, R10 및 R11이 각각 H이고; R2가 CH3이고; R8이 OCH3 또는 Cl이고; R9가 OH 또는 Cl일 때; R4는 Cl 또는 CF3이 아니고, R5는 Cl 또는 CF3이 아니다
또 다른 실시형태에서,
R1 및 R2는 각각 독립적으로 H 또는 CH3으로부터 선택되고;
R3, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬, OH, OCH3, O(C1-C6 알킬), O(C1-C6 할로알킬), F, Cl, CF3, 아릴, 헤테로아릴, C3 -7 사이클로알킬, CO2R', C(O)R', OC(O)N(R')2, CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR'로부터 선택되며; n은 0, 1 또는 2이고; R'는 각각 독립적으로 H, CH3, CH2CH3, C3-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일, 몰폴리닐, 헤테로사이클로알킬 또는 아릴이거나;
R3과 R4는, 이들이 부착된 C 원자와 함께, 5원 또는 6원 C3 -7 사이클로알킬 또는 아릴을 형성하거나; R4와 R5는, 이들이 부착된 C 원자와 함께, C3 -7 사이클로알킬, 또는 5원 또는 6원 아릴을 형성하거나; R3과 R4는 함께 연결되어 -O-C1 -2 메틸렌-O-기를 형성하거나; R4와 R5는 함께 연결되어 -O-C1-2 메틸렌-O-기를 형성하며;
R7, R8, R9, R10 및 R11은 각각 독립적으로 H, OH, CH3, CH2CH3, F, Cl, CF3, OCF3, C1-C6 할로알킬, OCH3, O(C1-C6 알킬), OCH2CH2OH, O(C1-C6 알킬)OH, 아릴, 헤테로아릴, C3 -7 사이클로알킬, 알킬아릴, CO2R', CONR'2, S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)O(C1-4 알킬), OC(O)N(R')2 및 C(O)NH(C1-4 알킬)로부터 선택되고; n은 0, 1 또는 2이며; R'는 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, 아릴, 알킬아릴 또는 C1-6 알콕시인, 화학식 I에 따른 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물이 제공된다.
또 다른 실시형태에서, R7, R10, R11은 각각 H이고; R3 및 R4는 각각 독립적으로 H, F, Cl, S(O)nR', C(O)R'로부터 선택되며, n은 2이고, R'는 CH3, 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일, 몰폴리닐로부터 선택되며; R8은 OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2 또는 OC(CH3)3로부터 선택되고; R9는 OH인, 화학식 I에 따른 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물이 제공된다.
또 다른 실시형태에서, 화학식 I에 따른 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물이 제공되고, 여기서 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure 112016084530517-pct00031
Figure 112016084530517-pct00032
Figure 112016084530517-pct00033
Figure 112016084530517-pct00034
Figure 112016084530517-pct00035
.
또 다른 실시형태에서, 하기 화학식 II에 따른 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염; 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물이 제공된다:
Figure 112016084530517-pct00036
식 중, R3, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 H, Cl, F, OH, CH3, C1-6 알킬, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, OC1-6 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬, CO2R', CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)R', OC(O)N(R')2 또는 C(O)NH(C1 -4 알킬)로부터 선택되고, n은 0, 1 또는 2이며; R'는 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬 또는 임의로 치환된 아릴, 알킬아릴, 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일, 몰폴리닐, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아릴, C1 -6 알콕시, NH(C1 -4 알킬) 또는 NH(C1 -4 알킬)2이고, 임의로 치환된 기는 C1-C6 알킬 또는 C2-C7 아실로부터 선택되거나;
R3과 R4는, 이들이 부착된 C 원자와 함께, 6원 아릴을 형성하거나; R3과 R4는 함께 연결되어 -O-C1 -2 메틸렌-O-기를 형성하거나; R4와 R5는, 이들이 부착된 C 원자와 함께, 6원 아릴을 형성하거나; R4와 R5는 함께 연결되어 -O-C1 -2 메틸렌-O-기를 형성하며;
R8 및 R9는 각각 독립적으로 H, Cl, F, OH, CH3, C1 -6 알킬, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, OC1 -6 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬, CO2R', CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', OC(O)N(R')2 또는 C(O)NH(C1-4 알킬)로부터 선택된다.
또 다른 실시형태에서, R3 및 R4는 각각 독립적으로 H, F, Cl, S(O)nR', C(O)R'로부터 선택되고, n은 2이며, R'는 CH3, 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일 또는 몰폴리닐로부터 선택되고; R5 및 R6은 각각 H이며; R8은 OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2 또는 OC(CH3)3로부터 선택되고; R9는 OH인, 화학식 II에 따른 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염; 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물이 제공된다.
추가의 실시형태에서, 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물이 제공되고, 여기서 화합물 또는 염은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure 112016084530517-pct00037
Figure 112016084530517-pct00038
Figure 112016084530517-pct00039
Figure 112016084530517-pct00040
Figure 112016084530517-pct00041
Figure 112016084530517-pct00042
Figure 112016084530517-pct00043
Figure 112016084530517-pct00044
Figure 112016084530517-pct00045
.
추가의 실시형태에서, 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물이 제공되고, 여기서 화합물 또는 염은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure 112016084530517-pct00046
Figure 112016084530517-pct00047
.
추가의 실시형태에서, 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물이 제공되고, 여기서 화합물 또는 염은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure 112016084530517-pct00048
.
일 실시형태에서, 하기 화학식 I에 따른 선택적 시그마-2 수용체 길항제 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염; 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 유효량의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 뉴런 세포에 대한 아밀로이드 베타 효과를 저해하기 위한 방법/용도가 제공되고, 여기서 화합물 또는 이의 염은 상기 세포에서 아밀로이드 베타 올리고머 결합을 저해하기에 효과적인 양으로 조성물 중에 존재한다:
Figure 112016084530517-pct00049
식 중,
R1 및 R2는 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬 또는 CH2OR'로부터 선택되고; R'는 H 또는 C1-C6 알킬이며;
R3, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬, OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, O(C1-C6 알킬), OCF3, OCH2CH2OH, O(C1-C6 알킬)OH, O(C1-C6 할로알킬), F, Cl, Br, I, CF3, CN, NO2, NH2, C1-C6 할로알킬, C1-C6 하이드록시알킬, C1 -6 알콕시 C1 -6 알킬, 아릴, 헤테로아릴, C3 -7 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 알킬아릴, 헤테로아릴, CO2R', C(O)R', NH(C1 -4 알킬), N(C1 -4 알킬)2, NH(C3 -7 사이클로알킬), NHC(O)(C1-4 알킬), CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)R', C(O)O(C1-4 알킬), OC(O)N(R')2, C(O)(C1-4 알킬) 및 C(O)NH(C1-4 알킬)로부터 선택되고; n은 0, 1 또는 2이며; R'는 각각 독립적으로 H, CH3, CH2CH3, C3-C6 알킬, C1-C6 할로알킬; 또는 임의로 치환된 아릴, 알킬아릴, 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일, 몰폴리닐, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아릴, C1 -6 알콕시, NH(C1 -4 알킬) 또는 NH(C1-4 알킬)2이고, 임의로 치환된 기는 C1-C6 알킬 또는 C2-C7 아실로부터 선택되거나;
R3과 R4는, 이들이 부착된 C 원자와 함께, OH, 아미노, 할로, C1 -6 알킬, C1 -6 할로알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 할로알콕시, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환기에 의해 임의로 치환된 4원, 5원, 6원, 7원 또는 8원 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬을 형성하며, R3 및 R4, 또는 R4 및 R5는 각각 독립적으로 결합, C, N, S 및 O로부터 선택되거나; R3과 R4는 함께 연결되어 -O-C1-2 메틸렌-O-기를 형성하거나;
R4와 R5는, 이들이 부착된 C 원자와 함께, OH, 아미노, 할로, C1 -6 알킬, C1 -6 할로알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 할로알콕시, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환기에 의해 임의로 치환된 4원, 5원, 6원, 7원 또는 8원 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬을 형성하고, R3 및 R4, 또는 R4 및 R5는 각각 독립적으로 결합, C, N, S 및 O로부터 선택되거나; R4와 R5는 함께 연결되어 -O-C1 -2 메틸렌-O-기를 형성하며;
R7, R8, R9, R10 및 R11은 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬, OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, O(C1-C6 알킬), OCF3, OCH2CH2OH, O(C1-C6 알킬)OH, O(C1-C6 할로알킬), F, Cl, Br, I, CF3, CN, NO2, NH2, C1-C6 할로알킬, C1-C6 하이드록시알킬, C1 -6 알콕시 C1 -6 알킬, 아릴, 헤테로아릴, C3 -7 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 알킬아릴, 헤테로아릴, CO2R', C(O)R', NH(C1 -4 알킬), N(C1 -4 알킬)2, NH(C3-7 사이클로알킬), NHC(O)(C1-4 알킬), CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)O(C1-4 알킬), OC(O)N(R')2, C(O)(C1-4 알킬) 및 C(O)NH(C1-4 알킬)로부터 선택되고; n은 0, 1 또는 2이며; R'는 각각 독립적으로 H, CH3, CH2CH3, C3-C6 알킬, C1-C6 할로알킬; 또는 임의로 치환된 아릴, 알킬아릴, 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일, 몰폴리닐, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아릴, C1-6 알콕시, NH(C1 -4 알킬) 또는 NH(C1 -4 알킬)2이고, 임의로 치환된 기는 C1-C6 알킬 또는 C2-C7 아실로부터 선택되거나;
R7과 R8은, 이들이 부착된 N 또는 C 원자와 함께, OH, 아미노, 할로, C1 -6 알킬, C1 -6 할로알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 할로알콕시, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환기에 의해 임의로 치환된 4원, 5원, 6원, 7원 또는 8원 사이클로알킬, 아릴, 헤테로사이클로알킬 또는 헤테로아릴기를 형성하며, R9 및 R10은 각각 독립적으로 결합, C, N, S 및 O로부터 선택되거나; R7과 R8은 함께 연결되어 -O-C1 -2 메틸렌-O-기를 형성하거나;
R8과 R9는, 이들이 부착된 N 또는 C 원자와 함께, OH, 아미노, 할로, C1 -6 알킬, C1 -6 할로알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 할로알콕시, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환기에 의해 임의로 치환된 4원, 5원, 6원, 7원 또는 8원 사이클로알킬, 아릴, 헤테로사이클로알킬 또는 헤테로아릴기를 형성하고, R9 및 R10은 각각 독립적으로 결합, C, N, S 및 O로부터 선택되거나; 또는 R8과 R9는 함께 연결되어 -O-C1 -2 메틸렌-O-기를 형성하며,
O, C1 -6 알킬, C1 -6 할로알킬, 헤테로아릴, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬 및 사이클로알킬의 각각은 임의로 독립적으로 OH, 아미노, 할로, C1 -6 알킬, C1-6 할로알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 할로알콕시, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환기에 의해 치환되고;
단, 하기 화합물은 배제된다:
Figure 112016084530517-pct00050
Figure 112016084530517-pct00051
Figure 112016084530517-pct00052
Figure 112016084530517-pct00053
.
또 다른 실시형태에서, 화학식 I에 따른 선택적 시그마-2 수용체 길항제 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는, 유효량의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 뉴런 세포에 대한 아밀로이드 베타 효과를 저해하기 위한 방법/용도가 제공되고, 여기서 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 상기 세포에서 막 수송 결함을 저해하기에 효과적인 양으로 투여되고, 상기 막 수송 효과는 가용성 아밀로이드 베타 올리고머에 대한 상기 세포의 노출과 연관된다.
또 다른 실시형태에서, 화학식 I에 따른 선택적 시그마-2 수용체 길항제 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는, 유효량의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 뉴런 세포에 대한 아밀로이드 베타 효과를 저해하기 위한 방법/용도가 제공되고, 여기서 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 상기 세포에서 가용성 아밀로이드 베타 올리고머에 대한 세포의 노출과 연관된 올리고머 결합 및 시냅스 손실 둘 다를 저해하기에 효과적인 양으로 투여된다.
또 다른 실시형태에서, 유효량의 화학식 I에 따른 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 뉴런 세포에 대한 아밀로이드 베타 효과를 저해하기 위한 방법/용도가 제공되고, 여기서 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 가용성 아밀로이드 베타 올리고머 매개 인지 효과를 저해하기에 효과적인 양으로 투여된다. 일 양상에서, 인지 효과는 인지 감소의 동물 모델에서 시험된 것처럼 인지 감소이다. 또 다른 양상에서, 인지 감소는 공포 조건화 검정(fear conditioning assay)에 의해 시험된 것처럼 감퇴이다. 추가의 양상에서, 인지 감소는 모리스 수중 미로(Morris water maze) 시험에 의해 시험된 것처럼 공간 학습 및 기억의 감퇴이다. 또 다른 양상에서, 인지 감소는 알츠하이머병의 형질전환 동물 모델에서 시험된 것처럼 해마 기반 공간 학습 및 기억 감퇴이다.
또 다른 실시형태에서, 유효량의 화학식 I에 따른 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염; 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 뉴런 세포에 대한 아밀로이드 베타 효과를 저해하기 위한 방법/용도가 제공되고: 여기서,
R1 및 R2는 각각 독립적으로 H 또는 CH3으로부터 선택되고;
R3, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬, OH, OCH3, O(C1-C6 알킬), O(C1-C6 할로알킬), F, Cl, CF3, 아릴, 헤테로아릴, C3 -7 사이클로알킬, CO2R', C(O)R', OC(O)N(R')2, CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR'로부터 선택되며; n은 0, 1 또는 2이고; R'는 각각 독립적으로 H, CH3, CH2CH3, C3-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일, 몰폴리닐, 헤테로사이클로알킬 또는 아릴이거나;
R3과 R4는, 이들이 부착된 C 원자와 함께, 5원 또는 6원 C3-7 사이클로알킬 또는 아릴을 형성하거나; R4와 R5는, 이들이 부착된 C 원자와 함께, C3- 7사이클로알킬, 또는 5원 또는 6원 아릴을 형성하거나; R3과 R4는 함께 연결되어 -O-C1 -2 메틸렌-O-기를 형성하거나; R4와 R5는 함께 연결되어 -O-C1-2 메틸렌-O-기를 형성하며;
R7, R8, R9, R10 및 R11은 각각 독립적으로 H, OH, CH3, CH2CH3, F, Cl, CF3, OCF3, C1-C6 할로알킬, OCH3, O(C1-C6 알킬), OCH2CH2OH, O(C1-C6 알킬)OH, 아릴, 헤테로아릴, C3 -7 사이클로알킬, 알킬아릴, CO2R', CONR'2, S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)O(C1-4 알킬), OC(O)N(R')2 및 C(O)NH(C1-4 알킬)로부터 선택되고; n은 0, 1 또는 2이며; R'는 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, 아릴, 알킬아릴 또는 C1-6 알콕시이다.
또 다른 실시형태에서, 유효량의 화학식 I에 따른 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염; 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 뉴런 세포에 대한 아밀로이드 베타 효과를 저해하기 위한 방법/용도가 제공되고: 여기서, R7, R10, R11은 각각 H이고; R3 및 R4는 각각 독립적으로 H, F, Cl, S(O)nR', C(O)R'로부터 선택되며, n은 2이고, R'는 CH3 또는 임의로 치환된 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일 또는 몰폴리닐로부터 선택되며, 임의로 치환된 기는 C1-C6 알킬 또는 C2-C7 아실로부터 선택되고; R8은 OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2 또는 OC(CH3)3로부터 선택되며; R9는 OH이다.
또 다른 실시형태에서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된, 유효량의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 뉴런 세포에 대한 아밀로이드 베타 효과를 저해하기 위한 방법/용도가 제공된다:
Figure 112016084530517-pct00054
Figure 112016084530517-pct00055
Figure 112016084530517-pct00056
Figure 112016084530517-pct00057
Figure 112016084530517-pct00058
.
또 다른 실시형태에서, 유효량의 화학식 II에 따른 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염; 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 뉴런 세포에 대한 아밀로이드 베타 효과를 저해하기 위한 방법/용도가 제공된다:
Figure 112016084530517-pct00059
식 중, R3, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 H, Cl, F, OH, CH3, C1 -6 알킬, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, OC1 -6 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬, CO2R', CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)R', OC(O)N(R')2 또는 C(O)NH(C1 -4 알킬)로부터 선택되고, n은 0, 1 또는 2이며; R'는 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬 또는 임의로 치환된 아릴, 알킬아릴, 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일, 몰폴리닐, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아릴, C1 -6 알콕시, NH(C1 -4 알킬) 또는 NH(C1 -4 알킬)2이고, 임의로 치환된 기는 C1-C6 알킬 또는 C2-C7 아실로부터 선택되거나;
R3과 R4는, 이들이 부착된 C 원자와 함께, 6원 아릴을 형성하거나; R3과 R4는 함께 연결되어 -O-C1 -2 메틸렌-O-기를 형성하거나; R4와 R5는, 이들이 부착된 C 원자와 함께, 6원 아릴을 형성하거나; R4와 R5는 함께 연결되어 -O-C1 -2 메틸렌-O-기를 형성하며;
R8 및 R9는 각각 독립적으로 H, Cl, F, OH, CH3, C1 -6 알킬, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, OC1-6 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬, CO2R', CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', OC(O)N(R')2 또는 C(O)NH(C1-4 알킬)로부터 선택된다.
또 다른 실시형태에서, 유효량의 화학식 II에 따른 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 뉴런 세포에 대한 아밀로이드 베타 효과를 저해하기 위한 방법/용도가 제공되고, 여기서 R3, R4, R5 및 R6 중 적어도 하나는 H가 아니고; R8 및 R9 중 적어도 하나는 H가 아니다.
또 다른 실시형태에서, 유효량의 화학식 II에 따른 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 뉴런 세포에 대한 아밀로이드 베타 효과를 저해하기 위한 방법/용도가 제공되고, 여기서, R3 및 R4는 각각 독립적으로 H, F, Cl, S(O)nR', C(O)R'로부터 선택되고, n은 2이며, R'는 CH3, 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일 또는 몰폴리닐로부터 선택되고; R5 및 R6은 각각 H이며; R8은 OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2 또는 OC(CH3)3로부터 선택되고; R9는 OH이다.
또 다른 실시형태에서, 유효량의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염; 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 뉴런 세포에 대한 아밀로이드 베타 효과를 저해하기 위한 방법/용도가 제공되고, 여기서 화합물 또는 이의 염은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure 112016084530517-pct00060
Figure 112016084530517-pct00061
Figure 112016084530517-pct00062
Figure 112016084530517-pct00063
Figure 112016084530517-pct00064
Figure 112016084530517-pct00065
Figure 112016084530517-pct00066
Figure 112016084530517-pct00067
Figure 112016084530517-pct00068
Figure 112016084530517-pct00069
.
또 다른 실시형태에서, 유효량의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염; 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 뉴런 세포에 대한 아밀로이드 베타 효과를 저해하기 위한 방법/용도가 제공되고, 여기서 화합물 또는 이의 염은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure 112016084530517-pct00070
Figure 112016084530517-pct00071
.
또 다른 실시형태에서, 유효량의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염; 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 뉴런 세포에 대한 아밀로이드 베타 효과를 저해하기 위한 방법/용도가 제공되고, 여기서 화합물 또는 이의 염은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure 112016084530517-pct00072
.
또 다른 실시형태에서, 화학식 I 및/또는 화학식 II에 따른 시그마-2 수용체 길항제 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염; 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 치료학적 유효량의 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 장기간 강화의 억제를 저해하는 방법/용도가 제공된다.
또 다른 실시형태에서, 화학식 I 및/또는 화학식 II에 따른 시그마-2 수용체 길항제 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염; 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 치료학적 유효량의 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 인지 감소를 나타내거나 이것을 나타낼 위험이 있는 대상체에서 인지 감소를 저해하는 방법/용도가 제공된다.
또 다른 실시형태에서, 화학식 I 및/또는 화학식 II에 따른 시그마-2 수용체 길항제 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염; 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 치료학적 유효량의 조성물을 상기 인지 감소로 고생하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 중추 뉴런에서 아밀로이드 베타 올리고머 효과와 연관된 대상체에서의 인지 감소를 저해하는 방법/용도가 제공된다.
또 다른 실시형태에서, 화학식 I 및/또는 화학식 II에 따른 시그마-2 수용체 길항제 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염; 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 치료학적 유효량의 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 알츠하이머병에서의 중등 인지 장애의 치료를 위한 방법/용도가 제공된다.
추가의 실시형태에서, 화학식 I 및/또는 화학식 II에 따른 아이소인돌린 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공되고, 이것은 시그마-2 수용체에 결합하고, 뉴런, 특히 시냅스에 대한 Aβ 올리고머의 결합을 저해함으로써 시그마-2 길항제로서 작용한다. 몇몇 실시형태에서, 시그마-2 길항제는 뉴런 및 구체적으로 시냅스에 대한 Aβ 올리고머 결합과 경쟁하거나, 그렇지 않으면 예컨대 Aβ 올리고머 형성 또는 Aβ 올리고머에 대한 결합을 방해하거나 가능하게는 뉴런에 대한 결합에 부수하는 운동 신호 전달 기전을 시작하는 Aβ 올리고머의 능력을 방해함으로써, 뉴런에 결합하는 Aβ 올리고머의 능력을 파괴한다. 소정의 실시형태에서, 시그마-2 길항제는 이로써 무엇보다도 막 수송에서의 결함, 시냅스 기능이상, 동물에서의 기억 및 학습 결함, 시냅스 수의 감소, 수지상 척추 길이 또는 척추 형태의 변화, 또는 장기간 강화(long term potentiation: LTP)의 결핍을 포함하는 비치사 Aβ 병리학적 효과("비치사 Aβ 병리학" 또는 "비치사 아밀로이드 베타 병리학)을 저해한다.
다른 실시형태에서, 본 명세서에 예시된 바와 같은 다른 검정에서 활성인 본 명세서에 제공된 아이소인돌린 시그마-2 길항제는 정상 상태로 뉴런을 복원시키거나 Aβ 올리고머 유도 시냅스 기능이상을 방해하는 능력을 보유한다. 이론에 구속됨이 없이, 본 명세서에 제공된 시그마-2 길항제는, Aβ 올리고머의 비치사 효과에 대응하고 가용성 Aβ 올리고머 관련 병리학의 초기 단계를 치료하는 데 있어서 유용한, Aβ 올리고머 구조, 뉴런에 대한 Aβ 올리고머 결합 또는 Aβ 올리고머 유도 분자 신호전달 기전 중 하나 이상을 방해한다.
일 실시형태에서, 화학식 I 및/또는 화학식 II에 따른 시그마-2 길항제, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공되고, 이것은 기능적 뉴런 길항제이고 뉴런 세포에서 시냅스 손실을 저해하는 방법에서 사용되고, 소실은 하나 이상의 A베타 올리고머 또는 다른 A베타 복합체, 또는 더 일반적으로, 단량체 또는 올리고머 또는 (하기 정의된 바와 같은) 달리 가용성 복합체화된 형태의 A베타 펩타이드를 포함하는 A베타 종에 대한 세포의 노출과 연관되고, 상기 방법은 상기 세포를 하나 이상의 시그마-2 길항제의 양과 상기 소실을 피하거나 감소시키거나, 상기 세포에서 시냅스 수를 예비 노출 수준으로 부분적으로 또는 완전히 복원하기에 효과적인 양으로 접촉시키는 단계를 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 뉴런 세포에서 막 수송 변화를 조절하는 방법이 제공되고, 상기 변화는 하나 이상의 A베타 종에 대한 상기 세포의 노출과 연관되고, 상기 방법은 상기 세포를 화학식 I 및/또는 화학식 II에 따른 하나 이상의 시그마-2 길항제, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 양과 상기 막 수송 변화를 피하거나 감소시키기에 효과적인 양(또는 이것은 상기 A베타 종에 대한 상기 세포의 노출 전에 관찰된 수준에 있거나 이와 가깝게 있음)으로 접촉시키는 단계를 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용의 하나 이상의 시그마-2 길항제를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 인지 감소를 치료하는 방법에서 사용되는, 화학식 I 및/또는 화학식 II에 따른 시그마-2 길항제, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
또 다른 실시형태에서, 유효량의 화학식 I 및/또는 화학식 II에 따른 하나 이상의 시그마-2 길항제, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 인지 감소를 치료하는 방법이 제공된다.
훨씬 또 다른 실시형태에서, 화학식 I 및/또는 화학식 II에 따른 시그마-2 길항제, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 본 개시내용의 하나 이상의 시그마-2 길항제를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 인지 감소 또는 신경퇴행성 장애 또는 시냅스 기능 및/또는 수의 결합을 치료하는 방법에서 사용되는 기능적 뉴런 시그마-2 길항제이다.
훨씬 또 다른 실시형태에서, 기능적 뉴런 시그마-2 길항제인 화학식 I 및/또는 화학식 II에 따른 하나 이상의 시그마-2 길항제, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 인지 감소 또는 신경퇴행성 장애 또는 시냅스 기능 및/또는 수의 결함을 치료하는 방법이 제공된다.
추가의 실시형태에서, 하나 이상의 화학식 I 및/또는 화학식 II에 따른 시그마-2 수용체 길항제, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 뉴런 세포의 아밀로이드 베타 올리고머 유도 시냅스 기능이상을 저해하고/하거나; A베타 올리고머에 대한 뉴런의 노출에 의해 발생한 해마 장기간 강화의 억제를 저해하기에 효과적인 양으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 제공된다.
화합물, 조성물 및 방법을 자세히 기재하기 전에, 본 개시내용이 기재된 특정한 공정, 조성물 또는 방법론에 제한되지 않는 것(이들이 변할 수 있으므로)으로 이해되어야 한다. 명세서에 사용된 전문용어가 오직 특정한 변형 또는 실시형태를 기술한 목적을 위한 것이고, 청구항에 의해서만 제한되는 본 개시내용의 범위를 제한하는 것으로 의도되지 않는 것으로 또한 이해되어야 한다. 달리 정의되지 않은 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 당해 분야의 당업자가 보통 이해하는 것과 동일한 의미를 가진다. 본 명세서에 기재된 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 재료가 본 개시내용의 실시형태의 실행 또는 시험 시 사용될 수 있지만, 바람직한 방법, 장치 및 재료가 이제 기재된다.
명확을 기하기 위하여 별개의 실시형태의 맥락에서 기재된 본 개시내용의 소정의 특징이 단일 실시형태와 조합되어 또한 제공될 수 있는 것으로 추가로 이해된다. 반대로, 간략화를 위하여 단일 실시형태의 맥락에서 기재된 본 개시내용의 다양한 특징은 별개로 또는 임의의 적합한 하위조합으로 또한 제공될 수 있다.
정의
단수 형태 "일", "하나" 및 "이"는 문맥이 달리 명확히 기술하지 않는 한 복수 언급을 포함한다. 따라서, 예를 들어 "세포"에 대한 언급은 하나 이상의 세포 및 당해 분야의 당업자에게 공지된 이의 등가물, 및 기타 등등에 대한 언급이다.
본 명세서에 사용되는 바대로, 용어 "약"은 소정의 값의 + 또는 - 10%를 의미한다. 예를 들어, "약 50%"는 45% 내지 55%의 범위를 의미한다.
"시그마-2 리간드"는 시그마-2 수용체에 결합하는 화합물을 의미하고, 이 수용체 또는 단백질의 다른 리간드에 대한 효현제, 길항제, 부분 효현제, 역효현제 및 단순히 경쟁자를 포함한다.
용어 "효현제"는 그 존재가 수용체에 대한 천연 발생 리간드의 존재로부터 생긴 생물학적 활성과 동일한 수용체의 생물학적 활성을 생성시키는 화합물을 의미한다.
용어 "부분 효현제"는 그 존재가 수용체에 대한 천연 발생 리간드의 존재로부터 생긴 것과 동일한 유형, 그러나 더 낮은 규모의 수용체의 생물학적 활성을 생성시키는 화합물을 의미한다.
용어 "길항제"는 그 존재가 수용체의 생물학적 활성의 규모를 감소시키는 집합체, 예를 들어 화합물, 항체 또는 단편을 의미한다. 소정의 실시형태에서, 길항제의 존재는 수용체의 생물학적 활성의 완전한 저해를 발생시킨다. 본 명세서에 사용되는 바대로, 용어 "시그마-2 수용체 길항제"는, 이것이 예를 들어 실험실내 검정, 예컨대 막 수송 검정, 또는 시냅스 손실 검정에서 볼 수 있는 것처럼 A베타 효과, 예를 들어 A베타 올리고머 유도 시냅스 기능이상, 또는 카스파제-3의 A베타 올리고머 매개 시그마-2 수용체 활성화(또는 거동 검정에서 또는 이를 필요로 하는 환자에서)를 차단한다는 점에서, 시그마-2 수용체에서 "기능성 길항제"로서 작용하는 화합물을 기술하도록 사용된다. 기능성 길항제는 직접적으로 예를 들어 시그마-2 수용체에 대한 A베타 올리고머의 결합을 저해함으로써, 또는 간접적으로 시그마-2 수용체에 결합하는 A베타 올리고머로부터 생긴 하향 신호전달을 방해함으로써 작용할 수 있다.
용어 "시그마-2 수용체 길항제 화합물"은 측정 가능한 양으로 시그마-2 수용체에 결합하고, 시그마-2 수용체 결합으로부터 생긴 A베타 효과, 올리고머 유도 시냅스 기능이상과 관련하여 기능성 길항제로서 작용하는 분자를 의미한다.
용어 "선택도" 또는 "선택적"은 비시그마 수용체와 비교하여 시그마 수용체, 예를 들어 시그마-2 수용체에 대한 화합물의 결합 친화도(Ki)의 차이를 의미한다. 시그마-2 길항제는 시냅스 뉴런에서 시그마 수용체에 대해 높은 선택도를 보유한다. 시그마-2 수용체 또는 시그마-2 및 시그마-1 수용체 둘 다에 대한 Ki는 비시그마 수용체에 대한 Ki와 비교된다. 몇몇 실시형태에서, 선택적 시그마-2 수용체 길항제, 또는 시그마-1 수용체 리간드는 상이한 수용체에서 결합 해리 상수 Ki 값, 또는 IC50 값, 또는 결합 상수의 비교에 의해 평가되는 것처럼, 비시그마 수용체와 비교하여, 시그마 수용체에 대한 결합에 대해 적어도 10배, 20배, 30배, 50배, 70배, 100배 또는 500배 이상의 친화도를 가진다. 임의의 공지된 검정 프로토콜은 예를 들어 문헌[Cheng and Prusoff (1973) (Biochem. Pharmacol. 22, 3099-3108)]의 방법에 의해, 또는 구체적으로 본 명세서에 제공된 바대로 예를 들어 공지된 해리 상수를 가지는 방사선 표지된 화합물의 수용체로부터 경쟁적 대체를 모니터링함으로써 상이한 수용체에서 Ki 또는 IC50 값을 평가하기 위해 사용될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 시그마-2 길항제 화합물은, 비시그마 수용체와 비교하여 시그마-2 수용체에 대한 결합에 특이적인, 항체, 또는 활성 결합 이의 단편이다. 항체, 또는 단편의 경우에, 당해 분야에 공지된 임의의 수단에 의해, 예를 들어 문헌[Beatty et al., 1987, J Immunol Meth, 100(1-2):173-179]의 방법, 또는 문헌[Chalquest, 1988, J. Clin. Microbiol. 26(12): 2561-2563]의 방법에 의해 시그마-2 수용체, 또는 단편에서의 결합 상수는 계산되고 비시그마 수용체에서 결합 상수와 비교될 수 있다. 비시그마 수용체는 예를 들어 무스카린 M1-M4 수용체, 세로토닌(5-HT) 수용체, 알파 아드레날린 수용체, 베타 아드레날린 수용체, 오피오이드 수용체, 세로토닌 운반체, 도파민 운반체, 아드레날린 운반체, 도파민 수용체, 또는 NMDA 수용체로부터 선택된다.
본원에서, 용어 "고친화도"는, 시그마-1 및 시그마-2 수용체 부위 둘 다에 대한 화합물의 결합 친화도를 측정하는, 문헌[Weber et al., Proc. Natl. Acad. Sci (USA) 83: 8784-8788 (1986)](본 명세서에 참조문헌으로 인용됨)에 개시된 바와 같은, 예를 들어 [3H]-DTG에 대해 시그마 수용체 결합 검정에서 600nM 미만, 500nM, 400nM, 300nM, 200nM, 150nM 미만, 100nM 미만, 80nM 미만, 60nM 미만, 또는 바람직하게는 50nM 미만의 Ki 값을 나타내는 화합물을 의미하도록 의도된다. 특히 바람직한 시그마 리간드는 [3H]-DTG에 대해 약 150nM 미만, 바람직하게는 100nM 미만, 약 60nM 미만, 약 10nM 미만, 또는 약 1nM 미만의 Ki 값을 나타낸다.
용어 "치료학적 표현형"은 거동 효율을 예측하는 실험실내 검정에서 화합물에 대한 활성의 패턴을 기술하기 위해 사용된다. (1) 시그마-2 수용체에 고친화도로 선택적으로 결합하고, (2) 뉴런에서 A베타 올리고머 유도 효과와 관련하여 기능성 길항제로서 작용하는 화합물은, (ⅰ) 이것이 Aβ 유도 막 수송 결함을 차단하거나 감소시키고; (ⅱ) 이것이 Aβ 유도 시냅스 손실을 차단하거나 감소시키고; (ⅲ) A베타 올리고머의 부재 하에 수송 또는 시냅스 수에 영향을 미치지 않는 경우, "치료학적 표현형"을 가진다고 말해진다. 실험실내 검정에서의 활성의 이 패턴은 "치료학적 표현형"이라 칭해지고, 거동 효율을 예측한다.
용어 "치료학적 프로필"은 치료학적 표현형을 충족시키고, 또한 우수한 뇌 침투성(혈액 뇌 장벽을 횡단하는 능력), 우수한 혈장 안정성 및 우수한 대사 안정성을 가지는 화합물을 기술하도록 사용된다.
용어 "약물 유사 특성"은, 뇌 침투성, 대사 안정성 및/또는 혈장 안정성을 포함하는, 투여 시 시그마-2 수용체 리간드의 약동학적 및 안정성 특징을 기술하도록 본 명세서에서 사용된다.
"A베타 종" 또는 "Aβ"는 가용성 아밀로이드 펩타이드 함유 성분, 예컨대 A베타 단량체, A베타 올리고머, 또는 (단량체, 이량체 또는 중합체 형태의) A베타 펩타이드와 다른 가용성 펩타이드 또는 단백질의 복합체, 및 아밀로이드 전구체 단백질의 임의의 가공된 생성물을 포함하는 다른 가용성 A베타 어셈블리를 포함하는 조성물을 포함해야 한다. 가용성 Aβ 올리고머는 신경독성인 것으로 공지되어 있다. 심지어 Aβ1-42 이량체는 마우스 해마 슬라이스에서 시냅스 가소성을 손상시키는 것으로 공지되어 있다. 당해 분야에 공지된 일 이론에서, 네이티브 Aβ1-42 단량체는 신경보호성으로 생각되고, 가용성 A베타 올리고머로의 Aβ 단량체의 자가 결합은 신경독성에 필요하다. 그러나, 소정의 Aβ 돌연변이체 단량체(북극 돌연변이(E22G)는 가족성 AD와 연관된 것으로 보고되었다. 예를 들어, 문헌[Giuffrida et al., β-Amyloid monomers are neuroprotective . J. Neurosci. 2009 29(34):10582-10587]을 참조한다. A베타 종을 포함하는 제제의 비제한적인 예는 미국 특허 출원 번호 제13/021,872호; 미국 특허 공보 제2010/0240868호; 국제 특허 출원 제WO/2004/067561호; 국제 특허 출원 제WO/2010/011947호; 미국 특허 공보 제20070098721호; 미국 특허 공보 제20100209346호; 국제 특허 출원 제WO/2007/005359호; 미국 특허 공보 제20080044356호; 미국 특허 공보 제20070218491호; 제WO/2007/126473호; 미국 특허 공보 제20050074763호; 국제 특허 출원 제WO/2007/126473호, 국제 특허 출원 제WO/2009/048631호 및 미국 특허 공보 제20080044406호(이의 각각은 본 명세서에 참조문헌으로 인용됨)에 개시되어 있다.
"투여하는"은, 본 개시내용의 화합물과 함께 사용될 때, 화합물을 표적 조직에 또는 이것으로 직접적으로 투여하는 것 또는 화합물을 환자 또는 다른 대상체에 전신으로 또는 국소로 투여하는 것을 의미한다.
용어 "동물"은 본 명세서에 사용되는 바대로 인간 및 비인간 척추동물, 예컨대 야생, 실험, 가축 및 농장 동물 및 애완동물을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
본 명세서에 사용되는 바대로, 용어 "대상체", "개인" 및 "환자"는 상호교환적으로 사용되고, 포유동물, 마우스, 래트, 다른 설치류, 토끼, 개, 고양이, 돼지, 소, 양, 말, 영장류, 비인간 영장류, 인간 등을 포함하는 임의의 동물을 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바대로, 용어 "접촉"은 2개의 펩타이드 또는 하나의 단백질과 또 다른 단백질 또는 다른 분자, 예컨대 소분자 사이의 분자간 상호작용, 예컨대 비공유 상호작용을 허용하는 거리 내에 있도록 분자(또는 더 높은 차수의 구조, 예컨대 세포 또는 세포막을 가지는 분자)를 함께 놓는 것 또는 이들을 조합하는 것을 의미한다. 몇몇 실시형태에서, 접촉은 합해지거나 접촉된 분자가 일반 용매 중에 혼합되고 자유로이 회합되게 하는 용액 중에 발생한다. 몇몇 실시형태에서, 접촉은 세포에서 또는 달리 세포 내에 또는 무세포 환경에서 발생할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 무세포 환경은 세포로부터 생성된 용해물이다. 몇몇 실시형태에서, 세포 용해물은 전체 세포 용해물, 핵 용해물, 세포질 용해물, 및 이들의 조합일 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 무세포 용해물은 핵 추출 및 단리로부터 얻은 용해물이고, 세포 집단의 핵은 세포로부터 제거되고 이후 용해된다. 몇몇 실시형태에서, 핵은 용해되지 않지만, 여전히 무세포 환경인 것으로 생각된다. 분자는 혼합, 예컨대 와류, 진탕 등에 의해 함께 놓일 수 있다.
용어 "개선한다"는 본 개시내용이 제공되거나 적용되거나 투여되는 조직의 특징 및/또는 물리적 속성을 변화시킨다는 것을 전달하도록 사용된다. 용어 "개선한다"는 질환 상태와 함께 또한 사용될 수 있어서, 질환 상태가 "개선"될 때, 질환 상태와 연관된 증상 또는 신체 특징은 줄거나, 감소하거나, 제거되거나, 지연되거나, 피해진다.
용어 "저해한다"는 소정의 결과 또는 과정의 봉쇄, 반감, 또는 반대의 결과 또는 과정의 회복을 포함한다. 본 개시내용의 화합물의 투여에 의한 예방 또는 치료의 면에서, "저해한다"는 증상에 대해 (부분적으로 또는 전체로) 보호하거나, 이의 발병을 지연시키거나, 증상을 경감시키거나, 질환, 병태 또는 장애에 대해 보호하거나, 이를 감소시키거나, 제거하는 것을 포함한다.
용어 "수송 결함을 저해하는 것"은 세포, 바람직하게는 뉴런 세포에서 가용성 Ab 올리고머 유도 막 수송 결함을 차단하는 능력을 의미한다. 수송 결함을 저해할 수 있는 화합물은 막 수송 검정에서 20μM 미만, 15μM 미만, 10μM 미만, 5μM 미만, 바람직하게는 1μM 미만의 EC50을 가지고, 추가로 예를 들어 실시예 6에 기재된 바대로 가용성 A베타 올리고머 유도 막 수송 결함의 A베타 올리고머 효과의 적어도 50%, 바람직하게는 적어도 60%, 더 바람직하게는 적어도 70%의 최대 저해를 할 수 있다.
용어 "log P"는 화합물의 분배 계수를 의미한다. 분배 계수는 2개의 용액 상, 예를 들어 옥탄올 및 물의 각각에서 탈이온화된 화합물의 농도의 비율이다. 이온화 가능한 용질 화합물의 분배 계수를 측정하기 위해, 수성 상의 pH는 화합물의 우세 형태가 탈이온화되도록 조정된다. 용매 중의 탈이온화된 용질 화합물의 농도의 비율의 로그는 log P라 불린다. log P는 친유성의 측정치이다. 예를 들어,
Figure 112016084530517-pct00073
본 명세서에서 다양한 위치에서, 본 개시내용의 화합물의 치환기는 기 또는 범위에 개시되어 있다. 본 개시내용의 실시형태가 이러한 기 및 범위의 구성원의 각각의 및 모든 개별적 하위조합을 포함하는 것으로 구체적으로 의도된다. 예를 들어, 용어 "C1-6 알킬"은 예를 들어 메틸 (C1 알킬), 에틸 (C2 알킬), C3 알킬, C4 알킬, C5 알킬, 및 C6 알킬, 및 예를 들어 C1-C2 알킬, C1-C3 알킬, C1-C4 알킬, C2-C3 알킬, C2-C4 알킬, C3-C6 알킬, C4-C5 알킬 및 C5-C6 알킬을 개별적으로 개시하도록 구체적으로 의도된다.
변수가 1회 초과 나타나는 본 개시내용의 화합물의 경우, 각각의 변수는 변수를 한정하는 마쿠쉬(Markush) 군으로부터 선택된 상이한 모이어티일 수 있다. 예를 들어, 구조가 동일한 화합물에 동시에 존재하는 2개의 R기를 가지는 것으로 기술될 때, 2개의 R기는 R에 대해 정의된 마쿠쉬 군으로부터 선택된 상이한 모이어티를 나타낼 수 있다.
용어 "n원"은, n이 정수일 때, 통상적으로 고리 형성 원자의 수가 n인 모이어티에서의 고리 형성 원자의 수를 기술한다. 예를 들어, 피리딘은 6원 헤테로아릴 고리의 예이고, 티오펜은 5원 헤테로아릴기의 예이다.
본 명세서에 사용되는 바대로, 용어 "알킬"은 선형 또는 분지형인 포화 탄화수소 기를 의미하도록 의도된다. 알킬기의 예는 메틸(Me), 에틸(Et), 프로필(예를 들어, n-프로필 및 아이소프로필), 뷰틸(예를 들어, n-뷰틸, 아이소뷰틸, t-뷰틸), 펜틸(예를 들어, n-펜틸, 아이소펜틸, 네오펜틸) 등을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 알킬기는 1개 내지 약 20개, 2개 내지 약 20개, 1개 내지 약 10개, 1개 내지 약 8개, 1개 내지 약 6개, 1개 내지 약 4개, 또는 1개 내지 약 3개의 탄소 원자를 함유할 수 있다. 용어 "알킬렌"은 2가 알킬 연결 기를 의미한다. 알킬렌의 예는 메틸렌(CH2)이다.
본 명세서에 사용되는 바대로, "알켄일"는 하나 이상의 이중 탄소-탄소 결합을 가지는 알킬기를 의미한다. 알켄일기의 예는 에테닐, 프로페닐, 사이클로헥세닐 등을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 용어 "알켄일레닐"은 2가 연결 알켄일기를 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바대로, "알킨일"은 하나 이상의 삼중 탄소-탄소 결합을 가지는 알킬기를 의미한다. 알킨일기의 예는 에티닐, 프로피닐 등을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 용어 "알킨일레닐"은 2가 연결 알킨일기를 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바대로, "할로알킬"은 F, Cl, Br 및/또는 I로부터 선택된 하나 이상의 할로겐 치환기를 가지는 알킬기를 의미한다. 할로알킬기의 예는 CF3, C2F5, CHF2, CCl3, CHCl2, C2Cl5, CH2CF3 등을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
본 명세서에 사용되는 바대로, "아릴"은 단환식 또는 다환식(예를 들어, 2개, 3개 또는 4개의 축합 고리를 가짐) 방향족 탄화수소, 예컨대, 예를 들어 페닐, 나프틸, 안트라세닐, 페난트레닐, 인다닐, 인데닐 등을 의미한다. 몇몇 실시형태에서, 아릴기는 6개 내지 약 20개의 탄소 원자를 가진다. 몇몇 실시형태에서, 아릴기는 6개 내지 약 10개의 탄소 원자를 가진다.
본 명세서에 사용되는 바대로, "사이클로알킬"은 20개 이하의 고리 형성 탄소 원자를 함유하는 고리화 알킬, 알켄일 및 알킨일기를 포함하는 비방향족 사이클릭 탄화수소를 의미한다. 사이클로알킬기는 단환식 또는 다환식(예를 들어, 2개, 3개 또는 4개의 축합 고리) 고리 시스템, 및 스피로 고리 시스템을 포함할 수 있다. 사이클로알킬기는 3개 내지 약 15개, 3개 내지 약 10개, 3개 내지 약 8개, 3개 내지 약 6개, 4개 내지 약 6개, 3개 내지 약 5개, 또는 5개 내지 약 6개의 고리 형성 탄소 원자를 함유할 수 있다. 사이클로알킬기의 고리 형성 탄소 원자는 옥소 또는 설피도에 의해 임의로 치환될 수 있다. 사이클로알킬기의 예는 사이클로프로필, 사이클로뷰틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 사이클로펜테닐, 사이클로헥세닐, 사이클로헥사다이에닐, 사이클로헵타트라이에닐, 노르보닐, 노르피닐, 노르카르닐, 아다만틸 등을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 또한, 사이클로알킬 고리에 축합된(즉, 이것과 공통하는 결합을 가지는) 하나 이상의 방향족 고리를 가지는 모이어티, 예를 들어 펜탄, 펜텐, 헥산 등의 벤조 또는 티에닐 유도체(예를 들어, 2,3-다이하이드로-1H-인덴-1-일, 또는 1H-인덴-2(3H)-온-1-일)가 사이클로알킬의 정의 내에 있다. 바람직하게는, "사이클로알킬"은 20개 이하의 고리 형성 탄소 원자를 함유하는 고리화 알킬기를 의미한다. 사이클로알킬의 예는 바람직하게는 사이클로프로필, 사이클로뷰틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 아다만틸 등을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바대로, "헤테로아릴"기는 20개 이하의 고리 형성 원자를 가지고 적어도 하나의 이종원자 고리 구성원(고리 형성 원자), 예컨대 황, 산소 또는 질소를 가지는 방향족 헤테로사이클을 의미한다. 몇몇 실시형태에서, 헤테로아릴기는 황, 산소 및 질소로부터 각각 독립적으로 선택된 적어도 하나 이상의 이종원자 고리 형성 원자를 가진다. 헤테로아릴기는 단환식 및 다환식(예를 들어, 2개, 3개 또는 4개의 축합 고리를 가짐) 시스템을 포함한다. 헤테로아릴기의 예는 제한 없이 피리딜, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 트라이아지닐, 퓨릴, 퀴놀릴, 아이소퀴놀릴, 티에닐, 이미다졸릴, 티아졸릴, 인돌릴, 피릴, 옥사졸릴, 벤조퓨릴, 벤조티에닐, 벤즈티아졸릴, 아이속사졸릴, 피라졸릴, 트라이아졸릴, 테트라졸릴, 인다졸릴, 1,2,4-티아다이아졸릴, 아이소티아졸릴, 벤조티에닐, 퓨리닐, 카바졸릴, 벤즈이미다졸릴, 인돌리닐 등을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 헤테로아릴기는 고리 형성 원자로서 1개 내지 약 20개의 탄소 원자, 추가의 실시형태에서 약 1개 내지 약 5개, 약 1개 내지 약 4개, 약 1개 내지 약 3개, 약 1개 내지 약 2개의 탄소 원자를 가진다. 몇몇 실시형태에서, 헤테로아릴기는 3개 내지 약 14개, 3개 내지 약 7개, 또는 5개 내지 6개의 고리 형성 원자를 함유한다. 몇몇 실시형태에서, 헤테로아릴기는 1개 내지 약 4개, 1개 내지 약 3개, 또는 1개 내지 2개의 이종원자를 가진다.
본 명세서에 사용되는 바대로, "헤테로사이클로알킬"은 고리화 알킬, 알켄일 및 알킨일기를 포함하는 20개 이하의 고리 형성 원자를 가지는 비방향족 헤테로사이클을 의미하고, 여기서 고리 형성 탄소 원자 중 하나 이상은 이종원자, 예컨대 O, N 또는 S 원자에 의해 대체된다. 헤테로사이클로알킬기는 단환식 또는 다환식(예를 들어, 축합 및 스피로 시스템 둘 다)일 수 있다. "헤테로사이클로알킬"기의 예는 몰폴리노, 티오몰폴리노, 피페라지닐, 테트라하이드로퓨라닐, 테트라하이드로티에닐, 2,3-다이하이드로벤조퓨릴, 1,3-벤조다이옥솔, 벤조-1,4-다이옥산, 피페리디닐, 피롤리디닐, 아이속사졸리디닐, 아이소티아졸리디닐, 피라졸리디닐, 옥사졸리디닐, 티아졸리디닐, 이미다졸리디닐, 피롤리딘-2-온-3-일 등을 포함한다. 헤테로사이클로알킬기의 고리 형성 탄소 원자 및 이종원자는 옥소 또는 설피도에 의해 임의로 치환될 수 있다. 예를 들어, 고리 형성 S 원자는 1개 또는 2개의 옥소에 의해 치환될 수 있다[즉, S(O) 또는 S(O)2를 형성한다]. 또 다른 예의 경우, 고리 형성 C 원자는 옥소에 의해 치환될 수 있다(즉, 카보닐을 형성한다). 또한, 비방향족 헤테로사이클릭 고리에 축합된(즉, 이것과 공통하는 결합을 가지는) 하나 이상의 방향족 고리를 가지는 모이어티, 예를 들어 헤테로사이클의 피리디닐, 티오페닐, 프탈이미딜, 나프탈이미딜 및 벤조 유도체, 예컨대 인돌린, 아이소인돌린, 아이소인돌린-1-온-3-일, 4,5,6,7-테트라하이드로티에노[2,3-c]피리딘-5-일, 5,6-다이하이드로티에노[2,3-c]피리딘-7(4H)-온-5-일 및 3,4-다이하이드로아이소퀴놀린-1(2H)-온-3일기가 헤테로사이클로알킬의 정의 내에 포함된다. 헤테로사이클로알킬기의 고리 형성 탄소 원자 및 이종원자는 옥소 또는 설피도에 의해 임의로 치환될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 헤테로사이클로알킬기는 1개 내지 약 20개의 탄소 원자, 추가의 실시형태에서 약 3개 내지 약 20개의 탄소 원자를 가진다. 몇몇 실시형태에서, 헤테로사이클로알킬기는 3개 내지 약 14개, 3개 내지 약 7개, 또는 5개 내지 6개의 고리 형성 원자를 함유한다. 몇몇 실시형태에서, 헤테로사이클로알킬기는 1개 내지 약 4개, 1개 내지 약 3개, 또는 1개 내지 2개의 이종원자를 가진다. 몇몇 실시형태에서, 헤테로사이클로알킬기는 0 내지 3개의 이중 결합을 함유한다. 몇몇 실시형태에서, 헤테로사이클로알킬기는 0 내지 2개의 삼중 결합을 함유한다.
