KR20210092587A

KR20210092587A - 피부생리활성물질을 함유하는 리포좀 조성물 및 그의 제조방법

Info

Publication number: KR20210092587A
Application number: KR1020200006158A
Authority: KR
Inventors: 최재환; 노윤화; 이경은; 여현주; 강승현; 박명삼; 최용한; 여민아; 강혜지; 이지언; 주일우
Original assignee: 코스맥스 주식회사; (주)모아캠
Priority date: 2020-01-16
Filing date: 2020-01-16
Publication date: 2021-07-26
Also published as: KR102321532B1

Abstract

피부생리활성물질을 함유하는 리포좀 조성물 및 그의 조제방법에 관한 것으로, 일 양상에 따른 피부생리활성물질을 함유하는 리포좀 조성물 및 그의 제조방법에 의하면, 물리화학적으로 안정하고 유효성분의 피부흡수를 증진시킬 수 있는 리포좀을 이용하여 피부생리활성물질을 피부에 전달시킴으로써, 다양한 피부 상태 개선, 예를 들면, 항산화, 또는 항노화를 제공하고, 또는 피부 주름 등을 개선할 수 있는 효과가 있다.

Description

피부생리활성물질을 함유하는 리포좀 조성물 및 그의 제조방법{LIPOSOME COMPOSITION COMPRISING SKIN PHYSIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCES AND METHOD OF PREPARING THE SAME}

피부생리활성물질을 함유하는 리포좀 조성물 및 그의 제조방법에 관한 것이다.

피부는 조직학적으로 표피, 진피, 피하지방 등으로 구성되어 있으며, 두께는 부위, 연령 및 성별에 따라 다르다. 다양한 피부조건이 존재하지만, 이러한 피부들은 각각 외부로부터의 장벽기능 및 기타 생리학적 기능 등의 역할을 수행하고 있다. 각질층은 상대적으로 소수성(hydrophobicity)이 높은 불용성 단백질 케라틴이 고밀도로 집적되어 있는 케라틴화된 사멸세포(keratinized dead cell)가 지질의 얇은 층인 세포간 지질 이중층(intercellular lipid bilayer)을 사이에 두고 적층되어 있는 구조로서, 지질과 불용성 단백질이 풍부한 매트릭스의 독특한 계층적 구조가 외부 환경 유래의 다양한 화합물을 포함한 화학적 요인에 대한 불투과적 성질을 만든다. 특히 친수성 생리활성물질은 각질층의 이러한 소수성 다중 구조로 인해 투과되는 것이 매우 어려운 실정이다.

따라서, 일반적으로 건강한 피부에서 각질을 통한 물질의 수송, 특히 친수성 생리활성물질의 피부 투과는 피부의 여러 가지 보호작용으로 인해 쉽게 이루어지지 않으며, 투과된다고 하여도 매우 낮은 농도만 투과될 뿐이다. 하지만, 화장료의 경우, 화장료에 포함된 생리활성물질이 그 효능을 나타내기 위해서는 피부의 최외각층인 각질층을 통과하여야만 하며, 친수성 생리활성물질의 경우 이러한 각질층의 소수성 다중 구조 및 이로 인한 장벽 기능으로 인해, 화장료에 포함된 생리활성물질이 그 기능을 충분히 나타내지 못하는 문제점을 가진다.

지질 소재 기반의 경피 투과용 베시클의 대표적인 예로 리포좀을 들 수 있다. 리포좀은 인지질(phospholipid) 이중층(bilayer)이 내부에 물을 포함하는 구조의 구형 베시클로 피부 투과 증진 외에도 산화가 쉬운 불안정한 물질의 안정화, 포집된 물질의 방출속도 조절 등의 기능으로 오래 전부터 의약, 식품 및 화장품에 널리 활용되어 왔다.

리포좀의 친수성과 소수성 영역을 모두 가지고 있어서 난용성 약물과 수용성 약물 모두를 그 구조 내에 포함시킬 수 있고 생체 친화성을 가지는 지질이나 콜레스테롤 등을 사용하여 생체적합성과 안전성이 높다. 한편 리포좀의 막 자체의 물리적 안정성이 낮고, 포집되는 물질이 제한적이면서 포집 효율도 낮고, 또한 피부 속 깊이 침투하지 못하고 피부 각질층에 남는 경우도 많아 이를 해결하기 위해 많은 연구와 다양한 방법들이 시도되어 왔다.

피부 각질층의 각질세포 사이의 지질층 간격은 대략 수십 나노미터 이기 때문에 리포좀과 같이 수백 나노미터 이상의 크기를 갖는 베시클은 지질층 통과가 쉽지 않다. 따라서 지질 소재 기반의 베시클의 지질층 통과가 쉽게 이루어지기 위해서는 베시클 자체가 좀 더 유연하면서 탄력적으로 변형이 가능해야 하는데 이러한 원리를 적용하여 트랜스퍼좀(transfersome), 에토좀(ethosome)이라는 베시클들이 개발되었다.

