WO2015099187A1 - 遺伝子発現制御のための人工マッチ型ｍｉＲＮＡおよびその用途 - Google Patents

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WO2015099187A1
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雅彦 黒田
慎一郎 大野
絵里子 青木
安彦 吉田
志織 加藤
忠明 大木
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株式会社ボナック
学校法人東京医科大学
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    • C12N2310/531—Stem-loop; Hairpin

Definitions

  • the present invention relates to an artificial match-type miRNA that suppresses gene expression and uses thereof.
  • Micro RNA is known as a nucleic acid molecule that suppresses gene expression, and has been reported to suppress transcription of a protein encoded by the gene through, for example, the following generation process. That is, first, a miRNA transcript (Pri-miRNA) having a cap structure at the 5 'end and poly (A) at the 3' end is generated in the nucleus. The Pri-miRNA is cleaved by RNase (Drosha) to generate a miRNA precursor (Pre-miRNA). The Pre-miRNA has a hairpin structure having a loop region and a stem region.
  • Pri-miRNA miRNA transcript having a cap structure at the 5 'end and poly (A) at the 3' end is generated in the nucleus.
  • the Pri-miRNA is cleaved by RNase (Drosha) to generate a miRNA precursor (Pre-miRNA).
  • the Pre-miRNA has a hairpin structure having a loop region and a stem region.
  • This Pre-miRNA moves out of the nucleus, and then is degraded by cytoplasmic RNase (Dicer) to cut out double-stranded miRNA (mature miRNA) having a 1 to 4 base overhang at the 3 'end.
  • double-stranded miRNAs one strand is called a guide strand, the other strand is called a passenger strand, and the guide strand binds to a complex similar to RNA-induced Silencing Complex (RISC).
  • RISC RNA-induced Silencing Complex
  • the miRNA / RISC complex binds to the 3 'untranslated region (3'UTR) of a specific mRNA, thereby suppressing protein translation from the mRNA.
  • the miRNA for example, there is a method using a double-stranded mature miRNA.
  • this method requires the annealing of two single-stranded nucleic acid molecules prior to use, and may generate autoimmunity by TLR3 or the like that recognizes the double strand.
  • an object of the present invention is to provide a new artificial match-type miRNA using miRNA.
  • the artificial match-type miRNA of the present invention comprises: A single-stranded nucleic acid having an X region and a Y region, The 3 ′ end of the X region and the 5 ′ end of the Y region are linked via a linker region having a non-nucleotide structure,
  • the X region includes a guide strand sequence of a mature miRNA;
  • the Y region includes a sequence completely complementary to the X region.
  • composition of the present invention is a composition for suppressing gene expression, and includes the artificial match-type miRNA of the present invention.
  • composition of the present invention is a pharmaceutical composition, characterized in that it contains the artificial match-type miRNA of the present invention.
  • the expression suppression method of the present invention is a method of suppressing the expression of a target gene, characterized by using the artificial match-type miRNA of the present invention.
  • the method for treating a disease of the present invention includes a step of administering the artificial match-type miRNA of the present invention to a patient, and the guide strand sequence in the artificial match-type miRNA suppresses the expression of a gene involved in the disease. It is a guide strand sequence of mature miRNA.
  • the artificial match-type miRNA of the present invention can be easily synthesized at low cost, and can suppress the translation of the protein encoded by the gene.
  • FIG. 1 is a schematic view showing an example of the artificial match-type miRNA of the present invention.
  • FIG. 2 is a graph showing the number of cells per well in Example 1 of the present invention.
  • FIG. 3 is a graph showing the relative values of cell proliferation in Example 1 of the present invention.
  • FIG. 4 is a graph showing the percentage of apoptosis in Example 1 of the present invention.
  • FIG. 5 is a graph showing the relative values of the amount of AXL mRNA and the amount of MET mRNA in Example 1 of the present invention.
  • FIG. 6 is a graph showing the relative value of the amount of AXL mRNA in Example 2 of the present invention.
  • FIG. 7 is a graph showing the relative value of the amount of MET mRNA in Example 2 of the present invention.
  • FIG. 8 is a graph showing the relative value of the amount of AXL mRNA in Example 3 of the present invention.
  • FIG. 9 is a graph showing the relative value of the amount of MET mRNA in Example 3 of the present invention.
  • FIG. 10 is a graph showing the relative value of the amount of HMGA2 mRNA in Example 4 of the present invention.
  • FIG. 11 is a graph showing the relative value of the amount of COLA1 mRNA in Example 5 of the present invention.
  • the artificial match-type miRNA of the present invention as described above, A single-stranded nucleic acid having an X region and a Y region, The 3 ′ end of the X region and the 5 ′ end of the Y region are linked via a linker region having a non-nucleotide structure,
  • the X region includes a guide strand sequence of a mature miRNA;
  • the Y region includes a sequence completely complementary to the X region.
  • the artificial match-type miRNA of the present invention can suppress the expression of a target gene, for example.
  • Expression suppression means, for example, suppression of translation of the target gene, that is, suppression of translation of a protein encoded by the target gene, and more specifically, suppression of translation of the protein from mRNA of the target gene.
  • the suppression of the expression of the target gene can be achieved, for example, by reducing the production amount of the transcription product from the target gene, reducing the activity of the transcription product, reducing the production amount of the translation product from the target gene, or activity of the translation product. It can be confirmed by decrease of Examples of the protein include a mature protein or a precursor protein before undergoing processing or post-translational modification.
  • the artificial match-type miRNA of the present invention is a single-stranded nucleic acid molecule, for example, it is not necessary to anneal two single-strands like mature miRNA, and can be produced at low cost. Furthermore, since the artificial match-type miRNA of the present invention is a single-stranded nucleic acid molecule, it can be prevented from being recognized by, for example, TLR3, RIG-I, MDA5, etc. involved in autoimmunity.
  • FIG. 1 shows an outline of the positional relationship between the X region and the Y region in the artificial match-type miRNA of the present invention.
  • FIG. 1 is schematic, and for example, the length, shape, and the like of each region are not limited.
  • the artificial match-type miRNA of the present invention has the X region disposed on the 5 ′ side, the Y region disposed on the 3 ′ side, and the 3 ′ end of the X region and the Y region.
  • the 5 ′ end is linked via a non-nucleotide structure linker region (indicated by “P” in the figure).
  • the Y region includes a sequence that is completely complementary to the X region
  • the X region and the Y region are annealed intramolecularly, for example.
  • Intramolecular annealing is also referred to as self-annealing, for example.
  • the artificial match-type miRNA of the present invention is also said to form a double strand in the intramolecularly annealed region.
  • the artificial match-type miRNA of the present invention can also be referred to as a linear single-stranded nucleic acid molecule in which the 5 'end and 3' end are not linked.
  • the artificial match-type miRNA of the present invention preferably has a non-phosphate group at the 5 'end, for example, to maintain unbonded both ends.
  • the X region includes a guide strand sequence of mature miRNA as described above.
  • the guide strand sequence of mature miRNA is registered in various databases (for example, http://www.mirbase.org/ etc.). Therefore, for example, the X region can be set based on information of these known mature miRNAs.
  • the guide strand of the mature miRNA is a strand that is incorporated into the RNA-induced silencing complex (RISC) Argonaute (Ago) protein and binds to the target mRNA.
  • RISC RNA-induced silencing complex
  • the X region may consist of, for example, only the guide strand sequence or may have an additional sequence.
  • the X region is composed of, for example, the guide strand sequence and the additional sequence, and the additional sequence is linked to the 3 ′ end of the guide strand sequence, for example.
  • the Y region includes a sequence that is completely complementary to the X region when the X region and the Y region are aligned.
  • the Y region may consist of, for example, a sequence that is completely complementary to the X region, or may have an overhang in addition to the complementary sequence. That is, in the artificial match-type miRNA of the present invention, for example, when the Y region and the X region are aligned, the Y region may have an overhang at the 3 ′ end.
  • the overhang of the Y region is, for example, a terminal base that the Y region has more than the X region when the Y region and the X region are aligned.
  • the length of each region is not particularly limited.
  • the conditions are exemplified below, but the artificial match-type miRNA of the present invention is not limited to these descriptions.
  • the numerical range of bases discloses all positive integers belonging to the range.
  • the description “1 to 4 bases” means “1, 2, 3, 4 bases”. (Hereinafter the same).
  • the length of the guide strand sequence is not particularly limited, and for example, the length of the guide strand sequence in the reported mature miRNA can be exemplified.
  • the lower limit is, for example, 19 base lengths and 20 base lengths
  • the upper limit is, for example, 25 base lengths, 24 base lengths
  • the range is, for example, 19-25 base lengths, 20-24 base lengths It is.
  • the length of the additional sequence in the X region is not particularly limited, and the lower limit is, for example, 0 base length, 1 base length, 2 base length, and the upper limit is, for example, 5 base length, 4 base length, 3
  • the base length is, for example, 0 to 5 bases, 1 to 5 bases, 1 to 4 bases, 2 to 3 bases, 3 to 5 bases.
  • the length of the X region is not particularly limited, and the lower limit is, for example, 19 base length, 21 base length, 23 base length, and the upper limit is, for example, 30 base length, 28 base length, 26 base length.
  • the range is, for example, 19-30 bases long, 21-28 bases long, 23-26 bases long.
  • the length of the overhang in the Y region is not particularly limited, and the lower limit is, for example, 0 base length, 1 base length, the upper limit is, for example, 4 base length, 3 base length, and the range is For example, it is 0 to 4 bases long, 1 to 3 bases long, 2 bases long.
  • the arrangement of the overhang is not particularly limited, and examples thereof include UU, CU, GC, UA, AA, CC, UG, CG, AU, and TT from the 3 'side.
  • the overhang is TT, resistance to RNase can be added.
  • the length of the Y region is not particularly limited, and the lower limit is, for example, 19 base length, 21 base length, 23 base length, and the upper limit is, for example, 32 base length, 30 base length, 28 base length.
  • the range is, for example, 19 to 32 bases long, 21 to 30 bases long, 23 to 28 bases long.
  • the total length (T) of the artificial match-type miRNA of the present invention is not particularly limited, and the lower limit is, for example, 38 base length, 42 base length, 46 base length, and the upper limit is, for example, 62 base length, 58 base length. 54 base length, and the range is, for example, 38 to 62 base length, 42 to 58 base length, 46 to 54 base length.
  • the type of the mature miRNA is not particularly limited, and can be appropriately selected according to the type of the target gene.
  • Examples of the mature miRNA include hsa-miR-34a (SEQ ID NO: 1), hsa-let-7a (SEQ ID NO: 2), hsa-let-7f (SEQ ID NO: 3), and hsa-miR-150 (SEQ ID NO: 4). ), Mature miRNA such as hsa-miR-29b (SEQ ID NO: 5).
  • hsa-miR-34a SEQ ID NO: 1
  • UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGU hsa-let-7a SEQ ID NO: 2
  • UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUU hsa-let-7f SEQ ID NO: 3
  • UGAGGUAGUAGAUUGUAUAGUU hsa-miR-150 SEQ ID NO: 4
  • UCUCCCAACCCUUGUACCAGUG hsa-miR-29b SEQ ID NO: 5
  • UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUU the nucleotide sequence represented by each SEQ ID NO represents a guide strand sequence.
  • the guide chain of miR-34a targets, for example, AXL, MET, CDK4, CDK6, SIRT1, CCND1, SIRT1, BCL-2, etc., and suppresses the expression of these target genes, for example, lung cancer, colon cancer, gastric cancer It can prevent or treat diseases such as liver cancer and breast cancer.
  • the guide strand of let-7a targets, for example, HMGA2 (high mobility group AT-hook 2), KRAS, NRAS, HRAS, MYC, TLR4 and the like, and by suppressing the expression of these target genes, for example, lung cancer and colon Can prevent or treat diseases such as cancer, stomach cancer, liver cancer and breast cancer.
  • the guide strand of let-7f targets, for example, HMGA2 (high mobility group AT-hook 2), KRAS, NRAS, HRAS, MYC, TLR4, etc., and by suppressing the expression of these target genes, for example, lung cancer and colon Can prevent or treat diseases such as cancer, stomach cancer, liver cancer and breast cancer.
  • the guide chain of miR-29b targets, for example, COL1A1, MCL1, DNMT3A, DNMT3B, TCL1A, TGFb3, etc., and suppresses the expression of these target genes, for example, lung cancer, colon cancer, stomach cancer, liver cancer, breast cancer Diseases such as pulmonary fibrosis and liver fibrosis can be prevented or treated.
  • the structural unit of the artificial match-type miRNA of the present invention is not particularly limited, and examples thereof include nucleotide residues.
  • the nucleotide residue include a ribonucleotide residue and a deoxyribonucleotide residue.
  • the nucleotide residue is preferably, for example, a ribonucleotide residue.
  • the nucleotide residue include an unmodified unmodified nucleotide residue and a modified modified nucleotide residue.
  • the artificial match-type miRNA of the present invention can improve nuclease resistance and stability, for example, by including the modified nucleotide residue.
  • the artificial match-type miRNA of the present invention may further include a non-nucleotide residue in addition to the nucleotide residue, for example.
  • the number of the modified ribonucleotide residue is not particularly limited.
  • “1 Specifically, the number is, for example, 1 to 5, preferably 1 to 4, more preferably 1 to 3, and most preferably 1 or 2.
  • the modified ribonucleotide residue relative to the unmodified ribonucleotide residue may be, for example, the deoxyribonucleotide residue in which a ribose residue is replaced with a deoxyribose residue.
  • the artificial match-type miRNA of the present invention includes, for example, the deoxyribonucleotide residue in addition to the unmodified ribonucleotide residue
  • the number of the deoxyribonucleotide residue is not particularly limited. Specifically, for example, 1 to 5, preferably 1 to 4, more preferably 1 to 3, and most preferably 1 or 2.
  • the nucleotide residue includes, for example, a sugar, a base and a phosphate as constituent elements.
  • the ribonucleotide residue has, for example, a ribose residue as a sugar, and has adenine (A), guanine (G), cytosine (C) and U (uracil) as bases
  • the deoxyribose residue is For example, it has a deoxyribose residue as a sugar and has adenine (A), guanine (G), cytosine (C) and thymine (T) as bases.
  • each component is the same or substantially the same as, for example, naturally occurring, specifically, for example, the same or substantially the same as that naturally occurring in the human body. Are identical.
  • the modified nucleotide residue may be modified, for example, with any component of the unmodified nucleotide residue.
  • Examples of the modified nucleotide residue include naturally occurring nucleotide residues, artificially modified nucleotide residues, and the like.
  • the modified nucleotide residue may be, for example, a residue of a substitute for the unmodified nucleotide.
  • the substitute include artificial nucleic acid monomer residues. Specific examples include PNA (peptide nucleic acid), LNA (Locked Nucleic Acid), ENA (2'-O, 4'-C-Ethylenebridged Nucleic Acid), and the like.
  • the base is not particularly limited.
  • the base may be, for example, a natural base or a non-natural base.
  • the base may be, for example, naturally derived or a synthetic product.
  • As the base for example, a general base or a modified analog thereof can be used.
  • the linker region having the non-nucleotide structure preferably includes at least one selected from the group consisting of amino acid residues, polyamine residues, and polycarboxylic acid residues.
  • the linker region may or may not contain residues other than amino acid residues, polyamine residues, and polycarboxylic acid residues.
  • the linker region may include any of a polycarboxylic acid residue, a terephthalic acid residue, or an amino acid residue.
  • polyamine refers to any compound containing a plurality (two or three or more) amino groups.
  • the “amino group” is not limited to —NH 2 group but also includes imino group (—NH—).
  • the polyamine is not particularly limited, and examples thereof include 1,4-diaminobenzene, 1,3-diaminobenzene, 1,2-diaminobenzene and the like.
  • polycarboxylic acid refers to any compound containing a plurality (two or three or more) of carboxy groups. In the present invention, the polycarboxylic acid is not particularly limited.
  • amino acid refers to any organic compound containing one or more amino groups and carboxy groups in the molecule, as will be described later.
  • amino group is not limited to —NH 2 group but also includes imino group (—NH—).
  • the amino acid residue may be a combination of a plurality of amino acid residues.
  • an amino acid residue in which a plurality of amino acid residues are linked refers to, for example, a residue containing a peptide structure. More specifically, the amino acid residue in which the plurality of amino acid residues are linked is, for example, an amino acid residue represented by chemical formula (I) described later, wherein a chemical formula (Ia) described later is a peptide (for example, glycine dimer or An amino acid residue that is a glycine trimer or the like.
  • the amino acid residue may be a glycine residue, a terephthalic acid amide residue, a proline residue, or a lysine residue.
  • the amino acid residue may be a modified amino acid residue or an amino acid derivative.
  • the linker region is represented, for example, by the following chemical formula (I-0).
  • Q11 and Q12 are each independently a single bond, CH 2 (methylene group), NH (imino group), C ⁇ O (carbonyl group), C ⁇ S (thiocarbonyl group), C ⁇ NH (iminomethylene group) ), O, or S
  • Q1 and Q2 are each independently a single bond, CH 2 (methylene group), NH (imino group), C ⁇ O (carbonyl group), C ⁇ S (thiocarbonyl group), C ⁇ NH (iminomethylene group) ), O, or S
  • Y 1 and Y 2 are each independently a single bond, CH 2 , NH, O or S
  • L 1 is an alkylene chain having n carbon atoms, and a hydrogen atom on the alkylene carbon atom is substituted with OH, OR a , NH 2 , NHR a , NR a R b , SH, or SR a May not be substituted
  • L1 is a polyether chain in which one or more carbon atom
  • L 2 is a polyether chain in which one or more carbon atoms of the alkylene chain are substituted with an oxygen atom
  • Y 2 is NH, O or S
  • the atom of L 2 bonded to Y 2 is carbon
  • the atom of L 2 bonded to OR 2 is carbon
  • oxygen atoms are not adjacent to each other
  • R a , R b , R c and R d are each independently a substituent or a protecting group
  • m is an integer ranging from 0 to 30
  • n is an integer ranging from 0 to 30
  • the X region and the Y region are each bonded to the linker residue via —OR 1 — or —OR 2 —;
  • R 1 and R 2 may or may not be present, and when present, R 1 and R 2 are each independently a nucleotide residue or the structure (I-0).
  • A is an arbitrary atomic group.
  • the combination of the bond between the X region and the Y region and —OR 1 — and —OR 2 — is not particularly limited, and examples thereof include any of the following conditions.
  • Condition (1) The X region is bonded to the structure of the formula (I) through —OR 2 —, and the Y region is bonded through —OR 1 —.
  • Condition (2) The X region is bonded to the structure of the formula (I) through —OR 1 — and the Y region is bonded through —OR 2 —.
  • Q 11 may be C ⁇ O (carbonyl group) and Q 1 may be NH (imino group). Further, for example, Q 11 may be NH (imino group) and Q 1 may be C ⁇ O (carbonyl group). Further, for example, Q 12 may be C ⁇ O (carbonyl group) and Q 2 may be NH (imino group). Further, for example, Q 12 may be NH (imino group) and Q 2 may be C ⁇ O (carbonyl group).
  • Q 11 and Q 12 may each be, for example, a carbonyl group.
  • Q 1 and Q 2 are each preferably an imino group.
  • the structure of the following chemical formula (I ⁇ ) is more preferably represented by the following chemical formula (I ⁇ 2).
  • R 100 is an arbitrary substituent and may or may not be present. When present, one or a plurality of R 100 may be present, and in the case of a plurality, R 100 may be the same as or different from each other.
  • R 100 examples include the substituents described below for R a , R b , R c, and R d , and more specifically, for example, halogen, hydroxy, alkoxy, Amino, carboxy, sulfo, nitro, carbamoyl, sulfamoyl, alkyl, alkenyl, alkynyl, haloalkyl, aryl, arylalkyl, alkylaryl, cycloalkyl, cycloalkenyl, cycloalkylalkyl, cyclylalkyl, hydroxyalkyl, alkoxyalkyl, aminoalkyl Silyl, silyloxyalkyl, pyrrolyl, imidazolyl, and the like. More preferably, the structure of the chemical formula (I ⁇ 2) is represented by the following chemical formula (I ⁇ 3).
  • the linker residue of the chemical formula (I-0) is a carboxylic acid amide residue. It can also be said that it is a carboxylic acid residue.
  • the “TPA” structure in the examples described later can be said to be a terephthalic acid amide residue, but it can also be said to be a terephthalic acid residue represented by the chemical formula (I ⁇ 3).
  • Q 11 and Q 12 may each be an imino group.
  • Q 1 and Q 2 are each preferably a carbonyl group.
  • the structure represented by the following chemical formula (I ⁇ ) is more preferably represented by the following chemical formula (I ⁇ 2).
  • R 100 is an arbitrary substituent and may or may not be present. When present, one or a plurality of R 100 may be present, and in the case of a plurality, R 100 may be the same as or different from each other. Specifically, for example, it is the same as R 100 in the chemical formula (I ⁇ 2). More preferably, the structure of the chemical formula (I ⁇ 2) is represented by the following chemical formula (I ⁇ 3).
  • the linker residue is an amino acid residue
  • the amino acid residue is represented, for example, by the following chemical formula (I).
  • the structure of the following chemical formula (I) is an example of a structure represented by the chemical formula (I-0).
  • X 1 , X 2 , Y 1 , Y 2 , L 1 and L 2 are the same as described above.
  • the complementary sequence to the sequence of the microRNA binds to the amino acid residue via —OR 1 — or —OR 2 —, respectively.
  • R 1 and R 2 may or may not be present, and when present, R 1 and R 2 are each independently a nucleotide residue or the structure (I);
  • A is an arbitrary atomic group, provided that the following chemical formula (Ia) is an amino acid or a peptide.
  • the atomic group A in the chemical formula (I), (I ⁇ ) or (Ia) is, for example, a chain group, an alicyclic group, an aromatic group, a heteroaromatic group, or a heteroalicyclic group. It may or may not include at least one selected from the group consisting of formula atomic groups.
  • the chain atomic group is not particularly limited, and examples thereof include alkyl, alkenyl, alkynyl, haloalkyl, hydroxyalkyl, alkoxyalkyl, aminoalkyl, silyl, silyloxyalkyl and the like.
  • the alicyclic atomic group is not particularly limited, and examples thereof include cycloalkyl, cycloalkenyl, cycloalkylalkyl, cyclylalkyl and the like.
  • the aromatic atomic group is not particularly limited, and examples thereof include aryl, arylalkyl, alkylaryl, condensed ring aryl, condensed ring arylalkyl, and condensed ring alkylaryl.
  • the heteroaromatic atomic group is not particularly limited, and examples thereof include heteroaryl, heteroarylalkyl, alkylheteroaryl, fused ring heteroaryl, fused ring heteroarylalkyl, and fused ring alkylheteroaryl. .
  • each atomic group may or may not further have a substituent or a protecting group.
  • substituents or protecting groups they may be the same or different.
  • substituents include the substituents exemplified for the above R a , R b , R c and R d , and more specifically, for example, halogen, hydroxy, alkoxy, amino, carboxy, sulfo, nitro Carbamoyl, sulfamoyl, alkyl, alkenyl, alkynyl, haloalkyl, aryl, arylalkyl, alkylaryl, cycloalkyl, cycloalkenyl, cycloalkylalkyl, cyclylalkyl, hydroxyalkyl, alkoxyalkyl, aminoalkyl, silyl, silyloxyalkyl, Examples include pyrrolyl,
  • amino acid refers to any organic compound containing at least one amino group and one carboxy group in the molecule, as described above.
  • the “amino group” is not limited to —NH 2 group but also includes imino group (—NH—).
  • imino group —NH—
  • proline, hydroxyproline and the like do not contain an —NH 2 group in the molecule but an imino group (—NH—), and are included in the definition of “amino acid” in the present invention.
  • the “amino acid” may be a natural amino acid or an artificial amino acid as described later.
  • a compound represented by the following chemical formula (Ia2) or (Ia3) also includes an amino group and a carboxy group in the molecule, and thus is included in the definition of “amino acid” in the present invention. Therefore, for example, in the chemical formula (I), the structure in which the atomic group A is represented by the following chemical formula (A2) or chemical formula (A2a) is included in the definition of “amino acid residue” in the present invention. Further, for example, the “TPA” structure in Examples described later is also included in the definition of “amino acid residue” in the present invention.
  • “peptide” refers to an organic compound having a structure in which two or more amino acids are bound by peptide bonds.
  • the peptide bond may have an acid amide structure or an acid imide structure.
  • the amino group explicitly shown in the chemical formula (Ia) may be any amino group.
  • the carboxy group clearly shown in the chemical formula (Ia) may be any carboxy group.
  • the amino acid may be a natural amino acid or an artificial amino acid as described above, for example.
  • “natural amino acid” refers to an amino acid having a naturally occurring structure or an optical isomer thereof.
  • the method for producing the natural amino acid is not particularly limited, and for example, it may be extracted from nature or synthesized.
  • “artificial amino acid” refers to an amino acid having a structure that does not exist in nature. That is, the artificial amino acid refers to a carboxylic acid derivative containing an amino acid, that is, an amino group (an organic compound containing one or more amino groups and carboxy groups in the molecule) and having a structure that does not exist in nature.
  • the artificial amino acid preferably does not include a heterocycle.
  • the amino acid may be, for example, an amino acid constituting a protein.
  • the amino acid include glycine, ⁇ -alanine, arginine, asparagine, aspartic acid, cysteine, cystine, glutamine, glutamic acid, histidine, isoleucine, leucine, lysine, hydroxylysine, methionine, phenylalanine, serine, threonine, tyrosine, valine, At least selected from the group consisting of proline, 4-hydroxyproline, tryptophan, ⁇ -alanine, 1-amino-2-carboxycyclopentane, aminobenzoic acid, aminopyridinecarboxylic acid, and an amino acid represented by the following chemical formula (Ia2)
  • substituents examples include the substituents exemplified for Ra, Rb, Rc and Rd, and more specifically, for example, halogen, hydroxy, alkoxy, amino, carboxy, sulfo, nitro, carbamoyl, sulfamoyl.
  • Examples of the protecting group are the same as those exemplified for Ra, Rb, Rc and Rd.
  • an amino acid that is not a peptide of the chemical formula (Ia) has an isomer such as an optical isomer, a geometric isomer, or a stereoisomer, any isomer may be used.
  • R100 is an arbitrary substituent and may or may not be present. If present, one or a plurality of R100 may be present, and in the case of a plurality, they may be the same as or different from each other.
  • the optional substituent in R100 include the substituents exemplified for Ra, Rb, Rc and Rd, and more specifically, for example, halogen, hydroxy, alkoxy, amino, carboxy, sulfo, nitro.
  • the structure of the chemical formula (Ia) is the chemical formula (Ia2)
  • the structure of the atomic group A in the chemical formula (I) is represented by the following chemical formula (A2).
  • R100 in the following chemical formula (A2) is the same as R100 in the chemical formula (Ia2).
  • the structure of the chemical formula (Ia) is the chemical formula (Ia3)
  • the structure of the atomic group A in the chemical formula (I) is represented by the following chemical formula (A2a).
  • Examples of the structure of the chemical formula (I) include the following chemical formulas (I-1) to (I-7).
  • n and m are the chemical formulas Same as (I).
  • n and m are not particularly limited and are as described above.
  • the structure is shown in the following chemical formulas (I-1a), (I-1b) (I-4a), (I-6a) and (I-7a).
  • the linker region is represented by the following formula (II), for example.
  • X 1 and X 2 are each independently H 2 , O, S or NH; Y 1 and Y 2 are each independently a single bond, CH 2 , NH, O or S; R 3 is a hydrogen atom or substituent bonded to C-3, C-4, C-5 or C-6 on ring A; L 1 is an alkylene chain consisting of n atoms, wherein the hydrogen atom on the alkylene carbon atom is replaced with OH, OR a , NH 2 , NHR a , NR a R b , SH, or SR a May or may not be substituted, or L 1 is a polyether chain in which one or more carbon atoms of the alkylene chain are substituted with an oxygen atom,
  • Y 1 is NH, O or S
  • the atom of L 1 bonded to Y 1 is carbon
  • the atom of L 1 bonded to OR 1 is carbon, and oxygen atoms are not adjacent to each other
  • L 2 is
  • the ring A may contain a carbon-carbon double bond or a carbon-nitrogen double bond
  • the X region and the Y region are each bonded to the non-nucleotide structure via —OR 1 — or —OR 2 —;
  • R 1 and R 2 may or may not be present, and when present, R 1 and R 2 are each independently a nucleotide residue or the structure (II).
  • X 1 and X 2 are each independently, for example, H 2 , O, S or NH.
  • X 1 being H 2 means that X 1 forms CH 2 (methylene group) together with the carbon atom to which X 1 is bonded. The same is true for X 2.
  • Y 1 and Y 2 are each independently a single bond, CH 2 , NH, O or S.
  • l 1 or 2.
  • ring A is a 5-membered ring, for example, the pyrrolidine skeleton.
  • the pyrrolidine skeleton include a proline skeleton and a prolinol skeleton, and examples thereof include a bivalent structure.
  • ring A is a 6-membered ring, for example, the piperidine skeleton.
  • one carbon atom other than C-2 on ring A may be substituted with nitrogen, oxygen or sulfur.
  • Ring A may contain a carbon-carbon double bond or a carbon-nitrogen double bond in ring A.
  • Ring A may be, for example, either L-type or D-type.
  • R 3 is a hydrogen atom or a substituent bonded to C-3, C-4, C-5 or C-6 on the ring A.
  • R 3 is the above-described substituent, the substituent R 3 may be one, plural, or absent, and when plural, it may be the same or different.
  • the substituent R 3 is, for example, halogen, OH, OR 4 , NH 2 , NHR 4 , NR 4 R 5 , SH, SR 4 or an oxo group ( ⁇ O).
  • R 4 and R 5 are, for example, each independently a substituent or a protecting group, and may be the same or different.
  • substituents include halogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, haloalkyl, aryl, heteroaryl, arylalkyl, cycloalkyl, cycloalkenyl, cycloalkylalkyl, cyclylalkyl, hydroxyalkyl, alkoxyalkyl, aminoalkyl, heterocyclylalkenyl. , Heterocyclylalkyl, heteroarylalkyl, silyl, silyloxyalkyl and the like. The same applies hereinafter.
  • the substituent R 3 may be any of these listed substituents.
  • the protecting group is, for example, a functional group that converts a highly reactive functional group to inert, and examples thereof include known protecting groups.
  • the description of the literature J. F. W. McOmie, “Protecting Groups in Organic Chemistry” Prenum Press, London and New York, 1973) can be used as the protecting group.
  • the protective group is not particularly limited, and examples thereof include tert-butyldimethylsilyl group (TBDMS), bis (2-acetoxyethyloxy) methyl group (ACE), triisopropylsilyloxymethyl group (TOM), 1- (2 -Cyanoethoxy) ethyl group (CEE), 2-cyanoethoxymethyl group (CEM), tolylsulfonylethoxymethyl group (TEM), dimethoxytrityl group (DMTr) and the like.
  • TBDMS tert-butyldimethylsilyl group
  • ACE (2-acetoxyethyloxy) methyl group
  • TOM triisopropylsilyloxymethyl group
  • CEE 2-Cyanoethoxymethyl group
  • CEM 2-cyanoethoxymethyl group
  • TEM dimethoxytrityl group
  • DMTr dimethoxytrityl group
  • R 3 is OR 4
  • the protecting group is not particularly
  • L 1 is an alkylene chain composed of n atoms.
  • the hydrogen atom on the alkylene carbon atom may be substituted with, for example, OH, OR a , NH 2 , NHR a , NR a R b , SH, or SR a , or may not be substituted.
  • L 1 may be a polyether chain in which one or more carbon atoms of the alkylene chain are substituted with an oxygen atom.
  • the polyether chain is, for example, polyethylene glycol.
  • L 2 is an alkylene chain composed of m atoms.
  • the hydrogen atom on the alkylene carbon atom may be substituted with, for example, OH, OR c , NH 2 , NHR c , NR c R d , SH or SR c , or may not be substituted.
  • L 2 may be a polyether chain in which one or more carbon atoms of the alkylene chain are substituted with an oxygen atom.
  • Y 2 is NH, O or S
  • the L 2 atom bonded to Y 2 is carbon
  • the L 2 atom bonded to OR 2 is carbon
  • oxygen atoms are not adjacent to each other. That is, for example, when Y 2 is O, the oxygen atom and the oxygen atom of L 2 are not adjacent, and the oxygen atom of OR 2 and the oxygen atom of L 2 are not adjacent.
  • N in L 1 and m in L 2 are not particularly limited, and the lower limit is, for example, 0, and the upper limit is not particularly limited.
  • n and m can be appropriately set according to the desired length of the non-nucleotide structure, for example.
  • n and m are each preferably 0 to 30, more preferably 0 to 20, and still more preferably 0 to 15 from the viewpoint of production cost and yield.
  • n + m is, for example, 0 to 30, preferably 0 to 20, and more preferably 0 to 15.
  • R a , R b , R c and R d are, for example, each independently a substituent or a protecting group.
  • the substituent and the protecting group are the same as described above, for example.
  • hydrogen atoms may be independently substituted with halogens such as Cl, Br, F and I, for example.
  • the X region and the Y region are bonded to the non-nucleotide structure via, for example, —OR 1 — or —OR 2 —, respectively.
  • R 1 and R 2 may or may not exist.
  • R 1 and R 2 are each independently a nucleotide residue or the structure of formula (II).
  • the non-nucleotide structure is, for example, the non-nucleotide residue having the structure of the formula (II) excluding the nucleotide residue R 1 and / or R 2 , And the nucleotide residues.
  • the non-nucleotide structure is, for example, a structure in which two or more of the non-nucleotide residues having the structure of the formula (II) are linked. Become.
