BR112014016072B1 - método e sistema para detectar uma infecção por plasmodium em uma amostra de sangue - Google Patents
método e sistema para detectar uma infecção por plasmodium em uma amostra de sangue Download PDFInfo
- Publication number
- BR112014016072B1 BR112014016072B1 BR112014016072-4A BR112014016072A BR112014016072B1 BR 112014016072 B1 BR112014016072 B1 BR 112014016072B1 BR 112014016072 A BR112014016072 A BR 112014016072A BR 112014016072 B1 BR112014016072 B1 BR 112014016072B1
- Authority
- BR
- Brazil
- Prior art keywords
- area
- colored
- sample
- stained
- pathogen
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 53
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims description 55
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims description 55
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 title claims description 28
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims abstract description 110
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims abstract description 56
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N acridine orange free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 48
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 46
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 27
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 23
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 claims description 19
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 19
- PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 2'-(4-ethoxyphenyl)-5-(4-methylpiperazin-1-yl)-2,5'-bibenzimidazole Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1C1=NC2=CC=C(C=3NC4=CC(=CC=C4N=3)N3CCN(C)CC3)C=C2N1 PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 11
- 238000010867 Hoechst staining Methods 0.000 claims description 10
- 241000223960 Plasmodium falciparum Species 0.000 claims description 7
- 241000223821 Plasmodium malariae Species 0.000 claims description 5
- 241000223810 Plasmodium vivax Species 0.000 claims description 5
- 206010035501 Plasmodium malariae infection Diseases 0.000 claims description 4
- 241001505293 Plasmodium ovale Species 0.000 claims description 4
- 206010035502 Plasmodium ovale infection Diseases 0.000 claims description 3
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 3
- NZVGXJAQIQJIOY-UHFFFAOYSA-N 4-[6-[6-(4-methylpiperazin-1-yl)-1h-benzimidazol-2-yl]-1h-benzimidazol-2-yl]benzenesulfonamide;trihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.Cl.C1CN(C)CCN1C1=CC=C(N=C(N2)C=3C=C4NC(=NC4=CC=3)C=3C=CC(=CC=3)S(N)(=O)=O)C2=C1 NZVGXJAQIQJIOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- VMCOQLKKSNQANE-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethyl-4-[6-[6-(4-methylpiperazin-1-yl)-1h-benzimidazol-2-yl]-1h-benzimidazol-2-yl]aniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=NC2=CC=C(C=3NC4=CC(=CC=C4N=3)N3CCN(C)CC3)C=C2N1 VMCOQLKKSNQANE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N pibenzimol Chemical compound C1CN(C)CCN1C1=CC=C(N=C(N2)C=3C=C4NC(=NC4=CC=3)C=3C=CC(O)=CC=3)C2=C1 INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000001048 orange dye Substances 0.000 claims 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 abstract description 112
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 abstract description 94
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 abstract description 32
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 25
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 143
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 64
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 27
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 19
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 16
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 8
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 8
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 7
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 6
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 6
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- -1 among others Substances 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 5
- 238000010801 machine learning Methods 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 4
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 4
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 4
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 4
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 4
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000009182 Parasitemia Diseases 0.000 description 3
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 3
- 241000223105 Trypanosoma brucei Species 0.000 description 3
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002738 Giemsa staining Methods 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091093105 Nuclear DNA Proteins 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 241000223801 Plasmodium knowlesi Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 2
- 201000008680 babesiosis Diseases 0.000 description 2
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 210000001563 schizont Anatomy 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000012706 support-vector machine Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KAMQIEYGMMPYLM-UHFFFAOYSA-N 4-[chloro-bis[4-(dimethylamino)phenyl]methyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(Cl)(C=1C=CC(=CC=1)N(C)C)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 KAMQIEYGMMPYLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NALREUIWICQLPS-UHFFFAOYSA-N 7-imino-n,n-dimethylphenothiazin-3-amine;hydrochloride Chemical compound [Cl-].C1=C(N)C=C2SC3=CC(=[N+](C)C)C=CC3=NC2=C1 NALREUIWICQLPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000230 African Trypanosomiasis Diseases 0.000 description 1
- 206010001935 American trypanosomiasis Diseases 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000223836 Babesia Species 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- 241000589968 Borrelia Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000244038 Brugia malayi Species 0.000 description 1
- 241000143302 Brugia timori Species 0.000 description 1
- FIZZUEJIOKEFFZ-UHFFFAOYSA-M C3-oxacyanine Chemical compound [I-].O1C2=CC=CC=C2[N+](CC)=C1C=CC=C1N(CC)C2=CC=CC=C2O1 FIZZUEJIOKEFFZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 description 1
- 208000024699 Chagas disease Diseases 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000224467 Giardia intestinalis Species 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000022705 Mansonella streptocerca Species 0.000 description 1
- 241001467578 Microbacterium Species 0.000 description 1
- 241000224438 Naegleria fowleri Species 0.000 description 1
- 241000243985 Onchocerca volvulus Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 229910006074 SO2NH2 Inorganic materials 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- MZZINWWGSYUHGU-UHFFFAOYSA-J ToTo-1 Chemical compound [I-].[I-].[I-].[I-].C12=CC=CC=C2C(C=C2N(C3=CC=CC=C3S2)C)=CC=[N+]1CCC[N+](C)(C)CCC[N+](C)(C)CCC[N+](C1=CC=CC=C11)=CC=C1C=C1N(C)C2=CC=CC=C2S1 MZZINWWGSYUHGU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 241000223996 Toxoplasma Species 0.000 description 1
- 201000005485 Toxoplasmosis Diseases 0.000 description 1
- 241000589884 Treponema pallidum Species 0.000 description 1
- 241000224527 Trichomonas vaginalis Species 0.000 description 1
- 241000223104 Trypanosoma Species 0.000 description 1
- 241000244005 Wuchereria bancrofti Species 0.000 description 1
- GRRMZXFOOGQMFA-UHFFFAOYSA-J YoYo-1 Chemical compound [I-].[I-].[I-].[I-].C12=CC=CC=C2C(C=C2N(C3=CC=CC=C3O2)C)=CC=[N+]1CCC[N+](C)(C)CCC[N+](C)(C)CCC[N+](C1=CC=CC=C11)=CC=C1C=C1N(C)C2=CC=CC=C2O1 GRRMZXFOOGQMFA-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000013528 artificial neural network Methods 0.000 description 1
- KSCQDDRPFHTIRL-UHFFFAOYSA-N auramine O Chemical compound [H+].[Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(=N)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 KSCQDDRPFHTIRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JPIYZTWMUGTEHX-UHFFFAOYSA-N auramine O free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(=N)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 JPIYZTWMUGTEHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 150000001555 benzenes Chemical class 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 238000000339 bright-field microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 108091092330 cytoplasmic RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003066 decision tree Methods 0.000 description 1
- 230000017858 demethylation Effects 0.000 description 1
- 238000010520 demethylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000003708 edge detection Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000002109 erythrocyte inclusion Anatomy 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000695 excitation spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000002284 excitation--emission spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 210000000973 gametocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 229940085435 giardia lamblia Drugs 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000003673 groundwater Substances 0.000 description 1
- 208000029080 human African trypanosomiasis Diseases 0.000 description 1
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DCYOBGZUOMKFPA-UHFFFAOYSA-N iron(2+);iron(3+);octadecacyanide Chemical compound [Fe+2].[Fe+2].[Fe+2].[Fe+3].[Fe+3].[Fe+3].[Fe+3].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-] DCYOBGZUOMKFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 210000001087 myotubule Anatomy 0.000 description 1
- 208000010753 nasal discharge Diseases 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 229940118768 plasmodium malariae Drugs 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960003351 prussian blue Drugs 0.000 description 1
- 239000013225 prussian blue Substances 0.000 description 1
- 238000007637 random forest analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N safranin Chemical compound [Cl-].C=12C=C(N)C(C)=CC2=NC2=CC(C)=C(N)C=C2[N+]=1C1=CC=CC=C1 OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000011218 segmentation Effects 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 201000002612 sleeping sickness Diseases 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 210000003812 trophozoite Anatomy 0.000 description 1
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Abstract
MÉTODO E SISTEMA DE DETECTAR UMA INFECÇÃO DE PATÓGENO EM UMA AMOSTRA. É revelado neste documento, entre outras coisas, um método, kit e sistemas para detectar uma infecção por patógeno em uma amostra corporal o método compreendendo (i) a coloração da dita amostra corporal com um ou mais corantes, compreendendo pelo menos um corante predominante corando DNA para, assim, prover coloração diferencial entre DNA e pelo menos um outro componente celular sendo diferente de DNA; (ii) a identificação de pelo menos uma área corada compreendendo o DNA, se existir na amostra, e pelo menos uma outra área corada compreendendo o outro componente celular; (iii) a extração de características estruturais para a primeira área corada e pelo menos uma outra área corada, as ditas características estruturais compreendem pelo menos um dentre (i) tamanho de pelo menos uma dentre a primeira área corada e uma outra área corada e (ii) local da dita primeira área corada e da dita pelo menos uma outra área corada, uma em relação à outra; e (iv) a determinação da presença de um patógeno suspeito na amostra corporal se uma primeira área corada foi identificada e as ditas características estruturais se conformarem a características estruturais predeterminadas como (...).
Description
[001] A presente revelação refere-se a métodos de diagnóstico e em particular, a métodos e sistemas para detectar patógenos em fluidos corporai s .
[002] Referências consideradas relevantes como histórico à matéria aqui revelada são listadas abaixo:
[003] J. Keiser, J. Utzinger, Z. Premji , Y. Yamagata e B. H. Singer em Annals of Tropical Medicine & Parasitology, Vol. 96, N° 7, 643-654 (2002)
[004] Patente americana n° US 5,470,751
[005] Publicação on-line do Centers for Disease Control and Prevention CDC, Diagnostic Procedures, 2009 "Blood specimens: Microscopic Examination" em http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/HTML/Frames/DiagnosticPro cedures/body_dp_bloodexamin.htm
[006] O reconhecimento das referências acima neste documento não deve ser interpretado significando que estas são de qualquer maneira relevantes à patenteabilidade da matéria aqui revelada.
[007] A coloração é uma técnica frequentemente utilizada na biologia e medicina para destacar estruturas em tecidos biológicos para visualizar, muitas vezes com a ajuda de diferentes microscópios. As colorações podem ser utilizadas para definir e examinar tecidos volumosos (destacando, por exemplo, fibras musculares ou tecido conjuntivo), populações celulares (classificando diferentes células do sangue, por exemplo), ou organelas dentro de células individuais.
[008] A coloração de células é utilizada para melhor visualizar células e componentes celulares sob um microscópio. Ao utilizar diferentes colorações, pode-se preferencialmente corar certos componentes celulares, tal como um núcleo ou uma parede celular, ou toda a célula. As colorações podem ser utilizadas em células fixas, ou não vivas, bem como em células vivas.
[009] Técnicas de coloração de células são também muitas vezes utilizadas para detectar um patógeno em uma amostra de sangue. Um patógeno importante é a malária.
[010] O primeiro corante sintetizado para detecção por coloração de foi azul de metileno, em 1876. Seis anos depois, ele foi utilizado para descobrir bacilos da tuberculose. Ao longo dos anos, modificações de MB foram empregadas, incluindo MB "curado" em combinação com outros corantes, tal como eosina, que permitiram diferenciação entre células do sangue e os núcleos de parasitas da malária, bem como a combinação de desmetilação de azul de metileno MB com glicerol como um agente estabilizante em solvente de metanol, conhecido como o corante de Malacowski-Wright-Giemsa.
[011] J. Keiser et al. descreve Laranja de Acridina em comparação com o corante de Giemsa, para diagnóstico de malária, incluindo seu desempenho de diagnóstico, sua promoção e implementação e as implicações para o controle da malária.
[012] A Patente americana n° US 5,470,751 descreve outro reagente para corar células infectadas com malária e um método para detectar células infectadas por malária utilizando o mesmo, em que o reagente é uma solução de coloração compreendendo pelo menos um primeiro corante de um análogo de Auramina, tal como Auramina O e pelo menos um segundo corante de um derivado de benzeno condensado, tal como iodeto de 3,3'-dietil-2,2'-oxacarbocianina. Uma amostra de testes é tratada com reagente para corar células infectadas com malária. As células infectadas com malária coradas são, em seguida, detectadas opticamente.
[013] Além disso, o Centers for Disease Control and Prevention CDC, Diagnostic Procedures, 2009 descreve sob o título "Blood specimens: Microscopic Examination" que a técnica de Kawamoto para da detecção de parasitas do sangue, tal como parasitas de malária, utilizando corantes fluorescentes que colorem ácidos nucleicos. Conforme discutido nesta publicação, na técnica de Kawamoto, esfregaços de sangue em um slide são corados com laranja de acridina (AO) e examinados com um microscópio de fluorescência ou um microscópio de luz adaptado com um sistema de filtro de interferência. Isto resulta em uma coloração diferencial de DNA nuclear em verde e de RNA citoplasmático em vermelho, o que permite o reconhecimento dos parasitas.
[014] A presente revelação provê, de acordo com um primeiro dos seus aspectos, um método de detectar uma infecção por patógeno em uma amostra, o método compreendendo:
[015] - a coloração da dita amostra corporal com um ou mais corantes, compreendendo pelo menos um corante predominante corando DNA para, assim, prover coloração diferencial entre DNA e pelo menos um outro componente celular sendo diferente de DNA;
[016] - a identificação de pelo menos uma área corada compreendendo o DNA, se existir na amostra, e pelo menos uma outra área corada compreendendo o outro componente celular;
[017] - a extração de características estruturais para a primeira área corada e pelo menos uma outra área corada, as ditas características estruturais compreendem pelo menos um dentre (i) tamanho de pelo menos uma dentre a primeira área corada e uma outra área corada e (ii) local da dita primeira área corada e da dita pelo menos uma outra área corada, uma em relação à outra; e
[018] - a determinação da presença de um patógeno suspeito na amostra se uma primeira área corada foi identificada e as ditas características estruturais se conformarem a características estruturais predeterminadas como caracterizante do patógeno suspeito.
[019] De acordo com um segundo aspecto, a presente revelação provê um kit compreendendo:
[020] - um primeiro corante predominantemente corando DNA;
[021] - um segundo corante para corar pelo menos um outro componente celular sendo diferente de DNA;
[022] - instruções para uso do primeiro corante e do dito segundo corante para determinar a presença de um patógeno suspeito em uma amostra.
De acordo com um terceiro aspecto, a presente revelação provê um sistema compreendendo:
De acordo com um terceiro aspecto, a presente revelação provê um sistema compreendendo:
[023] - um componente de captura de imagem configurado e operável para adquirir pelo menos uma imagem óptica de uma área corada em uma amostra, a área corada compreendendo uma primeira área corada correspondente predominantemente a DNA e pelo menos uma outra área corada correspondente a pelo menos um outro componente celular sendo diferente de DNA;
[024] - uma unidade de processamento de imagem configurada para
[025] i) extrair características estruturais pelo menos da dita primeira área corada e da dita outra área corada, as ditas características estruturais compreendem pelo menos um dentre (i) tamanho de pelo menos uma dentre a dita primeira área corada, e (ii) uma outra área corada; e um local da dita primeira área corada e da dita outra área corada, uma em relação à outra; e
[026] ii) determinar a presença de um patógeno suspeito na amostra corporal, se uma primeira área corada é identificada e as ditas características estruturais se conformarem a características estruturais predeterminadas como caracterizante de uma infecção por patógeno.
[027] Além disso, de acordo com um quarto aspecto, a presente revelação provê uma unidade de processamento para identificar um patógeno em uma amostra, compreendendo:
[028] - módulo de entrada configurado e operável para receber dados correspondentes a um objeto corado na amostra compreendendo pelo menos uma primeira área corada correspondente predominantemente a DNA e pelo menos uma outra área corada correspondente a pelo menos um outro componente celular diferente de DNA, e
[029] - uma unidade de processamento de imagem configurada e operável para processar os ditos dados correspondentes ao dito objeto corado, o processamento compreende:
[030] - a extração de características estruturais para pelo menos a primeira área corada e segunda área de corada no objeto corado, as ditas características estruturais compreendem pelo menos um dentre (i) área de pelo menos uma dentre a primeira e a outra área corada e (ii) um local da dita primeira área corada e da dita outra área corada, uma em relação à outra; e
[031] - a provisão de um valor ou combinação de valores sendo indicadores da presença ou ausência de um patógeno suspeito na amostra, se as ditas características estruturais se conformarem a características estruturais predeterminadas como caracterizante do patógeno suspeito
[032] De acordo com um quinto aspecto, a presente revelação provê um produto de programa de computador compreendendo um meio utilizável por computador tendo código de programa legível por computador incorporado no mesmo para detectar uma infecção de patógeno em uma amostra sendo corada com dois ou mais corantes, o produto de programa de computador compreendendo:
[033] código de programa legível por computador para fazer com que o computador identifique no objeto corado pelo menos de uma primeira área corada correspondente predominantemente a DNA e pelo menos uma outra área corada correspondente a pelo menos um outro componente celular diferente de DNA;
[034] código de programa legível por computador para fazer com que o computador extraia características estruturais para pelo menos a primeira área corada e uma outra área corada, as ditas características estruturais compreendem pelo menos um dentre (i) área de pelo menos uma dentre a primeira e uma outra área corada e (ii) local da dita primeira área corada e da dita outra área corada, uma em relação à outra;
[035] código de programa legível por computador para fazer com que o computador determine um valor ou combinação de valores sendo indicadores da presença de um patógeno suspeito na amostra, se as ditas características estruturais se conformarem a características estruturais predeterminadas como caracterizante de a infecção de patógeno suspeito.