유효성분의 경피투과를 증가시키기 위하여 리포좀에 에탄올을 함유한 에토좀(ethosome)은 에탄올이 각질 세포의 지질층에 접근하여 지질의 Tm을 낮추면서 지질층의 유동성을 증가시키고 견고한 구조의 장벽 막을 느슨하게 만들어 베시클의 피부투과 효능를 증가시키기도 하나, 이는 에탄올에 의한 피부 자극이 유발될 수 있다. 트랜스퍼좀은 레시틴을 이용하여 베시클 제조 시 에지활성화제(edge activator)라고 일컫는 단일 사슬의 계면활성제를 인지질에 혼합하여 만들어진 구조체이다. 에지활성화제는 인지질과 함께 구형 베시클 막의 곡면을 구성하는데 인지질과 다른 곡률 반경을 갖는 에지활성화제는 구조체의 지질 이중층 막을 약화시켜 구조체 막의 변형이 쉽게 일어날 수 있도록 유도할 수 있다. 물리화학적 안정성을 높이고 구조체의 유연성(Flexibility)을 높여 피부투과를 증진시킨 지질 소재 기반의 경피 투과용 베시클인 트랜스퍼좀(transfersome)에 대한 기술 연구들이 많이 이루어지고 있다.

이에 본 발명자들은 친수성 생리활성성분을 담지시켜 피부전달을 증진시킬 수 있는 트랜스퍼좀을 이용하여 친수성 생리활성성분을 함유하는 트랜스퍼좀형 피부 외용제를 제조하였으며, 그 조성물의 항산화 및 항노화 효능을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.

M. M. Elsayed, O. Y. Abdallah, V. F. Naggar, and N. M. Khalafallah, Lipid vesicles for skin delivery of drugs: Reviewing three decades of research, Int J. Pharm., 332, 1-16 (2007)

일 양상은 인지질 및 에지 활성화제를 포함하는 리포좀; 및 상기 리포좀에 담지된 친수성의 생리활성물질을 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

다른 양상은 인지질 및 에지 활성화제를 포함하는 리포좀; 및 상기 리포좀에 담지된 친수성의 생리활성물질을 포함하는 피부 외용제를 제공하는 것이다.

또 다른 양상은 인지질 및 에지 활성화제를 포함하는 리포좀; 및 상기 리포좀에 담지된 친수성의 생리활성물질을 포함하는 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

또 다른 양상은 상기 조성물을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.

일 양상은 인지질 및 에지 활성화제를 포함하는 리포좀; 및 상기 리포좀에 담지된 친수성의 생리활성물질을 포함하는 조성물을 제공한다.

상기 조성물은 피부 미용의 개선, 피부의 상태, 피부의 손상, 또는 피부의 노화를 예방, 개선, 또는 치료하기 위한 조성물일 수 있다.

용어 "피부 미용"은 피부 손상 또는 피부 노화로 인해 손상된 피부를 피부 주름 개선, 볼륨 강화, 탄력 개선, 또는 피부 재생 등의 방식으로 손상되기 이전의 상태로 되돌리는 것을 의미한다. 상기 피부는 얼굴, 손, 팔, 다리, 발, 가슴, 배, 등, 엉덩이, 및 두피를 포함하는 신체의 모든 피부 부위를 포함한다.

용어 "피부 손상"은 외부의 물리적 손상, 화학 물질, 세균, 곰팡이, 바이러스 등의 침투, 자외선에 대한 노출, 피부의 수분 손실, 노화 등에 의한 주름, 자유라디칼(활성산소) 등에 의한 산화, 피부 색소 침착, 피부 염증, 지루성 피부염, 붉어짐(발적, 홍반), 부종, 태선화, 습진, 소양감(가려움), 및 아토피 피부염 등을 포함하는 피부 조직 또는 세포의 임상적 및 미용적 관점에서의 손상을 포함한다.

용어 "피부 노화"는 시간의 흐름에 따른 내인성 노화 및 외부 환경에 의한 외인성 노화를 포함한다. 상기 피부 노화는 피부 주름, 잡티, 기미 등을 포함할 수 있다. 상기 피부 주름은 피부가 쇠하여 생긴 잔주름일 수 있다. 피부 주름은 광노화, 연령, 얼굴 표정, 수분 부족, 또는 이들의 조합에 의한 것일 수 있다. 상기 광노화는 자외선(UVA, UVB, 및 UVC 포함) 노출에 의한 피부 노화일 수 있다. 상기 피부 주름 개선은 피부에 주름이 생성되는 것을 억제 또는 저해하거나, 이미 생성된 주름을 완화시키는 것일 수 있다.

상기 리포좀은 인지질 및 에지 활성화제를 함유하는 지질 이중충의 구형 베지클을 의미할 수 있다.

상기 인지질은 포스파티딜콜린, 대두　레시틴,　스핑고마이엘린 (sphingomyelin), 콜레스테롤, 포스파티딘산, 포스파티딜세린, 포스파티딜 글리세롤, 포스파티딜이노시톨, 포스파티딜에탄올아민, 디포스파티딜글리세롤, 카르디오리핀 (cardiolipin), 플라즈마로겐, 디세틸포스페이트, 디스테아로일포스파티딜콜린, 디올레오일포스파티딜에탄올아민, 디팔미토일포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜에탄올아민, 디팔미토일포스파티딜세린, 엘레오스테아로일포스파티딜콜린, 엘레오스테아로일포스파티딜에탄올아민 및 엘레오스테아로일포스파티딜세린로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상일 수 있다. 또한, 상기 인지질은 전체 조성물에 대하여 0.05 중량% 내지 20 중량%, 0.1 중량% 내지 15 중량%, 0.1 중량% 내지 10 중량%, 0.1중량% 내지 8 중량%, 0.2 중량% 내지 15 중량%, 0.2 중량% 내지 10 중량%, 0.2 중량% 내지 8중량%, 0.1 중량% 내지 4 중량%, 0.2 중량% 내지 4 중량%, 0.2 중량% 내지 2 중량%, 0.8 중량% 내지 15 중량%, 0.8 중량% 내지 8 중량%, 2 중량% 내지 15 중량%, 2 중량% 내지 10 중량%, 또는 2 중량% 내지 8 중량%로 포함될 수 있다.

