TW201726700A - 用於活化「干擾素基因刺激子」依賴性訊號之組合物及方法 - Google Patents

用於活化「干擾素基因刺激子」依賴性訊號之組合物及方法 Download PDF

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大衛 凱恩
李奧納德 桑
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羅拉 西斯 吉利曼
賈斯汀 雷恩
莎拉 M 麥克惠特
湯瑪斯 Ｗ 二世 杜賓斯基
傑佛瑞 麥肯納
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Abstract

本發明提供高活性環狀二核苷酸(CDN)免疫刺激劑，其經由新近發現的稱為STING(干擾素基因刺激子)之細胞質受體活化DC。特定言之，本發明之CDN係以組合物形式提供，其包含一或多種誘導人類STING依賴性I型干擾素產生之環狀嘌呤二核苷酸，其中該組合物中之環狀嘌呤二核苷酸為經2'-或3'-單氟取代，或經2'3'-二氟取代之混合鍵2',5'-3',5'CDN。

Description

用於活化「干擾素基因刺激子」依賴性訊號之組合物及方法
提供以下背景技術之論述僅用於幫助閱讀者理解本發明且不視為描述本發明或承認先前技術組成本發明。
對免疫逃避潛在機制及組合治療方案(其經由與免疫檢查點抑制劑或其他療法之組合來直接或間接增強治療性疫苗接種之效能)的新見解已充當研發可引起或強化有效適應性免疫反應之疫苗或免疫調節劑的基礎。這些調節劑由對靶向惡性疾病具有特異性之腫瘤特異性CD4+及CD8+ T細胞組成，引起抗腫瘤反應及臨床益處。先天性免疫系統如何由靶向配位體接合決定了適應性反應之發展且使其適用於疫苗及免疫調節劑之設計(Reed等人，Trends Immunol.,30：23-32,2009；Dubensky及Reed,Semin.Immunol.,22：155-61,2010；Kastenmuller等人，J.Clin.Invest.,121：1782-1796,2011；Coffman等人，Immunity,33：492-503,2010)。
環狀二核苷酸(CDN)環狀二-AMP(由單核球增多性李氏菌(Listeria monocytogenes)及其他細菌產生)以及其類似物環狀二-GMP及環狀GMP-AMP由宿主細胞識別為病原體相關分子模式(PAMP)，其結合於稱為干擾 素基因刺激子(STING)之病原體識別受體(PRR)。STING為宿主哺乳動物細胞之細胞質中之接附蛋白質，其活化TANK結合激酶(TBK1)-IRF3及NF-κB訊號軸，引起IFN-β及其他強烈活化先天性免疫性之基因產物之誘導。現發現STING為宿主胞漿監督路徑之組分(Vanee等人，2009)，宿主胞漿監督路徑感測細胞內病原體之感染且作為回應而誘導IFN-β之產生，引起由抗原特異性CD4+及CD8+ T細胞以及病原體特異性抗體組成之適應性保護性病原體特異性免疫反應之產生。環狀嘌呤二核苷酸之實例詳細描述於例如：美國專利案7,709458及7,592,326；專利申請案WO2007/054279、WO2014/093936及WO2014/189805；以及Yan等人，Bioorg.Med.Chem Lett.18：5631(2008)中。
與人類寡腺苷酸合成酶環狀GMP-AMP合成酶之催化域具有顯著結構同源性之未經表徵之小鼠基因報導為引起哺乳動物細胞中產生STING結合CDN之酶(Sun等人，Science 339(6121)：786-91,2013)。稱為環狀GMP-AMP合成酶(cGAS)，此酶催化在DNA存在下，自ATP及GTP進行之環狀GMP-AMP(cGAMP)之合成。此cGAMP接著充當第二信使，其結合且活化STING。此等cGAS產生之CDN與細菌產生之CDN在結構上的不同之處在於其具有不尋常的磷酸二酯鍵。因此，儘管細菌產生之CDN含有兩個核苷酸之間的雙-3',5'鍵，但哺乳動物CDN含有一個2',5'鍵及一個3',5'鍵，或所謂的「混合鍵」(ML)或非典型CDN。此等2',5'-3',5'分子以奈米級親和力結合STING，比細菌c-二-GMP好約300倍。
人類STING(hSTING)亦具有已知多形性，包括編碼位置232處之組胺酸的對偶基因，該組胺酸對雙-3',5'(典型)CDN但非2',5'-3',5'(非典型、混合鍵)CDN具有抗性(Diner等人，Cell Reports 3,1355-61,2013；Jin等 人，Genes and Immunity,12：263-9,2011)。已報導hSTING基因中之單核苷酸多形現象可影響對細菌衍生之典型CDN之反應(Diner等人，2013；Gao等人，Cell 154,748-762,2013；Conlon等人，J.Immunol.190：5216-5225,2013)。已報導hSTING之五種單倍型(WT、REF、HAQ、AQ及Q對偶基因)，其在胺基酸位置71、230、232及293處不同(Jin等人，2011；Yi等人，PLOS One 8：e77846,2013)。據報導，表現hSTING之細胞對具有雙-(3',5')鍵之細菌CDN cGAMP、c-二-AMP及c-二-GMP之刺激反應較弱，但對內源性產生之cGAS產物ML cGAMP起反應(Diner等人，2013)。因此，已提出在hSTING靶向方面，2',5'-3',5'分子代表顯著更強效之生理學配位體(Zhang等人，Mol.Cell.51：226-35,2013；Xiao及Fitzgerald,Mol.Cell 51：135-39,2013)。
本發明之一個目標為提供可調節對疾病之免疫反應的組合物及方法。本發明之另一目標為提供可提供環狀嘌呤二核苷酸類似物之組合物及方法，該環狀嘌呤二核苷酸類似物在用於活化哺乳動物且較佳人類STING時呈現改良之特徵。本發明之另一目標為提供用於治療癌症之組合物及方法。
在第一態樣中，本發明提供式I之經單-或二-氟取代之混合鍵(ML)2',5'-3',5'環狀嘌呤二核苷酸(「單-或二-F-ML-CDN」)化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中：R1及R2獨立地為經由N9位置結合於結構之鳥嘌呤或腺嘌呤，限制條件為R1及R2不皆為鳥嘌呤；R3及R4獨立地為-H、-OH、-O-C(=O)-C1-14烷基或-F，限制條件為R3及R4中之至少一者為-F；及X1及X2獨立地為-OH或-SH。
如下文所描述，在某些實施例中，X1及X2各自為-SH，且R3及R4中之一者或兩者為-F；且在某些此等實施例中，若R3及R4中僅一者為F，則R3及R4中之另一者為-O-C(=O)-C1-14烷基，且較佳為-O-C(=O)-C6-12烷基。在某些此等實施例中，R3為F且R4為-O-C(=O)-C1-14烷基，且較佳為-O-C(=O)-C6-12。此外，當X1或X2為-SH時，在硫代磷酸酯基處將對掌性中心引入分子中。在某些此等實施例中，化合物為R,R非對映異構體。
在第一態樣之第一實施例中，式I化合物為式I-a化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R1、R2、R3、R4、X1及X2如關於式I化合物所定義。
在第一態樣之第二實施例中，式I化合物為式I-b化合物：
或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R1、R2、R3、R4、X1及X2如關於式I化合物所定義。
在第一態樣及其第一或第二實施例之一些實施例中，X1及X2為-SH。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3為-F且R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3為-F且R4為-H或-OH。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3為-F且R4為-OH。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4為-F。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3為-H或-OH且R4為-F。在一些 實施例中，X1及X2為-SH，R3為-OH且R4為-F。在一些實施例中，X1及X2為-SH，且R3及R4為-F。在一些實施例中，X1及X2為-SH，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3為-F，R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3為-F，R4為-H或-OH，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3為-F，R4為-OH，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R4為-F，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3為-H或-OH，R4為-F，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3為-OH,R4為-F，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3及R4為F，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3為-F，R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3為-F，R4為-H或-OH，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3為-F，R4為-OH，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R4為-F，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3為-H或-OH，R4為-F，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3為-OH，R4為-F，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3及R4為-F，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3為-F，R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及 X2為-SH，R3為-F，R4為-H或-OH，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3為-F，R4為-OH，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R4為-F，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3為-H或-OH，R4為-F，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3為-OH，R4為-F，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-SH，R3及R4為-F，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。
在第一態樣及其第一或第二實施例之一些實施例中，X1為-OH且X2為-SH。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R3為-F且R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R3為-F且R4為-H或-OH。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R3為-F且R4為-OH。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R3為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4為-F。在一些實施例中，X1為-OH，×2為-SH，R3為-H或-OH且R4為-F。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R3為-OH且R4為-F。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，且R3及R4為-F。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R3為-F，R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中。X1為-OH。X2為-SH。R3為-F。R4為-H或-OH，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R3為-F，R4為-OH，且R1及R2為腺瞟呤。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R3為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R4為-F，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-OH，X2為- SH，R3為-H或-OH，R4為-F，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R3為-OH，R4為-F，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R3及R4為-F，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R3為-F，R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R3為-F，R4為-H或-OH，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R3為-F，R4為-OH，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R3為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R4為-F，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R3為-H或-OH，R4為-F，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R3為-OH，R4為-F，R1為腺嘌呤且R2為鳥瞟呤。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R3及R4為-F，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R3為-F，R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R3為-F，R4為-H或-OH，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R3為-F，R4為-OH，R1為鳥嘌呤且R2為腺瞟呤。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R3為-OH，R4為-F，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-OH，X2為-SH，R3及R4為-F，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。
在第一態樣及其第一或第二實施例之一些實施例中，X1為-SH且X2 為-OH。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-F且R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-F且R4為-H或-OH。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-F且R4為-OH。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4為-F。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-H或-OH且R4為-F。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-OH且R4為-F。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH且R3及R4為-F。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-F，R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-F，R4為-H或-OH，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-F，R4為-OH，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R4為-F，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-H或-OH，R4為-F，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-OH，R4為-F，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3及R4為-F，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-F，R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-F，R4為-H或-OH，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-F，R4為-OH，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-H、-OH或-O- C(=O)-C1-14烷基，R4為-F，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-H或-OH，R4為-F，R1為腺瞟呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-OH，R4為-F，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3及R4為-F，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-F，R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-F，R4為-H或-OH，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-F，R4為-OH，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R4為-F，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-H或-OH，R4為-F，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3為-OH，R4為-F，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1為-SH，X2為-OH，R3及R4為-F，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。
在第一態樣及其第一或第二實施例之一些實施例中，X1及X2為-OH。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-F且R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-F且R4為-H或-OH。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-F且R4為-OH。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4為-F。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-H或-OH且R4為-F。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-OH且R4為-F。在一些實施例中，X1及 X2為-OH，且R3及R4為-F。在一些實施例中，X1及X2為-OH，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-F，R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-F，R4為-H或-OH，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-F，R4為-OH，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R4為-F，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-H或-OH，R4為-F，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-OH，R4為-F，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3及R4為-F，且R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-F，R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-F，R4為-H或-OH，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-F，R4為-OH，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R4為-F，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-H或-OH，R4為-F，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-OH，R4為-F，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3及R4為-F，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R1為鳥嘌呤且R2為腺瞟呤。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-F，R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-F，R4為-H或-OH，R1為鳥嘌呤且 R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-F，R4為-OH，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R4為-F，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-H或-OH，R4為-F，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3為-OH，R4為-F，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，X1及X2為-OH，R3及R4為-F，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。