  • the structure of formula (II) may include, for example, 1, 2, 3 or 4.
  • the structure (II) may be directly linked or may be bonded via the nucleotide residue.
  • R 1 and R 2 are not present, the non-nucleotide structure is formed only from the non-nucleotide residue consisting of the structure of the formula (II), for example.
  • the combination of the bond between the X region and the Y region and —OR 1 — and —OR 2 — is not particularly limited, and examples thereof include any of the following conditions.
  • Condition (1) The X region is bonded to the structure of the formula (II) through —OR 2 — and the Y region is bonded through —OR 1 —.
  • Condition (2) The X region is bonded to the structure of the formula (II) through —OR 1 —, and the Y region is bonded through —OR 2 —.
  • Examples of the structure of the formula (II) include the following formulas (II-1) to (II-9).
  • n and m are the same as the formula (II).
  • q is an integer of 0 to 10.
  • n, m and q are not particularly limited and are as described above.
  • alkyl includes, for example, a linear or branched alkyl group.
  • the number of carbon atoms of the alkyl is not particularly limited, and is, for example, 1 to 30, preferably 1 to 6, and more preferably 1 to 4.
  • alkyl group examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, n-pentyl, isopentyl, neopentyl, n-hexyl, isohexyl, n-heptyl, Examples thereof include n-octyl, n-nonyl, n-decyl and the like.
  • Preferred examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, n-pentyl, isopentyl, neopentyl, n-hexyl, isohexyl and the like.
  • alkenyl includes, for example, linear or branched alkenyl.
  • alkenyl include those having one or more double bonds in the alkyl.
  • the number of carbon atoms of the alkenyl is not particularly limited, and is the same as, for example, the alkyl, preferably 2 to 8.
  • alkenyl include vinyl, 1-propenyl, 2-propenyl, 1-butenyl, 2-butenyl, 3-butenyl, 1,3-butadienyl, 3-methyl-2-butenyl and the like.
  • alkynyl includes, for example, linear or branched alkynyl.
  • alkynyl include those having one or more triple bonds in the alkyl.
  • the number of carbon atoms of the alkynyl is not particularly limited, and is the same as, for example, the alkyl, preferably 2 to 8.
  • examples of the alkynyl include ethynyl, propynyl, butynyl and the like.
  • the alkynyl may further have one or more double bonds, for example.
  • aryl includes, for example, a monocyclic aromatic hydrocarbon group and a polycyclic aromatic hydrocarbon group.
  • the monocyclic aromatic hydrocarbon group include phenyl and the like.
  • the polycyclic aromatic hydrocarbon group include 1-naphthyl, 2-naphthyl, 1-anthryl, 2-anthryl, 9-anthryl, 1-phenanthryl, 2-phenanthryl, 3-phenanthryl, 4-phenanthryl, 9- And phenanthryl.
  • Preferable examples include naphthyl such as phenyl, 1-naphthyl and 2-naphthyl.
  • heteroaryl includes, for example, a monocyclic aromatic heterocyclic group and a condensed aromatic heterocyclic group.
  • heteroaryl include furyl (eg, 2-furyl, 3-furyl), thienyl (eg, 2-thienyl, 3-thienyl), pyrrolyl (eg, 1-pyrrolyl, 2-pyrrolyl, 3-pyrrolyl), Imidazolyl (eg, 1-imidazolyl, 2-imidazolyl, 4-imidazolyl), pyrazolyl (eg, 1-pyrazolyl, 3-pyrazolyl, 4-pyrazolyl), triazolyl (eg, 1,2,4-triazol-1-yl, 1,2,4-triazol-3-yl, 1,2,4-triazol-4-yl), tetrazolyl (eg 1-tetrazolyl, 2-tetrazolyl, 5-tetrazolyl), oxazolyl (eg 2-
  • cycloalkyl is, for example, a cyclic saturated hydrocarbon group, and the number of carbons is, for example, 3-15.
  • the cycloalkyl include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl, a bridged cyclic hydrocarbon group, a spiro hydrocarbon group, and the like, preferably cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl. And a bridged cyclic hydrocarbon group.
  • the “bridged cyclic hydrocarbon group” includes, for example, bicyclo [2.1.0] pentyl, bicyclo [2.2.1] heptyl, bicyclo [2.2.2] octyl and bicyclo [3. 2.1] octyl, tricyclo [2.2.1.0] heptyl, bicyclo [3.3.1] nonane, 1-adamantyl, 2-adamantyl and the like.
  • examples of the “spiro hydrocarbon group” include spiro [3.4] octyl and the like.
  • cycloalkenyl includes, for example, a cyclic unsaturated aliphatic hydrocarbon group, and has, for example, 3 to 7 carbon atoms.
  • examples of the cycloalkenyl include cyclopropenyl, cyclobutenyl, cyclopentenyl, cyclohexenyl, cycloheptenyl and the like, and preferably cyclopropenyl, cyclobutenyl, cyclopentenyl, cyclohexenyl and the like.
  • the cycloalkenyl includes, for example, a bridged cyclic hydrocarbon group and a spiro hydrocarbon group having an unsaturated bond in the ring.
  • arylalkyl includes, for example, benzyl, 2-phenethyl, naphthalenylmethyl and the like
  • cycloalkylalkyl or “cyclylalkyl” includes, for example, cyclohexylmethyl, adamantylmethyl and the like.
  • hydroxyalkyl include hydroxymethyl and 2-hydroxyethyl.
  • alkoxy includes, for example, the alkyl-O— group, and examples thereof include methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, and n-butoxy.
  • Alkoxyalkyl includes, for example, Examples thereof include methoxymethyl and the like, and “aminoalkyl” includes, for example, 2-aminoethyl and the like.
  • heterocyclyl is, for example, 1-pyrrolinyl, 2-pyrrolinyl, 3-pyrrolinyl, 1-pyrrolidinyl, 2-pyrrolidinyl, 3-pyrrolidinyl, pyrrolidinone, 1-imidazolinyl, 2-imidazolinyl, 4-imidazolinyl, 1 -Imidazolidinyl, 2-imidazolidinyl, 4-imidazolidinyl, imidazolidinone, 1-pyrazolinyl, 3-pyrazolinyl, 4-pyrazolinyl, 1-pyrazolidinyl, 3-pyrazolidinyl, 4-pyrazolidinyl, piperidinone, piperidinyl, 2-piperidinyl 4-piperidinyl, 1-piperazinyl, 2-piperazinyl, piperazinone, 2-morpholinyl, 3-morpholinyl, morpholino, tetrahydropyranyl, tetra
  • heterocyclylalkyl includes, for example, piperidinylmethyl, piperazinylmethyl and the like
  • heterocyclylalkenyl includes, for example, 2-piperidinylethenyl and the like
  • heteroarylalkyl Examples include pyridylmethyl and quinolin-3-ylmethyl.
  • sil includes a group represented by the chemical formula R 3 Si—, and R can be independently selected from the above alkyl, aryl and cycloalkyl, for example, trimethylsilyl group, tert-butyldimethylsilyl
  • R can be independently selected from the above alkyl, aryl and cycloalkyl, for example, trimethylsilyl group, tert-butyldimethylsilyl
  • the “silyloxy” includes, for example, a trimethylsilyloxy group, and the “silyloxyalkyl” includes, for example, trimethylsilyloxymethyl.
  • alkylene includes, for example, methylene, ethylene, propylene and the like.
  • the various groups described above may be substituted.
  • substituents include hydroxy, carboxy, sulfo, halogen, alkyl halide (haloalkyl, eg, CF 3 , CH 2 CF 3 , CH 2 CCl 3 ), nitro, nitroso, cyano, alkyl (eg, methyl, ethyl).
  • alkenyl eg, vinyl
  • alkynyl eg, ethynyl
  • cycloalkyl eg, cyclopropyl, adamantyl
  • cycloalkylalkyl eg, cyclohexylmethyl, adamantylmethyl
  • cycloalkenyl eg, : Cyclopropenyl
  • cyclylalkyl hydroxyalkyl (eg, hydroxymethyl, hydroxyethyl), alkoxyalkyl (eg, methoxymethyl, ethoxymethyl, ethoxyethyl), aryl (eg, phenyl, naphthyl), arylalkyl
  • alkenyl eg, vinyl
  • alkynyl eg, ethynyl
  • cycloalkyl eg, cyclopropyl, adamantyl
  • cycloalkylalkyl e
  • the artificial match-type miRNA of the present invention may contain, for example, a labeling substance and may be labeled with the labeling substance.
  • the labeling substance is not particularly limited, and examples thereof include fluorescent substances, dyes, isotopes and the like.
  • the labeling substance include fluorophores such as pyrene, TAMRA, fluorescein, Cy3 dye, and Cy5 dye, and examples of the dye include Alexa dye such as Alexa488.
  • the isotope include a stable isotope and a radioactive isotope, and preferably a stable isotope.
  • the stable isotope does not change the physical properties of the labeled compound, for example, and is excellent in properties as a tracer.
  • the stable isotope is not particularly limited, and examples thereof include 2 H, 13 C, 15 N, 17 O, 18 O, 33 S, 34 S, and 36 S.
  • the artificial match-type miRNA of the present invention can suppress the expression of the target gene. Therefore, the artificial match-type miRNA of the present invention can be used as a therapeutic agent for diseases caused by genes, for example.
  • the disease can be treated, for example, by suppressing the expression of the target gene.
  • “treatment” includes, for example, the meanings of preventing the disease, improving the disease, and improving the prognosis.
  • the disease is not particularly limited, and for example, the expression suppression sequence can be appropriately set according to the target disease.
  • Examples of the disease include breast cancer, lung cancer, stomach cancer, colon cancer, liver cancer, pancreatic cancer, esophageal cancer, prostate cancer, gallbladder cancer, uterine body cancer, cervical cancer, and ovarian cancer.
  • diseases such as osteosarcoma, cancer such as leukemia, pulmonary fibrosis, liver fibrosis and the like.
  • the method for using the artificial match-type miRNA of the present invention is not particularly limited, and for example, the artificial match-type miRNA may be administered to an administration subject having the target gene.
  • Examples of the administration subject include cells, tissues, and organs.
  • Examples of the administration subject include non-human animals such as humans and non-human mammals other than humans.
  • the administration may be, for example, in vivo or in vitro .
  • the cells are not particularly limited, and examples thereof include various cultured cells such as HeLa cells, 293 cells, NIH3T3 cells, and COS cells, stem cells such as ES cells and hematopoietic stem cells, and cells isolated from living bodies such as primary cultured cells. can give.
  • the target gene to be subject to expression suppression is not particularly limited, and a desired gene can be set. And as above-mentioned, what is necessary is just to select the said mature miRNA according to the kind of said target gene.
  • composition of the present invention expression suppression method, treatment method and the like described later can be referred to.
  • the artificial match-type miRNA of the present invention can suppress the expression of a target gene as described above, it is useful, for example, as a research tool for pharmaceuticals, diagnostic agents, agricultural chemicals, agriculture, medicine, life sciences and the like. is there.
  • the method for synthesizing the artificial match-type miRNA of the present invention is not particularly limited, and conventionally known nucleic acid production methods can be employed.
  • the synthesis method include a synthesis method using a genetic engineering technique, a chemical synthesis method, and the like.
  • genetic engineering techniques include in vitro transcription synthesis, a method using a vector, and a method using a PCR cassette.
  • the vector is not particularly limited, and examples thereof include non-viral vectors such as plasmids and viral vectors.
  • the chemical synthesis method is not particularly limited, and examples thereof include a phosphoramidite method and an H-phosphonate method. In the chemical synthesis method, for example, a commercially available automatic nucleic acid synthesizer can be used.
  • amidite is generally used.
  • the amidite is not particularly limited, and examples of commercially available amidites include RNA Phosphoramidates (2′-O-TBDMSi, trade name, Michisato Pharmaceutical), ACE amidite, TOM amidite, CEE amidite, CEM amidite, TEM amidite, and the like. Can be given.
  • the composition for suppressing expression of the present invention is a composition for suppressing the expression of a target gene, and includes the artificial match-type miRNA of the present invention. .
  • the composition of the present invention is characterized by including the artificial match-type miRNA of the present invention, and other configurations are not limited at all.
  • the expression suppressing composition of the present invention can also be referred to as an expression suppressing reagent, for example.
  • expression of the target gene can be suppressed by administration to a subject in which the target gene exists.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is characterized by containing the artificial match-type miRNA of the present invention.
  • the composition of the present invention is characterized by containing the artificial match-type miRNA of the present invention, and other configurations are not limited at all.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can also be referred to as a pharmaceutical product, for example.
  • treatment includes, for example, the meanings of prevention of the above-mentioned diseases, improvement of the diseases, and improvement of the prognosis.
  • the disease to be treated is not particularly limited, and examples thereof include diseases caused by gene expression.
  • a gene causing the disease is set as the target gene, and further, a guide strand sequence of the mature miRNA may be selected according to the target gene.
  • composition for suppressing expression and the pharmaceutical composition (hereinafter referred to as composition) of the present invention
  • the method for using the composition for suppressing expression and the pharmaceutical composition (hereinafter referred to as composition) of the present invention is not particularly limited.
  • the artificial match-type miRNA is administered to an administration subject having the target gene. do it.
  • Examples of the administration subject include cells, tissues, and organs.
  • Examples of the administration subject include non-human animals such as humans and non-human mammals other than humans.
  • the administration may be, for example, in vivo or in vitro .
  • the cells are not particularly limited, and examples thereof include various cultured cells such as HeLa cells, 293 cells, NIH3T3 cells, and COS cells, stem cells such as ES cells and hematopoietic stem cells, and cells isolated from living bodies such as primary cultured cells. can give.
  • the administration method is not particularly limited, and can be appropriately determined according to the administration subject, for example.
  • the administration subject is a cultured cell
  • examples thereof include a method using a transfection reagent and an electroporation method.
  • composition of the present invention may contain, for example, only the artificial match-type miRNA of the present invention, or may further contain other additives.
  • the additive is not particularly limited, and for example, a pharmaceutically acceptable additive is preferable.
  • the type of the additive is not particularly limited, and can be appropriately selected depending on, for example, the type of administration target.
  • the artificial match miRNA may form a complex with the additive, for example.
  • the additive can also be referred to as a complexing agent, for example.
  • the complex formation for example, the artificial match miRNA can be efficiently delivered.
  • the complexing agent is not particularly limited, and examples thereof include a polymer, cyclodextrin, adamantine and the like.
  • examples of the cyclodextrin include a linear cyclodextrin copolymer and a linear oxidized cyclodextrin copolymer.
  • Examples of the additive include a carrier, a binding substance to a target cell, a condensing agent, a fusing agent, an excipient, and the like.
  • the expression suppression method of the present invention is a method of suppressing the expression of a target gene, characterized by using the artificial match-type miRNA of the present invention.
  • the expression suppression method of the present invention is characterized by using the artificial match-type miRNA of the present invention, and other steps and conditions are not limited at all.
  • the mechanism for suppressing the expression of the target gene is not particularly limited, and examples thereof include expression suppression by mature miRNA.
  • the expression suppression method of the present invention includes, for example, a step of administering the artificial match-type miRNA to a subject in which the target gene is present.
  • the artificial match type miRNA is brought into contact with the administration subject.
  • the administration subject include cells, tissues, and organs.
  • the administration subject include non-human animals such as humans and non-human mammals other than humans.
  • the administration may be, for example, in vivo or in vitro .
  • the artificial match-type miRNA may be administered alone, or the composition of the present invention containing the artificial match-type miRNA may be administered.
  • the administration method is not particularly limited, and can be appropriately selected depending on, for example, the type of administration target.
  • the treatment method of the disease of the present invention comprises the step of administering the artificial match-type miRNA of the present invention to a patient, wherein the guide strand sequence in the artificial match-type miRNA is the above-mentioned It is a guide strand sequence of a mature miRNA that suppresses the expression of a gene involved in a disease.
  • the treatment method of the present invention is characterized by using the artificial match-type miRNA of the present invention, and other steps and conditions are not limited at all.
  • the expression suppression method of the present invention can be used.
  • the administration method is not particularly limited, and may be, for example, oral administration or parenteral administration.
  • the use of the present invention is use of the artificial match-type miRNA of the present invention for suppressing expression of the target gene.
  • the single-stranded nucleic acid of the present invention is a single-stranded nucleic acid for use in the treatment of a disease, and the single-stranded nucleic acid is the artificial match-type miRNA of the present invention, and the artificial match-type miRNA described above
  • the guide strand sequence is a guide strand sequence of a mature miRNA that suppresses the expression of a gene involved in the disease.
  • Example 1 Based on the guide strand of mature miR-34a, the artificial match-type miRNA of the present invention was synthesized, and suppression of proliferation of H1299 cells was confirmed.
  • an X region composed of the guide strand (SEQ ID NO: 1) and an additional sequence, and a Y region composed of a sequence completely complementary to the X region and an overhang are represented by the following formulae: Matched miR-34a linked via the non-nucleotide structure of the proline derivative (represented by [P] in the sequence) was synthesized.
  • the underlined portion corresponds to the guide strand.
  • the non-nucleotide structure in the matched miRNA is represented by the following formula, and was introduced by using L-proline diamide amidite (see WO2012 / 017919) in the synthesis of the matched miRNA.
  • a match-type miR-34a scramble comprising a guide strand in which the base composition of the guide strand was scrambled and a corresponding passenger strand was synthesized.
  • Mature miR-34a Guide strand (SEQ ID NO: 1) 5'- UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGU -3 ' Passenger strand (SEQ ID NO: 6) 5'-CAAUCAGCAAGUAUACUGCCCU-3 ' Mature miR-34a scrambled guide strand (SEQ ID NO: 7) 5'- UGUAUCGUUAUCGGGUCGGUUG -3 ' Passenger strand (SEQ ID NO: 8) 5'-CAACCGACCCGAUAACGAUACA-3 ' Matched miR-34a (SEQ ID NO: 9) 5'- UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGU UCC- [P] -GGAACAACCAGCUAAGACACUGCCAUA-3 ' Match-type miR-34a scramble (SEQ ID NO: 10) 5'- UGUAUCGUUAUCGG
  • the cells were cultured in the above-mentioned medium, and the culture solution was dispensed into a 24-well plate at 500 ⁇ L at 1 ⁇ 10 4 cells / well. Furthermore, after culturing the cells in the well for 24 hours, the miRNA was transfected using a transfection reagent RNAi MAX Transfection Reagent (trade name, Life Technologies) according to the attached protocol.
  • the composition per well was set as follows. In the following composition, (B) is Opti-MEM (trade name, Invitrogen), (C) is the RNA solution, and 49 ⁇ L of both was added. In the well, the final concentration of the miRNA was 100 nmol / L. After transfection, the cells in the wells were cultured for 3 days. And after the culture
  • FIG. 2 is a graph showing the number of cells per well.
  • “Normal” is an untreated cell
  • “Mock” is a cell into which only a transfection reagent is introduced
  • “Scramble” is a miR-34a scramble of a negative control
  • “miR-34a” is a positive control.
  • the mature miR-34a, “Scramble match” indicates the negative control match-type miR-34a scramble
  • “miR-34a match” indicates the result of the match-type miR-34a of the example (hereinafter the same).
  • the match-type miR-34a of the example was able to reduce the cell number to the same extent as the mature miR-34a of the positive control.
  • FIG. 3 is a graph showing relative values of cell proliferation.
  • the match type miR-34a of the example was able to reduce the number of cells to the same extent as the positive miR-34a of the positive control.
  • FIG. 4 is a graph showing early apoptosis (%) and late apoptosis (%).
  • the match-type miR-34a of the example was able to enhance apoptosis to the same extent as the mature miR-34a of the positive control.
  • reverse transcriptase (trade name: M-MLV reverse transcriptase, Invitrogen) was used to synthesize cDNA from the RNA according to the attached protocol. Then, quantitative PCR was performed using the synthesized cDNA as a template, and the amounts of AXL cDNA and MET cDNA were measured. GAPDH cDNA was used as an internal control, and the amount of the cDNA was measured together.
  • FIG. 5 (A) shows the result of AXL mRNA
  • FIG. 5 (B) shows the result of MET mRNA.
  • the match-type miR-34a of the example showed a decrease in the amount of AXL mRNA and the amount of MET mRNA, similar to the mature miR-34a of the positive control. For this reason, it can be said that the transcription
  • mold miRNA is also suppressed.
  • the match type miR-34a of the example suppresses the expression of AXL mRNA, MET mRNA, and the like, and can suppress the proliferation of H1299 cells and enhance apoptosis.
  • the artificial match-type miRNA is a single-stranded nucleic acid molecule, so that it is not necessary to anneal each single strand during use, and TLR3 involved in innate immunity. It is also possible to avoid being recognized.
  • Example 2 For the match type miR-34a of Example 1, the additional sequence in the X region and the overhang in the Y region were shortened.
  • match-type miR-34a has a 3 base-long additional sequence (J) surrounded by a square on the 3 ′ side of the X region, and on the 5 ′ side of the Y region. It has an overhang (O) with a length of 2 bases surrounded by a square. Therefore, a molecule in which the additional sequence is deleted by one base from the 3 ′ side and the corresponding Y region side sequence is deleted by one base from the 5 ′ side, and the overhang is deleted by one base from the 3 ′ side.
  • a lost molecule and a molecule in which the additional sequence and the overhang were deleted one by one were synthesized, and in the same manner as in Example 1, suppression of expression of AXL mRNA and MET mRNA was confirmed.
  • the 5 ′ side region of [P] is the X region, and in the X region, the underlined portion is the guide strand sequence, and the other is the additional sequence, and the 3 ′ side region of [P] Is a Y region, and in the Y region, a region surrounded by a square is an overhang.
  • FIG. 6 shows the results of AXL mRNA
  • FIG. 7 shows the results of MET mRNA.
  • Example 3 For the matched miR-34a, the non-nucleotide structure of the linker was altered and the additional sequence in the X region was increased or decreased, and the effect of suppressing the expression of AXL mRNA and MET RNA was examined.
  • match-type miR-34a (PH-0039) in which the base sequence of the overhang portion was modified was synthesized from match-type miR-34a of Example 1. Further, a molecule in which the additional sequence of PH-0039 and the corresponding Y region side sequence are deleted (PH-0037), and a molecule in which the additional sequence and the corresponding Y region side sequence are extended to 5 bases (PH -0093) was synthesized.
  • the non-nucleotide structure was introduced by using terephthalate amidite (see WO2013 / 133221).
  • GlyGly in the chemical formula (G2) is an atomic group represented by the following chemical formula (GlyGly), provided that the terminal carbonyl carbon in the chemical formula (GlyGly) is bonded to the N atom in the chemical formula (G2).
  • the terminal nitrogen atom in the following chemical formula (GlyGly) is bonded to the carbonyl carbon of the chemical formula (G2).
  • molecules (KH-0007 and KH-0011) were synthesized by substituting the linker regions of PH-0037 and PH-0039 with the non-nucleotide structure of the lysine derivative represented by the following formula (represented by [K] in the sequence), respectively.
  • the non-nucleotide structure of the glycine derivative is glycinamide amidite (see WO2013 / 103146)
  • the non-nucleotide structure of the glycylglycine derivative is glycylglycinamide amidite (see WO2013 / 133221)
  • the non-nucleotide structure of a lysine derivative Were introduced by using L-lysine amide amidites (see WO2013 / 103146), respectively.
  • each linker is an X region, and in the X region, the underlined portion is the guide strand sequence, the other is the additional sequence, and the 3 ′ region of each linker is Y It is an area.
  • PH-0000 SEQ ID NO: 31
  • a molecule NM-0004 in which the mature miR-34a guide strand and passenger strand are joined by the loop portion of the natural pre-miRNA and the mature miRNA guide strand and its completely complementary sequence were annealed.
  • a double-stranded matched RNA (NI-0209) was synthesized.
  • NM-0004 (SEQ ID NO: 32) 5'- UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGU UGUGAGCAAUAGUAAGGAAGCAAUCAGCAAGUAUACUGCCCU-3 ' NI-0209 Guide strand (SEQ ID NO: 1) / passenger strand (SEQ ID NO: 33) 5'-UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGU-3 '/ 5'-AACCAGCUAAGACACUGCCACU-3'
  • RNA was dissolved in distilled water for injection (Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) so as to be 4 ⁇ mol / L to prepare an RNA solution.
  • H1299 cells As cells, H1299 cells (ATCC) were used.
  • the medium used was RPMI Medium 1640 (Life Technologies) containing 10% FBS.
  • the culture conditions were 37 ° C. and 5% CO 2 .
  • the cells were cultured in the above-mentioned medium, and the culture solution was dispensed into a 24-well plate in a volume of 400 ⁇ L at 4 ⁇ 10 4 cells / well.
  • the RNA was transfected using the transfection reagent Lipofectamine RNAiMAX (Life Technologies) according to the protocol attached to the transfection reagent.
  • the composition per well was set as follows, and transfection was performed.
  • (B) is Opti-MEM (Life Technologies)
  • C) is 0.4 ⁇ mol / L and 2 ⁇ mol / L of the RNA solution, and 98.5 ⁇ L of both were added.
  • the final concentration of RNA was 2 nmol / L.
  • PCR was performed using the synthesized cDNA as a template, and the expression levels of the AXL and MET genes and the expression level of the GAPDH gene as an internal standard were measured. The expression levels of the AXL and MET genes were corrected by the expression level of the GAPDH gene.
  • LightCycler 480 SYBR Green I Master (trade name, Roche) was used as a reagent
  • LightCycler 480 Instrument II (trade name, Roche) was used as a device (hereinafter the same).
  • the following primer sets were used for amplification of the AXL, MET, and GAPDH genes, respectively.
  • PCR primer set for AXL gene (SEQ ID NO: 11) 5'-CTCAACCAGGACGACTCCAT-3 ' (SEQ ID NO: 12) 5'-AGACCGCTTCACTCAGGAAA-3 ' PCR primer set for MET gene (SEQ ID NO: 13) 5'-CAGGCAGTGCAGCATGTAGT-3 ' (SEQ ID NO: 14) 5'-TGTCCAACAAAGTCCCATGA-3 ' GAPDH gene primer set (SEQ ID NO: 15) 5'-ATGGGGAAGGTGAAGGTCG-3 ' (SEQ ID NO: 16) 5'-GGGTCATTGATGGCAACAATATC-3 '
  • the gene expression level was also measured for cells in which only 100 ⁇ L of the solution (B) was added to the culture solution ( ⁇ ).
  • the RNA solution was not added, and the cells treated in the same manner except that (A) 1.5 ⁇ L and (B) were added in total 100 ⁇ L were also used for gene expression. The amount was measured (mock).
  • the expression level in control cells was taken as 1, and the relative value of the expression level in cells into which each RNA was introduced was determined.
  • Example 4 Based on the guide strand of mature let-7a, various artificial match-type miRNAs of the present invention were synthesized, and the effect of suppressing the expression of the target gene, HMGA2 mRNA, was examined.
  • an X region consisting of a guide chain sequence of mature let-7a and an additional sequence (0, 3 or 5 bases in length) thereof, a completely complementary to the X region, and 5 ′ side
  • a proline derivative ([P]) a proline derivative ([P])
  • TP] terephthalic acid derivative
  • Gly glycine derivative
  • glycylglycine a proline derivative between the Y region having an overhang of 2 bases in length
  • Various artificial match-type let-7a into which a linker of a derivative ([GlyGly]) and a lysine derivative ([K]) was introduced was synthesized.
  • each linker is an X region, and in the X region, the underlined portion is the guide strand sequence, the other is the additional sequence, and the 3 ′ region of each linker is Y It is an area.
  • RNA was dissolved in distilled water for injection (Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) so as to be 0.4 ⁇ mol / L to prepare an RNA solution.
  • A549 cells (DS Pharma Biomedical) were used.
  • DMEM fetal bovine serum
  • FBS fetal bovine serum
  • the cells were cultured in the above-mentioned medium, and the culture solution was dispensed into a 24-well plate in a volume of 400 ⁇ L at 4 ⁇ 10 4 cells / well.
  • the RNA was transfected using the transfection reagent Lipofectamine RNAiMAX (Life Technologies) according to the protocol attached to the transfection reagent.
  • the composition per well was set as follows, and transfection was performed.
  • (B) is Opti-MEM (Life Technologies)
  • C) is 0.1 ⁇ mol / L and 0.2 ⁇ mol / L of the RNA solution, and 98.5 ⁇ L of both were added together.
  • the final concentration of RNA was 0.2 nmol / L.
  • PCR was performed using the synthesized cDNA as a template, and the expression level of the HMGA2 gene and the expression level of the GAPDH gene as an internal standard were measured.
  • LightCycler 480 SYBR Green I Master (trade name, Roche) was used as a reagent
  • LightCycler 480 Instrument II (trade name, Roche) was used as a device (hereinafter the same).
  • the following primer sets were used for amplification of the HMGA2 gene and GAPDH gene, respectively.
  • PCR primer set for HMGA2 gene (SEQ ID NO: 39) 5'-GAAGCCACTGGAGAAAAACG-3 ' (SEQ ID NO: 40) 5′-CTTCGGCAGACTCTTGTGAG-3 ′ GAPDH gene primer set (SEQ ID NO: 15) 5'-ATGGGGAAGGTGAAGGTCG-3 ' (SEQ ID NO: 16) 5'-GGGTCATTGATGGCAACAATATC-3 '
  • the gene expression level was also measured for cells in which only 100 ⁇ L of the solution (B) was added to the culture solution ( ⁇ ).
  • the RNA solution was not added, and the cells treated in the same manner except that (A) 1.5 ⁇ L and (B) were added in total 100 ⁇ L were also used for gene expression. The amount was measured (mock).
  • the expression level in the cells of the control was taken as 1, and the relative value of the expression level in the cells into which each RNA was introduced was determined.
  • the match-type let-7a of the example shows the expression of HMGA2 mRNA at the same level or higher than that of the positive control mature let-7a or double-stranded match-type let-7a. Suppressed. Moreover, even if the non-nucleotide structure of the linker region and the base length of the additional sequence of the X region were modified, the effect of suppressing the expression of HMGA2 mRNA was maintained.
  • Example 5 Based on the guide strand of mature miR-29b, various artificial match-type miRNAs of the present invention were synthesized, and the effect of suppressing the expression of the target gene COLA1 mRNA was examined.
  • NM-0005 (SEQ ID NO: 42) 5'-GCUGGUUUCAUAUGGUGGUUUAGAUUUAAAUAGUGAUUGUC UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUU -3 ' NI-0211 Passenger strand (SEQ ID NO: 41) / guide strand (SEQ ID NO: 5) 5'-CACUGAUUUCAAAUGGUGCUAGA-3 '/ 5'- UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUU -3'
  • an X region consisting of a guide strand sequence of mature miR-29b and an additional sequence (0, 3 or 5 bases length) on the 3 ′ side thereof, a complete complement to the X region, and the 5 ′ side
  • a proline derivative ([P]) a proline derivative ([P])
  • TP] terephthalic acid derivative
  • Gly glycine derivative
  • glycylglycine a glycylglycine between the Y region having an overhang of 2 bases in length
  • Various artificial match type miR-29b into which a linker of a derivative ([GlyGly]) and a lysine derivative ([K]) was introduced was synthesized.
  • each linker is an X region, and in the X region, the underlined portion is the guide strand sequence, the other is the additional sequence, and the 3 ′ region of each linker is Y It is an area.
  • RNA was dissolved in distilled water for injection (Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) so as to be 1 ⁇ mol / L to prepare an RNA solution.
  • A549 cells (DS Pharma Biomedical) were used.
  • DMEM fetal bovine serum
  • FBS fetal bovine serum
  • the cells were cultured in the above-mentioned medium, and the culture solution was dispensed into a 24-well plate in a volume of 400 ⁇ L at 4 ⁇ 10 4 cells / well.
  • the RNA was transfected using the transfection reagent Lipofectamine RNAiMAX (Life Technologies) according to the protocol attached to the transfection reagent.
  • the composition per well was set as follows, and transfection was performed.
  • (B) is Opti-MEM (Life Technologies)
  • C) is 0.4 ⁇ mol / L and 2 ⁇ mol / L of the RNA solution, and 98.5 ⁇ L of both were added.
  • the final concentration of RNA was 0.5 nmol / L.
  • PCR was performed using the synthesized cDNA as a template, and the expression level of the COL1A1 gene and the expression level of the GAPDH gene as an internal standard were measured.
  • LightCycler 480 SYBR Green I Master (trade name, Roche) was used as a reagent
  • LightCycler 480 Instrument II (trade name, Roche) was used as a device (hereinafter the same).
  • the following primer sets were used for the amplification of the COL1A1 gene and the GAPDH gene, respectively.
  • PCR primer set for COL1A1 gene (SEQ ID NO: 46) 5'-CCCAAGGACAAGAGGCATGT-3 ' (SEQ ID NO: 47) 5′-CCGCCATACTCGAACTGGAA-3 ′ GAPDH gene primer set (SEQ ID NO: 15) 5'-ATGGGGAAGGTGAAGGTCG-3 ' (SEQ ID NO: 16) 5'-GGGTCATTGATGGCAACAATATC-3 '
  • the gene expression level was also measured for cells in which only 100 ⁇ L of the solution (B) was added to the culture solution ( ⁇ ).
  • the RNA solution was not added, and the cells treated in the same manner except that (A) 1.5 ⁇ L and (B) were added in total 100 ⁇ L were also used for gene expression. The amount was measured (mock).
  • the expression level in the cells of the control was set to 1, and the relative value of the expression level in the cells into which each RNA was introduced was determined.
  • the match-type miR-29b of the example shows the expression of COLA1 mRNA at the same level or higher than that of the positive control mature miR-29b and the double-stranded match-type miR-29b. Suppressed. Moreover, even when the non-nucleotide structure of the linker region and the base length of the additional sequence of the X region were modified, the COLA1 mRNA expression inhibitory effect was maintained.
  • the artificial match-type miRNA of the present invention can be easily synthesized at low cost, and can suppress the translation of the protein encoded by the gene. Since the artificial match-type miRNA of the present invention can suppress the expression of a target gene as described above, it is useful, for example, as a research tool for pharmaceuticals, diagnostic agents, agricultural chemicals, agriculture, medicine, life sciences, and the like. .

