AT389996B - Verfahren zur herstellung von bis-indolverbindungen enthaltenden stabilen waesserigen arzneimittelpraeparaten - Google Patents

Description

Nr. 389996

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung neuer Arzneimittelpräparate, die eine Verbindung mit bis-Indolgenist oder deren therapeutisch akzeptierbares Salz in wäßrigem Milieu in stabil«' Form enthalten. Die Arzneimittelpräparate enthalten die Verbindungen mit bis-Indolgerüst in Form von neuen Metallkomplexen in wäßriger Lösung und weisen demzufolge eine wesentlich bessere Stabilität auf, als die bis-Indolverbindungen S selbst in wäßriger Lösung enthaltenden Präparate.

Die ersten bekannten Verbindungen mit bis-Indolgerüst waren in der Natur vorkommende Alkaloide. Von ihnen wurde zuerst das Vinblastin (VLB) aus der Pflanze Vinca rosea L. isoliert (US-PS 3 097 137). Darauf folgten einige weitere natürliche Verbindungen, so die Isolierung des Leurosin (Leu) und des Vinkristin (VCR) (US-PS 3 370 057 bzw. 3 205 220), dann die Herstellung von weiteren, synthetischen Derivaten. Die Forschung 10 wurde dadurch angeregt, daß innerhalb dieser Verbindungsfamilie Verbindungen mit hervorragender Anti-Geschwulst-(Tumor-)-Wiikung gefunden wurden.

Die Rolle der bekannten bis-Indolalkaloide in der Geschwulsttherapie berücksichtigend können zwei vorteilhafte Gruppen der Verbindungen unter der allgemeinen Formel (I)

15 20 25 30 35 zusammengefaßt werden, ln der Formel steht R1 für eine Methylgruppe, R2 für ein Wasserstoffatom, R^ für eine Hydroxylgruppe, oder R2 und R^ bilden in Verbindung miteinander eine Valenzbindung; 40 R^ steht für eine Hydroxyl- oder Acetoxygruppe; oder steht für eine Methoxy- oder Aminogruppe; oder R* steht für eine Formylgruppe, 45 R2 für ein Wasserstoffatom, R3 für eine Hydroxylgruppe; oder R2 und R^ haben miteinander verbunden die Bedeutung einer Epoxygrupppe, R^ steht für eine Acetoxygruppe oder ein Wasserstoffatom, 50 R^ bedeutet Methoxygruppe.

Von den unter der allgemeinen Formel (I) zusammengefaßten, als R* eine Methylgruppe enthaltenden Verbindungen besitzt in bezug auf die therapeutische Wirkung das Vinblastin (VLB) herausragende Bedeutung; in seiner Formel steht R2 für ein Wasserstoffatom, 55 · R^ für eine Hydroxylgruppe, R^ für eine Acetoxygruppe, R^ für eine Methoxygruppe, und an der Stelle 20' befindet sich die Hydroxylgruppe in Beta-, die Äthylgruppe -2-