在第一態樣及其第一或第二實施例之一些實施例中，R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，R1及R2為腺嘌呤，R3為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4為-F。在一些實施例中，R1及R2為腺嘌呤，R3為-H或-OH且R4為-F。在一些實施例中，R1及R2為腺嘌呤，R3為-OH且R4為-F。在一些實施例中，R1及R2為腺嘌呤，R3為-F且R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R1及R2為腺嘌呤，R3為-F且R4為-H或-OH。在一些實施例中，R1及R2為腺嘌呤，R3為-F且R4為-OH。在一些實施例中，R1及R2為腺嘌呤且R3及R4為-F。
在第一態樣及其第一或第二實施例之一些實施例中，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，R1為腺嘌呤，R2為鳥嘌呤，R3為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4為-F。在一些實施例中，R1為腺嘌呤，R2為鳥嘌呤，R3為-H或-OH且R4為-F。在一些實施例中，R1為腺嘌呤，R2為鳥嘌呤，R3為-OH且R4為-F。在一些實施例中，R1為腺嘌呤，R2為鳥嘌呤，R3為-F且R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R1為腺嘌呤，R2為鳥嘌呤，R3為-F且R4為-H或-OH。在一些實施例中，R1為腺嘌呤，R2為鳥嘌呤，R3為-F且R4為-OH。在一些實施例中，R1為 腺嘌呤，R2為鳥嘌呤且R3及R4為-F。
在第一態樣及其第一或第二實施例之一些實施例中，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，R1為鳥嘌呤，R2為腺嘌呤，R3為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4為-F。在一些實施例中，R1為鳥嘌呤，R2為腺嘌呤，R3為-H或-OH且R4為-F。在一些實施例中，R1為鳥嘌呤，R2為腺嘌呤，R3為-OH且R4為-F。在一些實施例中，R1為鳥嘌呤，R2為腺嘌呤，R3為-F且R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R1為鳥嘌呤，R2為腺嘌呤，R3為-F且R4為-H或-OH。在一些實施例中，R1為鳥嘌呤，R2為腺嘌呤，R3為-F且R4為-OH。在一些實施例中，R1為鳥嘌呤，R2為腺嘌呤且R3及R4為-F。
在第一態樣及其第一或第二實施例之一些實施例中，R3為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4為-F。在一些實施例中，R3為-H或-OH且R4為-F。在一些實施例中，R3為-OH且R4為-F。在一些實施例中，R3為-F且R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R3為-F且R4為-H或-OH。在一些實施例中，R3為-F且R4為-OH。在一些實施例中，R3及R4為-F。
在第一態樣之一些實施例中，化合物選自由以下組成之群： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第一態樣及其第一實施例之一些實施例中，化合物選自由以下組成之群： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第一態樣及其第二實施例之一些實施例中，化合物選自由以下組成之群：
或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第一態樣之第三實施例中，式I化合物為式I-c化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫 藥學上可接受之水合物，其中R1、R2、R3及R4如關於式I化合物所定義。
在第一態樣之第四實施例中，式I化合物為式I-d化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R1、R2、R3及R4如關於式I化合物所定義。
在第一態樣之第五實施例中，式I化合物為式I-e化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R1、R2、R3及R4如關於式I化合物所定義。
在第一態樣及其第三、第四或第五實施例之一些實施例中，R3為-F且R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R3為-F且R4為-H或-OH。在一些實施例中，R3為-F且R4為-OH。在一些實施例中，R3為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4為-F。在一些實施例中，R3為-H或-OH且R4為-F。在一些實施例中，R3為-OH且R4為-F。在一些實施例 中，R3及R4為-F。在一些實施例中，R1及R2為腺嘌呤。在一些實施例中，R1為腺嘌呤且R2為鳥嘌呤。在一些實施例中，R1為鳥嘌呤且R2為腺嘌呤。在一些實施例中，R1及R2為腺嘌呤，R3為-F且R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R1及R2為腺嘌呤，R3為-F且R4為-H或-OH。在一些實施例中，R1及R2為腺嘌呤，R3為-F且R4為-OH。在一些實施例中，R1及R2為腺嘌呤，R3為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4為-F。在一些實施例中，R1及R2為腺嘌呤，R3為-H或-OH且R4為-F。在一些實施例中，R1及R2為腺嘌呤，R3為-OH且R4為-F。在一些實施例中，R1及R2為腺嘌呤，且R3及R4為-F。在一些實施例中，R1為腺嘌呤，R2為鳥嘌呤，R3為-F且R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R1為腺嘌呤，R2為鳥嘌呤，R3為-F且R4為-H或-OH。在一些實施例中，R1為腺嘌呤，R2為鳥嘌呤，R3為-F且R4為-OH。在一些實施例中，R1為腺嘌呤，R2為鳥嘌呤，R3為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4為-F。在一些實施例中，R1為腺嘌呤，R2為鳥嘌呤，R3為-H或-OH且R4為-F。在一些實施例中，R1為腺嘌呤，R2為鳥嘌呤，R3為-OH且R4為-F。在一些實施例中，R1為腺嘌呤，R2為鳥嘌呤，且R3及R4為-F。在一些實施例中，R1為鳥嘌呤，R2為腺嘌呤，R3為-F且R4為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R1為鳥嘌呤，R2為腺嘌呤，R3為-F且R4為-H或-OH。在一些實施例中，R1為鳥嘌呤，R2為腺嘌呤，R3為-F且R4為-OH。在一些實施例中，R1為鳥嘌呤，R2為腺嘌呤，R3為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4為-F。在一些實施例中，R1為鳥嘌呤，R2為腺嘌呤，R3為-H或-OH且R4為-F。在一些實施例中，R1為鳥嘌呤，R2為腺嘌呤，R3為-OH且R4為-F。在一些實施例中，R1為鳥嘌 呤，R2為腺嘌呤，且R3及R4為-F。
在第一態樣及其任一個以上實施例之一些實施例中，當R3或R4為-O-C(=O)-C1-14烷基時，-O-C(=O)-C1-14烷基為-O-C(=O)-C3-14烷基、-O-C(=O)-C5-13烷基、-O-C(=O)-C5-11烷基或-O-C(=O)-C9烷基，較佳其中烷基鏈為直鏈。在一個較佳實施例中，-O-C(=O)-C1-14烷基為-O-C(=O)-(CH2)8-CH3。
在第一態樣及其第三實施例之一些實施例中，化合物選自由以下組成之群：
或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第一態樣及其第一或第四實施例之一些實施例中，化合物選自由以下組成之群：
或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第一態樣及其第五實施例之一些實施例中，化合物選自由以下組成之群： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第二態樣中，本發明提供式IA之單-或二-F-ML-CDN化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中：R3a及R4a獨立地為-H、-OH、-O-C(=O)-C1-14烷基或-F，限制條件為R3a及R4a中之至少一者為-F；及X1a及X2a獨立地為-OH或-SH。
如下文所描述，在某些實施例中，X1a及X2a各自為-SH，且R3a及R4a中之一者或兩者為-F；且在某些此等實施例中，若R3a及R4a中僅一者為F，則R3a及R4a中之另一者為-O-C(=O)-C1-14烷基，且較佳為-O-C(=O)-C6-12烷基。在某些此等實施例中，R3a為F且R4a為-O-C(=O)-C1-14烷基，且較佳為-O-C(=O)-C6-12。此外，當X1a或X2a為-SH時，在硫代磷酸酯基處將對掌性中心引入分子中。在某些此等實施例中，化合物為R,R 非對映異構體。
在第二態樣之第一實施例中，式IA化合物為式IA-a化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R3a、R4a、X1a及X2a如關於式IA化合物所定義。
在第二態樣之第二實施例中，式IA化合物為式IA-b化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R3a、R4a、X1a及X2a如關於式IA化合物所定義。
在第二態樣及其第一或第二實施例之一些實施例中，X1a及X2a為-SH。在一些實施例中，X1a及X2a為-SH，R3a為-F且R4a為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1a及X2a為-SH，R3a為-F且R4a為-H或-OH。在一些實施例中，X1a及X2a為-SH，R3a為-F且R4a為-OH。在一些實施例中，X1a及X2a為-SH，R3a為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4a為-F。在一些實施例中，X1a及X2a為-SH，R3a為-H或- OH且R4a為-F。在一些實施例中，X1a及X2a為-SH，R3a為-OH且R4a為-F。在一些實施例中，X1a及X2a為-SH，且R3a及R4a為-F。
在第二態樣及其第一或第二實施例之一些實施例中，X1a為-OH且X2a為-SH。在一些實施例中，X1a為-OH，X2a為-SH，R3a為-F且R4a為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1a為-OH，X2a為-SH，R3a為-F且R4a為-H或-OH。在一些實施例中，X1a為-OH，X2a為-SH，R3a為-F且R4a為-OH。在一些實施例中，X1a為-OH，X2a為-SH，R3a為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4a為-F。在一些實施例中，X1a為-OH，X2a為-SH，R3a為-H或-OH且R4a為-F。在一些實施例中，X1a為-OH，X2a為-SH，R3a為-OH且R4a為-F。在一些實施例中，X1a為-OH，X2a為-SH，且R3a及R4a為-F。
在第二態樣及其第一或第二實施例之一些實施例中，X1a為-SH且X2a為-OH。在一些實施例中，X1a為-SH，X2a為-OH，R3a為-F且R4a為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1a為-SH，X2a為-OH，R3a為-F且R4a為-H或-OH。在一些實施例中，X1a為-SH，X2a為-OH，R3a為-F且R4a為-OH。在一些實施例中，X1a為-SH，X2a為-OH，R3a為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4a為-F。在一些實施例中，X1a為-SH，X2a為-OH，R3a為-H或-OH且R4a為-F。在一些實施例中，X1a為-SH，X2a為-OH，R3a為-OH且R4a為-F。在一些實施例中，X1a為-SH，X2a為-OH，且R3a及R4a為-F。
在第二態樣及其第一或第二實施例之一些實施例中，X1a及X2a為-OH。在一些實施例中，X1a及X2a為-OH，R3a為-F且R4a為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1a及X2a為-OH，R3a為-F且R4a 為-H或-OH。在一些實施例中，X1a及X2a為-OH，R3a為-F且R4a為-OH。在一些實施例中，X1a及X2a為-OH，R3a為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4a為-F。在一些實施例中，X1a及X2a為-OH，R3a為-H或-OH且R4a為-F。在一些實施例中，X1a及X2a為-OH，R3a為-OH且R4a為-F。在一些實施例中，X1a及X2a為-OH，且R3a及R4a為-F。
在第二態樣及其第一或第二實施例之一些實施例中，R3a為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4a為-F。在一些實施例中，R3a為-H或-OH且R4a為-F。在一些實施例中，R3a為-OH且R4a為-F。在一些實施例中，R3a為-F且R4a為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R3a為-F且R4a為-H或-OH。在一些實施例中，R3a為-F且R4a為-OH。在一些實施例中，R3a及R4a為-F。
在第二態樣及其任一個以上實施例之一些實施例中，當R3a或R4a為-O-C(=O)-C1-14烷基時，-O-C(=O)-C1-14烷基為-O-C(=O)-C3-14烷基、-O-C(=O)-C5-13烷基、-O-C(=O)-C5-11烷基或-O-C(=O)-C9烷基，較佳其中烷基鏈為直鏈。在一個較佳實施例中，-O-C(=O)-C1-14烷基為-O-C(=O)-(CH2)8-CH3。
在第二態樣之第三實施例中，式IA化合物為式IA-c化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R3a及R4a獨立地為-H、-OH、-O-C(=O)- C1-14烷基或-F，限制條件為R3a及R4a中之至少一者為-F。在一些實施例中，R3a為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4a為-F。在一些實施例中，R3a為-H或-OH且R4a為-F。在一些實施例中，R3a為-OH且R4a為-F。在一些實施例中，R3a為-F且R4a為-H、-OH、-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R3a為-F且R4a為-H或-OH。在一些實施例中，R3a為-F且R4a為-OH。在一些實施例中，R3a及R4a為-F。在一些實施例中，當R3a或R4a為-O-C(=O)-C1-14烷基時，-O-C(=O)-C1-14烷基為-O-C(=O)-C3-14烷基、-O-C(=O)-C5-13烷基、-O-C(=O)-C5-11烷基或-O-C(=O)-C9烷基，較佳其中烷基鏈為直鏈。在一個較佳實施例中，-O-C(=O)-C1-14烷基為-O-C(=O)-(CH2)8-CH3。
在第二態樣之第四實施例中，式IA化合物為式IA-d化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R3a及R4a獨立地為-H、-OH、-O-C(=O)-C1-14烷基或-F，限制條件為R3a及R4a中之至少一者為-F。在一些實施例中，R3a為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4a為-F。在一些實施例中，R3a為-H或-OH且R4a為-F。在一些實施例中，R3a為-OH且R4a為-F。在一些實施例中，R3a為-F且R4a為-H、-OH、-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R3a為-F且R4a為-H或-OH。在一些實施例中，R3a為-F且R4a為-OH。在一些實施例中，R3a及R4a為-F。在一些實施例中，當R3a或 R4a為-O-C(=O)-C1-14烷基時，-O-C(=O)-C1-14烷基為-O-C(=O)-C3-14烷基、-O-C(=O)-C5-13烷基、-O-C(=O)-C5-11烷基或-O-C(=O)-C9烷基，較佳其中烷基鏈為直鏈。在一個較佳實施例中，-O-C(=O)-C1-14烷基為-O-C(=O)-(CH2)8-CH3。
在第二態樣之第五實施例中，式IA化合物為式IA-e化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R3a及R4a獨立地為-H、-OH、-O-C(=O)-C1-14烷基或-F，限制條件為R3a及R4a中之至少一者為-F。在一些實施例中，R3a為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4a為-F。在一些實施例中，R3a為-H或-OH且R4a為-F。在一些實施例中，R3a為-OH且R4a為-F。在一些實施例中，R3a為-F且R4a為-H、-OH、-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R3a為-F且R4a為-H或-OH。在一些實施例中，R3a為-F且R4a為-OH。在一些實施例中，R3a及R4a為-F。在一些實施例中，當R3a或R4a為-O-C(=O)-C1-14烷基時，-O-C(=O)-C1-14烷基為-O-C(=O)-C3-14烷基、-O-C(=O)-C5-13烷基、-O-C(=O)-C5-11烷基或-O-C(=O)-C9烷基，較佳其中烷基鏈為直鏈。在一個較佳實施例中，-O-C(=O)-C1-14烷基為-O-C(=O)-(CH2)8-CH3。
在第二態樣及其第三實施例之一些實施例中，化合物選自由以下組成之群：
或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第二態樣及其第一或第四實施例之一些實施例中，化合物選自由以下組成之群： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第二態樣及其第二或第五實施例之一些實施例中，化合物選自由以下組成之群： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第三態樣中，本發明提供式IB之單-或二-F-ML-CDN化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中：R1b及R2b中之一者為經由N9位置結合於結構之鳥嘌呤，且R1b及R2b中之另一者為經由N9位置結合於結構之腺嘌呤；R3b及R4b獨立地為-H、-OH、-O-C(=O)-C1-14烷基或-F，限制條件為R3b及R4b中之至少一者為-F；及X1b及X2b獨立地為-OH或-SH。
如下文所描述，在某些實施例中，X1b及X2b各自為-SH，且R3b及R4b中之一者或兩者為-F；且在某些此等實施例中，若R3b及R4b中僅一 者為F，則R3b及R4b中之另一者為-O-C(=O)-C1-14烷基，且較佳為-O-C(=O)-C6-12烷基。在某些此等實施例中，R3b為F且R4b為-O-C(=O)-C1-14烷基，且較佳為-O-C(=O)-C6-12。此外，當X1b或X2b為-SH時，在硫代磷酸酯基處將對掌性中心引入分子中。在某些此等實施例中，化合物為R,R非對映異構體。
在第三態樣之第一實施例中，式IB化合物為式IB-a化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R1b、R2b、R3b、R4b、X1b及X2b如關於式IB化合物所定義。
在第三態樣及其第一實施例之一些實施例中，X1b及X2b為-SH。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-F且R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-F且R4b為-OH。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-OH且R4b為-F。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，且R3b及R4b為-F。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-F，R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基， R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-F，R4b為-H或-OH，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-F，R4b為-OH，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R4b為-F，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-H或-OH，R4b為-F，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-OH，R4b為-F，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b及R4b為-F，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-F，R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-F，R4b為-H或-OH，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-F，R4b為-OH，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R4b為-F，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-H或-OH，R4b為-F，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-OH，R4b為-F，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b及R4b為-F，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。