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Abstract

　本発明は、ｍｉＲＮＡを利用した新たな人工マッチ型ｍｉＲＮＡを提供する。　Ｘ領域とＹ領域とを有する一本鎖核酸であり、前記Ｘ領域の３'末端と前記Ｙ領域の５'末端とが非ヌクレオチド構造のリンカー領域を介して連結し、前記Ｘ領域は、成熟ｍｉＲＮＡのガイド鎖配列を含み、前記Ｙ領域は、前記Ｘ領域と完全に相補な配列を含む一本鎖核酸を、人工マッチ型ｍｉＲＮＡとする。この人工マッチ型ｍｉＲＮＡによれば、前記標的遺伝子の発現を抑制できる。

Description

遺伝子発現制御のための人工マッチ型ｍｉＲＮＡおよびその用途
　本発明は、遺伝子発現を抑制する人工マッチ型ｍｉＲＮＡおよびその用途に関する。
　マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）は、遺伝子の発現を抑制する核酸分子として知られており、例えば、以下のような生成プロセスを経て、遺伝子がコードするタンパク質の転写を抑制すると報告されている。すなわち、まず、核内において、５’末端にキャップ構造、３’末端にポリ（Ａ）を有するｍｉＲＮＡ転写産物（Ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ）が生成される。前記Ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡは、ＲＮａｓｅ（Ｄｒｏｓｈａ）により切断され、ｍｉＲＮＡ前駆体（Ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ）が生成される。前記Ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡは、ループ領域とステム領域とを有するヘアピン構造をとる。このＰｒｅ－ｍｉＲＮＡは、核外に移動した後、細胞質のＲＮａｓｅ（Ｄｉｃｅｒ）により分解され、３’末端に１～４塩基のオーバーハングを有する、二本鎖のｍｉＲＮＡ（成熟ｍｉＲＮＡ）が切り出される。この二本鎖のｍｉＲＮＡのうち、一方の鎖は、ガイド鎖と呼ばれ、他方の鎖は、パッセンジャー鎖と呼ばれ、前記ガイド鎖が、ＲＮＡ　ｉｎｄｕｃｅｄ　Ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ　Ｃｏｍｐｌｅｘ（ＲＩＳＣ）に類似した複合体に結合する。このｍｉＲＮＡ／ＲＩＳＣ複合体が、特定のｍＲＮＡの３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）に結合することによって、前記ｍＲＮＡからのタンパク質の翻訳が抑制される。
　ｍｉＲＮＡは、分化、細胞増殖、アポトーシス等の生命現象やウイルス感染症，ガン等の多くの疾患に深く関わっていることが明らかになってきている（特許文献１、非特許文献１、非特許文献２）。このことから、特に医療分野における応用が期待されている。
ＷＯ　２０１０／０５６７３７　Ａ２
Deiters, 2009, The AAPS Journal, 12, 51-60 Takeshita etal., 2010, Mol. Ther., 18, 181-187
　前記ｍｉＲＮＡを応用するにあたっては、例えば、二本鎖の成熟ｍｉＲＮＡを使用する方法等がある。しかし、この方法は、使用に先立って、二本の一本鎖核酸分子をアニーリングする必要があり、また、二本鎖を認識するＴＬＲ３等によって自己免疫を発生する可能性がある。
　そこで、本発明は、ｍｉＲＮＡを利用した新たな人工マッチ型ｍｉＲＮＡの提供を目的とする。
　前記目的を達成するために、本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡは、
Ｘ領域とＹ領域とを有する一本鎖核酸であり、
前記Ｘ領域の３’末端と前記Ｙ領域の５’末端とが、非ヌクレオチド構造のリンカー領域を介して連結し、
前記Ｘ領域は、成熟ｍｉＲＮＡのガイド鎖配列を含み、
前記Ｙ領域は、前記Ｘ領域と完全に相補な配列を含むことを特徴とする。
　本発明の組成物は、遺伝子の発現を抑制するための組成物であって、前記本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡを含むことを特徴とする。
　本発明の組成物は、薬学的組成物であって、前記本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡを含むことを特徴とする。
　本発明の発現抑制方法は、標的遺伝子の発現を抑制する方法であって、前記本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡを使用することを特徴とする。
　本発明の疾患の治療方法は、前記本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡを、患者に投与する工程を含み、前記人工マッチ型ｍｉＲＮＡにおける前記ガイド鎖配列が、前記疾患に関与する遺伝子の発現を抑制する成熟ｍｉＲＮＡのガイド鎖配列であることを特徴とする。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡによれば、容易に低コストで合成でき、且つ、前記遺伝子がコードするタンパク質の翻訳の抑制が可能である。
図１は、本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡの一例を示す概略図である。 図２は、本発明の実施例１におけるウェルあたりの細胞数を示すグラフである。 図３は、本発明の実施例１における細胞増殖の相対値を示すグラフである。 図４は、本発明の実施例１におけるアポトーシスの割合を示すグラフである。 図５は、本発明の実施例１におけるＡＸＬ　ｍＲＮＡ量およびＭＥＴ　ｍＲＮＡ量の相対値を示すグラフである。 図６は、本発明の実施例２におけるＡＸＬ　ｍＲＮＡ量の相対値を示すグラフである。 図７は、本発明の実施例２におけるＭＥＴ　ｍＲＮＡ量の相対値を示すグラフである。 図８は、本発明の実施例３におけるＡＸＬ　ｍＲＮＡ量の相対値を示すグラフである。 図９は、本発明の実施例３におけるＭＥＴ　ｍＲＮＡ量の相対値を示すグラフである。 図１０は、本発明の実施例４におけるＨＭＧＡ２　ｍＲＮＡ量の相対値を示すグラフである。 図１１は、本発明の実施例５におけるＣＯＬＡ１　ｍＲＮＡ量の相対値を示すグラフである。
　本明細書で使用する用語は、特に言及しない限り、当該技術分野で通常用いられる意味で用いることができる。
（１）人工マッチ型ｍｉＲＮＡ
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡは、前述のように、
Ｘ領域とＹ領域とを有する一本鎖核酸であり、
前記Ｘ領域の３’末端と前記Ｙ領域の５’末端とが、非ヌクレオチド構造のリンカー領域を介して連結し、
前記Ｘ領域は、成熟ｍｉＲＮＡのガイド鎖配列を含み、
前記Ｙ領域は、前記Ｘ領域と完全に相補な配列を含むことを特徴とする。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡは、例えば、標的遺伝子の発現を抑制できる。発現抑制とは、例えば、前記標的遺伝子の翻訳の抑制、すなわち、前記標的遺伝子がコードするタンパク質の翻訳の抑制を意味し、より詳細には、前記標的遺伝子のｍＲＮＡからの前記タンパク質の翻訳の抑制を意味する。前記標的遺伝子の発現抑制は、例えば、前記標的遺伝子からの転写産物の生成量の減少、前記転写産物の活性の減少、前記標的遺伝子からの翻訳産物の生成量の減少、または前記翻訳産物の活性の減少等によって確認できる。前記タンパク質は、例えば、成熟タンパク質、または、プロセシングもしくは翻訳後修飾を受ける前の前駆体タンパク質があげられる。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡは、一本鎖の核酸分子であるため、例えば、成熟ｍｉＲＮＡのように二本の一本鎖をアニーリングする必要もなく、安価に製造できる。さらに、本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡは、一本鎖の核酸分子であるため、例えば、自己免疫に関与するＴＬＲ３、ＲＩＧ-Ｉ、ＭＤＡ５等に認識されることも回避できる。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡにおける前記Ｘ領域および前記Ｙ領域の配置関係の概略を、図１に示す。なお、図１は、概略であって、例えば、各領域の長さ、形状等は、制限されない。本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡは、図１に示すように、５’側に前記Ｘ領域が配置され、３’側に前記Ｙ領域が配置され、前記Ｘ領域の３’末端と前記Ｙ領域の５’末端とが、非ヌクレオチド構造のリンカー領域（図において「Ｐ」で表す）を介して連結している。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡにおいて、前記Ｙ領域は、前記Ｘ領域と完全に相補な配列を含むため、前記Ｘ領域と前記Ｙ領域とは、例えば、分子内アニーリングする。分子内アニーリングとは、例えば、自己アニーリングともいう。本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡは、前記分子内アニーリングした領域において、二本鎖が形成されるともいう。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡは、その５’末端と３’末端とが未連結である、線状一本鎖核酸分子ということもできる。本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡは、例えば、両末端の未結合の維持のため、５’末端が非リン酸基であることが好ましい。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡにおいて、前記Ｘ領域は、前述のように、成熟ｍｉＲＮＡのガイド鎖配列を含む。成熟ｍｉＲＮＡのガイド鎖配列は、例えば、各種データベースに登録されている（例えば、http://www.mirbase.org/等）。したがって、例えば、これらの公知の成熟ｍｉＲＮＡの情報に基づいて、前記Ｘ領域を設定できる。前記成熟ｍｉＲＮＡのガイド鎖とは、RNA-induced　silencing　complex（ＲＩＳＣ）のArgonaute（Ａｇｏ）タンパク質に取り込まれ、ターゲットのｍＲＮＡに結合する鎖である。
　前記Ｘ領域は、例えば、前記ガイド鎖配列のみからなってもよいし、さらに付加配列を有してもよい。後者の場合、前記Ｘ領域は、例えば、前記ガイド鎖配列と前記付加配列とからなり、前記付加配列は、例えば、前記ガイド鎖配列の３’末端に連結している。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡにおいて、前記Ｙ領域は、前記Ｘ領域と前記Ｙ領域とをアライメントした際、前記Ｘ領域と完全に相補な配列を含む。前記Ｙ領域は、例えば、前記Ｘ領域と完全に相補的な配列のみからなってもよいし、前記相補的な配列の他に、さらにオーバーハングを有してもよい。すなわち、本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡは、例えば、前記Ｙ領域と前記Ｘ領域とをアライメントした際に、前記Ｙ領域が、３’末端にオーバーハングを有してもよい。ここで、前記Ｙ領域のオーバーハングとは、例えば、前記Ｙ領域と前記Ｘ領域とをアライメントした場合に、前記Ｙ領域が前記Ｘ領域よりも過剰に有する末端の塩基である。オーバーハングの長さ（Ｏ）は、例えば、下記式で表すことができる。
オーバーハングの長さ（Ｏ）＝［Ｙ領域の全長の塩基数（Ｙ）］－［Ｘ領域の全長の塩基数（Ｘ）］
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡにおいて、各領域の長さは、特に制限されない。以下に、条件を例示するが、本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡは、これらの記載には限定されない。また、本発明において、塩基の数値範囲は、その範囲に属する正の整数を全て開示するものであり、例えば、「１～４塩基」との記載は、「１、２、３、４塩基」の全ての開示を意味する（以下、同様）。
　前記Ｘ領域において、前記ガイド鎖配列の長さは、特に制限されず、例えば、報告されている成熟ｍｉＲＮＡにおけるガイド鎖配列の長さが例示できる。具体例として、下限が、例えば、１９塩基長、２０塩基長であり、上限が、例えば、２５塩基長、２４塩基長であり、範囲が、例えば、１９～２５塩基長、２０～２４塩基長である。
　前記Ｘ領域における前記付加配列の長さは、特に制限されず、下限が、例えば、０塩基長、１塩基長、２塩基長であり、上限が、例えば、５塩基長、４塩基長、３塩基長であり、範囲が、例えば、０～５塩基長、１～５塩基長、１～４塩基長、２～３塩基長、３～５塩基長である。
　前記Ｘ領域の長さは、特に制限されず、下限が、例えば、１９塩基長、２１塩基長、２３塩基長であり、上限が、例えば、３０塩基長、２８塩基長、２６塩基長であり、範囲が、例えば、１９～３０塩基長、２１～２８塩基長、２３～２６塩基長である。
　前記Ｙ領域における前記オーバーハングの長さは、特に制限されず、下限が、例えば、０塩基長、１塩基長であり、上限が、例えば、４塩基長、３塩基長であり、範囲が、例えば、０～４塩基長、１～３塩基長、２塩基長である。
　前記オーバーハングの配列は、特に制限されず、例えば、３’側から、ＵＵ、ＣＵ、ＧＣ、ＵＡ、ＡＡ、ＣＣ、ＵＧ、ＣＧ、ＡＵ、ＴＴ等が例示できる。前記オーバーハングは、例えば、ＴＴとすることで、ＲＮＡ分解酵素に対する耐性を付加できる。
　前記Ｙ領域の長さは、特に制限されず、下限が、例えば、１９塩基長、２１塩基長、２３塩基長であり、上限が、例えば、３２塩基長、３０塩基長、２８塩基長であり、範囲が、例えば、１９～３２塩基長、２１～３０塩基長、２３～２８塩基長である。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡの全長（Ｔ）は、特に制限されず、下限が、例えば、３８塩基長、４２塩基長、４６塩基長であり、上限が、例えば、６２塩基長、５８塩基長、５４塩基長であり、範囲が、例えば、３８～６２塩基長、４２～５８塩基長、４６～５４塩基長である。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡにおいて、前記成熟ｍｉＲＮＡの種類は、特に制限されず、標的とする遺伝子の種類に応じて、適宜選択できる。
　前記成熟ｍｉＲＮＡとしては、例えば、ｈｓａ－ｍｉＲ－３４ａ（配列番号１）、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ａ（配列番号２）、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｆ（配列番号３）、ｈｓａ－ｍｉＲ－１５０（配列番号４）、ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｂ（配列番号５）等の成熟ｍｉＲＮＡがあげられる。
ｈｓａ－ｍｉＲ－３４ａ（配列番号１）
　　　UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGU
ｈｓａ－ｌｅｔ－７ａ（配列番号２）
　　　UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUU
ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｆ（配列番号３）
　　　UGAGGUAGUAGAUUGUAUAGUU
ｈｓａ－ｍｉＲ－１５０（配列番号４）
　　　UCUCCCAACCCUUGUACCAGUG
ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｂ（配列番号５）
　　　UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUU
　ここで、各配列番号で示されるヌクレオチド配列は、ガイド鎖配列を示す。
　ｍｉＲ－３４ａのガイド鎖は、例えば、ＡＸＬ、ＭＥＴ、ＣＤＫ４、ＣＤＫ６、ＳＩＲＴ１、ＣＣＮＤ１、ＳＩＲＴ１、ＢＣＬ－２等をターゲットとし、これらの標的遺伝子の発現抑制により、例えば、肺がん、大腸がん、胃がん、肝がん、乳がん等の疾患を予防または治療できる。
　ｌｅｔ－７ａのガイド鎖は、例えば、ＨＭＧＡ２（high　mobility　group　AT-hook　2）、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＨＲＡＳ、ＭＹＣ、ＴＬＲ４等をターゲットとし、これらの標的遺伝子の発現抑制により、例えば、肺がん、大腸がん、胃がん、肝がん、乳がん等の疾患を予防または治療できる。
　ｌｅｔ－７fのガイド鎖は、例えば、ＨＭＧＡ２（high　mobility　group　AT-hook　2）、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＨＲＡＳ、ＭＹＣ、ＴＬＲ４等をターゲットとし、これらの標的遺伝子の発現抑制により、例えば、肺がん、大腸がん、胃がん、肝がん、乳がん等の疾患を予防または治療できる。
　ｍｉＲ－１５０のガイド鎖は、例えば、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ４Ａ４、ＳＭＡＤ２、ＳＰ１等をターゲットとし、これらの標的遺伝子の発現抑制により、例えば、肺線維症、肝線維症等の疾患を予防または治療できる。
　ｍｉＲ－２９ｂのガイド鎖は、例えば、ＣＯＬ１Ａ１、ＭＣＬ１、ＤＮＭＴ３Ａ、ＤＮＭＴ３Ｂ、ＴＣＬ１Ａ、ＴＧＦｂ３等をターゲットとし、これらの標的遺伝子の発現抑制により、例えば、肺がん、大腸がん、胃がん、肝がん、乳がん、肺線維症、肝線維症等の疾患を予防または治療できる。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡの構成単位は、特に制限されず、例えば、ヌクレオチド残基があげられる。前記ヌクレオチド残基は、例えば、リボヌクレオチド残基およびデオキシリボヌクレオチド残基があげられる。本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡにおいて、前記ヌクレオチド残基は、例えば、リボヌクレオチド残基が好ましい。前記ヌクレオチド残基は、例えば、修飾されていない非修飾ヌクレオチド残基および修飾された修飾ヌクレオチド残基があげられる。本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡは、例えば、前記修飾ヌクレオチド残基を含むことによって、ヌクレアーゼ耐性を向上し、安定性を向上可能である。また、本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡは、例えば、前記ヌクレオチド残基の他に、さらに、非ヌクレオチド残基を含んでもよい。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡが、例えば、前記非修飾リボヌクレオチド残基の他に前記修飾リボヌクレオチド残基を含む場合、前記修飾リボヌクレオチド残基の個数は、特に制限されず、例えば、「１個もしくは数個」であり、具体的には、例えば、１～５個、好ましくは１～４個、より好ましくは１～３個、最も好ましくは１または２個である。前記非修飾リボヌクレオチド残基に対する前記修飾リボヌクレオチド残基は、例えば、リボース残基がデオキシリボース残基に置換された前記デオキシリボヌクレオチド残基であってもよい。本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡが、例えば、前記非修飾リボヌクレオチド残基の他に前記デオキシリボヌクレオチド残基を含む場合、前記デオキシリボヌクレオチド残基の個数は、特に制限されず、例えば、「１もしくは数個」であり、具体的には、例えば、１～５個、好ましくは１～４個、より好ましくは１～３個、最も好ましくは１または２個である。
　前記ヌクレオチド残基は、例えば、構成要素として、糖、塩基およびリン酸を含む。前記リボヌクレオチド残基は、例えば、糖としてリボース残基を有し、塩基として、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）およびＵ（ウラシル）を有し、前記デオキシリボース残基は、例えば、糖としてデオキシリボース残基を有し、塩基として、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）およびチミン（Ｔ）を有する。
　前記非修飾ヌクレオチド残基は、前記各構成要素が、例えば、天然に存在するものと同一または実質的に同一であり、具体的には、例えば、人体において天然に存在するものと同一または実質的に同一である。
　前記修飾ヌクレオチド残基は、例えば、前記未修飾ヌクレオチド残基の構成要素のいずれが修飾されてもよい。前記修飾ヌクレオチド残基は、例えば、天然に存在するヌクレオチド残基、人工的に修飾したヌクレオチド残基等があげられる。
　前記修飾ヌクレオチド残基は、例えば、前記未修飾ヌクレオチドの代替物の残基であってもよい。前記代替物は、例えば、人工核酸モノマー残基があげられる。具体例として、例えば、ＰＮＡ（ペプチド核酸）、ＬＮＡ（Ｌｏｃｋｅｄ　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄ）、ＥＮＡ（２’－Ｏ，４’－Ｃ－Ｅｔｈｙｌｅｎｅｂｒｉｄｇｅｄ　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄ）等があげられる。
　前記ヌクレオチド残基において、前記塩基は、特に制限されない。前記塩基は、例えば、天然の塩基でもよいし、非天然の塩基でもよい。前記塩基は、例えば、天然由来でもよいし、合成品でもよい。前記塩基は、例えば、一般的な塩基、その修飾アナログ等が使用できる。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡにおいて、前記非ヌクレオチド構造のリンカー領域は、アミノ酸残基、ポリアミン残基、およびポリカルボン酸残基からなる群から選択される少なくとも一つを含むことが好ましい。前記リンカー領域は、アミノ酸残基、ポリアミン残基、およびポリカルボン酸残基以外の残基を含んでいてもよいし、含んでいなくてもよい。例えば、前記リンカー領域は、ポリカルボン酸残基、テレフタル酸残基またはアミノ酸残基のいずれかを含むものであってよい。
　本発明において、「ポリアミン」は、アミノ基を複数（２つ、または３つ以上）含む任意の化合物をいう。前記「アミノ基」は、－ＮＨ２基に限定されず、イミノ基（－ＮＨ－）も含む。本発明において、前記ポリアミンは、特に限定されないが、例えば、１，４－ジアミノベンゼン、１，３－ジアミノベンゼン、１，２－ジアミノベンゼン等が挙げられる。また、本発明において、「ポリカルボン酸」は、カルボキシ基を複数（２つ、または３つ以上）含む任意の化合物をいう。本発明において、前記ポリカルボン酸は、特に限定されないが、例えば、１，４－ジカルボキシベンゼン（テレフタル酸）、１，３－ジカルボキシベンゼン（イソフタル酸）、１，２－ジカルボキシベンゼン（フタル酸）等が挙げられる。また、本発明において、「アミノ酸」は、後述するように、分子中にアミノ基およびカルボキシ基をそれぞれ１つ以上含む任意の有機化合物をいう。前記「アミノ基」は、－ＮＨ２基に限定されず、イミノ基（－ＮＨ－）も含む。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡにおいて、前記アミノ酸残基は、複数のアミノ酸残基が連結したものであってもよい。なお、本発明において、複数のアミノ酸残基が連結したアミノ酸残基とは、例えば、ペプチド構造を含む残基をいう。より具体的には、前記複数のアミノ酸残基が連結したアミノ酸残基は、例えば、後述する化学式（Ｉ）のアミノ酸残基において、後述する化学式（Ｉａ）がペプチド（例えば、グリシン二量体またはグリシン三量体等）であるアミノ酸残基をいう。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡにおいて、前記アミノ酸残基は、グリシン残基、テレフタル酸アミド残基、プロリン残基またはリシン残基であってもよい。また、前記アミノ酸残基は、修飾アミノ酸残基またはアミノ酸の誘導体であってもよい。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡにおいて、前記リンカー領域は、例えば、下記化学式（Ｉ－０）で表わされる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
前記化学式（Ｉ－０）中、
Ｑ１１およびＱ１２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ２（メチレン基）、ＮＨ（イミノ基）、Ｃ＝Ｏ（カルボニル基）、Ｃ＝Ｓ（チオカルボニル基）、Ｃ＝ＮＨ（イミノメチレン基）、Ｏ、またはＳであり、
Ｑ１およびＱ２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ２（メチレン基）、ＮＨ（イミノ基）、Ｃ＝Ｏ（カルボニル基）、Ｃ＝Ｓ（チオカルボニル基）、Ｃ＝ＮＨ（イミノメチレン基）、Ｏ、またはＳであり、
Ｙ１およびＹ２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ２、ＮＨ、ＯまたはＳであり；
Ｌ１は、ｎ個の炭素原子を有するアルキレン鎖であり、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲａ、ＮＨ２、ＮＨＲａ、ＮＲａＲｂ、ＳＨ、もしくはＳＲａで置換されても置換されていなくてもよく、または、
Ｌ１は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
ただし、Ｙ１が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ１に結合するＬ１の原子は炭素であり、ＯＲ１に結合するＬ１の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
Ｌ２は、ｍ個の炭素原子を有するアルキレン鎖であり、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲｃ、ＮＨ２、ＮＨＲｃ、ＮＲｃＲｄ、ＳＨもしくはＳＲｃで置換されても置換されていなくてもよく、または、
Ｌ２は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
ただし、Ｙ２が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ２に結合するＬ２の原子は炭素であり、ＯＲ２に結合するＬ２の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、それぞれ独立して、置換基または保護基であり；
ｍは、０～３０の範囲の整数であり；
ｎは、０～３０の範囲の整数であり；
前記Ｘ領域および前記Ｙ領域は、それぞれ、－ＯＲ１－または－ＯＲ２－を介して、前記リンカー残基に結合し、
ここで、Ｒ１およびＲ２は、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、ヌクレオチド残基または前記構造（Ｉ－０）であり、
Ａは、任意の原子団である。
　前記Ｘ領域および前記Ｙ領域と、－ＯＲ１－および－ＯＲ２－との結合の組合せは、特に制限されず、例えば、以下のいずれかの条件があげられる。
条件（１）
　前記Ｘ領域は、－ＯＲ２－を介して、前記Ｙ領域は、－ＯＲ１－を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
条件（２）
　前記Ｘ領域は、－ＯＲ１－を介して、前記Ｙ領域は、－ＯＲ２－を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
　前記化学式（Ｉ－０）において、例えば、Ｑ１１がＣ＝Ｏ（カルボニル基）であり、Ｑ１がＮＨ（イミノ基）であってもよい。また、例えば、Ｑ１１がＮＨ（イミノ基）であり、Ｑ１がＣ＝Ｏ（カルボニル基）であってもよい。また例えば、Ｑ１２がＣ＝Ｏ（カルボニル基）であり、Ｑ２がＮＨ（イミノ基）であってもよい。また、例えば、Ｑ１２がＮＨ（イミノ基）であり、Ｑ２がＣ＝Ｏ（カルボニル基）であってもよい。
　前記化学式（Ｉ－０）中、Ｑ１１およびＱ１２は、例えば、それぞれカルボニル基であってもよい。この場合において、Ｑ１およびＱ２が、それぞれイミノ基であることが好ましい。また、この場合において、下記化学式（Ｉα）の構造が、下記化学式（Ｉα２）で表されることがより好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
前記化学式（Ｉα２）中、
Ｒ１００は、任意の置換基であり、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合は、１個でも複数でもよく、複数の場合は、互いに同一でも異なっていてもよい。Ｒ１００における前記任意の置換基としては、例えば、前記Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄにおいて例示する後述の置換基が挙げられ、より具体的には、例えば、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、カルボキシ、スルホ、ニトロ、カルバモイル、スルファモイル、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、アリール、アリールアルキル、アルキルアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクリルアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、シリル、シリルオキシアルキル、ピロールイル、イミダゾリル、等があげられる。また、前記化学式（Ｉα２）の構造が、下記化学式（Ｉα３）で表されることがさらに好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
　なお、Ｑ１１およびＱ１２がカルボニル基であり、かつＱ１およびＱ２がイミノ基である場合、前記化学式（Ｉ－０）のリンカー残基は、カルボン酸アミド残基であるということもできるが、カルボン酸残基であるということもできる。例えば、後述の実施例における「TPA」構造は、テレフタル酸アミド残基であるということもできるが、前記化学式（Ｉα３）で表されるテレフタル酸の残基であるということもできる。
