KR20140021708A - 항-pcsk9 항체를 사용한 치료 - Google Patents

Abstract

본 발명은 혈장 중 저밀도 지단백질 입자의 현저한 상승을 특징으로 하는 장애에 걸리기 쉽거나 또는 이로 진단된 인간 환자를 PCSK9 길항제 항체 단독으로 또는 스타틴과 조합하여 치료하기 위한 투여에 관한 것이다.

Description

항-PCSK9 항체를 사용한 치료 {TREATMENT WITH ANTI-PCSK9 ANTIBODIES}

관련 출원

본원은 2011년 7월 14일에 출원된 미국 가출원 번호 61/507,865, 2012년 3월 22일에 출원된 미국 가출원 번호 61/614,312, 및 2012년 5월 4일에 출원된 미국 가출원 번호 61/643,063을 우선권 주장하며, 이들은 모두 그의 전문이 본원에 참고로 포함된다.

분야

본 발명은 혈장에서 저밀도 지단백질 ("LDL") 입자의 현저한 상승을 특징으로 하는 장애의 치료를 위한 치료 요법에 관한 것이다. 대상 치료 요법은 항-전구단백질 컨버타제 서브틸리신 켁신 유형 9 (PCSK9) 항체의 단독 또는 스타틴과 조합된 투여를 포함한다. 대상 치료 요법은 혈액 중 LDL-콜레스테롤 수준의 증진된 감소를 제공하고, 가족성 고콜레스테롤혈증, 아테롬발생 이상지혈증, 아테롬성동맥경화증, 급성 관상동맥 증후군, 및 보다 일반적으로 심혈관 질환을 포함하는 콜레스테롤 및 지단백질 대사 장애의 예방 및/또는 치료에 사용될 수 있다.

미국에서 수백만 명의 사람들이 심장 질환 및 그로 인한 심장 사건의 위험에 있다. 심혈관 질환 및 근원 아테롬성동맥경화증은 그의 다중 위험 인자에 대한 요법의 유용성에도 불구하고 모든 인구통계군 중에서 사망의 주요 원인이다. 아테롬성동맥경화증은 동맥의 질환이고, 산업화 국가에서 수많은 사망과 연관된 관상동맥 심장 질환의 원인이 된다. 관상동맥 심장 질환의 여러 위험 인자가 현재 확인되어 있다: 이상지혈증, 고혈압, 당뇨병, 흡연, 불량한 식이, 운동 부족 및 스트레스. 임상적으로 가장 관련이 높고 통상적인 이상지혈증은 고트리글리세리드혈증의 부재 또는 존재 하에 고콜레스테롤혈증과 함께 베타-지단백질 (초저밀도 지단백질 (VLDL) 및 LDL)의 증가를 특징으로 한다. 문헌 [Fredrickson et al., 1967, N Engl J Med. 276:34-42, 94-103, 148-156, 215-225, and 273-281]. 스타틴으로의 치료 (아테롬성동맥경화증에서의 현행 표준 치료법)에도 불구하고 발생하는 심혈관 사건, 심장 발작 및 졸중의 60-70%에서는 심혈관 질환과 관련하여 오랫동안 상당히 충족되지 못한 요구가 있다. 또한, 새로운 지침은 고위험 환자를 조기 심혈관 질환으로부터 보호하기 위해 훨씬 더 낮은 LDL 수준이 달성되어야 한다는 것을 시사한다 (문헌 [National Cholesterol Education Program (NCEP) 2004]).

PCSK9는 혈장 저밀도 지단백질 콜레스테롤 (LDL-C)의 주요 조절제인 것으로 나타났으며, 관상동맥 심장 질환 (CHD)의 예방 및 치료를 위한 유망한 표적으로 밝혀졌다. 문헌 [Hooper et al., 2011, Expert Opin Ther Targets 15(2):157-68]. 인간 유전자 연구는 기능-획득 돌연변이를 확인하였으며, 이는 LDL-C의 상승된 혈청 수준 및 CHD의 미성숙 및 발생률과 연관되는 반면에, 기능-상실 돌연변이는 낮은 LDL-C 및 CHD의 감소된 위험과 연관되었다. 문헌 [Abifadel, 2003, Nat Genet. 43(2):154-6; Cohen, 2005, Nat Genet. 37(2):161-5; Cohen, 2006, N Engl J Med. 354(12):1264-72; Kotowski, 2006, Am J Hum Genet. 78(3):410-22]. 인간에서, PCSK9의 완전한 소실은 다르게는 건강한 대상체에서 <20 mg/dL의 낮은 혈청 LDL-C를 초래한다. 문헌 [Hooper, 2007, 193(2):445-8; Zhao, 2006, Am J Hum Genet. 79(3):514-523].

PCSK9는 세린 프로테아제의 서브틸리신 패밀리에 속하고, N-말단 프로도메인, 서브틸리신-유사 촉매 도메인 및 C-말단 시스테인/히스티딘-풍부 도메인 (CHRD)에 의해 형성된다. 간에서 고도로 발현시에, PCSK9는 프로도메인의 자가촉매 절단 후에 분비되고, 이는 촉매 도메인과 비-공유 회합된 상태로 유지된다. PCSK9의 촉매 도메인은 7.4의 혈청 pH에서 저밀도 지단백질 수용체 (LDLR)의 표피 성장 인자-유사 반복부 A (EGF-A) 도메인에 결합하고, 대략 5.5-6.0의 엔도솜 pH에서 보다 높은 친화도로 결합한다. 문헌 [Bottomley, 2009, J Biol Chem. 284(2):1313-23]. C-말단 도메인은 촉매 도메인에 결합하지는 않으면서 LDLR-PCSK9 복합체의 내재화에 관여한다. 문헌 [Nassoury, 2007, Traffic 8(7):950; Ni, 2010, J Biol Chem. 285(17):12882-91; Zhang, 2008, Proc Natl Acad Sci USA, 2008, 105(35):13045-50]. PCSK9의 기능성은 둘 다 리소솜 분해를 위한 LDLR-PCSK9 복합체의 표적화 및 LDL-C 저하에 요구되며, 이는 기능-상실 및 기능-획득에 연관된 도메인 둘 다에서의 돌연변이와 일치한다. 문헌 [Lambert, 2009, Atherosclerosis 203(1):1-7].

siRNA 또는 안티센스 올리고뉴클레오티드에 의한 유전자 침묵 및 항체에 의한 PCSK9-LDLR 상호작용의 분열을 포함하여, PCSK9를 억제하기 위한 다양한 치료 접근법이 현재 개발 중이다. 문헌 [Brautbar et al., 2011, Nature Reviews Cardiology 8, 253-265]. 예를 들어, 문헌 [Chan, 2009] 및 [Ni, 2011]은 각각 마우스 및 비-인간 영장류에서 LDL-C 저하 활성을 갖는 항-PCSK9 모노클로날 항체를 보고하고; 각각의 항체의 반감기는 PCSK9 길항제 항체의 3 mg/kg의 투여시에 비-인간 영장류에서 각각 대략 61시간 및 77시간으로 보고되었다. 문헌 [Chan, 2009, Proc Natl Acad Sci USA 106(24):9820-5; Ni, 2011, J Lipid Res. 52(1):78-86]. PSCK9 길항제 항체 7D4는 시노몰구스 원숭이에서 혈청 콜레스테롤 수준을 효과적으로 감소시키는 것으로 보고되었고; 시노몰구스 원숭이에서 7D4의 반감기는 PCSK9 길항제 항체의 10 mg/kg의 단일 용량에서 2일 미만이었다. PCT 특허 출원 공개 번호 WO 2010/029513.

당업계에서 이용가능한 본 발명 이전의 정보로부터, PCSK9 길항제 항체의 낮고 드문 용량이 인간 환자에서 고콜레스테롤혈증 및 CVD의 연관된 발생률을 감소시키는데 효과적인지의 여부, 및 그렇다면 어떤 투여 요법이 이러한 생체내 유효성에 필요한지는 아직 명확하지 않다.

본 발명은 PCSK9 활성의 억제에 의한 혈액 중 LDL-C 수준의 지속 감소를 위한 치료 요법 및 LDL-C 혈장 수준에 대한 PCSK9의 상응하는 효과에 관한 것이다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 혈액 중 상승된 저밀도 지단백질 콜레스테롤 (LDL-C) 수준을 특징으로 하는 장애에 걸리기 쉽거나 또는 이로 진단된 인간 환자에게 전구단백질 컨버타제 서브틸리신 켁신 유형 9 (PCSK9) 길항제 항체의 적어도 약 0.25 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1 mg/kg, 1.5 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 8 mg/kg, 12 mg/kg, 50 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 350 mg 또는 400 mg의 초기 용량을 투여하는 단계; 및 상기 환자에게 상기 초기 용량과 거의 동일하거나 또는 그 미만인 양의 상기 항체의 다수의 후속 용량을 투여하며, 여기서 상기 초기 용량 및 제1 후속 및 추가의 후속 용량은 시간상 서로 적어도 약 1, 2, 3 또는 4주 떨어진 것인 단계를 포함하는, 혈액 중 상승된 저밀도 지단백질 콜레스테롤 (LDL-C) 수준을 특징으로 하는 장애에 걸리기 쉽거나 또는 이로 진단된 인간 환자의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 예를 들어 PCSK9 길항제 항체 L1L3을 사용하여 실시될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 서열 11에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역으로부터의 3개의 CDR 및 서열 12에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역으로부터의 3개의 CDR을 포함하는 항체를 사용하여 실시될 수 있다.

일부 실시양태에서, 초기 용량은 약 0.25 mg/kg, 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg 또는 약 1.5 mg/kg일 수 있고, 초기 용량 및 제1 후속 용량 및 추가의 후속 용량은 시간상 서로 약 1주 떨어질 수 있다.

다른 실시양태에서, 초기 용량은 약 2 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 8 mg/kg 또는 약 12 mg/kg일 수 있고, 초기 용량 및 제1 후속 용량 및 추가의 후속 용량은 시간상 서로 적어도 약 2주 떨어질 수 있다.

다른 실시양태에서, 초기 용량은 약 50 mg, 약 100 mg, 약 150 mg 또는 약 175 mg일 수 있고, 초기 용량 및 제1 후속 용량 및 추가의 후속 용량은 시간상 서로 적어도 약 2주 떨어질 수 있다.

다른 실시양태에서, 초기 용량은 약 3 mg/kg 또는 약 6 mg/kg일 수 있고, 초기 용량 및 제1 후속 용량 및 추가의 후속 용량은 시간상 서로 적어도 약 4주 떨어질 수 있다. 다른 실시양태에서, 초기 용량은 약 200 mg 또는 약 300 mg일 수 있고, 초기 용량 및 제1 후속 용량 및 추가의 후속 용량은 시간상 서로 적어도 약 4주 떨어질 수 있다. 일부 실시양태에서, PCSK9 길항제 항체는 피하로 투여된다. 일부 실시양태에서, PCSK9 길항제 항체는 정맥내로 투여된다.

일부 실시양태에서, 초기 용량 및 제1 후속 용량 및 추가의 후속 용량은 시간상 서로 약 4주 떨어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 초기 용량 및 제1 후속 용량 및 추가의 후속 용량은 시간상 서로 약 8주 떨어질 수 있다. 다수의 후속 용량은 각각 초기 용량과 거의 동일한 양이거나 또는 그 미만일 수 있다.

일부 실시양태에서, 장애는 고콜레스테롤혈증, 이상지혈증, 아테롬성동맥경화증, 심혈관 질환, 관상동맥 심장 질환 또는 급성 관상동맥 증후군 (ACS)일 수 있다. 인간 환자는 PCSK9 길항제 항체의 초기 용량의 투여 전에, 예를 들어 약 600 mg/dL 이상의 공복 총 콜레스테롤 수준을 가질 수 있다. 인간 환자는 PCSK9 길항제 항체의 초기 용량의 투여 전에, 예를 들어 약 130 mg/dL 이상의 공복 LDL 콜레스테롤 수준을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 인간 환자는 PCSK9 길항제 항체의 초기 용량의 투여 전에 약 145 mg/dL 이상의 공복 LDL 콜레스테롤 수준을 가질 수 있다.

일부 실시양태에서, 환자는 스타틴으로 치료 중이다. 일부 실시양태에서, 환자는 스타틴의 1일 용량으로 치료 중이다. 일부 실시양태에서, 환자는 PCSK9 길항제 항체의 초기 용량의 투여 전에 스타틴의 유효량을 투여받았을 수 있다. 일부 실시양태에서, 환자는 PCSK9 항체의 초기 용량의 투여 전에 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있다. 안정한 용량은, 예를 들어 1일 용량 또는 격일 용량일 수 있다. 일부 실시양태에서, 인간 환자는 PCSK9 길항제 항체의 초기 용량의 투여 전에 적어도 약 2, 3, 4, 5 또는 6주 동안 스타틴의 안정한 1일 용량을 제공받고 있다. 일부 실시양태에서, 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 인간 환자는 PCSK9 길항제 항체의 초기 용량의 투여 전에, 예를 들어 약 70 또는 80 mg/dL 또는 그 초과의 공복 LDL 콜레스테롤 수준을 갖는다.

일부 실시양태에서, 방법은 스타틴의 유효량을 투여하는 것을 추가로 포함한다.

일부 실시양태에서, PCSK9 길항제 항체의 초기 용량은 약 3 mg/kg 또는 약 6 mg/kg일 수 있고, 초기 용량 및 제1 후속 용량 및 추가의 후속 용량은 시간상 서로 약 4주 또는 약 1개월 떨어질 수 있다. 일부 실시양태에서, PCSK9 길항제 항체의 초기 용량은 약 200 mg 또는 약 300 mg일 수 있고, 초기 용량 및 제1 후속 용량 및 추가의 후속 용량은 시간상 서로 약 4주 또는 약 1개월 떨어질 수 있다.

스타틴은, 예를 들어 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 메바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 심바스타틴, 또는 심바스타틴 플러스 에제티미브, 로바스타틴 플러스 니아신, 아토르바스타틴 플러스 암로디핀, 및 심바스타틴 플러스 니아신으로 이루어진 군으로부터 선택된 조합 요법일 수 있다. 일부 실시양태에서, 스타틴 용량은 예를 들어 40 mg 아토르바스타틴, 80 mg 아토르바스타틴, 20 mg 로수바스타틴, 40 mg 로수바스타틴, 40 mg 심바스타틴 또는 80 mg 심바스타틴일 수 있다.

일부 실시양태에서, 방법은 환자에게 PCSK9 길항제 항체 L1L3의 적어도 약 3 mg/kg 또는 약 6 mg/kg의 초기 용량을 투여하는 단계; 및 환자에게 상기 초기 용량과 거의 동일하거나 또는 그 미만인 양의 상기 항체의 다수의 후속 용량을 투여하며, 여기서 상기 초기 용량 및 제1 후속 및 추가의 후속 용량은 시간상 서로 적어도 약 4주 떨어진 것인 단계를 포함하며, 여기서 환자는 스타틴의 안정한 1일 용량으로 치료 중이다. 일부 실시양태에서, 스타틴의 안정한 1일 용량은 40 mg 아토르바스타틴, 80 mg 아토르바스타틴, 20 mg 로수바스타틴, 40 mg 로수바스타틴, 40 mg 심바스타틴 또는 80 mg 심바스타틴일 수 있다.

일부 실시양태에서, 방법은 환자에게 PCSK9 길항제 항체 L1L3의 적어도 약 200 mg 또는 약 300 mg의 초기 용량을 투여하는 단계; 및 환자에게 상기 초기 용량과 거의 동일하거나 또는 그 미만인 양의 상기 항체의 다수의 후속 용량을 투여하며, 여기서 상기 초기 용량 및 제1 후속 및 추가의 후속 용량은 시간상 서로 적어도 약 4주 떨어진 것인 단계를 포함하며, 여기서 환자는 스타틴의 안정한 1일 용량으로 치료 중이다. 일부 실시양태에서, 방법은 환자에게 PCSK9 길항제 항체 L1L3의 적어도 약 50 mg, 약 100 mg, 약 150 mg 또는 약 175 mg의 초기 용량을 투여하는 단계; 및 환자에게 상기 초기 용량과 거의 동일하거나 또는 그 미만인 양의 상기 항체의 다수의 후속 용량을 투여하며, 여기서 초기 용량 및 제1 후속 및 추가의 후속 용량은 시간상 서로 적어도 약 2주 떨어진 것인 단계를 포함하며, 여기서 환자는 스타틴의 안정한 1일 용량으로 치료 중이다. 일부 실시양태에서, 스타틴의 안정한 1일 용량은 40 mg 아토르바스타틴, 80 mg 아토르바스타틴, 20 mg 로수바스타틴, 40 mg 로수바스타틴, 40 mg 심바스타틴 또는 80 mg 심바스타틴일 수 있다.

일부 실시양태에서, PCSK9 길항제 항체는 피하로 또는 정맥내로 투여된다.

본 발명은 또한 용기, PCSK9 길항제 항체를 포함하는 상기 용기 내 조성물, 및 적어도 약 0.25 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1 mg/kg, 1.5 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 6 mg/kg, 8 mg/kg, 12 mg/kg, 50 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 350 mg 또는 400 mg의 PCSK9 길항제 항체의 초기 용량, 및 상기 초기 용량과 동일한 양 또는 그 미만인 적어도 하나의 후속 용량의 투여를 위한 지침서를 함유하는 포장 삽입물을 포함하는 제조품을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 서열 11에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역으로부터의 3개의 CDR 및 서열 12에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역으로부터의 3개의 CDR을 포함하는 항체를 사용하여 실시될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 PCSK9 길항제 항체 L1L3을 사용하여 실시될 수 있다.

초기 용량 및 후속 용량의 투여는 시간상, 예를 들어 적어도 약 1주, 적어도 약 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8주 떨어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 지침서는 예를 들어 정맥내 주사에 의한 초기 용량 및 정맥내 또는 피하 주사에 의한 적어도 하나의 후속 용량의 투여를 위한 것일 수 있다. 다른 실시양태에서, 지침서는 예를 들어 피하 주사에 의한 초기 용량 및 정맥내 또는 피하 주사에 의한 적어도 하나의 후속 용량의 투여를 위한 것일 수 있다.

일부 실시양태에서, 다수의 후속 용량이 투여될 수 있다. 다수의 후속 용량은 시간상 서로, 예를 들어 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8주 떨어질 수 있다.

일부 실시양태에서, 포장 삽입물은 스타틴으로 치료 중인 환자에 대한 PCSK9 길항제 항체의 투여를 위한 지침서를 추가로 포함할 수 있다. 스타틴은 예를 들어 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 메바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 심바스타틴, 또는 심바스타틴 플러스 에제티미브, 로바스타틴 플러스 니아신, 아토르바스타틴 플러스 암로디핀 및 심바스타틴 플러스 니아신으로 이루어진 군으로부터 선택된 조합 요법일 수 있다.

일부 실시양태에서, 제조품은 조성물이 혈액 중 상승된 저밀도 지단백질 콜레스테롤 수준을 특징으로 하는 상태를 치료하는데 사용될 수 있다는 것을 나타내는, 용기 상의 또는 용기와 연관된 라벨을 추가로 포함할 수 있다. 라벨은 조성물이 예를 들어 고콜레스테롤혈증, 아테롬발생 이상지혈증, 아테롬성동맥경화증, 심혈관 질환의 치료 및/또는 급성 관상동맥 증후군 (ACS)의 치료에 사용될 수 있다는 것을 나타낼 수 있다.

도 1은 L1L3 항체 투여 후에 절대 공복 LDL-C 수준 (mg/dL)을 보여주는 그래프를 도시한다.
도 2는 L1L3 항체 투여 후에 공복 LDL-C 수준의 기준선으로부터의 변화 백분율을 보여주는 그래프를 도시한다.
도 3은 L1L3 항체 투여 후에 공복 총 콜레스테롤 수준의 기준선으로부터의 변화 백분율을 보여주는 그래프를 도시한다.
도 4는 L1L3 항체 투여 후에 공복 아포지단백질 B 수준의 기준선으로부터의 변화 백분율을 보여주는 그래프를 도시한다.
도 5는 L1L3 항체 투여 후에 공복 고밀도 지단백질 콜레스테롤 수준의 기준선으로부터의 변화 백분율을 보여주는 그래프를 도시한다.
도 6은 L1L3 항체 투여 후에 공복 트리글리세리드 지단백질 콜레스테롤 수준의 기준선으로부터의 변화 백분율을 보여주는 그래프를 도시한다.
도 7A는 L1L3 항체 투여 후에 절대 공복 LDL-C 수준 (mg/dL)을 보여주는 그래프를 도시한다. 도 7B는 L1L3 항체 투여 후에 공복 LDL-C 수준 (mg/dL)의 기준선으로부터의 변화 백분율을 보여주는 그래프를 도시한다.
도 8은 스타틴의 존재 또는 부재 하에 L1L3 항체 투여 후에 공복 LDL-C 수준의 기준선으로부터의 변화 백분율을 보여주는 그래프를 도시한다. X-축은 L1L3의 용량을 PCSK9 길항제 항체의 mg/kg으로 나타낸다.
도 9A-F는 L1L3 (A-C) 및 LDL-C (E-F)에 대한 모의 시간 프로파일을 도시한다. (A) 및 (D): PCSK9 길항제 항체의 2 mg/kg에서의 L1L3. (B) 및 (E): PCSK9 길항제 항체의 6 mg/kg에서의 L1L3. (C) 및 (F): 위약. X-축은 시간 (일)을 나타낸다.
도 10은 지시된 L1L3 용량으로의 투여 후에 LDL-C에 대한 모의 시간 프로파일을 도시한다.
도 11은 L1L3 단독요법에 대한 연구 설계의 개략도를 도시한다.
도 12는 L1L3 항체 투여 후에 절대 공복 LDL-C 수준 (mg/dL)을 보여주는 그래프를 도시한다.
도 13은 L1L3 항체 투여 후에 공복 LDL-C 수준의 기준선으로부터의 변화 백분율을 보여주는 그래프를 도시한다.
도 14는 L1L3 항체 투여 후에 공복 LDL-C 수준의 기준선으로부터의 평균 변화 백분율을 보여주는 표를 도시한다.
도 15는 L1L3 항체 투여 후에 공복 LDL-C 수준의 기준선으로부터의 변화 퍼센트를 보여주는 그래프를 도시한다.
도 16은 손실된 용량을 사용한 대상체를 제외하고, L1L3 항체 투여 후에 공복 LDL-C 수준의 기준선으로부터의 변화 퍼센트를 보여주는 그래프를 도시한다.

