KR102190612B1 - 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래된 저분자량 dna의 제조방법 - Google Patents

식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래된 저분자량 dna의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래된 저분자량 DNA의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료에 계면활성제 및 해양심층수 추출 미네랄을 혼합하여 형성된 용해물의 pH를 조정한 다음, 알코올로 침전시킨 후 정제 과정을 통해 고수율로 고순도의 저분자량 DNA를 추출하는 제조방법에 관한 것이다.

Description

식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래된 저분자량 DNA의 제조방법{Method of Producing Low Molecular Weight DNA derived from Plant Materials, Microbial Materials or Marine Materials}
본 발명은 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래된 저분자량 DNA의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료에 계면활성제 및 해양심층수 추출 미네랄을 혼합하여 형성된 용해물의 pH를 조정한 다음, 알코올로 침전시킨 후 정제 과정을 통해 고수율로 고순도의 저분자량 DNA를 추출하는 제조방법에 관한 것이다.
DNA는 데옥시리보오스, 인산, 염기(아데닌, 티민, 구아닌 및 시토신)로 구성된 뉴클레오타이드 단량체의 폴리머가 염기구조의 상보성에 따라 이중결합한 중합체이며, 모든 생명체의 유전정보를 포함한다.
DNA는 세포막의 아데노신 A2 수용체를 활성화시키는 효능이 있어서 상처 및 흉터 치료, 피부 재생, 퇴행성 관절염, 인대 손상 등의 치료 및 개선 등을 목적으로 의약품 등에 사용되고 있다.
기존 미생물 및 동물 세포로부터 DNA를 분리하는 경우에는 미생물 및 동물 세포가 인지질로 구성된 세포막이기 때문에 분리정제 과정이 물리적인 분쇄과정 없이 페놀, 클로로포름 등의 유기용매를 이용한 화학반응만으로도 용이하게 DNA의 추출이 가능하였다.
반면, 식물의 경우에는 셀룰로오스로 구성된 세포벽으로 인해 단순 화학 반응만으로는 세포 용해(cell lysis)가 일어나지 않고, 반드시 물리적 및 화학적인 방법을 순차적으로 또는 동시에 사용하여 식물을 분쇄해야 하므로, 이와 같은 다단계적 추출법에 의해 DNA 수율이 낮은 단점이 있다.
한편, 종래기술에 따르면 DNA 중합체 단편 복합체를 분리하는 방법으로는 참치의 정소로부터 한외여과막을 이용하여 핵산복합물질을 분리/추출하는 방법(특허문헌 1)이 있으나, 이 방법은 RNA까지 모두 포함하고 있는 복합물질이어서 목적하는 염기서열 외 물질이 혼재되는 문제점이 있었다. 또, 참치의 정소로부터 프로타민 황산염을 분리하는 방법(특허문헌 2)이 개시되어 있으나, 이 방법도 DNA 중합체 단편의 분리에 목적이 있는 것이 아니라 단지 프로타민이라는 단백질의 분리/추출에 목적이 있는 방법이었다.
또, 연어, 송어, 청어 등의 어류로부터 핵산복합물질을 식염수로 분리/추출하는 방법(비특허문헌 1), 또는 유기용제나 SDS(sodium dodecyl sulfate)와 같은 계면활성제를 이용하여 핵산을 분리하는 방법(비특허문헌 2 및 비특허문헌 3)이 보고된 바 있고, 상기 방법들로 얻어진 수용액을 산으로 침전시키거나 에탄올 등 알코올로 침전시켜 회수하는 방법이 더 알려져 있기는 하나, 이와 같은 방법들은 최종 산물의 수율이 매우 낮고 침전/회수 시 정제된 유기용매의 사용이 권장되므로 산업/경제적 측면에서 어려운 단점이 있다.
또, 핵산 분리/추출방법과 관련해서, 이온교환방법(특허문헌 3), 한외여과법 등이 알려져 있으나, 높은 설비비에 비해 낮은 수율로 가성비가 낮아 산업적으로 이용하기 어려운 문제점이 있었다. 이밖에도, DNA 중합체 단편의 분리/추출방법으로서 전처리 수행 후 얻어진 DNA 함유 수용액에 알칼리 용액을 첨가하여 가열처리하고 원심분리하여 얻은 상등액의 pH를 강하시키는 단계 등이 포함된 핵산복합물질을 침전/분리하는 방법(특허문헌 4), 불용성 유기용매 및 고농도 무기염과 완충제를 포함하는 수용액을 첨가하여 핵산복합물질을 분리하고 알코올을 첨가하여 추출하는 단계 등을 거쳐 핵산복합물질을 분리/추출하는 방법이 개시되어 있으나, 이들 방법 또한 과도하게 공정이 많을 뿐만 아니라, 강한 유기용매의 사용으로 인해 분리/추출과정에서 실험자에게 위해를 가할 수 있고 환경오염을 야기할 수 있는 문제점이 있어 DNA의 분리/추출방법에 있어서 실험자의 안전성이 확보된 친환경적이면서도 경제적인 개선책의 필요성이 제기되어 왔다.
해양성 원료(예컨대, 어류의 정소)로부터 특정 분자량 범위, 즉 3,000~10,000kDa의 분자량을 갖는 DNA를 함유하는 혼합물을 제조하는 방법 등이 알려져 있기는 하나, 견고한 세포벽을 가지는 식물로부터 고수율로 DNA를 추출하는 방법, 및 추출한 DNA의 분자량을 현격하게 감소시켜 약 16~40kDa의 분자량을 갖는 DNA 단편을 제조하는 방법을 보고한 사례는 없었다.
한편, 식물을 원료로 사용하여 제조한 추출물을 함유하는 조성물에 관한 종래기술은 다수 존재한다(아래 특허문헌 5 및 특허문헌 6 참조).
