TW202019933A - 作為類鐸受體7(TLR7)促效劑之1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶化合物及其方法與用途 - Google Patents

Abstract

本發明係關於式I之化合物，其適用作類鐸受體7 (TLR7)之促效劑。

Description

作為類鐸受體7(TLR7)促效劑之1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶化合物及其方法與用途

本發明係關於類鐸受體7 (「TLR7」)之促效劑及其偶聯物，以及此類促效劑及其偶聯物之製備方法與用途。

類鐸受體(toll-like receptor，「TLR」)為識別病原體相關分子模式(pathogen-associated molecular patterns，「PAMP」)之受體，該等病原體相關分子模式為在某些類別之病原體中保留之小分子基元。TLR可位於細胞表面或細胞內。TLR藉由結合同源PAMP而活化表明宿主內部存在相關病原體，亦即感染，且刺激宿主免疫系統來對抗感染。人類具有10種TLR，稱為TLR1、TLR2、TLR3等。

藉由促效劑對TLR進行活化(最主要研究TLR7)可藉由整體刺激免疫反應而對疫苗及免疫治療劑在治療除真正病原體感染外的多種病狀中之作用具有積極效果。因此，對使用TLR7促效劑作為疫苗佐劑或作為癌症免疫療法中之增強劑相當關注。參見例如Vasilakos 及Tomai 2013、Sato-Kaneko等人 2017、Smits等人2008及Ota等人2019。

TLR7係位於核內體膜上之細胞內受體，其識別與單股RNA病毒相關之PAMP。其活化誘導諸如IFNα及IFNβ之I型干擾素分泌(Lund等人 2004)。TLR7具有兩個結合位點，一個用於單股RNA配位體(Berghöfer等人2007)且一個用於諸如鳥苷之小分子(Zhang等人2016)。

TLR7可結合於類鳥苷合成促效劑且由其活化，該等促效劑諸如基於1H -咪唑并[4,5-c ]喹啉骨架之咪喹莫特(imiquimod)、雷西莫特(resiquimod)及嘎德莫特(gardiquimod)。關於小分子TLR7促效劑之綜述，參見Cortez及Va 2018。

基於喋啶酮分子骨架之合成TLR7促效劑亦為已知的，如例如威沙立德(vesatolimod) (Desai等人 2015)。

已揭示其他基於類嘌呤骨架之通常根據通式(A)之合成TLR7促效劑：

其中R、R'及R''為結構式變數，其中R''通常含有未經取代或經取代之芳環或雜芳環。

有關具有類嘌呤骨架之生物活性分子及其在治療諸如纖維化、發炎性病症、癌症或病原性感染之病狀中之用途的揭示案包括：Akinbobuyi等人2015及2016；Barberis等人2012；Carson等人2014；Ding等人2016、2017a及2017b；Graupe等人2015；Hashimoto等人2009；He等人2019a及2019b；Holldack等人2012；Isobe等人2009a及2012；Poudel等人2019a及2019b；Pryde 2010；及Young等人2019。

基團R”可為吡啶基：Bonfanti等人2015a及2015b；Halcomb等人2015；Hirota等人2000；Isobe等人2002、2004、2006、2009a、2009b、2011及2012；Kasibhatla等人2007；Koga-Yamakawa等人2013；Musmuca等人2009；Nakamura 2012；Ogita等人2007；及Yu等人2013。

存在其中式(A)之6,5-稠環系統(與咪唑五員環稠合之嘧啶六員環)經改質之相關分子的揭示案。(a) Dellaria等人2007、Jones等人2010及2012及Pilatte等人2017揭示其中嘧啶環經吡啶環置換之化合物。(b) Chen等人2011、Coe等人2017及Zhang等人2018揭示其中咪唑環經吡唑環置換之化合物。(c) Cortez等人2017及2018、Li等人2018及McGowan等人2016a、2016b及2017揭示其中咪唑環經吡咯環置換之化合物。

Bonfanti等人2015b及2016及Purandare等人2019揭示其中一個巨環跨越嘌呤部分之兩個環的TLR7調節劑：

TLR7促效劑可與搭配分子偶聯，該搭配分子可為例如磷脂、聚(乙二醇) (「PEG」)、抗體或另一TLR (通常為TLR2)。例示性揭示案包括：Carson等人2013、2015及2016、Chan等人2009及2011、Cortez等人2017、Gadd等人2015、Lioux等人2016、Maj等人2015、Vernejoul等人2014及Zurawski等人2012。常見偶聯位點位於式(A)之R''基團處。

Jensen等人2015揭示陽離子脂質媒劑用於遞送TLR7促效劑之用途。

一些TLR7促效劑(包括雷西莫特)為TLR7/TLR8雙促效劑。參見例如Beesu等人2017、Embrechts等人2018、Lioux等人2016及Vernejoul等人2014。

本文藉由第一作者或發明者及年份引用之文獻的完整引用列於本說明書末尾。

本說明書係關於具有1H -吡唑并[4,3-d]嘧啶芳族系統且具有作為TLR7促效劑之活性的化合物。

1H -吡唑并[4,3-d ]嘧啶

在一個態樣中，提供一種具有式I之結構之化合物

其中 各X¹ 獨立地為N或CR² ； X² 為O、CH₂ 、NH、S或N(C₁ -C₃ 烷基)； R¹ 為H、CH₃ (CH₂ )_{1 - 3} 、CH₃ (CH₂ )_{0 - 1} O(CH₂ )_{2 - 3} 、CH₃ (CH₂ )_{0 - 3} C(=O)、CH₃ (CH₂ )_{0 - 1} O(CH₂ )_{2 - 3} C(=O)、

； R² 為H、O(C₁ -C₃ 烷基)、C₁ -C₃ 烷基、Cl、F或CN； R³ 為H、鹵基、OH、CN、NH₂ 、NH(C₁ -C₅ 烷基)、N(C₁ -C₅ 烷基)₂ 、NH(CH₂ )_{0 - 1} (C₃ -C₆ 環烷基)、NH(C₄ -C₈ 雙環烷基)、NH(C₆ -C₁₀ 螺環烷基)、N(C₃ -C₆ 環烷基)₂ 、NH(CH₂ )_{1 - 3} (芳基)、N((CH₂ )_{1 - 3} (芳基))₂ 、具有結構

之環胺部分、6員芳族或雜芳族部分或者5員雜芳族部分； 其中 烷基、環烷基、雙環烷基、螺環烷基、環胺、6員芳族或雜芳族部分或5員雜芳族部分視情況經一或多個選自以下之取代基取代：OH、鹵基、CN、(C₁ -C₃ 烷基))、O(C₁ -C₃ 烷基)、C(=O)(Me)、SO₂ (C₁ -C₃ 烷基)、C(=O)(Et)、NH₂ 、NH(Me)、N(Me)₂ 、NH(Et)、N(Et)₂ 及N(C₁ -C₃ 烷基)、(CH₂ )_{1 - 2} OH、(CH₂ )_{1 - 2} OMe；及 環烷基、雙環烷基、螺環烷基或環胺部分可具有經O、S、NH、N(C₁ -C₃ 烷基)或N(Boc)置換之CH₂ 基團； m為0或1； 且 n為1、2或3； 或其醫藥學上可接受之鹽。

本文揭示之化合物具有作為TLR7促效劑之活性，且一些可與抗體偶聯以靶向遞送至預期作用之目標組織或器官。其亦可聚乙二醇化以調節其醫藥特性。

本文所揭示之化合物或其偶聯物或其聚乙二醇化衍生物可用於藉由活化免疫系統來治療罹患能夠治療之病狀的個體，該治療係藉由向此類個體投與治療有效量之此類化合物或其偶聯物或其聚乙二醇化衍生物，尤其與疫苗或癌症免疫治療劑組合投與。

相關申請案之交叉引用

本申請案根據35 U.S.C. §119(e)主張2018年8月3日申請之美國臨時申請案序列號62/714,238之權益；該申請案之揭示內容以引用之方式併入本文中。 定義

「抗體」意謂完整抗體及其任何抗原結合片段(亦即「抗原結合部分」)或單鏈變異體。完整或全長抗體為包含藉由二硫鍵互連之至少兩條重(H)鏈及兩條輕(L)鏈之蛋白質。各重鏈包含重鏈可變區(V_H )及包含C_H1 、C_H2 及C_H3 三個結構域之重鏈恆定區。各輕鏈包含輕鏈可變區(V_L 或V_k )及包含一個單結構域C_L 之輕鏈恆定區。V_H 及V_L 區可進一步再分成高變區，稱為互補決定區(complementarity determining region，CDR)，穿插有較保守構架區(framework region，FR)。各V_H 及V_L 包含三個CDR及四個FR，其自胺基至羧基末端按以下順序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4。可變區含有與抗原相互作用之結合域。恆定區可介導抗體與宿主組織或因子之結合，包括免疫系統之各種細胞(例如效應細胞)及經典補體系統之第一組分(Clq)。若抗體以5 × 10^{- 8} M或更小，更佳1 × 10^{- 8} M或更小，更佳6 × 10^{- 9} M或更小，更佳3 × 10^{- 9} M或更小，甚至更佳2 × 10^{- 9} M或更小之K_D 結合於抗原X，則稱該抗體「特異性結合」於抗原X。抗體可為嵌合抗體、人類化抗體或較佳人類抗體。重鏈恆定區可經工程改造以影響糖基化類型或程度，延長抗體半衰期，增強或減弱與效應細胞或補體系統之相互作用或調節一些其他特性。該工程改造可藉由置換、添加或刪除一或多個胺基酸或藉由用來自另一免疫球蛋白類型之結構域置換結構域或前述方法之組合來實現。

抗體之「抗原結合片段」及「抗原結合部分」(或簡單地「抗體部分」或「抗體片段」)意謂保留特異性結合於抗原之能力的一或多個抗體片段。已顯示抗體之抗原結合功能可藉由諸如以下之全長抗體之片段進行：(i) Fab片段，其係由V_L 、V_H 、C_L 及C_H1 結構域組成之單價片段；(ii) F(ab')₂ 片段，其係包含兩個在鉸鏈區藉由二硫橋鍵連接之Fab片段的二價片段；(iii) Fab'片段，其基本上為具有鉸鏈區一部分之Fab (參見例如Abbas等人，Cellular and Molecular Immunology , 第6版, Saunders Elsevier 2007)；(iv) Fd片段，其由V_H 及C_H1 結構域組成；(v) Fv片段，其由抗體之單臂的V_L 結構域及V_H 結構域組成；(vi) dAb片段(Ward等人，(1989)Nature 341 :544-546)，其由V_H 結構域組成；(vii)分離之互補決定區(CDR)；及(viii)奈米抗體，其為含有單一可變域及兩個恆定域之重鏈可變區。較佳抗原結合片段為Fab、F(ab')₂ 、Fab'、Fv及Fd片段。此外，儘管Fv片段之兩個結構域V_L 及V_H 由獨立基因編碼，但其可使用重組方法，藉由使其製成其中V_L 與V_H 區配對形成單價分子(稱為單鏈Fv或scFv)之單一蛋白鏈的合成連接子接合。參見例如Bird等人(1988)Science 242 :423-426；及Huston等人(1988)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 :5879-5883)。此類單鏈抗體亦涵蓋於術語抗體之「抗原結合部分」內。

除非另外指明(例如藉由提及SEQ ID NO:列表中之線性編號)，對抗體重鏈或輕鏈可變區(V_H 或V_L )中之胺基酸位置之編號的提及係根據Kabat系統(Kabat等人，「Sequences of proteins of immunological interest」, 第5版, 出版號 91-3242, U.S. Dept. Health & Human Services, NIH, Bethesda, Md., 1991,在下文中「Kabat」)及對抗體重鏈或輕鏈恆定區(C_H1 、C_H2 、C_H3 或C_L )中之胺基酸位置之編號的提及係根據如Kabat中所闡述之EU索引。參見Lazar等人之US 2008/0248028 A1，該文獻之揭示內容以引用例如此類用法之方式併入本文中。此外，免疫遺傳學資訊系統(ImMunoGeneTics Information System；IMGT)在其網站提供名稱為「IMGT Scientific Chart: Correspondence between C Numberings」之表，展示其針對重鏈恆定區之編號系統、EU編號及Kabat編號之間的對應關係。

「經分離之抗體」意謂實質上不含其他具有不同抗原特異性之抗體的抗體(例如特異性結合抗原X之經分離之抗體實質上不含特異性結合除抗原X以外之抗原的抗體)。然而，特異性結合抗原X之經分離之抗體可與諸如來自其他物種之抗原X分子之其他抗原具有交叉反應性。在某些實施例中，經分離之抗體特異性結合於人類抗原X且不與其他(非人類)抗原X抗原交叉反應。此外，經分離之抗體可實質上不含其他細胞材料及/或化學物質。

「單株抗體」或「單株抗體組合物」意謂具有單一分子組成之抗體分子製劑，其呈現對特定抗原決定基之單一結合特異性及親和力。

「人類抗體」意謂具有其中構架區與CDR區(及若存在，恆定區)均來源於人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區的抗體。人類抗體可包括後續修飾，包括天然或合成修飾。人類抗體可包括未由人類生殖系免疫球蛋白序列編碼之胺基酸殘基(例如藉由活體外隨機或定點突變引入或藉由活體內體細胞突變引入之突變)。然而，「人類抗體」不包括來源於另一哺乳動物物種(諸如小鼠)之生殖系之CDR序列已移植至人類構架序列上的抗體。

「人類單株抗體」意謂呈現單一結合特異性之抗體，其具有其中構架區與CDR區均來源於人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區。在一個實施例中，人類單株抗體由包括B細胞與永生化細胞融合之融合瘤產生，該B細胞自具有包含人類重鏈轉殖基因及輕鏈轉殖基因之基因組轉殖基因非人類動物(例如轉殖基因小鼠)獲得。

「脂族」意謂具有指定碳原子數(例如，如在「C₃ 脂族」、「C_{1 - 5} 脂族」、「C₁ -C₅ 脂族」或「C₁ 至C₅ 脂族」中，後三個片語為具有1至5個碳原子之脂族部分之同義詞)，或在碳原子數未明確指定下，具有1至4個碳原子(在不飽和脂族部分之情況下為2至4個碳)之直鏈或分支鏈、飽和或不飽和、非芳族烴部分。類似理解適用於其他類型中之碳數，如在C_2-4 烯烴、C₄ -C₇ 環脂族等中。以類似方式，諸如「(CH₂ )_1-3 」之術語應理解為下標為1、2或3之簡寫，因而此類術語表示CH₂ 、CH₂ CH₂ 及CH₂ CH₂ CH₂ 。

「烷基」意謂飽和脂族部分，其中指明碳原子數之相同慣例適用。以說明之方式，C₁ -C₄ 烷基部分包括(但不限於)甲基、乙基、丙基、異丙基、異丁基、第三丁基、1-丁基、2-丁基及其類似基團。「伸烷基」意謂烷基之二價對應物，諸如CH₂ CH₂ 、CH₂ CH₂ CH₂ 及CH₂ CH₂ CH₂ CH₂ 。

「烯基」意謂具有至少一個碳-碳雙鍵之脂族部分，其中指明碳原子數之相同慣例適用。以說明之方式，C₂ -C₄ 烯基部分包括(但不限於)乙烯基(ethenyl/vinyl)、2-丙烯基(烯丙基或丙-2-烯基)、順-1-丙烯基、反-1-丙烯基、E- (或Z- ) 2-丁烯基、3-丁烯基、1,3-丁二烯基(丁-1,3-二烯基)及其類似基團。

「炔基」意謂具有至少一個碳-碳參鍵之脂族部分，其中指明碳原子數之相同慣例適用。以說明之方式，C₂ -C₄ 炔基包括乙炔基(ethynyl/acetylenyl)、炔丙基(丙-2-炔基)、1-丙炔基、丁-2-炔基及其類似基團。

「環脂族」意謂具有1至3個環之飽和或不飽和、非芳族烴部分，各環具有3至8個(較佳3至6個)碳原子。「環烷基」意謂其中各環飽和之環脂族部分。「環烯基」意謂其中至少一個環具有至少一個碳-碳雙鍵之環脂族部分。「環炔基」意謂其中至少一個環具有至少一個碳-碳參鍵之環脂族部分。以說明之方式，環脂族部分包括(但不限於)環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環庚基、環辛基及金剛烷基。較佳環脂族部分為環烷基部分，尤其環丙基、環丁基、環戊基及環己基。「伸環烷基」意謂環烷基之二價對應物。類似地，「伸雙環烷基」及「伸螺環烷基」(或「伸螺烷基」)係指雙環烷基及螺環烷基/螺烷基之二價對應物。

「雜環脂族」意謂在至少一個環中至多三個(較佳1至2個)碳經獨立地選自N、O或S之雜原子置換的環脂族部分，其中N及S可視情況經氧化且N可視情況經四級銨化。較佳環脂族部分由大小為5員至6員之一個環組成。類似地，「雜環烷基」、「雜環烯基」及「雜環炔基」分別意謂其中至少一個環經如此修飾之環烷基、環烯基或環炔基部分。例示性雜環脂族部分包括氮丙啶基、氮雜環丁烷基、1,3-二氧雜環己烷基、氧雜環丁烷基、四氫呋喃基、吡咯啶基、哌啶基、哌嗪基、四氫哌喃基、四氫硫哌喃基、四氫硫哌喃基碸、嗎啉基、硫代嗎啉基、硫代嗎啉基亞碸、硫代嗎啉基碸、1,3-二氧戊環基、四氫-1,1-二側氧基噻吩基、1,4-二氧雜環己烷基、硫雜環丁烷基及其類似基團。「伸雜環烷基」意謂雜環烷基之二價對應物。

「烷氧基」、「芳氧基」、「烷硫基」及「芳硫基」分別意謂-O(烷基)、-O(芳基)、-S(烷基)及-S(芳基)。實例分別為甲氧基、苯氧基、甲硫基及苯硫基。

除非指示較窄含義，否則「鹵素」或「鹵基」意謂氟、氯、溴或碘。

「芳基」意謂具有單環、雙環或三環環系統(較佳單環)之烴部分，其中各環具有3至7個碳原子且至少一個環為芳族。環系統中之環可彼此稠合(如在萘基中)或彼此鍵結(如在聯苯中)且可與非芳族環稠合或鍵結(如在茚烷基或環己基苯基中)。以進一步說明之方式，芳基部分包括(但不限於)苯基、萘基、四氫萘基、茚烷基、聯苯、菲基、蒽基及苊基。「伸芳基」意謂芳基之二價對應物，例如1,2-伸苯基、1,3-伸苯基或1,4-伸苯基。

「雜芳基」意謂具有單環、雙環或三環環系統(較佳5員至7員單環)之部分，其中各環具有3至7個碳原子且至少一個環為含有1至4個獨立地選自N、O或S之雜原子的芳環，其中N及S可視情況經氧化且N可視情況經四級銨化。此類含至少一個雜原子之芳環可與其他類型之環稠合(如在苯并呋喃基或四氫異喹啉基中)或與其他類型之環直接鍵結(如在苯基吡啶基或2-環戊基吡啶基中)。以進一步說明之方式，雜芳基部分包括吡咯基、呋喃基、苯硫基(噻吩基)、咪唑基、吡唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、異噻唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、N-側氧基吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、喹啉基、異喹啉炔基、喹唑啉基、㖕啉基、喹喏啉基(quinozalinyl)、㖠啶基、苯并呋喃基、吲哚基、苯并苯硫基、噁二唑基、噻二唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基、二苯并呋喃基、咔唑基、二苯并苯硫基、吖啶基及其類似基團。「伸雜芳基」意謂雜芳基之二價對應物。

若指示部分可經取代，諸如在「未經取代或經取代之C₁ -C₅ 烷基」或「視情況經取代之雜芳基」中藉由使用「未經取代或經取代」或「視情況經取代」措辭，則此類部分可具有一或多個獨立選擇之取代基，較佳數目為一至五個，更佳數目為一或兩個。取代基及取代模式可由一般技術者考慮取代基所附接之部分來選擇，以提供化學上穩定且可藉由此項技術中已知之技術以及本文所闡述之方法合成的化合物。若一個部分鑑別為「未經取代或經取代」或「視情況經取代」，則在一較佳實施例中，此類部分未經取代。

「芳基烷基」、「(雜環脂族)烷基」、「芳基烯基」、「芳基炔基」、「聯芳基烷基」及其類似基團意謂視情況可經芳基、雜環脂族、聯芳基等部分取代之烷基、烯基或炔基部分，視情況可在烷基、烯基或炔基部分上具有開放(不飽和)價態，例如如在苯甲基、苯乙基、N-咪唑基乙基、N-嗎啉基乙基及其類似基團中。相反地，「烷基芳基」、「烯基環烷基」及其類似基團意謂視情況可經烷基、烯基等部分取代之芳基、環烷基等部分，視情況可例如如在甲基苯基(甲苯基)或烯丙基環己基中。「羥基烷基」、「鹵烷基」、「烷基芳基」、「氰基芳基」及其類似基團意謂視情況可經一或多個所鑑別之取代基(視情況可為羥基、鹵基等)取代之烷基、芳基等部分。

