DE1198489B

DE1198489B - Verfahren zur Herstellung eines Impfstoffes gegen Panleucopenie

Info

Publication number: DE1198489B
Application number: DEP33063A
Authority: DE
Inventors: Eben Arthur Slater; Carrell John Kucera
Original assignee: Philips Electronics and Pharmaceutical Industries Corp
Current assignee: Philips Electronics and Pharmaceutical Industries Corp
Priority date: 1962-11-27
Filing date: 1963-11-25
Publication date: 1965-08-12
Also published as: NL145903B; FI40922B; AT248793B; DK104899C; CH469093A; GB1071922A; BE640495A; BR6354820D0; US3293130A; FR1587309A; AT257042B; ES293828A1; SE334437B; NL300960A

Description

BUNDESREPUBLIK DEUTSCHLAND

DEUTSCHES

PATENTAMT

AUSLEGESCHRIFT

Int. α.:

A61k

Deutsche Kl.: 30 h - 6

Nummer: 1198 489

Aktenzeichen: P 33063IV a/30 h

Anmeldetag: 25. November 1963

Auslegetag: 12. August 1965

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Her-Stellung eines Impfstoffes gegen Panleucopenie.

Zahlreiche Untersucher haben versucht, Panleucopenievirus in Gewebekulturen zu züchten, jedoch ohne Erfolg. Das von allen vorherigen Untersuchern ausgeübte Verfahren gründete sich auf die Anwendung von Katzennieren, die frei waren von Panleucopenievirus und von einer Gewebekultur, die mit dem virulenten Virus geimpft wurde. Aus unerklärlichen Gründen wuchs das Virus nicht in einer Gewebekultur, wenn das Keimvirus auf eine frische Gewebekultur übertragen wurde.

Im Hinblick auf die kommerzielle Bedeutung der Entwicklung eines Impfstoffes gegen Panleucopenie wurden zahlreiche Versuche durchgeführt, um ein effektives Verfahren zur Herstellung eines Impfstoffes zu finden. Die in Zusammenhang mit dieser Aufgabe ausgeführten Untersuchungen haben gezeigt, daß die Katze eine große Anzahl von Virusarten mit sich trägt, die man leicht für Panleucopenievirus an- ao sehen könnte. Es ergab sich, daß das Virus von Panleucopenie mit anderen Virusarten gemischt war, die sich in den Gewebekulturen fortpflanzen, wobei der falsche Eindruck erweckt wurde, daß das Panleucopenievirus tatsächlich in der Züchtung vorhanden war. Nur nach sehr intensiver Arbeit wurde ganz unerwarteterweise ein Verfahren zum Züchten von Panleucopenievirus in Gewebekulturen entdeckt, wobei ein Impfstoff erhalten wurde, der sich erfolgreich zum Immunisieren von Katzen eignet. Es wurde gefunden, daß dieser Impfstoff auch zur Impfung von Nerzen gegen Entzündung des kleinen Eingeweides angewandt werden kann.

Gemäß der vorliegenden Erfindung wird ein gesundes Versuchstier der Familie Felidae, z. B. eine Katze, die für Panleucopenie empfindlich ist, mit dem Panleucopenievirus geimpft. Das Virus kann sich entwickeln, und nachdem das Versuchstier die pathologischen Symptome dieser Krankheit aufweist, wird das Tier zum Extrahieren des Virus geopfert. Im Vergleich zu früheren Verfahren in diesem Gebiet bildet diese Stufe des Verfahrens das Merkmal der Neuheit der vorliegenden Erfindung. Das mit Panleucopenievirus infizierte Gewebe des getöteten Tieres, vorzugsweise das Nierengewebe, wird entfernt und nach Präparation in eine Gewekultur gebracht. Zum Erzielen guten Erfolges gemäß der Erfindung ist es wichtig, daß das mit dem Virus versehene Gewebe einen Teil der Gewebekultur bildet.

Aus einer mikroskopischen Untersuchung der Gewebekultur mit dem Nierengewebe und dem Virus ergibt sich, daß die Nierenzellen sich in monolocu-Verfahren zur Herstellung eines Impfstoffes
gegen Panleucopenie

Anmelder:

Philips Electronics and Pharmaceutical

Industries Corp., New York, N. Y. (V. St. A.)