그러나 종래에는 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료의 추출물을 피부 적용 제품에 단순 첨가하여 이용하여 왔을 뿐, 실제로 그러한 추출물에서 특별히 활성이 높고, 또 산업적 유용성이 큰 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료 유래 저분자량 DNA를 규명한 사례는 이제까지 없었다.
이러한 기술적 배경하에서, 본 발명자들은 화장료 조성물, 약학 조성물, 건강기능식품 조성물 등의 유효성분으로 이용 가능한 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA의 추출방법을 개발하고자 노력한 결과, 정제공정에서 해양심층수 추출 미네랄을 이용하여 제조한 식물성 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 DNA, 특히 16~40kDa의 분자량을 갖는 식물성 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA의 분리가 가능함을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.
대한민국 등록특허 제10-0390529호(2003년 6월 25일) 대한민국 등록특허 제1993-0008087호(1993년 8월 25일) 일본특개소 54-15488(1979년 2월 5일) 일본특개평9-31093호(1997년 2월 4일) 대한민국 공개특허 제10-2015-0104754호(2015년 9월 16일) 대한민국 공개특허 제10-2009-0110727호(2009년 10월 22일)
Emanuel et al., J. Biol. Chem., 203(1), 167-71, 1953 Gulland et al., J. Chem. Soc., 25, 1129, 1947 Marko et al., J. Biol. Chem., 190(1), 165-76, 1951
본 발명의 목적은 효소분해공정 및 독성이 강한 유기용매의 사용 없이 고순도의 저분자량 DNA를 고수율로 추출할 수 있는 제조방법을 제공하는데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은,
(a) 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료에 정제수를 첨가하고, 균질화시켜 균질화물을 생성시키는 단계;
(b) 상기 (a) 단계에서 생성된 균질화물에 계면활성제 및 해양심층수 추출 미네랄을 첨가하여 용해시켜 용해물을 생성시키는 단계;
(c) 상기 (b) 단계에서 생성된 용해물의 pH를 조정하는 단계;
(d) 상기 (c) 단계에서 수득한 pH가 조정된 용해물에 알코올을 첨가하여 침전물을 수득하는 단계;
(e) 상기 (d) 단계에서 수득한 침전물을 정제하여 저분자량 DNA를 함유하는 정제물을 수득하는 단계; 및
(f) 상기 (e) 단계에서 수득한 정제물을 건조시켜 저분자량 DNA를 수득하는 단계;를 포함하는 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA의 제조방법을 제공한다.
본 발명에 따른 저분자량 DNA의 제조방법으로 효소분해공정 및 독성이 강한 유기용매의 사용 없이 환경친화적이면서도 생체에 안정적인 고순도의 저분자량 DNA를 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 고수율로 추출하여 약품/화장품/건강기능식품의 유효성분으로서 제조 및 응용할 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA의 제조방법을 모식도로 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 식물성 원료 유래 저분자량 DNA의 크기를 전기영동한 겔상에서 나타낸 사진이다
다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술 분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.
이하, 본 발명에 대하여 보다 구체적으로 설명한다.
본 명세서에서 부피, 면적, 길이, 시간(기간), 농도, 용량(함량 등), 온도, pH 등을 표현하는데 사용된 용어 "약"은 해당 수치 또는 수치 범위에서 최대 10%의 허용오차가 존재한다는 것을 의미한다.
본 발명은 일 관점에서, 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA의 제조방법으로서,
(a) 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료에 정제수를 첨가하고, 균질화시켜 균질화물을 생성시키는 단계;
(b) 상기 (a) 단계에서 생성된 균질화물에 계면활성제 및 해양심층수 추출 미네랄을 첨가하여 용해시켜 용해물을 생성시키는 단계;
(c) 상기 (b) 단계에서 생성된 용해물의 pH를 조정하는 단계;
(d) 상기 (c) 단계에서 수득한 pH가 조정된 용해물에 알코올을 첨가하여 침전물을 수득하는 단계;
(e) 상기 (d) 단계에서 수득한 침전물을 정제하여 저분자량 DNA를 함유하는 정제물을 수득하는 단계; 및
(f) 상기 (e) 단계에서 수득한 정제물을 건조시켜 저분자량 DNA를 수득하는 단계;를 포함하는 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA의 제조방법에 관한 것이다.
상기 (a) 단계에서 식물성 원료는 천연 식물 또는 재배 식물(농산물), 구체적으로 과실류, 채소류(엽채류, 근채류), 종자류, 견과류 등일 수 있고, 바람직하게는 채소류일 수 있으나, 이에 한정되지 아니하고 산업적으로 이용 가능한 모든 종류의 식물 원료를 사용할 수 있다.
상기 저분자량 DNA의 제조에 이용되는 식물성 원료의 사용부위는 꽃, 열매, 종자, 잎, 줄기 또는 전초, 바람직하게는 잎일 수 있다.
상기 (a) 단계에서 미생물 원료는 박테리아, 효모, 버섯종균 등일 수 있으나, 이에 한정되지 아니하고 산업적으로 이용 가능한 모든 종류의 미생물 원료를 사용할 수 있다.
상기 (a) 단계에서, 해양성 원료는 해양 생물, 구체적으로 어류, 연체동물, 갑각류 등일 수 있고, 바람직하게는 어류일 수 있으나, 이에 한정되지 아니하고 산업적으로 이용 가능한 모든 종류의 해양 원료를 사용할 수 있다.
상기 저분자량 DNA의 제조에 이용되는 해양성 원료의 사용부위는 특별히 제한되지 않으며, 해양 생물의 기관(organs), 조직(tissues), 세포, 예컨대 어류의 경우 어류비늘, 어피, 정소, 지느러미, 정액 또는 알일 수 있고, 바람직하게는 정액일 수 있다.