舉例而言，可容許取代基包括(但不限於)烷基(尤其甲基或乙基)、烯基(尤其烯丙基)、炔基、芳基、雜芳基、環脂族、雜環脂族、鹵基(尤其氟基)、鹵烷基(尤其三氟甲基)、羥基、羥烷基(尤其羥乙基)、氰基、硝基、烷氧基、-O(羥烷基)、-O(鹵烷基) (尤其-OCF₃ )、-O(環烷基)、-O(雜環烷基)、-O(芳基)、烷硫基、芳硫基、=O、=NH、=N(烷基)、=NOH、=NO(烷基)、-C(=O)(烷基)、-C(=O)H、-CO₂ H、-C(=O)NHOH、-C(=O)O(烷基)、-C(=O)O(羥基烷基)、-C(=O)NH₂ 、-C(=O)NH(烷基)、-C(=O)N(烷基)₂ 、-OC(=O)(烷基)、-OC(=O)(羥基烷基)、-OC(=O)O(烷基)、-OC(=O)O(羥基烷基)、-OC(=O)NH₂ 、-OC(=O)NH(烷基)、-OC(=O)N(烷基)₂ 、疊氮基、-NH₂ 、-NH(烷基)、-N(烷基)₂ 、-NH(芳基)、-NH(羥基烷基)、-NHC(=O)(烷基)、-NHC(=O)H、-NHC(=O)NH₂ 、-NHC(=O)NH(烷基)、-NHC(=O)N(烷基)₂ 、-NHC(=NH)NH₂ 、-OSO₂ (烷基)、-SH、-S(烷基)、-S(芳基)、-S(環烷基)、-S(=O)烷基、-SO₂ (烷基)、-SO₂ NH₂ 、-SO₂ NH(烷基)、-SO₂ N(烷基)₂ 及其類似基團。

在經取代之部分為脂族部分的情況下，較佳取代基為芳基、雜芳基、環脂族、雜環脂族、鹵基、羥基、氰基、硝基、烷氧基、-O(羥烷基)、-O(鹵烷基)、-O(環烷基)、-O(雜環烷基)、-O(芳基)、烷硫基、芳硫基、=O、=NH、=N(烷基)、=NOH、=NO(烷基)、-CO₂ H、-C(=O)NHOH、-C(=O)O(烷基)、-C(=O)O(羥烷基)、-C(=O)NH₂ 、-C(=O)NH(烷基)、-C(=O)N(烷基)₂ 、-OC(=O)(烷基)、-OC(=O)(羥烷基)、-OC(=O)O(烷基)、-OC(=O)O(羥烷基)、-OC(=O)NH₂ 、-OC(=O)NH(烷基)、-OC(=O)N(烷基)₂ 、疊氮基、-NH₂ 、-NH(烷基)、-N(烷基)₂ 、-NH(芳基)、-NH(羥烷基)、-NHC(=O)(烷基)、-NHC(=O)H、-NHC(=O)NH₂ 、-NHC(=O)NH(烷基)、-NHC(=O)N(烷基)₂ 、-NHC(=NH)NH₂ 、-OSO₂ (烷基)、-SH、-S(烷基)、-S(芳基)、-S(=O)烷基、-S(環烷基)、-SO₂ (烷基)、-SO₂ NH₂ 、-SO₂ NH(烷基)及-SO₂ N(烷基)₂ 。更佳取代基為鹵基、羥基、氰基、硝基、烷氧基、-O(芳基)、=O、=NOH、=NO(烷基)、-OC(=O)(烷基)、-OC(=O)O(烷基)、-OC(=O)NH₂ 、-OC(=O)NH(烷基)、-OC(=O)N(烷基)₂ 、疊氮基、-NH₂ 、-NH(烷基)、-N(烷基)₂ 、-NH(芳基)、-NHC(=O)(烷基)、-NHC(=O)H、-NHC(=O)NH₂ 、-NHC(=O)NH(烷基)、-NHC(=O)N(烷基)₂ 及-NHC(=NH)NH₂ 。尤其較佳為苯基、氰基、鹵基、羥基、硝基、C₁ -C₄ 烷氧基、O(C₂ -C₄ 伸烷基)OH及O(C₂ -C₄ 伸烷基)鹵基。

在經取代之部分為環脂族、雜環脂族、芳基或雜芳基部分時，較佳取代基為烷基、烯基、炔基、鹵基、鹵烷基、羥基、羥基烷基、氰基、硝基、烷氧基、-O(羥烷基)、-O(鹵烷基)、-O(芳基)、-O(環烷基)、-O(雜環烷基)、烷基硫基、芳基硫基、-C(=O)(烷基)、-C(=O)H、-CO₂ H、-C(=O)NHOH、-C(=O)O(烷基)、-C(=O)O(羥烷基)、-C(=O)NH₂ 、-C(=O)NH(烷基)、-C(=O)N(烷基)₂ 、-OC(=O)(烷基)、-OC(=O)(羥烷基)、-OC(=O)O(烷基)、-OC(=O)O(羥烷基)、-OC(=O)NH₂ 、-OC(=O)NH(烷基)、-OC(=O)N(烷基)₂ 、疊氮基、-NH₂ 、-NH(烷基)、-N(烷基)₂ 、-NH(芳基)、-NH(羥烷基)、-NHC(=O)(烷基)、-NHC(=O)H、-NHC(=O)NH₂ 、-NHC(=O)NH(烷基)、-NHC(=O)N(烷基)₂ 、-NHC(=NH)NH₂ 、-OSO₂ (烷基)、-SH、-S(烷基)、-S(芳基)、-S(環烷基)、-S(=O)烷基、-SO₂ (烷基)、-SO₂ NH₂ 、-SO₂ NH(烷基)及-SO₂ N(烷基)₂ 。更佳取代基為烷基、烯基、鹵基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、硝基、烷氧基、-O(羥烷基)、-C(=O)(烷基)、-C(=O)H、-CO₂ H、-C(=O)NHOH、-C(=O)O(烷基)、-C(=O)O(羥烷基)、-C(=O)NH₂ 、-C(=O)NH(烷基)、-C(=O)N(烷基)₂ 、-OC(=O)(烷基)、-OC(=O)(羥烷基)、-OC(=O)O(烷基)、-OC(=O)O(羥烷基)、-OC(=O)NH₂ 、-OC(=O)NH(烷基)、-OC(=O)N(烷基)₂ 、-NH₂ 、-NH(烷基)、-N(烷基)₂ 、-NH(芳基)、-NHC(=O)(烷基)、-NHC(=O)H、-NHC(=O)NH₂ 、-NHC(=O)NH(烷基)、-NHC(=O)N(烷基)₂ 及-NHC(=NH)NH₂ 。尤其較佳為C₁ -C₄ 烷基、氰基、硝基、鹵基及C₁ -C₄ 烷氧基。

在陳述範圍之情況下，如「C₁ -C₅ 烷基」或「5%至10%」，此類範圍包括範圍之端點，如第一實例中之C₁ 及C₅ 與第二實例中之5%及10%。

除非特別指示特定立體異構體(例如藉由結構式中相關立體中心之加粗或虛鍵，藉由將結構式中之雙鍵描述為具有E或Z組態或藉由使用立體化學指明之命名法或符號)，否則所有立體異構體包括在本發明之範疇內，呈純化合物以及其混合物之形式。除非另外指明，否則外消旋體、個別對映異構體(不論光學上純的或部分解析的)、非對映異構體、幾何異構體及其組合及混合物均涵蓋於本發明內。

熟習此項技術者將瞭解化合物可具有互變異構形式(例如酮及烯醇形式)、共振形式及兩性離子形式，等同於本文所用之結構式中所描繪之形式，且結構式涵蓋此類互變異構、共振或兩性離子形式。

「醫藥學上可接受之酯」意謂活體內(例如在人體中)水解產生母化合物或其鹽或自身活性類似於母化合物的酯。適合之酯包括C₁ -C₅ 烷基酯、C₂ -C₅ 烯基酯或C₂ -C₅ 炔基酯，尤其甲酯、乙酯或正丙酯。

「醫藥學上可接受之鹽」意謂適用於醫藥調配物的化合物之鹽。若化合物具有一或多個鹼性基團，則鹽可為酸加成鹽，諸如硫酸鹽、氫溴酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、順丁烯二酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、雙羥萘酸鹽(恩波酸鹽)、氫碘酸鹽、硝酸鹽、鹽酸鹽、乳酸鹽、甲基硫酸鹽、反丁烯二酸鹽、苯甲酸鹽、丁二酸鹽、甲磺酸鹽、乳糖酸鹽、辛二酸鹽、甲苯磺酸鹽及其類似鹽。若化合物具有一或多個酸性基團，則鹽可為如下鹽，諸如鈣鹽、鉀鹽、鎂鹽、葡甲胺鹽、銨鹽、鋅鹽、哌嗪鹽、緩血酸胺鹽、鋰鹽、膽鹼鹽、二乙胺鹽、4-苯基環己胺鹽、苄星青黴素(benzathine)鹽、鈉鹽、四甲銨鹽及其類似鹽。多晶型結晶形式及溶劑合物亦涵蓋在本發明之範疇內。

「個體」係指動物，包括(但不限於)靈長類動物(例如人類)、猴、牛、豬、綿羊、山羊、馬、狗、貓、兔、大鼠或小鼠。術語「個體」及「患者」在本文中提及例如哺乳動物個體(諸如人類)時可互換使用。

在治療疾病或病症之情形下，術語「治療(treat)」、「治療(treating)」及「治療(treatment)」意謂包括緩解或消除病症、疾病或病狀或與該病症、疾病或病狀有關之症狀中之一或多者；或減緩疾病、病症或病狀或一或多種其症狀之進展、擴散或惡化。「癌症治療」係指一或多種以下作用：(1)在一定程度上抑制腫瘤生長，包括(i)減緩及(ii)完全生長阻滯；(2)減少腫瘤細胞數目；(3)維持腫瘤大小；(4)減小腫瘤大小；(5)抑制，包括(i)減少、(ii)減緩或(iii)完全阻止腫瘤細胞浸潤至周邊器官中；(6)抑制，包括(i)減少、(ii)減緩或(iii)完全阻止癌轉移；(7)增強抗腫瘤免疫反應，其可(i)維持腫瘤大小，(ii)減小腫瘤大小，(iii)減緩腫瘤生長，(iv)減少、減緩或防止侵襲及/或(8)在一定程度上減輕與病症相關之一或多種症狀的嚴重程度或數目。

在本說明書之式中，相對於鍵橫向之波浪線(

)或位於鍵末端之星號(*)表示共價附接位點。舉例而言，式

中R為

或R為

之表述意謂

。

在本說明書之式中，橫穿芳環之兩個碳之間的鍵意謂附接至鍵之基團可位於芳環中藉由移除隱含之氫而變得可用的任何位置處。以說明之方式，式

表示

。

在其他說明中，

表示

且

表示

。

熟習此項技術者將瞭解，某些結構可以一種互變異構形式或另一種互變異構形式(例如酮相對於烯醇)繪製，且兩種形式為等效的。 化合物

在一個實施例中，在以下部分中各X¹ 為CR² 或不超過兩個X¹ '為N：

。其實例為

。

較佳實例為

等同

。

適合之基團R¹ 包括：

。

較佳地，基團R¹ 為

。

適合之基團R³ 之實例包括Cl、OH、

。

其中基團R³ 具有

結構之實例(包括一或多個亞甲基(CH₂ )視情況經O、S、SO₂ 、NH、C(=O)、N(C₁ -C₃ 烷基)、NC(=O)(C₁ -C₃ 烷基)或N(Boc)中之一或多者置換的情況，或具有稠合至其之另一環，如上文所揭示)為：

。

在另一實施例中，R³ 係選自由以下組成之群：

。

在式I之一個實施例中，m為0，在此情況下，該式簡化為式I'：

式I化合物之另一實施例由式Ia表示：

， 其中R¹ 及R³ 如上文關於式I所定義。

其中m為1之式I化合物之一個實施例由式Ib表示，其中R¹ 、R³ 及X¹ 如上文關於式I所定義。

較佳地，在式Ib中

為

，更佳為

。

以下列出本說明書中各化合物之特定實例。其製備方法及其特性提供於下文實驗部分中。

偶聯物  概要

本文中所揭示之TLR7促效劑可藉由局部投與或藉由以與靶向部分之偶聯物形式靶向遞送而遞送至預期作用位點。較佳地，靶向部分為抗體或其抗原結合部分，且其抗原位於預期作用位置，例如在預期作用位點位於腫瘤(癌症)時為腫瘤相關抗原。較佳地，相比於正常細胞，腫瘤相關抗原由癌細胞唯一表現或過度表現。腫瘤相關抗原可位於癌細胞表面上或由癌細胞分泌至其環境中。

在一個態樣中，提供一種包含本發明化合物及配位體之偶聯物，其由式(IV)表示 [D(X^D )_a (C)_c (X^Z )_b ]_m Z         (IV) 其中Z為靶向部分，D為本發明之促效劑，且-(X^D )_a C(X^Z )_b -由於其連接Z與D而統稱為「連接部分」或「連接子」。在連接子內，C為經設計以在D之預期生物學作用位點處或附近裂解的可裂解基團；X^D 及X^Z 分別為間隔開D與C及C與Z之間隔部分(或「間隔子」)；下標a、b及c獨立地為0或1 (亦即，X^D 、X^Z 及C視情況存在)。下標m為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10 (較佳1、2、3或4)。D、X^D 、C、X^Z 及Z更充分描述於下文中。

藉由結合於其抗原或受體所位於之目標組織或細胞，Z將偶聯物引導至此處。基團C在目標組織或細胞處裂解釋放D，從而局部地發揮其作用。以此方式，實現D在預期作用位點之精確遞送，從而降低所需劑量。另外，D在處於其偶聯狀態時通常無生物活性(或活性明顯更低)，從而減少脫靶效應。

如下標m所反映，各Z可與多於一個D偶聯，視可供用於偶聯之位點Z之數目及所採用實驗條件而定。熟習此項技術者將瞭解，雖然各個別Z與整數數目之D偶聯，但是偶聯物之製備方法可分析D與Z之非整數比率，其反映統計平均值。此比率稱為取代比率(「SR (substitution ratio)」)或藥物-抗體比率(「DAR (drug-antibody ratio)」)。 靶向部分Z

較佳地，靶向部分Z為抗體。為方便及簡潔起見且以非限制方式，本說明書中關於Z及其偶聯物之詳細論述以其為抗體之情形書寫，但熟習此項技術者將瞭解，其他類型之Z亦可在細節上作必要修改後偶聯。舉例而言，葉酸作為靶向部分之偶聯物可靶向其表面上具有葉酸受體之細胞(Leamon等人，Cancer Res.2008 , 68 (23), 9839)。出於相同原因，本說明書中之詳細論述主要按照1:1比率之Z/D (m=1)書寫。

可用於本發明偶聯物中之抗體包括識別以下抗原之抗體：間皮素、前列腺特異性膜抗原(prostate specific membrane antigen ，PSMA)、CD19、CD22、CD30、CD70、B7H3、B7H4 (亦稱為O8E)、蛋白質酪胺酸激酶7 (PTK7)、磷脂醯肌醇蛋白聚糖-3、RG1、岩藻糖基-GM1、CTLA-4及CD44。抗體可為動物(例如鼠類)抗體、嵌合抗體、人類化抗體或較佳人類抗體。抗體較佳為單株抗體，尤其單株人類抗體。針對一些上述抗原之人類單株抗體的製備方法揭示於以下文獻中：Korman等人，US 8,609,816 B2 (2013；B7H4，亦稱作08E；尤其抗體2A7、1G11、及2F9)；Rao-Naik等人，8,097,703 B2 (2012；CD19；尤其抗體5G7、13F1、46E8、21D4、21D4a、47G4、27F3及3C10)；King等人，US 8,481,683 B2 (2013；CD22；尤其抗體12C5、19A3、16F7及23C6)；Keler等人，US 7,387,776 B2 (2008；CD30；尤其抗體5F11、2H9及17G1)；Terrett等人，US 8,124,738 B2 (2012；CD70；尤其抗體2H5、10B4、8B5、18E7及69A7)；Korman等人，US 6,984,720 B1 (2006；CTLA-4；尤其抗體10D1、4B6及1E2)；Korman等人，US 8,008,449 B2 (2011；PD-1；尤其抗體17D8、2D3、4H1、5C4、4A11、7D3及5F4)；Huang等人，US 2009/0297438 A1 (2009；PSMA，尤其抗體1C3、2A10、2F5、2C6)；Cardarelli等人，US 7,875,278 B2 (2011；PSMA；尤其抗體4A3、7F12、8C12、8A11、16F9、2A10、2C6、2F5及1C3)；Terrett等人，US 8,222,375 B2 (2012；PTK7；尤其抗體3G8、4D5、12C6、12C6a及7C8)；Harkins等人，US 7,335,748 B2(2008；RG1；尤其抗體A、B、C及D)；Terrett等人，US 8,268,970 B2 (2012；間皮素；尤其抗體3C10、6A4及7B1)；Xu等人，US 2010/0092484 A1 (2010；CD44；尤其抗體14G9.B8.B4、2D1.A3.D12及1A9.A6.B9)；Deshpande等人，US 8,258,266 B2 (2012；IP10；尤其抗體1D4、1E1、2G1、3C4、6A5、6A8、7C10、8F6、10A12、10A12S及13C4)；Kuhne等人，US 8,450,464 B2 (2013；CXCR4；尤其抗體F7、F9、D1及E2)；及Korman等人，US 7,943,743 B2 (2011；PD-L1；尤其抗體3G10、12A4、10A5、5F8、10H10、1B12、7H1、11E6、12B7及13G4)；其揭示內容以引用之方式併入本文中。較佳地，抗體為抗間皮素抗體。

除為抗體外，Z亦可為抗體片段(諸如Fab、Fab'、F(ab')₂ 、Fd或Fv)或抗體模擬物，諸如親和抗體(affibody)、域抗體(dAb)、奈米抗體、單抗體、DARPin、抗運載蛋白(anticalin)、萬能抗體(versabody)、雙運載蛋白(duocalin)、脂質運載蛋白(lipocalin)或高親和性多聚體(avimer)。

Z上若干不同反應性基團中之任一者可為偶聯位點，包括離胺酸殘基中之ε-胺基、側鏈碳水化合物部分、天冬胺酸或麩胺酸側鏈上之羧酸基、半胱胺酸-半胱胺酸二硫基及半胱胺酸硫醇基。適用於偶聯之抗體反應性基團之綜述參見例如Garnett,Adv. Drug Delivery Rev. 2001 , 53, 171-216及Dubowchik及Walker,Pharmacology & Therapeutics 1999 , 83, 67-123，其揭示內容以引用之方式併入本文中。

大部分抗體具有多個離胺酸殘基，該等殘基可經由其ε-胺基藉由醯胺、脲、硫脲或胺基甲酸酯鍵而偶聯。

可藉由若干方法使用半胱胺酸之側鏈中之硫醇(-SH)基來形成偶聯物。該硫醇基可用於在其與連接子上之硫醇基之間形成雙硫鍵。另一方法係經由其與連接子上之順丁烯二醯亞胺基之邁克爾加成反應(Michael addition)。

通常，儘管抗體具有半胱胺酸殘基，但其缺乏游離硫醇基，因為其所有半胱胺酸均形成鏈內或鏈間二硫鍵。為產生游離硫醇基，可還原天然二硫基。參見例如Packard等人，Biochemistry 1986 ,25 , 3548；King等人，Cancer Res. 1994 , 54, 6176；及Doronina等人，Nature Biotechnol. 2003 , 21, 778。或者，可藉由使抗體突變，用半胱胺酸取代另一胺基酸或將半胱胺酸插入多肽鏈中而引入具有游離-SH基團之半胱胺酸。參見例如Eigenbrot等人，US 7,521,541 B2 (2009)；Chilkoti等人，Bioconjugate Chem. 1994 ,5 , 504；Urnovitz等人，US 4,698,420 (1987)；Stimmel等人，J. Biol. Chem. 2000 , 275, 30445；Bam等人，US 7,311,902 B2 (2007)；Kuan等人，J. Biol. Chem. 1994 , 269, 7610；Poon等人，J. Biol. Chem. 1995 , 270, 8571；Junutula等人，Nature Biotechnology 2008 , 26, 925及Rajpal等人，2015年12月21日申請之美國臨時申請案第62/270245號。在另一方法中，將半胱胺酸添加至重鏈或輕鏈之C端。參見例如Liu等人，US 8,865,875 B2 (2014)；Cumber等人，J. Immunol. 1992 , 149, 120；King等人，Cancer Res. 1994 , 54, 6176；Li等人，Bioconjugate Chem. 2002 , 13, 985；Yang等人，Protein Engineering 2003 , 16, 761；及Olafson等人，Protein Engineering Design & Selection 2004 , 17, 21。此段落中引用之文獻的揭示內容以引用之方式併入本文中。 連接子及其組分

如上文所提及，連接子包含至多三個要素：可裂解基團C及視情況存在之間隔子X^Z 及X^D 。

基團C在生理條件下可裂解。較佳地，基團C在偶聯物處於血液循環中時相對穩定，但在偶聯物到達其預期作用位點後容易裂解。

較佳基團C為肽，其由目標細胞內之蛋白酶選擇性裂解，而不是由血清中之蛋白酶裂解。通常，肽包含1至20個胺基酸，較佳1至6個胺基酸，更佳2至3個胺基酸。胺基酸可為天然及/或非天然α-胺基酸。天然胺基酸為由遺傳密碼編碼之胺基酸以及衍生自其之胺基酸，例如羥基脯胺酸、γ-羧基麩胺酸、瓜胺酸及O-磷酸絲胺酸。在本說明書中，術語「胺基酸」亦包括胺基酸類似物及模擬物。類似物為具有天然胺基酸之相同通用H₂ N(R)CHCO₂ H結構，但R基團並非天然胺基酸中發現之基團的化合物。類似物之實例包括高絲胺酸、正白胺酸、甲硫胺酸-亞碸及甲硫胺酸甲基鋶。胺基酸模擬物為結構不同於α-胺基酸之通用化學結構，但以類似於α-胺基酸之方式起作用的化合物。胺基酸可具有遺傳編碼胺基酸之「L」立體化學以及對映異構「D」立體化學。

