WO2001039731A1

WO2001039731A1 - Produits cosmetiques

Info

Publication number: WO2001039731A1
Application number: PCT/JP2000/008412
Authority: WO
Inventors: Shigetoshi Mizutani; Suzu Deguchi; Eiji Kobayashi; Eiji Nishiyama; Hiroaki Sagawa; Ikunoshin Kato
Original assignee: Takara Bio Inc.
Priority date: 1999-11-30
Filing date: 2000-11-29
Publication date: 2001-06-07
Also published as: TWI255192B; EP1234568A4; CN1433295A; ATE401933T1; DE60039622D1; KR20020067041A; US20060093566A1; AU1648601A; EP1234568A1; JP3831252B2; US7678368B2; ES2307540T3; EP1234568B1; KR100594342B1; CN100482238C

Description

明細書化粧料技術分野

本発明は酸性糖化合物の化粧料への利用に関する。背景技術

従来より、しみ、そばかす、しわは皮膚美容上の悩みであり、近年これらを防止する多くの化粧料が知られ、その有効成分としてレチノイン酸、ひーヒドロキシ酸、レチノール等が報告されている。しかしながら、これらの有効成分は皮膚刺激性や安定性等に問題点があり、且つその効果も十分なものとは言い難いものであった。

—方、育毛料は、頭髪の成長を促進又は刺激する製品であり、頭髪の脱毛を育毛により補い、頭髪の絶対数の減少を阻止する目的で使用される。一般に、頭部の脱毛の原因としては、毛根や皮脂腺の器官における男性ホルモンの活性化、毛包への血流量の低下、皮脂の分泌過剰、過酸化物の生成による頭皮の異常、栄養不良、ストレス等多様な因子が考えられる。一般的に従来の育毛料は、これらの頭部の脱毛の原因として考えられる因子を取り除いたり、軽減する作用を有する物質を配合したものである。例えばビタミン B、ビタミン E等のビタミン類、セリン、メチォニン等のアミノ酸類、センブリエキス、 Tセチルコリン誘導体等の血管拡張剤、紫根エキス、ヒノキチオール等の抗炎症剤、エストラジオール等の女性ホルモン剤、セファランチン等の皮膚機能亢進剤等が配合されて、脱毛の予防及び治療に用いられている。

しかしながら、前記の様に多くの試みがなされているにもかかわらず、従来の育毛料は、その脱毛予防作用や発毛作用等が弱く、必ずしも十分な育毛効果が得 JP00/0 412 られなかった。

本発明の主たる目的は、皮膚美容（皮膚の老化防止、敏感肌の改善、かゆみ抑制等）に効果があり、且つ育毛料の有効成分ともなりうる物質を見出し、当該有効成分を含有する化粧料を提供することにある。発明の開示

本発明を概説すれば、本発明はフコィダン、その分解物、硫酸化単糖又はそれらの塩から選択されるものを有効成分として含有することを特徵とする化粧料に関する。また、化粧料の製造のためのフコィダン、その分解物、硫酸化単糖又はそれらの塩から選択されるものの使用に関する。

本発明において使用するフコィダンは、皮膚美容効果（例えば、皮霜の老化防止作用、敏感肌の改善作用、かゆみ抑制作用等による）及び Z又は育毛効果（例えば、発毛作用、育毛作用、養毛作用、脱毛防止作用等による）を発現し得るものであれば特に限定はない。フコィダンとしては藻類由来のフコィダン、棘皮動物由来のフコィダンが好適に使用できる。本発明において使用するフコィダンとしては、構造が明確なフコィダンが好適であり、下記一般式（ I ) 〜（ I V) で表わされる硫酸化糖をそれぞれ構成糖の必須成分とするガゴメコンブ由来の U— フコィダン、 F—フコィダン、 G—フコィダン及びォキヮナモズク由来のフコィダンから選択されるフコィダンの使用が好ましい。

(式中、 Rは OH又は 0S0₃ H、 nは 1以上の整数である。）

(式中、 Rは OH又は OS〇₃ H、 nは 1以上の整数である。）

(式中、 Rは〇H又は OS0₃ H、 nは 1以上の整数である。）

(式中、 Rは OH又は OS0₃ H、 nは 1以上の整数である。）

また、フコィダンとしては、非沈澱形成性、化粧料の基剤への溶解性等の観点から、非曳糸性フコィダンが好ましい。

フコィダンの分解物としては、例えばフコィダンの酸分解物、フコィダンの酵素分解物が使用できる。本発明に使用するフコィダンの酸分解物、フコィダンの酵素分解物としては、皮 Jt美容作用及び Z又は育毛作用を示せば良く、それらの作用を指標に調製することができる。本発明においては下記式（V)で表される化合物、下記式（VI)で表される化合物及び下記式（VI I)で表わされる化合物から選択される化合物が好適に使用できる。

(式中、 Rは OH又は OS0₃ Hである。）

(式中、 Rは OH又は OS0₃ Hである。）

(式中、 Rは O H又は O S 0₃ Hである。）

本発明の化粧料の形状としては、ローション類、乳液類、クリーム類、パック類、軟膏類、浴用剤、浴用洗剤、洗顔剤、毛髪剤、育毛料、又は洗髪剤が例示される。また、医薬品、医薬部外品、食品又は飲料等の形状で提供することができる。

本発明の化粧料は、老化防止用、敏感肌改善用、かゆみ抑制用、アレルギー改善用、ァトピー症状改善用化粧料等として使用することができる。

また、本発明の化粧料としては、フコィダン、その分解物、硫酸化単糖又はそれらの塩から選択されるものを有効成分として含有する育毛作用に優れた育毛料、及びさらにフコィダン、その分解物、硫酸化単糖又はそれらの塩から選択されるものと共に用いることにより育毛作用を相乗的に増強し得る成分（育毛作用増強成分）を含有する育毛料が提供される。また、かかる化粧料、育毛料は、食品又は飲料としても提供され得る。なお、好適な育毛作用増強成分としては、ミノキシジル及び塩化カルプロニゥムが例示される。図面の簡単な説明

第 1図は、ガゴメコンブ由来フコィダンの D E A E—セル口ファイン A— 8 0 0カラム溶出パターンを示す図である。発明を実施するための最良の形態

本発明の化粧料は、特に皮膚美容作用及び Z又は育毛作用という生理作用を有するフコィダン、その分解物、硫酸化単糖及びそれらの塩から選択されるものを有効成分として含むことを 1つの大きな特徴とする。本明細書において「選択される」とは、 1種又は 2種以上のものが選ばれることを意味する。

なお、本明細書において「皮膚美容作用」とは、皮膚の老化防止作用、敏感肌改善作用、かゆみ抑制作用等をいい、また、かかる作用により奏される効果を Γ 皮膚美容効果」という。なお、皮膚の老化防止作用とは、肌にしっとり感やなめらかさを与え、かさつき、しみ等を減少させる等の皮膚の老化を抑制する作用を意味する。皮膚美容作用は、例えば、実施例 1 3— （8 ) 〜（ 1 0 ) に記載の方法により評価することができる。少なくとも実施例 1 3— （8 ) 〜（ 1 0 ) に記載の評価事項について優れた効果を示し得るフコィダン、その分解物、硫酸化単糖及びそれらの塩から選択されるものであれば、所望の皮膚美容効果を発現し得る。

また、「育毛作用」とは、発毛作用、育毛作用、養毛作用、脱毛防止作用等をいい、また、かかる作用により奏される効果を「育毛効果」という。育毛作用は、例えば、実施例 1 3〜2 0に記載の方法により評価することができ、かかる作用を有するフコィダン、その分解物、硫酸化単糖及びそれらの塩から選択されるものは、育毛効果を発現し得る。

本発明において使用するフコイダン及びその分解物は、皮膚美容作用及び Z又は育毛作用を有すれば良く、特に限定はないが、例えば藻類由来のフコィダンが使用できる。なお本発明においてフコィダンとはフコース硫酸（硫酸化フコースという場合がある）を構成糖とする多糖の総称であり、すなわち、本発明においてはフコース硫酸含有多糖、及び又はその分解物を使用することができる。フコース硫酸含有多糖としては、硫酸化フカン、硫酸化フコガラクタン、硫酸化フコグルクロノマンナン、硫酸化グルクロノキシロフカン、硫酸化キシロフコグルクロナン、硫酸化ァスコフイラン、硫酸化グルクロノガラクトフカン、硫酸化グルクロノフカン等が例示される。

これらのフコィダンの調製はそれぞれ公知の方法で調製すれば良く、精製物又は当該フコィダン含有物等を本発明に使用することができる。

例えばガゴメコンブ、マコンブ、トロロコンブ、ヒバマ夕、モズク、ォキナヮモズク、ワカメ、ワカメメカブ、クロメ、ァラメ、カジメ、ジャイアントゲルプ、レツソニァニグレセンス、ァスコフィラムノドッサム等の昆布目、ながまつも目、ひばまた目等の海藻は特に本発明の使用に好適なフコィダンを多く含んでおり、原料として好適である。なお、紅藻由来の硫酸化多糖、例えばマグサ

、ォゴノリ、おばくさ（Pterocladiella capillacea)由来の硫酸化多糖も本発明に使用するフコィダンと同様の効果を有し、本発明に使用することができる。本発明に使用するフコィダンとしては、前出の藻類由来のフコィダンが例示されるが、硫酸化フコースを構成成分とする多糖で皮膚美容作用及び/又は育毛作用を有するものであれば特に限定はなく、棘皮動物、例えばナマコ、ゥニ、ヒトデ等由来のフコィダンを使用してもよい。

例えばガゴメコンブからフコィダンを調製し、該フコィダンを一般式（ I ) で表される硫酸化糖の繰返し構造を有するグルクロン酸含有フコィダン（前出 U— フコィダン）と一般式（ I I ) で表される硫酸化糖の繰返し構造を有するグルクロン酸非含有フコィダン（前出 F—フコィダン）とを分離することができ、本発明の有効成分としてそれぞれのフコィダンを好適に使用することが出来る。またガゴメコンブから一般式（ I I I ) で表される硫酸化糖の繰返し構造を有する硫酸化フコガラクタン（前出 G—フコィダン）を調製し、好適に使用することができる。

また、ォキナヮモズクより、一般式（ I V) で表される硫酸化糖の繰返し構造を有するォキナヮモズク由来フコィダンを調製し、好適に使用することができる

U—フコィダン及び F—フコィダンはガゴメコンブから公知の方法に従ってフコィダンを調製後、陰イオン交換樹脂、界面活性剤等を用いて分離される。ガゴメコンブ由来の U—フコィダン及び F—フコィダンの存在比は重量比で約 1 ： 2 である。 U—フコイダンはフコース、マンノース、ガラクト一ス、グルクロン酸等を含み硫酸含量は約 2 0重量％、 F—フコイダンはフコースを主成分として含み、硫酸含量は約 5 0重量％であり、分子量は両物質共に約 2 0万を中心に分布している（第 1 8回糖質シンポジウム要旨集、第 1 5 9頁、 1 9 9 6年）。例えばガゴメコンブから調製したフコィダン溶液を D E A E—セル口ファイン A - 8 0 0カラムにアプライ後、 N a C 1含有緩衝液にて濃度勾配法により溶出させることにより、 U—フコィダンと F—フコィダンに分離することができる。第 1図にその 1例を示す。すなわち第 1図は U—フコィダンと F—フコィダンの分離を示す図であり、図中前ピークが U—フコィダン、後ピークが F—フコイダンである。

また例えばヒバマ夕由来フコィダン、モズク由来フコィダン、ォキナヮモズク由来フコィダン、ワカメ由来フコィダン、ワカメメカブ由来フコィダン、マクサ由来硫酸化多糖、ォゴノリ由来硫酸化多糖、レツソニァ由来フコィダン、ァスコフィラム由来フコィダン、おばくさ由来硫酸化多糖、他の藻類由来のフコイダンもそれぞれ公知の方法で調製し、本発明に使用することができる。

本発明において好適に用いられる棘皮動物由来のフコィダンとしては、例えば特開平 4 - 9 1 0 2 7号公報に記載のナマコに含有されるフコィダンを挙げることができ、当該公報記載の方法にてナマコより当該フコィダンを調製することができる。

また、本発明の皮霜美容作用及び Z又は育毛作用を有するフコィダンの分解物は、酵素学的方法、化学的方法、物理的方法等の公知の方法にて調製し、目的の皮膚美容作用及び又は育毛作用を有する分解物を選択し、使用することができる。

本発明で使用するフコィダンの分解物の好適な調製方法としては酸分解法及び酵素分解法があり、フコィダンを酸分解又は酵素分解することにより、皮膚美容作用及び Z又は育毛作用を有する分解物を調製することができる。

本発明で使用するフコィダンの酸分解条件は、皮膚美容作用及び Z又は育毛作用を有する分解物（以下、本発明の分解物と称す）が生成する条件であれば、特に限定はなく、得られる分解物の生理作用について評価することにより、その条件を決定することができる。

例えばフコィダンを酸に溶解またはけん濁し、反応させることにより、本発明の分解物が生成する。また、反応時に加熱することにより、本発明の分解物の生成に必要な時間が短縮される。

フコィダンを溶解またはけん濁する酸の種類は、特に限定するものではないが、塩酸、硫酸、硝酸等の無機酸、クェン酸、ギ酸、酢酸、乳酸、ァスコルビン酸等の有機酸、また陽イオン交換樹脂、陽イオン交換織維、陽イオン交換膜等の固体酸が使用可能である。