상기 (a) 단계에서 균질화(homogenization) 단계는 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료 100중량부 기준으로 정제수를 30~100중량부, 바람직하게는 50~100중량부 첨가한 후 적정 온도 및 적정 시간 동안 혼합하여 이루어지는 것임을 특징으로 할 수 있다.
상기 적정 온도는 20~60℃, 바람직하게는 25~55℃, 가장 바람직하게는 25~30℃이며, 적정 시간은 0.1~5시간, 바람직하게는 0.1~3시간, 가장 바람직하게는 0.1~0.5시간 일 수 있다.
상기 (b) 단계에서 용해물은 상기 균질화물(60~80℃, 바람직하게는 60~70℃의 온도가 되도록 30~40분간 가열한 균질화물 사용가능)에 계면활성제 및 해양심층수 추출 미네랄을 첨가하여 용해시켜 수득한 것임을 특징으로 할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 해양심층수(Deep Ocean Water)는 대한민국 동해, 미국 하와이 인근 바다, 바람직하게는 강원도 고성에서 취수한 것을 사용할 수 있으며, 멸균, 탈염 등의 과정을 거쳐 후처리한 것을 사용하는 것이 바람직하다.
상기 해양심층수는 멸균 필터, 바람직하게는 0.2μm의 필터를 이용하여 취수한 해수의 미생물 등의 불순물을 제거한 후 종래 알려진 탈염 방법, 예컨대, 플래시증발법, 해수동결법, 역삼투압법, 이온교환수지법, 전기투석법(electrodialysis; ED) 또는 시중에 유통되는 전기투석기나 탈염기를 사용하여 탈염된 것일 수 있으며, 바람직하게는 전기투석법으로 탈염된 것이 전기전도도 값을 달리하여 탈염 해수의 미네랄 농도 및 경도를 조절할 수 있으므로 바람직하다. 예컨대, 전기전도도 값을 8mS/㎝, 10mS/㎝, 12mS/㎝, 15mS/㎝ 등으로 조절하여 1가 양이온 및 2가 음이온을 제거하는 탈염과정을 거쳐 탈염 해수를 준비할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 해양심층수 추출 미네랄은 전술한 탈염방법으로 탈염된 해수를 당업계에 잘 알려진 건조방법, 예를 들어, 해양심층수를 가열증발, 진공증발, 천일건조 또는 통풍건조법 등의 건조방법을 통하여 수득된 기능성 소금 또는 고온 용융 해양심층수 미네랄, 구체적으로는 상기 해양심층수 미네랄을 600~1,000℃, 바람직하게는 700~900℃에서 4~12시간, 바람직하게는 6~10시간 동안 용융시킨 미네랄이다.
상기 해양심층수 추출 미네랄은 나트륨, 칼슘, 마그네슘, 칼륨뿐만 아니라 셀레늄, 아연 등의 무기성분과 철, 망간, 스트로늄 등의 금속이온을 함유할 수 있으며, 바람직하게는 염화나트륨을 주성분으로 함유한다.
상기 (b) 단계에서 용해물은 상기 균질화물에 계면활성제 및 해양심층수 추출 미네랄을 첨가한 후, 교반, 바람직하게는 10~30회 정도 천천히 인버팅(inverting)하여 균질화물, 계면활성제 및 해양심층수 추출 미네랄이 고루 섞이도록 한 다음, 0.1~1.0시간 동안, 바람직하게는 0.5~1.0시간 동안 상온, 바람직하게는 18~25℃의 온도에서 교반하여 생성시키는 것임을 특징으로 할 수 있다.
상기 (b) 단계에서 계면활성제 및 해양심층수 추출 미네랄은 중량기준으로 0.5~3.0: 1.0~3.0, 바람직하게는 0.5~2.0: 1.0~2.0의 조합비로 혼합한 것임을 특징으로 할 수 있다.
상기 계면활성제의 함량은 상기 계면활성제 및 해양심층수 추출 미네랄의 조합비를 유지한 상태에서, 상기 균질화물 중 0.5~3.0중량%, 바람직하게는 0.5~2.0중량%일 수 있으며, 상기 계면활성제의 함량이 0.5중량% 미만일 경우 용해 효능이 저하되는 문제점이 생길 수 있으며, 3.0중량%를 초과할 경우 정제과정에서 계면활성제가 충분히 제거되지 않아 최종 생성되는 산물인 저분자량 DNA를 생체(인체)에 적용 가능한 조성물, 예컨대, 약학 조성물, 화장료 조성물, 건강기능식품 조성물 등에 사용하기에 안전성의 우려가 있다.
상기 해양심층수 추출 미네랄의 함량은 상기 계면활성제 및 해양심층수 추출 미네랄의 조합비를 유지한 상태에서, 상기 균질화물 중 1.0~3.0중량%, 바람직하게는 1.0~2.0중량%일 수 있으며, 상기 해양심층수 추출 미네랄의 함량이 1.0중량% 미만일 경우 용해 및 침전 효능이 저하되는 문제점이 생길 수 있으며, 3.0중량%를 초과할 경우 함량 증가에 비해 그 효과의 증가가 크지 않을 수 있다.
상기 계면활성제는 음전하성 계면활성제, 바람직하게는 소듐 도데실 설페이트(sodium dodecyl sulfate, SDS), 아모늄 도데실 설페이트(ammonium dodecyl sulfate, ALS), 소듐 미레스 설페이트(sodium myreth sulfate), 소듐 파레스 설페이트(sodium pareth sulfate), 소듐 라우레스 설페이트(sodium laureth sulfate, SLES) 및 포타슘 라우릴 설페이트(potassium lauryl sulfate)로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상일 수 있고, 바람직하게는 소듐 도데실 설페이트일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 (c) 단계에서 용해물의 pH는 먼저 pH 7.0~13.0, 바람직하게는 pH 8.0~12.0, 가장 바람직하게는 pH 9.0~11.0이 되도록 염기성 pH 조절제를 첨가한 후, 40~80℃, 바람직하게는 55~75℃의 온도에서 1~5시간, 바람직하게는 1~3시간 동안 교반한 다음, pH 6.0~8.0, 바람직하게는 pH 6.5~7.5, 가장 바람직하게는 pH 6.7~7.3이 되도록 산성 pH 조절제를 첨가하여 조정될 수 있다.