본 명세서에 사용되는 바대로, "할로" 또는 "할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도를 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바대로, "알콕시"는 -O-알킬기를 의미한다. 알콕시기의 예는 메톡시, 에톡시, 프로폭시(예를 들어, n-프로폭시 및 아이소프로폭시), t-뷰톡시 등을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바대로, "할로알콕시"는 -O-할로알킬기를 의미한다. 할로알콕시기의 예는 OCF3이다. 본 명세서에 사용되는 바대로, "트라이할로메톡시"는 3개의 할로겐 치환기를 가지는 메톡시기를 의미한다. 트라이할로메톡시기의 예는 -OCF3, -OCClF2, -OCCl3 등을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
본 명세서에 사용되는 바대로, "아릴알킬"은 아릴에 의해 치환된 C1 -6 알킬을 의미하고, "사이클로알킬알킬"은 사이클로알킬에 의해 치환된 C1 -6 알킬을 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바대로, "헤테로아릴알킬"은 헤테로아릴기에 의해 치환된 C1 -6 알킬기를 의미하고, "헤테로사이클로알킬알킬"은 헤테로사이클로알킬에 의해 치환된 C1 -6 알킬을 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바대로, "아미노"는 NH2를 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바대로, "알킬아미노"는 알킬기에 의해 치환된 아미노기를 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바대로, "다이알킬아미노"는 2개의 알킬기에 의해 치환된 아미노기를 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바대로, C(O)는 C(=O)를 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바대로, 용어 "임의로 치환된"은 치환이 임의적이고 따라서 비치환된 및 치환된 원자 및 모이어티 둘 다를 포함한다는 것을 의미한다. "치환된" 원자 또는 모이어티는 지정된 원자 또는 모이어티에서의 임의의 수소가 표시된 치환기 기로부터의 선택에 의해 대체될 수 있되, 단 지정된 원자 또는 모이어티의 일반 원자가가 초과하지 않고, 치환이 안정한 화합물을 생성시킨다는 것을 나타낸다. 예를 들어, 메틸기(즉, CH3)가 임의로 치환되면, 탄소 원자에서의 3개의 수소 원자가 표시된 치환기 기에 의해 대체될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바대로, "아밀로이드 베타 효과", 예를 들어 "비치사 아밀로이드 베타 효과", 또는 "A베타 올리고머 효과"는 A베타 종과 접촉하는 세포에 대한 효과, 특히 비치사 효과를 의미한다. 예를 들어, 뉴런 세포가 가용성 아밀로이드-베타("A베타") 올리고머와 접촉할 때, 올리고머가 실험실내 뉴런 세포의 하위집단에서 시냅스의 하위집단에 결합하는 것으로 밝혀졌다. 이 결합은 예를 들어 실험실내 A베타 올리고머 결합을 측정하는 검정에서 정량화될 수 있다. A베타 종의 또 다른 보고된 효과는 인간 해마에서 약 18%인 것으로 보고되고(Scheff et al, 2007), (예를 들어, 시냅스 수를 측정하는 검정에서) 정량화될 수 있는 시냅스 수의 감소이다. 또 다른 예로서, 뉴런 세포가 아밀로이드-베타("A베타")가 올리고머와 접촉할 때, 막 수송이 조절되고, 막 수송의 변경이 이어지는 것으로 밝혀졌다. 이 비정상은 MTT 검정(이것으로 제한되지는 않음)을 포함하는 많은 검정에서 가시화될 수 있다. 예를 들어, 황색의 테트라졸륨염은 세포에 의해 세포내이입되고, 염은 엔도솜 경로에서 소포(vesicle) 내에 위치한 효소에 의해 불용성의 자주색 포마진으로 환원된다. 자주색 포마진의 수준은 배양물 중의 활성으로 대사 가능한 세포의 수의 반영이고, 포마진의 양의 감소는 배양물 중의 세포사 또는 대사 독성의 측정치로서 취해진다. 황색의 테트라졸륨염과 접촉하는 세포가 현미경을 통해 관찰될 때, 자주색 포마진은 세포를 충전하는 세포내 소포에서 처음에 보인다. 시간이 지나면서, 소포은 세포외유출되고, 불용성 포마진이 수성 매질 환경에 노출되면서 포마진은 혈장 막의 외부 표면에서 침형 결정으로서 침전된다. A베타 종의 훨씬 다른 효과는 생체내 동물 모델을 이용하여 검정에서 검출될 수 있는 인지 감소, 예컨대 새로운 기억을 형성하는 능력의 감소 및 기억 상실을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, A베타 효과는 예를 들어 실험실내 검정, 예컨대 막 수송 검정, 또는 시냅스 손실 검정에서 볼 수 있는 것처럼 A베타 올리고머 유도 시냅스 기능이상, 또는 카스파제-3의 A베타 올리고머 매개 시그마-2 수용체 활성화, 또는 A베타 유도 뉴런 기능이상, 장기간 강화(LTP)의 A베타 매개 감소, 또는 거동 검정에서의 또는 이를 필요로 하는 환자에서의 인지 감소로부터 선택된다.
몇몇 실시형태에서, 시험 화합물은 음성 대조군과 비교하여 약 10% 초과, 바람직하게는 15% 초과, 바람직하게는 20% 초과로 뉴런 세포에서 가용성 A베타 올리고머 종과 연관된 효과를 저해할 수 있을 때 인지 감소 또는 이와 연관된 질환을 치료하기에 효과적인 것으로 말해진다. 몇몇 실시형태에서, 시험 물질은 양성 대조군과 비교하여 약 10% 초과, 바람직하게는 15% 초과, 바람직하게는 20% 초과로 아밀로이드 전구체 단백질 매개 효과의 처리된 생성물을 저해할 수 있을 때 효과적인 것으로 말해진다. 예를 들어, 하기 실시예에 기재된 것처럼, 오직 18%만큼의 A베타 올리고머 결합의 저해는 시냅스 감소를 완전히 저해한다. 예를 들어, 도 3C 및 도 3D를 참조한다. 본 명세서가 A베타 종의 비치사 효과, 예컨대 뉴런 대사의 비정상 및 시냅스 수 감소의 저해를 초점으로 하지만, 인지 기능과 상관되고 게다가 시간이 지남에 따라 (비치료 대상체과 비교하여) 아밀로이드 병리학의 하향 측정 가능한 증상, 특히 임상 증상, 예컨대 1) 아밀로이드 조영제, 예컨대 풀루오르베타피르, PittB 또는 임의의 다른 조영제에 의해 측정되는 피브릴 또는 플라크(plaque) 축적, 2) FDG-PET에 의해 검출된 글루코스 대사저하에 의해 측정되는 시냅스 손실 또는 세포사, 또는 3) 영상화에 의해 검출 가능한 뇌 또는 신체에서의 단백질 발현 또는 대사물질 양 또는 ELISA에 의해 환자로부터 얻은 뇌척수액, 뇌 생검 또는 혈장에서의 단백질/대사물질 검출의 변화, 예컨대, ELISA에 의해 측정된 A베타 42, 포스포릴화 타우(tau), 전체 타우의 수준 및 또는 비율의 변화, 또는 ELISA 패널에서 검출 가능한 단백질 발현 변화의 패턴(참조문헌[Wyss-Coray T. et al. Modeling of pathological traits in Alzheimer's disease based on systemic extracellular signaling proteome. Mol Cell Proteomics 2011 Jul 8](본 명세서에 그 전문이 참조문헌으로 인용됨) 참조), 4) MRI에 의해 검출 가능한 혈관 부종 또는 미세출혈 및 영상화 기법에 의해 검출 가능한 임의의 다른 증상의 존재에 의해 측정된 뇌 혈관 이상, 및 5) 임의의 투여된 인지 시험, 예컨대 ADAS-Cog, MMSE, CBIC 또는 임의의 다른 인지 시험 기구에 의해 측정된 인지 감소를 감소시키는 것으로 밝혀졌다.
본 명세서에 사용되는 바대로, 용어 "뉴런 세포"는 단일 세포 또는 세포의 집단을 의미하도록 사용될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 뉴런 세포는 1차 뉴런 세포이다. 몇몇 실시형태에서, 뉴런 세포는 불활화된 또는 형질전환된 뉴런 세포 또는 줄기 세포이다. 1차 뉴런 세포는 다른 유형의 뉴런 세포, 예컨대 신경교 세포로 분화할 수 없는 뉴런 세포이다. 줄기 세포는 뉴런 및 다른 유형의 뉴런 세포, 예컨대 신경교로 분화할 수 있는 것이다. 몇몇 실시형태에서, 검정은 신경교 세포가 없는 적어도 하나의 뉴런 세포를 포함하는 조성물을 이용한다. 몇몇 실시형태에서, 조성물은 A베타를 내재화하고 축적하는 것으로 공지된 신경교 세포를 약 30% 미만, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% 또는 1% 포함한다. 1차 뉴런 세포는 동물의 뇌의 임의의 부위로부터 유래할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 뉴런 세포는 해마 또는 피질 세포이다. 신경교 세포의 존재는 임의의 방법에 의해 결정될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 신경교 세포는 GFAP의 존재에 의해 검출되고, 뉴런은 MAP2에 지향된 항체에 의해 양성으로 염색함으로써 검출될 수 있다.
구절 "약제학적으로 허용 가능한"은 안전하고 비독성으로 것으로 일반적으로 생각되는 분자 집합체 및 조성물을 의미한다. 특히, 본 개시내용의 약제학적 조성물에서 사용되는 약제학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 다른 부형제는 환자에게 투여될 때 생리학으로 관용성이고, 다른 성분과 상용성이고, 통상적으로 알레르기 또는 유사한 뜻밖의 반응(예를 들어, 위 연동, 현훈 등)을 생성하지 않는다. 바람직하게는, 본 명세서에 사용되는 바대로, 용어 "약제학적으로 허용 가능한"은 동물, 더 특히 인간에서 사용에 대해 연방정부 또는 주정부의 규제 기관에 의해 승인되거나 미국 약전 또는 다른 일반적으로 인정된 약전에 수록된다는 것을 의미한다. 구절 "약제학적으로 허용 가능한 염(들)"은, 본 명세서에 사용되는 바대로, 포유동물에서 사용하기에 안전하고 효과적이며, 원하는 생물학적 활성을 보유하는 본 개시내용의 화합물의 염을 포함한다. 약제학적으로 허용 가능한 염은 본 개시내용의 화합물 또는 본 개시내용의 방법에 따라 확인된 화합물에 존재하는 산성 또는 염기성 기의 염을 포함한다. 약제학적으로 허용 가능한 산 부가염은 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 하이드로아이오다이드, 니트레이트, 설페이트, 바이설페이트, 포스페이트, 산 포스페이트, 아이소니코티네이트, 아세테이트, 락테이트, 살리실레이트, 시트레이트, 타르트레이트, 판토테네이트, 바이타르트레이트, 아스코르베이트, 숙시네이트, 말레에이트, 겐티시네이트, 퓨마레이트, 글루코네이트, 글루카로네이트, 사카레이트, 폼메이트, 벤조에이트, 글루타메이트, 메탄설포네이트, 에탄설포네이트, 벤젠설포네이트, p-톨루엔설포네이트 및 파모에이트(즉, 1,1'-메틸렌-비스-(2-하이드록시-3-나프토에이트)) 염을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 본 개시내용의 소정의 화합물은 다양한 아미노산과 약제학적으로 허용 가능한 염을 형성할 수 있다. 적합한 염기 염은 알루미늄, 칼슘, 리튬, 마그네슘, 칼륨, 나트륨, 아연, 철 및 다이에탄올아민 염을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 약제학적으로 허용 가능한 염기 부가염은 또한 아민, 예컨대 유기 아민에 의해 형성된다. 적합한 아민의 예는 N,N'-다이벤질에틸렌다이아민, 클로로프로카인, 콜린, 다이에탄올아민, 다이사이클로헥실아민, 에틸렌다이아민, N-메틸글루카민 및 프로카인이다.
본 명세서에 사용되는 바대로, 용어 "치료제"는 대상체의 원치않는 병태 또는 질환을 치료하거나, 싸우거나, 경감시키거나, 보호하거나 개선하기 위해 사용되는 물질을 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바대로, 용어 "유효량"은 특정한 장애 또는 병리학적 과정의 적어도 하나의 증상 또는 매개변수의 측정 가능한 저해를 발생시키는 양을 의미한다. 예를 들어, A베타 올리고머의 존재 하에 측정 가능하게 더 낮은 시냅스 감소를 제공하는 본 개시내용의 시그마-2 리간드의 양은 아밀로이드 병리학의 임상 증상이 적어도 즉시 변경되지 않더라도 병리학적 과정을 감소시킬 수 있으므로 유효량으로서 자격 주어진다.
본 개시내용의 화합물 또는 조성물의 "치료학적 유효량" 또는 "유효량"은 임의의 의학 치료에 적용 가능한 합당한 이익/위험 비율로 치료되는 대상체에 치료학적 효과를 부여하는 미리 결정된 양이다. 치료학적 효과는 객관적(즉, 몇몇 시험 또는 마커에 의해 측정 가능) 또는 주관적(즉, 대상체가 효과의 표시를 제공하거나 효과를 느끼거나, 의사가 변화를 관찰)일 수 있다. 본 개시내용의 화합물의 유효량은 광범위하게 약 0.01㎎/㎏ 내지 약 500㎎/㎏, 약 0.1㎎/㎏ 내지 약 400㎎/㎏, 약 1㎎/㎏ 내지 약 300㎎/㎏, 약 0.05 내지 약 20㎎/㎏, 약 0.1㎎/㎏ 내지 약 10㎎/㎏, 또는 약 10㎎/㎏ 내지 약 100㎎/㎏ 범위일 수 있다. 본 명세서에 고려되는 효과는 적절한 바대로 의학 치료학적 및/또는 예방학적 치료 둘 다를 포함한다. 치료학적 및/또는 예방학적 효과를 얻기 위해 본 개시내용에 따라 투여된 화합물의 특정한 용량은 물론 예를 들어 투여된 화합물, 투여 경로, 다른 활성 성분의 동시투여, 치료되는 병태, 사용된 특정한 화합물의 활성, 사용된 특정한 조성물, 환자의 연령, 체중, 일반 건강, 성별 및 식이; 사용된 특정한 화합물의 투여 시간, 투여 경로 및 배설 속도 및 치료 기간을 포함하는 경우를 둘러싼 특정한 상황에 의해 결정될 것이고; 투여된 유효량은 상기 관련 상황 및 충분한 의학적 판단의 행사의 견지에서 의사에 의해 결정될 것이다. 본 개시내용의 화합물의 치료학적 유효량은 통상적으로, 생리학적으로 관용성인 부형제 조성물 중에 투여될 때, 효과적인 전신 농도 또는 조직에서의 국소 농도를 달성하기에 충분한 양이다. 단일 또는 분할 용량으로 인간 또는 다른 동물에게 투여되는 본 개시내용의 화합물의 전체 일일 용량은 예를 들어 매일 0.01㎎/㎏ 내지 약 500㎎/㎏, 약 0.1㎎/㎏ 내지 약 400㎎/㎏, 약 1㎎/㎏ 내지 약 300㎎/㎏, 약 10㎎/㎏ 내지 약 100㎎/㎏, 또는 더 일반적으로 0.1 내지 25㎎/㎏(체중)의 양일 수 있다. 단일 용량 조성물은 이러한 양 또는 일일 용량을 구성하는 이의 약수를 함유할 수 있다. 일반적으로, 본 개시내용에 따른 치료 섭생은 이러한 치료를 필요로 하는 환자에 대한 투여를 포함하고, 단일 또는 다수의 용량으로 매일 약 1㎎ 내지 약 5000㎎, 10㎎ 내지 약 2000㎎의 화합물(들), 20 내지 1000㎎, 바람직하게는 20 내지 500㎎, 가장 바람직하게는 약 50㎎의 화학식 I 및/또는 화학식 II에 따른 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 보통 함유할 것이다.
용어 "치료한다", "치료된", 또는 "치료하는"은 본 명세서에 사용되는 바대로 치료학적 치료 및 예방학적 또는 예방적 조치 둘 다를 의미하고, 목적은 원치않는 생리학적 조건, 장애 또는 질환에 대해 (부분적으로 또는 전체로) 보호하거나 이들을 느리게 하거나(예를 들어, 이들의 발병을 감소시키거나 연기하거나), 비정상을 가지거나 비정상이 되는 매개변수, 값, 기능 또는 결과의 감소에서 유리한 또는 원하는 임상 결과, 예컨대 부분 또는 전체 복원 또는 저해를 얻는 것이다. 본 개시내용의 목적을 위해, 유리한 또는 원하는 임상 결과는 증상의 완화; 병태, 장애 또는 질환의 발생의 정도 또는 활력 또는 속도의 감소; 병태, 장애 또는 질환의 상태의 안정화(즉, 비악화); 병태, 장애 또는 질환의 발병의 지연 또는 이들의 느려짐; 병태, 장애 또는 질환 상태의 경감; 및 (부분 또는 완전이든) 관해, 실제 임상 증상의 즉각적 감소로 번역되는지 아닌지, 또는 병태, 장애 또는 질환의 증대 또는 개선을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 치료는 과도한 부작용 수준 없이 임상적으로 유의적인 반응을 발생시키도록 추구한다. 치료는 또한 치료를 받지 않는 경우 예상된 생존율과 비교하여 생존율을 연장하는 것을 포함한다.
일반적으로 말해서, 용어 "조직"은 특정한 기능의 수행에서 통합된 유사하게 특수화된 세포의 임의의 응집을 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바대로, "인지 감소"는 동물의 인지 기능의 임의의 부정적 변화일 수 있다. 예를 들어 인지 감소는 기억 상실(예를 들어, 거동 기억 상실), 새로운 기억 획득의 실패, 혼란, 그릇된 판단, 성격 변화, 방향상실, 또는 임의의 이들의 조합을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 인지 감소를 치료하게 효과적인 화합물은 따라서 장기간 뉴런 강화(LTP) 또는 장기간 뉴런 저하(LTD) 또는 전기생리학적으로 측정되는 시냅스 가소성의 균형의 복원; 신경퇴행의 저해, 치료 및/또는 경감; 일반 아밀로이드증의 저해, 치료 및/또는 경감; 아밀로이드 생성, 아밀로이드 어셈블리, 아밀로이드 응집 및 아밀로이드 올리고머 결합 중 하나 이상의 저해, 치료, 경감; 뉴런 세포에서 A베타 종의 하나 이상의 비치사 효과(예컨대, 시냅스 손실 또는 기능이상 및 비정상 막 수송)의 저해, 치료 및/또는 경감; 및 임의의 이들의 조합에 의해 효과적일 수 있다. 추가적으로, 그 화합물은 알츠하이머병(AD), 예컨대 경증츠하이머병, 다운 증후군, 혈관 치매(뇌 아밀로이드 혈관증 및 뇌졸중), 루이소체를 동반한 치매, HIV 치매, 경증 인지 장애(Mild Cognitive Impairment: MCI); 연령 관련 기억 장애(Age-Associated Memory Impairment: AAMI); 연령 관련 인지 감소(Age-Related Cognitive Decline: ARCD), 전임상 알츠하이머병(preclinical Alzheimer's Disease: PCAD); 및 인지 장애가 없는 치매(Cognitive Impairment No Dementia: CIND)(이들로 제한되지는 않음)를 포함하는 치매(이것으로 제한되지는 않음)를 포함하는 A베타 연관 신경퇴행성 질환 및 장애를 치료하는 데 있어서 또한 효과적일 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바대로, 용어 "천연 리간드"는 생체내 단백질, 수용체, 막 지질 또는 다른 결합 파트너에 결합하거나, 실험실내 복제되는 대상체에서의 리간드를 의미한다. 천연 리간드는 기원이 합성일 수 있지만, 천연에서 대상체에서의 인간 중재 없이 또한 존재해야 한다. 예를 들어, A베타 올리고머는 인간 대상체에 존재하는 것으로 공지되어 있다. 따라서, 대상체에서 발견되는 A베타 올리고머는 천연 리간드로 생각될 것이다. 결합 파트너에 대한 A베타 올리고머의 결합은 재조합 또는 합성 기법을 이용하여 실험실내 복제될 수 있지만, A베타 올리고머는 A베타 올리고머가 어떻게 준비되고 제조되는지와 무관하게 여전히 천연 리간드로 생각될 것이다. 동일한 결합 파트너에 또한 결합할 수 있는 합성 소분자는 대상체에 존재하지 않는 경우 천연 리간드가 아니다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 아이소인돌린 화합물은 대상체에서 정상적으로 존재하지 않고, 따라서 천연 리간드로 생각되지 않을 것이다.
인간 아밀로이드 베타
아밀로이드 베타의 과생성 및 축척은 알츠하이머병의 병리학적 특징이다. 인간 아밀로이드 베타(A베타)는 알츠하이머병을 가지는 환자의 뇌에서 발견되는 불용성 아밀로이드 플라크 침착의 주성분이다. 플라크는 A베타의 섬유성 응집체로 이루어진다. 아밀로이드 베타 피브릴은 알츠하이머병의 진행된 상태와 연관된다.
초기 알츠하이머병(AD)의 인지 특징은 놀랍게 새로운 기억을 형성하지 못하는 것이다. 초기 기억 상실은 가용성 Aβ 올리고머에 의해 발생한 시냅스 실패라 생각된다. 이 올리고머는 시냅스 가소성에 대한 장기간 강화, 전통적 실험 패러다임을 차단하고, 이들은 AD 뇌 조직 및 형질전환 AD 모델에서 놀랍게도 상승한다. 초기 기억 상실이 뉴런 사멸 전에 시냅스 실패로부터 생기고, 시냅스 실패가 피브릴보다는 가용성 Aβ 올리고머의 작용으로부터 유래한다는 것이 가정된다. Lacor et al., Synaptic targeting by Alzheimer's -related amyloid β oligomers, J. Neurosci. 2004, 24(45):10191-10200.
A베타는, 뉴런의 시냅스에서 농축된 것으로 발견된, 통합 막 단백질, 아밀로이드 전구체 단백질(amyloid precursor protein: APP)의 절단 생성물이다. A베타의 가용성 형태는 알츠하이머 환자의 뇌 및 조직에 존재하고, 이의 존재는 질환 진행과 상관된다. Yu et al., 2009, Structural characterization of a soluble amyloid beta-peptide oligomer, Biochemistry, 48(9):1870-1877. 가용성 아밀로이드 β 올리고머는 학습 및 기억을 차단하는 뉴런 시냅스의 변화를 유도하는 것으로 입증되었다.
더 작은, 가용성 Aβ 올리고머는 정상 시냅스 가소성에 중요한 다수의 신호전달 경로를 방해하여서, 궁극적으로 척추 및 시냅스 손실을 발생시킨다. Selkoe et al., 2008, Soluble oligomers of the amyloid beta-protein impair synaptic plasticity and behavior, Behav Brain Res 192(1): 106-113. 알츠하이머가 시작하고 시냅스 가소성 질환으로서 계속된다.
가용성 Aβ 올리고머의 존재는 예비 알츠하이머병 뇌에서 초기 인지 감소에 책임이 있는 것으로 생각된다. 아밀로이드 베타 올리고머가 뉴런 시냅스에서 결합하고 시그마-2 수용체가 뉴런 및 신경교에서 상당한 양으로 존재하는 것으로 공지되어 있다.
시그마-2 수용체
시그마 수용체는 조직 및 상태 연관 방식으로 여러 명확한 단백질 신호전달 복합체에 참여하는 다중기능적 어댑터/샤페론 단백질이다. 시그마-2 수용체는 낮은 수준으로 뇌 및 다양한 말초 조직에서 발현된다. (Walker et al., 1990 Sigma receptors: biology and function. Pharmacol. Rev. 42:355-402). 시그마-2 수용체는 인간 해마 및 피질에 존재한다. 시그마-2 수용체는 종양 세포 증식에 대한 바이오마커로서 또한 이전에 검증되었다. (Mach et al., Sigma-2 receptors as potential biomarkers of proliferation in breast cancer. Cancer Res. 57:156-161, 1997).
시그마-2 수용체는 많은 신호전달 경로, 예컨대 헴(heme) 결합, 사이토크롬 P450 대사, 콜레스테롤 합성, 프로게스테론 신호전달, 아폽토시스 및 막 수송에 연루된다. 오직 시그마 수용체 결합 부위/신호전달 경로의 하위집단이 AD에서 올리고머 신호전달과 관련된다. 시그마-2 수용체 넉아웃(knock-out)이 현재 이용 가능하지 않고, 시그마-2 서열에서의 인간 돌연변이는 신경퇴행 상황에서 연구되지 않았다.
시그마-2 수용체는 래트 간에서 시그마-2 수용체를 비가역적으로 표지하는 광친화도 프로브 WC-21의 사용에 의해 래트 간에서 프로게스테론 수용체 막 성분 1(PGRMC1)로서 최근에 확인되었다. Xu et al. Identification of the PGRMC1 protein complex as the putative sigma-2 receptor binding site. Nature Communications 2, article number 380, July 5, 2011(본 명세서에 참조문헌으로 인용됨). PGRMC1(프로게스테론 수용체 막 성분 1)은 2011년 8월에 Xu 등에 의해 시그마-2 수용체 활성의 중요한 25kDa 성분으로서 확인되었다. PGRMC1은 시그마-1 단백질에 상동성을 갖지 않는 단일 막관통 단백질이고; 패밀리 구성원은 PGRMC2 및 네우데신을 포함한다. PGRMC1은 사이토크롬 b5 헴 결합 도메인을 함유한다. PGRMC1은 S1 단백질에 상동성을 갖지 않는 단일 막관통 단백질이고; 패밀리 구성원은 PGRMC2 및 네우데신을 포함한다. PGRMC1은 사이토크롬 b5 헴 결합 도메인을 함유한다. 내인성 PGRMC1 리간드는 프로게스테론/스테로이드, 콜레스테롤 대사물질, 글루코코르티코이드 및 헴을 포함한다. PGRMC1은 상이한 하위세포 위치에서 상이한 단백질 복합체와 연관된 샤페론/어댑터로서 작용한다(Cahill 2007. Progesterone receptor membrane component 1: an integrative review. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 105:16-36). PGRMC1은 감소한 활성으로 헴에 결합하고, CYP450 단백질과 복합체 형성하고(조절된 산화환원 반응), PAIRBP1과 회합하고, 아폽토시스의 프로게스테론 차단을 매개하고, 낮은 콜레스테롤에 반응하여 SRE 관련 유전자 전사를 유도하기 위해 Insig-1 및 SCAP와 회합한다. 씨. 엘레간스(C. elegans) 동족체 VEM1은 UNC-40/DCC와 회합하여 액손 가이던스를 매개한다. PGRMC1은 2개의 SH2 표적 서열, SH3 표적 서열, 티로신 키나제 부위, 2개의 호산성 키나제 부위(CK2), 및 ERK1 및 PDK1에 대한 공통 결합 부위를 함유한다. PGRMC1은 막 수송(소포 수송, 칼베올린 매개 피트의 클라트린 의존적 세포내이입)에 관여된 여러 ITAM 서열을 함유한다.
시그마-2 수용체 치료제는 AD의 치료를 위해서가 아니라 다른 CNS 적응증을 위한 인간 II상 임상 실험에 도달하였다. 많은 시그마-2 수용체 리간드는 매우 선택적이 아니고, 다른 비시그마 CNS 수용체에 대해 고친화도를 가진다. 예를 들어, Cyr-101/MT-210(Cyrenaic Pharmaceuticals; Mitsubishi)은 조현병에 대한 IIa상 임상 실험에서 시그마-2 수용체 길항제이지만, 5HT2a, ADRA1 및 히스타민 H1에서 다수의 다른 수용체 상호작용을 가진다. 시라메신(Lundbeck, 포레스트 Lu28179)은 불안에 대해 임상 실험에 있었지만 중단된 시그마-2 수용체 효현제이다. 시그마-1 수용체 리간드는 다양한 CNS 적응증에 대해 임상 실험에 있다. 쿠타메신 다이하이드로클로라이드(AGY SA4503, M's Science Corp.)는 뇌졸중에 대해 II상 임상 실험에 있고, 우울증에 대해 II상 실험에 있는 시그마-1 수용체 효현제이다. 아나벡스(Anavex) 2-73은 M2/3 길항제로서 무스카린 콜린성 수용체에서 또한 작용하는 시그마-1 수용체 효현제인, M1 효현제이고, 다양한 이온 채널(NMDAR, Na+, Ca++)과 관련하여 길항제이다. 아나벡스 2-73은 AD 및 경증 인지 장애를 가지는 환자에 대해 IIa상 임상 실험에 진입했다. AD에서 매우 선택적인 시그마-2 수용체 리간드 치료제에 의한 이전의 임상 실험이 없었다.
시그마-2 길항제
이론에 구속되지 않으면서, 시그마-2 수용체가 뉴런에서 A베타 올리고머에 대한 수용체라는 것이 제안되어 있다. 다양한 수용체는 프리온 단백질, 인슐린 수용체, 베타 아드레날린 수용체 및 RAGE(진행된 당화반응 최종 생성물에 대한 수용체)를 포함하는 가용성 A베타 올리고머에 대해 문헌에 제안되어 있다.
Figure 112016084530517-pct00074
, J. et al, 2009, Nature, 457(7233): 1128-1132; Townsend, M. et al, J. Biol. Chem. 2007, 282:33305-33312; Sturchler, E. et al, 2008, J. Neurosci. 28(20):5149-5158. 실제로, 많은 조사자들은 A베타 올리고머가 하나 초과의 수용체 단백질에 결합할 수 있다고 믿는다. 이론에 구속됨이 없이, 본 명세서에 제시된 증거에 기초하여, 본 발명자들은 뉴런에 위치한 (배타적으로 필요하지 않은) A베타 올리고머에 대한 추가적인 수용체를 상정하였다.
이론에 구속됨이 없이, A베타 올리고머는 시그마 단백질 복합체에 결합하고 비정상 수송 및 시냅스 손실을 야기하는 시그마 수용체 효현제이다. 뉴런에서 이 상호작용 및/또는 시그마 수용체 기능을 길항시키는 고친화도 시그마-2 리간드가 A베타 올리고머와 경쟁하거나 달리 방해하고 뉴런 반응을 정상으로 복원시킨다는 것이 본 명세서에서 입증되었다. 이러한 리간드는 기능적 시그마-2 수용체 길항제라 생각되고, 이러한 또는 더 단순히 시그마-2 수용체 길항제 또는 시그마-2 길항제라 칭해진다.
몇몇 실시형태에서, 화학식 I 및/또는 화학식 II에 따른 시그마-2 수용체 길항제, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 가용성 Aβ 올리고머 유도 시냅스 손실을 저해하고, 막 수송 검정에서 가용성 Aβ 올리고머 유도 결함을 저해하고; 시그마-2 수용체에서 고친화도를 나타내는 것; 및 임의의 다른 비시그마 수용체와 비교하여 하나 이상의 시그마 수용체에 대해 높은 선택도를 가지는 것; 및 우수한 약물 유사 특성을 나타내는 것과 관련하여 뉴런 세포에서 기능성 길항제로서 작용한다.
몇몇 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 소정의 실험실내 검정 기준을 충족시키는 시그마-2 수용체 기능성 길항제는 본 명세서에 개시된 바와 같은 하나 이상의 관련 동물 거동 모델에서 거동 효율을 나타내거나, 거동 효율을 가지는 것으로 예측될 것이다. 몇몇 실시형태에서, 거동 효율은 10㎎/㎏ p.o. 이하에서 결정된다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 고친화도 시그마-2 수용체 리간드에 대한 거동 효율을 예측하는 실험실내 검정 플랫폼을 제공한다. 실험실내 검정 플랫폼에 따라, 리간드는 시그마-2 수용체에 고친화도로 결합하고; 뉴런에서 A베타 올리고머 유도 효과와 관련하여 기능성 길항제로서 작용하고; 중추 뉴런에서 A베타 올리고머 유도 시냅스 손실을 저해하거나 뉴런에 대한 A베타 올리고머 결합을 감소시켜 시냅스 손실을 저해하고; A베타 올리고머의 부재 하에 수송 또는 시냅스 수에 영향을 미치지 않는다. 실험실내 검정에서 활성의 이 패턴은 "치료학적 표현형"이라 칭한다. A베타 올리고머의 부재 하에 정상 기능에 영향을 미치지 않으면서 성숙 뉴런에서 A베타 올리고머 효과를 차단하는 시그마-2 수용체 길항제의 능력은 치료학적 표현형에 대한 기준을 충족시킨다. 치료학적 표현형을 가지는 선택적 시그마-2 길항제가 A베타 올리고머 유도 시냅스 기능이상을 차단할 수 있다는 것이 이제 개시된다.
몇몇 실시형태에서, 이를 필요로 하는 환자에서 적합한 A베타 올리고머 유도 시냅스 기능이상을 치료하기 위한 치료학적 후보물질로서 하기 특징을 또한 보유하는 치료학적 표현형을 가지는 고친화도 선택적 시그마-2 길항제가 제공된다: 시그마 수용체에서의 고친화도; 다른 비시그마 CNS 수용체와 비교하여 시그마 수용체에 대한 고선택도; 시그마-2 수용체에 대한 더 고친화도, 또는 예를 들어 시그마-2 및 시그마-1 수용체에서 규모의 차수 내에 필적하는 친화도; 중추 신경계에서 관련한 다른 수용체에 반대하여 시그마 수용체에 대한 선택도 및 우수한 약물 유사 특성. 약물 유사 특성은 허용되는 뇌 침투성(혈액 뇌 장벽을 횡단하는 능력), 혈장에서의 우수한 안정성 및 예를 들어 간 마이크로솜에 대한 노출에 의해 측정된 바와 같은 우수한 대사 안정성을 포함한다. 이론에 구속됨이 없이, 고친화도 시그마-2 수용체 길항제는 A베타 올리고머와 경쟁하고/하거나 알츠하이머병을 발생시키는 병리학적 시그마 수용체 신호전달을 중지시킨다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용의 길항제는 시그마-2 수용체에보다 시그마-1 수용체에 더 고친화도로 결합할 수 있지만, A베타 올리고머 유도 효과(A베타 효과)를 차단하거나 저해하는 것과 관련하여 기능적 뉴런 길항제로서 여전히 거동해야 한다.
몇몇 실시형태에서, 하기 특징을 또한 보유하는 치료학적 표현형을 가지는 시그마-2 길항제는 이를 필요로 하는 환자에서 A베타 올리고머 유도 시냅스 기능이상을 치료하기 위한 치료학적 후보물질로서 적합하다: 시그마 수용체에서의 고친화도; 다른 비시그마 CNS 수용체와 비교된 시그마 수용체에 대한 고선택도; 시그마-2 수용체에 대한 고친화도, 또는 시그마-2 및 시그마-1 수용체에서 필적하는 친화도; 및 우수한 약물 유사 특성. 약물 유사 특성은 높은 뇌 침투성, 혈장 안정성, 및 대사 안정성을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 결합 활성 연구에서, 기껏해야 약 600nM, 500nM, 400nM, 300nM, 200nM, 150nM, 100nM, 바람직하게는 기껏해야 약 75nM, 바람직하게는 기껏해야 약 60nM, 바람직하게는 기껏해야 약 40nM, 더 바람직하게는 기껏해야 10nM, 가장 바람직하게는 기껏해야 1nM의 IC50 또는 Ki 값은 시그마 수용체 결합 부위와 관련하여 높은 결합 친화도를 나타낸다.
몇몇 실시형태에서, 다른 비시그마 CNS 또는 표적 수용체와 비교하여 시그마 수용체에 대해 약 20배 초과, 30배, 50배, 70배 또는 바람직하게는 100배 초과의 선택도를 가지고, 뇌 침투성 및 우수한 대사 및/또는 혈장 안정성을 포함하는 우수한 약물 유사 특성을 가지고, 치료학적 표현형을 보유하는, 시그마-2 수용체에서 고친화도(바람직하게는 약 600nM 미만, 500nM, 400nM, 300nM, 200nM, 150nM, 100nM, 70nM, 60nM, 50nM, 30nM 또는 10nM의 Ki)를 가지는 시그마-2 수용체 길항제는 거동 효율을 가지는 것으로 예측되고, 이를 필요로 하는 환자에서 A베타 올리고머 유도 시냅스 기능이상을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바대로 용어 "뇌 침투성"은 혈액-뇌 장벽을 횡단하는 약물, 항체 또는 단편의 능력에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에서, 동물 약동학적(pK) 연구, 예를 들어 마우스 약동학적/혈액-뇌 장벽 연구는 뇌 침투성을 결정하고 예측하기 위해 사용될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 약물의 다양한 농도는 5일 동안 예를 들어 3, 10 및 30㎎/㎏에서, 예를 들어 p.o. 투여될 수 있고, 다양한 pK 특성은 예를 들어 동물 모델에서 측정된다. 몇몇 실시형태에서, 용량 관련 혈장 및 뇌 수준이 결정된다. 몇몇 실시형태에서, 뇌 Cmax는 100 초과, 300, 600, 1000, 1300, 1600, 또는 1900ng/㎖이다. 몇몇 실시형태에서 우수한 뇌 침투성은 0.1 초과, 0.3 초과, 0.5 초과, 0.7 초과, 0.8 초과, 0.9 초과, 바람직하게는 1 초과, 더 바람직하게는 2 초과, 5 초과, 또는 10 초과의 뇌/혈장 비율로서 정의된다. 다른 실시형태에서, 우수한 뇌 침투성은 예비 결정된 시간의 기간 후에 BBB를 횡단하는 투여된 용량의 약 0.1% 초과, 1%, 5%, 약 10% 초과, 바람직하게는 약 15% 초과로서 정의된다. 소정의 실시형태에서, 용량은 경구로(p.o.) 투여된다. 다른 실시형태에서, 용량은 pK 특성을 측정하기 전에 정맥내로(i.v.) 투여된다. 약동학적 검정 및 뇌 침투성은 실시예 7에 기재되어 있다.
본 명세서에 사용되는 바대로 용어 "혈장 안정성"은 예를 들어 효소, 예컨대 하이드롤라제 및 에스터라제에 의한 혈장 중의 화합물의 분해를 의미한다. 임의의 다양한 실험실내 검정을 이용할 수 있다. 약물은 다양한 시간 기간에 걸쳐 혈장 중에 항온처리된다. 각각의 시점에 남은 모 화합물(분석물질)의 백분율은 혈장 안정성을 반영한다. 불량한 안정성 특징은 낮은 생체이용률을 가지는 경향일 수 있다. 우수한 혈장 안정성은 30분 후 남은 50% 초과의 분석물질, 45분 후 남은 50% 초과의 분석물질, 바람직하게는 60분 후 남은 50% 초과의 분석물질로서 정의될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바대로 용어 "대사 안정성"은 제1 통과 대사(경구로 투여된 약물의 장 및 간 분해 또는 접합)에 살아남은 화합물의 능력을 의미한다. 이것은 마우스 또는 인간 간 마이크로솜에 대한 화합물의 노출에 의해 예를 들어 실험실내 평가될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 우수한 대사 안정성은 마우스 또는 인간 간 마이크로솜에 대한 화합물의 노출 시 5분 초과, 10분 초과, 15분 초과, 20분 초과, 바람직하게는 30분 초과의 t1/2를 의미한다. 몇몇 실시형태에서, 우수한 대사 안정성은 300㎕/분/㎎ 미만, 바람직하게는 200㎕/분/㎎ 미만, 더 바람직하게는 100㎕/분/㎎ 미만의 내재 청소율(Clint)을 의미한다.
몇몇 실시형태에서, 선행 기술의 소정의 화합물이 배제된다. 몇몇 실시형태에서, 표 1에 기재된 화합물은 WO 제2013/029057호 및/또는 WO 제2013/029060호(이의 각각은 본 명세서에 참조문헌으로 인용됨)에 개시되어 있고, 본 명세서에 제공된 조성물 또는 방법과 관련하여 부인된다.
Figure 112016084530517-pct00075
본 명세서에 제공된 아이소인돌린 화합물은 치료학적 표현형, 및 우수한 약물 유사 특성을 가지는 고친화도 선택적 시그마-2 기능성 길항제로서 작용하고, 따라서 A베타 올리고머 유도 시냅스 기능이상을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
소정의 실시형태에서, 시그마 수용체에 대한 높은 결합 친화도를 가지는 선택적 시그마-2 기능성 길항제로서 화학식 I의 아이소인돌린 화합물을 포함하는 조성물이 제공된다. 몇몇 실시형태에서, 시그마 수용체는 시그마-1 및 시그마-2 하위유형 둘 다를 포함한다. 문헌[Hellewell, S. B. and Bowen, W. D., Brain Res. 527: 224-253 (1990); 및 Wu, X.-Z. et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 257: 351-359 (1991)]을 참조한다. (거의 동일한 친화도를 가지는 부위 둘 다를 표지하는 3H-DTG에 대한) 시그마 부위 둘 다에 대한 추정상 리간드의 결합 친화도를 정량화하는 시그마 수용체 결합 검정은 문헌[Weber et al., Proc. Natl. Acad. Sci (USA) 83: 8784-8788 (1986)]에 의해 개시되어 있다. 대안적으로, [3H]펜토조신은 결합 검정에서 시그마-1 결합 부위를 선택적으로 표지하기 위해 사용될 수 있다. [3H]DTG 및 비표지된 (+)펜타조신의 혼합물은 결합 검정에서 시그마-2 부위를 선택적으로 표지하기 위해 사용된다. 본 개시내용은 또한 시그마-1 및 시그마-2 수용체에 대해 선택적이고 시그마-2 기능성 길항제로서 작용하는 소정의 리간드를 포함하는 조성물, 및 A베타 올리고머 유도 시냅스 기능이상을 치료하는 이 조성물의 용도에 관한 것이다. 2개의 시그마 수용체 하위유형 중 하나에 선택적인 이러한 리간드의 발견은 최소 부작용으로 중추 신경계 장애를 치료하는 데 있어서 효율적인 화합물을 확인하는 데 있어서 중요한 인자일 수 있다.
몇몇 실시형태에서, 화학식 (I)의 아이소인돌린 화합물은 시그마-2 길항제 활성, 시그마-2 수용체에 대한 고친화도, 및 가용성 A베타 올리고머 결합 또는 A베타 올리고머 유도 시냅스 기능이상을 차단하는 능력을 나타낸다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 길항제는 혈액-뇌 장벽을 횡단하는 능력을 증대시키도록 설계된다.
몇몇 실시형태에서, 특이적 시그마-2 수용체 길항제 화합물은 가용성 A베타 올리고머와 시그마-2 수용체 사이의 결합을 차단한다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 길항제 화합물은 시그마-2 수용체에 대한 고친화도를 나타낸다.
시그마-2 수용체 길항제로서의 선택을 위한 시그마-2 수용체 리간드
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용에서 사용하기 위한 시그마-2 수용체 길항제는 추가적인 선택 기준을 또한 충족시키는 시그마-2 수용체 리간드 화합물 중에서 선택된다. 추가적인 기준은 시그마-2 수용체 리간드 중에서 본 개시내용에서 사용하기 위한 시그마-2 수용체 길항제를 선택하도록 사용된다. 추가적인 선택 기준은 가용성 Aβ 올리고머 유도 시냅스 손실을 저해하고, 막 수송 검정에서의 가용성 Aβ 올리고머 유도 결함을 저해하는 것과 관련하여 뉴런 세포에서 기능성 길항제로서 작용하는 것; 임의의 다른 비시그마 수용체와 비교하여 하나 이상의 시그마 수용체에 대해 높은 선택도를 가지는 것; 시그마-2 수용체에서 고친화도를 나타내는 것; 및 우수한 뇌 침투성, 우수한 대사 안정성 및 우수한 혈장 안정성을 포함하는 우수한 약물 유사 특성을 나타내는 것을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 시그마-2 수용체 길항제는 추가적인 하기 특성 중 하나 이상을 나타내는 것에 기초하여 추가로 선택된다: A베타 올리고머의 부재 하의 수송 또는 시냅스 수에 영향을 미치지 않음; 뉴런 세포에서 카스파제-3 활성을 유도하지 않음; 시그마-2 수용체 효현제에 의한 카스파제-3 활성의 유도를 저해하는 것; 및/또는 시그마-2 수용체 효현제에 의해 발생한 뉴런 세포에서의 뉴런 독성에 대해 보호하거나 이를 감소시키는 것.
몇몇 실시형태에서, 추가의 선택 기준으로 처리되는 소정의 시그마-2 수용체 리간드 화합물은 본 명세서에 기재된 화합물로부터 선택되고, 본 명세서 또는 WO 제2011/014880호(출원 제PCT/US2010/044136호), WO 제2010/118055호(출원 제PCT/US2010/030130호), 출원 제PCT/US2011/026530호, WO 제2012/106426호(출원 제PCT/US2012/023483호), WO 제2013/029057호(출원 제PCT/US2012/052572호) 및 WO 제2013/029060호(출원 제PCT/US2012/052578호)(이들은 각각 본 명세서에 그 전문이 참조문헌으로 인용됨)에 기재된 방법에 따라 합성될 수 있다. 이 화합물을 제조하기 위한 추가적인 옵션은 하기 자세히 기재되어 있다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다:
Figure 112016084530517-pct00076
R1 및 R2는 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬 또는 CH2OR'로부터 선택되고; R'는 H 또는 C1-C6 알킬이며;
R3, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬, OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, O(C1-C6 알킬), OCF3, OCH2CH2OH, O(C1-C6 알킬)OH, O(C1-C6 할로알킬), F, Cl, Br, I, CF3, CN, NO2, NH2, C1-C6 할로알킬, C1-C6 하이드록시알킬, C1 -6 알콕시 C1 -6 알킬, 아릴, 헤테로아릴, C3 -7 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 알킬아릴, 헤테로아릴, CO2R', C(O)R', NH(C1 -4 알킬), N(C1 -4 알킬)2, NH(C3 -7 사이클로알킬), NHC(O)(C1 -4 알킬), CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)O(C1-4 알킬), OC(O)N(R')2, C(O)(C1 -4 알킬) 및 C(O)NH(C1-4 알킬)로부터 선택되고; n은 0, 1 또는 2이며; R'는 각각 독립적으로 H, CH3, CH2CH3, C3-C6 알킬, C1-C6 할로알킬; 또는 임의로 치환된 아릴, 알킬아릴, 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일, 몰폴리닐, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아릴, C1-6 알콕시, NH(C1-4 알킬) 또는 NH(C1-4 알킬)2이고, 임의의 치환된 기는 C1-C6 알킬 또는 C2-C7 아실로부터 선택되거나;
R3과 R4는, 이들이 부착된 C 원자와 함께, OH, 아미노, 할로, C1 -6 알킬, C1 -6 할로알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 할로알콕시, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환기에 의해 임의로 치환된 4원, 5원, 6원, 7원 또는 8원 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬을 형성하며, R3과 R4 또는 R4와 R5는 각각 독립적으로 결합, C, N, S 및 O로부터 선택되거나; R3과 R4는 함께 연결되어 -O-C1 -2 메틸렌-O-기를 형성하거나;
R4와 R5는, 이들이 부착된 C 원자와 함께, OH, 아미노, 할로, C1 -6 알킬, C1 -6 할로알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 할로알콕시, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환기에 의해 임의로 치환된 4원, 5원, 6원, 7원 또는 8원 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬을 형성하고, R3 및 R4 또는 R4 및 R5는 각각 독립적으로 결합, C, N, S 및 O로부터 선택되거나; R4와 R5는 함께 연결되어 -O-C1-2 메틸렌-O-기를 형성하며;
R7, R8, R9, R10 및 R11은 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬, OH, OCH3, OCH(CH3)2, OCH2CH(CH3)2, OC(CH3)3, O(C1-C6 알킬), OCF3, OCH2CH2OH, O(C1-C6 알킬)OH, O(C1-C6 할로알킬), F, Cl, Br, I, CF3, CN, NO2, NH2, C1-C6 할로알킬, C1-C6 하이드록시알킬, C1 -6 알콕시 C1 -6 알킬, 아릴, 헤테로아릴, C3 -7 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 알킬아릴, 헤테로아릴, CO2R', C(O)R', NH(C1 -4 알킬), N(C1 -4 알킬)2, NH(C3 -7 사이클로알킬), NHC(O)(C1 -4 알킬), CONR'2, NC(O)R', NS(O)nR', S(O)nNR'2, S(O)nR', C(O)O(C1-4 알킬), OC(O)N(R')2, C(O)(C1 -4 알킬) 및 C(O)NH(C1-4 알킬)로부터 선택되고; n은 0, 1 또는 2이며; R'는 각각 독립적으로 H, CH3, CH2CH3, C3-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, 아릴, 알킬아릴, 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일, 몰폴리닐, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아릴, C1 -6 알콕시, NH(C1-4 알킬) 또는 NH(C1-4 알킬)2이거나;
R7과 R8은, 이들이 부착된 N 또는 C 원자와 함께, OH, 아미노, 할로, C1 -6 알킬, C1 -6 할로알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 할로알콕시, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환기에 의해 임의로 치환된 4원, 5원, 6원, 7원 또는 8원 사이클로알킬, 아릴, 헤테로사이클로알킬 또는 헤테로아릴기를 형성하고, R9 및 R10은 각각 독립적으로 결합, C, N, S 및 O로부터 선택되거나; R7과 R8은 함께 연결되어 -O-C1 -2 메틸렌-O-기를 형성하거나;
R8과 R9는, 이들이 부착된 N 또는 C 원자와 함께, OH, 아미노, 할로, C1 -6 알킬, C1 -6 할로알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 할로알콕시, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환기에 의해 임의로 치환된 4원, 5원, 6원, 7원 또는 8원 사이클로알킬, 아릴, 헤테로사이클로알킬 또는 헤테로아릴기를 형성하며, R9 및 R10은 각각 독립적으로 결합, C, N, S 및 O로부터 선택되거나; R8과 R9는 함께 연결되어 -O-C1 -2 메틸렌-O-기를 형성하고;
O, C1 -6 알킬, C1 -6 할로알킬, 헤테로아릴, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클로알킬 및 사이클로알킬의 각각은 OH, 아미노, 할로, C1 -6 알킬, C1 -6 할로알킬, C1 -6 알콕시, C1 -6 할로알콕시, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환기에 의해 임의로 독립적으로 치환되며;
단, 하기 화합물은 배제된다:
Figure 112016084530517-pct00077
Figure 112016084530517-pct00078
Figure 112016084530517-pct00079
Figure 112016084530517-pct00080
.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 화학식 I의 화합물(여기서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, 및 R11은 상기 기재된 바와 같음)의 라세미 혼합물 또는 거울상이성질체를 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 단리된 화합물은 하기 화학식 I 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염에 따라 제공된다:
Figure 112016084530517-pct00081
식 중, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11은 본 명세서에 정의된 바와 같고, 단, R1, R3, R6, R7, R10 및 R11이 각각 H이고; R2가 CH3이고; R8이 OCH3 또는 Cl이고; R9가 OH 또는 Cl일 때; R4는 Cl 또는 CF3이 아니고, R5는 Cl 또는 CF3이 아니다.
다른 실시형태에서, 단리된 화합물, 또는 이의 조성물, 또는 이의 투여를 포함하는 방법은 하기 화학식 I 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염에 따라 제공된다:
Figure 112016084530517-pct00082
식 중, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11은 본 명세서에 정의된 바와 같고, 단, R1, R3, R6, R7, R10 및 R11이 각각 H이고; R2가 CH3이고; R8이 OCH3 또는 Cl이고; R9가 OH 또는 Cl이고; R4가 Cl 또는 CF3이고, R5가 Cl 또는 CF3인 화학식 I에 따른 화합물은 바람직한 화합물이 아니다.
또 다른 실시형태에서, 하기 화학식 I에 따른 화합물: 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 뉴런 세포에 대한 아밀로이드 베타 효과를 저해하기 위한 약제학적 조성물이 제공된다:
Figure 112016084530517-pct00083
식 중, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11은 본 명세서에 정의된 바와 같고, 단, R1, R3, R6, R7, R10 및 R11이 각각 H이고; R2가 CH3이고; R8이 OCH3 또는 Cl이고; R9가 OH 또는 Cl일 때; R4는 Cl 또는 CF3이 아니고, R5는 Cl 또는 CF3이 아니다.
또 다른 실시형태에서, 하기 화학식 I에 따른 선택적 시그마-2 수용체 길항제 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 유효량의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 뉴런 세포에서 아밀로이드 베타 효과를 저해하는 방법/용도가 제공되되, 화합물 또는 이의 염은 상기 세포에서 아밀로이드 베타 올리고머 결합을 저해하기에 효과적인 양으로 조성물 중에 존재한다:
Figure 112016084530517-pct00084
식 중, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11은 본 명세서에 정의된 바와 같고, 단, R1, R3, R6, R7, R10 및 R11이 각각 H이고; R2가 CH3이고; R8이 OCH3 또는 Cl이고; R9가 OH 또는 Cl일 때; R4는 Cl 또는 CF3이 아니고, R5는 Cl 또는 CF3이 아니다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 하기 화학식 II의 화합물의 라세미 혼합물 또는 거울상이성질체를 포함한다:
Figure 112016084530517-pct00085
식 중, R3, R4, R5, R6, R8 및 R9는 본 명세서에 기재된 바와 같다.