Nr. 389996 in Alpha-Raumstellung; weiterhin das Leurosidin, in dessen Formel die Substituenten die obige Bedeutung besitzen, an der Stelle 20' ist jedoch die Hydroxylgruppe in Alpha- und die Äthylgruppe in Beta-Raumstellung; das I5',20'-Anhydrovinblastin, in dessen Formel R*, R^, R^ die im Zusammenhang mit dem Vinblastin angegebene Bedeutung besitzen, und R2 und R^ in Verbindung miteinander eine Valenzbindung bilden; und das 5 Vindezin, in dessen Formel R2 ein Wasserstoffatom, R^ eine Hydroxylgruppe, R* eine Hydroxylgruppe, R^ eine Aminogruppe bedeutet, und an der Stelle 20’ befindet sich die Hydroxylgruppe in Beta-, die 10 Äthylgruppe in Alpha-Raumstellung. Von den unter der allgemeinen Formel (I) zusammengefaßten, als R1 eine Formylgruppe enthaltenden bis-Indolalkaloiden sind vom Standpunkt der Anti-Geschwulst-Wirkung aus die folgenden Verbindungen von Bedeutung: Vinkristin (VCR), in dessen Formel R2 für ein Wasserstoffatom, R für eine Hydroxylgruppe, 15 R^ für eine Acetoxygruppe, R^ für eine Methoxygruppe steht, und an der Stelle 20' befindet sich die Hydroxylgruppe in Beta-, die Äthylgruppe in Alpha-Raumstellung; N-Desacetyl-N-formyl-leurozin, in dessen Formel Λ *2 R und RJ m Verbindung mitemander eine Alpha-Alpha-Epoxygruppe bilden, 20 für eine Acetoxygruppe, R^ für eine Methoxygruppe steht, und an der Stelle 20' befindet sich die Äthylgruppe in Beta-Raumstellung; 17-Desacetoxy-vinkristin, in dessen Formel R*, R2, R^ und R^ die im Zusammenhang mit dem Vinkristin erwähnte Bedeutung besitzen, R^ für ein Wasserstoffatom steht, und an der Stelle 20' befindet sich die Hydroxylgruppe in Beta-, die 25 Äthylgruppe in Alpha-Raumstellung; und 15', 20'-Anhydrovinkristin, in dessen Formel R und R zusammen eine Valenzbindung bedeuten, R^ für eine Acetoxygruppe und R^ für eine Methoxygruppe steht. 30 Die bis-Indolalkaloide mit Anti-Geschwulst-Wirkung werden Geschwulstkranken intravenös verabreicht, deshalb wäre es zweckmäßig, die Verbindungen in Form von Lösungen (Injektionen oder Infusionen) zu formulieren und auf den Markt zu bringen. Dazu bestand - bis in die letzte Zeit - wegen der nicht ausreichenden Stabilität der Lösungen der bis-Indolalkaloide keine Möglichkeit. Die bisher in die klinische Praxis eingeführten drei bis-Indolalkaloide mit Anti-Geschwulst-Wirkung, das Vinkristin, Vinblastin und Vindesin, kamen in Form 35 von Pulverampullen, die ein aus ihren Salzen - in erster Linie aus ihren Sulfaten - hergestelltes Lyophilisatum enthalten, bzw. in Form von zweiampulligen Präparaten, welche getrennt die Lyophilisatum- und Lösungsmittelkomponente enthalten, auf den Markt. Diese Lösung ist einesteils wegen der Kostspieligkeit des Lyophilisierens, andererseits infolge der während der klinischen Verwendung bei der Auflösung auftretenden Probleme nicht entsprechend. 40 Ein zur Formulierung von Vincaalkaloiden ausgearbeitetes, verbessertes Verfahren beschreibt die BE-PS 897 280. Nach der Beschreibung werden Vincaalkaloide enthaltende wäßrige Arzneimittelpräparate herstellt, indem ein therapeutisch akzeptierbares Vinca-Dimer-Salz ein Polyol, ein den pH-Wert der Lösung zwischen 3,5 und 5,0 haltender Acetatpuffer und ein die Vermehrung von Mikroorganismen hemmender Zuschlagstoff miteinander vermischt werden. Über die Stabilität wird - ohne konkrete Meßergebnisse - ausgesagt, daß das durch das dort 45 beschriebene Verfahren hergestellte Vinkristinsulfatpräparat einer Lagerungstemperatur von 5 °C 9 Monate lang 94 - 99 % seiner ursprünglichen Wirkstoffkonzentration bewahrt Für die inzwischen auf den Markt gebrachten, durch ein solches Verfahren hergestellten Vinkristin-Injektionen wird auch weiterhin eine Lagerung bei niedriger Temperatur (5 °C) vorgeschrieben und nur eine Haltbarkeit von einem Jahr garantiert 50 Ziel der Erfindung ist die Herstellung von Lösungen der bis-Indolalkaloide, deren Stabilität die Stabilität der bisher bekannten Lösungen bei weitem übertrifft und auch bei Zimmertemperatur eine Lagerung über längere Zeit ermöglicht Während unserer Versuche wurde gefunden, daß die bis-lndolalkaliode bzw. ihre Salze zur Komplexbildung geeignet sind, sie bilden mit mehrwertigen Metallen Metallkomplexe, die in wäßrigem Milieu bei einem 55 pH-Wert von 3,0 - 6,0 eine sehr gute Stabilität aufweisen.

Dementsprechend ist Gegenstand der Erfindung ein Verfahren zur Herstellung von bis-Indolalkaloide enthaltenden stabilen wäßrigen Arzneimittelpräparaten, indem ein bis-Indolalkaloid oder sein therapeutisch -3-

Nr. 389996 akzeptierbares Salz in wäßrigem Milieu bei einem pH-Wert zwischen 3,0 und 6,0 mit einem zur Komplexbildung geeigneten, mit einem organischen oder anorganischen Anion gebildeten wasserlöslichen Salz eines nicht toxischen zwei- oder mehrwertigen Metalls umgesetzt wird, gegebenenfalls in Gegenwart von üblichen pharmazeutischen Trägerstoffen und/oder anderen Hilfsstoffen oder vor deren Zugabe.

Die hiebei gebildeten Metallkomplexe der bis-Indolverbindungen sind neu. In der Literatur wurden bisher nur der N-2'-Bor-Komplex des 20’S-Desoxyvinblastin [Chemical Abstracts, 22.: 140214s (1983)] bzw. ein mit Tubulin gebildeter Komplex bestimmter bis-Indolalkaloide vom Vinblastin-Typ (BE-PS 854 053) erwähnt. Das Tubulin ist ein Protein mit großem Molekülgewicht, welches - dem erwähnten Patent zufolge - bei einem pH-Wert zwischen 6,6 und 7,6 mit den untersuchten bis-Indolalkaloiden Komplexe bilden. Die Stabilität der Komplexe in wäßriger Lösung wurde in keiner Veröffentlichung erwähnt.