[036] Para melhor entender a matéria que é revelada neste documento e exemplificar como ela pode ser realizada na prática, realizações serão agora descritas, apenas a título de exemplo não limitativo, em referência aos desenhos apensos, nos quais:
[037] As Figuras 1A a 1F mostram imagens obtidas em três exposições diferentes; imagens de campo brilhante (Figuras 1A, 1D) , fluorescência azul (365nm, Figuras 1B e 1E) e fluorescência UV (475nm, Figuras 1C, 1F) de glóbulos brancos do sangue (Figuras 1A-1C) e glóbulos vermelhos do sangue infectados com malária (Figuras 1D-1F).
[038] A presente invenção é baseada no desenvolvimento de métodos para coloração diferencial de diferentes componentes em uma amostra de sangue para, assim, permitir uma detecção quase instantânea de uma infecção no sangue.
[039] Especificamente, foi descoberto pelos inventores que a coloração de uma amostra de sangue com reagente de laranja de acridina (AO) permite a diferenciação entre patógenos contendo DNA e, por exemplo, plaquetas, reticulócitos, corpos de Howell-Jolly, e bactérias tal como Staphylococcus epidermidis.
[040] Foi ainda descoberto que a coloração de uma amostra de sangue com AO e reagentes de Hoechst e empregando uma análise de imagem do objeto corado incluindo as duas áreas coradas diferentes (o objeto sendo uma imagem no campo de visão compreendendo as áreas coradas sob análise), permitiu a detecção de infecção de malária na amostra de sangue. Nesta conexão, os inventores descobriram que, além de detectar duas áreas coradas diferentes no objeto corado visualizado (da amostra), às vezes também é importante levar em consideração algumas características espaciais das áreas coradas, tal como o tamanho ou as dimensões de cada área corada e/ou a relação espacial entre as mesmas.
[041] Os inventores também determinaram que, para detectar um patógeno na amostra de sangue, pelo menos um corante deve corar ácido nucleico desoxirribonucleico (DNA) com preferência em relação à coloração de outros componentes celulares.
[042] Foi também descoberto pelos inventores que a sensibilidade de diagnóstico obtida utilizando dois corantes, um predominantemente corando DNA, está acima de 95%, e até mesmo acima de 97% ou 99%.
[043] Além disso, foi descoberto, e foi também demonstrado no segundo exemplo, que o método revelado neste documento permite identificar a presença de um patógeno em baixas contagens/μl. Por exemplo, o exemplo provido neste documento mostra que um parasita, tal como Plasmodium, pode ser detectado no sangue mesmo em uma contagem abaixo de 1.000 parasitas por μl e até mesmo em uma baixa contagem de cerca de 20 parasitas por μl
[044] Assim, de acordo com um primeiro aspecto, a presente revelação provê um método de detectar uma infecção por patógeno em uma amostra, o método compreendendo:
[045] - a coloração da dita amostra corporal com um ou mais corantes, com pelo menos um corante predominante corando DNA para, assim, prover coloração diferencial entre DNA e pelo menos um outro componente celular sendo diferente de DNA;
[046] - a identificação de pelo menos uma área corada compreendendo o DNA, se existir na amostra, e pelo menos uma outra área corada compreendendo o outro componente celular;
[047] - a extração de características espaciais para a primeira área corada e pelo menos uma outra área corada, as ditas características espaciais compreendem pelo menos um dentre: (i) tamanho de pelo menos uma dentre a primeira área corada e uma outra área corada; e (ii) local da primeira área corada e da pelo menos uma outra área corada, uma em relação à outra;
[048] - a determinação da presença de um patógeno na amostra se uma primeira área corada foi identificada e as ditas características espaciais se conformarem a (a saber, corresponderem a, se enquadrarem a, caírem dentro de, estiverem associadas a) , um valor ou uma combinação de valores predeterminada caracterizante de uma infecção por patógeno suspeita.
[049] Conforme apreciado, embora a invenção seja descrita na seguinte descrição detalhada em referência a um método de detectar uma infecção por patógeno em uma amostra, tal como uma amostra de sangue, deve ser entendido que a presente revelação também engloba um kit para realizar a invenção, um sistema, uma unidade de processamento e outros aspectos, conforme revelado neste documento,
[050] O método da invenção é aplicável para uma variedade de amostras. Em algumas realizações, a amostra é uma amostra corporal. Em algumas realizações, a amostra corporal é uma amostra de fluido corporal, tal como, entre outras, sangue, salive, sêmen, suor, escarro, líquido vaginal, fezes, leite materno, lavado broncoalveolar, lavado gástrico, lágrimas e descarga nasal.
[051] Em algumas realizações, a amostra corporal é uma amostra de sangue.
[052] Em algumas realizações, a amostra de sangue é selecionada dentre amostra de sangue total, amostra de glóbulos vermelhos, amostra de creme leucocitário, amostra de plasma, amostra de soro, uma amostra de qualquer outra fração de sangue, ou qualquer combinação dos mesmos.
[053] A amostra corporal pode ser de qualquer criatura viva, mas preferivelmente de animais de sangue quente.
[054] Em algumas realizações, a amostra corporal é uma amostra de um mamífero.
[055] Em algumas realizações, a amostra corporal é obtida de um corpo humano.
[056] Em algumas outras realizações, a amostra é coletada de qualquer animal doméstico, animais de zoológico e animais de fazenda, incluindo, entre outros, cães, gatos, cavalos, vacas e ovelhas.
[057] Em algumas realizações, a amostra corporal pode ser coletada de animais que atuam como vetores de doença incluindo veados ou ratos.
[058] Em algumas outras realizações, a amostra é uma amostra ambiental, tal como, entre outras, amostra de água (por exemplo, águas subterrâneas), cotonete de superfície, amostra de solo, amostra de ar, ou qualquer combinação dos mesmos.
[059] Em algumas realizações, a amostra é uma amostra de alimento, tal como, entre outras, amostra de carne, amostra de produto lácteo, amostra de água, amostra de líquido de lavagem, amostra de bebida, e qualquer combinação dos mesmos.
[060] Como um primeiro estágio no método revelado neste documento, a amostra é corada com pelo menos dois corantes provendo, sob condições adequadas, duas áreas coradas distintas na amostra.
[061] Uma área corada pode ser definida, entre outras maneiras, em relação a, por exemplo, coloração de plano de fundo ou colateral. Por exemplo, um limiar baseado em intensidade, limiar baseado em contraste, detecção de borda, detecção de plano de fundo, normalização, ou combinação dos mesmos podem ser aplicados para definir a área corada. Além disso, a definição da área corada pode permitir, entre outros, fronteiras difusas, por exemplo, utilizando uma soma/integral ponderada por brilho.
[062] Em algumas realizações, tal como no caso de coloração de membrana, uma primeira área corada residindo dentro de uma segunda área corada pode ser definida incluindo um caso em que a primeira área reside dentro da área delimitada no interior da segunda área. Por exemplo, a coloração de membrana de glóbulos vermelhos do sangue pode resultar em uma segunda área corada que se assemelha a linhas estreitas ao redor da circunferência da célula (conforme vista em uma imagem de microscópio bidimensional); em tal caso, pode ser determinado que a primeira área reside dentro da dita segunda área se estiver enquadrada dentro da circunferência da célula corada.
[063] Em algumas realizações, a preparação de amostra microscópica padrão pode ser necessária para corar a amostra. Por exemplo, a preparação da amostra pode tirar proveito do método bem conhecido de esfregaço fino ou esfregaço espesso para preparação de esfregaço de sangue. Como um exemplo alternativo, uma gota da amostra é colocada no meio de um slide limpo junto com, antes ou depois de colocar o corante e uma lamínula é gentilmente colocada sobre a gota em um ângulo, com uma borda tocando a lamínula primeiro. O líquido é, em seguida, autorizado a se espalhar entre os dois pedaços de vidro sem aplicar pressão.
[064] Ao se referir a um corante, entende-se que engloba qualquer substância química ou biológica que é capaz de corar um componente de uma célula biológica, para melhorar o contraste e destacar estruturas do objeto corado, seja uma célula ou parte de uma célula. O corante pode ter uma preferência ou especificidade de classe, por exemplo, pode ter preferência ou especificidade para corar ácidos nucleicos e dentre o ácido nucleico, para DNA ou RNA, preferência a aminoácidos, a lipídios, carboidratos, etc.
[065] Ao se referir à preferência ou coloração predominante, deve ser entendido que o corante colore um outro componente celular em uma cor ou fluorescência específica que é pelo menos duas vezes, três vezes, quatro vezes ou mesmo 10 vezes maior em sua intensidade que sua intensidade de coloração de outro componente celular no mesmo espectro de cor ou fluorescência.
[066] Em algumas realizações, ao se referir à preferência ou coloração predominante, deve ser entendido que o corante possui afinidade (atração molecular) a um componente celular (no espectro de cor ou fluorescência específico) que é pelo menos duas vezes, três vezes, quatro vezes ou mesmo 10 vezes maior em sua afinidade a outro componente celular (no mesmo espectro de cor ou fluorescência).
[067] Em algumas realizações adicionais, ao se referir à preferência ou coloração predominante, deve ser entendido que a coloração de DNA pelo corante é estável ou possui mais estabilidade comparada com sua coloração de outros componentes. A estabilidade pode ser entendida como a coloração produzida pelo corante permanecer substancialmente consistente por pelo menos 30 minutos após ser trazida em contato com o corante, às vezes, pelo menos 1 hora, 2 horas ou mesmo 5 horas após coloração da amostra com o corante tendo preferência a DNA. Alternativamente, a estabilidade pode ser entendida como a coloração produzida pelo corante permanecer substancialmente consistente durante exposição à luz (por exemplo, luz utilizada para excitação por fluorescência) por pelo menos 0,25 segundos, 1 segundo ou mesmo 15 segundos de exposição.
[068] Neste contexto, deve ser entendido que o corante tendo preferência a DNA pode também corar outros componentes celulares mas com menor atração ou menor intensidade ou com uma diferente resposta de fluorescência (espectro de excitação e/ou espectro de emissão) de modo que permita maior aprimoramento do DNA, cujo corante possui preferência. Por exemplo, conforme será adicionalmente discutido abaixo, sob algumas condições, um corante pode predominantemente corar DNA, entretanto, sob algumas outras condições, o mesmo corante pode corar RNA.
[069] Da mesma forma, a coloração de um outro componente celular deve ser entendida englobando a coloração de um ou mais componentes celulares que são DNA. Isto pode também incluir a coloração de um ou mais componentes celulares além de DNA, mas sem preferência ou com menor preferência a coloração de DNA.
[070] Em algumas realizações, os corantes não são específicos a tipo de célula. Em outras palavras, o corante não é específico a um patógeno específico ou a um estágio específico do ciclo de vida de um patógeno específico ou a uma célula específica do hospedeiro sendo infectado com a mesma e irá corar um componente de célula independentemente de sua origem, por exemplo, uma sequência de DNA ou estrutura em si, uma sequência de RNA ou estrutura em si, proteína em si, etc.
[071] A existência de uma primeira área corada é determinada com base em diversos fatores que podem se referir, entre outros, à intensidade da coloração, ao formato da coloração, à variabilidade ou consistência da coloração, etc. Uma vez que é determinada a existência de uma primeira área corada, ela é atribuída à presença de DNA.
[072] O método também provê uma área corada de pelo menos um outro componente celular diferente de DNA. A área corada pode ser obtida pelo mesmo corante, sob diferentes condições ou pelo uso de um diferente corante.
[073] Sem ser limitado aos mesmos, o pelo menos um outro componente celular é selecionado do grupo que consiste em RNA, proteínas, lipídios, membrana, citoplasma, ribossomos, carboidratos, glucanos, glicoproteínas, retículos endoplasmáticos, ou qualquer combinação dos mesmos.
[074] Em algumas realizações, o pelo menos um outro componente celular é RNA.
[075] Há uma variedade de corantes que podem ser utilizados de acordo com a presente revelação. Em algumas realizações, o corante é um cromóforo ou fluoróforo.
[076] Corantes como a coloração Giemsa são conhecidos como cromogênicos - seu efeito é prover cor ou opacidade à amostra e são visíveis, por exemplo, em microscopia de campo claro.
[077] Em algumas realizações, o corante provê coloração fluorescente da amostra. A fluorescência é visualizada iluminando a amostra com um espectro de luz de "excitação", o que resulta em uma "emissão" em um espectro de luz distinto. Dentre as vantagens em potencial das colorações fluorescentes está o fato de que as regiões da amostra que não são coradas mostram como escuras ou quase escuras, assim, tipicamente provendo maior contraste entre as áreas coradas e não coradas do que colorações cromogênicas. O Laranja de Acridina (AO) é um exemplo de um corante utilizado para corar amostras biológicas com fluorescência.
[078] Em algumas realizações, o corante é um corante permeável em células.
[079] Sem ser limitado aos mesmos, um corante que predominantemente colore DNA pode ser qualquer membro do grupo que consiste em laranja de acridina (AO, N,N,N',N'-Tetrametilacridina-3,6-diamina, coloração verde), família Hoechst, DAPI (4',6-diamidino-2-fenilindol), brometo de etídio (brometo de 3,8-Diamino-5-etil-6-fenilfenantridínio), iodeto de propídio (iodeto metiodeto de 2,7-Diamino-9-fenil-10 (dietilaminopropil)-fenantrídio), família SYBR, YOYO, família DRAQ, família SYTO, família TOTO, ou qualquer combinação dos mesmos. Além disso, o corante compreende uma modificação química de qualquer um dos corantes acima mencionados que preserve sua preferência por DNA.
[080] Sem ser limitado aos mesmos, um corante que não colore DNA predominantemente pode ser qualquer membro do grupo que consiste em violeta cristal (Tris(4-(dimetilamino)fenil)cloreto de metílio), colorações de hematoxilina, colorações de eosina, Safranina (compostos azonium de 2,8-dimetil-3,7-diamino-fenazina simétrica), laranja de acridina (AO, N,N,N' ,N'-Tetrametilacridina-3,6-diamina, coloração com vermelho), colorações de ácido-Schiff, coloração de Masson, azul da Prússia, ou qualquer componente ou combinação dos mesmos. Muito mais colorações que não colorem predominantemente DNA são conhecidas na técnica.
[081] Corantes tal como AO provêm diferentes espectros de fluorescência para diferentes componentes celulares. Quando AO colore DNA em pH neutro, ele possui um máximo de excitação a 502 nm (ciano) e máximo de emissão a 525 nm (verde) ; quando colore RNA em pH neutro, o máximo de excitação muda para 460 nm (azul) e o máximo de emissão muda para 650 nm (vermelho) . Como tal, ele permite coloração diferencial entre DNA e RNA, dependendo do comprimento de onda de excitação e das condições da amostra.
[082] A família Hoechst de corantes é conhecida pela fórmula química C25H26N6R, com R representando uma variedade de possíveis substituintes, tal como, entre outros, OH (Hoechst 33258); -CH2CH3 (Hoechst 33342), -N(CH2)2 (Hoechst 34580), -SO2NH2 (Hoechst S769121).
[083] Em algumas realizações, o método envolve a coloração combinada com pelo menos dois corantes, o primeiro corante sendo um membro da família Hoechst e o segundo corante sendo laranja de acridina.
[084] Ao se referir a uma combinação de duas ou mais colorações, deve ser apreciado que as duas ou mais colorações podem ser adicionadas à amostra simultaneamente ou em sequência. Da mesma forma, as respectivas áreas coradas podem ser obtidas simultaneamente ou em sequência, contanto que exista um ponto no tempo que permita visualização de duas ou mais áreas coradas de maneira diferente na mesma amostra.
[085] Em uma realização, o método emprega uma combinação de AO com o corante permeável em membrana que é essencialmente específico a DNA nuclear (por exemplo, Hoechst 33342, rendendo emissão de azul).
[086] De acordo com esta realização, AO permite utilizar a emissão de vermelho ou uma combinação de emissões de vermelho e verde para corar o citoplasma do patógeno (e possivelmente o núcleo, mas sem interferir substancialmente com a coloração de Hoechst).
[087] Em algumas realizações, a combinação de AO e Hoechst permite a detecção de um parasita. De acordo com esta realização e sem se limitar à mesma, para a detecção de um parasita, tal como um membro da espécie Plasmodium, a concentração do reagente de Hoechst, tal como Hoechst 33342, pode ser 10µg/mL, mas outros possíveis valores podem ser utilizados também, por exemplo, na faixa de 3µg/mL a 250µg/mL; e AO pode ser utilizado em 1,5µg/mL, mas outros possíveis valores podem ser utilizados também, por exemplo, na faixa entre 0,2µg/mL e 125µg/mL.
[088] Em algumas realizações, a quantidade de AO e reagente de Hoechst a ser utilizada é determinada de modo a prover, na amostra biológica, uma proporção entre as mesmas. Portanto, a proporção de Hoechst:AO pode estar na faixa entre 50:1 e 1:1, às vezes, cerca de 7,5:1.
[089] Uma mesma proporção, ou similar, pode também ser aplicável para outras combinações de corante, um primeiro corante corando predominantemente DNA e o outro corante, um outro componente, conforme definido, a saber, uma relação entre o primeiro corante e outro corante na faixa entre 50:1 e 1:1.
[090] O AO pode, além disso, ou alternativamente, ser utilizado para corar, por exemplo, citoplasma de Plasmodium e/ou vacúolo alimentar, mas não o citoplasma do glóbulo vermelho do sangue (RBC) dentro do qual o parasita pode estar, permitindo que o corpo do parasita seja visto sem ser ofuscado por um RBC, mesmo se presente dentro do RBC.
[091] Concentrações apropriadas podem ser otimizadas em relação a fatores tal como a combinação de corante específica, duração desejada da incubação da coloração, brilho de cor ou fluorescência resultante, e caráter da coloração resultante.
[092] Em algumas realizações, o método revelado neste documento é aplicável para a detecção de uma infecção por um patógeno portando DNA. Como tal, pelo menos o primeiro corante colore pelo menos o DNA, se presente na amostra, para, assim, prover uma primeira área corada indicativa da presença do patógeno portando DNA na amostra.