또 다른 실시형태에서, 하기 화학식 III에 따른 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:
Figure 112016084530517-pct00086
식 중, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R11은 본 명세서에 제공된 바와 같고,
Figure 112016084530517-pct00087
는 각각 독립적으로 단일, 이중 또는 삼중 결합으로부터 선택된다.
몇몇 양상에서, 화학식 III에 따른 화합물은
Figure 112016084530517-pct00088
또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로부터 선택된다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 화학식 I의 화합물의 라세미 혼합물 또는 거울상이성질체를 포함하고, 여기서, R3, R4, R5, R6, R8 및 R9는 본 명세서에 기재된 바와 같다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이고, 여기서, R8 및 R9는 OH, C1-6 알콕시 및 하이드록시 C1-6 알콕시로부터 독립적으로 선택된다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이고, 여기서, R8 및 R9는 OH 및 NH(C1 -4 알킬)로부터 독립적으로 선택된다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이고, 여기서, R8 및 R9는 H, 할로, C1-6 할로알킬 및 C1-6 할로알콕시로부터 독립적으로 선택된다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이고, 여기서, R8 및 R9는 각각 독립적으로 OH, 할로, C1-6 알콕시 및 C1-6 할로알콕시로부터 선택되고, R1 및 R2는 각각 독립적으로 C1-6 알킬이다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이고, 여기서, R1 및 R2는 각각 메틸이다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이고, 여기서, R1 및 R2 중 하나는 메틸이고, 다른 하나는 H이다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이고, 여기서, R8 및 R9는 각각 독립적으로 OH 및 C1 -6 알콕시로부터 선택되고, R1 및 R2는 각각 독립적으로 메틸이다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이고, 여기서, R8 및 R9는 H, 할로 및 C1-6 할로알킬로부터 독립적으로 선택되고, R1 및 R2는 각각 메틸이다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이고, 여기서, R8 및 R9는 각각 독립적으로 H, 할로 및 C1 -6 할로알킬로부터 선택된다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이고, 여기서, R7 및 R11은 각각 H이다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이고, 여기서, R3, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 H, 할로, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬 및 C1-6 알콕시로부터 선택된다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이고, 여기서, R3, R4 및 R5는 각각 독립적으로 H, 할로, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬 및 C1-6 알콕시로부터 선택된다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이고, 여기서, R3, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 H, 할로, S(O)nR', C(O)OR', C(O)N(R')2 및 C(O)R'로부터 선택되고; n은 2이며; R'는 각각 독립적으로 H, CH3, CH2CH3, C3-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, 또는 임의로 C1-C6 알킬 또는 C2-C7 아실 치환된 아릴, 알킬아릴, 피페라지닐, 피페리디닐, 몰폴리닐, 헤테로사이클로알킬 및 헤테로아릴이다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이고, 여기서, R3, R4 및 R5는 각각 독립적으로 H, 할로, S(O)nR' 및 C(O)R'로부터 선택되고; n은 2이며; R'는 각각 독립적으로 CH3, CH2CH3, C3-C6 알킬, 아릴, 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일 및 몰폴리닐-4-일이다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이고, 여기서, R3, R4 및 R5는 각각 독립적으로 H, 할로, S(O)nR' 및 C(O)R'로부터 선택되고; n은 2이며; R'는 각각 독립적으로 CH3, CH2CH3, C3-C6 알킬, 아릴, 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일 및 몰폴리닐-4-일이고; R8 및 R9는 각각 독립적으로 OH, 할로, C1 -6 알콕시 및 C1 -6 할로알콕시로부터 선택되며; R1 및 R2는 각각 메틸이다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이고, 여기서, R3과 R4 또는 R4와 R5는 이들이 부착된 C 원자와 함께 6원 사이클로알킬, 또는 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴 고리를 형성한다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이고, 여기서, R3 및 R4 또는 R4 및 R5는 O이고, 함께 연결되어 -O-C1-2 메틸렌-O-기를 형성한다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이고, 여기서, R2 및 R3은 H, OH, 할로, C1 -6 알콕시 및 C1 -6 할로알킬로부터 독립적으로 선택된다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 화학식 II의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이고, 여기서, R3 및 R4는 H, Cl, F, -OMe, -CF3, S(O)nR' 및 C(O)R'로부터 독립적으로 선택되고; n은 2이며; R'는 각각 독립적으로 H, CH3, CH2CH3, C3-C6 알킬, 아릴, 피페라진-1-일, 피페리딘-1-일 및 몰폴리닐-4-일이고; R8 및 R9는 각각 독립적으로 OH 및 C1 -6 알콕시로부터 선택된다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 리간드는 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이고, 여기서, R2 및 R3은 H, OH, Cl, F, -OMe 및 -CF3으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서, R7 및 R8은 각각 독립적으로 H 및 C1 -6 알킬로부터 선택되며, R9는 H이고, R5 및 R6은 각각 독립적으로 H 및 C1 -6 할로알킬로부터 선택된다.
본 개시내용에서 사용하기에 바람직한 염은 상기 화합물의 하이드로클로라이드 염을 포함한다.
이들은 본 명세서에 제공된 일반 방법 및 특정한 합성 예에 따라 합성되고, 임의의 추가적인 단계는 당해 분야의 기술 내에 있다. 여러 이들 화합물은 본 명세서에 기재된 바와 같은 다양한 검정에서 시험되고 활성인 것으로 밝혀졌다. 시험된 화합물은 WO 제2010/110855호에 개시된 화합물을 참조하여 증가한 생체이용률을 또한 나타낸다.
몇몇 실시형태에서, 각각의 상기 일반식은 하기 화합물 중 하나 이상을 제거하는 단서를 함유할 수 있다:
Figure 112016084530517-pct00089
Figure 112016084530517-pct00090
Figure 112016084530517-pct00091
Figure 112016084530517-pct00092
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화학식 I 및/또는 화학식 II에 따른 화합물은 본 명세서에 제공된 일반 방법 및 특정한 합성 예에 따라 합성되고, 임의의 추가적인 단계는 당해 분야의 기술 내에 있다. 여러 이들 화합물은 본 명세서에 기재된 바와 같은 다양한 검정에서 시험되고 활성인 것으로 밝혀졌다. 시험된 화합물은 WO 제2010/110855호(본 명세서에 참조문헌으로 인용됨)에 개시된 화합물을 참조하여 증가한 생체이용률을 또한 나타낸다.
본 명세서에 사용되는 바대로, 용어 "수소 결합 억셉터 기"는 수소 결합을 수용할 수 있는 기를 의미한다. 수소 결합 억셉터 기의 예는 공지되어 있고, 알콕시기, 옥사졸리딘-2-온기, -O-C(O)-N-; -C(O)-N-; -O-; 사이클로헤테로알킬 내의 이종원자(예를 들어, 산소); -N-SO2- 등을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 기는 어느 한 방향으로 결합될 수 있고, 또 다른 탄소 또는 이종원자에 연결될 수 있다. 수소 결합 억셉터 기는 또한 소수성 지방족 기에 또는 이 근처에 존재할 수 있다. 예를 들어, 테트라하이드로퓨란기는 수소 결합 억셉터 기 및 소수성 지방족 기 둘 다를 포함한다. 테트라하이드로퓨란 고리에 존재하는 산소는 수소 결합 억셉터로서 작용하고, 테트라하이드로퓨란 고리에 존재하는 탄소는 소수성 지방족 기로서 작용한다.
본 명세서에 사용되는 바대로, 용어 "소수성 지방족 기"는 탄소 사슬 또는 탄소 고리를 의미한다. 탄소 사슬은 사이클로헤테로알킬에 존재할 수 있지만, 소수성 지방족 기는 이종원자를 포함하지 않는다. 상기 제공된 테트라하이드로퓨란 예는 하나의 이러한 예이지만, 많은 다른 것이 있다. 몇몇 실시형태에서, 소수성 지방족 기는 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 사이클로알킬, 또는 헤테로사이클로알킬의 C1-C6 탄소이다. "소수성 지방족 기"는 소수성 방향족 기가 아니다.
본 명세서에 사용되는 바대로, 용어 "양성 이온화 가능한 기"는 소정의 조건, 예컨대 용액 또는 세포에 존재하는 생물학적 조건 하에 양으로 하전될 수 있는 구조에 존재하는 원자 또는 원자의 기를 의미한다. 몇몇 실시형태에서, 양성 이온화 가능한 기는 질소이다. 몇몇 실시형태에서, 양성 이온화 가능한 기는 사이클로헤테로알킬 고리에 존재하는 질소이다. 예를 들어, 피페라진 기에서, 2개의 질소는 2개의 양성 이온화 가능한 기로 생각될 것이다. 그러나, 몇몇 실시형태에서, 양성 이온화 가능한 기에 연결된 탄소는 소수성 지방족 기로 생각되지 않는다. 몇몇 실시형태에서, 양성 이온화 가능한 기는 질소 함유 고리이다. 질소 함유 고리의 예는 피페라진, 피페라딘, 트라이아지난, 테트라지난 등을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 양성 이온화 가능한 기와 관련하여 몇몇 실시형태에서, 질소 함유 고리는 1개, 2개, 3개 또는 4개의 질소를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 양성 이온화 가능한 기는 -N-SO2-기에 존재하는 질소가 아니다.
몇몇 실시형태에서, 기는 수소 결합 억셉터 및 양성 이온화 가능한 기 둘 다를 포함한다. 예를 들어, 몰롤린기는 산소 기에서 수소 결합 억셉터 및 질소에서 양성 이온화 가능한 기 둘 다를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바대로, 용어 "수소 결합 도너"는 수소 결합을 공여할 수 있는 기를 의미한다. 수소 결합 도너 기의 예는 -OH 등을 포함하지만, 이것으로 제한되지는 않는다.
신규한 화합물의 염, 용매화물, 입체이성질체 , 유도체, 프로드럭 및 활성 대사물질.
본 개시내용은 임의의 상기 화학식의 화합물의 염, 용매화물, 입체이성질체, 프로드럭 및 활성 대사물질을 추가로 포함한다.
용어 "염"은 산 부가염 또는 유리 염기의 부가염을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 염은 약제학적으로 허용된다. 약제학적으로 허용 가능한 산 부가염을 형성하기 위해 사용될 수 있는 산의 예는 비독성 무기 산, 예컨대 질산, 인산, 황산, 또는 브롬산, 요오드산, 불소산, 인으로부터 유래한 염, 및 비독성 유기 산, 예컨대 지방족 모노- 및 다이카복실산, 페닐 치환된 알칸산, 하이드록실 알칸산, 알칸다이오산, 방향족 산, 지방족 및 방향족 설폰산, 및 아세트산, 말레산, 숙신산 또는 시트르산으로부터 유래한 염을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 이러한 염의 비제한적인 예는 나파디실레이트, 베실레이트, 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐포스페이트, 다이하이드로겐포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트, 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 아세테이트, 트라이플루오로아세테이트, 프로피오네이트, 카프릴레이트, 아이소뷰티레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 숙시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 퓨마레이트, 말레에이트, 만델레이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 다이나이트로벤조에이트, 프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 페닐아세테이트, 시트레이트, 락테이트, 말레에이트, 타르트레이트, 메탄설포네이트 등을 포함한다. 아미노산, 예컨대 아르기네이트 등 및 글루코네이트, 갈락투로네이트의 염이 또한 고려된다(예를 들어, 문헌[Berge, et al. "Pharmaceutical Salts," J. Pharma . Sci . 1977;66:1] 참조).
임의의 상기 화학식의 화합물의 산 부가염은 유리 염기 형태를 종래의 방식으로 염을 생성하기 위해 충분한 양의 원하는 산과 접촉시킴으로써 제조될 수 있다. 유리 염기 형태는 염 형태를 염기와 접촉시키고 유리 염기를 종래의 방식으로 단리시킴으로써 재생될 수 있다. 유리 염기 형태는 소정의 물성, 예컨대 극성 용매 중의 용해도에서 다소 이의 각각의 염 형태와 다르지만, 달리 염은 본 개시내용의 목적을 위해 이의 각각의 유리 염기와 동등하다.
전체 및 부분 염 둘 다, 즉 예를 들어 화학식 I 화합물 또는 염의 산의 1몰당 1, 2 또는 3, 바람직하게는 2당량의 염기, 임의의 상기 화학식 화합물의 염기의 1몰당 1, 2 또는 3당량, 바람직하게는 1당량의 산을 가지는 염가 또한 포함된다.
단리 또는 정제의 목적을 위해, 또한 약제학적으로 허용되지 않는 염을 사용할 수 있다. 그러나, 오직 약제학적으로 허용 가능한 비독성 염이 치료학적으로 사용되고, 이것이 따라서 바람직하다.
약제학적으로 허용 가능한 염기 부가염은 금속 또는 아민, 예컨대 알칼리 금속 및 알칼리 토금속 또는 유기 아민에 의해 형성된다. 양이온으로서 사용되는 금속의 예는 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘 등이다. 적합한 아민의 예는 N,N'-다이벤질에틸렌다이아민, 클로로프로카인, 콜린, 다이에탄올아민, 다이사이클로헥실아민, 에틸렌다이아민, N-메틸글루카민 및 프로카인이다.
상기 산성 화합물의 염기 부가염은 유리 산 형태를 종래의 방식으로 염을 생성하기 위해 충분한 양의 원하는 염기와 접촉시킴으로써 제조될 수 있다. 유리 산 형태는 염 형태를 산과 접촉시키고 유리 산을 종래의 방식으로 단리시킴으로써 재생될 수 있다.
본 개시내용의 화합물은 염기성 및 산성 중심 둘 다를 가질 수 있고, 따라서 양쪽성 이온 또는 내부 염의 형태일 수 있다.
통상적으로, 임의의 상기 화학식의 화합물의 약제학적으로 허용 가능한 염은 원하는 산 또는 염기를 적절한 바대로 사용함으로써 용이하게 제조될 수 있다. 염은 용액으로부터 침전되고 여과에 의해 수집될 수 있거나 용매의 증발에 의해 회수될 수 있다. 예를 들어, 산, 예컨대 염산의 수용액은 임의의 상기 화학식의 화합물의 수성 현탁액에 첨가되고, 생성된 혼합물은 증발 건조(동결건조)되어 고체로서 산 부가염을 얻을 수 있다. 대안적으로, 임의의 상기 화학식의 화합물은 적합한 용매, 예를 들어 알코올, 예컨대 아이소프로판올 중에 용해될 수 있고, 산은 동일한 용매 또는 또 다른 적합한 용매 중에 첨가될 수 있다. 이후, 생성된 산 부가염은 직접적으로 또는 덜 극성인 용매, 예컨대 다이아이소프로필 에터 또는 헥산의 첨가에 의해 첨전되고 여과에 의해 단리될 수 있다.
유기 화학의 분야의 당업자는 많은 유기 화합물이 용매와 복합체를 형성할 수 있다는 것을 이해할 것이고, 이 용매 중에 이것이 반응하거나 이 용매로부터 이것이 침전되거나 결정화된다. 이들 복합체는 "용매화물"이라 공지되어 있다. 예를 들어, 물과의 복합체는 "수화물"로 공지되어 있다. 본 개시내용의 화합물의 용매화물은 본 개시내용의 범위 내에 있다. 임의의 상기 화학식의 화합물의 염은 용매화물(예를 들어, 수화물)을 형성할 수 있고, 본 개시내용은 또한 모든 이러한 용매화물을 포함한다. "용매화물"의 단어의 의미는 용매 및 용질의 상호작용(즉, 용매화)에 의해 형성된 화합물로서 당해 분야의 당업자에게 널리 공지되어 있다. 용매화물을 제조하기 위한 기법은 당해 분야에 널리 확립되어 있다(예를 들어, 문헌[Brittain. Polymorphism in Pharmaceutical solids. Marcel Decker, New York, 1999] 참조.).
본 개시내용은 또한 화학식 I의 화합물의 N-옥사이드를 포함한다. 용어 "N-옥사이드"는, 달리 치환되지 않은 sp2 N 원자를 함유하는 헤테로사이클의 경우, N 원자가 공유 결합된 O 원자, 즉, -N→O를 보유할 수 있다는 것을 의미한다. 이러한 N-옥사이드 치환된 헤테로사이클의 예는 피리딜 N-옥사이드, 피리미딜 N-옥사이드, 피라지닐 N-옥사이드 및 피라졸릴 N-옥사이드를 포함한다.
임의의 상기 화학식의 화합물은 하나 이상의 키랄 중심을 가질 수 있고, 개별적 치환기의 성질에 따라, 이것은 또한 기하 이성질체를 가질 수 있다. 공간에서 원자의 배열이 다른 이성질체는 "입체이성질체"라 칭해진다. 서로의 거울상이 아닌 입체이성질체는 "부분입체이성질체"라 칭해지고, 서로의 중첩 가능하지 않은 거울상인 것은 "거울상이성질체"라 칭해진다. 화합물이 키랄 중심을 가질 때, 거울상이성질체의 쌍이 가능하다. 거울상이성질체는 이의 비대칭 중심의 절대 구성에 의해 규명될 수 있고, Cahn 및 Prelog의 R- 및 S-순서화 원칙에 의해, 또는 분자가 편광의 면을 회전시는 방식에 의해 기술되고, 우회전성 또는 좌회전성(즉, 각각 (+) 또는 (-)-이성질체로서)이라 칭해진다. 키랄 화합물은 개별적 거울상이성질체로서 또는 거울상이성질체의 혼합물로서 존재할 수 있다. 동일한 비율의 거울상이성질체를 함유하는 혼합물은 "라세미 혼합물"이라 불린다. 동일하지 않은 부분의 거울상이성질체를 함유하는 혼합물은 R 또는 S 화합물의 "거울상이성질체 과량"(ee)를 가지는 것으로 기술된다. 혼합물에서 하나의 거울상이성질체의 과량은 하기 화학식에 의해 결정되는 거울상이성질체 과량(%)(% ee) 값으로 대개 기술된다:
Figure 112016084530517-pct00093
거울상이성질체의 비율은 "광학 순도"에 의해 또한 정의될 수 있고, 여기서 거울상이성질체의 혼합물이 편광을 회전시키는 정도는 개별적인 광학적으로 순수한 R 및 S 화합물가 비교된다. 이후, 광학 순도는 하기 식을 이용하여 결정될 수 있다:
Figure 112016084530517-pct00094
화합물은 또한 본 명세서에 기재된 화합물의 실질적으로 순수한 (+) 또는 (-) 거울상이성질체일 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 실질적으로 순수한 거울상이성질체를 포함하는 조성물은 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 하나의 거울상이성질체를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 실질적으로 순수한 거울상이성질체를 포함하는 조성물은 적어도 99.5%의 하나의 거울상이성질체이다. 몇몇 실시형태에서, 조성물은 본 명세서에 기재된 화합물의 오직 하나의 거울상이성질체를 포함한다.
본 개시내용은 임의의 상기 화학식의 화합물의 모든 개별적 이성질체를 포함한다. 명세서 및 청구항에서의 특정한 화합물의 설명 또는 명칭은 개별적 거울상이성질체 및 혼합물 둘 다, 또는 달리 이의 라세미체를 포함하는 것으로 의도된다. 입체화학의 결정 및 입체이성질체의 분할 또는 정위적(stereotactic) 합성을 위한 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 구체적으로, 거울상이성질체의 일 세트를 생성하는 임의의 상기 화학식의 화합물에서 보이는 키랄 중심이 있다. 추가적인 키랄 중심은 치환기에 따라 존재할 수 있다.
많은 분야를 위해, 실질적으로 광학적으로 순수한 재료를 생성하기 위해 입체선택적 합성을 수행하고/하거나, 반응 생성물을 적절한 정제 단계로 처리하는 것이 바람직하다. 광학적으로 순수한 재료를 생성하기 위한 적합한 입체선택적 합성 절차는 라세미 혼합물을 광학적으로 순수한 분획으로 정제하기 위한 절차와 같이 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 당해 분야의 당업자는 개시내용 화합물이 다형 형태로 존재할 수 있고, 화합물이 상이한 형태로 결정화할 수 있다는 것을 추가로 인식할 것이다. 다형을 확인하고 분리하기에 적합한 방법은 당해 분야에 공지되어 있다.
부분입체이성질체는 물성 및 화학 반응성 둘 다가 다르다. 부분입체이성질체의 혼합물은 용해도, 분별 결정화 또는 크로마토그래피 특성, 예를 들어 박층 크로마토그래피, 칼럼 크로마토그래피 또는 HPLC에 기초하여 거울상이성질체 쌍으로 분리될 수 있다.
거울상이성질체로의 부분입체이성질체의 복잡한 혼합물의 정제는 통상적으로 2개의 단계를 요한다. 제1 단계에서, 부분입체이성질체의 혼합물은 거울상이성질체 쌍으로 분할된다. 상기 기재된 바와 같이, 제2 단계에서, 거울상이성질체 쌍은 하나의 또는 다른 거울상이성질체에 풍부한 조성물로 추가로 정제되거나, 더 바람직하게는 순수한 거울상이성질체를 포함하는 조성물로 분할된다. 거울상이성질체의 분할은 통상적으로 키랄제, 예를 들어 용매 또는 칼럼 매트릭스와의 반응 또는 분자 상호작용을 요한다. 분할은 예를 들어 제2 물질, 즉 분할제의 순수한 거울상이성질체와의 반응에 의해 거울상이성질체의 혼합물, 예를 들어 라세미 혼합물을 부분입체이성질체의 혼합물로 전환함으로써 달성될 수 있다. 2개의 생성된 부분입체이성질체 생성물은 이후 분리될 수 있다. 이후, 분리된 부분입체이성질체는 초기 화학 변환을 역전시킴으로써 순수한 거울상이성질체로 재전환된다.
거울상이성질체의 분할은 예를 들어 호모키랄 흡착제 상의 크로마토그래피에 의해 키랄 물질에 대한 이의 비공유 결합의 차이에 의해 또한 달성될 수 있다. 거울상이성질체와 크로마토그래피 흡착제 사이의 비공유 결합은 부분입체이성질체 복합체를 확립하여서, 크로마토그래피 시스템에서 이동 및 결합 상태에서 차등 분배를 발생시킨다. 2개의 거울상이성질체는 따라서 상이한 속도로 크로마토그래피 시스템, 예를 들어 칼럼을 통해 이동하여서 이의 분리를 허용한다.
키랄 분할 칼럼은 당해 분야에 널리 공지되어 있고, (예를 들어, 메타켐 테크놀로지스 인코포레이티드(MetaChem Technologies Inc.), 안시스 테크놀로지스 인코포레이티드(ANSYS Technologies, Inc.)(캘리포니아주 레이크 포레스트)의 부서로부터) 상업적으로 구입 가능하다. 거울상이성질체는 HPLC를 위한 예를 들어 키랄 정지상(chiral stationary phase: CSP)을 이용하여 분석되고 정제될 수 있다. 키랄 HPLC 칼럼은 통상적으로 실리카 패킹 재료의 표면에 부동화된 거울상이성질체 화합물의 하나의 형태를 함유한다.
D-페닐글리신 및 L-류신은 1형 CSP의 예이고, π-π 상호작용, 수소 결합, 다이폴-다이폴 상호작용, 및 키랄 인식을 달성하는 입체 상호작용의 조합을 이용한다. 1형 칼럼에서 분할되기 위해, 분석물질 거울상이성질체는, 분석물질이 CSP와 필수 상호작용을 겪도록, CSP의 것에 상보성인 기능성을 함유해야 한다. 샘플은 바람직하게는 하기 작용기 중 하나를 함유해야 한다: π-산 또는 π-염기, 수소 결합 도너 및/또는 억셉터, 또는 아마이드 다이폴. 유도체화는 때때로 상호작용 부위가 부족한 화합물에 이 부위를 첨가하기 위해 사용된다. 가장 흔한 유도체는 아민 및 카복실산으로부터 아마이드의 형성을 수반한다.
메타키랄(MetaChiral) ODM(상표명)은 II형 CSP의 예이다. 용질-CSP 복합체의 형성을 위한 1차 기전은 인력 상호작용을 통해서이지만, 봉입 봉합체는 또한 중요한 역할을 한다. 수소 결합, π-π 상호작용, 및 다이폴 스태킹은 메타키랄(상표명) ODM 상의 키랄 분할에 중요하다. 유도체화는 용질 분자가 용질-칼럼 상호작용에 필요한 기를 함유하지 않는 경우 필요할 수 있다. 보통 벤질아마이드에 대한 유도체화는 아민 및 카복실산과 같은 몇몇 강하게 극성인 분자에 필요할 수 있고, 이것은 달리 비특이적-입체 상호작용을 통해 정지상과 강하게 상호작용할 것이다.
이용 가능한 경우, 임의의 상기 화학식의 화합물은 예를 들어 실리카 겔 상의 칼럼 크로마토그래피 또는 TLC에 의한 분리에 의해 부분입체이성질체 쌍으로 분리될 수 있다. 이 부분입체이성질체 쌍은 본 명세서에서 상부 TLC Rf를 가지는 부분입체이성질체; 및 하부 TLC Rf를 가지는 부분입체이성질체라 칭해진다. 부분입체이성질체는 추가로 특정한 거울상이성질체에 대해 농후화되거나, 당해 분야에 널리 공지된 방법, 예컨대 본 명세서에 기재된 것을 이용하여 단일 거울상이성질체로 분할될 수 있다.
부분입체이성질체 쌍의 상대 구성은 이론적 모델 또는 원칙(예를 들어, Cram 원칙, Felkin-Ahn 모델)의 적용에 의해 또는 계산적 화학 프로그램에 의해 생성된 더 신뢰성 있는 3차원 모델을 이용하여 추론될 수 있다. 많은 경우에, 이 방법은 어떤 부분입체이성질체가 화학 변환의 에너지에서 양호한 생성물인지를 예측할 수 있다. 대안으로서, 부분입체이성질체 쌍의 상대 구성은 부분입체이성질체 쌍(들)의 하나(또는 둘 다)에서 단일 거울상이성질체의 절대 구성을 발견함으로써 간접적으로 결정될 수 있다.
입체중심의 절대 구성은 당해 분야의 당업자에게 매우 널리 공지된 방법(예를 들어, X선 회절, 원형 이색성)에 의해 결정될 수 있다. 절대 구성의 결정은 이론적 모델의 예측능력을 확인하는 데 또한 유용할 수 있고, 유사한 기전을 가지는 반응(예를 들어, 하이드라이드에 의해 케톤의 케톤 환원 및 환원성 아미노화)에 의해 제조된 유사한 분자로 이 모델의 이용을 확장시키는 데 도움이 될 수 있다.
본 개시내용은 고리에 직접적으로 연결되지 않은 이중 결합에 대한 R2-R3 치환기로 인해 Z-E 유형의 입체이성질체, 및 이의 혼합물을 또한 포함할 수 있다. 추가적인 Z-E 입체이성질체가 m이 1이 아니고 m 및 n이 상이할 때 접해진다. 이중 결합 치환기의 이중 결합의 면에서 각각의 위치로 인해 입체이성질체가 Z 또는 E인지를 결정하기 위해 Cahn-Ingold-Prelog 우선성 원칙이 적용된다. 입체이성질체는 가장 높은 우선성의 2개의 기가 C=C 결합을 통과하는 기준 면의 동일한 면에 있는 경우 Z( zusammen = 함께)라 칭해진다. 다른 입체이성질체는 E( entgegen = 반대)로 칭해진다.
E-Z 유형의 입체이성질체의 혼합물은 이들 화합물의 상이한 화학물성에 기초한 전통적인 정제 방법을 이용하여 이의 성분에서 분리(및/또는 규명)될 수 있다. 분별 결정화, 저압, 중압 또는 고압 기법에 의해 수행된 크로마토그래피, 분별 증류 및 당해 분야의 당업자에게 매우 널리 공지된 임의의 다른 방법이 이 방법에 포함된다.
본 개시내용은 또한 임의의 상기 화학식의 화합물의 프로드럭, 즉 포유동물 대상체에게 투여될 때 생체내 임의의 상기 화학식에 따른 활성 약물을 방출하는 화합물을 포함한다. 프로드럭은 약역학적 활성인 또는 더 통상적으로 대사 변환에 의해 약역학적 활성제로 전환되는 불활성인 화합물이다. 임의의 상기 화학식의 화합물의 프로드럭은 모 화합물을 방출하도록 변형이 생체내 절단될 수 있는 방식으로 임의의 상기 화학식의 화합물에 존재하는 작용기를 변형시킴으로써 제조된다. 생체내, 프로드럭은 약역학적 활성제의 방출을 발생시키는 생리학적 조건(예를 들어, 가수분해되거나 천연 발생 효소(들)가 작용) 하에 용이하게 화학 변화를 겪는다. 프로드럭은 임의의 상기 화학식의 화합물을 포함하고, 여기서 하이드록시, 아미노, 또는 카복시기는 각각 유리 하이드록실, 아미노 또는 카복시기를 재생시키도록 생체내 절단될 수 있는 임의의 기에 결합한다. 프로드럭의 예는 임의의 상기 화학식의 화합물의 에스터(예를 들어, 아세테이트, 폼메이트 및 벤조에이트 유도체) 또는 생리학적 pH가 될 시 또는 효소 작용을 통해 활성 모 약물로 전환되는 임의의 다른 유도체를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 적합한 프로드럭 유도체의 선택 및 제조에 대한 종래의 절차는 당해 분야에 기재되어 있다(예를 들어, 문헌[Bundgaard. Design of Prodrugs. Elsevier, 1985] 참조).
프로드럭은 이것이 전환하는 활성 성분과 동일한 방식으로 투여될 수 있거나, 이것은 (효소 또는 다른 적절한 시약의 제공에 의해) 시간에 걸쳐 천천히 활성 성분으로의 프로드럭의 전환, 및 환자에 대한 활성 성분의 전달을 허용하기에 적합한, 저장소 형태, 예를 들어 경피 패치 또는 다른 저장소로 전달될 수 있다.
구체적으로 표시되지 않은 경우, 용어 "활성 성분"은 본 명세서에 정의된 바와 같은 임의의 상기 화학식의 화합물을 의미하는 것을 이해되어야 한다.
본 개시내용은 또한 대사물질을 포함한다. 본 명세서에 개시된 화합물의 "대사물질"은 화합물이 대사될 때 형성되는 화합물의 유도체이다. 용어 "활성 대사물질"은 화합물이 대사될 때 형성되는 화합물의 생물학적 활성 유도체를 의미한다. 용어 "대사되는"은 살아있는 신체에서 특정한 물질이 변하는 과정의 합을 의미한다. 간단히 말하면, 신체에 존재하는 모든 화합물은 에너지를 추진하고/하거나, 신체로부터 이를 제거하기 위해 신체 내에 효소에 의해 조작된다. 특이적 효소는 화합물에 대한 특정한 구조 변경을 생성한다. 예를 들어, 사이토크롬 P450은 다양한 산화 및 환원 반응을 촉매화하는 반면, 유리딘 다이포스페이트 글루쿠로닐트랜스퍼라제는 방향족 알코올, 지방족 알코올, 카복실산, 아민 및 유리 설프하이드릴 기로 활성화된 글루쿠론산 분자의 이동을 촉매화한다. 대사에 대한 추가의 정보는 문헌[The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th Edition, McGraw-Hill (1996), pages 11-17]로부터 얻어질 수 있다. 본 명세서에 개시된 화합물의 대사물질은 숙주에 대한 화합물의 투여 및 숙주로부터의 조직 샘플의 분석에 의해, 또는 실험실내 화합물과 간 세포의 항온처리 및 생성된 화합물의 분석에 의해 확인될 수 있다. 방법 둘 다는 당해 분야에 널리 공지되어 있다.
시그마-2 수용체 길항제의 용도
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 시그마-2 수용체 길항제의 투여에 의해 A베타 종에 대한 뉴런 세포의 노출과 연관된 시냅스 수 감소 또는 막 수송 이상을 저해하는 방법을 제공한다. 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 시그마-2 길항제, 예를 들어 본 명세서에 기재된 임의의 화학식에 의해 포함된 것, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 환자에서 인지 감소 및/또는 신경퇴행성 질환, 예를 들어 알츠하이머병 또는 경증 인지 손상(MCI)을 치료하는 방법을 또한 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 인지 감소 및/또는 신경퇴행성 질환, 예를 들어 알츠하이머병을 저해하거나 치료하는 방법은 기억 상실, 혼란, 그릇된 판단, 성격 변화, 방향상실 및 언어 능력의 소실로 이루어진 군으로부터 선택된 인지 감소의 하나 이상의 증상을 저해하거나 치료하는 것을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 A베타 올리고머에 의해 매개되거나 이와 연관된 질환 또는 장애 또는 병태를 저해하거나 치료하는 것을 포함한다(002 문단 참조). 몇몇 실시형태에서, 인지 감소 및/또는 신경퇴행성 질환, 예를 들어 알츠하이머병을 저해하거나 치료하는 방법은 (ⅰ) 상기 용어의 정의에 언급된 바대로 전기생리학적 측정에 의해 검출 가능한 장기간 강화(LTP), 장기간 우울증(LTD) 또는 시냅스 가소성 또는 인지 기능의 임의의 다른 부정적인 변화의 복원; 및/또는 (ⅱ) 신경퇴행의 저해 또는 치료; 및/또는 (ⅲ) 일반 아밀로이드증의 저해 또는 치료; 및/또는 (ⅳ) 아밀로이드 생성, 아밀로이드 어셈블리, 아밀로이드 응집, 및 아밀로이드 올리고머 결합, 및 아밀로이드 침착 중 하나 이상의 저해 또는 치료; 및/또는 (ⅴ) 뉴런 세포에 대한 하나 이상의 A베타 올리고머의 효과, 특히 비치사 효과의 저해, 치료 및/또는 약화 중 하나 이상을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 인지 감소 및/또는 신경퇴행성 질환, 예를 들어 알츠하이머병을 저해하고/하거나 치료하고/하거나 약화시키는 방법은 아밀로이드 생성, 아밀로이드 어셈블리, 뉴런 세포에 대한 하나 이상의 A베타 올리고머의 활성/효과, 아밀로이드 응집, 아밀로이드 결합, 및 아밀로이드 침착 중 하나 이상을 저해하고/하거나 치료하고/하거나 약화시키는 것을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 인지 감소 및/또는 신경퇴행성 질환, 예를 들어 알츠하이머병을 저해하고/하거나 치료하고/하거나 약화시키는 방법은 뉴런 세포에 대한 하나 이상의 A베타 올리고머의 활성/효과 중 하나 이상을 저해하고/하거나 치료하고/하거나 약화시키는 것을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 뉴런 세포에 대한 하나 이상의 A베타 올리고머의 활성/효과, 아밀로이드 응집 및 아밀로이드 결합은 막 수송 또는 시냅스 수에 대한 A베타 올리고머의 효과이다. 몇몇 실시형태에서, 시그마-2 길항제는 막 수송 또는 시냅스 수 또는 A베타 올리고머 결합에 대한 A베타 올리고머 효과를 저해한다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 A베타 올리고머 독성, 구체적으로 비치사 A베타 올리고머 효과와 연관된 단백질접힘 질환(proteopathic disease)을 치료하는 방법을 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 이러한 단백질접힘 질환을 가지는 대상체를 본 개시내용의 시그마-2 길항제 또는 시그마-2 수용체에 결합하는 이를 함유하는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 단백질접힘 질환은 A베타 단백질, 예컨대 MCI, 다운 증후군, 황반변성 또는 알츠하이머병 등의 증가를 특징으로 하는 CNS 단백질접힘질환이다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 본 개시내용에 따라 시그마-2 길항제를 치료함으로써 하나 이상의 경증 인지 장애(MCI), 또는 치매를 치료하는 방법을 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 MCI 및 치매를 치료하는 방법을 제공한다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 A베타 종, 예컨대 A베타 올리고머에 의해 부정적으로 영향을 받는 기능의 면에서 대상체의 세포를 정상 표현형으로 부분적으로 또는 완전히 복원하기 위해 본 개시내용에 따른 시그마-2 길항제에 의해 개인을 치료하는 방법을 제공한다. 예는 본 명세서에 기재된 검정을 포함하는 다양한 방법에 의해 측정될 수 있는 시냅스 수 감소 및 막 수송 이상이다. 정상 표현형은 예를 들어 정상 막 수송일 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 정상 표현형은 정상 인지 능력이다. "정상" 표현형은 대상체의 결과를 정상 대상체의 샘플과 비교함으로써 결정될 수 있다. 샘플은 1개만큼 작은 대상체 또는 1개의 샘플일 수 있거나, 10개 초과의 샘플 또는 대상체일 수 있고, 표준은 복수의 대상체에 기초하여 계산된 평균이다.
몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 인지 감소 또는 신경퇴행성 질환에 의해 고통받는 대상체에게 시그마-2 단백질에 결합하고 베타-아밀로이드 병리학을 저해하는 화합물 또는 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 베타-아밀로이드 병리학은 막 수송 결함, 시냅스 수의 감소, 수지상 척추 수의 감소, 수지상 척추 형태의 변화, LTP의 변화, LTD의 변화, 동물에서의 기억 및 학습의 측정치의 결함, 또는 임의의 이들의 조합 등이다. 상기 용도는 하기와 같이 본 발명자들이 제시한 증거로부터 생긴다:
거동 효율의 평가: 마우스 공포 조건화에서의 A베타 올리고머 유도 기억 결함은 콜롬비아 대학의 옥타비오 아란시오(Ottavio Arancio) 박사의 실험실에서 확립된 모델(Puzzo 2008)이다. 여러 약제학적 회사는 이의 개발 노력에서 이 동일한 모델을 사용한다. 정황 공포 조건화는 인간 인지 기능과 상관되는 연상 기억 형성 및 구체적으로 새로운 기억의 생성의 승인 모델(Delgado 2006)이다. A베타 올리고머는 조건화 훈련 직전 야생형 동물의 해마로 주입되고, 24시간 후 동결 거동(freezing behavior)을 통해 기억은 평가된다. 올리고머의 해마내 투여가 화합물 활성 및 오프-표적 독성의 신속한 경쟁적 평가를 허용하므로, 이 모델 시스템이 선택된다.
화합물은 A베타 올리고머 관련 기억 상실을 역전시키는 데 있어서의 화합물의 효과를 나타내기 위해 2개의 형질전환 알츠하이머 모델에서 생체내 또한 시험될 수 있다. 이 거동 연구는 총체적으로 시그마-2 길항제 화합물이 성별 둘 다에서 및 단기간 또는 장기간 투여 후 알츠하이머병의 2개의 상이한 모델에 의해 2개의 상이한 거동에서 업무에서의 학습 및 기억의 개선을 발생시킨다는 것을 입증하고, 실험실내 검정이 생체내 활성과 상관된다는 것을 입증한다.
본 명세서에 기재된 바대로, 증거는 막 수송에 의해 매개된 뉴런 표면 수용체 발현에서의 A베타 올리고머 매개 감소가 시냅스 가소성(LTP) 및 따라서 학습 및 기억의 전기생리학적 측정에 대한 올리고머 저해에 대한 기본이라는 것을 제안한다(문헌[Kamenetz F, Tomita T, Hsieh H, Seabrook G, Borchelt D, Iwatsubo T, Sisodia S, Malinow R. APP processing and synaptic function. Neuron. 2003 Mar 27;37(6):925-37; 및 Hsieh H, Boehm J, Sato C, Iwatsubo T, Tomita T, Sisodia S, Malinow R. AMPAR removal underlies Abeta oligomer-induced synaptic depression and dendritic spine loss. Neuron. 2006 Dec 7;52(5):831-43] 참조). 포마진 형태학적 이동을 통해 올리고머에 의해 유도된 막 수송 속도 변화의 측정은 A베타 올리고머 차단 약물을 발견하기 위해 세포주에서 사용된다[Maezawa I, Hong HS, Wu HC, Battina SK, Rana S, Iwamoto T, Radke GA, Pettersson E, Martin GM, Hua DH, Jin LW]. 신규한 삼환식 피론 화합물은 세포내 아밀로이드-베타 올리고머 복합체와 연관된 세포사를 완화한다. J Neurochem. 2006 Jul;98(1):57-67; Liu Y, Schubert D. 세포독성 아밀로이드 펩타이드는 MTT 포마진 세포외배출을 증대시킴으로써 세포 3-(4,5-다이메틸티아졸-2-일)-2,5-다이페닐테트라졸륨 브로마이드(MTT) 환원을 저해한다. J Neurochem. 1997 Dec;69(6):2285-93; Liu Y, Dargusch R, Banh C, Miller CA, Schubert D. Detecting bioactive amyloid beta peptide species in Alzheimer's disease. J Neurochem. 2004 Nov;91(3):648-56; Liu Y, Schubert D. Treating Alzheimer's disease by inactivating bioactive amyloid beta peptide. Curr Alzheimer Res. 2006 Apr;3(2):129-35; Rana S, Hong HS, Barrigan L, Jin LW, Hua DH. Syntheses of tricyclic pyrones and pyridinones and protection of Abeta-peptide induced MC65 neuronal cell death. Bioorg Med Chem Lett. 2009 Feb 1;19(3):670-4. Epub 2008 Dec 24; 및 Hong HS, Maezawa I, Budamagunta M, Rana S, Shi A, Vassar R, Liu R, Lam KS, Cheng RH, Hua DH, Voss JC, Jin LW. Candidate anti-Abeta fluorene compounds selected from analogs of amyloid imaging agents. Neurobiol Aging. 2008 Nov 18. (Epub ahead of print)] that lower Abeta brain levels in rodents in vivo [Hong HS, Rana S, Barrigan L, Shi A, Zhang Y, Zhou F, Jin LW, Hua DH. Inhibition of Alzheimer's amyloid toxicity with a tricyclic pyrone molecule in vitro and in vivo. J Neurochem. 2009 Feb;108(4):1097-1108]. 따라서, 상기 시험은 초기 알츠하이머병 및 경증 인지 장애를 치료하기 위해 화합물을 확인하는 데 있어서 관련성을 확립하였다.
몇몇 실시형태에서, 임의의 상기 화학식의 화합물은 뉴런(예컨대, 뇌에서의 뉴런)에 대한 A베타 올리고머의 영향, 아밀로이드 어셈블리 또는 이의 파괴, 및 아밀로이드(아밀로이드 올리고머 포함) 결합, 및 아밀로이드 침착 중 하나 이상의 저해와 관련하여 100μM 미만, 50μM, 20μM, 15μM, 10μM, 5μM, 1μM, 500nM, 100nM, 50nM 또는 10nM의 IC50 값을 가진다. 몇몇 실시형태에서, 화합물은 뉴런(예컨대, 중추 신경계 뉴런)에 대한 A베타 종, 예컨대 올리고머의 활성/영향의 저해와 관련하여 100μM 미만, 50μM, 20μM, 15μM, 10μM, 5μM, 1μM, 500nM, 100nM, 50nM 또는 10nM의 IC50 값을 가진다.
몇몇 실시형태에서, 뉴런(예컨대, 뇌에서의 뉴런)에 대한 A베타 종, 예컨대 올리고머의 효과, 예컨대 시냅스에 대한 아밀로이드(아밀로이드 올리고머 포함) 결합, 및 A베타 올리고머에 의해 매개된 막 수송에서의 비정상 중 하나 이상의 본 개시내용의 화합물에 의한 저해의 백분율은 10nM 내지 10μM의 농도에서 측정된다. 몇몇 실시형태에서, 측정된 저해의 백분율은 약 1% 내지 약 20%, 약 20% 내지 약 50%, 약 1% 내지 약 50%, 또는 약 1% 내지 약 80%이다. 저해는 예를 들어 아밀로이드 베타 종에 대한 노출 전에 및 후에 뉴런의 시냅스 수를 정량화함으로써 또는 시그마-2 길항제 및 A베타 종 둘 다의 존재 하에 시냅스의 수를 정량화함으로써 평가될 수 있고, 시그마-2 길항제는 A베타 종 노출과 동시이거나 이에 선행하거나, 이에 후행한다. 또 다른 예로서, 저해는 막 수송을 결정하고, A베타 종의 존재 및 부재 하에 및 본 개시내용에 따른 시그마-2 길항제의 존재 및 부재 하에 세포외배출 속도 및 정도, 세포내이입 속도 및 정도, 또는 세포 대사의 다른 표시자를 측정하는 하나 이상의 매개변수를 비교함으로써 평가될 수 있다. 본 발명자들은 본 개시내용의 화합물이 또한 아밀로이드 응집을 저해한다는 생화학 검정 증거(데이터 비도시)를 제시하였다.
몇몇 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 화합물은 시그마-2 수용체에 특이적으로 결합한다. 특이적 수용체에 특이적으로 결합하는 화합물은 또 다른 수용체에 비해 하나의 수용체에 대한 선호도를 가지는 화합물을 의미한다. 예를 들어, 화합물이 시그마-1 및 시그마-2 수용체 둘 다에 결합할 수 있지만, 화합물은 시그마-1 수용체에 적어도 10% 초과인 결합 친화도로 결합할 때 시그마-2 수용체에 특이적이라고 말해질 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 특이성은 제2 결합 파트너보다 하나의 결합 파트너(예를 들어, 수용체)에 대해 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% 또는 1000% 초과이다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 표지된 시그마-2 리간드를 사용하여 동물에서 베타-아밀로이드 관련 인지 감소를 측정하는 방법을 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 동물을 본 개시내용에 따른 표지된 시그마-2 리간드와 접촉시키는 단계 및 시그마-2 활성 또는 발현을 측정하는 단계를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 동물에서 시그마-2 활성 또는 발현을 베타-아밀로이드 유도된 인지 감소를 가지는 것으로 공지된 동물과 비교하는 단계를 포함한다. 활성 또는 발현이 베타-아밀로이드 유도된 인지 감소를 가지는 것으로 공지된 동물과 동일할 때, 동물은 동일한 수준의 인지 감소를 가진다고 말해진다. 동물은 베타 아밀로이드 유도된 인지 감소의 다양한 단계의 공지된 활성 또는 발현에서 유사성에 따라 점수 매겨질 수 있다. 본 명세서에 기재된 임의의 시그마-2 리간드는 표지될 수 있어서, 표지된 시그마-2 리간드가 생체내 사용될 수 있다.
임의의 상기 화학식의 화합물 및 상기 시그마-2 길항제로서 기재된 다른 화합물이 본 명세서에 기재된 다양한 병태를 치료하는 데 있어서 효과적인지를 결정하는 데 있어서, 실험실내 검정을 이용할 수 있다. 실험실내 검정은 예를 들어 화합물 II와 구조 유사성을 보유하는 화학식 III-IV의 화합물이 활성인 경우 화합물 II를 사용하여 생체내 효과와 상관되고, 예를 들어 본 명세서에 기재된 실험실내 검정에서, 이것은, 시냅스 손실의 저해 또는 복원, 뉴런 세포에서의 막 수송 변화의 조절, 기억 상실에 대한 보호 또는 이의 복원, 및 인지 감소 병태, 질환 및 장애, 예컨대 MCI 및 알츠하이머병의 치료를 포함하는, 본 명세서에 기재된 병태를 치료하거나 경감시키기 위해 생체내 또한 사용될 수 있다. 검정은 부분적으로 아밀로이드 베타 올리고머 및 시냅스에서의 뉴런에 대한 결합 및 아밀로이드 베타 올리고머가 실험실내 뉴런에 대해 가지는 효과에서의 이의 기능에 기초한다. 몇몇 실시형태에서, 본 발명자들이 시그마-2 단백질을 포함한다고 믿는 뉴런에서의 A베타 올리고머 수용체는 본 명세서에 기재된 아밀로이드 베타 어셈블리와 접촉되고, 시그마-2 단백질에 결합하는 화학식 I, II 또는 III에 따른 화합물은 수용체에 대한 아밀로이드 베타 어셈블리의 결합을 저해할 것이다. 경쟁적 방사성 리간드 결합 검정에서, 본 발명자들은 본 화합물이 시그마-2 수용체에 특이적이라는 것을 밝혀냈다. 본 발명자들은 본 개시내용의 화합물이 뉴런의 표면에서 이의 지금까지 확인되지 않은 수용체에 대한 A베타 올리고머의 결합을 저해한다는 것을 또한 밝혀냈다. 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 뉴런 신호전달에서 임의의 상기 화학식의 화합물의 시그마-2 리간드 효율을 결정하기 위해 제공된다. 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 세포, 예컨대 1차 뉴런(이것으로 제한되지는 않음)을 시그마-2 리간드와 접촉시키는 단계 및 뉴런 기능을 측정하는 단계를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 세포는 실험실내 접촉된다. 몇몇 실시형태에서, 세포는 생체내 접촉된다. 뉴런 활성은 신호전달 활성, 전기 활성, 시냅스 단백질의 생성 또는 방출 등일 수 있다. 신호전달을 증대시키거나 복원하는 시그마-2 길항제는 뉴런 활성을 조절하는 데 효과적인 화합물로서 확인된다. 몇몇 실시형태에서, 세포는 병리학적 샘플로부터 유래한다. 몇몇 실시형태에서, 세포는 신경퇴행성 질환을 가지는 대상체로부터 유래한다. 몇몇 실시형태에서, 신경퇴행성 질환은 MCI 또는 알츠하이머병, 특히 경증 알츠하이머병이다.
수용체 결합 검정 및 화합물 스크리닝
몇몇 실시형태에서, 시험 화합물은 시험 화합물이 시그마-2 수용체에 결합할 수 있는지를 결정하기 위해 세포 또는 세포막과 접촉한다. 몇몇 실시형태에서, 시험 화합물은 담체 또는 비히클, 예컨대, 다이메틸 설폭사이드(이것으로 제한되지는 않음) 중에 용해된다. 몇몇 실시형태에서, 세포는 포화상태(confluent)까지 배양된다. 몇몇 실시형태에서, 포화상태 시, 세포는 온화한 긁어내기에 의해 탈착될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 세포는 트립신분해, 또는 임의의 다른 적합한 탈착 수단에 의해 탈착된다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 수용체에 대한 시험 화합물의 결합은 예를 들어 경쟁적 방사성 리간드 결합 검정에 의해 결정될 수 있다. 방사성 리간드 결합 검정은 인간 수용체를 안정하게 발현하는 온전한 세포 또는 조직 소스에서 수행될 수 있다. 탈착된 세포 또는 조직은 예를 들어 세척하고, 원심분리되고/되거나, 완충제 중에 재현탁될 수 있다. 시험 화합물은 본 명세서에 기재된 것을 포함하는 임의의 방법에 따라 방사성 표지될 수 있다. 방사성 리간드는 다양한 농도의 존재 하에 0.1μCi의 고정된 농도에서 사용될 수 있다(범위는 예를 들어 경쟁 약물의 1010-103M 내지 1011-104M일 수 있다). 약물은 완충제 중에 조직 또는 세포(약 예를 들어, 50,000개의 세포)에 첨가되고 항온처리되도록 허용될 수 있다. 비특이적 결합은 (예를 들어, 각각의 수용체에 대한 10μM의 적절한 리간드의 존재 하의, 예를 들어, 시그마 수용체에 대한) 각각의 수용체 하위유형에 대한 광역 스펙트럼 활성자 또는 저해제 또는 기능적 효현제 또는 길항제의 존재 하에 결정될 수 있다. 반응은 신속한 여과에 의해 결정될 수 있고, 이것에 얼음 냉각 완충제에 의해 2회 세척이 후행할 수 있다. 건조된 필터 디스크에서의 방사성은 액체 섬광 분석기(이것으로 제한되지는 않음)를 포함하는 임의의 방법을 이용하여 측정될 수 있다. 변위 곡선이 작도될 수 있고, 수용체 하위유형에 대한 시험 리간드의 Ki 값은 예를 들어 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism)(그래프패드 소프트웨어 인코포레이티드(캘리포니아주 샌 디에고))을 이용하여 결정될 수 있다. 특이적 결합의 백분율은 전체 결합(분당 분해)에 의해 전체 결합(분당 분해)과 비특이적 결합(분당 분해) 사이의 차이를 나눔으로써 결정될 수 있다.
몇몇 실시형태에서, 세포주 또는 조직 소스에서의 결합 연구를 위해, 다양한 농도의 각각의 약물은 각각의 실험 내에 2회 첨가되고, 개별적 IC50 값은 예를 들어 그래프패드 프리즘 소프트웨어를 이용하여 결정된다. 각각의 리간드의 Ki 값은 Cheng 및 Prusoff(1973)에 의해 기재된 식에 따라 결정될 수 있고, 최종 데이터는 pKi±S.E.M.으로 제시될 수 있고, 몇몇 실시형태에서, 시험의 수는 약 1-6개이다.
몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 시그마-2 수용체에 결합하는 화합물이 막 수송 검정에서 가용성 Aβ 올리고머 유도 시냅스 손실을 저해하고, 가용성 Aβ 올리고머 유도 결함을 저해하는 것과 관련하여 가용성 Aβ 올리고머 유도 신경독성을 저해함으로써 시그마-2 수용체에서 기능성 길항제로서 작용하는지를 결정하는 단계를 추가로 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 시그마-2 수용체 길항제가 A베타 올리고머의 부재 하에 수송 또는 시냅스 수에 영향을 미치지 않고/않거나; 뉴런 세포에서 카스파제-3 활성을 유도하지 않고/않거나; 시그마-2 수용체 효현제에 의해 카스파제-3 활성의 유도를 저해하고/하거나; 시그마-2 수용체 효현제에 의해 발생한 뉴런 세포에서 뉴런 독성에 대해 보호하거나 이를 감소시키는지를 결정하는 단계를 추가로 포함한다.
시험은 시그마-2 수용체(이것으로 제한되지는 않음)일 수 있는 결합 파트너의 기능에 대한 시험 화합물의 효과를 결정하는 기능적 검정을 또한 포함할 수 있다. 다양한 표준 검정 기술을 이용할 수 있다. 예를 들어, 상기 방법은 살아 있는 세포 또는 조직에서 화합물의 기능적 효현제 유사 또는 길항제 유사 활성을 측정하기 위해 이용될 수 있다. 상기 방법은 cAMP 농도 및 IP1 수준을 결정하는 TR-FRET, 칼슘 유입을 모니터링하는 실시간 형광, 임피던스 변조를 측정하는 세포 유전 분광법, 회장 수축, 또는 종양 세포 아폽토시스를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 시험 화합물의 특이성은 예를 들어 화합물이 시그마-1 수용체, 시그마-2 수용체에 결합하지 않거나 둘 다에 결합하는지를 결정함으로써 또한 결정될 수 있다. 시험 화합물이 시그마-1 수용체에 결합하는지를 결정하는 방법은 문헌[Ganapathy, M.E et al.(1999) J. Pharmacol. Exp. Ther., 289: 251-260](본 명세서에 그 전문이 참조문헌으로 인용됨)에 기재되어 있다. 시험 화합물이 시그마-1 수용체에 결합하는지를 결정하는 방법은 문헌[Bowen, W.D et al.(1993) Mol. Neuropharmacol., 3: 117-126](본 명세서에 그 전문이 참조문헌으로 인용됨), 및 또한 문헌[Xu, J. et al, Nature Communications, 2011, 2:380 DOI:10.1038/ncomms 1386](또한 본 명세서에 그 전문이 참조문헌으로 인용됨)에 기재되어 있다.
다양한 실시형태에서, 본 개시내용은 가용성 Aβ 올리고머 유도 시냅스 손실을 저해하는 것과 관련하여 가용성 Aβ 올리고머 유도 신경독성을 저해함으로써 시그마-2 수용체에서 기능성 길항제로서 작용할 수 있고, 막 수송 검정에서 가용성 Aβ 올리고머 유도 결함을 저해하고, A베타 올리고머의 부재 하에 수송 또는 시냅스 수에 영향을 미치지 않고; 본 명세서에 기재된 바와 같은 우수한 약물 유사 특성을 나타내는 선택적 고친화도 시그마-2 수용체 리간드의 확인을 위한 검정 프로토콜을 제공하여서, 이렇게 확인된 선택적 고친화도 시그마-2 수용체 길항제 화합물은 생체내 가용성 Aβ 올리고머 유도 시냅스 기능이상을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체가 시그마-2 길항제에 의해 치료되어야 하는지를 결정하는 방법을 제공하고, 여기서 대상체는 인지 감소 또는 신경퇴행성 질환 또는 본 명세서에 기재된 다른 병태, 질환 또는 장애를 가지는 것으로 의심된다. 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 환자로부터 유래한 샘플을 시그마-2 길항제와 접촉시키는 단계 및 시그마-2 조절 화합물이 샘플에 존재하는 베타-아밀로이드 병리학을 저해하거나 경감시키는지를 결정하는 단계를 포함하고, 여기서 샘플에 존재하는 베타-아밀로이드 병리학의 저해 또는 경감을 나타내는 샘플은 대상체가 시그마-2 길항제에 의해 치료되어야 한다는 것을 나타낸다.
추가적으로, 본 개시내용은 시냅스 수에서 Aβ 올리고머 유도 감소 등을 저해하는 시그마-2 길항제를 확인하는 방법을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 베타-아밀로이드 병리학을 치료하기 위해 시그마-2 길항제를 확인하기 위해 사용될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 베타-아밀로이드 병리학을 치료하기 위해 치료의 효율을 결정하기 위해 사용된다. 몇몇 실시형태에서, 베타-아밀로이드 병리학은 막 수송의 결함, 시냅스 기능이상, 동물에서의 기억 및 학습 결함, 시냅스 수의 감소, 수지상 척수 길이 또는 척수 형태의 변화, LTP의 결함, 또는 타우 단백질의 인산화의 증가이다.
본 개시내용에서 사용되는 아밀로이드 베타
인간 아밀로이드 β는, 뉴런의 시냅스에서 농축된 것으로 발견된, 내부 막 단백질, 아밀로이드 전구체 단백질(APP)의 절단 생성물이다. 아밀로이드 β는 자가 결합하여 준안정한, 올리고머 어셈블리를 형성한다. 더 높은 농도에서, A베타는 중합하고 선형 피브릴로 조립되고, 이는 더 낮은 pH에 의해 가속된다. 피브릴이 올리고머로부터 형성되는지에 대해 명확히 제시되어 있지 않다. 아밀로이드 β 올리고머는 학습 및 기억을 차단하는 뉴런 시냅스에서 변화를 유도함으로써 동물 모델에서 알츠하이머병을 발생시키는 것으로 입증되었고, 아밀로이드 β 피브릴은 동물 및 인간에서 진행된 상태의 알츠하이머병과 오랫동안 연관되었다. 사실, 알츠하이머병에 대해 현대의 이용 가능한 가설 및 많은 지원을 얻은 것은 A베타 어셈블리 및 특히 A베타 올리고머가 알츠하이머와 연관된 초기 병리학, 및 덜 심각한 치매, 예컨대 MCI 및 경증 AD와 연관된 병리학의 중심에 있다는 것이다. 명확히, 문헌[James P. et al. "Natural oligomers of the amyloid-β protein specifically disrupt cognitive function." Nature Neuroscience Vol. 8 (2005): 79 - 84; Klyubin, I. et al. "Amyloid beta protein dimer-containing human CSF disrupts synaptic plasticity: prevention by systemic passive immunization." J Neurosci . Vol. 28 (2008): 4231-4237]. 그러나, 올리고머가 어떻게 형성되는지 및 올리고머의 구조적 상태에 대해 아주 조금 공지되어 있다. 예를 들어, 올리고머를 형성하기 위해 회합하는 아밀로이드 β 하위단위의 수는 올리고머의 구조적 형태, 또는 어떤 잔기가 노출되었는지와 마찬가지로 현재 공지되어 있지 않다. 올리고머의 하나 초과의 구조적 상태가 신경활성이라는 것을 제시하는 증거가 있다. 문헌[Reed, Jess D. et al. "MALDI-TOF mass spectrometry of oligomeric food polyphenols." Phytochemistry 66:18 (September 2005): 2248-2263; 명확하게, James P. et al. "Natural oligomers of the amyloid-β protein specifically disrupt cognitive function." Nature Neuroscience Vol. 8 (2005): 79-84].
아밀로이드 β는 ApoE 및 ApoJ를 포함하는 뇌에서 발견되는 많은 단백질에 대해 친화도를 가진다. 그러나, 샤페론 또는 다른 단백질이 이의 최종 구조 상태 및/또는 이의 신경활성에 영향을 미칠 수 있는 단백질과 회합을 형성하는지는 명확하지 않다.
가용성 A베타 펩타이드는 시냅스 기능이상 및 인지 과정을 교란시킴으로써 AD의 초기 상태 동안 중요한 역할을 할 것이다. 예를 들어, 오리글리아(Origlia) 등은 가용성 A베타(A베타 42)가 p38MAPK의 진행된 당화반응 최종 생성물(RAGE) 매개 활성화에 대해 뉴런 수용체를 통해 내후각 피질에서 장기간 강화(LTP)를 손상시킨다는 것을 나타냈다. Origlia et al. 2008, p38 미토겐 활성화 단백질 키나제의 진행된 당화반응 최종 생성물 의존적 활성화에 대한 수용체는 아밀로이드-베타 매개 피질 시냅스 기능이상에 기여한다. J. Neuroscience 28(13):3521-3530(본 명세서에 참조문헌으로 인용됨).
시냅스 기능이상은 알츠하이머병의 초기 단계에 관여된다. 아밀로이드 베타 펩타이드는 시냅스 기능을 변경시키는 것으로 밝혀졌다. 푸조(Puzzo) 등은 A베타의 합성 섬유성 형태가 초기 단백질 합성 상에 영향을 미치지 않으면서 LTP의 후기 단백질 합성 의존적 상을 손상시킨다는 것을 보고하였다. 보고서는 A베타 올리고머가 세포에 매우 독성이고 시냅스 기능이상에 관여된다는 이전의 보고서와 일치한다. Puzzo et al., 2006, Curr Alzheimer's Res 3(3):179-183(본 명세서에 참조문헌으로 인용됨). A베타가 산화질소 캐스케이드를 포함하는 다양한 제2 메신저 캐스케이드에 의해 해마 장기간 강화(LTP)를 현저히 손상시키는 것으로 밝혀졌다. NO/cGMP/cGK/CREB. Puzzo et al., J Neurosci. 2005, 몇몇 실시형태에서, 본 개시내용은 뉴런 세포의 아밀로이드 베타 올리고머 유도 시냅스 기능이상을 저해하고; A베타 올리고머에 대한 뉴런의 노출에 의해 발생한 해마 장기간 강화의 억제를 저해하기 위한 시그마-2 수용체 길항제를 포함하는 조성물 및 방법을 제공한다.
아밀로이드 β의 임의의 형태는 아밀로이드 β 단량체, 올리고머, 피브릴, 및 단백질과 연관된 아밀로이드 β("단백질 복합체") 및 더 일반적으로 아밀로이드 β 어셈블리를 포함하는 본 개시내용에 따른 검정 및 스크리닝 방법의 실행 시 사용될 수 있다. 예를 들어, 스크리닝 방법은 예를 들어 미국 특허 출원 번호 제13/021,872호; 미국 특허 공보 제2010/0240868호; 국제 특허 출원 제WO/2004/067561호; 국제 특허 출원 제WO/2010/011947호; 미국 특허 공보 제20070098721호; 미국 특허 공보 제20100209346호; 국제 특허 출원 제WO/2007/005359호; 미국 특허 공보 제20080044356호; 미국 특허 공보 제20070218491호; 제WO/2007/126473호; 미국 특허 공보 제20050074763호; 국제 특허 출원 제WO/2007/126473, 국제 특허 출원 제WO/2009/048631호, 및 미국 특허 공보 제20080044406호, 미국 특허 제7,902,328호 및 미국 특허 제6,218,506호(이의 각각은 본 명세서에 참조문헌으로 인용됨)에 개시된 바대로 가용성 아밀로이드 β 올리고머의 다양한 형태를 사용할 수 있다.
아밀로이드 β의 단량체 또는 올리고머를 포함하는 아밀로이드 β 형태는 임의의 소스로부터 얻어질 수 있다. 예를 들어, 몇몇 실시형태에서, 상업적으로 구입 가능한 아밀로이드 β 단량체 및/또는 아밀로이드 β 올리고머는 수용액 중에 사용될 수 있고, 다른 실시형태에서, 수성 단백질 용액 중에 사용되는 아밀로이드 β 단량체 및/또는 아밀로이드 β 올리고머는 임의의 수의 공지된 기법을 이용하여 당업자에 의해 단리되고 정제될 수 있다. 일반적으로, 다양한 실시형태의 단백질 및 아밀로이드 β의 수용액의 제조에 사용된 아밀로이드 β 단량체 및/또는 아밀로이드 β 올리고머는 수용액 중에 가용성일 수 있다. 따라서, 수용액의 단백질 및 아밀로이드 β 둘 다는 가용성일 수 있다.
첨가된 아밀로이드 β는 임의의 아이소폼일 수 있다. 예를 들어, 몇몇 실시형태에서, 아밀로이드 β 단량체는 아밀로이드 β 1-42일 수 있고, 다른 실시형태에서, 아밀로이드 β 단량체는 아밀로이드 β 1-40일 수 있다. 훨씬 다른 실시형태에서, 아밀로이드 β는 아밀로이드 β 1-39 또는 아밀로이드 β 1-41일 수 있다. 그러므로, 다양한 실시형태의 아밀로이드 β는 아밀로이드 β의 임의의 C-말단 아이소폼을 포함할 수 있다. 훨씬 다른 실시형태는 N 말단이 벗겨진 아밀로이드 β를 포함하고, 몇몇 실시형태에서, 임의의 상기 기재된 아밀로이드 β C-말단 이성질체의 N 말단은 아미노산 2, 3, 4, 5, 또는 6일 수 있다. 예를 들어, 아밀로이드 β 1-42는 아밀로이드 β 2-42, 아밀로이드 β 3-42, 아밀로이드 β 4-42, 또는 아밀로이드 β 5-42 및 이들의 혼합물을 포함할 수 있고, 유사하게, 아밀로이드 β 1-40은 아밀로이드 β 2-40, 아밀로이드 β 3-40, 아밀로이드 β 4-40, 또는 아밀로이드 β 5-40을 포함할 수 있다.
다양한 실시형태에서 사용된 아밀로이드 β 형태는 야생형이거나, 즉 집단의 대부분에 의해 생체내 합성된 아밀로이드 β의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 가질 수 있거나, 몇몇 실시형태에서, 아밀로이드 β는 돌연변이체 아밀로이드 β일 수 있다. 실시형태는 임의의 특정한 다양한 돌연변이체 아밀로이드 β로 제한되지 않는다. 예를 들어, 몇몇 실시형태에서, 수용액으로 도입된 아밀로이드 β는 공지된 돌연변이, 예를 들어 "더치(Dutch)"(E22Q) 돌연변이 또는 "북극(Arctic)"(E22G) 돌연변이를 가지는 아밀로이드 β 등을 포함할 수 있다. 이러한 돌연변이된 단량체는 천연 발생 돌연변이, 예를 들어 알츠하이머병의 소인이 있는 개인의 집단으로부터 예를 들어 단리된 아밀로이드 β의 형태, 아밀로이드 β의 가족성 형태를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에서, 돌연변이체 아밀로이드 β 단량체는 특이적 돌연변이를 가지는 아밀로이드 β 돌연변이체를 생성하기 위한 분자 기법을 사용함으로써 합성으로 생성될 수 있다. 훨씬 다른 실시형태에서, 돌연변이체 아밀로이드 β 단량체는 이전에 확인되지 않은 돌연변이, 예를 들어 무작위로 생성된 아밀로이드 β 돌연변이체에서 발견되는 돌연변이체를 포함할 수 있다. 용어 "아밀로이드 β"는 본 명세서에 사용되는 바대로 아밀로이드 β의 야생형 형태, 및 아밀로이드 β의 임의의 돌연변이체 형태 둘 다를 포함하는 것으로 의도된다.
몇몇 실시형태에서, 수성 단백질 용액 중의 아밀로이드 β는 단일 아이소폼일 수 있다. 다른 실시형태에서, 아밀로이드 β의 다양한 C-말단 아이소폼 및/또는 아밀로이드 β의 다양한 N-말단 아이소폼은 수성 단백질 용액 중에 제공될 수 있는 아밀로이드 β 혼합물을 형성하도록 조합될 수 있다. 훨씬 다른 실시형태에서, 아밀로이드 β는 단백질 함유 수용액에 첨가되고 인시츄 절단된 아밀로이드 전구체 단백질(APP)로부터 유래할 수 있고, 이러한 실시형태에서, 아밀로이드 β의 다양한 아이소폼은 용액 내에 함유될 수 있다. N 말단의 벗겨짐 및/또는 C-말단 아미노산의 제거는 아밀로이드 β가 첨가된 후 수용액 내에 발생할 수 있다. 따라서, 본 명세서에 기재된 바대로 제조된 수용액은 단일 아이소폼이 초기에 용액에 첨가될 때에도 다양한 아밀로이드 β 아이소폼을 포함할 수 있다.
수용액에 첨가되는 아밀로이드 β 단량체는 천연 소스, 예컨대 살아 있는 조직으로부터 단리될 수 있고, 다른 실시형태에서, 아밀로이드 β는 합성 소스, 예컨대 형질전환 마우스 또는 배양된 세포로부터 유래할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 단량체, 올리고머, 또는 이들의 조합을 포함하는 아밀로이드 β 형태는 정상 대상체 및/또는 인지 감소 또는 이와 연관된 질환, 예컨대 알츠하이머병(이것으로 제한되지는 않음)으로 진단된 환자로부터 단리된다. 몇몇 실시형태에서, 아밀로이드 β 단량체, 올리고머, 또는 이의 조합은 정상 대상체 또는 이환된 환자로부터 단리된 A베타 어셈블리이다. 몇몇 실시형태에서, A베타 어셈블리는 고분자량, 예를 들어 100KDa 초과이다. 몇몇 실시형태에서, A베타 어셈블리는 중분자량, 예를 들어 10 내지 100KDa이다. 몇몇 실시형태에서, A베타 어셈블리는 10kDa 미만이다.
몇몇 실시형태의 아밀로이드 β 올리고머는 "올리고머"의 흔히 사용되는 정의와 일치하는 임의의 수의 아밀로이드 β 단량체로 구성될 수 있다. 예를 들어, 몇몇 실시형태에서, 아밀로이드 β 올리고머는 약 2개 내지 약 300개, 약 2개 내지 약 250개, 약 2개 내지 약 200개의 아밀로이드 β 단량체를 포함할 수 있고, 다른 실시형태에서, 아밀로이드 β 올리고머는 약 2개 내지 약 150개, 약 2개 내지 약 100개, 약 2개 내지 약 50개, 또는 약 2개 내지 약 25개의 아밀로이드 β 단량체로 구성될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 아밀로이드 β 올리고머는 2개 이상의 단량체를 포함할 수 있다. 다양한 실시형태의 아밀로이드 β 올리고머는 단량체의 확인에 기초하여 아밀로이드 β 피브릴 및 아밀로이드 β 프로토피브릴로부터 구별될 수 있다. 특히, 아밀로이드 β 올리고머의 아밀로이드 β 단량체는 일반적으로 β 병풍 시트로 구성된 구상인 반면, 피브릴 및 프로토피브릴의 아밀로이드 β 단량체의 2차 구조는 평형 β 시트이다.
알츠하이머병을 가지거나 이의 위험에 있는 대상체의 확인
알츠하이머병(AD)은 뇌 피질에서 세포외 β-아밀로이드(Aβ) 플라크 및 뉴런내 신경섬유 매듭의 존재에 의해 조직학적으로 정의된다. 다양한 진단학적 및 예후적 바이오마커가 당해 분야에 공지되어 있고, 예컨대 자기 공명 영상화, 단일 광자 방출 단층촬영, FDG PET, PiB PET, CSF 타우 및 A베타 분석, 및 진단학적 정확성에 대한 이용 가능한 데이터가 문헌[Alves et al., 2012, Alzheimer's disease: a clinical practice-oriented review, Frontiers in Neurology, April, 2012, vol 3, Article 63, 1-20](본 명세서에 참조문헌으로 인용됨)에 기재되어 있다.
누가 치매가 발병할 지의 예측과 함께 치매의 진단은 [(18)F]플루오로데옥시글루코스(FDG)를 이용함으로써 자기 공명 영상화 및 광장 방출 단층촬영(PET)에 의해 지원된다. 이들 기법은 AD에 특이적이지 않다. 예를 들어, 문헌[Vallabhajosula S. Positron emission tomography radiopharmaceuticals for imaging brain Beta-amyloid. Semin Nucl Med. 2011 Jul;41(4):283-99]을 참조한다. 인지 장애를 가지는 환자에서 보통 내지 빈번한 아밀로이드 신경반을 영상화하기 위해 최근에 FDA 승인된 또 다른 PET 리간드는 플로르베타피르(Florbetapir) F 18 주사, (4-((1E)-2-(6-{2-(2-(2-(18F)플루오로에톡시)에톡시)에톡시}피리딘-3-일)에테닐)-N-메틸벤젠아민, AMYVID(등록상표), 릴리(Lilly))이다. 플로르베타피르는 신경섬유 매듭이 아니라 섬유성 A베타에 특이적으로 결합한다. 예를 들어, 문헌[Choi SR, et al., Correlation of amyloid PET ligand florbetapir F 18 binding with Aβ aggregation and neuritic plaque deposition in postmortem brain tissue. Alzheimer Dis Assoc Disord. 2012 Jan;26(1):8-16]을 참조한다. PET 리간드 플로르베타피르는 PET 스캔의 정성적 육안 평가와 관련하여 낮은 특이성이 된다. Camus et al., 2012, Eur J Nucl Med Mol Imaging 39:621-631. 그러나, 신경반을 가지는 많은 사람들이 인지에서 정상인 것으로 보인다.
알츠하이머병에 대한 CSF 마커는 전체 타우, 포스포-타우 및 A베타42를 포함한다. 예를 들어 문헌[Andreasen, Sjogren and Blennow, World J Biol Psyciatry, 2003, 4(4): 147-155](본 명세서에 참조문헌으로 인용됨)을 참조한다. 다양한 연구에서 AD에서 A베타의 42개 아미노산 형태(Abeta42)의 감소한 CSF 수준 및 전체 타우의 증가한 CSF 수준이 발견되었다. 또한, AD가 발병할 위험에 있는 대상체의 확인에서 유용한 APP 유전자에서의 돌연변이에 대한 공지된 유전적 마커가 존재한다. 예를 들어 문헌[Goate et al., Segregation of a missense mutation in the amyloid precursor protein gene with familial Alzheimer's disease, Nature, 349, 704-706, 1991](본 명세서에 참조문헌으로 인용됨)을 참조한다. 실시형태에서, 임의의 공지된 진단학적 또는 예후적 방법은 알츠하이머병을 가지거나 이것이 발병할 위험에 있는 대상체를 확인하기 위해 이용될 수 있다.
시그마-2 수용체 길항제를 포함하는 약제학적 조성물
본 명세서에 제공된 시그마-2 수용체 길항제 화합물은 약제학적 조성물의 형태로 투여될 수 있다. 이 조성물은 약제 분야에서 널리 공지된 방식으로 제조될 수 있고, 국소 또는 전신 치료가 원해지는지 및 치료되는 부위에 따라 다양한 경로로 투여될 수 있다.
따라서, 본 개시내용의 또 다른 실시형태는 약제학적으로 허용 가능한 부형제 또는 희석제 및 치료학적 유효량의 본 개시내용의 시그마-2 수용체 길항제 화합물(거울상이성질체, 부분입체이성질체, N-옥사이드 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 포함)을 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다.
화합물이 벌크 물질로서 투여될 수 있으면서, 약제학적 제제 내에 활성 성분을 제시하는 것이 바람직할 수 있고, 예를 들어 여기서 활성제는 의도되는 투여 경로 및 표준 약제학적 실행과 관련하여 선택된 약제학적으로 허용 가능한 담체와의 혼합물이다.
따라서, 일 양상에서, 본 개시내용은 임의의 상기 화학식의 적어도 하나의 화합물, 항체 또는 단편, 및 상기 기재된 상기 시그마-2 수용체 길항제로서 기재된 다른 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 유도체(예를 들어, 염 또는 용매화물) 및, 임의로, 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 특히, 본 개시내용은 치료학적 유효량의 적어도 하나의 임의의 상기 화학식의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 유도체, 및, 임의로, 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
조합
본 개시내용의 조성물 및 방법의 경우, 임의의 상기 화학식의 화합물 및 상기 기재된 상기 시그마-2 수용체 길항제로서 기재된 다른 화합물은 다른 치료제 및/또는 활성제와 조합되어 사용될 수 있다.
몇몇 실시형태에서, 시그마-2 길항제 화합물은 콜린에스터라제 저해제, N-메틸-D-아스파르테이트(NMDA) 글루타메이트 수용체 길항제, 베타-아밀로이드 특이적 항체, 베타-분비효소 1(BACE1, 베타-부위 아밀로이드 전구체 단백질 절단 효소 1) 저해제, 종양 괴사 인자 알파(TNF 알파) 조정자, 정맥내 면역글로불린(intravenous immunoglobulin: IVIG), 또는 프리온 단백질 길항제 중 하나 이상과 조합될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 시그마-2 수용체 길항제는 타크린(COGNEX(등록상표); 사이엘), 도네페질(ARICEPT(등록상표); 화이자), 리바스티그민(EXELON(등록상표); 노바티스), 또는 갈란타민(RAZADYNE(등록상표); 오르토-맥네일-얀센)으로부터 선택된 콜린에스터라제 저해제와 조합된다. 몇몇 실시형태에서, 시그마-2 수용체 길항제는 페리스피날(perispinal) 에타네르셉트(ENBREL(등록상표), 암젠(Amgen)/화이자)인 TNF알파 조정자와 조합된다. 몇몇 실시형태에서, 시그마-2 수용체 길항제는 바피뉴주맙(화이자), 솔라네주맙(릴리), PF-04360365(화이자), GSK933776(글락소스미스클라인(GlaxoSmithKline)), 감마가드(박스터(Baxter)) 또는 옥타감(Octagam)(옥타팜(Octapharma))으로부터 선택된 베타-아밀로이드 특이적 항체와 조합된다. 몇몇 실시형태에서, 시그마-2 수용체 길항제는 메만틴(NAMENDA(등록상표); 포레스트)인 NMDA 수용체 길항제와 조합된다. 몇몇 실시형태에서, BACE1 저해제는 MK-8931(머크(Merck))이다. 몇몇 실시형태에서, 시그마-2 수용체 길항제는 문헌[Magga et al., J Neuroinflam 2010, 7:90, Human intravenous immunoglobulin provides protection against Ab toxicity by multiple mechanisms in a mouse model of Alzheimer's disease, 및 Whaley et al., 2011, Human Vaccines 7:3, 349-356, Emerging antibody products and Nicotiana manufacturing](이들 각각은 본 명세서에 참조문헌으로 인용됨)에 기재된 IVIG와 조합된다. 몇몇 실시형태에서, 시그마-2 수용체 길항제는 스트리트마터(Strittmatter) 등의 US 제2010/0291090호(본 명세서에 참조문헌으로 인용됨)에 개시된 바와 같은 프리온 단백질 길항제와 조합된다.
따라서, 본 개시내용은 추가의 양상에서 적어도 하나의 임의의 상기 화학식의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 유도체, 제2 활성제, 및 임의로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
동일한 제제에서 배합될 때, 2개 이상 화합물이 안정하고 서로 및 제제의 다른 성분과 상용성이어야 하는 것으로 이해될 것이다. 별개로 제제화될 때, 이들은 당해 분야에서 이러한 화합물에 대해 공지된 바와 같은 방식으로 편리하게 임의의 편리한 제제 중에 제공될 수 있다.
보존제, 안정화제, 염료 및 심지어 향료 물질은 약제학적 조성물 중에 제공될 수 있다. 보존제의 예는 나트륨 벤조에이트, 아스코르브산 및 p-하이드록시벤조산의 에스터를 포함한다. 항산화제 및 현탁제를 또한 사용할 수 있다.
생물제제, 예컨대 단일클론 항체 또는 단편을 포함하는 조합과 관련하여, 적합한 부형제는 응집을 방지하고, 일반적으로 비경구, 예를 들어 정맥내, 투여를 위해 적은 내독소로 용액 중에 항체 또는 단편을 안정화시키기 위해 사용될 것이다. 예를 들어, 문헌[Formulation and Delivery Issues for Monoclonal Antibody Therapeutics, Daugherty et al., in Current Trends in Monoclonal Antibody Development and Manufacturing, Part 4, 2010, Springer, New York pp 103-129]을 참조한다.
본 개시내용의 화합물은 정제 형성 및 다른 제제 유형에 적절한 입자 크기를 얻기 위해 공지된 분쇄 절차, 예컨대 습식 분쇄를 이용하여 분쇄될 수 있다. 본 개시내용의 화합물의 미분(나노입자) 제제는 당해 분야에 공지된 공정에 의해 제조될 수 있고, 예를 들어 WO 제02/00196호(스미스클라인 비참(SmithKline Beecham))를 참조한다.
투여 경로 및 단위 제형
투여(전달) 경로는 하기 중 하나 이상을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다: 경구(예를 들어, 정제, 캡슐로서, 또는 섭취용 용액으로서), 국소, 점막(예를 들어, 흡입용 비강 스프레이 또는 에어로졸로서), 비경구(예를 들어, 주사용 형태로), 위장관, 척수내, 복강내, 근육내, 정맥내, 뇌실내, 또는 다른 데포 투여 등. 항체 또는 단편의 투여는 일반적으로 비경구 수단에 의할 것이다.
따라서, 본 개시내용의 조성물은 특히 투여 방식에 대해 제제화된 형태의 것을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용의 약제학적 조성물은 경구 전달에 적합한 형태로 제제화된다. 예를 들어 화합물 CB 및 화합물 CF는 동물 모델에서 경구로 생체이용 가능하고 1일 1회 경구로 투여되고 공포 조건화 모델에서 효율을 나타낸 시그마-2 수용체 길항제 화합물이고, 예를 들어 도 12B를 참조한다. 본 명세서에 기재된 경구로 생체이용 가능한 화합물은 경구 제제에서 제조될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 시그마-2 길항제 화합물은 경구 전달에 적합한 경구로 생체이용 가능한 화합물이다. 다른 실시형태에서, 본 개시내용의 약제학적 조성물은 비경구 전달에 적합한 형태로 제제화된다. 몇몇 실시형태에서, 시그마-2 수용체 길항제 화합물은 항체 또는 이의 단편이고, 항체 또는 단편은 비경구 조성물 중에 제제화된다. 예를 들어, 항-시그마-2 수용체 항체, 예컨대 시그마-2 수용체에 대한 A베타 올리고머의 결합을 차단하는 항-PGRMC1 항체는 비경구 전달을 위해 제제화될 수 있다.
본 개시내용의 화합물은 인간 또는 수의 의학에서의 사용을 위한 임의의 편리한 방식으로 투여를 위해 제제화될 수 있고, 본 개시내용은 따라서 인간 또는 수의 의학에서의 사용에 적합한 본 개시내용의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 이의 범위 내에 포함한다. 이러한 조성물은 하나 이상 적합한 담체의 도움에 의해 종래의 방식으로 사용을 위해 제시될 수 있다. 치료학적 용도에 허용되는 담체는 약제학적 분야에 널리 공지되어 있고, 예를 들어 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro edit. 1985)]에 기재되어 있다. 약제학적 담체의 선택은 의도된 투여 경로 및 표준 약제학적 실행과 관련하여 선택될 수 있다. 약제학적 조성물은 담체 이외에 임의의 적합한 결합제(들), 활택제(들), 현탁제(들), 코팅제(들) 및/또는 용매화제(들)를 포함할 수 있다.
상이한 전달 시스템에 따라 상이한 조성물/제제 요건이 있을 수 있다. 모든 화합물이 동일한 경로에 의해 투여될 필요가 없는 것으로 이해되어야 한다. 마찬가지로, 조성물이 하나 초과의 활성 성분을 포함할 때, 이들 성분은 상이한 경로에 의해 투여될 수 있다. 예로서, 본 개시내용의 약제학적 조성물은 미니 펌프를 사용하여 또는 점막 경로에 의해, 예를 들어 흡입 또는 섭취용 용액을 위한 비강 스프레이 또는 에어로졸로서, 또는 비경구로(여기서, 조성물은 예를 들어 정맥내, 근육내 또는 피하 경로에 의한 전달을 위해 주사용 형태에 의해 제제화됨) 전달되도록 제제화될 수 있다. 대안적으로, 제제는 다수의 경로에 의해 전달되도록 설계될 수 있다.
본 명세서에 제공된 화합물 및 항체 또는 항체 단편 분자의 조합은 제제화되고 임의의 다수의 경로에 의해 투여될 수 있고, 적응증에서 또는 추구하는 목적에 대해 치료학적으로 유효 농도로 투여된다. 이 목표를 달성하기 위해, 항체는 당해 분야에 공지된 다양한 허용되는 부형제를 사용하여 제제화될 수 있다. 통상적으로, 항체는 주사, 예를 들어 정맥내 주사에 의해 투여된다. 이 투여를 달성하는 방법은 당해 분야의 당업자에게 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌[Gokarn et al., 2008, J Pharm Sci 97(8):3051-3066](본 명세서에 참조문헌으로 인용됨)은 다양한 고농도 항체 자가 완충 제제를 기술한다. 예를 들어, 5.25% 솔비톨(pH 5.0) 중의 50㎎/㎖ mAb 또는 5% 솔비톨, 0.01% 폴리솔베이트 20(pH 5.2) 중의 60㎎/㎖ mAb에서의 자가 완충 제제; 또는 종래의 완충 제제, 예를 들어 5.25% 솔비톨, 25 또는 50mM 아세테이트, 글루타메이트 또는 숙시네이트(pH 5.0) 중의 50㎎/㎖ mAb1; 또는 10mM 아세테이트 또는 글루타메이트, 5.25% 솔비톨, 0.01% 폴리솔베이트 20(pH 5.2) 중의 60㎎/㎖; 다른 더 낮은 농도 제제 중의 예를 들어 단일클론 항체가 당해 분야에 공지된 바대로 사용될 수 있다.
본 개시내용의 바람직한 시그마-2 수용체 길항제 화합물은 혈액 뇌 장벽을 횡단할 수 있으므로, 이것은 예를 들어 전신(예를 들어, iv, SC, 경구, 점막, 경피 경로에 의해) 또는 국소화 방법(예를 들어, 두개내)을 포함하는 다양한 방법에서 투여될 수 있다. 본 개시내용의 화합물이 위장 점막을 통해 점막으로 전달되는 경우, 이것은 위장관을 통한 수송 동안 안정하게 있을 수 있어야 하고; 예를 들어, 이것은 단백질 분해에 내성이고, 산 pH에서 안정하고, 담즙의 세제 효과에 내성이어야 한다. 예를 들어, 시그마-2 리간드로부터 선택되고 상기 기재된 경구 투여에 제조된 시그마-2 길항제 화합물은 장용 코팅 층에 의해 코팅될 수 있다. 장용 코팅 층 재료는 물 또는 적합한 유기 용매 중에 분산되나 용해될 수 있다. 장용 코팅 층 중합체로서, 하기 중 하나 이상이, 별개로 또는 조합으로, 사용될 수 있다; 예를 들어, 메타크릴산 공중합체, 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트, 셀룰로스 아세테이트 뷰티레이트, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스 프탈레이트, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스 아세테이트 숙시네이트, 폴리비닐 아세테이트 프탈레이트, 셀룰로스 아세테이트 트라이멜리테이트, 카복시메틸에틸셀룰로스, 쉘락 또는 다른 적합한 장용 코팅 층 중합체(들)의 용액 또는 분산액. 환경적 이유로, 수성 코팅 공정이 바람직할 수 있다. 이러한 수성 공정에서, 메타크릴산 공중합체가 가장 바람직하다.
적절한 경우, 약제학적 조성물은 흡입에 의해, 피부 패치의 사용에 의해, 부형제, 예컨대 전분 또는 락토스를 함유하는 정제의 형태로 경구로, 또는 단독의 또는 부형제와 혼합된 캡슐 또는 질좌약(ovule)으로, 또는 향료 또는 착색제를 함유하는 엘릭시르, 용액 또는 현탁액의 형태로 투여될 수 있거나, 이것은 비경구로, 예를 들어 정맥내로, 근육내로 또는 피하로 주사될 수 있다. 협측 또는 설하 투여를 위해, 조성물은 종래의 방식으로 제제화될 수 있는 정제 또는 로렌지제의 형태로 투여될 수 있다.
본 개시내용의 조성물이 비경구로 투여되고자 하는 경우, 이러한 투여는 제한 없이 본 개시내용의 화합물을 정맥내, 동맥내, 척추강내, 심실내, 두개내, 근육내 또는 피하 투여하는 것; 및/또는 점적주사 기법을 사용하는 것을 포함할 수 있다. 항체 또는 단편은 통상적으로 비경구로, 예를 들어 정맥내로 투여된다.
주사 또는 점적주사에 적합한 약제학적 조성물은 점적주사 또는 주사에 적합한 이러한 무균 용액 또는 분산액의 제조를 위해, 필요한 바대로, 조정되는 활성 성분을 함유하는 무균 수용액, 분산 또는 무균 분말의 형태일 수 있다. 이 제제는 리포솜으로 임의로 캡슐화될 수 있다. 모든 경우에, 최종 제제는 무균이고, 액체이며, 제조 및 저장 조건 하에 안정해야 한다. 저장 안정성을 개선하기 위해, 이러한 제제는 미생물의 성장을 막는 보존제를 또한 함유할 수 있다. 미생물의 작용의 예방은 다양한 항박테리아제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로뷰탄올, 또는 아시소르브산의 첨가에 의해 달성될 수 있다. 많은 경우에, 체액, 특히 혈액과 유사한 삼투 압력을 보장하기 위해 등장성 물질, 예를 들어 당, 완충제 및 염화나트륨이 추천된다. 이러한 주사용 혼합물의 연장된 흡수는 흡수-지연제, 예컨대 알루미늄 모노스테아레이트 또는 젤라틴의 도입에 의해 달성될 수 있다.
분산액은 액체 담체 또는 중간체, 예컨대 글라이세린, 액체 폴리에틸렌 글리콜, 트라이아세틴 오일, 및 이의 혼합물 중에 제조될 수 있다. 액체 담체 또는 중간체는 예를 들어 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 또는 기타), 식물성 오일, 비독성 글라이세린 에스터 및 이의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 액체 분산성 매질일 수 있다. 적합한 유동성은 리포솜의 생성, 분산의 경우에 적합한 입자 크기의 투여, 또는 계면활성제의 첨가에 의해 유지될 수 있다.
비경구 투여의 경우, 화합물은 용액이 혈액과 등장성이게 만드는 다른 물질, 예를 들어 충분한 염 또는 글루코스를 함유할 수 있는 무균 수용액의 형태로 최고로 사용된다. 수용액은 필요한 경우 (바람직하게는, 3 내지 9의 pH로) 적합하게 완충되어야 한다. 무균 조건 하의 적합한 비경구 제제의 제조는 당해 분야의 당업자에게 널리 공지된 표준 약제학적 기법에 의해 용이하게 달성된다.
화학식 I의 화합물을 적절한 용매 및 상기 언급된 담체 중 하나 이상과 혼합한 후, 무균 여과시킴으로써 무균 주사용 용액은 제조될 수 있다. 무균 주사용 용액의 조제에 사용하기에 적합한 무균 분말의 경우에, 바람직한 제제 방법은 진공 하 건조 및 동결건조를 포함하고, 이것은 시그마-2 수용체 길항제 및 무균 용액의 후속 제조를 위한 원하는 부형제의 분말 혼합물을 제공한다.
본 개시내용에 따른 화합물은 주사에 의해(예를 들어, 정맥내 볼루스 주사 또는 점적주사에 의해 또는 근육내, 피하 또는 척수강내 경로를 통해) 인간 또는 수의 의학에서 사용하도록 제제화될 수 있고, 필요한 경우 첨가된 보존제와 함께 단위 용량 형태로, 앰플 또는 다른 단위 용량 용기, 또는 다중 용량 용기에서 제시될 수 있다. 주사용 조성물은 오일 또는 수성 비히클 중의 현탁액, 용액 또는 에멀전의 형태일 수 있고, 제제화 물질, 예컨대 현탁, 안정화, 용매화 및/또는 분산 물질을 함유할 수 있다. 대안적으로, 활성 성분은 사용 전에 적합한 비히클, 예를 들어 무균, 발열원 비함유 물과의 재구성을 위해 무균 분말 형태일 수 있다.
본 개시내용의 화합물은 즉시, 지연, 변형, 지속, 펄스화 또는 제어 방출 적용을 위해 정제, 캡슐, 트로키, 질좌약, 엘릭시르, 용액 또는 현탁액의 형태로 투여될 수 있다.
본 개시내용의 화합물은 사용 전에 물 또는 다른 적합한 비히클과의 재구성을 위해 예를 들어 용액, 겔, 시럽, 또는 현탁액, 또는 건조 분말의 형태로 경구 또는 협측 투여에 적합한 형태로 인간 또는 수의 용도에 또한 제시될 수 있다. 고체 조성물, 예컨대 정제, 캡슐, 로젠지, 트로키, 파스틸(pastille), 환제, 볼루스, 분말, 페이스트, 과립, 불릿(bullet) 또는 프리믹스 제제가 또한 사용될 수 있다. 경구 용도를 위한 고체 및 액체 조성물은 당해 분야에 널리 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다. 이러한 조성물은 고체 또는 액체 형태일 수 있는 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 담체 및 부형제를 또한 함유할 수 있다.
정제는 부형제, 예컨대 미결정질 셀룰로스, 락토스, 시트르산나트륨, 탄산칼슘, 이염기성 인산칼슘 및 글리신, 붕괴제, 예컨대 전분(바람직하게는, 옥수수, 감자 또는 타피오카 전분), 나트륨 전분 글리콜레이트, 크로스카르멜로스 나트륨 및 소정의 복잡한 실리케이트, 및 과립 결합제, 예컨대 폴리비닐피롤리돈, 하이드록시프로필메틸셀룰로스(HPMC), 하이드록시프로필셀룰로스(HPC), 수크로스, 젤라틴 및 아카시아를 함유할 수 있다.
추가적으로, 활택제, 예컨대 스테아르산마그네슘, 스테아르산, 글라이세릴 베헤네이트 및 활석이 포함될 수 있다.
조성물은 이의 제조를 위해 신속 또는 제어 방출 정제, 마이크로입자, 미니 정제, 캡슐, 사셰(sachet), 및 경구 용액 또는 현탁액, 또는 분말의 형태로 경구로 투여될 수 있다. 경구 제제는 임의로 다양한 표준 약제학적 담체 및 부형제, 예컨대 결합제, 충전제, 완충제, 활택제, 유동화제, 염료, 붕괴제, 착취제, 감미료, 계면활성제, 금형 이형제, 접착방지 물질 및 코팅을 포함할 수 있다. 몇몇 부형제는 조성물 중에 다수의 역할을 가질 수 있고, 예를 들어 결합제 및 붕괴제 둘 다로서 작용한다.
본 명세서에서 유용한 경구 조성물을 위한 약제학적으로 허용 가능한 붕괴제의 예는 전분, 호화 전분, 나트륨 전분 글리콜레이트, 나트륨 카복시메틸셀룰로스, 크로스카르멜로스 나트륨, 미결정질 셀룰로스, 알기네이트, 수지, 계면활성제, 발포성 조성물, 수성 규산알루미늄 및 가교결합된 폴리비닐피롤리돈을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
본 명세서에서 유용한 경구 조성물을 위한 약제학적으로 허용 가능한 결합제의 예는 아카시아; 셀룰로스 유도체, 예컨대 메틸셀룰로스, 카복시메틸셀룰로스, 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 하이드록시프로필셀룰로스 또는 하이드록시에틸셀룰로스; 젤라틴, 글루코스, 덱스트로스, 자일리톨, 폴리메타크릴레이트, 폴리비닐피롤리돈, 솔비톨, 전분, 호화 전분, 트라가칸스, 잔틴 수지, 알기네이트, 마그네슘-규산알루미늄, 폴리에틸렌 글리콜 또는 벤토나이트를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
경구 조성물을 위한 약제학적으로 허용 가능한 충전제의 예는 락토스, 언하이드로락토스, 락토스 1수화물, 수크로스, 덱스트로스, 만니톨, 솔비톨, 전분, 셀룰로스(특히 미결정질 셀룰로스), 다이하이드로- 또는 언하이드로-인산칼슘, 탄산칼슘 및 황산칼슘을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
본 개시내용의 조성물에 유용한 약제학적으로 허용 가능한 활택제의 예는 스테아르산마그네슘, 활석, 폴리에틸렌 글리콜, 에틸렌 옥사이드의 중합체, 라우릴 황산 나트륨, 라우릴 황산 마그네슘, 나트륨 올레에이트, 나트륨 스테아릴 퓨마레이트, 및 콜로이드성 이산화규소를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
경구 조성물을 위한 적합한 약제학적으로 허용 가능한 착취제의 예는 합성 아로마 및 천연 방향족 오일, 예컨대 오일 추출물, 꽃, 과일(예를 들어, 바나나, 사과, 사우어 체리, 복숭아) 및 이들의 조합, 및 유사한 아로마를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 이의 용도는 많은 인자에 따라 달라지고, 가장 중요한 것은 약제학적 조성물을 취하는 집단의 관능적 수용능력이다.
경구 조성물을 위한 적합한 약제학적으로 허용 가능한 염료의 예는 합성 및 천연 염료, 예컨대 이산화티탄, 베타-카로텐 및 자몽 껍질의 추출물을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
삼키기 수월하게 하고/하거나, 방출 특성을 변경하고/하거나, 외관을 개선하고/하거나, 조성물의 맛을 차폐시키기 위해 통상적으로 사용되는 경구 조성물을 위한 유용한 약제학적으로 허용 가능한 코팅의 예는 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 하이드록시프로필셀룰로스 및 아크릴레이트-메타크릴레이트 공중합체를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
경구 조성물을 위한 약제학적으로 허용 가능한 감미료의 적합한 예는 아스파르탐, 사카린, 사카린 나트륨, 나트륨 사이클라메이트, 자일리톨, 만니톨, 솔비톨, 락토스 및 수크로스를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
약제학적으로 허용 가능한 완충제의 적합한 예는 시트르산, 시트르산나트륨, 중탄산나트륨, 이염기성 인산나트륨, 산화마그네슘, 탄산칼슘 및 수산화마그네슘을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
약제학적으로 허용 가능한 계면활성제의 적합한 예는 라우릴 황산 나트륨 및 폴리솔베이트를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
유사한 유형의 고체 조성물은 젤라틴 캡슐 중에 충전제로서 또한 사용될 수 있다. 바람직한 부형제는 이와 관련하여 락토스, 전분, 셀룰로스, 유당 또는 고분자량 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 수성 현탁액 및/또는 엘릭시르의 경우, 상기 물질은 다양한 감미료 또는 향료, 착색제 또는 염료, 유화제 및/또는 현탁제 및 희석제, 예컨대 물, 에탄올, 프로필렌 글리콜 및 글라이세린, 및 이들의 조합과 조합될 수 있다.
표시된 바대로, 본 개시내용의 화합물은 비강으로 또는 흡입에 의해 투여될 수 있고, 적합한 추진제, 예를 들어 다이클로로다이플루오로메탄, 트라이클로로플루오로메탄, 다이클로로테트라플루오로에탄, 하이드로플루오로알칸, 예컨대 1,1,1,2-테트라플루오로에탄(HFA 134AT) 또는 1,1,1,2,3,3,3-헵타플루오로프로판(HFA 227EA), 이산화탄소 또는 다른 적합한 가스의 사용에 의해 가압 용기, 펌프, 스프레이 또는 분무기로부터 건조 분말 흡입기 또는 에어로졸 스프레이 제시의 형태로 편리하게 전달된다. 가압 에어로졸의 경우에, 투약량 단위는 계량 양을 전달하기 위해 밸브를 제공함으로써 결정될 수 있다. 가압 용기, 펌프, 스프레이 또는 분무기는, 예를 들어 활택제, 예를 들어 소르비탄 트라이올레에이트를 추가적으로 함유할 수 있는, 용매로서 에탄올의 추진제의 혼합물을 사용하여, 활성 화합물의 용액 또는 현탁액을 함유할 수 있다.
흡입기 또는 취입기에서 사용하기 위한 (예를 들어, 젤라틴으로부터 제조된) 캡슐 및 카트리지는 화합물 및 적합한 분말 기제, 예컨대 락토스 또는 전분의 분말 혼합물을 함유하도록 제제화될 수 있다.
흡입에 의한 국소 투여를 위해, 본 개시내용에 따른 화합물은 분무기를 통해 인간 또는 수의 의학에서 사용하기 위해 전달될 수 있다.
본 개시내용의 약제학적 조성물은 활성 재료의 용적당 0.01 내지 99중량%를 함유할 수 있다. 국소 투여의 경우, 예를 들어 조성물은 0.01-10%, 더 바람직하게는 0.01-1%의 활성 재료를 일반적으로 함유할 것이다.
화합물은 리포솜 전달 시스템, 예컨대 작은 단층 소포, 큰 단층 소포 및 다층 소포의 형태로 또한 투여될 수 있다. 리포솜은 다양한 인지질, 예컨대 콜레스테롤, 스테아릴아민 또는 포스파티딜콜린으로부터 형성될 수 있다.
본 개시내용의 약제학적 조성물 또는 단위 제형은 특정한 환자에 대한 독성 또는 부작용을 최소화하면서 최적 활성을 얻기 위해 상기 제공된 가이드라인의 견지에서 일상적 시험에 의해 한정된 투약량 및 투여 섭생에 따라 투여될 수 있다. 그러나, 치료학적 섭생의 이러한 미세한 조율은 본 명세서에 제공된 가이드라인의 견지에서 일상적이다.
본 개시내용의 화합물의 투약량은 다양한 인자, 예컨대 기초 질환 상태, 개인의 상태, 체중, 성별 및 연령, 및 투여 방식에 따라 변할 수 있다. 장애를 치료하기 위한 유효량은 예를 들어 투약량의 매트릭스 및 투여 빈도를 확립하고 매트릭스에서의 각각의 점에서 실험 유닛의 군 또는 대상체를 비교함으로써 당해 분야의 당업자에게 공지된 실증적 방법에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 환자에게 투여되는 정확한 양은 장애의 상태 및 중증도 및 환자의 신체 상태에 따라 변할 것이다. 임의의 증상 또는 매개변수의 측정 가능한 경감은 당해 분야의 당업자에 의해 결정되거나 환자에 의해 의사에게 보고될 수 있다. 요로 장애의 임의의 증상 또는 매개변수의 임의의 임상적으로 또는 통계적으로 유의적인 감소 또는 경감이 본 개시내용의 범위 내에 있는 것으로 이해될 것이다. 임상적으로 유의적인 감소 또는 경감은 환자 및/또는 의사에게 지각 가능함을 의미한다.
투여되는 화합물의 양은 약 0.01 내지 약 25㎎/㎏/일, 보통 약 0.1 내지 약 10㎎/㎏/일, 가장 대개 0.2 내지 약 5㎎/㎏/일의 범위일 수 있다. 이러한 유효량이 이러한 약제학적 제제의 복수의 분할 용량의 투여에 의해 도달될 수 있으므로, 본 개시내용의 약제학적 제제가 장애를 치료하는 데 효과적인 화합물의 전체 양을 반드시 함유할 필요는 없는 것으로 이해될 것이다.
본 개시내용의 바람직한 실시형태에서, 화합물 I는 10 내지 200㎎의 본 개시내용의 화합물을 보통 함유하는 캡슐 또는 정제에서 캡슐화되고, 바람직하게는 10 내지 300㎎, 바람직하게는 20 내지 150㎎, 가장 바람직하게는 약 50㎎의 전체 일일 용량으로 환자에게 투여된다.
비경구 투여를 위한 약제학적 조성물은 전체 약제학적 조성물의 100중량% 기준으로 본 개시내용의 활성 화합물의 약 0.01중량% 내지 약 100중량%를 함유한다.
일반적으로, 경피 제형은 제형의 100% 전체 중량에 비해 활성 화합물의 약 0.01중량% 내지 약 100중량%를 함유한다.