較佳地，C含有作為蛋白酶裂解識別序列之胺基酸序列。許多裂解識別序列為此項技術中已知的。參見例如Matayoshi等人Science 247: 954 (1990)；Dunn等人Meth. Enzymol . 241: 254 (1994)；Seidah等人Meth. Enzymol . 244: 175 (1994)；Thornberry,Meth. Enzymol. 244: 615 (1994)；Weber等人Meth. Enzymol. 244: 595 (1994)；Smith等人Meth. Enzymol. 244: 412 (1994)；及Bouvier等人Meth. Enzymol. 248: 614 (1995)；其揭示內容以引用之方式併入本文中。

基團C可經選擇以使得其由存在於癌症附近之細胞外基質中之蛋白酶裂解，例如由附近瀕死癌細胞所釋放之蛋白酶或由癌細胞所分泌之腫瘤相關蛋白酶裂解。例示性細胞外腫瘤相關蛋白酶為纖維蛋白溶酶、基質金屬蛋白酶(matrix metalloprotease，MMP)、甲拌磷寡肽酶(thimet oligopeptidase，TOP)及CD10。參見例如Trouet等人，US 7,402,556 B2 (2008)；Dubois等人，US 7,425,541 B2 (2008)；及Bebbington等人，US 6,897,034 B2 (2005)。組織蛋白酶D (通常為存在於細胞內部之溶酶體酶)有時存在於腫瘤環境中，有可能由死亡癌細胞釋放。

對於經設計以由酶裂解之偶聯物而言，C較佳包含經選擇以藉由諸如組織蛋白酶B、C、D、H、L及S (尤其組織蛋白酶B)之蛋白酶裂解的胺基酸序列。例示性組織蛋白酶B可裂解肽包括Val-Ala、Val-Cit、Val-Lys、Lys-Val-Ala、Asp-Val-Ala、Val-Ala、Lys-Val-Cit、Ala-Val-Cit、Val-Gly、Val-Gln及Asp-Val-Cit。(在本文中，除非上下文另有明確指示，否則胺基酸序列以N-至-C方向書寫，如同H₂ N-AA² -AA¹ -CO₂ H。)參見Dubowchik等人，Biorg. Med. Chem. Lett. 1998 , 8, 3341；Dubowchik等人，Bioorg. Med. Chem. Lett. 1998 , 8, 3347；及Dubowchik等人，Bioconjugate Chem. 2002 , 13, 855；其揭示內容以引用之方式併入。

可用於裂解肽基連接子之另一酶為豆莢蛋白，一種較佳在Ala-Ala-Asn處進行裂解之溶酶體半胱胺酸蛋白酶。

在一個實施例中，基團C為包含兩胺基酸序列-AA² -AA¹ -之肽，其中AA¹ 為離胺酸、精胺酸或瓜胺酸，且AA² 為苯丙胺酸、纈胺酸、丙胺酸、白胺酸或異白胺酸。在另一實施例中，C由具有一至三個胺基酸之序列組成，其選自由以下組成之群：Val-Cit、Ala-Val、Val-Ala-Val、Lys-Lys、Ala-Asn-Val、Val-Leu-Lys、Cit-Cit、Val-Lys、Ala-Ala-Asn、Lys、Cit、Ser及Glu。更佳地，C為前述群中之兩胺基酸肽至三胺基酸肽。

由單個胺基酸組成之可裂解基團C之製備及設計如Chen等人，US 8,664,407 B2 (2014)中所揭示，其揭示內容以引用的方式併入本文中。

基團C可直接鍵結至Z或D；亦即，間隔子X^Z 或X^D 視情況可不存在。

在存在時，間隔基X^Z 提供C與Z之間的空間分隔，以免前者在空間上干擾後者之抗原結合或後者在空間上干擾前者之裂解。此外，間隔基X^Z 可用於賦予偶聯物增加之溶解性或降低之凝集特性。間隔基X^Z 可包含一或多個模組區段，其可呈任何數目之組合組裝。間隔基X^Z 之適合區段之實例為：

，及其組合， 其中下標g為0或1，且下標h為1至24，較佳2至4。此等區段可組合，諸如如下所說明：

。

若存在，間隔基X^D 提供C與D之間的空間分隔，以免後者在空間上或電子學上干擾前者之裂解。間隔基X^D 亦可用於將其他分子量及化學官能基引入偶聯物中。一般而言，其他質量及官能基將影響偶聯物之血清半衰期及其他特性。因此，經由明智地選擇間隔基，可調節偶聯物之血清半衰期。間隔基X^D 亦可類似於上文關於間隔基X^Z 之描述由模組區段組裝。

間隔基X^Z 及/或X^D 在存在時較佳在Z與C或D與C之間分別提供4至25個原子，更佳4至20個原子之線性分隔。

除共價連接抗體與藥物以外，連接子可執行其他功能。舉例而言，連接子可含有聚(乙二醇) (「PEG」)基團。由於偶聯步驟通常涉及在水性介質中將藥物-連接子偶合至抗體，因此PEG基團可增加藥物-連接子之水溶解度。另外，PEG基團可增加所得ADC之溶解度或減少其凝集。若存在PEG基團，則可將其併入間隔基X^Z 或X^D 或兩者中。PEG基團中重複單元之數目可為2至20，較佳4至10。

間隔基X^Z 或X^D 或兩者可包含自我分解型部分。自我分解型部分為如下部分，其(1)鍵結至C以及Z或D中之一者，且(2)具有使得自基團C之裂解引發反應序列，從而使自我分解型部分自身視情況與Z或D脫離之結構。換言之，遠離Z或D之位點處之反應(自基團C之裂解)使得X^Z -Z或X^D -D鍵亦斷裂。在間隔基X^D 之情況下希望存在自我分解型部分，因為若在偶聯物裂解後間隔基X^D 或其一部分保持連接於D，則D之生物活性可能受損。在可裂解基團C為多肽的情形下尤其希望使用自我分解型部分，在此情況下自我分解型部分通常鄰近於該多肽定位，以防D在空間上或在電子學上干擾肽裂解。

鍵結至D之羥基或胺基的例示性自我分解型部分(i)-(v)如下所示：

。

自我分解型部分為點線a與b (或點線b與c)之間的結構，其中展示相鄰結構特徵以提供背景。自我分解型部分(i)及(v)鍵結至D-NH₂ (亦即經由胺基偶聯)，而自我分解型部分(ii)、(iii)及(iv)鍵結至D-OH (亦即經由羥基或羧基偶聯)。點線b處之鍵由酶(在結構(i)-(v)之情況下為肽酶且在結構(vi)之情況下為β-葡糖醛酸酶)裂解，引發自我分解型反應序列，從而引起點線a處之鍵裂解以及視情況D-OH或D-NH₂ 之隨後釋放。以說明之方式，結構(i)及(iv)之自我分解機制如下所示：

。

換言之，自我分解型基團之一個部分處之第一化學鍵的裂解引發一系列步驟，從而引起自我分解型基團之不同部分處之第二化學鍵(將自我分解型基團連接至藥物之化學鍵)裂解，從而釋放藥物。

在一些情況下，自我分解型基團可串聯使用，如結構(vii)所示。在此情況下，點線c處之裂解觸發點線b與c之間的部分藉由1,6-消除反應而自我分解，接著點線a與b之間的部分藉由環化-消除反應而自我分解。關於自我分解型部分之其他揭示案參見Carl等人，J. Med. Chem. 1981 , 24, 479；Carl等人，WO 81/01145 (1981)；Dubowchik等人，Pharmacology & Therapeutics 1999 , 83, 67；Firestone等人，US 6,214,345 B1 (2001)；Toki等人，J. Org. Chem. 2002 , 67, 1866；Doronina等人，Nature Biotechnology 2003 , 21, 778 (勘誤, 第941頁)；Boyd等人，US 7,691,962 B2；Boyd等人，US 2008/0279868 A1；Sufi等人，WO 2008/083312 A2；Feng, US 7,375,078 B2；Jeffrey等人，US 8,039,273；及Senter等人，US 2003/0096743 A1；其揭示內容以引用之方式併入。

在另一實施例中，Z與D藉由不可裂解連接子連接，亦即不存在C。D之代謝最終將連接子減小成不會干擾D之生物活性的較小附加部分。 偶聯技術

本文中所揭示之TLR7促效劑之偶聯物較佳藉由以下方式製得：首先製備包含D及連接子(X^D )_a (C)_c (X^Z )_b (其中X^D 、C、X^Z 、a、b及c如針對式(II)所定義)之化合物，以形成由式(V)表示之藥物-連接子化合物： D-(X^D )_a (C)_c (X^Z )_b -R³¹ (V) 其中R³¹ 為適於與抗體Z上之互補官能基反應形成偶聯物之官能基。適合基團R³¹ 之實例包括胺基、疊氮基、硫醇、環辛炔、

； 其中R³² 為Cl、Br、F、甲磺酸酯基或甲苯磺酸酯基，且R³³ 為Cl、Br、I、F、OH、-O-N-丁二醯亞胺基、-O-(4-硝基苯基)、-O-五氟苯基或-O-四氟苯基。通常可用於製備適合部分D-(X^D )_a C(X^Z )_b -R³¹ 之化學方法揭示於以下中：Ng等人，US 7,087,600 B2 (2006)；Ng等人，US 6,989,452 B2 (2006)；Ng等人，US 7,129,261 B2 (2006)；Ng等人，WO 02/096910 A1；Boyd等人，US 7,691,962 B2；Chen等人，US 7,517,903 B2 (2009)；Gangwar等人，US 7,714,016 B2 (2010)；Boyd等人，US 2008/0279868 A1；Gangwar等人，US 7,847,105 B2 (2010)；Gangwar等人，US 7,968,586 B2 (2011)；Sufi等人，US 8,461,117 B2 (2013)；及Chen等人，US 8,664,407 B2 (2014)；其揭示內容以引用之方式併入本文中。

較佳反應性官能基-R³¹ 為-NH₂ 、-OH、-CO₂ H、-SH、順丁烯二醯亞胺基、環辛炔、疊氮基(-N₃ )、羥基胺基(-ONH₂ )或N-羥基丁二醯亞胺基。尤其較佳之官能基-R³¹ 為：

。

-OH基團可用抗體上，例如天冬胺酸或麩胺酸側鏈上之羧基酯化。

-CO₂ H基團可用抗體上之-OH基團酯化或用抗體上(例如離胺酸側鏈上)之胺基醯胺化。

N-羥基丁二醯亞胺基為功能上活化之羧基且可便利地藉由與胺基(例如來自離胺酸)反應而醯胺化。

在邁克爾加成反應中，順丁烯二醯亞胺基可與抗體上之-SH基團(例如來自半胱胺酸或來自引入硫氫基官能基之抗體之化學修飾)偶聯。

若抗體不具有可用於偶聯之半胱胺酸-SH，則離胺酸殘基之側鏈中之ε-胺基可與2-亞胺基硫雜環戊烷或N-丁二醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(「SPDP」)反應以引入游離硫醇(-SH)基，從而實際上產生半胱胺酸替代物。硫醇基可與順丁烯二醯亞胺或其他親核試劑受體基團反應以實現偶聯。下方示出利用2-亞胺基硫雜環戊烷之機制。

通常，實現每個抗體二至三個硫醇之硫醇化水準。關於代表性程序，參見Cong等人，US 8,980,824 B2 (2015)，其揭示內容以引用之方式併入本文中。

在相反配置中，可用4-(順丁烯二醯亞胺基甲基)-環己烷甲酸N-丁二醯亞胺基酯(「SMCC」)或其磺酸化變異體磺酸基-SMCC (該兩者可購自Sigma-Aldrich)來修飾抗體Z，以向其中引入順丁烯二醯亞胺基。隨後，可使用連接子上具有-SH基團之藥物-連接子化合物來達成偶聯。

替代偶聯方法使用無銅「點擊化學法(click chemistry)」，其中將疊氮基添加在緊繃的環辛炔上，以形成1,2,3-三唑環。參見例如Agard等人，J. Amer. Chem. Soc. 2004 ,126 , 15046；Best,Biochemistry 2009 ,48 , 6571, 其揭示內容以引用之方式併入本文中。疊氮基可位於抗體上且環辛炔位於藥物-連接子部分上或反之亦然。較佳環辛炔基為二苯并環辛炔(DIBO)。具有DIBO基團之各種試劑可獲自Invitrogen/Molecular Probes, Eugene, Oregon。以下反應說明DIBO基團附接於抗體(Ab)之情況下的點擊化學法偶聯：

另一偶聯技術包括將非天然胺基酸引入抗體中，其中非天然胺基酸提供用於與藥物部分中之反應性官能基偶聯的官能基。舉例而言，非天然胺基酸對乙醯基苯丙胺酸可併入至抗體或其他多肽中，如Tian等人，WO 2008/030612 A2 (2008)中所教示。對乙醯基苯丙胺酸中之酮基可經由與連接子-藥物部分上之羥基胺基形成肟，而成為偶聯位點。或者，可將非天然胺基酸對疊氮基苯丙胺酸併入抗體中，得到疊氮基官能基，以供經由點擊化學法偶聯，如上所述。非天然胺基酸亦可使用無細胞方法而併入抗體或其他多肽中，如Goerke等人，US 2010/0093024 A1 (2010)及Goerke等人，Biotechnol. Bioeng.2009 , 102 (2), 400-416中所教示。前述揭示內容以引用的方式併入本文中。因此，在一個實施例中，用於製備偶聯物之抗體具有一或多個經非天然胺基酸置換之胺基酸，該非天然胺基酸較佳為對乙醯基苯丙胺酸或對疊氮基苯丙胺酸，更佳為對乙醯基苯丙胺酸。

另一偶聯技術使用酵素轉麩醯胺酸酶(較佳來自茂原鏈黴菌(Streptomyces mobaraensis )之細菌轉麩醯胺酸酶或BTG)，根據Jeger等人，Angew. Chem. Int. Ed. 2010 ,49 , 9995。BTG在麩醯胺酸之側鏈甲醯胺(胺受體)與伸烷基胺基(胺供體) (其可為例如離胺酸之ε-胺基或5-胺基-正戊基)之間形成醯胺鍵。在典型偶聯反應中，如下所示，麩醯胺酸殘基位於抗體上，而伸烷基胺基位於連接子-藥物部分上：

麩醯胺酸殘基位於多肽鏈上對其對BTG介導之轉醯胺作用之敏感性具有很大影響。抗體上之麩醯胺酸殘基通常均不為BTG受質。然而，若抗體去糖基化，糖基化位點為重鏈之天冬醯胺297 (N297；根據如Kabat等人，「Sequences of proteins of immunological interest」, 第5版, 公開案第91-3242號, U.S. Dept. Health & Human Services, NIH, Bethesda, Md., 1991；下文簡稱「Kabat」中所闡述之EU索引進行編號)，則鄰近的麩醯胺酸295 (Q295)呈現對BTG敏感。抗體可藉由用PNGase F (肽-N-糖苷酶F)酶促去糖基化。或者，抗體可藉由在恆定區中引入N297A突變而以無糖苷之形式合成，從而消除N297糖基化位點。此外，已證實N297Q取代不僅消除糖基化，且亦引入同樣為胺受體之第二麩醯胺酸殘基(位置297)。由此，在一個實施例中，抗體去糖基化。在另一實施例中，抗體具有N297Q取代。熟習此項技術者將瞭解，藉由合成後修飾或藉由引入N297A突變進行之去糖基化使每個抗體產生兩個BTG反應性麩醯胺酸殘基(每條重鏈一個，在位置295處)，而具有N297Q取代之抗體具有四個BTG反應性麩醯胺酸殘基(每條重鏈兩個，在位置295及297處)。

藉由向抗體中引入含有麩醯胺酸之肽或「標籤」，亦可使抗體對BTG介導之偶聯敏感，例如Pons等人，US 2013/0230543 A1 (2013)及Rao-Naik等人，WO 2016/144608 A1中所教示。

在補充方法中，可藉由改變BTG之胺基酸序列，使得其變得能夠與未經修飾抗體中之麩醯胺酸295反應來改變其受質特異性，如Rao-Naik等人，WO 2017/059158 A1 (2017)中所教示。

雖然最常用之細菌性轉麩醯胺酸酶為來自茂原鏈黴菌之細菌性轉麩醯胺酸酶，但亦可考慮來自受質特異性略微不同的其他細菌之轉麩醯胺酸酶，諸如來自拉達卡鏈輪絲菌(Streptoverticillium ladakanum )之轉麩醯胺酸酶(Hu等人，US 2009/0318349 A1 (2009)、US 2010/0099610 A1 (2010)及US 2010/0087371 A1 (2010))。

具有一級或二級烷基胺之本發明TLR7促效劑尤其適用於偶聯物中，因為二級胺提供用於附接連接子之官能基。此類TLR7促效劑-連接子化合物之實例為化合物41 ，其含有酶促可裂解連接子。圖 15 展示製備化合物41 可根據之流程。

含有非酶促可裂解連接子之TLR7促效劑-連接子化合物之實例為化合物43 。圖 16 展示合成化合物43 之方式。

化合物41 及43 均含有一級烷基胺基，使得其能夠與轉麩醯胺酸酶偶聯。下文實例中描述適合的偶聯步驟。

亦可使用酶分選酶A實現偶聯，如以下中所教示：Levary等人，PLoS One 2011 , 6(4), e18342；Proft,Biotechnol. Lett. 2010 , 32, 1-10；Ploegh等人，WO 2010/087994 A2 (2010)；及Mao等人，WO 2005/051976 A2 (2005)。分選酶A識別基元(通常LPXTG，其中X為任何天然胺基酸)可位於配位體Z上，且親核性受體基元(通常GGG)可為式(III) 中之基團R³¹ ，或反之亦然。 TLR7促效劑偶聯物

應用前述技術，可製備諸如下方所示出之TLR7促效劑偶聯物：

偶聯物1

偶聯物2 其中m為1、2、3或4，且Ab為抗體。 聚乙二醇化

將聚(乙二醇) (PEG)鏈附接至藥物(「聚乙二醇化」)可改良藥物之藥物動力學特性。藥物之循環半衰期增加，有時增加超過一個數量級，同時降低實現所要治療作用所需之劑量。聚乙二醇化亦可減少藥物之代謝降解且降低其免疫原性。關於綜述，參見Kolate等人，J. Controlled Release 2014 , 192, 167。

聚乙二醇化最初應用於生物藥物。截至2016年，已批准超過十種聚乙二醇化生物製劑。Turecek等人，J. Pharmaceutical Sci. 2016 , 105, 460。最近，受該概念成功應用於生物製劑之刺激，人們注意力已轉向其應用於小分子藥物。除前述益處外，聚乙二醇化小分子藥物可具有增加之溶解性且引起較少毒性作用。Li等人Prog. Polymer Sci. 2013 , 38, 421。

本文所揭示之化合物可聚乙二醇化。在化合物具有脂族一級或二級胺或脂族羥基之情況下，諸如下文所展示之化合物之情況(箭頭)，其可利用諸如二環己基碳化二亞胺、HATU、N-羥基丁二醯亞胺酯及其類似物之習知技術，經由酯、醯胺、碳酸酯或胺基甲酸酯基進行聚乙二醇化。用於對醫藥分子進行聚乙二醇化之多種其他方法揭示於Alconcel等人，Polymer Chem . 2011 , 2, 1442中，其揭示內容以引用之方式併入本文中。

視需要，本文中所揭示之TLR7促效劑可經由包含自我分解型部分之酶促可裂解連接子來聚乙二醇化，從而允許未經聚乙二醇化之促效劑以設計之方式釋放。此外，若含有PEG之分子具有適用於附接至蛋白質之官能基(諸如胺)，則聚乙二醇化可與同蛋白質(諸如抗體)之偶聯組合。蛋白質可提供額外治療功能，或在抗體之情況下可提供靶向功能。在下方反應序列中示出此等概念，其中TLR7-NH-R通常表示TLR7促效劑：

在上述反應序列中，纈胺酸-瓜胺酸(Val-Cit)二肽可藉由組織蛋白酶B裂解，其中對胺基苯甲基氧基羰基(PABC)充當自我分解型間隔基。用於偶聯之官能基為胺基，其暫時受Fmoc基團保護。偶聯由轉麩醯胺酸酶實現，其中麩醯胺酸(Gln)側鏈充當醯基受體。視聚乙二醇化之目的而定，表示PEG重複單元之數目的下標x可廣泛變化，如下文所論述。出於一些目的，x可相對較小，諸如2、4、8、12或24。出於其他目的，x較大，例如在約45與約910之間。

熟習此項技術者將瞭解，該序列為說明性的，且可使用如此項技術中所熟知的其他要素(肽、自我分解型基團、偶聯方法、PEG長度等)。熟習此項技術者亦將瞭解，雖然上述序列組合聚乙二醇化與偶聯，但聚乙二醇化不需要偶聯，且反之亦然。

當化合物缺乏脂族羥基或脂族一級或二級胺時，其仍可在嘧啶環上之芳族胺處進行聚乙二醇化。在該位置處進行聚乙二醇化之方法由Zarraga, US 2017/0166384 A1 (2007)揭示，其揭示內容以引入之方式併入。