상기 에지 활성화제는, 지질 이중충에 유연성을 제공하는 물질을 의미할 수 있다. 일반적으로 에지 활성화제는 지질 이중층에 유동성을 증가시키기 위해 선택되고, 작은 사이즈를 갖는 피부 모공을 관통하기 위해, 고도로 변형 가능하도록 더 작은 또는 더 탄력성의 베지클을 제공할 수 있게 한다. 상기 에질 활성화제는 실리콘-함유 에지 활성화제, 양이온성 에지 활성화제, 음이온성 에지 활성화제, 비이온성 에지 활성화제, 양쪽이온성 에지 활성화제를 포함할 수 있다. 더욱 상세하게는 상기 에지 활성화제는 소디움 디옥시콜레이트(Sodium deoxycholate), 소디움 라우릴 설페이트(sodium lauryl sulfate), 소디움 라우릴 에테를 설페이트(sodium lauryl ether sulfate), 디소디움 라우릴 설포숙시네이트(disodium lauryl sulfosuccinate), 리조레시틴(lysolecithin), 폴리글리세린-10 라우레이트, 라우릴 PEG/PPG-18/18 메치콘, PEG-12 디메치콘, PEG/PPG-15/15 디메치콘, 세틸 트리메틸 암모니움 클로라이드(cetyl trimethyl ammonium chloride), 알킬 디메틸 벤질 암모니움 클로라이드(alkyl dimethyl benzyl ammonium chloride), 코코아미도프로필 베타인(cocoamidopropyl betaine), 소디움 코코암포아세테이트(sodium cocoamphoacetate), 코카마이드 엠이에이(cocamide MEA), 폴리소르베이트-20, 폴리소르베이트-40, 폴리소르베이트-60, 폴리소르베이트-80, 소르비탄 모노세테아레이트 및 스테아레스-2(steareth-2)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상일 수 있다. 또한, 상기 에지 활성화제는 전체 조성물에 대하여, 0.005 중량 내지 10 중량%, 0.01 중량 내지 10 중량%, 0.01 중량 내지 5 중량%, 0.01 중량 내지 3 중량%, 0.01 중량 내지 2 중량%, 0.01 중량 내지 1 중량%, 0.02 중량 내지 2 중량%, 0.02 중량 내지 1 중량% 또는 0.02 중량 내지 0.8 중량%로 포함될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 또한, 물(정제수) 및 다가 알코올을 더 포함할 수 있다. 상기 물 및 다가 알코올은 연속상을 형성시기키 위해 첨가될 수 있다. 상기 다가 알코올은 글리세린, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 디프로필렌글리콜, 에틸렌글리콜, 및 폴리에틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상일 수 있다. 상기 다가 알코올은 전체 조성물에 대하여 2 중량% 내지 30 중량%, 2 중량% 내지 25 중량%, 2 중량% 내지 15 중량%, 5 중량% 내지 30 중량%, 5 중량% 내지 25 중량%, 5 중량% 내지 20 중량%, 또는 5 중량% 내지 15 중량%로 포함될 수 있다.

일 구체예에 있어서, 상기 리포좀의 직경은 5 내지 1,500 nm, 5 내지 1,000 nm, 10 내지 1,500 nm, 10 내지 1,000 nm, 10 내지 800 nm, 10 내지 500 nm, 5 내지 500 nm, 5 내지 300 nm, 10 내지 300 nm, 5 내지 200 nm, 5 내지 100nm, 또는 10 내지 100 nm 일 수 있다.

본 명세서에서 용어 "생리활성물질(physiologically active substances)"는 개체에 유용한 활성, 예를 들면, 피부 재생, 피부 항노화, 피부 주름, 피부 미백 등을 부여할 수 있는 물질을 의미할 수 있다. 상기 생리활성물질의 비-제한적인 예는, 캐비어 추출물, 프로테오글리칸 또는 후코이단을 포함할 수 있다.

일 구체예에 있어서, 상기 생리활성물질은 캐비어 추출물, 프로테오글리칸 및 후코이단을 모두 포함하는 것일 수 있다.

본 명세서에서 용어 "캐비어"는 철갑상어의 알을 소금에 절인 것뿐만 아니라, 천연의 철갑상어의 알 및 이의 가공품을 모두 포함하는 의미로써 사용된다. 따라서 "캐비어"는 "철갑상어 알"과 상호 교환적으로 사용될 수 있다. 한편, 철갑상어 양수는 철갑상어에서 알을 채취하기 위하여 철갑상어의 배를 가르지 않고 알을 짜내는 방법을 이용할 때 얻을 수 있다. 상기 철갑상어 알과 철갑상어 양수는 직접 철갑상어로부터 채취하거나, 상업적으로 판매되는 것을 구매하여 쉽게 얻을 수 있다.

상기 캐비어 추출물은 캐비어로부터 추출된 핵산 혼합물일 수 있다.