약제학적 조성물 또는 단위 제형은 단일 일일 용량으로 투여될 수 있거나, 전체 일일 투약량은 분할 용량으로 투여될 수 있다. 또한, 장애의 치료를 위한 또 다른 화합물의 동시투여 또는 순차 투여가 바람직할 수 있다. 이 목적에, 조합 활성 원칙은 단순한 투약량 단위로 제제화된다.
화합물의 합성
화학식 I 및 II의 화합물 및 거울상이성질체, 부분입체이성질체, N-옥사이드, 및 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 예를 들어 WO 제2013/029057호(본 명세서에 참조문헌으로 인용되거나, 이하 본 명세서에 기재됨)에 기재된 일반 방법에 의해 제조될 수 있고, 상기 방법은 본 개시내용의 추가의 양상을 구성한다.
화합물의 제법에서 사용된 중간체의 보호된 유도체를 사용하는 것이 바람직할 수 있다는 것이 당해 분야의 당업자에 의해 이해될 것이다. 작용기의 보호 및 탈보호는 당해 분야에 공지된 방법에 의해 수행될 수 있다(예를 들어, 문헌[Green and Wuts Protective Groups in Organic Synthesis. John Wiley and Sons, New York, 1999] 참조.). 하이드록시 또는 아미노기는 임의의 하이드록시 또는 아미노 보호기에 의해 보호될 수 있다. 아미노 보호기, 예를 들어, 아실기, 예컨대 알카노일, 알콕시카보닐 및 아로일기는 종래의 기법에 의해 제거될 수 있고, 가용매분해에 의해, 예를 들어 산성 또는 염기성 조건 하의 가수분해에 의해 제거될 수 있다. 아릴메톡시카보닐기(예를 들어, 벤질옥시카보닐)는 촉매, 예컨대 챠콜 상 팔라듐의 존재 하에 수소화분해에 의해 절단될 수 있다.
당해 분야의 당업자에게 널리 공지된 표준 기법을 이용하여 끝에서 두번째 중간체에 존재할 수 있는 임의의 보호기를 제거함으로써 표적 화합물의 합성이 완료된다. 이후, 탈보호된 최종 생성물은, 필요한 바대로, 표준 기법, 예컨대 실리카 겔 크로마토그래피, 실리카 겔 상의 HPLC 등을 이용하여, 또는 재결정화에 의해 정제된다.
작업 및 합성 실시예
실시예 1 및 2는 실험에 사용될 수 있는 A베타 올리고머 제제, 예컨대 본 명세서에 기재된 것을 기술한다. 막 수송 및 올리고머 바인딘/시냅스 환원 검정에서 사용된 특정한 제제, 및 하기 기재된 생체내 검정에 사용된 것은 각각 이것이 관여하는 실시예에 기재되어 있다.
실시예 1: 아밀로이드 β 올리고머의 제조
아밀로이드 β 올리고머 및 피브릴의 더 질환 관련된 구조적 상태를 확인하기 위해 아밀로이드 β가 신경 조직에서 올리고머화할 수 있는 조건인, 이것이 회합할 수 있는 수성-가용성 단백질의 환경을 재생성하였다. 수성 가용성 단백질을 초원심분리에 의해 래트 뇌로부터 제조하였다. 구체적으로, 뇌 조직의 1그램당 5 용적의 TBS 완충제(20mM 트리스-HCL, pH 7.5, 34mM NaCl 및 완전 프로테아제 저해제 칵테일(Santa Cruz)를 얼음에서 래트 뇌 조직에 첨가하였다. 이후, 다운스(dounce) 균질화를 타이트 피팅 막자에 의해 수행하였다. 이후, 균질화된 뇌 조직을 150,000 x g에서 4℃에서 1시간 동안 원심분리하였다(40,000rpm Ty65). 이후, (부유하는 미엘린과 펠릿 위 반 ㎝ 사이의) 하층액을 제거하고 분취량을 -75℃에서 냉동시켰다. 이후, 펠렛을 원래 용적으로 TBS 중에 재현탁시키고, -75℃에서 분취량에서 냉동시켰다. 합성, 단량체 인간 아밀로이드 β 1-42를 이 혼합물에 첨가하여 1.5μM 아밀로이드 β의 최종 농도를 제공하고, 용액을 4℃에서 24시간 동안 항온처리하였다. 5,800g에서 10분 동안 혼합물의 원심분리를 수행하여 섬유성 어셈블리를 제거하고, 이후 면역침전을 4℃에서 24시간 동안 6E10 접합된 아가로스 스핀 칼럼(Pierce Chemical Company)을 사용하여 수행하였다. 이후, 용리된 아밀로이드 β 올리고머를 MALDI -Tof 질량 분광 분석으로 처리하여 샘플의 함량을 확인하였다.
아밀로이드 β는 단백질에서 자가 회합하여 22,599Da, 5 하위단위 5합체 및 31,950Da, 7 하위단위, 7합체의 하위단위 어셈블리를 형성한다. 49,291Da에서의 또 다른 피크는 12 하위단위, 12합체를 나타낼 수 있지만, 이는 아밀로이드 β 12합체에 대한 정확한 분자량인 것으로 보이지 않는다. 특히, 아밀로이드 β 단량체 및 이량체를 나타내는 4518Da 또는 9036Da에서 피크가 관찰되지 않았다. 그러나, 9,882Da 및 14,731Da에서의 피크는 각각 786Da(또는 2x393Da) 지질과 연관된 아밀로이드 β 이량체 또는 단백질 및 3x393Da 지질 또는 단백질과 연관된 아밀로이드 β 삼량체를 나타낼 수 있다. 또한, 19,686Da에서의 피크의 존재는 가능하게는 삼량체 복합체 및 4954Da의 래트 아밀로이드 β 단편을 포함하는 어셈블리 상태를 나타낸다. 따라서, 이 데이터는, 생리학적 시스템에 독특한 입체구성 상태의 어셈블리를 지시할 수 있는, 작은 지질 또는 단백질과 아밀로이드 β의 이량체 및 삼량체의 회합을 반영할 수 있다.
실시예 2: 베타-아밀로이드 올리고머의 제조
래트 뇌 가용성 단백질의 혼합물 중의 1.5μM 단량체 인간 아밀로이드 β 1-42의 용액을 실시예 1에 기재된 바대로 4℃에서 24시간 동안 항온처리하였다. 이후, 이 용액을 스펙트럼을 취하기 전에 트라이-플루오로 에탄올(TFE)에 의해 처리하였다. TFE에서, 조립된 단백질 구조 및 비공유로 결합된 단백질 복합체는 변성된 단백질로 해리하고, 조립된 올리고머와 연관된 피크는 사라지는 것으로 예상된다. 상기 확인된 9822Da, 14,731Da, 31,950Da 및 49,291Da 피크를 포함하는, 실시예 1에서 관찰된 대부분의 단백질 피크가 사라졌다. 그러나, 아밀로이드 β 단량체 피크를 나타내는 4518Da에서 풍부한 피크가 관찰된다. 아밀로이드 β 1-46과 유사한 긴 a베타 단편을 나타낼 수 있는 4954.7에서의 피크가 분명하다. 2550Da 공유로 결합된 단백질과 연관된 아밀로이드 β 단량체를 나타낼 수 있는, 실시예 1에 기재된 제제에 존재하지 않는, 7086Da에서의 추가적인 피크가 관찰되었다.
실시예 3: 인간 AD 뇌 조직으로부터의 베타-아밀로이드 올리고머의 단리.
TBS 가용성 추출물: 병원 뇌 조직 은행으로부터 조직병리학적 분석을 통해 브라크 병기(Braak stage) V/VI 알츠하이머병(AD)으로서 규명된 인간 환자로부터의 사후검시 뇌 조직의 샘플을 얻었다. 연령 및 성병 일치하는 AD 및 정상 조직 시편을 1mM EDTA 및 1㎎/㎖ 완전 프로테아제 저해제 칵테일(시그마 P8340)을 함유하는 20mM 트리스-HCL, 137mM NaCl(pH 7.6) 중에 0.15g 조직/㎖로 희석하고 균질화하였다. 조직 균질물의 초원심분리를 벡맨 옵티마(Beckman Optima) XL-80K 초원심분리기에서 105,000g에서 1시간 동안 수행하였다. 생성된 TBS 가용성 분획을 단백질-A 및 단백질-G 아가로스 칼럼(피어스 케미컬(Pierce Chemical))을 사용하여 면역결핍시키고, 이후, Amicon Ultra 3, 10 및 100kDa NMWCO 필터(밀리포어 코포레이션(Millipore Corporation))에 의해 크기 분별화하였다.
면역침전: 크기 분별화되고 면역결핍된 TBS 가용성 추출물을 적절한 NMWCO 아미콘 울트라 필터(Amicon Ultra filter) 중에 대략 200㎕로 농축시켰다. 농축된 TBS 가용성 추출물을 TBS 샘플 완충제(피어스 케미컬)에 의해 400㎕ 이하로 희석하고, 5,800 g에서 10분 동안 원심분리하여 피브릴을 제거하였다. 이후, 생성된 상청액을 6E10 접합된 아가로스 비드에 의해 4℃에서 밤새 면역침전시킨 후, 고삼투 강도 젠틀 일루션(Gentle elution) 완충제(피어스 케미컬)를 사용하여 항원 용리하여 A베타 함유 단백질 종을 단리하였다.
MALDI -질량 분광법: 면역단리된 베타 아밀로이드를 어플라이드 바이오시스템즈(Applied Biosystems)(ABI) 보이저(Voyager) DE-Pro MALDI-Tof 기기를 사용하여 질량 분광 분석으로 처리하였다. 분석의 표적 분자량 범위에 따라 다양한 매트릭스 유형, 예컨대 α-사이아노-4-하이드록시신남산(CHCA), 시나핀산(SA), 또는 6-아자-2-티오티민(ATT)을 사용하여 샘플을 분석하였다. 다양한 추출 지연과 함께 선형-양이온 모드에서 기기를 실행하였다. 비축적된 스펙트럼은 획득마다 "핫 스팟"의 100개의 샷을 나타내는 반면, 축적된 스펙트럼은 획득마다 200 레이저에 의한 각각의 스팟의 12개의 별개의 구역으로 나타낸다.
데이터 분석: 보이져 데이터 익스플로어 소프트웨어 패키지(Voyager's Data Explorer software package)를 사용하여 데이터 획득 및 분석을 수행하였다. 질량 스펙트럼의 표준 처리는 신호 대 노이즈 비율에서의 변동 이외에 스펙트럼의 평활화 및 기준 공제 기능을 포함한다.
Ab 정량화에 대한 ELISA: 변형 샌드위치 ELISA 기법을 이용하여 "전체" A베타 및 A베타 올리고머 농도 둘 다에 대해 면역침전된 TBS 가용성 분획을 분석하였다. 간단히 말하면, 6E10 및 4G8 코팅된 Nunc MaxiSorp 96웰 플레이트를 A베타 함유 샘플과 항온처리하고, 이후 바이오티닐화된 4G8 검출 항체에 의해 프로빙하였다. 스트렙타비딘-HRP(Rockland)에 의한 항온처리 후 테트라메틸 벤지딘(TMB) 기질의 발생은 바이오텍 시너지(BioTEk Synergy) HT 플레이트 판독기에서 a베타의 비색 검출(OD 450)을 허용하였다. 단량체 A베타 1-42는 표준 곡선의 생성에 사용되고, GEN 5 소프트웨어와 함께 면역침전된 샘플에서 A베타 수준의 정량화를 허용하였다.
실시예 4: 수용체 결합 검정
소정의 화합물을 결합 또는 이의 효현제 또는 길항제의 작용을 차단함으로써 여러 수용체와의 상호작용에 대해 시험하였다. 몇몇 화합물을 이들이 직접적으로 공지된 세포 수용체 또는 신호전달 단백질과 상호작용하는지를 보기 위해 시험하였다. 화합물을 세포주에서 과발현되거나 조직으로부터 단리된 소정의 인간 수용체의 공지된 효현제 또는 길항제의 결합을 대체하는 능력에 대해 시험할 수 있다. 화합물을 소정의 인간 수용체의 효현제 또는 길항제에 의해 유도된 하향 신호전달을 차단하는 능력에 대해 또한 시험할 수 있다. 화합물을 100개의 공지된 수용체에서 작용에 대해 시험할 수 있고, 오직 CNS 관련 수용체의 작은 하위집단에서 비활성(specific activity)이 발생하는 것이 바람직하다. 다른 수용체와 비교하여 가장 높은 친화도로 시그마-2 수용체에 결합하는 화합물은 시그마-2 수용체 선택적 리간드로 표지된다.
동일한 프로토콜을 이용하여, 막 수송 데이터가 표 2에 제공된 몇몇 화합물을 시그마-2 수용체의 인식에 대해 시험한다. 화학식 I의 소정의 바람직한 화합물은 선택적 시그마-2 수용체 리간드이고, 즉 시그마-2 수용체에 우선적으로 결합한다.
경쟁적 방사성 리간드 결합 검정.
시그마-1 수용체 및 시그마-2 수용체에 대한 방사성 리간드 결합 검정을 상업 계약 조사 협회에 의해 수행하였다. 시그마-1 결합을 위해, 100μM 내지 1nM의 다양한 농도의 시험 화합물을 사용하여 주카트(Jurkat) 세포막에서 내인성 수용체로부터 8nM [3H](+)펜타조신을 대체하였다(Ganapathy ME et al. 1991, J Pharmacol. Exp. Ther. 289:251-260). 10μM 할로페리돌을 사용하여 비특이적 결합을 한정하였다. 시그마-2 수용체의 경우, 100μM 내지 1nM의 다양한 농도의 시험 화합물을 사용하여 300nM (+)펜타조신의 존재 하에 래트 뇌 피질로부터 막에서 내인성 수용체로부터 5nM [3H] 1,3-다이-(2-톨릴)구아니딘을 대체하여 시그마-1 수용체를 마스킹하였다. (Bowen WD, et al. 1993, Mol. Neuropharmcol 3:117-126). 10μM 할로페리돌을 사용하여 비특이적 결합을 한정하였다. Brandel 12R 세포 수확장치를 사용하여 와트만(Whatman) GF/C 필터를 통해 신속히 여과한 후 얼음 냉각 완충제에 의해 2회 세척하여 반응을 종료시켰다. 건조된 필터 디스크에서의 방사성은 액체 섬광 분석기를 사용하여 측정하였다(Tri-Carb 2900TR; PerkinElmer Life and Analytical Sciences). 대체 곡선을 작도하고, 수용체 하위유형에 대한 시험 리간드의 Ki 값을 그래프패드 프리즘(그래프패드 소프트웨어 인코포레이티드(캘리포니아주 샌디에고))을 사용하여 결정하였다. 전체 결합(분당 분해)에 의해 전체 결합(분당 분해)과 비특이적 결합(분당 분해) 사이의 차이를 나눔으로써 특이적 결합의 백분율을 결정하였다.
시그마-1 및 시그마-2 수용체에 대한 친화도는 시그마-1 수용체로부터의 대체를 측정하기 위해 [3H] (+)펜타조신을 가지는 뇌 조직 균질물 및 시그마-2 수용체로부터의 대체를 측정하기 위해 300nM (+)펜타조신의 존재 하에 [3H] 1,3-다이-(2-톨릴)구아니딘을 사용하여 공개 연구로부터 통상적으로 얻어진다.
경쟁적 방사성 리간드 결합 검정 2.
시그마-1 및 시그마-2 수용체에서의 후보물질 시그마-2 리간드 화합물의 친화도를 상이한 공지된 표지된 시그마-2 또는 시그마-1 리간드의 대체에 의해 또한 결정하였다. 여과 검정을 이전에 공개된 절차(Xu, et al., 2005)에 따라 수행하였다. 시험 화합물을 N,N-다이메틸폼아마이드(DMF), 다이메틸 설폭사이드(DMSO) 또는 에탄올 중에 용해시키고, 이후 150mM NaCl 및 100mM EDTA를 함유하는 50mM 트리스-HCl(pH 7.4) 완충제 중에 희석하였다. 막 균질물을 시그마-1 결합 검정을 위해 기니아 피그 뇌로부터 만들고, 시그마-2 결합 검정을 위해 래트 간으로부터 만들었다. 막 균질물을 50mM 트리스-HCl 완충제(pH 8.0)에 의해 희석하고, 0.1nM 내지 10μM의 범위의 농도로 방사성 리간드 및 시험 화합물을 가지는 96웰 플레이트에서 150㎕의 전체 용적 중에 25℃에서 항온처리하였다. 항온처리를 완료한 후, 96 채널 이동 피펫(피셔 사이언티픽(Fisher Scientific)(펜실베니아주 피츠버그))을 사용하여 150㎕의 얼음 냉각 세척 완충제(10mM 트리스 HCI, 150mM NaCl, pH 7.4)의 첨가에 의해 반응을 종료하고, 샘플을 수확하고 100㎕의 50mM 트리스-HCI 완충제가 예비 침지된 96웰 섬유 유리 필터 플레이트(밀리포어(매사추세츠주 빌러리카))를 통해 신속히 여과시켰다. 각각의 필터를 200㎕의 얼음 냉각 세척 완충제(10mM 트리스-HCl, 150mM NaCl, pH 7.4)에 의해 4회 세척하였다. 왈락(Wallac) 1450 마이크로베타 액체 섬광 계수기(퍼킨 엘머(매사추세츠주 보스턴))를 사용하여 결합된 방사성을 정량화하였다.
시그마-l 수용체 결합 검정을 기니아 피그 뇌 막 균질물(약 300㎍ 단백질) 및 약 5nM [3H](+)-펜타조신(34.9Ci/m㏖, 퍼킨 엘머(매사추세츠주 보스턴))을 사용하여 수행하고, 항온처리 시간은 실온에서 90분이다. 비특이적 결합은 10μM의 차가운 할로페리돌을 함유하는 샘플로부터 결정된다.
시그마-2 수용체 결합 검정을 시그마-1 부위를 차단하기 위해 1μM (+)-펜타조신의 존재 하에 래트 간 막 균질물(약 300㎍ 단백질) 및 오직 약 2nM 시그마-2 매우 선택적인 방사성 리간드 [3H]RHM-l(다른 차단제 없음)(아메리카 라디오라벨링드 케미컬즈 인코포레이션(America Radiolabeled Chemicals Inc.)(미주리주 세인트 루이스)), 약 10nM [3H]DTG(58.1Ci/m㏖, 퍼킨 엘머(매사추세츠주 보스턴)) 또는 약 10nM [3H]할로페리돌(아메리카 라디오라벨링드 케미컬즈 인코포레이션(미주리주 세인트 루이스))을 사용하여 수행하고, 항온처리 시간은 실온에서 [3H]RHM-l의 경우 6분, [3H]DTG 및 [3H]할로페리돌의 경우 120분이다. 비특이적 결합을 10μM의 차가운 할로페리돌을 함유하는 샘플로부터 결정하였다.
경쟁적 저해 실험으로부터의 데이터를 비선형 회귀 분석을 이용하여 모델링하여 방사성 리간드(IC50 값)의 특이적 결합의 50%를 저해하는 저해제의 농도를 결정하였다. 결합 친화도, Ki 값을 Cheng 및 Prusoff의 방법을 이용하여 계산하였다. 기니아 피그 뇌에서의 [3H](+)-펜타조신에 사용된 Kd 값은 7.89nM이고, 래트 간에서의 [3H]RHM-l 및 [3H]DTG의 경우 각각 0.66nM 및 30.73nM이었다. 품질 확인에 표준 화합물 할로페리돌을 사용하였다. 실시예 1-118의 예시적인 화합물에 대한 시그마-2 수용체에서의 친화도 데이터가 표 2에 기재되어 있다.
몇몇 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 아이소인돌린 화학식 I 및/또는 화학식 II에 따른 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 본 명세서에 제공된 시그마-2 수용체 결합 검정 프로토콜에 따라 시험될 때 1,000nM 이하, 750nM 이하, 500nM 이하, 250nM 이하, 100nM 이하, 50nM 이하, 25nM 이하, 또는 10nM 이하의 시그마-2 수용체 결합 친화도 Ki를 나타낸다.
실시예 5: 형질전환 마우스에서의 기억 상실: 모리스 수영 시험
선택된 화합물을 시험하여 알츠하이머병의 나이 든 형질전환 마우스 모델에서 기억 상실을 역전시키는 능력을 결정하고, 여기서 올리고머는 연령에 따라 축적된다. 이 연구를 위해 쥣과 Thy-1 프로모터의 제어 하에 인간 APP751 Swedish(670/671) 및 런던(London)(717) 돌연변이를 발현하는 hAPP 마우스를 선택하였다. 이 마우스는 3-6달에 시작하면서 발생하는 플라크와 함께 A베타의 양의 연령 의존적 증가를 나타내고, 8월령에 확립된 인지 결함을 나타낸다. 이 연구에서, 결함이 발생하는 것을 방지하기보다는, 이미 확립된 결함을 치료하였다. 이 연구를 실험 조건에 맹검인 과학자와의 서비스 계약에 따라 수행하였다. 시험 화합물을 피하 미니펌프를 통해 8월령 암컷 마우스에서 1달 동안 0.5 및 0.1㎎/㎏/일에서 인퓨징하고, 인지 성능을 해마 기반 공간 학습 및 기억의 시험인 모리스 수중 미로에서 시험하였다. 이 마우스 모델은 뉴런 소실을 나타내지 않아서, 기억의 복원은 폽토시스의 회피로 인한 것일 수 없다.
수영 속도를 모리스 측정의 일부로서 분석하여 임의의 운동 또는 동기적 결함이 존재하는지를 결정하였다. 비히클은 5% DMSO/5% 솔루톨(Solutol), 90% 식염수 혼합물이다. 형질전환 동물을 저용량(예를 들어, 0.1㎎/㎏/일) 및 고용량(예를 들어, 0.5㎎/㎏/일)의 화합물에 의해 처리하였다. 각각 연속 4일에 평균 3개의 일일 실험을 결정하였다. 통상적으로, 이 연령에서 예상된 사망률 수준 아래에서 연구 동안 유의적인 운동 결함 또는 비정상 거동이 관찰되지 않았다. 또한, 화합물의 혈장 수준을 모니터링하기 위해 정기적으로 채혈하는 동물의 보초 군을 유지시켰다.
모리스 물 시험으로부터의 도피 잠재성 측정을 취했다. 통상적으로, 시험 2일째에 야생형과 형질전환 동물 사이의 상당한 차이가 관찰되었고, 야생형은 형질전환보다 더 신속히 습득한다. 통상적으로, 이 일자에 비히클에 비해 더 높은 화합물 용량에서의 형질전환 성능의 상당한 개선이 관찰될 때, 예를 들어 0.5㎎/㎏/일의 더 높은 용량에서 투여된 화합물이 AD의 형질전환 모델에서 인지 성능을 개선한다는 것이 결론지어진다.
통상적으로, A베타 42 올리고머는 시냅스 수를 약 18% 감소시키고; 이 손실의 100%는 바람직한 시험 화합물에 의해 제거될 수 있다. 다른 시그마-2 수용체 길항제는 또한 시냅스 손실을 차단한다. 공지된 선행 기술 시그마-2 수용체 리간드 NE-100 및 할로페리돌은 시냅스 손실을 완전히 제거하는 반면, SM-21, 선택적 시그마 1 리간드는 시냅스 손실(20% 회복)을 제거하는 데 있어서 오직 약하게 활성이다.
유사한 검정을 이용하여 시험 화합물을 또한 시험할 수 있다. 화합물(예를 들어, 1㎎/㎏/일, N=8 또는 10㎎/㎏/일, N=8) 또는 비히클(5% DMSO/5% 솔루톨/90% 식염수, N=15)을 20일 동안 예를 들어 9월령 수컷 hAPPSL 형질전환 마우스(예를 들어, N=8) 또는 비형질전환 한배새끼(예를 들어, N=6)에 피하 투약(Alzet 미니펌프)을 통해 전신으로 투여할 수 있고, 이들 마우스의 공간 학습 및 기억을 모리스 수중 미로에서 평가할 수 있다. 최종 4일의 치료 동안, 마우스를 3개의 실험/일에서 숨겨진 플랫폼을 찾도록 시험하였다. 컴퓨터화 추적 시스템은 도피 잠재성, 또는 수영 길이를 자동으로 정량화한다.
임의의 시험 일자(이 2개의 군으로 제한된 분석; 반복 측정에 의한 2방향(유전자형 및 시간) ANOVA 이후 본페로니(Bonferroni) 사후 시험)에 형질전환 동물 대 비형질전환 동물의 성능에서 상당한 차이가 없었다. 유사한 분석은, 10㎎/㎏/일의 시험 화합물에 의해 치료된 형질전환 동물에 의해, 형질전환군(치료 및 시간)으로 제한될 때, 치료된 동물이 예를 들어 스튜던츠 t-시험에 의해 분석될 때 시험 제1 일 후 비히클 치료된 형질전환 동물보다 상당히 우수하게 수행한다는 것을 보여주는 것으로 예상된다. 시험 화합물에 의해 치료된 동물이 시험 기간에 걸쳐 비히클 치료와 비교하여 개선된 형질전환 동물 성능을 나타내는 것으로 예상된다.
성공적인 시험 화합물은 용량 의존적 방식으로 나이 든 형질전환 동물에서 학습 및 기억의 확립된 거동 결함을 역전시킬 수 있다.
실시예 6: 막 수송 검정에서의 뉴런 세포에 대한 A베타 올리고머 효과의 저해
본 명세서에 제공된 시그마-2 리간드를 세포에 대한 아밀로이드 베타 효과를 저해하는 이의 능력에 대해 시험한다. 시그마-2 리간드는 일반적으로 막 수송/세포외배출 검정(MTT 검정)에 의해 측정되는 바대로 아밀로이드 베타 효과를 저해할 수 있다. 결과는 표 2에 표시되어 있다. 이 검정에 대한 이유는 하기와 같다:
시냅스 및 기억 결함, 및 널러 퍼지지 않은 세포사가 알츠하이머병의 가장 초기 단계에서 우세하므로, 이 변화를 측정하는 검정은 올리고머 활성의 소분자 저해제를 발견하는 데 특히 매우 적합하다. MTT 검정은 배양물 중에 독성의 측정치로서 흔히 사용된다. 황색의 테트라졸륨 염은 세포에 의해 세포내이입되고 엔도솜 경로에서 불용성의 자주색 포마진으로 환원된다. 자주색 포마진의 수준은 배양물 중에 활성으로 대사하는 세포의 수의 반영이고, 포마진의 양의 감소는 배양물 중의 세포사 또는 대사 독성의 측정치로서 취해진다. 현미경을 통해 관찰될 때, 자주색 포마진은 세포를 충전하는 세포내 소포에서 처음에 보인다. 시간이 지나면서, 소포은 세포외유출되고, 불용성 포마진이 수성 매질 환경에 노출되면서 포마진은 혈장 막의 외부 표면에서 침형 결정으로서 침전된다. 리우(Liu) 및 슈베르트(Schubert)('97)는 세포내이입 속도가 영향받지 않게 하면서 세포가 환원된 포마진의 세포외배출 속도를 선택적으로 가속시킴으로써 A베타 올리고머의 준치사 수준에 반응한다는 것을 발견하였다. 본 발명자들은 배양물 중의 성숙 1차 뉴런에서 이 관찰을 반복하고, 자동화 현미경검사법 및 영상 처리를 통해 이 형태학적 이동을 정량화하였다. 이러한 상황 하에, 환원된 포마진의 전체 양의 전체 감소, 단순히 이의 형성 및/또는 세포로부터의 방출의 속도의 변화를 반영하는 이의 형태의 이동이 없었다. 본 발명자들은 이 검정이 세포사를 발생시키지 않는 낮은 수준의 올리고머에 민감하지 않다는 이전의 발견을 확정하였다(Liu and Schubert '04, Hong et al., '07). 실제로, LTP의 저해를 발생시키는 적은 양의 올리고머는 세포사를 발생시키지 않고(Tong et al., '04), 배양물(또는 뇌 슬라이스) 중의 포마진의 전체 양을 변화시키는 것으로 예상되지 않았다.
다른 조사자들에 의해 제시된 증거는 막 수송에 의해 매개된 뉴런 표면 수용체 발현에서의 A베타 올리고머 매개 감소가 시냅스 가소성(LTP)의 전기생리학적 측정치의 올리고머 저해 및 이에 따라 학습 및 기억에 기초한다는 것을 제시한다(Kamenetz et al., '03, Hseih et al., '06). 포마진 형태학적 이동을 통해 올리고머에 의해 유도된 막 수송 속도 변화를 측정하는 것은 생체내 설치류에서 A베타 뇌 수준을 낮추는(Hong et al., '09) A베타 올리고머 차단 약물(Maezawa et al., '06, Liu and Schubert '97, '04,'06, Rana et al., '09, Hong et al., '08)을 발견하기 위해 세포주에서 사용된다. 세포외배출 검정/MTT 검정을 위한 유사한 절차가 문헌에서 발견될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Liu Y, et. al., Detecting bioactive amyloid beta peptide species in Alzheimer's disease. J Neurochem. 2004 Nov;91(3):648-56; Liu Y, and Schubert D. "Cytotoxic amyloid peptides inhibit cellular 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) reduction by enhancing MTT formazan exocytosis." J Neurochem. 1997 Dec;69(6):2285-93; 및 Liu Y, and Schubert D. "Treating Alzheimer's disease by inactivating bioactive amyloid beta peptide" Curr. Alzheimer Res. 2006 Apr;3(2):129-35]을 참조한다. 따라서, 접근법이 유효하다.
본 세포외배출 검정은 실험실내 3주 성장한 성숙 1차 뉴런 배양과 사용하기에 적합하다. WO 제2011/106785호(본 명세서에 그 전문이 참조문헌으로 인용됨)를 참조한다. A베타 올리고머는 셀로믹스(Cellomics) VTI 자동화 현미경검사법 시스템을 이용하여 영상 처리를 통해 측정된 바와 같은 환원된 자주색 포마진으로 충전된 세포내 소포(반점)의 양의 용량 의존적 감소를 발생시킨다. 오직 비히클에 노출된 배양된 뉴런 세포에 대한 현미경사진은 포마진으로 충전된 소포을 보여주는 반면; 비히클과 A베타 올리고머에 노출된 뉴런 세포의 현미경사진은 포마진으로 충전된 상당히 더 적은 소포을 보여주고, 대신에 세포외 환경에 부딪힐 때, 결정으로 침전하는, 세포외유출된 포마진을 보여준다. A베타 올리고머의 양을 증가시키는 것은 결국 명시적인 독성을 발생시킨다. 따라서, 검정에 사용된 신경활성 A베타 올리고머의 농도는 세포사를 발생시키는 것보다 훨씬 더 낮다. 본 발명자들은 A베타 올리고머의 효과가 항-A베타 항체의 첨가 시 차단되지만, 항체 단독은 저절로 효과를 가지지 않는다는 것을 보여줌으로써(데이터 비도시) 검정이 작동적이라는 것을 확정하였다. 이러한 방식으로 구성될 때, 검정은 올리고머의 파괴, 뉴런에 대한 올리고머 결합의 저해, 또는 올리고머 결합에 의해 개시된 작용의 신호 전달 기전의 저지를 통해 이 화합물이 작용하는지에 대한 A베타 올리고머의 비치사 효과를 저해하는 화합물을 검출할 수 있다.
결과를 생성하기 위해 사용된 방법은 막 수송/세포외배출(MTT) 검정에서 하기와 같다.
E18 스프라그-다울리(Sprague-Dawley) 래트 배아로부터의 1차 해마 뉴런을 NB 배지(인비트로겐(Invitrogen)) 중에 384웰 플레이트에서 최적화된 농도로 도말하였다. 뉴런을 N2 보충(인비트로겐)에 의해 NB 배지의 1주 2회 공급에 의해 3주 동안 배양물 중에 유지시켰다. 이 뉴런은 성숙 뇌에서 뉴런에 특징적인 시냅스 단백질의 전체 보체를 발현하고, 활성 의존적 전기 신호전달의 복잡한 기전을 나타낸다. 이러한 배양물에서의 뉴런 및 신경교는 온전한 뇌 회로에 의한 훌륭한 등록을 나타내는 분자 신호전달 네트워크를 가지고, 이러한 이유로 20년에 걸쳐 학습 및 기억에 대한 모델 시스템으로서 사용되었다(예를 들어, 문헌[Kaech S, Banker G. Culturing hippocampal neurons. Nat Protoc. 2006;1(5):2406-15. Epub 2007 Jan 11] 참조; 또한 문헌[Craig AM, Graf ER, Linhoff MW. How to build a central synapse: clues from cell culture. Trends Neurosci. 2006 Jan;29(1):8-20. Epub 2005 Dec 7. Review] 참조).
시험 화합물을 100μM 내지 0.001nM의 범위의 농도로 세포에 첨가한 후, 비히클 또는 A베타 올리고머 제제(3μM 전체 A베타 단백질 농도)를 첨가하고, 5% CO2 중에 37℃에서 1 내지 24시간 동안 항온처리하였다. MTT 시약(3-(4,5-다이메틸티아졸-2-일)-2,5-다이페닐 테트라졸륨 브로마이드)(로슈 모레큘러 바이오케미컬즈(Roche Molecular Biochemicals))을 인산염 완충 식염수 중에 5㎎/㎖로 재구성하였다. 10㎕의 MTT 표지 시약을 각각의 웰에 첨가하고, 37℃에서 1시간 동안 항온처리한 후 영상화하였다. 세포외배출을 자동화 현미경검사법 및 영상 처리에 의해 평가하여 세포내이입된 및 세포외유출된 포마진의 양을 정량화하였다.
각각의 검정 플레이트를 포맷팅하여서, 화합물을 각각의 플레이트에서 A베타 올리고머에 의해 및 이것 없이 시험하였다. 이 설계는 초기에 (1차 스크린의 수준에서) 캐스케이드를 스크리닝하는 데 있어서 독성 또는 대사상 활성인 화합물을 제거한다. 환원된 포마진은 세포내 소포에서 처음에 보인다. 결과적인 포마진 세포외배출은 A베타 올리고머를 통해 가속된다. 도 1A 및 도 1B는 포마진이 처음에 보이는 세포내 소포의 처음 것 및 세포외배출을 통해 방출된 불용성의 자주색 염료에 덮인 뉴런의 두번째 것인 뉴런의 현미경사진의 예이다. 염료는 배양물의 수성 환경 중에 침전하고, 뉴런의 표면에서 침형 결정을 형성하였다.
활성 시험 화합물의 유효 농도의 존재 하에, 막 수송 변화가 차단되고, 세포는 비히클 치료된 뉴런으로부터 구별 가능하지 않다. 게다가, 몇몇 경우에, 시험 화합물의 이 효과는 시험 화합물이 치료학적 효과, 및 예방학적 효과를 나타내는 A베타 올리고머에 대한 세포의 노출 전에 또는 후에 첨가되는지와 독립적인 것으로 보인다. 활성 시험 화합물의 적절한 농도는 이 검정에서 보이는 A베타 올리고머의 막 수송 효과를 차단한다. 선택적 고친화도 시그마-2 수용체 길항제 화합물의 상승 용량은 올리고머 효과를 중지시키고, 배양물이 더 비히클 치료된 배양물과 같이 보이게 한다.
이 결과에 기초하여, A베타 올리고머 독성을 저해하는 것에 효과적인, 본 명세서에 개시된 바와 같은, 선택적 고친화도 시그마-2 수용체 길항제 화합물은 아밀로이드 베타 올리고머 독성 관련 인지 감소, 예컨대 알츠하이머병에서 보이는 것에 치료학적 및 (매우 초기 단계에서) 예방학적 양상으로서 유망하다.
합성 A베타 올리고머는 막 수송 검정에서 투약되고, 여기서 이것은 820nM의 EC50을 나타낸다. 각각 선택적 고친화도 시그마-2 수용체 길항제 시험 화합물의 여러 농도에 대해 A베타의 각각의 농도를 시험하였다. 활성 화합물은 거의 2차수의 규모만큼 EC50을 오른쪽으로 이동시켰다. 데이터가 전통적인 선형 및 비선형 모델에 작도될 때, 데이터는 쉴드(Schild) 분석(1의 힐 기울기(nH))에 의해 선형이고, 이것은 시그마-2 수용체 화합물이 막 수송을 매개하는 표적에 대한 올리고머와 화합물 사이의 진정한 약역학적 경쟁을 나타낸다는 것을 나타낸다.
알츠하이머 환자의 뇌로부터 유래한 A베타 올리고머는 시험 화합물에 대해 투약될 수 있고, 오른쪽 이동은 화합물 노출에 의해 나타나는 것으로 또한 예상된다. 구체적으로, 유효 용량에서, 활성 시험 화합물은 합성 및 인간 알츠하이머 환자 유래 올리고머 둘 다와의 약역학적 경쟁을 나타낸다. 선택적 고친화도 시그마-2 수용체 길항제 화합물 후보물질 약물은 효과적으로 A베타 올리고머가 덜 시냅스독성이도록 한다. 이론에 구속됨이 없이, 가장 단순한 가능한 작용 기전은 시그마-2 수용체 화합물이 경쟁적 수용체 길항제로서 작용한다는 것이다.
실험 대조군:
공개 방법에 따라 제조된 A베타 1-42 올리고머를 양성 대조군으로서 사용하였다. [예를 들어, 문헌[Dahlgren et al., "Oligomeric and fibrillar species of amyloid-beta peptides differentially affect neuronal viability" J Biol Chem. 2002 Aug 30;277(35):32046-53. Epub 2002 Jun 10.; LeVine H 3rd. "Alzheimer's beta-peptide oligomer formation at physiologic concentrations" Anal Biochem. 2004 Dec 1;335(1):81-90; Shrestha et.al, "Amyloid beta peptide adversely affects spine number and motility in hippocampal neurons" Mol Cell Neurosci. 2006 Nov;33(3):274-82. Epub 2006 Sep 8; Puzzo et al., "Amyloid-beta peptide inhibits activation of the nitric oxide/cGMP/cAMP-responsive element-binding protein pathway during hippocampal synaptic plasticity" J Neurosci. 2005 Jul 20;25(29):6887-97; Barghorn et al., "Globular amyloid beta-peptide oligomer - a homogenous and stable neuropathological protein in Alzheimer's disease" J Neurochem. 2005 Nov;95(3):834-47. Epub 2005 Aug 31; Johansson et al., Physiochemical characterization of the Alzheimer's disease-related peptides A beta 1-42 Arctic and A beta 1-42wt. FEBS J. 2006 Jun;2 73(12):2618-30] 참조] 및 뇌 유래 A베타 올리고머(예를 들어, 문헌[Walsh et al., Naturally secreted oligomers of amyloid beta protein potently inhibit hippocampal long-term potentiation in vivo. Nature (2002). 416, 535-539; Lesne et al., A specific amyloid-beta protein assembly in the brain impairs memory. Nature. 2006 Mar 16;440(7082):352-7; Shankar et al, Amyloid-beta protein dimers isolated directly from Alzheimer's brains impair synaptic plasticity and memory. Nat Med. 2008 Aug;14(8):837-42. Epub 2008 Jun 22] 참조). 이 검정에서 또는 대조군으로서 상기 인용되고 참조문헌으로 그 전문이 인용된 특허 문헌에 기재된 제제를 포함하여, 임의의 A베타 올리고머 제제가 사용될 수 있다는 것에 주목한다.
특히 알츠하이머병 환자의 뇌로부터 단리된 올리고머 제제를 포함하여 다양한 상이한 A베타 올리고머 제제가 막 수송 검정에서 A베타 효과를 발생시키는 것으로 입증되었다.
올리고머는 세제의 사용 없이 사후 인간 해마 또는 전두 피질로부터 단리되고, 6pM의 Kd로 용량 의존적 방식으로 막 수송을 저해하였다. 인간 알츠하이머병 환자 유래 A베타 올리고머(137pM, 제2 막대 도 1J)는 비히클(제1 막대, 도 1J)과 비교하여 통계학적으로 유의적인 막 수송의 저해를 생성하였다. 화합물 II(제3 막대)는 AD 뇌 유래 A베타 올리고머에 의해 유도된 막 수송 결함을 제거하였지만, A베타의 부재 하에 투약될 때 수송에 영향을 미치지 않았다(4번째, 빗금, 막대). 데이터는 3회 실험으로부터 평균된다(n=3).
다양한 A베타 올리고머 제제의 효력이 다르지만(예를 들어, 네이티브 알츠하이머 단리물은 임의의 시험된 합성 제제보다 더 강력하다 - 데이터 비도시), 결과는 정성적으로 동일하고: 올리고머에 의해 매개된 병리학이 시그마-2 수용체 길항제 화합물을 포함하는 본 개시내용의 조성물에 의해 대응된다.
1차 뉴런 배양
판독으로서 세포외배출 검정, 및 배양물 중의 뉴런에 대한 신경교의 상대 비율의 면역조직화학 분석을 이용한 A베타 올리고머에 대한 세포 반응에 기초하여 최적 세포 밀도를 결정하였다. 배양물을 신경교(신경교 세포)에 대한 뉴런의 배양의 백분율을 모니터링하기 위한 정량화에 기초하여 면역조직화학 및 영상 처리에 의해 주 기준으로 모니터링하였다. 실험실내 21일의 스크리닝 연령(21 DIV)에 뉴런(1:5000(농도 변수)로 MAP2에 지시된 (닭 다중클론) 항체(밀리포어)에 의해 양으로 염색)에 대해 20% 초과의 신경교(GFAP에 대해 양성)를 함유하는 배양물을 거절하였다.
A베타 올리고머 제제.
인간 아밀로이드 펩타이드 1-42를 다수의 상업용 판매처, 예컨대 캘리포니아 펩타이드(California Peptide)로부터 얻고, 품질 관리 분석에 따라 롯트 선택하였다. 올리고머 제제의 품질 관리는 올리고머 크기 범위 및 상대 농도를 결정하는 웨스턴, 및 독성 없이 세포외배출 가속을 확인시켜주는 MTT 검정으로 이루어진다. DNA 결합 블루 염료 DAPI(인비트로겐)에 의해 가시화된 핵 형태의 정량화를 통해 각각의 영상 기반 검정에서 독성을 모니터링하였다. 단편화된 핵은 후기 단계 아폽토시스(Majno and Joris '95)에 있는 것으로 생각되고, 시험은 거절될 것이다. 드문 펩타이드 크기 범위 또는 표준 1.5μM 농도에서 뉴런에 대해 상당한 독성을 생성하는 펩타이드 롯트는 또한 거절될 것이다.
플레이트 기반 대조군 - 검정 최적화는 재포맷팅된 플레이트가 플레이트 사이에 10% 이하의 CV로 일상 기준으로 비히클과 A베타 올리고머 치료된 뉴런 사이의 최소 통계학적으로 유의적인 2배의 분리(p<0.01, 스튜던츠 t-시험, 이분산성)를 달성할 때 완전한 것으로 생각된다.
통계 소프트웨어 및 분석:
셀로믹스 VTI 영상 분석 소프트웨어 및 STORE 자동화 데이터염기 소프트웨어에 의해 데이터 취급 및 분석을 달성하였다. 배양물 중의 3주 후 낮은 동적 범위 및 뉴런 웰 대 웰 가변성 때문에, A베타 단독으로부터의 화합물 + A베타 올리고머 사이, 및 오직 비히클로부터의 화합물 사이의 분리의 유의성을 결정하기 위해 쌍 지은 터키-크라머(Tukey-Kramer) 분석을 통해 통계 비교를 하였다. 성인 뇌의 전기생리학적으로 매개된 신호 전달 네트워크에 더 가깝게 근접하는 성숙 1차 뉴런의 능력은 이 스크리닝 전략을 정당화한다. 파워 분석은 거짓 음성(예를 들어, N=4)을 최소화하는 다수의 반복검증 스크리닝 웰에 설정되었다. 본 개시내용의 시험 화합물은 막 수송에 대한 A베타 올리고머의 효과를 유의적으로 역전시키지만, 뉴런 대사 자체에 영향을 미치지 않는다.
화학식 I 및/또는 화학식 II에 따른 선택된 화합물을 A베타 올리고머 첨가 전에 본 명세서에 기재된 MTT 검정에서 투약하고, 표시된 EC50으로 A베타 올리고머 유도 막 수송 결함을 차단하는 것으로 나타났다. 구체적으로, 이 결과는 화합물이 마이크로몰 농도에서 뉴런 세포의 막 수송에 대한 A베타 올리고머의 활성/효과를 차단/약화시킨다는 것을 나타낸다.
로그 P, psa(Å2), 막 수송(μM), 시그마-2 수용체 친화도, 마우스 간 마이크로솜(MLM)에서의 마이크로솜 안정성(t1/2, 분), 실험실내 독성 칼륨 채널 hERG(IC50, nM), 및 뉴런 표현형에 관한 화학식 I 및 또는 화학식 II의 화합물에 대한 조합 결과가 표 2에 제공된다.
Figure 112016084530517-pct00095
Figure 112016084530517-pct00096
Figure 112016084530517-pct00097
Figure 112016084530517-pct00098
Figure 112016084530517-pct00099
표 2에서의 소정의 화합물은 표시된 EC50으로 세포외배출의 A베타 올리고머 유도 가속을 차단하는 것으로 나타났다. 따라서, 표 2에서의 화합물은 막 수송에서 A베타 올리고머 매개 변화를 상당히 차단하였다. 이 결과는 화합물이 뉴런 세포에 대한 A베타 올리고머의 활성/효과를 차단/약화시키고, 시그마-2 리간드가 A베타 올리고머 유도 막 수송 비정상을 차단하기 위해 사용될 수 있다는 것을 나타낸다.
표 2에서의 선택된 화합물을 막 수송 검정에서 투약하고, 표시된 EC50으로 A베타 올리고머 유도 막 수송 비정상을 차단하는 것으로 나타났다. 따라서, 표 2에서의 화합물은 막 수송에서 A베타 올리고머 매개 변화를 상당히 차단하였다. 이 결과는 화합물이 뉴런 세포에 대한 A베타 올리고머의 활성/효과를 차단/약화시키고, 시그마-2 수용체 리간드가 A베타 올리고머 유도 막 수송 비정상을 차단하기 위해 사용될 수 있다는 것을 나타낸다.
몇몇 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은 화학식 I 및/또는 화학식 II에 따른 아이소인돌린 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 본 명세서에 제공된 막 수송 검정 프로토콜에 따라 시험할 때 20μM 이하, 15μM 이하, 10μM 이하, 5μM 이하, 1μM 이하, 0.5μM 이하의 EC50으로 A베타 올리고머 유도 막 수송 결함을 저해한다.
상기 화학식에 의해 포함되는 화합물이 또한 시그마-2 리간드인 것으로 예상되고, 따라서 또한 세포외배출의 A베타 올리고머 유도 가속을 차단하는 데 있어서 유용할 것이다.
실시예 7. 약동학적 및 대사 안정성 연구.
제1 약동학적 연구를 마우스 간 마이크로솜(MLM)의 마이크로솜에서 상업 계약 조사 협회(commercial contract research organization)에 의해 수행하였다. 문헌[Obach, R.S et al. (1997) J. Pharmacol. Exp. Ther., 283: 46-58](본 명세서에 참조문헌으로 인용됨)에 따라 연구를 수행하였다. MLM 검정에서의 화합물의 반감기(t1 /2)가 표 2에 기재되어 있고, 3-617분의 범위이다.
몇몇 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 바와 같은, 화학식 I 및/또는 화학식 II에 따른 아이소인돌린 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 본 명세서에 제공된 바와 같은 마우스 간 마이크로솜(MLM) 검정에서 적어도 5분, 적어도 10분, 적어도 25분, 적어도 50분, 적어도 100분, 또는 적어도 200분의 반감기(t1/2)를 나타낸다.
결과는 시험된 여러 화합물이 마우스 간 마이크로솜에서 실질적으로 더 긴 반감기를 가진다는 것을 나타낸다. 이 결과는 이 화합물에 대한 경구 투여 후 더 높은 생체이용률의 전조를 보인다. 동일한 화합물을 상기 기재된 막 수송 검정 및 본 명세서에서 언급된 이의 활성에 의해 시험하였다.
시험 화합물의 고유 청소율이 신속하면, 이것은 실질적인 제1 통과 대사를 제시한다. 약동학적 특성을 개선하기 위해, 대사 안정성을 증대시키고 약물 유사 특성을 개선하도록 화합물을 설계하였다. 후보물질 화합물의 대사 및 간 안정성을 결정하기 위해 마이크로솜 안정성 실험 및 혈장 안정성 실험을 수행하였다. 몇몇 실시형태에서, 실험실내 마이크로솜 안정성을 표준 화합물 CT010914로 정규화하였다.
제2 PK 연구를 생체내 수행할 수 있고, 하기한 바대로 급성 또는 만성 방식으로 다양한 경로에 의해 투여된 시험 화합물에 대해 혈장 수준 및 뇌 수준을 측정하는 것을 포함한다:
HPLC-MS 최적화
각각의 시험 화합물의 용액을 준비하고, 일정한 속도로 주사기 펌프를 통해 TSQ 양자 분광기(피셔 써모 사이언티픽(Fisher Thermo Scientific)) 소스로 인퓨징하였다. 완전 스캔 MS(질량 분광법) 분석을 수행하고, 전체 이온 전류 크로마토그램 및 상응하는 질량 스펙트럼을 양성 및 음성 이온화 모드 둘 다에서 각각의 시험 화합물에 대해 생성하였다. 각각의 이온 풍부도의 함수로서 양성 또는 음성 질량 스펙트럼으로부터 MS/MS에 대한 전구체 이온을 선택하였다. 또한, 정량적 분석에서 사용하기 위한 적절한 선택된 단편화 반응을 결정하기 위해 생성물 이온 MS/MS 분석을 수행하였다. 성분의 복잡한 혼합물 내에 존재할 때 시험 화합물을 정량화하는 능력을 최대화하기 위해 최종 반응 모니터링 매개변수를 선택하였다. 각각의 시험 화합물에 사용되는 특이적 SRM 전이의 확인 후, TSQ 양자 화합물 최적화 작업실(TSQ Quantum Compound Optimization workspace)에서 자동화 프로토콜을 사용하여 검출 매개변수를 최적화하였다. 마지막으로, LC-MS 분석에 사용하고자 하는 크로마토그래피 조건을 적합한 LC 칼럼에서 분석물질의 주입 및 분리에 의해 확인하고, 구배 조건의 조정을 필요한 바대로 수행하였다.
IV 투약을 위한 제제:
인산염 완충 식염수(pH 7.4)(PBS) 중의 시험 화합물의 용해도를 처음에 육안 검사에 의해 평가하였다. 화합물이 표적 농도에서 가용성인 경우 PBS를 비히클로서 사용하였다. (IV 투약에 적합한 다른 비히클은 화합물이 PBS 중에 완전히 가용성이 아닌 경우 평가될 수 있다. 이러한 비히클은 무엇보다도 DMSO, 폴리에틸렌 글리콜(PEG 400), 솔루톨 HS 15 및 크레모포어(Cremophor) EL을 포함한다.) 여기 보고된 실험에서, 시험 화합물의 10㎎/㎏인 단일 볼루스를 IV 투여하였다.
PO 투약을 위한 제제: PBS 중의 시험 화합물의 용해도를 처음에 평가하였다. 화합물이 표적 농도에서 가용성인 경우 PBS를 비히클로서 사용하였다. (시험 화합물이 각각의 농도에서 PBS 중에 완전히 가용성이 아닌 경우, DMSO/솔루톨 HS 15/PBS(5/5/90, v/v/v), 또는 DMSO/1% 메틸셀룰로스(5/95, v/v)를 사용할 수 있다.)
혈장에서의 선형성
혈장의 분취량을 특정 농도에서 시험 화합물에 의해 스파이킹하였다. 스파이킹된 샘플을 아세토나이트릴 침전을 이용하여 처리하고, HPLC-MS 또는 HPLC-MS/MS에 의해 분석하였다. 농도에 대한 피크 면적의 보정 곡선을 작제하였다. 더 낮은 정량 한계(LLQ)와 함께 검정의 보고 가능한 선형 범위를 결정하였다.