상기 염기성 pH 조절제는 수산화암모늄(NH4OH), AMP(2-amino-2-methyl-1-propanol)-95, 탄산나트륨(Na2CO3) 및 수산화나트륨(NaOH)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상, 또는 이들의 혼합물일 수 있고, 바람직하게는 수산화나트륨이다.
상기 산성 pH 조절제는 시트르산(citric acid), 락트산(lactic acid), 말산(malic acid), 염산(hydrochloric acid), 아세트산(acetic acid), 인산(phosphoric acid) 및 타르타르산(tartaric acid)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상, 또는 이들의 혼합물일 수 있고, 바람직하게는 시트르산이다.
상기 (c) 단계에서 용해물의 pH 조정은 상기 용해물에 함유된 DNA의 분자량을 감소시키는 것을 특징으로 할 수 있다.
상기 용해물의 pH 조정으로 수득한 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 DNA의 분자량은 10~6,600kDa, 바람직하게는 15~3,500kDa, 더욱 바람직하게는 16~1,400kDa, 더욱 바람직하게는 16~700kDa, 가장 바람직하게는 16~40kDa일 수 있으며, 상기 DNA의 분자량이 10kDa 미만일 경우 조성물의 유효성분으로서 목적하는 건강 상태 개선 효과 및 피부 상태 개선 효과를 나타낼 수 없고, 6,600kDa을 초과할 경우 분자량 증가에 비해 그 효과의 증가가 크지 않을 수 있다.
상기 (c) 단계에서 pH가 조정된 용해물은 원심분리기를 사용하여 3,800~10,000rpm 또는 1,500~15,000 x g로 원심분리하여 수득한 pH가 조정된 용해물의 상등액인 것을 특징으로 할 수 있다.
상기 (d) 단계에서 수득한 침전물은 상기 (c) 단계에서 수득한 pH가 조정된 용해물에 알코올을 부피기준으로 용해물: 알코올 = 20~40 : 60~80, 바람직하게는 용해물: 알코올 = 25~35 : 65~75가 되도록 첨가한 후, 원심분리기를 사용하여 3,800~10,000rpm 또는 1,500~15,000 x g으로 원심분리하여 생성시키는 것임을 특징으로 할 수 있다.
상기 (e) 단계에서 정제는 상기 (d) 단계에서 수득한 침전물을 용해시켜 수득한 용해물에 알코올을 첨가하고 12~24시간, 바람직하게는 밤샘(overnight) 침전시킨 후, 원심분리기를 사용하여 3,800~10,000rpm 또는 1,500~15,000 x g로 원심분리하는 것으로 이루어지는 것을 특징으로 할 수 있다.
상기 (e) 단계에서 정제물은 상기 (d) 단계에서 수득한 침전물 100중량부 기준으로 정제수를 30~100중량부, 바람직하게는 50~100중량부 첨가하여 용해시킨 다음, 상기 용해된 용해물에 알코올을 부피기준으로 용해물 : 알코올 = 25~35 : 65~75가 되도록 첨가하고 12~24시간, 바람직하게는 밤샘 침전시킨 후, 원심분리기를 사용하여 3,800~10,000rpm 또는 1,500~15,000 x g으로 원심분리하여 생성시키는 것임을 특징으로 할 수 있다.
상기 알코올은 바람직하게는 탄소수 1 내지 4의 알코올, 더 바람직하게는 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol) 및 부탄올(butanol)로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상일 수 있고, 가장 바람직하게는 에탄올 또는 이소프로판올일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 (f) 단계에서 건조는 10~50℃, 바람직하게는 20~40℃에서 이루어질 수 있다.
다른 관점에서, 본 발명은 상기 저분자량 DNA의 제조방법으로 제조한 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA를 유효성분으로 함유하는 약학적, 화장학적 또는 식품학적 용도를 갖는 조성물에 관한 것이다.
상기 조성물은 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA를 조성물의 총 중량을 기준으로 0.01~10.0중량%, 바람직하게는 0.01~1.0중량%, 가장 바람직하게는 0.01~0.02중량%의 양으로 함유하는 것을 특징으로 할 수 있다. 상기 저분자량 DNA의 함량이 0.01중량% 미만이면 건강 상태 개선 효과, 피부 상태 개선 효과(예컨대, 노화 방지 효과, 피부 염증 완화 효과 등)등이 거의 없고, 상기 저분자량 DNA의 함량이 10.0중량%를 초과하면 제형 안정성에 영향을 미칠 수 있다.
본 발명에 따른 조성물에 있어서, 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 추출물은 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA의 목적하는 건강 상태 개선 효과, 예컨대 피부 상태 개선 효과(피부 노화 방지 효과, 피부 염증 완화 효과 등)를 더 향상시키기 위한 보조성분으로서 함유될 수 있다.
상기 조성물 중 상기 보조성분 및 상기 저분자량 DNA는 각각 동일한 양으로 함유될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 조성물은 일반적으로 피부 외용제 조성물로서, 화장료 조성물 또는 약학 조성물일 수 있으나, 바람직하게는 화장료 조성물이며, 상기 피부 외용제는 피부 외부에서 도포되는 어떠한 것이라도 포함될 수 있는 총칭이며, 다양한 제형의 화장품, 의약품이 여기에 포함될 수 있다.
