UA126229C2 - Застосування анти-pcsk9 антитіла у виробництві лікарського засобу для зниження рівня холестерину - Google Patents

Застосування анти-pcsk9 антитіла у виробництві лікарського засобу для зниження рівня холестерину Download PDF

Info

Publication number
UA126229C2
UA126229C2 UAA201703902A UAA201703902A UA126229C2 UA 126229 C2 UA126229 C2 UA 126229C2 UA A201703902 A UAA201703902 A UA A201703902A UA A201703902 A UAA201703902 A UA A201703902A UA 126229 C2 UA126229 C2 UA 126229C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
сас
sequence
послідовність
варіабельної
amino acid
Prior art date
Application number
UAA201703902A
Other languages
English (en)
Inventor
Джойс Чі Йі Чан
Джойс Чи Йи Чан
Джон Пі. Гіббс
Джон Пи. Гиббс
Клептон Ес. Діас
Клептон Эс. Диас
Скотт Вассерман
Роберт Ендрю Доналд Скотт
Роберт Эндрю Доналд Скотт
Крісті Ел. Клогстон
Кристи Эл. Колгстон
Тімоті Девід Осслунд
Тимоти Дэвид Осслунд
Еван Ей. Стейн
Эван Эй. Стэйн
Original Assignee
Амджен Інк.
Амджен Инк
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=46124771&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=UA126229(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Амджен Інк., Амджен Инк filed Critical Амджен Інк.
Publication of UA126229C2 publication Critical patent/UA126229C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)

Abstract

Винахід стосується застосування моноклонального анти-PCSK9 антитіла у виробництві лікарського засобу для зниження рівня холестерину ЛПНЩ в сироватці хворого, причому моноклональне анти-PCSK9 антитіло вводять в дозі від приблизно 70 мг до приблизно 420 мг.

