UA72187C2 - Регуляція експресії хінолатфосфорибозилтрансферази - Google Patents
Регуляція експресії хінолатфосфорибозилтрансферази Download PDFInfo
- Publication number
- UA72187C2 UA72187C2 UA99126735A UA99126735A UA72187C2 UA 72187 C2 UA72187 C2 UA 72187C2 UA 99126735 A UA99126735 A UA 99126735A UA 99126735 A UA99126735 A UA 99126735A UA 72187 C2 UA72187 C2 UA 72187C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- plant
- dna
- specified
- plant cell
- promoter
- Prior art date
Links
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title claims abstract description 53
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 title description 7
- YXLXNENXOJSQEI-UHFFFAOYSA-L Oxine-copper Chemical compound [Cu+2].C1=CN=C2C([O-])=CC=CC2=C1.C1=CN=C2C([O-])=CC=CC2=C1 YXLXNENXOJSQEI-UHFFFAOYSA-L 0.000 title description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 77
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims abstract description 22
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 240
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 124
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 claims description 117
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 claims description 117
- 229960002715 nicotine Drugs 0.000 claims description 78
- SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N (-)-Nicotine Chemical compound CN1CCC[C@H]1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N 0.000 claims description 75
- SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N nicotine Natural products CN1CCCC1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 75
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 65
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 64
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 49
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 40
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 39
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 38
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims description 35
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 31
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims description 27
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 26
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 claims description 22
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 19
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 19
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims description 19
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims description 19
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 18
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 13
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 10
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 10
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 9
- 235000019505 tobacco product Nutrition 0.000 claims description 7
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims description 6
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims description 6
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 5
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 claims description 4
- 230000010354 integration Effects 0.000 claims description 3
- 235000019504 cigarettes Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 2
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 claims description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 claims 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 abstract description 13
- 230000009467 reduction Effects 0.000 abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 88
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 44
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 41
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 25
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 18
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 18
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 17
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 11
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 11
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 11
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 10
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 10
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 10
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 8
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 8
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 7
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 7
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 7
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 5
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 5
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 5
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 5
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 5
- 108020004491 Antisense DNA Proteins 0.000 description 4
- 241000227653 Lycopersicon Species 0.000 description 4
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 4
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 4
- 102000016397 Methyltransferase Human genes 0.000 description 4
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 4
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 4
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 description 4
- 239000003816 antisense DNA Substances 0.000 description 4
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 108010060641 flavanone synthetase Proteins 0.000 description 4
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 4
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 4
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 4
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 4
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 3
- 108010003581 Ribulose-bisphosphate carboxylase Proteins 0.000 description 3
- 241001002356 Valeriana edulis Species 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 3
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 230000000442 meristematic effect Effects 0.000 description 3
- -1 phosphoribosyl Chemical group 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 238000005204 segregation Methods 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 108010035563 Chloramphenicol O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 230000026774 DNA mediated transformation Effects 0.000 description 2
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 2
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 2
- 108091092724 Noncoding DNA Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 240000007377 Petunia x hybrida Species 0.000 description 2
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 2
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 2
- 239000008406 cosmetic ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 2
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 2
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 2
- 108010002685 hygromycin-B kinase Proteins 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 230000005305 organ development Effects 0.000 description 2
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 230000014493 regulation of gene expression Effects 0.000 description 2
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 2
- 230000010153 self-pollination Effects 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- LXJXRIRHZLFYRP-VKHMYHEASA-L (R)-2-Hydroxy-3-(phosphonooxy)-propanal Natural products O=C[C@H](O)COP([O-])([O-])=O LXJXRIRHZLFYRP-VKHMYHEASA-L 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- MNIQECRMTVGZBM-UHFFFAOYSA-N 3-(1-methylpyrrolidin-2-yl)pyridine;7h-purin-6-amine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1NC=N2.CN1CCCC1C1=CC=CN=C1 MNIQECRMTVGZBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PJZBKCVVFPTFAW-UHFFFAOYSA-N 4-Methylaminobutanal Chemical compound CNCCCC=O PJZBKCVVFPTFAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZGXJTSGNIOSYLO-UHFFFAOYSA-N 88755TAZ87 Chemical compound NCC(=O)CCC(O)=O ZGXJTSGNIOSYLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700032845 Ala(2)- enkephalinamide-Met Proteins 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 241000207199 Citrus Species 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000724252 Cucumber mosaic virus Species 0.000 description 1
- 241000632511 Daviesia arborea Species 0.000 description 1
- 102100030011 Endoribonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108010093099 Endoribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 240000002989 Euphorbia neriifolia Species 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000614095 Homo sapiens Proton-activated chloride channel Proteins 0.000 description 1
- 108010025815 Kanamycin Kinase Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 241001144488 Nicotiana occidentalis Species 0.000 description 1
- 241000208134 Nicotiana rustica Species 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 108020005120 Plant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010064851 Plant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108020005089 Plant RNA Proteins 0.000 description 1
- 102100040631 Proton-activated chloride channel Human genes 0.000 description 1
- 230000007022 RNA scission Effects 0.000 description 1
- 108700005075 Regulator Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 241000251131 Sphyrna Species 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N anhydrous quinoline Natural products N1=CC=CC2=CC=CC=C21 SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003139 biocide Substances 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012832 cell culture technique Methods 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 230000001055 chewing effect Effects 0.000 description 1
- 235000019506 cigar Nutrition 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000035613 defoliation Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 241001233957 eudicotyledons Species 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000006272 natural pesticide Substances 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 108010058731 nopaline synthase Proteins 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 238000003976 plant breeding Methods 0.000 description 1
- 235000021118 plant-derived protein Nutrition 0.000 description 1
- 108010027792 poly A hydrolase Proteins 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- GJAWHXHKYYXBSV-UHFFFAOYSA-N quinolinic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1C(O)=O GJAWHXHKYYXBSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002786 root growth Effects 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000012090 tissue culture technique Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
- C12N9/1077—Pentosyltransferases (2.4.2)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
- C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Physiology (AREA)
- Botany (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Manufacture Of Tobacco Products (AREA)
Abstract
Винахід стосується молекул ДНК, які кодують фермент хінолатфосфорибозилтрансферазу, та конструкцій, які містять згадану ДНК, трансгенних рослин та клітин, трансформованих молекулою ДНК за винаходом, та способів зменшення або збільшення експресії ферменту.
Description
Даний винахід було зроблено при підтримці Уряду згідно з Грантом Ме МОВ-9206506 Національної
Наукової Фундації. Уряд має певні права на цей винахід.
Даний винахід відноситься до рослинної хінолат фосфорибозил трансферази (ХФРТази) та до ДНК, що кодує цей фермент. Зокрема, даний винахід пов'язаний з використанням ДНК, що кодує хінолат фосфорибозил трансферазу, для одержання трансгенних рослин, які мають генетично змінені рівні нікотину, та до рослин, одержаних таким чином.
Одержання тютюну зі зменшеними рівнями нікотину представляє інтерес, уважаючи на притягальну природу нікотину. Крім того, рослини тютюну з екстремально ризькими рівнями продукції нікотину, або ті, що не виробляють нікотину, привабливі як реципієнти для трансгенів, які експресують комерційно цінні продукти, такі як ліки, складові косметичних препаратів, або харчові добавки. Різноманітні способи призначені для видалення нікотину з тютюну. Проте більшість цих способів видаляє також інші інгредієнти з тютюну разом з нікотином, при цьому несприятливо впливаючи на тютюн. Класична технологія розведення культур забезпечує одержання рослин тютюну з нижчими рівнями нікотину (приблизно 895), ніж це знайдено у рослинах тютюну дикого типу. Бажаними є рослини тютюну та тютюн, що мають ще більше зменшення вмісту нікотину.
Один підхід до зменшення рівня біологічного продукту полягає у зменшенні кількості необхідного ферменту у біосинтетичному шляху обміну, що веде до утворення цього продукту. Якщо фермент, який піддають впливу, у природі знаходиться у нормо-лімітуючій кількості (відповідно до інших ферментів, що необхідні у цьому шляху обміну), будь-яке зменшення достатку ферменту буде зменшувати продукцію кінцевого продукту. Якщо кількість ферменту у природі не є нормо-лімітуючою, його присутність у клітині повинна бути зменшена до нормо-лімітуючих рівнів для того, щоб зменшити вихід продукту цього шляху обміну. Навпаки, якщо існуюча у природі кількість ферменту є нормо-лімітуючою, будь-яке збільшення ферментативної активності буде призводити до збільшення виходу кінцевого продукту біосинтетичного шляху обміну.
Нікотин утворюється, головним чином, у корінні рослин тютюну при подальшому транспорті до листя, де він запасається (Т50, Рпузіоюду апа Віоспетівігу ої Торассо Ріапіє5, рр.233-34, Оомадеп, Ниїспіпбоп 5 Нозвв5,
Зігоцазриго, Ра (1972)). Обов'язковим етапом біосинтезу нікотину є формування утворення нікотинової кислоти з хінолінової кислоти, цей етап каталізується за допомогою ферменту хінолін фосфорибозил трансферази (ХФРТази). Як виявляється, ХФРТаза є нормо-лімітуючим ферментом шляху обміну, забезпечуючи нікотинову кислоту для синтезу нікотину у тютюні. Див., наприклад, Ееїйп еї аЇ. "Регуляція ферментативної активності шляху обміну нікотину у капсулах тютюну", Ріапіа, 168, рр.402-07 (1986); Мадпег єї аі. "Регуляція ферментативної активності шляху обміну нікотину у тютюні", Рпузіо!. Ріапі., 68, рр.667-72 (1986).
Модифікація рівнів нікотину у рослинах тютюну шляхом антисмислової регуляції експресії путресцин метил трансферази (ПМтТази) була запропонована у патентах США Мо5,369,023 та Ме5,260,205, МакКаїапі та маїїйк.
Заявка РСТ УМ/О94/28142, УММанпай та МаїїК, описує ДНК, що кодує ПМТ, та використання смислових та антисмислових конструкцій ПМТ.
Першим аспектом даного винаходу є ізольована молекула ДНК, що включає послідовність ФЗЕО ІЮ МО:1; послідовності ДНК, що кодують фермент, який має послідовність 5ЕО ІЮО МО:2; послідовності ДНК, що гібридизуються з цими ДНК, та які кодують фермент хінолат фосфорибозил трансферазу; та послідовності
ДНК, які мають відмінності від вищезгаданих ДНК, що зумовлені виродженістю генетичного коду. Пептид, який кодується цими ДНК, представляє собою наступний аспект винаходу.
Ще один аспект даного винаходу представляє собою конструкцію ДНК, що включає оперативний у рослинній клітині промотор та кодуючий фермент хінолат фосфорибозил трансферазу сегмент ДНК, який розміщений нижче від промотора та оперативно зв'язаний з ним. ДНК, що кодує фермент може бути у антисмисловій або смисловій орієнтації.
Наступний аспект даного винаходу полягає у способі одержання трансгенної рослинної клітини, що має зменшену експресію хінолат фосфорибозил трансферази (ХФРТази), шляхом забезпечення рослинної клітини типу, відомого для експресії хінолпат фосфорибозил трансферази; трансформації рослинної клітини за допомогою екзогенної конструкції ДНК, що охоплює промотор та ДНК, яка включає частину послідовності, що кодує ІРНК хінолат фосфорибозил трансферази.
Наступний аспект даного винаходу представляє собою трансгенну рослину видів роду Місойапа, що має зменшену експресію хінолат фосфорибозил трансферази (ХФРТази) порівняно з нетрансформованою контрольною рослиною. Клітини таких рослин містять конструкцію ДНК, яка включає сегмент послідовності
ДНК, що кодує рослинну ІРНК хінолат фосфорибозил трансферази.
Наступний аспект даного винаходу представляє собою спосіб зменшення експресії гена хінолат фосфорибозил трансферази у рослинній клітині шляхом вирощування рослинної клітини, трансформованої внесенням екзогенної ДНК, при цьому ланцюг, який транскрибується, екзогенної ДНК, який транскрибується є комплементарним ендогенній по відношенню до клітини ІРНК хінолат фосфорибозил трансферази.
Транскрипція комплементарного ланцюга зменшує експресію ендогенного гена хінолат фосфорибозил трансферази.
Наступний аспект даного винаходу полягає у способі одержання рослини тютюну, що має зменшені рівні нікотину у листях рослин тютюну, шляхом вирощування рослини тютюну з клітинами, що містять екзогенну послідовність ДНК, при цьому ланцюг, що транскрибується, екзогенної послідовності ДНК є комплементарний до ендогенної ІРНК хінолат фосфорибозил трансферази у клітинах.
Наступний аспект даного винаходу представляє собою спосіб одержання трансгенної рослинної клітини, що має збільшену експресію хінолат фосфорибозил трансферази (ХФРТази), шляхом трансформації рослинної клітини, що експресує хінолат фосфорибозил трансферазу, за допомогою екзогенної конструкції
ДНК, яка включає послідовність ДНК, яка кодує хінолат фосфорибозил трансферазу.
Наступний аспект даного винаходу представляє собою трансгенну рослину Місойапа, що має збільшену експресію хінолат фосфорибозил трансферази (ХФРТАази), при цьому клітини трансгенної рослини включають екзогенну послідовність ДНК, яка кодує рослинну хінолат фосфорибозил трансферазу.
Наступний аспект даного винаходу представляє собою спосіб збільшення експресії гена хінолат фосфорибозил трансферази у рослинній клітині шляхом вирощування рослинної клітини, трансформованої внесенням екзогенної ДНК, що кодує хінолат фосфорибозил трансферазу.
Наступний аспект даного винаходу представляє собою спосіб одержання рослини тютюну, що має збільшені рівні нікотину у листях, шляхом вирощування рослини тютюну, що має клітини, які містять екзогенну послідовність ДНК, яка кодує функціональну у Клітинах хінолат фосфорибозил трансферазу.
Фігура 1 показує біосинтетичний шлях обміну, що веде до утворення нікотину. Відомо, що ферментативна активність, яка регулюється Міс! та Міс2, пов'язана з ХФРТазою (хінолат фосфорибозилтрансферазою) та
ПМтазою (путресцин метил трансферазою).
Фігура 2А показує послідовність нуклеїнової кислоти кКДНК МЮРТІ (5ЕО ІО МО: 1), з кодуючою послідовністю (5ЕО ІО МО:3), що показана великими літерами.
Фігура 28 показує дедуковану амінокислотну послідовність (ЗЕО ІЮ МО:2) ХФР'Тази тютюну, що кодується
КДНК МОРТІ.
Фігура З вирівнює дедуковану амінокислотну послідовність МЮРТІ та споріднені послідовності
АПподозрігійшт гпобгит, М у со Басієйт Іергєе, ЗаітопеПйа (Урнітигішт, ЕвбПегпспіа соїї, людини, та
Засспаготусез сегемівіає.
Фігура 4 показує результати комплементації мутанта Ев5Пегпсніа соїї, у якого відсутня хінолат фосфорибозил трансфераза (ТН265)) з кДНК МЮОРТІ. Клітини були трансформовані за допомогою експресійного вектора, що несе МЮОРТІ; ріст трансформованих клітин ТН265, що експресують МЮОРТІ на мінімальному середовищі, в якому відсутня нікотинова кислота, показує, що МОРТІ кодує ХФР Тазу.
Фігура 5 порівнює рівні нікотину та відповідні існуючі стійкі рівні ІРНК МОРТІ у мутантах тютюну Міс! та
Міс2: дикий тип Випєу 21 (Міс1/Місї Міс2/ Місг); Міс1- Випеу 21 (піс1/піс1 Міс2/ Місг); Міс2" Випеу 21 (Міс1/Мміс1 пісг/піс2г); Міс1 Міс2 ВипПйеу 21 (піст/пій пісг/піс2г). Суцільний стовпчик показує рівні транскрипту ІРНК, заштрихований стовпчик показує рівні нікотину.
Фігура 6 представляє діаграму відповідних рівнів ІРНК МОРТІ у рослинах тютюну після топпінгу порівняно з контрольними рослинами, що не зазнали топпінгу. Суцільний стовпчик показує рівні транскрипту ІРНК, заштрихований стовпчик показує рівні нікотину.
Нікотин виробляється у рослинах тютюну шляхом конденсації нікотинової кислоти та 4- метиламінобутаналу. Біосинтетичний шлях обміну, що призводить до продукції нікотину, ілюструється на фігурі 1. Два регуляторні локуси (Міс! та Міс2) діють як кодомінантні регулятори продукції нікотину. Ферментні аналізи коренів одиничного та подвійного Міс мутантів показують, що активності двох ферментів, хінолат фосфорибозил трансферази (ХФРТази) та путресцинметил трансферази (ПМтТази), є прямо пропорційними до рівнів біосинтезу нікотину. Порівняння ферментативної активності у тканинах тютюну (кореня та калусів) з різною здатністю до синтезу нікотину показує, що ХФРТазна активність строго корелює з вмістом нікотину (У/адпег та М/адпег, Ріапіа 165:532 (1985)). Зашпаєгв та Визп (Ріапі Рпузіої!. 64:236 (1979) показали, що рівень
ХФРТАази у коренях мутантів з низьким вмістом нікотину є пропорційним до рівнів нікотину у листі.
Даний винахід охоплює нові послідовності КДНК (5ЕО ІЮ МО: 1), що кодують рослинну хінолат фосфорибозил трансферазу (ХФРТазу) послідовності 5ЕО ІО МО:2. Оскільки ХФРТазна активність строго корелює з вмістом нікотину, створення трансгенних рослин тютюну, в яких ХФРтТазні рівні знижені у коренях рослини (порівняно з рівнями рослин дикого типу), призводять до утворення рослин, що мають зменшені рівні нікотину у листі. Даний винахід забезпечує способи та конструкції нуклеїнової кислоти для одержання таких трансгенних рослин, так само і самих трансгенних рослин. Такі способи включають експресію антисмислової
РНК МЮОРТІ, яка знижує кількість ХФРТази у коренях тютюну. Нікотин додатково було знайдено у видах та родинах рослин, що не відносяться до тютюну, але наявна кількість нікотину, звичайно, набагато нижча, ніж у
МЛабасит.
Даний винахід також стосується смислових та антисмислових рекомбінантних молекул ДНК, що кодують
ХФфРТазу або антисмислові молекули РНК ХфФфРТАази, та векторів, що включають ці рекомбінантні молекули
ДНК, а також трансгенні рослинні клітини та рослини, трансформовані за допомогою цих молекул ДНК та векторів. Трансгенні клітини табака та рослини згідно з даним винаходом характеризуються нижчим або вищим вмістом нікотину, ніж нетрансформовані контрольні клітини та рослини.