酸の濃度も特に限定はないが、好ましくは 0 . 0 0 '0 1〜5規定、より好ましくは 0 . 0 1〜1規定程度の濃度で使用可能である。また、反応温度も特に限定はないが 0〜2 0 0 ^eC、好ましくは 2 0〜1 3 0 °Cに設定すれば良い。

また、反応時間も特に限定するものではないが、好ましくは数秒間〜数日間に設定すれば良い。酸の種類と濃度、反応温度及び反応時間は本発明の分解物の生成量、分解物の重合度により適宜選択すれば良い。例えば、フコィダンの分解物の製造に際しては、好ましくはクェン酸、乳酸、リンゴ酸等の有機酸を使用し、酸の濃度は数 1 0 111 ^[〜数^1、加熱温度は 5 0〜1 1 0て、より好適には 7 0〜 9 5 、加熱時間は数分間〜 2 4時間の範囲から適宜選択することにより、本発明の分解物を調製することができる。フコィダンの酸分解物としてはガゴメコンブ由来フコィダンの酸分解物が例示され、当該分解物は特に皮膚美容作用及び Z 又は育毛作用の強い新生理機能を有する食物繊維として使用することができる。本発明の分解物は皮膚美容作用及び Z又は育毛作用を指標として分画することができ、例えば酸分解物をゲルろ過法、分子量分画膜による分画法等により分子量分画することができる。

ゲルろ過法の例としては、セル口ファイン GCL—' 3 0 0を使用し、例えば分子量 2 5 0 0 0超、分子量 25 0 0 0〜 1 0 0 0 0超、分子量 1 0 0 0 0〜 5 0 0 0超、分子量 5 0 0 0以下等の任意の分子量画分を調製でき、セル口ファイン GCL- 25を用い、例えば分子量 5 0 0 0以下の画分を分子量 5 0 0 0〜 3 0 0 0超、分子量 3 0 0 0〜 2 0 0 0超、分子量 2 0 0 0〜 1 0 0 0超、分子量 1 0 0 0〜5 0 0超、分子量 5 0 0以下等の任意の分子量画分に調製することができる。

また、限外ろ過膜を用いて工業的に分子量分画を行うことができ、例えばダイセル社製 FE 1 0 -FUSO 3 8 2を用いることにより分子量 3 0 0 0 0以下の画分を、同 FE— FUS— T 6 5 3を使用することによって分子量 6 0 0 0以下の画分を調製することができる。更にナノフィルター膜を用いることにより分子量 5 0 0以下の画分を得ることもでき、これらのゲルろ過法、分子量分画法を組み合せることにより、任意の分子量画分を調製することができる。例えばヒバマ夕由来フコィダンの分解物は分子量 3万以上の画分が強い皮膚美容作用及び Z又は育毛作用を示し、本発明においては分子量 3万以上のヒバマ夕由来フコィダンの使用が好適である。

本発明で使用できる皮膚美容作用及び/又は育毛作用を有するフコィダンの分解物としては、式（V) で表される化合物、式（V I ) で表される化合物、式（ V I I) で表される化合物が例示され、これらの化合物は、例えば、国際公開第 9 9/4 1 2 8 8号パンフレツト、国際公開第 9 6/ 34 0 0 4号パンフレツト、国際出願番号 PCTZJP 0 0/0 0 9 6 5号明細書記載の方法で調製することができる。なお、式（V)で表される化合物を基本骨格とし、その繰返し構造を有するオリゴ糖、また式（VI)で表される化合物を基本骨格とし、その繰返し構造を有するォリゴ糖もそれぞれ本発明において使用することができる。更に

、式（VI I)で表される化合物を基本骨格とし、その繰返し構造を有するオリゴ糖もそれぞれ本発明において使用することができる ₉ また、本発明の分解物としては、国際公開第 99/41288号パンフレツト、国際公開第 96/340 04号パンフレツト、国際出願番号 PCTZJP 00 / 00965号明細書記載のフコィダンの分解物も例示される。

式（V)で表される化合物は前出 F—フコィダンを、アルテロモナス sp. SN- 1009 (FERM B P— 5747 )が産生するエンド型硫酸化多糖分解酵素（F—フコィダン分解酵素）で処理し、その分解物より精製することにより得ることができる。当該化合物中の硫酸基の含量、部位についてはその分解物中より、任意のものを精製することができる。また当該分解物中には式（V)で表される化合物の多量体も含有されており、目的に応じて分離、精製することができる。

式（VI)で表される化合物は前出 U—フコィダンを、フラボバクテリゥム s p. SA— 0082 (FERM BP- 5402)が産生するェンド型硫酸化多糖分解酵素（U -フコィダン分解酵素）で処理し、その分解物より精製することにより得ることができる。当該化合物中の硫酸基の含量、部位についてはその分解物中より、任意のものを精製することができる。また当該分解物中には式 (VI)で表される化合物を基本骨格とする、その多量体も含有されており、目的に応じて分離、精製することができる。

ガゴメコンブ由来フコィダンをアルテロモナス sp. SN- 1009 (FE RM BP- 5747)が産生する F—フコィダン分解酵素、及びフラボバクテリウム sp. SA- 0082 (FERM B P— 5402 )が産生する U— フコィダン分解酵素で分解し、分解物を除去することにより、前出 G—フコイダンを精製することができる。

フラボパクテリゥム sp. SA- 0082 (FERM BP— 5402) はこの G—フコィダンを特異的に分解するェンド型硫酸化多糖分解酵素（G—フコィダン分解酵素）も産生し、当該 G—フコィダン分解酵素を G—フコィダンに作用させることにより、当該 G—フコィダンの分解物を調製し、当該分解物中より、目的に応じ分解物を精製することができる。式（V I I)で表される化合物はその例である。当該化合物中の硫酸基の含量、部位についてはその分解物中より、任意のものを精製することができる。また当該分解物中には式（V I I)で表される化合物を基本骨格とする、その多量体も含有されており、目的に応じて分離、精製することができる。

なお式（V)で表される化合物の例としては後述の式（V I I I)で表される化合物がある。また式（VI)で表される化合物の例としては後述の式（X)で表される化合物がある。更に、式（VI I)で表される化合物の例としては後述の式（ I X)で表される化合物がある。

また、前記 F—フコィダン分解酵素、 U—フコィダン分解酵素、 G—フコイダン分解酵素の 1単位（U) は、 1分間に 1 mo 1相当の F—フコィダン、 U— フコィダン、 G—フコィダンのそれぞれのグリコシル結合を切断する酵素量と定義 9"*Oo

フコィダンの塩、その分解物の塩は、フコィダン又はその分解物より通常の方法で調製することができる。また、フコィダンの分解物は所望により適宜硫酸化して使用することもでき、硫酸化の方法は公知の方法に従えばよい。

皮慮美容作用及びノ又は育毛作用を有する本発明で使用するフコィダン、その分解物及びそれらの塩は、その皮膚美容作用（皮膚老化防止作用等）より、ローシヨン類、乳液類、クリーム類、パック類、軟膏類、浴用剤、浴用洗剤、又は洗顔剤等の化粧料の有効成分として有用である。また、その育毛作用により、育毛料としての化粧料、例えば毛髪剤、育毛剤、養毛剤、脱毛防止剤の有効成分として有用であり、本発明により皮 It美容作用及び Z又は育毛作用を有するフコイダン、その分解物又はそれらの塩から選択されるものを有効成分とする、皮膚美容作用及び Z又は育毛作用に優れた化粧料が提供される。当該化粧料の有効成分としては、例えば U—フコィダン、 F—フコィダン、 G—フコィダン、ォキナヮモズク由来フコィダン及びそれらの分解物から選択されるものが好適であり、これらの物質を有効成分とするバイォ化粧料が提供できる。ここでフコィダンの分解物としては、例えば式（V：) 〜（V I I ) で表される化合物から選択される化合物を好適に使用することができる。

フコィダンは硫酸化フコースを含有する多糖であるが、本発明者らは硫酸化単糖にも皮霜美容作用及び Z又は育毛作用があることを見出した。すなわち、本発明者らは硫酸化単糖又はそれらの塩を有効成分として含有する化粧料も提供する

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当該化粧料に使用される硫酸化単糖又はその塩は皮膚美容作用及び Z又は育毛作用を有する硫酸化単糖又はその塩であれば良く、特に限定はされないが、硫酸化フコース、硫酸化グルコース、硫酸化ガラクト一ス硫酸化キンロース、硫酸化 2—デォキシーグルコース、硫酸化マンノース、硫酸化夕ロース及びこれらの塩が例示される。

これらの硫酸化単糖は公知の合成法で合成しても良く、また天然物中より硫酸化多糖を分解し、当該分解物中より精製して調製しても良い。また常法によりその塩を調製することが出来る。

本発明の化粧料における、フコィダン、その分解物、硫酸化単糖又はそれらの塩から選択されるものの含有量は、通常、好ましくは 0 . 0 0 0 1〜2 0重量％、より好ましくは 0 . 0 0 1〜5重量、更に好ましくは 0 . 0 3〜3重量％である。

本発明の化粧料は常法に従って製造することができ、通常、化粧料に使用される炭化水素類、ろう類、油脂類、エステル類、高級脂肪酸類、高級アルコール類、界面活性剤類、香料、色素、防腐剤、抗酸化剤、紫外線吸収剤、アルコール類

、 p H調整剤、各種薬効成分等を適宜選択して配合できる。なお、本発明の化粧料の有効成分であるフコィダン、その分解物、硫酸化単糖又はそれらの塩から選択されるもの以外の皮膚美容作用を有する成分や、育毛作用を有する発毛成分、育毛成分、養毛成分、脱毛防止成分等を所望により加えても良い。例えば、かかる皮膚美容作用を有する成分としては、レチノイン酸、ーヒドロキシ酸、レチノール、グリセリン、ボリエチレングリコール、苛性カリ、トリエタノールアミン、その他糖類等が、かかる育毛作用を有する成分としては、ミノキシジル、塩化カルプロニゥム、へパリン類似物質、グリセリルモノリレート、リノール酸、各種生薬エキス等が挙げられる。

本発明の化粧料に含有されるフコィダンとしては、非曳糸性のフコィダンが、非沈澱形成性、化粧料の基材への溶解性等において、曳糸性のフコィダンより優れており、非曳糸性のフコィダンが好適である。

化粧料の形態は皮膚美容作用を期待しうるものであれば特に限定はなく、ローシヨン類、乳液類、クリーム類、バック類、軟膏類、浴用剤、浴用洗剤、洗顔剤、洗髪剤等が挙げられる

また、育毛料としての化粧料の形態は、毛髪への作用を期待しうるものであれば特に限定はなく、例えばローション類、乳液類、クリーム類、軟膏類、毛髪剤、育毛剤、養毛剤、脱毛防止剤、又は洗髮剤が挙げられる。

本発明の化粧料の一態様としての育毛料は、育毛を要する部位に塗布或いは張り付けて用いても良い。また本発明の育毛料は飲食が可能な形状にして経口的に摂取しても良い。

本発明の化粧料の使用態様は特に限定されるものではないが、例えば、前記育毛料の使用態様としては、例えば l m L中にフコィダン、その分解物、硫酸化単糖及び/又はそれらの塩が 0 . 1 n g〜l 0 O m g含まれる該育毛料の数 m Lを少なくとも 1日 1回、育毛を要する部位に、塗布、或いは同量を含むパック類等を張り付ければよい。

なお、皮膚美容作用を期待する観点から、本発明の化粧料を用いる場合も、前記育毛料と同様の使用態様で用いることにより所望の効果を得ることができる。経口摂取される量としてはフコィダン、その分解物、硫酸化単糖及び又はそれらの塩が皮膚美容作用及び Z又は育毛作用を示す量が摂取できればよく、特に限定は無いが、通常、一日当たり好ましくは 0 . l m g〜l 0 g、より好ましくは 2 m g〜5 g、さらに好ましくは 1 0 m g〜2 gである。

ところで、従来、ヒトの頭髪の成長を促進又は維持させることに使用される育毛料には種々の技術が提案され、また実際に使用されている。

従来の育毛料の有効成分としてはミノキシジル（特開平 9— 1 6 9 6 2 2号公報）、塩化カルプロニゥム（特開平 9一 1 7 5 9 5 0号公報）等が知られている本発明者らは、フコィダン、その分解物、硫酸化単糖及びそれらの塩から選択されるものと共に従来の育毛料の有効成分を用いることにより育毛作用が相乗的に増強されることを見出した。

すなわち、本発明によりフコィダン、その分解物、硫酸化単糖及びそれらの塩から選択されるもの、及び育毛作用増強成分、例えば、従来の育毛料の有効成分を含有する育毛料が提供される。

前記育毛作用増強成分としては、フコィダン、その分解物、硫酸化単糖及びそれらの塩から選択されるものと共に用いることにより育毛作用を相乗的に増強し得るものであれば良く、本発明に開示の方法（例えば、実施例 1 9に記載の方法 ) に従って適宜選択することができる。かかる育毛作用増強成分として、本発明において好適に使用され得る従来の育毛料の有効成分としてはミノキシジル及び塩化カルプロニゥムが例示される。なお、これらは単独で、又は混合して使用することができる。

フコィダン、その分解物、硫酸化単糖及びそれらの塩から選択されるもの、及び育毛作用増強成分を含有する育毛料における、フコィダン、その分解物、硫酸化単糖及びそれらの塩から選択されるもの、及び育毛作用増強成分の含有量は、それらによる相乗効果が発揮され得る量であれば良く、特に限定はないが、フコィダン、その分解物、硫酸化単糖及びそれらの塩から選択されるものとしては該育毛料中、好ましくは 0 . 0 1〜3 0重量％、より好ましくは 0 . 1〜1 0重量である。また、育毛作用増強成分の含有量としては、ミノキシジルの場合、該育毛料中、好ましくは 0 . 1〜5重量％、より好ましくは 0 . 5〜2重量％である。一方、塩化カルプロニゥムの場合、該育毛料中、好ましくは 0 . 1〜1 0重量％、より好ましくは 0 . 5〜5重量％である。本発明に使用する前記有効成分及ぴ育毛作用増強成分が、それぞれかかる含有量範囲内で含有された育毛料は、育毛作用に非常に優れ好ましい。