Description

Дана заявка заявляє пріоритет Тимчасової Заявки США Мо 61/642,363, поданої З травня 2012 р., Тимчасової Заявки США Мо 61/614,417, поданої 22 березня 2012 р., Тимчасової Заявки
США Мо 61/595,526, поданої 6 лютого 2012 р., Тимчасової Заявки США Мо 61/562,303, поданої 21 листопаду 2011 р., Тимчасової Заявки США Мо 61/484,610, поданої 10 травня 2011 р., всі з яких включено до даного опису шляхом посилання.
Дана заявка подана разом із Переліком послідовностей в електронному форматі. Перелік послідовностей наданий у вигляді файлу під назвою А-1635-МУО-РСТ бедиепсе І івііпд. хі, створеного 10 травня 2012 р., розмір якого становить 315 Кбайт. Інформація з Переліку послідовностей в електронному форматі включена до даного опису шляхом посилання в повному обсязі.
Даний винахід пов'язаний із способами лікування або попередження пов'язаних з холестерином розладів, таких як гіперхолестеринемія, гіперліпідемія або дисліпідемія, із застосуванням антигензв'язувальних білків, зокрема, антитіл, проти пропротеїн конвертази субтилізин/кексин типу 9 (РСЗКУ). Додатково описані фармацевтичні композиції і способи одержання вказаних композицій. "Пов'язані з холестерином розлади" (які включають "пов'язані з холестерином сироватки розлади") включають будь-яке одне або більше з наступного: гіперхолестеринемія, гіперліпідемія, захворювання серця, метаболічний синдром, діабет, захворювання коронарних судин серця, інсульт, серцево-судинні захворювання, хвороба Альцгеймера і дисліпідемії в цілому, які можуть виявлятися, наприклад, підвищеним рівнем загального холестерину в сироватці, підвищеним рівнем ЛІНЩ, підвищеним рівнем тригліцеридів, підвищеним рівнем
ЛИДНЩ та/або низьким рівнем ЛПВЩ. Гіперхолестеринемія, фактично, є визнаним фактором ризику захворювання коронарних судин серця у людини (ЗКС). Зниження холестерину ліпопротеїнів низької щільності (ЛЛНЩ-Х) приводить до зниження ризику серцево-судинних захворювань і є основною метою фармакотерапії при ЗКС. Статини (інгібітори гідроксиметилглутарил коензим А редуктази |ГМГ КоАЇ) на сьогоднішній день є терапією вибору при гіперхолестеринемії. Однак, дані, що з'являються, вказують на те, що більш агресивне лікування гіперхолестеринемії пов'язане з нижчим ризиком катастроф при ЗКС. Крім того, підмножина хворих не переносять або не відповідають належним чином на лікування
Зо статинами. Таким чином, можуть бути корисними нові терапевтичні засоби, які можуть застосовуватися окремо або в комбінації з існуючими засобами, і ефективніше знижують ЛЛНЩ-
Х.
Добре встановлено, що рециклізація рецептора ліпопротеїнів низької щільності на поверхні клітин печінки (ЛЛНЩР) відіграє критичну роль в підтримці клітинного та організмового балансу холестерину, регулюючи рівні ЛОІНІЩ-Х в плазмі. Пізніше було показано, що пропротеїн конвертаза субтилізин/кексин типу 9 (РОБЗКО) відіграє важливу роль в рециклізації та регуляції
ЛІИННЩР. РОБЗКОУО є членом субтилізинової родини серинпротеаз та експресується, в основному, в печінці. Після секреції, вона індукує посттрансляційну регуляцію вниз ЛІОНЩР на поверхні клітин печінки за механізмом, який включає пряме зв'язування з ЛІНІЩР. Регуляція вниз печінкового ЛПНЩР, у свою чергу, призводить до підвищення рівнів циркулюючого ЛІЛНЩ-Х.
Таким чином, РОСБ5КО може представляти мішень для інгібування новими терапевтичними засобами в умовах гіперхолестеринемії. Серйозне обгрунтування такого підходу одержане в результаті досліджень на доклінічних моделях і на базі даних щодо того, що у людей з мутаціями РОБКУ з втратою функції рівні холестерину нижчі за норму, і частота ЗКС знижена.
У деяких аспектах винаходу запропонована стабільна композиція, що містить, щонайменше одне моноклональне антитіло, яке специфічно зв'язується з РОСБКОУ, причому РОКУ містить амінокислоти ЗЕО І МО 1, при цьому моноклональне антитіло присутнє в кількості від приблизно 40 мг/мл до приблизно 300 мг/мл, і фармацевтично прийнятний буфер присутній в кількості від приблизно 0,05 мМ до приблизно 40 мМ, і фармацевтично прийнятна поверхнево- активна речовина присутня в кількості, яка становить від 0,01 95, мас/об до приблизно 20 95, мас/об, і, щонайменше один фармацевтично прийнятний стабілізатор присутній в кількості від приблизно 0,5 95, мас/об до приблизно 10 95, мас/об, при тому, що рН стабільної композиції знаходиться в інтервалі від приблизно 4,0 до приблизно 6,0. У деяких варіантах згадана вище стабільна композиція містить фармацевтично прийнятний буфер, вибраний із групи, що складається із глутамату, фосфату, буферизованого фосфатом розчину солі, натрію ацетату, натрію цитрату і буфера Трис. У конкретних варіантах фармацевтично прийнятний буфер присутній у згаданій вище стабільній композиції в кількості 10-20 мМ. У конкретному варіанті фармацевтично прийнятний буфер являє собою натрію ацетат в кількості 10-20 мМ. У деяких варіантах фармацевтично прийнятна поверхнево-активна речовина присутня в кількості від 60 приблизно 0,004 95, мас/об до приблизно 0,0195, омас/о0б. У конкретних варіантах фармацевтично прийнятна поверхнево-активна речовина у згаданій вище стабільній композиції являє собою полісорбат 80 або полісорбат 20. У додаткових варіантах фармацевтично прийнятна поверхнево-активна речовина являє собою полісорбат 80 або полісорбат 20, присутній в кількості від приблизно 0,004 95, мас/об до приблизно 0,01 95, мас/об.
У деяких варіантах фармацевтично прийнятний стабілізатор у згаданій вище стабільній композиції вибраний з групи, що складається із полігідроксивуглеводню, дисахариду, поліолу, проліну, аргініну, лізину, метіоніну, таурину і бензилового спирту. У деяких варіантах фармацевтично прийнятний стабілізатор являє собою полігідроксивуглеводень, вибраний з групи, що складається із сорбіту, маніту і гліцерину. У конкретному варіанті полігідроксивуглеводень у згаданій вище стабільній композиції являє собою сорбіталь. У деяких варіантах фармацевтично прийнятний стабілізатор являє собою дисахарид, вибраний із групи, що складається із сахарози, мальтози, лактози, фруктози і трегалози. У деяких варіантах дисахаридний стабілізатор присутній в кількості приблизно 9 95, мас/об. У деяких варіантах вказаний дисахарид є сахарозою. У конкретних варіантах сахароза присутня в згаданій вище стабільній композиції в кількості приблизно 9 95, мас/об. У деяких варіантах стабілізатор є амінокислотою, вибраною з групи, що складається із проліну, аргініну, лізину, метіоніну і таурину. У конкретному варіанті стабілізатор є проліном. У додатковому варіанті пролін присутній в згаданій вище стабільній композиції в кількості від приблизно 2 95 до З 95, мас/об. У деяких варіантах рН згаданої вище стабільної композиції знаходиться в інтервалі від приблизно 5,0 до приблизно 5,5.
У деяких варіантах згадана вище стабільна композиція містить моноклональне антитіло, що містить: варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності зХЕО ІЮ МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 9095 ідентичною послідовності ЗЕО ІЮ МО: 49; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності ЗЕО ІЮ МО: 12, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності 5ЕО ІЮО МО: 67; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності БЕО ІЮ МО: 461, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності ЗЕО ІЮ МО: 459; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 9095 ідентичною послідовності ФЕО ІЮ МО: 465, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності 5ЕО ІЮ МО: 463, або варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності ЗЕО ІЮ МО: 485, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності ЗЕО ІЮ
МО: 483.
У деяких варіантах згадана вище стабільна композиція містить моноклональне антитіло, що містить: варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО: 49; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО: 12, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮО МО: 67; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮО МО: 461, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮО МО: 459; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮО МО: 465, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислоту 5ЕО ІЮ МО: 463, або варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮО МО: 485, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО: 483.
У деяких варіантах згадана вище стабільна композиція містить моноклональне антитіло 21812, ЗНА, 8АЗ, 11Е1 або 8А1.
У деяких варіантах в'язкість згаданої вище стабільної композиції становить 30 сПа або менше при 25" С. У конкретних варіантах згаданої вище стабільної композиції моноклональне антитіло присутнє в кількості від приблизно 70 мг/мл до приблизно 150 мг/мл, і в'язкість стабільної композиції становить 12 сПа або менше при 25" С. У деяких варіантах осмоляльність згаданої вище стабільної композиції становить від приблизно 250 мОсм/кг до приблизно 350 мОсм/кг. У деяких варіантах згадана вище стабільна композиція залишається стабільною щонайменше, 3, 6, 12 або 24 місяці.
У конкретних варіантах згадана вище стабільна композиція містить моноклональне антитіло, 60 що містить варіабельну ділянку, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною відповідній ділянці 5ХЕС
ІО МО: 465, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною відповідній ділянці ЗЕО ІЮ МО: 463. У деяких варіантах згадана вище стабільна композиція містить моноклональне антитіло, що містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮО МО: 465, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІО МО: 463, і, при цьому, кількість моноклонального антитіла становить приблизно 150.
У деяких варіантах згадана вище стабільна композиція містить антитіло, що містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною відповідній ділянці
ЗЕО ІЮ МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною відповідній ділянці ЗЕСО ІЮ МО: 49. У деяких варіантах згадана вище стабільна композиція містить моноклональне антитіло, що містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮО МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕ ІЮО МО: 49, їі, при цьому, кількість моноклонального антитіла становить 120 мг/мл або 140 мг/мл.
У деяких варіантах згадана вище стабільна композиція містить (а) моноклональне антитіло в кількості від приблизно 70 мг/мл до приблизно 200 мг/мл, причому вказане моноклональне антитіло містить: варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО ІЮ МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО ІЮ МО: 49; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО ІЮ МО: 12, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО ІЮ МО: 67; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО І МО: 461, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО ІЮ МО: 459; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО ІО МО: 465, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот
ЗБО ІО МО: 463; або варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 485, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО: 483, і приблизно 10 мМ натрію ацетату; приблизно 9,0 95, мас/об сахарози; від приблизно 0,004 95 до приблизно 0,01 95, мас/об полісорбату 20 або полісорбату 80, з рН приблизно 5,2.
У даному аспекті моноклональне антитіло може являти собою 21812, 8АЗ, 111. У конкретних варіантах даного аспекту моноклональне антитіло являє собою 21812 і присутнє в згаданій вище стабільній композиції в кількості приблизно 140 мг/мл. У додаткових варіантах даного аспекту стабільна композиція за пунктами формули містить приблизно 0,004 95 полісорбату 20. У додаткових конкретних варіантах даного аспекту згадана вище стабільна композиція містить моноклональне антитіло, що являє собою 8АЗ і присутнє в кількості приблизно 150 мг/мл.
У додаткових варіантах даного аспекту, згадана вище стабільна композиція містить моноклональне антитіло, що являє собою 1111 і присутнє в кількості приблизно 140, 150, 160. 170, 180, 190 або 200 мг/мл. У конкретних варіантах стабільна композиція, що містить 1121, також містить приблизно 0,01 95 полісорбату 80.
У додатковому варіанті стабільна композиція містить: (а) моноклональне антитіло в кількості від приблизно 70 мг/мл до приблизно 200 мг/мл, причому вказане моноклональне антитіло містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 49; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО: 12, варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮО МО: 67; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО: 461, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 459; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮО МО: 465, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО: 463, або варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО: 485, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 483, і приблизно 10 мМ натрію ацетату; від приблизно 2,095 до 3,095, мас/об проліну; приблизно 0,01 95, мас/об полісорбату 20 або полісорбату 80, з рН приблизно 5,0. У деяких варіантах даного аспекту стабільна композиція містить моноклональне антитіло, що являє собою 21812, 8АЗ або 1111.
В іншому аспекті винаходу стабільна композиція містить моноклональне анти-?РС5КУ антитіло в кількості від приблизно 70 мг/мл до приблизно 200 мг/мл, причому вказане моноклональне антитіло містить: варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить 60 послідовність амінокислот щонайменше на 90 95 ідентичну послідовності ЗЕО ІЮ МО: 577, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, щонайменше на 90 95 ідентичну послідовності ФЕО ІЮ МО: 576; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮО МО: 577, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО: 576; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, щонайменше на 90 95 ідентичну послідовності 5Е0О ІЮ МО: 588, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, щонайменше на 90 95 ідентичну послідовності «ЕО ІЮ МО: 589, або варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 588, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮО МО: 589; і (б) приблизно 10 мМ натрію ацетату; (в) приблизно 9,0 95, мас/об сахарози; (г) від приблизно 0,004 95 до приблизно 0,01 95, мас/об полісорбату 20 або полісорбату 80, і (д) з рН приблизно 5,2.
В іншому аспекті винаходу стабільна композиція містить моноклональне анти-?РС5КУ антитіло в кількості від приблизно 70 мг/мл до приблизно 200 мг/мл, причому вказане моноклональне антитіло містить: варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, щонайменше на 90 95 ідентичну послідовності 5Е0О ІЮ МО: 577, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, щонайменше на 90 95 ідентичну послідовності ФЕО ІЮ МО: 576; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮО МО: 577, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО: 576; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, щонайменше на 90 95 ідентичну послідовності 5600 ІЮ МО: 588, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, щонайменше на 90 95 ідентичну послідовності «ЕО ІЮ МО: 589, або варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 588, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 589; і (б) приблизно 10 мМ натрію ацетату; (в) від приблизно 2,0 95 до 3,0 95, мас/об проліну; (г) приблизно 0,01 95, мас/об полісорбату 20 або полісорбату 80, і (д) з рН приблизно 5,0.
У деяких аспектах запропонований винахід включає спосіб зниження холестерину ЛЛНЩ сироватки у пацієнта, який включає введення, щонайменше одного анти-РС5КОУ антитіла хворому, потребуючому цього, в дозі від приблизно 10 мг до приблизно 3000 мг, таким чином,
Зо знижуючи рівень холестерину ЛЛНЩ сироватки, щонайменше приблизно на 15 95, в порівнянні з рівнем холестерину ЛІИНЩ в сироватці вказаного хворого до введення дози. У деяких варіантах даного аспекту винаходу рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці вказаного хворого знижується щонайменше приблизно на 20 95, щонайменше приблизно на 25 9565, щонайменше приблизно на 3095, щонайменше приблизно на 3595, щонайменше приблизно на 4095, щонайменше приблизно на 4595, щонайменше приблизно на 5095, щонайменше приблизно на 55 965, щонайменше приблизно на 60 95, щонайменше приблизно на 65 9565, щонайменше приблизно на 7095, щонайменше приблизно на 7595, щонайменше приблизно на 8095, щонайменше приблизно на 85 95, або щонайменше приблизно на 90 95, в порівнянні з рівнем холестерину
ЛИН в сироватці хворого до введення дози.
У деяких варіантах даного аспекту винаходу анти-РС5КОУ антитіло вводять хворому в дозі від приблизно 35 мг до приблизно 3000 мг, від приблизно 35 мг до приблизно 2800 мг, від приблизно 35 мг до приблизно 2500 мг, від приблизно 35 мг до приблизно 2000 мг, від приблизно 35 мг до приблизно 1800 мг, від приблизно 35 мг до приблизно 1400 мг, від приблизно 25 мг до приблизно 1200 мг, від приблизно 35 мг до приблизно 1000 мг, від приблизно 35 мг до приблизно 700 мг, від приблизно 45 мг до приблизно 700 мг, від приблизно 45 мг до приблизно 600 мг, від приблизно 45 мг до приблизно 450 мг, від приблизно 70 мг до приблизно 450 мг, від приблизно 105 мг до приблизно 420 мг, від приблизно 120 мг до приблизно 200 мг, від приблизно 140 мг до приблизно 200 мг, від приблизно 140 мг до приблизно 180 мг, або від приблизно 140 мг до приблизно 170 мг, від приблизно 420 мг до
БО приблизно 3000 мг, від приблизно 700 мг до приблизно 3000 мг, від приблизно 1000 мг до приблизно 3000 мг, від приблизно 1200 до приблизно 3000 мг, від приблизно 1400 мг до приблизно 3000 мг, від приблизно 1800 мг до приблизно 3000 мг, від приблизно 2000 мг до приблизно 3000 мг, від приблизно 2400 мг до приблизно 3000 мг або від приблизно 2800 мг до приблизно 3000 мг. У деяких варіантах даного аспекту анти-РО5КОУ антитіло вводять хворому в дозі приблизно 35 мг, приблизно 45 мг, приблизно 70 мг, приблизно 105 мг, приблизно 120 мг приблизно 140 мг, приблизно 150 мг, приблизно 160 мг, приблизно 170 мг, приблизно 180 мг, приблизно 190 мг, приблизно 200 мг, приблизно 210 мг, приблизно 280 мг, приблизно 360 мг, приблизно 420 мг, приблизно 450 мг, приблизно 600 мг, приблизно 700 мг, приблизно 1200 мг, приблизно 1400 мг, приблизно 1800 мг, приблизно 2000 мг, приблизно 2500 мг, приблизно 2800 60 мг або приблизно 3000 мг.
У деяких варіантах даного аспекту винаходу анти-РС5КУ антитіло вводять хворому за схемою, вибраною з групи, що складається із: (1) 1 раз на тиждень, (2) 1 раз на 2 тижні, (3) 1 раз на місяць, (4) 1 раз на 2 місяці, (5) 1 раз на З місяці (6) 1 раз на Є місяців і (7) 1 раз на 12 місяців.
У деяких варіантах даного аспекту винаходу анти-РС5КУ антитіло вводять парентерально. У деяких варіантах даного аспекту винаходу анти-РС5КУ антитіло вводять внутрішньовенно. У деяких варіантах даного аспекту винаходу анти-РО5КЗ антитіло вводять підшкірно.
У деяких варіантах даного аспекту винаходу анти-РС5КОУ антитіло містить: варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності ЗЕО ІЮ МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності БЕО ІЮО МО: 49; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності 5ЕО ІЮ МО: 12, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності ЗЕО ІЮ
МО: 67; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності зЕО ІЮ МО: 461, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 9095 ідентичною послідовності ФЕО ІЮ МО: 459; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 9095 ідентичною послідовності 5ЕБЕО ОО МО: 465, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності зЗЕО ІЮ МО: 463; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності ЗЕО ІЮ
МО: 485: і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності ЗЕО ІЮ МО: 483; або варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності ФЕО ІО МО: 582, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності з«ЕО ІЮ МО: 583. У деяких варіантах даного аспекту винаходу анти-РО5КОУ антитіло містить: варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 49; варіабельну ділянку легкого
Зо ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 12, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 67; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 461, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮО МО: 459; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 465, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮО МО: 463; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 485, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 483; або варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІО МО: 582, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮО МО: 583. У деяких варіантах даного аспекту винаходу анти-РС5КУ антитіло вибране з групи, що складається із 21812, ЗНА,
ВАЗ, 11Е1 і вА1.
У деяких аспектах винахід включає спосіб лікування або попередження пов'язаного з холестерином розладу у хворого з рівнем холестерину ЛІПНІЩ сироватки, який включає введення, щонайменше одного анти-РС5КО антитіла хворому, який потребує цього, в дозі від приблизно 10 мг до приблизно 3000 мг, таким чином, здійснюючи лікування або попередження пов'язаного з холестерином розладу у хворого. В аспекті даного варіанту пов'язаний з холестерином розлад, який підлягає лікуванню або попередженню, являє собою родинну гіперхолестеринемію, зокрема, гетерозиготну родинну гіперхолестеринемію і гомозиготну родинну гіперхолестеринемію, неродинну гіперхолестеринемію, підвищений рівень ліпопротеїну (а), захворювання серця, метаболічний синдром, діабет, захворювання коронарних судин серця, інсульт, серцево-судинне захворювання, хворобу Альцгеймера, захворювання периферичних артерій, гіперліпідемію або дисліпідемію. У деяких варіантах даного аспекту рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці вказаного хворого знижується, щонайменше приблизно на 1595, щонайменше приблизно на 20 95, щонайменше приблизно на 25 95, щонайменше приблизно на 3095, щонайменше приблизно на 3595, щонайменше приблизно на 40 965, щонайменше приблизно на 45 95, щонайменше приблизно на 50 9565, щонайменше приблизно на 5595, щонайменше приблизно на 6095, щонайменше приблизно на 6595, щонайменше приблизно на 7095, щонайменше приблизно на 7595, щонайменше приблизно на 80 965, щонайменше приблизно на 85 95, або щонайменше приблизно на 90 95, в порівнянні з рівнем бо холестерину ЛІИНЩ в сироватці вказаного хворого до введення дози.
У деяких варіантах даного аспекту винаходу анти-РС5КОУ антитіло вводять хворому в дозі від приблизно 35 мг до приблизно 3000 мг, від приблизно 35 мг до приблизно 2800 мг, від приблизно 35 мг до приблизно 2500 мг, від приблизно 35 мг до приблизно 2000 мг, від приблизно 35 мг до приблизно 1800 мг, від приблизно 35 мг до приблизно 1400 мг, від приблизно 25 мг до приблизно 1200 мг, від приблизно 35 мг до приблизно 1000 мг, від приблизно 35 мг до приблизно 700 мг, від приблизно 45 мг до приблизно 700 мг, від приблизно 45 мг до приблизно 600 мг, від приблизно 45 мг до приблизно 450 мг, від приблизно 70 мг до приблизно 450 мг, від приблизно 105 мг до приблизно 420 мг, від приблизно 120 мг до приблизно 200 мг, від приблизно 140 мг до приблизно 200 мг, від приблизно 140 мг до приблизно 180 мг, або від приблизно 140 мг до приблизно 170 мг, від приблизно 420 мг до приблизно 3000 мг, від приблизно 700 мг до приблизно 3000 мг, від приблизно 1000 мг до приблизно 3000 мг, від приблизно 1200 до приблизно 3000 мг, від приблизно 1400 мг до приблизно 3000 мг, від приблизно 1800 мг до приблизно 3000 мг, від приблизно 2000 мг до приблизно 3000 мг, від приблизно 2400 мг до приблизно 3000 мг або від приблизно 2800 мг до приблизно 3000 мг. У деяких варіантах даного аспекту, анти-РСЗКЗО антитіло вводять хворому в дозі приблизно 35 мг, приблизно 45 мг, приблизно 70 мг, приблизно 105 мг, приблизно 120 мг, приблизно 140 мг, приблизно 150 мг, приблизно 160 мг, приблизно 170 мг, приблизно 180 мг, приблизно 190 мг, приблизно 200 мг, приблизно 210 мг, приблизно 280 мг, приблизно 360 мг, приблизно 420 мг, приблизно 450 мг, приблизно 600 мг, приблизно 700 мг, приблизно 1200 мг, приблизно 1400 мг, приблизно 1800 мг, приблизно 2000 мг, приблизно 2500 мг, приблизно 2800 мг або приблизно 3000 мг.
У деяких варіантах даного аспекту винаходу анти-РС5КУ антитіло вводять хворому за схемою, вибраною з групи, що складається із: (1) 1 раз на тиждень, (2) 1 раз на 2 тижні, (3) 1 раз на місяць, (4) 1 раз на 2 місяці, (5) 1 раз на З місяці (6) 1 раз на 6 місяців і (7) 1 раз на 12 місяців.
У деяких варіантах даного аспекту винаходу анти-РС5КУ антитіло вводять парентерально. У деяких варіантах даного аспекту винаходу анти-РСО5КУ антитіло вводять внутрішньовенно. У деяких варіантах даного аспекту винаходу анти-РО5КЗ антитіло вводять підшкірно.
У деяких варіантах даного аспекту винаходу анти-РС5КОУ антитіло містить: варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності ЗЕО ІЮ МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності БЕО ІЮО МО: 49; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності 5ЕО ІЮ МО: 12, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності 5ЕО ІЮ
МО: 67; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності зЕО ІЮ МО: 461, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 9095 ідентичною послідовності ФЕО ІЮ МО: 459; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 9095 ідентичною послідовності 5ЕБЕО ОО МО: 465, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності ЗЕО ІЮ МО: 463; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності ЗЕО ІЮ
МО: 485, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності ЗЕО ІЮ МО: 483; або варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності ФЕО ІО МО: 582, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності з«ЕО ІЮ МО: 583. У деяких варіантах даного аспекту винаходу анти-РО5КОУ антитіло містить: варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 49; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 12, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 67; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 461, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮО МО: 459; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 465, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮО МО: 463; варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 485, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО: 483; або варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІО МО: 582, і варіабельну ділянку 60 важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 583. У деяких варіантах б даного аспекту винаходу анти-РС5КУ антитіло вибране з групи, що складається із 21812, ЗНА,
ВАЗ, 11Е1 і вА1.
У деяких варіантах даного аспекту винаходу анти-РС5КУ антитіло вводять хворому за схемою, вибраною з групи, що складається із: (1) 1 раз на тиждень, (2) 1 раз на 2 тижні, (3) 1 раз на місяць, (4) 1 раз на 2 місяці, (5) 1 раз на З місяці (6) 1 раз на 6 місяців і (7) 1 раз на 12 місяців.
У деяких варіантах даного аспекту винаходу анти-РС5КУ антитіло вводять парентерально. У деяких варіантах даного аспекту винаходу, анти-РС5КОУ антитіло вводять внутрішньовенно. У деяких варіантах даного аспекту винаходу, анти-РС5КЗУ антитіло вводять підшкірно.
У конкретних варіантах винаходу анти-РСО5КОУ антитіло являє собою 21812 і ЗНА. У деяких варіантах анти-РС5ЗКУ антитіло містить: варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності БЕО ІЮО МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності зБЕО ІЮ МО: 49. У деяких варіантах анти-РС5КО антитіло містить: варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО ІЮ МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО ІЮО МО: 49. У деяких варіантах анти-РС5КОУ антитіло являє собою 21812. У конкретному варіанті анти-РС5КОУ антитіло містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності ЗЕО ІЮ МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності БЕО ІЮО МО: 49, або містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ
МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ
МО: 49, або антитіло являє собою 21812, причому анти-РС5КОУ антитіло вводять хворому підшкірно в дозі від приблизно 21 мг до приблизно 70 мг 1 раз на тиждень, при тому, що рівень холестерину ЛІПНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 3-10 днів; вводять хворому підшкірно в дозі приблизно 21 мг 1 раз на тиждень, при тому, що рівень холестерину ЛІПНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 3-10 днів; вводять підшкірно хворому в дозі приблизно 35 мг 1 раз на тиждень, при тому, що рівень холестерину ЛІЛНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 3-10 днів; вводять хворому підшкірно в дозі
Зо приблизно 70 мг 1 раз на тиждень, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 3-10 днів; вводять хворому підшкірно в дозі від приблизно 70 мг до приблизно 280 мг 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 7-14 днів; вводять хворому підшкірно в дозі приблизно 70 мг 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 7-14 днів; вводять хворому в дозі приблизно 105 мг підшкірно 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 7-14 днів; вводять хворому підшкірно в дозі приблизно 120 мг 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛЛНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 7-14 днів; вводять хворому підшкірно в дозі приблизно 140 мг 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛИПНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 7-14 днів; вводять хворому підшкірно в дозі приблизно 210 мг 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛЛНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 7-14 днів; вводять хворому підшкірно в дозі приблизно 280 мг 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 7-14 днів; вводять хворому підшкірно в дозі від приблизно 280 мг до приблизно 420 мг 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІПНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 21-31 день; вводять хворому підшкірно в дозі приблизно 280 мг 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 21-31 день; вводять хворому підшкірно в дозі приблизно 350 мг 1 раз на 4 тижні при тому, що рівень холестерину ЛЛНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 21-31 день; вводять хворому підшкірно в дозі приблизно 420 мг 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІИНЩ в сироватці хворого знижується на 15-50 95 приблизно на 21-31 день.
В іншому конкретному варіанті в якому анти-РС5КУ антитіло містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності ЗЕО ІЮО МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності зХЕО ІЮ МО: 49, або містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що 60 містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮО МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮО МО: 49, або антитіло являє собою 21812, анти-РС5КО антитіло вводять хворому в дозі від приблизно 420 мг до приблизно 3000 мг внутрішньовенно 1 раз на тиждень, причому рівень холестерину ЛІИНЩ в сироватці хворого знижується на 15-50 Фо приблизно на 3-10 днів, вводять хворому в дозі приблизно 700 мг внутрішньовенно 1 раз на тиждень, при тому, що рівень холестерину ЛІПНЩ в сироватці хворого знижується на 15-50 Фо приблизно на 3-10 днів; вводять хворому в дозі приблизно 1200 мг внутрішньовенно 1 раз на тиждень, при тому, що рівень холестерину ЛЛНЩ в сироватці хворого знижується на 15-50 Фо приблизно на 3-10 днів; вводять хворому в дозі від більш ніж приблизно 1200 мг до приблизно 3000 мг внутрішньовенно 1 раз на тиждень, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується на 15-50 95 приблизно на 3-10 днів; вводять хворому в дозі від приблизно 420 мг до приблизно 3000 мг внутрішньовенно 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІИНЩ в сироватці хворого знижується на 15-50 95 приблизно на 7-14 днів; вводять хворому в дозі приблизно 700 мг внутрішньовенно 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІИНЩ в сироватці хворого знижується на 15-50 95 приблизно на 7-14 днів; вводять хворому в дозі приблизно 1200 мг внутрішньовенно 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІПНЩ в сироватці хворого знижується на 15-50 95 приблизно на 21-31 день; вводять хворому в дозі від більш ніж приблизно 1200 мг до приблизно 3000 мг внутрішньовенно 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується на 15- 50 95 приблизно на 7-14 днів; вводять хворому в дозі від приблизно 420 мг до приблизно 3000 мг внутрішньовенно 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛИПНЩ в сироватці хворого знижується на 15-50 95 приблизно на 21-31 день, вводять хворому в дозі приблизно 700 мг внутрішньовенно 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується на 15-50 95 приблизно на 21-31 день; вводять хворому в дозі приблизно 1200 мг внутрішньовенно 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛИЛНЩ в сироватці хворого знижується на 15-50 95 приблизно на 21-31 день; вводять хворому в дозі від більш ніж приблизно 1200 мг до приблизно 3000 мг внутрішньовенно 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІИНЩ в сироватці хворого знижується на 15-50 95 приблизно на 21-31 день.
В іншому конкретному варіанті в якому анти-РС5КУ антитіло містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності ЗЕО ІЮО МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності зХЕО ІЮ МО: 49, або містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮО МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО: 49, або антитіло являє собою 21812, анти-РС5КО антитіло вводять хворому в дозі приблизно 21 мг підшкірно 1 раз на тиждень, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 7-10 днів; вводять хворому в дозі приблизно 35 мг підшкірно 1 раз на тиждень, при тому, що рівень холестерину ЛІПНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 7-10 днів; вводять хворому в дозі приблизно 70 мг підшкірно 1 раз на тиждень, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 7-10 днів; вводять хворому в дозі приблизно 70 мг підшкірно 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 10-14 днів; вводять хворому в дозі приблизно 105 мг підшкірно 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину
ЛИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 10-14 днів; вводять хворому в дозі приблизно 120 мг підшкірно 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 10-14 днів; вводять хворому в дозі приблизно 140 мг підшкірно 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІПНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 10-14 днів; вводять хворому в дозі приблизно 210 мг підшкірно 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 10-14 днів; вводять хворому в дозі приблизно 280 мг підшкірно 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛИПНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 10-14 днів; вводять хворому в дозі від приблизно 280 мг до приблизно 420 мг підшкірно 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 30- 50 95 приблизно на 24-28 днів; вводять хворому в дозі приблизно 280 мг підшкірно 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛЛНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 24-28 днів; вводять хворому в дозі приблизно 350 мг підшкірно 1 раз на 4 тижні при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого бо знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 24-28 днів; вводять хворому в дозі приблизно 420 мг підшкірно кожні 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 95 приблизно на 24-28 днів.
В іншому конкретному варіанті в якому анти-РС5КУ антитіло містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності ЗЕО ІЮО МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності зХЕО ІЮ МО: 49, або містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮО МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮО МО: 49, або антитіло являє собою 21812, анти-РС5КО антитіло вводять хворому в дозі від приблизно 420 мг до приблизно 3000 мг внутрішньовенно 1 раз на тиждень, при тому, що рівень холестерину ЛПНЩ в сироватці хворого знижується на 30- 50 95 приблизно на 7-10 днів; вводять хворому в дозі приблизно 700 мг внутрішньовенно 1 раз на тиждень, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 Фо приблизно на 7-10 днів; вводять хворому в дозі приблизно 1200 мг внутрішньовенно 1 раз на тиждень, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 Фо приблизно на 7-10 днів; вводять хворому в дозі від більш ніж приблизно 1200 мг до приблизно 3000 мг внутрішньовенно 1 раз на тиждень, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 95 приблизно на 7-10 днів; вводять хворому в дозі від приблизно 420 мг до приблизно 3000 мг внутрішньовенно 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 95 приблизно на 10-14 днів; вводять хворому в дозі приблизно 700 мг внутрішньовенно 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 95 приблизно на 10-14 днів; вводять хворому в дозі приблизно 1200 мг внутрішньовенно 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 95 приблизно на 10-14 днів; вводять хворому в дозі від більш ніж приблизно 1200 мг до приблизно 3000 мг внутрішньовенно 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується на 30- 50 95 приблизно на 10-14 днів; вводять хворому в дозі від приблизно 420 мг до приблизно 3000 мг внутрішньовенно 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 95 приблизно на 24-28 днів, вводять хворому в дозі приблизно 700 мг внутрішньовенно 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці
Зо хворого знижується на 30-50 95 приблизно на 24-28 днів; вводять хворому в дозі приблизно 1200 мг внутрішньовенно 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 95 приблизно на 24-28 днів; вводять хворому в дозі від більш ніж приблизно 1200 мг до приблизно 3000 мг внутрішньовенно 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІИНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 95 приблизно на 24-28 днів.
У конкретних варіантах винаходу, анти-?РС5КУ антитіло являє собою 8АЗ, 11Е1 ї 8А1. У деяких варіантах анти-РС5КУ антитіло містить: варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності ЗЕО ІЮ
МО: 465, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності ЗЕО ІО МО: 463. У деяких варіантах анти-
РОБЗКОУ антитіло містить: варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 465, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 463. У деяких варіантах анти-РС5КУ антитіло являє собою 11Е1. У конкретному варіанті анти-РС5КУ антитіло містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності зЕО ІЮ МО: 465, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 9095 ідентичною послідовності «ЕО ІЮ МО: 463, або містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮО МО: 465, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮО МО: 463, або антитіло являє собою 11Е1, анти-РСеК9 антитіло вводять хворому в дозі приблизно 45 мг підшкірно 1 раз на тиждень, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 3-10 днів, вводять хворому в дозі приблизно 150 мг підшкірно 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІПНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 7-14 днів; вводять хворому в дозі приблизно 150 мг підшкірно 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 21-31 день; вводять хворому в дозі від більш ніж приблизно 150 мг до приблизно 200 мг підшкірно 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 21-31 день; вводять хворому в дозі від приблизно 170 мг до приблизно 180 мг підшкірно 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого бо знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 21-31 день; вводять хворому в дозі від приблизно 150 мг до приблизно 170 мг підшкірно 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 21-31 день; вводять хворому в дозі приблизно 450 мг підшкірно 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІПНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 21-31 день; вводять хворому в дозі приблизно 150 мг підшкірно 1 раз на 6 тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 31-42 дні; вводять хворому в дозі від більш ніж приблизно 150 мг до приблизно 200 мг підшкірно 1 раз на 6 тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 31-42 дні; вводять хворому в дозі від приблизно 170 мг до приблизно 180 мг підшкірно 1 раз на б тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛИПНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 31-42 дні; вводять хворому в дозі від приблизно 150 мг до приблизно 170 мг підшкірно 1 раз на 6 тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 31-42 дні; вводять хворому в дозі приблизно 450 мг підшкірно 1 раз на 6 тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛІПНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 31-42 дні; вводять хворому в дозі від приблизно 140 мг до приблизно 200 мг підшкірно 1 раз на 8 тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується на 15-50 95 приблизно на 45-56 днів; вводять хворому в дозі від приблизно 170 мг до приблизно 180 мг підшкірно 1 раз на 8 тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується на 15-50 95 приблизно на 45-56 днів; вводять хворому в дозі від приблизно 150 мг до приблизно 170 мг підшкірно 1 раз на 8 тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується на 15-50 95 приблизно на 45-56 днів; вводять хворому в дозі приблизно 450 мг підшкірно 1 раз на 8 тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується на 15-50 95 приблизно на 45-56 днів; у дозі приблизно 600 мг підшкірно 1 раз на 8 тижнів, при тому, що рівень холестерину
ЛИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 45-56 днів; у дозі приблизно 700 мг підшкірно 1 раз на 8 тижнів, при тому, що рівень холестерину
ЛИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 45-56
Зо днів; у дозі приблизно 600 мг підшкірно 1 раз на 12 тижнів, при тому, що рівень холестерину
ЛИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 74-84 дні; у дозі приблизно 700 мг підшкірно 1 раз на 12 тижнів, при тому, що рівень холестерину
ЛИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 74-84 дні; у дозі приблизно 600 мг підшкірно 1 раз на 16 тижнів, при тому, що рівень холестерину
ЛИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 100- 112 днів; у дозі приблизно 700 мг підшкірно 1 раз на 16 тижнів, при тому, що рівень холестерину
ЛИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 100- 112 днів.
У конкретних варіантах винаходу, в яких анти-?РС5КУ антитіло містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 9095 ідентичною послідовності 5ЕБЕО ОО МО: 465, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності ХЕО ІЮ МО: 463, або містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 465, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЗЕО ІЮ МО: 463, або антитіло являє собою 11Е1, анти-РС5КЗУ антитіло вводять хворому в дозі приблизно 45 мг підшкірно 1 раз на тиждень, при тому, що рівень холестерину ЛІПНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 7-10 днів, вводять хворому в дозі приблизно 150 мг підшкірно 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 10-14 днів; вводять хворому в дозі приблизно 150 мг підшкірно 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛЛНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 24-28 днів; вводять хворому в дозі від більш ніж приблизно 150 мг до приблизно 200 мг підшкірно 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІПНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 24-28 днів; вводять хворому в дозі від приблизно 170 мг до приблизно 180 мг підшкірно 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 24-28 днів; вводять хворому в дозі від приблизно 150 мг до приблизно 170 мг підшкірно 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІПНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 24-28 днів; вводять хворому в дозі приблизно 450 мг бо підшкірно 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 24-28 днів; вводять хворому в дозі приблизно 150 мг підшкірно 1 раз на 6 тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛЛНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 40-41 день; вводять хворому в дозі від більш ніж приблизно 150 мг до приблизно 200 мг підшкірно 1 раз на 6 тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 40-41 день; вводять хворому в дозі від приблизно 170 мг до приблизно 180 мг підшкірно 1 раз на б тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 40-41 день; вводять хворому в дозі від приблизно 150 мг до приблизно 170 мг підшкірно 1 раз на 6 тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 40-41 день; вводять хворому в дозі приблизно 450 мг підшкірно 1 раз на б тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛИПНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 40-41 день; вводять хворому в дозі від приблизно 140 мг до приблизно 200 мг підшкірно 1 раз на 8 тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 95 приблизно на 50-56 днів; вводять хворому в дозі від приблизно 170 мг до приблизно 180 мг підшкірно 1 раз на 8 тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 95 приблизно на 50-56 днів; вводять хворому в дозі від приблизно 150 мг до приблизно 170 мг підшкірно 1 раз на 8 тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 Фо приблизно на 50-56 днів; вводять хворому в дозі приблизно 450 мг підшкірно 1 раз на 8 тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 95 приблизно на 50-56 днів; у дозі приблизно 600 мг підшкірно 1 раз на 8 тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 50-56 днів; у дозі приблизно 700 мг підшкірно 1 раз на 8 тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 50-56 днів; у дозі приблизно 600 мг підшкірно 1 раз на 12 тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 80-84 дні; у дозі приблизно 700 мг підшкірно 1 раз на 12 тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95
Зо приблизно на 80-84 дні; у дозі приблизно 600 мг підшкірно 1 раз на 16 тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 105-112 днів; у дозі приблизно 700 мг підшкірно 1 раз на 16 тижнів, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 105-112 днів.
У конкретних варіантах винаходу, в яких анти-?РС5КУ антитіло містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 9095 ідентичною послідовності 5ЕБЕО ОО МО: 465, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності ХЕО ІЮ МО: 463, або містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 465, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЗЕО ІЮ МО: 463, або антитіло являє собою 11Е41, анти-РО5КОУ антитіло вводять хворому анти-РС5КОУ антитіло вводять хворому в дозі від приблизно 420 мг до приблизно 3000 мг внутрішньовенно 1 раз на тиждень, при тому, що рівень холестерину ЛІИНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 95 приблизно на 7-10 днів; вводять хворому в дозі приблизно 700 мг внутрішньовенно 1 раз на тиждень, при тому, що рівень холестерину ЛІИНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 95 приблизно на 7-10 днів; вводять хворому в дозі приблизно 1200 мг внутрішньовенно 1 раз на тиждень, при тому, що рівень холестерину ЛІИНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 95 приблизно на 7-10 днів; вводять хворому в дозі від більш ніж приблизно 1200 мг до приблизно 3000 мг внутрішньовенно 1 раз на тиждень, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 Фо приблизно на 7-10 днів; вводять хворому в дозі від приблизно 420 мг до приблизно 3000 мг внутрішньовенно 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІИНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 95 приблизно на 10-14 днів; вводять хворому в дозі приблизно 700 мг внутрішньовенно 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІИНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 95 приблизно на 10-14 днів; вводять хворому в дозі приблизно 1200 мг внутрішньовенно 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛЛНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 95 приблизно на 10-14 днів; вводять хворому в дозі від більш ніж приблизно 1200 мг до приблизно 3000 мг внутрішньовенно 1 раз на 2 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 95 приблизно на 10-14 днів; вводять хворому в дозі від приблизно 420 мг до приблизно 3000 мг внутрішньовенно 1 раз на 4 бо тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІЛНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 Фо приблизно на 24-28 днів, вводять хворому в дозі приблизно 700 мг внутрішньовенно 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІЛНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 Фо приблизно на 24-28 днів; вводять хворому в дозі приблизно 1200 мг внутрішньовенно 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІЛНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 Фо приблизно на 24-28 днів; вводять хворому в дозі від більш ніж приблизно 1200 мг до приблизно 3000 мг внутрішньовенно 1 раз на 4 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується на 30-50 95 приблизно на 24-28 днів; вводять в дозі приблизно 1000-3000 мг внутрішньовенно 1 раз на 24 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛЛНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15-50 95 приблизно на 150-168 днів; вводять в дозі приблизно 1000-3000 мг внутрішньовенно 1 раз на 24 тижні, при тому, що рівень холестерину
ЛИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 160- 168 днів; вводять в дозі приблизно 1000-3000 мг внутрішньовенно 1 раз на 52 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 15- 50 95 приблизно на 350-365 днів; вводять в дозі приблизно 1000-3000 мг внутрішньовенно 1 раз на 52 тижні, при тому, що рівень холестерину ЛІИНЩ в сироватці хворого знижується, щонайменше приблизно на 30-50 95 приблизно на 360-365 днів.
В іншому аспекті винаходу, щонайменше одне анти-РС5КУ антитіло вводять хворому перед, після або одночасно, щонайменше із ще одним знижуючим рівень холестерину засобом.
Знижуючі рівень холестерину засоби включають статини, зокрема, аторвастатин, церивастатин, флувастатин, ловастатин, мевастатин, пітавастатин, правастатин, розувастатин, симвастатин, нікотинову кислоту (ніацин), ніадин сповільненого вивільнення (СЛО-НІАЦИН), лорапіпрант (КОРДАПТИВ), фібринову кислоту (ЛОПІД (гемфіброзил), ТРИКОР (фенофібрат)), секвестранти жовчних кислот, такі як холестирамін (КВЕСТРАН), колезвелам (ВЕЛХОЛ), КОЛЕСТИД (Колестипол)), інгібітор абсорбції холестерину (ЗЕТІА (езетиміб)), засоби для модифікації ліпідів, агоністи активованого проліфератором пероксисом рецептора (ППАР) гама, агоністи
ППАР альфа/гама, інгібітори скваленсинтетази, інгібітори транспортного білка холестеринових ефірів (ТБХЕ), антигіпертензивні засоби, протидіабетичні засоби, зокрема, похідні сульфонілсечовини, інсулін, аналоги (зі Р-1, інгібітори дипептидилпептидази 4 (ДДП4), модулятори АроВ, інгібітори мікросомального білка-переносника тригліцеридів (МТБ) та/або
Зо засоби для лікування облітерувального артеріосклерозу, онкостатин М, естроген, бербін і терапевтичні засоби для лікування пов'язаного з імунною системою розладу.
У деяких аспектах винахід включає спосіб зниження рівня холестерину ЛИПНЩ в сироватці хворого. Спосіб включає введення хворому, який потребує цього, дози від приблизно 10 мг до приблизно 3000 мг, щонайменше одного анти-РС5КО антитіла, описаного в даному описі. У деяких варіантах доза становить від приблизно 10 мг до приблизно 70 мг, щонайменше одного анти-РС5КУ антитіла, яке вводять 1 раз на тиждень (КТ). У деяких варіантах доза становить від приблизно 14 мг до приблизно 45 мг, щонайменше одного анти-РС5КО антитіла, яке вводять 1 раз на тиждень. У деяких варіантах доза становить від приблизно 14 мг до приблизно 35 мг, щонайменше одного анти-РС5КУ антитіла, яке вводять 1 раз на тиждень. У деяких варіантах доза становить від приблизно 70 мг до приблизно 420 мг, щонайменше одного анти-РСе5КО антитіла, яке вводять 1 раз на 2 тижні (К2Т). У деяких варіантах доза становить від приблизно 70 мг до приблизно 350 мг, щонайменше одного анти-РС5КУ антитіла, яке вводять 1 раз на 2 тижні (К2Т). У деяких варіантах доза становить від приблизно 105 мг до приблизно 350 мгГг, щонайменше одного анти-?РС5КОУ антитіла, яке вводять 1 раз на 2 тижні (К2Т). У деяких варіантах доза становить від приблизно 140 мг до приблизно 280 мг, щонайменше одного анти-
РОБЗКУО антитіла, яке вводять 1 раз на 2 тижні (К2Т). У деяких варіантах доза становить від приблизно 250 мг до приблизно 480 мг, щонайменше одного анти-РО5КУ антитіла, яке вводять 1 раз на 4 тижні (К4Т). У деяких варіантах доза становить від приблизно 280 мг до приблизно 420 мг, щонайменше одного анти-РС5КЗУ антитіла, яке вводять 1 раз на 4 тижні (К4Т). У деяких варіантах доза становить від приблизно 350 мг до приблизно 420 мг, щонайменше одного анти-
РОБЗКУО антитіла, яке вводять 1 раз на 4 тижні (К4Т). У деяких варіантах доза становить від приблизно 420 мг до приблизно 3000 мг, щонайменше одного анти-РС5КОУ антитіла, яким вводять 1 раз на тиждень (КТ). У деяких варіантах доза становить від приблизно 1000 мг до приблизно 3000 мг, щонайменше одного анти-РС5КОУ антитіла, яке вводять 1 раз на тиждень (КТ). У деяких варіантах доза становить від приблизно 2000 мг до приблизно 3000 мг, щонайменше одного анти-РС5КУ антитіла, яке вводять 1 раз на тиждень (КТ). У деяких варіантах доза становить від приблизно 420 мг до приблизно 3000 мг, щонайменше одного анти-РС5КУ антитіла, яке вводять 1 раз на 2 тижні (К2Т). У деяких варіантах доза становить від приблизно 1000 мг до приблизно 3000 мг, щонайменше одного анти-РС5КОУ антитіла, яке 60 вводять 1 раз на 2 тижні (К2Т). У деяких варіантах доза становить від приблизно 2000 мг до приблизно 3000 мг, щонайменше одного анти-РС5КОУ антитіла, яке вводять 1 раз на 2 тижні (К2Т). У деяких варіантах доза становить від приблизно 420 мг до приблизно 3000 мг, щонайменше одного анти-РС5КУ антитіла, яке вводять 1 раз на місяць (К4Т). У деяких варіантах доза становить від приблизно 1000 мг до приблизно 3000 мг, щонайменше одного анти-РС5КУ антитіла, яке вводять 1 раз на місяць (КАТ). У деяких варіантах доза становить від приблизно 2000 мг до приблизно 3000 мг, щонайменше одного анти-РС5КОУ антитіла, яке вводять 1 раз на місяць (К-Т). У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 1595, в порівнянні з рівнем холестерину ЛИНЩ в сироватці до введення дози. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 20 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛЛНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 25 95. У деяких варіантах рівень холестерину
ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 30 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 3595. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 40 95.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 45 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІЛНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 50 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 55 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИПНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 60 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛЛНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 75 95. У деяких варіантах рівень холестерину
ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 70 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 7595. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 80 95.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛЛНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 85 95. 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 90 95.
У деяких аспектах винахід включає спосіб зниження рівня холестерину ЛИПНЩ в сироватці хворого, причому спосіб включає введення хворому, який потребує цього, дози, щонайменше одного анти-РС5КУ антитіла, при тому, що дозу анти-?РС5КОУ антитіла вводять за схемою,
Зо вибраною з групи, що складається із: (1) щонайменше приблизно 14 мг 1 раз на тиждень (КТ); (2) щонайменше приблизно 35 мг 1 раз на тиждень (КТ); (3) щонайменше приблизно 45 мг 1 раз на тиждень (КТ); (4) щонайменше приблизно 70 мг 1 раз на 2 тижні (К2Т); (5) щонайменше приблизно 105 мг кожні 2 тижні або 1 раз на 2 тижні (К2Т); (6) щонайменше приблизно 140 мг кожні 2 тижні або 1 раз на 2 тижні (К2Т); (7) щонайменше приблизно 150 мг кожні 2 тижні або 1 раз на 2 тижні (К2Т) (8) щонайменше приблизно 280 мг кожні 2 тижні або 1 раз на 2 тижні (К2Т); і (9) щонайменше приблизно 150 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (10) щонайменше приблизно 160 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (11) щонайменше приблизно 170 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (12) щонайменше приблизно 180 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (13) щонайменше приблизно 190 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (14) щонайменше приблизно 200 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (15) щонайменше приблизно 280 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (16) щонайменше приблизно 350 1 раз на 4 тижні (КАТ); (17) щонайменше приблизно 420 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (18) щонайменше приблизно 1000 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (19у щонайменше приблизно 2000 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); і (20) щонайменше приблизно 3000 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ). У деяких варіантах рівень холестерину
ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 1595, в порівнянні з рівнем холестерину ЛІНЩ в сироватці до введення дози. У деяких варіантах рівень холестерину
ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 20 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 2595. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 30 95.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛЛНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 35 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 40 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 45 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИПНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 50 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛЛНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 55 95. У деяких варіантах рівень холестерину
ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 60 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 6595. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 70 95.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛЛНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 75 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІЛНЩ в сироватці знижується, щонайменше бо приблизно на 80 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці знижується,
щонайменше приблизно на 85 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИПНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 90 95.
У деяких аспектах винахід включає спосіб зниження значень РОБ5КОУ у хворого, причому спосіб включає введення хворому, який потребує цього, дози, щонайменше одного анти-РСе5КУ антитіла, при тому, що дозу анти-РС5КОУ антитіла вводять за схемою, вибраною з групи, що складається із: (1) щонайменше приблизно 14 мг 1 раз на тиждень (КТ); (2) щонайменше приблизно 35 мг 1 раз на тиждень (КТ); (3) щонайменше приблизно 45 мг 1 раз на тиждень (КТ); (4) щонайменше приблизно 70 мг 1 раз на 2 тижні (К2Т); (5) щонайменше приблизно 105 мг 1 раз на 2 тижні (К2Т); (б) щонайменше приблизно 140 мг 1 раз на 2 тижні (К2Т); (7) щонайменше приблизно 150 мг кожні два тижні або 1 раз на 2 тижні (К2Т); (8) щонайменше приблизно 280 мг кожні два тижні або 1 раз на 2 тижні (К2Т); (9у щонайменше приблизно 150 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (10) щонайменше приблизно 160 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (11) щонайменше приблизно 170 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (12) щонайменше приблизно 180 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (13) щонайменше приблизно 190 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (14) щонайменше приблизно 200 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (15) щонайменше приблизно 280 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (16) щонайменше приблизно 350 1 раз на 4 тижні (КАТ); (17) щонайменше приблизно 420 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (18) щонайменше приблизно 1000 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (19) щонайменше приблизно 2000 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); і (20) щонайменше приблизно 3000 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ). У деяких варіантах значення РСОБЗКОУО сироватки знижується, щонайменше приблизно на 6095, в порівнянні із значенням РСОБКОУО сироватки до введення дози. У деяких варіантах значення
РСОБКО сироватки знижується, щонайменше приблизно на 65 95. У деяких варіантах значення
РСОБКО сироватки знижується, щонайменше приблизно на 70 95. У деяких варіантах значення
РСОБКО сироватки знижується, щонайменше приблизно на 75 95. У деяких варіантах значення
РСОБКО сироватки знижується, щонайменше приблизно на 80 95. У деяких варіантах значення
РОЗКОУ сироватки знижується, щонайменше приблизно на 85 95. У деяких варіантах значення
РОЗКУ сироватки знижується, щонайменше приблизно на 90 95.
У деяких аспектах винахід включає спосіб зниження рівня загального холестерину у хворого, причому спосіб включає введення хворому, який потребує цього, дози, щонайменше одного анти-РОЗКУ антитіла, при тому, що дозу анти-РО5КОУ антитіла вводять за схемою, вибраною з
Зо групи, що складається із: (1) щонайменше приблизно 14 мг 1 раз на тиждень (КТ); (2) щонайменше приблизно 35 мг 1 раз на тиждень (КТ); (3) щонайменше приблизно 45 мг 1 раз на тиждень (КТ); (4) щонайменше приблизно 70 мг 1 раз на 2 тижні (К2Т); (5) щонайменше приблизно 105 мг 1 раз на 2 тижні (К2Т); (6) щонайменше приблизно 140 мг 1 раз на 2 тижні (К2Т); (7) щонайменше приблизно 150 мг кожні два тижні або 1 раз на 2 тижні (К2Т); (8) щонайменше приблизно 280 мг кожні два тижні або 1 раз на 2 тижні (К2Т); (9у щонайменше приблизно 150 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (10) щонайменше приблизно 160 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (11) щонайменше приблизно 170 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (12) щонайменше приблизно 180 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (13) щонайменше приблизно 190 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (14) щонайменше приблизно 200 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (15) щонайменше приблизно 280 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (16) щонайменше приблизно 350 1 раз на 4 тижні (К4Т); (17) щонайменше приблизно 420 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (18) щонайменше приблизно 1000 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (19) щонайменше приблизно 2000 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); і (20) щонайменше приблизно 3000 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ). У деяких варіантах рівень загального холестерину знижується, щонайменше приблизно на 20 95, в порівнянні з рівнем загального холестерину до введення дози. У деяких варіантах рівень загального холестерину знижується, щонайменше приблизно на 2595. У деяких варіантах рівень загального холестерину знижується, щонайменше приблизно на 3095. У деяких варіантах рівень загального холестерину знижується, щонайменше приблизно на 3595. У деяких варіантах рівень загального холестерину знижується, щонайменше приблизно на 4095. У деяких варіантах рівень загального холестерину знижується, щонайменше приблизно на 45595. У деяких варіантах рівень загального холестерину знижується, щонайменше приблизно на 5095. У деяких варіантах рівень загального холестерину знижується, щонайменше приблизно на 5595. У деяких варіантах рівень загального холестерину знижується, щонайменше приблизно на 60 95.
У деяких аспектах винахід включає спосіб зниження рівня не-ЛЛВЩ холестерину у хворого, причому спосіб включає введення хворому, який потребує цього, дози, щонайменше одного анти-РОЗКУ антитіла, при тому, що дозу анти-РО5КОУ антитіла вводять за схемою, вибраною з групи, що складається із: (1) щонайменше приблизно 14 мг 1 раз на тиждень (КТ); (2) щонайменше приблизно 35 мг 1 раз на тиждень (КТ); (3) щонайменше приблизно 45 мг 1 раз на тиждень (КТ); (4) щонайменше приблизно 70 мг 1 раз на 2 тижні (К2Т); (5) щонайменше бо приблизно 105 мг 1 раз на 2 тижні (К2Т); (6) щонайменше приблизно 140 мг 1 раз на 2 тижні
(К2Т); (7) щонайменше приблизно 150 мг кожні два тижні або 1 раз на 2 тижні (К2Т); (8) щонайменше приблизно 280 мг кожні два тижні або 1 раз на 2 тижні (К2Т); (9у щонайменше приблизно 150 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (10) щонайменше приблизно 160 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (11) щонайменше приблизно 170 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (12) щонайменше приблизно 180 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (13) щонайменше приблизно 190 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (14) щонайменше приблизно 200 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (15) щонайменше приблизно 280 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (16) щонайменше приблизно 350 1 раз на 4 тижні (К4Т); (17) щонайменше приблизно 420 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (18) щонайменше приблизно 1000 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (19) щонайменше приблизно 2000 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); і (20) щонайменше приблизно 3000 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т). У деяких варіантах рівень не-ЛІПВЩ холестерину знижується, щонайменше приблизно на 30 95, в порівнянні з рівнем не-ЛІВЩ холестерину до введення дози. У деяких варіантах рівень не-ЛЛВЩ холестерину знижується, щонайменше приблизно на 35 95. У деяких варіантах рівень не-ЛЛВЩ холестерину знижується, щонайменше приблизно на 40 95. У деяких варіантах рівень не-ЛЛВЩ холестерину знижується, щонайменше приблизно на 45 95. У деяких варіантах рівень не-ЛЛВЩ холестерину знижується, щонайменше приблизно на 50 95. У деяких варіантах рівень не-ЛЛВЩ холестерину знижується, щонайменше приблизно на 55 95. У деяких варіантах рівень не-ЛЛВЩ холестерину знижується, щонайменше приблизно на 60 95. У деяких варіантах рівень не-ЛЛВЩ холестерину знижується, щонайменше приблизно на 65 95. У деяких варіантах рівень не-ЛЛВЩ холестерину знижується, щонайменше приблизно на 70 95. У деяких варіантах рівень не-ЛЛВЩ холестерину знижується, щонайменше приблизно на 75 95. У деяких варіантах рівень не-ЛЛВЩ холестерину знижується, щонайменше приблизно на 80 95. У деяких варіантах рівень не-ЛЛВЩ холестерину знижується, щонайменше приблизно на 85 9б.
У деяких аспектах винахід включає спосіб зниження рівнів АроВ у хворого, причому спосіб включає введення хворому, який потребує цього, дози, щонайменше одного анти-РС5КО антитіла, при тому, що дозу анти-РС5ЗКОУ антитіла вводять за схемою, вибраною з групи, що складається із: (1) щонайменше приблизно 14 мг 1 раз на тиждень (КТ); (2) щонайменше приблизно 35 мг 1 раз на тиждень (КТ); (3) щонайменше приблизно 45 мг 1 раз на тиждень (КТ); (4) щонайменше приблизно 70 мг 1 раз на 2 тижні (К2Т); (5) щонайменше приблизно 105 мг 1
Зо раз на 2 тижні (К2Т); (6) щонайменше приблизно 140 мг 1 раз на 2 тижні (К2Т); (7) щонайменше приблизно 150 мг кожні два тижні або 1 раз на 2 тижні (К2Т); (86) щонайменше приблизно 280 мг кожні два тижні або 1 раз на 2 тижні (К2Т); (9у щонайменше приблизно 150 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (10) щонайменше приблизно 160 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (11) щонайменше приблизно 170 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (12) щонайменше приблизно 180 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (13) щонайменше приблизно 190 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (14) щонайменше приблизно 200 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (15) щонайменше приблизно 280 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (16) щонайменше приблизно 350 1 раз на 4 тижні (К4Т); (17) щонайменше приблизно 420 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ).
У деяких варіантах рівень АроВ знижується, щонайменше приблизно на 20 95, в порівнянні з рівнем АроВ до введення дози. У деяких варіантах рівень АроВ знижується, щонайменше приблизно на 25 95. У деяких варіантах рівень АроВ знижується, щонайменше приблизно на
З0 95. У деяких варіантах рівень АроВ знижується, щонайменше приблизно на 35 95. У деяких варіантах рівень АроВ знижується, щонайменше приблизно на 40 95. У деяких варіантах рівень
АроВ знижується, щонайменше приблизно на 45 95. У деяких варіантах рівень АроВ знижується, щонайменше приблизно на 50 95. У деяких варіантах рівень АроВ знижується, щонайменше приблизно на 55 95. У деяких варіантах рівень АроВ знижується, щонайменше приблизно на 60 95. У деяких варіантах рівень АроВ знижується, щонайменше приблизно на 65 95. У деяких варіантах рівень АроВ знижується, щонайменше приблизно на 70 95. У деяких варіантах рівень
АроВ знижується, щонайменше приблизно на 75 95.
У деяких аспектах винахід включає спосіб зниження рівнів ліпопротеїну А ("Гр(а)") у хворого, причому спосіб включає введення хворому, який потребує цього, дози, щонайменше одного анти-РОЗКУ антитіла, при тому, що дозу анти-РО5КОУ антитіла вводять за схемою, вибраною з групи, що складається із: (1) щонайменше приблизно 14 мг 1 раз на тиждень (КТ); (2) щонайменше приблизно 35 мг 1 раз на тиждень (КТ); (3) щонайменше приблизно 45 мг 1 раз на тиждень (КТ); (4) щонайменше приблизно 70 мг 1 раз на 2 тижні (К2Т); (5) щонайменше приблизно 105 мг 1 раз на 2 тижні (К2Т); (6) щонайменше приблизно 140 мг 1 раз на 2 тижні (К2Т); (7) щонайменше приблизно 150 мг кожні два тижні або 1 раз на 2 тижні (К2Т); (8) щонайменше приблизно 280 мг кожні два тижні або 1 раз на 2 тижні (К2Т); (9у щонайменше приблизно 150 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (10) щонайменше приблизно 160 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (11) щонайменше приблизно 170 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (12) щонайменше приблизно бо 180 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (13) щонайменше приблизно 190 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (14)
щонайменше приблизно 200 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (15) щонайменше приблизно 280 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (16) щонайменше приблизно 350 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (17) щонайменше приблизно 420 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (18) щонайменше приблизно 1000 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (19) щонайменше приблизно 2000 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); і (20) щонайменше приблизно 3000 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т). У деяких варіантах рівень Гр(а) знижується, щонайменше приблизно на 10 95, в порівнянні з рівнем Гр(а) до введення дози. У деяких варіантах рівень
Гра) знижується, щонайменше приблизно на 15 95. У деяких варіантах рівень І р(а) знижується, щонайменше приблизно на 20 95. У деяких варіантах рівень | р(а) знижується щонайменше приблизно на 25 95. У деяких варіантах рівень Гр(а) знижується, щонайменше приблизно на
ЗО 95. У деяких варіантах рівень І р(а) знижується, щонайменше приблизно на 35 95. У деяких варіантах рівень Гр(а) знижується, щонайменше приблизно на 40 95. У деяких варіантах рівень
Гра) знижується, щонайменше приблизно на 45 95. У деяких варіантах рівень І р(а) знижується, щонайменше приблизно на 50 95. У деяких варіантах рівень І р(а) знижується, щонайменше приблизно на 55 95. У деяких варіантах рівень І р(а) знижується, щонайменше приблизно на 60 95. У деяких варіантах рівень ГГ р(а) знижується, щонайменше приблизно на 65 95.
У деяких аспектах винахід включає спосіб лікування або попередження пов'язаного з холестерином розладу у хворого, причому спосіб включає введення хворому, який потребує цього, дози від приблизно 10 мг до приблизно 3000 мг, щонайменше одного анти-РС5КО антитіла, описаного в даному описі. У деяких варіантах доза становить від приблизно 10 мг до приблизно 70 мг, щонайменше одного анти-РС5КО антитіла, яке вводять 1 раз на тиждень (КТ).
У деяких варіантах доза становить від приблизно 14 мг до приблизно 45 мг, щонайменше одного анти-РОЗКУ антитіла, яке вводять 1 раз на тиждень. У деяких варіантах доза становить від приблизно 14 мг до приблизно 35 мг, щонайменше одного анти-РОЗКЗУ антитіла, яке вводять 1 раз на тиждень. У деяких варіантах доза становить від приблизно 70 мг до приблизно 420 мг, щонайменше одного анти-?РС5КОУ антитіла, яке вводять 1 раз на 2 тижні (К2Т). У деяких варіантах доза становить від приблизно 70 мг до приблизно 350 мг, щонайменше одного анти-
РОБЗКУО антитіла, яке вводять 1 раз на 2 тижні (К2Т). У деяких варіантах доза становить від приблизно 105 мг до приблизно 350 мг, щонайменше одного анти-РО5КУ антитіла, яке вводять 1 раз на 2 тижні (К2Т). У деяких варіантах доза становить від приблизно 140 мг до приблизно 280 мг, щонайменше одного анти-РС5КЗУ антитіла, яке вводять 1 раз на 2 тижні (К2Т). У деяких варіантах доза становить від приблизно 150 мг до приблизно 280 мг, щонайменше одного анти-
РОБЗКУО антитіла, яке вводять 1 раз на 2 тижні (К2Т). У деяких варіантах доза становить від приблизно 150 мг до приблизно 200 мг, щонайменше одного анти-РО5КУ антитіла, яке вводять 1 раз на 2 тижні (К2Т). У деяких варіантах доза становить від приблизно 150 мг до приблизно 480 мг, щонайменше одного анти-РС5КЗУ антитіла, яке вводять 1 раз на 4 тижні (К4Т). У деяких варіантах доза становить від приблизно 150 мг до приблизно 200 мг, щонайменше одного анти-
РОБЗКУО антитіла, яке вводять 1 раз на 4 тижні (К4Т). У деяких варіантах доза становить від приблизно 200 мг до приблизно 480 мг, щонайменше одного анти-РО5КУ антитіла, яке вводять 1 раз на 4 тижні (К4Т). У деяких варіантах доза становить від приблизно 250 мг до приблизно 480 мг, щонайменше одного анти-РОЗКОУ антитіла, яке вводять 1 раз на 4 тижні (К4Т). У деяких варіантах доза становить від приблизно 280 мг до приблизно 420 мг, щонайменше одного анти-
РОБЗКУО антитіла, яке вводять 1 раз на 4 тижні (К4Т). У деяких варіантах доза становить від приблизно 350 мг до приблизно 420 мг, щонайменше одного анти-РО5КУ антитіла, яке вводять 1 раз на 4 тижні. У деяких варіантах доза становить приблизно 1000 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ). У деяких варіантах доза становить приблизно 2000 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ). У деяких варіантах доза становить приблизно 3000 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т). У деяких варіантах рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 15 95, в порівнянні з рівнем холестерину ЛІНІЩ в сироватці до введення дози. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 2095. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 25 95. тижні (КАТ). У деяких варіантах рівень холестерину ЛІИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 30 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 35 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИПНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 40 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИЛНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 45 95. У деяких варіантах рівень холестерину
ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 50 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 5595. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 60 95.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛЛНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно бо на 65 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 70 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 75 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИПНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 80 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 85 95. У деяких варіантах рівень холестерину
ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 90 95. У деяких варіантах пов'язаний з холестерином розлад являє собою гетерозиготну родинну гіперхолестеринемію, гомозиготну родинну гіперхолестеринемію, неродинну гіперхолестеринемію, гіперліпідемію або дисліпідемію.
У деяких аспектах винахід включає спосіб лікування або попередження пов'язаного з холестерином розладу у хворого, причому спосіб включає введення хворому, який потребує цього, дози, щонайменше одного анти-РС5КЗ антитіла, при тому, що дозу анти-РС5КЗУ антитіла вводять за схемою, вибраною з групи, що складається із: (1) щонайменше приблизно 14 мг 1 раз на тиждень (КТ); (2) щонайменше приблизно 35 мг 1 раз на тиждень (КТ); (3) щонайменше приблизно 45 мг 1 раз на тиждень (КТ); (4) щонайменше приблизно 70 мг 1 раз на 2 тижні (К2Т); (5) щонайменше приблизно 105 мг 1 раз на 2 тижні (К2Т); (6) щонайменше приблизно 140 мг 1 раз на 2 тижні (К2Т); (7) щонайменше приблизно 150 мг кожні два тижні або 1 раз на 2 тижні (К2Т); (8) щонайменше приблизно 280 мг кожні два тижні або 1 раз на 2 тижні (К2Т); (9) щонайменше приблизно 150 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (10) щонайменше приблизно 160 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (11) щонайменше приблизно 170 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (12) щонайменше приблизно 180 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); (13) щонайменше приблизно 190 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (14) щонайменше приблизно 200 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (15) щонайменше приблизно 280 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (16) щонайменше приблизно 350 1 раз на 4 тижні (КАТ); (17) щонайменше приблизно 420 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (18) щонайменше приблизно 1000 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т); (19) щонайменше приблизно 2000 мг 1 раз на 4 тижні (КАТ); і (20) щонайменше приблизно 3000 мг 1 раз на 4 тижні (К4Т). У деяких варіантах рівень холестерину
ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 1595, в порівнянні з рівнем холестерину ЛІНЩ в сироватці до введення дози. У деяких варіантах рівень холестерину
ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 20 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 2595. У деяких
Зо варіантах рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 30 95.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛЛНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 35 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІЛНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 40 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 45 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИПНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 50 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛЛНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 55 95. У деяких варіантах рівень холестерину
ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 60 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 6595. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 70 95.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 75 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІЛНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 80 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 85 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИПНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 90 95.
У деяких варіантах, анти-РС5КУ антитіло являє собою 21812, 26Н5, 31Н4, ВАЗ, 11Е1 та/або вА1.
У деяких варіантах пов'язаний з холестерином розлад являє собою гетерозиготну родинну гіперхолестеринемію, гомозиготну родинну гіперхолестеринемію, неродинну гіперхолестеринемію, гіперліпідемію або дисліпідемію.
У деяких аспектах винахід включає фармацевтичні композиції, що містять щонайменше, одне анти-РО5КО антитіло, вибране з групи, що складається із 21812, 26Н5, 31Н4, 8АЗ, 11А1 Ї вА1.
Інші варіанти даного винаходу будуть очевидними з доданого опису.
Фіг. ТА ілюструє послідовність амінокислот зрілої форми РОБКУ з підкресленим рго- доменом.
Фіг 181-184 ілюструють послідовності амінокислот і нуклеїнової кислоти РСОБКУ з підкресленим рго-доменом і сигнальною послідовністю, виділеною напівжирним зображенням шрифту.
Фіг 2А-20 ілюструють таблиці порівняння послідовності різноманітних легких ланцюгів різноманітних антигензв'язувальних білків. На фіг. 23 продовжується послідовність, розпочата на фіг. 2А. На фіг. 20 продовжується послідовність, розпочата на фіг. 28.
Фіг. ЗА-3О0 ілюструють таблиці порівняння послідовності різноманітних важких ланцюгів різноманітних антигензв'язувальних білків. На фіг. ЗС продовжується послідовність, розпочата на фіг. ЗА. На фіг. ЗО продовжується послідовність, розпочата на фіг. ЗВ.
Фіг. ЗЕ-393У ілюструють послідовності амінокислот і нуклеїнової кислоти для варіабельних доменів деяких варіантів антигензв'язувальних білків.
Фіг. ЗКК ілюструє послідовності амінокислот для різноманітних константних доменів.
Фіг. ЗІ І -3ВВВ ілюструють послідовності амінокислот і нуклеїнових кислот для варіабельних доменів деяких варіантів антигензв'язувальних білків.
Фіг. 3ССС-3333) ілюструють таблиці порівняння послідовностей різноманітних важких і легких ланцюгів деяких варіантів антигензв'язувальних білків.
Фіг. 4А ілюструє криву зв'язування антигензв'язувального білка з РС5КОУ людини.
Фіг. 4В ілюструє криву зв'язування антигензв'язувального білка з РС5КОУ людини.
Фіг. 4С ілюструє криву зв'язування антигензв'язувального білка з РОКУ яванської макаки.
Фіг. 40 ілюструє криву зв'язування антигензв'язувального білка з РО5КОУ яванської макаки.
Фіг. 4АЕ ілюструє криву зв'язування антигензв'язувального білка з РОКУ миші.
Фіг. АР ілюструє криву зв'язування антигензв'язувального білка з РО5КОУ миші.
Фіг. 5А ілюструє результати експерименту 505 РАСЕ за участю РОБКЗО і різноманітних антигензв'язувальних білків, демонструючого відносну чистоту і концентрацію білків.
Фіг. 58 і 5С ілюструють графіки аналізів рівноваги в розчині Віасоге для 21812.
Фіг. 50 ілюструє графік кінетики аналізу захоплення Віасоге.
Філ 5Е ілюструє гістограму, що зображує результати зв'язування для трьох антигензв'язувальних білків.
Фіг. бА ілюструє криву інгібування для антигензв'язувального білка З31НА Ідс2 проти РОБ5КОУ в аналізі зв'язування РОЗКУО:ЛИНЩЕ іп міїго.
Фіг. 68 ілюструє криву інгібування для антигензв'язувального білка З1НА Ідс4 проти РОБКОУ в аналізі зв'язування РОСЗКО:ЛІИНЩЕ іп міїго.
Зо Фіг. 6С ілюструє криву інгібування для антигензв'язувального білка 21812 Ідс2 проти РОБКОУ в аналізі зв'язування РОСЗКО:ЛІИНЩЕ іп міїго.
Фіг. 60 ілюструє криву інгібування для АЗБ 21812 Ідс4 проти РОБ5КУ в аналізі зв'язування
РОЗКУО:ЛИНЩЕ іп міїго.
Фіг. 7А являє собою криву інгібування для АЗБ 31Н4 ІдС2 в аналізі захоплення ЛЛНЩ клітиною, що ілюструє вплив антигензв'язувального білка у напрямку зменшення ефектів блокування РОКУ захоплення ЛИЛИНЩ.
Фіг. 7В являє собою криву інгібування для АЗБ 31Н4 Ідс4 в аналізі захоплення ЛІЛНЩ клітиною, що ілюструє вплив антигензв'язувального білка у напрямку зниження ефектів блокування РОКУ захоплення ЛИЛИНЩ.
Фіг. 7С являє собою криву інгібування для АЗБ 21812 ІдС2 в аналізі захоплення ЛІЛНЩ клітиною, що ілюструє вплив антигензв'язувального білка у напрямку зниження ефектів блокування РОКУ захоплення ЛИЛИНЩ.
Фіг. 7О0 являє собою криву інгібування для антигензв'язувального білка 21812 Ідса4 в аналізі захоплення ЛІИНІЩЩ клітиною, що ілюструє вплив антигензв'язувального білка у напрямку зниження ефектів блокування РО5КУ захоплення ЛЛНЩ.
Фіг. 8А являє собою графік, що ілюструє здатність антигензв'язувального білка З31Н4 знижувати холестерин сироватки у мишей, зміни щодо лікованих контрольним дО мишей ("р « 0,01).
Фі. 8В являє собою графік, що ілюструє здатність антигензв'язувального білка З31Н4 знижувати холестерин сироватки у мишей, зміни щодо точки часу - 0 годин (2 р, 0,05).
Фіг. 8С являє собою графік, що ілюструє вплив АЗБ З1НА на рівні холестерину ЛПВЩ у мишей С57В1/6 ("р « 0,01).
Фіг. 80 являє собою графік, що ілюструє вплив АЗБ З1НА4 на рівні холестерину ЛПВЩ у мишей С57ВІ/6б (Ж р « 0,05).
Фіг. 9 ілюструє аналіз методом вестерн-блотингу здатності АЗБ З1НА збільшувати кількість білка ЛИЛНЩЕР в печінці в різних точках часу.
Фіг. 10А являє собою графік, що ілюструє здатність антигензв'язувального білка 31Н4 знижувати загальний холестерин сироватки у мишей дикого типу, відносний.
Фіг. 10В являє собою графік, що ілюструє здатність антигензв'язувального білка 31Н4 бо знижувати рівень ЛЛВЩ у мишей дикого типу.
Фіг. 10С являє собою графік, що ілюструє здатність різноманітних антигензв'язувальних білків З1НА і 16Е12 знижувати рівень холестерину сироватки.
Фіг. 11А о ілюструє протокол ін'єкцій для перевірки тривалості і здатності антигензв'язувальних білків знижувати рівень холестерину сироватки.
Фіг. 118 являє собою графік, що ілюструє результати протоколу на фіг. 11А.
Фіг. 12А ілюструє рівні ЛІПНІЩР в клітинах Нерс2 у відповідь на комбінацію статину та антигензв'язувального білка 21812.
Фіг. 128 ілюструє рівні ЛЛНЩЕР у відповідь на комбінацію статину та антигензв'язувального білка З1НА в клітинах Нерс2.
Фіг. 12С ілюструє рівні ЛЛНІЩР в клітинах Нерс2 у відповідь на комбінацію статину та антигензв'язувального білка 25А7.1, не нейтралізуючого антитіла (на протилежність нейтралізуючому антитілу "25А77.
Фіг. 120 ілюструє рівні ЛЛНЩЕР у відповідь на комбінацію статину і АЗБ 21812 в клітинах
Нерса2, що надмірно експресують РОБКОУ.
Фіг. 12Е ілюструє рівні ЛЛИНЩР у відповідь на комбінацію статину і АЗБ З1НА в клітинах
Нерса2, що надмірно експресують РОБКОУ.
Фіг. 12Е ілюструє рівні ЛІПНІЩР у відповідь на комбінацію статину і АЗБ 25А7.1, не нейтралізуючого антитіла (на протилежність нейтралізуючому антитілу "25А7") в клітинах
Нерса2, що надмірно експресують РОБКОУ.
Фіг. 13А ілюструє різноманітні послідовності амінокислот легкого ланцюга різноманітних АЗБ проти РОКУ. Точки (.) показують відсутність амінокислоти.
Фіг. 13В ілюструє кладограму легкого ланцюга для різноманітних АЗБ проти РОЗКО.
Фіг. 13С ілюструє різноманітні послідовності амінокислот важкого ланцюга різноманітних
АЗБ проти РОБКУ. Точки (.) показують відсутність амінокислоти.
Фіг. 130 ілюструє дендрограму важкого ланцюга для різноманітних АЗБ проти РОБКО.
Фіг. 13Е ілюструє порівняння СОК легкого і важкого ланцюга з позначенням груп, із яких одержаний консенсус.
Фіг. 13Е ілюструє консенсусні послідовності для Груп 1 і 2.
Фіг. 1305 ілюструє консенсусні послідовності для Груп З і 4.
Зо Фіг. 13Н ілюструє консенсусні послідовності для Груп 1 їі 2. Точки (.) показують ідентичні залишки.
Фіг. 13! ілюструє консенсусні послідовності для Групи 2. Точки (.) показують ідентичні залишки.
Фіг. 133 ілюструє консенсусні послідовності для Груп З і 4. Точки (.) показують ідентичні залишки.
Фіг. 14 являє собою графік, що ілюструє зниження рівнів ЛЛНЩ-Х у хворих, які одержують множинні дози анти-РОЗКОУ антитіла (21812).
Фіг. 15 являє собою графік, що ілюструє зниження рівнів ЛЛНЩ-Х у хворих, які одержують низькі або середні, а також високі дози статинів, і яким вводили множинні дози анти-РСеКО антитіла (21812).
Фіг. 16 являє собою графік, що ілюструє зниження рівнів АроВ у хворих, які одержують множинні дози анти-РОЗКОУ антитіла (21812).
Фіг. 17 являє собою гістограму, що ілюструє зниження рівнів ліпопротеїну ("Гр(а)") у хворих, які одержують низькі або середні, а також високі дози статинів, і яким вводили множинні дози анти-РО5ЗКЗУ антитіла (21812).
Фіг. 18 являє собою графік, що ілюструє зниження рівнів ЛЛНЩ-Х у хворих з гетерозиготною родинною гіперхолестеринемією ("ГесгГ"), які одержують множинні дози анти-РС5КО антитіла (21812).
Фіг. 19 являє собою графік, що ілюструє зниження рівнів РО5КО у хворих з гетерозиготною родинною гіперхолестеринемією ("ГесСГ"), які одержують множинні дози анти-РС5КОУ антитіла (21812).
Фіг. 20 являє собою графік, що ілюструє зниження загальних рівнів холестерину у хворих з гетерозиготною родинною гіперхолестеринемією ("Гесг"), які одержують множинні дози анти-
РОБКЗУ антитіла (21812).
Фіг. 21 являє собою графік, що ілюструє зниження рівнів не-ЛЛВЩ холестерину у хворих з гетерозиготною родинною гіперхолестеринемією ("Гесг"), які одержують множинні дози анти-
РОБКЗУ антитіла (21812).
Фіг. 22 являє собою графік, що ілюструє зниження рівнів АроВ у хворих з гетерозиготною родинною гіперхолестеринемією ("ГесгГ"), які одержують множинні дози анти-РС5КО антитіла (510) (21812).
Фіг. 23 являє собою гістограму, що ілюструє зниження рівнів ліпопротеїну ("| р(а)") у хворих з гетерозиготною родинною гіперхолестеринемією ("Гесг"), які одержують множинні дози анти-
РОЗКЗУ антитіла (21812).
Фіг. 24А являє собою графік, що ілюструє узагальнені дані стосовно зниження рівнів ЛЛНЩЦ-
Х у хворих із чотирьох досліджень, описаних в Прикладах 22-25, які одержували різні дози анти-
РОЗКУОУ антитіла (21812) 1 раз на 2 тижні (К2Т) протягом періоду 12 тижнів.
Фіг. 248 являє собою графік, що ілюструє узагальнені дані стосовно зниження рівнів ЛЛНЩЦ-
Х у хворих із чотирьох досліджень, описаних в Прикладах 22-25, які одержували різні дози анти-
РОЗКУОУ антитіла (21812) 1 раз на 4 тижні (К4Т) протягом періоду 12 тижнів.
Фіг. 25А являє собою гістограму, що ілюструє узагальнені дані стосовно зниження рівнів
Гр(а) у хворих із чотирьох досліджень, описаних в Прикладах 22-25, які одержували різні дози анти-РОЗКУ антитіла (21812) 1 раз на 2 тижні (К2Т) або 1 раз на 4 тижні (КАТ) протягом періоду 12 тижнів.
Фіг. 258 являє собою гістограму, що ілюструє узагальнені дані стосовно зниження рівнів
ЛИВЩ:-Х у хворих із чотирьох досліджень, описаних в Прикладах 22-25, які одержували різні дози анти-РО5КОУ антитіла (21812) 1 раз на 2 тижні (К2Т) або 1 раз на 4 тижні (К4Т) протягом періоду 12 тижнів.
Фіг. 25С являє собою гістограму, що ілюструє узагальнені дані стосовно зниження рівнів тригліцеридів у хворих із чотирьох досліджень, описаних в Прикладах 22-25, які одержували різні дози анти-РСЗКУ антитіла (21812) 1 раз на 2 тижні (К2Т) або 1 раз на 4 тижні (К4Т) протягом періоду 12 тижнів.
Фіг. 250 являє собою гістограму, що ілюструє узагальнені дані стосовно зниження рівнів
ЛІИДНЩ-Х у хворих із чотирьох досліджень, описаних в Прикладах 22-25, які одержували різні дози анти-РО5КОУ антитіла (21812) 1 раз на 2 тижні (К2Т) або 1 раз на 4 тижні (К4Т) протягом періоду 12 тижнів.
Фіг. 26 являє собою гістограму, що ілюструє в'язкість композицій анти-РС5КУ антитіла (21812), що містять різноманітні стабілізатори/допоміжні речовини.
Фіг. 27 являє собою графік, що ілюструє здатність стабілізатора/допоміжної речовини, проліну, знижувати в'язкість композицій анти-?РС5КУ антитіла (21812), що містять високі
Зо концентрації білка.
Фіг. 28А являє собою графік, що ілюструє в'язкість різних концентрацій анти-РС5КУ антитіла, 21812, в композиції, що містить 10 мМ натрію ацетату і 9 95 сахарози, рН 5,2, при 25 "Сі40 с.
Фіг. 288 являє собою графік, що ілюструє в'язкість різних концентрацій анти-РС5КО антитіла, 21812, в композиції, що містить 10 мМ натрію ацетату і 9 95 сахарози, рН 5,2, при 25 "б ї 40 "С, в порівнянні з композицією, що містить 10 мМ натрію ацетату, 125 мМ аргініну і З Фо сахарози, рН 5,0 при 25"Сі40 76.
Фіг. 28С являє собою графік, що ілюструє в'язкість різних концентрацій анти-РС5КО антитіла, 21812, в композиції, що містить 10 мМ натрію ацетату і 9 95 сахарози, рН 5,2, при 25 "С ії 40 "С, в порівнянні з композицією, що містить 10 мМ натрію ацетату, 100 мМ метіоніну і 4 Фо сахарози, рН 5,0 при 25"Сі40 76.
Фіг. 280 являє собою графік, що ілюструє в'язкість різних концентрацій анти-РС5КО антитіла, 21812, в композиції, що містить 10 мМ натрію ацетату і 9 95 сахарози, рН 5,2, при 25 "С і 40 "С, в порівнянні з композицією, що містить 10 мМ натрію ацетату і 250 мм проліну, рН 5,0, при 25"Сі40 76.
Фіг. 29А являє собою гістограму, що ілюструє кількість частинок розміром 10 мкм в різноманітних препаратах композицій анти-РО5КОУ антитіла (тобто, 21812) протягом періоду 6 місяців.
Фіг. 298 являє собою гістограму, що ілюструє кількість частинок розміром 25 мкм в різноманітних препаратах композицій анти-РС5КУ антитіла (тобто, 21812) протягом періоду 6 місяців.
Фіг. ЗОА являє собою гістограму, що ілюструє кількість частинок розміром 10 мкм в різноманітних препаратах композицій анти-РС5КОУ антитіла (тобто, 1121) протягом періоду 4 місяці.
Фіг. ЗОВ являє собою гістограму, що ілюструє кількість частинок розміром 25 мкм в різноманітних препаратах композицій анти-РС5КОУ антитіла (тобто, 111) протягом періоду 4 місяці.
Фіг. 31 являє собою графік, що ілюструє специфічність зв'язування 111 в аналізі конкуренції з РСОЗКР, РСОБК2, РОЗКІ1Т, РОБЗК7 і фурином (ЕРшигіп), причому ОЮз5о нанесена на бо графік по осі У, і концентрація РОБ5КУ (мкг/мл) нанесена на графік по осі Х.
Фіг. 32 являє собою графік, що ілюструє криву доза-реакція для інгібування зв'язування
ЛІПННЩР:ОЗ374У РОБЗКОУ під дією 1111 в аналізі конкуренції, причому ОЮз45о нанесена на графік по осі М, ії Год М1Е1) (пМ) нанесений на графік по осі Х.
Фіг. 33 являє собою графік, що ілюструє криву доза-реакція для інгібування зв'язування
ЛІИПННЩР:РСОБКОУО ДТ під дією 1111 в аналізі конкуренції, причому ОЮз-5о нанесена на графік по осі
У, іСод 1171) (пМ) нанесений на графік по осі Х.
Фіг. 34 являє собою графік, що ілюструє криву доза-реакція для здатності 1121 блокувати опосередковане людським 0374 РОСБЗКОУО зниження захоплення ЛІПНЩ клітинами Нерсаг, з відносними одиницями флуоресценції (х 107), нанесеними на графік по осі М, ії Год 121) (нм), нанесеним на графік по осі Х.
Фіг. 35 являє собою графік, що ілюструє криву доза-реакція для здатності 1121 блокувати опосередковане людським РОСЗКОУО ДТ зниження захоплення ЛІИПНЩ клітинами Нерс2, з відносними одиницями флуоресценції, нанесеними (х 107) на графік по осі М, і Год 11) (нМ), нанесеним на графік по осі Х.
Фіг. 36 являє собою гістограму, що ілюструє вплив 11Е1 і ВАЗ на холестерин не-ЛЛВЩ сироватки у мишей, які експресують людський РОКУ під дією АЗВ, з концентрацією (мг/мл) не-
ЛИВЩ-Х сироватки по осі У і часом після ін'єкції (дні), нанесеним на графік по осі Х.
Фіг. 37 являє собою гістограму, що ілюструє вплив 11Е1 і 8АЗ на загальний холестерин сироватки у мишей, які експресують людський РОБКО, під дією АЗВ, де загальний холестерин сироватки (мг/мл) нанесений по осі У, і час після ін'єкції (дні) нанесений на графік по осі Х.
Фіг. 38 являє собою гістограму, що ілюструє вплив 111 і 8АЗ на холестерин ЛІВЩ сироватки (ЛІВЩ-Х) у мишей, які експресують людський РСОБКОУ, під дією АЗВ, де ЛІОВЩ-Х (мг/мл) нанесений по осі У, і час після ін'єкції (дні) нанесений на графік по осі Х.
Фіг. 39 являє собою графік, що ілюструє профілі концентрації антитіл Ідс2, 8АЗ і 11Е1 у мишей, які експресують людський РОБКО, під дією АЗВ, де концентрація антитіла в сироватці (нг/мл) нанесена на графік по осі У, і час після ін'єкції в днях нанесений на графік по осі Х.
Фіг. 40 ілюструє таблицю, що підсумовує параметри фармакокінетики для Ідса2, 11Е1 ї ВАЗ у мишей, які експресують людський РОКУ під дією АЗВ.
Фіг. 41 являє собою графік, що ілюструє вплив одноразового підшкірного введення анти-
Зо ГуЦФ антитіла (контроль), 21812, 8АЗ ії 1121 на концентрацію ЛІНЩ сироватки (ЛІЛНЩ-Х) у яванських макак, де рівень ЛЛНЩ-Х (мг/дл) нанесений на графік по осі У, і час після введення в днях нанесений по осі Х.
Фіг. 42 являє собою графік, що ілюструє вплив одноразового підшкірного введення анти-
ГЦФ антитіла (контроль), 21812, 8АЗ і 11Е1 на загальний холестерин сироватки у яванських макак, де концентрація загального холестерину (мг/дл) нанесена на графік по осі У, і час після введення в днях нанесено по осі Х.
Фіг. 43 являє собою графік, що ілюструє вплив одноразового підшкірного введення анти-
ГЦФ антитіла (контроль), 21812, 8АЗ і 11Е1 на холестерин ЛІВЩ сироватки у яванських макак, де рівень ЛЛИВЩ-Х (мг/дл) нанесений на графік по осі У, і час після введення в днях нанесено по осі Х.
Фіг. 44 являє собою графік, що ілюструє вплив одноразового підшкірного введення анти-
ГЦФ антитіла (контроль), 21812, 8АЗ ї 11Е1 на тригліцериди сироватки у яванських макак, де концентрація тригліцеридів (мг/дл) нанесена на графік по осі У, і час після введення в днях нанесено по осі Х.
Фіг. 45 являє собою графік, що ілюструє вплив одноразового підшкірного введення анти-
ГЦФ антитіла (контроль), 21812, 8АЗ ї 111 на рівень Аполіпопротеїну В (АроВ) у яванських макак, де концентрація АРОВ (мг/дл) нанесена на графік по осі У, і час після введення в днях нанесено по осі Х.
Фіг. 46 являє собою графік, що ілюструє середні фармакокінетичні профілі для анти-ГЦФф антитіла (контроль), 21812, 8АЗ ї 1121 у яванських макак, де концентрація антитіла (нг/мл) нанесена на графік по осі У, і час після введення в днях нанесено по осі Х.
Фіг. 47 ілюструє таблицю, що підсумовує параметри фармакокінетики для анти-ГЦф антитіла (контроль), 21812, 8АЗ і 1111 у яванських макак.
Фіг. 48А ілюструє порівняння послідовностей амінокислот легких ланцюгів вА1, вВАЗІі11Е1, а також консенсусну послідовність, одержану в результаті порівняння. Послідовності СОК підкреслені.
Фіг. 488 ілюструє порівняння послідовностей амінокислот важких ланцюгів 8А1, 8АЗ і 11Е1, а також консенсусну послідовність, одержану в результаті порівняння. Послідовності СОК підкреслені.
Антигензв'язувальні білки (такі як антитіла та їх функціональні фрагменти зв'язування), які зв'язуються з РСОЗКОУ, розкриті в даному описі. У деяких варіантах антигензв'язувальні білки зв'язуються з РСОБКОУ і різноманітними шляхами перешкоджають функціонуванню РОБКУ. У деяких варіантах антигензв'язувальні білки блокують або знижують здатність РОКУ взаємодіяти з іншими субстанціями. Наприклад, в деяких варіантах антигензв'язувальний білок зв'язується з РСБКОУО таким чином, що до деякої міри попереджає або знижує ймовірність зв'язування РО5КУ з ЛИНЩР. В інших варіантах антигензв'язувальні білки зв'язуються з РСОБКО, але не блокують здатність РСБКО взаємодіяти з ЛІНІЦР. У деяких варіантах антигензв'язувальні білки є людськими моноклональними антитілами.
Як буде зрозуміло кваліфікованому фахівцю в даній галузі, у світлі даного опису, зміна взаємодії між РСБКУ і ЛИНЩР може збільшувати кількість ЛЛНЩР, доступного для зв'язування з ЛІНЩ, що, в свою чергу, зменшує кількість ЛОІНЩ сироватки у суб'єкта і приводить до зниження рівня холестерину в сироватці суб'єкта. Таким чином, антигензв'язувальні білки проти
РОБКОУ можуть застосовуватися в різноманітних способах і композиціях для лікування суб'єктів з підвищеними рівнями холестерину сироватки, схильними до ризику підвищення рівнів холестерину сироватки, або які можуть одержати користь від зниження рівнів холестерину сироватки. Таким чином, різноманітні способи і методи зниження, підтримки або попередження підвищення рівня холестерину сироватки також описані в даному описі. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок дозволяє зв'язування між РСОБЗКО і ЛПНІЦР, але антигензв'язувальний білок попереджає або знижує несприятливий вплив РС5КУ на ЛИНЩР. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок попереджає або зменшує зв'язування РО5КОУ з
ЛІПНЩР.
Для зручності, в наступних розділах, загалом, описані різні значення термінів, використовуваних в даному описі. Після даного обговорення, обговорюються загальні аспекти відносно антигензв'язувальних білків, і далі наведені конкретні приклади, що демонструють властивості різноманітних варіантів антигензв'язувальних білків, і яким чином вони можуть застосовуватися.
Визначення і варіанти
Слід розуміти, що як вищевикладений загальний опис, так і наступний детальний опис є тільки зразковими і пояснюючими, але не обмежують заявленого винаходу. У даній заявці, використання однини включає множину, якщо тільки конкретно не вказано інше. У даній заявці, використання "або" означає "та/або", якщо конкретно не вказано інше. Крім того, використання терміну "що включає (що містить)", а також інших форм, таких як "включає" і "включений", не є обмежуючим. Додатково, такі терміни, як "елемент" або "компонент" включають як елементи, так і компоненти, що містять одну одиницю, і елементи та компоненти, які містять більш ніж одну субодиницю, якщо тільки конкретно не вказано інше. Додатково, використання терміну "частина" може включати частину фрагмента або суцільний фрагмент.
Заголовки розділів, використовувані в даному описі, наведені тільки для організаційних цілей, і не повинні бути інтерпретовані як обмеження описаного об'єкту. Всі документи, або частини документів, процитовані в даній заявці, зокрема, але, не обмежуючись ними, патенти, патентні заявки, статті, книги і трактати, таким чином, явно включені шляхом посилання в повному обсязі для будь-якої мети. Відповідно до даного опису, наступні терміни, якщо тільки не вказано інше, слід розуміти як такі, що мають наступні значення:
Термін "пропротеїн конвертаза субтилізин кексин типу 9" або "РС5КУ" позначає поліпептид, визначений в ЗЕО ІЮ МО: 1 та/або 3, або його фрагменти, а також споріднені поліпептиди, які включають, не обмежуючись ними, алельні варіанти, варіанти з'єднання, похідні варіанти, варіанти заміни, варіанти делеції та/або варіанти вставки, в тому числі додавання М-кінцевого метіоніну, злиті поліпептиди і міжвидові гомологи. У деяких варіантах, поліпептид РОКУ містить кінцеві залишки, наприклад, не обмежуючись ними, залишки лідерної послідовності, націлювальні залишки, аміно-кінцеві залишки метіоніну, залишки лізину, залишки мітки та/або залишки злитого білка. ""С5КУ" також позначається як ЕНЗ, МАКСІ, НСНОГ АЗ, пропротеїн конвертаза субтилізин/кексин типу 9 і регульована апоптозом нервових клітин конвертаза 1. Ген
РСОБКО кодує білок пропротеїн конвертазу, який належить до підродини протеїнази К родини секреторної субтилази. Термін ""С5КУ" позначає як пропротеїн, так і продукт, що генерується після аутокаталізу пропротеїна. При посиланні тільки на аутокаталізований продукт (наприклад, для антигензв'язувального білка, який вибірково зв'язується з розщепленим РОЗКО), білок може позначатися як "зрілий", "розщеплений", "оброблений" або "активний" РОБКОУ. При посиланні тільки на неактивну форму, білок може позначатися як "неактивний", "про-форма" або "необроблена" форма РОБКУ. Термін РСОБ5КОУ в даному описі також включає природні алелі, бо наприклад, мутації 0О374У, 5127К і Е216Ї. Термін РОБ5КУ також включає молекули РОБКОУ, що містять посттрансляційні модифікації послідовності амінокислот РСБКУ, наприклад, послідовності РСОБ5КОУ, які були глікозильовані, пегільовані, послідовності РОЗКОУ, від яких відщеплена сигнальна послідовність, послідовність РОКУ, в якій рго-домен відщеплений від каталітичного домену, але не відокремлений від каталітичного домену (наприклад, фіг. ТА і 18).
Термін "активність РС5КУ" включає будь-який біологічний ефект РОЗКУ. У деяких варіантах, активність РОЗКО включає здатність РОСБКОУ взаємодіяти або зв'язуватися із субстратом або рецептором. У деяких варіантах активність РО5КОУ представлена здатністю РОЗКОУ зв'язуватися із рецептором ЛЛНЩ (ЛІНЩР). У деяких варіантах РОЗКУО зв'язується з і каталізує реакцію за участю ЛІНЩР. У деяких варіантах активність РОБКО включає здатність РСБКОУ змінювати (наприклад, зменшувати) доступність ЛЛНЩР. У деяких варіантах активність РОБКУ включає здатність РО5КОУ підвищувати рівень ЛІЛНЩ у суб'єкта. У деяких варіантах активність РСБ5КОУ включає здатність РОСЗКУ зменшувати кількість ЛЛНЩЕР, доступну для зв'язування з ЛЛНЩЦ. У деяких варіантах "активність РС5КОУ" включає будь-яку біологічну активність, яка є результатом проведення сигналу РОЗКОУ. Приклад активності включає, не обмежуючись ними, зв'язування
РОБЗКУ з ЛІНЩР, ферментну активність РОКУ, який розщеплює ЛІПНІЦР або інші білки, зв'язування РОЗКО з білками, окрім ЛИНЩР, яке полегшує дію РОБ5КО, зміну секреції АРОВ під дією РОЗКО9 (Бип Х-М 6ї аї, "ЕЄмідепсе бог епПесі ої тшапі РОБКО оп ароїїргоїєїп В зестейоп аз Ше саизе ої ипизцаПйу земеге дотіпапі НурегспоіІевієгоіїєтіа, Нитап МоіІесшіаг Сепеїйсв 14: 1161- 1169, 2005 і О!йдиетат К еї аї, "Ароїїроргоївіт В100 теїароїїзт іп ашозотаіІ-дотіпапі
Нурегспо!езієгоЇїетіа геіаїед ю тиїаййопв5 іп РСОБКУ, Апепозсієг (готр Мазс Віої. 24: 1448-1453, 2004), роль РСОБ5КУ в регенерації печінки і диференціації нейронів (Зеійдап МО еї аї, "Те зестеїогу ргоргоївіп сопумепйазе пешга! ароріозіз-гедшаїєд сопуейазе 1 (МАВС-1): Іімег гедепегайоп апа пешгопа! айегепііайоп" РМАБ 100: 928-933, 2003), і роль РО5КУ в печінковому метаболізмі глюкози (Совіеї еї аї., "Нераїйіс РОБКОУ ехргеззіоп і5 гедшаїеа Бу пишгйіопаї «їаг5 ма іпзцп апа вієгої гедшаюгу еіетепі-Бріпаїпу ргоїєїп 1с" у). Віої. Снет. 281(10):6211-18, 2006).
Термін "гіперхолестеринемія" в даному описі позначає стан, при якому рівні холестерину вищі за бажаний рівень. У деяких варіантах це означає, що рівні холестерину сироватки підвищені. У деяких варіантах бажаний рівень враховує різні "фактори ризику", що відомі фахівцю в даній галузі (та описані або на них є посилання в даному описі).
Зо Термін "полінуклеотид" або "нуклеїнова кислота" включає як одноланцюгові, так і дволанцюгові нуклеотидні полімери. Нуклеотиди, з яких складається полінуклеотид, можуть бути рибонуклеотидами або дезоксирибонуклеотидами або модифікованою формою будь-якого виду нуклеотидів. Вказані модифікації включають модифікації основ, наприклад, похідні бромуридину та інозину, модифікації рибози, наприклад, 2",3З'-дидезоксирибозу, і модифікації міжнуклеотидного зв'язку, наприклад, фосфоротіоат, фосфородитіоат, фосфороселеноат, фосфородиселеноат, фосфороанілотіоат, фосфораніладат і фосфороамідат.
Термін "олігонуклеотид" позначає полінуклеотид, що містить 200 або менше нуклеотидів. У деяких варіантах довжина олігонуклеотидів становить 10-60 основ. В інших варіантах довжина олігонуклеотидів становить 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 або 20-40 нуклеотидів. Олігонуклеотиди можуть бути одноланцюговими або двохланцюговими, наприклад, для використання в конструюванні гена мутанта. Олігонуклеотиди можуть бути смисловими або антисмисловими олігонуклеотидами. Олігонуклеотид може містити мітку, зокрема, радіомітку, флуоресцентну мітку, гаптен або антигенну мітку, для аналізів з метою виявлення. Олігонуклеотиди можуть використовуватися, наприклад, як праймери ПЛР, праймери клонування або зонди гібридизації. "Молекула виділеної нуклеїнової кислоти" позначає ДНК або РНК, мРНК, кДНК геномного або синтетичного походження, або деяку їх комбінацію, яка не пов'язана з повнорозмірним або частиною полінуклеотиду, в якому виділений полінуклеотид знайдений в природі, або пов'язана з полінуклеотидом, з яким вона не зв'язана в природі. Для цілей даного опису, слід розуміти, що "молекула нуклеїнової кислоти, що містить" конкретну послідовність нуклеотидів, не включає інтактних хромосом. Виділені молекули нуклеїнової кислоти, що "містять" вказані послідовності нуклеїнової кислоти, можуть містити, на додаток до вказаних послідовностей, кодуючі послідовності до 10 або навіть до 20 інших білків або їх частин, або може містити функціонально зв'язані регуляторні послідовності, які контролюють експресію кодуючої ділянки заявлених послідовностей нуклеїнової кислоти, та/або може містити векторні послідовності.
Якщо не вказано інше, лівий кінець будь-якої одноланцюгової послідовності полінуклеотиду, обговорюваної в даному описі, є 5" кінцем; напрямок вліво для двохланцюгових послідовностей полінуклеотиду позначається як 5" напрямок. Напрямок додавання виникаючих транскриптів
РНК 5-3" позначається як напрямок транскрипції; ділянки послідовності на ланцюгу ДНК з такою ж послідовністю, що і транскрипт РНК, які розташовані у напрямку 5" по відношенню до 5" кінця бо транскрипту РНК, позначаються як "розташовані проти ходу транскрипції"; ділянки послідовності на ланцюгу ДНК з такою ж послідовністю, що і транскрипт РНК, які розташовані у напрямку 3" по відношенню до 3" кінця транскрипту РНК, позначаються як "розташовані по ходу транскрипції".
Термін "контрольна послідовність" позначає послідовність полінуклеотиду, яка може впливати на експресію і обробку кодуючих послідовностей, з якими вона лігована. Природа таких контрольних послідовностей може залежати від організму-хазяїна. У конкретних варіантах, контрольні послідовності для прокаріот можуть містити промотор, сайт зв'язування з рибосомою і послідовність закінчення транскрипції. Наприклад, контрольні послідовності для еукаріот можуть містити промотори, що містять один або декілька сайтів розпізнавання для факторів транскрипції, послідовності енхансера транскрипції і послідовність закінчення транскрипції. "Контрольні послідовності" можуть містити лідерні послідовності та/або послідовності партнера для злиття.
Термін "вектор" позначає будь-яку молекулу або об'єкт (наприклад, нуклеїнову кислоту, плазміду, бактеріофаг або вірус), використовувану для перенесення кодуючої білок інформацію в клітину-хазяїна.
Термін "вектор експресії" або "експресійний конструкт" позначає вектор, який придатний для трансформації клітини-хазяїна і містить послідовності нуклеїнових кислот, які спрямовують та/або контролюють (в поєднанні з клітиною-хазяїном) експресію однієї або більше гетерологічних ділянок кодування, функціонально пов'язаних з ними. Експресійний конструкт може містити, не обмежуючись ними, послідовності, які впливають на або контролюють транскрипцію, трансляцію, і, якщо присутні інтрони, впливають на з'єднання РНК кодуючої ділянки, функціонально пов'язаної з ними.
У даному описі "функціонально пов'язаний" означає, що компоненти, до яких застосовується термін, знаходяться у взаємозв'язку, який дозволяє їм здійснювати властиві їм функції у відповідних умовах. Наприклад, контрольна послідовність у векторі, який "функціонально пов'язаний" з кодуючою білок послідовністю, лігована з ним таким чином, що експресія кодуючої білок послідовності досягається в умовах, сумісних з транскрипційною активністю контрольних послідовностей.
Термін "клітина-хазяїн" позначає клітину, яка трансформована або здатна до трансформації послідовністю нуклеїнової кислоти, і, таким чином, експресує цільовий ген. Термін включає нащадка батьківської клітини, незалежно від того, чи ідентичний нащадок з точки зору морфології або генетичної косметики оригінальній батьківській клітині, до тих пір, поки присутній цільовий ген.
Термін "трансфекція" позначає захоплення чужорідної або екзогенної ДНК клітиною, і клітина була "трансфікована", якщо екзогенна ДНК була введена всередину клітинної мембрани. Цілий ряд методів трансфекції добре відомий в даній галузі і розкритий в даному описі. Див., наприклад, Стапат есеї аї., 1973, Мігоїюду 52:456; ЗатрбгоокК еї аї., 2001, МоїІесшаг
СіІопіпд: А ІГарогаїгу Мапиаї!ї, вище; Оамі5 еї аї., 1986, Вавзіс Меїйоайв5 іп Моїесшіаг Віоіоду,
ЕіІвеміє!; Спи єї аї.,, 1981, Сепе 13:197. Такі методи можуть застосовуватися для введення одного або більше екзогенних фрагментів ДНК у відповідні клітини-хазяї.
Термін "трансформація" позначає зміну генетичних характеристик клітини, і клітина трансформована, якщо вона модифікована таким чином, щоб містити нову ДНК або РНК.
Наприклад, клітина трансформована, якщо вона генетично модифікована в порівнянні з її природним станом шляхом введення нового генетичного матеріалу за допомогою трансфекції, трансдукції, або іншими методами. Після трансфекції або трансдукції, трансформуюча ДНК може рекомбінувати з ДНК клітини шляхом фізичної інтеграції в хромосому клітини, або може підтримуватися тимчасово, як епісомальний елемент без реплікації, або може реплікуватися незалежно як плазміда. Клітина вважається "стабільно трансформованою", якщо трансформуюча ДНК реплікується при поділі клітини.
Терміни "поліпептид" або "білок" позначають макромолекулу, що містить послідовність амінокислот природного білка, тобто, білка, що виробляється природною, не рекомбінантною клітиною; або що виробляється генетично сконструйованою або рекомбінантною клітиною, і включає молекули, що містять послідовність амінокислот природного білка, або молекули, що містять делеції додавання та/або заміни однієї або більше амінокислот природної послідовності. Термін також включає полімери амінокислот, в яких одна або більше амінокислот є хімічними аналогами відповідної природної амінокислоти і полімерами. Терміни "поліпептид" і "білок" специфічно включають антигензв'язувальні білки проти РСОСБКОУ, антитіла, або послідовності, які містять делеції, додавання та/або заміни однієї або більше амінокислот в антигензв'язувальному білку. Термін "поліпептидний фрагмент" позначає поліпептид, який містить аміно-кінцеву делецію, карбокси-кінцеву делецію та/або внутрішню делецію в порівнянні бо з повнорозмірним природним білком. Такі фрагменти можуть також містити модифіковані амінокислоти в порівнянні з природним білком. У деяких варіантах довжина фрагментів становить від приблизно 5 до 500 амінокислот. Наприклад, довжина фрагментів може становити, щонайменше 5, 6, 8, 10, 14, 20, 50, 70, 100, 110, 150, 200, 250, 300, 350, 400 або 450 амінокислот. Придатні поліпептидні фрагменти включають імунологічно функціональні фрагменти антитіл, зокрема, домени зв'язування. У випадку антитіла, що зв'язується з РОБКО, придатні фрагменти включають, не обмежуючись ними, ділянку СОК, варіабельний домен важкого та/або легкого ланцюга, частину ланцюга антитіла або тільки його варіабельну ділянку, зокрема, два СОК, тощо.
Термін "виділений білок" означає, що вказаний білок (1) вільний, щонайменше від деяких інших білків, з якими його звичайно знаходять, (2) істотною мірою вільний від інших білків з того ж джерела, наприклад, того ж виду, (3) експресується клітиною іншого виду, (4) відокремлений, щонайменше від приблизно 50 95 полінуклеотидів, ліпідів, вуглеводів або інших матеріалів, з якими він зв'язаний в природі, (5) функціонально пов'язаний (шляхом ковалентної або нековалентної взаємодії) з поліпептидом, з яким він не зв'язаний в природі, або (6) не зустрічається в природі. Звичайно, "виділений білок" складає, щонайменше приблизно 5 95, щонайменше приблизно 1095, щонайменше приблизно 25 95, або, щонайменше приблизно 50 95 даного зразка. Такий виділений білок може кодуватися геномною ДНК, кКДНК, мРНК або іншою РНК, синтетичного походження або будь-якою їх комбінацією. Переважно, виділений білок істотною мірою вільний від білків або поліпептидів або інших забруднюючих речовин, які знайдені в його природному оточенні, і які перешкоджали б його терапевтичному, діагностичному, профілактичному, дослідницькому або іншому застосуванню.
Термін "амінокислота" включає його звичайне значення в рівні техніки. "Варіант" поліпептиду (наприклад, антигензв'язувальний білок або антитіло) містить послідовність амінокислот, в якій один або більше залишків амінокислот вставлені, видалені та/або замінені в послідовності амінокислот щодо іншої послідовності поліпептиду. Варіанти включають злиті білки.
Термін "ідентичність" позначає взаємовідношення між послідовностями двох або більше молекул поліпептиду або двох або більше молекул нуклеїнових кислот, визначене шляхом вирівнювання і порівняння послідовностей. "Відсоток ідентичності" позначає відсоток ідентичних
Зо залишків між амінокислотами або нуклеотидами в порівнюваних молекулах і обчислюється на підставі розміру найменшої з порівнюваних молекул. Для таких обчислень, до проміжків у вирівнюваннях (якщо вони присутні) переважно застосовують конкретну математичну модель або комп'ютерну програму (тобто, "алгоритм"). Методи, які можуть застосовуватися для обчислення ідентичності вирівняних нуклеїнових кислот або поліпептидів, включають описані в
Сотриїайопа! Моїієсшіаг Віооду (Ге5К, А. М., ей.), 1988, Мем/ Могк: Охіога Опімегейу Ргез5;
Віосотриїіпу Іптоптаїісв апа Сепоте Рго|есів (тій, О. М/., ед.), 1993, Мем/ Моїк: Асадетіс
Ргез5; Сотриїег Апаїузі5 ої Зеднепсе Вага, Рагі І (Сгійіп, А. М., апа Сгійіп, Н. 5., ед5.), 1994, Мем
Уегзеу: Нитапа Ргезв; моп Неїіпіє, са., 1987, Зедиепсе Апаїувів іп Моіесшіаг Віоїоду, Мем Могк:
Асадетіс Ргев55; Зедиепсе Апаїузів Ргітег (Стіб5Ком, М. апа Оеємегеих, у., едв5.), 1991, Мем/ Могк:
М. БіосКоп Ргез5; і Сапіо еї а!., 1988, БІАМ 3. Арріїєа Май. 48:1073.
При обчисленні відсотка ідентичності, порівнювані послідовності звичайно вирівнюють за способом, який дає найбільший збіг між послідовностями. Одним з прикладів комп'ютерної програми, яка може використовуватися для визначення відсотка ідентичності, є пакет програм осо, який включає САР (Оемегеєих еї а!., 1984, Мисі. Асіа Рез. 12:387; Сепеїйсв Сотршиег СтоиМр,
МОпімегейу ої М/івсопвзіп, Мадібзоп, УМ). Комп'ютерний алгоритм САР використовується для вирівнювання двох поліпептидів або полінуклеотидів, для яких повинен бути визначений відсоток ідентичності послідовностей. Послідовності вирівнюють для оптимальної відповідності відповідної амінокислоти або нуклеотиду ("діапазон відповідності», що визначається за алгоритмом). штраф на внесення делеції у вирівнювання (який обчислюють як Зх середню діагональ, причому "середня діагональ" є середньою величиною діагоналі використовуваної матриці порівняння; "діагональ" -- це кількість балів або число, надане кожному ідеальному збігу амінокислот конкретною матрицею порівняння) і штраф на подовження делеції (який становить звичайно 1/10 від штрафу на внесення делеції у вирівнювання), а також матриця порівняння, наприклад, РАМ 250 або ВІ ОЗит 62, використовуються в поєднанні з алгоритмом.
У деяких варіантах стандартна матриця порівняння (див. Юаупої єї а!., 1978, Айав ої Ргоївїп
Зедиєпсе апа бігисіиге 5:345-352 щодо матриці порівняння РАМ 250; Непікої! єї а!., 1992, Ргос.
Май. Асай. сі. Ш.5.А. 89:10915-10919 щодо матриці порівняння ВіОБЗй т 62) також використовується алгоритмом.
Приклади параметрів, які можуть використовуватися для визначення відсотка ідентичності для поліпептидів або нуклеотидних послідовностей із застосуванням програми САР, є наступними: - Алгоритм: Мееаіетанп еї аї., 1970, 9. Мої. Віої. 48:443-453 - Матриця порівняння: ВГОЗит 62 від Непікої еї а/., 1992, вище - Штраф на пропуск у послідовності: 12 (але без штрафу на закінчення пропуску) - Штраф на подовження проміжку: 4 - Поріг подібності: 0
Деякі схеми вирівнювання для вирівнювання двох послідовностей амінокислот можуть приводити до відповідності тільки короткої ділянки двох послідовностей, і така невелика вирівняна ділянка може мати найвищий ступінь ідентичності послідовностей, навіть якщо відсутнє значуще співвідношення між двома повнорозмірними послідовностями. Відповідно, вибраний метод вирівнювання (програма САР) може бути скоректований, при бажанні, таким чином, щоб давати вирівнювання, в якому діапазони дорівнюють, щонайменше 50 або іншій кількості суміжних амінокислот цільового поліпептиду.
У даному описі двадцять традиційних (наприклад, природних) амінокислот і їх скорочення використовуються звичайним способом. Див. Іттипоіоду--А Зупіпевіз (2па Еайіоп, Е. 5. СоїШр апа 0. К. Огеп, Еа5., бБіпацег Авзосіаге5, Зипаепапа, Маз55. (1991)), яка включена до даного опису шляхом посилання для будь-якої мети. Стереоізомери (наприклад, ЮО-амінокислоти) двадцяти традиційних амінокислот, неприродні амінокислоти, такі як а,-дизаміщені амінокислоти, М-алкіламінокислоти, молочна кислота та інші нетрадиційні амінокислоти, також можуть бути придатними компонентами для поліпептидів за даним винаходом. Приклади нетрадиційних амінокислот включають: 4-гідроксипролін, у-карбоксиглутамат, 8-М, М,М- триметиллізин, є-М-ацетиллізин, О-фосфосерин, М-ацетилсерин, М-формілметіонін, 3- метилгістидин, 5-гідроксилізин, о-М-метиларгінін, та інші подібні амінокислоти і імінокислоти (наприклад, 4-гідроксипролін). У номенклатурі поліпептиду, використовуваній в даному описі, напрямок вліво є аміно-кінцевим напрямком, і напрямок вправо є карбокси-кінцевим напрямком, відповідно до стандартного використання і конвенції.
Так само, якщо не вказано інше, лівий кінець послідовностей одноланцюгового полінуклеотиду є 5" кінцем; напрямок вліво для послідовностей двохланцюгових полінуклеотидів позначається як 5" напрямок. Напрямок 5-3" додавання виникаючих транскриптів РНК позначається як напрямок транскрипції; ділянки послідовності на ланцюгу
ДНК з такою ж послідовністю, що і транскрипт РНК, які розташовані у напрямку 5" по відношенню до 5" кінця транскрипту РНК, позначаються як "розташовані проти ходу транскрипції;" ділянки послідовності на ланцюгу ДНК з такою ж послідовністю, що і РНК, які розташовані у напрямку 3" по відношенню до 3" кінця транскрипту РНК, позначаються як "розташовані по ходу транскрипції".
Консервативні заміни амінокислот можуть включити неприродні залишки амінокислот, які звичайно вводять хімічним синтезом пептидів замість синтезу в біологічних системах. Вони включають пептидоміметики та інші реверсовані або інвертовані форми амінокислотних фрагментів.
Природні залишки можна поділити на класи, на підставі загальних властивостей бічного ланцюга: 1) гідрофобні: норлейцин, Меї, Аа, маї, І еи, Пе; 2) нейтральні гідрофільні: Су, Зег, ТАг, Азп, Сп;
З) кислі: А5р, См; 4) основні: Нів, І ув, Аго; 5) залишки, які впливають на орієнтацію ланцюга: су, Рго; і 6) ароматичні: Тгр, Туг, Ріє.
Наприклад, неконсервативні заміни можуть включати обмін члена одного з цих класів на члена іншого класу. Такі замінені залишки можуть бути введені, наприклад, в ділянки людського антитіла, що гомологічні нелюдським антитілам, або в негомологічні ділянки молекули.
При введенні модифікацій в антигензв'язувальний білок або білок РОБ5КО, згідно деяким варіантам, може розглядатися індекс гідрофобності амінокислот. Кожній амінокислоті наданий індекс гідрофобності на базі її характеристик гідрофобності і заряду. Він становить: ізолейцин (14,5); валін (14,2); лейцин (13,8); фенілаланін (12,8); цистеїн/цистин (12,5); метіонін (1,9); аланін (1,8); гліцин (-0,4); треонін (-0,7); серин (-0,8); триптофан (-0,9); тирозин (-1,3); пролін (- 1,6); гістидин (-3,2); глутамат (-3,5); глутамін (-3,5); аспартат (-3,5); аспарагін (-3,5); лізин (-3,9); і аргінін (-4,5).
Важливе значення індексу гідрофобності амінокислот в забезпеченні біологічної функції взаємодії на білку відоме з рівня техніки. Куїе еї аї., У. Мої. Віо!., 157:105-131 (1982). Відомо, що деякі амінокислоти можуть бути замінені іншими амінокислотами з подібним індексом або балами гідрофобності, та все ж зберігають подібну біологічну активність. При введенні змін на підставі індексу гідрофобності, в деяких варіантах включена заміна амінокислот, індекси гідрофобності яких знаходяться в межах 52. У деяких варіантах включені такі, що знаходяться в межах 1, і в деяких варіантах включені такі, що знаходяться в межах 50,5.
Додатково, в рівні техніки визнано, що заміна подібних амінокислот може бути ефективно здійснена на підставі гідрофільності, особливо, якщо створений таким чином біологічно функціональний білок або пептид призначений для застосування в імунологічних варіантах, як у даному випадку. У деяких варіантах найбільша локальна середня величина гідрофільності білка, визначувана за гідрофільністю суміжних амінокислот, корелює з його імуногенністю і антигенністю, тобто, з біологічною властивістю білка.
Наступні значення гідрофільності надані даним залишкам амінокислот: аргінін (ї3,0); лізин (13,0); аспартат (43,01); глутамат (43,01); серин (10,3); аспарагін (10,2); глутамін (10,2); гліцин (0); треонін (-0,4); пролін (-0,5:41); аланін (-0,5); гістидин (-0,5); цистеїн (-1,0); метіонін (-1,3); валін (-1,5); лейцин (-1,8); ізолейцин (-1,8); тирозин (-2,3); фенілаланін (-2,5) і триптофан (-3,4).
При введенні модифікацій на підставі подібних значень гідрофільності, в деяких варіантах включена заміна амінокислот, значення гідрофільності яких знаходяться в межах 52, в деяких варіантах включені такі, що знаходяться в межах 51, і в деяких варіантах включені такі, що знаходяться в межах ж0,5. Додатково можна ідентифікувати оепітопи з первинних послідовностей амінокислот на підставі гідрофільності. Дані ділянки також позначаються як "ключові ділянки епітопу".
Приклади замін амінокислот наведені в табл. 1.
Таблиця 1
Заміни амінокислот
Ше 77777777 |беш, Ма, МебАа,Рпе,норлейцин Ще /-:/ б Ф
Ще 77711111 |норлейцин,йе, Ма, МебАіа, Рпеї Пе /:/:0С:/(/ ЙО п, Авп
Термін "похідне" позначає молекулу, яка містить хімічну модифікацію, окрім вставки, делеції або заміни амінокислот (або нуклеїнових кислот). У деяких варіантах похідні містять ковалентні модифікації, зокрема, не обмежуючись ними, хімічний зв'язок із полімерами, ліпідами або
Зо іншими органічними або неорганічними фрагментами. У деяких варіантах хімічно модифікований антигензв'язувальний білок може мати більший період напіввиведення з кровотоку, ніж антигензв'язувальний білок, який хімічно не модифікований. У деяких варіантах хімічно модифікований антигензв'язувальний білок може володіти покращеною здатністю до націлювання на бажані клітини, тканини та/або органи. У деяких варіантах похідне антигензв'язувального білка ковалентно модифіковане таким чином, щоб містити один або більше приєднаних водорозчинних полімерних фрагментів, зокрема, не обмежуючись ними, поліетиленгліколь, поліоксиетиленгліколь або поліпропіленгліколь. Див., наприклад, патенти
США МоМо 4,640,835, 4,496,689, 4,301,144, 4,670,417, 4,791,192 і 4,179,337. У деяких варіантах похідне антигензв'язувального білка містить один або більше полімерів, зокрема, не обмежуючись ними, монометоксиполіетиленгліколь, декстран, целюлоза або інші полімери на основі вуглеводів, полі-(М-вінілпіролідон)-поліетиленгліколь, гомополімери пропіленгліколю, співполімер поліпропіленоксиду/етиленоксиду, поліоксиетильовані поліоли (наприклад, гліцерин) і полівініловий спирт, а також суміші таких полімерів.
У деяких варіантах похідне ковалентно модифіковане субодиницями поліетиленгліколю (ПЕГ). У деяких варіантах один або більше водорозчинних полімерів приєднані в одному або більше конкретних положень, наприклад, на аміно-кінці похідного. У деяких варіантах один або більше розчинних у воді полімерів випадковим чином приєднані до одного або більше бічних ланцюгів похідного. У деяких варіантах ПЕГ використовується для покращення терапевтичної ємності антигензв'язувального білка. У деяких варіантах ПЕГ використовується для покращення терапевтичної ємності гуманізованого антитіла. Деякі з таких способів обговорюються, наприклад, в патенті США 6,133,426, який, таким чином, включений шляхом посилання для будь-якої мети.
Аналоги пептидів звичайно застосовуються у фармацевтичній промисловості як непептидні лікарські засоби із властивостями, аналогічними пептиду-шаблону. Такі види непептидних сполук називаються "міметиками пептидів" або "пептидоміметиками". Раиспеге, -., Адм. ЮОгид
Вез., 15:29 (1986); Мебрег 4. Егеідіпдег, ТІМ5, р. 392 (1985); і Емапз еї аї., У. Мед. Спет., 30:1229 (1987), які включені до даного опису шляхом посилання для будь-якої мети. Такі сполуки часто розробляють за допомогою комп'ютеризованого молекулярного моделювання.
Пептидоміметики, структурно подібні до терапевтично придатних пептидів, можуть застосовуватися для одержання подібного терапевтичного або профілактичного ефекту.
Загалом, пептидоміметики структурно подібні до зразкового поліпептиду (тобто, поліпептиду, який володіє біохімічною властивістю або фармакологічною активністю), такого як людське антитіло, але в них один або більше пептидних зв'язків, необов'язково замінені зв'язком, вибраним із: -- 0Н2МН--, -- СНг5--, --СН2-СНе--, -- СОН-СН-(цис і транс), --СОСН»--, - СН(ОН)СНе-- і - -СНа5О--, за способами, добре відомими з рівня техніки. У деяких варіантах може використовуватися систематична заміна однієї або більше амінокислот консенсусної послідовності Ю-амінокислотою такого ж типу (наприклад, ЮО-лізин замість І-лізину), щоб генерувати більш стійкі пептиди. Крім того, обмежені пептиди, що містять консенсусну послідовність або істотною мірою ідентичну варіацію консенсусної послідовності, можуть генеруватися за способами, відомими з рівня техніки (Кі2о апа Сіегазсп, Апп. Кем. Віоспет., 61:387 (1992), включена до даного опису шляхом посилання для будь-якої мети); наприклад, шляхом додавання внутрішніх залишків цистеїну, здатних до утворення внутрішньомолекулярних дисульфідних містків, які циклізують пептид.
Термін "природний", використовуваний в описі у зв'язку з біологічними матеріалами, такими як поліпептиди, нуклеїнові кислоти, клітини-хазяї, тощо, позначає матеріали, які знайдені в природі, або форму матеріалів, яка знайдена в природі. "Антигензв'язувальний білок (АЗБ) у даному описі позначає будь-який білок, який зв'язується із вказаним антигеном-мішенню. У даній заявці вказаний антиген-мішень є білком
РСБКУ або його фрагментом. "Антигензв'язувальний білок" включає, не обмежуючись ними, антитіла і їх відповідальні за зв'язування частини, такі як імунологічно функціональні фрагменти.
Пептитіла є іншим прикладом антигензв'язувальних білків. У даному описі термін "імунологічно функціональний фрагмент" (або просто "фрагмент") антитіла або ланцюга імуноглобуліну (важкого або легкого ланцюга) антигензв'язувального білка позначає різновид антигензв'язувального білка, що містить частину (незалежно від того, яким чином така частина одержана або синтезована) антитіла, в якій відсутня, щонайменше частина амінокислот, присутніх в повнорозмірному ланцюгу, але яка все ж таки здатна специфічно зв'язуватися з антигеном. Такі фрагменти біологічно активні в тому значенні, що вони зв'язуються з антигеном- мішенню і можуть конкурувати з іншими антигензв'язувальними білками, зокрема, інтактними антитілами, за зв'язування з даним епітопом. У деяких варіантах фрагменти є нейтралізуючими фрагментами. У деяких варіантах фрагменти можуть блокувати або знижувати ймовірність взаємодії між ЛЛНЩЕР і РОЗКОУ. В одному з аспектів такий фрагмент зберігає, щонайменше один
СОК, присутній в повнорозмірному легкому або важкому ланцюгу, і в деяких варіантах буде бо містити одинарний важкий ланцюг та/або легкий ланцюг або його частину. Такі біологічно активні фрагменти можуть бути одержані за методами рекомбінації ДНК, або можуть бути одержані ферментним або хімічним розщепленням антигензв'язувальних білків, зокрема, інтактних антитіл. Імунологічно функціональні фрагменти імуноглобуліну включають, не обмежуючись ними, Раб, діатіло (варіабельну ділянку важкого ланцюга на тому ж поліпептиді, що і варіабельна ділянка легкого ланцюга, сполучені коротким пептидним лінкером, занадто коротким, щоб дозволити парування між двома доменами на одному ланцюгу), Бар", Е(ар")», Ем, доменні антитіла та одноланцюгові антитіла, і може походити з будь-якого джерела, що належить до ссавців, зокрема, але, не обмежуючись ними, людина, миша, щур, верблюд або кролик. Крім того, передбачається, що функціональна частина антигензв'язувальних білків, розкрита в даному описі, наприклад, один або більше СОК, може бути ковалентно з'єднана з другим білююм або молекулою невеликого розміру, для одержання терапевтичного агента, спрямованого на конкретну мішень в організмі, який володіє біфункціональними терапевтичними властивостями або тривалим періодом напіввиведення із сироватки. Як буде зрозуміло фахівцю в даній галузі, антигензв'язувальний білок може містити небілкові компоненти. У деяких розділах даного опису, приклади АЗБ описані в термінах "число/літера/число" (наприклад, 25А7). У цих випадках, точна назва позначає конкретне антитіло. Тобто, антигензв'язувальний білок під назвою 25А7 не обов'язково є таким же, як антитіло під назвою 25А7.1 (якщо тільки в описі вони явно не позначені як однакові, наприклад, 25А7 і 25А7.3). Як буде зрозуміло фахівцю в даній галузі, в деяких варіантах ЛЛНЩЕР не є антигензв'язувальним білком. У деяких варіантах відповідальні за зв'язування підрозділи
ЛІНІЩР не є антигензв'язувальними білками, наприклад, ЕбСЕа. У деяких варіантах інші молекули, які проводять сигнал РСОБЗКОУО іп мімо, не є антигензв'язувальними білками. Такі варіанти будуть явно ідентифіковані відповідним чином.
Деякі антигензв'язувальні білки, описані в даному описі, є антитілами або походять від антитіл. У деяких варіантах поліпептидна структура антигензв'язувальних білків базується на антитілах, зокрема, не обмежуючись ними, моноклональних антитілах, антитілах з подвійною специфічністю, мінітілах, доменних антитілах, синтетичних антитілах (що іноді позначаються в даному описі як "міметичні антитіла"), химерних антитілах, гуманізованих антитілах, людських антитілах, злитих антитілах (що іноді позначаються в даному описі як "кон'югати антитіл") та їх фрагментах, відповідно. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок містить або складається з авімерів (міцно зв'язаний пептид). Такі різноманітні антигензв'язувальні білки додатково описані в даному описі.
Ділянка "Ес" містить два фрагменти важкого ланцюга, що містять домени Сні і Сн2 антитіла.
Два фрагменти важкого ланцюга утримуються разом двома або більше дисульфідними зв'язками і гідрофобними взаємодіями доменів Снз. "Фрагмент Рар" містить один легкий ланцюг і Сні та варіабельні ділянки одного важкого ланцюга. Важкий ланцюг молекули Бар не може утворити дисульфідний зв'язок з іншою молекулою важкого ланцюга. "Фрагмент Рар" містить один легкий ланцюг і частину одного важкого ланцюга, який містить домен МН і домен Сні, а також ділянку між доменами Сні і Сн2, таким чином, що міжланцюговий дисульфідний зв'язок може бути утворений між двома важкими ланцюгами двох фрагментів Раб", з утворенням молекули Е(ар")». "Фрагмент Е(ар")2 містить два легкі ланцюги і два важкі ланцюги, що містять частину константної ділянки між доменами Сні і Сн2, таким чином, що міжланцюговий дисульфідний зв'язок утворюється між двома важкими ланцюгами. Фрагмент Е(арб")», таким чином, складається із двох фрагментів Раб", які утримуються разом дисульфідним зв'язком між двома важкими ланцюгами. "Ділянка РУ" містить варіабельні ділянки як важкого, так і легкого ланцюгів, але не містить константних ділянок. "Одноланцюгові антитіла" -- це молекули Ем, в яких варіабельні ділянки важкого і легкого ланцюга сполучені гнучким лінкером, щоб утворити єдиний поліпептидний ланцюг, який формує антигензв'язувальну ділянку. Одноланцюгові антитіла обговорюються детально в Публікації
Міжнародної патентної заявки УМО 88/01649 і патентах США МоМо 4,946,778 і 5,260,203, розкриття яких включене шляхом посилання. "Доменне антитіло" є імунологічно функціональним фрагментом імуноглобуліну, що містить тільки варіабельну ділянку важкого ланцюга або варіабельну ділянку легкого ланцюга. В деяких випадках, дві або більше ділянок Мн ковалентно сполучені пептидним лінкером з утворенням двохвалентного доменного антитіла. Дві ділянки Мн двохвалентного доменного антитіла можуть бути націлені на один і той же або різні антигени.
"Двохвалентний антигензв'язувальний білок" або "двохвалентне антитіло" містить два сайти зв'язування з антигеном. В деяких випадках, два сайти зв'язування володіють специфічністю відносно одного і того ж антигену. Двохвалентні антигензв'язувальні білки і двохвалентні антитіла можуть бути біспецифічними, див. нижче. Двохвалентне антитіло, окрім "поліспецифічного" або "поліфункціонального" антитіла, в деяких варіантах звичайно розуміють як таке, що містить ідентичні сайти зв'язування. "Поліспецифічний антигензв'язувальний білок" або "поліспецифічне антитіло" націлено на більш ніж один антиген або епітоп. "Біспецифічний", "з подвійною специфічністю" або "біфункціональний" антигензв'язувальний білок або антитіло являє собою гібридний антигензв'язувальний білок або антитіло, відповідно, що містить два різних сайти зв'язування з антигеном. Антигензв'язувальні білки і антитіла з подвійною специфічністю є різновидами поліспецифічного антигензв'язувального білка антитіла і можуть бути одержані за різноманітними способами, зокрема, але, не обмежуючись ними, злиття гібридом або з'єднання фрагментів Бар". Див., наприклад, бопдвіміаії апа І асптапп, 1990, Сііп. Ехр. Іттипої. 79:315-321; Козів!пу еї а!., 1992, у. Іттипої. 148:1547-1553. Два сайти зв'язування антигензв'язувального білка або антитіла з подвійною специфічністю зв'язуватимуться з двома різними епітопами, які можуть бути розташовані на одному і тому ж або різних білках-мішенях.
Говорять, що антигензв'язувальний білок "специфічно зв'язується" з антигеном-мішенню, якщо константа дисоціації (Ка) становить х 1077 М. АЗБ специфічно зв'язується з антигеном із "високою спорідненістю", якщо Ка становить х 5 х 10 М, і з "дуже високою спорідненістю", якщо
Ка становить х 5 х 1079 М. В одному з варіантів Ка АЗБ становить х 109 М. В одному з варіантів швидкість дисоціації становить « 1 х 105, В інших варіантах АЗБ зв'язуватимуться з РОБКУ людини із Ка від приблизно 1079 М до 10-13 М, і ще в одному варіанті АЗБ зв'язуватимуться з Ка х 5 х 1079, Як буде зрозуміло фахівцю в даній галузі, в деяких варіантах будь-які або всі антигензв'язувальні фрагменти можуть специфічно зв'язуватися із РСБКО.
Антигензв'язувальний білок є "селективним", якщо він зв'язується з однією мішенню міцніше, ніж він зв'язується з другою мішенню. "Антигензв'язувальна ділянка" позначає білок або частину білка, яка специфічно зв'язується
Зо з вказаним антигеном (наприклад, паратопом). Наприклад, така частина антигензв'язувального білка, яка містить залишки амінокислот, що взаємодіють з антигеном і забезпечують антигензв'язувальному білку його специфічність і спорідненість з антигеном, позначається як "антигензв'язувальна ділянка". Антигензв'язувальна ділянка звичайно містить одну або більше "комплементарних ділянок зв'язування" ("СОК"). Деякі антигензв'язувальні ділянки також містять одну або більше "каркасних" ділянок. "СОК" є послідовністю амінокислот, яка сприяє специфічності зв'язування і спорідненості з антигеном. "Каркасні" ділянки можуть сприяти збереженню відповідної конформації СОМ таким чином, щоб сприяти зв'язуванню між антигензв'язувальною ділянкою і антигеном. Структурно, каркасні ділянки можуть бути розміщені в антитілах між СОК. Приклади каркасних і СОК ділянок показані на фіг. 2А-30,
З3С0ОСО0-3999У. У деяких варіантах послідовності СОМ для легкого ланцюга антитіла З3Вб є наступними: СОВІ ТІ 55Д1:и555ЕМО (5ЕО ІЮ МО: 279); СОВН2 Ммотасімавкає (5ЕО ІЮО Мо: 280); СОКЗ САОНОБОТМЕММУМ (5ЕБЕО ІЮО МО: 281), і каркасні ділянки (ЕК) є наступними: ЕК1
ОРМІ ТОРІ ЕАБАБІ САБМТІ ТО (5ЕО ІЮ МО: 282); ЕВ2 ММООВРИаКаРАЕЕММЕА (5ЕО ІО МО: 283);
ЕКЗ СІРОКЕЗМІ ОЇ МЕМ ТІКМІОСЕЕСЕЗОМНС (ЗЕО ІО МО: 284); і ЕК4 ЕОСОСТКІ ТМ. (ЗЕО І
МО: 285).
У деяких аспектах пропонуються рекомбінантні антигензв'язувальні білки, які зв'язуються з
РОКУ, наприклад, людським РСБКО. У даному контексті "рекомбінантний антигензв'язувальний білок" є білюом, одержаним із застосуванням рекомбінантних методів, тобто, за допомогою експресії рекомбінантної нуклеїнової кислоти, як описано в даному описі.
БО Способи і методи одержання рекомбінантних білків добре відомі з рівня техніки.
Термін "антитіло" позначає інтактний імуноглобулін будь-якого ізотипу або його фрагмент, який може конкурувати з інтактним антитілом за специфічне зв'язування з антигеном-мішенню, і включає, наприклад, химерні, гуманізовані, повністю людські і біспецифічні антитіла. "Антитіло" є різновидом антигензв'язувального білка. Інтактне антитіло, загалом, містить, щонайменше два повнорозмірних важких ланцюги і два повнорозмірних легких ланцюги, але в деяких випадках може містити менше ланцюгів, наприклад, антитіла, що зустрічаються від природи у верблюдових, які можуть містити тільки важкі ланцюги. Антитіла можуть походити виключно з єдиного джерела, або можуть бути "химерними", тобто, різні частини антитіла можуть походити від двох різних антитіл, як додатково описано нижче. Антигензв'язувальні білки, антитіла або бо фрагменти зв'язування можуть бути продуковані в гібридомах, методами рекомбінантних ДНК, а
Зо також ферментним або хімічним розщепленням інтактних антитіл. Якщо не вказано інше, термін "антитіло" включає, на додаток до антитіл, що містять два повнорозмірних важких ланцюги і два повнорозмірних легких ланцюги, їх похідні, варіанти, фрагменти і мутєїни, приклади яких описані нижче. До того ж, якщо тільки це не виключено явно, антитіла включають моноклональні антитіла, антитіла з подвійною специфічністю (біспецифічні), мінітіла, доменні антитіла, синтетичні антитіла (іноді позначені в даному описі як "міметики антитіла"), химерні антитіла, гуманізовані антитіла, людські антитіла, злиті антитіла (іноді позначені в даному описі, як "кон'югат антитіла") та їх фрагменти, відповідно. У деяких варіантах термін також включає пептитіла.
Природні структурні одиниці антитіла звичайно складають тетрамер. Кожен такий тетрамер звичайно складається з двох ідентичних пар поліпептидних ланцюгів, причому кожна пара містить один повнорозмірний "легкий" (у деяких варіантах приблизно 25 кДа) і один повнорозмірний "важкий" ланцюг (у деяких варіантах приблизно 50-70 кДа). Аміно-кінцева частина кожного ланцюга звичайно містить варіабельну ділянку розміром приблизно 100-110 або більше амінокислот, які звичайно відповідальні за розпізнавання антигену. Карбокси-кінцева частина кожного ланцюга звичайно визначає константну ділянку, яка може бути відповідальною за ефекторну функцію. Людські легкі ланцюги звичайно класифікуються, як легкі ланцюги капа і лямбда. Важкі ланцюги звичайно класифікуються як мю, дельта, гама, альфа або іпсилон, і визначають ізотип антитіла як ЗМ, 940, Ідс, ІдДА ії ЗЕ, відповідно. (3 включає декілька підкласів, зокрема, не обмежуючись ними, Ідс1, Ідс2, ІдОЗ і Ідс4. (ДМ включає підкласи, зокрема, не обмежуючись ними, І9ДМІ1 і І(9М2. ІдА також поділяється на підкласи, зокрема, але, не обмежуючись ними, ІдА1 і ІЧА2. В межах повнорозмірних легких і важких ланцюгів, звичайно, варіабельні і константні ділянки з'єднуються ділянкою ")" завдовжки приблизно 12 або більше амінокислот, при тому, що важкий ланцюг також містить ділянку "ОО" завдовжки ще приблизно 10 амінокислот. Див., наприклад, Гипдатепіа! Іттипоіоду, Си. 7 (Раш, МУ., ед.,, 2пй єд. Вамеп
Ргез5, М.У. (1989)) (включена шляхом посилання в повному обсязі для всіх цілей). Варіабельні ділянки кожної пари легкий/важкий ланцюги звичайно формують сайт зв'язування з антигеном.
Варіабельні ділянки звичайно демонструють таку ж загальну структуру з точки зору консервативних каркасних ділянок (ЕК), сполучених трьома гіперваріабельними ділянками, які також називають ділянками, що визначають комплементарність, або СОК. СОЕ двох ланцюгів кожної пари звичайно вирівняні каркасними ділянками, що може дозволити зв'язування з конкретним епітопом. Від М-кінця до С-кінця, варіабельні ділянки як легкого, так і важкого ланцюга звичайно містять домени ЕК!, СОКІ, ЕК2, СОК2г, ЕКЗ, СОКЗ і ЕК4. Віднесення амінокислот до кожного з доменів звичайно здійснюють відповідно до визначень КаБбаї зедшиепсез ої Ргоїеїп5 ої Іттипо!одісаї Іпіегезі (Мабопаї Іпзійшез ої Неай, Веїпезада, Ма. (1987 і 1991)), або Споїпіа 8. І е5К, 9У. Мої. Віо!., 196:901-917 (1987); Споїніа єї аї., Майте, 342:878-883 (1989).
У деяких варіантах важкий ланцюг антитіла зв'язується з антигеном за відсутності легкого ланцюга антитіла. У деяких варіантах легкий ланцюг антитіла зв'язується з антигеном за відсутності важкого ланцюга антитіла. У деяких варіантах ділянка зв'язування антитіла зв'язується з антигеном за відсутності легкого ланцюга антитіла. У деяких варіантах ділянка зв'язування антитіла зв'язується з антигеном за відсутності важкого ланцюга антитіла. У деяких варіантах окрема варіабельна ділянка специфічно зв'язується з антигеном за відсутності інших варіабельних ділянок.
У деяких варіантах визначальне зображення СОК та ідентифікацію залишків, що складають сайт зв'язування з антитілом, здійснюють шляхом прояснення структури антитіла та/або прояснення структури комплексу антитіло-ліганд. У деяких варіантах це може бути здійснене за будь-яким з різноманітних способів, відомих фахівцям в даній галузі, таких як рентгенівська кристалографія. У деяких варіантах різноманітні методи аналізу можуть застосовуватися для ідентифікації або апроксимації ділянок СОМ. Приклади таких способів включають, не обмежуючись ними, визначення Кабраї, визначення СПоїйіа, визначення АБМ і контактне визначення.
Визначення Караї є стандартом для нумерації залишків в антитілі і звичайно використовується, щоб ідентифікувати ділянки СОК. Див., наприклад, допйпзоп 2 Ми, Мисівєїс
Асід5 Нез., 28: 214-868 (2000). Визначення Споїйіа подібно до визначення КаБбаї, але визначення
СпоїШпіа приймає до уваги положення деяких структурних ділянок петлі. Див., наприклад, Споїніа еї аї., У. Мої. Віої!., 196: 901-17 (1986); Споїніа єї а)ї., Майшге, 342: 877-83 (1989). Визначення АБМ використовує об'єднаний набір комп'ютерних програм, створених Оксфордською Молекулярною
Групою (Охтога МоїІесшаг Сгоир), які моделюють структуру антитіла. Див., наприклад, Мапіп єї 60 аІ,, Ргос Маї! Асад 5сі (05А), 86:9268-9272 (1989); "АБМП. А Сотршег Ргодгат їтог Модеїїпда