혈장 중 LDL 입자의 현저한 상승을 특징으로 하는 장애의 치료를 위한 치료 요법이 본원에 제공된다. 대상 치료 요법은 PCSK9 길항제 항체를 단독으로 또는 스타틴과 조합하여 투여하는 것을 포함한다. 대상 치료 요법은 혈액 중 LDL-콜레스테롤 수준의 지속 감소를 제공하고, 가족성 고콜레스테롤혈증, 아테롬발생 이상지혈증, 아테롬성동맥경화증, 급성 관상동맥 증후군 (ACS), 및 보다 일반적으로 심혈관 질환을 포함하는 콜레스테롤 및 지단백질 대사 장애의 예방 및/또는 치료에 사용될 수 있다.

일반적 기술

본 발명의 실시는 달리 나타내지 않는 한 당업계 기술 내의 분자 생물학 (재조합 기술 포함), 미생물학, 세포 생물학, 생화학 및 면역학의 통상의 기술을 이용할 것이다. 이러한 기술은 하기와 같은 문헌에 자세하게 설명되어 있다: 문헌 [Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook et al., 1989) Cold Spring Harbor Press; Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-1998) J. Wiley and Sons; Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel et al., eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: a practical approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal antibodies: a practical approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using antibodies: a laboratory manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J.D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995)].

정의

"항체"는 이뮤노글로불린 분자의 가변 영역에 위치하는 적어도 1개의 항원 인식 부위를 통해 표적, 예컨대 탄수화물, 폴리뉴클레오티드, 지질, 폴리펩티드 등에 특이적으로 결합할 수 있는 이뮤노글로불린 분자이다. 본원에 사용된 용어 "항체"는 무손상 폴리클로날 또는 모노클로날 항체 뿐만 아니라, 그의 임의의 항원 결합 단편 (즉, "항원-결합 부분") 또는 그의 단일 쇄, 항체를 포함하는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위를 포함하는 이뮤노글로불린 분자의 임의의 다른 변형된 형태 (예를 들어, scFv, 단일 도메인 항체 (예를 들어, 상어 및 낙타류 항체), 맥시바디, 미니바디, 인트라바디, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, v-NAR 및 비스-scFv를 포함하나 이에 제한되지는 않음)를 포괄한다 (예를 들어, 문헌 [Hollinger and Hudson, 2005, Nature Biotechnology 23(9): 1126-1136] 참조). 항체는 임의의 부류의 항체, 예컨대 IgG, IgA 또는 IgM (또는 그의 하위부류)을 포함하며, 항체가 임의의 특정한 부류일 필요는 없다. 항체의 중쇄의 불변 영역의 아미노산 서열에 따라, 이뮤노글로불린은 상이한 부류로 배정될 수 있다. 5가지 주요 부류의 이뮤노글로불린: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이 존재하고, 이들 중 몇몇은 하위부류 (이소형), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 추가로 분류될 수 있다. 이뮤노글로불린의 상이한 부류에 상응하는 중쇄 불변 영역은 각각 알파, 델타, 엡실론, 감마 및 뮤로 지칭된다. 상이한 부류의 이뮤노글로불린의 서브유닛 구조 및 3차원 배위는 널리 공지되어 있다.

본원에 사용된 용어 항체의 "항원 결합 부분"은 주어진 항원 (예를 들어, PCSK9)에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 무손상 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 항체의 항원 결합 기능은 무손상 항체의 단편에 의해 수행될 수 있다. 용어 항체의 "항원 결합 부분" 내에 포괄되는 결합 단편의 예는 Fab; Fab'; F(ab')₂; VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편; 단일 도메인 항체 (dAb) 단편 (문헌 [Ward et al., 1989, Nature 341:544-546]), 및 단리된 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함한다.

용어 "모노클로날 항체" (Mab)는 그를 제조하는 방법이 아닌, 예컨대 임의의 진핵, 원핵 또는 파지 클론을 포함하여 단일 카피 또는 클론으로부터 유래된 항체를 지칭한다. 바람직하게는, 본 발명의 모노클로날 항체는 균질하거나 실질적으로 균질한 집단으로 존재한다.

"인간화" 항체는 비-인간 이뮤노글로불린으로부터 유래된 서열을 최소로 함유하는, 키메라 이뮤노글로불린, 이뮤노글로불린 쇄, 또는 그의 단편 (예컨대, Fv, Fab, Fab', F(ab')₂ 또는 항체의 다른 항원-결합 하위서열)인 비-인간 (예컨대, 뮤린) 항체의 형태를 지칭한다. 바람직하게는, 인간화 항체는 수용자의 상보성 결정 영역 (CDR)의 잔기가 원하는 특이성, 친화도 및 능력을 보유하는 마우스, 래트 또는 토끼와 같은 비-인간 종 (공여자 항체)의 CDR의 잔기로 대체된 인간 이뮤노글로불린 (수용자 항체)이다.

본원에 사용된 "인간 항체"는 인간에 의해 생산될 수 있고/거나 당업자에게 공지되거나 본원에 개시된 인간 항체의 제조를 위한 임의의 기술을 이용하여 제조된 항체의 것에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 항체를 의미한다. 인간 항체의 이러한 정의는 적어도 하나의 인간 중쇄 폴리펩티드 또는 적어도 하나의 인간 경쇄 폴리펩티드를 포함하는 항체를 포함한다. 하나의 이러한 예는 뮤린 경쇄 및 인간 중쇄 폴리펩티드를 포함하는 항체이다. 인간 항체는 당업계에 공지된 다양한 기술을 이용하여 생산될 수 있다. 한 실시양태에서, 인간 항체는 파지 라이브러리로부터 선택되며, 여기서 상기 파지 라이브러리는 인간 항체를 발현한다 (문헌 [Vaughan et al., 1996, Nature Biotechnology, 14:309-314; Sheets et al., 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 95:6157-6162; Hoogenboom and Winter, 1991, J. Mol. Biol., 227:381; Marks et al., 1991, J. Mol. Biol., 222:581]). 인간 항체는 또한 인간 이뮤노글로불린 좌위가 내인성 좌위 대신에 트랜스제닉 도입된 동물, 예를 들어 내인성 이뮤노글로불린 유전자가 부분적으로 또는 완전히 불활성화된 마우스의 면역화에 의해 만들어질 수 있다. 이러한 접근법은 미국 특허 번호 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 및 5,661,016에 기재되어 있다. 대안적으로, 인간 항체는 표적 항원에 대해 지시된 항체를 생산하는 인간 B 림프구의 불멸화에 의해 제조될 수 있다 (이러한 B 림프구는 개체로부터 회수할 수 있거나 시험관내에서 면역화될 수 있다). 예를 들어, 문헌 [Cole et al. Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77, 1985; Boerner et al., 1991, J. Immunol., 147 (1):86-95]; 및 미국 특허 번호 5,750,373을 참조한다.

항체의 "가변 영역"은 단독 또는 조합된 항체 경쇄 가변 영역 또는 항체 중쇄 가변 영역을 지칭한다. 당업계에 공지된 바와 같이, 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 각각 초가변 영역으로도 공지된 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)에 의해 연결되어 있는 4개의 프레임워크 영역 (FR)으로 구성되고, 이는 항체의 항원 결합 부위를 형성하는 데 기여한다. 대상 가변 영역의 변이체가 바람직한 경우에, 특히 CDR 영역 외부 (즉, 프레임워크 영역 내) 아미노산 잔기 치환을 가지는 것이 바람직한 경우에, 대상 가변 영역과 동일한 정규 부류 중 CDR1 및 CDR2 서열을 포함하는 다른 항체의 가변 영역과 대상 가변 영역을 비교함으로써 적절한 아미노산 치환, 바람직하게, 보존적 아미노산 치환을 확인할 수 있다 (문헌 [Chothia and Lesk, J Mol Biol 196(4): 901-917, 1987]). 대상 CDR 측면에 위치하는 FR을 선택하는 경우에, 예를 들어 항체를 인간화하거나 최적화시키는 경우에, 동일한 정규 부류 중 CDR1 및 CDR2 서열을 함유하는 항체로부터의 FR이 바람직하다.

가변 도메인의 "CDR"은 카바트(Kabat) 정의, 코티아(Chothia) 정의, 카바트 및 코티아 둘 다의 누적 정의, AbM, 접촉, 및/또는 입체형태 정의 또는 당업계에 널리 공지된 임의의 CDR 결정 방법에 따라 확인되는 가변 영역 내의 아미노산 잔기이다. 항체 CDR은 카바트 등에 의해 최초로 정의된 초가변 영역으로 확인될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Kabat et al., 1992, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, NIH, Washington D.C.]을 참조한다. CDR의 위치는 또한 코티아 등에 의해 최초로 기재된 구조적 루프 구조로 확인될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Chothia et al., 1989, Nature 342:877-883]을 참조한다. CDR을 확인하는 다른 접근법으로는 카바트와 코티아의 절충안으로서, 옥스포드 몰레큘라(Oxford Molecular)의 AbM 항체 모델링 소프트웨어 (현재 엑셀리스(Accelrys)®)를 이용하여 유도된 "AbM 정의", 또는 문헌 [MacCallum et al., 1996, J. Mol. Biol., 262:732-745]에 설명되어 있는, 관찰된 항원 접촉에 기초한 CDR의 "접촉 정의"를 포함한다. 본원에서 CDR의 "입체형태 정의"로서 지칭되는 또 다른 접근법에서, CDR의 위치는 엔탈피에 의해 항원 결합에 기여하는 잔기로서 확인될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Makabe et al., 2008, Journal of Biological Chemistry, 283:1156-1166]을 참조한다. 또 다른 CDR 경계 정의는 상기 접근법 중 하나를 엄격히 따르지 않을 수 있고, 그럼에도 불구하고, 이들이 특정 잔기 또는 잔기의 기 또는 심지어 전체 CDR이 항원 결합에 유의하게 영향을 미치지 않는다는 예측 또는 실험적 발견에 비추어 더 짧아지거나 더 길어질 수 있을지라도, 적어도 카바트 CDR의 일부와 중첩될 것이다. 본원에 사용된 CDR은 접근법의 조합을 비롯하여 당업계에 공지된 임의의 접근법에 의해 정의된 CDR을 지칭할 수 있다. 본원에 사용되는 방법은 이들 접근법 중 임의의 것에 따라 정의된 CDR을 사용할 수 있다. 1개 초과의 CDR을 함유하는 것에 대한 임의의 주어진 실시양태의 경우에, CDR은 카바트, 코티아, 확장형, AbM, 접촉, 및/또는 입체형태 정의 중 임의의 것에 따라 정의될 수 있다.

당업계에 공지된 바와 같이, 항체의 "불변 영역"은 단독 또는 조합된 항체 경쇄의 불변 영역 또는 항체 중쇄의 불변 영역을 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "PCSK9"는 임의의 형태의 PCSK9, 및 PCSK9의 활성 중 적어도 일부를 보유하는 그의 변이체를 지칭한다. 인간 PCSK9에 대한 특정 언급에 의한 것과 같이 달리 나타내지 않는 한, PCSK9는 천연 서열 PCSK9의 모든 포유동물 종, 예를 들어 인간, 개, 고양이, 말 및 소를 포함한다. 하나의 예시적인 인간 PCSK9는 유니프로트(Uniprot) 등록 번호 Q8NBP7 (서열 1)로서 발견된다.

본원에 사용된 "PCSK9 길항제 항체"는 PCSK9 생물학적 활성 및/또는 PCSK9 신호전달에 의해 매개되는 하류 경로(들), 예를 들어 LDLR의 PCSK9-매개 하향-조절, 및 LDL 혈액 제거의 PCSK9-매개 감소를 억제할 수 있는 항-PCSK9 항체를 지칭한다. PCSK9 길항제 항체는 PCSK9 생물학적 활성, 예를 들어 PCSK9 신호전달에 의해 매개되는 하류 경로, 예컨대 LDLR 상호작용 및/또는 PCSK9에 대한 세포 반응의 제거를 차단하거나 길항작용을 하거나 저해하거나 감소시키는 (유의한 정도를 포함하는 임의의 정도로) 항체를 포괄한다. 본 발명의 목적을 위해, 용어 "PCSK9 길항제 항체"는 PCSK9 자체, PCSK9 생물학적 활성 (LDLR과의 상호작용의 임의의 측면을 매개하는 능력, LDLR의 하향-조절 및 혈액 LDL 제거의 감소를 포함하나 이에 제한되지는 않음), 또는 생물학적 활성의 결과가 임의의 의미있는 정도로 실질적으로 무효화되거나 감소되거나 중화되는, 모든 이전에 확인된 용어, 제목 및 기능적 상태 및 특징을 포괄한다는 것이 명백하게 이해될 것이다. 일부 실시양태에서, PCSK9 길항제 항체는 PCSK9에 결합하여 LDLR과의 상호작용을 방지한다. PCSK9 길항제 항체의 예는 예를 들어 그의 전문이 본원에 참고로 포함된 미국 특허 출원 공개 번호 20100068199에 제공된다.

본원에 사용된 "완전 길항제"는 유효 농도에서 PCSK9의 측정가능한 효과를 본질적으로 완전하게 차단하는 길항제이다. 부분 길항제는, 측정가능한 효과를 부분적으로 차단할 수 있지만, 최고 농도에서도 완전 길항제는 아닌 길항제를 의미한다. 본질적으로 완전하게는, 적어도 약 80%, 바람직하게는 적어도 약 90%, 보다 바람직하게는 적어도 약 95%, 가장 바람직하게는 적어도 약 98% 또는 99%의 측정가능한 효과가 차단됨을 의미한다. 관련 "측정가능한 효과"는 본원에 기재되어 있고, Huh7 세포에서 시험관내 검정된 바와 같은 PCSK9 길항제에 의한 LDLR의 하향 조절, 총 콜레스테롤의 혈액 (또는 혈장) 수준의 생체내 감소, 및 혈액 (또는 혈장) 중 LDL 수준의 생체내 감소를 포함한다.

본원에 사용된 용어 "임상적으로 의미있는"은 인간에서는 혈액 LDL-콜레스테롤 수준의 적어도 15% 감소, 또는 마우스에서는 총 혈액 콜레스테롤의 적어도 15% 감소를 의미한다. 혈장 또는 혈청 중의 측정치가 혈액 중 수준의 측정치에 대한 대용값으로 기능할 수 있음이 명백하다.

본원에 사용된 용어 "투여 요법"은 환자에 투여된 치료, 예를 들어 PCSK9 길항제 항체를 사용한 치료의 전체 과정을 지칭한다.

본원에 사용된, 혈액 중 LDL 콜레스테롤의 평균 수준이 특정 범위의 수준 내에 포함되는 시간과 관련된 "연속적인"이라는 용어는 평균 범위가 그 특정 범위에 포함되는 시간이 평균 수준이 특정 범위의 수준에 포함되지 않는 임의의 시간에 의해 중단되지 않는다는 것을 의미한다.

본원에 사용된, 혈액 중 LDL 콜레스테롤의 평균 수준이 특정 범위의 수준 내에 포함되는 시간과 관련된 "비연속적인"이라는 용어는 평균 범위가 그 특정 범위에 포함되는 시간이 어느 정도의 시간 (예를 들어, 15분, 20분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 8시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 24시간, 28시간, 32시간, 36시간, 40시간, 44시간, 48시간, 60시간, 72시간, 84시간, 90시간, 또는 임의의 상기 구체적으로 언급된 시간의 상한 및 하한을 갖는 임의의 범위의 시간)까지 중단된다는 것을 의미하고, 여기서 평균 수준은 그 특정 범위의 수준 내에 포함되지 않는다.

용어 "폴리펩티드", "올리고펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 바람직하게는 비교적 짧은 (예를 들어, 10-100개 아미노산) 임의의 길이의 아미노산 쇄를 지칭하기 위해 본원에서 교환가능하게 사용된다. 쇄는 선형 또는 분지형일 수 있고, 이것은 변형된 아미노산을 포함할 수 있고/거나, 비-아미노산에 의해 중단될 수 있다. 상기 용어는 또한 자연적으로 또는 개재에 의해 변형된 아미노산 쇄를 포괄한다 (예를 들어, 디술피드 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화, 또는 임의의 다른 조작 또는 변형, 예컨대 표지 성분과의 접합). 또한 이러한 정의에는, 예를 들어 하나 이상의 아미노산 유사체 (예를 들어, 비천연 아미노산 등 포함) 뿐만 아니라 당업계에 공지된 다른 변형을 함유하는 폴리펩티드가 포함된다. 폴리펩티드가 단일 쇄 또는 회합된 쇄로서 발생할 수 있는 것으로 이해된다.

당업계에 공지된 바와 같이, 본원에서 교환가능하게 사용되는 "폴리뉴클레오티드" 또는 "핵산"은 임의의 길이의 뉴클레오티드 쇄를 지칭하며, DNA 및 RNA를 포함한다. 뉴클레오티드는 데옥시리보뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드, 변형된 뉴클레오티드 또는 염기 및/또는 그의 유사체, 또는 DNA 또는 RNA 폴리머라제에 의해 쇄 내로 혼입될 수 있는 임의의 기질일 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드, 예컨대 메틸화 뉴클레오티드 및 그의 유사체를 포함할 수 있다. 뉴클레오티드 구조에 대한 변형이 존재하는 경우에, 이러한 변형은 쇄의 어셈블리 전에 또는 후에 부여될 수 있다. 뉴클레오티드의 서열에 비-뉴클레오티드 성분이 개재될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는, 예컨대 표지 성분과의 접합에 의해, 중합 후에 추가로 변형될 수 있다. 다른 유형의 변형은, 예를 들어 "캡", 1개 이상의 자연 발생 뉴클레오티드의 유사체로의 치환, 뉴클레오티드간 변형, 예컨대 예를 들어 비하전된 연결을 갖는 것 (예를 들어, 메틸 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포아미데이트, 카르바메이트 등) 및 하전된 연결을 갖는 것 (예를 들어, 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트 등), 펜던트 모이어티, 예를 들어 단백질 (예를 들어, 뉴클레아제, 독소, 항체, 신호 펩티드, 폴리-L-리신 등)을 함유하는 것, 인터칼레이터 (예를 들어, 아크리딘, 프소랄렌 등)가 있는 것, 킬레이트화제 (예를 들어, 금속, 방사성 금속, 붕소, 산화성 금속 등)를 함유하는 것, 알킬화제를 함유하는 것, 변형된 연결이 있는 것 (예를 들어, 알파 아노머 핵산 등), 뿐만 아니라 비변형된 형태의 폴리뉴클레오티드(들)를 포함한다. 또한, 당에 본래 존재하는 임의의 히드록실 기는 예를 들어 포스포네이트 기, 포스페이트 기에 의해 대체되거나, 표준 보호기에 의해 보호되거나, 또는 추가의 뉴클레오티드에 대한 추가의 연결을 제조하기 위해 활성화될 수 있거나, 또는 고체 지지체에 접합될 수 있다. 5' 및 3' 말단 OH가 인산화되거나 또는 아민 또는 1 내지 20개의 탄소 원자의 유기 캡핑 기 모이어티로 치환될 수 있다. 다른 히드록실이 또한 표준 보호기로 유도체화될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 또한 예를 들어 2'-O-메틸-, 2'-O-알릴, 2'-플루오로- 또는 2'-아지도-리보스, 카르보시클릭 당 유사체, 알파- 또는 베타-아노머 당, 에피머 당, 예컨대 아라비노스, 크실로스 또는 릭소스, 피라노스 당, 푸라노스 당, 세도헵툴로스, 비-시클릭 유사체 및 무염기성 뉴클레오시드 유사체, 예컨대 메틸 리보시드를 포함하여, 일반적으로 당업계에 공지된 유사한 형태의 리보스 또는 데옥시리보스 당을 함유할 수 있다. 하나 이상의 포스포디에스테르 연결이 대안적인 연결 기로 대체될 수 있다. 이러한 대안적인 연결 기는 포스페이트가 P(O)S ("티오에이트"), P(S)S ("디티오에이트"), (O)NR₂ ("아미데이트"), P(O)R, P(O)OR', CO 또는 CH₂ ("포름아세탈")로 대체된 실시양태를 포함하나 이에 제한되지는 않으며, 여기서 각각의 R 또는 R'는 독립적으로 H 또는 임의로 에테르 (-O-) 연결을 함유하는 치환되거나 비치환된 알킬 (1-20 C), 아릴, 알케닐, 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 아랄딜이다. 폴리뉴클레오티드 내의 모든 연결이 동일할 필요는 없다. 상기 기재는 RNA 및 DNA를 비롯하여 본원에 언급되는 모든 폴리뉴클레오티드에 적용된다.

본원에 사용된 바와 같이, 항체는 미국 특허 출원 공개 번호 20100068199의 실시예 2에 개시된 방법에 의해 측정시에 평형 해리 상수가 20 nM 이하, 바람직하게는 약 6 nM 미만, 보다 바람직하게는 약 1 nM 미만, 가장 바람직하게는 약 0.2 nM 미만인 경우에 PCSK9"와 상호작용"한다.

에피토프에 "우선적으로 결합"하거나 "특이적으로 결합" (본원에서 교환가능하게 사용됨)하는 항체는 당업계에서 널리 이해되는 용어이고, 이러한 특이적 또는 우선적 결합을 측정하는 방법이 또한 당업계에 널리 공지되어 있다. 대체 세포 또는 물질보다 특정한 세포 또는 물질과 보다 빈번하게, 보다 급속하게, 보다 큰 지속력으로, 및/또는 보다 큰 친화도로 반응하거나 회합하는 경우에, 분자는 "특이적 결합" 또는 "우선적 결합"을 나타내는 것으로 언급된다. 항체는, 다른 물질에 결합하는 것보다 더 큰 친화도, 결합력으로, 보다 용이하게, 및/또는 보다 큰 지속력으로 결합하는 경우에, 표적에 "특이적으로 결합"하거나 "우선적으로 결합"한다. 예를 들어, PCSK9 에피토프에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 항체는 다른 PCSK9 에피토프 또는 비-PCSK9 에피토프와의 결합에 비해 이 에피토프에 보다 큰 친화도, 결합력으로, 보다 용이하게 및/또는 보다 큰 지속력으로 결합하는 항체이다. 또한, 이 정의는, 예를 들어 제1 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 항체 (또는 잔기 또는 에피토프)는 제2 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합할 수도 있고 그렇지 않을 수도 있다는 것으로 해석되어야 함이 이해되어야 한다. 따라서, "특이적 결합 " 또는 "우선적 결합 "은 배타적 결합을 (포함할 수는 있지만) 반드시 필요로 하지는 않는다. 일반적으로, 반드시 그러한 것은 아니지만, 결합에 대한 언급은 우선적 결합을 의미한다.