Рослини тютюну з екстремально низькими рівнями продукції нікотину, або ті, що не виробляють нікотину, привабливі як реципієнти для трансгенів, що експресують комерційно цінні продукти, такі як ліки, складові косметитчних препаратів, або харчові добавки. Тютюн привабливий як рецепієнтна рослина для трансгену, що кодує бажаний продукт, оскільки табак легко піддається генноїіїнженерним маніпуляціям, та виробляє дуже велику біомасу на акр; рослини тютюну зі зменшеними ресурсами, призначені для одержання нікотину, таким чином, будуть мати більше ресурсів, доступних для продукції трансгенних продуктів. Способи трансформації тютюну за допомогою трансгенів, що виробляють бажані продукти, відомі у даній галузі; будь-яка придатна методика може бути використана на рослинах тютюну з низьким рівнем нікотину згідно з даним винаходом.
Рослини тютюну зі зменшеною експресією ХФРТази згідно з даним винаходом, та зі зменшеними рівнями нікотину, можуть бути бажані при одержанні тютюнових виробів, що мають зменшений вміст нікотину. Рослини тютюну згідно з даним винаходом можуть бути придатні для використання у будь-якому традиційному тютюновому продукті, включаючи, але не обмежуючись, курильну трубку, сигари, цигарки, та жувальний табак, та можуть бути у будь-якій формі, включаючи листя тютюну, пресоване листя тютюну або різаний тютюн.
Конструкції згідно з даним винаходом можуть також бути корисні у забезпеченні трансгенних рослин, що мають підвищену експресію ХФРТази та збільшений вміст нікотину у рослині. Такі конструкції, способи при використанні цих конструкцій та рослини, отримані таким чином, можуть бути бажаними при одержання тютюнових виробів, що мають змінений вміст нікотину, або в одержанні рослин, що мають збільшений вміст нікотину для інсектицидної дії.
Автори винаходу відкрили, що ген ТОЬАба (див. Сопкіїпо та ін., Ріапі Рнув. 93, 1203 (1990)) кодує ХФРТазу
Місойапа (абасит і розкрили послідовність КДНК МОРТІ (раніше позначеної як ТорАОг) та амінокислотну послідовність ферменту, що кодується. Порівняння амінокислотної послідовності МОРТІ з амінокислотною послідовністю з бази даних бепВапк, виявило обмежену подібність послідовності до бактеріальних білків хінолат фосфорибозил трансферази (ХФРТази) (Фігура 3).
Хінолат фосфорибозил трансфераза необхідна для біосинтезу де помо нікотин аденін динуклеотиду (МАЮ) як у прокаріотах, так і в еукаріотах. У тютюні високі рівні ХФРТази визначились у корінні, але не в листях. Для встановлення, що МРТ! кодує ХФРТазу, автори даного винаходу використали бактеріальний штам
Езсепетісніа соїї (ТН265), мутант, у якого відсутня хінолат фосфорибозил трансфераза (пааст). Цей мутант не може рости на мінімальному середовищі, в якому відсутня нікотинова кислота. Проте, експресія МОРТІ білка у цьому бактеріальному штамі демонструє МайС" фенотип (Фігура 4), підтверджуючи, що МЮРТІ кодує хХФРТАазу.
Винахідники перевіряли дію Міс! та Міс2 мутантів тютюну, та дію топпінгу на рослин тютюну на стабільні рівні ІРНК МОРТІ та рівні нікотину. (Видалення апікального домінування шляхом відрізування на початку цвітіння, як добре відомо, призводить до збільшених рівнів біосинтезу нікотину та транспорту у тютюн, та є стандартною практикою при одержанні тютюнових виробів). Якщо МОРТІ насправді втягнена у біосинтез нікотину, можна очікувати, що (1) рівні ІРНК МОРТІ будуть нижчі у Міс1/Міс2 подвійних мутантів та (2) рівні
ІРНК МОРТІ будуть підвищуватись після топпінгу. Було виявлено, що рівні ІРНК МОРТІ у Міс1/Мміс2 подвійних мутантах були на 2595 вищими, ніж у дикого типа (Фігура 5). Далі, протягом 6 годин після топпінгу, рівні тРНК
МЮОРТІ у рослинах тютюну збільшувались приблизно у 8 разів. Таким чином, було визначено, що МЮОРТІ є ключовим регуляторним геном у біосинтетичному шляху обміну нікотину. Трансгенні рослинні клітини та рослини
Регуляція експресії гена у геномі рослинних клітин може бути досягнута шляхом інтеграції гетерологічної
ДНК під транскрипційним контролем промотора, який є функціональним у хазяїні, та в якому ланцюг, що транскрибується, гетерологічної ДНК є комплементарним до ланцюга ДНК, який транскрибується з ендогенного гена, що піддають регуляції. Вбудована ДНК, Що згадується як антисмислова ДНК, забезпечує послідовність РНК, яка є комплементарною до ІРНК, що одержують у природних умовах (ендогенної), та яка інгібує експресію ендогенної ІРНК. Механізм такої регуляції експресії гена за допомогою антисмислової ДНК повністю ще не зрозумілий. Оскільки не виказано побажання дотримуватись будь-якої єдиної теорії, можна зазначити, що одна теорія антисмислової регуляції пропонує, що транскрипція антисмислової ДНК продукує
РНК молекулу, яка зв'язується та запобігає або інгібує транскрипцію ендогенних молекул ІРНК.
У способах згідно з даним винаходом, антисмисловий продукт може бути комплементарним до кодуючої або некодуючої (або до обох) частин природно одержаних цільових РНК. Антисмислова конструкція може бути вбудована у рослинні клітини будь-яким придатним способом, та може бути інтегрована у рослинний геном для індукованої або конститутивної транскрипції антисмислової послідовності. Див., наприклад, патенти США
Мо5,453, 566 та Ме5,107,065, Зпем/такег та ін. (введені в опис як посилання).
Як використовується у контексті даної заявки, екзогенна або гетерологічна ДНК (або РНК) відноситься до
ДНК (або РНК), яка була вбудована у клітину (або у її предка) Завдяки зусиллям людини. Така гетерологічна
ДНК може бути копією послідовності, яка Знайдена у природі у трансформованій клітині, або фрагментом останньої. ; Для одержання рослини тютюну, що має зменшені рівні ХФР'Тази, і таким чином, нижчий рівень нікотину, ніж нетрансформована контрольна рослина тютюну, клітина тютюну, може бути трансформована за допомогою екзогенної антисмислової транскрипційної одиниці ХФРТ, що включає частину послідовності КДНК
ХФРТ, повну довжину послідовності КДНК ХФРТ, частину хромосомної послідовності ХФРТ, або повну довжину хромосомної послідовності ХФРТ, оперативно з'єднані з придатними регуляторними послідовностями у смисловій орієнтації. Придатні регуляторні послідовності включають послідовність ініціації транскрипції
Спромотор"), оперативний у трансформованій рослині, та послідовність термінації поліаденілування/гранскрипції.
Стандартні методи, такі як рестрикційне картування, Саузерн блоттінг гібридизація, аналіз нуклеотидної послідовності, пізніше використовуються для ідентифікації клонів, що несуть послідовності ХФРТази, оперативно зв'язані з регуляторними послідовностями у антисмисловій орієнтації. Рослини тютюну потім регенерують з успішно трансформованих клітин. Найбільш бажано, щоб антисмислова послідовність, що використовується, була комплементарна до ендогенної послідовності, проте, незначні варіації у екзогенній та ендогенній послідовностях можуть бути припустимі. Бажано, щоб антисмислова послідовність ДНК мала достатню подібність допослідовності, що робить її здатною до ув'язування з ендогенною послідовністю у клітині, що піддають регуляції, у жорстких умовах, як описано нижче.
Антисмислова методика використовується у деяких лабораторіях для створення трансгенних рослин, що характеризуються нижчим, ніж нормальний, вмістом специфічних ферментів. Наприклад, рослини зі зниженими рівнями синтази халькона, фермента біосинтетичного шляху квіткових пігментів, одержували шляхом вбудовування антисмислового гена синтази халькона у геном тютюну та петунії. Ці трансгенні рослини тютюну та петунії продукували квіти з більш світлим, порівняно з нормальним, забарвленням (Мап дег
Кто! та ін. "Антисмисловий ген синтази халькона у трансгенних рослинах інгібує пігментацію квітів", Майге, 333, рр.866-869 (1988)). Технологія антисмислової РНК також успішно використовується для інгібування продукції ферменту полігалактуронази у томатах (Зтіїй та ін. "Антисмислове РНК інгібування експресії гена полігалактуронази у трансгенних томатах", Майте, 334, рр. 724-266 (1988); 5Ппеепу та ін. "Зменшення полігалактуроназної активності у плодах томатів за допомогою антисмислової РНК", Ргос. Маї!. Асад. осі. ОБА, 85, рр.8805-09 (1988)), та малої субодиниці ферменту рибулозо біфосфат карбоксилази у тютюні (Нодеттеї та ін. "Ядерно-органельні взаємодії: ядерний антисмисловий ген інгібує рівні ферменту рибулозо біфосфат карбоксилази у трансформованих рослинах тютюну", СеїІ, 55, рр.673-81 (1988)). З іншого боку, трансгенні рослини, що характеризуються більшою, ніж у нормі кількістю даного ферменту, можуть бути створені шляхом трансформації рослин за допомогою гена фермента у смисловій (тобто, нормальній) орієнтації. Рівні нікотину у трансгенних рослинах тютюну згідно з даним винаходом можуть бути визначені стандартними аналізами на нікотин. Трансформовані рослини, в яких рівень ХРФТази зменшений порівняно з нетрансформованими контрольними рослинами, будуть мати відповідно зменшені рівні нікотину порівняно з контролем; трансформовані рослини, в яких рівень ХРФТази збільшений порівняно з контрольними рослинами будуть відповідно мати збільшений рівень нікотину порівняно з контролем.
Гетерологічні послідовності, що використовуються у антисмислових способах згідно з даним винаходом, можуть бути відібрані як такі, що виробляють продукт РНК, комплементарний до повної послідовності ІРНК
ХФфРТази, або до частини останньої. Послідовність може бути комплементарною до будь-якої наявної поєднаної послідовності природної інформаційної РНК, вона може бути комплементарною до ендогенної послідовності ІРНК, проксимальної до 5'-термінального сайту або до кепппінг сайту, нижче від кеппінг сайту, між кеппінг сайтом та кодоном ініціації, та може містити усю або тільки частину некодуючої ділянки, може зв'язуватись з некодуючою або кодуючою ділянкою бути комплементарною до усієї або частини кодуючої ділянки, комплементарною до 3'-кінця кодуючої ділянки, або комплементарною до 3'-ділянки, що не транслюється, ІРНК. Придатні антисмислові послідовності можуть складатися, принаймі, приблизно з 13 або нуклеотидів, принаймі, приблизно з 16 до приблизно 20 Иуклеотидів, принаймі, приблизно з 20 нуклеотидів, принаймі, приблизно з 30 нуклеотидів, принаймі, приблизно з 50 нуклеотидів, принаймі, приблизно з 75 нуклеотидів, принаймі, Приблизно з 100 нуклеотидів, принаймі, приблизно з 125 нуклеотидів, принаймі, приблизно з 150 нуклеотидів, принаймі, приблизно з 200 нуклеотидів, або більше. Крім того, послідовності можуть бути розширені або вкорочені на 3' та 5'- кінцях останніх.
Конкретна антисмислова послідовність та довжина антисмислової послідовності будуть варіювати в залежності від ступеня бажаного інгібування, стабільності антисмислової послідовності, і т.п. Будь-який спеціаліст у даній галузі буде керуватись у виборі придатних антисмислових послідовностей ХФРТази використанням методів, доступних у даній галузі, та інформацією, яка тут наводиться. Як згадується стосовно фігури 2А та 5ЕО ІЮО МО, що наводяться у даній заявці, олігонуклеотиди згідно з винаходом можуть бути безперервним фрагментом послідовності КДНК ХФРТази у амтисмисловій орієнтації будь-якої довжини, яка достатня для досягнення бажаного результату, коли вбудовуєтьсяу реципієнтну рослинну клітину.
Даний винахід може також бути використаний у способах смислової косупресії продукції нікотину.
Смислові ДНК, залучені до реалізації даного винаходу, під час експресії у рослинній клітині мають довжину, достатню для супресії природньої експресії рослинного білка фермента ХФРТАази у цій рослинній клітині, як описано у даній заявці. Такі смислові ДНК можуть бути суттєво повною геномною або комплементарною ДНК, що кодує фермент ХФРТазу, або фрагментом останньої, такі фрагменти, звичайно, мають довжину, яка становить 15 нуклеотидів. Способи встановлення довжини смислової ДНК, що призводить до супресії експресії нативного гена у клітині, знайомі спеціалістам у даній гаїілузі.
В альтернативному втіленні даного винаходу, клітини рослини Місойапа трансформують за допомогою конструкції ДНК, що містить сегмент ДНК, який кодує ферментативну молекулу РНК (тобто "рибосому"), така ферментативна молекула РНК спрямовується проти (тобто розрізає) ІРНК транскрипту ДНК, що кодує рослинну ХФРТазу, як описано у даній заявці. Рибосоми містять зв'язуючи субстрат домени, що зв'язують доступні ділянки цільової ІРНК, та домени, що каталізують розрізання РНК, запобігаючи трансляції та продукції білка. Зв'язуючи домени можуть включати антисмислові послідовності, комплементарні до послідовності цільової ІРНК; каталітичний фрагмент може бути хамерхеад фрагментом або іншим фрагментом, таким як шпильковий фрагмент. Рибосомальні сайти розрізування усередині РНК можуть попередньо бути ідентифіковані шляхом сканування цільової молекули на рибосомальні сайти розрізування (тобто, ОША, ЦИ або 20 послідовності). Короткі ідентифіковані послідовності РНК розміром 15, 20, ЗО або більше рибонуклеотидів, що відповідають ділянці цільового гена, що містить сайт розрізування можуть бути оцінені на передбачені структурні риси.
Придатність кандидатів мішеней може також бути оцінена шляхом тестування їх доступності для гібридизації з комплементарними олігонуклеотидами, використовуючи методи захисту від рибонуклеази, що добре відомі у цій галузі. ДНК, що кодує ферментативні молекули РНК, може бути одержана згідно з відомими способами. Див., наприклад Т. Сесп та ін. Патент США Мо4,987,071; Кееп та ін. Патент США Мое5,559,021;
Бопвоп та ін. Патент США Мое5,589,367; Тоїтепсе та ін. Патент США Ме5,583,032; доусе та |ін. Патент США Мо 5,580,967; Са та ін, Патент США Ме5,595,877; Уадпег та ін. Патент США Мо5,591,601; та Патент США Ме 5,622,854 (вказівка на які введена удану заявку як посилання). Продукція такої ферментативної молекули РНК у рослинній клітині та переривання продукції білел«а ХФРТази зменшує ХФРТазну актвиність у рослинних клітинах таким самим чином, як і продукція антисмислової молекули РНК: тобто, шляхом Переривання трансляції ІРНК у клітині, що продукує фермент. Термін "рибосома", як такий, що використовується в контексті даної заявки, описує нуклеїнову кислоту, що діє як фермент (як ендорибонуклеаза) та може використовуватись поряд з терміном "ферментативна молекула РНК". Даний винахід також включає ДНК, що кодує рибосоми, та яка була вбудована в експресійний вектор, хазяйські клітини, що містять такі вектори, та способи зменшення продукції ХФР'Тази у рослинах при використанні рибосом.
Послідовності нуклеїнової кислоти, що використовувались у даному винаході, включають ті, що мають подібність до 5ЕО ІО МО: 1, та кодують білок, що має хінолат ффсфорибозил трансферазну активність. Це визначення призанчене для охоплення природних алельних варіацій ХФРТазних білків Таким чином, ДНК послідовності, які гібридизуються з ДНК послідовносте 5ЕСО ІЮО МО:1, та несуть інформацію для експресії
ХФфРТАази, особливо рослинних ХФРТазних ферментів, можуть також використовуватись для реалізації даного винаходу.
Можуть існувати різноманітні форми рослинного ферменту ХФРТ. Різноманітні форми ферменту можуть існувати завдяки пост-транскрипційним модифікаціям єдиного генного продукту, або завдяки різноманітним формам гена МОРТІ1.
Умови, які потребують інших послідовностей ДНК, які несуть інформацію для експресії білка, що має
ХФфРТАазну активність, для гібридизації ДНК з послідовністю 5ЕО ІО МО: 1 або іншими послідовностями ДНК, що кодують білок, представлений послідовностю 5ЕО ІЮ МО:2, можуть бути визначені звичайним способом.
Наприклад, гібридизація таких послідовностей може бути виконана у жорстких умовах (наприклад, умови, що визначаються жорсткістю 0.3 М Масі, 0.03 М цитрату натрію, 0.195 505 при 60"С або навіть 707С з ДНК, що кодує білок, представлений 5ЕО ІО МО:2 в стандартному гібридизаційному аналізі іп віш. Див. У. Затогоок єї аім., МоІесшаг Сіопіпд, А Гарогаїгту Мапиа! (24 Ба. 1989) (Соїй брігіпд Нарог Іарогайюгу)). Взагалі, такі послідовності будуть Гіринаймі на 6595 подібні, на 7595 подібні, на 8095 подібні, на 8595 подібні, на 9090 подібні, або навіть на 9595 подібні, або більше, до послідовності, наведеної тут як послідовність 5Е0О ІЮ МО, або послідовностей ДНК, що кодують білки послідовності 5ЕО ІЮ МО:2. (Визначення подібності послідовності роблять з двома послідовностями, вирівняними для максимального підбору; пробіли у будь-якій з двох послідовностей, що підбираються, дозволені у максимізуючому значенні. Довжина пробілу 10 або менше є більш бажаною, довжина пробілу 5 або менше є більш бажаною, довжина пробілу 2 або менше є найбільш бажаною.