Магіабіе Кедіоп5 ої Апіїбодіе5, " Охіога, ОК; Охіога МоїІесшаг, а. Визначення АБМ моделює третинну структуру антитіла на базі первинної послідовності, з використанням комбінації баз даних знань і способів аб іпіїо, таких як описані Затиагаїа еї аї., "АБ Іпйо Ргоївїп Бігисішге
Ргедісноп О5іпд а Сотбіпей Ніегагопіса! Арргоасі", у РКОТЕЇМ5, Бігисіиге, Еипсйоп апа Сепеїїс5 зиррі., 3:194-198 (1999). Контактне визначення базується на аналізі доступних складних кристалічних структур. Див., наприклад, МасСаїІшт еї аї., у). Мої. Віої., 5:732-45 (1996).
Згідно конвенції, ділянки СОК у важкому ланцюгу звичайно позначаються як НІ, Н2 і НЗ, Її нумеруються послідовно в напрямку від аміно-кінця до карбокси-кінця. Ділянки СОК в легкому ланцюгу звичайно позначаються як 11, 12 і І З, і нумеруються послідовно в напрямку від аміно- кінця до карбокси-кінця.
Термін "легкий ланцюг" включає повнорозмірний легкий ланцюг та його фрагменти, що містять достатню послідовність варіабельної ділянки, щоб забезпечити специфічність зв'язування. Повнорозмірний легкий ланцюг містить домен варіабельної ділянки, Мі, і домен константної ділянки, Сі. Домен варіабельної ділянки легкого ланцюга знаходиться на аміно-кінці поліпептиду. Легкі ланцюги включають ланцюги капа і ланцюги лямбда.
Термін "важкий ланцюг" включає повнорозмірний важкий ланцюг і його фрагменти, що містять достатню послідовність варіабельної ділянки, щоб забезпечити специфічність зв'язування. Повнорозмірний важкий ланцюг містить домен варіабельної ділянки, Мн, і три домени константної ділянки, Сні, Сн2 і Сн3. Домен Мн розташований на аміно-кінці поліпептиду, і домени Сн розташовані на карбокси-кінці, причому Сн3 розташований найближче до карбокси- кінця поліпептиду. Важкі ланцюги можуть відноситися до будь-якого ізотипу, зокрема, Ідс (включаючи підтипи ІдС1, Ідс2, ДОЗ і Ідея), ІА (включаючи підтипи ІДА1 і ІДА2), І9М і ЧЕ.
Біспецифічне або біфункціональне антитіло звичайно є штучним гібридним антитілом, що містить дві різні пари важкий/легкий ланцюг і два різних сайти зв'язування. Антитіла з подвійною специфічністю можуть бути одержані за різноманітними способами, зокрема, але, не обмежуючись ними, злиття гібридом або з'єднання фрагментів Раб". Див., наприклад, бБопавіміїаї еї аї., Сіп. Ехр. Іттипо)., 79: 315-321 (1990); КозівіІпу еї аї., у. Іттипої., 148:1547-1553 (1992).
Деякі види ссавців також продукують антитіла, що містять тільки один важкий ланцюг.
Кожен індивідуальний ланцюг імуноглобуліну звичайно складається з декількох "Імуноглобулінових доменів", кожен з яких складається грубо із 90-110 амінокислот і володіє характерним зразком згортання. Ці домени є базовими одиницями, із яких скомпоновані поліпептиди антитіла. У людини, ізотипи ІдА і ДО містять чотири важких ланцюги і чотири легких ланцюги; ізотипи ДС і ІДЕ містять два важких ланцюги і два легких ланцюги; та ізотип Ї9М містить п'ять важких ланцюгів і п'ять легких ланцюгів. Ділянка С важкого ланцюга звичайно містить один або більше доменів, які можуть бути відповідальними за ефекторну функцію.
Кількість доменів константної ділянки важкого ланцюга залежатиме від ізотипу. Важкі ланцюги
ІС, наприклад, містять три домени ділянки С, відомі як Сні, Сн2 і Сн3. Антитіла, що пропонуються, можуть відноситися до будь-якого з цих ізотипів і підтипів. У деяких варіантах даного винаходу, анти-РО5КЗУ антитіло належить до підтипу Ідс2 або Ідсаі.
Термін "варіабельна ділянка" або "варіабельний домен" позначає частину легкого та/або важкого ланцюгів антитіла, що звичайно містить приблизно 120-130 аміно-кінцевих амінокислот у важкому ланцюгу і приблизно 100-110 аміно-кінцевих амінокислот в легкому ланцюгу. У деяких варіантах послідовність амінокислот варіабельних ділянок різноманітних антитіл значно відрізняється навіть серед антитіл одного виду. Варіабельна ділянка антитіла звичайно визначає специфічність конкретного антитіла відносно його мішені
Термін "нейтралізуючий антигензв'язувальний білок" або "нейтралізуюче антитіло" позначає антигензв'язувальний білок або антитіло, відповідно, яке зв'язується з лігандом і попереджає або зменшує біологічну дію такого ліганду. Це може бути здійснено, наприклад, шляхом безпосереднього блокування сайта зв'язування на ліганді або шляхом зв'язування з лігандом і зміни здатності ліганду до зв'язування через непрямі засоби (такі як структурні або енергетичні модифікації в ліганди). У деяких варіантах термін може також позначати антигензв'язувальний білок, який перешкоджає здійсненню біологічної функції білка, з яким він зв'язаний. При оцінці зв'язування та/або специфічності антигензв'язувального білка, наприклад, антитіла або його імунологічно функціонального фрагмента, антитіло або фрагмент може істотною мірою перешкоджати зв'язуванню ліганда з його партнером по зв'язуванню, коли надлишок антитіла зменшує кількість партнера по зв'язуванню, пов'язаного з лігандом, щонайменше приблизно на 1-20, 20-30 ув, 30-40 95, 40-50 Ув, 50-60 95, 60-70 95, 70-80 Уо, 80-85 95, 85-90 95, 90-95 о, 95-97 б, 97-98 95, 98-99 95 або більше (за даними аналізу конкурентного зв'язування іп міго). У деяких варіантах, у випадку антигензв'язувальних білків проти РО5КО, така нейтралізуюча молекула бо може знижувати здатність РОБКОУ зв'язуватися з ЛІНЩР. У деяких варіантах нейтралізуюча здатність характеризується та/або описується за допомогою конкурентного аналізу. У деяких варіантах нейтралізуюча здатність описана в термінах значення ІСво або ЕСв5о. У деяких варіантах АЗБ 2782, 1ЗНІ, 1385 і 3С4 є не нейтралізуючими АЗБ, 386, 9С9 і 31А4 є слабкими нейтралізаторами, та інші АЗБ в табл. 2 є високоактивними нейтралізаторами. У деяких варіантах антитіла або антигензв'язувальні білки нейтралізують зв'язування із РОЗКО і перешкоджають зв'язуванню РОЗКОУ із ЛЛНЩЕР (або знижують здатність РО5КО зв'язуватися із
ЛІИНЩР). У деяких варіантах антитіла або АЗБ нейтралізують зв'язування з РОЗКО, і хоча вони все ж таки дозволяють РСОБКОУ зв'язуватися із ЛІНІЩЩР, але попереджають або зменшують опосередкований РОБКУ розклад ЛІНІЩР. Таким чином, в деяких варіантах нейтралізуючий
АЗБ або антитіло все ж таки може дозволяти зв'язування РОСЗКО/ЛИНЩЕР, але попереджатиме (або зменшуватиме) подальший розклад ЛЛНЩЕР за участю РОЗКОУ.
Термін "мішень" позначає молекулу або частину молекули, здатну до зв'язування з антигензв'язувальним білком. У деяких варіантах мішень може містити один або більше епітопів. У деяких варіантах мішень є антигеном. Використання терміну "антиген" у виразі "антигензв'язувальний білок" просто означає, що білкова послідовність, яка містить антиген, може зв'язуватися з антитілом. У даному контексті це не вимагає, щоб білок був чужорідним, або щоб він володів здатністю індукувати імунну реакцію.
Термін "конкурувати" в контексті антигензв'язувальних білків (наприклад, нейтралізуючих антигензв'язувальних білків або нейтралізуючих антитіл), які конкурують за один і той же епітоп, позначає конкуренцію між антигензв'язувальними білками, що визначається аналізом, в якому антигензв'язувальний білок (наприклад, антитіло або його імунологічно функціональний фрагмент) попереджає або інгібує (наприклад, зменшує) специфічне зв'язування референтного антигензв'язувального білка (наприклад, ліганду або референтного антитіла) із спільним антигеном (наприклад, РО5КОУ або його фрагментом). Численні види конкурентних аналізів зв'язування можуть використовуватися для визначення того, чи конкурує один з антигензв'язувальних білків з іншим, наприклад: твердофазний прямий або непрямий радіоїмуноаналіз (РІА), твердофазний прямий або непрямий імуноферментний аналіз (ІФА), сендвічевий конкурентний аналіз (див., наприклад, єїапії єї аі., 1983, Меїподзв іп Епгутоіоаду 9:242-253); твердофазний непрямий ІФА біотин-авідин (див., наприклад, КіїКіапо еї аї., 1986, 9.
Зо Іттипої. 137:3614-3619), твердофазний аналіз із прямою міткою, твердофазний сендвічевий аналіз із прямою міткою (див., наприклад, Напом/ апа Іапе, 1988, Апііродіе5, А Гарогафогу
Мапиаї, Соїа 5ргіпд Натог Ргев5); твердофазний РІА із прямою міткою з використанням мітки І- 125 (див., наприклад, Мотгєї єї аї!., 1988, Моїес. Іттипої. 25:7-15); твердофазний спрямований
ІФА біотин-авідин (див., наприклад, Спецйпа, єї аї!., 1990, Мігоїоду 176:546-552); і РІА з прямою міткою (МоІдепнацег єї а!., 1990, Зсапа. У). Іттипої. 32:77-82). Звичайно, такий аналіз проводять з використанням очищеного антигену, пов'язаного з твердою поверхнею або клітинами, яки несуть будь-яке із наступного: немічений досліджуваний антигензв'язувальний білок і мічений референтний антигензв'язувальний білок. Конкурентне інгібування вимірюють шляхом визначення кількості мітки, пов'язаної з твердою поверхнею або клітинами, в присутності досліджуваного антигензв'язувального білка. Звичайно, досліджуваний антигензв'язувальний білок присутній в надлишку. Антигензв'язувальні білки, ідентифіковані конкурентним аналізом (конкуруючі антигензв'язувальні білки), включають антигензв'язувальні білки, які зв'язуються з тим же епітопом, що і референтні антигензв'язувальні білки, і антигензв'язувальні білки, які зв'язуються 3 суміжним епітопом, розташованим достатньою мірою проксимально по відношенню до епітопу, зв'язаного із референтним антигензв'язувальним білком, щоб забезпечити стеричні перешкоди. Додаткові подробиці щодо способів визначення конкурентного зв'язування запропоновані в прикладах даного опису. Звичайно, якщо конкуруючий антигензв'язувальний білок присутній в надлишку, він перешкоджатиме (наприклад, зменшуватиме) специфічне зв'язування референтного антигензв'язувального білка із спільним антигеном, щонайменше на 40-45 95, 45-50 95, 50-55 95, 55-60 95, 60-65 90, 65-70 95, 70-75 95 або 75 95 або більше. В деяких випадках, зв'язування інгібується, щонайменше на 80-85 95, 85-90 9, 90-95 95, 95-97 95 або 97 95 або більше.
Термін "антиген" позначає молекулу або частину молекули, здатну до зв'язування із селективним агентом зв'язування, таким як антигензв'язувальний білок (зокрема, наприклад, антитіло або його імунологічно функціональний фрагмент). У деяких варіантах антиген може застосовуватися у тварини для продукування антитіл, здатних до зв'язування із вказаним антигеном. Антиген може містити один або більше епітопів, здатних до взаємодії з різними антигензв'язувальними білками, наприклад, антитілами.
Термін "епітоп" включає будь-який детермінант, здатний до зв'язування з бо антигензв'язувальним білком, наприклад, антитілом або рецептором Т-клітини. Епітоп є ділянкою антигену, яка зв'язується з антигензв'язувальним білком, націленим на даний антиген, і якщо антиген є білком, то містить специфічні амінокислоти, які безпосередньо контактують з антигензв'язувальним білком. Найчастіше, епітопи розташовані на білках, але в деяких випадках можуть бути розташовані на інших видах молекул, таких як нуклеїнові кислоти.
Детермінанти епітопу можуть містити хімічно активні поверхневі угрупування молекул, такі як амінокислоти, бічні ланцюги цукрів, фосфорильні або сульфонільні групи, і можуть володіти специфічними характеристиками трьохвимірної структури та/або специфічними характеристиками заряду. Загалом, антитіла, специфічні відносно конкретного антигену-мішені, переважно розпізнаватимуть епітоп на антигені-мішені в складній суміші білків та/або макромолекул.
У даному описі "істотною мірою чистий" означає, що описані види молекул є домінуючими видами в даному контексті, тобто, в молярному співвідношенні їх більше, ніж будь-яких інших окремих видів в тій же суміші. У деяких варіантах, істотною мірою чиста молекула є композицією, в якій цільовий вид складає, щонайменше 50 95 (у молярному співвідношенні) від всіх присутніх видів макромолекул. В інших варіантах, істотною мірою чиста композиція буде містити, щонайменше 80 95, 85 95, 90 95, 95 95 або 99 95 від всіх присутніх в композиції видів макромолекул. В інших варіантах цільові види очищені до істотної однорідності, причому забруднюючі види не можуть бути знайдені в композиції звичайними методами виявлення, і, таким чином, композиція складається з єдиного знайденого виду макромолекул.
Термін "агент (засіб)" використовується в даному описі для позначення хімічної сполуки, суміші хімічних сполук, біологічної макромолекули або екстракту, одержаного з біологічних матеріалів.
У даному описі терміни "мітка" або "мічений" позначають введення детектованого маркера, наприклад, шляхом введення радіоміченої амінокислоти або прикріплення до поліпептиду біотинових фрагментів, які можуть бути знайдені за допомогою міченого авідину (наприклад, стрептавідину, що містить флуоресцентний маркер або володіє ферментною активністю, яка може бути знайдена оптичними або колориметричними методами). У деяких варіантах мітка або маркер також може бути терапевтичною. Різноманітні способи введення міток в поліпептиди і глікопротеїни відомі з рівня техніки і можуть застосовуватися. Приклади міток для поліпептидів включають, не обмежуючись ними, наступні: радіоізотопи або радіонукліди (наприклад, ЗН, "С,
М, 5, у Тс, Ти, 7125І, 191), флуоресцентні мітки (наприклад, ФІТЦ, родамін, лантанід фосфору), ферментні мітки (наприклад, пероксидаза хріну, В-галактозидаза, люцифераза, лужна фосфатаза), біотинільні групи, попередньо визначені епітопи поліпептиду, що розпізнаються вторинним репортером (наприклад, парні послідовності лейцинового зіпера, сайти зв'язування для вторинних антитіл, домени зв'язування з металом, мітки епітопу). У деяких варіантах мітки приєднуються за допомогою спейсерних гілок різної довжини для зменшення потенційних стеричних перешкод.
Термін "біологічний зразок" в даному описі включає, не обмежуючись ними, будь-яку кількість субстанції з організму живої істоти або у минулому живої істоти. Такі живі істоти включають, не обмежуючись ними, людей, мишей, мавп, щурів, кроликів та інших тварин. Такі субстанції включають, не обмежуючись ними, кров, сироватку, сечу, клітини, органи, тканини, кістку, кістковий мозок, лімфатичні вузли і шкіру.
Термін "композиція фармацевтичного агента" (або агент або лікарський засіб) в даному описі позначає хімічну сполуку, композицію, агент або лікарський засіб, здатний спричиняти бажаний терапевтичний ефект при введенні належним чином хворому. Це не обов'язково вимагає більш ніж одного виду інгредієнта.
Термін "терапевтично ефективна кількість" позначає деяку кількість антигензв'язувального білка проти РО5КУ для одержання терапевтичної реакції у ссавця. Такі терапевтично ефективні кількості легко визначаються середнім фахівцем в даній галузі.
Термін "модулятор" в даному описі позначає сполуку, яка змінює або модифікує активність або функцію молекули. Наприклад, модулятор може спричиняти зростання або зниження величини певного виду активності або функції молекули, порівняно з величиною виду активності або функції, спостережуваної за відсутності модулятора. У деяких варіантах модулятор є інгібітором, який зменшує величину, щонайменше одного виду активності або функцію молекули. Деякі приклади видів активності і функції молекули включають, не обмежуючись ними, спорідненість зв'язування, ферментну активність і перетворення сигналу. Деякі приклади інгібіторів включають, не обмежуючись ними, білки, пептиди, антитіла, пептитіла, вуглеводи або органічні молекули невеликого розміру. Пептитіла описані, наприклад, в патенті США 6,660,843 (відповідає заявці РСТ УМО 01/83525).
Терміни "пацієнт (хворий) і "суб'єкт" використовуються рівнозначним чином і включають людей та негуманоїдних тварин, зокрема, суб'єктів з формально діагностованими розладами, суб'єктів без формально розпізнаних розладів, суб'єктів, які одержують медичний догляд, суб'єктів, схильних до ризику розвитку розладів, тощо.
Терміни "лікувати" і "лікування" включають терапевтичне лікування, профілактичне лікування, і види застосування, при яких знижується ризик розвитку у суб'єкта розладу або інший фактор ризику. Лікування не вимагає повного вилікування розладу і включає варіанти, в яких воно зменшує симптоми або базові фактори ризику.
Термін "попереджати" не вимагає 100 95 усунення ймовірності події. Швидше, він означає, що ймовірність настання події знижується у присутності сполуки або способу.
Стандартні методи можуть застосовуватися для рекомбінантної ДНК, синтезу олігонуклеотидів, а також культури і трансформації тканини (наприклад, електропорація, ліпофекція). Ферментні реакції і способи очищення можуть бути здійснені у відповідності до специфікацій виробника, або як завжди прийнято в даній галузі, або як описано в даному описі.
Вищевикладені способи і методики можуть, в цілому, виконуватися відповідно до звичайних способів, добре відомих з рівня техніки, і як описано в різноманітних загальних і більше конкретних посиланнях, які цитуються і обговорюються в даному описі. Див., наприклад, затргоок еї аї!., МоіІесшіаг Сіопіпд: А Гарогаїогу Мапиаї (24 єд., Соїд 5ргіпуд Нагбог Іарогаїогу
Ргез5, Соїд бргіпд Нагрог, М.У. (1989)), яка включена до даного опису шляхом посилання для будь-якої мети. Якщо тільки не були запропоновані конкретні визначення, номенклатура, використовувана у зв'язку з, а також лабораторні методики і методи аналітичної хімії, синтетичної органічної хімії і медичної та фармацевтичної хімії, описані в даному описі, є добре відомими і звичайно вживаними в даній галузі. Стандартні процедури можуть застосовуватися для хімічного синтезу, хімічного аналізу, одержання, розробки і введення фармацевтичних композицій, а також лікування хворих.
АНТИГЕНЗВ'ЯЗУВАЛЬНІ БІЛКИ ПРОТИ РОЗКОУ
Пропротеїн конвертаза субтилізин кексин типу 9 (РСЗКО) -- це серинпротеаза, що приймає участь в регуляції рівнів білка рецептора ліпопротеїнів низької щільності (ЛОНЩР) (Нопоп еї аї., 2007; бЗеіїданй апа Ргаї 2007). РОСБЗКОУО є прогормон-пропротеїн конвертазою в родині
Зо серинпротеаз субтилізину (58) (Звідан сеї аї., 2003). Приклад послідовності амінокислот РЕСЗКУ людини представлений як ЗЕО ІЮ МО: 1 ї З на фіг ТА ("рго" домен білка показаний підкресленим) і фіг. 18 (сигнальна послідовність показана напівжирним зображенням шрифту, і рго домен підкреслений). Приклад послідовності, що кодує людський РОБКО, представлений як
ЗЕО І МО: 2 (фіг. 18). Як проілюстровано в даному описі, біли РОСЗКУ можуть також містити фрагменти повнорозмірного білка РОБ5КОУ. Структура білка РОЗКОУ була встановлена двома групами (Сиппіпопат еї аї., Маїиге Бігисіига! 5 МоїІесшаг Віоіоду, 2007 і Рірег еї аї., Бігисіиге, 15:1-8, 2007), обидва з яких включені до даного опису шляхом посилання в повному обсязі.
РСБКОУ містить сигнальну послідовність, М-кінцевий рго-домен, субтилізин-подібний каталітичний домен і С-кінцевий домен.
Антигензв'язувальні білки (АЗБ), які зв'язуються з РСБКОУ, зокрема, людським РОЗКО, запропоновані в даному описі. У деяких варіантах запропоновані антигензв'язувальні білки є поліпептидами, які містять одну або більше додаткових ділянок, що визначають комплементарність (СОК), як описано в даному описі. У деяких антигензв'язувальних білках
СОК вбудовані в "каркасну" ділянку, яка орієнтує СОК, таким чином, що забезпечуються відповідні антигензв'язувальні властивості СОК. У деяких варіантах антигензв'язувальні білки, запропоновані в даному описі, можуть перешкоджати, блокувати, зменшувати або модулювати взаємодію між РО5КОУ і ЛИНЩР. Такі антигензв'язувальні білки позначають як "нейтралізуючі". У деяких варіантах зв'язування між РОБЗКУ і ЛИНЩР все ж таки може відбуватися, навіть якщо антигензв'язувальний білок є нейтралізуючим і зв'язується з РСОБ5КУ. Наприклад, в деяких варіантах АЗБ попереджає або зменшує несприятливий вплив РСЗКУО на ЛПНІЩР без блокування сайта зв'язування з ЛІНІЩР на РСО5БКУ. Таким чином, в деяких варіантах АЗБ модулює або модифікує здатність РОЗКО призводити до розкладу ЛИНЩЕР, без необхідності перешкоджати взаємодії зв'язування між РОЗКОУО і ЛІНЩР. Такий АЗБ може бути конкретно описаний як "не конкурентно нейтралізуючий" АЗБ. У деяких варіантах нейтралізуючий АЗБ білок зв'язується з РСЗКО в такому положенні та/(або таким чином, який перешкоджає зв'язуванню РСБКО з ЛІИНІЦР. Такі АЗБ можуть бути конкретно описані як "конкурентно нейтралізуючі" АЗБ. Обидва згаданих вище нейтралізатори можуть приводити до більшої кількості вільного ЛІНІЩР в організмі суб'єкта, що приводить до більшого рівня зв'язування
ЛІИННЩЕ з ЛІИНЩ (таким чином, зменшуючи кількості ЛЛНЩ в організмі суб'єкта). У свою чергу, бо це веде до зменшення кількості холестерину, присутнього в сироватці суб'єкта.
У деяких варіантах антигензв'язувальні білки, запропоновані в даному описі, здатні перешкоджати опосередкованій РОКУ активності (зокрема, зв'язуванню). У деяких варіантах зв'язування антигензв'язувальних білків з даними епітопами перешкоджає, серед іншого, взаємодії між РОБКУ ії ЛИНЩЕР та іншим фізіологічним ефектам, опосередкованим РСО5КОУ. У деяких варіантах антигензв'язувальні білки є людськими, наприклад, повністю людські антитіла проти РОБКО.
У деяких варіантах АЗБ зв'язується з каталітичним доменом РОКУ. У деяких варіантах АЗБ зв'язується із зріллю формою РОЗКОУ. У деяких варіантах зв'язування АЗБ відбувається в рго- домені РОЗКУ. У деяких варіантах АЗБ селективно зв'язується із зрілю формою РОБКОУ. У деяких варіантах АЗБ зв'язується з каталітичним доменом, до деякої міри таким чином, що
РОБКОУ не може зв'язуватися або зв'язуватися ефективно з ЛИЛНЩР. У деяких варіантах АЗБ не зв'язується з с-кінцем каталітичного домену. У деяких варіантах АЗБ не зв'язується з п-кінцем каталітичного домену. У деяких варіантах АЗБ не зв'язується з п- або с-кінцем білка РОКУ. У деяких варіантах АЗБ зв'язується з будь-яким із епітопів, з яким зв'язуються антитіла, обговорювані в даному описі. У деяких варіантах це може бути визначено аналізами конкуренції між антитілами, розкритими в даному описі, та іншими антитілами. У деяких варіантах АЗБ зв'язується з епітопом, із яким зв'язується одне з антитіл, описаних в табл. 2. У деяких варіантах
АЗБ зв'язуються з РОЗКУ в конкретному конформаційному стані, щоб перешкодити взаємодії
РОБЗКУО з ЛІИНЩР. У деяких варіантах АЗБ зв'язується з М доменом РОКУ. У деяких варіантах
АЗБ зв'язується з М доменом РСБ5БКОУО і перешкоджає (або зменшує) зв'язуванню РСОБКОУ з
ЛИНЩР. У деяких варіантах АЗБ зв'язується з М доменом РОБЗКУО, і хоча він не попереджає (або зменшує) зв'язування РОСБ5КОУ з ЛИНЩР, АЗБ попереджає або зменшує опосередковану РО5КОУ несприятливу дію на ЛЛНЩР.
Антигензв'язувальні білки, які розкриті в даному описі, володіють різноманітними корисними властивостями. Деякі з антигензв'язувальних білків, наприклад, придатні для аналізів специфічного зв'язування, очищення спорідненості до РОКУ, зокрема, людського РОЗКОУ або його лігандів, і для скринінгових аналізів з метою ідентифікації інших антагоністів активності
РОБКУОУ. Деякі з антигензв'язувальних білків придатні для того, щоб перешкоджати зв'язуванню
РОБКУ з ЛИНЩР, або інгібувати опосередковані РСЗКУ ефекти.
Зо Антигензв'язувальні білки можуть застосовуватися в різноманітних терапевтичних сферах, як проілюстровано в даному описі. Наприклад, в деяких варіантах антигензв'язувальні білки
РОБЗКО придатні для лікування станів, пов'язаних з РОКУ, таких як пов'язані з холестерином розлади (або "пов'язані з холестерином сироватки розлади"), наприклад, гіперхолестеринемія, як додатково проілюстровано в даному описі. Інші види застосування антигензв'язувальних білків включають, наприклад, діагностику зв'язаних з РСБ5КО захворювань або станів і скринінгові аналізи з метою визначення присутності або відсутності РСБКУ. Деякі з антигензв'язувальних білків, описаних в даному описі, придатні для лікування наслідків, симптомів та/або патології, пов'язаної з активністю РОБКО.
У деяких варіантах антигензв'язувальні білки, які запропоновані, містять один або більше
СОК (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5 або 6 СОК). У деяких варіантах антигензв'язувальний білок містить (а) структуру поліпептиду і (б) один або більше СОКБК, які введені всередину та/або приєднані до структури поліпептиду. Структура поліпептиду може набувати безліч різноманітних форм.
Наприклад, вона може бути або містити каркас природного антитіла або його фрагмент або варіант, або може бути повністю синтетичною за своєю природою. Приклади різноманітних поліпептидних структур додатково проілюстровані нижче.
У деяких варіантах поліпептидна структура антигензв'язувальних білків є антитілом або походить від антитіла, зокрема, не обмежуючись ними, моноклональних антитіл, антитіл з подвійною специфічністю, мінітіл, доменних антитіл, синтетичних антитіл (що в даному описі іноді мають назву "міметиків антитіл"), химерних антитіл, гуманізованих антитіл, злитих антитіл (що в даному описі іноді мають назву "кон'югатів антитіл"), і частин або фрагментів кожного з них, відповідно. В деяких випадках антигензв'язувальний білок є імунологічним фрагментом антитіла (наприклад, Раф, Раб", Е(ар")2 або 5сЕм). Різноманітні структури додатково описані і визначені в даному описі.
Деякі з антигензв'язувальних білків, запропонованих в даному описі, специфічно та/або селективно зв'язуються з людським РСЗКОУ. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок специфічно та/або селективно зв'язується з людським білком РСБЗКУ, що містить та/або складається із залишків 153-692 5ЕО ІЮО МО: 3. У деяких варіантах АЗБ специфічно та/або селективно зв'язується з людським РСОБКО, що містить та/або складається із залишків 31-152
ЗЕО ІО МО: 3. У деяких варіантах АЗБ селективно зв'язується з людським білюом РСОБ5КО, як 60 проілюстровано на фіг. ТА (ЗЕО ІЮ МО: 1). У деяких варіантах антигензв'язувальний білок специфічно зв'язується, щонайменше з фрагментом білка РО5КОУ та/або повнорозмірним білком
РСОСБКУО, із сигнальною послідовністю або без неї.
У варіантах, де антигензв'язувальний білок використовується для терапевтичного застосування, антигензв'язувальний білок може інгібувати, перешкоджати або модулювати один або більше біологічних ефектів РОЗКОУ. В одному з варіантів антигензв'язувальний білок специфічно зв'язується з людським РОБКУО та/або істотною мірою інгібує зв'язування людського
РОСБКУ з ЛИНЩР, щонайменше приблизно на 20-40 95, 40-60 95, 60-80 95, 80-85 956 або більше (наприклад, за даними вимірювання зв'язування в аналізі конкурентного зв'язування іп міїго).
Деякі з антигензв'язувальних білків, запропонованих в даному описі, є антитілами. У деяких варіантах Ка АЗБ становить менш ніж (міцніше зв'язування) 10-7, 108, 109, 1070, 10-11, 1072, 1073
М. У деяких варіантах ІСзо АЗБ для блокування зв'язування ЛИНЩР з РОКУ (0374, варіант з високою спорідненістю) становить менше 1 мкМ, від 1000 нМ до 100 нМ, від 100 нМ до 10 нм, від 10 нМ до 1 нМ, від 1000 пМ до 500 пМ, від 500 пМ до 200 пМ, менше 200 пМ, від 200 пМ до 150 пМ, від 200 пМ до 100 пМ, від 100 пМ до 10 пМ, від 10 пМ до 1 пМ.
Один із прикладів константного домену важкого ланцюга Ід052 анти-РС5КОУ антитіла за даним винаходом містить послідовність амінокислот, як показано в ЗЕО ІЮ МО: 154, фіг. ЗКК.
Один із прикладів константного домену важкого ланцюга Ід54 анти-РС5КО антитіла за даним винаходом містить послідовність амінокислот, як показано в 5ХЕО ІЮ МО: 155, фіг. ЗКК.
Один із прикладів константного домену легкого ланцюга капа анти-РС5КОУ антитіла містить послідовність амінокислот, як показано в 5ЕО ІЮ МО: 157, фіг. ЗКК.
Один із прикладів константного домену легкого ланцюга лямбда анти-?РС5КОУ антитіла містить послідовність амінокислот, як показано в ЗЕО ІЮ МО: 156, фіг. ЗКК.
Варіабельні ділянки ланцюгів імуноглобуліну, загалом, демонструють однакову загальну структуру, що містить відносно консервативні каркасні ділянки (ЕК), сполучені трьома гіперваріабельними ділянками, що частіше мають назву "ділянок визначення комплементарності" або СОК. СОК від двох ланцюгів кожної пари важкий ланцюг/легкий ланцюг, згаданої вище, звичайно вирівняний каркасними ділянками таким чином, щоб сформувати структуру, яка специфічно зв'язується з конкретним епітопом на білку-мішені (наприклад, РОБКОУ). Від М-кінця до С-кінця, природні варіабельні ділянки легкого і важкого ланцюгів звичайно обидві узгоджуються з наступним порядком даних елементів: ЕК1, СОК1,
ЕК2, СОК2, ЕКЗ, СОКЗ і ЕК4. Система нумерації винайдена для надання номерів амінокислотам, які займають положення в кожному із цих доменів. Дана система нумерації визначена в Кабаї Зедиепсез ої Ргоївїп5 ої Іттипоіодісаї Іпієгеві (1987 апа 1991, МІН, Веїйезаа,
МО) або Споїпіа 8. І е5К, 1987, 9. Мої. Віо!. 196:901-917; Споїпіа єї а!., 1989, Майшге 342:878-883.
Різноманітні варіабельні ділянки важкого ланцюга і легкого ланцюга запропоновані в даному описі і проілюстровані на фіг. 2А-3933 і ЗІ/.-3ВВВ. У деяких варіантах кожна з цих варіабельних ділянок може бути приєднана до згаданих вище константних ділянок важкого і легкого ланцюгів, щоб сформувати повнорозмірний важкий і легкий ланцюг антитіла, відповідно. Додатково, кожна із таких генерованих послідовностей важкого і легкого ланцюга може бути скомбінована з утворенням повної структури антитіла.
Конкретні приклади деяких із варіабельних ділянок легкого і важкого ланцюгів запропонованих антитіл та їх відповідні послідовності амінокислот підсумовані в табл. 2.
Таблиця 2
Приклади варіабельних ділянок важкого і легкого ланцюга
Таблиця 2
Приклади варіабельних ділянок важкого і легкого ланцюга
Знову, кожен із прикладів варіабельних важких ланцюгів, наведених в табл. 2, може бути об'єднаний з будь-яким із прикладів варіабельних легких ланцюгів, показаних в табл. 2, з утворенням антитіла. У табл. 2 показані приклади парування легких і важких ланцюгів, знайдені в деяких антитілах, розкритих в даному описі. В деяких випадках, антитіла містять, щонайменше один варіабельний важкий ланцюг і один варіабельний легкий ланцюг з числа наведених в табл. 2. В інших випадках, антитіла містять два ідентичних легких ланцюги і два ідентичних важких ланцюги. Як приклад, антитіло або антигензв'язувальний білок може містити важкий ланцюг і легкий ланцюг, два важких ланцюги або два легких ланцюги. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок містить (та/або складається із) 1, 2 та/"або З СОК важкого та/або легкого ланцюга, щонайменше з однією із послідовностей, наведених в табл. 2 (СОК для послідовностей проілюстровані на фіг. 2А-30, та інші варіанти на фіг. ЗССС-39099 і 15А-150). У деяких варіантах всі 6 СОК (СОК1-3 із легкого (СОКІ 1, СОКІ2, СОКІ 3) і СОК1-3 із важкого ланцюга (СОКНІ, СОКНаІ2 і СОКНЗ)) є частиною АЗБ. У деяких варіантах 1, 2, 3, 4, 5 або більше
СОК входять до АЗБ. У деяких варіантах один важкий і один легкий СОК із числа СОК в послідовностях табл. 2 входять до АЗБ (СОК для послідовностей в табл. 2 проілюстровані на фіг. 2А-30). У деяких варіантах додаткові секції (наприклад, як проілюстровано на фіг. 2А-20,
ЗА-30, та інші варіанти в ЗССС-3)9У ії 15А-1503) також входять до АЗБ. Приклади СОК і ЕК для важких і легких ланцюгів, відзначених в табл. 2, проілюстровані на фіг. 2А-30 (та інші варіанти на фіг. ЗССС-39099У їі 15А-150). Необов'язкові варіабельні послідовності легкого ланцюга (зокрема, СОКІ1, СОМ2, СОКЗ, ЕК, ЕК2, ЕКЗ і ЕК4) можуть бути вибрані з наступних: 5, 7, 9,10, 12, 13, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 28, 30, 31, 32, 33, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44, 46, 421, 425, 429, 433, 437, 441, 445, 449, 453, 457, А61,465, 469, 473, 477, 481 і 485. Необов'язкові варіабельні послідовності важкого ланцюга (зокрема, СОКІ, СОК2, СОКЗ, ЕК, ЕК2, ЕКЗ і ЕК4) можуть бути вибрані з наступних: 74, 85, 71, 72, 67, 87, 58, 52, 51, 53, 48, 54, 55, 56, 49, 57, 50, 91, 64, 62, 89, 65, 79, 80, 76, 77, 78, 83, 69, 81,60, 419, 423, 427, 431, 435, 439, 443, 447, 451, 455, 459, 463, 467, 471, 475, 479 і 483. У деяких з вхідних даних на фіг. 2А-30, ідентифіковані варіації послідовностей або альтернативні межі СОК і ЕК. Ці альтернативи показані за допомогою "мі" після назви АЗБ. Оскільки більшість таких альтернатив є незначною за своєю природою, тільки секції з відмінностями наведені в таблиці. Слід розуміти, що решта секції легкого або важкого ланцюга є такою ж, як показано для базового АЗБ на інших панелях. Тому, наприклад, 19Н9м1 на фіг. 2С містить такі ж ЕК1, СОК'І і ЕК2, як 19Н9 на фіг. 2А, оскільки єдина різниця відзначена на фіг. 2С. Для трьох із послідовностей нуклеїнових кислот (АЗБ 26Е10, 3089 ї 31812), додаткові альтернативні послідовності нуклеїнових кислот запропоновані на фігурах. Як буде зрозуміло фахівцю в даній галузі, не більше ніж одна така послідовність фактично повинна бути використана в створенні антитіла або АЗБ. Дійсно, в деяких варіантах, існує потреба у присутності тільки однієї або жодної з конкретних нуклеїнових кислот важкого або легкого ланцюга.
У деяких варіантах АЗБ кодується послідовністю нуклеїнової кислоти, яка може кодувати будь-яку з послідовностей білка в табл. 2.
У деяких варіантах АЗБ зв'язується селективно з формою РОБКУО, яка зв'язується з ЛЛНЩР (наприклад, аутокаталізована форма молекули). У деяких варіантах антигензв'язувальний білок не зв'язується із с-кінцем каталітичного домену (наприклад, 5. 5-10, 10-15, 15-20, 20-25, 25-30, 30-40 і більше амінокислот на с-кінці). У деяких варіантах антигензв'язувальний білок не зв'язується з п-кінцем каталітичного домену (наприклад, 5. 5-10, 10-15, 15-20, 20-25, 25-30, 30- 40 і більше амінокислот на п-кінці). У деяких варіантах АЗБ зв'язується з амінокислотами в
Зо межах амінокислот 1-100 зрілої форми РСБКОУ. У деяких варіантах АЗБ зв'язується з амінокислотами в межах (та/або послідовностями амінокислот, що складаються із) амінокислот 31-100, 100-200, 31-152, 153-692, 200-300, 300-400, 452-683, 400-500, 500-600, 31-692, 31-449, та/або 600-692. У деяких варіантах АЗБ зв'язується з каталітичним доменом. У деяких варіантах нейтралізуючий та/або не нейтралізуючий АЗБ зв'язується з рго-доменом. У деяких варіантах
АЗБ зв'язується як з каталітичним, так і з рго-доменом. У деяких варіантах АЗБ зв'язується з каталітичним доменом, щоб блокувати область на каталітичному домені, яка взаємодіє з рго- доменом. У деяких варіантах АЗБ зв'язується з каталітичним доменом в положенні або на поверхні, з якою взаємодіє рго-домен, як проілюстровано в Рірег еї аї!. (зігисіиге 15:1-8 (2007), яка, таким чином, включена шляхом посилання в повному обсязі, зокрема структурні представлення в даному описі). У деяких варіантах АЗБ зв'язується з каталітичним доменом і обмежує рухливість рго-домену. У деяких варіантах АЗБ зв'язується з каталітичним доменом без зв'язування з рго-доменом. У деяких варіантах АЗБ зв'язується з каталітичним доменом, без зв'язування з рго-доменом, при цьому, перешкоджаючи переорієнтації рго-домену, яка дозволила б зв'язування РО5КУ з ЛИПНЩР. У деяких варіантах зв'язування АЗБ відбувається на тому ж епітопі, що і навколишні залишки 149-152 рго-домену в Рірег із співавт. У деяких варіантах АЗБ зв'язуються з жолобком (як проілюстровано у загальних рисах в Рірег із співавт.) на М домені. У деяких варіантах АЗБ зв'язуються з багатою на гістидин ділянкою, проксимальною по відношенню до жолобка на М домені. У деяких варіантах такі антитіла (які зв'язуються з М доменом) не є нейтралізуючими. У деяких варіантах антитіла, які зв'язуються з
М доменом, є нейтралізуючими. У деяких варіантах нейтралізуючі АЗБ попереджають зв'язування РОЗКОУО з ЛІНЩР. У деяких варіантах нейтралізуючі АЗБ, хоча і попереджають розкладання ЛІПНІЩР під дією РСБКОУ, не попереджають зв'язування РСБКО з ЛІИНЩР (наприклад, АЗБ З31А4). У деяких варіантах АЗБ зв'язується з або блокує, щонайменше один із залишків гістидину, проілюстрованих на фіг. 4 роботи Рірег із співавт. У деяких варіантах АЗБ блокує каталітичну тріаду в РЕЗКОУ.
У деяких варіантах антитіло зв'язується селективно з різними білками РС5КО, наприклад,
О0374У, в порівнянні з РСОБКОУО дикого типу. У деяких варіантах такі антитіла зв'язуються з варіантом, щонайменше в 2 рази міцніше, ніж з диким типом, і переважно в 2-5, 5-10, 10-100, 1100-1000, 1000-10 000 разів або більше -- з мутантом, ніж з диким типом (за даними Ка). У бо деяких варіантах антитіло селективно інгібує взаємодію варіанту 0374 РОЗКОУО з ЛИНЩР в порівнянні із здатністю РСОБКОУО дикого типу взаємодіяти з ЛІНІЦР. У деяких варіантах такі антитіла блокують здатність варіанту зв'язуватися з ЛЛНЩЕР міцніше, ніж здатність дикого типу, наприклад, щонайменше в 2 рази міцніше в порівнянні з диким типом, і переважно в 2-5, 5-10, 10-100, 100-1000 разів або більше міцніше для мутанта, ніж для дикого типу (за даними ІСво). У деяких варіантах антитіло зв'язується з і нейтралізує як РОКУ дикого типу, так і варіанти
РСОБКО, наприклад, Ю374М при подібних рівнях. У деяких варіантах антитіло зв'язується з
РОБКО, щоб перешкодити зв'язуванню варіантів ЛЛНЩЕР з РСБ5КОУ. У деяких варіантах варіанти
ЛІИНЩЕР є, щонайменше на 50 95 ідентичними ЛІНЩР людини. Наголошується, що варіанти
ЛІИНЩР відомі фахівцю в даній галузі (наприклад, Вгом/п М5 еї аї, "Саісійшт садев, асіа баїнз апа гесусіїпд гесеріогв" Маїшиге 388: 629-630, 1997). У деяких варіантах АЗБ може підвищувати рівень ефективного ЛИПНЩЕР при гетерозиготній родинній гіперхолестеринемії (якщо присутній варіант із втратою функції ЛЛНЩР).
У деяких варіантах АЗБ зв'язується (але не блокує) з варіантами РОЗКУО, які є, щонайменше на 50 95, 50-60, 60-70, 70-80, 80-90, 90-95, 95-99 або більше ідентичними формі РСБКО, проілюстрованій на фіг. ТА та/або фіг. 18. У деяких варіантах АЗБ зв'язується (але не блокує) з варіантами РОЗКУО, які є, щонайменше 50 95, 50-60, 60-70, 70-80, 80-90, 90-95, 95-99 або більше ідентичними зрілій формі РОЗКО, проілюстрованій на фіг. 1А та/або фіг. 18. У деяких варіантах
АЗБ зв'язується з і попереджає взаємодію з ЛІЛНЩЕР варіантів РОБ5КО, які є, щонайменше на
БО, 50-60, 60-70, 70-80, 80-90, 90-95, 95-99 або більше ідентичними формі РОЗКО, проілюстрованій на фіг. 1А та/або фіг. 18. У деяких варіантах АЗБ зв'язується з і попереджає взаємодію з ЛИЛНЩЕР варіантів РОБ5КО, які є, щонайменше на 50 95, 50-60, 60-70, 70-80, 80-90, 90-95, 95-99 або більше відсотків ідентичними зрілій формі РОБ5КО, проілюстрованій на фіг. 18.
У деяких варіантах варіант РО5КО є людським варіантом, наприклад, варіанти в положенні 474,
Еб200О та/або Еб6700. У деяких варіантах амінокислота в положенні 474 є валіном (як у інших людських варіантах) або треоніном (як у мавпи і миші). За умови, що дані перехресної реактивності наведені в даному описі, ми вважаємо, що дані антитіла легко зв'язуватимуться з описаними вище варіантами.
У деяких варіантах АЗБ зв'язується з епітопом, зв'язаним з одним із антитіл, описаних в табл. 2. У деяких варіантах антигензв'язувальні білки зв'язуються із специфічним
Зо конформаційним станом РОЗКУ, щоб перешкодити взаємодії РСЗКУ з ЛИНЩР.
ГУМАНІЗОВАНІ АНТИГЕНЗВ'ЯЗУВАЛЬНІ БІЛКИ (НАПРИКЛАД, АНТИТІЛА)
Як описано в даному описі, антигензв'язувальний білок проти РС5КО може містити гуманізоване антитіло та/або його частину. Важливим практичним застосуванням такої стратегії є "гуманізація" гуморальної імунної системи миші.
У деяких варіантах гуманізоване антитіло є істотною мірою не імуногенним для людини. У деяких варіантах гуманізоване антитіло володіє істотною мірою такою же спорідненістю до мішені, як антитіло іншого виду, з якого одержано гуманізоване антитіло. Див., наприклад, патент США 5,530,101, патент США 5,693,761; патент США 5,693,762; патент США 5,585,089.
У деяких варіантах ідентифіковані амінокислоти варіабельного домену антитіла, які можуть бути модифіковані без зниження природної спорідненості антигензв'язувального домену, при зменшенні його імуногенності. Див., наприклад, патенти США 5,766,886 і 5,869,619.
У деяких варіантах модифікація антитіла за способами, відомими з рівня техніки, звичайно конструюється таким чином, щоб забезпечити підвищену спорідненість зв'язування з мішенню та/або знизити імуногенність антитіла для реципієнта. У деяких варіантах гуманізовані антитіла модифікують для виключення сайтів глікозилювання з метою підвищення спорідненості антитіла до спорідненого антигену. Див., наприклад, Со єї аї., Мої. Іттипої., 30:1361-1367 (1993). У деяких варіантах для одержання гуманізованих антитіл застосовуються такі способи, як "реконструювання", "гіперхимеризація" або "покриття/модифікація поверхні". Див., наприклад,
Мазмжаті єї аї., Аппаї5 ої АПегду, Азтта, « Іттипої. 81:105 (1998); РодизхкКа еї аї., Ргої. Епдіпеег., 9:895-904 (1996); і патент США 6,072,035. У деяких з таких варіантів, подібні методи звичайно знижують імуногенність антитіла, зменшуючи кількість чужорідних залишків, але не попереджають анти-ідіостипових та анти-алотипових реакцій, що слідують за повторним введенням антитіл. Описані деякі інші способи зниження імуногенності, наприклад, в СійШапа єї а!., У. Іттипо)., 62(6): 3663-71 (1999).
У деяких випадках, гуманізація антитіл приводить до збитку для ємності зв'язування з антигеном. У деяких варіантах гуманізовані антитіла "зворотно мутували". У деяких з таких варіантів, гуманізоване антитіло видозмінене таким чином, щоб містити один або більше залишків амінокислот, знайдених в донорському антитілі. Див., наприклад, баідапна єї аї., Мої!
Іттипо! 36:709-19 (1999).
У деяких варіантах ділянки визначення комплементарності (СОК) варіабельних ділянок легкого і важкого ланцюга антитіла проти РОБКУ можуть бути пересаджені на каркасні ділянки (ЕК) того ж або іншого виду. У деяких варіантах СОК варіабельних ділянок легкого і важкого ланцюга антитіла проти РСБКУО можуть бути пересаджені на консенсусні людські ЕК. Для створення консенсусних людських ЕК, в деяких варіантах ЕК з декількох послідовностей амінокислот людських важких ланцюгів або легких ланцюгів вирівнюють, щоб ідентифікувати консенсусну послідовність амінокислот. У деяких варіантах ЕК важкого ланцюга або легкого ланцюга антитіла проти РС5БКУО замінюють на ЕК з іншого важкого ланцюга або легкого ланцюга. У деяких варіантах рідкісні амінокислоти в ЕК важких і легких ланцюгів антитіла проти
РСОБЗКОУО не замінюють, тоді, як решту амінокислот ЕК замінюють. Рідкісні амінокислоти є специфічними амінокислотами, які знаходяться в положеннях, в яких вони звичайно не знайдені у ЕК. У деяких варіантах пересаджені варіабельні ділянки від антитіла проти РОЗКУ можуть використовуватися з константною ділянкою, яка відрізняється від константної ділянки антитіла проти РСОСБКУ. У деяких варіантах пересаджені варіабельні ділянки є частиною одноланцюгового антитіла Ем. Пересаджування СОК описане, наприклад, в патентах США 6,180,370, 6,054,297, 5,693,762, 5,859,205, 5,693,761, 5,565,332, 5,585,089 і 5,530,101, і в допе5 еї аі., Маїшге, 321: 522-525 (1986); Ніесптапп еї аї., Маїиге, 332: 323-327 (1988); Метоеуеп еї аї.,
Зсіепсе, 239:1534-1536 (1988), М/іпієгї, РЕВ5 І енв., 430:92-94 (1998), які, таким чином, включені шляхом посилання для будь-якої мети.
ЛЮДСЬКІ АНТИГЕНЗВ'ЯЗУВАЛЬНІ БІЛКИ (НАПРИКЛАД, АНТИТІЛА)
Як описано в даному описі, антигензв'язувальний білок, який зв'язується з РОКУ, може містити людське (тобто, повністю людське) антитіло та/"або його частину. У деяких варіантах запропоновані нуклеотидні послідовності, які кодують, і послідовності амінокислот, які містять молекули важких і легких ланцюгів імуноглобуліну, особливо послідовності, відповідні варіабельним ділянкам. У деяких варіантах запропоновані послідовності, відповідні ділянкам визначення комплементарності (СОК), конкретно, від СОКІ до СОКЗ. Відповідно до деяких варіантів, запропонована лінія клітин гібридоми, що експресує таку молекулу імуноглобуліну.
Відповідно до деяких варіантів, запропонована лінія клітини гібридоми, що експресує таке моноклональне антитіло. У деяких варіантах лінію клітини гібридоми вибирають, щонайменше з однієї лінії клітин, описаної в табл. 2, наприклад, 21812, 16Е12 і 31Н4. У деяких варіантах запропоноване очищене людське моноклональне антитіло проти людського РСБКО.
Можна сконструювати породи мишей з недостатнім продукуванням мишачих антитіл з великими фрагментами людських локусів Ід в припущенні, що такі миші продукували б людські антитіла за відсутності мишачих антитіл. Великі людські фрагменти Ід можуть зберігати широку різноманітність варіабельного гена, а також належну регуляцію продукування та експресії антитіла. При використанні мишачої "фабрики" для диверсифікації і селекції антитіл за відсутності імунологічної толерантності до людських білків, відтворений людський репертуар антитіл у таких порід мишей може давати повністю людські антитіла з високою спорідненістю проти будь-якого цільового антигену, зокрема, людських антигенів. При використанні технології гіоридоми, антигенспецифічні людські МАБ з бажаною специфічністю можуть бути одержані і відібрані. Деякі приклади способів описані в УМО 98/24893, патенті США 5,545,807, ЕР 546073 і
ЕР 546073.
У деяких варіантах можна використовувати константні ділянки інших видів, окрім людини, разом з людською варіабельною ділянкою(ами).
Здатність клонувати і реконструювати людські локуси розміром в мільйони основ в штучних хромосомах дріжджів (ШХД) і вводити їх в зародкову лінію миші пропонує підхід для прояснення функціональних компонентів дуже великих або грубо картованих локусів, а також для генерації корисних моделей захворювань людини. Крім того, застосування такої технології для заміни локусів миші їх людськими еквівалентами могло б забезпечити інтуїтивне проникнення в експресію і регуляцію генних продуктів у людини в ході розвитку, їх комунікацію з іншими системами, та їх залучення до індукції і прогресування захворювання.
Людські антитіла дозволяють уникнути деяких проблем, пов'язаних з антитілами, які містять мишачі або щурячі варіабельні та/або константні ділянки. Присутність таких білків мишачого або щурячого походження може призводити до швидкого кліренсу антитіл або генерації імунної реакції хворого проти антитіла. Щоб уникнути використання антитіл мишачого або щурячого походження, повністю людські антитіла можуть генеруватися за допомогою введення функціональних людських локусів антитіла в організм гризуна, іншого ссавця або тварини, таким чином, що гризун, інший ссавець або тварина продукує повністю людські антитіла.
Гуманізовані антитіла є такими антитілами, які, хоча спочатку містили послідовності 60 амінокислот антитіла, що не є людськими, але згодом, щонайменше деякі з цих нелюдських послідовностей амінокислот антитіла були замінені послідовностями людських антитіл. Вони становлять протилежність людським антитілам, в яких антитіло кодується (або може кодуватися) генами, що належать людині.
ВАРІАНТИ АНТИГЕНЗВ'ЯЗУВАЛЬНОГО БІЛКА
Інші запропоновані антитіла є варіантами АЗБ, наведеного вище, які утворені комбінацією або підчастинами варіабельних важких і варіабельних легких ланцюгів, наведених в табл. 2, |і містять варіабельні легкі та/або варіабельні важкі ланцюги, кожен з яких є, щонайменше на
БО Зо, 50-60, 60-70, 70-80 95, 80-85 95, 85-90 95, 90-95 95, 95-97 95, 97-99 906 або більше ніж на 9995 ідентичним послідовностям амінокислот наведених в табл. 2 послідовностей (повна послідовність або підчастина послідовності, наприклад, одна або більше СОМ). В деяких випадках такі антитіла містять, щонайменше один важкий ланцюг і один легкий ланцюг, тоді як в інших випадках варіанти містять два ідентичних легких ланцюги і два ідентичних важких ланцюги (або їх підчастини). У деяких варіантах порівняння послідовностей на фіг. 2А-30 (і 13А- 137, інші варіанти в 15А-150 і на фіг. 48А і 488) може використовуватися для того, щоб ідентифікувати секції антитіл, які можуть бути модифіковані, шляхом спостереження за тими варіаціями, які впливають на зв'язування і тими варіаціями, які, схоже, не впливають на зв'язування. Наприклад, порівнюючи подібні послідовності, можна ідентифікувати такі секції (наприклад, конкретні амінокислоти), які можуть бути модифіковані, і яким чином вони можуть бути модифіковані, щоб все ж таки зберегти (або покращити) функціональність АЗБ. У деяких варіантах варіанти АЗБ містять такі консенсусні групи і послідовності, які проілюстровані на фіг. 13А, 13С, 1З3Е, 130, 1ЗН, 13І, 13) та/"або 48А і 488, і варіації дозволені в положеннях, ідентифікованих на фігурах як варіабельні. СОК, проілюстровані на фіг. 13А, 13С, 13Е, 130, 48А і 488, були визначені на підставі гібридної комбінації способу СпПоїйіа (базується на розташуванні структурних ділянок петлі, див., наприклад, "Зіапдага сопіогтайоп5 їТог Ше сапопіса! віписішге5 ої іттиподіобиїйп5", Вівзап АЇ!-І агікапі, Айпиг М. Ге5К апа Сугив. Споїпіа,
Уоитаї! ої Моїесшціаг Віоіоду, 273(4): 927-948, 7 Мометбег (1997)) і способу Кабаї (базується на варіабельності послідовності, див., наприклад, бедиепсев ої Ргоївіп5 ої Іттипоіодісаї! Іпіегеві,
ЕРИ Ейайіоп. МІН Рибіїсайоп Мо. 91-3242, Кабаї еї аї., (1991)). Кожен залишок, визначений за будь-яким із способів, включений до кінцевого переліку залишків СО (і представлений на фіг. 13А, 13С, 13Р, 130, і 48А і 488). СОК на фіг. 1ЗН, 131 ї 13) були одержані тільки за способом
Караїя. Якщо не вказано інше, деякі консенсусні послідовності, СОК ії ЕК на фіг. 13Н-13) визначатимуть і контролюватимуть відзначені СОК і ЕК на вказаних АЗБ на фіг. 13.
У деяких варіантах антигензв'язувальний білок містить важкий ланцюг, що містить варіабельну ділянку, яка містить послідовність амінокислот, щонайменше на 90 95 ідентичну послідовності амінокислот, вибраній з, щонайменше однієї з послідовностей 5ЕО ІЮО МО: 74, 85, 71, 72, 67, 87, 58, 52, 51, 53, 48, 54, 55, 56, 49, 57, 50, 91, 64, 62, 89, 65, 79, 80, 76, 77, 78, 83, 69, 81 і 60. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок містить важкий ланцюг, що містить варіабельну ділянку, яка містить послідовність амінокислот, щонайменше на 95 95 ідентичну послідовності амінокислот, вибраній з, щонайменше однієї з послідовностей 5ЕО ІЮО МО: 74, 85, 71, 72, 67, 87, 58, 52, 51, 53, 48, 54, 55, 56, 49, 57, 50, 91, 64, 62, 89, 65, 79, 80, 76, 77, 78, 83, 69, 81 ії 60. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок містить важкий ланцюг, що містить варіабельну ділянку, яка містить послідовність амінокислот, щонайменше на 99 95 ідентичну послідовності амінокислот, вибраній з, щонайменше однієї з послідовностей 5ЕО ІЮО МО: 74, 85, 71, 72, 67, 87, 58, 52, 51, 53, 48, 54, 55, 56, 49, 57, 50, 91, 64, 62, 89, 65, 79, 80, 76, 77, 78, 83, 69, 8160.
У деяких варіантах антигензв'язувальний білок містить послідовність, яка є щонайменше на 90 9ь, 90-95 95 та/або 95-99 95 ідентичною одній або більше СОК із числа СОК, щонайменше в одній з послідовностей 5ЕО ІЮ МО: 74, 85, 71, 72, 67, 87, 58, 52, 51, 53, 48, 54, 55, 56, 49, 57, 50, 91, 64, 62, 89, 65, 79, 80, 76, 77, 78, 83, 69, 81 і 60. У деяких варіантах присутня 1, 2, 3, 4, 5 або 6
СОК (кожна з яких, щонайменше на 90 95, 90-95 95 та/або 95-99 95 ідентична згаданим вище послідовностям).
У деяких варіантах антигензв'язувальний білок містить послідовність, що є, щонайменше на 90 Фо, 90-95 95 та/або 95-99 95 ідентичною одній або більше ЕК із числа ЕК, щонайменше в одній з послідовностей 5ЕО ІЮ МО: 74, 85, 71, 72, 67, 87, 58, 52, 51, 53, 48, 54, 55, 56, 49, 57, 50, 91, 64, 62, 89, 65, 79, 80, 76, 77, 78, 83, 69, 81 і 60. У деяких варіантах присутня 1, 2, З або 4 ЕК (кожна з яких є, щонайменше на 90 95, 90-95 95 та/або 95-99 95 ідентичною згаданим вище послідовностям).
У деяких варіантах антигензв'язувальний білок містить легкий ланцюг, що містить варіабельну ділянку, яка містить послідовність амінокислот, щонайменше на 90 95 ідентичну 60 послідовності амінокислот, вибраній з, щонайменше однієї з послідовностей 5ЕО ІЮ МО: 5, 7, 9,
10, 12, 13, 15, 16,17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 28, 30, 31, 32, 33, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44 і 46. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок містить легкий ланцюг, що містить варіабельну ділянку, яка містить послідовність амінокислот, щонайменше на 95 95 ідентичну послідовності амінокислот, вибраній з, щонайменше однієї з послідовностей 5ЕО ІО МО: 5, 7, 9, 10, 12, 13, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 28, 30, 31, 32, 33, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44 і 46. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок містить легкий ланцюг, що містить варіабельну ділянку, яка містить послідовність амінокислот, щонайменше на 99 95 ідентичну послідовності амінокислот, вибраної з, щонайменше однієї з послідовностей 5ЕО ІЮО МО: 5, 7, 9, 10, 12, 13, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 28, 30, 31, 32, 33, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44 і 46.
У деяких варіантах антигензв'язувальний білок містить послідовність, яка є щонайменше на 90 Уь, 90-95 95 та/або 95-99 95 ідентичною одній або білоше СОК з числа СОК, щонайменше в одній з послідовностей ЗЕО ІЮ МО: 5, 7, 9, 10, 12, 13, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 28, 30, 31, 32, 33, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44 і 46. У деяких варіантах присутня 1, 2, 3, 4, 5 або 6
СОК (кожна з яких є, щонайменше на 90 95, 90-95 95 та/або 95-99 95 ідентичною згаданим вище послідовностям).
У деяких варіантах антигензв'язувальний білок містить послідовність, яка є щонайменше на 90 Фо, 90-95 95 та/або 95-99 95 ідентичною одній або більше ЕК із числа ЕК, щонайменше в одній з послідовностей ЗЕО ІЮ МО: 5, 7, 9, 10, 12, 13, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 28, 30, 31, 32, 33, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 42, 44 і 46. У деяких варіантах присутня 1, 2, 3, або 4 ЕК (кожна з яких є, щонайменше на 9095, 90-95595 та/або 95-9995 ідентичною згаданим вище послідовностям).
У світлі даного розкриття, кваліфікований фахівець зможе визначити відповідні варіанти
АЗБ, як було описано в даному описі, із застосуванням відомих методів. У деяких варіантах фахівець в даній галузі може ідентифікувати відповідні області молекули, які можуть бути модифіковані без знищення активності, націлювальними ділянками, які не вважаються важливими для активності. У деяких варіантах можна ідентифікувати залишки і частини молекул, які є консервативними серед подібних поліпептидів. У деяких варіантах навіть області, які можуть бути важливими з точки зору біологічної активності або структури, можуть підлягати
Зо консервативним замінам амінокислот без знищення біологічної активності або без несприятливого впливу на структуру поліпептиду.
Додатково, фахівець в даній галузі може розглядати дослідження структури-функції, що ідентифікують залишки в подібних поліпептидах, які важливі для активності або структури.
Беручи до уваги таке порівняння, можна передбачити важливість залишків амінокислот в білку, які відповідають залишкам амінокислот, важливим з точки зору активності або структури в подібних білках. Фахівець в даній галузі може вибрати заміни хімічно подібних амінокислот для таких залишків амінокислот з передбаченою значущістю.
Фахівець в даній галузі може також проаналізувати трьохвимірну структуру і послідовність амінокислот щодо такої структури в подібному АЗБ. Приймаючи до уваги таку інформацію, фахівець в даній галузі може передбачити вирівнювання залишків амінокислот антитіла з урахуванням його трьохвимірної структури. У деяких варіантах фахівець в даній галузі може зробити вибір не вносити радикальних змін в залишки амінокислот, передбачені як такі, що знаходяться на поверхні білка, оскільки такі залишки можуть брати участь в значущих взаємодіях з іншими молекулами. Крім того, фахівець в даній галузі може генерувати тестові варіанти, що містять одинарну заміну амінокислоти в кожному бажаному залишку амінокислоти.
Далі може бути проведений скринінг варіантів з використанням аналізів активності, відомих фахівцям в даній галузі. Такі варіанти можуть використовуватися для збору інформації про придатні варіанти. Наприклад, якщо знайдено, що модифікація конкретного залишку амінокислоти призводила до знищення, небажаного зниження або невідповідної активності, варіантів з такою модифікацією можна уникати. Іншими словами, на підставі інформації, одержаної в результаті таких шаблонних експериментів, фахівець в даній галузі, може легко визначити амінокислоти, в яких додаткових замін слід уникати, окремо або в комбінації з іншими мутаціями.
Цілий ряд наукових публікацій присвячений прогнозу вторинної структури. Див. Моий ..,
Ст. Ор. іп Віоїеспй., 7(4):422-427 (1996), Спои еї аї., Віоспетівігу, 19(2):222-245 (1974); Споиц єї а!., Віоспетівігу, 119(2):211-222 (1974); Спои сеї аї., Аду. Епгутої. Веїаї. Агеа5 Мої. Віо!., 47:45- 148 (1978); Спо єї аїІ., Апп. Вему. Віоспет., 47:251-276 і Спои еї аї., Віорнув. 9., 26:367-384 (1979). Крім того, на сьогоднішній день доступні комп'ютерні програми, які допомагають передбачити вторинну структуру. Один із способів прогнозу вторинної структури базується на 60 моделюванні гомології. Наприклад, два поліпептиди або білок, для яких ідентичність послідовностей становить більше 3095 або більше 4095, часто володіють подібною структурною топологією. Нещодавнє збільшення бази даних про структуру білків (БДБ) забезпечило підвищення передбачуваності вторинної структури, зокрема, потенційну кількість згортань в межах поліпептиду або структури білка. Див. Ноїт еї аї., Мисі. Асіа. Вев., 27(1):244- 247 (1999). Висловлено думку (Вгеппег еї аї., Сит. Ор. Бігисі. Віої., 7(3):369-376 (1997)) щодо існування обмеженої кількості згортань в даному поліпептиді або білку, і про те, що як тільки буде визначена критична кількість структур, прогноз структури стане набагато точнішим.
Додаткові способи прогнозу вторинної структури включають "нанизування" (Чопев, О., Си.
Оріп. Бігисі. Віо!., 7(3):377-87 (1997); зіррі єї аї., 5іисішиге, 4(1):15-19 (1996)), "аналіз профілю" (Вом/е єї аї., Зсієпсе, 253:164-170 (1991); Ситір5Ком єї аї., Мей. Еплут., 183:146-159 (1990);
Сиірзком єї аї., Ргос. Маї. Асад. сі. ОБА, 84(13):4355-4358 (1987)), і "еволюційне з'єднання" (див.
Но!т, вище (1999), і Вгеппег, вище (1997)).
У деяких варіантах варіанти антигензв'язувального білка включають варіанти глікозилювання, в яких кількість та/або тип сайта глікозилювання модифіковані в порівнянні з послідовностями амінокислот батьківського поліпептиду. У деяких варіантах варіанти білка включають більшу або меншу кількість М-зв'язаних сайтів глікозилювання, ніж природний білок.
М-Зв'язаний сайт глікозилювання характеризується послідовністю: Аб5п-Х-5ег або Ав5п-Х-ТНг, в якій залишок амінокислоти, позначений як Х, може бути залишком будь-якої амінокислоти, окрім проліну. Заміна залишків амінокислот для створення даної послідовності пропонує потенційний новий сайт для додавання М-зв'язаного вуглеводного ланцюга. Альтернативно, заміни, які виключають дану послідовність, виключатимуть існуючий М-зв'язаний вуглеводний ланцюг.
Додатково запропонована реорганізація М-зв'язаних вуглеводних ланцюгів, при якій один або більше М-зв'язаних сайтів глікозилювання (звичайно природних) виключаються, і один або більше нових М-зв'язаних сайтів створюються. Додаткові переважні варіанти антитіла включають цистеїнові варіанти, в яких один або більше залишків цистеїну видаляють або замінюють іншою амінокислотою (наприклад, серином) в порівнянні з батьківською послідовністю амінокислот. Цистеїнові варіанти можуть бути придатними, якщо антитіла повинні бути повторно згорнуті в біологічно активну конформацію, наприклад, після виділення нерозчинних тілець включення. Цистеїнові варіанти, загалом, містять менше залишків цистеїну,
Зо ніж природний білок, і звичайно містять парну кількість, щоб мінімізувати взаємодії, які є результатом непарних залишків цистеїну.
Відповідно до деяких варіантів, заміни амінокислот є такими, що: (1) знижують чутливість до протеолізу, (2) знижують чутливість до окиснення, (3) модифікують спорідненість зв'язування для формування білкових комплексів, (4) модифікують спорідненість зв'язування, та/або (4) забезпечують або модифікують інші фізико-хімічні або функціональні властивості таких поліпептидів. Відповідно до деяких варіантів одноразові або множинні заміни амінокислот (у деяких варіантах консервативні заміни амінокислот) можуть бути здійснені в природній послідовності (у деяких варіантах -- в частині поліпептиду поза межами домену(ів), що утворюють міжмолекулярні контакти). У деяких варіантах консервативна заміна амінокислоти звичайно може істотною мірою не змінювати структурних характеристик батьківської послідовності (наприклад, заміна амінокислоти не повинна демонструвати тенденції до руйнування спіралі, яка існує в батьківській послідовності, або руйнувати інші види вторинної структури, яка характеризує батьківську послідовність). Приклади визнаних в рівні техніки вторинних і третинних структур поліпептиду описані в Ртгоївіп5, біписійгез апа Моїіесшіаг
Ргіпсіріє5 (Стеідніоп, Ед., МУ. Н. Егеетап апа Сотрапу, Мем Могк (1984)); Іпігодисійоп о Ргоївіп зігисішиге (3. Вгапаеп 8... Тоо7е, ед5»., сзапапа Рибіїєпіпо, Мем/ МогК, М.М. (1991)); і Тпогпіоп еї аї.,
Майшге, 354:105 (1991), кожна з яких включена до даного опису шляхом посилання.
У деяких варіантах, варіанти є варіантами послідовностей нуклеїнових кислот АЗБ, розкритих в даному описі. Фахівцю в даній галузі буде зрозуміло, що наведене вище обговорення може використовуватися для ідентифікації, оцінки та/створення варіантів білка
АЗБ, а також для послідовностей нуклеїнових кислот, які можуть кодувати такі варіанти білка.
Таким чином, передбачені послідовності нуклеїнових кислот, кодуючі такі варіанти білка (а також послідовності нуклеїнових кислот, які кодують АЗБ в табл. 2, але відмінні від явно розкритих в даному описі). Наприклад, варіант АЗБ може бути, щонайменше на 80, 80-85, 85-90, 90-95, 95-97, 97-99 або більше ідентичним, щонайменше одній послідовності нуклеїнової кислоти, описаній в ЗЕО ІЮ МО: 152, 153, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, або, щонайменше від 1 до 6 (і різним їх комбінаціям) СОЕК, 60 кодованих послідовностями нуклеїнових кислот в ЗЕО ІЮО МО: 152, 153, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98,
99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150 і 151.
У деяких варіантах антитіло (або кодуюча його послідовність нуклеїнової кислоти) є варіантом, якщо послідовність нуклеїнової кислоти, яка кодує конкретний АЗБ (або безпосередньо послідовність нуклеїнової кислоти), може селективно гібридизуватися з будь- якою із послідовностей нуклеїнових кислот, які кодують білки в табл. 2 (наприклад, але, не обмежуючись ними, ЗЕО ІЮ МО: 152, 153, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150 ії 151) в суворих умовах. В одному з варіантів придатні помірно суворі умови включають попереднє промивання в розчині 5 х натрію хлориду і цитрату (НХЦ); 0,5 95 натрію лаурилсульфату, 1,0 мМ ЕДТА (рН 8:0); гібридизацію при 50 "С, -65 "С, 5 х НХЦ протягом ночі, або, у випадку перехресно-видової гомології, при 45 "С із 0,5 х НХЦ; з подальшим промиванням двічі при 65 "С протягом 20 хв кожним з 2х, 0,5х і 0,2 х НХЦ, що містить 0,1 95 натрію лаурилсульфату. Такі послідовності, що гібридизуються з ДНК, також знаходяться в межах контексту даного винаходу, оскільки існують нуклеотидні послідовності, які, в результаті виродженості коду, кодують поліпептид антитіла, який кодується послідовністю
ДНК, що гібридизується, і послідовності амінокислот, які кодуються такими послідовностями нуклеїнових кислот. У деяких варіантах, варіанти СОК містять послідовності нуклеїнових кислот і послідовності амінокислот, кодовані такими послідовностями, що гібридизуються з одним або більше СОК в межах послідовностей, відзначених вище (індивідуальні СОК можуть легко бути визначені у світлі фіг. 2А-30, та інші варіанти на фіг. 3ЗССС-399) і 15А-1503). Вираз "селективно гібридизуватися" в даному контексті позначає детектоване і селективне зв'язування.
Полінуклеотиди, олігонуклеотиди та їх фрагменти відповідно до винаходу селективне гібридизуються з ланцюгами нуклеїнової кислоти в умовах гібридизації і промивання, які мінімізують кількості детектованого зв'язування з неспецифічними нуклеїновими кислотами, що піддаються визначенню. Умови високої суворості можуть застосовуватися для забезпечення умов селективної гібридизації, як відомо з рівня техніки і обговорюється в даному описі.
Загалом, гомологія послідовностей нуклеїнових кислот між полінуклеотидами, олігонуклеотидами і фрагментами за винаходом і цільовою послідовністю нуклеїнової кислоти становитиме, щонайменше 80 95, і більше типово, із збільшенням гомології, щонайменше до 85 95, 90 95, 95 95, 99 95 і 100 95. Дві послідовності амінокислот гомологічні, якщо існує часткова або повна ідентичність між ними. Наприклад, гомологія 85 95 означає, що 85 95 амінокислот ідентичні, якщо дві послідовності вирівняні для максимальної відповідності. Проміжки (у будь- якій з двох співпадаючих послідовностей) дозволені для максимізації відповідності; довжина проміжку 5 або менш є переважною, причому 2 або менше є більш переважною. Альтернативно і переважно, дві послідовності білка (або поліпептидні послідовності, що походять від них, завдовжки, щонайменше 30 амінокислот) є гомологічними, в тому значенні, в якому даний термін використовується в даному описі, якщо для них бал вирівнювання становить більше 5 (у одиницях стандартного відхилення), з використанням програми АСОМ з матрицею даних мутації і штрафом проміжку 6 або більше. Див. ЮОауйоїй, М. Про., в Аа ої Ргоївіп Зедциепсе апа зігисішге, рр. 101-110 (Моїште 5, Маїйопа! Віотедіса! Везєвагсп Рошипааїйоп (1972)) і доповнення 2 до даного тому, стор. 1-10. Дві послідовності або їх частини, переважніше, є гомологічними, якщо ідентичність їх амінокислот становить - 50950, при оптимальному вирівнюванні з використанням програми АГІСМ. Термін "відповідає" використовується в даному описі для позначення того, що послідовність полінуклеотиду гомологічна (тобто, ідентична, але не зв'язана суворо еволюційно) всій або частині референтного полінуклеотиду, або що послідовність поліпептиду ідентична послідовності референтного поліпептиду. На протилежність цьому, термін "комплементарний" використовується в даному описі для позначення того, що комплементарна послідовність гомологічна всій або частини послідовності референтного полінуклеотиду. Для ілюстрації, нуклеотидна послідовність "ТАТАС" відповідає референтній послідовності "ТАТАС" і комплементарна референтній послідовності "ЗТАТА".
ОДЕРЖАННЯ АНТИГЕНЗВ'ЯЗУВАЛЬНИХ БІЛКІВ (НАПРИКЛАД, АНТИТІЛ)
У деяких варіантах антигензв'язувальні білки (такі як антитіла) одержують шляхом імунізації антигеном (наприклад, РСОБКОУ). У деяких варіантах антитіла можуть бути продуковані шляхом імунізації повнорозмірним РОКУ, розчинною формою РОБКО, тільки каталітичним доменом, зрілою формою РОБЗКО, показаною на фіг. 1А, вкороченою варіантною формою РОЗКО або його фрагментом. У деяких варіантах антитіла за винаходом можуть бути поліклональними або бо моноклональними, та/(або можуть бути рекомбінантними антитілами. У деяких варіантах антитіла за винаходом є людськими антитілами, одержаними, наприклад, імунізацією трансгенних тварин, здатних до продукування людських антитіл (див., наприклад, опубліковану заявку РСТ УМО 93/12227).
У деяких варіантах можуть застосовуватися деякі стратегії, щоб маніпулювати властивими антитілу властивостями, такими як спорідненість антитіла до його мішені. Такі стратегії включають, не обмежуючись ними, використання сайт-специфічного або випадкового мутагенезу молекули полінуклеотиду, кодуючої антитіло, щоб генерувати варіант антитіла. У деяких варіантах така генерація завершується скринінгом варіантів антитіла, які демонструють бажану зміну, наприклад підвищену або знижену спорідненість.
У деяких варіантах залишки амінокислоти, що є мішенню в стратегіях мутагенезу, є залишками СОК. У деяких варіантах мішенню служать амінокислоти в каркасних ділянках варіабельних доменів. У деяких варіантах показано, що такі каркасні ділянки вносять свій внесок у властивості зв'язування з мішенню деяких антитіл. Див., наприклад, Нидзоп, Ст. Оріп.
Віотеси., 9:395-402 (1999) і процитовані в ній посилання.
У деяких варіантах одержують бібліотеки меншого розміру з ефективнішим скринінгом варіантів антитіла шляхом обмеження випадкового або сайт-спрямованого мутагенезу сайтами гіпермутації в СОК, які є сайтами, відповідними областям, схильним до мутації в ході соматичного процесу дозрівання спорідненості. Див., наприклад, Споманиту є Равіап, Маїшге
Віотесн., 17: 568-572 (1999) і процитовані в ній посилання. У деяких варіантах певні види елементів ДНК можуть використовуватися для ідентифікації сайтів гіпермутації, зокрема, але, не обмежуючись ними, деякі прямі і зворотні повтори, деякі консенсусні послідовності, деякі вторинні структури і деякі паліндроми. Наприклад, такі елементи ДНК, які можуть використовуватися для ідентифікації сайтів гіпермутації включають, не обмежуючись ними, послідовність тетраоснови, що містить пурин (А або б), з подальшим гуаніном (С), і далі піримідин (С або Т), з подальшим аденозином або тимідином (А або Т) (тобто, А/5-0-С/Т-А/1).
Інший приклад елементу ДНК, який може використовуватися для ідентифікації сайтів гіпермутації, -- це кодон серину, А-(-С/Т.
ОДЕРЖАННЯ ПОВНІСТЮ ЛЮДСЬКИХ АЗБ (НАПРИКЛАД, АНТИТІЛ)
У деяких варіантах техніка показу фага застосовується для генерації моноклональних антитіл. У деяких варіантах така техніка дає повністю людські моноклональні антитіла. У деяких варіантах полінуклеотид, що кодує одинарний Рар або Ем фрагмент антитіла, експресується на поверхні частинки фага. Див., наприклад, Ноодепроот еї аї., У. Мої. Віої., 227: 381 (1991); Маї/к5 еї а!., У Мої Віої 222: 581 (1991); патент США 5,885,793. У деяких варіантах проводять "скринінг" фага, щоб ідентифікувати фрагменти антитіла, які володіють спорідненістю до мішені. Таким чином, деякі з цих процесів імітують імунну селекцію шляхом показу репертуарів фрагментів антитіл на поверхні волоконного бактеріофага і подальшої селекції фага за їх зв'язуванням з мішенню. У деяких з таких методик виділені функціональні нейтралізуючі фрагменти антитіл з високою спорідненістю. У деяких з таких варіантів (обговорюваних більш детально нижче), повний репертуар генів людських антитіл створений шляхом клонування природним чином реорганізованих генів М людини з лімфоцитів периферичної крові. Див., наприклад, Миїпах еї а). Ргос Маї! Асай 5сі (О5А), 87: 8095-8099 (1990).
Відповідно до деяких варіантів, антитіла за винаходом одержують з використанням трансгенної миші, організм якої містить істотну частину вставленого генома, що продукує людське антитіло, але у якої присутній дефіцит продукування ендогенних, мишачих антитіл. Такі миші здатні до продукування молекул людського імуноглобуліну і антитіл, і нездатні до продукування молекул мишачого імуноглобуліну і антитіл. Технології, використовувані для досягнення даного результату, розкриті в патентах, заявках і посиланнях, наведених в даному описі. У деяких варіантах можна застосовувати, наприклад, такі способи, як розкриті в опублікованій заявці РСТ УМО 98/24893 або в Мепае? вї а!., Майшге Сепеїїсв, 15:146-156 (1997), які таким чином включені шляхом посилання для будь-якої мети.
Загалом, повністю людські моноклональні АЗБ (наприклад, антитіла), специфічні відносно
РОСБКО, можуть бути одержані, як вказано нижче. Трансгенних мишей, які несуть людські гени імуноглобуліну, імунізують цільовим антигеном, наприклад, РОБ5КО, і одержують лімфатичні клітини мишей (наприклад, В-клітини), що експресують антитіла. Здійснюють злиття таких виділених клітин з лінією клітин мієлоїдного типу, щоб одержати безсмертні лінії клітин гібридоми, і такі лінії клітин гібридоми піддають скринінгу та селекції, щоб ідентифікувати лінії клітин гібридоми, які продукують антитіла, специфічні відносно цільового антигену. У деяких варіантах запропоноване одержання лінії клітин гібридоми, яка продукує антитіла, специфічні відносно РСБКО.
У деяких варіантах повністю людські антитіла продукують, забезпечуючи контакт спленоцитів людини (В- або Т-клітини) з антигеном іп місто, з подальшим введенням таких клітин імуноскомпрометованій миші, наприклад, 5СІЮ або под/5СІЮ. Див., наприклад, Вгатбх е6ї аї.,
УЛюттипої. 160: 2051-2058 (1998); Саграїїадо еї а!., Маї. Мед., 6: 103-106 (2000). У деяких з таких підходів, енграфтмент ембріональної тканини людини мишам ЗСІЮ (5СІЮ-пи) приводить до тривалого гемопоезу і розвитку людських Т-клітин. Див., наприклад, МеСипе еї аї., бсієпсе, 241:1532-1639 (1988); Пмегвєеп єї аЇ,, Зет. Іттипої., 8:243-248 (1996). В деяких випадках, гуморальна імунна реакція у таких химерних мишей залежить від спів-розвитку людських Т- клітин в організмі тварин. Див., наприклад, Мапепзв5оп еї аї., Іттипої., 83:1271-179 (1994). У деяких підходах, лімфоцити периферичної крові людини пересаджують мишам ЗСІЮО. Див., наприклад, Мобхієг еї аї., Маїшге, 335:256-259 (1988). У деяких з таких варіантів, якщо такі пересаджені клітини обробляють праймувальним агентом, таким як стафілококовий ентеротоксин А (СЕА), або моноклональними антитілами проти СО40 людини, знайдені вищі рівні продукування В-клітин. Див., наприклад, Мапепзвзоп еї аї., Іттипої!., 84: 224-230 (1995);
Митгрнпу еї а!., Віоса, 86:1946-1953 (1995).
Таким чином, в деяких варіантах повністю людські антитіла можуть бути продуковані експресією рекомбінантної ДНК в клітинах-хазяях або експресією в клітинах гібридоми. В інших варіантах антитіла можуть бути продуковані з використанням методів показу фага, описаних в даному описі.
Антитіла, описані в даному описі, одержували з використанням технології ХепоМоизе , як описано в даному описі. Такі миші здатні до продукування молекул людського імуноглобуліну і антитіл і нездатні до продукування молекул мишачого імуноглобуліну і антитіл. Технології, використовувані для досягнення такого результату, розкриті в патентах, заявках і посиланнях, наведених в розділі "Рівень техніки" даного опису. Зокрема, однак, переважний варіант одержання трансгенних мишей і антитіл від них розкритий в патентній заявці США, серійний номер 08/759,620, поданій З грудня 1996 р., і Міжнародних патентних заявках М/О 98/24893, опублікованій 11 червня 1998 р., ії ММО 00/76310, опублікованій 21 грудня 2000 р., розкриття яких, таким чином, включено шляхом посилання. Див. також Мепае єї аї., Маїште Сепеїїісв, 15:146-156 (1997), розкриття якої, таким чином, включено шляхом посилання.
За допомогою застосування такої технології, одержані повністю людські моноклональні антитіла до різних антигенів. По суті, лінії мишей ХепоМоизе імунізують цільовим антигеном (наприклад, РОБКОУ), лімфатичні клітини (наприклад, В-клітини) виділяють у гіперімунізованих мишей, і здійснюють злиття виділених лімфоцитів з лінією клітин мієлоїдного типу, щоб одержати безсмертні лінії клітин гібридоми. Такі лінії клітин гібридоми піддають скринінгу і селекції, щоб ідентифікувати лінії клітин гібридоми, які продукують антитіла, специфічні відносно цільового антигену. У даному описі запропоновані способи одержання множинних ліній клітин гібридоми, які продукують антитіла, специфічні відносно РОЗКО. Крім того, в даному описі запропонована характеристика антитіл, продукованих такими лініями клітин, зокрема, аналізи послідовності нуклеотидів і амінокислот важких і легких ланцюгів таких антитіл.
Одержання порід мишей ХепоМоизеФ додатково обговорюється та ілюструється в патентних заявках США, серійний номер 07/466,008, поданій 12 січня 1990 р., 07/610,515, поданій 8 листопаду 1990 р., 07/919,297, поданій 24 липня 1992 р., 07/922,649, поданій 30 липня 1992 р., 08/031,801, поданій 15 березня 1993 р., 08/112,848, поданій 27 серпня 1993 р., 08/234,145, поданій 28 квітня 1994 р., 08/376,279, поданій 20 січня 1995 р., 08/430,938, поданій 27 квітня 1995 р., 08/464,584, поданій 5 червня 1995 р., 08/464,582, поданій 5 червня 1995 р., 08/463,191, поданій 5 червня 1995 р., 08/462,837, поданій 5 червня 1995 р., 08/486,853, поданій 5 червня 1995 р., 08/486,857, поданій 5 червня 1995 р., 08/486,859, поданій 5 червня 1995 р., 08/462,513, поданій 5 червня 1995 р., 08/724,752, поданій 2 жовтня 1996 р., 08/759,620, поданій
З грудня 1996 р., публікації США 2003/0093820, поданій 30 листопаду 2001 р., і патентах США 6,162,963, 6,150,584, 6,114,598, 6,075,181 і 5,939,598, а також японських патентах З 068 180 В2,
З 068 506 82 і 3 068 507 В2. Див. також Європейський Патент ЕР 0 463 151 В1, наданий для публікації 12 червня 1996 р., Міжнародну патентну заявку МО 94/02602, опубліковану З лютого 1994 р., Міжнародну патентну заявку УМО 96/34096, опубліковану 31 жовтня 1996 р., МО 98/24893, опубліковану 11 червня 1998 р., УМО 00/76310, опубліковану 21 грудня 2000 р.
Розкриття кожного з процитованих вище патентів, заявок і посилань, таким чином, включено шляхом посилання в повному обсязі.
В альтернативному підході інші, зокрема, СепРНатт Іпіегпайопаї, Іпс., застосовували підхід "мінілокусу". У підході мінілокусу, екзогенний локус Ід імітують шляхом введення фрагментів (індивідуальні гени) локусу Ід. Таким чином, один або більше генів Ун, один або більше генів Юн, 60 один або більше генів Ун, константна ділянка ти, і, звичайно, друга константна ділянка
(переважно, константна ділянка гама) формують конструкт для вставки в організм тварини.
Даний підхід описаний в патенті США 5,545,807, виданому Зигапі із співавт., і патентах США 5,545,806, 5,625,825, 5,625,126, 5,633,425, 5,661,016, 5,770,429, 5,789,650, 5,814,318, 5,877,397, 5,874,299 і 6,255,458, кожен з яких виданий І опбрего і Кау, патентах США 5,591,669 і 6,023.010, виданих Кгітрепіогі і Вегп5, патентах США 5,612,205, 5,721,367 і 5,789,215, виданих Вегп5 із співавт., і патенті США 5,643,763, виданому Спої і Оипп, патентних заявках США СепРпагт
Іпіепгпайіопаї!ї, серійний номер 07/574,748, поданій 29 серпня 1990 р., 07/575,962, поданій 31 серпня 1990 р., 07/810,279, поданій 17 грудня 1991 р., 07/853,408, поданій 18 березня 1992 р., 07/904,068, поданій 23 червня 1992 р., 07/990,860, поданій 16 грудня 1992 р., 08/053,131, поданій 26 квітня 1993 р., 08/096,762, поданій 22 липня 1993 р., 08/155,301, поданій 18 листопаду 1993 р., 08/161,739, поданій З грудня 1993 р., 08/165,699, поданій 10 грудня 1993 р., 08/209,741, поданій 9 березня 1994 р., розкриття яких, таким чином, включено шляхом посилання. Див. також Європейський патент Мо 0 546 073 ВІ1, Міжнародні патентні заявки УМО 92/03918, МО 92/22645, МО 92/22647, МО 92/22670, МО 93/12227, МО 94/00569, МО 94/25585,
УМО 96/14436, УМО 97/13852 і УМО 98/24884 і патент США 5,981,175, розкриття яких, таким чином, включено шляхом посилання в повному обсязі. Див. також Тауїог єї а!., 1992, Спеп еї аї., 1993,
Тиаїоп еї аї., 1993, Сної еї аї., 1993, І опрега еї аї., (1994), Тауог єї аї., (1994), і Тиайоп еї аї., (1995), РівПпм/ій еї аї., (1996), розкриття яких, таким чином, включено шляхом посилання в повному обсязі.
Кігіп також продемонстрував генерацію людських антитіл мишами, яким були введені, шляхом мікроклітинного злиття, великі фрагменти хромосом або повнорозмірні хромосоми. Див.
Європейські патентні заявки 773 288 і 843 961, розкриття яких, таким чином, включено шляхом посилання. Додатково, одержані миші КМП, які є результатом схрещування мишей Тс Кіїгіп з мінілокусними мишами Медагех (Нитарб). Такі миші несуть людську трансхромосому ІН мишей
Кігіп і трансгенні ланцюги капа мишей Сепрпагт (Ізпіда еї аї., Сіопіпа бієт СеїІв (2002) 4:91- 102).
Людські антитіла також можуть бути одержані за способами іп міїго. Відповідні приклади включають, не обмежуючись ними, показ фага (САТ, Могрпозух, Юуах, Віозйе/Медагех, Хота, бЗутрподеп, АЇІехіоп (у минулому Ргоїїїтегоп), Айітейа), показ рибосоми (САТ), показ дріжджів,
Зо тощо.
У деяких варіантах антитіла, описані в даному описі, містять важкі ланцюги Ід4 людини, а також важкі ланцюги Ідс2. Антитіла також можуть належати до інших людських ізотипів, зокрема, Ідс1. Антитіла володіли високою спорідненістю, звичайно з Ка від приблизно 105 до приблизно 10-33 М або нижче, при вимірюванні різними методами.
Слід розуміти, що антитіла можуть експресуватися в інших лініях клітин, окрім ліній клітин гібридоми. Послідовності, що кодують конкретні антитіла, можуть використовуватися для перетворення відповідної ссавцевої клітини-хазяїна. Трансформація може бути здійснена за будь-яким відомим способом для введення полінуклеотидів в клітину-хазяїна, зокрема, наприклад, пакуванням полінуклеотиду у вірус (або у вірусний вектор) і трансфекцію клітини- хазяїна вірусом (або вектором) або за методиками трансфекції, відомими з рівня техніки, наприклад, патенти США 4,399,216, 4,912,040, 4,740,461 ї 4,959,455 (вказані патенти, таким чином, включені до даного опису шляхом посилання). Використовувана методика трансформації залежить від хазяїна, який підлягає трансформації. Способи введення гетерологічних полінуклеотидів в клітини ссавців добре відомі з рівня техніки і включають опосередковану декстраном трансфекцію, осадження кальцію фосфатом, опосередковану полібреном трансфекцію, злиття протопластів, електропорацію, інкапсуляцію полінуклеотиду(ів) у ліпосоми і пряму мікроін'єкцію ДНК в ядра.
Доступні лінії клітин ссавців як хазяї для експресії добре відомі з рівня техніки і включають численні безсмертні ліній клітин, доступних від Американської Колекції Типових Культур (АКТК), зокрема, але, не обмежуючись ними, клітини яєчника китайського хом'яка (СНО), клітини Нега, ниркові клітини дитинчат хом'яка (ВНК), ниркові клітини мавпи (СО5), клітини гепатоцелюлярної карциноми людини (наприклад, Нер 02), клітини ниркового епітелію людини 293, і цілий ряд інших ліній клітин. Особливо переважні лінії клітин вибирають шляхом відбору ліній клітин з високими рівнями експресії і продукуванням антитіл з конститутивними властивостями зв'язування з РОБКО.
У деяких варіантах антитіла та/або АЗБ продукує, щонайменше одна з наступних гібридом: 21812, З1НА4, 16Е12, будь-які інші гібридоми, наведені в табл. 2 або розкриті в прикладах. У деяких варіантах антигензв'язувальні білки зв'язуються з РСБ5КОУ з константою дисоціації (Ко) менше ніж приблизно 1 нМ, наприклад, від 1000 пМ до 100 пМ, від 100 пМ до 10 пМ, від 10 пмМ 60 до 1 пМ та/або від 1 пМ до 0,1 пМ або менше.
У деяких варіантах антигензв'язувальні білки містять молекулу імуноглобуліну, щонайменше одного 3 ізотипів Ідс1, /дс2, ІдсЗ, Ідс4, ЧЕ, ЧА, ІД4О і ДМ. У деяких варіантах антигензв'язувальні білки містять людський легкий ланцюг капа та/або людський важкий ланцюг. У деяких варіантах важкий ланцюг належить до ізотипу Іде, Іде2, дез, Тас4, ІЧЗЕ, ІдА,
ІЧО або І9М. У деяких варіантах антигензв'язувальні білки клоновані для експресії в клітинах ссавців. У деяких варіантах антигензв'язувальні білки містять іншу константну ділянку, окрім будь-якої з константних ділянок ізотипу Ідс1, Ідс2, Іде, Ідсе4, ЧЕ, ІдА, до і дм.
У деяких варіантах антигензв'язувальні білки містять людський легкий ланцюг лямбда і людський важкий ланцюг Ідс2. У деяких варіантах антигензв'язувальні білки містять людський легкий ланцюг лямбда і людський важкий ланцюг Ід54. У деяких варіантах антигензв'язувальні білки містять людський легкий ланцюг лямбда і людський важкий ланцюг Ідс1, дез, ІДЧЕ, ІдА,
ІЧО або ІдМ. В інших варіантах антигензв'язувальні білки містять людський легкий ланцюг капа і людський важкий ланцюг Ідс2. У деяких варіантах антигензв'язувальні білки містять людський легкий ланцюг капа і людський важкий ланцюг ІдС4. У деяких варіантах антигензв'язувальні білки містять людський легкий ланцюг капа і людський важкий ланцюг Ідс1, дез, ЧЕ, ІдА, дО або ДМ. У деяких варіантах антигензв'язувальні білки містять варіабельні ділянки антитіл, ліговані з константною ділянкою, яка не є ані константною ділянкою для ізотипу Ідс2, ані константною ділянкою для ізотипу Ідс4. У деяких варіантах антигензв'язувальні білки клоновані для експресії в клітинах ссавців.
У деяких варіантах консервативні модифікації важких і легких ланцюгів антитіл, щонайменше із однієї з ліній гібридоми: 21812, З1НА і 16Е12 (і відповідні модифікації кодуючих нуклеотидів) даватимуть антитіла проти РОКУ, володіючі функціональними і хімічними характеристиками, подібними до антитіл з ліній гібридоми: 21812, З1НА ії 16Е12. І, навпаки, в деяких варіантах істотні модифікації функціональних та/або хімічних характеристик антитіл проти РОЗКУ можуть бути досягнуті шляхом вибору замін в послідовності амінокислот важких і легких ланцюгів, які істотно відрізняються за їх впливом на збереження (а) структури молекулярного скелета основи в ділянці заміни, наприклад, як листової або спіральної конформації, (б) заряду або гідрофобності молекули на цільовому сайті, або (в) більшої частини бічного ланцюга.
Зо Наприклад, "консервативна заміна амінокислоти" може включати заміну природного залишку амінокислоти неприродним залишком, таким чином, що присутній незначний або відсутній вплив на полярність або заряд залишку амінокислоти в даному положенні. Крім того, будь-який природний залишок в поліпептиді також може бути замінений аланіном, як було описано раніше для "аланінсканувального мутагенезу".
Бажані заміни (консервативні або неконсервативні) амінокислот можуть бути визначені фахівцем в даній галузі в той час, коли такі заміни будуть бажаними. У деяких варіантах заміни амінокислот можуть використовуватися для ідентифікації значущих залишків антитіл проти
РОСБКО, або підвищення або зниження спорідненості антитіл до РСБ5КО, як описано в даному описі.
У деяких варіантах антитіла за даним винаходом можуть експресуватися в інших лініях клітин, окрім ліній клітин гібридоми. У деяких варіантах послідовності, що кодують конкретні антитіла, можуть використовуватися для трансформації придатної ссавцевої клітини-хазяїна.
Відповідно до деяких варіантів, трансформація може бути здійснена за будь-яким відомим способом для введення полінуклеотидів в клітину-хазяїна, зокрема, наприклад, пакуванням полінуклеотиду у вірус (або у вірусний вектор) і трансфекцію клітини-хазяїна вірусом (або вектором) або за методиками трансфекції, відомими з рівня техніки, наприклад, патенти США 4,399,216, 4,912,040, 4,740,461 і 4,959,455 (вказані патенти, таким чином, включені до даного опису шляхом посилання для будь-якої мети). У деяких варіантах використовувана методика трансформації може залежати від хазяїна, який підлягає трансформації. Способи введення гетерологічних полінуклеотидів в клітини ссавців добре відомі з рівня техніки і включають, не обмежуючись ними, опосередковану декстраном трансфекцію, осадження кальцію фосфатом, опосередковану полібреном трансфекцію, злиття протопласта, електропорацію, інкапсуляцію полінуклеотиду(ів) в ліпосоми і пряму мікроін'єкцію ДНК в ядра.
Доступні лінії клітин ссавців як хазяї для експресії добре відомі з рівня техніки і включають численні безсмертні лінії клітин, доступні від Американської Колекції Типових Культур (АКТК), зокрема, але, не обмежуючись ними, клітини яєчника китайського хом'яка (СНО), клітини Нега, ниркові клітини дитинчат хом'яка (ВНК), ниркові клітини мавпи (СО5), клітини гепатоцелюлярної карциноми людини (наприклад, Нер 02), клітини ниркового епітелію людини 293, і цілий ряд інших ліній клітин. У деяких варіантах лінії клітин можуть бути вибрані шляхом відбору ліній бо клітин з високими рівнями експресії і продукуванням антитіл з конститутивними властивостями зв'язування з фактором росту гепатоцитів (ФРГ). Придатні вектори експресії для ссавцевих клітин-хазяїв добре відомі.
У деяких варіантах антигензв'язувальні білки містять один або більше поліпептидів. У деяких варіантах будь-яка з різноманітних систем вектор експресії/хазяїн може використовуватися для експресії молекул полінуклеотиду, кодуючих поліпептиди, що містять один або більше компонентів АЗБ або безпосередньо АЗБ. Такі системи включають, не обмежуючись ними, мікроорганізми, наприклад, бактерії, трансформовані рекомбінантним бактеріофагом, плазміду або космідні вектори експресії ДНК; дріжджі, трансформовані дріжджовими векторами експресії; системи клітин комах, інфіковані вірусними векторами експресії (наприклад, бакуловірус); системи рослинних клітин, трансфіковані вірусними векторами експресії (наприклад, вірус мозаїки цвітної капусти, Саму, вірус мозаїки тютюну,
ТММ) або трансформовані бактеріальними векторами експресії (наприклад, Ті або плазміда рве322); або системи тваринних клітин.
У деяких варіантах поліпептид, що містить один або більше компонентів АЗБ або безпосередньо АЗБ, рекомбінантно експресується в дріжджах. У деяких з таких варіантів використовуються комерційно доступні системи експресії, наприклад, система експресії Рісніа (Іпмігодеп, Сан Дієго, Каліфорнія), відповідно до інструкцій виробника. У деяких варіантах така система залежить від послідовності рге-рго-альфа для спрямування секреції. У деяких варіантах транскрипцією вставки управляє промотор алкогольоксидази (АОХТ) в умовах індукції метанолом.
У деяких варіантах виділений поліпептид, що містить один або більше компонентів АЗБ або безпосередньо АЗБ, очищують із середовища культивування дріжджів. У деяких варіантах способи, використовувані для очищення поліпептиду із середовища культивування дріжджів, є такими ж, як застосовуються для очищення поліпептиду від супернатантів бактеріальних клітин і ссавцевих клітин.
У деяких варіантах нуклеїнова кислота, що кодує поліпептид, який містить один або більше компонентів АЗБ або безпосередньо АЗБ, клонована у вектор експресії бакуловірусу, наприклад, рмі 1393 (Рпагміпдеп, Сан Дієго, Каліфорнія). У деяких варіантах такий вектор може застосовуватися згідно вказівкам виробника (РпагМміпдеп) для інфікування клітин 5родорієга
Зо тидірегаа у вільних від білка середовищах 5ЕЗ9 і продукування рекомбінантного поліпептиду. У деяких варіантах поліпептид очищають і концентрують із такого середовища з використанням колонки гепарин-Сефароза (РПпагтасіа).
У деяких варіантах поліпептид, що містить один або більше компонентів АЗБ або безпосередньо АЗБ, експресується в системі комахи. Деякі системи комахи для експресії поліпептиду добре відомі фахівцям в даній галузі. В одній із таких систем, вірус ядерного поліедрозу Ашодгарга саїпогпіса (АСМРМУ) використовується як вектор для експресії чужорідних генів в клітинах 5родоріеєга пидірегаа або в личинках Тгіспоріивіа. У деяких варіантах молекула нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид, може бути вставлена в несуттєвий ген вірусу, наприклад, в межах гена полієдрину, і розміщена під контролем промотору для вказаного гена.
У деяких варіантах успішна вставка молекули нуклеїнової кислоти буде утримувати несуттєвий ген в неактивному стані. У деяких варіантах така інактивація дає детектовану характеристику.
Наприклад, інактивація гена поліедрину приводить до утворення вірусу без оболонкового білка.
У деяких варіантах рекомбінантні віруси можуть використовуватися для інфікування клітин
З. пидірегда або личинок Ттгіспоріивзіа. Див., наприклад, Зтійй еї аї., У. Мігоі., 46: 584 (1983);
ЕподеїНагао еї аї., Ргос. Маї. Асад. 5сі. (ОА), 91: 3224-7 (1994).
У деяких варіантах поліпептиди, що містять один або більше компонентів АЗБ або безпосередньо АЗБ, одержують в бактеріальних клітинах, продукованими у вигляді нерозчинних тілець включення в бактеріях. У деяких варіантах клітини-хазяї, що містять такі тільця включення, відокремлюють центрифугуванням; промивають в 0,15 М Масі, 10 мм Трис, рН 8, 1 мМ ЕДТА; та обробляють 0,1 мг/мл лізоциму (Зідта, Сент-Луїс, Міссурі) протягом 15 хв при кімнатній температурі. У деяких варіантах лізат освітлюють ультразвуком, та уламки клітин гранулюють центрифугуванням протягом 10 хв із швидкістю 12 000 х д. У деяких варіантах гранулу, що містить поліпептид, ресуспендують в 50 мМ Трис, рН 8, і 10 мМ ЕДТА; нашаровують на 50 95 гліцерин; і центрифугують протягом 30 хв при 6000 х 9. У деяких варіантах така гранула може бути ресуспендована в стандартному буферизованому фосфатом сольовому розчині (ФБР), вільному від Мод і Са-. У деяких варіантах поліпептид додатково очищують, фракціонуючи ресуспендовану гранулу в денатуруючому натрій лаурилсульфат- поліакриламідному гелі (див., наприклад, ЗатюбгооК із співавт..., вище). У деяких варіантах такий гель може бути просочений 0,4 М КСІ для візуалізації білка, який може бути вирізаний та бо електроелюйований в буфері для аналізу на гелі, що не містить натрію лаурилсульфату. 5О0
Відповідно до деяких варіантів, злитий білок, глутатіон-5-трансфераза (ГСТ) виробляється в бактеріях як розчинний білок. У деяких варіантах такий злитий білок ГСТ очищують з використанням модуля очищення ГСТ (РПаптасіа).
У деяких варіантах бажано "повторно згорнути" деякі поліпептиди, наприклад, поліпептиди, що містять один або більше компонентів АЗБ або безпосередньо АЗБ. У деяких варіантах такі поліпептиди продукують з використанням деяких рекомбінантних систем, обговорюваних в даному описі. У деяких варіантах поліпептиди "повторно згортають" та/"або окиснюють, щоб сформувати бажану третинну структуру та/(або генерувати дисульфідні зв'язки. У деяких варіантах така структура та/або зв'язки мають відношення до певної біологічної активності поліпептиду. У деяких варіантах повторне згортання здійснюють з використанням будь-якої із цілого ряду методик, відомих з рівня техніки. Приклади способів включають, не обмежуючись ними, контакт із солюбілізуючим поліпептид агентом, звичайно, при рН вище 7, в присутності хаотропного агента. Прикладом хаотропного агента є гуанідин. У деяких варіантах розчин для повторного згортання/окиснення також містить відновлювальний агент і окиснену форму такого відновлювального агента. У деяких варіантах відновлювальний агент і його окиснена форма присутні у співвідношенні, яке генеруватиме конкретний редоксо-потенціал, що дозволяє дисульфідне перетасування. У деяких варіантах таке перетасування дозволяє утворення цистеїнових містків. Приклад редоко-пар включає, не обмежуючись ними, цистеїн/цистамін, глутатіон/дитіобісглутатіон, міді хлорид, дитіотрейтол ДТТ/дитіан ДТТ і 2-меркаптоетанол (БМЕ)/дитіо-ОМЕ. У деяких варіантах, співрозчинник використовується для підвищення ефективності повторного згортання. Приклади співрозчинників включають, не обмежуючись ними, гліцерин, поліетиленгліколь з різною молекулярною масою та аргінін.
У деяких варіантах проводять істотне очищення поліпептиду, що містить один або більше компонентів АЗБ або безпосередньо АЗБ. Деякі методи очищення білка відомі фахівцям в даній галузі. У деяких варіантах очищення білка включає фракціонування неочищеної речовини для відокремлення поліпептидних частинок від не поліпептидних частинок. У деяких варіантах поліпептиди очищають з використанням хроматографічних та/або електрофоретичних методів.
Приклади методів очищення включають, не обмежуючись ними, осадження сульфатом амонію; осадження ПЕГ, імунопреципітацію; денатурування нагріванням З подальшим
Зо центрифугуванням; хроматографію, зокрема, але, не обмежуючись ними, ащфінну хроматографію (наприклад, протеїн-А-сефароза), іонообмінну хроматографію, ексклюзійну хроматографію та обернено-фазову хроматографію; гель-фільтрацію; хроматографію на гідроксіапатиті; ізоелектричне фокусування; електрофорез на поліакриламідному гелі; і комбінації вказаних та інших методів. У деяких варіантах поліпептид очищають швидкою рідинною хроматографією білка або рідинною хроматографією з високим тиском (ВЕРХ). У деяких варіантах стадії очищення можуть бути модифіковані, або деякі стадії можуть бути опущені, та все ж даватимуть придатний спосіб одержання істотною мірою очищеного поліпептиду.
У деяких з варіантів кількісно визначають ступінь очищення препарату поліпептиду. Деякі способи кількісного визначення ступеню очищення відомі фахівцям в даній галузі. Деякі приклади способів включають, не обмежуючись ними, визначення специфічної активності зв'язування препарату і оцінку кількості поліпептгиду в препараті методом 50О5/РАСБЕ. Деякі приклади способів кількісної оцінки очищення препарату поліпептиду включають обчислення активності зв'язування препарату та порівняння її з активністю зв'язування початкового екстракту. У деяких варіантах результати такого обчислення виражають як "кратність очищення". Одиниці, використовувані для кількісного представлення активності зв'язування, залежать від конкретного аналізу, що проводиться.
У деяких варіантах поліпептид, що містить один або більше компонентів АЗБ або безпосередньо АЗБ, частково очищений. У деяких варіантах часткове очищення може бути здійснене з використанням меншої кількості стадій очищення або різних форм однієї і тієї ж загальної схеми очищення. Наприклад, в деяких варіантах катіонообмінна колонкова хроматографія, що проводиться з використанням приладу для ВЕРХ, загалом, даватиме більшу "кратність очищення", ніж така ж методика з використанням системи хроматографії з низьким тиском. У деяких варіантах способи, що дають нижчий ступінь очищення, можуть надавати перевагу з точки зору загального виходу поліпептиду або збереження у поліпептиду активності зв'язування.
В деяких випадках, електрофоретична міграція поліпептиду може варіювати, іноді значно, за різних умов ЗОЗ/РАСЕ. Див., наприклад, Сараїйаі єї а!., Віоспет. Віорпуз. Ве5. ботт., 76: 425 (1977). Слід розуміти, що в різних умовах електрофорезу очевидна молекулярна маса бо очищеного або частково очищеного поліпептиду може відрізнятися.
ПРИКЛАДИ ЕПІТОПІВ
Запропоновані епітопи, з якими зв'язуються анти-РС5КУ антитіла. У деяких варіантах епітопи, з якими зв'язуються розкриті в даному описі антитіла, є особливо придатними. У деяких варіантах антигензв'язувальні білки, які зв'язуються з будь-яким з епітопів, що зв'язуються з антитілами, описаними в даному описі, є придатними. У деяких варіантах епітопи, зв'язані з будь-яким із антитіл, наведених в табл. 2 і на фіг. 2 і 3, є особливо придатними. У деяких варіантах епітоп розташований на каталітичному домені РОЗКО.
У деяких варіантах епітоп РО5КОУ може використовуватися для попередження (наприклад, зменшення) зв'язування анти-РС5КУ антитіла або антигензв'язувального білка з РСБ5КОУ. У деяких варіантах епітоп РОБКОУО може використовуватися для зменшення зв'язування анти-
РСОБКОУ антитіла або антигензв'язувального білка з РОЗКУ. У деяких варіантах епітоп РСБ5КОУ може використовуватися, щоб істотною мірою перешкодити зв'язуванню анти-РС5КО антитіла або антигензв'язувального білка з РСБКОУ.
У деяких варіантах епітоп РОЗКУО може використовуватися для виділення антитіл або антигензв'язувальних білків, що зв'язуються з РОС5КОУ. У деяких варіантах епітоп РОЗКОУ може використовуватися для генерації антитіл або антигензв'язувальних білків, що зв'язуються з
РСОБКОУ. У деяких варіантах епітоп РОКУ або послідовність, що містить епітоп РОЗКОУ, може використовуватися як імуногенний засіб для генерації антитіл або антигензв'язувальних білків, що зв'язуються з РОКУ. У деяких варіантах епітоп РО5КОУ можна вводити тварині, і антитіла, що зв'язуються з РОЗКОУ, можуть бути згодом одержані від тварини. У деяких варіантах епітоп
РСБКОУО або послідовність, що містить епітоп РОСБКУ, може використовуватися, щоб перешкодити нормальній опосередкованій РСО5КОУ активності, такій як асоціація РОКУ з
ЛІПНЩР.
У деяких варіантах антигензв'язувальні білки, розкриті в даному описі, зв'язуються специфічно з М-кінцевим рго-доменом, субтилізин-подібним каталітичним доменом та/або С- кінцевим доменом. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок зв'язується з жолобком зв'язування РСОБК-9 із субстратом (описаний в Сиппіпудйат із співавт., включена до даного опису в повному обсязі шляхом посилання).
У деяких варіантах домен(и)/ділянка(ки), що містить залишки, які знаходяться у контакті з
Зо або приховані антитілом, може бути ідентифікований шляхом мутації конкретних залишків в
РОБКУ (наприклад, антиген дикого типу) і визначення того, чи може антигензв'язувальний білок зв'язуватися 3 мутантним або варіантним білком РОСБКУ. Шляхом створення ряду індивідуальних мутацій, можуть бути ідентифіковані залишки, які відіграють пряму роль в зв'язуванні або які знаходяться в достатній близькості до антитіла, таким чином, що мутація може вплинути на зв'язування між антигензв'язувальним білком та антигеном. Визначення таких амінокислот може пролити світло на домен(и) або ділянку(ки) антигену, які містять залишки у контакті з антигензв'язувальним білком або вкриті антитілом. Такий домен може містити епітоп зв'язування з антигензв'язувальним білком. В одному з конкретних прикладів даного загального підходу використовується протокол сканування аргініну/глутамінової кислоти (див., наприклад,
Мапемісл, Т., єї аї!., 1995, 9. Віої. Спет., 270:37, 21619-21625 і 2ирпіскК, А., еї аї., 2006, 9. Віо|.
Спет., 281:29, 20464-20473). В цілому, аргініном і глутаміновою кислотою замінюють (звичайно, індивідуально) амінокислоти в поліпептиді дикого типу, оскільки дані амінокислоти заряджені та об'ємні, і, таким чином володіють потенціалом руйнування зв'язування /- між антигензв'язувальним білком і антигеном на ділянці антигену, де здійснена мутація. Залишки аргініну, які присутні в антигені дикого типу, замінюють глутаміновою кислотою. Одержують спектр таких індивідуальних мутантів, і одержані результати зв'язування аналізують з метою визначення того, які залишки впливають на зв'язування.
Модифікація (наприклад, зменшення або збільшення) зв'язування між антигензв'язувальним білком і варіантом РОКУ в даному описі означає, що присутня зміна спорідненості зв'язування (наприклад, виміряна відомими методами, такими як випробування Віасоге або аналіз на основі гранул, описані в прикладах нижче), ЕСво та/або зміна (наприклад, зменшення) загальної ємності зв'язування антигензв'язувального білка (наприклад, за даними зменшення Втах на графіку концентрації антигензв'язувального білка проти концентрації антигену). Значна зміна зв'язування вказує на те, що мутантний залишок безпосередньо бере участь в зв'язуванні з антигензв'язувальним білком або знаходиться в достатній близькості до зв'язувального білка, коли зв'язувальний білок зв'язується з антигеном.
У деяких варіантах істотне зменшення зв'язування означає, що спорідненість зв'язування,
ЕС5БО та/або ємність між антигензв'язувальним білком і мутантним антигеном РСЗКУ знижена більш, ніж на 10 95, більш, ніж на 20 95, більш, ніж на 40 95, більш, ніж на 50 95, більш, ніж на 60 55 95, більш, ніж на 60 95, більш, ніж на 65 95, більш, ніж на 70 95, більш, ніж на 75 95, більш, ніж на 80 95, більш, ніж на 85 95, більш, ніж на 90 95, або більш, ніж на 95 95, щодо зв'язування між антигензв'язувальним білком і РОЗКОУ дикого типу (наприклад, показаним в 5ЕО ІЮ МО: 1 та/або
ЗЕО ІО МО: (303). У деяких варіантах зв'язування зменшується нижче за межі детектування. У деяких варіантах говорять про істотне зменшення зв'язування, якщо зв'язування антигензв'язувального білка з варіантом білка РОЗКОУ становить менш, ніж 50 95 (наприклад, менш, ніж 40 95, 35 Фо, ЗО 95, 25 о, 20 95, 15 95 або 10 95) від зв'язування, спостережуваного між антигензв'язувальним білком і білюьом РСО5КОУ дикого типу (наприклад, білок ЗЕО ІЮ МО: 1 та/або
ЗЕБЕО ІЮ МО: (303). Такі вимірювання зв'язування можуть бути проведені з використанням різноманітних аналізів зв'язування, відомих з рівня техніки.
У деяких варіантах запропоновані антигензв'язувальні білки, які демонструють істотне зниження зв'язування з варіантом білка РОЗКУ, в якому залишок в білюу РОЗКУ дикого типу (наприклад, ЗЕО ІЮО МО: 1 або 5ЕО ІО МО: 303) замінений аргініном або глутаміновою кислотою.
У деяких варіантах зв'язування антигензв'язувального білка істотно зменшене або збільшене для варіанту білка РО5КО, що містить будь-яку одну або більше (наприклад, 1,2, 3,4,5,6,7,8, 9, 10 або 244) з наступних мутацій: К207Е, 0208, К185Е, К439Е, Е5Б1ІЗК, М538Е, Е5З9Р,
Т1328, 53518, АЗООВ, А41З3А, Е5828, 01628, В164Е, Е167В, 51238, Е1298, АЗІТ1А, 03138, раз37к, К519Е, Н521К і 0554, в порівнянні з білюоом РСОБКОУ дикого типу (наприклад, 5ЕО І
МО: 1 або 5ЕО ІО МО: 303). У короткій нотації, використовуваній в даному описі, формат є наступним: залишок дикого типу: положення в поліпептиді: мутантний залишок, із нумерацією залишків, як показано в ЗЕО ІЮО МО: 1 або 5ЕО ІЮО МО: 303.
У деяких варіантах зв'язування антигензв'язувального білка істотно зменшене або збільшене для мутантного білка РОЗКО, що містить одну або більше (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5 або більше) мутацій в наступних положеннях: 207, 208, 185, 181, 439, 513, 538, 539, 132, 351, 390, 413, 582, 162, 164, 167, 123, 129, 311, 313, 337, 519, 521 і 554, як показано в ЗЕО ІО МО: 1, в порівнянні з білком РОЗКОУ дикого типу (наприклад, 5ЕО ІЮ МО: 1 або ЗЕО ІЮ МО: 303). У деяких варіантах зв'язування антигензв'язувального білюа зменшене або збільшене для мутантного білка РОКУ, що містить одну або більше (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5, або більше) мутацій в наступних положеннях: 207, 208, 185, 181, 439, 513, 538, 539, 132, 351, 390, 413, 582, 162, 164, 167, 123, 129, 311, 313, 337, 519, 521 і 554, як показано в 5ЕО ІЮО МО: 1, в порівнянні з білком
Зо РСОБЗКОУ дикого типу (наприклад, ЗЕО ІЮО МО: 1 або 5ЕО ІО МО: 303). У деяких варіантах зв'язування антигензв'язувального білка істотною мірою зменшене або збільшене для мутантного білка РСОБ5КО, що містить одну або більше (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5 або більше) мутацій в наступних положеннях: 207, 208, 185, 181, 439, 513, 538, 539, 132, 351, 390, 413, 582, 162, 164, 167, 123, 129, 311, 313, 337, 519, 521 і 554, в межах ЗЕО ІО МО: 1, в порівнянні з білком РОЗКУ дикого типу (наприклад, ЗЕО ІЮ МО: 1 або 5ЕО ІО МО: 303).
У деяких варіантах зв'язування з АЗБ істотно зменшене або збільшене для мутантного білка
РОБКУО, що містить одну або більше (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5, тощо) із наступних мутацій: К207Е, рговА, ВІ1І85Е, В439Е, Е51З3В8, У5388, Е5З9ВА, Т1328, 53518, АЗООВ, АЯ1ЗА, Е582НА, 01628,
В164Е, Е167В, 51238, Е129В, АЗІТ1В8, 0313, 0337, К519Е, Н521К і 0554Е. в межах ЗЕО ІЮ
МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 303, в порівнянні з білюом РОКУ дикого типу (наприклад, ЗЕО ІЮО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 303).
У деяких варіантах зв'язування з АЗБ істотно зменшене або збільшене для мутантного білка
РОБКУО, що містить одну або більше (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5, тощо) із наступних мутацій: К207Е, ргове, К185Е, К439Е, Е5ІЗЕК, М538К, Е5ЗО9К, Т1321, 5351, АЗООРГ, А413Е і Е582Е. в межах
ЗЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 303, в порівнянні з білюоом РО5КОУ дикого типу (наприклад, 5ЕО ІЮ
МО: 1 або 5ЕО ІЮО МО: 303). У деяких варіантах зв'язування зменшене. У деяких варіантах зменшення зв'язування спостерігається як зміна ЕС50. У деяких варіантах зміна ЕС5О являє собою збільшення чисельного значення ЕС50 (і, таким чином, представляє зменшення зв'язування).
У деяких варіантах зв'язування з АЗБ істотно зменшене або збільшене для мутантного білка
РСОБКУО, що містить одну або більше (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5, тощо) із наступних мутацій: 0162,
В164Е, Е167В, 51238, Е129В, АЗІтТ1В8, 0313, 03378, В519Е, Н521Е ії 0554Е. в межах ЗЕО ІЮ
МО: 1, в порівнянні з білюоом РОКУ дикого типу (наприклад, 5ЕО ІЮ МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 303).
У деяких варіантах зв'язування зменшене. У деяких варіантах зменшення зв'язування спостерігається як зміна Втах. У деяких варіантах зсув Втах представляє зменшення максимального сигналу, що генерується АЗБ. У деяких варіантах для амінокислоти, яка є частиною епітопу, значення Втах знижене, щонайменше на 10 95, наприклад, зниження, щонайменше на будь-яку з наступних величин: 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 98, 99 або 100 95 може, в деяких варіантах, указувати на те, що залишок є частиною епітопу.
Хоча на наведені безпосередньо вище варіанти посилаються відносно послідовності дикого типу, показаної в БЕО ІЮ МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 303, слід розуміти, що в алельному варіанті
РОБКОУ амінокислота у вказаному положенні може відрізнятися. Антигензв'язувальні білки, що демонструють істотно нижче зв'язування з такими алельними формами РОБКУ9, також передбачені. Відповідно, в деяких варіантах будь-який із згаданих вище варіантів може швидше порівнюватися з алельною послідовністю, ніж винятково з послідовністю дикого типу, показаною на фіг. 1А
У деяких варіантах зв'язування антигензв'язувального білка істотно зменшене для варіанту білка РОБ5КО, в якому залишок у вибраному положенні білка РС5КОУ дикого типу мутований до будь-якого іншого залишку. У деяких варіантах даного опису описані заміни аргініну/глутамінової кислоти використовуються для ідентифікованих положень. У деяких варіантах аланін використовується для ідентифікованих положень.
Як наголошувалося вище, залишки, що безпосередньо беруть участь в зв'язуванні або вкриті антигензв'язувальним білком, можуть бути ідентифіковані на основі результатів сканування. Такі залишки можуть, таким чином, забезпечити вказівку на домени або ділянки
ЗЕО ІЮО МО: 1 (або 5ЕО ІО МО: 303 або ЗЕО ІЮ МО: 3), які містять ділянку(ки) зв'язування, з якою зв'язуються антигензв'язувальні білюи. Як можна побачити з результатів, підсумованих в
Прикладі 39, в деяких варіантах антигензв'язувальний білок зв'язується з ділянкою, яка містить, щонайменше одну з амінокислот: 207, 208, 185, 181, 439, 513, 538, 539, 132, 351, 390, 413, 582, 162, 164, 167, 123, 129, 311, 313, 337, 519, 521 і 554 5ЕО ІЮ МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 303. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок зв'язується з ділянкою, яка містить, щонайменше одну з амінокислот 207, 208, 185, 181, 439, 513, 538, 539, 132, 351, 390, 413, 582, 162, 164, 167, 123, 129, 311, 313, 337, 519, 521 ії 554 5ЕО ІЮО МО: 1 або 5ЕО ІЮ МО: 303.
У деяких варіантах антигензв'язувальний білок зв'язується з ділянкою, яка містить, щонайменше одну з амінокислот 162, 164, 167, 207 та/або 208 5ЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІЮО МО: 303. У деяких варіантах більш ніж одним (наприклад, 2, 3, 4, або 5) із ідентифікованих залишків є частина ділянки, яка зв'язується з АЗБ. У деяких варіантах АЗБ конкурує з АЗБ 21812.
У деяких варіантах антигензв'язувальний білок зв'язується з ділянкою, яка містить, щонайменше одну з амінокислоти 185 ЗЕО ІЮ МО: 1 або 5ЕО ІО МО: 303. У деяких варіантах
Зо АЗБ конкурує з АЗБ З1НАа.
У деяких варіантах антигензв'язувальний білок зв'язується з ділянкою, яка містить, щонайменше одну з амінокислот 439, 513, 538 та/або 539 5ЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІО МО: 303. У деяких варіантах більш ніж один (наприклад, 2, З або 4) із ідентифікованих залишків є частиною ділянки, яка зв'язується з АЗБ. У деяких варіантах АЗБ конкурує з АЗБ 31А4.
У деяких варіантах антигензв'язувальний білок зв'язується з ділянкою, яка містить, щонайменше одну з амінокислот 123, 129, 311, 313, 337, 132, 351, 390 та/або 413 5ЕО ІЮ МО: 1 або 5ЕО ІО МО: 303. У деяких варіантах більш ніж один (наприклад, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 або 9) із ідентифікованих залишків є частиною ділянки, яка зв'язується з АЗБ. У деяких варіантах АЗБ конкурує з АЗБ 12Н11.
У деяких варіантах антигензв'язувальний білок зв'язується з ділянкою, яка містить, щонайменше одну з амінокислот 582, 519, 521 та/або 554 5ЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІО МО: 303. У деяких варіантах більш ніж один (наприклад, 2, З або 4) із ідентифікованих залишків є частиною ділянки, яка зв'язується з АЗБ. У деяких варіантах АЗБ конкурує з АЗБ ЗС4.
У деяких варіантах антигензв'язувальні білки зв'язуються з вищеописаними ділянками в межах фрагмента або повнорозмірної послідовності ЗЕО ІЮ МО: 1 або ЗЕО ІО МО: 303. В інших варіантах антигензв'язувальні білки зв'язуються з поліпептидами, що складаються з таких ділянок. Посилання на "ЗЕО ІЮ МО: 1 або 5ЕО ІЮО МО: 303" означає, що одна або обидві із цих послідовностей можуть використовуватися або є доречними. Вираз не означає, що слід використовувати тільки одну.
Як наголошується вище, у вищевикладеному описі конкретні положення амінокислот наведені із посиланням на 5ЕО ІО МО: 1. Однак, в описі в цілому, посилання зроблено на домен
Рго/Саї, який розпочинається в положенні 31, запропонованому в ЗЕО ІЮ МО: 3. Як наголошується нижче, в 5БЕО ІЮО МО: 1 та 5ЕО ІЮО МО: 303 відсутня сигнальна послідовність
РОБКУ. Таким чином, будь-яке порівняння між цими різними розкриттям повинно приймати до уваги дану різницю в нумерації. Зокрема, будь-яке положення амінокислоти в ЗЕО ІЮО МО: 1, відповідатиме положенню амінокислоти на 30 амінокислот далі в білку ЗЕБЕО ІЮ МО: 3.
Наприклад, положення 207 5ЕО ІО МО: 1 відповідає положенню 237 5ЕБО ІО МО: З (повнорозмірна послідовність і система нумерації, загалом використовувана в даному описі).
Табл. 39.6 у загальних рисах показує, яким чином відзначені вище положення з посиланням на 60 ЗЕО ІЮО МО: 1 (та/"або 5ЕО ІЮ МО: 303) відповідають 5ЕО ІЮО МО: З (яка містить сигнальну послідовність). Таким чином, будь-який з відзначених вище варіантів, які описані з посиланням на ЗЕО ІЮ МО: 1 (талабо 5ЕБЕО ІО МО: 303), описаний з посиланням на 5ЕО ІЮ МО: З та відповідними відзначеними положеннями.
У деяких варіантах АЗБ 21812 зв'язується з епітопом, що містить залишки 162-167 (наприклад, залишки 0162-Е167 5ЕО ІО МО: 1). У деяких варіантах АЗБ 12НІ11 зв'язується з епітопом, який містить залишки 123-132 (наприклад, 5123-1132 5БО ІЮО МО: 1). У деяких варіантах АЗБ 12НІ11 зв'язується з епітопом, який містить залишки 311-313 (наприклад, АЗ11- 0313 ЗЕО ІЮ МО: 1). У деяких варіантах АЗБ можуть зв'язуватися з епітопом, містить будь-яку із послідовностей цих ланцюгів.
КОНКУРУЮЧІ АНТИГЕНЗВ'ЯЗУВАЛЬНІ БІЛКИ
В іншому аспекті запропоновані антигензв'язувальні білки, які конкурують з одним із прикладів антитіл або функціональних фрагментів, що зв'язуються з епітопом, описаному в даному описі, за специфічне зв'язування з РО5КОУ. Такі антигензв'язувальні білки можуть також зв'язуватися з тим же епітопом, що і один з наведених в даному описі як приклад антигензв'язувальних білків, або з епітопом, що частково перекривається. Очікується, що антигензв'язувальні білки ії фрагменти, які конкурують або зв'язуються з тим же епітопом, що і наведені для прикладу антигензв'язувальні білки, демонструватимуть подібні функціональні властивості. Наведені для прикладу антигензв'язувальні білки і фрагменти включають описані вище, зокрема, такі, що містять важкі і легкі ланцюги, домени варіабельних ділянок і СОК, проілюстровані в табл. 2 та/або на фіг. 2-3. Таким чином, як конкретний приклад, запропоновані антигензв'язувальні білки включають такі, що конкурують з антитілом або антигензв'язувальним білком, що містить: (а) всі 6 СОК, перераховані для антитіла, наведеного на фіг. 2-3; (б) МН і МІ, перераховані для антитіла, наведеного в табл. 2; або (в) два легких ланцюги і два важких ланцюги, як визначено для антитіла, наведеного в табл. 2.
ТЕРАПЕВТИЧНІ ФАРМАЦЕВТИЧНІ КОМПОЗИЦІЇ І ВВЕДЕННЯ
У даному винаході пропонуються фармацевтичні композиції, що містять антигензв'язувальні білки проти РОКУ. У даному описі "фармацевтична композиція (препарат) -- це стерильна
Зо композиція фармацевтично активного лікарського засобу, а саме, щонайменше одного антигензв'язувального білка проти РОКУ, придатна для парентерального введення (зокрема, але, не обмежуючись ними, внутрішньовенного, внутрішньом'язового, підшкірного, аерозольного, внутрішньолегеневого, інтраназального або інтратекального) хворому, який потребує цього, і містить тільки фармацевтично прийнятні допоміжні речовини, розбавлювачі та інші добавки, визнані безпечними Федеральним Управлінням Лікарських Засобів або національними відомствами інших країн. Фармацевтичні композиції включають рідину, наприклад, водні розчини, які можуть бути введені безпосередньо, і ліофілізовані порошки, які можуть бути розбавлені з одержанням розчинів шляхом додавання розбавлювача перед введенням. Конкретно виключені з контексту терміну "фармацевтична композиція (препарат)" композиції для місцевого застосування у хворих, композиції для прийому всередину і композиції для парентерального харчування.
У деяких варіантах фармацевтична композиція є стабільною фармацевтичною композицією.
У даному описі вирази "стабільна фармацевтична композиція (препарат), "стабільна композиція (препарат)" або "фармацевтична композиція (препарат) є стабільною" позначають фармацевтичну композицію біологічно активних білків, яка демонструє підвищену агрегацію та/або знижену втрату біологічної активності не більш, ніж 5 95 в умовах зберігання при 2-87 0, щонайменше протягом 1 місяця або 2 місяців, або З місяців, або 6 місяців, або 1 року або 2 років, в порівнянні з контрольним зразком композиції. Стабільність композиції може бути легко визначена фахівцем в даній галузі з використанням будь-якої кількості стандартних аналізів,
БО зокрема, але, не обмежуючись ними, ексклюзійної ВЕРХ ("ЕК-ВЕРХ"), катіонообмінної ВЕРХ (КО-ВЕРХ), виявленням мікроскопічних частинок за розсіюванням світла ("НІАС") та/або візуальною перевіркою.
У деяких варіантах фармацевтична композиція містить будь-який з антигензв'язувальних білків проти РОБКОУ, проілюстрованих в табл. 2 і на фіг. 2 та/або З ії фіг. 48А і 488. У деяких інших варіантах фармацевтична композиція може містити інші антигензв'язувальні білки проти
РОСБКУО; а саме, антитіло, що складається з варіабельного домену легкого ланцюга, 5ЕО ІО МО: 588, і варіабельного домену важкого ланцюга, 5ЕО ІЮ МО: 589. У деяких варіантах фармацевтична композиція містить будь-який з 21812, 26Н5, 31На4, 8АЗ, 11Е1 або 8А1.
У деяких варіантах фармацевтична композиція містить більш ніж один інший бо антигензв'язувальний білок проти РОЗКОУ. У деяких варіантах фармацевтичні композиції містять більш ніж один антигензв'язувальний білок проти РСОБ5КО, причому антигензв'язувальні білки проти РСБКОУ зв'язуються більш ніж з одним оепітопом. У деяких варіантах різні антигензв'язувальні білки не конкуруватимуть один з одним за зв'язування із РОБ5КОУ. У деяких варіантах будь-які з антигензв'язувальних білків, проілюстрованих в табл. 2 і на фіг. 2 та/або З можуть бути поєднані у фармацевтичній композиції.
У деяких варіантах антигензв'язувальний білок проти РО5КОУ та/або терапевтична молекула сполучені з носієм, що збільшує період напіввиведення, який відомий в даній галузі. Такий носій включає, не обмежуючись ними, поліетиленгліколь, глікоген (наприклад, глікозилювання АЗБ) і декстран. Такий носій описаний, наприклад, в заявці США, серійний номер 09/428,082, на даний час патент США 6,660,843, і опублікованій заявці РСТ УМО 99/25044, які, таким чином, включені шляхом посилання для будь-якої мети.
У деяких варіантах прийнятні матеріали композиції переважно є нетоксичними для реципієнтів у використовуваних дозах і концентраціях. У деяких варіантах матеріал(и) композиції призначені для п/ш та/або в/в введення. У деяких варіантах фармацевтична композиція містить матеріали композиції для модифікації, підтримки або збереження, наприклад, рН, осмолярності, в'язкості, прозорості, кольору, ізотонічності, запаху, стерильності, стабільності, швидкості розчинення або вивільнення, адсорбції або проникнення композиції.
У деяких варіантах відповідні матеріали композиції включають, не обмежуючись ними, амінокислоти (наприклад, пролін, аргінін, лізин, метіонін, таурин, гліцин, глутамін або аспарагін); протимікробні речовини; антиоксиданти (наприклад, аскорбінова кислота, натрію сульфіт або натрію гідросульфіт); буфери (наприклад, борат, бікарбонат, натрію фосфат ("Маодс"), Трис-
НСІ, буфер Трис, цитрати, фосфатний буфер, буферизований фосфатом сольовий розчин (тобто, буфер ФБР) або інші органічні кислоти); наповнювачі (наприклад, маніт або гліцин); хелатні агенти (наприклад, етилендіамінтетраоцтова кислота (ЕДТА)); комплексоутворювальні агенти (наприклад, кофеїн, полівінілпіролідон, бета-циклодекстрин або гідроксипропіл-бета- циклодекстрин); наповнювачі; моносахариди; дисахариди; та інші вуглеводи (наприклад, глюкоза, сахароза, фруктоза, лактоза, маноза, трегалоза або декстрини); білки (наприклад, альбумін сироватки, желатин або імуноглобуліни); барвники, смакові добавки і розбавлювачі; емульгатори; гідрофільні полімери (наприклад, полівінілпіролідон); низькомолекулярні
Зо поліпептиди; солеутворювальні протиїони (наприклад, натрій); консерванти (наприклад, бензалконію хлорид, бензойна кислота, саліцилова кислота, тимеросал, фенетиловий спирт, метилпарабен, пропілпарабен, хлоргексидин, сорбінова кислота або пероксид водню); розчинники (наприклад, гліцерин, пропіленгліколь або поліетиленгліколь); цукрові спирти (наприклад, маніт або сорбіт); суспендувальні агенти; поверхнево-активні речовини або зволожувачі (наприклад, плюроники, ПЕГ, ефіри сорбітану, полісорбати, такі як полісорбат 20, полісорбат 80, тритон, трометамін, лецитин, холестерин, тилоксапол); агенти для підвищення стабільності (наприклад, сахароза або сорбіт); агенти для збільшення тонічності (наприклад, галогеніди лужних металів, переважно, натрію або калію хлорид, маніт, сорбіт); розчинник для введення; розбавлювачі; допоміжні речовини та/або фармацевтичні ад'юванти. (Ветіпдіоп'є РІапттасеціїса! бсієпсев, 181" Едйіоп, А.В. Сеппаго, єд., Маск Рибіїзпіпд Сотрапу (1995).
У деяких варіантах оптимальна фармацевтична композиція буде визначена фахівцем в даній галузі в залежності від, наприклад, передбаченого способу введення, формату введення і бажаних доз. Див., наприклад, ВКетіпаїоп'є Рпаппасешіса! бсіеєпсез, вище. У деяких варіантах такі композиції можуть впливати на фізичний стан, стабільність, швидкість вивільнення іп умімо і швидкість кліренсу антитіл за винаходом іп мімо.
В одному з аспектів фармацевтична композиція містить високі концентрації антигензв'язувального білка проти РСО5КОУ. У деяких варіантах інтервал концентрації АЗБ становить від приблизно 70 мг/мл до приблизно 250 мг/мл, наприклад, приблизно 70 мг/мл, приблизно 80 мг/мл, приблизно 90 мг/мл, приблизно 100 мг/мл, приблизно 100 мг/мл, приблизно
БО 120 мг/мл, приблизно 130 мг/мл, приблизно 140 мг/мл, приблизно 150 мг/мл, приблизно 160 мг/мл, приблизно 170 мг/мл, приблизно 180 мг/мл, приблизно 190 мг/мл, приблизно 200 мг/мл, приблизно 210 мг/мл, приблизно 220 мг/мл, приблизно 230 мг/мл, приблизно 240 мг/мл або приблизно 250 мг/мл, і, зокрема, всі значення між ними. У деяких варіантах концентрація 21812, 26Н5 або 31Н4 знаходиться в інтервалі від приблизно 100 мг/мл до приблизно 150 мг/мл, наприклад, 100 мг/мл, приблизно 100 мг/мл, приблизно 120 мг/мл, приблизно 130 мг/мл, приблизно 140 мг/мл або приблизно 150 мг/мл. У деяких варіантах концентрація 8АЗ, 11Е1 або 8А1 варіює від приблизно 140 мг/мл до приблизно 220 мг/мл, наприклад, 140 мг/мл, приблизно 150 мг/мл, приблизно 160 мг/мл, приблизно 170 мг/мл, приблизно 180 мг/мл, приблизно 190 мг/мл, приблизно 200 мг/мл, приблизно 210 мг/мл, приблизно 220 мг/мл або приблизно 250 бо мг/мл.
В іншому аспекті фармацевтична композиція містить, щонайменше один буферизуючий агент, такий як, наприклад, натрію ацетат, натрію хлорид, фосфати, буферизований фосфатом сольовий розчин ("ФБР") та/або буфер Трис, рН приблизно 7,0-8,5. Буфер служить для підтримки фізіологічно прийнятного значення рН. Крім того, буфер може служити цілям підвищення ізотонічності і хімічної стабільності фармацевтичної композиції. У деяких варіантах вміст буферизуючого агента варіює від приблизно 0,05 мМ до приблизно 40 мМ, наприклад, приблизно 0,05 мМ, приблизно 0,1 мМ, приблизно 0,5 мМ, приблизно 1,0 мм, приблизно 5,0 мМ, приблизно 10 мМ, приблизно 15 мМ, приблизно 20 мМ, приблизно 30 мМ, приблизно 40 мМ, приблизно 50 мМ, приблизно 60 мМ, приблизно 70 мМ, приблизно 80 мМ, приблизно 90 мМ, або приблизно 100 нМ буферизуючого агента, в тому числі, всі значення між ними. У деяких варіантах буферизуючий агент являє собою МаОАС. Приклади значень рН фармацевтичної композиції включають від приблизно 4 до приблизно 6, або від приблизно 4,8 до приблизно 5,8, або від приблизно 5,0 до приблизно 5,2, або приблизно 5, або приблизно 5,2.
У деяких варіантах фармацевтична композиція є ізотонічною, з осмоляльністю в межах від приблизно 250 до приблизно 350 мОсм/кг, наприклад, приблизно 250 мОсм/кг, приблизно 260 мОсм/кг, приблизно 270 моОсм/кг, приблизно 280 мОсм/кг, приблизно 290 мОсм/кг, приблизно 300 мОсм/кг, приблизно 310 мОсм/кг, приблизно 320 мОсм/кг, приблизно 330 моОсм/кг, приблизно 340 мОсм/кг або приблизно 350 моОсм/кг, і, зокрема, всі значення між ними. У даному описі "осмоляльність" є мірою співвідношення розчинних речовин до об'єму рідини. Іншими словами, це кількість молекул та іонів (або молекул) на кг розчину. Осмоляльність може бути виміряна на аналітичному приладі під назвою осмометр, такому як осмометр Адмапсей
Іпвігитепів 2020 Мийі-затріє, Норвуд, Массачусетс. Осмометр Айдмапсей Іпзігитепів 2020 Мийі- затріе вимірює осмоляльність з використанням методу зниження точки замерзання. Чим вище вміст осмолітів у розчині, тим нижче знижується температура, при якій він замерзає.
Осмоляльність також можна виміряти з використанням будь-яких інших методів та в будь-яких інших одиницях, відомих з рівня техніки, наприклад, лінійною екстраполяцією.
Ще в одному аспекті фармацевтична композиція містить, щонайменше одну поверхнево- активну речовину, зокрема, але, не обмежуючись ними, Полісорбат-80, Полісорбат-60,
Полісорбат-40 і Полісорбат-20. У деяких варіантах фармацевтична композиція містить
Зо поверхнево-активну речовину в концентрації, що варіює від приблизно 0,004 95 до приблизно 1095, мас/об ("мас/об") композиції, наприклад, приблизно 0,004 95, приблизно 0,005 95, приблизно 0,006 95, приблизно 0,007 956, приблизно 0,008 95, приблизно 0,009 95, приблизно 0,01 95, приблизно 0,05 95, приблизно 0,1 95, приблизно 0,5 95, приблизно 1 95, приблизно 5 95, або приблизно 10 95, мас/об поверхнево-активної речовини в композиції. У деяких варіантах фармацевтична композиція містить полісорбат 80 в концентрації, що варіює від приблизно 0,004 95 до приблизно 0,1 95, мас/об композиції. У деяких варіантах фармацевтична композиція містить полісорбат 20 в концентрації, що варіює від приблизно 0,004 95 до приблизно 0,1 95, мас/об композиції.
У деяких варіантах фармацевтична композиція містить, щонайменше один стабілізуючий агент, наприклад, полігідроксивуглеводень (зокрема, але, не обмежуючись ними, сорбіт, маніт, гліцерин і дульцит) та/або дисахарид (зокрема, але, не обмежуючись ними, сахарозу, лактозу, мальтозу і трегалозу) та/або амінокислоту (зокрема, але, не обмежуючись ними, пролін, аргінін, лізин, метіонін і таурин) та/або бензиловий спирт; загальний зміст вказаного полігідроксивуглеводню та/або дисахариду та/або амінокислоти та/або бензилового спирту становить від приблизно 0,595 до приблизно 10 95, мас/об композиції. У деяких варіантах фармацевтична композиція містить стабілізуючий агент в концентрації приблизно 1 95, приблизно 2 95, приблизно З 95, приблизно 4 95, приблизно 5 95, приблизно 6 95, приблизно 7 95, приблизно 8595, приблизно 9595 або приблизно 1095 сахарози. У деяких варіантах фармацевтична композиція містить стабілізуючий агент в концентрації приблизно 5 95 сахарози.
У деяких варіантах фармацевтична композиція містить стабілізуючий агент в концентрації приблизно 1 95, приблизно 2 95, приблизно З 95, приблизно 4 95, приблизно 5 95, приблизно 6 95, приблизно 7 95, приблизно 895, приблизно 995 або приблизно 1095 сорбіталю. У деяких варіантах фармацевтична композиція містить стабілізуючий агент в концентрації приблизно 9 95 сорбіталю. У деяких варіантах фармацевтична композиція містить стабілізуючий агент в концентрації приблизно 1 95, приблизно 2 95, приблизно З 95, приблизно 4 95, приблизно 5 95 проліну, аргініну, лізину, метіоніну та/або таурину. У деяких варіантах фармацевтична композиція містить стабілізуючий агент в концентрації в інтервалі приблизно 2-3 95 проліну. У деяких варіантах фармацевтична композиція містить стабілізуючий агент в концентрації приблизно 1 95, приблизно 2 95, приблизно З 95, приблизно 4 95, приблизно 5 95 бензилового спирту. У деяких варіантах фармацевтична композиція містить стабілізуючий агент в концентрації в інтервалі приблизно 1-2 95 бензилового спирту.
В одному з аспектів в'язкість фармацевтичної композиції становить менш ніж приблизно 30 сантипуансон (СП), за даними вимірювання при кімнатній температурі (тобто, 25" С). У даному описі "в'язкість" являє собою опір рідини витіканню, і може бути виміряна в одиницях сантипуансони (СП) або міліпаскаль-с (мПа-с), причому 1 сП - 1 мПа-с, при заданій швидкості зсуву. В'язкість може бути виміряна з використанням віскозиметру, наприклад, Вгооктеїа
Еподіпеегіпд Оіа! Кеайдіпд Міхзсотеїег, модель ІМТ. В'язкість також може бути виміряна з використанням будь-яких інших способів і в будь-яких інших одиницях, відомих з рівня техніки (наприклад, абсолютна, кінематична або динамічна в'язкість або абсолютна в'язкість). У деяких варіантах рівень в'язкості фармацевтичної композиції становить менш ніж приблизно 25 сП, приблизно 20 СП, приблизно 18 СП, приблизно 15 СП, приблизно 12 сП, приблизно 10 сп; приблизно 8 СП, приблизно 6 сП, приблизно 4 сП; приблизно 2 сП; або приблизно 1 сП.
В одному з аспектів фармацевтична композиція є стабільною за даними вимірювання, щонайменше за допомогою одного аналізу стабільності, відомого фахівцю в даній галузі, наприклад, аналізу, в якому досліджують біофізичні або біохімічні характеристики біологічно активних білків у часі. Як згадано вище, стабільна фармацевтична композиція за даним винаходом є фармацевтичною композицією біологічно активних білків, які демонструють підвищену агрегацію та/або зменшене зниження біологічної активності не більше ніж 5 95, в умовах зберігання при 2-87 С, щонайменше протягом 1 місяця або 2 місяців, або З місяців, або 6 місяців, або 1 року або 2 років, в порівнянні з контрольним зразком композиції. У деяких варіантах стабільність фармацевтичної композиції вимірюють з використанням ексклюзійної
ВЕРХ (СЕК-ВЕРХ"М. ЕК-ВЕРХ розділяє білки на підставі їх відмінностей в гідродинамічних об'ємах. Молекули з великим гідродинамічним об'ємом білків елююються раніше, ніж молекули з меншими об'ємами. У випадку ЕК-ВЕРХ, стабільна фармацевтична композиція повинна продемонструвати збільшення вмісту високомолекулярних форм не більш ніж на 595, в порівнянні з контрольною вибіркою. У деяких інших варіантах фармацевтична композиція повинна продемонструвати збільшення змісту високомолекулярних форм не більше 4 95, не більше З 95, не більше 2 95, не більше 1 95, не більше 0,595, в порівнянні з контрольною
Зо вибіркою.
У деяких варіантах стабільність фармацевтичної композиції вимірюють з використанням катіонообмінної ВЕРХ (КО-ВЕРХ). КО-ВЕРХ розділяє білки на базі відмінностей їх поверхневого заряду. При встановленому значенні рН, заряджені ізоформи анти-РС5КУ АЗБ розділяють на катіонообмінній колонці та елююють з використанням градієнта солі. Елюент контролюють за
УФ-поглинанням. Розподіл зарядженої ізоформи оцінюють, визначаючи площу піку кожної ізоформи як відсоток загальної площі піку. У випадку КО-ВЕРХ, стабільна фармацевтична композиція повинна продемонструвати зменшення не більше ніж на 595 основного піку ізоформи в порівнянні з контрольною вибіркою. У деяких інших варіантах, стабільна фармацевтична композиція повинна продемонструвати зменшення не більше ніж на 3-5 95 основного піку ізоформи в порівнянні з контрольною вибіркою. У деяких варіантах фармацевтична композиція повинна продемонструвати зменшення не більше ніж на 4 95, зменшення не більше ніж на З 95, зменшення не більше ніж на 2 95, зменшення не більше ніж на 195, зменшення не більше ніж на 0,5 95 основного піку ізоформи в порівнянні з контрольною вибіркою.
У деяких варіантах стабільність фармацевтичної композиції вимірюють з використанням виявлення мікроскопічних частинок за розсіюванням світла ("НІАС"). Електронна система підрахунку частинок в рідині (НІАС/Коусо 9703 або еквівалентна), обладнана датчиком розсіювання світла (НІАС/Коусо НА О-150 або еквівалентним) з пристроєм для відбору зразків рідини визначає кількість частинок та інтервал їх розміру в даному досліджуваному зразку.
Якщо частинки в рідині проходять між джерелом світла і детектором, вони зменшують або "затемнюють" пучок світла, який падає на детектор. Якщо концентрація частинок знаходиться в межах нормального інтервалу датчика, такі частинки виявляються по одній. Проходження кожної частинки через зону виявлення зменшує світло, що падає на фотодетектор, і напруга на виході фотодетектора негайно знижується. Зміни напруги реєструють як електричні імпульси, які прилад переводить в кількість присутніх частинок. Метод є неспецифічним, і вимірює частинки незалежно від їх походження. Контрольовані розміри частинки складають, загалом, 10 мкм і 25 мкм. У випадку НІАС, стабільна фармацевтична композиція повинна продемонструвати не більше 6000 частинок розміром 10 мкм на контейнер (або одиницю), в порівнянні з контрольною вибіркою. У деяких варіантах стабільна фармацевтична композиція повинна 60 продемонструвати не більше 5000, не більше 4000, не більше 3000, не більше 2000, не більше
1000 частинок розміром 10 мкм на контейнер (або одиницю), в порівнянні з контрольною вибіркою. В інших варіантах стабільна фармацевтична композиція повинна продемонструвати не більше 600 частинок розміром 25 мкм на контейнер (або одиницю), в порівнянні з контрольною вибіркою. У деяких варіантах стабільна фармацевтична композиція повинна продемонструвати не більше 500, не більше 400, не більше 300, не більше 200, не більше 100, не більше 50 частинок розміром 25 мкм на контейнер (або одиницю), в порівнянні з контрольною вибіркою.
У деяких варіантах стабільність фармацевтичної композиції вимірюють з використанням візуальної оцінки. Візуальна оцінка є якісним методом, використовуваним для опису видимих фізичних характеристик зразка. Зразок розглядають проти чорного фону та/або білого фону в камері для перевірки, в залежності від оцінюваної характеристики (наприклад, колір, прозорість, присутність частинок або чужорідної речовини). Зразки також розглядають проти референтного стандарту опалесценції та референтних стандартів кольору. У випадку візуальної оцінки, стабільна фармацевтична композиція не повинна демонструвати істотної зміни кольору, прозорості, присутності частинок або чужорідної речовини, в порівнянні з контрольною вибіркою.
Одним з аспектів даного винаходу є фармацевтична композиція, яка містить: (ї) від приблизно 70 мг/мл до приблизно 250 мг/мл антигензв'язувального білка проти РОЗКУО; (ії) від приблизно 0,05 мМ до приблизно 40 мМ буфера, такого як натрію ацетат ("МаорАС") в ролі буферизуючого агента; (ії) від приблизно 195 до приблизно 595 проліну, аргініну, лізину, метіоніну або таурину (також відомого, як 2-аміноетансульфонова кислота) та/або від 0,5 95 до приблизно 5 95 бензилового спирту, який служить стабілізуючим агентом; і (їм) від приблизно 0,004 95 до приблизно 10 95, мас/об композиції неіонної поверхнево-активної речовини (зокрема, але, не обмежуючись ними, Полісорбату-80, Полісорбату-60, Полісорбату-40 і Полісорбату-20); причому рН вказаної композиції знаходиться в інтервалі від приблизно 4,0 до 6,0. У деяких інших варіантах фармацевтичні композиції за даним винаходом містять (ї), щонайменше приблизно 70 мг/мл, приблизно 100 мг/мл, приблизно 120 мг/мл, приблизно 140 мг/мл, приблизно 150 мг/мл, приблизно 160 мг/мл, приблизно 170 мг/мл, приблизно 180 мг/мл, приблизно 190 мг/мл, приблизно 200 мг/мл анти-РОЗКЗ антитіла; (і) приблизно 10 мМ МАОАС;
Зо (ії) приблизно 0,01 95 полісорбату 80; і (ім) приблизно 2-3 95 проліну (або від приблизно 250 мМ до приблизно 270 мМ проліну), при тому, що рН композиції становить приблизно 5. У деяких інших варіантах фармацевтичні композиції за даним винаходом містять () щонайменше приблизно 70 мг/мл, приблизно 100 мг/мл, приблизно 120 мг/мл, приблизно 140 мг/мл анти-
РОЗКЗУ антитіла, 21812, 26Н5 та/або З1НА; (ії) приблизно 10 мМ МАОАС; (іїї) приблизно 0,01 95 полісорбату 80; і (ім) приблизно 2-3 95 проліну (або від приблизно 250 мМ до приблизно 270 мМ проліну), при тому, що рН композиції становить приблизно 5. В деяких інших варіантах, фармацевтичні композиції за даним винаходом містять (ї), щонайменше приблизно 150 мг/мл, приблизно 160 мг/мл, приблизно 170 мг/мл, приблизно 180 мг/мл, приблизно 190 мг/мл, приблизно 200 мг/мл анти-РО5КО антитіла, 8АЗ, 11Е1 та/або 8А1; (ії) приблизно 10 мМ МАСАС; (ії) приблизно 0,01 95 полісорбату 80; і (ім) приблизно 2-3 95 проліну (або від приблизно 250 мМ до приблизно 270 мМ проліну), при тому, що рН композиції становить приблизно 5.
Одним 3 аспектів даного винаходу є фармацевтична композиція, яка містить (Її) щонайменше, від приблизно 70 мг/мл до приблизно 250 мг/мл анти-РС5КО антитіла; (ії) від приблизно 5 мМ до приблизно 20 мМ буфера, наприклад, МАОАС; (іїї) від приблизно 1 95 до приблизно 1095, мас/об композиції полігідроксивуглеводню, наприклад, сорбіту, або дисахариду, наприклад, сахарози; і (ім) від приблизно 0,004 95 до приблизно 10 95, мас/об композиції поверхнево-активної речовини, наприклад, полісорбату 20 або полісорбату 80; причому рН вказаної композиції становить приблизно від 4,8 до 5,8; при тому, що фармацевтична композиція необов'язково містить від приблизно 80 мМ до приблизно 300 мМ проліну, аргініну, лізину, метіоніну або таурину та/або від 0,5 95 до приблизно 5 95 бензилового спирту, який служить меті зниження в'язкості У деяких інших варіантах фармацевтичні композиції за даним винаходом містять (ї) щонайменше, від приблизно 70 мг/мл до приблизно 250 мг/мл анти-РО5КУОУ антитіла; (ії) приблизно 10 мМ МАОАС; (ії) приблизно 9 95 сахарози; і (їм) приблизно 0,004 95 полісорбату 20, причому рН композиції становить приблизно 5,2. У деяких інших варіантах фармацевтичні композиції за даним винаходом містять (ї) щонайменше приблизно 70 мг/мл, приблизно 100 мг/мл, приблизно 120 мг/мл, приблизно 140 мг/мл, приблизно 160 мг/мл, приблизно 180 мг/мл, приблизно 200 мг/мл анти-РС5КО антитіла; (ії) приблизно 15 мМ МАОАС; (ії) приблизно 9 95 сахарози; і (м) приблизно 0,01 95 полісорбату 20, при тому, що рН композиції становить приблизно 5,2. У деяких інших варіантах фармацевтичні бо композиції за даним винаходом містять () щонайменше приблизно 70 мг/мл, приблизно 100 мг/мл, приблизно 120 мг/мл, приблизно 140 мг/мл, приблизно 160 мг/мл, приблизно 180 мг/мл, приблизно 200 мг/мл анти-РС5КУ антитіла; (ії) приблизно 20 мМ МАОАС; (іїї) приблизно 9 95 сахарози; і (ім) приблизно 0,01 95 полісорбату 20, причому рН композиції становить приблизно 5,2. У деяких інших варіантах фармацевтичні композиції за даним винаходом містять (Її) щонайменше приблизно 70 мг/мл, приблизно 100 мг/мл, приблизно 120 мг/мл, приблизно 140 мг/мл, приблизно 160 мг/мл, приблизно 180 мг/мл, приблизно 200 мг/мл анти-РО5КО антитіла; (ії) приблизно 10 мМ МАОАС; (ії) приблизно 9 95 сахарози; (ім) приблизно 0,01 95 полісорбату 80; і (м) приблизно 250 мМ проліну, причому рН композиції становить приблизно 5.
Фармацевтичні композиції за винаходом можна вводити у складі комбінованої терапії, тобто, в поєднанні з іншими засобами. У деяких варіантах комбінована терапія включає антигензв'язувальний білок, здатний до зв'язування з РОЗКО, в комбінації, щонайменше з одним антихолестеринемічним засобом. Засоби включають, не обмежуючись ними, одержані іп мйто синтетичні хімічні композиції, антитіла, антигензв'язувальні ділянки, а також їх комбінації і кон'югати. У деяких варіантах агент може діяти як агоніст, антагоніст, алостеричний модулятор або токсин. У деяких варіантах дія агента може полягати в інгібуванні або стимуляції мішені (наприклад, активація або інгібування рецептора або ферменту), і, таким чином, сприянні підвищенню експресії ЛЛНЩР або зниженні рівнів холестерину в сироватці.
У деяких варіантах антигензв'язувальний білок проти РОЗКОУ може вводитися до, одночасно з і після лікування засобом для зниження рівня холестерину (у сироватці та/або загального холестерину). У деяких варіантах антигензв'язувальний білок проти РСЗКОУО можна вводити профілактично, щоб попередити або пом'якшити початок гіперхолестеринемії, захворювання серця, діабету та/або будь-якого із пов'язаних з холестерином розладів. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок проти РСБКУО можна вводити для лікування існуючого гіперхолестеринемічного стану. У деяких варіантах АЗБ відсовує початок розладу та/або симптомів, пов'язаних з розладом. У деяких варіантах АЗБ пропонують суб'єкту, у якого відсутні які-небудь симптоми будь-якого із пов'язаних з холестерином розладів або їх підмножина.
У деяких варіантах антигензв'язувальний білок проти РОБКО застосовується з конкретними терапевтичними засобами для лікування різноманітних пов'язаних з холестерином розладів, таких як гіперхолестеринемія. У деяких варіантах, з урахуванням стану і бажаного рівня
Ко) лікування, можна вводити два, три або більше засобів. У деяких варіантах такі засоби можуть бути забезпечені спільно шляхом введення в одну і ту ж саму композицію. У деяких варіантах такий засіб(оби) і антигензв'язувальний білок проти РОБКОУ можуть бути забезпечені спільно шляхом введення в одну і ту ж саму композицію. У деяких варіантах такі засоби можуть бути введені в композиції окремо і забезпечені спільно шляхом включення до схеми лікування. У деяких варіантах такі засоби і антигензв'язувальний білок проти РОЗКОУ можуть бути введені в композиції окремо і забезпечені спільно шляхом включення до схеми лікування. У деяких варіантах такі засоби можуть бути забезпечені окремо.
У деяких варіантах композиція, що містить антигензв'язувальний білок проти РОБКО, щонайменше з одним додатковим терапевтичним засобом або без нього, може бути підготовлена для зберігання шляхом змішування вибраної композиції, що володіє бажаним ступенем чистоти, з необов'язковими агентами композиції (ВНетіпдїоп'є Рнаптасецшіїса! Зсієепсев, вище) у формі ліофілізованої грудки або водного розчину. Додатково, в деяких варіантах композиція, що містить антигензв'язувальний білок проти РС5КО, щонайменше з одним додатковим терапевтичним засобом або без нього, може бути одержана як ліофілізат, з використанням відповідних допоміжних речовин.
У деяких варіантах, якщо передбачено парентеральне введення, терапевтична композиція може знаходитися у формі апірогенного, придатного для парентерального введення водного розчину, що містить бажаний антигензв'язувальний білок проти РСОБЗКУ, з додатковими терапевтичними засобами або без них, у фармацевтично прийнятному носії. У деяких варіантах носій для парентеральної ін'єкції є стерильною дистильованою водою, що містить антигензв'язувальний білок проти РОЗКОУО, щонайменше з одним додатковим терапевтичним засобом або без нього, одержану у формі стерильного, ізотонічного розчину, з необхідними консервантами. У деяких варіантах композиція може містити препарат бажаної молекули з агентом, таким як ін'єкційні мікросфери, біорозкладані частинки, полімерні сполуки (наприклад, полімолочна кислота або полігліколева кислота), гранули або ліпосоми, що може забезпечити контрольоване або безперервне вивільнення продукту, який далі може бути введений за допомогою ін'єкції депо. У деяких варіантах також може використовуватися гіалуронова кислота, і може сприяти тривалому знаходженню в кровотоку. У деяких варіантах імплантовані пристрої для доставки лікарського засобу можуть використовуватися для введення бажаної (516) молекули. бо
У деяких варіантах фармацевтична композиція може набувати форми для інгаляції. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок проти РОСБ5КО, щонайменше з одним додатковим терапевтичним засобом або без нього, може бути одержаний у формі сухого порошку для інгаляції. У деяких варіантах розчин для інгаляції, який містить антигензв'язувальний білок проти РО5КУ, щонайменше з одним додатковим терапевтичним засобом або без нього, може бути одержаний з пропелентом для доставки аерозолю. У деяких варіантах розчини можуть бути розпилені. Легеневе введення додатково описане в заявці РСТ Мо РСТ/О594/001875, в якій описано легеневе введення хімічно модифікованих білків.
У деяких варіантах фармацевтична композиція може містити ефективну кількість антигензв'язувального білка проти РОЗКОУ, щонайменше з одним додатковим терапевтичним засобом або без нього, в суміші з нетоксичними допоміжними речовинами, придатними для виробництва таблеток. У деяких варіантах шляхом розчинення таблеток в стерильній воді або іншому відповідному розчиннику, можуть бути одержані розчини в однодозовій формі. У деяких варіантах придатні допоміжні речовини включають, не обмежуючись ними, інертні розбавлювачі, такі як карбонат кальцію, карбонат або бікарбонат натрію, лактоза або фосфат кальцію; або зв'язуючі агенти, наприклад, крохмаль, желатин або акацієва камедь; або змащувачі, наприклад, стеарат магнію, стеаринову кислоту або тальк.