[093] O patógeno pode ser um microrganismo infeccioso. Em algumas realizações, o patógeno é um parasita eucariótico. Ao se referir ao parasita eucariótico, no contexto da presente revelação, deve ser entendido englobar parasitas unicelulares e parasitas multicelulares, mas também fungos, tal como levedura (por exemplo, Candida) e Aspergillus.
[094] Em algumas realizações, os patógenos são bactérias. Isto inclui, por exemplo, e sem se limitar aos mesmos, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Microbacterium tuberculosis, Salmonella espécie, Borrelia espécie e Treponema pallidum e outras conhecidas.
[095] Em algumas realizações, o patógeno é um parasita eucariótico. De acordo com esta realização, o parasita pode ser um parasita unicelular, tal como protozoários. Isto inclui protozoários genitais, por exemplo, Trichomonas vaginalis, protozoários do sistema nervoso, por exemplo, Naegleria fowleri, protozoários fecais, por exemplo, Giardia lamblia, protozoários do sangue. Em algumas realizações, o patógeno pode ser um parasita multicelular, tal como Wuchereria bancrofti, Brugia malayi, Brugia timori, Mansonella streptocerca, ou Onchocerca volvulus.
[096] Em algumas realizações, o parasita é um protozoário selecionado dentre os gêneros que consistem em Trypanosoma (causador doença de Chagas e doença do sono africana); Plasmodium (causador da Malária); Toxoplasma (causador de Toxoplasmose); Babesia (causador de Babesiose).
[097] Especificamente, ao se referir a Plasmodium, deve ser entendido englobando pelo menos qualquer membro do grupo que consiste em Plasmodium falciparum (P. falciparum), Plasmodium vivax (P. vivax), Plasmodium ovale (P. ovale), Plasmodium malariae (P. malariae), e Plasmodium knowlesi (P.knowlesi).
[098] Em algumas realizações, o patógeno é entendido por significar um estágio específico do ciclo de vida de um patógeno específico ou grupo do mesmo. Por exemplo, a invenção revelada neste documento pode ser aplicada especificamente à detecção de trofozoítos, esquizontes ou gametócitos da espécie de Plasmodium ou P. falciparum em particular.
[099] Como pode ser apreciado, o método revelado neste documento pode ser aplicável para a detecção de múltiplos patógenos utilizando as mesmas condições e/ou na mesma amostra, por exemplo, mesma combinação de corantes, mesmas condições de testes, etc., bem como para a detecção de um patógeno em múltiplos estágios de seu ciclo de vida. Em algumas realizações, o método revelado neste documento pode determinar qual dos um ou mais dos múltiplos patógenos (ou estágios de vida) é o suspeito.
[0100] Em algumas realizações, o método revelado neste documento é para detectar infecção por Plasmodium em uma amostra do sangue humano, o método compreendendo:
[0101] - coloração da amostra do sangue humano com pelo menos dois corantes, sob condições que permitem pelo menos a coloração de DNA e pelo menos um outro componente celular sendo diferente de DNA;
[0102] - a identificação de pelo menos uma área corada compreendendo o DNA, se existir na amostra de sangue, e pelo menos uma outra área corada compreendendo um outro componente celular na amostra de sangue;
[0103] - a extração das características estruturais para a primeira área corada e a pelo menos outra área corada, as ditas características espaciais compreendendo o tamanho de pelo menos uma dentre a primeira área corada e uma outra área corada e um local da primeira área corada e a pelo menos outra área corada uma em relação à outra;
[0104] - determinação de valor ou combinação de valores sendo indicadores da presença de Plasmodium suspeito no sangue se uma primeira área corada foi identificada e as ditas características estruturais se enquadrarem dentro de limitações predeterminadas como caracterizante de uma infecção de patógeno.
[0105] Em algumas realizações referentes à determinação da presença de Plasmodium no sangue, o objeto corado é obtido pela coloração da amostra de sangue com uma combinação de laranja de acridina (AO) e corante de Hoechst, em particular, Hoechst 33342 com uma proporção de concentração entre AO e Hoechst 33342 na faixa de 1:50 a 1:1, às vezes, até mesmo na faixa de 1:75.
[0106] De acordo com a realização acima, o método é aplicável para detecção de infecção da malária em uma amostra do sangue humano.
[0107] Uma vez que a amostra é corada com um ou mais corantes, pelo menos um objeto corado é obtido e o método em seguida envolve a seleção de pelo menos um objeto corado na amostra e obtenção de características estruturais ou espaciais do objeto corado.
[0108] Ao se referir a características espaciais ou estruturais de um objeto corado, deve ser entendido englobar qualquer característica mensurável das áreas coradas no objeto corado selecionado. As características podem ser apresentadas como um valor discreto ou uma faixa de valores caracterizando a área corada.
[0109] Em algumas realizações, as características estruturais incluem pelo menos um dentre o tamanho (por exemplo, dimensão, comprimento, circunferência, largura mínima, largura máxima ou área) das áreas coradas e/ou o local da primeira área corada em relação ao local da outra área ou áreas corada(s). Em outras palavras, o método pode ser realizado com base, pelo menos, na determinação das dimensões, por exemplo, área das áreas coradas, ou no local da primeira área corada em relação ao local da outra área ou áreas corada(s). Estas características podem ser combinadas também com uma ou mais características adicionais.
[0110] As características estruturais adicionais podem incluir, entre outras, formato da(s) área(s) corada(s), padrão de movimento da(s) área(s) corada(s), intensidade da(s) área(s) corada(s), cor da área corada, textura (contorno) da área corada, nitidez da fronteira da área corada, padrão de coloração em intensidade ou cor, sobreposição da área corada com outras áreas coradas ou características de imagem, tamanho relativo da área corada a outras áreas coradas ou características de imagem, proximidade ou contato da área corada a outras áreas coradas ou características de imagem
[0111] Em algumas realizações, a amostra corporal é uma amostra de sangue.
[0112] Em algumas realizações, o patógeno é um parasita do sangue.
[0113] Em algumas realizações, a amostra corporal é sangue humano e o patógeno é espécie Plasmodium responsável pela malária humana, tal como os selecionados do grupo que consiste em P. falciparum, P. vivax, P. ovale e P. malariae.
[0114] Quando a amostra corporal é uma amostra do sangue, a extração de características estruturais compreende a seleção de um objeto corado na amostra do sangue que compreende a primeira área corada e a pelo menos uma outra área corada.
[0115] Com base nas áreas coradas e na análise das características estruturais, uma alta probabilidade da amostra ser infectada com um patógeno suspeito é determinada. Assim, no contexto da presente revelação, ao se referir à determinação de presença de um patógeno ou patógeno suspeito, deve ser entendido que qualquer um dos seguintes é determinado:
[0116] que um ou mais patógenos suspeitos estão presentes na amostra;
[0117] que um ou mais patógenos suspeitos estão presentes na amostra em níveis de confiança acima de um limiar predefinido; os níveis de confiança podem aumentar ou uma determinação final da presença de um patógeno suspeito pode exigir uma ou mais etapas de análise adicionais.
[0118] que um ou mais patógenos suspeitos podem estar presentes na amostra com pontuações ou probabilidades de confiança determinadas ou estimadas que estão disponíveis para etapas de análise adicionais
[0119] De acordo com algumas realizações, é determinado que um patógeno suspeito está presente na amostra se uma primeira área corada é identificada (sendo indicativa da presença de DNA na amostra), e a primeira área corada faz divisa com, está em proximidade a, ou reside dentro da uma outra área corada e o tamanho de pelo menos uma dentre a primeira coloração, isto é, a área contendo DNA, e da outra coloração está dentro de uma faixa predeterminada. Por exemplo, uma área contendo DNA muitas vezes reside próxima de uma área corada para RNA, que existe no citoplasma.
[0120] De acordo com algumas outras realizações, é determinado que o patógeno suspeito está presente na amostra se uma primeira área corada é identificada (novamente, sendo indicativa da presença de DNA na amostra) e o tamanho da primeira área corada satisfaz uma relação predeterminada em relação ao tamanho da uma área corada. Este critério pode ser utilizado, por exemplo, para diferenciar parasitas eucarióticos de bactérias: em células eucarióticas, a área predominantemente corada para DNA deveria ser menor que uma coloração citoplasmática, indicando um núcleo distinto que não está presente em bactérias.
[0121] De acordo com algumas outras realizações, a presença de um patógeno é determinada se uma primeira área corada for identificada e as dimensões ou área da primeira área corada estiverem dentro de uma faixa de valores predeterminados a serem associados ao patógeno específico ou com um estágio específico do ciclo de vida de um patógeno específico. Por exemplo, se o patógeno foi o causador da malária (isto é, Plasmodium), a área da primeira área corada tipicamente não estaria abaixo de 0,2m ou acima de 20pm ou estaria na faixa de 0.2µm2 a 20µm2. Em algumas realizações, a área da primeira área corada na detecção de Plasmodium não estaria abaixo de 0.8µm2 ou acima de 13µm2 ou estaria dentro da faixa de 0.8µm2 a 13µm2.
[0122] De acordo com algumas outras realizações, a presença de um patógeno é determinada na amostra se uma primeira área corada for identificada e as áreas da uma outra área corada estiverem dentro de uma faixa de valores predeterminados a serem associados ao patógeno específico ou um estágio específico do ciclo de vida de um patógeno específico. Por exemplo, se o patógeno foi o causador da malária (isto é, Plasmodium), a área, por exemplo, um citoplasma, da outra área corada tipicamente não estaria abaixo de 0,8µm2 ou acima de 65µm2 ou estaria na faixa de 0,8µm2 a 65µm2. Em algumas realizações para detectar infecção de malária, a área da outra área corada não está abaixo de 1,6µm2 ou não excede 40µm2 ou está na faixa de 1,6µm2 a 40µm2.
[0123] Considerando as características acima, entende-se que, de acordo com algumas realizações da presente revelação, a área específica da primeira área corada não pode exceder a área específica da outra área corada. Da mesma forma, as dimensões da primeira área corada devem ser estatisticamente significativamente (por exemplo, por teste t) menores que as dimensões da outra área corada.
[0124] Em algumas outras realizações, a presença de um patógeno suspeito é determinada na amostra se uma primeira área corada for identificada e a primeira área corada ocupar uma % de volume predeterminada de todas as outras áreas coradas. Por exemplo, ao se referir a malária, a primeira área corada tipicamente ocuparia entre 12% e 60% da dita uma outra área corada.
[0125] De acordo com algumas outras realizações, a presença de um patógeno suspeito é determinada na amostra se uma primeira área corada for identificada e a primeira área corada e a uma outra área corada possuem formatos predeterminados. Por exemplo, o estágio de triptomastigotas de Trypanosoma brucei é conhecido por ter um formato alongado, semelhante a eixo. Outros formatos podem incluir, entre outros, propriedades de espiral, oval, alongada e esférica.
[0126] De acordo com algumas realizações, a presença de um patógeno suspeito é determinada na amostra se uma primeira área corada for identificada e a primeira área corada possuir uma variabilidade em intensidades que está acima de um limiar predeterminado. A variabilidade de intensidades pode aparecer como um agrupamento de mais de uma área corada com a primeira coloração (pluralidade da primeira área corada) ou como uma primeira área corada de formato irregular tendo diferentes tons de cor ou fluorescência. Isto pode refletir, por exemplo, em um estágio mononucleado no desenvolvimento de um protozoário, tal como esquizontes de Plasmodium.
[0127] Além disso, de acordo com algumas realizações, a presença de um patógeno suspeito é determinada se uma primeira área corada for identificada e o padrão de direcionalidade e/ou velocidade de movimento) do objeto corado corresponder a um padrão predeterminado estando associado ao patógeno suspeito. Por exemplo, ao considerar Trypanosoma brucei, espera-se que seu movimento (mobilidade) ocorra em um padrão característico. Como tal, quando a amostra é corada com coloração por AO e Hoechst, o movimento da área corada com AO pode ser analisado para confirmar uma correspondência ou uma correlação esperada com o padrão esperado.
[0128] Em ainda outras realizações, a presença de um patógeno suspeito é determinada se, durante o movimento do objeto corado, a primeira área corada é mantida dentro dos limites da outra área corada. Assim, ao se referir ao exemplo acima com Trypanosoma brucei, o movimento da área corada com Hoechst pode ser analisado para garantir que um suposto núcleo permanece em todos os momentos dentro da área corada com AO móvel.
[0129] As características estruturais podem ser determinadas simplesmente visualizando a amostra, entretanto, em algumas realizações, elas são preferivelmente determinadas com base em uma ou mais imagens ópticas da amostra. Assim, de acordo com algumas realizações, o método compreende a captura de pelo menos uma imagem óptica do objeto corado e a extração das características estruturais da pelo menos uma imagem óptica.
[0130] Às vezes, particularmente, quando o parâmetro estrutural inclui o movimento do objeto corado, mais de uma imagem óptica são capturadas e o parâmetro estrutural do movimento é determinado com base em uma sequência de imagens no tempo.
[0131] É desnecessário dizer que quanto mais acumuladas (ou coletadas) as informações de parâmetro(s) estrutural(is) do objeto corado, mais precisa pode ser a determinação e a identificação de um patógeno na mesma amostra.
[0132] As características estruturais podem ser analisadas manualmente, ou pelo uso de um sistema dedicado para permitir uma detecção e/ou identificação automatizada e, como tal, relativamente rápida do patógeno na amostra corporal. O resultado da análise pode obter uma indicação Sim/Não da presença de um patógeno, uma indicação probabilística da presença de um patógeno, imagens de um patógeno suspeito para análise adicional (manual ou automática) e/ou pode prover um resultado mais específico, incluindo o tipo do patógeno, nível de invenção (contagem/µl), etc.
[0133] O uso de um sistema automatizado pode ser de significância, não apenas para superar erros humanos na análise dos objetos corados na amostra e economizar tempo e mão-de-obra, mas também uma vez que certos componentes de uma amostra corporal pode não corar imediatamente e/ou o grau de coloração pode variar significativamente ao longo do tempo, como é o caso às vezes com Hoechst 33342 corando células do sangue contaminadas. Consequentemente, as características da imagem podem variar dependendo do quão rápido a amostra é analisada. Como tal, há uma vantagem em ter um sistema automatizado permitindo a aquisição de imagem e análise da amostra corada rápida, ou até mesmo quase instantânea.
[0134] Assim, de acordo com um aspecto adicional da presente revelação, é provido um sistema compreendendo:
[0135] - um componente de captura de imagem configurado e operável para capturar pelo menos uma imagem óptica de uma área corada em uma amostra, a área corada compreendendo uma primeira área corada correspondente predominantemente a DNA e pelo menos uma outra área corada correspondente a pelo menos um outro componente celular sendo diferente de DNA;
[0136] - uma unidade de processamento de imagem configurada para extrair características estruturais da dita pelo menos primeira área corada e dita uma outra área corada, as ditas características estruturais compreendendo pelo menos o tamanho de pelo menos uma dentre a dita primeira área corada, e uma outra área corada; e um local da primeira área corada e da dita outra área corada, uma em relação à outra; e determinar que um patógeno está presente na amostra, se uma primeira área corada é identificada e as características estruturais se conformarem a características estruturais predeterminadas como caracterizante de uma infecção por patógeno.
[0137] Em algumas realizações, o sistema também inclui uma unidade de saída para prover uma saída compreendendo um valor ou uma combinação de valores sendo indicativa da presença ou ausência dos patógenos suspeitos na amostra.
[0138] Em algumas realizações, o sistema é preferivelmente baseado em computador utilizando um conjunto de parâmetros armazenados no mesmo e correspondentes a, entre outras coisas, características estruturais associadas a pelo menos um patógeno definido. Os parâmetros podem, por exemplo, incluir valores ou faixas de valores esperados das características estruturais, associados a um patógeno, ou parâmetros que controlam a execução de algoritmos de aprendizagem de máquina ou análise de dados. Os parâmetros podem ser derivados de informações coletadas a priori ou simultaneamente obtidas com base em amostras de referência incluindo patógenos predeterminados.
[0139] Os parâmetros podem também compreender informações referentes ao comportamento de um patógeno, ou célula infectada com um patógeno, tal como motilidade e variações em características dependendo do estágio específico do ciclo de vida de um patógeno específico.
[0140] Os parâmetros podem também compreender informações referentes a condições a serem utilizadas para a detecção de um patógeno em um tipo de amostra corporal, por exemplo, na amostra do sangue, informações estatísticas referentes a qualidades de coloração e variabilidade de um conjunto de corantes a serem utilizados para um fluido corporal específico, combinações de corantes ou combinações de condições alternativas, etc.
[0141] Em algumas realizações, o conjunto de parâmetros armazenados compreende parâmetros associados a uma pluralidade de patógenos. Em algumas realizações, o conjunto de parâmetros armazenados compreende parâmetros que se associaram à determinação de qual dos um ou mais patógenos é o suspeito.
[0142] Em algumas realizações, o conjunto de parâmetros é associado a patógenos transmitidos pelo sangue. Em algumas outras realizações, o conjunto de parâmetros é associado a parasitas do sangue. Em algumas realizações específicas, o conjunto de parâmetros é associado a patógenos que abrigam sangue humano, em particular, de, uma espécie de Plasmodium responsável pela malária humana, tal como as selecionadas do grupo que consiste em P. falciparum, P. vivax, P. ovale e P. malariae.
[0143] Também é provida pela presente revelação uma unidade de processamento de imagem para identificar um patógeno em uma amostra, compreendendo:
[0144] - módulo de entrada configurado e operável para receber (imagem) dados correspondentes ao objeto corado na amostra compreendendo pelo menos uma primeira área corada correspondente predominantemente a DNA e pelo menos uma outra área corada correspondente a pelo menos um outro componente celular diferente de DNA, e
[0145] - uma unidade de processamento de imagem configurada e operável para processar os dados correspondentes ao objeto corado, o processamento compreende:
[0146] - a extração de características estruturais para pelo menos a primeira área corada e a uma outra área corada no objeto corado, as ditas características estruturais compreendendo pelo menos um dentre (i) tamanho de pelo menos uma dentre a primeira e as outras áreas coradas e (ii) local da dita primeira área corada e da dita outra área corada, uma em relação à outra; e
[0147] - a provisão de um valor ou combinação de valores sendo indicadores da presença ou ausência de um patógeno na amostra, se as ditas características estruturais se conformarem a características estruturais predeterminadas como caracterizante de um patógeno suspeito.