Im erfindungsgemäßen Verfahren können die z. B. mit gesättigten einbasischen Karbonsäuren (z. B. Ameisensäure, Essigsäure), mit Oxysäuren mit 6 Kohlenstoffatomen (z. B. Gluconsäure, Levulinsäure, Lactobionsäure), mit Disacchariden (z. B. Saccharose) oder mit anorganischen Säuren (z. B. Schwefelsäure) gebildeten Salze von beispielsweise Zink, Magnesium, Kalzium, Kobalt, Eisen oder Nickel zur Komplexbildung verwendet werden. Besonders vorteilhaft sind die mit Zink, Magnesium oder Kalzium gebildeten Komplexe, wobei die Metalle vorzugsweise in Form von Gluconat oder Acetat zum Reaktionsgemisch gegeben werden.

Die Komplexbildung erfolgt bei einem pH-Wert zwischen 3,0 und 6,0, und der pH wird durch ein geeignetes Puffersystem, vorzugsweise durch einen den pH-Wert in den entsprechenden Grenzen haltenden Acetatpuffer (z. B. durch einNatriumacelat/Essigsäure-System), stabilisiert.

Werden durch das erfindungsgemäße Verfahren direkt für Injektionen verwendbare Lösungen hergestellt, ist in diesen die Konzentration der bis-Indolalkaloide von der wirksamen Dosis und vom therapeutischen Spektrum der Wirkstoffe abhängig. Die Konzentration der bis-Indolalkaloide beträgt im allgemeinen 0,01 · 10 mg/ml, vorzugsweise 0,1 - 10 mg/ml, günstigstenfalls 0,5 - 1,0 mg/ml. Da die bis-Indolalkaloide, die in der oben gegebenen allgemeinen Formel (I) als R* eine Formylgruppe enthalten, im allgemeinen in niedrigerer Dosis wirken, ist es zweckmäßig, von diesen Lösungen mit kleinerer Wirkstoffkonzentration herzustellen, während im Falle der in größerer Dosis wirkenden, als R* eine Methylgruppe enthaltenden Verbindungen, z. B. dem Vinblastin, die Wirkstoff konzentration etwas größer ist.

Bei Durchführen der Komplexbildung unter den obigen Bedingungen bilden sich - polarographischen Messungen zufolge - dominant bis-Indolalkaloid-Metallkomplexe mit einem Molverhältnis von 1:1. Deshalb wird das Metallsalz, auf das bis-Indolalkaloid gerechnet, mindestens in moläquivalenter Menge verwendet Im Interesse dessen, daß garantiert die volle bis-Indolalkaloid-Menge in Komplexe überführt wird, ist es zweckmäßig, mit einem kleinen Überschuß an Metallsalz zu arbeiten. Auf 1 mg Vinkristinsulfat gerechnet ist die Ca -Masse z. B. vorteilhaft 41 - 100 μg, günstigstenfalls etwa 50 μg, die Mg-Ionenmasse vorzugsweise 24 - 55 pg, o. günstigstenfalls etwa 26 - 28 μg, die Zn -Ionenmasse dagegen vorzugsweise 66 - 140 μg, günstigstenfalls 70 pg.

In den Injektionslösungen werden als Isotonierungsmittel im allgemeinen Zucker oder Zuckeralkohole, wie Glucose, Mannit oder Maltose, verwendet. Die Menge des Isotonierungsmittels wird in jedem Fall osmometrisch festgelegt.

Als organische Hilfslösungsmittel werden z. B. Äthanol oder Glykoläther mit einem Molekülgewicht von 200 - 600 (Polyalkylenglykole) verwendet, ersteres vorzugsweise in einer Konzentration von 4 - 8 %, letztere vorzugsweise in einer Konzentration von 5 - 15 %.

Die stabilen, gebrauchsfertigen Injektionslösungen können noch bekannte Konservierungsmittel, wie z. B. den Benzylalkohol, Nipagin A, Nipagin M,Nipasol (Propyl-paraben) oder deren Gemisch (Nipacombin), in in der Pharmazie bekannten und verwendeten Konzentrationen enthalten.

Als Antioxydans kann z. B. Natrium- oder Kaliumpirosulfit in einer Konzentration von 0,02 - 0,15, vorzugsweise 0,05 %, verwendet werden.