상기 화장료 조성물로는, 예를 들어, 기초 화장료, 메이크업 화장료, 모발용 화장료, 바디용 화장료 등이 있을 수 있고, 그 제형은 특별히 제한되지 않으며, 목적하는 바에 따라 적절히 선택할 수 있다. 예컨대, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연화장수, 영양화장수, 로션, 바디로션, 영양 크림, 마사지 크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 젤, 패치, 수중유(O/W)형, 유중수(W/O)형 등의 기초 화장료, 립스틱, 메이크업베이스 또는 파운데이션 등의 색조 화장료, 샴푸, 린스, 바디클렌저, 치약, 여성용 세정제 또는 구강 청정제 등의 세정료, 헤어토닉, 젤 또는 무스 등의 정발제, 양모제 또는 염모제 등의 모발용 화장료 조성물로 제형화될 수 있다.
상기 조성물은 화장품 안전에 관한 규칙에 의거한 사용 제한량을 고려하여, 보습제(폴리올 등), 오일, 왁스, 점도 조절제, 점증제, pH 조정제(pH 조절제), 지방, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 유화제, 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 습윤화제, 염료, 안료, 친수성 활성제, 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 더 함유할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 피부 상태 개선 효과를 증가시키기 위하여 피부 흡수 촉진 물질을 더 함유할 수 있다.
본 발명의 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA를 포함하는 약학 조성물은 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 약제학적 보조제 및 기타 치료적으로 유용한 물질(담체, 부형제, 희석제 등)을 추가로 함유할 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 다양한 비경구 투여제(도포제) 형태로 제형화할 수 있다.
용어 "담체(carrier)"는 세포 또는 조직 내로의 화합물의 부가를 용이하게 하는 화합물로 정의된다. 예를 들어, 디메틸술폭사이드(DMSO)는 생물체의 세포 또는 조직 내로의 많은 유기 화합물들의 투입을 용이하게 하는 통상 사용되는 담체이다.
용어 "부형제(excipient)"는 정제나 환약 등의 제제 과정에서 주약(主藥)의 양이 적은 경우에 약을 먹기 쉽게 하거나 어떤 빛깔과 형태를 갖추게 하려고 더 넣는 물질로, 락토오스나 녹말을 주로 사용한다.
용어 "희석제(diluent)"는 대상 화합물의 생물학적 활성 형태를 안정화시킬 뿐만 아니라, 화합물을 용해시키게 되는 물에서 희석되는 화합물로 정의된다. 버퍼 용액에 용해되어 있는 염은 당해 분야에서 희석제로 사용된다. 통상 사용되는 버퍼 용액은 포스페이트 버퍼 식염수이며, 이는 인간 용액의 염 상태를 모방하고 있기 때문이다. 버퍼 염은 낮은 농도에서 용액의 pH를 제어할 수 있기 때문에, 버퍼 희석제가 화합물의 생물학적 활성을 변형하는 일은 드물다.
여기에 사용된 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA를 포함하는 조성물은 인간 환자에게 그 자체로서, 또는 결합 요법에서와 같이 다른 활성 성분들과 함께 또는 적당한 담체나 부형제와 함께 혼합된 의약 조성물로서, 투여(도포)될 수 있다.
상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
상기 비경구 투여제(도포제)는 예를 들어, 주사제, 점적제, 연고, 로션, 겔, 크 림, 스프레이, 현탁제, 유제, 좌제(坐劑), 패취 등의 제형일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 따른 상기 약학 조성물은 비경구, 국소, 경피, 피하 등으로 투여(도포)될 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 따른 약학 조성물은 예를 들어 두피에 국소 투여(도포)될 수 있다.
또한, 상기 활성성분의 약제학적으로 허용 가능한 용량, 즉 투여량(도포량)은 치료 받을 대상의 연령, 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여경로(도포경로) 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량(도포량) 결정은 당업자의 수준 내에 있다. 투여량은, 예컨대, 하루에 체중 1㎏당 0.01~5000㎎, 바람직하게는 0.1~2000㎎, 더욱 바람직하게는 0.5~500㎎, 가장 바람직하게는 1~100㎎의 양으로 투여(도포)되도록 1 내지 수회에 나누어 투여(도포)할 수 있으나, 상기 투여량은 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다.
본 발명의 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA는 천연물질이므로 독성이 전혀 없어서 의약품으로 지속적으로 다량 사용할 수 있다.
본 발명에서 사용에 적합한 약학 조성물에는, 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA를 포함하는 활성 성분들이 그것의 의도된 목적을 달성하기에 유효한 양으로 함유되어 있는 조성물이 포함된다. 더욱 구체적으로, 치료적 유효량은 치료될 객체의 생존을 연장하거나, 질환의 증상을 방지, 경감 또는 완화시키는데 유효한 화합물의 양을 의미한다. 치료적 유효량의 결정은, 특히, 여기에 제공된 상세한 개시 내용 측면에서, 당업자의 능력 범위 내에 있다.
본 발명의 방법들에서 사용되는 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA, 및 이를 유효성분으로 포함하는 조성물(화합물들)에 대한 치료적 유효량은 세포 배양 분석으로부터 초기에 측정될 수 있다. 예를 들어, 용량(dose)은 세포 배양에서 결정된 IC50(half maximal inhibitory concentration) 또는 EC50(half maximal effective concentration)를 포함하는 순환 농도 범위를 얻기 위하여 동물 모델에서 계산될 수 있다. 그러한 정보는 인간에서의 유용한 용량을 더욱 정확히 결정하는데 사용될 수 있다.