Додаткові фармацевтичні композиції будуть очевидними для фахівців в даній галузі, зокрема, композиції, що містять антигензв'язувальні білки проти РОС5КОУ, щонайменше з одним додатковим терапевтичним засобом(ами) або без нього, в препаратах із сповільненою або контрольованою доставкою. У деяких варіантах способи одержання різноманітних інших засобів сповільненої або контрольованої доставки, наприклад, ліпосомальні носії, біорозкладані мікрочастинки або пористі гранули та ін'єкції депо, також відомі фахівцям в даній галузі. Див. наприклад, заявку РСТ Мо РСТ/О593/00829, в якій описано контрольоване вивільнення з пористих полімерних мікрочастинок для доставки фармацевтичних препаратів. У деяких варіантах композиції із сповільненим вивільненням можуть містити напівпроникні полімерні матриці у визначеній геометричній формі, наприклад, плівки або мікрокапсули. Матриці із сповільненим вивільненням можуть містити поліефіри, гідрогелі, полілактиди (05 3,773,919 і ЕР 058,481), співполімери І-глутамінової кислоти і гама-етил-І-глутамату (Зідчтап еї аї.,
Зо Віороїтутегв, 22:547-556 (1983)), полі(2-гідроксиетилметакрилат) (І апдег еї аї., У. Віотеай. Маїгег.
Вез., 15:167-277 (1981) і І апдег, Спет. Тесп., 12:98-105 (1982)), етиленвінілацетат (І апдег із співавт., вище) або полі-О(-)-З-гідроксимасляну кислоту (ЕР 133,988). У деяких варіантах препарати із сповільненим вивільненням можуть також містити ліпосоми, які можуть бути одержані за будь-яким із декількох способів, відомих з рівня техніки. Див., наприклад, Еррзієїп еї а!., Ргос. Маї). Асад. 5сі. ОБА, 82:3688-3692 (1985); ЕР 036,676; ЕР 088,046 і ЕР 143,949.
Фармацевтична композиція для введення іп мімо звичайно є стерильною. У деяких варіантах це може бути досягнуто фільтруванням крізь мембрани для стерилізуючої фільтрації. У деяких варіантах, в яких композицію ліофілізують, стерилізація із застосуванням даного способу може проводитися до або після ліофілізації і розбавлення. У деяких варіантах композиція для парентерального введення може зберігатися в ліофілізованій формі або розчині. У деяких варіантах парентеральні композиції, загалом, вміщують до контейнеру, обладнаного стерильним портом доступу, наприклад, пакет або флакон для розчину для внутрішньовенного введення, обладнаний пробкою, яку можна проткнути голкою для підшкірних ін'єкцій.
У деяких варіантах фармацевтична композиція безпосередньо після одержання може зберігатися в стерильних флаконах як розчин, суспензія, гель, емульсія, тверда речовина або як дегідратований або ліофілізований порошок. У деяких варіантах такі композиції можуть зберігатися в готовій до застосування формі або у формі (наприклад, ліофілізованій), яку розбавляють перед введенням.
У деяких варіантах фармацевтична композиція безпосередньо після одержання може зберігатися в попередньо заповнених шприцах у вигляді розчину або суспензії в готовій до застосування формі.
У деяких варіантах запропоновані набори для одержання однодозових форм для введення.
У деяких варіантах набір може містити як перший контейнер, що містить сухий білок, так і другий контейнер, що містить водну композицію. У деяких варіантах включені набори, що містять одно- і багатокамерні попередньо заповнені шприци (наприклад, шприци з рідиною і ліошприци).
У деяких варіантах ефективна кількість фармацевтичної композиції, що містить антигензв'язувальний білок проти РОЗКОУО, щонайменше з одним додатковим терапевтичним засобом або без нього, для терапевтичного застосування буде залежати, наприклад, від бо терапевтичного контексту і завдань. Фахівцю в даній галузі буде зрозуміло, що придатні рівні дози для лікування, згідно деяких варіантів, таким чином, варіюватимуть, частково, в залежності, від молекули, що вводиться, показання, при якому застосовується антигензв'язувальний білок проти РОЗКОУО, щонайменше з одним додатковим терапевтичним засобом або без нього, способу введення і розмірів (маса тіла, площа поверхні тіла або розмір органу) та/або стану (вік і загальний стан здоров'я) хворого. У деяких варіантах клініцист може титрувати дози і змінювати спосіб введення, щоб одержати оптимальний терапевтичний ефект.
У деяких варіантах композицію можна вводити локально за допомогою імплантації мембрани, губки або іншого відповідного матеріалу, на якому бажана молекула абсорбована або в якому інкапсульована. У деяких варіантах, якщо застосовується імплантований пристрій, він може бути імплантований в будь-яку відповідну тканину або орган, і доставка бажаної молекули може здійснюватися за допомогою дифузії хронометрованого болюсу або безперервного введення.
ДОЗИ І СХЕМИ ЛІКУВАННЯ
Будь-який із антигензв'язувальних білків проти РОБКО, проілюстрованих в табл. 2 і на фіг. 2 та/або З та/або фіг. 48А і 488,7 можна вводити хворому відповідно до способів за даним винаходом. У деяких варіантах антигензв'язувальні білки проти РО5КУ включають 21812, 26Н5,
З1НА4, 8АЗ, 11Е1 або 8А1.
Кількість антигензв'язувального білка проти РОБКО (наприклад, анти-РС5КОУ антитіло), що вводиться хворому відповідно до способів за даним винаходом, загалом, є терапевтично ефективною кількістю. Кількість АЗБ може бути виражена в термінах мг антитіла (тобто, мг) або міліграмів антитіла на кілограм маси тіла хворого (тобто, мг/кг). У деяких варіантах типові дози антигензв'язувального білка проти РСБ5КО можуть варіювати від приблизно 0,1 мкг/кг до приблизно 100 мг/кг або більше антигензв'язувального білка проти РО5КОУ. У деяких варіантах доза може варіювати від 0,1 мкг/кг до приблизно 100 мг/кг; або від 1 мкг/кг до приблизно 100 мг/кг; або від 5 мкг/кг до приблизно 100 мг/кг антигензв'язувального білка проти РОЗКО; або від 1 мг/кг до приблизно 50 мг/кг антигензв'язувального білка проти РОЗКОУ; або від 2 мг/кг до приблизно 20 мг/кг антигензв'язувального білка проти РОБКО; або від 2 мг/кг до приблизно 10 мг/кг антигензв'язувального білка проти РОБКОУ.
У деяких варіантах кількість (або доза) антигензв'язувального білка проти РОБ5КОУ може
Ко) варіювати, щонайменше від приблизно 10 мг до приблизно 1400 мг; або від приблизно 14 мг до приблизно 1200 мг; або від приблизно 14 мг до приблизно 1000 мг; або від приблизно 14 мг до приблизно 800 мг; або від приблизно 14 мг до приблизно 700 мг; або від приблизно 14 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 20 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 70 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 80 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 90 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 100 мг до приблизно 480 мг, або від приблизно 105 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 110 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 115 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 120 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 125 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 130 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 135 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 140 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 145 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 150 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 160 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 170 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 180 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 190 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 200 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 210 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 220 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 230 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 240 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 250 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 260 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 270 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 280 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 290 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 300 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 310 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 320 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 330 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 340 мг до
БО приблизно 480 мг; або від приблизно 350 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 360 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 370 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 380 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 390 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 400 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 410 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 420 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 430 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 440 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 450 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 460 мг до приблизно 480 мг; або від приблизно 470 мг до приблизно 480 мг антигензв'язувального білка проти РОБКО.
У деяких варіантах частота введення враховує фармакокінетичні параметри антигензв'язувального білка проти РО5КО та/або будь-яких додаткових терапевтичних засобів у бо вживаному препараті. У деяких варіантах клініцист буде вводити препарат до досягнення дози,
яка забезпечує бажаний ефект. Таким чином, в деяких варіантах препарат можна вводити у вигляді одноразової дози, або у вигляді двох, трьох, чотирьох або більше доз (які можуть містити або не містити однакову кількість цільової молекули) через проміжки часу, або у формі безперервної інфузії через імплантований пристрій або катетер. Препарат також може бути введений підшкірно або внутрішньовенно за допомогою стандартної голки і шприца. Крім того, з урахуванням підшкірного введення, пристрої для введення у формі ручки, а також пристрої, для введення у формі аутоїнжектора знаходять застосування для введення фармацевтичної композиції за даним винаходом. Додаткове уточнення відповідних доз шаблонно проводиться середніми фахівцями в даній галузі і знаходиться в межах кола задач, шаблонно виконуваних ними. У деяких варіантах відповідні дози можуть бути визначені шляхом використання відповідних даних доза-реакція. У деяких варіантах кількість і частота введення може враховувати бажаний рівень холестерину (у сироватці та/або загальний), якого слід досягти, а також існуючий рівень холестерину у суб'єкта, рівень ЛИНЩ та/або рівні ЛЛНЩР, всіх з яких можуть бути досягнуті за способами, добре відомими фахівцям в даній галузі.
У деяких варіантах дозу, щонайменше приблизно 10 мг; або до приблизно 14 мг; або до приблизно 20 мг; або до приблизно 35 мг; або до приблизно 40 мг, або до приблизно 45 мг, або до приблизно 50 мг; або до приблизно 70 мг антигензв'язувального білка проти РО5КОУ вводять 1 раз на тиждень (КТ) хворому, який потребує цього.
У деяких інших варіантах, дозу, щонайменше приблизно 70 мг, або до приблизно 100 мг; або до приблизно 105 мг, або до приблизно 110 мг; або до приблизно 115 мг, або до приблизно 120 мг; або до приблизно 140 мг; або до приблизно 160 мг; або до приблизно 200 мг; або до приблизно 250 мг; або до 280 мг; або до 300 мг; або до 350 мг; або до 400 мг; або до 420 мг антигензв'язувального білка проти РСОБ5КОУ вводять 1 раз на 2 тижні (або кожні два тижні) (К2Т) хворому, який потребує цього.
У деяких інших варіантах дозу, щонайменше приблизно 250 мг; або до приблизно 280 мг; або до приблизно 300 мг; або до приблизно 350 мг; або до приблизно 400 мг; або до приблизно 420 мг; або до приблизно 450 мг; або до 480 мг антигензв'язувального білка проти РСБКОУ вводять 1 раз на 4 тижні (або щомісячно) хворому, який потребує цього.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше
Зо приблизно на 15 95, в порівнянні з рівнем холестерину ЛИНЩ в сироватці до введення дози. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 2095. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 25 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 30 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИПНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 40 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛЛНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 50 95. У деяких варіантах рівень холестерину
ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 55 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 6095. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 65 95.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 70 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІЛНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 75 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 80 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИПНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 85 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛЛНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 90 95.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 15 95, в порівнянні з рівнем холестерину ЛІИНЩ в сироватці до введення дози, і зниження зберігається протягом періоду, щонайменше приблизно З днів, щонайменше приблизно 5 днів, щонайменше приблизно 7 днів, щонайменше приблизно 10 днів, щонайменше
БО приблизно 14 днів, щонайменше приблизно 21 дня, щонайменше приблизно 25 днів, щонайменше приблизно 28 днів, або, щонайменше приблизно 31 дня, відносно рівня до введення дози.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 20 95, в порівнянні з рівнем холестерину ЛІИНЩ в сироватці до введення дози, і зниження зберігається протягом періоду, щонайменше приблизно З днів, щонайменше приблизно 5 днів, щонайменше приблизно 7 днів, щонайменше приблизно 10 днів, щонайменше приблизно 14 днів, щонайменше приблизно 21 дня, щонайменше приблизно 25 днів, щонайменше приблизно 28 днів, або, щонайменше приблизно 31 дня, відносно рівня до введення дози.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 25 95, в порівнянні з рівнем холестерину ЛІИНЩ в сироватці до введення дози, і зниження зберігається протягом періоду, щонайменше приблизно З днів, щонайменше приблизно 5 днів, щонайменше приблизно 7 днів, щонайменше приблизно 10 днів, щонайменше приблизно 14 днів, щонайменше приблизно 21 дня, щонайменше приблизно 25 днів, щонайменше приблизно 28 днів, або, щонайменше приблизно 31 дня, відносно рівня до введення дози.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 30 95, в порівнянні з рівнем холестерину ЛІИНЩ в сироватці до введення дози, і зниження зберігається протягом періоду, щонайменше приблизно З днів, щонайменше приблизно 5 днів, щонайменше приблизно 7 днів, щонайменше приблизно 10 днів, щонайменше приблизно 14 днів, щонайменше приблизно 21 дня, щонайменше приблизно 25 днів, щонайменше приблизно 28 днів, або, щонайменше приблизно 31 дня, відносно рівня до введення дози.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 35 95, в порівнянні з рівнем холестерину ЛІИНЩ в сироватці до введення дози, і зниження зберігається протягом періоду, щонайменше приблизно З днів, щонайменше приблизно 5 днів, щонайменше приблизно 7 днів, щонайменше приблизно 10 днів, щонайменше приблизно 14 днів, щонайменше приблизно 21 дня, щонайменше приблизно 25 днів, щонайменше приблизно 28 днів, або, щонайменше приблизно 31 дня, відносно рівня до введення дози.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 40 95, в порівнянні з рівнем холестерину ЛІИНЩ в сироватці до введення дози, і зниження зберігається протягом періоду, щонайменше приблизно З днів, щонайменше приблизно 5 днів, щонайменше приблизно 7 днів, щонайменше приблизно 10 днів, щонайменше приблизно 14 днів, щонайменше приблизно 21 дня, щонайменше приблизно 25 днів, щонайменше приблизно 28 днів, або, щонайменше приблизно 31 дня, відносно рівня до введення дози.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше
Зо приблизно на 45 95, в порівнянні з рівнем холестерину ЛЛНЩ в сироватці до введення дози, і зниження зберігається протягом періоду, щонайменше приблизно З днів, щонайменше приблизно 5 днів, щонайменше приблизно 7 днів, щонайменше приблизно 10 днів, щонайменше приблизно 14 днів, щонайменше приблизно 21 дня, щонайменше приблизно 25 днів, щонайменше приблизно 28 днів, або, щонайменше приблизно 31 дня, відносно рівня до введення дози.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 50 95, в порівнянні з рівнем холестерину ЛІИНЩ в сироватці до введення дози, і зниження зберігається протягом періоду, щонайменше приблизно З днів, щонайменше приблизно 5 днів, щонайменше приблизно 7 днів, щонайменше приблизно 10 днів, щонайменше приблизно 14 днів, щонайменше приблизно 21 дня, щонайменше приблизно 25 днів, щонайменше приблизно 28 днів, або, щонайменше приблизно 31 дня, відносно рівня до введення дози.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 55 95, в порівнянні з рівнем холестерину ЛІИНЩ в сироватці до введення дози, і зниження зберігається протягом періоду, щонайменше приблизно З днів, щонайменше приблизно 5 днів, щонайменше приблизно 7 днів, щонайменше приблизно 10 днів, щонайменше приблизно 14 днів, щонайменше приблизно 21 дня, щонайменше приблизно 25 днів, щонайменше приблизно 28 днів, або, щонайменше приблизно 31 дня, відносно рівня до введення дози.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 60 95, в порівнянні з рівнем холестерину ЛІИНЩ в сироватці до введення дози, і зниження зберігається протягом періоду, щонайменше приблизно З днів, щонайменше приблизно 5 днів, щонайменше приблизно 7 днів, щонайменше приблизно 10 днів, щонайменше приблизно 14 днів, щонайменше приблизно 21 дня, щонайменше приблизно 25 днів, щонайменше приблизно 28 днів, або, щонайменше приблизно 31 дня, відносно рівня до введення дози.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 65 95, в порівнянні з рівнем холестерину ЛІИНЩ в сироватці до введення дози, і зниження зберігається протягом періоду, щонайменше приблизно З днів, щонайменше 60 приблизно 5 днів, щонайменше приблизно 7 днів, щонайменше приблизно 10 днів, щонайменше приблизно 14 днів, щонайменше приблизно 21 дня, щонайменше приблизно 25 днів, щонайменше приблизно 28 днів, або, щонайменше приблизно 31 дня, відносно рівня до введення дози.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 70 95, в порівнянні з рівнем холестерину ЛЛНЩ в сироватці до введення дози, і зниження зберігається протягом періоду, щонайменше приблизно З днів, щонайменше приблизно 5 днів, щонайменше приблизно 7 днів, щонайменше приблизно 10 днів, щонайменше приблизно 14 днів, щонайменше приблизно 21 дня, щонайменше приблизно 25 днів, щонайменше приблизно 28 днів, або, щонайменше приблизно 31 дня, відносно рівня до введення дози.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 75 95, в порівнянні з рівнем холестерину ЛІИНЩ в сироватці до введення дози, і зниження зберігається протягом періоду, щонайменше приблизно З днів, щонайменше приблизно 5 днів, щонайменше приблизно 7 днів, щонайменше приблизно 10 днів, щонайменше приблизно 14 днів, щонайменше приблизно 21 дня, щонайменше приблизно 25 днів, щонайменше приблизно 28 днів, або, щонайменше приблизно 31 дня, відносно рівня до введення дози.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 80 95, в порівнянні з рівнем холестерину ЛІИНЩ в сироватці до введення дози, і зниження зберігається протягом періоду, щонайменше приблизно З днів, щонайменше приблизно 5 днів, щонайменше приблизно 7 днів, щонайменше приблизно 10 днів, щонайменше приблизно 14 днів, щонайменше приблизно 21 дня, щонайменше приблизно 25 днів, щонайменше приблизно 28 днів, або, щонайменше приблизно 31 дня, відносно рівня до введення дози.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 85 95, в порівнянні з рівнем холестерину ЛІИНЩ в сироватці до введення дози, і зниження зберігається протягом періоду, щонайменше приблизно З днів, щонайменше приблизно 5 днів, щонайменше приблизно 7 днів, щонайменше приблизно 10 днів, щонайменше приблизно 14 днів, щонайменше приблизно 21 дня, щонайменше приблизно 25 днів,
Ко) щонайменше приблизно 28 днів, або, щонайменше приблизно 31 дня, відносно рівня до введення дози.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 90 95, в порівнянні з рівнем холестерину ЛІИНЩ в сироватці до введення дози, і зниження зберігається протягом періоду, щонайменше приблизно З днів, щонайменше приблизно 5 днів, щонайменше приблизно 7 днів, щонайменше приблизно 10 днів, щонайменше приблизно 14 днів, щонайменше приблизно 21 дня, щонайменше приблизно 25 днів, щонайменше приблизно 28 днів, або, щонайменше приблизно 31 дня, відносно рівня до введення дози.
ДЕЯКІ ВИДИ ТЕРАПЕВТИЧНОГО ЗАСТОСУВАННЯ
Як буде зрозуміло фахівцю в даній галузі, при розладах, які пов'язані з, включають, або на які можуть вплинути варіюючі рівні холестерину, ЛІНЩ, ЛІИНІЩР, РСОБЗКУ, ЛИДНЩ-Х, апопротеїну В ("АроВ"), ліпопротеїну А ("Гр(а)), тригліцеридів, ЛЛВЩ-Х, не-ЛІВЩ-Х, і рівні загального холестерину, можна застосовувати антигензв'язувальні білки проти РО5КО, описані в даному винаході. В одному з аспектів, антигензв'язувальні білюи проти РСО5КОУ можуть застосовуватися в способах лікування та/або попередження та/або зниження ризику розладів, пов'язаних з підвищеними рівнями холестерину в сироватці або при яких підвищені рівні холестерину в сироватці мають значення. В одному з аспектів, антигензв'язувальні білки проти
РСБКУ можуть застосовуватися в способах лікування та/або попередження та/або зниження ризику розладів, які пов'язані з підвищеними значеннями РСО5КОУ або при яких підвищені значення РОЗКОУ мають значення. В одному з аспектів, антигензв'язувальні білки проти РЕСЗКУ можуть застосовуватися в способах лікування та/"або попередження та/або зниження ризику розладів, пов'язаних з підвищеними рівнями загального холестерину або при яких підвищені загальні рівні холестерину мають значення. В одному з аспектів, антигензв'язувальні білки проти РСБКУО можуть застосовуватися в способах лікування та/(або попередження та/або зниження ризику розладів, які пов'язані з підвищеними рівнями не-ЛИВЩ холестерину або при яких підвищені рівні не-ЛОВЩ холестерину мають значення. В одному з аспектів, антигензв'язувальні білюи проти РОКУ можуть застосовуватися в способах лікування та/або попередження та/або зниження ризику розладів, які пов'язані з підвищеними рівнями АроВ або при яких підвищені рівні АроВ мають значення. В одному з аспектів, антигензв'язувальні білки 60 проти РСЗКУО можуть застосовуватися в способах лікування та/або попередження та/або зниження ризику розладів, які пов'язані з підвищеними рівнями ГГ р(а) або при яких підвищені рівні Гр(а) мають значення. В одному з аспектів, антигензв'язувальні білки проти РОЗКУ можуть застосовуватися в способах лікування та/або попередження та/або зниження ризику розладів, які пов'язані з підвищеними рівнями тригліцеридів або при яких підвищені рівні тригліцеридів мають значення. В одному з аспектів, антигензв'язувальні білки проти РСБ5КУ можуть застосовуватися в способах лікування та/або попередження та/або зниження ризику розладів, які пов'язані з підвищеними рівнями ЛІДНЩ-Х або при яких підвищені рівні ЛЛДНЩ-Х мають значення.
В одному з аспектів, антигензв'язувальний білок проти РОБ5КОУ застосовується для модуляції рівнів холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок проти РОКУ застосовується для зменшення кількості холестерину ЛИНЩ в сироватці від аномально високого рівня або, навіть, від нормального рівня. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 3095. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 35 95.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 40 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІЛНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 45 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 50 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИПНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 55 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛЛНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 60 95. У деяких варіантах рівень холестерину
ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 65 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 7095. У деяких варіантах рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 75 95.
У деяких варіантах рівень холестерину ЛЛНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 80 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 85 95. У деяких варіантах рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці знижується, щонайменше приблизно на 90 95.
В одному з аспектів, антигензв'язувальний білок проти РО5КОУ застосовується для модуляції значень РСОБЗКОУО в сироватці хворого. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок проти
Зо РСЗКОУО є нейтралізуючим. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок проти РОКУ застосовується для зменшення значення РОБЗКО від аномально високого рівня або, навіть, від нормального рівня. У деяких варіантах значення РОЗКУ в сироватці зменшується, щонайменше приблизно на 60 95. У деяких варіантах значення РО5КУ в сироватці зменшується, щонайменше приблизно на 65 95. У деяких варіантах значення РО5КУ в сироватці зменшується, щонайменше приблизно на 70 95. У деяких варіантах значення РОЗКУОУ в сироватці зменшується, щонайменше приблизно на 75 95. У деяких варіантах значення РО5КУ в сироватці зменшується, щонайменше приблизно на 80 95. У деяких варіантах значення РО5КУ в сироватці зменшується, щонайменше приблизно на 85 95. У деяких варіантах значення РО5КУ в сироватці зменшується, щонайменше приблизно на 90 95.
В одному з аспектів, антигензв'язувальний білок проти РО5КОУ застосовується для модуляції рівня загального холестерину у хворого. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок проти
РСБКОУО є нейтралізуючим. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок проти РОБКОУ застосовується для зменшення кількості загального холестерину від аномально високого рівня або, навіть, від нормального рівня. У деяких варіантах загальний рівень холестерину знижується, щонайменше приблизно на 20 95. У деяких варіантах загальний рівень холестерину знижується, щонайменше приблизно на 25 95. У деяких варіантах загальний рівень холестерину знижується, щонайменше приблизно на 30 95. У деяких варіантах загальний рівень холестерину знижується, щонайменше приблизно на 35 95. У деяких варіантах загальний рівень холестерину знижується, щонайменше приблизно на 40 95. У деяких варіантах загальний рівень холестерину знижується, щонайменше приблизно на 45 95. У деяких варіантах загальний рівень холестерину знижується, щонайменше приблизно на 50 95. У деяких варіантах загальний рівень холестерину знижується, щонайменше приблизно на 55 95. У деяких варіантах загальний рівень холестерину знижується, щонайменше приблизно на 60 95.
В одному з аспектів, антигензв'язувальний білок проти РО5КОУ застосовується для модуляції рівня не-ЛЛВЩ холестерину у хворого. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок проти
РСБКОУО є нейтралізуючим. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок проти РОБКОУ застосовується для зниження рівня не-ЛІИВЩ холестерину від аномально високого рівня або, навіть, від нормального рівня. У деяких варіантах не-ЛІВЩ рівень холестерину знижується, щонайменше приблизно на 30 95. У деяких варіантах рівень не-ЛЛВЩ холестерину знижується, бо щонайменше приблизно на 35 95. У деяких варіантах рівень не-ЛЛВЩ холестерину знижується,
щонайменше приблизно на 40 95. У деяких варіантах рівень не-ЛЛВЩ холестерину знижується, щонайменше приблизно на 50 95. У деяких варіантах рівень не-ЛЛВЩ холестерину знижується, щонайменше приблизно на 55 95. У деяких варіантах рівень не-ЛЛВЩ холестерину знижується, щонайменше приблизно на 60 95. У деяких варіантах рівень не-ЛЛВЩ холестерину знижується, щонайменше приблизно на 65 95. У деяких варіантах рівень не-ЛЛВЩ холестерину знижується, щонайменше приблизно на 70 95. У деяких варіантах рівень не-ЛЛВЩ холестерину знижується, щонайменше приблизно на 75 95. У деяких варіантах рівень не-ЛЛВЩ холестерину знижується, щонайменше приблизно на 80 95. У деяких варіантах рівень не-ЛЛВЩ холестерину знижується, щонайменше приблизно на 85 95.
В одному з аспектів, антигензв'язувальний білок проти РО5КОУ застосовується для модуляції рівнів АроВ у хворого. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок проти РС5КО є нейтралізуючим. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок проти РОБ5КОУ застосовується для зменшення кількості АроВ від аномально високого рівня або, навіть, від нормального рівня.
У деяких варіантах рівень АроВ знижується, щонайменше приблизно на 2595. У деяких варіантах рівень АроВ знижується, щонайменше приблизно на 30 95. У деяких варіантах рівень
АроВ знижується, щонайменше приблизно на 35 95. У деяких варіантах рівень АроВ знижується, щонайменше приблизно на 40 95. У деяких варіантах рівень АроВ знижується, щонайменше приблизно на 45 95. У деяких варіантах рівень АроВ знижується, щонайменше приблизно на 50 95. У деяких варіантах рівень АроВ знижується, щонайменше приблизно на 55 95. У деяких варіантах рівень АроВ знижується, щонайменше приблизно на 60 95. У деяких варіантах рівень
АроВ знижується, щонайменше приблизно на 65 95. У деяких варіантах рівень АроВ знижується, щонайменше приблизно на 70 95. У деяких варіантах рівень АроВ знижується, щонайменше приблизно на 75 95.
В одному з аспектів, антигензв'язувальний білок проти РО5КОУ застосовується для модуляції рівнів І р(а)») у хворого. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок проти РСОЗКУ є нейтралізуючим. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок проти РОБ5КОУ застосовується для зменшення кількості І р(а) від аномально високого рівня або, навіть, від нормального рівня.
У деяких варіантах рівень Гр(а) знижується, щонайменше приблизно на 5 95. У деяких варіантах рівень І р(а) знижується, щонайменше приблизно на 10 95. У деяких варіантах рівень Гр(а)
Зо знижується, щонайменше приблизно на 1595. У деяких варіантах рівень І р(а) знижується, щонайменше приблизно на 20 95. У деяких варіантах рівень Гр(а) знижується, щонайменше приблизно на 25 95. У деяких варіантах рівень Гр(а) знижується, щонайменше приблизно на
ЗО 95. У деяких варіантах рівень І р(а) знижується, щонайменше приблизно на 35 95. У деяких варіантах рівень Гр(а) знижується, щонайменше приблизно на 40 95. У деяких варіантах рівень |р(а) знижується, щонайменше приблизно на 45 95. У деяких варіантах рівень ГІ р(а) знижується, щонайменше приблизно на 50 95. У деяких варіантах рівень І р(а) знижується, щонайменше приблизно на 55 95. У деяких варіантах рівень Гр(а) знижується, щонайменше приблизно на 60 95. У деяких варіантах рівень ГГ р(а) знижується, щонайменше приблизно на 65 95.
Як буде зрозуміло фахівцю в даній галузі, антигензв'язувальні білки проти РОБКОУ за даним винаходом можуть бути терапевтично придатними для лікування та/або попередження пов'язаного з холестерином розладу. У деяких варіантах "пов'язаний з холестерином розлад" (що включає "пов'язані з холестерином сироватки розлади") включає будь-яке одне або більше з наступного: родинна гіперхолестеринемія, неродинна гіперхолестеринемія, гіперліпідемія, захворювання серця, метаболічний синдром, діабет, захворювання коронарних судин серця, інсульт, серцево-судинні захворювання, хвороба Альцгеймера і дисліпідемії в цілому, які можуть виявлятися, наприклад, підвищеним рівнем загального холестерину в сироватці, підвищеним рівнем ЛІНЩ, підвищеним рівнем тригліцеридів, підвищеним рівнем ЛІДНЩ та/або низьким рівнем ЛІВЩ. Деякі не обмежуючі приклади первинних і вторинних дисліпідемій, які можна лікувати із застосуванням АЗБ, окремо або в комбінації з одним або більше інших засобів, включають метаболічний синдром, цукровий діабет, родинну комбіновану гіперліпідемію, родинну гіпертригліцеридемію, родинні гіперхолестеринемії, зокрема, гетерозиготну гіперхолестеринемію, гомозиготну гіперхолестеринемію, родинний дефектний аполіпопротеїн В-100; полігенну гіперхолестеринемію; захворювання видалення ремнанту, дефіцит печінкової ліпази; дисліпідемію, вторинну до будь-якого з наступного: нераціональне харчування, гіпотиреоз, лікарські засоби, в тому числі, естрогенову і прогестинову терапію, бета-блокатори і тіазидні діуретики; нефротичний синдром, хронічну ниркову недостатність, синдром Кушінга, первинний біліарний цироз, хвороби зберігання глікогену, гепатому, холестаз, акромегалію, інсуліному, ізольований дефіцит гормону росту і спричинену алкоголем гіпертригліцеридемію. АЗБ також може бути придатним для попередження або лікування 60 атеросклеротичних захворювань, таких як смерть внаслідок серцево-судинних катастроф,
смерть внаслідок не серцево-судинних або загальних причин, захворювання коронарних судин серця, захворювання коронарних артерій, захворювання периферичних артерій, інсульт (ішемічний та геморагічний), стенокардія або цереброваскулярне захворювання і гострий коронарний синдром, інфаркт міокарду і нестабільна стенокардія. У деяких варіантах АЗБ придатний для зниження ризику: фатальних і не фатальних серцевих нападів, фатальних і не фатальних інсультів, деяких видів хірургічних втручань на серці, госпіталізації з приводу серцевої недостатності, болю в грудях у хворих на захворювання серця, та/або серцево- судинних катастроф в результаті діагностованого захворювання серця, такого як серцевий напад в анамнезі, хірургічне втручання на серці в анамнезі та/або біль в грудях з доказами закупорювання артерій та/або пов'язане з трансплантацією захворювання судин. У деяких варіантах АЗБ придатний для попередження або зниження серцево-судинного ризику в результаті підвищеного рівня С-реактивного білка (СРБ) або високочутливого С-реактивного білка (всРБ). У деяких варіантах АЗБ і способи можуть застосовуватися для зниження ризику рецидивів серцево-судинних катастроф.
Як буде зрозуміло фахівцю в даній галузі, при захворюваннях або розладах, на які, загалом, спрямовані (або які піддаються лікуванню, або піддаються профілактиці) шляхом застосування статинів, можна також одержати користь від застосування розчинних антигензв'язувальних білків. Крім того, в деяких варіантах, розлади або захворювання, при яких можна одержати користь від запобігання синтезу холестерину або збільшення експресії ЛЛНЩР, можна також лікувати різними варіантами антигензв'язувальних білків. Крім того, як буде зрозуміло фахівцю в даній галузі, застосування анти-РС5КОУ антитіл може бути особливо придатним для лікування діабету. Діабет не тільки сам по собі є фактором ризику захворювання коронарних судин серця, але й інсулін збільшує експресію РОБКОУ. Таким чином, у хворих на діабет підвищені рівні ліпідів в плазмі (що може бути пов'язане з високими рівнями РСОБ5КО), і вони можуть одержати користь від зниження вказаних рівнів. Це, загалом, обговорюється детальніше в Совієеї еї аї. ("Нераїїіс
РОБКО Ехргезвіоп із Неашатеа Бу Миїйіопа! Єбашве міа Іпзційп апа 5іегоЇ Ведшіайгу ЕІетепі-
Біпаїпд Ргоївїп 10", У. Віо!. Снет., 281: 6211-6218, 2006), яка включена до даного опису шляхом посилання в повному обсязі.
У деяких варіантах антигензв'язувальний білок вводять тим, у кого присутній цукровий
Зо діабет, аневризма черевної аорти, атеросклероз та/або захворювання периферичних судин для того, щоб знизити у них рівні холестерину в сироватці до безпечнішого інтервалу. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок вводять хворим, схильним до ризику розвитку будь-якого з описаних в даному описі розладів. У деяких варіантах АЗБ вводять суб'єктам, які палять або палили (тобто, колишні курці), з гіпертензією або родинним анамнезом ранніх серцевих нападів.
У деяких варіантах суб'єктам вводять АЗБ, якщо вони схильні до помірного ризику або вище згідно цілей лікування НОПХ 2004. У деяких варіантах АЗБ вводять суб'єкту, якщо рівень холестерину ЛИНЩ у суб'єкта вищий за 160 мг/дл. У деяких варіантах АЗБ вводять, якщо рівень холестерину ЛІНІЩ у суб'єктів вищий за 130 (і вони схильні до помірного або помірно підвищеного ризику згідно цілей лікування НОПХ 2004). У деяких варіантах АЗБ вводять, якщо рівень холестерину ЛИНЩ у суб'єктів вищий за 100 (і вони схильні до високого або дуже високого ризику згідно цілей лікування НОПХ 2004). У деяких варіантах АЗБ вводять, якщо рівень холестерину ЛИНЩ у суб'єктів вищий за 80 мг/дл. У деяких варіантах АЗБ вводять, якщо рівень холестерину ЛИНЩ у суб'єктів вищий за 70 мг/дл.
Лікар зможе вибрати відповідні показання для лікування і цільові рівні ліпідів, в залежності від індивідуального профілю конкретного хворого. Одним з широко визнаних стандартів лікування гіперліпідемії є Третій Звіт Національної освітньої програми з холестерину (НОПХ),
Завершальний звіт Експертної панелі з виявлення, оцінки та лікування високого рівня холестерину в крові дорослих (Панель лікування дорослих І), Національні Інститути Здоров'я,
МІН Рибіїсайоп Мо. 02-5215 (2002), надрукована версія якої, таким чином, включена шляхом посилання в повному обсязі.
У деяких варіантах антигензв'язувальні білюи проти РОЗКОУ застосовуються для лікування або попередження гіперхолестеринемії, гіперліпідемії або дисліпідемії та/лабо для одержання призначених для цієї мети лікарських засобів та/"або при інших пов'язаних з холестерином розладах (таких як відзначені в даному описі). У деяких варіантах антигензв'язувальний білок проти РСБЗКОУО застосовується для лікування або попередження таких станів, як гіперхолестеринемія, при яких активність РОКУ є нормальною. При таких станах, наприклад, зниження активності РС5КОУ нижче за норму може забезпечити терапевтичний ефект.
КОМБІНОВАНА ТЕРАПІЯ
У деяких варіантах запропоновані способи лікування пов'язаного з холестерином розладу, 60 такого як гіперхолестеринемія, гіперліпідемія або дисліпідемії, що включають введення терапевтично ефективної кількості одного або більше антигензв'язувальних білків проти РС5КУ та іншого терапевтичного агента. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок проти РОБ5КОУ вводять до введення, щонайменше одного іншого терапевтичного агента. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок проти РОЗКОУ вводять одночасно з введенням, щонайменше одного іншого терапевтичного агента. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок проти РО5КОУ вводять після введення, щонайменше одного іншого терапевтичного агента.
Терапевтичні агенти (окрім антигензв'язувального білка), включають, не обмежуючись ними, щонайменше один інший агент для зниження рівня холестерину (у сироватці та/або загального холестерину в організмі). У деяких варіантах агент збільшує експресію ЛІИНЩР, згідно спостереженням підвищував рівні ЛПВЩ в сироватці, знижував рівні ЛЛНЩ або знижував рівні тригліцеридів. Приклади засобів включають, не обмежуючись ними, статини (аторвастатин, церивастатин, флувастатин, ловастатин, мевастатин, пітавастатин, правастатин, розувастатин, симвастатин), нікотинову кислоту (ніацин) (НІАКОР, НІАСПАН (ніацин сповільненого вивільнення), СЛО-НІАЦИН (ніацин сповільненого вивільнення), КОРДАПТИВ (ларопіпрант)), фібринову кислоту (ЛОПІД (гемфіброзил), ТРИКОР (фенофібрат), секвестранти жовчних кислот (КВЕСТРАН (холестирамін), холезевелам (велхол), колестИд (колестипол)), інгібітори абсорбції холестерину (ЗЕТІА (езетиміб)), комбінації нікотинової кислоти і статину (АДВІКОР (ловастатин і
НІАСПАН), комбінації статину з інгібітором абсорбції (ВІТОРИН (ЗОКОР і ЗЕТІА) та/або модифікуючими ліпіди засобами. У деяких варіантах АЗБ комбінують з агоністами ППАР гама, агоністами ППАР альфа/гама, інгібіторами скваленсинтетази, інгібіторами ТБХЕ, антигіпертензивними засобами, протидіабетічними засобами (такими як похідні сульфонілсечовини, інсулін, аналоги (І Р-1, інгібітори ДДП4, наприклад, метформін), модулятори АроВ, наприклад, міпомерсан, інгібітори МТБ та/або засоби для лікування облітерувального артеріосклерозу. У деяких варіантах АЗБ комбінують із засобом, який підвищує рівень білка ЛІНІЦР у суб'єкта, таким як статини, деякі цитокіни, наприклад, онкостатин М, естроген та/або деякі рослинні інгредієнти, наприклад, берберин. У деяких варіантах АЗБ комбінують із засобом, який підвищує рівні холестерину в сироватці суб'єкта (такими як деякі антипсихотичні засоби, деякі інгібітори ВІЧ, дієтичні фактори, наприклад, високий вміст фруктози, сахарози, холестерину або деяких жирних кислот, і агоністи деяких
Зо ядерних рецепторів та антагоністи ретиноїдного Х рецептора, рецептора ретиноєвої кислоти, рецептора Х печінки, рецептор фарнезоліду Х). У деяких варіантах АЗБ комбінують із засобом, який підвищує рівень РОБКУ у суб'єкта, таким як статини та/або інсулін. Комбінація двох засобів може дозволити пом'якшення побічної дії інших засобів під впливом АЗБ.
У деяких варіантах антигензв'язувальний білок проти РСОБЗКУО може застосовуватися, щонайменше з одним протизапальним терапевтичним засобом. У деяких варіантах антигензв'язувальний білок проти РСБ5КО може застосовуватися, щонайменше з одним терапевтичним засобом для лікування імунного розладу. Приклади терапевтичних засобів для лікування запалення та імунних розладів включають, не обмежуючись ними, інгібітори циклооксигенази типу 1 (ЦОГ-1) і 2 (ЦОГ-2), низькомолекулярні модулятори мітоген-активованої протеїнкінази розміром 38 кДа (рЗ8-МАРК); низькомолекулярні модулятори внутрішньоклітинних молекул, що приймають участь в шляху запалення, причому такі внутрішньоклітинні молекули включають, не обмежуючись ними, іпК, ІКК, МЕ-кВ, 2АРТО і ІсК. Деякі приклади терапевтичних засобів для лікування запалення описані, наприклад, в С.А. Оіпагейо 4 3 Моїідамжмег
Ргоіпїаттаїйюгу апа Апіі-ІпПаттаїйогу СуїоКіпе5 іп КПпештайоій Агйпгійй5: А Ргітег їог Сііпісіап5
Тпіга Едйоп (2001) Атдеп Іпс. Тпоизапа Оак», Каліфорнія.
ДІАГНОСТИЧНЕ ЗАСТОСУВАННЯ
У деяких варіантах АЗБ застосовується як діагностичний інструмент. АЗБ може застосовуватися для кількісного аналізу РОЗКО, присутнього в зразку та/або організмі суб'єкта.
Як буде зрозуміло фахівцю в даній галузі, такі АЗБ не повинні бути нейтралізуючими АЗБ. У деяких варіантах діагностичний АЗБ не є нейтралізуючим АЗБ. У деяких варіантах діагностичний АЗБ зв'язується з іншим епітопом, ніж нейтралізуючий АЗБ. У деяких варіантах два АЗБ не конкурують один з одним.
У деяких варіантах АЗБ, розкриті в даному описі, застосовуються або пропонуються в наборі для аналізу талабо способі виявлення РС5КО в тканинах або клітинах ссавців з метою скринінгу/діагностики захворювання або розладу, пов'язаного із змінами рівнів РС5КОУ. Набір містить АЗБ, який зв'язується з РОЗКУО, і засоби для виявлення зв'язування АЗБ з РОЗКОУ, якщо воно присутнє, і необов'язково, визначення рівнів білела РОЗКОУО. Можуть використовуватися різноманітні засоби для виявлення присутності АЗБ. Наприклад, флюорофори, інші молекулярні зонди або ферменти можуть зв'язуватися з АЗБ, і присутність АЗБ може бути виявлена бо різноманітними способами. Спосіб скринінгу для виявлення таких розладів може включати використання набору, або просте використання одного з розкритих АЗБ і визначення того, чи зв'язується АЗБ з РСОБЗКОУ в зразку. Як буде зрозуміло фахівцю в даній галузі, високі або підвищені рівні РОЗКОУ будуть приводити до більшої кількості АЗБ, зв'язаного із РОБКО в зразку.
Таким чином, ступінь зв'язування АЗБ може використовуватися для визначення кількості РОСЗКОУ в зразку. Суб'єкти або зразки із кількістю РОЗКО, яка перевищує попередньо визначену кількість (наприклад, кількість або інтервал, який був би присутній у особи без пов'язаного з РСБ5КОУ розладу) можуть бути охарактеризовані як такі, що мають опосередкований РОЗКОУ розлад. У деяких варіантах АЗБ вводять суб'єкту, який отримує статин, з метою визначення того, чи збільшує статин кількість РОКУ у суб'єкта.
У деяких варіантах АЗБ є не нейтралізуючим АЗБ і застосовується для визначення кількості
РСОБКУО у суб'єкта, який одержує лікування АЗБ та/або статином.
ПРИКЛАДИ
Наступні приклади, зокрема проведені досліди і отримані результати, запропоновані тільки для ілюстративних цілей і не повинні бути інтерпретовані як обмежуючі даний винахід.
ПРИКЛАД 1
Імунізація і титрування
ГЕНЕРАЦІЯ АНТИ-РОЗКОУ АНТИТІЛ І ГІБРИДОМ
Антитіла до зрілої форми РОСБКУ (проілюстрованої як послідовність на фіг. ТА, з підкресленим рго-доменом) були одержані у мишей ХепоМоизе? (Ардепіх, Егетопі, Каліфорнія), які є мишами, що містять гени людського імуноглобуліну. Дві групи мишей ХепоМоизеФф), групи 1 і 2, використовували для продукування антитіл проти РОБКУ. Група 1 включала породу мишей
ХепоМоизе? ХМО2-КІ,, яка продукує повністю людські антитіла Ідсак і І(92А. Групу 1 мишей імунізували людським РСБКУ. РСБКУО одержували з використанням стандартних рекомбінантних методів, з використанням послідовності бепВапк як референтної (ММ 174936).
Група 2 включала мишей породи ХепоМоизе? ХМ(4-КІ, які продукують повністю людські антитіла Ідосак і І(д9у054Х. Мишей групи 2 також імунізували людським РОБКО.
Мишам з обох груп ін'єкційно вводили антиген 11 разів, згідно розкладу в табл. 3. При початковій імунізації кожній миші вводили загальну кількість 10 мкг антигену внутрішньочеревинно в черево. Подальшими бустерними дозами були дози 5 мкг, і метод
Зо ін'єкції розподілявся в шаховому порядку між внутрішньочеревними ін'єкціями в черево і підшкірними ін'єкціями в основу хвоста. Для внутрішньочеревинних ін'єкцій антиген готували у вигляді емульсії ТйегпМах? (ой (бідта, кат. Мо Т2684), і для підшкірних ін'єкцій антиген змішували з галуном (алюмінію фосфат) та олігонуклеотидами Сро. В ході ін'єкцій 2-8 ї 10 кожній миші вводили загальну кількість 5 мг антигену в гелі ад'юванту алюмінію фосфату.
Завершальну ін'єкцію 5 мг антигену на мишу вводили в буферизованому фосфатом сольовому розчині і проводили в 2 місця 50 95 внутрішньочеревинно в черево і 50 95 підшкірно в основу хвоста. Програми імунізації підсумовані в табл. З нижче.
Таблиця З 10 мкг кожна 10 мкг кожна 5 мкг кожна 5 мкг кожна 5 мкг кожна 5 мкг кожна 5 мкг кожна 5 мкг кожна 5 мкг кожна 5 мкг кожна
Таблиця З мкг кожна 5 мкг кожна 5 мкг кожна 5 мкг кожна 5 мкг кожна 5 мкг кожна о Відбірзразкакрові | 77777771 5 мкг кожна 5 мкг кожна 5 мкг кожна 5 мкг кожна 5 мкг кожна 5 мкг кожна о Збіртканин/// | 77777711
Протокол, використовуваний для титрування у тварин ХепоМоизе, був наступним: планшети
Совіаг 3368 для середовища зв'язування вкривали нейтравідином в концентрації 8 мкг/мл (50 5 мкл/лунку) та інкубували при 4 "С в 1 х ФБР/0,05 95 азиду протягом ночі. Їх промивали з використанням З циклів промивання ТШегТек водою, очищеною за допомогою зворотного осмосу та іонного обміну (ОЇ). Планшети блокували з використанням 250 мкл 1 х ФБР/ 95 молока та інкубували, щонайменше протягом 30 хв при кімнатній температурі. Блок вимивали з використання З циклів промивання Тйегтек водою ОЇ. Далі планшет вкривали р-людським
РОЗКОУ в концентрації 2 мкг/мл в 1 х ФБР/1 95 молока/10 мМ Саг-- (розбавлювач аналізу) 50 мкл/лунку та інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі. Далі промивали з використанням З циклів промивання ТійегТек водою ОЇ. Для первинного антитіла, сироватки титрували 1:3 в подвійному повторенні від 1:100. Це здійснювали в розбавлювачі аналізу 50 мкл/лунку та інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі. Далі промивали з використанням З циклів промивання ТігегТек водою ОЇ. Вторинне антитіло було козиним анти- людським до Ес ПХ в концентрації 400 нг/мл в розбавлювачі аналізу в кількості 50 мкл/лунку.
Планшети інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі. Далі їх промивали з використанням З циклів промивання ТйегТек водою ОЇ і промокали насухо паперовими рушниками. Для субстрату використовували розчин ТМБ для однієї стадії (Меодеп, Лексингтон,
Кентуккі) (50 мкл/лунку) і дозволяли проявлятися протягом 30 хв при кімнатній температурі.
Протоколи, яким слідували в аналізах ТІФА, були наступними: для зразків, що містять р-
РСБКОУ без мітки М5Ніх, використовували наступний протокол: планшети Сов5іаг 3368 для середовища зв'язування (Сопіпа І їе Зсіепсе5) вкривали нейтравідином в концентрації 8 мкг/мл в 1ХФБР/О,05 95 азіду (50 мкл/лунку). Планшети інкубували при 4 "С протягом ночі. Далі планшети промивали з використанням пристрою для промивання планшетів Тепек мМ384 (Тіепек, Нипібєміе, АГ). Здійснювали З цикли промивання. Планшети блокували 250 мкл 1 х
ФБР/І 95 молока та інкубували приблизно 30 хв при кімнатній температурі. Далі планшети промивали з використанням пристрою для промивання планшетів М384. Здійснювали З цикли промивання. Для покриття використовували Бб-пи РОСБЗКОУ, без мітки М5, і додавали в
Зо концентрації 2 мкг/мл в 1 х ФБР/1 95 молока/10 мМ Са» (40 мкл/лунку). Далі планшети інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі. Здійснювали З цикли промивання.
Сироватки титрували 1:3 в подвійному повторенні від 1:100, і ряд Н був холостим для сироваток. Титрування проводили в розбавлювачі аналізу, в об'ємі 50 мкл/лунку. Планшети інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі. Далі виконували З цикли промивання.
Козиний анти-людський Ідс Ес ПХ в концентрації 100 нг/мл (1:4000) в 1 х ФБР/1 95 молока/10
ММ Са (50 мкл/лунку) додавали на планшет та інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі. Планшети промивали ще раз, з використанням З циклів промивання. Далі планшети промокали насухо паперовим рушником. В кінці, ТМБ для 1 стадії (Меодеп,
Лексингтон, Кентуккі) (50 мкл/лунку) додавали на планшет і гасили 1 н хлористоводневою кислотою (50 мкл/лунку) через 30 хв при кімнатній температурі. Значення оптичної густини реєстрували негайно на довжині хвилі 450 нм з використанням пристрою для зчитування планшетів Тіегек.
Позитивним контролем для виявлення зв'язаного із планшетом РСОЗКУ були розчинний рецептор ЛІНІЩ (КО Зузіет5, кат. Мо 21481 0/СЕ) і поліклональне кроляче анти-?РС5КО антитіло (Саутеп Спетіса! Мо 10007185), титроване 1:3 в подвійному повторенні від З мкг/мл в розбавлювачі аналізу. ЛЛНІЦР виявляли за допомогою козиного анти-ЛІНЩР (К8О Зузіетв, кат. Мо АЕ2148) і кролячого анти-козиного (ДЕС ПХ в концентрації 400 нг/мл; поліклональне кроляче антитіло виявляли з використанням козиного анти-кролячого дос Ес в концентрації 400 нг/мл в розбавлювачі аналізу. Негативним контролем були наївні сироватки ХМО2-КІ. і ХМО4-
КІ, титровані 1:3 в подвійному повторенні від 1:100 в розбавлювачі аналізу.
Для зразків, що містять 6-РСБ5КОУ з міткою М5НІі5, використовували наступний протокол: планшети Созіаг 3368 для середовища зв'язування (Согпіпд іІйе Зсіепсе5) вкривали нейтравідином в концентрації 8 мкг/мл в 1ХФБР/0О,05 95 азіду (50 мкл/лунку). Планшети інкубували при 4 "С протягом ночі. Далі планшети промивали з використанням пристрою для промивання планшетів Тіепек мМ384 (Тіепек, НипізміПе, АС). Здійснювали З цикли промивання.
Планшети блокували 250 мкл 1 х ФБР/1 95 молока та інкубували приблизно 30 хв при кімнатній температурі. Далі планшети промивали з використанням пристрою для промивання планшетів
М384. Здійснювали З цикли промивання. Для покриття використовували б-пи РОБКО, з міткою
М5, і додавали в концентрації 2 мкг/мл в 1 х ФБР/1 95 молока/10 мМ Са (40 мкл/лунку). Далі планшети інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі. Здійснювали З цикли промивання. Сироватки титрували 1:3 в подвійному повторенні від 1:100, і ряд Н був холостим для сироваток. Титрування проводили в розбавлювачі аналізу, в об'ємі 50 мкл/лунку. Планшети інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі. Далі планшети промивали за допомогою пристрою для промивання планшетів М384, з використанням З циклів промивання. Козиний
Зо анти-людський Ідс Ес ПХ в концентрації 400 нг/мл в 1 х ФБР/1 95 молока/10 мМ Са?" додавали на планшет в концентрації 50 мкл/лунку, і планшет інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі. Планшети промивали знову, з використанням З циклів промивання. Далі планшети промокали насухо паперовим рушником. В кінці, ТМБ для 1 стадії (Меодеп, Лексингтон, Кентуккі) (50 мкл/лунку) додавали на планшет, і планшет гасили 1 н хлористоводневою кислотою (50 мкл/лунку) через 30 хв при кімнатній температурі. Значення оптичної густини реєстрували негайно на довжині хвилі 450 нм з використанням пристрою для зчитування планшетів ТПегек.
Позитивним контролем був ЛІНЩ, кролячий анти-РС5КУ, титрований 1:3 в подвійному повторенні від З мкг/мл в розбавлювачі аналізу. ЛЛНЩР виявляли за допомогою козиного анти-
ЛІПННЩР (КО 5узіет»5, кат. Мо АЕ2148) і кролячого анти-козиного дос Ес ПХ в концентрації 400 нг/мл; поліклональне кроляче антитіло виявляли з використанням козиного анти-кролячого дО
Ес в концентрації 400 нг/мл в розбавлювачі аналізу. Людські анти-Ніб 1.2.3 ії анти-М5 1.71, титровані 1:3 в подвійному повторенні від 1 мкг/мл в розбавлювачі аналізу; обидва виявляли з використанням козиного анти-людського (ДО Ес ПХ в концентрації 400 нг/мл в розбавлювачі аналізу. Негативним контролем були наївні сироватки ХМО2-КІ і ХМО4-КІ, титровані 1:3 в подвійному повторенні від 1:100 в розбавлювачі аналізу.
Титри антитіла проти людського РОЗКОУ вимірювали в аналізі ТІФА для мишей, імунізованих розчинним антигеном, як було описано. У табл. 4 підсумовані дані ТІФА, і показано, що були деякі миші, які, схоже, були специфічними відносно РОЗКОУ. Див., наприклад, табл. 4. Таким чином, в кінці програми імунізації, 10 мишей (виділені напівжирним шрифтом в табл. 4) були вибрані для відбору тканин, і спленоцити і лімфоцити був виділені із селезінок та лімфатичних вузлів, відповідно, як описано в даному описі.
Таблиця 4
Резюме результатів ТІФА мкг/мл
Група 11ОБКИ
Група 2Л1ОБЯКИ пет нин ВЕ А МВС КН
ПРИКЛАД 2
Одержання лімфоцитів, виділення В-клітин, злиття і генерація гібридом
У даному прикладі проілюстровано, яким чином були одержані імунні клітини і згенеровані гібридоми. Відібраних імунізованих мишей умертвляли зсувом шийних хребців, дреновані лімфатичні вузли витягали і об'єднували в пул від кожної когорти. В-Клітини відокремлювали від лімфоїдної тканини шляхом помелу в модифікованому Дюльбекко середовищі Ігла (МДСІ), щоб звільнити клітини від тканин, і клітини суспендували в МДСІ. Клітини перераховували, і 0,9 мкл
МДСІ на 100 млн лімфоцитів додавали до гранули клітин, щоб обережно, але повністю ресуспендувати клітини.
Лімфоцити змішували з клітинами несекреторної мієломи РЗ х 63А98.653, придбаними у
АКТК, кат. Ме СК. 1580 (Кеатпеу еї аї., (1979) 9. Іттипої. 123, 1548-1550), у співвідношенні 1:4.
Суміш клітин обережно гранулювали центрифугуванням при 400 х д протягом 4 хв. Після декантації супернатанта, клітини обережно перемішували з використанням піпетки 1 мкл.
Підігрітий розчин ПЕГ/ДМСО від Зідта (кат. Ме Р7ЗОб) (1 мл на мільйон В-клітин) повільно додавали при ретельному збовтуванні протягом 1 хв, з подальшим перемішуванням протягом 1 хв. Далі додавали підігріте мінімальне есенціальне середовище Дюльбекко, модифіковане за способом Ісков (МЕСДІ, 2 мл на мільйон клітин В) (МДСІ без глутаміну, І1-глутамін, пеніцилін/стрептоміцин, замінні амінокислоти МЕС (всі від Іпмігодеп), протягом 2 хв при ретельному збовтуванні. В кінці підігріте МЕСДІ (8 мкл на 105 В-клітин) додавали протягом З хв.
Злиті клітини осаджували при 400 х 9 протягом 6 хв і ресуспендували в 20 мл селекційного середовища (МДСЇІ (Іпмігодеп), 15 95 сироватки телячого ембріона (Нусіопе), з додаванням І - глутаміну, пеніциліну/стрептоміцину, замінних амінокислот МЕС, натрію пірувату, 2- меркаптоетанолу (всі від Іпмігодеп), НА-азасерину гіпоксантину та ОПІ (оксалоацетат, піруват, телячий інсулін) (обидва від Зідіта) та ІІ -6 (Воєніпдег МаппПеїт)) на мільйон В-клітин. Клітини інкубували протягом 20-30 хв при 37 С, а потім ресуспендували в 200 мл селекційного середовища і культивували протягом 3-4 днів в колбі Т175 до вміщення на 96-лункові планшети.
Таким чином, одержували гібридоми, які продукували антигензв'язувальні білки проти РСБКОУ.
Коо) ПРИКЛАД З
Селекція антитіл проти РОБКОУ
Даний приклад у загальних рисах ілюструє, яким чином проводилася характеристика і відбір різноманітних антигензв'язувальних білків проти РС5КУ. Оцінювали зв'язування виділених антитіл (продукованих гібридомами, одержаними в Прикладах 1 і 2) з РО5К9У. Селекція антитіл базувалася на даних зв'язування та інгібуванні зв'язування РОЗКУ з ЛІИНЩЕР і спорідненості.
Зв'язування з розчинним РОБКОУО було проаналізоване методом ТІФА, як описано нижче.
ВІАсоге? (резонанс поверхневого плазмону) використовували для кількісного визначення спорідненості зв'язування.
ПЕРВИННИЙ СКРИНІНГ
Здійснювали первинний скринінг антитіл, які зв'язуються з РОБКУ дикого типу. Первинний скринінг проводили на двох партіях. Первинний скринінг включав аналіз методом ТІФА і виконувався з використанням наступного протоколу.
Використовували 384-лункові планшети Совіаг 3702 (Сопіпод І їе Зсіепсе5) для середовища зв'язування. Планшети вкривали нейтравідином в концентрації 4 мкг/мл в ІХФБР/О,05 95 азиду в об'ємі 40 мкл/лунку. Планшети інкубували при 4 "С протягом ночі. Далі планшети промивали з використанням пристрою для промивання планшетів Тйегек (Тйепек, Нипівмійе, А).
Здійснювали 3 цикли промивання. Планшети блокували 90 мкл 1 х ФБР/1 95 молока та інкубували приблизно 30 хв при кімнатній температурі. Далі планшети промивали. Знову виконували З цикли промивання. Як зразок покриття використовували біотинільований-РС5КО, без мітки М5, і додавали в концентрації 0,9 мкг/мл в 1 х ФБР/1 95 молока/10 мМ Са": в об'ємі 40 мкл/лунку. Далі планшети інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі. Далі планшети промивали за допомогою пристрою для промивання планшетів ТіегекК, з використанням З циклів промивання. 10 мкл супернатанта переносили в 40 мкл 1 х ФБР/1 95 молока/10 мМ Са та інкубували протягом 1,5 год. при кімнатній температурі. Планшети знову промивали за допомогою пристрою для промивання планшетів Тіепек, з використанням З циклів промивання. 40 мкл/лунку козиного анти-людського до Ес пероксидази в концентрації 100 нг/мл (1:4000) в 1 х ФБР/1 95 молока/10 мМ Са?" додавали на планшет та інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі. Планшети промивали ще раз, з використанням З циклів промивання. В кінці, 40 мкл/лунку ТМБ для 1 стадії (Меодеп, Лексинітон, Кентуккі) додавали на планшет і гасили за
Зо допомогою 40 мкл/лунку 1 н хлористоводневої кислоти через 30 хв при кімнатній температурі.
Значення оптичної густини реєстрували негайно на довжині хвилі 450 нм з використанням пристрою для зчитування планшетів Тпепек.
Первинний скринінг дав загалом 3104 антигенспецифічних гібридом, ідентифікованих для 2 партій. На підставі найбільшого значення оптичної густини в аналізі ТІФА, 1500 гібридом на партію були переведені в загальну кількість 3000 позитивних.
ПІДТВЕРДЖУЮЧИЙ СКРИНІНГ
Далі 3000 позитивних були піддані вторинному скринінгу на зв'язування із РСБКОУ дикого типу, щоб підтвердити утворення стабільних гібридом. Скринінг проводили таким чином: використовували 384-лункові планшети Совіаг 3702 (Согпіпуд І їе 5сіепсе5) для середовища зв'язування. Планшети вкривали нейтравідином в концентрації З мкг/мл в 1 х ФБР/0,05 95 азиду в об'ємі 40 мкл/лунку. Планшети інкубували при 4 "С протягом ночі. Далі планшети промивали з використанням пристрою для промивання планшетів Тйегек (Тйепек, Нипівмійе, А).
Здійснювали З цикли промивання. Планшети блокували 90 мкл 1 х ФБР/1 95 молока та інкубували приблизно 30 хв при кімнатній температурі. Далі планшети промивали з використанням пристрою для промивання планшетів М384. Здійснювали З цикли промивання.
Як зразок покриття використовували Б-РС5КОУ, без мітки М5, і додавали в концентрації 0,9 мкг/мл в 1 х ФБР/1 956 молока/10 мМ Са? в об'ємі 40 мкл/лунку. Далі планшети інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі. Далі планшети промивали за допомогою пристрою для промивання планшетів ТіепекК, з використанням З циклів промивання. 10 мкл супернатанта переносили в 40 мкл 1 х ФБР/1 95 молока/10 мМ Са" та інкубували протягом 1,5 год. при кімнатній температурі. Планшети знову промивали за допомогою пристрою для промивання планшетів Тіепек, з використанням З циклів промивання. 40 мкл/лунку козиного анти-людського
ІДС Ес пероксидази в концентрації 100 нг/мл (1:4000) в 1 х ФБР/1 95 молока/10 мМ Са?" додавали на планшет та інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі. Планшети промивали ще раз, з використанням З циклів промивання. В кінці, 40 мкл/лунку ТМБ для 1 стадії (Меодеп, Лексинітон, Кентуккі) додавали на планшет і гасили за допомогою 40 мкл/лунку 1 н хлористоводневої кислоти через 30 хв при кімнатній температурі. Значення оптичної густини реєстрували негайно на довжині хвилі 450 нм з використанням пристрою для зчитування планшетів Тйепек. Всього 2441 позитивних були повторені при вторинному скринінгу. Ці бо антитіла далі використовували для подальшого скринінгу.
СКРИНІНГ ПЕРЕХРЕСНОЇ РЕАКТИВНОСТІ МИШІ
Далі проводили скринінг панелі гібридом щодо перехресної реактивності з мишачим РОБКО, щоб переконатися у тому, що антитіла можуть зв'язуватися як з людським, так і мишачим
РСОБЗКУ. Наступний протокол використовували для скринінгу перехресної реактивності: використовували 384-лункові планшети Совіаг 3702 (Согпіпуд І їе 5сіепсе5) для середовища зв'язування. Планшети вкривали нейтравідином в концентрації З мкг/мл в 1 х ФБР/0,05 95 азиду в об'ємі 40 мкл/лунку. Планшети інкубували при 4 "С протягом ночі. Далі планшети промивали з використанням пристрою для промивання планшетів Тйепйек М384 (Тпепек, Нипівмійе, А).
Здійснювали З цикли промивання. Планшети блокували 90 мкл 1 х ФБР/1 95 молока та інкубували приблизно 30 хв при кімнатній температурі Далі планшети промивали з використанням пристрою для промивання планшетів Тіепек. Здійснювали З цикли промивання.
Як зразок покриття використовували біотинільований мишачий РСОСБЗКУ, і додавали в концентрації 1 мкг/мл в 1 х ФБР/1 95 молока/10 мМ Са: в об'ємі 40 мкл/лунку. Далі планшети інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі. Далі планшети промивали за допомогою пристрою для промивання планшетів Тіїегек, з використанням З циклів промивання. 50 мкл супернатанта переносили на планшети та інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі.
Планшети знову промивали з використанням 3 циклів промивання. 40 мкл/лунку козиного анти- людського дО Ес пероксидази в концентрації 100 нг/мл (1:4000) в 1 х ФБР/ 95 молока/10 мМ
Са" додавали на планшет, і планшет інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі.
Планшети промивали ще раз, з використанням З циклів промивання. В кінці, 40 мкл/лунку ТМБ для 1 стадії (Меодеп, Лексингтон, Кентуккі) додавали на планшет і гасили за допомогою 40 мкл/лунку 1 н хлористоводневої кислоти через 30 хв при кімнатній температурі. Значення оптичної густини реєстрували негайно на довжині хвилі 450 нм з використанням пристрою для зчитування планшетів Тйепек. Для 579 антитіл спостерігалася перехресна реактивність з мишачим РОБЗКО. Далі ці антитіла були використані для подальшого скринінгу.
СКРИНІНГ ЗВ'ЯЗУВАННЯ З МУТАНТНИМ 0374У
Мутація 0374У в РОБКОУ документована в людській популяції (наприклад, Тітте5 КМ еї аї. "А тиїайоп іп РОБЗКОУ сайзіпд ашозота!-дотіпапі пурегспоїІезіегоЇетіа іп а (лай реадідгее", Нит.
Сепеї. 114: 349-353, 2004). Для того, щоб визначити, чи були антитіла специфічними для дикого
Зо типу або також зв'язувалися із формою РОЗКОУ 0374У, проводили додатковий скринінг зразків щодо зв'язування з мутантною послідовністю РСОБКУ, що містить мутацію Ю374У. Протокол скринінгу був наступним: в ході скринінгу використовували 384-лункові планшети Совіаг 3702 (Сотіпа Ше Зсіепсе5) для середовища зв'язування. Планшети вкривали нейтравідином в концентрації 4 мкг/мл в 1 х ФБР/0,05 95 азиду в об'ємі 40 мкл/лунку. Планшети інкубували при 4 "Сб протягом ночі. Далі планшети промивали з використанням пристрою для промивання планшетів Тіепек мМ384 (Тпепек, Нипізміе, АГ). Здійснювали З цикли промивання. Планшети блокували 90 мкл 1 х ФБР/1 95 молока та інкубували приблизно 30 хв при кімнатній температурі.
Далі планшети промивали з використанням пристрою для промивання планшетів Тіепек.
Здійснювали З цикли промивання. Планшети вкривали біотинільованим людським РО5КОУ 0р374У в концентрації 1 мкг/мл в 1 х ФБР/1 95 молока/10 мм Са": та інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі. Далі планшети промивали за допомогою пристрою для промивання планшетів Тіепек. Здійснювали З цикли промивання. Пізній супернатант культури гібридоми розбавляли 1:5 у ФБР/молоко/Са-: (10 плюс 40 мл) та інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі. Далі, 40 мкл/лунку кролячого анти-людського РОКУ (Саутап СПетісаї) і людського анти-Ні5 1.2.3 1:2 в концентрації 1 мкг/мл в 1 х ФБР/1 95 молока/10 мМ Са? титрували на планшети, які далі інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі. Далі планшети промивали ще раз, з використанням пристрою для промивання планшетів Тіеплпек.
Здійснювали З цикли промивання. 40 мкл/лунку козиного анти-людського ІДС Ес ПХ в концентрації 100 нг/мл (1:4000) в 1 х ФБР/1 95 молока/10 мМ Са? додавали на планшет та інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі. 40 мкл/лунку козиного анти-кролячого до
Ес ПХ в концентрації 100 нг/мл (1:4000) в 1 х ФБР/1 95 молока/10 мм Са?" додавали на планшет, і планшет інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі. Далі планшети промивали з використанням пристрою для промивання планшетів Тіекек. Здійснювали З цикли промивання.
В кінці, 40 мкл/лунку ТМБ для 1 стадії (Меодеп, Лексингтон, Кентуккі) додавали на планшет і гасили за допомогою 40 мкл/лунку 1 н хлористоводневої кислоти через 30 хв при кімнатній температурі. Значення оптичної густини реєстрували негайно на довжині хвилі 450 нм з використанням пристрою для зчитування планшетів Тіегек. Понад 96 95 позитивних антитіл по відношенню до РОКУ дикого типу також зв'язувалися з мутантним РО5КОУ.
СКРИНІНГ БЛОКУВАННЯ ЛІГАНДУ РЕЦЕПТОРА У ВЕЛИКИХ МАСШТАБАХ
Для скринінгу на антитіла, які блокують зв'язування РОЗКУО з ЛІИНЩР, був розроблений аналіз з використанням мутанта 0374У РОБКУ. Мутант використовували для даного аналізу, оскільки він володіє вищою спорідненістю зв'язування з ЛІНІЩР, що дозволяє розробити чутливіший аналіз блокування ліганду рецептора. Наступний протокол використовували для скринінгу блокування ліганду рецептора: в ході скринінгу використовували 384-лункові планшети Сов5іаг 3702 (Согпіпд І їе Зсіепсе5) для середовища зв'язування. Планшети вкривали козиним анти-ЛІЛНЩР (КО кат. Мо АБ2148) в концентрації 2 мкг/мл в 1 х ФБР/0,05 95 азиду в об'ємі 40 мкл/лунку. Планшети інкубували при 4" С протягом ночі. Далі планшети промивали з використанням пристрою для промивання планшетів Піейек мМ384 (Тпепек, Нипівміїє, АМ.
Здійснювали 3 цикли промивання. Планшети блокували 90 мкл 1 х ФБР/1 95 молока та інкубували приблизно 30 хв при кімнатній температурі. Далі планшети промивали з використанням пристрою для промивання планшетів Тйегпек. Знову виконували З цикли промивання. Як зразок покриття використовували ЛЛНЩР (КУ, кат. Мо 21481 0Б/СЕ), і додавали в концентрації 0,4 мкг/мл в 1 х ФБР/1 95 молока/10 мм Саг: в об'ємі 40 мкл/лунку. Далі планшети інкубували протягом 1 год. 10 хв при кімнатній температурі Одночасно, 20 нг/мл біотинільованого людського 0О374У РОЗКУ інкубували з 15 мкл пізнього супернатанта гібридоми в поліпропіленових планшетах Мипс, і концентрацію пізнього супернатанта розбавляли 1:5. Далі планшети попередньо інкубували приблизно на 1 год. 30 хв при кімнатній температурі. Далі планшети промивали з використанням пристрою для промивання планшетів ТйепекК, з використанням З циклів промивання. 50 мкл/лунку попередньо інкубованої суміші переносили на вкриті ЛЛНЩР планшети ТІФА та інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі. Щоб виявити ЛІОНЩР-зв'язаний Б-РОЗКО, 40 мкл/лунку стрептавідину ПХ в концентрації 500 нг/мл в розбавлювачі аналізу додавали на планшети. Планшети інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі Далі планшети знову промивали з використанням пристрою для промивання планшетів Тіегек. Здійснювали З цикли промивання. В кінці 40 мкл/лунку ТМБ для 1 стадії (Меодеп, Лексингтон, Кентуккі) додавали на планшет, і через 30 хв гасили за допомогою 40 мкл/лунку 1 н хлористоводневої кислоти при кімнатній температурі. Значення оптичної густини реєстрували негайно на довжині хвилі 450 нм з використанням пристрою для зчитування планшетів Тіепек. Скринінг ідентифікував 384 антитіла, які ефективно блокують
Зо взаємодію між РСОЗКУ і ЛІНІЩР, причому 100 антитіл блокували взаємодію з високою активністю (00 « 0,3). Вказані антитіла перешкоджали взаємодії зв'язування РОСЗКУ з ЛЛНЩР більш ніж на 90 95 (інгібування більш ніж на 90 об).
АНАЛІЗ ЗВ'ЯЗУВАННЯ З ЛІГАНДОМ РЕЦЕПТОРА НА ПІДМНОЖИНІ БЛОКАТОРІВ
Далі аналіз ліганду рецептора повторювали з використанням мутантного ферменту на підмножині із 384 нейтралізуючих членів, ідентифікованих в першому аналізі інгібування ліганду рецептора у великому масштабі. Такий же протокол використовували для скринінгового аналізу підмножини із 384 блокуючих членів, як проводили для скринінгу блокування ліганду рецептора у великому масштабі. Даний повторний скринінг підтвердив дані початкового скринінгу.
Даний скринінг підмножини із 384 членів ідентифікував 85 антитіл, які блокують взаємодію між мутантним ферментом РОЗКУ і ЛИНЩР більш ніж на 90 95.
АНАЛІЗ ЗВ'ЯЗУВАННЯ З ЛІГАНДОМ РЕЦЕПТОРА БЛОКАТОРІВ, ЯКІ ЗВ'ЯЗУЮТЬСЯ З
РОЗКУ ДИКОГО ТИПУ, АЛЕ НЕ З МУТАНТОМ 0374У
У початковій панелі із 3000 супернатантів присутні 86 антитіл, які продемонстрували специфічне зв'язування з РСБКУ дикого типу, але не з мутантом пПиИРСЗКУ(0О374У). Дані 86 супернатантів були перевірені щодо здатності блокувати зв'язування РОКУ дикого типу з рецептором ЛІНЩР. Здійснювали наступний протокол: в ході скринінгу використовували 384- лункові планшети Совіаг 3702 (Согпіпуд І їе Зсіепсе5) для середовища зв'язування. Планшети вкривали анти-Нів 1.2.3 в концентрації 10 мкг/мл в 1 х ФБР/0,05 95 азиду в об'ємі 40 мкл/лунку.
Планшети інкубували при 4 "С протягом ночі. Далі планшети промивали з використанням пристрою для промивання планшетів Тіепек мМ384 (Тіегек, Нипізміе, А). Здійснювали З цикли промивання. Планшети блокували 90 мкл 1 х ФБР/І 95 молока та інкубували приблизно 30 хв при кімнатній температурі. Далі планшети промивали з використанням пристрою для промивання планшетів Тіепек. Здійснювали З цикли промивання. ЛЛНЩР (КО 5узетв, кат.
Мо 2148 Б/СЕ або КО, Мо 21481 0) додавали в концентрації 5 мкг/мл в 1 х ФБР/1 95 молока/10
ММ Са» в об'ємі 40 мкл/лунку. Далі планшети інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі. Далі планшети промивали за допомогою пристрою для промивання планшетів
Тінепек, з використанням З циклів промивання. Одночасно, біотинільований людський РСБ5КО дикого типу попередньо інкубували з пізнім супернатантом гібридоми в поліпропіленових планшетах Мипс. 22 мкл супернатанта гібридоми переносили в 33 мкл Б-РСЗКО в концентрації бо 583 нг/мл в 1 х ФБР/1 95 молока/10 мМ Саг-- з одержанням кінцевої концентрації Б-РСОЗКО-350 нг/мл і пізнього супернатанта в кінцевому розведенні 1:2,5. Планшети попередньо інкубували приблизно протягом 1 год. і 30 хв при кімнатній температурі. 50 мкл/лунку попередньо інкубованої суміші переносили на вкриті ЛЛНЩР планшети ТІФА та інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі. Далі планшети промивали з використанням пристрою для промивання планшетів Тпегек. Здійснювали З цикли промивання. На планшети додавали 40 мкл/лунку стрептавідину ПХ в концентрації 500 нг/мл в розбавлювачі аналізу. Планшети інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі Далі планшети промивали з використанням пристрою для промивання планшетів Тіепек. Здійснювали З цикли промивання.
В кінці, 40 мкл/лунку ТМБ для 1 стадії (Меодеп, Лексингтон, Кентуккі) додавали на планшет і через 30 хв гасили за допомогою 40 мкл/лунку 1 н хлористоводневої кислоти при кімнатній температурі. Значення оптичної густини реєстрували негайно на довжині хвилі 450 нм з використанням пристрою для зчитування планшетів ТПйегек.
РЕЗУЛЬТАТИ СКРИНІНГУ
На базі результатів описаних аналізів, декілька ліній гібридоми був ідентифіковані як продукуючі антитіла з бажаною взаємодією із РС5КУ. Обмежене розведення застосовували для виділення керованої кількості клонів із кожної лінії. Клони були позначені за номером лінії гібридоми (наприклад, 21812) і номером клону (наприклад, 21812.1). В цілому, функціональні аналізи, описані в даному описі, не виявили різниці між різними клонами конкретної лінії. У декількох випадках, були ідентифіковані клони з конкретної лінії, які поводили себе інакше у функціональних аналізах, наприклад, було знайдено, що 25А7.1 не блокує РСЗКОУ/ЛІПНЩЕР, тоді як 25А7.3 (тут і надалі 25А7) є нейтралізуючим. Кожен із виділених клонів вміщували в 50-100 мл середовища гібридоми і дозволяли рости до виснаження (тобто, життєздатність клітини менш ніж приблизно 10 95). Концентрацію і активність антитіл проти РОСБ5КОУ в супернатантах таких культур визначали методом ТІФА і функціональними тестами іп міїто, як описано в даному описі. В результаті скринінгу, описаного в даному описі, були ідентифіковані гібридоми з найвищими титрами антитіл проти РОКУ. Відібрані гібридоми показані на фіг. 2А-30 і в табл. 2.
Приклад 4.1
Продукування гібридомами людських антитіл 31НА4 Ід
Даний приклад, загалом, описує, яким чином один із антигензв'язувальних білків був
Зо одержаний від лінії гібридоми. Для роботи із продукування застосовували генерації 50 мкл пізнього супернатанта, з подальшим очищенням протеїном А. Продукування Іпіедга застосовували для масштабу і проводили пізніше. Лінія гібридоми 3134 була вирощена в колбах 175 в 20 мл середовища (Іпівдга Медіа, табл. 5). Коли гібридома практично досягала злиття в колбах 175, її переносили в колбу Іпіедга (Іпіведга Віозсіепсев, Іпіедга СІ 1000, кат. Мо 90 005).
Колба Іпієдга є колбою для культури клітин, яка розділена мембраною на дві камери, маленьку камеру і велику камеру. Об'єм клітин гібридоми 20-30 мл з мінімальною повністю клітин 1 х 106 клітин на мл від лінії гібридоми 3134 вміщували до маленької камери колби
Іпїедга в середовищі Іпівдга (див. табл. 5 щодо компонентів середовища Іпіедга). Тільки середовище Іпіедга (1 л) вміщували у великі камери колб Іпіедга. Мембрана, що розділяє дві камери, є проникною для низькомолекулярних поживних речовин, але герметична для клітин гібридоми і антитіл, продукованих такими клітинами. Таким чином, клітини гібридоми і антитіла, продуковані такими клітинами гібридоми, утримувалися в маленькій камері.
Через 1 тиждень середовища видаляли з обох камер колби Іпієдга і замінювали свіжими середовищами Іпіедга. Зібрані середовища з маленьких камер зберігали окремо. Після другого тижня росту, середовища з маленьких камер збирали знову. Зібрані середовища тижня 1 для лінії гібридоми поєднували із зібраними середовищами тижня 2 лінії гібридоми. Одержаний зразок зібраних середовищ лінії гібридоми центрифугували для видалення клітин і уламків (15 хв при 3000 об/хв), і одержаний супернатант фільтрували (0,22 мкм). Освітлені кондиційовані середовища завантажували на колонку протеїн А Сефарози. Необов'язково, середовища спочатку можна концентрувати, а потім завантажувати на колонку протеїн А Сефарози.
Неспецифічне зв'язування виключали інтенсивним промиванням ФБР. Зв'язані білки антитіла на колонці протеїну А витягали стандартною кислотною елюацією антитіл з колонок протеїну А (наприклад, 50 мМ цитрату, рН 3,0). Агреговані білки антитіл з пулу протеїну А Сефарози видаляли ексклюзійною хроматографією або іонообмінною хроматографією зв'язування на аніонообмінній смолі, такій як смола ОО Сефароза. Конкретні умови іонного обміну для білків
З1Н4 являли собою С-Сефарозу НР при рН 7,8-8,0. Антитіло елюювали з градієнтом Масі 10- 500 мМ в 25 об'ємах колонки.
Таблиця 5
Склад середовищ вирощування гібридом
ПРИКЛАД 4.2
Продукування рекомбінантних людських антитіл 31 НА 1202 трансфікованими клітинами
У даному прикладі проілюстровано у загальних рисах, яким чином антитіла З1НА Ід052 були продуковані трансфікованими клітинами. Клітини 293 для тимчасової експресії і клітини СНО для стабільної експресії були трансфіковані плазмідами, які кодують важкі і легкі ланцюги 314.
Кондиційовані середовища від трансфікованих клітин витягали, видаляючи клітини та уламки клітин. Освітлені кондиційовані середовища завантажували на колонку протеїн А Сефарози.
Необов'язково, середовища спочатку можна концентрувати, а потім завантажувати на колонку протеїн А Сефарози. Неспецифічне зв'язування виключали інтенсивним промиванням ФБР.
Зв'язані білюи антитіла на колонці протеїну А витягали стандартною кислотною елюацією антитіл з колонок протеїну А (наприклад, 50 мМ цитрату, рН 3,0). Агреговані білки антитіл з пулу протеїну А Сефарози видаляли ексклюзійною хроматографією або іонообмінною хроматографією зв'язування на аніонообмінній смолі, такій як смола ОО Сефароза. Конкретні умови іонного обміну для білків 31Н4 являли собою 0О-Сефарозу НР при рН 7,8-8,0. Антитіло елюювали з градієнтом Масі 10-500 мМ в 25 об'ємах колонки.
Приклад 5
Продукування людських антитіл 21812 І2С4 гібридомою
У даному прикладі проілюстровано у загальних рисах, яким чином антитіла 21812 Ід054 були продуковані гібридомами. Лінію гібридом 21812 вирощували в колбах Т75 в середовищах (Іпгедга Медіа, табл. 5). Коли гібридоми практично досягали злиття в колбах 175, їх переносили в колби Іпіедга (Іпіедга Віозсіепсев5, Іпієдга СІ 1000, кат. Мо 90 005).
Колба Іпієдга є колбою для культури клітин, яка розділена мембраною на дві камери, маленьку камеру і велику камеру. Об'єм клітин гібридоми 20-30 мл з мінімальною щільністю клітин 1 х 106 клітин на мл від лінії гібридоми 3134 вміщували до маленької камери колби
Іпїедга в середовищі Іпівдга (див. табл. 5 щодо компонентів середовища Іпіедга). Тільки середовище Іпіедга (1 л) вміщували у великі камери колб Іпієедга. Мембрана, що розділяє дві камери, є проникною для низькомолекулярних поживних речовин, але герметична для клітин гібридоми і антитіл, продукованих такими клітинами. Таким чином, клітини гібридоми і антитіла, продуковані такими клітинами гібридоми, утримувалися в маленькій камері.
Через 1 тиждень середовища видаляли з обох камер колби Іпієдга і замінювали свіжими середовищами Іпіедга. Зібрані середовища з маленьких камер зберігали окремо. Після другого тижня росту, середовища з маленьких камер збирали знову. Зібрані середовища тижня 1 для лінії гібридоми поєднували із зібраними середовищами тижня 2 лінії гібридоми. Одержаний зразок зібраних середовищ лінії гібридоми центрифугували для видалення клітин та уламків (15 хв при 3000 об/хв), і одержаний супернатант фільтрували (0,22 мкм). Освітлені кондиційовані середовища завантажували на колонку протеїн А Сефарози. Необов'язково, середовища спочатку можна концентрувати, а потім завантажувати на колонку протеїн А Сефарози.
Неспецифічне зв'язування виключали інтенсивним промиванням ФБР. Зв'язані білки антитіла на колонці протеїну А витягали стандартною кислотною елюацією антитіл з колонок протеїну А (наприклад, 50 мМ цитрату, рН 3,0). Агреговані білки антитіл з пулу протеїну А Сефарози видаляли ексклюзійною хроматографією або іонообмінною хроматографією зв'язування на аніонообмінній смолі, такій як смола ОО Сефароза. Конкретні умови іонного обміну для білків 21812 являли собою О-Сефарозу НР при рн 7,8-8,0. Антитіло елюювали з градієнтом Масі 10- 500 мМ в 25 об'ємах колонки.
ПРИКЛАД 6
Продукування людських антитіл 21812 ІйСс2 трансфікованими клітинами
У даному прикладі проілюстровано у загальних рисах, яким чином антитіла 21812 Ід02 були продуковані трансфікованими клітинами. Клітини 293 для тимчасової експресії і клітини СНО для стабільної експресії були трансфіковані плазмідами, які кодують важкі і легкі ланцюги 21812. Кондиційовані середовища від трансфікованих клітин витягали, видаляючи клітини і уламки клітин. Освітлені кондиційовані середовища завантажували на колонку протеїн А
Сефарози. Необов'язково, середовища спочатку можна концентрувати, а потім завантажувати на колонку протеїн А Сефарози. Неспецифічне зв'язування виключали інтенсивним промиванням ФБР. Зв'язані білки антитіла на колонці протеїну А витягали стандартною кислотною елюацією антитіл з колонок протеїну А (наприклад, 50 мМ цитрату, рН 3,0).
Агреговані білки антитіл з пулу протеїну А Сефарози видаляли ексклюзійною хроматографією або іонообмінною хроматографією зв'язування на аніонообмінній смолі, такій як смолабр-
Сефароза. Конкретні умови іонного обміну для білків 21812 являли собою ЗР-Сефарозу НР при рН 5,2. Антитіла елюювали в 25 об'ємах колонки буферного розчину з градієнтом Масі 10-500
ММ в 20 мМ натрій-ацетатного буфера.
ПРИКЛАД 7
Аналіз послідовності важкого і легкого ланцюгів антитіла
Послідовності нуклеїнових кислот і амінокислот для легких і важких ланцюгів згаданих вище антитіл далі були визначені секвенуванням нуклеотидів Запдег (дидезокси). Далі послідовності амінокислот були виведені з послідовностей нуклеїнових кислот. Послідовності нуклеїнових кислот для варіабельних доменів проілюстровані на фіг. ЗЕ-39.).
Послідовності кДНК для варіабельних ділянок легкого ланцюга лямбда З1НА4, 21812 і 1612 були визначені і розкриті як ЗЕО ІЮ МО: 153, 95 і 105, відповідно.
Послідовності КДНК для варіабельних ділянок важкого ланцюга З1Н4, 21812 і 16Е12 були визначені і розкриті як зЗЕО ІО МО: 152, 94 і 104, відповідно.
Константна ділянка легкого ланцюга лямбда (ЗЕО ІЮ МО: 156) і константні ділянки важкого ланцюга да і два (5ЕО ІО МО: 154 і 155) проілюстровані на фіг. ЗКК.
Були визначені послідовності поліпептидів, передбачені для кожної з таких послідовностей
КДНК. Передбачені послідовності поліпептидів для варіабельних ділянок легкого ланцюга лямбда З1НА4, 21812 і 16Е12 були передбачені і розкриті як ЗЕО ІО МО: 12, 23 і 35, відповідно,
Ко) константної ділянки легкого ланцюга лямбда (ЗЕО ІЮ МО: 156), для варіабельних ділянок важкого ланцюга З1НА, 21812 і 1612 були передбачені і розкриті як (ЗЕО ІЮО МО: 67, 49 і 79, відповідно. Константні ділянки важкого ланцюга дог і Ідс4 (5ЕО ІЮ МО: 154 і 155).
Розподіл на ЕК1, СОКІ, ЕК2, СОК2, ЕКЗ, СОКЗ, ЕКА показано на фіг. 2А-30.
На підставі даних послідовності, були визначені гени зародкової лінії, з яких була одержана кожна варіабельна ділянка важкого ланцюга або легкого ланцюга. Ідентичність генів зародкової лінії вказана після відповідної лінії гібридоми на фіг. 2А-30, і кожен представлений унікальним
ЗБО ІО МО: Фіг. 2А-30 також ілюструють деякі послідовності амінокислот для додаткових антитіл, які були охарактеризовані.
ПРИКЛАД 8
Характеристика зв'язування антитіл з РОБ5КУ
Після ідентифікації ряду антитіл, які зв'язуються з РСБКУ, декілька підходів використовувалися для кількісного визначення і додаткової характеристики природи зв'язування. В одному з аспектів дослідження виконували аналіз спорідненості Віасоге. У іншому аспекті дослідження виконували аналіз спорідненості КіпЕхА?. Зразки і буфери, використовувані в даних дослідженнях, представлені в табл. б нижче.
Таблиця 6 20 мМ Маосдс, рн 5,2, 10 ММ МАСАС, рН 5,2, 10 ММ МАСАС, рН 5,2,
Вимірювання спорідненості ВіАсоге?
Аналіз спорідненості ВіАсоге? (пристрій резонансу поверхневого плазмону, Віасоге, Іпс.,
Різсаїаулау, МО) для антитіл 21812 проти РСОБ5КУ, описаний в даному Прикладі, виконувався згідно інструкціям виробника.
Якщо коротко, експерименти з резонансом поверхневого плазмону виконувалися з використанням оптичних біодатчиків Віасоге 2000 (Віасоге, Неайпсаге СЕ, Різсаїаулау, Нью-
Джерсі). Кожне індивідуальне анти-РС5КУ антитіло іммобілізували на чіпі біодатчика категорії "для досліджень" СМ5 шляхом амінного сполучення при рівнях, які давали максимальну реакцію (Ктах) зв'язування аналізованої речовини не більше ніж 200 одиниць резонансу (КИ,
ОР). Концентрацію білка РОБ5КОУ варіювали з 2-разовими проміжками (аналізована речовина) і вводили ін'єкційно над поверхнею з іммобілізованим антитілом (із швидкістю потоку 100 мкл/хв протягом 1,5 мін). Свіжий буфер НВЗ-Р (рН 7,4, 0,01 М Нерез, 0,15 М Масі, 0,005 95 поверхнево- активних речовин Р-20, Віасоге)у з додаванням 0,01 95 альбуміну телячої сироватки (АТС) використовували як буфер зв'язування. Спорідненість зв'язування для кожного анти-РС5КО антитіла вимірювали в окремих експериментах проти кожного з білків РО5КОУ людини, миші і яванської макаки при рН 7,4 (використовувані концентрації становили 100, 50, 25, 12,5, 6,25, 3,12510 нм).
Крім того, спорідненість зв'язування антитіла з РОС5КУ людини також вимірювали при рН 6,0 з використанням буфера НВ5З-Р, рН 6.0 (рН 6,0, 0,01 М Нерез, 0,15 М Масі, 0,005 95 поверхнево- активних речовин Р-20, Віасоге) з додаванням 0,01 95 АТС. Одержаний сигнал зв'язування був пропорційний вмісту вільного РСОБКОУ в розчині. Рівноважна константа дисоціації (Ко) була отримана в результаті нелінійного регресивного аналізу кривих конкуренції з використанням однорідної моделі гомогенного зв'язування на одному сайті з подвійною кривою (програмне забезпечення КіпЕхАЄ, Зарідупе Іпвігитепів Іпс., Воіїбе, Індіана) (п-1 для циклів з рН 6,0).
Цікаво, що антитіла, схоже, демонструють вищу спорідненість зв'язування при нижчих значеннях рН (при яких Ка становила 12,5, 7,3 і 29 пМ для З1НА, 21812 і 16Е12, відповідно).
Кінетичні параметри зв'язування антитіла, зокрема Ка (константа швидкості асоціації), Ка (константа швидкості дисоціації) і Ко (рівноважна константа дисоціації) були визначені з використанням комп'ютерної програми оцінки ВІА 3.1 (ВіІАсоге, Іпс. Різсаїажау, Нью-Джерсі).
Нижчі значення рівноважної константи дисоціації вказують на вищу спорідненість антитіла до
РОЗКУ. Значення Ко, визначені аналізом спорідненості ВіАсоге-, наведені в табл. 7.1 нижче.
Таблиця 7.1 11 981на 1777771 2лопмМ | 77777717 лобом бнм
У табл. 7.2 проілюстровані швидкості Коп і Кон.
Таблиця 7.2 11111001 Ко(Ме) 7771711 Кос) | 7777777 КС
Вимірювання спорідненості КіпЕХА?
Аналіз спорідненості КіпЕХА? (Зарідупе Іпвігитепів, Іпс., Воїзе, Індіана) 1612 і ЗНА виконували згідно інструкціям виробника. Якщо коротко, Кеасії-Се! м (бх) (Ріегсе) попередньо вкривали одним із білків РОС5КО людини, яванської макаки з міткою М5 або миші з міткою Нів і блокували АТС. 10 або 100 пМ антитіла З1НА та один з білків РОБКО далі інкубували з різними концентраціями (0,1 пМ-25 нМ) білків РОЗКО при кімнатній температурі протягом 8 год. перед пропусканням через вкриті РОКУ гранули. Кількість зв'язаного з гранулою З1НА визначали за допомогою козиного анти-людського Ідс (Не!) антитіла з флуоресцентною міткою (Суб) (Часкзоп Іттипо Кезеагсі). Сигнал зв'язування пропорційний концентрації вільного З1Н4А в рівновазі зв'язування. Рівноважна константа дисоціації (Ко) була одержана в результаті нелінійної регресії двох наборів кривих конкуренції з використанням моделі гомогенного зв'язування на одному сайті. В аналізі використовували програмне забезпечення КіпЕхАє Рго.
Криві зв'язування, що генеруються в даному аналізі, проілюстровані на фіг. 4А-4Е.
Як 1612, так і З31Н4 антитіла продемонстрували подібну спорідненість до РОБКОУ людини і яванської макаки, але приблизна в 10-250 разів нижчу спорідненість до РОЗКУ мишії. Із двох антитіл, досліджених з використанням системи КіпЕХА-, антитіло З31Н4 продемонструвало вищу спорідненість до РОКУ як людини, так і яванської макаки, із значенням Ко З і 2 пМ, відповідно. 16212 продемонструвало дещо нижчу спорідненість із значенням Ко 15 пМ у випадку РОБ5КУ людини і Ко 16 пМ у випадку РОКУ яванської макаки.
Результати аналізу спорідненості КіпЕХА? підсумовані в табл. 8.1 нижче.
Таблиця 8.1 11100111 пРОБКУ | 7777 сРОБК | 7 тРОЗК З//З довірчий довірчий довірчий
Зразок Ко (ПМ) інтервал Ко (ПМ) інтервал Ко (ПМ) інтервал 95 96 95 90 95 96 ни и я Я ПО ПО ОО
Додатково, проводили аналіз 5О5РАСЕ, щоб перевірити якість і кількість зразків; результати показані на фіг. БА. СРС5КОУ продемонстрував результат приблизно на 50 95 менший на гелі, а також від активної концентрації зв'язування, обчисленої на підставі аналізу КіпЕхХА?.
Таким чином, Ко тАБбБ проти сРС5КОУ була скоректована з урахуванням присутності 50 95 активного СРСОЗКО.
Аналіз рівноважного зв'язування в розчині ВіІАсоге використовували для вимірювання значень Ка для антигензв'язувального білка 21812. 21812.1 продемонстрував низький сигнал в аналізі КіпЕхХА, тому застосовували аналіз рівноваги в розчині Віасоге. Оскільки не спостерігалося значущого зв'язування при зв'язуванні антитіл з поверхнею з іммобілізованим
РОСБКУО, антитіло 21812 було іммобілізоване на проточній кюветі 4 чіпу СМ5 з використанням амінного сполучення з густиною приблизно 7000 ОР. Проточну кювету З використовували як контроль фону. 0,3, 1 і З нМ РОКУ людини або РОКУ яванської макаки змішували із серійними розведеннями зразків антитіла 21812.1 (які варіювали від 0,001 до «25 нМ) у ФБР плюс 0,1 мг/мл альбуміну телячої сироватки, 0,005 95 Р20. Зв'язування вільного РОБКОУ в змішаних розчинах вимірювали шляхом ін'єкції над поверхнею антитіла 21812.1. 100 95 сигнал зв'язування РОКУ на поверхні 21812.1 було визначено за відсутності тАб в розчині. Знижена відповідь у формі зв'язування з РОСБКОУО з підвищенням концентрацій тАр показувала
Зо зв'язування РСЗКОУО з тАбБ в розчині, який блокував зв'язування РСЗКОУО з поверхнею з іммобілізованим пептитілом. Після нанесення на графік сигналу зв'язування РСО5КОУ проти концентрацій тАб, було обчислене значення Ко на основі трьох наборів кривих (фіксована концентрація РОЗКО 0,3, 1 ї З нМ) з використанням моделі гомогенного зв'язування на одному сайті в програмному забезпеченні КіпЕХА Рго"М. Хоча сРС5КОУ містить нижчу концентрацію білка за даними аналізу КіпЕХА і гелю натрію лаурилсульфату, його концентрація не була скоректована в даному дослідженні, оскільки концентрація СРС5КОУ не використовувалася для обчислення Ко. Результати показані в табл. 8.2 нижче і на фіг. 58-50. фіг. 5В ілюструє результати аналізу рівноваги в розчині для ПРОБКУ при трьох різних концентраціях ПРОЗКО.
Фіг. 5С ілюструє подібний набір результатів для тРСОБЗКУ. Фіг. 50 ілюструє результати описаного вище аналізу захоплення Віасоге.
Таблиця 8.2
Зразок довірчий інтервал довірчий інтервал довірчий о2івіг | 15 | 9523. | 711 | 7ж6 | 17000| -
ПРИКЛАД 9
Ефективність З1НА і 21812 з точки зору блокування зв'язування 0374 РОСЗКОУ/ЛІПНЩР
Даний приклад забезпечує значення ІС5О для двох із антитіл, що володіють здатністю блокувати зв'язування РСОБ5БКО 0374 з ЛІИНІЩР. Прозорі 384-лункові планшети (Совіег)
вкривали 2 мкг/мл козиного антитіла проти рецептора ЛІНЩ (КО 5бузіетв), розбавленого буферним розчином А(100 мМ натрію какодилату, рН 7,4). Планшети ретельно промивали буферним розчином А, а потім блокували протягом 2 год. буферним розчином В (1 95 молока в буферному розчині А). Після промивання планшети інкубували протягом 1,5 год. з 0,4 мкг/мл рецептора ЛЛИНЩ (КО Зузіетв5), розбавленого буферним розчином С (буферний розчин В із додаванням 10 мМ Сасіг2). Паралель з даною інкубацією, 20 нг/мл біотинільованого 0374У
РСОБКО інкубували з різними концентраціями антитіл З31Н4 Ідс2, З31Н4 Ідс4, 21812 Ідс2 або 21812 Ідс4, які були розбавлені буферним розчином А, або тільки з буферним розчином А (контроль). ЛЛИНЩ планшети, що містять рецептор, промивали, біотинільовану суміш 0374
РОЗКО/антитіло переносили в них та інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі.
Зв'язування біотинільованого 0374У з рецептором ЛІИНЩ виявляли інкубацією із стрептавідин-
ПХ (Віозоигсе) в концентрації 500 нг/мл буферного розчину С, з подальшим додаванням субстрату ТМБ (КР). Сигнал гасили 1 н НОСІ, і зчитували поглинання на довжині хвилі 450 нм.
Результати даного дослідження зв'язування показані на фіг. БА-60. Сумарно, значення ІСво були визначені для кожного антитіла і становили 199 пМ для З1НА ІдС2 (фіг. 6А), 156 пМ для
ЗНА ІдСа4 (фіг. 6В), 170 пМ для 21812 Ід52 (фіг. 6С), і 169 пМ для 21812 Ід4 (фіг. 603).
У даному аналізі антитіла також блокували зв'язування РОБКОУ дикого типу з ЛЛНЩР.
ПРИКЛАД 10
Аналіз захоплення ЛИНЩ клітинами
Даний приклад демонструє здатність різноманітних антигензв'язувальних білків зменшувати захоплення ЛІИНЩ клітинами. Людські клітини Нерса2 висівали в 96-лункові чорні планшети з прозорим дном (Созіаг) в концентрації 5 х 105 клітин на лунку в середовищі МДСІ (Меадіагесни,
Іпс) з додаванням 1095 сироватки телячого ембріона та інкубували при 37 "С (595 бог) протягом ночі. Для утворення комплексу РОЗКУО і антитіла, 2 мкг/мл людського 0374 РОКУ інкубували з різними концентраціями антитіла, розбавленого буферним розчином захоплення (МДСІ з вмістом 195 сироватки телячого ембріона), або тільки з буферним розчином захоплення (контроль) протягом 1 год. при кімнатній температурі. Після промивання клітин ФБР, суміш 0374 РСОСБКОУ/антитіло переносили в кювети, після чого додавали ЛИНЩ-ВОБІРУ (Іпмігодеп), розбавлений буферним розчином захоплення до кінцевої концентрації б мкг/мл.
Зо Після інкубації протягом З год. при 37 "С (595 СО2) клітини ретельно промивали ФБР, і сигнал флуоресценції в кюветі визначали за допомогою зЗаїїге м (ТЕСАМ) на довжині хвилі 480-520 нм (збудження) і 520-600 нм (емісія).
Результати аналізу захоплення клітинами проілюстровані на фіг. 7А-70. Сумарно, значення
ІСво були визначені для кожного антитіла і становили 16,7 нМ для З1НА4 Ідса2 (фіг. 7А), 13,3 НМ для З1НА ІдС4 (фіг. 7В), 13,3 нМ для 21812 ІдС2 (фіг. 7С) і 18 нМ для 21812 Ід04 (фіг. 70).
Одержані результати демонструють, що застосування антигензв'язувальних білків може зменшувати блокуючий вплив РОБКОУ (0374У) на захоплення ЛІНЩ клітинами. Антитіла також блокували вплив РОЗКУ дикого типу в даному аналізі.
ПРИКЛАД 11
Зниження рівня холестерину в сироватці під дією антитіла З1НА в б-денному дослідженні
Для того, щоб оцінити зниження загального холестерину (ОХ) сироватки у мишей дикого типу (ДТ) при лікуванні антитілом проти білка РСБ5КО, виконували наступну методику.
Мишей-самців ДТ (порода С57ВІ/6б, вік 9-10 тижнів, 17-27 г), одержаних від Уаскзоп
І арогагогу (Ваг Нагбог, МЕ) годували звичайним кормом (Нагпапа-Текіадй, раціон 2918) протягом всього експерименту. Мишам вводили анти-РС5КО антитіло З1НА (2 мг/мл у ФБР) або Ід (2 мг/мл у ФБР) в кількості 10 мкг/кг у хвостову вену в Т-0. Наївні миші були також залишені як група наївного контролю. Дози в групах і час умертвіння наведені в табл. 9.
Таблиця 9 776 7177771181нЕ | 77777771 тагтодии.7///:///1/7 28 1171777111181НА | 77777771 лаягодини.7//:///С/(«// | / 7 С 79117771 Навні/ | 77777777717171717171717171снв11111111111ї117
Мишей умертвляли асфіксією СО2 в попередньо визначених точках часу, наведених в табл. 9. Кров збирали через порожнисту вену в пробірку Еппендорфа і дозволяли зсідатися при кімнатній температурі протягом 30 хв. Далі зразки центрифугували в настільній центрифузі при 12 000 х уд протягом 10 хв для відокремлення сироватки. Загальний холестерин сироватки і
ЛИВЩ:-Х вимірювали з використанням клінічного аналізатора Нітасні 912 і наборів Коспе/Нігасні для визначення ОХ і ЛЛВЩ-Х.
Результати експерименту проілюстровані на фіг. 8А-80. Сумарно, миші, яким вводили антитіло З1Н4, продемонстрували знижені рівні холестерину сироватки протягом експерименту (фіг. 8А і фіг. 88). Крім того, наголошується, що миші також продемонстрували знижені рівні
ЛПВЩ (фіг. 8С і фіг. 80). Для фіг. 8А і фіг. 8С відсоток зміни показано у співвідношенні до контролю до в тій же точці часу (Р «0,01, Ж Р « 0,05). Для фіг. 88 і фіг. 80, відсоток зміни показаний у співвідношенні до рівнів загального холестерину сироватки і ЛПВЩ, виміряних у наївних тварин в'ї-О год. (Р.«0,01, Ж Р « 0,05).
Із урахуванням знижених рівнів ЛОВЩ, наголошується, що фахівцю в даній галузі буде зрозуміло, що зниження рівня ЛПВЩ у мишей не є показником того, що зниження рівня ЛЛВЩ буде відбуватися у людини, і відображає тільки те, що рівень холестерину сироватки в організмі знижений. Наголошується, що в організмі мишей велика частина холестерину сироватки переноситься у формі частинок ліпопротеїну високої щільності (ЛЛВЩ), що відрізняється від людини, у якої велику частину холестерину сироватки переносять частинки ЛЛНЩ. У мишей вимірювання загального холестерину сироватки найбільш подібне до рівня ЛПВІЩ-Х в сироватці. ЛЛВЩ миші містить аполіпопротеїн Е (ароЄ), який є лігандом для рецептора ЛЛНЩ (ЛІНЩР) і дозволяє його кліренс під дією ЛІПНЩР. Таким чином, дослідження ЛПВЩ є придатним показником для даного прикладу у мишей (з розумінням того, що зниження ЛЛВЩ у людини не очікується). Наприклад, ЛПВЩ людини, навпаки, не містить ароЕ і не є лігандом для
ЛІИНЩР. В міру того, як антитіла РОС5КОУ збільшують експресію ЛІНЩЕР у миші, печінка може здійснювати кліренс ЛІИВЩ і, таким чином, знижує рівні ЛЛВЩ-Х в сироватці.
ПРИКЛАД 12
Вплив антитіла З1НА на рівні ЛЛНЩЕР в б-денному дослідженні
Даний приклад демонструє, що антигензв'язувальний білок змінює рівень ЛЛНЩР у суб'єкта,
Зо як було передбачено, з часом. Для того, щоб з'ясувати вплив антитіла З1НА на рівні ЛЛНЩР, виконували аналіз методом вестерн-блотингу. 50-100 мг тканини печінки, одержаної від умертвлених мишей, описаних в Прикладі 13, сгомогенізували в 0,5 мл буфера радіоїмунопреципітаційного аналізу (РІПА, Запіа Стги? Віоїесппоїоду Іпс.), що містив повний інгібітор протеази (Коспе). Гомогенат інкубували на льоду протягом 30 хв і центрифугували, щоб гранулювати уламки клітин. Концентрацію білка в супернатанті вимірювали з використанням реактивів для аналізу білка ВіокКай (Віокай Іабогайогіе5). 100 мкг білка денатурували при 70 "С протягом 10 хв і розділяли на градієнтному гелі 4-12 95 біс-Трис натрію лаурилсульфату (Іпмігодеп). Білки переносили на ПВДФ мембрану з розміром отворів 0,45 мкм (Іпмігодеп) і блокували в буфері промивання (50 мМ Трис, рн 7,5, 150 мМ Масі, 2 мм Сасі» і 0,05 95 Твіну 20), що містив 5 96 нежирного молока протягом 1 год. при кімнатній температурі.
Далі пляму зондували з козиним антитілом проти мишачого ЛЛНЩР (2850 Зузіетв) 1:2000 або анти-б-актином (Зідта) 1:2000 протягом 1 год. при кімнатній температурі. Пляму коротко промивали та інкубували з телячим анти-козиним ІдО-ПХ (Запіа Сги?7 Віоїесппоіоду Іпс.) 1:2000 або козиним анти-мишачим ІдО-ПХ (рвіаге) 1:2000. Після інкубації протягом 1 год. при кімнатній температурі пляму ретельно промивали, та імунореактивні групи виявляли з використанням набору ЕСІ ріиб (Атег5пат бБіобсіепсе5). Вестерн-блот продемонстрував підвищення рівнів білка ЛЛНЩЕР в присутності антитіла З1НА, як проілюстровано на фіг. 9.
ПРИКЛАД 13
Зниження рівня холестерину в сироватці під дією антитіла З1НА в 13-денному дослідженні
Для того, щоб оцінити зниження загального холестерину (ОХ) сироватки у мишей дикого типу (ДТ) при лікуванні антитілом проти білка РОБКО, в 13-денному дослідженні, виконували наступну методику.
Мишей-самців ДТ (порода С57ВІ/6б, вік 9-10 тижнів, 17-27 г), одержаних від Уаскзоп
І арогагогу (Ваг Нагбог, МЕ) годували звичайним кормом (Нагпапа-Текіадй, раціон 2918) протягом всього експерименту. Мишам вводили анти-РС5КО антитіло З1НА (2 мг/мл у ФБР) або Ід (2 мг/мл у ФБР) в кількості 10 мкг/кг у хвостову вену в Т-0. Наївні миші були також залишені як група наївного контролю.
Дози в групах і час умертвіння наведені в табл. 10. Тварин умертвляли, печінку витягали і обробляли, як описано в Прикладі 13. (510)
Таблиця 10 1 юа | -//о7агодини.////////// | 6 | ЛОмкко 2 | зн | о татодини.////////// | 6 | лОомкУко 3 | зн | о 7агодини.///////// | 6 | мк 4 | юа | о лаагодини./////////// | 6 | ЛОмкко | зн | о лаагодини./////////// | 6 | лЛОмкУко 6 | зн | о лаагодини.////////// | 6 | мк 77 | юа | о лоагодини./////////// | 6 | ЛОмкко 8 | зн | о лоагодини./////////// | 6 | лЛОмкУко 9 | зн. | о ледгодини.////////// | 7/6 | мк | юс | о 24бгодини////////// | 6 | ЛОмкк 11 | він | о 24бгодини/////// | 6 | лОмкУко 12 | зн | об години.7/////// | 6 | мк 13 | юа | о З'агодини////////// | 6 | ЛОмкко 14 | зн | о З'агодини////////// | 6 | лЛОмкУко | зн | о Загодини//////// | 6 | мк 16 | навні | ((/////7777сснв777777/ |Ї7711716117 17771717 нв с
При розширенні б-денного експерименту до 13-денного дослідження, такий же знижуючий вплив на холестерин сироватки, який спостерігали в б-денному дослідженні, також спостерігався в 13-денному дослідженні. Більш конкретно, тварини, яким вводили 10 мг/кг, 5 продемонстрували зниження холестерину сироватки на 3195 на 3-й день, і поступове повернення до рівня перед лікуванням на 13-й день. Фіг. 10А ілюструє результати даного експерименту. Фіг. 10С ілюструє результати повторення описаної вище методики з дозою 10 мкг/кг З1НА, та з іншим антитілом, 16Е12, також в дозі 10 мкг/кг. Дози в групах і час умертвіння наведені в табл. 11. 10
Таблиця 11 1 | юа | 24 години/////// | 6 | ЛОмккс 2 | 1662 | г4години./////// | 6 | ЛОмккс 3 | зн | 4 години////// | 6 | / ЛОмккс 4 | юю | тлгодини/////// | 6 | ЛОмккс 5 | 1672 | Тл години.//// | 6 | ЛОмкс Б 6 | зн | години | 6 | ЛОмклс Б 7 | юб | 44 години.////// | 6 | /// ЛОмккс 8 | 1662 | ляє години./////// | 6 | ////// ЛОмкюсо 9 | зна | б44години.////// | 6 | ///// ЛОмкксо 10 | юс | лоба години.////// | 6 | ЛОмккс 11 | л6ла | о леагодини.//// | 6 | 777 ЛОмкюко 12 | зна | ла години.///// | 6 | /// ЛОмккс 13 | 1юб2 | г24бгодиї/////// | 6 | ЛОмккс Б 14 | 1662 | // г4бгодиї//// | 6 | ЛОмккс 15 | зн | г4бгодиї////// | 6 | ЛОмккс 16 | їюб2 | За годиї/////// | 6 | ЛОмккс Б 17 | 1662 | За годиї//// | 6 | ///// ЛОмкксо 18 | зна | За годиї///// | 6 | /// ЛОмккс 19 | Навні | (:Р:.ЙКр/ьнв | 71/76 71/77 ломки
Як проілюстровано на фіг. 10С, як 16Е12, так ії З1Н4 приводили до значущого та суттєвого зниження загального холестерину сироватки вже після одноразової дози і забезпечували сприятливий ефект протягом тижня (10 днів або більше). Результати повторного 13-денного 15 дослідження узгоджувалися з результатами першого 13-денного дослідження, (із спостережуваним зниженням рівнів холестерину сироватки на 26 95 на 3-й день. Для фіг. 10А і фіг. 108 відсоток зміни показаний у співвідношенні до контролю дос в тій же точці часу СР «
0,01). Для фіг. 10С відсоток зміни знаходиться у співвідношенні до контролю Ідс в тій же точці часу СР « 0,05).
ПРИКЛАД 14
Вплив антитіла ЗНА на рівні лявщ в 13-денному дослідженні
Рівні ЛЛВЩ для тварин в Прикладі 15 також вивчалися. Рівні ЛЛВЩ у мишей знижувалися.
Більш конкретно, тварини, які одержували 10 мг/кг, продемонстрували зниження рівнів ЛЛВЩ на
З3З 9 на 3-й день, з поступовим поверненням до рівнів перед введенням дози на 13-й день. Фіг. 108 ілюструє результати експерименту. Спостерігалося зниження рівнів ЛПВЩ на 34 95 на 3-й день. Фіг. 108 ілюструє результати повторного 13-денного експерименту.
Як буде зрозуміло фахівцю в даній галузі, хоча антитіла знижують рівень ЛПВЩ у миші, не очікується, що це відбуватиметься у людини через відмінності в ЛОВЩ у людини та інших організмів (наприклад, мишей). Таким чином, зниження ЛПВЩ у миші не є показником зниження
ЛИВЩ у людини.
Приклад 15
Повторне введення антитіл забезпечує тривалу сприятливу дію антигензв'язувальних пептидів
Для перевірки того, чи будуть результати, одержані в Прикладах вище, подовжуватися для додаткової сприятливої дії при введенні додаткових доз, експерименти з Прикладів 15 і 16 повторювали із схемою введення, проілюстрованою на фіг. 11А. Результати проілюстровані на фіг 118. Як можна побачити із графіка на фіг. 118, хоча обидві когорти мишей продемонстрували істотне зниження загального холестерину сироватки, оскільки всі миші одержували початкову ін'єкцію антигензв'язувального білка 31Н4, миші, які одержували додаткові ін'єкції АЗБ 31Н4, продемонстрували тривале зниження загального холестерину сироватки, тоді як миші, які одержали тільки контрольну ін'єкцію, зрештою продемонстрували підвищення загального холестерину сироватки. На фіг. 11, відсоток змін проілюстрований у співвідношенні до наївних тварин в точці часу 1-0 ("Р «0,01, "Р « 0,001).
Результати даного прикладу демонструють, що, на відміну від інших способів лікування холестерину, у яких повторне введення призводило до зниження ефективності через біологічну корекцію в організмі суб'єкта, даний підхід, схоже, не спричиняє даної проблеми в межах даного
Зо періоду часу. Більше того, це наводить на думку про те, що повернення рівнів загального холестерину сироватки або холестерину ЛІПВІЩ до початкового рівня, спостережуване в попередніх прикладах, не є результатом опору лікуванню, що розвивається у суб'єкта, але скоріше виснаження доступного антитіла в організмі суб'єкта.
ПРИКЛАД 16
Застосування антитіл проти РОКУ для лікування пов'язаних з холестерином розладів
Хворому-людині, що демонструє пов'язаний з холестерином розлад (при якому зниження рівня холестерину (наприклад, холестерину сироватки) може бути сприятливим), вводять терапевтично ефективну кількість антитіла проти РОКУ, 31Н4 (або, наприклад, 21812).
Періодично в ході лікування стан хворого контролюють, щоб визначити зменшення симптомів розладу. Знайдено, що після лікування у хворих, які пройшли курс лікування антитілом проти
РСОБКУО, рівні холестерину сироватки були знижені, в порівнянні із хворими, які не одержували лікування.
Приклад 17
Застосування антитіл проти РОБ5КУОУ для лікування гіперхолестеринемії
Хворому-людині, що демонструє симптоми гіперхолестеринемії, вводять терапевтично ефективну кількість антитіла проти РОБКОУ, 31Н4 (або, наприклад, 21812). Періодично в ході лікування стан хворого-людини контролюють, щоб визначити, чи знижується рівень холестерину в сироватці. Знайдено, що після лікування у хворих, які пройшли курс лікування антитілом проти
РСОБКУО, рівні холестерину сироватки були знижені, в порівнянні із хворими, які не одержували лікування.
Приклад 18
Застосування антитіл проти РОБКОУ для запобігання захворюванню коронарних судин серця та/або рецидивів серцево-судинних катастроф
Ідентифікують хворого-людину, схильного до ризику розвитку захворювання коронарних судин серця. Хворому вводять терапевтично ефективну кількість антитіла РО5КОУ, такого як
З1НА4 (або, наприклад, 21812), окремо, паралельно або послідовно із статином, наприклад, симвастатином. Періодично в ході лікування стан хворого-людини контролюють, щоб визначити, чи змінюється рівень загального холестерину сироватки у хворого. Знайдено, що за допомогою профілактичного лікування у хворого, який одержує лікування антитілами проти бо РОБКУО, рівень холестерину сироватки знижений, таким чином, зменшуючи ризик захворювань коронарних судин серця або рецидивів серцево-судинних катастроф, в порівнянні з хворими, які не одержують лікування.
ПРИКЛАД 19
Застосування антигензв'язувального білка проти РОКУ для запобігання гіперхолестеринемії
Хворий являє собою людину, у якої присутній ризик розвитку гіперхолестеринемії, ідентифікований за допомогою аналізу родинного анамнезу та/або способу життя, та/або існуючих рівнів холестерину. Суб'єкктгу регулярно вводять (наприклад, 1 раз на тиждень) терапевтично ефективну кількість антитіла проти РСОБ5КОУ, 31Н4 (або, наприклад, 21812).
Періодично в ході лікування стан хворого контролюють, щоб визначити, чи знижується рівень холестерину сироватки. Після лікування знайдено, що у суб'єктів, які пройшли курс профілактичного лікування антитілом проти РОКУ, рівні холестерину сироватки знижені, в порівнянні з суб'єктами, які не одержували лікування.
ПРИКЛАД 20
Рандомізоване, подвійне сліпе, плацебо-контрольоване дослідження фази 1 з підвищенням дози для оцінки безпечності, переносимості, фармакокінетики і фармакодинаміки людського анти-РО5КО антитіла у здорових суб'єктів
Дане дослідження було рандомізованим, подвійним сліпим, плацебо-контрольованим дослідженням з підвищенням одноразової дози для оцінки безпечності, переносимості, фармакокінетики, фармакодинаміки (ФД) (ЛІЛНЩ-Х) та імуногенності людського анти-РС5КУ антитіла (моноклональне антитіло 21812) у здорових суб'єктів. Суб'єкти були рандомізовані у співвідношенні 3:1 (21812:плацебо; 8 суб'єктів на когорту дози, всього 56 суб'єктів в 7 когортах) для одержання 21812 в дозах 7, 21, 70, 210 або 420 мг п/ш, або відповідного плацебо; або 21812 в дозах 21 або 420 мг в/в, або відповідного плацебо. 56 суб'єктів були рандомізовані і одержували досліджуваний продукт (42 - 21812, 14 - плацебо); 40 суб'єктів (30 - 21812, 10 - плацебо) одержували досліджуваний продукт п/ш способом, і 16 суб'єктів (12 - 21812, 4 - плацебо) одержували досліджуваний продукт в/в способом. 53 з 56 суб'єктів (9595), які одержували досліджуваний продукт, завершили дослідження. З суб'єкти, які одержували 21812, відкликали повну згоду і не завершили дослідження.
Популяція дослідження, в основному, складалася із чоловіків (54 (96 95), із середнім віком 31,2 роки (інтервал: 20-45). 86 95 суб'єктів був білими, 9 95 іспанцями, 4 95 темношкірими, ії 1 95 мали інше походження. Середні початкові значення ЛІНІЩ-Х були подібними між групами лікування і варіювали від 113 до 143 мг/дл.
У даному дослідженні 21812 знижував рівень ЛІПНІЩ-Х в середньому на 55-6095 в одноразових дозах 270 мг п/ш, причому тривалість ефекту залежала від дози. Найнижчий рівень ЛЛНЩ-Х спостерігався в межах 2 тижнів після введення дози. Повне пригнічення РОБКОУ спостерігалося при одноразових дозах 270 мг п/ш, що добре корелювало із спостережуваним впливом на циркулюючий ЛІНЩ-Х.
Аналізи фармакокінетики продемонстрували, що 21812 показує нелінійну (концентраційно- залежну) елімінацію. Середнє значення їЇтпах варіювало від 4 до 6 днів. Як очікується, найвищий медіанний максимум спостережуваної концентрації (Стах) і площа під кривою концентрація-час від точки часу 0 до нескінченності (АОСо-пі) спостерігалися в групі 420 мг в/в і становили 139 мкг/мл і 1550 день"мкг/мл, відповідно.
Про побічні ефекти, що з'являються в ході лікування, повідомляли 29 із 42 суб'єктів (69 Об), які одержували 21812 в будь-якій дозі, і 10 із 14 суб'єктів (71 95), які одержували плацебо. Не спостерігалося очевидної кореляції між частотою побічних ефектів у суб'єктів і дозою 21812, або між частотою побічних ефектів у суб'єктів і способом введення 21812 (п/ш проти в/в).
Не повідомлялося про серйозні побічні ефекти, і жоден із суб'єктів не припинив участі в дослідженні в результаті побічного ефекту. Не було смертельних випадків в ході дослідження.
Про пов'язані з лікуванням побічні ефекти повідомляли 18 із 42 суб'єктів (43 95), які одержували 21812, і 10 із 14 суб'єктів (71 95), які одержували плацебо. Не спостерігалося очевидної кореляції між частотою побічних ефектів у суб'єктів і дозою 21812, або між частотою побічних ефектів у суб'єктів і способом введення 21812 (п/ш проти в/в).
Не спостерігалося тенденцій, вказуючих на клінічно значущий вплив 21812 на вибрані лабораторні змінні, електрокардіограми (ЕКГ) або основні показники життєдіяльності.
У даному дослідженні 21812, схоже, добре переносився при одноразовому п/ш і в/в введенні доз до 420 мг.
Зразки сироватки суб'єктів, зареєстрованих в даному дослідженні, були проаналізовані щодо присутності (у початковій точці) або продукування (після лікування) антитіл проти 21812.
Зразки всіх 42 суб'єктів, які одержували 21812, були негативними щодо антитіл проти 21812.
ПРИКЛАД 21
Рандомізоване, подвійне сліпе, плацебо-контрольоване дослідження фази 1 з підвищенням багатократних доз для оцінки безпечності, переносимості, фармакокінетики і фармакодинаміки людського анти-РС5КОУ антитіла у суб'єктів із гіперліпідемією, які одержують стабільні дози статину
Дане дослідження являє собою рандомізоване, подвійне сліпе, плацебо-контрольоване дослідження з підвищенням множинних доз з використанням людського анти-РС5КОУ антитіла (моноклональне антитіло 21812) у гіперліпідемічних суб'єктів (наприклад, гіперхолестеринемічних), які на даний час одержують стабільні дози статину. Дослідження включало сім когорт. Завдання для всіх когорт включали характеристику безпечності, переносимості та імуногенності 21812, а також характеристику ФК і ФД (/ЛІНЩ-Х і РОЗКОУ).
Когорти 1-5 дослідження представляли частину з підвищенням дози 21812 у гіперхолестеринемічних суб'єктів на стабільних низьких або середніх дозах статину. Суб'єкти в когортах 1-5 (п-8 на когорту) з ЛЛНЩ-Х (700-200 мг/дл), які одержували стабільну щоденну дозу розувастатину « 40 мг, аторвастатину « 80 мг або симвастатину 20-80 мг протягом 2 1 місяця, були рандомізовані у співвідношенні 3:1 для одержання 1 із 5 доз 21812 п/ш (14 або 35 мг Кт 6 разів; або 140 мг або 280 мг К2Т 3 рази; або 420 мг К4Т 2 рази) або відповідного плацебо, відповідно. Когорта 6 проводилася для гіперхолестеринемічних суб'єктів, які одержували високі дози статину (аторвастатин 80 мг або розувастатин 40 мг). Суб'єкти в даній когорті (п-12) одержували розувастатин 40 мг або аторвастатин 80 мг і були рандомізовані у співвідношенні 31 для одержання 21812 (140 мг п/ш К2Т З рази) або відповідного плацебо, відповідно. Когорта 7 проводилася для суб'єктів з гетерозиготною родинною гіперхолестеринемією (ідентифікованих з використанням критеріїв ВООЗ); суб'єкти в даній когорті (п-б) були рандомізовані у співвідношенні 2:11 для одержання 21812 (140 мг п/ш К2Т З рази) або відповідного плацебо, відповідно. Для зрозумілості, Когорта 1 одержувала п/ш дози 14 мг 21812 1 раз на тиждень, 6 разів. Когорта 2 одержувала п/ш дози 35 мг 21812 1 раз на тиждень, 6 разів.
Зо Когорта З одержувала п/ш дози 140 мг 21812 1 раз на 2 тижні, З рази. Когорта 4 одержувала п/ш дози 280 мг 21812 1 раз на 2 тижні, З рази. Когорта 5 одержувала п/ш дози 420 мг 21812 1 раз на 4 тижні, 2 рази.
Попередні результати були одержані для 40 суб'єктів, які були зареєстровані і рандомізовані для одержання 21812 або плацебо. Із цих 40 суб'єктів, 28 суб'єктів одержали 2 1 дози досліджуваного продукту (21812 або плацебо) і, таким чином, представляють множину для попереднього аналізу безпечності (сліпе лікування). Існуючі попередні сліпі дані безпечності були доступні для ці 28 суб'єктів, всі з яких були із когорт 1-4. Не було зареєстровано смертельних випадків, серйозних побічних ефектів або передчасного припинення участі в дослідженні внаслідок побічних ефектів. Загалом, щонайменше про 1 випадок побічних ефектів повідомляли 15 із 28 суб'єктів (54 95), які одержали 2 1 дози досліджуваного продукту. Про більшість побічних ефектів (при сліпому лікуванні) повідомляли одиничні суб'єкти, за винятком втомленості, артралгії, закрепу і вірусної інфекції верхніх відділів дихальних шляхів, кожен з яких був зареєстрований у 2 із 28 суб'єктів (7 95).
Попередні фармакодинамічний результати (сліпе лікування) були доступні для когорт 1,2 і 3. Залежне від дози 21812 зниження рівня ЛІЛНЩ-Х в кровотоку спостерігалося у суб'єктів на стабільних середніх дозах статинів. Найнижчий рівень ЛЛНЩ-Х спостерігався в межах 2 тижнів після введення першої дози і знаходився в інтервалі зниження на 60-80 9о в когорті З (140 мг
К2Т п/ш 3 рази). Практично повне пригнічення РСОБ5КО спостерігалося в когорті 3, що добре корелює із спостережуваним впливом на ЛЛНЩ-Х в кровотоку.
Зрештою, суб'єкти (М-51) в когортах 1-6 були рандомізовані для одержання 21812 (М-39) або плацебо (М-12); стать 26 суб'єктів (51 95) була чоловічою; середній вік (СВ) становив 58 (7) років. Не повідомлялося про смертельні випадки або серйозні побічні ефекти (ПЕ), і жоден із суб'єктів не припинив участі в дослідженні через ПЕ. Нейтралізуючі антитіла до 21812 не були знайдені.
У суб'єктів в когортах 1-5, які одержували низькі або середні дози статинів, відбувалося помірне зниження ЛОІНЩ-Х до 81 95 проти плацебо при максимальному зменшенні і 75 95 проти плацебо в кінці часового проміжку введення (тобто, на б-му тижні) після З щотижневих доз п/ш 21812, і 66 95 в кінці часового проміжку введення (тобто, на 8-му тижні) після 2 доз п/ш 1 раз на 4 тижні. У суб'єктів в когортах 1-5, які одержували низькі і середні дози статинів, відбувалося бо максимальне зниження ЛИНЩ-Х до 81 95 проти плацебо при максимальному зменшенні і 75 905 проти плацебо в кінці часового проміжку введення (фіг. 14). Вираженість і тривалість ефекту були дозозалежними. При введенні вищих доз РОЗКОУ не виявлявся в плазмі. Так само, в кінці часового проміжку введення після З щотижневих доз, у суб'єктів, які одержували високі дози статинів (когорта 6) спостерігалося середнє зниження рівня ЛІНІЩ-Х 63 95 проти плацебо, і максимальне зниження рівня ЛЛНЩ-Х 73 95 проти плацебо (фіг. 15).
Одержані дані показують, що повторні п/ш дози 21812 протягом 6 тижнів знижували рівень
ЛИНЩ:-Х в кровотоку до 81 95 проти плацебо, в залежності від схеми введення, у суб'єктів, які одержували низькі або середні або високі дози статинів, без серйозних ПЕ. Ефект зниження рівня ЛІНЩ-Х під дією 21812 був порівнянним для груп високої дози статину і низької або середньої дози статину.
У суб'єктів в когортах 1-5, яки одержували низькі або середні дози статинів, відбувалося помірне зниження рівнів РОЗКО до 94 95 проти плацебо в кінці часового проміжку введення, дані не показані. У суб'єктів в когортах 1-5, які одержували низькі або середні дози статинів, спостерігалося середнє зниження рівня АроВ до 54 95 проти плацебо в кінці часового проміжку введення, і максимальне зниження варіювало від 48 95 (35 мг КТ) до 59 95 (140 мгі 280 мг К2тТ і 420 мг КАТ) в ході дослідження (р « 0,001) (фіг. 16). Крім того, у суб'єктів в когортах 1-6, які одержували низькі або середні і високі дози статинів, спостерігалося середнє зниження рівня ра) до 43 95 проти плацебо в кінці часового проміжку введення (фіг. 17).
У суб'єктів в когорті 7 із спадковою родинною гіперліпідемією (ГеРГ) спостерігалося середнє зниження рівня ЛІЛНЩ-Х 65 95 проти плацебо в кінці часового проміжку введення (тобто, 6-й тиждень, через 2 тижні після введення 3-ої п/ш дози 21812 1 раз на 2 тижні), і максимальне зниження ЛІНІЩ-Х 7095 проти плацебо (фіг. 18). Зниження ЛІПНІЩ-Х в ході тимчасового проміжку введення були порівнянним із спостережуваним у суб'єктів без ГеРГ. Після лікування 21812 РОБЗКУ не був знайдений в кровотоку суб'єктів з ГеРГ.
У суб'єктів з ГеРГ в когорті 7 спостерігалося середнє зниження рівня РОЗКОУ в сироватці 78 95 проти плацебо в кінці часового проміжку введення (тобто, 6-й тиждень, через 2 тижні після введення 3-0ї п/ш дози 21812 1 раз на 2 тижні) (фіг. 19). У суб'єктів з ГеРГ в когорті 7 спостерігалося середнє зниження загального холестерину до 42 95 проти плацебо в кінці часового проміжку введення (тобто, 6-й тиждень, через 2 тижні після введення 3-ої п/ш дози
Зо 21812 1 раз на 2 тижні), і максимальне зниження загального холестерину 47 95 проти плацебо (фіг. 20). У суб'єктів з ГеРГ в когорті 7 спостерігалося середнє зниження рівня холестерину не-
ЛПВЩ 61 95 проти плацебо в кінці часового проміжку введення (тобто, 6-й тиждень, через 2 тижні після введення 3-ої п/ш дози 21812 1 раз на 2 тижні), і максимальне зниження рівня не-
ЛПВЩ холестерину 67 95 проти плацебо (фіг. 21). У суб'єктів з ГеРГ в когорті 7 спостерігалося середнє зниження рівнів АроВ до 47 95 проти плацебо в кінці часового проміжку введення (тобто, 6-й тиждень, через 2 тижні після введення 3-ої п/ш дози 21812 1 раз на 2 тижні), і максимальне зниження АроВ 57 95 проти плацебо (фіг. 22). У суб'єктів з ГеРГ в когорті 7 спостерігалося середнє зниження рівня ліпопротеїну (Гр(а)) 50 95 проти плацебо в кінці часового проміжку введення (тобто, 6-й тиждень, через 2 тижні після п/ш введення 3-ої дози 21812 1 раз на 2 тижні) (фіг. 23).
У когорті 7, 21812 знижував рівні вільного РОКУ та істотною мірою знижував рівні ЛЛНЩ-Х в кровотоку суб'єктів з ГерРГ і гіперліпідемією, які одержували терапію стандартного догляду.
Досліджувана доза 1 раз на 2 тижні забезпечувала зниження рівня ЛИНЩ-Х у суб'єктів з ГеРГ, в порівнянні із спостережуваним у суб'єктів без ГеРГ. Не повідомлялося про серйозні ПЕ.
Приклад 22
Подвійне сліпе, рандомізоване, плацебо-контрольоване дослідження для оцінки переносимості та ефективності людського анти-РС5КОУ антитіла у хворих на гетерозиготну родинну гіперхолестеринемію
Мета даного дослідження -- оцінити вплив 12 тижнів підшкірного (п/ш) введення людського анти-РСЗКУ антитіла (моноклональне антитіло 21812), в порівнянні з плацебо, на відсоток зміни від початкового значення холестерину ліпопротеїнів низької щільності (ЛІНЩ-Х) у суб'єктів з гетерозиготною родинною гіперхолестеринемією (Гесг).
Дане дослідження є подвійним сліпим, рандомізованим, стратифікованим, плацебо- контрольованим клінічним випробуванням для оцінки безпечності, переносимості та ефективності моноклонального антитіла 21812 у суб'єктів з діагнозом ГесСГ. Планується включення загальної кількості 150 суб'єктів. Суб'єкти, які відповідають всім критеріям включення/виключення, будуть рандомізовані у рівному співвідношенні в З групи лікування: моноклональне антитіло, 21812 в дозі 350 мг або 420 мг К4Т п/ш (1 раз на 4 тижні підшкірно) або плацебо КАТ п/ш. Рандомізація буде стратифікована на базі скринінгу рівня ЛЛНЩ-Х (« 130 бо мг/дл ІЗ,4 ммоль/лі| проти 2 130 мг/дл) і застосування езетимібу в початковій крапці (так проти ні). Рандомізація повинна відбуватися в межах 5-10 днів після скринінгової оцінки ЛІНЩ-Х, використовуваної для визначення придатності. Моноклональне антитіло, 21812, і плацебо вводитимуть усліпу. Візити дослідження припадають на тижні 2, 4, 8 і 12. Введення останньої дози моноклонального антитіла, 21812, або плацебо буде здійснено на 8-му тижні. Кінцевий візит дослідження (КВД) і остання оцінка рівня ліпідів будуть здійснені на 12-му тижні.
Чоловіки і жінки, віком від 2 18 до х 75 років, з діагнозом гетерозиготної родинної гіперхолестеринемії згідно діагностичних критеріїв групи реєстрів Саймон Брум (ГРСБ), придатні для даного дослідження. Для включення, суб'єкти повинні одержувати зареєстрований статин, із стабільною дозою(ами) для всіх дозволених (наприклад, езетиміб, смола-секвестрант жовчних кислот, станоли або схвалена регуляторними органами і присутня на ринку форма ніацину (наприклад, Ніаспан або Ніакор)) лікарських засобів, що регулюють рівні ліпідів, щонайменше протягом 4 тижнів до скринінгу на ЛИІНЩ-Х, і, на думку дослідника, не вимагати титрування вгору. Рівень ЛЛНЩ-Х натщесерце повинен становити 2 100 мг/дл (2,6 ммоль/л), і рівень тригліцеридів натщесерце «х 400 мг/дл (4,5 ммоль/л) за даними центральної лабораторії на момент скринінгу.
Попередні дані (дані не показані) продемонстрували, що суб'єкти, ліковані 350 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження за методом найменших квадратів (НК) від початкового значення ЛІЛНЩ-Х 38,46 95 в кінці часового проміжку введення, і суб'єкти, ліковані 420 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення
ЛИНЩ-АХ 45,68 95. Суб'єкти, ліковані 350 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення Гр(а) 21,69 95 в кінці часового проміжку введення, і суб'єкти, ліковані 420 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення ІГр(а) 28,23 95. Суб'єкти, ліковані 350 мг 21812, продемонстрували середній відсоток підвищення НК від початкового значення ЛОІВЩ-Х 15,39 905 в кінці часового проміжку введення, і суб'єкти, ліковані 420 мг 21812, продемонстрували середній відсоток підвищення НК від початкового значення ЛОВІЩ-Х 6,77 95. Суб'єкти, ліковані 350 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення ЛІОДНЩ-Х 17,16 95 в кінці часового проміжку введення, і суб'єкти, ліковані 420 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення ЛЛДНЩ-Х 18,49 95. Суб'єкти, ліковані 350 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення тригліцеридів 17,24 95 в кінці часового проміжку введення, і суб'єкти, ліковані 420 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення тригліцеридів 4,56 95. Суб'єкти, ліковані 350 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення не-ЛОВІЩ холестерину 36,16 95 в кінці часового проміжку введення, і суб'єкти, ліковані 420 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення не-ЛИВЩ холестерину 41,81 95. В кінці, суб'єкти, ліковані 350 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення загального холестерину 24,82 95 в кінці часового проміжку введення, і суб'єкти, ліковані 420 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення загального холестерину 29,45 90. (дані не показані)
Фіг. 24 являє собою графік, що ілюструє дані зниження рівня ЛІЛНЩ-Х для наступних доз 21812: 70 мг, 105 мг і 140 мг (введення К2Т або 1 раз на 2 тижні) і 280 мг, 350 мг і 420 (введення
К4Т або 1 раз на місяць). Вказані дані є узагальненими даними досліджень, описаних в
Прикладах 22-25). Якщо коротко, узагальнені дані показують, що 140 мг К2Т приводять до зниження приблизно на 60 95 від початкового значення ЛОІНІЩ-Х на 12-му тижні і плавній підтримці зниження ЛІНЩ-Х. Крім того, вказані дані демонструють, що 420 мг К4Т приводять до зниження приблизно на 5695 від початкового значення ЛІПНЩ-Х на 12-му тижні і менш вираженому ефекту віддачі для ЛИНЩ-Х в кінці часового проміжку введення.
Фіг. 25А-250 являють собою гістограми, що ілюструють сприятливий вплив доз 21812 на
Гр(іа), ЛЛВЩ-Х, тригліцериди і ЛЛИДНЩ.-Х, відповідно, побудовані на базі узагальнених даних досліджень, описаних в Прикладах 22-25. Крім того, дозозалежне зниження від початкового значення спостерігалося для загального холестерину (25-37 95, значення р « 0,001), не-ЛІЛВЩ-Х (36-53 90, значення р « 0,001) і АроВ (36-53 95, значення р « 0,001) (дані не показані).
Приклад 23
Рандомізоване дослідження для оцінки переносимості та ефективності людського анти-
РСОБКОУ антитіла на ЛЛНЩ-Х в порівняні з езетимібом у гіперхолестеринемічних хворих, які неспроможні переносити ефективну дозу інгібітора редуктази
Мета даного дослідження -- оцінити вплив 12 тижнів підшкірного (п/ш) введення людського анти-РОЗКОУ антитіла (моноклональне антитіло 21812), в порівнянні з езетимібом, на відсоток бо зміни від початкового значення холестерину ліпопротеїнів низької щільності (ЛІНЩ-Х) у гіперхолестеринемічних суб'єктів, які неспроможні переносити ефективну дозу інгібітора ГМГ-
КоА редуктази.
Дане дослідження є рандомізованим, стратифікованим клінічним випробуванням з паралельними групами людського анти-РС5КУ антитіла, моноклонального антитіла 21812.
Планується включення 150 суб'єктів. Суб'єкти, які відповідають всім критеріям включення/виключення, будуть рандомізовані в рівному співвідношенні у 5 груп лікування: моноклональне антитіло, 21812, в дозі 280 мг, 350 мг або 420 мг К4Т п/ш (1 раз на 4 тижні підшкірно); езетиміб в дозі 10 мг щоденно (КД) перорально (п/о) з моноклональним антитілом, 21812, в дозі 420 мг К4Т п/ш; або езетиміб 10 мг КД п/о з плацебо КАТ п/ш. Рандомізація буде стратифікована на базі скринінгу рівня ЛЛНЩ-Х (« 130 мг/дл ІЗ,4 ммоль/лі| проти 2 130 мг/дл) і застосування статину в початковій точці (так проти ні). Рандомізація повинна відбуватися в межах 5-10 днів після скринінгової оцінки ЛПІИНІЩ-Х, використовуваної для визначення придатності. Моноклональне антитіло, 21812, і плацебо вводитимуть усліпу. Візити дослідження припадають на тижні 2, 4, 8 і 12. Введення останньої дози моноклонального антитіла, 21812, або плацебо буде здійснено на 8-му тижні. Кінцевий візит дослідження (КВД) та останню оцінку рівня ліпідів будуть здійснювати на 12-му тижні.
Чоловіки і жінки, віком від 2 18 до х 75 років придатні для даного дослідження. Суб'єкт повинен спробувати, щонайменше 1 статин і бути неспроможним переносити будь-яку дозу або збільшення дози статину вище за наступні загальні щотижневі максимальні дози внаслідок міалгії або міопатії: аторвастатин х 70 мг, симвастатин х 140 мг, правастатин х 140 мг, розувастатин «х 35 мг, ловастатин «х 140 мг, флувастатин «х 280 мг. Для не наведених статинів, максимальна загальна щотижнева доза не повинна перевищувати в 7 разів найменше доступне дозування таблеток. Симптоми повинні зникати після припинення прийому статину або зниження дози. Якщо вводять дозу(и) (що не перевищує максимальної дози, визначеної вище) статину, смоли-секвестранта жовчних кислот та/або терапії станолом, доза(и) повинна бути стабільною, щонайменше протягом 4 тижнів до скринінгу ЛОНЩ-Х. Якщо суб'єкт одержує езетиміб на момент скринінгу, введення езетимібу повинно бути припинено на г 4 тижні перед скринінгом ЛІНЩ-Х. В залежності від категорії ризику (на підставі мети лікування НОПХ ПЛД
І), суб'єкти повинні відповідати наступним критеріям ЛІПНІЩ-Х натщесерце (центральна
Зо лабораторія) на момент скринінгу: 2 100 мг/дл (2,6 ммоль/л) для суб'єктів з діагностованим захворюванням коронарних судин серця (ЗКС) або еквівалентом ризику ЗКС; 2 130 мг/дл (3,4 ммоль/л) для суб'єктів без діагностованого ЗКС або еквівалента ризику і 2 або більше факторів ризику; 2 160 мг/дл (4,1 ммоль/л) для суб'єктів без діагностованого ЗКС або еквівалента ризику, з одним присутнім або відсутніми факторами ризику. Рівень тригліцеридів натщесерце повинен становити х 400 мг/дл (4,5 ммоль/л) за даними аналізу центральної лабораторії на момент скринінгу.
Попередні дані (не показані) продемонстрували, що суб'єкти, ліковані 280 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення ЛІЛНЩ-Х 38,79 95 в кінці часового проміжку введення; суб'єкти, ліковані 350 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення ЛІНЩ-Х 40,01 905 в кінці часового проміжку введення; і суб'єкти, ліковані 420 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення ЛІНІЦ-Х 50,63 95. Попередні дані продемонстрували, що суб'єкти, ліковані 280 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення І р(а) 27,38 95 в кінці часового проміжку введення; суб'єкти, ліковані 350 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення І! р(а) 16,04 95 в кінці часового проміжку введення; і суб'єкти, ліковані 420 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення Ір(а;) 23,84 95. Попередні дані продемонстрували, що суб'єкти, ліковані 280 мг 21812, продемонстрували середній відсоток підвищення НК від початкового значення ЛІВЩ-Х 8,62 95 в кінці часового проміжку введення; суб'єкти, ліковані 350 мг 21812, продемонстрували середній відсоток підвищення НК від початкового значення ЛІПВЩ-Х 4,62 95 в кінці часового проміжку введення; і суб'єкти, ліковані 420 мг 21812, продемонстрували середній відсоток підвищення НК від початкового значення
ЛИВЩ-АХ 7,55965. Попередні дані показали, що суб'єкти, ліковані 280 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення ЛЛДНЩ-Х 31,02 95 в кінці часового проміжку введення; суб'єкти, ліковані 350 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення ЛІДНЩ-Х 38,14 95 в кінці часового проміжку введення; і суб'єкти, ліковані 420 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення ЛЛДНЩЦ-Х 37,27 95. Попередні дані показали, що суб'єкти, ліковані 280 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення бо тригліцеридів 15,35 95 в кінці часового проміжку введення; суб'єкти, ліковані 350 мг 21812,
продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення тригліцеридів 19,22 95 в кінці часового проміжку введення; і суб'єкти, ліковані 420 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення тригліцеридів 19,55 95. Попередні дані показали, що суб'єкти, ліковані 280 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення загального холестерину 31,03 9о в кінці часового проміжку введення; суб'єкти, ліковані 350 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення загального холестерину 34,46 95 в кінці часового проміжку введення; і суб'єкти, ліковані 420 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення загального холестерину 42,23 95. Попередні дані показали, що суб'єкти, ліковані 280 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення не-ЛІПВІЩ-Х 39,92 95 в кінці часового проміжку введення; суб'єкти, ліковані 350 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення не- ЛЛВЩ-Х 42,86 95 в кінці часового проміжку введення; і суб'єкти, ліковані 420 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення не-ЛЛВЩ-Х 53,49 95.
Приклад 24
Рандомізоване, плацебо- та езетиміб-контрольоване дослідження 3 визначенням оптимальної дози для оцінки переносимості та ефективності впливу людського анти-РСЗКУ антитіла на ЛІИНЩ-Х у гіперхолестеринемічних пацієнтів з балами ризику за 10-річною
Фрамінгемською шкалою 10 95 або менше
Мета даного дослідження -- оцінити вплив 12 тижнів підшкірного (п/ш) введення людського анти-РОЗКОУ антитіла (моноклональне антитіло 21812) 1 раз на 2 тижні (К2Т) або 1 раз на 4 тижні (К4Т), в порівнянні з плацебо, на відсоток зміни від початкового значення холестерину ліпопротеїнів низької щільності (ЛІПНЩ-Х), при застосуванні для монотерапії у гіперхолестеринемічних суб'єктів з балами ризику за 10-річною Фрамінгемською шкалою 10 95 або менше.
Дане дослідження було рандомізованим, стратифікованим, плацебо- та езетиміб- контрольованим клінічним випробуванням з визначенням оптимальної дози і паралельними групами людського анти-РС5КО антитіла, моноклонального антитіла, 21812, що включало 411 суб'єктів. Суб'єкти, які відповідали всім критеріям включення/виключення, були рандомізовані у
Зо рівному співвідношенні в 9 груп лікування: 1 із б схем лікування моноклональним антитілом, 21812 (70 мг, 105 мг або 140 мг п/ш К2Т, або 280 мг, 350 мг або 420 мг п/ш К4Т (підшкірно 1 раз на 4 тижні), плацебо з п/ш введенням К2Т або КАТ, або езетиміб з щоденним (КД) пероральним (п/о) введенням. Рандомізацію стратифікували на базі скринінгу рівня ЛЛНЩ-Х (х« 130 мг/дл ІЗ,4 ммоль/лі| проти 2 130 мг/дл). Рандомізацію здійснювали в межах 5-10 днів після скринінгової оцінки ЛЛНЩ-Х, використовуваної для визначення придатності. Візити дослідження відбувалися 1 раз на 2 тижні, незалежно від того, чи одержував суб'єкт лікування К2Т п/ш або К4Т або езетиміб. Три групи дози К2Т моноклонального антитіла, 21812, і одну групу плацебо К2Т лікували всліпу одна проти одної, і три групи дози КАТ і одну групу плацебо КАТ лікували всліпу одна проти одної. Езетиміб вводили відкритим способом. Кінцевий візит дослідження та останню оцінку рівня ліпідів здійснювали на 12-му тижні для суб'єктів з переліку К4Т в/б або які одержували езетиміб, і на 14-му тижні для суб'єктів з переліку К2Т в/б.
Чоловіки і жінки, віком від 2 18 до х 75 років були придатними для даного дослідження.
Рівень ЛЛНЩ-Х натщесерце становив 2 100 мг/дл (2,6 ммоль/л) і « 190 мг/дл (4,9 ммоль/л), та рівень тригліцеридів натщесерце становив х 400 мг/дл (4,5 ммоль/л) за даними центральної лабораторії на момент скринінгу. Для суб'єктів було визначено бал ризику за Фрамінгемською шкалою 10 95 або менше згідно Панелі лікування дорослих ІІ Національної освітньої програми з холестерину (НОПХ ПЛД ІП).
Первинною кінцевою точкою був відсоток зміни від початкового значення ЛЛНЩ-Х на 12-му тижні. Вторинні кінцеві точки включали відсоток зміни рівня аполіпопротеїну В (АроВ), ліпопротеїну (а) (Гр(а)) і співвідношення загального холестерину до ліпопротеїну високої щільності (ЛЛВЩ)І-Х. Додатково оцінювали переносимість і безпечність.
Попередні дані показали, що суб'єкти, ліковані 70 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження від початкового значення ЛІИНІЩ-Х 41,21 95 в кінці часового проміжку введення; суб'єкти, ліковані 105 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження від початкового значення ЛІОНЩ-Х 45,44 95 в кінці часового проміжку введення; і суб'єкти, ліковані 140 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження від початкового значення ЛИЛНЩ-Х 51,56 95 (дані не показані).
Попередні дані показали, що суб'єкти, ліковані 280 мг 21812 (К4Т), продемонстрували середній відсоток зниження від початкового значення ЛІИНІЩ-Х 37,53 95 в кінці часового 60 проміжку введення; суб'єкти, ліковані 350 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження від початкового значення ЛІОНЩ-Х 42,16 95 в кінці часового проміжку введення; і суб'єкти, ліковані 420 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження від початкового значення ЛІНЩ-Х 47,52 95 (дані не показані).
Завершальні дані показали, що на 12-му тижні суб'єкти, одержуючі 21812, продемонстрували середній відсоток зниження за методом найменших квадратів (НК) від початкового значення ЛЛНЩ-Х до 51 95 (табл. 12); відсоток зміни від початкового значення для езетимібу становив 14 95. Зміна від початкового значення до 12-го тижня була до 72 мг/дл більшою для 21812, ніж для плацебо. Суб'єкти, що одержували 21812, продемонстрували зниження ЛІНЩ-Х від початкового значення на 37-53 95 більше, ніж плацебо, і на 37 95 більше, ніж езетиміб. Середні значення зниження від початкового рівня для АроВ (до 44 95), І р(а) (до 29 95) і значення співвідношення холестерин/ЛПВЩ (до 38 95) були більшими для 21812, ніж для плацебо.
Таблиця 12
Відсоток зміни ЛЛНЩ-Х від початкового значення на 12-му тижні: 21812 п/ш проти езетимібу або плацебо га
М-45 (М-45) | (М-46) | (М-45) М-45 (М-45) | (М-45) | (М-45)
Середній відсоток зміни від початкового значення за -3,71 | -40,98 | -43,87 | -50,93 | 4,54 | -39,02 | -43,20 | -47,98 -14,26 методом найменших квадратів о
Різниця пкування -37,277 -40177 | -47,23" -43,57" | -47,747 | -Б2,Б3" проти плацебо (95
Різниця лікування проти -26,737 | -29,627 | -36,68" -25,177 | -29,34 | -34147 езетимібу о
Приклад 25
Подвійне сліпе, рандомізоване, плацебо-контрольоване дослідження 3 визначенням оптимальної дози для оцінки переносимості та ефективності впливу людського анти-РСЗКУ антитіла на ЛИНЩ-Х в комбінації з інгібіторами ГМГ-КоА редуктази у гіперхолестеринемічних хворих
Мета даного дослідження -- оцінити вплив 12 тижнів підшкірного (п/ш) введення людського анти-РОЗКОУ антитіла (моноклональне антитіло 21812) 1 раз на 2 тижні (К2Т) або 1 раз на 4 тижні (К4Т), в порівнянні з плацебо, на відсоток зміни від початкового значення холестерину ліпопротеїнів низької щільності (ЛЛИНЩ-Х), у випадку застосування на додаток до інгібітора ГМГ-
КоА редуктази (наприклад, статину) у суб'єктів з гіперхолестеринемією.
Дане дослідження є подвійним сліпим, рандомізованим, стратифікованим, плацебо- контрольованим клінічним випробуванням з визначенням оптимальної дози і паралельними групами людського анти-РС5КУ антитіла, моноклонального антитіла 21812, за участю 631 суб'єкта. Суб'єкти, які одержують стабільну дозу(и) протягом, щонайменше 4 тижнів лікування статином, з езетимібом або без нього, і які відповідають всім критеріям включення/виключення,
Зо будуть рандомізовані в рівному співвідношенні у 8 груп лікування: моноклональне антитіло, 21812 підшкірно (п/ш) (70 мг К2Т, 105 мг К2Т, 140 мг К2Т, 280 мг КАТ, 350 мг КАТ і 420 мг КАТ, плацебо К2Т п/ш або плацебо К4Т п/ш). Рандомізація буде стратифікована на базі скринінгу рівня ЛІПНЩ-Х (х 130 мг/дл |З,4 ммоль/л| проти 2 130 мг/дл) і застосування езетимібу в початковій точці (так проти ні). Рандомізація повинна відбуватися в межах 5-10 днів після скринінгової оцінки ЛЛИНЩ-Х, використовуваної для визначення придатності. Візити дослідження проводяться кожні 2 тижні, незалежно від того, чи одержує суб'єкт лікування К2Т п/ш або КАТ.
Три групи дози К2Т о моноклонального антитіла, 21812, і одна група плацебо К2тТ одержуватимуть лікування всліпу одна проти одної, а також три групи дози КАТ і одна група плацебо К4Т одержуватимуть лікування всліпу одна проти одної. Кінцевий візит дослідження (КВД) та останню оцінку рівня ліпідів будуть здійснювати на 12-му тижні для суб'єктів з переліку
КАТ в/б і на 14-му тижні для суб'єктів з переліку К2Т в/б.
Чоловіки і жінки, віком від 2 18 до х 80 років придатні для даного дослідження. Для включення суб'єкти повинні одержувати статин, з езетимібом або без нього, в стабільній дозі(ах), щонайменше протягом 4 тижнів перед скринінгом ЛІНЩ-Х і не вимагати титрування вгору. Рівень ЛЛНЩ-Х натщесерце на момент скринінгу повинен становити 2 85 мг/дл (2,2 ммоль/л). Включення суб'єктів із скринінговими значеннями ЛІЛНЩ-Х натщесерце від 2 85 мг/дл (2,2 ммоль/л) до « 100 мг/дл (2,6 ммоль/л) буде обмежене не більше ніж приблизно 20 95 від загальної кількості включених суб'єктів. Рівень тригліцеридів натщесерце повинен становити х 400 мг/дл (4,5 ммоль/л) за даними центральної лабораторії на момент скринінгу.
Попередні дані показали, що суб'єкти, ліковані 70 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення ЛІНІЩ-Х 39,22 95 в кінці часового проміжку введення; суб'єкти, ліковані 105 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення ЛІНЩ-Х 56,38 95 в кінці часового проміжку введення; і суб'єкти, ліковані 140 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення ЛИНЩ-Х 68,76 95 (дані не показані). Попередні дані показали, що суб'єкти, ліковані 70 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення І р(а) 21,17 95 в кінці часового проміжку введення; суб'єкти, ліковані 105 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення І р(а) 33,41 95 в кінці часового проміжку введення; і суб'єкти, ліковані 140 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення І р(а) 33,87 95 (дані не показані). Попередні дані показали, що суб'єкти, ліковані 70 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток підвищення НК від початкового значення ЛІПВЩ-Х 21,17 95
Зо в кінці часового проміжку введення; суб'єкти, ліковані 105 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток підвищення НК від початкового значення ЛІПВІЩ-Х 6,80 95 в кінці часового проміжку введення; і суб'єкти, ліковані 140 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток підвищення НК від початкового значення ЛІПВІЩ-Х 8,43 95 (дані не показані). Попередні дані показали, що суб'єкти, ліковані 70 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення ЛІДНЩ-Х 14,84 95 в кінці часового проміжку введення; суб'єкти, ліковані 105 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення ЛЛДНЩ-Х 12,75 95 в кінці часового проміжку введення; і суб'єкти, ліковані 140 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення
ЛИДНЩ-Х 45,14 95 (дані не показані). Попередні дані показали, що суб'єкти, ліковані 70 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення тригліцеридів 7,20 95 в кінці часового проміжку введення; суб'єкти, ліковані 105 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення тригліцеридів 5,6595 в кінці часового проміжку введення; і суб'єкти, ліковані 140 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення тригліцеридів 17,60 95 (дані не показані). Попередні дані показали, що суб'єкти, ліковані 70 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення не-ЛІЛВЩ-Х 362095 в кінці часового проміжку введення; суб'єкти, ліковані 105 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення не-ЛІЛВЩ-Х 51,2095 в кінці часового проміжку введення; і суб'єкти, ліковані 140 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення не-ЛЛВЩ-Х 64,61 95 (дані не показані). Попередні дані показали, що суб'єкти, ліковані 70 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення загального холестерину 26,33 905 в кінці часового проміжку введення; суб'єкти, ліковані 105 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення загального холестерину 36,91 95 в кінці часового проміжку введення; і суб'єкти, ліковані 140 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення загального холестерину 46,17 95 (дані не показані).
Попередні дані показали, що суб'єкти, ліковані 280 мг 21812 (К4Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення ЛІНЩ-Х 42,62 95 в кінці часового 60 проміжку введення; суб'єкти, ліковані 350 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення ЛІНЩ-Х 56,84 95 в кінці часового проміжку введення; і суб'єкти, ліковані 420 мг 21812, продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення ЛИНЩ-Х 52,19 95 (дані не показані). Попередні дані показали, що суб'єкти, ліковані 280 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення І р(а) 22,54 95 в кінці часового проміжку введення; суб'єкти, ліковані 350 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення рда) 29,43 95 в кінці часового проміжку введення; і суб'єкти, ліковані 420 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення / р(а) 23,29 95 (дані не показані). Попередні дані показали, що суб'єкти, ліковані 280 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток підвищення НК від початкового значення ЛІЛВЩ-Х 2,17 95 в кінці часового проміжку введення; суб'єкти, ліковані 350 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток підвищення НК від початкового значення ЛОВІЩ-Х 6,92 95 в кінці часового проміжку введення; і суб'єкти, ліковані 420 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток підвищення НК від початкового значення ЛОВЩ-Х 7,42 95 (дані не показані). Попередні дані показали, що суб'єкти, ліковані 280 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення ЛІДНЩ-Х 18,12 95 в кінці часового проміжку введення; суб'єкти, ліковані 350 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення ЛЛДНЩ-Х 20,89 95 в кінці часового проміжку введення; і суб'єкти, ліковані 420 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення
ЛІПДДНЩЦ-Х 28,66 95 (дані не показані). Попередні дані показали, що суб'єкти, ліковані 280 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення тригліцеридів 6,75 95 в кінці часового проміжку введення; суб'єкти, ліковані 350 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення тригліцеридів 9,17 956 в кінці часового проміжку введення; і суб'єкти, ліковані 420 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення тригліцеридів 11,13 95 (дані не показані). Попередні дані показали, що суб'єкти, ліковані 280 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення не-ЛІЛВЩ-Х 38,89 95 в кінці часового проміжку введення; суб'єкти, ліковані 350 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення не-ЛІЛВЩ-Х