본 명세서에서 용어 "핵산 혼합물"은 생체 고분자인 핵산의 분자량이 저감된 핵산 단편이 혼합되어 존재하는 불특정 형태를 지칭할 수 있다. 상기 핵산은 DNA일 수 있다. 상기 핵산 단편의 혼합물은 핵산 중합체로, 생체 구성 성분이기 때문에 알레르기 반응이나 체내 거부반응이 없으며, 주성분이 음전하를 가지는 DNA 또는 RNA로 이루어져 있어 친수성을 띠고 있어 산업적 적용이 매우 용이하여 약학적 조성물 및 화장료 조성물에 사용될 수 있다.

일 구체예에서, 상기 핵산은 DNA일 수 있다.

상기 핵산 단편은 약 10 kDa 내지 2000 kDa, 약 10 kDa 내지 1900 kDa, 약 10 kDa 내지 1800 kDa, 약 10 kDa 내지 1700 kDa, 약 15 kDa 내지 1700 kDa, 약 15 kDa 내지 1650 kDa, 약 15.5 내지 1650 kDa, 약 16 내지 1650 kDa 분자량을 갖는 것일 수 있다.

상기 핵산 혼합물은 식염수, 유기용제나 SDS와 같은 계면활성제 등을 처리한 후 얻어진 수용액에 가열처리하고, 원심분리하여 상등액을 얻은 뒤 다시 pH를 낮추는 등의 여러 단계를 거쳐 핵산복합물질을 침전분리하는 방법 등 당업계에 알려진 일반적인 방법에 따라 분리될 수 있다.

구체적으로, 상기 핵산 혼합물은 캐비어 원료에 정제수를 첨가하고, 균질화시켜 균질화물을 생성시키는 단계; 상기 단계에서 생성된 균질화물에 계면활성제 및 해양심층수 추출 미네랄을 첨가하여 용해시켜 용해물을 생성시키는 단계; 상기 단계에서 생성된 용해물의 pH를 조정하는 단계; 상기 단계에서 수득한 pH가 조정된 용해물에 알코올을 첨가하여 침전물을 수득하는 단계; 상기 단계에서 수득한 침전물을 정제하여 저분자량 DNA를 함유하는 정제물을 수득하는 단계; 및/또는 상기 단계에서 수득한 정제물을 건조시켜 저분자량 DNA를 수득하는 단계; 를 포함하는 방법으로 제조된 것일 수 있다.

본 명세서에서 용어 "프로테오글리칸(proteoglycan)"은 단백질과 복합된 산성 점액성 다당류로, 그 안에 포함된 당분자가 질소를 가지고 있으며, 코어단백질(core protein)이라는 폴리펩티드 사슬 1개에 글리코사미노글리칸(glycosaminoglycan, GAG) 당사슬이 결합한 구조를 포함한다. 프로테오글리칸은 히알루론산의 수분 보습력을 가지고 있으며, 콜라겐 섬유의 간격을 채우고, 진피층의 보습성 및 탄력성을 높이는 역할을 할 수 있다.

본 명세서에서 "후코이단(fucoidan)"은 해조류에서 추출된 후코스(fucose)와 황산기가 결합되어있는 황산화 다당체를 포함할 수 있다. 상기 후코이단은 세포 내 골지체에서 합성되어 갈조류의 세포간 물질이나 세포벽 구성 물질로 존재할 수 있으며, 수용성으로 점성이 높고, 후코스(fucose), 갈락토스(galactose), 만노스(mannose), 자일로스(xylose), 우론산(uronic acid) 등을 함유하는데 식이섬유로서의 기능을 갖는다.

상기 후코이단은 준비된 갈조류를 탈염 및 탈취시키는 단계; 상기 탈염 및 탈취시킨 갈조류를 분쇄하는 단계; 상기 분쇄한 갈조류에 효소처리하는 단계; 상기 효소처리한 갈조류로부터 조후코이단을 수득하는 단계; 및/또는 상기 조후코이단을 정제하여 후코이단을 수득하는 단계를 포함하는 방법으로 제조된 것일 수 있다.

일 구체예에 있어서, 상기 생리활성물질은 전체 조성물에 대하여 0.005 중량% 내지 50 중량%, 0.005 중량% 내지 40 중량%, 0.01 중량% 내지 10 중량%, 0.005 중량% 내지 10 중량%, 0.001 중량% 내지 2 중량%, 0.04 중량% 내지 10 중량%, 또는 0.004 중량% 내지 1.5 중량%일 수 있다.

상기 프로테오글리칸:후코이단:캐비어로부터 추출된 핵산 혼합물의 성분 비율은 1:0.5 내지 2: 3 내지 8, 1:0.8 내지 1.5: 3 내지 8, 1:0.5 내지 2: 4 내지 6, 또는 1:0.8 내지 1.5: 4 내지 6일 수 있고, 일 구체예에 있어서, 1:1:5일 수 있다.

상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다. 화장료 조성물은 다양한 형태로 제조될 수 있으며, 일 구체예에 있어서, 상기 조성물은 화장수(스킨로션), 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양 로션, 마사지크림, 영양 크림, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양 에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 현탁액, 겔, 분말, 페이스트, 마스크팩 또는 시트, 및 에어로졸로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있다. 이러한 제형의 조성물은 당해 분야에서 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 상기 화장료 조성물은 보존제, 안정화제, 계면활성제, 용해제, 보습제, 에몰리언트제, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 유기 및 무기 안료, 향료, 냉감제 또는 제한제 등을 더 포함할 수 있다. 상기 보습제 등의 추가 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며, 그 배합량은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.001 내지 5 중량%, 구체적으로 0.01 내지 3 중량%일 수 있다.