본원에 사용된 "실질적으로 순수한"은 적어도 50% 순수한 (즉, 오염물 없음), 보다 바람직하게는 적어도 90% 순수한, 보다 바람직하게는 적어도 95% 순수한, 보다 더 바람직하게는 적어도 98% 순수한, 가장 바람직하게는 적어도 99% 순수한 물질을 지칭한다.

"숙주 세포"는 폴리뉴클레오티드 삽입물의 도입을 위한 벡터(들)의 수용자일 수 있거나 수용자였던 개별 세포 또는 세포 배양물을 포함한다. 숙주 세포는 단일 숙주 세포의 자손을 포함하고, 상기 자손은 천연적, 우연적 또는 계획적인 돌연변이로 인해 반드시 본래 모 세포에 완전하게 동일 (형태적으로 또는 게놈 DNA 보체에서)할 필요는 없을 수 있다. 숙주 세포는 본 발명의 폴리뉴클레오티드(들)로 생체내 형질감염된 세포를 포함한다.

당업계에 공지된 바와 같이, 용어 "Fc 영역"은 이뮤노글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하기 위해 사용된다. "Fc 영역"은 천연 서열 Fc 영역 또는 변이체 Fc 영역일 수 있다. 이뮤노글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계는 달라질 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 일반적으로 위치 Cys226에서의 아미노산 잔기로부터, 또는 Pro230으로부터 그의 카르복실-말단까지의 범위로 경계지어진다. Fc 영역 내 잔기의 넘버링은 카바트에서와 같이 EU 인덱스의 넘버링이다. 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991]. 이뮤노글로불린의 Fc 영역은 일반적으로 2개의 불변 도메인, CH2 및 CH3을 포함한다.

당업계에 사용된 바와 같이, "Fc 수용체" 및 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 기재한다. 바람직한 FcR은 천연 서열 인간 FcR이다. 또한, 바람직한 FcR은 IgG 항체 (감마 수용체)에 결합하는 것이고, 대립유전자 변이체 및 이러한 수용체의 대안적으로 스플라이싱된 형태를 포함하여 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII 하위부류의 수용체를 포함한다. FcγRII 수용체는 FcγRIIA ("활성화 수용체") 및 FcγRIIB ("억제 수용체")를 포함하며, 이들은 주로 그의 세포질 도메인에서 차이가 나는 유사한 아미노산 서열을 갖는다. FcR은 문헌 [Ravetch and Kinet, 1991, Ann. Rev. Immunol., 9:457-92; Capel et al., 1994, Immunomethods, 4:25-34; 및 de Haas et al., 1995, J. Lab. Clin. Med., 126:330-41]에서 검토된다. "FcR"은 또한 모체 IgG의 태아로의 전달을 담당하는 신생아 수용체, FcRn을 포함한다 (문헌 [Guyer et al., 1976 J. Immunol., 117:587; 및 Kim et al., 1994, J. Immunol., 24:249]).

항체와 관련하여 본원에 사용된 용어 "경쟁하다"는 제1 항체 또는 그의 항원-결합 부분이 제2 항체 또는 그의 항원-결합 부분의 결합과 충분히 유사한 방식으로 에피토프에 결합하여, 상기 제1 항체와 그의 동족 에피토프의 결합이 제2 항체 부재 하의 제1 항체의 결합과 비교하여 제2 항체의 존재 하에 검출가능하게 감소되는 것을 의미한다. 제2 항체가 그의 에피토프에 결합하는 것이 또한 제1 항체의 존재 하에 검출가능하게 감소되는 상황도 가능하지만, 반드시 그러할 필요는 없다. 즉, 제2 항체는 제1 항체가 그의 각각의 에피토프에 결합하는 것을 억제하지 않으면서 제1 항체는 제2 항체가 그의 에피토프에 결합하는 것을 억제할 수 있다. 그러나, 각각의 항체가 동일한 정도, 보다 큰 정도, 또는 보다 적은 정도의 여부와 상관없이 다른 항체와 그의 동족 에피토프 또는 리간드의 결합을 검출가능하게 억제하는 경우에, 이러한 항체들은 이들의 각각의 에피토프(들)의 결합에 대해 서로 "교차-경쟁"하는 것으로 언급된다. 경쟁 및 교차-경쟁 항체가 둘 다 본 발명에 포괄된다. 이러한 경쟁 또는 교차-경쟁이 일어나는 메카니즘 (예를 들어, 입체 장애, 입체형태 변화 또는 공통적인 에피토프 또는 그의 일부에 대한 결합)과는 상관없이, 당업자는 본원에 제공되는 교시를 기초로 하여 본원에 개시된 방법에 이러한 경쟁 및/또는 교차-경쟁 항체가 포괄되며 유용할 수 있음을 알 것이다.

또 다른 (제2) 에피토프 또는 LDLR의 EGF-유사 도메인과 상호작용하는 PCSK9 상의 표면과 "중첩"되는 에피토프를 갖는 항체는, PCSK9 잔기의 측면에서 그와 상호작용하는 공간이 공유됨을 의미한다. 중첩의 퍼센트, 예를 들어 청구된 항체의 PCSK9 에피토프와 LDLR의 EGF-유사 도메인과 상호작용하는 PCSK9 표면이 중첩되는 퍼센트를 계산하기 위해, LDLR과 복합체를 형성하는 경우에 매립되는 PCSK9의 표면적을 잔기 1개당 기초로 하여 계산한다. 또한, PCSK9:항체 복합체에서도 이들 잔기의 매립된 면적을 계산한다. 가능한 중첩이 100%를 초과하는 것을 방지하기 위해, LDLR:PCSK9 복합체에서보다 PCSK9:항체 복합체에서 더 높은 매립된 표면적을 갖는 잔기에 대한 표면적을 LDLR:PCSK9 복합체로부터의 값 (100%)에 대해 설정한다. 표면 중첩 퍼센트는 모든 LDLR:PCSK9 상호작용 잔기에 대해 합하여 계산되며, 상호작용 면적으로 가중된다.

"기능성 Fc 영역"은 천연 서열 Fc 영역의 적어도 하나의 이펙터 기능을 갖는다. 예시적인 "이펙터 기능"은 C1q 결합; 보체 의존성 세포독성; Fc 수용체 결합; 항체-의존성 세포-매개 세포독성; 식세포작용; 세포 표면 수용체 (예를 들어, B 세포 수용체)의 하향-조절 등을 포함한다. 이러한 이펙터 기능에는 일반적으로 Fc 영역이 결합 도메인 (예를 들어, 항체 가변 도메인)과 결합될 것이 요구되고, 이것은 이러한 항체 이펙터 기능을 평가하기 위한 당업계 공지의 다양한 검정을 이용하여 평가할 수 있다.

"천연 서열 Fc 영역"은 자연에서 발견되는 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. "변이체 Fc 영역"은 적어도 하나의 아미노산 변형으로 인하여 천연 서열 Fc 영역의 아미노산과 상이한 아미노산 서열을 포함하나, 천연 서열 Fc 영역의 적어도 하나의 이펙터 기능이 유지된다. 바람직하게는, 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역 또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역과 비교해서 1개 이상의 아미노산 치환, 예를 들어 약 1개 내지 약 10개의 아미노산 치환을 갖고, 바람직하게는 천연 서열 Fc 영역 또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역 내에 약 1개 내지 약 5개의 아미노산 치환을 갖는다. 본원에서의 변이체 Fc 영역은 바람직하게는 천연 서열 Fc 영역 및/또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역과 적어도 약 80%의 서열 동일성, 가장 바람직하게는 이와 적어도 약 90%의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 이와 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%의 서열 동일성을 가질 것이다.

본원에 사용된 용어 "아토르바스타틴", "세리바스타틴", "플루바스타틴", "로바스타틴", "메바스타틴", "피타바스타틴", "프라바스타틴", "로수바스타틴" 및 "심바스타틴"은 각각 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 메바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 심바스타틴, 및 그의 임의의 제약상 허용되는 염 또는 입체이성질체를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는 염"은 대상체에 의해 생리학상 허용되는 염을 포함한다. 이러한 염은 전형적으로 무기 산 또는 염기 및/또는 유기 산 또는 염기로부터 제조된다. 이러한 산 및 염기의 예는 당업자에게 널리 공지되어 있다.

본원에 사용된 "치료"는 유익하거나 원하는 임상 결과를 수득하기 위한 접근 방식이다. 본 발명의 목적을 위해, 유익하거나 원하는 임상 결과는 하기 중 하나 이상을 포함하나 이에 제한되지는 않는다: LDL 제거의 증진 및 대사 및/또는 섭식 장애, 또는 가족성 고콜레스테롤혈증, 아테롬성 이상지혈증, 아테롬성동맥경화증, ACS, 및 보다 일반적으로 심혈관 질환 (CVD)으로부터 발생하는 이상 콜레스테롤 및/또는 지단백질 수준의 발생률 감소 또는 개선.

"발생률 감소"는 임의의 중증도 감소 (이러한 상태에 일반적으로 사용되는 다른 약물 및/또는 요법의 필요성 및/또는 그의 양 (예를 들어, 그에 대한 노출)의 감소를 포함할 수 있음)를 의미한다. 당업자가 이해하는 바와 같이, 개체는 치료에 대한 반응과 관련하여 다양할 수 있고, 따라서 예를 들어 "발생률을 감소시키는 방법"은 PCSK9 길항제 항체의 투여가 특정한 개체에서의 발생률을 감소시킬 수도 있다는 합리적인 예상을 기초로 하여 이러한 PCSK9 길항제 항체를 투여하는 것을 반영한다.

"개선"은 PCSK9 길항제 항체를 투여하지 않는 경우와 비교하여 하나 이상의 증상이 감소되거나 개선된 것을 의미한다. "개선"은 또한 증상의 지속기간의 단축 또는 감소를 포함한다.

본원에 사용된 약물, 화합물 또는 제약 조성물의 "유효 투여량" 또는 "유효량"은 임의의 하나 이상의 유익하거나 원하는 결과를 발생시키기에 충분한 양이다. 예방적 사용의 경우에, 유익하거나 원하는 결과는 위험의 제거 또는 감소, 중증도의 감소, 또는 질환 (질환의 생화학적, 조직학적 및/또는 거동적 증상, 질환의 발생 동안 나타나는 그의 합병증 및 중간 병적 표현형 포함)의 발생 지연을 포함한다. 치료 용도의 경우에, 유익하거나 원하는 결과는 고콜레스테롤혈증 또는 이상지혈증, 아테롬성동맥경화증, 심혈관 질환 또는 관상동맥 심장 질환의 하나 이상의 증상의 감소, 질환을 치료하기 위해 필요한 다른 의약의 용량의 감소, 또 다른 의약의 효과의 증진 및/또는 환자의 질환의 진행 지연과 같은 임상 결과를 포함한다. 유효 투여량은 하나 이상의 투여로 투여될 수 있다. 본 발명의 목적을 위해, 약물, 화합물 또는 제약 조성물의 유효 투여량은 예방적 또는 치유적 치료를 직접적으로 또는 간접적으로 달성하기에 충분한 양이다. 임상적 문맥에서 이해되는 바와 같이, 약물, 화합물 또는 제약 조성물의 유효 투여량은 또 다른 약물, 화합물 또는 제약 조성물과 함께 달성되거나 달성되지 않을 수 있다. 따라서, "유효 투여량"은 하나 이상의 치료제의 투여와 관련하여 고려될 수 있고, 단일 작용제는 하나 이상의 다른 작용제와 관련하여 바람직한 결과가 달성될 수 있거나 달성된다면 유효량으로 주어진 것으로 간주될 수 있다.

"개체" 또는 "대상체"는 포유동물, 보다 바람직하게는 인간이다. 포유동물은 또한 가축, 경주용 동물, 애완동물, 영장류, 말, 개, 고양이, 마우스 및 래트를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

본원에 사용된 "벡터"는 숙주 세포 내에 하나 이상의 관심 유전자(들) 또는 서열(들)을 전달할 수 있는, 바람직하게는 이를 발현시킬 수 있는 구축물을 의미한다. 벡터의 예는 바이러스 벡터, 네이키드 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 플라스미드, 코스미드 또는 파지 벡터, 양이온성 축합제와 회합된 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 리포솜에 캡슐화된 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 및 특정 진핵 세포, 예컨대 생산자 세포를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

본원에 사용된 "발현 제어 서열"은 핵산의 전사를 지시하는 핵산 서열을 의미한다. 발현 제어 서열은 프로모터, 예컨대 구성적 또는 유도성 프로모터, 또는 인핸서일 수 있다. 발현 제어 서열은 전사될 핵산 서열에 작동가능하게 연결된다.

본원에 사용된 "제약상 허용되는 담체" 또는 "제약상 허용되는 부형제"는 활성 성분과 조합되는 경우에 상기 성분이 생물학적 활성을 보유하고 대상체의 면역계와 비-반응성이도록 하는 임의의 물질을 포함한다. 그 예는 표준 제약 담체, 예컨대 포스페이트 완충 염수 용액, 물, 에멀젼, 예컨대 수중유 에멀젼, 및 다양한 유형의 습윤제 중 임의의 것을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 에어로졸 또는 비경구 투여에 바람직한 희석제는 포스페이트 완충 염수 (PBS) 또는 통상의 (0.9%) 염수이다. 이러한 담체를 포함하는 조성물은 널리 공지된 통상의 방법에 의해 제제화된다 (예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A. Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990; 및 Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed., Mack Publishing, 2000] 참조).

본원에 사용된 용어 "k_on"은 항원에 대한 항체의 결합에 대한 속도 상수를 지칭한다. 구체적으로, 속도 상수 (k_on 및 k_off) 및 평형 해리 상수는 Fab 항체 단편 (즉, 1가) 및 PCSK9를 사용하여 측정된다.

본원에 사용된 용어 "k_off"는 항체/항원 복합체로부터의 항체의 해리에 대한 속도 상수를 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "K_D"는 항체-항원 상호작용의 평형 해리 상수를 지칭한다.

본원에서 "약" 값 또는 파라미터에 대한 언급은 그 값 또는 파라미터 자체에 대한 실시양태를 포함(하고 이를 기재)한다. 예를 들어, "약 X"를 언급하는 기재는 "X"의 기재를 포함한다. 수치 범위는 그 범위를 정의하는 숫자를 포함한다.

실시양태가 표현 "포함하는"을 사용하여 본원에 기재된 경우에, "로 이루어진" 및/또는 "로 본질적으로 이루어진"과 관련하여 기재된 다른 유사한 실시양태가 또한 제공되는 것으로 이해된다.

본 발명의 측면 또는 실시양태를 마쿠쉬 군 또는 다른 대안적 분류의 방법으로 기재한 경우에, 본 발명은 전체로서 열거한 전체 군 뿐만 아니라, 군의 각 구성원을 개별적으로, 및 주요 군의 모든 가능한 하위군 뿐만 아니라 하나 이상의 군 구성원이 없는 주요 군을 포괄한다. 본 발명은 또한 본 발명의 특허청구범위에서 하나 이상의 임의의 군 구성원이 명시적으로 배제된 것도 고려한다.

달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 전문 과학 용어는 본 발명이 속하는 업계의 통상의 기술자가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 예시적인 방법 및 물질이 본원에 기재되어 있지만, 본원에 기재된 것과 유사하거나 동일한 방법 및 물질도 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있다. 본원에 언급되는 모든 공개 및 다른 참고문헌은 그 전부가 참고로 포함된다. 상충되는 경우에는, 정의를 비롯하여 본 명세서가 우선될 것이다. 다수의 문헌들이 본원에 참고로 포함되어 있지만, 이와 같이 포함하는 것이 이들 문헌 중 어느 것이 당업계의 통상의 일반 지식 중 일부를 형성한다는 것을 인정한다는 것은 아니다. 본 명세서 및 특허청구범위 전반에 걸쳐, 용어 "포함하다", 또는 "포함한다" 또는 "포함하는"과 같은 변형은 언급한 정수 또는 정수 군을 포함하지만, 임의의 다른 정수 또는 정수 군은 배제시키지 않는다는 것을 의미하는 것으로 이해될 것이다. 문맥에서 달리 요구되지 않는 한, 단수의 용어는 복수를 포함할 것이고, 복수의 용어는 단수를 포함할 것이다. 물질, 방법 및 예는 단지 예시적인 것이며 제한적임을 의도하지 않는다.

항-PCSK9 항체와 관련된 공개 정보는 하기 공개 출원을 포함한다: WO 2010/029513으로 2010년 3월 18일에 공개된 PCT/IB2009/053990, 및 US 2010/0068199로 2010년 3월 18일에 공개된 미국 특허 출원 번호 12/558312 (이들은 각각 그의 전문이 본원에 참고로 포함됨).

항-PCSK9 항체를 사용한 치료

혈장에서 LDL 입자의 현저한 상승을 특징으로 하는 장애의 치료를 위한 치료 요법이 본원에 제공된다. 대상 치료 요법은 PCSK9 길항제 항체의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 대상 치료 요법은 스타틴의 안정한 용량을 제공받은 환자에게 PCSK9 길항제 항체를 투여하는 것을 포함한다. 본원에 개시된 치료 요법은 개체에서 고콜레스테롤혈증 및/또는 이상지혈증, 아테롬성동맥경화증, 심혈관 질환, 급성 관상동맥 증후군 (ACS) 또는 관상동맥 심장 질환 중 적어도 하나의 증상을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한, 순환 PCSK9에 길항하는 PCSK9 길항제 항체의 유효량을 제공한다.

유리하게는, 본원에 개시된 치료 요법은 실질적이고 지속적인 LDL-C 저하를 발생시킨다. 바람직하게는, 혈액 콜레스테롤 및/또는 혈액 LDL은 투여 전보다 적어도 약 10% 또는 15% 더 낮다. 보다 바람직하게는, 혈액 콜레스테롤 및/또는 혈액 LDL은 항체의 투여 전보다 적어도 약 20, 30, 40, 50, 60, 70 또는 80% 더 낮다.

투여 요법

일부 실시양태에서, 투여 요법은 PCSK9 항체의 약 2 mg/kg의 초기 용량에 이어 4주마다 약 2 mg/kg의 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 다른 실시양태에서, 투여 요법은 PCSK9 항체의 약 4 mg/kg의 초기 용량에 이어 4주마다 약 4 mg/kg의 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 다른 실시양태에서, 투여 요법은 PCSK9 항체의 약 4 mg/kg의 초기 용량에 이어 8주마다 약 4 mg/kg의 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 다른 실시양태에서, 투여 요법은 PCSK9 항체의 약 8 mg/kg의 초기 용량에 이어 8주마다 약 8 mg/kg의 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 다른 실시양태에서, 투여 요법은 PCSK9 항체의 약 12 mg/kg의 초기 용량에 이어 8주마다 약 12 mg/kg의 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다.

다른 실시양태에서, 투여 요법은 PCSK9 항체의 약 0.25 mg/kg의 매주 용량을 투여하는 것을 포함한다. 다른 실시양태에서, 투여 요법은 PCSK9 항체의 약 0.5 mg/kg의 매주 용량을 투여하는 것을 포함한다. 다른 실시양태에서, 투여 요법은 PCSK9 항체의 약 1 mg/kg의 매주 용량을 투여하는 것을 포함한다. 다른 실시양태에서, 투여 요법은 PCSK9 항체의 약 1.5 mg/kg의 매주 용량을 투여하는 것을 포함한다.

그러나, 진료의가 달성하고자 하는 약동학 붕괴 패턴에 따라 다른 투여 요법이 유용할 수 있다. 이러한 요법의 진행은 통상의 기술 및 검정에 의해 용이하게 모니터링된다. 바람직한 실시양태에서, 초기 용량 및 제1 후속 및 추가의 후속 용량 시간상 서로 적어도 4주 떨어진다. 투여 요법 (사용된 PCSK9 길항제(들) 포함)은 시간 경과에 따라 달라질 수 있다.

일반적으로, PCSK9 항체 투여의 경우에, 초기 후보 투여량은 PCSK9 길항제 항체의 약 0.3 mg/kg 내지 약 18 mg/kg일 수 있다. 본 발명의 목적을 위해, 전형적인 투여량은 상기 언급된 요인에 따라 대략 약 3 μg/kg으로부터 30 μg/kg까지, 300 μg/kg까지, 3 mg/kg까지, 30 mg/kg까지, 100 mg/kg까지 또는 그 초과의 범위일 수 있다. 예를 들어, 약 0.3 mg/kg, 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 1.5 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 2.5 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 3.5 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 4.5 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 5.5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 6.5 mg/kg, 약 7 mg/kg, 약 7.5 mg/kg, 약 8 mg/kg, 약 8.5 mg/kg, 약 9 mg/kg, 약 9.5 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 10.5 mg/kg, 약 11 mg/kg, 약 11.5 mg/kg, 약 12 mg/kg, 약 12.5 mg/kg, 약 13 mg/kg, 약 13.5 mg/kg, 약 14 mg/kg, 약 14.5 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 15.5 mg/kg, 약 16 mg/kg, 약 16.5 mg/kg, 약 17 mg/kg, 약 17.5 mg/kg, 약 18 mg/kg, 약 18.5 mg/kg, 약 19 mg/kg, 약 19.5 mg/kg, 약 20 mg/kg, 약 20.5 mg/kg, 약 21 mg/kg, 약 21.5 mg/kg, 약 22 mg/kg, 약 22.5 mg/kg, 약 23 mg/kg, 약 23.5 mg/kg, 약 24 mg/kg, 약 24.5 mg/kg 및 약 25 mg/kg의 투여량이 사용될 수 있다. 수일 이상에 걸친 반복 투여의 경우에, 상태에 따라 원하는 증상 억제가 나타날 때까지 또는 예를 들어 혈액 LDL 수준을 감소시키기에 충분한 치료 수준이 달성될 때까지 치료가 지속된다.