Для того, щоб ізолювати клони кКДНК, рівні ІРНК яких знаходяться у межах 0.0595 роїу(АУРНК існує процедура диференційної гібридизації. Див. М.Сопкіїпд та ін., Ріапі Рпузіо!. 93, 1203-1211 (1990). Таким чином, бібліотеки КДНК відбираються при використанні одноланцюгових КДНК зондів зворотньо транскрибованих
ІРНК з рослинних тканин (наприклад, коренів та/або листя). Для диференційного відбору нітроцелюлозні або нейлонові мембрани змочують у 5х55С, поміщають у прилад на 96 відсмоктувальних комірок, 150 мкл стаціонарної нічної культури переносять з чашок у кожну комірку, використовують вакуум доки уся рідина не пройде через фільтр. 150мкл денатуруючого розчину (0.5М Ммаон, 1.5мМ масі) поміщають у кожну комірку, використовуючи прилад для багатократного піпетування, та залишають для осадження протягом З хвилин.
Відсмоктування проводять так, як описано вище, фільтр видаляють та нейтралізують у 0.5М Трис-НСЇІ (рнва,о), 1.5 М масі. Витримують 2 години у вакуумі та інкубують з релевантними зондами. За допомогою використання нейлонових мембранних фільтрів та витримування для зберігання при -70"С у 795 ДМСО, фільтри можуть бути використані багато разів з різноманітними зондами та підходящі клони відновлені після декількох років зберігання.
Як такий, що використовується в контексті заявки, термін "ген" відноситься до послідовності ДНК, що включає (1) вище розташований (5) регуляторний сигнал, включаючи промотор, (2) кодуючу ділянку, специфічну для продукту, білка або РНК гена, (3) нижче розташовані (3) ділянки, включаючи сигнали термінації транскрипції та поліаденілування, та (4) асоційовані послідовності, необхідні для ефективної та специфічної експресії.
Послідовність ДНК згідно з даним винаходом, може суттєво складатися з послідовності, що наведена у даній заявці (5ЕО ІЮ МО:1), або еквівалентної нуклеотидної послідовності, що являє собою алельні або поліморфні варіанти цих генів, або кодуючи ділянки останніх.
Використання виразу "суттєва подібність послідовності" у даному описі та формулі означає, що ДНК, РНК або амінокислотна послідовності, які мають незначні та непослідовні варіанти послідовностей, розкритих та заявлених у даній заявці, вважаються еквівалентними до послідовностей даного винаходу. У цьому зв'язку, "незначні та непослідовні варіанти послідовностей" означають, що "подібні" послідовності (тобто, послідовності, які мають суттєву подібність послідовності з ДНК, РНК, або білком, розкритими та заявленими у даній заявці) будуть функціонально еквівалентні до послідовностей, розкритих та заявлених у даному винаході. Функціонально еквівалентні послідовності будуть функціонувати таким самим чином для продукції суттєво тих самих сполук, як і нуклеїнові кислоти, амінокислотні сполуки, розкриті та заявлені у даній заявці.
Послідовності ДНК, що забезпечуються даним винаходом можуть бути трансформовані у широке коло хазяйських клітин. Різноманітність придатних хазяйських клітин, що мають бажаний ріст та властивості, якими можна керувати, легко доступні у даній галузі.
Використання виразів "ізольований" або "суттєво чистий" у даному описі та пунктах формули стосовно
ДНК, РНК, поліпептидів або білків, означає, що ДНК, РНК, поліпептиди або білки відокремлені від свого клітинного оточення іп мімо завдяки зусиллям людини.
Як такі, що використовуються у контексті заявки, вирази "нативна послідовність ДНК" або "природна послідовність ДНК" означають послідовність ДНК, яка може бути ізольована з нетрансгенних клітин або тканин. Нативними послідовностями ДНК є такі, які не були штучно змінені, як наприклад, за допомогою сайт- направленого мутагенезу. Якщо послідовності нативної ДНК, ДНК молекули, що містять нативні послідовності
ДНК, визначеня, то вони можуть бути хімічно синтезовані або одержані при використанні методу рекомбінантних ДНК, що добре відомий у цій галузі. Як використовується у контексті даної заявки, нативна рослинна послідовность ДНК є такою, що може бути ізольована з нетрансгенних рослинних клітин або тканини. Як використовується у контексті даної заявки, нативна послідовність ДНК тютюну це така, що може бути ізольована з нетрансгенних клітин або тканини тютюну.
Конструкції ДНК, або "транскрипційні касети" згідно з даним винаходом включають, від 5' до 3' кінця, у напрямку транскрипції, промотор, як зазначено у даній заявці, послідовність ДНК, як зазначено у даній заявці, оперативно зв'язану з промотором, та, необов'язково, послідовність термінації транскрипції, включаючи стоп сигнал для РНК полімерази та сигнал поліаденілування для поліаденілази. Усі ці регуляторні ділянки можуть бути здатні до роботи у клітинах трансформованих тканин. Будь-який придатний сигнал термінації може бути використаний для реалізації даного винаходу, приклади останніх включають, але не обмежені, термінатор нопалін синтази (поз), термінатор октапін синтази (осв), термінатор вірусу мозаїки цвітної капусти, або нативні сигнали термінації, що походять від того самого гена, що і ділянка ініціації транскрипції або ті, що походять від різних генів. Див. , наприклад, Веліап та ін. (1988), зирга та Нодегтеї! та ін. (1988), зирга.
Термін "оперативно зв'язаний" як такий, що використовується у контексті даної заявки, відноситься до послідовностей ДНК у єдиній молекулі ДНК, які зв'язані таким чином, що функція однієї з них піддається впливу з боку інших. Таким чином, промотор є оперативно зв'язаним з ДНК, коли він здатний впливати на транскрипцію цієї ДНК (тобто, ДНК знаходиться під транскрипційним контролем промотора). Вказаний промотор розміщений "вище" від ДНК, яка в свою чергу розміщується "нижче" від промотора.
Транскрипційна касета може бути забезпечена у ДНК конструкції, яка також має принаймні одну реплікаційну систему. Зручно мати реплікаційну систему, що є функціональною в ЕвсПегісніа соїї, таку як
СоІЕї1, реС101, рАСУС184, і т.п. Таким чином, на кожному етапі, після кожної маніпуляції, одержана конструкція може бути клонована, ееквенована, та визначена правильність маніпуляцій. Крім того, замість реплікаційної системи Е. соїї, може бути використане широке коло хазяйських реплікаційних систем Р-1 несумісних плазмід, наприклад, рАК290. У доповнення до реплікаційної системи часто присутній принаймі один маркер, який може бути корисним в одному або більше хазяїні, або різні маркери для індивідуальних хазяїв. Таким чином, один маркер може використовуватись для селекції у прокаріотичному хазяїні, у той час, як інший маркер може використовуватись для селекції в еукаріотичному хазяїні, особливо у рослинному хазяїні. Маркери можуть забезпечувати захист від біоцидів, таких як антибіотики, токсини, важкі метали, і.т.п.; можуть забезпечувати комплементацію шляхом надання прототрофності ауксотрофному хазяїну; або може забезпечувати видимий фенотип шляхом продукції нової сполуки у рослині.
Різноманітні фрагменти, що включають різні конструкції, транскрипційні касети, маркери, і.т.п. можуть бути вбудовані послідовно за допомогою розрізування рестрикційними ферментами придатних реплікаційних систем, та інсерції певної конструкції або фрагменту у доступний сайт. Після лігування та клонування конструкція ДНК може бути ізольована для подальших маніпуляцій. Усі ці методи повністю підтверджені у літературі, як описано Затобгоок еї аї., МоІесшаг Сіопіпд, А І арогаюгу Мапиаї! (2па Еа. 1989) (Соїй ргіпод
Нарюог І арогагу).
Вектори, які можуть використовуватись для трансформації рослинної тканини за допомогою конструкцій нуклеїнової кислоти згідно з даним винаходом, включають вектори на основі Адгорасіепйцт та балістичні вектори, так як вектори, придатні для проведення ДНК-опосередкованої трансформації.
Термін "промотор" відноситься до ділянки послідовності ДНК, що містить необхідні сигнали для успішної експресії кодуючої ділянки. Він може включати послідовності, з якими зв'язується РНК-полімераза, але не обмежується цими послідовностями, може також включати ділянки, з якими зв'язуються інші регуляторні білки разом з ділянками, що втягнені у процес контролю трансляції білків та можуть включати кодуючі послідовності.
Промотори, що використовуються для реалізації даного винаходу, можуть бути конститутивно активними промоторами. Доступною є велика кількість конститутивно активних промоторів, які є оперативними у рослинах. Прикладом промотора, якому надається перевага, є промотор 355 вірусу мозаїки цвітної капусти (Саму), який конститутивно експресується у багатьох рослинних тканинах. Альтернативно, промотор може бути промотором, специфічним для коріння, або промотором, специфічним для кори коріння, як пояснюється більш детально нижче.
Антисмислові послідовності були експресовані у трансгенних рослинах тютюну при використанні 355 промотора вірусу мозаїки цвітної капусти. Див., наприклад, Сотеїїб5зеп та ін."Рівень РНК та ефективність трансляції зменшуються при використанні антисмислової РНК у трансгенному тютюні", Мисієїс Асіа5 Незв. 17, рр.833-43 (1989): Вегаїап та іню., "Антисмислові РНК вірусу мозаїки огірків у трансгенних рослинах для контролю вірусу", Ріапі МоІесшаг Віоіоду 11, рр.463-71 (1988); Водептеї! та ін., "Ядерно-рганельні взаємодії: ядерний антисмисловий ген інгібує рівні ферменту рибулозо біфосфат карбоксилази у трансформованих рослинах тютюну", Се! 55, рр.673-81 (1988); тії та ін., "Антисмислове РНК інгібування експресії гена полігалактуронази у трансгенних томатах", Майшге 334, рр.724-26 (1988); Мап адег Ко! та ін. "Антисмисловий ген синтази халькона у трансгенних рослинах інгібує пігментацію квітів", Майшге 333, рр.866-69 (1988).
Використання промотора Саму 355 для експресії ХФРТази у трансформованих клітинах тютюну та рослинах згідно з даним винаходом є найбільш бажаним. Використання промотора Самму для експресії інших рекомбінантних генів у коренях тютюну було добре описано (І ат та ін. "Сайт-специфічні мутації змінюють іп міго фактор зв'язування та експресійну модель промотора у трансгенних рослинах", Ргос.Маї.Асай.5сі. ОБА 86, рр.7890-94 (1989); Роцізеп та ін. "Вичленення 5 нижче розташованих послідовностей для селективної експресії гена гос5-88 Місойапа ріитрадіпігїйа" Мої. Сеп.Сепеї. 214, рр.16-23 (1988)).
Інші промотори, які є активними тільки у тканинах кореня (промотори, специфічні для коріння), також інколи придатні для способів згідно з даним винаходом. Див., наприклад, Патент США Ме5,459,252, Сопкіїпд та ін; Чататой та ін. Те Ріапі Сеїї, 3:371 (1991). Може також бути використаний специфічний для кори кореня промотор ТОБАО2. Див., наприклад, патентну заявку США 5М 08/508,786, по якій на даний момент винесено рішення, Сопсіїпд та ін; РСТ УУ/О 9705261. Усі патенти, що цитуються у даній заявці, призначені для включення у заявку як посилання у їх цільності.
Рекомбінантні молекули ДНК ХФРТази та вектори, що використовуються для одержання трансформованих клітин тютюну та рослин згідно з даним винаходом, можуть включати домінантний селективний маркерний ген. Придатні домінантні селективні маркери для використання у тютюні включають, поміж інших, гени резистентності до антибіотиків, що кодують неоміцин фосфотрансферазу (МРТІЇ), гігроміцин фософотрансферазу (НРТ), та хлорамфенікол ацетилтарнсферазу (САТ). Іншим добре відомим домінантним селективним маркером, придатним для використання у тютюні, є мутант гена дигідрофолат редуктази, що кодує резистентну до метотрексату дигідрофолат редуктазу. Вектори ДНК, що містять придатні гени стійкості до антибіотику, та відповідні антибіотики є комерційно доступними.
Трансформовані клітини тютюну вибирають з оточуючої популяції нетрансформованих клітин шляхом перенесення змішаної популяції клітин у культуральне середовище, що містить придатну концентрацію антибіотика (або іншої сполуки, що у нормі токсична для клітин тютюну), проти якого вибраний продукт домінантного селективного маркерного гена забезпечує резистентність. Таким чином, тільки ті клітини тютюну, що були трансформовані, будуть виживати та розмножуватись.
Способи одержання рекомбінантних рослин згідно з даним винаходом передбачають, перш за все, забезпечення рослинних клітин, здатних до регенерації (рослинна клітина, що знаходиться у тканині, здатній до регенерації). Рослинну клітину потім піддають трансформації за допомогою конструкції ДНК, що включає транскрипційну касету згідно з даним винаходом (як описано у даній заявці), а рекомбінантну рослину регенерують з трансформованої рослинної клітини. Як пояснюється нижче, етап трансформації виконують за допомогою методів, добре знайомих спеціалісту у даній галузі, що включають, але не обмежуються, методи бомбардування рослинної клітини мікрочастинками, що несуть транскрипційну касету, інфікування клітини
Адгорасієпйцт іштегасієпе, що містить Ті-плазміду, яка несе транскрипційну касету, або будь-який інший метод, придатний для одержання трансгенної рослини.
Відомі різноманітні векторні системи на основі Адгобасієепйт, що є корисними у реалізації даного винаходу. Наприклад, Патент США Ме4,459,355 розкриває спосіб трансформації чутливих рослин, включаючи дводольні, за допомогою штаму Адгобрасієегпцт, що містить Ті-плазміду. Трансформація деревних рослин за допомогою вектора на основі Адгобрасіегпцт розкрита у патенті США Ме4,795,855. Патент США Мо 4,940,838,
Зепірегоогі та ін. розкриває бінарний вектор Адгобасіепит (наприклад, в одному з них Адгобасієлцт містить одну плазміду, що має міг ділянку Ті-плазміди, але не Т-ділянку, а друга плазміда має Т-ділянку, але не міг- ділянку), корисний для реалізації даного винаходу.
Мікрочастинки, що несуть ДНК конструкцію згідно з даним винаходом, і є придатними для балістичної трансформації рослинної клітини, також корисні для одержання трансформованих рослин згідно з даним винаходом. Мікрочастинки вводять у рослинну клітину для одержання трансформованої рослинної клітини, а рослину регенерують з трансформованої рослинної клітини. При цьому може бути використана будь-яка придатна технологія балістичної трансформації клітини та будь-яке придатне обладнання для реалізації даного винаходу. Приклади обладнання та процедури виконання розкриті у Западогї та Уоїї, Патент США Ме 4,945,050 та Спіізіси та ін. Патент США Мо 5,015,580. Коли використовують балістичну трансформаційну процедуру, транскрипційна касета може бути вбудована у плазміду, здатну до реплікації у клітині, що піддають трансформації, або до інтеграції у цю клітину. Приклади мікрочастинок, придатних для використання у таких системах, включають частинки золота розміром 1-5мкм. Конструкція ДНК може бути осаджена на мікрочастинці шляхом будь-якого придатного способу, такого, як преципітація.
Види рослин можуть бути трансформовані конструкціями ДНК згідно з даним винаходом за допомогою
ДНК-опосередкованої трансформації протопластів рослинних клітин та подальшої регенерації рослин з трансформованих протопластів згідно зі способами, що добре відомі у даній галузі. Злиття протопластів тютюну з ліпосомами, що містять ДНК, шляхом електропорації добре відомо у даній галузі (ЗПЙШО та ін. "Прямий генний перенос до протопластів дводольних та однодольних рослин рядом методів, включаючи. електропорацію", Метод» іп Епгутоіоду 153, рр.313-36 (1987)).
Як такий, що використовується у контексті даної заявки, термін трансформація відноситься до вбудовування екзогенної ДНК в клітини, для того, щоб одержати трансгенні рослини, стабільно трансформовані за допомогою екзогенної ДНК.
Трансформовані клітини індукуються до регенерації непошкоджених рослин тютюну шляхом використання клітин тютюну та методів тканинної культури, що добре відомі у даній галузі. Спосіб регенерації рослин вибраний як сумісний з методом трансформації. Стійка присутність та орієнтація послідовності ХФРТази у трансгенних рослинах тютюну може бути перевірена за допомогою методів Менделівського наслідування
ХФРТазної послідовності, що виявляється стандартними методами аналізу ДНК, які застосовуються до потомства, що походить від контрольного схрещування. Після регенерації трансгенних рослин тютюну з трансформованих клітин вбудована послідовність ДНК легко переноситься до інших сортів тютюну при використанні практики умовного рослинного розведення та при відсутності неправильих експериментів.
Наприклад, для того, щоб проаналізувати сегрегацію трансгена, регенеровані трансформовані рослини (Бо) можуть бути вирощені до зрілості, тестовані на рівні нікотину, та самозапилені для одержання Ві рослин.
Розподіл Рі рослин, що несуть трансген, є гомозиготним по трансгену. Для ідентифікації гомозиготних Ні рослин, трансгенні рослини вирощують до зрілості та самозапилюють. Гомозиготні рослини Ні будуть давати потомство, в якому кожний нащадок рослин несе трансген; потомство гетерозиготних Ві рослин буде мати розподіл 3:71.
Нікотин служить природним пестицидом, що допомогає захистити рослини тютюну від збитків, що зумовлені пестицидами. Виходячи з цього, може бути бажаним додатково трансформувати одержані описаним способом рослини тютюну з низьким рівнем нікотину або ті, у яких відсутній нікотин, за допомогою трансгена (такого, як Васійив (пигіпдієпвів), що буде привносити додатковий захист від комах.
Рослинами, яким надається перевага для використання у даних методах, є види Місоїйапа, або тютюну, включаючи М. їтарасит, М.пивіїса, М. дішіпоза. Можуть використовуватись будь-які штами або сорти тютюну.
Штамами, яким надається перевага, є штами з низьким вмістом нікотину, такі, як Міс1/міс2 подвійні мутанти.
Будь-яка рослинна тканина, здатна до подальшого клонального розмноження, або шляхом органогенезу, або шляхом ембріогенезу, може бути трансформована за допомогою вектора згідно з даним винаходом.
Термін "органогенез", як такий, що використовується у контексті даної заявки, означає процесе, внаслідок якого паростки та корені розвиваються послідовно з меристематичних центрів; термін "ембріогенез", як такий, що використовується у контексті даної заявки, означає процес, внаслідок якого паростки та корені розвиваються одночасно в узгодженому поєднанні (не послідовно), з соматичних клітин, або гамет. Зокрема, культури, які вибирають, будуть варіювати, залежно від придатності систем клонального розмноження, та найбільшої придатності для специфічних видів, які піддають трансформації. Приклади цільових тканин включають листові диски, пилок, зародки, сім'ядолі, гіпокотилі, калусні тканини, існуючі меристематичні тканини (наприклад, апікальні меристеми, пазушні бруньки та кореневі меристеми), та індуковані меристематичні тканини (наприклад, сім'ядольні меристеми та меристеми гіпокотилей).