여기에 기재되어 있는 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA, 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물(화합물들)의 독성과 치료 효율성은, 예를 들어, LD50(군집의 50%에 대한 치사량), ED50(군집의 50%에 대해 치료 효과를 갖는 용량), IC50(군집의 50%에 대해 치료 억제 효과를 갖는 용량)을 결정하기 위하여, 세포 배양 또는 실험동물에서의 표분 제약 과정들에 의해 산정될 수 있다. 독성과 치료 효과 간의 용량 비가 치료 지수이고 이것은 LD50과 ED50(또는, IC50) 간의 비율로서 표현될 수 있다. 높은 치료 지수를 보이는 화합물들이 바람직하다. 이들 세포 배양 분석에서 얻어진 데이터는 인간에 사용하는 용량의 범위를 산정하는데 사용될 수 있다. 그러한 화합물들의 투여량(dosage) 또는 도포량은 바람직하게는 독성이 없거나 거의 없는 상태에서 ED50(또는, IC50)을 포함하는 순환 농도의 범위 내에 있다.
본 발명에서 '기능식품' 또는 '기능성 식품'이란, 일반 식품에 본 발명의 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA를 첨가함으로써 일반 식품의 기능성을 향상시킨 식품을 의미한다. 기능성은 물성 및 생리기능성으로 대별될 수 있는데, 본 발명의 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA를 일반식품에 첨가할 경우, 일반 식품의 물성 및 생리기능성이 향상될 것이고, 본 발명은 이러한 향상된 기능의 식품을 포괄적으로 '기능식품(건강기능식품)' 또는 '기능성 식품(건강기능성 식품)'이라 정의한다.
본 발명의 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA를 함유하는 건강기능식품은, 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 주 효과에 상승효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유할 수 있다. 예를 들어, 물성 개선을 위하여 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제, 보습제, 점증제, 무기염류, 유화제 및 합성 고분자 물질 등의 첨가제를 더 포함할 수 있다. 그 외에도, 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당 및 해초 엑기스 등의 보조 성분을 더 포함할 수도 있다. 상기 성분들은 제형 또는 사용 목적에 따라서 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 그 첨가량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 선택될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물 자체가 다른 식품에 대한 첨가제의 형태로 사용될 수 있다.
본 발명의 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA를 함유하는 건강기능식품의 제형은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어, 정제, 과립제, 드링크제, 음료, 용액, 유화물, 점성형 혼합물, 타블렛, 분말 등의 다양한 형태로 제형화될 수 있다. 또한, 상기 건강기능식품 투여시 단순 음용, 주사 투여, 스프레이 방식 또는 스퀴즈 방식 등의 다양한 방법으로 투여될 수 있다.
또한, 본 발명의 건강기능식품은, 예를 들어, 각종 식품류, 사탕, 초콜릿, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.
본 발명의 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA는 건강 상태 개선 효과, 예컨대 피부 상태 개선을 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이때, 식품 또는 음료 중의 상기 저분자량 DNA의 양은 일반적으로 본 발명의 건강기능식품 조성물은 전체 식품 중량의 0.01 내지 50중량%, 바람직하게는 0.1 내지 20중량%로 가할 수 있으며, 건강음료 조성물은 100mL를 기준으로 0.02 내지 10g, 바람직하게는 0.3 내지 1g의 비율로 가할 수 있다.
본 발명의 건강음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA를 함유하는 것 외에는 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등의 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100mL당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.
상기 추가 성분 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100중량부 당 0 내지 20중량부, 바람직하게는 0.001 내지 19.9중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
[ 실시예 1] 해양심층수를 이용한 식물성 원료 유래 저분자량 DNA의 제조
원료: 식물성 원료로서 소매상에서 입수한 알로에 베라의 잎, 정제수 및 강원도 고성에서 취수한 해양심층수로부터 추출한 염화나트륨을 이용하여 저분자량 DNA를 제조하였다.
(a) 분쇄 단계(grinding step): 알로에 베라 잎에 정제수를 알로에 베라 잎 100중량부 기준으로 50~100중량부 첨가한 후 균질화기(homogenizer)에 넣고, 25~30℃ 조건하에서 0.1~0.5시간 동안 균질화를 수행하여 알로에 베라 잎의 분쇄물(균질화물)을 준비하였다.
(b) 용해 단계(dissolving step): 상기 분쇄물(균질화물)로부터 DNA가 추출될 수 있도록 상기 분쇄물(균질화물) 중의 SDS(sodium dodecyl sulfate)의 최종 농도가 약 1중량% 되고, 해양심층수 추출 염화나트륨의 최종 농도가 약 1.25중량%가 되도록 SDS 및 해양심층수 추출 염화나트륨을 첨가한 후 10~30회 정도 천천히 인버팅(inverting)하여 상기 분쇄물(균질화물), SDS 및 해양심층수 추출 염화나트륨이 고루 섞이도록 한 다음, 약 1시간 동안 상온(예컨대, 18~25℃)에서 교반시켜 용해물을 수득하였다.
(c) pH 조정(pH calibration): 상기 용해물에 수산화나트륨을 첨가하여 pH 9.5~10.5로 만든 후, 60~75℃에서 1~2시간 동안 교반하였다. 그 후, 시트르산을 넣어 최종 pH를 pH 6.7~7.3으로 조정한 후, 원심분리기를 사용하여 약 10,000rpm으로 원심분리한 후 pH가 조정된 용해물(상등액)을 수득하였다.
(d) 침전 단계(precipitation step): 상기 pH가 조정된 용해물에 에탄올을 부피기준으로 용해물 : 에탄올 = 25~35 : 65~75가 되도록 첨가한 후, 0~4℃의 조건하에서 밤새(overnight) 침전시킨 후, 원심분리기를 사용하여 약 7,000rpm으로 원심분리하여 침전물(조추출물; crude extract)을 수득하였다.