혈장 샘플의 정량적 바이오분석
혈장 샘플을 아세토나이트릴 침전을 이용하여 처리하고, HPLC-MS 또는 HPLC-MS/MS에 의해 분석하였다. 혈장 보정 곡선을 생성하였다. 약물 비함유 혈장의 분취량을 특정 농도 수준에서 시험 화합물에 의해 스파이킹하였다. 스파이킹된 혈장 샘플을 동일한 절차를 이용하여 미공지 혈장 샘플과 함께 처리하였다. 처리된 혈장 샘플(건조된 추출물)을 HPLC-MS 또는 HPLC-MS/MS 분석까지 통상적으로 냉동(-20℃) 저장하였다. 건조된 추출물을 적합한 용매로 재구성하고, 원심분리 후 HPLC-MS 또는 HPLC-MS/MS에 의해 분석하였다. 피크 면적을 기록하고, 각각의 보정 곡선을 이용하여 미공지 혈장 샘플 중의 시험 화합물의 농도를 결정하였다. 더 낮은 정량 한계(LLQ)와 함께 검정의 보고 가능한 선형 범위를 결정하였다.
연구에 사용된 동물은 통상적으로 각각 체중이 20-30g인 수컷 C57BL/6 마우스 또는 체중이 180-250g인 수컷 스프라그-다울리 래트이다. 3마라의 동물을 각각의 투여 조건 및 각각의 시점에 대해 치료하여, 각각의 동물을 오직 한 번의 채혈로 처리하였다. 복강내 주사에 의해 피하 화합물 투여를 달성하였다. 위관 영양에 의해 경구 투여를 달성하였다. 경정맥 카테터를 통해 정맥내 투여를 달성하였다.
다양한 농도에서의 화합물 투여 후, 예를 들어 10, 30, 60, 120, 240, 360, 480 및 1440분에서 혈장 샘플을 수집하였다.
마우스 및 래트로부터의 혈장 샘플 수집
심장 천자(마우스) 또는 정맥내 카테터(래트)에 의해 채혈을 위해 일반 흡입 마취제(3% 아이소플루란) 하에 동물을 진정시켰다. 혈액 분취량(300-400㎕)을 리튬 헤파린으로 코팅된 관에서 수집하고, 수집 1시간 내에 온화하게 혼합하고, 얼음에서 유지시키고, 2,500x g에서 4℃에서 15분 동안 원심분리하였다. 이후, 혈장을 수확하고, 추가의 처리까지 -20℃에서 냉동 채 유지시켰다.
동물 투약 설계 - 생체내 PK - 캐뉼러 삽입되지 않은 민첩하지 않은 동물
1군: SC, 시점마다 n=3 동물(24 동물 전체) 또는
IV, 시점마다 n=3 동물(24 동물 전체)
2군: PO, 시점마다 n=3 동물(24 동물 전체)
3군: (약물 비함유 혈액의 경우) 대조군 동물, n=5 마우스
각각의 동물을 한 번의 채혈 및 한 번의 뇌 수집으로 처리하였다.
동물로부터의 뇌 샘플 수집
혈액 샘플링 직후, 동물을 목을 베고, 전체 뇌를 신속히 제거하고, 차가운 식염수(0.9% NaCl, g/㎖)로 세정하고, 표면 맥관구조를 파열시키고, 거즈로 블롯 건조하고, 중량을 재고, 수집 1시간 내에 추가의 처리까지 얼음에 유지시켰다. 각각의 뇌를 파워 건(Power Gen) 125를 사용하여 얼음에서 10초 동안 1.5㎖의 차가운 인산염 완충 식염수(pH 7.4)(마우스 =1.5㎖, 래트 =) 중에 균질화하였다. 이후, 각각의 뇌로부터의 뇌 균질물을 추가의 처리까지 -20℃에서 저장하였다.
뇌 샘플에서의 선형성
뇌 균질물의 분취량을 특정 농도에서 시험 화합물에 의해 스파이킹하였다. 각각의 뇌 분취량에 동일 용적의 차가운 26%(g/㎖) 중성 덱스트란(평균 분자량 65,000-85,000 시그마사제, 카탈로그 D-1390호) 용액을 첨가하여 13%의 최종 덱스트란 농도를 얻었다. 균질물을 54000 x g에서 4℃에서 15분 동안 원심분리하였다. 상청액을 후속하여 아세토나이트릴 침전을 이용하여 처리하고 HPLC-MS/MS에 의해 분석하였다. 농도에 대한 피크의 보정 곡선을 작도하였다. 더 낮은 정량 한계(LLQ)와 함께 검정의 보고 가능한 선형 범위를 결정하였다.
뇌 샘플의 정량적 분석
각각의 뇌 균질물 분취량에 동일 용적의 차가운 26%(g/㎖) 중성 덱스트란(평균 분자량 65,000-85,000 시그마사제, 카탈로그 D-1390호) 용액을 첨가하여 13%의 최종 덱스트란 농도를 얻었다. 균질물을 54000 x g에서 4℃에서 15분 동안 원심분리하였다. 상청액을 후속하여 아세토나이트릴 침전을 이용하여 처리하고 HPLC-MS/MS에 의해 분석하였다. 뇌 보정 곡선을 생성하였다. 약물 비함유 뇌 균질물의 분취량을 특정 농도 수준에서 시험 화합물에 의해 스파이킹하였다. 스파이킹된 뇌 균질물 샘플을 동일한 절차를 이용하여 미공지 뇌 균질물 샘플과 함께 처리하였다. 처리된 뇌 샘플을 LC-MS/MS 분석까지 -20℃에서 저장하고, 이때 피크 면적을 기록하고, 미공지 뇌 샘플에서의 시험 화합물의 농도를 각각의 보정 곡선을 이용하여 결정하였다. 더 낮은 정량 한계(LLQ)와 함께 검정의 보고 가능한 선형 범위를 결정하였다.
뇌 침투성
뇌(ng/g 조직) 및 혈장(ng/㎖)에서의 시험 화합물의 농도, 및 뇌 농도의 비율 및 각각의 시점에서의 혈장 농도를 LC-MS/MS에 의해 결정하고, 상기 기재된 바와 같이 보고된다.
약동학
시간에 대한 화합물의 혈장 농도의 도면을 작도하였다. 경구 및 SC 투약 후 화합물의 기본적인 약동학적 매개변수(AUClast, AUCINF, T1/2, Tmax 및 Cmax)를, 윈논린(WinNonlin)(Pharsight)을 이용하여 혈장 데이터의 비구획적 분석(non-compartmental analysis: NCA)으로부터 얻었다. 비구획적 분석은 약물 또는 대사물질에 대한 특정한 구획적 모델의 추정을 필요로 하지 않는다. NCA는 혈장 농도-시간 곡선 하의 면적의 측정을 위한 사다리꼴 규칙의 적용을 허용한다(Gabrielsson, J. and Weiner, D. Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Data Analysis: Concepts and Applications. Swedish Pharmaceutical Press. 1997).
보고된 용어의 정의
곡선 하 면적(AUC) - 전신 순환에 도달한 변하지 않은 약물의 전체 양의 측정치. 곡선 하 면적은 시간에 대해 농도를 작도하고 각각의 사다리꼴의 증분 면적을 합함으로써 계산된 기하 측정이다.
윈논린은 면적의 계산을 위한 2개의 컴퓨터 방법을 가진다: 선형 사다리꼴 방법 및 선형-로그 사다리꼴 방법. 선형 사다리꼴 방법이 농도-시간 곡선의 하강 부분에 대해 편향된 결과를 생성하고 AUC를 과대평가할 수 있으므로, 윈논린은 AUC의 계산에 대한 선형-로그 옵션을 제공한다. 디폴트에 의해, 로그-선형 사다리꼴 방법은 혈장 농도-시간 곡선의 나머지에 대한 Tmax 후 면적을 측정하기 위해 사용된다.
AUClast: 투약의 시간으로부터 정량 한계 초과인 마지막 관찰의 시간의 곡선 하 면적.
AUCINF: 무한으로 외삽된 투약의 시간으로부터의 곡선 하 면적.
Cmax - 투약 시간과 최종 관찰된 시점 사이의 약물의 경구 또는 비-IV 투여 후 얻은 최대 혈장 약물 농도.
Tmax - 약물의 투여 후 분 단위로 보고된 최대 관찰된 혈장 농도(Cmax)에서의 시간.
T1 /2 - IV 및 비IV 투약 둘 다로부터의 말단 제거 반감기.
여기서, 람다 Z(z)는 혈장 농도-시간 곡선의 말단 (로그-선형) 부분과 연관된 1차 속도 상수이다. z는 로그 농도에 대한 시간의 선형 회귀에 의해 예측된다.
결과는 소정의 시험 화합물이 급성으로 또는 만성으로(5일에 걸쳐 매일) 0.1 내지 0.5㎎/㎏의 범위의 용량으로 투여될 때 우수한 생체이용률 및 우수한 뇌 침투성을 나타낸다는 것을 보여주는 것으로 예상된다. 선택된 시험 화합물을 이러한 방식으로 경구 생체이용률에 대해 평가하였다.
실시예 8: A베타 1-42 올리고머 결합 및 시냅스 손실 검정
이 검정에서, A베타 올리고머를 배양물 중의 성숙 1차 뉴런과 접촉시키고, 이의 결합을 면역조직화학(항-A베타 항체)에 의해 결정하고 영상 처리에 의해 정량화하였다. 뉴런 수상돌기에서의 신경염에서 표지된 반점의 수를 계수함으로써 A베타의 양을 평가하였다. A베타 올리고머는 1차 배양물에서 상당한 백분율(30 내지 50%)의 해마 뉴런에 존재하는 포스트시냅스 뉴런의 하위집단에 포화가능하게(대략 400nM의 Kd; Lauren 2009) 및 고친화도로(Lacor et al, 2004; Lambert et al, 2007) 결합하는 것으로 공지되어 있고, 이것은 알츠하이머 환자로부터의 뇌에서의 A베타 결합의 관찰과 매우 상관된다(Lambert et al, 2007). 이 표지화는 시냅스와 연관되어서, 포스트시냅스 스캐폴드 단백질 PSD-95에 의해 동시국재화된다(Lacor et al., '04). A베타 올리고머는, 뇌 슬라이스에서 인간 해마 뉴런에서 18%로 보고된(Schef et al, 2007), 시냅스 손실을 매기하고 장기간 강화(LTP)를 저해하는 것으로 또한 공지되어 있다. 시냅스의 수를 이 검정에서 면역플루오로화학에 의해 또한 정량화할 수 있다. 결합 검정에 대한 유사한 절차가 문헌에서 발견될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Look GC, et. al. Discovery of ADDL--targeting small molecule drugs for Alzheimer's disease. Curr Alzheimer Res. 2007 Dec;4(5):562-7. Review]을 참조한다.
뉴런의 표면에 결합된 A베타의 양의 측정은 하기 기전 중 하나 이상을 통해 작용하는 화합물을 확인하기 위해 2차 스크린으로서 사용될 수 있다: 뉴런 표면에 대한 A베타 올리고머 결합에 의한 간섭에 의해 또는 올리고머 자체에 대한 변경(역효현작용 또는 올리고머 해리) 또는 올리고머가 결합하는 표면 수용체의 변경(입체적 변조 또는 전통적인 수용체 길항작용)을 실행함으로써 A베타 효과를 차단하는 것. 이것은 하향 신호전달 사건에 작용하는 화합물로부터 이 화합물을 또한 구별할 수 있다. 따라서, 이 검정은 뉴런에 대한 A베타 올리고머 비치사 효과에 의해 규명된 질환 상태에 관한 것이고, 임상적으로 관련된 화합물을 확인하기 위해 본 발명자들이 사용하는 스크리닝 캐스케이드의 형태를 형성한다. 막 수송 검정 및 이 결합/시냅스 손실 검정에서 활성인 선택된 시험 화합물을 알츠하이머병에 대한 2개의 상이한 형질전환 모델에서 및 또한 유도된 모델에서 활성에 대해 시험할 수 있다. 따라서, 이것 및 막 수송 검정은 임상적으로 관련된 화합물을 확인하는 데 유용하고, 생체내 결과에 대한 예측 값을 가지는 것으로 보인다. 이 검정의 예측 타당성은 본 개시내용의 범위 밖의 화합물을 사용하는 화합물 특성을 예측하는 능력을 입증함으로써 확인된다.
1차 해마 뉴런 배양을 상기 막 수송 검정에서처럼 확립하였다. (10-8 내지 30 마이크로몰의 농도에서) 시험 화합물을 플레이트에 첨가한 후, 포화 결합에 도달하는 농도에서 A베타 1-42 올리고머 함유 제제를 첨가하였다. 1시간 동안 시험 화합물에 의한 전처리 및 A베타 올리고머의 첨가 또는 올리고머의 비첨가(비히클 단독) 후에 추가적인 23시간 동안 항온처리하였다.
플레이트를 인산염 완충 식염수 중에 3.7% 파라폼알데하이드에 의해 15분 동안 고정하였다. 이후, 플레이트를 PBS에 의해 각각 5분 동안 3회 세척하였다. 플레이트를 PBS 중에 5% 염소 혈청 및 0.5% 트리톤 X-100 중에 실온에서 1시간 동안 실온에서 차단하였다. 1차 항체(항-MAP 2 다중클론, 밀리포어 AB5622호 및 항-베타 아밀로이드 6E10 단일클론, Covance SIG-39300호, 1㎍/㎖에서, 및 토끼 다중클론 항-시냅토파이신, 아나스펙(Anaspec), 0.2㎍/㎖에서)를 PBS에 의해 5% 염소 혈청 중에 1:1000 희석하였다. 1차 항체를 4℃에서 밤새 항온처리하였다. 이후, 플레이트를 PBS에 의해 각각 5분 동안 3회 세척하였다. 2차 항체(알렉사 플루오르 488 다중클론, 인비트로겐 A11008호 및 알렉사 플루오르(Alexa Flor) 647 단일클론, 인비트로겐 A21235호)를 PBS에 의해 5% 염소 혈청 중에 1:1000 희석하였다. 2차 항체를 실온에서 1시간 동안 항온처리하였다. 플레이트를 PBS에 의해 1회 세척하였다. 이후, DAPI(4',6-다이아미디노-2-페닐인돌, 인비트로겐)를 0.03㎍/㎕에서 적용하고, 실온에서 5분 동안 항온처리한 후, PBS에 의해 세척하였다.
결과는 하기 기재된 바대로 제조되고 사용된 제제에 따라 3 또는 1μM으로 투약되고, 시냅스에서 뉴런에 결합된, A베타 올리고머가 적색 염료에 의해 드러난다는 것을 밝히는 것으로 예상된다. 초기 알츠하이머병을 가지는 인간에서, 해마에서의 시냅스의 수는 연령 일치된 인지가 정상인 개인과 비교하여 18% 감소한다는 것으로 밝혀졌고(Scheff et al., '07), 이 결과는 형광 반점 및 이에 따라 시냅스의 수의 20% 회귀만큼 이 검정에서 또한 가시화될 수 있다. 선택된 시험 화합물의 동시존재에서, A베타 결합은 본질적으로 제어 수준으로 감소하는 것으로 예상되고, 녹색 형광은 영향을 받지 않아서 감소하지 않은 시냅스 수를 나타낸다. A베타 42 올리고머는 포스트시냅스 척추에 결합하고; 1차 뉴런 포스트시냅스 척추에서 시냅토파이신에 의해 표지되고, 시냅스는 유효량의 바람직한 시험 화합물이 배양물에 첨가될 때 본질적으로 제어 수준에서 나타나는 것으로 예상된다. 단독으로 첨가된 A베타 42 올리고머는 비히클 단독과 비교할 때 24시간 후 시냅토파이신 반점의 밀도를 20% 감소시킨다. 이 손실은 유효량의 바람직한 시험 화합물에 의해 역전된다. A베타 올리고머의 부재 하에, 바람직한 시험 화합물은 시냅스 수에 영향을 미치지 않고, 대조군(비히클 단독)과 필적하는 수준으로 남아 있다. A베타 반점에 의해 계산된 바와 같은 A베타 결합 강도가 유효량의 시험 화합물의 존재 하에 약 18% 감소하지만, 이 감소는 이 화합물의 존재 하에 대조군 수준에 도달하는 시냅스 수를 허용하기에 충분한 것으로 예상된다.
추가적으로, 반점 시냅스 A베타 올리고머 결합은 농도 의존적 방식으로 소정의 시험 화합물의 존재 하에 약 38% 감소하는 것으로 예상된다. 반점 강도의 히스토그램은 정상 바이모달 결합 집단(밝은 반점을 가지는 뉴런 및 덜 밝은 반점을 가지는 집단)이 약물(데이터 비도시)의 존재 하에 왼쪽으로 이동한다는 것을 나타낸다. A베타 올리고머 결합의 부분 저해는 LTP 기능의 100%를 복원하는 것으로 보고되었다(Strittmatter SM et al., Cellular Prion Protein Mediates Impairment of Synaptic Plasticity by Amyloid-Beta Oligomers Nature (2009) 457 (7233:1128-32)).
A베타 올리고머는 비히클 치료 군(제1 막대)과 비교하여 24시간 후 시냅토파이신 반점의 밀도를 20% 감소시키고, 이것은 유효량의 시험 화합물에 의해 역전된다. 예를 들어 WO 제2013/029060호(본 명세서에 참조문헌으로 인용됨)를 참조한다.
A베타의 부재 하에, 시험 화합물이 시냅스 수에 영향을 미치지 않는 것이 바람직하다. A베타 올리고머는 시냅스 수를 18.2% 감소시키고; 이 소실의 100%는 유효량의 바람직한 시험 화합물에 의해 제거된다.
DAPI에 의해 가시화된 핵은 정상 형태를 나타내어서, 신경퇴행의 부재를 나타낸다. 화학식 I 및/또는 II에 의해 포함되는 것 중에서부터 선택되는 선택된 시험 화합물에 의해 절차를 수행한다.
A베타 올리고머 제제:
인간 아밀로이드 펩타이드 1-42를 캘리포니아 펩타이드로부터 얻고, 품질 관리 분석에 따라 롯트 선택하였다. A베타 1-42 올리고머를 상기 기재된 바와 같은 공개 방법에 따라 만들었다. [예를 들어, 문헌[Dahlgren et al., "Oligomeric and fibrillar species of amyloid-beta peptides differentially affect neuronal viability" J Biol Chem. 2002 Aug 30;277(35):32046-53. Epub 2002 Jun 10.; LeVine H 3rd. "Alzheimer's beta-peptide oligomer formation at physiologic concentrations" Anal Biochem. 2004 Dec 1;335(1):81-90; Shrestha et.al, "Amyloid beta peptide adversely affects spine number and motility in hippocampal neurons" Mol Cell Neurosci. 2006 Nov;33(3):274-82. Epub 2006 Sep 8; Puzzo et al., "Amyloid-beta peptide inhibits activation of the nitric oxide/cGMP/cAMP-responsive element-binding protein pathway during hippocampal synaptic plasticity" J Neurosci. 2005 Jul 20;25(29):6887-97; Barghorn et al., "Globular amyloid beta-peptide oligomer - a homogenous and stable neuropathological protein in Alzheimer's disease" J Neurochem. 2005 Nov;95(3):834-47. Epub 2005 Aug 31; Johansson et al., Physiochemical characterization of the Alzheimer's disease-related peptides A beta 1-42 Arctic and A beta 1-42wt. FEBS J. 2006 Jun;2 73(12):2618-30] 참조] 및 뇌 유래 A베타 올리고머(예를 들어, 문헌[Walsh et al., Naturally secreted oligomers of amyloid beta protein potently inhibit hippocampal long-term potentiation in vivo. Nature (2002). 416, 535-539; Lesne et al., A specific amyloid-beta protein assembly in the brain impairs memory. Nature. 2006 Mar 16;440(7082):352-7; Shankar et al, Amyloid-beta protein dimers isolated directly from Alzheimer's brains impair synaptic plasticity and memory. Nat Med. 2008 Aug;14(8):837-42. Epub 2008 Jun 22] 참조). 올리고머 제제의 품질 관리는 올리고머 크기 범위 및 상대 농도를 결정하는 웨스턴, 및 독성 없이 세포외배출 가속을 확인시켜주는 MTT 검정으로 이루어진다. DNA 결합 염료 DAPI(인비트로겐)에 의해 가시화된 핵 형태의 정량화를 통해 각각의 영상 기반 검정에서 독성을 모니터링하였다. 단편화된 핵은 후기 단계 아폽토시스에 있는 것으로 생각되고, 시험은 거절될 것이다(Majno and Joris Apoptosis, oncosis, and necrosis. An overview of cell death. Am J Pathol 1995;146:3-16). 드문 펩타이드 크기 범위 또는 표준 농도에서 뉴런에 대해 상당한 독성을 생성하는 펩타이드 롯트는 거절될 것이다.
대조군
올리고머 제제에 의한 항-A베타 항체 6E10의 예비 흡착은 용량 의존적 방식으로(7.84x10-6에서) 시냅스 결합을 저해하고, 양성 대조군으로서 사용하였다. 항체를 1:1000(1㎍/㎖)으로 사용하였다. 시냅스 손실 검정을 위해, NMDA 길항제 다이조실핀(MK-801)을 80μM에서 양성 대조군으로서 사용하였다.
영상 처리
영상을 포획하고 뉴런 프로파일링 알고리즘을 이용하여 셀로믹스 VTI 자동화 현미경 플랫폼에 의해 분석하였다. 통계 분석을 위해, 이분산성에 의한 터키-크라머 쌍 지음 비교를 이용하였다.
웨스턴 블롯
A베타 1-42를 함유하는 샘플을 비환원 레인 마커 샘플 완충제(피어스 1859594호) 중에 (1:5) 희석하였다. 30마이크로리터(㎕) 샘플을 18개의 웰 프리캐스트 4-15% 트리스-HCl 겔(BIORAD 345-0028호)에 로딩하였다. 125볼트(V)에서 90분 동안 트리스-글리신 완충제를 사용하여 바이오라드 크리터리언 프리캐스트 겔 시스템(BIO-RAD Criterian precast gel system)에서 전기영동을 수행하였다. 겔을 30V에서 120분 동안 트리스-글리신/10% 메탄올 완충제 중에 0.2μM 나이트로셀룰로스 막에 블롯팅하였다. 막을 PBS 용액 중에 5분 동안 비등시키고 4℃에서 TBS/5% 젖 용액에 의해 밤새 차단하였다. 막을 실온에서 1시간 동안 TBS/1% 젖 용액 중에 10㎍/㎖로 희석된 6E10-HRP(Covance SIG-39345호)에 의해 프로빙하였다. 막을 TBS/0.05% tween-20의 용액에 의해 각각 40분 동안 3회 세척하고 ECL 시약(BIO-RAD 162-0112호)에 의해 5분 동안 전개시켰다. 알파 이노텍 플루오르켐 큐 정량적 영상화 시스템(Alpha Innotech FluorChem Q quantitative imaging system)에서 영상 획득을 수행하고 알파뷰 큐 소프트웨어(AlphaView Q software)에 의해 분석하였다.
활성
바람직한 시험 화합물은 (영상화 처리 알고리즘을 이용하여) 결합 검정에 따라 뉴런에 대한 A베타 올리고머 리간드의 결합을 약 25% 부분적으로 차단하는 것으로 나타나는 것으로 예상된다.
실시예 9: 공포 조건화 검정
선택된 시험 화합물을 공포 조건화로서 공지된 기억 의존적 거동 업무의 동물 모델에서 시험하였다. 연구 프로토콜을 공개 프로토콜에 기초하여 설계하였다(예를 들어, 문헌[Puzzo D, Privitera L, Leznik E, Fa M, Staniszewski A, Palmeri A, Arancio O. Picomolar amyloid-beta positively modulates synaptic plasticity and memory in hippocampus. J Neurosci. 2008 Dec 31;28(53):14537-45] 참조.). 정황 기억의 형성은 중앙 측두엽 구조, 예컨대 해마의 통합성에 의존한다. 이 검정에서, 마우스를 특정한 핵심적인 정황(조건화 자극; CS)이 가벼운 발 쇼크(비조건화 자극, US)의 경우에 회피 사건과 연관된다는 것을 기억하도록 훈련시켰다. 우수한 학습을 나타낸 동물은 동일한 정황에 다시 위치할 때 동결 거동의 증가를 나타낼 것이다. 이 동결은 새로운 정황에서 부재한다. 정황에서의 동결의 증가는 동물에서 강한 해마 의존적 기억 형성을 나타낸다. 공포 조건화에서 시험된 기억은 가용성 Aβ의 상승에 민감하다. 화합물 II는 막 수송에서 A베타 올리고머 매개 효과를 중단시키는 데 있어서 효과적이다. A베타 올리고머 투여 전에 동물에게 투여될 때, 바람직한 시험 화합물은 용량 의존적 방식으로 기억에 대한 올리고머 효과를 차단하는 것으로 예상된다.
소정의 바람직한 시험 화합물은 기억에서 A베타 올리고머 유도 결함을 제거할 수 있는 것이지만, 단독 용량될 때 기억에 영향을 미치지 않을 것이다. 이 거동 효율은 올리고머에 의해 발생한 거동 기억 상실을 치료하는 데 있어서 막 수송 검정이 어떤 화합물이 효율적인지를 예측할 수 있다는 것을 나타낸다. 기억에 대한 공포 조건화 모델을 본 명세서에 기재된 바대로 수행하였다. 임의의 용량에서 불리한 거동 변화가 관찰되지 않는 것이 바람직하다. 따라서, 막 수송 검정에서의 이 화합물의 성능과 공포 조건화 검정에서의 이의 성능 사이의 상관관계가 존재하고, 후자는 기억 상실의 표시자이다. 본 명세서에 제공된 아이소인돌린 화합물이 공포 조건화 검정에서 활성이고, 따라서 기억 상실을 치료하는 데 있어서 효율적인 것으로 나타날 것이라고 예상된다. 공포 조건화 모델에서의 화합물의 성능과 기억 상실을 치료하는 데 있어서의 이의 효율 사이의 상관관계가 문헌에서 확립되어 있다. (Delgado MR, Olsson A, Phelps EA. "Extending animal models of fear conditioning to humans" Biol . Psychol. 2006 Jul;73(1):39-48
실시예 10. 래트 , 레서스 원숭이 및 인간 사후 뇌 샘플에 의한 방사선자동사진법 연구.
시그마-2 및 시그마-1 수용체 리간드의 신경학적 및 약역학적 프로파일링에 대한 방사선자동사진법 영상화 연구를 문헌[Xu et al., 2010. Xu, J., Hassanzadeh B, Chu W, Tu Z, Vangveravong S,.Tones LA, Leudtke RR, Perlmutter JS, Mintun MA, Mach RH. [ 3 H]4-( Dimethylamino )-N-[4-(4-(2-methoxyphenyl)piperazin-1-yl)butyl]benzamide, a selective radioligand for dopamine D(3) receptors . II . Quantitative analysis of dopamine D3 and D2 receptor density ratio in the caudate - putamen . Synapse 64: 449-459(2010)](본 명세서에 참조문헌으로 인용됨)에 의해 이전에 보고된 프로토콜의 변형에 의해 수행하였다. 표지된 RHM-1을 문헌[Xu J, Tu Z, Jones LA, Wheeler KT, Mach RH. [ 3 H]N-[4-(3,4- dihydro -6,7-dimethoxyisoquinolin-2(1 H)- yl ) butyl ]-2- methoxy -5-methylbenzamide: a Novel Sigma -2 Receptor Probe. Eur. J. Pharmacol. 525: 8-17 (2005)](본 명세서에 참조문헌으로 인용됨)의 방법에 의해 얻었다.
래트, 레서스 원숭이 및 사후 인간 뇌로부터의 20μM 두께의 뇌 절편을 마이크롬 냉동절편기(cryotome)을 사용하여 절단하고 슈퍼프로스트(superfrost)와 유리 슬라이드(피셔 사이언티픽(펜실베니아주 피츠버그))에 탑재하고, 뇌 피질 및 해마의 뇌 구역을 통한 연속 절편을 이 연구에 사용하였다. 뇌 절편을 시그마-1 수용체 프로파일링에 위해 5nM [3H](+)-펜타조신, 오직 시그마-2 수용체 규명을 위해 4nM [3H]RHM-l, 시그마-l 수용체 블록 (+)-펜타조신의 존재 하에 10nM [3H]DTG 및 [3H]할로페리돌과 항온처리하여 시그마-2 수용체 분포를 영상화하고; 30분 동안 방사성 리간드와 항온처리 후, 뇌 절편 함유 유리 슬라이드를 얼음 냉각 완충제에 의해 매회 1분에 5회 세정하였다.
슬라이드를 건조하고 프리 슬라이드에서 구리 호일 테이프에 의해 코팅함으로써 전도성으로 만들고 이후 가스 챔버[가스 검출기의 아르곤과 트라이에틸아민(시그마-알드리히(미국))]의 혼합물, 베타 이미저 2000Z 디지털 베타 이미징 시스템(Beta Imager 2000Z Digital Beta Imaging System)(Biospace(프랑스))에 위치시켰다. 가스를 잘 혼합하고 균질 상태에 도달한 후, 고품질 영상까지 24시간 내지 48시간 동안 추가의 노출을 관찰한다. [3H]마이크로스케일(American Radiolabeled Chemicals, Inc.(미주리주 세인트 루이스))을 전체 방사성 정량적 분석을 위한 기준으로서, 즉 nCi/mg 조직으로 cpm/㎟를 전환하기 위해 동시에 수행하였다. 정량적 분석을 해부학적 관심 구역(regions of interest: ROI)을 위해, 즉 피질 및 해마의 구역에서 정량적 방사성 흡수(cpm/nlln2)를 얻기 위해 프로그램 베타-이미지 플러스(Beta-Image Plus)(BioSpace(프랑스))에 의해 수행하였다. 결합 밀도를 상응하는 방사성 리간드의 비활성 및 표준 [3H]마이크로스케일로부터의 보정 곡선에 기초하여 fmol/mg 조직으로 정규화하였다. 일련의 시험 화합물(10nM, 100nM, 1,000nM 및 10,000nM)의 희석액을 정량적 방사선자동사진법을 이용하여 결합 부위와의 경쟁에 대해 시험하고, 4개의 방사성 리간드, [3H](+)-펜타조신, [3H]RHM-l, [3H]DTG 및 [3H]할로페리돌의 경우, 특이적 결합(대조군(%))을 분석하여 피질 및 해마의 구역(치상회, 해마 CA I 및 CA3)에서의 결합 친화도를 추론하였다.
정상 환자, 루이소체 치매(DLB) 환자, 또는 알츠하이머병(AD) 환자 특이적 결합으로부터의 예를 들어 인간 전두 피질 슬라이스에서 [3H]-(+)-펜타조신(시그마-1 수용체 리간드) 및/또는 [125I]-RHM-4, 또는 [3H]-RHM-1, (시그마-2 수용체 리간드)에 의한 시그마-1 및 시그마-2 수용체에서의 방사선자동사진법을 수행하고 대조군과 비교하였다. 시그마-1 수용체는 정상 대조군과 비교하여 알츠하이머병에서 및 가능하게는 DLB에서 통계학적으로 하향조절되고, 예를 들어 미시나(Mishina) 등은 초기 알츠하이머병에서 시그마-1 수용체의 저밀도를 보고하였다. Mishina et al., 2008, Low density of sigma1 receptors in early Alzheimer's disease. Ann. Nucl Med 22: 151-156. 그러나; 시그마-2 수용체는 AD에서 통계적으로 하향조절되지 않았다. 방사선자동사진법은 이용하여 시험 화합물 시그마-2 리간드에 의한 원숭이 전두 피질, 원숭이 해마 또는 인간 측두 피질에서의 예를 들어 18.4nM [3H]-RHM-1의 대체를 나타낸다. 시라메신, 공지된 시그마-2 수용체 리간드, 및 시험 화합물은 표적 조직에서 [3H]-RHM-1을 부분적으로 대체하는 것으로 예상된다.
실시예 11. MTS 검정: 다양한 시그마-2 리간드의 효현제 또는 길항제 활성의 결정.
시험 화합물의 세포독성은 셀티터 96 수성 원 용액 검정(CellTiter96 Aqueous One Solution Assay)(프로메가(위스콘신주 매디슨))를 사용하여 결정하였다. 간단히 말하면, MDA-MB-435 또는 MDA-MB231 또는 SKOV-3 세포를 시그마-2 수용체 선택적 리간드에 의한 처리 전날에 2000개의 세포/웰의 밀도로 96웰 플레이트에 시딩하였다. 24시간 처리 후, 셀티터 96 수성 원 용액 시약을 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 37℃에서 2시간 동안 항온처리하였다. 플레이트를 Victor3 플레이트 판독기(PerkinElmer Life and Analytical Sciences(코네티컷수 셀턴))에서 490㎚에서 판독하였다. 비처리 세포에 비해 세포 생존능력을 50% 저해하는 데 필요한 시그마 리간드의 농도로서 정의된, EC50 값을 각각의 세포주에 대한 용량 반응 곡선으로부터 결정하였다. 시라메신은 효현제로서 인정된다. 시그마-2 리간드의 효현제 및 길항제는 하기 대로 정의된다: 시그마-2 리간드 시험 화합물의 EC50이 시라메신의 EC50의 2배 미만인 경우, 이 시그마-2 리간드 시험 화합물은 효현제로서 생각된다. 시그마-2 리간드의 EC50이 시라메신의 EC50의 2배 내지 10배인 경우, 이 시그마-2 리간드는 부분 효현제로서 생각된다. 시그마-2 리간드의 EC50이 시라메신의 EC50의 10배 초과인 경우, 이 시그마-2 리간드는 길항제로서 생각된다. 연구에 사용된 시그마-2 리간드 표준 화합물은 효현제(시라메신 및 SV 119), 부분 효현제(WC26) 및 길항제(RHM-1)이다. 표준품에 대한 결과는 표 3에 기재되어 있다.
Figure 112016084530517-pct00100
뉴런 배양물을 24시간 동안 다양한 농도의 시그마 화합물에 의해 처리하고, 비히클과 비교된 핵 강도를 측정하였다. 시그마-2 효현제(시라메신, SV-119, WC-26)는 시험 농도에서 핵 강도를 감소시키지 않은 시그마-2 길항제(RHM-1)와 반대로 뉴런에서 상당한 비정상 핵 형태를 발생시켰다. 예를 들어 WO 제2013/029060호, 도 9B(본 명세서에 참조문헌으로 인용됨)를 참조하고, 여기서 시그마-2 수용체 효현제는 뉴런 및 암 세포에 세포독성인 것으로 나타났지만; 시그마-2 수용체 길항제는 독성이 아니고, 시그마-2 수용체 효현제에 의해 발생한 세포독성을 추가로 차단하였다. 본 개시내용의 아이소인돌린 시험 화합물을 이 검정에서 분석하여 뉴런 표현형을 결정하는 것을 돕고, 결과가 표 2에 기재되어 있다.
실시예 12. 카스파제 -3 검정. 시그마-2 리간드의 효현제 또는 길항제 활성의 결정.
본 명세서에 기재된 바대로, Xu 등은 추정적 시그마-2 수용체 결합 부위로서 PGRMC1 단백질 복합체를 확인하였다. Xu et al., 2011. Nature Commun. 2, article number 380(본 명세서에 참조문헌으로 인용됨). 시그마-2 수용체 효현제는 카스파제-3 의존적 세포사를 유도할 수 있다. Xu 등(2011)은 시그마-2 수용체 효현제 WC-26에 의해 카스파제-3 활성화를 조절하는 PGRMC1의 능력을 조사하기 위한 기능적 검정을 개시한다.
A베타 올리고머는 낮은 수준의 카스파제-3 활성화를 발생시키고, LTD를 생성시켰다. 높은 수준의 A베타 올리고머 및 카스파제-3 활성화는 세포사를 발생시켰다. Li et al., 2010; Olsen and Sheng 2012. WO 제2013/029060호(본 명세서에 참조문헌으로 인용됨)에서 시그마-2 수용체 효현제(SV-119, 시라메신)가 종양 세포 및 뉴런에서 카스파제-3을 활성화한다는 것이 입증되었고; 예를 들어 도 10A 및 도 10B를 참조한다. 시그마-2 수용체 길항제 RHM-1은 종양 세포(도 10A)에서 활성화를 저해하지만, 이 실험에서 뉴런에서 효현제 SV-119에 의해 활성화를 차단할 수 없었다(도 10B). 시그마 2 수용체 길항제인 시험 화합물은 종양 세포에서 카스파제-3 활성화를 저해하고 뉴런에서 카스파제-3의 시그마-2 수용체 효현제 SV-119 활성화를 차단할 수 있다. 따라서, 소정의 시험 화합물을 이 실시예에서 입증된 바대로 종양 세포 및 뉴런에서 카스파제-3 검정에서 시그마-2 수용체 길항제 거동에 대해 시험하였다.
시그마-2 수용체 리간드에 의한 내인성 카스파제-3의 활성화를, 제조사의 프로토콜에 따라 카스파제-3 비색 활성 검정 키트(밀리포어(매사추세츠주 빌러리카))를 사용하여 측정하였다. 간단히 말하면, MDA-MB 435 또는 MDA-MB23I 세포를 0.5x106개의 세포 100㎜ 접시에서 도말하였다. 도말 24시간 후, 시그마-2 리간드를 배양 접시에 첨가하여 카스파제 3 활성화를 유도하였다. 시그마-2 리간드의 최종 농도는 이의 EC50이다. 처리 24시간 후, 세포를 수확하고, 300㎕의 세포 용해 완충제 중에 용해시키고, 10,000 x g에서 5분 동안 원심분리하였다. 상청액을 수집하고 카스파제-3 기질, DEVD-pNA와 37℃에서 2시간 동안 항온처리하였다. 단백질 농도를 Dc 단백질 검정 키트(Bio-Rad(캘리포니아주 헤르큘스))를 사용하여 결정하였다. 생성된 유리 pNA를 405㎚에서 Victor3 마이크로플레이트 판독기(PerkinEliner Life and Analytical Sciences(코네티컷수 셀턴))를 사용하여 측정하였다. 시험된 리간드는 표준 시그마-2 효현제(시라메신, SV119, WC26), 및 시그마-2 길항제, RHMWU-I-102(RHM-1), 및 시험 화합물을 포함하였다. 카스파제 3을 활성화하는 리간드는 효현제로 생각되는 반면, 카스파제 3을 활성화하지 않는 리간드는 길항제로 생각된다. WO2013/029060, 도 10A에 기재된 것처럼, 시그마-2 효현제 시라메신은 카스파제-3 활성을 유도하는 반면, 시그마-2 길항제, 예를 들어 RHM-1, 및 시그마-2 길항제인 시험 화합물은 암 세포 및 뉴런 둘 다에서 카스파제-3 활성을 유도하지 않는다.
실시예 13. 치료학적 표현형.
시험 화합물에 대한 치료학적 표현형은 실험실내 검정 플랫폼에 의해 결정되고 거동 효율을 예측한다. (1) 시그마-2 수용체에 고친화도로 선택적으로 결합하고; (2) 뉴런에서 기능성 길항제로서 작용하는, 화합물은 A베타 올리고머의 부재 하에 Aβ 유도 막 수송 결함을 차단하고; Aβ 유도 시냅스 손실을 차단하고, 수송 또는 시냅스 수에 영향을 미치지 않는 경우 거동 효율을 가지는 것으로 예측된다. 실험실내 검정에서 활성의 이 패턴은 "치료학적 표현형"이라 칭해진다. A베타 올리고머의 부재 하에 정상 기능에 영향을 미치지 않으면서 성숙 뉴런에서 A베타 올리고머 효과를 차단하는 시그마-2 수용체 길항제의 능력은 치료학적 표현형에 대한 하나의 기준이다. 올리고머의 부재 하에 수송 또는 시냅스 수에 영향을 미치는 화합물은 거동에서 효율적이지 않다. 정상 수송에 영향을 미치거나 시냅스 수를 변경하지 않으면서 올리고머를 선택적으로 차단하는 유일한 이 화합물은 A베타 올리고머 유도 기억 상실을 예방하고 치료하는 데 있어서 거동에서 효율적이다. 일 실시형태에서, 실험실내 검정 플랫폼은 거동 효율을 예측할 수 있다. 플랫폼 검정에서의 활성의 이 패턴은 따라서 치료학적 표현형이다.
요약하면, 다른 비시그마 CNS 또는 표적 수용체와 비교하여 시그마 수용체에 대해 약 20배 초과, 30배, 50배, 70배, 또는 바람직하게는 100배 초과의 선택도를 가지는 시그마-2 수용체에서 고친화도(바람직하게는 약 600nM 미만, 500nM, 400nM, 300nM, 200nM, 150nM, 100nM 또는 70nM의 Ki)를 가지는 시그마-2 길항제는 뇌 침투성 및 우수한 대사 및/또는 혈장 안정성을 포함하는 우수한 약물 유사 특성을 가지고, 치료학적 표현형을 보유하는 것은 거동 효율을 가지는 것으로 예측되고, 이를 필요로 하는 환자에서 A베타 올리고머 유도 시냅스 기능이상을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
실험실내 검정 규명에 의해 경구 생체이용률을 가지는 것으로 예측된 여러 아이소인돌린 화학식 I 및/또는 화학식 II에 따른 화합물에 대한 기능적 뉴런 표현형은 표 2에 기재되어 있다.
치료학적 표현형
여러 시그마-2 리간드는 3개의 기능적 뉴런 표현형에 들어간다: 길항제(A베타 신호전달을 차단); 효현제(U형상 용량-반응 곡선에 의해 A베타 신호전달 및 고용량에서의 독성을 차단; 및 불활성(뉴런 배양에서 효과 없음). 공지된 선행 기술 시그마-1 수용체 리간드는 2개의 카테고리에 들어간다: 길항제(A 베타 신호전달을 차단) 및 불활성(뉴런 배양에서 효과 없음). 대부분의 선행 기술 화합물은 다른, 비시그마, 수용체에 대해 상당한 친화도를 가진다는 점에서 낮은 선택도가 된다. 여러 선행 기술 화합물은 혈액 뇌 장벽(BBB)을 침투할 수 없고, 산화 대사에 대한 기질일 것이고, 따라서 치료학적 프로필에 맞지 않을 것이다.
여러 임상 화합물이 원하는 기능적 표현형을 가지지만, 이것은 원하는 치료학적 프로필을 충족시키지 않았다. 원하는 길항제 기능적 뉴런 표현형을 가지지만, 비선택적이거나, BBB를 횡단하지 못하는 것에 의해, 또는 산화성 기질인 것으로 예측되고 대사 불안정성을 가지는 것에 의해 치료학적 프로필에 대한 기준에 실패한 공지된 선행 기술 화합물이 WO 제2013/029060호, 표 11C 및 표 11D(본 명세서에 참조문헌으로 인용됨)에 기재되어 있다.
실시예 14: 실험실내 독성.
대표적인 시그마-2 길항제 시험 화합물은 실험실내 급성 또는 만성 투약에 의해 뉴런 또는 신경교 독성을 유도하지 않았다. 시그마-2 수용체 길항제는 막 수송에서의 A베타 올리고머 유도 변화를 제거하거나 감소시켰다. 올리고머 없이 투약될 때 막 수송에 대한 화합물의 상당한 효과 발생하지 않았다. 3일 동안 EC50 농도의 10배 이하까지 시험될 때 뉴런 수, 신경교 수, 핵 크기, 핵 형태, 신경돌기 길이, 세포골격 형태에 비해 독성이 없었다. 예를 들어 WO 제2013/029060호, 표 12(본 명세서에 참조문헌으로 인용됨)를 참조한다.
다수의 표준 검정에서 시험 화합물에 대한 실험실내 독성을 시험하였다. 바람직하게는, 실험실내 tox 연구를 시험하는 것은 10μM에서의 무의 유전독성(AMES, 소핵, 박테리아 사이토톡스); HepG2 종양 세포주에서의 시그마-2 수용체에서 친화도 100배 초과의 HepG2 독성; 10μM에서의 CYP 450 효소 2D6, 3A4 및 2C19의 저해; 및 hERG 저해를 나타낸다. hERG 저해(IC50, nM)에 대한 시험 화합물에 결과는 표 2에 기재되어 있다.
몇몇 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 화학식 I 또는 화학식 II에 따른 아이소인돌린 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 300nM 초과, 500nM 초과, 1,000nM 초과, 3,000nM 초과, 5,000nM 초과, 10,000 초과, 또는 20,000nM 초과의 IC50으로 최소 hERG 저해를 나타낸다. 특정한 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 화학식 I 또는 화학식 II에 따른 아이소인돌린 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 최소 hERG 저해를 나타내고, 5,000nM 초과, 10,000 초과, 또는 20,000nM 초과의 IC50을 나타낸다.
실시예 15: 막 수송 검정에서 화합물 II 의 거울상이성질체의 분리 및 활성.
몇몇 실시형태에서, 유사체 중 하나의 실질적으로 순수한 또는 순수한 거울상이성질체를 제조하기 위해 비대칭적으로 합성을 수행하였다. 몇몇 경우에, 당해 분야에 공지된 임의의 기법에 의해 라세미 혼합물로부터 키랄 화합물을 분할하였다.
몇몇 경우에, 키랄 화합물은 키랄 크로마토그래피에 의해 (+) 및 (-) 거울상이성질체로 분리된다. 라세미 혼합물을 4.6X250mm) 공지된 기법; 예를 들어, WO 제2013/029060호, 실시예 15(본 명세서에 참조문헌으로 인용됨)에 의해 실리카 겔에 코팅된 키랄 칼럼 CHIRALPAK AD-H(아밀로스 트리스(3,5-다이메틸페닐카바메이트)에 적용할 수 있다. 칼럼으로부터의 용리 후, 각각의 (+) 거울상이성질체 및 (-) 거울상이성질체에 대한 특정 회전을 결정하였다. 분할된 거울상이성질체를 예를 들어 막 수송 검정에서 개별적으로 시험하였다.
실시예 16. 경구로 이용 가능한 화합물의 거동 효율 - 형질전환 알츠하이 머 마우스 모델에서 기억 결함의 개선.
AD의 TG 모델로서 수컷 hAPP Swe/Ldn 형질전환(Tg) 마우스를 사용하였다. 특정 시간 기간 동안 비히클, 또는 10 또는 30㎎/㎏/일의 시험 화합물에 의해 p.o. 치료된 형질전환 마우스, 및 비형질전환 비히클 치료 한배새끼를 표준 공포 조건화 패러다임으로 처리하였다. 동일한 시간 기간 동안 비히클에 의해 p.o. 치료된 비히클 치료 9월령 수컷 hAPP Swe/Ldn 형질전환(Tg) 마우스는 정황 공포 조건화에서 비히클 치료 비형질전환 한배새끼에 비해 상당한 기억 결함을 나타낸다.
동물을 훈련 24시간 후 연상 기억에 대해 시험을 때, 반복된 측정을 가지는 2방향(유전자형 및 시간) ANOVA는 형질전환과 비형질전환 비히클 치료 마우스 사이의 전체 동결 시간의 임의의 상당한 차이를 검출하기 위해 사용된다. 경구로 이용 가능한 화합물에 대한 뇌/최저 혈장 및 뇌/피크 혈장 비율을 결정하였다. 후속하는 연구를 이용하여 바람직한 시험 화합물의 최소 유효 용량을 결정할 수 있다.
합성 실시예
본 명세서에 제공된 화합물은 임의의 합성 경로를 통해 합성할 수 있고; 예를 들어, WO 제2013/029060호 및 WO 제2013/029067호(이의 각각은 본 명세서에 참조문헌으로 인용됨)를 참조한다.
실시예 17: 젬- 다이메틸 아민 중간체의 합성.
실시예 17A는 반응식 1에 도시된 바와 같은 예시적인 젬-다이메틸 아민 중간체의 제법을 예시한다.
Figure 112016084530517-pct00101
반응식 1. 예시적인 젬-다이메틸 아민 중간체 4-(3-(tert-뷰톡시)-4-((tert-뷰틸다이메틸실릴)옥시)페닐)-2-메틸뷰탄-2-아민의 제법.
반응식 1은 젬-다이메틸 아민 중간체, 화합물 11; 4-(3-(tert-뷰톡시)-4-((tert-뷰틸다이메틸실릴)옥시)페닐)-2-메틸뷰탄-2-아민의 제조를 위한 절차를 예시한다.
화합물 3; 3-(tert-뷰톡시)-4-하이드록시벤즈알데하이드의 제법(반응식 1): DCM(30㎖) 중의 3,4-디하이드록시벤즈알데하이드 1(2.0g, 14.5m㏖)의 교반된 용액에 농축 H2SO4(0.1㎖)를 첨가하고, 3시간 동안 아이소뷰틸렌을 버블링하였다. 트라이에틸아민(2㎖)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 얻고, 이것을 실리카 겔(PE:EA = 5:1) 상에 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 3(1.01g, 35%)을 얻었다.
화합물 5, (E)-4-(3-(tert-뷰톡시)-4-하이드록시페닐)뷰트-3-엔-2-온의 제법(반응식 1): 아세톤(10㎖) 중의 3(0.8g, 4.1m㏖)의 교반된 용액에 10% NaOH 수용액(0.5㎖)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하고, 빙수에 붓고, 이것을 에틸 아세테이트(3x20㎖)에 의해 추출하였다. pH 6이 달성될 때까지 수성 상을 1N HCl에 의해 산성화시켰다. 반응물을 EtOAc(3x30㎖)에 의해 추출하고, 유기 층을 염수 및 물에 의해 세척하고, 황산나트륨 위로 건조시키고 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 얻고, 이것을 실리카 겔(PE:EA = 3:1)에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 5(0.5g, 50%)를 얻었다.
화합물 7, (E)-4-(3-(tert-뷰톡시)-4-((tert-뷰틸다이메틸실릴)옥시)페닐)뷰트-3-엔-2-온의 제법(반응식 1): DCM(40㎖) 중의 5(0.22g, 0.9m㏖)의 교반된 용액에 TBSCl(0.28g, 1.8m㏖) 및 이미다졸(0.14g, 2m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 8시간 동안 교반하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 얻고, 이것을 실리카 겔(PE:EA = 10:1)에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 7(0.22g, 67%)을 얻었다.
화합물 8, 4-(3-(tert-뷰톡시)-4-((tert-뷰틸다이메틸실릴)옥시)페닐)뷰탄-2-온의 제법(반응식 1): EA(10㎖) 중의 7(0.22g, 0.6m㏖)의 교반된 용액에 10% Pd/C(0.02g)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하고, 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 얻고, 이것을 실리카 겔(PE:EA = 10:1)에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 8(0.6g, 0.4m㏖, 68%)을 얻었다.
화합물 9, (R,E)-N-(4-(3-(tert-뷰톡시)-4-((tert-뷰틸다이메틸실릴)옥시)페닐)뷰탄-2-일리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아마이드의 제법(반응식 1): THF(30㎖) 중의 8(2.6g, 7.4m㏖, 1당량)의 교반된 용액에 (R)-(+)-t-뷰틸설핀아마이드(1.0g, 8.14m㏖, 1.1당량) 및 Ti(OEt)4(3.2g, 14.8m㏖, 2.0당량)를 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 빙수에 의해 급랭시키고 여과시켰다. 여과액을 에틸 아세테이트에 의해 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 위로 건조시키고, 농축시켜 미정제 생성물 9(2.7g, 80%)를 얻고, 이것을 다음 단계에서 직접 사용하였다.
화합물 10, (R)-N-(4-(3-(tert-뷰톡시)-4-((tert-뷰틸다이메틸실릴)옥시)페닐)-2-메틸뷰탄-2-일)-2-메틸프로판-2-설핀아마이드의 제법(반응식 1): 0℃에서의 에터(30㎖) 중의 9(2.7g, 5.9m㏖, 1당량)의 교반된 용액에 메틸마그네슘 브로마이드(10㎖, 30m㏖, 5당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 빙수에 의해 급랭시키고, 에틸 아세테이트에 의해 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 위로 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 얻고, 이것을 실리카 겔(PE:EA = 10:1)에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 10(1.6g, 57%)을 얻었다.
화합물 11; 4-(3-(tert-뷰톡시)-4-((tert-뷰틸다이메틸실릴)옥시)페닐)-2-메틸뷰탄-2-아민의 제법(반응식 1): EA(30㎖) 중의 10(1.2g, 2.55m㏖, 1당량)의 교반된 용액에 0℃에서의 EA(HCl)(10㎖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 감압 하에 농축시켜 황색의 오일로서 11(1.3g, 100%)을 얻었다. 화학식 I 및/또는 II의 아이소인돌린의 합성에서 사용되는 젬-다이메틸 아민 중간체를 제조하기 위해 유사한 합성 경로를 이용할 수 있다. t-뷰틸다이메틸실릴 옥시 치환기 및/또는 tert-뷰톡시 치환기는 대안적인 치환기에 의해 대체될 수 있거나, 추가적인 R1 기는 다른 유사체를 생성하기 위해 또한 사용될 수 있다.