또한, 상기 조성물은 피부외용제용 조성물일 수 있다.

본 명세서에서, 상기 피부외용제는 크림, 겔, 연고, 피부 유화제, 피부 현탁액, 경피전달성 패치, 약물 함유 붕대, 로션, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 피부외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예를 들면 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 증점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제, 또는 이들의 조합과 필요에 따라서 적절하게 배합될 수 있다. 상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제, 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염등의 약제, 비타민 C, 아스코르브산인산마그네슘, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산, 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류등도 적절하게 배합할 수 있다.

다른 구체예에 있어서, 상기 조성물은 약학적 조성물일 수 있다.

상기 약학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 추가적으로 포함할 수 있다. 상기 희석제는 유당, 옥수수 전분, 대두유, 미정질 셀룰로오스, 또는 만니톨, 활택제로는 스테아린산 마그네슘, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 담체는 부형제, 붕해제, 결합제, 활택제, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 부형제는 미결정 셀룰로오즈, 유당, 저치환도 히드록시셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 붕해제는 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 전분글리콜산 나트륨, 무수인산일수소 칼슘, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 결합제는 폴리비닐피롤리돈, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오즈, 히드록시프로필셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 활택제는 스테아린산 마그네슘, 이산화규소, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다.

상기 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여 제형으로 제형화될 수 있다. 경구 투여 제형은 과립제, 산제, 액제, 정제, 캅셀제, 건조시럽제, 또는 그 조합일 수 있다. 비경구 투여 제형은 주사제일 수 있다.

다른 양상은 상기 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.

상기 방법은 인지질과 에지 활성화제를 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; 친수성 생리활성물질을 수상에 용해시키는 단계; 상기 생리활성물질이 용해된 수상에 상기 혼합물을 혼합하고 균질화하여 리포좀을 포함하는 혼합 균질액을 제조하는 단계; 및 상기 혼합 균질액 내의 생리활성물질을 리포좀 내로 담지하는 단계(예를 들면, 마이크로플루다이저(microfluidizer)를 사용하여)를 포함하는 단계를 포함할 수 있다.

도 1은 일 구체예에 따른 생리활성성분을 함유하는 리포좀의 도식화하여 나타낸 도면이다.
도 2는 일 구체예에 따른 생리활성성분을 함유하는 리포좀을 나타낸 사진이다.
도 3은 일 구체예에 따른 생리활성성분을 함유하는 리포좀의 입도 분석 결과를 나타낸 그래프이다.

이하, 실시예와 실험예들을 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예와 실험예들은 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예 1 내지 5 : 생리활성 물질을 함유하는 리포좀의 제조

하기 표 1의 조성과 같이 인지질인 레시틴(lipoid사, lipoid P75-3)과 에지활성화제인 폴리소베이트-80 또는 폴리글리세린-10 라우레이트를 다가알콜인 글리세린, 부틸렌글리콜에 60~70℃로 가열하여 용해시켰다. 다음으로 리포좀에 담지시킬 생리활성성분인 캐비어 DNA를 준비하였다. 캐비어 DNA는 대한민국 출원번호 제10-2019-0105223호에 기재된 바와 같이 준비하였다. 구체적으로, 분쇄된 캐비어 중의 SDS(sodium dodecyl sulfate)의 최종 농도가 약 1중량% 되고, 해양심층수 추출 염화나트륨의 최종 농도가 약 1. 25 중량%가 되도록 SDS 및 해양심층수 추출 염화나트륨을 첨가한 후 10 내지 30회 정도 천천히 인버팅(inverting) 하여 상기 분쇄물(균질화물), SDS 및 해양심층수 추출 염화 나트륨이 고루 섞이도록 한 다음, 약 1시간 동안 상온(예컨대, 18 내지 25℃)에서 교반시켜 용해물을 수득하였다. 상기 용해물에 수산화나트륨을 첨가하여 pH 9.5 내지 10.5로 만든 후, 60 내지 75℃에서 1 내지 2시간 동안 교반하였다. 그 후, 시트르산을 넣어 최종 pH를 pH 6.7 내지 7.3으로 조정한 후, 원심분리기를 사용하여 약 10,000rpm으로 원심분리하여 pH가 조정된 용해물(상등액)을 수득하였다. 상기 pH가 조정된 용해물에 에탄올을 부피기준으로 용해물 : 에탄올 = 25 내지 35 : 65 내지 75가 되도록 첨가한 후, 0 내지 4℃의 조건하에서 하룻밤 동안 침전시킨 후, 원심분리기를 사용하여 약 7, 000rpm으로 원심분리하여 침전물(조추출물)을 수득하였고, 이를 건조시켜 저분자량 DNA를 수득하였다(수득율: 4%).