在一些實施例中，可能需要單個分子中連接有多個聚乙二醇化促效劑。舉例而言，可在季戊四醇(C(CH₂ OH)₄ )上構築四個聚乙二醇化臂，且TLR7促效劑可附接至各聚乙二醇化臂。參見Gao等人，US 2013/0028857 A1(2013)，其揭示內容以引用之方式併入。

為了調節藥物動力學，通常較佳地，PEG部分之分子量在約2 kDa (對應於約45個-(CH₂ CH₂ O)-重複單元)與約40 kDa (對應於約910個-(CH₂ CH₂ O)-重複單元)之間，更佳在約5 kDa與約20 kDa之間。亦即，上式中下標x之範圍為約45至約910。應瞭解，PEG組合物並非100%均質的，而是顯示出分子量之分佈。因此，提及例如「20 kDa PEG」意謂PEG具有20 kDa之平均分子量。

聚乙二醇化亦可用於提高促效劑之溶解性。在此等情況下，可使用較短PEG鏈，例如包含2個、4個、8個、12個或24個重複單元。 醫藥組合物及投與

在另一態樣中，提供一種醫藥組合物，其包含如本文所揭示之化合物或其偶聯物，該化合物或其偶聯物與醫藥學上可接受之載劑或賦形劑一起調配。其可視情況含有一或多種額外醫藥學上活性成分，諸如生物藥物或小分子藥物。醫藥組合物可呈與另一治療劑、尤其抗癌劑之組合療法形式投與。

醫藥組合物可包含一或多種賦形劑。可使用之賦形劑包括載劑、表面活性劑、增稠劑或乳化劑、固體黏合劑、分散或懸浮助劑、增溶劑、著色劑、調味劑、塗層、崩解劑、潤滑劑、甜味劑、防腐劑、等張劑及其組合。適合賦形劑之選擇及使用教示於Gennaro編,Remington : The Science and Practice of Pharmacy , 第20版 (Lippincott Williams & Wilkins 2003)中。

較佳地，醫藥組合物適用於靜脈內、肌肉內、皮下、非經腸、經脊椎或表皮投與(例如藉由注射或輸注)。視投與途徑而定，活性化合物可包覆於材料中以使其免受酸及可使其不活化之其他天然條件之作用。片語「非經腸投與」意謂除腸內及表面投與以外，通常藉由注射進行之投與模式，且包括(但不限於)靜脈內、肌肉內、動脈內、鞘內、囊內、眶內、心內、皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蛛膜下、脊柱內、硬膜外及胸骨內注射及輸注。或者，醫藥組合物可經由非經腸途徑投與，諸如表面、表皮或黏膜投與途徑，例如經鼻內、經口、經陰道、經直腸、經舌下或局部。

醫藥組合物可呈無菌水溶液或分散液之形式。其亦可調配於微乳劑、脂質體或適合於實現高藥物濃度之其他有序結構中。組合物亦可呈凍乾物形式提供以在投與前於水中復原。

可與載劑材料組合產生單一劑型之活性成分之量視所治療個體及特定投與模式而變化，且一般為組合物產生治療作用之量。一般而言，以100%計，此量將在約0.01%至約99%活性成分，較佳在約0.1%至約70%、最佳約1%至約30%活性成分範圍內，與醫藥學上可接受之載劑組合。

劑量方案經調節以提供治療反應。舉例而言，可投與單次劑量，可隨時間投與若干分次劑量，或可按情形之緊急狀態所指示，按比例減少或增加劑量。就投與容易性及劑量均一性而言，尤其宜以單位劑型調配非經腸組合物。「單位劑型」係指適合作為單一劑量用於欲治療個體之物理離散單位；各單位含有經計算以產生所要治療反應的預定量之活性化合物以及所要醫藥載劑。

劑量在每千克主體體重約0.0001至100 mg範圍內，且更通常每千克0.01至5 mg範圍內。舉例而言，劑量可為每千克體重0.3 mg、每千克體重1 mg、每千克體重3 mg、每千克體重5 mg或每千克體重10 mg或在1-10 mg/kg或者0.1-5 mg/kg範圍內。例示性治療方案為每週投與一次、每兩週一次、每三週一次、每四週一次、一個月一次、每3個月一次或每三至6個月一次。較佳劑量方案包括每千克體重1 mg或每千克體重3 mg，經由靜脈內投與且使用一種以下給藥時程：(i)每四週六次劑量，隨後為每三個月；(ii)每三週；(iii)投與每千克體重3 mg一次，繼而每三週投與每千克體重1 mg。在一些方法中，調節劑量以達到約1-1000 μg/mL之血漿抗體濃度，且在一些方法中達到約25-300 μg/mL。

「治療有效量」之本發明化合物較佳使得疾病症狀之嚴重性降低、無疾病症狀期之頻率或持續時間增加或預防疾病病痛所致之損傷或失能。舉例而言，為治療身患腫瘤之個體，「治療有效量」相對於未經治療之個體較佳抑制腫瘤生長達至少約20%，更佳至少約40%、甚至更佳至少約60%且再更佳至少約80%。治療有效量之治療化合物可降低腫瘤大小或者改善個體之症狀，該個體通常為人類但可為其他哺乳動物。在組合治療中投與兩種或兩種以上治療劑時，「治療有效量」係指組合作為整體，而非單獨各藥劑之功效。

醫藥組合物可為控制釋放或持續釋放之調配物，包括植入物、經皮貼片及微膠囊化遞送系統。可使用生物可降解之生物相容性聚合物，諸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、膠原蛋白、聚原酸酯及聚乳酸。參見例如Sustained and Controlled Release Drug DeliverySystems , J.R. Robinson編, Marcel Dekker, Inc., New York, 1978。

治療性組合物可經由醫學裝置投與，諸如(1)無針皮下注射裝置；(2)微輸注泵；(3)經皮裝置；(4)輸注裝置；及(5)滲透裝置。

在某些實施例中，醫藥組合物可經調配以確保活體內適當分佈。舉例而言，為確保本發明之治療化合物跨越血腦障壁，其可調配於脂質體中，脂質體可另外包含靶向部分以提高向特定細胞或器官之選擇性傳輸。 工業應用性

本文所揭示之TLR7促效劑化合物可用於治療可藉由TLR7活化來改善之疾病或病狀。

在一個實施例中，TLR7促效劑與抗癌免疫治療劑(亦稱為免疫腫瘤學藥劑)組合使用。抗癌免疫治療劑藉由刺激身體免疫系統攻擊及摧毀癌細胞，尤其經由活化T細胞起作用。免疫系統具有許多檢查點(調節)分子，幫助維持其合理攻擊目標細胞與防止其攻擊健康正常細胞之間的平衡。一些為刺激劑(上調劑)，意謂其加入促進T細胞活化且增強免疫反應。其他為抑制劑(下調劑或閘)，意謂其加入抑制T細胞活化且減少免疫反應。促效免疫治療劑與刺激性檢查點分子之結合可引起後者活化且增強針對癌細胞之免疫反應。相反地，拮抗性免疫治療劑與抑制性檢查點分子之結合可防止後者下調免疫系統且幫助維持對癌細胞之劇烈反應。刺激性檢查點分子之實例為B7-1、B7-2、CD28、4-1BB (CD137)、4-1BBL、ICOS、CD40、ICOS-L、OX40、OX40L、GITR、GITRL、CD70、CD27、CD40、DR3及CD28H。抑制性檢查點分子之實例為CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、LAG-3、TIM-3、半乳糖凝集素9、CEACAM-1、BTLA、CD69、半乳糖凝集素-1、CD113、GPR56、VISTA、2B4、CD48、GARP、PD1H、LAIR1、TIM-1、CD96及TIM-4。

無論抗癌免疫治療劑採用哪種作用模式，其有效性可藉由免疫系統之總體上調，諸如藉由TLR7之活化來提高。因此，在一個實施例中，本說明書提供一種治療癌症之方法，其包含向患有該癌症之患者投與治療有效的抗癌免疫治療劑與如本文中所揭示之TLR7促效劑之組合。投與時序可為同時、依序或交替的。投與模式可為全身或局部的。TLR7促效劑可以靶向方式經由偶聯物遞送。

可藉由如上文所描述之組合治療之癌症包括急性骨髓白血病、腎上腺皮質癌、卡堡氏肉瘤(Kaposi sarcoma)、淋巴瘤、肛門癌、闌尾癌、畸胎樣/橫紋肌樣瘤、基底細胞癌、膽管癌、膀胱癌、骨癌、腦癌、乳癌、支氣管瘤、類癌瘤、心臟腫瘤、子宮頸癌、脊索瘤、慢性淋巴細胞白血病、慢性骨髓增生性贅瘤、結腸癌、結腸直腸癌、顱咽管瘤、膽管癌、子宮內膜癌、室管膜瘤、食道癌、敏感性神經胚細胞瘤、尤文氏肉瘤(Ewing sarcoma)、眼癌、輸卵管癌、膽囊癌、胃腸道類癌瘤、胃腸道基質腫瘤、生殖細胞腫瘤、毛細胞白血病、頭頸癌、心臟癌、肝癌、下咽癌(hypopharngeal cancer)、胰臟癌、腎癌、喉癌、慢性骨髓性白血病、唇腔癌、肺癌、黑素瘤、梅克爾細胞(Merkel cell)癌、間皮瘤、口腔癌、口部癌、骨肉瘤、卵巢癌、陰莖癌、咽癌、前列腺癌、直腸癌、唾液腺癌、皮膚癌、小腸癌、軟組織肉瘤、睪丸癌、咽喉癌、甲狀腺癌、尿道癌、子宮癌、陰道癌及外陰癌。

可用於如本文所揭示之組合療法中的抗癌免疫治療劑包括：AMG 557、AMP-224、阿特珠單抗(atezolizumab)、艾維路單抗(avelumab)、BMS 936559、賽咪單抗(cemiplimab)、CP-870893、達西珠單抗(dacetuzumab)、德瓦魯單抗(durvalumab)、伊諾貝利珠(enoblituzumab)、加利昔單抗(galiximab)、IMP321、伊匹單抗(ipilimumab)、魯卡木單抗(lucatumumab)、MEDI-570、MEDI-6383、MEDI-6469、莫羅單抗(muromonab)-CD3、尼魯單抗(nivolumab)、派姆單抗、皮立珠單抗(pidilizumab)、斯帕塔利單抗(spartalizumab)、曲美木單抗(tremelimumab)、烏瑞魯單抗(urelumab)、烏圖木單抗(utomilumab)、瓦力單抗(varlilumab)、萬利珠單抗(vonlerolizumab)。下表A列舉其替代名稱(品牌名稱、曾用名稱、研究代碼或同義詞)及對應目標檢查點分子。

在利用TLR7促效劑之組合治療之一個實施例中，抗癌免疫治療劑為拮抗性抗CTLA-4、抗PD-1或抗PD-L1抗體。癌症可為肺癌(包括非小細胞肺癌)、胰臟癌、腎癌、頭頸癌、淋巴瘤(包括霍奇金氏淋巴瘤)、皮膚癌(包括黑素瘤及梅克爾皮膚癌)、尿道上皮癌(包括膀胱癌)、胃癌、肝細胞癌或結腸直腸癌。

在利用TLR7促效劑之組合治療之另一實施例中，抗癌免疫治療劑為拮抗性抗CTLA-4抗體，較佳伊匹單抗。

在利用TLR7促效劑之組合治療之另一實施例中，抗癌免疫治療劑為拮抗性抗PD-1抗體，較佳納武單抗或派立珠單抗。

本文中所揭示之TLR7促效劑亦適用作疫苗佐劑。 生物活性

本文所揭示之作為TLR7促效劑之化合物的生物活性可藉由以下程序分析。 人類TLR7促效劑活性分析

此程序描述一種用於分析本說明書中所揭示之化合物之人類TLR7 (hTLR7)促效活性的方法。

將經工程改造之具有人類TLR7分泌性胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)報導轉殖基因的人類胚胎腎藍色細胞(HEK-Blue^TM TLR細胞；Invivogen)懸浮於非選擇性培養基(DMEM高葡萄糖(Invitrogen)，其補充有10%胎牛血清(Sigma))中。將HEK-Blue™ TLR7細胞添加至384孔組織培養盤之各孔(每孔15,000個細胞)中，且在37℃、5% CO₂ 下培育16-18小時。將化合物(100 nl)施配至含有HEK-Blue™ TLR細胞之孔中，且將經處理之細胞在37℃、5% CO₂ 下進行培育。在處理18小時之後，將十微升之新鮮製備之Quanti-Blue^TM 試劑(Invivogen)添加至各孔中，培育30分鐘 (37℃，5% CO₂ )且使用Envision盤式讀取器(OD=620 nm)量測SEAP含量。計算半數最大有效濃度值(EC₅₀ ；誘導分析基線與最大值之間一半反應的化合物濃度)。 人類血液中I型干擾素基因(MX-1)及CD69之誘導

I型干擾素(IFN) MX-1基因及B細胞活化標記物CD69之誘導係在TLR7路徑活化後發生之下游事件。以下為一種人類全血分析，量測其回應於TLR7促效劑之誘導。

自人類個體收集肝素化人類全血，且用1 mM之測試TLR7促效劑化合物處理。用RPMI 1640培養基稀釋血液且使用Echo每孔預點10 nL，得到最終濃度1 μM (10 μL血液中10 nL)。在震盪器上混合30秒之後，將盤覆蓋且置放於37℃腔室中維持隔夜=17小時。製備固定/溶解緩衝液(H₂ O中5×-＞1×，在37℃下加溫；目錄#BD 558049)且保存perm緩衝液(在冰上)以備後續使用。

對於表面標記物染色(CD69)：製備之表面Ab：0.045 μl hCD14-FITC (ThermoFisher目錄號MHCD1401) + 0.6 μl hCD19-ef450 (ThermoFisher目錄號48-0198-42) + 1.5 μl hCD69-PE (目錄號BD555531) + 0.855 μl FACS緩衝液。添加3微升/孔，旋轉1000 rpm 1分鐘且在震盪器上混合30秒，置於冰上30分鐘。在30分鐘之後用70 μL預先升溫之1×固定/溶解緩衝液停止刺激且使用Feliex mate再懸浮(15次，換掉各培養盤之尖端)且在37℃下培育10分鐘。

以2000 rpm離心5分鐘，用HCS盤式洗滌器抽吸，在震盪器上混合30秒，接著用dPBS中70 μL洗滌且粒化2次(2000 rpm持續5分鐘)且50 μl於FACS緩衝液中洗滌，粒化1次(2000 rpm持續5分鐘)。在震盪器上混合30秒。對於細胞內標記物染色(MX-1)：添加50 μl BD Perm緩衝液III且在震盪器上混合30秒。在冰上培育30分鐘(在黑暗中)。用50 μL FACS緩衝液洗滌2次(在perm之後2300 rpm旋轉5分鐘)，隨後在震盪器上混合30秒。使其再懸浮於20 μl FACS緩衝液中，該FACS緩衝液含有MX1抗體()(4812)-Alexa 647: Novus Biologicals #NBP2-43704AF647) 20 μl FACS bf + 0.8 μl hIgG + 0.04 μl MX-1。在1000 rpm下旋轉1分鐘，在震盪器上混合30秒且在室溫下在黑暗中培育樣品45分鐘，隨後FACS緩衝液洗滌2次(在perm之後2300 rpm旋轉5分鐘)。再懸浮於20 μl (每孔總共35 μL) FACS緩衝液中且用箔片覆蓋且置放於4℃下以第二天讀取。在iQuePlus上讀取盤。將結果載入工具集中且在曲線主控中產生IC50曲線。y軸100%設定成1 μM瑞喹莫特(resiquimod)。 小鼠血液中之TNF-α及I型IFN反應基因之誘導

TNF-α及I型IFN反應基因之誘導係在TLR7路徑活化後發生之下游事件。以下為量測小鼠全血中其回應於TLR7促效劑之誘導之分析。

用具有Pen-Strep之RPMI 1640培養基以5:4 (50 μL全血及40 μL培養基)之比率稀釋肝素化小鼠全血。將90 μL體積之經稀釋血液轉移至Falcon平底96孔組織培養盤之孔中，且在4℃下培育盤1小時。在用於濃度反應分析之相同培養基中將含測試化合物之100% DMSO儲備液稀釋20倍，且隨後將10 μL經稀釋之測試化合物添加至孔中，以使得最終DMSO濃度為0.5%。對照孔接受含有5% DMSO之10 μL培養基。隨後在5% CO₂ 培育箱中在37℃下培育盤17小時。培育之後，向各孔中添加100 μL培養基。將培養盤離心且移除130 μL上清液，用於ELISA (Invitrogen，目錄號88-7324，Thermo-Fisher Scientific)對TNFa產生之分析中。將70 μL體積的來自Invitrogen mRNA Catcher Plus套組(目錄號K1570-02)之具有DTT之mRNA catcher溶解緩衝液(1×)添加至孔中之剩餘70 μL樣品中，且藉由上下吸液5次將其混合。隨後在室溫下震盪培養盤5-10分鐘，隨後向各孔中添加2 μL蛋白酶K (20 mg/mL)。接著在室溫下震盪培養盤15-20分鐘。隨後將培養盤儲存在80℃下直至進一步處理。

將冷凍樣品解凍且根據製造商之說明使用Invitrogen mRNA Catcher Plus套組(目錄號K1570-02)提取mRNA。使用Invitrogen SuperScript IV VILO Master Mix (目錄號11756500)用來自RNA提取之一半產量mRNA在20 μL反轉錄酶反應中合成cDNA。使用來自ThermoFisher (Applied Biosystems)之QuantStudio Real-Time PCR系統進行TaqMan®即時PCR。使用針對小鼠IFIT1、IFIT3、MX1及PPIA基因表現及TaqMan Master Mix之商業預先設計之TaqMan分析法一式兩份地操作所有即時PCR反應。PPIA用作管家基因。遵循來自製造商之建議。藉由平均管家基因(Ct)標準化所有原始資料(Ct)，且接著利用比較Ct (ΔΔCt)方法定量相對基因表現(RQ)用於實驗分析。 一般程序

以下一般程序用於液相層析(製備型或分析型)及核磁共振。 液相層析法

除非另外指出，否則以下通用條件用於高壓液相層析(HPLC)純化或用於液相層析-質譜分析(LC-MS)：製備型 HPLC / MS 條件 A - 1 ： 管柱：XBridge C18，200 mm×19 mm，5 μm粒子；移動相A：具有0.05%三氟乙酸之5:95乙腈:水；移動相B：具有0.05%三氟乙酸之95:5乙腈:水；梯度：保持在0% B下0分鐘，0-40% B經20分鐘，接著在100% B下保持0分鐘；流動速率：20 mL/min；管柱溫度：25℃。製備型 HPLC / MS 條件 A - 2 ： 管柱：XBridge C18，200 mm×19 mm，5 μm粒子；移動相A：具有10 mM乙酸銨之5:95乙腈:水；移動相B：具有10 mM乙酸銨之95:5乙腈:水；梯度：在7% B下保持0分鐘，7-47% B經20分鐘，接著在100% B下保持0分鐘；流動速率：20 mL/min；管柱溫度：25℃。製備型 HPLC / MS 條件 A - 3 ： 管柱：XBridge Shield RP18 OBD管柱，19×150 mm，5 µm；移動相A：具有0.05% TFA之水；移動相B：具有0.05% TFA之乙腈；流動速率：18.9 mL/min；梯度：0% B持續2分鐘，0-35% B持續20分鐘，100% B持續3分鐘；偵測器，UV 254/210 nm；管柱溫度：25℃。LC / MS 條件 B ： 管柱：Aquity UPLC BEH C18，2.1 mm×50 mm，1.7 µm粒子；移動相A：具有0.05% TFA之100%水；移動相B：具有0.05% TFA之100%乙腈；梯度：2% B至98% B經1分鐘，接著98% B下保持0.50分鐘；流速：0.8 mL/min。LC / MS 條件 C ： 管柱：Waters XBridge C18，2.1 mm×50 mm，1.7 μm粒子；移動相A：具有0.1%三氟乙酸之5:95乙腈:水；移動相B：具有0.1%三氟乙酸之95:5乙腈:水；溫度：50℃；梯度：0% B至100% B經3分鐘，接著100% B下保持0.50分鐘；流速：1 mL/min；偵測：MS及UV (220 nm)。LC / MS 條件 D ： LC/MS條件：管柱：Aquity UPLC BEH C18，2.1 mm×50 mm，1.7 µm粒子；移動相A：具有10 mM NH₄ OH之95:5水:乙腈；移動相B：具有10 mM NH₄ OH之95:5乙腈:水；梯度：5% B至95% B經1分鐘，接著95% B下保持0.50分鐘；流速：0.8 mL/min至95% B，經1分鐘，接著在95% B下保持0.50分鐘；流速：0.8 mL/min。LC / MS 條件 E ： LC/MS條件：管柱：Waters XBridge C18，2.1 mm×50 mm，1.7 μm粒子；移動相A：含0.1% TFA之水；移動相B：具有0.1% TFA之乙腈；溫度：40℃；梯度：5% B至95% B經2.6分鐘，接著在95% B下保持0.20分鐘；流動速率：0.6 mL/min。 NMR

以下條件用於獲得質子核磁共振(NMR)譜：在400 Mz或500 Mhz Bruker儀器中使用DMSO-d6或CDCl₃ 作為溶劑及內標獲取NMR譜。藉由ADC Labs或MestReNova軟體使用2015-01版本ACD Spectrus分析粗NMR資料。