Vertreter:

Dipl.-Ing. H. Zoepke, Patentanwalt,

München 5, Erhardtstr. 11

Als Erfinder benannt:

Eben Arthur Slater,

Carrell John Kucera, St. Joseph, Mo. (V. St. A.)

Beanspruchte Priorität:
V. St. v. Amerika vom 27. November 1962
(240408)

laren Schichten von Zellen innerhalb einer nicht zu langen Periode gruppieren. Nach etwa 2 bis 10 Tagen nach der Herstellung der Gewebekultur wird die Kulturflüssigkeit gesammelt und auf Gewebekulturen von Katzennieren ohne Panleucopenievirus übertragen. Für jeden weiteren Übertrag des gesammelten Virus kann neues Nierengewebe von krankheitsfreien Katzen benutzt werden. Aus unerklärlichen Gründen muß die Kultur des Panleucopenievirus zunächst in einer Kultur vom Gewebe eines mit dem Panleucopenievirus infizierten Tieres, z. B. einer Kultur des panleucopenieinfizierten Nierengewebes, erfolgen, worauf das Virus auf andere Gewebekulturen übertragen werden kann. Es kann ein Impfstoff aus dem Virus hergestellt werden, indem dieses mindestens sechsmal oder vorzugsweise mindestens zehnmal durch Gewebekulturen von Katzennieren geführt wird; die Gesamtzahl von Übertragungen kann bis zu einer Höhe gesteigert werden, wo das gezüchtete Virus nicht antigen — also unwirksam — wird, was durch die Reaktion eines mit dem Panleucopenievirus geimpften Tieres festgestellt werden kann. Im allgemeinen werden nicht mehr als zweihundertfünfzig Übertragungen, aber aus wirtschaftlichen Gründen nicht mehr als fünfzig Stufen ausgeführt. Vorzugsweise beträgt die Anzahl zehn bis

509 630/365

dreißig und inbesondere zwanzig bis dreißig. Etwa bei dem fünften Übertrag auf die Gewebekultur einer Katzenniere ergibt sich, daß das Versuchstier eine Infektion mit dem Panleucopenievirus bestehen wird, aber eine ziemlich heftige Reaktion vor dem Höhepunkt der Krankheit aufweist. Es ist daher erwünscht, das Virus weiter zu schwächen, bevor es als Impfstoff zum Immunisieren von Katzen benutzt wird.

Der Impfstoff nach der Erfindung läßt sich erfolgreich zum Immunisieren jedes Exemplars der Familie Felidae verwenden, z. B. für die Hauskatze, den Ozelot, den Tiger, den Leopard, den Panther, den Jaguar, welche auf diese Weise geschützt werden. Der Impfstoff läßt sich auch zum Immunisieren von Nerz benutzen.

Bei der Herstellung eines geschwächten Virus wird das Gewebe, meistens Nierengewebe, mit dem Panleucopenievirus aus der Katze unter aseptischen Bedingungen entfernt (im Falle eines Nierengewebes wird die jede Niere umgebende Kapsel entfernt, und die Rindenschicht wird gesichert). Die infizierten Gewebe werden in dünnen Schichten einer Trypsinbehandlung unterworfen gemäß J. S.Youngher (Proc. Soc. Explt. Biol. Med., 85, 202, 1954). Die Zellensuspension wird darauf zentrifugiert, und die überschwemmende Flüssigkeit wird entfernt. Die Zellen werden aufs neue in einem Tierserum, z. B. Kalbsserum, suspendiert, um das zurückbleibende Trypsin unwirksam zu machen, worauf wieder zentrifugiert wird. Das Serum wird abgetrennt, und die Zellen werden in einem Nährboden suspendiert. Der Nährboden, in dem die Zellen gezüchtet werden können, enthält Parker 199, Karzon, Earle usw. mit einem Antibiotikum. Es wird etwa eine Portion infizierter Zellen etwa zweihundert bis vierhundert Portionen des Nährbodens zugesetzt. Das Tierserum wird auch in den Nährboden gebracht. Man verwendet die Seren von: Kalb, Pferd, Lamm, Schwein, Ziege. Etwa 7 bis 15%, vorzugsweise etwa 10%, des Nährbodens werden durch das Tierserum gebildet. Die Zellen und das Virus werden bei einer Temperatur von etwa 30 bis 37° C, insbesondere bei etwa 36° C, inkubiert. Das Kulturmedium kann nach etwa 24 bis 60 Stunden ersetzt werden von dem Augenblick an, in dem die Zellen mit dem Nährboden kombiniert werden, um ein schnelleres Wachstum der Zellen und des Virus zu bewerkstelligen. Vor dem Zusatz des frischen Nährbodens kann der pH-Wert auf etwa 6,5 bis 7,8 eingestellt werden. Etwa anderthalb Tage nachher wird der Nährboden erneuert, und die Menge des Tierserums wird dabei derart verringert, daß die endgültige Konzentration etwa 3 bis 7% beträgt. Während des verbleibenden Teiles dieser ersten Stufe kann der Nährboden alle 3 bis 7 Tage in einer Gesamtperiode von etwa 15 bis 25 Tagen erneuert werden, von dem Anfang der Kultivierung des mit dem Virus infizierten Gewebes an gerechnet.