[0148] Diversos modos de operação podem ser utilizados em relação ao sistema e a unidade de processamento de imagem. Sistemas automatizados, bem como manuais e semiautomatizados, podem ser empregados.
[0149] Em relação ao sistema, o componente de captura de imagem pode ser qualquer dispositivo configurado e operável para adquirir pelo menos uma imagem óptica do objeto corado sendo selecionado, por exemplo, uma câmera CCD ou CMOS. O componente de captura de imagem pode ser equipado com funcionalidades convencionais, tal como funcionalidades de foco. O componente de captura de imagem pode também incluir lentes, abertura e obturador.
[0150] O componente de captura de imagem provê dados de imagem para processar pela unidade de processamento de imagem. Os dados de imagem no contexto de análise de imagem é baseado em um conjunto de informações de pixels que essencialmente cobrem uma ou mais Regiões de Interesse (ROI).
[0151] Os dados de imagem tipicamente incluindo informações de pixel podem ser apresentados em qualquer formato disponível, incluindo, entre outros, Tagged Image File Format (TIFF), Joint Photographic Experts Group (JPEG), Graphic Image Format (GIF), Portable Network Graphics (PNG), Portable Document Format (PDF), bitmap (BMP), e dados de sensor de imagem brutos. Os dados de imagem podem estar em um formato de dados comprimido ou em um formato de dados não comprimido; podem se referir a qualquer escala de cinza ou de cores; podem incluir dados de bitmap, ou uma porção de um arquivo de bitmap contendo dados de bitmap.
[0152] Uma vez que uma ou mais imagens são capturadas, elas são processadas pela unidade de processamento de imagem. O processamento pela unidade de processamento é configurada e operável para prover um ou mais valores de características estruturais das áreas coradas. Em outras palavras, com base nas técnicas de análise de imagem, diversos valores de saída referentes a características estruturais das áreas coradas são determinadas, que podem permitir a identificação da presença ou ausência do patógeno suspeito na amostra ou estimativa da probabilidade de presença na mesma. Os valores podem incluir as dimensões de uma ou mais áreas coradas na ROI, a relação entre as áreas coradas, e/ou médias, composição ou estatística de valores referentes a características estruturais. O processamento pode incluir, em algumas realizações, a análise dos um ou mais valores ou combinação de valores correspondente a características estruturais em relação aos parâmetros (por exemplo, valores ou faixas de valores ou pesos de aprendizado de máquina apropriados) que foram a priori determinados para caracterizar um ou mais patógenos, ou diferenças entre os mesmos.
[0153] A análise de imagem pode ser baseada em uma ou mais das práticas comuns, tal como detecção de contorno, derivados de parâmetro de imagem, detecção de formato, reconstrução de imagem, segmentação, diferenciação de imagem, correspondência de padrão, filtragem adaptada, aprendizagem de máquina e hashing geométrico.
[0154] O processamento de dados pela unidade de processamento de imagem pode utilizar um módulo de classificação. O módulo de classificação pode ser provido de pelo menos um parâmetro estrutural previamente determinado para um patógeno. O módulo de classificação pode analisar as características estruturais providas e deduzir uma seleção de possíveis patógenos identificados. A título de ilustração, um classificador pode identificar uma pluralidade de possíveis patógenos ou um único tipo de patógeno.
[0155] Em realizações específicas, as características estruturais determinadas são associadas a um patógeno esperado e estas são analisadas em relação aos parâmetros predefinidos.
[0156] Deve ser observado que a identificação de um único patógeno pode ser um processo complexo que inclui diferentes combinações de características. Portanto, características estruturais determinadas após o uso de uma combinação específica de corantes pode ser utilizadas como critérios para análise posterior de uma combinação adicional de corantes. Por exemplo, características estruturais identificadas em uma análise anterior podem ser utilizadas para continuar o processo de identificação enquanto se foca em um subconjunto de possíveis combinações de corantes. Por exemplo, em um nível de família biológico de identificação de um patógeno, os resultados de análises anteriores podem prover uma lista de seleção de possível(is) melhor(es) filtro(s) a ser(em) utilizado(s) em uma próxima rodada de análise.
[0157] Em algumas realizações, a análise de imagem e a determinação da presença de patógenos suspeitos ou um valor ou valores indicativos com a presença de patógenos suspeitos podem tirar proveito de um ou mais algoritmos de aprendizagem de máquina, que operam em uma pluralidade de características estruturais ou valores relacionados. Tais algoritmos incluem, entre outros, Support Vector Machines (SVM), redes neurais artificiais, classificadores Naive Bayes, redes Bayesianas, árvores de decisão, algoritmos de vizinho mais próximo, florestas aleatórias, Boosting, análise de regressão, classificadores lineares, classificadores quadráticos, k-vizinhos mais próximos, modelos de Markov ocultos e qualquer combinação dos mesmos. O resultado dos um ou mais algoritmos de aprendizagem de máquina pode compreender um ou mais dentre pontuação de confiança, probabilidades e/ou decisões sim/não.
[0158] Conforme apreciado, quanto mais características determinadas na análise - mais preciso é o processo de identificação. Ao utilizar uma pluralidade de corantes para induzir uma pluralidade de características estruturais, o risco de erro de detecção ou erro de classificação é reduzido. Entretanto, características adicionais podem também corresponder a maior carga computacional ou operacional. Algumas realizações se esforçam para equilibrar o benefício adicional de características adicionais com as desvantagens de carga associadas.
[0159] Com base no valor ou na combinação de valores obtidos pela análise, diversas decisões são feitas pela unidade de processamento quanto à presença ou ausência de um patógeno na amostra, incluindo, às vezes, o tipo do patógeno (identificação qualitativa) e/ou a quantidade (identificação quantitativa) do patógeno na amostra.
[0160] A unidade de processamento também é configurada para se comunicar com uma unidade de saída. Assim, com base no valor ou valores de saída das características estruturais determinados pela unidade de processamento, um sinal de saída ou sinais de saída indicativos da presença ou ausência de pelo menos um patógeno e, em algumas realizações, o tipo do patógeno, na imagem adquirida são providos por uma unidade de saída.
[0161] A saída pode ser provida em qualquer forma aceitável, incluindo um gráfico, gráfico ou texto exibido em um monitor de uma unidade de controle, uma impressão, como uma mensagem de voz, ou uma tela de smartphone do usuário, para aceitar dados processados da unidade de processamento e exibir informações referentes às características estruturais obtidas e/ou valores associados determinando a presença e opcionalmente a identidade de uma infecção patogênica, utilizando listas, tabelas, gráficos, etc. Um monitor pode ser conectado a uma impressora para imprimir a saída.
[0162] A unidade de processamento pode também incluir um módulo de interface de usuário, por exemplo, um teclado, ou uma tela de toque para permitir que um técnico realize o método de algumas realizações da invenção, para controlar a operação do sistema, incluindo, entre outras coisas, dados de entrada em relação à fonte do fluido corporal examinado, data, local, etc.) condições de operação do sistema, tipos de corantes utilizados, número de imagens a serem obtidas, intervalo de tempo entre imagens, etc.
[0163] Às vezes, a análise de imagem pode também envolver ajuste ou normalização de brilho da imagem com base no grau de coloração da amostra. Estes podem ser baseados, por exemplo, na identificação de um ou mais dentre os valores de pixel mais claros e mais escuros na imagem ou conjunto de imagens (por exemplo, correspondentes a uma amostra específica), brilho médio da área mais clara e/ou mais escura, e/ou histograma da imagem. Tais características podem ser extraídas de uma imagem representativa (não necessariamente a imagem sendo normalizada) ou de análise estatística de múltiplas imagens. As características utilizadas para normalização podem ser baseadas em uma única imagem ou em múltiplas imagens, que podem ser capturadas utilizando diferentes comprimentos de onda de excitação (como em AO provendo diferentes cores sob diferentes comprimentos de onda de iluminação).
[0164] O brilho da imagem pode também ser ajustado utilizando outros meios de controle, tal como o componente de captura de imagem tempo de exposição e/ou brilho da iluminação.
[0165] Além disso, as condições de operação do sistema podem permitir a temporização da aquisição da imagem, por exemplo, para permitir tempo de incubação suficiente com os um ou mais corantes, bem como a operação com diferentes configurações ópticas de comprimentos de onda de excitação e/ou emissão, para capturar a imagem da amostra corada em diversos espectros de cores ou fluorescência.
[0166] Para capturar a imagem da amostra corada em diversos espectros de cores ou fluorescência, mudanças em excitação podem ser atingidas mudando a cor da iluminação. Isto pode ser feito, por exemplo, provendo duas ou mais fontes de luz (por exemplo, para AO, luz de LED UV em 365nm e luz de LED azul a 475nm) e combinando-as opticamente (por exemplo, utilizando um espelho dicroico ou grade).
[0167] Em outro exemplo, uma única fonte de iluminação (por exemplo, luz de LED UV em 365nm) pode ser utilizada para excitar dois corantes simultaneamente, e um ou mais filtros ópticos são movidos para dentro ou fora do caminho óptico para selecionar os comprimentos de onda de emissão relevantes. Outros conjuntos de corante podem ser simultaneamente excitados utilizando a mesma iluminação incidente descrita aqui, mesmo se um u mais dos corantes forem excitados de maneira não ideal. Como exemplo, AO pode ser analogamente co-excitado com "uma coloração de Hoechst, colorações de DAPI e DRAQ.
[0168] Em ainda outro exemplo, uma única fonte de iluminação (por exemplo, luz de LED UV em 365nm) pode ser utilizada para excitar dois ou mais corantes simultaneamente, e o caminho óptico de emissão é dividido de modo que as duas ou mais emissões são capturadas em dois ou mais componentes de captura de imagem.
[0169] Em ainda outro exemplo, um sensor de aquisição de imagem em cores é utilizado para simultaneamente capturar dois ou mais sinais de fluorescência. O uso de um sensor de aquisição de imagem pode, por exemplo, evitar a necessidade de um ou mais filtros ópticos que são movidos para dentro ou para fora do caminho óptico para selecionar o comprimento de onda relevante.
[0170] No contexto da presente revelação, diversas fontes de iluminação podem ser utilizadas, estas incluem, entre outras, as que provêm luz branca (como em microscopia de luz brilhante), luz UV, luz azul, luz verde, luz amarela, luz vermelha, combinações das mesmas, ou qualquer luz aplicável para excitar um ou mais dos corantes utilizados para coloração.
[0171] Os componentes do sistema, a saber, o componente de captura de imagem, a unidade de processamento, a unidade de saída, etc., podem ser conectados diretamente uns aos outros (por exemplo, diretamente por um fio) ou um ou mais dos componentes podem estar remotos de um ou mais outros componentes. Por exemplo, o dispositivo de captura de imagem pode enviar dados a uma unidade de processamento por uma intranet ou pela internet, para permitir o processamento em um local remoto.
[0172] Um exemplo de um sistema que pode ser utilizado para realizar o método da presente revelação é descrito na publicação de pedido de patente PCT n° WO 2012/090198, o conteúdo da qual é incorporada a este documento, na íntegra, por referência.
[0173] A unidade de processamento é tipicamente operável ao executar um programa dedicado de instruções (por exemplo, aplicativo de software) que realiza a análise e o armazenamento de dados de entrada. O aplicativo de software pode ser incorporado em um dispositivo de armazenamento de programa legível por máquina, tal como um CD ou um disco de memória.
[0174] Em conformidade com o acima exposto, a presente invenção provê um dispositivo de armazenamento de programa legível por máquina, tangivelmente incorporando o programa de instruções executáveis pela máquina para realizar um método de detectar uma infecção de patógeno em uma amostra, o método compreendendo:
[0175] - a coloração da dita amostra de fluido com dois ou mais corantes, os ditos dois ou mais corantes provendo coloração diferencial de pelo menos DNA e pelo menos um outro componente celular sendo diferente de DNA;
[0176] - a identificação pelo menos de uma primeira área corada correspondente predominantemente a DNA e pelo menos uma outra área corada correspondente ao pelo menos um outro componente celular;
[0177] - a extração das características estruturais para pelo menos uma primeira área corada e a outra área corada, as ditas características estruturais compreendendo pelo menos o tamanho de pelo menos uma dentre a primeira e uma outra áreas coradas e um local da dita primeira área corada e a dita uma outra área corada uma em relação à outra;
[0178] - a determinação de um valor ou combinação de valores sendo indicadores da presença de um patógeno na amostra, se as ditas características estruturais corresponderem a características estruturais predeterminadas como caracterizante de uma infecção de patógeno.
[0179] Além disso, a presente revelação provê um produto de programa de computador compreendendo um meio utilizável por computador tendo código de programa legível por computador incorporado no mesmo para detectar uma infecção de patógeno em uma amostra corporal sendo corada com dois ou mais corantes, o produto de programa de computador compreendendo:
[0180] código de programa legível por computador para fazer com que o computador identifique em um objeto corado dentro da amostra corporal;
[0181] código de programa legível por computador para fazer com que o computador identifique no objeto corado pelo menos de uma primeira área corada correspondente predominantemente a DNA e pelo menos uma outra área corada correspondente a pelo menos um outro componente celular diferente de DNA;
[0182] código de programa legível por computador para fazer com que o computador extraia características estruturais para pelo menos uma primeira área corada e uma outra área corada, as ditas características estruturais compreendendo pelo menos o tamanho de pelo menos uma dentre a primeira e uma outra áreas coradas e um local da dita primeira área corada e a dita uma outra área corada uma em relação à outra;
[0183] código de programa legível por computador para fazer com que o computador determine um valor ou combinação de valores sendo indicadores da presença de um patógeno suspeito na amostra, se as ditas características estruturais corresponderem a características estruturais predeterminadas como caracterizante de a infecção de patógeno.
[0184] Por fim, a presente revelação provê um kit compreendendo:
[0185] - um primeiro corante predominantemente corando DNA;
[0186] - um segundo corante para corar pelo menos um outro componente celular sendo diferente de DNA;
[0187] - instruções para uso do primeiro corante e do segundo corante para determinar a presença de um patógeno suspeito em uma amostra corporal.
[0188] De acordo com este aspecto, o primeiro e o segundo corantes podem ser providos em uma única composição ou em uma primeira composição compreendendo o primeiro corante e uma segunda composição compreendendo o segundo corante. A primeira e a segunda composições, cada uma, compreendem, além do corante, um veículo adequado para uso na coloração da amostra corporal com os respectivos corantes.
[0189] O kit revelado neste documento deve ser utilizado para realizar cada uma das etapas e condições do método revelado neste documento.
[0190] Em algumas realizações, o primeiro corante compreende um corante de Hoechst. Em algumas realizações, o segundo corante compreende laranja de acridina.
[0191] Em algumas realizações, o kit compreende instruções para a provisão da amostra corporal com o primeiro corante e o segundo corante em uma relação na faixa entre 50:1 e 1:1.
[0192] Em algumas realizações, o primeiro corante compreende corante de Hoechst, especificamente Hoechst 33342 e o segundo corante compreende AO, a concentração do primeiro corante está na faixa entre 3µg/mL e 250µg/mL; e a concentração de AO está na faixa entre 0,2µg/mL e 125µg/mL.
[0193] Em algumas outras realizações, o primeiro corante compreende corante de Hoechst, especificamente Hoechst 33342 e o segundo corante compreende AO, a concentração do Hoechst 33342 é cerca de 10µg/mL e a concentração de AO é cerca de 1,5µg/mL.
[0194] Em algumas realizações, o primeiro e o segundo corantes podem ser combinados com um tampão adequado, tal como, entre outros, um compreendendo tampão de Tris-EDTA 1%, DDW 4,5% e solução salina 92,5%.
[0195] Sem desejar vínculo com teoria, é possível que a coloração por AO/Hoechst provou coloração mais robusta e estável, o que permitiu a visão de máquina rápida e eficiente da amostra corada. Isto permitir a aquisição de imagem de uma maior quantidade de sangue do que pode ser examinado sob um microscópio em métodos convencionais, o que, por sua vez, proveu maior sensibilidade em parasitemia baixa. Também é possível (além de, ou alternativamente) que um ou mais dos critérios de análise aplicados proveram resultados de confiança que não são dependentes no fator humano.
[0196] Algumas realizações da presente revelação agora serão exemplificadas na seguinte descrição de exemplos não limitativos que foram realizados de acordo com o método revelado. Deve ser entendido que estes exemplos se destinam a estar na natureza de ilustração em vez de limitação. Obviamente, muitas modificações e variações destes exemplos são possíveis à luz do ensinamento acima. Portanto, deve ser entendido que, dentro do escopo das reivindicações anexas, a invenção pode ser praticada de outra maneira, em uma miríade de formas possíveis, do que o especificamente descrito abaixo.
[0197] Uma amostra de sangue obtida de um indivíduo humano sendo identificada tendo infecção por malária foi corada com uma solução de corante compreendendo Laranja de Acridina 2µg/ml, Hoechst 33342 15µg/ml, tampão de Tris-EDTA 1%, DDW 4,5% e solução salina 92,5%.
[0198] Após a coloração, foram obtidas imagens das amostras utilizando uma diferente cor de iluminação, utilizando luz de LED UV em 365nm para digitalizar a coloração por AO e luz de LED azul em 475nm, para digitalizar a coloração por Hoechst). A amostra foi também digitalizada no campo brilhante (iluminando com luz branca).
[0199] As imagens resultantes são providas na Figura 1A-1F, com as Figuras 1A-1C sendo obtidas de uma amostra de glóbulos brancos do sangue, e as Figuras 1D-1F sendo obtidas de amostra de glóbulos vermelhos infectados com malária.