실시예 17B는 반응식 3에 도시된 바와 같은 젬-다이메틸 아민 중간체의 일반적인 제법을 예시한다.
Figure 112016084530517-pct00102
반응식 3: 젬-다이메틸아민의 일반적인 제조
화합물 2; (E)-4-(4-플루오로페닐)뷰트-3-엔-2-온의 제법(반응식 3): 아세톤(1000㎖) 중의 1,4-플루오로벤즈알데하이드(100g, 805.7m㏖, 1당량)의 교반된 용액에 10% NaOH 수용액(100㎖)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하고, 이후 빙수에 붓고, 이것을 EtOAc(3x300㎖)에 의해 추출하였다. 유기 층을 염수 및 물에 의해 세척하고, 황산나트륨 위로 건조시키고 여과시키고 여과액을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 얻고, 이것을 실리카 겔(PE:EA = 10:1)에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 2; (E)-4-(4-플루오로페닐)뷰트-3-엔-2-온(110g, 85%)을 얻었다.
화합물 3; 4-(4-플루오로페닐)뷰탄-2-온의 제법(반응식 3): MeOH(40㎖) 중의 2(50g, 304.5m㏖)의 교반된 용액에 Pd/C(10%, 5g)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 이후 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시켜 화합물 3; 4-(4-플루오로페닐)뷰탄-2-온(50g, 300.9m㏖, 99%)을 얻고, 이것을 다음 단계에서 직접 사용하였다.
화합물 4; (R,E)-N-(4-(4-플루오로페닐)뷰탄-2-일리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아마이드의 제법(반응식 3): THF(30㎖) 중의 3(50g, 300.9m㏖, 1당량)의 교반된 용액에 (R)-(+)-t-뷰틸설핀아마이드(40.4g, 331m㏖, 1.1당량) 및 Ti(OEt)4(136.8g, 600.2m㏖, 2당량)를 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 밤새 교반하고 빙수에 의해 급랭시키고 여과시키고 EA에 의해 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 위로 건조시키고 농축시켜 미정제 생성물 4(65g, 80%)를 얻고, 이것을 다음 단계에서 직접 사용하였다.
화합물 5; (R)-N-(4-(4-플루오로페닐)-2-메틸뷰탄-2-일)-2-메틸프로판-2-설핀아마이드의 제법(반응식 3): 에터(30㎖) 중의 4(30g, 111.4m㏖, 1.0당량)의 교반된 용액에 0℃에서의 MeMgBr(111㎖, 333m㏖, 3.0당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 빙수에 의해 급랭시키고 EA에 의해 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 위로 건조시키고 감압 하에 농축시켜 잔류물을 얻고, 이것을 실리카 겔(PE:EA = 10:1)에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 5(28.6g, 90%)을 얻었다.
화합물 6; 4-(4-플루오로페닐)-2-메틸뷰탄-2-아민의 제법(반응식 3): EA(150㎖) 중의 5(28.6g, 100m㏖, 1당량)의 교반된 용액에 0℃에서의 EA(HCl)(200㎖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고 감압 하에 농축시켜 황색의 오일로서 6(18g, 100%)을 얻었다.
실시예 17C는 반응식 7에 도시된 바와 같은 젬-다이메틸 아민 중간체 4-(3-아미노-3-메틸뷰틸)-2-(트라이플루오로메톡시)페놀 하이드로클로라이드의 일반적인 제법을 예시한다.
Figure 112016084530517-pct00103
반응식 7: 젬-다이메틸 아민 중간체 4-(3-아미노-3-메틸뷰틸)-2-(트라이플루오로메톡시)페놀 하이드로클로라이드의 제법.
화합물 2의 제법(반응식 7): 트라이플루오로아세트산(400㎖) 중의 2-트라이플루오로메톡실페놀 1(40.0g, 0.224mol, 1당량)의 교반된 용액에 헥사메틸렌테트라민(188.7g, 1.35mol, 6당량)을 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 12시간 동안 교반하였다. 진공에 의해 농축시킨 후, 반응 혼합물을 2N HCl에 의해 희석하고 EA(3x400㎖)에 의해 추출하였다. 합한 유기 층을 염수에 의해 세척하고 Na2SO4 위로 건조시키고 진공 하에 농축시켜 오렌지색 오일을 얻었다. 미정제 생성물을 칼럼 크로마토그래피(PE:EA = 5:1)로 처리하여 표제 화합물 2(30.0g, 65%)를 얻었다.
화합물 3의 제법(반응식 7): 아세톤(300㎖) 중의 4-하이드록시-3-트라이플루오로메톡시-벤즈알데하이드(30.0g, 145.5m㏖, 1.0당량)의 교반된 용액에 10% NaOH 수용액(150㎖)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하고 빙수에 부었다. 반응물을 EtOAc(3x20㎖)에 의해 추출하였다. pH 6이 달성될 때까지 수성 상을 1N HCl에 의해 산성화시켰다. 반응물을 EtOAc(3x100㎖)에 의해 추출하였다. 유기 층을 염수 및 물에 의해 세척하고 황산나트륨 위로 건조시키고 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 얻고, 이것을 실리카 겔(PE : EA = 3:1)에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 3(30.1g, 84%)을 얻었다.
화합물 4의 제법(반응식 7): 메탄올(100㎖) 중의 4-(4-하이드록시-3-트라이플루오로메톡시-페닐)-뷰트-3-엔-2-온(12g, 47.5m㏖)의 용액에 10% Pd/C(1g)를 첨가하였다. 생성된 용액을 H2 분위기 하에 8시간 동안 교반하였다. 용액을 셀라이트의 패드를 통해 여과시키고 농축시켜 미정제 4-(4-하이드록시-3-트라이플루오로메톡시-페닐)-뷰탄-2-온(11g, 94%)을 얻었다.
화합물 5의 제법(반응식 7): THF(100㎖) 중의 4-(4-하이드록시-3-트라이플루오로메톡시-페닐)-뷰탄-2-온(11g, 44.3m㏖)의 용액에 (R)-(+)-t-뷰틸설핀아마이드(7.0g, 58m㏖) 및 Ti(OEt)4(22.0g, 96.7m㏖)를 첨가하였다. 생성된 용액을 밤새 교반하였다. 반응물을 빙수에 의해 급랭시키고 여과시켰다. 여과액을 에틸 아세테이트에 의해 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 위로 건조시키고 농축시켜 미정제 생성물 5(11.2g, 78%)을 얻고, 이것을 다음 단계에 사용하였다.
화합물 6의 제법(반응식 7): 에터(120㎖) 중의 5(23g, 49.4m㏖, 1당량)의 교반된 용액에 0℃에서의 MeMgBr(82㎖, 247m㏖, 5당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 빙수에 의해 급랭시키고 EA에 의해 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 위로 건조시키고 감압 하에 농축시켜 잔류물을 얻고, 이것을 실리카 겔(PE:EA = 10:1)에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 6(16.7g, 70%)을 얻었다.
화합물 7의 제법(반응식 7): 에틸 아세테이트(5㎖) 중의 6(1.0g, 2.08m㏖, 1당량)의 교반된 용액에 0℃에서의 아세테이트 중의 포화 HCl(5㎖)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고 감압 하에 농축시켜 황색의 오일로서 화합물 7(0.85g, 100%)을 얻었다.
실시예 17D는 반응식 8에 도시된 바와 같은 젬-다이메틸 아민 중간체 4-(4-((tert-뷰틸다이메틸실릴)옥시)-3-(트라이플루오로메톡시)페닐)-2-메틸뷰탄-2-아민의 일반적인 제법을 예시한다.
Figure 112016084530517-pct00104
반응식 8: 젬-다이메틸아민 4-(4-((tert-뷰틸다이메틸실릴)옥시)-3-(트라이플루오로메톡시)페닐)-2-메틸뷰탄-2-아민의 제법.
화합물 5의 제법(반응식 8): DCM(200㎖) 중의 4(18g, 72.5m㏖, 1당량)의 교반된 용액에 TBSCl(16.4g, 108.8m㏖, 1.5당량) 및 이미다졸(9.9g, 145m㏖, 2.0당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 8시간 동안 교반하고 감압 하에 농축시켜 잔류물을 얻고, 이것을 실리카 겔(PE:EA = 10:1)에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 5(19g, 73%)을 얻었다.
화합물 6의 제법(반응식 8): THF(20㎖) 중의 5(1.2g, 3.3m㏖, 1당량)의 교반된 용액에 (R)-(+)-t-뷰틸설핀아마이드(0.4g, 3.6m㏖, 1.1당량) 및 Ti(OEt)4(1.5g, 6.6m㏖, 2당량)를 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 빙수에 의해 급랭시키고 여과시키고 에틸 아세테이트에 의해 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 위로 건조시키고 농축시켜 미정제 생성물 6(1.6g, 97%)을 얻고, 이것을 다음 단계에 직접 사용하였다.
화합물 7의 제법(반응식 8): 0℃에서의 에터(30㎖) 중의 6(1.6g, 3.4m㏖, 1.0당량)의 교반된 용액에 MeMgBr(5㎖, 17m㏖, 5.0당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 빙수에 의해 급랭시키고, 에틸 아세테이트에 의해 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 위로 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 얻고, 이것을 실리카 겔(PE:EA = 10:1)에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 7(0.6g, 1.2m㏖, 37%)을 얻었다.
화합물 8의 제법(반응식 8): 에틸 아세테이트(30㎖) 중의 7(3.0g, 6.2m㏖, 1당량)의 교반된 용액에 0℃에서의 아세테이트(10㎖) 중의 포화 HCl을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 감압 하에 농축시켜 황색의 오일로서 화합물 8 4-(4-((tert-뷰틸다이메틸실릴)옥시)-3-(트라이플루오로메톡시)페닐)-2-메틸뷰탄-2-아민(2.6g, 100%)을 얻었다.
실시예 17E는 반응식 11에 도시된 바와 같은 젬-다이메틸 아민 중간체 4-(3-아미노-3-메틸뷰틸)-2-(트라이플루오로메톡시)페닐 다이메틸카바메이트 하이드로클로라이드의 일반적인 제법을 예시한다.
Figure 112016084530517-pct00105
반응식 11: 젬-다이메틸아민 4-(3-아미노-3-메틸뷰틸)-2-(트라이플루오로메톡시)페닐 다이메틸카바메이트 하이드로클로라이드의 제법.
화합물 8c의 제법(반응식 11): DCM(100㎖) 중의 7c(5.0g, 13.6m㏖, 1.0당량) 및 다이메틸카바밀 클로라이드(3.0g, 27.8m㏖, 2.2당량)의 용액에 DMAP(0.25g, 5몰%), TEA(2.9g, 22.6m㏖, 2.0당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하고, 진공에 의해 농축시킨 후, 미정제 생성물을 칼럼 크로마토그래피(20%-30% EtOAc/헥산)로 처리하여 생성물 8c(4.8g, 48%)를 얻었다.
화합물 8d; 4-(3-아미노-3- 메틸뷰틸 )-2-( 트라이플루오로메톡시 )페닐 다이메틸 카바메이트 하이드로클로라이드의 제법(반응식 11): 0℃에서의 EA(30㎖) 중의 8c(4.8g, 11.0m㏖, 1당량)의 교반된 용액에 EA(HCl)(30㎖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 감압 하에 농축시켜 황색의 오일로서 8d(4.1g, 100%)를 얻었다.
실시예 18: 키랄 아민 중간체의 일반적인 제법.
실시예 18A는 반응식 2에 도시된 바와 같은 키랄 아민 중간체 (R)-4-(3-아미노뷰틸)-2-아이소프로폭시페놀의 일반적인 제법을 예시한다.
Figure 112016084530517-pct00106
반응식 2: 키랄 아민 중간체 (R)-4-(3-아미노뷰틸)-2-아이소프로폭시페놀의 일반적인 제법.
화합물 2; (R)-N-((R)-4-(4-하이드록시-3-아이소프로폭시페닐)뷰탄-2-일)-2-메틸프로판-2-설핀아마이드의 제법(반응식 2): THF(200㎖) 중의 1; (R,E)-N-(4-(4-하이드록시-3-아이소프로폭시페닐)뷰탄-2-일리덴)-2-메틸프로판-2-설핀아마이드(20g, 61.4m㏖, 1당량)의 교반된 용액에 -78℃에서의 DABAL-H(180㎖, 180m㏖, 3당량)를 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 4시간 동안 교반하고, 이후 빙수(20㎖)에 의해 급랭시키고, 여과시키고 여과액을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 얻고, 이것을 실리카 겔(PE:EA = 5:1)에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 2(17.1g, 52.2m㏖, 85%)를 얻었다.
화합물 3; (R)-4-(3-아미노뷰틸)-2-아이소프로폭시페놀의 제법(반응식 2): EA(50㎖) 중의 2(17.1g, 52.2m㏖, 1당량)의 교반된 용액에 0℃에서의 EA(HCl)(50㎖, 100m㏖, 2당량, 2N)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고 감압 하에 농축시켜 황색의 오일로서 화합물 3(11.6g, 100%)을 얻었다.
실시예 18B는 반응식 4에 도시된 바와 같은 3,4-벤즈알데하이드 출발 물질로부터의 키랄 아민 중간체 (R)-4-(3,4-다이아이소프로폭시페닐)뷰탄-2-아민의 제법을 예시한다.
Figure 112016084530517-pct00107
반응식 4: 키랄 아민(R)-4-(3,4-다이아이소프로폭시페닐)뷰탄-2-아민의 일반적인 제법.
화합물 1의 제법(반응식 4): DMF(300㎖) 중의 3,4-디하이드록시-벤즈알데하이드 1a(30.0g, 65.7m㏖, 1당량) 및 2-브로모 프로판(18.4g, 131.4m㏖, 2당량) 및 NaH(5.4g, 오일 중의 60%, 130m㏖)의 혼합물을 70℃에서 12시간 동안 교반하였다. 진공에 의해 농축시킨 후, 혼합물을 2N HCl에 의해 희석하고, 에틸 아세테이트(3x100㎖)에 의해 추출하였다. 합한 유기 층을 염수에 의해 세척하고, Na2SO4 위로 건조시키고 진공 하에 농축시켜 오렌지색 오일을 얻었다. 미정제 생성물을 칼럼 크로마토그래피(20%-30% EtOAc/헥산)로 처리하여 생성물 1; 3,4-다이아이소프로폭시벤즈알데하이드(10.1g, 30%)를 제공하였다.
화합물 2의 제법(반응식 4): 화합물 1(20g, 90m㏖)을 아세톤(80㎖) 중에 용해시켰다. 용기에 이후 에탄올(8㎖), 10% NaOH(80㎖) 및 물(200㎖)을 첨가하였다. 생성된 용액을 8시간 동안 교반하였다. EA(3x100㎖)에 의해 추출하였다. 합한 유기 층을 염수의 의해 세척하고, Na2SO4 위로 건조시키고 진공 하에 농축시켜 오렌지색 오일을 얻었다. 미정제 생성물을 칼럼 크로마토그래피로 처리하여 화합물 2; (E)-4-(3,4-다이아이소프로폭시페닐)뷰트-3-엔-2-온(12g, 98%)을 얻었다.
화합물 3의 제법(반응식 4): MeOH(300㎖) 중의 화합물 2(30.0g, 114m㏖, 1당량)의 교반된 용액에 10% Pd/C(3g)를 첨거하였다. 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하고, 셀라이트의 패드를 통해 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 얻고, 이것을 실리카 겔(PE:EA = 5:1)에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 3; 4-(3,4-다이아이소프로폭시페닐)뷰탄-2-온(11.4g, 38%)을 얻었다.
화합물 4의 제법(반응식 4): THF(100㎖) 중의 화합물 3(11.4g, 43.1m㏖, 1.0당량)의 교반된 용액에 (R)-(+)-t-뷰틸설핀아마이드(5.7g, 47.4m㏖, 1.1당량) 및 Ti(OEt)4(19.7g, 86.2m㏖, 2.0당량)를 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 빙수에 의해 급랭시키고, 여과시키고, 에틸 아세테이트에 의해 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 위로 건조시키고, 농축시켜 미정제 생성물 4(15g, 95%)을 얻고, 이것을 다음 단계에서 직접 사용하였다.
화합물 5의 제법(반응식 4): -78℃에서의 THF(50㎖) 중의 4(6.3g, 17.1m㏖, 1당량)의 교반된 용액에 DABAL-H(34㎖, 34m㏖, 2.0당량)를 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 4시간 동안 교반하고, 빙수(20㎖)에 의해 급랭시키고, 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 얻고, 이것을 실리카 겔(PE:EA = 5:1)에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 5; (R)-N-((R)-4-(3,4-다이아이소프로폭시페닐)뷰탄-2-일)-2-메틸프로판-2-설핀아마이드(2.5g, 40%)을 얻었다.
화합물 6의 제법(반응식 4): EA(30㎖) 중의 5(2.5g, 6.8m㏖, 1.0당량)의 교반된 용액에 0℃에서의 에틸 아세테이트(10㎖) 중의 포화 HCl을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 감압 하에 농축시켜 황색의 오일로서 화합물 6; (R)-4-(3,4-다이아이소프로폭시페닐)뷰탄-2-아민(2.1g, 100%)을 얻었다.
실시예 18C는 반응식 5에 도시된 바와 같은 키랄 아민 중간체 (R)-2-(4-(3-아미노뷰틸)-2-메톡시페녹시)에탄-1-올의 제법을 예시한다.
Figure 112016084530517-pct00108
반응식 5: 키랄 아민 중간체 (R)-2-(4-(3-아미노뷰틸)-2-메톡시페녹시)에탄-1-올의 제법.
화합물 2; (R)-N-((R)-4-(4-(2- 하이드록시에톡시 )-3- 메톡시페닐 ) 뷰탄 -2-일)-2-메틸프로판-2-설핀아마이드의 제법(반응식 5): DMF(50㎖) 중의 화합물 1; (R)-N-((R)-4-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)뷰탄-2-일)-2-메틸프로판-2-설핀아마이드(4.3g, 14.4m㏖, 1.0당량)의 교반된 용액에 K2CO3(4.0g, 28.8m㏖, 2.0당량) 및 2-브로모에탄올(1.5g, 13.6m㏖, 1.2당량)을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 8시간 동안 교반하고, 빙수(100㎖)에 의해 급랭시키고, EA(3x50㎖)에 의해 추출하였다. 합한 유기 층을 염수에 의해 세척하고, Na2SO4 위로 건조시키고 진공 하에 농축시켜 오렌지색 오일을 얻었다. 미정제 생성물을 실리카 겔(PE:EA = 5:1)에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 2(3.1g, 63%)를 얻었다.
화합물 3; (R)-2-(4-(3- 아미노뷰틸 )-2- 메톡시페녹시 )에탄-1-올의 제법(반응식 5): EA(30㎖) 중의 2(3.1g, 9.0m㏖, 1.0당량)의 교반된 용액에 0℃에서의 HCl-EA(10㎖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고 감압 하에 농축시켜 황색의 오일로서 3(2.1g, 100%)을 얻었다.
실시예 18D는 반응식 6에 도시된 바와 같은 키랄 아민 중간체 (S)-4-(3,4-다이클로로페닐)-1-메톡시뷰탄-2-아민의 제법을 예시한다.
Figure 112016084530517-pct00109
반응식 6: 키랄 아민 중간체, (S)-4-(3,4-다이클로로페닐)-1-메톡시뷰탄-2-아민의 제법.
화합물 2; 3-(tert-뷰틸) 4-메틸(R)-2,2-다이메틸옥사졸리딘-3,4-다이카복실레이트의 제법(반응식 6): 실온에서의 DCM(150㎖) 중의 화합물 1; 메틸 N-(tert-뷰톡시카보닐)-D-세린(13g, 59.2m㏖)의 용액에 톨루엔-4-설폰산 1수화물(2.0g, 10.3m㏖) 및 2,2-다이메톡시프로판(18.5g, 177.6m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 48시간 동안 교반하고, 농축시켜 잔류물을 얻고, 이것을 섬광 칼럼 크로마토그래피(PE:EA=4:1)에 의해 정제하여 황색의 오일로서 화합물 2(13g, 84%)를 얻었다.
화합물 3의 제법(반응식 6): N2 하의 0℃에서의 THF(200㎖) 중의 LiAlH4(2.85g, 75m㏖)의 혼합물을 20분 동안 교반하였다. 0℃에서의 혼합물에 화합물 2(13.0g, 50.1m㏖)를 적하하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하고, Na2SO4.10H2O에 의해 급랭시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시켜 잔류물을 얻고, 이것을 FCC(PE:EA=4:1)에 의해 정제하여 황색의 오일로서 화합물 3(10.3g, 89%)을 얻었다.
화합물 4의 제법(반응식 6): -78℃에서의 메틸렌 클로라이드(200㎖) 중의 옥살릴 클로라이드(7.6g, 60.1m㏖)의 예비 냉각된 용액에 메틸렌 클로라이드(20㎖) 중의 DMSO(9.3g, 120.21m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하였다. -78℃에서의 혼합물에 메틸렌 클로라이드(30㎖) 중의 화합물 3(10.3g, 44.5m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하고, 이때 트라이에틸아민(18.0g, 178.13)을 첨가하였다. 생성된 용액을 0℃로 가온시키고, 염수(30㎖)에 의해 급랭시키고, 다이에틸 에터(2x300㎖)에 의해 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 위로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 오일로서 화합물 4(9.0g, 85%)를 얻었다.
화합물 6의 제법(반응식 6): N2 하의 -78℃에서의 THF(15㎖) 중의 화합물 5(285㎎, 0.56m㏖)의 용액에 n-BuLi(0.3㎖, 2.5M)를 첨가하였다. 10분 후, 침전물이 사라질 때까지 반응 혼합물을 -40℃로 가온시켰다. 반응 혼합물을 -78℃로 냉각시키고, THF(5㎖) 중의 화합물 4(130㎎, 0.56m㏖)를 -78℃에서 적하하였다. 생성된 용액을 실온으로 가온시키고, 밤새 교반한 후 메탄올(2㎖)에 의해 급랭시켰다. 30분 동안 교반한 후, 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻고, 이것을 섬광 칼럼 크로마토그래피(PE:EA=4:1)에 의해 정제하여 황색의 오일로서 화합물 6(200㎎, 90%)을 얻었다.
화합물 7의 제법(반응식 6): 메탄올(50㎖) 중의 화합물 6(2.6g, 6.98m㏖)의 용액에 H2 벌룬 하에 실온에서 Pd/C(2.0g)를 첨가하였다. 혼합물을 12시간 동안 교반하고, 여과시키고, 농축시켜 잔류물을 얻고, 이것을 FCC(PE)에 의해 정제하여 황색의 오일로서 화합물 7(2.0g, 77%)을 얻었다.
화합물 8의 제법(반응식 6): THF(20㎖) 중의 화합물 7(500㎎, 1.34m㏖)의 용액에 실온에서 0.5M HCl(1㎖)을 첨가하였다. 반응물을 12시간 동안 교반하고, Mg2SO4 위로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시켜 잔류물을 얻고, 이것을 FCC(PE)에 의해 정제하여 황색의 오일로서 7(400㎎, 90%)을 얻었다.
화합물 9의 제법(반응식 6): 아세토나이트릴(10㎖) 중의 화합물 8(140㎎, 0.42m㏖)의 용액에 Ag2O(200㎎, 0.87m㏖)를 첨가한 후, 메틸 아이오다이드(0.15㎖, 2.4m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 24시간 동안 교반하고, 셀라이트의 패드를 통해 여과시켰다. 여과액을 농축시켜 잔류물을 얻고, 이것을 Prep-HPLC에 의해 정제하여 황색의 오일로서 화합물 9(70㎎, 48%)를 얻었다.
화합물 10의 제법(반응식 6): DCM(2㎖) 중의 화합물 9(70㎎, 0.20m㏖)의 용액에 TFA(1㎖)를 첨가하였다. 혼합물을 24시간 동안 교반하고, 농축시켜 오일로서 화합물 10; (S)-4-(3,4-다이클로로페닐)-1-메톡시뷰탄-2-아민(50㎎, 100%)을 얻었다.
실시예 18E는 반응식 9에 도시된 바와 같은 키랄 아민 중간체 (R)-4-(3-아미노뷰틸)-2-(트라이플루오로메톡시)페놀의 제법을 예시한다.
Figure 112016084530517-pct00110
반응식 9: 키랄 아민(R)-4-(3-아미노뷰틸)-2-(트라이플루오로메톡시)페놀의 제법.
화합물 6의 제법(반응식 9): 화합물 5(11g, 31.3m㏖)를 THF(100㎖) 중에 용해시키고 -78℃로 냉각시켰다. 용기에 이후 DIBAL-H(60㎖, THF 중의 1.5M, 90m㏖)를 첨가하고, 생성된 용액을 3시간 동안 교반하였다. TLC에 의한 반응 혼합물의 분석은 설핀아마이드 화합물 5를 생성시키는 출발 이민의 완전한 소모를 나타낸다. 용액을 이후 물에 의해 급랭시키고 EA(3x500㎖)에 의해 추출하였다. 합한 유기 층을 염수에 의해 세척하고, Na2SO4 위로 건조시키고 진공 하에 농축시켜 오렌지색 오일을 얻었다. 미정제 생성물을 칼럼 크로마토그래피(50%-75% EtOAc/헥산)로 처리하여 생성물 6(6g, 55%)을 얻었다.
화합물 7; (R)-4-(3-아미노뷰틸)-2-(트라이플루오로메톡시)페놀의 제법(반응식 9): 화합물 6(7g, 15m㏖)을 EA(20㎖) 중에 용해시켰다. 용기에 이후 EA-HCl(20㎖, 1.5M, 30m㏖)를 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용액을 H2O(3회 동안 50㎖)에 의해 추출하였다. 합한 수성 층을 포화 Na2CO3에 의해 pH를 10으로 조정하고, EA(3회 동안 50㎖)에 의해 추출하고, Na2SO4 위로 건조시키고 진공 하에 농축시켜 생성물 7(5g, 95%)을 얻었다.
실시예 18F는 반응식 10에 도시된 바와 같은 키랄 아민 중간체 (R)-4-(3-아미노뷰틸)-2-(트라이플루오로메톡시)페닐 다이메틸카바메이트의 제법을 예시한다.
Figure 112016084530517-pct00111
반응식 10: 키랄 아민(R)-4-(3-아미노뷰틸)-2-(트라이플루오로메톡시)페닐 다이메틸카바메이트의 제법.
화합물 6b의 제법(반응식 10): DCM(50㎖) 중의 6(4g, 11.3m㏖, 1.0당량)의 교반된 용액에 DMAP(0.2g, 5몰%), TEA(2.3g, 22.6m㏖, 2.0당량) 및 다이메틸카바밀 클로라이드 5(1.5g, 13.6m㏖, 1.2당량)를 첨가하였다. 혼합물을 40℃에서 4시간 동안 교반하고, 빙수(20㎖)에 의해 급랭시켰다. 혼합물을 DCM(3x50㎖)에 의해 추출하였다. 합한 유기 층을 염수에 의해 세척하고, Na2SO4 위로 건조시키고 진공 하에 농축시켜 오렌지색 오일을 얻었다. 미정제 생성물을 실리카 겔(PE:EA = 5:1)에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 6b(2.8g, 58%)를 얻었다.
화합물 7b의 제법(반응식 10): 0℃에서의 EA(30㎖) 중의 6b(3g, 7.1m㏖, 1당량)의 교반된 용액에 EA(HCl)(10㎖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 감압 하에 농축시켜 황색의 오일로서 7b(1.8g, 100%)를 얻었다.
실시예 18G는 반응식 12에 도시된 바와 같은 키랄 아민 중간체 (R)-2-(4-(3-아미노뷰틸)-2-(트라이플루오로메톡시)페녹시)에탄-1-올의 제법을 예시한다.
Figure 112016084530517-pct00112
반응식 12: 키랄 아민(R)-2-(4-(3-아미노뷰틸)-2-(트라이플루오로메톡시)페녹시)에탄-1-올의 제법.
화합물 2의 제법(반응식 12): DMF(10㎖) 중의 1(0.7g, 2m㏖, 1.0당량)의 교반된 용액에 K2CO3(0.55g, 4m㏖, 2.0당량) 및 2-브로모에탄올(0.3g, 2.4m㏖, 1.2당량)을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 8시간 동안 교반하고, 이후 빙수(30㎖)에 의해 급랭시키고, EA(3회 동안 20㎖)에 의해 추출하였다. 합한 유기 층을 염수에 의해 세척하고, Na2SO4 위로 건조시키고 진공 하에 농축시켜 오렌지색 오일을 얻었다. 미정제 생성물을 실리카 겔(PE:EA = 5:1)에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 2(0.66g, 83%)를 얻었다.
화합물 3의 제법(반응식 12): EA(30㎖) 중의 2(0.9g, 2.3m㏖, 1당량)의 교반된 용액에 0℃에서의 EA(HCl)(10㎖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 감압 하에 농축시켜 황색의 오일로서 3(0.75g, 100%)을 얻었다.
실시예 19: 키랄 아민 중간체 또는 젬-다이메틸 아민 중간체로부터의 아이소인돌린의 일반적인 제법.
실시예 19A는 반응식 13에 도시된 바와 같은 젬-다이메틸 아민 중간체로부터의 아이소인돌린 화합물 56, 2-(4-(4-하이드록시-3-(트라이플루오로메톡시)페닐)-2-메틸뷰탄-2-일)아이소인돌린-4-카복실산의 제법을 예시한다.
Figure 112016084530517-pct00113
반응식 13: 아이소인돌린 2-(4-(4-하이드록시-3-(트라이플루오로메톡시)페닐)-2-메틸뷰탄-2-일)아이소인돌린-4-카복실산(실시예 56)의 제법.
화합물 2의 제법(반응식 13): MeOH(30㎖) 중의 1; 2,3-다이메틸벤조산(2.0g, 13.3m㏖, 1.0당량)의 용액에 티오닐 클로라이드(1.5㎖)를 첨가하고 환류에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, EA(30㎖)에 의해 추출하였다. 유기 층을 물(2x30㎖)에 의해 세척하고, Na2SO4 위로 건조시키고, 농축시켜 추가의 정제 없이 원하는 생성물 2(2.1g, 98%)를 얻었다.
화합물 3의 제법(반응식 13): CCl4(30㎖) 중의 2(2.1g, 13.3m㏖, 1.0당량)의 용액에 NBS(4.7g, 26.6m㏖, 2.0당량) 및 BPO(0.2g)를 첨가하였다. 혼합물을 4시간 동안 환류로 가열하였다. 반응물을 DCM(30㎖)에 의해 희석하고, 물(2x30㎖)에 의해 세척하고, Na2SO4 위로 건조시키고, 농축시켜 미정제 생성물을 얻고, 이것을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 3; 메틸 2,3-비스(브로모메틸)벤조에이트(4.0g, 94%)를 얻었다.
화합물 5의 제법(반응식 13): THF(10㎖) 중의 3(0.3g, 0.93m㏖, 1.0당량)의 용액에 Na2CO3(0.2g, 1.9m㏖, 2.0당량)을 첨가하였다. 혼합물을 환류에서 4시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 EA에 의해 희석하고, 염수에 의해 세척하고, 농축시켜 추가의 정제 없이 원하는 생성물 5(300㎎, 82%)를 얻었다.
화합물 6의 제법(반응식 13): THF(5㎖) 중의 5(0.3g, 0.56m㏖, 1.0당량)의 용액에 10N NaOH(5㎖)를 첨가하였다. 혼합물을 55℃에서 4시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 농축시키고 6N HCl에 의해 pH 5로 조정하였다. 혼합물을 EA에 의해 추출하였다. 유기 층을 황산나트륨 위로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻고, 이것을 pre-HPLC에 의해 정제하여 백색의 고체(86㎎, 37%)로서 원하는 생성물, 2-(4-(4-하이드록시-3-(트라이플루오로메톡시)페닐)-2-메틸뷰탄-2-일)아이소인돌린-4-카복실산(실시예 화합물 56)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.04 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.54 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.14 (s, 1H), 7.10 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.10-4.70 (m, 4H), 2.73-2.69 (m, 2H), 2.10-2.06 (m, 2H), 1.56 (s, 6H); m/z (ESI+)(M+H)+ = 410.15. LC-MS: 410.1 (M+1)+ .
실시예 19B는 반응식 14에 도시된 바와 같은 젬-다이메틸 아민 중간체부터의 설폰 치환된 아이소인돌린 화합물, 2-메톡시-4-(3-메틸-3-(4-(메틸설포닐)아이소인돌린-2-일)뷰틸)페놀 하이드로클로라이드의 제법을 예시한다.
Figure 112016084530517-pct00114
반응식 14: 설폰 치환된 아이소인돌린 2-메톡시-4-(3-메틸-3-(4-(메틸설포닐)아이소인돌린-2-일)뷰틸)페놀 하이드로클로라이드(실시예 화합물 64)의 제법에 대한 일반적인 절차.
화합물 2의 제법(반응식 14): THF(150㎖) 중의 1(12.0g, 64.8m㏖, 1당량)의 교반된 용액에 -75℃에서의 n-BuLi(30㎖, 2.5M)를 첨가하였다. 혼합물을 -75℃에서 1시간 동안 교반하고, 이후 다이메틸 다이설파이드(7.2g, 76.4m㏖)를 적하하였다. 혼합물을 -75℃에서 4시간 동안 교반하고, 포화 NH4Cl 용액에 의해 급랭시키고, 에틸 아세테이트에 의해 추출하고, Na2SO4 위로 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 미정제 생성물 2(12g, 100%)를 얻었다. 상하이 루이딩 케미컬 코포레이티드로부터 1-브로모-2,3-다이메틸벤젠을 구입하였다.
화합물 3의 제법(반응식 14): DCM(200㎖) 중의 2(12.0g, 78.8m㏖, 1당량)의 교반된 용액에 0℃에서 m-CPBA(30g, 173.8m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 10℃에서 2시간 동안 교반하고 10% Na2SO3에 의해 급랭시켰다. 수용액을 10% NaOH에 의해 pH 10으로 조정하고, DCM에 의해 추출하고, Na2SO4 위로 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 미정제 생성물을 얻고, 이것을 칼럼 크로마토그래피(PE:EA = 5:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 3(9.0g, 62%)을 얻었다. 상하이 데모 케미컬 코포레이티드(Shanghai DeMo Chemical Co. Ltd)로부터 3-클로로퍼벤조산을 구입하였다.
화합물 4의 제법(반응식 14): CCl4(15㎖) 중의 3(1.0g, 5.42m㏖)의 교반된 용액에 NBS(2.22g, 12.4m㏖, 1.2당량) 및 AIBN(400㎎, 2.43m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 6시간 동안 교반하고, 냉각시키고, 진공 하에 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(PE:EA=3:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 4(1.4g, 75%)를 얻었다. 상하이 징춘 케미컬 코포레이티드로부터 N-브로모숙신이미드를 구입하였다. 상하이 구오야오 케미컬 코포레이티드(Shanghai GuoYao Chemical Co. Ltd.)로부터 아조비스아이소뷰티로나이트릴을 구입하였다.
화합물의 제법 6(반응식 14): EA(100㎖) 중의 6(4.0g, 1.2 mol)의 용액에 HCl/EA(1.2g, 2M, 200 mol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축시켜 미정제 생성물 7(2.8g, 99%)을 얻고, 이것을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
화합물 7의 제법(반응식 14): THF(10㎖) 중의 6(280㎎, 1.20m㏖)의 용액에 4(410㎎, 1.2m㏖) 및 K2CO3(330㎎, 2.4m㏖)을 첨가하였다. 생성된 용액을 70℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과시키고, EA에 의해 세척하고, 여과액을 농축시켜 미정제 생성물 7(500㎎, 100%)을 얻고, 이것을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
화합물 8의 제법(반응식 14): THF(10㎖) 중의 7(500㎎, 미정제)의 용액에 TBAF(1.2㎖, 1M)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻고, 이것을 Prep-HPLC에 의해 정제하여 8(120㎎, 2개의 단계에 걸쳐 20%)을 얻었다.
화합물 9; 2-메톡시-4-(3-메틸-3-(4-(메틸설포닐)아이소인돌린-2-일)뷰틸)페놀 하이드로클로라이드(실시예 화합물 64)의 제법(반응식 14): EA(10㎖) 중의 8(120㎎, 0.30 mol)의 용액에 HCl/EA(1.2g, 2M, 2m㏖)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축시켜 생성물 9(90㎎, 75%)를 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.97 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.78-7.68 (m, 2H), 6.88 (s, 1H), 6.72 (s, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.85 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.20 (s, 3H), 2.73-2.70 (m, 2H), 2.13-2.10 (m, 2H), 1.58 (s, 6H); m/z (ESI+)(M+H)+ = 390.15.
실시예 19C는 반응식 15에 도시된 바와 같은 젬-다이메틸 아민 중간체부터의 설폰 치환된 아이소인돌린 화합물, 2-메톡시-4-(3-메틸-3-(5-(메틸설포닐)아이소인돌린-2-일)뷰틸)페놀 하이드로클로라이드의 대표적인 제법을 예시한다.
Figure 112016084530517-pct00115
반응식 15: 설폰 치환된 인돌린 2-메톡시-4-(3-메틸-3-(5-(메틸설포닐)아이소인돌린-2-일)뷰틸)페놀 하이드로클로라이드의 제법에 대한 일반적인 절차.
화합물 2a의 제법(반응식 15): CHCl3(500㎖) 중의 1(50g, 0.47mol, 1.00당량)의 용액에 얼음 냉각 욕 내에서 HSO3Cl(75.5㎖, 0.95mol, 2.00당량)을 적하하였다. 첨가를 완료한 후, 혼합물을 실온으로 가온시키고, 1시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 얼음물에 붓고 이후 3회 동안 DCM(500㎖)에 의해 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수에 의해 세척하고, Na2SO4 위로 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 백색의 고체 생성물 2a(76.5g, 79.3%)를 얻었다. 상하이 구오야오 케미컬 코포레이티드로부터 1,2-다이메틸벤젠을 구입하였다. 상하이 아오유 케미컬 코포레이티드(Shanghai AoYue Chemical Co. Ltd.)로부터 클로로설폰산을 구입하였다.
화합물 3a의 제법(반응식 15): 포화 Na2SO3(118g, 0.94mol, 2.50당량) 중의 2(77g, 0.38mol, 1.00당량)의 현탁액에 32% NaOH(30g, 0.75mol, 2.00당량) 용액을 첨가하였다. 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 반응물을 얼음 냉각 욕 내에서 25% HCl 용액에 의해 pH = 1로 산성화시켰다. 침전물은 미정제 생성물 3a(59.75g, 93.8%)이고, 이것을 추가의 정제 없이 사용하였다.
화합물 4a의 제법(반응식 15): 밀봉 유기 관 내에서 H2O(50㎖) 및 MeOH(67.5mL) 용액의 혼합물 중의 3(20g, 0.12mol, 1.00당량)의 현탁액에 요오드화메틸(20g, 0.14mol, 1.15당량) 및 32% NaOH(47g, 1.2mol, 10.00당량) 용액을 첨가하였다. 반응물을 90℃로 가열하고 밤새 교반하였다. 반응을 완료한 후, 메탄올을 감압 하에 제거하고, EA에 의해 추출하고, 농축시켜 생성물 4a(8.33g, 38.5%)를 얻었다. 상하이 아오유 케미컬 코포레이티드로부터 요오드화메틸을 구입하였다.
화합물 5a의 제법(반응식 15): CCl4 중의 화합물 4(9.5g, 51.6m㏖, 1.00당량)의 용액에 NBS(18.3g, 103m㏖, 2.00당량) 및 BPO(1.0g, 5.2m㏖, 0.10당량)를 첨가하였다. 반응물을 환류로 6시간 동안 가열하였다. 반응을 완료한 후, 용매를 감압 하에 제거하였다. 얻은 잔류물을 PE 및 H2O에 의해 희석하였다. 유기 층을 Na2SO4 위로 건조시키고 농축시켜 미정제 생성물을 얻고, 이것을 FCC(PE:EA = 10:1 약 3:1)에 의해 정제하여 설폰 중간체 5a; 1,2-비스(브로모메틸)-4-(메틸설포닐)벤젠을 얻었다.
화합물 9a, 2-메톡시-4-(3-메틸-3-(5-(메틸설포닐)아이소인돌린-2-일)뷰틸)페놀 하이드로클로라이드의 제법은 실시예 19B에 기재된 기법에 의해 중간체 5a로부터 수행된다.
실시예 20: 4-(3-(4-플루오로아이소인돌린-2-일)-3-메틸뷰틸)-2-아이소프로폭시페놀 하이드로클로라이드, 실시예 화합물 28의 제법
실시예 20은 반응식 16에 도시된 바와 같은 4-(3-(4-플루오로아이소인돌린-2-일)-3-메틸뷰틸)-2-아이소프로폭시페놀 하이드로클로라이드, 실시예 화합물 28의 대표적인 제법을 예시한다.
Figure 112016084530517-pct00116
반응식 16: 4-(3-(4-플루오로아이소인돌린-2-일)-3-메틸뷰틸)-2-아이소프로폭시페놀 하이드로클로라이드, 실시예 화합물 28의 제조를 위한 절차.
화합물 2의 제법(반응식 16): 사염화탄소(1.5ℓ) 중의 1-플루오로-2,3-다이메틸벤젠(100g, 0.81m㏖)의 현탁액에 N-브로모숙신이미드(288g, 1.62m㏖), 벤조일 퍼옥사이드(10g)를 첨가하였다. 혼합물을 70℃로 가열하였다. 15시간 동안 교반한 후, 혼합물을 실온으로 냉각시키고 물(1ℓ)에 붓고 DCM(3x1ℓ)에 의해 추출하였다. 합한 유기 층을 석유 에터에 의해 섬광 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 백색의 고체로서 생성물 2(161g, 70%)를 얻었다.
TLC: PE/EA = 10/1; Rf(화합물 1) = 1; Rf(화합물 2) = 0.8
화합물 3의 제법(반응식 16): THF(900㎖) 중의 1,1-다이메틸프로파길아민(20g, 240m㏖, 1.0당량)의 혼합물에 화합물 2(70.7g, 253m㏖, 1.05당량) 및 트라이에틸아민(73g, 720m㏖, 3당량)을 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과시키고, 패드를 에틸 아세테이트에 의해 세척하였다. 여과액을 진공 하에 농축시켜 오렌지색 오일을 얻었다. 잔류물을 섬광 칼럼 크로마토그래피(PE/EA, 10/1)에 의해 정제하여 황색의 고체로서 화합물 3(30g, 61%)을 얻었다. TLC: PE/EA = 10/1; Rf(화합물 2) = 0.8; Rf(화합물 3) = 0.5.
화합물 5의 제법(반응식 16): 메탄올(700㎖) 중의 2-아이소프로폭시-페놀(100g, 0.66mol, 1.0당량)의 용액에 수산화나트륨(39.4g, 1.0mol, 1.5당량) 및 요오드화칼륨(114.5g, 0.69mol, 1.05당량)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물에 나트륨 하이포클로라이트(978g, 1.31mol, 2.0당량)를 적하하였다. LCMS가 출발 물질이 사라졌다는 것을 나타낼 때, pH 1까지 농축 HCl을 첨가하였다. 황산나트륨(56g, 445m㏖, 1.0당량)을 첨가하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(3x500㎖)에 의해 추출하고, 합한 유기 층을 염수에 의해 세척하고, 황산나트륨 위로 건조시키고 여과시키고 진공 하에 농축시켜 백색의 고체로서 화합물 5(175g, 96%)를 얻었다. TLC: PE/EA =10/1; Rf(화합물 4) = 0.4; Rf(화합물 5) = 0.4
화합물 6의 제법(반응식 16): DMF(2ℓ) 중의 화합물 5(350g, 1.26mol, 1.0당량)의 용액에 질소 하에 0℃에서의 수소화나트륨(65.4g, 1.64mol, 1.3당량)을 첨가하였다. 0.5시간 동안 교반한 후, 클로로메틸 메틸 에터(131.7g, 1.64m㏖, 1.3당량)를 천천히 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물(4ℓ)에 의해 급랭시키고 에틸 아세테이트(3x1ℓ)에 의해 추출하였다. 합한 유기 층을 염수에 의해 세척하고, 황산나트륨 위로 건조시키고 여과시키고 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 잔류물을 섬광 칼럼 크로마토그래피(PE/EA, 10/1)에 의해 정제하여 백색의 고체로서 화합물 6(300g, 74%)을 얻었다. TLC: PE/EA =10/1; Rf(화합물 5) = 0.4; Rf(화합물 6) = 0.6
화합물 7의 제법(반응식 16): 아세토나이트릴(600㎖) 중의 화합물 6(56.2g, 174m㏖, 1.0당량)의 용액에 화합물 3(39g, 192m㏖, 1.1당량) 및 X-Phos(4.16g, 9.0m㏖, 0.05당량), 이어서 탄산세슘(56.9g, 174m㏖, 1.0당량) 및 팔라듐 다이아세테이트(1.2g, 5.23m㏖, 0.03당량)를 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응물을 빙수(1ℓ)에 의해 급랭시킨 후, 에틸 아세테이트(3x500㎖)에 의해 추출하였다. 합한 유기 층을 염수에 의해 세척하고, 황산나트륨 위로 건조시키고 여과시키고 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 잔류물을 섬광 칼럼 크로마토그래피(PE/EA, 10/1)에 의해 정제하여 갈색의 고체로서 화합물 6(48.5g, 70%)을 얻었다. TLC: PE/EA =10/1; Rf(화합물 6) = 0.6; Rf(화합물 7) = 0.3.
화합물 28의 제법(반응식 16): 메탄올(1.4ℓ) 중의 화합물 7(72g, 181m㏖, 1.0당량)의 용액에 농축 HCl(36㎖, 360m㏖, 2.0당량) 및 활성탄 상의 10% 팔라듐(14g)을 첨가하였다. 반응물을 수소 벌룬 하에 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과시키고, 패드를 메탄올에 의해 세척하였다. 여과액을 진공하에 농축시켜 옅은 오렌지색 오일을 얻었다. 잔류물을 에터에 의해 희석하고, 실온에서 교반하고 고체가 형성되었다. 고체를 여과시키고 에탄올에 의해 세척하여 백색의 고체로서 실시예 화합물 28(60g, 93%)을 얻었다. TLC: PE/EA =3/1; Rf(화합물 7) = 0.6; Rf(생성물 실시예 화합물 28) = 0.3. LC-MS: 358.2 (M+1)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.17 (s, 1H), δ 8.59 (s, 1H), δ 7.43 (m, 1H), δ 7.21 (m, 2H), δ 6.80 (s, 1H), 6.71 - 6.63 (m, 2H), 4.88 - 4.79 (m, 2H), δ 4.66 (m, 2H), δ 4.47 (m, 2H), δ 2.53 (m, 2H), δ 1.97 (m, 2H), δ 1.43 (s, 6H), δ 1.22 (s, 6H).
실시예 21: 2 -( Tert - 뷰톡시 )-4-(3- 메틸 -3-(5-( 메틸설포닐 ) 아이소인돌린 -2-일)뷰틸)페놀, 실시예 화합물 62의 제법.
실시예 21은 반응식 17에 도시된 바와 같은 2-(Tert-뷰톡시)-4-(3-메틸-3-(5-(메틸설포닐)아이소인돌린-2-일)뷰틸)페놀, 실시예 화합물 62의 대표적인 제법을 예시한다.
Figure 112016084530517-pct00117
반응식 17: 2-(Tert-뷰톡시)-4-(3-메틸-3-(5-(메틸설포닐)아이소인돌린-2-일)뷰틸)페놀, 실시예 화합물 62의 제조를 위한 절차.
화합물 1의 제법(반응식 17): 다이클로로메탄(200㎖) 중의 카테콜(50.0g, 454m㏖, 1.0당량), 농축 황산(0.3㎖)의 혼합물을 함유하는 -30℃에서의 유리 압력 병에 아이소뷰텐(152.6g, 2.72mol, 6.0당량)을 응축시켰다. 테플론 보호된 고무 O-고리가 팁핑된 트레딩된 테플론 캡을 가지는 압력 병을 밀봉한 후, 투명한 용액이 얻어질 때까지 혼합물을 35℃에서 3시간 동안 가열하였다. 냉각(-30℃) 후, 트라이에틸아민(1.5㎖, 10.8m㏖)을 첨가하고 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 0.5M NaOH(1ℓ) 중에 현탁시키고 10분 동안 교반하였다. 어두운 녹색의 용액을 석유 에터(2x100㎖)에 의해 세척하고 세척 층을 0.5M NaOH(3x100㎖)에 의해 재추출하였다. 합한 수성 층을 2N HCl(400㎖)에 의해 pH 7-8이 되게 하고, 에틸 아세테이트(2x1ℓ)에 의해 추출하고, 황산나트륨 위로 건조시키고 농축시켜 무색의 오일로서 생성물 1(67.7g, 90%)을 얻고, 이것을 추가의 정제 없이 다음 단계 반응에 직접적으로 사용하였다. TLC: PE/EA = 50/1; Rf(카테콜) = 0.1; Rf(화합물 1) = 0.6.
화합물 2의 제법(반응식 17): 0℃에서의 메탄올(2ℓ) 중의 화합물 1(112.2g, 676m㏖, 1.2당량) 및 요오드화칼륨(112.2g, 676m㏖, 1.0당량)의 교반된 용액에 0℃ 미만에서 반응을 유지시키면서 3시간에 걸쳐 수산화나트륨(27.0g, 676m㏖, 1.0당량), 이어서 수성 아염소산나트륨(7% 수성, 718.8㎖, 710m㏖, 1.05당량)를 천천히 적하하였다. 혼합물을 0℃에서 또 다른 30분 동안 교반하고 pH 7까지 2N HCl을 0℃에서 첨가함으로써 중화시키고, DCM(2x 1ℓ)에 의해 추출하였다. 유기 층을 황산나트륨 위로 건조시키고 농축시켜 생성물 2(179.8g, 91%)를 얻었다. TLC: PE/EA = 50/1; Rf(화합물 1) = 0.6 ; Rf(화합물 2) = 0.6.
화합물 3의 제법(반응식 17): 0℃에서의 다이클로로메탄(2ℓ) 중의 화합물 2(179.8g, 616m㏖, 1.0당량) 및 트라이에틸아민(186.6g, 1.85mol, 3.0당량)의 교반된 용액에 아세틸 클로라이드(53.2g, 677m㏖, 1.1당량)를 천천히 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 또 다른 30분 동안 교반하고, 실온으로 가온시키고, 실온에서 3시간 동안 교반하고, 물(1ℓ)을 반응 혼합물에 첨가하고 유기 층을 염수에 의해 세척하고, 황산나트륨 위로 건조시키고 농축시켜 생성물 3(206g, 100%)을 얻고, 이것을 추가의 정제 없이 다음 단계에 직접적으로 사용하였다. TLC: PE/EA = 50/1; Rf(화합물 2) = 0.6; Rf(화합물 3) = 0.5.
화합물 4의 제법(반응식 17): 트라이에틸아민(4.0ℓ) 중의 화합물 3(206g, 616m㏖, 1.0당량)의 교반된 용액에 2-메틸뷰트-3-인-2-아민(102.5g, 1.23mol, 2.0당량), Pd(PPh3)2Cl2(15.1g, 18.5m㏖, 0.03당량) 및 요오드화구리(I)(5.9g, 31m㏖, 0.05당량)를 첨가하고 생성된 혼합물을 실온에서 17시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고 미정제 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 4(132.7g, 74%)를 얻었다. TLC: PE/EA = 1/1; Rf(화합물 3) = 0.9; Rf(화합물 4) = 0.3.
화합물 5의 제법(반응식 17): 에탄올(1.5ℓ) 중의 화합물 4(104.5g, 0.36 mol)의 교반된 용액에 Pd/C(10중량%, 10.5g)를 첨가하였다. 혼합물을 수소(벌룬) 하에 밤새 교반하고, 여과시켰다. 여과액을 증발 건조시켜 화합물 5(106.3g, 100%)를 얻고, 이것을 추가의 정제 없이 다음 단계에 직접적으로 사용하였다. TLC: PE/EA = 1/1; Rf(화합물 4) = 0.3 ; Rf(화합물 5) = 0.3.