예시적인 투여 요법은 PCSK9 항체의 약 0.25 mg/kg, 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 1.5 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 2.5 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 7 mg/kg, 약 8 mg/kg, 약 9 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 11 mg/kg, 약 12 mg/kg, 약 13 mg/kg, 약 14 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 16 mg/kg, 약 17 mg/kg 또는 약 18 mg/kg에 이어의 유지 용량 약 0.25 mg/kg, 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 1.5 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 2.5 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 7 mg/kg, 약 8 mg/kg, 약 9 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 11 mg/kg, 약 12 mg/kg, 약 13 mg/kg, 약 14 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 16 mg/kg, 약 17 mg/kg 또는 약 18 mg/kg의 초기 용량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 유지 용량은 매주 투여된다. 일부 실시양태에서, 유지 용량은 격주로 투여된다. 일부 실시양태에서, 유지 용량은 약 3주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 유지 용량은 약 4주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 유지 용량은 약 5주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 유지 용량은 약 6주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 유지 용량은 약 7주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 유지 용량은 약 8주마다 투여된다. 바람직한 실시양태에서, 초기 용량 및 제1 후속 및 추가의 후속 용량은 시간상 서로 적어도 약 4주 떨어진다. 일부 실시양태에서, 유지 용량은 매월 투여된다.

다른 실시양태에서, 고정 용량이 사용될 수 있다. 예를 들어, 약 0.25 mg, 약 0.3 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 1.5 mg, 약 2 mg, 약 2.5 mg, 약 3 mg, 약 4 mg, 약 5 mg, 약 6 mg, 약 7 mg, 약 8 mg, 약 9 mg, 약 10 mg, 약 11 mg, 약 12 mg, 약 13 mg, 약 14 mg, 약 15 mg, 약 16 mg, 약 17 mg, 약 18 mg, 약 19 mg, 약 20 mg, 약 21 mg, 약 22 mg, 약 23 mg, 약 24 mg, 약 25 mg, 약 26 mg, 약 27 mg, 약 28 mg, 약 29 mg, 약 30 mg, 약 31 mg, 약 32 mg, 약 33 mg, 약 34 mg, 약 35 mg, 약 36 mg, 약 37 mg, 약 38 mg, 약 39 mg, 약 40 mg, 약 41 mg, 약 42 mg, 약 43 mg, 약 44 mg, 약 45 mg, 약 46 mg, 약 47 mg, 약 48 mg, 약 49 mg, 약 50 mg, 약 51 mg, 약 52 mg, 약 53 mg, 약 54 mg, 약 55 mg, 약 56 mg, 약 57 mg, 약 58 mg, 약 59 mg, 약 60 mg, 약 61 mg, 약 62 mg, 약 63 mg, 약 64 mg, 약 65 mg, 약 66 mg, 약 67 mg, 약 68 mg, 약 69 mg, 약 70 mg, 약 71 mg, 약 72 mg, 약 73 mg, 약 74 mg, 약 75 mg, 약 76 mg, 약 77 mg, 약 78 mg, 약 79 mg, 약 80 mg, 약 81 mg, 약 82 mg, 약 83 mg, 약 84 mg, 약 85 mg, 약 86 mg, 약 87 mg, 약 88 mg, 약 89 mg, 약 90 mg, 약 91 mg, 약 92 mg, 약 93 mg, 약 94 mg, 약 95 mg, 약 96 mg, 약 99 mg, 약 98 mg, 약 99 mg, 약 100 mg, 약 101 mg, 약 102 mg, 약 103 mg, 약 104 mg, 약 105 mg, 약 106 mg, 약 107 mg, 약 108 mg, 약 109 mg, 약 110 mg, 약 111 mg, 약 112 mg, 약 113 mg, 약 114 mg, 약 115 mg, 약 116 mg, 약 117 mg, 약 118 mg, 약 119 mg, 약 120 mg, 약 121 mg, 약 122 mg, 약 123 mg, 약 124 mg, 약 125 mg, 약 126 mg, 약 127 mg, 약 128 mg, 약 129 mg, 약 130 mg, 약 131 mg, 약 132 mg, 약 133 mg, 약 134 mg, 약 135 mg, 약 136 mg, 약 137 mg, 약 138 mg, 약 139 mg, 약 140 mg, 약 141 mg, 약 142 mg, 약 143 mg, 약 144 mg, 약 145 mg, 약 146 mg, 약 147 mg, 약 148 mg, 약 149 mg, 약 150 mg, 약 151 mg, 약 152 mg, 약 153 mg, 약 154 mg, 약 155 mg, 약 156 mg, 약 157 mg, 약 158 mg, 약 159 mg, 약 160 mg, 약 161 mg, 약 162 mg, 약 163 mg, 약 164 mg, 약 165 mg, 약 166 mg, 약 167 mg, 약 168 mg, 약 169 mg, 약 170 mg, 약 171 mg, 약 172 mg, 약 173 mg, 약 174 mg, 약 175 mg, 약 176 mg, 약 177 mg, 약 178 mg, 약 179 mg, 약 180 mg, 약 181 mg, 약 182 mg, 약 183 mg, 약 184 mg, 약 185 mg, 약 186 mg, 약 187 mg, 약 188 mg, 약 189 mg, 약 190 mg, 약 191 mg, 약 192 mg, 약 193 mg, 약 194 mg, 약 195 mg, 약 196 mg, 약 199 mg, 약 198 mg, 약 199 mg, 약 200 mg, 약 250, 약 300, 약 350, 약 400, 약 450 또는 약 500 mg의 PCSK9 길항제 항체 용량이 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 고정 용량은 피하로 또는 정맥내로 투여된다.

PCSK9 길항제 항체는 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 개체에게 본원에 개시된 하나 이상의 투여 요법에 따라 투여될 수 있다. 안정한 용량은, 예를 들어 스타틴의 1일 용량 또는 격일 용량일 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 다양한 스타탄이 당업자에게 공지되어 있고, 예를 들어 아토르바스타틴, 심바스타틴, 로바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 플루바스타틴, 세리바스타틴, 메바스타틴, 피타바스타틴, 및 스타틴 조합 요법을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 스타틴 조합 요법의 비제한적 예는 아토르바스타틴 플러스 암로디핀 (카듀엣(CADUET)™), 심바스타틴 플러스 에제티미브 (비토린(VYTORIN)™), 로바스타틴 플러스 니아신 (아드비코르(ADVICOR)™), 및 심바스타틴 플러스 니아신 (심코르(SIMCOR)™)을 포함한다.

일부 실시양태에서, 개체는 PCSK9 길항제 항체의 초기 용량의 투여 전에 적어도 1, 2, 3, 4, 5 또는 6주 동안 스타틴의 안정한 용량을 제공받는다. 바람직하게는, 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 개체는 PCSK9 길항제 항체의 초기 용량의 투여 전에 약 70 mg/dL 이상의 공복 LDL-C를 갖는다. 일부 실시양태에서, 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 개체는 PCSK9 길항제 항체의 초기 용량의 투여 전에 약 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 또는 200 mg/dL 이상의 공복 LDL-C를 갖는다.

본 발명의 목적을 위해, 전형적인 스타틴 용량은 상기 언급된 요인에 따라 약 1 mg 내지 약 80 mg의 범위일 수 있다. 예를 들어, 약 0.3 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 2.5 mg, 약 3 mg, 약 4 mg, 약 5 mg, 약 6 mg, 약 7 mg, 약 8 mg, 약 9 mg, 약 10 mg, 약 11 mg, 약 12 mg, 약 13 mg, 약 14 mg, 약 15 mg, 약 16 mg, 약 17 mg, 약 18 mg, 약 19 mg, 약 20 mg, 약 21 mg, 약 22 mg, 약 23 mg, 약 24 mg, 약 25 mg, 약 26 mg, 약 27 mg, 약 28 mg, 약 29 mg, 약 30 mg, 약 30 mg, 약 31 mg, 약 32 mg, 약 33 mg, 약 34 mg, 약 35 mg, 약 36 mg, 약 37 mg, 약 38 mg, 약 39 mg, 약 40 mg, 약 41 mg, 약 42 mg, 약 43 mg, 약 44 mg, 약 45 mg, 약 46 mg, 약 47 mg, 약 48 mg, 약 49 mg, 약 50 mg, 약 51 mg, 약 52 mg, 약 53 mg, 약 54 mg, 약 55 mg, 약 56 mg, 약 57 mg, 약 58 mg, 약 59 mg, 약 60 mg, 약 61 mg, 약 62 mg, 약 63 mg, 약 64 mg, 약 65 mg, 약 66 mg, 약 67 mg, 약 68 mg, 약 69 mg, 약 70 mg, 약 71 mg, 약 72 mg, 약 73 mg, 약 74 mg, 약 75 mg, 약 76 mg, 약 77 mg, 약 78 mg, 약 79 mg 또는 약 80 mg의 스타틴 용량이 사용될 수 있다.

바람직한 실시양태에서, 40 mg 또는 80 mg 아토르바스타틴의 용량이 사용된다. 다른 실시양태에서, 20 mg 또는 40 mg 로수바스타틴의 용량이 사용된다. 다른 실시양태에서, 40 mg 또는 80 mg 심바스타틴의 용량이 사용된다.

일부 실시양태에서, 투여 요법은 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 대상체에게 PCSK9 항체의 약 2 mg/kg의 초기 용량에 이어 약 4주마다 약 2 mg/kg의 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 다른 실시양태에서, 투여 요법은 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 대상체에게 PCSK9 항체의 약 3 mg/kg의 초기 용량에 이어 약 4주마다 약 3 mg/kg의 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 다른 실시양태에서, 투여 요법은 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 대상체에게 PCSK9 항체의 약 4 mg/kg의 초기 용량에 이어 약 4주마다 약 4 mg/kg의 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 다른 실시양태에서, 투여 요법은 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 대상체에게 PCSK9 항체의 약 5 mg/kg의 초기 용량에 이어 약 4주마다 약 5 mg/kg의 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 다른 실시양태에서, 투여 요법은 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 대상체에게 PCSK9 항체의 약 4 mg/kg의 초기 용량에 이어 8주마다 약 4 mg/kg의 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 다른 실시양태에서, 투여 요법은 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 대상체에게 PCSK9 항체의 약 6 mg/kg의 초기 용량에 이어 약 4주마다 약 6 mg/kg의 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 다른 실시양태에서, 투여 요법은 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 대상체에게 PCSK9 항체의 약 8 mg/kg의 초기 용량에 이어 8주마다 약 8 mg/kg의 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 다른 실시양태에서, 투여 요법은 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 대상체에게 PCSK9 항체의 약 12 mg/kg의 초기 용량에 이어 8주마다 약 12 mg/kg의 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다.

다른 실시양태에서, 투여 요법은 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 대상체에게 피하로 PCSK9 항체의 약 200 mg의 초기 용량에 이어 약 4주마다 약 200 mg의 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 다른 실시양태에서, 투여 요법은 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 대상체에게 PCSK9 항체의 약 300 mg의 초기 용량에 이어 약 4주마다 약 300 mg의 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 다른 실시양태에서, 투여 요법은 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 대상체에게 PCSK9 항체의 약 50 mg의 초기 용량에 이어 약 2주마다 약 50 mg의 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 다른 실시양태에서, 투여 요법은 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 대상체에게 PCSK9 항체의 약 100 mg의 초기 용량에 이어 약 2주마다 약 100 mg의 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 다른 실시양태에서, 투여 요법은 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 대상체에게 PCSK9 항체의 약 150 mg의 초기 용량에 이어 약 2주마다 약 150 mg의 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다.

또 다른 예시적인 투여 요법은 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 대상체에게 PCSK9 길항제 항체의 약 0.25 mg/kg의 초기 용량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여 요법은 PCSK9 길항제 항체의 약 0.25 mg/kg의 매월 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 예시적인 투여 요법은 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 대상체에게 PCSK9 길항제 항체의 약 0.5 mg/kg의 초기 용량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여 요법은 PCSK9 길항제 항체의 약 0.5 mg/kg의 매월 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 예시적인 투여 요법은 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 대상체에게 PCSK9 길항제 항체의 약 1 mg/kg의 초기 용량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여 요법은 PCSK9 길항제 항체의 약 1 mg/kg의 매월 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 예시적인 투여 요법은 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 대상체에게 PCSK9 길항제 항체의 약 1.5 mg/kg의 초기 용량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여 요법은 PCSK9 길항제 항체의 약 1.5 mg/kg의 매월 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 예시적인 투여 요법은 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 대상체에게 PCSK9 길항제 항체의 약 2 mg/kg의 초기 용량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여 요법은 PCSK9 길항제 항체의 약 2 mg/kg의 매월 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 예시적인 투여 요법은 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 대상체에게 PCSK9 길항제 항체의 약 3 mg/kg의 초기 용량을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 예시적인 투여 요법은 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 대상체에게 PCSK9 길항제 항체의 약 4 mg/kg의 초기 용량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여 요법은 PCSK9 길항제 항체의 약 4 mg/kg의 매월 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 예시적인 투여 요법은 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 대상체에게 PCSK9 길항제 항체의 약 5 mg/kg의 초기 용량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여 요법은 PCSK9 길항제 항체의 약 5 mg/kg의 매월 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 예시적인 투여 요법은 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 대상체에게 PCSK9 길항제 항체의 약 6 mg/kg의 초기 용량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여 요법은 PCSK9 길항제 항체의 약 6 mg/kg의 매월 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다.

그러나, 진료의가 달성하고자 하는 약동학적 붕괴 패턴에 따라 다른 투여 요법이 유용할 수 있다. 이러한 요법의 진행은 통상의 기술 및 검정에 의해 용이하게 모니터링된다. 바람직한 실시양태에서, 초기 용량 및 제1 후속 및 추가의 후속 용량은 시간상 서로 적어도 4주 떨어진다. 투여 요법 (사용된 PCSK9 길항제(들) 포함)은 시간 경과에 따라 달라질 수 있다.

PCSK9 길항제 항체

하기에 본 발명에 따라 사용되는 항체의 생산을 위한 예시적인 기술을 기재한다. 항체의 생산에 사용될 PCSK9 항원은, 예를 들어 전장 인간 PCSK9, 전장 마우스 PCSK9 및 PCSK9의 다양한 펩티드 단편일 수 있다. 항체를 생성하기에 유용한 PCSK9의 다른 형태는 당업자에게 명백할 것이다.

모노클로날 항체는 재조합 전장 PCSK9 단백질로 PCSK9 널 마우스를 면역화시켜 생성하였다. 이러한 방식의 항체 제조는, LDLR에 대한 PCSK9의 결합을 완전하게 차단하고, Huh7 세포에서의 LDLR 수준의 PCSK9-매개 저하를 완전하게 차단하며, 미국 특허 출원 번호 12/558312의 실시예 7에 나타난 바와 같이 PCSK9 -/- 마우스에서 나타난 것과 대등한 수준으로 마우스를 포함하는 생체내에서 LDL 콜레스테롤 수준을 저하시키는 길항제 항체를 생성하였다.

이해되는 바와 같이, 본 발명에 사용하기 위한 항체는 하이브리도마로부터 유래될 수 있으나, 또한 하이브리도마 이외의 세포주에서 발현될 수 있다. 특정한 항체에 대한 cDNA 또는 게놈 클론을 코딩하는 서열은 적합한 포유동물 또는 비포유동물 숙주 세포의 형질전환에 사용될 수 있다. 발현을 위한 숙주로서 이용가능한 포유동물 세포주는 당업계에 널리 공지되어 있으며, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, NSO, HeLa 세포, 새끼 햄스터 신장 (BHK) 세포, 원숭이 신장 세포 (COS) 및 인간 간세포성 암종 세포 (예를 들어, Hep G6)를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (American Type Culture Collection) (ATCC)으로부터 입수가능한 다수의 불멸화 세포주를 포함한다. 박테리아, 효모, 곤충 및 식물 세포를 포함하는 비-포유동물 세포가 또한 사용될 수 있다. 글리코실화의 제거를 위한 항체 CH6 도메인의 부위 지정 돌연변이는 또한 비-인간 글리코실화로부터 발생하는 면역원성, 약동학 및/또는 이펙터 기능의 변화를 방지하기 위해 바람직할 수 있다. 발현의 글루타민 신타제 시스템은 유럽 특허 616 846, 656 055 및 363 997 및 유럽 특허 출원 89303964.4와 관련하여 전체적으로 또는 부분적으로 논의된다. 또한, 당업계에 공지된 것을 비롯한 디히드로폴레이트 리덕타제 (DHFR) 발현 시스템이 항체를 생산하는데 사용될 수 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 PCSK9 길항제 항체 L1L3을 사용하여 실시된다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 항체 L1L3에 의해 인식되는 에피토프와 동일한 PCSK9의 에피토프를 인식하는 항체를 사용하여 실시된다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 서열 11에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역으로부터의 3개의 CDR 및 서열 12에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역으로부터의 3개의 CDR을 포함하는 항체를 사용하여 실시된다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 서열 2 (SYYMH), 서열 13 (GYTFTSY) 또는 서열 14 (GYTFTSYYMH)에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역 1 (CDR1); 서열 3 (EISPFGGRTNYNEKFKS) 또는 서열 15 (ISPFGGR)에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2 및/또는 서열 4 (ERPLYASDL)에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는, PCSK9에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3의 상기 서열에서 하나 이상의 보존적 아미노산 치환을 가지며 상기 서열에 의해 정의되는 CDR과 본질적으로 동일한 결합 특이성을 보유하는 그의 변이체를 사용하여 실시된다. 바람직하게는, 변이체는 최대 약 10개의 아미노산 치환, 보다 바람직하게는 최대 약 4개의 아미노산 치환을 포함한다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 서열 5 (RASQGISSALA)에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 6 (SASYRYT)에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및/또는 서열 7 (QQRYSLWRT)에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 항체, 또는 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3의 상기 서열에서 하나 이상의 보존적 아미노산 치환을 가지며 상기 서열에 의해 정의되는 CDR1과 본질적으로 동일한 결합 특이성을 보유하는 그의 변이체를 사용하여 실시된다. 바람직하게는, 변이체는 최대 약 10개의 아미노산 치환, 보다 바람직하게는 최대 약 4개의 아미노산 치환을 포함한다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 서열 8 또는 10을 포함하거나 또는 이로 이루어진 중쇄 서열 및 서열 9를 포함하거나 또는 이로 이루어진 경쇄 서열을 갖는 항체를 사용하여 실시된다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 서열 11에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 중쇄 가변 영역 및 서열 12에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 경쇄 가변 영역을 갖는 항체를 사용하여 실시된다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 서열 1의 PCSK9 아미노산 서열의 아미노산 잔기 153-155, 194, 195, 197, 237-239, 367, 369, 374-379 및 381을 포함하는 인간 PCSK9 상의 에피토프를 인식하는 항체를 사용하여 실시된다. 바람직하게는, 인간 PCSK9 상의 항체 에피토프는 서열 1의 PCSK9 아미노산 서열의 아미노산 잔기 71, 72, 150-152, 187-192, 198-202, 212, 214-217, 220-226, 243, 255-258, 317, 318, 347-351, 372, 373, 380, 382 및 383 중 하나 이상을 포함하지 않는다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션에 기탁되어 등록 번호 PTA-8986을 배정받은 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 5A10, 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션에 기탁되어 등록 번호 PTA-8985를 배정받은 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 4A5, 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션에 기탁되어 등록 번호 PTA-8984를 배정받은 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 6F6 및 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션에 기탁되어 등록 번호 PTA-8983을 배정받은 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 7D4로 이루어진 군으로부터 선택된 모노클로날 항체에 의해 인식되는 제2 에피토프와 동일하거나 중첩되는 PCSK9의 제1 에피토프를 인식하는 항체를 제공한다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 PCSK9 길항제 항체 L1L3을 이용하여 실시된다 (WO 2010/029513으로 2010년 3월 18일에 공개된 PCT/IB2009/053990, US 2010/0068199로 2010년 3월 18일에 공개된 미국 특허 출원 번호 12/558312 참조).

바람직하게는, 상기 변이체는 최대 약 20개의 아미노산 치환, 보다 바람직하게는 최대 약 8개의 아미노산 치환을 포함한다. 바람직하게는, 상기 항체는 면역학적으로 불활성 불변 영역을 추가로 포함하고/하거나 상기 항체는 IgG₂, IgG₄, IgG_2Δa, IgG_4Δb, IgG_4Δc, IgG₄ S228P, IgG_4Δb S228P 및 IgG_4Δc S228P로 이루어진 군으로부터 선택된 이소형을 갖는다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 불변 영역은 비-글리코실화 Fc이다.

본 발명에 유용한 항체는 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 항체 단편 (예를 들어, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, Fc 등), 키메라 항체, 이중특이적 항체, 이종접합체 항체, 단일 쇄 (ScFv), 그의 돌연변이체, 항체 일부를 포함하는 융합 단백질 (예를 들어, 도메인 항체), 인간 항체, 인간화 항체, 및 필요한 특이성의 항원 인식 부위를 포함하는 이뮤노글로불린 분자의 임의의 다른 변형된 형태, 예를 들어 항체의 글리코실화 변이체, 항체의 아미노산 서열 변이체 및 공유 변형된 항체를 포괄할 수 있다. 항체는 뮤린, 래트, 인간, 또는 임의의 다른 기원일 수 있다 (키메라 또는 인간화 항체 포함).

일부 실시양태에서, PCSK9 길항제 항체는 모노클로날 항체이다. PCSK9 길항제 항체는 또한 인간화될 수 있다. 다른 실시양태에서, 항체는 인간이다.