Зо 50,83 95 в кінці часового проміжку введення; і суб'єкти, ліковані 420 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення не-ЛІЛВЩ-Х 48,54 95 (дані не показані). Попередні дані показали, що суб'єкти, ліковані 280 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення загального холестерину 28,08 95 в кінці часового проміжку введення; суб'єкти, ліковані 350 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення загального холестерину 36,04 95 в кінці часового проміжку введення; і суб'єкти, ліковані 420 мг 21812 (К2Т), продемонстрували середній відсоток зниження НК від початкового значення загального холестерину 42,76 95 (дані не показані).
Приклад 26
АЗБ РОБЗК9У додатково регулюють вгору ЛИЛНЩЕР у присутності статинів.
Даний приклад демонструє, що АЗБ проти РОБ5КОУ спричиняють додаткове збільшення доступності ЛІНІЩР, у випадку застосування в присутності статинів, демонструючи, що додатковий сприятливий ефект може бути досягнутий шляхом комбінованого застосування обох.
Клітини Нерс2 висівали в МДСІ з 10 95 сироватки телячого ембріона (СТЕ) і дозволяли рости до «90 95 злиття. Клітини обробляли вказаними кількостями мевіноліну (статин, Зідта) і
АЗБ проти РОБКУОУ (фіг. 12А-12С) в МДСІ, що містило З 95 СТЕ, протягом 48 год. Одержували загальні лізати клітин. 50 мг загального білка розділяли гель-електрофорезом і переносили на
ПВДФ мембрану. Імуноблотинг виконували з використанням кролячого антитіла проти рецептора ЛОІОНЩ людини (Ейгдегаїй) або кролячого антитіла проти людського бБ-актину.
Підсилені результати хемілюмінесценції показані на верхніх панелях фіг. 12А-12С. Інтенсивність смуг кількісно визначали за допомогою програмного забезпечення Ітаде.) і нормалізували за Б- актином. Відносні рівні ЛЛНІЩР показані на нижніх панелях фіг. 12А-12С. АЗБ 21812 ії З1Н4 являють собою нейтралізуючі антитіла проти РОСБЗКУ, тоді як 25А7.1 являє собою не нейтралізуюче антитіло.
Додатково були створені клітини Нерс2-РС5КОУ. Вони являли собою стабільну лінію клітин
Нерса2, трансфікованих людським РОЗКО. Клітини висівали в МДСІ, що містило 10 95 сироватки телячого ембріона (СТЕ) і дозволяли рости до «90 95 злиття. Клітини обробляли вказаними кількостями мевіноліну (статин, Зідта) і АЗБ проти РОКУ (фіг. 120-127) в МДСІ, що містило 60 З 90 СТЕ, протягом 48 годин. Одержували загальні лізати клітин. 50 мг загального білка розділяли гель-електрофорезом і переносили на ПВДФ мембрану. Імуноблотинг виконували з використанням кролячого антитіла проти рецептора ЛЛНЩ людини (Рії7дегаій) або кролячого антитіла проти людського р-актину. Підсилені результати хемілюмінесценції показані на верхніх панелях. Інтенсивність смуг кількісно визначали за допомогою програмного забезпечення
Ітаде» і нормалізували за б-актином.
Як можна побачити з результатів, проілюстрованих на фіг. 12А-12Е, збільшення кількості нейтралізуючого антитіла і збільшення кількості статину, загалом, приводило до підвищення рівня ЛІНІЩР. Таке збільшення ефективності для підвищених рівнів антигензв'язувального білка особливо очевидне на фіг. 120-12Е, на яких клітини також були трансфіковані РОКУ, що дозволило АЗБ продемонструвати свою ефективність більшою мірою.
Цікаво, що вплив концентрацій АЗБ на рівні ЛІОНІЩР різко збільшується, якщо РОБКОУ продукується клітинами, як продемонстровано результатами порівняння фіг. 120-12Е і 12А-126.
Крім того, очевидно, що нейтралізуючі АЗБ (21812 і 31Н4) приводять до більш вираженого підвищення рівнів ЛЛНЩЕР, навіть у присутності статинів, ніж АЗБ 25А7.1 (не нейтралізуючий), демонструючи, що додаткові переваги можуть бути одержані із застосуванням як статинів, так і
АЗБ проти РОЗКОУ.
ПРИКЛАД 27
Консенсусні послідовності
Консенсусні послідовності були визначені з використанням стандартних філогенних аналізів
СОК, відповідних Мн і Мі АЗБ анти-РС5КУ. Консенсусні послідовності були визначені шляхом утримування СОК безперервними в межах однієї і тієї ж послідовності, відповідної Мн або М.
Якщо коротко, послідовності амінокислот, відповідні повним варіабельним доменам Мн або Мі, були переведені у форматування ГАЗТА для легкості обробки порівняльних вирівнювань та філогенетичного виведення. Далі, каркасні ділянки цих послідовностей були замінені штучною послідовністю лінкера (замінники "брррЬББрррБр", неспецифічний конструкт нуклеїнової кислоти), таким чином, щоб можна було виконати дослідження тільки СОК без введення навантаження в будь-яке положення амінокислоти за рахунок супутніх подій (наприклад, не споріднені антитіла, які, за щасливим збігом обставин, розділяють загальний успадкований каркас зародкової лінії), при цьому утримуючи СОК безперервними в межах однієї і тієї ж послідовності, відповідної Мн
Зо або Мі. Для послідовностей Мн або Мі даного формату далі обробляли запит вирівнювання щодо подібності послідовностей, з використанням програми, яка використовує стандартний
СіІшаМму/-подібний алгоритм (див. Тпотрзоп еї аї., 1994, Мисієїс Асіах Вез. 22:4673-4680). Штраф на внесення делеції до вирівнювання 8.0 використовували разом із штрафом на подовження делеції 2.0. Дана програма також генерувала філограми (ілюстрації філогенетичного дерева) на підставі вирівнювань для визначення подібності послідовностей, з використанням ОРОМА (метод незважених парних груп, в якому використовуються арифметичні середні величини) або методів приєднання сусіда (див. Ззайои апа Меї, 1987, МоїІесшіаг Віоіоду апа Емоїшіоп 4:406-425) для конструювання та ілюстрації подібності і відмінності груп послідовностей за допомогою порівняння довжини і групування відгалужень. Обидва методи давали подібні результати, але, кінець кінцем, використовували одержані за методом ОРОМА дерева, оскільки в способі використовується простіший і більш консервативний набір допущень. Згенерували дерева за методом ОРОМА, в яких подібні групи послідовностей були визначені як такі, що містять менше 15 замін на 100 залишків (див. легенду в ілюстраціях дерева щодо масштабу) між індивідуальними послідовностями в межах групи, і використовувалися для визначення колекцій консенсусних послідовностей. Результати порівняння проілюстровані на фіг. 1ЗА-13 і фіг. 48- 49. На фіг. 13Е групи були вибрані таким чином, що послідовності в легкому ланцюгу, які є монофілетичною гілкою, також є монофілетичною гілююою у важкому ланцюгу та містять менше 15 замін.
ПРИКЛАД 28
Одержання препаратів АЗБ проти РОБКУ
УФ/ДФ - МЕТОДОЛОГІЯ УЛЬТРАФІЛЬТРАЦІЇ
Субстанцію лікарського засобу, наприклад, антитіло 21812 і антитіло 11Е1, обмінювали з буфером в буфері препарату, що містив стабілізатор, за допомогою лабораторної системи
МіПіроге ТЕЕ Уф/ДФ, з використанням фільтру Мійїроге Реїїїсоп Хі, з мембраною розміром 50 смг (регенерована целюлоза, поріг молекулярної маси 30 000). Стадію діафільтрації виконували до обміну, щонайменше 10 об'ємів буфера. Як тільки стадія діафільтрації була завершена, систему УФ/ДФ перемикали в режим ультрафільтрації, і кожен препарат концентрували до цільових рівнів концентрації.
Після того, як стадія УФ/ДФ була завершена, відповідну кількість полісорбату 20 або 80 додавали до кожного препарату у вигляді 1,0 96, мас свіжоприготованого запасного розчину полісорбату ("ПС") до бажаної концентрації полісорбату.
Перед заповненням первинних контейнерів, кожен препарат фільтрували в асептичних умовах під ламінарною витяжкою, і використовували фільтри з розміром отворів 0,2 мкм.
Заповнення також виконували в асептичних умовах і проводили вручну або автоматично з використанням відповідного інструменту для заповнення.
Приклад 29
Препарати з високою концентрацією антигензв'язувального білка проти РСОБКО їі зниженою в'язкістю
Для оцінки впливу різноманітних допоміжних речовин на в'язкість високих концентрацій білка, використовували скринінгові аналізи в'язкості, стабільності і розчинності, щоб дослідити допоміжні речовини як модулятори в'язкості для препаратів з високою концентрацією білка.
Конкретно, підготування зразка, наприклад, зразка 21812 антитіла, проводили повністю в асептичних умовах під ламінарною витяжкою. Ліофілізація досліджуваних зразків дозволяла здійснити простий спосіб досягнення високих концентрацій білка. 1,5 мл білка (наприклад, 21812) з концентрацією 70 мг/мл переносили за допомогою піпетки в скляні флакони об'ємом З см3 для ліофілізації. Ліофілізацію виконували з використанням загального циклу ліофілізації на лабораторному ліофілізаторі МігТіх. Буфер ліофілізації являв собою 10 мМ І-глутамату з вмістом 1,0 до сахарози, рН 4,8. Ліофілізовані зразки (наприклад, ліофілізований зразок 21812) розбавляли індивідуально за допомогою приблизно 0,65 мл буферів допоміжної речовини, показаних в табл. 13 нижче, до кінцевої концентрації білка 150-200 мг/мл. Розбавлені зразки відстоювали протягом ночі, щоб дозволити повне розчинення. Далі вимірювали в'язкість, як описано нижче.
Таблиця 13
Амінокислоти
Солі
Інші
Результати скринінгу в'язкості, стабільності, розчинності показали зміни в'язкості 21812 після додавання різноманітних допоміжних речовин (фіг. 26). Не всі допоміжні речовини, використовувані для скринінгу, приводили до зниження в'язкості розчину; додавання І -аланіну,
Зо гліцерину, натрію сульфату, сахарози і цинку хлориду призводило до значного підвищення в'язкості в порівнянні з контрольною вибіркою. Схоже, що декілька допоміжних речовин, використаних для скринінгу, є придатними кандидатами для модуляції в'язкості, наприклад, І - аргінін, карнітин, креатинін, І -метіонін і таурин.
Для оцінки впливу різноманітних рецептур на в'язкість АЗБ, специфічного по відношенню до
РОЗКОУ, композиції 21812 були введені в 6 різних препаратів, показаних в табл. 29.2 нижче.
Концентрація 21812 у всіх препаратах становила 134 мг/мл. Препаратами були заповнені флакони до кінцевого об'єму 1,0 мл. Препарати інкубували при кімнатній температурі (тобто, 2576).
ДІАЛІЗ І КОНЦЕНТРАЦІЯ 21812
Видалення сахарози з 21812, спочатку в 10 мМ натрію ацетату, 9,0 95, мас/об сахарози здійснювали за допомогою діалізу, додаючи приблизно 10 мл 21812 на касети для діалізу Ріегсе
ЗІіде-А-І улег (КосКоога, Іллінойс) і здійснюючи діаліз проти 2 л буфера при 4" С протягом З циклів (2 год. х 2 і 16 год. х 1) для повного обміну буфера. Буфер для діалізу містив 10 мМ натрію ацетату (одержаного з оцтової кислоти), рН 5,0. Далі всі зразки концентрували з використанням пристроїв МійПроге Атісоп ОКгаРгер (ВШегіса, Массачусетс) в центрифузі
ВесКтап Сошгег АПедга ЄЕК (Ешегпоп, Каліфорнія), при швидкості 3000 об/хв, поки об'єм зразка не ставав дещо меншим за об'єм, необхідний для бажаної концентрації.
Далі здійснювали визначення концентрації шляхом вимірювання поглинання при А280 з використанням спектрофотометра Адііепі 8453 (Санта Клара, Каліфорнія). Концентрацію білка обчислювали з використанням відповідного коефіцієнта екстинції. Далі відповідну кількість буфера додавали до зразка для його повторного розведення до бажаної концентрації, і знову проводили вимірювання А280, щоб одержати кінцеву концентрацію для експерименту.
ДОДАВАННЯ СТАБІЛІЗАТОРІВ, ЯКІ ТАКОЖ МОЖУТЬ ЗНИЖУВАТИ В'ЯЗКІСТЬ:
Допоміжні речовини, такі як пролін, бензиловий спирт, креатинін, метіонін, таурин, тощо, були перевірені щодо зниження в'язкості. Вказані допоміжні речовини додавали індивідуально до зразків композиції 21812 із запасних розчинів з високою концентрацією.
ВИМІРЮВАННЯ В'ЯЗКОСТІ
В'язкість вимірювали з використанням конуса Вгооктеїй І М-ОМІ! ї віскозиметра з пластиною (Міадіерого, Массачусетс) із шпинделем СРЕ-40 і підбором температури чашки із зразком, регульованої циркулюючою водяною банею на постійному рівні 250. 500 мкл зразка вміщували в чашку для зразка за допомогою піпеткового дозатора з нагнітачем об'ємного типу. Після встановлення чашки із зразком, швидкість обертання шпинделя поступово збільшували, до досягнення приблизно 8095 обертання. У цей момент обертання зупиняли, і проводили зчитування в'язкості за допомогою програмного забезпечення КПеосаїс.
Таблиця 14 додані для зниження в'язкості (СП) о лЛомМм Маацетату.д////777777777171111111Ї1111111111111111111111111111111111111424
Результати показують, що І-пролін, бензиловий спирт, креатинін, метіонін і таурин всі значно знижували в'язкість при високих концентраціях АЗБ проти РОЗКО, 21812 (див. табл. 14).
Зо Для додаткової оцінки впливу різноманітних рецептур на АЗБ, специфічний по відношенню до РОБЗКО, композиції 21812 були введені в різні препарати, показані в табл. 15 нижче.
Препарати розділені на три групи: (1) набір різних концентрацій 21812 в 10 мМ натрій- ацетатному буфері, рН 5,2, (2) набір різних концентрацій 21812 в 10 мМ натрій-ацетатному буфері, рН 5,2, що містить З 95 І-проліну (приблизно 261 мМ) в кожному зразку, і (3) набір зразків 21812, концентрованих приблизно до 117-134 мг/мл в 10 мМ натрій-ацетатному буфері при різних рівнях рН (4,0-5.5) плюс два зразки в 10 мМ натрій-ацетатному буфері, рН 5,2, з додаванням Масі або комбінації І -метіонін/бензиловий спирт.
Таблиця 15
Конц. Додаткові В'язкість ли й при 40" С (мОсм/кг) (мг/мл) речовини (0; 76 МОомММаацетатурн5г!| нд | 284 | | 53 704 ОмММаацетатурНн52!| нд | 71 | | 57 7126 ОмММаацетатурНн52!| нд | 16 | 89 | 58 і 73 МОмММаацетату рНн52| яЗобпролну| 26 | | 253
Таблиця 15
Конц. Додаткові В'язкість |... . 21812 Препарат допоміжні /((сП) при 252" Язкість (СП). Осмоляльність при 40" С (мОсм/кг) (мг/мл) речовини (0; 10мММаацетату, рН 52 кЗОбпролну| 5 | | 252 10мММаацетату, рН 52 5Збпролну| 88 | (| 274 10 ММ Ма ацетату, рН 5,2| з З 95 проліну 10мМ Маацетату, рН 52 150мМ Масі| 11 | 66 | 346 10 ММ Ма ацетату, рН 4 10мММаацетатурН45| нд | 108 | 6 | 59 10 ММ Ма ацетату, рН 5 10 мМ Ма ацетату, рН 5,5 я 150 мМ метіоніну і З Уо 134 10 мМ Ма ацетату, рН 5,5 бензилового 6,5 520 спирту
Результати показали, що І -пролін значно знижував в'язкість при високих концентраціях АЗБ проти РОБКО, 21812 (див. фіг. 27).
Для додаткової оцінки впливу різноманітних препаратів на АЗБ, специфічний відносно
РОЗКУ, композиції 21812 були введені в різні препарати, показані в табл. 16 нижче.
Таблиця 16
Конц. в. й 21812 Препарат Допоміжні речовини В'язкість (сП) Осмоляльність при 257.С (мОсм/кг) (мг/мл) мМ натрію ацетату, 10 мМ натрію ацетату, 50 мМ метіоніну « 2 Фо 116 рн 4,68 бензилового спирту 1 323 116.9 мМ натрію ацетату, 150 мМ аргініну 3,7 га рН 4,8 10 мМ натрію ацетату, (2 95 проліну ж 1 95 бензилового 116 7 313 рн 4,68 спирту 10 мМ натрію ацетату, 1,5 95 проліну «т 1 95 116 рн 4,68 бензилового спирту 7,3 277
Результати показують, що в препаратах 21812, які містять 1,595 або 2,095 проліну (приблизно 131-174 мМ проліну) і 1 95 бензилового спирту, в'язкість при високих концентраціях 10 АЗБ проти РОБКО, 21812, була значно знижена.
Для додаткової оцінки впливу різноманітних препаратів на АЗБ, специфічний відносно
РСОБКУО, композиції 21812 були введені в різні препарати, показані в табл. 17 нижче.
Таблиця 17
Кінцевий буфер Кінцевий серед. В'язкість (СП) при | Стрес зсуву |Швидкість зсуву й А280 21812 конц. о М о допоміжних речовин (мг/мл) 2576 (Па) при 25 7 ) (1/с) при 2570 що 18,50 тбммрнатіюацетату! 33951 497 51 71860 99 сахарози ОБ В.А 7 223,19 18,40
Таблиця 17
Кінцевий буфер дов ІВ то ко В'язкість (СП) при Стрес зсуву Швидкість зсуву й конц. о М о допоміжних речовин (мг/мл) 2576 (Па) при 25 С | (1/с) при 257 77775789 юЮю.ЮюЮЙ| 480 | 1800 | 375
Я
10 мМ натрію ацетату, 125 мМ аргініну, З 95 сахарози, рН 5,0
ЯЗ
10 мМ натрію ацетату, 100 мМ метіоніну, 4 Зо сахарози, рН 5,0 77.793 | .з0956 | 18560 | 6 яа 10 мМ натрію ацетату овомМпролну НО 32323739. 1354. 1.018801. 135. т 203 | 32335 | 1940 | 6
Результати показують можливість досягнення високих концентрацій білка 21812 із зниженою в'язкістю у випадку препаратів, що містять конкретні стабілізатори/допоміжні речовини (див. фіг. 28А-2803). Конкретно, фіг. 28А являє собою графік, що ілюструє в'язкість різних концентрацій анти-РО5КУ антитіла, 21812, в препараті, що містить 10 мМ натрію ацетату і 9 9о сахарози, рН 5,2, при 257Сі 40 76.
Фіг. 288 являє собою графік, що ілюструє в'язкість різних концентрацій анти-РС5КУ антитіла, 21812, в препараті, що містить 10 мМ натрію ацетату і 9 95 сахарози, рН 5,2, при 2570 і 40 "С, в порівнянні з препаратом, що містить 10 мМ натрію ацетату, 125 мМ аргініну ї З Фо сахарози, рН 5,0, при 25 С і 40 76.
Фіг. 28С являє собою графік, що ілюструє в'язкість різних концентрацій анти-РС5КО антитіла, 21812, в препараті, що містить 10 мМ натрію ацетату і 9 95 сахарози, рН 5,2, при 2570 і 40 "С, в порівнянні з препаратом, що містить 10 мМ натрію ацетату, 100 мм метіоніну і 4 Фо сахарози, рН 5,0, при 25 "С і 40 76.
Фіг. 280 являє собою графік, що ілюструє в'язкість різних концентрацій анти-РС5КО антитіла, 21812, в препараті, що містить 10 мМ натрію ацетату і 9 95 сахарози, рН 5,2, при 2570 і 40 "С, в порівнянні з препаратом, що містить 10 мМ натрію ацетату і 250 мМ проліну, рН 5,0, при 25 "С і 40 76.
ПРИКЛАД 30
Дослідження в'язкості високих концентрацій 11Е1
Табл. 30 ілюструє в'язкість антитіла 111 при 25 за шкалою Цельсія при різних концентраціях антитіла і в різних препаратах.
Запасний розчин 11Е1 з високою концентрацією готували так само, як описано для 21812 в
Прикладі 29 вище. Далі проводили визначення концентрації шляхом вимірювання поглинання при А280 з використанням спектрофотометра Адієпі 8453 (Санта Клара, Каліфорнія).
Концентрацію білка обчислювали з використанням відповідного коефіцієнта екстинції. Далі відповідну кількість буфера додавали до зразка для його повторного розведення до бажаної концентрації, і знову виконували вимірювання А280, щоб одержати кінцеву концентрацію для
Зо експерименту. Допоміжні речовини додавали індивідуально до зразків препаратів 11Е1, одержаних із запасних розчинів з високою концентрацією.
В'язкість вимірювали з використанням конуса ВгоокіївЇа І М-ОМІ! ії віскозиметра з пластиною (Міадіерого, Массачусетс) із шпинделем СРЕ-40 і підбором температури чашки із зразком, регульованою циркулюючою водяною банею на постійному рівні 252С. 500 мкл зразка вміщували в чашку для зразка за допомогою піпеткового дозатора з нагнітачем об'ємного типу.
Після встановлення чашки із зразком, швидкість обертання шпинделя поступово збільшували,
до досягнення приблизно 80 95 обертання. У цей момент обертання зупиняли, і проводили зчитування в'язкості за допомогою програмного забезпечення КПеосаїс.
Іноді вимірювання для препаратів з високою концентрацією білка проводили з використанням віскозиметра іншого типу, Апіоп Рааг Рпузіса модель МСКЗО00 із шпинделем
СРБО-1. 600 мкл зразка використовуються в даному інструменті, і застосовують програмне забезпечення Кпеоріих версія 3.4 для обчислення в'язкості розчину. При використанні кожного із віскозиметрів не спостерігалося значної різниці в результатах вимірювань.
Таблиця 30 271831 Ї111111718
ММ натрію ацетату, 995 сахарози 00196..ЙЮЙй...ЙИЮ5ИИлИлсЙ 11111141 полісорбату ("ПС") 20, рН 5,2 10 мМ натрію ацетату, 150 мМ метіоніну, 395.33333333333192.181 сахарози, 0,01 95 ПС 20, рН 5,2 пнн|шнннинннншш нн 10 мМ натрію ацетату, 250 мм проліну, 0,01 Фо псго,риво
М нини аргініну, РН 5,2 натрію хлориду, рН 5,2 гліцину, РН 5,2 серину, рН 5,2 аланіну, рН 5,2 10 Результати, показані в табл. 30, демонструють здатність досягти високих концентрацій 1121 антитіла з відносно низькою в'язкістю в препаратах, що містять конкретні стабілізатори/допоміжні речовини. Препарати, що містять стабілізатори метіонін, пролін, аргінін, гліцин, серин і аланін, продемонстрували особливо низьку в'язкість.
ПРИКЛАД 31
Дослідження стабільності препаратів АЗБ проти РО5КОУ з високою концентрацією
Для оцінки впливу на стабільність препаратів з високим вмістом білка АЗБ проти РОБ5КО, композиції 21812 були введені в різні препарати, показані в табл. 31.1 нижче. Препарати інкубували у вказаних контейнерах при температурі -30" С або 4" С протягом 0 тижнів, 1 місяця, 2 місяців, З місяців, б місяців і 1 року. Для кожної композиції в кожній точці часу, зразок відбирали із кожної упаковки для моніторингу мономера антитіла шляхом нативної ексклюзійної
ВЕРХ (ЕК-ВЕРХ) і виявлення мікроскопічних частинок за розсіюванням світла (НІАС).
Таблиця 31.1
Конц Об'єм Цільове
Препарати 21812 | апов'| Упаковка Буфер Допоміжні Полісорбат значення нення речовини 80 (мг/мл) рн (мл)
Флакон 5 | 10 мМ Ма 9,0 до о 100 мм см ацетату сахарози
Флакон 5 | 10 мМ Ма 250 ММ о
ВО скляний| 10 мМ Ма 9,0 до о . 100 мм шприц ацетату сахарози шпри ацетат пролін
Ся ЗомМмМма 909 7 110 1,2 пластиковий оо 0,010 95 5,2 ацетату сахарози шприц (074 100 мм ацетату шприц сахарози (074 20 | 12 пластиковий мила | во ма 0,010 96 5, шприц Ц У р У
ЕК-ВЕРХ:
ЕК-ВЕРХ розділяє білки на підставі відмінностей в їх гідродинамічних об'ємах. Молекули білків з великими гідродинамічними об'ємами елююються раніше, ніж молекули з меншими об'ємами. Нативну ЕК-ВЕРХ здійснювали з використанням колонки Т5К-СЕЇ сСЗ000О5МУХІ 7,8 мм ох 300 мм (То5оп Віозсієпсе), з розміром частинок 5 мкм, на приладі ВЕРХ Адієепі з детектором для різних довжин хвиль. Рухома фаза являла собою 100 мМ натрію фосфату, 250
ММ натрію хлориду, рН 6,8:50,1. Швидкість потоку становила 0,5 мл/хв. Елюат колонки контролювали на довжині хвилі 280 нм. Інтегровані площі піків на хроматограмах використовували для кількісного визначення мономера і високомолекулярних форм.
Таблиця 31.2 уо ВМФ при -30 70 уо ВМФ при 4 "С 77717171771..ю | 003|003|004 004 |0031004|001| 003 006 | 0,07 7772 .ю.ю.ю | 0бову|оль|ола | ол |006|1006|003| 005 006 | 006 777.74... | 004|0051009 005 |0041005|001| 004 | 006 | 0,09 777.75 --.-.и...| 006 10201024 021 |0061006|003| 005 001 | 0,07 7777777611111|0041004) 01 | 005Щ004100310011 0031 0 | 007 7777717.7.77 юю | 004|004|009| 006 |004|005|001/| 003 007 | 0,09 7778 | 0бовуіолв|оло ол |006|006|003| 005) ол | 006 777.7ИБ79 юю | 004|004|002| 005 |004|004|001| 003 | 006 | 0,08
У табл. 31.2 наведені результати аналізу нативною ЕК-ВЕРХ препаратів 21812, наведених в табл. 31.1, інкубованих при Х" С протягом 0 тижнів, 1 місяця, 2 місяців, З місяців і 6 місяців. "95
ВМФ" відображає вміст високомолекулярного мономера 21812 в зразку. Одержані результати вказують на те, що не спостерігалося проблем із рецептурою через 6 місяців; однак, вміст деяких високомолекулярних форм збільшився у метіонінвмісному препараті (тобто, препарати 2,518).
ВИЯВЛЕННЯ МІКРОСКОПІЧНИХ ЧАСТИНОК ЗА РОЗСІЮВАННЯМ СВІТЛА (НІАС):
Електронна система підрахунку частинок в рідині (НІАС/Аоусо 9703 або еквівалентна), обладнана датчиком розсіювання світла (НІАС/Коусо НАГО-150 або еквівалентним) з пристроєм для відбору зразків рідини, визначає кількість частинок та інтервал їх розміру в наданому досліджуваному зразку. Коли частинки в рідині проходять між джерелом світла і детектором, вони знижують інтенсивність або "затемнюють" пучок світла, який падає на детектор. Якщо концентрація частинок знаходиться в межах нормального інтервалу датчика, ці частинки виявляються по одній. Проходження кожної частинки через зону виявлення зменшує освітленість фотодетектора, і напруга на виході фотодетектора негайно знижується. Зміни напруги реєструються як електричні імпульси, які прилад переводить в кількість присутніх частинок. Спосіб неспецифічний, і розмір частинок визначається незалежно від їх походження.
Розміри частинок, які контролювали, становили 10 мкм і 25 мкм.
У даному прикладі аналіз НІАС виконували з використанням зразків, які зберігали при 4" б.
Конкретно, зразки препаратів 21812 із табл. 31.1 обробляли вакуумом (процедура під назвою "дегазація") для видалення міхурців повітря, які могли б бути розпізнані як частинки в системі підрахунку частинок. Для зразків 21812 методика полягала в обробці зразків вакуумом при 75 торр протягом 1-2 год. Підрахунок частинок виконували в межах 2 год. після завершення процесу дегазації.
Фіг. 29А і 298 ілюструють результати аналізів НІАС для ідентифікованих вище препаратів, які інкубували в контейнерах протягом 0 тижнів, 1 місяця, 2 місяців, З місяців і б місяців.
Підраховували частинки розміром 10 мкм і 25 мкм. Фіг. 29А і 298 демонструють, що всі препарати 21812 за даними НІАС були стабільними. Хоча препарати в скляних шприцах, тобто, препарати 4-6, продемонстрували вищий вміст частинок щодо концентрації білка і препарату, результати підрахунку частинок виявилися нижчими за межі Фарм. США для кожного розміру частинок (10 мкм і 25 мкм). Межі Фарм. США для частинок розміром 10 мкм становлять 6000 на контейнер, і для частинок розміром 25 мкм становлять 600 на контейнер.
Коо) ПРИКЛАД 32
Дослідження стабільності 1121
Для дослідження препаратів 11Е1 з високою концентрацією (150 мг/мл), декілька препаратів були одержані з використанням допоміжних речовин-кандидатів, як показано в табл. 3З2А нижче.
Препарати зберігали у вказаних контейнерах при -307 Сб або 4" Сб, щонайменше протягом 6 місяців.
Таблиця 32А
Досліджувані препарати
Кінце- . Цільові . ве п езва. ви Контейнер Буфера допоміжні Полідороат значе- репарату речовини ння ріне
Скляний 10 мМ Ма 9,0 до о
ВО скляний | 10 мМ Ма 9,0 до о . 150 мМ шприц ацетату сахарози
ВО скляний | 10 мМ Ма 250 ММ о (074 -| 10 мМ Ма 9,0 9 о б й шприц (074 150 мМ 150 пластиковий 10 мМ Ма метіоніну, 0,010 96 52 ацетату о шприц З до сахарози
Таблиця 32А
Досліджувані препарати
Кінце- . Цільові : ве
Назва Цільова конц. Контейнер Буфер» допоміжні Полісорбат значе- препарату (мг/мл) 20 речовини ння ріне
СЕ і1омм ма | 250мМ 7 150 пластиковий й 0,010 96 52 ацетату проліну шприц до ВМФ оцінювали ексклюзійною ВЕРХ, після зберігання при -30 "СО ії 4 "С, в точках часу, показаних в табл. 32В нижче. Якщо коротко, ЕК-ВЕРХ розділяє білки на підставі відмінностей в їх гідродинамічних об'ємах. Молекули білків з великими гідродинамічними об'ємами елююються раніше, ніж молекули з меншими об'ємами. Нативну ЕК-ВЕРХ проводили з використанням колонки Т5К-СЕЇ 30005УУХІ 7,8 мм х 300 мм (То5зой Віозсієпсє), з розміром частинок 5 мкм, на приладі ВЕРХ Адіїепі з детектором для різних довжин хвиль. Рухома фаза являла собою 100
ММ натрію фосфату, 250 мМ натрію хлориду, рН 6,8:0,1. Швидкість потоку становила 0,5 мл/хв.
Елюат колонки контролювали на довжині хвилі 280 нм. Інтегровані площі піків на хроматограмах використовували для кількісного визначення кількостей мономера і високомолекулярних форм.
Таблиця 32 В уо ВМФ при -30 С уо ВМФ при 4 "С 21111111 10051 005 005 | 006 | 005 | 005 11111121 10051 005 005 | 006 | 004 | 002 11117817. |1007| 026 | 007 | 007 | 007 | 006 77717174 ..юрюр7 10061 007 006 | 007 | 006 | 008 11117577. 10051 004 005 | 005 | 004 | 006 7777юЮБрриюж6 | 006| 032 006 | 006 | 006 | 006 7777171717171771177.7.7.7ю.ю | 0081 007 | 008 | 006 | 007 | 008
У табл. 328 наведені результати аналізу нативною ЕК-ВЕРХ препаратів 11Е1, наведених в табл. 32А, інкубованих при 4 "С або -30 "С протягом 0 тижнів, 2 місяців, 4 місяців або 6 місяців. «у ВМФ" відображає вміст високомолекулярного 11Е1 в зразку. Одержані результати вказують на те, що не спостерігалося проблем із рецептурою через б місяців; однак, вміст деяких високомолекулярних форм збільшився в метіонінвмісних препаратах, які зберігали при температурі -30 "С (тобто, препарати З і 6).
Стабільність додаткових препаратів з високою концентрацією 111 оцінювали шляхом приготування препаратів в первинних контейнерах, як показано в табл. 320 нижче:
Таблиця 32 С
Конц. - о, 0,010 Фо Кінцеве
Препарат 111 Первинний Допоміжні полісор- Буфер | значення контейнер речовини (мг/мл) бату он
Скляні о 10 мМ Ма
Скляні о 10 мМ Ма
ВО скляний/|150 мМ метіоніну, 10 мМ Ма
ВО скляний/|150 мМ метіоніну, 10 мМ Ма
ВО скляний й 10 мМ Ма
Таблиця 32 С
Конц. - о, 0,010 Фо Кінцеве контейнер речовини (мг/мл) бату он
ВО скляний : 10 мМ Ма 7700119 Рбдннн оммтютю|(вю ие ве (074 с. в З до сахарози ацетату вий шприц (074 с. 150 мМ метіоніну, 10 мМ Ма юю |нястю Моумнеюи вв тими г вий шприц 180 пластико- | 250 мМ проліну | РБ5 20 52 в ацетату вий шпри 100 180 пластико- | 250 мМ проліну | РБ5 80 52 в ацетату вий шприц
Препарати інкубували при 4" Цельсія протягом 1 року. В точках часу, вказаних в табл. 320 нижче, відбирали зразок із кожного контейнера та аналізували методом ЕК-ВЕРХ, як описано для табл. 32В вище.
Таблиця 320 до ВМФф за даними ексклюзійної ВЕРХ через 1 рік зберігання при 4 70 10041 007 | 008 | 006 | 007 | вв | 007 | 003 20 10051 007 | 007 | 007 | 006 | нв | 006 | 001 40 10091 05 | 0 | нв | нв | нв | 006 | 003 50 008 05 | 0 | 0 | нв | нв | 007 | 001 60 1007| 06 | 0 | 0 | нв | нв | 008 | 001 70 1008 014 | 0 | о | нв | 009 | 006 | 002 80 1007| 014 | 0 | 0 | нв | нв | 007 | 000 790 10091 05 | 0 | 0 | нв | 009 | 005 | 004 і лоо 1008 05 | 0 | 0 | нв | нв | 008 | 000
В точках часу, вказаних в табл. 32Е нижче, відбирали зразок із кожного контейнера, аналізували методом катіонообмінної ВЕРХ (КО-ВЕРХ). Катіонообмінна ВЕРХ розділяє білки на підставі відмінностей в їх поверхневому заряді. При заданому значенні рн, заряджені ізоформи 10 1121 розділяли на катіонообмінній колонці та елюювали з використанням градієнта солі.
Елюент контролювали за УФ-поглинанням. Розподіл зарядженої ізоформи оцінювали шляхом визначення площі піку кожної ізоформи як відсотка від загальної площі піку.
Нативну КО-ВЕРХ проводили з використанням колонки біопех 530005МУХІ. 4,0 мм ВД х 250 мм (Тозоп Віозсієпсеє), з розміром частинок 10 мкм, на приладі ВЕРХ Адіїепі з детектором для різних довжин хвиль. Рухома фаза була лінійним градієнтом 20 мМ морфоліноетансульфонової кислоти, рН 6,0 г 0,1, і такого ж буфера, що містив 500 мМ натрію хлориду. Швидкість потоку становила 0,6 мл/хв. Елюат колонки контролювали на довжині хвилі 280 нм. Інтегровані площі піків на хроматограмах використовували для кількісного визначення кількостей ізоформ з різним зарядом.
Таблиця 32Е
Фо піку основної ізоформи через 1 рік зберігання при 4" С за даними катіонообмінної ВЕРХ 11111607. 758) н/в | н/в | нів | 7581 щ 0 2 керЯу 11111180... |762| нів | н/в | нів | 7631 Юющ (03 11111171180..77777.7.7.7.7.7.7.7. | 760) нів | н/в | н'в | 7601 Юющ 00 щ( 1111111оо1111111111117111 | 758) н/в | н/в | нів |759| 2 щ 00 2 ж Ж9Ш
Табл. 320 і 32Е демонструють, що описані препарати 111 продемонстрували збільшення 95 ВМФ менш ніж 595 (ЕК-ВЕРХ) або відхилення менше 3-595 піку основної ізоформи (КО-ВЕРХ) в умовах зберігання до 1 року при 4" б. Фактично, зміни обох параметрів були на дуже низькому рівні, що вказує на високо стабільні препарати.
ВИЯВЛЕННЯ МІКРОСКОПІЧНИХ ЧАСТИНОК ЗА РОЗСІЮВАННЯМ СВІТЛА (НІАС):
Електронна система підрахунку частинок в рідині (НІАС/Аоусо 9703 або еквівалентна), обладнана датчиком розсіювання світла (НІАС/Коусо НАГО-150 або еквівалентним) з пристроєм для відбору зразків рідини визначає кількість частинок та інтервал їх розміру в даному досліджуваному зразку. Коли частинки в рідині проходять між джерелом світла і детектором, вони зменшують або "затемнюють" пучок світла, який падає на детектор. Якщо концентрація частинок знаходиться в межах нормального інтервалу датчика, такі частинки знаходять по одній. Проходження кожної частинки через зону виявлення зменшує випадкове світло на фотодетекторі, і напруга на виході фотодетектора негайно знижується. Зміни напруги реєструють як електричні імпульси, які прилад переводить в кількість присутніх частинок. Метод є неспецифічним, і вимірює частинки незалежно від їх походження. Контрольовані розміри частинки складають, загалом, 10 мкм і 25 мкм.
У даному прикладі аналіз НІАС виконували з використанням зразків, які зберігали при 4" б.
Конкретно, зразки препаратів 1121 з табл. 32а обробляли вакуумом (процедура під назвою "дегазація") для видалення міхурців повітря, які могли б бути розпізнані як частинки в системі підрахунку частинок. Для зразків 1121 методика полягала в обробці зразків вакуумом при 75 торр протягом 1-2 год. Підрахунок частинок виконували в межах 2 год. після завершення процесу дегазації.
Фіг. ЗОА і ЗОВ ілюструють результати аналізів НІАС для ідентифікованих вище препаратів, які інкубували в контейнерах протягом 0 тижнів і 4 місяців. Підраховували частинки розміром 10 мкм ії 25 мкм. Фіг. ЗО0А ії ЗОВ демонструють, що всі препарати 1121 за даними НІАС були стабільними. Результати підрахунку частинок виявилися нижчими за межі Фарм. США для кожного розміру частинок (10 мкм і 25 мкм). Межі Фарм. США для частинок розміром 10 мкм
Зо становлять 6000 на контейнер, і для частинок розміром 25 мкм становлять 600 на контейнер.
Приклад 33
Специфічність зв'язування 11Е1
Результати даного аналізу демонструють, що 11Е1 зв'язується з РОБКО і не зв'язується з
РОБКІ, РОБК2, РОБЗК7 або фурином, демонструючи специфічність 11Е1 відносно РОБКО.
Забезпечували зв'язування біотинільованого РО5КОУ, розбавленого буфером А (25 мМ Трис, 150 мМ Масі, 0,195 альбуміну телячої сироватки, 0,0595 твіну, рН 7,5) із вкритими нейтравідином 96-лунковими планшетами в концентрації 0,2 мкг/мл, для інкубації протягом 1 год. при кімнатній температурі. Окремо, 0,4 мкг/мл 111 інкубували протягом 1 год. при кімнатній температурі з різними концентраціями (що варіювали від 0 до 20 мкг/мл) РОКІ,
РОБЗК2, РОБК7, РОБЗКОУ або фурину (КО бузіет5, Міннеаполіс, Міннесота) (розбавлений в буфері А твін вода-у-маслі). Інгібітор фурину, в концентрації 4,5 мкг/мл вводили у всі реакційні суміші, що містили фурин. Вкритий РОБ5КУ стрептавідиновий планшет промивали буфером А, суміш антитіло/лропротеїн конвертаза додавали на планшет та інкубували при кімнатній температурі протягом 1 год. Після промивання, зв'язане антитіло виявляли шляхом інкубації з козиним-а-людським Ес-пероксидаза хріну (160 нг/мл, розбавлений буфером А) (ЧасК5оп
І арогайогієх, Ваг Нагбої, МЕ), після чого додавали субстрат ТМБ. Реакцію зупиняли за допомогою 1 н НОЇ, і поглинання зчитували на довжині хвилі 450 нм на спектрофотометрі
Зресігатах Різ 384 (МоїІєсшіаг Ремісез Іпс., Саннівейл, Каліфорнія).
Даний аналіз базується на здатності пропротеїн конвертази в розчині конкурувати з 11Е1 за зв'язування з РСОБКОУ, яким вкритий планшет. Попередня інкубація 1121 і РСОБКОУ в розчині дозозалежним і стійким чином зменшує кількість 111, пов'язаного з РСО5КОУ, яким вкритий планшет, що виявляють за зменшенням 00450 (фіг. 31). Всі результати виражають, як середнє значення 00450 ж- стандартне відхилення проти концентрації пропротеїн конвертази.
Попередня інкубація 111 з РОБКІ, РОЗК2, РОБЗК7 або фурином в розчині не впливає значно на зв'язування 111 із РСОБКОУ, яким вкритий планшет. Таким чином, в досліджуваних концентраціях білка 1121 зв'язується тільки з РСО5КУ, але не з іншими членами родини пропротеїн конвертази з числа досліджених.
Приклад 33
Ефективність інгібування 11Е1 зв'язування ЛЛИНЩР:РОЗКО
Приклад демонструє, що наномолярні концентрації 1121 можуть перешкоджати зв'язуванню як 0374, так і РОБЗКУ дикого типу з ЛЛНЩЕР в умовах даного аналізу.
Якщо коротко, прозорі 384-лункові планшети вкривають козиним антитілом проти рецептора
ЛІИНЩ в концентрації 2 мкг/мл (КО Зузіет5, Міннеаполіс, Міннесота), розбавленим ФБР, шляхом інкубації при 4" С протягом ночі. Планшети ретельно промивають буфером А (100 мМ натрію какодилату, рН 7,5), і далі блокують буфером В (1 95 нежирного сухого молока |Віо-Най
І арогайогієв, Негсцез, Каліфорнія| в буфері А) протягом 2 год. при кімнатній температурі. Після промивання, планшети інкубують з 0,4 мкг/мл рецептора ЛИНЩ (К5О Зузіетв5, Міннеаполіс,
Міннесота), розбавленого буфером С (буфер В, що містить 10 мМ Сасіг) протягом 1,5 год. при кімнатній температурі. Паралельно з даною інкубацією, 20 нг/мл біотинільованого 0374У РСОБКО або 100 нг/мл біотинільованого РОБКОУ ДТ інкубували з різними концентраціями анти-РС5КО антитіла 11Е1, розбавленого буфером А (кінцеві концентрації варіюють від 6,0 нг/мл до 200 мкг/мл для аналізу 0374У РОСБКО, або від 3,1 нг/мл до 25 мкг/мл для аналізу РОБКО ДТ). Вкриті
Ко) ЛІИНЩР планшети промивали, і додавали суміш біотинільований РО5КОУ/антитіло. Планшет
ЛІИНЩЕР інкубували при кімнатній температурі протягом 1 год. Зв'язування біотинільованого
РОБКУ з ЛИНЩЕР виявляли інкубацією із стрептавідин-ПХ (500 нг/мл в буфері С), з подальшим додаванням субстрату ТМБ. Реакцію зупиняли за допомогою 1 н НОЇ, і поглинання зчитували на довжині хвилі 450 нм з використанням спектрофотометра ЗресігаМах Ріих 384 (МоїІесшаг
Ремісев Іпс., Саннівейл, Каліфорнія). Програмне забезпечення СгарпРай Р'гїзт (версія 4.01) використовували для нанесення на графік логарифма концентрації антитіла проти 00450, для визначення значень ІС50 нелінійною регресією. 11241 інгібує зв'язування ЛИНЩР:РОБ5КОУ. Значення ІС5О для 11РЕ1 в аналізі 0374М РОКУ варіювали від 7,3 нМ до 10,1 нМ із середнім значенням (хх стандартне відхилення) 9,1 нМ 5 1,5
НМ (п-3). Значення ІС50О для 1111 в аналізі РО5КОУ дикого типу варіювали від 4,4 нМ до 8,1 нМ із середнім значенням (ж стандартне відхилення) 5,9 нМ х 1,9 нМ (п-3). Слід зазначити, що ці значення ІС5О залежать від кількості рекомбінантного 0374уУ РСБКО або РОБКО ДТ, використовуваних в аналізі зв'язування. Характерна крива доза-реакція для аналізів як 0374, так і дикого типу представлена на фіг. 32 і фіг. 33, відповідно.
Приклад 34
Ефективність 11РЕ1 з точки зору блокування захоплення ЛИНЩ клітиною 11221 блокує взаємодію між РОКУ і ЛІНЩР іп міго і може зменшувати опосередковане
РОБКУ зниження захоплення ЛИНЩ клітинами Нерсаг.
Якщо коротко, клітини Нерб2 людини висівали в чорні 96-лункові планшети з прозорим дном (Різпег Зсієпіййс СО 1 І С, Санта Клара, Каліфорнія) з щільністю 5 х 104 клітин на лунку в
МДСЇІ (Меадіагесі Іпс., Негпдоп, Вірджинія) з додаванням 10 95 СТЕ і 1 95 розчину антибіотика- протигрибкового засобу (Медіатесн Іпс., Негпаоп, Вірджинія). Клітини інкубували при 37" С (5 95
Со2) протягом ночі. Для утворення комплексу між 0374М РОБКО і антитілом або РОБКУ ДІ і антитілом, готували серійні розведення 11Е1 (1:2), від 666,7 нМ до 0,7 нМ (для блокування 0374У РОБКО) або від 3,3 мкм до 3,3 НМ (для блокування РОБ5КО ДТ) в буфері композиції (25
ММ НЕРЕБ5, рН 7,5, 0015 М Мас!) 0374М РОБКОУ (2 мкг/мл) або РОБКО ДТ (25 мкг/мл) розбавляли буфером захоплення (МДСІ, що містить 195 СТЕ) та інкубували з різними концентраціями 11Е1 або тільки буфера захоплення (негативний контроль) протягом 1 год. при кімнатній температурі із струшуванням. ВОБІРУ-ЛІПНЩ (Іпуийгодеп, Карлсбад, Каліфорнія) бо розбавляли буфером захоплення до концентрації 12 мкг/мл. Після інкубації протягом ночі,
клітини Нероа2 двічі споліскували ОРВ5 (Медіатесі Іпс., Негпаоп, Вірджинія). 25 мкл комплексу 0374У РОБКО або РОБКО ДТ з 111 ії 25 мкл розбавленого ВОВБІРУ-ЛІПНЩ (Іпийгодеп,
Карлсбад, Каліфорнія) додавали до клітин та інкубували при 377 б (595 СбО2) протягом З год.
Клітини промивали 5 разів ФОБД і повторно суспендували в 100 мкл ФСОБД. Флуоресцентні сигнали виявляли з використанням пристрою для зчитування планшетів Заїїге (Тесап бувієтв
Іпс., Сан-Хосе, Каліфорнія) на довжині хвилі 480-520 нм (збудження) і 520-600 нм (емісія) та виражали, як відносні одиниці флуоресценції (ВОФ).
Програмне забезпечення СгарпРаай Р'гізт (версія 4.02, СгарпРад боймаге Іпс., Сан Дієго,
Каліфорнія) використовували для нанесення на графік логарифма концентрації антитіла проти
ВОФ і визначення значення ЕС5О нелінійною регресією, з використанням програми апроксимації сигмоподібної кривої доза-реакція (варіабельний нахил).
Даний приклад показує, що 1121 блокував опосередковане 0374У РОБКОУ або РОБЗКОУ ДТ зменшення захоплення ЛІИПНІЩ клітинами Неро2 дозозалежним чином. Додавання рекомбінантного очищеного 0374У РОБКО (2 мкг/мл) або РОБКОУ ДТ (25 мкг/мл) до клітин Нерсаг зменшувало захоплення ВО0ІРМ-ЛІПНЩ до «50-60 95 і --40 95 від рівня, виміряного для необроблених клітин, відповідно. Антитіла дозозалежним чином відновлювали захоплення
ЛИНЩ до рівня, спостережуваного в необроблених клітинах. Середнє значення (ж стандартне відхилення) ЕС5О для здатності 1121 блокувати опосередковане 374 РОБ5БКУ зменшення захоплення ЛІНЩ становило 35,3ж49,1 нМ (п-б, фіг. 34). Значення ЕС5О для здатності 11Е1 блокувати опосередковане РО5КУ ДТ зменшення захоплення ЛІНЩ становило 124,2528,5 НМ (п-3, фіг. 35). Слід зазначити, що одержані значення ЕС5О є функцією кількості рекомбінантного 0374У РОБКОУ або РОБ5КОУ ДТ, використовуваного в клітинному аналізі. Значення ЕС50О є нижчим проти 0374У РОБКО, ніж РОЗКУ ДТ, оскільки меншу кількість 0374 РОБКО використовували в аналізі у зв'язку з тим, що його спорідненість зв'язування з ЛІОНІЩР в 5-30 разів вища, ніж спорідненість зв'язування РОБКОУ ДТ (Сиппіпопат із співавт., 2007; Рівнег із співавт., 2007; Кимоп із співавт., 2008).
Значення ЕС50О, наведені в даному описі, характерні для середніх значень, одержаних в результаті 3-6 окремих вимірювань для 11Е1.
Приклад 35
Зо Ефективність 111 і ВАЗ з точки зору блокування людського РОБЗКОУ, експресованого за допомогою адено-зв'язаного вірусу на мишачій моделі
Одноразове внутрішньовенне введення болюсу анти-РСОКУ антитіл 111 або 8АЗ приводить до значного зниження не-ЛІИВЩ:-Х і ОХ в сироватці мишей, які експресують людський
РОКУ під дією адено-зв'язаного вірусу (АЗВ). Даний приклад демонструє ефективність обох анти-РОЗКУ антитіл з точки зору блокування функції людського РОБКО іп мімо.
Якщо коротко, 120 мишей С57ВІ/6б6, які експресують людський РОБ5КОУ, генерували інфікуванням сконструйованим адено-зв'язаним вірусом (АЗВ), який кодує людський РОБКОУ, що приводило до підвищення рівнів холестерину ліпопротеїну низької щільності (ЛЛНЩ-Х) в кровотоку. Аналіз холестерину сироватки проводили з використанням хімічного аналізатора
Собаз Іпівага 400 ріих (ВКосне Оіаадпозіїсв, Індіанаполіс, Індіана). Тварини були рандомізовані в групи лікування з подібними рівнями не-ЛЛВЩ-Х (ЛІЛНЩ-Х і ЛЛДНЩ-Х), ЛІИВЩ-Х і ОХ. У 0-й день лікування (Т-0) підмножину мишей умертвляли евтаназією, і сироватку збирали з метою визначення початкових рівнів у вказаний день. Далі решті мишей вводили 111, 8АЗ або контрольне антитіло Іде2 проти гемоціаніну фісурелових (ГЦФ) в дозі 30 мг/кг ін'єкцією у хвостову вену. На 1-5-й дні після ін'єкцій, підмножини мишей умертвляли евтаназією, суцільну кров відбирали з порожнистої вени і дозволяли згортання протягом 30 хв при кімнатній температурі. Після центрифугування із швидкістю 12 000 об/хв за допомогою настільної центрифуги протягом 10 хв сироватку збирали. Аналіз холестерину сироватки проводили з використанням хімічного аналізатора Собаз Іпівага 400 рів.
Концентрації РО5КОУ в сироватці визначали з використанням сендвічевого аналізу ТІФА.
Прозорі 96-лункові планшети вкривали протягом ночі 2 мкг/мл моноклонального анти-РСО5КУ антитіла (31Н4), розбавленого їх ФБР. Планшети ретельно промивали їх ФБР/0,05 95 твіну, і потім блокували протягом 2 год. з використанням З 95 АТС/1х ФБР. Після промивання планшети інкубували протягом 2 год. із сироваткою, розведеною загальними розбавлювачами для аналізу (Іттипоспетівігу Тесппоіодіеє5, Блумінгтон, Міннесота). Рекомбінантний людський РОКУ (від 1 нг/мл до 500 нг/мл) аналізували паралельно і використовували для генерації стандартної кривої на кожному планшеті ТІФА. Кроляче поліклональне біотинільоване анти-РС5КУ антитіло (08773, Атдеп Іпс, Каліфорнія) додавали в концентрації 1 мкг/мл (у 1 95 АТС/ФБР), з подальшим додаванням нейтравідину-ПХ в концентрації 200 нг/мл (у 1 95 АТС/ФБР). Зв'язаний 60 РОБЗКО виявляли інкубацією із субстратом ТМБ. Реакцію зупиняли додаванням 1 н НОСІ, і поглинання вимірювали на довжині хвилі 450 нм на спектрофотометрі 5ресіта Мах Ріи5 384 (МоІесшаг Оеємісе5 Іпс, Саннівейл, Каліфорнія). Стандартну криву (4-параметрична логістична апроксимація), що генерується з використанням рекомбінантного людського РОБКО, використовували для визначення відповідної концентрації РОЗКОУ в зразках сироватки.
Концентрації антитіла в сироватці визначали з використанням сендвічевого аналізу ТІФА.
Реактиви: поліклональний козиний анти-людський Ес до і ПХ-мічений козиний поліклональний анти-людський Ідсї Есг (обидва від Чдаскзоп ІттипоРезвеаїгсі І абогаюгтієв5 Іпс, М/езі Стгоме, РА) використовувалися як антитіло для захоплення і виявлення, відповідно. Розчин субстрату 3,3",5,5'-т-етраметилбензидину (ТМБ), що реагує з пероксидом, і в присутності пероксидази хріну (ПХ) генерує сигнал для колориметричного виявлення, який пропорційний кількості відповідного анти-РО5КУ антитіла, зв'язаного з реактивом для захоплення. Інтенсивність кольору (оптична густина, ОО) вимірювали на довжині хвилі 450 нм мінус 650 нм з використанням пристрою для зчитування мікропланшетів (Зресігта Мах Ріих 384). Дані були проаналізовані з використанням пакету упаковки даних УМаїхоп версія 7.0.0.01 (ТНепто 5сіепіййс, Уолтем, Массачусетс) з логістичною регресією (аутооцінках одержаних окремо стандартних кривих. Нижня межа кількісного визначення (НМКВ) для аналізу становила 34,4 нг/мл.
ОБЧИСЛЕННЯ ФАРМАКОКІНЕТИЧНИХ ПАРАМЕТРІВ У МИШЕЙ АЗВ
Не-компартментальний аналіз (НКА) проводили на концентраціях в сироватці з використанням попередньо визначених номінальних точок часу для кожного суб'єкта, з використанням УмМіпМопіїп Епіегргізе, версія 5.1.1 (Ріагзідні, Сан-Луїс, Міссурі). Точки даних для оцінки констант термінальної швидкості елімінації і періодів напіввиведення були вибрані шляхом візуальної інспекції профілів концентрація-ч-ас. Зареєстровані параметри НКА включають: очевидний період напіввиведення (11/2), площу під кривою концентрація в сироватці-час від нульової точки часу до останньої виміряної концентрації (АОСО-І) і очевидний кліренс із сироватки (СІ 0-3. АШОСО-ї визначали з використанням лінійного логарифмічного- лінійного трапецеїдального методу, і СІ 0-ї обчислювали за дозою/АШСО-ї для антитіл 11Е1, вВАЗ і ЗНА. Аналіз розчину дози після дослідження показав, що фактичні дози знаходяться в межах 20 95 від цільової дози 30 мг/кг. Однак, для контролю Ід2 аналіз показав, що фактична доза становить тільки 40 95 від передбаченої цільової дози. Таким чином, відкоректовану дозу 12
Зо мг/кг використовували для обчислення Сі0-ї з метою контролю Ідс52. Параметри були проілюстровані на трьох значущих фігурах, за винятком періоду напіввиведення, який був проілюстрований на двох значущих фігурах.
СТАТИСТИЧНИЙ АНАЛІЗ
Всі результати для холестерину виражали, як середнє значення ж стандартна похибка середнього. Всі фармакокінетичні дані виражали, як середнє значення х стандартне відхилення.
Значення р 0,05, визначене 1-бічним дисперсійним аналізом, використовували як поріг для визначення статистичної значущості співвідношення між тваринами, яким було ін'єкційний введено контрольне анти-ГЦф Ідс2 антитіло і анти-РО5КУОУ антитіло, в одній і тій же точці часу.
ВПЛИВ АНТИ-РО5БКУ АНТИТІЛ НА НЕ-ЛПВЩ-Х, ЛІПВЩ-Х І ОХ СИРОВАТКИ
Для визначення початкового рівня, підмножину мишей, які експресують людський РОБКО, умертвляли евтаназією до ін'єкції антитіл, і кров збирали. Рівні не-ЛЛВЩ-Х, ЛІВЩ-Х і ОХ у цих тварин становили 33:24, 117-344 і 183:9 мг/дл, відповідно (середнє значення ж стандартна похибка середнього). Рівні РОБКОУ у наївних тварин були визначені як такі, що становлять 4921 нг/мл х 2044 нг/мл.
В порівнянні з мишами, яким було ін'єкційно введене контрольне анти-ГЦФ Ідс2 антитіло (контрольні тварини), ін'єкція 1121 приводила до значущого зниження не-ЛЛВЩ-Х на 1-й, 2-й і 4- й день після ін'єкції (з максимумом 59 95), тоді як рівень ОХ істотно знижувався тільки на 4-й день (на 22 905) (фіг. 36, фіг. 37). Не спостерігалося значного зниження ЛІПВЩ-Х ні в одній з точок часу (фіг. 38).
В порівнянні з контрольними тваринами, ін'єкція ЗАЗ приводила до значного зниження рівня не-ЛІПВЩ:-Х на 1-й, 2-й і 4-й день після ін'єкції (з максимумом 65 95), тоді як рівень ОХ значно знижувався на 2-й день після ін'єкції (з максимумом 24 95) (фіг. 36, фіг. 37). Не спостерігалося значного зниження ЛИВЩ-Х ні в одній із точок часу (фіг. 38).
ФАРМАКОКІНЕТИКА
При внутрішньовенному введенні дози 30 мг/кг, 11-41 ії ВАЗ демонстрували високою мірою подібну фармакокінетичну поведінку (фіг. 39). Для цих двох молекул, системний контакт АОСО-Ї, оцінене значення СІ 0-ї і очевидні періоди напіввиведення були еквівалентними (таблиця на фіг. 40). Контрольне анти-ГЦФ Ід52 антитіло несподівано продемонструвало нижчий системний контакт АОСО-Ї, ніж 111 і вАЗ, але, ймовірно, це є результатом введення антитіла в дозі нижче бо за передбачену (12 мг/кг на протилежність 30 мг/кг; аналіз розчину дози показав концентрацію антитіла 40 95 від цільового значення. Значення СІ 0-ї контрольного анти-ГЦФ Ідс2 антитіла було подібним до значень 1111 і 8АЗ, при обчисленні з використанням відкоректованої дози, і очевидний період напіввиведення контрольного анти-ГЦФ Ідс2 антитіла був оцінений як »120 год. Одержані дані свідчили, що вплив ліганду РСО5КОУО на розподіл антитіла був менш вираженим для 1111 і 8АЗ в порівнянні з іншими антитілами, введеними в моделі АЗВ, оскільки значення СІ 0-ї для 11Е1 і ВАЗ були більшою мірою подібними до контрольного анти-ГЦФ Іде антитіла.
КОРОТКИЙ ОПИС
Експресія людського РСОБКУО у мишей АЗВ (приблизно 5 мкг/мл) приводила до рівня не-
ЛИВЩ:-Х сироватки приблизно 33 мг/дл. Після ін'єкції 30 мг/кг 11Е1, значне зниження рівня не-
ЛИВЩ-Х сироватки спостерігалося на 1-й, 2-й і 4-й день після ін'єкції (з максимумом 59 95, в порівнянні з контрольними тваринами). Значне зниження рівня ОХ спостерігалося тільки на 4-й день. Ін'єкція ЗАЗ приводила до подібного зразка зниження рівня не-"ЛІВЩ-Х з максимумом 65 95, в порівнянні з контрольними тваринами. Однак, введення ВАЗ приводило до істотного зниження рівня ОХ тільки на 2-й день після ін'єкції, з максимумом 24 905. Не спостерігалося значного зниження рівня ЛЛИВЩ-Х у тварин, якими вводили 11Е1 або 8АЗ. Аналіз рівнів антитіла 11241 ї вАЗ в сироватці продемонстрував профіль, подібний до контрольного анти-ГЦФ Іде антитіла.
Приклад 36
Вплив одноразової підшкірної дози 11Е1, 21812 і ВАЗ на ліпіди сироватки у яванських макак
Одноразове п/ш введення 11РЕ1, ВАЗ або 21812 яванським макакам приводило до істотного зниження рівня ЛИЛНЩ-Х і ОХ в сироватці. Дане дослідження продемонструвало здатність анти-
РОБЗКУ антитіл знижувати рівень холестерину сироватки у негуманоїдних приматів.
Якщо коротко, наївних самців яванських макак акліматизували до середовища, щонайменше протягом 2 тижнів до експерименту. Тварини були рандомізовані в групи лікування на підставі попереднього скринінгу рівнів ОХ, ЛІЛВЩ-Х, ЛІИНЩ:-Х і тригліцеридів сироватки, а також їх маси тіла. Через 1 тиждень, тварини голодували протягом ночі, і відбирали зразки крові з периферичних судин (головна або сафенна вена) для вимірювання початкових рівнів ліпідів сироватки в точці часу, позначеній 1-0. Далі тваринам ін'єкційно вводили п/ш контрольне анти-
ГЦФ /дс2 антитіло, 1121, 21812 або 8АЗ (всі в 10 мМ МабАс, рН 5,2, 995 сахарози) в концентрації 0,5 мг/кг (всі в концентрації 0,4 мл/кг маси тіла). Далі зразки крові натщесерце були відібрані у тварин в позначених точках часу протягом 45 днів.
Дизайн експерименту й й . Рівень дози Об'єм
У вказаних точках часу, зразки крові відбирали у тварин в умовах голодування протягом ночі з периферичних судин (головна або сафенна вена). Суцільній крові дозволяли зсідатися протягом 30 хв при кімнатній температурі. Після центрифугування із швидкістю З 000 об/хв протягом 20 хв сироватку збирали. Прямий аналіз холестерину сироватки проводили з використанням аналізатора Собаз Іпівага 400 (Восне Оіадповіїсз Іпс, Індіанаполіс, Індіана). Рівні
Аполіпопротеїну В в сироватці визначали у вказаних точках часу (дні 0, 3, 6, 15, 24 їі 33) за допомогою Апіуїс5, МО, і наступної методології. Аліквоту 17 мкл зразка (без підготовки) використовували для аналізу на аналізаторі Нітастпі 717 з використанням стандартної 6-точкової кривої. Якщо початкове значення зразка було вищим, ніж лінійність стандартної кривої, то зразок розбавляли і аналізували повторно, помножуючи результат на відповідний фактор розведення. Реактиви для аналізу (набір реактивів АРО-В Мо 86071, набір антитіл Мо 86060, контрольний набір Мо 86103) були одержані від Оіабогіп (ЗІмаїег, Міннесота).
Концентрації антитіла в сироватці визначали з використанням твердофазного імуноферментного аналізу (ТІФА) з інтервалом аналізу від 34,4 до 3000 нг/мл (причому 34,4 нг/мл представляє нижню межу кількісного визначення (НМКВІ).
Не-компартментальний аналіз (НКА) виконували для концентрацій в сироватці з використанням попередньо визначених номінальних точок часу для кожного суб'єкта, з використанням Умаїзоп? ГІМ5, версія 7.0.0.01 (Тпегто 5бсієпійіс, Уолтем, Массачусетс). Точки даних для оцінки констант термінальної швидкості елімінації і періодів напіввиведення були вибрані шляхом візуальної інспекції профілів концентрація-час і лінійного методу найкращої апроксимації (звичайно від 360 год., до тих пір, поки концентрації антитіла не знижувалися нижче за нижню межу кількісного визначення). Зареєстровані параметри НКА включають: термінальний період напіввиведення (11/2,7), максимальну концентрацію в сироватці (Стах), площу під кривою концентрація в сироватці-час від нульової точки часу до безкінечності (АОСО- іп) і очевидний кліренс із сироватки (СІ /Е). АОСО-їіпї обчислювали з використанням лінійного логарифмічного-лінійного трапецеїдального методу. Всі параметри були проілюстровані на трьох значущих фігурах, за винятком періоду напіввиведення, який був проілюстрований на двох значущих фігурах.
СТАТИСТИЧНИЙ АНАЛІЗ
Статистичну модель, в якій початковий рівень розглядається як коваріант, і група лікування як фіксований вплив, була апроксимована до логарифмічно перетвореної відповіді в кожній точці часу для ЛІЛНЩ-Х, ЛІИВЩ-Х, ОХ і тригліцеридів. Корекція множинного порівняння Тьюкі була застосована, щоб відрегулювати попарні порівняння в кожній точці часу. Статистична значущість була оцінена при альфа - 0,05 з використанням скоректованих значень р.
ВПЛИВ 111, 21812 І ВАЗ НА РІВЕНЬ ХОЛЕСТЕРИНУ ЛІНЩ СИРОВАТКИ
Максимальне зниження ЛІПНЩ-Х для 11Е1 спостерігалося через 9 днів після ін'єкції, із зниженням ЛІИНЩ-Х на 57 95, в порівнянні з макаками, яких лікували контрольним анти-ГЦФ
Ід92 антитілом (контрольні тварини). Рівень ЛІОНЩ-Х повертався до значень, подібних до спостережуваних у контрольних тварин, на 27-й день. Максимальне зниження ЛІНЩ-Х для 21812 спостерігалося через З дні після ін'єкції, із зниженням ЛІПНЩ-Х на 64 95, в порівнянні з контрольними тваринами. Рівень ЛІПНІЩ-Х повертався до значень, подібних до спостережуваних у контрольних тварин, на 6-й день. Максимальне зниження ЛОНЩ-Х для 8АЗ спостерігалося на 4-й день після ін'єкції, із зниженням ЛІИНІЩ-Х на 54 9о, в порівнянні із контрольними тваринами. Рівень ЛІПНІЩ-Х повертався до значень, подібних до спостережуваних у контрольних тварин, на 27-й день (фіг. 41).
ВПЛИВ 111, 21812 І ВАЗ НА РІВЕНЬ ЗАГАЛЬНОГО ХОЛЕСТЕРИНУ СИРОВАТКИ
Максимальне зниження ОХ для 11Е1 спостерігалося через 9 днів після ін'єкції, із зниженням
Зо ОХ на 27 95, в порівнянні з макаками, яких лікували контрольним анти-ГЦФ Ідб2 антитілом (контрольні тварини). Рівень ОХ повертався до значень, подібних до спостережуваних у контрольних тварин, на 27-й день. Максимальне зниження ОХ для 21812 спостерігалося на 3-й день після ін'єкції, із зниженням ОХ на 20 95, в порівнянні з контрольними тваринами. Рівень ОХ тимчасово повертався до рівнів, подібних до спостережуваних у лікованих розчинником макак на 4-й день, але був істотно нижчий між 14 і 18 днями, включно. Максимальне зниження ОХ для 8АЗ спостерігалося на 9-й день після ін'єкції, із зниженням ОХ на 22 95, в порівнянні з контрольними тваринами. Рівень ОХ тимчасово повертався до рівнів, подібних до спостережуваних у лікованих розчинником макак, на 30-й день (фіг. 42).
ВПЛИВ 1161, 21812 І 8АЗ НА РІВЕНЬ ХОЛЕСТЕРИНУ ЛПИПВЩ СИРОВАТКИ І
ТРИГЛІЦЕРИДІВ
В середньому і в кожній точці часу, рівні ЛЛВЩ-Х або тригліцеридів у тварин, лікованих 11Е1 або 8АЗ, не відрізнялися істотно (на підставі рівня значущості альфа - 0,05) від спостережуваних у лікованих контрольних анти-ГЦФ Ідс2 антитілом макак. Однак, 21812 індукував статистично значущу зміну рівня ЛЛВЩ-Х в одній точці часу (18-й день після ін'єкції) (фіг. 43 і фіг. 45).
ВПЛИВ 111, 21812 І ВАЗ НА РІВЕНЬ АПОЛІПОПРОТЕЇНУ В (АРОВ)
Рівні АроВ в сироватці вимірювали на 3-й, 6-й, 15-й, 24-й і 33-й день після ін'єкції. 11Е1 і ВАЗ асоціювалися із зниженням рівня АроВ на 3-24-й дні, в порівнянні з лікованими контрольним анти-ГЦФ ІдсС2 антитілом макаками (фіг. 46). 21812 асоціювався із статистично значущим зниженням рівнів АровВ тільки на 3-й день.
ФАРМАКОКІНЕТИЧНІ ПРОФІЛІ 111, 21812 І ЗАЗ
Сумарний графік середніх профілів концентрація-час в ході лікування показаний в 748.
Оцінені середні фармакокінетичні параметри для тварин, що одержували 11РЕ1, 21812, 8АЗ і контрольне анти-ГЦФ Ідс2 антитіло, проілюстровані в таблиці на фіг. 47.
Абсорбція антитіла у всіх групах була систематичною і характерною для підшкірного введення антитіла. Фармакокінетична поведінка 21812 щодо СіІ/Б, Стах ії АИСО-їпі узгоджувалася із спостережуваною в попередніх дослідженнях, в яких 21812 вводили в такій же дозі. Фармакокінетика 11Е1 ї 8АЗ істотно відрізнялася від 21812, при цьому спостерігалося зниження СІ /Е (приблизно 15 95 від СІ /Е 21812), і періоди напіввиведення були оцінені як більш бо тривалі (приблизно 200 год. в порівнянні із 40 год. для 21812). Слід зазначити, що з точки зору фармакокінетики 1161 ії 8АЗ було неможливо відрізнити як один від одного, так і від контрольного анти-ГЦФ Ідс2 антитіла. Одержані дані наводять на думку про те, що асоціація з мішенню РСОБКОУ здійснює набагато менший вплив на диспозицію 11Е1 і 8АЗ, ніж 21812, при тому, що профіль системного контакту для 1111 і ВАЗ такий же, як і для контрольного анти-ГЦФ
Ід02 антитіла без спорідненості до РСОБКОУ.
КОРОТКИЙ ОПИС РЕЗУЛЬТАТІВ
В ході 45-денного дослідження, статистично значуще зниження рівня ОХ і ЛІНЩ-Х спостерігалося у тварин, яким вводили 11Е1, 21812 або 8АЗ, в порівнянні з контрольним анти-
ГЦФ 1Ідс2 антитілом. 11Е1 асоціювалося із статистично значущим зниженням рівня ЛЛНЩ-Х (проти контрольного анти-ГЦФ Ідс2 антитіла) з 2-го дня до 24-й день, включно. 21812 продемонструвало статистично значуще зниження рівня ЛІНЩ-Х (проти контрольного анти-
ГЦФ ІдбС2 антитіла) з 1-го дня до 4-го дня, включно. ВАЗ продемонструвало статистично значуще зниження рівня ЛЛНЩ-Х (проти контрольного анти-ГЦФф ІдС2 антитіла) з 1-го дня до 24- го дня, включно. Зміни рівня ОХ і дзеркальні зміни рівня АроВ спостерігалися для ЛІНЩ-Х у всіх групах. 1121 забезпечувало максимальне зниження рівня ЛІПНЩ-Х (проти контрольного анти-ГЦФ Ідсвс2 антитіла в тій же точці часу) через 9 днів після ін'єкції (-57 95). 21812 забезпечував максимальне зниження рівня ЛІНІЩ-Х (проти контрольного анти-ГЦФ Ідсхе антитіла в тій же точці часу) через З дні після ін'єкції (-64 95). ВАЗ забезпечувало максимальне зниження рівня ЛЛНЩ-Х (проти контрольного анти-ГЦФ Ідса2 антитіла в тій же точці часу) через 4 дні після ін'єкції (-54 95). 21812 знижувало ЛІВЩ-Х в єдиній точці часу, через 18 днів після ін'єкції. Не спостерігалося статистично значущих змін рівня ЛЛПИВЩ-Х після введення 11Е1 або 8АЗ. Не спостерігалося статистично значущих змін рівня тригліцеридів після введення 111Е1, 21812 або 8АЗ.
Приклад 37
Дослідження в 2-х частинах для оцінки безпечності, переносимості та ефективності впливу людського анти-РС5КОУ антитіла на рівень ЛІНІЦ-Х у суб'єктів з гомозиготною родинною гіперхолестеринемією
Дизайн дослідження: дане дослідження проводилося в 2-х частинах. Частина А є відкритим, рандомізованим, плацебо-контрольованим, багатоцентровим пілотним дослідженням з однією гілкою. Частина Б є подвійним сліпим, рандомізованим, плацебо-контрольованим, багатоцентровим дослідженням людського антитіла, 21812, з розширеним включенням, але в іншому з ідентичним Частині А дизайном. Критерії включення/виключення і розклад оцінки будуть однаковими для Частин А і Б.
Критерії включення: - чоловіки і жінки віком від 2 12 до « 65 років; - діагноз гомозиготної родинної гіперхолестеринемії; - стабільна гіполіпідемічна терапія, щонайменше протягом 4 тижнів: - холестерин ЛІПНЩ » 130 мг/дл (3,4 ммоль/л); - тригліцериди « 400 мг/дл (4,5 ммоль/л); - маса тіла » 40 кгабо більше на момент скринінгу.
Критерії виключення: - аферез ЛИНЩ або плазми в межах 8 тижнів до рандомізації; - клас І або ІМ згідно Нью-йоркської Асоціації серцевої недостатності (НАСН) або останні показники фракції викиду лівого шлуночку « 30 95, - інфаркт міокарду, нестабільна стенокардія, крізьшкірне втручання на коронарних судинах (КККС), аортокоронарне шунтування (АКШ) або інсульт в межах З місяців до рандомізації; - планове кардіохірургічне втручання або реваскуляризація; - неконтрольована серцева аритмія; - неконтрольована гіпертензія.
Розклад оцінки включає, не обмежуючись ними, збір інформації про побічні ефекти (ПЕ) і серйозні побічні ефекти (СПЕ), основні показники життєдіяльності, супутнє лікування, лабораторні аналізи, тощо.
Суб'єкти, які відповідають критеріям включення/виключення, будуть проінструктовані дотримуватися дієти Панелі лікування дорослих НОПХ ПЛД ШІ (або порівнянної), і від них вимагатимуть приймати поточну гіполіпідемічну терапію протягом дослідження.
Препарати 21812 будуть надані у формі стерильної, прозорої, безбарвної, замороженої рідини. Кожен стерильний флакон заповнений об'ємом для введення 1 мл розчину 70 мг/мл 21812, що містить 10 мМ натрію ацетату, 9 95, мас/об сахарози, 0,004 95, мас/об полісорбату 20, рН 5,2. Кожен флакон призначений тільки для одноразового використання. Плацебо буде бо надане в ідентичних контейнерах у вигляді прозорої, безбарвної, стерильної, замороженої рідини, що не містить білка та містить 10 мМ натрію ацетату, 9 95, мас/об сахарози, 0,004 95, мас/об полісорбату 20, рН 5,2.
До Частини А будуть включені 4-16 суб'єктів, які одержуватимуть немасковані препарати 21812 (420 мг К4Т). Візити дослідження відбуватимуться 1 раз на 4 тижні. Ці візити включатимуть збір інформації про побічні ефекти (ПЕ) і серйозні побічні ефекти (СПЕ), основні показники життєдіяльності, супутнє лікування, лабораторні аналізи, тощо. Панель ліпідів натщесерце буде одержана на 6б-му тижні для оцінки надиру ЛИПНЩ-Х у відповідь на лікування препаратом 21812. Препарат 21812 вводитимуть в 1-й день, на 4-му тижні і 8-му тижні.
Кінцевий візит дослідження (КВД) та остання оцінка рівня ліпідів будуть здійснені на 12-му тижні.
Приблизно 51 нових суб'єктів будуть включені до Частини Б. Включені суб'єкти будуть рандомізовані для розподілу 2:1 в 2 групи лікування: 420 мг 21812 К4Т п/ш або плацебо К4Т п/ш. Рандомізація буде стратифікована початковими рівнями ЛІНЩ-Х. Візити дослідження проводитимуться 1 раз на 4 тижні, з двома необов'язковими візитами на 2-му тижні і 10-му тижні. Візити включатимуть збір даних щодо ПЕ і СПЕ, основних показників життєдіяльності, супутнього лікування, лабораторні аналізи, тощо. Панель ліпідів натщесерце буде одержана на б-му тижні, щоб оцінити надир ЛІНЩ-Х у відповідь на лікування 21812. Препарат 21812 вводитимуть в 1-й день, на 4-му тижні і на 8-му тижні. Кінцевий візит дослідження (КВД) та остання оцінка рівня ліпідів будуть здійснені на 12-му тижні для всіх суб'єктів.
ВКЛЮЧЕННЯ ШЛЯХОМ ПОСИЛАННЯ
Всі посилання, процитовані в даному описі, зокрема патенти, патентні заявки, трактати, керівництва, тощо, а також посилання, процитовані в даному описі, до того ступеня, до якого вони не були включені раніше, таким чином, включені до даного опису шляхом посилання в повному обсязі. До того ступеня, до якого будь-яке з визначень або термінів, запропонованих в посиланнях, включених шляхом посилання, відрізняється від термінів і обговорення, запропонованих в даному описі, переважають дані терміни і визначення.
ЕКВІВАЛЕНТИ
Вищевикладений письмовий опис розглядається як достатній, щоб дозволити фахівцю в даній галузі практикувати винахід. Вищевикладений опис і приклади деталізують деякі
Зо переважні варіанти винаходу і описують найкращий метод, передбачений винахідниками. Слід розуміти, однак, що, незалежно від того, наскільки детально вищевикладене описане в тексті, винахід може практикуватися багатьма способами, і винахід слід трактувати як обмежений відповідно до доданої формули винаходу і будь-яких її еквівалентів.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
-110» СНап, дУоусе сиірв, доп
Оіаз, Сіарюп сої, Вореп
МУаззептап, сої
Сіодвіоп, СнНтгів
О55Ішпа, Тітоїйу «120» СПОСОБИ ЛІКУВАННЯ АБО ПОПЕРЕДЖЕННЯ ПОВ'ЯЗАНИХ ІЗ ХОЛЕСТЕРИНОМ
РОЗЛАДІВ
-130» А-1635-МО-РСТ -150» 61/642,363 -1515 2012-05-03 -1505» 61/614,417 -1515 2012-03-22 -1505» 61/595,526 -1515 2012-02-06 -1505» 61/562,303 (510) «1515 2011-11-21
-150» 61/484,610 «1515 2011-05-10 -160» 587 «170» Равіз5ЕО для УМіпаому5 версія 4.0 «2105 1 «2115 662 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 1 бів біз Ар біз Авроб1у АвротТух біз біб во Уві цей АтТа цей Ак 3 5 10 15 бек пі: біз авр біу беб Азїа бій Аза РКО біб Нів біу ТВ ТНх Аза
Щі 28 25 30 тик вне нів ака Сув Аза був Авр РКО Тер Ас Бей Ро біу Тк о тТук чаї уаї чаї без був бій біо ТЕ Вів еп бек бій Яех бій Ака ТВЕ во діа Ака дк бео біп Аїз біз Аза дія Аго Аго біу Туг Бевза Твг Був 55 78 75 о ті ї-еч Ні чаї Ре Ві біУу Пец Бей хо 5іу Бе ві Уаї був Ме 85 чо 95
Веж біу Ашрв ій оїжеах сій їн Аїва їжи Був їз Рко Нів уаї Авротук
ЦЕ 195 1160
Хіе Бій: Бій Ав бек бЗех уві РБе Аза бі» Беж ї1ї6 РЕ ТЕвр Ав їв 315 125 155 іш дху ї1е ТВк о Рко Рко Ако Тук Ака Аїз Авр о біо тук біп ко РКО 130 135. 140 двр сі біуУу Бек рез уаї біз уаї Ту Бей Бей Аве ТВ Бек їі біп 195 159 155 166
Бек дя Ні Ага січ їі6 січ бі Ак уаї Меє уаї Те Авр Бе сій 165 170 175 й туаії Руо бів бів; Авробіу ТВк Ак вБе нів Ак бів Аза бек Був 185 185 130
Сув Аяр Бех Ніз сіу тах Вів рез Аза б1у Уві Уві беїх 51У Ака Авр 395 290 205 із піу Уаї Аїа зує сі Ата Бек Меб га Бех пес йо Маї Бем Ави 210 215 220. сСув віп бі був бі ТнЕ Уві неї біу ТИЖ без тів сіУу Сей сій Ве 225 230 235 Кен їі Ахз Був Бак бів їми уаї бів Бко чаї 5іуУ ко Ббеб Чаї уУуаї йей 245 250 255 їжи Ріо ін; діа сіу сбіу Тух бек дк Уаї Пес Ява Аза Аза Сув сій : гей -йвЕ Ка -дЕЖа бер) Аїя Ака віз сі» учні Уві без уаї ТвнК Аза Аза с1у Ави вве 278. 280 285
Акз Агро Авр Аза Сув Ббеп Тут Бех рхо Аза Бес Аїа Бо біз Ууаї ї1е 290 295 зав
Твх Уаї сіу Аїа Тк Авв о Аіа пів Авроб1ібв Бто туаї ТЕ пео; сі1у ТВвх
За5 310 315 320
Пец біу Твх Авоп о рРБе сіу дк Сув уаї Авр бе) вне Аза Рхо 21у 01 325 зза 335
Авр тів Тіеєе 519 Аія Беж Бех Авр Сув беж Тих Суб Ріє чаї Бех сію 340 345 3590
Бех бі1у Твах Бех бій Аіа Азіа Аіа Нія Уаї Аза біУу ї16є Аіїа Аіїа Меє 355 360 365
Мет реп бек Атїа З1п ко 010 Бей Твжх Бей Аза бт10 пей Агу бів Акд 379 375 380 ва їі нів Ре бег Аза їв Авроуаї Хі дев бій Аза Тр о рве рко з85 390 395 409 бій Авр біз АкЯ Уаї Бей тах о вко Авпобей Уаі Аізїз Аза ви Рко РКО 305 410 415
Вет Тву Ніз бі Аза сбіу Ттр о а1ів Пец Ра Суз Аку Так Уві Тео Бек 420 425 430 аїз нів бек пі Вко Тк о Дку Мей іа Твх Аза ті Аіа Аха Сув Аза 435 449 445. вхо авр біз сіб Бей беб Бек Сув Бек бек Рпе Бек Ака Бек піу їв 458 4558 ко
Ака Ака Бі ПМ Агу Мет біз Аїа сів сїу бпіу ув пцец Уві Сув Ака 45 470 і 475 . 250 діа ців Ап діа ве біу біу бій біу уаї Тук Аїа тів діа Ака Сув 485 450 495 сув бе Бей Рго біп Аза Ав Сув Бех Уві Нів ТНК Аза ро Рго вів 500 55 510 ої від Бек Меї Біу Тіх Ака уаї нія Сув Ні біп біп сіу Нів узі 5іВ 5 55 їєв ТВ» піт Суз Бек бек Віз Ткр б0)Ми уві 016 Ав бе З1у ТВжЖ нів ай вав 5ІО
Був Вко хо уаї Гей Ак РКО Ак піу сів РКО Аза бів буз уаї сі 45 550 555 58 нів дк біз іа бек їі нів Ааїа бек Су Сув Нів дія рхо бі Беи 585 570 575 сій Сув Був Уві був сій Нів сіу т11іє Бро Лів Рхо бів бі бів чаї во вав 590
ТнЕ уві Азів Сув бій біз біу Тер отак раз ТвБе о біу Суз бек АТа Гео 55 во 505 !
Бу піу ТвВх Зек Вів УВІ тео 01у Аза Тук Аза чаї Авр дай Тк був 510 15 520 уві маї Ах дек АкЗ Авроуаі Беї ТвІ ТВ: сіу Бе Тнх бер бій б5і1Ш 625 вій вза 540
Дік Уві Тк Аів аз вів ї1і6 Су Су Аг бег Агу Ні во діа бій 545 650 655 вів Бах ап пір Зей пів 5Ббо -21052 «2115 2076 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «40052 аєздадсассо бсадстосво здодоабостоа гоадссзстоас састодстосї дссостосваЯ 60 сгЧессссач чдосссасача сасосЯбоасЯ садаачааса вачасадсача стасавоцацч 120 стачЕчсеїву ссстусуссс соачузучає чуссбуцчесу азусасссча дсасодаасо 1950 зосзчосозесс бесвссасту соссавучає ссезсоуадчуї БЯсебодеає стасобсадсаЯ 240 чідсідавоч ачдчачассса ссбсєсосач Ссачачесаса седсссЯяссЯя сссосацуєсс 300 саччстоссс Чдссддодаса ссссассавач абсстбадсаєа єекєсезвуд сесееткеск 360 частксссзу бувачасязву сучсасову сбууачебуд ссббаачевє чдесосаєцве 450 чЧастзезгсз зодаочасьс стесакевск дессадауеа їсссбоуаа себоддадесда 480 агтасссстс сасачбассЯ чдасачабаза сассадоссс ссаасадача садссвзаво 540 зчазччсЧтасс тсстадвсас сацсасасау аубсддассзосс дууаааєсуа чудеса 500 акУугсвосе аоссодачаа Собосссзва чаздчасодча сесосухоса садасаодес БО здсавачіЯса асацесаєсод сасссассвоя чЧдсачачасачЧ ксадсодасся заасассачи 720 чеЕччсесвачу чсоссацевє деодсаасаву сусубоустса ассуссазуч чаазуусаєд 780
ЧчЕтадодоса состсаєазу сессучауєсе асбсзозаава досаостоУх сеачостоаєву 840 чічссасічу сечідєкає зесссіоаса зодбаЗзасаса досоасзбосє саасассоасе 900 кдссачечес ссдсдчасоаде сЧдЧоЧісЯЯ сідЧісасся сідсосдасав себссуадає 960 чекческасес сссвстсссс восстосваєх сскувучіса ссасачесуч дудссассааб 1020 есссздувос зуссззкзас сосззззасе ссЗзЗЗЗзасса астссозссо стат отодас 1080 чксеїсгоссс сачзчоачатіа сабсаєкаЯчи честссвасоа зосасазасає стастквака 1140 тсзсвазУуєа ззасвесасв частот асео сасчкацсту зсассоєаує сасзавосва 1200 сстососзаує сучацебово ссбддосава скздадсада даседабсеоса сткстстасе 1250 ваавчасчса саван стячекессї даддассвас дачдсаседас ссссавассту 1320 чЕдассассс воссссссву сасссакЗчУ зба кзУє азУссУсессе сваочаєстоку 1380 содцісаусає зсбсууодсс сзсасоуаву уссасадеса сеусссуєко сдососацах 1449 чаззазекос сдасобостс сачбесебос задцдачссача адсодсдадоа саадсоасавку 1509 паздеосаач уудссвачеї зуїебоссчу дессасаасая себетазача гавадзуєаке 1569 сасцосако ссазчусоасто себохтаєси садуєсваєсє дсаздсуссса сасачестоса 1620 сезцеєщезу ссзосаєзоз заессоУсУус састоссасс аасазддцеса сбсстсаса 1680 чассосацес сссасбоадоаз сободдадоас ссбадсассо асавуссасо сакчассавоч 1740 тсасзачеас посссвасса зідсочсоащс сасачацуачу ссачсакоса сосстссбає 1505 кцесзБасос сзадксточа збусазвуєтє аазчацсаку даахсессоуде состсачача 1860 сацаєдаєсу соФдеобосоуз здозозоуссов ассстдаска чегосадедє сскссстоду 1920 востсссаса ссстоачодчое стіасоссдтса сасвасасоає чезкачссаз задосочцаєс 1980 чеісзуєзствз сазосазсас сазезавзаз дес засая ссасбцссає стдстоссуд 2940 вчссчесасс спусусвоус сбсссазчач стссай 2876 2105 З «2115 692 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» З
Меб цпіу тТвгоУа1ї бех цех Ак Ах Бах Ттв Тв рРго цей Рто цей йеи 1 5 10 15 їєш ем оГем оБец без би пе) біу Ко Аза біуУу Аза Ак Аїіа бів сій
Авв обі Ар обі Або Тук бів біб без Уаї без Аза Без Ак Бех бій 5
Зі Аве бі Бей Аза со1з Аза рхо біз нів бі ТвВЕ о тТвнх Аза тТнх Ре 5 55 60 нів да Сув Аза Був Аве оРКо Тер Ак Гец ро СіУу ТВ о Тух Узі Зах в5 79 | 75 во с мМаї рей рув 015 біо Твх Вів це) бек бів бек біз Ака Тйх Аза ка. 85 за | 35 вх би бів Аіз вів Аіз діа ваг АхЯ біу тує без Так був Ті ей 100 105 110
Кіз уаї вБпє Ні бБіу Бей пен РрРхо біу Ріє Гц Чаї Був Меї Бек с1у
115 120 125
Авр беч без сін ей Аїа Бей був пе Рко нів узі Авротук Щіе бій 130 135 140 сій Авр о бек бек уві вББе Аза сіп Бек їїе Бго Тур дви Бей сій Ага 145 ї50 155 160 соте так рко ро Аге Тух АхУу Аїв Ар бій Тут пів го го АЮ Фу 155 170 аль
Бі Беж їмж':є уаї бій туаї Ту ем йо Авр о тТвВЕ бек Тіє бій Бех Авр 180 185 199 нів вгу біо Ї1е бів б1у Ага Уаї Меб аї Тих Авр Ре біз Авво чаї 195 гав 2505
Вко біз січ Аве о сіу Тис Аку Ре Ніз Агу бів Аза бах Був Сув дар 210 215 230
Бек бів сіу Тв: бів Сес Аіа С1у Чаї Уаії бег біу Ака Авр діа б1у 23 235 240
Уві із бух Бі Аіда Бех Ме ак Бех Пей АкЯ Уаї пев Ав сСув бій 245 250 255 сі їув Біу Тих Узі дек біу Тл без тів бі ем о бій ве Ії6є Агу
КО 255 10 уз бек біб ївч Уві бій Бо уаі біу Бкбо Пе) уві узі без Бей вКо 215 280 285 їжч Аід біу біу тТук Бех Ака уаї пев Авп Аїа Аза Сув бів да Бей 290 235 300
Атїа йку дів сіу У1 Узі Бей Маї Тр діа АТа біуУ Ави Ре Ахе Авр 305 31 315 320
Авр він Сук Пе) Тує бек ко діва еко Атїа ко 3із Узі зів тТвх уаї й 35 й | 336 3335: сіу 3їа Тв Ап Аза біп о Авр осів Во баї Твх без піу Ту ем біх 340 345 350
Твкх вва пе 0і1у Ак Су» Мі Аво оБец Рце Аза Кто Зі біз Авр їі 355 зво 355
Ті бі лів пе Вех АвроСув Вес ТВ Сув РБа узі бех дій бек щІіу 370 375 380
ТїБЕ беж біб зів діа Аза із Чаї Аза бі їТ1іе Аіа Аза Меб Межб їжи за 390 395 409
Зак Аїз біб Бго біз бен Тк їжа Азїва бі) без вку бів Аку пе) їїе 405 410 415 нів вне бех Аза Бу Анрв Узі ї1іе Ап осів авіа Тр гвБа вхо с1и Авр ! 420 425 | 430 сій Ако Уві без ТВЕ Бго Авп ої Уаі Аза Аза Без Бо Бкго Бек Таж 435 440 445
Ніз бі Аза с1у Тср бів Без рве Сув Аку ТБ Уаї Тур обБех АТа Вів 4550 455 460
Бех бі вко ТВу Ака Мей Азіа Твї Аза їі діа дха Сув Аїа ро Авр 455 879 475 | 480 пін Біс баб Бе» Зег Сув Бек бек Рпе бег Ага Бек бі ув Ага АкЧ 495 490 495 сіу біз дез Ме бі діа біб біу б1їу БЖ пе уаї Сув аку Аіа нів м 500 505 519 дав Аїв Рое сіу сіу Біо біу Уві Тук Ата Т16є Аза Ак Сув Сузв пец 515 520 вг5 їез ко бБіп Аза Аво Сук бек Уві Нів ТВх А1іа рко ро Аїа біз Аа
М 5135 540.
Бек Межх біу Тк аку Ууаії Нів Суп Ніз бів бію бі біз уаї Бей ТВЕ 54 556 555 560
ЗіУу Суз бек бек нів ткр бій Маї бі) двр опе) біу Твк о Нів Був Бо
І 585 570 575 вко бтаї пес ака Вго Ака біу зіп рко Ава сій Сув Уві с1іу пів Ак9
БНО за зай сі діа Беє ї1іє Нів Аіа Бек Сув Сув Нів Аза Рхз бі Пец б) Сув 600 5О05 уж Уа бух СЛ нів сіу ї1еє Рто Аза Рко сів сіу біп Ууаї ТВ Чаї вів 615 20
Аза Сув біз бів сіу Ткр ТВк Бей Тахо сіу Сув Бег Аза ев Рго біу 525 230 635 вай
Тк Бех Нів Уаї еп біу Аїа Тук Аіа Уаї Авр Ав Тр Сув уаї чаї в45 650 55
Аха бек Аг Авр Хаії Бек Тіх тТВх біу бек Тік бек бій біз Аза уаї бо 665 Бо
Тве Аза уУаї Атїа її Сузв Сув Агу Бех Ак Нів Бевз Аіїз піп Аза бек 675 580 585 зів Б) бе біоб 690 «2105 4 «2115112 «212» Білок «213» Ното зарієпо «4005» 4 вв тів Уаї Меї Твк бів Бек рРко Пен бек цев Рко Чаї ТВк Рго біу 1 5 10 15 сів Еко вів Бех їі Бех Сув АкЗз Бех Бех бір Беж Ба Ген нів Бех 20 25 30
Авп обіу Тук вв Тук рез Авр Тхр Тух йев бів цує Рго 0іу віп Бех 35 о 45
Тко біб їео бео їі Ту баз біу Бех Ав Ак діа Бех сіу уаії Ро 5а 58 во авр АкЯ пе йек біу ех біу ех 01у Таж Авро вне Таж Бей був Її6 55 за 75 | во
Бех Ак чаї бі АТа 01) Авр чаї бі баї тує Тук Суз Меб біз діа 35 за 95 їви бів ТвВк о рко ре ТЕ РВе сбіу рто б1іу Тв Був уві двр тів Був щю 105 110 «21055 «2115112 «212» Білок «213» Ното зарієпо «4005 5
Авроїіє Мві Меї тТнпх бій Вег РБга ей Бек Бей бек Уаї Тк Рко іу 1 5 10 15 сів вко Рко бек ІЗіе бЗех Сув Ако бек Бек бів Бек бев без Нів Бех
Авпопіу Тух Ав Рпе рем Ав Тур Тук їец бів був Ро біу бів Бех
Вто сій без пен хіє Тух Пейп 01у бек Вів Ако Аза бек б1іу чаї Рхко
Бо
Авр о АкЯ Рпе Бек піу бек сіу Бек б1у ТК Авр ББе Тпк Гей б1и ї16 в 70 78 80
Бех Аха Маї бій Аїа біз Аяр уаї біу чаї Тух Тух Суз Меб бів Уві я5 Зо 95
Пен бів Твх Рго ре Твк Ре Сіу Ро б1у Твх Дув Уаїі Авр Т1е Був 100 105 110 20 «21056 «2115107 «212» Білок «213» Ното заріеп5 25 «4005» 6 зви її6 бій Ме: Тву бів ех Вуб ек вех Бей ех йіз век чаї У 1 5 10 15
Авр о Ака Уаї Тк іє Тих Сув Ак Аза бех бів бек ї1е Бек Бех Тухк 20 25 30 ївча АвпоТЕхв Тух бів бів уз рРко біуУу Був Аїа Рхао Був ем без її 35 40 45
Тух Аза А1їз бек Бек Бе біп Бех сіу Уаії Руо бек АкФ4 Ре бек бі1у 55 бо дек сіу Бех йпіу Тих Авр о Раз Тк зво ТВ їі Бех Бех бай піп Рго 65 70 75 80 сії Азр о БВе Аза ТвЕ Тух Тук Сув 010 біб бек Тух Бех ТВжЖ Ро Бо 85 90 З5
Тк вБе с1іу Ф1іу б1іу Так ув чаї 19 ї16 Був 100 105 5 -2105 7 «2115107 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 7 зАвр гів сій Ме Тих Сів Бет Ро Вех Бех Гей бег йїа бек Чаї 1їуУ 1 5 10 15 дар Акч туаї Тк Т1е Тік був АкЯ діа бек сіп АкчЯ Ії век Ава Тух 20 25 зо їво бек Тер Тух їв біп Буш Рко 1у Т1і5 Азія ВБко був цей без ї1їе 5 | М: 45 :
ТуУук ді Аза Зек бек їй бій бек сіу Уаї ко бах Ах Ра бек Фу 50 55 60 ак сіу Бек с1іу ТВ двр рве Тк без Тв їїе Бех Беж Пем бій Бек 65 то | 78 о біз дв рве Аза ТВх Тух Тук сСув бів бів бах Тух Бех Так РКО Бев 85 зо 95
Ії вне сіу сіу б1уУ Тйк пПув Ууаї біб Те Буз оо їх 2105» 8 «2115107 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 8
Авр їі біп Меї тах сів Бех Бо Бех Бех тей Бек Авіа Бек Маї 1у 3 5 10 15 кар аку Узі Твг о Тїе Твк Сув Акад Аїа бек біп бек ї3іе бех бек Тух
Ка 25 30 ев дво Тжв оТук біп бій був Вко 41іу був Аза РІО Був ем пен Хіє: «5 тТух діа Аіа Бек Бек йез пів Бек б5Біу Чаї вКо бек Ак Ре бек біш 5а 55 60
Бек біу Яек біу ТВк авр Ре Твг пев Тнт Ї16 бек Бек Бей бБіп рко та та во сів двр Бе Аї« Ти: Ту тТук Сув біп біп Бех Тук Бех Тпг оБкго ї16 85 Зо 5
Тв ві пьУу бів 0БУу ТВ Ах пе бБіч ї16е Був 168 305
«2105 9 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 9
Авр тів ем Меб ТИ бій Бех Рко Бек бек еп бек діа дек уаї біу ше В вв 15
Авв вжч Маї ТВх її ТвВх Сув АкФ Аїа Бек бій Жек Ії бек бек Туг 20 25 30 їви дво ТгроТуУух сів бій ув Рсо бі Пцув Аза Рхо Був уаї їжи ї16 35 ай 45 тТук Аіа Аїа Бех бек Пей біп бек б1іу Чаї Рко бек Ак Ріе Вег 01 50 | 5 БО
Зек б3іу Бех с0іу Тих АвроРне Так ви Тв о ї16 Авп бек бей бів вхо 55 70 75 во із Авр о Ре Азїа тТвх Тух Тук Сув бів біп Бек Тук Бек Бек Рко ї1є 85 зо За
ТтТВк вве сіу сів біу Тпг Ах Ббец сФ18 її Був 109 105 «210510 «2115107 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 10
Авв її біз Меї ТВк бів Зек Рко бех Бех без Вех Аіа бех туаі б1у
Н 5 10 15
АвроАхку Уаї Твг ї1е Тв: Сув Аку Аїа Бек біп Бех їі Бех її1е Тук 2 25 30
Без Ав Тр Тук бій сій Пбув вхо б1у пу Аза Рко тТух Бей Пео їТ1е 35 40 15 тТух Аїз Аіїа А1їа бек пез бі) Зех 51 Уві Вжко Бех Ака рРре бех с1у 50 55 650
Зек Зіу Бех сіу Тих Авр Бе ТВг о бем Тв її бБес бек Пей бів Рко 65 79 7 о сі АвроРбе Аза ТІ Тух Тух Сув бів бів бек Тужк Бех Аіїа Рхо ї1е ва 90 95
Так вре бі бів сіу Твх Агя а сії ш116 Був 1600 105 -2105 11 «2115 111 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 11
Фіп бБег Узі Бей тиж бів Рко Рхо Бек Уві йех спіу Аїа Рхез біу біп ї 5 16 15
Аха чаї Так її Бек Сув Тк бі Бек Бек Бек Авв І1еє біу Аіа біу 20 25 30
ТуУук Авр оуаї нів Ткр Тукх біп бій без рко б01у Твх Аза рхо Був їм 35 40 45 їжч їз Туг с1іу Ави Бек Ав Аху Рхо Бех біу Чаї Рко Авр Ак Ре
Ти 55 60
Вех біу Вех Був Бех сіу ТВх Бек Аїа Бек течі Азїа Хе тТвВк бБіу ей 55 70 75 во
Пів Аза біо Авр біо Ата Авр о Тук Тух Сув біп бБег Тухк Авр Бех Бек 85 зо зе їей бак о біу Бек Узі Рбе біу б01у біу Тк Був бец Тпжх Уаї Бей 00 105 110 «2105 12 «2115 111 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «4005 12 біп Беж уві Брец тТпж сіп вКо Бго Бек уаї Бех біу Аїа Рко бі бій 1 5 10 15
Ака маії ТБ ї16е бек Сув Тпк біу бек Бек Зек Авп Т1е біу Аїа бі 20 25 30
Тух Авр уві Нів Ткр Тух сів Сіп бе Рко б1у Твг Аза рхо Пув Сей 35 40 45 бешп ї1іе Бек зі Авп Бек Авп Аха Рко бек біу узі рРго Авр Ако Ре 50 55 50
Бех с5іу Бек Пув Бег сіу Ті Бет Аїа бек Пез Аїа Ії ТВвк біу Гей 65 70 75 Во сій Аіїва спи Авробій Аїа Авр оТух Тук Сув біп Бег Тук Авр Бех Бек 85 чо 95 їви Бек біу Бек Уаї Ре сіу біу біу Трх Був пес ТВвх Уаї Пец 100 105 110 «210513 «2115 111 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «4005 13 іп Зех тТаї бер ТвВЕ бів Рко Рко бек Уаї бек сіу діа рРхо Фіу Фіп 1 5 15 15
Ако чаї ТВ Т3Зіе Бег Сув Тпж біу Бек Бек Бех АБп їіє б5іу Аза Нів тТУук Авр о Ууаі Нік ТІр тус сів сів Чаї Рто 5іу Так Аіа Рко Дуб Бей її їі Тухк бір Авап отТВх Тук Акад Рко Бек 51іу Уа) вхо Авр Ака Ра о 55 50
Зах сіу бах Був Бег біу Типу Бех А183 Бек Пец Аза їіє Тк бі Беи 5 7 75 во бів діа бів Авробів Аза Азр о Тук Тук Сув бів бек Тух Авр Авп о бех 85 Зо 95 їеві бек о біу Уаї Уа1ї РБе бі б5іУу біу ТНК був беч ТнНж Уаії Ббец 100 105 110 20 «2105 14 -2115108
«212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 14 «ій Бех Аза їй ТВ бі: Рхо Аїа Бех уаї Бех біу бек рко біуУу бій ї 5 10 15
Бек їїіє ТВ їі чек Суз ТВх піу ТВх Бек Бек Вер Маї сі біу ТУЄ 20 25 зо жа Тух чаї Зек Ткр Тук бів бів нів Кто біу був діа Рко Був пев 35 а: 45 і
Має гів тус біз Маї Беє Авп Аз Рго Бех біу Уві Бек Авп АкЯ Рпе 5 55 650 дек біу бек їйув баг СОЖМу Аво ТВх Аїа бек Бей Ти ї1Є Бек біу цей 55 то 75 о вів; Аїа бів АБр обу Аїв АвротТухк Тухк сСув бак Бек Тух Тих бас Бег 85 9 Й пи
Зеї Узі Ре біу біу біу Тік Був Беч Тнх Уві Беч І 100 105 «210515 «2115109 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 15 піп ех Аза пес ТвЕ бів РКО Аів Бек чаї бек біу бек Ро бі бій 1 в 16 15
Бек їі Тих Іі Бех Сув тн о сіУ тТВх Бек Бех Аво аз сіу Аку Тук
Ж 5 30
Авт Бек чаї бек ТЕр Тух 13 нів Нів ко зіУу Був Віа хо муз Уаї 35 40 45
Чек їі Тух Бів баї Бех Авв Ак Рко Бек біу уві Бек ТВ Ака рве ча 55 50
Щек сіу бдех ув бах сСіу дво ТВк Аза бек Без ТВ ті Бех п1у Тем 65 70 75 во біп Аза бі: Авробіз Аза Авр о тТук Тут Сув Вех бек Тук ТвВк Бех ех 5 90 ше
Зек уаї Уві РВе біу біу сіу Тих Шув Шев Тв Ууаії Бей 100 105 «210516 2115109 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 16 бій Бех Аза їз Твах сів Кто Аіа бек Уаї Бек біу бек Рко б1у біз 3 5 10 15
Бек її Тв Ї1е Бек Сув Твх біу ТрЕ Бек бек вар Ууаї біуУу бі тТух 29 25 30 лев бек уаї Цех Тер Тух бій сів нів Рхо п01у їув Во вхо ув Гей 35 40 45
Мек їіє тую 01и Ууаї Вег Авап Акад Вго бек зпіу гаї Бех її: Аку Рпе 50 55 60
Яву 01у Бех Ппузв Бек йіу Авп оТвк діа бек без Так Ті бек біу Бей 55 70 5 80 бів Аза 010 Авр сії Азія Авр Тух Ре Сув Бех Бет Тук Твг бек ТВк 85 а а5 бек Меє уаї рпе біу б5іу Бі Твж Пув ви ТВх Уаї Беи 100 105 «210517 2115109 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 17 іп дес Аза їм Твк бів РКО А1а бек Уаї Бех біу Бех Рко бБіУу бів і і 10 15
Бек ї116 Ту ї16 бек Сув Ту біу ТВ Бех Бех Ар узі сїу біу тТух 20 25 за
Аза Бех уаї Бех Тхр Тук пів біп нів Бхо 9іу був рхо хо був ев 35 за 45
Меї тів ТУук біс Узі бек Аз дку рко бек біу Уаї Бех Ге Ак вва 50 55 60 дек сіу бек Пув Бек біу Анп Таж Аза бек Бей ТВг їі Бек о біу ем 55 то 75 во іа вів сій йзр сій Аза Авр о тТух Ре Сув Бех бек Тух ТВіж ех ТЕ 85 50 95
Бек Меї Уаії Ре бі біу біу ТВвх Ппув без Тр оУаї Бей 100 105 ! й «2105 18 2115109 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 18 біп бек Аза бе Так б)іп Рко Віа Бех Чаї бек б1у бег Рко біу біп 3 5 10 15 бек І1їе Тих І1є Бех Сув Ту піу Ту Бех Бех Азр Уаї біу біу Тухг 79 25 30
Анп Бек Чаї бек ТЕр Тух біп біз нів рко б3іу Був рхо рРко Був їжи 35 40 45 .
Мебє Іі Тук сіб Уаії Бек Ав Ага Рко Бех біу Чаї Бех Анп АкЯ РВе
Зо 55 бо
Бек 01у бек Пув бек біу Ап ТВк Аїа баг без Тпх тіе Бех «Ф1у Бей 65 70 75 во бів Аза біз Авр біб Аза Авр Тук рРВе Сув бех бек Тук Тих бек Трг 85 зо з5 5-х Меї уаі Рпе 51у б51у біу ТК Був ем Аіїа Хаї Бей 109 195 «2105 19 2115109
«212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 19 сіп Бек А1із пев тах бів Рго діа Бех чаї Бек біу Бек Рко біу бів 1 5 10 15 бек Іі ТвЕ ї1е Бек Сув тТвжх сіу ТВ Бек бек бер Чаї біу біу тТук 20 25 30
Авп Бех уаї век Тир Тух бів біз Тух Кко бБіу Був Рхо Рхо Був Ге 35 40 45 уз Тіз Тух спіо Узі Бех Авп Ах Ро бех сіу Уаії Бех Або Ак Ре за За й Бо
Бек бЗіу Бек Був Бек с1іу Авп Тих Аза Бех їжи Твх Її Бек сіу Гі
Ба 70 75 во сів Аза пі) Авр обі Аїз Авр о Тук РБе Сув Бек Бех Тух Тих Бек ТЕ 85 за 95
Зек Мек Узі РБпе бі біу сіу Твх Був без Тв Уаї ем 100 105 «2105» 20 2115109 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 20 сів Бех дія Бей Тв бій РКО Аїа Бех Уді Бех Біу Бек РкКо бі 010
І в 10 15 дес тіє Ттнж її Вех Сух ТВ Ту тах Бех Бех Авр уаї сіу біу тТук 20 25 30 ав Бех уві Бех Ткр тТУук ів бів ів Рко бБіу був ВБко РКО був їви 35 40 45
Маї Ті Тух сіб; баї бек двп Ага ко бек біуУу Уа) йек Дав Ака Ре
Зо 55 бо
Зек біу бек Муз Бек б5іу Авп Тих Аза Бех цез ТАК їІ1е беж б1у Ім 85 70 75 80 зЗіп діа сії Авр обі Аза Авр о тТук Ре Сув беїг Бех Тух Так Бек ТЬкг 8 зо 57795 йеж Меб уаї РБе сіу б31іу сіу тих Був їжі ТнІ Уаї рей . 100 135 «2105 21 2115109 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 21 біб Бех Аіа рей Тк 033 Рхо Аза бек Маії бек п0іу бек РКО 01іу бій 1 5 10 15 как Ті Тк їі бек Суз Тпх 01у Тих Бех Бех Авр Чаї с1іу сіу тУхг 20 25 за
Авподек уві вах тер тТух сів сів Нів Рго біу Був Вго Рго Був ви 35 0 45
Мет Ііє Тух бій Уаї Бех Авп Ак4 Кто Бек 01у Уаі беж Ав АкаЯа Ре 50 55 Бо
Бек зіу Чек муз Зек бі Авп о Тит Аза бек Бей Тк ї1іє Бек 51ї1у Гей 65 7 15 во бів Аза біз Авр осі Аія Аврв оТух Рве Сув Беж бек Ту Твх бек ТЕ 85 зо 95
Бек Ме: уаї Ре біу бі пбіу ТВх цу пев Тк о туаї дей 100 105 «2105 22 2115109 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 22 сів бек Аїа Пе) ТВЕ бів вКо Аза бек Уаї бек 03іу Бех ро бі» бій 1 5 10 15 ек їі Тих їі бек сув ТНх со1у ТВ Авв о Бег Авр о чуаї бі іх тує
КІ й 30
Авп бек уаї бек ТЕрв Тухк бів бій Нів го сіуУу Муз РКО Рхо Був їй
З 40 45
Має Іфе ТтТук сів Узі Бек Авп АсЯ Ро Бех с1у їїе Бек Ав Ака Ре 50 55 БО бек 5іу Бех Був Беж б03іу Ашо ТИХ о Аїа Бек їжа Тк ї1і6е Бек осіу бйей 6 70 75 во сів Аза сі) вар Бі Аза дер Тук РБе Сув Зек бек Тук ТпЕ бек ТВ ! | 85 90 95 ек Меє уві Бе біу сіу сіу тиж Був Без Тйх Уві Бех і 105 «2105 23 2115109 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 23 сів ех йїв їн ТВх бів» Рго Аза Зек Чаї Зек біуУу Зек ко щіуУ іп 1 5 то 15
Бех І16 твк ї11іе Бех Сув ТВх біу тТвк Бех Бах Адвр о уаї Сіу с1у Туг 29. 25 За
Авп о Бас уві Бек Тер Тух сів бів о Нів Бго БіУ Був Аз Во Був їни 35 40 45
Меє їі тує сій Уа) Бех Ава Ак Рто бЗех біу Узі Чек Аво йка вве
За 55 БО
Бек БІ1у Бек був бек біу Ави Твж Аза бех Без Твх їХіє бек Бі Бей 65 то 75 ши 8о -ів діа бій Авр о біз лі Авр тує Тух Сув Ав Бехг Тук Тк обех ТЕ ве з 95 бек Мет Уві Рне сіу (1і1у сіу Тк цу пе) ТВк уві ївей 160 105 : : «2105» 24
«212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 24
Зів Бех Аїа це» Тву біп Рко Аіа бек Уаї бБег біу Бех Руо піу бій
І: 5 10 15
Бек ї1іє Ту її Зак Суб ТвВк біу ТВх бек бек Авротаї бі діа тТух 20 25 30 лав обБек чаї бек Ткр Тук бів бБіп Нів Бко б01іу Був Аїа Рко Був Ак 35 40 : 45
Меї Ііе Тух Біб Уві Кекс Авп Аку Рео вах со1у уУаї вве депо оАкУу Ре 5О 55 60 бБег біу Бех Пув бек Б5Біу Аква ТВк Аїа бек Бей таж г3іе бек бі ей
Ех 7 78 ва сіб віза бій Авросіб Азія Ар тус Тух Сув Бег Бех Тус ТВх Бек ТВЖ 85 ря 95 деп Мек чаї рне бі сі Бі ТЕЖ пу бе) ТВЕ Уві Бей 100 105 «2105 25 «2115 108 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «4005 25 щіп бек дій пес Тих бій вКкОо Аза Бек чні Бех бі Бех Ркго шіу іх і В 10 15
Бек її: ТВК І16 бек Сув Тих сіу ТВ бек Бех Авр узі с1у сіу тТук пи НН | Зо
Ази Тук уаю Бек Ткр ТУК біп біп Нів ко біу Був Азія Рко Був Бей 35 | 48 45
Ммеї Тіє Тух бін Уві Вес Ана Ака Бо Бек сіу уві Бек Ав Ах Рапв
СО 55 50
Зах сіу бек муз бек біу Авп Так Атїа бЗек пе Твж Ті Бех біу пей 65 70 75 во бів віз 10 дво біб АзяЯ Авр о тТуг Ту Сув Бек Бек Тук Тих Бех Бек 85 | о 95
Бет Уаі ве пі Біу біу Тит Був ви Тнх Уві Ти 100 105 «2105» 26 2115109 20 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 26 сій Бех Віа рем Твк бів го Аза йех Уаї Бех сіу ек РКО біу бій 3 5 16 15 йек ТБе Тож їі бек Су Так сіу ТНХ Бех Бех Авр Уаї 0іу піу Тух 29 25 30 вва бек Уаї Бек Тер Тух біп біп Ві Ро 01іу пуб діа РКО Був беч 35 40 «5
Меж І Тук бі уаї Тс двлоАку Рко Бех с1іу Уаії бех АвпоАго Ре 50 55 во бек біу бек Був бек біу Авип ТИЖ Аза бек Бей Ток Ї16 беж б01їу Бей 55 70 75 во сій Аза с1з Ав ос Аза АвротТухк Тух Сув двп о бек Тук Твк Бех ТЕ 55 90 95
Бек Меї Уаї Ре 6б1у сіу пі тах Був без тах Уві ех 100 105. «2105 27 -2115108 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 27
Фіп Бех Аїд Ге Тпж бій Рхо Аза бек чаї Бек біу Бек рхо біу віп 1 в 10 15 пеж Ії ТВх Тїє бек Сузв Трк біу Тпх бетх Бах Авр чаї с1у Бек тух 20 25 30
Авп оБеюв узі Бек Тер Тух сів піп Нів Рко біу був Аіа рРко був ей 35 4 415
Меї їІіїє Тух сій сту Бек Був Аху Рко бек с1у Уаї Бех Ава Ака Ре 50 55 БО
КЖек піу бек Був бек 01у Авп тних Аза бек ем ТНК Її Бех бі Пе 65 70 72 50 бій Азія біз Авробіз Аїа дер оТук Тук Субв Суз Бек Тук Аїіа біу Бек 85 зо 95
Бек Твк Рбе біу біу біу Твх був Бей ТтТвжх Уаії Пец 100 105 «2105» 28 «2115 110 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 28 їв Бек Аїа Ме: ТпжЖ бів Ргбо Аза Бех Уаї бек б1іу Бек Рко б5іу Бій 1 5 10 15
Бер їз1е ТВх їіе Бек Суз Три б3іу ТВх Бех бек Авр уа1і Ф1у Ави тух 70 25 30
Ап обец уаї бек Тер тТук біп біп Туг Бек с17у Був Аїа ро Був Г 35 40 45
Ммек І1іе Тут бій Уаі Бех Пує Ак Рко бех б1іу Узі Бех Ап Акуд рве 50 55 бо
Бех біу бек був бек сіуУу АДвп Тк Аза бек пев Тйх тТіє Бек б1у Бей 8 70 75 80 сія діа біз двр осіб Аза Авр о Тух Тук Сув Сув Бек Тук Аіа бі Бех 85 зо 95
Беж ТВ и уві рве сіу біу Біу ТВх Був рей Тк Уаї ви 100 105 110 «2105» 29 -2115108 «212» Білок «213» Ното заріеп5
«400» 29 біб Бек Уаі ви ТБу бів Бхо Рхго бек діа бек п1у Тк Во бі бів 1 5 10 15 ака Уаї Так ті Бек Сув Бех с1у Бек Бег Бетг Авп Ії Сіу Бек Ава 20 25 30
ТтТнЖ Уаії Авп о Тхр о Тух бів бій фей Рхо б1іу ТВк Аїа Бко пув веб Бво 35 40 45 їі тук Бек Авп о Авпобів Ак Ро бек біу баї Вго двр дк ВВе бек 50 55 БО
СБУ Бет був бек сіу ТВк Зак діа Бек Бей Аза іє Бек 51уУ ГПеч бів 55 70 75. во бЗех 010 Авр Бій Аза Авр о Тук Тух Сув А1з Аїа Тур Авр Авр Бех Бай 85 | ва 95
Ави Уві Ре біу біу біу три цу пе) тТЬК Ууаї бе . 18 105 . -2105» 30 2115109 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 30 піп Бех баї ме) ТВх біз РКО ро Бек Аза Бек 5Б1у Тв рко бі бів 1 В 19 15
Ах уаї тп їіе Бех Сув бетх 01у Бех Бек Бех Авп о їі 01у Бек Був 29 25 30 тн Уві Ази Тр оТую сі» сів Уа) Рго а1у ТвВк Аїа Рко був їви во 35 40 45 ;
Іі Тух Аку Аві Двопобів Згу Рго цес с1іу Уаіїі Рго Авр Ак ВБе Бех 50 55 во
Ф5іу Вег рув дет сіу ТижЖ бек діа Вег бо дія Ті ехо осіу Бей с1вй я то 75 о ййвЕ піз Азр обі) Аїа зво о тТук Тухк був діа Аіа Ткр Авр Авр о бек гей 85 90 95 дав Ткв Ууді Бе сіу віу сіу Тих Був рев Твж Уві бе цю 105 -2105 31 2115109 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 31 піз йеж уві еп Тнх бій Рез Ро Бех Аїа Бек 0іУ Бго Бко біУ БІ 1 5 10 15 вхи Чаї Тв ті6 бек Сув Бек біу бек Бек бек Ал їі сіу бек два 20 25 30 тТвпх о Уаї Ави ТжкротУє бів ія Без РКО бБ1іУ ТВЕ діа Бкго був Без Бех
Ті Тує Беж Ап Ави Аг Ага Ро Бех сіу Уаї Рго Авр о Аку Ре Бек о сіу Бег ру Бег бї1у Твж Бек Аза бах ївши Аіа ї1ісє бек сіу Мей бів «5 70 75 50
Вех сій Авр біб Аїа Авр отук тук Сув діа йіа ТЕр Ввр Авр Бек Без 5 50 5
Аква о Тхр уаії ре сіу сі сіу ТНЕ Був Пез Ту Уаї бецч 100 195
«2105 32 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 32 стіп Бех Уі їй ТВ сів РКО Рхо бек діа бек Ч41у ТНК Бго Фіу Чіп 1 КІ 18 ша ко уві Тнх їіБ Бех Су бек біу Зах Вак бак двп тів сіу вех Ав 0 25 Те) тТвЕ чаї Ав Тер Тує бін бін реч вро бі тв Афа РКО Був пев пев
ЗВ ай | 45 їіз Тух Беї Авп Авп біо Ак Рко бак бсіу баї рго Авр Ака Ре бег 50 55 68 сіу Бек цу Бех б1іу Тну Бевг Аза Бек їм Віа їіє Зег біу пеп бів еВ 7 75 о ек сій Авр осів Аа Ав о Тух Тук Суз Аіа Узі Ткр двр Ар Бех пев 85 | за а
Ави бі Тжвр Уаї Бе біу біу с0їуУ Твжх Був бей Таж мМаії їни 109 105 110 -2105» 33 «2115109 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 33 ів Бек Уа) без Те бій Бко вто бек Аза бах піу Та Кто сі пів 1 5 10 15 дкз Ууаі ТИС Ії Бех Сув Бек біу Бек Бек Бек Аев о ї1є б1у бек Був зо
ТвВж Уві Аз» отТжр тую бтТо біп Ре Рто сіу Тне дія Бо був Бей бе ь зе 45.
Те Тує Бек Авп о Авп о АкЧ АкЯ Ркхо Бек біу Чаї Рго Авр о Аку РБе Бех 5 а 60. бі ех Був йеїх сіу ТВжЖ бек діа бех пев Аза Ме Бех біу Беш 518 65 70 ТУ во чек біз дво біс Аза двр тТужх Тух Сув Аза Аза Тгр Авр о Авр о Бех пей 85 0 55 двпоткр уві Ре слу Аза сіу ТВх Був рез ТВх уаї Бей 100 105 20 «210» 34 «2115110 «212» Білок «213» Ното заріеп5 25 «400» 34 сій Зах уві бе) Тви бів Рхо Ро Бех уві Зек Аіа Віа ро 0Іу віп 1 5 19 15 був уаї ТВх ї1е бек Сув Бек біу Бех Бех Бех Авп Тіз б1у Авп Ав 29 25 30 тує уаї Бех Ткр о тТук бів бів цей Рко БіУ ТВх Аза Рко Був рей пай 49 ав
Їїе Тук АБр вп о Авп о був АкЧ рХо Бех с1у т11є Бго Ав» Ак Рпе бех 50 55 ва сіу бек був бек біу Тих бек Аїа Тьж Бем б1у їїє Тих 01іу Бей Фів 55 то 75 80 тих сіу дв; сій Аіа Авр о Тук Тук Сув бі тТЬжЖ тТЕр Ав; бек Зежх Бе 55 50 95
Бех Аїа Тух туаї вВпе ЗіУ Так сіу твх Був Уа Твх Узі цей 100 105 119 «2105 35 «2115 110 5 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 35 сіє Бех Уві Бей ТАК сій Рко Ро бек туаї Зех діа А1їя Рго сФіу сій 1 5 10 15 їув Та тах бів бек Сув чек бру Бек Бек Бех Авп ї1є 01у Авп Ав 20 25 30 тре уаї Бех Ткр Тук бій біп Бе Рро біу Ту Аїа Бго Був Бей бе
З5 «й 45 їіє Тух Авр оТух Аво Пув Ак РКО ек бі тіе Ркго Авр Ах рве Бетг 50 55 о с ву Бех оцув Бек біу Тнк Бег Аїа ТНК о Геч біу ї1іе Тв бБіу цей 018 65 7 75 що тиж біу Аврооів Аза АвроТух Тук Сув сіу ТпЕ Тхр о АБр Бех Бех бецй 85 зо 95
Бек Аіа Тух чаї ве 01 Тк 8іУу Тк Ака Маї Тнж Уаії бе 360 105 110 -2105» 36 «2115 110 «212» Білок «213» Ното зарієпо «400» 36 бів Бех Ууді би ТНх сій во Ро Бех Уві бах Аїа Аїз Рко ту сій 1 5 10 15 їув уві ТВ їі Бек Сув Бек 5іу Бек Бек Бек Ав Тіє 51у Авй Ава о 25 30
ТтТве узі Бек Ткр Тек бій біб ей Ро біу ТВЖ Аза во Був Бем їви 35 40 45 їіе Тух Авр Тух Авп Був Ах Ро Бех сі їі Ркго Авр АкЯ РБе Бех 0 55 бо сіУу Бе Був Бек 0іу Тк Бек Аїа ТтВх бей сіу т1іе Тк біУ Бей біп 55 70 75 80 тик сіу Ав 010 А1із йвр тує Тук Сув С1у Тв Ттр Авр Бек Бек Пец вх зй 95 век сі тТух У«і Ве бі ТВвх Сі ТВх Ак уаї Тв Уві пев 100 105 110 -2105 37 «2115 110
«212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 37
Піп бек Уві їви ТвВх Сів Рго Роб Бек Маї Бек йїа Аіа Рко Бім бів 3 а 10 15
Ту уаї ТВх ї1е беж сСув бек сіу Яек Бех чек дп тів Сіу Авп дви 2 23 30 впе уві Бех Ткр Тук бів бій впе Рко біу ТП Віа Ро Був Ббем пек
Ка а 45 тіс Тух АвроТух Ана уз Агу Бк бЗех сіу їі Рко вро Ак Рве Бек 50 а во 2іу бек обу Бек бБіу тТВху Зах Аїа Тв без біт її тВх сіу мез бів 55 То 75 во
ТВх Бі Авросію діа дер о тТуУук Туж Сув 01у ТНж ТтТКкр о Авр о бех беж Бей па зо 85 ек щеах тує УВІ впж сіт ТЕЖ сіУ ТВ ойка Узі ТВ: Узі Бей
МЕН 105 о -2105» 38 «2115 110 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 38 сіп Бех уаї Бей ТЕ бів вхо РКО Бех Уаї Бек Аіїа діа РКО біу віп ї 5 10 ІВ ух Уаї Так Ії бек Суз Бек Сіу Зет беж бах Авпоїтіж С1уУ Ав Ави вве Уві йек Тр тТух зів дій Без ро біу тВх Аза рко Був пем Без 80 415
Її Тух АвротТук Авв Був Ака БО Бек з5іу ї1іе Ехо Авр и Ако вне Важ 5 6о0 аіу Бех Був Бе бі Тнх Бех Аза ТВХ їз бі їі ТВх Бу без ів ва 78 75 о
Тв іУ Авросіо Аїа АвроТук тТук Суз С1у ТвВг ТІр двр ВЗех Бех їв зо 95 бек зіу Тук уві Ве б5іу Твж б1іу Ти ага Уаі тТвж Уді їни 100 105 110 2105» 39 «2115 110 20 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 39 сій Бехс Маї їн Тк бів реко РКО ТвВу Чаї Бех діа Віа ро БіУ віп 1 5 16 15
Му уаї Твх тів ех Сув ек сіу Бех Бек Бег Авп ї1їє б1У Авп Ав 20 2. 30
ВБе узі бек тТжр Теж піп бій Без Его сіу Тах Аїа ко Був Гей Пей а5 40 45 їіє Тух Аврв Тук Ав їв Ак рко Бех біу їїе ко двр ака вва Вехтх ва 5 сіу Бех Бу бек о піу тТВкК Зах Аїа Твк о бес б1іу Т1іє ТЕ бБіу Без бій 55 то 175 80 тв 51іу Авр біб Аза АвротТук Тух Сув с1у Таж Тгр о Авр о бак Бех Пец 85 Зо ши
Бех сіу тТух УвЕ рн сіуУ Жвх Сі ТВ Ах уаї ТвВк Уаї дей що 105 | 1 «2105» 40 «2115 110 5 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 40 бів Бек мазі Бей тк о біп Бко рго Бех Уа1ї Бех Аза Аза Ркго с1у біп ї З 10 15
Був Уаі Тнж тТіє Беж Су Беж Сіу Бех Бех Бех Авап їі6 піу Ана Авп 20 25 30
Внпе уві Бебг Тер оТук сіб сів Ббеч Рхо біу ТЕ Азїа Ркб був Бей їпец 35 40 45
Ії Тух Азр Бех Авп їув Аху Бко Бек біу їі Рко Авр Ах Ре беї 5 55 во біу Бек Був бек піу тах бек Аіїа ТВ Пеб Авр тів Тахо біу ге) бів 65 70 75 а
Тих біу Авр біз Аза Авр оТужх ТутК Сув біу Твх Ткр Авр бек Яех ей
ВА 0 95 ваг Аіїа Тух чаї Ре спіу Так біу Тах був уаї Тнк Уві Пец 100 105 118 «2105» 41 «2115 110 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 41 сів век уаї їз Тк бів ко ко бек Чаї Бех Аїв Аіїа Рко 5іу бів 1 В 10 15
Буз уаії Трх їТ1іе Бек Сув йех сіу Ббег Бех Бек Ава їі псіу Авп Авп
Тук чаї Бех ТЕр ТУукК бів бів пей Бко біУу ТВх діа Рхо Був рей Бей
Ті Тух Авр оАбо Ав бує Дку РКО бек спіу їЇ1е ро Авр Ах Ре Бех зо 5 бо
Зіт Бех Був бег сіу Тих Бех Аїа Тк їви сіу Тіе Тк біу пев бій 65 то 175 ва тТвк 5іу Авр о 01 Аїа Аз; Тук Тут Сув біу Тк Ттр Авр бех Бех Ббеа 85 з0 95 пек віз уві уаї Ре сі сіу сіу ТВг Був без ТЕ Маї Без 100 195 110 20 «2105» 42 «2115 110
«212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 42 зів век Мі Гей Тпжх біз Рго Рто Бек Чаї бек А1їа Азїа Рко біу біп 1 5 10 15
Був таї ТВЕ Ті бек Суз бег біу Зеїх деп беж дзп т1е С1у Авлп Авап 20 25 30 тух чаї Бек Ткр Тук бів бів Без Рко біу Тпх Аза Бка ув Бей Пец 35 40 45
Іів Тух Авр Ап Ава Був Ага ро Бек б1іу їіє Рко Авр Ак Рбе бек
Зо Б 0
Сб1у Бех Ачп бетх біу ТВх бек діа ТЕ Бе сіу ті Так біу бей біп я 70 75 во
Твх піу Авр біз Аїа Авр Тук тТук Суз біу Так Тжр Авр Бек вВех Бей 85 90 95
Бех Аза Уаї уаіїі рне сіу сіу с1і1у Тк Був бе) ТВ Уаї Бей 190 105 110 «2105 43 «2115107 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 43
Кек Тух ім Без ТВЕ біп Бго Бго Бех Уаї Бек Чаї Бек рРхо сіу біп 1 В 10 15
Тв Азії Бек ї1е Тв Сук Вех с1у Авропув їв біУу Авром»уз Тук діа 20 25 30
Сув Тхв Тех біп бів буз Ро біу сів бек Рко Узі Пец уаї ТІТе Тук 35 40 45 спіп о Авробех був Аху Рго бек біу ІТ Рго бі Агу РБе бег сіу бех 50 5 бо
Авп оЗек біу АБп ТВх Аза ТЕ Без Твк ї16 бек біу Тк бів зіва Мек 655 то 75 80
Авр січ діа Авр отТух Тух Су бів Аїа Тер Авр Бек Бек тв діа Уаї 85 зо - 5 уаї вне біу біу піу ТБх Пув Пец ТвкоУуаї Бе 100 105 «210» 44 «2115106 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 44
Бет Туг Сб їі ТВвх бів Рго Бгто Бек Узі Бек Уаі Бек рго п1у бій 1 а 10 15
ТвВк ліз Ака їіе тк Сув Бех с1у Авр був без сіу Аєр Гуз Тухк діа 20 25 30
Сув тер Тух бів бій Ппув Рхо піу біз бек РКО Уаіїі їєх Уаї Тіє Тук 35 40 45 бів зявп ТВвх пПув Ткровко без сіу Т16е Рхо біб Ах ре бег сі Бек 50 55 ' Ба
Був Бех Ф1іу Авп о Тнх Чаї ТВх Пец ТвВх Хіе бек біу Твк біп А1з Меє 65 70 75 во
Анрв озіз Аза азр тТухк Тух Суз Сів А1з Ткр Авр Бех Бек Трх Чаї Маї 85 90 95 вве сіу бі 515 Тв Бу бем тах Уві Бец 100 105 «2105» 45 «2115 116 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 45 сіп БРуо уаї без ТЕ бів ко рго бех діа бех діа Бах їеи б1у Ма 1 а 10 15
Бек узі Тих беп Твг оСув Тв Без бБес Бех біу Тух Бех Авп о Тух Був 20 25 30
Уаї вро Тжр о Тух віп пій Ага Рго п1у Був сіу Рхо Ахку Ре Уа1ї Меє 35 «й 45 аку уаї бі ТтВк бі бБіу ї1їе Уаї біу бек уз біу Авр сіу Т1в0 Ркго 50 55 бо дар АкчЧ БКВпе бех Уві ев с1у Бек бБіу Бео дев Ака Тук Бей таж їт1е 55 та | 75 о
Був Ави їі біп біц біз Авросія Бех Авр отТух Нівз Сув сіу Аза Авр 85 90 95
Нівз сіу Бек сіу бек Авп Рре уУаі Уаї 7аї РБе бі сіу б0іу тах Був 100 105 110 їез Ттвх Уві Бей 115 «2105» 46 «2115 116 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 46 сій рго Уаї Гем тих біп Ро Без Ре Аза Бех Аза Бех Тен б1у Аїа
1 я 10 15
Беж Уві Тис їжи ТАх Су Таж Пез бех Чех сіу Тух Бек Бех Тук сіц 20 25 30
Чаї взр Ткр Тук біз біб Ака Рго біу Був с0іу Ро АхЯ Ре чаї Мех 35 40 ' 45
Ака Уві Ар Твх сіу сі їз Уаї б1іу Бек Ппуз сіу сі: сіу їі рхо
Зо ва бо
Ар Аку Рпе Бех Ууаі їжи 41іу Бех 01у їв Ава дгу тТух ей ТвВк ї1в 65 70 75 во
Був Авп о ЇТіє сів бі) біз Авр бій бек Авр Тук Ні Сув б1Уу Аза Авро 85 80 95
Ні сту бек біу Тс Авп рРпе Ма1ї Уаї Маії Ре сіу піу бБіу тн Буз 109 105 119
Бей Тк Ууаї Пе; 115 «2105 47 «2115 114 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 47 сів Уаї бів во уаї бів Чех 01у Аіа біз Ув3)і Був був Рко со1у діа і 5 10 15 йЗех Маї Гуз Уа) бет Сув МБув Аїв Бех біу Тух ТВх ве ТВу Вех Тук 20 25 30 піу іє Бех Ткр уУаї Аку сів Аїа Рхо біу біп бі Бевз біз Ткр Меї 35 40 45 пі Ткр о т1іє чех Аза Тух Авп піу АДвп о тТвах Авп оТух Аза бій був їі 50 35 650 сіп б1іу Аг Уаї Тк Мес Твх ТВ Авр ТВх Бек ТВк Бек ТВвк Аїа Тук 65 70 75 8о
Меї біз рез Ак бек ви Аку Бек вдвр о Авр о ТЬх Аза уаї Тук Тук Сув 55 0 25
Віа Аху Тух біу Меї Авр уаї Ткр біу біп сіу Тих тних Узі твх Уаї 100 195 110
Бех дек «2105» 48 «2115115 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 48 біб ї1і6 біп Бей Уві Зі Бек бі Аїв біз Маі Пув Пув рРхо б1іу іа
І 5 10 15
Бех чаї Мубв уаі бек Суя Був Аза бек б1іу Тук Рко Бей Ту бек Тук
Єіу їі бек Тер узі Ак бій Ата Рхо біу бів 517 Бей 010 Тр Меє «й біу тТгр їТіє Бех Аіа Тух Авп сіу АвпоТвах Авп о тТуг Аїа бів Був уаії ко 55 50 сів сіу Бех уаї ТВх Мек тВх ТВ Авр Тих бек ТВх Зех Тавх уаї Тук 70 35 що мес бій Бей Аку бек бе) аку бак Авр о вБр тах А1іа Уаіїі Тук Тук сув 85 90 85 іа дк піу Ту б1у Меє Авр уаї Ттр біу біп біу Тнжх Тв уаї тТву 100 105 110 уві Бах Бек 115
«2105» 49 «212» Білок «213» Ното зарієпо «400» 49 сій хай сів Се) уві бів» Бех біу Аїа бів Уаіїі Був ув Бко біу Аїа 4 5 10 15
Бек Уві Був Уаї Бек Сув Був Аз Бех Фіу Тух Твх Пец ТВ БЕК Тух й 25 З с1іу ї16 Бек Тер аі Акз віп Аза рхо оіу бів б1іу Бей бій Тр Меє 35 40 45 оїіу тв чаї Бех Ре Тух Ава 01уУ вав» ТВ дзо Ту Аза бій Був ем о 55 що
Біп Ф1у дкоа сіу тах мес Те ТВу двр о руо Бах тТву Бех тТнх Аза тух. я та 75 що
Ме біз рен Ака4 бек без Ако бек Ар Авр Тих Аів Маї Тук Тук сСув ва за 55 дія Ага с1іу тус спіу Меб дер оуаі Тсробіж біб біу Твк Твх Ууаї Тне 100 185 по уві Бех Бек л7ьь 2105 50 «2115115 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 50 ій Уаї бів без Ууаї біп бек біу Аїа бі Уаі Був Був Ро біу Ата ї в 10 15
Бек уяі Був уві бек Суз пуз Аіа Бех піу Тук Тих пец ТВ бек Тут
Ки 25 30 піу їле Бех Ткр Узі Ака бів Ата рхо пі піп сіу Без бів тТкр Ме 35 40 45 сіу Тхр Уві Бех РОє ТУух Аа пі Ап отв два Тук діа бів Пув пен 50 55 5о бів Біу Акоа З3іу ТвВх Меб Тржх ТВЕ Авр рхо Бех Тнжх Бех Твих Атїа тук 53 70 75 Що
Мекє сів Пео Ага бБег Ббеч Ага Бет Авр Авр ТК вів Чаї Тух Тух сув 8 96 95 іа Аха Ф1у Тук сіу Меї Авр о уаії Тер о сіу бів біу Тв Тв узі Тве 195 105 110
Чаї Бех Бех 115 -2105 51 «2115115 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 51
Зіб таї бів беб уз) бів Бек біу ді біз Уві Був Був Бо Бі Аза 1 5 10 15
Щек уч«і був уві бек Сув Був Аз бех біу Тух ТБЕ їі Так бек тТук 30 5 30 оіу тів бек Тхр Чаї йку сів діа Бо Біу бів 01іу Бей сій Ткр Неї 0 5 піу ТЕв тів бак вВе ту два сФі1у два ТВх дез Тух Аза бів Був чаї 0 55 60 бій сіу Ак Уа) ТВ Меб ТвВкЕ Твг о Авр о ТвВг обес Тс Бех Тв оУаї Тух 65 та 75 80
Меєб біс ем Ахо Бех їжи Аку Бех Авр Авр о ТвВЕ Аза паї Тух Тук Сув 85 зо 95
Аіз Ахз біу Тук біу Меї Авр уаї Ткр біу біп сіу Ттвг Твк Ууаї Те 100 105 це тУаї Чек чек 115 «2105 52 5 «2115115 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 52 сів уві сів їй Уаї пів бек біу Аза бій Уаї був Ака вхо бБіу діа 1 5 10 15
Яех таї ув Уаї Бек Суз ув Аіїа бек п1у Тухк ТВ Бей ТК Бек Тук 29 25 зо сі Т1е Бек Ткр Маї Аказ Зіп Аія Ркго біу біз біу Пец сій Тер Меї 35 40 45 біу Тв їі Бех Уаії Туг Ав» біу Ав о ТЬх Авп о тТук Аїа бів був Уаії 50 55 6о зів бі вка чаї ТВх Меє Три торт Авр тТвВх Бех ТаЇ Бех Трах Маї Тух 65 70 75 | с В8й
Меб сію еп Акоу Бек Бе Бек Бек Ар Авр Тс Аїа Ууаї Туюк тТук сСув 85 90 55 йіа вха сі Тук білу Меб Авр о узі ТЕр о сіу біп діу тТвх Тв Ууаї Тве 169 105 110 тУуаї Бех бег 115 -2105 53 «2115115 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 53 бів їіє Біб ви аз біз бек сі віз бій Узі Був був Рхо О1у Аза
І 5 10 13
Бех узі мМув уаї Бек Сув був Аза Бек зіу Тук тах Бе Тих беж тус 2 25 30 біу їіє Бех Тв Уві Аху бів діа Ро аіу бів біу Беб бій Тер Меї 35 40 45 біу Тхвр їі Бех вве Тух Ав біу Два тТВк Аза Тук Аза біп Був Уді 55 50 ців пі Ако тУаї ТВЖ Мебє ТВЖХ Тих Авр о Твк Бех Тну Бех ТВж уві Тук
У та 75 80
Меб 2-4 їеи Ака бек Бей Ак ех Авр о Авр отих Аза Уві Тук вне сСув
І 0 95 піз Ак сіу Тухк О3Ху Мех Авр Уві Тер 5іх біз біу тТвж тТвх Уві ТВ 100 105 І ме чаї бек Бек 15 «2105» 54 «2115115 5 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 54
Зіб Ма) бій йей Уді бій Бех біу Аї8а піц Уаії цуз пу Рхго сіу діз 1 5 10 15.
Беж їж Був Уаї Бек Сув ГПув Аїа Бек су Тук бек Пе) Трек Бек Тух 20 25 Зо біу Іїє Бек Ттр Узі Аго піп А1а Рго біу сіп біу Без бій Тхр Меє 35 40 45 сіу Ткр ї1е Бек Аїа Тук Авп о біу Авп ТБх Авп о Тує Аза біп Був Уаї 50 55 60 сів с0)у Аг Уаї Тв Мех Тну Тв АвротТвВх Бех ТВх Бек ТвВк Чаї Тук 55 79 75 о
Меї бі Чаї АхЯ Бех Пец Ак Зек Авр Авр Тих Аза Ууаї Тух Тук сСув 85 90 95 віз АкчЧ сіу Тук біу Меї Авр Уаї Тер біу біп 0б1іу ТВх Тк уа)ї ТвВкЕ 100 105 116
Уві Беж Берг 115 2105 55 «2115115 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 55 пів узі бів пе узі біо бек біу Аза біз уві хв Був Рко б1іу Аїа 1 5 10 15
Бех уві Був уві Бех Сув Був Аїа бек біу Тук Рко цео ТВх бек Тук 20 25 30 сіу ї1їе Щек Ткр Уві Ака бій діа рРхо бі біп б1у Бей сій Ткр Меї 35 40 45 сіу Ткр її Бех Аза Тух Авп сіу Аво о Тк Аво Тух АтТа 61 пу Уаї 50 55 во пів біу Ак Уаї Твк Меб Ти ТВх Азр ТВж бек ТЕ Бек ТНК Маії Туг 85 70 75 ва
Меї біз Бей Ак Бех Гец Аг Бех Авр Ав ТВс Аза туаї Тук Тук сСув
З 90 95
Аїа Аку біу Тук бБіу Меї Авр Уаії Ткр біу біп біу Твх Твх Ма1і тн 100 105 110 таїі Бек бек 115 -2105 56 «2115115 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 56 діп Узі біб бе Уві біп Бех 017 Аїа біз чаї Був Був Рко біу Азів і В 10 15
Бек уві Був Уві Бес Су Пув Аза Бек сіу Тук Аіїз її ТВк бек Тук 2 25 30 біу їі Бех Ткхр таї Аха бів Аза хо біу біп біу Бей сій Тер Меїх 35 40 45 сСіу Ткр ї16є бек Аза Тук Ав С1у АБа Таж Авп о Тук Аїа біп був уві 59 55 50 піп бі Ак Уа) ТвЕ Мес Тих ТВх Авр ТВХ Бек Ту Бех ТВх чаї Тук 65 та 75 80
Мек біз її: Ак век ви Ак Бах Авр АвроТВк А1а Уві Тук Тук Сув 55 90 25 віз аку біу Тух біу Меї дар Уаї Ткр біу бів біу Тк Тк Чаї Те хи Зв табу. їв
Уві Бек вет ше не ик «2105 57 «2115115 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 57 біп Уаї біп рей уаї бів бек б5Біу Азїа бій уаї Ббуз був рхо біу А1їв 1 5 10 15
Яск о уаї бЗуз Уаї бек Сув Був Азїа Бех сіу Тук Бек Ве ТЬу Бех Тук 20 25 30 іт їі Бех Тер оуаії Аха спіп Аза Рко сіу сів сіу без біз Ткр Меє 35 40 45 сіу Тер уаї бек Аза Тук Авп біу Авп ТБ Авп оТук Аза біп був РВе 50 55 650 біо бі Ак Уаї Тнж Меб Те Твах Ар о ТВх Бех Тк бек ТВх діа тТух 655 70 75 80
Меб сій Бей; Аку Бех Пеб Аку бЗех Авр Авр ТК о Аіа уаї Тук Тук Сув ва 90 95
Аіа Акоа біу Тух Уаі1і Меб Авр Уаії Тхр сіу сіп сіу ТвВк ТВк о Уаї ТНК 100 105 110 уві ех Бех -2105 58 «2115115 5 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 58 зів чаї біо пев Узі бів бек біу Аіїа січ Уві Був Бу Рко Фіу А1та 1 5 10 15 ц5еат Маії був Уві Бек Сув Був Аіа бБес бі Тух ТВк Ре Бко бВех Тук 2 2755 Зо 5іу іє Бех Ткр Уа! Аку сів Аіа Рхо сіу Сіп с1у без біз Ткр Мек 35 49 45 сіу Ткр Т1іе Бек Аза Тукх Авп С1у Авп о ТВх АвпотТук Аїа бій Був Бей 5 ва ва бій б1у Агу Уаї Тах Мебї Так Тву Авр о тТВх бек Та бек Тк Віа Тухг йпя 70 75 во
Меї пів аї Ак бек пей АкаЯ Бех Авр Авр Твх Аія Уві Ре Тух Сук ве 99 95
Аіа Аха біу тТух Уві Мек Аве Уаї Тжр піу сіп бі ТВх ТВ чаї Твх 100 105 110
Уаї Бек ех є 115 2105 59 «2115 113 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 59 сів уві сій їжи уві сів Бех біУу Аза бій уаї Був уз РКО біу Аїа 1 5 10 15
Бек чаї був Ууаї Бек Су цу Аїа бех сСіу Тук ТВжх вва ТвВк бек тує 2 25 30 сіу Її Бех Ткр Уаї Аку бів А1іа ро п1у бій сіу Пец бій Тев Меї 35 40 45
Зіу Тр їіє Бех Аіїз Тус Авп сіу Ав Тк Або Тук Аза біп Був йо 50 55 Бо біп 01у Ако Уаї Ту Меї Тік Твк о Авр ТвВг о бех Ту бек ТНК ліва ТЕ ва 70 ТВ 80
Мек сі) їео Ак бек Гео ду Бех Авр Авр о Твк Аїз Маї Туг Тетх Сув 85 чо 95
Ліз Аха біу Тук Анр Тух Ткр 1у біз біу ТВк Бей Уаї Тк туаї бек 300 185 110
Бег -2105» 60 «2115115 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 60 бів Уві біп Гем уаї бія Бек бі Аїа 01) таї був Був рРхо 51у Аза 1 5 19 15
Ззек Уаії був Уаі Бек Сув був Аза Бех саіу Тух ТВву РМе Трху Бек тТух 20 5 30 сіу Ії Бех Ттр Чаї Ак бій Аїа Рхо біу біп піу пев біз Ткр Мек 35 40 45 піу Ткр оТ1іе бек ТЬкЕ Тук Авп біу Авп Тих Авп оТук Аза бів Був уаї 5 55 60 піп с1у Ахо уаї Тк оМес Тв Тк Авр ТВк Бех ТвВжх бек ТаВх Аза Тух 655 70 75 80
Меї Бі) Ппей Акад бек Без Ак Бех Авр АБр Трх Аза Уаї Тук Тук Сув 85 зо 95 діз ку сіу Тує ТВг Ага Авр оту Тур біу б1іп біу Тк Бео уаі Те їп0 105 1190
Уаї дех Бех 115 -2105 61 «2115 116 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 61 біч уві біз їва Уві бів бек сіу біу 01у пе Чаї бів Рко біу 51У 1 5 10 15. бек пев Ака Бей бек Сув Аза Аза Бех біу Ре Тпх Рпе бек йек Тух
ТЕер мес Бег Тхр Уві Аку біб Аіа Рго біу був б1у ем біз ТЕв Уа1ї «0 45
Аіїа вав їїе Був сів Авробіу бек бій був Тух Тух Уаї Авр Бек Чаї 60
Був пі Аг Рпе ТЕ Ї1е Бех Ако Авр Авп о Аіа Був Ав бек Бей Тух
БО та 7 во
Іво пів Меї Авп беж їжі Асу Аза бій Аврв ТВ Аза Маї Тух Тут Сув 85 за 95
Аіз АкЗ Авв Тхр о біу Авіа ББе Адар уві Тер біу сів сіу ТвВу Меї Уаї1 100 105 110 тТВвІ Уві бек Бек 113 20 «2105 62
«2115 119 «212» Білок «213» Ното зарієпо «4005» 62 біб Узі біп бец уаі біз беж біуУу біу б1іУу бво Уаї бів рхо бі біу 1 5 10 15 кек Геа Аку Пец Бек Сув Аза А1іа бек біу Рре ТвВхжх РНе Бех Ака тТук 20 25 30
Тюкр Меє цех Ткр Уаі Ак біп діа Рхо біу був с0іу Пец піз Тутр уві 35 40 45 діа Авп оті Був Нів Авр біу бек бій Буя Тух Тук Уаії Авр бех Уаї о 55 50 їжа сіу Ак Рбе Так ГК1іе бек Аку Авр Авп о діа Пув Ави Бех Ген ТуУг 55 7о 75 во ев бів Меє Авп бек бем Ага Аївн 01 Авр Тих Аза Уаї Тук Тук Суб 85 90 35
Аіа Аку бід Бех Ави Ткр сіу РБе діа Рпе Авр Ма! Тго біу Нів сіу 100 105 116
Так Меїє уаї ТВ: Уаї бек Бех 115 -2105» 63 «2115 116 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 63 сі) Ууаї бів бео Уаї біз Бех біу біу біу бе Уві біп Рго біу с01у 1 5 10 15 так би Аг во Бес оСув Азїв Аза Бех 01 Ре ТЬх РВе бех бек тТук кі 25 0
Тхр Меб Бех Ткр Уаї АкЯ бів діа Рко біу Був бвіу без біз Тхрвр увї1 35 40 45 діз Авп Ті Був сіп Авр бі1іу Бех 01 Пув Тух Тук Чаї Збр Бех Уаї 50 55 650
Був іх Ак Ре Твх Гі Зек Аку Авр Авп А1з уз Авп Бех Бей тут 65 то 75 во їво біб Мес Авп Бек Печ Ак Аза бій Ар ТВЕ Аів Уаії Тух Тук сСув ва | зо 95
Аза Ак Авп Тгробіу Аза Ре Аврої1їв Ткросіу сів біу ТВк Меб уаї 100 195 116
Твх хаї бек бех 115 «2105» 64 «2115 119 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 64
Фіз Хаї біп пе) уаї біз Бек б1у с1у біу Пйеп уаї біб Рго с01їу 0біу 1 5 46 15 ек без Аку о бео бек Суз Узі Узі Бек біу РБе Твк РБпе бек бек тТух 20 25 30
Ткр Ммебє бек Ттр оуаї Ажоа біп Аза рко с1іу Був 4Ф1у без 013 Тер уві 35 40 45 лін Ав її пув біп Авробіу Бек бі) був Тук Тук Чаї Авр бек Ууаї 5а 55 5о
Був 5іу Аку ре Тк їі Бех Агу Авр Ап о АТа був Авп Бек бе Тух 79 7а во без біп Меї Ази Бех Пец Ак іа сій Авр о Твк діа уаії Тух Тух сСув 85 | 0 95
Аіз Акч бів Бех Авп о Ткробіу Бпе Аіїа Бе Авр їі Тур и біу бів 01у 106 105 3110
Те Меб уаі Тк Узі Бех Бех : 115 : -2105 65 5 «2115 119 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 65 піз узі бів зи Уа) сьо Бех сіу с1іу 1у без уаї бій рто біу бі 1 5 10 15
Бех пе) йка Без бек Сув Аза Аза бек біу Гви ТВх Ве беж Авп о вБе 20 25 30 тТср мек Бех Ткгр чаї Аг бів Аїа Рко біу був біу йейп б) Тер Уві 35 0 45
Аіз Авз ї1е Був 010 Авробіу йех сій був Тух Тух Уві Авр Бех Уві 5о 5 50
Був о1у Ак впЄ ТЕ ї1і6є Бех Акч Авр Авп о Аіа Був дяп о бек Бей Туг 8 78 15 о їІнм сій Мебє АвпоВехк це) Аку Аза біо Авр отТвах Аза Ма1ї Тухк Бех Сув 85 зо за
ТвВх АкЧ бій Бек Акп о Ткр о біу па діа пе Аврої1е Ткр с1іу сів «1у 100 105 110
ТНК Мек Уаї Твг Уаіїі Бек Бех 115 -2105» 66 «2115 123 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 66 сій Уві бій Без уаї бі Бек біу Біу біу пе уаії Був Рко біу біу 1 5 10 15
Зех пев Ака Бей бек Сув Азїа Аіа бех сі» Бе Твх Ре Бех Бех Тус 290 25 30 дах Меб Ави Ттр Уаі Акз бів Аіа Рхо біу був бі без БМ) ТКр о чаї 35 «й 45 бек Бек ї16 Бех Бек дек бек бек Туг Іі Тук Тух А1а Авор Бех Уаї 5о 55 6о0
Був 0Біу Аго Ре Тк Т31іє бек ВЗку Авр Азп Аїд Був Авп о Бех без Тух 55 7 5 во їв) піп Мех Авп Бех Гез Ак йіа бі двр тТВг Аза чаї тую тТух Сув ч5 зо з5
Аіз ака Авр Тук Авр о РБе Ткр бек сіу Тукх Тук тТпж Аза Бра Авр Узі 100 105 110
Ткв біу біп 01у Трг о Меї Уаії Тит Маії Бег Бех 1158 120 «2105 67 «2115 123 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 67 іп уаї Біб їжи уаї біз бех б1у 01у с01у Бео узі ув ро Ту біУ 5 10 15
Бетг Бей Вк цею бек Сув Аза Аза бек с1у Ре Тих Ре Бех Бех Тук 20 25 30 чек Мет Ави Тр уаї Аку сів Аза Рго с1у був біу йви бі) Тер ув1 35 40 45
Бег Бек ї116 йех Бех Бех бек бЗек Тук Т1е Чек Тук Аза Авр бек уві 50 55 60 їув о сіу Ак РБе Твх Тіе Бек Ако Авр Авп Аіа Був Авп Бек Бей тух
БУ 70 75 80 цевз вів Мек Авп бек ей Аказ Аїа Січ Ар ТВг о Аіа Уаї Тук Ре сСув 85 90 95
Аза Ак Авр Тукх Авр Ріє Тюр Бек Аіїа Тух Тук Авр Аїа РБе Авр Ууаї 100 105 110
Тхвр аіу піп сіу ТЬк Меї Уаї Тік Уаї Бех бек 115 120 -2105» 68 «2115112 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «4005» 68 сіб баї біп без Бес біб Бек біу б1у б1у Ббем Уаї бів Рко біу біу 1 5 10 15
Беж йбем АхчЧ о їГец Ветх Сув Аза Аза Бех сіу Рпе ТіК Рбе Вес бек тук й 25 30 віз Має Бех Тхр Уаії Аку біп Аіїа ро бі Був біу без бій Ткр Уаї 35 40 45
Беж Аза їі бЗеї біу Бек біу сіу Бех ТВх Тук Тук Аза Авр бах Ууаї 50 55 60
Туз сіу Ак впе тТвх ї1е бек Аку Авр Авп бек Був Авп Тв Бем Тух 65 70 75 80 їео біб Мех Авп Беж Без Аха Аза сій Авр ТБ А1тТа уаї Тук Тук Сув 85 зо з5
Аіа муз Ре Авр ТуУук Ткр біу біп б1іу Твк Беп уаї Твжх Уві Беж Бек 100 195 110 -2105» 69 «2115117 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 69 азів Уаї бій без Пез із Бех бі біу бі ей Маї ія Рхте біу в1іу ї 5 10 15 веж іц Аа без бек Суз Аза Ава бек Сі РБе ТаХ Ре бек бек тТук 20 25 КІВ
Аіз Меб бек Ткр Уві Ака бів Аїа ко біу Був сіу Бей аз Тер Уві 35 40 45 дак Тих їі дес сіу Бек сі 5іУу Ак тру Тух тТук Аїа Авр Бек Уві
Те 55 «й
Був 01у Аа Ріє ТВЕ їі Бек Асу Авр о Ана Вес пув Авап о ТВу бе тТук 65 | 70 75 80 їм бів Меї Авп бек Пе) Аху Аза бій Ар о ТвЕ Аіз Узі Тук тТук Сує і 85 50 95 льа ув біб У31і бі1у Зек Ро Ре Авр Тук Тжр б1іу біп біу Твх о Бей ї00 | 105 110 чаї тах Уві беж дах 115 -2105 70 «2115117 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 70 біз Уа біп бей без Сів бех б1у сіу біу без Уаї іп Рхо бі щу 1 5 10 15
Зах Бей Аг Без бек Сув Аїа Аїа Бех 51у Рпе ТВвх Рпе Бех бек Тух 29 25 30
Аїа Меж Зах Тер Ууаї Аку бів Аіа Рхто біу був бі Гей біз Тгр Уа1ї
Зех Аза Т1іеє бек бі Зек бі бі бек Тих Тук Тук Аза Авр бек Уаї 60 був 01у Ак Рпе ТнНІ їіє Бех АхУ Авр о Аво Бек уз Азв ТВх Бей Тук 55 70 75 во
Без бів Ме Ав Бех їн Аху Аїв сіб Авзр Твтх Ата чаї Тук Тук Сув 55 20 95
Аіа ув Чаї це» Меї Уаї Тук Аза Авр Тух Тктр сіу сів сіу ТВх Гей 100 105 119 таї тТнх уві Бек Бек 115
-2105 71 «2115 121 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 71 піз Маї бів без Без біз Бех сіу біу піу їви чаї бів Рко біу Б1у 1 5 16 15
Бек Без Ак іФи Бет Сув Аїа Аїа Бек біу Ріє Тік Рпе Бек Бех Тух 20 25 30 дів Меаб Ав Ткр о Уаї Ака біп Аза Рго біу Був біу Бей біз Ткр Уаї 35 «0 45 ех ТЕ Ті Бех сіу Вау п1іу дар Аве Тк о Тук Тух Аза Авр Бек Уаї 50 55 бо їуз біУу АхкУ РВе Тк Т1іеє бек Ак Авр Авп бек Був Авп отих без Тух 65 70 75 80
Бей бій Меє Авп о Бег Гей Аг ліа сі) Авр Тьк Аіа уаї Тухк Тук Сув
З 90 35 віза був ру РБбе Уаі Бей Меб Уаї тТук Аіа Мебє Ппеци Аво Тух Ткр 61У 100 105 110 піп піуУу Тк опеоз чУуаї ТВк о Уаі бек бек 115 120 «-2105 72 «2115 121 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 72 «Фіз уві сій їн Їїи Сіш бек біу бі біу без Ууаїі бів рко 5іу бі» 3 5 18 15
Бек Пес Ак Сей бек Сув Аіа Аза беж біу РМ Таж Ре Бех Бек Тук
Азіа Мес ввБо Ткроуаії Ака біп Аза Бко 51у Був б1іу ви бій Тер чаї
Вех тах хів бер о сіу Бек біу біу Айва Ту Тук Тук Аза Авр бек Уаї 5 5 60 ув БІу АхЯ Рре ТВкК ів бек Аку Авр Авп бек Пув Авап о Твк Бей Тухк ва 70 75 во їви сів Ме Ап оБех їжи Ак Аіз бій Аве Тахо Аза Уаї Тух Тук Сув 85 20 а5
Аів Гуз Бу Ре уаї цей Ммеб Уаї Тук А1їа Мебє без Авр тТуг Ттр б1х 100 105 1160
Оіп віу тах пбео уаї ТВ уаї Бех бек 115 120 20 -2105 73 «2115116 «212» Білок «213» Ното заріеп5 25 «4005 73 бів аї біз йеюй Уаї бій бех біу біу бік Маії Уві бів Рхо біу Ака 1 В 10 15
Бет їх АхЯ Гей бехт сСсув Аза Аіа бех сіу Ре ТВх Рне Бек Бек тух 20 25 30 біу Меє Вів Тер Уаї Ака4 біп Аіа хо б1у Ппув а1у Бей сій Ткр уаї 35 40 45 діз Уаї І1є Тер тТуг Авр сіу Бек Авп Пув Тух Тук АТїа Авр бек уаї
Зо 55 Бо їуе Бі Аку впе ТОК Ії Бах АхЯ Ар о Авп обех Був Авп Твг Без тТуУхг 65 70 75 о їев)в бів Мей Аво Бек бею Аку Аіа біс Авр Тих Азїа Уа1ї Тук Тух Сув вх 0 35
Аі« Ака Тух Тух Тух с1у Мес Авр о уаії Тхр сіу біп с1іу Твх Твх Ма1ї 100 165 110
Ту Уаї Бек Бек ! 115 «2105» 74 «2115 123 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 74 сСіп уаї біп бе Уві біз Бег біу біу біу Маї Уаї біп Бко б1у Акад і й 10 15
Бех їй Ак ойецй Чек Суз Азіа Ата бас сіу Рпе Тис Ре бек Бек Тук 20 25 30 сіу Меб Нів Ткр Уаї Ак бів діа Рко біу був біу бемч біч Тжхр Ууаії 35 40 45
Аїа уаї Їїе Тр тТуУух Авр біу Бех Авр Був Тук Тух Аіїа Авр бек Уаї
ЗО 5 о
Був 5іу Аха Ре ТВкг ї31Зе Бех Ахо АвроАвп Бек Був АвпотТак Бей тТук 5 70 15 во їжи піп Мех Авп о Бек це» Акт А1їа бі Авр Тк Аіа Уаії Тух Тук сСув ва 90 95
Аїа бку біо твх сі Рго Пез був без Тух Тук Тук сіу Меї Авр уві 100 105 110
Ткр Бі біз біу тиж Тах Уа1і ТнІ Уаії Бех Бех 115 120 «-2105 75 «2115 116 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 75 біп Уаї бів ГПез уаї бі) Бех біу біу біу Уаї Уаї біп Рго біу АФ 1 5 10 15 вет Інні АкчЧ оїез бек Сув Аза діа бех сіу рРМпе ТвкЕ Ве Бех Бех тут 20 25 30
С1у Меє Нів Ткр Уаї Акад біл А1їа Рго біу Був б1іу Пец бі Тер Уа) 35 4 45
Аіз Маї Іі Ткр Тух Авр біу бек Авп Пув Туї Тук Аза Авр бек Чаї 0 55 бо
Був а1іу Ак Бре Твх 116 бек Вгу Азр АБп бек був АвпоТйх ев тех бо 70 75 во
Без біп Меє веп о Бек бео Ака Аза 019 Авр отак Аїа Ууаї Тук Тук Сув 90 35
Аїа Аку ї1і6 Аза Аівн біу Меї Авр уаї Ткр 01іу біп сіу Тк ТвВж Уаї 100 105 116 твж Чаї Бех Зех 115 «-2105 76 «2115 122 5 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 76 біп уаї Нів Пец Чаї бі бек б1іу б1іу біу уаї Уаї Сбіп Рко с1у Ак9Ф 3 5 10 15
Бек йец Ак без бек Сув А1і1а А1а Бек біу Рпе Тих Ре Аяп бек Ра 20 25 30 бБіУу Меб Ні Тер Уаі Ак піп Аїа Ро б1у був сі пей біо Ткр о уаї 35 40 45
Аіа мем їІїе Тхр Бек Дар сіу бех Авр був Тук Тух Аїа двр бек Уві 50 55 60
Був зіу Ак Рпе Тв І1в Бех Ага Авр Авп Бек Був Авп Ту Пец Тук 655 70 75 во
Без бій Меї АвппоБек Пец Аху діа 20 Авр Так Аза уаї Тух Тух Сув 85 90 95
Аіїа Аку Аіа ї1е д1і8 А1а пе Тут Тук Тук Туг біу Меї Авр Маї ТЕр 100 105 116 біу біп біу Тнж тних Уві Тнх Уаії Бех Бех 115 129 -2105 77 «2115 122 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 77 піп уаї біп без Уаї бі Бек біу біу біу Уаї Чаї біп Рхо біу Акгу 1 5 10 15
Бек Пе Агу ей бек Суз Аза діа Бек сіу Рре Так РБе бек бек РБре 20 25 30 сіу Меб Нів Тур Маі Ага біп Аїа Рго біу був с1у беп бій Тер чаї 35 40 45
Аіаа йез 112 Тур о Авп Аврос1іу Бек АвпоПув Тух Тук Аїа Авр Бек Маї 55 во
Пув бБіу Ака Рпе ТВжх ТІ1е бек АкаЯ Авр Авоп бах Пув Аяп Тік Бей тТук аб КН) ть 80 їево бій Меб Аво бек пев Аку діа біб Авр Тк Аза туаї Тут Тух сСув 5 90 95 діа Ак Аїа ї1є Аза Аїв без Тух Тух Тух Тук біу Меб Авр Уаї Ткр 109 105 110 сіу нів б1у Так Твк Уаї тп Уаї Бек Бек -2105 78 5 «2115 122 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 78 біз Уаі біп Гей Уві бін Бек біу біу біу чаї Уві піп Бго бБіу Ахд 1 5 10 15 вах їжи АкУ їй Бек Су Аза віз бек сіу РБе Твх Ре Бек Бех РБе то 25 30 сту Меб Нів Ткр Уаії Ака сіп Аза хо С1у Був сіу Ппей бій Ткр узі 35 40 45 '
Аїва цес Її Ткр Авп Авр б1у бек Аво Пув Тук Тук Аїа Авр бек Уді 50 55 Бо
Му п1у АкЧ Рпе Тк ї1і2е Бех Аку Авр о Авп о Бех ув Ап ТВ їез тує 5 то 75 80 пе) бій Меє Азп Бех їжи АкУ Аза бі) Авр ТВх Віа Уаї Тук Тук Сув 85 зо 35
Аді Ага Аіїа І1їе Аза Азїз еп Тук Тук Тухк Тух сіу Меї Авр Уаї Ткр 100 105 110 сіу біп б1іу Таж Тв чаї Твх Уаї Бех бехг 115 120 «2105 79 «2115 122 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 79 пів уаї нів цез Уаї бій бек біу бі1у бі1у Уаї уаії бів рхо сбіу Аху 1 5 10 15
Бек бе Аху Пец Бех Сув Аза Аза Бек сі Ріє ТВу РБе Ап бех Ре 20 25 30 біУу Мас: Нів Ткр уаї Аку бів зїа рко біу Був біу Бей сій Ткр Уаї 35 40 45 аїіа тез Ті Ткр бек Авр біу Бек Авр біл Туг Тухк Аза Авр Зах Уаї 50 55 во їув пі Ажч вне ТВ о їіє Бех Аку Авр Ана Бек цув Ав о ТВкК о Бев Тук «5 70 15 во їи йпію Меї Ав бех Пес Аку Аза бій вдвр ТВх Аза Уаії Тух Тух Сув 85 зо 95
Аїа Ажха А1їз ї1з діа Аза бе Тух Тух Тук Тух сіу Мек Авр Уаї ТЕр 100 105 116 оіу сіп 01у Ттвк тТвк Уаї ТВх чаї Зех Вех 115 120 -2105» 80 «2115 122 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 80 зів Уаї бій без Уві біз Бех бі чіу біу Хаї Ууаї піп Вхо піу Ага і 5 10 | 15
Бех їжи Аку пез бек Сув Аза Віа бек біу Ре Тк пе бег бЗег Рбе 20 25 30 сіуу Меє нів Ткгр Узі ко сіп діа Рго 01у Був біу Бей бій ТЕр Уві1 35 40 45
Аїа йей Т1е Тер Авп Авр сіу бек Або Пує Тук Тук Аза Авр бек Уа) 50 55 5 ув біу Ако РБе Тк їіе бек Ага Авр Авп Бех Пув Авп Тахо Гем туг 55 70 78 80 їви біп Ме Аво бек Пед АкЯ Аза пій Авр о ТВх А1з уа1ї Тук Тук Сув в5 90 95 аіа лйха Авіа Ті Аїа Аїз йецп Тух Тух Тух Тух біу Меб Авр уаї Тер 109 105 119 сіу сів с1у Твк о тТвВх Уві Тву уаї Бех Бех 115 120 -210» 81 «2115 122 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 81 вів Уаї бій бей Уві січ Бек сіу сіу п1іу уаї уаї сіп Кго сіу Аху і 5 10 15 бег Без Ака ге бек Сув Аіїа Азїа бек біу ББе ТвВк ВРБе Бек Бек Тук 20 25 30 сЬу Меж Ні Ткр узі Аку піп діа Рго с1у Був біуУу без бій Ткр Уаї 35 40 45 діа І1їе Ті Ткр Тух Авр біу Бек Ав Був Тух Тук Аза Авр Бех Уві 50 55 60
Був с1іу Аг Рпе ТвВх ї1і6 Бех АхкУ Авр Авоп бек був АвпотТВх пеп Тук 65 70 75 во їво бів Мек Авп о бек Бей Ака Аіа сій Авр ТЕ Аза Уаі Тук Тук Сув в 90 95 діз Аку дха біу біу Без Аїа іа Аг Ркто піу біу Мебс Авр уаї Тер
Та 105 110 сі біп біу ТвВх ТвВх Уві ТВ Узі Бех бег 115 120 -2105 82 «2115 122 «212» Білок «213» Ното зарієпо «4005» 82 бів чаї біп бе У«1і бій беж сіу аїу сіу Уаі Уаї сбіп Рко 01у АхФ 1 5 10 15 дес їз Ач їец Бе Сув Аза Аза Бек бБіу Епе Так Рпе Бех Бек Тух 20 25 30 піу Меї Ніз Ткр уві дка біп ліз Рхо сіУу був сіу о біо Ткр чаї 35 40 45 іа уві ї1з Ттр о тТух Авр о біу Бек Авп був Тухк Тух Аїа Авр Бек Уві
Зо 85 во
Був П1у Ак Ра ТВх тів Бек Аку Авр Аво Зех Ппув Ав) о ТВк пей Тук 65 70 75 50 їв 51в Меб Авп бек пе Ака діа сій Авр Тахо Аза Уа1ї Тух Тук Сув ве 95 95 дів АкЯ 41 11 діа Уаї Аза Тух Тухк Тухк Тук 51у Меб Авр уа1ї Тер 19а 105 110 с1іу біп б1іу тлу ТВ Уві Твх Уаії Бек Бек 115 120 -2105» 83 «2115 122 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 83 бів уаї біб Бей уаії біз Бех біу біу біу Чаї баї бів Рко біу Ага 1 Е 10 15 веж ем Асу їні ек Сув Аза Аза Бек сіу Ре Тк Ре АкаЯ Бех Туг 20 25 30
Зіу меї Нів Ткр Уа) Ака біп Аза Ро біу Був б1у бе) бій Ткр оуаї 35 ай 45 діа Бен їі Тор Нів Авр сіу Бек Вво ТвВг тТук Тухк уаї Авр Бах Уві 5о 55 во
Вуж сіу Ахо Рінс Тк ї1ів бек Ак Авр Авп Бек був Авипотпх Пец тує то 75 во їи біз Ме АвпоБек без Акта Аіїа біз Авр тк Аза уаї Тук Тук Сув ва 50 95 ліз Ак Ф1у тів Аів Уві Аїа Тус Тус Тух Тук піу Меб двр уаї Ткр 100 105 110 2іуУу ів щЩіу Тк тТвЕ Уа)і Твкх оуаі бех бек 115 120 «210» 84 «2115117 5 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 84
Сів Ууаї бів бео біб біо бек сфу рРго чіу Без уаї Ппув Ро Бек бій 1 а 10 5
Тв Бей Бек бес ТЕЕ Су ТНЕ Уаі йех біу бі Беж Ті Бех бек 5іу 20 25 30
Сіу Тук Тук Ткр бек Ткр Гі йго бів Вів рхо біу Був бБіу Бей 1 35 40 45
Ттр тів б1іу Тух Їіє Туг Тух Бек б1у Бек ТЕ Тух Тух Авп Ркго Бек 5О 55 0
Гей Буш век Аку Ууаї ТВх Ті Бек Уаг1ї Авр ТнЕ бек Був Авп о біп Ре 65 70 75 о
ЯЗек Без Був Пец Бек Бек уді Тк Аза Аза Авр Тих Аїа Уаї Тук Тук 85 90 25
Су дів Аку Тук Тухк Тух сіу Мех Вер баї Тхр біу бів біу Тож Тож 100 105 115 таї тТвВх чаї Бек Бек 115 -2105» 85 «2115 122 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 85 бій чаї бів цен бів біз бек біу рРхо сіу бе Уаї Був Рто бек бій ї 5 10 | 15
Так оїйво бек ойеб Тв Суз Тв Уа) Бех біу біу Чек Т1іе чек дек цех
Авротук Тук Тхр Бек Ттр 116 Бгто бій Біб Бко б1у Був біу Бей вій тр їіє біу Тух 118 Тух Тух Зах сіу Бех Тих Ту Тух Аво во век о 55 Бо їн Був Бек Ака її Ти тіе бек Уаї Авр ТВжЕ Бех Пуз Аво їжи БвВе
ЩО. 70 | 75 | во
Бек би пуз їео бек бек Уаї Тв діа Аза дер тТвх Аза уаї Тух Тук я за 55.
сув 3)із Ака сіу п1у Маї ТАх Так о Тух Тух Тух Дів Маб Азв уві Ткр 100 105 110 с1у біп біу тТнж Тну Уді Тк 7аї Бек бек ни 115 120 -2105» 86 «2115 120 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 86 сіп Уаї сіп бео бів біз Бег бі Ро 01у Тез Узі Ппув Рхо Бек бів 1 в 10 15
Тих йез беж Пец ТВЕж Сув Твк о Уаі бек біу Зіу Бек Тіз беж Бех п1у 20 25 30 сту Тук Тук Ткр Бек Ткр Ті1еє Ага б1п Нів Рко біу пув біу пеш бій
ЗУ 40 45
Ткр Ті біу Тук тів Тух Туг Бех сіу бек Тву Ттух Туг Авп Рго Бехг
Зо 55 60 їєз Був Бех АкЧ баї ТвВх ї1е беж Уаї Авр Тк Бек був Авп біп Ре
Б 70 15 во хек це) був Беос Бек бек Уаі1 Тк Аїа Аза Авр Так Аза Уаї Тух Тук 85 98 95
Сув Аза Аху Бі дер ТЬх Аза Меб таї Тухк РБе АБр Тух Ттр сіу бів 100 105 110 біу тТвх ївиа Уаі Тв Уаїії Бех Бех 115 122 -2105» 87 «2115 121 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 87
Сів уві сій Без сіп ско Бех біу рРхо бі йез чаї був Рхо бек вів» 1 5 10 15
ТВж без бек бе ТВк Суз ТвК Уаї Бех Ф1у п(іу Бех Ті Бех бек «1їу
Чіу Тук Тук Тер Бек Ткр їі6є Ах біп Нів Рго 51у Був біу Пец Біц ттв їі су Тух Іі Тух Авп Бех сСіу Бек ТВх Тух Тук Зп Рко Бек 650 їжи Пцуз Бек Ак чаї Так Т1е Бек Уаї Авр Тих бек Був Авп біп Ре 55 то 75 во
Щек бе Був ес Кек Бек Уаії Тс Аза Азїа Авр Тнх Аза уаї Тух Тук 85 90 55
Сув Аіа Агоа 1 Авр о тТвк дів Меб уві Рго Тук РБе Авр Тук Тер б01уУ 1660 105 110 сів сту тах Без уаї Те баї бек бек 115 129 20 -2105» 88 «2115115 «212» Білок «213» Ното заріеп5 25 «400» 88 сій маії бій Сей сФіп біп тер б1іу Аза б1у пезч обез був Бо Бех Фіш 1 в: 10 15 тТнЕ реч Вех їм ТЕ Су Аза Маї Тух піу сіу Бек Ріє Беж Сіу тує 290 25 30
Тук Ткр бех Тгр Ті Ах біп Ро Рко біу Ппув бїіу Бей біб Тер Це 35 й | 45 бі біз Їіє Ап Ні бек біу Бех ТВЖж Авп о Тук Авпорхо баг оїви Бук 50 55 во
Бек Аку Уаї Твк о їТ1е Бек Уаії Авр Ту Бек їув Ав бів Ре бек Бей 55 70 75 во
Був Бей беж йетх Уа) Тих Ада Аїа Авр Так Азїа туаї Тух тТух Сув АІав 85 20 95
Яка сі» бів цез Чаї ВРБе Авр Тук Ткр біт біп біу Ту Бе Уаї б ве 160 105 110 туаї Бек бехг 115 -2105» 89 «2115 116 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 89 сіз Уаї біп Бей біп бів Тр б1у Аїа б1іу ей їви Був Бгто Вак сій 1 5 10 15
Таж їм Вех їні ТВ о Сув Аза уаї Тух Сіу б1іу Бех Ре Бех Аза Тухг 20 25 30
Тух Ткр Авп о тТкр тів дка біп вхо рРко 01у Був сбі1у Пец аїц Тер ї11е 35 48 45 сіу піз їі АвпоНів бек 0іу АкЯ ТвВу Авр о Тук Авп ко бек пе) Був 50 58 бо
Бех АкЯ чаї тік їі бек Ууаї Авзр Тах Бех був був біп Ре Бех їжи 55 70 ГЕ: во
Був без Авп Бег чаї ТВе Аїа Аза Вер ТВ Аза Уаї Тук тТук Сув Аза 85 90 35 вхч б1іу біб без Узі Бко ББе йвр о Тук Ткр о біу біп 01у Твх Без уді 100 195 110
Твх таї Бек бек 115 2105» 90 «2115115 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 90 дів Уві бів тез бів бів Бех біу рРхо біу без уаї Був Рко Бек віп 1 а 10 15
ТВ: бесш бек ей тах Сув Аза Т1е Бех Сіу Авр Бек уаї Бех Бех Авп 20 25 зо ес Аіа Аіїа Тер Ав Ткр о їів Аку бів бах вхо ех Агу б1у Ццео сів 35 40 45
Ткр рей біу Ак ТБх о Тук Тух Агу бах Був Ткр Тук Авп о Авр Тух Ата 50 55 БО
Маї Бек Уаї Був беж Ака Тіз Тих їі Ав Рго Авр Тих Бех Був Авп ва 70 75 во сів Ре Бе їб) біб Пе) Ап Бех Чаї Тах го піз Авр о ТБк Аїа Уві 55 ай 95
Тух Тух Сузв ліз Аку Ре Азр о Тух Ткр біу бів біу тТвх Ппез чаї ТЕ 198 105 110
Чаї Зех Бех 115 -2105» 91 «2115 121 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 91 бів Уаї бів без біп біп Бех біу Бко біу Пев Уаї Був Рко Бек бів ї 5 19 15
ТВг Сем Бек Пец ТЬх Сув Аі1а Ї1е Бек 01у Авр Бех Уаї бЗех бек Авп 20 25 30 зек Аїа Аїа Ткр Ап Тер І31е Ака біп бек Рко бек Ак б1у Бей бій 35 40 45
Тер Пец сіу Ак ТВк Тук Тут Ас Бег ув Тер Тук Ппув Аво Тух Бех 50 55 60
Уаї бек Уаї був бек АхЯ Тіє Таж їі Ачп Рхко Авр ТВ бех був Авп 65 79 75 во зів РБе Бек пес бій Гец Авп Бек ч7аї ТвВк Рко б1у Авр Тік діа туаї 85 39 95
Тут Тук Сув Аіа Ак біу 0іу Рко Тих Аза діа Рре двр Тук Тгр сіу 100 105 110 бів віу Твж Бей Уаі Тнх Узі бех Бех 115 135 «2105» 92 «2115 345 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005» 92 сачаїсїсасо сачсосачкс сададсьчач чсаааздааде стоаЗаЗосвс аубовауюєс 50
Бесстчсвацу сексу єта сеєссткоуаєє зоуставууіа созостоФеє дсдасазасе 120 сосодасєсзаз зусттозазсз засзззасуз аїсваусуєє асаасуукаа сасадзаєстає 180 чедосачаачя бссаспудсао суєсєсаосабая аосасводзса сатоовсчву сасаусеткає 240 акоадисестЧча зар ссова всссцдасове зсудосубує аєсассубаєс зЗаачстає 300
Часзтчовзсз секочаЗсса азоузасовсу чсвассуєої собох 345 «2105 93 «2115 327 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005» 93 сацескассе їзастсазес сусетосУсу себе вс сідуасадчіс чабсассавьс 60 тссбусзеко чазесзозовз3з сзасостоазє дассасавсї стчкстссто деассаасау 120 їасссаодеа васспессссайа астсавоавЕт сгабсдазцакса зесзаєсдудсо скозоадоЧев 180 тскаавксчех Кежстодско саазтскочо дасасдосії ссостоадосає стістодасво 240 садчуссззаз зочЧчачуассоа сБкакесевас аздескбсакака саадовосаз сакоазчкекке 395 ччссЧаасоча ссайчетоас сукеста 327 210» 94 «2115 345 «212» ДНК «213» Ното зарієп5 «400» 94 саччуїсвоєс соЧкодсачіс содадстдадя убсозадаадс сооуууєстс аубуазоудіє 60 ксескосвааа стгстуЧіта сассттавсс аустабууба ссазосоцзї додасадаєс 120 сокадасззу ЗдессЗацеа засззчасоя Чдесазевкє атавєсаєаа сасавастає 150 чсезсазавує бссадузсазч адусаєссаєя ассасавдасс сабссасоаад сасацестає 940 зкззазстчЧа ззчадсстааа абсскоасавс васучссчкує асбастзсос зазадустає 300 ччватсодасо ксбоузчусса зуддаєсвзсу Чесассубесв себе 345 «2105» 95 «2115 327 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 95 сацестоассс Сдасєтсадос бусстсоаба Єободуєобе сточасачіс даксассаєс 60 їсссдсаскоа даассзочсяч гоасочстоач чУссавгайсь сеобсбессо драссовасазч 120 ксатсслсзвзадеа задессосаз астозкчвкк Каса їса збаасозосо сссаадачех 380
Кесаассоєе бексвуцокс сзаусосЯус засасодест сссодаєсає сістдддаєво 740 сзодссзвоч дсзачустзча састаєтяє закксзкаса савосвссаа сабозкаєто 300 посоовазчоав ссавоастаас сабоста 327 «2105» 96 «2115 345 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 96 сачастсвдос сЧЧусосвуїс сзодачсвоаа чсчвачааоає стоадаасеко ачгчаавачссс БО сесбасаваЧч сеКетачета сасстсЧакс ачесасоува ссачссочочЧЕ здсузсзддес 136 спссдпцасазу засо кзаЗвУ засоузвзасоз абесаозссук асаатууїая сасаваєтайє 180 чсасазаачч їсосазудсвя взгсазосава асевовзадасяа сатссасавоа сасвукссетаєс 240 акчавастча зчачастчач акссоасоуас веччесуєує астассуєує чаувзучеосас 300 тасасоцчасу кстоЗуцеса зудууасєсасо збсассекек сокеох 345
Зо 210» 97 «2115 327 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 97 сазчсстассс гчастсвуєс сосстссуву сссоЗуєсс ссодаєвуєес даїсассаєс 60 їсстосасто заассадсад єЄдасаєвоує заскасаасеї сі стсссу зсассвасач 120 свосссаузса вассссссва асісабуайї їагодзуЧіса Чдесзассадес сісачачає: 180 жїстактсоцсх Кесбстоачстс саачсістоазче аасвсЯдчесї ссстуассаїє сеіссоуаєкс 240 саччесазад зсазодевав сЕаєстстоус здстсатата савосассач сабсачсекто 300 часодачоаза ссаазчебсоцає субєкта 327 «2105 98 «2115 345 212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 98 садавксаде садсодсваїс БадвзскзаЗ Ззсзвазайс стододесхо зуговадчЧчїс 60
Ксссдевзача себсвуєса сасссвєдасе адсбавсзба ксадесбозас зсдасаддсе 129 сскузасаау усі суасЧ чЧаїзацасод абсадес асазаєцуєаа сасавастває 180 дсзсззааду сссадцдсеад зуїсассасбу ассасадаса сабссасчад сасадкістає 240 агадачеїдча ссасессовзу абсбуасуає асоудссобоє абежсєавбас дачачаєсас 300 зсасууає сссоузууєса ачучЧассасяа чпісассоябсї сесса 345 «2105» 99 «2115 327 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 99 сачістоссс сзасссазсс суссіссятоЯ їстоадоїстс стіддасауєс дассассаєо 650 їсстусаєсєо даассадсва бчдасаєкаЧе чдуаскакаасє ссусскеоку дсассвасад 120 сасссацаса азссссосаза астісаєдаєс сзбсузууєса усазесудсос сесададааєє 180 тстаатсосо себстцуоевс сзачдістїуує аасасодсесї состдассає стсеуудевес 940 сзвузсєчачч асдадоастсча стат їстас адстісатата савосассву сакоадесске 300 зпезразача ссавустоде субосеа 337 «2105100 «2115 345 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005 100 саччсевоє суЗсускачек сууазцевуач чусдавузаде скаче азсувачеєс 60 їсстосззва сітосзоста сассттавос аустаєзуса ссзуєссезУє Зедасацосо 120 сстоддасазя зпсібазасоа Чабодзчаєза чісаозеееЕ акаакачаа сасаваєстає 180 чеасаднаде гссасоозєву вадусассакц всозсацасо сабосавуаа свсацесквс 940 зЕсЧечеєуа зуазсссозву зсесуасуає асуусоуєоує абкзссубус дададуєсвао 300 чусабоцасу бсезосдосса зоддассасо чісассЯсх ссоїса 345
Зо «2105101 «2115 327 «212» ДНК «213» Ното зарієп5
З5 «4005 101 сашеістзчоесс сзчасссадес сасогосУсоа гссчоауїсіс сідуасауюс дабсассаєс 80 собдсаста зЗазсозоасза єдасзсбаче ззстабааст сткекссту дівссвасац 120 сасссачоса вадессссза зсссаєцаєє каєдацуєса стаассодес стсаззаукх 180 ксЕзаксаст КсЕскоцеКо сввачуссвуус аасасцєссх состчассає сесбодасво 40 казчекслазчу асзадусвза бБастаскас аастсатакта савоасассаоя сасауєке 300 зчеодасоЧча ссаваєсоаае сугесва 327 «2105102 «2115 363 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005 102 сзацечевоас єодсвоЗачис ЗдоусссвоЗа ссЗЗзсЧавою сстовдсадас сеобобсссто БО всобсуєаєбу бебеБоубод стіссаєсаче ачбачеачв: астасточазч стоачакседе 150 садевсосач чоададоадссї зчачіоЧаїс сучевсасає агзасзуєцу дадеасстас 180 іасвасссяк сссревазау сезачуссвос акассачіад асасоїєстяа даассачіе 240 кссссцаадо бузосбсбуї засбоссоса дасасодесаЯа сатаїтаста сасдчадачач 300 засасачеста соЧісосіса стссдастас соддодссацоа дазасссаує сасоуюбевос 360 аа 353 -2105103 «2115 333 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005 103 сзобстаиво савсодсадос десстсачьа гскочадссс свочоусачаз зозбсвассасс 60 бссісдевстЯ зуаосвассс сазсзбесууу дсасаєтаєу абобосасвсо одбассвасад 120 чІкссвозаа сачессосая асгсстсакс сагуукавса сстабєсоддес сеісазодуєс 180 сстузессечах сскскоадеве саазсскоде достсвуетх ксстодесах састоздско 40 садчебозода асдадасказ сБабєеастдс садессстаєу асаасаасст дассодьока 300 чаїтсодсу звозоавосва зскЧасовке ота 333 «2105» 104 «2115 366 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005 104 сзазкасасо гоачічовчс соасазчазоє здо вссазс сеууЧадако сосдадастс 69 бсесіабадсва сосссодзаєт сасстссваас адссссоддса Басасєадає седссвадеє 150 ссачасаазч часта счбодсвсї ахгстЯадесва асазаачтоа соваагастайї 180 зЗкачастссу бузазузесу асссасовис сссазазаса абсбсссаацаа сасастсоаває 240. стодсаваєсча асачостічад адссчазуаєс асодссакє ассассосус дауачесата 300) дездсостстї аставсівстя созусабодас Чесводдуєс вадоазаєсас дабсассояко 360 мастсва Ки
Зо 2105105 -2115 330 «212» ДНК «213» Ното заріеп5
З5 «4005 105 своктебовУує сзасзсаЗсс зосстовЗке сстзсуЗссс саддасауаа зуссасевве бо
Кессоассскт дазасадекс сзасаєтада забзаєска сайсстачьа ссадсачеке 120 ссвачвасач ссссовавиї сиїнаєвтає дассаєсааєз здсдасостьс асадаєссся 180 чаєсчаєтст студосссова зсоесодсасо бсйадосассс содусаксас создасіссву 840 ас алсч ачассчаста ссастасода асасчочара чевасосава бастсакоатс 300
ЕЕсасваску чаассвучах сасидссста 330 -2105 106 «2115 366 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005» 106 сазччсдевас колосок о сазчсачааао чечЧкосаче ссоЗчачако сесчачассс 60 тсстчичсац сессуцакк сассоксадс зУуссксоуса бусасбоауць сесуссачасе 12й сезоазоваза зуссоцзазо зусочдсастх абасоозаєу агоддаавоїва савзатастає 180 чезцзастоса бдаводоассз абксассактс бесадчацчаса абксовачав сасвуєтуває 340 сісдсааайца зсадостаза апосузудає асодсеаєає зесвскЧсЯс чачадссака 300 зсацесстсї аствптасса сузусасоцчає зсессовзууєс аздузаєсає зукесассявбе Зб тостев 386 «2105 107 -2115 330 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005 107 свасскЧчіЧЕ суасосауєс зессстсаЗзке сесусодссс садаасачаа дугсассато бо тсстосвесво дазосадеїс саасаєєааа азбааєеєка баксестодіа ссадозасто 120 сесдаздаазач соссссааасї собсатстаї дассзсазбса зусчаєсссте зузуаєтест 189 чассчавтткт стуфикесав зсекзсасо кеадссассс гузудсассас содастссау 240 зсгдадузсу зоддссовевса гбсастосода асабосдава ссачессіава бадетаєес 300 тісодаассо зЗдассваоздаї сассЯїеста 339 -2105 108 «2115 366 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005 108 сазабасасс Кочссадавасс ссаодаззаззс ззщсссацо стозоачако сстідачастс 60 тпсолідеву субсбозавєь сассіксаас зоасіббоаса бчсассудуб ссдссадуєв 120 ссазчевазо сдодсідчанЧсЧ соїддсвиве асакоуєсво асудуаачьда бааахаєстає 180 чсвавсвсоч бозачоЗсоз акЕсассабо бссздачаса акбссавдаа сасоастоакає 249 стосаввсда асацєесісдад азессуачуає асчастятох абссассоєує дасвуєсаєа 300 сазесстст асівстаста содтвтаЧас Чіскудоузсс ваазоадаєссас здссассукс 360 косіса 366 0) «2105109 -2115 330 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 109 сазтстУсеє счасусачсс усссссачеу бєскусудссс саддасачаа зєсассате 60 кссбоскеса даазсазевс саасаєсочу аабаактссЧ баксескодіа ссадсачі ве 120 ссастуавсах сесссазасте сстбсаєжєкає чассакааса адсувссстое асдодакєтсстї 180 чзасесчаскех стучесссза чксссуусаєу ссзуссасос боддудсаєсас содасессау 240 зскодзочасз азассзатта стастоусоада асабсчучаба дсадссвавя сЕсевБаєоєсе 300 тксачайскоя здпассвачуї сассодесста 330 «2105 110 «2115 366 -212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005 110 озоачЧевсвос сузсвчвосо сзчоозвоу осоцссевоє сгуувадуве естововесо 60 їесееукуєау сзБсьозаке сесоссовзос адосскозеа сосастооєах содссацчев щей ссвоченися зе Чесопасастє зкабаазаєа абадавасав Савасаєтає 180 евчасессу сЗаауЗусоч асСссвосакс бебазадаєа акссесвацав сасосвовав 4й седсвавсда зсадсосбовзо зоассазачас зсаастатах: встастосоє часвоссвса 300 деовцссстек всеуеитаски соусами чес Чес зсздцассас Яуксассуко 360 тсскев що зве «2105 111 -2115 330 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005 111 сала кзасодоздсо деосбозува бебосздосс саддасадаа здчдбсассато 60
Коссзокссоа даассвасіс сзасаєтяду ааїаайькта бабєсстадіа ссвасацеєе 1250 ссозазвасва сесссаваст сстсатттаї уастабазта азсцассстєс адуцзастессв 180 чассдчасєтсст сідускссва уксетуцезса бсздсесасос бозозсаєсає сздастосазч 24й зетзчаззасз ззчессчаста сгбассосоча асабдодаба чсачестчач бачає 300 кссозазсова зазессзазУє сассуксста 339 2105» 112 «2115 366 «212» ДНК «213» Ното зарієп5 «4005 112 сачукчесвос зобов косо Че чад ссвас стзззчазао секововоке Бо сек зова собсвадавєє сасссбсзує засссказса сзсаскоазУє содосазаєт 150 «ссезосзчсваЗу зустузачвУ З зосасіх абсасздааєч абддаачіаа базвабастає 180
Чеззастоссу сзаззззосз зсесассако госазадаса ассссзачай сасустекай 280 сіцсаваїзча асадесідач вуссузадає асудссвує збезебубос уаздадосаєба 300 чевоссстсї аствссаста сзоусасозас зіскододес ааздоудассвє зогсасодьс 3650 слесеа 366 0) «2105 113 -2115 330 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005 113 садесвосУує сзасчсазос Зсоссасазтоа кстосудесо садодасадчаа здксвссате 60 клсечсїсту уазасовуєсс сазсаєтодЯ аабааєєсссЯа Єабссбадаса ссадсовуєке 120 ссаззаасао сессссаайої ссїсаттває частаєааса зусуасостьс адудаєсосяї 180 чавсозаєкеї стаддсетссза зсеродзсвсу гсачесасес годусавсає судаєтеосад 249 згоду даєу зЗздсозаїва стасеусуда асакєсодава дсадестчач са сасвке 355 тхоззавстЯа счассазчоазчї сассезссста 330 «2105 114 «2115 366 -212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 114 сзоаачучсазс сазсосбазіс суззууазуус зБоддбссаоас ссодаазасо сетоадасьс 60 їсосабосач сУкстодаве сасстссаза достіатсоса годсастодух ссоссзасії 120 ссачтсавеач зассозчачу засаоссассх абагоаодсатсчЯ асозчаачтіаа басабастає 380 чзсачастссуч с3аваууусєсу агтеассаєс гссацацаса асессавува сасзстукає 240 стодсавасча асаасстоаас адосчасчудес всочевУусЯ: асбассабЯс чдасадавсавєа 300 чсеачісдеїї асівораска сочбіабодчас чістааадсс ваводддассас собсасоцчіє 360 секс 366 «2105 115 -2115 330 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005 115 сачбебубає Єдасодсадес дсостісачкс сстЧеууєсс садцасваза чассзсосаєо 60 сссбасьста даззсачеко сзасаєсоазча вабавкЕЕко Кассебозка сезодсауете 120 ссаздчавсву ссосозавої собсавебає узсадсваба восзаоссте аззчастост 180 зассезчактсї стуустссаа чоссуусасу ссадссассо бодасавсає содастссацзч 240 зебу5ЗоЗзсо зузосзавса срастоасоди дсагчаЧчати ссачессуву босткакове 300 кіссозваєстя зозвесазаце сасодеесста за «2105 116 «2115 363 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005 116 чачесоусауео боббсозавосс сзозачазає гбазсвасаде скачки сотувуаесео во кестзсосах сстстазакх сассіткадо ачссабдєса бдаасбозчує содсозчаєь 120 ссзодчазсо зсуву зУссксазих акказсууса зусузвдаєаа сасатастас 180 чезвоастесу счавоззассЯ Зсксвссато госаоддоаса агтссвачаа сасостував 940 сізсааведа всовососбово звоссоазвадас зсоацесчєве авбастуєзе зазазвЗзк 30 псастадтса ссеасостаї чеггдвассяс судуудессзвоуз дазособуЧь саооЯстсо ЗБ їеа 363
Зо «2105 117 «2115 321 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005 117 чвезксстав гаасссачіс кесакестсо скасекоасахє стос коздаза сададісасо 60 аксзектіуес зоодсазуєса заубаттаце ачЕтаткскаа аккасдкатса дсадазвассаяа 1950 чуцааацесс сбавучіссї зчабстатасї дсстссаціб сусазачсодч дусссосагса 180 азззс сво зсазбодчаксс сааадвеячах сссаскстса ссваісвасаяа Сесосаассї 240 чаачасєскка сзасткаска стуєсазсзу зубсбсасзуєе оссосабсас сежсодассаа 300 чзоазвсвсцас бруачаїтаз а 321 «2105 118 «2115 363 -212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005» 118 засобі асвас соїбоовоєс бозоузазоє сбодеасадє содаЧаааЯьс ссбововесе 60 ксстусосву сегсбочаг сасобстаче ачетаєдсса сузастодуує ссоссавуєх 180 ссадачааоча чоаскодачся дуксесваст зЕсазсзЗса зсоусозсаа сасатаєтаєс 180 езчастсся счайочоескоч Чессассакс сссачачаса актссаяаодада сасустукай 240 ссдезвавкиза зсаЗзсосово воссуачуаєс асоууєссутає ассастубоаєс дазавачеки 300 зсасіаакзу кукакуєкає чуесредастає созздссаво пдаасссвоче сассячсстсо 360 їса 363 «2105 119 «2115 321 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 119 цасатосада суасосачіо госассоссос стасцсьвсах сізбсадузда сзузуєсасо 6й аксасєтстес дадсзачіоз зчдачсаксачсе акстасстава аїтуукаїтса Чевдаацеса 120 зачавацесс сесасетехх засстабусє здсаздссачоє сасаавувоЯ дассссвісая 180 зоаттезуєо зевукузакссе сзузасацає ббсзсбевсв созбозасвау кокусєсвасов 240 зчзавчаксЕско саасттаста скуєсвасая вастасачед сссссватсас стбсодесаа 300 зачасавсочас Кодасатіваа а 321 «2105 120 «2115 345 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 120 свучессвує суубосвебс бодадебсад дбдававаос стодадесто асічавоаціс БО коскзсаноч стїстосета саобухцасєс ачесбавбудва єсадстоазЯє дечасазаео 150 сстіпуасавч часксчачвЯ чабазчасзч вісаусостї зпаасоцева сасазваєсає 180 чевсазавацу ссосзудосву зЗбсзосабо ассасазаса сакссасуаз сасазїстає 248 акучазчкза зчазієковя віскдасоас асадосабає зккаскакоас чачасдоасктви ЗО зУусаезЗаасо гстодоассся вчодцеснсасу чссассцкеє ссвеа 345 0) «2105 121 «2115 327 «212» ДНК «213» Ното заріеп5
«4005» 121 сазістчесс сдасбісацес бассіссЯаба ссбадаєсво сєузасазко зассассако 69 ксстасвсто завссазсво засос сЯч чЧустасавсї стусссссто удбассаасва 190 сасосацдуса аассоссосаа асбосакзаєс сабозззкса зклахсодеє стсвадчуЧчів 180
Кставссчєї собсбудоїо саацісїсдас забсасаддссї ссокзассає сбссудзске 540 сазоастаача асолачоаєстсв скат ссЧче аустсатата савауєсвасесвзу сабуЧьсєве 300 чзасозвоадча ссаззссзас сгЗбеска 327 «2105 122 «2115 345 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 122 саззсксзоас гоадічсачіс годазстовоу зсзаазаззс стіучуцеско адбоааччьс во сссбосзадуа секстоЧьва сассєєдасс здстасозса бсадссоооє дедасадасе 120 сстодасвач доста затсуучабоу аїсачсувиіх асааксочеаєаа сасавааєтає 180 чсасауавда сссгоодусад адсассату ассасауаса саєссасовау сасаувстає 240 агозадесаза зааадсставо стстаасозе асчдесзкоє аксастокос зачачастає 300 чоасасачасд ксксоузсоса адуууаєссозсу дісассЯвс ссбса 345 «2105» 123 «2115 327 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 123 чтазкокудссс суаєбсвусс бусстссуву секоздУусессс стузасауєс дасовссаєс 60 бостасастЯа даассацеду Часу Ч десбабаась скчбокосто зкіассавсач 120 жасссаццса азвоссоссза зотсвасчасх сабоазауїса човаєсачес сісаваачаєє 180 скати сескскууєкос сазуєссуде авасаозасев сестуавесає скссдуцдавс 240 савозустзазча асчасчстЧа стасстсвс адевсавака сазасассзо сакодкствс 300 часлазачца ссавазстдає сабескта 327 «210» 124 «2115 345 «212» ДНК «213» Ното зарієп5 «400» 124 сзачитсаче сзщічскващз сочачссуау чсдазуазує ссчдччсске адсдаазаке 60
Кестусзазоа стека сосскуЧасес ачстабсоубєа бсаусбоууЧь дсузсводес 120 сесудасавя зассбодваоасо закодаавоз аксадеоасех асааїчакав сасааастат 180 ссасачаяч сссаччодсва ачссзссаба ассасачаса сатосавесзва сасазкстає 340 акччвагсча ззазсстчац всскозвасзає асуусеукує асхастобсує Ччададустстаєс 300 чекакцувсу ссгозЗздеса зоаззЗзассвсез зесассакех состава. 345
Зо «2105 125 «2115 327 «212» ДНК «213» Ното заріеп5
З5 «400» 125 сапіскуесс бсдасісачес соссіссаба спад Ччісіс ссддасачіс чаєсассаєо 60 бсебодсаска здаассваєвоа азс чаїкасвасї сеобстссву чусассвасєву 120 скасссацаса зассссссваа зсксаєуаєє саєзаоцєса згавксзасо стсачзодаєї 189 кесавссуєт сстстддесе сазуїстдудс аабасоадосі ссстадзсосає стстадаскс 240 сзоазосзача асоадастча гас Етовоаос адсісасата сазасавассзвзу саточестсе 300 поссазазаа ссазастаас сабеста 327 «2105 126 «2115 345 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005» 126 своаЧіїсацї сзцзсоусазсс содадевоаз уеіуаазааоєс сбдддусескс адбогацеєс 60 тсстзсаазоа ссестоЗта сусоктдасо ачетатадіа ссачскточЧаї Чдедасачоасс 120 согузасзаз зоасЕсазоаса часодаакча аїсадезовє асазкчуєаа сзсазаєскає 150 здсясадаасо сссазузсву ззссассаєу ассасадаса сайбссасяау сасачістає 240 зкєзачесЗа ззаздостзаз зесгодедас асоодссчкаї аїтастакас чадвачастає 300 чуусасзцзаса бебададосса задчассасу дессвссуєеє сстса 345 «2105 127 «2115 327 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005» 127 сачкстсссс гзвсбсвдки босу сссуЗУуїссо стдудасадіс дассассаєс 859
Єсстодсасто звассвасаз сзасоєкоз зерасваст стдтсїісста девссваєсву 120 скасссвоєа авссососаа асїсаєдчавєї бабосвоацьса зчіаасосудес сесзадзчаєь 180 «естаатсЧек секстзцсто савЗсссЗзУс засасоЗаост сосідаєссаї сістоууєтс 240 садуєтовуз асдадуєвзча сктаєфеосос адоссаєака савдсвосву саєдеєстке 300 ччзсзсачуча ссвачеїчає сзбсота 327 «2105» 128 «2115 345 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005» 128 сачусссвас кадсасачес сочачесчач зЧаздааде скадачестс адіснпадутс 60 тпстосаауо ссбесбоЗсса сачетккасс вустаєучса ссадсбсуаує чдедасадуєс 120 сесууасавоа ззессоазс забуззасу зссадезое асааєзЗсаа сасазастає 180 певсаззазває СссовоадасаЯ ауссассасЯ ассасачаса сабєссасава сасадествс 740 всоучавссза дчасестова асстаасявес всузесУкУї астассуєуе зачдачастаєс 300 чекакучасу сстоузучєса зудузссвоЯ дссасовксє себса 345
Зо «2105 129 «2115 327 «212» ДНК «213» Ното заріеп5