후코이단은 대한민국 출원번호 제10-2019-0105016호에 기재된 바와 같이 준비하였다. 구체적으로, 분쇄한 갈조류에 100배(중량 기준)의 정제수를 가하여 교반한 다음, 효소(펙티넥스, 플라보자임, 알카라제, 셀루클라스트 및 비스코자임에서 선택된 2종 의 효소 혼합물)를 투입하여 추출하였다. 추출이 완료되고 난 후 100℃에서 20분 이상 방치하여 효소작용을 중지시켰다. 8000rpm에서 15분 동안 원심분리하여 갈조류 원물과 상층액을 분리하고, 1M HCl 을 참가하여 pH 2.0으로 적정한 후에 염화칼슘(CaCl2)을 첨가하여 알긴산을 제거하였다. 그 다음, 8000rpm에서 15분 동안 원심분리하여 상층액을 분리하고, 분리된 상층액의 pH를 1M NaOH를 이용하여 pH 7로 조정하였다. 그 다음, 상층액을 회전식 증발 농축기를 이용하여 농축하고, 농축 후 7-10 brix로 맞춘 다음, 농축액 양과 동일한 양의 에탄올을 투입하여 침전물로서 조후코이단을 수득하였다. 상기 침전물을 정제수에 용해시키고, 다시 에탄올을 투입하여 재정제 공정을 거친 후코이단을 수득하였으며, 이를 최종 동결건조시켰다.

프로테오글리칸은 코리아코스팩으로부터 구입하여 사용하였다.

다음으로 상기 준비된 세 개의 생리활성 성분 등을 증류수에 첨가하여 30~70℃로 가온하여 용해시켰다. 30~70℃의 생리활성성분이 함유된 수용액에 상기 가온 용해된 인지질과 에지활성화제 혼합액을 서서히 첨가하며, 호모제나이저를 이용하여 30~70℃에서 1,000~10,000rpm으로 균질화시켰다. 균질화된 혼합액을 마이크로플루다이저를 이용하여 30~70℃ 에서 100~3,000bar 압력으로 3회 처리하여 생리활성성분을 함유하는 리포좀을 제조하였다.

원료명	실시예 1	실시예 2	실시예 3	실시예 4	실시예 5
레시틴(P75-3)	0.5	1.0	5.0	0.5	0.5
폴리소베이트-80	0.05	0.1	0.5	0.05	0
폴리글리세린-10 라우레이트	0	0	0	0	0.05
부틸렌글리콜	10.0	10.0	20.0	0	10.0
글리세린	0	0	0	10.0	0
캐비어 DNA	0.05	0.1	0.5	0.05	0.05
프로테오글리칸	0.01	0.02	0.1	0.01	0.01
후코이단	0.01	0.02	0.1	0.01	0.01
증류수	To 100	To 100	To 100	To 100	To 100

도 1은 일 구체예에 따른 생리활성성분을 함유하는 리포좀의 도식화하여 나타낸 도면이다.

도 2는 일 구체예에 따른 생리활성성분을 함유하는 리포좀의 사진이다.

또한, 상기 제조된 실시예 1의 생리활성성분을 함유하는 리포좀에 대해 입도 분석을 수행하였다. 입도 분석은 동적광산란을 사용하여 90도 산란각에서 입자의 크기를 측정할 수 있는 Malvern사의 Zetasizer Nano ZS90를 이용하여 입자의 크기와 입도 분포의 분석을 수행하였고, 그 결과를 도 3에 나타내었다.

도 3은 일 구체예에 따른 생리활성성분을 함유하는 리포좀의 입도 분석 결과를 나타낸 그래프이다.

도 3에 나타낸 바와 같이, 일 구체예에 따른 리포좀은 직경이 10 내지 1000 nm인 것을 알 수 있었다.

비교예 1 및 2 : 트렌스퍼좀의 제조

하기 표 2의 조성으로 한 것만을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법으로, 상기 실시예와 조성만 달리하여 트랜스퍼좀을 제조하였다.

원료명	비교예 1	비교예 2	비교예 3
레시틴(P75-3)	0.5	0.5	0
폴리소베이트-80	0.05	0	0
부틸렌글리콜	10.0	10.0	0
캐비어 DNA	0	0.05	0.05
프로테오글리칸	0	0.01	0.01
후코이단	0	0.01	0.01
증류수	To 100	To 100	To 100

실험예 1. 항산화 활성 분석

상기 실시예 1, 비교예 1 및 비교예 3 에 대한 피부 노화개선 효과 검정시험으로 항산화 효과를 확인하기 위하여 자유라디칼소거시험과 활성산소소거시험을 실시하였다. 자유라디칼 소거시험은 안정한 DPPH의 흡광도가 540nm에서 최대 흡광도를 나타내는 것을 이용하는 것으로, 구체적으로, 자유라디칼인 DPPH가 시료에 의해 소거되어 보라색에서 투명한 색이 될수록 즉, 자유라디칼 소거율이 증가될수록 상기 540nm파장에서 흡광도가 줄어들게 됨을 이용하는 방법이다.

먼저, 0.1 mM 2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl radical(DPPH, Sigma) 용액 1 mL에 상기의 실시예 시료를 메탄올에 적당한 농도로 희석하여 1 mL를 혼합하고, 37℃에서 15분간 방치한 후 microplate reader (Thermo max, USA)를 이용하여 540nm파장에서 흡광도를 측정하였다. 상기 자유라디칼소거시험에서 대조군은 DPPH 1 ml과 메탄올 1 ml을 넣어 같은 방법으로 측정하였으며, 메탄올 1 ml과 시료 1 ml을 넣어 시료와 대조군에 대한 각각의 색 보정값을 얻는 것으로 설정하였다.양성 대조군으로는 L-아스코르브산을 이용하였고, 하기 수학식 1을 이용하여 자유라디칼소거율을 계산하여 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다. 표 3에서 IC₅₀은 자유라디칼을 50% 소거하기 위해 소요되는 시료의 농도이며, 값이 작을수록 항산화활성이 높음을 나타낸다.