일부 실시양태에서, 항체는 변형된 불변 영역, 예컨대 면역학적으로 불활성인, 즉 면역 반응 유발을 위한 잠재력이 감소된 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 불변 영역은 문헌 [Eur. J. Immunol., 1999, 29:2613-2624]; PCT 공개 번호 WO99/58572; 및/또는 영국 특허 출원 번호 9809951.8에 기재된 바와 같이 변형된다. Fc는 인간 IgG₂ 또는 인간 IgG₄일 수 있다. Fc는 돌연변이 A330P331 → S330S331을 함유하는 인간 IgG₂ (IgG_2Δa)일 수 있다 (여기서, 아미노산 잔기는 야생형 IgG2 서열에 대해 넘버링됨). 문헌 [Eur. J. Immunol., 1999, 29:2613-2624]. 일부 실시양태에서, 항체는 하기 돌연변이를 포함하는 IgG₄의 불변 영역을 포함한다 (문헌 [Armour et al., 2003, Molecular Immunology 40 585-593]): E233F234L235 → P233V234A235 (IgG_4Δc) (여기서, 넘버링은 야생형 IgG4에 대한 것임). 또 다른 실시양태에서, Fc는 결실 G236을 갖는 인간 IgG₄ E233F234L235 → P233V234A235 (IgG_4Δb)이다. 또 다른 실시양태에서, Fc는 힌지 안정화 돌연변이 S228 → P228을 함유하는 임의의 인간 IgG₄ Fc (IgG₄, IgG_4Δb 또는 IgG_4Δc)이다 (문헌 [Aalberse et al., 2002, Immunology 105, 9-19]). 또 다른 실시양태에서, Fc는 비-글리코실화 Fc일 수 있다.

일부 실시양태에서, 불변 영역은 올리고사카라이드 부착 잔기 (예컨대, Asn297) 및/또는 불변 영역 내 글리코실화 인식 서열의 일부인 플랭킹 잔기를 돌연변이시켜서 비-글리코실화된다. 일부 실시양태에서, 불변 영역은 N-연결 글리코실화에 대하여 효소적으로 비-글리코실화된다. 불변 영역은 N-연결 글리코실화에 대하여 효소적으로 또는 글리코실화 결핍 숙주 세포에서의 발현에 의해 비-글리코실화될 수 있다.

일부 실시양태에서, 1종 초과의 길항제 항체가 존재할 수 있다. 적어도 1종, 적어도 2종, 적어도 3종, 적어도 4종, 적어도 5종 또는 그 초과의 길항제 항체 및/또는 펩티드가 존재할 수 있다. 일반적으로, PCSK9 길항제 항체 또는 펩티드는 서로 유해한 영향을 미치지 않는 상보적 활성을 가질 수 있다. PCSK9 길항제 항체는 또한 다른 PCSK9 길항제 또는 PCSK9 수용체 길항제와 함께 사용될 수도 있다. 예를 들어, 하기 PCSK9 길항제 중 1종 이상이 사용될 수 있다: PCSK9에 대한 안티센스 분자 (PCSK9를 코딩하는 핵산에 대한 안티센스 분자 포함), PCSK9 억제 화합물, 및 PCSK9 구조적 유사체. PCSK9 길항제 항체는 또한 제제의 유효성을 증진시키고/거나 보완하는 작용을 하는 다른 제제와 함께 사용될 수 있다.

본원에 기재된 모든 방법과 관련하여, PCSK9 길항제 항체에 대한 언급은 또한 하나 이상의 추가 작용제를 포함하는 조성물을 포함한다. 이러한 조성물은 당업계에 공지된 적합한 부형제, 예컨대 제약상 허용되는 부형제, 예를 들어 완충제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명은 단독으로 사용될 수도 있고, 또는 다른 통상의 치료 방법과 조합되어 사용될 수도 있다.

PCSK9 길항제 항체는 임의의 적합한 경로를 통해 개체에게 투여될 수 있다. 본원에 기재된 예는 이용가능한 기술을 제한하려는 것이 아니라 예시하기 위한 것임이 당업자에게 명백할 것이다. 따라서, 일부 실시양태에서, PCSK9 길항제 항체는 공지된 방법에 따라, 예컨대 정맥내 투여, 예를 들어 볼루스로서 또는 소정 기간에 걸친 연속 주입에 의해, 근육내, 복강내, 뇌척수내, 경피, 피하, 관절내, 설하, 척수강내, 취입, 경막내, 경구, 흡입 또는 국소 경로를 통해 개체에게 투여된다. 투여는 전신성, 예를 들어 정맥내 투여일 수도 있고, 또는 국소화될 수도 있다. 제트 네뷸라이저 및 초음파 네뷸라이저를 비롯하여 액체 제제를 위한 상업적으로 입수가능한 네뷸라이저가 투여에 유용하다. 액체 제제는 직접 분무될 수 있고, 동결건조 분말이 재구성 후에 분무될 수 있다. 대안적으로, PCSK9 길항제 항체는 플루오로카본 제제 및 계량 용량 흡입기를 이용하여 에어로졸화될 수 있거나, 동결건조 및 분쇄된 분말로서 흡입될 수 있다.

한 실시양태에서, PCSK9 길항제 항체는 부위-특이적 또는 표적화된 국부 전달 기술을 통해 투여된다. 부위-특이적 또는 표적화된 국부 전달 기술의 예는 PCSK9 길항제 항체의 다양한 이식가능한 데포 공급원 또는 국부 전달 카테터, 예컨대 주입 카테터, 유치 카테터, 또는 바늘 카테터, 합성 이식편, 외피 랩, 션트 및 스텐트 또는 다른 이식가능한 장치, 부위 특이적 담체, 직접 주사, 또는 직접 적용을 포함한다. 예를 들어, PCT 공개 번호 WO 00/53211 및 미국 특허 번호 5,981,568을 참조한다.

PCSK9 길항제 항체의 다양한 제제는 투여를 위해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, PCSK9 길항제 항체는 그 자체로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, PCSK9 길항제 항체 및 제약상 허용되는 부형제는 다양한 제제 중에 존재할 수 있다. 제약상 허용되는 부형제는 당업계에 공지되어 있고, 약리학상 유효한 물질의 투여를 용이하게 하는 상대적으로 불활성인 물질이다. 예를 들어, 부형제는 형태 또는 점조도를 제공할 수도 있고, 또는 희석제로서 작용할 수도 있다. 적합한 부형제는 안정화제, 습윤제 및 유화제, 오스몰농도를 변화시키는 염, 캡슐화제, 완충제 및 피부 침투 증진제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 부형제 뿐만 아니라 비경구 및 경구 약물 전달을 위한 제제는 문헌 [Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed., Mack Publishing (2000)]에 열거되어 있다.

이러한 작용제는 제약상 허용되는 비히클, 예컨대 염수, 링거액, 덱스트로스 용액 등과 조합될 수 있다. 특정힌 투여 요법, 즉 용량, 시기 및 반복 횟수는 특정한 개체 및 그 개체의 병력에 따라 달라질 것이다.

허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용된 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이고, 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기 산; 염, 예컨대 염화나트륨; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제 (예컨대, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 잔기 미만) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 이뮤노글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드, 및 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 포함하는 다른 탄수화물; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대-이온, 예컨대 나트륨; 금속 착체 (예를 들어, Zn-단백질 착체); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예컨대 트윈(TWEEN)™, 플루로닉스(PLURONICS)™ 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함할 수 있다.

PCSK9 길항제 항체를 함유하는 리포솜은 당업계에 공지된 방법에 의해, 예컨대 문헌 [Epstein, et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688; Hwang, et al., 1980, Proc. Natl Acad. Sci. USA 77:4030]; 및 미국 특허 번호 4,485,045 및 4,544,545에 기재된 방법에 의해 제조된다. 순환 시간이 증진된 리포솜은 미국 특허 번호 5,013,556에 개시되어 있다. 특히 유용한 리포솜은 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 PEG-유도체화 포스파티딜에탄올아민 (PEG-PE)을 포함하는 지질 조성물을 사용한 역상 증발 방법에 의해 생성될 수 있다. 리포솜을 규정된 기공 크기의 필터를 통해 추출하여 원하는 직경을 갖는 리포솜을 생성한다.

활성 성분은 또한 예를 들어 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어 각각 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐에, 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로구체, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐)에, 또는 마크로에멀젼에 포획될 수 있다. 이러한 기술은 문헌 [Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed., Mack Publishing (2000)]에 개시되어 있다.

지속-방출 제제를 제조할 수 있다. 지속-방출 제제의 적합한 예는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하고, 이러한 매트릭스는 성형품, 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다. 지속-방출 매트릭스의 예는 폴리에스테르, 히드로겔 (예를 들어, 폴리(2-히드록시에틸-메타크릴레이트) 또는 폴리(비닐알콜)), 폴리락티드 (미국 특허 번호 3,773,919), L-글루탐산 및 7 에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비-분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해성 락트산-글리콜산 공중합체, 예컨대 루프론 데포(LUPRON DEPOT)™ (락트산-글리콜산 공중합체 및 류프롤리드 아세테이트로 이루어진 주사가능한 마이크로구체), 수크로스 아세테이트 이소부티레이트, 및 폴리-D-(-)-3-히드록시부티르산을 포함한다.

생체내 투여에 사용될 제제는 멸균되어야 한다. 이것은 예를 들어 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성된다. 치료적 PCSK9 길항제 항체 조성물은 일반적으로 멸균 접근 포트를 갖는 용기, 예를 들어 피하 주사 바늘이 관통가능한 마개가 있는 정맥내 용액 백 또는 바이알에 놓는다.

적합한 에멀젼은 상업적으로 입수가능한 지방 에멀젼, 예컨대 인트라리피드(Intralipid)™, 리포신(Liposyn)™, 인포누트롤(Infonutrol)™, 리포푼딘(Lipofundin)™ 및 리피피산(Lipiphysan)™을 사용하여 제조될 수 있다. 활성 성분은 미리 혼합된 에멀젼 조성물 중에 용해시킬 수도 있고, 또는 대안적으로는 활성 성분을 오일 (예를 들어, 대두 오일, 홍화 오일, 면실 오일, 참깨 오일, 옥수수 오일 또는 아몬드 오일) 중에 용해시키고 인지질 (예를 들어, 난 인지질, 대두 인지질 또는 대두 레시틴) 및 물과의 혼합시에 에멀젼이 형성될 수도 있다. 에멀젼의 등장성을 조정하기 위해, 다른 성분, 예를 들어 글리세롤 또는 글루코스를 첨가할 수 있는 것으로 이해될 것이다. 적합한 에멀젼은 전형적으로 최대 20%의 오일, 예를 들어 5 내지 20%의 오일을 함유할 것이다. 지방 에멀젼은 0.1 내지 1.0 μm, 특히 0.1 내지 0.5 μm의 지방 액적을 포함할 수 있고, 5.5 내지 8.0 범위의 pH를 갖는다.

에멀젼 조성물은 PCSK9 길항제 항체를 인트라리피드(Intralipid)™ 또는 그의 성분 (대두 오일, 난 인지질, 글리세롤 및 물)과 혼합하여 제조될 수 있다.

흡입 또는 취입을 위한 조성물은 제약상 허용되는 수성 또는 유기 용매 또는 그의 혼합물 중 용액 및 현탁액, 및 분말을 포함한다. 액체 또는 고체 조성물은 상기 기재된 바와 같은 적합한 제약상 허용되는 부형제를 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 국부 또는 전신 효과를 위해 경구 또는 비강 호흡 경로에 의해 투여된다. 바람직하게는 멸균 제약상 허용되는 용매 중의 조성물은 기체를 이용하여 분무될 수 있다. 분무된 용액은 분무 장치로부터 직접 호흡될 수도 있고, 또는 분무 장치가 페이스 마스크, 텐트 또는 간헐성 양압 호흡 기계에 부착될 수도 있다. 용액, 현탁액 또는 분말 조성물은 제제를 적절한 방식으로 전달하는 장치로부터 바람직하게는 경구로 또는 비내로 투여될 수 있다.

항체 L1L3의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 2009년 8월 25일에 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (ATCC) (미국 90110 버지니아주 마나사스 유니버시티 불러바드 10801)에 기탁되었다. L1L3 중쇄 가변 영역 폴리뉴클레오티드 기탁물은 ATCC 등록 번호 PTA-10302를 배정받았고, L1L3 경쇄 가변 영역 폴리뉴클레오티드 기탁물은 ATCC 등록 번호 PTA-10303을 배정받았다. 이러한 기탁은 특허절차상 미생물 기탁의 국제적 승인에 관한 부다페스트 조약 및 이러한 조약 (부다페스트 조약) 하의 규정의 조항 하에 이루어졌다. 이것은 기탁일로부터 30년 동안 기탁물의 살아있는 배양물의 유지를 보장한다. 기탁물은 부다페스트 조약의 규정하에 ATCC로부터 이용가능할 것이고, 이는 화이자, 인크.(Pfizer, Inc.)와 ATCC 사이의 협정에 따르며, 상기 협정은 관련 미국 특허의 허여시에 또는 임의의 미국 또는 타국 특허 출원의 공개시에 (이 중 빠른 시점에) 기탁 배양물의 자손에 대한 영구적이고 비제한적인 이용가능성을 보장하고, 35 U.S.C. 섹션 122 및 그에 대한 미국 특허청장의 규칙 (886 OG 638에 대한 특정한 언급을 갖는 37 C.F.R. 섹션 1.14 포함)에 따라 특허청장에 의해 자격이 인정된 것에 대한 자손의 이용가능성을 보장한다.

본원의 양수인은 기탁된 물질의 배양물이 적합한 조건 하에 배양시에 사멸하거나 또는 손실 또는 파괴되는 경우에, 그 물질을 통지하에 또 다른 동일한 것으로 신속하게 대체할 것에 동의하였다. 기탁 물질의 유용성은 그의 특허법에 따른 임의의 정부의 권한 하에 보장된 권리에 반하여 본 발명을 실시하는데에 대한 허가로 간주되지 않는다.

실시예

하기 실시예는 본 발명의 방법 및 물질을 설명하기 위한 것이다. 당업자에게 명백하고, 당업계에서 통상적으로 접하게 되는 기재된 조건 및 파라미터의 적합한 변형 및 변경이 본 발명의 취지 및 범위 내에 포함된다.

실시예 1: 인간화 PCSK9 길항제 항체 L1L3으로의 치료는 혈청 콜레스테롤 및 LDL 콜레스테롤 수준을 감소시키는데 효과적이다

본 실시예는 동물 모델에서 혈청 콜레스테롤 및 LDL 콜레스테롤 수준을 감소시키는데 있어 인간화 PCSK9 길항제 항체, L1L3의 효능을 설명한다.

L1L3은 분비된 PCSK9에 결합하고, LDLR의 그의 하향-조절을 효과적으로 방지하여, 혈청에서 개선된 LDL 제거 및 LDL-C의 감소를 발생시키는 인간화 (<5% 뮤린 잔기) 모노클로날 항체이다.

정상 식이를 공급한 C57BL/6 마우스 (n=10)에게 L1L3의 10 mg/kg을 단일 복강내 (IP) 용량으로서 투여시에, 혈청 콜레스테롤 수준은 처리 48시간 후에 염수 처리된 대조군에서의 75 mg/dL에 비해 47 mg/dL로 감소 (37% 감소)하고 처리 4일 후에 대조군 동물에서의 83 mg/dL에 비해 44 mg/dL로 감소 (47% 감소)하였다. 혈청 콜레스테롤 수준은 처리 7일 후에 69 mg/dL로 회복되었다.

L1L3은 정상 식이를 공급한 스프라그-돌리 래트에서의 용량-반응 실험에서 0, 0.1, 1, 10 및 80 mg/kg (n=6/군)의 단일 IP 용량으로 투여하였다. 혈청 콜레스테롤 수준은 용량-의존적으로 감소하였으며, 투여 48시간 후에 10 및 80 mg/kg에서 50%의 최대 효과가 나타났다. 또한, 콜레스테롤 억제의 지속 시간은 1 내지 21일의 범위로, 용량 의존성이었다. L1L3의 콜레스테롤 저하-효과의 정도 및 지속 시간은 둘 다 약물 노출과 관련되었다. 비-공복 혈청 트리글리세리드 수준은 또한 용량-의존적으로 증가하였으며, 80 mg/kg에서 대략 3배의 최대 증가가 나타났고, 시간 경과는 약물 노출과 관련되었다. 혈청 트리글리세리드 수준에 대한 L1L3의 유사한 효과가 다른 종, 예컨대 마우스 및 비-인간 영장류에서 관찰되지 않았고 (하기 참조), 혈액 트리글리세리드 수준의 변화가 PCSK9 돌연변이를 보유하는 인간에서 보고되지 않았으므로 (문헌 [Abifadel et al., 2003, Nat. Genet., 34:154-156; Cohen et al., 2005, Nat. Genet. 37:161-165; Zhao et al., 2006, Am. J. Hum. Genet. 79:514-523]), L1L3 처리에 의해 유발된 혈청 트리글리세리드 수준의 증가는 래트에서 종-특이적 현상인 것으로 보인다.

정상 식이를 공급한 시노몰구스 원숭이에서, L1L3을 0.1, 1, 3 및 10 mg/kg (n=4/군)에서 단일 IV 용량으로 투여하였다. 0.1 mg/kg L1L3의 투여는 제2일에 LDL-C 수준의 일시적인 50% 강하를 유발하였고, 제5일에 빠르게 회복되었다. 1 mg/kg 투여는 제5일에 LDL-C의 71% 감소의 최대 효과에 도달하였고, 그 직후에 회복되기 시작하여 제14일에 투여전 수준에 도달하였다. 3 mg/kg 투여는 제7일에 LDL-C의 72% 감소의 최대 효과에 도달하였고, 수준은 제13일에 회복되기 시작하여 제22일에 기준선으로 돌아왔다. 10 mg/kg 투여는 투여후 제21일까지 LDL-C 수준의 70% 감소를 유지하였고, 동물은 제31일에 완전히 회복되었다. L1L3의 LDL-C 저하 효과의 정도 및 지속기간은 둘 다 약물 노출과 관련되었다. HDL-C 수준은 모든 용량 군에서 L1L3 처리에 의해 영향을 받지 않았다.

3 mg/kg 용량 군 (n=4)의 원숭이는 또한 연구 제42일 및 제56일 (2-주 간격)에 3 mg/kg L1L3의 2회 추가의 IV 용량을 제공받았다. 이들 2회의 추가의 용량은 다시 LDL-C를 저하시키고, LDL-C 수준을 4주 동안 50% 아래로 유지시켰다. LDL-C 수준은 2주 후에 정상으로 돌아왔다. 혈청 HDL-C 수준은 변하지 않고 유지되었다.

PK 연구를 시노몰구스 원숭이에서 0.1, 1.0, 3.0, 10.0 및 100.0 mg/kg의 L1L3의 단일 볼루스 i.v. 주사에 의해 수행하였고, 총 항체 농도를 측정하였다. L1L3에 대해 추정된 β-상 반감기는 0.1mg/kg의 단일 용량에서 0.67일이었고, 1.0, 3.0, 10.0 및 100.0 mg/kg에서 각각 1.91, 2.33, 3.49 및 5.25일로 증가하였다. 따라서, 시노몰구스 원숭이에서, L1L3은 항원 매개 분해와 일치하고 막-연관 항원을 갖는 항체 요법에서 관찰되는 반감기의 용량-의존성 및 비-선형 단축을 입증하였다.

요약하여, L1L3은 혈청 PCSK9에 결합하여 그의 기능에 길항하며, 이는 동물 모델에서 혈청 콜레스테롤 및 LDL 콜레스테롤 수준의 빠르고 유의한 감소를 발생시킨다.

실시예 2: PCSK9 길항제 항체 L1L3의 단일, 상승적, 정맥내 투여 후의 약동학 및 약역학

본 실시예는 다르게는 콜레스테롤 저하 요법을 위한 후보인 건강한 대상체에서 인간화 PCSK9 길항제 항체, L1L3의 단일, 상승적, 정맥내 투여 후의 약동학 및 약역학을 평가하기 위한 임상 시험 연구를 설명한다. L1L3의 투여는 평가된 모든 투여량 군에서 LDL-C의 저하를 발생시켰다.

연구는 L1L3의 무작위화, 위약-제어된, 상승적, 단일 용량 연구를 수반하였다. 대상체, 연구자, 및 실무자 (약물 제조를 담당하는 실무자 제외)에게는 CRO 설계에서와 같이 치료 배정을 비공개로 하는 반면; 후원 임상 연구 팀에게는 공개하였다. 연구는 최대 허용 용량 또는 MTD (대략 48명의 대상체의 합)를 찾기 위한 노력으로 코호트당 8명의 대상체의 6개의 계획된 코호트에서 수행하였다. 각각의 코호트 내에서 대상체를 L1L3 또는 위약 (3:1 배정 비)으로 무작위화하였다. 용량을 밤새 단식시킨 후에 60분에 걸친 정맥내 주입으로 투여하였다. 주입 비율은 프로토콜당 주입 장치에 의해 주의깊게 제어하였다. 주입은 60분에 걸친 단일 주입으로 투여될 것이다.

투여는 표 1에서 하기 설명되는 바와 같다:

투여 계획을 최대 허용 용량 및 효과가 없는 용량을 수득하기 위해 보다 낮은, 중간 또는 보다 높은 용량의 투여를 허용하도록 조정하였다. 연구에 등록한 각각의 대상체는 코호트 배정에 상관없이 이들의 연구 참여 기간 동안 오직 한 가지 용량의 연구 약물을 제공받았다. 모든 환자를 그의 연구 완료 전에 추가의 21일 (총 28일) 동안 안전성에 대해 관찰하였다.

연구의 1차 PK 종점은 L1L3의 AUC_(0-t[last]), T_max 및 C_max였다. 2차 PK 종점은 L1L3의 말단 제거 반감기 (T_1/2), 제거 (CL), 정상 상태에서의 부피 (Vss) 및 AUC_(0-∞)를 포함하였다. 혈청 지질 (총 콜레스테롤, LDL, HDL, 트리글리세리드, 비-HDL-C 및 아포단백질 B)의 변화를 평가하였다.

스크리닝은 각각의 대상체에 대한 투여 28일 내에 수행하였다. 대상체는 제0일에 L1L3의 단일 용량을 제공받았고, 격리 기간 (연구 제-1일, 제0일 및 제1일) 전반에 걸쳐서, 뿐만 아니라 제4일, 제7일, 제14일, 제21일, 제28일, 및 초기 PK 발견에 따라 제28일 후에 1일 PK 및 안전성 평가를 수행하였다.