化學位移以自內部四甲基矽烷(TMS)低場百萬分率(ppm)或由氘化NMR溶劑推斷之TMS位置報導。表觀多峰性報導如下：單峰-s、二重峰-d、三重峰-t、四重峰-q或多重峰-m。顯示變寬之峰值進一步表示為br。積分為近似的。應注意，積分強度、峰形、化學位移及耦合常數可視溶劑、濃度、溫度、pH值及其他因素而定。此外，在NMR譜中與水或溶劑峰重疊或與水或溶劑峰交換之峰無法提供可靠積分強度。在一些情況下，NMR譜可使用水峰抑制來獲得，水峰抑制可引起重疊峰不可見或具有改變之形狀及/或積分。 合成

可參考以下實例進一步理解本發明之實踐，其係以說明方式提供且不意謂限制。

一般而言，本文所揭示之程序製備區位異構體之混合物，該等區位異構體在吡唑并嘧啶環系統之1H 或2H 位置處烷基化(其亦分別稱為N1及N2區位異構體，暗指烷基化之氮)。在圖式中，為方便起見，有時未展示N2區位異構體，但應瞭解，其存在於初始產物混合物中且例如藉由製備型HPLC在稍後時間分離。

區位異構體之混合物可在合成之初期分離且剩餘合成步驟用1H 區位異構體進行，或者，可攜帶區位異構體之混合物進行合成且按需要在後期實現分離。 程序1-根據圖1之化合物

此程序及隨附圖 1 說明製備本文所揭示之化合物之方法，使用化合物800 作為範例。

化合物 3 . 用乙酸(8.11 mL，142 mmol)處理含4-胺基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯2 (4 g，28.3 mmol)及4-(2,3-雙(甲氧羰基)胍基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯1 之甲醇(50 mL)，此時形成沈澱。將反應混合物攪拌隔夜。添加甲醇鈉(64.8 mL，283 mmol)且繼續攪拌隔夜。LCMS顯示反應完成。藉由緩慢添加乙酸將pH值調節至5，由此形成沈澱，用水及隨後乙腈洗滌且乾燥，得到5.2 g呈灰白色固體狀之化合物3 。LCMS ESI: C₇ H₇ N₅ O₃ 計算值=210.16(M+H⁺ ), 實驗值210.0(M+H⁺ )。

化合物 4 . 用BOP (5 g，11 mmol)緩慢處理含化合物3 (2 g，9.56 mmol)、丁-1-胺(1.8 mL，9 mmol)及DBU (1.6 mL，10 mmol)之DMSO (10 mL)。在60℃下加熱反應混合物2小時，此時LCMS顯示反應完成。在逆相COMBIFLASH^TM 設備上，使用80 g C-18管柱，用0-100%乙腈/水(0.1%甲酸)溶離來直接純化反應物，得到呈白色固體狀之化合物4 。LCMS ESI: C₁₁ H₁₆ N₆ O₂ 計算值=265.28(M+H⁺ ), 實驗值265.2(M+H⁺ )。¹ H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ 8.02 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 1.74 - 1.66 (m, 2H), 1.49 - 1.38 (m, 2H), 1.25 (s, 1H), 0.95 (t,J = 7.4 Hz, 3H)。

化合物 6 .將4-(溴甲基)-2-甲氧基苯甲酸甲酯5 (1 g，3.86 mmol)及環丁胺5a (0.659 mL，7.72 mmol)於DMF (2 mL)中之混合物在70℃下加熱30分鐘，此時LCMS顯示形成胺產物。蒸發過量鹼且添加休尼格氏鹼(Hunig's Base) (1.348 mL，7.72 mmol)，隨後添加Boc-酐(0.896 mL，3.86 mmol)。LCMS顯示反應完成。蒸發溶劑且粗產物藉由COMBIFLAS^TM 設備使用EtOAc/己烷純化，得到0.82 g呈無色油狀之所要產物6 。LCMS ESI: C₁₉ H₂₇ NO₅ 計算值=350.42 (M+H⁺ ), 實驗值350.1 (M+H⁺ )。

化合物 7 . 在0℃下將化合物6 (0.82 g，2.347 mmol)於THF (5 mL)中之溶液用LiAlH₄ (2 M於THF中，1.173 mL，2.347 mmol)緩慢處理且攪拌30分鐘，此時LCMS顯示反應完成。藉由緩慢添加甲醇淬滅反應且與羅謝爾鹽(Rochelle salt)溶液一起攪拌2小時。分離有機層且粗產物7 在COMBIFLAS^TM 設備上使用EtOAc/己烷、矽膠管柱純化。LCMS ESI: C₁₈ H₂₇ NO₄ 計算值=322.41 (M+H⁺ ), 實驗值322.1 (M+H⁺ )。

化合物 8 及 9 . 化合物4 (100 mg，0.378 mmol)、化合物7 (182 mg，0.568 mmol)及三苯基膦(248 mg，0.946 mmol)於THF (3 mL)中之混合物經5分鐘用DIAD (0.110 mL，0.568 mmol)緩慢處理且在室溫下在N₂ 下攪拌30分鐘，此時LCMS顯示反應完成。蒸發溶劑且在逆相COMBIFLASH^TM 設備上使用80 g C-18管柱用0-100%乙腈/水(1 mM TEAA)溶離來純化粗產物，得到呈白色固體狀之化合物8 與9 之混合物。LCMS ESI: C₂₉ H₄₁ N₇ O₅ 計算值: 566.69 (M-H⁺ ), 實驗值566.3 (M-H⁺ )。

異構體藉由對掌性超臨界流體層析使用以下條件進行分離：管柱：Kromasil 5-CelluCoat，21×250 mm，5微米，移動相：15% MeOH-DEA/85% CO₂ ，流動條件：45 mL/min，150巴，40℃，偵測器波長：230 nm，注射細節：0.5 mL，於MeOH中約25 mg/mL，得到17 mg化合物8 及25 mg化合物9 。化合物 8 之分析資料 ： ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 9.61 (s, 2H), 7.86 (s, 2H), 6.94 (s, 2H), 6.83 (s, 2H), 6.63 (d,J = 7.9 Hz, 2H), 6.51 (d,J = 7.5 Hz, 2H), 5.69 (s, 4H), 4.39 (s, 4H), 3.79 (s, 6H), 3.63 (s, 6H), 3.48 (d,J = 6.2 Hz, 4H), 3.33 (s, 20H), 3.18 (d,J = 5.3 Hz, 1H), 2.05 - 1.95 (m, 8H), 1.53 (t,J = 7.5 Hz, 7H), 1.35 (s, 11H), 1.23 (q,J = 7.2 Hz, 6H), 0.86 (t,J = 7.4 Hz, 6H)。化合物 9 之分析資料 ： ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 9.37 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 6.90 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 6.71 (d,J = 7.7 Hz, 1H), 5.48 (s, 2H), 4.42 (s, 3H), 3.78 (d,J = 18.0 Hz, 4H), 3.69 (s, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.51 - 3.42 (m, 3H), 2.06 - 1.97 (m, 6H), 1.61 - 1.47 (m, 6H), 1.36 (s, 8H), 1.34 - 1.26 (m, 6H), 0.99 (t,J = 7.1 Hz, 3H), 0.94 - 0.85 (m, 4H)。

化合物 800 . 使化合物8 (13 mg，0.023 mmol)之溶液溶解於THF (0.5 mL)中且用TFA (0.018 mL，0.229 mmol)處理。30分鐘內LCMS展示Boc保護基脫除。蒸發TFA且用氫氧化鈉(9.16 mg，0.229 mmol)處理此混合物且在60℃下加熱2小時，此時LCMS顯示反應完成。藉由緩慢添加6M HCl來中和鹼且用EtOAc/水處理。在HPLC/MS條件A-2下經由製備型HPLC純化粗物質。

細節上作必要修改後，本發明之其他化合物可藉由使用另一胺代替環丁胺5a 類似地製備。 程序2-根據圖2A-2B之化合物

此程序及隨附圖 2A - 2B 說明製備本文所揭示之化合物的另一方法，使用化合物801 及818 作為範例。

化合物 12 及化合物 13 . 用K₂ CO₃ (2.90 g，21.02 mmol)及4-(溴甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯11 (5 g，19.30 mmol)處理4-硝基-1-吡唑-5-甲酸甲酯10 (3.27 g，19.11 mmol)於DMF (20 mL)中之溶液。在0℃下開始反應且可進行1小時，此時LCMS顯示反應完成，產物混合物約1:5。過濾鹼且反應物用EtOAc稀釋且用水洗滌2次。蒸發溶劑且使粗產物原樣用於下一步驟。LCMS ESI: C₁₅ H₁₅ N₃ O₇ 計算值=350.2 (M-H⁺ ), 實驗值350.0 (M-H⁺ )。

出於表徵目的，使用矽膠管柱層析使用0-50% EtOAc/己烷分離少量產物混合物。化合物 12 之分析資料 ： ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 8.40 (s, 1H), 7.57 (dd,J = 7.8, 1.5 Hz, 1H), 7.50 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 7.27 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 5.53 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.84 (d,J = 16.2 Hz, 6H)。化合物 13 之分析資料 ： ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 9.05 (s, 1H), 7.62 - 7.51 (m, 2H), 7.28 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 5.47 (s, 2H), 3.87 (s, 8H), 3.31 (s, 1H)。

化合物 14 及 15 . 在室溫下攪拌化合物12 及13 (2 g，5.73 mmol)、甲酸鋅及甲酸銨之溶液2小時，其後LCMS顯示反應完成。過濾及濃縮得到化合物14 及15 之粗混合物。LCMS ESI: C₁₅ H₁₇ N₃ O₅ 計算值=320.3 (M+H⁺ ), 實驗值320.2 (M+H⁺ )。

化合物 16 及 17 . 用乙酸(1.640 mL，28.7 mmol)處理化合物14 及15 (1.830 g，5.73 mmol)及化合物1 於MeOH (20 mL)中之混合物且攪拌隔夜。將溶液用甲醇鈉(13.11 mL，57.3 mmol)處理且攪拌隔夜。LCMS顯示轉化為產物。將pH值調節至5且用水洗滌所得沈澱物。乾燥殘餘物，得到化合物16 及17 之混合物。LCMS ESI: C₁₇ H₁₇ N₅ O₆ 計算值=388.3 (M+H⁺ ), 實驗值388.1 (M+H⁺ )。

化合物 18 及 19 . 將化合物16 及17 (1 g，2.58 mmol)於DMSO (10 mL)中之混合物用丁-1-胺(0.510 mL，5.16 mmol)、DBU (0.428 mL，2.84 mmol)處理，隨後緩慢用BOP (1.370 g，3.10 mmol)處理。在70℃下加熱反應2小時，此時LCMS顯示反應完成。用水稀釋反應物且用EtOAc萃取。合併之有機相經Na₂ SO₄ 乾燥且原樣用於下一步驟。LCMS ESI: C₂₁ H₂₆ N₆ O₅ 計算值=443.4 (M+H⁺ ), 實驗值: 443.2 (M+H⁺ )。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 9.41 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.57 - 7.42 (m, 3H), 6.93 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 5.80 (s, 1H), 5.60 (s, 2H), 4.04 (q,J = 7.1 Hz, 1H), 3.95 - 3.82 (m, 10H), 3.62 (d,J = 6.1 Hz, 4H), 3.45 (q,J = 7.0 Hz, 3H), 2.68 (d,J = 9.9 Hz, 1H), 2.57 - 2.50 (m, 6H), 2.00 (s, 1H), 1.59 (p,J = 7.3 Hz, 3H), 1.54 - 1.48 (m, 1H), 1.39 - 1.26 (m, 3H), 1.18 (t,J = 7.1 Hz, 2H), 0.86 (dt,J = 29.5, 7.3 Hz, 5H)。

化合物 818 . 在0℃下用LiAlH₄ (THF，2.58 mL，5.16 mmol)處理化合物18 及19 (1.142 g，2.58 mmol)於THF (2.58 mL，5.16 mmol)中之溶液且攪拌1小時，其後LCMS顯示反應完成。用MeOH淬滅反應物且與羅謝爾鹽溶液一起攪拌隔夜。產物用EtOAc萃取且以粗化合物經還原之中間物之混合物形式用於下一步驟中。LCMS ESI: C₂₀ H₂₆ N₆ O₄ 計算值=415.4 (M+H⁺ ), 實驗值415.2 (M+H⁺ )。

用氫氧化鈉水溶液(2.58 mL，25.8 mmol)處理經還原之中間物(1069 mg，2.58 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物且在80℃下加熱5小時，其後LCMS顯示產物形成。用6M HCl中和鹼且蒸發溶劑。將殘餘物溶解於5 mL DMF中且針筒過濾。蒸發溶劑，得到化合物818 與其區位異構體19a 之3:1混合物。

化合物 801 及 19b . 用亞硫醯氯(0.172 mL，2.357 mmol)處理化合物818 及19a (420 mg，1.178 mmol)於THF (1 mL)中之溶液且攪拌30分鐘，其後LCMS顯示反應完成。蒸發溶劑且粗苯甲基氯中間物原樣用於下一步驟。LCMS ESI: C₁₈ H₂₃ ClN₆ O計算值=375.8 (M+H⁺ ), 實驗值375.2 (M+H⁺ )。

在70℃下加熱前述粗產物混合物(20 mg，0.053 mmol)與四氫-2H-哌喃-4-胺22 (5.40 mg，0.053 mmol)於DMF (1 mL)中之混合物1小時，其後LCMS顯示反應完成。將反應物針筒過濾且純化粗產物且經由製備型LC/MS在以下條件下分離：管柱：XBridge C18，200 mm×19 mm，5 μm粒子；移動相A：具有0.1%三氟乙酸之5:95乙腈:水；移動相B：具有0.1%三氟乙酸之95:5乙腈:水；梯度：在6% B下保持2分鐘，6-27% B下經25分鐘，接著在100% B下保持2分鐘；流動速率：20 mL/min；管柱溫度：25℃。藉由MS信號觸發溶離份收集。合併含有所需產物之溶離份且經由離心蒸發乾燥。

必要時，可在合成過程中，例如在化合物12 及13 之混合物中較早實現1H 及2H 區位異構體之分離且僅利用1H 區位異構體進行合成步驟。

細節上作必要修改後，本發明之其他化合物可例如藉由使用另一種胺代替四氫-2H-哌喃-4-胺22 類似地製備。 程序3-根據圖3A-3B之化合物

此程序及隨附圖3A - 3B 說明製備本文所揭示之化合物的另一方法，使用化合物844 、 817 及861 作為範例。

化合物 24 . 向化合物16 (400 mg，1.033 mmol)及(S)-3-胺基己-1-醇23 (242 mg，2.065 mmol)於DMSO (5 mL)中之混合物中添加DBU (0.463 mL，3.10 mmol)，隨後緩慢添加BOP (502 mg，1.136 mmol)。在70℃下加熱反應混合物2小時，此時LCMS顯示反應完成。反應混合物用EtOAc稀釋且用水洗滌。濃縮有機層，留下粗產物，其用於下一步驟中。

用含第三丁基氯二苯矽烷(0.295 mL，1.136 mmol)及咪唑(141 mg，2.065 mmol)之DMF (5 mL)處理粗產物。將反應混合物攪拌隔夜。用水稀釋反應混合物且用EtOAc處理。使用EtOAc/己烷用COMBIFLAS^TM 設備進行純化，得到化合物24 。LCMS ESI: C₃₈ H₄₈ N₆ O₆ Si計算值=725.9 (M+H⁺ ), 實驗值: 725.3 (M+H⁺ )。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 9.53 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.57 - 7.50 (m, 2H), 7.50 - 7.30 (m, 7H), 7.25 - 7.14 (m, 3H), 6.31 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 6.24 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 5.78 (d,J = 17.2 Hz, 2H), 4.56 (s, 1H), 3.92 - 3.82 (m, 4H), 3.78 (s, 3H), 3.59 (s, 3H), 3.55 - 3.43 (m, 2H), 3.31 (s, 2H), 1.86 - 1.68 (m, 2H), 1.47 (q,J = 8.7, 7.9 Hz, 2H), 1.18 (t,J = 7.1 Hz, 5H), 0.91 (s, 9H)。

化合物 25 . 化合物24 (408 mg，0.563 mmol)於THF (5 mL)中之溶液用LiAlH₄ (0.563 mL，1.126 mmol)緩慢處理且在0℃下攪拌反應物1小時，此時LCMS顯示反應完成。用MeOH淬滅反應物且與羅謝爾鹽溶液一起攪拌隔夜。用EtOAc萃取且用COMBIFLAS^TM 設備、含0-50% MeOH之DCM梯度純化，得到化合物25 。 LCMS ESI: C₃₈ H₄₈ N₆ O₅ Si計算值: 697.9 (M+H+), 實驗值679.4 (M+H+)。

化合物 26 . 用亞硫醯氯(0.031 mL，0.430 mmol)緩慢處理化合物25 (150 mg，0.215 mmol)於THF (0.5 mL)中之溶液且攪拌1小時。LCMS顯示反應完成。蒸發溶劑且使粗產物26 原樣用於下一步驟。LCMS ESI: C₃₈ H₄₇ ClN₆ O₄ Si計算值=715.3 (M+H⁺ ), 實驗值715.4 (M+H⁺ )。

化合物 844 . 將化合物26 (15 mg)溶解於DMF (0.5 mL)中且用1,2,3,4-四氫-2,6-㖠啶27 (5.78 mg，0.043 mmol)處理且在70℃下加熱2小時，其後LCMS顯示反應完成。將中間產物之溶液(0.018 g，0.022 mmol)溶解於二噁烷(0.5 mL)中且用三乙胺三氫氟酸鹽(0.018 mL，0.110 mmol)處理。在室溫下攪拌隔夜之後，LCMS顯示移除TBDPS保護基。中和至pH 7，蒸發溶劑且在逆相ISCO上使用TEAA作為改質劑純化，得到脫除保護基之中間物產物。

將來自上文之脫除保護基之中間物產物溶解於二噁烷(0.5 mL)中，用氫氧化鈉(0.220 mL，0.220 mmol)處理且在80℃下加熱2小時。LCMS顯示反應完成。用HCl水溶液將反應混合物中和至pH 7且蒸發溶劑。將殘餘物溶解於DMF中且進行針筒過濾且藉由製備型LC/MS使用以下條件純化：管柱：XBridge C18，200 mm×19 mm，5 μm粒子；移動相A：具有10 mM乙酸銨之5:95乙腈:水；移動相B：具有10 mM乙酸銨之95:5乙腈:水；梯度：保持在15% B下0分鐘，15-55% B下經20分鐘，接著在100% B下保持4分鐘；流動速率：20 mL/min；管柱溫度：25℃。藉由MS信號觸發溶離份收集。合併含有所要產物之溶離份，且經由離心蒸發乾燥，得到化合物844 (4.7 mg，40%產率)。

化合物 817 . 一般遵循以上程序用三甲胺三氫氟酸鹽及隨後氫氧化鈉處理化合物25 ，得到化合物817 。

圖3B 展示圖3A 之流程之變化形式，其中在製備化合物26 之後的步驟變化。圖3B 之流程藉由特定提及化合物861 來說明。

化合物 26b . 在室溫下將化合物26 (22 mg，0.031 mmol)溶解於DMF (0.6 mL)中且用DIEA (27 µL，0.15 mmol)及呈鹽酸鹽形式之3-甲氧基氮雜環丁烷(26a )(11 mg，0.093 mmol)處理。在70℃下攪拌2小時之後，在真空中濃縮反應混合物，得到化合物26b ，其未經進一步純化即使用。LC/MS條件B: LC RT: 0.88 min。LCMS (M+H) =766.9。

化合物 861 . 在室溫下用NaOH (10 M水溶液，0.1 mL，1.0 mmol)處理化合物26a (24 mg，0.031 mmol)於二噁烷(0.3 mL)中之溶液且反應物在70℃下加熱60分鐘，隨後添加另一份NaOH (10 M水溶液，0.1 mL，1.0 mmol)。在2小時之後，在真空中濃縮反應混合物。用MeOH (0.3 mL)及HCl (37%水溶液，0.3 mL，3.7 mmol)處理殘餘物，在室溫下攪拌30分鐘且濃縮。將粗產物溶解於DMF中，經由PTFE玻璃料過濾，且經由製備型HPLC條件A-1純化。藉由MS信號觸發溶離份收集。合併含有所需產物之溶離份且經由離心蒸發乾燥，得到呈其TFA鹽形式之化合物861 (8.4 mg，46%)。LC/MS條件C: LC RT: 0.82 min。LCMS (M+H) =470.3。

細節上作必要修改後，本發明之其他化合物可例如藉由使用除圖 3A -3B 中所示之胺以外的胺類似地製備。 程序4-根據圖4A-4B之化合物

此程序及隨附圖 4A -4B 說明製造本文所揭示之化合物之另一方法。

化合物 30 . 將化合物4 (400 mg，1.513 mmol)於二噁烷(5 mL)中之懸浮液用氫氧化鈉(10 N於水中，1.513 mL，15.13 mmol)處理且在60℃下攪拌45分鐘。將反應混合物濃縮。將粗產物溶解於水中且藉由在COMBIFLASH^TM 單元上使用150 g C-18管柱之反相層析法，用含10 mM TEAA之乙腈:10 mM於水中、0-70%梯度溶離來純化。冷凍且凍乾所需溶離份，得到化合物30 (150 mg，0.727 mmol，48.1%產率)。LCMS ESI: C₉ H₁₅ N₆ 計算值=207.1 (M+H⁺ ), 實驗值207.2 (M+H⁺ )。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.56 (br s, 1H), 5.53 (br s, 2H), 3.43 (br d, J=6.2 Hz, 2H), 1.57 (t, J=7.2 Hz, 2H), 1.44 - 1.29 (m, 2H), 0.95 - 0.76 (m, 3H)。