Nachdem die Flüssigkeit mit dem Virus des Mediums der ersten Stufe gesammelt worden ist, wird sie auf Kulturmedia mit Katzengewebe übertagen, welche frei von Panleucopenieinfektion sind. Ähnlich wie in der ersten Stufe befindet sich das Virus in einem Nährboden gleicher Zusammensetzung, wie vorstehend erwähnt mit Ausnahme des Katzengewebes, das jetzt von einer der Panleucopeniekrankheit freien Katze genommen worden ist, während einer Periode von 24 bis 60 Stunden, bei der vorerwähnten Inkubationstemperatur. Darauf wird innerhalb IVa bis 5 Tagen zum ersten Mal der Nährboden ersetzt, wonach während des verbleibenden Teiles jeder Stufe der Nährboden alle 3 bis 7 Tage während einer Gesamtperiode von 6 bis 20 Tagen in jeder Stufe ersetzt wird. Die Dauer einer Stufe wird durch das Maß der Degeneration der Zellen der infizierten Kulturmedia bestimmt, so daß die Dauer jeder Stufe von den vorerwähnten Werten verschieden sein kann.

Die nach der Erfindung hergestellten Vaccine eignen sich außerdem zum Schützen von Nerzen gegen Entzündung des kleinen Eingeweides. Zu diesem Zweck kann das geschwächte Panleucopenievirus auf die vorstehend beschriebene Weise durch die verschiedenen Stufen geführt werden.

Im allgemeinen werden mindestens etwa zehn, gewöhnlich mindestens etwa fünfzehn Passagen verwendet, aber bis zu sechzig Passagen können erforderlich sein. Die Vaccine können dem gegen Entzündung des kleinen Eingeweides empfindlichen Nerz und einem jungen Nerz von etwa 4 bis 8 Wochen in Dosen von etwa 10 bis 1000 TCID 50 (TCID bedeutet: Infektionsdosis für eine Gewebekultur [tissue culture infective Üosage]), gewöhnlich etwa lOObis 300TCID5Q injiziert oder verabreicht werden.

Für die Impfung von Katzen gegen Panleucopenie kann die Dosis zwischen etwa 10 und 1000 TCID 50 schwanken (die wirklichen Grenzen werden durch praktische,, wirtschaftliche Erwägungen und eine effektive Immunisierung bedingt). Gewöhnlich beträgt die Dosis etwa 100 bis 300 TCID 50. Die Katzen können zu jeder Zeit geimpft werden, von einem Alter von 6 bis 8 Wochen bis zu jedem höheren Alter, wenn sie noch für die Krankheit empfindlich

sind. -

Zur weiteren Erläuterung der. vorliegenden Erfindung werden nachstehend einige Beispiele gegeben. Zwei Hauskatzen, welche für Panleucopenie empfindlich sind (was serologisch festgestellt wurde), wurden mit dem Virus injiziert. Nach dem Feststellen ernstlicher klinischer und pathologischer Symptome der Krankheit wurden die Katzen zur Herstellung von Gewebekulturen geopfert. Die Katzen waren 4 Monate alt. Die in Celsiusgraden angegebenen Tagestemperaturen und die Gesamtzahl weißer Blutkörper (»w. B.«) sind in der nachfolgenden Tabelle angegeben.