また、本発明の育毛料にはミノキシジル及び又は塩化カルプロニゥムの効果を増強できるものを更に含有させても良い。例えば、かかる効果を有するものとして、ェピネフリン、テトラヒドロゾリン、塩酸ナファゾリン等の局所滞留化剤、プロピレングリコール、 1 , 3—ブチレングリコール等の極性溶媒、シコン、ドッカツ、マオゥ、カシュゥ、チクセッニンジン等の生薬エキス、パンテノールェチルエーテル、水溶性キチン誘導体等を挙げることができる。

さらに、本発明の一態様として、食品又は飲料として使用され得る化粧料を提供する。かかる化粧料は、皮膚美容作用及びノ又は育毛作用を有するフコィダン、その分解物、硫酸化単糖又はそれらの塩を含有、添加及び又は希釈してなり、その皮膚美容作用及び Z又は育毛作用により、例えば、皮膚美容用食品又は飲料、脱毛防止用食品又は飲料、又は育毛用食品又は飲料として極めて有用である

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本発明の皮膚美容用食品又は飲料、育毛用食品又は飲料等の製造方法は、特に限定はないが、調理、加工及び一般に用いられている公知の食品又は飲料の製造方法による製造を挙げることができ、製造された食品又は飲料に皮膚美容作用及びノ又は育毛作用を有する、本発明で使用するフコィダン、その分解物、硫酸化単糖、及びそれらの塩から選択されるものが有効成分として含有、添加及び Z又は希釈されていれば良い。

なお、本態様において、「含有」とは、食品又は飲料中に本発明で使用される有効成分が含まれる態様を、「添加」とは、食品又は飲料の原料に本発明で使用される有効成分を添加する態様を、「希釈」とは、本発明で使用される有効成分に食品又は飲料の原料を添加する態様をいう。

本発明の皮膚美容用食品又は飲料、又は育毛用食品又は飲料等の形状としては、特に限定はないが、例えば穀物加工品（小麦粉加工品、デンプン類加工品、プレミックス加工品、麵類、マカロニ類、パン類、あん類、そば類、麩、ビーフン、はるさめ、包装餅等）、油脂加工品（可塑性油脂、てんぷら油、サラダ油、マヨネ一ズ類、ドレッシング等）、大豆加工品（豆腐類 > 味噌、納豆等）、食肉加ェ品（ハム、ベーコン、プレスハム、ソーセージ等）、水産製品（冷凍すりみ、かまぼこ、ちくわ、はんぺん、さつま揚げ、つみれ、すじ、魚肉ハム、ソ一セ一ジ、かつお節、魚卵加工品、水産缶詰、つくだ煮等）、乳製品（原料乳、クリ— ム、ヨーグルト、バタ一、チーズ、練乳、粉乳、アイスクリーム等）、野菜 '果実加工品（ペースト類、ジャム類、漬け物類、果実飲料、野菜飲料、ミックス飲料等）、菓子類（チョコレート、ビスケット類、菓子パン類、ケーキ、餅菓子、米菓類等）、アルコール飲料（日本酒、中国酒、ワイン、ウィスキー、焼酎、ゥォッ力、ブランデー、ジン、ラム酒、ビール、清涼アルコール飲料、果実酒、リキユール等）、嗜好飲料（緑茶、紅茶、ウーロン茶、コーヒー、清涼飲料、乳酸飲料等）、調味料（しょうゆ、ソース、醉、みりん等）、缶詰 ·瓶詰め ·袋詰め食品（牛飯、釜飯、赤飯、カレ一、その他の各種調理済み食品）、半乾燥又は濃縮食品（レバーペースト、その他のスプレツド、そば，うどんの汁、濃縮スープ類）、乾燥食品（即席麵類、即席カレー、インスタントコーヒー、粉末ジュース、粉末スープ、即席味噌汁、調理済み食品、調理済み飲料、調理済みスープ等）、冷凍食品（すき焼き、茶碗蒸し、うなぎかば焼き、ハンバーグステーキ、シュゥマイ、餃子、各種スティック、フルーツカクテル等）、固形食品、液体食品（スープ等）、香辛料類等の農産 ·林産加工品、畜産加工品、水産加工品等が挙げられる。

本発明の食品又は飲料としては、皮膚美容作用及び Z又は育毛作用を有するフコィダン、その分解物、硫酸化単糖、及びそれらの塩から選択されるものが含有、添加及び Z又は希釈されており、その生理機能を発現するための必要量が含有されていれば特にその形状に限定はなく、タブレット状、顆粒状、カプセル状等の形状の経口的に摂取可能な形状物も包含する。なお、皮膚美容作用及び又は育毛作用を有する藻類由来のフコィダン及びその分解物は、当該生理作用と食物繊維機能とを合わせ持つ健康食品素材として、食品又は飲料の製造素材として極めて有用である。

本発明の皮膚美容用食品、育毛用食品等における、フコィダン、その分解物、硫酸化単糖又はそれらの塩から選択されるものの含有量は、皮膚美容作用及び又は育毛作用を示す量が含有されておれば良く限定はないが、好ましくは 0 . 0 0 1〜1 0 0重量％、より好ましくは 0 . 0 1〜1 0重量％、さらに好ましくは 0 . 0 5〜5重量％である。当該皮膚美容用食品、育毛用食品等として、フコィダン、その分解物、硫酸化単糖又はそれらの塩から選択されるものをそのまま粉末として、また錠剤として摂取しても良い。

また、皮 It美容用飲料、育毛用飲料等における、フコィダン、その分解物、硫酸化単糖又はそれらの塩から選択されるものの含有量は、皮膚美容作用及び又は育毛作用を示す量が含有されていれば良く限定はないが、好ましくは 0 . 0 0 0 1〜1 0重量％、より好ましくは 0 . 0 0 5〜5重量％、さらに好ましくは 0 . 0 2〜2重量％である。

皮膚美容用食品又は飲料、育毛用食品又は飲料等の使用態様は特に限定されるものではないが、皮膚美容効果及び又は育毛効果を有効に得る観点から、一日

1 g 当たり、本発明に使用する前記有効成分が好ましくは 0. lmg〜l 0 g、より好ましくは 2mg〜5 g、さらに好ましくは 1 0mg〜2 g摂取できるように摂取するのが望ましい。

本発明に使用するフコィダン、その分解物、硫酸化単糖、及びそれらの塩はラットへの経口投与において 1 gZkgを経口単回投与しても死亡例は認められない。

また、ハーレ一系モルモッ卜の背部を剃毛し、フコィダン、その分解物、硫酸化単糖、及びそれらの塩の 3%溶液を 1日 1回、 0. 05mLずつ 5日間連日塗布投与し、投与開始後 6日目にパッチテスト基準（日本皮膚科学会）に基づいて判定したが、無反応であり、フコィダン、その分解物、硫酸化単糖、及びそれらの塩の皮膚刺激性は認められない。

本発明により提供される化粧料は皮膚美容用及びノ又は育毛用化粧料として極めて有用である。実施例

以下、実施例を挙げて、本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの記載に何ら限定されるものではない。なお、特に記載のない限り実施例におけるは重量％を意味する。実施例 1

( 1 ) ガゴメ昆布を充分乾燥後、乾燥物 20 k gを自由粉砕機（奈良機械製作所製）により粉砕し、ガゴメ昆布粉砕物を得た。

水道水 900リツトルに塩化カルシウム二水和物（日本曹達社製） 7. 3 kg を溶解し、次にガゴメ昆布粉砕物 20 kgを混合した。液温 1 2°Cから液温 90 でとなるまで水蒸気吹込みにより 40分間昇温させ、次いで攪拌下 90〜95°C に 1時間保温し、次いで冷却し、冷却物 1 1 00リツトルを得た。次いで固液分離装置（ウェストファリアセパレ一ター社製 CNA型）を用い、冷却物の固液分離を行い、約 9 0 0リツトルの固液分離上清液を調製した。

固液分離上清液 3 6 0リツトルをダイセル社製 FE 1 0 -FC-FUS 0 38 2 (分画分子量 3万）を用い、 20リツトルまで濃縮した。次いで水道水を 20 リットル加え、また 20リットルまで濃縮するという操作を 5回行い、脱塩処理を行い、ガゴメ昆布由来の抽出液 25リットルを調製した。

該溶液 1 リットルを凍結乾燥し、非曳糸性のガゴメ昆布由来フコィダンの乾燥物 1 3 gを得た。

上記方法に準じ、マ昆布乾燥粉砕物から非曳糸性のマ昆布由来フコィダンの乾燥物を調製した。また同様に、レツソニァニグレセンス（Lessonia nigrescen s ) の乾燥粉末（商品名シーウイ一ドパウダー：アンデス貿易株式会社販売）から非曳糸性のレツソニァニグレセンス由来のフコィダン乾燥物を調製した。

(2) 実施例 1— ( 1) 記載のガゴメ昆布由来フコィダン乾燥物 7 gを、 50 mMの塩化ナトリゥムと 1 0 %のエタノールを含む 2 OmMのィミダゾール緩衝液（pH8. 0) 70 OmLに溶解し、遠心分離により不溶物を除去した。 DE AE—セル口ファイン A— 8 0 0カラム（01 1. 4 cmx 4 8 cm) を同緩衝液にて平衡化し、遠心分離上清をアプライ後、同緩衝液で洗い、塩化ナトリウムの 5 OmMから 1. 95 Mの濃度勾配により溶出させた（1フラクション： 25 OmL) 。フヱノール硫酸法及び力ルバゾ一ル硫酸法にて、総糖量及びゥロン酸含量を求め、溶出順にフラクシヨン 43〜 4 9、フラクション 50〜 55、フラクシヨン 5 6〜67の画分を得た。次に、これらの画分を電気透析により脱塩後凍結乾燥し、フラクション 4 3〜4 9より I画分（340mg：) 、フラクション 50〜 55より I I画分（8 70mg) 、フラクション 56〜 67より I I I画分（2. 64 g) をそれぞれ調製した。

第 1図にガゴメ昆布由来フコィダンの DEAE—セル口ファイン A— 800力ラム溶出パターンを示す。第 1図において、縦軸は力ルバゾール硫酸法での 5 3 O nmの吸光度（図中黒丸）、フニノール硫酸法での 480 nmの吸光度（図中白丸）、及び電導度（mSZcm：図中白四角）、横軸はフラクション番号を示す。実施例 2

(1) アルテロモナス s p. SN- 1 00 9 (PERM BP— 574 7) を、グルコース 0. 25%、ペプトン 1. 0%、酵母エキス 0. 05 %を含有させた人工海水（ジャマリンラボラトリ一社製） pH8. 2からなる培地 60 OmLを分注して殺菌した（1 20。C、 20分間） 2リットルの三角フラスコに接種し、 25でで 26時間培養して種培養液とした。ペプトン 1. 0% 、酵母エキス 0. 02%、下記実施例 2— (2) に記載の硫酸化多糖 0. 2 %、及び消泡剤（信越化学工業社製 KM 70) 0. 0 1 %を含有させた人工海水 pH 8. 0からなる培地 20リットルを 30リットル容のジャーファメンターに入れて 1 20で、 20分間殺菌した。冷却後、上記の種培養液 6 0 OmLを接種し、 24てで 24時間、毎分 1 0リットルの通気量と毎分 25 0回転の攪拌速度の条件で培養した。培養終了後、培養液を遠心分離して菌体及び培養上清を得た。得られた培養上清を、排除分子量 1万のホロファイバーを装着させた限外ろ過機により濃縮後、 85%飽和硫安塩折し、生じた沈殿を遠心分離により集め、 1 0分の 1濃度の人工海水を含む 2 OmMのトリス一塩酸緩衝液（pH 8. 2) に対して充分透析し、 60 OmLの F—フコィダンに選択的に作用する F—フコィダン分解酵素液を調製した。

(2) 乾燥したガゴメ昆布 2 k gを直径 1 mmのスクリーンを装着させた力ッターミル（増幸産業社製）により粉砕し、得られた昆布のチップを 20リットルの 80%エタノール中に懸濁し、 25°Cで 3時間攪拌し、ろ紙でろ過後、残渣を充分洗浄した。得られた残渣を、 95 °Cに加温した 40リットルの 5 OmMの塩化ナトリウムを含む 2 OmMリン酸ナトリウム緩衝液 pH6. 5に懸濁し、時々攪拌しながら 95 °Cで 2時間処理し、硫酸化多糖を抽出した。

抽出液中の懸濁物を、ろ過し、ろ液を調製した後、ろ過残渣を 3. 5リットルの 1 0 OmM塩化ナトリウムにより洗浄し、更にろ液を得た。

両ろ液を合わせた後、 30でまで温度を下げ、 300 0 Uのアルギン酸リア一ゼ（ナガセ生化学工業社製）を添加後、エタノールを 4リットル加え 25°Cで 2 4時間攪拌した。次に遠心分離を行い、得られた上清を排除分子量 1 0万のホロファイバーを備えた限外ろ過機により 4リットルに濃縮し、更に、 1 0%のエタノールを含む 1 0 OmMの塩化ナトリウムにより、着色性物質がろ過されなくなるまで限外ろ過を続けた。