化合物 33 . 將6-氟菸鹼醛31 (1.809 g，14.46 mmol)、4-羥基苯甲酸甲酯32 (2 g，13.15 mmol)及K₂ CO₃ (1.998 g，14.46 mmol)於DMF (26.3 mL)中之懸浮液在110℃下攪拌4小時。LCMS指示反應完成。冷卻後，用水淬滅反應物。藉由過濾收集所得固體且用水沖洗且真空乾燥，得到化合物33 (3.30 g，12.84 mmol，95.1%產率)。LCMS ESI: C₁₄ H₁₁ NO₄ 計算值=258.1 (M+H⁺ ), 實驗值258.0 (M+H⁺ )。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 10.01 (s, 1H), 8.63 (d,J =2.4 Hz, 1H), 8.23 (dd,J =8.6, 2.4 Hz, 1H), 8.17 - 7.97 (m, 2H), 7.27 - 7.22 (m, 2H), 7.10 (d,J =8.6 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H)。

化合物 34 . 在0℃下用NaBH₄ (0.553 g，14.62 mmol)逐份處理化合物33 (3.76 g，14.62 mmol)於MeOH (100 ml)中之溶液，且隨後在繼續冷卻下攪拌10分鐘。LCMS指示反應完成。藉由緩慢添加半飽和NH₄ Cl來淬滅反應。在室溫下繼續攪拌30分鐘。用乙酸乙酯萃取反應混合物。有機萃取物經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將粗製固體加入水中製成漿液，且藉由過濾來收集且在真空中乾燥，得到化合物34 (3.37 g，13.00 mmol，89%產率)。LCMS ESI: C₁₄ H₁₃ NO₄ 計算值=260.1 (M+H⁺ ), 實驗值260.0 (M+H⁺ )。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.21 (d,J =2.2 Hz, 1H), 8.12 - 8.04 (m, 2H), 7.81 (dd,J =8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.21 - 7.13 (m, 2H), 6.99 (d,J =8.4 Hz, 1H), 4.71 (s, 2H), 3.91 (s, 3H)。

化合物 35 . 在0℃下用MsCl (2.61 mL，33.5 mmol)處理含化合物34 (7.9 g，30.5 mmol)之DCM (75 mL)。在室溫下攪拌16小時之後反應完成。用水淬滅反應物。在用DCM (3×20 mL)萃取之後，合併之有機萃取物經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。在ISCO二氧化矽管柱(80 g)上，用乙酸乙酯:己烷、0-70%梯度溶離來純化粗產物。濃縮所需溶離份，得到化合物35 (7.47 g，26.9 mmol，產率88%)。LCMS ESI: C₁₄ H₁₃ ClNO₃ 計算值=278.1 (M+H⁺ ), 實驗值278.0 (M+H⁺ )。1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.19 (d, J=2.2 Hz, 1H), 8.13 - 8.02 (m, 2H), 7.79 (dd, J=8.5, 2.5 Hz, 1H), 7.22 - 7.14 (m, 2H), 6.99 (d, J=8.6 Hz, 1H), 4.57 (s, 2H), 3.92 (s, 3H)。

化合物 36 及化合物 37 . 將含化合物30 (70 mg，0.339 mmol)之DMF (1 mL)相繼用碳酸銫(332 mg，1.018 mmol)及化合物35 (94 mg，0.339 mmol)處理。在室溫下攪拌5小時之後，反應完成。在用水淬滅且用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取之後，合併之有機萃取物經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。在ISCO二氧化矽管柱(24 g)上，用含20% MeOH之DCM:DCM、0-60%梯度溶離來純化粗產物。濃縮所需溶離份，得到1:4比率之化合物36 及37 之混合物(120 mg，0.080 mmol，79%產率)。LCMS ESI: C₂₃ H₂₆ N₇ O₃ 計算值=448.2 (M+H⁺ ), 實驗值448.3 (M+H⁺ )。

化合物 37a 及 37b . 在0℃下在N₂ 下用LiAlH₄ (1.0 M於THF中，0.22 mL，0.22 mmol)緩慢處理化合物36 及37 (60 mg，0.114 mmol)於THF (2 mL)中之混合物。在0℃下攪拌反應混合物1小時，此時LCMS顯示反應完成。藉由緩慢添加Na₂ SO₄ •10H₂ O，隨後添加MeOH且在室溫下攪拌3小時來淬滅反應物。濾出固體。濃縮濾液。將殘餘物溶解於DMF中且經由製備型LC/MS在以下條件下純化產物：管柱：XBridge C18，200 mm×19 mm，5 μm粒子；移動相A：具有0.1%三氟乙酸之5:95乙腈:水；移動相B：具有0.1%三氟乙酸之95:5乙腈:水；梯度：在10% B下保持0分鐘，10-45% B下經20分鐘，接著在100% B下保持4分鐘；流動速率：20 mL/min。藉由MS及UV信號觸發溶離份收集。合併含有所需產物之溶離份且經由離心蒸發乾燥。

化合物 38a 及 38b . 用亞硫醯氯(0.14 mL，1.9 mmol)處理化合物37a 及化合物37b (40 mg，0.095 mmol)於THF (1 mL)中之混合物。在室溫下攪拌3小時後，LCMS顯示反應完成。蒸發溶劑且用DCM共沸移除過量亞硫醯氯。粗氯化物物質未經進一步純化即直接用於下一步驟。LCMS ESI: C₂₂ H₂₅ N₇ O計算值=438.2 (M+H⁺ ), 實驗值438.1 (M+H⁺ )。

將先前段落之前述氯化物(40 mg，0.091 mmol)之混合物溶解於DMF (1.0 mL)中且用2-胺基乙-1-醇(55.0 µl，0.91 mmol)處理，隨後在室溫下攪拌16小時。LCMS顯示反應完成。混合物經由製備型LC/MS以如下條件純化：管柱：XBridge C18，200 mm×19 mm，5 μm粒子；移動相A：具有10 mM乙酸銨之5:95乙腈:水；移動相B：具有10 mM乙酸銨之95:5乙腈:水；梯度：在8% B下保持0分鐘，8-48% B經25分鐘，接著在100% B下保持4分鐘；流動速率：20 mL/min；管柱溫度：25℃。藉由MS信號觸發溶離份收集。合併含有所需產物之溶離份且經由離心蒸發乾燥。

在圖 4A -4B 之流程中用4-氟-2-甲氧基苯甲醛替換6-氟菸鹼醛31 且一般遵循以上程序，可製備本發明之其他化合物，例如：802 、803 、808 、809 及810 。 程序5-根據圖5之化合物

此程序及隨附圖 5 係關於(S )-N-(3-胺基己基)乙醯胺54 之合成，其可用作合成本文所揭示之化合物的中間物。

化合物 51 . 將(S )-3-胺基己-1-醇50 (1 g，8.53 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液用休尼格氏鹼(4.47 mL，25.6 mmol)及Boc酐(2.377 mL，10.24 mmol)處理且攪拌3小時，其後LCMS顯示反應完成。在真空中脫去溶劑及鹼。粗產物在具有N₂ 偵測器之ISCO機上使用80 g矽膠gold管柱，使用0-100% EtOAc/己烷純化，得到具有所需產物之溶離份，將其合併且濃縮，得到化合物51 (1.05 g，56.6%產率)。LCMS ESI: C₁₁ H₂₃ NO₃ 計算值=218.3 (M+H⁺ ), 實驗值218.2。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 3.76 (s, 1H), 3.63 (dd,J = 7.6, 3.0 Hz, 2H), 1.90 - 1.77 (m, 1H), 1.46 - 1.44 (m, 10H), 1.44 - 1.17 (m, 4H), 1.00 - 0.81 (m, 5H)。

化合物 52 . 向化合物51 (1050 mg，4.83 mmol)、三苯膦(1648 mg，6.28 mmol)及異吲哚啉1,3-二酮(924 mg，6.28 mmol)於THF (10 mL)中之溶液中緩慢添加DIAD (1.221 mL，6.28 mmol)。在室溫下攪拌隔夜之後，LCMS顯示反應完成。在旋轉式蒸發器中脫去溶劑且在ISCO機上使用80 g gold矽質管柱用0-50% EtOAc/己烷溶離來純化，得到具有乾燥產物之溶離份，其經濃縮，提供呈淡黃色固體狀之化合物52 (1.6 g，96%產率)。LCMS ESI: C₁₉ H₂₆ NO₄ 計算值=347.4 (M+H⁺ ), 實驗值247.2 (M-Boc+H⁺ )。δ 7.83 (dd,J = 5.4, 3.1 Hz, 2H), 7.70 (dd,J = 5.5, 3.0 Hz, 2H), 4.40 (s, 1H), 3.75 (dd,J = 8.4, 7.0 Hz, 2H), 3.64 (s, 1H), 1.69 (dq,J = 15.8, 7.9 Hz, 1H), 1.52 - 1.44 (m, 2H), 1.42 (s, 9H), 1.39 - 1.28 (m, 3H), 0.91 (t,J = 7.1 Hz, 3H)。

化合物 53 . 用含甲胺之MeOH (15.59 g，92 mmol)處理化合物52 (1.6 g，4.62 mmol)。攪拌反應混合物1小時，其後LCMS顯示脫除鄰苯二甲醯亞胺保護基。蒸發溶劑及鹼且將殘餘物溶解於THF (5 mL)中且相繼用休尼格氏鹼(1.613 mL，9.24 mmol)及乙醯氯(0.394 mL，5.54 mmol)處理。反應混合物在室溫下攪拌1小時且蒸發溶劑。粗產物在逆相ISCO上使用80 g C-18管柱用0-95%乙腈/水(0.05%甲酸)溶離來純化，得到具有所要產物之溶離份，其經凍乾，得到呈淡黃色糊狀之化合物53 (0.8 g)。LCMS ESI: C₁₃ H₂₆ N₂ O₃ 計算值=259.3 (M+H⁺ ), 實驗值159.1 (M-Boc+H⁺ )。δ 6.65 (s, 2H), 4.30 (d,J = 9.4 Hz, 2H), 3.75 - 3.67 (m, 2H), 3.60 (s, 2H), 2.84 (t,J = 12.7 Hz, 2H), 2.00 (s, 3H), 1.75 (dddd,J = 14.1, 10.7, 5.3, 3.6 Hz, 1H), 1.44 - 1.24 (m, 9H), 0.91 (t,J = 6.8 Hz, 3H)。

化合物 54 . 用TFA (4.7 mL，61.9 mmol)處理化合物53 (0.8 g，3.10 mmol)。30分鐘後之LCMS顯示反應完成。蒸發TFA。在凍乾器中乾燥殘餘物隔夜，得到呈淡黃色糊狀之化合物54 (322 mg，65.7%產率)。LCMS ESI: C₈ H₁₈ N₂ O計算值: 159.2 (M+H⁺ ), 實驗值159.1 (M+H⁺ )。δ 8.08 (s, 2H), 6.71 (s, 1H), 3.49 (s, 1H), 3.38 - 3.32 (m, 2H), 3.30 (s, 1H), 3.18 (d,J = 9.7 Hz, 1H), 2.04 (s, 3H), 1.96 - 1.83 (m, 2H), 1.67 (ddq,J = 36.7, 14.4, 7.5, 7.0 Hz, 1H), 1.40 (dq,J = 15.6, 7.7 Hz, 1H), 0.94 (t,J = 7.3 Hz, 3H)。

化合物54 可用於製備諸如846 及847 之化合物，通常根據程序3及圖 3A - 3B ，使用化合物16 。 程序6-根據圖6a-6B之化合物

此程序及隨附圖 6A - 6B 說明製備本文中所揭示之化合物的另一方法，使用化合物857 作為範例。

化合物 55 . 向化合物30 (1.50 g，7.27 mmol)於DMF (25 mL)中之懸浮液中分三部分添加NBS (1.29 g，7.27 mmol) (顏色自紅色變成淡黃色)。在室溫下攪拌10分鐘後，LCMS指示反應完成。將混合物倒於少部分冰上且攪拌16小時。藉由過濾收集所得固體且在高真空中乾燥，得到化合物55 (1.96 g，6.9 mmol，95%產率)。

化合物 57 . 在105℃下攪拌4-氟-2-甲氧基苯甲醛56 (1.5 g，9.73 mmol)、4-羥基苯甲酸甲酯32 (1.777 g，11.68 mmol)及K₂ CO₃ (2.69 g，19.46 mmol)於DMF (19.46 ml)中之懸浮液三天，LCMS指示反應完成。其用水淬滅。藉由過濾收集所得乳脂狀有色固體之沈澱且在真空中乾燥，得到化合物57 (2.6 g，9.08 mmol，產率93%)。LCMS ESI: C₁₆ H₁₅ O₅ 計算值=287.1 (M+H⁺ ), 實驗值287.1 (M+H⁺ -18)。

化合物 58 . 向化合物57 (2.6 g，9.08 mmol)於MeOH (25 mL)中之攪拌懸浮液中逐份添加NaBH₄ (0.344 g，9.08 mmol)。反應混合物變得澄清。在1小時之後，反應完成。將反應混合物濃縮至一半體積。添加水，隨後攪拌30分鐘。藉由過濾收集所得固體且風乾，得到呈白色固體狀之化合物58 (2.50 g，8.67 mmol，產率95%)，其純度足夠用於下一步驟中。LCMS ESI: C₁₆ H₁₇ O₅ 計算值=289.1 (M+H⁺ ), 實驗值271.1 (M+H⁺ -18)。

化合物 59 . 在攪拌下，用SOCl₂ (0.924 mL，12.66 mmol)處理含化合物58 (730 mg，2.53 mmol)之THF (10 mL)。在室溫下繼續攪拌16小時。在旋轉式蒸發器上濃縮，得到化合物59 。用DCM (3×)共沸移除額外SOCl₂ 。所得固體純度足夠用於進行下一步驟而無需進一步純化。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.07 - 7.83 (m, 2H), 7.46 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.16 - 7.01 (m, 2H), 6.87 (d, J=2.2 Hz, 1H), 6.66 (dd, J=8.3, 2.3 Hz, 1H), 4.73 (s, 2H), 3.84 (d, J=5.3 Hz, 6H)。

化合物 60 . 向化合物55 (300 mg，1.052 mmol)於DMF (1 mL)中之攪拌混合物中添加化合物59 (323 mg，1.052 mmol)。在室溫下攪拌3小時後，未偵測到起始物質59 。反應混合物用鹽水淬滅，用DCM (3×20 mL)萃取。合併之有機萃取物經Na₂ SO₄ 乾燥且濃縮。濃縮濾液。粗混合物藉由ISCO二氧化矽管柱(40 g)，用EtOAc/己烷=0-100%溶離來純化。濃縮所需溶離份，得到化合物60 (166 mg，0.299 mmol，28.4%產率)。LCMS ESI: C₂₂ H₂₈ BrN₆ O₄ 計算值=555.1、557.1 (M+H⁺ ), 實驗值555.2、557.2 (M+H⁺ )。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.96 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.55 - 7.55 (m, 1H), 7.12 - 6.98 (m, 2H), 6.87 (d, J=2.2 Hz, 1H), 6.76 (t, J=5.4 Hz, 1H), 6.71 (d, J=8.1 Hz, 1H), 6.62 (dd, J=8.3, 2.3 Hz, 1H), 5.97 (s, 2H), 5.62 (s, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.50 - 3.39 (m, 2H), 1.59 - 1.46 (m, 2H), 1.31 - 1.21 (m, 2H), 0.87 (t, J=7.4 Hz, 3H)。

化合物 61 . 在室溫下在氮氣下向經攪拌的化合物60 (160 mg，0.288 mmol)於THF (10 mL)中之混合物中添加LiAlH₄ (2.5 M於THF中) (10.93 mg，0.288 mmol)。10分鐘後，LCMS指示反應完成。反應混合物小心地用羅謝爾鹽溶液淬滅，且在室溫下攪拌18小時。分離有機層且進一步用乙酸乙酯(2×50 mL)萃取水層。合併之有機萃取物經Na₂ SO₄ 乾燥且濃縮。濃縮濾液，得到化合物61 (140 mg，0.265 mmol，92.2%產率)。LCMS ESI: C₂₄ H₂₈ BrN₆ O₃ 計算值: 527.1、529.1(M+H⁺ ), 實驗值527.2、529.2(M+H⁺ )。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.32 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.96 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.77 - 6.65 (m, 3H), 6.43 (dd, J=8.3, 2.3 Hz, 1H), 5.95 (s, 2H), 5.57 (s, 2H), 5.15 (t, J=5.6 Hz, 1H), 4.47 (d, J=5.7 Hz, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.45 (br d, J=5.7 Hz, 2H), 1.53 (t, J=7.2 Hz, 2H), 1.31 - 1.20 (m, 2H), 0.88 (t, J=7.4 Hz, 3H)。

化合物 62 . 用N₂ 吹掃化合物61 (165 mg，0.313 mmol)於MeOH (10 mL)及乙酸乙酯(3 mL)中之懸浮液。添加Pd-C 5% (40 mg，0.019 mmol)，用H₂ 吹掃，且在H₂ 氣球下攪拌18小時。隨後藉由經CELITE®墊過濾來移除催化劑。濃縮濾液，得到化合物62 (157 mg，0.350 mmol，112%產率)。LCMS ESI: C₂₄ H₂₉ N₆ O₃ 計算值=449.2 (M+H⁺ ), 實驗值449.3 (M+H⁺ )。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.13 (br d, J=4.0 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.61 (br s, 2H), 7.33 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.97 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.83 (d, J=8.6 Hz, 1H), 6.74 (d, J=2.2 Hz, 1H), 6.42 (dd, J=8.3, 2.3 Hz, 1H), 5.68 (s, 2H), 5.26 - 5.03 (m, 1H), 4.48 (d, J=5.3 Hz, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.58 (br d, J=6.2 Hz, 2H), 1.59 (br t, J=7.3 Hz, 2H), 1.35 - 1.18 (m, 2H), 0.90 (t, J=7.4 Hz, 3H)。

化合物 857 . 用SOCl₂ (0.081 mL，1.115 mmol)處理化合物62 (100 mg，0.223 mmol)於THF (4 mL)中之懸浮液，隨後在室溫下攪拌1小時。反應混合物接著經旋轉式蒸發器濃縮。用DCM共沸移除過量SOCl₂ (3×)，所得固體純度足夠用於下一步驟中。LCMS ESI: C₂₄ H₂₈ ClN₆ O₂ 計算值=467.2 (M+H⁺ ), 實驗值467.2 (M+H⁺ )。將所得固體(20 mg，0.043 mmol)溶解於DMF (0.5 mL)中。將1-胺基-2-甲基丙-2-醇(19.09 mg，0.214 mmol)添加至反應混合物中且在室溫下攪拌溶液16小時。反應混合物經針筒過濾且粗物質經由製備型LC/MS用以下條件純化：管柱：XBridge C18，200 mm×19 mm，5 μm粒子；移動相A：具有0.1%三氟乙酸之5:95乙腈:水；移動相B：具有0.1%三氟乙酸之95:5乙腈:水；梯度：在19% B下保持0分鐘，在19-59%下經20分鐘，接著在100% B下保持0分鐘；流動速率：20 mL/min；管柱溫度：25℃。藉由MS及UV信號觸發溶離份收集。合併含有所要產物之溶離份且經由離心蒸發乾燥，得到呈TFA鹽形式之化合物857 (6.9 mg，10.63 μmol，24.81%產率)。

可使用此程序6及先前程序4來製造類似化合物。已觀測到，3-溴化合物55 之烷基化相較於程序4中之對應化合物36 之烷基化產生更高比例之1H 區位異構體(圖 6A 中未展示2H 區位異構體)。因此，在1H 區位異構體為更需要之區位異構體之情況下，此程序6可為較佳之程序，即使其需要額外溴化及去溴化步驟。下表B列舉藉由程序4或6製得之一些化合物。此外，3-溴化合物55 可為其他合成路徑中之中間物，如下文中之程序中所顯示。 程序7-根據圖7之化合物

此程序及隨附圖 7 說明製備本文所揭示之化合物的另一方法，使用化合物864 作為範例。

化合物 64 . 使化合物16 (48.5 mg，0.125 mmol)於THF (1.8 mL)中之溶液冷卻至0℃且用LiAlH₄ (1 M於THF中，219 µL，0.219 mmol)處理。在10分鐘之後，添加另一份LiAlH₄ (1 M於THF中，200 µL，0.200 mmol)且在0℃下再攪拌反應物20分鐘。將反應混合物用MeOH及羅謝爾鹽(飽和水溶液)淬滅，且在室溫下攪拌30分鐘。用EtOAc (3×)萃取混合物。合併之有機層用H₂ O洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，得到化合物64 (38 mg，84%)。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ 11.60 - 11.12 (m, 2H), 7.85 - 7.83 (m, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.77 (d,J =8.0 Hz, 1H), 6.59 (d,J =7.7 Hz, 1H), 5.66 (s, 2H), 5.15 (t,J =5.7 Hz, 1H), 4.44 (d,J =5.6 Hz, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.74 (s, 3H)。LC/MS條件B：LC RT：0.61 min。LCMS (M+H) =360.1。