	2 I 3	39,2 17750 38,9 9 350	Tabelle	H-I	39,8 14400 39,9 13 850	38,9 12400 39,2 2500	39,3 5 850 39,9 1700	39,4 1300 39,0 550	9
	39,4 16 950 38,8 11950			40,5 300
Katze A Temperatur, ° C w.B
Katze B Temperatur, ⁰C w.B
	Tage nach Inokulation ⁴I⁵I⁶I⁷I⁸
	38,9 13 350 39,0 7 400

Jede Katze wurde durch Injektion von Natriumpentobarbital getötet und gesondert, aber auf gleiche Weise behandelt, um festzustellen, ob das Virus einer besonderen Art war oder nur bei der betreffenden Katze individuell auftrat und daß die Fortpflanzung tatsächlich auf das erfindungsgemäße Verfahren zurückzuführen war. Die Nieren jeder Katze wurden unter aseptischen Bedingungen entfernt. Eine Untersuchung der verbleibenden Glieder jeder Katze zeigte, daß die Katzen an der Panleucopenieinfektion litten. Die klinischen Symptome und die postmortalen Hinweise entsprachen denen, die von Hamm ο η und En den s in J. Exptl. Md., 69, 327 (1939), beschrieben wurden. Die Kapsel wurde von jeder Niere entfernt, und das Rindengewebe wurde in dünne Schichten geteilt und dann einer Trypsinbehandlung gemäß Youngher Supra (Proc. Soc. Explt. Biol. Med., 85, 202, 1954) unterworfen. Die Zellensuspension wurde mit einer Drehgeschwindigkeit von 600 Umdr./Min. zentrifugiert, und die überschwemmende Flüssigkeit ao wurde entfernt. Die Zellen wurden in 15 ml Kalbsserum suspendiert, um die Wirkung zurückbleibenden Trypsins zu neutralisieren, bevor wieder zentrifugiert wurde, wie vorstehend beschrieben ist. Das Serum wurde entfernt, und die Zellen wurden in einem Nährboden in einem Verhältnis von 1 Teil kompakter Zellen und 250 Teilen des Nährbodens suspendiert. Der Nährboden bestand aus Earle Salzlösung mit Zusatz von 0,5 Vo Laktalbuminhydrolysat und lOV» Kalbsserum.

Die Suspension der Gewebekultur wurde in normale Gewebekulturröhrchen (bekannt unter dem Namen Rollenröhrchen) gebracht, bis zu einer Menge von ImI. Die Röhrchen wurden aufrecht stehend bei einer Temperatur von 36,5° ± 0,5° C inkubiert. Nach 48 Stunden klebten die meisten Zellen am Glas und zeigten eine Neigung zur Reproduktion. Der alte Nährboden wurde entfernt und durch einen frischen Nährboden mit der gleichen Zusammensetzung ersetzt. Vor dem Zusatz des frischen Nährbodens wurde der pH-Wert auf etwa 7,4 eingestellt. Die Gewebekulturen wurden in diesem Zustand bis zu 5 Tagen nach dem Ersatz gehalten. Am Ende dieser Periode war der pH-Wert auf etwa 6,8 gesunken. Das Medium wurde durch ein frisches Medium der gleichen Zusammensetzung ersetzt, mit Ausnahme der Reduktion des Serumgehaltes von 10 auf 5% in dem neuen Medium. Während des verbleibenden Teiles dieser Stufe wurde der Nährboden alle 5 Tage durch einen frischen Nährboden ersetzt. In der Zwischenzeit sank der pH-Wert auf 6,8 herab. Die Nährböden wurden während 18 bis 20 Tagen nach dem Einbringen des Virus stets ersetzt. Die Flüssigkeitsphasen der Kulturen wurden entfernt und gesammelt. Die Sammelflüssigkeit wurde zum Injizieren empfindlicher Katzen benutzt, um die etwaige Wirkung des Virus festzustellen.