Der pH der durch das erfindungsgemäße Verfahren helgestellten stabilen Lösungen wird zwischen 3,0 und 6,0, vorzugsweise auf 3,5 - 5,0, eingestellt, im Falle von Vinkristinsulfat vorzugsweise auf einen Wert von 4,5, was in Einklang mit den im USP XX vorgeschriebenen Grenzen ist. In Gegenwart der verwendeten Metallsalze kann der pH gut stabilisiert weiden.

Nach einer vorteilhaften Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens werden in destilliertem Wasser von Injektionsqualität die zur Komplexbildung notwendige Menge an Metallsalzen und gegebenenfalls weitere übliche Zuschlagstoffe, z. B. Isotonierungsmittel, Hilfslösungsmittel, Puffer, Konservierungsmittel und Antioxydanten, aufgelöst, dann wird zur erhaltenen Lösung die wäßrige Lösung des entsprechenden bis-Indolalkaloids gegeben. Die Lösung wird danach mit destilliertem Wasser von Injektionsqualität auf das Endvolumen ergänzt, homogenisiert, sterilem Filtern unterworfen und in inerter Gasatmosphäre in sterile Gläser gefüllt.

Polarographische Untersuchungen

Zum Nachweis der Wechselwirkung zwischen Vinkristin und den Metallionen (Zink, Kalzium und Magnesium) diente eine polarographische Untersuchungsreihe. Es wurde eine Probenreihe hergestellt, in der jede -4-

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Probe neben einer variablen Menge Vinkristinsulfat (Vinkristin-Konzentration zwischen 10"^ und 10'^ Mol/dm^) Zinkionen in einer konstanten Konzentration von IO"4 Mol/dnr* enthielt Aus den Proben, deren pH-Wert durch ein Essigsäure-Natriumacetat-Puffersystem auf 5,5 eingestellt wurde, wurden wäßrige Lösungen mit einer

Acetation-Konzentration von 0,15 Mol/dm^ hergestellt. Die Meßergebnisse sind der Figur 1 zu entnehmen. Die in der Figur verwendeten 2feichen sind die folgenden: "A"-Kurve: Polarogramm einer wäßrigen Zinkacetat-Lösung mit einer Zinkionen-Konzentration von 10-4 Mol/dm3 "B"-Kurve: Polarogramm einer IO'4 Mol/dnr* Zinkionen und 5 x 10"4 Mol/dm^ Vinkristin enthaltender wäßrigen Lösung "C "-Kurve: Polarogramm einer 10'4 Mol/dnr* Zinkionen und IO-4 Mol/dm^ Vinkristin enthaltenden wäßrigen Lösung.

Aus der Figur ist erkennbar, daß bei Vinkristin-Überschuß auf dem Polarogramm überhaupt keine Zink-Stufe erscheint. Eine auf die Erscheinung einer Zink-Stufe hinweisende Oszillation größeren Ausmaßes wurde unmittelbar vor dem Abscheiden der Grundlösung bei einem Vinkristin-Zink-Verhältnis von etwa 1 : 1 wahrgenomnen. Bei der weiteren stufenweisen Verringerung der Konzentration des Liganden wurde auch die Zink-Stufe sichtbar, und bei einer Vinkristin-Konzentration von 2,5 x 10"^ und darunter war ihre Form und das Potential der Halbstufe gleich dem des freien Zinks.

Die oben genannten Fakten beweisen eindeutig, daß das Zinkion mit dem Vinkristin auch schon bei einem Konzentrationsverhältnis von 1:1 einen Komplex großer Stabilität bildet.

Die Wechselwirkung des Vinkristin mit den Kalzium- und Magnesiumionen wurde auf indirekte Weise durch die Untersuchung der Wirkung dieser letzteren Ionen auf das polarographische Verhalten des Vinkristin-Zink-Systems nachgewiesen.

Bei einem Vinkristin-Zink-Verhältnis von 1: 1 (IO-4 Mol/dm^), bei dem die Zink-Stufe gerade auf dem Polarogramm erscheint, wurden in stufenweise ansteigender Menge Kalzium (Figur 2) bzw. Magnesium (Figur 3) zum System gegeben. Die in den Figuren verwendeten Zeichen sind die folgenden:

Figur 2: "A”-Kurve: Polarogramm einer 10"4 Mol/dm^ Zinkionen und IO'4 Mol/dm^ Vinkristin enthaltenden wäßrigen Lösung "B"-Kurve: Polarogramm einer 10'4 Mol/dm^ Zinkionen und 5 Mol/dm^ Kalziumchlorid enthaltenden wäßrigen Lösung "C"-Kurve: Polarogramm einer in Gegenwart von 5 Mol/dm^ Kalziumchlorid, 10"4 Mol/dm^ Zinkionen und 10"4 Mol/dm^ Vinkristin enthaltenden wäßrigen Lösung

Figur 3: "A"-Kurve: Polarogramm einer 10‘4 Mol/dm^ Zinkionen und 10‘4 Mol/dm^ Vinkristin enthaltenden wäßrigen Lösung "BM-Kurve: Polarogramm einer IO*4 Mol/dm^ Zinkionen und 5 Mol/dm^ Magnesiumchlorid enthaltenden wäßrigen Lösung "C"-Kurve: Polarogramm einer in Gegenwart von 5 Mol/dm·^ Magnesiumchlorid, IO"4 Mol/dm^ Zinkionen und IO"4 Mol/dm^ Vinkristin enthaltenden wäßrigen Lösung.

