LU86115A1 - Metallkomplexe der bis-indolverbindungen und diese enthaltende arneimittelpraeparate - Google Patents

Description

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METALLKOMPLEXE DER BIS - INDOL VERBINDUNGEN UND DIESE ENTHALTENDE ARZNEIMITTELPRAPARATE

Die Erfindung betrifft neue Arzneimittelpräparate, 5 die eine Verbindung mit bis-Indolgerüst oder deren therapeutisch akzeptierbares Salz in wässrigem Milieu in stabiler Form enthalten. Gegenstand der Erfindung sind Arzneimittelpräparate, welche die Verbindungen mit bis-Indolgerüst in Form von neuen Metallkomplexen 10 in wässriger Lösung enthalten und demzufolge eine wesentlich bessere Stabilität aufweisen als die an sich bis-Indolverbindungen in wässriger Lösung enthaltenden Präparate. Gegenstand der Erfindung sind weiterhin die neuen Metallkomplexe bzw. die Herstellung dieser 15 und von diese enthaltenden Arzneimittelpräparaten.

Die ersten bekannten Verbindungen mit bis-Indol-‘ gerüst waren in der Natur vorkommende Alkaloide. Von ihnen wurde zuerst das Vinblastin (VLB) aus der Pflanze Vinca rosea L. isoliert (US Patentschrift Nr.

20 3 097 137). Darauf folgten einige weitere natürliche

Verbindungen, so die Isolierung des Leurosin (Leu) und des Vinkristin (VOR) (US . Patentschriften Nr.

3 370 057 bzw. 3 205 220), dann die Herstellung von weiteren, synthetischen Derivaten. Eie Forschung wurde 25 dadurch angeregt, daß innerhalb dieser Verbindungsfamilie Verbindungen mit hervorragender Anti-Geschwulst--Wirkung gefunden wurden.

Die Rolle der bekannten bis-Indolalkaloide in der Geschwulsttherapie berücksichtigend können zwei vorteil-30 hafte Gruppen der Verbindungen unter der allgemeinen Formel (I)

A 3566-67 / MR

\ λ * 1 - 2 -j» g· _5' £ 2Τ Jg* 5 ,<k^N4sS^>fr:ft2 12 h àr-rTù l ή 3 \ 9 6V Hj21 |) 10 T il- \ J1 Ji » ii?02 5 cH3d^^Nri^R4 (|) R1 COR5 15 zusammengefaßt werden. In der Formel steht R·*" für eine Methylgruppe,

^ O

R für ein Vasserstoffatom, 3 R für eine Hydroxylgruppe, - L· R für eine Hydroxyl- oder Acetoxygruppe ? 20 oder

Ο Q

R und RJ bilden in Verbindung miteinander eine Valenzbindung,

K

R steht für eine Methoxy- oder Aminogruppe; oder 25 R^ steht für eine Formylgruppe, ? R für ein Wasserstoffatom, 3 R^ für eine Hydroxylgruppe; oder 2 3 R und R haben miteinander verbunden die Bedeutung 30 einer Epoxygruppe, R^ steht für eine Acetoxygruppe oder ein Wasserstoff atom, 5 R bedeutet Methoxygruppe.

4 ? · 1 - 3 -

Von den unter der allgemeinen Formel (I) zusammengefaßten, als R^ eine Methylgruppe enthaltenden Verbindungen besitzt in Bezug auf die therapeutische Wirkung das Vinblastin (VLB) herausragende Bedeutung; 5 in seiner Formel steht 2 R für ein Wasserstoffatom, 3 R für eine Hydroxylgruppe, h R für eine Acetoxygruppe, £ R für eine Methoxygruppe, und an der Stelle 20’ be- t! 10 findet sich die Hydroxylgruppe in ß-, die Athyl- gruppe in x-Raumstellung; weiterhin das Leurozidin, in dessen Formel die Substituenten die obige Bedeutung besitzen, an der Stelle

H

20’ ist jedoch die Hydroxylgruppe in cc- und die Athyl-15 gruppe in ß-RaUmstellung; das 15’,20’-Anhydrovinblastin, in dessen Formel 1 U k , .

: R , R , R die im Zusammenhang mit dem Vinblastin an gegebene Bedeutung besitzen, und 2 3 R und R in Verbindung miteinander eine Valenzbindung 20 bilden; und das Vindezin, in dessen Formel 2 R ein Wasserstoffatom, 3 R eine Hydroxylgruppe, 4 R eine Hydroxylgruppe, 25 5 R eine Aminogruppe bedeutet, und an der Stelle 20’ tr befindet sich die Hydroxylgruppe in ß-, die Athyl-gruppe in öc-Raumstellung.

