TWI640317B - 茯苓萃取物及其活性成分於保養肌膚及／或促進傷口癒合之用途 - Google Patents

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Abstract

一種使用茯苓萃取物、去氫茯苓酸（DPA）、茯苓酸（PA）、去氫土莫酸（DTA）、土莫酸（TA）、豬苓酸C（PAC）、3-表-去氫土莫酸（EDTA）、去氫栓菌酸（DTTA）、栓菌酸（TTA）、去氫層孔菌酸（DEA）、層孔菌酸（EA）、茯苓新酸A（PAA）及／或茯苓新酸B（PAB）於製備一製劑的用途，其中該製劑係用於保養肌膚及／或促進傷口癒合。

Description

茯苓萃取物及其活性成分於保養肌膚及／或促進傷口癒合之用途
本發明係關於茯苓萃取物及／或其活性成分的應用，尤其是關於使用茯苓萃取物及／或其活性成分以保養肌膚及／或促進傷口癒合的應用。其中，該茯苓萃取物及／或其活性成分係提升膠原蛋白及／或透明質酸之表現以保養肌膚及／或促進傷口癒合。
當肌膚的水分含量降低時，會使得肌膚表面的角質細胞因為無法正常脫落而堆積，進而使肌膚失去光澤與彈性，顯得乾燥、粗糙，甚至出現皺紋等肌膚老化現象。因此，若可有效提升肌膚的水分含量，將可減少前述情況的發生。
研究證實，膠原蛋白（collagen）與透明質酸（hyaluronic acid）係具有提升肌膚水分含量的功能，故市面上許多添加有膠原蛋白及／或透明質酸的保養品、健康食品，皆宣稱可提供滋潤肌膚、緊實肌膚、修復肌膚、保濕、淡化皺紋、延緩肌膚老化、及預防肌膚老化的效果。此外，膠原蛋白因具有高生物相容性、低免疫性，且可以被身體分解吸收，故亦有健康食品因添加有膠原蛋白而宣稱可提供促進傷口癒合的效果。
然而，近年來在世界各地爆發口蹄疫、禽流感、狂牛症等人畜共通傳染病，此使得動物性膠原蛋白及透明質酸的安全性受到質疑。此外，不論是以口服、塗抹或是注射的方式以使用外源性膠原蛋白或透明質酸，皆有吸收率不佳、或是可能引起免疫反應的問題。此所以，業界對於外源性膠原蛋白與透明質酸的使用，一直以來都存在相當大的爭議。因此，業界目前仍積極開發可有效提升內源性膠原蛋白及／或透明質酸表現量的製劑或方法，希望藉由內源性膠原蛋白及／或透明質酸的提升以達到保養肌膚及／或促進傷口癒合的效果，且避免因補充外源性膠原蛋白及／或透明質酸而引起的安全性及有效性問題。
本案發明人研究發現，茯苓萃取物及／或其活性成分可有效提升細胞內膠原蛋白、細胞外膠原蛋白、及／或細胞外透明質酸之含量，此即，茯苓萃取物及／或其活性成分可有效提升內源性膠原蛋白及／或透明質酸的含量，故可用於保養肌膚及／或促進傷口癒合。
因此，本發明之一目的，在於提供一種使用茯苓萃取物於製備一製劑之用途，其中該製劑係用於保養肌膚及／或促進傷口癒合。較佳地，該茯苓萃取物係包含以下之至少一者：去氫茯苓酸（dehydropachymic acid，DPA）、茯苓酸（pachymic acid，PA）、去氫土莫酸（dehydrotumulosic acid，DTA）、土莫酸（tumulosic acid，TA）、豬苓酸C（polyporenic acid C，PAC）、3-表-去氫土莫酸（3-epi-dehydrotumulosic acid，EDTA）、去氫栓菌酸（dehydrotrametenolic acid，DTTA）、栓菌酸（trametenolic acid，TTA）、去氫層孔菌酸（dehydroeburicoic acid，DEA）、層孔菌酸（eburicoic acid，EA）、茯苓新酸A（poricoic acid A，PAA）及茯苓新酸B（poricoic acid B，PAB）。更佳地，該茯苓萃取物係茯苓皮部萃取物，其中以茯苓皮部萃取物之總重量計，茯苓新酸A及茯苓新酸B之總含量係不小於40重量%。