Sowohl im Fall von Kalzium als auch im Fall von Magnesium wurde gefunden, daß sich mit Erhöhen der Konzentration der erwähnten Metalle die charakteristische Stufe des freien Zinks stufenweise herausbildet, und auf den in Gegenwart von 5 Mol/dm^ Kalzium bzw. Magnesium auch Vinkristin enthaltenden und nur Zink enthaltenden, aber unter sonst gleichen Bedingungen aufgenommenen Polarogrammen die Zink-Stufe in Hinsicht auf Höhe und Halbstufenpotential übereinstimmt. Es sei bemerkt, daß das Zink vom Kalzium und Magnesium völlig aus dem Vinkristin-Komplex verdrängt wurde. Auf Grund des zum völligen Verdrängen des Zinkes notwendigen Kalzium- bzw. Magnesiumüberschusses (50000-fach) kann gesagt werden, daß die Stabilität des Zink-Vinkristin-Komplexes um etwa 4,5 - 5 Größenordnungen größer ist als bei den mit Vinkristin gebildeten Komplexen des Kalzium bzw. Magnesium.

Potentiometrische Untersuchungen

Zum Zwecke der direkten Bestimmung der Stabilitätskonstanten des Kalzium-Vinkristin-Komplexes wurden potentiometrische Untersuchungen durchgeführt. Für die Messungen wurde eine spezielle (DD-Patent Nr. 146 101) kalziumselektive Membranelektrode verwendet. Die referente Elektrode war eine Ag/AgCl-Elektrode des Typs Radelkis OP-0820P. Die Messungen wurden mit einer computergesteuerten automatischen Titriereinrichtung durchgeführt. Die Vinkristin-

Konzentration wurde zwischen 5 x IO"4 und 2 x 10"^ Mol/dm^, aber innerhalb der einzelnen Meßreihen auf einem konstanten Wert gehalten. Als Titriermittel wurde Kalziumchloridlösung einer Konzentration von -5-

Nr. 389996 0,1 Mol/dm^ verwendet, deren Faktor durch komplexometrische Titration kontrolliert wurde. Die Messungen wurden bei einer Temperatur von 25 °C in einer Lösung mit einem pH von 5,5 durchgeführt, die Ionenstärke wurde im Interesse des Haltens des Aktivitätskoeffizienten auf einem konstanten Wert auf einen Wert von 1,00 eingestellt.

Ein typisches Titrationskurvenpaar wird in Figur 4 gezeigt. Die in der Figur verwendeten Zeichen sind die folgenden:

Kurve 1: Kalibrationskurve der Elektrode

Kurve 2: Titrationskurve der 10'^ mol/dm^ Vinkristin enthaltenden Lösung p[Ca] = -log[Ca2+]

Hieraus ist ersichtlich, daß die Konzentration der freien Kalziumionen in Gegenwart von Vinkristin signifikant sinkt, die Komplexbildung zwischen den Kalziumionen und dem Vinkristin anzeigend. Auf den Messungen basierend wurde n (d. h. die Zahl der auf ein Vinkristinmolekül kommenden gebundenen Kalziumionen) ausgerechnet, dieser Wert ergab maximal 1,0. Mit dieser Bekannten wurde die Stäbilitätskonstante des Komplexes ausgerechnet, wofür in einer Lösung mit einer Ionenstärke von 1 Mol der Wert logß = 3,27 ± 0,1 erhalten wurde. In Figur 5 sind die gemessenen und die auf der obigen Stabilitätskonstanten basierend errechneten n-Werte aufgezeigt. Die errechneten Werte wurden durch eine fortlaufende Linie verbunden. Die gute Übereinstimmung der errechneten und gemessenen Werte bestätigt die Richtigkeit des für die Stabilitätskonstante erhaltenen Wertes.

Die pH-Abhängigkeit der erwähnten Komplexbildungsreaktionen wurde mit Deprotonierungs-Gleichgewichtsmessungen des Calvin-Typs untersucht, es wurde das polarographische Verhalten des Zn-VCR-Systems untersucht, und die potentiometrischen Ca2+-Ionen-Koordinationsuntersuchungen wurden in Lösungen mit verschiedenem pH durchgeführt. Bei den Untersuchungen zeigte sich im pH-Bereich von 3,5 - 5,5 keine Abhängigkeit vom pH. Das bestätigt, daß die genannten Ionen (Zn2+, Ca2+, Mg2*) von den Sauerstoffatomen des VCR-Donors umgeben werden, welche im untersuchten pH-Bereich nicht protoniert werden.