Von den . unter der allgemeinen Formel (I) zusammengefaßten, als R eine Formylgruppe enthaltenden 30 bis-Indolalkaloiden sind vom Standpunkt der Anti-Ge-schwulst-Wirkung aus die folgenden Verbindungen von Bedeutung:

Vinkristin (VOR), in dessen Formel i ‘ 1 - 4 - i 2 r R für ein Wasserstoffatom, 3 R für eine Hydroxylgruppe, - 4 R für eine Acetoxygruppe , κ R für eine Methoxygruppe steht, und an der Stelle 5 20’ befindet sich die Hydroxylgruppe in ß-, die tl

Athylgruppe in dc-Raumstellung; N-Desacety1-N-formyl-leurozin, in dessen Formel 2 3 R und R in Verbindung miteinander eine öc-öc.-Epoxy- gruppe bilden, 4 10 R für eine Acetoxygruppe, R·5 für eine Methoxygruppe steht, und an der Stelle

II

20’ befindet sich die Athylgruppe in ß-Raumstellung; 17-Desacetoxy-vinkristin, in dessen Formel 12 3 5 R , R , R und R die im Zusammenhang mit dem Vinkri- 15 stin erwähnte Bedeutung besitzen, R^ für ein Wasserstoffatom steht, und an der Stelle 20’ befindet sich die Hydroxylgruppe in ß-, die . »

Athylgruppe in öc-Raumstellung; und 15’ , 20’-Anhydrovinkri'&tin, in dessen Formel 2 3 20 R und R zusammen eine Valenzbindung bedeuten, 4 R für eine Acetoxygruppe und

K

R für eine Methoxy gruppe steht.

Die bis-Indolalkaloide mit Anti-Geschwulst-Wirkung werden Geschwulstkranken intravenös verabreicht, des-25 halb wäre es zweckmäßig, die Verbindungen in Form von Lösungen (Injektionen oder Infusionen^ zu formulieren und auf den Markt zu bringen. Dazu bestand - bis in die letzte Zeit - wegen der nicht ausreichenden Stabilität der Lösungen der bis-Indolalkaloide keine 30 Möglichkeit. Die bisher in die klinische Praxis eingeführten drei bis-Indolalkaloide mit Anti-Geschwulst-- -Wirkung, das Vinkristin, Vinblastin und Vindezin, kamen in Form von Pulverampullen, die ein aus ihren - 5 - λ ; . 7 ? Salzen - in erster Linie aus ihren Sulfaten - herge- stelltes Lyophilisatum enthalten, bzw. in Form von zweiampulLigen Präparaten, welche getrennt die Lyo-philisatum- und Lösungsmittelkomponente enthalten, 5 auf den Markt. Diese Lösung ist einesteils wegen der Kostspieligkeit des Lyophilisierens, andererseits infolge der während der klinischen Verwendung bei der Auflösung auftretenden Probleme nicht entsprechend.

Ein zur Formulierung von Vincaalkaloiden ausgear-10 beitetes, verbessertes Verfahren beschreibt die un garische Patentanmeldung Nr. 2522/83 (Belgische Patentschrift Nr. 897 280). Nach der Beschreibung werden Vincaalkaloide enthaltende wässrige Arzneimittelpräparate hergestellt, indem ein therapeutisch akzeptier-15 bares Vinca-Dimer-Salz, ein Polyol, ein den pH-Wert der Lösung zwischen 3,5 und 5>0 haltender Acetatpuffer und ein die Vermehrung von Mikroorganismen hemmender Zuschlagstoff miteinander vermischt werden. Über die Stabilität wird - ohne konkrete Meßergebnisse -20 ausgesagt, daß das durch das erfindungsgemäße Verfahren hergestellte Vinkristinsulfat bei einer Lagerungstemperatur von 5 °c 9 Monate lang 94 - 99 # seiner ursprünglichen Wirkstoffkonzentration bewahrt.

Für die inzwischen auf den Markt gebrachten, durch ein 25 solches Verfahren hergestellten Vinkristin-Injektio-nen wird auch weiterhin eine Lagerung bei niedriger Temperatur (5 °C) vorgeschrieben und nur eine Haltbarkeit von einem Jahr garantiert.

Ziel der Erfindung ist die Herstellung von Lö-30 sungen der bis-Indolalkaloide, deren Stabilität die Stabilität der bisher bekannten Lösungen bei weitem übertrifft und auch bei Zimmertemperatur eine Lagerung über längere Zeit ermöglicht.

.,/ - 6 - i Während unserer Versuche wurde gefunden, daß die bis-Indolalkaloide bzw. ihre Salze zur Komplexbildung , geeignet sind, sie bilden mit mehrwertigen Metallen

Metallkoraplexe, die in wässrigem Milieu bei einem 5 pH-Wert von 3,0 - 6,0 eine sehr gute Stabilität auf-weisen.

Dementsprechend ist Gegenstand der Erfindung unter anderem die Herstellung von therapeutisch akzeptierbaren Metallkomplexen der bis-Indolalkaloide und 10 gegebenenfalls von diese enthaltenden stabilen wässrigen Arzneimittelpräparaten, indem ein bis-Indolal-kaloid oder sein therapeutisch akzeptierbares Salz in wässrigem Milieu bei einem pH-Wert zwischen 3,0 und 6,0 mit einem zur Komplexbildung geeigneten, 15 mit einem organischen oder anorganischen Anion gebildeten Salz eines nicht toxischen zwei- oder mehrwerti-gen Metalls umgesetzt wird, gegebenenfalls in Gegen-i wart von üblichen pharmazeutischen Trägerstoffen und/oder anderen Zuschlägen oder vor deren Zugabe, und gewünsch-20 tenfalls ein Metallkomplex isoliert wird.