Рослини згідно з даним винаходом можуть мати різноманітні форми. Рослини можуть бути химерними, що складаються з трансформованих та нетрансформованих клітин; рослини можуть бути клональними трансформантами (наприклад, усі клітини трансформовані за допомогою транскрипційної касети); рослини можуть включати живці трансформованих та нетрансформованих тканин (наприклад, трансформований стовбур кореня, прищеплений на нетрансформовану прищепу виду цитрусових). Трансформовані рослини можуть бути розмножені різноманітними способами, такими, як клональне розмноження або класична технологія розведення. Наприклад, перше покоління (або Ті) трансформованих рослин може бути самозапилене для одержання гомозиготного другого покоління (або Т2) трансформованих рослин, та Т2 рослини можуть бути далі розмножені шляхом класичних способів розведення. Домінантний селективний маркер (такий як прії) може бути асоційований з транскрипційною касетою для допомоги у розведенні.
З огляду на зазначене вище, є очевидним, що рослини, які можуть бути використані у практиці даного винаходу, включають ті, які відносяться до роду Місоїйапа.
Для того, хто добре обізнаний з методами рекомбінантних ДНК, які описані вище, зрозуміло, що кожен може використати молекулу кДНК повної довжини, що кодує ХФРТазу, або хромосомний ген повної довжини, що кодує ХФРТазу, оперативно зв'язані у смисловій орієнтації з придатними регуляторними послідовностями, для створення трансгенних клітин або рослин. (Обізнаний з методами у даній галузі також знає, що придатні регуляторні послідовності для експресії генів у смисловій орієнтації включають будь-яку з відомих стартових послідовностей трансляції еукаріот, у доповнення до промотора та послідовностей поліаденілування/гермінації транскрипції що описані вище). Там трансформовані рослини тютюну характеризуються збільшеними рівнями ХфФРТази, і таким чином, більш високим вмістом нікотину, ніж нетрансформовані контрольні рослини тютюну.
Зрозуміло, що використання послідовностей ДНК ХФРТази для зменшення або збільшення рівнів ферменту ХФРТази, і таким чином, для зменшення або збільшення вмісту нікотину у рослинах тютюну охоплюється даним винаходом.
У контексті даного винаходу культури рослин включають багатоманітність рослин згідно з даним винаходом, того самого роду, що вирощуються разом на тому самому сільськогосподарському полі. Під "сільськогосподарським полем" розуміють спільну ділянку грунту або вегетаційний будиночок. Таким чином, даний винахід забезпечує спосіб одержання врожаю рослин, що мають змінену активність ХФРТази, і таким чином, мають Збільшений або зменшений рівні нікотину, порівняно до подібного врожаю нетрансформованих рослин того самого виду та сорту.
Приклади, які наведені, представлені для ілюстрації даного винаходу, та не можуть розглядатись як такі, що обмежують даний винахід.
Приклад 1 Ізоляція та секвенування кКДНК ТорАба (Сопкіїйпо та ін., Ріапі Рпуз. 93, 1203 (1990)), була секвенована, вона представлена тут як
ЗЕО ІЮО МО:1, дедукована амінокислотна послідовність представлена 5ЕО ІЮО МО:2. Було передбачено, що дедукована послідовність являє собою білок цитозоля. Хоча рослинні гени ХФРТази були опубліковані, порівняння МІРТІ амінокислотної послідовності з базою даних СепВапк виявило обмежену подібність до певних бактеріальних та інших білків; хінолат фосфотрансферазна активність (ХФРТазна) активність була продемонстрована для генів 5.Урпітигпшт, Е.соїї та Мларасит. МОРТІ, що кодує ХФРТазу має подібність до дедукованого пептидного фрагменту, що кодується послідовністю Е5Т Агарідорвзіз (мічена експресійна послідовність) (депозитний номер у СепВапк Е20096), яка може представляти собою частину гена ХФРТази
Агарідорвів.
Приклад 2 Гібридизація іп віш
Для визначення просторового розміщення ТоОБАБ2 ІРНК транскриптів у різноманітних тканинах кореня, проводили гібридизацію іп зіш у трансформованих рослинах. Гібридизація іп віш антисмислового ланцюга
ТорАОаІ2 з ІРНК ТорвбаІ2 у клітинах кореня була зроблена при використанні способа, як описано Меуеєегомйя,
Ріапі Мої. Вісі. Вер. 5, 242 (1987) та тій та ін. Ріапі Мої. Вісі. Вер. 5, 237 (1987). Пагони кореня табака віком 7 днів (Місоїйапа їабасит) фіксували у забуференому фосфатом глутаральдегіді, переносили у Рагаріавзі Ріив (Мопо|есі Іпс., 5. І оці5, МО) та розрізували на шматочки товщиною 8 мм для одержання поперечних та поздовжніх шматків. Антисмислові транскрипти ТОо0АО2, синтезовані іп міо у присутності 355-АТО, використовували як зонди. Мічену РНК гідролізували за допомогою лужної обробки до отримання від 100 до 200 основної маси середньої довжини, що використовувалась раніше.
Гібридизіцію проводили у 5095-ному формаміді протягом 16 годин при 42"С, з міченою РНК, що давала приблизно 5 х 1059 імпульсів за хвилину на мілілітр гібридизаційного розчину. Після витримування, препарати візуалізовали в освітленому та темному полях мікроскопа.
Гібридизаційний сигнал був локалізований у кортикальному шарі клітин кореня (результати не показані).
Порівняння обох освітленого та темного полів відображало одне й те саме місце локалізації транскриптів
ТорАОр2 по відношенню до паренхіматозних клітин кортикального шару кореня. Не було одержано сигналу гібридизації в епідермісі або у центральному стрижні стовбура судинної системи рослини (стели).
ПРИКЛАД З Рівні ІРНК ТоБАБАа у мутантах тютюну Міс! та Місг та їх кореляція з рівнями нікотину
Стійкі рівні ІРНК Торнбра перевіряли у Міс! та Міс2 мутантних рослинах тютюну. Міс! та Міс2 відомі як такі, що регулюють активність хінолат фосфорибозил трансферази та активність путресцин-метил-трансферази, вони також є кодомінантними регуляторами продукції нікотину. Ці результати проілюстровані на фігурах 5А та 5В, вони показують, що експресія ТОРБА регулюється Міс! та Міс2.
РНК ізолювали з коренів рослин тютюну дикого типу Вигієу 21 (Міс1/Міс! Міс2г/Ммісг); коренів Міа- Вигієу 21 (піст/пісї. Міс2/Місг); коренів Міс2- Вигпєу 21 (Міс1/Місі1 пісг/піс2); та коренів Місї - Міс2- Вигівеу 21 (піс1/піс1 пісг/пісг).
Чотири лінії тютюну Вигієу 21 (піс) вирощували з насіння у грунті протягом місяця, потім переносили до гідропонних камер на поживне середовище, яке піддавали аерації, у вегетаційний будиночок, де вирощували протягом наступного місяця. Ці лінії були ізогенними, за винятком двох низьконікотинових локусів, та мали генотипи Місі/Місї Міс2/Міс2, Міс1/Місії пісг/піс2, пісі/пісї Міс2/Міс2, пісі/пісї піс2/піс2. Відбирали корені приблизно 20 рослин для кожного генотипу та розділяли на пули для ізоляції РНК. Загальну РНК (мкг) кожного генотипу піддавали електрофорезу у 195 агарозному гелі, що містить 1.1 М формальдегіда та переносили на нейлонові мембрани згідно з Затрьгоок та ін. (1989). Мембрани гібридизували з ЗгР- міченими фрагментами кКДНК ТорАО2. Відносну інтенсивність транскриптів ТОБАО2 вимірювали за допомогою денситометру. Фігура 5 (суцільний стовпчик) ілюструє відповідні рівні транскрипту (порівняно до Місті/Міс!
Міс2/Міс2) для кожного з чотирьох генотипів. Відповідний вміст нікотину (порівняно до Міс1/Місї Міс2/Місг) чотирьох генотипів показано заштрихованим стовпчиком.
На фігурі 5 графічно порівнюється відповідний стабільний рівень ІРНК ТорАба2 у порівнянні з рівнем,
знайденим у рослинах тютюну дикого типу Вигієу 21 (Міс1/Місї Міс2/Міс2), як кількість, з якою роблять порівняння. Рівні ІРНК Тора у Міс1/Міс2 подвійних мутантах складали приблизно 2595, від такого у тютюні дикого типу. Фігура 5В далі порівнює відповідні рівні нікотину у близько ізогенних лініях тютюну, що вивчалися у цьому прикладі (суцільний стовпчик відображає транскрипційний рівень ТОБАО2; заштрихований стовпчик відображає рівень нікотину). Існувала близька кореляція між рівнями нікотину та транскрипційними рівнями
Тора.
ПРИКЛАД 4 Вплив топпінгу на рівні ІРНК Торг
Добре відомо у даній галузі, що видалення суцвіття у рослин тютюну (топпінг) збільшує ріст коренів та збільшує вміст нікотину у листях цих рослин. Топпінг рослин є стандартною практикою при комерційному культивуванні тютюну, оптимальний час для топпінгу даної рослини табака залежить від відомого набору ростових умов, що може бути легко визначено будь-яким спеціалістом у даній галузі.
Рослини тютюну (М.арасит 5А1) вирощували з насіння у грунті протягом місяця та переносили до сосудів, що містили пісок. Рослини вирощували у вегетаційних будиночках протягом двох інших місяців до початку зав'язуваня квіток. Квіткові суцвіття та два вузли потім видаляли з чотирьох рослин (топпінг). Частину коренів збирали з кожної рослини після фіксованого часу та розділяли на пули для екстракції РНК. Контрольні рослини не піддавали такій обробці. Загальну РНК (1мкг) для кожного моменту часу піддавали електрофорезу в 196-ному агарозному гелі, що містив 1.1 М формальдегіду та переносили на нейлонові мембрани згідно з
ЗатогоокК та ін. (1989). Мембрани гібридизували з ЗР міченими фрагментами КкДдДНК Торг. Відповідну інтенсивність транскриптів ТОБАО2 вимірювали за допомогою денситометра. Фігура 6 ілюструє відповідні рівні транскриптів (порівняно до нульового часу) для кожної точки часу при топпінгу (суцільний стовпчик) або при відсутності топпінгу (заштрихований стовпчик).
Відповідні рівні ТОБАО2 визначали у тканині кореня через 24 години; результати представлені на Фігурі 6 (суцільний стовпчик показує рівні транскрипції ТОБАОС2 у рослинах, які піддавали топпінгу; заштрихований стовпчик показує рівні транскрипції ТОБАО2 у контролі, що не піддавали топпінгу). Протягом 6 годин після топпінгу рослин тютюну, рівні ІРНК Тов збільшувались приблизно у 8 разів у рослин, які піддали топпінгу; не спостерігали збільшення у контрольних рослинах протягом того самого періоду часу.
ПРИКЛАД 5
Комплементація бактеріального мутанту, м якого відсутня ХФРТаза з ДНК, що має послідовність ЗЕО ІЮ
МО: 1
Штам ТН265 ЕзспПетісніа соїї є мутантом, у якого відсутня хінолат фосфорибозил трансфераза (паас-), і таким чином, він не може рости на середовищі, в якому відсутня нікотинова кислота.
ТН265 клітини трансформували за допомогою експресійного вектора (рМ/5161), який містив ДНК згідно з послідовністю 5ЕО ІЮ МО:1, або трансформованих тільки за допомогою експресійного вектора (рКК233). Ріст трансформованих бактерій порівнювали з ростом ТН265 (рКК233) трансформантів, та з ростом нетрансформованогоТН265 мутанту падс-. Ріст порівнювали на мінімальному середовищі МЕ (в якому була відсутня нікотинова кислота) та на МЕ мінімальному середовищі, до якого додавали нікотинову кислоту.
Штам БЕс.соїї з ХФРТазною мутацією (пайсС), ТН265, був люб'язно наданий доктором К.Т. Хаггісом (Нидпев та ін., уУ.Васі. 175: 479 (1993). Клітини переносили на середовище І В та компетентні клітини готували так, як описано Затрьгоок та ін. (1989). Експресійну плазміду конструювали у рКК2233 (Вгозіив, 1984) з КДНК Торг, клонованою під контролем промотора Тас. Одержану плазміду, руУу5161, трансформували у ТН265 клітини.
Трансформовані клітини потім переносили на мінімальне середовище (Моде! та Воппег, 1956) на агарові пластинки з доданням (0.000295) або без додання нікотинової кислоти. Клітини ТН265 та ТНа2б65, трансформовані за допомогою рКК2233, висаджували на такі самі агарові пластинки і використовували як контроль.
Результати представлені на фігурі 4. Тільки ТН265, трансформовані за допомогою послідовності 5ЕО ІЮ
МО:1, росли на середовищі, в якому була відсутня нікотинова кислота. Ці результати показують, що експресія
ДНК згідно з БЕО ІЮ МО: 1 у бактеріальних клітинах ТН265 надає цим клітинам фенотип Маася, підтверджуючи, що ця послідовність кодує ХФРТазу. ТОБАО2 номенклатура була таким чином змінена на МОРТІ1.
Приклад 6 Трансфомація рослин тютюну
ДНК послідовності 5ЕСО 10 МО: у антисмисловій орієнтації оперативно зв'язували з рослинним промотором (Самм 355 або ТорАр2 промотором, специфічним для кори коренів) для одержання двох різних касет ДНК: Самм 355 промотор/антисмислова 5ЕО ІО МО: 1 та ТорАбр2 промотор/антисмислова 5ЕО ІЮ МО:1.
Лінію тютюну дикого типу та лінію з низьким вмістом нікотину відбирали для трансформації, наприклад, тютюну дикого типу Вигієу 21 (Міс1--/Міс2--) та гомозиготну піс1-/піс2- Вигієу 21. Багаточисельні клітини рослин тютюну кожної лінії трансформували, іикористовуючи кожну касету ДНК. Трансформацію проводили при використанні вектора Адгорасієгпййт, наприклад Адгобрасіегпйт-бінарного вектора, що несе Ті-граничні послідовності, та ген прій (що несе резистентність до канаміцину та знаходиться під контролем поз промотора (прій)).
Трансформовані клітини відбирали та регенерували у трансгенні рослини тютюну (Но). НКо рослини вирощували до зрілості та тестували на рівні нікотину; підгрупа трансформованих рослин тютюну показала значно нижчі рівні нікотину порівняно з нетрансформованими контрольними рослинами.
Во рослини потім піддавали самозапиленню, а сегрегацію трансгена аналізували в Ні потомстві. Ві потомство вирощували до зрілості та піддавали самозапиленню; сегрегація трансгена у А» потомстві показала, які Ві рослини є гомозиготними по трансгену.
СПИСОК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
(1) Загальна інформація: () Заявник: Конклінг, Марк А.
Менду, Нандіні
Сонг, Вен (її) Назва винаходу: Регуляція експресії хінолат фосфорибозил трансферази
(ії) Кількість послідовностей: 4 (м) Адреса для листування: (А) Адресат: Кеннет Сіблі, Белл Зельтцер Парк енд Гібсон (В) Вулиця: Пост Офіс Драйвер 34009 (С) Місто: Шарлотт (О) Штат: Північна Кароліна (Е) Країна: США (Р) Поштовий код: 28234 (м) Форма, що зчитується з комп'ютера (А) Тип носія: диск (В) Комп'ютер: ІВМ РС сумісний (С) Оперуюча система: РО-ЮО5/М5-0О5 (С) Програмне забезпечення: Раїепіїп НеІєазе 241.0, версія 41.30 (мі) Дані стосовно заявки (А) Номер заявки: (В) Дата подачі: (С) Класифікація: (мії) Представник/інформація стосовно агента: (А) Ім'я: Сіблі, Кеннет Д. (В) Реєстраційний номер: 31,665 (С) Номер справи: 5051-338Р (їх) Інформація стосовно засобів зв'язку (А) Телефон: 919-420-2200 (В) Телефакс: 919-881-3175 (2) Інформація для послідовності 5ХЕО ІЮ МО:1 () Характеристики послідовності: (А) Довжина: 1399 пар основ (В) Тип: нуклеїновокислотний (С) Кількість ланцюгів: одноланцюгова (ОС) Топологія: лінійна (ії) Тип молекули: кДНК (їх) Характерні риси: (А) Назва/Ключове слово: СО5 (В) Розташування: 52...1104 (хі) Відображення послідовності: 5ЕО 10 МО:1 (2) Інформація для послідовності ФЕО ІО МО:2 (і) Характеристики послідовності (А) Довжина: 351 амінокислота (В) Тип: амінокислотний (С) Топологія: лінійна (її) Тип молекули: білок (хі) Відображення послідовності: 5ЕО ІЮ МО:2 (2) Інформація для послідовності ФЕО ІЮ МО:З (ї) Характеристики послідовності: (А) Довжина: 1053 пари основ (В) Тип: нуклеїновокислотний (С) Кількість ланцюгів: одноланцюгова (ОС) Топологія: лінійна (ії) Тип молекули: кКДНК (хі) Відображення послідовності: 5ЕО ІЮ МО:З хінолат фосфорибозий
Глицеральдегид 3-фосфат трансфераза хінопінова нікотинон т т я То кислота а ддспота й
Аспартамова кислота р Нікотин вутресцин метил транефераза
Орнвітино я--я Путреєцино с-н М-аметиппутроєцин пеянняж й-матипамінобутанан й
Фіг, 1 севавастає Кїссасава абїсаїїтса саассосссс вазаававас САТСТТТАСА 60
ССТАТТОСТТ ТСАСТОСТАЄ АБТОСАТОСТ ТАТОСЛАТТА САБСТОСААЄ ТТОбТовТо 120
АДДАТСТСАВ СААТАВССАС САДОДАТАСА ДБАСТОСАСТ САТТАСАБОТ САДАССАССА 180
ССАСАСССАД СТТАТСАТТТ АААОБААСТТ АТОАЛАСТТО САСТСТСТОА АБАТОСТОСЯ 250
ТІТСТАБСАА ДОБААСАСОС БАТСАТАВСА СБААТТОСАЄ ТТОСТСАБАТ БАТАТТСООВ 360
СААСТТСАТС СТТСАТТААА ССТОСАСТВО ТАТОТАДАТО АТОБСБАТАА АСТТСАТААА 420
СОСТТОДААТ ТТООСАААВТ. АСАДЕСАААС ССТТАСАДСА ТТОТТАТАВС ТБАБАСВОТІ 480
СТТСТСААТТ ТТАТОСАДАЄ ДАТОАСТОСА АТАБСТАСАЄ ТААСТААОСА ДАТООСАСАТ 540
БСТОСАСАСС СТОСТТАСАТ СТТОБАБАСТ АББАДААСТО СТОСТОСАТІ АСБТТТОСТе 600
САТАДАТОССЄ СОСТАТТОАТ СОСТОБСОСО ААБААТСАСА СААТОСОСТТ АТТТСАТАТО 660
СТААТОАТАА. ДАСАСААТСА САТАТСТОСТ БСТОБАССТО ТОБОСАДАЄС ТСТАДААТСТ 720
СТОСАТСАЄТ АТТТОБАССА ДААТАДАСТТ САДАТАСОВО ТТОАССТІСА ДАССАССАСА 780
АТТСААСАДО. ТАСОТОАССТ ТСТАБАСТАТ ВСАТСТСААА. САКАСАЄТТО БТТСАСТАВО 840
АТААТОСТОС АСААТАТОСТ ТОТТССАТТА ТСТААСОБАЄ АТАТТОАТСТ АТОСАТОСТТ 900
АДОБАСБСТО ТАБААТТВАТ СААТОВСАЄО ТТОАТАСОЄ АВОСТТСАВО АААТСТТАЄС 960 с
СТТОАААСАЄ ТАСАСААСАТ ТОБАСАААСТ БЕТЕТТАССТ АСАТТ СТАЄ ТОСТОСОСТО 1020.