화합물 6의 제법(반응식 17): 0℃에서의 클로로form(1.0ℓ) 중의 o-자일렌(115.7g, 1.09mol, 1.0당량)의 용액에 ClSO3H(254g, 2.18mol, 2.0당량)를 적하하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 실온에서 2일 동안 교반하고, 얼음에 부었다. 미정제 혼합물을 다이클로로메탄(3x1.0ℓ)에 의해 추출하였다. 유기 층을 합하고, 무수 황산나트륨 위로 건조시키고, 농축시켜 백색의 고체로서 미정제 화합물 6(161.5g, 80%)을 얻고, 이것을 추가의 정제 없이 다음 단계에 직접적으로 사용하였다. TLC: PE/EA = 5/1; Rf(화합물 6) = 0.7.
화합물 7의 제조를 위한 일반적인 절차(반응식 17): 포화 황산나트륨 용액(273g, 2.17mol, 2.5당량, 2.0ℓ의 물 중) 중의 화합물 6(161.5g, 0.87mol, 1.0당량)의 교반된 용액에 용액이 pH 9에 도달할 때까지 32% NaOH(69.4g, 1.73mol, 2.0당량)를 적하하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 얼음 냉각 욕 내에서 pH 1까지 농축 HCl에 의해 산성화시켰다. 침전물을 여과시키고, 얼음물(2x)에 의해 세척하고, 진공 하에 건조시켜 미정제 생성물 7(131g, 88%)을 얻고, 이것을 추가의 정제 없이 다음 단계에 직접적으로 사용하였다. TLC: PE/EA = 5/1; Rf(화합물 6) = 0.7; Rf(화합물 7) = 0.6.
화합물 8의 제법(반응식 17): DMF(300㎖) 중의 화합물 7(130g, 0.76mol, 1.0당량) 및 탄산칼륨(211g, 1.53mol, 2.0당량)의 교반된 용액에 요오도메탄(96㎖, 1.53mol, 2.0당량)을 첨가하였다. 반응물을 40℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시키고, 에틸 아세테이트에 의해 추출하였다. 유기 층을 물 및 염수에 의해 세척하고, 황산나트륨 위로 건조시키고 농축시키고, 섬광 칼럼 크로마토그래피(PE: EA,10: 1 약 5:1)에 의해 정제하여 화합물 8(85.2g, 61%)을 얻었다. TLC: PE/EA = 5/1; Rf(화합물 7) = 0.6; Rf(화합물 8) = 0.3.
화합물 9의 제법(반응식 17): 1,2-다이클로로에탄(1.2ℓ) 중의 화합물 8(78.2g, 424m㏖, 1.0당량)의 교반된 용액에 N-브로모숙신이미드(166g, 934m㏖, 2.2당량) 및 AIBN(6.9g, 42.4m㏖, 0.1당량)을 첨가하였다. 반응물을 환류에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물 및 다이클로로메탄에 의해 희석하였다. 유기 층을 수집하고, 황산나트륨 위로 건조시키고 농축시키고, 섬광 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 9를 얻고, 이것을 뜨거운 메탄올로부터 추가로 재결정화하여 순수한 생성물 8(75g, 52%)을 얻었다. TLC: PE/EA = 5/1; Rf(화합물 8) = 0.3; Rf(화합물 9) = 0.2.
화합물 10의 제법(반응식 17): THF(460㎖) 중의 화합물 5(46g, 157m㏖, 1.0당량) 및 화합물 9(53.5g, 157m㏖, 1.0당량)의 교반된 용액에 트라이에틸아민(47.7g, 472m㏖, 3.0당량)을 첨가하였다. 반응물을 40℃에서 밤새 교반하고, 여과시키고 여과액을 증발 건조시키고 섬광 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 10(45g, 63%)을 얻었다. TLC: PE/EA = 1/1; Rf(화합물 5) = 0.3; Rf(화합물 9) = 1.0; Rf(화합물 10) = 0.4.
화합물 62의 제법(반응식 17): 메탄올(300㎖) 중의 화합물 10(45g, 98.4m㏖)의 교반된 용액에 나트륨 메톡사이드(844㎎, 15.6m㏖, 0.16당량)를 일 부분으로 첨가하였다. 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 물(250㎖)을 1시간에 걸쳐 반응 혼합물에 적하하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 여과시켰다. 백색의 고체를 수집하고 진공 하에 밤새 건조시켜 순수한 실시예 화합물 62 염기(38g, 89%)를 얻었다. TLC: PE/EA = 1/1; Rf(화합물 10) = 0.4; Rf(화합물 62) = 0.4; ESI-MS: 432 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.80-7.78 (m, 2H). 7.40-7.38 (m, 1H), 6.87-6.79 (m, 3H), 5.58 (s, 1H), 4.11 (s, 4H), 3.05 (s, 3H), 2.61-2.57 (m, 2H), 1.76-1.72 (m, 2H), 1.48 (s, 9H), 1.18 (s, 6H).
실시예 22: (2-(4-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)-2-메틸뷰탄-2-일)아이소인돌린-4-일)(피페라진-1-일)메탄온, 실시예 화합물 76의 제법.
실시예 22는 반응식 18에 도시된 바와 같은 (2-(4-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)-2-메틸뷰탄-2-일)아이소인돌린-4-일)(피페라진-1-일)메탄온, 실시예 화합물 76의 대표적인 제법을 예시한다.
Figure 112016084530517-pct00118
반응식 18: (2-(4-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)-2-메틸뷰탄-2-일)아이소인돌린-4-일)(피페라진-1-일)메탄온, 실시예 화합물 76의 제조를 위한 절차.
화합물의 제법 2(반응식 18): 0℃에서의 메탄올 중의 2,3-다이메틸벤조산(60g, 0.399 mol)의 용액에 티오닐 클로라이드(20㎖)를 첨가하였다. 반응물을 60℃로 가열하였다. 밤새 교반한 후, 반응물을 냉각시키고 농축시켜 미정제 메틸 에스터(65g, 0.396 mol)를 얻었다. 사염화탄소(500㎖) 중의 미정제 메틸 에스터(65g, 0.396 mol)의 현탁액에 N-브로모숙신이미드(142.2g, 0.798m㏖), 벤조일 퍼옥사이드(6g, 24.8m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 70℃로 가열하였다. 15시간 동안 교반한 후, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물(250㎖)에 붓고 다이클로로메탄(3x250㎖)에 의해 추출하였다. 합한 유기 층을 석유 에터에 의해 섬광 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 백색의 고체로서 생성물 2(120g, 94%)를 얻었다. TLC: PE/EA = 10/1; Rf(화합물 1의 메틸 에스터) = 0.8; Rf(화합물 2) = 0.7.
화합물 3의 제법(반응식 18):
THF(500㎖) 중의 1,1-다이메틸프로파길아민(11.4g, 0.14mol, 1.0당량)의 혼합물에 메틸 2,3-비스(브로모메틸)벤조에이트(40.0g, 0.125mol, 1.1당량) 및 트라이에틸아민(50.5g, 0.50mol, 4.0당량)을 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과시키고, 패드를 에틸 아세테이트에 의해 세척하였다. 여과액을 진공 하에 농축시켜 오렌지색 오일을 얻었다. 잔류물을 섬광 칼럼 크로마토그래피(PE/EA: 10/1)에 의해 정제하여 황색의 고체로서 화합물 3(19g, 62%)을 얻었다. TLC: PE/EA = 10/1; Rf(화합물 2) = 0.8; Rf(화합물 3) = 0.5.
화합물 5의 제법(반응식 18): 메탄올(1ℓ) 중의 2-메톡시페놀(100g, 0.81mol, 1.0당량)의 용액에 수산화나트륨(48.3g, 1.21mol, 1.5당량) 및 요오드화칼륨(140.4g, 0.84mol, 1.05당량)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물에 나트륨 하이포클로라이트(1199g, 1.61mol, 2.0당량)를 적하하였다. LCMS가 출발 물질이 사라졌다는 것을 나타낼 때, 농축 HCl을 pH 1까지 첨가하였다. 황산나트륨(56g, 0.44mol, 0.54당량)을 첨가하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(3x500㎖)에 의해 추출하고, 합한 유기 층을 염수에 의해 세척하고, 황산나트륨 위로 건조시키고 여과시키고 진공 하에 농축시켜 황색의 오일로서 화합물 5(160g, 79%)를 얻었다. TLC: PE/EA =10/1; Rf(화합물 4) = 0.4; Rf(화합물 5) = 0.4.
화합물 6의 제법(반응식 18): DMF(200㎖) 중의 화합물 5(31.4g, 125.8m㏖, 1.0당량)의 용액에 질소 하에 0℃에서 수소화나트륨(6.54g, 163.6m㏖, 1.3당량)을 첨가하였다. 0.5시간 후, 클로로메틸 메틸 에터(13.2g, 163.6m㏖, 1.3당량)를 천천히 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물(400㎖)에 의해 급랭시키고 에틸 아세테이트(3x200㎖)에 의해 추출하였다. 합한 유기 층을 염수에 의해 세척하고, 황산나트륨 위로 건조시키고 여과시키고 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 잔류물을 섬광 칼럼 크로마토그래피(PE/EA, 10/1)에 의해 정제하여 황색의 오일로서 화합물 6(30g, 74%)을 얻었다. TLC: PE/EA =10/1; Rf(화합물 5) = 0.4; Rf(화합물 6) = 0.6.
화합물 7의 제법(반응식 18): 아세토나이트릴(120㎖) 중의 화합물 6(10.2g, 34.5m㏖, 1.2당량)의 용액에 화합물 3(7.00g, 28.7m㏖, 1.0당량) 및 X-Phos(624㎎, 1.30m㏖, 0.05당량), 이어서 탄산세슘(9.38g, 28.7m㏖, 1.0당량) 및 팔라듐 다이아세테이트(168㎎, 0.74m㏖, 0.03당량)를 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응물을 빙수(100㎖)에 의해 급랭시키고 에틸 아세테이트(3x300㎖)에 의해 추출하였다. 합한 유기 층을 염수에 의해 세척하고, 황산나트륨 위로 건조시키고 여과시키고 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 잔류물을 섬광 칼럼 크로마토그래피(PE/EA, 10/1)에 의해 정제하여 갈색의 고체로서 화합물 6(9.4g, 79%)을 얻었다. TLC: PE/EA =10/1; Rf(화합물 6) = 0.6; Rf(화합물 7) = 0.3.
화합물 8의 제법(반응식 18): 메탄올(220㎖) 중의 화합물 7(3.81g, 9.31m㏖, 1.0당량)의 용액에 농축 HCl(2㎖) 및 활성탄 상의 팔라듐(1.8g, 10%)을 첨가하였다. 반응물을 수소 분위기 하에 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과시키고, 패드를 메탄올에 의해 세척하였다. 여과액을 진공 하에 농축시켜 옅은 오렌지색 오일을 얻었다. 잔류물을 에터에 의해 희석하고, 실온에서 교반하고, 고체가 형성되었다. 고체를 여과시키고 에탄올에 의해 세척하여 황색의 고체로서 8(4.8g, 100%)을 얻었다. TLC: PE/EA =3/1; Rf(화합물 7) = 0.6; Rf(생성물 8) = 0.3.
화합물 9의 제법(반응식 18): 메탄올(100㎖) 중의 화합물 8(4.80g, 13.0m㏖, 1.0당량)의 용액에 수산화나트륨(2.0g, 50m㏖) 및 물(15㎖)을 첨가하였다. 반응물을 40℃에서 6시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 6N HCl에 의해 pH 7로 조정하고, (DCM/MeOH, 10/1; 3x100㎖)에 의해 추출하였다. 유기 상을 황산나트륨 위로 건조시키고 여과시키고 진공 하에 농축시켜 미정제 생성물을 얻고, 이것을 에틸 아세테이트에 의해 미분쇄하여 청색의 고체로서 9(2.8g, 60%)를 얻었다. TLC: PE/EA =2/1; Rf(화합물 8) = 0.6; Rf(생성물 9) = 0.05.
화합물 76의 제법(반응식 18): DMF(50㎖) 중의 9(2.8g, 7.87m㏖, 1.0당량)의 혼합물에 후속하여 1-(tert-뷰톡시카보닐)피페라진(1.54g, 8.26m㏖, 1.04당량), EDCI(1.81g, 9.44m㏖, 1.2당량), HOBT(615㎎, 4.55m㏖, 0.57당량) 및 트라이에틸아민(1.74g, 17.2m㏖, 2.18당량)을 첨가하였다. 반응물을 25℃에서 36시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과시키고, 패드를 에틸 아세테이트에 의해 세척하였다. 여과액을 진공 하에 농축시켜 오일을 얻었다. 잔류물을 Prep-HPLC에 의해 정제하여 백색의 고체로서 화합물 10(2.0g)을 얻었다. 화합물 10(2.0g)을 에틸 아세테이트(3.5M, 15㎖) 중의 HCl에 의해 처리하였다. 25℃에서 1시간 동안 교반한 후, 석유 에터(100㎖)를 첨가하였다. 생성된 백색의 고체를 여과시키고, 에터에 의해 세척하고 공기 건조시켜 백색의 고체로서 실시예 화합물 76(1.6g, 41%, 2개의 단계)을 얻었다. TLC: DCM/MeOH =10/1; Rf(화합물 9) = 0.3; Rf(생성물 10) = 0.35; LC-MS: 424.70 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.55-7.48 (m, 3H), 6.87 (s, 1H), 6.72-6.70 (m, 2H), 4.95-4.79 (m, 4H) 3.90-3.80 (m, 7H), 3.35-3.30 (m, 4H), 2.72-2.69 (m, 2H), 2.12-2.08 (m, 2H), 1.56 (s, 6H).
실시예 23: 아이소인돌린 화합물 종에 대한 분석 데이터.
실시예 23은 상기 기재된 것과 유사한 방식으로 제조된 화합물에 대한 분석 데이터를 제공한다.
Figure 112016084530517-pct00119
실시예 화합물 1: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.45 (br. s, 1H), 8.76 (br. s, 1H), 7.48-7.41 (m, 3H), 6.82 (s, 1H), 6.69 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.53 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.80-4.50 (m, 4H), 3.75 (s, 3H), 3.53-3.50 (m, 1H), 2.70-2.65 (m, 1H), 2.12-2.10 (m, 1H), 1.83-1.80 (m, 1H), 1.36 (d, J = 6.0 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 332.05.
Figure 112016084530517-pct00120
실시예 화합물 2: 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.75-7.45 (m, 4H), 6.85-6.60 (m, 5H), 5.71 (br. s, 2H), 4.14-3.75 (m, 7H), 2.90-2.50 (m, 5H), 1.78-1.20 (m, 8H0, 1.26-1.23 (m, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 366.10.
Figure 112016084530517-pct00121
실시예 화합물 3: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.57 (br. s, 1H), 8.80 (br. s, 1H), 7.66 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 6.79 (s, 1H), 6.68 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 7.2 Hz, 1H) 3.74 (s, 3H), 3.53-3.50 (m, 1H), 2.70-2.60 (m, 1H), 2.12-2.10 (m, 1H), 1.83-1.80 (m, 1H), 1.36 (d, J = 6.0 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 366.20.
Figure 112016084530517-pct00122
실시예 화합물 4: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.75-7.72 (m, 2H), 7.61 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.51-7.45 (m, 2H), 7.24 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 5.05-4.90 (m, 2H), 4.75-4.65 (m, 2H), 3.69-3.64 (m, 1H), 2.89-2.82 (m, 1H), 2.73-2.67 (m, 1H), 2.27-2.22 (m, 1H), 1.98-193 (m, 1H), 1.52 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 388.10.
Figure 112016084530517-pct00123
실시예 화합물 5: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.61 (br, s. 2H), 7.49-7.45 (m, 2H), 7.22 (dd, J1 = 8.4 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 4.80-4.20 (m, 4H), 3.66-3.62 (m, 1H), 2.89-2.80 (m, 1H), 2.75-2.65 (m, 1H), 2.25-2.20 (m, 1H), 1.98-1.90 (m, 1H), 1.52 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 390.00.
Figure 112016084530517-pct00124
실시예 화합물 6: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 6.84 (s, 2H), 6.74-6.68 (m, 2H), 5.99 (s, 2H), 4.74-4.65 (m, 2H), 4.47-4.41 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.60-3.55 (m, 1H), 2.80-2.70 (m, 1H), 2.65-2.55 (m, 1H), 2.25-2.15 (m, 1H), 1.98-1.90 (m, 1H), 1.46 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 342.05.
Figure 112016084530517-pct00125
실시예 화합물 7: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.61 (s, 1H), 6.83 (s, 2H), 6.74 (s, 1H), 6.65 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.80 (s, 4H), 3.69 (s, 6H), 3.60-3.55 (m, 1H), 2.85-2.80 (m, 1H), 2.75-2.70 (m, 1H), 1.82-1.75 (m, 1H), 1.60-1.55 (m, 1H), 1.06 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 358.25.
Figure 112016084530517-pct00126
실시예 화합물 8: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.20 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.44-7.40 (m, 1H), 7.24-7.19 (m, 2H), 6.84 (s, 1H), 6.70 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.65 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.85-4.57 (m, 4H), 3.52-3.48 (m, 1H), 2.71-2.64 (m, 1H), 2.20-2.17 (m, 1H), 1.97-1.84 (m, 1H), 1.40-1.38 (m, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 316.10.
Figure 112016084530517-pct00127
실시예 화합물 9: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.60 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.48-7.43 (m, 2H), 7.24 (dd, J1 = 8.8 Hz, J2 - 2.0 Hz, 2H), 7.15 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 4.90-4.70 (m, 4H), 3.70-3.60 (m, 1H), 2.90-2.80 (m, 1H), 2.30-2.20 (m, 1H), 2.00-1.80 (m, 1H), 1.51 (d, J = 6.8 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 338.10.
Figure 112016084530517-pct00128
실시예 화합물 10: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.90 (s, 1H), 7.58 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.28 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.65-4.50 (m, 2H), 4.48-4.35 (m, 2H), 3.55-3.45 (m, 1H), 2.82-2.78 (m, 1H), 2.65-2.55 (m, 1H), 2.15-2.05 (m, 1H), 1.90-1.80 (m, 1H), 1.35 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 364.10.
Figure 112016084530517-pct00129
실시예 화합물 11: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.96 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.29 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.66-4.55 (m, 2H), 4.48-4.35 (m, 2H), 3.74 (s, 6H), 3.55-3.45 (m, 1H), 2.82-2.78 (m, 1H), 2.65-2.55 (m, 1H), 2.20-2.10 (m, 1H), 1.95-1.80 (m, 1H), 1.37 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 380.15.
Figure 112016084530517-pct00130
실시예 화합물 12: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.58 d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.41-7.38 (m, 1H), 7.28 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 7.24-7.16 (m, 3H), 4.73-4.62 (m, 2H), 4.58-4.45 (m, 2H), 3.55-3.45 (m, 1H), 2.82-2.78 (m, 1H), 2.65-2.55 (m, 1H), 2.20-2.10 (m, 1H), 1.95-1.80 (m, 1H), 1.37 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 338.10.
Figure 112016084530517-pct00131
실시예 화합물 13: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.58 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.28 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 7.22 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 3.2 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 4.73-4.61 (m, 2H), 4.54-4.45 (m, 2H), 3.52-3.49 (m, 1H), 2.80-2.75 (m, 1H), 2.65-2.59 (m, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.16-2.14 (m, 1H), 1.90-1.85 (m, 1H), 1.35 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 334.15.
Figure 112016084530517-pct00132
실시예 화합물 14: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.41-7.38 9m, 1H), 7.25-7.15 (m, 2H), 6.80 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 6.68 (d, 8.0 Hz, 1H), 6.62 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 4.77-4.63 (m, 2H), 4.59-4.44 (m, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.51-3.48 (m, 1H), 2.70-2.62 (m, 1H), 2.52-2.44 (m, 1H), 2.14-2.11 (m, 1H), 1.90-1.85 (m, 1H), 1.35 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 316.60.
Figure 112016084530517-pct00133
실시예 화합물 15: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.60 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.29-7.24 (m, 2H), 6.93-6.90 (m, 2H), 4.75-4.58 (m, 2H), 4.58-4.44 (m, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.52-3.50 (m, 1H), 2.81-2.74 (m, 1H), 2.65-2.57 (m, 1H), 2.20-2.10 (m, 1H), 1.90-1.80 (m, 1H), 1.36 (d, J = 6.0 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 350.15.
Figure 112016084530517-pct00134
실시예 화합물 16: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.32 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.56-7.54 (m, 1H), 7.44-7.28 (m, 4H), 4.86-4.40 (m, 4H), 3.60-3.50 (m, 1H), 2.83-2.75 (m, 1H), 2.65-2.59 (m, 1H), 2.30-2.15 (m, 1H), 1.95-1.82 (m, 1H), 1.17-1.13 (m, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 356.15.
Figure 112016084530517-pct00135
실시예 화합물 17: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.93 (dd, J1 = 11.6 Hz, J2 = 8.4 Hz, 2H), 7.82 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.63-7.54 (m, 2H), 7.48 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 6.92-6.86 (m, 1H), 6.78-6.70 (m, 2H), 5.22-4.76 (m, 4H), 3.85 (s, 3H), 3.75-3.65 (m, 1H), 2.83-2.77 (m, 1H), 2.68-2.60 (m, 1H), 2.40-2.30 (m, 1H), 2.10-1.95 (m, 1H), 1.58-1.50 (m, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 348.65.
Figure 112016084530517-pct00136
실시예 화합물 18: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.06 (s, 1H), 7.95-7.87 (m, 4H), 7.62-7.50 (m, 4H), 7.31 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.98-4.85 (m, 2H), 4.73-4.63 (m, 2H), 3.59-3.55 (m, 1H), 2.86-2.78 (m, 1H), 2.68-2.60 (m, 1H), 2.25-2.20 (m, 1H), 2.00-1.90 (m, 1H), 1.43 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 370.20.
Figure 112016084530517-pct00137
실시예 화합물 19: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.94 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 7.83 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.64-7.43 (m, 5H), 7.40-7.30 (m, 1H), 5.34-4.80 (m, 4H), 3.80-3.70 (m, 1H), 2.90-2.80 (m, 1H), 2.80-2.70 (m, 1H), 2.40-2.30 (m, 1H), 2.10-2.00 (m, 1H), 1.60-1.55 (m, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 370.10.
Figure 112016084530517-pct00138
실시예 화합물 20: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.62 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.56 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.94 (s, 2H), 4.68-5.55 (m, 2H), 4.49-4.40 (m, 2H), 3.73 (s, 6H), 3.55-3.48 (m, 1H), 2.82-2.78 (m, 1H), 2.65-2.57 (m, 1H), 2.20-2.08 (m, 1H), 1.90-1.80 (m, 1H), 1.36 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 380.10.
Figure 112016084530517-pct00139
실시예 화합물 21: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.20 (s, 1H), 7.42 (dd, J1 = 12.8 Hz, J2 = 8.0 Hz, 1H), 7.33-7.30 (m, 2H), 7.23-7.18 (m, 2H), 7.15-7.05 (m, 2H), 4.88-4.72 (m, 2H), 4.70-4.55 (m, 2H), 3.60-3.50 (m, 1H), 2.80-2.70 (m, 1H), 2.65-2.52 (m, 1H), 2.22-2.10 (m, 1H), 1.90-1.82 (m, 1H), 1.42-1.35 (m, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 288.15.
Figure 112016084530517-pct00140
실시예 화합물 22: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.05 (s, 1H), 7.40-7.09 (m, 7H), 4.76-4.65 (m, 2H), 4.60-4.45 (m, 2H), 3.55-3.48 (m, 1H), 2.80-2.70 (m, 1H), 2.62-2.52 (m, 1H), 2.20-2.08 (m, 1H), 1.90-1.82 (m, 1H), 1.37 (d, J = 6.0 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 288.15.
Figure 112016084530517-pct00141
실시예 화합물 23: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.29 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 - 6.4 Hz, 2H), 7.03 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 6.85 (s, 2H), 6.00 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 4.75-4.67 (m, 2H), 4.51-4.44 (m, 2H), 3.60-3.55 (m, 1H), 2.83-2.79 (m, 1H), 2.72-2.67 (m, 1H), 2.22-2.18 (m, 1H), 1.93-1.89 (m, 1H), 1.47 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 314.20.
Figure 112016084530517-pct00142
실시예 화합물 24: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.12 (s, 1H), 7.08 (dd, J1 = 8.4 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 6.90 (d, 8.4 Hz, 1H), 6.84 (s, 2H), 6.00 (s, 2H), 4.75-4.50 (m, 4H), 3.58-3.53 (m, 1H), 2.81-2.73 (m, 1H), 2.65-2.58 (m, 1H), 2.22-2.18 (m, 1H), 1.93-1.82 (m, 1H), 1.45 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 396.15.
Figure 112016084530517-pct00143
실시예 화합물 25: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 6.91 (br. s, 3H), 6.81 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.06 (d, J = 2.8 Hz, 2H), 4.82-4.72 (m, 2H), 4.68-4.61 (m, 1H), 4.55-4.48 (m, 2H), 3.62-3.57 (, 1H), 2.86-2.78 (m, 1H), 2.68-2.60 (m, 1H), 2.26-2.22 (m, 1H), 1.97-1.91 (m, 1H), 1.52 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.38 (d, J = 6.0 Hz, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 370.20.
Figure 112016084530517-pct00144
실시예 화합물 26: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.45-7.41 (m, 1H), 7.21 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.17-7.11 (m, 1H), 6.84 (s, 1H), 6.74 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.69 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.82-4.50 (m, 5H), 3.61-3.56 (, 1H), 2.80-2.70 (m, 1H), 2.62-2.55 (m, 1H), 2.25-2.18 (m, 1H), 1.95-1.85 (m, 1H), 1.48 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.30 (d, J = 6.0 Hz, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 370.20.
Figure 112016084530517-pct00145
실시예 화합물 27: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.41 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 4.8 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.16-7.14 (m, 1H), 6.84 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.71 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 1.6 Hz, 1H), 4.82-4.62 (m, 4H), 4.58-4.55 (m, 1H), 2.67-2.63 (m, 2H), 2.05-2.00 (m, 2H), 1.52 (s, 6H), 1.30 (d, J = 6.0 Hz, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 358.15.
Figure 112016084530517-pct00146
실시예 화합물 28: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.49-7.43 (m, 1H), 7.24 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.16 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.74 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.71 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 1.6 Hz, 1H), 4.87-4.79 (m, 4H), 4.58-4.56 (m, 1H), 2.67-2.63 (m, 2H), 2.07-2.03 (m, 2H), 1.54 (s, 6H), 1.30 (d, J = 6.0 Hz, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 358.25.
Figure 112016084530517-pct00147
실시예 화합물 29: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 6.84 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.83 (s, 2H), 6.73 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.70 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.98 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 4.68-4.54 (m, 5H), 2.66-2.62 (m, 2H), 2.04-2.00 (m, 2H), 1.50 (s, 6H), 1.30 (d, J = 6.0 Hz, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 384.25.
Figure 112016084530517-pct00148
실시예 화합물 30: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.40 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 4.8 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.15-7.12 (m, 1H), 6.92-6.90 (m, 2H), 6.80 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 4.85-4.52 (m, 4H), 4.02-4.00 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.85-3.82 (m, 2H), 3.61-3.55 (m, 1H), 2.84-2.77 (m, 1H), 2.67-2.59 (m, 1H), 2.24-2.18 (m, 1H), 1.94-1.88 (m, 1H), 1.48 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 360.20.
Figure 112016084530517-pct00149
실시예 화합물 31: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.38-7.34 (m, 1H), 7.14-7.08 (m, 3H), 7.04 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.86-4.73 (m, 2H), 4.60-4.48 (m, 2H), 3.60-3.53 (m, 1H), 2.76-2.69 (m, 1H), 2.61-2.53 (m, 1H), 2.16-2.12 (m, 1H), 1.86-1.82 (m, 1H), 1.42 (d, J = 6.8 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 370.10.
Figure 112016084530517-pct00150
실시예 화합물 32: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.42-7.38 (m, 1H), 7.24-7.11 (m, 5H), 4.92-4.80 (m, 2H), 4.68-4.55 (m, 2H), 4.10-4.07 (m, 2H), 3.88-3.86 (m, 2H), 6.64-3.60 (m, 1H), 2.85-2.75 (m, 1H), 2.72-2.60 (m, 1H), 2.24-2.18 (m, 1H), 1.98-1.88 (m, 1H), 1.49 (d, J = 6.0 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 414.20.
Figure 112016084530517-pct00151
실시예 화합물 33: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.46-7.41 (m, 1H), 7.32-7.29 (m, 2H), 7.23 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.13 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.01 (t, 8.8 Hz, 2H), 4.86-4.80 (m, 4H), 2.78-2.73 (m, 2H), 2.12-2.08 (m, 2H), 1.56 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 302.10.
Figure 112016084530517-pct00152
실시예 화합물 34: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.31-7.27 (m, 2H), 7.03 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 6.98 (s, 2H), 4.72 (d, J = 13.6 Hz, 2H), 4.61 (d, J = 13.6 Hz, 2H), 3.83 (6H), 2.81-2.72 (m, 2H), 2.07-1.98 (m, 2H), 1.56 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 344.20.
Figure 112016084530517-pct00153
실시예 화합물 35: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.43-7.40 (m, 2H), 7.32-7.27 (m, 2H), 7.20-7.14 (m, 2H), 7.03 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 4.85-4.70 (m, 4H), 2.77-2.72 (m, 2H), 2.08-2.03 (m, 2H), 1.54 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 302.20.
Figure 112016084530517-pct00154
실시예 화합물 36: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.29 (dd, J1 = 8.4 Hz, J2 = 5.6 Hz, 2H), 7.01 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 6.83 (s, 2H), 4.67 (d, J = 14.0 Hz, 2H), 4.58 (d, J = 14.0 Hz, 2H), 2.78-2.71 (m, 2H), 2.07-2.03 (m, 2H), 1.53 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 328.10.
Figure 112016084530517-pct00155
실시예 화합물 37: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.38 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 4.4 Hz, 1H), 7.16-7.10 (m, 2H), 6.86 (s, 1H), 6.75 (d, J = 8.0 HZ, 1H), 6.70 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.93-4.76 (m, 2H), 4.62-4.50 (m, 3H), 3.60-3.52 (m, 1H), 2.78-2.70 (m, 1H), 2.62-2.55 (m, 1H), 2.25-2.15 (m, 1H), 1.95-1.85 (m, 1H), 1.47 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.30 (d, J =6.4 Hz, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 344.15.
Figure 112016084530517-pct00156
실시예 화합물 38: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.39 (dd, J1 = 8.4 Hz, J2 = 4.8 Hz, 1H), 7.17-7.10 (m, 2H), 6.89 (s, 1H), 6.88 (d, J = 8.4 HZ, 1H), 6.81 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.92-4.83 (m, 2H), 4.58-4.42 (m, 4H), 3.60-3.55 (m, 1H), 2.80-2.70 (m, 1H), 2.65-2.55 (m, 1H), 2.25-2.15 (m, 1H), 1.95-1.85 (m, 1H), 1.47 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.30-1.25 (m, 12H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 386.25.
Figure 112016084530517-pct00157
실시예 화합물 39: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.46-7.40 (m, 1H), 7.22 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.12 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 6.90 (s, 1H), 6.89 (d, J = 8.4 HZ, 1H), 6.82 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 4.95-4.85 (m, 2H), 4.70-4.62 (m, 2H), 4.60-4.52 (m, 1H), 4.50-4.42 (m, 1H), 3.60-3.52 (m, 1H), 2.82-2.72 (m, 1H), 2.65-2.55 (m, 1H), 2.28-2.18 (m, 1H), 1.95-1.88 (m, 1H), 1.49 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.30-1.25 (m, 12H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 386.70.
Figure 112016084530517-pct00158
실시예 화합물 40: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.26 (s, 1H), 6.84 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.72-6.65 (m, 4H), 6.00 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.96-4.87 (m, 2H), 4.50-4.41 (m, 2H), 4.18-4.10 (m, 2H), 3.42-3.36 (m, 1H), 2.77-2.74 (m, 1H), 2.58-2.50 (m, 1H), 2.18-2.10 (m, 1H), 1.92-1.86 (m, 1H), 1.42 (d, J = 5.6 Hz, 3H), 1.30-1.25 (m, 12H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 412.30.
Figure 112016084530517-pct00159
실시예 화합물 41: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.47-7.42 (m, 1H), 7.35-7.30 (m, 2H), 7.25-7.22 (m, 2H), 7.13 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 5.01-4.91 (m, 2H), 4.72-4.65 (m, 2H), 3.72-3.65 (m, 1H), 3.12 (s, 3H), 2.98 (s, 3H), 2.92-2.85 (m, 1H), 2.80-2.70 (m, 1H), 2.30-2.20 (m, 1H), 2.02-1.95 (m, 1H), 1.52 (d, J = 4.0 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 441.20.
Figure 112016084530517-pct00160
실시예 화합물 42: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.43-7.40 (m, 1H), 7.19-7.16 (m, 2H), 6.89-6.87 (m, 2H), 6.82 (dd, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.0 Hz, 1H), 4.84-4.67 (m, 4H), 4.55-4.45 (m, 2H), 2.71-2.66 (m, 2H), 2.08-2.03 (m, 2H), 1.53 (s, 6H), 1.30-1.26 (m, 12H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 400.25.
Figure 112016084530517-pct00161
실시예 화합물 43: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.46-7.38 (m, 1H), 7.36-7.32 (m, 2H), 7.26-7.22 (m, 1H), 7.20-7.12 (m, 2H), 4.90-4.80 (m, 2H), 4.70-4.55 (m, 2H), 3.70-3.60 (m, 1H), 3.12 (s, 3H), 2.99 (s, 3H), 2.95-2.85 (m, 1H), 2.80-2.70 (m, 1H), 2.30-2.20 (m, 1H), 2.00-1.90 (m, 1H), 1.50 (d, J =6.0 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 441.15.
Figure 112016084530517-pct00162
실시예 화합물 44: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.15 (s, 1H), 7.44-7.42 (m, 1H), 7.24-7.21 (m, 2H), 6.88-6.86 (m, 2H), 6.77-6.75 (m, 1H), 4.88-4.79 (m, 2H), 4.71-4.66 (m, 2H), 3.93-3.90 (m, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.69-3.66 (m, 2H), 2.63-2.58 (m, 2H), 2.05-2.00 (m, 2H), 1.45 (s, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 347.15.
Figure 112016084530517-pct00163
실시예 화합물 45: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.43-7.39 (m, 1H), 7.18-7.12 (m, 2H), 6.92-6.88 (m, 2H), 6.82-6.80 (m, 1H), 4.85-4.70 (m, 4H), 4.02-3.99 (m, 2H), 3.85-3.82 (m, 5H), 2.73-2.69 (m, 2H), 2.10-2.05 (m, 2H), 1.54 (s, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 374.15.
Figure 112016084530517-pct00164
실시예 화합물 46: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.48 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.44-7.38 (m, 1H), 7.23 (dd, J1 = 8.0 Hz, J2 = 2.0 hz, 1H), 7.20-7.12 (m, 2H), 4.85-4.55 (m, 4H), 3.86-3.75 (m, 2H), 3.72-3.65 (m, 1H), 3.46 (s, 3H), 2.85-2.70 (m, 2H), 2.18-2.12 (m, 2H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 368.05.
Figure 112016084530517-pct00165
실시예 화합물 47: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 6.90-6.86 (m, 4H), 6.74 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.04 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.63 (dd, J1 = 14.0 Hz, J2 = 6.4 Hz, 2H), 4.46 (dd, J1 = 14.0 Hz, J2 = 6.4 Hz, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.69-3.67 (m, 2H), 2.62-2.57 (m, 2H), 1.99-1.96 (m, 2H), 1.42 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 400.15.
Figure 112016084530517-pct00166
실시예 화합물 48: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 6.99 (br. s, 2H), 6.92-6.89 (m, 2H), 6.81 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.72 (d, J = 11.6 Hz, 2H), 4.62 (d, J = 11.6 Hz, 2H), 4.02-4.00 (m, 2H), 3.86-3.82 (m, 11 H), 2.73-2.68 (m, 2H), 2.09-2.05 (m, 2H), 1.53 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 416.20.
Figure 112016084530517-pct00167
실시예 화합물 49: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.22 (br. s, 1H), 7.46-7.41 (m, 1H), 7.24-7.20 (m, 2H), 7.01 (s, 1H), 6.96 (d, J = 8.0 HZ, 1H), 6.82 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.92-4.80 (m, 2H), 4.72-4.69 (m, 2H), 3.02 (s, 3H), 2.88 (s, 3H), 2.70-2.66 (m, 2H), 2.09-2.05 (m, 2H), 1.47 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 401.20.
Figure 112016084530517-pct00168
실시예 화합물 50: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.07 (br. s, 1H), 7.42-7.39 (m, 1H), 7.24-7.18 (m, 2H), 7.01-6.95 (m, 2H), 6.82 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.82-4.60 (m, 4H), 3.02 (s, 3H), 2.88 (s, 3H), 2.70-2.65 (m, 2H), 2.07-2.04 (m, 2H), 1.44 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 401.15.
Figure 112016084530517-pct00169
실시예 화합물 51: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.48-7.42 (m, 1H), 7.23 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.14 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 6.90 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.01-4.89 (m, 2H), 4.69-4.63 (m, 2H), 4.03-4.00 (m, 2H), 3.86-3.83 (m, 5H), 3.64-3.60 (m, 1H), 2.86-2.78 (m, 1H), 2.67-2.60 (m, 1H), 2.30-2.20 (m, 1H), 1.98-1.90 (m, 1H), 1.50 (d, J = 6.0 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 360.15.
Figure 112016084530517-pct00170
실시예 화합물 52: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 6.91 (s, 1H), 6.90 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.83 (s, 2H), 6.79 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.98 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 4.75-4.66 (m, 2H), 4.49-4.42 (m, 2H), 4.02-3.99 (m, 2H), 3.86-3.79 (m, 5H), 3.50-3.44 (m, 1H), 2.82-2.75 (m, 1H), 2.66-2.58 (m, 1H), 2.25-2.18 (m, 1H), 1.95-1.86 (m, 1H), 1.46 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 386.20.
Figure 112016084530517-pct00171
실시예 화합물 53: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.40-7.36 (m, 1H), 7.18 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.08 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 6.86 (s, 1H), 6.73 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.68 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.58 (br. s, 4H), 4.81-4.75 (m, 3H), 3.82 (s, 3H), 2.67-2.63 (m, 2H), 2.10-2.06 (m, 2H), 1.52 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 330.10.
Figure 112016084530517-pct00172
실시예 화합물 54: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.04 (s, 1H), 7.46-7.40 (m, 1H), 7.23-7.18 (m, 3H), 7.10 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.85-4.78 (m, 2H), 4.69-4.66 (m, 2H), 2.63-2.59 (m, 2H), 2.03-1.98 (m, 2H), 1.46 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 384.15.
Figure 112016084530517-pct00173
실시예 화합물 55: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.20 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 7.15 (s, 1H), 7.11 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.90-4.86 (m, 4H), 2.73-2.68 (m, 2H), 2.10-2.06 (m, 2H), 1.54 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 402.15.
Figure 112016084530517-pct00174
실시예 화합물 56: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.04 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.54 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.14 (s, 1H), 7.10 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.10-4.70 (m, 4H), 2.73-2.69 (m, 2H), 2.10-2.06 (m, 2H), 1.56 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 410.15.
Figure 112016084530517-pct00175
실시예 화합물 57: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.48-7.38 (m, 3H), 7.12 (s, 1H), 7.10 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.81-4.71 (m, 4H), 3.09 9s, 3H), 209 (s, 3H), 2.71-2.66 (m, 2H), 2.07-2.03 (m, 2H), 1.62 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 437.25.
Figure 112016084530517-pct00176
실시예 화합물 58: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.07-8.05 (m, 1H), 7.66-7.54 (m, 2H), 6.90-6.78 (m, 3H), 5.20-4.80 (m, 4H), 2.67-2.60 (m, 2H), 2.07-2.00 (m, 2H), 1.55 (s, 6H), 1.35 (s, 9H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 398.25.
Figure 112016084530517-pct00177
실시예 화합물 59: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.32 (s, 1H), 7.44-7.37 (m, 3H), 6.83-6.74 (m, 3H), 4.81-4.56 (m, 4H), 3.00 (s, 3H), 2.91 (s, 3H), 2.60-2.50 (m, 2H), 2.00-1.90 (m, 2H), 1.43 (s, 6H), 1.28 (s, 9H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 425.35.
Figure 112016084530517-pct00178
실시예 화합물 60A: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.19 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 6.90 (s, 1H), 6.85 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.86-4.80 (m, 4H), 3.65-3.60 (m, 1H), 2.80-2.70 (m, 1H), 2.62-2.52 (m, 1H), 2.25-2.15 (m, 2H), 1.95-1.85 (m, 1H), 1.48 (d, J =6.0 Hz, 3H), 1.36 (s, 9H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 376.25.
Figure 112016084530517-pct00179
실시예 화합물 60B: 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.18-7.15 (m, 1H), 6.98 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.88-6.80 (m, 4H), 4.04-4.00 (m, 4H), 2.80-2.72 (m, 1H), 2.70-2.62 (m, 1H), 2.60-2.50 (m, 1H), 1.95-1.88 (m, 1H), 1.76-1.70 (m, 1H), 1.42 (s, 9H), 1.20 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 358.25.
Figure 112016084530517-pct00180
실시예 화합물 61: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.95 (br. s, 1H), 10.00 (br. s, 1H), 7.93 (s, 2H), 7.65-7.64 (m, 1), 7.22-7.09 (m, 2H), 6.92-6.90 (m, 1H), 4.85-4.75 (m, 4H), 3.23 (s, 3H), 2.65-2.60 (m, 2H), 2.02-1.95 (m, 2H), 1.45 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 444.20.
Figure 112016084530517-pct00181
실시예 화합물 62: 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.80-7.78 (m, 2H), 7.40-7.38 (m, 1H), 6.87-6.78 (m, 3H), 4.18-4.10 (m, 4H), 3.02 (s, 3H), 2.62-2.56 (m, 2H), 1.80-1.60 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.20 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 432.25.
Figure 112016084530517-pct00182
실시예 화합물 63: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.98-7.95 (m, 1H), 7.63 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.90 (s, 1H), 6.85 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.79 (d, J =8.0 Hz, 1H), 4.90-4.80 (m, 4H), 3.66-3.60 (m, 1H), 3.12 (s, 3H), 2.80-2.72 (m, 1H), 2.65-2.55 (m, 1H), 2.25-2.15 (m, 1H), 1.95-1.85 (m, 1H), 1.47 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.36 (s, 9H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 418.20.
Figure 112016084530517-pct00183
실시예 화합물 64: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.97 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.78-7.68 (m, 2H), 6.88 (s, 1H), 6.72 (s, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.85 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.20 (s, 3H), 2.73-2.70 (m, 2H), 2.13-2.10 (m, 2H), 1.58 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 390.15.
Figure 112016084530517-pct00184
실시예 화합물 65: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.75 (s, 1H), 7.85 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.70 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.05-4.60 (m, 4H), 3.76 (s, 3H), 3.60-3.50 (m, 1H), 3.40-3.30 (m, 2H), 2.72-2.65 (m, 1H), 2.20-2.10 (m, 1H), 1.90-1.80 (m, 1H), 1.45-1.40 (m, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 376.10.
Figure 112016084530517-pct00185
실시예 화합물 66: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.55 (br. s, 1H), 7.86 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.74-7.67 (m, 2H), 6.83-6.77 (m, 3H), 4.93 (s, 2H), 4.81-4.73 (m, 2H), 3.28 (s, 3H), 2.60-2.55 (m, 2H), 2.02-1.98 (m, 2H), 1.48-1.46 (m, 6H), 1.28 (s, 9H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 432.30.
Figure 112016084530517-pct00186
실시예 화합물 67: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.93 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.76-7.66 (m, 2H), 7.15 (s, 1H), 7.11 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.05 (s, 2H), 4.82 (s, 2H), 3.20 (s, 3H), 2.75-2.70 (m, 2H), 2.30-2.00 (m, 2H), 1.57-1.56 (m, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 444.15.
Figure 112016084530517-pct00187
실시예 화합물 68: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.98 (s, 2H), 7.66-7.63 (m, 1H), 6.84 (s, 1H), 6.75-6.69 (m, 2H), 4.83 (s, 4H), 3.85 (s, 3H), 3.63-3.59 (m, 1H), 3.13 (s, 3H), 2.82-2.76 (m, 1H), 2.66-2.58 (m, 1H), 2.24-2.21 (m, 1H), 1.96-1.91 (m, 1H), 1.49 (d, J =6.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 376.15.
Figure 112016084530517-pct00188
실시예 화합물 69: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.99 (s, 2H), 7.64 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.75 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.71 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.84 (s, 4H), 4.60-4.55 (m, 1H), 3.60-3.56 (m, 1H), 3.13 (s, 3H), 2.78-2.73 (m, 1H), 2.62-2.58 (m, 1H), 2.22-2.18 (m, 1H), 1.93-1.89 (m, 1H), 1.48 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.31 (d, J = 6.0 Hz, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 404.20.
Figure 112016084530517-pct00189
실시예 화합물 70: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.01 (s, 2H), 7.67 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.78-6.70 (m, 2H), 4.84 (s, 4H), 4.60-4.56 (m, 1H), 3.13 (s, 3H), 2.70-2.66 (m, 2H), 2.08-2.04 (m, 2H), 1.55 (s, 6H), 1.31 (d, J = 6.0 Hz, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 418.25.
Figure 112016084530517-pct00190
실시예 화합물 71: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.99-7.91 (m, 4H), 7.62-7.54 (m, 4H), 6.83 (s, 1H), 6.72-6.68 (m, 2H), 4.82 (s, 4H), 3.81 (s, 3H), 2.70-2.65 (m, 2H), 2.08-2.02 (m, 2H), 1.51 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 452.00.
Figure 112016084530517-pct00191
실시예 화합물 72: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.00 (s, 1H), 7.86 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.74-6.70 (m, 2H), 4.85 (s, 4H), 3.85 (s, 3H), 3.13 (s, 3H), 2.72-2.68 (m, 2H), 2.10-2.06 (m, 2H), 1.56 (s, 6H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 390.15.
Figure 112016084530517-pct00192
실시예 화합물 73.
Figure 112016084530517-pct00193
실시예 화합물 74: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.03-6.99 (m, 2H), 6.88-6.83 (m, 2H), 6.78-6.75 (m, 1H), 4.80-4.65 (m, 4H), 2.65-2.60 (m, 2H), 2.03-1.99 (m, 2H), 1.52 (s, 6H), 1.40 (s, 9H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 390.20.
Figure 112016084530517-pct00194
실시예 화합물 75: 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.07-8.05 (m, 1H), 7.66-7.54 (m, 2H), 6.90-6.78 (m, 3H), 5.20-4.80 (m, 4H), 2.67-2.60 (m, 2H), 2.07-2.00 (m, 2H), 1.55 (s, 6H), 1.35 (s, 9H); m/z (ESI+) (M+H)+ = 398.25.
Figure 112016084530517-pct00195
실시예 화합물 76: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.55-7.48 (m, 3H), 6.87 (s, 1H), 6.72-6.70 (m, 2H), 4.95-4.79 (m, 4H) 3.90-3.80 (m, 7H), 3.35-3.30 (m, 4H), 2.72-2.69 (m, 2H), 2.12-2.08 (m, 2H), 1.56 (s, 6H). LC-MS: 424.70 (M+1)+.
추가적인 화합물은 상기 제공된 것과 유사한 방식으로 제조되고, 각각에 대한 구조는 표 4에 기재된 바와 같은 1H-NMR 및 MS에 의해 확인되었다.
Figure 112016084530517-pct00196
Figure 112016084530517-pct00197
Figure 112016084530517-pct00198
Figure 112016084530517-pct00199
Figure 112016084530517-pct00200
Figure 112016084530517-pct00201
Figure 112016084530517-pct00202
요약서 및 도면을 포함하는 명세서에 개시된 모든 특징, 및 개시된 임의의 방법 또는 공정에서의 모든 단계는 이러한 특징 및/또는 단계의 적어도 일부가 상호 배타적인 조합을 제외하고 임의의 조합으로 조합될 수 있다. 요약서 및 도면을 포함하는 명세서에 개시된 각각의 특징은 달리 명확히 기재되지 않은 한 동일한, 동등한 또는 유사한 목적을 제공하는 대안적인 특징에 의해 대체될 수 있다. 따라서, 달리 명확히 기재되지 않은 한, 개시된 각각의 특징은 포괄적인 일련의 동등한 또는 유사한 특징의 오직 일 예이다. 본 명세서에 기재된 것 이외의 본 개시내용의 다양한 변형은 상기 설명으로부터 당해 분야의 당업자에게 명확할 것이다. 이러한 변형은 첨부된 청구항의 범위 내에 해당하는 것으로 또한 의도된다.
본 명세서에 언급된 모든 공보는 참조문헌으로 그 전문이 인용된다. 본 명세서에서 어느 것도 본 개시내용이 선행 개시내용에 의해 이러한 개시내용에 선행하도록 권한부여되지 않는다는 인정으로서 해석되어서는 안 된다.

Claims (37)

  1. 하기 화학식의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure 112020009484225-pct00265
    .
  2. 하기 화학식의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 알츠하이머 질환에서 경증 인지 장애를 치료하기 위한 약제학적 조성물:
    Figure 112021096403896-pct00266
    .
  3. 뉴런 세포에 대한 아밀로이드 베타 효과를 저해하는 것을 포함하는, 인지 감소(cognitive decline)를 나타내거나 또는 인지 감소를 나타낼 위험이 있는 대상체에서 인지 감소를 저해시키는 방법에서 사용하기 위한 약제학적 조성물로서,
    하기 화학식의 화합물:
    Figure 112021096403896-pct00267
    또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하되,
    상기 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 상기 세포에서 아밀로이드 베타 올리고머 결합을 저해시키기에 효과적인 양으로 존재하는, 약제학적 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 상기 인지 감소는 중추 뉴런에 대한 아밀로이드 베타 올리고머 효과와 연관되는, 약제학적 조성물.
  5. 제3항에 있어서, 알츠하이머병에서의 경증 인지 장애(mild cognitive impairment)의 치료 방법에서 사용하기 위한, 약제학적 조성물.
  6. 제3항에 있어서, 상기 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 상기 세포에서 아밀로이드 베타 올리고머 결합을 저해시키기에 효과적인 양으로 존재하고, 상기 효과적인 양은 1일 10 내지 2000㎎인, 약제학적 조성물.
  7. 제3항에 있어서, 상기 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 상기 세포에서 아밀로이드 베타 올리고머 결합을 저해시키기에 효과적인 양으로 존재하고, 상기 효과적인 양은 1일 10 내지 300㎎인, 약제학적 조성물.
  8. 제6항 또는 제7항에 있어서, 상기 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 상기 세포에서 아밀로이드 베타 올리고머 결합을 저해시키기에 효과적인 양으로 존재하고, 상기 효과적인 양은 1일 20 내지 150㎎인, 약제학적 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 상기 약제학적으로 허용 가능한 염은, 하이드로클로라이드염, 하이드로브로마이드염, 하이드로아이오다이드염, 니트레이트염, 설페이트염, 바이설페이트염, 포스페이트염, 산 포스페이트염, 아이소니코티네이트염, 아세테이트염, 락테이트염, 살리실레이트염, 시트레이트염, 타르트레이트염, 판토테네이트염, 바이타르트레이트염, 아스코르베이트염, 숙시네이트염, 말레에이트염, 겐티시네이트염, 퓨마레이트염, 글루코네이트염, 글루카로네이트염, 사카레이트염, 폼메이트염, 벤조에이트염, 글루타메이트염, 메탄설포네이트염, 에탄설포네이트염, 벤젠설포네이트염, p-톨루엔설포네이트염 및 파모에이트염으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 화합물.
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