Die Metallkomplexe der bis-Indolverbindungen sind neu. In der Literatur wurden bisher nur der N-2’-Bor--Komplex des 20’S-Desoxyvinblastin LChemical Abstracts, 99:140214s (1983)] bzw. ein mit Tubulin gebildeter 25 Komplex bestimmter bis-Indolalkaloide vom Vinblastin-Typ (Belgische Patentschrift Nr. 854 053) erwähnt.

Das Tubulin ist ein Protein mit großem Molekülgewicht, welches - dem erwähnten Patent zufolge - bei einem pH-Wert zwischen 6,6 und 7,6 mit den untersuchten bis-30 -Indolalkaloiden Komplexe bildet* Die Stabilität der Komplexe in wässriger Lösung wurde in keiner Veröffentlichung erwähnt.

Im erfindungsgemäßen Verfahren können die z.B.

- η - mit gesättigten einbasischen Karbonsäuren (z.B, Ameisensäure, Essigsäure), mit Oxysäuren mit 6 Kohlenstoff-» atomen (z.B. Gluconsäure, Levulinsäure, Lactobionsäu- re), mit Disacchariden (z.B. Saccharose) oder mit an-5 organischen Säuren (z.B. Schwefelsäure) gebildeten Salze von beispielsweise Zink, Magnesium, Kalzium, Kobalt, Eisen oder Nickel zur Komplexbildung verwendet werden. Besonders vorteilhaft sind die mit Zink, Magnesium oder Kalzium gebildeten Komplexe, wobei die 10 Metalle vorzugsweise in Form von Gluoonat oder Acetat zum Reaktionsgemisch gegeben werden.

Die Komplexbildung erfolgt bei einem pH-Wert zwischen 3,0 und 6,0, und der pH wird durch ein geeignetes Puffersystem, vorzugsweise durch einen den pH-Wert 15 in den entsprechenden Grenzen haltenden Acetatpuffer (z.B. durch ein Natriumacetat/Essigsäure-System), sta-j bilisiert.

’ Werden durch das erfindungsgemäße Verfahren direkt für Injektionen verwendbare Lösungen hergestellt, ist 20 in diesen die Konzentration der bis-Indolalkaloide von der wirksamen Dosis und vom therapeutischen Spektrum der Wirkstoffe abhängig. Die Konzentration der bis--Indolalkaloide beträgt im allgemeinen 0,01 - 10 mg/ml, vorzugsweise 0,1 - 10 mg/ml, günstigstenfalls 0,5 - 1>0 25 mg/ml. Da die bis-lndolalkaloide, die in der oben gegebenen allgemeinen Formel (I) als eine Formylgrup-pe enthalten, im allgemeinen in niedrigerer Dosis wirken, ist es zweckmäßig, von diesen Lösungen mit kleinerer Wirkstoffkonzentration herzustellen, während 30 im Falle der in größerer Dosis wirkenden, als R"*" eine Methylgruppe enthaltenden Verbindungen, z.B. dem ! Vinblastin, die Wirkstoffkonzentration etwas größer ist.

. , · - 8 - s ; Bei Durchführen der Komplexbildung unter den obi gen Bedingungen bilden sich - polarographischen Mes-= sungen zufolge - dominant bis-Indolalkaloid-Metallkomp- lexe mit einem Molverhältnis von 1:1. Deshalb wird 5 das Metallsalz, auf das bis-Indolalkaloid gerechnet, • mindestens in moläquivalenter Menge verwendet. Im Interesse dessen, daß garantiert die volle bis-Indol-alkaloid-Menge in Komplexe überführt wird, ist es zweckmäßig, mit einem kleinen Überschuß an Metallsalz 10 zu arbeiten. Auf 1 mg Vinkristinsulfat gerechnet ist 2 x die Ca -Menge z.B. vorteilhaft 4l - 100 /Ug, günstig- 2+ stenfalls etwa 50 /Ug, die Mg -Ionenmenge vorzugsweise 24 - 55 /«g, günstigstenfalls etwa 26 - 28 /ug, die Zn^+-Ionenmenge dagegen vorzugsweise 66 - 140 ^ug, 15 günstigstenfalls 70 /ug.

In den Injektionslösungen werden als Isotonierungs-j mittel im allgemeinen Zucker oder Zuckeralkohole, wie “ Glucose, Mannit oder Maltose, verwendet. Die Menge des

Isotonierungsmittels wird in jedem Fall osmometrisch 20 festgelegt.

IV

Als organische Hilfslösungsmittel werden z.B. Äthanol oder Glycoläther mit einem Molekülgewicht von 200 - 600 (Polyalkylenglycole) verwendet, ersteres vorzugsweise in einer Konzentration von 4 - 8 %, letz-25 tere vorzugsweise in einer Konzentration von 5 - 15

Die stabilen, verbrauchsfertigen Injektionslösun-gen können noch bekannte Konservierungsmittel, wie z.B. den Benzylalkohol, Nipagin A, Nipagin M, Nipasol (Propyl-paraben) oder deren Gemisch (Nipacombin), in 30 in der Pharmazie bekannten und verwendeten Konzentrationen enthalten.