АСОСАТТССО ТОААДОСАСЄТ ТОАСАТТТОС СТОААБАТОС АТАСАСАЄСТ СОСССТТОДА ОВО.
СТТОБАДОВС СТАСАДАДСЯ АССАТОоЛОоСе ссаттасттс Тостаєавоз їтодаовав 1140 зчзсаостова тадстозаво обосававтаа олабсаєс ассвоєтао заасавааов 1900 тесстсаєсу сусвассява садвавачзаєст саваєтосто даабаєссся пасооскетю 1260. ттссавсссо аїбасттовго Стоубавсих сабтаєвось сс ееосає отесатода 1350. асссоссасе вбодзавсас Єсоаіттата ост тботох атоїааааєє сеотартасе 1380
Есвавта й бозоа 1399
Фіг. 2А
МЕКАТРЕТАТ УНРУДІТАРВ | УУКМОАЇАТ КИТА ЕУ КРРАНРТУТЬ 50
КЕУМКЕ ЛІЗЕ ПАСМ СОУТС КАТІРІ ОМЕ5 ОАНЕБАКЕОС ПАСІАСАЄМ. 100 о 1ТЕАСУДРБК УБИУУМОВОК УНКСІ КРОКУ ОБМАУМІУТА ЕВУМ НЕМОВ 150
М5СТАТІТКЕ МАОДАНРАХІ БЕТВКТАРСЇ. РІ ХОКМАМЬЇ СССКМНАМО. 200
РОМУМІКОМН Т5ААСОМОКА СКЗУООМ КО МКЕОТСУЄУЄ ТАТІЕЕМНЕМ 250.
ІОУАБОТКТВ І ТКІМСОММУ УРІ5МСОТОУ ЗМІ КЕАМУЕІ І МОВЕОТЕАБО 300
МИТ ЕТУНКТ БОТОМТКІ55 БАСТНБУКАЇ 015 КООТЕВ АСЕМОВЕТКК 50 с
А ЗБ
Фіг. 26
М. хабасит МЕВАТРЕТАТУНРУАТ ТАРІ УУКМОАТАТКМИТКУЄЗМЕУКРРАНРТУО.
В РуВг ЖояжаняюиВОМН яю тяжких --РУДДІ ЗЕ. -аАЇ
М. Тергае Женянжня Об енннняннннттнянтя няня ЕЕОДАВ он 5. Хуртітет ут Життя ня «- РРВВЯМРОДВХ- я я я ях ян я «ДАЦОКВ ТМ ХА - - - ДУ
Є со Женя ня РЕВВХМРОТЕХ - я ен и ДЕОКІНСОТО--- - ДУ
Н. зарієп Жинижати няття ДЖЕКА МОРРУТІ ДАЛА ВЕВСКВ я яння 5, сегеуібіве Жуля життя яю ДУЖЕАНИ РУМОДКВОЮУ ТМ ЗЕ ля
М. ХаВасит КЕУМКІАЇ ЗЕПАСМ СВУТСКАТТРЕОМЕ ЗВАНА АКЕОСТ ТАТА. я я
В. гуВицт. ПУДУВКе дяк круто режи ДАТЕАНеКЕ УВО як ОСА
М. Тергае «ДІВКА Ня ВУД тет ух АОТУУТО5МУРЕХР ХУ ТАБУВУАЦІ, 5. Єурптітиг іт АОДЕКЕВІ СО МОАОМУ АВ ГЕ ХАКТОАНЯТУТТЕКОУЄ- я СОКЕ є. со АДАСВЕВОБОТ УВАММХ ГТД КЕКВ НЯТ УТ ТЕМУ УК» я У СОКК
Н. заріга фжкжкжкикюни ких ММУАД УЗВАР ОДА,МАКВРУМ, я «я «АСОР 5. сегемісіве вжж княжих ЕОКОВУМУВО ОКЕАН УСКОДУМС- -- я СОУР
М. тарбасит «ГАЕМІЕАЕУПРО КУЄ УМОБОКУНКОЇ К я 4-2 я «РОК УОСМАУМТУЇ
ОКО туби «УВБАКЕ-АСООТУТЕТТРІЕУКАЕТААХОТ - я я «5 УАЕМАКАКГ А
М. Тергае МКК УДОМА М МА КЕ АД БОР я 5 - У ТУОААХВО СТ 5. Єурпітуєіцт СУБ КМЕТОВАБОСУВЕ ТНК А ТАМОТ «ня - МРЕМКУРАКМНЬТ
Є. со КУЕМУРТОСАВОВУ ГТК МАМО» - я я «ПЕС ЕХРУКМИТ
Н. 5арієп ЕРОАТЕТОЇ. - - «МОУ ре УРУДК «яю яю А МАЕ УКУРУНО І, 5, Сегеуібіае РАКЧУРМОС Я - Я ДУЄМЕКЕКА ЕРЗКМОБОК ГУУАК ТРК |,
М. табасот АЕВУМІ МЕМОВМБОТАТІТКЕМАЮ--АДН- «РАХ ПЕ ТЕКТАРСОЇ КІ УДК
К. сироті яті СНІ оди ДЕСтАТХНТ- КК То ткяноі Сх
М. Тергає атм у СИМ у ДК АУВОаТ -- КК жид дя 5. Турттат ит оте УА ОЕУКАТ УВІ от ОТО хррекні ххх
Е. сої ОКЕАНУ АБКУАКНУМВ ЕТ я МО вик ккд й. 5апіви др дт| ДВОХ ДАДАДУЄААКСАСИТОНУдо жк жжржяке ж 5. сегеуібіде ТА КУ ТАНК ТБЕАКЗТОУКО ТТ Дитя
М. Барасит КАМ ТОСБКМНЕМОЇ ЕОМУМІКОМНТЗАДОБУБКА КОУДОУСЕОМК ОЇ
К. гобешт: доня екю дк жду де КАК АСУСНММКІ
М. Тергав Оекдревуювь зда тд жук рАхВ-АДАРЕС-РО 5. СУрпітлигі ут уд Тед як ку КА -КУЧРО-АРУ
Е осо укр джежі жисждр| жк кї оку кВ Уг КА «мер. Деу
Н. 5арівп уві уж доку ер УМ жрендуррач ЕК уВАДКО- З ААПЕД 5. сегемізіае 00 убмжуютртеву дк кре то ТК ИМАВА- - -МОБЕДУ
Фіг. З
М. Єврасит БУЕУЕТЕ ТІ ЕЕУВЕМ ОТАБОТКСТЬІ ТАКІ МІ ОММУХРІ МБО ТВУБМІ КЕ
К. огибгит реж. Ж А АУВОАКУ яю ех Ду я 52 ДДРТ я ТВ
М. Тергає Еко я | ЖД ПДМХАУЕЕРЕ я як р КОТОМ АС 5. сурпітчитцт рееєкма | ВЕ ОВАККУКОАОЇ я я кр яю я МОДА -- МКУ
Е. со режі як ЖАКА яр я 5 ТЕО - МК
Н. 5арієй КО Де ЦД КОД я укр нях -КРЕКЧРТАТ 5. сегетісіде КЕ ЗЕД АТУАТЕ АДМ юю я ккже хх я я «КОД КУСАО но
М. табасит АЕС. «КСАРОТЕАБСМУТЕТМНКТО-ДТСУТУТ556АТНОУКАГ О
К. о тбгит ЯМ я ДК дреккя ТАДСА- Бу жають ях
М. Тергає ВАТА» яеАРТУ жор УК КААТУД А у дує ккд ех 5. бур ітльи от ЯКУ - и ОДВ уредЕ КІ ВЕД ЕД курки
Е. со ЖК» «КА кукакекрюі. ДЕЕ Арк Енужкюквруюкх
Н. Барієп "КАК РУКА. УБАКО ГТ ОМСРОЕ- СоРНТОУчхмемеходкряж 5. сСегеуїб5іве БІЛКИКИКОККНА І Еко КОМ ЕЕ СО-ІВ ГИ Т55ТНОСТРУуїх
М. сарасит ІЗКІІОТЕС АГ ЕМСВРТКВА 5 ідентичності 96 Подібності.
Ко гРОБКИт КА я РЕКАЕКА 15.9 43.2
М. Тергав щеня 18.3 37.3. 5. Хурнітце шт ОМА 152 ма. ще Г5МЕЕК | 17,9 чи.
Н. 5арієп ря и РКХуДеУРІН 16.8: М. 5. сегечівіда режі АН 146 218
Фіг. З (прод.) ! шн 4. Штам Е. соїї ТН (МааС-) шшнь ч й. тн 285, що експребсує ШОРТІ
ШИ сруувівл) - а ин 0
Н 3. тн 265 (рккг233) ше
Мінімальне середовище МЕ Мінімально середовище нжотивовна киспота иа а А а ння
Фіг. 4
1.25 -
ГУ Транскрипти ТОЬКО2 !
ГА Нікотин и
БІК с-- 18 0.75 й » їй
Відповідні А Що рівні й їх й ! г Щ | шк
Місію Місї- Місії» о Місі-
Міс Міс Міс2- Міс2-:
Фіг. 5 я тні
ГУ) Тванскринти тсьВо2 | Ї
ГА нікотин ю
Відповідні с | . ди я. 5 і товКр2 :
Мк 2 ! ! х : | : уукащи й ик У
ОМ ди и 6136 га
Години тсля видалення верхівки
Фіг. 6
Claims (69)
1. Ізольована молекула ДНК, що включає послідовність, вибрану з групи, що складається з: (а) БЕОІЮ МО-1; (р) послідовностей ДНК, які кодують фермент, який містить зХЕО ІЮ МО:2; (с) послідовностей ДНК, що є принаймні на 9095 подібними до (а) або (Б) та які кодують фермент ХФРТазу; та (а) послідовностей ДНК, які відрізняються від (а) або (р) за рахунок виродженості генетичного коду.
2. Конструкція ДНК, що включає експресійну касету, причому конструкція містить, в напрямку від 5' до 3, оперативний у рослинній клітині промотор та молекулу ДНК згідно з пунктом 1, що розміщена нижче від вказаного промотора та оперативно зв'язана з ним.
3. Конструкція ДНК згідно з пунктом 2, в якій промотор є конститутивно активним в рослинних клітинах.
4. Конструкція ДНК згідно з пунктом 2, в якій вказаний промотор є селективно активним у клітинах тканини кореня рослини.
5. Конструкція ДНК згідно з пунктом 2, в якій вказаний промотор є селективно активним у клітинах тканини кори кореня рослини.
6. Конструкція ДНК згідно з пунктом 2, яка додатково включає плазміду.
7. Конструкція ДНК згідно з пунктом 2, яка переноситься за допомогою рослинного вектора трансформації.
8. Конструкція ДНК згідно з пунктом 2, яка переноситься за допомогою рослинного вектора трансформації, при цьому рослинний вектор трансформації являє собою вектор на основі Адгобасієгпут Шптегасієпв.
9. Конструкція ДНК, що включає експресійну касету, причому конструкція містить, в напрямку від 5' до 3, рослинний промотор та молекулу ДНК згідно з пунктом 1, що розміщена нижче від вказаного промотора та оперативно зв'язана з ним, при цьому вказаний сегмент ДНК знаходиться у антисмисловій орієнтації.
10. Конструкція ДНК згідно з пунктом 9, в якій промотор є конститутивно активним в рослинних клітинах.
11. Конструкція ДНК згідно з пунктом 9, в якій вказаний промотор є селективно активним у клітинах тканини кореня рослини.
12. Конструкція ДНК згідно з пунктом 9, в якій вказаний промотор є селективно активним у клітинах тканини кори кореня рослини.
13. Конструкція ДНК згідно з пунктом 9, яка додатково містить плазміду.
14. Конструкція ДНК згідно з пунктом 9, яка переноситься за допомогою рослинного вектора трансформації.
15. Конструкція ДНК згідно з пунктом 9, яка переноситься за допомогою рослинного вектора трансформації, при цьому рослинний вектор трансформації являє собою вектор на основі Адгорасіейит Шптвегасієпв.
16. Конструкція ДНК, що включає, в напрямку від 5' до 3, оперативний у рослинній клітині промотор та молекулу ДНК, що включає послідовність, вибрану з групи, яка складається з: (а) БЕОІЮ МО-1; (р) послідовностей ДНК, які кодують фермент, який містить 5ЕО ІЮ МО:2; (с) послідовностей ДНК, що є принаймні на 9095 подібними до (а) або (б), та (а) послідовностей ДНК, які відрізняються від (а) або (р) за рахунок виродженості генетичного коду, при цьому вказана молекула ДНК оперативно зв'язана з вказаним промотором.
17. Конструкція ДНК згідно з пунктом 16, в якій промотор є конститутивно активним в рослинних клітинах.
18. Конструкція ДНК згідно з пунктом 16, в якій вказаний промотор є селективно активним у клітинах тканини кореня рослини.
19. Конструкція ДНК згідно з пунктом 16, в якій вказаний промотор є селективно активним у клітинах тканини кори кореня рослини.
20. Конструкція ДНК згідно з пунктом 16, яка додатково містить плазміду.
21. Конструкція ДНК згідно з пунктом 16, яка переноситься за допомогою рослинного вектора трансформації.
22. Конструкція ДНК згідно з пунктом 16, яка переноситься за допомогою рослинного вектора трансформації, при цьому рослинний вектор трансформації являє собою вектор на основі Адгорасіейит Шптвегасієпв.
23. Конструкція ДНК, що включає, в напрямку від 5' до 3, оперативний у рослинній клітині промотор та молекулу ДНК, що включає послідовність, вибрану з групи, яка складається з: (а) 5ЕО ІЮ МО:1; (р) послідовностей ДНК, які кодують фермент, який містить БЕО ІЮ МО:2; (с) послідовностей ДНК, що є принаймні на 9095 подібними до (а) або (б), та (84) послідовностей ДНК, які відрізняються від (а) або (р) за рахунок виродженості генетичного коду, при цьому вказана молекула ДНК знаходиться в антисмисловій орієнтації та оперативно зв'язана з вказаним промотором.
24. Конструкція ДНК згідно з пунктом 23, в якій промотор є конститутивно активним в рослинних клітинах.
25. Конструкція ДНК згідно з пунктом 23, в якій вказаний промотор є селективно активним у клітинах тканини кореня рослини.
26. Конструкція ДНК згідно з пунктом 23, в якій вказаний промотор є селективно активним у клітинах тканини кори кореня рослини.
27. Конструкція ДНК згідно з пунктом 23, яка додатково містить плазміду.
28. Конструкція ДНК згідно з пунктом 23, яка переноситься за допомогою рослинного вектора трансформації.
29. Конструкція ДНК згідно з пунктом 23, яка переноситься за допомогою рослинного вектора трансформації, при цьому рослинний вектор трансформації являє собою вектор на основі Адгорасіейит Шптвегасієпв.
30. Рослинна клітина, що містить конструкцію ДНК згідно з п. 2, 9, 16 або 23.
31. Трансгенна рослина, що містить рослинні клітини згідно з п.30.
32. Ізольований пептид, що містить 5ЕО ІЮ МО:2.
33. Ізольований пептид, що кодується послідовністю ДНК, вибраною з групи, що складається з: (а) БЕОІЮ МО, (р) послідовностей ДНК, які є принаймні на 9095 подібними до (а) та які кодують фермент ХФРТазу; та (с) послідовностей ДНК, які відрізняються від ДНК згідно з (а) за рахунок виродження генетичного коду.
34. Спосіб одержання трансгенної рослинної клітини, що має знижену експресію ХФР'Тази, при цьому вказаний спосіб включає: одержання рослинної клітини; одержання екзогенної конструкції ДНК, причому конструкція включає, у напрямку від 5' до 3", оперативний у рослинній клітині промотор та молекулу ДНК, що містить частину послідовності, яка має довжину принаймні 15 нуклеотидів, при цьому послідовність вибрана з групи, яка складається з: (а)5БО ІЮ МО; (р) послідовностей ДНК, які кодують фермент, що містить ЗЕО ІЮ МО:2, при цьому вказана молекула ДНК оперативно зв'язана з вказаним промотором; трансформацію вказаної рослинної клітини вказаною конструкцією ДНК для одержання трансформованих клітин, при цьому вказана рослинна клітина демонструє знижену експресію ХФРТази у порівнянні з нетрансформованою рослинною клітиною.
35. Спосіб згідно з п.34, в якому вказана ДНК, що включає частину послідовності, яка кодує ІРНК ХФРТази, знаходиться в антисмисловій орієнтації.
36. Спосіб згідно з п.34, в якому вказана ДНК, що включає частину послідовності, яка кодує ІРНК ХФРТази, знаходиться у смисловій орієнтації.
37. Спосіб згідно з п.34, в якому вказана рослинна клітина є клітиною Місоїйапа їарасит.