在第三態樣及其第一實施例之一些實施例中，X1b為-OH且X2b為-SH。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-F且R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH， R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-F且R4b為-OH。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-OH且R4b為-F。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，且R3b及R4b為-F。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-F，R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-F，R4b為-H或-OH，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-F，R4b為-OH，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R4b為-F，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-H或-OH，R4b為-F，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-OH，R4b為-F，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b及R4b為-F，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-F，R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-F，R4b為-H或-OH，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-F，R4b為-OH，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b 為-SH，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R4b為-F，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-H或-OH，R4b為-F，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-OH，R4b為-F，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b及R4b為-F，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。
在第三態樣及其第一實施例之一些實施例中，X1b為-SH且X2b為-OH。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-F且R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-F且R4b為-OH。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-OH且R4b為-F。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，且R3b及R4b為-F。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-F，R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R1b為腺瞟呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-F，R4b為-H或-OH，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-F，R4b為-OH，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R4b為-F，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-H或-OH，R4b為-F，R1b為腺嘌 呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-OH，R4b為-F，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b及R4b為-F，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-F，R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-F，R4b為-H或-OH，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-F，R4b為-OH，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R4b為-F，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-H或-OH，R4b為-F，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-OH，R4b為-F，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b及R4b為-F，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。
在第三態樣及其第一實施例之一些實施例中，X1b及X2b為-OH。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-F且R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-F且R4b為-OH。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-OH且R4b為-F。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，且R3b及R4b為-F。在一些實施 例中，X1b及X2b為-OH，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-F，R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-F，R4b為-H或-OH，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-F，R4b為-OH，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R4b為-F，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-H或-OH，R4b為-F，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-OH，R4b為-F，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b及R4b為-F，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-F，R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-F，R4b為-H或-OH，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺瞟呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-F，R4b為-OH，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R4b為-F，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-H或-OH，R4b為-F，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-OH，R4b為-F，R1b為鳥嘌呤其R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b及R4b為-F，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。
在第三態樣及其第一實施例之一些實施例中，R1b為腺嘌呤且R2b為 鳥嘌呤。在一些實施例中，R1b為腺嘌呤，R2b為鳥嘌呤，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，R1b為腺嘌呤，R2b為鳥嘌呤，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，R1b為腺嘌呤，R2b為鳥嘌呤，R3b為-OH且R4b為-F。在一些實施例中，R1b為腺嘌呤，R2b為鳥嘌呤，R3b為-F且R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R1b為腺嘌呤，R2b為鳥嘌呤，R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，R1b為腺嘌呤，R2b為鳥嘌呤，R3b為-F且R4b為-OH。在一些實施例中，R1b為腺嘌呤，R2b為鳥嘌呤且R3b及R4b為-F。
在第三態樣及其第一實施例之一些實施例中，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，R1b為鳥嘌呤，R2b為腺嘌呤，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，R1b為鳥嘌呤，R2b為腺嘌呤，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，R1b為鳥嘌呤，R2b為腺嘌呤，R3b為-OH且R4b為-F。在一些實施例中，R1b為鳥嘌呤，R2b為腺嘌呤，R3b為-F且R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R1b為鳥嘌呤，R2b為腺嘌呤，R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，R1b為鳥嘌呤，R2b為腺嘌呤，R3b為-F且R4b為-OH。在一些實施例中，R1b為鳥嘌呤，R2b為腺嘌呤且R3b及R4b為-F。
在第三態樣及其第一實施例之一些實施例中，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-OH且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-OH。在一些實施例中，R3b及R4b為-F。
在第三態樣及其第一實施例之一些實施例中，化合物選自由以下組成之群： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第三態樣之第二實施例中，式IB化合物為式IB-b化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R1b、R2b、R3b及R4b如關於式IB化合物所定義。
在第三態樣之第三實施例中中，式IB化合物為式IB-c化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫 藥學上可接受之水合物，其中R1b、R2b、R3b及R4b如關於式IB化合物所定義。
在第三態樣及其第二或第三實施例之一些實施例中，R3b為-F且R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-OH。在一些實施例中，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-OH且R4b為-F。在一些實施例中，R3b及R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-F，R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，R3b為-F，R4b為-H或-OH，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，R3b為-F，R4b為-OH，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R4b為-F，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，R3b為-H或-OH，R4b為-F，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，R3b為-OH，R4b為-F，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，R3b及R4b為-F，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，R3b為-F，R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，R3b為-F，R4b為-H或-OH，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，R3b為-F，R4b為-OH，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基，R4b為-F，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，R3b為-H或-OH，R4b為-F，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，R3b為-OH，R4b為-F，R1b為鳥瞟呤且R2b為腺嘌呤。在一些實施例中，R3b及R4b為-F，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌 呤。
在第三態樣及其第二或第三實施例之一些實施例中，R1b為腺嘌呤且R2b為鳥嘌呤。在一些實施例中，R1b為鳥嘌呤且R2b為腺嘌呤。
在第三態樣及其第一或第二實施例之一些實施例中，化合物選自由以下組成之群： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第三態樣及其第一或第三實施例之一些實施例中，化合物選自由以下組成之群： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第三態樣之第四實施例中，式IB化合物為式IB-d化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R3b、R4b、X1b及X2b如關於式IB化合物所定義。
在第三態樣之第五實施例中，式IB化合物為式IB-e化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R3b、R4b、X1b及X2b如關於式IB化合物 所定義。
在第三態樣及其第四或第五實施例之一些實施例中，X1b及X2b為-SH。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-F且R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-F且R4b為-OH。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-OH且R4b為-F。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，且R3b及R4b為-F。
在第三態樣及其第四或第五實施例之一些實施例中，X1b為-SH且X2b為-OH。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-F且R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-F且R4b為-OH。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-OH且R4b為-F。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，且R3b及R4b為-F。
在第三態樣及其第四或第五實施例之一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-F且R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-F且R4b為-OH。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為- SH，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-OH且R4b為-F。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，且R3b及R4b為-F。
在第三態樣及其第四或第五實施例之一些實施例中，X1b及X2b為-OH。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-F且R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-F且R4b為-OH。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-OH且R4b為-F。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，且R3b及R4b為-F。
在第三態樣及其第四或第五實施例之一些實施例中，R3b為-F且R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-OH。在一些實施例中，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-OH且R4b為-F。在一些實施例中，R3b及R4b為-F。
在第三態樣及其第一、第四或第五實施例之一些實施例中，化合物選自由以下組成之群： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第三態樣之第六實施例中，式IB化合物為式IB-f化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R3b及R4b獨立地為-H、-OH、-O-C(=O)-C1-14烷基或-F，限制條件為R3b及R4b中之至少一者為-F。在一些實施例中，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-OH且R4b為- F。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-OH。在一些實施例中，R3b及R4b為-F。
在第三態樣之第七實施例中，式IB化合物為式IB-g化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R3b及R4b獨立地為-H、-OH、-O-C(=O)-C1-14烷基或-F，限制條件為R3b及R4b中之至少一者為-F。在一些實施例中，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-OH且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-OH。在一些實施例中，R3b及R4b為-F。
在第三態樣及其第一、第二、第四、第五、第六或第七實施例之一些實施例中，化合物選自由以下組成之群： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第三態樣之第八實施例中，式IB化合物為式IB-h化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R3b及R4b獨立地為-H、-OH、-O-C(=O)-C1-14烷基或-F，限制條件為R3b及R4b中之至少一者為-F。在一些實施例中，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-OH且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。 在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-OH。在一些實施例中，R3b及R4b為-F。
在第三態樣之第九實施例中，式IB化合物為式IB-i化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R3b及R4b獨立地為-H、-OH、-O-C(=O)-C1-14烷基或-F，限制條件為R3b及R4b中之至少一者為-F。在一些實施例中，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-OH且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。 在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-OH。在一些實施例中，R3b及R4b為-F。
在第三態樣及其第一、第二、第四、第五、第八或第九實施例之一些實施例中，化合物選自由以下組成之群： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第三態樣之第十實施例中，式IB化合物為式IB-j化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R3b、R4b、X1b及X2b如關於式IB化合物所定義。
在第三態樣之第十一實施例中，式IB化合物為式IB-k化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R3b、R4b、X1b及X2b如關於式IB化合物所定義。
在第三態樣及其第十或第十一實施例之一些實施例中，X1b及X2b為-SH。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-F且R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-F且R4b為-OH。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，R3b為-OH且R4b為 -F。在一些實施例中，X1b及X2b為-SH，且R3b及R4b為-F。
在第三態樣及其第十或第十一實施例之一些實施例中，X1b為-SH且X2b為-OH。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-F且R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-F且R4b為-OH。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，R3b為-OH且R4b為-F。在一些實施例中，X1b為-SH，X2b為-OH，且R3b及R4b為-F。