Als Antioxydans kann z.B. Natrium- oder Kalium-pirosulfit in einer Konzentration von 0,02 - 0,15, • * ' - 9 - t, vorzugsweise 0,05 $>, verwendet werden.

Der pH der durch das erfindungsgemäße Verfahren 1 hergestellten stabilen Lösungen wird zwischen 3j0 und 6,0, vorzugsweise auf 3>5 - 5>0? eingestellt, im Falle 5 von Vinkristinsulfat vorzugsweise auf einen Vert von U,5> was in Einklang mit den im USP XX vorgeschriebe-nen Grenzen ist. In Gegenwart der verwendeten Metallsalze kann der pH gut stabilisiert werden.

Nach einer vorteilhaften Ausführungsform des £ir-10 findungsgemäßen Verfahrens werden in destilliertem

Vasser von Injektionsqualität die zur Komplexbildung notwendige Menge an Metallsalzen und gegebenenfalls weitere übliche Zuschlagstoffe, z.B. Isotonierungsmit-tel, Hilfslösungsmittel, Puffer, Konservierungsmittel 15 und Antioxydanten, aufgelöst, dann wird zur erhaltenen Lösung die wässrige Lösung des entsprechenden bis-In-j dolalkaloids gegeben. Die Lösung wird danach mit de- - stilliertem Vasser von Injektionsqualität auf das End volumen ergänzt, homogenisiert, sterilem Filtern unter-20 worfen und in inerter GasatmoSphäre in sterile Gläser gefüllt.

Polarographische Untersuchungen

Zum Nachweis der Wechselwirkung zwischen Vinkristin und den Metallionen (Zink, Kalzium und Magnesium) diente 25 eine polarographische Untersuchungsreihe, Es wurde eine

Probenreihe hergestellt, in der jede Probe neben einer variablen Menge Vinkristinsulfat (Vinkristin-Konzentra- -3 -5 3 tion zwischen 10 und 10 Mol/dm ) Zinkionen in einer -h / 3 konstanten Konzentration von 10 Mol/dm enthielt.

30 Aus den Proben, deren pH-Vert durch ein Essigsäure-Nat-riumacetat-RafCersystem auf 5>5 eingestellt wurde, wur-: den wässrige Lösungen mit einer Acetation-Konzentration : o von 0,15 ol/dnr hergestellt. Die . Meßergebnisse 4 • * ' - 10 - werden in Figur 1 betrachtet. Die in der Figur verwendeten Zeichen sind, die folgenden: "A"-Kurve: Polarogramm einer wässrigen Zinkacetat-Lösung mit einer Zinkionen-Konzentration von 5 10~k Mol/dm"^ "B"-Kurve: Polarogramir; einer 10 ^ Mol/dm"^ Zinkionen und.

Jt o 5 x 10“ Mol/dir. Vinkristin enthaltenden wässrigen Lösung "C"-Kurve : Polarogramm einer 10”^ Mol/dm^ Zinkionen und U o 10 10 Mol/dnr Vinkristin enthaltenden wäss rigen Lösung

Aus der Figur ist erkennbar, daß bei Vinkristin-Über-schuß auf dem Polarogramm überhaupt keine Zink-Stufe erscheint. Eine auf die Erscheinung einer Zink-Stufe 15 hinweisende Oszillation größeren Ausmaßes wurde unmittelbar vor dem Abscheiden der Grundlösung bei einem j Vinkristin-Zink-Verhältnis von etwa 1 : 1 wahrgenomiren.

* Bei der weiteren stufenweisen Verringerung der Konzentra tion des Liganden wurde auch die Zink-Stufe sichtbar, -5 20 und bei einer Vinkristin-Konzentration von 2,5 x 10 und darunter war ihre Form und das Potential der Halbstufe gleich dem des freien Zinks.

Die oben genannten Fakten beweisen eindeutig, daß das Zinkion mit dem Vinkristin auch schon bei einem 25 Konzentrationsverhältnis von 1 : 1 einen Komplex großer Stabilität bildet.

Die Wechselwirkung des Vinkristin mit den Kalzium-und Magnesiumionen wurde auf indirekte Weise durch die Untersuchung der Wirkung dieser letzteren Ionen auf 30 das polarographische Verhalten des Vinkristin-Zink-Sy-stems nachgewiesen.

Bei einem Vinkristin-Zink-Verhältnis von 1 : 1 (lO ^ Mol/dm^), bei dem die Zink-Stufe gerade auf dem • - 11 - «

Polarogramm erscheint, wurden in stufenweise anstei-' gender Menge Kalzium (Figur 2) bzw. Magnesium (Figur 3) zum System gegeben.