化合物 65 . 用亞硫醯氯(1.6 mL，22 mmol)處理化合物64 (402 mg，1.12 mmol)於DCM (15 mL)中之溶液。15分鐘後，在真空中濃縮反應混合物。將殘餘物再溶解於DCM中且再次真空濃縮，得到化合物65 (422 mg，100%)。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ 11.25 - 11.02 (m, 1H), 7.89 - 7.88 (m, 1H), 7.11 (d,J =1.5 Hz, 1H), 6.92 (dd,J =7.8, 1.5 Hz, 1H), 6.62 (d,J =7.7 Hz, 1H), 5.69 (s, 2H), 4.72 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.75 (s, 3H)。有一個質子看不見，可能歸因於與水峰或質子交換重疊。LC/MS條件B：LC RT：0.80 min。LCMS (M+H) =378.0。

化合物 66 . 用化合物65 (249 mg，0.659 mmol)於THF (8 mL)中之溶液處理環丁胺5a (0.84 mL，9.9 mmol)於THF (11 mL)中之溶液。反應混合物在60℃下攪拌16小時，且隨後在真空中濃縮。將殘餘物溶解於DCM/MeOH中，吸收於CELITE®上且經由管柱層析(50 g C18 gold管柱；移動相A：具有0.1%三氟乙酸之10:90甲醇:水；移動相B：具有0.1%三氟乙酸之90:10甲醇:水；流動速率：40 mL/min)純化，得到呈TFA鹽形式之化合物66 (168 mg，48%產率)。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ 11.55 (br s, 1H), 11.18 - 11.12 (m, 1H), 9.04 - 8.93 (m, 2H), 7.91 - 7.89 (m, 1H), 7.19 (d,J =1.4 Hz, 1H), 6.95 (dd,J =7.7, 1.3 Hz, 1H), 6.68 (d,J =7.7 Hz, 1H), 5.71 (s, 2H), 4.02 - 3.97 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.72 - 3.63 (m, 1H), 2.20 - 2.10 (m, 4H), 1.85 - 1.72 (m, 2H)。LC/MS條件B：LC RT：0.63 min。LCMS (M+H) =413.3。

化合物 864 . 化合物66 (15 mg，0.036 mmol)於DMF (1 mL)中之溶液用BOP (161 mg，0.364 mmol)、2-乙氧基乙-1-胺6a (32.4 mg，0.364 mmol)及DBU (73 µL，0.49 mmol)處理且在室溫下攪拌18小時。在氮氣流下濃縮反應混合物。粗產物67 於二噁烷(0.5 mL)中之溶液用NaOH (10 M水溶液，0.05 mL，0.5 mmol)處理且加熱至75℃。在1小時之後，用HOAc (0.03 mL，0.5 mmol)中和反應混合物且在氮氣流下濃縮。將殘餘物溶解於DMF中，經由PTFE玻璃料過濾，且粗物質經由製備型LC/MS用以下條件純化：管柱：XBridge C18，200 mm×19 mm，5 μm粒子；移動相A：具有10 mM乙酸銨之5:95乙腈:水；移動相B：具有10 mM乙酸銨之95:5乙腈:水；梯度：在3% B下保持0分鐘，3-43% B下經25分鐘，接著在100% B下保持0分鐘；流動速率：20 mL/min；管柱溫度：25℃。藉由MS信號觸發溶離份收集。合併含有所需產物之溶離份且經由離心蒸發乾燥，得到化合物864 (7.3 mg，48%產率)。LC/MS條件C：LC RT：0.8 min。LCMS (M+H) =426.17。

根據此程序，在細節上作必要修改後，可製得其他根據本發明化合物。 程序8-根據圖8之化合物

此程序及隨附圖 8 說明製備本文所揭示之化合物的另一方法，使用化合物866 作為範例。

化合物 70 . 用化合物69 (321 mg，1.01 mmol)處理化合物68 (307 mg，0.922 mmol)於乙腈(0.9 mL)中之溶液且在室溫下攪拌72小時。接著將反應混合物加熱至60℃，持續4小時，再冷卻至室溫且過濾。用乙腈沖洗所收集之固體且在真空中乾燥。真空濃縮濾液且藉由管柱層析(12 g SiO₂ ，0-30% EtOAc-己烷，梯度溶離)純化殘餘物，得到白色固體，將其與藉由過濾分離之固體組合，得到化合物70 (392 mg，74%)。LC/MS條件B：LC RT：1.21 min。LCMS (M+H) =576.9。

化合物 71 . 化合物70 (144 mg，0.251 mmol)於MeOH (1.2 mL)中之溶液用NaOMe (81 mg，1.5 mmol)處理且在室溫下攪拌。96小時後，將反應混合物用H₂ O稀釋且用EtOAc (3×)萃取。合併之有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，得到化合物71 (108 mg，100%產率)。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ 11.62 - 11.59 (m, 1H), 10.85 - 10.82 (m, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.51 (d,J =1.4 Hz, 1H), 7.47 (dd,J =7.9, 1.4 Hz, 1H), 6.69 (d,J =7.9 Hz, 1H), 5.75 (s, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 1.50 (s, 9H)。LC/MS條件B：LC RT：0.89 min。LCMS (M+H) =430.6。

化合物 72 . 化合物71 (294 mg，0.685 mmol)於DMSO (3.4 mL)中之溶液用(S )-1-(((第三丁基二苯基矽烷基)氧基)己-3-胺(71a )鹽酸鹽(322 mg，0.822 mmol)、BOP (364 mg，0.822 mmol)及DBU (516 µL，3.43 mmol)處理且在室溫下攪拌。3小時後，將反應混合物用EtOAc稀釋且用H₂ O洗滌。真空濃縮有機層且經由管柱層析(24 g SiO₂ ；0-25% EtOAc-DCM，梯度溶離)純化殘餘物，得到化合物72 (227.8 mg，43%)。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ 9.00 - 8.93 (m, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.53 (dd,J =8.0, 1.4 Hz, 2H), 7.46 (s, 2H), 7.44 (d,J =1.3 Hz, 1H), 7.42 - 7.37 (m, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 3H), 7.24 - 7.20 (m, 2H), 7.20 - 7.16 (m, 1H), 6.28 (d,J =7.9 Hz, 1H), 6.20 (d,J =8.5 Hz, 1H), 5.83 - 5.72 (m, 2H), 4.60 - 4.46 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.55 - 3.43 (m, 2H), 1.83 - 1.73 (m, 1H), 1.73 - 1.65 (m, 1H), 1.46 (br d,J =13.6 Hz, 2H), 1.41 (s, 9H), 1.15 - 1.04 (m, 2H), 0.91 (s, 9H), 0.74 (t,J =7.3 Hz, 3H)。LC/MS條件B：LC RT：1.07 min。LCMS (M+H) =767.4。

化合物 73 . 使甲酯72 (227 mg，0.297 mmol)於THF (4.2 mL)中之溶液冷卻至0℃且用LiAlH₄ (1 M於THF中，327 µL，0.327 mmol)處理。在10分鐘之後，添加額外LiAlH₄ (1 M於THF中，150 µL，0.150 mmol)。在30分鐘之後，用MeOH及羅謝爾鹽(飽和水溶液)淬滅反應物且在室溫下攪拌30分鐘。用EtOAc (3×)萃取混合物。經合併之有機層用H₂ O洗滌且真空濃縮。經由管柱層析(12 g SiO₂ ；0-100% U EtOAc-己烷，梯度溶離)純化殘餘物，得到化合物73 (91.5 mg，42%)。LC/MS條件B：LC RT：1.02 min。LCMS (M+H) =739.7。

化合物 74 . 用亞硫醯氯(45 µL，0.61 mmol)處理化合物73 (91.5 mg，0.124 mmol)於THF (1.2 mL)中之溶液且在室溫下攪拌。在15分鐘之後，真空濃縮反應混合物，將殘餘物再溶解於DCM中且真空濃縮，得到化合物74 (94 mg，100%)。LC/MS條件B：LC RT：1.09 min。LCMS (M+H) = 757.3。

化合物 75 . 化合物74 (20 mg，0.027 mmol)於DMF (0.5 mL)中之溶液用DIEA (70 µL，0.40 mmol)及3-(第三丁基)環丁-1-胺74a (34.1 mg，0.268 mmol)處理且加熱至70℃，持續1小時。使反應混合物冷卻至室溫且在真空中濃縮。將殘餘物溶解於EtOAc中且用NaHCO₃ 飽和水溶液洗滌。在真空中濃縮有機層，得到化合物75 (22 mg，97%)，其未經進一步純化即使用。LC/MS條件B：LC RT：0.95 min。LCMS (M+H) = 848.6。

化合物 866 . 用HCl (37%水溶液，0.3 mL，3.7 mmol)處理化合物75 (25 mg，0.029 mmol)於MeOH (0.6 mL)中之溶液且在室溫下攪拌6小時。反應混合物用NaHCO₃ 中和且用DCM (3×)萃取。真空濃縮經合併之有機層。將殘餘物再溶解於DMF中且經由PTFE過濾器過濾。經由製備型HPLC/MS條件A-1純化粗產物：藉由MS信號觸發溶離份收集。合併含有所需產物之溶離份且經由離心蒸發乾燥，得到化合物866 (3.3 mg，產率22%)。 LC/MS條件C：LC RT=1.23 min。LCMS (M+H) = 510.23。

細節上作必要修改後，根據本發明之額外化合物可根據此程序製得。 程序9-根據圖9之化合物

此程序及隨附圖 9 說明製備本文所揭示之化合物的另一方法，使用化合物853 及870 作為範例。

化合物 76 . 在冰浴中冷卻化合物55 (400 mg，1.40 mmol)及碳酸銫(914 mg，2.8 mmol)於DMF/乙腈(5 mL/5 mL)中之溶液。添加4-(溴甲基)-3-氟苯甲酸甲酯55a (277 mg，1.12 mmol)於乙腈(5 mL)中之溶液，且在0℃下攪拌反應物30分鐘，隨後在室溫下再攪拌一小時。自反應混合物蒸發乙腈且使用逆相急驟層析(100 g管柱，10%至60% MeCN/含有0.05% TFA之水)純化，得到呈固體狀之化合物76 (482 mg，1.07 mmol，35%純度(混雜有N2區位異構體，27%產率)。LC-MS (ES,m/z ): [M+H]⁺ = 451.1, 453.2。

化合物 77 . 將化合物76 (470 mg，1.04 mmol，35%純度(混雜有N2區位異構體)溶解於乙醇(50 mL)中。添加10% Pd/C (20 mg)，且抽空反應物且用氫氣吹掃六次，隨後在氫氣氛圍下攪拌90分鐘。反應混合物經CELITE®過濾，用EtOH (100 mL)洗滌且蒸發至乾燥，得到呈固體狀之化合物77 (370 mg，0.99 mmol，35%純度(混雜有N2區位異構體)，95%產率)。LC-MS (ES,m/z ): [M+H]⁺ = 373.3。

化合物 78 . 在冰浴中冷卻經攪拌的化合物77 (370 mg，0.99 mmol，35%純度，混雜有N2區位異構體)於THF (100 mL)中之懸浮液。歷經5分鐘逐份添加LiAlH₄ (754 mg，1.98 mmol)，且在0℃下攪拌反應物20分鐘。添加NaOH (1N，50 mL)，且在室溫下攪拌反應物10分鐘，轉移至分液漏斗中且用EtOAc (3×40 mL)萃取。合併之有機相用鹽水(3×30 mL)洗滌，乾燥(MgSO₄ )，過濾且濃縮。急驟層析(40 g管柱，0-25% MeOH/DCM)產生呈固體狀之化合物78 (74 mg，0.215 mmol，21.63%產率)。LC-MS (ES,m/z ): [M+H]⁺ = 345.3。

化合物 853 . 向20 mL閃爍瓶中裝入化合物78 (25 mg，0.073 mmol)及THF (4 mL)。添加3滴亞硫醯氯，且攪拌反應混合物1小時。將反應混合物蒸發至乾燥且將殘餘物溶解於乙腈(5 mL)中且蒸發兩次。將殘餘物溶解於DMF (1.5 mL)中。添加環丁胺(20.7 mg，0.29 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物隔夜。過濾反應混合物且經由製備型HPLC/MS條件A-1純化：藉由MS及UV信號觸發溶離份收集。合併含有所需產物之溶離份且經由離心蒸發乾燥，得到化合物853 (19.5 mg，0.03 mmol，42%產率)。

化合物 870 . 向20 mL閃爍瓶中裝入化合物78 (50 mg，0.15 mmol)及THF (4 mL)。添加3滴亞硫醯氯，且攪拌反應混合物1小時。將反應混合物蒸發至乾燥。將殘餘物溶解於乙腈(5 mL)中且蒸發兩次。將殘餘物溶解於DMF (2 mL)中。添加2-(哌嗪-1-基)乙-1-醇(38 mg，0.29 mmol)，隨後添加DIPEA (0.10 mL，0.58 mmol)，且在50℃下攪拌反應混合物1小時。冷卻後，過濾反應混合物且經由製備型HPLC/MS條件A-1純化：藉由MS及UV信號觸發溶離份收集。合併含有所需產物之溶離份且經由離心蒸發乾燥，得到化合物870 (41 mg，0.06 mmol，產率42%)。

細節上作必要修改後，根據本發明之額外化合物可根據此程序製得。 程序10-根據圖10之化合物

此程序及隨附圖 10 說明製備本文所揭示之化合物的另一方法，使用化合物873 作為範例。

化合物 80 . 向40 mL閃爍瓶中裝入化合物79 (250 mg，1.55 mmol)、NBS (331 mg，1.86 mmol)、AIBN (50.9 mg，0.31 mmol)及CCl₄ (5 mL)。在70℃下攪拌反應混合物2小時。在冷卻之後，將反應混合物蒸發至乾燥。急驟層析(24 g管柱，0-40% EtOAc/己烷)得到呈固體狀之化合物80 (189 mg，0.787 mmol，51%產率)。LC-MS (ES，m/z): 未偵測到離子。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.33 (d,J =7.7 Hz, 1H), 6.88 (d,J =7.7 Hz, 1H), 6.84 (s, 1H), 4.53 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.74 (s, 2H)。

化合物 81 . 向經攪拌的(7-(丁胺基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)胺基甲酸甲酯(6 g，22.7 mmol)於DMF (10 mL)中之懸浮液中添加NBS (4.44 g，25.0 mmol)於乙腈(20 mL)中之溶液。在室溫下攪拌反應混合物1小時。添加水(50 mL)。過濾反應混合物。用水(3×30 mL)洗滌殘餘物且風乾隔夜，得到呈固體狀之化合物81 (5.112 g，14.9 mmol，66%產率)。LC-MS (ES,m/z ): [M+H]⁺ = 343.0, 345.0。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ 12.87 (br s, 1H), 9.80 (s, 1H), 7.56 (br s, 1H), 3.62 (s, 3H), 3.54 (q,J =6.6 Hz, 2H), 1.62 (quin,J =7.2 Hz, 2H), 1.40 (dq,J =14.8, 7.4 Hz, 2H), 0.94 (t,J =7.4 Hz, 3H)。

化合物 82 . 將化合物81 (1 g，2.91 mmol)溶解於DMF (10 mL)中且在冰浴中冷卻。添加碳酸銫(1.899 g，5.83 mmol)，隨後添加化合物80 (0.560 g，2.33 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物5小時且接著倒入飽和NaHCO₃ 溶液(50 mL)中且用EtOAc (3×40 mL)萃取。合併之有機相用鹽水(4×40 mL)洗滌，乾燥(MgSO₄ )，過濾且濃縮。急驟層析(40 g管柱，0至85% EtOAc/己烷)得到呈固體狀之化合物82 (219 mg，0.44 mmol，15%產率)。LC-MS (ES,m/z ): [M+H]⁺ 502.2, 504.2。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.25 - 7.19 (m, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.97 - 6.91 (m, 1H), 5.70 (s, 2H), 5.28 (s, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 3.78 - 3.60 (m, 4H), 1.72 - 1.41 (m, 2H), 1.41 - 1.20 (m, 2H), 0.94 (t,J =7.3 Hz, 3H)。

化合物 83 . 將化合物82 (219 mg，0.44 mmol)溶解於EtOH (10 mL)中且添加10% Pd/C (20 mg)。將反應容器抽空且用H₂ 吹掃六次，隨後在H₂ 氛圍下攪拌2小時。過濾反應混合物且蒸發至乾燥，得到呈固體狀之化合物83 (188 mg，0.44 mmol，100%產率)。LC-MS (ES,m/z ): [M+H]⁺ 424.4。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ 11.71 (br s, 1H), 8.67 (br s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.89 (s, 2H), 5.77 (s, 2H), 4.01 (s, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.69 - 3.58 (m, 2H), 1.72 - 1.48 (m, 2H), 1.41 - 1.17 (m, 2H), 0.90 (t,J =7.4 Hz, 3H)。

化合物 873 . 將化合物83 (25 mg，0.059 mmol)溶解於二噁烷(2 mL)中；添加氫氧化鈉(0.354 mL，1.77 mmol)。在80℃下攪拌反應混合物3小時。在冷卻之後，反應物用5N HCl中和，隨後蒸發至乾燥。將殘餘物溶解於DMF (2 mL)中，過濾且經由製備型HPLC/MS條件A-2純化：藉由MS信號觸發溶離份收集。合併含有所需產物之溶離份且經由離心蒸發乾燥，得到化合物873 (6.2 mg，0.013 mmol，22%)。

細節上作必要修改後，根據本發明之額外化合物可根據此程序製得。 程序11-根據圖11之化合物

此程序及隨附圖 11 說明製備本文所揭示之化合物的另一方法，使用化合物855 作為範例。

化合物 85 . 向5-甲氧基-6-甲基菸鹼酸甲酯84 (300 mg，1656 μmol)及NBS (413 mg，2318 μmol)於CCl₄ (3 mL)中之溶液中添加AIBN (54.4 mg，331 µmol)。在80℃下攪拌反應混合物30分鐘。LCMS分析顯示反應完成。冷卻反應混合物且用DCM (2 mL)稀釋。在40 g RediSepRf Gold矽石管柱上純化所得溶液。移動相A：己烷；移動相B：乙酸乙酯；梯度：在0% B下1分鐘，在0-50% B下15分鐘；流動速率：40 mL/min；管柱溫度：25℃。藉由254 nm下之UV信號觸發溶離份收集。合併含有預期產物之溶離份，濃縮且在高真空下乾燥，得到化合物85 (215 mg，50%)。LC/MS條件E：LC RT：1.57 min。[M+H]+/Z= 260.0

化合物 86 . 向化合物30 (427 mg，2070 µmol)於DMF (2 mL)中之溶液中添加Cs₂ CO (701 mg，2152 µmol)。在室溫下攪拌反應混合物10分鐘。將化合物85 (215 mg，0.827 mmol)於乙腈(2 mL)中之溶液緩慢添加至反應混合物中。在室溫下攪拌反應混合物30分鐘。LCMS分析顯示3個峰對應產物m/z。反應混合物用乙酸(0.3 mL)中和，用水稀釋且藉由製備型HPLC/MS條件A-3純化：藉由UV信號觸發溶離份收集。分別冷凍乾燥對應於三個峰之溶離份。NMR分析證實對應於最後峰之化合物為所需化合物86 (76 mg，119%)。LC/MS條件E：LC-RT：1.89 min。[M+H]+/Z= 386.2。¹ H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.57 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 8.50 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 5.95 (s, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.89 (s, 3H), 3.55 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 1.59 - 1.48 (m, 2H), 1.30 - 1.14 (m, 2H), 0.86 (t, J = 7.4 Hz, 3H)。

化合物 87 . 向化合物86 (38 mg，0.099 mmol)於THF (1 mL)中之溶液中添加含LiAlH₄ 之THF (0.079 mL，0.197 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物10分鐘。LCMS分析顯示反應完成。反應混合物用乙酸(0.2 mL)中和，用水(3 mL)稀釋且根據HPLC/MS條件A3純化：藉由UV信號觸發溶離份收集。合併含有預期產物之溶離份且冷凍乾燥，得到化合物87 (28 mg，79%)。LC/MS條件E：LC-RT：1.26 min。[M+H]+/Z= 357.2。

化合物 855 . 向化合物87 (28 mg，0.078 mmol)於DCM (1 mL)中之溶液中添加SOCl₂ (0.144 mL，1.972 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物隔夜。濃縮反應混合物且與DCM (3×20 mL)共蒸發以形成粗N7-丁基-1-((5-(氯甲基)-3-甲氧基吡啶-2-基)甲基)-1-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5,7-二胺(41 mg)，其未經純化即立即用於下一步驟。

向前述化合物(41 mg，0.109 mmol，粗物質)於DMF(1 mL)中之溶液中添加環丁胺(388 mg，5.45 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物3小時。LCMS分析顯示反應完成。用乙腈及水冷凍乾燥反應混合物。粗物質經由製備型HPLC用以下條件純化：管柱：XBridge C18，200 mm×19 mm，5 μm粒子；移動相A：具有10 mM乙酸銨之5:95乙腈:水；移動相B：具有10 mM乙酸銨之95:5乙腈:水；梯度：保持在8% B下之0分鐘，8至48% B下保持20分鐘，接著在100% B下保持0分鐘；流動速率：20 mL/min；管柱溫度：25℃。藉由MS及UV信號觸發溶離份收集。合併含有所需產物之溶離份且經由離心蒸發乾燥，得到6.6 mg (14.8%)化合物855 (6.6 mg，14.8%)。LC/MS條件：管柱：Waters Acquity BEH C18，2.1 mm×50 mm，1.7 μm粒子；移動相A：具有10 mM乙酸銨之5:95乙腈:水；移動相B：具有10 mM乙酸銨之95:5乙腈:水；溫度：50℃；梯度：0% B至100% B經3分鐘，接著在100% B下保持0.50分鐘；流動速率：1 mL/min；偵測: MS及UV (220 nm)。LC RT=1.36 min。(M+H) = 411.1