非ろ過液中に生じた沈殿は遠心分離により除去し、この上清を 5 °Cまで温度を下げ、 0. 5N塩酸により pHを 2. 0とした後、生じたタンパク質等の沈殿を遠心分離により除去し、得られた上清を速やかに 1 N水酸化ナトリウムにより p Hを 8. 0とした。

次に、排除分子量 1 0万のホロファイバーを装着させた限外ろ過機により限外ろ過を行い、 2 OmM塩化ナトリウム pH8. 0により完全に溶媒置換後、再度 pHを 8. 0として遠心分離後、凍結乾燥を行い、約 95 gの硫酸化多糖を調製した。

( 3 ) 乾燥したガゴメ昆布 2 k gを直径 1 mmのスクリ一ンを装着させた力ッターミルにより粉砕し、得られた昆布のチップを 20リットルの 8 0%ェタノ一ル中に懸濁し、 25でで 3時間攪拌し、ろ紙でろ過後、残渣を充分洗浄した。得られた残渣を、 3 OmLの上記実施例 2— （ 1 ) で調製した F—フコィダン分解酵素、 1 0%のエタノール、 1 0 OmMの塩化ナトリウム、 5 OmMの塩化カルシゥム、及び 5 OmMのィミダゾ一ルを含む 20リットルの緩衝液（pH8. 2 ) に懸濁し、 25 °Cで 4 8時間攪拌した。この懸濁液を網目の直径 32 のステンレス金網でろ過し、残渣を 5 OmMの塩化カルシウムを含む 1 0%のェタノ P 8412 ールで洗浄した。更にその残渣を 1 0リットルの 5 OmM塩化カルシウムを含む 1 0%のエタノール中に懸濁し、 3時間攪拌後、ステンレス金網でろ過、洗浄した。更にその残渣を同条件で懸濁後、 1 6時間攪拌し、直径 32 のステンレス金網でろ過、洗浄した。

こうして得られたろ液及び洗浄液を集め、排除分子量 300 0のホロファイバ一を装着させた限外ろ過機により限外ろ過し、ろ過液と非ろ過液に分離した。このろ過液をロータリ一エバポレーターで約 3リットルに濃縮後、遠心分離して上清を得た。得られた上清を排除分子量 30 0の膜を装着させた電気透析器により脱塩し、この溶液に 0. 1Mとなるように酢酸カルシウムを添加し、生じた沈殿を遠心分離により除去した。この上清をあらかじめ 5 OmMの酢酸カルシゥムにより平衡化させた DEAE—セル口ファイン（樹脂量 4リットル）にかけ、 5 OmMの酢酸カルシウム及び 5 OmMの塩化ナトリウムで充分洗浄後、 5 0 m M〜8 0 OmMの塩化ナトリゥムのグラジェントにより溶出させた。この時の分取量は 1本当り 5 0 OmLで行った。分取した画分をセルロースアセテート膜電気泳動法 [アナリティカルバイオケミストリー（An a 1 y t i c a 1 B i o c h em i s t r y) 、第 37巻、第 1 9 7〜202頁（ 1 9 70) ] により分析したところ塩化ナトリウム濃度が約 0. 4Mで溶出される硫酸化糖（フラクシヨンナンバー 63付近）が均一であった。

そこで、まずフラクションナンバー 6 3の液を 1 5 OmLに濃縮後、濃度が 4 Mとなるように塩化ナトリゥムを添加し、あらかじめ 4Mの塩化ナトリゥムにより平衡化した Ph e ny 1—セル口ファイン（樹脂量 20 OmL) にかけ、 4M の塩化ナトリゥムにより充分洗浄した。非吸着性の硫酸化糖画分を集め、排除分子量 30 0の膜を装着させた電気透析器により脱塩し、脱塩液 5 05 mLを得た得られた脱塩液のうち 4 OmLを 1 0 %のエタノールを含む 0. 2 Mの塩化ナトリウムによって平衡化させたセル口ファイン GCL— 90のカラム（4. 1 c mx 87 cm) にかけて、ゲルろ過を行った。分取は 1フラクション当り 9. 2 m Lで行った。

全フラクションに対して総糖量の分析をフヱノール硫酸法〔アナリティカルケミストリ一（Analytical Chemistry)、第 28巻、第 350頁（ 1 956 )〕により行った。

この結果、硫酸化糖は 1つのピークを形成したので、そのピークの中央部分、フラクションナンバー 63〜70を集め、排除分子量 300の膜を装着させた電気透析器により脱塩後、凍結乾燥し、 1 12mgの下記式（VI I I)で表される化合物の乾燥品を得た。以下、該化合物を 7— 12SFd— Fと称す。

(4)実施例 1一（2)で調製した I I I画分（F—フコィダン）の 2. 5% 水溶液 80mLに 1M トリスー塩酸緩衝液（pH 7. 6)を 1 6mL、 1 M CaC 12 水溶液を 1 6mL、 4 Na C 1水溶液を 24mL、実施例 2 - ( 1)で得た F—フコィダン分解酵素液を 8 m L、蒸留水を 176mL添加し、 3 0 で 3時間加熱した。この酵素処理 F—フコィダン溶液を酵素処理 F—フコィダンの最終濃度が 2 %になるようにロータリ一エバポレーターで濃縮し、その後蒸留水中で透析操作を行い、 2%酵素処理 F—フコィダン水溶液を調製した。この試料を HP LC (カラム： SB 802. 5、カラム温度： 35 °C、移動相： 5 OmM NaC l、流速： 0. 5 mLZm i n、検出： R I ATT=8) で分析した。その結果、試料中の約 40%が式（V I I I)記載の 7_ 1 2 SF d- Fであることが明らかになつた。実施例 3

( 1 ) 乾燥ガゴメ昆布 2kgを穴径 1 mmのスクリーンを装着した力ッタ一ミル（増幸産業社製）により破砕し、 20リツトルの 80%エタノール中で 25°C 、 3時間攪拌後ろ過、洗浄した。得られた残渣を 5 OmMの塩化カルシウム、 1 0 OmMの塩化ナトリウム、 1 0%のエタノール、及び参考例 2— (1) で調製したアルテロモナス sp. SN- 1 009 (FERM BP— 5747) F 一フコィダン分解酵素を 1 U含む 20リットルの 3 OmMイミダゾ一ル緩衝液（ pH8. 2) に懸濁し、 25°Cで 2日間攪拌し、次いで穴径 32；/mのステンレス金網でろ過し、洗浄した。得られた残渣を 1 0 OmMの塩化ナトリウム、 1 0 %のエタノール、及び 4 gのアルギン酸リア一ゼ（ナガセ生化学工業製）を含む 40リットルのリン酸ナトリウム緩衝液（pH 6. 6) に懸濁し、 25。 (、 4日間攪拌後、遠心分離し上清を得た。得られた上清中に含まれるアルギン酸の低分子化物を除去するため排除分子量 1 0万のホロファイバーを装着した限外ろ過機により 2リットルに濃縮後、 1 0 %のエタノールを含む 1 0 OmMの塩化ナトリゥムで溶液交換した。この溶液に等量の 40 OmM酢酸カルシウムを添加攪拌後、遠心分離し、得られた上清を氷冷しながら、 1 Nの塩酸で pH2とした。生じた沈殿を遠心分離により除去し、得られた上清を 1 N 水酸化ナトリウムにより pH8. 0とした。この溶液を限外ろ過により 1リットルに濃縮後、 l O OmM の塩化ナトリゥムで溶液交換した。この時生じた沈殿は遠心分離により除去した。得られた上清中の疎水性物質を除去するため、上清に 1 IV [となるように塩化ナトリウムを加えて、 1 Mの塩化ナトリウムで平衡化した 3リットルのフヱニルセルロファインカラム（生化学工業製）にかけ、素通り画分を集めた。この画分を限外ろ過機により濃縮後、 2 OmMの塩化ナトリウムで溶液交換し、凍結乾燥した。凍結乾燥物の重量は 29. 3 gであった。

(2) 上記の凍結乾燥物 1 5 gを、国際公開第 97/26 8 9 6号バンフレツト記載の、フラボパクテリゥム s p. SA- 00 82 (FERM BP— 54 02) を培養し、該培養物から得られたエンド型硫酸化多糖分解酵素（U—フコィダン分解酵素）を 9U、及び 40 OmMの塩化ナトリウムを含む 1. 5リットルの 5 OmMトリスー塩酸緩衝液に溶解し、 25 °Cで 6日間反応後、エバポレーターで約 30 OmLに濃縮した。濃縮液を排除分子量 3 5 0 0の透析チューブに入れて徹底的に透析し、透析チューブ内に残った液を、 5 OmMの塩化ナトリウムで平衡化した 4リットルの DEAE—セル口ファイン A— 8 0 0にかけ、 50 mM塩化ナトリウムで充分洗浄後、 50〜650 mMの塩化ナトリウムの濃度勾配による溶出を行った。更に同カラムを 65 OmMの塩化ナトリウムで充分溶出させた。溶出画分のうち 6 5 OmMの塩化ナトリウムで溶出した画分を硫酸化フコガラクタン画分として集め、排除分子量 1 0万の限外ろ過機により濃縮後、 1 OmMの塩化ナトリゥムで溶液を置換し、凍結乾燥して非曳糸性の硫酸化フコガラクタンの凍結乾燥物 0. 8 5 gを得た。得られた硫酸化フコガラクタン（G— フコィダン）は、構成糖としてガラクト一スとフコースを含有し、そのモル比は、約 2 ： 1であった。

(3) G—フコィダン分解酵素の生産のため、フラボパクテリゥム s p. SA- 0082 (FERM B P— 5402 ) を、グルコース 0. 1 %、ぺプトン 1. 0%、酵母エキス 0. 0 5%を含む人工海水（ジャマリンラボラトリ一製 ) H7. 5からなる培地 60 OmLを 1 20で、 20分間殺菌した後、該培地に接種し、 24 で 23時間培養して種培養液とした。実施例 3— ( 1) の方法で調製したガゴメ昆布由来のフコィダン画分 0. 2%、ペプトン 2. 0%、酵母エキス 0. 0 1 %、及び消泡剤（KM 70、信越化学工業製） 0. 0 1 %を含む人工海水（pH7. 5) からなる培地 20リットルを 30リットル容のジャーフアーメンターにいれ 1 20でで 20分間殺菌した。冷却後、上記の種培養液 60 OmLを接種し、 24でで 23時間、毎分 1 0リットルの通気量と毎分 1 25回転の攪拌速度の条件で培養した。培養終了後、培養液を遠心分離して菌体を得た得られた菌体を、 1 20 OmLの 0. 4M塩化ナトリウムを含む 1 OmMのトリス—塩酸緩衝液（ P H 8. 0 ) に懸濁し、超音波破砕後、遠心分離して菌体抽出液を得た。得られた菌体抽出液を同じ緩衝液で充分透析し、遠心分離して上清を得た。得られた上清に終濃度が 9 0%飽和となるように硫安を添加し生じた沈殿を遠心分離して集めた。得られた沈殿を 1 5 OmLの 5 OmM塩化ナトリウムを含む 1 OmMトリスー塩酸緩衝液（pH8. 0) に溶解させ、同じ緩衝液で充分透析し、遠心分離した。得られた上清を同じ緩衝液で平衡化した 50 OmLの DEAE—セファロ一ス FF (アマシャムフアルマシア社製）のカラムにかけ、同じ緩衝液で洗浄後、 5 OmMから 60 OmMの塩化ナトリウムの濃度勾配により溶出させ、活性画分を集めた。

得られた活性画分を 0. 1 M塩化ナトリゥムを含む 1 0 mMトリス一塩酸緩衝液（pH8. 0) で充分透析し、同じ緩衝液で平衡化した 1 0 OmLの DEAE 一セル口ファイン A— 800 (チッツ社製）のカラムにかけ、同じ緩衝液で洗浄後、 0. 1Mから 0. 4 Mの塩化ナトリウムの濃度勾配により溶出させ、活性画分を集めた。得られた活性画分に 4Mとなるように塩化ナトリウムを添加し、 4 Mの塩化ナトリウムを含む 1 OmMのトリス一塩酸緩衝液（pH8. 0) で平衡化した 2 OmLの Ph e ny 1一セル口ファイン（チッソ社製）のカラムにかけ、同じ緩衝液で洗浄後、 4 Mから 1Mの塩化ナトリウムの濃度勾配により溶出後、さらに 1Mの塩化ナトリウムを含む 1 OmMのトリス—塩酸緩衝液（pH8. 0) で充分溶出させ、活性画分を集めた。得られた活性画分に 3Mとなるように塩化ナトリウムを添加し、 3 Mの塩化ナトリウムを含む 1 OmMのトリス一塩酸緩衝液（pH8. 0) で平衡化した 1 OmLの Ph e ny l—セル口ファイン（チッソ社製）のカラムにかけ、同じ緩衝液で洗浄後、 3Mから 0. 5Mの塩化ナトリウムの濃度勾配により溶出後、さらに 0. 5 Mの塩化ナトリウムを含む 1 0 mMのトリス一塩酸緩衝液（pH8. 0) で充分溶出させ、活性画分を集めた。このようにして得られた精製酵素を G—フコィダン分解酵素として用いた。

(4) 実施例 3— （2) 記載の G—フコィダンに上記の精製 G_フコィダン分解酵素を作用させ低分子化物を調製した。すなわち、 1. 94 gの G—フコイダンを 0. 2Mの塩化ナトリウムを含む 25mMトリス—塩酸緩衝液（pH8. 0 ) に溶解後、 1 8 6mUの G—フコィダン分解酵素を ¾ϋえ、 25てで、 6日間反応させた。反応液をエバボレーターにより 8 OmLに濃縮し、セル口ファイン G CL- 1 000 (チッソ社製）のカラム（4 X 9 0 cm) による分子量分画を行つた。分子量 1 5, 0 00以下の画分を集め、 G—フコィダン酵素消化物画分とした。