Die in den Figuren verwendeten Zeichen sind die fol-5 genden:

Figur 2: -h /3 "A”-Kurve: Polarogramm einer 10 Mol/dm Zinkionen und -h /3 10 Mol/dm Vinkristin enthaltenden wässrigen Lösung -h /3 10 "B”-Kurve: Polarogramm einer 10 Mol/dm Zinkionen und 3 5 Mol/dm Kalziumchlorid enthaltenden wässrigen Lösung "C'-Kurve: Polarogramm einer in Gegenwart von 5 Mol/dnr _ Il 3

Kalziumchlorid 10 Mol/dm Zinkionen und 15 10”^ Mol/dm^ Vinkristin enthaltenden wäss rigen Lösung

Figur 3 : < _ If. 3 ”A”-Kurve: Polarogramm einer 10 Mol/dm Zinkionen und 10"4 Mol/dm^ Vinkristin enthaltenden wäss-20 rigen Lösung -k /3 "B”-Kurve: Polarogramm einer 10 Mol/dm Zinkionen und

O

5 Mol/dnr Magnesiumchlorid enthaltenden wässrigen Lösung "C'-Kurve: Polarogramm einer in Gegenwart von 5 Mol/dm ~h / 3 25 Magnesiumchlorid 10 Mol/dm Zinkionen und 10~k Mol/dm^ Vinkristin enthaltenden wässrigen Lösung

Sowohl im Fall von Kalzium als auch im Fall von Magnesium wurde gefunden, daß sich mit Erhöhen der 30 Konzentration der erwähnten Metalle die charakteristische Stufe des freien Zinks stufenweise herausbildet,

O

und auf den in Gegenwart von 5 Mol/dnr Kalzium bzw.

\ Magnesium auch Vinkristin enthaltenden und nur Zink < * * - 12 - * ' enthaltenden, aber unter sonst gleichen Bedingungen

V

aufgenommenen Polarogrammen die Zink-Stufe in Hinsicht auf Höhe und Halbstufenpotential übereinstimmt. Es sei bemerkt, daß das Zink vom Kalzium und Magnesium völlig 5 aus dem Vinkristin-Komplex verdrängt wurde. Auf Grund des zum völligen Verdrängen des Zinkes notwendigen Kalzium- bzw. Magnesiumüberschusses (50000-fach) kann gesagt werden, daß die Stabilität des Zink-Vinkristin-Komplexes um etwa 4,5 - 5 Größenordnungen größer . ist 10 als bei den mit Vinkristin gebildeten Komplexen des Kalzium bzw. Magnesium.

Potentiometrisohe Untersuchungen Zum Zwecke der direkten Bestimmung der Stabilitätskonstanten des Kalzium-Vinkristin-Komplexes wurden po-15 tentiometrische Untersuchungen durchgeführt.

Für die Messungen wurde eine spezielle (DD-Patent Nr. 146 101) kalziumselektive Membranelektrode verwen-* det. Die referente Elektrode war eine Ag/AgCl-Elektrode des Typs Radelkis OP 0820P. Die Messungen wurden mit ' 20 einer computergesteuerten automatischen Titriereinrich tung durchgeführt. Die Vinkristin-Konzentration wurde -4 -3 /3 zwischen 5 x 10 und 2 x 10 Mol/dm , aber innerhalb der einzelnen Meßreihen auf einem konstanten Wert gehalten. Als Titriermittel wurde Kalziumchloridlösung

O

25 einer Konzentration von 0,1 Mol/dnr verwendet, deren Faktor durch komplexometrisehe Titration kontrolliert wurde. Die Messungen wurden bei einer Temperatur von 25 °C in einer Lösung mit einem pH von 5>5 durchgeführt, die Ionenstärke wurde im Interesse des Haltens des 30 Aktivitätskoeffizienten auf einem konstanten Wert auf einen .Wert von 1,00 eingestellt.

Ein typisches Titrationskurvenpaar wird in Figur 4 gezeigt. Die in der Figur verwendeten Zeichen sind . · ‘ - 13 - » , die folgenden:

Kurve 1: Kalibrationskurve der Elektrode L Kurve 2: Titrationskurve der 10 J mol/dnr Vinkristin enthaltenden Lösung 5 p[Ca] = -log[Ca2+]

Hieraus ist ersichtlich, daß die Konzentration der freien Kalziumionen in Gegenwart von Vinkristin signifikant sinkt, die Komplexbildung zwischen den

Kalziumionen und dem Vinkristin anzeigend. Auf den 10 Messungen basierend wurde n (d.h. die Zahl der auf ein Vinkristinmolekül kommenden gebundenen Kalzium- ionen) ausgerechnet, dieser Vert ergab maximal 1,0.

Mit dieser Bekannten wurde die Stabilitätskonscante des

Komplexes ausgerechnet, wofür in einer Lösung mit einer 15 Ionenstärke von 1 Mol der Vert logß = 3,27 +. 0,1 er- - halten wurde. In Figur 5 sind die gemessenen und die auf der obigen Stabilitätskonstanten basierend er- , rechneten n-Verte aufgezeigt. Die errechneten Verte wurden durch eine fortlaufende Linie verbunden. Die 20 gute Übereinstimmung der errechneten und gemessenen

Verte bestätigt die Richtigkeit des für die Stabili- tätskonstante erhaltenen Vertes.

Die pH-Abhängigkeit der erwähnten Komplexbildungs- reaktionen wurde ihit Deprotonierungs-Gleichgewichts- 25 messungen des Calvin-Typs untersucht, es wurde das polarographische Verhalten des Zn-VCR-Systems unter- 2+ sucht, und die potentiometrischen Ca -Ionen-Koordi-nationsuntersuchungen wurden in Lösungen mit verschiedenem pH durchgeführt. Bei den Untersuchungen zeigte 30 sich im pH-Bereich von 3,5 - 5,5 keine Abhängigkeit vom ; ,2+2+ pH. Das bestätigtdaß die genannten Ionen (Zn~ , Ca , p i ^ Mg ) von den Sauerstoffatomen des VCR-Donors umgeben 7 werden, welche im untersuchten pH-Bereich nicht pro- ; / - ik - ; tocxsiert werden.