연구를 위한 포함 기준은 다음과 같다: 18세 내지 70세의 건강하고 보행가능한 남성 및/또는 여성 (여성은 임신 가능성이 없는 여성일 것임); 기준선 총 콜레스테롤 ≥ 200 mg/dl, 기준선 LDL ≥ 130 mg/dl; 18.5 내지 35 kg/m²의 체질량 지수 (BMI) BMI 18.5 내지 35, 및 체중 ≤ 150kg; 대상체 (또는 법률상 허용되는 대리인)가 시험의 모든 관련 측면에 대한 정보를 제공받았음을 나타내는 개인 서명 및 날짜 기입된 사전 동의 문서의 증거; 및 계획된 방문, 치료 계획, 실험실 시험, 및 다른 시험 절차에 따르기로 한 자발적 의사 및 능력.

연구를 위한 제외 기준은 다음과 같다: 임상적으로 유의한 혈액학적, 신장, 내분비, 폐, 위장, 심혈관, 간, 정신의학적, 신경학적, 또는 알레르기성 질환 (약물 알레르기 포함, 그러나 투여시에 치료되지 않은 무증상 계절성 알레르기는 제외)의 증거 또는 병력; 속발성 고지혈증; 대상체는 투여 전에 적어도 1주일 동안 다른 처방 의약을 제공받지 않아야 한다. 환자가 지질 저하 의약을 제공받은 경우에 이러한 약물은 혈청 지질을 치료전 수준으로 되돌리기에 적절한 기간 동안 중단되어야 한다; 투여 전 5일 내의 열성 질병의 병력; 졸중 또는 일과성 허혈 발작의 병력; 지난 해 내의 심근경색의 병력; 소변 약물 스크리닝 양성; 스크리닝 6개월 내의 여성의 경우에 7잔/주 또는 남성의 경우에 14잔/주 (1잔 = 5 온스 (150 mL)의 와인 또는 12 온스 (360 mL)의 맥주 또는 1.5 온스 (45 mL)의 증류주)를 초과하는 잦은 알콜 섭취의 병력; 시험 의약의 1차 투여 전 30일 또는 5 반감기 (이 중 보다 긴 기간) 내의 연구 약물로의 치료; 스크리닝시에 QTc >450 msec를 입증한 12-유도 ECG; 임신 또는 수유 중인 여성; 출산 가능성이 있는 여성; 투여 전 56일 내의 대략 1 핀트 (500 mL)의 헌혈; 헤파린 또는 헤파린-유도 혈소판감소증 (헤파린이 정맥내 카테터의 플러슁을 위해 사용된 경우)에 대한 감수성의 병력; 연구 참여 또는 연구 제품 투여와 연관된 위험을 증가시킬 수 있거나 연구 결과의 해석을 방해할 수 있으며, 연구자의 판단으로, 대상체가 이 연구에 참여하기에는 부적절하게 만드는 다른 중증의 급성 또는 만성 의학적 또는 정신의학적 상태 또는 실험실 이상.

대상체를 연구에서 무작위화시켰으며, 단 이들은 모든 대상체 선택 기준을 만족시켰다. 컴퓨터-생성 무작위화 계획을 이용하여 대상체에게 치료 순서를 배정하였다.

용량 증가를 위해, 이전 용량 수준의 투여 후에 적어도 7일 동안 이에 따른 모든 코호트 대상체로부터의 이용가능한 안전성 및 허용성 데이터를 검토한 후에 후원자 및 연구자에 의해 보다 높은 용량의 L1L3로 진행하기로 한 결정이 이루어졌다.

L1L3 약물 제품 (100 mg)은 고무 마개 및 알루미늄 실이 있는 정맥내 (IV) 투여용 유리 바이알에 10 mg/mL의 농도에서 멸균, 액체 형태로 제공되었다. 각각의 바이알은 10 mg/mL의 농도 및 5.5의 pH에서 10 mL (추출가능한 부피)의 L1L3을 함유하였다. L1L3 및 위약을 현장에 제공될 약학 매뉴얼의 투여량 및 투여 지침에 따라 제조하였다. 약물은 자격을 갖춘 공개 실무자에 의해 제조되고, 환자 및 담당 연구 직원에게 비공개 방식으로 분배되었다. L1L3은 약학 매뉴얼 및 연구 참조 지침에 위치한 투여량 투여 지침 (DAI)에 따라 대략 60분에 걸쳐 속도 제어된 정맥내 주입에 의해 투여하였다.

연구 프로토콜

제-1일: 대상체에게 무작위화 수를 배정하고, 제0일 활동을 시작하기 적어도 12시간 전에 임상 연구부에 들어가고, 제1일에 절차 완료시까지 임상 연구부 (CRU)에 남아있도록 요청하였다. 대상체는 제0일에 계획된 지질 패널 적어도 10시간 전 저녁에 단식을 시작하였다. 하기 절차를 완료하였다: 스크리닝 이후 병력의 변화 검토; 스크리닝 이후 병용 의약의 변화 검토; 스크리닝 이후 약물, 알콜 및 담배 남용의 병력 검토; 유해 사례의 자발적 보고 및 비-유도 질문, 예컨대 "상태가 어떻습니까?"에 대한 대상체의 질의 응답에 의한 증상 평가; 체중 측정을 포함하는 신체 검사; 소변 약물 스크리닝; 누운 자세 활력 징후 수득; 대략 2-4분 간격의 3회 12-유도 ECG 수득

제0일: 투여 전에, 하기 절차를 완료하였다: 적어도 10-시간 단식 후에 공복 지질 프로파일 수집 (총 콜레스테롤, LDL, HDL, 비-HDL 콜레스테롤, Apo B 및 트리글리세리드); 통상적 및 추가의 실험실 시험을 위한 샘플 수집: 혈액학; 화학; 응고, 아밀라제; 요분석; 투여전 PK를 위한 샘플 수집; PCSK9 수준/관심 PD 마커를 위한 샘플 수집; 항-L1L3 항체를 위한 샘플 수집; 스크리닝 이후 병용 의약의 변화 검토; 유해 사례의 자발적 보고 및 비-유도 질문, 예컨대 "상태가 어떻습니까?"에 대한 대상체의 질의 응답에 의한 증상 평가; 누운 자세 활력 징후 수득; 약학 매뉴얼 지침에 따른 연구 약물 주입 투여.

투여 후에, 하기 절차를 완료하였다: 주입 종점 (EOI)의 10분 내에 시작하여 대략 2-4분 간격으로 3회 12-유도 ECG 수득; EOI에서의 누운 자세 활력 징후 수득; EOI, 및 하기 주입 후 시점 (즉, EOI + 하기 시점): 60분, 120분 및 360분에서의 PK 분석을 위한 혈액 샘플 수집.

제1일: 하기 절차를 완료하였다: 투여 후 1440분 (24시간) +/- 30분에서의 PK 분석을 위한 혈액 샘플 수집; 간소화된 신체 검사 수행; 적어도 10-시간 단식 후에 공복 지질 프로파일 수집 (총 콜레스테롤, LDL, HDL, 비-HDL 콜레스테롤, Apo B 및 트리글리세리드); PCSK9 수준/관심 PD 마커를 위한 샘플 수집; 유해 사례의 자발적 보고 및 비-유도 질문, 예컨대 "상태가 어떻습니까?"에 대한 대상체의 질의 응답에 의한 증상 평가; 스크리닝 이후 병용 의약의 변화 검토; 누운 자세 활력 징후 수득; CRU로부터 나옴.

제4일: 하기 절차를 완료하였다: 통상적 실험실 시험을 위한 샘플 수집: 혈액학; 화학; 및 요분석; 적어도 10-시간 단식 후에 공복 지질 프로파일 수집 (총 콜레스테롤, LDL, HDL, 비-HDL 콜레스테롤, Apo B 및 트리글리세리드); PK 분석을 위한 단일 혈액 샘플 수집; PCSK9 수준/관심 PD 마커를 위한 샘플 수집; 유해 사례의 자발적 보고 및 비-유도 질문, 예컨대 "상태가 어떻습니까?"에 대한 대상체의 질의 응답에 의한 증상 평가; 스크리닝 이후 병용 의약의 변화 검토; 누운 자세 활력 징후 수득

제7일: 하기 절차를 완료하였다: 간소화된 신체 검사 수행; 통상적 및 추가의 실험실 시험을 위한 샘플 수집: 혈액학; 화학; 응고, 아밀라제; 요분석; 적어도 10-시간 단식 후에 공복 지질 프로파일 수집 (총 콜레스테롤, LDL, HDL, 비-HDL 콜레스테롤, Apo B 및 트리글리세리드); PK 분석을 위한 단일 혈액 샘플 수집; PCSK9 수준/관심 PD 마커를 위한 샘플 수집; 항-L1L3 항체를 위한 샘플 수집; 유해 사례의 자발적 보고 및 비-유도 질문, 예컨대 "상태가 어떻습니까?"에 대한 대상체의 질의 응답에 의한 증상 평가; 스크리닝 이후 병용 의약의 변화 검토; 스크리닝 이후 약물, 알콜 및 담배 남용의 병력 검토; 누운 자세 활력 징후 수득; 대략 2-4분 간격의 3회 12-유도 ECG 수득.

제14일: 하기 절차를 완료하였다: 간소화된 신체 검사 수행; 통상적 및 추가의 실험실 시험을 위한 샘플 수집: 혈액학; 화학; 응고, 아밀라제; 요분석; 적어도 10-시간 단식 후에 공복 지질 프로파일 수집 (총 콜레스테롤, LDL, HDL, 비-HDL 콜레스테롤, Apo B 및 트리글리세리드); PK 분석을 위한 단일 혈액 샘플 수집; PCSK9 수준/관심 PD 마커를 위한 샘플 수집; 항-L1L3 항체를 위한 샘플 수집; 유해 사례의 자발적 보고 및 비-유도 질문, 예컨대 "상태가 어떻습니까?"에 대한 대상체의 질의 응답에 의한 증상 평가; 스크리닝 이후 병용 의약의 변화 검토; 스크리닝 이후 약물, 알콜 및 담배 남용의 병력 검토; 누운 자세 활력 징후 수득.

제21일: 하기 절차를 완료하였다: 간소화된 신체 검사 수행; 통상적 및 추가의 실험실 시험을 위한 샘플 수집: 혈액학; 화학; 응고, 아밀라제; 요분석; 적어도 10-시간 단식 후에 공복 지질 프로파일 수집 (총 콜레스테롤, LDL, HDL, 비-HDL 콜레스테롤, Apo B 및 트리글리세리드); PK 분석을 위한 단일 혈액 샘플 수집; PCSK9 수준/관심 PD 마커를 위한 샘플 수집; 항-L1L3 항체를 위한 샘플 수집; 유해 사례의 자발적 보고 및 비-유도 질문, 예컨대 "상태가 어떻습니까?"에 대한 대상체의 질의 응답에 의한 증상 평가; 스크리닝 이후 병용 의약의 변화 검토; 스크리닝 이후 약물, 알콜 및 담배 남용의 병력 검토; 누운 자세 활력 징후 수득.

제28일: 하기 절차를 완료하였다: 완전한 신체 검사 수행; 대상체의 체중 수득; 통상적 및 추가의 실험실 시험을 위한 샘플 수집: 혈액학; 화학; 응고, 아밀라제; 요분석; 적어도 10-시간 단식 후에 공복 지질 프로파일 수집 (총 콜레스테롤, LDL, HDL, 비-HDL 콜레스테롤, Apo B 및 트리글리세리드); PK 분석을 위한 단일 혈액 샘플 수집; PCSK9 수준/관심 PD 마커를 위한 샘플 수집; 항-L1L3 항체를 위한 샘플 수집; 유해 사례의 자발적 보고 및 비-유도 질문, 예컨대 "상태가 어떻습니까?"에 대한 대상체의 질의 응답에 의한 증상 평가; 스크리닝 이후 병용 의약의 변화 검토; 스크리닝 이후 약물, 알콜 및 담배 남용의 병력 검토; 누운 자세 활력 징후 수득; 대략 2-4분 간격의 3회 12-유도 ECG 수득.

장기 PK를 위한 추가의 추적: 적용가능한 경우에 하기 절차를 완료하였다: 간소화된 신체 검사 수행; 통상적 및 추가의 실험실 시험을 위한 샘플 수집: 혈액학; 화학; 응고, 아밀라제; 요분석; 적어도 10-시간 단식 후에 공복 지질 프로파일 수집 (총 콜레스테롤, LDL, HDL, 비-HDL 콜레스테롤, Apo B 및 트리글리세리드); PK 분석을 위한 단일 혈액 샘플 수집; PCSK9 수준/관심 PD 마커를 위한 샘플 수집; 항-L1L3 항체를 위한 샘플 수집; 유해 사례의 자발적 보고 및 비-유도 질문, 예컨대 "상태가 어떻습니까?"에 대한 대상체의 질의 응답에 의한 증상 평가; 스크리닝 이후 병용 의약의 변화 검토; 스크리닝 이후 약물, 알콜 및 담배 남용의 병력 검토; 누운 자세 활력 징후 수득; 대략 2-4분 간격의 3회 12-유도 ECG 수득.

개별 환자에 대한 전체 혈액 샘플링 부피는 대략 183-210 mL였다. L1L3 수준의 분석을 위한 혈장 샘플은 투여 전에 제0일, 주입 종결시에, 및 주입 종점 후 60, 120, 360 및 1440분 (24-시간)에 수집하였다. 또한, 단일 PK 샘플을 제4일, 제7일, 제14일, 제21일, 제28일 및 추가의 PK 추적 방문 (적용가능한 경우)시에 수득하였다. 하나의 샘플을 각각의 시점에서 채취하였다.

PCSK9 수준 및 다른 관심 실험적 약역학적 마커의 평가를 위한 혈액 샘플을 투여-전에 제0일 및 제1일, 제4일, 제7일, 제14일, 제21일, 제28일 및 추가의 추적 방문 (적용가능한 경우)시에 수득하였다.

적어도 10-시간 단식 후에 공복 지질 프로파일의 수집 (총 콜레스테롤, LDL, HDL, 비-HDL 콜레스테롤, Apo B 및 트리글리세리드)을 수행하였다.

연구 결과

L1L3 PK NCA 결과: 0.3 mg/kg에서 투여된 L1L3의 중간 반감기는 2.71일이었다. 1 mg/kg에서 투여된 L1L3의 중간 반감기는 4.77일이었다. 3 mg/kg에서 투여된 L1L3의 중간 반감기는 8.1일이었다. 6 mg/kg에서 투여된 L1L3의 중간 반감기는 7.75일이었다. 12 mg/kg에서 투여된 L1L3의 중간 반감기는 12.24일이었다. 18 mg/kg에서 투여된 L1L3의 중간 반감기는 11.76일이었다. L1L3 PK 농도-시간 프로파일은 다중-상이었고, 표적-매개 약물 배치와 일치한다. 그러나, 인간 대상체에서의 L1L3의 반감기는 시노몰구스 원숭이에서의 L1L3의 반감기보다 놀랍고도 유의하게 더 길다 (즉, 시노몰구스 원숭이에서 각각 1.0, 3.0, 10.0 및 100.0 mg/kg에서 1.91, 2.33, 3.49 및 5.25일 (실시예 1 참조)). 0.3, 1, 3, 6, 12 및 18 mg/kg에서 투여된 L1L3에 대한 약물 제거 (Cl)의 평균 비율은 각각 8.70, 6.58, 4.54, 4.33, 3.28 및 3.85 mL/일/kg이었다. 이 연구로부터의 PK NCA 결과는 하기 표 2에 요약된다. 표의 칼럼 2-7에서, 상부 값은 평균값을 나타내고, 하부 값은 중간값을 나타낸다.

L1L3으로의 처리는 실질적이고 지속적인 용량-의존성 공복 LDL-콜레스테롤 (LDL-C) 저하를 발생시켰다. LDL-C vs. 시간 프로파일은 도 1에 제시된다. 기준선 공복 LDL-C는 약 145 mg/dL였다. 투여-후 제7일에, L1L3의 단일 0.3, 1, 3, 6, 12 또는 18 mg/kg 용량으로 처리된 대상체에서의 LDL-C 수준은 50 내지 100 mg/dL였다. 대조적으로, 위약 투여된 대상체에서의 LDL-C 수준은 일반적으로 약 기준선에서 유지되었다. 투여-후 제14일에, 1, 3, 6, 12 또는 18 mg/kg L1L3으로 처리된 대상체에서의 LDL-C 수준은 약 70 mg/dL 이하였다. 투여-후 제14일에, 6 mg/kg 또는 12 mg/kg L1L3으로 처리된 대상체는 약 55 mg/dL의 LDL-C 수준을 가졌고, 18 mg/kg L1L3으로 처리된 대상체는 약 20 mg/dL의 LDL-C 수준을 가졌다. L1L3의 단일 12 mg/kg 용량으로 처리된 대상체에서의 LDL-C 수준은 투여-후 적어도 약 제57일 (연구 종점)까지 약 60 mg/dL 이하로 유지되었다. L1L3의 단일 18 mg/kg 용량으로 처리된 대상체에서의 LDL-C 수준은 투여-후 적어도 약 제57일까지 50 mg/dL 미만으로 유지되었다. L1L3의 단일 6 mg/kg 용량으로 처리된 대상체에서의 LDL-C 수준은 투여-후 약 42일 동안 50 mg/dL 미만으로 유지되었고, 투여-후 적어도 약 57일까지 100 mg/dL 미만으로 유지되었다. L1L3의 단일 3 mg/kg 용량으로 처리된 대상체에서의 LDL-C 수준은 투여-후 제14일에 약 70 mg/dL, 투여-후 제21일에 약 60 mg/dL였고, 투여-후 약 36일까지 100 mg/dL 미만으로 유지되었다. L1L3의 단일 1 mg/kg 용량으로 처리된 대상체에서의 LDL-C 수준은 투여-후 제14일에 약 65 mg/dL였고, 투여-후 약 21일까지 100 mg/dL 미만으로 유지되었다. L1L3의 단일 0.3 mg/kg 용량으로 처리된 대상체에서의 LDL-C 수준은 투여-후 제7일에 약 85 mg/dL였고, 투여-후 약 10일까지 100 mg/dL 미만으로 유지되었다.

혈액 중 공복 LDL-C 수준의 기준선으로부터의 변화 백분율은 도 2에 제시되고 (제시된 데이터는 평균 +/- SE임), 하기 표 3에 요약된다. 표에서, "N"은 대상체의 수를 나타내고, "평균"은 공복 LDL-C 수준의 기준선으로부터의 평균 변화 백분율을 나타내고, "PBO"는 위약이다.

위약을 투여한 대상체에서 LDL-C 수준은 일반적으로 도 2에 "0"으로 표시된 기준선 이상으로 유지되었다. 상기 언급된 바와 같이, 기준선 공복 LDL-C는 약 145 mg/dL였다. 18 mg/kg L1L3의 투여는 최대 약 83%의 기준선으로부터의 변화 백분율을 발생시켰다 (도 2). 단일 18 mg/kg L1L3 용량은 투여 후 적어도 최대 57일 동안 기준선 아래 약 65% 미만의 LDL-C 수준을 유지하였다. 단일 6 mg/kg 또는 12 mg/kg L1L3 용량은 투여 후 43일까지 기준선 아래 약 60% 미만의 LDL-C 수준을 유지하였다. 단일 3 mg/kg L1L3 용량은 투여 후 29일까지 기준선 아래 약 60% 미만, 및 투여 후 50일까지 기준선 아래 20% 미만의 LDL-C 수준을 유지하였다.

L1L3으로의 처리는 실질적이고 지속적인 용량-의존성 공복 총 콜레스테롤 (TC) 저하를 발생시켰다. 혈액 중 공복 TC 수준의 기준선으로부터의 변화 백분율은 도 3에 제시된다 (제시된 데이터는 평균 +/- 2 SE임). 기준선 공복 TC는 약 230 mg/dL였고; 기준선은 도 3에 "0"으로 표시된다. 투여 후 약 제9일에, 12 또는 18 mg/kg L1L3의 단일 용량을 투여한 대상체에서의 TC 수준은 기준선 아래 약 30% 이하로 감소하였고; TC 저하 효과는 투여-후 적어도 제57일 (연구 종점)까지 지속되었다. 6 mg/kg L1L3의 단일 용량을 투여한 대상체에서의 TC 수준은 투여-후 약 제52일까지 투여 후 약 제9일에 기준선 아래 약 30% 이하로 감소하였다. 3 mg/kg L1L3의 단일 용량을 투여한 대상체에서의 TC 수준은 투여 후 제9일에 기준선 아래 약 30%로 감소하였고, 투여 후 약 제22일에 기준선 아래 약 40%로 감소하였다. 3 mg/kg L1L3의 단일 용량을 투여한 대상체에서의 TC 수준은 투여 후 약 제22일에 기준선 아래 약 40%로 감소하였다. 1 mg/kg L1L3의 단일 용량을 투여한 대상체에서의 TC 수준은 투여 후 약 제15일에 기준선 아래 약 36%로 감소하였다. 0.3 mg/kg L1L3의 단일 용량을 투여한 대상체에서의 TC 수준은 투여 후 약 제9일에 약 25%로 감소하였다. 투여-후 제15일에, 다수의 대상체는 12 또는 18 mg/kg L1L3의 단일 용량으로의 투여 후에 기준선 아래 50% 미만의 TC 수준을 가졌다. 투여-후 제30일에, 다수의 대상체는 6 mg/kg L1L3의 단일 용량으로의 투여 후에 기준선 아래 50% 미만의 TC 수준을 가졌다. 위약을 투여한 대상체에서의 TC 수준은 연구 지속기간 동안 기준선 아래 2% 이상으로 유지되었다.