本發明之另一目的，在於提供一種使用一活性成分於製備一用於保養肌膚及／或促進傷口癒合之製劑的用途，其中該活性成分係選自以下之至少一者：去氫茯苓酸、茯苓酸、去氫土莫酸、土莫酸、豬苓酸C、3-表-去氫土莫酸、去氫栓菌酸、栓菌酸、去氫層孔菌酸、層孔菌酸、茯苓新酸A及茯苓新酸B。較佳地，該活性成分係茯苓新酸A及／或茯苓新酸B。更佳地，該活性成分係以萃取物的形式提供，尤其是以真菌萃取物或植物萃取物的形式提供。
較佳地，上述製劑係以一化妝品、保養品、食品或藥劑之形式提供，其中，該藥劑係提升膠原蛋白及／或透明質酸之表現以促進傷口癒合，該化妝品、保養品及食品係提升膠原蛋白及／或透明質酸之表現以保養肌膚，用於以下之至少一者：滋潤肌膚、緊實肌膚、修復肌膚、保濕、淡化皺紋、延緩肌膚老化、及預防肌膚老化。
本發明之又一目的，在於提供一種保養肌膚及／或促進傷口癒合的方法，其係包含對一有需要的個體投予一有效量之上述活性成分或茯苓萃取物。
本發明之再一目的，在於提供一種保養肌膚及／或促進傷口癒合的組合物，該組合物係一化妝品、保養品、食品或藥劑，且係包含一有效量之上述活性成分或茯苓萃取物。
本發明之詳細技術內容及部分具體實施態樣，將描述於以下內容中，以供本發明所屬領域具通常知識者據以明瞭本發明之特徵。
以下將描述根據本發明之部分具體實施態樣；惟，在不背離本發明精神下，本發明尚可以多種不同形式之態樣來實踐，不應將本發明保護範圍解釋為限於說明書所陳述者。此外，除非文中有另外說明，於本說明書中（尤其是在後述專利申請範圍中）所使用之「一」、「該」及類似用語應理解為包含單數及複數形式；所謂「有效量」，係指投予至個體時，可有效提升該個體之膠原蛋白及／或透明質酸之表現的化合物用量；所謂「個體」係指哺乳動物，哺乳動物可為人類或非人動物；單位「毫克／公斤體重」係指每公斤體重個體所須之劑量。
如上述說明，肌膚中的水分含量降低乃造成肌膚老化的一個重要原因。已知膠原蛋白是人體的結締組織與細胞外間質中一種重要的含醣蛋白質，佔人體總蛋白的20%以上。膠原蛋白以三條胜肽鏈纏繞成三股螺旋作為基礎結構，此三股螺旋結構在皮膚纖維母細胞內合成後，會被分泌到細胞外，形成緊密的成熟膠原纖維，此結構賦予膠原蛋白保持肌膚彈性、提高肌膚保水度及促進傷口癒合的功效。透明質酸則大量存在於真皮層中，屬於黏多醣類，具有高度的保濕功能，可使肌膚保持彈性、濕潤，並可減少皺紋、避免肌膚老化。
茯苓藥材是指擬層孔菌科真菌（Poria cocos (Schw.) Wolf）之乾燥菌核。茯苓真菌常寄生在松樹根上，外皮呈淡棕色或黑褐色（茯苓皮部），內部則呈粉紅色或白色（茯苓肉部）。傳統中醫典籍記載茯苓具有鎮靜、利尿、營養素補充、免疫力增強及延緩老化等用途。現代醫學研究也證實茯苓具有抗發炎、抗腫瘤、調節免疫系統、降血糖、促進營養吸收等功效。本案發明人研究發現，茯苓萃取物可有效促進細胞表現膠原蛋白及／或透明質酸（即，提升內源性膠原蛋白及／或透明質酸之含量），故可用於保養肌膚及促進傷口癒合。
因此，本發明係提供一種使用茯苓萃取物於保養肌膚及／或促進傷口癒合的應用，包括使用茯苓萃取物製備一用於保養肌膚及／或促進傷口癒合之製劑的用途、對有需要之個體投予茯苓萃取物以保養肌膚及／或促進傷口癒合的方法、以及提供一包含茯苓萃取物的組合物。