　前記化学式（Ｉ－０）中、Ｑ１１およびＱ１２が、それぞれイミノ基であってもよい。この場合において、Ｑ１およびＱ２が、それぞれカルボニル基であることが好ましい。また、この場合において、下記化学式（Ｉβ）の構造が、下記化学式（Ｉβ２）で表されることがより好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
前記化学式（Ｉβ２）中、
Ｒ１００は、任意の置換基であり、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合は、１個でも複数でもよく、複数の場合は、互いに同一でも異なっていてもよい。具体的には、例えば、前記化学式（Ｉα２）中のＲ１００と同様である。また、前記化学式（Ｉβ２）の構造が、下記化学式（Ｉβ３）で表されることがさらに好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡにおいて、前記リンカー残基が、アミノ酸残基である場合、前記アミノ酸残基は、例えば、下記化学式（Ｉ）で表わされる。なお、下記化学式（Ｉ）の構造は、前記化学式（Ｉ－０）で表される構造の一例である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
　前記式（Ｉ）中、例えば、Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１、Ｙ２、Ｌ１およびＬ２は、前記と同様である。
　前記microRNAの配列に対する相補的配列は、それぞれ、－ＯＲ１－または－ＯＲ２－を介して、前記アミノ酸残基に結合し、
ここで、Ｒ１およびＲ２は、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、ヌクレオチド残基または前記構造（Ｉ）であり、
Ａは、任意の原子団であり、ただし、下記化学式（Ｉａ）は、アミノ酸またはペプチドである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
　前記化学式（Ｉ）、（Ｉα）または（Ｉａ）中の原子団Ａは、例えば、鎖式原子団、脂環式原子団、芳香族性原子団、ヘテロ芳香族性原子団、およびヘテロ脂環式原子団からなる群から選択される少なくとも一つを含んでいても含んでいなくても良い。前記鎖式原子団は、特に限定されないが、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、シリル、シリルオキシアルキル等が挙げられる。前記脂環式原子団は、特に限定されないが、例えば、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクリルアルキル等が挙げられる。前記芳香族性原子団は、特に限定されないが、例えば、アリール、アリールアルキル、アルキルアリール、縮環系アリール、縮環系アリールアルキル、縮環系アルキルアリール等が挙げられる。前記ヘテロ芳香族性原子団は、特に限定されないが、例えば、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アルキルヘテロアリール、縮環系ヘテロアリール、縮環系ヘテロアリールアルキル、縮環系アルキルヘテロアリール等が挙げられる。また、前記化学式（Ｉ）、（Ｉα）または（Ｉａ）中の原子団Ａにおいて、前記各原子団は、さらに置換基または保護基を有していても有していなくても良い。前記置換基または保護基は、複数の場合は同一でも異なってもよい。前記置換基としては、例えば、前記Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄで例示した置換基が挙げられ、より具体的には、例えば、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、カルボキシ、スルホ、ニトロ、カルバモイル、スルファモイル、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、アリール、アリールアルキル、アルキルアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクリルアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、シリル、シリルオキシアルキル、ピロールイル、イミダゾリル、等があげられる。前記保護基は、例えば、前記Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄで例示した保護基と同様である。
　本発明において、「アミノ酸」は、前述のとおり、分子中にアミノ基およびカルボキシ基をそれぞれ１つ以上含む任意の有機化合物をいう。前記「アミノ基」は、－ＮＨ２基に限定されず、イミノ基（－ＮＨ－）も含む。例えば、プロリン、ヒドロキシプロリン等は、分子中に－ＮＨ２基を含まず、イミノ基（－ＮＨ－）を含むが、本発明における「アミノ酸」の定義に含まれる。本発明において、前記「アミノ酸」は、後述するとおり、天然アミノ酸でもよいし、人工アミノ酸でもよい。例えば、後述する化学式（Ｉａ２）または（Ｉａ３）で表される化合物も、分子中にアミノ基およびカルボキシ基を含むため、本発明における「アミノ酸」の定義に含まれる。したがって、例えば、前記化学式（Ｉ）において、原子団Ａが、後述の化学式（Ａ２）または化学式（Ａ２ａ）で表される構造は、本発明における「アミノ酸残基」の定義に含まれる。また、例えば、後述の実施例における「TPA」構造も、本発明における「アミノ酸残基」の定義に含まれる。また、本発明において、「ペプチド」は、２分子以上のアミノ酸がペプチド結合により結合した構造の有機化合物をいう。前記ペプチド結合は、酸アミド構造でも良いし、酸イミド構造でも良い。また、前記化学式（Ｉａ）で表すアミノ酸またはペプチド分子中にアミノ基が複数存在する場合は、前記化学式（Ｉａ）中に明示しているアミノ基は、いずれのアミノ基であっても良い。また、前記化学式（Ｉａ）で表すアミノ酸またはペプチド分子中にカルボキシ基が複数存在する場合は、前記化学式（Ｉａ）中に明示しているカルボキシ基は、いずれのカルボキシ基であっても良い。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡの前記アミノ酸残基において、前記アミノ酸は、例えば、前述のとおり、天然アミノ酸でも良いし、人工アミノ酸であっても良い。なお、本発明において、「天然アミノ酸」は、天然に存在する構造のアミノ酸またはその光学異性体をいう。前記天然アミノ酸の製造方法は特に限定されず、例えば、天然から抽出しても良いし、合成しても良い。また、本発明において、「人工アミノ酸」は、天然に存在しない構造のアミノ酸をいう。すなわち、前記人工アミノ酸は、アミノ酸すなわちアミノ基を含むカルボン酸誘導体（分子中にアミノ基およびカルボキシ基をそれぞれ１つ以上含む有機化合物）であって、天然に存在しない構造のカルボン酸誘導体をいう。前記人工アミノ酸は、例えば、ヘテロ環を含まないことが好ましい。前記アミノ酸は、例えば、タンパク質を構成するアミノ酸であっても良い。前記アミノ酸は、例えば、グリシン、α－アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、シスチン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、ヒドロキシリシン、メチオニン、フェニルアラニン、セリン、トレオニン、チロシン、バリン、プロリン、４－ヒドロキシプロリン、トリプトファン、β－アラニン、１－アミノ－２－カルボキシシクロペンタン、アミノ安息香酸、アミノピリジンカルボン酸および下記化学式（Ｉａ２）で表されるアミノ酸からなる群から選択される少なくとも１種類であっても良く、さらに置換基または保護基を有していても有していなくても良い。前記置換基としては、例えば、前記Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄで例示した置換基が挙げられ、より具体的には、例えば、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、カルボキシ、スルホ、ニトロ、カルバモイル、スルファモイル、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、アリール、アリールアルキル、アルキルアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクリルアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、シリル、シリルオキシアルキル、ピロールイル、イミダゾリル、等があげられる。前記保護基は、例えば、前記Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄで例示した保護基と同様である。また、前記化学式（Ｉａ）のペプチドでないアミノ酸に、光学異性体、幾何異性体、立体異性体等の異性体が存在する場合は、いずれの異性体でも良い。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
　前記化学式（Ｉａ２）中、
Ｒ１００は、任意の置換基であり、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合は、１個でも複数でもよく、複数の場合は、互いに同一でも異なっていてもよい。Ｒ１００における前記任意の置換基としては、例えば、前記Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄで例示した置換基が挙げられ、より具体的には、例えば、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、カルボキシ、スルホ、ニトロ、カルバモイル、スルファモイル、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、アリール、アリールアルキル、アルキルアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクリルアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、シリル、シリルオキシアルキル、ピロールイル、イミダゾリル、等があげられる。また、前記化学式（Ｉａ２）の構造は、例えば、下記化学式（Ｉａ３）であってもよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
　なお、前記化学式（Ｉａ）の構造が、前記化学式（Ｉａ２）である場合、前記化学式（Ｉ）中の原子団Ａの構造は、下記化学式（Ａ２）で表される。下記化学式（Ａ２）中のＲ１００は、前記化学式（Ｉａ２）中のＲ１００と同じである。また、前記化学式（Ｉａ）の構造が、前記化学式（Ｉａ３）である場合、前記化学式（Ｉ）中の原子団Ａの構造は、下記化学式（Ａ２ａ）で表される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
　前記化学式（Ｉ）の構造は、例えば、下記化学式（Ｉ－１）～（Ｉ－７）が例示でき、下記化学式（Ｉ－１）～（Ｉ－７）において、ｎおよびｍは、前記化学式（Ｉ）と同じである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
　前記化学式（Ｉ－１）～（Ｉ－７）において、ｎおよびｍは、特に制限されず、前述の通りである。具体例として、前記化学式（Ｉ－１）においてｎ＝１１およびｍ＝１２、または、ｎ＝５およびｍ＝４と、前記化学式（Ｉ－４）においてｎ＝５およびｍ＝４と、前記化学式（Ｉ－６）において、ｎ＝４およびｍ＝４と、前記化学式（１－７）においてｎ＝５およびｍ＝４とがあげられる。その構造を、下記化学式（Ｉ－１ａ）、（Ｉ－１ｂ）（Ｉ－４ａ）、（Ｉ－６ａ）および（Ｉ－７ａ）に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
　あるいは、本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡにおいて、前記リンカー領域は、例えば、下記式（ＩＩ）で表わされる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
　前記式（ＩＩ）中、例えば、
Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、Ｈ２、Ｏ、ＳまたはＮＨであり；
Ｙ１およびＹ２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ２、ＮＨ、ＯまたはＳであり；
Ｒ３は、環Ａ上のＣ－３、Ｃ－４、Ｃ－５またはＣ－６に結合する水素原子または置換基であり、
Ｌ１は、ｎ個の原子からなるアルキレン鎖であり、ここで、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲａ、ＮＨ２、ＮＨＲａ、ＮＲａＲｂ、ＳＨ、もしくはＳＲａで置換されても置換されていなくてもよく、または、
Ｌ１は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
ただし、Ｙ１が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ１に結合するＬ１の原子は炭素であり、ＯＲ１に結合するＬ１の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
Ｌ２は、ｍ個の原子からなるアルキレン鎖であり、ここで、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲｃ、ＮＨ２、ＮＨＲｃ、ＮＲｃＲｄ、ＳＨもしくはＳＲｃで置換されても置換れていなくてもよく、または、
Ｌ２は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
ただし、Ｙ２が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ２に結合するＬ２の原子は炭素であり、ＯＲ２に結合するＬ２の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、それぞれ独立して、置換基または保護基であり；
ｌは、１または２であり；
ｍは、０～３０の範囲の整数であり；
ｎは、０～３０の範囲の整数であり；
環Ａは、前記環Ａ上のＣ－２以外の１個の炭素原子が、窒素、酸素、硫黄で置換されてもよく、
前記環Ａ内に、炭素－炭素二重結合または炭素－窒素二重結合を含んでもよく、
前記Ｘ領域および前記Ｙ領域は、それぞれ、－ＯＲ１－または－ＯＲ２－を介して、前記非ヌクレオチド構造に結合し、
ここで、Ｒ１およびＲ２は、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、ヌクレオチド残基または前記構造（ＩＩ）である。
　前記式（ＩＩ）中、Ｘ１およびＸ２は、例えば、それぞれ独立して、Ｈ２、Ｏ、ＳまたはＮＨである。前記式（ＩＩ）中において、Ｘ１がＨ２であるとは、Ｘ１が、Ｘ１の結合する炭素原子とともに、ＣＨ２（メチレン基）を形成することを意味する。Ｘ２についても同様である。
　前記式（ＩＩ）中、Ｙ１およびＹ２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ２、ＮＨ、ＯまたはＳである。
　前記式（ＩＩ）中、環Ａにおいて、ｌは、１または２である。ｌ＝１の場合、環Ａは、５員環であり、例えば、前記ピロリジン骨格である。前記ピロリジン骨格は、例えば、プロリン骨格、プロリノール骨格等があげられ、これらの二価の構造が例示できる。ｌ＝２の場合、環Ａは、６員環であり、例えば、前記ピペリジン骨格である。環Ａは、環Ａ上のＣ－２以外の１個の炭素原子が、窒素、酸素または硫黄で置換されてもよい。また、環Ａは、環Ａ内に、炭素－炭素二重結合または炭素－窒素二重結合を含んでもよい。環Ａは、例えば、Ｌ型およびＤ型のいずれでもよい。
　前記式（ＩＩ）中、Ｒ３は、環Ａ上のＣ－３、Ｃ－４、Ｃ－５またはＣ－６に結合する水素原子または置換基である。Ｒ３が前記置換基の場合、置換基Ｒ３は、１でも複数でも、存在しなくてもよく、複数の場合、同一でも異なってもよい。
　置換基Ｒ３は、例えば、ハロゲン、ＯＨ、ＯＲ４、ＮＨ２、ＮＨＲ４、ＮＲ４Ｒ５、ＳＨ、ＳＲ４またはオキソ基（＝Ｏ）等である。
　Ｒ４およびＲ５は、例えば、それぞれ独立して、置換基または保護基であり、同一でも異なってもよい。前記置換基は、例えば、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクリルアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、ヘテロシクリルアルケニル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリールアルキル、シリル、シリルオキシアルキル等があげられる。以下、同様である。置換基Ｒ３は、これらの列挙する置換基であってもよい。
　前記保護基は、例えば、反応性の高い官能基を不活性に変換する官能基であり、公知の保護基等があげられる。前記保護基は、例えば、文献（J.　F.　W.　McOmie,　「Protecting　Groups　in　Organic　Chemistry」　Prenum　Press,　London　and　New　York,　1973）の記載を援用できる。前記保護基は、特に制限されず、例えば、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基（ＴＢＤＭＳ）、ビス（２－アセトキシエチルオキシ）メチル基（ＡＣＥ）、トリイソプロピルシリルオキシメチル基（ＴＯＭ）、１－（２－シアノエトキシ）エチル基（ＣＥＥ）、２－シアノエトキシメチル基（ＣＥＭ）およびトリルスルフォニルエトキシメチル基（ＴＥＭ）、ジメトキシトリチル基（ＤＭＴｒ）等があげられる。Ｒ３がＯＲ４の場合、前記保護基は、特に制限されず、例えば、ＴＢＤＭＳ基、ＡＣＥ基、ＴＯＭ基、ＣＥＥ基、ＣＥＭ基およびＴＥＭ基等があげられる。この他にも、シリル含有基もあげられる。以下、同様である。
　前記式（ＩＩ）中、Ｌ１は、ｎ個の原子からなるアルキレン鎖である。前記アルキレン炭素原子上の水素原子は、例えば、ＯＨ、ＯＲａ、ＮＨ２、ＮＨＲａ、ＮＲａＲｂ、ＳＨ、もしくはＳＲａで置換されてもよいし、置換されていなくてもよい。または、Ｌ１は、前記アルキレン鎖の１つ以上の炭素原子が酸素原子で置換されたポリエーテル鎖でもよい。前記ポリエーテル鎖は、例えば、ポリエチレングリコールである。なお、Ｙ１が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ１に結合するＬ１の原子は炭素であり、ＯＲ１に結合するＬ１の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接しない。つまり、例えば、Ｙ１がＯの場合、その酸素原子とＬ１の酸素原子は隣接せず、ＯＲ１の酸素原子とＬ１の酸素原子は隣接しない。
　前記式（ＩＩ）中、Ｌ２は、ｍ個の原子からなるアルキレン鎖である。前記アルキレン炭素原子上の水素原子は、例えば、ＯＨ、ＯＲｃ、ＮＨ２、ＮＨＲｃ、ＮＲｃＲｄ、ＳＨもしくはＳＲｃで置換されてもよいし、置換されていなくてもよい。または、Ｌ２は、前記アルキレン鎖の１つ以上の炭素原子が酸素原子で置換されたポリエーテル鎖でもよい。なお、Ｙ２が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ２に結合するＬ２の原子は炭素であり、ＯＲ２に結合するＬ２の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接しない。つまり、例えば、Ｙ２がＯの場合、その酸素原子とＬ２の酸素原子は隣接せず、ＯＲ２の酸素原子とＬ２の酸素原子は隣接しない。
　Ｌ１のｎおよびＬ２のｍは、特に制限されず、それぞれ、下限は、例えば、０であり、上限も、特に制限されない。ｎおよびｍは、例えば、前記非ヌクレオチド構造の所望の長さに応じて、適宜設定できる。ｎおよびｍは、例えば、製造コストおよび収率等の点から、それぞれ、０～３０が好ましく、より好ましくは０～２０であり、さらに好ましくは０～１５である。ｎとｍは、同じでもよいし（ｎ＝ｍ）、異なってもよい。ｎ＋ｍは、例えば、０～３０であり、好ましくは０～２０であり、より好ましくは０～１５である。
　Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、例えば、それぞれ独立して、置換基または保護基である。前記置換基および前記保護基は、例えば、前述と同様である。
　前記式（ＩＩ）において、水素原子は、例えば、それぞれ独立して、Ｃｌ、Ｂｒ、ＦおよびＩ等のハロゲンに置換されてもよい。
　前記Ｘ領域および前記Ｙ領域は、例えば、それぞれ、－ＯＲ１－または－ＯＲ２－を介して、前記非ヌクレオチド構造に結合する。ここで、Ｒ１およびＲ２は、存在しても存在しなくてもよい。Ｒ１およびＲ２が存在する場合、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、ヌクレオチド残基または前記式（ＩＩ）の構造である。Ｒ１および／またはＲ２が前記ヌクレオチド残基の場合、前記非ヌクレオチド構造は、例えば、ヌクレオチド残基Ｒ１および／またはＲ２を除く前記式（ＩＩ）の構造からなる前記非ヌクレオチド残基と、前記ヌクレオチド残基とから形成される。Ｒ１および／またはＲ２が前記式（ＩＩ）の構造の場合、前記非ヌクレオチド構造は、例えば、前記式（ＩＩ）の構造からなる前記非ヌクレオチド残基が、２つ以上連結された構造となる。前記式（ＩＩ）の構造は、例えば、１個、２個、３個または４個含んでもよい。このように、前記構造を複数含む場合、前記（ＩＩ）の構造は、例えば、直接連結されてもよいし、前記ヌクレオチド残基を介して結合してもよい。他方、Ｒ１およびＲ２が存在しない場合、前記非ヌクレオチド構造は、例えば、前記式（ＩＩ）の構造からなる前記非ヌクレオチド残基のみから形成される。
　前記Ｘ領域および前記Ｙ領域と、－ＯＲ１－および－ＯＲ２－との結合の組合せは、特に制限されず、例えば、以下のいずれかの条件があげられる。
条件（１）
　前記Ｘ領域は、－ＯＲ２－を介して、前記Ｙ領域は、－ＯＲ１－を介して、前記式（ＩＩ）の構造と結合する。
条件（２）
　前記Ｘ領域は、－ＯＲ１－を介して、前記Ｙ領域は、－ＯＲ２－を介して、前記式（ＩＩ）の構造と結合する。
　前記式（ＩＩ）の構造は、例えば、下記式（ＩＩ－１）～式（ＩＩ－９）が例示でき、下記式において、ｎおよびｍは、前記式（ＩＩ）と同じである。下記式において、ｑは、０～１０の整数である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
　前記式（ＩＩ－１）～（ＩＩ－９）において、ｎ、ｍおよびｑは、特に制限されず、前述の通りである。具体例として、前記式（ＩＩ－１）において、ｎ＝８、前記（ＩＩ－２）において、ｎ＝３、前記式（ＩＩ－３）において、ｎ＝４または８、前記（ＩＩ－４）において、ｎ＝７または８、前記式（ＩＩ－５）において、ｎ＝３およびｍ＝４、前記（ＩＩ－６）において、ｎ＝８およびｍ＝４、前記式（ＩＩ－７）において、ｎ＝８およびｍ＝４、前記（ＩＩ－８）において、ｎ＝５およびｍ＝４、前記式（ＩＩ－９）において、ｑ＝１およびｍ＝４があげられる。前記式（ＩＩ－４）の一例（ｎ＝８）を、下記式（ＩＩ－４ａ）に、前記式（ＩＩ－８）の一例（ｎ＝５、ｍ＝４）を、下記式（ＩＩ－８ａ）に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000026
　本発明において、「アルキル」は、例えば、直鎖状または分枝状のアルキル基を含む。前記アルキルの炭素数は、特に制限されず、例えば、１～３０であり、好ましくは、１～６であり、より好ましくは、１～４である。前記アルキル基は、例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ぺンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ－ヘキシル、イソヘキシル、ｎ－ヘプチル、ｎ－オクチル、ｎ－ノニル、ｎ－デシル等があげられる。好ましくは、例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ぺンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ-ヘキシル、イソヘキシル等があげられる。
　本発明において、「アルケニル」は、例えば、直鎖状または分枝状のアルケニルを含む。前記アルケニルは、前記アルキルにおいて、１個または複数の二重結合を有するもの等があげられる。前記アルケニルの炭素数は、特に制限されず、例えば、前記アルキルと同様であり、好ましくは２～８である。前記アルケニルは、例えば、ビニル、１－プロペニル、２－プロペニル、１－ブテニル、２－ブテニル、３－ブテニル、１，３－ブタジエニル、３－メチル－２－ブテニル等があげられる。
　本発明において、「アルキニル」は、例えば、直鎖状または分枝状のアルキニルを含む。前記アルキニルは、前記アルキルにおいて、１個または複数の三重結合を有するもの等があげられる。前記アルキニルの炭素数は、特に制限されず、例えば、前記アルキルと同様であり、好ましくは２～８である。前記アルキニルは、例えば、エチニル、プロピニル、ブチニル等があげられる。前記アルキニルは、例えば、さらに、１個または複数の二重結合を有してもよい。
　本発明において、「アリール」は、例えば、単環芳香族炭化水素基および多環芳香族炭化水素基を含む。前記単環芳香族炭化水素基は、例えば、フェニル等があげられる。前記多環芳香族炭化水素基は、例えば、１－ナフチル、２－ナフチル、１－アントリル、２－アントリル、９－アントリル、１－フェナントリル、２－フェナントリル、３－フェナントリル、４－フェナントリル、９－フェナントリル等があげられる。好ましくは、例えば、フェニル、１－ナフチルおよび２－ナフチル等のナフチル等があげられる。
　本発明において、「ヘテロアリール」は、例えば、単環芳香族複素環式基および縮合芳香族複素環式基を含む。前記ヘテロアリールは、例えば、フリル（例：２－フリル、３－フリル）、チエニル（例：２－チエニル、３－チエニル）、ピロリル（例：１－ピロリル、２－ピロリル、３－ピロリル）、イミダゾリル（例：１－イミダゾリル、２－イミダゾリル、４－イミダゾリル）、ピラゾリル（例：１－ピラゾリル、３－ピラゾリル、４－ピラゾリル）、トリアゾリル（例：１，２，４－トリアゾール－１－イル、１，２，４－トリアゾール－３－イル、１，２，４－トリアゾール－４－イル）、テトラゾリル（例：１－テトラゾリル、２－テトラゾリル、５－テトラゾリル）、オキサゾリル（例：２－オキサゾリル、４－オキサゾリル、５－オキサゾリル）、イソキサゾリル（例：３－イソキサゾリル、４－イソキサゾリル、５－イソキサゾリル）、チアゾリル（例：２－チアゾリル、４－チアゾリル、５－チアゾリル）、チアジアゾリル、イソチアゾリル（例：３－イソチアゾリル、４－イソチアゾリル、５－イソチアゾリル）、ピリジル（例：２－ピリジル、３－ピリジル、４－ピリジル）、ピリダジニル（例：３－ピリダジニル、４－ピリダジニル）、ピリミジニル（例：２－ピリミジニル、４－ピリミジニル、５－ピリミジニル）、フラザニル（例：３－フラザニル）、ピラジニル（例：２－ピラジニル）、オキサジアゾリル（例：１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）、ベンゾフリル（例：２－ベンゾ［ｂ］フリル、３－ベンゾ［ｂ］フリル、４－ベンゾ［ｂ］フリル、５－ベンゾ［ｂ］フリル、６－ベンゾ［ｂ］フリル、７－ベンゾ［ｂ］フリル）、ベンゾチエニル（例：２－ベンゾ［ｂ］チエニル、３－ベンゾ［ｂ］チエニル、４－ベンゾ［ｂ］チエニル、５－ベンゾ［ｂ］チエニル、６－ベンゾ［ｂ］チエニル、７－ベンゾ［ｂ］チエニル）、ベンズイミダゾリル（例：１－ベンゾイミダゾリル、２－ベンゾイミダゾリル、４－ベンゾイミダゾリル、５－ベンゾイミダゾリル）、ジベンゾフリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、キノキサリル（例：２－キノキサリニル、５－キノキサリニル、６－キノキサリニル）、シンノリニル（例：３－シンノリニル、４－シンノリニル、５－シンノリニル、６－シンノリニル、７－シンノリニル、８－シンノリニル）、キナゾリル（例：２－キナゾリニル、４－キナゾリニル、５－キナゾリニル、６－キナゾリニル、７－キナゾリニル、８－キナゾリニル）、キノリル（例：２－キノリル、３－キノリル、４－キノリル、５－キノリル、６－キノリル、７－キノリル、８－キノリル）、フタラジニル（例：１－フタラジニル、５－フタラジニル、６－フタラジニル）、イソキノリル（例：１－イソキノリル、３－イソキノリル、４－イソキノリル、５－イソキノリル、６－イソキノリル、７－イソキノリル、８－イソキノリル）、プリル、プテリジニル（例：２－プテリジニル、４－プテリジニル、６－プテリジニル、７－プテリジニル）、カルバゾリル、フェナントリジニル、アクリジニル（例：１－アクリジニル、２－アクリジニル、３－アクリジニル、４－アクリジニル、９－アクリジニル）、インドリル（例：１－インドリル、２－インドリル、３－インドリル、４－インドリル、５－インドリル、６－インドリル、７－インドリル）、イソインドリル、フェナジニル（例：１－フェナジニル、２－フェナジニル）またはフェノチアジニル（例：１－フェノチアジニル、２－フェノチアジニル、３－フェノチアジニル、４－フェノチアジニル）等があげられる。
　本発明において、「シクロアルキル」は、例えば、環状飽和炭化水素基であり、炭素数は、例えば、３～１５である。前記シクロアルキルは、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、橋かけ環式炭化水素基、スピロ炭化水素基等があげられ、好ましくは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、橋かけ環式炭化水素基等があげられる。
　本発明において、「橋かけ環式炭化水素基」は、例えば、ビシクロ［２．１．０］ペンチル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、ビシクロ［２．２．２］オクチルおよびビシクロ［３．２．１］オクチル、トリシクロ［２．２．１．０］ヘプチル、ビシクロ［３．３．１］ノナン、１－アダマンチル、２－アダマンチル等があげられる。
　本発明において、「スピロ炭化水素基」は、例えば、スピロ［３．４］オクチル等があげられる。
　本発明において、「シクロアルケニル」は、例えば、環状の不飽和脂肪族炭化水素基を包み、炭素数は、例えば、３～７個である。前記シクロアルケニルは、例えば、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル等があげられ、好ましくは、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル等である。前記シクロアルケニルは、例えば、環中に不飽和結合を有する橋かけ環式炭化水素基およびスピロ炭化水素基も含む。