1 ml der Sammelflüssigkeit jeder der zwei Gewebekulturen der Katzen A und B wurde in empfindliche Katzen in verschiedenen Entwicklungsstufen injiziert, um die etwaige Wirkung festzustellen. In Tabelle 2 beziehen sich die Buchstaben A und B darauf, ob das Virus von den Katzen A und B erhalten wurde, und die Ziffer nach dem Buchstaben bezeichnet das Versuchstier, welches die Sammelflüssigkeit injiziert bekam.

Tabelle II

Tage nach Inokulation

15 16

Katze A-I

Temperatur, ⁰C...
w. B

Katze A-2

Temperatur, ⁰C...
w. B

Katze B-I

Temperatur, ⁰C...
w. B

Katze B-2

Temperatur, ⁰C ...
w. B

39,0
13 800

39,1
13 450

39,1
11700

38,7
13100

38,7
13 300

39,0
18 500

38,8 39,0

17 750 16 950

39,2 9

38,8 6

38,8 14400

38,9 13 39,0
3 350

39,2
16 650

38,9
13 450

39,8
9 350

40,6
950

40,0
900

39,6
9 700

40,4
2500

40,8
850

38,2
450

39,6
900

40,6
350

tot

39,4
1000

tot

Die vier in Tabelle II angegebenen Katzen reagierten auf die Injektion mit der Sammelflüssigkeit durch ausgesprochenes Fieber und einen stark verringerten w.-B.-Gehalt. Zwei Katzen waren tot am achten Tag nach der Injektion mit dem Virus, während die anderen zwei sterbend waren. Die Symptome waren bei den vier Katzen gleich denen der Katzen A und B, so daß nachgewiesen wurde, daß die Katzen an Panleucopenie litten.

Die Sammelflüssigkeit der ersten Gewebekultur wurde zum Inokulieren eines neuen Gewebekulturmediums der zweiten Stufe benutzt, welches Gewebe von den Nieren einer normalen, krankheitsfreien Katze erhalten wurde. Das Verfahren zum Präparieren der Nieren der krankheitsfreien Katze war gleich dem Verfahren bei der Behandlung der Nieren der virusinjizierten Katzen A und B. Die Sammelflüssigkeit der ersten Gewebekultur wurde der Zellensuspension zugesetzt, die aus den Nieren der seuchenfreien Katze erhalten wurde, und zwar in einer Konzentration von 1 ml Sammelflüssigkeit in 10 ml Zellensuspension. Die Zellen wurden in Röhrchen in

Mengen von 1 ml bei einer Temperatur von 36,5° ±0,5° C gebracht. Nach 48 Stunden wurde der Nährboden durch einen frischen Nährboden gleicher Zusammensetzung ersetzt. Nach 5 Tagen entstand eine volle Zellenplatte, wonach der Nährboden wieder durch einen frischen Nährboden ersetzt wurde, wobei jedoch die Konzentration des Kalbsserums auf 5% herabgemindert wurde. Darauf wurde der Nährboden in einem Intervall von 4 bis 5 Tagen jeweils ersetzt. Nach 15 Tagen hatte sich der Zustand der Zellen derart verschlechtert, daß die Flüssigkeit gesammelt werden mußte, um auf eine frische Gewebekultur für die nächste Stufe übertragen zu werden.

Tabelle ΠΙ

Tage nach Inokulation
I 6

Katze A-3

Temperatur, ⁰C... w.B

Katze B-3

Temperatur, ⁰C... w. B

Katze B-4

Temperatur, ⁰C... w.B

Katze B-5

Temperatur, ⁰C... w.B

39,3 17

38,3 18

37,8 13

38,3 11950

39,6 8

39,6 6100

38,9 9150

38,9 9

39,5 7500

38,9 5

38,8 10150

39,0 7250 39,8
300

39,2
000

38,7
500

39,1
7100

38,7
300

40,1
2150

38,7
4150

39,1
1300

40,2
1800

41,3
2200

38,7
5100

38,0
1850

(dritte

41,1 950

41,2 4450

38,9 050

38,7 850

Katze B-6	39,9	39,1	38,9	38,3	39,1	40,6	40,4
Temperatur, ⁰C...	20 500	5 050	9 800	15 800	1000	1400	2 800
w. B