[0200] Especificamente, a Figura 1A mostra na imagem de campo de luz brilhante, que mostra as fronteiras (a membrana mostrada pela seta na Figura 1A) de uma célula branca e que a área de coloração de DNA (seta na Figura 1B) e da outra área corada de componente (neste caso, o citoplasma mostrado na seta na Figura 1C) têm dimensões que são típicas a um glóbulo branco do sangue (ambas as colorações de DNA e RNA sendo maiores que o típico para um parasita de Plasmodium).
[0201] Entretanto, as Figuras 1D-1F mostram que a primeira área corada (DNA, mostrada pela seta, Figura 1E) e a segunda área corada (RNA, mancha branca na Figura 1F) são muito menores que os limites da célula (conforme mostrado pela seta na Figura 1D), sendo indicativo de uma infecção do glóbulo vermelho do sangue anucleado.
[0202] Notavelmente, em uma amostra não infectada, nenhuma área corada correspondente às mostradas na Figura 1E e na Figura 1F é obtida.
[0203] Estes resultados mostram que, através da coloração com pelo menos dois corantes, um predominantemente corando DNA (neste caso específico, Hoechst 33342), é possível identificar infecção por Plasmodium em um glóbulo vermelho do sangue.
[0204] Neste estudo, um grupo de 200 amostras de sangue foi testado de acordo com uma realização da presente revelação. Dentre estas amostras de sangue, 100 foram determinadas positivas para malária utilizando coloração de Giemsa com base em metodologia de microscópio padrão e 100 sendo determinadas negativas. Uma duplicata de cada uma das 200 amostras foi corada com uma solução de corante para ter uma concentração final na amostra testada de 2pg/ml de Laranja de Acridina e 15µg/ml de Hoechst 33342 e, em seguida, analisada utilizando visão de máquina automatizada sob campo brilhante, luz UV e luz azul, essencialmente conforme descrito acima. Os resultados mostraram que mais de 97% das amostras que foram identificadas como infectadas sob o método convencional foram também identificadas como tais utilizando a coloração com AO/Hoechst. Dentre as 100 amostras que foram consideradas saudáveis utilizando a coloração com Giemsa convencional, 93 foram confirmadas utilizando a coloração com AO/Hoechst, mas sete amostras foram identificadas como infectadas. Estas sete foram, em seguida, novamente analisadas utilizando reagente de Giemsa (repetindo tanto coloração quanto microscopia com uma nova amostra do mesmo doador ou por microscopia adicional da preparação original que deu origem ao resultado negativo) . Em todos os sete casos, foi confirmado que, realmente, elas estafam infectadas, mas aparentemente em uma parasitemia baixa abaixo de 1.000 parasitas/μl.
[0205] O acima disposto mostra que não só o método revelado neste documento permite a detecção (mesmo por visão de máquina) de infecção com um alto nível de confiança (acima de 97%), mas também quando a contagem de parasitas é muito baixa (baixa parasitemia), mesmo abaixo de 1.000 parasitas por μl, ou abaixo de 500 parasitas por μl e até mesmo em 20 parasitas/μl.
Claims (6)
- MÉTODO DE DETECTAR UMA INFECÇÃO POR PLASMÓDIUM EM UMA AMOSTRA DE SANGUE, o método caracterizado por compreender:
- - a coloração da dita amostra de sangue com pelo menos corante Hoechst e corante laranja de acridina;
- - a aquisição de uma ou mais imagens ópticas da amostra; dentro de uma ou mais imagens ópticas, identificação de pelo menos uma área corada que é corada pelo corante Hoechst, e pelo menos uma outra área corada que é corada pelo corante laranja de acridina; e
- - identificação da amostra de sangue como sendo infectada por plasmodium, identificando, dentro de uma ou mais imagens ópticas, pelo menos uma dentre:
um objeto corado compreendendo a primeira área corada e a dita pelo menos uma outra área corada, a área da dita pelo menos uma outra área corada sendo na faixa de 0,8μm2 a 65μm2; e
um objeto corado compreendendo a primeira área corada e a dita pelo menos uma outra área corada, e a área da primeira área corada ocupa entre 12% e 60% da dita pelo menos uma outra área corada. - MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelos corantes Hoechst e laranja de acridina serem não específicos a um tipo de célula.
- MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por corar a amostra de sangue com coloração Hoechst compreender corar uma amostra de sangue com um corante Hoechst selecionado do grupo que consiste em Hoechst 33258, Hoechst 33342, Hoechst 34580, e Hoechst S769121.
- MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pela dita amostra de sangue ser uma amostral total de sangue e/ou uma amostra de glóbulos vermelhos.
- MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pela identificação da amostra de sangue como estando infectada por plasmodium compreender identificar a amostra de sangue como estando infectada por uma espécie de Plasmodium responsável por malária humana, a qual é selecionada do grupo que consiste em P. falciparum, P. vivax, P. ovale e P. malariae.
- SISTEMA PARA DETECTAR UMA INFECÇÃO POR PLASMODIUM EM UMA AMOSTRA DE SANGUE, caracterizado por compreender:
- - um componente de captura de imagem configurado e operável para adquirir pelo menos uma imagem óptica de uma amostra de sangue;
- - uma unidade de processamento de imagem configurada para
dentro de pelo menos uma imagem óptica, identificar pelo menos uma primeira área corada que é corada por um corante Hoechst e pelo menos uma outra área corada que é corada por corante laranja de acridina; e
identificação da amostra de sangue como infectada por plasmodium, identificando, dentro de uma ou mais imagens ópticas, pelo menos uma dentre:
um objeto corado compreendendo pelo menos a primeira área corada, e a área da primeira área corada estando na faixa de 0,2μm2 a 20μm2;
um objeto corado compreendendo a primeira área corada e a dita pelo menos uma outra área corada, e a área da dita pelo menos uma outra área corada estando na faixa de 0,8μm2 a 65μm2; e
um objeto corado compreendendo a primeira área corada e a dita pelo menos uma outra área corada, e a área da primeira área corada ocupa entre 12% e 60% da dita pelo menos uma outra área corada.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/IL2011/000973 WO2012090198A2 (en) | 2010-12-29 | 2011-12-29 | An apparatus and method for automatic detection of pathogens |
| ILPCT/IL2011/000973 | 2011-12-29 | ||
| US201261664769P | 2012-06-27 | 2012-06-27 | |
| US61/664,769 | 2012-06-27 | ||
| PCT/IL2012/050556 WO2013098821A1 (en) | 2011-12-29 | 2012-12-27 | Methods and systems for detecting a pathogen in a biological sample |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BR112014016072A2 BR112014016072A2 (pt) | 2017-06-13 |
| BR112014016072A8 BR112014016072A8 (pt) | 2017-07-04 |
| BR112014016072B1 true BR112014016072B1 (pt) | 2021-01-12 |
Family
ID=48696439
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BR112014016072-4A BR112014016072B1 (pt) | 2011-12-29 | 2012-12-27 | método e sistema para detectar uma infecção por plasmodium em uma amostra de sangue |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US10640807B2 (pt) |
| EP (1) | EP2798350B1 (pt) |
| CN (2) | CN104169719B (pt) |
| BR (1) | BR112014016072B1 (pt) |
| WO (1) | WO2013098821A1 (pt) |
| ZA (1) | ZA201405506B (pt) |
Families Citing this family (36)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9522396B2 (en) | 2010-12-29 | 2016-12-20 | S.D. Sight Diagnostics Ltd. | Apparatus and method for automatic detection of pathogens |
| US10640807B2 (en) | 2011-12-29 | 2020-05-05 | S.D. Sight Diagnostics Ltd | Methods and systems for detecting a pathogen in a biological sample |
| WO2014188405A1 (en) | 2013-05-23 | 2014-11-27 | Parasight Ltd. | Method and system for imaging a cell sample |
| IL227276A0 (en) | 2013-07-01 | 2014-03-06 | Parasight Ltd | A method and system for obtaining a monolayer of cells, for use specifically for diagnosis |
| WO2015029032A1 (en) | 2013-08-26 | 2015-03-05 | Parasight Ltd. | Digital microscopy systems, methods and computer program products |
| US10482595B2 (en) | 2014-08-27 | 2019-11-19 | S.D. Sight Diagnostics Ltd. | System and method for calculating focus variation for a digital microscope |
| US10625259B1 (en) | 2014-11-26 | 2020-04-21 | Medica Corporation | Automated microscopic cell analysis |
| US11478789B2 (en) | 2014-11-26 | 2022-10-25 | Medica Corporation | Automated microscopic cell analysis |
| US20170328924A1 (en) | 2014-11-26 | 2017-11-16 | Ronald Jones | Automated microscopic cell analysis |
| EP3859425B1 (en) | 2015-09-17 | 2024-04-17 | S.D. Sight Diagnostics Ltd. | Methods and apparatus for detecting an entity in a bodily sample |
| US11733150B2 (en) | 2016-03-30 | 2023-08-22 | S.D. Sight Diagnostics Ltd. | Distinguishing between blood sample components |
| EP3455610B1 (en) | 2016-05-11 | 2023-01-04 | S.D. Sight Diagnostics Ltd. | Sample carrier for optical measurements |
| EP3455626A1 (en) | 2016-05-11 | 2019-03-20 | S.D. Sight Diagnostics Ltd. | Performing optical measurements on a sample |
| CN108007754A (zh) * | 2016-10-31 | 2018-05-08 | 陈石磊 | 一种脱落细胞一步染色法、所用染料组合及试剂盒 |
| US11538159B2 (en) * | 2017-04-13 | 2022-12-27 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Methods and apparatus for label compensation during specimen characterization |
| CN109830260A (zh) * | 2017-08-23 | 2019-05-31 | 长庚医疗财团法人林口长庚纪念医院 | 一种以机械学习演算法分析检验数值以侦测体液中微生物的方法 |
| US11921272B2 (en) | 2017-11-14 | 2024-03-05 | S.D. Sight Diagnostics Ltd. | Sample carrier for optical measurements |
| US11047845B1 (en) | 2017-11-15 | 2021-06-29 | Medica Corporation | Control material and methods for cell analyzers |
| WO2019121851A1 (en) | 2017-12-20 | 2019-06-27 | Intervet International B.V. | System for external fish parasite monitoring in aquaculture |
| US20200288680A1 (en) * | 2017-12-20 | 2020-09-17 | Intervet Inc. | System for external fish parasite monitoring in aquaculture |
| CN112041655A (zh) * | 2018-01-26 | 2020-12-04 | 罗切斯特大学 | 用于生物学表面的紫外激发显微术的方法 |
| CN108344613A (zh) * | 2018-02-05 | 2018-07-31 | 江苏诺鬲生物科技有限公司 | 一种标记白带及宫颈脱落细胞病原菌的荧光染色试剂 |
| KR20220084167A (ko) | 2019-10-22 | 2022-06-21 | 에스.디. 사이트 다이그노틱스 엘티디 | 광학 측정들에서의 오류들의 고려 |
| CN110807426B (zh) * | 2019-11-05 | 2023-11-21 | 苏州华文海智能科技有限公司 | 一种基于深度学习的寄生虫检测系统及方法 |
| CA3160695A1 (en) | 2019-12-12 | 2021-06-17 | S.D. Sight Diagnostics Ltd | Analyzing an analyte disposed within a medium |
| BR112022011233A2 (pt) | 2019-12-12 | 2022-08-30 | S D Sight Diagnostics Ltd | Detecção de plaquetas em uma amostra sanguínea |
| JP2023506417A (ja) | 2019-12-12 | 2023-02-16 | エス．ディー．サイト ダイアグノスティックス リミテッド | サンプルのオフフォーカス顕微鏡画像 |
| BR112022011354A2 (pt) | 2019-12-12 | 2022-08-23 | S D Sight Diagnostics Ltd | Geração artificial de uma imagem colorida de esfregaço sanguíneo |
| EP4073685A1 (en) | 2019-12-12 | 2022-10-19 | S.D. Sight Diagnostics Ltd. | Classification models for analyzing a sample |
| JP2021162323A (ja) * | 2020-03-30 | 2021-10-11 | 学校法人順天堂 | 疾患鑑別支援方法、疾患鑑別支援装置、及び疾患鑑別支援コンピュータプログラム |
| WO2022009104A2 (en) | 2020-07-07 | 2022-01-13 | S.D. Sight Diagnostics Ltd | Focusing a microscope using fluorescent images |
| WO2022047171A1 (en) * | 2020-08-28 | 2022-03-03 | Chan Zuckerberg Biohub, Inc. | Method and system for label-free imaging and classification of malaria parasites |
| GB2600719B (en) * | 2020-11-05 | 2023-10-11 | Oxford Nanoimaging Ltd | Fluorescence assay |
| CN113567217A (zh) * | 2021-07-27 | 2021-10-29 | 肖波 | 一种妇科荧光染色液 |
| CN114004851B (zh) * | 2021-11-26 | 2022-11-29 | 广州市艾贝泰生物科技有限公司 | 一种细胞图像分割方法、装置及细胞计数方法 |
| WO2023144713A1 (en) | 2022-01-25 | 2023-08-03 | S.D. Sight Diagnostics Ltd | Sample carrier for use with a bodily sample |
Family Cites Families (342)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3603156A (en) | 1970-02-04 | 1971-09-07 | Gradko Glass Lab Inc | Disposable dilution system |
| US3676076A (en) | 1970-09-24 | 1972-07-11 | Gradko Glass Lab Inc | Disposable container |
| GB1324323A (en) | 1971-02-05 | 1973-07-25 | Image Analysing Computers Ltd | Automatic focusing of an optical image |
| US3967056A (en) | 1973-02-26 | 1976-06-29 | Minolta Camera Kabushiki Kaisha | Automatic focusing apparatus |
| US3916205A (en) | 1973-05-31 | 1975-10-28 | Block Engineering | Differential counting of leukocytes and other cells |
| US4076419A (en) | 1976-07-12 | 1978-02-28 | Kleker Richard G | Method and apparatus for hematology |
| US4209548A (en) | 1976-11-01 | 1980-06-24 | Rush-Presbyterian-St. Luke's Medical Center | Method for the preparation of blood samples for automated analysis |
| DE2910875C2 (de) | 1979-03-20 | 1985-11-14 | Kernforschungszentrum Karlsruhe Gmbh, 7500 Karlsruhe | Verfahren zur automatischen Scharfeinstellung |
| ES8307122A1 (es) | 1981-08-27 | 1983-06-16 | Becton Dickinson Co | "perfeccionamientos introducidos en un aparato para introducir reactivos en recipientes de recogida de muestras". |
| US4454235A (en) | 1982-06-01 | 1984-06-12 | Miles Laboratories, Inc. | Capillary tube holder for liquid transfer in immunoassay |
| US4494479A (en) | 1982-10-14 | 1985-01-22 | Coulter Electronics, Inc. | Slide preparation apparatus |
| WO1984002721A1 (en) | 1983-01-10 | 1984-07-19 | Gen Probe Inc | Method for detecting, identifying, and quantitating organisms and viruses |
| US4580895A (en) | 1983-10-28 | 1986-04-08 | Dynatech Laboratories, Incorporated | Sample-scanning photometer |
| WO1985005446A1 (en) | 1984-05-15 | 1985-12-05 | Merck Patent Gmbh | Single dye replacement for romanowsky plural dye variable compositions in human biopsy specimen constituent identifications |
| US4700298A (en) | 1984-09-14 | 1987-10-13 | Branko Palcic | Dynamic microscope image processing scanner |
| JPS61198204A (ja) | 1985-02-28 | 1986-09-02 | Disco Abrasive Sys Ltd | 顕微鏡のオ−トフオ−カス方法 |
| US5164598A (en) | 1985-08-05 | 1992-11-17 | Biotrack | Capillary flow device |
| US4761381A (en) | 1985-09-18 | 1988-08-02 | Miles Inc. | Volume metering capillary gap device for applying a liquid sample onto a reactive surface |
| DE3707487A1 (de) | 1986-05-16 | 1987-11-26 | Reichert Optische Werke Ag | Verfahren zur autofokussierung von mikroskopen und mikroskope mit einer autofokussierung |
| JPH0774856B2 (ja) | 1986-10-16 | 1995-08-09 | オリンパス光学工業株式会社 | 自動焦点調節方法 |
| US4774192A (en) | 1987-01-28 | 1988-09-27 | Technimed Corporation | A dry reagent delivery system with membrane having porosity gradient |
| US4849430A (en) | 1988-03-09 | 1989-07-18 | Monsanto Company | Method of inhibiting virus |
| US6262798B1 (en) | 1992-09-29 | 2001-07-17 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Method and apparatus for direct spectrophotometric measurements in unaltered whole blood |
| US5001067A (en) | 1989-09-18 | 1991-03-19 | Nova Biomedical Corporation | Determining the concentration of water soluble species in biological fluid |
| US5064282A (en) | 1989-09-26 | 1991-11-12 | Artel, Inc. | Photometric apparatus and method for measuring hemoglobin |
| US5229265A (en) * | 1990-03-13 | 1993-07-20 | Litron Laboratories | Process for analyzing clastogenic agents |