38. Спосіб згідно з п.34, який також передбачає регенерацію рослини з вказаної трансформованої рослинної клітини.
39. Спосіб згідно з п.34, в якому вказаний промотор є конститутивно активним.
40. Спосіб згідно з п.34, в якому вказаний промотор є селективно активним у клітинах тканини кореня рослини.
41. Спосіб згідно з п.34, в якому вказаний промотор є селективно активним у клітинах тканини кори кореня рослини.
42. Спосіб згідно з п.34, в якому вказаний етап трансформації виконують шляхом бомбардування вказаної рослинної клітини частинками, що несуть зазначену конструкцію ДНК.
43. Спосіб згідно з п.34, в якому вказаний етап трансформації виконують шляхом інфікування зазначеної рослинної клітини Адгобасіепйит (теїасієпв, що містить Ті-плазміду, яка несе вказану конструкцію ДНК.
44. Спосіб згідно з п.34, в якому вказана молекула ДНК є комплементарною до інформаційної РНК ХФРТази (ІРНК), що експресується у вказаній рослинній клітині на ділянці, вибраній з групи, що складається з: (а) 5'-послідовності, що не транслюється, вказаної ІРНК ХФРТАази; (р) З'-послідовності, що не транслюється, вказаної ІРНК ХФРТази; та (с) ділянки, що транслюється, ІРНК ХФРТАази.
45. Спосіб згідно з п.34, в якому вказана молекула ДНК є комплементарною до, принаймні 30 нуклеотидів вказаної інформаційної РНК ХФРТази, що експресується у зазначеній рослинній клітині.
46. Спосіб згідно з п.34, в якому вказана молекула ДНК є комплементарною до, принаймні 200 нуклеотидів вказаної інформаційної РНК ХФР Тази, що експресується у зазначеній рослинній клітині.
47. Спосіб згідно з п.34, в якому вказана молекула ДНК включає кодуючу послідовність ХФР'Тази, вибрану з послідовностей ДНК згідно з п.1.
48. Спосіб одержання трансгенного насіння, що включає одержання трансгенної рослини, що містить рослинну клітину, одержану у відповідності зі способом згідно з п.34; вирощування вказаної рослини до стадії утворення насіння; та збір насіння від вказаної трансгенної рослини.
49. Трансгенна рослинна клітина видів Місойапа, що має знижену експресію ХФРТази порівняно з нетрансформованою контрольною рослинною клітиною, при цьому вказана трансгенна рослинна клітина включає: екзогенну конструкцію ДНК, що включає, у напрямку від 5' до 3", оперативний у вказаній рослинній клітині промотор та молекулу ДНК, яка містить сегмент послідовності ДНК, що має довжину 30 нуклеотидів, послідовності ДНК, яка вибрана з групи, яка складається з: (а) БЕОІЮ МО1, та (р) послідовностей ДНК, які кодують фермент, що містить ЗЕО ІЮ МО:2, при цьому вказана молекула ДНК є оперативно зв'язаною з вказаним промотором, а вказана рослинна клітина демонструє знижену експресію ХФРТази у порівнянні з нетрансформованою контрольною рослинною клітиною.
50. Трансгенна рослинна клітина згідно з пунктом 49, в якій вказаний сегмент послідовності ДНК знаходиться в антисмисловій орієнтації.
51. Трансгенна рослинна клітина згідно з пунктом 49, в якій вказаний сегмент послідовності ДНК знаходиться в смисловій орієнтації.
52. Трансгенна рослина видів Місойапа, що має знижену експресію ХфРТази порівняно з нетрансформованою контрольною рослиною, причому трансгенна рослина є потомством рослини, регенерованої з рослинної клітини згідно з п.49.
53. Насіння трансгенної рослини видів Місойапа, що має знижену експресію ХФРТази порівняно з нетрансформованою контрольною рослиною, причому трансгенна рослина є рослиною, регенерованою з рослинної клітини згідно з п.49, або її потомством.
54. Спосіб зниження експресії гена ХФРТази у рослинній клітині, при цьому вказаний спосіб включає: одержання рослинної клітини для зниження експресії гена ХФРТази у вказаній рослинній клітині; трансформацію вказаної рослинної клітини за допомогою молекули екзогенної ДНК, що включає сегмент, який має довжину принаймні 30 нуклеотидів, причому послідовність ДНК вибрана з групи, яка складається 3: (а) БЕОІЮО МО: 1, та (Б) послідовностей ДНК, які кодують фермент, що містить 5ЕО ІЮ МО:2, де вказаний етап трансформації приводить до зниження експресії вказаного гена ХФРТази у вказаній рослинній клітині.
55. Спосіб одержання рослини тютюну, що має знижені рівні нікотину у листі вказаної рослини тютюну, при цьому вказаний спосіб включає: одержання рослинної клітини тютюну для зниження експресії гена ХФРТази у вказаній рослинній клітині тютюну; трансформацію вказаної рослинної клітини тютюну за допомогою молекули екзогенної ДНК, що включає сегмент, який має довжину принаймні 30 нуклеотидів послідовності ДНК, що вибрана з групи, яка складається з: (а) 5ЕОІЮ МО: 1, та (б) послідовностей ДНК, які кодують фермент, що містить 5ЕБЕО І МО:2, так, щоб одержати трансформовану рослинну клітину тютюну; та вирощування вказаної трансформованої клітини рослини тютюну у трансгенній рослині тютюну, причому вказана трансгенна рослина тютюну має листя зі зниженим рівнем нікотину у порівнянні з трансгенною рослиною тютюну, вирощеною з нетрансформованої рослинної клітини.
56. Спосіб одержання трансгенної рослинної клітини, що має збільшену експресію ХФРТази, при цьому вказаний спосіб передбачає: одержання рослинної клітини типу, відомого для експресії ХФРТази; одержання екзогенної конструкції ДНК, яка включає, в напрямку від 5' до 3, оперативний у рослинній клітині промотор та послідовність ДНК, що кодує ХФРТазу, при цьому вказана послідовність ДНК оперативно зв'язана з зазначеним промотором; та трансформацію вказаної рослинної клітини за допомогою зазначеної конструкції ДНК для одержання трансформованих клітин, при цьому вказана рослинна клітина має збільшену експресію ХФРТази порівняно з нетрансформованою клітиною, де конструкція ДНК вибрана з групи, яка включає: (а) БЕОІЮ МО-1; (р) послідовності ДНК, які кодують фермент, який містить 5ЕО ІЮ МО:2; (с) послідовності ДНК, що є принаймні на 9095 подібними до (а) або (Б), та (ад) послідовності ДНК, які відрізняються від (а) або (р) за рахунок виродженості генетичного коду.
57. Трансгенна рослина видів Місойапа, що має збільшену експресію ХФРтТази порівняно з нетрансформованою контрольною рослиною, при чому вказана трансгенна рослина включає трансгенні рослинні клітини, що містять екзогенну конструкцію ДНК, яка включає в напрямку від 5' до 3", оперативний у рослинній клітині промотор та послідовність ДНК, що кодує ХФРТазу, при цьому вказана послідовність ДНК оперативно зв'язана з зазначеним промотором; та при цьому вказана рослина демонструє збільшену експресію ХФРТази порівняно з нетрансформованою контрольною рослиною, де вказана конструкція екзогенної ДНК вибрана з групи, яка включає: (а) БЕОІЮ МО-1; (р) послідовності ДНК, які кодують фермент, який містить 5ЕО ІЮ МО:2; (с) послідовності ДНК, що є принаймні на 9095 подібними до (а) або (Б), та (8) послідовності ДНК, які відрізняються від (а) або (р) за рахунок виродженості генетичного коду.
58. Трансгенна рослина видів Місойапа, що має збільшену експресію ХФРтТази порівняно з нетрансформованою контрольною рослиною, причому вказана трансгенна рослина являє собою потомство рослини у відповідності з пунктом 57.
59. Спосіб збільшення експресії гена ХФРТази у рослинній клітині, причому вказаний спосіб передбачає: вирощування рослинної клітини, трансформованої внесенням екзогенної ДНК, причому вказана екзогенна ДНК кодує ХФРТАазу і вибрана з групи, яка складається з: (а) 5ЕО ІЮ МО:1; (р) послідовностей ДНК, які кодують фермент, який містить 5ЕО ІЮ МО:2; (с) послідовностей ДНК, що є принаймні на 9095 подібними до (а) або (Б), та (а) послідовностей ДНК, які відрізняються від (а) або (р) за рахунок виродженості генетичного коду.
60. Спосіб згідно з п.59, в якому вказана трансформована рослинна клітина одержана способом, що передбачає: інтеграцію у геном хазяйської рослинної клітини конструкції що включає, у напрямку транскрипції, функціональний у вказаній рослинній клітині промотор, послідовність ДНК, що кодує ХФфРТазу, функціональну у вказаній клітині, при цьому вказана послідовність ДНК оперативно зв'язана з зазначеним промотором, та функціональну у вказаній клітині ділянку термінації транскрипції, в результаті чого одержують трансформовану рослинну клітину.
61. Спосіб одержання рослини тютюну, що має збільшені рівні нікотину у листі вказаної рослини тютюну, при цьому вказаний спосіб передбачає: вирощування рослини тютюну або її потомства, де вказана рослина включає клітини, які містять конструкцію ДНК, що включає функціональну у вказаній рослині ділянку ініціації транскрипції та екзогенну послідовність ДНК, оперативно зв'язану з вказаною ділянкою ініціації транскрипції, де вказана послідовність ДНК кодує функціональну у вказаних клітинах ХФРТазу, а вказана екзогенна конструкція ДНК вибрана з групи, яка складається з: (а) БЕОІЮ МО-1; (р) послідовностей ДНК, які кодують фермент, який містить БЕО ІЮ МО:2; (с) послідовностей ДНК, що є принаймні на 9095 подібними до (а) або (б), та (8) послідовностей ДНК, які відрізняються від (а) або (р) за рахунок виродженості генетичного коду.
62. Ізольована молекула ДНК, яка включає послідовність 5ХЕО І МО:1.
63. Конструкція ДНК, що включає експресійну касету, при цьому вказана конструкція містить, у напрямку від 5 до 3, рослинний промотор та молекулу ДНК згідно з пунктом 62, розміщену нижче вказаного промотора та оперативно зв'язану з ним, при цьому вказаний сегмент ДНК знаходиться в антисмисловій орієнтації.
64. Рослинна клітина, що включає молекулу ДНК згідно з пунктом 62.
65. Трансгенна рослина тютюну, що включає молекулу ДНК згідно з пунктом 62.
66. Тютюновий продукт, одержаний з трансгенної рослини тютюну згідно з пунктом 65.
67. Тютюновий продукт згідно з пунктом 66, в якому вказаний тютюновий продукт являє собою сигарету.
68. Насіння, одержане від трансгенної рослини тютюну згідно з пунктом 65.
69. Спосіб одержання рослин тютюну, що мають знижені рівні нікотину у листі вказаної рослини тютюну, при цьому вказаний спосіб включає: одержання рослинної клітини тютюну для зниження експресії гена ХФРТази у вказаній рослинній клітині тютюну; трансформацію вказаної рослинної клітини за допомогою екзогенної молекули ДНК, що включає послідовність ФЕО ІЮ МО:1; та вирощування трансформованої рослинної клітини у трансгенній рослині тютюну, при цьому вказана трансгенна рослина тютюну має листя зі зниженим рівнем нікотину у порівнянні з трансгенною рослиною, вирощеною з нетрансформованої рослинної клітини тютюну.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US4947197P | 1997-06-12 | 1997-06-12 | |
| PCT/US1998/011893 WO1998056923A1 (en) | 1997-06-12 | 1998-06-10 | Regulation of quinolate phosphoribosyl transferase expression |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA72187C2 true UA72187C2 (uk) | 2005-02-15 |
Family
ID=21960004
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA99126735A UA72187C2 (uk) | 1997-06-12 | 1998-10-06 | Регуляція експресії хінолатфосфорибозилтрансферази |
Country Status (38)
| Country | Link |
|---|---|
| US (9) | US6586661B1 (uk) |
| EP (3) | EP0991766B1 (uk) |
| JP (4) | JP4095678B2 (uk) |
| KR (1) | KR100365969B1 (uk) |
| CN (2) | CN1304576C (uk) |
| AP (1) | AP1169A (uk) |
| AT (1) | ATE262039T1 (uk) |
| AU (1) | AU748514B2 (uk) |
| BG (1) | BG64319B1 (uk) |
| BR (1) | BRPI9810870B1 (uk) |
| CA (2) | CA2287776C (uk) |
| CU (1) | CU23174A3 (uk) |
| CZ (1) | CZ297379B6 (uk) |
| DE (2) | DE991766T1 (uk) |
| DK (1) | DK0991766T3 (uk) |
| EA (2) | EA009898B1 (uk) |
| EE (1) | EE04595B1 (uk) |
| ES (1) | ES2154624T3 (uk) |
| GE (1) | GEP20032871B (uk) |
| GR (1) | GR20010300003T1 (uk) |
| HK (3) | HK1027379A1 (uk) |
| HU (1) | HU225888B1 (uk) |
| ID (1) | ID29311A (uk) |
| IL (3) | IL132184A0 (uk) |
| LT (1) | LT4706B (uk) |
| LV (1) | LV12507B (uk) |
| NO (1) | NO324872B1 (uk) |
| NZ (1) | NZ500963A (uk) |
| OA (1) | OA11219A (uk) |
| PL (1) | PL201266B1 (uk) |
| PT (1) | PT991766E (uk) |
| RO (1) | RO121968B1 (uk) |
| RS (1) | RS49677B (uk) |
| SI (1) | SI20215B (uk) |
| SK (1) | SK161899A3 (uk) |
| TR (1) | TR199902728T2 (uk) |
| UA (1) | UA72187C2 (uk) |
| WO (1) | WO1998056923A1 (uk) |
Families Citing this family (51)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6586661B1 (en) * | 1997-06-12 | 2003-07-01 | North Carolina State University | Regulation of quinolate phosphoribosyl transferase expression by transformation with a tobacco quinolate phosphoribosyl transferase nucleic acid |
| US20100251425A9 (en) * | 1998-05-15 | 2010-09-30 | University Of Central Florida | Expression of human interferon in transgenic chloroplasts |
| DE19926216A1 (de) * | 1999-06-09 | 2001-02-22 | Metallgesellschaft Ag | Verfahren zur Herstellung von Bariumsulfat, Bariumsulfat und Verwendung des Bariumsulfats |
| US6911541B2 (en) * | 2000-08-30 | 2005-06-28 | North Carolina State University | Promoter fragment that is recognized by the product of the tobacco Nic gene |
| DE60128149D1 (en) * | 2000-11-07 | 2007-06-06 | Univ North Carolina State | Putrescin-n-methyltransferasepromotor |
| DE10055870A1 (de) * | 2000-11-10 | 2002-05-29 | Degussa | Neue für das nadC-Gen kodierende Nukleotidsequenzen |
| EA200400005A1 (ru) * | 2001-06-06 | 2004-08-26 | 22 Сенчури Лимитед, Ллс | Утилизация табачной биомассы |
| WO2005103296A2 (en) * | 2004-03-30 | 2005-11-03 | Vector Tobacco, Ltd. | Global gene expression analysis of human bronchial epithelial cells exposed to cigarette smoke, smoke condensates, or components thereof |
| US20060157072A1 (en) * | 2001-06-08 | 2006-07-20 | Anthony Albino | Method of reducing the harmful effects of orally or transdermally delivered nicotine |
| JP2004530430A (ja) * | 2001-06-08 | 2004-10-07 | ベクター、タバコ、リミテッド | タバコに含まれるニコチンおよびニトロソアミンの濃度の変更 |
| US6730832B1 (en) | 2001-09-10 | 2004-05-04 | Luis Mayan Dominguez | High threonine producing lines of Nicotiana tobacum and methods for producing |
| WO2003041521A2 (en) * | 2001-11-09 | 2003-05-22 | Vector Tobacco Inc. | Method and composition for mentholation of charcoal filtered cigarettes |
| AU2002357903A1 (en) * | 2001-12-19 | 2003-07-09 | Vector Tobacco Inc. | Method and composition for mentholation of cigarettes |
| WO2003053176A2 (en) * | 2001-12-19 | 2003-07-03 | Vector Tobacco Inc. | Method and compositions for imparting cooling effect to tobacco products |
| WO2003086076A1 (en) * | 2002-04-09 | 2003-10-23 | Vector Tobacco Ltd. | Tobacco having reduced nicotine and nitrosamines |
| JP2007502621A (ja) * | 2003-08-19 | 2007-02-15 | ２２ンド センチュリー リミテッド，エルエルシー | 曝露低減タバコ製品 |
| US7920906B2 (en) | 2005-03-10 | 2011-04-05 | Dexcom, Inc. | System and methods for processing analyte sensor data for sensor calibration |
| WO2005041151A2 (en) * | 2003-10-02 | 2005-05-06 | Vector Tobacco Ltd. | Tobacco product labeling system |
| US9247900B2 (en) | 2004-07-13 | 2016-02-02 | Dexcom, Inc. | Analyte sensor |
| US7538071B2 (en) | 2003-11-21 | 2009-05-26 | Carl Berger | Methods of reducing the nicotine content of tobacco plants and tobacco plants obtained thereby |
| US8792955B2 (en) | 2004-05-03 | 2014-07-29 | Dexcom, Inc. | Transcutaneous analyte sensor |
| US7946984B2 (en) | 2004-07-13 | 2011-05-24 | Dexcom, Inc. | Transcutaneous analyte sensor |
| AU2012203977B2 (en) * | 2005-02-28 | 2015-01-29 | 22Nd Century Limited, Llc | Reducing levels of nicotinic alkaloids in plants |
| WO2006109197A2 (en) * | 2005-02-28 | 2006-10-19 | Nara Institute Of Science And Technology | Reducing levels of nicotinic alkaloids in plants |
| NZ564025A (en) | 2005-05-11 | 2012-03-30 | Vector Tobacco Inc | Reduced risk tobacco products and methods of making same |
| FR2889003A1 (fr) * | 2005-07-22 | 2007-01-26 | St Microelectronics Sa | Adaptation automatique d'une source video a un recepteur |
| CA2656430C (en) | 2006-06-19 | 2014-08-05 | Jonathan E. Page | Nucleic acid encoding n-methylputrescine oxidase and uses thereof |
| EP3578661A1 (en) | 2006-09-13 | 2019-12-11 | 22nd Century Limited, LLC | Increasing levels of nicotinic alkaloids |
| US9551003B2 (en) | 2006-09-13 | 2017-01-24 | 22Nd Century Limited, Llc | Increasing levels of nicotinic alkaloids in plants |
| US9102948B2 (en) | 2006-11-17 | 2015-08-11 | 22Nd Century Limited, Llc | Regulating alkaloids |
| US9106606B1 (en) | 2007-02-05 | 2015-08-11 | F5 Networks, Inc. | Method, intermediate device and computer program code for maintaining persistency |