(vierte

(fünfte

	1	2	3	4	5	6	7
Katze A-4
Temperatur, ⁰C...	39,2	39,9	39,8	39,2	38,7	39,0	39,9
w. B	23 900	10500	8 600	6 500	3 450	2700	2100
Katze A-5
Temperatur, ⁰C...	38,4	39,2	39,2	38,5	38,5	38,5	38,4
w.B	12000	7 900	8 300	6 400	6 050	7 450	8 850

Aus der Tabelle ΠΙ ergibt sich, daß das Virus der wurden. Es sei weiter bemerkt, daß nach der fünften dritten bis fünften Stufe heftige Reaktion in allen Stufe die Katzen A-4 und A-5 mit virulenten Panleuco-Hauskatzen hervorrief, die mit diesem Virus geimpft penievirus geimpft werden konnten, ohne daß Todes-

Für die dritte Stufe wurde die Niere einer krankheisfreien Katze gemäß dem an Hand der zweiten Stufe beschriebenen Verfahren und die Zeliensüspehsiön auch" gemäß diesem Verfahren behandelt. Statt 15 Tage vor dem Sammeln der Flüssigkeit wurde die§e" nach,7 Tagen .gesammelt Für, aU.e weiterem Stufen wurde das gleiche Verfahren wiederholt, bis das Virus insgesamt sechzehn Stufen durchlaufen hatte, Am. Ende jeder Stufe wurden seuehenfreie Hauskatzen, die für Panleucopenie empfindlich waren, geimpft, üüi festzustellen, welche etwaige Wirkung das geschwächte Virus auf die Katzen hatte,. Diese.Resultate sind in der nachfolgenden Tabelle 3 angedeutet.

Tabelle III (Fortsetzung)

	I ίο	11	Tage nach	Inokulation	14	I ¹⁵	J 16 -
9			12	13
Virusstufe)	38,4 9 000	3%4 11100			id Zählung bl	eiben normal
39,4 7 600	40,0 171Ö0	39,5 13 500	angegriffen,'	Temperatur ui
41,2 2140Ö	39,1 8 950	39il 15 550	tot		38,0 20150	38,0 15 950	angegriffen, Temperatur iindi w, B. bleiben normal
39,4 5 250	38,1 10 850	37;8 15 900	32000	38,1 25100	38,8 30900	38,7 3 450	38,8 2Ö3ÖÖ angegriffen, Temperatur Und w;B. jleiben normal
38*,5 10 200		38,4 2225Ö	38,3 33 800

Virusstufe)

37,7
9700

40,5
24000

39,1 13 450

keine Temperatur

Viriisstüfe)

10

40,0
3 500

38,5
12000

39,1
10250

38,3 14700

angegriffen, Temperatur und w. B. bleiben normal

fall eintrat. Aus der Zählung der weißen Blutkörper der Katzen Ä-4 und A-5-.ergibt sich, daß die Reaktion bei den Katzen ziemlich heftig war. Weitere krankheitsfreie Katzen, die für Panleucopenie empfindlich wären, wurden mit dem Virus der zehnten Stufe geimpft. Die Resultate sind in Tabelle IV angegeben.

509 630/365

11

TabellelV (zehnte Virusstufe der Katze A)

12

Tage nach Inokulation

18 19

10

11

Katze 375

Temperatur, ⁰C... w.B

Katze 376

Temperatur, ⁰C.., w.B, ."..

Katze 377

Temperatur, ⁰C... w.B

Katze 378

Temperatur, ⁰C... w.B

Katze 379

Temperatur, ⁰C... w.B

Katze 380

Temperatur, ⁰C... w.B. .,,....,.....

Katze 381 P-

Temperatur, ⁰C...

Katze .382

Temperatur, ⁰C ... w.B. ν .;:

16

35 400 ·

18

32900

13

14 8.00.