L1L3으로의 처리는 실질적이고 지속적인 용량-의존성 공복 아포지단백질 B (apo B) 저하를 발생시켰다. 혈액 중 공복 apo B 수준의 기준선으로부터의 변화 백분율은 도 4에 제시된다. 제시된 데이터는 평균 +/- 2 SE이다. 기준선 공복 apo B 수준은 약 119 mg/dL였고; 기준선은 도 4에 "0"으로 표시된다. 위약을 투여한 대상체에서의 Apo B 수준은 연구 지속기간 동안 약 기준선에서 유지되었다. 12 또는 18 mg/kg L1L3을 투여한 대상체에서의 Apo B 수준은 제14일에 기준선 아래 약 50%로 감소하였고, 연구 나머지 기간 동안 기준선 아래 약 50% 이하로 유지되었다. 6 mg/kg L1L3을 투여한 대상체에서의 Apo B 수준은 제14일에 기준선 아래 약 40%로, 제21일에 기준선 아래 약 50%로 감소하였고, 일반적으로는 연구 나머지 기간 동안 기준선 아래 약 30% 미만이었다. 3 mg/kg L1L3을 투여한 대상체에서의 Apo B 수준은 제14일에 기준선 아래 약 40%로, 제28일에 기준선 아래 약 50%로 감소하였다. 1 mg/kg L1L3을 투여한 대상체에서의 Apo B 수준은 제14일에 기준선 아래 약 40%로 감소하였다. 0.3 mg/kg L1L3을 투여한 대상체에서의 Apo B 수준은 제7일에 기준선 아래 약 25%로 감소하였다.

도 5에 나타난 바와 같이, 고밀도 지단백질 콜레스테롤 (HDL-C) 수준은 L1L3으로의 처리 후에 유의하게 변화하지 않았다. 도 5에 제시된 데이터는 평균 +/- 2 SE이다. 기준선 공복 HDL-C 수준은 약 49 mg/dL였고; 기준선은 도 5에서 "0"으로 표시된다. 위약을 투여한 대상체에서의 HDL-C 수준은 연구의 지속기간 동안 약 기준선으로 유지되었다. 공복 트리글리세리드 (TG) 수준은 연구 동안 변하지 않고 유지되었다. 혈액 중 공복 TG 수준의 기준선으로부터의 변화 백분율은 도 6에 제시된다. 제시된 데이터는 평균 +/- 2 SE이다. 기준선 공복 TG 수준은 173 mg/dL였고; 기준선은 도 6에 "0"으로 표시된다.

연구에서, 심각한 유해 사례는 발생하지 않았고, 이상 반응 (TEAE)으로 인해 중단된 환자도 없었다. 대부분의 TEAE는 강도가 경미하였고: 심각한 경우는 없었다.

요약하여, L1L3의 투여는 평가된 모든 투여량 군에서 LDL-C의 저하를 발생시켰다. 일반적으로, 최대 LDL-C 저하 백분율은 제15일 또는 제22일에 수행한 측정에서 발생하였다. 저하 효과는 제3일만큼 빨리 관찰되었다. LDL-C 저하의 정도 및 지속기간은 용량-의존성이었다. 결과는 L1L3이 긴 작용 지속기간, 즉 각각 0.3 mg/kg 및 1.0 mg/kg의 용량에서 7 및 14일 동안, 3.0 mg/kg 용량에서 최대 4주 동안, 및 6 mg/kg, 12 mg/kg 및 18 mg/kg L1L3 항체의 용량에서 6주 초과 동안의 최대 효과를 갖는다는 것을 입증한다. 이러한 지속기간 효과는 L1L3에 대한 T½ 데이터에 기초하여 놀라운 것이었다.

실시예 3: 스타틴과 조합된 PCSK9 길항제 항체 L1L3의 단일 용량의 약동학 및 약역학

본 실시예는 아토르바스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 인간 대상체에서의 PCSK9 길항제 항체 (L1L3)의 단일 용량의 약동학 및 약역학을 평가하기 위한 임상 시험 연구를 설명한다.

본 연구에서, 아토르바스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 인간 대상체에게 L1L3 항체의 단일 용량을 PCSK9 길항제 항체의 0.5 mg/kg 또는 4 mg/kg으로 투여하였다. L1L3을 대략 60분에 걸쳐 단일 주입으로 투여하였다. 주입 속도는 프로토콜당 주입 장치에 의해 주의깊게 제어하였다. 아토르바스타틴 (1일에 40 mg)을 연구 프로토콜에서 하기 기재된 바와 같이 투여하였다. 대상체는 자격을 갖춘 실무자가 동일한 용량을 투여하는 클리닉에서의 격리 기간 제1일 내지 제7일 동안은 제외하고, 본 연구에 참여하는 동안 아토르바스타틴을 자가-투여하였다.

L1L3 주사, 10 mg/mL는 정맥내 (IV) 투여를 위한 멸균 용액으로 제공되었다. 각각의 바이알은 10 mL의 수성 완충 용액 중 100 mg의 L1L3을 함유하였고, 코팅된 마개 및 알루미늄 실로 실링하였다. 아토르바스타틴 (40 mg)은 한 측면 상에 "PD 157"로 코드화되고, 다른 측면 상에 "40"로 코드화된 백색 정제이다.

스크리닝은 각각의 대상체에 대한 투여의 28일 내에 수행하였다. 대상체는 스크리닝 전에 적어도 45일 동안 아토르바스타틴의 안정한 용량을 제공받았다. 대상체는 제4일에 L1L3의 단일 용량을 제공받았고, 격리 기간 (연구 제-1일, 제1-7일) 전반에 걸쳐 다중 PK 및 안전성 평가를 수행하였다. 대상체는 추적 방문을 위해 임상 연구부로 돌아갔다.

대상체에 대한 주요 포함 기준은 다음과 같다: 제1일 전에 45일 동안 제공되는 아토르바스타틴의 안정한 용량 (1일에 40 mg), 18.5 내지 40 kg/m²의 체질량 지수 (BMI), 및 150 kg 이하의 체중. 대상체에 대한 주요 제외 기준은 다음과 같다: 지난 해 동안 심혈관 사건 (예를 들어, 심근경색 (MI))의 병력; 잘 제어되지 않은 제1형 또는 제2형 당뇨병 (정의: 제어되지 않은 당뇨병은 HBIAc >9%로 정의됨); 및 잘 제어되지 않은 고혈압 (제어되지 않은 고혈압은 치료에도 불구하고 140 mm Hg 초과의 수축기 혈압 또는 90 mm Hg 초과의 확장기 혈압으로 정의됨). 고혈압을 가지며 항고혈압 의약의 안정한 투여량을 제공받으면서 제어된 대상체는 포함될 수 있다. 연구는 양쪽 성별을 포함하며, 최소 연령 제한은 18세이고 최대 연령 제한은 80세이다.

아토르바스타틴의 존재 하의 L1L3 항체 및 아토르바스타틴의 약동학적 파라미터 추정치는 0.5 또는 4 mg/kg L1L3 항체의 단일 용량 후에 평가하였다. 공복 LDL 콜레스테롤 (LDL-C)의 기준선으로부터의 절대 변화 및 변화 퍼센트는 L1L3 항체 투여 후에 측정하였다. 연구에서, 독성 또는 허용되지 않는 용량 기준이 나타난 대상체의 발생률을 측정하였다. 심각성 및 연구 약물에 대한 인과 관계에 의해 분류되는 이상 반응 (TEAE)의 발생률을 또한 측정하였다. 각각의 상기 결과의 측정을 위한 기간은 2개월이었다.

연구 프로토콜

제-1일: 대상체가 임상 연구부 (CRU)에 들어가고, 하기를 완료하였다: 포함 및 제외 기준 검토 및 갱신; 병력 검토 및 갱신; 계획된 1차 투여 전 28일 내에 제공받은 모든 처방 또는 일반 약물, 및 식이 보충제의 병력 검토 및 갱신; 간소화된 신체 검사; 누운 자세 및 선 자세 활력 징후 측정 (혈압, 맥박수, 체온); 10-시간 단식 후의 안전성 실험실 시험을 위한 혈액 및 소변 시편 수집 (혈청 화학; 혈액학, 요분석, 응고, 리파제, 아밀라제, CRP); 소변 약물 및 알콜 스크린 시험; 소변 임신 테스트 (출산 가능성이 있는 여성); 면역원성 분석 (항-L1L3 항체)을 위한 혈액 샘플 수집; 약역학적 분석 (PCSK9 및 지질 입자)을 위한 혈액 샘플 수집; 약리유전체학을 위한 혈액 샘플 수집 (임의, 대상체의 동의가 요구됨); 3회, 누운 자세 ECG; 알콜, 카페인 및 담배의 남용 평가; 기준선 증상/유해 사례 평가; 및 대상체 무작위화.

제1일: 투여 전에, 하기를 완료하였다: 3회, 누운 자세 ECG (적용가능한 경우, IV 카테터 삽입 전); 누운 자세 및 선 자세 활력 징후 측정 (혈압, 맥박수, 체온); PK (아토르바스타틴)를 위한 혈액 샘플 수집 (제1일, 0시); 대상체는 후원자-제공된 아토르바스타틴 용량 (40 mg)을 제공받았다; 투여 후에, PK (아토르바스타틴)를 위한 혈액 샘플을 제1일에 하기 시점에서 수집하였다: .25, .5, 1, 2, 3, 4, 6, 8 및 12시간. 하기를 완료하였다: 기준선 증상/유해 사례 평가; 병용 의약 검토. 대상체는 제2일에 지질 패널 혈액 샘플 전에 적어도 10시간 단식하였다.

제2일: 투여 전에, 하기를 완료하였다: 누운 자세 및 선 자세 활력 징후 측정 (혈압, 맥박수, 체온); PK (아토르바스타틴)를 위한 혈액 샘플 수집 (제2일, 0시); 10-시간 단식 후의 지질 패널 수집; 대상체는 후원자-제공된 아토르바스타틴 용량 (40 mg)을 제공받았다. 하기를 완료하였다: 기준선 증상/유해 사례 평가 및 병용 의약 검토.

제3일: 투여 전에, 하기를 완료하였다: PK (아토르바스타틴)를 위한 혈액 샘플 수집 (제3일, 0시); 누운 자세 및 선 자세 활력 징후 측정 (혈압, 맥박수, 체온); 대상체는 후원자-제공된 아토르바스타틴 용량 (40 mg)을 제공받았다. 하기를 완료하였다: 기준선 증상/유해 사례 평가; 병용 의약 검토. 대상체는 제4일에 지질 패널 혈액 샘플 전에 적어도 10시간 단식하였다.

제4일: 아토르바스타틴 및 L1L3으로의 투여 전에, 하기를 완료하였다: 3회, 누운 자세 ECG; 누운 자세 및 선 자세 활력 징후 측정 (혈압, 맥박수, 체온); 아토르바스타틴 PK를 위한 혈액 샘플 수집 (제4일, 0시); L1L3 PK를 위한 혈액 샘플 수집 (제4일, 0시); 10-시간 단식 후의 안전성 실험실 시험을 위한 혈액 및 소변 시편 수집 (혈청 화학; 혈액학, 요분석, 리파제, 아밀라제, CRP); 체중 측정; 10-시간 단식 후의 지질 패널 수집; 약역학적 분석 (PCSK9 및 지질 입자)을 위한 혈액 샘플 수집; 면역원성 (항-L1L3 항체)을 위한 혈액 샘플 수집. 용량 투여: 대상체는 후원자-제공된 아토르바스타틴 (40 mg)을 제공받았다. L1L3을 대략 60분에 걸쳐 속도 제어된 정맥내 주입에 의해 투여하였다. 용량 투여 후에, 하기를 완료하였다: 제4일에 아토르바스타틴 투여 후 .25, .5, 1, 2, 3, 4, 6, 8 및 12시간에서의 PK (아토르바스타틴)를 위한 혈액 샘플 수집; 제4일에 주입 시작으로부터 1, 4, 8 및 12시간에서의 PK (L1L3)를 위한 혈액 샘플 수집; 투여 1시간 후 3회, 누운 자세 ECG; L1L3 주입의 시작으로부터 1 및 4시간에서의 누운 자세 및 선 자세 활력 징후 측정 (혈압, 맥박수, 체온); 및 기준선 증상/유해 사례 평가; 병용 의약 검토. 대상체는 제5일 및 제6일에 지질 패널 혈액 샘플 전에 적어도 10시간 단식하였다.

제5일 및 제6일: 투여 전에, 하기를 완료하였다: 누운 자세 및 선 자세 활력 징후 측정 (혈압, 맥박수, 체온); PK (아토르바스타틴)을 위한 혈액 샘플 수집 (제5일, 0시); PK (L1L3)를 위한 혈액 샘플 수집 (제5일); 10-시간 단식 후의 지질 패널 수집. 제5일 단독: 약역학적 분석 (PCSK9 및 지질 입자)을 위한 혈액 샘플 수집. 대상체는 후원자-제공된 아토르바스타틴 용량 (40 mg)을 제공받았다. 하기를 완료하였다: 기준선 증상/유해 사례 평가; 병용 의약 검토. 대상체는 제7일에 지질 패널 혈액 샘플 전에 적어도 10시간 단식하였다.

제7일: 투여 전에, 하기를 완료하였다: 3회, 누운 자세 ECG; 누운 자세 및 선 자세 활력 징후 측정 (혈압, 맥박수, 체온); PK (아토르바스타틴)을 위한 혈액 샘플 수집 (제7일); PK (L1L3)를 위한 혈액 샘플 수집 (제7일); 10-시간 단식 후의 지질 패널 수집; 약역학적 분석 (PCSK9 및 지질 입자)을 위한 혈액 샘플 수집; 10-시간 단식 후의 안전성 실험실 시험을 위한 혈액 및 소변 시편 수집 (혈청 화학; 혈액학, 요분석, 응고, 리파제, 아밀라제, CRP). 대상체는 마지막 후원자-제공된 아토르바스타틴 용량 (40 mg)을 제공받았다. 연구부에서 나가기 전에, 하기를 완료하였다: 간소화된 신체 검사; 기준선 증상/유해 사례 평가; 병용 의약 검토. 대상체에게 클리닉으로 돌아가고 제15일에 지질 패널 혈액 샘플 전에 적어도 10시간 단식할 것을 상기시켰다. 대상체는 연구 나머지 기간에 걸쳐 그의 처방된 아토르바스타틴 의약을 계속 제공받았다.

제15일 (± 1일): 하기를 완료하였다: 간소화된 신체 검사; 아토르바스타틴에 대한 감독; 표준, 누운 자세 ECG; 누운 자세 및 선 자세 활력 징후 측정 (혈압, 맥박수, 체온); PK (L1L3)를 위한 혈액 샘플 수집 (제15일); 10-시간 단식 후의 지질 패널 수집; 면역원성 (항-L1L3 항체)을 위한 혈액 샘플 수집; 약역학적 분석 (PCSK9 및 지질 입자)을 위한 혈액 샘플 수집; 10-시간 단식 후의 안전성 실험실 시험을 위한 혈액 및 소변 시편 수집 (혈청 화학, 혈액학, 요분석, CRP); 기준선 증상/유해 사례 평가; 병용 의약 검토. 대상체에게 클리닉으로 돌아가고 제22일에 지질 패널 혈액 샘플 전에 적어도 10시간 단식할 것을 상기시켰다.

제22일 (± 1일): 하기를 완료하였다: 간소화된 신체 검사; 아토르바스타틴에 대한 감독; 누운 자세 및 선 자세 활력 징후 측정 (혈압, 맥박수, 체온); PK (L1L3)를 위한 혈액 샘플 수집 (제22일); 10-시간 단식 후의 지질 패널 수집; 10-시간 단식 후의 안전성 실험실 시험을 위한 혈액 및 소변 시편 수집 (혈청 화학, 혈액학, 요분석, CRP); 기준선 증상/유해 사례 평가; 병용 의약 검토. 대상체에게 클리닉으로 돌아가고 제29일에 지질 패널 혈액 샘플 전에 적어도 10시간 단식할 것을 상기시켰다.

제29일 (± 1일): 하기를 완료하였다: 완전한 신체 검사; 아토르바스타틴에 대한 감독; 누운 자세 및 선 자세 활력 징후 측정 (혈압, 맥박수, 체온); PK (L1L3)를 위한 혈액 샘플 수집 (제29일); 약역학적 분석 (PCSK9 및 지질 입자)을 위한 혈액 샘플 수집; 면역원성 (항-L1L3 항체)을 위한 혈액 샘플 수집; 10-시간 단식 후의 지질 패널 수집; 3회, 누운 자세 ECG; 10-시간 단식 후의 안전성 실험실 시험을 위한 혈액 및 소변 시편 수집 (혈청 화학, 혈액학, 요분석, 응고, 리파제, 아밀라제), 소변 약물 및 알콜 스크린 시험; 혈청 임신 테스트 (출산 가능성이 있는 여성); 기준선 증상/유해 사례 평가; 병용 의약 검토. 대상체에게 클리닉으로 돌아가고 제36일에 지질 패널 혈액 샘플 전에 적어도 10시간 단식할 것을 상기시켰다.

제36일, 제43일, 제50일, 제57일 및 제64일 (종결 방문): 하기를 완료하였다: 간소화된 신체 검사; 아토르바스타틴에 대한 감독; 표준, 누운 자세 ECG; 누운 자세 및 선 자세 활력 징후 측정 (혈압, 맥박수, 체온); PK (L1L3)를 위한 혈액 샘플 수집; 면역원성 (항-L1L3 항체)을 위한 혈액 샘플 수집; 10-시간 단식 후의 지질 패널 수집; 10-시간 단식 후의 안전성 실험실 시험을 위한 혈액 및 소변 시편 수집 (혈청 화학, 혈액학, 요분석, 리파제, 아밀라제, CRP); 기준선 증상/유해 사례 평가; 병용 의약 검토. 제64일 단독: 소변 임신 테스트 (출산 가능성이 있는 여성); 응고 패널; 체중 측정; 약역학적 분석 (PCSK9 및 지질 입자)을 위한 혈액 샘플 수집.

제78일 및 제 92일: 일부 경우에, 제78일 및 제92일에 2회 방문이 추가되며, 제57일로부터의 약동학적 결과는 보류된다. 이러한 경우에, 제57일에서의 절차는 제78일에서 적용되고, 제64일에서의 절차는 제92일에서 적용된다. 제92일이 종결 방문이 되었다.

결과

연구 중에 중단된 대상체는 없었다. 한 가지 심각한 유래 사례 (SAE), 즉 편두통성 두통의 악화가 있었는데, 약물-관련되지 않은 것이었다. TEAE는 일반적으로 비특이적이었으며, 강도가 심한 경우는 없었다. 또한, TEAE는 일시적이었고, 3x ULN 알라닌 아미노트랜스퍼라제 (ALT) 및/또는 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제 (AST) 초과였으며, 임상 징후/증상은 없었고, 모두 1주 내에 해결되었다.

표 4는 본 연구의 L1L3 PK 파라미터를 요약한다.

표 5는 아토르바스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 인간 대상체에서 L1L3의 단일 용량의 약동학 및 약역학을 평가하기 위한 본 임상 시험 연구로부터의 결과를 요약한다. L1L3 항체 투여 후에 공복 LDL-C 수준의 기준선으로부터의 평균 변화 퍼센트가 제공된다 (표 4).

아토르바스타틴 (용량 = 40 mg)의 존재 하에 L1L3으로의 처리는 실질적이고 지속적인 용량-의존성 공복 LDL-C 저하를 발생시켰다. 기준선 공복 LDL C는 약 72.5 mg/dL였다. 도 7A는 L1L3 항체 투여 후에 절대 공복 LDL-C 수준을 도시한다. 도 7B는 L1L3 항체 투여 후에 공복 LDL-C 수준의 기준선으로부터의 변화 퍼센트를 도시한다. 기준선은 도 7B에서 "0"으로 표시된다. 0.5 mg/kg의 L1L3 용량에서, 최대 LDL-C 저하 효과가 L1L3 투여 후 제3일에 관찰되었다. 4 mg/kg의 L1L3 용량에서, 최대 LDL-C 저하 효과는 L1L3 투여 후 제32일에 걸쳐 관찰되었다. LDL-C 저하의 용량-의존성 반응은 도 8에 제시된다. 도 8에 나타난 바와 같이, L1L3은 투여되는 모든 용량에서 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 대상체에서 LDL-C를 저하시켰다. 또한, 스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 환자에서 LDL-C 저하 효과는 L1L3 단독을 투여한 환자에서의 효과보다 더 컸다 (도 8).

실시예 4: PK-PD 모델링 및 모의 시간 프로파일

상기 기재된 연구에서 제공된 데이터에 기초하여, 모의 혈청 L1L3-시간 프로파일 및 LDL-C-시간 프로파일을 생성하였다. 도 9A-F는 지시된 용량의 L1L3, 또는 위약의 투여 후에 L1L3 (상부 패널) 및 LDL-C (하부 패널)에 대한 모의 시간 프로파일의 그래프를 도시한다. 2 mg/kg L1L3 (좌측) 또는 6 mg/kg L1L3 (중앙)으로의 투여에 대한 모의 프로파일을 위약 (우측)과 비교하여 생성하였다. L1L3 또는 위약을 제0일 및 제29일에, 즉 4주 간격의 2회 용량으로 투여하였다. 도 10은 하기 L1L3 용량: 0.25 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1 mg/kg, 2 mg/kg, 4 mg/kg 및 6 mg/kg의 투여 (각각 제0일, 제29일 및 제56일에 투여됨) 후에 모의 LDL-C-시간 프로파일을 도시한다 (도 10). 모의 L1L3-시간 프로파일 및 LDL-C-시간 프로파일은 4주마다 1회 투여된 L1L3의 낮은 용량이 지속적인 LDL-C 저하를 발생시킨다는 것을 입증한다.

실시예 5: L1L3의 다중 투여 후의 약동학 및 약역학

본 실시예는 인간 대상체에서 PCSK9 길항제 항체 (L1L3)의 다중 정맥내 투여 후의 약동학 및 약역학을 평가하기 위한 임상 시험 연구를 설명한다.

본 연구는 28일 스크리닝 기간, 4주 치료 기간 및 8주 추적 기간을 갖는 무작위화, 다중심, 이중-맹검, 위약 대조군, 병행 설계된 시험이었다 (도 11). 연구에서, 인간 일본인 대상체에게 L1L3 항체를 PCSK9 길항제 항체의 0.25 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1.0 mg/kg 또는 1.5 mg/kg으로 투여하였다. 각각의 대상체에 대해, 연구는 3가지 기간으로 이루어진다: 스크리닝, 치료, 및 추적. 치료 기간은 대략 28일까지 지속되며 제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 L1L3 또는 위약의 4회 단일 I.V. 용량이 투여되었다. 추적 기간은 대략 제29일부터 마지막 방문 (제78일)까지 대략 8주 지속될 것이다. 대상체는 통상적인 실험실 시험, 지질 프로파일, PK, PD 및 면역원성 샘플에 대한 안전성 평가 및 혈액 수집을 위해 클리닉에 정기적으로 방문하였다.