| US8822757B2 (en) * | 2007-05-25 | 2014-09-02 | National Research Council Of Canada | Nucleic acid sequences encoding transcription factors regulating nicotine alkaloid biosynthesis and their use in modifying plant metabolism |
| US20100206317A1 (en) * | 2007-09-28 | 2010-08-19 | Vector Tobacco, Inc. | Reduced risk tobacco products and use thereof |
| PT2231861E (pt) | 2007-12-13 | 2015-02-03 | Philip Morris Products Sa | Plantas transgénicas modificadas para transporte de cádmio reduzido, produtos derivados e métodos relacionados |
| US9493776B2 (en) | 2009-11-19 | 2016-11-15 | National University Corporation Okayama University | System for increasing gene expression and vector comprising the system |
| WO2011071773A1 (en) | 2009-12-11 | 2011-06-16 | Caridianbct, Inc. | System for blood separation with shielded extraction port and optical control |
| JP5540068B2 (ja) | 2010-02-17 | 2014-07-02 | 日本たばこ産業株式会社 | 植物内容成分の調節因子、およびその利用 |
| US9862923B2 (en) | 2010-03-26 | 2018-01-09 | Philip Morris Usa Inc. | Cultured tobacco cells as a matrix for consumable products |
| EP2565265A1 (en) | 2011-09-02 | 2013-03-06 | Philip Morris Products S.A. | Isopropylmalate synthase from Nicotiana tabacum and methods and uses thereof |
| US8716571B2 (en) | 2011-09-21 | 2014-05-06 | Reynolds Technologies, Inc. | Tobacco having reduced amounts of amino acids and methods for producing such lines |
| US9137958B2 (en) | 2012-02-08 | 2015-09-22 | Reynolds Technologies, Inc. | Tobacco having altered amounts of environmental contaminants |
| AP2015008563A0 (en) * | 2012-12-21 | 2015-06-30 | Philip Morris Products Sa | Tobacco specific nitrosamine reduction in plants |
| CN103173488B (zh) * | 2013-03-14 | 2014-09-03 | 浙江省农业科学院 | 新的融合标签进行水稻转基因快速筛选的方法 |
| US10375910B2 (en) | 2013-03-15 | 2019-08-13 | Altria Client Services Llc | Development of tobacco varieties with no or significantly reduced anatabine content |
| WO2016179356A1 (en) * | 2015-05-05 | 2016-11-10 | North Carolina State University | Methods and compositions for reducing the tobacco specific nitrosamine nnk in tobacco |
| US10405571B2 (en) | 2015-06-26 | 2019-09-10 | Altria Client Services Llc | Compositions and methods for producing tobacco plants and products having altered alkaloid levels |
| EP3480314A1 (en) | 2017-11-03 | 2019-05-08 | Philip Morris Products S.A. | Regulation of alkaloid content |
| US10897925B2 (en) | 2018-07-27 | 2021-01-26 | Joseph Pandolfino | Articles and formulations for smoking products and vaporizers |
| US20200035118A1 (en) | 2018-07-27 | 2020-01-30 | Joseph Pandolfino | Methods and products to facilitate smokers switching to a tobacco heating product or e-cigarettes |
| EP4041899A1 (en) * | 2019-10-10 | 2022-08-17 | Altria Client Services LLC | Compositions and methods based on qpt engineering for producing tobacco plants and products having altered alkaloid levels |
| CN113528537A (zh) * | 2021-08-11 | 2021-10-22 | 云南省烟草农业科学研究院 | 一种降低烟叶烟碱含量的NtQPT2基因突变体及其应用 |
Family Cites Families (178)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US254285A (en) | 1882-02-28 | David w | ||
| US299541A (en) | 1884-06-03 | heae-n | ||
| US38123A (en) * | 1863-04-07 | Improvement in harvesters | ||
| US819751A (en) * | 1905-01-04 | 1906-05-08 | Giuseppe Gianoli | Process of charging silk. |
| US2479526A (en) | 1940-12-11 | 1949-08-16 | Wurton Machine Company | Apparatus for curing green tobacco |
| US2728803A (en) * | 1951-12-28 | 1955-12-27 | Standard Oil Co | Separation of ethylbenzene from other c8 aromatic hydrocarbons by extraction with hf-bf3 |
| US2728603A (en) | 1954-12-13 | 1955-12-27 | James H Stagg | Lawn and garden sprinkler |
| DE1917552U (de) | 1964-01-31 | 1965-06-10 | Fritz Tautenhahn | Flaechig-ornamentales gitterwerk. |
| US3693631A (en) | 1971-04-28 | 1972-09-26 | Reynolds Leasing Corp | Tobacco expansion process |
| US3840025A (en) | 1972-08-14 | 1974-10-08 | Industrial Nucleonics Corp | Tobacco moisture control system and method |
| US3905123A (en) | 1973-10-15 | 1975-09-16 | Industrial Nucleonics Corp | Method and apparatus for controlling a tobacco dryer |
| US4319587A (en) | 1975-06-09 | 1982-03-16 | Irving S. Moser | Smoking article |
| DE7522272U (de) | 1975-07-12 | 1977-06-02 | Deutsche Benkert Gmbh & Co Kg, 4690 Herne | Poroeses mundstueckbelagpapier |
| US4192323A (en) | 1977-09-21 | 1980-03-11 | Gas-Fired Products, Inc. | Apparatus and method for automatically controlling curing conditions in a tobacco curing barn |
| US4557280A (en) | 1978-06-15 | 1985-12-10 | Brown & Williamson Tobacco Corporation | Process for reduction of nitrate and nicotine content of tobacco by microbial treatment |
| US4243056A (en) | 1979-01-12 | 1981-01-06 | Philip Morris Incorporated | Method for uniform incorporation of additives into tobacco |
| FR2478958A1 (fr) | 1980-04-01 | 1981-10-02 | Decoufle | Dispositif d'alimentation en encre des appareils d'imprimerie pour machines a confectionner les cigarettes |
| US4499911A (en) | 1980-12-09 | 1985-02-19 | Johnson William H | Energy efficient curing and drying system |
| GB2092149B (en) * | 1981-02-03 | 1985-01-03 | Searle & Co | Imidazoline hydrazone and hydrazine derivatives production thereof and use in medicine |
| US4459355A (en) | 1982-07-12 | 1984-07-10 | International Paper Company | Method for transforming plant cells |
| US4762785A (en) | 1982-08-12 | 1988-08-09 | Calgene, Inc. | Novel method and compositions for introducting alien DNA in vivo |
| NL8203963A (nl) | 1982-10-14 | 1984-05-01 | Naarden International Nv | Werkwijze voor het aromatiseren van droog plantaardig materiaal. |
| EP0290799B9 (en) | 1983-01-13 | 2004-09-01 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Transgenic dicotyledonous plant cells and plants |
| US6051757A (en) | 1983-01-14 | 2000-04-18 | Washington University | Regeneration of plants containing genetically engineered T-DNA |
| WO1984002919A1 (en) | 1983-01-17 | 1984-08-02 | Monsanto Co | Plasmids for transforming plant cells |
| WO1984002913A1 (en) | 1983-01-17 | 1984-08-02 | Monsanto Co | Chimeric genes suitable for expression in plant cells |
| US6174724B1 (en) | 1983-01-17 | 2001-01-16 | Monsanto Company | Chimeric genes suitable for expression in plant cells |
| US5034322A (en) | 1983-01-17 | 1991-07-23 | Monsanto Company | Chimeric genes suitable for expression in plant cells |
| SU1582990A3 (ru) | 1983-01-17 | 1990-07-30 | Монсанто Компани (Фирма) | Способ получени трасформированных клеток двудольных растений |
| US5352605A (en) | 1983-01-17 | 1994-10-04 | Monsanto Company | Chimeric genes for transforming plant cells using viral promoters |
| NL8300698A (nl) | 1983-02-24 | 1984-09-17 | Univ Leiden | Werkwijze voor het inbouwen van vreemd dna in het genoom van tweezaadlobbige planten; agrobacterium tumefaciens bacterien en werkwijze voor het produceren daarvan; planten en plantecellen met gewijzigde genetische eigenschappen; werkwijze voor het bereiden van chemische en/of farmaceutische produkten. |
| NL8300699A (nl) | 1983-02-24 | 1984-09-17 | Univ Leiden | Werkwijze voor het inbouwen van vreemd dna in het genoom van tweezaadlobbige planten; werkwijze voor het produceren van agrobacterium tumefaciens bacterien; stabiele cointegraat plasmiden; planten en plantecellen met gewijzigde genetische eigenschappen; werkwijze voor het bereiden van chemische en/of farmaceutische produkten. |
| US4751348A (en) | 1983-07-16 | 1988-06-14 | Cold Spring Harbor Laboratory | Nicotiana plants with both altered polyamine levels and flower structures and method for obtaining these plants |
| US4766855A (en) * | 1983-07-20 | 1988-08-30 | Cummins Engine Co., Inc. | Plasma jet ignition apparatus |
| US5208149A (en) | 1983-10-20 | 1993-05-04 | The Research Foundation Of State University Of New York | Nucleic acid constructs containing stable stem and loop structures |
| EP0467349B1 (en) | 1983-10-20 | 2000-12-27 | The Research Foundation Of State University Of New York | Regulation of gene expression by employing translational inhibition utilizing mRNA interfering complementary RNA |
| US5272065A (en) | 1983-10-20 | 1993-12-21 | Research Foundation Of State University Of New York | Regulation of gene expression by employing translational inhibition of MRNA utilizing interfering complementary MRNA |
| US5190931A (en) | 1983-10-20 | 1993-03-02 | The Research Foundation Of State University Of New York | Regulation of gene expression by employing translational inhibition of MRNA utilizing interfering complementary MRNA |
| US4885248A (en) | 1984-02-15 | 1989-12-05 | Lubrizol Genetics, Inc. | Transfer vector |
| US4771002A (en) | 1984-02-24 | 1988-09-13 | Lubrizol Genetics, Inc. | Transcription in plants and bacteria |
| NL8401780A (nl) | 1984-06-04 | 1986-01-02 | Rijksuniversiteit Leiden En Pr | Werkwijze voor het inbouwen van vreemd dna in het genoom van planten. |
| US5149645A (en) | 1984-06-04 | 1992-09-22 | Rijksuniversiteit Leiden | Process for introducing foreign DNA into the genome of plants |
| US4945050A (en) | 1984-11-13 | 1990-07-31 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor |
| US5036006A (en) | 1984-11-13 | 1991-07-30 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor |
| US5100792A (en) | 1984-11-13 | 1992-03-31 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for transporting substances into living cells and tissues |
| ATE93542T1 (de) | 1984-12-28 | 1993-09-15 | Plant Genetic Systems Nv | Rekombinante dna, die in pflanzliche zellen eingebracht werden kann. |
| US5753475A (en) | 1985-01-17 | 1998-05-19 | Calgene, Inc. | Methods and compositions for regulated transcription and expression of heterologous genes |
| US6281410B1 (en) | 1986-07-31 | 2001-08-28 | Calgene Llc | Methods and compositions for regulated transcription and expression of heterologous genes |
| US4943674A (en) | 1987-05-26 | 1990-07-24 | Calgene, Inc. | Fruit specific transcriptional factors |
| US6617496B1 (en) | 1985-10-16 | 2003-09-09 | Monsanto Company | Effecting virus resistance in plants through the use of negative strand RNAs |
| NL8502948A (nl) | 1985-10-29 | 1987-05-18 | Rijksuniversiteit Leiden En Pr | Werkwijze voor het inbouwen van "vreemd dna" in het genoom van dicotyle planten. |
| US4795855A (en) | 1985-11-14 | 1989-01-03 | Joanne Fillatti | Transformation and foreign gene expression with woody species |
| GB8529851D0 (en) | 1985-12-04 | 1986-01-15 | Rothmans Of Pall Mall | Linear layered cigarette |
| US5107065A (en) | 1986-03-28 | 1992-04-21 | Calgene, Inc. | Anti-sense regulation of gene expression in plant cells |
| US5453566A (en) | 1986-03-28 | 1995-09-26 | Calgene, Inc. | Antisense regulation of gene expression in plant/cells |
| NZ219472A (en) | 1986-03-28 | 1990-08-28 | Calgene Inc | Regulation of phenotype in plant cells using dsdna constructs |
| US4700725A (en) | 1986-04-17 | 1987-10-20 | Philip Morris Incorporated | Adjustable filter cigarette |
| US4699158A (en) | 1986-04-17 | 1987-10-13 | Philip Morris Incorporated | Adjustable filter cigarette with tactile indicator |
| ATE39600T1 (de) | 1986-04-23 | 1989-01-15 | Reynolds Tobacco Gmbh | Verfahren zur behandlung von tabak und aehnlichen organischen materialien. |
| US4766911A (en) | 1986-06-23 | 1988-08-30 | R. J. Reynolds Tobacco Company | Method for tracing smoking articles |
| US4962028A (en) | 1986-07-09 | 1990-10-09 | Dna Plant Technology Corporation | Plant promotors |
| US5229292A (en) | 1986-07-28 | 1993-07-20 | Stine Seed Farm, Inc. | Biological control of insects using pseudomonas strains transformed with bacillus thuringiensis insect toxingene |
| EP0265556A1 (en) | 1986-10-31 | 1988-05-04 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Stable binary agrobacterium vectors and their use |
| US5268463A (en) | 1986-11-11 | 1993-12-07 | Jefferson Richard A | Plant promoter α-glucuronidase gene construct |
| US5015580A (en) | 1987-07-29 | 1991-05-14 | Agracetus | Particle-mediated transformation of soybean plants and lines |
| US4835162A (en) | 1987-02-12 | 1989-05-30 | Abood Leo G | Agonists and antagonists to nicotine as smoking deterents |
| US4966916A (en) | 1987-02-12 | 1990-10-30 | Abood Leo G | Agonists and antagonists to nicotine as smoking deterrents |
| US5356799A (en) | 1988-02-03 | 1994-10-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Antisense gene systems of pollination control for hybrid seed production |
| US5922602A (en) | 1988-02-26 | 1999-07-13 | Biosource Technologies, Inc. | Cytoplasmic inhibition of gene expression |
| US5179022A (en) | 1988-02-29 | 1993-01-12 | E. I. Du Pont De Nemours & Co. | Biolistic apparatus for delivering substances into cells and tissues in a non-lethal manner |
| US4954442A (en) | 1988-08-31 | 1990-09-04 | Purdue Research Foundation | Opine enhancement of vir gene induction |
| US5023179A (en) | 1988-11-14 | 1991-06-11 | Eric Lam | Promoter enhancer element for gene expression in plant roots |
| GB8827592D0 (en) | 1988-11-25 | 1988-12-29 | Taniguchi T | Improvements in & relating to regulation of expression |
| US5223419A (en) | 1989-03-14 | 1993-06-29 | The Rockefeller University | Alteration of gene expression in plants |
| US4990607A (en) | 1989-03-14 | 1991-02-05 | The Rockefeller University | Alteration of gene expression in plants |
| US5034323A (en) | 1989-03-30 | 1991-07-23 | Dna Plant Technology Corporation | Genetic engineering of novel plant phenotypes |
| US5231020A (en) | 1989-03-30 | 1993-07-27 | Dna Plant Technology Corporation | Genetic engineering of novel plant phenotypes |
| GB8916213D0 (en) | 1989-07-14 | 1989-08-31 | Ici Plc | Dna constructs,cells and plants derived therefrom |
| US5580722A (en) | 1989-07-18 | 1996-12-03 | Oncogene Science, Inc. | Methods of determining chemicals that modulate transcriptionally expression of genes associated with cardiovascular disease |
| JPH04506902A (ja) * | 1989-07-18 | 1992-12-03 | オンコジーン・サイエンス・インコーポレイテッド | 遺伝子発現の転写変調方法及び遺伝子発現モジュレーターとして作用できる化学物質の検出方法 |
| US6203976B1 (en) | 1989-07-18 | 2001-03-20 | Osi Pharmaceuticals, Inc. | Methods of preparing compositions comprising chemicals capable of transcriptional modulation |
| US5665543A (en) | 1989-07-18 | 1997-09-09 | Oncogene Science, Inc. | Method of discovering chemicals capable of functioning as gene expression modulators |
| US5776502A (en) | 1989-07-18 | 1998-07-07 | Oncogene Science, Inc. | Methods of transcriptionally modulating gene expression |
| US5501967A (en) | 1989-07-26 | 1996-03-26 | Mogen International, N.V./Rijksuniversiteit Te Leiden | Process for the site-directed integration of DNA into the genome of plants |
| US5097025A (en) | 1989-08-01 | 1992-03-17 | The Rockefeller University | Plant promoters |
| US5062434A (en) | 1989-09-22 | 1991-11-05 | Brown & Williamson Tobacco Corporation | Cigarette paper |
| GB8923716D0 (en) | 1989-10-20 | 1989-12-06 | Ici Plc | Dna,constructs,cells and plants derived therefrom |
| US5177308A (en) | 1989-11-29 | 1993-01-05 | Agracetus | Insecticidal toxins in plants |
| ES2079467T3 (es) | 1989-12-19 | 1996-01-16 | Ciba Geigy Ag | Procedimiento y dispositivo para la transformacion genetica de celulas. |
| JPH0673478B2 (ja) * | 1990-01-11 | 1994-09-21 | 旭化成工業株式会社 | Ｌ―カルニチンの高感度測定法および測定用組成物 |
| CA2036935A1 (en) | 1990-02-26 | 1991-08-27 | Paul Christou | Plant transformation process with early identification of germ line transformation events |
| US5109876A (en) | 1990-04-19 | 1992-05-05 | R. J. Reynolds Tobacco Company | Cigarette paper and cigarette incorporating same |
| US5204253A (en) | 1990-05-29 | 1993-04-20 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Method and apparatus for introducing biological substances into living cells |
| US5932782A (en) | 1990-11-14 | 1999-08-03 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant transformation method using agrobacterium species adhered to microprojectiles |
| US5668295A (en) | 1990-11-14 | 1997-09-16 | Philip Morris Incorporated | Protein involved in nicotine synthesis, DNA encoding, and use of sense and antisense DNAs corresponding thereto to affect nicotine content in transgenic tobacco cells and plants |
| US5260205A (en) | 1990-11-14 | 1993-11-09 | Philip Morris Incorporated | Method of purifying putrescine N-methyltransferase from tobacco plant extract with a polyamine |
| US5035252A (en) | 1990-12-14 | 1991-07-30 | Mondre Steven J | Nicotine-containing dental floss |