Die Metallkomplexe können in fester Form abgetrennt und isoliert werden.

Stabilitätsuntersuchungen

Die Stabilität der durch das erfindungsgemäße Verfahren hergestellten vinkristinsulfathaltigen Lösungen wurde mit hochdruckflüssigkeitschromatographischen (HPLQ Methoden kontrolliert. HPLC-Methode zur Bestimmung des Vinkristin-Gehalts: Säule: Nucleosil 5 μ Cg, 250 x 4,6 mm (Chrompack)

Eluens: Gemisch aus Methanol, Wasser und Diäthylamin

Wellenlänge: 297 nm

Strömungsgeschwindigkeit: 2ml/min

Die Bestimmung des Wirkstoffgehaltes fand mit einem äußeren Standard statt, d. h. als Vergleich wurde die reine wäßrige Lösung von Vinkristinsulfat des gleichen Ursprungs und gleicher Konzentration verwendet wie die zu untersuchende Lösung (Injektion) von Vinkristinsulfat.

Beschleunigte Stabilitätsuntersuchungen

In der folgenden Tabelle 1 werden die Ergebnisse der beschleunigten Stabilitätsuntersuchungen zusammengefaßt. Dabei wurde die Stabilität des nach Beispiel 1 hergestellten erfindungsgemäßen Präparates (Lösung 1) mit der Stabilität des nach Beispiel 1 der BE-PS 897 280 hergestellten (Lösung 3) und des unter dem Namen "Oncovin" (Eli Lilly and Co.) gehandelten einampulligen Injektions-Vinkristinpräparates (Lösung 2) verglichen. Die Lösungen werden unter völlig gleichen Bedingungen, 5 bis 10 Tage lang bei 7 °C mit Wärme behandelt.

Tabelle 1

Nummer der Lösung Ausgangs- Wirkstoff-gehalt (%) 75 °C, 5 Tage Wiikstoff-gehalt (%) Farbe* 75 °C, 10 Tage Wiikstoff- gehalt(%) Farbe* 1 100 82,6 2S 69,6 3γ 2 100 67,9 4S 433 5Y 3 100 80,6 2S 59,6 4γ x Die Farben wurden nach den Angaben des Ph JIg.VI. bezeichnet.

Aus den Angaben der Tabelle 1 ist ersichtlich, daß das erfindungsgemäß hergestellte, den Ca-Komplex des -6-

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Vinkristin enthaltende stabilisierte Injektionspräparat während der beschleunigten Stabilitätsuntersuchungen eine wesentlich bessere Stabilität zeigte als die Lösungen nach der genannten belgischen Patentschrift oder die im Handel befindlichen, das Vinkristin nicht in Form von Metallkomplexen enthaltenden Lösungen.

Langanhaltende Stabilitätsuntersuchungen a) Von der nach dem Beispiel 1 der vorliegenden Anmeldung hergestellten Vinkristinsulfat-Lösung mit einer Wirkstoffkonzentration von 1 mg/ml-wurden je 5 ml in 3 Ampullen gefüllt. Bei ständiger Lagerung der Lösungen bei 5° C erhielt man die in Tabelle 2/A aufgeführten Ergebnisse. Aus den Angaben der Tabelle ist ersichtlich, daß während einer zwölfmonatigen Lagerung praktisch keine Zersetzung stattgefunden hat.

Tabelle 2/A Wirkstoffmenge (%)

Ausgangs-_3 Monate_6 Monate_9 Monate_12 Monate_ 100,8 100,9 100,2 100,5 98,7

Im wesentlichen mit der obigen Methode, aber anstelle von Ampullen Phiolen verwendend, erhielt man die folgenden Ergebnisse (Lagerungskühlschrank, 2-8 °Q:

Tabelle 2/B <%)

Ausgangs- 3 Mon. 6 Mon. 9 Mon. 12 Mon. VCR-Gehalt (%) 97,5 96,9 95,4 96,3 95,1 Alkaloide mit ähnlicher Struktur (%) 1,9 2,5 3,0 2,8 3,1 b) Von der nach Beispiel 1 hergestellten Vinkristinsulfat-Lösung mit einer Wirkstoffkonzentration von 1 mg/ml wurde je 1 ml in Gläser gefüllt 100 Gläser wurden bei 5 °C, 100 Gläser bei Zimmertemperatur gelagert. Die erhaltenen Durchschnittsergebnisse sind in Tabelle 3 zusammengefaßt. lateikl

Wirkstoffmenge (%)