在第三態樣及其第十或第十一實施例之一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-F且R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-F且R4b為-OH。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，R3b為-OH且R4b為-F。在一些實施例中，X1b為-OH，X2b為-SH，且R3b及R4b為-F。
在第三態樣及其第十或第十一實施例之一些實施例中，X1b及X2b為-OH。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-F且R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-F且R4b為- OH。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，R3b為-OH且R4b為-F。在一些實施例中，X1b及X2b為-OH，且R3b及R4b為-F。
在第三態樣及其第十或第十一實施例之一些實施例中，R3b為-F其R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-OH。在一些實施例中，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-OH且R4b為-F。在一些實施例中，R3b及R4b為-F。
在第三態樣之第十二實施例中，式IB化合物為式IB-m化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R3b及R4b獨立地為-H、-OH、-O-C(=O)-C1-14烷基或-F，限制條件為R3b及R4b中之至少一者為-F。在一些實施例中，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-OH且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-OH。在一些實施例中，R3b及R4b為-F。
在第三態樣之第十三實施例中，式IB化合物為式IB-n化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R3b及R4b獨立地為-H、-OH、-O-C(=O)-C1-14烷基或-F，限制條件為R3b及R4b中之至少一者為-F。在一些實施例中，R3b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-H或-OH且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-OH且R4b為-F。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-H或-OH。在一些實施例中，R3b為-F且R4b為-OH。在一些實施例中，R3b及R4b為-F。
在第三態樣及其任一個以上實施例之一些實施例中，當R3b或R4b為-O-C(=O)-C1-14烷基時，-O-C(=O)-C1-14烷基為-O-C(=O)-C3-14烷基、-O-C(=O)-C5-13烷基、-O-C(=O)-C5-11烷基或-O-C(=O)-C9烷基，較佳其中烷基鏈為直鏈。在一個較佳實施例中，-O-C(=O)-C1-14烷基為-O-C(=O)-(CH2)8-CH3。
在第三態樣及其第一、第二、第十、第十一、第十二或第十三實施例之一個實施例中，化合物選自由以下組成之群： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第四態樣中，本發明提供式IC之單-F-ML-CDN化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中：R1c及R2c獨立地為經由N9位置結合於結構之鳥嘌呤或腺嘌呤，限制條件為R1c及R2c不皆為鳥嘌呤；R4c為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基；及X1c及X2c獨立地為-OH或-SH。
如下文所描述，在某些實施例中，X1c及X2c各自為-SH，且R3c及R4c中之一者或兩者為-F；且在某些此等實施例中，若R3c及R4c中僅一者為F，則R3c及R4c中之另一者為-O-C(=O)-C1-14烷基，且較佳為-O-C(=O)-C6-12烷基。在某些此等實施例中，R3c為F且R4c為-O-C(=O)-C1-14烷基，且較佳為-O-C(=O)-C6-12。此外，當X1c或X2c為-SH時，在硫代磷 酸酯基處將對掌性中心引入分子中。在某些此等實施例中，化合物為R,R非對映異構體。
在第四態樣之第一實施例中，式IC化合物為式IC-a化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R1c、R2c、R4c、X1c及X2c如關於式IC化合物所定義。
在第四態樣及其第一實施例之一些實施例中，X1c及X2c為-SH。在一些實施例中，X1c及X2c為-SH，R1c為腺嘌呤且R2c為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1c及X2c為-SH，R1c為鳥嘌呤且R2c為腺嘌呤。在一些實施例中，X1c及X2c為-SH，且R1c及R2c為腺嘌呤。在一些實施例中，X1c及X2c為-SH，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-H或-OH。在一些實施例中，X1c及X2c為-SH，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1c及X2c為-SH，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-OH。在一些實施例中，X1c及X2c為-SH，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-H。在一些實施例中，X1c及X2c為-SH，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1c及X2c為-SH，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺瞟呤且R4c為-H或-OH。在一些實施例中，X1c及X2c為-SH，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1c及X2c為-SH， R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-OH。在一些實施例中，X1c及X2c為-SH，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-H。在一些實施例中，X1c及X2c為-SH，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1c及X2c為-SH，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-H或-OH。在一些實施例中，X1c及X2c為-SH，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1c及X2c為-SH，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-OH。在一些實施例中，X1c及X2c為-SH，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-H。在一些實施例中，X1c及X2c為-SH，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-O-C(=O)-C1-14烷基。
在第四態樣及其第一實施例之一些實施例中，X1c為-SH且X2c為-OH。在一些實施例中，X1c為-SH，X2c為-OH，R1c為腺嘌呤且R2c為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1c為-SH，X2c為-OH，R1c為鳥嘌呤且R2c為腺嘌呤。在一些實施例中，X1c為-SH，X2c為-OH且R1c及R2c為腺嘌呤。在一些實施例中，X1c為-SH，X2c為-OH，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-H或-OH。在一些實施例中，X1c為-SH，X2c為-OH，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1c為-SH，X2c為-OH，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-OH。在一些實施例中，X1c為-SH，X2c為-OH，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-H。在一些實施例中，X1c為-SH，X2c為-OH，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1c為-SH，X2c為-OH，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-H或-OH。在一些實施例中，X1c為-SH，X2c為-OH，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1c為-SH，X2c為- OH，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-OH。在一些實施例中，X1c為-SH，X2c為-OH，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-H。在一些實施例中，X1c為-SH，X2c為-OH，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1c為-SH，X2c為-OH，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-H或-OH。在一些實施例中，X1c為-SH，X2c為-OH，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1c為-SH，X2c為-OH，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-OH。在一些實施例中，X1c為-SH，X2c為-OH，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-H。在一些實施例中，X1c為-SH，X2c為-OH，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-O-C(=O)-C1-14烷基。
在第四態樣及其第一實施例之一些實施例中，X1c為-OH且X2c為-SH。在一些實施例中，X1c為-OH，X2c為-SH，R1c為腺嘌呤且R2c為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1c為-OH，X2c為-SH，R1c為鳥嘌呤且R2c為腺嘌呤。在一些實施例中，X1c為-OH，X2c為-SH且R1c及R2c為腺瞟呤。在一些實施例中，X1c為-OH，X2c為-SH，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-H或-OH。在一些實施例中，X1c為-OH，X2c為-SH，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1c為-OH，X2c為-SH，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-OH。在一些實施例中，X1c為-OH，X2c為-SH，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-H。在一些實施例中，X1c為-OH，X2c為-SH，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1c為-OH，X2c為-SH，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-H或-OH。在一些實施例中，X1c為-OH，X2c為-SH，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且 R4c為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1c為-OH，X2c為-SH，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-OH。在一些實施例中，X1c為-OH，X2c為-SH，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-H。在一些實施例中，X1c為-OH，X2c為-SH，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1c為-OH，X2c為-SH，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-H或-OH。在一些實施例中，X1c為-OH，X2c為-SH，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1c為-OH，X2c為-SH，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-OH。在一些實施例中，X1c為-OH，X2c為-SH，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-H。在一些實施例中，X1c為-OH，X2c為-SH，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-O-C(=O)-C1-14烷基。
在第四態樣及其第一實施例之一些實施例中，X1c及X2c為-OH。在一些實施例中，X1c及X2c為-OH，R1c為腺嘌呤且R2c為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1c及X2c為-OH，R1c為鳥嘌呤且R2c為腺嘌呤。在一些實施例中，X1c及X2c為-OH且R1c及R2c為腺嘌呤。在一些實施例中，X1c及X2c為-OH，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-H或-OH。在一些實施例中，X1c及X2c為-OH，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1c及X2c為-OH，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-OH。在一些實施例中，X1c及X2c為-OH，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-H。在一些實施例中，X1c及X2c為-OH，R1c為腺瞟呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1c及X2c為-OH，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-H或-OH。在一些實施例中，X1c及X2c為-OH，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c 為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1c及X2c為-OH，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-OH。在一些實施例中，X1c及X2c為-OH，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-H。在一些實施例中，X1c及X2c為-OH，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1c及X2c為-OH，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-H或-OH。在一些實施例中，X1c及X2c為-OH，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1c及X2c為-OH，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-OH。在一些實施例中，X1c及X2c為-OH，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-H。在一些實施例中，X1c及X2c為-OH，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-O-C(=O)-C1-14烷基。
在第四態樣及其第一實施例之一些實施例中，R1c為腺嘌呤且R2c為鳥嘌呤。在一些實施例中，R1c為鳥嘌呤且R2c為腺嘌呤。在一些實施例中，R1c及R2c為腺嘌呤。
在第四態樣及其第一實施例之一些實施例中，化合物選自由以下組成之群： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第四態樣之第二實施例中，式IC化合物為式IC-b化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R1c、R2c及R4c如關於式IC化合物所定義。
在第四態樣之第三實施例中，式IC化合物為式IC-c化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R1c、R2c及R4c如關於式IC化合物所定義。
在第四態樣及其第二或第三實施例之一些實施例中，R1c為腺嘌呤且R2c為鳥嘌呤。在一些實施例中，R1c為鳥嘌呤且R2c為腺嘌呤。在一些實施例中，R1c及R2c為腺嘌呤。在一些實施例中，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-H或-OH。在一些實施例中，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-OH。在一些實施例中，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-H。在一些實施例中，R1c為腺瞟呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-O- C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-H或-OH。在一些實施例中，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-OH。在一些實施例中，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-H。在一些實施例中，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-H或-OH。在一些實施例中，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-OH。在一些實施例中，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-H。在一些實施例中，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-O-C(=O)-C1-14烷基。
在第四態樣及其第一、第二或第三實施例之一些實施例中，化合物選自由以下組成之群：
或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第四態樣之第四實施例中，式IC化合物為式IC-d化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R1c、R2c及R4c如關於式IC化合物所定義。
在第四態樣之第五實施例中，式IC化合物為式IC-e化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R1c、R2c及R4c如關於式IC化合物所定義。
在第四態樣及其第四或第五實施例之一些實施例中，R1c為腺嘌呤且R2c為鳥嘌呤。在一些實施例中，R1c為鳥嘌呤且R2c為腺嘌呤。在一些實施例中，R1c及R2c為腺嘌呤。在一些實施例中，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-H或-OH。在一些實施例中，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R1c為腺嘌呤，R2c 為鳥嘌呤且R4c為-OH。在一些實施例中，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-H。在一些實施例中，R1c為腺嘌呤，R2c為鳥嘌呤且R4c為-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-H或-OH。在一些實施例中，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-OH。在一些實施例中，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-H。在一些實施例中，R1c為鳥嘌呤，R2c為腺嘌呤且R4c為-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-H或-OH。在一些實施例中，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-OH。在一些實施例中，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-H。在一些實施例中，R1c及R2c為腺嘌呤且R4c為-O-C(=O)-C1-14烷基。
在第四態樣及其任一個以上實施例之一些實施例中，當R3c或R4c為-O-C(=O)-C1-14烷基時，-O-C(=O)-C1-14烷基為-O-C(=O)-C3-14烷基、-O-C(=O)-C5-13烷基、-O-C(=O)-C5-11烷基或-O-C(=O)-C9烷基，較佳其中烷基鏈為直鏈。在一個較佳實施例中，-O-C(=O)-C1-14烷基為-O-C(=O)-(CH2)8-CH3。
在第四態樣及其第一、第四及第五實施例之一些實施例中，化合物為 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫 藥學上可接受之水合物。
在第五態樣中，本發明提供式ID之單-F-ML-CDN化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中：R1d及R2d獨立地為經由N9位置結合於結構之鳥嘌呤或腺嘌呤，限制條件為R1d及R2d不皆為鳥嘌呤；R3d為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基；及X1d及X2d獨立地為-OH或-SH。