根據本發明，所採用之茯苓萃取物可以是一透過包含如下步驟之操作所提供的粗萃物或萃取物：（a）以一第一極性溶劑萃取茯苓原料，獲得一粗萃物；（b）乾燥該粗萃物，獲得一粗萃物粉末；（c）以一第二極性溶劑萃取該粗萃物粉末，獲得茯苓萃取物。其中，該第一極性溶劑與該第二極性溶劑係相同或不同，且可分別選自水、乙醇、及前述之組合。於本發明之部分實施態樣中，係採用乙醇濃度為相同或不同之乙醇水溶液作為第一極性溶劑與第二極性溶劑。
於步驟（a）中，該茯苓原料可以是茯苓皮部及／或茯苓肉部，且可視需要調整第一極性溶劑與茯苓原料之用量比率。一般而言，第一極性溶劑的用量並無特殊限制，只要可使原料均勻分散即可。舉例言之，可於步驟（a）採用第一極性溶劑與茯苓原料之體積比為約 8：1至約16：1的用量。於本發明一具體實施態樣中，係以茯苓皮部作為原料，且乙醇水溶液為第一極性溶劑，並以乙醇水溶液：原料之體積比為約 8：1 的用量以進行步驟（a）之萃取。於本發明另一具體實施態樣中，係以茯苓皮部及肉部作為原料，且乙醇水溶液為第一極性溶劑，並以乙醇水溶液：原料之體積比為約 8：1 的用量以進行步驟（a）之萃取。
於步驟（a）中，可視所採用之第一極性溶劑來選用合宜的萃取時間。以採用乙醇水溶液作為第一極性溶劑且乙醇水溶液：茯苓之體積比為 8：1為例，通常萃取歷時至少1小時，較佳至少2小時，更佳至少3小時。此外，可視需要輔以例如煎煮、冷卻、過濾、減壓濃縮、樹脂管柱層析等其它操作以進行步驟（a）。另，可視需要於進行步驟（a）之前，先將茯苓預浸泡於第一極性溶劑中一段時間。以採用乙醇水溶液為第一極性溶劑為例，可先進行預浸泡歷時例如約12小時。
於步驟（c）中，可視需要調整第二極性溶劑與由步驟（b）所獲得之粗萃物粉末的用量比。一般而言，第二極性溶劑的用量並無特殊限制，只要可使粗萃物粉末均勻分散即可。舉例言之，可於步驟（c）採用第二極性溶劑與茯苓粗萃物粉末的體積比為約8：1至約16：1的用量。於本發明一具體實施態樣中，係以乙醇水溶液為第二極性溶劑，並以乙醇水溶液：茯苓粗萃物粉末之體積比為約 8：1的用量以進行步驟（c）之萃取。
根據本發明所採用之茯苓萃取物，亦可以是一乾燥物，此乾燥物可透過乾燥步驟（c）所得之萃取液而提供。為儘可能達到最大的萃取效益，視需要地，可於進行步驟（b）之前，以相同或不同的第一極性溶劑對茯苓重複進行萃取，並合併該多次萃取所得之萃取液以提供進行步驟（b）之粗萃物；亦可重複進行步驟（b）、步驟（c）、以及前述視需要之其它操作之循環。
如後附實施例所示，根據本發明，可由茯苓萃取物中純化分離出去氫茯苓酸、茯苓酸、去氫土莫酸、土莫酸、豬苓酸C、3-表-去氫土莫酸、去氫栓菌酸、栓菌酸、去氫層孔菌酸、層孔菌酸、茯苓新酸A及茯苓新酸B等成分。其中，根據本發明所提供之茯苓皮部萃取物係含有去氫土莫酸、豬苓酸C、3-表-去氫土莫酸、去氫栓菌酸、栓菌酸、去氫層孔菌酸、層孔菌酸、茯苓新酸A、以及茯苓新酸B等成分。
本案發明人進一步研究發現，去氫茯苓酸、茯苓酸、去氫土莫酸、土莫酸、豬苓酸C、3-表-去氫土莫酸、去氫栓菌酸、栓菌酸、去氫層孔菌酸、層孔菌酸、茯苓新酸A及茯苓新酸B皆可有效促進細胞表現膠原蛋白及／或透明質酸（即，提升內源性膠原蛋白及／或透明質酸之含量），故可用於保養肌膚及促進傷口癒合。因此，本發明亦關於一種使用一活性成分於保養肌膚及／或促進傷口癒合的應用，其中該活性成分係選自以下之至少一者：去氫茯苓酸、茯苓酸、去氫土莫酸、土莫酸、豬苓酸C、3-表-去氫土莫酸、去氫栓菌酸、栓菌酸、去氫層孔菌酸、層孔菌酸、茯苓新酸A及茯苓新酸B。前述應用包括使用該活性成分以製備一用於保養肌膚及／或促進傷口癒合之製劑的用途、對有需要之個體投予該活性成分以保養肌膚及／或促進傷口癒合的方法、以及提供一包含該活性成分的組合物。較佳地，根據本發明所採用之活性成分係以萃取物的形式提供；更佳地，該活性成分係以真菌萃取物或植物萃取物的形式提供。