(e) 정제 단계(purification step): 상기 원심분리로부터 얻어진 침전물에 정제수를 침전물 100중량부 기준으로 50~100중량부 첨가한 후, 25~30℃ 조건하에서 0.1~0.5시간 동안 교반하여 재용해시켜 용해물을 수득하였다. 그다음, 에탄올을 부피기준으로 용해물 : 에탄올 = 25~35 : 65~75가 되도록 첨가하여 0~4℃의 조건하에서 밤새 침전시킨 후, 원심분리기를 사용하여 약 7,000rpm으로 원심분리하여 정제된 침전물(정제물)을 수득하였다.
(f) 건조 단계(drying step): 상기 정제 단계로부터 얻어진 정제된 침전물(정제물)을 25~30℃ 조건하에서 1~3시간 동안 건조시켜 목적물인 저분자량 DNA를 수득하였으며, 이때 상기 저분자량 DNA의 수율은 사용된 원료 100중량부 기준으로 약 9%로 나타났다.
[ 실시예 2] 해양심층수를 이용한 해양성 원료 유래 저분자량 DNA의 제조
원료: 해양성 원료로서 소매상에서 입수한 연어 정액, 정제수 및 강원도 고성에서 취수한 해양심층수로부터 추출한 염화나트륨을 이용하여 저분자량 DNA를 제조하였다.
(a) 분쇄 단계: 해동된 연어 정액에 정제수를 연어 정액 100중량부 기준으로 50~100중량부 첨가한 후 균질화기에 넣고, 25~30℃ 조건하에서 0.1~0.5시간 동안 균질화를 수행하여 연어 정액의 분쇄물(균질화물)을 준비하였다.
(b) 용해 단계: 상기 분쇄물(균질화물)로부터 DNA가 추출될 수 있도록 상기 분쇄물(균질화물) 중의 SDS의 최종 농도가 약 1중량% 되고, 해양심층수 추출 염화나트륨의 최종 농도가 약 1.25중량%가 되도록 SDS 및 해양심층수 추출 염화나트륨을 첨가한 후 10~30회 정도 천천히 인버팅하여 상기 분쇄물(균질화물), SDS 및 해양심층수 추출 염화나트륨이 고루 섞이도록 한 다음, 약 1시간 동안 상온(예컨대, 18~25℃)에서 교반시켜 용해물을 수득하였다.
(c) pH 조정: 상기 용해물에 수산화나트륨을 첨가하여 pH 9.5~10.5로 만든 후, 60~75℃에서 1~2시간 동안 교반하였다. 그 후, 시트르산을 넣어 최종 pH를 pH 6.7~7.3으로 조정한 후, 원심분리기를 사용하여 약 10,000rpm으로 원심분리하여 pH가 조정된 용해물(상등액)을 수득하였다.
(d) 침전 단계: 상기 pH가 조정된 용해물에 에탄올을 부피기준으로 용해물 : 에탄올 = 25~35 : 65~75가 되도록 첨가한 후, 0~4℃의 조건하에서 밤새(overnight) 침전시킨 후, 원심분리기를 사용하여 약 7,000rpm으로 원심분리하여 침전물(조추출물)을 수득하였다.
(e) 정제 단계: 상기 원심분리로부터 얻어진 침전물에 정제수를 침전물 100중량부 기준으로 50~100중량부 첨가한 후, 25~30℃ 조건하에서 0.1~0.5시간 동안 교반하여 재용해시켜 용해물을 수득하였다. 그다음, 에탄올을 부피기준으로 용해물 : 에탄올 = 25~35 : 65~75가 되도록 첨가하여 0~4℃의 조건하에서 밤새 침전시킨 후, 원심분리기를 사용하여 약 7,000rpm으로 원심분리하여 정제된 침전물(정제물)을 수득하였다.
(f) 건조 단계: 상기 정제 단계로부터 얻어진 정제된 침전물(정제물)을 25~30℃ 조건하에서 1~3시간 동안 건조시켜 목적물인 저분자량 DNA를 수득하였으며, 이때 상기 저분자량 DNA의 수율은 사용된 원료 100중량부 기준으로 약 4%로 나타났다.
[ 비교예 1] 일반 염수를 이용한 식물성 원료(알로에) 유래 DNA의 제조
실시예 1의 제조법과 동일한 방법으로 알로에 베라 잎을 원료로 사용하고, 해양심층수 대신 소매상에서 입수한 일반 염수 염(식용 정제염)을 이용하여 DNA를 수득하였다.
[ 비교예 2] 일반 염수를 이용한 해양성 원료(연어 정액) 유래 DNA의 제조
실시예 2의 제조법과 동일한 방법으로 연어 정액을 원료로 사용하고, 해양심층수 대신 소매상에서 입수한 일반 염수 염(식용 정제염)을 이용하여 DNA를 수득하였다.
[ 실험예 1] 식물성 원료(알로에) 및 해양성 원료(연어 정액) 유래 DNA의 특성 확인
실시예 1, 실시예 2, 비교예 1 및 비교예 2 각각에서 제조한 DNA 시료를 적절 함량의 RNase A가 포함된 25mM Tris-HCl pH8.0에 용해시켜 동일한 농도(DNA 시료 농도: 10,000μg/ml)로 1% 아가로스 겔 상에서 전기영동한 후, EtBr 용액으로 염색하여 실시예 1, 실시예 2, 비교예 1 및 비교예 2 각각의 DNA 시료의 특성을 확인하였다.
그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 실시예 1 및 비교예 1 각각의 DNA 시료는 1% 아가로스 겔 상에서 전기영동 시 마커(Marker: 50~10,000bp) 기준으로 약 16~1,400kDa의 크기를 갖는 것을 확인하였다. 특히, 실시예 1의 DNA 시료는 비교예 1의 DNA 시료보다 약 17.5~35kDa의 분자량 값에서 DNA 수득량이 많아 고순도로 DNA 추출효율이 높은 것을 확인할 수 있었다.