^ Die Metallkomplexe können in fester Form getrennt i' und isoliert werden.

Stabilitätsuntersuohungen 5 Die Stabilität der durch das erfindungsgemäße Ver fahren hergestellten vinkristinsulfathaltigen Lösungen wurde mit hochdruckflüssigkeitschromatographischen (HPLC) Methoden kontrolliert.

HPLC-Methode zur Bestimmung des Vinkristin-Gehalts: 10 Säule: Nucleosil 5 yu Cg, 250 x 4,6 mm (Chrompack)

Eluens: Gemisch aus Methanol, Wasser und Diäthylamin Wellenlänge : 297 nm Strömungsgeschwindigkeit : 2ml/min

Die Bestimmung des Wirkstoffgehaltes fand mit einem 15 äußeren Standard statt, d.h. als Vergleich wurde die ^ reine wässrige Lösung von Vinkristinsulfat des gleichen =. Ursprungs und gleicher Konzentration verwendet wie die , zu untersuchende Lösung (Injektion) von Vinkristinsul- fat.

t 20 Beschleunigte Stabilitätsuntersuohungen

In der folgenden Tabelle 1 werden die Ergebnisse der beschleunigten Stabilitätsuntersuchungen zusammengefaßt. Dabei wurde die Stabilität des nach Beispiel 1 hergestellten erfindungsgemäßen Präparates (Lösung l) 25 mit der Stabilität des nach Beispiel 1 der belgischen Patentschrift Nr. 897 280 hergestellten (Lösung 3) und des unter dem Namen "Oneovin" (Eli Lilly and Co.) gehandelten einampulligen Injektions-Vinkristinpräparates (Lösung 2) verglichen. Die Lösungen werden unter völlig 30 gleichen Bedingungen, 5 bis 10 Tage lang bei 75 °c mit Wärme behandelt.

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3 :0 ^ 1-3 * ‘ , * - 16 - 5 Aus den Angaben der Tabelle 1 ist ersichtlich, c daß das erfindungsgemäß hergestellte, den Ca-Kom- r plex des Vinkristin enthaltende stabilisierte Injek- tionspräparat während der beschleunigten Stabili-5 tätsuntersuchungen eine wesentlich bessere Stabilität zeigte als die Lösungen nach der genannten belgischen Patentschrift oder die im Handel befindlichen, das Vinkristin nicht in Form von Metallkom-plexen enthaltenden Lösungen.

10 Langanhaltende Stabilitätsuntersuchungen a) Von der nach dem Beispiel 1 der vorliegenden Anmeldung hergestellten Vinkristinsulfat-Lösung mit einer Wirkstoffkonzentration von 1 mg/ml· wurden je 15 5 ml in 3 Ampullen gefüllt. Bei ständiger Lagerung der Lösungen bei 5 °C erhielt man die in Tabelle 2/A ~ auf geführten Ergebnisse. Aus den Angaben der Tabelle .r ist ersichtlich, daß während einer zwölfmonatigen

Lagerung praktisch keine Zersetzung stattgefunden 20 hat.

Tabelle 2/A Wirkstoffmenge (%)

Ausgangs- 3 Monate 6 Monate 9 Monate 12 Monate 25 100,8 100,9 100,2 100,5 98,7

Xm wesentlichen mit der obigen Methode, aber anstelle von Ampullen Phiolen verwendend, erhielt man die folgenden Ergebnisse (Lagerungskühlschrank, 30 2 - 8 °C): ' - 17 -

Tabelle 2/B

(*) : Ausgangs- 3 Mon. 6 Mon. 9 Mon. 12 Mon.

5 VCR-Ge- halt {%) 97,5 96,9 95,^ 96,3 95,1

Alkaloide mit ähnlicher 10 Struktur 1,9 2,5 3,0 2,8 3,1 (*) b) Von der nach Beispiel 1 hergestelLton Vinkristin-sulfat-Lösung mit einer Virkstoffkonzentration von 15 1 mg/ml wurde je 1 rnl in Gläser gefüllt. 100 Gläser wurden bei 5 °C, 100 Gläser bei Zimmertemperatur ge-* lagert. Die erhaltenen Durchschnittsergebnisse sind 3 in Tabelle 3 zusammengefaßt.

Tabelle 3 20 Wirkstoffmenge {%)

Ausgangs- 1 Monat 2 Monate 3 Monate 5 °C Zimmert. 5 °C Zimmert. 5°C Zimmert·.

100 98,0 ' 98,4 100,4 96,4 100,4 98,4 25 ____ 4 Monate 5 Monate 6 Monate 7 Monate 5 °C Zimmert. 5 °C Zimmert. 5 °0 Zimmert. 5°C Zimmert.

100,4 97,6 98,7 102,8 99,4 100,3 100,3 98,3 30 _______ 8 Monate 10 Monate 12 Monate 15 Monate ^ 5°C Zimmert. 5°ü Zimmert.- 5°G Zimmert. 5°c Zimmert.