З5 «4005» 129 сазіскцєсос суастсацос бусстевасе Себоазабсьс сіззчасачьо дабссаєссавс й
Ксседесассу даассадсвя саасаскоаЧе чстбакадесї стдестсста ФдФіассаасац 120 сасессвоадся авусссссаз асосасцавєє єзбсдаодеса зсваєссоцдсс сесвачууцєк 180 їотавбсоск сстстууско сааусесуЗс аасасудесе сосьдассабє сбобоодосво 250 сгачускзазчоа зсоаздассаз стаєбастас аастсатата савдсаєссва сабачтакєсс 300 зчсчавачча ссващекови пУусеска 327 -2105 130 «2115 363 «2125» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 130 стзуусасавує Бусаусзвоєс зззбесазаз стоссовавс соксдсачдо сетстсасто Бо зсстозкоЧоеса бссссодода пачці стсї асдеазсваса сеасесачав ссззаксачу 190 свакссссає счазчазусеє сувУукозико зуавочасає асбасаууєе сазубустає 180 ааазаєєакє сацЕвжосоє дззвазкоа асвасевкса асссадасає акссзадавсо 240 сазобсбо сусаассуайа сссбубуасе сссудочаса соаскакака вгвстотасв 300 ззазззазае саастостос І соасбає будедуесачу дазсоссуує озосабесвос 350 пра зві
І
«2105 131 -2115 330 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 131 тиску сее суастсадес суссбосава бссдадеьсво сказасачкос заксасоате 50 бсскоасасту давссачсвя соасостозу авссасавсс єсуБесвесву збассзасвоа 120 саВЕссводез зауесосеза зстсовезаєє бассовозкса сіадосодам сісаоЧЧае 180 тсвваєсуєї бебссадеко саадкеваЯдо аасасадест сссєдасває ссстуууєте 540 свзоастзчазоа васчачосезча гтаставкає ссссатасу єзоауксазсау сасвероаче Зо сгсдоссуво додзесззусє Засозссеска 330 «2105 132 «2115 357 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005 132 чацчесдзиаи: Зб уЗазес сузаоаадоєс сеЕддбссадес стачачачее ссічвавеске 60 хестзкзкач ссїстоЧчаку сассеттачї аздстаттоца сузустоуу ссуссадуєвь 180 ссавопдозавоаз засос одабадосаас асазазсааЗ агодавосза дадасастак 180 чЕЧччвстсту бозазуцесу асссассайїє бесздадаса асассзачава сесасткаває 540 стізсвавіза дсазчосічач ачесуаддає асоачебчтаї абєсастуєас дадачачіса 300 заскзазчак сао кіца бакеточочуас свазоазасваа сууссасеЗї стсксса за7 0) «2105 133 «2115 327 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 133 сачіссткас сласссадес ассстсачеЯ сескаазасос ссододсвоау зассзссавс во ес астсса чвачсацесце свасаєсоча азсазаавсва сазастазчсв ссвасвоазсє 129 созоаздазсаЗ соссессававсї сстсакеваї заууааєсзаєс зусудессте зоуууєссов 180 цасезабкої сгддоросаа збетаЗовос гоадосіссо судссаїбау содасбсбваа чай ксеідазодаву зодскдаєса ссаєтаєсуєа дсягоадчака йсадостчавй стозуїаєсе 300 засосвоачоа ссавоастовс сочесста 327 «2105» 134 «2115 357 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 134 часуєзсазес гозсозавкс сззчзазає буд осадес стдуаЧЯЧьс ссбсацассс 60 їсевуєусау ссобссазвеє свостттаає состаєсоазча сучас содссачуєє 190 тсаззЧадоач ччебодацчья засдодессвас агазачусабо асоазачесча давакастає 180 зісчастста сочавддчссоу астсвоесаєє сссадздаса зсуссаауаа сбсастосає 240 сткчезазбзча асазсстзаа аоссадас асзустого аббастЯчбсЯс дачачачеса 300 авскозчазає сруссексоз сзссгрозадес сасазазсва гоадісвосує стстсвова 357 2105 135 «2115 327 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 135 сазчстзує бзасгсвуєс асособсвусяЯ бегопдосссо ссдавовавая зчссассвкес 60 жсксЗскстоа дадодсяостс савсабсоча азуїватасту бсазасбоуба ссаусауеве 190 ссвоздаасза сосбссаззасв собсатстає азсзасавсо зусодссесе азЗадссснс 189 часечасссї скдудевєссав чссгуусвос бсадсобооо бадосаєсва бачастссва 249 тестзазчакЗ дозчестчаста стастчкоса чсабодсчасо асадестуаав ббуууєоєсе 300 зусзавазза ссваостоавос сабеска 327 «2105 136 «2115 351 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 136 чадоїдсвос сабсоддвасс содадцачос сбууєзсаус сбооЧочубо собоадастьс бо тссідтдсву сесскууаєк сасссстаус аздстабусса гозастЯчЯє ссдссадаєсє 120 ссзазззазу зсзскзаачкоа сзстісвасї агтївуїтудка зтоукооусвац дасасаєтсає 180 -адаскссу будзаводассу збссаосаєс босацдадаса аббосаачай саезекоараї 740 стдсалаїзла асаоосідао адссузуцає засудесутає астастотас дЧавасаваєт 300 засзагссст їсуасетасту ззососазоча ассостоусса сеубстссте а зі
Зо «2105 137 «2115 330 «212» ДНК «213» Ното заріеп5
З5 «400» 137 сазкссЗзсок гзасусладсо десосовасЯ сус десс сазуасачаа ЗзУксвссако бо сесгосіссу заадсавоєс сзасаєсучу засазесаєо бабссбодба ссадезвоаєто 120 ссвзуаасад сссосзавсб ссїсабстаї дасаасаайа адсдассстіс адоадатсеьсст 180 зассзвккок стадерсосая сістадсвся ссачесассс сзуздсатево созастссяд 240 ассдадазсу задссоакєва стастдсода зсабєуодаєз здсадссєдад босєоєаава 300 тссодездач зддассаазеє зассозбоста 330 -2105 138 «2115 366 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005» 138 саазсосаце ЄпчЧеодчачіє єсоачаваче ЧкаЧкссвосє скводаоцукс сстоздаєте 60 кестзсусву сука сасестсазе зазссасзЗеа косастуЗУє седссадуєє 190 севзозеззаз Застдаача зчзосаасх абабчутаку асдазачсаа базабастах 180 чсевуасізеу зазудоссо асксассасо ссевувавсв асбосаацва свсастясає 540 сЕксанасов васпазоссзаз ацесузучас асуесебУє ассаскокує уазазазооуя 300 ччЕссодсаз стосдкссозо соусаїодас сто адес звададассво дабсассакс 360
Кособев 366 «2105 139 «2115 318 -212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005» 139 кссгвтузус гузетсздео зсостовута соту сос сзууасачає ацдссачаакс 60 восіссїстїо лдадатааає: зддудаквааа какоасєкасЕ заасассавдса зайассадеє 120 садксосстч соастоачссах стаїсваває ассзачцеяде сессзоаузчає сссбузоасва 180 жЕстовацеє ссзауєссод чадсасадсс астстьдаєсса ссадсоудаєс ссаддсіава 240 часецчуєту ассажесзесу бсзоодсзсо9 дЧасадсадса стчачкаке счасадацчя 300 звихаацєтуа соодбсста зів «210» 140 «2115 366 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 140 сапчедевос бусзузазес зЗудсссадоа ссоусозадо сккеасадас ссотчессоте 6о висштзчевсоту ссісбучоЯ сіссайсацо аабасьсаєє асбассазач сезассеЗс 120 сзосвоссока здаададесї «чага зуокасавск ассасачьод дадсасстає 180 їтвсавсссчЕ соссісзауву бсуааксасс абассачесва асасадаєстаа заасоеєчЕкс 240
Есоссзаазк сзазетстаї чдастдесасЯ Часасоачесу бутассзасву бусузуазоу 390 чаЧчасазсіа собастасва состаєачає зЕссозоасс авазуадассяс аусассокс 369 тссїса 366 0) «2105 141 «2115 321 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 141 чуасзізсзоз сдасссоаадюс Бссаксстсо стасстуусає ссзсаддада садчадеісасс й вкісасіїсєс пудсазобсв деусавтвує заставі:аа чебодбассії дсачазасса 1270 зазчассзесс стадочсєіссї саїстаїоеї деаїтссвокхх госазазсоо ддусесессаєса 180 зеЧасссвоко дсаосочаїс бодочвсачає срсасветсв ссабсаусау сетоасааєсь 240 давчаїїїса сзасссвска ссдбсазасзу зуобссасауєа оссосоастсабє сстсассада 300 чачассвавоу сучазаснпав й 391 «2105 142 «2115 369 -212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 142 садакасвос кззсззазс сзузузчачзає зічссосаде сізоучадевро сстадаадастс 69 тоссосзсау сУусссуцасе сасесбесзує зостакууса бусастсоуує содссаздуєт 120 совочсаззу зчесоЗзазка закоодсазес абсабоазаса асздавосов Саваксастакє 180 пасчасіссу бдазвзаасса вктсассакс госячацаса аббссавааа сасастатак 240 сктцевавасда зсадесстузу здссочаззає аваосковУє акбастутцс удадвазаасє 300 фуксссксуа засісткаєса ссзеуубаєо дасуєстоЗа Зсевааодууає сасоубєсасс 360 чеЕстеоксова заз «210» 143 «2115 336 -212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 143 часасукуа бзасбевобе кссзсбсбоо сбасосассаяа ссостззача десусестсс Бо аксотсстосе ччїстаовся дЧачесіссвя сабачеваву даєасзасее ЕЕбаваккоц 150 свсскосвоуз аЗссзозоаса збстесасава обенкзаєсї абсбузуєтє безбецЧадесо 180 мсмоуччис сідасзуче свукодсває здабсадаса сачасскгас астоздававс 240 засво з азостсоваача сассоЧЧаї сбаїсасьцса боасаачесст асзаайсссса 300 жЖксвсеЕксЯ чеескззас сзваусучах акевав 336 «2105» 144 «2115 357 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 144 сдзвадкчсаос сзозсоазвас сузодзазує СтЗусссазс сроудудучьс ссбдацасьс 0 ксстдеосву сстогодасе сасеєстазе засссттода содачдсетозт сосдссадеаєт 120 ссачедчавує усесодадія Ззубасдссаас згвавоасавя зечдчаваєаа давасастає 180 чкоачаскстс ссчвводосеч віїссаєсавсс сссазцацаєа асуєсавуаа Ебсасвавбав 440 седсззабза зоаЗоссзЗаЗ зуесчазаво асоЗскУксої аїбсстотаєс чачачачіса 300 ааскучоучає сізесескса сакскодаЯде савзадздасва садесасесяв сесткса 357
Зо «2105» 145 «2115 327 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 145 зазкотзос счасісаосо досеоексяося сстододдассс созузсазац зуссассако 80 сід стЯ здзадесзаоїс сзасвєсуоаз ауєзазасту савасбододба ссвдсачютс 120 чиевусавсоу сссссаавоб сбсссабссбає адсаасаасс часддсссто аддадеосоє 180 чассзаккох сгодоїссаа зістдадсасо ксацистисс будсовкову СуЧуєтссяЯ 240 сегсазлсдава здассовсва Єсассувоса дсаєсзоуабо асадсовоаа Кбадасаєке 300 часочсвзуца свазусоцає соуїоста . 357 «2105 146 «2115 345 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005» 146 саччіїсвоє сазідсваїс содаозссузу чіуаадавує сбуудЧесс ачсдаачасо 60 ссстссазац стбссацзесва сасстстрасс адссакоадіа бсадокоазає додасаозЗсо 120 сеЕдевсаво сусссозз3їа дабссадавад зссзасвоїо асазаєууваа сасвазестає 180 зеасачаазое сссасодчевоа вуссвассасу вассасачаса сакбссасчау сасадеєстає 9240 зксззастов зоаодостозо зсстозсзає асодссаве: аккаскакоас задааадсакє 305 всісуузаєє зобгоудуєса зспувасссту чесассяссї сетов 345 «2105» 147 «2115 348 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005» 147 ч«ацессчеяе сдасесаасс веж стоса гевоссвосо садчаачосьс адісасвоте 60 асссусаскс куаосацезе стзсазсазЕ саоваосоє зсбуубаєса дсазуаувсся 120 частот сосочок сакусоауво дасастччсо зчассатоду аїосазччоє 180 чаацасзтсс стчасечекк сссвуїскУу досесзадос базаєсазва ксечесисатє 240 авувасассс зудааузоза сузуазеєзас Кассвстукєу зудсваовоса судесзусояу 300 ассвпасттсз усу аї суЧеддаччЯ ассаачеєча соечкоста 348
«2105 148 «2115 348 «212» ДНК «213» Ното заріеп5
«400» 148 сазукусвус сасзосзасЗз зЗзздсосвзЗа стзгсозаче стігсуддацас ссбодєбоссскес бо асстосустЯ ссбасоубад зссскксазк зедеастасї одчдазотода ссодосацдосо 190 стеазачаазоа доасісоувасУ уассодозаа ассааєсака чічЧавсадс счастасаво 180 ссчессстса ачачссоао сассасасса чбачасасяє созачаваса чЕЕсвсссту 249 зводстузаск стебзассосє сусочасасу чесуєусає зобубусузо зуууеазеке 300 чЧесесссЕко зебассозаУ созозаавсс стоааровося бсотсттоа 348 0) «2105 149 «2115 330 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005» 149 садієсвукує суазеосозусо асосбоваодсо Кебоддасос ссзоддесадая ддксассаєс 90 кексу сву зазодсадеке сзасаєсадча адіаабаєта газастоцчтв ковусєваєти 190 ссачоваасоо ососсвдасї собсабсстаї здбазсваасо зоасодесоссс ачузссссх 180 зассзчвкїсї стзчустссав зсебоеаєс ссазссоссс будссабсацч бучдастссва 2460 сскдзвузкУ ззЗзссЗзасса стаскзсоса засо асяадсстсва БсачЕсодася 300 кісоздсзчаз зууассавчєї зассабоста 330 «2105 150 «2115 345 -212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005 150 свзоачсссваує бедіодсадіє будадстдач дсдаачааас ссдададесто ачедаачуєс 60 твскусавод сокскЯаїса сассісвсосс адстасядса єсзасесдаає Чдесузовудес 120 сскдавсааа адастгчачтд Ччасуучасуу абсазсзєсь асаакууіаа сасаваєтає 180 зсадздавас сссадоЗсаз азссассаксу ассасзуаса сдоссасова сасадостас 240 агччазасза зузоссбовзу збсбуасуає асудесуба вебаскявас дачачастас 309 чкасззасу ссебододоса аздучассасу дісасосЯкеї ссесе 345
«2105 151 «2115 327 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005 151 сацісводсос суаобозусс босебосуба согадассьс ссддасачес чассассаєе 60 тспсоуєвско дазссадсау сдасуєтоЯ сятатааєє сседєссссво дсвосвасвао 120 сасссаадеа айдесосевда доаїсакчасх таєдацеєся зсаакездес стсададатх 150 бстасссдсв бебободуссо сазаубсєуде аасасуаесї сеставосає сеЕстаЯадасте 740 свууссзаз асузучебца біастастас адсїісатаса савудсачсач суєсєуєзЕже 300 ззезччакним ссавластдаєсє соска 327
«2105152 «2115 369 «212» ДНК «213» Ното заріеп5
«4005 152 зчзаччксчсвос соч оачачсс созооучачує ссодесаачс ска сскзадаєсте 60 їескобосва соїстодчать сассттсазї зостаїачса бозасьдачь ссассачасі 120 ссачачавдоеч чдчстісдаачса чдасстсакос актачевоса чсачсасеса сабессстає 180 чсадастсвч сувазоуесоа асссасрабс бооваауаса асссавцаа схтсаскатає 240 ссусзаакуа асачестаау адесчазчаєс асчекУсЯє асстсбабас дадчачаєтає 300 часскссасда чдодсекаска каакоасьсх чЧагосстчдч дссавооуає засодісасс 360 чкстссеса 365 0) «2105 153 «2115 333 «2125» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005 153 сачЧЕстчтус сзвицкацсс дссстсвчву всеосччсоо сзадчевуву Зассасесакс 60 востуозокУ засво савсаєсузо зсазуєкаку абебасасвчя збассвасва 120 сктсосвудаа свасссосаз всбссксако сессоадкваса здсвабсачцес стсвовуцьс 180 сескчвссоаах сстстуцесс сааубсвуює зосбсауссє ссссудесає сассоеке 240 сачаасєчаччу асчаччсеча стаккасєтує саубсостаку асацсвассї давсачсссЯ 300 чЕасксодсо дадодассвза зесдасосуюе ста 333 «2105 154 «2115 326 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 154
Аіа бек ТВх Був БіУу ко бех уаії Рпе Рхо бев Аза Бо Сув Бех Ахку 1 З 19 15
Щек Тпк Бек бід Бет Тих Азїа Аза без б5іу Сув реп уаї Був Авр тТух 2 23 Зо
Епе Рго біз Рко Уві Тву Уаї Бех Тер А5зп о бБеї біУу діа Без ТВх Вех 5 40 45
Сіу узі Вів ТК Бе Рхо діа Уаі Беч біп бек Бак п01іу ви Тух Зег
За 5 6 їєц Бек Бех Уаї Уаї Тлю Маі Рко Зек Бек Абвп РБе біу Твк бій ТЕ
ВВ 70 15 80
ТтТУук ТВх Сув Авп о Уаї Авр пів Буз Рко бек Авп тах був Уві Аво був ва 90 5 твх Узі 10 Ас був Сув Сув Уаї піз сСув Рко Рхо Сув РКО Аза РКО 1 105 110 рго уаї А1їа бі рго бак Уві КВе їво РБе Рхо Рко цуз Рко був Авр 115 120 125
ТВХ без мес Тїе Бех Аку ТВк рРко бій уаї Тс Сув аз чаї чаї Авр 130 135 140 тУа1і Бех Нів б1ч Ар орхо 01 уві бів Ре Авп Тер Тук Уа) Авр с1уУ 145 150 155 160
Уа ліс уаї Нів Авб Аїа ув Твкоцув рко Ака4 біз бі бів Рве Авп 165 ї7о 175 бек Твх вне Аку Узі Уа1ї! Бек Уаї Гез ТВ Маї Уаї Нія біл Авр Ткр 1859 185 199 цес дво біу був біз Тух Буз Сув Був уві Бех Ап о Ппуз 01у Яви Ро 195 200 205
Аіз рхсо Ті СТ Ппув Тк їїе Бек Пуз Тк Був 01у біо Рго Аку біо 210 2515 : 2а2о
Вухо сів уві тТук ТВк о їво Рко Рко Бек Вка біз бів Меє ТВвЕ Був Авл хи 230 235 240 пів Уаї бек без Тк Сув Бей узі Був 01у Вле Тух ро Бех Авр ї16є ! 245 250 2585 ліз Уаїі біз Тер біз бек Ав) біу 013 ко біо два Аза Тух ув ТВЕ 260 2765 270
Тих рес вто Ме їн) Аво бек Авр б1у Бех Ре вве їж Тук Бех Був 375 зво 85 їез ТвВк Узі Авробув бек Ак Ткр бів біз біу двп Ууаї Ере бек Сув 250 295 300 мех Уаї Ме нів сла Аза їв Ні АвБап о Нів Тух так бів Був Бек їні 305 318 315 Зо йех Сей Бек вВко Бі Був 355 «2105 155 «2115 327 «212» Білок «213» Ното заріеп5
«400» 155
Аіїа Беж ТВх цув сіу хто чех Уві Ре Рко Бей А1їа Рго Сув Бек Агу 1 Б то 15
Бек Тик бек біо Бек ТнЕ Аіа Аза без біу Сув Пец уаї Був Авр Тук 20 75 Зо
Епе Рхо сід бко уаї Твйх 9аі бак Ткр дво бах б1у Аза Без Так бек 35 40 415 стіу уаї Вів Твк Ре Рко Азча Уві Без бій Бех Бек біу Бей Тук Бек 50 в | 60 їв Баг Бех Ууаії Чаії Тих Уаії Рсо Бек Бек Бек цей біу ТвВк Пув ТвЕ 65 70 75 80 тТух Тк Суб Ав Уаї Авр нів був Вко бек Авп ТвВх Буз чуаї Авр гув во 0 95
Ака Уаі біз бе Був Тух с1у Рео Рго Сув Рко Бек Сув Рко А1їа рко 109 105 110 пі0 вве о йео біу 5іу Рко Бек Уаі Ре Бей РвБе вБко Рко був Рга Був 115 12 175
Аво тик йей Меб ТіЗів Бех Ах Твнх Бгто бі тУаї тв Сув уаї Уаї Заї 130 135 149 вар Уаї Бех піп бів АбБр БкКо сій Узі біз Ре дп о Ткр Тух Уаї Авр 145 159 155 160
Зіу уві біз Уа) Ні Ава Аза був Тпх Був РБго Ака біз біз біп Ве 1685 170 175
Авпобек Тих Тук Ак Уві Уві Бек Уві І Тих Уві Без Нів бій Авр 180 185 190
Тер іа Ав обіу Був бі Тук пу Суб Був уаї бек Аво був 51у ви 195 299 205
Ттхо бат Бек ї1е сі) Ббуз ТВжх Ті Бех Дбуз Аіїа Був Ф1у біп Рко Ак9 219 215 о іч ро бій уаї Тук ТВх їц Кк Рко Бех сів біо бРо Меб Тах Був 5 Зо 235 240 два пів бзї1 бек без ТВ був беп уаї Був біу Ве Тух рха Бех Авр 245 250 55 їі Аза Уві біб Тор бів Бех Авп об1іу бів Рко бі) Ав Аво Тух Був 260 268 279 тТВЕ Тк Бхо ро Уві Без Ар обех Авросіу век РВе Ба» Бво Тук бек 275 280 | 285
Ахз ем тву тТаї двр був Бек Ак ТЕКробів бій біу Два Маї Ре бек 2ча | 295 | 300
Сує бех Узі Меї Нів бій Аїа цес нів Авп Пів Тус ТВг осів Був Бех 305 310 3І5 320
Бей Бек їі Беж йеч біу Був 375 «2105 156 -2115105 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 156 піп оБко Зув діа Аза рко Бех Ма1ї Тнх Бей РБе Рко Рхо бек бек 01 ї 5 10 15 біз бе сіп Аїа Ай пу Аіїа Тс Пе) Чаї Сув Бей їі Бех Аво рРне 70 25 30
Тухк Ркго біу АЗіа Уаї Тк Уаї Аїа Тр був Азї1а Авр Бех бех Рко Уві 35 40 45 їуз Аіз біу Уаї сі Тс Тахо Твпг о Рго Бес ГПув б1п Бек Авп Авап о цув 50 55 60
Тух Аіа Аіа Бек Бех Тук цею Бек бе) Таж Ро бім біп Ткр Був Бек 65 70 75 80 йівз Ака бек Тухк Бех Су піп Чаї ТВк Ні біз й1у бек Тік таї сій 85 20 95 пув Тахо Уаї Аза Рко Тік о бБів Сув бек 160 105 «2105 157 «2115106 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «4005 157
ТвВх уві діа біз Рко бек Уаії Ре Т1е РБе Рго Ро Бек Авр біз біїп ї 5 10 15 їєв був бек біу Тих Аза беж Уві Уаі Сув Пец Пец Авпи Авпо Бе Тук 20 25 30
Его Ага сій Аїа пув уаї бів Тр був Чаї Авр о АБв діа Бей біб бек 35 40 45 біу Авп бек 5іп 510 Бех Узі Ттрх бій біл АвробБех Мув Авр о Бех ТЬхЕ 5о 3 во
Тух Бак реч Бех Бех ТНК Без Тр Бен бек Був Аза АвроТук бін Був ве 70 75 | 80 нів бує таї Тук йіз Сук 01з Узі Тв нів бів біу без Бек бак РКО 55 90 55 тУуаї ТвЕ був Бек РБе Авп Ака біу бій сСув 100 105 «2105 158 «2115 14 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 158
Твж 01 ТВЕ Явх Ябх Авроуаї піу йіу Тук Авп о бек Уві пек 1 5 10 «2105 159 «2115 14 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 159
Твх сі тво Ав Бех Авроуаї с1іу біу Тух Авп обБег Чаї Бех 1 5 18
Коо) «2105» 160 «2115 14 «212» Білок
«213» Ното заріеп5 «400» 160 тах діу тах бек бек Ар уві с1іу Аза Тух Ап Бет Уві Баг 1 5 10 «2105 161 «2115 14 «212» Білок «213» Ното зарієпо «4005 161 тиж біу ТВх Бех бЗех Авр узі сіу аку Тух Ав обБех Уві Бех 1 5 10 «2105 162 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 162 пін таї бек вв АкЯ вко Бех 1 в. «2105» 163 «21157 «212» Білок «213» Ното зарієп5
Зо «4005 163 сій чаї тох Ап о Аку хо бек 1 в «2105» 164 «21159 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 164
Бак Бек Тук Тк Бек Так бек Мебє уаї 1 5 «2105 165 «21159 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 165
Ані оБех Тух ТВж Бех Тпк бек Ме Маї ; . 5 «2105 166 «21159
«212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 166
Беж век тТух Тпх КЖек Та Адвп мес чаї 1 5 «2105 167 «21159 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 167
Зетх Кехк Тук Тих Бех бек Бек Узі мМаві1 и й -2105 168 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 168 сіу Тук Рхо Бею ТВк Бек Тук біу Ті бек ї Ко 10 «2105 169 «211510 «212» Білок «213» Ното зарієп5
Зо «400» 169 сСіу Тухк бек це) ТвВе Бек Тук б1у Ге бек
Її а 10 2105 170 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 170 сіу Тук Аїа пе Тах Явак Тух б1у тТ1ї6є Бех ї ї 18 «2105 171 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 171
Пі Тук тах о пей ТВх Бек Ту БІУ Се Бехг 1 5 10 «2105172
«212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 172
З3іу Тух Бех Ра ТВЕ бек Тук бі Тіє бек і 5 10 «2105 173 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 173 п3іу Тух Тих ріж Рео Вех Тухк 01у її бак
І 5 10 «2105 174 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 174
ТтТкр Ї1є6є бек Аза Тух Авп б1у Авап ТВІ Авп оТух діа біп пув уаї 510 1 5 10 15
Чіу
У
«2105 175 «211517 «212» Білок
Зо «213» Ното заріеп5 «4005 175
Ттвр уді йех Рле Тух Азп о піу Ап оТвк Або Тук діа біп пу бе) їв 1 5 19 15 сі «2105 176 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 176
Ткр хі бек Рае Тук дво біу Ав» ТвВк деп Тук Аза піз Був Узі біп 1 З 10 15 5іуУ «2105 177 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 177
Тер Іі Яег Уаї Тук Авп сіу Авп ТВ Аво о Тух Аза бів Був уві б1п у 5 10 15 піу 2105 178 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 178
Тер Уаї бех А1їа ТУхХ Авв 0іу Аа ТвВг о Авап Ту Аіа бів був Рве пів 1 В 16 15 сту «2105 179 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 179
Тткв Іі Бех Аза Тук Авп о п3Уу Авп ОТИХ Ави отТух Аза біз був без бів ї З 19 15 іт -2105 180 «-211556 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 180 сіу Тух біу Меї Авр Уаї 1 5
Коо) «2105» 181 «21156 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 181 (БіУ Тук Уа) Ме Ар УВї 3 5 «2105 182 «211513 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 182
Зек біу Бек бек Бек Авп Ті біу дБп Авп Рпе Уаії Бег 1 5 .18 -2105 183 «21157
«212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 183
АворотТух Аап Був АхЯ рко вес «2105» 184 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 184
Ав Бек Авп о був АкКо Вко бехг 1 5 -2105 185 «211511 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 185 сіу тик Тер Авр Бек Бек ГБемш Бех б1у Тук Уаї 1 5 10 -2105 186 «211511 «212» Білок «213» Ното заріеп5
Зо «400» 186 біу Тк їтр Ар обег Ббес Пец бек Аїа Тук Ууаї 1 5 10 «2105» 187 «211511 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 187 сіу тв: Ткр о двр Бех Бек бе) бек Бек Тук Чаї і в 16 -2105 188 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 188 біу вне Твх вВБе бБег бек Ре біу Мей Вів 1 5 10
-2105 189 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 189
З1у вве ТТН вне Авпобех Ра с1у Мес Нів 1 5 .10 «210» 190 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 190 пі ВБе Твк о РБе ака Бех Тук біу Меї Нів 1 5 10 «2105 191 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 191 їеа Ті Тер Ав Авросіу Бег Ави ув Тух Тух Аза Авр обек уаї Був 1 ІЗ 16 15 о1їу «2105 192 «211517
Зо «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 192 ї6) ї1е Ткр Бек Авр о біу Бек Авр зЗіс Тухк Тух Аза Авр бек УМаії Був
НІ 5 10 15
ЗБ ві -2105 193 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 193 їви ї1іе Ткр Бех Авр біу Бех Авр Був Тук Тук Аїа АвробБех Уаї Був 1 5 18 15 віт І «2105» 194 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 194 їн їі Тхр Пія дир біу Бех Ап Тих Тухг Тух Узі Авр бек Чаї Ппув 3 5 10 ї5 сію 2105 195 «211513 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 195 дів її Аїа Аїа пев Тух Тук Тух Тук біу Меї Ар Уві 1 5 10 «2105» 196 «2115 13 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 196 сі тів Азія та) Азїа Тук Тук Тух Тук піу Меє дяр Уаї
І 5 10 «2105» 197 «2115 13 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 197
Бех Біу Бех Бек бек Авпип їі БСіу бек АВ Ттбх Уаї Аво 1 5 10
Зо -2105 198 «2115 13 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 198 бех щіуУу бах Бех беї Депо оТ1іе сіу бек Мув Тит Маї Ав ї КУ 10 «210» 199 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 199 веб Ач) АВ оАкс Ак РКО Бек 1 5 -2105» 200 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5
«400» 200
АкчЧ Аяв авпосіп Ак Рхо во 1 З «2105» 201 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 201 діа Аїа Ткр дДвр Двр бек Бей Авп о ТЕр Уаї 1 5 10 «2105 202 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 202 піу вве Тих Ре Бек Акч Тух Тур Мек Бек 3 5 10 -2105» 203 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 203
Зо чіу пес Так пе Бех Ада пе Тер Ме дек 1 5 10 «210» 204 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 204 а1у рве Тк Рре Бех бек Тух Ткр Меї бех 1 5 іо «2105 205 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 205
Ав п оїіє Був Ні Ар сі бек бій Туз Тук Тук таї Авр бак УЗЮ цув 1 5 10 15 су «2105» 206 «211517
«212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 206
Авпої3фе Був біп Азросіу Вес сі Пув Тух Тук Чаї Авр Бек Чаї цу 1 5 10 15
Зіу «2105» 207 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 207
Зіз Бех АвпотТкЕр о піу впе Аза Ве Авр Чаї 1 Б 18 -2105» 208 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 208 бій Бех Авп Тер б1іу Ріє Аіа Ра Авр ї16 ї 5 10 «2105» 209 «211511 «212» Білок «213» Ното зарієп5
Зо «400» 209 вх іа Бек біп Бех іє Бек беж Тух меш Авп і а 10 «2105» 210 «211511 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 210
АхЗз вів Бех зів Бек їїі6є Бех Ї1ї16є ТУук цев дв 1 5 19 «2105 211 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 211 діа віз бах Зах Ббев біп Бехг
«2105» 212
«212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 212 ліз Аїіа Аїд Бек реч сів век і 5
«2105 213 «21159 «212» Білок «213» Ното заріеп5
«4005 213 зЗіп біб беж Тук Бех Бек рРко ї1їеє ТНЕ і й «210» 214 «21159 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 214 бів бів Зех Тук бек Аза Бго Ії ТНЕ і В «2105» 215 «2115 10 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 215 сбіу Бе Тк Ре бек Вех Тук Аїа Меї дай 1 У 19 «2105 216 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 216 тах Іїе Бек Сіу Бех бі1у Авр Авпип Тах Тух Тух Аіїа Авр Бех Чаї Гув 1 5 10 15 ву «2105» 217 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 217
Тис Тіє Бек біу бек біу сіу Ап Тиг о Тук Тут Аїа Авр Бек Уаї їв 1 5 10 15 «2105» 218 «211512 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 218 уз Ре о таї їі Мех Уді Тух дів Мет їмо Авротух 1 5 10 «2105» 219 «2115 11 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 219 дка віз Бех сін Аку Ті Бек Ап Тук беи бек і З 10 «2105» 220 «211516 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 220
Ак Бех бек бів Бек Пец пе Нія Бек Авв біу Тук Авп Ре бецп Авп 1 5 10 15
Коо) «2105 221 «2115 14 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 221 твЕ О0О1у ТВх бех бек Авр чаї біу Авоп Тух Авп бви чні Бех
І 5 10 «2105 222 «2115 14 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 222
Трж сіу бех ех бек о Авв тів біу діа біу Тут Азв Уві Ні 1 5 їо «2105» 223 «2115 14 «212» Білок
«213» Ното заріеп5 «400» 223 тних бі Бех Бек Бек Ап їіе біу діа Ні Тух двр уаї нів 1 5 10 «2105» 224 «211513 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 224
Бек біу Бек Авп бек Авп ої1ів біу Авл Авп Тухк Уаії Бех 1 5 18 «2105» 225 «211511 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 225
Беж о1іу Авробук їм сіу Авр о пув Тух Аза сСув і В 160 «2105» 226 «2115 12 «212» Білок «213» Ното зарієп5
Зо «400» 226
ТИЖ Пси ех Чех сіу Тук дек бек тТух єї Уаї Авр 1 5 Іо «2105» 227 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 227 їво зіу Бек нів ду дів щехг і З «210» 228 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 228 віз ба) бек Був Ага ро Бех
БО і З «210» 229 «21157
«212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 229 чу ави Бек Ав Ага рує веж ї 5 2105» 230 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 230 сіу Аа Тк Тух Ах рРко Бек 1 5 «2105 231 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 231 ет Ава Ав біп Ак РКО Бек і в «2105» 232 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5
Зо «400» 232
АЗв АВ да о цув да вко Бек ї 5 «2105» 233 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 233 бів Аве Тк Бу Тр вхо во 3 5 «2105» 234 «21157 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 234 чаї вво твс сі1Уу б1у Те чаї 1 В «2105» 235
«212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 235 бів біб бек Тух Беж Таж хо без ії 1 ву «2105» 236 «21159 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 236
Мек бів чаї цез бів тТВх Рко Ре ТЕ 1 5 «2105» 237 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 237
Сув Зек Тух Аів біу бак бак тих Бей; уаї 1 5 10 «2105» 238 «211511 «212» Білок
Коо) «213» Ното зарієпо «400» 238 бів бех Тух двр бек Бех Ге Бек біу Бех Уа)
Ще 5 10 «2105» 239 «211511 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 239 сів Бек Тух Авр Аво Бех пев Бех сіу чаї Уві 1 5 19 «210» 240 «211511 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 240
Аіа чаї Тур Азр Ар Бех Пси Аяп сіу Тер Уаї 1 5 10
«210» 241 «212» Білок «213» Ното зарієпо «400» 241 сФіу Тк ТкКр о Авр о йех Зег ей бек Аїа уаї уаї ї 5 16 «2105» 242 «21159 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 242 ої Азїа ТЕр Авр бек ех Тк Узі Уві 3 5 «210» 243 «211518 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 243 дек Авр о Тух Нів Сув 01 Аза Авр Ні б1іу бек біу так два Ре Уві
У 5 10 15
Уаї чай «210» 244
Зо «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 244 с1іу тує Тв рнНе тТвж Бек Ту сіу Хі Бек ї В 10 «210» 245 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 245
Біу Ве ТВх вро бек Бех Тух Аїа Межб Вехг 1 З 18 «210» 246 «211510 «212» Білок «213» Ното зарієпо «400» 246
Бі ЕВБе о Тбк пе бек Бех Тух біу Мех нів 1 З 108 «210» 247 «2115 10 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 247 сіу Ре Тну Ре бек Бех Тух Бек Меб Ав 1 во 10 10 . «210» 248 «2115 12 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 248 -іу біу Бек ї11є Бек Бек б1у сіу Тух Тух Ткр вк 1 5 10 «210» 249 «2115 12 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 249 піуУу спі Бех ї1і6 Бек Зек бек Авор тТук ТУкх Ткр Бек 1 5 10
Зо «2105» 250 «2115 10 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 250 сі Біу Бек Впе бек Аза Тук Тук тТкр. Ап ї в їз «-2105 251 «2115 12 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 251
Зіу Авр бех Уві Вег Зах Аве Зек Аіз Діа Тхр Ави 1 5 іо «2105 252 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5
«400» 252
Тжв Іі бек ТВх Тух Ап осіу Авп оТах Авп о тТух Аза сіп ув маї бій 1 5 о 15 пі ! «210» 253 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 253
ТВЕ о тіє беж бі беж спі с01у Акзт ТВІ Тук тТух Аа Авр дех уаї ув 1 5 10 15
ФІ
«210» 254 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 254
Ууаї тів Тер ТУ Авропіу Беж Ар був Тух Тук Аза Авр Бех Чаї Був 1 З 10 15 су «2105» 255 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 255
Іі їі Тхр тТук Авр Сіу Бех Ав Був Тук Тук Аза Авр Бек Уаі Був 1 5 10 15 се1у
Зо і «2105» 256 «211517 «212» Білок «213» Ното зарієпо «400» 256 цех її Беї Берг Бек бек беїт Тух їі1є Бех Туж Азча Авр пек Уаі Був 1 « 16 Ії щу «2105» 257 «211516 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 257
Тух ї1е Туг Авп Бек біу Бех ТВк Тух Тук Або Рко бек Без цуз бек 1 КІ 10 15 «2105» 258 «211516 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 258
Ту зів Тух Тук бек З1у бек тТвЕ ТУх ТУух Авп о рКО Бек и Був Бех 1 5 10 ї5 «2105» 259 «211516 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 259 біз ї1їє АвпоНів бек б1іу АкЯ Тк Авр отух дво Рго Бех Пезч був Бехг 1 5 10 158 «2105» 260 «211518 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 260 ахч тих Тух Тук Ак ех пуз Тер Тух цув айва Тух йех уаї Бек Уа1 1 5 10 15
Був Щаг :
Зо «2105 261 «-211556 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 261 біу Тук ТВвх Акц двв Тухг 3 5 «2105» 262 «2115 8 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 262 біч уаі біу Бех Рхо Рле Авр о тТух 1 КІ «2105» 263 «2115 14 «212» Білок «213» Ното заріеп5
«400» 263 біб тТвж біу ро Бей Був во Тукх Тух Тук біу Меє Азр чаї 1 5 10 «2105» 264 «2115 13 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 264 вка чіу сіу їм Аза Аза Аку Рхо сіу біу Меб Авр Уві 1 я 10 «2105» 265 «2115 14 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 265
Аво ТУК во ре Ткр о бек Аія Тук Тук Айр Аза Рі Авр Уа 1 З 16 «210» 266 «211511 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 266
Зо сій Авр о тТВе о Аїа Меб Маі Рко Тух вне АвроТує 1 5 19 «210» 267 «2115 12 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 267 сіу сі уві Твкотвк Тух Тук Тук діа Меб Авр уві і 5 10 «210» 268 «2115 8 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 268 біу сіп пе) уаї Рко Ре дер Тк «210» 269 «21159
«212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 269 сі біу Бко Тк діа Аі1а вне дар тТух 1 5 І «2105» 270 2115109 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 270 зів бек Від Сей ТВу біп Рто Аза Бех аз бех біу бек рРхо с1у іп 1 5 10 15
Беж Ті ТЕ Ті Бех Сузв Те біу Ток бек бекг Авр Уаї біу біу Тук 20 25 30
Аап Кек Уві Зех Ттр Тух біп сіп Нів Рго бі цув Віа Рхко цув Гец 35 4й 45
Меї Іі Тук біс Улі бет Авп о АгЯ Ркго Бек біу Уаї Рпе Ав Ах Ре 5о0 55 60
Чек піу бек Був бек біу Ава тТвг Аза Бек це тв Іі Бех біу ге) 55 7 75 во сіп Аїа бій Авр осі Аїда Авр о Тук Тук Сує Аво бек Тук Тк дек Тих 85 зо 95 пехг Мес Уаї Бе біу піу біу Твк Пув Пен Твк Уві Бей 100 195 «2105 271 2115109 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 271 біп бек Азїа пеп Тк біз ко діа бех Уаії РВйе 41у Бех рРко бі1у біп 1 5 їа 15 бек їіє ТвВк Ті Бех Суз Твж біу ТВвх бех бек Авр Уві с1у АЇїв тТуг 20 25 30
Авп обех Уві Бек ТЕр Тук біп сій Нів Рко сіу БПуя Аза Рко Був Ак 35 4й 45
Меї їі Тух 03) уві бек Авп Ака ко бек сіу уві Бех дви Ака рве 50 5 60 бек Зіу дек Був бек біу Ап Тих А1а Бех Пен Твж їіе Бек бі Іво 5 7 75 80 «іп Аза біз Авробіз Аза Авр отТух Тук Сув Зак бек ТтТухк Трх Бек тТвВЕ 85 зо 98 два оМеє уві Ре с1іу бі бі тТВк Був Бей Тк Уві Бей 100 195 «2105 272 2115109 «212» Білок «213» Ното заріеп5
Коо) «4005 272 із бек уві беи тн біп врхо Рхо Бех Віа Бек бБіу Рхо Рхо 1у бід 1 к 16 15
Ак Маі Тит Іі Бе Сув Бек сіу Бег Бех Бек Авпої1ївє біу Бех Авп аа | 25. 30 тн Уві Авв отр отТух бів бів пе) Рго 01іу ТВх Аїа Рко Був без Бей 35 40 45 їі Тух бек Авп двп Аг Ак Рхо Бех сіу Чаї РКО Авр Ах вве Бех 50 55 50 «біу ех ув Бех Чіу ТІ Бек Аза бак Бей йїа 11е Бек сіу ей бін 70 75 850
Бек йіз Авр біз Аза Авр о Тук Тук Сув діа Аїя Ткр Авр дер бек йец 85 90 95
Авп оТхр Уві Ре піу сі п1іу Тк Був во ТВх уаії Ге 1050 185 «2105 273 5 «2115109 «212» Білок «213» Ното зарієпо «4005» 273 сів Вех Уаї цей тТВЕ сів Рхо Ркго Бек Аза бБег бі Рхо ро бі бів 1 5 15 15
Вт уаї ТВї їіє Рре Сув Бех біу бек Бех Бех Авп Її б1іу Бех дві 20 25 30
Тк Уаї Азп о Тер о тТук бів віп Бей реко Ф1у Твх Аза Рго був без Те 35 40 45
Ті Тук Бег Авп Авп о Ако Ага Рхо бех б1у Чаї рРко Авр Ака Бе бах 50 55 бо бі Вег Пуз Зак біу Тйх Век Аїа Бек Бао Аіз Т1в бек 01у Геч біп 55 70 75 | 80
Шек бів Авр обі Аза Авр Тук Тухк Сув Аїа Аіз Тгр Авр Аве Бех їжи ва зо а5 вп о Ткр Уві Ре сіу 01іу сіу Тих Був пе) Тк Уаї цем 100 105 шо «2105» 274 «2115106 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 274
Бек Туг біш йец Тих біп Рко РКО бек Уаї дет Уаї Бех Рго бі біп 1 5 19 15
Твх Аіа бек Ії Тк о Сув бех біу Адвр цузв Бей 01у Авр був Тук Аїа 2 25 30
Сув Тткр тТук зЗіп біп Був Рко 201у бів Бех Рго Маі без Уаї їіє Тух 38 40 45 сіб Авр Бех ув АкЧч Рго Бек біу ї1іє Рхо сі: Ак Ре бек 01у Бех 5О 55 бо
Ап Бек біу Авоп о тВк Аза ТВ о бей Тв о ї1е бек біу ТвВкК біп Ата мех ва 70 7 во
Авр с10 Аза Авр Туг Тух Сув сіп діа Тгтр Авр Бех Бек Тих Маії Уві 85 50 95
Ре бі біу сіу ТВвк Був бео ТтТвк о Уаї Бей 100 105 «2105 275
«212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 275
Беж Тухк біз іїб) Тк сів Рго Бує Бек оуаї бек Чаї Бек Рхо свіу іп 1 5 10 15
Твг дія Ака І1є Тс Сув Бех б1іу Авр ув пев б1у Авр Був Тук діа 2 25 30
Сун ТЕр Тук віп біп Був рко біу біп Бек Рто уаї рей уа)ї Т1е Туг 35 40 45 . пів Аве Твх о ГБув Тгр о вРго їен б1у Ї1е Рко біз АкФ РБе Бег б1у бек 5о 55 о їув бек сіу Авп Тих Маї Тв їв. Ту Хі Бек б01у Тк біп Аза Мех
З 70 75 80
Авр сіб Віа Авр о Тук Тухк Сув сіл Аза Тер Авр о беу бах Твк Ууаї Ууаі 85 30 95
Рпе біУу с1у с01у Тік Ппув їву Ту Ууаї Ге) 100 105 «2105 276 «2115107 «212» Білок «213» Ното зарієп5 400» 276
Зек Тух біс пе Тр о біп вхо Вко Бех Уаі беж узі Век о Бго сіу бів 1 5 10 15 тТнЕ Аіа беж їіє ТЕ Сув Бек біу Авр Був Бе) піу дво був Тук А1а
Су Тжр о Тух со1а сів Пув Ркго сіу сів бек Бко уаї ес уа1ї Т1є Тух
Сіз вар Бех дув Ака Рко Бех біу Ті ко біч Ах Рпе Ввк сіу Вег 5 60
Ав обек сіУу Авп о Тв Аза Тв Пец Твх їїе Бех піу ТВвх вів віа Меб 65 78 75 о
Аврв обі діва звроТух Тух Сув біп Аїа Тр Авр бек Бех Тк діа Уві 85 90 95 туаї пе с1іу біу біу ТнкЕ Був ем ТВ Уаї еи 100 105 «2105 277 20 «2115107 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «4005» 277 25
Бех Ту січ їни іє бів Рго Рго Бек Уаії бек аї Бек Рхко б5іу віп 1 5 .10 15
ТтВк віз бек Тїє Тож Сув бек біу Авр Буз бей 01у Авр Сув Тух Азїа 20 25 30
Сув Тер Тух бій Ак ув Рхо біу іп Бех Рко їі реп Уаї І1є Тух 35 40 45 сів йвр ТвВху був Ак Рко бек с01у Ї16є Рго бі) Аг Ре бек б1у Вех 50 55 бо
Авп бек піу Аво ТЬк діа ТВк опе) Так Хі Зек біу тах бів Ліз Меб 55 то 75 во
Авр біо Аза АвроТух Тух Сув сіп Аіз Тер Авр Бех Бек ТВк Аїіа Уві 85 а0 95
Уві рн бі ві біу Ту був Бей тТвх Уаї Пец 100 105 «2105 278 «2115 120 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 278 бів баї бів без біз бі Бек Сіу Рго піу без Уаї Пув Рко Бек біз 4 5 ! 40 8
ТтТВЕ рес бек рей Тис Сув Тих Уаї бек біу біу бек їі Зех тТвх Тук 20 25 30
Туг Тер Бех Тер І16є Ак біп Рко Рко біу Був біу Пец бій Тур 116 35 40 45 сіу тук ї1е Рук Тух Бех сіу Бех Тк Авп Тук Авп Рхго Бех Меп Гу 50 55 60
Бек Ак Уаії Так ї1е Бек уаї Авр ТВвх бек Пув Авп біп Ре Бех Пец ва за 75 во пу без бек Бек уаї ТЬх Аїа А1а Авр Тк діа Уа1ї Тух Тут Сув А1а 85 90 95
Ах біу бек Туг бек бек біу Тхр Ре бій Ре Авр Туг Тгр біу сбіп 100 105 110 сіу тТвг їз уаї Тв Уві бек Бек 115 120 «2105» 279 «211512 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 279
ТЬк їев Бек бек біу Тук бек беж Тух біч Уві Авр 1 5 12 «2105» 280 «211512 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 280
Чаї Авр ТВх Сі біу Ізіеєе Ууаї біу бек був 017у іч 1 5 10
Зо «2105» 281
«2115 13 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 281 сі; Аза Авр нів біу бек біу Так Авп оре уаї Уві Уві 1 5 10 «2105» 282 «2115 22 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 282 пів вко Уві Без Твжх біп рго Без Рйе Аза бБег Аїа Бек Бей б3іу Аіа і З 19 15
Бек ув Тк оби Тк Сув . о «2105» 283 «211515 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 283
Ткр ТтТух біп біб Акгу Рго біу був б01у Рко АкаЯ РБе Уаї Мек ка 1 в 10 15 «210» 284 «2115 32 «212» Білок
Коо) «213» Ното зарієпо «400» 284
З1іу ті хто Авр Асу Ре Бег Ууаї Пем с1іу Бек сіу Пе) бе? Аку тТух 1 5 10 15
Тео Тк їі Бук Ави Ті 015 бії бій вро біо бек Авр Тух Нів Сук 20 75 30 «2105» 285 «2115 10 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 285
Ре Біт Біу Ззіу тах був Бей тк Уаї бей і 5 10 «210» 286 -2115108 «212» Білок «213» Ното заріеп5
«400» 286 бів бек Аза це) Тк бів ко Діа ех Уаї бек піу Бек Рго біу бів 1 5 10 15
Зак Т1іе Таб ї16є бек Сув Тпж біу Тпх Бек бех Авр Уаї сіу Аку Тук 29 25 за
Ав обех уа1і Бек Тур Тук сіп нів Нів Рхо б1у Був Азїа Ркго Був Уві 35 40 45
Ме: Ї1е Тук біз Уаї бек Авп Ака Рко бек біу Уаї Бех Тих Аку Рве 50 55 60
Беї біу Бех Пув Бек сіу Авп Тпх Аіа Бек Бец тТПпжх Ії бек біу Бей 65 70 75 во біп Азія бі: Ар обій Аза Авр Тут Тук Сув Чек Бех Тук ТПж бек Бех 85 930 958
Бек Уві аї ебе бі біу біу Тв Був бей Трх Уві 100 105 «2105» 287 -2115108 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 287 ів бек із без Тік сіп Рхо віз Бех чаї Бех с1у Бех ко 51у бів
М З 18 15
Бех Ті Тну І1є Бек Сув Ту сі1у Тих беж йех Авр уві сіу сі Тук 20 25 зо
Азп Бех уаї бек Тюр Тук біп біб Нів Рко б1у Ппув Рко Ро Був жу 35 40 45
Меї І1е Тук біо Уаї Бех Авп Ак9 Рго Бех біу Уаї Бек т11е Акад Ре 50 55 бо
Нек б1у Бех Був Бех с1іу Ап Тк Аїа Бат Бей ТЬг І1е Бех с1у Бей 65 70 75 80 біп Аза іш Авр б0)п Аза Авр Тух Ре Сувз Бех Бек Тух Тих Бек ТВЕ 85 90 95 ех неї Уаї Рпбе біу бі біу твж Був Гец Ту чаї 100 105 «210» 288 -2115108 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 288 біп беж Аа пев ТВк біз Рко Аза бек чаї Бех біу Бек Ркго біу біп 1 5 10 15 бек тів Тих Іі Бек Сув Тих сі1у ТВхк Азов Бек Авроуаї с1іу б1у Тухг 20 25 30
АвпоБек Уаі Бех Тер Тух бів бів нів Рко біу Був Вко Вго Був Бей 35 40 45
Меб Ії Тух бів Узі Бех Аза Ак Рко Бек б1у їіє6є Бек Авп Ак4 Ре 50 55 60
Зек біу Бех Був Бех біу Авп Тах Аїа Бек їец Твх їі бек сіу Гез 655 70 75 80 сій Аза сій Авросіц Авіа Авр Тук РБВе Сув Бех бек Тук ТІ Бех Тнх 85 зо 95
Бек Мебї Уаі пе біу біу біу Твх Був Пец тп Уаї 1090 105 «210» 289 «2115 122 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 289 сій Уа Нів Пец Уві біз бек бі біу біу Уаї чаї бів Ро біу Ах 1 5 10 15
Бех цей АкЯ Пей бек сСув Аза Аіа Бех біу Рпе тих рве Бех Бек Рпе 20 25 30 сіу Меб нів Тер Уаї Аг бів Аза Рхо б1іу Був біу Пе б1з Ткр Уві 35 ай а5 діа без Хе ТЕр Аво Азробіу бек Авп Був Тук Туг Аза Авр бек Уаї 50 55 ва уз піу Ак Рпе ТвЕ їі Бек АкЗ Авр Авп бек Був Авп о Тйх ем Тук 55 70 78 80 їшч біп Меї Авп о бех Пе) Аку діа сій Авр оте А1а Узі ТУук Тухк сСув в5 Зо з5 діз Аго Аза Т1е Аза Азїз Без Тук Тук Тук Тук с1іу Мек Авр Уаі Тер 109 105 110 сіу нів сіу Тих тТлт о Ууаї твк о Ууаї Бек бБег 115 120 «210» 290 «2115 122 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 290 бін Уаї бів пес Уаї 610 Бек біу піу сіу чаї Уаї бів рРго біу Ахд 1 В 10 15
Зах Бей Аку Ге йех Сув А1а Аїа бек біу Рпе Трх Ре бех бек Тухг 20 75 30 сіу Меї Нів Ткр Уаї Ак бів Аїа Рго біу був біу Пец бій Сув таї 35 40 45
Аїа їі6 Тіе Тер Тух Авр б1у Бех Авп ГПув Тух Тук Аїа Авр бег Уаї 50 55 60 був біу Ако Рпе ТВх І1і6 бек Ак4 Авр Авп бег пузв АвпоТвкК Бей тух 70 75 о їжи сіп Меб Авп обБег о Пе) Аку Аза 013 Авр Твк Аза Уаї Тук тТук сСув 85 90 95
Аіа Ак Аку піу піу Бей Аза А1а АкаЯ Рго б1у біу Меб Авр Уаіїі тТтр 100 105 110 сіу сів с1іу тТвх тТвк оУаї ТвВроуаї бек Бех 115 120 «210» 291 «2115 121 5 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 291 бів таї бів пес Уаї біб беж біу біу біу уаї уа1ї сій рко біу Ак 1 5 10 15 бек йесп Ак Пес Бек Сув А1їа Аіа Бех сіу Ре ТВжх Ре бек Бек рве 2 25 30 сі Меї Ніж Тур уУаї Акч сіп Аза Рго біу Був біу Без біз Ттгр Ууаї 35 3) 45
Аіїа пей І1їе Ткр Аво Аво біу Бех Авп був Тух Тук А1а Авр Бех Уаї 50 55 во
Був ві Ахоа Ре Тнх Іі Вег Ах Ар Ав» о бес пу Ап Твх пейй Тук 65 70 75 во
Ге біп Меї Або о бек ей Ако Аза біо Азр о ТВк Аїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 935
А1із Ак д1із Ті Аза Аза Ге Туг Тук Тук Туг піу Меї Авр уаї Тер 100 105 110 біу біп бБіу Тк ТвВх уаї ТВхк Уаї век 115 120 «2105» 292 «2115 119 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 292 с піп Уа с01в без уві біо бек б1іу 51у біу Чаї Уві біп Рхо с1у АгФ і 5 10 15
Бек Геч Аку їжи Век Сук Аїа Аза Бек сіу РБе Тпх РБе Бек бек Тук 29 25 30 с1іу Меє Нів Тур Уаі йку біп Азїа Рго біу Був б1іу Ббеш біз Ткр уві 35 49 45 із т)1Єє їіє Тер Тук Авр сп1у Бек Авп Був Тух Тук Аїа Авр Бех Уві 50 58 6 їув 21у Ахо Ре Тк ї1іе Бек АкЯ Авр Авоп о бек був Аво тат Пео Тук 55 То 75 во ісц бів Меб Авп о бек пей Акуд Аза бів Авр о ТВкс Аза Уаї Тук Тук Сув в5 90 95 діз Ака Аха біу біу Бей рго с1іу сіу Меє Авр Уаї Ткгр сіу біп щіу 100 105 110 тТвЕ тк оМаії Тйх Уаії Бек век «2105» 293 «2115 327 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 293 сазсесусос гзасксазєс бусюсбссувУу бебодурсво сездасазес захсассакс во
Ксскосаєто здавссовоозоа голос ч частаїаасї ссабсессоса чевссвасач 120 сасссвчузуса авусссссва асесаєчаєє баба кса зсаассчуєєс стсазудаєе 180 севаєсосєх сехекодете свауїстуує аасасудест соскчассає стскачадастес 240 саводссозаза асазвадскча кастастос вастсатата сазусассау сабсясаєке 300 чзоссоЧчасоазча соввостваас собоста 327 «210» 294 «2115 327 -212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 294 сзакстассс счастевусс сусстссУу сссудоувем стдуаєсауєс дабесвссабс 60 їсссоуєзсБу давесзосзу сзазочусезУє д9ссасавох стассрообо зкассвасвзч 190 сззосвозуса аассссесва асбсабрцЧаїх бабоадаєса зсазсодасо стсачаачеє 180
Ксбваксаст псевскоацчевс савоссвоуес авсасуусех состдассах стссудуєве 40 сказзетовоуд зесдаовеева веавЕксвос зоастсатаба савосассад сагодссїке 300 зЗчеззачода ссавусічає субсста За «2105» 295 «2115 318 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 295 їсстаїсазчо саасссвадсс вессесбсаубу босубуєссс саддасадас адосазаако 60 воистЧиксоку зачасаааєх зуззЧатааа бабудссбас чабассадса чдаачссааас 120 сацтсссскоа сзсїзУїсах стаєсададх ассаачічує ссгтадудає сесбдацеуа 180
БЕсеістЗЗсЕ ссаааєссоаа заасасадєо астстувсса ссачеуузає ссваодстаєу 240 чахсоазодетса асізсттвску ссадусоуєуз дасзаабадса сесусадсаєє сдососадзаа 300 зосзазскза сосок 318 0)
«210» 296 «2115 327 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 296 сачістдски боастсвачюс Єдессбссубу КеБузувсве сбадасадіє забсассако 60 тсссасассто дайссачсевз зас зу тасавсї ссдссссстЯ дсвосвасач 129 сасессадуса задсососва всбсакочаєє каєчазаєса зкаассудсес сксазучкх 180 тстадіссе ссбссдоасес сазубостоЗс аасаєсудесе сеседасесає сгсбоачеве 440 сзачебозаочу асчазусєтуа ссассастоус аагсїсабата сазаодсассац сатсаатаєтс 300 чЧессзазвоз ссвзачеосоаао сзвоска 327 «2105» 297 «2115 215 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 297 піз Бас Аїа рем ТС бів рсо діа Бек Уаї Беж б1у Бек Рко «1у їв ї: я 16 15 зак тів Тк Ті бек Суб ТНх біу ТНК Бех Бек Авр Уаї сіу пі тус 29 25 30
Авп бек Уві дек Тжр тух сіп сій нів Рко біу був Аіза рко Був Бей 35 40 45
Меї їіє ТуУух біз баї Бех Авп Ак Рко Бек 51у Узі Бех Авп Ага Ріє о 55 60
Бек сіу Бек Мув Бек спіу Авп ТК Аза бек Пез Тих Ї1е Бех с1у Сем 55 70 75 80
Чіп Аіа біо Авр сії Аза АвроТух Тух Сув Авп бет Тук ТЬк бек тТву в5 чо 95 чех Меї Уаїі ре біу сіу сіу ТВж Був їні Твк оУаї Бей бі біз рко 00 405 110 цу Азіа Аза рко Бек Уаі Тк їєбш РБВе Вко Рто бЗех бек іп бій Бей 115 1250 125 сів Аіїа Азп Пує Аїа Тахо Пе уаї Сув цей ї1іе Бех Авр Рпе Тух рРго 130 135 140 б1іу Аїз Ууаї тах Угз) Аза Тур був Аіа Авр Бех Яех Рге Уаі ГПуч Аїа 145 150 155 160 сбіу Уаї біц Тк ТВк Так о Рхо бех Пув бів Бех Авп Авп цув Тук дів 165 170 175
Аіїа век бек Тук йес бек цей Тих Рго січ с01п Ткр Мув Бек Нів Аху 180 185 1930 бек Туг Бех Сув біп Уаі Ту Нів біз біУу Бек ТВвк Ууаії бій Пув ТВЕ 1958 205 205
Уаі лін Рус ТВх січ Суз бехг 210 215 «2105» 298 «2115 230 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 298 піз уаі біз бе Узі бів Бех с1у діа біб Уаіїі Був був рхо 017 Дів 1 З 10 15
Бек Уаї Пув уаії Бех Су Був Аза бек б1у Тух Таж Пец Тжх Бек Тук 20 25 30 біу її бех тер уУаї Аку бСіп Аїа Рко біу бів біу бев біб Ткр Меїх 35 40 45 біу Ткр Уаї бек вре Тук Авп біу Авп Таж Авп отТук Аза б1п Був Гей 5о 5 60 біп бі Ах а1у Тк Меї Твк ТЬк о Авр о рко Бех Тих Бех ТВвк Аїа Тук 65 70 75 во
Ме бів Гео Ак бек бе Ака Бек Авр Авр о тах Аза Уаї тТук Тух сСув зо 95
Азія дк сФіу Тук сіу Меї Авр уаії Ткр біу бів біу ТВвх Тв 7аї ТВк 199 105 110 таї Бек Бек Аіа чек Так Пув С01у Рко Бех Уві Ре Рко Пе Аза Рко 115 129 125
Зек бег був Бек ТБЕ бБег біу біу Тих Аїд Аїй Пеи біу Сув їжи Уаї 139 135 140
Був Ав Тух Ре Рго М Ро Уаї Ту Уаї Бех Ткр дДвп бек біу діа 145 155 155 150 їєц ТВу Бех біу Уа) Нів Ту РБе Рко Аїа уаї бев бів Бек Бек біу 165 170 175 їв) Тук бБег рей бек ВЗек Маї Уаї Тижх Маї рРжо ех Бех Бех без с1у 180 185 190 тТпи бів Твх Тух їіє Сув Ап уаї Авп нів Був рРхо Бех Ав о ТвВк Був 195 200 205
Уаії АвроБуз пу Уаї біз Рхо Був бек Суз Аїа діа Авр бій чаї Авр 210 215 220 нів бів нів нів Вів нів
Ка 230 5 «210» 299 «2115 217 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 299 пім бек уУаї цей ТВ: бів Рко Рго Бех Узі Бех сіу Аїа Рго біу бів 1 Б 19 15
Ак Уві ТВк ті Чех Су Так б1у Бех Бех Бек Авп І16 п1у Аїа біт
Тук Квр Маї Нів Ткр Тук біп бів реп Рхо 01у Тк діа рко Був без їба їі Бек спіу Авп Бек Ав Ак Рко бек біу Маії Рко Авр Ак Ріє «й ак | ва ек сіу Бех Був бек біу Тих Бех Азїа бех ем дів Ії Твж с1іу Ппецй 655 70 75 80 бів Аїа біз Авр біч Азїа Авр о Тук Тухк Сув бів бек Тук Авр Зех Бек як 90 з5 ївч Вех біу Бек Уаї Уйе сіу сіу сіу Тих Був ем ТвВх Маї цеш сіу 100 105 10 бів Ркб цуз А1їа Діз Рхо бек Уаї Тах Гей Бе рго Рто Бех бек 51; 115 120 125 біз їйес бій Аза Ажп Був Аза ТаХх їни Уаї Сув без їі Вех Авр рНе 130 135 140
Тух Рхо піу Азїа баї Твк оУаї Аза Тер Був Аза Авр Бех беж Ржхо Уаї 145 150 155 160 пув Аза зіУу уаі біз Таж Твх тах рРхо Бех був бів Бех Авп Авп Був 165 170 175
Тух Аза Аїва Бех Бех Тух Пец бек бе) Твх ко біз бів Тхр Був Бех 180 185 190 нів Ак бек Тук бек Сув біл Маї Так Нів 013 сіу Бех Тк Уві 91) 155 200 2905 цуУув ТвВЕ Узі Аїа вхо Тих біз Сув Бех 210 215 «2105 300 «2115 238 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 300 зів Уві бій Бей Уві біз Бек с17 сіу біу Без таї Був Рхо б1у ту 1 і 5 16 45
Чет бе дуЯ пе) Бек Сув Аза Аза Бех сі Ра твх Рпеа Бех Бек Тух 28 28 30
Чек МОЖ Ав оТкроУуві Агу сіп іа рго біу Був піу Пей бій Тер Мах 35 40 45
Бех Бех їі беж бек Бех бек бек Тух І1їє Зек Тук Аза Авр бЗех Уаї 5 55 60 пу Ту аку РНе тних їїе Бек Ак Авр Авб Ата Був Авп век бей тую 55 70 | т7а во їва піп Мес дв бах без Ага Аіа біз Авро Тв Аза Уві Тук Впе сСув ва 50 95 ді Ака дкротух Авровне Тхробех Аза Тух Туг Авр Аза РБе Авр о таї 100 105 1190 тер піу бів біу ТВЕ Меї Уаї Твж Уаї бої бех Аіа Бак ТтТВк був 51у 115 120 125
Вко бех узі Ейз орто йо діа Рго бек бек цув беж ТВх бех сіу бі 130 135 140
Твк Аїа Аіз пе біу Сук без чаї Був Авр о Тук Ріпа Рго бій Рко уві 145 159 155 160
ТвІ Уаї Бек Тер Авп обек піу Аїа ГПеп ТЬу бек б1у Уаії Нів Тву Ре 165 170 175
Ркоз дів Ууаї цес бСіп Бек бек сі1у Пе Тук Бех Іви бек Зех Уаї Узі 180 ї85 190
Тв уаї Бко чек Бек Бек ей 01у Тк біп Тих Тук І16 Сув Авп Ууаї 135 280 205
Авп нів пуб Бго Бек Авп Тс Пув Маї Авр МПмув був Уаї біз рРко Був 210 215 220 «Вег Сув Аїа АТа АБр осі Уаії дар Нів Ніз нів Нів Нів Нів 225 230 235 «-2105» 301 «2115 218 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 301
Аїа ївиц піп бек Заї пев Тнк біп Рко Рко Бек Аїа бек б1іу Тік Рго 1 5 10 15 біу бів Ак Маії тпх Ті бег Сув Бег сіу Зег Бег Бек деп ї1іє п1у 20 25 30
Бех Аа Так уаї ввп оТер Тух біз біз Бей Рко біу ТВх Аза Рго Був 35 40 45
Бей цей Т1іе Тух Бех Авп Авпоаідй Ахо Рго Бек біу Чаї Рхо Авр Ак 5о 55 Ст) гпе бег сіу Бех пу Бех біу Тпж Бек Аза бЗех Пеп Аза Ті бек Ф1У 85 70 75 во їси пів йех бі) АвБр обі Аіа Авр о Тук Тук Сув Аза чаї Тхр Авр Авр зо 95
Зек їез Авп обіу Ткр оУаі Ре біу біу п1у Тйг Був ви ТВ Уаї пей 100 105 116 сі бів Бго Був Аза Аза Ро бех ча1і ТВвк Пец Рбе Рко Рко бек Бех 115 170 125 бі ОМ їні сій Аза Ав опуз діа ТВх їв уаї Су преп І1е бек Авр 130 135 140 -ВвБе Тук Рко 51уУу Аза уві тТВжх Уві Аза Тгр був А1а Авр Бех Бех рРго . 145 159 155 160 тузі був Аіїа б1і1у уа1ї біз Тр отну Ту Бро Бех Ппув біб Бек Аво Аво 165 170 175 їшв ТУх Аза Аїів бех бек Тук їні бех песо тах Рко біз біп Тер Буз 180 185 190
Зах Ніз Аг Бег Тух Бек Сув біп Уаї ТЕ Нів біз сіу Бех Тк Уві 195 200 зп
Зіз був твх Уві Аза Рко тТВх сім Сув Бех 2190 215 -2105 302 5 «2115 231 «212» Білок «213» Ното заріеп5 -4005 302 біп уві сів це) сіп сів Ткр біу Віз біу пе Бей був РхОо бек вій ї 5 10 15 твВх їв Зех пей твх Сув Аза уві тТух сі б01у Бех рРпйе Бех Аїа Тух
Тух ТІр Анни Тр їі АхУ бів Бко РБКко біу уз бі без біб Ткр ї16 біу бій Ї16 Ап нів бек сСіу Агу ТВг АвротТух дев Бко Бек цей Був
БВ 55 о
Бех Ак Уаії ТК І1є Бег о Уаї Авр Тпт Бех Пув Пув біп Ре Бек Гео 65 70 75 80
Був пеп Авп бек Уаі Тк Аїа Аїа Азр ТВж Аза узі Тух ТУК Сув Аїа 85 "90 95
Ах 5Зіу біп еп Уаї вкго Ре Авр Тух Тер 01у біп біу Тапг Ббеч уаї 100 105 110
ТрЕ Уаї Бек Бех Аза Бех ТіК був Сіу Рко бек Уаіїі Рпе Рго Пи Аїа 115 120 125 вто бек ек цув зек ТП Бек біу біу Ту Аіа А1а йцез біу Суз вий 139 135 140
Уаї Був Авр Тух Рне Рго бій Рго Уаї Тах Уаї Чех Ткр вп Яех с1у 145 1560 155 160 вів пен тТвхи Бех біу Уаї Вів Твк рве Рко А1а Уаї беч бів Бех Бек 165 і75 175 с1у бе Тух бек Нів Бех йех уа1ї Чаї Та Уаії Рко бек Вех Бек цей 189 185 190 біу Тс бів тк Тук їіе Сузв Авп Уа1і Аввп Вів ув ро Бек Авп ТЕ 195 200 205
Пув уві Авробув був Уві біш Рго був Бех Сув Аїа Аза Авр бій Уві 210 215 220
Авр Нів Ніз Нів Нів Нія Нів 225 230 «2105» З03 -2115 680 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 303 сйівп 610 Авробів Авр о біу Авр Тук бій біз Пец Уаї Пец діа цей АкдФ
З 5 10 15
Зек біз сій Авр о біу Без Аза біш Аза Бко біз Нів б1іу ТВж твх А1а 20 25 30
ТВХ вве Ніз Ако Сув Аїз Пув Авр о Ртго Тгр Ак Бей РКО піу ТЕГ тую 35 40 ав
Уаї Уві Уаї йеч був біз біз Твг о Нів Ге) бек біп бек бі дку ТЕ 50 55 60
Аіз Агу Ак їн бів Аза біб Аа Аза АкЯа Ака бі Тук бейп Тк Був 55 70 75 80
Ііїв це) нів Уа)! Вбе Нів бі» Бай Бей рРко 01у рРпе без Уаї був Мех в5 90 95 бек бі Авр о Бес їз біз Без Аіїа Беи Був Бей Рго Нів Уаї Авзр Тухг 100 105 110 ї1їе 01: сі) Авродек бек Уаї РБе Аїа бів Бек Т1е Рко Ткр Авп Бей 115 170 125 сів Аку т1е Тк оВко Рко Акоа Тук АгЯ Аза Авр зі Тух біп Рко Рго 130 із: 140
Авр об1іу біу вбегоїви Уаї бід Ууаї Тух Ге їі Вар ТВг бек Т1е бів 145 150 155 160
Бех Азр нів аку біб Т1іе біб 51іу Ака Уаї Меє Маї Тк Авр Рпе бій 155 179 175
Аввоуаі Бо січ сій Авросіу Твх Ага Ре Нів Аку біп Аіа Бех Був 180 185 190
Сув АвроВех Нів ціу Тих Нів дей Аза біу уаї Ууаї Бех біу Ак9у Авр 155 229 205
А1із біу уаї 8іа Пув біу Аза Бек Меб Акад Беї Бей АкчЯч Уаї йей Ввп 210 215 220
Сув сіп біу був сіу ТвВк уаї бек б1у ТижЖ Без тіе біу еп бі Ре 225 230 235 240 т1е Ага Був Бех біп їм Уаї бій Рко Уві Сіу Рхо Гей Уаї Уаї Сей 245 250 255
Гей Рго Івц Аза сіу сіу Тук бек Ак Уві Пес Ап Аза Аза Сув сій 260 265 270
Ак Бей Аза Ага Аза б1у Уаї чаї цев уаї Тв; діа Аза с1у Авп пе 275 280 285
Ака АзроАвр о А1а Сув пес Тут бек РрРхо Аза Бех Аїа Рко бій Уаї їіїв 290 295 300
ТвВх Уаї б1іу Аза ТвВк Авп Аза б3іп Авробіп Рко Уаї ТВк Бей біу ТЕ 205 310 315 320
Гм сіу ТВж Ав ре сіу Ак Сув Чаї Авр Пеп Ре діа Рко біу січ 325 330 335
Авр ї1іє Ііс біу Аїа бех бек Авр Сув Бак ТвІ Сув Рпе Уаії Бек біп 340 345 359 бек біу ТБк Бек біп діа Азїа Аза Нівз уаї Аїа біу І1е Аза Азїа Меє 355 360 365
Меї їви бек Аза 61) ко ЄБа без ТВжх Без Аза сі) Бей Ах бій Ага 376 375 зво
Те) їі нів Бре Бек Аїа Був Авр оуа1ї Т1іеє Анп аї3 Аїа Тер Рі рРко 385 390 395 400
Фіз Авор о бій Ах Ууаі їі ТВу Ро Авпобец уаї Віа Аза Бей рРко Вко 405 410 415
Бех ТвВу нів ві Аза бЗ)іу ТЕр сіп Без Ре Сув Аху тТвх Ууаії Тер Бех 320 425 430 йіз нів бек сіу Рго тис Аг Ме Аіїа Ту Аза ї1і6 Аіїа Ако Сув Аїа 4135 440 445 вжо Ар бій бій без без бек Сув Зах бех Ре Бех Аку бек с1у Спув 450 355 во шо
Аку аку С1іуУу 010 Ако Меб біз Аз1а біп біу біу Був беви Уві Сув Акц 365 479 475 480
Аіїа нів АвпоАЗа вбе біу біу біз бі узі Тух іа ї1е Аза Ах сСув 485 450 495
Су це бе рРго біп Аза Авп о Сув Бек Маї Нів ТК Аїа Рко Рго Аїа 500 505 510 біз діа Бех Меї с1іу твх Ак уві Нів Суз Нів сів біп а1у нів Уаї 5і5 5720 525 їси Тк сіу Сув бек Бек Вів Ткр Біо Уаї біб Азр Ббеч біу ТНЕ Нів 539 5358 | 540
Був Вко Вхо уаі Пец Аку Рго Агу біу бів Рхо Аа бів Сув Уаї б5іу 545 550 555 550 нів Агу піц Аіа Бех Ії Вів Аіа бек Сув Сув Нів діа рРхо біу Без 585 570 575 бів Су був Уаї Був біо Нів біу т11е Рго А1іа Рко біп бі біп Ма1 580 585 590 що
Тих о Ууаії Аїа Сув біч б01з б1у Ткр ТВх Пец Так біу Сув бек віа Гей 595 600 605
Рко бБіу Тк бек Нів Ууаї йейп сіу Аіа Тук Азїа Уа1ї Авр Авп о ТвВк Сув 610 615 6520 чаї Ууаі Ак бек Аго АвроУа1і Бек Тік Тк біу бек Тпг Бех 01 (1; 625 53 635 вай діа уаї тах ліва хУаї Аїа ї1е Сув Сув Згода Бех дк Нів печ А1а сіоб 645 650 655 дів бек сів бів це) біп біу Бех Бех Авр Туїх Був Авр Авр Авр ГІв бо 665 670 нів Нів Нів НівБ Нів Нів Нів НівВ 675 БО «2105» 304 -2115 680 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 304
Ажа Ахо вхо Акч Аку АкЗз Ак АкКУу Ак АгеЯ Ак АхЯ Бем Ак Ак Ахго 1 5 10 15 даху АкЗ АкУ АкЯ Аку Агу Агу Аку Аку Ак Аку нів Аг Агу Агу Ага
Ак Ре Аху Ако Сув Ак Аку Аха хо Тер Агу Ах рто біу дк ТУ чаї Чаї Узі Бео Ак Аку Ак Аку Аху Аку Бек дк бек Аха січ ТУ 5а 58 50 діа бій біз їжа бій Аку Ак АТа дк бій бі 01у Аг Аку тн Був 65 70 175 во
Іі Ак Аку Ака РБе Ака сіу Пец Гец Рко біу ре рес Уві дка Меї ва й з5 дка Ах Ага Тем Агу Агу Бе) Аїа Аху Аку Бей Рко Ах уві Ак тТук 160 105 110
Ііє біз 01) Авр Шех Бек Уаї Рпе Ака біп Ака 1ї1е РкЕо Ак Авп Агу 115 120 125
Ак під Ті Ак РКО Рго Ага Тук АкЯ Аіа Аху АкаЯ АкаЯ Аа вхо РКО 130 135 140
Ака б5іу піу Аку Ак Уаї сі) Уаї Ту Пе бе) Авр о Тах Ак ї11е Ах 145 150 155 160
Аку Аху Нів бів біз тї1еєе Ака бі Ака чаі Ак Аг Аку Аку РБе ху 165 170 175 зкУ Ах РКО Ак Акоа Ага Аке4 Акз іч Ако біз бій Аку Ака Ак Ах 189 185 190
Сув Авр Акоа Ах 03у ТІ Нів Пец АтТа сіу Заї Уаї бек б1у біс Ак 195 200 295
Аїа піу таї Аїа Ако Ака Аіа Ага4 Меб Ак бек їви січ Уаї їжа Ав 710 215 ай
Сув Ах бі Ак біу Ак Уаї Бек біу ТВг без 116 біУу Без 510 Ага 225 238 235 249 їіє біц Ах Ак Ако Ак Ак АкЯа вко Ака Ага рхо без уаї Уаї Гей 245 250 255 пев Вко без Аіа 01іу Ах Тук бех сій Уаї Пец Авп Ак Аза Сув Ак 260 265 270 вхч ем Аіа бів Ак Біу Чаї чаї бем Чаї ТвВжх діа Аза сп1у АвпоРве 275 2990 285. ! біз АвроАвр о Аіа Сув Аху Туг Бех рРхго Аїа Ак Аіїа Рхо бі уаї ї1їе 290 295 300
Твк У«і біу діа Тс Азов Агу Ак АкЯ Аку то узі Аку Ах б1у Ако 305 318 315 320
Аха сіу Тахо Авп оре шіу Аха Сув Уаї Авр рей Рпе Аіа рхо біу АКу 325 230 335
Дка тів Ті біу Аза жес мет АкУ Сув Бех Ахо Сув Ак Ак АкчЧ Ака 340 345 350
Бек сіу Так бек сій діа Аза Аза Нів чаї Аїз біу тів Аїа Ата Ак 355 360 355
Меї їви Ака Аку Аку Ркго Аг Пев Агу АкЧ Аза ака без Ака біп бій 370 375 | Й 380 шо шо
Гео АкЯ4 Ака Ака Бех Аха Ах АкУ Ак їіе Аку АкКУу Аку Ак Ре ркКо зва 390 395 400
Ага Ага Аку пім АгЯ Пей Так Бко АкЯ пей туаї А1а Аку пей Рко Рго 405 410 415
Аха АкЧ АкЯ Аку Акгу сіу Аку Аку Бей РБе Сув Акад Тйх Уві Тр Бег 420 425 430
Аку Ак бек біу Вко Ака бій Агу Аза Ак Аза їі Аїа бід Сув Аза 435 440 445 вто вкЗз біз бі Без їв: бер Сув Бех Бех Рпе Бех Аку Бех 51у цу 450 455 460
Ака Ах сіу сі) Аку Меб бі Аку біп біу біу був Бей Уаї Суз Аку 465 470 475 4180 іа вів Аво Азїа Ак Ак біу Аку Ф1у Ма1ї Тук Аїа Тіє Аза Ака Сув 485 490 495
Су мев опе вго бів дів Аг Сув Бек уді Нів Ах9 Аїа РКО Ро дів 500 505 510
АхчЧ АхЧч Ага Ага біу Тк бів уаї АкЯ Сув дк Ага Агу піу Нів Уаї 515 529 52 їв) Твкг о біу Сув Бек Зек Нів Тр Ак Ак Ага Авр о Ак пі тах Ака ай 535 540 '
Був Вко Рхо Ак мч Аг Ро біцш біу Ак Рко Ак біп Сув уазї віу 545 вай 5 560 нів дка 213 Аза пежх ІЗіе Нів Аїа Бех Сув Сув Нів 8іаз Рко біуУу Гецз вва 570 5 ів Сув АкЧ Ака Ака Ак Ако Ако ї1е Рко діа Рго Ага йіа Ака Уві 580 585 599 тик Уак Ак Сув ака Ак біу ТЕр Твх без Твх а1у Сув Бех Аза грец ав 609 во5 вко сіу Тах бек Ні уві 10 біт Аза Тук Аза Аказ Авр Авзп ТВ Сув 6510 ві 520 уаї чаї Ах бек іс Авв Яка Ага Ах Акз Ак Аху Ак АкЯ АкКаЯ 81 525 630 535 640
Аху Уаї Твг Віа Маї Афа т1іе Сув Суз 601) бек бій із Бей А1їа бів
Ба 650 655 дів Бех бів сі їм зів сі Бех Бе Авр Тух Був Авр Авр о Авро БУВ 6ей 665 670
Кі нів нів нів нів Нів Нів нів 6575 во «2105» 305 «2115 14 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 305 твнжх с1у Твх Бек Бек Авр Уаї біу бі1у Тух Айва бех Уаї Бех і а 19 «2105» 306 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 306 біз уаї бек Авп Ах Рго бБеу
Ї Її 7 7 -2105» 307 «21159
«212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 307
Чех Век Тук ТОх Бех ТВ ек Меє Ууаї 1 5 «2105» 308 «-21155 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 308
Беж Тух біу 115 Бех 1 5 «2105» 309 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 309
Тер їі Бек АТа Тук Авп Су Ава тТву Аза Тух Аїв боїв Був уаї біп 1 5 10 15 віт -2105» 310 «-211556 «212» Білок «213» Ното заріеп5
Коо) «400» 310 піу тТук сіу Меї Авр Ууаї 1 5 «2105 311 «2115 14 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 311 тик біУу тих ех бех Авр уві сіу Аку тТухк Ап бек Уаї Бек і 5 10 «2105 312 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 312 піз узі Бек Аво Ака бго бек 1 В
-2105 313 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 313 пет Бех Тухк Тапх Бех бах бек Уаї Уаї ї З «210» 314 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 314 тер Ії Бех А1Та Тук Азп б1у Аво о ТВк дво Тух Аіа біо Був Пец бів 1 5 10 15 піу -2105 315 «-211556 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 315 зі ТУ Уві Меї Акр Уві 1 5 -2105 316 «2115 14
Зо «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 316
Таж сіу ТВх бек Бех Авр о Узі біу Аза Тук Азвп Бех уаї бек 1 5 10 «2105 317 «21159 «212» Білок «213» Ното зарієпо «400» 317 дек ех Тух Тлпх Бек ТВх Ап о Меї Чаї 1 В -2105» 318 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 318
Тер уаї бек діа Тук Авп Сіу дай Тих Авип Тух Аіїіа біп Був Ре сів 1 в 13 15 щу 2105» 319 «21159 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 319
Ави Бех Тух Ту бех Тах бек Меб Чаї и, З «2105» 320 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 320
Тер Ууаї Бек Ре Тук Анп о сіу Аза о Твг АвпотТуг Аїа біп пув Без бій 1 в 10 15 с1у «2105» 321 «21157 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 321 сів уаї ТИХ Авп о Агу Ро дес
Ї 5
Коо) «2105» 322 «2115 14 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 322 «ах сіу Тпх Ав бБет Двр о Ууаї сіу бі тус Ав Бек Уаї бак ше: 5 10 «2105» 323 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 323
Тир їі бек уаї Тук Авп о сіу Авп о ТтТвах Авап о тТук Аіїа бій Був чаї бів 1 5 10 15 5іу «210» 324 «211517 «212» Білок
«213» Ното заріеп5 «400» 324 тер їїе Бех Ріє Тук дап б1іу Авп о ТВйх Авп о Тук діа біп був Уаї бій 1 Б 10 15 б1У в ! «2105 325 «211513 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 325
Бех Фіу бек Бек бек Аво Іі біу Авп Ввп гРрпе Узі Бех 1 а 19 «2105» 326 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 326
Авр ТУ Авп оїбуз вку Ро бат 1 5 «2105» 327 «2115 11 «212» Білок «213» Ното заріеп5
Зо «400» 327 біу ТВ Ткр Авр Бек Бех Пе) Век зіу Тук Уаї 1 5 10 «2105» 328 «-21155 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 328
Зак вне зіу Меї Нік 1 5 «2105» 329 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 329
Бйеч іє Тер о Авп Авросіу бек Аа Був Тух Тухк йіа Авр Бек Уаї Був 3 5 то 15 пі у
«210» 330 «2115 13 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 330 дів її Аза Аза їво Тук Тук Тук Тук Оїу Меб двр Уаї 1 ту 19 «210» 331 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 331
Аво бек АвпоБузв Ах рко Бек «2105» 332 «211511 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 332 сі Тис тро йвр бек обес ії беж Афа тує Ма
Н 5 10
Зо «2105» 333 «2115 5 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 333
Беж Тух 01іу Меї Нів 1 5 «210» 334 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 334 їв) Хіє Тр Ні Ар о іу Бех Ап ТВх тТук Тук уаї йвр ех Уаї Муз 1 5 10 15 біт «2105» 335 «2115 13 «212» Білок «213» Ното заріеп5
«400» 335 піт ів Аів у Азїв Тухг Тух Туг Ту сі Меї Аввр Уві 3 5 10 «2105» 336 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 336
Ген їіє Тер Бех Авр сіу йех Авр о с1й Тук Тух діа Авр Бек Уаії Цув ії 5 16 15 5і1у «2105» 337 «2115 11 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 337 піу твх: Ткр Авр обех ех ей Бех бек Тук Чаї 1 5 10 «210» 338 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 338 їеч т1еє Тур Бех Авр біу Бек Авр Був Тук Тухк Аза Авр бек Уаї Був 1 5 10 15 п1їу
Зо «2105» 339 «211513 «212» Білок «213» Ното зарієпо «400» 339
Бек сзіу Бек Чек бек Авп ї1іе сіу Бех Пуз Тих Уві Ави 1 5 10 «2105» 340 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 340 бек Ап Аво Ака АкФ ро бек «2105» 341 «211510
«212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 341 5 .
Зіа дія Тв Авр Авр бек їн Ачзп ТЕр Уві 1 5 10 «210» 342 «21154 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 342
ТУ Тур Ме Бех і «210» 343 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 343 дао оїів буз біп АвБр осіу Бек біз Був тТух Тук Уаї Авю Бек чаї рев ії В 18 15 ві «210» 344 «2115 10 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 344 ів Бек Аве Ткр обіу Ре Аіа Ве Авр її 3 5 16 «2105» 345 «2115 13 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 345
Беї сіу Бек Бек Бек Авп її біу бек Авп ТБжх Уаї Ав 1 в 10 «210» 346 «2115 5 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 346 дка тус ТЕв Меб веж 1 5
«2105» 347 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 347
Ави ої1є Був Нів Авр Сі Бек сій Пцуз Тук Тух уаї Ав» Бех Ма1ї СЦув 1 5 10 15 о1уУ «2105» 348 «2115 10 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 348
Зі яз: Ави Тер о біу РНе Аза рне Аврохаї 1 Ко 16 «210» 349 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 349
Акч лап аз» спіл Аку ко їво 1 У «2105» 350
Зо «2115 5 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 350
Бвжх Ттух Тхр Ммек вех ії й -2105 351 «2115 5 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 351
Аво Рів Тер Меї Бек 1 У «2105 352 «2115 10 «212» Білок «213» Ното зарієпо
«400» 352 джоа віз ех бів бек її Вех Тук тей деп і ру 10 -2105 353 «-211556 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 353 від від Бех Бевз біп Зехг
Н 5 «2105» 354 «2115 8 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 354
Зі бів бес Тук бек Вко тів ТЕ 1 5 «2105» 355 «211511 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 355 дкЗ А1а Бех біп Бек тіє Бек І1е Тук Пи Анп 1 5 19
Зо «2105» 356 «21157 «212» Білок «213» Ното зарієпо «400» 356 вій Аза дів бах бео бій Бех і З «2105» 357 «21159 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 357 сів біп бек Тух Бех Аїа Руо Іїе ТВкК ії 5 2105» 358 «211511 «212» Білок
«213» Ното заріеп5 «400» 358
Ахч Аіз бек бів Кек Тів бах бБетх Тух Га Авп 1 а 16 «210» 359 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 359 ліз Аіз бек Бех їв) бів Бек 1 5 «210» 360 «21159 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 360 «сій сій Яег Тук бек Бех Рко ї1е ТВЕ і 5 «2105» 361 «2115 5 «212» Білок «213» Ното заріеп5
Зо «400» 361 ех тук діа Меїб Ав «2105» 362 «211516 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 362
Тв їЇ1їе бек пі Щек сіу двп оТнх Тук Тук Аза Авр бек Чаї Був сту ії а 19 15 «2105» 363 «2115 12 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 363
Був Ре туаї Бей Меб ді Тух йіа Меб пен Ар Туг 1 Б 10 «210» 364
«212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 364
Тапх їі бех 5іу Бек сіу Ф1у Авп ТВпх Тух Тух Авіа Авр Бех Чаї пуз 1 5 10 15 вЗіу що «2105» 365 «211517 212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 365 тих Хіє ех піу ек сі Авр Ави Тв тує Тук Ата Авр Бех чаї Був 1 к 16 15 іх «2105» 366 «2115 10 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 366 піу тТук Бек дез Тк Бек Тук біу їіє Бех ї 5 10 «2105» 367 «2115 10 «212» Білок
Коо) «213» Ното зарієпо «400» 367 біу тує дів і ТВе Бех Тух сі І16 Бех і З 10 «210» 368 «2115 10 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 368 біу ТуУкК тТВЕ їви Тйх Бех Тук СУу їїе бБехг ї 5 10 «210» 369 «2115 10 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 369 спі бух Бех Ре ТНК Бех Тух Біу Ії БОЖЕ ї 5 16 -2105» 370 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 370 5іу Ту Твах ве Рхо Бех Тук б51іУ її бак і У то -2105 371 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 371 сіу пе тк о Бпе Бех Бех Тух Ттр Меї Бех 4 В 10 -2105 372 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 372 сі вве ТВ Ріє веж Аку Тук ТКроНеї Бех і 5 10
Зо «2105» 373 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 373 бЗіуУу Бер ТВкЕ бе Зек дво Ре Ткр Меї бек 1 В 10 «2105» 374 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 374 сіу вне тих Ре Бек Бех Туг Аїа Меї Авп 1 5 19 2105 375 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5
«4005» 375 сіу ве ТВх РБе Ап Бек Ре сіу Мебє нів 1 5 10 «2105 376 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 376
БіУ БВе Тв ве Ага беж Тужх б1іу Меї нів 1 5 16 -2105 377 «211516 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 377
Ава їі їшв сів Авр обТу бек зів був Тук таї Ар ех Ууаї Був ціх 1 ь їо 15 -2105 378 «211516 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 378 дза тіе був Ні АБропіУ Беж бій Був ТУК Маії Авробех Уві Був ФІ1у 1 В 10 15
Зо «2105» 379 «211516 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 379
ТвВу їіїє Бех біу Бек сіуУу Авр дво ТВК Тук діа Авр бек Уаії був СТУ ї 5 їа Із 210» 380 «211516 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 380
ТВж її бех пі баг біу Ббіу дво) ТвК ТУк діа дво» Бек и Уаї Був Біу 1 а 10 15 «210» 381 «211516 «212» Білок «213» Ното заріеп5
«400» 381 ївци їі Ткр Аза Авр біу бек Аза Пуз Тук діа Авр бек уаї Ммув б1У
І 5 19 13 -2105 382 «211516 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 382 їеч їі Тер Бек Айр слу Бек Авр біз Тух Аїа Авр Бех Уаї Був 1у 3 зу 10 15 «210» 383 «211516 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 383 цен ТІ3іе ТЕр бек Авр сіу Бех Авр ув Туг Аіа Авр и Бек уаї цу іУ ї Ко 10 15 «210» 384 «211516 «212» Білок «213» Ното заріеп5
Зо «400» 384 їж їі Тев Нів Авр с1у Бег Ав ТВг Туг Уаї Авр о бех уві був ШУ і 5 10 15 «210» 385 «2115 10 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 385 сів Бег Ази Тер обіу Ріє Аза Ре Ар о їів 1 5 10 «210» 386 «2115 10 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 386 «БІО БЕ Аво Теродіу вве вів Бо азр уві
БО ех я Ав «2105» 387 «21156
«212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 387 біу Тук Чаї Мес Авр Ууаї 1 5 «210» 388 «211511 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 388 ахЗз Аі Бех бів Бек їі Бех Їїє Тук Бей Ав ї З 10 «210» 389 «2115 14 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 389
ТВЕ Біу тТвх Авоп обех Авор о узі біу сіу Тух Авп о Бех Уаї Бех 1 5 15 «210» 390 «2115 14 «212» Білок «213» Ното заріеп5
Зо «400» 390
ТВЕ жу ТВ: Бек За; дво баї соту Віа Тук дев бек Ма3 ех ї 5 19 «210» 391 «2115 14 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 391
Тьг сьу Твк Бег Бех Ав; а) біу Ака Тук дя» Бак Уаїф Зег. 1 | а 10 о -2105 392 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 392
Вт веп Аво сів Ака РКО їв 1 5
«2105» 393 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 393 ліз Аів Аїа Бек їй бій! БЕЖ 3 5 «2105» 394 «21159 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 394 бів бів бек Тух бек діа Вро їі ТвЕ 1 к . «210» 395 «21159 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 395
Ав бек ТуУух Тву Бех твх Бех Меб чаї 1 5 «2105» 396 «21159
Зо «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 396
Бех шек Тук Тих Бек бек бек Уві Уві ї 5
Й
«210» 397 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 397
Віз Аїз Тер о АвроАвробеє Беч Авп оТкро уві 1 х. 10 «2105» 398 «211511 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 398
Зі ТЕ Тов Авр Бех Бес Ії-і Бех ех Тух Уаї 3 5 10 «210» 399 «211511 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 399 діу тах отко двр бек бек пев бек Аза Тук чаї ї 5 19 -2105» 400 «2115 116 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 400 зів уаї бів Сео бів біз бек сФіу ро ці їєюш Уві Був рго бек Фі 1 5 16 15
ТВх мес Бех ей Тих Сув Тих Уві бек сіу біу дек І18 Бек ех Тук зо 25 30 щ
Тук Тр бех Ткр Тіе Аку бів БРхго Бго біу Був піу Ппепобко Ткр їїв 35 ст 45
Зіу Тук їі Тух Тук Бех сіу Бех ТВх Ана Тук Авап Рко бах беа Був : 50 55 50
Бек Ака Уаї Тв їів Бех Уаї Авр Ток бек був Авп о біп Ррє Век їв
Б та з5 во
Гу їх Бех Бех уаії Твх Аїа Аіз Авр оте Аза уаї Тук Тут Суз Аза ва 90 95
Ак тТук бек бетг 01У ТЕр Ре Ар Тук ТЕр пі дів піу ТнЖж їжи уві 160 105 110
Тих Уві Бех бах 315 «2105» 401 «2115 118 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 401 п Майї сів пез уаї біо Бек біуУу с1іу Сіу Бен Ууаї біп Рко біу біх 1 а о її ек бвип Ак бей Кежх Сув уві Уві Бех б1у РНе тах вне Зех Бег Тук 20 25 30
Тер Ммеї Бек Тгр чаї Ак бів діа Ро біу цув бі реп 51) Ткр баз
КІ 20 а5 .
Аїв Ава Її Був бів др бпіуУу бек сів ув тТук тТук уУазї Азу» Бек Хаї о За о ув біу Ак вве Тих ї1іе бех Ак Авр Авп о Аїв Був Авп бек бен Тук
ВВ 70 75 80 їжи біз Меб: Авий Бек їж Ахе Віа бі) Авр Твк о Аіа чаї Тук Тук Суз 85 за 55 діа АкЯ біз Бек Аво Тер б1у Рве Аза Вне Авр її Тхр с1у пів (1у 109 105 110 тн Меї таї тк уві Бех ля
«2105 402 «2115 115 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 402 бів Уві бів беб Узі бів бек 01їу бі біу Бей Уві бів вхо біу б1у і В 10 15 ках Без Ако їец Беж Сув Аза Аза Бех с1у кКпе тах Ра Бех Бех Тух 20 2 30
Тхр Мехє Шек Ткр Уаі Вку бів Аза Вко 53іу був біу без біо Ткр Уві 35 40 45 ліз Аа їі Був сій Ар о сіу Бес с13 Був Тух Ту Уві Авр Бек Уді
Зо 55 ва ув Бі Акоа рве ТнжЖ тів Бех Ах Авр оАво Аза пув Ав Бех гей Тух вк зо 75 во їни їв Мей Авп Бек бен АкЯ Аза біз Авр ТВх Аіа чаї Тук Тук Суб 85 зо 95
Віа Ако Аво Ткр Фі Аза Ре Авр ої1Зіе Тгр бі бів б1іу Те Межї Маї 100 195 116 тв: Ма) Вес 0 115 «210» 403 «21156 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 403 біб Авп без Тухк Ре бів 1 5 «2105» 404 «2115 14 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «220» «221» ВАРІАНТ «00251 «223» Хаа-0О, А, Е, або амінокислота відсутня «220» «221» ВАРІАНТ «02» 2 «223» Хаа-"У, І, С, або амінокислота відсутня «220» «221» ВАРІАНТ «222» З «223» Хаа-0О, А, б, або амінокислота відсутня «220» «221» ВАРІАНТ «002» 4 «223» Хаа-Е, А, Ї, або амінокислота відсутня
«020» «221» ВАРІАНТ «002» 5 «223» Хаа-УМ, І, А, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «022» 6 «223» Хаа-5, У, А, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «222» (1)...(17) «223» Хаа-А, У, ЕР, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «222» (8) ...(8) «2 2 З» Хаа-У, Р, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «222» (9)...(9) «223» Хаа-У, б, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «222» (10)...(10) «223» Хаа-0, б, або амінокислота відсутня
Зо «020» «221» ВАРІАНТ «222» (11)...411) «223» Хаа-А, М, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «222» (12) ...(12) «223» Хаа-РЕ, р, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «222» (13)...(13) «223» Хаа-О, М, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «222» (14)...(14) «223» Хаа-М, або амінокислота відсутня «400» 404
Хла хай Хаз Хай Хаз Хаз Хаа хаа Хай Хаа Хаа Хва Хава Хай 1 З 10 «210» 405 «2115 11 «212» Білок «213» Ното заріеп5
«020» «221» ВАРІАНТ «00251 «223» Хаа:О або б «020» «221» ВАРІАНТ «02» 2 «223» Хаа-5, Т, А, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «002» З «223» Хаа-У, М, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «002» 4 «223» Хаа-0р, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «002» 5 «223» Хаа-5, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «022» 6 «223» Хаа-5, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «222» (1)...(17) «223» Хаа-ї, Т, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «222» (8)...(8) «223» Хаа-А, 5, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «222» (9)...(9) «223» Хаа-С, А, М, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «222» (10)...(10) «223» Хаа-5, У, М, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «222» (11) ...411) «223» Хаа-М, або амінокислота відсутня «400» 405
Хав Хаа Хаа Хаа Хаа Каа хХаа Хаа Хаа Хаа Каа 1 п 10
«-210» 406 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «020» «221» ВАРІАНТ «00251 «223» Хаа-Аа «020» «221» ВАРІАНТ «02» 2 «023» Хаа-У, Е або О «020» «221» ВАРІАНТ «002» З «223» Хаа- Ї або 5 «020» «221» ВАРІАНТ «002» 4 «23» Хаа-і! або Е «020» «221» ВАРІАНТ «002» 5 «223» Хаа-Т, 5 або М
Ко) «020» «221» ВАРІАНТ «022» 6 «023» Хаа-5 або А «020» «221» ВАРІАНТ «222» (1)...(17) «223» Хаа-У або Е «020» «221» ВАРІАНТ «222» (8)...(8) «223» Хаа:о, 5 або У «020» «221» ВАРІАНТ «222» (9)...(9) «223» Хаа-і, М або М/
БО
«020» «221» ВАРІАНТ «222» (10)...(10) «223» Хаа-5, М або Н «400» 406 каз ХхХаа Хаз Хаз хХаа Хаз Хаа Хава Хава Хай 1 є; 10
«210» 407 «2115 14 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «020» «221» ВАРІАНТ «00251 «223» Хаа-Т, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «02» 2 «р23» Хаа-О або 5 «020» «221» ВАРІАНТ «002» З «р23» Хаа-5, ї або о «020» «221» ВАРІАНТ «002» 4 «223» Хаа-5 «020» «221» ВАРІАНТ «002» 5 «223» Хаа-5
Ко) «020» «221» ВАРІАНТ «022» 6 «223» Хаа-М, О або 5 «020» «221» ВАРІАНТ 222» (17)...(17) 223» Хаа-ї, М або М «020» «221» ВАРІАНТ «222» (8)...(8) «023» Хаа-с або «020» «221» ВАРІАНТ «222» (9)...(9) «р23» Хаа-А або б
БО
«020» «221» ВАРІАНТ «222» (10)...(10) «023» Хаа-О, У, 5 або М «020» «221» ВАРІАНТ «222» (11)...411) «223» Хаа- У або М 60
«020»
«221» ВАРІАНТ
«222» (12)...(12)
«223» Хаа-О, 5, ГТ або Е
«020»
«221» ВАРІАНТ
«222» (13)...(13)
«223» Хаа- М
«020»
«221» ВАРІАНТ
«222» (14)...(14)
«223» Хаа-5, М або Н
«400» 407 хаа Ха Хаа Хав Хаа Ха Хаа Ха Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 3 5 10
«210» 408
-211517
«212» Білок
«213» Ното заріеп5 «020»
«221» ВАРІАНТ
«00251
«223» Хаа-УУ, 5, І, або амінокислота відсутня «020»
«221» ВАРІАНТ
«02» 2
«223» Хааєм, І або Е «020»
«221» ВАРІАНТ
«002» З
«223» Хаа:5, М або «020»
«221» ВАРІАНТ
«002» 4
«223» Хаа:тЕ, 5 або М «020»
«221» ВАРІАНТ
«002» 5
«223» Хаа-", 5, ОЮ або Н «020»
«221» ВАРІАНТ
«022» 6
«223» Хаа-М, 5 або 5 «020»
«221» ВАРІАНТ
«222» (1)...(17)
«223» Хаа-5 або б
«221» ВАРІАНТ «222» (8)... (8) «223» Хаа-М, М, О або ВК «220» «221» ВАРІАНТ «222» (9)...(9) «223» Хаа-Т, І або Е «220» «221» ВАРІАНТ «222» (10)...(10) «223» Хаа-М, 5, М або Ю «220» «221» ВАРІАНТ «222» (11)...(11) «223» Хаа- У «220» «221» ВАРІАНТ «222» (12)...(12) «223» Хаа-Аи М «220» «221» ВАРІАНТ «222» (13)...(13) «223» Хаа-О, ОО або Р
Зо «220» «221» ВАРІАНТ «222» (14)...(14) «223» Хаа-К або 5 «220» «221» ВАРІАНТ «222» (15)...(15) «223» Хаа-1 або М «220» «221» ВАРІАНТ «222» (16)...(16) «223» Хаа-О або К «220» «221» ВАРІАНТ «222» (17)...(17) «223» Хаа-О або 5 «400» 408
Хаа КХаа Хаа Хаа Хаа Хаз Хаа Хаав Хаа Хаа КХаз Хаа Хаа Хза Хаа Хай 1 І Кв: 15 хва 2105» 409 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5
«020» «221» ВАРІАНТ «00251 «223» Хаа-О, Е, З або Ю «020» «221» ВАРІАНТ «02» 2 «223» Хаа-М, М або У «020» «221» ВАРІАНТ «002» З «223» Хаа-5 або М «020» «221» ВАРІАНТ «002» 4 «223» Хаа-М, О або К «020» «221» ВАРІАНТ «002» 5 «223» Хаа- В «020» «221» ВАРІАНТ «022» 6 «223» Хаа-Р «020» «221» ВАРІАНТ «222» (1)...(7) «223» Хаа-5 «400» 409
Хза Хаа Ява Хай Хаа Хаа Хай 1 В -2105» 410 «2115 14 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «020» «221» ВАРІАНТ «00251 «223» Хаа-0, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «02» 2 «223» Хаа-У, А, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «002» З «223» Хаа:0О, І, або амінокислота відсутня
«020» «221» ВАРІАНТ «002» 4 «223» Хаа-Р, А, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «002» 5 «223» Хаа-МУМ, А, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «022» 6 «223» Хаа-5, І, або амінокислота відсутня «020» «2 21» ВАРІАНТ «222» (1)...(17) «223» Хаа-А, У, б, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «222» (8)...(8) «223» Хаа-У, О, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «222» (9)...(9)
Ко) «223» Хаа-О, ХУ абої. «020» «221» ВАРІАНТ «222» (10)...(10) «223» Хаа-У, О або М «020» «221» ВАРІАНТ «222» (11)...411) «223» Хаа:б, А або Р «020» «221» ВАРІАНТ «222» (12)...(12) «223» Хаа-М або ГЕ «020» «221» ВАРІАНТ «222» (13)...(13) «223» Хаа-Ю «020» «221» ВАРІАНТ «222» (14)...(14) «223» Хаа-М або У «400» 410
Каа Хаа Хаа Хаа хаа Хана Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 1 В 10
«2105» 411 «2115 11 «212» Білок «213» Ното зарієпо «020» «221» ВАРІАНТ «92251 «223» Хаа-О, А, б, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «922»2 «223» Хаа-5, М, Т, або амінокислота відсутня «020» «221» ВАРІАНТ «002» З «223» Хаа-"У, М або М/ «020» «221» ВАРІАНТ «922» 4 «223» Хаа-5 або Ю «020» «221» ВАРІАНТ «002» 5
Ко) «223» Хаа-5, М або ОЮ «020» «221» ВАРІАНТ «022» 6 «223» Хаа-5 або Т «020» «221» ВАРІАНТ «222» (1)...(7) «223» Хаа-і! або 5 «020» «221» ВАРІАНТ «222» (8)...(8) «223» Хаа-5, Т або М «020» «221» ВАРІАНТ «222» (9)...(9)
БО «223» Хаа-с,зЗабоАд «020» «221» ВАРІАНТ «222» (10)...(10) «223» Хаа-5, М, УМ або У «020» «221» ВАРІАНТ «222» (11)...(11) 60 «223» Хаа- М
«400» 411
Хаа Хва Хза Хаз Хза Хва Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 1 5 10 «-2105 412 -211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «020» «221» ВАРІАНТ «00251 «223» Хаа-б, Рабо А «020» «221» ВАРІАНТ «02» 2 «223» Хаа- У, М, Е, Т або 5 «020» «221» ВАРІАНТ «002» З «223» Хаа-Г, Р, 5, А, С, М, Ї або «020» «221» ВАРІАНТ «002» 4 «223» Хаа-|, Е, І, М, М, А або У
Ко) «020» «221» ВАРІАНТ «002» 5 «023» Хаа-І, Р, З або А «020» «221» ВАРІАНТ «022» 6 «223» Хаа-5, Т, А або С «020» «221» ВАРІАНТ «222» (1)...(17) «223» Хаа- У, М, Е, Т або 5 «020» «221» ВАРІАНТ «222» (8)...(8) «223» Хаа-б, Рабо А
БО
«020» «221» ВАРІАНТ «222» (9)...(9) «223» Хаа-ї|, |, М, М, А або ЕЕ «020» «221» ВАРІАНТ «222» (10)...(10) «223» Хаа-5, Т, А або с
«4005» 412 хХаа хза Хаа Хаа Хаа Каз Хаз Хаа Хаа Хаа ї 5 10 «-2105» 413 «2115 14 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «020» «221» ВАРІАНТ «00251 «223» Хаа- Ї або 5 «020» «221» ВАРІАНТ «02» 2 «223» Хаа-б, Рабо А «020» «221» ВАРІАНТ «002» З «223» Хаа- Ї або 5 «020» «221» ВАРІАНТ «002» 4 «223» Хаа-5, М, Т, А, Сабо ОО
Ко) «020» «221» ВАРІАНТ «002» 5 «223» Хаа-5, Т, А або С «020» «221» ВАРІАНТ «022» 6 «223» Хаа-0О або Е «020» «221» ВАРІАНТ «222» (1)...(17) «023» Хаа-М, І, М, І, ЕБЕабо А «020» «221» ВАРІАНТ «222» (8)...(8) «223» Хаа-б, Рабо А
БО
«020» «221» ВАРІАНТ «222» (9)...(9) «223» Хаа-С, А, Н, Р,М, 1,1, К, О або М «020» «221» ВАРІАНТ «222» (10)...(10) «223» Хаа-У, м, Е, Т або 5
«020» «221» ВАРІАНТ «222» (11)...411) «р23» Хаа-М або 0 «020» «221» ВАРІАНТ «222» (12)...(12) «223» Хаа-У, 5, М, Е, Т, 5, Т, А або С «020» «221» ВАРІАНТ «222» (13)...(13) «023» Хаа-М, І, М, І, Е, або А «020» «221» ВАРІАНТ «222» (14)... (14) «223» Хаа-5, Т, А або С «400» 413
Хаз Хав хХаа Хаа Хаа Хаа Хай Хаа хХаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хай 1 в 12 «210» 414 -211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5
Ко) «020» «221» ВАРІАНТ «00251 «223» Хаа-Му, М або Е «020» «221» ВАРІАНТ «02» 2 «023» Хаа-М, І, М, І, ЕБЕабо А «020» «221» ВАРІАНТ «002» З «223» Хаа-5, Т, А або С «020» «221» ВАРІАНТ «002» 4 «223» Хаа-А, Е, М, 1, І, М або М
БО
«020» «221» ВАРІАНТ «002» 5 «223» Хаа- У, М, Е, Т або 5 «020» «221» ВАРІАНТ «022» 6 «р23» Хаа-М або 0
«020» «221» ВАРІАНТ «222» (1)...(17) «223» Хаа-б, Рабо А «020» «221» ВАРІАНТ «222» (8)...(8) «223» Хаа-М або О «020» «221» ВАРІАНТ «222» (9) ...(9) «223» Хаа- Ї або 5 «020» «221» ВАРІАНТ «222» (10)...(10) «223» Хаа-М або О «020» «221» ВАРІАНТ «222» (11)...411) «223» Хаа- У, М, Е, Т або 5 «020» «221» ВАРІАНТ «222» (12)... (12)
Ко) «223» Хаа-А, М, І або «020» «221» ВАРІАНТ «222» (13)...(13) «223» хаа-О, Е,Мабо О «020» «221» ВАРІАНТ «222» (14)..14) «223» Хаа-К, Р, О або М «020» «221» ВАРІАНТ «222» (15)...(15) «223» Хаа-!, Е, М, І, М, А або У «020» «221» ВАРІАНТ «222» (16)...(16) «223» Хаа-:О або М «020» «221» ВАРІАНТ «222» (17)...(17) «223» Хаа-б, Рабо А «400» 414 хаа хай Хай Хлаа Хай Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хавд 1 5 10 15
Хва «-2105» 415 -21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «020» «221» ВАРІАНТ «00251 «223» Хаа-Е або 0 «020» «221» ВАРІАНТ «02» 2 «023» Хаа-М, І, М, І, ЕБЕабо А «020» «221» ВАРІАНТ «002» З «223» Хаа-5, Т, А або С «020» «221» ВАРІАНТ «002» 4 «р23» Хаа-М або 0 «020» «221» ВАРІАНТ «002» 5 «223» Хаа-В, К, О або М «020» «221» ВАРІАНТ «022» 6 «023» Хаа-Рабо А «020» «221» ВАРІАНТ «222» (1)...(1) «223» Хаа-5, Т, А або С «400» 415
Хаа Хаа Хай Хай Хана Хай
З 5 «210» 416 «91156 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «020» «221» ВАРІАНТ «00251 «223» Хаа:-б, Р, А, або амінокислота відсутня «020»
«221» ВАРІАНТ «02» 2 «223» Хаа- У, М, Е, Т або 5 «020» «221» ВАРІАНТ «002» З «223» Хаа-О, М, Р, А, І, М, Ї або Е «020» «221» ВАРІАНТ «002» 4 «223» Хаа-М, І, Е або «020» «221» ВАРІАНТ «002» 5 «223» Хаа-:О або Е «020» «221» ВАРІАНТ, «022» 6 «023» Хаа-М, І, М, І, ЕБЕабо А «400» 416
Хзва хХаз Хаа Хаа Каа хай «2105» 417 «-21159 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «020» «221» ВАРІАНТ «00251 «223» Хаа-5, М, Т, А, Сабо ОО «020» «221» ВАРІАНТ «02» 2 «223» Хаа-5, Т, А або С «020» «221» ВАРІАНТ «002» З «223» Хаа- У, М, Е, Т або 5 «020»
БО «221» ВАРІАНТ «002» 4 «223» Хаа- Ї або 5 «020» «221» ВАРІАНТ «002» 5 «223» Хаа-5, Т, А або С «020»
«221» ВАРІАНТ «222»6 «223» Хаа-5, ТІ, А або С «220» «221» ВАРІАНТ «222» (1)...(1) «223» Хаа-М, 5, О, Т, А або С «220» «221» ВАРІАНТ «222» (8)...(8) «223» Хаа-М,М,І, Е,ІТабо А «220» «221» ВАРІАНТ «222» (9)...(9) «223» Хаа-М, І, М, І, Б або А «4005» 417 хва Хаа Хаз Хаз Хаз Хаа Хаа хХаз Хаз 1 З «2105 418 «2115 363 «2125» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005» 418
Зо саодчедцевою ссусусаово бодозссуау дсзавззавоє ссзазоассто авагозадаєо 60 моестоссаазчу согссусаса сассвксасс чдастаєсбсава сасастоаач: зсазсавадеес 150 сстсопзасвач засскозава часодчакач ассадсссто васазсоЗзсач сосаваєстає 180 чсевсаздааце ббсзуеуеву чеубсассвбу зссздоуаса собссабсао сасаоєскас 940 зезчечесза зсазустодо аїстдасуає асочесусаї астастусоє дададусави 300 їзпазсїзсз зсбаствсод бзбудаочєс сузаЧесаву ЗЗзассасЗзУує сассокексо 360 жк 363 «2105» 419 «2115 121 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 419 зіп Узі сій уаі Уві піз бек біу Аза біб уаї буа Був Рко бі Аза 1 5 10 15
Бег Чаї Був уві бек Сув був Аїа Бек біу Тух Ту Рпе Тру сіу Тух 20 25 30
Тут І1е Ніз ТтТкр Узі Ак біп діа Рко б1у біп біу Без 413 Тер Мех 35 40 45
Зіу Ткр Т1е Авп о рко нів бек б1у сіу Аза Ана о Тух Аіїа сій Гл; Рпе о 55 60 біб б1іу Ака уаї Тс Меї Трк о Акд Авр отак бек їі бек Тік Аза Туг 65 70 75 во
Мек біч цез бек Аку Пез Аку Бех Авр о Авр Твх Аза уаії Тук Тук Сув 85 зо 95
Аівв аку Оіу Аво Тур Ап о Тух Авр о Тух Тух с1у Мес Авр Уві Тер с1іу 100 105 110 бів 51у Тс ТВж Уа) Тв Маї беж Бех 115 126 «210» 420 «2115 321 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 420 часасссазцча суасссаціс єссасессвсс стЧбсьасае ссобадсача сададісасс 60 зЕсастсчос зчасчазчіоа зуасаттаче аагтаїстад сссодбаєса дсачааасся 150 зчазазасьс стааастсск часстасусЕ Чдсакесаскї сосааєсачуа дчксссаєсь 180 ск сачсц одсаосоуаєс судуасзаав вбсасессса ссассезасад сотасадосії 240 чаззчасзско саассксаккї стіуїсаазуч баїсачаєса ссссаєссао ЕЕсадсссю 300 чЧчачассазад гоадататсвай я 321 «2105» 421 «2115107 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 421
Авр ї1є піп Меб Тьх біп бек Рко Дек Зех еп Бех діа бах Уаї «1у 1 5 10 15
Авр о Ака уаї Тк її8 Так Сув аку Аза бек біп Авр о ї1е бек Двп Тухг їн діа Тр Тух біп бБіп ув Рхо б51іу Пув Чаї вхо Був Бей Бей їі 5 за 45
Тут дів Аза Чек ТВЕ во біп бах б1у Уаї Рго Бех Акч РБне Бек 5і 5О 35 Бо
Зехк сбіу Бег бі ТВж Авр о Рпе Тік Бен ТВ Іії6 Бек Бек Пап біп Рко 5 70 75 що біз Ар Уві Аїа так Тух вве Сув бів Ах Тух бів Се Аїа вхо Рпе 85 90 з5 тТВж вве біу ко сіу ТЬЖ був уаї Авр тів Був 100 195 20 «2105» 422 «2115 366 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 25 «400» 422 савдокоасазсе бачсачаасс сБачоаччачас чбадессесвцс ссзЗззваУке сековаєке 60 їсесїчбасацч сусссауавєє сасосссзуї ачстабазса Єдсасбадає ссассадасе 126 ссвчасадос зЧссочачія здугдасачьє абсбсабаса аксзддадлоакас казактастаю 180 чсездастссу сдзачудеса ассосассвкс бссадааса абсссааоава сасаядскакатє 240 ссусаааєца зсадестуву зудссаззас ассозесбосає актасьобоє задуссвасо 300 чу сасс асіастасса судбаєсочає ч«сссодочсс задудассаєс задбссассуве 360 тсстса 386 «2105» 423 «2115 122 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 423 сіп Уаї бів пез Узі біо бек бі 01у біж Маї баї біп Рко біу Ак4 1 З 10 15
Зах пе Ак Без Бек сСув Аїа Аїа Бек сіу Рпе тТвх Ре бек Зех Тух 20 25 30 біу Меї Ні Тур Уаї Ахо сіп Аїа Рго сіу цув сіу ей бій Ткр уаї 35 40 45
Аїа уаї ї16е Ткр Тук Авр біу Бек Тих Був Тух Тук А1їа Авр бек чаї 5 Зо бо їузв піу Агу бек Тис Ії Бех Ах Авр Аво Бек Був Аво тах еп Тук 65 7 75 во
Без біп Меї АвпобЗек ей АкЯ АТа біз Авр о ТВх Азіа уа1ї Тук Тух сСув ва 90 955
Азїа Ах бек Уві Аза сіу Тух Нів Тух Тухк Тух біу Ме Авр уаї Ткр 100 105 110 сіу бів біу ТВк тТвх ба Тк Уаї бек Бек 113 120 «210» 424 «2115 324 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 424 бсЕкскдчадче гЧастсвода сестоссосо стос удесі соуцдасадчає адссаадчаєс 60 асаїбцесазу дазасацдссе сазачоастає хасосаассї зїасовуса даачесваца 120 сачуссссїз басібабсає стабадсааз азсевссЯдо сесссазузає сссадасезча 180 трексрадсї ссассісада вайдсасацчех Ксссбувсса єсазсбууудес ссзадсчЯааа 240 чЧасчачоасеч зсбзесасту саастсссуд дасацдсаєсоа дгавассатст зуба ксуде 300 ччазччасса ачсоїцаєссуї сота 324 «2105» 425 -2115108 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 425 ек Вес сім Гей Тк бій АвроРкКо Аза Маї Бех Уаї Аіїа цец сіу біп 1 5 10 15
Твк уаї Акаа їі ТЕ Суз сів 01 Двр Бек Пе Ак біу Тут Тук лів 20 25 30 тв оїкротух Зіб біб був рхо Ах бій лів Рго Уві рез чаї їії1є Тук 35 40 45 41іу був Азп тує Ак рго Бек біу 1126 Вко Авр Аху Ре Бех біу Бек 5о 55 ва
ТВХ баг бі Аввп оТвВк діа Бех цей Ту ї1е Так біу Аїа біп Атїа сі 85 70 5 80 ззр обід діа Авр оТук Тук Сув Авп Заг дк Авробек Ті біу лвп пів 85 30 95 теп о уаї ЕБе біу бі» б1іу Твх був без тТБжх Уаії їв 100 105 «210» 426 «2115 366 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 426 сазукчовус содобоовавс созазЗачазос згздгосаує стсудачуєс ссвдзаавеве 60
Костчтосау сзсстядчас: сассосссаче адссабучсї басасточаї ссдссадустє 170 севадесазач зчесоЗаЗкУ чУусозусачьс ахгакууєсац зсчузадсва саватастах» 180
Ччезвцаєтсоу соузазоососу асосвяосяке сесадазаса ахтссзадаа сасчеєбабав 340 сідсладідча асацессідад зассдадчас асзастасзк: астаскосоєс чдачдуєсауєа 300 чзесоачЕтасс астастаста сопагсасачас Ччіссаадасс азвччавссас зуссассуєс 360 тостев 386 «2105» 427 «2115 122 «212» Білок «213» Ното зарієпо «400» 427 піп уві біп Їїви уві сії) бек сі сіУу біу Уві Узі бій Рко 01у Ага 1 5 10 15
Бех це) дха Пес бек Суб Аїа діа бек біу Рце Тпр Рпе Бек пек Туг с1іу без нів Тур уаії Аку сіп діа Ркго біу цув бБіу еп біо Ткр о баї діа чаї їіє Тер цез Авроб1у Бек Авп уз Тух Тух Аіа Авр Бах Уві о 55 50
Був сбіу Аг пег о ТвІ Ії Бех Аку Авр Авп о бехг ГПув Авб оТВк Бей Тух 65 70 75 80 іні бів Меї Авіа бех пев вкЯ Аїа бій Авр тах Аїа Ууаї Тух Тух Сув 85 90 95 із Ак бек Уаії Аіа 01іу Тук Нівз Тук Тук Тук біу Мех Авр Уві ТЕр 100 105 110 сі біз біу ТижЖ Тих Уаї Твпх Уаї бек Бег 115 120 20 «210» 428 «2115 324 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 25 «400» 428 тсехістсадєи сзасссвода ссстуєскуєу сесбусудссі судзуасачас азїсадавес 60 зсагдссзаз чазасадоої садавоааєтає багочаваст чугасовуса завоссаада 120 садоуєссссо бастбопссає ссссддсаза засзассуце себсауоадає сосадаєсдча 180 ткстскочеї ссасстсаоу вайсвсауок бесттдасса ссдоїоооче Бсаудеууаа 240 чаказадсто астастассу сазорсасза дасабсаєтса чбдчаассакеє чзекаске99е 300 ччватузассва ачосзасочо сета 324 «210» 429 -2115108 «212» Білок «213» Ното зарієпо «400» 429
Бех бек сім їжи Тв бій Авр Рхо Аза Маії Бек Уаі Аіїа без с1у бів 1 5 10 15 тик Ууаї Вк Ііе ТЕ Суз біп біу Авр бек ї2о Ак бех Тух Тух 51У 20 25 30
Зек Ткр Тук сій біп ГПув Ро Аку бів діа Бко Уаї Бесп туа1ї їїеє вВБе 40 45 біу Був Ази Авп Аку Ро Бек біу Її Рко Авр Ака Ре Бек біу Зек 50 55 | во ' -ТВих Бех сіу Авюи Так Аїа бек Бей ТНх І1е ТрЕ сіу Аїа сбіп Аїа біо 58 70 | 75 | во
Авр біз АтТа Авр Тук Тук Сув Авп бек Аку Авр о їїе їі сіу дер нів 5 90 35 їв без Бпе 5іу Бі б5іу Тнж Був це) ТВ Уаії Без 100 105 -2105» 430 «2115 366 15 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 430 свчачічсвує сзЗсочадіс соус дсзчеосаа сказав ссгацаєто 60
Ессссосач сзсескуЧаь сасокесацу аастабсдуса бдсасбучує содесадасі 1720 созадовазча застчзчазса ач оачевЧЕ аїайсччії со абадазуїаа саавабастай 180 чсачастссу бчазаддоссу абссассаєс єссвовчаса вісосавзчви сасостобає 240 стічставсуа асвусссуву вуссузозає асууебчвУє асбастубос Ззавассазка 300 чЧесузетасс асквастаста соч одчас чес чччсс зачадасассає чаїсасодке 360 їпвотеса 366 «210» 431 «2115 122 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 431 бів Уаї біб без Уаї біо бек 01у б1іу піу аї Уа1і біл Бех Ф1у АкФ 1 З 10 15
Зех Бей Агу Беи Бех Сув Аїа Азїа Бек бі Ре ТЕ рБе Ак Авп тТукг кт! 25 зо біу Мей Нів Ткгр Уаї Зха біп Азіа Рхо біу Був біу без бій Тжхр Уві 35 49 45
Аіаз Уаї ті Тр Ре Авр б01у Бех Авп Був Тух Тух Аїа Авр Бек МУаї
ЗО 55 6о0
Муз б5іу АхФ4 бех Ту їі1і6 беж Аху Авр оАвп бек Був АзпоТвх пе) тухг 70 75 во їжі Пе) Мей Авоп обех пев Ака Аза біб Авр Тк Аза Чаї ТуУух Тух Сув за з0 95 дів Ак бек Узі дів сіу Туг Нів Тук Туг Тух сіу Мек Авр Уаї Тур 100 195 110 5іу біп біу Тпх ТВт уаї Твт уаї Век Зек 115 120 «2105» 432 «2115 324 5 -212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 432 хсіїсідаце Єсаєсвсзода сссбуєвува бсвубддесе сопачасачас адбссаддаєс 60 асасчссвуз чазчасваочесі сачавчетаї сасусвадеї добассвоса зааоссаауа 199 своддсссста Бастварсвз: стаєчусаза аасавссуЗзо ссгсачадає сссасассда 380 аїстстідпдсє ссассотсадо завасасачев Бесб:дасса бсасбадоадс бсадасадаз 240 засчазусєво астіастгасіо сддаїсссоо Часатсаєка сдедассакев зако кесоує 300 зазудпузсоса заставссяї сека 324 2105» 433 -2115108 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 433
Бек Бек біз бе Тік о біп Авр о Ро А1а Уаії беж уаї Аїа реч бі сіп 1 5 19 15
Тпк оУаії Агу 116 ТнНк Сув біп б1у Аяр Бек Пес Аг бек Тук Туг діа
Бех Тр оТух іп сіп Пцув Рко Аку б1іп Аза Рхо Уаї Пец Уа1їі 116 тує біу Був Авп Авп о Ака Бко Бек біу І1е Ркго Авр Акд Ії бек о01у Бех 50
Тпх Баг сіу Авп Тлйх Аза Бек Пец Ту їІ1е Ту біу іа бів Аза біз 65 70 75 во
Агро біс Аіїв Авр Тух Тух Сув МПув Бек Аку аАвр т116е І1е Сіу Азр Нів 85 20 95 їи уаї вве біу біу біу Так Був еп тах Уаії Пец 100 105 20 «210» 434 «2115 342 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 25 «400» 434 свацуєуесаце єЗ9Бубавес созЗузаУЗс ЗБоососвос ссозадачоо ссідачаствс 650 зтсосакосвац сус азаве сасскссачі: вустаєдаса косастчачЕ сеадссачоаєкх 155 севозчсзаза застачваа чаїоосачки атасуусаво збодаауєаз бзазсассає 180 чезвзассосу бзавозуєсо асксассасо госададчаса агсссдачай сасустотах 240 тсхциваатза всачестзач зЧеозадавао асячсбабЯ абкасбЧавє чаазавесач 300 зчзаастззчаск задассваза авсосстоазіс весукекесх са 342 «2105» 435 «2115 114 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 435 сів уаї бій Геч У«і біз Бех сіу аіу спіу Уаї Уаї бів Рго біу АкКЯ 1 5 10 15
Яек їні Ак ев бек Суз діа Аїа Бек біу Рпе Тих Ре йех бех Тух 20 25 30
Зіу Меї йів Тр Уві Ага піп Аза рго біу Був сіу Пец біз Ткр Чаї 35 49 45
Аза Уві Тіє Тер тТух аво біУу бек Ап Пуз Туг Тух Аза Авр пек Уві 50 За о шк
Муз біУу Ак впе Тр їіе бек Ах Авр Ав Бех Пцув Авп ТНК без тТук 63 70 75 80 ївиц сій Ме Авп Бех їец Ак Азія біз Авр ТВжх Аза Чаї Тух Тух Сув 85 90 з5
Уаї вхо Аар АхЯ сіу тео» й5р о тТкр сіу біб сіу Твх Бевз уаї Тк Уаі 100 105 по чах бек «2105» 436 «2115 324 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 436 їстїссладо сдассосвучда ссстастаба гстЧтоЯдосі сдадасадас адесасчаєс 650 асакодссаау зачасвуєсі садвоудстає сакдсаачеї дакассадса даадссаацча 120 сачуссссте гастсоссає стасууюааа засаасосуує ссобсазуучає ссесадассса 180
ЕхссстаЧек ссассксадо азасасадсї їсстітоасса ссастдуаЯс їсададсадаа 240 чзасчазчаскоа астаєсасскоя Саачеісссуу дасадсазко чсдассаксї чого сссоде 300 зпаздозасса застзассчь сста 324 «2105» 437 -2115108 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 437 бек нехк сі) бе) ТВжх біп Авор о Рго Аза Маії Бег Маї діа пез біу бій 1 Бо їй 15
ТВк Уа! Аса Тіє Тнжх Сув бій с031у Авр Бек йеп Ак біу Тухк Тук А18 20 25 30
Бех Ткгр Тук сіп біп ГПув Рхо АкЯя бів Аза Рко Уаі Бен уаї іє Тух 35 40 45 сіу Був Авп АБп Аку Рко Бек піу Т1е Рго Авр о Ако Ре Бех б1у Бех: 50 55 Бо
Так Бех б51У Авп от Аза Бек Бей Твт тів ТЬе бі Аїа бів Аза 017 65 15 75. 50
Авробі) Аза Авор тує Тух Сув Пув Бех АгЧЯ Авр ех Зех біу Авр Ні 85 90 95 їв таї рве Зіу бі» зі тах Був бйео тТвх Уві Ге 100 105 «2105» 438 «2115 366 «212» ДНК «213» Ното зарієп5 «400» 438 сзучсусацу суосодазіс буччЧачЧчачас чечдасссаце сеооддуЧуєес себузуастсо 60 ссстотосва счссточасх сассетсаує аастаксзуєа кусастууує ссдссачЯєь 120 ссазодчсзацу д9сс9озос9 ообдосадее асссоадсасу абадаачказч Євавакастатє 180 чезчастіссу сзавусдуссЯа аїссассаїс гссадацаса аббссазуза сасччетає 240 стусазаєцча зсадостчаа зассдвоуас всозссабої агтастусус здадассачтя 300 чебаЧчевасс астастаста суусаєсузас зссбодоадес аадоадассас дассасечке 360 їпесска зва «2105» 439 «2115 122 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 439 бів уві дів туаї баї пів Бех 0іу біу сбіу уаї чаї бів ко бі с1у 1 і 10 | 15
Бек без Ако Пейп Бек Сув А1із Аза Бек біу Бе Тих впе бек Авп о тук о 25 30
Сіу Меє ців Тр Уаї дка біп Аїа Рхо біу був сіу Пез біз Ткр Маї 35 40 45 дів Уві її: Тер Тук Авр піу Бек Зек Був Тук Тух діа Авр Бех Чаї о 55 60 їув пПіу Ака Зех ТВг Іі Векг Аг Авр Ав бек Був Авп о ТВк Чаї Тук 653 70 78 80 їезб бів Меб Аво бек без Акад Аза сій Вазр Так Азїа Маї Тук Тух сСув - 85 | 90 | з5 "Віа Ак Бек Уаї Аїв сіу Туг Нів Тук Тук Тук сіу Мей дер Уа! Ткр 00 105 110 сіу сіп сіу ТБ тк Ууаї тТвх Ууазї Зек ех 115 120 «210» 440 «2115 324 «212» ДНК «213» Ното заріеп5
«400» 440 кестесуаче бЧасссадда сеосбостЯаба ссбаврадосї сазчасадас адусвоЧако бо асакчесана дадасацчест сачазуустає сасусавасі: дусассауса чаадессвача 150 саучсосесбу сасксуссах скасуутадаа засзаєссузе себсаузуає сесздасецда 180 сксссгвуєє ссассісаду заасасачеє бсссссасса ксастузоддс гсадчсддаа 240 засчаччскЯа авассасєсасся баадссссоаа часацезаса чкчассаєстє чабасксаце 300 чазаачасся аустдчассдї сста 324 «2105» 441 -2115108 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 441 цех Бех бій без Тпжх бій Авр Рго Аїа Маї Бех Чаї Аіїа Тез); біу 0біп 1 5 16 15
Тнг о Маї Аєч о їіе Твх Сув бсіп біу Аяр бек пеп Ака сіу Тух Тук А1а 20 25 39 пек Ткротухк біп біп Пуз Рго Ака бів Азіа Бго Уаі Бей Уаі їіє Тух 35 40 45 сіу Був Авп о Авп о дгЯ Рко бек 0)у 116 Рко дар Ака Ре бек бі бек
За За 650
ТВх бек біу Авп о тТБЕ Аіа Бех Пец Твг о їіе Тну с1у Аза біп Аіїа 01) 65 70 75 но
Аворосіз Аїа Авр Тує Тух Сув ув Бех Вку Авр бек ВЗех б1іу Авр Вів
ВЕ з0 з5
Меп тбаї вве о сіу біу сіу Тс Був еп Твг о Уаіїі Бей 159 105 «210» 442 «2115 366 «212» ДНК «213» Ното зарієп5 «400» 442 сачцєосаце сзусодазесс содудоаачоє дсозсссаче стадаачавс сетзуауєстс 60 костабусавч соїссоддаве сассстсачі адстасудса єусасєдуде ссссадаасєсе 120 ссавдасаваа застуда ззсодсачее акакузставу абсоувачіса гааачассає 180 чеадаєсссо бдазоддцосу акссассатбе гссацдацдаса асіссавазаа сасустокає 240 стдсаваїтча асачестчач адссдаздцає асччебуєа: абсассчьцс чачаєссачся 300
Ччесчассасс астастасста соубсаєоаєс дЕскадацчес аададассас доаксассуєс 350 тссеса зве «210» 443 «2115 122 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 443
Фів маї бій їжи Уаї сіб бек бі бі біу Чаї баї бів Рко біу Ак 1 5 10 15
Бек бес Бек реп Бек Сув Азіа А1а бек біу Ре Тк Рпе Бетг Бех Тук о 25 30 сіу Ммеї Ні Ткр Уаї Аку біп Аза Рго біу йув біу Пец бій Ткр уаї
За 40 45 іа уаї Її Тгр Туг Авр о1у Бек Тух цПуз Авр Тух Аїіз Авр о дех уаї
Зо 55 во
Муз с1іу Агу Бех Твг Ії Бег Ак Авр Авп Веах Цув АзпоТнк обец тТух 55 70 75 80 їеч біп Мес Авп бек цей АкЯ Аза бій Авр ТВкх Аза чаї Тук Тук Сув 90 95
Аїа Ако Бек уаї Аза біу Тук Нів Тук Тук Тук Сіу Меб Авр уаї Ткр 100 105 110 5іу біп біу ТВх ТвВк Уаї ТЬу Уаї Яек бек 115 120 «210» 444 «2115 324 5 -212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 444
Жсссосбоцвзує бБозсесадда состуссЗя Кекс суЗЗасачає зубсзучаве во зезсцчесаву чачасачссо сазавссбає бабдсазась засассачса зчавоссвача 120 сацдцдссоска тЕстбсассяї стасуодсава аасаассоце себсадчаає сссзаассда 1855 ситет дев сосазссссвзуу забсасазеє сесскцаєса бсаскодаЯс бсадасчдав 240 зчзаєсзаззсеся асєбсаскаєса саваксссод часабсактоа чівассатекх чека соодс Зоо зчазозаска ачебоассо сота 324 «2105» 445 -2115108 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 445 бек Бек бій Ге Ту бій Авр Рко Аза Уаї бек уаї А1а Бей сіу біп 1 5 10 15
ТвВх Уаї Аку ї1е Тк Сув іп с21у Авр Бех Ппез Аго Тік Тух Тук А1а о 25 30
Бек Тжр ТУук біп бій Був Рхо Ах біп Аза Рхо їІ16 Без Узі ті Тук 35 49 45 сіу ГПУ Ав Авп о Аку Рхо бек бБіу ІТ1їе Рко Авр АкЯ Рпе Бек біу Бек 5а 5 во
ТВжх Бех біУ Іїе тТЬвкх Ата бек Пей Тих ТІ1е ТНх біу Аза біп Азїа біз 65 70 75 80 вАвр біз Аїа Авр о тТук Тук Сув Був бек Аку Авроїіе Ї18е біу Авп нів 85 30 25 бец іа Ра біу сіу піу ТВ цув пеп Тк Ууаї Бей І 100 105 «210» 446 «2115 375 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 446 спасзедесвацє сЗЗгзусУо сучузувуЧе ЧеодФсосадс сечачадавс сседачасос 60
Ессстзсасд сууретосдамї сдссобсазї ачетабодзсв сосассоуУує сесуссадуєх 199 зовадосада ЧастчазЧсо собузсачьс асасозсабєз абосаачєва саватастає 180 чевасоссесд соззузосоо аббсассабю бесададаса аббссаздзаа сасястатає 540 сідсвазеоа васачістояч адссовучас всодстосУє ассастчвоє зазазучоачи 390 чеЕссооода десабсоусоа сбасбассає Ззасзбозася єсбададеса зазчассасу 360 чьсассзкок секеа 375 «2105» 447 «2115 125 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 447 сів Уві біп без уаї Аїа Бек біу п0іу біу Уаї Уаї біб Рго сіу Акад
З я 10 15 ек Бей Аку їм Бек сСув Аіа Аїа бек Сіу Рае тих без Бех Бег Тукг о 25 30 сіу Меб Нів Ткр Уаії Ак4 бів Аза рРкго біу бій біу бецш бій Ткр чаї 35 40 45 діа узі Ті Тр Тух Авр біу Бех Авй Пув Тух Тук А1а Аза Баг уві
Зо 55 о їв п1іУ Ага ЕБе Ту Тіе бек Аку дер о Авп бек Був Авп о ТВх їви Ту 65 70 75 80 їжи Сів Меб Авп о Бек Бею Ак Аіа біз Авр ТБх йіа чаї Тук Тук Сув 85 90 95
Аїа Аха бім біу біу Бек сіу ек нів Ака Тух Тук Тух Тук біу Має 100 105 110 звзрвоуаї Ткр Бі бів бі ТВ тТвх Уаї Тв Уаії Бек бек 115 120 125 «210» 448 «2115 324 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 448 тожЕстЧазе соастсвоуча состостУво бебусучисі сопуддасацас адбезазаєс 80 асаїдесзаз заздавсадесс садаасстає бакосванЧеї ЗзУчсассвуса зааоссваца 120 сасцеиссаота сссссдссає ссозсоуеваза засзасезус ссссазузає соссазасоза І180 тжкокстугст ссвестсвзз дахгсодолоасі їсстіїдасса ссастпоацає ссаддсдава 240 чатсчасоеся вссаосвсосу казаксессач дЧасаєсаєт зсаассаксв зекекезоєс 390 счзваспзаста вустуассУї сова й ча «210» 449 -2115108 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 449
Чек Бек біч їйей ТНЕ сій Ар орто Аза уаі бекс чаї іа їжи б5іх їв 1 5 10 15
Тис Ууаї ко їі Тк Сув бів біу Авр бек пев вка ТВ Тук Тук діа 20 25 30
Бех Ткро Тук сій біп був рРхо АхЯ сів А1їз ро їі ем уві ї1їє ТуЖ 35 ай 45
Фіу ув АвВи Аяп о Ако Ркз Бек біу ї1е ко Ар о Аку Рпе бек бвіу Явх 55 во
Твих Вехк Зфу Х1іе Тбх Аїз бек бе) Тк їі Твх бу Аза 018 Аза біо 55 70 75 що
Авр біо Аза Або Туг Тух Сув був Бех Ах Авр її 11 с1у Ава нів 85 90 зв пев без Ра бі 01іу бі ТВж Був ем тах Уві Бей 109 465 «2105» 450 «2115 366 5 «212» ДНК «213» Ното зарієпо «400» 450 саччсасвач кчасадазкс БозаоаЧчасос зсздссадс сочадачавс ссєаачасьс во тестусусау суБсбузаве сасстєсвує аассаєчоаса бусассузує ссуссадуєє 120 ссзводзсазоз засгтаоваса засозсачі: абзабудсасу збоададабав сааахстастає 180 чсадасіссЯ сдавддоасся абссаєсаєс Кссадачаса аббссавдач сасуседчває 240 стосавасоча асачестЯва адссдачуас асздекавк аскакссувоє дадуєсвуєу 300 чесччскасс агтаєтаєта сузукаєууас уєседоасс вадодассас зуссасодьс 380
Честса 366 «210» 451 «2115 122 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 451 сів Маю бій баз уаі бі1іч бек 5іу б3)іу біу таї Узі біп ко біу Ак 1 5 10 15 веж їв аку лев Бех Сув Аза Аза Бех біу Рне Тих Рнє Бех Ап тує ціу Меї Ніз Ткр Уві Аху біп Аза рго сіу Був піу вип 01 Тур чаї о «5
Аіа уаї іє Тер ТУхХ Авв о бБіу б1іу Авп о Пув Тух тТук Аза Авр бек Уві 60
Був піу Аку Бех їз її баг Ак Ар о Авп о Бех пув Бех ТпЖ їей Туг 65 то 75 80 їв біп Мек Авп обех їч Ага Аза бі) АвроТау Аза уаї Тук Тук Суз 85 90 95 віз Ахо Бех Маї Аіз сіу Тух Нів Тухк Тух Тук біу Меє АвЕр уаї Тер 10 105 110
Оіу пів сіу ТВк о тТвх Узі ТВх уаї АтТа Бехг 115 120 20 «2105 452 «2115 327 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 25 «4005» 452 зазсссоссо сдаєїсацес сосстсоЯвЯ ссбооувсво сбоуасвуво удзбозссвре 60 ксскоасаскЯ свассвзсна павсускчаї заїкатавсх сідбестїсску дкассавосову 129 сазссозоууез зассосооза зсбсавзайєе бакзадоаєса чсвабсадес стсвазцвкк 180
Кетаассєї ссгістчасіс свачістоци засасцассь сссбудзоса ссобоцдаЯстьс я савзудстовач асчацаскцча гтакктссас вустсзкака саазедосда сабсоусстто 300 часадзазоаа ссазустоодс суєоста з21 «2105 453 2115109 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 453 сій Бех діа гей тнж бін ржо Аїв вк о уаї Бех сіу Бек Рко Біу бій 1 5 16 15
Зах її Твх її Бех Сув Тик біу ТвВк Бек бек Авр уаї сіу сіу Туг о 25 30
Аза Зек Узі бек Ткр тук сій сіп ів вго сбіу Був рко хо Був ей 35 40 45
Меб ї1іе Тух бій Уві беж Авп Ася Рко Бех с21у Тіє Бек Авп Ака Рів (Ва 55 ви
Бех б1у Бек Пув бек біу Авп Так: Аїа бек Гей Так ЇЗїе бек 01у бем 55 70 75 во зів Аза бій Авр об) Аза Авр Тух Ре Сув Зек Бек Тук Тнг Бех Тк 85 530 98
Зак оМебє Узі Ріє біу біу сіу тТЬБхк Ппув пе діа уаї грец 105 105 «2105» 454 «2115 366 «212» ДНК «213» Ното зарієп5 «400» 454 свзазкусавау зучкочачіс сузуоцачує чЕУУубсссвус седодадавс секоацчастьс 60
Кестобосад саакстоадаєеь сасостсадії аастаєддса бсосасеєдадчі ссассачасі 170 ссазполсавоЯ чЧассЧазава чзасчасазас акаєчасаса асоЧачусаа сааатсастає 180 чеваастссо счавочцеся абссаєсаєс сссацачаса актесаачва сасостоває 240 стдсазаєтца асавусеєзау вчесоаууає асоускУєес акєтаєстобус часеєссачкя 300 чЧекочкозвзеос ассавосвоста сзабасзаас зссаЧдадесо аачудассас дчбісассчєс 360 честса 366 «2105 455 «2115 122 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 455 сів Чаї біп баї уаї біз Бек біу біу бі Уаз таї біп Рхо 01у Ак5 1 5 19 15
Щек ієм; Аг рео бек Сув Аза Аза Бех Зіу Ре тах Ре Бех Авп о тТух 2 25 50 біу Межї Ні Тюкр Уві Аку сіп Аза Бго піу пуз біУу пев біз Ткр Уаї 35 40 45
Аів чаї їі Тер ТУх Звр Біу зіуУу Аво був Тужх ТУх Азія Авр Бек Уаї 50 55 бо пув о піу Ак баг о ї1іе ті бет Ака Авр Авп Бех Пуз бек ТЬжЖ Пец Тух 65 70 75 во їв бій Мех Ан Бех жа АкУу Аїта бій Авр отв діа Чаї Тух Тук Сув 85 90 | | 95 ліз Агу бех Узі діа сіу тТук із Тух ТуУук Тук біу Мек Авр уві Ткр 100 105 110 б1у бів біу Тих Тв Уві ТвЕ Уві Аїа Бек 115 120 Й «2105» 456 «2115 324 -212» ДНК «213» Ното зарієп5 «400» 456 жстЕсбовос сзастсводча сосбостевра бебзбодес сочачасадас вадксводчаєс 60 азакчесаво здаваасвассї сачачуєтає сабусавуєє дусассадса узадссаада 190 свадчессста свсїсуссває стасЗтаза засаассооє ссссачачає сесачассуа 180 тосвествоос ссаозссазоа вавсасацеї гостстдавсса ссастічачаче ссвозсзава 240 часцачоєто зстаїктаста саастісссоЯє дасзасаєтя чедассаєсяї осуєчсєсуде 300 з соасасся ачитовссУує київ 324 «2105» 457 -2115108 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 457
Зек Зек біз без Тв обіп Авр Рко Аіїа Ууаї Бех Уаї Аїа еп сіу сів 1 5 10 Й тТвх Уаі Акоа Ї1е Тв о Суз бій 01іу Авр бек Бей Ах с1іу Тут Тук Аїа 2 25 зо
Бех Тер Тух бів бів зу Рко АкЯ біп діа Рко Уаї беч Уаї її Тух 35 40 45
Біу йцув Аво Авп о Акго Рхо бек б1у тіє Рко Авр Ак Ріе Бек біу бек 50 5 во тТвк бек сіу Авп Тнг Аза бег Печ Так о ї1ів ТВ о біу діа біп діа 01 55 7 75 во
Авр о біч Аза Ар о Тук Тухк Сув Аяп бек Аку Авр Ап І1е 01у Авр Нів 55 30 з5 іївц Уаї вве біу с1у біу тТвх був без Тв баї їей 100 105 «2105» 458 «2115 381 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 458 чаччасчсачи сзчсочаче ооо вкоЯессаце седадачУєе секдачастео 50 тсскчеосаз сотосззаєо сасосккаЗзЕ азстагкоза боачсаЧчаї ссоссачасі 120 шпсачучазу ЗзчсбсозадзУса забадесаас вкгваавнасвва ягачевуєца азасаєстає 180 чсечасістїЯ Ссазвчозсса зббсассабс єссзаауаса всадсоаЗуза сксаскоаках 240 стчсзваасза асаусессову зуссузузає асууєсуєує абтастоаєсо задазакстю 300
ЧеаекзабсоЗз совакєззває зузотаскас бастасочта сучасаїстЯ Чдадссазада 360 впсасудіса ссзбстосьс а зві «2105» 459 «2115 127 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 459 бів гаї бів без Уаї б10 Бек біу б1іу с(1у Пец Маії Сіп Ро б1іу бі1у 1 5 10 15 ех Без Аку без Бех Сув Аїа Аїа Бех біу Рів Тіжх Ре Век Бех Тук 20 25 30
Тр Ме бак Ткр узі Аку сів Ата Рко біу цув Б1іу без біз Ткр Уві 35 49 45
Аїа Бек ї10 ЦПув бів Авр біу бек бій Був Тух Тух Уаі Авор йЖех Уві
Зо 55 БО
Був сіу Аку Ре Тв їі Бех Ако Авр Авоа Аза Ак Авп бек пен Тує 65 78 75 во ївч сів Меб Взо Зех ви вк Аза біо Авр о ТВк Аза Чаї Тух Тук Суб 85 | о 95
Аіа Ак Авробеб Уаі Бей Меє Уаії Тух Авр Т1є Ар тТух Тух Тук тук 100 105 110 б1у Меї Айр чаї Тур пу сів сіу ТВас Тв Уаї ТВ уаї Бес Бех 115 120 125 «2105» 460 «2115 336 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 460 чатаєсусов слдасісадіьс бссасістсс скідсссоабса сособсудаца дссудєссьсся 60 акстоскоса зазїетазчкса задестссту сасачеізаєу датасааста Єтбсозчастод 120 тасссдсача ацесазцяаса зсссссасад стсстацвтстї вкіхтоадЧуїес сгаассоцєс 180 тссччаЗсс судчасаЗуєє саукуусачь уздассадуса сзуаесвкас астоваваєс 240 ачесазачсяа зачЧседЧазчаа сасбсадазчие бастастідса сусавустсї асазаастсся 300 стсасітсса дсачачазас сазадчіачач аєсаза 336 «2105» 461 «2115112 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 461
Вер Ії Чаї Меб Тв бо бех ВБго Без бех Пезй Рко Чаї Тк Рко біу
Н 5 10 15
Я3іп вхо Аза Бех їі Бех Сув Ак Бек Бек біз Бех Пе) Пец Вів Бех 20 5 30
Ана о біу Тухк Анп Тук їжа Ар оТЕр тує бе) Сів був Рко Ф1у бій бах 35 40 45 вхо пів Пе) без Ті Тук Без 017 Бек Авп Ака Аіїз Бех О1у Уаї Рего
Зо 5 60
Авзр Ака Ба Бех біу Бег п1іу Бех б1іу ть Аве оре Тк Пей Пув їТ1є 85 7 75 во
Бег дкхч Чаї біз Азїа бій Авр Ууаі біу Уа) Тужх Тух Суд Меб сія А1а 8 5 5 ев бій Тих РКО їжи Тв Ра сі сіж с1у Тк о цПув о Уаї 010 Т1в Був 100 105 110 «2105» 462 «2115 381 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 462 зчазусповос тоЗзсзовоїс сзоЗоЗзазас таз ссовао стодаЗазеьс сстоавоастс 68 тес сат ссіссосаїї сассїіссаз аастсасєвсязча базусеууує сеуссздусе 130 совззздааово застчоазчко зчзбозосву вквавасавз аскузавзсуа чаваїсастаї 180 чезууасксво боззодосоз абксЗссабе бссададвса дедссзаодяа сксастУукеЕ 240 скзсвавкЗа асассстоуадч ассосачовас аосочеїсчсзї аїсвсбеєде узузуаєсве 300 чезсосзакза сокекавраї вадвастаствас БаствсзЗса сззуасукекуУ зздсеаводча 380 аспасзцісв ссуковесско а зві «210» 463 «2115 127 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 463 бі уаї біп Бец маї бі Бех бі1у біу б1у Пеп уаї біб Рхко біу біу 3 в 10 15
Вех Пец Ака Пец бек Суз Аза Аїа Бех біу Ре ТЕ Рпе бек Аввп о тТух а 25 30
Тхр мекв бек тТкр маї Ака біп Аза Рхо біу зув сіу Без са1із Тур Чаї 35 40 45
Аіа бек ті Пув бід Авр сіу Бег сій Був Тух Тухк Уві Авр о бег чаї 5о 58 60
Був біу Аха Рпе Аїа їі: Бех Ахо Авр Авп Аіа Пув Аво Бех Бей Ре 55 70 75 80 їви біп Меб АБв о Зек без Ак Аза бій Авр ТВх Аза Уаі Тук Тук Суз ва 90 95 діа вка Авробец Уаї бе Мебє Уаї Тук Авр Т1е Авр ТІ Тук Тук тук 100 105 110 біу Мек Авр уві Тер біу біп біу Тих Тв Уаї ТБк Уаї бБехг Бег 115 120 135 «210» 464 «2115 336 «2125» ДНК «213» Ното заріеп5
«400» 464 чатассзсза Едасковуєс босзогобоо сросекуєса сесстодаза Уссучесьсе 60 акстетсоса зерстасіса дадчесісстя сасачеааєдя чдасасваста етозасточ 120 касссусзаа здссачоааев зсестссасау стсотцаєст асссодуєсс саассодосе 1850 босу скузсвуУукЕ саздвуздсауює узасоваоодсса сасассстасє асіудазаайс 940 ачсосваоазсоЧс азчустоасча сЧстоаЧадчії сассассоса Єцдсавастстї асадастсся 300 стсастстсо зсодасодас саазчсоЧач ассава 336 «2105» 465 «2115112 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 465
Азв о Ї1ве баї Меє Тк біп Бех Ро Їїез Бес їец Ро Уаї Тк Рко біу 1 5 18 15 сі Бко Аза Вет Ї16 Бех Сув Аку Бех Бех бів бех беп бей Нів Бехг о 25 30
Ав обіу Тук Аво Тук Без Авр оТкр Тук Гез біп Був Рко б1у бів Бех 35 40 45 хо бік бем їнви ІЗ Ту еп сіу ех Авп о Аку А1а бек б1у уУаї рго 50 55 50
Авр Ах вББе Бек біу Бек біу Бек біу Таж Нія без Таж Бйец Був І18 65 то 75 во ек Аку узі сій Аза 10 Авр оуаї с1у Уаї тує Тук Сув Меї бів ТВвЕ яв 90 95
Без біс Тс Рго Пец Тв Ра б1у біу біу ТВк о пуз уаї бій ї1е Був 159 105 110 «210» 466 «2115 342 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 466 сзачеічсаце сззсезазко сзУзЗзазує чдсодсссаде сізззачдїс ссідацаєстс 80 кпсідтусво сзбстоЧавє сассвссадЕ воастаєдадаса єасастааає ссдсеацск 120 ссасссавйчи зостодазоа чогоадевчсї акзакастаєу зкууазаєтав єазззсасває 180 езазвскссз сзаазЗззссз астсассато сссададася аттссавувая сасчебатає 240 чкдсаазайуа зсадсссцад адссдаздчас асоаадстабчЧе аєсассячсяс чазчачассоз 300 чадстаЧчасії золпдссацоаз вассссаяьс асоуісвесю са 342 «2105» 467 «2115 114 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 467 0) сіп Заї біп цев Уві пів бек біу біу б1іу Уаї Аіа біп РКО бЗіуУу АЖхщ 1 5; 10 15 бек без Ака Бес бек Сув Азїа Азїа Бек сіу Ре Тпх Рпе Бек Бек тТук 29 25 30 сіу Мек нія Тер Уаї Ах бів Аза Рко біу пух сіу еп сі Ткр Ууаї
Аіїа Уаї Ті Тук Тук Авр біу Т1е Авп Пув Нів Тук А1а Авр Бек Уаї 5о 55 во пуз сп1у Аку Рре Тих Ї1е бБег Агу Авр Ап бек пуб Авп оТас опей Тух 55 | 70 | 75 во
Без біп Меї Авзп бех Пеи Аку А1і1а біз Азр Твг оАзїа уа1ї Туг Тук Суз 85 - 30 95 із Аку Авр Акгу біу Пей Авр Тер о біу біп біу ТЕ Пец уаї твВх Уаї 100 105 110
Бек баг «2105» 468 «2115 339 -212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 468 засяссосдча їзасссачіє сссзоавсєссо ссодссЯвЧе сессоацеда засдддссасс 60 азксазстоса аодсссацеса зачоцЧцеЕкеста басацстсса зевзасаазава стасттаріьк 120 кзЧкассзуо зо3ззазссазо зсзусосеск аазстуєтса себаєсууус сеесгасссод 180 чаакссесчоу їособосассо акббсзабзоас азсоазскоа заасачатуї састстсасс 940 аксасеацес сЧдейаоацсїза зсдасабчаса чевсакєкасті десаасваєа сстатвусасє 300 сечкчозеує ссодсесваз3 звссавЗусу уазаєссава 339 «2105» 469 «2115 113 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 469
Авр о т1е Чаї Ммек Тих біп бетг Рго Авр Бех Пейп Аїа уаї бЗех Бей біу 1 5 10 15
Сі Ак Аза Твк о І1їе Азв Сув Пув бек Бек біп бек Уаіїі Геч Тух Бек зЗек АБвп обехт Гу Ап о Тухк Пец Уаії ТЕр Тук біп спів Був Рко біу сів ай 45
Вго Рго Пув пей Бей І1е Тух Ткр АТа бек Тік Ака піц бех біу Уві
БО
Ехо Авр оАку Ре бек с1у Бех сіу Бек б1у ТіК Авр Ре Тс Пец Та 655 79 75 80 їіе бек бех Пец біп Аза 214 Авр Ууаї Аіїа Чаї ТтТух Тух Суз біп бів 85 з0 25
Туг Тухк Бек ТВх Рхко Тер Тік РБе сіу біп б5іу Тк Був уаї бів їТ1е 100 195 110 ув 20 «2105» 470 «2115 357 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 25 «400» 470 чаччкосаце счЧчгочачьс гоадоачадас стоЧдіссаде стос сессуацдасьс 60 бссідбдсач ссебстадась сассістазі: аасікекода суачессоЗУє седосадаст 120 ссадчачаваод доссдоазуєа дуєсуддссаас абааадезач абддаааєда бавасассає 180 чеЗЧчастсто суаводудосс абїсассабо босадачаса асуссаадаа кЕсасвобає 240 сгдсадаєда асадоскчад адссадуас асаодсвосує ассассусуєс дадададеса 300 аасічачодчає ссоссксвоа бассоодуцче саадоцчасаа содчевсассЯє сесеєса 357
«2105» 471 «2115 119 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 471
Зій Уві бій Тем уаї бі) бех б1іу біу біу без а1ї сів Рко сіу біу 1 5 10 15
Бех Пец Акад їйео Бек Сув Аїа Аза бек 5іу реп Тік Ре бек Аяп РНе 20 25 30
Тер Меє Бак Тер Уаі Аху бів Аїа Ркго сіу Був б1іу ГПем біз Ткр Уаї 35 40 45
Аіа Ап ої1і6є Пув бів Авросіу адвп о Авробув Тух Тукг Уві Ано Бек Уаї 50 55 60 зуз сіу Аку БНе Тис ї1є Бек Аку Авр Авп Аза уз Авп бек Ппей Тух 65 То 15 во реч піп Ме Взробех Бей Ак Аіа 010 Авр о тТВх Аіа Уаї Туг Тут Сув ва 90 95
Аїа Аку сів ет АвпоТгтробіу Рпе Аза РБе АЗвр ї16є Ткр біу б1іп біу 1090 105 110
ТЕ Мет Уві Тпх Уві Бех Бех 115 «2105 472 «2115 327 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005 472 сауссечсуєс сзасксвасс асоссесзоса сстадчасос сосзадсачач чаксассаєс 60 ссткоста сдавоасазстс свавсассоуа ачсзазастсу бзааебууса ссадсвассес 190 сезваазвасоз сссссаавстї сотсакєстає ауіаатсавіс зЗусудсесстс азудабссссе 180 чассуаїтеї сіоподосссаа зЕсбоадсасс гсадестсесс садссассач КЧоЧебссво 240 ксеказазчака аоаостсатта стастдсоса дсасозоасо асзусссова ссоуууєаесо 300 часцосзвацоз сезвоассоас субссса 327 «2105» 473 2115109 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 473
Сбіп век Уві їжі тв бів Рго Рко Бек Азіа Бех біу ТВЕ РКО біуУу бів 1 5 10 15 вхо чаї ТВі тТіе дек Сув бех спіу бех бКех Бех Авп о Т1е сб1у Бек Був 20 25 30
ТвВк Узі АДзвп о Ткр о Тук біз біп Бе Рго бі таж Аза Вко Був Бей їжи 49 45
ХТіє Тух Вех Ава Аа Аху Аку Бго Беб сіу чаї Рхо Авр АкЯа РБе бек 60 сіу бах Пцув бек біу Тв бек діа Беж Пей діа Т1е Бек са1у Бей іп 65 7а 175 во
Век біз зво біз Аза Авр о Туг Тук Сув Аза Аіа ТІр Авр Авр Бек Пи 85 90 95
Ави Тхв о стаї ре біУу діа біу Тк був ей тТвВЕ Узі Бе) 100 105
«2105» 474 «2115 357 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 474 чааЧсдевое соЧсозачіо сода скаЧкссаос седудодувс ссвдацаєсе 60 ссегасасад собстодас сасствбвбаді аасеєттссода їсдадскузуї ссуссадастї 120 ссзччузачу зускчаз зчсдоссавс агазадсаач асдазачецча чдавасастат 180 чказчассссо сзазоууссу асссассаєс сесададаса асоссаауаа сбсасватає 240 стоасаавсдча асазчссьзазч адссааочас асачастчсоє агтастутуєс дауададєса 300 застачодчає стос за сасссоудусєс саауудасаа бддесассЯє стсттса 357 «2105» 475 «2115 119 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «4005» 475 біз Маії1 біп Бей Уаї 91; бек біу 01У б1іуУу Бей Уаії біп РКО б1у біу і 5 10 15
Бех їйе) Аку без бек Сув А1іа Азіа Бех біу Беч ТВЕ Ре бЗех Аво РБе
Тер Мек Бех Тер уаі Агу сів Аїа Рко біу пув сіу пев 015 Тер Чаї діа вап ої1іє був бів АвробБіУу бек сій був Тух Тус Уаї Ав; Бек Чаї во уз П1У Ак Впе тТвкої1іе Бех Аг9 Авр Авпв оАіяа Був Або Бек йей Тух 65 70 75 во
Бей біп Меї Авп бек Гей Агу Аіа сії АБроТЬК Азїа уаї Тук Тук Сув 85 зо 95 дій Ага піц бек Ап Тгр о біу РВе Аїа Ре дяр Ії Тур с1у біп б1у 1606 105 110
Тв Ме: Уаіїі ТЬх Уаї Бех Бек 115 «2105» 476 20 «2115 327 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005» 476 25 садіссчеде Боастоаусс зосстсацеу бебдодасос ссазосачач зЧаксассаєс 59 какао завосвусіс саасаєсуда адбааавсва сазассячеа соавчсаазєко 179 сезузазоза сососдаяст сстсактстає ааксвасавкс доусдуєсске аудудксссьї 180 чассдаксіст скочекссаа осссддсасе ссаусстсосо содссаїтсач КодЧскссяч 249 їстсвочасу зууссуасєка сбсастуєуса асабдочаєо асадасєчаа садка ке 309 ччезсвазаза ссдадостаде собсста 347 «2105» 477 2115109
Зо «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 477 піз бек узі бе Твкобібв Вко Рго бек Аза бек бі ТВпжЖ ро біу 018 ї 5 10 15
Ак Уаї ТЕ ї31е Дек Сув бек піу бек бек Бех Авп ї1е біу Бек Був 20 25 30
ТвВк таі Ава Тр Тк біп бів вве Рго біу тах Аїа Ресо Був йемз пйей 35 49 45 ів Тух Бек Авп Авп АКЧ Ако Рко бек біу Маї Ркго Авр Аку РВе Бех 50 55 60 сі Бех цу Бек сСіу ТОх бек діа Вех Пец А1а Ї1і6є бек сіу бей біл 7о 75 во бЗек біз Ав обіч Аза Авр ТУжЖ Тух Сув Аза Твк ТКр АвВр Авр Ак Бех 85 во 95
Авп оТхр Уві Епе біу Аз сіу ТВх був рей ТЕвжх уві Бей 1090 105 «2105» 478 5 «2115 366 «212» ДНК «213» Ното зарієп5 «400» 478 саччксасеї сзЗазоузауіс созкоскаса сбодссавас ссасачадчас скстсасцстя во асекзчевосу стека стсасісваос аасассаздаа сєзозваєзЗаз ссоазакесУх 120 садссосоза зчзазадсссє чочвнчсачесс сасасаєсє сесссузаєда сузацаєсос 180 тасадавасає стстузадау сзздстовзсс аресссзачу асассїссав аачесацубу й
Зксскіасоа сдассвасаї здодассстаба дасасадсоса сакаєкасто Кусасоадата 300 чсзазадсва сзвсодЧчатав КасткЕкЧаї вВсссододсс азадозсває дуубсассоро 350 їси зве «2105» 479 «2115 122 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 479 біп таї ТВ бец о пуя 013 бек піу Рко Уаї Ппео уаїії Дбув рРкго Так біс 1 5 19 15 тТвх ту Твх без ТВЕк Сув Ток Уаії бех біу РБе бех пед Бех Авп чаї го 28 30
Аха Меє сіу Узі Бег Ткр тів Ахз біп Рго Рго біу був А1а пецп 610 35 й а5 тТЕр о їіє Азїа Ніз ї11і6е вБе Бек Авп Авр біо Авпобех Тух АкчЯ Твк Бек 5О 55 50 іп уз Зек Аку Пес Тих І1е Бек Пув Авр ТВг бек був Бех сіп Уві 55 79 75 80
Уаї Бе» Тих Мет Ту Ав Меї Авр о Ркз Уаії Авр о тТВк Аіа тах Тук тТук 85 90 95
Сув Азїа Аку її6є Уаї біу Аїа Так Тк Авр Авр Азїа Рве Авр їі ТЕр 100 105 119 біу біо біу Тк Меє Узі тТвх УМа1і бак Бех 115 120 я» -2105» 480 «2115 324 «212» ДНК «213» Ното заріеп5
«400» 480 тсссасутцє буастссвзуєо асесіссЯбЯ ссадбсддссо саддасадає доддссзоуаве 60 звсссзсоаЗ99 дайасайсах содавубава аусоїдсасх зусассауса завуссаяує 120 сазцососка Костодаксоє стазсозечає адсзассоцо сстсаодачає сеставасаа 180 мівістгадєв ссавссссуу даасасодесс асссьдасса їсадсачачі сузауесууд 249 часчаздчесу асіїссастч сао оч дЧасазсачса чедасесвує уусаєседє 300 чіззчаасса заскдассує сежа 324 «2105» 481 «2115 108 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 481
Зак Тук уаї Бем так біб Ро Рго Бех Маї Бех Уаї Аїа рко б1у бій 1 5 19 15
Твк Аіз дра ї1є6 Твж Сув бі біУу Аза Аза її біу Бех їув Бек уаї 20 25 за
Нів Ткр Тук сіп біп буз рхо сіу сіп Аіїв Кто Уві без уві так тТух нов 5 40 | 45
АвроАвр Бек Авр Ах Ру Бек біу Ї1їе РКО бій дкЯ пе Бек біу Бех о 58 | о
Ана бек біу Ава Тк АТа тТвт Без Тих ї31іе Бех Ахоа Маї пі» Аза с1у 55 75 75 50
Авр біо Аїа Авр о Ріє Тух Сув 5іп таї Тер Авр Бек бек бек Авр ВКОо 85 59 95
Маї Уві Ре сфу біу зіу Ту Був ев ТВх Уаї ев 1656 105 «2105 482 «2115 381 «212» ДНК «213» Ното заріеп5 «4005» 482 чзачасдсвЯс бадсадаасс єЧчачачачас Екодессвоєс стадо себуадаєсьс 60 ксстіЧідсау себссчзаєє сасссссвує зассаєсяацча кузестоЗЯає ссссадуєст 120 ссвзчачавчу зусіззазсу зусоудесаую абсазаусазу збузаачєда уадасастає 180
ЧчісчаєвссЯ бдааадасса асссассаєс ксссоаацчаса сечесавчаа стстссовав 240 стіссазаїєча асацсскоса здссдацчазвс асадстчєУє ассасвусос дачассткох: 300 зкастазкучу счіасочсісї дсастастас гастасодбіа Бадасчїста дадссасоава 360 ассасуєчіса ссубсобосьс а 381 «210» 483 «2115 127 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 483 0)
сій уві біб бе Уаї 510 Бех с1у с1іу 01у йез Маії бід Рко біу б1у 1 5 18 15
Бех Гец АгЧч Пец Бек Сучз Аза дів бек біу Рпе Тпх Рпа баг Авоп оТук 20 25 30
Тур Має Тах Тхр Ув) Аку бів діа Рго 51у Муз біу цеб біз Ткр чаї 35 40 45 діа бек Тіе Був біп Авр піу Бех біц Аку Тук Тук Уаі Авр Бех Мах
Бо 55 50
Був у Ак Рпе Тах їіє Бек зако Авр о тТпк Аза пу Авпв Бек цей Тук 55 70 75 во
Пец бів Меї Азп о бек без Аку Аза сій Авр ори діа Узі Тук Тух Сув в5 90 95
Аза дк Рго Гей Уаї Се Меї Уаї Тук Аза без Нів Тух Тук Тук Тух 100 105 М10 біу Меї Айр уаї Тер піу Нів біу Твх ТвВх Уаї Тк Уаї Бех Бек 115 120 125 «210» 484 «2115 336 -212» ДНК «213» Ното заріеп5 «400» 484 чатасїзкуа сзасбсаціс сосаєтессс сіуєссоїса сессстддадча чдссодесбсо 80 абебсстуса зусссачіса задостостд сатачтвата чатасавств кекззаскоз 120 тассбусевов зассаддадса десіссасад сбсстдаєся абббудуєьс баассдадес 160 тссссоччксс сіцасачуєе садчідусачі ззагсаччса сачатєєтссаєс асбдаавааєс 2490 здезозавоо з3зссозоза сзбсозозчі: баграскуса соасавцстоес асаваєтсоя 300 стсассскеЗз чзедсасюодчає сазодбочад аїсагва 336 «2105» 485 «2115112 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 485
Авр іє Чаї Меї Твх біп бек РКО Бей беж беп хо Маії Твх Рхо б1У 1 5 19 15 піц Рко АТа бек Ті Бех Сув Ага бек Бек бів Бек цей Пеп Нів Бек га 25 30
Авп обі Тух Анп Тут би АвроТкр Тут ей біп Був Рко с1іу бій Бег 35 40 45
РхБ бів їео бе) тів тТух бен біу бек Авп Ага Віа бек біу Чаї рко 50 За 0
Азв Аго Ре Бег біу Бек сіу Бех с01іу ТЕЖ Авр ББе Тк пе) був ї18 65 70 75 во
Беж Акч уді бі Аіа біз Авр баї біу уаї Тух Тух Сув Мебє бій А1їа 85 зо 95 їємїм зів ТВк Рко Пе) ТВк о ББе біу біу біу Таж Був Уаї бів їі1іє Був 100 105 119 «2105» 486 -2115100 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 486 сій туаї тах Бей був бі Бек сіу Рго Маї Бей аї Був Рко Тк 030 1 З 16 15
ТвВЕ Пе Тих о Бесй Тнж Су ТвВї Уаї бек спіу РБе бег Пе) Бек Авп дів 20 25 30
Аг Мес сіу Чаї Бек Ткр І1е Ак бів Рко Рко біу Був Аіїа ей 017 35 зо 45
Ткр бев Аіа нів тів РНе бег Авпип Авр 014 ув Беїг Тух Бек тТВу Вех 5о ве | 60
Без Був Бех АкЧ Бей Тпх їІ16е Бек Був Авр Тк Кехк Був Бех Сіп Уаї ва то 75 во уві їн твх меї Тьхк дев Меє Авр Рко Чаї Авр тТпх Аза Тлх Тук Туг 85 зо 95
Сув іа Ака Ті 100 «2105» 487 «2115 98 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 487 біз уаї бів пев узі біз бек с01у б1у сіу дей уаї біп рко с1іу сіу 1 5 19 15 бек їпе) Аку Бей Зек Сув Аіїа Аза бек біу Рпе Тпх Рпеа Бех Бех Тух 20 25 30
Тер Меї бдег Тер Уаї дхз бів Аза Рко біу був б5іу Пемз біз Ткр Уаї 35 ай 45 дів Авоої1ї6 йув біб Ар о піу Вех а1о їув Тух Тух Чаї звр Бех Маї 50 55 50 пув 0іу Ако Ре Тк Ті6е бек Ако Авр АвБп Аїа буз Азп бак їви Тут 655 то 75 во їво бій МеєЄє дво бек пес) Дку Аза біс Авр ТВх Аза Уаї Тук Тух сСув 85 зо з5 іа Аго -2105» 488 «2115 98 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 488 біп Уаі біп бец уаї бій Бек сіу біу сіу Уаї Маї біп Рго біу Ак4Ч 1 5 10 15 ек Гецй Аг ей зек Сув Аїа Аза Бех с41іу Ре Тк РБа бек бах тТух 20 25 30 піу Мек Нів Ткр Уаї Ак біп А1а Рго біу Був біу ей біш Ткр Уаї ' 45 діа Уаі Тіє Ткр Тук Авр сіу бесг Авп Був Туг Туг А1їа Авр Бек Маї
БО
Був сп1іу Акч пе Тих ї1іе бех Аху Авор Авп обетг Гу Авп ТВкопез Тух 65 70 75 во їв бів Мек Авп Бек Пец Ага Аз1а б1п Авр Ту Аіа уаї Тук Тук Сув 85 90 95 діа Акгц «2105» 489
«2115 93 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 489
Авр їіє Уаії Меє Так бів бек Рхо Бей бек їй Ро Уаї ТвкЕ Рхго у 1 5 10 15
Рго Азія Бех ї1і6 Бех Сув Аку Бех Бех біп бек Бей Пен Нів бек 2й 25 30
Ави Зіу Тух Аза Тух Без Авр о Тхр Тух бе біп Був Ро сіу біп Бек 35 40 45
Вко бзів Бей Бей ї11і6 Тук без біу Бех Авп Ага А1з дек с1іу уві Рко 50 55 | 60
Авр Аг Рпе Бех б3іу Бех біу Бех біу Таж Авр Ре ТВк пе був ї1е 65 70 15 во
Бех Ахч уаї біз Аїа сів Авр о уаї сфу Уаї Тух Тук Сув 5 90 2105» 490 10 «2115» 94 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 490 вво Ті уаї Меж Тих сій Бек Рхо Авр Бех Пец Аіїа Уаї бек ви щу 3 5 10 15 піз Ага Аіїа ТВу ї1іе АБа Сув уз Зек Зек біп Зет Уаї Пес Тух Вех до 25 39
Бех Аяп о дав цув Або Тук бе Аза ТЕр Тух біп біп Був Ро с1іу б1в 35 49 45
Тхо рРхо Був ей Бей ті Тух Тер Аза Бех Тих Ака бій Бек біу Ма1
Зо ве: бо
Вкго Авр о Аха вне бег с1іу йех бі беж б01іу Так Авр о РвВе ТВх Бей тТВк 5 70 75 80 їі Бех Бек Мей бів Аза бій Авроуаї Аза уаї Тух о Тук Сув 85 0 «210» 491 «2115» 89 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 491 бів бек уаї пес тпг біп Ро Рко бек Аза бек біу Тіжх ко біу бід 1 5 16 15
Агз Ууаї Тах Іі1іе Бек Суз бек С1у Бек Бех Бех Авп І1е сіу Бех Авп 20 25 30
Тих уаї Авп тер Тух біп біб Мей Ро 01у Таж Аза вхо був Бей ей за 40 45 ї1іе Тухє Бех Ап Ап о сіп Аку Рко Веїг біу узі рРхо Авр Ак Ре Бех 5 БО бі пех Пув Бек б)іу ТЬх Бек Аіа Бех Бей А1їа ї1їє Бех біу Пец бій 5 70 75 80
Зак біз двр біб діа Авр о Тухк Тук Сув 85 «2105» 492 «2115 87
«212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 492 бек тТух уаії бе Так бій Рко Рго Бех Уаї Бег уаї Азїа Рко бі Був 1 5 10 15
ТвК Аза АкУу їіє ТВх Суз б1іу біу Авп о Авп Т1е біу Бех Був чех Уві31 20 25 39
Нів Тхр тТук бів бів Був Рго с1іу біп Аза Рго Уаії їецч Маї Ііїє Ту 35 40 45
Тук Авр Бех Ар Аха Рго Бех бЗі1у її Рко б Аку Ре Бек СІіу Бекг 5о 55 65о
Два бек біу Авп тик А1їа Тлг Без Тк о Ї1. Бех Ак чаї бі Аза б1у 65 70 75 що
Авр осі Аїа АБроТує Тук Сув 8 2105» 493 «2115 49 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 493 сій уаї бів мез баї бів бек біу діа біо Уа) був Був рРхо ФіУу А18. 1 5 10 15
Бех Уаі Гук уаії Бех Сув був Аїа Бек сі Тух ТЕ РБе ТБх біу Тук 0 25 30 тук Меїс нів Тур чаї Ага бів діа Рко б1у бів піу пе) біб ТтТхр Меї 35 40 45 ву «210» 494 «2115 98 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 494 сій уаї бій цео уаї біз бех піу пі1у сіу чаї Маї бів Рго біу Акад 1 5 10 15
Щек їжи Акт опей Бек сСув Аза Аза Бех п1іу Рье Тпх Ре Бех Бек Тук 20 25 30 біу Меб нів Ткр Уаї Ака біп Аза Рко біу Був піу цес бі) Тер Уаї 35 40 45
Аїа уУаії ї11є Ткр Тук Авр о спіу Бех Авп Цув Тук Тук Аза Авр бек Уві зо 55 60
Був біу Ахгу Рае Тахо ті Бек Агу Авр Авай бек Був Авп о ТвВк о Бей Тух 65 70 75 80 їм біп Мебє Авп бат Пец Аго Аза бій Авр тах діа уаї Тук Туг Сув 85 90 95 іа вхо «2105» 495 «2115 98 «212» Білок «213» Ното заріеп5
Зо «400» 495 зів уві біп без Уві біз Бех біу біу б1у Чаї Чаї 530 вхо оту ка 1 КЗ 10 15
Бех Пеп АхЧ Бей бек сСув Азіа Аза Бех сіу РбБе ТВ Рпе Бех Бек Тух 20 25 30 сіу Меб Нів Тер Уаії Аку біп Аза Рго бі Був Зіу Без піз ТЕр Уа) 35 40 45
Аіа уаі їіє Тур Тух Анр о сіу бек Ап о цув Тук Тух Аїа Авр бек Чаї 5О 55 во їув сіу Ак бе Тк о ї1е бек Ак Авр Авп Бек Був Авп ТВжх Бей тут аз | то 75 во без бів Меє Авп о бек Бей Агу Аза біз Авр о Тпг о Аза Уаї Тухк Тух сСув 85 о 95 йМіа АК «2105» 496 «2115 88 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 496
Авр ї11е біп Меє Тиг о біп бек Ро Бех Бех Пец бБег Аїа Бех Уаї біх 1 5 10 15
Авр Ах маії ТвВу Т1іе Тах Сув Агу Аза Бех біп біу Х1е Бех деп отТух 20 25 30 їеи діа Ткр о Тук біб біз Був ко 01у був уаї рРго Ззув Бей Бец Т1е 35 40 45 тук Аїа Аза Бек Тк бев бій Бек біу Маї Рко Бех Ахе Ріпа Бех ч1у 5о 55 БО бек піу дес с1у Твк Авр Ре Тр рем Тігот11іє Бек бек Пец сіп Рго 65 79 75 во 1 Авр о уаї Аза Тв Тух Ту Сув 85 «2105» 497 «2115 90 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 497
Зіп Беє Аза Пец ТВж сбіп Рко Аза Зек Уаї бек біу бек рко сп1у Фій і 5 19 15 ек їі ТВкК їі Бек Сув ТвВкЕ б8іу ТЬх Бех Бек Авр чаї біу біу Тух 29 25 за
Ава тТук уві Бех Ттр Тух бій бій Нів Рко сіу уз Аіа Рко був Без 35 40 45
Мек їіє Тук 5іцш уаї бек Авп Ака Рко Зек біу Уаі бех Анп Ака Вле 5О 55 6о0
Вер біу Бех Пув Бек сіу Авп Тпс Ата Бек беч ТнжЕ їіїє Беж бі Гей 655 79 7 80 зів зів біз Авр а36 Аза Авр о Тук Тук Сук 55 90 2105» 498 «2115 87 «212» Білок «213» Ното заріеп5
«400» 498
Бех бах бій Бей ТВ бів Айр Бо АтТа Уаї Бек Узі Аїа це) біу бів 1 5 10 15
Твх тУаії дку їі Твх Сув бів біу Авр бек Пей АкЯ бек Тух Тук Аів йо 25 30
Зек Ткр тТук біп біп Був Рго біу біп Аза Рко Уаії Без уаї їі Туг 35 40 45 сіу Був Авп Ав АкУ Ро Бех Біу І16є Рхо Айр Аку БВе пек сіу Бек 55 60 бек бек піу Авп о Твх дів Бех цез ТВк їіе ТВвк б3іу Аїа віп Аїа бій 85 та 75 8
АврР біз Азіа АвроТтТух Тух Суд ве 5 «210» 499 «2115 13 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 499 ех бі Бек Бек Бек Ав їів бі» Бех Був ТМпх Уаї Ав і В 19 «2105» 500 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 500 пбіу вне ТвВх вве Бек Ап тує Тр Меб Бех ії 5 10 -2105 501 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 501 бек їіє пу біп Ввр біу Бек сіб Пув Тух Тук Уаї Ввр Бех Маї Гув 1 В 19 15 зо віу -2105 502 «211518 «212» Білок «213» Ното зарієпо «4005» 502
Азр бен уаї їсцї Меї Уві Тухк Авр ї1е Авр Тук Тух Тух Тухг б5іу Мех 1 5 10 15
Авр Маії «2105 503 «211515 «212» Білок
«213» Ното заріеп5 «4005» 503 вка бек Бех біп бег без без Нів Бех Авпосіу Тух Авп їжа Авр 1 В 10 15 «2105» 504 «21157 «212» Білок «213» Ното зарієпо «400» 504
Без 051у Бек Авп АкЯ Аза Бек 1 5 «2105 505 «21159 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 505 (Же бів ТВ Бей біп Твг орто цей Тве 1 5 «2105» 506 «2115 25 «212» Білок «213» Ното зарієп5
Зо «4005» 506 піз уаї Тк Бей Був біб бек б1іу Рго Уаї Ппез Уаї Був Рко Тк сій 1 5 10 15 тн Без Тв Ге Тк Суб Тк Уаії Бег 20 25 -2105 507 «2115 12 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 507 сСіу Ре бек бес бек Аа А1а Аку Меї бі Уаї «ек 1 Ко 10 «2105» 508 «2115 12 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 508 сіу РБе Бех Ццез Бек Авв Ууаї ка Меб п3іуУу чаї Бе 3 в 16
«2105» 509 «2115 14 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 509
Уві АхоЗ сій ро рез п1у Був Аза Бей вій ТКо ей діа ї но 10 «210» 510 «2115 25 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 510 зіш Уві стіп їни тУаї біз бек бі Бі б1іу ей Узі біп РКО у Ф1у ії 5 10 15 бек Пес Ака бер бек Сув діа дія дек 29 25 «2105 511 «2115 10 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 511 піу Рре ТВх вБе Бех чек Тук Тер Меї 5ек 1 5 10 «2105 512
Зо «2115 10 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 512 бЗіу пе) ТВх Бе Вех Ав» Рпе Тер Меї Бекг 1 5 10 «2105» 513 «2115 10 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «4005» 513 счіУ вве тТвх Рпе бах АвпотТух Тхр меж тнг і 5 15 «210» 514 «2115 14 «212» Білок «213» Ното зарієпо «400» 514
Тхр Уаі Аку біп діа ко біу був б1у Пец сі: Тер уаї Аїа 1 5 19 -2105 515 «2115 25 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 515 сів Уаї біб без Уа1ї біб Бех с1іу с1іу сіу Уаї Маї піп Ро 01у КО 1 З 16 15
Бек Бей Ака Без Бех Сук Аз Аза Бег 20 25 «2105 516 «2115 25 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «4005» 516 із Уаї бів цер уаї бів Бек біу 61у бі уаї Аїз біп рхо б1у Акга 1 З 10 15
Бек беч Ака без Бех Сух Аза Аіз Бех . 20 «2105 517 «211510 «212» Білок 25 «213» Ното заріеп5 «4005» 517 біу бе тих рРбе хек Бек Тук біу Меє нів 1 З 10
Зо -2105 518 «2115 14 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 518 тгр уві Аг3з іп діа Рсо біу Ппув біу йеч біз Тхр о уаі Аза 1 В 16 2105 519 «211516 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 519
Ні Т1іе рве бБег Ап Авр біз їув Бех Ту Бех ТВжх Зек йез Був бек 1 5 10 15 «2105» 520
«212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 520
Нін їі: Бе Бех Авіа Авр Бів Ав оЗек Тух дка ТвВкс бек пе був бек 1 У 10 15 «2105 521 «2115 33 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 521 «йхч пед Тих 116 Бек Пув Авр ТВх Бех Був Бек біп Уаії Чаї Бей Тих
У З 19 15
Ме: тах Ап о Меї Авр РКО Уаї Авр ТВпжк Аза ТвВІ Тук Тук Сув Аіїа Ака т1е «2105 522 «2115 11 20 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 522
Уві біт Аїа тає ТЕ АвроАзр Аза Бра Авв 19 і 5 16 25 «2105 523 «2115 11 «212» Білок «213» Ното заріеп5
Зо «4005» 523
Тко Біт біп біу Твх Мес Уаї ТВх Уаї Бек Бек 4 а 160 «2105» 524 «2115 11 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 524 тев біт бів зіу ТВ Ту Уаї Тв Уаї Беж Бех ї. 5 18 «2105 525 «2115 11 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 525
Ткр сі Ніз зіу ТЕ ТВЕ Уві твЕ узі чек чех і. 5 10 «2105 526 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 526 вав ті був сів Авросіє бех біз бук Ту Тух Чаї йвр бек Ууаї цу 3 с 10 15 яру
У
«2105 527 «211517 «212» Білок «213» Ното зарієпо «4005» 527
Ашп її пув осіб дво біу два Авр був тує Тк уві двробев У Буж ух х 10 15
БУ
«2105 528 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 528
Бах діє Був піп Азр о біу Вег бій Аку Ту о Тук Уві Авробет Уві ув. 1 5 то 15 гу Ш
Коо) «2105» 529 «2115 32 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 529 вка вве тах ї18 бех Ахз Авр Авап Аза Бу Авп о бек Бец Тук Бей сій ї В 10 15
Мес Ав обех їз Ага Аїа сої др ТВ Аїа Уаї Тух ТтТухк Сув Аїа вка 20 25 30 «2105» 530 «2115 32 «212» Білок «213» Ното заріеп5 -4005 530
Ак вне Ту 116 Бех АкЯЧ Авр Авп Аза Аг Ап о Зег бе) тує Бей ств ї 5 30. 15
Мас Ав лек во аку Аза біо Авр отТве Аза Уаії тує Ту Сув ві га а) 25 чо «2105» 531 «2115 32 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 531
Ах вва Аза їі Бех Агу Ар о Авв Аза цуз Авпобек пев Рпе Бей іп 1 У 10 15
Ме дей бек пев ака діа бій Аво ТВг діа уаї Тук тТук Сув Дів Агз 20 25 30 -2105 532 «2115 32 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 532
Аха ВБе ТВ гіє бек Ака дар тах А1а був Ава Бех пен Ту їі 510 1 З 18 15
Маж АвпобБег їз Ага Аза січ АвротТпх Аза Чаї Тухк Тухк Сув ДТа Аку й 25 30 «2105 533 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005 533 віз Бек АБИ Тр осі вве АТа вро Авро її є с 10
Коо) «2105» 534 «211518 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 534 вхо їбео Маї їі Меб Уаї тує Аїа ей Ні тТух Тукх тТук Тух віу Меї 1 5 10 15
Авв чуаі «2105» 535 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 -4005 535 чаї ї1їз тов тТух Азрвосіу Ве Аза ув тує Тух Аїіа Авр Бех Уаї Був 1 5 10 15 «2105» 536 «211517 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 536 чаї їіє Тухк Тук Авр біу І1е Авп о був Нів Тук Аза Авр бек Уві Бу 1 5 10 15 пу «2105 537 «2115 32 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 537 дхо Бе тик її Беж АкЗз Авр одн о Векг Був Ави Тйх без тую їж; ої ї щ 16 15
Ме Ави Век їн Аже вів сім яр Так Аівз уві Тук Тух був Аїа Ак 26 25 зо «2105» 538 «2115 5 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 538
Анв Ах бі Бей дар 1 щу
Зо «2105» 539 «211511 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 539 тТхв сі сїв бі Тк Гец Чаї ТЕ оУуаж бек Бех ї 5 10 «2105» 540 «2115» 23 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 540 дво о ті16 чаї Меї ТИЖ сій беж Рха їм Бех їец ро чаї ТЕ Рго б5іу і В 10 ІВ піз рго Аза век їіє Беж Сув й
«2105 541 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 541
ТюЕр Тук бев бів Був Рго с1іу бій бес Рсо бій без без її Тег і В 16 15 «2105 542 «2115 23 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 542 вв їіє чаї Мебс ТВх біз Бех Рхо дар бек Без діа Уві Век рей сіу 3 5 19 15 ай АкУу Віа ТвкК Їїе Авпа сСув 2 «2105 543 «211517 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 543
Був веж пек сій век уаї ме) Тук Бек Бек Двп Ап Був Авп оТух бе і 5 19 15
Аза «2105» 544 «211517
Зо «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 544
Ту Бек Бек біп Бех Узі Пи Тук бек бек Ап обех Пув Авп отук Гей 3 У 10 і5
ЗБ тва «2105 545 «211515 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 545
Тео тТрж сі бій Був РКО бі біп вко Ро Був ей Їх їїе Тух 1 к 10 15 «2105» 546 «2115 22 «212» Білок «213» Ното заріеп5
«4005 546 піп дек уаї Пео Тк обіп ро Вго бех Аза Бек біу Тих рРхо б1іу біп ц 5 10 15 вка Уугі твк Ії веж Сув 20 «2105» 547 «211513 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 547
Беж біу ех пек бек Або) І3е біу ак дви Тих уві два 3 5 15: «2105» 548 «211513 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 548
Щек сіу бЗеї бБетгт Бех Аваип Ті піу Бек пув ТВ Чаї Ав ї Ко 16 «2105» 549 «211515 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 549
Тер тТУух ів іл їз вуз біу тТвпк вата РКО був цев пев І1е Ту 3 ве 10 ТУ
Зо «2105 550 «211515 «212» Білок «213» Ното заріеп5 -4005 550
Тер Тух Фіп дій ре рРго ЧФіу Твгодіа Рго Був бей бе Ї1е Туг 1 5 10 15 -2105 551 «2115 22 «212» Білок «213» Ното зарієпо -4005 551
Зек Туг Узі ем Таг бія Бго РКО бек Уаіїі Жех уаї Аза Рко біу цув 4 8 10 15
Твху Аїа Ахго ЇЗМе Твх сСув 20
-2105 552 «2115 22 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 552
Бек Тух Ууі реп Тих б) го вхо Бех уа1і Бек чаї Аіа Еко біу сіп 1 5 16 15
ТВк дів АкЧ її Тк о Сув
ВО
«2105» 553 «2115 11 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 553 пі сіу Ав Аа т1е 531» бек Був Бех Уві НіВ і Ко 16 «2105 554 «211515 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 554 тЕр тук бів бій Буг рко пу сів Аза го Уві бею Уві 316 тух ї З 18 ї85 «2105 555
Зо «211515 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 555 тв тує сія бів Був Бо піу Біп Ата Рко Уві Пнх уві Уаії Тух 1 5 10 15 «2105» 556 «2115 32 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 556 сіу уві Бго Авр Ага Ре бек п1у Бек Ччіу БЖехт б1у Тік Авр РБе так 1 5 18 15 їши Був її Бех Ак уаї бій Аїа біз Ар оуаї біу Маї Тук Тук сСув
Ка 25 Кт) «2105 557 «2115 32 «212» Білок «213» Ното зарієпо
«4005» 557 сФ1іу Уаі Рсо Авр Ага Ре Бех с01у Бех с1у Бех біу Тк Нів дей тн 1 5 10 13 їж: їм Ті бек Ага уді бі Аза б; Авроуаї с01у Уаї Тує Тук Сув 20 25 30 «2105» 558 «21159 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 558
Ме бів Аїа це бів ТВї Кто їй Те 1 5 «2105» 559 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 559 те 1у піу біу Тк був маї б1іч її Був 1 5 16 «2105» 560 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 560
Зо тТЕр Аівн Как тих Ага їв Баш і а -2105 561 «2115 32 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 561 бі уві Рго АвроАка Ре Бех біу Бек біу Бек 5іу Тих Авр РБе Тс 1 5 10 15 їси ТВж її Бек Ввтоіїж бів Аїа сі) Авр оуаї Аза чаї Тух Тук сСув 20 25 30 -2105 562 «21159 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 562 біз Біб тТуж Ту Бех Тк Бгто Ткр ТВх
«2105» 563 «212» Білок «213» Ното зарієпо «4005» 563 вне сіу сїв йіу ТВх був чаї сій ї116 був 1 5 19 «2105» 564 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 564
Бек Ав Аваи бів Ажа вБкго Бек х 5 «2105 565 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 565
Бек Ав Авп о Ак Ак РКО бек і 5 «2105» 566
Зо «2115 32 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 566 сіу Уаіїі Рхто Авр Аг Ре бек біу беж ГПув бек біу Ту йек діа бек 1 не 10 15 їси Аіа їі Бек «1у їєц сів Бек біо Авр бів Аза Авр Тук Тук сСув о 25 30 «2105» 567 «211510 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 567
Кі ві Тер Ав» Ав Вех їжи Ави Тгв Уві ї 5 їв «2105» 568 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 568
Аза тих Тер о Авр Авр Аг Без Авпп о Тр уві 1 З 19 «2105» 569 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 569 рве сіу Вії сіу Тк був пеб Твх Уа) ев і 5 10 7 «2105» 570 «21157 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «4005» 570 ту дяр вах Авро Ак Рко ех 1 5 «2105 571 «21157 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 571
Авр о Авр Бех Авр Ак Бго Бек 1 З
Зо «-2105 572 «2115 32 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 572 сіу їїе Рко 810 Акз ВБпе Бех бі йех Аяйп Бад сіу Авп ТВх Аїва ТВЕ 1 5 10 15
Без Твх її бВег Ага Уаї бій Аїа с01іу АвроБій діа дер Тук Тук був 20 25 30 «2105 573 «2115 32 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 573 біу їі ко біо Ака вве бек спіу Бак Аво бек с01у Авп о тТлх Ата ТВЕ 1 В 10 15 ем Тахо тіє Бех Ака Уаї сій Атїа біу Авр обіш Аза Авр Тук РБе сув. 20 25 30 «2105 574 «211511
«212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 574 сій Уві Тв Авр Бех Бех Бех Авр рхо Чаї Уд1 і 5 ї6 «2105 575 «211510 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4005» 575 вве пі сі сіу Тих був рей Тнх Уаі Без і З 10 ' «2105 576 «2115 127 «212» Білок 213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний «4005» 576 сів Ме Фів рев Узі сіб бек сіу сіу біу без чаї бів рко бі віу 1 5 10 15
Беж Бе) джу бе бек Сув діз діа бБеї піу Ре ТВ Ре бек бек Ні 29 25 Зо
Ткр о Мебс Був Ткр Узі Ак сів діа Рко п1у був біт Пей бої Тер Узі
Аїа Азп тів Авп обіп Авр осбіу Бех сій пу Тухк Ту уаї Авр бек чаї о 55 бо
Був віу Ако Ре Таж їїє бек Аку Авр о Авп о діа був Авп бек бе рак 5 70 75 80
ІТжнх пів Мей Аза бек ес Ак іа іч Авв тн Аза уаї Тук о тТук Сув я 90 5 діа Акч Аве ої1іє Уаїф рей Ме уаї тТух Авр о Месє двротук тТук Тух ТУд 100 105 110 сіу Ме Авр о уаї Ткр обі сів зіу ТВжЖ ТВ уаїі Тих Уві бек бег 115 129 125
Зо «2105 577 «2115112 «212» Білок 213» Штучна послідовність 35 «220» «223» Синтетичний «4005» 577
Азр ї1іе уд)і меж тТрЕ біп бех рхо Па Беж їжи рко Заї Тв Рко бі 1 5 15 15 січ вхо Аза бек їі Бех Сув Ах Бек бек бів Зех бей еп Нів ех о 25 30
Ава Оіу ляв Ав Тук йев АвроТжр о Тук Без бій ув РКО біу біп Бек 35 40 45 го бід бен їні її1е Ту рей сіу Бех Ава Ак Аза бек ту Уаї РЕб 50 55 5о
Ар Ах Ве бек бі бек біу бек сіу Таж Авр о РНе Тк Ппем був Тіє 65 7 75 во
Бек Ака Уві січ Аза біз Авр Чаї біу Уаї Тухк Тух Сув Меб бів Тк 85 за 35
Без сій твс о БКо б; отв вне осі сіу сіу ТВ пу Чаї бій Т1е Буз 1066 105 110 «210» 578 «2115 10 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 578 сіу Ра ТЬс Рае Зех бах Нів Тр Меб Був 1 5 10 «210» 579 «211517 «212» Білок «213» Ното зарієпо «400» 579 лап Іїе два пів Авробіу бек бійп Буя Тух Тук Чаї Авр бек Уві Був 3 З 10 15
Фу «210» 580 «211518 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 580
Ав Ії уві без Мебє Уаї Тух Авр Ме Авр о Тукх Тук Тух тТух сіу Меє 1 5 10 15 дворові
Зо «2105 581 «211516 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 581
Аг Бех Бех 0105 Бех Бей Те) Ні бек Авп біу Ап Ав оТук во Ар ї 5 10 15 «2105» 582 «2115112
«212» Білок 213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний «220» «2 21» ВАРІАНТ «002» 15 «223» Хаа - Набо 0 «220» «221» ВАРІАНТ «002» 16 «223» Хаа-Е абої «220» «221» ВАРІАНТ «222» 96 «223» Хаа-ТГабоА -4005 582
Ав ї11іе Ууаї Меб Те бів Бек Рхо без бек Бей во Уаї ТВк хо слу і 5. 10 15 біз Рго йіз бех їі Бех Сує Аку Чех чех бів Бех цей ей ів Бех 20 | 8 30
Ака бі Ана Ави Тує Сея АвротТтр Тухг без біп був Бжхо біу біп бек 35 «й 45 ро бій фі іні їі Ту іже сіу Бех Ава Ах Аїа Бек піу туаї рЕЗ о 55 І5;
Аврв Ага Ре бек бі бек біу бек біу ТЕх Хаа Хаа Тік Пе) цув їт1е 5 70 75 80
Чек аку уві біз дів біб Авроуаї б1іу Уаї Тук Тук Сув Меб сіп Хаа 85 30 з5
Без бів Тих РКО їжі ТНХ Ре с1у с1іу біу Тв Був Уві 010 Т16є Був 190 105 119 -2105 583 «2115127 «212» Білок 213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» Синтетичний «220» «221» ВАРІАНТ «002» З1 «223» Хаа-5 або М «220» «221» ВАРІАНТ «222» 35 «223» Хаа-5 або Т «220» «221» ВАРІАНТ «222» 58 «223» Хаа - К або К
«020» «221» ВАРІАНТ «022» 69 «023» Хаа - А або Т «020» «221» ВАРІАНТ «002» 14 «223» Хаа-М або Т «020» «221» ВАРІАНТ «222» (16)...(176) «2023» Хаа - К або М «020» «221» ВАРІАНТ «222» (80)...(80) «223» Хаа-У або Е «020» «221» ВАРІАНТ «222» (99)...(99) «223» Хаа-О або Р «020» «221» ВАРІАНТ «222» (106)...(106)
Зо «223» хаа-О або А «020» «221» ВАРІАНТ «222» (107)...0107) «023» Хаа - І або І «020» «221» ВАРІАНТ «222» (108)...(108) «223» Хаа-:0О або Н «020» «221» ВАРІАНТ «222» (119)...(119) «223» Хаа-О або Н «400» 583 сій Уаї сіп би Узі біз бек сіу п1у с1у Без Уві б1іп Рго с1у аіу і 5 10 15
Бек Без Акс Гм Бех Сув Азча Аза бек сбіу Ре Тк Ре бек Хаа Тук й 25 за тТгр Мас Хаа Тер Уаї Аку бів діа Рхко біу МДув біу Пе) бі) Ткр уаї 35 40 45
Аза Ве Ії цу бБів Авробіу бек піп Хаа Тук Тук Узі Авр Зек Маї 5О 85 во
Муз 01у Ага вВпе Хаа Ті бек Аха Ар о Хаа Аза Хав Авп о бех їши Хав 55 та 75 8о
Гец бів Мет Авп бек Би Аку діа бій Авр о тах Аза Уаї тух Тук Сув в5 90 95
Аіз Ага Хай їец уаї їси Меї Ууаї Тук Каа Хаа Хаа Тух Тук Тух Тух 150 105 110 сіу Меї Авр о Уаі Тхр 5Біу хаа Зіу Тих тТвх Уаї Трх уаі бек Бех 115 120 125 «210» 584 «21159 «212» Білок 213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний «220» «221» ВАРІАНТ «222» З «223» Хаа-ТГабоА «4005» 584
Меї біз хаа Пей біп Тпг вко Бей ТЕ 1 З -2105 585 «2115 10 «212» Білок 213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний «220» «221» ВАРІАНТ «222»6 «223» Хаа-5 або М «220» «221» ВАРІАНТ «222» 10 «223» Хаа-5 або Т -4005» 585 іш ве тах рпе Бех Хаа Тух ТЕр Мек Хва 1 ! 5 10 -2105» 586 «211517
«212» Білок 213» Штучна послідовність «020» «223» Синтетичний «020» «221» ВАРІАНТ «002» 9 «223» Хаа - Кабо В «400» 586
Жех їі Був сіп Авр сіу Бек біс Хай Тух Тук Уаї Авр беж Уаї Був і В 10 ІЗ зу «-2105» 587 -211518 «212» Білок 213» Штучна послідовність «020» 223» Синтетичний «020» «221» ВАРІАНТ «00251 «223» Хаа-:О або Р «020»
Зо «221» ВАРІАНТ «022» 8 «223» Хаа:-Ю або А «020» «221» ВАРІАНТ «002» 9 «223» Хаа - І або І «020» «221» ВАРІАНТ «0025» 10 «223» Хаа:0О або Н «400» 587
Хив ви уді Пе) Мей Чаї Тук Хаа хХаа Хаа тТук Тух ТуУус Тук БУ Веє і Ко 10 15
Авв чаї «210» 588 «2115113 «212» Білок 213» Штучна послідовність «020» 223» Синтетичний «400» 588
Авр Ії Уаї Межї ТНЕ бій Бек Рко Авр обек Бей Аіа уаї Бех Бей сі
Ї 5 10 15 із Аху Аза ТВк їі АБ) Сув Пубз Бек Бек бів Бек уві Без ТУух АкЧ
В 23 зо
Зек Авп Аво Ака деп БНе бей біу Ткр Тух сіп сіп Був Ро сіу сіз з 40 45
Вжо ВЕш о Ави іні Мені їі Ту Тхр Атїа бек ТЕ Ака біс бек с1у Уві 55 во
Рюо Авр о АкЯа Бпє бек біт бек ціу Беж біу Тих Авр оре Тк їжи ТБ 5 То 75 о
Ііе Бех Бех Без біп ліз біз Аво Уаї Аїіа Уаї Тук Тук Сув бів бій ва 0 з5
Тух Тук ТВу Тпх Кго Тухк Твх Рве біу біп йіу Тпж Був їва біз Щ1е іо 195 118 «210» 589 «2115 118 5 «212» Білок 213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетичний «400» 589 сій Уві бів без уаї Ото бек бІуУ бІу 0іу баз уаї бів вко б1у У 1 5 10 15
Век беб дк без бек Сув Аїа ліз Бек біу Біне Тих Ра Авп АвпотТук
КЕ 25 30
Віа Меб дей Тер УТ Ак сій Аза Рсо сіу вуз біу без двр о тТкр о уаї ше ЕТ й
Зек Тік її6 їв; біу бех біу 1у ТЕ Тйх два тТук Аїа Аво Бех Уаї 5о й ши Ди 6 ши
Пує 0іу два Ве їі їі: ех ака Аве век Беу був Нів ТЕ беч тує г та 7; І во їжа сій Меб Ав оба без АжЯ віз ето Айр о тТву Аіз уаї Тук Тук Сув 8 | 50 35 із був дев Бек Ап Тхо сіу Авй Бе Авр опе Тр БУ АКкЯ Ту ТЕ 100 105. їто ївча уві Тв Уві Бек Вед-
ТІ