| US5459252A (en) | 1991-01-31 | 1995-10-17 | North Carolina State University | Root specific gene promoter |
| JPH04265569A (ja) * | 1991-02-19 | 1992-09-21 | Canon Inc | 音声信号記録装置及び再生装置 |
| US5683985A (en) | 1991-04-18 | 1997-11-04 | The Salk Institute For Biological Studies | Oligonucleotide decoys and methods relating thereto |
| GB9109063D0 (en) | 1991-04-26 | 1991-06-12 | Ici Plc | Modification of lignin synthesis in plants |
| JP3169610B2 (ja) | 1991-06-27 | 2001-05-28 | ジーンラブズ テクノロジーズ，インコーポレイテッド | Ｄｎａ結合分子の検出のためのスクリーニングアッセイ |
| US5994629A (en) | 1991-08-28 | 1999-11-30 | Novartis Ag | Positive selection |
| GB9304200D0 (en) | 1993-03-02 | 1993-04-21 | Sandoz Ltd | Improvements in or relating to organic compounds |
| WO1993005646A1 (en) * | 1991-09-13 | 1993-04-01 | Technology Management Services, S.A. | Reduction of nicotine levels in tobacco |
| ES2157217T3 (es) | 1992-02-26 | 2001-08-16 | Zeneca Mogen B V | Cepas de agrobacterium capaces de recombinacion especifica para el sitio. |
| UA41319C2 (uk) | 1992-04-02 | 2001-09-17 | Сембайозіс Дженетікс Інк. | Спосіб експресії послідовності днк,що представляє інтерес,у клітині насіння,химерний ген,експресуюча касета,ізольована регуляторна ділянка транскрипції,спосіб зміни специфічного для насіння метаболізму, спосіб одержання нових поліпептидів у насінні,ізольована днк, спосіб експресії послідовності днк,що представляє інтерес,у рослині-хазяїні,спосіб одержання очищеного поліпептиду,що представляє інтерес,спосіб одержання поліпептиду, що представляє інтерес, в олійному тілі |
| US5780051A (en) | 1992-04-02 | 1998-07-14 | Dynagen, Inc. | Methods and articles of manufacture for nicotine cessation and monitoring nicotine use |
| US5626152A (en) | 1992-08-26 | 1997-05-06 | Molins Plc | Cigarette making machine |
| US5469871A (en) | 1992-09-17 | 1995-11-28 | R. J. Reynolds Tobacco Company | Cigarette and method of making same |
| JPH08506909A (ja) | 1992-11-27 | 1996-07-23 | ボクセル | ホログラムを形成する方法および装置 |
| JPH08503853A (ja) | 1992-11-30 | 1996-04-30 | チューア，ナム−ハイ | 植物における組織−及び発生−特異的な発現を付与する発現モチーフ |
| IL108367A0 (en) | 1993-01-27 | 1994-04-12 | Hektoen Inst For Medical Resea | Antisense polynzcleotide inhibition of human growth factor-sensitive cancer cells |
| AU684785B2 (en) | 1993-05-13 | 1998-01-08 | Plant Genetic Systems N.V. | Marker gene |
| WO1994028142A1 (en) * | 1993-06-01 | 1994-12-08 | Philip Morris Products Inc. | Putrescine n-methyltransferase, recombinant dna molecules encoding putrescine n-methyltransferase, and transgenic tobacco plants with decreased alkaloid content |
| US5540242A (en) | 1993-07-07 | 1996-07-30 | Brown & Williamson Tobacco Corporation | Cigarette paper having reduced sidestream properties |
| US5377697A (en) | 1993-08-27 | 1995-01-03 | Hoechst Celanese Corporation | Cigarette filter test apparatus and associated method for measuring filter hot collapse and tobacco consumption |
| US5810020A (en) | 1993-09-07 | 1998-09-22 | Osmotek, Inc. | Process for removing nitrogen-containing anions and tobacco-specific nitrosamines from tobacco products |
| CA2155570C (en) | 1993-12-08 | 2007-06-26 | Toshihiko Komari | Method for transforming plant and vector therefor |
| US5394894A (en) | 1994-02-22 | 1995-03-07 | Zade; Ismail Y. | Method and apparatus for elimination of smoking |
| US5858774A (en) | 1994-05-12 | 1999-01-12 | The Research Foundation Of State University Of New York | Antisense DNA constructs for expression of hybrid MRNAs driven by inducible, tissue-specific promoters |
| ES2081257B1 (es) | 1994-05-12 | 1996-07-16 | Sagrera Jorge Martinez | Instalacion y procedimiento para el curado de tabaco. |
| JP3235934B2 (ja) | 1994-08-04 | 2001-12-04 | 三菱レイヨン株式会社 | ロドコッカス属細菌由来カナマイシン耐性遺伝子 |
| IT1275697B1 (it) * | 1994-12-20 | 1997-10-17 | Olmo Giancarlo Dell | Metodo per stampare direttamente su carta microincisioni di ologrammi,chinogrammi,reticoli di diffrazione o microincisioni |
| EP0817856A1 (en) | 1995-03-22 | 1998-01-14 | Novo Nordisk A/S | Introduction of dna into bacillus strains by conjugation |
| KR100424844B1 (ko) | 1995-03-30 | 2004-07-05 | 다카라 홀딩즈 가부시키가이샤 | 식물프로모터 및 이 프로모터를사용한 유전자 발현방법 |
| DE69636997T2 (de) | 1995-05-12 | 2007-07-12 | Anges MG Inc., Ibaraki | HEILUNG UND VORBEUGUNG VON DURCH NF-kappaB VERURSACHTEN ERKRANKUNGEN |
| US5837876A (en) | 1995-07-28 | 1998-11-17 | North Carolina State University | Root cortex specific gene promoter |
| GB9517263D0 (en) | 1995-08-23 | 1995-10-25 | Cancer Res Campaign Tech | Expression systems |
| US6051409A (en) | 1995-09-25 | 2000-04-18 | Novartis Finance Corporation | Method for achieving integration of exogenous DNA delivered by non-biological means to plant cells |
| US6198827B1 (en) * | 1995-12-26 | 2001-03-06 | Rocktron Corporation | 5-2-5 Matrix system |
| US5693512A (en) | 1996-03-01 | 1997-12-02 | The Ohio State Research Foundation | Method for transforming plant tissue by sonication |
| US5851804A (en) | 1996-05-06 | 1998-12-22 | Apollon, Inc. | Chimeric kanamycin resistance gene |
| US5713376A (en) | 1996-05-13 | 1998-02-03 | Berger; Carl | Non-addictive tobacco products |
| US6022863A (en) | 1996-05-21 | 2000-02-08 | Yale University | Regulation of gene expression |
| US5834236A (en) | 1996-06-27 | 1998-11-10 | The Salk Institute For Biological Studies | AATT repeat transcription enhancer element |
| US6135121A (en) * | 1996-06-28 | 2000-10-24 | Regent Court Technologies | Tobacco products having reduced nitrosamine content |
| US5803081A (en) | 1996-06-28 | 1998-09-08 | Regent Court Technologies | Tobacco and related products |
| US5845647A (en) * | 1996-06-28 | 1998-12-08 | Regent Court Technologies | Tobacco and related products |
| USRE38123E1 (en) * | 1996-06-28 | 2003-05-27 | Regent Court Technologies, Llc. | Tobacco products having reduced nitrosamine content |
| US5830318A (en) | 1996-10-25 | 1998-11-03 | Schweitzer-Mauduit International, Inc. | High opacity tipping paper |
| US5929306A (en) | 1996-11-15 | 1999-07-27 | University Of Kentucky Research Foundation | KYRT1, a disarmed version of a highly tumorigenic Agrobacterium tumefaciens strain identified as Chry5 |
| US6202649B1 (en) * | 1996-12-02 | 2001-03-20 | Regent Court Technologies | Method of treating tobacco to reduce nitrosamine content, and products produced thereby |
| US6166032A (en) * | 1997-02-07 | 2000-12-26 | Synapse Pharmaceuticals International, Inc. | Method for controlling tobacco use and alleviating withdrawal symptoms due to cessation of tobacco use |
| ES1036967Y (es) * | 1997-04-15 | 1998-05-01 | Techpack Espana S L | Cazoleta perfeccionada para estuche de lapiz de labios. |
| US6163521A (en) * | 1997-04-16 | 2000-12-19 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Disk having read-only and read-write areas |
| US6020989A (en) * | 1997-05-14 | 2000-02-01 | Affinity Co., Ltd. | Laminated bodies and windows using them |
| US6586661B1 (en) * | 1997-06-12 | 2003-07-01 | North Carolina State University | Regulation of quinolate phosphoribosyl transferase expression by transformation with a tobacco quinolate phosphoribosyl transferase nucleic acid |
| US6020969A (en) * | 1997-07-11 | 2000-02-01 | Philip Morris Incorporated | Cigarette making machine including band inspection |
| CA2248622A1 (en) | 1997-09-23 | 1999-03-23 | Joe Celeste | Biolistic apparatus for delivering substances into cells and tissues |
| ATE232384T1 (de) * | 1997-10-03 | 2003-02-15 | Cary Medical Corp | Zusammensetzungen zur behandlung von nikotinabhängigkeit, enthaltend mecamylamin und bupropion |
| US6077992A (en) * | 1997-10-24 | 2000-06-20 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Binary viral expression system in plants |
| US6060310A (en) * | 1997-11-24 | 2000-05-09 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Transcription factor decoy and tumor growth inhibitor |
| US6153811A (en) | 1997-12-22 | 2000-11-28 | Dekalb Genetics Corporation | Method for reduction of transgene copy number |
| US6265538B1 (en) * | 1998-02-27 | 2001-07-24 | The Regents Of The University Of California | Inhibitor of the inflammatory response induced by the TNFA and IL-1 |
| JP3444191B2 (ja) * | 1998-03-31 | 2003-09-08 | 日本製紙株式会社 | フェニルプロパノイド生合成経路を制御する転写因子 |
| US6136799A (en) | 1998-04-08 | 2000-10-24 | Abbott Laboratories | Cosolvent formulations |
| SI1068311T1 (sl) | 1998-04-08 | 2011-07-29 | Commw Scient Ind Res Org | Postopki in sredstva za pridobivanje modificiranih fenotipov |
| US5938017A (en) * | 1998-05-04 | 1999-08-17 | Wik; Dennis O. | Article for assisting persons to quit smoking and method for same |
| CA2334186A1 (en) * | 1998-06-05 | 1999-12-09 | Regent Court Technologies | Monoamine oxidase (mao) inhibitors and uses thereof |
| US6271031B1 (en) | 1998-08-12 | 2001-08-07 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Quinolinate metabolism enzymes |
| EP1117816B1 (en) * | 1998-10-01 | 2005-12-21 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Method of plant transformation |
| DE19847767A1 (de) * | 1998-10-16 | 2000-04-20 | Decoufle Sarl | Anordnung zum Zuführen von fließfähiger Druckfarbe zu einem Druckwerk für einen Zigarettenpapierstreifen |
| AU4991500A (en) | 1999-05-06 | 2000-11-21 | Michael Timko | Regulation of gene expression in tobacco for manipulation of plant growth and secondary metabolism |
| US6314964B1 (en) * | 1999-09-15 | 2001-11-13 | Schweitzer-Mauduit International, Inc. | Cigarette paper containing carbon fibers for improved ash characteristics |
| ATE538205T1 (de) | 1999-11-29 | 2012-01-15 | Midwest Oilseeds Inc | Verfahren, medien und vorrichtung zur einführung von molekülen in pflanzenzellen und bakterien mittels aerosolstrahlen |
| AU2778801A (en) | 2000-01-07 | 2001-07-24 | Baylor University | Antisense compositions and methods |
| IL151781A0 (en) | 2000-03-16 | 2003-04-10 | Genetica Inc | Methods and compositions for rna interference |
| WO2001077350A2 (en) | 2000-04-07 | 2001-10-18 | Large Scale Biology Corporation | Compositions and methods for inhibiting gene expression |
| US6911541B2 (en) | 2000-08-30 | 2005-06-28 | North Carolina State University | Promoter fragment that is recognized by the product of the tobacco Nic gene |
| DE60128149D1 (en) * | 2000-11-07 | 2007-06-06 | Univ North Carolina State | Putrescin-n-methyltransferasepromotor |
| EA200400005A1 (ru) | 2001-06-06 | 2004-08-26 | 22 Сенчури Лимитед, Ллс | Утилизация табачной биомассы |
| JP2004530430A (ja) * | 2001-06-08 | 2004-10-07 | ベクター、タバコ、リミテッド | タバコに含まれるニコチンおよびニトロソアミンの濃度の変更 |
| US20060157072A1 (en) * | 2001-06-08 | 2006-07-20 | Anthony Albino | Method of reducing the harmful effects of orally or transdermally delivered nicotine |
| US6557560B2 (en) * | 2001-06-18 | 2003-05-06 | Ctc Canada Inc. | Cigarette making machine |
| WO2006109197A2 (en) | 2005-02-28 | 2006-10-19 | Nara Institute Of Science And Technology | Reducing levels of nicotinic alkaloids in plants |
| CA2656430C (en) | 2006-06-19 | 2014-08-05 | Jonathan E. Page | Nucleic acid encoding n-methylputrescine oxidase and uses thereof |
| WO2008070274A2 (en) | 2006-10-13 | 2008-06-12 | North Carolina State University | Alteration of tobacco alkaloid content through modification of specific cytochrome p450 genes |
-
1998
- 1998-02-10 US US09/021,286 patent/US6586661B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-10 AT AT98926456T patent/ATE262039T1/de active
- 1998-06-10 WO PCT/US1998/011893 patent/WO1998056923A1/en active IP Right Grant
- 1998-06-10 DE DE0991766T patent/DE991766T1/de active Pending
- 1998-06-10 CA CA2287776A patent/CA2287776C/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-10 DK DK98926456T patent/DK0991766T3/da active
- 1998-06-10 SK SK1618-99A patent/SK161899A3/sk unknown
- 1998-06-10 EP EP98926456A patent/EP0991766B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-10 PL PL337442A patent/PL201266B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1998-06-10 KR KR1019997011675A patent/KR100365969B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-06-10 BR BRPI9810870-0A patent/BRPI9810870B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-06-10 PT PT98926456T patent/PT991766E/pt unknown
- 1998-06-10 CN CNB2004100641115A patent/CN1304576C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-10 GE GEAP19985122A patent/GEP20032871B/en unknown
- 1998-06-10 CZ CZ0367799A patent/CZ297379B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-06-10 HU HU0003767A patent/HU225888B1/hu unknown
- 1998-06-10 CA CA002484366A patent/CA2484366A1/en not_active Abandoned
- 1998-06-10 SI SI9820033A patent/SI20215B/sl not_active IP Right Cessation
- 1998-06-10 ID IDW991260A patent/ID29311A/id unknown
- 1998-06-10 ES ES98926456T patent/ES2154624T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-10 JP JP50307599A patent/JP4095678B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-10 EA EA200400186A patent/EA009898B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-06-10 RS YUP-648/99A patent/RS49677B/sr unknown
- 1998-06-10 TR TR1999/02728T patent/TR199902728T2/xx unknown
- 1998-06-10 CN CNB988053705A patent/CN100482799C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-10 AU AU78291/98A patent/AU748514B2/en not_active Expired
- 1998-06-10 DE DE69822463T patent/DE69822463T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-10 EE EEP199900575A patent/EE04595B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-06-10 EP EP04004192A patent/EP1457563B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-10 RO RO99-01306A patent/RO121968B1/ro unknown
- 1998-06-10 AP APAP/P/1999/001680A patent/AP1169A/en active
- 1998-06-10 IL IL13218498A patent/IL132184A0/xx unknown
- 1998-06-10 EP EP04004191A patent/EP1457562B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-10 NZ NZ500963A patent/NZ500963A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-06-10 EA EA200000007A patent/EA004652B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-10-06 UA UA99126735A patent/UA72187C2/uk unknown
-
1999
- 1999-10-03 IL IL132184A patent/IL132184A/en not_active IP Right Cessation
- 1999-10-29 US US09/431,976 patent/US6423520B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-16 BG BG103886A patent/BG64319B1/bg unknown
- 1999-11-24 OA OA9900257A patent/OA11219A/en unknown
- 1999-11-26 CU CU1999206A patent/CU23174A3/es unknown
- 1999-12-10 LT LT99-142A patent/LT4706B/lt not_active IP Right Cessation
- 1999-12-13 LV LVP-99-174A patent/LV12507B/en unknown
- 1999-12-13 NO NO19996169A patent/NO324872B1/no not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-10-12 HK HK00106489A patent/HK1027379A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-06-29 GR GR20010300003T patent/GR20010300003T1/el unknown
- 2001-09-24 US US09/963,340 patent/US7605308B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2003
- 2003-01-31 US US10/356,076 patent/US7304220B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-30 US US10/748,789 patent/US7408098B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2004
- 2004-05-25 JP JP2004155034A patent/JP4288206B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2004-10-07 HK HK04107697.7A patent/HK1065066A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-03-14 HK HK05102204.3A patent/HK1069411A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-05-03 US US11/416,568 patent/US7425670B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-05-03 US US11/416,574 patent/US7645925B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-05-03 US US11/416,887 patent/US7795509B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-05-04 US US11/417,682 patent/US20070011774A1/en not_active Abandoned
-
2008
- 2008-01-08 JP JP2008001397A patent/JP4459271B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2008-06-16 IL IL192232A patent/IL192232A0/en unknown
-
2009
- 2009-02-27 JP JP2009046336A patent/JP2009112316A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA72187C2 (uk) | Регуляція експресії хінолатфосфорибозилтрансферази | |
| AU2004203879B2 (en) | Regulation of quinolate phosphoribosyl transferase expression | |
| AU2002300895B2 (en) | Regulation of quinolate phosphoribosyl transferase expression | |
| MXPA99011625A (en) | Regulation of quinolate phosphoribosyl transferase expression |