V __ 100,2 96,7 99,2 94,3 98,3 91,7 98,1 85,5 35_________ - 18 - *

Aus den Angaben ist ersichtlich, daß die Lösun-^ gen nach der Lagerung bei 5 °c nicht zerfielen und der VCR-Gehalt bei Lagerung auf Zimmertemperatur ein -wenig sinkt.

5 Ans den Stabilitätsangaben geht eindeutig hervor, daß die erfindungsgemäßen, die bis-Indolalkaloide in komplexer Form enthaltenden Lösungen eine ausgezeichnete Stabilität aufweisen. Demzufolge bleibt bei 5 °C auch über einen Zeitraum von 2 Jahren eine verwendungs-10 fähige Qualität erhalten. Außerdem ist es bei der Injektionenherstellung von Vorteil, daß die Sterilisation auch mit einer Wärmebehandlung von 100 °C mit Sicherheit, ohne die Gefahr des Zerfalls, durchführbar ist, 15 Die Erfindung wird mit den folgenden Beispielen veranschaulicht, ohne daß der Schutzumfang auf diese « eingeschränkt wird, ä Beispiel 1

VinkristinsuIfat 0,1 g 20 Propyl-paraoxybenzoat 0,02 g

Essigsäure (98 $>) 0,025 S

Kalziumgluconat . H^O 0,05 g

Natriumacetat . 3 H^O 0,06 g

Methyl-paraoxybenzoat 0,13 S

25 Äthanol (96 %) 5 S

Mannit 10 g

Destilliertes Wasser von

Injektionsqualität auf 100 ml

In einer aliquoten Menge frisch ausgeicoohten und 30 mit Stickstoffgas gesättigten destillierten Wassers von Injektionsqualität werden das Mannit, Kalziumglu-w oonat und Natriumacetat aufgelöst, und man gibt die vorgeschriebene Menge Essigsäure dazu. Die Nipaester i Λ · - 19 - ; (Propyl-paraoxybenzoat und Methyl-paraoxybenzoat)

λ II

werden in 96 Jfeigem Äthanol aufgelöst, dann wird die '3 erhaltene Lösung mit der auf die obige Weise herge stellten Grundlösung vermischt. Endlich wird das in 5 einem kleinen Teil destilliertem Wasser gesondert aufgelöste Vinkristinsulfat dazugegeben. Das Volumen der Lösung wird sodann mit destilliertem Wasser von Injektionsqualität auf das Endvolumen ergänzt, dann wird die Lösung homogenisiert, sterilem Filtern 10 unterworfen und in unter inerter Gasatmosphäre sterilisierte Gläser gefüllt.

Beispiel 2

Vinkristinsulfat 0,1 g

Propyl-paraoxybenzoat 0,005 S

15 Magnesiumgluconat 0,045 S

.? Essigsäure (98 $) 0,025 g ^ Natriumacetat , 3 Ho0 0,0256 g ä Methyl-paraoxybenzoat 0,05 g Äthanol (96 5 ë 20 Mannit 5 g

Destilliertes Wasser von

Injektionsqualität auf 100 ml

Bei der Herstellung der Lösungen wird nach der Beschreibung des Beispiels 1 vorgegangen, 25 Beispiel 3

Vinkristinsulfat 0,1 g

Essigsäure (98 $) 0,025 ë

Zinkgluconat 0,049 ë

Natriumacetat . 3 H^O 0,06 g 30 Benzylalkohol 0,9 ë Äthanol (96 %) 5 ë

Mannit 5 ë te T Destilliertes Wasser von

Injektionsqualität auf 100 ml i * ·*· 20 —

""SI

* ^ In einem aliquoten Teil frisch ausgekochten, mit

Stickstoffgas gesättigten destillierten Wassers von Injektionsqualität werden das Mannit und Zinkgluconat aufgelöst, dann werden zur Lösung die Essigsäure und

II

5 das Gemisch aus Äthanol und Benzylalkohol gegeben.

Nun wird das in einem kleinen Teil des destillierten Wassers gesondert aUfgeiös-te Vinkristinsulfat hinzugegeben, Das Volumen der Lösung wird mit destilliertem Wasser von Injektionsqualität auf das Endvolumen er- 10. gänzt, dann wird die Lösung homogenisiert und nach sterilem Filtern in unter inerter Gasatmosphäre sterilisierte Gläser gefüllt.

Beispiel 4

Vinkristinsulfat 0,1 g 15 Propyl-paraoxybenzoat 0,005 g .£ Kalziumacetat , H^O 0,0222 g

Essigsäure (98 $) 0,025 g £ Natriumacetat , 3 H^O 0,0256 g

Methyl-paraoxybenzoat 0,05 g 20 Äthanol (96 $) 5g

Mannit 5 g

Destilliertes Wasser von

Injektionsqualität auf 100 ml

Bei der Herstellung der Lösung wird nach der Be-25 Schreibung von Beispiel 1 verfahren,

Beispiel 5

Vinkristinsulfat 0,1 g

Essigsäure (98 $) 0,025 g

Natriumacetat . 3 H^O 0,026 g 30 Kalziumgluconat 0,056 g

Benzylalkohol 0,9 g

Sorbit 5 g ? Poly(äthylenglycol) 400 10 g

Destilliertes Wasser von j*»

Injektionsqualität auf 100 ml ^ 1 - 21 - fr

In einem aliquoten Teil frisch ausgekochten und.