Ausgangs- 1 Monat 2 Monate 3 Monate 5 °C Zimmert_5 °C Zimmert._5 °C Zimmert 100 98,0 98,4 100,4 96,4 100,4 98,4 4 Monate 5 Monate 6 Monate 7 Monate 5 °C Zimmert 5°C Zimmert 5 °C Zimmert. 5°C Zimmert 100,4 97,6 98,7 102,8 99,4 100,3 1003 983 8 Monate 10 Monate 12 Monate 15 Monate 5°C Zimmert 5 °C Zimmert 5 °C Zimmert. 5 °C Zimmert 1002 96,7 99,2 94,3 98,3 91,7 98,1 85,5

Aus den Angaben ist ersichtlich, daß die Lösungen nach der Lagerung bei 5 °C nicht zerfielen und der VCR-Gehalt bei Lagerung auf Zimmertemperatur ein wenig sinkL

Aus den Stabilitätsangäben geht eindeutig hervor, daß die erfindungsgemäß hergestellten die bis-Indolalkaloide in komplexer Form enthaltenden Lösungen eine ausgezeichnete Stabilität aufweisen. Demzufolge bleibt bei 5 °C -7-

Nr. 389996 auch über einen Zeitraum von 2 Jahren eine verwendungsfähige Qualität erhalten. Außerdem ist es bei der Injektionenherstellung von Vorteil, daß die Sterilisation auch mit einer Wärmebehandlung von 100 °C mit Sicherheit, ohne die Gefahr des Zerfalls, durchführbar ist.

Die Erfindung wird mit den folgenden Beispielen veranschaulicht 5

Beispiel 1

Vinkristinsulfat 0,1 g Propyl-paraoxybenzoat 0,02 g 10 Essigsäure (98 %) 0,025 g Kalziumgluconat. H20 0,05 g Natriumacetat. 3 H20 0,06 g Methyl-paraoxybenzoat 0,13 g Äthanol (96 %) 5 g 15 Mannit Destilliertes Wasser von 10 g Injektionsqualität auf 100 ml

In einer aliquoten Menge frisch ausgekochten und mit Stickstoffgas gesättigten destillierten Wassers von 20 Injektionsqualität werden Mannit, Kalziumgluconat und Natriumacetat aufgelöst, und man gibt die vorgeschriebene Menge Essigsäure dazu. Die Nipaester (Propyl-paraoxybenzoat und Methyl-paraoxybenzoat) werden in 96 %igem Äthanol aufgelöst, dann wird die erhaltene Lösung mit der auf die obige Weise hergestellten Grundlösung vermischt. Endlich wird das in einem kleinen Teil destilliertem Wasser gesondert aufgelöste Vinkristinsulfat dazugegeben. Das Volumen der Lösung wird sodann mit destilliertem Wasser von 25 Injektionsqualität auf das Endvolumen ergänzt, dann wird die Lösung homogenisiert, sterilem Filtern unterworfen und in unter inerter Gasatmosphäre sterilisierte Gläser gefüllt

Beispiel 2 30 Vinkristinsulfat 0,1 g Propyl-paraoxybenzoat 0,005 g Magnesiumgluconat 0,045 g Essigsäure (98 %) 0,025 g Natriumacetat. 3 H20 0,0256 g 35 Methyl-paraoxybenzoat 0,05 g Äthanol (96 %) 5 g Mannit 5 g Destilliertes Wasser von Injektionsqualität auf 100 ml 40

Bei der Herstellung der Lösungen wird nach der Beschreibung des Beispiels 1 vorgegangen. Beispiel 3 45 Vinkristinsulfat 0,1 g

Essigsäure (98 %) 0,025 g

Zinkgluconat 0,049 g

Natriumacetat. 3 H20 0,06 g

Benzylalkohol 0,9 g 50 Äthanol (96 %) 5 g

Mannit 5 g

Destilliertes Wasser von

Injektionsqualität auf 100 ml 55 In einem aliquoten Teil frisch ausgekochten, mit Stickstoffgas gesättigten destillierten Wassers von Injektionsqualität werden Mannit und Zinkgluconat aufgelöst dann werden zur Lösung die Essigsäure und das Gemisch aus Äthanol und Benzylalkohol gegeben. Nun wird das in einem kleinen Teil des destillierten Wassers gesondert aufgelöste Vinkristinsulfat hinzugegeben. Das Volumen der Lösung wird mit destilliertem Wasser von Injektionsqualität auf das Endvolumen ergänzt, dann wird die Lösung homogenisiert und nach sterilem Filtern in 60 unter inerter Gasatmosphäre sterilisierte Gläser gefüllt. -8-

Nr. 389996

Beispiel 4 Vinkristinsulfat Prppyl-paraoxybenzoat K Kalziumacetat. H^O Essigsäure (98 %) Natriumacetat. 3 H^O Methyl-paraoxybenzoat Äthanol (96 %) Mannit Destilliertes Wasser von Injektionsqualität 0,1 g 0,005 g 0,0222 g 0,025 g 0,0256 g 0,05 g 5 g 5 g auf 100 ml

Bei der Herstellung der Lösung wird nach der Beschreibung von Beispiel 1 verfahren.