| DE69118295T2 (de) | 1990-10-01 | 1996-09-19 | Canon Kk | Vorrichtung und Verfahren zur Messung einer Probe |
| US5331958A (en) | 1992-03-31 | 1994-07-26 | University Of Manitoba | Spectrophotometric blood analysis |
| US5430542A (en) | 1992-04-10 | 1995-07-04 | Avox Systems, Inc. | Disposable optical cuvette |
| US5342790A (en) * | 1992-10-30 | 1994-08-30 | Becton Dickinson And Company | Apparatus for indirect fluorescent assay of blood samples |
| DE69327775T2 (de) * | 1992-11-19 | 2000-06-21 | Sysmex Corp | Verfahren zur Vorbehandlung für Blutanalyse |
| DE69424079T2 (de) | 1993-02-22 | 2000-09-07 | Sysmex Corp | Ein Reagenz zum Nachweis von malariainfizierten Zellen und ein Nachweis-Verfahren für malariainfizierte Zellen unter Verwendung desselben |
| US5483055A (en) | 1994-01-18 | 1996-01-09 | Thompson; Timothy V. | Method and apparatus for performing an automatic focus operation for a microscope |
| US6074789A (en) | 1994-03-08 | 2000-06-13 | Philips Electronics N.A. Corp. | Method for producing phosphor screens, and color cathode ray tubes incorporating same |
| US5590660A (en) | 1994-03-28 | 1997-01-07 | Xillix Technologies Corp. | Apparatus and method for imaging diseased tissue using integrated autofluorescence |
| US5782770A (en) | 1994-05-12 | 1998-07-21 | Science Applications International Corporation | Hyperspectral imaging methods and apparatus for non-invasive diagnosis of tissue for cancer |
| JPH07325247A (ja) | 1994-05-31 | 1995-12-12 | Nikon Corp | 自動合焦装置 |
| CA2192986C (en) | 1994-07-01 | 2002-01-22 | Jeffrey H. Price | Autofocus system for scanning microscopy |
| US5932872A (en) | 1994-07-01 | 1999-08-03 | Jeffrey H. Price | Autofocus system for scanning microscopy having a volume image formation |
| WO1996012981A1 (en) | 1994-10-21 | 1996-05-02 | Kla Instruments Corporation | Autofocusing apparatus and method for high resolution microscope system |
| WO1996013615A1 (en) | 1994-10-27 | 1996-05-09 | Entremed, Inc. | Identification of infection with flow cytometry |
| DE69417900T2 (de) | 1994-11-17 | 1999-11-11 | Chemunex Maisons Alfort | Vorrichtung und Verfahren zum schnellen und hochempfindlichen Erkennen und Zählen von Mikroorganismen mittels Fluoreszenz |
| SE504193C2 (sv) | 1995-04-21 | 1996-12-02 | Hemocue Ab | Kapillär mikrokyvett |
| US5985595A (en) * | 1995-06-07 | 1999-11-16 | The University Of Connecticut | Early detection of Borrelia infection |
| US6005964A (en) | 1996-01-24 | 1999-12-21 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Automatic machine vision microscope slide inspection system and method |
| KR0165522B1 (ko) | 1996-05-23 | 1999-03-20 | 김광호 | 혈증성분 무혈진단을 위한 최적지점 검색장치및 이를 이용한 무혈진단기 |
| US6100038A (en) * | 1996-09-06 | 2000-08-08 | Litron Laboratories Limited | Method for the enumeration of micronucleated erythrocyte populations with a single laser flow cytometer |
| EP1935983B1 (en) | 1997-05-05 | 2011-06-22 | ChemoMetec A/S | Method for determination of biological particles in blood |
| JPH1173903A (ja) | 1997-08-28 | 1999-03-16 | Jeol Ltd | 走査電子顕微鏡のオートフォーカス方法 |
| GB2329014A (en) | 1997-09-05 | 1999-03-10 | Colin Campbell | Automated identification of tubercle bacilli |
| AU9233698A (en) * | 1997-11-22 | 1999-06-17 | Robert A. Levine | Method for the detection, identification, enumeration and confirmation of circulating cancer cells and/or hematologic progenitor cells in whole blood |
| US6064474A (en) | 1998-02-06 | 2000-05-16 | Optical Sensors, Inc. | Optical measurement of blood hematocrit incorporating a self-calibration algorithm |
| US20020028471A1 (en) | 1998-02-20 | 2002-03-07 | Oberhardt Bruce J. | Cell analysis methods and apparatus |
| US6350613B1 (en) | 1998-03-07 | 2002-02-26 | Belton Dickinson & Co. | Determination of white blood cell differential and reticulocyte counts |
| US5948686A (en) | 1998-03-07 | 1999-09-07 | Robert A. Leuine | Method for performing blood cell counts |
| US6929953B1 (en) | 1998-03-07 | 2005-08-16 | Robert A. Levine | Apparatus for analyzing biologic fluids |
| US6723290B1 (en) | 1998-03-07 | 2004-04-20 | Levine Robert A | Container for holding biologic fluid for analysis |
| US6027695A (en) | 1998-04-01 | 2000-02-22 | Dupont Pharmaceuticals Company | Apparatus for holding small volumes of liquids |
| KR20010083041A (ko) | 1998-06-02 | 2001-08-31 | 추후 | 파수 도메인 반사측정과 배경 진폭 감소 및 보상을 사용한공초점 간섭 마이크로스코피용 방법 및 장치 |
| US6101104A (en) | 1998-06-04 | 2000-08-08 | Hughes Electronics Corporation | Predictive threshold synchronous rectifier control |
| IT1304854B1 (it) | 1998-07-29 | 2001-04-05 | Paolo Fazii | Metodo di differenziazione cromatica dei microrganismi in fluorescenza |
| US6132685A (en) | 1998-08-10 | 2000-10-17 | Caliper Technologies Corporation | High throughput microfluidic systems and methods |
| US6320979B1 (en) | 1998-10-06 | 2001-11-20 | Canon Kabushiki Kaisha | Depth of field enhancement |
| US6496260B1 (en) | 1998-12-23 | 2002-12-17 | Molecular Devices Corp. | Vertical-beam photometer for determination of light absorption pathlength |
| JP2000199845A (ja) | 1999-01-05 | 2000-07-18 | Ricoh Co Ltd | 自動合焦装置及び自動合焦方法 |
| US6344340B1 (en) | 1999-03-01 | 2002-02-05 | Novus International, Inc. | Viability assay for sporocyst-forming protozoa |
| AU762085B2 (en) * | 1999-04-13 | 2003-06-19 | Chromavision Medical Systems, Inc. | Histological reconstruction and automated image analysis |
| US6582964B1 (en) | 1999-05-12 | 2003-06-24 | Cme Telemetrix Inc. | Method and apparatus for rapid measurement of HbA1c |
| JP3901427B2 (ja) | 1999-05-27 | 2007-04-04 | 松下電器産業株式会社 | 電子装置とその製造方法およびその製造装置 |
| US7034883B1 (en) | 1999-08-10 | 2006-04-25 | Cellavision Ab | Automatic focusing |
| US6711516B2 (en) | 1999-11-23 | 2004-03-23 | Spectromedical Inc. | Method for calibrating spectrophotometric apparatus |
| US6611777B2 (en) | 1999-11-23 | 2003-08-26 | James Samsoondar | Method for calibrating spectrophotometric apparatus |
| US6949384B2 (en) | 2001-12-21 | 2005-09-27 | Spectromedical Inc. | Method for monitoring degradation of Hb-based blood substitutes |
| ATE433499T1 (de) * | 1999-12-21 | 2009-06-15 | Ortho Clinical Diagnostics Inc | Detektion von nukleinsäuren |
| US7754439B2 (en) | 2003-06-12 | 2010-07-13 | Accupath Diagnostic Laboratories, Inc. | Method and system for the analysis of high density cells samples |
| ATE386815T1 (de) | 2000-01-06 | 2008-03-15 | Caliper Life Sciences Inc | Methoden und syteme zur überwachung intrazellulärer bindereaktionen |
| US6836559B2 (en) | 2000-03-09 | 2004-12-28 | The Regents Of The University Of California | Automated video-microscopic imaging and data acquisition system for colloid deposition measurements |
| WO2001078005A2 (en) | 2000-04-11 | 2001-10-18 | Cornell Research Foundation, Inc. | System and method for three-dimensional image rendering and analysis |
| US6711283B1 (en) | 2000-05-03 | 2004-03-23 | Aperio Technologies, Inc. | Fully automatic rapid microscope slide scanner |
| US7668362B2 (en) | 2000-05-03 | 2010-02-23 | Aperio Technologies, Inc. | System and method for assessing virtual slide image quality |
| US6799119B1 (en) | 2000-05-15 | 2004-09-28 | Colorado School Of Mines | Method for detection of biological related materials using biomarkers |
| US7630063B2 (en) | 2000-08-02 | 2009-12-08 | Honeywell International Inc. | Miniaturized cytometer for detecting multiple species in a sample |
| JP2003535330A (ja) | 2000-06-02 | 2003-11-25 | メディコメトリクス アンパーツゼルスカブ | 生物試料の分類のための方法及びシステム |
| US6554788B1 (en) | 2000-06-02 | 2003-04-29 | Cobe Cardiovascular, Inc. | Hematocrit sampling system |
| US6632681B1 (en) | 2000-07-24 | 2003-10-14 | Ey Laboratories | Reagent delivery device and method of use |
| US6819408B1 (en) | 2000-09-27 | 2004-11-16 | Becton, Dickinson And Company | Method for obtaining a monolayer of desired particles in a liquid sample |
| US6448024B1 (en) | 2000-10-03 | 2002-09-10 | Roche Diagnostics Corporation | Method, reagent, cartridge, and device for determining fibrinogen |
| US20100261159A1 (en) | 2000-10-10 | 2010-10-14 | Robert Hess | Apparatus for assay, synthesis and storage, and methods of manufacture, use, and manipulation thereof |
| DE10051806A1 (de) | 2000-10-18 | 2002-04-25 | Bayer Ag | Verfahren zur Charakterisierung, Identifizierung und Kennzeichnung von mikrobiellen Mischungen |
| US7027628B1 (en) | 2000-11-14 | 2006-04-11 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Automated microscopic image acquisition, compositing, and display |
| US7155049B2 (en) | 2001-01-11 | 2006-12-26 | Trestle Acquisition Corp. | System for creating microscopic digital montage images |
| US6956650B2 (en) | 2001-01-12 | 2005-10-18 | General Hospital Corporation | System and method for enabling simultaneous calibration and imaging of a medium |
| JP4937457B2 (ja) | 2001-03-01 | 2012-05-23 | オリンパス株式会社 | 顕微鏡制御装置、顕微鏡制御システム、顕微鏡の制御方法、プログラム、及び記録媒体 |
| US6898451B2 (en) | 2001-03-21 | 2005-05-24 | Minformed, L.L.C. | Non-invasive blood analyte measuring system and method utilizing optical absorption |
| US6519355B2 (en) | 2001-03-28 | 2003-02-11 | Alan C. Nelson | Optical projection imaging system and method for automatically detecting cells having nuclear and cytoplasmic densitometric features associated with disease |
| US20040131348A1 (en) | 2001-03-30 | 2004-07-08 | Kohtaro Ohba | Real-time omnifocus microscope camera |
| US6884983B2 (en) | 2002-06-10 | 2005-04-26 | Palantyr Research, Llc | Imaging system for examining biological material |
| US7132636B1 (en) | 2001-07-06 | 2006-11-07 | Palantyr Research, Llc | Imaging system and methodology employing reciprocal space optical design |
| US7439478B2 (en) | 2001-07-06 | 2008-10-21 | Palantyr Research, Llc | Imaging system, methodology, and applications employing reciprocal space optical design having at least one pixel being scaled to about a size of a diffraction-limited spot defined by a microscopic optical system |
| US6664528B1 (en) | 2001-07-06 | 2003-12-16 | Palantyr Research, Llc | Imaging system and methodology employing reciprocal space optical design |
| US7105795B2 (en) | 2001-07-06 | 2006-09-12 | Palantyr Research, Llc | Imaging system, methodology, and applications employing reciprocal space optical design |
| US7248716B2 (en) | 2001-07-06 | 2007-07-24 | Palantyr Research, Llc | Imaging system, methodology, and applications employing reciprocal space optical design |
| US7863552B2 (en) | 2001-07-06 | 2011-01-04 | Palantyr Research Llc | Digital images and related methodologies |
| US7385168B2 (en) | 2001-07-06 | 2008-06-10 | Palantyr Research, Llc | Imaging system, methodology, and applications employing reciprocal space optical design |
| US7151246B2 (en) | 2001-07-06 | 2006-12-19 | Palantyr Research, Llc | Imaging system and methodology |
| US6872930B2 (en) | 2003-03-31 | 2005-03-29 | Palantyr Research, Llc | Imaging system and methodology employing reciprocal space optical design |
| US7288751B2 (en) | 2001-07-06 | 2007-10-30 | Palantyr Research, Llc | Imaging system, methodology, and applications employing reciprocal space optical design |
| US7338168B2 (en) | 2001-07-06 | 2008-03-04 | Palantyr Research, Llc | Particle analyzing system and methodology |
| JP4751535B2 (ja) | 2001-07-26 | 2011-08-17 | シスメックス株式会社 | 分画方法とそれを用いた血液分析装置 |
| ATE470859T1 (de) | 2001-09-06 | 2010-06-15 | Straus Holdings Inc | Schneller und empfindlicher nachweis von molekülen |
| US6989891B2 (en) | 2001-11-08 | 2006-01-24 | Optiscan Biomedical Corporation | Device and method for in vitro determination of analyte concentrations within body fluids |
| SE0104443D0 (sv) | 2001-12-28 | 2001-12-28 | Hemocue Ab | Analysis method and cuvette therefor |
| US7713474B2 (en) | 2002-01-15 | 2010-05-11 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Liquid permeable composition in dry reagent devices |
| US7133547B2 (en) | 2002-01-24 | 2006-11-07 | Tripath Imaging, Inc. | Method for quantitative video-microscopy and associated system and computer software program product |
| US7764821B2 (en) | 2002-02-14 | 2010-07-27 | Veridex, Llc | Methods and algorithms for cell enumeration in a low-cost cytometer |
| WO2003069421A2 (en) * | 2002-02-14 | 2003-08-21 | Immunivest Corporation | Methods and algorithms for cell enumeration in a low-cost cytometer |
| WO2003073365A1 (en) | 2002-02-22 | 2003-09-04 | Bacus Research Laboratories, Inc. | Focusable virtual microscopy apparatus and method |
| US20030161514A1 (en) | 2002-02-28 | 2003-08-28 | Curry Bo U. | Bi-directional scanner control system |
| DE10246777A1 (de) | 2002-03-21 | 2003-10-02 | Endress & Hauser Wetzer Gmbh | Vorrichtung zur Identifizierung eines Probennehmerbehälters |
| DE10217404A1 (de) | 2002-04-18 | 2003-11-06 | Leica Microsystems | Autofokusverfahren für ein Mikroskop und System zum Einstellen des Fokus für ein Mikroskop |
| US6658143B2 (en) | 2002-04-29 | 2003-12-02 | Amersham Biosciences Corp. | Ray-based image analysis for biological specimens |
| CA2495787A1 (en) | 2002-05-01 | 2003-11-13 | Chromos Molecular Systems, Inc. | Methods for delivering nucleic acid molecules into cells and assessment thereof |
| US7272252B2 (en) * | 2002-06-12 | 2007-09-18 | Clarient, Inc. | Automated system for combining bright field and fluorescent microscopy |
| JP2004061942A (ja) | 2002-07-30 | 2004-02-26 | Nikon Corp | 顕微鏡システム |
| US7177767B2 (en) | 2002-10-18 | 2007-02-13 | Abaxis, Inc. | Systems and methods for the detection of short and long samples |
| JP3904505B2 (ja) | 2002-10-22 | 2007-04-11 | 独立行政法人科学技術振興機構 | マラリア感染診断剤及びマラリア原虫染色剤 |
| DE10254685A1 (de) | 2002-11-22 | 2004-06-03 | Roche Diagnostics Gmbh | Messeinrichtung zur optischen Untersuchung eines Testelements |
| US7490085B2 (en) | 2002-12-18 | 2009-02-10 | Ge Medical Systems Global Technology Company, Llc | Computer-assisted data processing system and method incorporating automated learning |
| US20040132171A1 (en) | 2003-01-06 | 2004-07-08 | Peter Rule | Wearable device for measuring analyte concentration |
| US20040218804A1 (en) | 2003-01-31 | 2004-11-04 | Affleck Rhett L. | Image analysis system and method |
| JP3869810B2 (ja) | 2003-02-24 | 2007-01-17 | 株式会社堀場製作所 | マイクロ血球カウンタ |
| US6955872B2 (en) * | 2003-03-20 | 2005-10-18 | Coulter International Corp. | Dye compositions which provide enhanced differential fluorescence and light scatter characteristics |
| CN1795272B (zh) | 2003-03-27 | 2013-04-24 | 巴特朗医疗成像有限责任公司 | 快速识别病原体、细菌和异常细胞的系统和方法 |
| EP1616286A1 (en) | 2003-04-02 | 2006-01-18 | Amersham Biosciences UK Limited | Method of, and computer software for, classification of cells into subpopulations |
| US7329537B2 (en) | 2003-04-17 | 2008-02-12 | Nexcelom Bioscience, Llc | Micro-pattern embedded plastic optical film device for cell-based assays |
| US7706862B2 (en) | 2003-04-17 | 2010-04-27 | Research Foundation Of The City University Of New York | Detecting human cancer through spectral optical imaging using key water absorption wavelengths |
| US7324694B2 (en) | 2003-05-23 | 2008-01-29 | International Remote Imaging Systems, Inc. | Fluid sample analysis using class weights |