19

12450

37,8 10 800

39,0 18 400

40,1 11950

39,0 24100

38,1 6 250

37,9 8 950

38,3 10 950

38,2 20100

38,7 14 600

38,1 6 200

38,2
800

38,8
17750

39,0
14600

■ 39,3
950

38,2
800

39,2
600

39,3
20100

38,9
11950

38,2
200

38,8
24100

39,1
400

38,8
300

38,9
950

39,0
950

38,7
250

38,1
21900

39,2
550

38,8
3.6 850

38,9
850

38,5
900

39,2
36450

39,1
23100

39,0
050

38,2
950

38,0
22900

37,7
30400

39,3
050

38,9
500

38,4
950

38,5
28150

38,3
21900

37,2
500

38,3
000

37,2
500

38,2
500

38,1
14100

38,8
050

38,4
250

38,3
550

38,3 16100

38,8 600

39,1 27100

39,3 200

38,8 600

39,3 600

38,9 26250

38,9 19550

Aus vorstehender Tabelle IV ergibt sich, daß die Impfung des Virus bei Hauskatzen nach der zehnten Stufe entweder keine oder nur eine verhältnismäßig leichte Reaktion hervorrief. Alle Katzen der Tabelle IV wurden mit virulentem Panleucopenievirus geimpft ohne irgendwelche Zeichen einer schädlichen Wirkung.

Andere Katzen des gleichen Nestes wie die der Tabelle IV wurden auch mit virulentem Virus kontrollweise geimpft. Die Resultate dieser Untersuchungen sind in der nachfolgenden Tabelle V angegeben.

Tabelle V

: (Kontrollkatzen) (Virus aus infizierter Katzenmilch)

0	5	6	Tage 7	nach Inok ο	ulation 9	10	11
11400	39,2 5 750-	39.0 .6 450	39,0 7 500	40,2 450	tot
21650	39,0 16 600	39,0 20450	40,6 17150	39,9 3 850	tot
14350	39,2 12 600	39,3 13 550	35,6 200	tot
10 200	38,9 12750	38,9 9 000	38,4 6700	39,0 3 750	38,4 8100	38,5 4500 Ü1	38,5 7 350 Verstanden

Katze 359

Temperatur, ⁰C w.B

Katze 360

Temperatur, ⁰C... w. B

Katze 361

Temperatur, ⁰C... w.B

Katze 362

Temperatur, ⁰C... w.B.

38,8 800

13	Katze 363 Temperatur, ⁰C... w. B	O	1 198 489 Tabelle V (Fortsetzung)	—	Tage 7	nach Inokulation 8 I 9	41,1 700 39,1 1150	14	10	11	12
	Katze 364 Temperatur, ⁰C... w. B	14050 17150	5 I 6	—	Il Il	41,4 850 39,3 23 550	40,1 18 200 40,5 900	40,3 2 850 tot	40,5 7 250	tot
Katze 365 Temperatur, ⁰C... w. B	12500 13 050	Il Il	Il M	39,6 15150 38,9 3 050	38,9 20550 U 41,1 3 300 üt	38,3 15 500 >erstande: 38,3 6 300 >erstandei
Katze 366 Temperatur, ⁰C... w. B	—				38,5 2700 1 38,5 10350 1

Aus Tabelle V ergibt sich, daß die halbe Anzahl von Katzen, die mit virulentem Panleucopenievirus geimpft waren, starb. Alle Katzen wiesen heftige Reaktionen auf, die für Panleucopenie symptomatisch waren.

Obgleich in den vorerwähnten Beispielen Nierengewebe benutzt wurde, ergeben sich gleiche Resultate bei Anwendung von Eingeweide-, Mandel-, Testikel-, Lungen-, Leber-, Milz-, Herz-, und ähnlichen Geweben des Waschbären und des grauen Fuchses.

Claims

Patentanspruch:

Verfahren zur Herstellung eines Impfstoffes gegen Infektionen mit Panleucopenievirus durch Züchtung des Virus auf Felidengewebe, dadurch gekennzeichnet, daß man Gewebe eines an Leucopenie erkrankten Tieres in eine Gewebekultur von Felidengewebe bringt und das Virus in wenigstens sechs, besonders zehn bis dreißig Passagen mit frischen Gewebekulturen von nicht mit Panleucopenievirus infizierten Tieren züchtet.

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