Claims (11)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Застосування моноклонального анти-РОЗКО антитіла у виробництві лікарського засобу для зниження рівня холестерину ЛІНЩ в сироватці хворого, причому моноклональне антитіло містить: а) ділянку визначення комплементарності (СОК) легкого ланцюга послідовності СОКІ 1 у БЕО 10 МО: 23, СОКІ 2 послідовності СОКІ2 у БЕО ІЮ МО: 23 та СОКІ З послідовності СОКІ З у БЕО ІЮ МО: 23; і ділянку визначення комплементарності (СОК) важкого ланцюга послідовності СОКНІ у ЗЕО І МО: 49, СОКНЕІО послідовності СОКНІ2 у 5ЕО ІО МО: 49 та СОКНЗ послідовності СОКНЗ у БЕО І МО: 49; причому СОЕК визначені Споїіа або АБМ; б) ділянку визначення комплементарності (СОК) легкого ланцюга СОМІ1, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 158, СОКІ2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 162, СОКІ З, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 395; і ділянку визначення комплементарності (СОК) важкого ланцюга СОКНІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 368, СОКНАа, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 175, СОКНУЗ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 180;
в) ділянку визначення комплементарності (СОК) легкого ланцюга СОКІ7!, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 305, СОКІ2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 312, СОКІ З, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 319; їі ділянку визначення комплементарності (СОК) важкого ланцюга СОКНІ, що містить амінокислотну послідовність «ЕО ІЮ МО: 308, СОКНАІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 320, СОКНУЗ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 310; г) варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності зХЕО ІЮ МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності 5ЕО ІЮ МО: 49; або д) варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮО МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮО МО: 49, причому моноклональне анти-РС5КУ антитіло вводять в дозі від приблизно 70 до приблизно 420 мг, таким чином, знижуючи вказаний рівень холестерину ЛІНЩ в сироватці щонайменше приблизно на 15 95.
2. Застосування моноклонального анти-РСЗКОУ антитіла у виробництві лікарського засобу для лікування або попередження пов'язаного з холестерином розладу у хворого з рівнем холестерину ЛІИНЩ в сироватці, причому моноклональне анти-РС5КУ антитіло містить: а) ділянку визначення комплементарності (СОК) легкого ланцюга послідовності СОКІ 1 у 5ЕО ІЮ МО: 23, СОКІ 2 послідовності СОКІ2 у БЕО ІЮ МО: 23 та СОКІ З послідовності СОКІ З у БЕО ІЮ МО: 23; і ділянку визначення комплементарності (СОК) важкого ланцюга послідовності СОКНІ у ЗЕО І МО: 49, СОКНЕІО послідовності СОКН2 у 5ЕО ІЮ МО: 49 та СОКНЗ послідовності СОКНЗ у БЕО І МО: 49; причому СОЕК визначені Споїіа або АБМ; б) ділянку визначення комплементарності (СОК) легкого ланцюга СОМІ1, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 158, СОКІ2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 162, СОКІ З, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 395; і ділянку визначення комплементарності (СОК) важкого ланцюга СОКНІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 368, СОКНАІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 175, СОКНУЗ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 180; Зо в) ділянку визначення комплементарності (СОМК) легкого ланцюга СОКІ1, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 305, СОКІ2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 312, СОКІ З, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 319; і ділянку визначення комплементарності (СОК) важкого ланцюга СОКНІ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 308, СОКНАІ, що містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮО МО: 320, СОКНУЗ, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 310; г) варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності зХЕО ІЮ МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності 5ЕО ІЮ МО: 49; або д) варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮО МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮО МО: 49, причому моноклональне анти-РС5КУ антитіло вводять в дозі від приблизно 70 до приблизно 420 мг, таким чином, проводячи лікування або попередження пов'язаного з холестерином розладу у вказаного хворого.
3. Застосування за п. 2, яке відрізняється тим, що пов'язаний з холестерином розлад вибраний з групи, що складається із родинної гіперхолестеринемії, зокрема гетерозиготної родинної гіперхолестеринемії і гомозиготНої родинної гіперхолестеринемії, неродинної гіперхолестеринемії, підвищеного рівня ліпопротеїну (а), захворювання серця, метаболічного синдрому, діабету, захворювання коронарних судин серця, інсульту, серцево-судинного захворювання, хвороби Альцгеймера, захворювання периферичних артерій, гіперліпідемії і дисліпідемії.
4. Застосування за п. 3, яке відрізняється тим, що родинна гіперхолестеринемія включає гетерозиготну родинну гіперхолестеринемію та гомозиготну родинну гіперхолестеринемію.
5. Застосування за п. 1 або 2, яке відрізняється тим, що рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці у вказаного хворого знижується на кількість, вибрану з групи, що складається із: а) щонайменше приблизно 30 95, б) щонайменше приблизно 40 95, в) щонайменше приблизно 50 95 і г) щонайменше приблизно 60 95.
6. Застосування за п. 1 або 2, яке відрізняється тим, що анти-РО5КЗО антитіло містить ділянку визначення комплементарності (СОК) легкого ланцюга послідовності СОКІ 1! у 5ЕО ІЮ МО: 23, 60 СОКІ2 послідовності СОКІ 2 у БЕО ІЮ МО: 23 та СОКІЗ послідовності СОКІ З у БЕО ІЮО МО: 23, і ділянку визначення комплементарності (СОК) важкого ланцюга послідовності СОКНІ у ЗЕО ІЮ МО: 49, СОКН2 послідовності СОКН2 у 5ЕО ІЮ МО: 49 та СОКНЗ послідовності СОКНЗ у 5ЕО ІО МО: 49.
7. Застосування за п. 6, яке відрізняється тим, що анти-РСО5КО антитіло містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО: 49.
8. Застосування за п. 6, яке відрізняється тим, що анти-РСО5КО антитіло містить варіабельну ділянку легкого ланцюга 5ЕО ІЮО МО: 297 і варіабельну ділянку важкого ланцюга 5ЕО ІЮ МО:
298.
9. Застосування за п. б, яке відрізняється тим, що важкий ланцюг містить: СОКІ1, що містить ЗБЕО Ір МО: 308, СОК2, що містить 5ЕО ІЮ МО: 175, та СОКЗ, що містить 5ЕО ІЮ МО: 180, і легкий ланцюг містить: СОКІ, що містить ЗЕО ІЮО МО: 158, СОК2, що містить 5ЕО ІЮО МО: 162, та СОКЗ, що містить 5ЕО ІЮ МО: 395.
10. Застосування за п. б, яке відрізняється тим, що важкий ланцюг містить: СОКІ1, що містить ЗЕО І МО: 368, СОК2, що містить ЗЕО І МО: 175, СОКЗ, що містить ЗЕО ІЮ МО: 180, і легкий ланцюг містить: СОКІ1, що містить зхЕО ІЮ МО: 158, СОК2, що містить 5ЕО ІО МО: 162, та СОКЗ, що містить ЗЕО ІО МО: 395.
11. Застосування за п. 6, яке відрізняється тим, що анти-РС5КУ антитіло вводять хворому в дозі, вибраній з групи, що складається із: а) від приблизно 70 мг до приблизно 420 мг, б) від приблизно 105 мг до приблизно 420 мг, в) від приблизно 120 мг до приблизно 420 мг, г) від приблизно 140 мг до приблизно 420 мг, д) від приблизно 150 мг до приблизно 420 мг, є) від приблизно 210 мг до приблизно 420 мг, ж) від приблизно 280 мг до приблизно 420 мг, и) від приблизно 300 мг до приблизно 420 мг, к) від приблизно 350 мг до приблизно 420 мг, л) приблизно 70 мг, м) приблизно 105 мг, н) приблизно 120 мг, п) приблизно 140 мг, р) приблизно 150 мг, с) приблизно 210 мг, т) приблизно 280 мг, ф) приблизно 300 мг, х) приблизно 350 мг, ц) приблизно 420 мг.
12. Застосування за п. 11, яке відрізняється тим, що анти-РОЗКО антитіло вводять хворому за схемою, вибраною з групи, що складається із: (1) 1 раз на тиждень, (2) 1 раз на 2 тижні, (3) 1 раз на місяць, (4) 1 раз на 2 місяці, (5) 1 раз на З місяці, (6) 1 раз на 6 місяців і (7) 1 раз на 12 Зо місяців.
13. Застосування за п. 12, яке відрізняється тим, що стадія введення включає введення щонайменше одного анти-РС5КУ антитіла парентерально.
14. Застосування за п. 12, яке відрізняється тим, що стадія введення включає введення щонайменше одного анти-РС5КУ антитіла внутрішньовенно.
15. Застосування за п. 12, яке відрізняється тим, що стадія введення включає введення щонайменше одного анти-РС5КЗУ антитіла підшкірно.
16. Застосування за п. 15, яке відрізняється тим, що щонайменше одне анти-РС5КОУ антитіло містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності зХЕО ІЮ МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот, яка є щонайменше на 90 95 ідентичною послідовності зЕО ІЮ МО: 49.
17. Застосування за п. 15, яке відрізняється тим, що щонайменше одне анти-РС5КОУ антитіло містить ділянку визначення комплементарності (СОКІ1) легкого ланцюга послідовності СОКІ 1 у ЗЕО ІЮ МО: 23, СОКІ2 послідовності СОКІ 2 у БЕО ІЮО МО: 23 та СОКІЗ послідовності СОКІ З у ЗЕО ІО МО: 23, і ділянку визначення комплементарності (СОК) важкого ланцюга послідовності СОКНІ у 5ЕО ІЮ МО: 49, СОКНО послідовності СОКН2 у ЗЕО ІЮ МО: 49 та СОКНЗ послідовності СОМКНЗ у 5ЕО ІЮО МО: 49.
18. Застосування за п. 15, яке відрізняється тим, що щонайменше одне анти-РС5КОУ антитіло містить варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО: 23, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:
49.
19. Застосування за п. 16 або 17, яке відрізняється тим, що анти-РС5КОУ антитіло вводять хворому в дозі від приблизно 14 мг до приблизно 45 мг підшкірно 1 раз на тиждень, причому рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується щонайменше приблизно на 30-70 95.
20. Застосування за п. 16 або 17, яке відрізняється тим, що анти-РС5КОУ антитіло вводять хворому в дозі від приблизно 70 мг до приблизно 420 мг підшкірно 1 раз на 2 тижні, причому рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується щонайменше приблизно на 30-70 95.
21. Застосування за п. 16 або 17, яке відрізняється тим, що анти-РС5КОУ антитіло вводять хворому в дозі від приблизно 250 мг до приблизно 420 мг підшкірно 1 раз на місяць, причому бо рівень холестерину ЛИНЩ в сироватці хворого знижується щонайменше приблизно на 30-70 95.
22. Застосування за п. 20, яке відрізняється тим, що анти-РСО5КО антитіло вводять хворому в дозі приблизно 120 мг.
23. Застосування за п. 20, яке відрізняється тим, що анти-РСО5КО антитіло вводять хворому в дозі приблизно 140 мг.
24. Застосування за п. 20 або 21, яке відрізняється тим, що анти-РС5КОУ антитіло вводять хворому в дозі приблизно 420 мг.
25. Застосування за п. 2, яке відрізняється тим, що щонайменше одне анти-РС5КУ антитіло вводять хворому перед, після або одночасно щонайменше з ще одним іншим засобом для зниження рівня холестерину.
26. Застосування за п. 25, яке відрізняється тим, що щонайменше один інший засіб для зниження рівня холестерину вибраний з групи, що складається із: статинів, зокрема аторвастатину, церивастатину, флувастатину, ловастатину, мевастатину, пітавастатину, правастатину, розувастатину, симвастатину, нікотинової кислоти, фібринової кислоти, секвестрантів жовчних кислот, інгібітора абсорбції холестерину, модифікуючих ліпіди засобів, агоністів ППАР-гамма, агоністів ППАР-альфа/гамма, інгібіторів скваленсинтетази, інгібіторів ТБХЕ, антигіпертензивних засобів, протидіабетичних засобів, зокрема, сульфонілсечовини, інсуліну, аналогів СІ Р-1, інгібіторів ДДП4, модуляторів АровВ, інгібіторів МТБ та/або засобів для лікування облітеруючого артеріосклерозу, онкостатину М, естрогену, бербіну і терапевтичного засобу для пов'язаного з імунітетом розладу.
27. Застосування за п. 18, яке відрізняється тим, що щонайменше одне анти-РС5КОУ антитіло вводять хворому перед, після або одночасно щонайменше з ще одним засобом для зниження рівня холестерину.
28. Застосування за п. 27, яке відрізняється тим, що щонайменше один інший засіб для зниження рівня холестерину вибраний з групи, що складається 3: статинів, зокрема аторвастатину, церивастатину, флувастатину, ловастатину, мевастатину, пітавастатину, правастатину, розувастатину, симвастатину, нікотинової кислоти, фібринової кислоти, секвестрантів жовчних кислот, інгібітора абсорбції холестерину, модифікуючих ліпіди засобів, агоністів ППАР-гамма, агоністів ППАР-альфа/гамма, інгібіторів скваленсинтетази, інгібіторів ТБХЕ, антигіпертензивних засобів, протидіабетичних засобів, зокрема сульфонілсечовини, Зо інсуліну, аналогів СІ Р-1, інгібіторів ДДП4, модуляторів АроВ, інгібіторів МТБ і/або засобів для лікування облітеруючого артеріосклерозу, онкостатину М, естрогену, бербіну та терапевтичного засобу для пов'язаного з імунітетом розладу. КО) 1 МО:1 ОБОБОБОУБЕДУСАСЕЗБЕОСТАБАРЕПОТТАТЕНКСАКОРИКОРОТУУМУСКЕЕ ТНІГБОВЕКТАККІОАСОААВККОХТКІНМЕНСІ ЕЕ КМ АПКГРАУ ОХТЕКОБОУКАОБІРИМІВКІТЕРКУКАЛЕТХОБРОСОЗиУВУТІОТОТОБОНЕЕ ТЕСЕУМУТОПЕЕНУРЕЕОСТКЕНЕОСАОКСОБНОТНАСУМБВОКПАСУАКОАВМАБІ, КУТ СОСКОТУБОГТЛІСТЕКТ ЕКО ГУОРУСРІЕУУДПРІАСОСУ ВЕУ МААСОКГА ЕАСУМУТААСМЕВПрАСТХЗРАВАРЕМІТУСАТМАОПОРУРООТООТМЕСКСУЮ ГЕАРОСЕПІТСАЗВОСЗТСЕУВОВОТБОЛААНУАСІААММІЗАВРЕТТІТАВЕГКОК, ІНЕБАКОМІМЕАйЕРЕВОВУИ ТЕМ МААГРРаТНОАОМОЕСКТУМВАНОВОСРТиМ АТАТАКСАРОВЕЕОПОСОЗВЕЗКБаКеАКОВКМВАОСОКОУСКАНМАВКОСЬОУТАТАВК ССТОРОАМСЗУНТАРЕРАКБАЗМОТеМНСНООСНУТТОаСсеВОНнНЕМЕООТНКРРУТ ВК ЕКООРМОСУОНЕБАВІНАВССПАРОТЕСКУКЕНОІТ РАРОСОУТМАСЕВОИТОЬТОС вАгПеспГТЗнМзАХАУПМТСУУКОВАУвТТОБГТВЕВБАМТАЧАТССсАВЕНІАОАВОВ Ї ій Фіг. 1А
19 20 0 40 НО) пиття |нитяняяня |ннняянянт риття |ннянттятя бШиеку : агаддсассуїсадсьссачадсадкосськсосааседевдесаєтавоствоєсе БО Тр оОМО:Я Егалтаї М а т У 8 З в В 8 ий? Рв її ко Ів ' но: оо 70 ао зо 199 пятяяянят || рин Спеку : чоєдсбадсвдавдсбссьдадсоссдсдодсдсссдгдсаслодадоаса БЕгашаї її Б ої По 0 Б о ї б Р А С А В А С ЕЕ 0 Е 119 120 120 140 159 пяти |няяятяяня |нняняятятринитяняня | ниття Опеку 1 азтчасуасаассасуаузасесчаусчсвазесіасусьесчачузацчас Еташеї 1 по вх ЕЕ ЕЕ ППУ А ПП Ко ЕЕ ЕЕ о Зо 159 170 180 199 229 іненінінініньнннй Кінінінінені нання Пиніненінінннннй Кеініннннні ніна Пибпіннннінаніньн СОпеку : зчсостучосзазшосзассесчадсвоудчазссасацосассввосзссосі Я Ехтатеі 15 0 А ж А Р ЕЕ Н б т 7 А ТТ ЕЕ НН В С 219 22 230 249 250 плини |няяяняяяя | рин | няння межу 1: суссаассаіссасччачассесссддсасстасві с ячсассаваци Еташе! її АК пов й в ПР С ВУ мМ М М Кк БО 260 270 во 250 За нини пиононннн пон поні Пон Сиеку ї адудчЧачасссассусссдсазіскаовучусчсасочессассдсстасасосс Егатшеї : Е ЖК В 0 5 а з Б ВЕ ТА В ВК ОА 315 320 30 349 ЗБ ними попі пон поні Пон смеку 1: саччстассозчссодадагсасестоассаачаєсогасаєдьогсссвіся Етатв1і : 3 А А в ВА с У пт КІ Пн МЕ БЕ о зо 5 370 зво 3980 49 ттттяттянр|лятянняняя | фияннянтнн|нтянттяяя смеку 1 сосБЕогстостуЧевссстузсааачаєсчачсоустсасстастачачосяа Ехтатше1і її 0 0 о ЕЕ М М Кк М 5 501 ЕЕ А 413 420 30 449 452 тля |нияняняяя |нятяняяня сяяти |нянянтянт лиеку 1: постлаадсспосссаєчесчастасассладчасвасьсоєста ес ЕІашеві : пок. в НМ ої ІЕЕ ВД з М ЕЕ НІ 453 470 во 490 за пиття |няняяняня | нти р яння Опеку : асссадаосасессаксодаасестодачесачассассссьсеосватасосч Ехатеї її д 005 І РУ М 0 КІ ТЕ КЕ вх 510 зай зо Зао ЗО ттяяянят|нятяяяяня|нттятяняттрняянянння | няння сдиеку ї: чусучарсавьвосачессеосссчасочауучсачесс сус ччачасававс Егашві її А 0 вк ХХ 0 в вв ббобБ МЕ М хх
Фіг. 18-1 о зей 51 я 550 опо пятяяятяя | няття || рт Шеегу о: ксстадзсзссачеатасачауідассасслоудазансоаодасавссьо Екатеї : п 0 т 5 055 НЕЇ ЕС В ХУ 6513 го ва вай бло тля ||| риття йлвту о: абузрсасоуасьсезачанс чі чсссзаччассвассузчасеосаськося Ехапеі М М ТТ 0 КЕ ЕЕ МО У Р ЕЕ ЕЕ п пот КЕН 5о об 67о Бо 690 та кими Пп Пов Поні пон рреку о: сапасачессачеаазсзсзасачссагсачсасессасстачсадача се Ктате1! : в ад 5 Кк п нот АБ М У 710 78 за 740 75о вини Повні Поні Пон нон палету ІІ ЕсазсодзссооЧасцчссозосотодсесаауучіассадсагсуєсоєачесься Етате1і : 5 б КК п А о МА ЖК 5 А б М ВК Б 1. 160 779 780 то БО пжотя яю ня жо жло я. жю яти І плато жж жа ша сте по жи тя, І пжя шне же аж ж тя же яж вя ! пжконжя свя жжі вжотою ша кжя ня І тен яння няня ймеку 5 содсоубосісавсочссаачачаачачсасузссадсучсвоссстсаврача БЕхташе1і В У її М с оо Кот М 5 Ів 810 8253 830 вай 850 пнях | няття | нттняяятяя| птн | птн рЯрюмеку її согоаодасі стат садаазачссачексоадіссассотїчеЧочЧчассась а ЖХташеі г: ПП ОЖЕ КЕ І В ОК 5 00 дав М бово їх Зо нео 870 вЯо а ва пенні Пиннанінннннн Пнннвнн Коініннннвнн ннннннннннн дсегу : гЧчЧтїдссастосссстодососЧіачдасасадссосяасесісаасоссясео Екашеї : У 0 ві Або їх 5 КМ КА А 910 325 30 950 820 питяятяян|ннтяняняя|нняяняяня |лняняняня | няття ятнят Шиету : гдссадедсстоддедчатассьсоддісусдстддесассдесясодастав Бкакеї с 0 В г А ВАМ мМ тА А ОМ зо еп 970 засо Зап 190 піпонніннннннн Пенні Пснонінінінніньн Кикніноні іній Вибнінчнініннтнн Ойшету о: СББеосоодастаєцестосесьорасьсоссадосьсаче с сессчауцчьосв БЕгапшеї її ЕЕ В 0 ОО под С тв АВ А В ЕЕ М І 1910 1020 1029 1940 1250 нінанініненнннй Пенні Пнінінінннінінннінй Піна Кейн диегу о: Есасачдссадцодоссассвасстсссасзатсачесосечасссьоасиасась Ехгаштеї : ТТ х б АТ МА шо РЕМ т шо т 50 1060 1о7а 1080 1090 1100 повин пон Повні Попов ин СОпеку 3: Есодовссаасоттоаседссапгсасозасоссстссоссссададчсдоча БКхгашеї її 05 ТТ М ЕЕ б В С М 00 ЕЕ А Р о в В
Фіг. 18-2
190 1110 1125 1130 1120 1159 іонні ненініннн Пейн Писанні Кибнінані ніна Кінні Олек о: саксатбоЧфіосстссаусузстосассассізстт сота ссасачача Ехапеії її ЖЕ її 0 А 5 505 Тс Ем Б 1180 1170 1189 1190 1220 пек читетя | зеежюжю жи кн же тя же те фени зим тю лючня те тя | тонтечют нт Савко: шчатстаєбсасводестчсесчсосасогодеоччсагсссоваролпичацсосву Кхатеї : т 508 ААНХчУ А ої ААМ М ХЕ 2па 1219 1720 1230 1249 1255 тля |няяняят ренти умекм о: срдоссЧасссолочадесбслоссідЧчосчачесчасссоачачасечасеса Етатеї її 5 А Б В ЖЕ її 0 АБ ОВО ВА МІ КЕ 2 1259 1270 1280 12390 1399 тт |нятян риття бчаеку г собсгссбодссваачарчісвссалзгссачассізаігесскавцдчассацйс Ехташеі її КЕ 5 А КЕ 0 мМ її М БЕ А ХХ ЕР ЕЕ 0 ОО В зо 15319 1320 133 1340 1353 пеячнин ня плля ня мання | дл вана вл яз яло ва па ля : знання тя чна | пеленнямня ме ляія та ла | сени ня пкнеакютя чеку : учасасссчвсссссавдоссзогопосадссосассссосацчсасосатовоу Етхашеї с: МОЖ Ж МА А МВ Но за 1357 1370 1380 1390 1423 птлжнтння| пиття устя | тля | ження чивжу : ссачассчасадстесссстчсвезчастчкасосзгссавсасасісадоосс Ехгатеії А Б М Ос АВМ БА НН 5 пе 400 1410 1425 1азо 198 1459 попав Порксненннннан Питні Пика Питання Ямнеку о: Евасасудаїооссасачссвзродссоасгасоссосавзаєдачуваєсьося Ехатеі її Ж КК М А Ж А Її А В С А РО ЕЕ М її Я 1481 14705 їі480 1490 ї529 пиття | тт | тю | шт | жттн яти Опеку о: Газвадсідстітссавікустуссадуаскадавацесастодчсечаусасаку Кхапті : ги ви ст и п: п и с п о и З см ЗМИВ с зпа 1510 1:ї2о 1539 1589 15535 тяятятннт|няттнятт рення | няття | няння чеку : зазусссазоососсаачестаоьсізесацчсссасавасосьвЕтопоооо Ехаштеі г: ЕЕ А З 0 п ЕК 0, У п ВАН н ак о: ЗО 155 1570 1280 1390 1590 пон Пимонинннниннй Пирнананнннннй Пийнанан нання Пий чеку : Гшчеачччисіссастисаєслесачскчокчсстзствосссвачеспасє Ехапеїі її ЕЕ 5 М її А ЕЕ а Кс сп, вод с БО 1510 1520 1630 1540 1559 пн Поспоннннні поопн нні Пон Поп аешЕУ їх шсачцсасссасасаустіссассацсезачассассаточсааосясчас Еташеї1ї ; в и БТ А РР АЕА БМ ОТ ЕЕ У
Фіг. 18-3 бо ї656о 1579 1689 1690 1799 ттятятяят|нннтянян я |няянтя яння |ннтнння Опегу : сасудосзосаасадоадссасогсесісасяяддосгдсадеєсссасідссса Ккатшеї її НО С НО 00 он мМмЬ то с Ба НИ 700 1710 1720 4730 1740 1755 пінні Кен нний Побніннтьннінн нітенінівенінінння Пінініннні інн пивтху : д3згодучасоасстклоссасссасавоссуссососсстсачоссасчасоєс Ехгатве! її М ЕЕ 0 По б т нок Р в У ПВ в В по зо 1760 1770 17850 1790 1559 ятятятяняя|сяяяяяяяя|няянняня я фнняянняяя | няння ййцету : адссспассапі чеу сучдессасатччачуєсачсаєссасуєтьсесьує КЕкашеї : РМ 0 с У об НВ ЕА ВІ НА впо 19812 1829 1830 1840 1851 яти || финтяятят| ниття йиету її ЄзссагсассссаздЕссчусавіусвавуєсазачазсассчаавососоо КЕхатше1ї її С НА Вс ЕС КМУ КЕН ІРА во 1850 1879 188 1830 1990 пяяятянтт || т Оцесту ої сессгсасвоцесачус чассогссосдосстусзачзазуцссазатесосвасст Егамше1! 1 Р Об 00 МТУ АС ЕВ Ото т 90 1910 1929 1930 1940 1959 тя |сятяяня|яннрт | К ЯПривгу : чесадсавсосссгссстдаззасстсссасассстодддачдчсстасячссута Екате1 г: 2 5 А во тн о А ХХ АХ 950 193560 1970 1980 19390 2990 півнів Коотнініліні він Пктініпіпіннн півнівінінінінннй Пекіні Ойцету : часаасасчсасасасиьсазоасссаллчасассачесассасачоасаусає Ехамшеї її 0 Кк т с У М в ВВ МВ т то Б 2010 2025 2030 2940 2250 тяяяяяння| няння |няннянняя| ння | нинянняяя дивту : садсуадачачассясчасассоссЯксассасесбостассоуачссяссася Екате1! : 5 ЕЕ ЕЕ А М ТТ А М А І С СВБ ВЕ зо 7ОпБО 2072 2п8о 2090 5190 тя || риття СОпегу : качсасаддсстбсссяууасстосьЯ Кхашеі1 : А 0 А 5 0 ЕЕ її. ОЗ
Фіг. 18-4
4 Зародкова рІУЧМІООрЬеоРУТРОВРАВІВС роко ьнеВМСУМЕсо о ОКРОСВРОСЬКУ З зада АЗ нс и В вв в з п ви Зародкова да зевтаз ять - що що пли ктиит я то 6 лінія ПІОМРОоВРБОИБАБУСОВИТІТО КАВОБТББУТМ МОСК РОКАРКІТІУ 7 зс4 02 ЯКА оселю нн ню тини нні жк пннючню тні чт чня нн дні: шині БК інн? М інбніннйннній Міні нніннннінннн Зародкова 8 лінія пІОМтОовРоОБоВАеУСОКУТІТС ВАЗІ СМ ХООКРОКАРКООВЕХ Е 2385 о2 КУ чуття шннянняняня яння 25534 с ШКО шт няння інн ній нні шт нннння Зародкона 11 лінія ОБУСТОРРБУВБАРОСАМ ТІ тов ЕСАСУурУН МЕООСРОТАЕКОЦЕУ 12 зіні чУ1-13 кн В 13 27в2е 1-13 ШІЙ отит няння пттюни няня няння тн Зародкова 14 лінія ОЗАПТОРАЗУВОВРОВВІ КІВ тТожкЗЗОУосхМхУ В КТ ООНРОКАРКОМЕУ 25А7 у1-4 вн ня 16 гт7НнЬ 1-4 ШЬЙ оон шт ятяятняя рин 17 265 ч1-4 кн В В пп п 18 За г -4 ФУ осяяння няння нянятняняня тяткт ння ння яння Вин 19 20510 У-4 той (-- 5 - 2 х - - - З - : 5 5 - 5. -------- --- 2 - - ж - З Ж- 5 -- 5-- -- -- -1т- -8 --« -- 27Е7 мі-4 ун вв в вв в в в в вв 21 зов9 ч1-4 нен п в п в пи в В 22 1959 Уї-4 ФО? ост няння тт нин тично ню нн ііі з ян пінні зінінининннн 23 2610 У-4 ЦЕ оо-ятттттяяняяяяняя інн нні сіні Пнів нн 23 2і1в1і2 хг -4 ПЕ от яння яння 24 1752 ч-4 ШІ 0оттнтнняню няня няння пеню няня Дн няня тн Дня
Фіг. ЗА Вело нн ФОВе рядокї З Я ВВ Он ВВЕ ВВА Зародкова ОЗАГТОРАЕУЄСЯРООВІТІСС ТСТООрУССУМУУЄ МУООНРОКАРКІМІХ лінія о як оям м зах У і їй 26 23с1 чі-4 ПОЗ осяяння тн яння зЗародкова 27 лінія овагтогАвУЗсвРооБІТІВО ТОРБУ МЬУВ ООН ЕОКАРКІМЕУ 28 ізні 1-7 ФІЗ Поняття и Мои ння 29 Зародкова сит при ту тво й СТ Ох в завести че «пат ту лінія ЗМІ ТОРРБАБОоТеООВУТІВС БОБ5БОМІСНМІММ уд СРОТАРКООТ зо зс9 1-16 па -- - - 5 5 2 - 2 - 5: 5 : - 5 --------00---------К--,Д. ----ї---------- зі зне У1-16 ФЕШЮ остяитня няння яння | нен тя няня няння 0 няння няня ня няння ля няня 00 печне ня пеню ня пяснючн няню чнн ня няня з2 зіді4 ч1-їБ ває ша 33 1812 У1-16 сш Нв ння Зародкова з4 пінія ОБУПТОВРБУЗААРІОКУТІЗО БоспБаМІСММиУЄ МОСС РІУТАРКІІУ 1612 У1-19 пн и І п зв ге 1-19 ШПЕ1 осяяння ня фо ння 37 ТАЄ 21-19 виш а п 38 28812 51-19 виш на а 39 28136 М-ї ПАНИ КИ інно Мінін інн нн нні нн інн нні нн ай зіт1 чи-19 ФТІ оон няння тя няню тя няня тя няня тя няття 00 печеня лятнн ля тнячнню фронти 000 печення таня тю нення тютя Зародкова 41 лінія ОМ оРЕБУЗААРОСКУТТВС БвСсОВБЕаЕМЕОММІУБ шрот АРКИМЕХ 42 1385 -1-19 ФЕВ осн ннетя тні тю ніш няня нн тлітя ж чнітятня 00 птетяотя В доля чні нюля нт ян 000 пон чня птн тю зт нтю тя та чтотя тя кіна Зародкова 43 лінія зІвІтОоврРБУБУВЗРОЮТАВІТО варки АЄ кІООКЕООВРМІМЕУ 14 31812 Ув-1 ЕЙ яння Дня тя пиття нт Зародкова пінія ОРУГТОРЕЗАБАБІВАВУТІ Жов оМІКУО чтОсвРОКОРВЕУМА, 46 зве ча-й ок ння вели нний Ти син ні інн ній нний нінінннні інн
Фіг. 28 ввів НН ше РЯДОК З ННЯ нн В НВ й іс оУРрЕкКБовОо5ОТОЕКТИКІБВУБВАВОУОУТИС МОАКОТРЕТ гезневи НЯ З зоа4 --Н--- --- - 2 2 5 ж-2 - ---- -----2-- - 5 ---------- -Ч------ ---------- 6 АдЕБТОЄ сУувбвВЕБСЕОаОоТОЕТИтТІВОВЕСКАТУХС соте КОСУ ТКУКІК 7 зса шт нні нні він новні нн с нанні інініннінннин й пеня тн нктиняя в ААБББОВ СУРБВЕБСЕСВСТОЕТЬТІЄВБОРЕРЕАТХ ІС ООБІЕТРІТ ЕБОСТВЛКІК З 2385 тях Мод нінн нний нн нні нний небі яння яння 5504 шення шт ----- Ан яння М МОЗМ УКОКЕБсЗзКеСТБАВОАТТВрОАЕРВАрТУС оБхраізГБоВУ ЕОбОТКЕТМХ 12 зін4 шпенентння шелнтнте тн ник тет т ня пкт нн тютюн шення шннтеттнння 13 тва -- туя інн нн нні він нні нні нн нн нн ян Мн --у- тн 14 ЖЕчМЕМКВЕ стУМвкосвкеомтавькІвоБОАЕЕАОТХС світу У гост, ТУї, 7587 тн шен яння няння тет тнння пеншетнтнння пешнлюшнте нт 286 е5Атчі1 шт пелена нні нон ніна нн нн ння яння шт 15 атна понині ренні Кен кінні інн ін нн нанні нн Зк птетнютю титр Ме шенню тютюн 287 атн5Уї ян яння я---- ТАМ яння 17 26н5 ян тет Інятяяттянтяттяннянтнннннянкя ян -М- шт 18 зірі яння нн нні ові нні нн нні нні ян М тяж 19 20010 ------- ---- 4 Й - - 5 5 - - ---- - ---С- - - ------ж - 02- -----тТ-щ- тн 29 2лЕ7 яння нні ні нні інн нн З т -- ЩА пня 21 зово олій поді ненні пінні пінні нн нинішні З -----Т-М- яння 22 19н9 ------- -І----------------------------ї- ---5-Ж- т--------- 287 і19нЗхі1 яння яд тн М шиття 23 26510 яння нні нні нні пінні нині пні нн нні нні нн М----Т-М- яння 23 21851? шт сет яння нн ння нн няння Щире шт ння 74 їтс22? ян тя ----СММ- тя
Фіг. 20 с пишне 5 Рядок З ОЯВНЯ ВІ нн ВВ ВНИХ ЕМБМВвО оУуБМКЕОсСеКкЗзОоМТАвиКІВОССОАЕсЕАОТІС оОБІТОКО У ЕБОСТКОТХ 26 23с1 -т---- т 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 к----тТ-М- т--------- 27 ЕСБЕВРо пУуБМВКОсОКОЗБМТАБОКІВОВОдЕрВАВХС СЕХАСВЬОТ ксБаТеОТМ, 28 13н1 шення шт шт ння 29 еММОоврЕ СУРОКЕВСБКБОТБАБАТГТОпБОВЕРЕАВИХУ ААМООІМ У кОасОтТкКЕтТУї зо все Делятин шини шштннтття 31 вне що Ви піц птн за 3184 дян пяти нут --О дян 33 1512 тд пяти шт ня терня 34 риМКАРо СІ1РОБЕКЕЗоЗКЗСТЗАТЬСІТОСОТСОВБАВУОС отТирОБІБАЖУ ЕОТОТКУТУ, 16512 -х--- тт шнтнттня шт---в-я 36 22Е2 яння аа штяянянянядня тт рн 37 27АЄ шу шиття шиття вия шини диняя за 28в12 -ї----- дян --------4-- ------- 39 28956 -ї----- нн я тн тн дин 4й 31611 -в-нння п по штшятнятн- яння 11 ОМИКАРБ СІРРЕЕБСБКЯСТВАТІЬСІТССОТСРЕАОХУС СТИОЗБІБАУХ ЕСССТКІТУ. аг 1385 шення пи пор птн тя 43 ОообКАРЕ СІРЕВЕБСОМБСМТАТЬТІЗСТОАМОЕАрУУС ОЛИВ ТАУУ ЕСОСТКЬТУ 44 зіві2 -мер-щ-ї в пи пн шля у дяттянтян- УСТОобІУСЕКО сСІРОВЕВУПОЗСОІМВІПтТІКМІОЕВОВЕВУНС сАдрнеБаеМКуУУМ еееумя в й 46 зве С В пол пити С нон нн нн нні ни нн нн пн пн нний яятяятняТяяняя нні нн 45 УстобІМ скор РОКЕВУрсВОоМАХТІЕМІОЕВОЕ БрУБССАрНнОеОСВчЕММУМ КЕсООТКТОТУТ 46 Звбхї -р----- ----Е----- яння о
Фіг. 20 вав ПИМаЄ. Рядок ЗМ оон нн А о В ЖК 47 Зародкова О7ОГУОВОАЕЧУККРОАВУКУВСКАУ СУТЕТЗУСІВ КУКОЛРООСЬКИМО 48 200510 УНі-18 ФНБВ Отто Вр 49 2г6щО Уні-18 ЯЇНБВ сяяти нт ря тн 49 21812 УВі-18 ЯНБВ о-ви Я 5о 2301 Уні-18 ШОВ ст жятрутиття тяннтнтнняяняя ві 2685 уні-18 прі: На Кн 52 ат7н5 о УНІ-ї18 днев о ------------К------------- --Д----- -------------- 53 3102 УНі-18 ЧНЕВ -Т-ттттиттяянтяння кри няння 54 отЕТ7 хні-18 ШЕбВ туя рн няння 85 309 0оуні-18 ЧЩБВ сто явно тя 56 1989 УуВн1-18 ПБВ яння Арно няння 57 1702 Уні-18 ШОВ сти жди тити 58 25АТ7 хні-18 рн в 59 Зародкова ОУСІУО5СЛЕУККРОАБУКУЄВСКАЕ СУТЕТБУСІВ УВОАРСОСЬЕМНМО 60 Звб 00 уні-18 ве 81 Зародкова ЕУСІУББВСОСІЛОРОСЗІКЬОСААО СРТЕБЯУНМО КУВОАРСКСЬЕИУА 62 не УНЗ-7 0007-97 ШНЗА сти ння 63 :Зароднова ЕБУСГУЕВСОСЬУОРОСЗЬВЬЯСААЯУ ОСЕТЕЗЗЖИМЕ МУВОАРОКСЬЕММА 64 929 УНІ! 07-97 ШН3В сти яти няння 65 1А12 УНЗЯТ 07-97 ШНЗВ сти нини ння 66 Зародкова ЕУОГУВВСОСТЬУКРОСВІВЬБСААВ РІКБЗІ5ММ ЯУВОАРСКСЬКИУВ 67 Зіна о УНЗ-21 0 рз-3 ОДНЗА яння няння няння 68 / Зародкова БУОТПОЕБСОСІЛОРОСЯІВЬЯСААЄ СЕТЕББХАМО МУВОАРОКСЬКМУВ 83 ізв5 Унз-23 «ЛАВ сення ння няня ня тен тя тими няття 0 нолн тю ння сля нят ня вні тю чн няню
Фіг. ЗА и 70 Зеродкова ЕУСІІЕЗСССІХОРОСВЗІВІОСАЛЯ СЕТЕЗАУАМИО МУВОАРОКОТЕНУЄ т71 2385 УНІ-ЯЗ 0П9-8 ОШНІЯВ сяяти М няння 72 2564 УнЩз-23 ро-в днів ---- - - - ------ 5 ----- 5-5 -------М-------------- 73 Зародкава ОМОГУЕЗСССУУОРСВБЬВЬОСААБ СЕТЕБЕЯСМНО УВОАРОКСІЕНУХ 74 зола Унз-33 ФЕВ няння 75 Зародкова ОМОГУББСССУТОРСВБОЬНЬБСААБ СЕТЕББЯУСМН УВОАРОКСІЕЖУА 76 27А6 УНЗ-33 0006-65 0НБВ ее Неитятттянятянннянятннняя нин вняо тин 77 28812 УПЗА33 066 ЗПБВ Дня 289 2981251 уУн3-33 06Б-5 ЛЕБВ ее шенню рн 00 птн 78 2806 УНЗ-З3 0 рб-б ШНЕВ сти тятянннннянняня о нятнннфнняо няння 79 16Е12 УНЗ-33 00 рб-б ШНбВ сени ння Ми Енн ниття 80 27Е: УнзЗ-33 06-65 ЙНБВ яння 81 31812 УНЗ-З3 00 рб-б ПНО сети яння яння 230 зЗів12ч1 хУпІ3-33 8-6 ШНЕБВ о снятнттт тт ттттттояотнннн ня 82 Зародкова ОУОБУЕВОСОУУОРОВБЬВЬОСАЛЕ СЕТЕЗБХУСМИ ПУКОАРОКСТІЕНУА 83 З1611 УНЗ-33 06-19 шНБбВ о --------------------00-3---ф------------------- 84 Зародкова ОУОБОКЕЗСРСІУКРЕОТЬНЬТСТУЗ СОБІВБОСУУИВ МІВОНРСКСТЕКІС 85 зс4 Ууна-31 ШНБЕ ост жи оняо тинтннннняння Вб Зародкова ОУОБОЕБСРОТУКРЕОТЬВЬТСТУВ СОБІЗВОСХУХ МІВОНРОКСТЕМТО 87 2782 УНА-31 05-45 ШДНаВ тля няття тт 88 Зародкова ОУОТООМСАСІТЕРБЕТЬБІТСАУХ ССБЕБСТУЙВ 0 МІВОРРОКСЬЕТТС ва зіва Ун4-34 06-6 НАВ ----ттнтттнтттттнтнняняо ння 90 шен ОМОБООБСРОТУКРООТЬБЬТОВІБ СОБУБОМЕААНМ МІВОЗРОВСІВНЧЬС 51 ізні уне-1 лу: нини вв в и в и
Фіг. ЗВ пвеаспу хо о ве Ен но в о ув ПІЖеу трЯДОК 000009 0 ОВЕН ЯВИ 47 МІЗАЇМОМТМУАОКІОС ВУТМТТОТОТОТАХМЕСАСПВОООРТАУУХСАВ їсМоу нсосттутува за ШОУ О оно Бринннннттн нфнінтя тн дення шелест нення 49 гл вв сн п фунт шетятятняня 49 218185 -ху-Е---нтннтняття дян риття Фен шяяятяяняня 5О 2351 -5-Е------------- -5-----р------------------------ Ф----- яння ві рі: нин нн ни и и в дення шт 52 зтяв -- -5 5 - - - - - « - - - - 5-5 -.2(-- - - - -С - - - - - - --- - - -- - -- ----- в----- дян 53 ЗО оосреняненняаноняалоничютя у вини 0 полю аніж няня яви нясли ХХ піч свіжа лі ня ліві ня лясвя ніяка ня лячя (для нютянячя знннжня ж лиж вини вини т БІ аз нини и и лм п пи пи и п Прес ти жкжж хи з єю жу вк жа ж ех ів: нн на о пп по п т пн п но Сун ничнюниня мине свк нах в ж па жа ння жі 56 19Н9 осяяння яння Фен тяяяяяннння 57 ші ша нин п Семен шянянннянняя 58 кун пн а а а п п Деми птн тятяня Ба МІдВУМСМТМУАОКТОС ВоТМТТрТатТатТАУМЕТАВІВОПОТАСТУСАВ су пу ксОстьУутТува бо ЗВб о ---жнннняняннунн няння --т-- пяти ві МІКОПСОЗЕКХУУОВУКО ВЕТІЗНОМАКМЕТУПОММЗІААКОТАУХУСАВ, МИС АЕРУ 0 МСОСТМУТУЗЯ в2 СІ з сон нн нн ПН нн нн НН ння 63 МІКОРОЗЕКУУУОВУКС ВКЕТІБВОМАКМЗІЧТОМИЗБВАЖЕОТАУЧУСАК ММС АКОТ 0 сОстМуТУВО ва се; нн в в п п в в п В в в в п п по п п 65 1812 снення тн тт тт нти т Едеянвня пеня 66 БІЗБЗББЖІхУАПЕУКО БЕТІЗВОМАКМЕІУГТОММОБВАЕртТАУТУСАК ПУЕ БСУУТАВЕрУ МООстТМУтиВе 67 Зінв о ---------8- нн ЕН АНА Дня ва ВІБСЕОСЕТУТАРЕУКС ВЕТІЄВОМОКМТІХІОММББААЕОТАУХУХСАК, ЕрУ МсОостьУтУВЕ ва 1385 Тесс вннятттяяяо яти БУДОВА шт яттняня
Фіг. ЗС
"вва кі а сети вв оововвея ет дер вв тер в ероте в пот ол кове питво вот ТИЖ Вядок ЗТ ВВ о ЕВ п ооо Вова В то дІБОБОсООТУТАББВУКОИ БЕТІШВОМоКМТБУТОММО КАБІТАУХУСАК МЕМОчА БУ кот УтУЄВ 71 2385 нн нн НН п р в в п В в в в п 7Е 254 ня при и а а а п а м и я Кн ни Мн шилютю тент тю нттяня 73 УТІМ ЕлУАЮБУКО дЕТІВБКОКеКМТИхОММ ВАК ОТУУ ХАН, хом уУ мово гЕУТУ та зова теж чн ння ЕТОВІБКфУттятя тт 73 МІЖ ОМКІТАбЕУКО БЕРІБВІКЕКМЕТУБОММБОКАБПТАУчХСАВ ТАА Мо яса 76 27Ав6 П--8-- дня АКТАХ нт 77 28819 0 1-------нтннтня нн АТААБМУЧУ---- 000 --Н-я 78 2806 ременя о чення АТВАБТУЯУ няття та ї5К12 1--8---ШЕ---нт тт АТАВЕУХЧУ- о нттнтя во ик: ря Мет няно пенні ню тин тен жест снженютинютнннняя ВІДАВ тт 291 ФаЮРчі 0-й тити АХТААБУХХХЯ нт 81 зЗів12 у нні НН в в ВТ ОП у ово с газ ЗІВА о Тееняннчнєтяяєтчяєяттяют тет нки пт тю лях жі зві вх хе че ее чнснсютячнеєтняє 00 МОМОТ рідня теляти нює тня 82 чІШУІОСМКхтТараико вВЕТІБВОМЕЕМКІХОММОвАБОТаАУхХСЬВ ОТАУАУУХаИаМИМ 0 ЯсОоС ТУТ ві 31, 0--детттинуєтття о тт ві хтяазатеУМиВтКУ кУтІЗшУПТаКМОКВиКІОЗОиТААТАУЧМУСАВ ване мило 85 зЗс4 пня зфинтнтняннфнн няння няння ПОМІЖ НяЯднняо0яятняняня ве хІЗУБСВТУУМРІКЕ вУтТІБУБСТВЕМОБІКІЕБУТААВТАУХУХСАВ БОТАМУ ХЕ яСоОтьУТУВЕ 57 7пв; стю нти тн няня тин нн а а а стен тю фс петля тити ня нтинтя ва ІМС евОК кУгІВУТІОКМСКВиКІаУ ТАТА СА, зав Кору коптити вЕ ва ЗТ зееюужя юю ке рен тю ж женюню и и п в и пп и ру пюсженмті То пк ях пахне ма сах жи ж ма жа тк км 0 ЕтТУХАБКМУМОЗАУВУКО ВІТІМРОТБВКМОСКБІ МОТО АУЧУСАВ ТПУ зов тОУТУБО зі і1зні ятячн- КМ ння СОРТАА--- ятятянянняя
Фіг. 30 НЯ Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого панцюга: мА ОСА ПОЗА СТО ОВ АН САС СТА ЧАСТИ КОСА СТО АТТСАССТ САТАНА ТАОССАТОА АСОМ САС АС ААСВОСС ОСА ОО СТ СА ТЕАТР ТАСТАСТАСТАСТАСТ ТАСАТТТОССТАСОСАСАСТС АОС ТОА МИНА СОСАТСАССА ТТ ОСА АСАСАМКХНС ААСААСТСАСТО ТАТО ПЕСАЛАТОЛАСАОССТО ЛО МИКОЛА САСОСТО ТИТА тютюн авЛаАТТАСОАЛТТТАСТОИСТТАСТАТОАТОСТІТТОСАТОТСТОЮ КССААСТИАСААТОС ТАС СТСТТСАХТІВЕО МОХ Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЕУОСУВБО КН УКРОВОСААООВТЕВУММУУВ АВК УВІ У АПАУКОКЕПяУЕПМАКМІ ГОМ ВАТА ТЕСАКПУЛЕУВА У УПАВ УХУГИТ МУТУБВ (БІВ МОН КЛ Нуклеотидна послідовність варіабельної діпянки легкого панцюга: зпАСВТ Ста КК СТ САСТО ПОТОКОВОГО НОТА САС ТА СТА ТСТОСИСТОСАСТОС АОС АКК ТССААСАЛССОЮО САС ТАЛОАТОТАСАЄСТОСТЕ АССАОСАННТ ПОСЛОСААСАОСССОССАЛАСТО С СА ТСТСИ КОТА АСАССААТОССНИ СИсАВН СОС ОАССВАТТС СТО ССААТТСТИКЮМЛСАСОСТОССТОЄ ССАТСАСТОН НИ ТС АН ТО АОНАТО КН ТВАТТАТТАСТО ССО ТССТАТОЛСА ОсССАСКС ТАС ТОН АТС СОСАСОАКССАКМОСТ АС ТОСТАЗ (КК тощо: Послідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого панцюга: ОБУ УВЗ АРКУ ПЬСТОВаВМІСАС УНУС МИ РОТАРКІІБОИМОМВРЕТУ КК еЗОоВКВОоТзАВ АТО ОАКЕОВА УКОСУ ВОоЗУвОоасс КОТУ КО о Мах і
Фіг. ЗЕ нн Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого панцюга: КСАСАТІСАС СОМ СТ ОСА ЗАС ГАЛАС СТСАСТОААССОТС СТА АССОСТ СТО ТАССССТ ТО АССАССТАТ СТАТОК ОС КОС АСАККН АКТ ОТАК ТАС ОА ТО САТОСАТСАККАН ТТ ТАСААТИОТААСАСАААСТА ПОСАСАЛпА АС СА КАСККИТСАССАТИАССАСАПСАСАСАТССАССАССАСАСІСТАЄС АПА аАСАСККСТОАЛОАТСТАСТАСАСО ОСІ С ГАТТАСТО СА АСс НТ АССТО ТА ТОСТАСО СТОК СА АС АСГАСЧН САС СС СССР сао МЕН Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого ланцюга: ОКО ЗОАБУККРОАУКУВКАВО ВУ СЕМ УКОАРОСКН УМО УВА АК ВУ ГМО АТУ МЕ КБУ ТАУ У САК пом оУмосстТУугУВВ (ЕС МО: 4 Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого панцюга: КСсАСпН СТАС ОО ОВО СТО ТОСТИ АСАЄ ТОСАТСАССАТС ТО ОСТОСАСТОСААССАОССАСТАСО ТОН ООЕТАТА АСТСТИТСТОСТАКТТАССААСАСТАСССТАСТЕАААССТХКСТАААСТСАА сАТТТАТЧАС І САСТААТ СЦЕН ТАС ТІСТА СТ СТАЛО СТО СЛ АСА СКАН С ПОСТ СОАОСАТСТ СН НСС АС СТАС АСИЙАОСКТ А ТАТ С ОССАСЄСТСАТАТАСААССАССАССАЇТ ст СОСКА АСИСТ ОЄСТАУ (ВЕС МО: Послідовність амінокислот варіабельної діпянки легкого ланцюга: ЗАГ ОРАВУЗОВРОЮВ ТІСТО Та УСсОМВУз А ОО РОКРРКТКТУ В уза зУ КК БОоЗКЗОМ АВС АБОВАВУКСВВ У У ОМУ КОСІ ТКУ зе чо о,
Фіг. ЗЕ з02
ОК Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: ЗСУ ТСАССТЮ КОСА СТО АКТ А АНАНАСА СОААСТ СТ СОССТОСААСТ СН ТАСАССТТААССАСЄСТА КН ТА САС СП КОСА САНТА АМИКНИЛАСТООСАТОСТА ТИСА ТЕТТАТААТ НИ ТААСАСААЛАСТА КСАСАСААСИТТОСАСК НС АСАСНСАССА ТОАССАСАПАСССАТССАСЛАССАСАСССТАСАТОСАССТОА СА СЮЄСТО МО АТСТОАССОАСЛСНИКС СО ТО ТАТ ТАС ГОССАСАСК НАСТАЛА ТЕКИ КК СААСОССАССПАССОССТСАСССТСТОССТСТУ БЕ МОН 94 Послідовність амінокислот варіабельної діпянки важкого ланцюга: Оу УОЗ АКУККРОАВУКУМ КАВИ СЗТ ОМУКОАРСОСИ КУ МОМ У ЕММА ОСС МІТОРУТУТА МК КАТА У САВООМВУ МСОСТГУТУХХ ЗЕ ЕМО: 49) Нуклеотидна послідовність наріабельної ділянки легкого ланцюга: САС СТ САСТСАКСТ ТТ ОСТ С КСТОК СТО САСАСТОСА ТАССАТСТОСТОСАСТОСЙААССАОСАСТОАССТ ПОС ТОСТТАТААСТСТОТЄ ТЕСТ АССААСАССАС САН КСАМАССССССААЛАСТСАТОАТТ ТАТО ТАСТААТСЦЧО ТАС НТ ПТ СТААТОККТ ТС ОССТССААСТСТОЬС ААСАС КК ССС АССАТОСИ СТОЛ ОАСАССАСАТСАТТ АТТАСЛОСААТТСАТАТАСААССАССАССА КИТА ТТ СОС ОПАСЮОСАССАА ОСТАП ОСТАВГ (ВЕС МО: 55) Послідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого панцюга: ОБАБТОРАБУКСЬРОСОВИ ТО ЗЗОУсС МУ ВАИ УЮ НРИОКАРКІМІУБУВМ КРОС УБМЕВВОЗКЗОМТАБО ТСН ОАЕОБАМВУТСМаУ ГЕ МУКОС ТК УЮ зо МО: Альтернативна нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга І26ЕТОУТ); УСАССЧ НТ АСТСАСКСС ОСС ОСТ СТО АСАСТСОА ТСАССАТСТОСТОСАСТПОСААССАЛАССАСТСАСС ПОСТ СОСТ ТАТА ТТ ТТ ТАССААСАОССАЯ САЛА ССС ААСТСАТСАТТГТАТОАСЮ ТСАСТААТССНК НК СТ САС ТІСТА АТС СТ ССО СА АСТСТОС ААСАНН ПОСТ АССАЛЛСИ СТОК О САН ТО АС АССАСННИТСАТТ АТТАСТОСААСТСАТАТАСААССАССАССА ТИ ГАТТ ТОН О АС АССАА ОССТОАСССТОСТАУ (ЗКЕО ПЧ 393)
Фіг. 30 зо Нуклеотидна послідовність варіабельної діпянки важкого ланцюга: САС САТ СОН ГО САС СТО АОС САЛО ТО АС СТСАСТОААНТСТОСТОСААСНСТ СОТ ТАСАССТІСАССАСЄТАТ СТА ТСАСТОКЮ ПОС АсАТ ОА АН ТО АС СОЗАТО ОСАТОСАТСАССТІ ТАСААТ ЮСТА АСАСАААСТАТОСАСАСОААССТС САС САСАС ТСАССАТТАССАСАСАСАСАТСАССАССАСАСТСТАЄС АТЛАС ОА АС ТТ ОАСАТСТОАССАСАССОНК ХТО ТАТТАСТОТ С ИАСАСНЯ ТАС ТАТОСАСО СН НН СААСЮВАССАСС САС ОСТІСТССТСТА ЧЕН КО: 9 Послідовність амінокиспот варіабельної ділянки важкого панцюга: Оу УСЗаАЕУККРОАВУКУ КАВУ ПВС АУУКОАРОЮ ПУ МО ІЗ МОМТУУАОКУССВУТМТТОТУТВТУУ МЕ ЗВО АУУ СА сама УХжсЮюТТУу УВО ан МО: 5 Нуклгеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга: САНТА САС ОСТ СНО СС СТ ССО ААУ ТСАТАССАТСТОС ОСА ОМА АС СОСАСТОАСО ТКУ ТО ТАТА АСТСОСТ СО СТ СОС ОНО ТКС АСК ОССАС САС ААСССОСПТСАЛАСТОСАТ ОАТТТАТСАСС САС АТС ССТСАССОСО ТІСТА ТТСОСТТСТС ССО АС ССС КАКАО СТО АССАТСТ СНО САС СТАС АССАСОСТОАТТАТТСТОСАОССТСАТАТАСЛАССАССАССАТ СС ОНА АССААССТОАССОТОСТАУ (ЕС ТО МОН Л Послідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого ланцюга: ОБАГТОРАВУБСВРООВМ ПОСТОТВОУСОСУМУМУСОЮНРОКРРКІ МТУ КУЗОВОМ АМЛІКНОАБОБАЛВУВСВУ ТУТ МУ СОС ТКСТУЇ (ЗО ІЛ: 17
Фіг. ЗН
ЗІ Нукпеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: КСАСАТТСАССТОС САС КО ГПЛАСААНАТТО В СТАС СОС ТО СААСОСТ ІСТОТ ТАСАССТТЗАССАССТА СОССТАТСАСЛИОН С КОЗАКА ТО АСК АСТТОСАТО ОПСВАТОЧАТСАСТ ТТ ТТАСААКНИ ГА АСАСАААСТА ТАС АСААССТЄ САС АСАССАССА ТА СТАСАСАСАСАТОТАСАСАСАСТСТАЄС АТО САТАНИ САСАТСТОАССАСАСССССС ГАТТ ССС АСК ТАСОС ТАТА СОН КАСА САС ОСА У ВЕН І МО: ОВ Послідовність амінокислот варіабепьної ділянки важкого ланцюга: ОНИ УОБСТАБУККРОАЗУКУ МКАС ПТО ВУУКОАРОКН БУМ АТО УМОМІМАСКУСОКУТМІТОТОТТУХ МЕ КН КОТА РСАК пУОоМОУХСОСІгУТУЗВ ВЕСНИ БО Нуклеотидна поспідовність варіабельної діпянки легкого панцюга: КСАСТСТН СТ АСТСАСОСТТТОНС СТ ОСС ССС ССС ОО АСАС ТОСАТАССА ТЛО ТОСАС ТАЛА ССАСТОАСС ТОГО ТАТА АСІСТО СТО ОТ ГАС АСАССАСССАСОСААА АЛ АСТСАГ САТ ТАТСАССТ САС ТААТС ОС ССТСА НС ГЕ ЕСТААТСОСТЕСТ С СОСТОСА АС СТИ АСАСНККСТ ССС АССАТСТТОСК САС СТОК АССТАССТОАТТАТТТСОСТОСАССТСАТАТАСААССАССАССАТ ОО АК АС А ААСТ ОКХ ТО СТ АХ НМ Послідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого ланцюга: ОЗАКТОРАВУВМ ВИСО ІСТ ВБМОУСИ ТТ МУ ВА ОН РОКРРКІМІУ БУБМКрРЗЄУ КЕ ЗОЗКВОСМГАМЛІЧННОАКОБАПУ КСВ ОТ ЗМУ С ОСТКБАУІ КОН ЧО 18
Фіг. ЗІ
АВ Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: УСсАс САС ПОСЛА СТОПА ТАС ГОЛ АААЛОССТОНН Є СТАС ВААС ССС ОСА СТО ТАСАССТТААССАОСТАТ ОСТАНОК АСК АСААСКК АСТМА ТО ОСА ТСАСЕТ ТТ ТАТАА ТИ ГА АСАСАААСТА ТО САСАПААЛСОЮТЄ САСКНКСАНАСОСАССАТАССАСАСАССССАТОСАСТАССАСАСССТАЄС АПА САМА АСА СТАС АсАТ РОС ТАТТАСТО СКАЗ АСВИСТАССО ТАТА СТ САС АССАСС САС яКлОостСсАУ (вка ОК НУ Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого ланцюга: ОУС УК КСАБВУККРСАВУКУВ КАВУ ТЗОВ УКОАРНМЯ УМО щУЗЕУМаМІ МАСОК ОСКО ТМ ОРУТВГАУ МА КІ ЗОТАУУ АК стОоМмпужшсн ту тувв вон МмО: Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки пегкого ланцюга: УСАСІТСТН СТО АСТСАСОН ТТ ОСС С ГО СН ССО ТСБАТАССАТСТТОССТОКСАСТИИЛАССАСКАСТОАСОСТТОСОТОСОТ ТАТА АСТСТО СТ СТО ГАССААСАОСАСС САС А ААКМСНСАААСТСАТ сАТТТАТАСКИСАСТАА ТОНН СТАС Т ЕСТААТЛССОСТ ТС СКС СТАС ТС СТ АССАТСТТСТКНО СТ СТАС СТАС АСАСИК АТ САТ ТАТТАСТОСААСТСТАТАТАСТААССАССАСА Ти ОС АК АССААССТАССО ТТ ССТАХУ ВЕТО МО НН Послідовність амінокислот варіабельної діпянки легкого ланцюга: ОБАСТОВАЗУЗОЗРОЮВ ІСТОТУ МУЗА ОНР КАРККМІУ БУТМКВБОСУМКЕЗОСВКОсМТАВ ТІВ ОСОБАМ ІМ УКЄС ОКУ ЕК КО: Хо
Фіг. З
Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: УСАИ С АСНТТОАСКСАС СКК САССАСТИНТААСНССТЕСАСА САСССТО ССС ТСАССТОСАСТО ССО СС ТСОССАТСАССАСТССТ ОСТ ТАСТАСТЛОЧАССТО АСК СА ССАССПСАСОААСН КТС ТАТО ГАСАТАТАТААСАЛАО КНИНА С АССТАСТАСААССОССКТОЄС СТСААСАССОЗАСТТАССАТАТСАСТАСАСАСОСТСОСТААСААССАСТТСТ СТАС АССТОТО АСТКНК ИН САС НН АТТАСТО ТКС АСАСАСЗАТАСАСКТА КК СТ ТАСТЕТОАСТАСТОН НК САС ССААСССТОСТ САС СТОСТСАХ (БО МОХ НІ Поспідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого ланцюга: ооо У КРУ НСТУ ОС В АКА К ОНР ВК ТТУМБОоБОУ УРОКУ ПУТЬ КМОВК КВУ ТААТАУУ САКЕ АМУР КС УТУВВ СЕС МО: 7 Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга: УКСАСТСТИТАСТИАСОСАНЧ НС СТСАСТОСТС ТОНН СТАНКА САС САССА ТТ СС ОСАСТО ОСА АССТОСААСАТС НКИ СА ТТАТА ТВ СКСАС ТО ГАССАССАС ТТ ТОССАСКСА АсАТ КАААЄСТ ССЛСАТСТАТИЕИТААСАССТА СО КС СТСАСС І СССТИАСОССА С СТ ТССАЛО СТОК АССТО КАК ССС ТО ССАТСАСТИИНТСЄ АКА АСА ТАС ГОАТТАТТАСТОССАСО СТА ТО АСААСАСКН ТАС ОО ТАТ СХ ОА АССААССТТТО ММС АХ сек НО: 103 Послідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого ланцюга: ОБУ ТОРБУ КАРУ ПОСТОМ МАННУ ВУНАОСУРСТАВКГСЕГУ МГУ аУРОКЕВОСЗКВОТЗАБГАТ ОАБСОБАМТУУСОВ ОМ БОУУЄ сс ТКУ аа Ен: 1
Фіг. ЗК їекіз Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: КСАсСп ОС АССТК ОСА СТОЛА ПОН САНТА СОТ АСАСТС СО ГОСТ ОСА САССТСААСАССТТ САТАНИ ХНА ОА НААН ОЗАСТОКНЯ КАСА НК СТА ТО ААСТСТАТОСААТАСТАТОСАСАСТОСС ОА АНА ТГТСАССАТСТОСАСАПАСААТТССААСААСАССИТОТГАТС ТОСАААТА АсАТ СА АКС САС АСАССНН СТ СТАТ ТАСТОТ СОСАСАКК САТАНА ТС ТАСТАСТАСЄТА СЮ ТАТО А СН СТОК с ААСНИАССАЦ САС СТ ССТСАХ КОТИ КО) Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого ланцюга: УНУС У УРОК КІСлЛАЗИКТЕМВЕОМАХУУВОАРОКОГ ЕММА ЛУЗІ НУХАОВУКСКЕ ТЗОВ Л ОМ КАКТУС АКА ААУ тОоМрВущмсни г УугувВ (ЗК УК 79) Нуклеотидна послідовність варіабельної діпянки легкого панцюга: киСАОТСТ ЄтОоттоА СОСАСС СОС Ас кН САС АСА САМА САССАТСТОСТСТОСТООАЛОСАССТСОСААСАТ ТО ААТАА ТО ТАТССТИ ГАССАССАС ОС САЛО АСК САААСТССТО АТТТАТАСТАТААТААСАСОССТОАСК ЧАТ ТОСТОАСССАТІСТСТО ОССТИСААССТ ОС АСО ТТ САСССАСОССТОИАСА ТСАССОЗАСТОСАСА СТАС АСКС АТ ТАТ ТАС ОС АСАТНАТАСКАСК СТА СТСТТА ТИ СТ СООСААСТОСАССАСНКТСАССООСТАХ (Са КОТ вк ЦК) Послідовність амінокислот варіабельної ділянки пегкого ланцюга: ОЗУСТОРРВУЗААРОСОКУ ПВС ВОВЗОМІСММКУ УА ОСС ТАРКО Я ЧО У УКЕРОНЕРІОКЕВ КОСІ ЗА ОТО ОВС КОЗА УКСТ сІКУТУС ЕКОН 38
Фіг. ЗІ.
за Нуклеотидна послідовність варіабельної діпянки важкого ланцюга: САС АССТ СО ОСА СТ ОЦНАН САЄСТ ОА ССО ИАСАСТСТОС ТИ ОСАССО СТО АТІСАССТТСАССАССТТ ОСССАТОСАСТО ОО ОС ОКСАСКСТЕ САС СА АСИН ВИ ТО АС ТОН О СКСАСТТАТАТОСАА ТА КА АСТААТАААТАСТАТОИСАСАСТОС ГО Ап КАТ САССА ТИССА АСАСААТССААСААСАСТОГАТ СТАЛА ААСАК СТАЛО МАС АсАТ СТО ГАТТАСТОГТ САЛА АТАКА ОСТАСТАСТАСЄТАЄСОСОС ТАТО АСОТ СТО кА АССАЛН АСИСТ СТАВ ЕКО ТО ЧК 1083 Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого панцюга: ОУсСсУМнУ ОРВК СААОЕТЕБЗКМнНУУКаАРОКОЕУУА 1гУМОсЗчКУтАОЗВУКОСКЕТІЗВОМаКМІУ ММ КАТА УХУСАК АТААГХУУООМОУ МОУ ГУ во МО: Нуклеотидна послідовність варіавельної ділянки легкого ланцюга: са СТО ТО АСОИСАСО СОС ССТСАС ТО СТ ОКО САС АСА Аз САССАТСИТСОСТОС СТО АССАСНЛ СА АсАТ НС ААТАА ТП ОТА СТО ТАССАССАЛИОИС ТТ СС САСИААСАСМНТАК СА ААСТОССТС АТТТАТОАСТАТААТЛААССАСОССТОАСОЧЗАТ ГОСТОАССПАТІСТСТО а САН ТС КАСОТСАСКСАСССТОИК ВКА ТСАССОЧАСТОСАСА СТ АСЧАСКК ЗАТ ТАТ АСТ СС АСАТСКИАТАССАСИСТОА ОСС ТАТО СТ ПОС АСТООСАССАСОС САС ОСТАУ КО Мк ЦЯ Послідовність амінокислот варіабельної діпянки легкого ланцюга: ОоБУуСтвВРЗУвААРНЖЖУ ПЕСВОВВаМмИМчКУА ОСОБИ ТАКУ МКЕКРЕСТВОВРБОЗКОТЗАТ ОТО ОТО0БАОУУСИТУ ОВБІ ЗСУ УВИТ ОсІКкУГУС (БО МО 3)
Фіг. ЗМ йтАВ Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого паннюга: УсСАСС ОСА ОА СТОК САС ГО САС ТО АС ОСС ИадаАСИСИТОИЛ ОС ТОаСАССС ТС ОСАТТСАССТ СА АСАССТТТ сОсСА АС АКТ ССАССААСННИНМЯ АС сССАСТТАТАТАН СТАТОК А ТАААТАСТА САСАСТОСС ТС Ам САТ ТСАССАТСТОССАВАСАСЛАТТОССЛАСААЛСАСКОСТО ТАТО САЛА ТСОДАСАСВАК СЛ АСАС М АСИСАСКНСТ ОГО АТТАСТО ТО СпАСАСОССАТАОСАНЧНССТСТАСТАСТАЄТАСОНТТАТОЗАСОЧТ СТОЮ КОСАМИ КАССАСООТСАССОТСТОСТСАВТ (КО НО МО: 08) Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого ланцюга: ОУН УкаСсУ ООН КЕОСААВОКТЕМВОМНЖУУКОАРОКОГ БУ УА САБО У АОВУКОКЕ ПКП ОММВКАВОТАЛУТУСАКА ілАСухУчОоМОУ сс У У (ЗЕ ВК 703 Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого панцюга: КСАаТСТО С ТОАСОСАОСН ЯЛТА СКС АССАСА СААТКИТСАССАТСТОСТОСТС ОСА АССАСТ СОССААСАТТООНЛАТААТ ТЕСОСТАТССТОТТАССАОСАСТ СССАСОЛСЛАСАССССОСАААСТОСТСА ТАТ ЗАСТАТААТА АЮ ЧАСОСТСАСОСА ГТ ТОСТОАСССАТІСТСТОЮ СТАС СТООСАСК СА ОСТАНКИ САТАНА С САСАСТ ОСИКИ АСЗАНКН ОЗ АТТАТ ТАС АКЛАСАТИНЗАТАССАЛК КТ САС ТСТПАТСТТСООСААСТНСАССАСН ТТ САССОТОСТАУ (КОЮ щік Послідовність амінокислот варіабельної ділянки пегкого ланцюга: ОБУ СТОРРУВА АМКУ ПОС МІСММ УВУ РО ТАРКО ТО МКАРБСІТАОКЕОСяКЗСТВАЛІСНТ ОР ОТО БАБТУССПУЮаВ ВУ УКОТ СсІКУТУЇ (БО ТО МО: 37)
Фіг. ЗМ
Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: УСАСН ОСА ГОПАК АН ОО САС ТОТА ОСС АСАСТС НТ ОСА СТ ОСА ТСАССТТСАСКАССТТ СОСА ОСА ГСК АНАНАСИ ТАТО КУ СССАСТТАТАТИИСЛВАТСОСА КОСА АОСТААТАААТАСТА НОСА АСТССС ТО АКА АТ ТСАССАТСТО ОС АСАСАСААТ С СААСААСАССТО ТАТ СТКАААТААСАСНКЛ САЛА МА З АСАСН ТО ГО ТАТТАСТОЇ ОСА АССАТАССАСОКССТСТАСТАСТАСТАСООС ТАТОСАСОТСТО СИС АССАСООСТСАССОССТСТОСТСАХ ЗЕ ПІ ЗЕ: НВ Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого панцюга: ОУН УВС У УОРОКН КОСА АВОКТЕЗЗКОМН А УКОАРОКЯ ЕМУ УА ГАК КАОВУКОКЕ ТАЛУ ОМЯМІКАКОТАУМУУСАК АААГтУУОМОУухканНОоТУгУ5О ЗЕНИК 77, Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга: КСАСІСТОа СТАС АК С СТ САСТНССН НН АССТАСА САЛО САССАТСТОСТОИСТОСИТ СО АС АССТОСААСАТ ТКА АТАХ ТЕПОТАТССТТО ГАССАССА НОСА АСК ССС ААСТОССТС АТТТАТАСТАТААТААССАССОС ТС АТТОСТОАСОСАТСТСТО СсССОААН СКАТ САН САС СТ КН САТСАСАСЛССАНА СІК АССАСІ С СССА ТАТ ТАСТО СА АСАТОССАТАСАСЮТО А СПЕ ТАТИ СТОЛА АСК АССАССОК САС СТУ їБЕОЮ ВО: Послідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого ланцюга: ОЗУСТОРРХУ БА АРОК У ТЕС СВО МІЮ ГУБУ УООСРОТАРКС ТО МКК ОККО за ОКА УВО Уа СсІКУТУгБ іо ПІК ЗВ
Фіг. 30
Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого панцюга: ТСАсСС САС ТО ОВАЛ СТОЮ А ОА СТ СОС с СА САС ОСА ТС ОАТТСАССТ СА ОСА ТТ СЕ КСАТОСА са ОКА АСИСТ ОА ОК АСТТАТ АТС ААТСАТОПААСТААТАААТАСТА ПОСАСАСТОСОТОСА АННИ АТП ТСАССАТСТСОССАПАСАСААТ СА АСААСАСКЛОТАТС ТТ ОСАЛАТО ЗАСАДИ САС АСАСС ССП АТ ТАСТО ОСА АТАК ССО АСТАСТАСТА ЄС ТАЗ АСО СН НК АС АССАХСАССОТСТССТСАХ ЗЕ ПО: Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого ланцюга: СОУСУ Бас УСС КМ СА АВОК ТЕЗ КОМН АК УКОАРСКСНЕУ У А, ГУМОК ТАЗУ КОКЕТІЗК КМ ОММВІ КАТА САК АГАТ МОВУ КУТУ (БО ОК 7 Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга: УСсАсІСстОо тат АСОСНХ НС САС СОН НН СОС АСА пал САССАТСТОС ТОСОЛ АЛО .САОСТОСАЛСА ТОНОМ ААТАА ТРРТОТАТССТООТАССАССАНЛТОсССТАССАХАСККСНХ ОСА АСТОЄСТО АТПТАТОАСТАТА ТАКА АСОССТСАСОСА ТТ ОАСОЧАТІСТСТО СККПОСААКСТИИ САС САН АССС ЕК СА САРА СТССАСА СТАС СОСАТТАСТАСЄ ТОК ОСААСАТИ КАТА ССАСЛ ОСА СГС ТАТИ СТ СОВА АСТОАССАСО САС СТА ХУ ска мі Послідовність амінокислот варіабепльної ділянки легкого ланцюга: ОБУЛТОРЕТУВААРОЮКУ ПОС МЕМ УВА ОО СРОТАРКИЛТ ОХ чУККеЕБО1вОВаОоВКас ЗАТ ТО ОСА СС РУ УГСЕ СКУ ТУС ЗЕ ЦІ МК 39
Фіг. ЗР з Нуклеотидна послідовність варіабельної діпянки важкого ланцюга: УСАСН ОСА ОА СОН АН ОСА СН АС ССС АСАСТОТ ОСЛО ОСАСККС ТТ СТОСАТ ТСАССТ САД ОЄТАТ СА ТОСАСТ НО ХОЛ СНО ТТ ОАНААНИКАК СОЮ ГОСТЯ ССАСТТАТА ТИСА САТОСААОТААТАСАТАСТАТО ГАННА СТ СА АННА ТТСАССАТС ТССАСАСАСААТТССААСААСАСОСТОГАТС ТОСАААТЧААСАСККСОСТОАОСА СООТАОССАСАССНН ТО ТО ТАТТАСТОТЄ САВА АТАСАН КА ТАСТАСТАСТАСС ТАТО АСОТСТОКИ САЛО АССАС ТТ САСССТСТССТСАХ СЕС ЧЕН І Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого ланцюга: ОУН УР КГОСААВЕ ТЕКУ СМНУ УКОАРСЬСН КУ У АБУ НОоОСьМІУУУрВУКОКЕТЗКОоМВЕМТ ОМ МУИАКПВТАУТУСА КАУлтУтТУУупМоУумОоюогУтУБО (ЕС ОН 53 Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга: ССАСІСТСЕО ТО АСКОСАСК СТАС СОННА АСА СААСКТСАССА ТТ СОССТОСТТ СТ ОСА АСАССТСААСАТ НС ААТАА ТЕТ А СТГ АССАСКСАСТОСССАОССА АСК САААСТОСТС АТТТАТСАСАЛИТААТААСАССОСТСОАООА ТТ ОСТОАСССАТІСТСТО ОСТАНОК САС СТО АСАТСАССОАСТОСАСА СКАЗАНО АТ ТАТ ТАСТОКСОСААСАТОВАТАССАСКЄТТ ОА СТОСТТАЛСОИ ПОС ААСТОИ КА ССААСКИТСАСССОСТССТА АХ КО НО ЩО: 15 Послідовність амінокислот варіабельної діпянки легкого ланцюга: ОБУ СТОРРЗУКААРООКУТІВСЗОСЗЕМІОММЕУ ЗА УООГРОТАРКОЛУЮВ МКК КВО ТАТО ПО О ТОВ АПУУСО ГУБАХ УВО сту Я
Фіг. 303
Нуклеотидна послідовність варіабельної діпянки важкого ланцюга: гаАО САС О ОСА СТС ПОЗ АСК ТО ТАСАСОЮТСК КВ ССС ТОАСАСТСОИ СЕТ ПОСАССТСТОСАТТСАССТТТАССАССТАТ сССАТААСТОД НО ОКА НН САСН ВАНН ОАЄ ТСААСТАГАСТТОА ТАС СОС ТОАТААСАСАТАСТАС С КСАСАСТОСОТСА КМИН ГТС АССАТСТОИСАСАСАСААТТССЛАСААСАСОСТИТА ТС ТСАААТСААСАСТ ЛАСКА АСИСТ КК ТАТАТТАСТИТИ СА АААА,ТТТОТАСТААТОС ТТ ОТАТОСТАТОСТІЧАСТАСТОН НН КА СОС ААСС ТО Т САС ССС САУ КОН ЧО: Іо) Послідовність амінокислот варіабельної діпянки важкого ланцюга: ЕМ МОР КАВОВУ АМУМУУКОАРОКОН У У псом АВВУКОКЕТІКОМОКМЧТ У ОММОІ КАКТУС ГУМУ АМірУ с УТУва КО ЦІ МК 7 Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга: МОАСАТ СТАТ АСКССАСТСТОСАТОИЛТОС СТО СКАТ ТО А САСАСАОТСАССА САС ПОН ССААСТСАПАССАТТАССАСТТАТ ТЕАААТ КИТА ТСАСКАСАААССАПООСАААН СОС А АК КСТОАТО ТАНК ТОССТОСАСТЕОСАЛАСН НК ТКС САТСААСН САС НА СТАТ АСАСАТТСАСТСТСАССАТСААСАС СТА АССТСА АсАТ ТТОСААСТТАСТАСТОИ СААСАСАСТ ТАСАСТ ОСС САТСАСЄ ТЕКА АСАССАСТОСАСАТТАААУ КОТОВ ЧК Послідовність амінокислот варіабельної діпянки легкого ланцюга: СМ ТО5РОБ ВАЗУ У ГТС АВОВІЗ МУ УСЮ КРОКАРКУ ГУ ААВ зісвОУ вк зОоВБОо КТ ОгЕПКАТтТУСООВБУЗЗВ ТЕО ІК (ек 5
Фіг. ЗЕ
Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: УА ОО АОС ОК АСК ГО АС ННКІ ССО АСАСТСО ССО ОСА ОС ТОСАТТСАССТТ ТАССАСЄТАТ СС САТААСТО НК ПН САТ ОСА АС Є ТСААСТАТТАС ТО ТАС ТО ОСНО Т АСАСАТАСТАЄССАСАСТОСТО ТО АН ТС АА СТ ССАСАСАСАЛАТТСОСААСААСАСОСТО ТАТО ТСАААТСАЛАСАККСТОАСАКН САС АСАССНКК ОО ТАТАТТАСТОТС СОААЛААКН ТТ ТО ТАСТАА ТНК ТА ТОСТАТОСТТОАСТАСТОИКНЮССА, СКЛА АСОСОСТСОИТСАСССТОСТСАК ВЕ ІВ МО НВ Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого ланцюга: УЧ зо УС КГ САЛОМ УКОАРОКОТКУу У пом Ар УКОаКЕПВОМаКМ У ОММа КАЛ АУТ САКЕ УСМУХУАМО КСО У ГУ (ЗО МО: 73 Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга: УСАСАТССАСАТАСССАСТСТОСАТССТОССТАТСТОМСАТСТОИ ТАС САСАСЛС РСАССАТСАСТ ОЦК НК С АСТСАСАССАТТАСКСАТСТА ТТ ТТАААТ ТАКТ АТСАССАСАКАЛОССАТН ВАК ТАССТОСТОАТСТ АТСТОСАСССАСТ ТТ ТОСААКАСО ПК ГТ СССАТСААСОСТТСАСТОаСА СТОПА ОС АСАСАТТ ТСАСТСТСАССАТСАОСАСТ С САС АсАТ ТТ ТОСААСТРАСТАСТО ТСЛАСАСА СТ ТАСАСТ ОС СОСАТСАСЄС ТСОССССААСОСПСАСАСОСАСТОЗАСАТТАААХ (БО В МК 119) Послідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого ланцюга: ГОМ ТОР ЗАВ КУ ТТ ТСВАО ІЗВГУТ МУ СОКРОКАРУПІХААХА ЗОБУ СВОВО ГОТОВА ТУ СОЮ УВАРІТЕСООСТК Є ік БО ЧО Ох це
Фіг. 35
ТК Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: САН ТАТО НОСА СТОМАТИТ АСАЛСОЮТТО СПСАСТОААСИ СТОСТОСААОССТІСТОС ТТ ТАСАСТТТОСАССАССТАТ ОсОТАТСТАСНСТТ НС ПОСОАСАСН НК СТ ОПАСААКНСТ ТАС ТОСАТИ ОСЗАТОА САН КЛТТАСАА ТТ ААСАСАААСТАТОСАСАСААЦСТС САН АСАСТСАСТАТАССАГАСАСАСА НЕ САССАСКСАСАСІСТАСЄ АТАК АССАС СТАЛА ОА ГАТТ ТАСТО ОСИАСАСОИСТАЄОССТАТОСАСО ПОТОП ОССААСОСАССАСООТСАСС СсІСТСОСТСАУ ЕВ НІ ОК СМ Послідовність амінокислот варіабепьної ділянки важкого ланцюга: ОКУ БО АКУККРОАЗКУВОКАВ ВІЗУ У КОАРОСАУ МО ТЛЗАТЧОМІ МАСКУ СКУ ТУТ КУКА КЗ ТАУУЖСАК оаМоУЖмсОСтТТУТУВУ «ЕІ МО: 5 Нуклеотидна послідовність наріабепьної ділянки пегкого ланцюга: УСАСТС ТС СТОАСТСАСНАСТТОА СОЦ СТО ТО С ПКС ССО АСАЄ ТССАТСАССАТСТССПОСАСТОСААССАССАСТОАСС ТО ТОСІТАТА АСТСТО СТСОСТОСТАССААСЛОСАСССЛООГССАААССССССАААСТСАТ САТТТАТАСКСТСАСТААТСН С ССТСАСКЮ СО ГТС ТААТССОСТІСТСТ СС СААОСТ СА АТАННССТАССАСИСН НТ САТ СТАС АССТАСТИА ТАТ СТОСАССТСАТАТАСА А АССАССАТ с СПОСО АС ПАССААССТАССО СТА ХУ (ВЕС МОН 2, Послідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого панцюга: О5БАГСТОРАВУВОВРОЮВТІСТОТВВБУССТМВУВМУ УСОНАСОКРРКІ МГУ БУБУКРУСУВЗМКЕБСЗКООМТ АЛІ ОАББСВБАБУКСВВУІВЕОМУКОС ТЕТУ! «ЗЕО В МО: 3)
Фіг. ЗТ
Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого панцюга: САБО ТСАССТО ОСА СТ СТО АССТТТ ОА ГТ СААИАЦИССТТТОСНЮЄ СТАТ ААСН ІСТОТИ СА АСК СТО АСАССТТСАССАССТА ОсСОТАТСАСТЧОКОСТ КАСА ААУ ТАС ОСА СЗАТОСАТСАОССО ТТ ТТАСААТОСТТААСАСАААСТАТОСАСАСААССТС САНКИ АПЧАСТСАССАТАСССТАСАпАСАСАТССАСПАССАСАСИСТАЄ АТапвАОЄТ САС СТИ СТСАСОАСАСНКК ТС ТАТТАСТОТ СА АСНСТТАСН ТАТА НСС АССАСХИ ГАС ССТОСТСАУ КСО НУМО: 122) Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого ланцюга: ОО ЗСАБКУККРОАУКУВКАВО ПЛОВУ УМО мІБУУМмОаМчіМТтАОКУч У МІТОЗУ МЕ каз АУ СА стоМмоУМУсОосггУгУВВ ВО м Нуклеотидна поспідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга: УСАСТСТИОИК СТИ АСТСАОСТОСС ТОСТИ СТ ССО АСАКЕ ТССАТСАССАТСТОСПЕСАСТОСААССАССАСТСАССТ КС ТАТА АССТОИ СТО ТО ТАССА СА ССС АСК САААСТСАТ САТ ТАТА ТСАСТАА ТСН СТСА ССО ТІСТА ТТ ОСТ ТСТСТ СС ССААСТСТОСААСАК НАТО СТО АсАТ СТОК СОС А СО СОЛО АССОАСОТ АТ ТАТТСТОСАССТСАТАТАСААЛОСАССАСКАТ с ССО АСЮСАССААССТАССОТССТАХ (ЗЕ МО: 12) Послідовність амінокислот варіабельної ділянки пегкого панцюга: ОзАГТОРАВУВЗОаВРОСЬ ІСТОТ 5ВБУССУМВУВАЧОСНРОКРРКМГ КУБКМЕРОСУВМІ КОВО МАТІОС ОАЕПБАБУКСВВУ ТТ МУКСОСЮ ТЕКСТУ! (5 МЕ: 16)
Фіг. ЗИ
МН Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого панцюга: КЕСАСКТТТОСАССТТИСТ ОСА СТОПА АСУ ТО ААЛААССОК НАС А СС АС СОСОК СК ТАССССТ ТО АССАССТАТОСТАТСАЄ СТО ПОС АСАСН СС ТО АСААСИКСТ ТОАСТОСАТИКАТНИАТСАСЄ ССТТАСААТА ГААСАСАЛААСТА ТИС АСАСААМ НИ ОСА АС АСТСАССА ТАССАСАСАСАСАТССАСИПНАССАСАСТСТАСАТССАС ТС АСЧ АОС ОАЄ АТИЛСАССАСА0АССИК ССО ТОСТАТТАСТИ КАСА АССОСТА ТО АСОТС ПЕН СААСОПАССАСОС САС ТСТОСТСАХ (ВВС МОВ ТІ Послідовність амінокислот варіабепьної ділянки важкого ланцюга: ПУ УА УКАРАВУКУСКАОРОТУ ВИ УК АРОС ЕМО КТВА, ВОМУ АСКУССВУ МІТОЗУ МЕ КО ЕЗОИТАМУСАКСХУСМУ СГ ГУ ГУБ ЗО ПІ МН 55) Нукпеотидна поспідовність варіабельної діпянки легкого ланцюга: КСАСТЧ КТ АСТСАССТ ОО ОК НО СТ СКК СТ ОСТ ОС АСАСТОНА ТСАССАТСТИТИСАСТОПААССАССАСТОАСС ПТО ТАТААСТСТОТС ТСТОСТАССААЛСАССАСССАСИКИАААССССССАААСТСАТСАТТТАТСАСС ТСАОСТААТСН НК СТАС СТА АССТТ ССС СААСТСТОК ААТАСЧНК НСС ССТИАССАТС ТС ТИНА САН САС АССАСКИТОАТІ АТТІСТВСАОССТСАТАТАСААСКАССАОССА НН ТС ОСС СО АС САС САА ост АССОСТОССтТАТ БКОа ЕКО: І Альтернативна нуклеотидна поспідовність варіабельної діпянки легкого ланцюга КСАОТСТ ССО АСТСО АС ОССТССО ОС СТССТОАСАСТССА ТСАССАТСТССОСАСТОПААССАССАСТОАСО ТО ГТАТААСТСТОТС СИСТЕМАМ СА СКСАААССССКСАААСТСАТСА ТТ ТАРОЮ ТСАСТАА ТК СТАС ТЕСТ ААТСЕСНК ТЕСТИ СС АС СН ААПАСН ЛОТ АССА СС НАС АСАСПАСНЛОАТГ АТ ТСТОСАССТСАТАТАСААССАССАССА ТОК ПОН НАСК АССАА ОСТОАССОГТАУ БЕ ВИ 294) Послідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого ланцюга: ОБАСТОРАВУВОВРООМТБСТО ЗМУ МУЗА ОС НРОКРРЕКОМІУ БУ ММ КРЕСУБМЕЕКОВКООМТАВМЛІЗС ОАЛЕПСАБВУВСВВУ ГТ МУКСНС КІ ТУ зо НК
Фіг. ЗМУ
Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого панцюга: УСсАБО САС ОСА СТ ОСАССТОД ОО ТАКО СНИ СТО СА АС СТО АСНАТТ ТО ТАСОССТ ТАКА А САТАНИ С АСАСНАК КОЗАК ЗАСТ АТО ССАТОСА ТАН ТАСАА ТО ГЛ АСАСАААСТАТСАСАаЧААСНИТС САССКОСАЗАСТСАССАТАСПТАСАЛАСАСАТОСАСПСАССАСАСТСТАЄ АТЛАСИ САСОАСССТОАСАТСТАССАСАИНССТ ОТ АТТАСТО ССС АПВАССТАСИН ТА ОА СОН САС АССАСН САС СІСТССТСАХУ (КО НІ МО 126 Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого ланцюга: ОМС ЛОЗОАБУККРОАБУКУЗСКАБОСТАТТЗУСІУУКОАРООССТЕЖМ сива чОаМІ МАСКУ дОКУ МІТОЗУ МЕ КАВА СА ато МОоУМм ТУГУ (еко Мч о) Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга: УСАОТС НКТ АСТОКОА ЮСТА ССС АСАС ТСБАТСАССАТ ТТ ССПКСАСТОСААССААСАСТСАССИСТ ОС КЕ ТАТА АЛ СТОС ПО ТАССЛАСАОССАССОССЛОСАААССССССАЛАСТСАТ сСАТТТАТАССТ САСТААТСН АК СОСТСАСЮВА СТАЛА ТС ОСС ААССТИ САС СТО СТО АССАТСТС ТОК НКИ АСО СТО АСО ОТ ИА ТАТ СОС ОСТСАТАТАСААСАССАССАТ ваг САС АССААССТаАССОТОСТАУ (ЗЕ МС 127 Послідовність амінокиспот варіабельної ділянки легкого панцюга: ОЗАГТОРАЗУМІЗРООВ ПСО МОСС УМаУ А УСЮНРОКРРКОМТУ СУ5БМКРНТЛЬКр Ваза МАЛІК ОАСОВБАВТКСВУ ТОМУ ОС ТКУ (БК ТО МО: ЗХ
Фіг. ЗУУ
СХ Нуклеотидна послідовність варіабельної діпянки важкого панцюга: САС ОСА ТЕКС ТА АСАЛОВА ОН СТАТ СААСОИ ССС ОСА АС ГОСТ ТАСАСТ ТТ ТАССАСОЄТАТ СОТАТСАС ОН НІ ОО ТАКО АсАТ ОАСТОСАТО ОСА САС СТ ТАСАА ТО ААСАСАААСТА ТАС АСААСТІС САКНСАЧВАС ТТ САССАТОСАСПАСАИЛЧАСАСА ПОС АССАССАСАСОСЄСТАЄ АТ АСТТАСЛАССТИаАСА СТО АССАСАССОИ СОС ГО ТАТТАСТОТ САВАН ТА ПО АСО СТОК КСААСКАССАЦКО СА ОсІСТОСтТСАУ ЕС МО: 128 Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого панцюга: ОО УОБСАБУККРОАВУКУВСКАВОУ ВЕТО ЗУ УКОАРИНН ЕЕ УМО чУБА;УМИаМІМАОККОСКУ МАТ ТАУМЕ КОЮ ТАУХТСА КС УМБУКООСТТУТУ»в БО ОО МО: 5 Нуклеотидна послідовність варіабелпьної діпянки легкого ланцюга: КСАССОСТН СТАС ТАСНКСТТ ССО СТАС ТО АСАС ТА ТСАССАТСТОСТОСАСТОСААССАССАСТСАССИТТОС АКТ ТАТА АССТАИ СТО ПОТ АССААСАОСАСССЛЛОС АЛЛО САЛА ТАТ ТТАТСАСОТ САСОТААТС НК СТСАСН НК СТА, СТО ТКА СК АС ОССАССАТСТС ТНК АС СТАС АССАСНИСТИАТАТТАСТОСАСЄСТСАТАТАСААСКСАССААЄ АКТА СКС ОСА АССААССТОАССОІССТА КТ ЗЕ МО: НИ Послідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого ланцюга: О5БАБТОРАВУВБОСОВРОСЮ ПОСТ рУСАТМВУВУ ТООСНРОКАРККМІУ БУБМЕРУСУЗМЕ БОКОМ ГАЛІ ОАЕ УСТ ММУ КС СТЕСТУГ ЗБ МО: 2
Фіг. ЗХ
ЦИ Нуклеотидна послідовність варіабепьної ділянки важкого панцюга: САС ТАСАСТТОаСАаСАСТСАС ТО САССАСТК САМСОН САСССТТСАСТСАССТИ ПОСОССА СТО КАСА СТСТАССА АС АОС ГОЛ АСТОСАТСАСНСАСТ ОСС С САТОЗАСАСНКК СТАС КОСА АСАТАСТАСАО САЛО ТО ТАТАААААТТАТТСА СТАТСТОИ САД ААСТОААТААССАТСААСОСАЛАСАСА ОСА АСАЛАЄ САС ЕЛ ОСТСТОСААСТОААСТОТО ПОАСТОС ОКО АсАТ ТО АТТАСТ ОСЛАСАЛСОИН АННИ СА АСТОИСТО СТ ТО АСТАСТОКНННКЄ АСТРА АСОС ТИ САС СТСОСТСАУ сВКОВ чО: 130 Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого ланцюга: ОО ОБР У КРОК САТ ОБУ МА АМЧА КОР КО СМ ОЮ КТК ВуУВУКЗАПІМРЕОТХКМОВКІ СН МУ ТРООТАУТУ СА ОССРТААГ КО У ТУ В ЗО ЦО НО ЗИ Нуклеотидна поспідовність варіабельної ділянки легкого панцюга: КССТК СТАС АСКССТО СС СОТОК СТ ССО АСАЄ ТСАТАССАСОСПОСАСТ ВЛ АССАССАСЕСАТС ТООСАЛАТТАТА АМС СТОССТОО ТАССААСАСТА ТТ ТСАСООСА АН САААСТСАТ САТ ТАТЧАСКИ САС ТАКИ СТ ОСАСООС ТС ТААТОСТІСТСТ СКЛ СОСАЛСТС ПИКА АСАСОТ НКТ СТ ОАСАА СТ СН ССС СТАС АСОСАСВАЮ САТ ТАТТАСТОС ПОСТ САТАНИ АСТАССАЄ пос САС АС АССТ а ССТАУ (ВКО Н КО 13 Поспідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого ланцюга: Г5АГТОРАВУВБО РОМ ПТО то УСсМУ Ума кАРКСМІЄ СБУБЗБКЕКеЗсуУВМКЕЗОоВКамМ АЛ ЗО КО АКОКБАВУ СУ АСВ Уго ско УуС чо чн О
Фіг. ЗУ я Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: ува ТОСАС ТС ОСА СИНА САН СПОСО АСТО СТО ТО ТАСТСТСТОСАТТСАССТТТАСТАССТАТТ ОЗ ААСТН ОСА ССАСО АСК ОСАСІН ССААСАТАААСССААСАТОААЛО ГАС ААЛАТАСТАТО ТОЗАСТСТО ТА АСИНССОА ГТ ТСАССА ТО ПОСПАСАСАСААС НК СААСААСТСАСТОТАТС ПИКАААТСААСАКИСТОАЧПАС СТАЛАСЯ КСО ГАТАТТАСТОТО ССАПАСАОСТСААЛАСТК КАТ ТС АТАТСТ КН СА АСКА СААТОСТСАССОСОСТСТСОТ СА (ЗЕ ОН: 15 Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого панцюга: БУС УБОСО УСЮ КІ СУ УВО МОЖ УКОАРОКОСЕУ УА, МКС ЗеКУ У Ул УуКОоКРТаКОМАКМа У ОМ КАСА У САКЕ З АСРАГТАСІ МУ ГУ КО ТО МО: БА, Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки пегкого ланцюга: УСАСВІСТО ССО АСТСА НК САСССТСАСНК СТО АСССОС НК НА САС САССАТС ТС ТЕТ ТСТОСААССАСТ ОО СААСАТС ОСА АСТАА САСТО ГАЛАС АССААСАНК СОСКА АНА КС САААСТОЄСТ САТСТАТАССТААТЛАТСА ОЦ НС ССТ ТА ВО СС СТО АСССАТІСТСТ ССС; СН САССТСАССТСС СТОК САТАНИ ТС САС СТАС АТаАСОСТОСАТ ТАТАР ОСА ССАТ АНА ТАС АСЮСТОАХ АТО ТСООСОСАСОСАССААССТаАССОСТОСТА У КО МО: 13 Послідовність амінокиспот варіабельної діпянки пегкого ланцюга: ОЗУСТОРРЗА БО ТРОСОКУ ПС БСК УМО УРОТАВКС ТУ КМ МОКРСУРОКЕВОСВК БОС ТВА АВОГОЗОЕАОС САМОМУ УКОС ОКУ БО Я ще
Фіг. 37
Не Нукпеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: КалсаИаСсАСЄТО ОА СОКОВИТОСТІ ОССССТОАСАСТСТОСТО ПОТАСССТСТОСАТТСАССТ ТАС ТСОСТАТТ сССЗАТАСНТ НН НАСК АСК ТО АСІ КИ ССААСАТАААССАТСОА ТА АСТИАСААХАТАСТА КИ ОС АСТСТОТОА АОС СССАТТСАССА ТТ ОССАЧПАСАСААСОССААЙААСТСАСТИОТАТС ТКСААЛАТСААСКИ СТОЛА СО ЗАССАСАСННТО ОТ АТТАСТО ТС СА АСАСТСАААСТИКЮСВАТ СТАТ СОН АССННА СААТК ТТ САССОТСТСТСАХ Б КОН 13) Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого панцюга: МОУ ОРОС КІ ВСЛАЗОКТеК УМА УКОАРОКСО КУ УА МКС У УПУКОКЕ КОМА КМ ТОМУ КАКОТАУТУСАКВ МСА У МСС МУТУ о НН ЦО а Нуклеотидна послідовність варіабельної діпянки легкого панцюга: УсСАСТСОСТО ПОСТ АСТСАСНКСАСССТСАСНО СН КСО АСА САС САССАТСТСТТС ТСТОСААОСАСКТОСААСАТСОСААМИТААТ АСТОТАААСТОИ ТТ АССАССАСЛ СО ССАОСО ХАН КК С САЛАСТОЄСТО АТСТАТАОТААТААТОО НОСОК ТСН ССС АССОСАТТСТСТО ОКСТОСААСТСТСИКСАССТСАСВССТСССТООССАТСАС ОКСАНО ТСАССАТОАСКСТ ЗАТ ТАТТАСТИОИ ОСА ССАТООЗА ТАС А теп СТО ОАООСПАССААОСТОАССОРГССТАХ (ВО ЦИ МО: ЕК Послідовність амінокислот варіабепьної ділянки легкого ланцюга: ОВУ ОРРЕЗА СОРОК У ПСО Ма МТУ МАУ ОО СРО ТАРКОГ ГУ М МКЕКРаЕСУРІЖЕВСсСЬКастЗААВИООЗОВАП САЛА Уг ОКУ КО МО: 3
Фіг. ЗАА
Нуклеотидна послідовність варіабельної діпянки важкого ланцюга: КПА ПОСАССТОИ ОСА СТАС АСАСН СОН СТЕКТИ АСАСТСОСТ ОСС ОА ОСА САССТТ ТАССАССТАТ ССС АТСАОН ОНА СО ОА ССАСОААСКНК ТО АСТОІ С ТСААСТАТТАСО ТОН ТАСОС ТНК СК ГАСКАСАТАТ ТАС КСАСАСТС І СА КМИН ТТАССАТС ТОСАСАСАСААТТ С СААСААСАСССТО ГАТТ ПСАААТСААСАНИ ТС АКС С АССАСАССН КСО ТАТАТТАСТОТО ССОАААСААС КАНАТ АСТАСТОТСКНК КАСА АСССТО ТАССОСТСТОСТСА У (БО МО ЗО Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого панцюга: ЕОР СО КОСА АВМОКТЕЗзТАМЗУУКОСАРОКОСЕМ УВІ ОК ТУ У АБВЗУКОКЕПУКОМВКМ ГО ОМ КАВОТАУТУСАКЕСУ ОЗ у АКТУ ТУ (ЕС ЦО 6 Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга: САС ОТО АСОСАНО ССС САНОК НК САССАСА САМО САССА ПИЛЛСОССТ ЛГ СТ ОСА АСОССАЛЛАСТОЛАСАТ КА АТАА ТАБЛ АТСЧС ТЕНТ АССАОСАСЄСТОИ САС АСАСЯ КС САААСТАТС АТТТАТТАСААТААТААЧЙСПАСССТОАСЗОСА ТТ ОСТОАСОМАТСТОСТО СТ ОССААСТО СА АНА СКАТ САС АСТСАСА СТО АСОСАСКИХОСАТ ТАТТАСТОСООААСАТОСАТАОСАСКИЮТОА сСОСТО ГО ТАТ ПСО АНА ССААСКТ САС ССТА ХК ЗК В Ме: 137 Послідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого ланцюга: СБУ ЛОВ РБУЗААРСОКУ ПВС УВА КМ РОТАРКО У МКК КСВ ВАТНОГО КАПУ СУКА УКО ск РУС (ЗО МО: 43
Фіг. ВЕ
КУН Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: КСАСТОСАССТОВ ОСА АСКОЕ ОО ПОСАСОСТОСОСАСВТО ССОАСАСТТОСТО КАС СТОСАТТСАССТТСАСТАСКСТАТ НА КАТОС АТО ПК НААН САНИ НИКА КН ОО СААТТАТАТО ОТАТАТООСОЛАСТААТАЛАТАСТАТОСАЛАСТ ОО ТАЛАН СССАТТСАСЄ АТСТОАСВАСАСААТТОСААСВААСАСАСТОТАТСТІСАААТОААСАСКССТОХ САС АСИИАСАСОСКТ СИ ОТАТТАСТО ОСОСЛОВ ЛОКОНИ ОО СОС ОЄ ТТН ТАЛА СКИТ НАССАС САС ТА ВЕС ТВ Послідовність амінокиспот варіабельної ділянки важкого ланцюга: вУССУвБаОСУ УВО КМКГОСААМКТЕО СМ НУ УКОАРОКОСЕУУАНУ У ТОМ АПУ КОКЕ ЗНО МОМ ГЛ ОМУ КАВА У САККОСНААВР соус У ТУ (БЕ МО: ВИ Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга: ТТОСТАТП АСИСТ АК КАСА СТО ПОТ ССССАССТАСАСАСА СССАИЧАТЛАТСАССТТ СС ОСАСАТАААТ ТОННА ТАААТАТОСТТОСТОС АТ АССАСААКАССАИ КАТ О ОСТОС САТСТАТСААХАТАССАА СТ ЄСТ ТАТА ТСССТОАСОССАЛ СТО ТОСТТОСА АТС ТЕНОСААСАСА СТСАСТСТИАССАТСАСНС КС АСССАСКЄСТАТОСАТИО КНТ САСТАТТАСТ САН ОАЄ АСКОЕ А ТОК ОСА С СААСНСТОИАС СОТССТАХ ЕОМ: 13 Послідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого ланцюга: зУЕСтТОРРУУ БУВ АКПТСВОЛК КОКСУ УСУГУОМІКУР РЕК зАБОМ УВО ТАМ ОВАПТУСОА ЖОВ УМО СС КОТУ Ю ЕС НІ МО: 44 дльтернативна нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга АК ТССТАТСТАЛАОСЄ ТОВСТА КАСКО ОТО СТ СС САСПАСАПАСА СССАСААТСАССТИОИСТОСИ ОА ТЛААТ ПНО АТАААТАТОСТЬ ОСТ АТСАОСАСААОСССАК НК КАС ТОССОСТИТОСТОО ТТ САТСТАТСААААТАССАА КАК ССТРАСНЗАТСОССТ АКА СТ СТИ НЛО ААИТ ЕС НК ААСАЄСА, ОС ТСАСЄЛСТСАССАТСАСК НО АСССА СНО АТО АТСОАЕН КТ САСТАТТАЄТ УСАНКСС ПА АСАССАСКАТСИКНТАТ ТОНКОЮ АССТААССТОСАЄ СОТССтТАУ с5ЕОТВ МО: Оу
Фіг. ЗСС за Нукпеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: УПА АС ПАСА НН НАСОСА САМ СТІСАСА САС ГОСТ ОС АКА АСТО СТО ОНОТО ССАТСАССАСТАС САТТАСТАСТОСАСЄС ТОПКА ТСОССОССАССАСССАСКОСААСКНИКТОСАС тТапАТТОССРАСАТСТАТТАСАС СН СА ОСАССТАСТАСААССС ЕК ТСААСАС СС АТТАССАТАТСАСТАСАСАСОТСТААСААССТО ТІСТО СС ААСТ АСК СК ТАСТ СИН Х СОАСАССОСОССС ТС ГАТТ ТАТО САВАН НО ГСАСТАСОСТАСТАСТАСИТАТОСАСО СТОК НОЮ СААСИАССАСО САС СТ ОССТСАУ (вВЕО В МК 14 Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого ланцюга: СОУС ОКВИаРОСУКРМОТ МТ СТУВОСВІВВЗО УЗА ТОНРОКОСЇ ЕН Гу Базі умру ТКС КОЗУ ГААОСТАУУСАКОСЯУ КГ ТТУТУАМПУчУСОСТГУ ГУ (КО НІМ В Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга: КСАСАТАПАСАТСАСССАСТСТСОСАТОС ТОССТОЕСТОСАТСТОТАССА САСАСАСТСАССАТСАСТ НК НОСА САССССАТТАСКСААСТАТ ТАС АКТА СТОСАСААЛАССАСО АТ ТОК ККАЛ ОАТСТ АНЕСТСАТ САС ТТОСАпАС ТОК ОСА САЛМОН САС ОНА, сОСАТС СКС АСАСАТСАСТТСАССАТСАССАСТСТОСААТСТОА, АОАТТТОСААСТТАСТАСТО ОСА АСАСАСТТАСАСТАСОССОСТСАТТ СОСНА АССА АСК ОСАСАТСААЛАХ ВЕС ТВ КО: 141 Послідовність амінокислот варіабельної діпянки легкого ланцюга: ПОМ ЗАУСОКУТТ ТТ СВАЗОКІВМНЖ ЯКУ ОКРОТАРКІ Тел АВ з ООУвЗЕЕБОВОВС ТОК ЛІ ОЗЕПКАТУУСОСЗУВІРИЕССОСТКУЄ ІК ЗО ів
Фіг. ЗО0 зва Нукпеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого панцюга: УСАС ТТ ОСА СО КОЗАК СТОК АНОНС ОА ССССТОАСАСТСИТОСТИ ОСА СССИТСТОСАТТСАССТТСАСТАССТАТ сСОСАаСАСТН ХАСКІ ОСС ОССАСТ ТАТА ТОЮ ТАТОАТИЗААО ТА ТАААТАСТА ТОСАСАСЄТОСОТО ААСККНСЛТА ТТ САССА ТС КСАСАСАСАА ТТ ССЛАСААСАСОСТО ТАТ СК САААТААСАНССТ АСМАП АСАСАССКНТТООТОТАТТАСТО ССС АПАСАЛНАСТОС ПОССТТСОАААСТОТАСТАСТАСОСТАТОСАСЄТОСТ КАКАО АССАС САС СРС САУ ЕНН МОХ ТЯМ Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого ланцюга: ОУСУВССУ УРОК ЮБСЛАВОКТЕБаМ ОМА УКОАРОКОСЕ УХА, УГУУ ПОВЕНІ АПВ УКОКЕПУКОМКМ ТО ОМ КАБОТАУУЖСАК ЕТОаРІК У УаМоУ УСС У Уа СЗКОЧВ МО: 74) Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки пегкого ланцюга: КОСАТАТТОТОАТОАСТСАСТСТОСАСТОИ ССО ССО ТАС ОСА сл ОСА ССС СТАС САС ТССТСАТАСТА АТОСАТАСААСТТ ПОЗА АССТКСАПААСК САС АСНТ СТО АСААСТОСТЧАТТАТІ ТОНИ КЛСАТСОН НО ОО ГОСТ АЄ АЧВОТТСАСТОНСАС ОА ТС АСАСАТІ ТТ ТАСАСТОСАААТСАЄЄ АСАС ТАНКИ АОСА ТО ТОСОСОТ ТТАТТАСТОСА ПОСААСТІСТАЄ АААСТССАТСАСТ ПН СТО АССАААСТОЗАТАТСАлА КГ (КО НМ: 43 Послідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого ланцюга: МУМТОВЗРІЗОВУТРОВБРРМИМСКЗЗОВНаМО МОМ О КРОВО УЦзНнКАВОУВОКЕВОВОВО ПІКУ БАБЛУСУ У СМОУГОТРЕТЕС РОТ КУГТНК БЕ ЦО ЧО
Фіг. ЗЕЕ
Нуклеотидна поспідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: Мол ОСА ОС ОВ АС НН АК АОС СН ССС ТОАВАСТЕИТССТО ПОСАСКСОЄСТОСИТОПАСЄТСАЄСТТТАЄТАА СТТТОвВАТВАСТТ ОН ССО ССАСНКЛЛ СТАС ВААС НС АС КОКС СААСАТАААСОССААСАТОСААСТИАСАААТАЄСЄТАТСОТ СЮ АСПСИТО ТТЛ АН ОСАТТСАССАТСТПТОСАОАСАС АС СААСАА ПСАСТТАТТНСАААТААСАСИЄСТОААСОСМАСАСАССНИТ ОСТОТАТОСТОТАССАСАСАСТСВААСТОСОСАТТТОСТТТТСАТАТ СПИНКА АСААТН САС СТТСАУ (БЕН МО 144, Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого панцюга: ЕУОСУЕССО ОРОС ДЕ БСАЛАБОСТЕЕМЕАУ МУК УКОАРОКОТЕ У УАМмІКОНВБКУ У ОЗУКОАРПЛьКОМА КМУ ГОМ КАГОТАУ У СТЕ УСВАГНУКНСТМУТУ5ь КК ЧО: 65, Нукпеотидна поспідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга: КСАСТСТО ПОСТ ОАСТСАСКСАССТ САС СТО АПА САССАТСТСТ ТО СПО СААССАССТОСААСАТОСОСЛАСІТ ААААСТИТААЛАСТИТАССАССАСТТ ТТ СОССАССААСС(КН СА АС ТСТСАТСТАТАСТААТААТСООСНК СТАС СЛ САСССА ПСТТООСТОСААС ТС СОС АСТ САС ОО САТСАСТОЄ ОССТОСАСИСТИОАССАТСАСОСТСАТТАТТАСТОТОСАССАТОСОСАТО АСАСКССТОААТ ОВО С ОСС САССАССААССТИАСТТОЄСТА КО (ЗЕ НВ ЩО: 145) Поспідонність амінокислот варіабельної ділянки пегкого панцюга: ОозУТТОРРЗАВОТРООВКУ ПСО МІСВК ГУМУ УООБРОТАРКІ Ту ММККРеОСУРІКЕь КВОТ ЗАГАЛ АПУ САЛА ПпОВН У У гасу (КО МО: Я
Фіг. ЗЕЕ їв Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: КСАНТ САН ОСА СТ ОСА СААСААСССТОСИ ССП САСТСААС ССС ОСА АСИСТ СТО ТАСАССТТТАССАЄ СТА КС ТАТСАСКТ ОКО ОС ЗАС АНН КТ ОАСААССТ САС ОСА ПА ПОЗА ТСАССАСТТАСАА ТО ТААСАСАААСТАТОСАСА ПААСЕТСОСАСНИКСАПАСТСАСПТАТАССАСАСАСАСАТССАСОСАСЄ АСАСССТАСАТОСТАССТО АС АСИК СТО АСАТСТОАСОСАСАССН ТГТАТТАСЄТСО ПОССАСАСССТАТАСЄТОСС ЗАСТАЄ ПЕН НОСА СКЮСТА АСССТОСІСАСОСІСТССТСАУ БО АК НО Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого панцюга: Оу УОБОАЕУЕКРОАВУКУВСКАБСТ ТЕТУ КИОАРООСТЕУ КОСА ча МУАОКУОМОКУ ТМ ГТОТУТТАУМеЕ ВОСКУ ТАМ У УСАКОСУТКпУСНУ у тув ЗЕ: В Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки пегкого ланцюга: УСС АТО СКЛ САСТОАСССАСТТ ТТ РОСА ТСН СТО САС СХ АКОТ САСАСТСАССТОАС ТА АННИ ТАСАСТАСТТАТ СААОТОПАСТОО ТАТСАССАСАСАССАОС АКА НК АК ОГО ТАС АСТТОСАСАСТК СОВА САТ СА АСЮОСОССА АСК САТССОСТОАТСОСТІ СТАС ПНТ САС СТОААТССКН АТ ПАССАТСААСВААСАПТИСАОВААВАСАТОАСАСТТАСТАССАСТОТ СА САССАТОК АС ПИСАССААСТТОС КТ ОС ТАТ ПАС АССААОСТОАССОТОСТАУ СЕК МЕ 147 Послідовність амінокислот варіабельної діпянки легкого ланцюга: СРУТЛОРБКАВАВЕСАВУ ГТ ТСТІ Вот БУГУ УОСЕРОКОРКЕУМ КУП УСЗКОБОТРОКЕВУ ОО МАХІЛІКМОВЕВЕВОУ НССАН сс МЕУМУвО КТ УГ ЕС МО: ав
Фіг. ЗБ
МА Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: УСАСИ ОСА ССТАСАССАС ОСНО КО САСКАСТИ ОСА Ав АСССТО ССС ССТОС ТС СТАТОЮ ТОССОС СОСТТСАСНЕОС ОТАСТАСТОСААСТОЛА ЕС НАСОС ПАСКА ОА ТАТ ОСА ААТСААТСАТАС САЛА АССАСТАСААСССО СИТО АВАСТСИАСТСАССАТАТСАСТАПСВАСАССТССЛАВАЛОСА ОСС А АСТОААСТС ТО САС СОСАСАСОО СТО ГЕ АТГпАСТО ТИС САВА САССТОТССССТТ ТОСАСТАСТНКННИ САС ССААСССТН ІТ САССОССИ СТО САХ (ЗЕ МО: 14 Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого ланцюга: оУО ВОАС КРУЕ ТТ ЗСТСАМУССЬЕВАЖУККАИВОРНКОСЕ Осн ОК ТОМ ККУ ПЗУВІЗКЕКОКО КМУ ТАТА УУТСАК соусу УВО ЗБ О Ме: 5 Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга: УСАСТС ТИ ТОСТОАСТСАСССАСОСТСОАСССТ СТО САССССС НЄ АПА САССА СЕС ОТ СТОСААССАССТООСААСАТЕСССА АС ААТАСТОТААХААТТСООТАТСАССААСТИИС СЛОВА АСОНК ОКО САААСТ ССТСАТСТАТАОТААТААТСЛОЦНК КТ САС ОСС ОАСССАТ КИСТИККСТОСААСТСТНАССТСТАСКСТОССТОК КС АТСАСТОКСНІ СТОСАСТСИТАСОЛАТОАСККСТОАТТАТТАСТО ПОСАСТАТСНСАТОИАХ САТ ИаААТОС СН ОСНАСТКА АС СТАУ БК ЕМО: 149) Послідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого ланцюга: ОБУГТОРРМАВОТ РОКУ ПОСЬСВВМ МСГ УА УНК РОТАРКІІ ТУ ЗАМОК У ОККО ЗАВАОЦОМЕПКАБУ У САУНІ ВОМС УВО ОСТКСТУЇ СЕС ПМК 32)
Фіг. ЗНН
25А7 Нукпеотидна послідовність варіабепьної ділянки важкого панцюга: САС ТАС ОН ОА СТА ССТИАСОС ТТ ОСААСААСЮЄТОСЮ СТ САС ОДА СОСОК СТОК ГАСАССТТ ТЕ ССАС СТАТИ АТСАССТОИ ОСС АСАСНИКХ СТОПА САС ТАТ ОСА ТООСАТОСАТСАН ОСТ ТАСААТОТААСАСАААСТАТСАСА, САА АТАК КАСА САССАТОАСОССАСАСАСАСАТССАССАСЮ АСАСККСТАСА ОСА ТАТА СТОСАСАТСТОСАСОСАСАССКЄ ТТ АСТО КС АСАС АК ТАСОС ТТ ТА ТОСАС ТС ОН НА АССЮ АССАССОСОТСАССС СТО КО НМ 150 Поспідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого панцюга: ОСУДУ ОБСАВЕУККЕРОАЗУКУ СКАЗУ ТЕР ОЗ УУКОАРОСОСТЕУ МОЖІБАУМОИМІМУ АВК ООСКУТ МІТОЗУ МУ ВО АХЕ УСАКОУМІ ЖУСОСТТУ ГУБ (ЗЕСІЮ МО: 58, Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга: КСАСТСТИССТИаАСТСОАСССТО СТ ССО ТО СТЕ СТ ОСТ АС АСТСВСАТСАССАТЛСОИТОЕСТОСАСТОСААССАССАСТАССТТОСТССТЕ ТАТААТ СОС ТСИСТООСТАССААСАССАСССМХМСОС КАМ САА АСТСАТСАТТТАТОАССТ САС ТААТОСОСООСОСТСАСОС ТС АСТС ССТІСТСТОССТОСААС СТ СААСАСЧН СОС АССАСТСТ ЧАСТА САТ ТАТТАСТОСАОСТСАТАТАЄ ААСКСАССАССОТТОТАТ ТЕН СО САСЮСАССАЛАСТО АС ССТА ОКО ПМ: 151) Послідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого ланцюга: ОБАТГЛОРАВУЗОСОВРООМЯСТОТВЗВУуСКУ МУКУ УОНВЕРОКАРКУМ Те БУБМЕРЗОСУВ КРОКОМ АВ ІС ОАБЕОБАП СВУ ГУ УК СОСКУ Є (БЕ МО: 1
Фіг. ЗІЇ
Нуклеотидна послідовність варіабепьної ділянки важкого ланцюга: САБО ТСАССТО ТП ОСАСТСТОСАССТ СА ОО ТОЛАСААЄОСТТОС ССС САСТОА АС СТ ССТОААСНКТ ССО ТАСАССТТААССАЄ СТАТОСТАТСАНЄТО ОО КИ ЗАСАСНН СС ОСАСААСНИЄСТТОАСТ СИАТООСАТО КО САС ТТ ТТАТААТОСТЛАСАСАААСТА ТОСАСАЄ ААССТСООСАС НАС АСКАССАТИАССАСАСАСССАТСАССАССА САНИ АСА ТОВ АССТ САЛАТ ОАСАТСТОАСОАСАССОНСЮС СТАТТАСТО ПОИСОСАСАСССТАСОСТАТОСАССИТСТН НИК СААСЮ АССАСОСТСАССОТСТОСТСТАЕ ЧО о ЩО: ЗД Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого ланцюга: СУС УОЗСАЕУККРОАЗУКУВСКАВОУ ПТУ ОЗ КУКА ВСООСТЕМ МОЖУ УМОМІ МТ АСК КО РМ ГОРУ ТА УМЕСКВ УВО ТАУУ тСАКСтУСОМЛУХСОСТГУТУВУ (БЕН МС ЖИ Нуклпеотидна послідовність варіабепьної ділянки легкого ланцюга: САТ ССТАСТСАЦНТ ОТО СТ СТО АС АС СОСАТСАССАТС ТС ТОСАСТОСААССАССАСТОСАССТ ОС ОС ТАТААЄТС ТИ СТОСПОСТТАССААСАСКАСССАССЮАААСС С ССАА АСТСАТСАТТТАТОАСКТИ САСТААТОСК НЕТ САС ТІСТА АТС ОСС СІСТИ СС А0АСТС ТС СА АСАСОСССТОССТОАССАТСТСТ ОО ОСА СОТ ПАСА ССАСНСТОАТТАТТАСТОСААТТСАТАТАЄ АКХАСКСАССАССАТОСТАТ ТОЧНА АССААСНТО АС СТА и ЗЕ ТО КО: 296) Послідовність амінокислот варіабельної діпянки легкого ланцюга: ОЗАГТОВАБУВОВЗВООВПТСТОТВБЕПУсСУМаУ У ХОЗОНРОКАРКІ М ТУЕУМАРУСУВМКЕВОСВКВОМГАВІ ВС ОА АПтУСМ ТІ ЗМУ РОСОоТкТУЄ КОТ МО: 2
Фіг. 35.)
Конетантні домени ідб2 людини: АВІКОРЗУВРГАРСКЗТЗКЯТААГОСТУКОУЕРЕВУ УВУ МВОСАСТЬО УНІТРАУМ ОО СуУВі ЗВУ У ГУрРХІМВО ТО У ТСМУПИКрММІКУ ПТУ ЕЕКССУВСРРСВАРРУАОРЗУКСЕРРКРЮП ТС МІК ВвУу СУ УГА ОРЕ УУУВОСУЕУНМАКТКРКЕСОМОТ КУ УВУСТУ УНСО КЕКСКУВМКОГ РАТЕКТВЕТКОСОРКЕРОУУПРРаУКЕЕМТКМОУВОТ СОУКСРУРОАМАМАЖВУМОССРЕММУКТТРеМ ОО ОсгЕ УК ТУ ко АСОМ У КС УМиКАСНУМУТОК ВІР ОСК ОТ МО ЕХ їдб4і людини: АВІКСРУУВРГАРСТВІЯЕТААГОСТУКОУКВЕВУТУУМОСАГ ТВО УНТІЕВАУТ ОМС зУУТУрьа СІ КТУТОМУВАКРОМ КУТКУ ЕВКЕХОРРОРУСРАРВЕР СОР УКСЕРРКРКОТ МІРУ СУМУ пУВО ЕОРЕУОМИУУУСУВУНМАКТЕРЕЕВОРМОТУКУУВУСЄТУ НОГУ оКЕУкКСкУВчАСІГаНЕКТІЗКАКСОРКЕРОУУ ТВО МТЕ МОУ СКУКОГУРИЕНА УВУ БОМООСРЕММУКТТРРУСОВОСР У ВКСТУВ КМ МУГУСВУМНЕАСНМАН ТОК ОК (КОТ МО 155) Пямода людини; ОРКААРЗУТСТРРУЗЕЕГ ОАМКАТЬУСТЬБВЕУ РА УТУАМКАРЬЗРУК АСУБТІТРьКОВММКААВЗ М ТРЕКУ ВСОУ НЕСЕ УКТ УАРТЕСВ (ЗО МО: 156) і Капа людини: ТУААРЗУМЕРРУВЕ КОСТА ВУУСЬММЕУРККАКУОАКУПВАГОВО МОГУТ КОВТ МТ ТІЗКАПУВКНКУТУАСЕМТНОСТВВРУТ КЗЕМНОСвС ЗО МО ГУ
Фіг. ЗКК
ЗНн Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: УСАС ОСА ОТ ОСА СН КОСА ААСААСНЮТТО сп САС СААСІ ЕТО СССААСКСТ СОС АТАСАССТСА СКАТ АСТАТАТАСАЛЬСЄ ТОН ПОС АСАСН КС ОС АСААССИ СТО АСТА НАТО АСВ АСССТСАСАСТ ЕК ССААА СТАН АСАСААСТТТСАСНКИ НАС АССАТАСО САС НАСА С ОСА ТСАССАСАССТ АСАТОСАС САС АСКТСАСАТСТ пАССАСАЦЧН АС АТ ТАСТО САТАНИ АСТОВААСТА СОССАСТАСТАСАИИ ГАТОСАСО СТО КС ААСКСАС САС ТКА СОТ СТОСТСАУ БО ТО МОЯ 18) Послідовність амінокислот варіабельної діпянки важкого ланцюга: ВУОУУ АБУ КЕРОСаАВУ КУМ КАВОВУ УКОАРОЮСТ, БУ мМО ЖІН сАкАОКОСКУ МІК ГАУ МЕ ВК ТАУУТСАВОМУУМУ ТУ УСМИОУмУСсЮтТ У ТУ БО ТО МОЯ) Нуклгеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга: КСАСАТОСАСАТАСССАСИТ СТ ОСАЛОСС ТОСТИ СТОСАТСТОТ АССТАСАСАСАСІСАССАТАСТ НН ЗАС ТСАСАСАТТА СсССААТТАТ ТАС СИНН АТАКА ААССАССОССАААСТЕТОСТА АОС САТСТАТОСТОСАТСОСАСТТ ОСА АТСАСНВ НТ КАТ ССС ЕТ САС КАС СА СТОС С АСАСАТСАСТОТСАССА ТАК АСЦКСТАСАСКСТОСААСАТОТТОСААСТТАТ ТТ СТО СААА СОТ АТСАСАТ ССС АТТСАСТТ ТСН ССО АССААСОСТОС АТАТСАААХ (ВКО О МОЯ Поспідовність амінокислот варіабельної діпянки легкого ланцюга: ЕОМ ОБУ БАВУСІОКУ ПІСКАЗСОН НВК КАЖУ ЮКРОКМУРККІ. ААУ ОВБсУваКраСсВоВО ОТ ОРЕ АТС УСНА РЕ ТРОРОТКУТНК ЗЕ ТОЮ МСКЯЗ
Фіг. ЗІ.
за Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: САС ПОС АССТО ОВ ОА ОКО АКА НОСОК САС С СТО АСАСТСТССТИИ ОСА СОС АТСАСЄТТСА СТАОССТАТНККАТОСАСТО НИ НОЯ НСС ОСА САС СЛОВА СООСАСТТАТСТООТАТОАТОСААСТАСТАААТАЄ ТАТСАСАСТОССТТ ОА КАТ ССАССАТСТОСАСАСАСААТ ТСААСЛАСАССЛОТАТСИС ТО САЛАТ АСАМЮЄТОАС АЕН КА ССАСАСЦСОНОСТСО ТО ТАТ ТАС ОСА СО ТСАС ТО ТАССА СТАСТАСТАЄССЯК ТА ОА СЕН АК САС АССАЄЮАКІ СА СОТ СТССТСАУ КО ПУ МСКЯОО Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого ланцюга: ОУС УВС МУ ОРВК ВІ ЗСААВОСК ЕЕ СМ МУКОАРИКОЇ, ЕУУАУТАУТОСОЗТКЖТАПВУКОКОТБВИМчЕМІ ОМА ТАУЖУСАНВУАСУНУУУОМОУ КСО УГУБВІБВО МО Я Нуклпеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга: УТА АСТСАСНАСССТ ОТО СС АСАСАСАОТСАССАТСАСА ОСС АСК САС АПА ААССТИЮТАССКМТКАСААССТААСАСАННСОССТОТА СТО ТСАТСТАТООСТААЛААЛАСТАЦЄСОНИ КС САС АС АСАС САТ ТС ТОНН ОО САССТОАССАААСАСАССТІЮТІСАССАТС АПК НАСАЛИКА АСАТОАСКАТОАСТАТТАСТИИТААСТОЄ СК АСАССАТ КТ ААССАТСТОН НН АСОМ АССАА ОСОБА ССТА КЕ ТО МОЯ Послідовність амінокислот варіабельної діпянки легкого панцюга: БЕ ТОПРАУВЗУА ТЕ УКПСОСОБКСУТАТУУОЮОКРЕОСАРУТУ ГЕОКМУВРКАРОВЕБОВІ ВОМ АМЛІТСАСАВОВБАВУТУСМВАВМО МНСУКОСОсТК ТУГІ ЗО 10 МОЯ
Фіг. ЗММ
ЗАВ Нукпеотидна послідовність варіабельної діпянки важкого ланцюга: КСАС САС ОН ОА СНАСТІ НТ АКТІ ОСА ХТО АЗАСТС СО ОСА СОС АТІСАСЄТТСА СпАССТАТН ПОСАСТН ОА САСНСТААСЮЮЮ СТИАСТНН ОСА ТАТАТООГ ТАСАТОСААСТААТАААТА АПА АСТОСО СА АССНК А ТОСТАССАТСТОСАСАСАСА АПпПССААСБААСАСОЄСТО АТС АТОААСАНСТТО МИ АОЄ АС АСАССКСТО ТО ТАТТАСТО ОСС АСК САС НОСТІ ТАЄ САСТАСТАСТАССЮТАТОСАССТ НН СААСАСА СО САС СТОСТСАВК ВЕС МОЯ201 Послідовність амінокислот варіабельної діпянки важкого панцюга: УСС УЄЕНОССТУ УОРОКВ КЕ САЛОНУ АРИКО Є УА ВБМКУ хАПЛОУКОКО Кам ОМ КАК АУЖУСАКЕУАСУНУУУСМОУ МОЮ ТУТУВО га І МОСТІ нукпеотидна послідовність варіабельної діпянки легкого ланцюга: УВС ТСАСТСТАСМВАСССОСТ ОО СТО ОТ ОН АКСАСАСАСТСАСЗАТСАСАТОИССААОССААСАССТСАСААСІТ АГТАТО САЛО ТОТООТГ АССАССАСЛААСОСА АПА СТА ОСТ САТСТ ТК АААЛАСААЦНН ТОК ЗА ССАСАЄС САС ТССАССТСАССАЛАСАСАСТ ОСТ АССАТС АСК САН ААСАТАСКАТСАСТАТТАСТОГААСТО АКННКОСАСАТСАТТООСТВАССА ТС ОП ТОАКОС АН АССА АОСТОАССОТОСТА У (БО НУ МСКЯОВ) Послідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого ланцюга: жНАЛТОБРАВУАН УК СОСОБ КВУ УОЗ ООКРЕОСАРУ ТУ РОК МкКРЬСІЇВОК БОМБ МАСА ОСАВОБАЮУСМЧОКОНОСО нг КУ ГКС МОКЯОЯ)
Фіг. ЗММ
КЕ Нукпеотидна поспідовність варіабельної ділянки важкого панцюга: КСАСО ГАС ОА АСК КН АС О ОС АС ХХ ТАН АСТО СТО ОСА СТТОСАТТСАССТТСА ОССААСТА НС АТОСАСТ НИ СЕН АС ААСЮСИ СТАС ОКА ТАТА ТП ТОАТасСААСТААТАЛАТАС ТАТ АСЙАСТО С ТСАЛССН КАТ ОСАССА СТО САС АСААХЕ ТСАХАЙАХАСАЙОСТТОИ ТАС ТОСТААТОААСАСН КІ САСАСЮССА ССАСАСИННКЛОТОТАТТАСТО ПОСОСАСОСТСАСТОСКТ ОСТ ТАССА СТАСТАСТАСЄСОСОЮ ТАТО АОС КАС АССТАССНА СОСПСТОСТОСАаІЧВЕО ТО МОЗ Послідовність амінокислот варніабельної ділянки важкого ланцюга: ОУОСУЄМ ТУ УОЗ КОСА АВаКТЕКМУ СОМ УКОАРСВО У АУРУвОСВМКУ УА АВУКСКУПьКрУВКМТУСМКаКАБО АУУТУСАКНЯУАОСУНУУУСМОУ КСО ТУ ТУВ(ВЕО ТО МОЗ Р, Нуклеотидна поспідовність варіабельної діпянки пегкого панцюга: етТСстІСствАОСТвАСТОЗОвВАСССТОСТОТО ТСТОТОСССТТОвОЮ АСАСАСАСТТ САВА ТСАСА КИ САЛО АСАСКАЛСАСААССТ АГАТ СААСОСЄС ПИТ АССАССАЛААСССТААСАКАСКСССТОТА СТЕ САТСТАТОС ТАКА АСААЦНН САС АТСИССАСАЄС СОААТСТСОТНКИО САМОК ОСАСЮАЛАСАСАССТТССТТОАССАТС АТО НН САН НКТ ААСАТ АСК СТОАСТАТТАСТОИТА АТО СО АСАТСАТ НТ АССАТОТОС ОТ ОКСАНА ААСТОАССОТОСТАУ ЗБОЮ МОЯА2У Послідовність амінокислот варіабельної діпянки легкого ланцюга: БТ ОСА ВУАО ТУКА КрКОАРУ СУ УОокУМкРЗОЇВОКІЗСсСВІВОаМТАВЛ ПП сАОАВОБАВчСКЗАТ ОУБ ТАС У Є (ЗО 1 МОЯ)
Фіг. 300
Нуклеотидна поспідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: САС ОСА ПОСАСТ СТОК САС ГО САТ ОСА ОКО АИЙАСТСИТ СТО САС СО АГТТСАССТТСА СТАССТА ТИСА ТОСАСТОКСН СОС КАСК СТ САС ААСЮЮИ СОВА ОС ОО САСТ ТАТА АТСАТОСАЛАСТААТАААТА. СТАТ САВА СОСО ТА АСО АТ ТСАССАТСТОСАСАИВСАА ПССААПВААСАСНСТ СТАТ ОСААЛАТОААСАСКЛТСАСАСНХІЗ АКМАСАСИН ТО ОС АТ ТАСТО САС АСА ТОК АСТОЗАЄ те АСК ААСОИКТСАССОИТСТССТСАЯ (ВЕС ЦЮ МОЯ) Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого ланцюга: У Уест У УРОК КАВОВІ ОМ Ж УКОАРСКСЇ. пжУАУГУХІЬкКУ ТАЗУ ОокКеяКОокеКМ Мк КАК ТАЖ СУКОКОС ПАСТУ ТУ ЗО ПО МОЯ 35І Нуклеотидна послідовність варіабельної діпянки легкого ланцюга: КЛАС АС АСЗАСОСТОТ СОТНЮ АПСАИНЙАДСАСТСАСОСАТСАСА ОСС АСЙСАСАСАНК ТТ САС АПА КСААКССТЕТАССАСКСАЛАКМНКСАААСАСАСНК КС КССТОТА СТО САТАНИ ААЛААСААМКНКН КТ САСК АТО САЛА САТ СТИ СКС ССАССТС АС АЛ АСАСАСКСТ ТССТТОАССАТС АТО САС ОА АСАТО АКТ ОАСТАТТАСТОТ АОС п АСАССАС ТСН ГГ ЗАСТСА ТС ОТО ТК ОА АСА АС ОАССОСОТОСТАХ ДОО МОЮ Послідовність амінокиспот варіабельної діпянки легкого панцюга: ВТО АОС ОО КОС КАВУ УСИК РКОАРУ КУ ПО кМчАРаЗОТ ОКО ОМА ТО ОАВОКАвУ УСЕ ВО ВНУ КОРУ КО ТО МОУ
Фіг. ЗРР за Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого панцюга: исАсС ОСА ОН ОСА СТ СКАН НТ ССС сн ОСТ САС АСНТССТ ОО ОСС АССОСТСТСОСАТТСАССТ СА СТААСТА НС САТОСАСТ НК ТС АСН НОСА ААСЮН СТАС СКС КА САСЇ ТАТ ОС АТОСАТОСААСТАСТАААТАЄ ТАТКСАСАСТСО СТОЛА КАТ КСАССАТСТОСАСАСАСААТ ТСААСААСАССКСТ ОТА СТО ААТИ КАСКИ ОСА Ос АСАССЄСТО ТО ТАТТАСТО ГТ ОССАСИО САС ОНКО ТАССА СТАСТАСЄТАСЄСТА ТОСАСОС НОСИ НА АКА СА ОСС тТеСтОСстедачВЕО ПО МОВ Послідовність амінокислот варіабельної діпянки важкого ланцюга: У УБн У ОК НК СА АВОК ТЗ МНК УКОАРСКОЇ, ЕУУАУуАУпОсяКУ АПУ КОСКО ЗОМ ТУ УА ММКАВО тТАУХУСАКВУАСсСУНУУОоМП Ус У ТУувВ ВО ГМО Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого панцюга: КТС ТСТСАССТАСТСАССАОСТОСТ ОСТ СЕКТ СЮ АСАСАСА САС А ТС АСА КИ КА АССАСАСАСНКТ САВА АТТАТНКСААСН ОН ТАССЛХД,ОСАСЛАССААСАСАЛОСККЮТОТА СТО ТСАТСТА НЕТ АЛАААСААСЧН НК СТАС САТСОСОЄСАСАС ОСПСПАТСИССИСТО ТТ СОСПАССТСАССА А АСАСАССТІССТТСАССАТО АЛЛО ССО ЗАС АТО АКТ ОАСТАТТАСТОТ ЛАСТІ СОСКИ АСАССАСТТ ОС ТАССАНСТОО ОС ОХ НО АС АССА АНТ ОАСОСОЄСТАХ ВЕС ОО КОН Послідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого ланцюга: МЕ ТОВРАУВМАКОТУКСОСОВ КОТ АУРА АРУВУ ГОККчЕРНЯ РОКОМ АВЛІТОЛОАВОКАпТУ СВК НСУкООС КУ ВКО ПУКОЯЯ
Фіг. ЗО0
«А Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: КСАССТОСАССТОС ОА СОННА ОН ОСА опа ОК ОА СТ ССО ОА ОСС ОА ТТ САС СА ОСТАЄСТА НА ТОСАСТН НК ПКС САСКЄСТ С САНТА СОС АСККН ОО АСТТАТАТССТАТА ТОСОЛ АСТТАТАААСА СТА АСАМТОИ ТТ СААКИ НК АТОСАССАТСТСОСАСАСАСА АСТОСААОСОХАСАСЄ СТАС ОСА АТСААПАСНИЛ ОС АС сАСОАМАСОСТО САТ ТАТ ТО ЧНО АСКО САС НКИ ОС ГТАС САСТАСТАСТАССОС ТАТ ОСАСОТСЕ КН САН АКАСН СсАССВІСТОСТСАУ НО ТО МОЯ) Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого панцюга: ОО БИУ МОРОК БСААВОГІВМТОМН У УКОАРИКОЕ хмУАУГАКІЮВУКОиУАПВУКОВаВІБВОМКМТ ГОМ МО КАБ Ач САКВУАСсУНеУХСМУУсО УГТ МОкаЯх Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга: КТС аАСТСАССАСССТТО ОО СТОЮ АСАПАСАСТСАСОАЛТСТАСАТ КАСА АСАС СТАС ААССТ АТТАТ САЛАТ ОСТАССАММСАСААСКСААСАСАСОССНСССТАТИ СТО САТСТАТОСТААХАААСААСККН Я СТО АСЗАТЕССТАСАЄ СВАТИ ОКО САС СА ОСААТСАСАССТ КТ ТО АССАТС АСТОНК НН САС КЛ ААСАТАССИКТОАСТАТРАСТОГАААТС СС АСАТСАТ ПО ТААССА СТО СН ТАС АСТАА ОСТ АСОССТТОСТАХ (ВЕС МЕККА) Послідовність амінокислот варіабепьної ділянки легкого панцюга: ЗЕ ОВРАУВУА ОО У КО ОН ВТ АВКУУООСКРЕСПВАРЬУ! ОКУ РЕСО ВОКЗАЛ САСАБОВАВУ СКЗ ОПИМ НОБСсСсСсТК ТМ НО ЕК ЯЯ У
Фіг. ЗЕ зад Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: УСАСОССТ АС О СК СККАСН АК С АССТТСХ ОаАОО КАТ ОС АЛЙАСТОС СТО ОСАССО СТ ОСАТТСАСССТОСА СТАССТАТОИККСАТОСАСТОН ВО ОС НАСК АНОНС ОО ОС ОСА САТАТОИС ТАТА ТОСААСТААСАЛАТА СТАТОСАСССТОССТ ТО ААССКСССАТ ТСАССА СТИ САС АСАСАА ТССААСААСАССИЛТОТАТСОСАЛАТОААСАССТОСАСАСККО АСАСАСССТОТОТАТТАСТОЇ НА ЛАСКИН НТ СОЮ АТ САТЄТАСТАСТАСТАСОСТА ТО АСО СО КК СА АОС АССАССОСО ТТ СОАСОСС СТ ССТСА КСВ 10 МОСК) Послідовність амінокислот варіабельної ділянки нажкого ланцюга: ОО АВОСОСУУОРОКО КЕ ВСЛАВСТ ТСН УКОАРОСЮ, ЕУУАУАУОСВМКУААВУКСВТОКОМКМТ ОМ КАС ТАУЖУСАКОСОСВОБНЕТ У ОМП У СОС У ТУ БЕ ТОЮ МмСка4 Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга: КТСТІ СТАТИС АСТСАСОСАССОССТОСТО СОСЕН ТСН АСАнАСАС СА АТСАСА ТОК САЛА СТАЛА АССТ АПпАТОСЛАЛСОИСТО ГТ АССАССАСА АК СА АСАСН СТАТ СПО ТСАТСТАТОЮТАААААСААССОС ССС ТСАСКЗАТОКССАСАС СВАТИ ЕС АССТСАССААТСТАСАССТ СТ ТИ АССАТО АСК САСИЛАСАТОАЛСНТОАСТАТТАСТОТААЛАТС СИН ЗАСАТСАТТООТААССА СТОЮ ПОС СОАСОСАСТАА ОССТОАССОСОТССТАУ (БОЮ МОКАЯЕ Послідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого ланцюга: УВІ СОЮРАУВУАІЮ УК ККУ ААУ ЖООКРЕВАТЕУ ОКА МКРЕОТРОКВОВ ГНН ТАМ ЛТОАОАКОБАСУ УСКВКОПИ М НЕК КУТ БО ТО МК ЯЯН
Фіг. 355 ЗА
205.1 версія 1 (1) Нуклеотидна послідовність варіабельної діпянки важкого ланцюга: УСАСО ОС ААС ПИСК С АСИСТ ОСА ОСС ТО АСАСТТССТТСОИОСАССХ С ТОСАТІСАССТСА сОІААСТА САС АСТ ННЦ АНТ АНСААСНК ОСНО АС СК ОКОСАСТЕ БРАТА ТА ГСАТОСАОСІЛАТААЛАТА СТАС АСАСТОС ЧИСЛО ЗАТОСАТСА ОСА АСАСАА ТССААСБАСАСН ТО ТАТС ТС ААТСААСАСНТОАСАССО АССЗАСАССН СТО ТАТА ТКС АССО САС НТ ОСТ ТАС АПАТТАСТАСОСТАТОСАЮ СОННА М САС ССО СсстеАУ БО МОЯ Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого панцюга: ОУСУУВВОССУ ОРОС ААВОКТОМ МН УУКОАРСЬКСЯЇ, пУчАУМАУМІХСчАТАрЗУКОСОКВИЗВОМеКУТ У ОМ КАСИ АУУУСАКВУАСУНХУУОМПУ КОЮ ТУТУАВІЧЕС ЦО МОЯ Нукпеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга: САС ТСТОСССТОАСТСАСССТОССТ ОС ТО СТ ОО СТОЮ АСАСТОВАГСАССАЛСИТ КОС ТОСАСТОСААССАСОС АС САСС ТО ТС ТАТААСТОЕ ТО СТОСТОЮТАССААСАСАС САВА АМОСС ГП САААСТСАТСА ТАТА САСТААТ НС СТОСАСКСАТ ТСТААЛСОСТ ССО ТОСАВИ ТСН АсАТ АОСАТСТСО ТОНН ОС АС НТ САС АССАСОСТОА ТАТ ЕТО АСКЛТСАТАТАСААОССАССАССА ТО СТ СН ЗАСН АССАА ОС СОТ ССТА ВТ (ЗЕО ТО МСКЯ5 Послідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого ланцюга: ОЗАБТОРАВУ ВОЗ ПТО 1 ЗЕ УСНТУ МУ ЗУ УСЮНРИКАРВК ГМІХБУМЕРООТМКЕБОоВКОо МАМ ОО АКОКАрВКСВУТГ ЗМУРСОСОСТКБАУТаВКО ТО МОКАВІ
Фіг. ЗТТ щНИЕ5 - версія 2 (У2) Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: УСАСС СА АСК ОА СИН АСК АНА СПАС ОСТ АЧНАСТ ССО ОТ АСССОТ СТО АТТСАЄСТТСА СТААСТА КА ТОСАСТОН НО СОС САС ОА ААСЮЮИХ СЛОВА СНОСАСТТАТА ОО ТАТСАТОСАСОТААТАААТА САПКСАСАСТСЮ ТС ААСНКНН ХА А ОСА ТСАТСТОСАСАСАСАА ТССААСВАОСТАСОСТИТАТСИТ ОО АЛАТААСАСЮСТОАСАСН АСАСАСОССТТО ГТ ТАТТАТ ТИССА САН СОТ ТАС АТПТАТТАСТАСЄССТА ПОЗА СТОК НОСА АС АССАСНИСА СОТОК АК (ЕС ТО МОЯ, Послідовність амінокислот варіабельної діпянки важкого панцюга: ОоУОУУгБеБУ ОРОС ААВСОКІГЗМ СМАКУ УКОАРОКОЇ, ЕУАУУтТюСсчКУА,ОоВУКОоКаКОУВКе ОМВК АБОТ АУтУСАНяУАСУН МОУ ОТУТ УМАВ(ЗЕСІЮ МО455 Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга: КТС ств ОоСтТИаАСТСАСВАСОСТТОСТО ОТ СТО ОСС ОО АСАСВАСАТТСМАТСАСАТ С СААССАНАСАСТЛСАСАМНЄСТ АПпПАТСААЄСТИ ТТ АССМСЛСААСИССААСАСАКК С ЄСТОТА СПО ТАТЛТАНОЮ ТАААААСАКМСОИО СТОЛА САСАС СИаАТЕСТСОИ КЕН ОСА САС АААСАСАСНС ОСТ ТЕО АССАТС АТО САС АСАТАСОНТЗАСТАТТАСЛТОТААСТОЄ СП АСААСАТ НТ ОАССАТСТНИ ОТ ТСООК АОС АС СА ОССТОАССС ССАВЦІ ВО) Послідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого ланцюга: ЗЗР АУВУАООТУКПОССКНИю КОСУ АБУ УСЮ КрРЛАВУСУ АМУР РОВОМ ТАВІЛТ ОАЕ АВУ УСВА ПАЕСУВОСОСТКСТУТ ЕС МОХУ
Фіг. ЗОШ
Аз Нуклеотидна послідовність варіабельної діпянки важкого ланцюга: УСАсрсГ АС ОСА СОС АСК САСКАКЮТО НИК СТ СОАСАСТСТОСИСТО ОСА ССС АТСАСЄСТІТА С АССТАТПОСАТОАОСТО ОО КОС САН ССАСКЮСААССЮЮ СТО АСО ОО АОСА ТТ ААААСААСАТОСААЛОТСАСАЛАТА СТАТИ СОСАСТТ ОТАК ЗАТ ТСАССАТСТООСАСАСАСАА СССАССААСТСАСТОИТ АТ СТОСАААТИААСАОССТОАОСАСОС МАСА ТО ГОТАТТАСТ КЗ АСАСАТСТТОТАТТААТОЄ ТСОТАТОАТАТАСАСТАЄТАЄТАСЄТАЄСЮ ТАТО АСС СОН НЮЄ АМС АССАСС ТТ САСССТСТОСТСА ВГ (БО МОЯ Послідовність амінокислот варіабельної ділянки нажкого ланцюга: БУС УДЕНЬ ЕБаУуМаУКОАРОКОЕ чУУуАчкОоросзЕКУрВУкКакг пат ОММОВАСОТА УЖУСАКОСУТМУУТНМрВУУУУОМПУ КОСТІ УГУВОВЕО 10 Мказ9) Нукпеотидна послідовність варіабельної діпянки легкого панцюга: УСАТАТ СА ТСАСТСАС СТ СПАТИ ОСТ САС ТС АвАСс НОСА ССС СТАС ТСАСАСНЄСТЬСЄСТТ САТ ТААТСАТАСААСТА ТТ ТТОСАТТООСГАССТОСАСАЛОСС А САСЕССТОСАСАССТОС ТАТА ГТС ААТСОСОС ОСА а ОСС СОАСАНН САС ОСА ТО ВАТСАОСАСАЄ АТТТТАСАСТАЛААТСАСЮАСАСТОО АСИСТ С АСОСАТО ТОЮ ОСТІТАТТАСТСА ТТ СААОССТТАСАААСТИЧ НТ САСТІ ТСН ОСПВАСОВАССААСОТАСАСАТСАААНТ (ВЕС ЇВ МСКЯВОЇ Послідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого ланцюга: ПУМТОБРСХРУТРОВРАМЯСКЯВОВО НКИ МУ СОУ ООКрРОСЬ РОЛУ ска УВОКЕВОВО ВО ОТ КОКУБАЕЛВУЛУ У УСМО АМЛУТРІТЕОСС ТЕКУ КК СО 1 МОЯ
Фіг. ЗМУ па Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого панцюга: КОСА ОСА СН КАС АТО Са КАТА АСТСТОСТООАСНКЗ АТ САССТЕТА СТААСТАТІСОСАТОСАСТН ОО ПОС САС КАСА СТАС ЕН НН АСК АТААААСААСАТОЗААСТОСАСАААТА СТАТ САС КАСА ТСН АКА ТС АСАСАСАА СС СААСААСТСАСТИЕИ ТЕСТ АААТСААСАСНСТ САС СО АОЗАСАССОС НО СК АТТАСТО ОСОАСАСАТСТТСГАСТААТОСІ ТТАТСАТАТАСАСТАСТАСЄТАСТАЄСОЮТАТОСАСО СТОЮ ААОССИСАССАСОСТСАССОС ТТ СТОССТСАХ (ЗЕО ОО МСКЯОО) Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого ланцюга: КУ УВК УСИК КІ ЗСААЗСОСКТЕМ УМА УКОА ОКО ЕММА КООС5ЕКУУраУКСКРАВКОМАКМаН ОМ КАВИ УЖ ТСАКОСУ муру сМОУ СОС ТУГУ ВЕСНОЮ МОЯ Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого панцюга: КОАТАТОГ АТО АСТСАСІСТСОСАСТС ССС ОСТ ОТ САС сан СТАТСТ СТ ТОСАСС СТАС САСАСССТСЮТЬ САТАСТААТ КИ ГАСААСТАТІ ТОСА СГ АССТОСАСААСЮСА САС СТ СОССАСАСЮСТСО СТ САТСТАТТ ОС РСТААТ НЄ ТК ТАС САС САС ОСА ТАС АСАСАТ СТАСАСТОЛАЛАТСАСАСАСТ ОСА ОАСОСАТОТТОСАС ТТАТТАСТОСАТЕСААЛАСТОТАСАААСТОССОЄСТСАСТІ ТСОССЮВ АК АССАЛОСЮ КОС АСАТСАААУ ВЕ МОЯ Послідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого ланцюга: ЛУ МТОЗРІЗРУТРОЕРАМЬСКВЗВОВ НЕО МУ ГУ РЕ ОКРОСЬ Ва СсВМКАВУРІЖЕВОВОО НІЛ ККУ ВАВВУСУ ХУ СМО ПОТ ТРОоСсОС ТКУ ВЕОО КОЗо
Фіг. ЗАМ
МН Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: САС ОСА ОС ОСА СОСКА САС ОСС СТО АСАСТОТОС ТО ТОСАССО СТО АТТСАССТІСА «ЧАСТА СА САС СС САСНККСТССАООСАЛОСЮВ СТАС ИН КОСАМИ ТАТАТАСТАТСОАТОСААТТААТАААСАЄС ТАТОЕСАСАСТСОСТ АСК САТ САССАТСТОСАСАСАСААТ ГКСАХЩААВААСАЦОСТО А ТСТОСАЛАТСОАХАСАСТТО Аза СА СПАСА СТО ГОТАТТАСТ НО АСАСАТС НН АСТОСАСТ ТИСА АСССТОИ САС СТССТСАХ ВЕС ОО ОКО Послідовність амінокислот наріабельної ділянки важкого ланцюга: ОО АСРО КН АГАТ СМ Ж УКОАРСЬОСЇ ЕУУАУГУН КУА УКОСКРТВКОМЗКМгО ОМ КАСКО АКТУ САВОКО УСНУ гу ЗК ТО МО Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого ланцюга: УСАСАТЧИСАТОАСОСАС ТС ТОСАСАСТОССТОК СТО ТС СТ СН САМА НК АССАТСААСТИСАДАС С АСССАСАСТОТТ ТтТАТАСАССТОСАЛАСАСТААСААСТАСТТАСП ТО ТГАССАССАСА, ААССАСАСАОССС СИС НКТСАТТТАСТОННН ТС АС СОССААТОХККНО КЕ СТ АСОЗАТ САТАНИ ЕСТОЮСЮ АСАСАТТТСАСТОСОТСАССАТСАССАОНССТ ОСА ОА АсАТ ОССАСОТТТАТТАСТО СА АСААТАТТАТАСТАСТОСО ОСА СКЛА АСКЗАССАЛО ОА ААТСАААУ (ЗБОРОМ ОКАБК Послідовність амінокислот варіабельної діпянки легкого ланцюга: УМ ТОБ ААУ КА ІХС ВВОВУ ВКМ У УКР ОРЕ АКБ УРІЖЕСЬОСВ ПОЛТАВУ УСО ОохуУВІгуУТаСс ТКУ 13 МОЯ
Фіг. ЗХХ пе Нукпеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого панцюга: УпАСОТОСАСИТО ОСА СН АСНОСТ СОТТОТАСЮТТСЯ СК СС САС АСТОСИ СТО ОСА СТО АСТСАССЄТТТА сААСТТПТТ ОСА АСНИ НН САКАК ССАСОЮОЮ ЛАСЯ СОС АСО КИ НА АСАТЛААСКСААСА ПОЛА АТСАТАААТА СТАТ АСТ ТО САС ЗАТ САССАТСТОССАСАСАСАд ПН СААСААТІСАСТО ТАТ ТОСАААТСААСАСКХТСАСАСКЮЮ А АСАСНКАЛО КГ АТТАСТТСО КАСАСАСІСАААСТОИСКИА ТОСТІВ АТА СН КК СААСОСТАСААТО УТ САСССТ СОС ТСАУ Бр ПО МСА Поспідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого ланцюга: УС ВОсСо ОРОС КОСА АВОС ТОМУ Ме УКОАРОКОЇ. БУУМАМКОМрОМОКтУУУПВУКСК ПКП МАКМе З ОММВі КАК ТАУТУСАКЕБ УСТАВ УСС МУ ТУВВІ ВЕС ПО МСАТ Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки пегкого ланцюга: КСАСПСИТТОИ ОСТ АСТС АНА САСССТТ САС СТ ОО АССОСОЮ сСАСАСКО ТСАССАТСТС ТО СТО ААССАСАЛОСААСАТОСО ААСТААХААСТОТАААСТН ГТ АССАССАСТ ОС САСОААСНИНКСС ССААДАСТСОСТСАТСТАТАСТААТАА ТОННАХ НА КСАСИ СЮ СТСАССОЛАТ ССС ССААСТ СТО АССТСАСС СТОК СПАТСАС НН ТССАСТСОСТОАССАТСАСКНКОІЇСАТТАТТАСТОТО САССАТОССАТСИаАСАНСТОААТТОНО ТО ПН САСЮСАСС ААСЛИАССОТССТАУ (БО МСА Послідовність амінокиспот варіабельної ділянки легкого панцюга: УГТ ОРРМАВСГРООКУТВСЬОСЗВВМКТУМУУООВТРОТАРКИІ, ГБАМККРЬСТУ РІВ ЕВОСБКВСЗАЗАТОЇОВЕКАВУ У СААЖУПО Соч УгОсАСЕКЕТУЮ (ЗЕСО МОЯ
Фіг. ЗУ
ТБ Нуклеотидна поспідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: САС ОСА ОН ПОМНАСІТС ТО СОАОТОНО ГОСАСНЮТТСЯ ска ХК АНВАСТТССТО ОСА СТ ОСАСТСАССТТТА ОСТААСТІ ТРОСА ТАС ОСА САСННС САС АЛСНЮЮ АСК КАСА ТАААСТААСА ТАМИ ТСАСАААТА СТАТИ ТО АСТСТО ЗАЛА ПАСА ТСТОСАПАСАСАА СССААСААТ САС А СТО АААТСААСАС САВА А АСАССИНИТИ ТО ТАТТАСТО ККАЛ АСАСТСАЛАСТОСНИТА ТТ АТАК НН СА АСК А СА АТО САС ТСАУ ЗО а МеКЯ7Я) Поспідовність амінокислот варіабельної ділянки нажкого панцюга: БУС НН ОК КСО ТЕМ УМА УКОАРОИКИЇ, ВУ УАМІКОТ ЮТЬ КУчУрЗУКСВЕТьКОИМАЕМО ОМ ММН ЕАВЕШТЕ АУУУСАКВОЗАУСТАВУСс СГ МУТУВВ ЗВО МОЯ КНуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого панцюга: УСАСТСН ОСТ АСТСАСКЮ АК С ТОАСЮСС ТС ОО АС сСАСАСИ САССАТТ СТО ТС ТЕС АЕН ЛЕ САААСАТОССК ААСТААААСТОТАААСТОИТАССАССАСТ ПОС САСОСААНИНИЮ СПАААСТОСТСАТОСОТАТАСТААТААТ ЗНАНИХ СОАСНКНИ СЮ СТАС АТ КОТИС ОСА АСТТСТОО НС АСССТОСССТТОЮ ССАТСАСТОКНАКЛСОССАСТСТИАССАТОАСНК АТО АТТАТТАСТОТО СААСАНСАТСАСАСАСТОААТТОСНКН ОН СС АС АСЯ ААССТпАСССОТОСТАХ СБЕСИТО МО470) Послідовність амінокислот варіабельної ділянки пегкого ланцюга: ОзУСТОРРВАЗСОТРОЮКУ ПОІСВСсВАКЧ ЗК УМА ОСТРОГ АРКИ. ГЗУМеКРОСУ РОКОКО ВАЗА ОЗ ОКАТУ УСАТУ ВОК СУС АСТККМ УВО МСАТ
Фіг. 377
Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: ОВО САС ТАС СО КОТ ОС ААСОСАС АСАСАСОСТСАНО ТТ САС АСК ССС СТ САСТСАЄ СААТО ТТ ТАЛА АТОСИО ТО ТАС АОС САС САС А АСККОСТОАС ТС ТОСАСАСАТТ ТО ААТОАСОСАЛААТІТ ССТАСАСААСАТСИ СТАКАНА САССАТСТОСОСААССАС МАС АААНКЮ А НСС ТАССАТОАССААСА ТАС СО АСАСАСНКСАСАТАТТАСТО ОСА АТАСТТ ОА АЄС ААСССАТАТНИТІТТОАТАКН НК КАЛ АСААТСИКИ САС ССТСТСТТСАУВЕО КОКЯТЮ Послідовність амінокислот варіабельної ділянки важкого ланцюга: ОУТІКЕБЕУБУКРТЕТТЕТСТУчОВК ЗМУ МОУ ВУ ТОРРОКАЇ, БУМБАШЕВМОЕМВУКТе КОКО ОУУЕ ТМ ММОРУ МТА УУСАКГУСАТТОВАТНАУС КОСІ МУ ПО МОЯ Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки легкого панцюга: ЄЕС ТАТТОСТОАСТСАНСАССЄСТТОСЯ Я ОСА НК КАС АПАСЛАСОК САЛАТ ТАТО ККАЛ АСАЛАСАТТОИЛААСТА АААСПТСПНАСТН ТТ АССАССАСААСН САС САН ТОГО СТОК СОСОСТСТАТаАТ ТАС АСОСОНОСТСАСОС АСИСТ АС САС ЛОСОСААСТСТТИ КАСА САС АССАТ А САН ОА КА ОА ССЗ АС ГРАСТОИ САС а АТАСТАСТАСІСАТСИСТО ОСТАП САС АСК ОСАСКК СТАХІВ МОХУ Поспідовність амінокислот варіабельної ділянки легкого ланцюга: БУГ ТОРРБУВУАРОСТАВ ССС УМ ВУНАУ УОЗ КРОЗАРУГУ Ух ПОПЕРЕЧНЕ РЕКВЗСЗМЯСМ ТАТІ ЛІВУ БАСОВБАБЕЖСОУу Хр МОРУУВ КУТ СВО ТО МОВІ)
Фіг. ЗААА
АТ Нуклеотидна послідовність варіабельної ділянки важкого ланцюга: КОАОСТОСАСОСТОИ ТОСАО САС ТО ТССАСССТТО с ЛИ АВАСТСТТ ОСИ АСК ОСА САССТІТА ОТААСТАТ ОСА ТАССТОИНОИО ПОС КСАНСТТ ССО А АСНОЮ СТАС ОС АССАТАААОСААСА ГА АСТСАСАСАТА САТ ОСАСТС ОТ СААКН КАТ САССАТС КС АСВАСАС СИСААСААСТТСОИО СТО ТАТСТОСАААТОЛАСАСНСТТО КАСА СИАСАССННТ ОГО ТАТТАСТО КИ САСАССТОСТ ТО ТАСТААТОЄСТ САТ ЛТСТАСАСТАСТАСТАСЄТАССОТАТОСАССТОС ТНК КА СаССАССАСООТСАССОСТСТОСТСАУ СБС МОЯ Послідовність амінокислот наріабельної ділянки важкого ланцюга: У ЕВОосиУОРОСО ВГС УМГ УКОАРСТККЇ ЕУУАМКОрОоСКУу УВУ ОКА ОМ МО КАКОТ АМУУСАВРСУМУТАСНУУУСМИУ УСНО УТУув ЕС МОЯ) Нуклеотидна послідовність варіабельної діпянки пегкого панцюга: КСАТАТТО ТАТО АСТСАССПОСАСТО ВО СНО САС пс АЧАЛСОЦК НОСА САС ЕЕ СТАТ САСАСКИТТОЄСТТ ССАТАСТААСКСАТАСААСТАТ ПТОСАТ ТК АССТОСАСААСИЄ Ми АССТОСАСАСНЛСТИАТСТАТ СНО СТАС СК А ССС АСАССКТ САС КСТАС ОСА АС АСАЄС АТТТТАСАСТААААТСАССАПАСТОСАСИЕТТОАСЮСАТСТ ТОЮ СТАТ АСТСАТОСЛАОССТОТАСАлАСТОСОСТСАСТТТССЮЄ САН АССЛ АС ОСАСАТСАЛАХІВЕО ПЕМОХЯМИ Послідовність амінокислот варіабельної діпянки легкого ланцюга: УМОВ РОБСРУТРОКВАВМІСКВаМОВ НУМО КА ОКРООЄ ВОЛКОВ кКАлаСсУ РОК ВОВОВО КТК КАКПУСУТУУСМО АмОТеЕОТЕОоО І КУ ВКЗЕОО МОВ У)
Фіг. ЗАВ х Важкий в їі Варіабельний |! Н і о: і Зародкова лінія! Зародкова пінія Кі Н СОКУ | жк: І тк «2 «ОО Кн НО 00000000 ОХОБУОЛОАЕУККИОАВУКЮУВСКАВ СЕТЕТОУУМНО МУВОЛРЗОТЬКИМО пиннинн нн пи п п п пп п п п пн пп нн : Н Н І Н пан нн пня прп пні пня упорі нон пн пн нні Попит нн інн нн рі ння Н Зародкова пінія : Зародкова лінія Кі Н сові | ЕВ ово пон ни и и зи а КОМА о в окон а онов пионовое он оон : І 54 УНН 3135-33 і ІЯчОМУ, ЕВСОСУСРаНИЬКЕВОА ВВ шЕТиЗВиСЯ «БУКОЛЕСКОВЕНМА с жаваяє Я УНЖ ЯЗ! ЗНЯ | епопопопту лот лили пллллліллло плпллллллтллггі ІЗ Кк Кк т 1 ПЗ 22 2 З5« ( «5 2 « « « « « - « « « « « « - « Р«Л«Л ОК Н і Зародхова пінія: Завродкова лінія кві Я сові І ки ! тн 3.33 000000000.10У0БУКВОВОУУОВонВОВеОСВеВ І ОБЖБЕБУЄМН ВУВОЛРОКОВКНУВ : За4вУіїб 435 УНЗІЗ-33І їн | панянхнуячп ся няння ня няні пила нтнкно 0 техн еупня няння спитати тки рн І Н тд: Малих В Й т ї : й |! і 228511.15 427 УНЗІ333 НВ | сн пня | пня : Н таль злі ше | с Н ! ї - ОА Я УНІЯ НО пли пл дело ВІ ЛПІ ПІП ЕЛИтІл : 20АБ.2б 4 УНЗІЗЗ3 ОН спаси посил полон ну ни нин му ни т и нин п нин пон нн пи зн оп нн нн ня пон ин ОСЗОРУ.ЯЄ 143 УНЗІЗЗ ЗНО 00 голосів сттти тих сллтвМІнтя | супу нн ши ин нирок нн ин пп по п пп по пп по по вв пп п о плов поп п о пп Вс Ле я ЗНАЛА и Я НИКА ЛІНА Нонна, Афін ніц нн нин нн нн нн п зеве є 433 ун 33 Б 001222 пп пиши
Фіг. ЗССС і важня 0 ЗБО : Важкий й : варіабельний . Ю ОНИ пох ТИНИ І і спро і ді | среЗ : ква Я 494 МІМРИООСОТМУАОКУЄЮ ВУТМТЕОТЗІЄТАХМЕСЕКЬНЯрОТАМЕУСАН : ' ни Фжчжм'чТтчтчТчнтнж'н нт нтнтФлФф4'лдИтТтфтжнфжфлчтТтфжфлтчччятфтлинннньнвьвьвввьввнвьвявнвяьвявьвьвнвьнвивьнииинни шини покути ОО БНЯ ЛО 0415 Бе сидннняня і нини нт нн няня няня иннин няня ОМИМУСУЖУОМОУ Б ИсОсттУуТУВЕ онв вн ооо нім ромів вин ононіонво поро ов нроно він пово оо ові опорно вв нів воно нн ові нон нннона інно нвоввн Я сов: і ККЗ | Сова : ЕКА : І 2389.36 435 ссср нт нт ння ним РОЮ ПИООСТЬУТУВЯ: : Т ---------:.ТИНЙШ:ЙЙТІЧТТЧТЧЧІІЧТІТТТСІНТІІІШТТІІТІНІН8ІЧІТТСТТІСШТНЙТІ8МЬД:І У Й: Й Й 68 9 Й: Й9:9И2/ 2 Й 20 6"ОТт06Т66 (С ОС Я ЛЗ ЗЛ З «З 2 2 2 Н | Н ! Н й п ! сов і вк | ств Е тва І нин нон поп чн дини о ок рр опр НОВ Анонс ороріа Ноні Зннннннннннннанн і аву. Ва 04935 вс Диня тт тт ВМАЦУНУХУЛКОУ пост ТУТУВЕ сЖаві є 429 зесвоттполлалоллу лУплилллалІплтпллпІп п лплло ЗУ ВОЖНХХХОМОУ | МООЗТТУТУВЕ СОВОАНОЄ ЯЯХ сссс сс сросллдлл пбллдлллолллгІлоплллдлІдлІдгтлопо ЗХАЗУНХУУОМОУ п ИОООТТУТУВВ і .ЯОАБ.Є ЯЯ47 ссстглллллллвллгло ллтлллІДллЛЛІТЛІІІлЛІДЛІЛІЛІЛЛІІ.- ОБОБНЕУХЕУОМОМ НООСТТУТУВЕ і 363.15 43 свое Дн нн нн няня ря няня нн БУДОХУНУЖУОВОУ | МООбТТУТУВЕ птадив я являти І Ф4ОЕБ.Я10 0451 зссзссдстннтнятня булу няня юдатняинумннянякнякнхняк ЗУДОУНУЖУОМОУ | ИЗООТТУТУАВ І ЖЯВУ ЄЮ 1435 се ссобінн нт тп плит плголитлліплгі СУВОЖНУУХОВОУ кОООТТУТУВЕ
Фіг. ЗОСО ші ТД тт пити риття :8ЕЙ і ! ! І Капа Св і ! і І й 2: і ! ; | і варіабельний Н Е І Н Н ! убервовльний ме Н Ї Зеродкова лінія | Зародкова лінія | БА і СОВА І ЕР сй96 УКіАгО | ОПІОСМТОБРОБЬЗАБУСЮВУТІТС БАБОСІШЕВЖЬВ | МУООКРОКУРКЬВІХ нт и чн ин ин ииитттТтТтТтТтТТтТтТнТттТтТтТтТтТтТтнТ'ТнтчТтТнТ'ТтТтптчнннниниини! ГО БНБАКО 1471 УКЦАФО ОЇ О0О3КЗ3 000 с-ссссслс нти сто й ї 1 І о... Н5К ЯКІ МУКА ЯК 000 сплтлллплллтлллтлтлот ШПЛІВллтл ЛЛПЛЛл. Н 1 | Н Н І : і | і нн нище юн и п и І нн Тл лйт т тїйїиттттТтттнвтвтнвнвнвнввнвнвнннтннни нини Лямбда : і варіабельний : Е | | І он нн нн нн В Н | Зародкока півін Звродкова лінів | ЕК І спкї і ГК і ломи ідо рів о і пи пп доводив ово орви пово ровів вони зорово ооо вав ЗОЗ, 453 МОВИ 10000000 пспгспооотот опти ооо плоті нн кннннмоонооааа нан: пп п пп пп п нн нн нн» Зп пн про ни пн сн нон ни Мн Н |Заводкова пінія ; Зародкава пінія ЕК Я Сов ! Ева ви рати й : а м З і | шлЕБТОЮВАЧУОтВвЬООТУВІТО ' спОлеБештУАЕ р КУСЮКРОСВУТЧТУ ! ПОВОЖІЯЬ 1433 МІ3ІЗОЇ0Щ900 ссспссгто тс по ото 2 20 1 попроси окол авіа МВ Я пит полллілллиплліл і плини лили Во В М- 50 МАО Я тт тплппдлІптпІІ Пл дт ло Пл ІЕВ п тлл ПІІ ДІВ пл Дт шести нини ин нн нн нн ин ни ння Го аьмй ау МОЗ 10 ІІТ ІТШІДІІІ ІІІ І ЗЕ. 1455. БВ авт длдлІЛЛЛЛІЛЛЛІЛЛІДІІІЛОЇ ЛлІГІЛОІЛІВО | олллллВІллотлІс 4 оОвеАВЯЬ 00450 0МЕЗНО 02020200 оспттплпптллдлт пт тпт тт Ето ТІ ІЛЛІ ПВ ІВІттту п у У нн ни и инннчнчлчлнли т ннниннннчнтнннтнтннтнжнтнчьснннннтнчнннтнчнчтннннтнтннвччнчнннннннниннннииечннни нин потавав.ь ад Ма ОЗ 21121212 12121212. І КІТ
Фіг. ЗЕБЕ Капа т ! ! | і ! і й | | й о варіабельний лю: | | і в п о в п п в п р в в п о р в в в п ! СОЄВКЯ Кв | сові СЕВЯ пами о ооо о м п, пр р оп оо по п оп о по о оп п о оо п о п п о оп о пп о о опо п о поп п о пп поп о пн опо опо п поп ови ! 358 АБТІОВ! СУГБЕНВОВОФОТОСТЬТІДЕСОРВОУАТУХУО . і с... К Я поп пли п. МКК АВЕХ, 0 ЕЧРОТКУВІХ І і | ! бюд три рити рити іЛямбда варіабельний | ! Н | В Екс іні ав МИНА НА нн нин НИ ! | сова | ЕКЗ : среЗ ! тра і нн ння МА НН Вечір опір рр и те Кор и оц вич чи ння пн нина пи нин 497 рЕУудМеРО сУубМеВоояКОсМтАВ ТВО ОВЕОЕАНИХС У Й Н що 1 Н - ц й ож А
ОБ. ЛЬмі 0453 сс-сс| уосопоно сосни сонси нс ----Ж- 0 ОББУТЮТВМУ | ЕОООТЖККАХЬ і | спва ЕКЗ В сові | тра ! ВИННА ТЕЗ ЗНАНІ Н й Пн З нн М в Ки АН,
С... пл слоти лотлллі 1 МЗКОХІСЮМЧЬО | ЕОФОТКОТУЄ р зав 4437 сусло султану етану тяскхитмихя -КВЕРЕВООНЬМ | ЕОЗОТКОТУЄ нн ну ча чтчтчТтнн'вчТнжТнжТтТнТтТтТтТтТтТтнтТтТТтТнТнТТтТтТтТтТттТтнТтТтннтннтннии нави гав, 441 сення ння нифри ння няння няння ння КУРЕЗЕСОМВУ | БОСОТЕГТМЬ ря 00000 ОПІПЛІПІ ППП ІЛІІП ВІ ТПТІ ПІСТ ПІП ПП ГО 0 БІБЕОЕЗОКВІ З ЕМУМІБНІЇоі
05. УЙ 1857 сесссию соту тсус фест МЕЕБМІОЮНЬМ ВОЗОЕКЬТТ інн поп в пив пов поко о п опо ннння по п п п п п п п п пн п в они поп п нини нин ; - : Аз т ; «чт ї сетутітю кгстаєту я 0 дихенучит сити
237.3. 1495 -стхлоло плллллллТлллллІллолллллллІллголо МЗВБЗІСННІХ | БОСОТКОТУЮ / ОА 00445 сестер нт КОБВІХОМНЕ - ЕПОСТКЕЕТЬ пн у у ех нини поч у нини НО о пн нн но ані он вну о нини нора но нання
00.0 АБОЗЮ 0445 сс рт нн с 2 « « « М КБВОІТІоюНчЬО коОсотТКетУВ!
Фіг. ЗЕЕЕ
Г"яЕВ пн нн нн ТЕ | | ЖЕ пеннтнн няння Ів і рем нини сх во в шк м мин " Зародесва -. Н ни в С чо | в ; рент «іній " Н Заредковя тт юс юю ютююья ють ж втік юю юю Н | пн нин Щ - гео ї ВЕ сни 225 - ня пи кі о зн пинннннону : шшшше ТО ! І Ол МИ Дь 1275 Н Роми ти попере а ; ж шк ; спите ЖИМ ння ПТПЕЕНАЛ НИТКА ШЕ доня ши ше ся штуки с ша роБНБ 0 шУНБЕВАНКО дова с ш -а | ИН не вн УВО ВАНІЧМВ І що ПЕрОКАЮЕНОВ пах | Бий шт ОМНЕ 0; 1 ЯН КАЦННМЙО БОР Ш0- нн ни ПО жи пиши мВ ши пори ДОННА В нн ше ши 387 Узі соя | шик | шк : пе : : под МК ння Н дУСИАННИВИТ. пенні шити ши Ко | ви ши: і сяг ЛОБ т ши дна шати Я --- т ; ШК шення деслаю | ВІЙ КІвшЕ тина І ТО зМЕОАНОКаТИ СОМІНЯ. і Н г: р; Ії Б 3 Па кЯ ї речи пи пттипттаипиннх І ! Вик ї : Бе -р- сце оо ас | не - ТІЛІ Її 51 | -8---МЕ сни тини ша 7 мч ; де: ут пу пи. плетінні пп стю яко : | ї ши я: масо : се у | ТЕ Я пилці ніна ЩІ і х й | х НИ ИН ший : ! с в ик не солена М ОД КК МИСАК пт НВ з ши Е- си тлллтиттт ' 510 | -- ТЕТ СТІ. Я вик у НИЦІ тт РОЮ | пнмаажН і у м аа п г ВАТЯ хв ! мазі Її пня піт 5 он | зх о -- ше ОЗ ОМАНУ | ІННА Н дк я ста ! плн - синя о Її лани | ШЕ ШИ Пеня Її ген нан 50 птн ши про т п АНА ПИ нн : шу ж од» норкова 7. поп птн ; поза шнннй - Що ІЕЕ Ї унаг33 т с шк | в- ро ах і ори А : ше ши пот | се паковання ОщБеОучи позовах Н ї сне ! -- шини дет в ї А Ге Зі 3-32 І їни нт : Є : пили | те г пря М висно тЕевтуаМно 15170 ск ОТЖЕ СИП УПИ рт СХЕМ ОБ ро УА КОекета З ря ов сли КА пон лини ж пня ! птн фнтинфтнтннян пкт БИ титр ! ; ПОД КО ОАи ЗА
Фіг. 3005 нини І і БО 1 ! (зо в ! зу ! ви жи в ння вий не. | | ; п й Ів і ІВ Я . | в | і Я і Б5ЕО. пиши ния У пан ій в вв пехтятхталяжчжтичкахяктя: і ШИ ШИ СТ що я М пнів | і ни! Шо | » вв; ї | зилкткиллатлткктхтатчевчякчтяня. у Н п й С 1 ав | он повин При ПИчНО З нишш: | | пр гони вва: подамо рою увітхлоЇ Бі ду ди тил ! : Ми виш М ше по соя СТ НИЙ і ї о рт МОЛ «Мен 1 520 Н Сіли тити пУужтсАНІ І Є ' пен же си Кун, 1 5 Ж жит вачачх жала пимонннниов ме : | 7 ши ст | везе пиноннаоннн й тт 1 822 | фен пиши пику ніх тннчонтхтяи БОЮ ЗОРЕ МАР ми нини пн пиши в ПИ пий захихмакиї Н Н я порно МИ шк | С | Ар пиходтичкияя 153 ння адт ВАЛА УНУЮХ Н БІЄ : е П-а | і З двори ї ВИМ 6: МЕРІ ; -- ю--- па Би ІЕКТТУСВУК; 536 ЯКІ ІЗкЕКИАУВЕ ГУ ММК аКОТАМУ ! - син не яв не ТІЗКРВАКТВІ ТММ КАКО ТАКУ | БУВ. | т юита сптттю спиш пити і8раі лях дили БУ у яп тя спі 1 085900 нвиножьн і 5383) мамин 53 екв птютитую пл повна ня ст Не іо октижтУухя 523 не зе в --е петлі | БОЇ ВЕХХЗРАТОЇ си ше ше еЕ бе : пеня ДЕТО оюнтьннння не ее нин Еї я. шин ЕрННо пп. Є. ЕКЕ 535 | нофнуУТУЯЕ | БИЗ І сю я ссллттт и | 830 | Оля мУТОТОУУУСМТУ Бо; птн Бе пе п р хи пт, Зп БЕ 0 назутлуве ГБ ФоТЕ п -Е ПИШИ пон: пк, чн вве ія ня | го т | ше ПИКИПИШ ШИ ДІВ мумеуюву змоу ой | о носзотутув. ся р | | пит тт: 1533 ти я тт шаня пиши ши ОКХ Тк яМмм | 5 4 | ІДЕ нори МО ЩІ ява понуро Моне ще виш я | що нн, ОЛІЖОСВМЕХУМВУКЮ 535 0 НЕТІВЕТКеК сддеоси я пре, ше а ЗБМЕУУАОЄУЮТІ Б35 НРТТЗКОЮЕКИТІТЬСММии Ко! ем ие и ВИ і | | і пр МТ, СЛІЗ же | | нн пттттинт тних нотч няття. 1 ВВА ІННО пи и ення ЛІ ДЕН З Н тав 15 рова ! 518 3 КО чННникяЯ І ств
Фіг. ЗННН нини 7 НО поні рт р ндтрт і 50 пн пил Ї ІВ і І і ин СНИ ТЕ | НЕ в Й і Н хо 1 Зо | т ЩІ ї Зародепея тозароде: Я я | о ПН НА іес-ей водно З пн зе с рон 489 1 ОУКІАїО Ї п нн пк о і ск пен нини : ее МУ и я аа вк М ш ши АН п ЗАВ ЕМО ГБЯ | кевовітнеміяут Ки: їЗ ш-- Свою ре тв пою Жежнев ет вва тео ше Бі со т З с і пон нн кап 1 а ооо шен ПИТ КІЖИ С хх мкс клятви ення 1 чи гля нт в пе можли м ли меятяя БІ по 50: ШИ й з Яя т : я с Моно ни м зчи чи ч ч ич ч ч Ач ч Н т ОПТ й - 2 | т ши св их див що о п В МИНА ПЛІТ ВЕУ ТТ о ле Ка КТ шик діння винен 503. ОЙ з ний | ма пеня діння ії Баг З СОПЛО ще : п ши 7 | і ОНааааиаананаананнн яки с их й СЕЗ ЛТТТ, СТИ с уж Три 5 пк ква З ПІ 7 - шк -к | пн й ! во пока пеки ха - до Ен і шо ЕНІ Н пи и чани Що : шшшй ва скит тн. | ГТ овтзтовурннахвосиааст о ГЕ ! пт виш ши ня ве - облі ІВИВа МОЇ рохЕ зе -т- 3 рент Миски ян. РОЛУ. тенет У і хнезауужвеюмУинй | Б до т т | Пе я ПЕ. ЯЗ | тку повимиїу ШЕУГ п ПОКЕЗОВТИТОЇУ вав фен вн не кс нан а пе рот. т НИМИ і І Н сення й Н тт пн в і ши жи зЗародкова - Е | | пт-ЗЕВО - п ! олко Ї Зароджана тя : сфоолня ле 1 дО і й дама ре нт ренти м пров. | пи Й ши, гі нен Н ТЕХ тях ПЕСТОВАРТ : | шин спютяе - і Шо РОДАПЛОРрУМЕа М ют ї кає шт вк НИ пиття МЕ ке БАВЕЛІВЕ ООсиТІтВО РОБ. ЗВ МІЗ п Ба ще Я 1їнбо 7 Д- ЕМ ЕМ фо няння п Ж оваеВБІТУВМТУМ й І ОВОдЬКМаритих ие ся НЕ як и т тЕде птн тт пл АДИ МНН ХОМ РаТАРХНЦІЇ 5 пит шт ВАЄ столи тд Би я Ки | пен киш нен ВК ото ШИ - І | п- 1 55| Ж яр! пи ен Зо нн ме о він Н гуни ши рн - нини, нин СА шишки | стр пелет -й ЗЕ няння УптОррЕУВУАРОКТАНІКИ стен | сво ппЕСЕТГ ХО Ой | ту в СУБ ЕУВУ ВКА 5 заповкин а оОКлря то г І НК НИ Нв ЗНДЕДе фен Ба ОД птоокросях ПОЛИТИ я - закон ран Краса Рчх яд ПИТ ТТ х і пиття ва ТІ опиа і таж кю ммоя що Ще ЕЕЕТт
Фіг. ЗІ ши пиши ши сзупмнннммлмлмюмммМммюмюМм м сть по м у о ВЕ рі ех У іі ра оо дн МО Моно нн п А 5 ИН ПОВ х ЗО ПИВА КАВИ: ЛОКК нн шш: Ш сини шо ешЕ ни нм о С ПО 255800 КеюТчнаК 0155 ША ЕЕ Я ЕЕ ев се т Ос ВН ПЕС со НИ НСС РН 1465 рення БОМ россии Няня ниття | 55 МИТЬ І БОБ І РІЗИТКУВІК і 555 1 пн ния п и нон пон пн нн пн пон нення пи п ння нин шва кю Н рої жАВТНКВ | 50 | пУВОВЕБІНзНпОтИтетТ погони Ує | 55 і | і І ! Ул пт У и М І ПОП ОО о ПО о ОО В Й ПНО Ку ПИУЧ ПІН ко ПИ уч п рвоавя 1111 тв в ШИ раз: зниовен ЩЕ | оРоЕВНевотвАВІАІ ВОМ ВКОКАСУУО осяй НИ 1 і п Ії СНО 950 55 СПІЛ БвО жк 01 БЕК Бош ОБО ТОЖЕНВМ РОЯЛ осн і «б5 І внтттнн ниття тн Боб ВТЕКоВІММ І 5о8 і кІАЛТКЦТМ 1 568 Делллилили пики ПИТНІ ПОНІ НИК нн нт нти НИ тн нти Ки уник пннниних пит тт вв в р я 2 Ол Я о Са яв г поток 15300 дуравову ре колом 1575
Фіг. ЗЛУ 10 або 100 пм 192 12 кл тм я ТОнм | РОЗКО 1- Ї г пов 100 5 сни й о Во- не:
до. х ся х х --О чл що. 5 т . М
ВО. у ж і В | й ЕОЗ0- Кух 15 пм у е М 8 40. о5 у; довірчий інтервая: Ах у зо. 1і-оа лм й 20- х 0- х й геть тя - : т тут тт 100Е-15 ЗЮК-13 ТОК 1062-49 10607 ПРСБКОНМ
Фіг. 4А
10або оо пм З1НЯ Ля м я їОнм1 ВРСБКО 100- ПИ вн син некоторенннин т Ф я в 90- 9 х Во х т- Х М - ВО у і ня і сз ЩІ о щ Круг З пм і , 9555 довірчий інтервал: | Н Б 1-5 ям ь хе 4
46. 1206-15 1206-13 10-08 10067 ПРОБКУ (М)
Фіг. 48 абочоо лм 10819 я (0.0бам я нм СРСЗКО 103 я нн пн 90- ху щ х с 80 Ж 704 у о 507 ; 507 Кох їбаям , у а 404 95955 довірчий інтервал: | у ані 19 пм чи Зо ; й 4 т ту чт т - у Ф є ка о: курю я ; ТООБ-15 ЗОЗ ТО0Е-15 100509 1006-07 РОКОМ)
Фіг. 4С
10 або 100 ям З1НЯ я (ООбпм я Знмі СРОЗКУ 100- 2 - нн тн 90 Я 5 Ж воН ; 7 х вв х Ви а 2 ї Тов ) у о Кусевм 3 х й 8555 довірчий інтервайн: що 30 і-Зпм М Кого шк Ї і ї Кі НІ нин и пил зн и пи п хр ни ня ЕЕ Ей те пи ек ки пи оленя ТОбсеВ я плн шини! 404 1006415 10 1002-09 1006407 СРСЗКОЇ (М)
Фіг. 40
Зобам 1БЕ19 я пам» ТО нмі пРСЗКО 0- Т- нн в в во- У 89 70- - Во а ц- ежИ т К де 223 пм і Е ав 9556 довірчий інтервал: х а що 30. 106-410 ям
720. Ше
Й. й і нн мин нн им нина мин ни м ми нини нити нки ни нн ання нн и нак 100БЯ3 ОБ» ТО0Е 1ТО0ОБ1О ОБ 0 ТО0БО8 00100607 МаРСОКУ М)
Фіг. ЗЕ 100 ям НЯ я Об лм дбим) птРОЗКУ Шк п нин у пі че НИ . - - - ЩО с о 50- Кох 500 пм х ай 95 5 довірчий інтервал: ШО 30. 400 «820 пм Шк 18 в. й т пяти рекрутер тн нят ДЕД 1006-13 1006-12 1006 1О0610 ОО 300608 100647 10066 ПОРОЗКУ МІ
Фіг. ЗЕ н ТЯ -пді «а 12345678 910112 13 4 5 ТК ТристліциновийтельХ/ ШИЛОМ и у Мк Ту МИ КЕ КО ВИ Кок, забарвлення Сюіск віце, тмкгі лінію (7 Невідновлювальний 775 Відновлювальний що 1,Маркері? кда пет кра 2. НРОЗКа в 4. срсеКа СЕ ще шо ни 5. Маркер 12 в і й в с я ке В ПРОБКУ яв ; її То, ток с ТІ сРоВКО ж 1.1 п.с є З МВ? мен ння іа. З1На
15. БееВіце Бір?
Фіг. БА ОЛАУТлнМ ВРСВКО я Пам я Ябнм) 21815 Зо п ав К Я
90. с . 4 8о- х у е х Х х КА
80. в х Бк в - зе мМ х 2 40 М у п 2 9535 довірчий інтервал: щі І до Я ; Б 9-23 пм і - 204 ще І і і Н сх се ; і 2 олені са І р чий 1 | МОБ 1006-09 100647 ІЯВІ2 М)
Фіг. БЕ
ЛОЗИ ам сРСОКО лм я бнм) 21819 І Шин сне і , 80 У и х : тп х ! А в во о І 804 ше ще | в о 404 Куті ям і 4 К 1 9555 довірчни інтервал: М Б щі 7-18 пи М | Ї В т -З п с не 20- А х і 14 У і їй не Ж кі ж й нини ни ним нн нн жк ема кі нини ниви низ мини нн низ нн нив нн он кни ВЯ КІ ее кузня ТО0ЕЛ4 ТОБ 100 Т 00-08 ТОБ АВІА М,
Фіг. 5С Зв'язування 1,50 00нМ ВИ із ОР ПРОБКУ що вкриває пента-Пі5 АВ, вд 404 Коп й вро, І Тдбнм Кок» ТЗ ще Ко с 17 нм у их, 7 КН ї и чн й. і уж пи ов г / М їй 20-44 р і ; ; У отцрк опор укрити лір БИ І й о пняфф чення Кк нн. Спо оврссткя і 15внм і -«Ю ве вини пен пон нин ння пн ння пня пня панни нини ння нин пики ин ин, ТО 5 ВО 90 Я 100050 161150 Час (сі с
Фіг. БО
Зв'язування анти «РОСОКОДВЕ з епітопом на ЯРСОКУЗ 140 з т Як аб иа
9. Й | ККЗ | | до пи «80 - ний хе я т : ки я є : С Е й й ! й ий ш 40-00 с де г ! и КО б / и У пу 5 І | и б переннвсвх кох С нн ДК КОККК за шини С чи 20 й ІЕС) ВТ ЗНМ) ее рів Гн
Фіг. БЕ збо
Сигмоподібна крива доза-реакція і Апроксимовані значення Нижнє значення ! по Верхнє значення | 109.0 ГОсЕсБо 1458 ЕС5О | 28 З1НЯ осо т гу 100 в Фо ра щ 80 щ М 7 / 8 5 / є В Ж - АВ з 2, М в ення пен пон нин нин 1 й 1 Кі КІ 4 ще нгімя
Фіг. БА
Сигмоподібна крива доза-реакція Апроксимовані значення Нижнє значення па Верхнє значення | 100 ГОБЕС5о 1.55 СВО | 224 мо- ЗІНе що 1005 -а до й ра І й Не М, с то- / 5804 й 504 ІЙ жо 405 я ОО и юе я иа , - о 1 2 З 4 ЇІДВ) номп
Фіг. 68
Сигмоподібна крива доза-реакція Апроксимовані значення Нижнє значення 00 Верхнє значення о ГОСЕСБО 1,381 ЕСВО 247 21812 1962 1104
- щ. й щи 80 4 ОО 704 8503 , 404 8 зо й "й ж ; п М і Ц 1 Ні З й АВ нгімл
Фіг. ВС
Сигмоподібна крива доза-реакція Апроксимовані значення Нижнє значення | ПВ Верхнє значення шЕНчИЕ іОСЕС5О 1380 СВО | а 21812 щої 105 1005 я щу я ж 804 5ОО70- жо 504 л се 404 л шко, в ауд о й Зк Ти «1 0 1 2 З 4 АВ! нглмл
Фіг. 60 1503 125 ! т 00- АН я р Ф юс? зн ШЕ / Ж ш / Ко 50-
4 й. в к-т Я ший коннни шини нини нн
-0.5 00 05 10 15 КОПІЮ, мкг/мл
Фіг. 7А чо 155 т т фронт 100 у 4. ІЙ т Фо оса ЗНА в Гаї го ди Ж ке / ї
25. рі 8 є її нипипнижининнжнлтлшни тт нити! -15 0о 05 10 15 І одІАВІ; мкглал
Фіг. 78 150 7 в. т ко. р М 4
Й . 5 | ; Фо юсо Ві? 54 є 5 7 /
/
в. Ж шк о : ни
«0.5 о 05 10 15 І ОоІАВЕ мкг/мл
Фіг. 72 ше 1954 о -йн- 100 | щі її ! Фо юС4 21812 Е І жов і 25 т- її ШЕ 0 фр «885 по 05 10 15 МО9ІАВЕ; мкома
Фіг. 70 загальний холестерин МО - 1304 - 120 в з т у ІК р нн 5804 оди хо 704 Її ин 5 805 «дво Ве 2 ВД рт ї о 4 Я 7 1530 м Шо Часігоді
Фіг. ЗА загальний холестевин - о зи в х А Ши т ше я ж 80 23 гою в є 548 07И 61201 а Час (годі
Фіг. 88 ливщ ТО о -- 00» ВОЛО х ВО пн Що во. у - ть -е-31Н4 - діа «Ра ! ! 0 24 048 072 95 50 144 Час (год)
Фіг. ВС лиПвщ Що 100 їж. -5 п Вя г і. В ста Шк пн -- | о с - Я т Н Ше Я І чпеткней а -к й ! но чек, Фо во- нн Де Оу и ; Кк : т, -РВоЕ 405 КЕ Н Ї Н Ї 5 02448 72 96 420 44 Час (ігоді)
Фіг. 80 ЗА нн Є па пп пн п п в, п мн ланщео СП аю НН В год І. 5 лпяще ня 24 год пе ян не стен ше се ОЛАЩіо нн нн те год ши а ля 144 год ХВО о Сет ВЕУ стек ОВУ дити ве я вктиц нн ші ріг. З
Загальний холестерин І: 140 130-- х п 150 ре шт З 5 0-яе. 4 р-ни 5 ев й 504 А що 70 ; щ- р 5 50 : - в 002 4 8 8 ю т2 Час (дні) песновння ВНТИ «НСКУ 1 мкг птн ВАТИ «РОКУ ТО мкг
Фіг. 10А ппвО що. д Ми т 1-х - -й ОК Я то- х, Ж ва ие не я і. о вдо й Зк ССО ще нини нини нин нання пи зими шия п 2 ж 4 б Я 2 Час (дні! пенні - ДНТИ РОКУ Ї мкг піт ДНТИ УРОКУ ТО мкг
Фіг. 108 о ! - --0- ово -2356 ! Х
- й. | ки / / -7 Еш р/н ех куди 8 904 ж ре в у. де а и ШЕУ М Ж Ж й й ж М г ТО й й Ж ЗІНЕ К- ря пн З 8 50. рт 0 2 й б 8 НЯ 12 Час (дні)
Фіг. 10С ре ОЗ по ГЗ3 Умертвили паб Умертвили Пе Умертвили п:12 Умертвили пий ї ! і ! ! ! у Доза ЗНА Доза ЗІНЕ Доза ЗНА мгкг або ЩО або ЩО ідпя всіхмишей) 1) мг/кг ТО мгікг
Фіг. МА
150 що -й-- ДО в ОЗ 119 -й- МНА в ОТО ж як ся ДО Фо ; Бо й : | лм ве ще Ф- І р х вет там птсаванннннненнкнся Е не Птн нтичннн ДВ тонкі ї 5 Я гм їх, ' Шк Я а в о80- 0006 1656 18 85, жк 0000200040000800008000100001200 Час (дні)
Фіг. 118
Мев (мкг/мл): 0 02 Е АвВімкимт: 01 3 10015 10013 10 ЛНЩео 6 12 Ї Й - й ж Ж б | є ї ак ! ХК в ї й я ячутж я" її ІЗ т ,, У ся
- 2. тропя є ОМ М км 5 5
Я. ще у ух сені сен протя скл їн у Я з -х ке Ма 102521 33133255455 91 37 78108 ріг. 124
Мн 0 п Ї 1 а 0801303 п т в пек я пови ня ен й | ок Щ - 3 Т х РО Ух Й ; ку и ї, ї щі Її « | : ще і го з. Ко хо а МЕ. са шкики не ср шах 10252524 155324953234540 85552
Фіг. 128
2ВАТ 0 пе Е 1 3 10015100 о з ' ж
; Е. СУ ї я хх МК з- ЩО Не х ї ва ок Ка КІ Я ї М М КЕ ЕВ Ко й тя Ще я я. : ї цк ІЗ де 5 Ку ік х я (з К. З ЕХ м в; М і: Я пек те пен нн нини нн нн ни нн 10090915 20991и 68394 97 а
Фіг. 12
Мев імкг/млу: о 0.2 1 АВвімкоми: 01 5 00151001 щої нн Ашино 45 -о 0» -- Ша 28 с сх ев 20 Х Е 15 я й БУ; в 10 -е сш во. лоз сшешешеше о ілатсвт МОЗОК, с ен жу 10171649 44 44 656 26.3 91195154 593
Фіг. 120
ЗНА Й 02 1 іш ши ж ШЕ Еш о В ЕЕ В, ВО НЕ ік З» ії ри т | : пох ЧІ З Кк х ві і левААКЯВИ о Й «зніс свт ня Мен рн реве «іх 41118 10243555 70227 БА 87 94 283 «ріг. 12Е год о 0о Ї б 3 10015710 01 9 ПИТИ ЕЕН ММК НВ НЕИ о ККВК и ВИ 25 щі і у, З У в р: 4 фе ше з х З В Е зі й не ен: шини ет ші же шлю ни ни в ЕН В 1019512 0955 70 51 95 187 204 907180
Фіг. 12Е
Легкий ланцюг: 235 ЗідвЕ сак ВАВОЮІ.....ВЯЖБМ (око їромо:3098) ВАБОЩОЄ зно ірохо:7ії! ОО9УНОрутентнняя (550 39 ХО:2АЗ) 54 Зідве сак ВАЗОДІ.....ШІЖЬМ (око їроз28) ОАВАБІОЮ (ЗБО 10 50:33) ОДШХНАрІтТ мем ння (БР ІЗ МО:354, 3с4 1бувс сах 0 ВаНОКІ.....ШМНЖБЙ (СКО 10 НО:219) ААЗЗБОВ (зво зо оЖО:2і1М) 0 ООБУНФЕОх нн (БЖО ІрОМО:225) ЗпАй хідвс сах ВОВОЯЬЬНОМСЯТМТЬМ ОКО б БО:220 1ОБНААЙ (СПО ТО МОо:187) МІЛЛЮФЕЕтТесяменння (ЕЖО ХБОМО:23 218519 їіічвк сах «ТЕТНВОУЄОЯНОМИ поБО їо Мо:158) ОБУБМАВУ (554 хо ЩО:162) МЕХЧОТОМУєнмеминнм (ЗО 26 МО:335, 2351 ЗіднЕ сах Те ТВВПУБОХМВИВ іово їоомо:158) ОБУТМАБВ сло їб йо:182) МЕЖУВЕВМу юн (Пр 10 Ща:335) 20030 зідвЕ сах ЗУТЕшТЕАПОУННИВ (ово о мо:і158) БУБНЯКЯО (ско їрощйо:182) ВЖЕ ТЯМуючхянняяя ї5ИУ МО МИ:152 265 Хіднж сах зеТСТОНОУССЯВОМО сУ5О ї0ОБОг158) БУЯМНАВЯ (ст Її хо:152) ВЕФВТЯМУєтнкняя (58о ЩО МТА ЗП) ЗаЯвЕ сах о ЗЗТЕТОДОУССЯМОМИ бо ТО БО158) БУБМВВЕ сто 15 що:129) ВБЖРЕТОМухемемннятісно МО ОМО:54) ЯтЕ7 ліан сах о ееТОТЕБОУКСЯМОУО (БА ТО мо:АБВ: БМВМАЯЖ «зе 15 хо: 122) БВХЕЖБУБМУ. м няяяяідво МОМО:154) о7нЕ хічне саке ТСТОВОУЄСЯНОМО бо то мої158: БУБМАВУ 550 хр яО:182) ЯБЖТВЕХБМУє няні) ЦЮ ОЯ0:154) 305О Зісбь сах м еттВВОчсениУВ (зкб 10 Мо:їівн)у ОБУБВМАРЯ (250 Її МоОг182) яБЕТЕТВМИУ юні КО ІФ оМО:164, 199 Зідне сах «еТОЖМВОУЮСУМЕИЇ (бло то мо:Зні) БУБМЯЕЯ (Зо хо Мо:1621 0 БЕЖЕВЕЮВМуУ хто і ПВ ЩО МО:154) 3702 діднЕ сах С ТВООУЄАЖНКУВ с5иб то мої1350) ОБМБМВИЄ (250 3 Мо:167) 0 ВЕХТВРММ У» ЯН МО МО:154) 2БАЗ ЗічвЕ сік зететВВО ВАН (вно 10 мс:зн1) БУБМЕНЯ (550 35 МОї167) НЕЧТВЕВУ чення ЗвО 10 ОМО:ЗЗК, 13ні Зі4БЕ аж ее тотвдОУЄНУНОХВ ідо Ід ОМО:221, БУБЕКЕЯ іББО ТО МС:?278 СЕУАСВВ УЛ ее іно їБроМмОо:237, 33Н4 З5ЧВЄ сах те ТСВВаМІСЬСТВУВ іже ІроМОо:2282І омвМиее (пкО 15 МО: СБХРЕВЕВСЕм ен бБЕО Ір оМмОо:538, 272 зічнї сак «ето умІсАНтВУВ Іво ІП ОВОо:222І смтудна (5БО ОТО ОМО:230 ОБОВ сне ічЕО Ір оМО:23, НЕ зз4ве сах «ВОВКИ МІЖЕЮВТ. УМ (5ЖО 10 МО:197 БМВ (5БО 12 о мо:135; ВАЙДИ ШУ І5Б3 ІВОЖМЗ97) 1819 З1Ч4ВЕ сак е«ВООВВМІСЕКТ.УМ (3ЕО ІбоМОо:З81) БВММАВЕЄ фя2о їз мо:193) 0 ААНОБОМ Ин 8) ІБ ОМО:397) 929 їїдає сах -"«ВОЗВОМІШЕКТ.ЮМ (5ЖО І0оМо:383) ВММОЖЕЬ сбЕФ їромо:392) ААЯЮОВВЕМ.Мужеятт (ЕЖО ХВ ОМО:397) 3154 хічнЄ сак - ОВО ОМІШЕМТ.ШМ ОБО ХО МО:1з7) ЗММОВИЯ (550 10 МО:751) АУНОВВІНОМИ нення (БО ІБ МО:240) 222 зідве сйг о -ВОВОЗМІШММЕ.УВ с5жо зб мо:152) РУМКЕЕЕИ 5ЕО го Ммос183) СТОВВВИЯЯУМ нн ВНУ ЇВ МОЗ) 288195 зіс0с сає ОСББ МІШНМЕ.ФВ (ско іо мо:1821і ПУМКЩНЯ ї5ЖО їроМо:153) СТЯДЯЕОВаЖу ння (ЖЕО ую МО:385, 2врб Хідйь сбко ОБОВ МІЄММЕ.УЯ сзюс іо мО:1521 РЕМЕНЯ «еко їромо:183) СТМОВВИЯЕ я І8КО Зб ЗО:185І 1615 з3АЧВТ саг о «ЯСНО ВМІСВМЕ.СЮ (550 15 БО:1553 ОРУМЕНЯВ (ак о оМмог18л) СРО ЬЗАЖИ м ЗБОЮ ЇВ Жні85) 2ТАЄ їіЧвЕ сак ««ВОБОЯМНІШММЕ.ЧМЯ (збо 16 Жо:155) ОУМЕЩЕО сожо їі Мо:183) СРИОВЕБОВУЦе ян Іі8БО ІВ ОМмО:398) 31613 ї3сьх сак «-ЗОББЯМІОММЕ.УВ схо 15 во:182)3 ООЕМКДВО ізхо со моі184) СТНОВЯЬЕАХуєттяем (8БО ЇЮОЦО:399І і3В5 З39ВЕ сек о -«ВНОМУМІЯННХ. У (3БО І0ОМО:224) ОММЖНЕО (350 І ПО:235) ФРНОДЯБІАММ ням (БО ІВ МО:241, ЗІВІ22 339 сако я ВООКІЮКХАС. (БО ІБ ОМО:225) ОМЖЕЖЕЬ (30 І МО:238) ОДНОДЕТУУетнняяям (ЗБО ІБ МО:242, ЗЕ зап сах зн ТЕХ ВВЖВЮ СВО ІВ ОМО:226) УМ ЕУ СЗБО б ЩО:272) ВОУНОСВОНаЗстТМЕУУУ іпБоО ІбоМо:243) Консенсус
Фіг. 13А
ЗНА (юні сої ШІ С 2782 от с не 1БЕ12 Мой сот Ї 2222 юйі са - 128012 ІН сг 2806. КОНІ са ГА 27АВ ові сг ЗТ ЮР со ши - 155 ОН сот й -я96с9 Їоні сг С ДУ ВНО ОВ саг щі 1 1А12 Ой сг ш З1АЯ Той. сот шшшй 31812, їюй сг (20010 Пон сот - -26Н5 ЮМІ сг й 13101 ЛЮ сот й ТЕТ ЛО са (27Н5 ПОМ сої і 3089 Той. сот Ш «21812 1ЮМЕ сдг то «С 19МО ові сої -1-2301 ММ сг І | І 1709 ЮНІ сої І ШИ -- 25А7 МОМ сг ши ІЗНИ Ломі от ! - ЗНО ПОМ с Й ог- 2504 Мой сг Ш- 304 ом су пентеююннннннннюснннню ЗДА ПОМ сг ншшшшш ЗВЕ Той со фененеесттюннсснссо
10.00 заміни на 100 залишків
Фіг. 138
Важкий ланцюг: 20210 Мевту сах «З ШУРІТВЯВІЯ (5Жжо со мо:і68) МУВАХМО.НЕМУДОЮЮЄЮ (550 со око:і74) ВУСМретяяяяят КО ІРО МО:180 3089 Меауу сах З ПХРІЖВІСТВ (БО 10 во:162) МУВАХМО.МОМ ЗОКУОЮ (ско 10 коі174) БЖОМОуетнняяяівЕО то ПОо180) 27Е7 пеату сбк ПУВІЛВЯСІЯ (3БО І омо:з5є; МІВЗАУМС. КИМ ЯСКШОЮ (550 ІФ ОКО:174) ШУСМОД чення (вЕО їБОМОТ180) 19Н9 Нневуу ско -ЗБУВІЛТВЯНІО (5БО ІБ ОМо:367) МЕПАУМС. МЕМ ВОКУОЄ (950 ІФ КО:174) ХОМ ннтеняне(вЕО ІВ МО:180) 21815 пеаоу сах «БОРТ ОЯСТ (5БО І Мо:368) ЗУБРУМС-НИМ АОКІЮЄ (їБО Ібокоїї1т5) БУСМОЮеченннязіВКО 10 ВОР180» 2391 Пеату сбк --ПЖУТЕТЖІЙ (8БО 10 Мо:36Н) ЗПЛІРУМО.НОМ ВОКІЮЮ (250 0 Мої175) ШУФМОЮееенеяя(ВКО МО МОВО» 26нН5 певуу сік ше ЖІ. (ЗБОЇ ОМО:368) МІБЕУМО МЕМ ОЯОКУОЄ (850 ІС оМоОї174) УСМОу»мненкняе(ВВО Ї0 МОБ186) 3103 пеату сак --ПЖЕШЖНУЄІН (обо тр омо:368) ЖТБЕУМС.МЕМ ЯОКУОЄ (550 10 Мо:174) БУсМОф» ння зіБКО 13 МО:180) 27Н5 пеату сбк о - ЖТІЛЯАТСІО (охо Ірохо:368) МІНУТМО.МНОМ ЗОКУОВ (сво Ір оМо:і74) БЖЄМрМм»тттннннівКО Ір МмО:180) 17С2 певауу сак --СЗХЗБТЯУОЇВ (5хО 1? мо:363) ЗАЛУВУМС.КЕМ ЯОКРОЄ (35о (0 оМоїі72) БУУМОМм» ення і5ВО 10 ВО:287) 25А? Вреату сак --ЩЖЕКРЕЯВІЇ (5хо то мо:370) МІВАУНа-МОМ ДЕКО (5ЕО Іо Коїї79) ДеумМофеннеяі5яО по МО:387Ь ЗВ6 пеаху сає меШЖЕЕТЯЯВІВ (ЗКО то пос344) ЯІЕТУМС-МНОМ ВОКШОЄ (2КО 10 МО:252) БУТВру»еечняме(5ЕО ІП ОМО:981) 9с9 пеачу ск Ж ТЕЄНЖНМ; (5по то омоє37і) МИКОООВ.ККУ УОБУНЄЕ соБО їрохо:377) Б....БМОКАЖЩІОБО 1? мб:ЗВБІ оНб певчу сг зе ЗЕТКЯВТНМО (550 10 Бо:322) МІЖНОШЕ.БЕКУ УОБУХЄ (3БО І0 оМо:378) Б....ЕЕИСЕЖАЖНЕООВО Ір ОМО:ЗВБІ 1А19 пеєту сдт «ЦЕ ЯНЕНМИ (55О 10 Мо:373) МіКОРОЯ.БКУ УОУЖКЄ (5БО ІРомо:377) Б... БКИСКАЖДІ:ЗкО 19 Мо:585) 2385 невту сак ««ШЕДЕЯЙЖАММ (5КО 10 В0О:374 тібсеюо.ВУХ йРУМКИ сяБо ої мо:3т9) КЕУТМУЧАМІОХУМІЗКО 10 ЗО:218) 254 певту сйк еЗНЕТЕБЗУАММ (550 10 МО:372) ТІШСВОС.МІЯЇ ВОМУ (БО Іо МО:38О0) КРУТМУХАМІЮТ»Є(ВКО І0 МО:238) 1385 Неату ск «ПЕТКЕОТАМЕ ї55о Іромо:245) ТІВСВОсС.-ВГЇ ЛОБУЄЄ (8БО ІВ ОМО:253) Б....УСВРЕВТУЗ(БЕО ІРОЖЮ:262) 2252 пеату сах «ШЕТКЯВЕЕМН (бо 10 моїіРв; ІЯМОБе.ЩКУ АОБУКК (сво іо мо:зві) АТАА.-ХХФЖСМОЙ5ЕО Ір ОМО:195) 29815 незту сах «ЗК ТКВОЕЄМИ (5жО сб омо:і82) ПИНМОВО.МНЕХ ДОБУНО сзко ї0 мо:381) АКААТ.-УЖЖЖОМОМІБЕС то МО:195) 2806 йейуу сбкг --НЕФЕЗНВКШМИ (ЗКО 12 мхо:182; ШІЛЖМОМе.МКУ ЗОБМЕО (яко то оМмо:38ії АХАВЬ.ХХЖУОМОМ ЗО 10 МО:195) 16812 пеауу сак «"ВЕТЕНОЮШМИ (5жО 10 Мо:375) ШЖНВОШЕВ.ОЕУ ВОБУНО (во 10 Мо:382) АТАКА. УУЖЖСМОМВКО 10 МО:195) 27А6 Незту сдк еПЕТЕМОКОМН (БО 15 мО:375) ЗИМНЕОСВ.ОЖУ ВО В (бро їо 8о:383) АТААЬ.УЯУКТСМОМІВКО І0 ЩМО:195) З101ї незуу сах --ЗРЕБВЯЯОМУ (ско іп омо:276) ЗЖННОЮО.НЕУ УВВУНЮО (зво го но:384і ШКАМА.ЖЖЕТОМОКІЗвО 10 МО:135) Зола йеату сСбх --БЕТЖКЯВЯЄМНОСЗБО то Мо:746є) МЖМУПОЗ.РКУ ЖОВУЄО ЗБО Іб ОМО:254) ЕТОРЬКІУЯТСМОКІЗБО І МО:263) 31512 Меаєу сах -ПЕТКОНІШМНОС(ЗБО І» Мо:246) ІЇМУРЄЗ.НКУ МБУКЄ (ЗО І2 ОМО:255) Щ.ОССААВРЕЄМІУ(БЕО І МО:2б6) 3ін4 пеату сде т БЕТЕББУЗММ сБЖО ТІ МО:247) вібеваЗ.тІВ ВОНУКС (аБО І МОг2Б6, ВУПЕМНЕАУЖОАКНМ (КО ІВ МО:258) 2782 Веахту сак ЕбБІВВсСсттМИ (950 Ір мо:248) УФУМБОВЕЖ.. МРВІИЗ (БО ІРО МО:257) ЕВ-ТАМУРЯ.КОУУ(ББО І0 МО:2665) 324 Беачу сак ЄСВІББВОЯЧНЯ (охо Ір оМО:249) вів т. - МЕНІЖВ (9ЕО І МО:258) ЩС.УТТЯЖУАМОУ-(5ЕО Іб МО:257) 31А4 пеачу сає БСБИБА..ЖЖНМ (5хо їі? мо:350) ЕШНЕБСЯФО.. МРБШКЕ (550 Ір МО:259) БО ХИТ енння(5БО ТО ОМО:268) 13Ні пеату сак ПОБУЗБМНЯАМНМ (зко то мо: 251) ВТУТНВКНИКН ЗУНКЕ (559 І0 МО:260) ДОРТААЕОДе нні БЕО ІВ ОМО:269) Консенсус х
Фіг. 136 п ЗНА, певуу СК м 1612 Неаму с0г гі ТАБ певаху СК г реа певму сої ш -- 88812 пеауу сг шк | | 12806 Везму сої ве ння ЗОЇ педху сі ши ше п7-8-- 31812 Неаху сої ще ї ЗОДЯ пезму сбг 789 пеаху сії С 1--9НВ Невму, сіг ше і- 1А12 певуу сої й - 2385 неаму сг ша - ЗА певуу с Мн 1385 Пеауу С щ :200МО поауу с щ / 3089. пеаму, сг щ І О7Е? певму сії ще і. 419Н9 пезму са ї 26Н5 пеаху, сот 3101 певмуу сії ще - . 2ТН5 Неауу сог і. 21812 педуу сг 100 Я301 Веаму сії інн - 2101709 Незвху ст о-25А7 Пезуу сф і- я -388 Меаху, сг рення 278 пев; со Пшн-- - 34 Пезвуу СЕ шк ши «МАЯ пезуу ой нення» 13 Вевму сг рення 100 Заміни на 109 залищшків
Фіг. 1З0
Легкий Бажкий в- 3 ЗНА ПОМ ост рен о ЗНА Ппезму сої - 2782 Мой саг | - 18212 Неаху сг 2 18519 йот сг 2 МС отв Пеауу сії 2 22Е? Мові сяг 2 | - 22ЕО Мевуу сі 2 28812 йюїч сф 2 11 28812 Неаху сії 2 12806 ом сот 2 і | 2808 пеаху сот 2 ГТ 27АВ Юм сого 2 І ння ЗОМ Веаму сот 2 г і. 311 ом со 2 | ! | -- З1812 Недуу сії о-- 1385 ЦО сог їй КА - - --- ЗОАЄ Невуу сг і -5с9 ек 3 | 00 р- 9Со ему З о т 9НО ом сі З | Пп. он неаху сі З - ІАТ2 ой ся 301 шо 1А12 певху сі З і- З1А4 ІЮНЕ сот | | м- ЗВО Мевауу сої 4 і - . З1В12 Мом со | т 2504 пеаху сг 4 ОзОс1О енксй 1 0000000-0 1385 леву сф о 2ОН5 ом сг гі и 20010 реяху сг і МОМ ОН сот ше Гі Зоо певму сб 1 ТЕТ ОВ саг 1 я ТЕТ пеауу сот 1 27НБ Ком сг Й ч ЗНО о Невму сг! ЗОВО дм ей Я Тор 26Н5 пеаму сі рев іджеги | Го пеому ог! І лено ом сік І Ді 27Н5 ревму сі Сезон Я 11 р и1812 пеаху, с п Со от со | | | зно мідні ! яке 2БА7 ой сяг 1 нт С Веаху сйг Мн 13НЯ ВОМ, сйг | 1 25А? Пеачу сої 77 ЗВБ дв с Я ішнн-- ЗВО Веаху сг - і- 3504 ді со 4 я-2 2782 пеаму сої 304 ЮМ сг ор бннннн ЗМОА Веаху сої снн-я«- -о ЗОАЙ Кові, сег я о щ. З1АЯ певху ої ЗВО ой сот і нннюнтнюннююннннннннннснннн ЗМІ Нпевуу сОГ рення ренні
10.00 10.00 заміни на 100 залишків. заміни на 100 залишків
Фіг. 13Е
2нвій зі зв іде со Меаоу сх БВ Кон 3089 І1пв песту, с т ВОТЕВОНОСЮИВ с я псевд г БО 10 МОс:198) сенсу для Групи 4: ізн 1ічасЗ звту КЕ шо Ей Ір ОМО:158 ке 7. ївна лідпт Мевту ах с; не; Ір МОо:158) ще (ЗВО ІВ НОг162 115 Зі Невху хіх о ОБ; ес яю о ЗО іромох Бе ва з нО:142у ВО т пе ни Ванни с (ко Іо вищі о (ББО ІЮ ЖОТІ52 у (вва Ів М
Бк . здо поду поч о. ЖЕО ІБ о МО:155) пе (8ЖО о ліва а. ІввОа та МОг184 зБНУ 119 сбповуу сак ши (БР б 11733) Ек ня вкО То о Ммо:187 оо ке ГБО т 11854, НУ зів девху, нн вЕО Ір ожю:1581 ШИЯ (жо ї пед БНО (ББО Ір МО:154) зії 14 леву сас ен шує т 11551 екв іо зр ощо: Й БО Я мч :154, зммоміяве нев е я ішно хромо:158 ша (вЕО тр МО:162, п. (ЗЕО 10 Ме:158) ДЕ ісп неафи се 00000 Шен ге) що зро що:16 5 ШИН хтяі ітнЕ ів ввечу ой о (зво тр огіе! ще поІЯ2) 00100 5Бо то юогіях) їтс2 119аб тва ок шо БО Ір оюх158) ОВ тако тп потів3ю кВ яБО 10 МО:155) БАТ 14 Зопвату сеау ОВ ОН сире То ма:1581 шен ско 10 МО:165 Б я гавО 1 515 ТАТ 1йЧах дозту сх її; іїБ5но хо мог1583 о (8БО Ір нвітв ! Я що могье5) т - о во ІБ МО:180) По (Ко тво не:іїдою Я БО ІЮ ЩО:ї84) горі : ши в сш пох с:1601 і ШИЯ поса ЕМ І5БО І магА64) торі зі9Ас пезуу тик МИ во тв омот15И ОО ІББО Ір катьЕд шо МБО Хо МО:152) зов Тачіх Зеху «у сах ШУРОКНОНО с ПІ вка: воіягь 5 КУ тако ІД МО:13) озЕУ ік ев ск г сЕО тр ОМО:ї6 тк ак (БО Хю МО:Б65) З ВЕС ІВ Матв! тЕУ 114пх лях 7 во ок Ше тїромо:1655) ВЕБ ЧЄВ ПИ 1633 058У (БЕЗ ІЮ МО:168) ізна 14 пт лекту, сах п НО 0ОБО то хо:168 шо ШОН БЕУ ІБКО її в Іва дать пахуу сЯЕ й. свЕо то мо 168) с (ЗЕО ІВ МО:І7 а кох МО:127 115 тер Я КА На ЗО тро: 68 еВИН ЗЕ Іво МНК ЖЕО ДО ОМОо: спливом ' 2 2 їі: На ОА о ЗЕ кОо:168) В п ш й 5ЖО 1 :Ат4х БОБ ; І3сь збо сповуу о й (БО о Жогтю) с (БО то ноті) | сеНО І? МО:18С дип педУм т винне фе при ЛО и ПКеВННН Кох ПИ І5ЕО ІВ В Н есе " го» омао:18 зе 1їдчи вауу сах ве ІБЕО 10 50:17 жАня М стр тв ОМО:ж78 ПЕлеНее (БО Ір МО палі че пвшум ВО ЗЕО 16 ж:171) с фра дя та ОМ : тр оЖщО:180) по пн ши БО 1 з пуше О М (8КО гоомо:1З ТОН пет 80) 101 11 я у саг ОД ПНЯ СЗБО 10 щО:17) Я ке хАши Пи пд МО: 41 п, ко Ір оМО:18 не - пввхУу ИН ДИВ ни о: ТЕ Бе ев пра 1741 ЕНН і тпомо:і180 275 тів «Вашу, СЕ п по 5БО 10 ОМо ни м БНО тб ОМО:175 і (8ЕО І0 ЩО 180 тата кг 0. (БО ІФ О.І в ни Ше то но:180) 1702 1ідає пеяму сі: 00 ШЕ ІБ МО1ТІ ЗКУ НН івво т хіт 0 (вБо 10 МОо:1380) ЗА 1 попвах у пах пд ско Іон 17І у ЕЕ пе 1 тромохіта у (ВКО їй ЩО 180) М ладає сажу с СОБКО ВЕО І мочз171; ват ни 0 шах «ввату сах 5. (ЕО Ір оЗО:172) с (8БО Ір Ммо:1275) п, (380 16 мог180) Ко! ПР БО то хогІт8 3 (ББС ТО МО:ІТТ) БО ІВ ма:80 Консенсус для Г що НИ вх ши ше но:180) 2382 1194 рупи 2: й ва. ввО Ір Мо:ІТ8 ши Іво 20 МОг180) звві? чаї пвачу сах Ше ооо в МИ ІБ МОсілої МОХ Бе ко Ірма й ві? іїане сах кеш свісукнвх у 1171 БОАНОО м хоа:181 завпе -клт леаху, сих ие ска Її Бе ї5БО ІБ'МО Би 1 об їїдоє Неату пак. п їко ІР МО:1К8) хо ххя Ір МО:181) нас ве ос твня шия - 2 сенввия 16РІЗ з19ис пеату сф с (БО тв МОг185) (ІНН сво то во 27АВ Зі нев Ту сдх в с5ва Ір охо:182 5 ШК тр о носї8лу ОБОВ 31211 дих надуу сах п. спро ту я 11891 шо СЕС ІЮ МО:185 еиюєвася б 31811 3199с Невту сі Б ІБКО Іо МОг182 Во а з омогівх) ОБОВ ОСББ Ір ОМ ЗІ Нея ЕЕ Мер Мо:189 ДИКЕ КВ. дв : НН СО ІБ МО:18ї) опеачу сах п ББо тоомо й) я зо хо щО:183) про (5КО т 1185) ли Уссах пені роя щог182 ОК БЕЗ Її тити пон (БЕЮ Хр ОМОо:185) ЗИ зіФрт Зак етика ких і8ва 19 Метр с ей І0 МО:183) ох бвВО ТО МО: гот гав12 ікони у вах ВЕбкеВОвх й і шик ІВ ХО:183) ПА ВЕО то в шо звик її іцчх Неат»у сах й. вка Іо я (во І Мов З вна МОгІіВЄ) звр5 їіЯнт педуу кар шила кота шоста пе ва у жк цосіві; дво т 1Же тирі зі ноя заг й: ВЕ могіаву МІ пезнвевиця ш-- ше Тр Мо:387) 272 тод тане пеаху са ПЯ КО ЗЕо що ма:188) ос сББО Іб КК ОА БО то Мо:188) ТАБ Їідах пеету сах ПК 5 ШИ тр омаг188 я а І8БО ТО ОМОТЕ81) Ваня т зіс1ї по певту, СЯЕ ще ІЗКО 10 жтяо ян І8БО То Мма:191) ВАНОМНННОВ (зво 1 4Азлє пеах : де Ме ФВЖО ТІ тая Бо я се (580 І тА ще кни ЗЕО То оКоОсї98 ЗІ зі9ах пеаху сйх й: шим тв яю пе б. 0 БО ІГ Моз кн (Бо То КОг195) ох ВАН Ж тво мо:188У ов МОБ в ЗЕ Магія яко хпоМО: й ШО вв 5 йо (ЩО То Мого) ОАЕ (БО ХО Мо:195) «о жжж 10 щО:150) й З тстлот МО: ах а сББО ІВ ХО:195 з пев м (БЮ ІВ МО:1951) ше роми 1195) й а й ИН Б у ізве тв ож) ши :194) СПОХА (ве Ір МО:195) ч сава Її 7
Фіг. 13Е хх «кг Бк) Ір о МО:19Б Конс зн зенсус дпя Групи 3: знє 1іув: веатт сах ВІКВВНЕНІ ій недху се т соверні зсз піде два щи п ХО ІВ ЖНК107 ШИ її т ПУТІН УНІ се СІ . оВпевячу сах о (хо Ір Мото ВИННІ (ско Б Аж ше ЗЕЙ 195 ЖКП жо гвоЩО:19 Й жЖЖЕКАЖ ОВ (ЗЕО І ли. й ПИШЕ сек їв оМОо:195, снення вче ііЧнЕ Аж жк ромо:198 у Пес зе з. мо199 ЗИ (5БО Ії не ВЕ псаму со з; ло. І5ЕО І о:598, ЯМ (БО ло Мо:20, не віч носту сох ПЕВНЕЗННК: ЮововкО тв о:20с р:2о1) 2 1ідв печу ВЕК МЯ (Ех Жх :200) їх і опевжу сах М БО Її Й осо КіЧнЕ Пеату А п ВЕ Вк То о мота02 ож коррзююрх вкхяашк Беата КО я Іво Ів оБО:703 ВКНВее и ви звик 7 ОВ з ОтВОБО:Я02 пи Ви Ноя В на (ЗБОЇ з кю яке ЗЕО ІВ МО:204 пи Ох дО Ір МО:2051 ВНДНОВКВВ що юю с (ЕС тв Мо:208) НЯМ сво зо во то в хоп ЗЕО зб МО:291) Консенсу хзжиткя ) ІВ о МнОо:206) шо (5БО ІЮ МО:2О08) с для Ви зво ІОВ, 2385 11 Групи Я: ПО р вБо то мо:308) 2385 1їі905 пеях поруки с опеячу сах пок ен 2504 1їдвЄ пеа у.-5ах век ШІ гллеачу сак повин ня ско трОМО:50 - МЕНІ (КО мо:709) МДЕ с ПО НОМу (Бво то мо:210) п во ІРО МО:211 рів 7 м и Нечая М | Коня 2385 1і4н5 по па ІОВ М т 1) квезя ше г овеатіане тових сах пвироння сх о жжжх 0 Іо ЩМО:212) її (ББО ХО МОЗ) па 1з9Чпо це 745 ши ї ле шк ЕНН зер ЧпЕО їЇ " о певху сах г (зно їр ко:зіз» НеКВЕОЮ ин (ББО ІЮ МО:212) вав кову сих па ОО і5кО Ір омо:216) ВОДО жк І5БО ї тя КИ гранях кккккиики З 1) Мо:217) МОУ ВН (БО хо Мо:218 Фі жкклакивичяя й іг. 13 г
Група 1(11 членів ) у сові 5ЕО ІЛ; сов 5ЖО їм совЗ 5БО НОсрА1 5БО я сова зкО но сриЗ 5ЕО ІВ ТО то 10 то І Мо: МО: о: МО: ко: що: 1 5В Консенсус тстЗБрУссуМвУуЗ 305 ЕУЗМЕРО 306 ЗБУТЗТЕМУ 307 5УСІ5 308 МІБАХМСМІМУАОКУОС 309 сЖСМрУ 310 25А7 ууалаєо висі, З11 укл.» 312 .....5.У. 313 й... 308 й... .Ш.В,, 314 .,М.,. 315 1702 4.......А...,. 316 ....... 312 ......М.. 317 ..... 0 ЗОВ 0М.....31ии3и.Е.. 318 ..М... 315 21В12 ую іюченкчкюу 305 0... 312 М....1.,. 319 ..... 0 ЗО .М.Т,. ин. 320 ...... 0 310 83 0. саолачн: ЗО5 ..82.... 321 М.......:..319 .....0 308 .М.Ж...1и:1.1.1.. 320 ...... 310 198Н8 0..М.. ис. 332 1.4... 312 1... 307 0... 308 у... униз. 309 й,.... 310 ЗНУ сазавалинасяка З0О5 сили. 310 вача. 307 0-48. ЗОВ 0.00 Мі.снхиинахнк.и» 393.01... 310 ЗБНБ ссслазлаяияяяи З05 .у113.. ЗМ2 0. З07 0.1... 308 0... 324 ...... 310 ЗІ осн З05 сяючі З1М2 їхали» З07 3... 808 0. Сиччичиникихх В2Я .х.... 310 ТЕ? сс. 305 011.51. 319 1.8. 307 0... 308 0.0... и... 308 ...... 310 20010 спалахи З05 зна 312 азни. З07 уз. ЗО8 ууїоинчнханикикчхх 309 0... 310 ЗВУ 00. игіаиняи 305 1.18 315 гази З07 014.1 308 у... З09 ...... 310 ІгГрупа 216 членів) Легкий панцюг їч сові ЗО жу сОво БЕО їм СОВЗ 8ЕО ІП Ії ІБ що: Ма: МО: Консенсус зЗсазиМмІСМНМЕУБ 325 ПІМКЕРО 326 страва У 0397 31011 ю.гсааанчетнх» 325 .5...65 331 1113: А.. 335 Ф8ОЄ о... 325 11:14. ЗАВ 11.11. 327 28ВІ12 осллзнинлняияия 385 їажннчя Зб гання ЗИ ЗЕ 0. 325 и... 396 00.1: 377 пе ни Я: НА А ЗЕ ТАЄ у... 325.11. 326 ....1::-:.8.. 337
Фіг. 13Н Група 2, продовження Важкий ланцюг : носвВ1 Бо н сода ие, н ср ЗЕ То І І: МО: Мо: МО; іс Консенсусє оБЕсСМмн о 398 1ТИМОСаМКУХАЮБУКОС 329 АТАдДрУУЖУСсСМІУ 330 31011 .У... 333 ...8....7..Х..... 334 б..УА........ 335 2ВОб ук» ЗВ дуувяаковавая няня нях ЗАЗ уза жжканчякачюк 330 ВІЙ 0..... 398 4... ачяаняя ЗАЗ ут янччняяя 330 ЗАВ олюялтяя ЗВ ду ючла яна нянитя ЗОЗ 0 узяття няння 330 156217 і ши ши о 328 скік іа вань» 338 іш ши ши ж ши ши ши ше ше ши ши 335 ТАБ 0.... 328 ...5. 66 киян ЗАЙ ою ва няня няня З
Фіг. 131
Група З (З члени) І сові БО ІЛ СоВО 5ЕО ОБУ СРВЗ ЗБО НОСОВІ 5БО он осоВО бо я совЗ во п Ти КІ і хо Ів Ма: о: МО: ЩО: МО: Ма: 1 в2 Консенсус БСБ5БОМІСБКТУМ 339 дММАКРО зва ВАБрОБіНАУ 341 ЖНМО за2 МІКООСВЕКУХУриІМиОо 343 ЕБМИСКАКЗІ 344 ЗНО слина... 345 0.1. ЗАЙ 0, 331 В,... 385 (1.Нигзчиитняя 347 ууіихяиМ 348 ЗС9 0... и.1:... 333 В..0..5 349 0... 343 5,... ЗВО 00.10... 343 0... 344 112 скул. 339 0.11. ЗАЙ ух 341 МК... 851 синяки 343 1... 344 Група 4(2члени) ку сові 8кО БУ сов? КО КУ СОВЗ КО Іо чо І МО: Ма: М: Консенсус ВАВОБІБ ХІІ 352 Ай 5І05 353 ДОВЖ РІТ 354 ек за жжжиняяи ЯЗ чи Аля ЗМО А. У 2385 «14114: -8... 358 ..4.... 359 ....,9... 350 я сові во п сов? во но ср БО Її їЮ їб МО: МО: Мо: 1 Консенсус втамм 351 тТІосбСвВо МІЖХАЙОУКО Зб КЕУРМУТАМІХ 353 25014 зазна ЗБЇ асо Огаччяааняї ЗОМ зазнало» 33 2385 бі 361 011411. Зб узи 363
Фіг. 13 Гей о -- 4 - І і) - щи піти і т чт ФО щ- - ше Щ Ге 4 Н у шк | 7 Ж | ни ч Ж ї й у ва -7ож Ж Н щЇ - 7 Ше - в В шия і о. ка Е ТКА І к-т о -0-5 0 щ - хи | в 5 шк со хи Пт) я М З | ши і ит ше кн ни ШИ и Е Е ун й й в уй І т 4 з с їй ---- Плацебо о дної м Шан х . ко да з ке 4 -йк- Которта| (КТ) І | о в ; г 4 У оди в ко " су» Когорта У (КТ): З 05 що Когорта З (Каті - І У , у зеейкн- Когорта 4 КОТ) е «100 с д х І сер Когорта 5 (Кат) г : . Н ) у а В) 79 40 о що дні піспя першої дози Доспіджуване лікування проводили . 11 раз натиждень (КТ) Х тразна?тижні(К2т) У 1 раз на 4 тижні (КАТ) СП: стандартна похибка
Фіг. 14
Початкове значення РОВКО, Середнє значення (стандартне відхилення): ж Когорта З: іа 5 40- З Зо (88) нонл. в Когорта (: 486 (214) нгімл ке йо 70 І» ще : Ко Ей й і З ? г І не ШИ Ка є; р І: Ж | й Ї - | ЛЯ 5-0 ь о в у / я с З Й ря о 00 іх , / ж ву ще І - Шия Ж ---- Когорта ЗК), ї -0 п Низька або середня доза статину Гн й щ Й
8 . т т г. -- Когорта ЗК), Висока доза статину 8 -і І; - Ї Н т І Н ї Ер 0 2 40 бо яО Дні після першої дози ТУ Доспіджуване лікування проводили 1 раз на 2 тижні (К2т) ст: стандартна похибка
Фіг. 15 Га
9. шо й Ж і ж і 54 | І 9 03 бе ї- я с я: в 4 і «й шк « А р й А Ти зе ї Н 35 -е ша я Бі Ех 5 20- ї ГТ. я -ї ТЯ я пн УС е 1 й -- є і ї й: щі Кся ик / на й ! с шк ї ж ї са 0 АХ , ЩІ и -- Плацебо Я І ке "ЕЕ го ; --к- Когорта (КТ) и ше: в: сових нен Когорта 2 (КТ). Е: | І "ИШЖхї І -- Когорта З оті о 4 ї х ї сейк-Когорта 4 КОТ) І їх о і : сн Которта З (КАТ) З Її тт ху тет їй дон зни зам них зп п кинь зни кими Мол знання зн зни пн мил пити прин тонни нин о 250 40 60 о дні після перної дози Досліджуване лікування проводили : 1 1 раз на тиждень (КТ) ХК разнатижнікК2т) У 4 раз на 4 тижні (КАТ) Сл: стандартна похибка
Фіг. 16 й о - ХЕ Когорта низької або Когорта високої є середньої дози статину дози статину Ка Кт Кот кат К2тТ їй і 5 Її т 5 ро тА Н ї їй ! й З й с й Плацебо Ж о пк пай Пе йше пов пс 000опе1й ФО я ше ше шини нини ин мох пи по пон пн по зи пон нишшишшншшшще бод ши ши ше 7105 ши ше р ВО | шк ще
Е я. ши ще ще 5-20 р ше о : шк ше е і ш ще В 80. щ- щі шини шк ще с ті щі є і «і» : ші пішіє й : ! м нини и ши ши ЖЕО ж б -50-4 7005 проти плацебо ій Значення або суб'єкти, що різко відрізняються, з початковими або скринінговими значеннями нижче за нижній ліміт кількісного визначення були викпючені з анапізу СП: стандартна похибка ї КТ раз на тиждень, КАТ С; 2 рази натиждень) КА о, 4 рази на тиждень
Фіг. 17
Е ж о 23 804 о Н я З і ж 404 и ше що з т ві Х Її 4 Х і ; і Н і Н є б і Ше з ; д- Я к- 5204 ше ше шо ная Ж і ; Й 4. а А ооо що й ' 0 и Їкк ІЗ ж Н З 604 ї-- и Ж 4 І з мне І я - ВО : й й «ве Когорта плацебо ГеРГ(К2т) 21 | і -ен- Когорта 71812 ГеРГ (К2Т) ерО-100 кн нн и и нн и в В о и; 40 бо Во дні після першої дози Досліджуване лікування проводили сп: стандартнапохибка ; КОТ: 1 раз на 2 тижні
Фіг. 18 зЗ88
- й » Е в 150.
5. га -
00. во 100 . : 9 і Н 7 су сет і ТЕ --еЕ т - я з | - , ше , т о 504 | | І ше іх 50 ї ЦІ ШИЯ Т | і в-- са ї ! ОА МАК Ин / 1 З Ми 2 ; а я х : ! я. т г -50 7 Н я 1 І з Н р о. 1005 о- -к- Когорта плацебо ГерГ (КОТ їй | ! : | -ь- Когорта 21812 ГеРг (К2т) 0 4 40 БО 80 й Дні після першої дози і Доспліджуване лікування проводили СП: стандартна похибка ; КОТ 1 разна 2 тижні:
Фіг. 19
ДГ ж ря Ж Гея Кай ш с ФО 20 Т -Т Т р о 5 | і Шк шО Ж ; Я ня о - шо в а щ і м й Ши м в- а що у о НИ; ші 5 5 | | 7 плани ши В! г гх 1 й. сін -к- ЕБ | й - Б 40 о : і най о ях х й. й Я не я --й- Когорта плацебо ГерГ(К2Т) оовівння аа 60 | і і «Ф-- Когорта 71812 ГеРГ (КОТ) ва пк п ВИ й о 40 бо ВО дні після першої дози і Досліджуване лікування проводили Сп: стандартна похибка ; КОТ: 1 раз на 2 тижні
Фіг. 20 те
9. Ж ж Ф й І й б е 50 5 Її м 40 т У ' о о . - 8 20 тт тт ше ї ї 5 0 г! р аа ! - : й ЩІ пе ою т - ри в! ; ї Ж
9. -40 щ Ей ій рей хо Ша в -К0 --- Когорта плацебо ГеРГіка2т) с ; й і -- Когорта 21812 ГеРгГ(К2т)
Ф і. и ' М ЩО Н См мими мами чамона повна залив милими малими поимх зомиломи поивони звивини поовних покори: помиви панни замов й я 40 о 8О Дні після першої дози досліджуване лікування проводили Сп: стандартна похибка ; КОТ 1 разна тижні:
Фіг. 21 її й щк зі Нм В) Ж шо 405 о / 1 за тт 54 к тт їх Ж : Я і 904 ! Ш - с і - | Фі що - ШИ Пррн-я « : їі кеш ши ШИ шо й і М ї 5 405 ) са ї се М Я с жи в 0 сні Которта плацебо ГеРГ (Кат) «ї : і і ; -ве- Когорта АМО 145 Гер ГГ (К2т) -КО0 вк вия В й А Ай кі Б дні після першої дози і Досліджуване лікування проводили ст: стандартнапохибка ; КОТ її разна г тижні:
Фіг. 22 а б 05 що Е о : 500 -- с пики Ко БОБИ ! й | ДА ММ Є і ПІІ. щ -- в рий КЕ о оби ще о БО БЕИИ Ї «вик к їх -40- А і Б«0001 проти плацебо "рейх проти плацебо ну і лиже Т о і я щу й Ку 4 ч во й й 21819 кК2т(Здози), суб'єкти Герг і: . ни КІ 1812, суб'єкти не-ГерГ з однаковими дозами Е -дп- Й Плацебо, суб'єкти ГеРг СП: стандартна похибка
Фіг. 23 х | Плацебо с 04 но ЧІ нини нини сни "В и ни о ї у - - Ї У 580-204 У ще | їх га га | Ів А. 7о НИ - 105 ме Я ЕЕ Ф Й Ши чання офрчнненентнЙЬ я в | 140 мг хв Ера 0 4 4 б ши ген Тиждень
Фіг. 24А У | Плацебо і ' с 04 ня рн не хмкглл сн їй о | г -5 сетер Е 5 оо 00 -й0. 5 б ЖЖ ! х 5540 я 3000 Ге : роя Ку- я ЯМ мг Є ЖОЖоО 00 У и ний ) «еве ду й вх Ку р, ЕМ ра У Й 5, ро 420 МЕ : г і г ; ря й Н о с т «ВО шк ин ан Ін 02 4 68 8 102 Тиждень
Фіг. 248
«о о 0. проносне» поронкноссос ще пхднннонессесдпосавороонесесооскрвнгя ш- ше Н : З : - тт ож ї | І | ї хе | | Й ншщ : УВК ж ши ШИ бе ще рот і ; че І | | -- те і їй шо Е снедстос пеніс ж жо в. БЕ ще | Всізначення ри кт на аа а Ямг о ЗОбме о З4Оме еВОмг Зббхмг 40 ме
Фіг. 2БА
15. гре002 ре0 00 реа о | ре0.005 ре0.19 ребобо б с 05 . І ТО ож: ПЕ - шле ШЕ ще ої ! нав |. | | | в ет кт во ш ши Я 0 ті нні нанні нні нні нн ні нн ТОмг о Обмг о і4Омг У8Омг Зб мг о 400 ме
Фіг. 258
20 рад 03 р«0001 00 ребог3 о р«0077 редля р«0.088 0 пиши их а пи и І 11А- 1 се | гот ше в же че) меч ші ЖЕО я БО нн нн ЯОме о ЗОбмеб о і4Оме б мг ЗбОмг «ме
Фіг. 25С я шо ей В чен М р«0. 00 де0 и реддю5 5, робот 00003 рабом р З ї Ві Н о ХЕ. | | щ 58-20 | | я -т Ед 5 шк ЕЕ й ПТМ ПВ ТОмг о З05ме і4бмг УВОмг Зб ме 40 мг
Фіг. 250
14п о грунт нюннтннинтеснтннттсесненикннессенанноососннетнгонтяненеоососнасооюеннтентосооетнтннесососоннснн т 15003 0000 | я ЕН і печинЕ | т вч ни яті бю А я : рі Н 7 їі : І : І 20001. ши НИЙ! щи | ще ще у лов ниншишишиши 41 і. і В щ щч в Ж ш шо ж щ х дж Ч 5 В 5 9 5 Х 5 Е Ж 5 5 5 5 5 5 5 8 9 5 Б 8 е Б о ЖЕ 5 8 є Ко ке б ЕВ в х Е; Я в в ве що б о м ж хе а кх жа о - е іх о 2 З КЕ: в Е: й 5 ве щ - хх Кз Стабілізатор / Допоміжна речовина
Фіг. 26 3 1004 л і / шо /
б. / - і
В б. / Е 5 ї / БЕ І / ш 404 / і рі в і | Щ п на ї фон ВП що То ВО що що ОО 401 Концентрація (мгімлі тн Контроль --305 Пролін
Фіг. 27
225. А БІ ой о / - 175 і З 150 / Б 15. / й 100- її 75 ра й ря - ві фас 25- - В о ' вс зовн 0 70 Вб 100 10 120 130 1490 150 160 170 180 90 200 20 25 Концентрація білка (мг/мл)
Фіг. 28А
УБ0. 225- наж7 я афоБс
200. / ри - Ї
175. / у З 150 о /
195. / / я о рі / в Ф40с ї5 ок а А ща. рай п вес , р з. ша 070 80 90 00 410 120 0 340 50 160 0 180 190 200 9 220 Концентрація білка (мгімлі
Фіг. 28
20 2 Й вк / веж й неже / 2004 І / 2754 / 18564 и Дяк Н М ; о | / 7 з Ф40с : | ря Ві ра 4 р 34 йо итеюс 54 те ра в зв. Йо БО 70 Во 90 200 110 120 130 140 150 460 170 180 100 200 210 220 Концентрація білка (мг/мл)
Фіг. 280 Кі п «вд с в. й /лвазвс г 7-х ЕЕ: гі
00. тег / Ї, в 115 і / а 150- / зай і: 325 | ре! гео ще Ж 00 А ра я рай х р уяв ко и ней сни «7 Й дит в ШИ нене нн нас в птн поси в ПОН нн 60 0 80 90 400 410 390 130 40 Бо ЯБО 0 80 90 900 910 920 Концентрація білка (імл)
Фіг. 280
ЗМ г є і її 8 зв ; ! ОО 2 сх т тав г : Їй З І З | З ї Е 2000 й ч і ві М Я и З я 35005 УЗ я щі їн Н ск і щі то 5 ! - з ЩІ гп1тх2М й Н Н Н Ко З і І ЧЕ ГТМ 5 - ЖЕ ЕН ВЕ МИ і КОВО КІ НІ ОБОВ З Н ! ЕМО ЕМ ОБ о ше не ни В й МО шення МЕ Ї Її ї 7 те де те 0, їй «о ре т РУ в і м рі і і со, о, ге в- -- рн І - то -3 - т 2 то - ГЕХУ Ро 2 : що гі р. то до же -Е - ще «Е щї до ща Ф Я 158 т й 53 РЕ Е 25 ; пл : М Е - І м) «з са З і ї- т, с о Композиція
Фіг. 294 - ЕОЮУ х в й : : м іх З : с іх Тео ш 40-00 я Ку | ІЗ й Ге : т КЕ -ш ! Ж ще Кі |З ен Ко рок Нх х т Б М ще . їх Ще НН: в ЩІ й ! ТЕ ов ; | З Г1тчим за ЧЕ в 5 й | х е 7 20 З Хе й х Ка А | З М я Ек ЕЕ х Ул й з З Я Е Би . В ОН ШЕ. Кк х ї - пт НІ ще. . ше ші втезм 5 юн в Ж ше ще З В ів т Ко ні Б Ек Не Її В ЕВ ттиє «АК вв Пай п -Н М в птевм пе г т с, Ф Ф, де ку м - в- яд в т- в -, о, о, Я 8 5 4 а 5 з 5 є їзй - м) «о - ше їй ще пз где З й М - «3 «Е с 5 сх же це с 3 С «З ча щ щ 25 р: че в ні - вся - ге Ко « й в жи рак Н р - і Баку «Е м і рак з Е щ- «о її с «т, тех к-т и ях я «з З ! чх ні -я- о - У Н со! Композиція
Фіг. 208 в щ Во є 2500 Частинки розміром 10 мкм Е о КН СЯ Тед а ; 7 ее су це ж А З 1500 й г Тайм 5ооовдя й ск т і; До каювня син на Не 1 2 З 4 5 5 7
Фіг. З0А Е та) Їх) В Частинки розміром 25 МКМ ЕОО505 КЗ ! й ТЕ (5) І су ен є і - 204 р х | до в. 105 І 5 ру Бо оішжЯ га з С -К Й Бз- 1 2 З 4 н б 7
Фіг. ЗОВ Ї «а РСВКО Й шк «аа РОКІ ШЕ Ки в ща В мае фурин щі с гі - М, І ифіжннееомнлн Віко чт ОК АЖ Юх жж лети о пря В КВ нн 0 5 10 15 20 25 Ї Пропротеїн конвертаза| мкг/мл
Фіг. 31
4. Шон
Е. 2 З Х в рент Шен нн 2 4 Є 8 ЮР ПМ
Фіг. 32 З --Й че й ЯК зм - ПН щі що КЗ ! 0 Що 4 З 4 5 б о 11 пм
Фіг. 33
! | п Оз ДБ данні що м ше Й ше р: я 9 дощ Фе Я З й с ше Кон 23747 гй и . Ж У 85 в о 2. й м ї -е щу чн вн НИ ШЕ 105 : п ; й по по 05 10 15 20 2.8 За
Фіг. За 0 55 Ї че КВ ї заміна (В й Кон ДТ Р жо нн жк Й е 25 4 А (6, й Й 05 10 15 20 25 30 3.5
Фіг. 35
Ї т - з - т | | 7 в ї й ! Г а щ В пе хв т ше І ех ї я ІЗ се КА. | ж й | ! Й їй | | АК кін МАЕ ик, ля вик 1» і ! і и нн а ша У. ми ие Ти ШЕ літе І Ах В пиши ни Те ще т ша ще 1 Я З 4 не Час піспя ін'єкції (дні) СГ во? ВАЗ С
Фіг. 36 є ; Е оо п . д, З Ї ІЙ | Ж з в. ни х Іде пе ой ПК Ф як | ІК 1 їж і | я кН Б 1ИКООЯЕ ІКНІ шНІ е АК АК Її Я с ни | ИМЯ их є ж кн ТКА І виш І К.
Е.О их хе й- | В, Е і Ей т рих І У ї БУ ек и И й дня пиши реко вксвнвенннтя пишне Зо нянні ча повно рийдння 1 а З 4 5 Час після ін'єкції іднії т юс? ГИ ВАЗ ЗОН
Фіг. 37
150 4 Е ких І» их НЕТ Кит ще ПИ Як / | у Ї | і м й йк шо 0-3 Ї і й Е с ІЙ ї ІК тк | і - Ки (я Ки и : ПК о ---МАК екв н ківш міч І Ж 1 2 З 4 5 Час після ін'єкції ідні) ГІ о? 224 ВАЗ ОЗ 4Е!
Фіг. 38 Ех ях ш 000000 - о о - -к що о Щи К с | зве, де шин щі -ео І5е) джек, ння ня леви Ху Шен м а ок ов Шин шин ше ЩЕ ШИ ШЕ: ! Бош 100000- т і р)
г. ке Ж ш гу склял З 10000 яння - 0 1 2 З й 5 Час після ін'єкції іднії -- Юа -е- ВАЗ -
Фіг. 32
Антитіло АйсСод імкг годімп) с да (млі годікг) Очевидний і, і? щі Що? 23,500 ді х120 МЕ 34.700 0805 83 ВАЗ 35,700 0817 во пок чн есте чні тн неточне нн пек тен Неон тенСкнчкетсоетнк чесне
Фіг. 40 ВО г Ж, йо шк ШИ Ши а МЕ, рт не г ч ю ї | Ві їй ра дек Ж й наці ї те ; тай оре неон м І Я: 7 в«ООддо 0000 0 тенту пре рнринрнрнн 0 3 6 9 12151821 24 27 30 53 360 39 425 45 Час після введення (дні) за: анти КІН - 21812
-ж. ВАЗ че
Фіг. 41
1401 А І ше ще й. г й Ще тк с дн ки ри " кни Ж он шій 5. я опори т 27 дет зер ер 100 фі ГК ЯК: ще б «002 800 В вовчі є ої р. 0.0004 вод і З ЗО 0 3 6 9 12151821 24 27 30 33 36 39 42 45 Час після введення ідні! «я: анти-КІН -- 21812 -ж ВАЗ я
Фіг. 42 вОге я У Гн гай |В зак й сн пе -ї- "й й Я» а сви кс шк в: зе з В 80 й В ж з 40 (й - їн 0 3 6 9 12 151821 24 27 30 33 36 39 42 45 Час після введення (дні) о анти- КІН -- 21812 -ж- ВАЗ 11
Фіг. 43
4 Аж К У С іже їж. й Не ну Я нак , | М ЧА Ше : ЗИ ут ж ор 0 3 86 9 12151821 24 27 30 33 36 39 42 45 Час після введення (дні) «з анти- КІН -- 21832 -ж- ВАЗ не 11Е1
Фіг. 44
І І І В дал - М Бодя ГУ веоомаооди фронтон ненні нена 03 6 9 12 15185254 2730 5 Час після введення (дні)
«в. анти- КІ Н - 21812
-ж. ВАЗ я 1
Фіг. 45
МО об з ще ши се шк ! ї що Я з с - с | ни щ- шк - 1000: к-т ТТ.
8. ро хв ке т й щ Ї зе г -В г У офрнненоо, її 5 їз |. сі Ши Е | Є ве - ; КО 100 ХМ ш 4 я с в. ї Е Ех : зе ОЗ й 95 12151825 юю 3543 45 Час після введення (дні) т ТІ -няк-- ВАЗ сан 18 --анти-Кі Я
Фіг. 46 Фармакокінетичні параметри, середнє значення (Її стандартне відхилення ) Ніах се Стах АОСаен ОО Анти-ГЦе (годі імлі годікг) іімкгімлі імкг" годіми) Анти-КІН 2201130 09340036 БО Т015 2170130 212 4015 ТБ7ТО6В 6091901 355 7109 Я 21010 02980081 6727062 ЗАКО ТУЮ ВАЗ 19040 02550039 663006 980 5 280
Фіг. 47
Порівняння послідовностей варіабепьної ділянки легкого ланцюга і консенсусна послідовність (ПК, НОСОК ОО НСВВЗУ підкреслені у ХА: Послідовність варіабельної о а мОохавЗх СОЛО Па МО КИ го ТО ча СО діпянки пегкого ланцюга БО Н че 55 ХА: Послідовність варіабельної коп МОоЗВ Сором СО БО Па МОЯ СО ділянки легкого ланцюга І5БО НН МОЗ 12: Послідовність варіабельної взмозі ЗВО чо СТІ (КО 1 ЧОМУ СІ діпянки легкого ланцюга «5 во НН МО 503 Консенсус: Послідовність варіабепьної (ЗО ЦІ МОБ СВІ КО МОЗ СКЗ чо ПО МК 5ОЯ у ввнки пертого ланцюга ІСОВЗ(55О ПУ МО: 584 БА: УМ ТОРБУ ТиСКВАВіН ВВЕ НУМО УМО ОКО МА АХ СЕНУМТОВА ЯРУ ТРОБРАВІВСВЯВОВИ НакМОУКМУ ТА ОК РООВРОГІ ТУ СеМВА ІН 1ГУМ ТОРІВ ВУТРОБВАВІВСКаВОВ УМО МУ СУУГОКРООВРОТІ ХК А Консенсус: ІЗ УМТОБРІЕЗРУТРОКРАМВСВВМОВ Немо ММУ ВУ ОКРООЗРНІ ТУ ОЗМКА А ВОУРПЕРИИО ТОК КІЗ У БА УСУ Ж УСМОАЛЬСТРОТРОС ТК УВК 1250 НО МО 455) ЗА; ЗОУРОКЕВОВОВОТОКТІ КІВ УВАКЛУСУУУСЄМОАЕОТРЕ Трос КУБКА 2(5БО НІ МОТО, ПЕ: БУРЕ ОВОВ НЕО З КІВ БАВВУСУ У УСМОТЬО ТР ТРОС КУ ВІКУ СО ГО МСКАВХ Консенсуєї ВСУ РІЖКИ ам Т ХА КІЗКУВАТЛУСУХУСМО АКТ ОКР ОО АУККАЯ 12 52 ЦЯ МОЗ Хі являє собою Ноабо 1); Хо являє собою Б або 1; Хх являє собою 1 або А
Фіг. 48А Порівняння послідовностей варіабельної ділянки важкого ланцюга і консенсусна послідовність
СЕМ. НСТУ І НСОКО підкреслені ); ЯА; Послідовність варіабельної ПІ МЕКЯО НСВЕТІББО БО МІ СОКІВ О МОУ ПСО КЗ ділянки важкого ланцюга (БО ЦО МОЗМ Ії І БАД: Послідовністьваріабельної (5БО І СКЯНІ ВСІ НО міх НОЗІ яКО ОО Мен НСОКІ ділянки важкого панцюга ВО Та МО ТІБІ; Послідовністьваріабельної БЕ ОО НСВКІіСБВБО НАМО НОСПКО ВЕС МОЗ; СК діпянки важкото ланцюга (БО Ця. МО:5ОлІ І І Консенсус: Послідовність варіабельної ЯББОТО КОЗУ; НСПКІФВКО То МОЗ НОСКОМ УКОК діпянки важкого ланцюга НСПВДЕВО ЇВ МОВ ВАХ БЕУОСУКЕО У ОВО КС АКИКЕ РОКУ МЕЖ УВОАРОКОСНВУУАМКОВИВЕКУ БІК: ІЕС УВО МОСС М КІС АЗОКТ РОМ МОЖ УВОАРСКН ЕУМАВКОВОЗАК УМ зді: БЕУССУВН С У ОРОСВ КІ БСААХОЕТЕО МУ КМТ МУУВОАРВОКОЕУУАВІКОВОВЕКАУ У Консенсує! ЗЕ МОРС ВІВСА; УМА КАРОКСОКЕЖУАВКОМВСВЕХа У БАЗ: УВУ КСВЕТІВАЛМАККЕЕ У ОМ ВАТА УГА УСМУТО ОО УХ УСІМ У ГЕ: УВВУКОСВЕАЇЗВОМАКМУСРІОММУН ВАЕСТАУЄТУСАВВ У МУ УОМОУЖ БА: У ВЗЕжКСЕКИВКИТАКМОТ ОМ КАББРТАУУЖУСАНРЕУ МУЖАСНТУ МІУ Консенсусі ЗУ ВУБОКЕХАІВ ПХхА ХА АЛАО ММ КАВА САВА У МУХ Хе ХО МОУ У БАХ сс гу ТУ ІТ ЕКО НО МЕКЯО) НИ ОО тТтУТУВКАЯАЛТ ЗБОЮ МОЯ А ОБО ТгУутгтУБВІОТ КО НІ МОКАВІ Консенсусі АБО ГТУ гУувеО7ІВКО 10 ЩЧО553) Й Хі являє собою 5 або М; Хо являє собою 5 до 1; Ха являє собою К або КЕ: Ха являє собою А або Т; Х: являє собою М або 1: Хе являє собою Ко або КЕ; Хто лилялє собою ХУ або Е; Хе являє собою ГП або В; Хо являє собою або А: Хі являє собою або 1: Хі являє собою ГП або Но Хі: являє собою Сабо НЕ
Фіг. 488
UAA201703902A 2011-05-10 2012-05-10 Застосування анти-pcsk9 антитіла у виробництві лікарського засобу для зниження рівня холестерину UA126229C2 (uk)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161484610P 2011-05-10 2011-05-10
US201161562303P 2011-11-21 2011-11-21
US201261595526P 2012-02-06 2012-02-06
US201261614417P 2012-03-22 2012-03-22
US201261642363P 2012-05-03 2012-05-03