시험된 모든 용량에서 L1L3으로의 매주 처리는 지속적, 실질적이고 지속적인 용량-의존성 공복 LDL-C 저하를 발생시켰다. 기준선 공복 LDL-C는 약 155 mg/dL였다. 도 12는 L1L3 항체 투여 후의 절대 공복 LDL-C 수준을 도시한다. 도 13은 L1L3 항체 투여 후의 공복 LDL-C 수준의 기준선으로부터의 변화 퍼센트를 도시한다. 기준선은 도 13에서 "0"으로 표시된다.

도 14의 표는 아토르바스타틴의 안정한 용량을 제공받고 있는 인간 대상체에서의 L1L3의 다중 투여 후의 약동학 및 약역학을 평가하기 위한 이 임상 시험 연구로부터의 결과를 요약한다. L1L3 항체 투여 후에 공복 LDL-C 수준의 기준선으로부터의 평균 변화 퍼센트 ("평균")가 제공된다 (도 14).

실시예 6: 스타틴과 조합된 L1L3 의 다중 투여 후의 약동학 및 약역학

본 실시예는 아토르바스타틴, 심바스타틴 또는 로수바스타틴을 제공받고 있는 인간 대상체에서의 PCSK9 길항제 항체 (L1L3)의 다중 정맥내 투여 후의 약동학 및 약역학을 평가하기 위한 임상 시험 연구를 설명한다.

본 연구는 3주 스크리닝 기간, 12주 치료 기간 및 8주 추적 기간을 갖는 무작위화, 다중심, 이중 맹검, 위약 대조군, 병행 설계된 시험이었다.

연구에 등록된 대상체는 하기 기준을 모두 만족시켰다: 18세 이상의 남성 및 여성 대상체; 18.5 내지 40 kg/m²의 체질량 지수; 50 kg (110 lb) 초과 및 150 kg (330 lb) 미만의 총 체중; 제1일 전에 최소 45일 동안 아토르바스타틴 40 또는 80 mg, 로수바스타틴 20 또는 40 mg 또는 심바스타틴 40 또는 80 mg으로 정의된 스타틴의 안정한 1일 용량을 제공받음; 지질은 2회 평가 방문 (스크리닝 및 제-7일)에서 하기 기준을 만족시킨다: 100 mg/dL 이상의 공복 LDL-C;

대상체는 안전성 실험실, 지질 프로파일, PK, PD 및 면역원성 샘플에 대한 안전성 평가 및 혈액 수집을 위해 클리닉에 정기적으로 방문하였다. 전화 접촉은 10-시간 공복 요구사항을 대상체에게 상기시키기 위해 각각의 방문 전에 이루어졌고, 스크리닝 동안 및 제3일에 유해 사례를 평가하고, 대상체의 원문서에서 접촉을 기록하였다. 대상체는 제1일, 제29일 및 제57일에 1 mg/kg L1L3, 3 mg/kg L1L3, 6 mg/kg L1L3, 또는 위약의 1회 주입을 제공받았고, 치료 및 추적 기간 전반에 걸쳐 다중 효능, 안정성 및 PK 평가를 수행하였다. 주입 비율은 프로토콜당 주입 장치에 의해 주의깊게 제어하였다. 주입은 대략 60분에 걸쳐 단일 주입으로 투여되었다.

결과

3 mg/kg 투여 요법 및 6 mg/kg 투여 요법은 둘 다 통계적 유의성을 달성하였고, 기준선으로부터의 LDL-C의 30% 변화의 목표 값을 초과하였다. 트리글리세리드에 대한 L1L3의 효과가 관찰되지 않았다. HDL 최대 9%의 HDL의 약간의 상승이 관찰되었다. 처리군 및 등록은 표 6에 나타낸다.

사전-규정된 1차 효능 종점은 ANCOVA 모델을 이용하여 분석된 제85일에서의 LDL-C의 기준선으로부터의 변화 백분율이었다. 최종 ANCOVA 모델은 기준선 LDL-C 및 치료에 대한 항목을 함유하였다. 1차 종점 분석을 위한 0.05의 수준의 전체 유형 I 오류율을 보존하기 위해, 소비된 0.001 알파를 갖는 경계인 헤이비틀-페토(Haybittle-Peto)를 이용하였다.

명백한 투여 반응을 갖는 강한 치료 효과가 용량의 손실에 의해 구동된 3 및 6 mg/kg 처리군에서 LDL-C의 변화로 관찰되었다 (도 15 및 16). LDL-C 데이터는 이후에 시간 및 경험적 용량-반응 프로파일에 의한 치료를 둘 다 추정하기 위해 혼합 모델 반복 측정을 이용하여 분석하였다.

스타틴에 첨가시에 추가의 30% LDL-C의 사전-결정된 목표 값은 성공의 개념 증명 기준이었다. 스타틴 요법에 첨가시에 30% 이상의 LDL-C 저하의 이러한 목표 수준은 4주마다 주어진 3 및 6 mg/kg 용량에서 명백하게 달성되었다 (도 15 및 16). 도 15의 그래프는 연구일에 기준선으로부터의 변화 퍼센트 및 처리를 보여주고, 도 16의 그래프는 손실된 용량을 사용한 대상체를 제외하고 연구일에 기준선으로부터의 변화 퍼센트 및 처리를 보여준다. 스타틴의 안정한 1일 용량을 제공받고 있는 환자에서의 3 mg/kg L1L3 투여 요법은 제29일에 기준선 아래 약 50%로 LDL-C 저하를 달성하였다 (도 15). 스타틴의 안정한 1일 용량을 제공받고 있는 환자에서의 6 mg/kg L1L3 투여 요법은 제29일에 기준선 아래 약 65%로 LDL-C 저하를 달성하였다 (도 15). 3 mg/kg 및 6 mg/kg 투여 요법 둘 다에서, 30% LDL-C 초과의 저하가 28일 동안 지속되었다 (도 16). 제85일에 위약 조정된 치료 효과의 통계적 요약이 표 7에 제공된다. 표 7에서, 지질 프로파일의 기준선은 제-7일 및 제1일에 관찰된 값의 평균으로 정의된다.

L1L3 Cmax 및 최저 농도의 개요는 표 8에 제시된다.

스타틴의 안정한 1일 용량을 제공받고 있는 환자에서 L1L3의 3 및 6 mg/kg으로의 매월 치료는 혈액 LDL-C 수준을 기준선으로부터 30% 넘게 저하시켰다. HDL 수준의 약간의 상승 (최대 9%) 및 트리글리세리드에 대한 L1L3의 매우 적은 효과가 관찰되었다. L1L3은 일반적으로 안전하고, 잘-허용되었다. LFT, CK, ECG 및 BP에서의 변화는 일시적이고, 사실상 경미하고, 대부분의 경우에 치료와 관련되지 않은 것으로 간주되었다. 양성 ADA인 환자는 없었다.

실시예 7: 스타틴과 조합된 L1L3의 다중 투여 후의 약동학 및 약역학

본 실시예는 스타틴을 제공받고 있는 인간 대상체에서 PCSK9 길항제 항체 (L1L3)의 다중 피하 투여 후의 LDL-C 수준을 평가하기 위한 임상 시험 연구를 설명한다.

본 연구는 스타틴을 제공받고 있는 고콜레스테롤혈증 대상체에서 6개월 동안 매월 및 매월 2회 피하 투여 후에 L1L3의 효능, 안전성 및 허용성을 평가하기 위한 무작위화, 다중심, 이중 맹검, 위약 대조군, 병행 군, 용량-범위 연구 설계 시험이다. 2개의 투여 계획 (Q28d 또는 Q14d)에서 총 7개의 투여 군 (투여 군당 50명의 대상체)을 계획하였다. 프로토콜 설계는 표 9에 열거된다.

적격성: 연령 18세 이상.

포함 기준: 대상체는 임의의 스타틴의 안정한 용량 (적어도 6주)을 제공받아야 하고, 이 시험의 지속기간 동안 동일한 용량의 스타틴을 계속 제공받았다. 지질은 스크리닝시 및 제1일에서의 무작위화 적어도 7일 전에 수행한 2회 스크리닝 방문에서 스타틴으로의 배경 치료에 대해 하기 기준을 만족시켜야 한다: 80 mg/dL (2.31 mmol/L) 이상의 공복 LDL-C; 400 mg/dL (4.52 mmol/L) 이하의 공복 TG; 대상체의 공복 LDL-C는 초기 스크리닝 방문에서 80 mg/dL (2.31 mmol/L) 이상이어야 하고, 무작위화의 7일 내의 2차 방문에서의 값은 이 시험에 대한 적격성 기준을 만족시키기 위한 이 초기 값의 20% 이상이어야 한다.

1차 결과 척도는 무작위화 후 제12주 말에서의 LDL-C의 기준선으로부터의 절대 변화일 것이다. 2차 결과 척도는 하기를 포함한다: LDL-C는 무작위화 후 제12주 말에서의 기준선으로부터의 변화 및 변화 %로 평가될 것임; 혈장 정상-상태 L1L3 약동학적 파라미터; 규정된 제한 미만 (<100 mg/dL, <70 mg/dL, <40 mg/dL, <25 mg/dL)의 LDL-C를 갖는 대상체의 비율; 총 콜레스테롤은 무작위화 후 제12주 말에서의 기준선으로부터의 변화 및 변화 %로 평가될 것임; ApoB는 무작위화 후 제12주 말에서의 기준선으로부터의 변화 및 변화 %로 평가될 것임; ApoA1은 무작위화 후 제12주 말에서의 기준선으로부터의 변화 및 변화 %로 평가될 것임; 지단백질 (a)은 무작위화 후 제12주 말에서의 기준선으로부터의 변화 및 변화 %로 평가될 것임; HDL-콜레스테롤은 무작위화 후 제12주 말에서의 기준선으로부터의 변화 및 변화 %로 평가될 것임; 초저밀도 지단백질-콜레스테롤은 무작위화 후 제12주 말에서의 기준선으로부터의 변화 및 변화 %로 평가될 것임; 트리글리세리드는 무작위화 후 제12주 말에서의 기준선으로부터의 변화 및 변화 %로 평가될 것임; 비-HDL-콜레스테롤은 무작위화 후 제12주 말에서의 기준선으로부터의 변화 및 변화 %로 평가될 것임.

개시된 교시가 다양한 적용, 방법 및 조성물과 관련하여 기재되어 있더라도, 본원의 교시 및 하기 청구된 발명을 벗어나지 않으면서 다양한 변화 및 변형이 이루어질 수 있는 것으로 이해될 것이다. 상기 예는 개시된 교시를 보다 잘 설명하기 위해 제공되고, 본원에 제시된 교시의 범위를 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 본 발명의 교시가 이러한 예시적 실시양태들의 관점에서 기재되어 있지만, 이러한 예시적 실시양태의 수많은 변경 및 변형이 과도한 실험 없이 가능하다는 것을 당업자는 용이하게 이해할 것이다. 모든 이러한 변경 및 변형이 현재의 교시의 범위 내에 속한다.

특허, 특허 출원, 논문, 교재 등을 비롯한 본원에 인용된 모든 참고문헌 및 이에 인용된 참고문헌은 이들이 이미 포함되어 있지는 않은 정도로, 그의 전문이 본원에 참고로 포함된다. 정의된 용어, 용어 용법, 기재된 기술 등을 포함하나 이에 제한되지 않는, 포함된 문헌 및 유사한 자료 중 하나 이상이 본 출원과 다르거나 모순되는 경우에, 본 출원이 우선한다.

상기 기재 및 실시예는 본 발명의 특정의 구체적 실시양태를 상세히 기재하고, 본 발명자들에 의해 고려된 최적 방식을 기재한다. 그러나, 상기의 것을 문서에서 아무리 상세히 기재할 수 있을지라도, 본 발명이 다수의 방식으로 실시될 수 있고, 첨부된 특허청구범위 및 그의 임의의 등가물에 따라 본 발명이 해석되어야 하는 것으로 이해될 것이다.

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Claims (36)

1. 적어도 약 3 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 5 mg/kg 또는 약 6 mg/kg의 초기 용량으로 투여되고; 상기 초기 용량과 거의 동일하거나 또는 그 미만인 양의 다수의 후속 용량으로 투여되며, 여기서 상기 초기 용량 및 제1 후속 및 추가의 후속 용량이 시간상 서로 적어도 약 4주 떨어진 것인, 혈액 중 상승된 저밀도 지단백질 콜레스테롤 (LDL-C) 수준을 특징으로 하는 장애의 치료에 사용하기 위한 전구단백질 컨버타제 서브틸리신 켁신 유형 9 (PCSK9) 길항제 항체.
2. 적어도 약 200 mg 또는 약 300 mg의 초기 용량으로 투여되고; 상기 초기 용량과 거의 동일하거나 또는 그 미만인 양의 다수의 후속 용량으로 투여되며, 여기서 상기 초기 용량 및 제1 후속 및 추가의 후속 용량이 시간상 서로 적어도 약 4주 떨어진 것인, 혈액 중 상승된 저밀도 지단백질 콜레스테롤 (LDL-C) 수준을 특징으로 하는 장애의 치료에 사용하기 위한 전구단백질 컨버타제 서브틸리신 켁신 유형 9 (PCSK9) 길항제 항체.
3. 적어도 약 50 mg, 약 100 mg 또는 약 150 mg의 초기 용량으로 투여되고; 상기 초기 용량과 거의 동일하거나 또는 그 미만인 양의 다수의 후속 용량으로 투여되며, 여기서 상기 초기 용량 및 제1 후속 및 추가의 후속 용량이 시간상 서로 적어도 약 2주 떨어진 것인, 혈액 중 상승된 저밀도 지단백질 콜레스테롤 (LDL-C) 수준을 특징으로 하는 장애의 치료에 사용하기 위한 전구단백질 컨버타제 서브틸리신 켁신 유형 9 (PCSK9) 길항제 항체.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 스타틴이 PCSK9 길항제 항체의 초기 용량 전에 투여된 것인 PCSK9 길항제 항체.
5. 제4항에 있어서, 스타틴의 1일 용량이 투여되는 것인 PCSK9 길항제 항체.
6. 제4항 또는 제5항에 있어서, 스타틴의 안정한 용량이 PCSK9 항체의 초기 용량 전에 적어도 약 2, 3, 4, 5 또는 6주 동안 투여된 것인 PCSK9 길항제 항체.
7. 제4항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 스타틴이 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 메바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 심바스타틴, 또는 그의 임의의 제약상 허용되는 염 또는 입체이성질체인 PCSK9 길항제 항체.
8. 제5항에 있어서, 1일 스타틴 용량이 40 mg 아토르바스타틴, 80 mg 아토르바스타틴, 20 mg 로수바스타틴, 40 mg 로수바스타틴, 40 mg 심바스타틴 및 80 mg 심바스타틴으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 PCSK9 길항제 항체.
9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 장애가 고콜레스테롤혈증, 이상지혈증, 아테롬성동맥경화증, 심혈관 질환 또는 급성 관상동맥 증후군 (ACS)인 PCSK9 길항제 항체.
10. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 11에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역으로부터의 3개의 CDR 및 서열 12에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역으로부터의 3개의 CDR을 포함하는 PCSK9 길항제 항체.
11. 제10항에 있어서, L1L3인 PCSK9 길항제 항체.
12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 피하로 또는 정맥내로 투여되는 PCSK9 길항제 항체.
13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 1개월에 약 1회 투여되는 PCSK9 길항제 항체.
14. 혈액 중 상승된 저밀도 지단백질 콜레스테롤 (LDL-C) 수준을 특징으로 하는 장애에 걸리기 쉽거나 또는 이로 진단된 환자에게 전구단백질 컨버타제 서브틸리신 켁신 유형 9 (PCSK9) 길항제 항체의 적어도 약 3 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 5 mg/kg 또는 약 6 mg/kg의 초기 용량을 투여하는 단계; 및
    상기 환자에게 상기 초기 용량과 거의 동일하거나 또는 그 미만인 양의 상기 항체의 다수의 후속 용량을 투여하며, 여기서 상기 초기 용량 및 제1 후속 및 추가의 후속 용량이 시간상 서로 적어도 약 4주 떨어진 것인 단계
    를 포함하는, 혈액 중 상승된 저밀도 지단백질 콜레스테롤 (LDL-C) 수준을 특징으로 하는 장애에 걸리기 쉽거나 또는 이로 진단된 환자의 치료 방법.
15. 혈액 중 상승된 저밀도 지단백질 콜레스테롤 (LDL-C) 수준을 특징으로 하는 장애에 걸리기 쉽거나 또는 이로 진단된 환자에게 전구단백질 컨버타제 서브틸리신 켁신 유형 9 (PCSK9) 길항제 항체의 적어도 약 200 mg 또는 약 300 mg의 초기 용량을 투여하는 단계; 및
    상기 환자에게 상기 초기 용량과 거의 동일하거나 또는 그 미만인 양의 상기 항체의 다수의 후속 용량을 투여하며, 여기서 상기 초기 용량 및 제1 후속 및 추가의 후속 용량이 시간상 서로 적어도 약 4주 떨어진 것인 단계
    를 포함하는, 혈액 중 상승된 저밀도 지단백질 콜레스테롤 (LDL-C) 수준을 특징으로 하는 장애에 걸리기 쉽거나 또는 이로 진단된 환자의 치료 방법.
16. 혈액 중 상승된 저밀도 지단백질 콜레스테롤 (LDL-C) 수준을 특징으로 하는 장애에 걸리기 쉽거나 또는 이로 진단된 환자에게 전구단백질 컨버타제 서브틸리신 켁신 유형 9 (PCSK9) 길항제 항체의 적어도 약 50 mg, 약 100 mg 또는 약 150 mg의 초기 용량을 투여하는 단계; 및
    상기 환자에게 상기 초기 용량과 거의 동일하거나 또는 그 미만인 양의 상기 항체의 다수의 후속 용량을 투여하며, 여기서 상기 초기 용량 및 제1 후속 및 추가의 후속 용량이 시간상 서로 적어도 약 2주 떨어진 것인 단계
    를 포함하는, 혈액 중 상승된 저밀도 지단백질 콜레스테롤 (LDL-C) 수준을 특징으로 하는 장애에 걸리기 쉽거나 또는 이로 진단된 환자의 치료 방법.
17. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 스타틴으로 치료 중인 것인 방법.
18. 제17항에 있어서, 환자가 스타틴의 1일 용량으로 치료 중인 것인 방법.
19. 제17항 또는 제18항에 있어서, 환자가 PCSK9 항체의 초기 용량 전에 적어도 약 2, 3, 4, 5 또는 6주 동안 스타틴의 안정한 용량을 제공받은 것인 방법.
20. 제17항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 스타틴이 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 메바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 심바스타틴, 또는 그의 임의의 제약상 허용되는 염 또는 입체이성질체인 방법.
21. 제18항에 있어서, 1일 스타틴 용량이 40 mg 아토르바스타틴, 80 mg 아토르바스타틴, 20 mg 로수바스타틴, 40 mg 로수바스타틴, 40 mg 심바스타틴 및 80 mg 심바스타틴으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
22. 제14항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 장애가 고콜레스테롤혈증, 이상지혈증, 아테롬성동맥경화증, 심혈관 질환 또는 급성 관상동맥 증후군 (ACS)인 방법.
23. 제14항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 PCSK9 길항제 항체의 초기 용량의 투여 전에 약 70 mg/dL 이상의 공복 총 콜레스테롤 수준을 갖는 것인 방법.
24. 제14항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 PCSK9 길항제 항체의 초기 용량의 투여 전에 약 130 mg/dL 이상의 공복 LDL 콜레스테롤 수준을 갖는 것인 방법.
25. 제14항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열 11에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역으로부터의 3개의 CDR 및 서열 12에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역으로부터의 3개의 CDR을 포함하는 것인 방법.
26. 제25항에 있어서, 항체가 L1L3인 방법.
27. 제14항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 피하로 또는 정맥내로 투여되는 것인 방법.
28. 제14항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 1개월에 약 1회 투여되는 것인 방법.
29. 용기, PCSK9 길항제 항체를 포함하는 상기 용기 내 조성물, 및 적어도 약 3 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 200 mg 또는 약 300 mg의 PCSK9 길항제 항체의 초기 용량, 및 상기 초기 용량과 동일한 양 또는 그 미만인 적어도 하나의 후속 용량의 투여를 위한 지침서를 함유하는 포장 삽입물을 포함하며, 여기서 상기 초기 용량 및 후속 용량의 투여는 시간상 적어도 약 4주 떨어진 것인 제조품.
30. 제29항에 있어서, 포장 삽입물이 스타틴으로 치료 중인 개체에 대한 PCSK9 길항제 항체의 투여를 위한 지침서를 포함하는 것인 제조품.
31. 제30항에 있어서, 스타틴이 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 메바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 심바스타틴, 또는 그의 임의의 제약상 허용되는 염 또는 입체이성질체인 제조품.
32. 제29항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 지침서가 정맥내 또는 피하 주사에 의한 초기 용량의 투여 및 정맥내 또는 피하 주사에 의한 적어도 하나의 후속 용량의 투여를 위한 것인 제조품.
33. 제29항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 다수의 후속 용량이 투여되는 것인 제조품.
34. 제29항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 혈액 중 상승된 저밀도 지단백질 콜레스테롤 수준을 특징으로 하는 상태를 치료하기 위해 사용될 수 있다는 것을 나타내는 용기 상의 또는 용기와 연관된 라벨을 추가로 포함하는 제조품.
35. 제29항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 라벨이 조성물이 고콜레스테롤혈증, 아테롬발생 이상지혈증, 아테롬성동맥경화증, 심혈관 질환 또는 급성 관상동맥 증후군 (ACS)의 치료에 사용될 수 있다는 것을 나타내는 것인 제조품.
36. 제29항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 L1L3인 제조품.

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