於根據本發明之應用，該製劑或組合物係可以一化妝品、保養品、食品、或藥劑的形式提供。當以一化妝品或保養品的形式提供該製劑或組合物時，該化妝品或保養品係可呈任何合宜的形式，並無特殊的限制，端視所欲之用途而呈對應之合宜劑型。舉例言之，但不以此為限，該化妝品或保養品可呈供直接外用之乳液、乳霜、凝膠（例如水凝膠）、膏狀物（例如分散膏、軟膏）、噴霧劑、或溶液（例如洗液、懸浮液）等形式。或者，可將本發明之製劑或組合物製備成可供吞食或飲用的食品形式，例如健康食品、美容飲品等。此外，亦可將本發明製劑或組合物以皮下注射之針劑形式提供。
類似地，當以一藥劑的形式提供該根據本發明之製劑或組合物時，該藥劑係可呈任何合宜的型式，並無特殊限制，端視所欲之用途而呈對應之合宜劑型。舉例言之，但不以此為限，該藥劑可以口服或非經口服（例如：經皮、皮下、或靜脈內）之投藥方式施用至有需要之個體上，以保養肌膚及／或促進傷口癒合。其中，視使用形式及用途而定，可選用合宜之載劑以提供該藥劑，其中，該載劑包括賦形劑、稀釋劑、輔助劑、安定劑、吸收延遲劑、崩散劑、增溶劑、乳化劑、抗氧化劑、黏合劑、結合劑、增黏劑、分散劑、懸浮化劑、潤滑劑、及╱或吸濕劑等。
以適於口服投藥之藥劑形式為例，該藥劑中可含有任何不會不利影響所含有活性成分（即，茯苓萃取物、去氫茯苓酸、茯苓酸、去氫土莫酸、土莫酸、豬苓酸C、3-表-去氫土莫酸、去氫栓菌酸、栓菌酸、去氫層孔菌酸、層孔菌酸、茯苓新酸A及茯苓新酸B之至少一者）之所欲效益的醫藥上可接受之載劑，該載劑可以例如選自以下群組：水、食鹽水、葡萄糖（dextrose）、甘油、乙醇或其類似物、纖維素、澱粉、糖膨潤土（sugar bentonite）、及前述之組合。可利用任何合宜之方法，以適於口服投藥的劑型提供該藥劑，例如：錠劑（例如糖衣錠）、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、流浸膏劑、溶液劑、糖漿劑、懸液劑、酊劑等。
至於適於皮下或靜脈內之針劑或點滴劑型，則可於該藥劑中含有一或多種例如等張溶液、鹽類緩衝液（如磷酸鹽緩衝液或檸檬酸鹽緩衝液）、增溶劑、乳化劑、5%糖溶液、以及其他載劑等成分，以靜脈輸注液、乳劑靜脈輸注液、乾粉注射劑、懸液注射劑、或乾粉懸液注射劑等劑型提供該藥劑。或者，將該藥劑製備成一注射前固體，以可溶於其他溶液或懸浮液中之劑型、或可乳化之劑型提供該注射前固體，並於投予至有需要之個體之前，將該注射前固體溶於其他溶液或懸浮液中或將其乳化，以提供所欲之注射劑。
視需要地，可於根據本發明所提供之製劑或組合物中另外含有合宜用量之添加劑，例如可提高該製劑或組合物於服用時的口適感及視覺感受之調味劑、調色劑、著色劑等，以及可改善該製劑或組合物的穩定性及儲存性之緩衝劑、保存劑、防腐劑、抗菌劑、抗真菌劑等。此外，該製劑或組合物可視需要另含一或多種其他活性成分（例如，膠原蛋白、透明質酸、彈性蛋白、杏仁酸、熊果素等），或者與含該一或多種其他活性成分之保養品或藥物併用，以進一步加強該製劑或組合物之功效或增加該製劑或組合物配方的運用靈活性與調配度。原則上，只要所添加的其它成分或添加劑不會對本發明製劑或組合物之所欲功效沒有不利的影響即可。