| US20040241677A1 (en) * | 2003-05-29 | 2004-12-02 | Lin Jeffrey S | Techniques for automated diagnosis of cell-borne anomalies with digital optical microscope |
| US7425421B2 (en) | 2003-06-26 | 2008-09-16 | Litron Laboratories, Ltd. | Method for the enumeration of micronucleated erythrocyte populations while distinguishing platelets and/or platelet-associated aggregates |
| AU2004273783A1 (en) | 2003-07-12 | 2005-03-31 | Accelr8 Technology Corporation | Sensitive and rapid biodetection |
| KR100573621B1 (ko) | 2003-07-18 | 2006-04-25 | 주식회사 디지탈바이오테크놀러지 | 세포 개체수 계수용 장치 및 그 제조방법 |
| EP1651947B1 (en) | 2003-07-19 | 2015-11-04 | NanoEnTek, Inc. | Device for counting micro particles |
| SE0302114D0 (sv) | 2003-07-21 | 2003-07-21 | Cellavision Ab | Sätt att urskilja en objektkontur |
| US20050089208A1 (en) | 2003-07-22 | 2005-04-28 | Rui-Tao Dong | System and method for generating digital images of a microscope slide |
| US7846738B2 (en) * | 2003-08-15 | 2010-12-07 | President And Fellows Of Harvard College | Study of polymer molecules and conformations with a nanopore |
| US7998435B2 (en) | 2003-09-19 | 2011-08-16 | Life Technologies Corporation | High density plate filler |
| US20060233671A1 (en) | 2003-09-19 | 2006-10-19 | Beard Nigel P | High density plate filler |
| US7697764B2 (en) | 2003-11-21 | 2010-04-13 | National University Corporation Kochi University | Similar pattern searching apparatus, method of similar pattern searching, program for similar pattern searching, and fractionation apparatus |
| US7030351B2 (en) | 2003-11-24 | 2006-04-18 | Mitutoyo Corporation | Systems and methods for rapidly automatically focusing a machine vision inspection system |
| JP5630936B2 (ja) | 2004-02-09 | 2014-11-26 | ラピッド パトゲン スクリーニング インコーポレイテッドＲａｐｉｄ Ｐａｔｈｏｇｅｎ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ｉｎｃ． | ヒトの体液中のターゲットを特定することにより疾病を高速に検出する方法 |
| US9176121B2 (en) | 2004-02-13 | 2015-11-03 | Roche Diagnostics Hematology, Inc. | Identification of blood elements using inverted microscopy |
| JP4417143B2 (ja) | 2004-03-11 | 2010-02-17 | シスメックス株式会社 | 試料分析装置、プログラムおよびそのプログラムを記録した記録媒体 |
| CA2559171A1 (en) | 2004-03-12 | 2005-09-29 | Biotrove, Inc. | Nanoliter array loading |
| AU2005228046B2 (en) * | 2004-03-29 | 2011-01-20 | Inguran, Llc | Use of a composition which regulates regulates oxidation/reduction reactions intracellularly and/or extracellularly in a staining or sorting process of spermatozoa |
| US7925070B2 (en) | 2004-03-30 | 2011-04-12 | Sysmex Corporation | Method for displaying virtual slide and terminal device for displaying virtual slide |
| JP4362532B2 (ja) | 2004-04-07 | 2009-11-11 | ウォードロウ パートナーズ エルピー | 生体液を分析する使い捨てチャンバ |
| JP2004247768A (ja) | 2004-05-31 | 2004-09-02 | Hitachi High-Tech Instruments Co Ltd | 電子部品装着装置 |
| EP1787156A1 (en) | 2004-06-11 | 2007-05-23 | Nicholas Etienne Ross | Automated diagnosis of malaria and other infections |
| DE602005023305D1 (de) | 2004-06-17 | 2010-10-14 | Koninkl Philips Electronics Nv | Autofocus-mechanismus für ein spektroskopisches system |
| GB0414201D0 (en) | 2004-06-24 | 2004-07-28 | Fujifilm Electronic Imaging | Method and apparatus for forming a multiple focus stack image |
| US8582924B2 (en) | 2004-06-30 | 2013-11-12 | Carl Zeiss Microimaging Gmbh | Data structure of an image storage and retrieval system |
| US7456377B2 (en) | 2004-08-31 | 2008-11-25 | Carl Zeiss Microimaging Ais, Inc. | System and method for creating magnified images of a microscope slide |
| US20060063185A1 (en) * | 2004-09-09 | 2006-03-23 | Edouard Vannier | Methods for detection of pathogens in red blood cells |
| US20060095241A1 (en) | 2004-10-29 | 2006-05-04 | Microsoft Corporation | Systems and methods that utilize machine learning algorithms to facilitate assembly of aids vaccine cocktails |
| EP1802959A1 (en) | 2004-10-11 | 2007-07-04 | Thermo Fisher Scientific Oy | Method for automatically detecting factors that disturb analysis by a photometer |
| US8045782B2 (en) | 2004-12-07 | 2011-10-25 | Ge Healthcare Niagara, Inc. | Method of, and apparatus and computer software for, implementing image analysis protocols |
| WO2006065898A1 (en) | 2004-12-13 | 2006-06-22 | Bayer Healthcare Llc | Transmission spectroscopy system for use in the determination of analytes in body fluid |
| EP2248590B1 (en) | 2004-12-13 | 2012-02-08 | Bayer Healthcare LLC | Self-contained test sensor |
| ZA200705737B (en) * | 2004-12-14 | 2008-10-29 | Univ Witwatersrand Jhb | A method for diagnosing and monitoring cellular reservoirs of disease |
| US20070103678A1 (en) | 2005-02-14 | 2007-05-10 | Sterling Bernhard B | Analyte detection system with interferent identification and correction |
| US20060223052A1 (en) | 2005-03-30 | 2006-10-05 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Technique for detecting microorganisms |
| EP1866637B1 (en) | 2005-04-01 | 2016-02-03 | pts Diagnostics | Body fluid testing component for analyte detection |
| US7580120B2 (en) | 2005-04-07 | 2009-08-25 | Sysmex Corporation | Blood analyzer, sample analyzer, and flow cytometer |
| JP2006301270A (ja) | 2005-04-20 | 2006-11-02 | Hitachi Kokusai Electric Inc | オートフォーカス装置及びオートフォーカス方法 |
| JP4667944B2 (ja) | 2005-04-20 | 2011-04-13 | シスメックス株式会社 | 画像作成装置 |
| FR2884920B1 (fr) | 2005-04-21 | 2007-08-10 | Horiba Abx Sa Sa | Dispositif et procede d'analyse multiparametrique d'elements microscopiques |
| US8263386B2 (en) | 2005-05-06 | 2012-09-11 | Samsung Electronics Co., Ltd. | Digital bio disc (DBD), DBD driver apparatus, and assay method using the same |
| AT501944B1 (de) | 2005-06-15 | 2007-06-15 | Tissuegnostics Gmbh | Verfahren zum segmentieren von leukozyten |
| US7417213B2 (en) | 2005-06-22 | 2008-08-26 | Tripath Imaging, Inc. | Apparatus and method for rapid microscopic image focusing having a movable objective |
| EP1904826B1 (en) | 2005-07-14 | 2019-02-20 | Battelle Memorial Institute | Systems and methods for biological and chemical detection |
| US20070031056A1 (en) | 2005-08-02 | 2007-02-08 | Perz Cynthia B | System for and method of focusing in automated microscope systems |
| JP2007040814A (ja) | 2005-08-03 | 2007-02-15 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 吸光度測定用センサ及び吸光度測定方法 |
| US7776553B2 (en) | 2005-09-16 | 2010-08-17 | Presidents And Fellows Of Harvard College | Screening assays and methods |
| US7609369B2 (en) | 2005-09-24 | 2009-10-27 | Beckman Coulter, Inc. | Methods of detection of iron deficiency and hemochromatosis |
| US7796797B2 (en) | 2005-09-28 | 2010-09-14 | Sysmex Corporation | Apparatus for obtaining an image of a blood cell and method for obtaining an image of a blood cell |
| US7599893B2 (en) | 2005-10-13 | 2009-10-06 | Aureon Laboratories, Inc. | Methods and systems for feature selection in machine learning based on feature contribution and model fitness |
| GB2431537B (en) | 2005-10-20 | 2011-05-04 | Amersham Biosciences Uk Ltd | Method of processing an image |
| US7344890B2 (en) | 2005-11-09 | 2008-03-18 | Beckman Coulter, Inc. | Method for discriminating platelets from red blood cells |
| US7933435B2 (en) | 2005-11-21 | 2011-04-26 | Vala Sciences, Inc. | System, method, and kit for processing a magnified image of biological material to identify components of a biological object |
| EP1954715A1 (en) | 2005-12-01 | 2008-08-13 | Evotec Technologies GmbH | A generic assay for monitoring endocytosis |
| SE529536C2 (sv) | 2006-01-25 | 2007-09-04 | Hemocue Ab | Metod för säkerställande av en provbehållares kvalitet |
| GB2435925A (en) | 2006-03-09 | 2007-09-12 | Cytokinetics Inc | Cellular predictive models for toxicities |
| SE530244C2 (sv) | 2006-05-05 | 2008-04-08 | Hemocue Ab | Förfarande och system för kvantitativ hemoglobinbestämning |
| JP5040191B2 (ja) | 2006-06-29 | 2012-10-03 | 富士通株式会社 | マイクロインジェクション装置及び自動焦点調整方法 |
| AT503862B1 (de) | 2006-07-05 | 2010-11-15 | Arc Austrian Res Centers Gmbh | Pathogen-identifizierung anhand eines 16s oder 18s-rrna mikroarray |
| DE102006031177A1 (de) | 2006-07-06 | 2008-01-10 | Carl Zeiss Microimaging Gmbh | Verfahren und Vorrichtung zur Erzeugung eines Bildes einer dünnen Schicht eines Objekts |
| SE530750C2 (sv) | 2006-07-19 | 2008-09-02 | Hemocue Ab | En mätapparat, en metod och ett datorprogram |
| US8067245B2 (en) | 2006-07-24 | 2011-11-29 | Medica Corporation | Automated microscope for blood cell analysis |
| US7542137B2 (en) | 2006-07-24 | 2009-06-02 | University Of Ottawa | Pathogen detection using coherent anti-stokes Raman scattering microscopy |
| US8428331B2 (en) | 2006-08-07 | 2013-04-23 | Northeastern University | Phase subtraction cell counting method |
| US8110026B2 (en) * | 2006-10-06 | 2012-02-07 | The Trustees Of Princeton University | Functional graphene-polymer nanocomposites for gas barrier applications |
| WO2008063135A1 (en) | 2006-11-24 | 2008-05-29 | Agency For Science, Technology And Research | Apparatus for processing a sample in a liquid droplet and method of using the same |
| KR100844350B1 (ko) | 2007-01-09 | 2008-07-07 | 주식회사 디지탈바이오테크놀러지 | 부유 혼합 미세입자 중 특정 미세입자를 광학적인 방법으로계수하기 위한 미세채널 칩 및 이를 이용한 미세입자 계수방법 |
| CN101669143B (zh) | 2007-01-11 | 2012-06-20 | Mvm知识产权有限公司 | 利用自动图像分析测试机能微循环几何结构和速度分布 |
| US7738094B2 (en) | 2007-01-26 | 2010-06-15 | Becton, Dickinson And Company | Method, system, and compositions for cell counting and analysis |
| CA2677123A1 (en) | 2007-02-02 | 2008-08-07 | Canadian Blood Services | Method of detecting bacterial contamination using dynamic light scattering |
| CN101657840B (zh) | 2007-02-05 | 2013-07-31 | 西门子医疗保健诊断公司 | 用于以显微术进行细胞分析的系统和方法 |
| AU2008236678B2 (en) * | 2007-04-05 | 2013-09-12 | Genera Biosystems Limited | Compositions and methods of detection |
| JP5105945B2 (ja) | 2007-04-19 | 2012-12-26 | キヤノン株式会社 | 雲台装置及びその制御方法 |
| DE102007021387A1 (de) | 2007-05-04 | 2008-11-06 | Eads Deutschland Gmbh | Detektionsvorrichtung zur Detektion von biologischen Mikropartikeln wie Bakterien, Viren, Sporen, Pollen oder biologische Toxine, sowie Detektionsverfahren |
| US20080305514A1 (en) | 2007-06-06 | 2008-12-11 | Alcon Research, Ltd. | Method for detecting microbes |
| KR100900511B1 (ko) | 2007-07-23 | 2009-06-03 | 주식회사 디지탈바이오테크놀러지 | 유체분석용 칩 |
| EP2171420A1 (en) | 2007-07-31 | 2010-04-07 | Micronics, Inc. | Sanitary swab collection system, microfluidic assay device, and methods for diagnostic assays |
| US7936913B2 (en) | 2007-08-07 | 2011-05-03 | Nextslide Imaging Llc | Network image review in clinical hematology |
| US8878923B2 (en) | 2007-08-23 | 2014-11-04 | General Electric Company | System and method for enhanced predictive autofocusing |
| CN101387599B (zh) | 2007-09-13 | 2011-01-26 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 一种区分粒子群落的方法及粒子分析仪 |
| CN101861347A (zh) | 2007-09-21 | 2010-10-13 | 陶氏环球技术公司 | 用于弹性体的预聚物和聚合物 |
| US8331627B2 (en) | 2007-09-26 | 2012-12-11 | Agency For Science, Technology And Research | Method and system for generating an entirely well-focused image of a large three-dimensional scene |
| JP2009109198A (ja) | 2007-10-26 | 2009-05-21 | Arkray Inc | 分析装置 |
| KR101009447B1 (ko) | 2007-11-12 | 2011-01-19 | 바디텍메드 주식회사 | 체액 샘플링, 전처리 및 투입장치 및 방법 |
| US8125512B2 (en) | 2007-11-16 | 2012-02-28 | Samsung Electronics Co., Ltd. | System and method for moving object selection in a handheld image capture device |
| CN101952762B (zh) | 2008-01-02 | 2012-11-28 | 加利福尼亚大学董事会 | 高数值孔径远程显微镜设备 |
| US20090185734A1 (en) | 2008-01-18 | 2009-07-23 | Hemocue Ab | Apparatus and method for analysis of particles in a liquid sample |
| JP4558047B2 (ja) | 2008-01-23 | 2010-10-06 | オリンパス株式会社 | 顕微鏡システム、画像生成方法、及びプログラム |
| US7929121B2 (en) | 2008-03-21 | 2011-04-19 | Abbott Point Of Care, Inc. | Method and apparatus for detecting and counting platelets individually and in aggregate clumps |
| ES2464572T3 (es) | 2008-03-21 | 2014-06-03 | Abbott Point Of Care, Inc. | Método y aparato para determinar los índices de células sanguíneas rojas en una muestra de sangre utilizando la pigmentación intrínseca de la hemoglobina contenida en las células sanguíneas rojas |
| JP2011516833A (ja) | 2008-03-21 | 2011-05-26 | アボット・ポイント・オブ・ケア | 蛍光消光及び／又は蛍光退色を用いて個々の細胞又は粒状物質を分析するための方法及び装置 |
| CA2718992C (en) | 2008-03-21 | 2013-04-30 | Abbott Point Of Care, Inc. | Method and apparatus for determining the hematocrit of a blood sample utilizing the intrinsic pigmentation of hemoglobin contained within the red blood cells |
| CN102016595B (zh) | 2008-03-27 | 2014-08-06 | 哈佛学院院长等 | 三维微流体装置 |
| US8883491B2 (en) | 2008-04-09 | 2014-11-11 | Nexcelom Bioscience Llc | Systems and methods for counting cells and biomolecules |
| US9017610B2 (en) | 2008-04-25 | 2015-04-28 | Roche Diagnostics Hematology, Inc. | Method of determining a complete blood count and a white blood cell differential count |
| US8379944B2 (en) | 2008-04-29 | 2013-02-19 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Identification, classification and counting of targets of interest in multispectral image data |
| CN102076841B (zh) | 2008-06-27 | 2015-04-22 | 古河电气工业株式会社 | 细胞的识别和分选方法及其装置 |
| DE102008030874A1 (de) | 2008-06-30 | 2010-01-07 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Verfahren und Vorrichtung zum Ermitteln einer Kontur und eines Mittelpunktes eines Objekts |
| KR20100007809A (ko) | 2008-07-14 | 2010-01-22 | 삼성전자주식회사 | 미세유동장치, 이를 이용한 시료분석방법 및 희석비율측정방법 |
| US8385971B2 (en) | 2008-08-19 | 2013-02-26 | Digimarc Corporation | Methods and systems for content processing |
| JP5492207B2 (ja) | 2008-08-27 | 2014-05-14 | ライフ テクノロジーズ コーポレーション | 生物学的サンプルの処理装置および処理方法 |
| CA2737116C (en) | 2008-09-16 | 2019-01-15 | Historx, Inc. | Reproducible quantification of biomarker expression |
| US8280134B2 (en) | 2008-09-22 | 2012-10-02 | Cambridge Research & Instrumentation, Inc. | Multi-spectral imaging including at least one common stain |
| JP5380973B2 (ja) | 2008-09-25 | 2014-01-08 | 株式会社ニコン | 画像処理装置及び画像処理プログラム |
| WO2010044870A1 (en) | 2008-10-14 | 2010-04-22 | The Burnham Institute For Medical Research | Automated scanning cytometry using chromatic aberration for multiplanar image acquisition |
| US8842900B2 (en) | 2008-10-28 | 2014-09-23 | Sysmex Corporation | Specimen processing system and blood cell image classifying apparatus |
| CN102282467B (zh) | 2008-11-13 | 2014-08-13 | 贝克曼考尔特公司 | 对血红蛋白测量的颗粒干扰的校正的方法 |
| CN101403650B (zh) | 2008-11-21 | 2010-06-23 | 北京理工大学 | 差动共焦组合超长焦距测量方法与装置 |
| US9041792B2 (en) | 2008-11-27 | 2015-05-26 | Koninklijke Philips N.V. | Generation of a multicolour image of an unstained biological specimen |
| US20100157086A1 (en) | 2008-12-15 | 2010-06-24 | Illumina, Inc | Dynamic autofocus method and system for assay imager |
| GB0900526D0 (en) | 2009-01-14 | 2009-02-11 | Perkinelmer Ltd | Fluorescence microscopy methods and apparatus |
| JP5426181B2 (ja) | 2009-01-21 | 2014-02-26 | シスメックス株式会社 | 検体処理システム、細胞画像分類装置、及び検体処理方法 |
| EP2216095A1 (en) | 2009-01-27 | 2010-08-11 | Koninklijke Philips Electronics N.V. | Microfluidic device for full blood count |
| US9778188B2 (en) | 2009-03-11 | 2017-10-03 | Industrial Technology Research Institute | Apparatus and method for detection and discrimination molecular object |