또, 위와 같은 방법으로 실시예 2 및 비교예 2 각각의 DNA 시료를 전기영동한 결과, 실시예 2의 DNA 시료는 비교예 2의 DNA 시료보다 약 17.5~35kDa의 분자량 값에서 DNA 수득량이 많아 고순도로 DNA 추출효율이 높은 것을 확인할 수 있었다(데이터 미제시).
본 발명의 식물성 원료, 미생물 원료, 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA를 유효성분으로 포함하는 약학 조성물, 화장료 조성물 및 식물 조성물은 제형예 1∼3의 다양한 제형으로 제품화(의약품, 화장품, 건강기능식품)될 수 있으나, 이에 한정되지 아니하고, 구현하고자 하는 제품의 기능성, 비용 및 기타 조건을 고려하여 적정 함량의 저분자량 DNA를 포함하는 여러 가지 제제 및 제형으로 응용 가능하다.
[ 제형예 1] 연고의 제조
유상성분과 수상성분을 포함하는 표 1의 성분들을 혼합하여 본 발명의 저분자량 DNA을 포함하는 연고를 제조하였다.
배합성분 함량(중량%)
정제수 잔량
본 발명에 따른 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 수득한 저분자량 DNA 10.0
카프린/카프릴트리글릭세리드 10.0
액상파라핀 10.0
솔비탄세스퀴올리에이트 6.0
옥틸도데세스-25 9.0
세틸에틸헥사노에이트 10.0
스쿠알란 1.0
살리실산 1.0
글리세린 15.0
솔비톨 10.0
[ 제형예 2] 영양화장수의 제조
유상성분과 수상성분을 포함하는 표 2의 성분들을 혼합하여 본 발명의 저분자량 DNA를 포함하는 영양화장수를 제조하였다.
배합성분 함량(중량%)
정제수 잔량
본 발명에 따른 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 수득한 저분자량 DNA 0.1
밀납 4.0
폴리솔베이트 60 1.5
솔비탄세스퀴올레이트 1.5
유동파라핀 0.5
Montana 202 (제조사:Seppic) 5.0
글리세린 3.0
부틸렌글리콜 3.0
프로필렌글리콜 3.0
카르복시비닐폴리머 0.1
트리에탄올아민 0.2
방부제, 색소, 향료 적량
[ 제형예 3] 드링크제의 제조
본 발명에 따른 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 수득한 저분자량 DNA 80mg, 비타민 E 9mg, 비타민 C 9mg, 포도당 10g, 구연산 0.6g, 및 액상 올리고당 25g을 혼합한 후 정제수 300㎖를 가하여 각 병에 200㎖씩 되게 충진하였다. 병에 충진한 후 130℃에서 4∼5초간 살균하여 음료를 제조하였다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 예일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (7)

  1. 해양심층수 추출 미네랄을 활용한 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA 단편의 제조방법으로서,
    (a) 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료에 원료 100중량부 기준으로 정제수를 30~100중량부 첨가하고, 20~60℃에서 0.1~5시간 동안 균질화시켜 균질화물을 생성시키는 단계;
    (b) 상기 균질화물에 음전하성 계면활성제 및 해양심층수 추출 미네랄을 0.5~3.0 : 1.0~3.0의 중량비로 혼합하여 첨가하고, 상온 이상의 온도에서 교반하여 용해물을 생성시키는 단계;
    (c) 상기 용해물의 pH가 pH 9.0~13.0이 되도록 조정한 후, 40~80℃에서 1~5시간 동안 교반한 다음, pH 6.0~8.0이 되도록 조정하는 단계;
    (d) 상기 pH가 조정된 용해물에 알코올을 부피기준으로 용해물: 알코올 = 20~40 : 60~80이 되도록 첨가하여 침전물을 수득하는 단계;
    (e) 상기 침전물에 정제수를 침전물 100중량부 기준으로 30~100중량부 첨가한 후, 25~30℃ 조건하에서 0.1~0.5시간 동안 교반하여 용해시켜 수득한 용해물에 알코올을 부피기준으로 용해물 : 알코올 = 25~35 : 65~75가 되도록 첨가하고 침전시켜 저분자량 DNA 단편을 함유하는 정제물을 수득하는 단계; 및
    (f) 상기 정제물을 건조시켜 저분자량 DNA 단편을 수득하는 단계;를 포함하고,
    상기 음전하성 계면활성제는 소듐 도데실 설페이트, 아모늄 도데실 설페이트, 소듐 미레스 설페이트, 소듐 파레스 설페이트, 소듐 라우레스 설페이트 및 포타슘 라우릴 설페이트로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상이고,
    상기 알코올은 탄소수 1 내지 4의 알코올인 것을 특징으로 하는, 해양심층수 추출 미네랄을 활용한 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 저분자량 DNA 단편의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 저분자량 DNA 단편은 음전하성 계면활성제 및 염수 염을 이용하여 제조한 식물성 원료, 미생물 원료 또는 해양성 원료로부터 유래한 DNA 단편보다 수득량이 증가되는 것을 특징으로 하는, 저분자량 DNA 단편의 제조방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 음전하성 계면활성제는 소듐 도데실 설페이트인 것을 특징으로 하는, 저분자량 DNA 단편의 제조방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 알코올은 에탄올인 것을 특징으로 하는, 저분자량 DNA 단편의 제조방법.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 식물성 원료는 천연 식물, 재배 식물 또는 이들의 혼합물이고, 상기 미생물 원료는 미생물이며, 상기 해양성 원료는 해양 생물인 것을 특징으로 하는, 저분자량 DNA 단편의 제조방법.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 저분자량 DNA 단편의 분자량은 10~6,600kDa인 것을 특징으로 하는, 저분자량 DNA 단편의 제조방법.
  7. 삭제
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