　本発明において、「アリールアルキル」は、例えば、ベンジル、２－フェネチル、およびナフタレニルメチル等があげられ、「シクロアルキルアルキル」または「シクリルアルキル」は、例えば、シクロヘキシルメチル、アダマンチルメチル等があげられ、「ヒドロキシアルキル」は、例えば、ヒドロキシメチルおよび２－ヒドロキシエチル等があげられる。
　本発明において、「アルコキシ」は、例えば、前記アルキル－Ｏ－基を含み、例えば、メトキシ、エトキシ、ｎ－プロポキシ、イソプロポキシ、およびｎ－ブトキシ等があげられ、「アルコキシアルキル」は、例えば、メトキシメチル等があげられ、「アミノアルキル」は、例えば、２－アミノエチル等があげられる。
　本発明において、「ヘテロシクリル」は、例えば、１－ピロリニル、２－ピロリニル、３－ピロリニル、１－ピロリジニル、２－ピロリジニル、３－ピロリジニル、ピロリジノン、１－イミダゾリニル、２－イミダゾリニル、４－イミダゾリニル、１－イミダゾリジニル、２－イミダゾリジニル、４－イミダゾリジニル、イミダゾリジノン、１－ピラゾリニル、３－ピラゾリニル、４－ピラゾリニル、１－ピラゾリジニル、３－ピラゾリジニル、４－ピラゾリジニル、ピペリジノン、ピペリジノ、２－ピペリジニル、３－ピペリジニル、４－ピペリジニル、１－ピペラジニル、２－ピペラジニル、ピペラジノン、２－モルホリニル、３－モルホリニル、モルホリノ、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル等があげられる。
　本発明において、「ヘテロシクリルアルキル」は、例えば、ピペリジニルメチル、ピペラジニルメチル等があげられ、「ヘテロシクリルアルケニル」は、例えば、２－ピペリジニルエテニル等があげられ、「ヘテロアリールアルキル」は、例えば、ピリジルメチルおよびキノリン－３－イルメチル等があげられる。
　本発明において、「シリル」は、化学式Ｒ３Ｓｉ－で表される基を含み、Ｒは、独立して、前記アルキル、アリールおよびシクロアルキルから選択でき、例えば、トリメチルシリル基、tert-ブチルジメチルシリル基等があげられ、「シリルオキシ」は、例えば、トリメチルシリルオキシ基等があげられ、「シリルオキシアルキル」は、例えば、トリメチルシリルオキシメチル等があげられる。
　本発明において、「アルキレン」は、例えば、メチレン、エチレン、およびプロピレン等があげられる。
　本発明において、前述した各種基は、置換されてもよい。前記置換基は、例えば、ヒドロキシ、カルボキシ、スルホ、ハロゲン、ハロゲン化アルキル（ハロアルキル、例：ＣＦ３、ＣＨ２ＣＦ３、ＣＨ２ＣＣｌ３）、ニトロ、ニトロソ、シアノ、アルキル（例：メチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ－ブチル）、アルケニル（例：ビニル）、アルキニル（例：エチニル）、シクロアルキル（例：シクロプロピル、アダマンチル）、シクロアルキルアルキル（例：シクロヘキシルメチル、アダマンチルメチル）、シクロアルケニル（例：シクロプロペニル）、シクリルアルキル、ヒドロキシアルキル（例：ヒドロキシメチル、ヒドロキシエチル）、アルコキシアルキル（例：メトキシメチル、エトキシメチル、エトキシエチル）、アリール（例：フェニル、ナフチル）、アリールアルキル（例：ベンジル、フェネチル）、アルキルアリール（例、ｐ－メチルフェニル）、ヘテロアリール（例：ピリジル、フリル）、ヘテロアリールアルキル（例：ピリジルメチル）、ヘテロシクリル（例：ピペリジル）、ヘテロシクリルアルケニル、ヘテロシクリルアルキル（例：モルホリルメチル）、アルコキシ（例：メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ）、ハロゲン化アルコキシ（例：ＯＣＦ３）、アルケニルオキシ（例：ビニルオキシ、アリルオキシ）、アリールオキシ（例：フェニルオキシ）、アルキルオキシカルボニル（例：メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）、アリールアルキルオキシ（例：ベンジルオキシ）、アミノ［アルキルアミノ（例：メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ）、アシルアミノ（例：アセチルアミノ、ベンゾイルアミノ）、アリールアルキルアミノ（例：ベンジルアミノ、トリチルアミノ）、ヒドロキシアミノ］、アミノアルキル（例：アミノメチル）、アルキルアミノアルキル（例：ジエチルアミノメチル）、カルバモイル、スルファモイル、オキソ、シリル、シリルオキシアルキル等があげられる。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡは、例えば、標識物質を含み、前記標識物質で標識化されてもよい。前記標識物質は、特に制限されず、例えば、蛍光物質、色素、同位体等があげられる。前記標識物質は、例えば、ピレン、ＴＡＭＲＡ、フルオレセイン、Ｃｙ３色素、Ｃｙ５色素等の蛍光団があげられ、前記色素は、例えば、Ａｌｅｘａ４８８等のＡｌｅｘａ色素等があげられる。前記同位体は、例えば、安定同位体および放射性同位体があげられ、好ましくは安定同位体である。また、前記安定同位体は、例えば、標識した化合物の物性変化がなく、トレーサーとしての性質にも優れる。前記安定同位体は、特に制限されず、例えば、２Ｈ、１３Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３３Ｓ、３４Ｓおよび３６Ｓがあげられる。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡは、前述のように、前記標的遺伝子の発現抑制ができる。このため、本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡは、例えば、遺伝子が原因となる疾患の治療剤として使用できる。本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡが、例えば、前記疾患に関与する遺伝子の発現を抑制する成熟ｍｉＲＮＡのガイド鎖配列を有する場合、例えば、前記標的遺伝子の発現抑制により、前記疾患を治療できる。本発明において、「治療」は、例えば、前記疾患の予防、疾患の改善、予後の改善の意味を含み、いずれでもよい。前記疾患は、特に制限されず、例えば、目的の疾患に応じて前記発現抑制配列を適宜設定できる。前記疾患としては、例えば、乳がん、肺がん、胃がん、大腸がん、肝がん、膵がん、食道がん、前立腺がん、胆嚢がん、子宮体がん、子宮頸がん、卵巣がん、骨肉腫、白血病等のがん、肺線維症、肝線維症等の疾患があげられる。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡの使用方法は、特に制限されず、例えば、前記標的遺伝子を有する投与対象に、前記人工マッチ型ｍｉＲＮＡを投与すればよい。
　前記投与対象は、例えば、細胞、組織または器官があげられる。前記投与対象は、例えば、ヒト、ヒトを除く非ヒト哺乳類等の非ヒト動物があげられる。前記投与は、例えば、ｉｎ　ｖｉｖｏでもｉｎ　ｖｉｔｒｏでもよい。前記細胞は、特に制限されず、例えば、ＨｅＬａ細胞、２９３細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、ＣＯＳ細胞等の各種培養細胞、ＥＳ細胞、造血幹細胞等の幹細胞、初代培養細胞等の生体から単離した細胞等があげられる。
　本発明において、発現抑制の対象となる前記標的遺伝子は、特に制限されず、所望の遺伝子を設定できる。そして、前述のように、前記標的遺伝子の種類に応じて、前記成熟ｍｉＲＮＡを選択すればよい。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡの使用に関しては、後述する本発明の組成物、発現抑制方法および治療方法等の記載を参照できる。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡは、前述のように、標的遺伝子の発現を抑制可能であることから、例えば、医薬品、診断薬および農薬、ならびに、農学、医学、生命科学等の研究ツールとして有用である。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡの合成方法は、特に制限されず、従来公知の核酸の製造方法が採用できる。前記合成方法は、例えば、遺伝子工学的手法による合成法、化学合成法等があげられる。遺伝子工学的手法は、例えば、インビトロ転写合成法、ベクターを用いる方法、ＰＣＲカセットによる方法があげられる。前記ベクターは、特に制限されず、プラスミド等の非ウイルスベクター、ウイルスベクター等があげられる。前記化学合成法は、特に制限されず、例えば、ホスホロアミダイト法およびＨ－ホスホネート法等があげられる。前記化学合成法は、例えば、市販の自動核酸合成機を使用可能である。前記化学合成法は、一般に、アミダイトが使用される。前記アミダイトは、特に制限されず、市販のアミダイトとして、例えば、ＲＮＡ　Ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅｓ（２’－Ｏ－ＴＢＤＭＳｉ、商品名、三千里製薬）、ＡＣＥアミダイトおよびＴＯＭアミダイト、ＣＥＥアミダイト、ＣＥＭアミダイト、ＴＥＭアミダイト等があげられる。
（２）組成物
　本発明の発現抑制用組成物は、前述のように、標的遺伝子の発現を抑制するための組成物であって、前記本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡを含むことを特徴とする。本発明の組成物は、前記本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡを含むことが特徴であり、その他の構成は、何ら制限されない。本発明の発現抑制用組成物は、例えば、発現抑制用試薬ということもできる。
　本発明によれば、例えば、前記標的遺伝子が存在する対象に投与することで、前記標的遺伝子の発現抑制を行うことができる。
　また、本発明の薬学的組成物は、前述のように、前記本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡを含むことを特徴とする。本発明の組成物は、前記本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡを含むことが特徴であり、その他の構成は何ら制限されない。本発明の薬学的組成物は、例えば、医薬品ということもできる。
　本発明によれば、例えば、遺伝子が原因となる疾患の患者に投与することで、前記遺伝子の発現を抑制し、前記疾患を治療することができる。本発明において、「治療」は、前述のように、例えば、前記疾患の予防、疾患の改善、予後の改善の意味を含み、いずれでもよい。
　本発明において、治療の対象となる疾患は、特に制限されず、例えば、遺伝子の発現が原因となる疾患があげられる。前記疾患の種類に応じて、その疾患の原因となる遺伝子を前記標的遺伝子に設定し、さらに、前記標的遺伝子に応じて、前記成熟ｍｉＲＮＡのガイド鎖配列を選択すればよい。
　本発明の発現抑制用組成物および薬学的組成物（以下、組成物という）は、その使用方法は、特に制限されず、例えば、前記標的遺伝子を有する投与対象に、前記人工マッチ型ｍｉＲＮＡを投与すればよい。
　前記投与対象は、例えば、細胞、組織または器官があげられる。前記投与対象は、例えば、ヒト、ヒトを除く非ヒト哺乳類等の非ヒト動物があげられる。前記投与は、例えば、ｉｎ　ｖｉｖｏでもｉｎ　ｖｉｔｒｏでもよい。前記細胞は、特に制限されず、例えば、ＨｅＬａ細胞、２９３細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、ＣＯＳ細胞等の各種培養細胞、ＥＳ細胞、造血幹細胞等の幹細胞、初代培養細胞等の生体から単離した細胞等があげられる。
　前記投与方法は、特に制限されず、例えば、投与対象に応じて適宜決定できる。前記投与対象が培養細胞の場合、例えば、トランスフェクション試薬を使用する方法、エレクトロポレーション法等があげられる。
　本発明の組成物は、例えば、本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡのみを含んでもよいし、さらにその他の添加物を含んでもよい。前記添加物は、特に制限されず、例えば、薬学的に許容された添加物が好ましい。前記添加物の種類は、特に制限されず、例えば、投与対象の種類に応じて適宜選択できる。
　本発明の組成物において、前記人工マッチ型ｍｉＲＮＡは、例えば、前記添加物と複合体を形成してもよい。前記添加物は、例えば、複合化剤ということもできる。前記複合体形成により、例えば、前記人工マッチ型ｍｉＲＮＡを効率よくデリバリーすることができる。
　前記複合化剤は、特に制限されず、ポリマー、シクロデキストリン、アダマンチン等があげられる。前記シクロデキストリンは、例えば、線状シクロデキストリンコポリマー、線状酸化シクロデキストリンコポリマー等があげられる。
　前記添加剤は、この他に、例えば、担体、標的細胞への結合物質、縮合剤、融合剤、賦形剤等があげられる。
（３）発現抑制方法
　本発明の発現抑制方法は、前述のように、標的遺伝子の発現を抑制する方法であって、前記本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡを使用することを特徴とする。本発明の発現抑制方法は、前記本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡを使用することが特徴であって、その他の工程および条件は、何ら制限されない。
　本発明の発現抑制方法において、前記標的遺伝子の発現抑制のメカニズムは、特に制限されず、例えば、成熟ｍｉＲＮＡによる発現抑制があげられる。
　本発明の発現抑制方法は、例えば、前記標的遺伝子が存在する対象に、前記人工マッチ型ｍｉＲＮＡを投与する工程を含む。前記投与工程により、例えば、前記投与対象に前記人工マッチ型ｍｉＲＮＡを接触させる。前記投与対象は、例えば、細胞、組織または器官があげられる。前記投与対象は、例えば、ヒト、ヒトを除く非ヒト哺乳類等の非ヒト動物があげられる。前記投与は、例えば、ｉｎ　ｖｉｖｏでもｉｎ　ｖｉｔｒｏでもよい。
　本発明の発現抑制方法は、例えば、前記人工マッチ型ｍｉＲＮＡを単独で投与してもよいし、前記人工マッチ型ｍｉＲＮＡを含む前記本発明の組成物を投与してもよい。前記投与方法は、特に制限されず、例えば、投与対象の種類に応じて適宜選択できる。
（４）治療方法
　本発明の疾患の治療方法は、前述のように、前記本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡを、患者に投与する工程を含み、前記人工マッチ型ｍｉＲＮＡにおける前記ガイド鎖配列が、前記疾患に関与する遺伝子の発現を抑制する成熟ｍｉＲＮＡのガイド鎖配列であることを特徴とする。本発明の治療方法は、前記本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡを使用することが特徴であって、その他の工程および条件は、何ら制限されない。
　本発明の治療方法は、例えば、前記本発明の発現抑制方法等を援用できる。前記投与方法は、特に制限されず、例えば、経口投与および非経口投与のいずれでもよい。
（５）人工マッチ型ｍｉＲＮＡの使用
　本発明の使用は、前記標的遺伝子の発現抑制のための、前記本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡの使用である。
　本発明の一本鎖核酸は、疾患の治療に使用するための一本鎖核酸であって、前記一本鎖核酸は、前記本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡであり、前記人工マッチ型ｍｉＲＮＡにおける前記ガイド鎖配列が、前記疾患に関与する遺伝子の発現を抑制する成熟ｍｉＲＮＡのガイド鎖配列であることを特徴とする。
　以下、実施例等により、本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
（実施例１）
　成熟ｍｉＲ－３４ａのガイド鎖に基づいて、本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡを合成し、Ｈ１２９９細胞の増殖の抑制を確認した。
（１）ｍｉＲＮＡの合成
　ポジティブコントロールのｍｉＲＮＡとして、以下に示すガイド鎖（配列番号１）およびパッセンジャー鎖（配列番号６）からなるヒト成熟ｍｉＲ－３４ａを合成した。また、ネガティブコントロールとして、前記ガイド鎖の塩基組成をスクランブルにしたガイド鎖スクランブル（配列番号７）とそれに対するパッセンジャー鎖（配列番号８）とからなる成熟ｍｉＲ－３４ａスクランブルを合成した。
　実施例の人工マッチ型ｍｉＲＮＡとして、前記ガイド鎖（配列番号１）と付加配列とからなるＸ領域と、前記Ｘ領域に完全に相補的な配列とオーバーハングとからなるＹ領域とが、下記式のプロリン誘導体の非ヌクレオチド構造（配列において［P］で表す）を介して連結しているマッチ型ｍｉＲ－３４ａを合成した。下記配列において、下線部が、前記ガイド鎖に対応する。前記マッチ型ｍｉＲＮＡにおける前記非ヌクレオチド構造は、下記式で表され、前記マッチ型ｍｉＲＮＡの合成において、Ｌ－プロリンジアミドアミダイト（ＷＯ２０１２／０１７９１９参照）を使用することにより導入した。また、人工マッチ型ｍｉＲＮＡに対するネガティブコントロールとして、前記ガイド鎖の塩基組成をスクランブルにしたガイド鎖とそれに対応するパッセンジャー鎖とからなるマッチ型ｍｉＲ－３４ａスクランブルを合成した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000027
　これらのｍｉＲＮＡの配列および構造を、以下に示す。下記において、下線部で示す配列が、ガイド鎖に相当する。
成熟ｍｉＲ－３４ａ
　　ガイド鎖（配列番号１）
　　　　　5’-UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGU-3’
　　パッセンジャー鎖（配列番号６）
　　　　　5’-CAAUCAGCAAGUAUACUGCCCU-3’
成熟ｍｉＲ－３４ａスクランブル
　　ガイド鎖（配列番号７）
　　　　　5’-UGUAUCGUUAUCGGGUCGGUUG-3’
　　パッセンジャー鎖（配列番号８）
　　　　　5’-CAACCGACCCGAUAACGAUACA-3’
マッチ型ｍｉＲ－３４ａ（配列番号９）
　　　　　5’-UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGUUCC-［P］-GGAACAACCAGCUAAGACACUGCCAUA-3’
マッチ型ｍｉＲ－３４ａスクランブル（配列番号１０）
　　　　　5’-UGUAUCGUUAUCGGGUCGGUUGUCC-［P］-GGACAACCGACCCGAUAACGAUACAUA-3’
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000028
（２）肺がん由来細胞に対する人工マッチ型ｍｉＲＮＡの影響
　前記人工マッチ型ｍｉＲＮＡを、ヒト非小細胞性肺がん細胞株（ＮＣＩ－Ｈ１２９９）に導入し、前記細胞への影響を確認した。
（２－１）トランスフェクション
　前記ｍｉＲＮＡを、注射用蒸留水（大塚製薬、以下同様）で溶解し、１００μｍｏｌ／ＬのｍｉＲＮＡ溶液を調製した。培地は、１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ－１６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用し、培養条件は、３７℃、５％ＣＯ２下とした。
　まず、細胞を、前記培地中で培養し、その培養液を、２４穴プレートに、５００μＬずつ、１×１０４細胞／ウェルとなるように分注した。さらに、前記ウェル中の細胞を２４時間培養した後、前記ｍｉＲＮＡをトランスフェクション試薬ＲＮＡｉ　ＭＡＸ　Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ　Ｒｅａｇｅｎｔ（商品名、Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を用い、添付プロトコールに従って、トランスフェクションした。トランスフェクションは、前記ウェルあたりの組成を以下のように設定した。下記組成において、（Ｂ）は、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ（商品名、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）であり、（Ｃ）は、前記ＲＮＡ溶液であり、両者をあわせて４９μＬ添加した。なお、前記ウェルにおいて、前記ｍｉＲＮＡの最終濃度は、１００ｎｍｏｌ／Ｌとした。トランスフェクション後、前記ウェル中の細胞を３日間培養した。そして、前記３日間の培養後、培養細胞について、以下に示す確認を行った。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000029
（２－２）細胞数のカウント
　培養後の培養細胞について、ウェルあたりの細胞数をカウントした。この結果を、図２に示す。図２は、ウェルあたりの細胞数を示すグラフである。図２において、「Normal」は、未処理の細胞、「Mock」は、トランスフェクション試薬のみを導入した細胞、「Scramble」は、ネガティブコントロールのｍｉＲ－３４ａスクランブル、「miR-34a」は、ポジティブコントロールの成熟ｍｉＲ－３４ａ、「Scramble　match」は、ネガティブコントロールのマッチ型ｍｉＲ－３４ａスクランブル、「miR-34a　match」は、実施例のマッチ型ｍｉＲ－３４ａの結果を示す（以下、同様）。図２に示すように、実施例のマッチ型ｍｉＲ－３４ａは、ポジティブコントロールの成熟ｍｉＲ－３４ａと同程度に、細胞数を減少できた。
（２－３）ＭＴＴアッセイ
　培養後の培養細胞について、市販の試薬キット（商品名　Cell　Count　Reagent　SF、ナカライテスク社）を用いてＭＴＴアッセイを行い、細胞増殖を評価した。細胞増殖の評価は、Ｎｏｒｍａｌ（無処置）の結果を１として、相対値により表した。この結果を、図３に示す。図３は、細胞増殖の相対値を示すグラフである。図３に示すように、実施例のマッチ型ｍｉＲ－３４ａは、ポジティブコントロールの成熟ｍｉＲ－３４ａと同程度に、細胞数を減少できた。
（２－４）アポトーシス
　培養後の培養細胞について、市販の試薬キット（商品名Annexin　V:PE　Apoptosis　Detection　Kit、BD　Biosciences社）を用いてアポトーシスの検出を行った。この結果を、図４に示す。図４は、早期アポトーシス（％）と後期アポトーシス（％）とを示すグラフである。図４に示すように、実施例のマッチ型ｍｉＲ－３４ａは、ポジティブコントロールの成熟ｍｉＲ－３４ａと同程度に、アポトーシスを亢進できた。
（２－５）ｍＲＮＡの発現抑制
　培養後の培養細胞について、ＩＳＯＧＥＮ　ｒｅａｇｅｎｔ（商品名、ニッポンジーン）を用い、添付のプロトコールに従って、ＲＮＡを回収した。
　次に、逆転写酵素（商品名Ｍ－ＭＬＶ　ｒｅｖｅｒｓｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用い、添付のプロトコールに従って、前記ＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。そして、合成した前記ｃＤＮＡを鋳型として定量ＰＣＲを行い、ＡＸＬ　ｃＤＮＡの量およびＭＥＴ　ｃＤＮＡの量を測定した。また、ＧＡＰＤＨ　ｃＤＮＡを内部コントロールとし、そのｃＤＮＡの量をあわせて測定した。
　前記定量ＰＣＲは、試薬として、ＦａｓｔＳｔａｒｔ　Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ　ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　Ｍａｓｔｅｒ（商品名、Ｒｏｃｈｅ）、サーモサイクラーとしてＭＸ３０００Ｐ（商品名、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、解析機器としてＭｘＰｒｏ（商品名、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を用いた（以下、同様）。前記ＡＸＬ　ｃＤＮＡ、前記ＭＥＴ　ｃＤＮＡおよび前記ＧＡＰＤＨ　ｃＤＮＡの増幅には、それぞれ、下記プライマーセットを使用した。反応液の全量は２５μＬとして、それぞれ３回測定した。
AXL　プライマーセット
　　　5’-CTCAACCAGGACGACTCCAT-3’　　（配列番号１１）
　　　5’-AGACCGCTTCACTCAGGAAA-3’　　（配列番号１２）
MET　プライマーセット
　　　5’-CAGGCAGTGCAGCATGTAGT-3’　　（配列番号１３）
　　　5’-TGTCCAACAAAGTCCCATGA-3’　　（配列番号１４）
GAPDH　プライマーセット
　　　5’-ATGGGGAAGGTGAAGGTCG-3’　　　（配列番号１５）
　　　5’-GGGTCATTGATGGCAACAATATC-3’　（配列番号１６）
　そして、ｍｉＲＮＡ未添加のコントールにおけるＡＸＬ　ｍＲＮＡまたはＭＥＴ　ｍＲＮＡを１とした場合における、各トランスフェクション細胞でのＡＸＬ　ｍＲＮＡおよびＭＥＴ　ｍＲＮＡの相対値を算出した。これらの結果を、図５に示す。図５（Ａ）は、ＡＸＬ　ｍＲＮＡの結果、図５（Ｂ）は、ＭＥＴ　ｍＲＮＡの結果である。
　図５に示すように、実施例のマッチ型ｍｉＲ－３４ａは、ポジティブコントロールの成熟ｍｉＲ－３４ａと同程度に、ＡＸＬ　ｍＲＮＡの量およびＭＥＴ　ｍＲＮＡの量が減少した。このため、前記人工マッチ型ｍｉＲＮＡにより、ＡＸＬ　ｍＲＮＡおよびＭＥＴ　ｍＲＮＡがそれぞれコードするタンパク質の転写も、抑制されているといえる。
　これらの結果から、実施例のマッチ型ｍｉＲ－３４ａは、ＡＸＬ　ｍＲＮＡおよびＭＥＴ　ｍＲＮＡ等の発現を抑制し、Ｈ１２９９細胞の増殖の抑制およびアポトーシスの亢進を可能とすることがわかった。
　前記人工マッチ型ｍｉＲＮＡは、二本鎖の成熟ｍｉＲ－３４ａとは異なり、一本鎖の核酸分子であるため、使用時に各一本鎖をアニーリングする必要がなく、また、自然免疫に関与するＴＬＲ３等に認識されることも回避できる。
（実施例２）
　実施例１のマッチ型ｍｉＲ－３４ａについて、Ｘ領域の付加配列およびＹ領域のオーバーハングの短縮化を行った。
（１）ｍｉＲＮＡの合成
　以下に示すように、マッチ型ｍｉＲ－３４ａは、Ｘ領域の３’側に四角で囲んだ３塩基長の付加配列（Ｊ）を有し、Ｙ領域の５’側に四角で囲んだ２塩基長のオーバーハング（Ｏ）を有している。そこで、前記付加配列を３’側から１塩基ずつ欠失させ且つそれに対応するＹ領域側の配列を５’側から１塩基ずつ欠失させた分子、オーバーハングを３’側から１塩基ずつ欠失させた分子、および、前記付加配列とオーバーハングとを１塩基ずつ欠失させた分子を合成し、前記実施例１と同様にして、ＡＸＬ　ｍＲＮＡおよびＭＥＴ　ｍＲＮＡの発現抑制を確認した。下記配列において、［Ｐ］の５’側領域がＸ領域であり、前記Ｘ領域において、下線部は前記ガイド鎖配列であり、その他が、前記付加配列であり、［Ｐ］の３’側領域がＹ領域であり、前記Ｙ領域において、四角で囲んだ領域がオーバーハングである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000030
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000031
　これらの結果を、図６および図７に示す。図６は、ＡＸＬ　ｍＲＮＡの結果であり、図７は、ＭＥＴ　ｍＲＮＡの結果である。図６および図７に示すように、前記Ｘ領域における付加配列および前記Ｙ領域におけるオーバーハングを短縮させても、発現抑制の効果は維持された。
（実施例３）
　マッチ型ｍｉＲ－３４ａについて、リンカーの非ヌクレオチド構造の改変およびＸ領域の付加配列の増減を行い、ＡＸＬ　ｍＲＮＡおよびＭＥＴ　ＲＮＡの発現抑制効果を調べた。
（１）ｍｉＲＮＡの合成
　以下に示すように、実施例１のマッチ型ｍｉＲ－３４ａから、オーバーハング部分の塩基配列を改変したマッチ型ｍｉＲ－３４ａ（ＰＨ－００３９）を合成した。さらに、ＰＨ－００３９の付加配列およびそれに対応するＹ領域側の配列を欠失させた分子（ＰＨ－００３７）、付加配列およびそれに対応するＹ領域側の配列を５塩基長に延長した分子（ＰＨ－００９３）を合成した。
　また、ＰＨ－００３７、ＰＨ－００３９およびＰＨ－００９３のリンカー領域を、下記式のテレフタル酸誘導体の非ヌクレオチド構造（配列において［TP］で表す）にそれぞれ置換した分子（ＸＨ－００１６、ＸＨ－００２５およびＸＨ－００２７）を合成した。該非ヌクレオチド構造は、テレフタル酸アミダイト（ＷＯ２０１３／１３３２２１参照）を使用することにより導入した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000032
　さらに、ＰＨ－００３７およびＰＨ－００３９のリンカー領域を、下記式のグリシン誘導体の非ヌクレオチド構造（配列において［Gly］で表す）にそれぞれ置換した分子（ＸＨ－００１２およびＸＨ－００２８）、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000033
　ＰＨ－００３７およびＰＨ－００３９のリンカー領域を、下記式のグリシルグリシン誘導体の非ヌクレオチド構造（配列において［GlyGly］で表す）にそれぞれ置換した分子（ＸＨ－００１４およびＸＨ－００２９）、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000034
　前記化学式（Ｇ２）中のＧｌｙＧｌｙは、下記化学式（ＧｌｙＧｌｙ）で表される原子団であり、ただし、下記化学式（ＧｌｙＧｌｙ）中の末端のカルボニル炭素は、上記化学式（Ｇ２）中のＮ原子に結合しており、下記化学式（ＧｌｙＧｌｙ）中の末端の窒素原子は、上記化学式（Ｇ２）のカルボニル炭素に結合している。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000035
　並びに、ＰＨ－００３７およびＰＨ－００３９のリンカー領域を、下記式のリシン誘導体の非ヌクレオチド構造（配列において［K］で表す）にそれぞれ置換した分子（ＫＨ－０００７およびＫＨ－００１１）を合成した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000036