如下文所描述，在某些實施例中，X1d及X2d各自為-SH，且R3d及R4d中之一者或兩者為-F；且在某些此等實施例中，若R3d及R4d中僅一者為F，則R3d及R4d中之另一者為-O-C(=O)-C1-14烷基，且較佳為-O-C(=O)-C6-12烷基。在某些此等實施例中，R3d為F且R4d為-O-C(=O)-C1-14烷基，且較佳為-O-C(=O)-C6-12。此外，當X1d或X2d為-SH時，在硫代磷酸酯基處將對掌性中心引入分子中。在某些此等實施例中，化合物為R,R非對映異構體。
在第五態樣之第一實施例中，式ID化合物為式ID-a化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R1d、R2d、R3d、X1d及X2d如關於式ID化合物所定義。
在第五態樣及其第一實施例之一些實施例中，X1d及X2d為-SH。在一些實施例中，X1d及X2d為-SH，R1d為腺嘌呤且R2d為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1d及X2d為-SH，R1d為鳥嘌呤且R2d為腺嘌呤。在一些實施例中，X1d及X2d為-SH，且R1d及R2d為腺嘌呤。在一些實施例中，X1d及X2d為-SH，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-H或-OH。在一些實施例中，X1d及X2d為-SH，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1d及X2d為-SH，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-OH。在一些實施例中，X1d及X2d為-SH，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-H。在一些實施例中，X1d及X2d為-SH，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1d及X2d為-SH，R1d為鳥嘌呤，R2d為腺嘌呤且R3d為-H或-OH。在一些實施例中，X1d及X2d為-SH，R1d為鳥嘌呤，R2d為腺瞟呤且R3d為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1d及X2d為-SH，R1d為鳥瞟呤，R2d為腺嘌呤且R3d為-OH。在一些實施例中，X1d及X2d為-SH，R1d為鳥嘌呤，R2d為腺嘌呤且R3d為-H。在一些實施例中，X1d及X2d為-SH，R1d為鳥嘌呤，R2d為腺嘌呤且R3d為-O-C(=O)- C1-14烷基。在一些實施例中，X1d及X2d為-SH，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-H或-OH。在一些實施例中，X1d及X2d為-SH，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1d及X2d為-SH，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-OH。在一些實施例中，X1d及X2d為-SH，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-H。在一些實施例中，X1d及X2d為-SH，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-O-C(=O)-C1-14烷基。
在第五態樣及其第一實施例之一些實施例中，X1d為-SH且X2d為-OH。在一些實施例中，X1d為-SH，X2d為-OH，R1d為腺嘌呤且R2d為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1d為-SH，X2d為-OH，R1d為鳥嘌呤且R2d為腺嘌呤。在一些實施例中，X1d為-SH，X2d為-OH且R1d及R2d為腺嘌呤。在一些實施例中，X1d為-SH，X2d為-OH，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-H或-OH。在一些實施例中，X1d為-SH，X2d為-OH，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1d為-SH，X2d為-OH，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-OH。在一些實施例中，X1d為-SH，X2d為-OH，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-H。在一些實施例中，X1d為-SH，X2d為-OH，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1d為-SH，X2d為-OH，R1d為鳥嘌呤，R2d為腺嘌呤且R3d為-H或-OH。在一些實施例中，X1d為-SH，X2d為-OH，R1d為鳥瞟呤，R2d為腺嘌呤且R3d為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1d為-SH，X2d為-OH，R1d為鳥嘌呤，R2d為腺瞟呤且R3d為-OH。在一些實施例中，X1d為-SH，X2d為-OH，R1d為鳥瞟呤，R2d為腺嘌呤且R3d為-H。在一些實施例中，X1d為-SH，X2d為-OH，R1d為鳥嘌呤，R2d為腺嘌呤且R3d為- O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1d為-SH，X2d為-OH，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-H或-OH。在一些實施例中，X1d為-SH，X2d為-OH，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1d為-SH，X2d為-OH，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-OH。在一些實施例中，X1d為-SH，X2d為-OH，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-H。在一些實施例中，X1d為-SH，X2d為-OH，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-O-C(=O)-C1-14烷基。
在第五態樣及其第一實施例之一些實施例中，X1d為-OH且X2d為-SH。在一些實施例中，X1d為-OH，X2d為-SH，R1d為腺嘌呤且R2d為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1d為-OH，X2d為-SH，R1d為鳥嘌呤且R2d為腺嘌呤。在一些實施例中，X1d為-OH，X2d為-SH且R1d及R2d為腺嘌呤。在一些實施例中，X1d為-OH，X2d為-SH，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-H或-OH。在一些實施例中，X1d為-OH，X2d為-SH，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1d為-OH，X2d為-SH，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-OH。在一些實施例中，X1d為-OH，X2d為-SH，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-H。在一些實施例中，X1d為-OH，X2d為-SH，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1d為-OH，X2d為-SH，R1d為鳥嘌呤，R2d為腺嘌呤且R3d為-H或-OH。在一些實施例中，X1d為-OH，X2d為-SH，R1d為鳥嘌呤，R2d為腺嘌呤且R3d為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1d為-OH，X2d為-SH，R1d為鳥嘌呤，R2d為腺嘌呤且R3d為-OH。在一些實施例中，X1d為-OH，X2d為-SH，R1d為鳥嘌呤，R2d為腺嘌呤且R3d為-H。在一些實 施例中，X1d為-OH，X2d為-SH，R1d為鳥嘌呤，R2d為腺嘌呤且R3d為-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1d為-OH，X2d為-SH，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-H或-OH。在一些實施例中，X1d為-OH，X2d為-SH，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1d為-OH，X2d為-SH，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-OH。在一些實施例中，X1d為-OH，X2d為-SH，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-H。在一些實施例中，X1d為-OH，X2d為-SH，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-O-C(=O)-C1-14烷基。
在第五態樣及其第一實施例之一些實施例中，X1d及X2d為-OH。在一些實施例中，X1d及X2d為-OH，R1d為腺嘌呤且R2d為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1d及X2d為-OH，R1d為鳥嘌呤且R2d為腺嘌呤。在一些實施例中，X1d及X2d為-OH，且R1d及R2d為腺嘌呤。在一些實施例中，X1d及X2d為-OH，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-H或-OH。在一些實施例中，X1d及X2d為-OH，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1d及X2d為-OH，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-OH。在一些實施例中，X1d及X2d為-OH，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-H。在一些實施例中，X1d及X2d為-OH，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1d及X2d為-OH，R1d為鳥嘌呤，R2d為腺嘌呤且R3d為-H或-OH。在一些實施例中，X1d及X2d為-OH，R1d為鳥嘌呤，R2d為腺嘌呤且R3d為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1d及X2d為-OH，R1d為鳥嘌呤，R2d為腺嘌呤且R3d為-OH。在一些實施例中，X1d及X2d為-OH，R1d為鳥嘌呤，R2d為腺嘌呤且R3d為-H。在一些實施例 中，X1d及X2d為-OH，R1d為鳥嘌呤，R2d為腺嘌呤且R3d為-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1d及X2d為-OH，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-H或-OH。在一些實施例中，X1d及X2d為-OH，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，X1d及X2d為-OH，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-OH。在一些實施例中，X1d及X2d為-OH，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-H。在一些實施例中，X1d及X2d為-OH，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-O-C(=O)-C1-14烷基。
在第五態樣及其第一實施例之一些實施例中，R1d為腺嘌呤且R2d為鳥嘌呤。在一些實施例中，R1d為鳥嘌呤且R2d為腺嘌呤。在一些實施例中，R1d及R2d為腺嘌呤。
在第五態樣之第二實施例中，式ID化合物為式ID-b化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R1d、R2d及R3d如關於式ID化合物所定義。
在第五態樣之第三實施例中，式ID化合物為式ID-c化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R1d、R2d及R3d如關於式ID化合物所定義。
在第五態樣及其第二或第三實施例之一些實施例中，R1d為腺嘌呤且R2d為鳥嘌呤。在一些實施例中，R1d為鳥嘌呤且R2d為腺嘌呤。在一些實施例中，R1d及R2d為腺嘌呤。在一些實施例中，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-H或-OH。在一些實施例中，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-OH。在一些實施例中，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-H。在一些實施例中，R1d為腺嘌呤，R2d為鳥嘌呤且R3d為-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R1d為鳥嘌呤，R2d為腺嘌呤且R3d為-H或-OH。在一些實施例中，R1d為鳥嘌呤，R2d為腺嘌呤且R3d為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R1d為鳥嘌呤，R2d為腺嘌呤且R3d為-OH。在一些實施例中，R1d為鳥嘌呤，R2d為腺嘌呤且R3d為-H。在一些實施例中，R1d為鳥嘌呤，R2d為腺嘌呤且R3d為-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-H或-OH。在一些實施例中，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基。在一些實施例中，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-OH。在一些實施例中，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-H。在一些實施例中，R1d及R2d為腺嘌呤且R3d為-O-C(=O)-C1-14烷基。
在第三態樣及其任一個以上實施例之一些實施例中，當R3d或R4d為-O-C(=O)-C1-14烷基時，-O-C(=O)-C1-14烷基為-O-C(=O)-C3-14烷基、-O-C(=O)-C5-13烷基、-O-C(=O)-C5-11烷基或-O-C(=O)-C9烷基，較佳其中烷 基鏈為直鏈。在一個較佳實施例中，-O-C(=O)-C1-14烷基為-O-C(=O)-(CH2)8-CH3。
在第五態樣及其第二實施例之一個實施例中，化合物選自由以下組成之群： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第五態樣及其第一、第二或第三實施例之一個實施例中，化合物為 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第六態樣中，本發明提供式IE之二-F-ML-CDN化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫 藥學上可接受之水合物，其中：R1e及R2e獨立地為經由N9位置結合於結構之鳥嘌呤或腺嘌呤，限制條件為R1e及R2e不皆為鳥嘌呤；及X1e及X2e獨立地為-OH或-SH。
如下文所描述，在某些實施例中，X1e及X2e各自為-SH，且R3e及R4e中之一者或兩者為-F；且在某些此等實施例中，若R3e及R4e中僅一者為F，則R3e及R4e中之另一者為-O-C(=O)-C1-14烷基，且較佳為-O-C(=O)-C6-12烷基。在某些此等實施例中，R3e為F且R4e為-O-C(=O)-C1-14烷基，且較佳為-O-C(=O)-C6-12。此外，當X1e或X2e為-SH時，在硫代磷酸酯基處將對掌性中心引入分子中。在某些此等實施例中，化合物為R,R非對映異構體。
在第六態樣之第一實施例中，式IE化合物為式IE-a化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R1e、R2e、X1e及X2e如關於式IE化合物所定義。
在第六態樣之第二實施例中，式IE化合物為式IE-b化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R1e、R2e、X1e及X2e如關於式IE化合物所定義。
在第六態樣及其第一或第二實施例之一些實施例中，X1e及X2e為-SH。在一些實施例中，X1e及X2e為-SH，R1e為腺嘌呤且R2e為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1e及X2e為-SH，R1e為鳥嘌呤且R2e為腺嘌呤。在一些實施例中，X1e及X2e為-SH，且R1e及R2e為腺嘌呤。
在第六態樣之一些實施例中，X1e為-SH且X2e為-OH。在一些實施例中，X1e為-SH，X2e為-OH，R1e為腺嘌呤且R2e為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1e為-SH，X2e為-OH，R1e為鳥嘌呤且R2e為腺嘌呤。在一些實施例中，X1e為-SH，X2e為-OH且R1e及R2e為腺嘌呤。
在第六態樣之一些實施例中，X1e為-OH且X2e為-SH。在一些實施例中，X1e為-OH，X2e為-SH，R1e為腺嘌呤且R2e為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1e為-OH，X2e為-SH，R1e為鳥嘌呤且R2e為腺嘌呤。在一些實施例中，X1e為-OH，X2e為-SH且R1e及R2e為腺嘌呤。
在第六態樣之一些實施例中，X1e及X2e為-OH。在一些實施例中，X1e及X2e為-OH，R1e為腺嘌呤且R2e為鳥嘌呤。在一些實施例中，X1e及X2e為-OH，R1e為鳥嘌呤且R2e為腺嘌呤。在一些實施例中，X1e及X2e為-OH，且R1e及R2e為腺嘌呤。
在第六態樣及其第一或第二實施例之一些實施例中，R1e為腺嘌呤且R2e為鳥嘌呤。在一些實施例中，R1e為鳥嘌呤且R2e為腺嘌呤。在一些實施例中，R1e及R2e為腺嘌呤。
在第六態樣及其實施例之一些實施例中，化合物選自由以下組成之群： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第六態樣之第三實施例中，式IE化合物為式IE-c化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R1e及R2e獨立地為鳥嘌呤或腺嘌呤，其經由N9位置結合於該結構，其限制條件為R1e及R2e不皆為鳥嘌呤。在一些實施例中，R1e為腺嘌呤且R2e為鳥嘌呤。在一些實施例中，R1e為鳥嘌呤且R2e為腺嘌呤。在一些實施例中，R1e及R2e為腺嘌呤。
在第六態樣之第四實施例中，式IE化合物為式IE-d化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R1e及R2e獨立地為鳥嘌呤或腺嘌呤，其經由N9位 置結合於該結構，其限制條件為R1e及R2e不皆為鳥嘌呤。在一些實施例中，R1e為腺嘌呤且R2e為鳥嘌呤。在一些實施例中，R1e為鳥嘌呤且R2e為腺嘌呤。在一些實施例中，R1e及R2e為腺嘌呤。
在第六態樣之第五實施例中，式IE化合物為式IE-e化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R1f及R2f獨立地為鳥嘌呤或腺嘌呤，其經由N9位置結合於該結構，其限制條件為R1f及R2f不皆為鳥嘌呤。在一些實施例中，R1f為腺嘌呤且R2f為鳥嘌呤。在一些實施例中，R1f為鳥嘌呤且R2f為腺嘌呤。在一些實施例中，R1f及R2f為腺嘌呤。
在第六態樣及其第三實施例之一個實施例中，化合物選自由以下組成之群： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第六態樣及其第一、第三或第四實施例之一個實施例中，化合物選自由以下組成之群： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第六態樣及其第二或第五實施例之一個實施例中，化合物為 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第六態樣之第六實施例中，式IE化合物為式IE-f化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R1e及R2e獨立地為鳥嘌呤或腺嘌呤，其經由N9位置結合於該結構，其限制條件為R1e及R2e不皆為鳥嘌呤。在一些實施例中，R1e為腺嘌呤且R2e為鳥嘌呤。在一些實施例中，R1e為鳥嘌呤且R2e為腺嘌呤。在一些實施例中，R1e及R2e為腺嘌呤。
在第六態樣之第七實施例中，式IE化合物為式IE-g化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中R1e及R2e獨立地為鳥嘌呤或腺嘌呤，其經由N9位置結合於該結構，其限制條件為R1e及R2e不皆為鳥嘌呤。在一些實施例 中，R1e為腺嘌呤且R2e為鳥嘌呤。在一些實施例中，R1e為鳥嘌呤且R2e為腺嘌呤。在一些實施例中，R1e及R2e為腺嘌呤。
在第六態樣及其第一、第六或第七實施例之一個實施例中，化合物為
或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第七態樣中，提供化合物2'3'-RR-(3'F-A)(2'F-A)，其具有以下結構：
或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第八態樣中，提供化合物2'3'-RR-(3'βF-A)(2'F-A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫 藥學上可接受之水合物。
在第九態樣中，提供化合物2'3'-RR-(A)(2'F-A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第十態樣中，提供化合物2'3'-RR-(3'F-A)(A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第十一態樣中，提供化合物2'3'-RR-(3'H-A)(2'F-A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第十二態樣中，提供化合物2'3'-RR-(G)(2'F-A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第十三態樣中，提供化合物2'3'-RR-(3'癸醯基-O-G)(2'F-A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第十四態樣中，提供化合物2'3'-RR-(3'F-G)(2'F-A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第十五態樣中，提供化合物3'2'-RR-(2'F-G)(3'F-A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第十六態樣中，提供化合物3'2'-RR-(2'F-G)(A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第十七態樣中，提供化合物2'3'-(G)(2'F-A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第十八態樣中，提供化合物2'3'-(3'F-G)(2'F-A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在第十九態樣中，提供化合物2'3'-RR-(3'βF-A)(A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