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA126229C2 true UA126229C2 (uk) 2022-09-07

Family

ID=46124771

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201703902A UA126229C2 (uk) 2011-05-10 2012-05-10 Застосування анти-pcsk9 антитіла у виробництві лікарського засобу для зниження рівня холестерину
UAA201314464A UA114602C2 (uk) 2011-05-10 2012-05-10 Способи лікування або попередження пов'язаних із холестерином розладів

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201314464A UA114602C2 (uk) 2011-05-10 2012-05-10 Способи лікування або попередження пов'язаних із холестерином розладів

Country Status (36)

Country Link
US (2) US20130064825A1 (uk)
EP (2) EP3597218A1 (uk)
JP (3) JP6166717B2 (uk)
KR (4) KR102528752B1 (uk)
CN (3) CN107261139A (uk)
AP (1) AP2013007303A0 (uk)
AR (1) AR086344A1 (uk)
AU (4) AU2012253434B2 (uk)
BR (1) BR112013028819A2 (uk)
CA (1) CA2835294C (uk)
CL (2) CL2013003214A1 (uk)
CR (1) CR20130640A (uk)
CY (1) CY1122967T1 (uk)
DK (1) DK2707029T3 (uk)
EA (1) EA031228B1 (uk)
ES (1) ES2781749T3 (uk)
HR (1) HRP20200545T1 (uk)
HU (1) HUE049018T2 (uk)
IL (4) IL311262A (uk)
JO (2) JOP20200043A1 (uk)
LT (1) LT2707029T (uk)
ME (1) ME03765B (uk)
MX (2) MX2013013187A (uk)
MY (2) MY173860A (uk)
PE (3) PE20141159A1 (uk)
PH (1) PH12019501274A1 (uk)
PL (1) PL2707029T3 (uk)
PT (1) PT2707029T (uk)
RS (1) RS60292B1 (uk)
SG (1) SG194855A1 (uk)
SI (1) SI2707029T1 (uk)
TW (5) TWI809272B (uk)
UA (2) UA126229C2 (uk)
UY (1) UY34063A (uk)
WO (1) WO2012154999A1 (uk)
ZA (1) ZA201309173B (uk)

Families Citing this family (154)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JOP20080381B1 (ar) 2007-08-23 2023-03-28 Amgen Inc بروتينات مرتبطة بمولدات مضادات تتفاعل مع بروبروتين كونفيرتاز سيتيليزين ككسين من النوع 9 (pcsk9)
JO3672B1 (ar) 2008-12-15 2020-08-27 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية عالية التفاعل الكيماوي بالنسبة لإنزيم سبتيليسين كنفرتيز بروبروتين / كيكسين نوع 9 (pcsk9).
US20130064834A1 (en) 2008-12-15 2013-03-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia using antibodies to pcsk9
RU2604139C2 (ru) 2011-01-28 2016-12-10 Санофи Байотекнолоджи Фармацевтические композиции, содержащие антитела к pcsk9 человека
KR20140021708A (ko) * 2011-07-14 2014-02-20 화이자 인코포레이티드 항-pcsk9 항체를 사용한 치료
AR087305A1 (es) 2011-07-28 2014-03-12 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-pcsk9, metodo de preparacion y kit
EA028278B1 (ru) 2011-09-16 2017-10-31 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. СПОСОБЫ СНИЖЕНИЯ УРОВНЕЙ ЛИПОПРОТЕИНА(а) ПОСРЕДСТВОМ ВВЕДЕНИЯ ИНГИБИТОРА ПРОПРОТЕИНКОНВЕРТАЗЫ СУБТИЛИЗИН/КЕКСИН-9 (PCSK9)
EA039663B1 (ru) * 2012-05-03 2022-02-24 Амген Инк. Применение антитела против pcsk9 для снижения сывороточного холестерина лпнп и лечения связанных с холестерином расстройств
US9255154B2 (en) 2012-05-08 2016-02-09 Alderbio Holdings, Llc Anti-PCSK9 antibodies and use thereof
US9266961B2 (en) 2012-06-15 2016-02-23 Genentech, Inc. Anti-PCSK9 antibodies, formulations, dosing, and methods of use
EP2882778B1 (en) 2012-08-13 2018-04-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-pcsk9 antibodies with ph-dependent binding characteristics
US20160032014A1 (en) * 2013-03-15 2016-02-04 Amgen Inc. Human antigen binding proteins that bind to proprotein convertase subtilisin kexin type 9
GB2523527A (en) * 2013-04-05 2015-09-02 Weiming Xu Screen compounds for the modulation of proprotein convertase subtilisin/kexin type 9(PCSK9)
TWI679019B (zh) * 2013-04-29 2019-12-11 法商賽諾菲公司 抗ｉｌ－４／抗ｉｌ－１３之雙特異性抗體調配物
US10111953B2 (en) * 2013-05-30 2018-10-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing remnant cholesterol and other lipoprotein fractions by administering an inhibitor of proprotein convertase subtilisin kexin-9 (PCSK9)
EP2810955A1 (en) 2013-06-07 2014-12-10 Sanofi Methods for inhibiting atherosclerosis by administering an inhibitor of PCSK9
EP2862877A1 (en) 2013-10-18 2015-04-22 Sanofi Methods for inhibiting atherosclerosis by administering an inhibitor of PCSK9
EP3004171B1 (en) 2013-06-07 2021-10-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for inhibiting atherosclerosis by administering an inhibitor of pcsk9
CA2916259C (en) * 2013-06-28 2024-02-20 Amgen Inc. Methods for treating homozygous familial hypercholesterolemia
CN104371019B (zh) * 2013-08-13 2019-09-10 鸿运华宁（杭州）生物医药有限公司 一种能与glp-1r特异性结合的抗体及其与glp-1的融合蛋白质
ES2779126T3 (es) * 2013-10-11 2020-08-13 Sanofi Biotechnology Uso de un inhibidor de PCSK9 para tratar hiperlipidemia
KR20230119045A (ko) * 2013-10-11 2023-08-14 사노피 바이오테크놀로지 고지혈증을 치료하기 위한 ｐｃｓｋ9 억제제의 용도
CN118105482A (zh) 2013-11-12 2024-05-31 赛诺菲生物技术公司 用于与pcsk9抑制剂一起使用的给药方案
KR20160079124A (ko) * 2013-11-20 2016-07-05 사이머베이 쎄라퓨틱스, 인코퍼레이티드 동질접합성 가족성 과콜레스테롤증의 치료
US9045548B1 (en) 2014-07-15 2015-06-02 Kymab Limited Precision Medicine by targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment
US9034332B1 (en) 2014-07-15 2015-05-19 Kymab Limited Precision medicine by targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment
US8883157B1 (en) 2013-12-17 2014-11-11 Kymab Limited Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment
US8992927B1 (en) 2014-07-15 2015-03-31 Kymab Limited Targeting human NAV1.7 variants for treatment of pain
US9045545B1 (en) 2014-07-15 2015-06-02 Kymab Limited Precision medicine by targeting PD-L1 variants for treatment of cancer
US9051378B1 (en) 2014-07-15 2015-06-09 Kymab Limited Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment
US8986691B1 (en) 2014-07-15 2015-03-24 Kymab Limited Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA
US9023359B1 (en) 2014-07-15 2015-05-05 Kymab Limited Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment
US9067998B1 (en) 2014-07-15 2015-06-30 Kymab Limited Targeting PD-1 variants for treatment of cancer
DE112014005747T5 (de) * 2013-12-17 2016-10-06 Kymab Limited Antikörper zur Verwendung bei der Behandlung von Zuständen, die mit spezifischen PCSK9 Varianten in spezifischen Patientenpopulationen in Beziehung stehen
US9017678B1 (en) 2014-07-15 2015-04-28 Kymab Limited Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R
TWI713444B (zh) * 2013-12-17 2020-12-21 英商凱美寶有限公司 人類標靶
US8986694B1 (en) 2014-07-15 2015-03-24 Kymab Limited Targeting human nav1.7 variants for treatment of pain
US8945560B1 (en) 2014-07-15 2015-02-03 Kymab Limited Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R
EP2886558A1 (en) * 2013-12-17 2015-06-24 Kymab Limited Antibodies for use in treating conditions related to specific PCSK9 variants in specific patient populations
EP2975058A1 (en) * 2014-07-15 2016-01-20 Kymab Limited Antibodies for use in treating conditions related to specific PCSK9 variants in specific patient populations
US9914769B2 (en) 2014-07-15 2018-03-13 Kymab Limited Precision medicine for cholesterol treatment
WO2015092394A1 (en) * 2013-12-17 2015-06-25 Kymab Limited Antibodies for use in treating conditions related to specific pcsk9 variants in specific patients populations
US8980273B1 (en) 2014-07-15 2015-03-17 Kymab Limited Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA
KR20160124787A (ko) 2014-02-21 2016-10-28 메디뮨 엘엘씨 항-pcsk9∼glp-1 융합체 및 사용 방법
GB201403775D0 (en) 2014-03-04 2014-04-16 Kymab Ltd Antibodies, uses & methods
CN114642661A (zh) * 2014-03-17 2022-06-21 赛诺菲生物技术公司 用于降低心血管风险的方法
ES2701094T3 (es) 2014-03-20 2019-02-20 Cymabay Therapeutics Inc Tratamiento de enfermedades colestáticas intrahepáticas
US10272058B2 (en) 2014-03-20 2019-04-30 Cymabay Therapeutics, Inc. Treatment of intrahepatic cholestatic diseases
UA121208C2 (uk) 2014-04-11 2020-04-27 Сімабей Терапьютікс, Інк. Лікування нажхп та насг
SG10201811702TA (en) 2014-05-07 2019-01-30 Amgen Inc Autoinjector with shock reducing elements
JP6822843B2 (ja) 2014-06-03 2021-01-27 アムジエン・インコーポレーテツド 薬物送達装置によって収集されたデータを遠隔で処理するためのシステム及び方法
ES2813678T3 (es) 2014-06-11 2021-03-24 SpecGx LLC Desaromatización oxidativa de berbinas
EP3169709B1 (en) * 2014-07-14 2021-05-12 Amgen Inc. Crystalline antibody formulations
EP3169710A1 (en) 2014-07-14 2017-05-24 Amgen Inc. Crystalline antibody formulations
EP3332790A1 (en) * 2014-07-15 2018-06-13 Kymab Limited Antibodies for use in treating conditions related to specific pcsk9 variants in specific patients populations
US9150660B1 (en) 2014-07-15 2015-10-06 Kymab Limited Precision Medicine by targeting human NAV1.8 variants for treatment of pain
EP4328245A3 (en) * 2014-07-15 2024-06-05 Kymab Ltd. Antibodies for use in treating conditions related to specific pcsk9 variants in specific patients populations
US9139648B1 (en) 2014-07-15 2015-09-22 Kymab Limited Precision medicine by targeting human NAV1.9 variants for treatment of pain
EP3677277A1 (en) 2014-07-16 2020-07-08 Sanofi Biotechnology Methods for treating patients with heterozygous familial hypercholesterolemia (hefh)
CN107106678A (zh) * 2014-07-16 2017-08-29 赛诺菲生物技术公司 用于治疗患有高胆固醇血症的高心血管风险患者的方法
JP6766040B2 (ja) 2014-10-14 2020-10-07 アムジエン・インコーポレーテツド 視覚および可聴インジケータを備える薬剤注射装置
WO2016061551A1 (en) * 2014-10-17 2016-04-21 Amgen Inc. Antibodies directed to angiopoietin-1 and angiopoietin-2 for ocular therapies
BR112017008125B1 (pt) 2014-10-23 2023-11-21 Amgen Inc. Método para a redução da viscosidade de formulações farmacêuticas, formulações farmacêuticas, método de preparação de um pó liofilizado, pó liofilizado e método para reconstituição de um pó liofilizado
WO2016100055A1 (en) 2014-12-19 2016-06-23 Amgen Inc. Drug delivery device with live button or user interface field
JP6484345B2 (ja) 2015-02-17 2019-03-20 アムジエン・インコーポレーテツド 固定及び／または戻りが真空によって支援された薬物送達装置
EP3258963A1 (en) * 2015-02-18 2017-12-27 Universität Zürich Acetylated pcsk9
JP2018512184A (ja) 2015-02-27 2018-05-17 アムジエン・インコーポレーテツド 針ガードの移動に対する抵抗力の閾値が調整可能な針ガード機構を備えた薬物送達装置
AU2016226280C1 (en) 2015-03-02 2020-09-24 Medlab Clinical U.S., Inc. Transmucosal and transdermal delivery systems
WO2016169454A1 (zh) * 2015-04-21 2016-10-27 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 一种神经生长因子组合物及注射粉剂
US20170044516A1 (en) 2015-08-11 2017-02-16 Industrial Technology Research Institute Biochemistry reactive material and device for eliminating electronegative low-density lipoprotein (ldl) and method for treating blood or plasma ex vivo to eliminate electronegative low-density lipoprotein therein
CA2995645A1 (en) 2015-08-18 2017-02-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-pcsk9 inhibitory antibodies for treating patients with hyperlipidemia undergoing lipoprotein apheresis
WO2017034990A1 (en) 2015-08-21 2017-03-02 Portola Pharmaceuticals, Inc. Composition and methods of use of tetrahydroisoquinoline small molecules to bind and modulate pcsk9 protein activity
EP3337788A4 (en) 2015-08-21 2019-03-27 Portola Pharmaceuticals, Inc. PHENYLPIPERAZINE PROPROTEIN CONVERTASE SUBTILISIN / -KEXIN TYPE 9 P (CSK9) MODULATORS AND THEIR USE
WO2017034994A1 (en) 2015-08-21 2017-03-02 Portola Pharmaceuticals, Inc. Composition and methods of use of novel phenylalanine small organic compounds to directly modulate pcsk9 protein activity
WO2017039786A1 (en) 2015-09-02 2017-03-09 Amgen Inc. Syringe assembly adapter for a syringe
CN106810609A (zh) 2015-11-27 2017-06-09 苏州君盟生物医药科技有限公司 抗pcsk9抗体及其应用
US11351308B2 (en) 2015-12-09 2022-06-07 Amgen Inc. Auto-injector with signaling cap
JP7032662B2 (ja) 2015-12-31 2022-03-09 ジエンス ヘンルイ メデイシンカンパニー リミテッド Ｐｃｓｋ９抗体、その抗原結合フラグメント及び医薬用途
US20200270365A1 (en) 2016-01-05 2020-08-27 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Pcsk9 antibody, antigen-binding fragment thereof, and medical uses thereof
US11154661B2 (en) 2016-01-06 2021-10-26 Amgen Inc. Auto-injector with signaling electronics
US20190119236A1 (en) 2016-02-23 2019-04-25 Portola Pharmaceuticals, Inc. Compounds for binding proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (pcsk9)
EP3721922B1 (en) 2016-03-15 2022-05-04 Amgen Inc. Reducing probability of glass breakage in drug delivery devices
WO2017189089A1 (en) 2016-04-29 2017-11-02 Amgen Inc. Drug delivery device with messaging label
US11389588B2 (en) 2016-05-02 2022-07-19 Amgen Inc. Syringe adapter and guide for filling an on-body injector
GB201608323D0 (en) * 2016-05-12 2016-06-29 Ucb Biopharma Sprl Pharmaceutical compositions
ES2959783T3 (es) 2016-05-13 2024-02-28 Amgen Inc Conjunto de cubierta protectora de vial
WO2017200989A1 (en) 2016-05-16 2017-11-23 Amgen Inc. Data encryption in medical devices with limited computational capability
WO2017200715A1 (en) * 2016-05-19 2017-11-23 Cymabay Therapeutics, Inc. Treatment of severe hyperlipidemia
US11541176B2 (en) 2016-06-03 2023-01-03 Amgen Inc. Impact testing apparatuses and methods for drug delivery devices
US11285266B2 (en) 2016-07-01 2022-03-29 Amgen Inc. Drug delivery device having minimized risk of component fracture upon impact events
WO2018034784A1 (en) 2016-08-17 2018-02-22 Amgen Inc. Drug delivery device with placement detection
KR102551269B1 (ko) * 2016-09-29 2023-07-05 암젠 인크 저-점도 항원 결합 단백질 및 이의 제조 방법
MA46466A (fr) 2016-10-06 2019-08-14 Amgen Inc Formulations pharmaceutiques de protéines à viscosité réduite
EP3532127A1 (en) 2016-10-25 2019-09-04 Amgen Inc. On-body injector
EP3534947A1 (en) 2016-11-03 2019-09-11 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses & methods
JOP20190112A1 (ar) * 2016-11-14 2019-05-14 Amgen Inc علاجات مدمجة لتصلب الشرايين، شاملة مرض قلبي وعائي تصلبي
CN108239150A (zh) 2016-12-24 2018-07-03 信达生物制药(苏州)有限公司 抗pcsk9抗体及其用途
CA3049780A1 (en) 2017-01-17 2018-07-26 Amgen Inc. Injection devices and related methods of use and assembly
EP3582825A1 (en) 2017-02-17 2019-12-25 Amgen Inc. Drug delivery device with sterile fluid flowpath and related method of assembly
WO2018152073A1 (en) 2017-02-17 2018-08-23 Amgen Inc. Insertion mechanism for drug delivery device
JP7377596B2 (ja) * 2017-02-22 2023-11-10 アムジエン・インコーポレーテツド 低粘度、高濃度エボロクマブ製剤及びそれらの製造方法
CA3050927A1 (en) 2017-03-06 2018-09-13 Brian Stonecipher Drug delivery device with activation prevention feature
CA3055402A1 (en) * 2017-03-06 2018-09-13 Merck Patent Gmbh Aqueous anti-pd-l1 antibody formulation
US11571511B2 (en) 2017-03-07 2023-02-07 Amgen Inc. Insertion mechanism and method of inserting a needle of a drug delivery device
AU2018230486B2 (en) 2017-03-09 2023-05-11 Amgen Inc. Insertion mechanism for drug delivery device
PT3600491T (pt) 2017-03-28 2023-10-18 Amgen Inc Sistema e método de haste de êmbolo e conjunto de seringa
BR112019020148A2 (pt) 2017-04-13 2020-05-05 Cadila Healthcare Ltd peptídeo
EP3634539A1 (en) 2017-06-08 2020-04-15 Amgen Inc. Syringe assembly for a drug delivery device and method of assembly
CA3066399A1 (en) 2017-06-08 2018-12-13 Amgen Inc. Torque driven drug delivery device
US11541183B2 (en) 2017-06-22 2023-01-03 Amgen Inc. Device activation impact/shock reduction
CA3063921A1 (en) 2017-06-23 2018-12-27 Amgen Inc. Electronic drug delivery device comprising a cap activated by a switch assembly
CA3067953A1 (en) * 2017-06-30 2019-01-03 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Pharmaceutical composition comprising pcsk-9 antibody and use thereof
MA49562A (fr) 2017-07-14 2020-05-20 Amgen Inc Système d'insertion-rétractation d'aiguille présentant un système à ressort en double torsion
IL271173B2 (en) 2017-07-21 2024-04-01 Amgen Inc Gas permeable sealing element for drug container and methods of assembly
EP4085942A1 (en) 2017-07-25 2022-11-09 Amgen Inc. Drug delivery device with gear module and related method of assembly
JP7242562B2 (ja) 2017-07-25 2023-03-20 アムジエン・インコーポレーテツド 容器アクセスシステムを有する薬物送達デバイス及び関連する組立方法
WO2019032482A2 (en) 2017-08-09 2019-02-14 Amgen Inc. HYDRAULIC-PNEUMATIC PRESSURE CHAMBER DELIVERY SYSTEM
WO2019036181A1 (en) 2017-08-18 2019-02-21 Amgen Inc. BODY INJECTOR WITH STERILE ADHESIVE PATCH
US11103636B2 (en) 2017-08-22 2021-08-31 Amgen Inc. Needle insertion mechanism for drug delivery device
MA50611A (fr) 2017-10-04 2020-08-12 Amgen Inc Adaptateur d'écoulement destiné à un dispositif d'administration de médicament
US11813426B2 (en) 2017-10-06 2023-11-14 Amgen Inc. Drug delivery device including seal member for needle of syringe
EP3694578A1 (en) 2017-10-09 2020-08-19 Amgen Inc. Drug delivery device with drive assembly and related method of assembly
US11826480B2 (en) 2017-11-03 2023-11-28 Amgen Inc. Systems and approaches for sterilizing a drug delivery device
EP3707075A1 (en) 2017-11-06 2020-09-16 Amgen Inc. Fill-finish assemblies and related methods
AU2018358749B2 (en) 2017-11-06 2024-02-29 Amgen Inc. Drug delivery device with placement and flow sensing
US11191904B2 (en) 2017-11-10 2021-12-07 Amgen Inc. Plungers for drug delivery devices
MX2020004996A (es) 2017-11-16 2020-08-27 Amgen Inc Un mecanismo de pestillo de puerta para un dispositivo de administracion de farmacos.
JP6639463B2 (ja) * 2017-12-21 2020-02-05 アムジエン・インコーポレーテツド ホモ接合性家族性高コレステロール血症の治療方法
CN110464842B (zh) * 2018-05-11 2022-10-14 信达生物制药(苏州)有限公司 包含抗pcsk9抗体的制剂及其用途
US10835685B2 (en) 2018-05-30 2020-11-17 Amgen Inc. Thermal spring release mechanism for a drug delivery device
US11083840B2 (en) 2018-06-01 2021-08-10 Amgen Inc. Modular fluid path assemblies for drug delivery devices
US20210260279A1 (en) 2018-07-24 2021-08-26 Amgen Inc. Hybrid drug delivery devices with optional grip portion and related method of preparation
CA3103682A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Delivery devices for administering drugs
MX2021000748A (es) 2018-07-24 2021-03-26 Amgen Inc Dispositivos de suministro para administrar farmacos.
WO2020023336A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Hybrid drug delivery devices with grip portion
US20210228797A1 (en) 2018-07-31 2021-07-29 Amgen Inc. Fluid path assembly for a drug delivery device
CN113166195A (zh) * 2018-08-24 2021-07-23 艾斯柏伦治疗公司 在正在治疗高胆固醇相关疾病的患者中降低糖尿病风险的方法
MA53724A (fr) 2018-09-24 2021-12-29 Amgen Inc Systèmes et procédés de dosage interventionnel
MA53718A (fr) 2018-09-28 2022-01-05 Amgen Inc Ensemble d'activation d'échappement de fil de muscle pour un dispositif d'administration de médicament
MA53815A (fr) 2018-10-02 2022-01-05 Amgen Inc Systèmes d'injection pour administration de médicament avec transmission de force interne
AU2019355979A1 (en) 2018-10-05 2021-03-18 Amgen Inc. Drug delivery device having dose indicator
JP2022504805A (ja) 2018-10-15 2022-01-13 アムジエン・インコーポレーテツド 薬物送達デバイスのプラットフォーム式組み立てプロセス
US12053617B2 (en) 2018-10-15 2024-08-06 Amgen Inc. Drug delivery device having damping mechanism
WO2020091956A1 (en) 2018-11-01 2020-05-07 Amgen Inc. Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction
TWI831847B (zh) 2018-11-01 2024-02-11 美商安進公司 部分針頭縮回之藥物遞送裝置及其操作方法
MA54057A (fr) 2018-11-01 2022-02-09 Amgen Inc Dispositifs d'administration de médicament à rétraction partielle d'élément d'administration de médicament
SG11202107614PA (en) 2019-01-18 2021-08-30 Astrazeneca Ab Pcsk9 inhibitors and methods of use thereof
US11634485B2 (en) 2019-02-18 2023-04-25 Eli Lilly And Company Therapeutic antibody formulation
MX2021012557A (es) 2019-04-24 2021-11-12 Amgen Inc Conjuntos y metodos de verificacion de esterilizacion de jeringuillas.
WO2021041067A2 (en) 2019-08-23 2021-03-04 Amgen Inc. Drug delivery device with configurable needle shield engagement components and related methods
KR20210095781A (ko) 2020-01-24 2021-08-03 주식회사 에이프릴바이오 항원결합 단편 및 생리활성 이펙터 모이어티로 구성된 융합 컨스트럭트를 포함하는 다중결합항체 및 이를 포함하는 약학조성물
AU2022279223A1 (en) 2021-05-21 2023-10-19 Amgen Inc. Method of optimizing a filling recipe for a drug container
WO2023286766A1 (ja) * 2021-07-13 2023-01-19 浩志 貴田 抗体と遺伝子に結合能を有するポリペプチド
CN114438075A (zh) * 2022-02-25 2022-05-06 刘博巽 一种枯草芽孢杆菌前蛋白酶9靶向结合蛋白的筛选方法与应用

Family Cites Families (86)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3180193A (en) 1963-02-25 1965-04-27 Benedict David Machines for cutting lengths of strip material
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4263428A (en) 1978-03-24 1981-04-21 The Regents Of The University Of California Bis-anthracycline nucleic acid function inhibitors and improved method for administering the same
JPS6023084B2 (ja) 1979-07-11 1985-06-05 味の素株式会社 代用血液
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
IE52535B1 (en) 1981-02-16 1987-12-09 Ici Plc Continuous release pharmaceutical compositions
US4640835A (en) 1981-10-30 1987-02-03 Nippon Chemiphar Company, Ltd. Plasminogen activator derivatives
EP0088046B1 (de) 1982-02-17 1987-12-09 Ciba-Geigy Ag Lipide in wässriger Phase
JPS58166633A (ja) 1982-03-29 1983-10-01 Toshiba Corp 有機溶媒電池用正極
JPS58166634A (ja) 1982-03-29 1983-10-01 Toshiba Corp 有機溶媒電池用正極
HUT35524A (en) 1983-08-02 1985-07-29 Hoechst Ag Process for preparing pharmaceutical compositions containing regulatory /regulative/ peptides providing for the retarded release of the active substance
EP0143949B1 (en) 1983-11-01 1988-10-12 TERUMO KABUSHIKI KAISHA trading as TERUMO CORPORATION Pharmaceutical composition containing urokinase
US4740461A (en) 1983-12-27 1988-04-26 Genetics Institute, Inc. Vectors and methods for transformation of eucaryotic cells
US4496689A (en) 1983-12-27 1985-01-29 Miles Laboratories, Inc. Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer
DE3675588D1 (de) 1985-06-19 1990-12-20 Ajinomoto Kk Haemoglobin, das an ein poly(alkenylenoxid) gebunden ist.
JPS62170639A (ja) 1986-01-22 1987-07-27 株式会社システムメンテナンス 防蟻板の取付け工法
US4791192A (en) 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
US4959455A (en) 1986-07-14 1990-09-25 Genetics Institute, Inc. Primate hematopoietic growth factors IL-3 and pharmaceutical compositions
US5260203A (en) 1986-09-02 1993-11-09 Enzon, Inc. Single polypeptide chain binding molecules
WO1988001649A1 (en) 1986-09-02 1988-03-10 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US4912040A (en) 1986-11-14 1990-03-27 Genetics Institute, Inc. Eucaryotic expression system
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5175384A (en) 1988-12-05 1992-12-29 Genpharm International Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6673986B1 (en) 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
DE69133566T2 (de) 1990-01-12 2007-12-06 Amgen Fremont Inc. Bildung von xenogenen Antikörpern
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
FR2664073A1 (fr) 1990-06-29 1992-01-03 Thomson Csf Moyens de marquage d'objets, procede de realisation et dispositif de lecture.
US5874299A (en) 1990-08-29 1999-02-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
EP0814159B1 (en) 1990-08-29 2005-07-27 GenPharm International, Inc. Transgenic mice capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
WO1994025585A1 (en) 1993-04-26 1994-11-10 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US6300129B1 (en) 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
EP0546091B1 (en) 1990-08-29 2007-01-24 Pharming Intellectual Property BV Homologous recombination in mammalian cells
WO1992022670A1 (en) 1991-06-12 1992-12-23 Genpharm International, Inc. Early detection of transgenic embryos
WO1992022645A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Genpharm International, Inc. Transgenic immunodeficient non-human animals
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
AU2515992A (en) 1991-08-20 1993-03-16 Genpharm International, Inc. Gene targeting in animal cells using isogenic dna constructs
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
ATE408012T1 (de) 1991-12-02 2008-09-15 Medical Res Council Herstellung von autoantikörpern auf phagenoberflächen ausgehend von antikörpersegmentbibliotheken
US5869619A (en) 1991-12-13 1999-02-09 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
DE69233204T2 (de) 1991-12-13 2004-07-15 Xoma Corp., Berkeley Verfahren und materialien zur herstellung von modifizierten variablen antikörperdomänen und ihre therapeutische verwendung
CA2124967C (en) 1991-12-17 2008-04-08 Nils Lonberg Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
JPH07508410A (ja) 1992-06-18 1995-09-21 ジェンファーム　インターナショナル　インコーポレイテッド 酵母人工染色体を有するトランスジェニック非ヒト動物の製造方法
EP0652950B1 (en) 1992-07-24 2007-12-19 Amgen Fremont Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6066718A (en) 1992-09-25 2000-05-23 Novartis Corporation Reshaped monoclonal antibodies against an immunoglobulin isotype
US5981175A (en) 1993-01-07 1999-11-09 Genpharm Internation, Inc. Methods for producing recombinant mammalian cells harboring a yeast artificial chromosome
US5625825A (en) 1993-10-21 1997-04-29 Lsi Logic Corporation Random number generating apparatus for an interface unit of a carrier sense with multiple access and collision detect (CSMA/CD) ethernet data network
US5643763A (en) 1994-11-04 1997-07-01 Genpharm International, Inc. Method for making recombinant yeast artificial chromosomes by minimizing diploid doubling during mating
AU2466895A (en) 1995-04-28 1996-11-18 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6127977A (en) 1996-11-08 2000-10-03 Cohen; Nathan Microstrip patch antenna with fractal structure
EP0843961B1 (en) 1995-08-29 2007-01-24 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Chimeric animal and method for constructing the same
AU5702298A (en) 1996-12-03 1998-06-29 Abgenix, Inc. Transgenic mammals having human Ig loci including plural VH and VK regions nd antibodies produced therefrom
US6133426A (en) 1997-02-21 2000-10-17 Genentech, Inc. Humanized anti-IL-8 monoclonal antibodies
US6660843B1 (en) 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
US6833268B1 (en) 1999-06-10 2004-12-21 Abgenix, Inc. Transgenic animals for producing specific isotypes of human antibodies via non-cognate switch regions
JP2003533187A (ja) 2000-05-03 2003-11-11 アムジエン・インコーポレーテツド 治療薬としてのＦｃドメインを含む修飾ペプチド
ATE507816T1 (de) * 2001-11-14 2011-05-15 Durect Corp Injizierbare depotzusammensetzungen und deren verwendung
CN1897918A (zh) * 2003-11-17 2007-01-17 阿尔萨公司 包含两亲性分子作为混悬载体的组合物和剂型
WO2007074880A1 (ja) * 2005-12-28 2007-07-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 抗体含有安定化製剤
MX2009007406A (es) * 2007-01-09 2010-01-25 Wyeth Corp Formulaciones de anticuerpo anti-il-13 y usos de las mismas.
JP5456658B2 (ja) * 2007-03-30 2014-04-02 メディミューン，エルエルシー 抗体製剤
JOP20080381B1 (ar) * 2007-08-23 2023-03-28 Amgen Inc بروتينات مرتبطة بمولدات مضادات تتفاعل مع بروبروتين كونفيرتاز سيتيليزين ككسين من النوع 9 (pcsk9)
AU2008316587B2 (en) * 2007-10-26 2014-07-17 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-PCSK9 and methods for treating lipid and cholesterol disorders
AR070316A1 (es) * 2008-02-07 2010-03-31 Merck & Co Inc Antagonistas de pcsk9 (proproteina subtilisina-kexina tipo 9)
CN104740631B (zh) * 2008-10-29 2019-04-16 阿布林克斯公司 单域抗原结合性分子的制剂
JO3672B1 (ar) * 2008-12-15 2020-08-27 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية عالية التفاعل الكيماوي بالنسبة لإنزيم سبتيليسين كنفرتيز بروبروتين / كيكسين نوع 9 (pcsk9).
WO2011028938A1 (en) * 2009-09-02 2011-03-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods for lowering serum cholestrol in a subject using inhibition of pcsk9
SI3295957T1 (sl) * 2010-01-15 2020-02-28 Kirin-Amgen, Inc. Formulacija protitelesa proti IL-17RA in terapevtski režim za zdravljenje luskavice
US20130171128A1 (en) * 2010-03-02 2013-07-04 Amgen Inc. Reducing viscosity of pharmaceutical formulations
US9401875B2 (en) 2012-06-01 2016-07-26 Nippon Telegraph And Telephone Corporation Packet transfer processing method and packet transfer processing device
JP6071725B2 (ja) 2013-04-23 2017-02-01 カルソニックカンセイ株式会社 電気自動車の駆動力制御装置
US9300829B2 (en) 2014-04-04 2016-03-29 Canon Kabushiki Kaisha Image reading apparatus and correction method thereof
US11284893B2 (en) 2019-04-02 2022-03-29 Covidien Lp Stapling device with articulating tool assembly

Also Published As

Publication number Publication date
US20130064825A1 (en) 2013-03-14
JOP20200043A1 (ar) 2017-06-16
WO2012154999A1 (en) 2012-11-15
AU2012253434B2 (en) 2017-07-06
BR112013028819A2 (pt) 2017-01-31
MX2013013187A (es) 2014-03-21
NZ734570A (en) 2021-11-26
IL229276A0 (en) 2014-01-30
JO3520B1 (ar) 2020-07-05
UA114602C2 (uk) 2017-07-10
CN103841992B (zh) 2021-08-13
PT2707029T (pt) 2020-04-22
JP6599527B2 (ja) 2019-10-30
SI2707029T1 (sl) 2020-08-31
CA2835294C (en) 2023-09-19
EP3597218A1 (en) 2020-01-22
CL2017003288A1 (es) 2018-04-27
MX2019004264A (es) 2021-12-08
AU2017232084B2 (en) 2019-11-21
JP2014516953A (ja) 2014-07-17
TW202108172A (zh) 2021-03-01
TWI809272B (zh) 2023-07-21
IL311262A (en) 2024-05-01
IL281178B (en) 2021-12-01
PE20141159A1 (es) 2014-09-19
CN103841992A (zh) 2014-06-04
IL288048B1 (en) 2024-05-01
PL2707029T3 (pl) 2020-07-27
PE20240547A1 (es) 2024-03-19
ES2781749T3 (es) 2020-09-07
JP6400768B2 (ja) 2018-10-03
HRP20200545T1 (hr) 2020-10-02
JP2018199717A (ja) 2018-12-20
NZ717550A (en) 2021-08-27
CN107261139A (zh) 2017-10-20
AU2012253434A1 (en) 2013-12-19
ZA201309173B (en) 2021-05-26
PH12019501274A1 (en) 2020-09-14
HUE049018T2 (hu) 2020-08-28
KR20230066480A (ko) 2023-05-15
IL288048A (en) 2022-01-01
TW201536323A (zh) 2015-10-01
IL288048B2 (en) 2024-09-01
LT2707029T (lt) 2020-07-10
KR20140031938A (ko) 2014-03-13
TW202417041A (zh) 2024-05-01
CR20130640A (es) 2014-01-14
IL281178A (en) 2021-04-29
TWI705826B (zh) 2020-10-01
CA2835294A1 (en) 2012-11-15
IL229276B (en) 2021-03-25
AR086344A1 (es) 2013-12-04
ME03765B (me) 2021-04-20
AU2020201219A1 (en) 2020-03-12
TW201306865A (zh) 2013-02-16
CN113786482A (zh) 2021-12-14
PE20181790A1 (es) 2018-11-15
NZ618300A (en) 2016-04-29
JP6166717B2 (ja) 2017-07-19
TWI609695B (zh) 2018-01-01
AU2017232084A1 (en) 2017-10-12
TWI610683B (zh) 2018-01-11
KR20200086745A (ko) 2020-07-17
CL2013003214A1 (es) 2014-06-20
RS60292B1 (sr) 2020-07-31
AU2020201219B2 (en) 2022-05-12
CY1122967T1 (el) 2021-10-29
UY34063A (es) 2012-11-30
JP2017160208A (ja) 2017-09-14
MY173860A (en) 2020-02-25
MY198324A (en) 2023-08-24
AU2022215259A1 (en) 2022-09-29
US20210047434A1 (en) 2021-02-18
TW201811367A (zh) 2018-04-01
AP2013007303A0 (en) 2013-12-31
KR102132496B1 (ko) 2020-07-09
EP2707029A1 (en) 2014-03-19
EA031228B1 (ru) 2018-12-28
DK2707029T3 (da) 2020-03-30
EA201391668A1 (ru) 2014-06-30
KR102528752B1 (ko) 2023-05-08
SG194855A1 (en) 2013-12-30
EP2707029B1 (en) 2020-01-15
KR20210109675A (ko) 2021-09-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA126229C2 (uk) Застосування анти-pcsk9 антитіла у виробництві лікарського засобу для зниження рівня холестерину
US20210040189A1 (en) Dkk1 antibodies and methods of use
AU2021200309B2 (en) Compositions and methods for treatment of diabetic macular edema
UA127200C2 (uk) Молекула антитіла до pd1
CN104619340B (zh) 含有抗pcsk9抗体的稳定制剂
UA124734C2 (uk) Антитіло проти с5 і його застосування
UA123695C2 (uk) Епітоп склеростину, антитіло, яке зв'язує склеростин, та застосування такого антитіла для лікування захворювання, опосередкованого склеростином
UA126275C2 (uk) Конструкція антитіла для cd70 та cd3
UA126657C2 (uk) ОДНОЛАНЦЮГОВА КОНСТРУКЦІЯ АНТИТІЛА ДО BCMA І CD3<font face="Symbol">e</font>
UA125757C2 (uk) Антитіло до par2 і його застосування
UA97086C2 (uk) Виділене людське антитіло, яке специфічно зв'язується з фактором росту нервової тканини (ngf)
UA117446C2 (uk) Гуманізоване антитіло до cxcr5
UA125580C2 (uk) Конструкція біспецифічного антитіла, що зв'язується з мезотеліном і кд3 (cd3)
UA123773C2 (uk) ВИДІЛЕНЕ АНТИТІЛО ПРОТИ HtrA1 ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ ПРИ ЛІКУВАННІ ПОВ'ЯЗАНОГО З HtrA1 ПОРУШЕННЯ АБО ХВОРОБИ ОКА
EA027160B1 (ru) Модифицированные белки и пептиды
EA022796B1 (ru) Антитело, способное связывать тимусный стромальный лимфопоэтин, нуклеиновая кислота, его кодирующая, экспрессирующий вектор, клетка-хозяин, гибридома, способ получения антитела и его применение
BRPI0919289A2 (pt) antagonista de pcsk9.
UA128330C2 (uk) Конструкція на основі біспецифічного антитіла, спрямована на muc17 і cd3
UA125136C2 (uk) Антитіла, які зв'язуються з сортиліном і пригнічують зв'язування програнуліну
CN110790839A (zh) 抗pd-1抗体、其抗原结合片段及医药用途
AU2016202118B2 (en) Carrier immunoglobulins and uses thereof
CN114026119A (zh) 结合pdgf-b和pdgf-d的抗原结合分子及其用途
AU2015201676A1 (en) Anti-C5a antibodies and methods for using the antibodies
CN110612120A (zh) 使用特异性于α4β7整联蛋白的抗体(维多珠单抗)治疗儿科病症的方法
RU2796019C9 (ru) Биспецифическое антитело