| WO2010116341A1 (en) | 2009-04-09 | 2010-10-14 | Koninklijke Philips Electronics N.V. | Preparation of thin layers of a fluid containing cells for analysis |
| JP5518184B2 (ja) | 2009-04-27 | 2014-06-11 | コンスティテューション・メディカル・インコーポレイテッド | 体液を分析するためのシステムおよび方法 |
| JP5424712B2 (ja) | 2009-05-21 | 2014-02-26 | キヤノン株式会社 | 画像処理装置及びその制御方法とプログラム |
| US20100300563A1 (en) | 2009-05-27 | 2010-12-02 | John Ramunas | Modular device and method for moving fluids to and from a sample delivery element |
| US8891851B2 (en) | 2009-07-15 | 2014-11-18 | Glenn F. Spaulding | Home healthcare management system and hardware |
| US8481303B2 (en) | 2009-10-12 | 2013-07-09 | Corning Incorporated | Microfluidic device for cell culture |
| US8320655B2 (en) | 2009-10-16 | 2012-11-27 | General Electric Company | Process and system for analyzing the expression of biomarkers in cells |
| CA2842721C (en) | 2009-10-19 | 2016-03-29 | Ventana Medical Systems, Inc. | Imaging system and techniques |
| JP5394887B2 (ja) | 2009-10-29 | 2014-01-22 | オリンパス株式会社 | 顕微鏡装置および顕微鏡観察方法 |
| US20120058504A1 (en) | 2009-10-30 | 2012-03-08 | Simon Fraser University | Methods and apparatus for dielectrophoretic shuttling and measurement of single cells or other particles in microfluidic chips |
| CN102053051A (zh) | 2009-10-30 | 2011-05-11 | 西门子公司 | 一种体液分析系统和用于体液分析的图像处理设备、方法 |
| US9072772B2 (en) | 2009-11-05 | 2015-07-07 | University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education | Methods of treating disorders associated with protein aggregation |
| US9119573B2 (en) | 2009-12-10 | 2015-09-01 | Siemens Aktiengesellschaft | Stent marker detection using a learning based classifier in medical imaging |
| US8748186B2 (en) | 2009-12-22 | 2014-06-10 | Abbott Laboratories | Method for performing a blood count and determining the morphology of a blood smear |
| WO2011076413A1 (en) | 2009-12-22 | 2011-06-30 | Universität Heidelberg | Means and methods for detecting plasmodia and for screening or diagnosing drug resistance or altered drug responsiveness of plasmodia |
| US8237786B2 (en) | 2009-12-23 | 2012-08-07 | Applied Precision, Inc. | System and method for dense-stochastic-sampling imaging |
| EP2519820B1 (en) | 2009-12-31 | 2013-11-06 | Abbott Point Of Care, Inc. | Method and apparatus for determining mean cell volume of red blood cells |
| US8906308B2 (en) | 2010-01-15 | 2014-12-09 | Abbott Laboratories | Method for determining volume and hemoglobin content of individual red blood cells |
| CN102822657B (zh) | 2010-01-20 | 2016-01-20 | 耐克思乐生物科学有限责任公司 | 细胞计数和样品室及其装配方法 |
| WO2011094204A2 (en) * | 2010-01-26 | 2011-08-04 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Methods of fabricating large-area, semiconducting nanoperforated graphene materials |
| KR101851117B1 (ko) | 2010-01-29 | 2018-04-23 | 마이크로닉스 인코포레이티드. | 샘플-투-앤서 마이크로유체 카트리지 |
| JP5490568B2 (ja) | 2010-02-26 | 2014-05-14 | オリンパス株式会社 | 顕微鏡システム、標本観察方法およびプログラム |
| SG174650A1 (en) | 2010-03-31 | 2011-10-28 | Agency Science Tech & Res | A method of monitoring parasite development in blood |
| US8396269B2 (en) | 2010-04-08 | 2013-03-12 | Digital Pathco LLC | Image quality assessment including comparison of overlapped margins |
| CN101831633A (zh) * | 2010-04-21 | 2010-09-15 | 清华大学 | 一种石墨烯与非晶碳复合薄膜的制备方法 |
| US8040517B1 (en) | 2010-04-30 | 2011-10-18 | General Electric Company | Arc flash detection system and method |
| EP2585578A4 (en) | 2010-05-08 | 2014-01-08 | Univ Twente | EASY AND AFFORDABLE METHOD FOR IMMUNOPHENOTYPIZING ON SAMPLE PREPARATION WITH A MICROFLUIDIC CHIP WITH IMAGE CYTOMETRY |
| WO2012000102A1 (en) | 2010-06-30 | 2012-01-05 | The Governors Of The University Of Alberta | Apparatus and method for microscope-based label-free microflutdic cytometry |
| WO2012006565A2 (en) | 2010-07-08 | 2012-01-12 | Life Technologies Corporation | Systems and methods for assigning attributes to a plurality of samples |
| US20150032671A9 (en) | 2010-07-23 | 2015-01-29 | General Electric Company | Systems and methods for selecting and analyzing particles in a biological tissue |
| US10139613B2 (en) | 2010-08-20 | 2018-11-27 | Sakura Finetek U.S.A., Inc. | Digital microscope and method of sensing an image of a tissue sample |
| US8933927B2 (en) | 2010-09-02 | 2015-01-13 | Samsung Electronics Co., Ltd. | Display system with image conversion mechanism and method of operation thereof |
| US8351676B2 (en) | 2010-10-12 | 2013-01-08 | Sony Corporation | Digital image analysis using multi-step analysis |
| US8542274B2 (en) | 2010-10-18 | 2013-09-24 | Olympus America Inc. | Wide field microscopic imaging system and method |
| USD655421S1 (en) | 2010-11-03 | 2012-03-06 | Life Technologies Corporation | Cell counter |
| US9050595B2 (en) | 2010-12-03 | 2015-06-09 | Abbott Point Of Care Inc. | Assay devices with integrated sample dilution and dilution verification and methods of using same |
| US9522396B2 (en) | 2010-12-29 | 2016-12-20 | S.D. Sight Diagnostics Ltd. | Apparatus and method for automatic detection of pathogens |
| JP5331828B2 (ja) | 2011-01-14 | 2013-10-30 | 株式会社日立ハイテクノロジーズ | 荷電粒子線装置 |
| AU2012228063A1 (en) | 2011-03-14 | 2013-10-24 | The University Of Warwick | Histology analysis |
| US20120257037A1 (en) | 2011-04-07 | 2012-10-11 | Valerica Raicu | High speed microscope with two-stage scanning for detection of rarities in samples |
| US9064301B2 (en) | 2011-04-14 | 2015-06-23 | Abbott Point Of Care, Inc. | Method and apparatus for compressing imaging data of whole blood sample analyses |
| ES2890413T3 (es) | 2011-04-15 | 2022-01-19 | Roche Diagnostics Hematology Inc | Sistema y procedimiento para determinar el volumen celular medio de una muestra de sangre |
| TWI493505B (zh) | 2011-06-20 | 2015-07-21 | Mstar Semiconductor Inc | 影像處理方法以及影像處理裝置 |
| US10426356B2 (en) | 2011-07-09 | 2019-10-01 | Gauss Surgical, Inc. | Method for estimating a quantity of a blood component in a fluid receiver and corresponding error |
| US8792693B2 (en) | 2011-07-09 | 2014-07-29 | Gauss Surgical | System and method for estimating extracorporeal blood volume in a physical sample |
| BR112014001238A2 (pt) | 2011-07-19 | 2017-06-13 | Ovizio Imaging Systems N V | método para a detecção de células cancerosas e/ou classificação de células numa amostra de células de líquido; sistema para a detecção de células e/ou a classificação de células cancerosas numa amostra de células; método de atualização e/ou melhoria de uma base de dados que compreende os limiares ligados á informação holográfica; e base de dados de objetos |
| WO2013016039A1 (en) | 2011-07-22 | 2013-01-31 | Constitution Medical, Inc. | Identifying and measuring reticulocytes |
| JP5959814B2 (ja) | 2011-08-08 | 2016-08-02 | ソニー株式会社 | 血液分析装置および血液分析方法 |
| EP2758765B1 (en) | 2011-09-22 | 2020-08-12 | FOCE Technology International B.V. | Optical platelet counter method |
| US9046473B2 (en) | 2011-09-28 | 2015-06-02 | Abbott Point Of Care, Inc. | Method and apparatus for detecting the presence of intraerythrocytic parasites |
| US9526431B2 (en) | 2011-10-19 | 2016-12-27 | Biovotion Ag | System for noninvasive optical measurements of physiological properties in tissue |
| TWI431264B (zh) | 2011-10-20 | 2014-03-21 | Lite On It Corp | 光學偵測裝置及光學量測系統 |
| US8885912B2 (en) | 2011-11-03 | 2014-11-11 | General Electric Company | Generate percentage of positive cells for biomarkers by normalizing and autothresholding the image intensity produced by immunohistochemistry technique |
| US10640807B2 (en) | 2011-12-29 | 2020-05-05 | S.D. Sight Diagnostics Ltd | Methods and systems for detecting a pathogen in a biological sample |
| CN107064079A (zh) | 2011-12-30 | 2017-08-18 | 艾博特健康公司 | 用于识别全血样品中的血小板的方法和设备 |
| US9322767B2 (en) | 2012-04-17 | 2016-04-26 | i-calQ, LLC | Device for performing a blood, cell, and/or pathogen count and methods for use thereof |
| WO2013170051A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-14 | Advanced Animal Diagnostics, Inc. | Sample cartridge and sample stage |
| US8873827B2 (en) | 2012-06-29 | 2014-10-28 | General Electric Company | Determination of spatial proximity between features of interest in biological tissue |
| US8744165B2 (en) | 2012-07-19 | 2014-06-03 | Sony Corporation | Method and apparatus for stain separation in digital pathology images |
| JP5333635B1 (ja) | 2012-08-23 | 2013-11-06 | 富士ゼロックス株式会社 | 画像処理装置、プログラム及び画像処理システム |
| JP5464244B2 (ja) | 2012-08-24 | 2014-04-09 | 富士ゼロックス株式会社 | 画像処理装置、プログラム及び画像処理システム |
| EP2731051A1 (en) | 2012-11-07 | 2014-05-14 | bioMérieux | Bio-imaging method |
| US9400414B2 (en) | 2012-11-19 | 2016-07-26 | Raytheon Company | Methods and apparatus for imaging without retro-reflection using a tilted image plane and structured relay optic |
| WO2014084255A1 (ja) | 2012-11-28 | 2014-06-05 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 細胞観察装置、細胞観察方法及びそのプログラム |
| WO2014159692A1 (en) | 2013-03-13 | 2014-10-02 | Tahoe Institute for Rural Health Research, LLC | Portable blood count monitor |
| WO2014159620A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-10-02 | Samuels Mark A | Encoded calibration device and systems and methods thereof |
| WO2014188405A1 (en) | 2013-05-23 | 2014-11-27 | Parasight Ltd. | Method and system for imaging a cell sample |
| IL227276A0 (en) | 2013-07-01 | 2014-03-06 | Parasight Ltd | A method and system for obtaining a monolayer of cells, for use specifically for diagnosis |
| WO2015029032A1 (en) | 2013-08-26 | 2015-03-05 | Parasight Ltd. | Digital microscopy systems, methods and computer program products |
| JP6194791B2 (ja) | 2013-12-27 | 2017-09-13 | 富士ゼロックス株式会社 | 画像処理装置及びプログラム |
| US10482595B2 (en) | 2014-08-27 | 2019-11-19 | S.D. Sight Diagnostics Ltd. | System and method for calculating focus variation for a digital microscope |
| JP6352750B2 (ja) | 2014-09-26 | 2018-07-04 | シスメックス株式会社 | 血液分析装置および血液分析方法 |
| US10724069B2 (en) | 2014-09-29 | 2020-07-28 | Chipcare Corporation | Methods and devices for cell detection |
| US20170328924A1 (en) | 2014-11-26 | 2017-11-16 | Ronald Jones | Automated microscopic cell analysis |
| US11478789B2 (en) | 2014-11-26 | 2022-10-25 | Medica Corporation | Automated microscopic cell analysis |
| US10061972B2 (en) | 2015-05-28 | 2018-08-28 | Tokitae Llc | Image analysis systems and related methods |
| JP6461739B2 (ja) | 2015-07-28 | 2019-01-30 | 富士フイルム株式会社 | 画像処理装置及び内視鏡システム並びに画像処理装置の作動方法 |
| DE102015113557B4 (de) | 2015-08-17 | 2019-05-02 | Gerresheimer Regensburg Gmbh | Probenvorrichtung mit Referenzmarkierung |
| EP3859425B1 (en) | 2015-09-17 | 2024-04-17 | S.D. Sight Diagnostics Ltd. | Methods and apparatus for detecting an entity in a bodily sample |
| JP6559555B2 (ja) | 2015-12-02 | 2019-08-14 | 株式会社日立エルジーデータストレージ | 光計測方法および装置 |
| US11733150B2 (en) | 2016-03-30 | 2023-08-22 | S.D. Sight Diagnostics Ltd. | Distinguishing between blood sample components |
| EP3455610B1 (en) | 2016-05-11 | 2023-01-04 | S.D. Sight Diagnostics Ltd. | Sample carrier for optical measurements |
| EP3455626A1 (en) | 2016-05-11 | 2019-03-20 | S.D. Sight Diagnostics Ltd. | Performing optical measurements on a sample |
| US10281386B2 (en) | 2016-05-11 | 2019-05-07 | Bonraybio Co., Ltd. | Automated testing apparatus |
| JP7315458B2 (ja) | 2016-07-08 | 2023-07-26 | メディカ・コーポレーション | 自動顕微鏡血球分析 |
| US20190054466A1 (en) | 2017-08-17 | 2019-02-21 | Abbott Point Of Care Inc. | Single-use test device for imaging blood cells |
| JP6505792B2 (ja) | 2017-08-29 | 2019-04-24 | 富士フイルム株式会社 | 内視鏡用光源装置及び内視鏡システム |
| US11921272B2 (en) | 2017-11-14 | 2024-03-05 | S.D. Sight Diagnostics Ltd. | Sample carrier for optical measurements |
| WO2019102277A1 (en) | 2017-11-23 | 2019-05-31 | Sigtuple Technologies Private Limited | Method and system for determining hematological parameters in a peripheral blood smear |
| WO2019198094A1 (en) | 2018-04-09 | 2019-10-17 | Sigtuple Technologies Private Limited | Method and system for estimating total count of blood cells in a blood smear |
| JP2019195304A (ja) | 2018-05-10 | 2019-11-14 | 学校法人順天堂 | 画像解析方法、装置、コンピュータプログラム、及び深層学習アルゴリズムの生成方法 |
| KR20220084167A (ko) | 2019-10-22 | 2022-06-21 | 에스.디. 사이트 다이그노틱스 엘티디 | 광학 측정들에서의 오류들의 고려 |
-
2012
- 2012-12-27 US US14/369,251 patent/US10640807B2/en active Active
- 2012-12-27 WO PCT/IL2012/050556 patent/WO2013098821A1/en active Application Filing
- 2012-12-27 CN CN201280070778.9A patent/CN104169719B/zh active Active
- 2012-12-27 CN CN201710065911.6A patent/CN106840812B/zh active Active
- 2012-12-27 EP EP12861524.2A patent/EP2798350B1/en active Active
- 2012-12-27 BR BR112014016072-4A patent/BR112014016072B1/pt active IP Right Grant
-
2014
- 2014-07-25 ZA ZA2014/05506A patent/ZA201405506B/en unknown
-
2019
- 2019-12-06 US US16/705,941 patent/US11584950B2/en active Active
-
2023
- 2023-01-23 US US18/100,181 patent/US20230159982A1/en active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20150037806A1 (en) | 2015-02-05 |
| US20230159982A1 (en) | 2023-05-25 |
| EP2798350A1 (en) | 2014-11-05 |
| EP2798350A4 (en) | 2015-09-02 |
| CN106840812A (zh) | 2017-06-13 |
| CN104169719A (zh) | 2014-11-26 |
| WO2013098821A1 (en) | 2013-07-04 |
| US20200181680A1 (en) | 2020-06-11 |
| BR112014016072A2 (pt) | 2017-06-13 |
| US11584950B2 (en) | 2023-02-21 |
| US10640807B2 (en) | 2020-05-05 |
| CN106840812B (zh) | 2019-12-17 |
| BR112014016072A8 (pt) | 2017-07-04 |
| EP2798350B1 (en) | 2021-07-28 |
| CN104169719B (zh) | 2017-03-08 |
| ZA201405506B (en) | 2016-01-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11584950B2 (en) | Methods and systems for detecting entities in a biological sample | |
| AU2022200112B2 (en) | Methods and apparatus for detecting an entity in a bodily sample | |
| US11151716B2 (en) | Methods and systems for assessing cell morphology | |
| EP3436864B1 (en) | Image processing device for identifying blood parasites | |
| US20230145084A1 (en) | Artificial immunohistochemical image systems and methods | |
| WO2017061112A1 (ja) | 画像処理方法および画像処理装置 | |
| JP2021507419A (ja) | 膜特徴に基づいて組織画像内で細胞を分類するためのシステム及び方法 | |
| BR122020017765B1 (pt) | Métodos e aparelho para detectar uma entidade em uma amostra corporal | |
| BR112018005099B1 (pt) | Métodos e aparelho para detectar uma entidade em uma amostra corporal | |
| JP2011045329A (ja) | 微生物検出方法及び微生物検出装置 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| B25G | Requested change of headquarter approved |
Owner name: SIGHT DIAGNOSTICS LTD. (IL) |
|
| B06F | Objections, documents and/or translations needed after an examination request according [chapter 6.6 patent gazette] | ||
| B06U | Preliminary requirement: requests with searches performed by other patent offices: procedure suspended [chapter 6.21 patent gazette] | ||
| B07A | Application suspended after technical examination (opinion) [chapter 7.1 patent gazette] | ||
| B09A | Decision: intention to grant [chapter 9.1 patent gazette] | ||
| B16A | Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette] |
Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 27/12/2012, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS. |