細節上作必要修改後，根據本發明之額外化合物可根據此程序製得。 步驟12-根據圖12之化合物

此步驟及隨附圖 12 說明製備本文所揭示之化合物的另一方法，使用化合物867 作為範例。

化合物 90 . 在-78℃下向化合物89 (300 mg，0.722 mmol)溶解於DCM (3 mL)中之溶液中添加溴化乙基鎂(0.633 mL，2.165 mmol)。將2-甲基四氫呋喃緩慢添加至反應混合物中且在-78℃下攪拌1小時且隨後在0℃下攪拌1小時。反應混合物用飽和氯化銨溶液(1 mL)淬滅且達到室溫，接著用DCM (10 mL)稀釋，用水(5 mL)洗滌，接著用鹽水溶液(5 ml)洗滌。有機層經硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，用乙酸乙酯/己烷在矽膠上純化。濃縮含有產物之溶離份，得到呈稠油狀之化合物90 (204 mg，63.4%產率)。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 7.58 (m, 4H), 7.42 - 7.26 (m, 6H), 3.75 - 3.57 (m, 2H), 3.31 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 2.93 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 1.75 (m, 1H), 1.68 - 1.47 (m, 3H), 1.06 (s, 9H), 0.98 (s, 9H), 0.87 (t,J = 7.4 Hz, 3H). LCMS: M/Z = 446.2。

化合物 91 . 將鹽酸(194 µL，0.774 mmol，4 M於二噁烷中)添加至化合物90 (203 mg，0.455 mmol)於乙醚(4554 µL)及MeOH (55.3 µL，1.366 mmol)中之溶液中。在室溫下將混合物攪拌1小時。將溶液濃縮至稠油狀物。接著將20 mL己烷添加至油狀物中且將燒瓶保持於冷凍器中-20℃下1小時。收集白色固體且用冷己烷洗滌，隨後在真空下乾燥，得到呈白色固體狀之化合物91 (116 mg，0.307 mmol，67.4%產率)。1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 7.85 (s, 3H), 7.63 (ddd,J = 7.7, 3.0, 1.7 Hz, 4H), 7.56 - 7.40 (m, 6H), 3.92 - 3.65 (m, 2H), 3.18 (p,J = 6.3 Hz, 1H), 1.86 (dq,J = 13.0, 6.5 Hz, 1H), 1.76 (dq,J = 13.4, 6.4 Hz, 1H), 1.64 - 1.47 (m, 2H), 1.01 (s, 9H), 0.89 (t,J = 7.5 Hz, 3H)。LCMS: M/Z = 342.2。

化合物 867 . 化合物88 (30 mg，0.068 mmol)於DMSO (0.75 mL)中之溶液用化合物91 (51.3 mg，0.136 mmol)、DBU (51.1 µL，0.339 mmol)、隨後BOP (60.0 mg，0.136 mmol)處理且在70℃下加熱2小時，得到化合物92 ，其未分離。將10 M氫氧化鈉水溶液(250 µl，2.500 mmol)添加至化合物92 之反應混合物中且在75℃下攪拌隔夜。真空濃縮反應混合物且用MeOH (0.3 mL)及HCl (37%水溶液，0.3 mL，3.7 mmol)處理殘餘物，在室溫下攪拌30分鐘且濃縮。將粗產物溶解於DMF中，經由PTFE玻璃料過濾，且經由製備型HPLC條件A-1純化。藉由MS信號觸發溶離份收集。合併含有所需產物之溶離份且經由離心蒸發乾燥，得到呈白色固體狀之化合物867 (13 mg，產率40%)。

細節上作必要修改後，根據本發明之額外化合物可根據此程序製得。 程序13-根據圖13之化合物

此程序及隨附圖 13 說明製備本文所揭示之化合物的另一方法，使用化合物851 作為範例。

在細節上作必要修改後，遵循上文針對各種步驟所述之反應條件，使6-(羥基甲基)菸鹼酸甲酯94 與化合物55 偶合且隨後用於化合物851 。

細節上作必要修改後，根據本發明之額外化合物可根據此程序製得。 程序14-根據圖14之化合物

此程序及隨附圖 14 說明製備本文所揭示之化合物的另一方法,使用化合物877 作為範例。

化合物 102 . 將4-硝基-1H-吡唑-5-二甲酸甲酯100 (1.00 g，5.61 mmol)及K₂ CO₃ (0.93 g，6.73 mmol)於DMF (5.9 mL)中之溶液冷卻至0℃且逐份添加4-(溴甲基)苯甲酸甲酯101 (1.29 g，5.61 mmol)。使反應混合物升溫至室溫且攪拌4小時。在真空中濃縮反應混合物。將殘餘物溶解於EtOAc中且用飽和NaHCO₃ 及H₂ O (2×)洗滌。在真空中濃縮有機層。將殘餘物溶解於DCM中且經由管柱層析(80 g SiO₂ ，0-50% EtOAc-己烷梯度)純化，得到化合物102 (0.37 g，21%)。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 8.10 - 8.08 (m, 1H), 8.06 - 8.01 (m, 2H), 7.32 (d, J=8.6 Hz, 2H), 5.55 (s, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.92 - 3.92 (m, 3H)。LC/MS條件B。LC RT: 0.95 min。LCMS (M+H) =320.1。

在前述反應中，產生一些N2區位異構體，其在SiO₂ 層析期間移除：

化合物 103 . 在室溫下將甲酸銨(292 mg，4.64 mmol)及鋅(189 mg，2.9 mmol)添加至化合物102 (370 mg，1.16 mmol)於THF (1.5 ml)/MeOH(1.5 ml)中之溶液中。在室溫下攪拌反應物3小時且添加額外部分之甲酸銨(100 mg，1.59 mmol)及鋅(100 mg，2.04 mmol)。在30分鐘之後，反應混合物經CELITE^TM 墊過濾，且在真空中濃縮濾液，獲得白色固體。將固體懸浮於EtOAc中，攪拌30分鐘且過濾。隨後在真空中濃縮有機濾液，得到化合物103 (335 mg，100%)。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ 7.93 - 7.86 (m, 2H), 7.19 - 7.15 (m, 3H), 5.59 (s, 2H), 5.13 (s, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.73 (s, 3H)。LC/MS條件B：LC RT：0.78 min。LCMS (M+H) =290.1。

化合物 104 . 在室溫下將1,3-雙(甲氧基羰基)-2-甲基-硫代異脲1 (271 mg，1.27 mmol)及乙酸(0.994 mL，17.37 mmol)添加至化合物103 (335 mg，1.16 mmol)於MeOH (14 mL)中之溶液中。在室溫下攪拌反應混合物3小時且添加額外部分HOAc (0.5 mL，8.7 mmol)。在16小時之後，在室溫下再添加一份HOAc (0.3 mL，5.2 mmol)。在72小時後，將甲醇鈉溶液(7.94 mL，34.7 mmol，25%於MeOH中)添加至反應混合物中。攪拌2小時後，用HOAc (3 mL)酸化反應混合物且過濾所得漿料。所得固體用H₂ O及MeOH洗滌，且乾燥隔夜，得到化合物104 (383 mg，93%)。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ 11.52 - 11.22 (m, 1H), 7.94 - 7.88 (m, 3H), 7.33 (d,J =8.3 Hz, 2H), 5.79 (s, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.74 (s, 3H)。一個質子不可見，可能歸因於質子交換。LC/MS條件B：LC RT：0.80 min。LCMS (M+H) =358.2。

化合物 105 . 依序將(S )-1-(((第三丁基二苯基矽烷基)氧基)己-3-胺(71a )鹽酸鹽(840 mg，2.14 mmol)、BOP (711 mg，1.61 mmol)及DBU (808 µL，5.36 mmol)添加至化合物104 (383 mg，1.07 mmol)於DMF (5.4 mL)中之室溫溶液中。攪拌反應混合物16小時。在反應結束時，混合物用EtOAc稀釋且用H₂ O (2×)洗滌。在真空中濃縮有機層。將殘餘物溶解於DCM中且經由管柱層析(40 g SiO₂ ，0-80% EtOAc-己烷梯度)純化，得到化合物105 (424 mg，57%)。¹ H NMR (400 MHz, DMSO- d₆ ) δ 9.53 - 9.49 (m, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.66 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.64 - 7.59 (m, 1H), 7.54 - 7.50 (m, 2H), 7.47 - 7.44 (m, 1H), 7.42 - 7.39 (m, 2H), 7.36 - 7.31 (m, 2H), 7.31 (br t, J=1.4 Hz, 1H), 7.19 - 7.12 (m, 2H), 6.94 (d, J=8.4 Hz, 2H), 6.32 (d, J=8.6 Hz, 1H), 6.03 - 5.84 (m, 2H), 4.56 (td, J=8.4, 4.4 Hz, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.56 (s, 3H), 3.49 - 3.38 (m, 1H), 1.84 - 1.68 (m, 2H), 1.55 - 1.39 (m, 2H), 1.36 - 1.21 (m, 1H), 1.18 - 1.07 (m, 1H), 0.91 - 0.86 (m, 9H), 0.74 (t, J=7.3 Hz, 3H)。LC/MS條件B：LC RT：1.08 min。LCMS (M+H) =695.6。

化合物 106 . 將化合物105 (424 mg，0.610 mmol)於THF (8.7 mL)中之溶液冷卻至15℃且添加LiAlH₄ (1 M於THF中，1.1 mL，1.1 mmol)。在15分鐘之後，添加另一份LiAlH₄ (1 M於THF中，0.3 mL，0.3 mmol)。在10分鐘之後，用MeOH及羅謝爾鹽(飽和溶液)淬滅反應且在室溫下攪拌30分鐘。用EtOAc (3×)萃取混合物。經合併之有機層用H₂ O洗滌且真空濃縮。將殘餘物溶解於DCM/MeOH中，吸收於CELITE^TM 上，且經由管柱層析(24 g SiO₂ ；0-100% EtOAc-己烷梯度溶離)純化，得到化合物106 (181 mg，44%)。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ 9.47 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.62 (ddt,J =5.7, 3.6, 1.8 Hz, 1H), 7.56 (dd,J =7.9, 1.5 Hz, 2H), 7.48 - 7.43 (m, 3H), 7.39 - 7.32 (m, 3H), 7.24 - 7.20 (m, 2H), 7.08 (d,J =8.1 Hz, 2H), 6.91 (d,J =8.1 Hz, 2H), 6.29 (d,J =8.6 Hz, 1H), 5.78 (d,J =1.9 Hz, 2H), 5.06 (t,J =5.6 Hz, 1H), 4.63 - 4.54 (m, 1H), 4.32 (d,J =5.4 Hz, 2H), 3.57 (s, 3H), 3.55 - 3.49 (m, 1H), 1.85 - 1.76 (m, 2H), 1.55 - 1.40 (m, 2H), 1.20 - 1.02 (m, 2H), 0.91 (s, 9H), 0.78 (t,J =7.3 Hz, 3H)。LC/MS條件B：LC RT：0.95 min。LCMS (M+H) =667.6。

化合物 107 . 將亞硫醯氯(99 µL，1.4 mmol)添加至甲基化合物106 (181 mg，0.224 mmol)於THF (2.7 mL)中之室溫溶液中。在攪拌10分鐘之後，在真空中濃縮反應混合物。將殘餘物再溶解於DCM中且真空濃縮，得到化合物107 (172.2 mg，93%)。LC/MS條件B：LC RT：1.11 min。LCMS (M+H) =685.6。

化合物 108 . 在室溫下將化合物107 (23 mg，0.034 mmol)溶解於DMF (0.7 mL)中且用DIEA (88 μL，0.50 mmol)及3-甲氧基氮雜環丁烷(26a )鹽酸鹽(21 mg，0.17 mmol)處理。在70℃下攪拌2小時之後，在真空中濃縮反應混合物，得到粗化合物108 ，其未經進一步純化即使用。LC/MS條件B：LC RT：0.89 min。LCMS (M+H) =736.7。

化合物 877 . 在室溫下用NaOH (10 M水溶液，0.1 mL，1.0 mmol)處理化合物108 (25 mg，0.034 mmol)於二噁烷(0.7 mL)中之溶液。將反應物加熱至75℃，持續2小時，隨後添加另一份NaOH (10 M水溶液，0.15 mL，1.5 mmol)。在80℃下加熱4小時之後，在真空中濃縮反應混合物。殘餘物用MeOH (0.5 mL)處理，添加HCl (37%水溶液，0.4 mL，4.9 mmol)，在室溫下攪拌60分鐘且濃縮。將粗產物溶解於DMF中，經由PTFE玻璃料過濾，且經由製備型LC/MS條件A-2純化。藉由MS信號觸發溶離份收集。合併含有所需產物之溶離份且經由離心蒸發乾燥，得到殘餘物，其經由製備型LC/MS條件A-1進一步純化。藉由MS信號觸發溶離份收集。合併含有所需產物之溶離份且經由離心蒸發乾燥，得到呈TFA鹽形式之化合物877 (5.7 mg，38%)。LC/MS條件C：LC RT：1.0 min。LCMS (M+H) =440.2。

化合物 874 . 在室溫下用NaOH (10 M水溶液，0.2 mL，2.0 mmol)處理化合物106 (20 mg，0.030 mmol)於二噁烷(0.15 mL)中之溶液且加熱反應物至75℃，持續1小時，隨後添加另一份NaOH (10 M水溶液，0.2 mL，2.0 mmol)。在75℃下加熱3小時後，在真空中濃縮反應混合物。殘餘物用MeOH (0.5 mL)及HCl (37%水溶液，0.4 mL，4.9 mmol)處理，在室溫下攪拌30分鐘且濃縮。將粗產物溶解於DMF中，經由PTFE玻璃料過濾，且經由製備型LC/MS條件A-2純化。藉由MS信號觸發溶離份收集。合併含有所需產物之溶離份且經由離心蒸發乾燥，得到化合物874 。LC/MS條件C：LC RT：1.07 min。LCMS (M+H) = 371.2。

細節上作必要修改後，根據本發明之額外化合物可根據此程序製得。 程序15-化合物829

此程序係關於化合物829 及其區位異構體之製備方法。此等化合物藉由使化合物36 及37 與MeMgCl格林納試劑(Grignard reagent)反應來製備。

在0℃下向化合物36 及37 (60 mg，0.134 mmol)於THF (1 mL)中之混合物中添加MeMgCl (0.171 mL，0.513 mmol)。1小時後，LCMS顯示反應完成。混合物經由製備型LC/MS以如下條件純化：管柱：XBridge C18，200 mm×19 mm，5 μm粒子；移動相A：具有0.1% TFA之5:95乙腈:水；移動相B：具有0.1%TFA之95:5乙腈:水；梯度：在10% B下保持0分鐘，10-45% B經20分鐘，接著在100% B下保持4分鐘；流動速率：20 mL/min；管柱溫度：25℃。藉由MS信號觸發溶離份收集。合併含有所需產物之溶離份且經由離心蒸發乾燥。 特性

本發明化合物之分析資料提供於下表B中，以及其人類TLR7(hTLR7)促效作用資料。在一些實例中，所報導之活性促效作用值為複數個分析之平均值。特定化合物與特定程序之關聯為說明性且非窮盡性的。化合物可藉由其他程序之一來製造，且相反地，相同程序可用於製造本發明之其他化合物。滯留時間(retention time，RT)列適用時係指根據上文LCMS程序B/C/D/E之滯留時間。

本發明之前述詳細描述包括主要或僅僅涉及本發明之特定部分或態樣的章節。應瞭解，出於明晰及便利之目的，特定特徵可不僅僅在揭示該特徵之章節中相關，且本文之揭示內容包括不同段落中存在之資訊的所有適當組合。類似地，儘管本文之各種圖式及描述係關於本發明之特定實施例，但應瞭解，若特定特徵於特定圖式或實施例之情形下揭示，則此類特徵亦可在適當程度上與另一特徵組合用於另一圖式或實施例之情形下或通常本發明中。

此外，儘管本發明尤其關於某些較佳實施例進行描述，但本發明並不限於此類較佳實施例。確切言之，本發明之範疇藉由所附申請專利範圍界定。 字首語及縮寫

表C提供本說明書中所用之字首語及縮寫以及其含義之清單。

參考文獻

下文提供在本說明書中較早部分以縮寫方式藉由第一作者(或發明者)及年份引用之以下參考文獻的完整引用。此等參考文獻各以引用的方式併入本文中以用於所有目的。

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圖 1 、2A 、2B 、3A 、3B 、4A 、4B 、5 、6A 、6B 、7 、8 、9 、10 、11 、12 、13 及14 展示製備本文所揭示之化合物的反應流程。

圖 15 及16 展示將連接子附接至本發明之化合物以使得該等化合物適合於偶聯之流程。

Claims (20)

1. 一種化合物，其具有式I之結構

   

   其中 各X¹ 獨立地為N或CR² ； X² 為O、CH₂ 、NH、S或N(C₁ -C₃ 烷基)； R¹ 為H、CH₃ (CH₂ )_{1 - 3} 、CH₃ (CH₂ )_{0 - 1} O(CH₂ )_{2 - 3} 、CH₃ (CH₂ )_{0 - 3} C(=O)、CH₃ (CH₂ )_{0 - 1} O(CH₂ )_{2 - 3} C(=O)、

   

   ； R² 為H、O(C₁ -C₃ 烷基)、C₁ -C₃ 烷基、Cl、F或CN； R³ 為H、鹵基、OH、CN、NH₂ 、NH(C₁ -C₅ 烷基)、N(C₁ -C₅ 烷基)₂ 、NH(CH₂ )_{0 - 1} (C₃ -C₆ 環烷基)、NH(C₄ -C₈ 雙環烷基)、NH(C₆ -C₁₀ 螺環烷基)、N(C₃ -C₆ 環烷基)₂ 、NH(CH₂ )_{1 - 3} (芳基)、N((CH₂ )_{1 - 3} (芳基))₂ 、具有結構

   

   之環胺部分、6員芳族或雜芳族部分或者5員雜芳族部分； 其中 烷基、環烷基、雙環烷基、螺環烷基、環胺、6員芳族或雜芳族部分或5員雜芳族部分視情況經一或多個選自以下之取代基取代：OH、鹵基、CN、(C₁ -C₃ 烷基))、O(C₁ -C₃ 烷基)、C(=O)(Me)、SO₂ (C₁ -C₃ 烷基)、C(=O)(Et)、NH₂ 、NH(Me)、N(Me)₂ 、NH(Et)、N(Et)₂ 及N(C₁ -C₃ 烷基)、(CH₂ )_{1 - 2} OH、(CH₂ )_{1 - 2} OMe；及 環烷基、雙環烷基、螺環烷基或環胺部分可具有經O、S、NH、N(C₁ -C₃ 烷基)或N(Boc)置換之CH₂ 基團； m為0或1； 且 n為1、2或3； 或其醫藥學上可接受之鹽。
2. 如請求項1之化合物，其中該基團R¹ 係選自由以下組成之群：

   

   

   。
3. 如請求項1之化合物，其中該基團R¹ 係選自

   

   。
4. 如請求項1之化合物，其中該部分

   

   係選自由以下組成之群：

   

   。
5. 如請求項1之化合物，其中該部分

   

   為

   

   。
6. 如請求項1之化合物，其中該基團R³ 係選自由以下組成之群：Cl、H、

   

   

   

   。
7. 如請求項1之化合物，其中R³ 係部分

   

   ， 其選自由以下組成之群：

   

   。
8. 如請求項1之化合物，其具有式(I')之結構

   

   。
9. 如請求項1之化合物，其具有式Ia之結構

   

   。
10. 如請求項9之化合物，其中R¹ 為

    

    。
11. 如請求項1之化合物，其具有式Ib之結構

    

    。
12. 如請求項11之化合物，其中

    

    為

    

    。
13. 如請求項1至12中任一項之化合物，其與大小在2 kDa與40 kDa之間的聚(乙二醇)部分共價鍵結。
14. 一種如請求項1至13中任一項之化合物之用途，其用於製造供治療癌症用之藥劑，其中該藥劑進一步包含抗癌免疫治療劑或與抗癌免疫治療劑組合使用。
15. 如請求項14之用途，其中該抗癌免疫治療劑係拮抗性抗CTLA-4、抗PD-1或抗PD-L1抗體。
16. 如請求項15之用途，其中該抗癌免疫治療劑係伊匹單抗(ipilimumab)、納武單抗(nivolumab)或派姆單抗(pembrolizumab)。
17. 如請求項14至16中任一項之用途，其中該癌症為肺癌(包括非小細胞肺癌)、胰臟癌、腎癌、頭頸癌、淋巴瘤(包括霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma))、皮膚癌(包括黑素瘤及麥克爾皮膚癌(Merkel skin cancer))、尿道上皮癌(包括膀胱癌)、胃癌、肝細胞癌或結腸直腸癌。
18. 一種如請求項1至13中任一項之化合物與抗癌免疫治療劑之醫藥組合。
19. 如請求項18之醫藥組合，其中該抗癌免疫治療劑係拮抗性抗CTLA-4、抗PD-1或抗PD-L1抗體。
20. 如請求項19之醫藥組合，其中該抗癌免疫治療劑係伊匹單抗、納武單抗或派姆單抗。

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