(5) 上記 G—フコィダン酵素消化物画分をエバポレーターで 50 OmLに濃縮後、電気透析装置により脱塩し、あらかじめ 1 OmMの塩化ナトリウムを含む 1 OmMのイミダゾールー塩酸緩衝液（pH8) で平衡化した 1 リツトルの DE AE—セル口ファイン A— 800 (チッソ社製）のカラムにかけ、同緩衝液で洗浄後、 1 OmMから 9 0 OmMの塩化ナトリゥムのグラジェントにより溶出させた。溶出画分は 6 lmLずつ分取し、それぞれの糖含をフ Xノール一硫酸法により測定した。 27 OmM付近の塩化ナトリウムで溶出される画分が糖含量のピークを形成していたので、それを集め 27 OmM溶出画分（口）とした。

また上記の 27 OmM溶出画分（口）に関しては、 1 5 OmMの塩化ナトリウムを含む 1 OmMのイミダゾ一ルー塩酸緩衝液（pH8) と同じ電導度になるように水を添加し、あらかじめ 1 5 OmMの塩化ナトリウムを含む 1 OmMのイミダブールー塩酸緩衝液（pH8) で平衡化した 200111しの0£八£ーセルロファイン A— 800 (チッソ社製）のカラムにかけ、同緩衝液で洗浄後、 1 50m Mから 30 OmMの塩化ナトリウムのグラジェントにより溶出させた。溶出画分は 12mLずつ分取し、それぞれの糖含量をフユノール—硫酸法により測定した。 1 6 OmMから 1 80 mM付近の塩化ナトリウムで溶出される画分を集め、スピードバック（サバントインストルメンッ社製； SAVANT Instruments Inc. ) で 2mLに濃縮後、あらかじめ 1 0%のエタノールで平衡化した 20 OmLのセルロファィン〇〇1^ー25 (チッソ社製）のカラムにかけ、同溶液で溶出させた。溶出画分は 2 m Lずつ分取し、それぞれの糖含量をフエノールー硫酸法により測定した。糖含量がピークを形成している画分を集め、（D) とした。

上記画分（D) について電気透析装置により脱塩後、凍結乾燥し、糖組成及び分子量を分析した。また、定法により重水で置換後 NMR分析による構造解析を

ΤΓつた。

(D) の物性

分子量； 1 358

1 H-NMR (D20)

5； 5. 1 9 (1H, d, J = 4. 3Hz, F 1 - 1 -H) , 4. 93 ( 1 H, d, J=3. 7Hz, F2- 1— H) , 4. 62 ( 1 H, HODと重複， G l— 1一 H) , 4. 59 (1 H, HODと重複， G2— 1一 H) , 4. 54 ( 1 H, d-d, J= 1 0. 6, 2. 7Hz, F l - 3 - H) ， 4. 46 ( 1 H, d, J =7. 6Hz, G3 - 1一 H) , 4. 46 ( 1 H, m, F2-3-H) , 4. 4 1 (1H, b r - s, G2 - 4一 H) , 4. 4 1 ( 1 H, d, J= 7. 6Hz, G4- 1 -H) , 4. 37 ( 1 H, q, J= 6. 4Hz, F2 - 5 - H) , 4. 27 ( 1 H, m, G2-3-H) , 4. 24 ( 1 H, br - s, G3 - 4一 H) , 4. 21 (1H, m, G3 - 3 - H) , 4. 1 9 ( 1 H, m, G4-3-H) , 4. 1 5 (1H, b r - s, G4 - 4一 H) , 4. 1 3 ( 1 H, q, J= 6. 7Hz, F 1 - 5 -H) , 4. 09 ( 1 H, d, J= 2. 7Hz, F l - 4一 H ) , 4. 04 ( 1 H, d, J = 2. 8Hz, F2— 4— H) , 3. 98 ( 1 H,

3 o m, G2— 6— H) 、 3. 96 ( 1 H, d-d, J= 1 0. 6, 4. 3Hz, F 1— 2— H) , 3. 93 ( 1 H, m, G 3 - 6 -H) , 3. 88 ( 1 H， b r— s, G 1 - 4一 H) 86 ( 1 H, m, G2-5-H) ， 3. 8 1 ( 1 H, m, G2- 6-H) 8 1 ( 1 H, m, F 2 - 2— H) , 3. 80 ( 1 H, m， G 3 - 5 -H) 80 (1 H, m, G 3 - 6 -H) , 3. 66 ( 1 H, m， G 1 - 3— H) 65 (1 H, m, G2— 2— H) ， 3. 64 ( 1 H, m, G 1 - 6一 H) 64 ( 1 H, m, G 4 - 6— H) , 3. 6 1 ( 1 H, m, G4 -5-H) 58 ( 1 H, m, G 1— 2 - H) , 3. 56 ( 1 H, m, G 1— 6 - H) 56 (1H， m, G 4 - 6 -H) , 3. 55 ( 1 H, m, G 4 - 2 -H) 54 ( 1 H, m, G 1 - 5 -H) , 3. 54 ( 1 H， m， G3-2-H) 20 (3H, d, J= 6. 7, ,F 1 - 6 -H) , 1. 14 (3H, d, J= 6 4, F2- 6-H)

糖組成（モル比） L—フコース： D—ガラクトース =2 ： 4

硫酸基 5分子

なお、 ¹ H— NMRにおけるピークの帰属の番号は下記式（I X) の通りである。以下、該化合物を 6— 5 S F d— Gと称する。

実施例 4

実施例 2— （2) で調製した硫酸化多糖 1 20 gを 2 OmMの塩化カルシウム、 30 OmMの塩化ナトリウム、 1 0%のエタノール、及び 1 0 Uの実施例 2— ( 1) で調製した F—フコィダン分解酵素を含む 8リットルの 2 OmMィミダゾール緩衝液（PH7. 5) に懸濁し、 25 °Cで 3日間攪拌し、排除分子量 1 0万のホロファイバーを装着させた限外ろ過装置を用い、上記緩衝液を添加しながら限外ろ過した。

限外ろ過内液に 34 Uの実施例 3— （2) 記載の U—フコィダン分解酵素を添加して、 25でで 2日間攪拌し、排除分子量 1 0万のホロファイバーを装着させた限外ろ過を行い、水を添加しながら限外ろ過した。

ろ液を集め、エバボレーターで 1. 5リットルに濃縮後、脱塩装置により完全に脱塩し、あらかじめ 3 OmMの塩化ナトリウムを含む 5 mMのィミダゾールー塩酸緩衝液（pH 6. 5) で平衡化した 3リットルの DEAE—セル口ファイン A— 800のカラムにかけ、 6リットルの同緩衝液で洗浄後、 30mMから 50 0 mMの塩化ナトリゥ厶の濃度勾配による溶出を行った。溶出に要した液量は 4 8リツトルであった。溶出液は 1 8 OmLずつ分取し、その糖含量をフヱノール一硫酸法により測定した。また、 232 nmにおける吸光度も同時に測定した。

1 3 OmMから 1 7 OmMの塩化ナトリウム溶出画分が一つのピークを形成したので、これらの画分を集め、脱塩装置により脱塩後、凍結乾燥し、 5. 85 gのオリゴ糖を得た。このオリゴ糖は質量分析により、分子量 1 1 28でぁり1^^1¾ 分析により下記式（X) で表される化合物であることを確認した。以下、該化合物を 6— 2 SFd— Uと称す。

実施例 5

( 1 ) ガゴメ昆布 5 0 0 gを細断し、 1 0リットルの 8 0%エタノールで洗浄後、 5 0リットルの 1 mM塩化カリウムを含有する 1 0%エタノール中にて内径 4 0 cmの容器で 25でで 2日間、 1分間当り 1 20回転の速度で攪拌し、フコイダンを抽出し、抽出物を網目 32 /zmのステンレス金網でろ過し、フコィダン溶液を調製した。

該フコィダン溶液 4 6リットルに、 1 gのパームオイル（花王社製：化粧品用 ) を 1 リットルのエタノールに溶解し調製した、パームオイル溶液 1 リットルを攪拌しながら添加し、更に 1 リツトルのグリセロールを添加し、化粧水を調製した。また、同様の方法で、各実施例に記載のフコィダン及びその分解物についても化粧水を調製した。

(2) 実施例 5— （ 1 ) で調製したフコィダン溶液に、終濃度が 0. 0 2%となるようにゼラチン及び香料を添加しゼラチン使用の化粧水を得た。また同様にコラーゲンを添加しコラーゲン使用の化粧水を得た。また、同様の方法で、各実施例に記載のフコィダン及びその分解物についても化粧水を調製した。

(3) 実施例 5— ( 1 ) で調製したフコィダンに香料を添加し、毛髮剤を調製した。また同様に、各実施例に記載のフコィダン及びその分解物についても毛髪剤を調製した。実施例 6

市販のワカメメカブの乾燥物 1 k gを穴の径が 1 mmのスクリーンを装着させたカッターミルにより破砕後、 1 0リツトルの 8 0 %エタノール中に懸濁し、 3時間攪拌後、ろ紙によりろ過し、残渣を得た。残渣を 5 OmMの塩化ナトリウムを含む 4 OmMのリン酸緩衝液（pH 6. 5) 20リットルに懸濁し 95でで 2時間処理した。処理液を 37てまで冷却後、 1 0%となるようにエタノールを添加し、市販のアルギン酸リア一ゼ K (ナガセ一生化学工業社製）を 1 20 0 0 U添加後、室温で 24時間攪拌した。得られた処理液を遠心分離し、その上清を排除分子量 1 0万のホロファイバ一を装着させた限外ろ過機により 2リットルに濃縮後、生じた沈殿を遠心分離により除去した。得られた上清を 5でに冷却後 0 . 5 Nの塩酸を添加して pHを 2. 0とした後 30分間攪拌し、生じた沈殿を遠心分離により除去した。上清の pHを 0. 5Nの水酸化ナトリウムにより 8. 0 とし、限外ろ過により溶液を 2 OmMの塩化ナトリウムに置換した。溶液の pH を 8. 0に調整後、遠心分離して得られた上清を凍結乾燥し、 90. 5 gの非曳糸性のワカメメカブ由来フコィダンを得た。実施例 7

粉砕したヒバマ夕（Fucus vesiculosus ) の乾燥物 1 kgを、 1 0リツトルの 80%エタノール中に懸濁し、 3時間攪拌後、ろ紙によりろ過し、残渣を得た。残渣を 1 0 OmMの塩化ナトリウムを含む 3 OmMのリン酸緩衝液（pH 6. 0 ) 30リツトルに懸濁し 9 5°Cで 2時間処理した。処理液を 3 7°Cまで冷却後、 1 0 O gの活性炭を添加し 30分間攪拌した。市販の'アルギン酸リアーゼ Kを 3 000U添加後、 1 0%となるようにエタノールを添加し室温で 24時間攪拌した。得られた処理液を遠心分離し、その上清を排除分子量 1 0万のホロファイバ一を装着させた限外ろ過機により 2リットルに濃縮後、生じた沈殿を遠心分離により除去した。この上清に抽出液を加えながら限外ろ過し、色素を除去した。得られた非ろ過液を 5てに冷却後 0. 5 Nの塩酸を添加して pHを 2. 0とした後 30分間攪拌し、生じた沈殿を遠心分離により除去した。上清の pHを 0. 5N の水酸化ナトリウムにより 8. 0とし、限外ろ過により溶液を 2 OmMの塩化ナトリウムに置換した。溶液の pHを 8. 0に調整後、遠心分離して得られた上清を凍結乾燥し、 7 1 gの非曳糸性のヒバマ夕由来フコィダンを得た。

上記方法に準じ、ァスコフィラムノドッサム（Ascophyllum nodosum ) の乾燥粉末（商品名アルギンゴールド：アンデス貿易株式会社販売）から非曳糸性のァスコフィラムノドッサム由来フコィダンを調製した。実施例 8

実施例 1一（1 ) 記載の方法で調製したガゴメ昆布'由来フコィダン 2 gを 1 0 0 m Lの水に溶解し、その pHをクェン酸にて p H 3に調整後、 1 00 °Cで 3時間処理し、当該フコィダンの酸分解物を調製した。この加水分解物をセルロファイン GCL— 300、又はセル口ファイン GCL— 25によるゲルろ過で分子量分画し、セル口ファイン GCL— 300を用い分子量 2500 0超（A画分）、 25000〜 1 0 000超（B画分）、 1 00 0 0〜 5 00 0超（C画分）、セルロファイン GCL— 25を用い 50 00〜 20 0 0超（D画分）、 200 0〜 500超（E画分）、 500以下（F画分）に分画した。更にこれらの画分及び酸分解物をそれぞれ脱塩後凍結乾燥を行い、酸分解物及び酸分解物の各分画物を調製した。実施例 9