[수학식 1]

자유라디칼소거율(%) = 100 - ((시료의 흡광도 / 대조군의 흡광도) x 100)

시료	자유라디칼소거율, IC₅₀(ppm, μg/ml)
실시예 1	23.50
비교예 1	N.D.
비교예 3	25.75
L-아스코르브산	22.50

상기 표 3의 결과 실시예 1와 비교예 3은 강력한 합성 항산화제인 L-아스코르브산과 비교하여 유사한 항산화 능력을 나타내었으며, 자유라디칼 소거율 50%는 미량의 농도에서 항산화 효능이 나타남을 확인할 수 있었다. 이는 일 구체예에 따른 조성물은 리포좀 담지에 의해서 생리활성물질의 전달을 향상시킬 뿐만 아니라, 리포좀을 제조하기 위한 다른 성분을 혼합하여도, 생리활성성분의 항산화 활성이 감소되지 않았음을 의미한다.

실험예 2. 피부주름 억제 및 개선 활성 분석

실시예 1, 비교예 1 및 비교예 3 의 피부주름 억제 및 개선 효과를 검정하기 위하여 엘라스테이즈 활성저해시험 (elastase inhibition activity test)을 실시하였다. 엘라스틴은 피부 진피 내 매트릭스 (matrix)층을 구성하는 성분으로 피부가 노화됨에 따라 엘라스틴이 분해되고 진피 내 매트릭스층이 무너지며 주름이 생기게 된다. 이러한 원리를 이용하여 엘라스틴(elastin)을 분해하는 효소인 엘라스테이즈의 활성을 측정하는 방법으로 엘라스테이즈 기질인 N-석시닐-(Ala)₃ p-니트로아닐린(N-succinyl-(Ala)₃ p-nitroaniline, Sigma)을 이용하여 p-니트로아닐린이 분해되면서 생기는 색의 변화를 405nm의 파장에서 흡광도를 측정함으로써 엘라스테이즈 활성을 측정할 수 있다.

구체적으로, 완충액은 pH 8.0, 0.267 M Trizma-HCl (Sigma), 기질액은 8.8 mM N-Succinyl-(Ala)3 p-nitroaniline, 효소액은 돼지췌장 엘라스테이즈를 10 μg/mL (Sigma사에서 제조)의 농도로 사용하였다. 완충액 60 μL, 기질액 20 μL와 상기 시료 각각을 농도별로 3차 증류수에 희석한 시료액 100 μL를 섞은 후, 효소액 20 μL를 넣어 25 ℃항온수조에서 15분간 반응시켜 p-니트로아닐린의 생성량을 microplate reader(UVT-06685, Thermo max, USA)를 사용하여 파장 405nm에서 측정하였다. 상기 엘라스테이즈 활성도를 측정하기 위한 대조군은 시료 대신 3차 증류수를 넣어 같은 방법으로 측정하였으며, 효소액 대신 3차 증류수를 넣어 각각에 대한 색 보정값을 얻은 경우를 설정하였다. 시험에 사용한 시료는 실시예 1, 비교예 1 및 비교예 3의 엘라스테이즈 활성저해효과를 판단하기 위하여, 현재 주름개선 기능성 원료로 효과가 뛰어나다고 알려진 올레오놀산(Oleanolic acid)(Sigma-Aldrich)를 양성 대조군으로 설정하였다. 하기 수학식 2을 이용하여 엘라스테이즈 저해율을 수치로 계산하였고, 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다. 표 4에서 IC₅₀은 엘라스테이즈 활성을 50% 저해하기 위해 소요되는 시료의 농도이며, 값이 작을수록 저해율이 높음을 나타낸다.

[수학식 2]

엘라스테이즈활성저해율(%) = 100 - ((시료의 흡광도/대조군의 흡광도) x 100)

시료	엘라스테이즈 활성저해율, IC₅₀(mg/mL)
실시예 1	0.23
비교예 1	N.D.
비교예 3	0.25
올레오놀산	0.21

표 4에 나타난 바와 같이, 상기 실시예 1 및 비교예 3 의 엘라스테이즈 활성저해율은 각각 0.23, 및 0.25 mg/mL로 올레오놀산 과 비슷할 정도로 주름개선효과 및 항노화 효능이 있음을 확인할 수 있었다. 이는 일 구체예에 따른 조성물은 리포좀 담지에 의해서 생리활성물질의 전달을 향상시킬 뿐만 아니라, 리포좀을 제조하기 위한 다른 성분을 혼합하여도, 생리활성성분의 항주름 활성이 감소되지 않았음을 의미한다.

실험예 3. MMP 발현 억제 활성 분석

상기 실시예 1, 비교예 1 및 비교예 3 의 UV 조사 및 시료 첨가 후 MMP-1 농도를 측정하기 위해서 효소면역분석법(ELISA)를 실시하였다.

