AT268518B - Verfahren zur Herstellung eines lebenden Mumpsvirus - Google Patents

Description

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  Verfahren zur Herstellung eines lebenden Mumpsvirus 
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Tod führen können. 



   Allgemein betrachtet betrifft die Erfindung die Anpassung und Fortpflanzung von Mumpsvirus in
Gewebekulturen, welche auf bereits Embryonen enthaltenden Hühnereiern hergestellt werden. Insbe- sondere ist die Erfindung gerichtet auf die Entwicklung eines lebenden, verdünnten Mumpsvirus-Impf- stoffes, welche einem Reihen Durchgang durch eine Hühnerembryo-Gewebekultur folgt. Dieses Ver- fahren umfasst die nachfolgenden Stufen :
A. Die Isolierung des virulenten Virus in irgendeiner Art von Kulturzellen oder Embryonen ent- haltenden Hühnereiern und seine Anpassung an die   Hühnerembryo-Gewebekultur ;  
B. die Entwicklung des verdünnten, lebenden Virus durch eine Vielzahl von Reihen-Durchgängen in Hühnerembryo-Gewebekulturen und
C. die Herstellung des Impfstoffes aus diesem verdünnten lebenden Virus. Diese Stufen werden nachfolgend getrennt erläutert. 



   A. Isolierung und Anpassung des virulenten Virus. 



   Die Isolierung und Anpassung des Mumpsvirus kann in einer Hühnerembryo-Gewebekultur erreicht werden unter Verwendung von klinischem Material (z. B. einem Rachenabstrich) oder von Virus, welches zuvor in Embryonen enthaltenden Hühnereiern fortgepflanzt wurde. Die Inkubation der infizierten Kulturen kann bei 30 bis 340 C (am günstigsten 320 C) oder bei 35 bis 380 C (am günstigsten bei 360 C) ausgeführt werden. 



   Ein Beispiel für   Isolierungsverfahrensweisen   ist folgendes :
Das Mumpsvirus wurde in Embryonen enthaltenden Hühnereiern aus klinischem Material isoliert,   d. h.   von Personen, welche an Mumps erkrankt waren. 



   B. Entwicklung des verdünnten Impfstoffes aus lebendem Mumpsvirus. 



   Das Virus, welches gemäss A als Mumpsvirus festgestellt ist, wird Glasflaschen zugefügt, welche   Hühnerembryo-Gewebekulturen   enthalten, die aus zerkleinerten und mit Trypsin versehenen, annähernd 10 Tage alten Hühnerembryos hergestellt sind. Das Kulturmedium kann jedes sein, welches das Zellwachstum unterstützt und es kann beispielsweise das bekannte "Medium 199" sein, welchem Kälberserum zugefügt worden ist. Nach Zusatz des Virus werden die infizierten Zellenkulturen in aufeinanderfolgenden Durchgängen bei 30 bis 380 C während wechselnder Zeitspannen bebrütet und während dieser Zeit repliziert sich das Virus und wird verdünnt. Dann werden die virushaitigen Flüssigkeiten gewonnen und in gefrorenem Zustand oder bei einer andern tiefen Temperatur, welche die Infektionsfähigkeit des Mittels erhält, gelagert. 



   Die oben erwähnten Reihen-Durchgänge werden unter Verwendung von verdünntem Impfmaterial ausgeführt und mehrfache Ernten werden in verschiedenen Zeitspannen gesammelt. Man führt Bestimmungen der Ansteckungsfähigkeit   in "HeLa", GrUnaffen-Nierengewebe oder Hühnerembryo-Gewebe-   kulturen aus. 



   C. Herstellung des Impfstoffes. 



   Es hat sich gezeigt, dass das nach diesem wiederholten Reihen-Durchgang gewonnene Mumpsvirus für Affen und Nagetiere nicht pathogen ist, nur geringe, wenn überhaupt klinische Reaktion bei menschlichen Empfängern bewirkt und einen bedeutenden Antikörperspiegel hervorruft. Die Ansteckungsfähigkeit des Virus wird mittels eines geeigneten Stabilisators, wie Sucrose, menschlichem Eiweiss, Glutamin, Phosphat oder Mischungen davon stabilisiert. Nach der Titration zur Bestimmung seiner Wirksamkeit wird das angesammelte Virus unterteilt und in Ampullen zum Gebrauch abgefüllt. Das Produkt kann in gefrorenem Zustand gelagert und verteilt werden oder vorzugsweise aus dem gefrorenem Zustand getrocknet und von Feuchtigkeit freigehalten werden. 



   Die nachfolgenden Beispiele dienen der   Erläuterung :  
Beispiel 1 : Das Impfmaterial wird nach der oben unter A beschriebenen Verfahrensweise erhalten. 



   9 bis 11 Tage alte Hühnerembryos werden nach dem Entfernen der Köpfe und Extremitäten unter aseptischen Bedingungen fein zerkleinert und das zerkleinerte Gewebe unter mehrfachem Wechsel von   'Hanks'BSS" (Hanks, T.   H. und Wallace, R. E., Proc. Soc. Exper. Biol. Med., 71, S. 146 bis 200   z   gewaschen. Das gewaschene Gewebe wird bei 360 C mit Trypsin versehen unter Verwendung von   0, 251o Trypsin"Difco 1 : 250"in Tris- (hydroxymethyl)-aminomethan-Kochsalz-Puffer während     2   bis 3 h. Die Trypsin-Zellen-Suspension wird durch zwei Lagen steriler Gaze gewonnen und bei L500 Umdr/min 5 min zentrifugiert. Zusammengewachsene Zellen werden im Kulturmedium zur wei- : eren Behandlung neuerlich suspendiert.

   Das Kulturmedium besteht aus Medium 199, welches Wo Agamma-Kälberserum (30 min auf 560 C erhitzt) und 50 mcg/ml Neomycin enthält. Die Flaschen- 

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Claims (1)

1. <Desc/Clms Page number 4> Virus für eine ausreichende Zahl von Fällen, um es zu verdünnen, in einer 9 bis 11 Tage alten Hühnerembryo-Gewebekultur bei 30 bis 380 C bebrütet, wobei man den Reihen-Durchgängen eine Bebrütung mit mindestens zehn aufeinanderfolgenden Durchgängen in Embryonen enthaltenden Hühnereiern vorangehen lässt.