市販の塩蔵モズク 5 kgをはさみで細断し、 20リツトルのエタノールと混合した。 1晚放置後ろ紙でろ過し、得られた残渣を 1 2. 5リットルの水に懸濁し、 9 5 °Cで 2時間処理した。処理液をろ紙によりろ過、 3 5 OmMの塩化ナトリゥムを含む 2. 5%の塩化セチルピリジニゥム溶液を 2 6 0 OmL添加し 3日間放置した。上清部分を廃棄し、沈殿部分を遠心分離して、その上清も廃棄した。得られた沈殿に 2. 5リットルの 3 5 0 mMの塩化ナトリウ厶を添加後、ホモジナイザーで均一にし遠心分離した。この洗浄操作を 3回繰り返した。得られた沈殿に 4 O OmLの 4 0 0 mM 塩化ナトリウムを添加後、ホモジナイザーで均一にし、 8 0%となるようにエタノールを添加して 3 0分間攪拌後ろ紙でろ過した。得られた残渣に 5 0 OmLの塩化ナトリウム飽和 8 0%エタノールを添加後、ホモジナイザーで均一にし、 1 リットルとなるように塩化ナトリウム飽和エタノールを添加して 3 0分間攪拌後ろ紙でろ過した。この洗浄操作をろ液の 2 6 0 nmの吸光度がゼロになるまで繰り返した（通常 5回）。得られた残渣を 1. 5 リットルの 2Mの塩化ナトリウムに溶解後、不溶物を遠心分離により除去し、あらかじめ 2 Mの塩化ナトリウムにより平衡化した 1 0 0111しの0£八£ーセルロファイン A— 8 0 0のカラムを素通りさせた。素通り画分を排除分子量 1 0万のホロファイバ一を装着させた限外ろ過機により 2リットルに濃縮後、限外ろ過により溶液を 2 mMの塩化ナトリウムに置換した。この溶液を遠心分離して得られた上清を凍結乾燥し、 22. 9 gのモズク由来フコィダンを得た。実施例 1 0

( 1 ) 乾燥したマクサ 5 0 gをはさみで細断し、 5 0 OmLの 8 0%ェタノ一ル中に懸濁後 2 5 °Cで 3時間攪拌し、ろ紙でろ過した。得られた残渣を 1 リットルの 1 0 OmMの塩化ナトリゥムを含む 3 OmMのリン酸ナトリゥム緩衝液（p H 6. 5) に懸濁し、 9 5'Cで 2時間処理後、穴径 1 0 6〃mのステンレス製ふるいでろ過した。得られたろ液に上記のリン酸ナトリウム緩衝液を加え、 3リツトルとし、 5 gの活性炭を添加し、 2 5でで 1晚攪拌後、遠心分離した。得られた上清を排除分子量 1 0万のホロファイバーを装着させた限外ろ過機で 2 0 Om Lに濃縮後、限外ろ過機により溶液交換して 1 OmM塩化ナトリウム溶液とした。溶液中の不溶物を遠心分離により除去後、凍結乾燥し、マクサ由来硫酸化多糖画分の乾燥物を 2. 3 g得た。

(2) 実施例 1 0— （ 1) 記載の方法により乾燥ォゴノリ 50 gよりォゴノリ由来硫酸化多糖 4. 4 gを調製した。また、同様に乾燥おばくさ（Pterocladiel la capillacea)より、おばくさ由来硫酸化多糖 1. 0 gを調製した。

(3) —① 市販の乾燥レツソニァニグレセンスの粉末 1 kgを 1 0リットルの 80%エタノール中に懸濁後 25°Cで 3時間攪拌し、ろ紙でろ過した。得られた残渣を 20リットルの 1 0 OmMの塩化ナトリゥムを含む 3 OmMのリン酸ナトリウム緩衝液（PH6. 5) に懸濁し、 95'Cで 2時間処理後、穴径 1 0 6 /mのステンレス製ふるいでろ過した。得られたろ液に 1 0 O gの活性炭、 2.

4リットルのエタノール、 6, 000 Uのアルギン酸.リア一ゼ Kを添加し、 25 でで 22時間攪拌後、遠心分離した。得られた上清を排除分子量 1 0万のホロフアイバーを装着させた限外ろ過機で 1. 2リットルに濃縮後、遠心分離により不溶物を除去し、 5でで 24時間放置した。生じた沈殿を遠心分離により除去し、得られた上清を限外ろ過機により溶液交換して 1 0 OmM塩化ナトリウム溶液とした。この溶液を 4 °C以下に冷却後、塩酸により pHを 2. 0とし、生じた沈殿を遠心分離により除去した。得られた上清の p Hを水酸化ナトリウムにより 8. 0とし、 2リットルに濃縮後、限外ろ過機により 2 OmMの塩化ナトリウムに溶液交換した。この溶液中の不溶物を遠心分離により除去後、凍結乾燥し、非曳糸性のレツソニァ由来フコィダン画分の乾燥物を 4 1 gを得た。

(3) -② 上記の凍結乾燥物 6 gを 1 0 OmMの塩化ナトリウムを含む 6 0 OmLの 2 OmMイミダブールー塩酸緩衝液（pH6) に溶解し、あらかじめ同緩衝液で平衡化した 5リットルの DEAE—セル口ファイン A_ 8 00にかけ、 1 0リツトルの同緩衝液で洗浄後、 1 00〜 1 6 0 OmMの塩化ナトリウムの濃度勾配による溶出を行った。溶出に使用した液量は 1 3リットルで、分取は 1本あたり 5 0 OmLで行った。溶出画分のうち 25 OmM、 53 OmM、及び 70 OmM付近の塩化ナトリウム溶出画分をそれぞれ 5 0 OmLずつ純水で透析し、凍結乾燥して凍結乾燥物をそれぞれ DEAE 33画分、 DEAE 37画分、 DE AE 4 0画分と命名し、それぞれ 57mg、 24mg、及び 6 2mgを得た。実施例 1 1

マナマコを 5 kg解体し、内臓を除去し、体壁を集めた。体壁湿重量 20 O g 当り 50 OmLのアセトンを加え、ホモジナイザーで処理後ろ過し、残渣をこれ以上着色物質がでなくなるまでアセトンで洗浄した。この残渣を吸引乾燥し、 1 4 0 gの乾燥物を得た。この乾燥物に 0. 4 Mの食塩水 2. 8リットルを加え、 1 00°Cで 1時間処理後、ろ過し、残渣を 0. 4 Mの食塩水で充分洗浄し、抽出液 3. 7リットルを得た。この抽出液に 5%のセチルピリジニゥムクロリドをこれ以上沈殿が生じなくなるまで加え、生じた沈殿を遠心分離で集めた。この沈殿を 0. 4 Mの食塩水に懸濁後再度遠心分離し、得られた沈殿に 1 リットルの 4M 食塩水を添加し、ホモジナイザーで処理後、攪拌しながら 4リットルのェタノ一ルを添加し、 1時間攪拌後、ろ過し、沈殿を得た。この沈殿に対して、 8 0%ェ夕ノールに懸濁後ろ過という工程を上清の 26 0 nmの吸光度がほぼ 0になるまで繰り返した。得られた沈殿を 2リットルの 2 M食塩水に懸濁し、不溶物を遠心分離により除去した。上清を排除分子量 3万の膜を備えた限外ろ過装置により限外ろ過し、完全に脱塩後、凍結乾燥し 3. 7 gのナマコ由来フコィダンを得た。実施例 1 2

( 1 ) 市販の塩蔵ォキナヮモズク 625 gを 4 375mLの 30mMリン酸ナトリゥム緩衝液（pH 6. 0) に懸濁し、ホモジナイザーにより 80 0 0回転 Z 分、 5分処理後、 95で、 1時間処理し、遠心分離により上清を得た。得られた上清に 1 0 gの活性炭を添加後 30分間攪拌し、遠心分離により上清を得た。得られた上清を排除分子量 1 0万のホロファイバーを装着させた限外ろ過機により 2リットルに濃縮後、 2 OmMの塩化ナトリゥムで溶液置換し、凍結乾燥して 1 0. 9 gの非曳糸性のォキナヮモズク由来のフコィダンの乾燥物を得た。

(2) 当該フコィダンにフコフィラスフコイダノリティカス（Fucophilus f ucoidanolyticus)S 1 - 1 234 (F ERM P— 1 75 1 7) の生産するフコィダン分解酵素を作用させ、得られた酵素分解物の NMR、 MASS等による機器分析の結果、当該フコィダンは前記一般式（IV) の構造を繰返し単位とするフコィダンであることが判明した。また当該フコイダンはフコースとグルクロン酸を 35 ： 1 0〜44 ： 1 0のモル比で含有するフコィダンで、その平均分子量は約 1 00万であった。実施例 1 3

(1)雄性 C 3HZHeマウスを日本 SLC社から購入し、予備飼育の後 5週齢より実験に用いた。実施例 1— (1) で調製したガゴメ昆布由来フコィダンをエタノールで 3%濃度に懸濁溶解し、マウスの背部に 1匹あたり 200 Lづっ塗布した。対照群にはエタノールを同様に塗布した。投与は 1日 1回とし、連日 8日間行った。投与開始 9日目に背部の毛を一部脱毛し、顕微鏡下でカリパーを用いて毛の長さを測定した。また、脱血致死後皮膚を剝離し、裏側皮膚色を画像解析ソフト（NIH Image) により解析処理した。

結果を表 1に示す。なお、表中、毛の長さについては 5例の平均値土標準誤差で示し、皮膚色については対照群の色合いを 1 00とした時の色調の黒さの 5例の平均値で示す。

対照群では明らかに休止期に移行している状態が観察され、皮膚色は白色に移行していた。一方、フコィダン投与群では成長期を維持しており、皮膚色は対照群より灰色がかつていた。毛の長さはフコィダン投与群では対照群より長かつた。すなわち、フコィダン投与群では育毛効果が確認された。表 1 毛の長さ（mm) 皮膚色ガゴメ昆布由来 6. 8 6 ± 0. 20 1 25

フコィダン投与群（N= 5)

対照群（N= 5) 6. 38 ± 0. 1 9 1 00 平均値土標準誤差

C SHZHeマウスは、育毛効果の評価に繁用される。 5週齢時の毛髪は成長期に相当し、毛および毛包が盛んに成長する時期である。かかる時期では、毛包細胞における色素や酵素の分泌が盛んであるため、皮膚色はかなり黒っぽく見える。しかし、毛髪の状態が成長期から休止期に移行し始めると毛は成長を止め、毛包も小さくなり分泌機能も衰える。そのため、皮膚色は次第に薄くなり、ピンクから白っぽく見えるようになる。毛髪のサイクルはもともと生理的なものであるが、成長期を維持することができれば、成長している毛髪の割合が増加することになり、育毛剤として有用である（The Journal of Dermatology 10： 45-54, 1983.) 。

また、各実施例に記載のフコィダン及びその分解物について同様の試験を行つたところ、同様な育毛効果が確認できた。

(2) 雄性 C 3HZHeマウスを日本 SLC社から購入し、予備飼育の後 8週齢より実験に用いた。マウスの背部をバリカンで毛刈りした。

実施例 1— ( 1) で調製したガゴメ昆布由来フコィダンをエタノールで 3%濃度に懸濁溶解し、マウスの背部に 1匹あたり 200 / Lづっ、上記の毛刈り部位に塗布した。対照群にはエタノールを同様に塗布した。投与は 1 日 1回とし、連日行った。投与開始から経時的に投与部位を観察し、皮膚色調の変化をスコア化して判定した。すなわちスコア化の基準は、スコア 0 ；皮膚色の変化無し、スコア 1 ；皮膚色が青色に変化、スコア 2 ；皮膚色が青黒〜灰色に変化、スコア 3 ；発毛が見られる、スコア 4 ；ほぼ毛刈り前の状態に復帰、とした。

各群のスコアの平均値を求め、その結果を表 2に示す。

表 2に示すように対照群に対して、ガゴメ昆布由来フコィダン投与群は早期より、皮膚色の変化が観察され、育毛が促進され、最終的には発毛に至った。すなわち、育毛効果が確認できた。また各実施例に記載のフコィダン及びその分解物について同様の試験を行ったところ、同様な育毛効果が確認できた。

表 2 投与期間（週） 8 9 1 0

スコア平均値ガゴメ昆布由来 0 0.3 1.7 2.0 2.3 3.0

フコィダン投与群（N = 3)

対照群（N= 3) 1.0 1.0 2.0

(3) 雄性 C 3HZHeマウスを日本 SLC社から購入し、予備飼育の後 8週齢より実験に用いた。マウスの背部をバリカンによる毛刈り後、更に剃刀により毛剃りした。

実施例 1一（1 ) で調製したガゴメ昆布由来フコィダン、又は実施例 2— (3 ) で調製した 7— 1 23 （1ー？を用ぃ、実施例 1 3— （2) と同様の方法でそれらの育毛効果について試験した。

各群のスコアの平均値を求め、その結果を表 3に示す。

表 3に示すように対照群に対して、ガゴメ昆布由来フコィダン投与群、 7— 1

4 1 2 SFd— F投与群で各々、皮霜色の変化が早期に観察され、育毛が促進され、最終的には発毛に至った。なお、ガゴメ昆布由来フコィダン投与群、 7— 1 2 S Fd— F投与群を比較すると、 7— 1 2 SF d— F投与群が、やや早い時期から皮膚色の変化が見られはじめた。また各実施例に記載のフコィダン及びその分解物について同様の試験を行ったところ、同様な育毛効果が確認できた。

表 3 投与期間（曰） 8 9 1 0 1 1 1 2

スコア平均値

7- 1 2 S 0 0. 4 0. 5 1. 1 1. 8

Fd— F投与群（N= 8)

ガゴメ昆布由来 0 0 0. 4 0. 7 1. 3 フコィダン投与群（N= 7)

対照群（N=8) 0 0 0 0. 5 0. 6

(4) 雄性 C 3HZHeマウスを日本 SLC社から購入し、予備飼育の後 5週齢より実験に用いた。実施例 2— (3) で調製した 7— 1 2 SFd— Fをェタノールで 3%濃度に懸濁溶解し、マウスの背部に 1匹あたり 20 0 zLづっ塗布した。対照群にはエタノールを同様に塗布した。投与は 1日 1回とし、連日 8日間行った。投与開始 9日目に脱血致死後皮膚を剝離し、裏側皮膚色を画像解析ソフトにより解析処理した。