　前記グリシン誘導体の非ヌクレオチド構造は、グリシンアミドアミダイト（ＷＯ２０１３／１０３１４６参照）を、前記グリシルグリシン誘導体の非ヌクレオチド構造は、グリシルグリシンアミドアミダイト（ＷＯ２０１３／１３３２２１参照）を、リシン誘導体の非ヌクレオチド構造は、Ｌ－リシンアミドアミダイト（ＷＯ２０１３／１０３１４６参照）を、それぞれ使用することにより導入した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000037
　下記配列において、各リンカーの５’側領域がＸ領域であり、前記Ｘ領域において、下線部は前記ガイド鎖配列であり、その他が、前記付加配列であり、各リンカーの３’側領域がＹ領域である。
ＰＨ－００３７（配列番号２８）
　5’-UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGU-[P]-ACAACCAGCUAAGACACUGCCACU-3’
ＰＨ－００３９（配列番号２９）
　5’-UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGUUCC-[P]-GGAACAACCAGCUAAGACACUGCCACU-3’
ＰＨ－００９３（配列番号３０）
　5’-UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGUUCCGG-[P]-CCGGAACAACCAGCUAAGACACUGCCACU-3’
ＸＨ－００１６（配列番号２８）
　5’-UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGU-[TP]-ACAACCAGCUAAGACACUGCCACU-3’
ＸＨ－００２５（配列番号２９）
　5’-UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGUUCC-[TP]-GGAACAACCAGCUAAGACACUGCCACU-3’
ＸＨ－００２７（配列番号３０）
　5’-UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGUUCCGG-[TP]-CCGGAACAACCAGCUAAGACACUGCCACU-3’
ＸＨ－００１２（配列番号２８）
　5’-UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGU-[Gly]-ACAACCAGCUAAGACACUGCCACU-3’
ＸＨ－００２８（配列番号２９）
　5’-UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGUUCC-[Gly]-GGAACAACCAGCUAAGACACUGCCACU-3’
ＸＨ－００１４（配列番号２８）
　5’-UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGU-[GlyGly]-ACAACCAGCUAAGACACUGCCACU-3’
ＸＨ－００２９（配列番号２９）
　5’-UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGUUCC-[GlyGly]-GGAACAACCAGCUAAGACACUGCCACU-3’
ＫＨ－０００７（配列番号２８）
　5’-UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGU-[K]-ACAACCAGCUAAGACACUGCCACU-3’
ＫＨ－００１１（配列番号２９）
　5’-UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGUUCC-[K]-GGAACAACCAGCUAAGACACUGCCACU-3’
　また、ネガティブコントロールとして、核酸データベース上で登録されているすべての配列に相補性を有さない配列からなるガイド鎖とそれに対応するパッセンジャー鎖とからなるマッチ型ｍｉＲＮＡ（ＰＨ－００００）を合成した。
ＰＨ－００００（配列番号３１）
　5’-UACUAUUCGACACGCGAAGUUCC-[P]-GGAACUUCGCGUGUCGAAUAGUAUU-3’
　ポジティブコントロールとして、成熟ｍｉＲ－３４ａのガイド鎖とパッセンジャー鎖を天然型ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡのループ部分でつないだ分子（ＮＭ－０００４）および成熟ｍｉＲＮＡのガイド鎖とそれに完全相補的な配列とをアニーリングさせた二本鎖マッチ型ＲＮＡ（ＮＩ－０２０９）を合成した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000038
ＮＭ－０００４（配列番号３２）
　5’-UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGUUGUGAGCAAUAGUAAGGAAGCAAUCAGCAAGUAUACUGCCCU-3’
ＮＩ－０２０９
　ガイド鎖（配列番号１）／パッセンジャー鎖（配列番号３３）
　5’-UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGU-3’/5’-AACCAGCUAAGACACUGCCACU-3’
（２）ＡＸＬ遺伝子の発現量の測定
　前記各ＲＮＡを、４μｍｏｌ／Ｌとなるように、注射用蒸留水（大塚製薬）に溶解し、ＲＮＡ溶液を調製した。
　細胞は、Ｈ１２９９細胞（ＡＴＣＣ）を使用した。培地は、１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ Ｍｅｄｉｕｍ　１６４０（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用した。培養条件は、３７℃、５％ＣＯ２下とした。
　まず、細胞を、前記培地中で培養し、その培養液を、２４穴プレートに、４００μＬずつ、４×１０４細胞／ウェルとなるように分注した。さらに、前記ＲＮＡをトランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ　ＲＮＡｉＭＡＸ（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用い、前記トランスフェクション試薬の添付プロトコールに従って、トランスフェクションした。具体的には、前記ウェルあたりの組成を以下のように設定し、トランスフェクションを行った。下記組成において、（Ｂ）は、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、（Ｃ）は、０．４μｍｏｌ／Ｌおよび２μｍｏｌ／Ｌ　前記ＲＮＡ溶液であり、両者をあわせて９８．５μＬ添加した。なお、前記ウェルにおいて、前記ＲＮＡの最終濃度は、２ｎｍｏｌ／Ｌとした。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000039
　トランスフェクション後、前記ウェル中の細胞を２４時間培養した後、ＲＮｅａｓｙ　Ｍｉｎｉ　Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ、オランダ）を用い、添付のプロトコールに従って、ＲＮＡを回収した。次に、トランスクリプターファーストストランドｃＤＮＡ合成キット（Ｒｏｃｈｅ）を用い、添付のプロトコールに従って、前記ＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。そして、以下に示すように、合成した前記ｃＤＮＡを鋳型としてＰＣＲを行い、ＡＸＬおよびＭＥＴ遺伝子の発現量および内部標準であるＧＡＰＤＨ遺伝子の発現量を測定した。前記ＡＸＬおよびＭＥＴ遺伝子の発現量は、前記ＧＡＰＤＨ遺伝子の発現量により補正した。
　前記ＰＣＲは、試薬としてＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ　４８０　ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　I　Ｍａｓｔｅｒ（商品名、Ｒｏｃｈｅ）、機器としてＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ　４８０　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　II（商品名、Ｒｏｃｈｅ）を用いた（以下、同様）。前記ＡＸＬ、ＭＥＴおよびＧＡＰＤＨ遺伝子の増幅には、それぞれ、以下のプライマーセットを使用した。
ＡＸＬ遺伝子用ＰＣＲプライマーセット
　　（配列番号１１）　5’-CTCAACCAGGACGACTCCAT-3’
　　（配列番号１２）　5’-AGACCGCTTCACTCAGGAAA-3’
ＭＥＴ遺伝子用ＰＣＲプライマーセット
　　（配列番号１３）　5’-CAGGCAGTGCAGCATGTAGT-3’
　　（配列番号１４）　5’-TGTCCAACAAAGTCCCATGA-3’
ＧＡＰＤＨ遺伝子用プライマーセット
　　（配列番号１５）　5’-ATGGGGAAGGTGAAGGTCG-3’
　　（配列番号１６）　5’-GGGTCATTGATGGCAACAATATC-3’ 
　なお、コントロール１として、前記培養液に前記（Ｂ）液１００μＬのみを添加した細胞についても、遺伝子発現量を測定した（－）。また、コントロール２として、トランスフェクションにおいて、前記ＲＮＡ溶液を未添加とし、前記（Ａ）１．５μＬと前記（Ｂ）とを合計１００μＬ添加した以外は、同様にして処理した細胞についても、遺伝子発現量を測定した（ｍｏｃｋ）。
　補正後のＡＸＬおよびＭＥＴ遺伝子の発現量について、コントロール（ｍｏｃｋ）の細胞における発現量を１として、各ＲＮＡを導入した細胞での発現量の相対値を求めた。
（３）結果
　図６および７に示すように、リンカー領域の非ヌクレオチド構造を改変しても、また、Ｘ領域の付加配列を欠失もしくは延長しても、ＡＸＬ　ｍＲＮＡおよびＭＥＴ　ＲＮＡの発現抑制効果は維持された。
（実施例４）
　成熟ｌｅｔ－７ａのガイド鎖に基づいて、種々の本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡを合成し、標的遺伝子であるＨＭＧＡ２　ｍＲＮＡの発現抑制効果を調べた。
（１）ｍｉＲＮＡの合成
　ポジティブコントロールとして、成熟ｌｅｔ－７ａのガイド鎖（配列番号２）とパッセンジャー鎖（配列番号３４）を天然型ｐｒｅ－ｌｅｔ－７ａのループ部分でつないだ分子（ＮＭ－０００３）および成熟ｌｅｔ－７ａのガイド鎖とそれに完全相補的な配列とをアニーリングさせた二本鎖マッチ型ＲＮＡ（ＮＩ－０２０７）を合成した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000040
　下記配列において、下線部は前記ガイド鎖配列を示す。
ＮＭ－０００３（配列番号３５）
　5’-UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUUUUAGGGUCACACCCACCACUGGGAGAUAACUAUACAAUCUACUGUCUUUC-3’
ＮＩ－０２０７
　ガイド鎖（配列番号２）／パッセンジャー鎖（配列番号３４）
　5’-UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUU-3’/5’-CUAUACAACCUACUACCUCAUC-3’
　以下に示すように、成熟ｌｅｔ－７ａのガイド鎖配列およびその３’側の付加配列（０、３または５塩基長）からなるＸ領域と、該Ｘ領域に完全相補的で、かつ５’側に２塩基長のオーバーハングを有するＹ領域との間に、実施例３と同様、プロリン誘導体（[P]）、テレフタル酸誘導体（[TP]）、グリシン誘導体（[Gly]）、グリシルグリシン誘導体（[GlyGly]）およびリシン誘導体（[K]）のリンカーを導入した、種々の人工マッチ型ｌｅｔ－７ａを合成した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000041
　下記配列において、各リンカーの５’側領域がＸ領域であり、前記Ｘ領域において、下線部は前記ガイド鎖配列であり、その他が、前記付加配列であり、各リンカーの３’側領域がＹ領域である。
ＰＨ－００１３（配列番号３６）
　5’-UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUU-[P]-AACUAUACAACCUACUACCUCAUC-3’
ＰＨ－００１５（配列番号３７）
　5’-UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUUUCC-[P]-GGAAACUAUACAACCUACUACCUCAUC-3’
ＰＨ－００９４（配列番号３８）
　5’-UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUUUCCGG-[P]-CCGGAAACUAUACAACCUACUACCUCAUC-3’
ＸＨ－００１０（配列番号３６）
　5’-UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUU-[TP]-AACUAUACAACCUACUACCUCAUC-3’
ＸＨ－００３０（配列番号３７）
　5’-UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUUUCC-[TP]-GGAAACUAUACAACCUACUACCUCAUC-3’
ＸＨ－００３１（配列番号３８）
　5’-UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUUUCCGG-[TP]-CCGGAAACUAUACAACCUACUACCUCAUC-3’
ＸＨ－０００８（配列番号３６）
　5’-UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUU-[Gly]-AACUAUACAACCUACUACCUCAUC-3’
ＸＨ－００３２（配列番号３７）
　5’-UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUUUCC-[Gly]-GGAAACUAUACAACCUACUACCUCAUC-3’
ＸＨ－０００９（配列番号３６）
　5’-UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUU-[GlyGly]-AACUAUACAACCUACUACCUCAUC-3’
ＸＨ－００３３（配列番号３７）
　5’-UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUUUCC-[GlyGly]-GGAAACUAUACAACCUACUACCUCAUC-3’
ＫＨ－０００５（配列番号３６）
　5’-UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUU-[K]-AACUAUACAACCUACUACCUCAUC-3’
ＫＨ－００１２（配列番号３７）
　5’-UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUUUCC-[K]-GGAAACUAUACAACCUACUACCUCAUC-3’
　また、ネガティブコントロールとして、実施例３で合成したＰＨ－００００を使用した。
（２）ＨＭＧＡ２遺伝子の発現量の測定
　前記各ＲＮＡを、０．４μｍｏｌ／Ｌとなるように、注射用蒸留水（大塚製薬）に溶解し、ＲＮＡ溶液を調製した。
　細胞は、Ａ５４９細胞（ＤＳファーマバイオメディカル）を使用した。培地は、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用した。培養条件は、３７℃、５％ＣＯ２下とした。
　まず、細胞を、前記培地中で培養し、その培養液を、２４穴プレートに、４００μＬずつ、４×１０４細胞／ウェルとなるように分注した。さらに、前記ＲＮＡをトランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ　ＲＮＡｉＭＡＸ（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用い、前記トランスフェクション試薬の添付プロトコールに従って、トランスフェクションした。具体的には、前記ウェルあたりの組成を以下のように設定し、トランスフェクションを行った。下記組成において、（Ｂ）は、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、（Ｃ）は、０．１μｍｏｌ／Ｌおよび０．２μｍｏｌ／Ｌ　前記ＲＮＡ溶液であり、両者をあわせて９８．５μＬ添加した。なお、前記ウェルにおいて、前記ＲＮＡの最終濃度は、０．２ｎｍｏｌ／Ｌとした。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000042
　トランスフェクション後、前記ウェル中の細胞を２４時間培養した後、ＲＮｅａｓｙ　Ｍｉｎｉ　Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ、オランダ）を用い、添付のプロトコールに従って、ＲＮＡを回収した。次に、トランスクリプターファーストストランドｃＤＮＡ合成キット（Ｒｏｃｈｅ）を用い、添付のプロトコールに従って、前記ＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。そして、以下に示すように、合成した前記ｃＤＮＡを鋳型としてＰＣＲを行い、ＨＭＧＡ２遺伝子の発現量および内部標準であるＧＡＰＤＨ遺伝子の発現量を測定した。前記ＨＭＧＡ２遺伝子の発現量は、前記ＧＡＰＤＨ遺伝子の発現量により補正した。
　前記ＰＣＲは、試薬としてＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ　４８０　ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　I　Ｍａｓｔｅｒ（商品名、Ｒｏｃｈｅ）、機器としてＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ　４８０　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　II（商品名、Ｒｏｃｈｅ）を用いた（以下、同様）。前記ＨＭＧＡ２遺伝子およびＧＡＰＤＨ遺伝子の増幅には、それぞれ、以下のプライマーセットを使用した。
ＨＭＧＡ２遺伝子用ＰＣＲプライマーセット
　　（配列番号３９）　5’-GAAGCCACTGGAGAAAAACG-3’
　　（配列番号４０）　5’-CTTCGGCAGACTCTTGTGAG-3’
ＧＡＰＤＨ遺伝子用プライマーセット
　　（配列番号１５）　5’-ATGGGGAAGGTGAAGGTCG-3’
　　（配列番号１６）　5’-GGGTCATTGATGGCAACAATATC-3’ 
　なお、コントロール１として、前記培養液に前記（Ｂ）液１００μＬのみを添加した細胞についても、遺伝子発現量を測定した（－）。また、コントロール２として、トランスフェクションにおいて、前記ＲＮＡ溶液を未添加とし、前記（Ａ）１．５μＬと前記（Ｂ）とを合計１００μＬ添加した以外は、同様にして処理した細胞についても、遺伝子発現量を測定した（ｍｏｃｋ）。
　補正後のＨＭＧＡ２遺伝子の発現量について、コントロール（ｍｏｃｋ）の細胞における発現量を１として、各ＲＮＡを導入した細胞での発現量の相対値を求めた。
（３）結果
　図１０に示すように、実施例のマッチ型ｌｅｔ－７ａは、ポジティブコントロールの成熟ｌｅｔ－７ａや二本鎖マッチ型ｌｅｔ－７ａと同程度もしくはそれ以上に、ＨＭＧＡ２　ｍＲＮＡの発現を抑制した。また、リンカー領域の非ヌクレオチド構造や、Ｘ領域の付加配列の塩基長を改変しても、ＨＭＧＡ２　ｍＲＮＡの発現抑制効果は維持された。
（実施例５）
　成熟ｍｉＲ－２９ｂのガイド鎖に基づいて、種々の本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡを合成し、標的遺伝子であるＣＯＬＡ１　ｍＲＮＡの発現抑制効果を調べた。
（１）ｍｉＲＮＡの合成
　ポジティブコントロールとして、成熟ｍｉＲ－２９ｂのガイド鎖（配列番号５）とパッセンジャー鎖（配列番号４１）を天然型ｐｒｅ－ｍｉＲ－２９ｂのループ部分でつないだ分子（ＮＭ－０００５）および成熟ｍｉＲ－２９ｂのガイド鎖とそれに完全相補的な配列とをアニーリングさせた二本鎖マッチ型ＲＮＡ（ＮＩ－０２１１）を合成した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000043
　下記配列において、下線部は前記ガイド鎖配列を示す。
ＮＭ－０００５（配列番号４２）
　5’-GCUGGUUUCAUAUGGUGGUUUAGAUUUAAAUAGUGAUUGUCUAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUU-3’
ＮＩ－０２１１
　パッセンジャー鎖（配列番号４１）／ガイド鎖（配列番号５）
　5’-CACUGAUUUCAAAUGGUGCUAGA-3’/5’-UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUU-3’
　以下に示すように、成熟ｍｉＲ－２９ｂのガイド鎖配列およびその３’側の付加配列（０、３または５塩基長）からなるＸ領域と、該Ｘ領域に完全相補的で、かつ５’側に２塩基長のオーバーハングを有するＹ領域との間に、実施例３と同様、プロリン誘導体（[P]）、テレフタル酸誘導体（[TP]）、グリシン誘導体（[Gly]）、グリシルグリシン誘導体（[GlyGly]）およびリシン誘導体（[K]）のリンカーを導入した、種々の人工マッチ型ｍｉＲ－２９ｂを合成した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000044
　下記配列において、各リンカーの５’側領域がＸ領域であり、前記Ｘ領域において、下線部は前記ガイド鎖配列であり、その他が、前記付加配列であり、各リンカーの３’側領域がＹ領域である。
ＰＨ－００７１（配列番号４３）
　5’-UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUU-[P]-AACACUGAUUUCAAAUGGUGCUAGA-3’
ＰＨ－００７３（配列番号４４）
　5’-UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUUUCC-[P]-GGAAACACUGAUUUCAAAUGGUGCUAGA-3’
ＰＨ－００９５（配列番号４５）
　5’-UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUUUCCGG-[P]-CCGGAAACACUGAUUUCAAAUGGUGCUAGA-3’
ＸＨ－００３４（配列番号４３）
　5’-UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUU-[TP]-AACACUGAUUUCAAAUGGUGCUAGA-3’
ＸＨ－００３５（配列番号４４）
　5’-UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUUUCC-[TP]-GGAAACACUGAUUUCAAAUGGUGCUAGA-3’
ＸＨ－００３６（配列番号４５）
　5’-UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUUUCCGG-[TP]-CCGGAAACACUGAUUUCAAAUGGUGCUAGA-3’
ＸＨ－００３７（配列番号４３）
　5’-UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUU-[Gly]-AACACUGAUUUCAAAUGGUGCUAGA-3’
ＸＨ－００３８（配列番号４４）
　5’-UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUUUCC-[Gly]-GGAAACACUGAUUUCAAAUGGUGCUAGA-3’
ＸＨ－００３９（配列番号４３）
　5’-UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUU-[GlyGly]-AACACUGAUUUCAAAUGGUGCUAGA-3’
ＸＨ－００４０（配列番号４４）
　5’-UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUUUCC-[GlyGly]-GGAAACACUGAUUUCAAAUGGUGCUAGA-3’
ＫＨ－００１３（配列番号４３）
　5’-UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUU-[K]-AACACUGAUUUCAAAUGGUGCUAGA-3’
ＫＨ－００１４（配列番号４４）
　5’-UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUUUCC-[K]-GGAAACACUGAUUUCAAAUGGUGCUAGA-3’
　また、ネガティブコントロールとして、実施例３で合成したＰＨ－００００を使用した。
（２）ＣＯＬ１Ａ１遺伝子の発現量の測定
　前記各ＲＮＡを、１μｍｏｌ／Ｌとなるように、注射用蒸留水（大塚製薬）に溶解し、ＲＮＡ溶液を調製した。
　細胞は、Ａ５４９細胞（ＤＳファーマバイオメディカル）を使用した。培地は、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用した。培養条件は、３７℃、５％ＣＯ２下とした。
　まず、細胞を、前記培地中で培養し、その培養液を、２４穴プレートに、４００μＬずつ、４×１０４細胞／ウェルとなるように分注した。さらに、前記ＲＮＡをトランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ　ＲＮＡｉＭＡＸ（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用い、前記トランスフェクション試薬の添付プロトコールに従って、トランスフェクションした。具体的には、前記ウェルあたりの組成を以下のように設定し、トランスフェクションを行った。下記組成において、（Ｂ）は、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、（Ｃ）は、０．４μｍｏｌ／Ｌおよび２μｍｏｌ／Ｌ　前記ＲＮＡ溶液であり、両者をあわせて９８．５μＬ添加した。なお、前記ウェルにおいて、前記ＲＮＡの最終濃度は、０．５ｎｍｏｌ／Ｌとした。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000045
　トランスフェクション後、前記ウェル中の細胞を２４時間培養した後、ＲＮｅａｓｙ　Ｍｉｎｉ　Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ、オランダ）を用い、添付のプロトコールに従って、ＲＮＡを回収した。次に、トランスクリプターファーストストランドｃＤＮＡ合成キット（Ｒｏｃｈｅ）を用い、添付のプロトコールに従って、前記ＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。そして、以下に示すように、合成した前記ｃＤＮＡを鋳型としてＰＣＲを行い、ＣＯＬ１Ａ１遺伝子の発現量および内部標準であるＧＡＰＤＨ遺伝子の発現量を測定した。前記ＣＯＬ１Ａ１遺伝子の発現量は、前記ＧＡＰＤＨ遺伝子の発現量により補正した。
　前記ＰＣＲは、試薬としてＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ　４８０　ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　I　Ｍａｓｔｅｒ（商品名、Ｒｏｃｈｅ）、機器としてＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ　４８０　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　II（商品名、Ｒｏｃｈｅ）を用いた（以下、同様）。前記ＣＯＬ１Ａ１遺伝子およびＧＡＰＤＨ遺伝子の増幅には、それぞれ、以下のプライマーセットを使用した。
ＣＯＬ１Ａ１遺伝子用ＰＣＲプライマーセット
　　（配列番号４６）　5’-CCCAAGGACAAGAGGCATGT-3’
　　（配列番号４７）　5’-CCGCCATACTCGAACTGGAA-3’
ＧＡＰＤＨ遺伝子用プライマーセット
　　（配列番号１５）　5’-ATGGGGAAGGTGAAGGTCG-3’
　　（配列番号１６）　5’-GGGTCATTGATGGCAACAATATC-3’
　なお、コントロール１として、前記培養液に前記（Ｂ）液１００μＬのみを添加した細胞についても、遺伝子発現量を測定した（－）。また、コントロール２として、トランスフェクションにおいて、前記ＲＮＡ溶液を未添加とし、前記（Ａ）１．５μＬと前記（Ｂ）とを合計１００μＬ添加した以外は、同様にして処理した細胞についても、遺伝子発現量を測定した（ｍｏｃｋ）。
　補正後のＣＯＬ１Ａ１遺伝子の発現量について、コントロール（ｍｏｃｋ）の細胞における発現量を１として、各ＲＮＡを導入した細胞での発現量の相対値を求めた。
（３）結果
　図１１に示すように、実施例のマッチ型ｍｉＲ－２９ｂは、ポジティブコントロールの成熟ｍｉＲ－２９ｂや二本鎖マッチ型ｍｉＲ－２９ｂと同程度もしくはそれ以上に、ＣＯＬＡ１　ｍＲＮＡの発現を抑制した。また、リンカー領域の非ヌクレオチド構造や、Ｘ領域の付加配列の塩基長を改変しても、ＣＯＬＡ１　ｍＲＮＡの発現抑制効果は維持された。
　以上、実施形態を参照して本願発明を説明したが、本願発明は、上記実施形態に限定されるものではない。本願発明の構成や詳細には、本願発明のスコープ内で当業者が理解しうる様々な変更をすることができる。　ここで述べられた特許および特許出願明細書を含む全ての刊行物に記載された内容は、ここに引用されたことによって、その全てが明示されたと同程度に本明細書に組み込まれるものである。
　本出願は、2013年12月27日付で日本国に出願された特願2013-273033を基礎としており、ここで言及することによりその内容は全て本明細書に包含される。
　本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡによれば、容易に低コストで合成でき、且つ、前記遺伝子がコードするタンパク質の翻訳の抑制が可能である。本発明の人工マッチ型ｍｉＲＮＡは、前述のように標的遺伝子の発現を抑制可能であることから、例えば、医薬品、診断薬および農薬、ならびに、農学、医学、生命科学等の研究ツールとして有用である。