於根據本發明之應用所提供之製劑或組合物係可以一日一次、一日多次、或數日一次等不同頻率施用，端視投予個體之需求、年齡、體重、健康況狀、及施用目的而異。
本發明亦提供一種用於保養肌膚及／或促進傷口癒合的方法，其係包含對一有需要之個體投予一有效量之活性成分（即，茯苓萃取物、去氫茯苓酸、茯苓酸、去氫土莫酸、土莫酸、豬苓酸C、3-表-去氫土莫酸、去氫栓菌酸、栓菌酸、去氫層孔菌酸、層孔菌酸、茯苓新酸A及茯苓新酸B之至少一者）。於根據本發明之保養肌膚及／或促進傷口癒合的方法中，有關該活性成分的態樣、投予途徑、投予形式、適用劑量、以及相關應用，均如上述之說明。
茲以下列實施例進一步例示說明本發明。其中該等實施例僅提供作為說明，而非用以限制本發明之保護範圍。本發明保護範圍係如後附申請專利範圍所示。
實施例
[ 製備實施例 ]
A. 茯苓萃取物之製備
A-1. 取茯苓藥材（來源產地為雲南），清洗後剝取其外皮（下稱「茯苓皮部」），其餘即為肉部（下稱「茯苓肉部」）。
A-2. 取 A-1 所獲得之茯苓皮部，於室溫下，以1：8（茯苓藥材：乙醇水溶液）的體積比浸泡於75%乙醇水溶液中，歷時12小時，然後煮沸並進行萃取（歷時3小時）。重複前述萃取步驟，共三次。合併三次萃取所得的萃取液並過濾以去除不溶物，以獲得一粗萃取物。接著，對前述之粗萃取物進行減壓濃縮以去除溶劑，再以噴霧乾燥機進行乾燥，以獲得一粗萃物粉末。
A-3. 取 A-2 所獲得之粗萃物粉末，以1：8（粗萃物粉末：乙醇水溶液）的體積比與95%乙醇混合，並進行萃取（歷時3小時），接著，再利用以矽膠為固定相的管柱進行分離，獲得一茯苓皮部萃取物。
A-4. 以液相層析／紫外光／質譜儀，分別於243奈米及210奈米波長下檢測 A-3 所獲得之茯苓皮部萃取物的成分，並以高效液相色譜法定量該萃取物中各成分的含量，分析結果係示於表1。
表1
A-5. 合併 A-1 所獲得之茯苓皮部及茯苓肉部，重複上述 A-2 及 A-3的萃取步驟，以獲得一茯苓萃取物。接著，以 A-4 的分析方法檢測所獲得之茯苓萃取物的成分。結果顯示，該茯苓萃取物係含有去氫茯苓酸、茯苓酸、去氫土莫酸、土莫酸、豬苓酸C、3-表-去氫土莫酸、去氫栓菌酸、栓菌酸、去氫層孔菌酸、層孔菌酸、茯苓新酸A及茯苓新酸B等成分。
B. 茯苓萃取物之活性成分的製備
B-1. 以1：500（萃取物：甲醇）的體積比，將 A-5 所獲得之茯苓萃取物均勻溶解於甲醇中。過濾去除不溶物後，以製備級高效能液相層析儀（以甲醇與水混合作為移動相），分別於243奈米及210奈米波長下，針對去氫茯苓酸、茯苓酸、去氫土莫酸、土莫酸、豬苓酸C、3-表-去氫土莫酸、去氫栓菌酸、栓菌酸、去氫層孔菌酸、層孔菌酸、茯苓新酸A及茯苓新酸B進行分離及收集，收集後再以減壓濃縮機去除甲醇，分別得到去氫茯苓酸、茯苓酸、去氫土莫酸、土莫酸、豬苓酸C、3-表-去氫土莫酸、去氫栓菌酸、栓菌酸、去氫層孔菌酸、層孔菌酸、茯苓新酸A及茯苓新酸B。
B-2. 以液相層析／紫外光／質譜儀，分別於243奈米及210奈米波長下檢測B-1 所獲得之去氫茯苓酸、茯苓酸、去氫土莫酸、土莫酸、豬苓酸C、3-表-去氫土莫酸、去氫栓菌酸、栓菌酸、去氫層孔菌酸、層孔菌酸、茯苓新酸A及茯苓新酸B，結果顯示該等成分的純度皆大於98%。
C. 細胞培養
將正常人類皮膚初代纖維母細胞（normal primary human skin fibroblastic cell，購自ATCC）培養在纖維母細胞生長培養基（Fibroblast Growth Medium）培養基中，以供後續實驗使用。