구체적으로, UV 챔버를 이용하여 인간 진피 섬유아세포에 UVA를 5 J/㎠의 에너지로 조사하였다. 자외선 조사량과 배양시간은 예비 실험을 통하여 섬유아세포에서 MMP 발현량이 최대가 되는 조건을 확립하였다. 음성 대조군은 은박지로 싸서 UVA의 환경에 같은 시간 유지하였다. UVA 방출량은 UV 라디오미터를 이용하여 측정하였다. UVA가 조사되는 동안에는 배지를 교환하지 않았고, UV 조사가 완료된 후, 샘플을 함유하는 배지로 교환하였다. 이후에, 세포를 24시간 동안 추가 배양하고, 배지를 회수한 후, 이를 96-웰에 첨가하였다. 이후에, 상기 웰에 일차항체(MMP-1 (Ab-5) 단일클론항체)를 처리하고 37 ℃에서 60분 반응시켰다. 상기 웰에서 이차항체인 안티마우스 IgG(whole mouse, alkaline phosphatase conjugated)를 다시 60분 정도 반응시킨 후, 알카린 포스파타제 기질 용액(1 mg/mlρ-nitrophenyl phosphate in diethanolamine 완충용액)을 상온에서 30분간 반응시키고 마이크로플레이트 리더로 405nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 시료를 첨가하지 않은 것을 사용하였고, 양성 대조군으로는 올레오놀산을 사용하였으며, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.

시험군	처리농도(%)	MMP-1 발현 억제율(%)
실시예 1	10	25
비교예 1	10	0
비교예 3	10	17
Oleanolic acid	0.05	20

상기 표 5에 나타난 바와 같이, 자외선 조사시에 발현이 유도되는 MMP-1에 대하여 시료를 처리하지 않은 대조군 대비 실시예 1의 조성물은 25% 이상의 억제율을 보여 효과가 있음을 확인할 수 있었다.

또한, 비교예 3은 피부생리활성 물질을 리포좀에 담지시키지 않고, 직접 처리한 것으로, 일 구체예에 따른 리포좀 조성물은 비교예 3에 비해 오히려 MMP-1 억제 활성이 더 좋은 것을 알 수 있었다. 이는 일 구체예에 따른 조성물은 리포좀 담지에 의해서 생리활성물질의 전달을 향상시킬 뿐만 아니라, 리포좀을 제조하기 위한 다른 성분을 혼합하여도, 생리활성성분의 MMP-1 억제 활성이 감소되지 않았음을 의미한다.

이상의 결과로, 일 구체예에 따른 피부생리활성 담지 리포좀 조성물은 피부 상태 개선, 예를 들면, 항산화, 항노화, 항주름, 또는 피부장벽개선 등의 효과가 있음을 알 수 있었다.

Claims

전체 조성물에 대하여 0.1 중량% 내지 10 중량%의 인지질 및 0.01 중량% 내지 5 중량%의 에지 활성화제(edge activator)를 포함하는 리포좀; 및
상기 리포좀에 담지된, 전체 조성물에 대하여 0.01 내지 10 중량%의 친수성의 피부생리활성물질을 포함하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 리포좀은 직경이 10 내지 10,000 nm인 것인 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 인지질은 포스파티딜콜린, 대두　레시틴,　스핑고마이엘린 (sphingomyelin), 콜레스테롤, 포스파티딘산, 포스파티딜세린, 포스파티딜 글리세롤, 포스파티딜이노시톨, 포스파티딜에탄올아민, 디포스파티딜글리세롤, 카르디오리핀 (cardiolipin), 플라즈마로겐, 디세틸포스페이트, 디스테아로일포스파티딜콜린, 디올레오일포스파티딜에탄올아민, 디팔미토일포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜에탄올아민, 디팔미토일포스파티딜세린, 엘레오스테아로일포스파티딜콜린, 엘레오스테아로일포스파티딜에탄올아민 및 엘레오스테아로일포스파티딜세린로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것인 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 소디움 디옥시콜레이트(Sodium deoxycholate), 소디움 라우릴 설페이트(sodium lauryl sulfate), 소디움 라우릴 에테를 설페이트(sodium lauryl ether sulfate), 디소디움 라우릴 설포숙시네이트(disodium lauryl sulfosuccinate), 리조레시틴(lysolecithin), 폴리글리세린-10 라우레이트, 라우릴 PEG/PPG-18/18 메치콘, PEG-12 디메치콘, PEG/PPG-15/15 디메치콘, 세틸 트리메틸 암모니움 클로라이드(cetyl trimethyl ammonium chloride), 알킬 디메틸 벤질 암모니움 클로라이드(alkyl dimethyl benzyl ammonium chloride), 코코아미도프로필 베타인(cocoamidopropyl betaine), 소디움 코코암포아세테이트(sodium cocoamphoacetate), 코카마이드 엠이에이(cocamide MEA), 폴리소르베이트-20, 폴리소르베이트-40, 폴리소르베이트-60, 폴리소르베이트-80, 소르비탄 모노세테아레이트 및 스테아레스-2(steareth-2)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것인 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 친수성의 생리활성소재는 캐비어로부터 추출된 핵산 함유물, 프로테오글리칸 및 후코이단을 포함하는 것인 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 피부 미용 개선용인 것인 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 피부 미용 개선은 항주름, 항산화, 또는 항피부노화인 것인 화장료 조성물.
전체 조성물에 대하여 0.1 중량% 내지 10 중량%의 인지질, 및
전체 조성물에 대하여 0.01 중량% 내지 5 중량%의 에지 활성화제(edge activator)를 포함하는 리포좀; 및
상기 리포좀에 담지된, 전체 조성물에 대하여 0.01 내지 10 중량%의 친수성의 피부생리활성물질을 포함하는 피부 상태 개선용 피부 외용제 조성물.