在以上態樣中之任一者及其實施例之單-或二-F-ML-CDN化合物中之任一者中，當X1及X2(包括X1a、X2a、X1b、X2b等)在結構內且X1及X2為-SH，或X1為-SH且X2為-OH，或X1為-SH且X2為-OH時，各經硫基取代之磷處的立體化學為R。在一些實施例中，當在結構內定義硫代磷酸酯立體化學時(例如第一態樣之第三實施例)，或當X1及X2在結構內且X1及X2為-SH，或X1為-SH且X2為-OH，或X1為-SH且X2為-OH時，各經硫基取代之磷處的立體化學為R，且化合物為實質上純的。在一個較佳實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物為具有硫代磷酸酯立體化學之結構，其定義為結構中之R(例如第一態樣之第三實施例)，或X1及X2在結構內且X1及X2皆為-SH，各磷處的立體化學為R，且化合物為實質上純的。
在以上態樣及其實施例中之任一者之一些實施例中，單-或二-F-ML- CDN化合物包括其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，包括其任何前藥之醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，且包括其任何醫藥學上可接受之鹽之任何醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。在一些實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物包括其醫藥學上可接受之溶劑合物、醫藥學上可接受之水合物或醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物為其醫藥學上可接受之鹽或醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。在一些實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物為醫藥學上可接受之鹽。
在以上態樣及其實施例中之任一者之一些實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物包括其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，醫藥學上可接受之鹽係選自由以下組成之群：鈉、鉀、鈣、鎂、鋅、鋁、銨、二乙胺、異丙胺、乙醇胺、苯乍生(benzathine)、苯明(benethamine)、緩血酸胺(2-胺基-2-(羥基甲基)丙-1,3-二醇)、嗎啉、吡咯乙醇(epolamine)、哌啶、哌嗪、甲吡啶、二環己胺、N,N'-二苯甲基乙二胺、2-羥乙胺、三-(2-羥基乙基)胺、氯普魯卡因(chloroprocaine)、膽鹼、丹醇(deanol)、咪唑、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基還原葡糖胺)、普魯卡因(procaine)、二苯甲基哌啶、去氫樅胺(dehydroabietylamine)、還原葡糖胺、三甲基吡啶、奎寧(quinine)、喹諾酮、特丁胺(erbumine)、離胺酸及精胺酸鹽。
在以上態樣或其實施例中之任一者之一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物係以其二鈉鹽形式提供。在一些實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物係以其二鈉鹽或其醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可 接受之水合物形式提供。
在以上態樣及其實施例中之任一者之一些實施例中，在量測人類STING依賴性IFN-β產生之誘導的細胞分析法中，單-或二-F-ML-CDN化合物與一或多種參考化合物相比具有更高活性。在一些實施例中，一或多種參考化合物係選自由以下組成之群：2'3'-(A)(A)、2'3'-(G)(A)、3'2'-(G)(A)、2'3'-RR-(A)(A)及2'3'-RR-(G)(A)。在一些實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物為單-或二-F-ML-RR-CDN化合物且一或多種參考化合物係選自由以下組成之群：2'3'-RR-(A)(A)及2'3'-RR-(G)(A)。在一些實施例中，參考化合物為二-OH參考化合物。在一些實施例中，細胞分析法為hPBMC分析法，例如實例15中所描述之分析法。在一些實施例中，細胞分析法為THP1分析法。例如實例16中所描述之分析法。在一個較佳實施例中，在不添加可促進分析細胞對單-或二-F-ML-CDN化合物或參考化合物之吸收之試劑或可促進單-或二-F-ML-CDN化合物或參考化合物對分析細胞之滲透性之試劑的情況下進行細胞分析法。在一些實施例中，細胞分析法為在不添加可促進分析細胞對單-或二-F-ML-CDN化合物或參考化合物之吸收之試劑或可促進單-或二-F-ML-CDN化合物或參考化合物對分析細胞之滲透性之試劑的情況下進行的THP1細胞分析法，其中單-或二-F-ML-CDN化合物具有小於40μM、小於30μM、小於20μM、小於15μM或小於10μM之EC50。在一些實施例中，在量測人類STING依賴性IFN-β產生之誘導的細胞分析法中，單-或二-F-ML-CDN化合物具有小於40μM、小於30μM、小於20μM、小於15μM或小於10μM之EC50，其中在不添加可促進分析細胞對單-或二-F-ML-CDN化合物之吸收之試劑或可促進單-或二-F-ML-CDN化合物對分析細胞之滲透性之試劑的情況下進行 細胞分析法。在一個實施例中，細胞分析法為如實例16中所描述之THP1細胞分析法，其中分析法在不添加毛地黃皂苷(digitonin)之情況下進行。在一些實施例中，在測量人類STING依賴性IFN-β產生之細胞分析法中，單-或二-F-ML-CDN化合物具有小於一或多種選自由以下組成之群的參考化合物之EC50的EC50：2'3'-(A)(A)、2'3'-(G)(A)、3'2'-(G)(A)、2'3'-RR-(A)(A)及2'3'-RR-(G)(A)，較佳其中細胞分析法在不添加可增強分析細胞對單-或二-F-ML-CDN化合物或參考化合物之捕獲之試劑或可增強單-或二-F-ML-CDN化合物或參考化合物對分析細胞之滲透性之試劑的情況下進行。在一些實施例中，在如實例16中所描述之THP1細胞分析法中，單-或二-F-ML-CDN化合物之EC50小於二-OH參考化合物之EC50，較佳其中分析法在不添加毛地黃皂苷之情況下進行。在一些實施例中，在如實例16中所描述之THP1細胞分析法中，單-或二-F-ML-CDN化合物之EC50比二-OH參考化合物之EC50低至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍或至少8倍，其中分析法在不添加毛地黃皂苷之情況下進行。
在以上態樣中之任一者及其實施例之一些實施例中，當使用至少一種人類STING蛋白質量測時，單-或二-F-ML-CDN化合物與一或多種選自由以下組成之群的參考化合物相比以更大的親和力結合至少一種人類STING對偶基因蛋白質產物(包括WT、REF、HAQ、AQ及Q對偶基因中之任一者)：2'3'-(A)(A)、2'3'-(G)(A)、3'2'-(G)(A)、2'3'-RR-(A)(A)及2'3'-RR-(G)(A)。在以上態樣及其實施例中之任一者之一些實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物以比二-OH參考化合物更大的親和力結合至少一種人類STING對偶基因蛋白質產物。此較佳係使用諸如差示掃描螢光測定 法(DSF)之方法，使用由hSTING(WT)、hSTING(HAQ)或hSTING(REF)對偶基因編碼之經分離之蛋白質量測(Ishikawa,H.及Barber,G.N.(2008).Nature 455,674-678；Yi等人，2013,PLos One 2013年10月21日，8(10)：e77846；REF對偶基因之蛋白質序列為NCBI參考序列NP_938023)，如下文及實例14中所描述。
在第二十態樣中，本發明提供醫藥組合物，其包含一或多種單-或二-F-ML-CDN化合物，如如上文所描述之第一至第十九態樣及其任何實施例中所描述，包括其任何前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，及傳遞媒劑，其增強化合物之細胞吸收及/或穩定性。在一些實施例中，傳遞媒劑包含一或多種選自由以下組成之群的試劑：佐劑、脂質、脂質體、雙層間交聯多層微脂粒、基於生物可降解聚(D,L-乳酸-共-乙醇酸)[PLGA]或基於聚酐之奈米粒子或微米粒子，及奈米多孔粒子負載型脂質雙層。
在第二十一態樣中，本發明提供醫藥組合物，其包含一或多種如上文所描述之第一至第十九態樣及其任何實施例中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物，包括其任何前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，及醫藥學上可接受之賦形劑。
在第二十一態樣之第一實施例中，醫藥組合物不包括可增強一或多種單-或二-F-ML-CDN化合物之細胞滲透性的試劑。
在第二十一態樣之第二實施例中，醫藥組合物不包括可增強一或多種單-或二-F-ML-CDN化合物之細胞吸收的試劑。
在第二十一態樣之第三實施例中，醫藥組合物進一步包含傳遞媒劑，其增強化合物之細胞吸收及/或穩定性。在一些實施例中，傳遞媒劑 包含一或多種選自由以下組成之群的試劑：佐劑、脂質、脂質體、雙層間交聯多層微脂粒、基於生物可降解聚(D,L-乳酸-共-乙醇酸)[PLGA]或基於聚酐之奈米粒子或微米粒子，及奈米多孔粒子負載型脂質雙層。
在第二十態樣及其實施例或第二十一態樣及其第一、第二或第三實施例之一些實施例中，醫藥組合物進一步包含一或多種選自由以下組成之群的其他醫藥活性組分：免疫檢查點抑制劑(例如CTLA-4、PD-1、Tim-3、Vista、BTLA、LAG-3及TIGIT路徑拮抗劑；PD-1路徑阻斷劑；PD-L1抑制劑；包括(但不限於)抗PD-1抗體尼沃單抗(nivolumab)、派立珠單抗(pembrolizumab)或皮立珠單抗(pidilizumab)；PD-1抑制劑AMP-224；抗CTLA-4抗體伊派利單抗(ipilimumab)；及抗PD-L1抗體BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736或艾維路單抗(avelumab))；TLR促效劑(例如CpG或單磷醯基脂質A)；不活化或滅毒細菌，其誘導先天性免疫性(例如不活化或滅毒單核球增多性李氏菌)；經由類鐸受體(Toll-like Receptor,TLR)、經由(NOD)樣受體(NLR)、經由基於視黃酸可誘導之基因(RIG)-I樣受體(RLR)、經由C型凝集素受體(CLR)或經由病原體相關分子模式(PAMP)介導先天性免疫活化之組合物；及化學治療劑。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係選自由以下組成之群：CTLA-4路徑拮抗劑、PD-1路徑拮抗劑、Tim-3路徑拮抗劑、Vista路徑拮抗劑、BTLA路徑拮抗劑、LAG-3路徑拮抗劑及TIGIT路徑拮抗劑。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑為抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗CTLA-4抗體、抗TIM-3抗體、抗Vista抗體、抗BTLA抗體、抗TIGIT抗體或抗LAG-3抗體。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係選自由以下組成之群：尼沃單抗、派立珠單抗、皮立珠單抗、AMP-224、伊派利單抗、BMS-936559、 MPDL3280A、MEDI4736及艾維路單抗。在一些實施例中，TLR促效劑為CpG或單磷醯基脂質A。
在第二十態樣或第二十一態樣及其以上實施例中之任一者之一些實施例中，醫藥組合物進一步包含不活化腫瘤細胞，其表現及分泌一或多種可刺激樹突狀細胞誘導、募集及/或成熟之細胞激素，或其表現及分泌一或多種熱休克蛋白質，包括gp96-Ig融合蛋白。在一些實施例中，一或多種細胞激素係選自由以下組成之群：GM-CSF、CCL20、CCL3、IL-12p70及FLT-3配位體。在一些實施例中，腫瘤細胞不由輻射處理活化。在一些實施例中，一或多種細胞激素係選自由以下組成之群：GM-CSF、CCL20、CCL3、IL-12p70及FLT-3配位體，且腫瘤細胞藉由用輻射處理來不活化。在一些實施例中，不活化腫瘤細胞表現及分泌gp96-Ig融合蛋白。
在第二十態樣或第二十一態樣及其以上實施例中之任一者之一些實施例中，醫藥組合物進一步包含一或多種抗原，其經選擇以用於在組合物投與個體時誘導針對該一或多種抗原之免疫反應之目的。在一些實施例中，抗原為重組型蛋白質抗原。在一些實施例中，抗原為與感染性疾病、惡性腫瘤或過敏原(allergan)相關之重組型蛋白質抗原。在一些實施例中，該一或多種抗原為表1中之一或多種抗原。
在第二十態樣或第二十一態樣及其以上實施例中之任一者之一些實施例中，醫藥組合物調配為水性或水包油乳液。
在第二十二態樣中，本發明提供用於治療患有癌症之個體之方法，其中該方法包含投與有需要之個體有效量之一或多種如上文所描述之第一至第十九態樣及其任何實施例中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物，包 括其任何前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，或其如上文所描述之第二十及第二十一態樣及其任何實施例中所描述之組合物。在一些實施例中，該一或多種單-或二-F-ML-CDN化合物或其組合物係經腸或非經腸投與。在一些實施例中，投藥為靜脈內、皮下、肌肉內、皮內、經口、經黏膜、經陰道、經子宮頸、經瘤周、腫瘤內或直接投與腫瘤引流淋巴結中。在一些實施例中，投藥為經黏膜或經口，較佳為經口。
在第二十二態樣之第一實施例中，接受此類治療之個體可患有選自由以下組成之群的癌症：結腸直腸癌、上呼吸消化道鱗狀癌、肺癌、腦癌、肝癌、胃癌、膀胱癌、甲狀腺癌、腎上腺癌、胃腸道癌、口咽癌、食道癌、頭頸癌、卵巢癌、子宮癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、乳癌、黑素瘤、前列腺癌、胰腺癌、腎癌、肉瘤、白血病、淋巴瘤及多發性骨髓瘤。
在第二十二態樣之第二實施例及其第一實施例中，用於治療患有癌症之個體的方法進一步包含投與一或多種其他癌症療法。在一些實施例中，該一或多種其他癌症療法包含放射療法、手術、化學療法或免疫療法(例如(但不限於)免疫調節劑、免疫檢查點抑制劑、細胞免疫療法或癌症疫苗)。在一些實施例中，該一或多種其他癌症療法包含可表現及分泌一或多種細胞激素或一或多種熱休克蛋白質之不活化腫瘤細胞。在一些實施例中，細胞激素選自由以下組成之群：GM-CSF、CCL20、CCL3、IL-12p70及FLT-3配位體。在一些實施例中，熱休克蛋白質為gp96-Ig蛋白質。在一些實施例中，該方法包含投與一或多種選自由以下組成之群的其他癌症療法：化學治療劑；免疫檢查點抑制劑；TLR促效劑；經選擇以刺激針對一或多種癌症抗原之免疫反應的疫苗、誘導抗體依賴性細胞毒性之 治療性抗體；免疫調節細胞株；誘導先天性免疫性之不活化或滅毒細菌；經選擇以用於誘導免疫反應之目的之抗原，及經由類鐸受體(Toll-like Receptor,TLR)、(NOD)樣受體(NLR)、基於視黃酸可誘導之基因(RIG)-I樣受體(RLR)、C型凝集素受體(CLR)或病原體相關分子模式(「PAMP」)介導先天性免疫活化之組合物。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑為抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗CTLA-4抗體、抗TIM-3抗體、抗Vista抗體、抗BTLA抗體、抗TIGIT抗體或抗LAG-3抗體。在一些實施例中，TLR促效劑為CpG或單磷醯基脂質A。在一些實施例中，誘導抗體依賴性細胞毒性之治療性抗體為利妥昔單抗(rituximab)、異貝莫單抗(ibritumomab)、托西莫單抗(tositumomab)、西妥昔單抗(cetuximab)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、貝倫妥單抗維多汀(brentuximab vedotin)、阿侖單抗(alemtuzumab)、奧科立姆(oncolym)、易必利單抗(ibilimumab)、維他欣(vitaxin)或貝伐單抗(bevacizumab)。
在第二十二態樣及其第一及第二實施例之一些實施例中，個體患有表現癌症抗原之癌症，且用於治療該個體之方法進一步包含投與個體初步治療以移除或殺死表現癌症抗原之癌細胞，其中初步治療之投藥係與單-或二-F-ML-CDN化合物或其組合物之投藥同時、在其之前或在其之後進行。在一些實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物或其組合物係作為初步治療之新輔助療法投與。在較佳實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物或其組合物係在基本療法之後投與。在一些實施例中，基本療法包含用於自哺乳動物移除癌細胞之手術、用於殺死哺乳動物中之癌細胞的放射療法或同時包含手術及放射療法。
在第二十三態樣中，本發明提供治療個體中之疾病之方法，其包含 投與有需要之個體i)有效量之一或多種如上文所描述之第一至第十九態樣及其任何實施例中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物，包括其任何前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，或其如上文所描述之第二十及第二十一態樣及其任何實施例中所描述之組合物；及ii)有效量之一或多種治療性抗體，其誘導抗體依賴性細胞毒性，其中該疾病係選自由以下組成之群：癌症、急性器官移植排斥、I型糖尿病、類風濕性關節炎、牛皮癬、克羅恩氏病(Crohn's disease)、再狹窄及過敏性哮喘。在一些實施例中，癌症係選自由以下組成之群：淋巴瘤(例如B細胞淋巴瘤)、乳癌、慢性淋巴球性白血病、結腸直腸癌、黑素瘤、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、前列腺癌及其他實體腫瘤。在一些實施例中，治療性抗體係選自由以下組成之群：莫羅單抗-CD3(muromonab-CD3)、英利昔單抗(infliximab)、達利珠單抗(daclizumab)、奧馬珠單抗(omalizumab)、阿昔單抗(abciximab)、利妥昔單抗、異貝莫單抗、托西莫單抗、西妥昔單抗、曲妥珠單抗、貝倫妥單抗維多汀、阿侖單抗、奧科立姆、易必利單抗、維他欣及貝伐單抗。
在第二十四態樣中，本發明提供用於治療其中Th1免疫性轉變成Th2免疫性可提供臨床益處之病症的方法，其中該方法包含投與有需要之個體一或多種如上文所描述之第一至第十九態樣及其任何實施例中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物，包括其任何前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，或其如上文所描述之第二十及第二十一態樣及其任何實施例中所描述之組合物。細胞介導之免疫性(CMI)與產生細胞激素IL-2、干擾素(IFN)-γ及腫瘤壞死因子(TNF)-α之TH1 CD4+ T淋巴球相關。相比之下，體液免疫性與產生IL-4、IL-6及 IL-10之TH2 CD4+ T淋巴球相關。針對TH1反應之免疫偏差通常引起細胞毒性T細胞淋巴球(CTL)、自然殺手(NK)細胞、巨噬細胞及單核細胞之活化。通常，Th1反應在針對細胞內病原體(位於宿主細胞內部之病毒及細菌)及腫瘤方面更有效，而Th2反應在針對細胞外細菌、寄生蟲(包括蠕蟲)及毒素方面更有效。此外，預期先天性免疫性之活化可校正1及2型T輔助細胞(Th1/Th2)免疫系統平衡及抑制可引起免疫球蛋白(Ig)E依賴性過敏及過敏性哮喘之Th2類型反應之過度反應。
在第二十五態樣中，本發明提供用於治療患有慢性感染性疾病之個體的方法，其中該方法包含投與有需要之個體有效量之如上文所描述之第一至第十九態樣及其任何實施例中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物，包括其任何前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之其水合物或其組合物，如如上文所描述之第二十及第二十一態樣及其任何實施例中所描述。在一些實施例中，一或多種單-或二-F-ML-CDN化合物或其組合物與另一種試劑組合投與以用於治療慢性感染性疾病。在一些實施例中，慢性感染性疾病係選自由以下組成之群：HBV感染、HCV感染、HPV感染、HSV感染及肝細胞癌症。
如上文所描述之第一至第十九態樣及其任何實施例中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物，包括其任何前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。或其如上文所描述之第二十及第二十一態樣及其任何實施例中所描述之組合物，可在含有醫藥學上可接受之賦形劑(例如載劑、佐劑、媒劑及其類似物)之配方中藉由多種非經腸及經腸途徑投與有需要之個體，如上文所描述之第二十二至第二十五態樣及其任何實施例之方法中所描述。優選非經腸途徑包括經口、經黏 膜、經陰道、經鼻及子宮頸途徑。優選非經腸途徑包括(但不限於)皮下、靜脈內、肌肉內、動脈內、皮內、鞘內及硬膜外投藥中之一或多者。較佳投藥係藉由皮下、瘤內或瘤周途徑。
如上文所描述之第一至第十九態樣及其任何實施例中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物，包括其任何前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，或其如本文中所描述之第二十及第二十一態樣及其任何實施例中所描述之組合物可與一或多種其他醫藥活性組分共同投與有需要之個體，如上文所描述之第二十二至第二十五態樣及其任何實施例之方法中所描述，該一或多種其他醫藥活性組分為諸如佐劑、脂質、雙層間交聯多層微脂粒、基於生物可降解聚(D,L-乳酸-共-乙醇酸)[PLGA]或基於聚酐之奈米粒子或微米粒子，及奈米多孔粒子負載型脂質雙層、免疫檢查點抑制劑(例如CTLA-4、PD-1、Tim-3、Vista、BTLA、LAG-3及TIGIT路徑拮抗劑；PD-1路徑阻斷劑；PD-L1抑制劑；包括(但不限於)抗PD-1抗體尼沃單抗、派立珠單抗或皮立珠單抗；PD-1抑制劑AMP-224；抗CTLA-4抗體伊派利單抗；及抗PD-L1抗體BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736或艾維路單抗)、誘導先天性免疫性之不活化或滅毒細菌(例如不活化或滅毒單核球增多性李氏菌)、經由類鐸受體(TLR)、(NOD)樣受體(NLR)、基於視黃酸誘導性基因(RIG)之I樣受體(RLR)、C型凝集素受體(CLR)或病原體相關分子模式(「PAMP」)介導先天性免疫活化之組合物，或化學治療劑。