實施例 1 ：茯苓萃取物對細胞表現膠原蛋白及透明質酸之能力的影響
取[製備實施例C]所提供之正常人類皮膚初代纖維母細胞，將其分成四組並分別以如下培養基進行培養，歷時48小時： 1. 第I組：纖維母細胞生長培養基； 2. 第II組：含有0.005微克／毫升[製備實施例A-3]所提供之茯苓皮部萃取物的纖維母細胞生長培養基； 3. 第III組：含有0.05微克／毫升[製備實施例A-3]所提供之茯苓皮部萃取物的纖維母細胞生長培養基； 4. 第IV組：含有0.5微克／毫升[製備實施例A-3]所提供之茯苓皮部萃取物的纖維母細胞生長培養基。
其後，收集各組細胞培養液並加以濃縮，再以西方墨點法及酵素免疫分析法（ELISA）進行分析，測定各組之細胞內膠原蛋白的含量、細胞培養液中（即，細胞外）膠原蛋白的含量、以及細胞培養液中透明質酸的含量。最後，以控制組（即，經第I組培養液培養之細胞）的結果為100%，計算其他各組之膠原蛋白及透明質酸的相對含量（以百分比表示），結果示於表2。
表2
由表2可知，相較於控制組，經本發明茯苓萃取物處理之細胞（即，以第II、III、或IV組培養液培養之細胞）之細胞內膠原蛋白含量、細胞培養液中（即，細胞外）膠原蛋白含量、以及細胞培養液中的透明質酸含量皆顯著提升。前述結果顯示，本發明茯苓萃取物可有效提升纖維母細胞表現膠原蛋白及／或透明質酸之能力（即，提升內源性膠原蛋白及／或透明質酸的含量），故可用於保養皮膚及／或促進傷口癒合。
實施例 2 ：茯苓萃取物之活性成分對細胞表現膠原蛋白及透明質酸之能力的影響
（ 2-1 ）細胞內之膠原蛋白表現
取[製備實施例C]所提供之正常人類皮膚初代纖維母細胞，將其分成三十七組，分別以如下培養基進行培養，歷時48小時： 1. 第1組：纖維母細胞生長培養基； 2. 第2-1至2-3組：含有[製備實施例B]所提供之茯苓酸（PA）的纖維母細胞生長培養基，濃度分別為0.01、0.1、及1微莫耳濃度； 3. 第3-1至3-3組：含有[製備實施例B]所提供之去氫茯苓酸（DPA）的纖維母細胞生長培養基，濃度分別為0.01、0.1、及1微莫耳濃度； 4. 第4-1至4-3組：含有[製備實施例B]所提供之土莫酸（TA）的纖維母細胞生長培養基，濃度分別為0.01、0.1、及1微莫耳濃度； 5. 第5-1至5-3組：含有[製備實施例B]所提供之去氫土莫酸（DTA）的纖維母細胞生長培養基，濃度分別為0.01、0.1、及1微莫耳濃度； 6. 第6-1至6-3組：含有[製備實施例B]所提供之豬苓酸C（PAC）的纖維母細胞生長培養基，濃度分別為0.01、0.1、及1微莫耳濃度； 7. 第7-1至7-3組：含有[製備實施例B]所提供之3-表-去氫土莫酸（EDTA）的纖維母細胞生長培養基，濃度分別為0.01、0.1、及1微莫耳濃度； 8. 第8-1至8-3組：含有[製備實施例B]所提供之去氫栓菌酸（DTTA）的纖維母細胞生長培養基，濃度分別為0.01、0.1、及1微莫耳濃度； 9. 第9-1至9-3組：含有[製備實施例B]所提供之栓菌酸（TTA）的纖維母細胞生長培養基，濃度分別為0.01、0.1、及1微莫耳濃度； 10. 第10-1至10-3組：含有[製備實施例B]所提供之茯苓新酸A（PAA）的纖維母細胞生長培養基，濃度分別為0.01、0.1、及1微莫耳濃度； 11. 第11-1至11-3組：含有[製備實施例B]所提供之去氫層孔菌酸（DEA）的纖維母細胞生長培養基，濃度分別為0.01、0.1、及1微莫耳濃度； 12. 第12-1至12-3組：含有[製備實施例B]所提供之茯苓新酸B（PAB）的纖維母細胞生長培養基，濃度分別為0.01、0.1、及1微莫耳濃度； 13. 第13-1至13-3組：含有[製備實施例B]所提供之層孔菌酸（EA）的纖維母細胞生長培養基，濃度分別為0.01、0.1、及1微莫耳濃度。