Claims (51)

  1. 　Ｘ領域とＹ領域とを有する一本鎖核酸であり、
    前記Ｘ領域の３’末端と前記Ｙ領域の５’末端とが、非ヌクレオチド構造のリンカー領域を介して連結し、
    前記Ｘ領域は、成熟ｍｉＲＮＡのガイド鎖配列を含み、
    前記Ｙ領域は、前記Ｘ領域と完全に相補な配列を含むことを特徴とする、人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  2. 　前記Ｙ領域と前記Ｘ領域とをアライメントした際に、前記Ｙ領域が、３’末端にオーバーハングを有する、請求項１記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  3. 　前記オーバーハングが、０～４塩基長である、請求項２記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  4. 　前記Ｘ領域が、前記ガイド鎖配列と付加配列とからなり、前記付加配列が、前記ガイド鎖配列の３’末端に連結している、請求項１から３のいずれか一項に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  5. 　前記Ｘ領域における前記付加配列の長さが、０～５塩基長である、請求項４記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  6. 　前記Ｘ領域の長さが、１９～３３塩基長である、請求項１から５のいずれか一項に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  7. 　前記Ｙ領域の長さが、２１～３５塩基長である、請求項１から６のいずれか一項に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  8. 　全長が、４０～６８塩基長である、請求項１から７のいずれか一項に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  9. 　前記リンカー領域が、アミノ酸残基、ポリアミン残基、およびポリカルボン酸残基からなる群から選択される少なくとも一つを含む請求項１から８のいずれか一項に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  10. 　前記リンカー領域が、ポリカルボン酸残基を含む、請求項９に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  11. 　前記ポリカルボン酸残基が、テレフタル酸残基である、請求項１０に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  12. 　前記リンカー領域が、アミノ酸残基を含む、請求項９に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  13. 　前記アミノ酸残基が、グリシン残基、テレフタル酸アミド残基、プロリン残基またはリシン残基である、請求項１２に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  14. 　前記アミノ酸残基が、複数のアミノ酸残基が連結したものである、請求項１２または１３に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  15. 　前記複数のアミノ酸残基が連結したものが、グリシン二量体または三量体の残基である、請求項１４に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  16. 　前記リンカー残基が、下記化学式（Ｉ－０）で表される請求項１から１５のいずれか一項に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     前記化学式（Ｉ－０）中、
    Ｑ１１およびＱ１２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ２（メチレン基）、ＮＨ（イミノ基）、Ｃ＝Ｏ（カルボニル基）、Ｃ＝Ｓ（チオカルボニル基）、Ｃ＝ＮＨ（イミノメチレン基）、Ｏ、またはＳであり、
    Ｑ１およびＱ２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ２（メチレン基）、ＮＨ（イミノ基）、Ｃ＝Ｏ（カルボニル基）、Ｃ＝Ｓ（チオカルボニル基）、Ｃ＝ＮＨ（イミノメチレン基）、Ｏ、またはＳであり、
    Ｙ１およびＹ２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ２、ＮＨ、ＯまたはＳであり；
    Ｌ１は、ｎ個の炭素原子を有するアルキレン鎖であり、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲａ、ＮＨ２、ＮＨＲａ、ＮＲａＲｂ、ＳＨ、もしくはＳＲａで置換されても置換されていなくてもよく、または、
    Ｌ１は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
    ただし、Ｙ１が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ１に結合するＬ１の原子は炭素であり、ＯＲ１に結合するＬ１の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
    Ｌ２は、ｍ個の炭素原子を有するアルキレン鎖であり、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲｃ、ＮＨ２、ＮＨＲｃ、ＮＲｃＲｄ、ＳＨもしくはＳＲｃで置換されても置換されていなくてもよく、または、
    Ｌ２は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
    ただし、Ｙ２が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ２に結合するＬ２の原子は炭素であり、ＯＲ２に結合するＬ２の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
    Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、それぞれ独立して、置換基または保護基であり；
    ｍは、０～３０の範囲の整数であり；
    ｎは、０～３０の範囲の整数であり；
    前記Ｘ領域および前記Ｙ領域は、それぞれ、－ＯＲ１－または－ＯＲ２－を介して、前記リンカー残基に結合し、
    ここで、Ｒ１およびＲ２は、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、ヌクレオチド残基または前記構造（Ｉ－０）であり、
    Ａは、任意の原子団である。
  17. 　前記化学式（Ｉ－０）中、Ｑ１１およびＱ１２が、それぞれカルボニル基である請求項１６記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  18. 　前記化学式（Ｉ－０）中、Ｑ１およびＱ２が、それぞれイミノ基である請求項１７記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  19. 　下記化学式（Ｉα）の構造が、下記化学式（Ｉα２）で表される請求項１７または１８に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     前記化学式（Ｉα２）中、
    Ｒ１００は、任意の置換基であり、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合は、１個でも複数でもよく、複数の場合は、互いに同一でも異なっていてもよい。
  20. 　前記化学式（Ｉα２）の構造が、下記化学式（Ｉα３）で表される請求項１４記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
  21. 　前記化学式（Ｉ－０）中、Ｑ１１およびＱ１２が、それぞれイミノ基である請求項１６記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  22. 　前記化学式（Ｉ－０）中、Ｑ１およびＱ２が、それぞれカルボニル基である請求項２１記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  23. 　下記化学式（Ｉβ）の構造が、下記化学式（Ｉβ２）で表される請求項１６または１７記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
     前記化学式（Ｉβ２）中、
    Ｒ１００は、任意の置換基であり、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合は、１個でも複数でもよく、複数の場合は、互いに同一でも異なっていてもよい。
  24. 　前記化学式（Ｉβ２）の構造が、下記化学式（Ｉβ３）で表される請求項２３記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
  25. 　前記リンカー領域が、アミノ酸残基を含み、前記アミノ酸残基が、下記化学式（Ｉ）で表される請求項１から３および６から１０のいずれか一項に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
     前記化学式（Ｉ）中、
    Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、Ｈ２、Ｏ、ＳまたはＮＨであり；
    Ｙ１およびＹ２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ２、ＮＨ、ＯまたはＳであり；
    Ｌ１は、ｎ個の炭素原子を有するアルキレン鎖であり、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲａ、ＮＨ２、ＮＨＲａ、ＮＲａＲｂ、ＳＨ、もしくはＳＲａで置換されても置換されていなくてもよく、または、
    Ｌ１は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
    ただし、Ｙ１が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ１に結合するＬ１の原子は炭素であり、ＯＲ１に結合するＬ１の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
    Ｌ２は、ｍ個の炭素原子を有するアルキレン鎖であり、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲｃ、ＮＨ２、ＮＨＲｃ、ＮＲｃＲｄ、ＳＨもしくはＳＲｃで置換されても置換されていなくてもよく、または、
    Ｌ２は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
    ただし、Ｙ２が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ２に結合するＬ２の原子は炭素であり、ＯＲ２に結合するＬ２の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
    Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、それぞれ独立して、置換基または保護基であり；
    ｍは、０～３０の範囲の整数であり；
    ｎは、０～３０の範囲の整数であり；
    前記Ｘ領域および前記Ｙ領域は、それぞれ、－ＯＲ１－または－ＯＲ２－を介して、前記アミノ酸残基に結合し、
    ここで、Ｒ１およびＲ２は、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、ヌクレオチド残基または前記構造（Ｉ）であり、
    Ａは、任意の原子団であり、ただし、下記化学式（Ｉａ）は、アミノ酸またはペプチドである。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
  26. 　前記アミノ酸残基における前記アミノ酸が、天然アミノ酸および人工アミノ酸の少なくとも一方である請求項１から３、６から１０および２０のいずれか一項に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  27. 　前記天然アミノ酸が、タンパク質を構成するアミノ酸である請求項２６記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  28. 　前記アミノ酸残基における前記アミノ酸が、グリシン、α－アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、シスチン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、ヒドロキシリシン、メチオニン、フェニルアラニン、セリン、トレオニン、チロシン、バリン、プロリン、４－ヒドロキシプロリン、トリプトファン、β－アラニン、１－アミノ－２－カルボキシシクロペンタン、アミノ安息香酸、アミノピリジンカルボン酸および下記化学式（Ｉａ２）で表されるアミノ酸からなる群から選択される少なくとも１種類であり、前記アミノ酸は、さらに置換基または保護基を有していても有していなくても良い、請求項１から９、１２から１５、２５および２６のいずれか一項に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
     前記化学式（Ｉａ２）中、
    Ｒ１００は、任意の置換基であり、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合は、１個でも複数でもよく、複数の場合は、互いに同一でも異なっていてもよい。
  29. 　前記化学式（Ｉａ２）の構造が、下記化学式（Ｉａ３）で表される請求項２８記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
  30. 　前記化学式（Ｉ－０）または（Ｉ）の構造が、下記化学式（Ｉ－１）～（Ｉ－７）であり、下記化学式（Ｉ－１）～（Ｉ－７）において、ｎは、０～３０の整数、ｍは、０～３０の整数である、請求項１６または２５記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
  31. 　前記化学式（Ｉ－１）において、ｎ＝１１およびｍ＝１２、またはｎ＝５およびｍ＝４である、請求項３０記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  32. 　前記化学式（Ｉ－４）において、ｎ＝５およびｍ＝４である、請求項３０記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  33. 　前記化学式（Ｉ－６）において、ｎ＝４およびｍ＝４である、請求項３０記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  34. 　前記化学式（Ｉ－７）において、ｎ＝５およびｍ＝４である、請求項３０記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  35. 　前記リンカー領域の非ヌクレオチド構造が、ピロリジン骨格およびピペリジン骨格の少なくとも一方を含む、請求項１から９、１２および１３のいずれか一項に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  36. 　前記非ヌクレオチド構造が、下記式（ＩＩ）で表わされる、請求項１から８のいずれか一項に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
     前記式中、
    Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、Ｈ２、Ｏ、ＳまたはＮＨであり；
    Ｙ１およびＹ２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ２、ＮＨ、ＯまたはＳであり；
    Ｒ３は、環Ａ上のＣ－３、Ｃ－４、Ｃ－５またはＣ－６に結合する水素原子または置換基であり；
    Ｌ１は、ｎ個の原子からなるアルキレン鎖であり、ここで、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲａ、ＮＨ２、ＮＨＲａ、ＮＲａＲｂ、ＳＨ、もしくはＳＲａで置換されても置換されていなくてもよく、または、
    Ｌ１は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
    ただし、Ｙ１が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ１に結合するＬ１の原子は炭素であり、ＯＲ１に結合するＬ１の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
    Ｌ２は、ｍ個の原子からなるアルキレン鎖であり、ここで、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲｃ、ＮＨ２、ＮＨＲｃ、ＮＲｃＲｄ、ＳＨもしくはＳＲｃで置換され
    ても置換されていなくてもよく、または、
    Ｌ２は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
    ただし、Ｙ２が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ２に結合するＬ２の原子は炭素であり、ＯＲ２に結合するＬ２の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
    Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、それぞれ独立して、置換基または保護基であり；
    ｌは、１または２であり；
    ｍは、０～３０の範囲の整数であり；
    ｎは、０～３０の範囲の整数であり；
    環Ａは、前記環Ａ上のＣ－２以外の１個の炭素原子が、窒素、酸素または硫黄で置換されてもよく、
    前記環Ａ内に、炭素－炭素二重結合または炭素－窒素二重結合を含んでもよく、
    前記Ｘ領域および前記Ｙ領域は、それぞれ、－ＯＲ１－または－ＯＲ２－を介して、前記非ヌクレオチド構造に結合し、
    ここで、Ｒ１およびＲ２は、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、ヌクレオチド残基または前記構造（Ｉ)である。
  37. 　前記Ｘ領域は、ｈｓａ－ｍｉＲ－３４、ｈｓａ－ｍｉＲ－２９およびｈｓａ－ｌｅｔ－７からなる群から選択される成熟ｍｉＲＮＡのガイド鎖配列を含む、請求項１から３６のいずれか一項に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  38. 　前記成熟ｍｉＲＮＡが、ｈｓａ－ｍｉＲ－３４ａである、請求項３７記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  39. 　ヌクレオチド配列が、配列番号９および１７～２８からなる群から選択されるヌクレオチド配列である、請求項３８記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  40. 　前記成熟ｍｉＲＮＡが、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ａである、請求項３７記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  41. 　ヌクレオチド配列が、配列番号３６～３８からなる群から選択されるヌクレオチド配列である、請求項４０記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  42. 前記成熟ｍｉＲＮＡが、ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｂである、請求項３７記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  43. 　ヌクレオチド配列が、配列番号４３～４５からなる群から選択されるヌクレオチド配列である、請求項４２記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡ。
  44. 　標的遺伝子の発現を抑制するための組成物であって、
    請求項１から４３のいずれか一項に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡを含むことを特徴とする、発現抑制用組成物。
  45. 　請求項１から４３のいずれか一項に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡを含むことを特徴とする、薬学的組成物。
  46. 　標的遺伝子の発現を抑制する方法であって、
    請求項１から４３のいずれか一項に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡを使用することを特徴とする、発現抑制方法。
  47. 　前記人工マッチ型ｍｉＲＮＡを、細胞、組織または器官に投与する工程を含む、請求項４６記載の発現抑制方法。
  48. 　前記人工マッチ型ｍｉＲＮＡを、ｉｎ　ｖｉｖｏまたはｉｎ　ｖｉｔｒｏで投与する、請求項４６または４７記載の発現抑制方法。
  49. 　前記人工マッチ型ｍｉＲＮＡを、非ヒト動物に投与する、請求項４６または４７記載の発現抑制方法。
  50. 　疾患の治療方法であって、
    請求項１から４３のいずれか一項に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡを、患者に投与する工程を含み、
    前記人工マッチ型ｍｉＲＮＡにおける前記ガイド鎖配列が、前記疾患に関与する遺伝子の発現を抑制する成熟ｍｉＲＮＡのガイド鎖配列であることを特徴とする、治療方法。
  51. 　疾患の治療に使用するための一本鎖核酸であって、
    前記一本鎖核酸は、請求項１から４３のいずれか一項に記載の人工マッチ型ｍｉＲＮＡであり、
    前記人工マッチ型ｍｉＲＮＡにおける前記ガイド鎖配列が、前記疾患に関与する遺伝子の発現を抑制する成熟ｍｉＲＮＡのガイド鎖配列であることを特徴とする、一本鎖核酸。 
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CN201480076467.2A CN106068324B (zh) 2013-12-27 2014-12-27 控制基因表达的人工匹配型miRNA及其用途
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IL246395A IL246395B (en) 2013-12-27 2016-06-22 Artificial coordination type micro rna for controlling gene expression and its use
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Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016167366A1 (ja) * 2015-04-17 2016-10-20 国立大学法人 東京大学 眼疾患治療剤
WO2017131237A1 (ja) * 2016-01-30 2017-08-03 株式会社ボナック 人工単一ガイドｒｎａ及びその用途
CN108350457A (zh) * 2015-10-30 2018-07-31 株式会社博纳克 稳定地含有抑制TGF-β1基因的表达的单链核酸分子的组合物
WO2018143475A1 (ja) 2017-02-06 2018-08-09 日産化学工業株式会社 一本鎖オリゴヌクレオチド
WO2018155487A1 (ja) * 2017-02-21 2018-08-30 株式会社ボナック 核酸含有ｄｐｉ用粉末製剤及びその用途
US20180326091A1 (en) * 2014-12-27 2018-11-15 Bonac Corporation NATURALLY OCCURRING miRNA FOR CONTROLLING GENE EXPRESSION, AND USE OF SAME
WO2019156020A1 (ja) * 2018-02-09 2019-08-15 住友化学株式会社 核酸分子の製造方法
WO2019182037A1 (ja) 2018-03-20 2019-09-26 国立大学法人東京工業大学 毒性が低減されたアンチセンスオリゴヌクレオチド
US11142769B2 (en) 2015-03-27 2021-10-12 Bonac Corporation Single-stranded nucleic acid molecule having delivery function and gene expression regulating ability