在第二十六態樣中，本發明提供一或多種如上文所描述之第一至第十九態樣及其任何實施例中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物，包括其任何前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上 可接受之水合物，或其如上文所描述之第二十及第二十一態樣及其任何實施例中所描述之組合物，其係與治療性或預防性疫苗組合用作佐劑。在一些實施例中，疫苗經選擇以刺激針對一或多種預定抗原之免疫反應。在一些實施例中，疫苗包含一或多種抗原，包括與感染性疾病、惡性腫瘤或過敏原有關之重組型蛋白質抗原。在一些實施例中，該一或多種單-或二-F-ML-CDN化合物或其組合物與疫苗同時、在疫苗之前或在疫苗之後使用。在一些實施例中，該一或多種單-或二-F-ML-CDN化合物或其組合物與疫苗在相同組合物中調配。
在第二十六態樣之第一實施例中，疫苗包含不活化或滅毒細菌或病毒(其包含一或多種相關抗原、一或多種純化抗原、以重組方式經工程改造以表現及/或分泌一或多種抗原之活病毒或細菌傳遞載體)、抗原呈現細胞(APC)載體(其包含負載有一或多種抗原或經包含編碼該一或多種抗原之核酸之組合物轉染的細胞)、脂質抗原傳遞媒劑或編碼一或多種抗原之裸核酸載體。在一些實施例中，疫苗為抗細菌、抗病毒或抗癌治療性或預防性疫苗。在一些實施例中，一或多種抗原為一或多種選自由以下組成之群的抗原：病毒抗原、細菌抗原及癌症抗原。
在第二十六態樣及其第一實施例之一些實施例中，疫苗包含表現及分泌一或多種細胞激素之不活化腫瘤細胞。在一些實施例中，細胞激素選自由以下組成之群：GM-CSF、CCL20、CCL3、IL-12p70及FLT-3配位體。
在第二十六態樣及其第一實施例之一些實施例中，疫苗包含表現及分泌一或多種熱休克蛋白質之不活化腫瘤細胞。在一些實施例中，熱休克蛋白質為gp96-Ig融合蛋白質。
在第二十七態樣中，本發明提供一或多種如上文所描述之第一至第十九態樣及其任何實施例中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物，包括其任何前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，或其如上文所描述之第二十及第二十一態樣及其任何實施例中所描述之組合物，其係用於治療如上文所描述之第二十二至第二十六態樣及其任何實施例中之任一者中所描述的疾病或適應症。在一個較佳實施例中，一或多種單-或二-F-ML-CDN化合物係用於治療癌症。在一些實施例中，癌症係選自由以下組成之群：結腸直腸癌、上呼吸消化道鱗狀癌、肺癌、腦癌、肝癌、胃癌、膀胱癌、甲狀腺癌、腎上腺癌、胃腸道癌症、口咽癌、食道癌、頭頸癌、卵巢癌、子宮癌症、子宮頸癌、子宮內膜癌、乳癌、黑素瘤、前列腺癌、胰腺癌、腎癌、肉瘤、白血病、淋巴瘤及多發性骨髓瘤。
在第二十八態樣中，本發明提供一或多種如上文所描述之第一至第十九態樣及其任何實施例中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物，包括其任何前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，或其如上文所描述之第二十及第二十一態樣及其任何實施例中所描述之組合物，其係用於製備用以治療如上文所描述之第二十二至第二十六態樣及其任何實施例中之任一者中所描述之疾病或適應症的藥劑。在一個較佳實施例中，一或多種單-或二-F-ML-CDN化合物係用於製備用以治療癌症之藥劑。在一些實施例中，癌症係選自由以下組成之群：結腸直腸癌、上呼吸消化道鱗狀癌、肺癌、腦癌、肝癌、胃癌、膀胱癌、甲狀腺癌、腎上腺癌、胃腸道癌症、口咽癌、食道癌、頭頸癌、卵巢癌、子宮癌症、子宮頸癌、子宮內膜癌、乳癌、黑素瘤、前列腺癌、胰腺癌、 腎癌、肉瘤、白血病、淋巴瘤及多發性骨髓瘤。
在第二十九態樣中，本發明提供一種套組，其包括一或多種如上文所描述之第一至第十九態樣及其任何實施例中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物，包括其任何前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，或其如上文所描述之第二十及第二十一態樣及其任何實施例中所描述之組合物。在一些實施例中，一或多種單-或二-F-ML-CDN化合物或其組合物封裝於例如小瓶、瓶子或類似容器中，其可進一步封裝於例如盒子、包膜或類似容器內。在一些實施例中，一或多種單-或二-F-ML-CDN化合物或其組合物由美國食品藥物管理局(U.S.Food and Drug Administration)或類似監管機構核准用於投與哺乳動物，例如人類。在一個實施例中，此類套組包括該一或多種單-或二-F-ML-CDN化合物或其組合物適合或批准用於投與哺乳動物(例如人類)以用於適合的疾病或病狀的書面使用說明書及/或其他指示。在一些實施例中，化合物或組合物以單位劑量或單次劑量形式封裝，例如單次劑量藥九、膠囊或其類似物。
圖1A-C描繪針對人類STING WT(圖1A)、HAQ對偶基因(圖1B)及REF對偶基因(圖1C)蛋白質之單-或二-F-ML-CDN化合物之DSF分析法中之Tm偏移。
圖2描繪在用10μM二-腺嘌呤單-或二-F-ML-CDN化合物刺激之後2小時，人類PBMC中STINGWT/WT、STINGHAQ/HAQ及STINGREF/REF之相關IFNβ表現。
圖3描繪在用10μM鳥嘌呤-腺嘌呤單-或二-F-ML-CDN化合物刺激之 後2小時，人類PBMC中STINGWT/WT、STINGHAQ/HAQ及STINGREF/REF之相關IFNβ表現。
圖4A-E描繪在用10μM或100μM化合物45及49刺激之後2及6小時，人類PBMC中由STINGWT/WT、STINGHAQ/HAQ及STINGREF/REF進行之IFNβ(4A)、TNFα(4B)、IFNγ(4C)、IL-6(4D)及IL-12p35(4E)之相關表現。
圖5A-D描繪在1μg、10μg或100μg化合物26(5A、B)及化合物35(5C、D)及10μg或100μg參考化合物2'3'-RR-(A)(A)之三次瘤內注射之後，B16.SIY黑素瘤小鼠模型中之腫瘤體積，其中在初始生長(5A、C)或在再攻擊(5B、D)之後量測腫瘤體積。
圖6A-B描繪在FACS分析法中，在1μg、10μg或100μg化合物26(6A)及化合物35(6B)及10μg或100μg參考化合物2'3'-RR-(A)(A)之第三次瘤內注射之後第7天量測之B16.SIY黑素瘤小鼠模型中PBMC中之SIY+ CD8+ T細胞。
圖7A-E描繪0.1μg、1μg、10μg或100μg化合物5(7A)、化合物10(7B)、化合物20(7C)、化合物49(7D)或化合物50(7E)及1μg參考化合物2'3'-RR-(A)(A)之瘤內注射之後6小時，B16.SIY黑素瘤小鼠模型中促炎性細胞激素TNF-α、IL-6、MCP-1及IFN-γ之血清濃度。
圖8描繪在0.1μg、1μg、10μg或100μg化合物5、10、20、49或50及1μg參考化合物2'3'-RR-(A)(A)之瘤內注射之後，B16.SIY黑素瘤小鼠模型中之腫瘤體積。
圖9A-B描繪在0.1μg、1μg、10μg或100μg化合物5、10、20、49或50及1μg參考化合物2'3'-RR-(A)(A)之瘤內注射之後，B16.SIY黑素瘤小鼠模型中脾細胞中之SIY+ CD8+ T細胞，如藉由FACS(9A)或IFN-γ ELISPOT(9B)所量測。
本申請案主張2015年10月28日申請之美國臨時專利申請案62/247,658及2016年8月25日申請之美國臨時專利申請案62/379,611的優先權，其中每一者以全文(包括所有表格、圖式及申請專利範圍)引用之方式併入本文中。
本發明係關於經氟單取代或雙取代之混合鍵環狀-二-核苷酸(單-或二-F-ML-CDN)免疫刺激劑之製備及用途，該等免疫刺激劑經由稱為STING(干擾素基因刺激子)之細胞質受體活化DC。
稱為病原體相關分子模式(PAMP)之保存性微生物結構由宿主細胞模式識別受體(具有生殖系編碼特異性之PRR)感測，觸發可引起細胞激素及趨化激素之誘導的下游信號級聯，及特異性適應性免疫反應之起始(Iwasaki及Medzhitov,Science 327,291-5,2010)。由感染劑呈現之PAMP如何參與先天性免疫系統決定了適於對抗可引起疾病之入侵病原體之適應性反應的發展。
免疫調節劑及佐劑之設計中的一個目標為選擇可活化指定PRR及起始所需反應之既定PAMP或合成分子。諸如單磷醯基脂質A(MPL)及CpG之佐劑為由類鐸受體(TLR)識別之微生物衍生之PAMP，其為經由MyD88及TRIF銜接子分子進行訊息傳導且介導NF-kB依賴性促炎性細胞激素之誘導的一類PRR(Pandey等人，Cold Spring Harb Perspect Biol 2015；7：a016246)。MPL(TLR-4促效劑)及CpG(TLR-9促效劑)為臨床上最高級的佐劑，且為由FDA批准或正在申請批准之疫苗組分(Einstein等人，Human Vaccines,5：705-19,2009；Ahmed等人，Nature Immunol.12：509-17, 2011)。儘管TLR呈現於細胞表面(例如TLR-4)及內體(例如TLR-9)有義細胞外及液泡病原體上，但胞溶質中存在包括病毒及細胞內細菌之多重病原體之生產性生長循環。細胞外、液泡及胞漿PRR之區室化引起先天性免疫系統可藉由監測胞溶質來感測生產性複製病原性微生物之假設(Vance等人，Cell Host & Microbe 6：10-21,2009)。此提供使用可活化PRR(包含胞漿監督路徑)之促效劑之基本原理且可為用於設計用以引發細胞免疫(與針對細胞內病原體之保護及癌症中之治療效益相關的免疫)之有效疫苗的有效策略。
I型干擾素(IFN-α、IFN-β)為由兩種不同TLR非依賴性胞漿訊號傳導路徑誘導之特徵細胞激素。在第一路徑中，單股及雙股(ds)RNA之多種形式由RNA解螺旋酶感測，包括視黃酸誘導性基因I(RIG-I)及黑素瘤分化相關基因5(MDA-5)，且經由IFN-β啟動子刺激子1(IPS-1)銜接蛋白質介導IRF-3轉錄因子之磷酸化，引起IFN-β之誘導(Ireton及Gale,Viruses 3：906-19,2011)。IPS-1-/-缺失型小鼠具有增加之感染RNA病毒之敏感性。經由IPS-1路徑進行訊號傳導之感測子經多種病毒蛋白質直接靶向以用於不活化，表明需要此胞漿宿主防禦路徑以控制生產性病毒感染。合成dsRNA(諸如多聚肌苷酸：聚胞苷酸酸(聚(I：C)及聚ICLC，一種用聚L離胺酸調配以對抗RNase消化之類似物)為TLR3及MDA5路徑之促效劑、IFN-β之強力誘導劑且當前正在若干種不同臨床環境中進行評估(Caskey等人，J.Exp.Med.208：2357-77,2011)。
STING(干擾素基因刺激子)為第二胞漿路徑之中心介體，其回應於來自感染性病原體或異常宿主細胞(危險相關分子模式(Danger Associated Molecular Patterns；DAMPS))之感測胞漿雙股(ds)DNA而觸發1型干擾素 (Barber,Immunol.Rev 243：99-108,2011)。替代性地稱為TMEM173、MITA、ERIS及MPYS，STING係使用cDNA表現選殖方法(如表現於巨噬細胞中之MyD88非依賴性宿主細胞防禦因子)發現，發現樹突狀細胞(DC)及纖維母細胞回應於單純疱疹病毒感染而誘導對感測細胞質DNA起反應之IFN-β及NF-κB依賴性促炎性細胞激素之表現(Ishikawa及Barber,Nature 455：674-79,2008)。
已研究環狀二核苷酸(CDN)作為由細菌合成之廣泛小分子第二信使，其調節不同過程，包括生物膜之動力及形成(Romling等人，Micrb.Mol.Biol.Rev.,77：1-52,2013)。CDN亦為STING之配位體(Burdette等人，Nature 478：515-18,2011)。回應於結合CDNs，STING經由TBK-1/IRF-3軸及NF-κB軸活化訊號傳導且誘導IFN-β及其他共調節之基因之表現(Burdette及Vance,Nat Immunol.14：19-26,2013；McWhirter等人，J.Exp.Med.206：1899-1911,2009)。環狀(c)-二-AMP自細胞內細菌單核球增多性李氏菌藉由多藥抗性流出泵分泌至受感染之宿主抗原呈現細胞之胞溶質中，且在小鼠李氏菌病模型中與CD4+及CD8+ T細胞介導之保護相關(Woodward等人，Science 328,1703-05,2010；Crimmins等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 105：10191-10196,2008)。受Lm感染之巨噬細胞中IFN-β之誘導取決於STING訊號傳導路徑之活化，且來自MyD88-/- Trif-/-或C57BL/6親本小鼠之巨噬細胞中由c-二-AMP誘導之I型IFN之含量不可區分(Leber等人，PLoS Pathog 4(1)：e6.doi：10.1371,2008：Witte等人，mBio 4：e00282-13,2012)。相比之下，在來源於金券(goldenticket；gt)小鼠之編碼非功能性突變型STING蛋白質之巨噬細胞中，IFN-β不由CDN誘導(Sauer等人，Infect.Immun.79：688-94, 2011)。細胞外細菌，霍亂弧菌(Vibrio cholera)，產生雜交c-GMP-AMP(cGAMP)分子，其亦誘導STING路徑(Davies等人，Cell 149：358-70,2012)。由此等廣泛第二信使進行之先天性免疫性之活化表明感測CDN可與針對細菌感染之宿主防禦整合成一體。
儘管發現STING為誘導回應於單純疱疹病毒感染而產生IFN-β之關鍵感測子，但仍未知細胞質中如何最初檢測來自此病毒病原體之DNA。此難題由發現環狀GMP-AMP合成酶(cGAS)解決，環狀GMP-AMP合成酶為一種直接結合dsDNA且作為回應，合成第二信使環狀GMP-AMP(cGAMP)之宿主細胞核苷酸基轉移酶，該第二信使活化STING路徑且誘導IFN-β表現(Sun等人，Science 339：786-91,2013；Wu等人，Science 339：826-30,2013)。不含功能性cGAS之細胞不能回應於胞漿DNA之刺激而表現IFN-β。隨後證實表現特定STING對偶基因之細胞不對CDN刺激起反應，但以cGAS依賴性及TLR9(MyD88)非依賴性方式對dsDNA刺激起反應(Diner等人，2013)。此觀測結果與由cGAS回應於傳感胞漿dsDNA而合成STING活化CDN配位體定義之機制不相容。此明顯衝突由若干位獨立的研究者解決，其證明cGAS產生一種非典型CDN(c-GMP-AMP；cGAMP)，其活化不對典型CDN起反應之STING對偶基因(Civril等人，Nature 498：332-37,2013,Diner等人，2013,Gao等人，2013,Ablasser等人，Nature 498：380-84,2013，Kranzusch等人，Cell Reports 3：1362-68,2013，Zhang等人，Mol.Cell.51：226-35,2013)。因此，cGAMP充當第二信使，其結合且活化STING。與由細菌產生之CDN第二信使(其中兩個嘌呤核苷由具有雙(3',5')鍵之磷酸橋接合)不同，由cGAS合成之環狀-GMP-AMP中之核苷酸間磷酸橋由非典型2',5'及3',5'鍵(或者稱 為「混合」鍵或ML)接合，表示為c[G(2',5')pA(3',5')p]。此等2',5'-3',5'分子以奈米級親和力結合STING，比細菌c-二-GMP好約300倍。因此，已提出在STING靶向方面，2',5'-3',5'分子代表顯著更強的生理學配位體。Zhang等人，2013；亦參見Xiao及Fitzgerald,Mol.Cell 51：135-39,2013。由細菌[典型雙(3',5')鍵]產生之CDN與由宿主細胞cGAS(非典型2',5'及3',5'鍵)產生之CDN之間的核苷酸間磷酸橋結構的差異表明STING受體經演進以區分由細菌產生之CDN或由宿主細胞cGAS產生之CDN。
人類STING具有已知多形性，包括編碼位置232處之組胺酸的對偶基因，其對典型CDN而非非典型CDN具有抗性(Diner等人，2013，Jin等人，2011)。已證實hSTING基因中之單核苷酸多態性可影響對細菌衍生之典型CDN之反應(Diner等人，2013；Gao等人，2013；Conlon等人，2013)。已鑑別hSTING之五種單倍型(WT、REF、HAQ、AQ及Q對偶基因)，其在位置71、230、232及293處之胺基酸處不同(Jin等人，2011；Yi等人，2013)。據報導，表現hSTING之細胞對具有雙-(3',5')鍵之細菌CDNcGAMP、c-二-AMP及c-二-GMP之刺激反應較弱，但對內源性產生之cGAS產物ML cGAMP起反應(Diner等人，2013)。因此，所公開之文獻指示對於所有人類STING對偶基因之廣泛活化，需要CDN核苷酸間磷酸橋具有非標準、混合鍵c[G(2',5')pA(3',5')p]結構。環狀嘌呤二核苷酸之實例詳細描述於例如美國專利案第7,709458號及第7,592,326號；WO2007/054279、WO2014/093936及WO2014/189805；以及Yan等人，Bioorg.Med.Chem Lett.18：5631(2008)。
原生CDN分子對由宿主細胞(例如抗原呈現細胞)中之磷酸二酯酶引起之降解敏感，該等宿主細胞吸收含有該等原生CDN分子之疫苗調配 物。既定佐劑之效能可由此類降解減弱，因為佐劑將不能結合及活化其既定PRR目標。可例如藉由與較弱疫苗效能相關之先天性免疫性之特徵分子(例如IFN-β)之誘導表現量降低來量測佐劑效能降低，如由所量測之抗原特異性免疫反應之量值定義。
定義
「投藥」在其於本文中關於人類、哺乳動物、哺乳動物個體、動物、獸醫學個體、安慰劑個體、研究個體、實驗個體、細胞、組織、器官或生物流體使用時係指(但不限於)使外源性配體、試劑、安慰劑、小分子、藥劑、治療劑、診斷劑或組合物與個體、細胞、組織、器官或生物流體及其類似物接觸。「投藥」可指例如治療、藥物動力學、診斷、研究、安慰劑以及實驗方法。細胞處理涵蓋使試劑接觸細胞，以及使試劑接觸流體，其中該流體與細胞接觸。「投藥」亦涵蓋藉由試劑、診斷劑、結合組合物或藉由另一細胞進行之例如細胞之活體外及離體治療。「一起投與」或「共同投與」不意謂暗示兩種或更多種藥劑以單一組合物形式投與。儘管本發明涵蓋以單一組合物形式投藥，但此類藥劑可以單獨投藥形式傳遞至單一個體，該等單獨投藥可在相同或不同時間且可藉由相同投藥途徑或不同投藥途徑進行。「同時投與」意謂暗示兩種或更多種藥劑在實質上相同時間投與，但未必以單一組合物形式或藉由相同投藥途徑投與。
「促效劑」，如其係關於配位體及受體，包含分子、分子之組合、複合物或試劑之組合，其可刺激受體。舉例而言，粒細胞-巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)受體之促效劑可涵蓋GM-CSF、GM-CSF之突變蛋白質或衍生物、GM-CSF之肽模擬劑、模擬GM-CSF之生物功能的小分子或刺激GM-CSF受體之抗體。
如本文中所使用，術語「烷基」係指含有至多二十四個碳原子之飽和直鏈或分支鏈烴基。烷基之實例包括(但不限於)甲基、乙基、丙基、丁基、異丙基、正己基、辛基、癸基、十二烷基及其類似物。烷基典型地包括1至約24個碳原子，更典型地1至約12個碳原子，其中更佳為1至約6個碳原子。如本文所使用，術語「低碳烷基」包括1至約6個碳原子。如本文所使用，烷基可視情況包括一或多個其他取代基。
「拮抗劑」，如其係關於配位體及受體，包含可抑制、抵消、下調受體及/或使受體去敏之分子、分子之組合或複合物。「拮抗劑」涵蓋任何可抑制受體之組成性活性的試劑。組成性活性為在不存在配位體/受體相互作用之情況下顯現之活性。「拮抗劑」亦涵蓋任何抑制或防止受體之經刺激(或調節)之活性的試劑。作為實例，GM-CSF受體之拮抗劑包括(但不限於)結合於配位體(GM-CSF)且阻止其結合於受體之抗體，或結合於受體且阻止配位體結合於受體之抗體，或其中抗體以非活性構形封鎖受體。
如本文所使用之術語「抗體」係指能夠特異性結合抗原或抗原決定基之肽或多肽，其來源於免疫球蛋白基因或或其片段、在免疫球蛋白基因或其片段之後模型化或實質上由免疫球蛋白基因或其片段編碼。參見例如Fundamental Immunology，第3版，W.E.Paul編，Raven Press,N.Y.(1993)；Wilson(1994；J.Immunol.Methods l75：267-273；Yarmush(1992)J.Biochem.Biophys.Methods 25：85-97。術語抗體包括抗原結合部分，亦即保留結合抗原之能力的「抗原結合位點」(例如片段、子序列、互補決定區(CDR))，包括(i)Fab片段，一種由VL、VH、CL及CH1結構域組成之單價片段；(ii)F(ab')2片段，一種包含由鉸鏈區(hinge region)處之二硫橋鍵連接之兩個Fab片段的二價片段；(iii)由VH及CH1結構域組 成之Fd片段；(iv)由抗體之單臂之VL及VH域組成之Fv片段；(v)dAb片段(Ward等人，(1989)Nature 341：544-546)，其由VH域組成；及(vi)經分離之互補決定區(CDR)。對術語「抗體」之參考亦包括單鏈抗體。
如本文所使用，術語「二-OH參考化合物」係指不含如本文中所描述之單或二-F-ML-CDN化合物之任何2'及/或3'氟取代基之已知ML-CDN化合物，但在此等位置處具有-OH取代基。較佳的是，如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之已知二-OH參考化合物與單-或二-F-ML-CDN化合物具有相同鹼基，且具有相同磷酸二酯鍵(例如磷酸二酯或硫代磷酸酯類似物)。舉例而言，2'3'-RR-(3'F-A)(2'F-A)、2'3'-RR-(3'F-A)(A)、2'3'-RR-(A)(2'F-A)及2'3'-RR-(3'βF-A)(2'F-A)之二-OH參考化合物為2'3'-RR-(A)(A)；2'3'-RR-(G)(2'F-A)、3'2'-RR-(2'F-G)(3'F-A)及3'2'-RR-(2'F-G)(A)之二-OH參考化合物為2'3'-RR-(G)(A)；且2'3'-(G)(2'F-A)及2'3'-(3'F-G)(2'F-A)之二-OH參考化合物為2'3'-(G)(A)。二-OH參考化合物2'3'-RR-(A)(A)及2'3'-RR-(G)(A)描述於例如PCT公開案WO 2014/189805中。
如本文關於細胞滲透性或細胞對化合物之吸收所使用，「促進滲透性之試劑」或「促進吸收之試劑」為活體外或活體內促進化合物對細胞之滲透性或促進細胞對化合物之吸收的試劑。可在基於活體外細胞之分析法中比較如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物或二-OH參考化合物，其中分析法可在具有或不具有允許化合物由細胞吸收之試劑(諸如毛地黃皂苷)下進行。如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物意外地在無需諸如可促進細胞之滲透性或促進細胞對化合物之吸收之試劑的情況下，在此類基於細胞之分析法中，例如在如本文中所描述之THP-1細胞分析法中具有活性。如本文中所描述之包含單-或二-F-ML-CDN化合物之組 合物可在不存在可促進細胞之滲透性或促進細胞對化合物之吸收之試劑的情況下，例如在不存在可促進細胞之滲透性或促進細胞吸收之傳遞媒劑的情況下調配。此類添加劑或傳遞媒劑包括(但不限於)脂質或脂質類佐劑、脂質體、雙層間交聯多層微脂粒、奈米載體、奈米粒子及其類似物，諸如包含聚(乳酸)(PLA)、聚(乙醇酸)(PGA)及/或其共聚物之奈米粒子，諸如生物可降解聚之基於(D,L-乳酸-共-乙醇酸)[PLGA]或基於聚酐之奈米粒子或微米粒子。