». mit Stickstoffgas gesättigten destillierten Wassers von Injektionsqualität werden nacheinander das Sorbit und Kalziumgluconat aufgelöst. Dann werden die 5 Essigsäure und das Gemisch von Benzylalkohol und Poly(äthylenglycol) hinzugegeben. Danach wird das in einem kleinen Teil des destillierten Wassers, gesondert gelöste Vinkristinsulfat eingemessen und das Volumen der Lösung mit destilliertem Wasser von In-10 jektionsqualität auf das Endvolumen ergänzt. Nach

Homogenisieren und sterilem Filtern wird die Lösung in unter inerter Gasatmosphäre sterilisierte Gläser gefüllt,

Beispiel 6 15 Vinblastinsulfat 0,1 g

Propyl-paraoxybenzoat 0,005 g - Kalziumacetat . H^O 0,023 g Γ Essigsäure (98 $) 0,0k9 g

Natriumacetat , 3 H90 0,0U9 g 20 Methyl-paraoxybenzoat 0,05 g Äthanol (96 $) 5 g

Mannit 5 g

Destilliertes Wasser von

Injektionsqualität auf 100 ml 25 Bei der Herstellung der Lösung wird nach der Be schreibung von Beispiel 1 vorgegangen,

Beispiel 7

Vinkristinsulfat 0,1 g

Propyl-paraoxybenzoat 0,02 g 30 Essigsäure (98 $) 0,025 g

Zinksulfat 0,033 g

Natriumacetat , 3 Ho0 0,06 g

Methyl-paraoxybenzoat 0,13 g ί · - 22 - \ » ο- Äthanol (96 %) 5 S .

Mannit 10 g V Destilliertes Wasser von

Injektionsqualität auf 100 ml 5 Boi der Herstellung der Lösung wird nach der

Beschreibung von Beispiel 1 verfahren.

Claims (10)

1. 3, Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß als bis-Indolverbindung eine Verbindung der allgemeinen Formel (i)
2. 25 Q· £_£ £ 2V J2! loj^f—y 1 Η 1ΕΛ VfR SL 4 3 \>v»sVAJk T II T-C2H5 ( CH3dW^Vfiiie (1)
3. 35 R* COR5 - 24 - Λ \' " . oder deren therapeutisch akzeptierbares Salz ver- - wendet wird, worin in Formel (i) R1 für eine Methylgruppe, 2 R für ein Wasserstoffatom, 5. für eine Hydroxylgruppe stehtj oder 2 3 R und R haben zusammen die Bedeutung einer Valenzbindung, 4 R steht für eine Hydroxyl- oder Acetoxygruppe, und K R hat die Bedeutung einer Methoxy- oder Aminogrup- 10 pej(oder die Bedeutung von R"*" ist eine Formylgruppe, 2 R ist ein Wasserstoffatom, 3 R steht für eine Hydroxylgruppej oder 2 3 R und R bedeuten zusammen eine Epoxygruppe, h 15. bedeutet ein Wasserstoffatom oder eine Acetoxy- ^ gruppe und g R eine Methoxygruppe, ^ 4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 - 3, da durch gekennzeichnet, daß* als bis-Indolverbindung der 20 allgemeinen Formel (i) Vinkristin oder Vinblastin oder eines ihrer therapeutisch akzeptierbaren Salze verwendet wird,
4. 5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-4, dadurch gekennzeichnet, daß als zur Komplexbildung geeig- 25 notes, nicht toxisches zwei- oder mehrwertiges Metall Zink, Kalzium oder Magnesium verwendet wird.
5. 6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-5» dadurch gekennzeichnet, daß das Zink, Kalzium oder Magnesium in Form seines Acetat- oder Gluconatsalzes 30 verwendet wird.
6. 7. Verfahren zur Herstellung eines Metallkomple-xes einer bis-Indolverbindung, dadurch gekennzeichnet, daß man eine bis-Indolverbindung oder ihr Salz in wäss- ^ rigem Millieu bei einem pH zwischen 3}0 und 6,0 mit ' 1 * - 25 - ' einem wasserlöslichen Salz eines zur Komplexbildung geeigneten zwei- oder mehrwertigen Metalls umsetzt ^ und den erhaltenen Komplex auf bekannte Weise iso liert.
7. 8. Mit zwei- oder mehrwertigen Metallen gebilde te Metallkomplexe von bis-Indolverbindungen. 9* Zink-, Kalzium- oder Magnesiumkomplex des Vinkristin.
8. 10. Zink-, Kalzium- oder Magnesiumkomplex des
9. 10 Vinblastin.
10. 11, Stabile wässrige Arzneimittelpräparate, die in therapeutisch wirksamer Menge als Wirkstoff den mit zwei- oder mehrwertigem Metall gebildeten therapeutisch akzeptierbaren Komplex einer bis-Xndolver- 15 bindung enthalten. «aT - ! ?