結果を表 4に示す。表中の数字は、 5例の平均値土標準誤差を表す。表中の * 印は、対照群に対して、 5%以下の危険率で有意な差を有することを意味する。皮膚色調は白色を 0、黒色を 1 00とした時の色調の程度を表す。対照群では明らかに休止期に移行している状態が観測され、皮盧色は白色に移行していた。一方、 7— 1 2 SF d - F投与群では成長期を維持しており、皮膚色は対照群より灰色がかっていた。以上より、 7— 1 2 SFd - Fは後期成長期維持作用、すなわち、実施例 1 3— （ 1 ) と同様に育毛作用を示すことが分かつた。また各実施例に記載のフコイダン及びその分解物について同様の試験を行つたところ、同様な育毛効果が確認できた。表 4 皮膚色調

7 - 1 2 SFd_F投与群（N= 5) 24. 8 ± 0. 6 1 *

対照群（N=5) 20. 9 ± 1. 1 9 平均値土標準誤差 * ； P < 0. 0 5

(5) 雄性 C 3HZHeマウスを日本 SLC社から購入し、予備飼育の後 8週齢より実験に用いた。マウスの背部をバリカンによる毛刈り後、更に力ミソリにより毛剃りした。実施例 2— (3) で調製した 7— 1 2 SFd— Fをエタノールで 3%濃度に懸濁溶解し、マウスの背部に 1匹あたり 200 iLづっ、上記の毛剃り部位に塗布した。対照群にはエタノールを同様に塗布した。投与は 1日 1回とし、連日行った。投与開始日（毛剃りの翌日）から 2 1日目に発毛した面積を測定し、毛剃りした面積に対する割合（％) で表した

結果を表 5に示す。表中の数字は、 7〜 8例の平均値土標準誤差を表す。対照群に比し、 7— 1 2 S F d— F投与群では明らかに休止期から成長期への移行が促進されており、発毛に至った割合が多かった。また各実施例に記載のフコィダン及びその分解物について同様の試験を行ったところ、同様な育毛効果が確認できた。表 5 発毛割合（％)

(発毛面積毛剃面積）

7— 1 2SFd— F投与群（N=7) 31. 8 ± 1 2. 8

対照群（N=8) 1 2. 0土 4. 1 7 平均値土標準誤差

(6) 実施例 1 3— （5) と同様の方法で実施例 1一（1) で調製したガゴメ昆布由来フコィダン、後述の実施例 1 6— （2) で調製した F— r i chフコィダンを用いてその育毛効果を確認した。結果を表 6に示す。対照群に比し、フコィダン投与群、 F— r i c hフコィダン投与群では発毛に至った割合が高かった

表 6 発毛割合（％)

(発毛面積 Z毛剃面積）フコィダン投与群（N=6) 44. 4 ± 1 0. 6

F— r i c hフコィダン（N= 6) 45. 6土 9. 6

対照群（N-6) 26. 7土 7. 5 平均値土標準誤差

(7)雄性 C 3HZHeマウスを日本 SLC社から購入し、予備飼育の後 8週齢より実験に用いた。マウスの背部をバリカンによる毛刈り後、更に力ミソリにより毛剃りした。実施例 2— (3) で調製した 7— 1 2 SF d— Fをエタノールで 3%濃度に懸濁溶解し、マウスの背部に 1 匹あたり 2 0 0 /Lづっ、上記の毛剃り部位に塗布した。対照群にはエタノールを同様に塗布した。投与は 1日 1回とし、連日行った。投与開始日（毛剃りの翌日）から 2 1日目に脱血致死後背部皮膚を剝離し、ホモジナイズにより抽出液を作製した。背部皮膚抽出液中のグルコース一 6—リン酸脱水素酵素活性 (G-6-PDH活性）をロッシュ ·ダイァグノステイツクス株式会社製のテストキットで、また、アルカリホスファタ一ゼ活性 (ALP 活性）を和光純薬工業株式会社製のテストキットで測定した。なお、 G-6- PDH および ALP は育毛効果の見られた組織においてその酵素活性の上昇することが知られている。

それらの結果を表 7に示す。表中の数字は、 7〜 8例の平均値土標準誤差を表す。対照群に比し、 7— 1 2 S F d— F投与群では明らかに皮膚組織中の酵素活性が上昇しており、休止期から成長期への移行が促進されていることが示された。すなわち、育毛効果が確認された。また各実施例に記載のフコィダン及びその分解物について同様の試験を行ったところ、同様な育毛効果が確認できた。

G - 6-PDH活性（IU/g組織） ALP活性（IU/g組織）卜 12SFd-F投与群 (N= 7) 1. 22± 0. 2 6 0. 3 5 ± 0. 0 8 対照群（N= 8) 0. 8 4 ± 0. 1 8 0. 22 ± 0. 0 6 平均値土標準誤差

(8) 実施例 5— ( 1 ) 記載の本発明のガゴメ昆布由来フコィダン含有化粧水と、フコィダンを含有しない対照の化粧水とを比較して、 2 0〜3 5才の成人女性 25人に対しブラインドで官能検査を行った。その結果、より有効と判定した人数を表 8に示す _c 表 8 肌のしっとりさ肌のなめらかさ肌のはり本発明の化粧水 2 1 1 9 1 6

対照の化粧水 5 6 9

以上の結果、フコィダン配合の本発明の化粧水は肌のしっとりさ、なめらかさ、はりのいずれの事項についても優れた検査結果を示し、皮慮美容作用のある化粧水であることが示された。

また、その他のフコィダン及びその分解物を含有する化粧水について、それぞれ同様の試験を行ったところ、同様な皮膚美容効果が確認できた。

(9) 実施例 1一（ 1) 記載のガゴメ昆布由来フコィダンを 20 Omg含有する 5 OmL容の清涼飲料（麦芽糖溶液 3%、梅粉末 0. 05%、 1Z5レモン透明果汁 0. 2%、無水クェン酸 0. 02%) を作製し、この飲料の皮膚美容効果を検討した。当該飲料を毎日 1本 3力月飲用したところ、皮膚のかゆみ、目のかゆみが抑制され、しみの減少が確認された。また毛髪の増毛、白髪の進行抑制も認められた。更に乾燥肌も改善された。

またその他のフコィダン及びその分解物を含有する飲料についても、それぞれ同様の試験を行ったところ同様の皮膚美容効果、育毛効果が確認された。

( 1 0) 実施例 1一（ 1) 記載のガゴメ昆布由来フコィダンを用い、以下の成分の乳液を調製した。なお、「部」は重量部を表わす _b 流動パラフィン 23. 0部ミリスチン酸イソプロピル 5. 0部ワセリン 6. 0部ミツロウ 5. 0部ステアリン酸 2. 0部ベへニルアルコール 1. 0部モノステアリン酸ソルビタン 3. 0部ポリオキシエチレン（20) モノステアリン酸ソルビタン 3. 0部

1, 3—ブチレングリコール 3. 0部パラベン 0. 3部フコィダン 1. 0部香料適量精製水残余敏感肌の人 6名に上記乳液を朝晩 2回、連日 3力月使用させたが、炎症等の好ましくない現象は全く現れず、肌状態も全員改善した。実施例 1 4

( 1 ) D— （ + ) —グルコース 20 Omg ( 1. 1 mmo 1 ) をピリジン 1 0 mLに溶解し、室温にて Pyridine Sulfur Trioxide Complex (Pyr · S0₃ ：東京化成製） 1. 05 g (6. 6mmo 1 ) を添加した後、室温にて数分間、さらに 6 0でで 1時間攪拌した。反応液を水で希釈し、飽和水酸化バリウム水溶液で p Hを中性付近に調整してから減圧乾固した。得られた濃縮物に再度水を添加し再び減圧乾固した。この操作をもう一度繰り返した。得られた濃縮物に少量の水を添加し遠心で硫酸化バリゥムの沈殿を除去し、得られた上清を陽ィォン交換力ラム〔アンバーライト IRA-120(Na+ ) (オルガノ）〕に供じた。最終的に、得られたカラム素通り画分を減圧濃縮し硫酸化（_S0₃ - Na⁺ ) D- ( + ) —グルコース 70 Omgを得た。又、同様にして硫酸化フコース、硫酸化マンノース、硫酸化ガラクト一ス、硫酸化キシロース、硫酸化 2—デォキシ—グルコース、硫酸化夕ロースを調製した。

(2) 実施例 1 3— (3) と同様の方法で実施例 1 4一（ 1 ) で調製した硫酸化グルコースの育毛効果について検討した。ただし、 ^酸化グルコースは、 50 %エタノールに 3 %になるように溶解し、マウスの背部に 1日 1回 20 0 Lづつ塗布した。対照群には 50%エタノールのみを塗布した。その結果、表 9に示すように対照群に対して、硫酸化グルコース投与群では、皮膚色の変化が早期に観測され、育毛が促進されて、最終的には発毛に至った。また、硫酸化フコース、硫酸化マンノース、硫酸化ガラクト一ス、硫酸化キシロース、硫酸化 2—デォキシーグルコース、硫酸化タロースについて同様の試験を行い、同様な育毛効果を確認した。

表 9 投与期間（曰） 1 1 1 2 1 3 1 4 1 5

スコア平均値硫酸化グルコース 0. 6 0. 6 1. 0 1. 6 1. 8 投与群（N= 5)

対照群（N= 5) 0. 2 0. 4 0. 6 0. 8 1. 0

実施例 1 5

( 1 ) 生後 2日齢の雄性 C 3 HZH eマウスを母獣と一緒に日本 S L C社から購入し、 5日齢で実験に用いた。マウスを脱血致死させ、ハサミとピンセットを用いてヒゲを、皮下組織ごと採取した。さらに、 Ogawa らの方法（J. Invest. D ermatol 103: 306-309, 1994) に従い、顕微鏡下、シャーレの中でヒゲを毛包ごと分離した。一匹の左右より 1 4〜1 6本のヒゲを採取した。

実施例 1一（ 1 ) 記載のガゴメ昆布由来フコィダンおよび実施例 2— （3) 記載の 7— 1 2 SF d— Fは、 RPM I - 1 64 0培地に溶解し、所定濃度の 20 倍濃度液を調製し、培養系には 20分の 1量を加えた。対照群には同量の培地を加えた。なお、各添加サンプルの所定濃度は表 1 0に、培地 I mL当たりの濃度 (mg/mL) として、それぞれ示す。ヒゲの培養は、組織培養用ディッシュ Fa Icon 3037 (Becton Dickinson Labware社製）を用い、中央のゥエルに 0. 7 mLの 20% 〇3添加1¾?1^ 1 - 1 640培地を入れ、その上に滅菌したステンレスメッシュ（池田理化株式会社製）とレンズペーパー（ティーシーケース株式会社製）を敷いた。ヒゲはその上に載せて培養した。ガゴメ昆布由来フコイダンおよび 7— 1 2 SFd— Fは、予め培地の中に添加した。培養は 35 °C、 5% C0₂ 存在下で 6日間行った。ヒゲの長さは、培養開始前と終了後に、顕微鏡下でカリパーを用いて 0 l mmの位まで測定した。各サンプル濃度の一群について 3〜 5本のヒゲを用いて測定し、伸長した長さを平均値土標準誤差で表示した。また、有意差検定はステューデントの t検定を行い、対照群に対して P値を求めた。その結果を表 1 0に示す。

表 1 0 添加サンプル濃度検体数ヒゲの伸長 (隱） P値

^mg/mL) (平均値土標準誤差）

7 - 1 2 S 0. 0 1 3 1. 3 3 ± 0. 8 8 0. 5 8 F d-F

0. 1 3 1. 6 7 ± 0. 8 8 0. 3 8 1 4 2. 7 5 ± 0. 6 3 0. 0 4

ガゴメ昆布由来 0. 1 4 1. 2 5 ± 0. 9 5 0. 6 7 フコィダン

4 2. 5 0 ± 0. 5 0 0. 0 5

対照 0. 8 0 ± 0. 4 9

その結果、ガゴメ昆布由来フコィダンおよび 7— 1 2 SFd— Fは、対照に比ベて濃度依存的にマウスのヒゲを伸長させた。すなわち、ガゴメ昆布由来フコィダンおよび 7— 1 2 SF d— Fに育毛効果があることが確認できた。また各実施例に記載のフコィダン及びその分解物について同様の試験を行ったところ、同様な育毛効果が確認できた。

(2) 生後 2日齢の雄性 C 3 HZHeマウスを母獣と一緒に日本 SLC社から購入し、 9日齢で実験に用い実施例 1 5 - （ 1 ) と同様の方法で、実施例 1一（ 1 ) 記載のガゴメ昆布由来フコィダン及び実施例 2— (3) 記載の 7— 1 2 SF d— Fの育毛効果について調べた。その結果を表 1 1に示す。表 1 1 添加サンプル濃度検体数ヒゲの伸長 (mm) P値

^mg/mL) (平均値土標準誤差）

7— 1 2 S 0. 0 0 1 5 0. 34 ± 0. 1 0 0. 1 2

F d-F

0. 0 1 5 0. 6 6 ± 0. 1 6 0. 0 2

0. 1 5 0. 5 1 ± 0. 1 0 0. 0 1

ガゴメ昆布由来 0 1 5 0. 6 2± 0. 1 7 0. 0 3

フコィダン

1 5 0. 8 0 ± 0. 1 7 0. 0 1

対照 0. 1 0 ± 0. 1 0

その結果、 9日齢のマウスのヒゲを用いた場合にも;》ガゴメ昆布由来フコイダンおよび 7— 1 2 SF d— Fは、対照に比べて有意にマウスのヒゲを伸長させた。すなわち、ガゴメ昆布由来フコィダンおよび 7— 1 2 SF d— Fに育毛効果があることが確認できた。また各実施例に記載のフコイダン及びその分解物について同様の試験を行ったところ、同様な育毛効果が確認できた。