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109810977A (zh) 2012-05-26 2019-05-28 株式会社博纳克 具有递送功能的基因表达调控用单链核酸分子
CN105899663B (zh) 2013-12-26 2019-07-26 学校法人东京医科大学 用于基因表达控制的人工模拟miRNA及其用途
JP6425142B2 (ja) 2013-12-27 2018-11-21 株式会社ボナック 遺伝子発現制御のための人工マッチ型ｍｉＲＮＡおよびその用途
CN116064544A (zh) 2016-01-26 2023-05-05 日产化学株式会社 单链寡核苷酸

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008519606A (ja) * 2004-11-12 2008-06-12 アンビオン インコーポレーティッド ｍｉＲＮＡおよびｍｉＲＮＡ阻害分子に関する方法および組成物
WO2010056737A2 (en) 2008-11-11 2010-05-20 Mirna Therapeutics, Inc. Methods and compositions involving mirnas in cancer stem cells
WO2012017919A1 (ja) 2010-08-03 2012-02-09 株式会社ボナック 含窒素脂環式骨格を有する一本鎖核酸分子
WO2012106591A1 (en) * 2011-02-03 2012-08-09 Mirna Therapeutics, Inc. Synthetic mimics of mir-34
WO2013103146A1 (ja) 2012-01-07 2013-07-11 株式会社ボナック アミノ酸骨格を有する一本鎖核酸分子
JP2013153736A (ja) * 2012-01-07 2013-08-15 Bonac Corp ペプチド骨格を有する一本鎖核酸分子
WO2013133221A1 (ja) 2012-03-04 2013-09-12 株式会社ボナック microRNA阻害剤

Family Cites Families (100)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE873543C (de) 1942-10-28 1953-04-16 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von hydroxyl- bzw. sulfhydryl-gruppenhaltigen Dicarbaminsaeureestern
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US4550163A (en) 1979-02-05 1985-10-29 Abbott Laboratories Ligand analog-irreversible enzyme inhibitor conjugates
US20030232355A1 (en) 1992-05-22 2003-12-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Double-stranded peptide nucleic acids
US5631148A (en) 1994-04-22 1997-05-20 Chiron Corporation Ribozymes with product ejection by strand displacement
GB9621367D0 (en) 1996-10-14 1996-12-04 Isis Innovation Chiral peptide nucleic acids
US6197557B1 (en) 1997-03-05 2001-03-06 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for analysis of nucleic acids
EP1013770A1 (en) 1998-12-23 2000-06-28 Université Louis Pasteur de Strasbourg Non-viral transfection vector
FR2790757B1 (fr) 1999-03-09 2003-08-01 Bioalliance Pharma Oligonucleotides contenant une sequence antisens stabilises par une structure secondaire et compositions pharmaceutiques les contenant.
US6852334B1 (en) 1999-04-20 2005-02-08 The University Of British Columbia Cationic peg-lipids and methods of use
US7833992B2 (en) 2001-05-18 2010-11-16 Merck Sharpe & Dohme Conjugates and compositions for cellular delivery
US6962906B2 (en) 2000-03-14 2005-11-08 Active Motif Oligonucleotide analogues, methods of synthesis and methods of use
ATE496139T1 (de) 2001-03-09 2011-02-15 Boston Probes Inc Kombinationsoligomere betreffende verfahren, kits und zusammensetzungen
AU2004266311B2 (en) 2001-05-18 2009-07-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
US6905827B2 (en) 2001-06-08 2005-06-14 Expression Diagnostics, Inc. Methods and compositions for diagnosing or monitoring auto immune and chronic inflammatory diseases
US20050233455A1 (en) 2001-10-29 2005-10-20 Damha Masad J Acyclic linker-containing oligonucleotides and uses thereof
US20060111312A1 (en) 2002-02-22 2006-05-25 The John Hopkins University Antigene locks and therapeutic uses thereof
CA2479530A1 (en) 2002-03-20 2003-10-02 Massachusetts Institute Of Technology Hiv therapeutic
SI3222724T1 (sl) 2002-08-05 2019-03-29 Silence Therapeutics Gmbh Nadaljnje nove oblike molekul interferenčne RNA
US20040058886A1 (en) 2002-08-08 2004-03-25 Dharmacon, Inc. Short interfering RNAs having a hairpin structure containing a non-nucleotide loop
US6936651B2 (en) 2002-12-17 2005-08-30 E. I. Du Pont De Nemours And Company Compatibility improvement in crystalline thermoplastics with mineral fillers
JP2006522158A (ja) 2003-04-03 2006-09-28 アルナイラム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ｉＲＮＡ複合体
CA2528958A1 (en) 2003-06-12 2004-12-23 Applera Corporation Combinatorial nucleobase oligomers comprising universal base analogues and methods for making and using same
WO2005047505A2 (en) 2003-08-07 2005-05-26 Whitehead Institute For Biomedical Research Methods and products for expression of micro rnas
ATE532865T1 (de) 2003-09-30 2011-11-15 Anges Mg Inc Klammerartiges oligonukleotid und dieses enthaltender arzneistoff
US20050222009A1 (en) 2003-10-14 2005-10-06 Itschak Lamensdorf Dual phase - PNA conjugates for the delivery of PNA through the blood brain barrier
US20050209141A1 (en) 2003-10-17 2005-09-22 Silver Randi B Mast cell-derived renin
AU2005327517B2 (en) 2004-06-30 2011-05-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising a non-phosphate backbone linkage
AU2005276245C1 (en) 2004-08-23 2015-02-26 Sylentis S.A.U. Treatment of eye disorders characterized by an elevated introacular pressure by siRNAs
US7655768B2 (en) 2004-08-26 2010-02-02 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Galactose derivative, drug carrier and medicinal composition
CA2594672C (en) 2004-08-31 2014-12-30 Ana I. Jimenez Methods and compositions to inhibit p2x7 receptor expression
JP2008522585A (ja) 2004-10-12 2008-07-03 ザ ロックフェラー ユニバーシティー マイクロｒｎａ
JP2008526213A (ja) 2004-12-30 2008-07-24 トッド エム． ハウザー， 自己保護オリゴヌクレオチドを使用する、遺伝子発現を調節するための組成物および方法
CA2638797A1 (en) 2006-03-01 2007-09-07 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Galactose derivative, drug carrier and medicinal composition
CA2651042A1 (en) 2006-05-05 2007-12-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating expression of sglt2
ES2392478T3 (es) * 2006-05-11 2012-12-11 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Composiciones y métodos para inhibir la expresión del gen PCSK9
EP2700638A1 (en) 2006-05-31 2014-02-26 The Regents Of the University of California Purine analogs
EP1890152A1 (en) 2006-08-14 2008-02-20 Charite Universitätsmedizin-Berlin Determination of renin/prorenin receptor activity
JP2008220366A (ja) 2007-02-16 2008-09-25 National Institute Of Advanced Industrial & Technology 修飾型ｐｎａ／ｒｎａ複合体
JP5145557B2 (ja) 2007-03-01 2013-02-20 財団法人ヒューマンサイエンス振興財団 マイクロｒｎａを有効成分として含有する腫瘍増殖抑制剤、および癌治療用医薬組成物
HUE027018T2 (en) 2007-03-21 2016-08-29 Brookhaven Science Ass Llc Combination hairpin antisense compositions and methods for modulating expression
CN101121934B (zh) * 2007-04-11 2011-12-07 哈尔滨医科大学 多靶点miRNA反义核苷酸的制备方法
WO2008137862A2 (en) * 2007-05-03 2008-11-13 Rosetta Inpharmatics Llc Methods of using mir34 as a biomarker for tp53 functional status
JP5296328B2 (ja) 2007-05-09 2013-09-25 独立行政法人理化学研究所 １本鎖環状ｒｎａおよびその製造方法
US20090123501A1 (en) 2007-05-17 2009-05-14 Baylor College Of Medicine Inhibition of the sh2-domain containing protein tyr-phosphatase, shp-1, to enhance vaccines
WO2008147837A1 (en) 2007-05-23 2008-12-04 Dharmacon, Inc. Micro-rna scaffolds, non-naturally occurring micro-rnas, and methods for optimizing non-naturally occurring micro-rnas
DK2164967T3 (en) 2007-05-31 2015-10-19 Univ Iowa Res Found Reduction of off-target rna interferenstoksicitet
US20110212075A1 (en) 2007-06-25 2011-09-01 Siemens Aktiengesellschaft Screening method for polymorphic markers in htra1 gene in neurodegenerative disorders
EP2201022A4 (en) 2007-08-27 2012-01-04 Boston Biomedical Inc COMPOSITION OF ASYMMETRIC RNA DUPLEX AS MICRO-RNA MIMETICUM OR INHIBOTOR
WO2009048932A2 (en) 2007-10-09 2009-04-16 Children's Medical Center Corporation Methods to regulate mirna processing by targeting lin-28
WO2009047362A2 (en) 2007-10-12 2009-04-16 The Provost, Fellows And Scholars Of The College Of The Holy And Undivided Trinity Of Queen Elizabeth, Near Dublin Method for opening tight junctions
TW200927177A (en) 2007-10-24 2009-07-01 Nat Inst Of Advanced Ind Scien Lipid-modified double-stranded RNA having potent RNA interference effect
AR069328A1 (es) 2007-11-15 2010-01-13 Alcon Mfg Ltd Liberacion de rna interferente corto o sirna, intermediada por receptor de lipoproteina de baja densidad
JP2011504730A (ja) 2007-11-29 2011-02-17 蘇州瑞博生物技術有限公司 標的遺伝子の発現を干渉する複合体分子およびその合成方法
EP3156077B1 (en) 2007-12-04 2022-03-09 Arbutus Biopharma Corporation Targeting lipids
US20110159586A1 (en) 2007-12-07 2011-06-30 Halo-Bio Rnai Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating gene expression using asymmetrically-active precursor polynucleotides
US20110055965A1 (en) 2008-02-15 2011-03-03 Hiroshi Abe Cycle single-stranded nucleic acid complex and method for producing the same
EP2264167B1 (en) 2008-03-31 2016-10-12 National Institute of Advanced Industrial Science and Technology Double-stranded lipid-modified rna having high rna interference effect
US20110172295A1 (en) 2008-04-11 2011-07-14 The University Of North Carolina At Chapel Hill METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE REGULATION OF microRNA PROCESSING
WO2009143619A1 (en) 2008-05-27 2009-12-03 Chum Methods of treating or preventing obesity and obesity-related hypertension
WO2010058824A1 (ja) 2008-11-19 2010-05-27 国立大学法人岐阜大学 間葉系細胞の分化を調節するための薬剤及びその利用
EP2411518A2 (en) 2009-03-27 2012-02-01 Merck Sharp&Dohme Corp. Rna interference mediated inhibition of the high affinity ige receptor alpha chain (fcerla) gene expression using short interfering nucleic acid (sina)
WO2010141511A2 (en) 2009-06-01 2010-12-09 Halo-Bio Rnai Therapeutics, Inc. Polynucleotides for multivalent rna interference, compositions and methods of use thereof
WO2011008730A2 (en) * 2009-07-13 2011-01-20 Somagenics Inc. Chemical modification of small hairpin rnas for inhibition of gene expression
CA2768598A1 (en) 2009-07-22 2011-01-27 Cenix Bioscience Gmbh Delivery system and conjugates for compound delivery via naturally occurring intracellular transport routes
WO2011028550A1 (en) 2009-08-24 2011-03-10 Merck Sharp & Dohme Corp. Segmented micro rna mimetics
US20110052666A1 (en) 2009-09-03 2011-03-03 Medtronic, Inc. Compositions, Methods, and Systems for SIRNA Delivery
US8871509B2 (en) 2009-11-06 2014-10-28 Chung-Ang University-Academy Corporation Foundation Nanoparticle-based gene delivery systems
EP3494963A1 (en) 2009-12-18 2019-06-12 The University of British Columbia Methods and compositions for delivery of nucleic acids
US8933046B2 (en) 2009-12-23 2015-01-13 Max-Planck-Gesellschaft Zur Foerderung Der Wissenschaften E.V. Influenza targets
CA2785492C (en) 2009-12-23 2018-07-24 Novartis Ag Lipids, lipid compositions, and methods of using them
EP3560503B1 (en) 2010-03-24 2021-11-17 Phio Pharmaceuticals Corp. Rna interference in dermal and fibrotic indications
CN101845071B (zh) 2010-03-25 2012-02-01 北京欧凯纳斯科技有限公司 一种2’或3’偶联氨基酸的核苷衍生物、其制备方法及应用
JP5555940B2 (ja) 2010-04-14 2014-07-23 国立大学法人佐賀大学 増殖糖尿病網膜症の検出方法および予防・治療剤のスクリーニング方法
WO2011132672A1 (ja) 2010-04-19 2011-10-27 独立行政法人理化学研究所 機能性核酸の安定化法
CA2795815C (en) 2010-04-23 2018-06-26 Cold Spring Harbor Laboratory Novel structurally designed shrnas
US8785121B2 (en) 2010-07-08 2014-07-22 Bonac Corporation Single-stranded nucleic acid molecule for controlling gene expression
NZ704812A (en) 2010-07-08 2017-01-27 Bonac Corp Single-stranded nucleic acid molecule for controlling gene expression
US8618073B2 (en) * 2010-07-22 2013-12-31 The University Of North Carolina At Chapel Hill Use of miR-29 for cell protection
US8691782B2 (en) * 2010-08-03 2014-04-08 Bonac Corporation Single-stranded nucleic acid molecule having nitrogen-containing alicyclic skeleton
US20130253168A1 (en) 2010-08-31 2013-09-26 Steven L. Colletti Novel single chemical entities and methods for delivery of oligonucleotides
BR112013013522A2 (pt) 2010-12-02 2019-09-24 Daiichi Sankyo Co Ltd polinucleotídeo ou um sal deste, composição farmacêutica, uso de um polinucleotídeo ou um sal deste, reagente, composição, e, método para produzir um composto
CN102559666B (zh) * 2010-12-18 2013-12-25 中国科学院上海生命科学研究院 抑制植物病毒的人工miRNA及其构建和用途
CN102784398B (zh) * 2011-05-16 2014-06-18 南京大学 内皮抑素作为递送系统和化学合成的rna干扰分子组成的组合物及应用
JP6011945B2 (ja) 2011-05-20 2016-10-25 公一 中城 マイクロｒｎａ又はその発現系を含む組成物
EP2527440A1 (en) 2011-05-27 2012-11-28 Institut Curie Cancer treatment by combining DNA molecules mimicking double strand breaks with hyperthermia
JP2013055913A (ja) 2011-09-09 2013-03-28 Bonac Corp 遺伝子発現制御のための一本鎖ｒｎａ分子
WO2013077446A1 (ja) 2011-11-26 2013-05-30 株式会社ボナック 遺伝子発現制御のための一本鎖核酸分子
AR090905A1 (es) 2012-05-02 2014-12-17 Merck Sharp & Dohme Conjugados que contienen tetragalnac y peptidos y procedimientos para la administracion de oligonucleotidos, composicion farmaceutica
CN109810977A (zh) 2012-05-26 2019-05-28 株式会社博纳克 具有递送功能的基因表达调控用单链核酸分子
EP2975938A4 (en) 2013-03-15 2017-02-15 Ohio State Innovation Foundation Inhibitors of prmt5 and methods of their use
EP3828276A1 (en) 2013-05-22 2021-06-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Tmprss6 irna compositions and methods of use thereof
WO2015093495A1 (ja) 2013-12-16 2015-06-25 株式会社ボナック ＴＧＦ－β１遺伝子発現制御のための一本鎖核酸分子
CN105899663B (zh) 2013-12-26 2019-07-26 学校法人东京医科大学 用于基因表达控制的人工模拟miRNA及其用途
JP6492014B2 (ja) * 2013-12-27 2019-03-27 株式会社ボナック 遺伝子発現制御のための人工マッチ型ｍｉＲＮＡおよびその用途
JP6425142B2 (ja) 2013-12-27 2018-11-21 株式会社ボナック 遺伝子発現制御のための人工マッチ型ｍｉＲＮＡおよびその用途
WO2015161255A1 (en) 2014-04-18 2015-10-22 Board Of Regents Of The Nevada System Of Higher Education, On Behalf Of The University Of Nevada, Reno Methods for enhancing or decreasing the levels of mir124 and mir29 in subjects with muscular dystrophy
BR112017013664A2 (ja) 2014-12-27 2018-03-13 Bonac Corporation Naturally occurring type miRNA for gene expression control, and its use
EP3276003B1 (en) 2015-03-27 2022-07-20 Bonac Corporation Single-chain nucleic acid molecule having delivery function and gene expression control ability
AU2016382055C1 (en) 2015-12-29 2020-06-04 Bonac Corporation Single-stranded nucleic acid molecule inhibiting expression of prorenin gene or prorenin receptor gene, and use thereof

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008519606A (ja) * 2004-11-12 2008-06-12 アンビオン インコーポレーティッド ｍｉＲＮＡおよびｍｉＲＮＡ阻害分子に関する方法および組成物
WO2010056737A2 (en) 2008-11-11 2010-05-20 Mirna Therapeutics, Inc. Methods and compositions involving mirnas in cancer stem cells
WO2012017919A1 (ja) 2010-08-03 2012-02-09 株式会社ボナック 含窒素脂環式骨格を有する一本鎖核酸分子
WO2012106591A1 (en) * 2011-02-03 2012-08-09 Mirna Therapeutics, Inc. Synthetic mimics of mir-34
WO2013103146A1 (ja) 2012-01-07 2013-07-11 株式会社ボナック アミノ酸骨格を有する一本鎖核酸分子
JP2013153736A (ja) * 2012-01-07 2013-08-15 Bonac Corp ペプチド骨格を有する一本鎖核酸分子
WO2013133221A1 (ja) 2012-03-04 2013-09-12 株式会社ボナック microRNA阻害剤

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DEITERS, THE AAPS JOURNAL, vol. 12, 2009, pages 51 - 60
J. F. W. MCOMIE: "Protecting Groups in Organic Chemistry", 1973, PRENUM PRESS
See also references of EP3088525A4
TAKESHITA ET AL., MOL. THER., vol. 18, 2010, pages 181 - 187

Cited By (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11027023B2 (en) * 2014-12-27 2021-06-08 Bonac Corporation Natural type miRNA for controlling gene expression, and use of same
US20180326091A1 (en) * 2014-12-27 2018-11-15 Bonac Corporation NATURALLY OCCURRING miRNA FOR CONTROLLING GENE EXPRESSION, AND USE OF SAME
US11142769B2 (en) 2015-03-27 2021-10-12 Bonac Corporation Single-stranded nucleic acid molecule having delivery function and gene expression regulating ability
WO2016167366A1 (ja) * 2015-04-17 2016-10-20 国立大学法人 東京大学 眼疾患治療剤
CN108350457A (zh) * 2015-10-30 2018-07-31 株式会社博纳克 稳定地含有抑制TGF-β1基因的表达的单链核酸分子的组合物
JPWO2017131237A1 (ja) * 2016-01-30 2018-11-01 株式会社ボナック 人工単一ガイドｒｎａ及びその用途
WO2017131237A1 (ja) * 2016-01-30 2017-08-03 株式会社ボナック 人工単一ガイドｒｎａ及びその用途
CN109072224A (zh) * 2016-01-30 2018-12-21 株式会社博纳克 人工单导rna及其用途
US11518994B2 (en) 2016-01-30 2022-12-06 Bonac Corporation Artificial single guide RNA and use thereof
CN109072224B (zh) * 2016-01-30 2022-07-15 株式会社博纳克 人工单导rna及其用途
EP3409776A4 (en) * 2016-01-30 2019-12-25 Bonac Corporation ARN UNIQUE ARTIFICIAL GUIDE AND ITS USE
JP7096604B2 (ja) 2016-01-30 2022-07-06 株式会社ボナック 人工単一ガイドｒｎａ及びその用途
JP2020198880A (ja) * 2016-01-30 2020-12-17 株式会社ボナック 人工単一ガイドｒｎａ及びその用途
AU2017213405B2 (en) * 2016-01-30 2021-02-04 Bonac Corporation Artificial single guide RNA and use thereof
WO2018143475A1 (ja) 2017-02-06 2018-08-09 日産化学工業株式会社 一本鎖オリゴヌクレオチド
WO2018155487A1 (ja) * 2017-02-21 2018-08-30 株式会社ボナック 核酸含有ｄｐｉ用粉末製剤及びその用途
JP2020182461A (ja) * 2018-02-09 2020-11-12 住友化学株式会社 核酸分子の製造方法
JPWO2019156020A1 (ja) * 2018-02-09 2020-06-25 住友化学株式会社 核酸分子の製造方法
WO2019156020A1 (ja) * 2018-02-09 2019-08-15 住友化学株式会社 核酸分子の製造方法
WO2019182037A1 (ja) 2018-03-20 2019-09-26 国立大学法人東京工業大学 毒性が低減されたアンチセンスオリゴヌクレオチド

Also Published As

Publication number Publication date
RU2016130611A (ru) 2018-01-31
SG10201913570XA (en) 2020-03-30
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JP2018145199A (ja) 2018-09-20
BR112016014986A2 (ja) 2018-01-23
EP3088525A1 (en) 2016-11-02
SG10201805087VA (en) 2018-07-30
JP6653889B2 (ja) 2020-02-26
IL271715B (en) 2022-03-01
MX2016008518A (es) 2017-01-26
CN106068324B (zh) 2020-12-29
KR20160121510A (ko) 2016-10-19
AU2014370829A1 (en) 2016-08-11
IL271715A (en) 2020-02-27
CN106068324A (zh) 2016-11-02
US20160319282A1 (en) 2016-11-03
IL246395B (en) 2020-01-30
IL246395A0 (en) 2016-08-31
SG11201605247XA (en) 2016-08-30
CA2935022A1 (en) 2015-07-02
KR102357337B1 (ko) 2022-01-28
AU2014370829B2 (en) 2021-03-11
JPWO2015099187A1 (ja) 2017-03-23
US10934542B2 (en) 2021-03-02
RU2697094C2 (ru) 2019-08-12

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