其後，收集各組細胞培養液並加以濃縮，再以西方墨點法及酵素免疫分析法（ELISA）進行分析，測定各組之細胞內膠原蛋白的含量。最後，以控制組（即，經第1組培養液培養之細胞）的結果為100%，計算其他各組之膠原蛋白的相對含量（以百分比表示），結果示於表3。
表3
由表3可知，相較於控制組，經茯苓酸、去氫茯苓酸、土莫酸、去氫土莫酸、豬苓酸C、去氫栓菌酸、或茯苓新酸A處理之細胞，其細胞內之膠原蛋白的含量皆顯著提升。前述結果顯示，茯苓酸、去氫茯苓酸、土莫酸、去氫土莫酸、豬苓酸C、去氫栓菌酸、及茯苓新酸A可有效提升纖維母細胞表現膠原蛋白之能力（即，提升內源性膠原蛋白及／或透明質酸的含量），故可用於保養皮膚及／或促進傷口癒合。
（ 2-2 ）細胞外之膠原蛋白表現
為了解本發明活性成分對細胞外之膠原蛋白表現的影響，係以西方墨點法及酵素免疫分析法（ELISA），對實施例（2-1）所提供之經濃縮的各組細胞培養液進行分析，測定各組培養液中（即，細胞外）的膠原蛋白含量。最後，以控制組（即，經第1組培養液培養之細胞）的結果為100%，計算其他各組之膠原蛋白的相對含量（以百分比表示），結果示於表4。
表4
由表4可知，相較於控制組，經去氫茯苓酸、茯苓酸、去氫土莫酸、土莫酸、豬苓酸C、3-表-去氫土莫酸、去氫栓菌酸、栓菌酸、去氫層孔菌酸、層孔菌酸、茯苓新酸A、及茯苓新酸B處理之細胞，其細胞外之膠原蛋白的含量皆顯著提升。前述結果顯示，本發明活性成分可有效提升纖維母細胞表現及分泌膠原蛋白之能力，故可用於保養皮膚及／或促進傷口癒合。
（ 2-3 ）細胞外之透明質酸表現
為了解本發明活性成分對細胞外之透明質酸表現的影響，係以西方墨點法及酵素免疫分析法（ELISA），對實施例（2-1）所提供之經濃縮的各組細胞培養液進行分析，測定各組培養液中（即，細胞外）的透明質酸含量。最後，以控制組（即，經第1組培養液培養之細胞）的結果為100%，計算其他各組之透明質酸的相對含量（以百分比表示），結果示於表5。
表5
由表5可知，相較於控制組，經去氫茯苓酸、茯苓酸、去氫土莫酸、土莫酸、豬苓酸C、3-表-去氫土莫酸、栓菌酸、去氫層孔菌酸、層孔菌酸、茯苓新酸A或茯苓新酸B處理之細胞，其細胞外之透明質酸的含量皆顯著提升，其中，經茯苓酸、去氫茯苓酸、土莫酸、去氫土莫酸、及3-表-去氫土莫酸處理之細胞的提升效果特別顯著。前述結果顯示，本發明活性成分可有效提升纖維母細胞表現透明質酸的能力，故可用於保養皮膚。
如上述實施例所示，本發明茯苓萃取物及／或其活性成分確實可提升細胞表現膠原蛋白及透明質酸的能力（即，具有提升內源性膠原蛋白及透明質酸之含量的能力），可用於保養皮膚（包括滋潤肌膚、緊實肌膚、修復肌膚、保濕、淡化皺紋、延緩肌膚老化、及預防肌膚老化）及／或促進傷口癒合。

Claims (22)

  1. 一種使用茯苓萃取物於保養肌膚之應用，其中該茯苓萃取物係不含茯苓酸。