実施例 1 6

( 1 ) 実施例 1— ( 1 ) 記載のガゴメ昆布由来フコィダン 3 0 gを蒸留水 1 2 リットルに室温で 3 0分間攪拌溶解した。この懸濁液を 1 O O O O Xgで 4 0分間遠心分離し、その上清を集めた。これをメンブレンフィル夕一（0. 22〃m ) (ミリポア社製）で無菌ろ過し、凍結乾燥品 2 1. 4 gを得た。これを TaK aRaコンブフコィダン B f (以下、フコィダン B f と称す）とした。

(2) 乾燥ガゴメ昆布 5 0 0 gを細断し、 1 0 Lの 8 0%エタノールで洗浄後、 5 0リットルの 1 mM塩化カリウムを含有する 1 0 %エタノール中にて、 25 °Cで 3日間攪拌し、網目の直径 32〃mのステンレス金網でろ過してろ液約 45 リットルを得た。このろ液 34リットルを 80°Cで 3時間加熱した後、 5 0°Cまで冷却した。これを分子量 1万カットの限外ろ過 OMEGAカセット（フイノレトロン社製）で液温 50°Cに保ちながら濃縮した。さらに 50でに加温した蒸留水 5リットルで脱塩を行い、同蒸留水 20 OmLを加えて流路を 2回洗浄して回収し濃縮液 1. 5リットルを得た。これを凍結乾燥し、 8. 2 gの F— r i c hフコィダンを得た。

(3) 生後 2日齢の雄性 C 3HZHeマウスを母獣と一緒に日本 SLC社から購入し、 1 4日齢で実験に用い実施例 1 5— （ 1) と同様の方法で、実施例 1 6 一（ 1) 記載のフコィダン B f及び実施例 1 6— (2) 記載の F— r i c hフコィダンの育毛効果について調べた。ヒゲの長さは、培養開始前と終了後に、顕微鏡下でカリパーを用いて 0. 1 mmの位まで測定し、伸長した長さを平均値土標準誤差で表示した。また、有意差検定はステューデントの t検定を行い、対照群に対して P値を求めた。その結果を表 1 2に示す。

表 1 2 添加サンプル濃度検体数ヒゲの伸長 (ram) P値

(mg/mL) (平均値土標準誤差）フコィダン B 0. 0 1 6 0. 62±0. 1 8 0. 0 3

0. 1 6 0. 82± 0. 1 8 0. 0 1

F-richフコィダン 0. 0 1 6 0. 68± 0. 22 0. 03

0. 1 6 0. 6 5± 0. 1 2 0. 0 1

対照 0. 1 0 ± 0. 1 0

その結果、フコィダン B f および F— r i c hフコィダンは、対照に比べて有意にマウスのヒゲを伸長させた。すなわち、育毛効果があることが確認できた。また、各実施例に記載のフコィダン及びその分解物について同様の試験を行ったところ、同様な育毛効果が確認できた。

実施例 1 7

生後 2日齢の雄性 C 3 HZHeマウスを母獣と一緒に日本 SLC社から購入し、 5日齢で実験に用い実施例 1 5 - （ 1 ) と同様の方法で、実施例 1 6— (2) 記載の F— r i c hフコィダン、実施例 6記載のワカメメカブ由来フコィダン、実施例 7記載のヒバマ夕由来フコィダン、実施例 9記載のモズク由来フコイダン及び実施例 1 2記載のォキナヮモズク由来フコィダンの育毛効果について調べた。その結果を表 1 3に示す。表 1 3 添加サンプル濃度検体数ヒゲの伸長 (隱） P値

(mg/mL) (平均値土標準誤差）

F-rich フコィダン 0. 0 1 5 1. 72± 0. 4 2 0. 0 2

ワカメメカブ 0. 0 1 5 0. 6 2± 0. 3 0 0. 5 4

由来フコィダン

ヒバマタ 0. 0 1 5 1. 4 0 ± 0. 3 8 0. 0 4

由来フコィダン

モズク 0. 0 1 5 0. 74 ± 0. 24 0. 3 1

由来フコィダン

才キナヮモズク 0. 0 1 5 0. 9 0 ± 0. 2 5 0. 1 7

由来フコィダン

対照 0 0. 3 8 ± 0. 2 3

その結果、これらのフコィダンは対照に比べて有意にマウスのヒゲを伸長させた。また、 F— r i c hフコィダンおよびヒバマ夕由来フコィダンは、特に良くマウスのヒゲを伸長させた。すなわち、フコィダンの種類によってマウスのヒゲを伸長させる作用には強弱があり、ガゴメ昆布由来の F— r i chフコィダンおよびヒバマ夕由来フコィダンには他に比べて強い育毛効果があることが確認できた。また、各実施例に記載のフコィダン及びその分解物について同様の試験を行つたところ、育毛効果が確認できた。

実施例 1 8

生後 2日齢の雄性 C 3HZHeマウスを母獣と一緒に日本 SLC社から購入し、 6日齢で実験に用い実施例 1 5 - （ 1 ) と同様の方法で、実施例 1 4一（ 1 ) 記載の硫酸化グルコースの育毛効果について調べた。その結果を表 1 4に示す。表 1 4 添加サンプル濃度検体数ヒゲの伸長 (mm) P値

(mg/mL) (平均値土標準誤差）硫酸化グルコ-ス 0. 1 9 0. 39±0. 1 1 0. 8 90

1 8 1. 3 1 ± 0. 3 1 0. 0 04

対照 0 1 8 0. 42± 0. 1 3 —

その結果、硫酸化グルコース lmgZmLは、対照に比べて有意にマウスのヒゲを伸長させた。すなわち、この実験系においても硫酸化グルコースに育毛効果があることが確認できた。また、実施例 1 4に記載の各硫酸化単糖についても同様の効果があることが確認できた。

実施例 1 9

雄性 C 3HZHeマウスを日本 SLC社から購入し、予備飼育の後 8週齢より実験に用いた。マウス背部をバリカンによる毛刈りの後、更に力ミソリにより毛剃りした。実施例 1 6— （ 1 ) 記載のフコィダン B f のみ、又はフコィダン B f 及び市販育毛剤の有効成分である塩化力ルプロニゥム若しくはミノキシジルが 3 0 エタノール溶液中、表 1 5に記載の濃度となるように溶解して各エタノール溶液を調製した。マウスの背部に 1匹あたり 20 0 /Lづっ、上記の毛剃り部位に該エタノール溶液を塗布した。対照群には 30%エタノールを同様に塗布した。投与は 1日 1回とし、連日行った。投与開始日（毛剃りの翌日）から経時的に投与部位を観察し、毛剃り後 2 1日目に発毛した面積を測定し、毛剃り面積に対する割合（％) で表した。各群 6匹の平均値土標準誤羑を表 1 5に示した。

市販育毛剤である育毛剤 Aの有効成分である塩化カルプロニゥムの塗布投与による育毛効果は、本実験系においては認められず、従って対照群との差は認められなかった。しかしながら、フコィダン B f と塩化カルプロニゥムとの併用投与群では、早期より皮膚色の変化が観察され、発毛に至った。発毛割合も対照群より高かった。 6 0 %以上の発毛割合を示した個体は、対照群および塩化カルプ口ニゥム投与群では認められなかったのに対し、フコィダン B f 併用投与群では、 6例中 3例に認められた。

一方、市販育毛剤 Bの有効成分であるミノキシジルは 1 %濃度で塗布することにより育毛効果が認められ、早期より皮盧色の変化が観察され、発毛に至った。

0 . 1 %濃度では効果は弱かった。更に、フコィダン B f とミノキシジルとの併用投与群では、育毛効果が促進される傾向が認められた。すなわち、実験終了時に 6 0 %以上の発毛割合を示した個体は、ミノキシジルの 1 %投与群では 6例中 4例であったのに対し、フコィダン B f併用投与群では、 6例全例が良好な発毛状態を呈していた。一方、効果の弱かったミノキシジルの 0 . 1 %投与群では 6 例中 1例のみであったのに対し、フコィダン B f併用投与群では、 6例中 3例でめつ 7こ o

以上から、フコィダン B f と共にミノキシジル又は塩化カルプロニゥムを用いることで育毛作用が相乗的に増強されることが分かった。また他のフコィダン、フコィダン分解物、硫酸化単糖等に対しても同様な試験を行ったところ、同様な結果が得られた。

表 1 5 発毛割合（％) 6 0%以上添加サンプルの濃度 (発毛面積 Z毛剃面積）発毛した個体の数塩化カルプロニゥム 0. 5 % 23. 9土 4. 9 0/6 塩化カルプロニゥム 0. 5% 5 5. 4 ± 1 1. 1 3/6 +フコィダン B f Z%

ミノキシジル 19 6 9. 1 ± 1 3. 9 4/6 ミノキシジル 1 % 9 2. 2土 2. 5 6/6 +フコィダン B f Z%

ミノキシジル 0. 1 % 4 2. 9土 5. 5 1/6 ミノキンジル 0. 1 % 4 8. 2± 1 0. 0 3/6 +フコィダン B f 396

対照群 2 9. 2土 9. 2 0/6 平均値土標準誤差

実施例 20

雄性 C 3HZHeマウスを日本 SLC社から購入し、予備飼育の後 8週齢より実験に用いた。マウス背部をバリカンによる毛刈りの後、更に力ミソリにより毛剃りした。実施例 1 6— （ 1 ) 記載のフコィダン B f を 3%濃度になるように軟膏基剤〔親水軟膏（丸石製薬社製）〕に混合（フコィダン軟膏）し、マウスの背部に 1匹あたり 0. 2 gづっ、上記の毛剃り部位に塗布した。対照群には軟膏基剤のみを塗布した。投与は 1日 1回とし、連日行った。投与開始日（毛剃りの翌日）から経時的に投与部位を観察し、皮膚色調の変化をスコア化して判定した。すなわち、スコア化の基準は、スコア 0 ；変化なし、スコア 1 ；皮膚色が青色に変化、スコア 2 ；皮膚色が青黒〜灰色に変化、スコア 3 ；発毛が見られる、スコァ 4 ；ほぼ毛剃り前の状態に復帰、とした。各群のス.コアについては、 6例の平均値土標準誤差として表 1 6に示す。また、毛剃り後' 2 1日目に発毛した面積を測定し、毛剃り面積に対する割合（％) で表した。有意差検定はステューデントの t検定を行い、対照群に対して P値を求めた。その結果を表 1 7に示す。なお、表中の発毛割合は、各群 6例の平均値土標準誤差として示す。

その結果、フコィダン軟膏を塗布することにより顕著な育毛効果が認められた。対照群に比し、早期より皮膚色の変化が観察され、発毛に至った。また、実験終了時には、全例が毛剃り前の状態にほぼ復帰していた。また各実施例に記載のフコイダン及びその分解物についても同様にして軟膏を調製し、同様の試験を行つたところ、同様な育毛効果が確認できた。表 1 6 毛剃り後の日数

9 10 11 12 13 14 15

スコア（平均値土標準誤差）フコィダン軟膏群（N = 6)

0.0±0.0 0.7±0.2 1.0±0.0 1.5±0.2 2.0±0.0 2.7±0.2 3.0±0.0 対照群（N= 6)

0.0±0.0 0.2±0.2 0.4±0.2 1.2±0.2 1.6±0.2 1.8±0.4 2.4±0.0 平均値土標準誤差

表 1 発毛割合（％)

(発毛面積/毛剃面積） P値フコィダン軟膏群 95. 4 ± 2. 9 P< 0. 000 1

(N=6)

対照群 31. 3±5. 7

(N=6) 平均値土標準誤差

寄託された生物材料

( 1 ) 寄託機関の名称 ·あて名

通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所

日本国茨城県つくば市東 1丁目 1番 3号（郵便番号 305 )

(2)寄託された微生物

( i ) アルテロモナス（Alteromonas) s p. SN- 1 009

原寄託日：平成 8年 2月 1 3曰国際寄託への移管請求日：平成 8年.1 1月 1 5曰

受託番号： FERM BP - 5747

(ii) フラボパクテリゥム（Flavobacterium) s p. S A- 0082 原寄託日：平成 7年 3月 29曰国際寄託への移管請求日：平成 8年 2月 1 5曰受託番号： FERM BP— 5402

産業上の利用可能性

本発明によりフコィダン、その分解物、硫酸化単糖又はそれらの塩から選択されるものを有効成分とする安全性に優れたバイオ化粧料が提供される。またフコィダン、その分解物、硫酸化単糖又はそれらの塩から選択されるものを有効成分とする皮膚美容用食品又は飲料、及び育毛用食品又は飲料等として使用され得る化粧料も提供され、これらの食品又は飲料は皮膚美容作用及び又は育毛作用を有する機能性食品又は飲料として有用である。特にフコィダン、その分解物、硫酸化単糖又はそれらの塩から選択されるものを有効成とする飲料は飲む化粧料、育毛料として日常的に摂取でき、皮膚美容維持、皮膚老化防止、皮膚老化予防、毛髪維持 ·養毛 ·増毛等に極めて有用である。

また、本発明に使用される前記有効成分と共に従来の育毛料の有効成分（育毛作用増強成分）を用いることで育毛作用が相乗的に増強され得、従って、本発明により、前記有効成分及び育毛作用増強成分を含む、従来に比し非常に優れた育毛作用を有する育毛料が提供される。