Beispiel 5

Vinkristinsulfat Essigsäure (98 %) Natriumacetat. 3 H2O Kalziumgluconat Benzylalkohol Sorbit Poly(äthylenglycol) 400 Destilliertes Wasser von Injektionsqualität 0,1 g 0,025 g 0,026 g 0,056 g 0,9 g 5 g 10 g auf 100 ml

In einem aliquoten Teil frisch ausgekochten und mit Stickstoffgas gesättigten destillierten Wassers von Injektionsqualität werden nacheinander das Sorbit und Kalziumgluconat aufgelöst. Dann werden die Essigsäure und das Gemisch von Benzylalkohol und Poly(äthylenglycol) hinzugegeben. Danach wird das in einem kleinen Teil des destillierten Wassers gesondert gelöste Vinkristinsulfat eingemessen und das Volumen der Lösung mit destilliertem Wasser von Injekdonsqualität auf das Endvolumen ergänzt. Nach Homogenisieren und sterilem Filtern wird die Lösung, in unter inerter Gasatmosphäre sterilisierte Gläser gefüllt.

Beispiel 6

Vinblastinsulfat Propyl-paraoxybenzoat Kalziumacetat. H2O Essigsäure (98 %) Natriumacetat. 3 H2O Methyl-paraoxybenzoat Äthanol (96 %) Mannit Destilliertes Wasser von Injektionsqualität 0,1 g 0,005 g 0,023 g 0,049 g 0,049 g 0,05 g 5 g 5 g auf 100 ml

Bei der Herstellung der Lösung wird nach der Beschreibung von Beispiel 1 vorgegangen.

Beispiel 7 Vinkristinsulfat 0,1 g Propyl-paraoxybenzoat 0,02 g Essigsäure (98 %) 0,025 g Zinksulfat 0,033 g Natriumacetat. 3 H2O 0,06 g Methyl-paraoxybenzoat 0,13 g Äthanol (96 %) 5 g Mannit 10 g 9-

Claims (6)

1. Nr. 389996 Destilliertes Wasser von Injektionsqualität auf 100 ml Bei der Herstellung der Lösung wird nach der Beschreibung von Beispiel 1 verfahren. PATENTANSPRÜCHE 1. Verfahren zur Herstellung von bis-Indolverbindungen enthaltenden stabilen wässerigen Arzneimittelpräparaten, dadurch gekennzeichnet, daß eine bis-Indolverbindung oder deren therapeutisch akzeptables Salz in wässerigem Milieu bei einem pH-Wert von 3,0 bis 6,0 mit einem nicht toxischen, in Wasser löslichen Salz eines zwei- oder mehrwertigen, zur Komplexbildung geeigneten Metalles umgesetzt wird, gegebenenfalls in Gegenwart oder vor Zugabe von in der Arzneimittelherstellung gebräuchlichen Trägerstoffen und/oder anderen Hilfsstoffen.
2. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das nicht toxische zwei- oder mehrwertige Metall in einer Menge verwendet wird, daß das Molverhältnis Metall: bis-Indolverbindung 1:1 ist.
3. 3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß als bis-Indolverbindung eine Verbindung der allgemeinen Formel

   oder deren therapeutisch akzeptierbares Salz verwendet wird, worin in Formel (I) R* für eine Methylgruppe, für ein Wasserstoffatom, R für eine Hydroxylgruppe stehen; oder Λ * R und R zusammen eine zusätzliche Valenzbindung bedeuten, R4 für eine Hydroxyl- oder Acetoxygruppe steht, und eine Methoxy- oder Aminogruppe darstellt; -10- Nr. 389996 oder die Bedeutung von R1 ist eine Formylgruppe, ist ein Wasserstoffatom, R^ steht für eine Hydroxylgruppe; 5 oder 9 o R und R bedeuten zusammen eme Epoxygruppe, R4 bedeutet ein Wasserstoffatom oder eine Acetoxygruppe und eine Methoxygruppe.
4. 4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-3, dadurch gekennzeichnet, daß als bis-Indolverbindung der allgemeinen Formel (I) Vinkristin oder Vinblastin oder eines ihrer therapeutisch akzeptierbaren Salze verwendet wird.
5. 5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 - 4, dadurch gekennzeichnet, daß als zur Komplexbildung 15 geeignetes, nicht toxisches zwei- oder mehrwertiges Metall Zink, Kalzium oder Magnesium verwendet wird.
6. 6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-5, dadurch gekennzeichnet, daß das Zink, Kalzium oder Magnesium in Form seines Acetat- oder Gluconatsalzes verwendet wird. 20 Hiezu 5 Blatt Zeichnungen -11-