  2. 如請求項1之應用，其中該茯苓萃取物係包含以下之至少一者：去氫茯苓酸(dehydropachymic acid，DPA)、去氫土莫酸(dehydrotumulosic acid，DTA)、土莫酸(tumulosic acid，TA)、豬苓酸C(polyporenic acid C，PAC)、3-表-去氫土莫酸(3-epi-dehydrotumulosic acid，EDTA)、去氫栓菌酸(dehydrotrametenolic acid，DTTA)、栓菌酸(trametenolic acid，TTA)、去氫層孔菌酸(dehydroeburicoic acid，DEA)、層孔菌酸(eburicoic acid，EA)、茯苓新酸A(poricoic acid A，PAA)及茯苓新酸B(poricoic acid B，PAB)。
  3. 如請求項1之應用，其中該茯苓萃取物係茯苓皮部萃取物。
  4. 如請求項3之應用，其中以茯苓皮部萃取物之總重量計，茯苓新酸A及茯苓新酸B之總含量係不小於40重量%。
  5. 如請求項1至4中任一項之應用，其中該茯苓萃取物係以一化妝品、保養品或食品之形式使用，且係提升膠原蛋白及/或透明質酸之表現以保養肌膚。
  6. 如請求項5之應用，其中該化妝品、保養品及食品係用於以下之至少一者：滋潤肌膚、緊實肌膚、保濕、淡化皺紋、延緩肌膚老化、及預防肌膚老化。
  7. 一種使用茯苓萃取物於製備一藥物之用途，其中，該茯苓萃取物係不含茯苓酸，且該藥物係用於修復肌膚及/或促進傷口癒合。
  8. 如請求項7之用途，其中該茯苓萃取物係包含以下之至少一者：去氫茯苓酸、去氫土莫酸、土莫酸、豬苓酸C、3-表-去氫土莫酸、去氫栓菌酸、栓菌酸、去氫層孔菌酸、層孔菌酸、茯苓新酸A及茯苓新酸B。
  9. 如請求項7之用途，其中該茯苓萃取物係茯苓皮部萃取物。
  10. 如請求項9之用途，其中以茯苓皮部萃取物之總重量計，茯苓新酸A及茯苓新酸B之總含量不小於40重量%。
  11. 如請求項7至10中任一項之用途，其中該藥物係提升膠原蛋白及/或透明質酸之表現以修復肌膚及促進傷口癒合。
  12. 一種使用一活性成分於保養肌膚之應用，其中該活性成分係選自以下之至少一者：去氫茯苓酸、去氫土莫酸、土莫酸、豬苓酸C、3-表-去氫土莫酸、去氫栓菌酸、栓菌酸、去氫層孔菌酸、層孔菌酸、茯苓新酸A及茯苓新酸B。
  13. 如請求項12之應用，其中該活性成分係茯苓新酸A及/或茯苓新酸B。
  14. 如請求項12之應用，其中該活性成分係以萃取物的形式提供。
  15. 如請求項14之應用，其中該活性成分係以真菌萃取物或植物萃取物的形式提供。
  16. 如請求項12至15中任一項之應用，其中該活性成分係以一化妝品、保養品或食品之形式使用，且係提升膠原蛋白及/或透明質酸之表現以保養肌膚。
  17. 如請求項16之應用，其中該化妝品、保養品及食品係用於以下之至少一者：滋潤肌膚、緊實肌膚、保濕、淡化皺紋、延緩肌膚老化、及預防肌膚老化。
  18. 一種使用一活性成分於製備一用於修復肌膚及/或促進傷口癒合之藥物的用途，其中該活性成分係選自以下之至少一者：去氫茯苓酸、去氫土莫酸、土莫酸、豬苓酸C、3-表-去氫土莫酸、去氫栓菌酸、栓菌酸、去氫層孔菌酸、層孔菌酸、茯苓新酸A及茯苓新酸B。
  19. 如請求項18之用途，其中該活性成分係茯苓新酸A及/或茯苓新酸B。
  20. 如請求項18之用途，其中該活性成分係以萃取物的形式提供。
  21. 如請求項20之用途，其中該活性成分係以真菌萃取物或植物萃取物的形式提供。
  22. 如請求項18至21中任一項之用途，其中該藥物係提升膠原蛋白及/或透明質酸之表現以修復肌膚及促進傷口癒合。
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