關於本發明之CDN，「實質上純」意謂具有CDN活性之指定物質占組合物之至少50重量%，更通常占至少60重量%，典型地占至少70重量%，更典型地占至少75重量%，最典型地占至少80重量%，通常占至少85重量%，更通常占至少90重量%，最通常占至少95重量%且習知地占至少98重量%。純度之測定中通常不使用水、緩衝液、鹽、清潔劑、還原劑、蛋白酶抑制劑、穩定劑(包括所添加之蛋白質，諸如白蛋白)及賦形劑之重量。
當參考配位體/受體、核酸/互補核酸、抗體/抗原或其他結合配對(例如細胞激素與細胞激素受體)(各自通常在本文中稱為「目標生物分子」或「目標」)時，「特異性」或「選擇性」結合指示與蛋白質及其他生物製劑之異質性群體中目標之存在有關的結合反應。特異性結合可意謂例如在預期方法中，來源於抗體之抗原結合位點之結合化合物、核酸配位體、抗體或結合組合物以比非目標分子之親和力通常大至少25%，更通常大至少50%，最通常大至少100%(2倍)，通常大至少十倍，更通常大至少20倍且最通常大至少100倍之親和力結合於其目標。
「配位體」係指結合於目標生物分子之小分子、核酸、肽、多肽、 醣、多醣、聚醣、醣蛋白、醣脂或其組合。儘管此類配位體可為受體之促效劑或拮抗劑，但配位體亦涵蓋結合劑，其不為促效劑或拮抗劑，且不具有促效劑或拮抗劑特性。配位體與其同源目標之特異性結合通常以「親和力」表示。在較佳實施例中，本發明之配位體以約104M-1與約108M-1之間的親和力結合。親和力計算為Kd=koff/kon(koff為解離速率常數，Kon為結合速率常數且Kd為平衡常數)。
可藉由在多種濃度(c)下量測經標記之配位體之結合分數(r)來在平衡下測定親和力。資料使用史卡查方程式(Scatchard equation)圖示：r/c=K(n-r)：其中r=平衡下結合配位體之莫耳數/受體之莫耳數；c=平衡下之游離配位體濃度；K=平衡結合常數；且n=每個受體分子之配位體結合位點之數目。藉由圖形分析，在Y軸上標繪r/c且在X軸上標繪r，因此產生史卡查曲線。在此項技術中熟知藉由史卡查分析進行親和力量測。參見例如van Erp等人，J.Immunoassay 12：425-43,1991；Nelson及Griswold,Comput.Methods Programs Biomed.27：65-8,1988。在替代方案中，可藉由等溫滴定熱量測定(ITC)來量測親和力。在典型ITC實驗中，將配位體之溶液滴定至其同源目標之溶液中。隨時間推移監測在其相互作用(△H)時釋放之熱量。隨著連續量之配位體滴定至ITC細胞中，所吸收或釋放之熱量與結合量成正比。隨著系統達到飽和，熱信號減小直至僅觀測到稀釋熱量。接著針對細胞中配位體及結合搭配物之比率，自各注射之熱量曲線獲得結合曲線。藉由適合的結合模型分析結合曲線以測定KB、n及△H。應注意KB=1/Kd。
如本文所使用之術語「前藥」係指預期化合物之改質，其中經改質之化合物呈現較低藥理學活性(與經改質之化合物相比)且其中經改質之化 合物在身體內(例如在目標細胞或目標器官中)經由酶促或非酶促反應重新轉化呈未經改質之形式。在某些實施例中，一個核糖上之羥基包含前藥脫離基。前藥可改良藥物之物理化學、生物藥學及藥物動力學特性。傳統前藥歸類為藉由活體內經歷轉型作用而活化以形成活性藥物之藥物。前藥發展之原因通常為與母藥相關之不良水溶性、化學不穩定性、低口服生物可用性、血腦屏障滲透不足及高首次代謝。適合的前藥部分描述於例如「Prodrugs and Targeted Delivery」,J.Rautico編，John Wiley & Sons,2011中。實例包括(但不限於)由細胞酯酶移除之離去基、C6至C18脂肪酸酯、肉豆蔻醯基酯、戊醯基酯、己醯基酯及庚醯基酯。舉例而言，如本文中所描述之單-2'F-ML-CDN或單-3'F-ML-CDN化合物可分別包括3'羥基或2'羥基處之取代以形成此類酯。
如本文所使用之術語「個體」或「個人」係指人類或非人類生物體。因此，本文所述之方法及組成物適用於人類及獸醫學疾病。在某些實施例中，個體為「患者」，亦即接收疾病或病狀之醫學護理之活人。此包括正接受病理學病徵研究之患有不確定疾病的人員。較佳為診斷患有本發明之組合物及方法靶向之特定癌症之個體。用本文中所描述之組合物治療之較佳癌症包括(但不限於)前列腺癌、腎癌瘤、黑素瘤、胰臟癌、子宮頸癌、卵巢癌、結腸癌、頭頸癌、肺癌及乳癌。
「治療有效量」定義為足以展示患者利益(亦即引起降低、預防或改善所治療之病狀之症狀)試劑或醫藥組合物之量。當試劑或醫藥組合物包含診斷劑時，「診斷有效量」定義為足以產生信號、影像或其他診斷參數之量。醫藥調配物之有效量將根據諸如個體之敏感性程度、個體之年齡、性別及體重以及個體之特質反應之因素而變化。「有效量」涵蓋(但不限 於)可改善、逆轉、緩和、預防或診斷醫學病狀或病症之症狀或病徵或其致病過程之量。除非明確地或由上下文另外指出，否則「有效量」不限於足以改善病狀之最小量。
「治療(Treatment/treating)」(關於病狀或疾病)為用於獲得有利或所需結果(包括且較佳為臨床結果)之方法。在本發明中，關於疾病之有利或所需結果包括(但不限於)以下中之一或多者：預防疾病、改良與疾病與相關之病狀、治癒疾病、減輕疾病之嚴重度、延緩疾病之進程、緩解與疾病相關之一或多種症狀、提高疾病患者之生活質量及/或延長存活期。類似地，在本發明中，關於病狀之有利或所需結果包括(但不限於)以下中之一或多者：預防病狀、改良病狀、治癒病狀、減輕病狀之嚴重度、延緩病狀之進程、緩解與病狀相關之一或多種症狀、提高病狀患者之生活質量及/或延長存活期。舉例而言，在其中本文中所描述之組合物用於治療癌症之實施例中，有利或所需結果包括(但不限於)以下中之一或多者：降低贅生性或癌細胞之增殖(或破壞贅生性或癌細胞)、降低在癌症中發現之贅生性細胞之轉移、減小腫瘤之尺寸、減少由癌症引起之症狀、提供此等癌症患者之生活質量、降低治療疾病所需之其他藥物之劑量、延緩癌症進程及/或延長癌症患者之存活期。視上下文而定，個體之「治療」可暗示個體需要治療，例如在其中個體包含預期可由投與試劑改善之病症之情形中。
「疫苗」涵蓋防治性疫苗。疫苗亦涵蓋治療疫苗，例如投與包含與由疫苗提供之抗原或抗原決定基相關之病狀或病症的哺乳動物之疫苗。
環狀嘌呤二核苷酸
原核以及真核細胞使用多種小分子進行細胞訊號傳導以及細胞內及細胞間通訊。已知環狀核苷酸(例如cGMP、cAMP等)在原核及真核細胞 中具有調節及起始活性。與真核細胞不同，原核細胞亦使用環狀嘌呤二核苷酸作為調節分子。在原核細胞中，兩個GTP分子之縮合由酶二鳥苷酸環化酶(DGC)催化以產生c-diGMP，其表示細菌中之重要調節劑。
當前研究表明環狀diGMP或其類似物亦可刺激或增強患者中之免疫或發炎反應，或在哺乳動物中可藉由充當佐劑來增強對疫苗之免疫反應。病原體衍生之DNA之胞漿檢測需要經由TANK結合激酶1(TBK1)及其下游轉錄因子IFN調節因子3(IRF3)進行訊號傳導。一種稱為STING(IFN基因之刺激子；亦稱為MITA、ERIS、MPYS及TMEM173)之跨膜蛋白充當此等環狀嘌呤二核苷酸之訊號傳導受體，引起刺激TBK1-IRF3訊號傳導軸及STING依賴性I型干擾素反應。參見例如圖1。Burdette等人，Nature 478：515-18,2011證明STING直接結合於環狀二鳥苷酸單磷酸，但不與其他不相關核苷酸或核酸結合。
適用作前驅體以衍生本發明之CDN之環狀嘌呤二核苷酸詳細描述於例如Gao等人，Cell(2013)153：doi：10.1016/j.cell.2013.04.046；美國專利案第7,709458號及第7,592,326號；WO2007/054279、WO2014/093936及WO2014/189805；以及Yan等人，Bioorg.Med.Chem Lett.18：5631(2008)中。此等CDN可使用標準有機化學技術改質以產生本發明之CDN。
如本文中所描述之本發明之單-或二-F-ML-CDN化合物為強效STING促效劑，且與已知未經氟取代之ML-CDN化合物(諸如2'3'-RR-(A)(A)，一種STING促效劑，已證實其在小鼠腫瘤模型中有效)相比顯示未預期的改良(Corrales等人，Cell Reports 2015,11：1018-1031)。比較本發明之單-或二-F-ML-CDN化合物與在2'及3'位置之取代不同的已知化合 物，例如二-OH參考化合物，諸如2'3'-(A)(A)、2'3'-(G)(A)、3'2'-(G)(A)、2'3'-RR-(A)(A)或2'3'-RR-(G)(A)。單-或二-F-ML-CDN化合物之特性說明於以下實例14-16中，其中化合物與二-OH參考化合物相比顯示改良，如具有以下中之一或多者：i)在DSF分析法中具有較高Tm偏移，如實例14中關於hSTING(WT)、hSTING(HAQ)或hSTING(REF)中之一或多者所描述；ii)在hPBMC分析法中具有較高IFN-β轉錄之相關表現，如實例15中關於hSTING(WT)、hSTING(HAQ)或hSTING(REF)中之一或多者所描述；或iii)在THP1細胞分析法中具有較低EC50，如實例16中所描述，其中THP1分析法較佳在不存在毛地黃皂苷之情況下進行。在一些實施例中，單-或二-F-ML-CDN與二-OH參考化合物相比顯示改良，如具有以下中之兩者或更多者：i)在DSF分析法中具有較高Tm偏移，如實例14中關於hSTING(WT)、hSTING(HAQ)或hSTING(REF)中之一或多者所描述；ii)在hPBMC分析法中具有較高IFN-β轉錄之相關表現，如實例15中關於hSTING(WT)、hSTING(HAQ)或hSTING(REF)中之一或多者所描述；或iii)在THP1細胞分析法中具有較低EC50，如實例16中所描述，其中THP1分析法較佳在不存在毛地黃皂苷之情況下進行。在一些實施例中，單-或二-F-ML-CDN與二-OH參考化合物相比顯示改良，如具有以下各者i)在DSF分析法中具有較高Tm偏移，如實例14中關於hSTING(WT)、hSTING(HAQ)或hSTING(REF)中之一或多者所描述；ii)在hPBMC分析法中具有較高IFN-β轉錄之相關表現，如實例15中關於hSTING(WT)、hSTING(HAQ)或hSTING(REF)中之一或多者所描述；或iii)在THP1細胞分析法中具有較低EC50，如實例16中所描述，其中THP1分析法較佳在不存在毛地黃皂苷之情況下進行。在如本文中所描述之單-或二-F-ML- CDN化合物之一些實施例中，與2'3'-RR-(A)(A)相比，單-或二-F-ML-CDN化合物在hPBMC分析法中具有至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少50倍、至少100倍、至少500倍或至少1000倍更高的IFN-β轉錄之相關表現，如實例15中關於hSTING REF對偶基因所描述。在一些實施例中，在實例16中所描述之不添加毛地黃皂苷之THP1分析法中，單-或二-F-ML-CDN化合物之EC50比二-OH參考化合物之EC50低至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍或至少8倍。在一些實施例中，在不添加可促進化合物對細胞之滲透性之試劑或可促進細胞對化合物之吸收之試劑的THP1細胞分析法中，單-或二-F-ML-CDN化合物之EC50小於40μM，小於30μM，小於20μM，小於15μM或小於10μM。在一些實施例中，在實例16中所描述之THP1分析法中，在不添加毛地黃皂苷之情況下，單-或二-F-ML-CDN化合物之EC50小於40μM、小於30μM、小於20μM、小於15μM或小於10μM。
如本文中所描述之本發明之單-或二-F-ML-CDN化合物可為硫代磷酸酯類似物，本文中稱為「硫代磷酸」。硫代磷酸酯為正常核苷酸之變異體，其中一個非橋聯氧由硫置換。核苷酸間鍵之硫化顯著降低內切核酸酶及外切核酸酶之作用，包括5'至3'及3'至5'DNA POL 1外切核酸酶、核酸酶S1及P1、RNases、血清核酸酶及蛇毒磷酸二酯酶。此外，交聯脂質雙層之潛力增加。
硫代磷酸酯鍵固有地為對掌性。熟習此項技術者將認識到，此結構中之磷酸酯可各自以R或S形式存在。因此，有可能為Rp,Rp、Sp,Sp、Sp,Rp及Rp,Sp形式。如上文所提及，本發明之單-或二-F-ML-RR-CDN化合物較佳具有Rp,Rp形式，例如本文中所描述之2'F-ML-RR-CDN、3'F- ML-RR-CDN或2'3'F-ML-RR-CDN化合物。
如上文所提及，單-或二-F-ML-CDN化合物亦包括CDN之前藥形式。前藥可改良藥物之物理化學、生物藥學及藥物動力學特性。傳統前藥歸類為藉由活體內經歷轉型作用而活化以形成活性藥物之藥物。前藥發展之原因通常為與母藥相關之不良水溶性、化學不穩定性、低口服生物可用性、血腦屏障滲透不足及高首次代謝。適合的前藥部分描述於例如「Prodrugs and Targeted Delivery」,J.Rautico編，John Wiley & Sons,2011中。
如本文關於二硫基二磷酸酯ML環狀嘌呤二核苷酸所使用之術語「實質上純」係指Rp,Rp形式，其相對於如本文中所描述之單-或二-F-ML-RR-CDN化合物中指示之對掌性磷中心處之其他可能的立體化學為至少75%純的。作為實例，「實質上純的2'3'-RR-(G)(2'F-A)」將關於Rp,Sp、Sp,Rp及Sp,Sp，亦即相對於2'3'-RS-(G)(2'F-A)、2'3'-SR-(G)(2'F-A)及2'3'-SS-(G)(2'F-A)為至少75%純的。在較佳實施例中，實質上純的環狀嘌呤二核苷酸為至少85%純、至少90%純、至少95%純、至少97%純及至少99%純的。儘管本發明之實質上純的環狀嘌呤二核苷酸製劑為「立體化學純」，但此不意謂指示製劑內在此等對掌性中心處具有特定立體化學之所有CDN在其他方面相同。舉例而言，實質上純的環狀嘌呤二核苷酸製劑可含有2'3'-RR-(G)(2'F-A)硫代磷酸酯與2'3'-RR-(A)(2'F-A)硫代磷酸酯之組合且仍為實質上純的環狀嘌呤二核苷酸製劑。此類製劑亦可包括如下文所描述之有利於患者治療之其他組分，其限制條件為製劑內之所有CDN在此等對掌性中心處具有特定立體化學。
本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物及其組合物可以足以誘 導、改良或刺激適合的免疫反應之量單獨或與醫藥學上可接受之賦形劑組合投與宿主。免疫反應可包含(但不限於)特異性免疫反應、非特異性免疫反應、特異性及非特異性反應、先天性反應、原發性免疫反應、適應性免疫性、第二免疫反應、記憶免疫反應、免疫細胞活化、免疫細胞增殖、免疫細胞分化及細胞激素表現。在某些實施例中，本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物及其組合物與一或多種其他組合物結合投與，該一或多種其他組合物包括意欲刺激針對一或多種預定抗原之免疫反應的疫苗；佐劑；CTLA-4及PD-1路徑拮抗劑、脂質、脂質體、化學治療劑、免疫調節細胞株等。
本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物及其組合物可在其他治療性或預防性組合物或儀器治療之前、之後及/或與其同時投與。此等組合物包括(但不限於)B7共刺激分子、介白素-2、干擾素-γ、GM-CSF、CTLA-4拮抗劑、OX-40/OX-40配位體、CD40/CD40配位體、沙格司亭(sargramostim)、左旋咪唑(levamisol)、牛痘病毒、卡介苗(Bacille Calmette-Guerin；BCG)、脂質體、礬、弗氏完全或不完全佐劑(Freund's complete or incomplete adjuvant)、解毒內毒素、礦物質油、表面活性物質(諸如脂質卵磷脂(lipolecithin))、普洛尼克多元醇(pluronic polyols)、聚陰離子、肽及油或烴乳液。較佳為誘導T細胞免疫反應之載劑，其相對於抗體反應優先刺激溶胞T細胞反應，但亦可使用刺激兩種類型之反應的載劑。在其中試劑為多肽之情況下，可投與多肽本身或編碼多肽之聚核苷酸。載劑可為細胞，諸如抗原呈現細胞(APC)或樹突狀細胞。抗原呈現細胞包括諸如巨噬細胞、樹突狀細胞及B細胞之細胞類型。其他專業抗原呈現細胞包括單核細胞、邊緣區庫普弗細胞(marginal zone Kupffer cells)、 微神經膠質細胞、蘭格漢氏細胞(Langerhans' cells)、嚙合樹突狀細胞、濾泡樹突狀細胞及T細胞。亦可使用兼性抗原呈現細胞。兼性抗原呈現細胞之實例包括星形膠質細胞、濾泡細胞、內皮細胞及纖維母細胞。載劑可為細菌細胞，其經轉型以表現多肽或傳遞聚核苷酸，其接著在經經疫苗接種之個體之細胞中表現。可添加佐劑(諸如氫氧化鋁或磷酸鋁)以提高疫苗觸發、增強或延長免疫反應之能力。其他材料，諸如細胞激素、趨化激素及細菌核酸序列，例如CpG、類鐸受體(TLR)9促效劑以及TLR 2、TLR 4、TLR 5、TLR 7、TLR 8、TLR9之其他促效劑，包括脂蛋白、LPS、單磷醯基脂質A、脂磷壁酸、咪喹莫特(imiquimod)、雷西莫特(resiquimod)以及視黃酸誘導性基因I(RIG-I)促效劑，諸如聚I：C亦為潛在佐劑，其單獨或與所描述之組合物組合使用。佐劑之其他代表性實例包括合成佐劑QS-21，其包含自皂皮樹之樹皮純化之均質皂素及短小棒狀桿菌(Corynebacterium parvum)(McCune等人，Cancer,1979；43：1619)。應理解，佐劑經歷最佳化。換言之，熟習此項技術者可進行常規實驗以測定待使用之最佳佐劑。
用於與其他治療劑共同投藥之方法為此項技術中所熟知(Hardman等人(編)(2001)Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics，第10版，McGraw-Hill,New York,NY；Poole及Peterson (編)(2001)Pharmacotherapeutics for Advanced Practice：A Practical Approach,Lippincott,Williams & Wilkins,Phila.,PA；Chabner及Longo(編)(2001)Cancer Chemotherapy and Biotherapy,Lippincott,Williams & Wilkins,Phila.,PA)。通常，共同投藥或一起投藥表示用兩種或更多種藥劑治療個體，其中該等藥劑可同時或在不同時間投與。舉例 而言，此類藥劑可以單獨投藥形式傳遞至單一個體，該等單獨投藥可在實質上相同時間或不同時間進行，且其可藉由相同投藥途徑或不同投藥途徑進行。此類藥劑可在同一次投藥(例如同一調配物)中傳遞至單一個體，使得其同時藉由相同投藥途徑投與。
由於本發明化合物之佐劑特性，其亦可與其他治療模式(包括其他疫苗、佐劑、抗原、抗體及免疫調節劑)組合使用。實例提供於下文中。
佐劑
除上文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物及其組合物以外，本發明之組合物或方法可進一步包含一或多種其他物質，其由於其性質可用於刺激或以其他方式利用免疫系統以對目標腫瘤細胞上之癌症抗原起反應。此類佐劑包括(但不限於)脂質、脂質體、誘導先天性免疫性之不活化細菌(例如不活化或滅毒單核球增多性李氏菌)、經由類鐸受體(TLR)介導先天性免疫活化之組合物、(NOD)樣受體(NLR)、基於視黃酸誘導性基因(RIG)之I樣受體(RLR)、C類凝集素受體(CLR)及/或病原體相關分子模式(「PAMP」)。PAMP之實例包括脂蛋白、脂多肽、肽聚糖、酵母聚糖、脂多糖、奈瑟氏球菌外膜蛋白(neisserial porins)、鞭毛蛋白、普洛非林(profillin)、半乳糖神經醯胺、胞壁醯二肽。肽聚糖、脂蛋白及脂磷壁酸為革蘭氏陽性(Gram-positive)細胞壁組分。脂多糖由大部分細菌表現，其中MPL為一個實例。鞭毛蛋白係指由病原性及共生細菌分泌之細菌鞭毛之結構組分。α-半乳糖苷基神經醯胺(α-GalCer)為自然殺手T(NKT)細胞之活化因子。胞壁醯二肽為所有細菌共有的生物活性肽聚糖主結構。此清單不意欲為限制性。較佳佐劑組合物描述於下文中。
免疫檢查點抑制劑
如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物可與免疫檢查點抑制劑組合使用，諸如選自由以下組成之群的免疫檢查點抑制劑：CTLA-4路徑拮抗劑、PD-1路徑拮抗劑、Tim-3路徑拮抗劑、Vista路徑拮抗劑、BTLA路徑拮抗劑、LAG-3路徑拮抗劑或TIGIT路徑拮抗劑。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係選自由以下組成之群：抗CTLA-4抗體、抗PD-1抗體、抗Tim-3抗體、抗Vista抗體、抗BTLA抗體、抗LAG-3抗體或抗TIGIT抗體。
如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物可與CTLA-4路徑拮抗劑組合使用。在一些實施例中，該組合用於治療實體腫瘤或血液科惡性疾病。認為CTLA-4為適應性免疫反應之重要負調節劑。經活化之T細胞上調CTLA-4，其與CD28相比以較高親和力結合抗原呈現細胞上之CD80及CD86，因此抑制T細胞刺激、IL-2基因表現及T細胞增殖。已在結腸癌瘤、轉移性前列腺癌及轉移性黑素瘤之鼠類模型中觀測到CTLA4阻斷之抗腫瘤作用。在一些實施例中，CTLA-4路徑拮抗劑為選自由以下組成之群的抗CTLA-4抗體分子：曲美單抗(tremelimumab)及伊派利單抗(ipilimumab)。在一些實施例中，抗CTLA-4抗體為如例如美國專利案第5,811,097號中所揭示之抗CTLA-4抗體。
伊派利單抗(Ipilimumab)(YervoyTM，一種CTLA-4抗體，亦稱為MDX-010，CAS編號477202-00-9)及曲美單抗(可自Pfizer購得之IgG2單株抗體，先前稱為替西單抗(ticilimumab)，CP-675,206)為人類化單株抗體，其結合於人類CTLA4且阻止其與CD80及CD86之相互作用。使用伊派利單抗及曲美單抗進行之I期及II期研究在癌症患者中具有顯著臨床活性。可由類似策略靶向之其他陰性免疫調節劑包括漸進式細胞死亡1(PD- 1)、B及T淋巴細胞弱化子、轉型生長因子ββ、介白素-10及血管內皮生長因子。
在一些實施例中，如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物可與抗CTLA-4抗體及抗PD-1抗體組合使用。在一個實施例中，組合包括抗PD-1抗體分子，例如本文中所描述，及抗CTLA-4抗體，例如伊派利單抗。可使用之例示性劑量包括約1mg/kg至10mg/kg，例如3mg/kg之抗-PD-1抗體分子之劑量，及約3mg/kg之抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗)之劑量。
如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物可與PD-1路徑拮抗劑組合使用。在一些實施例中，該組合用於治療實體腫瘤或血液科惡性疾病。PD-1為表現於經活化之T細胞上之適應性免疫反應之另一種負調節劑。PD-1結合於B7-H1及B7-DC，且PD-1之接合可抑制T細胞活化。已由PD-1路徑阻斷表明抗腫瘤作用。已在文獻中報導抗PD-1抗體分子(例如尼沃單抗(Nivolumab)(OpdivoTM)、派立珠單抗(pembrolizumab)(KeytrudaTM)及皮立珠單抗(pidilizumab))及AMP-224為PD-1路徑阻斷劑之實例，其可用於本發明中。在一些實施例中，PD-1路徑拮抗劑為選自由以下組成之群的抗PD-1抗體分子：尼沃單抗、派立珠單抗或皮立珠單抗。
在一些實施例中，抗PD-1抗體為尼沃單抗。尼沃單抗之替代性名稱包括MDX-1106、MDX-1106-04、ONO-4538或BMS-936558。在一些實施例中，抗PD-1抗體為尼沃單抗(CAS註冊號：946414-94-4)。尼沃單抗為完全人類IgG4單株抗體，其特異性阻斷PD1。尼沃單抗(純系5C4)及其他特異性結合於PD1之人類單株抗體揭示於US 8,008,449及 WO2006/121168中。在一個實施例中，PD-1之抑制劑為尼沃單抗，且具有本文中所揭示之序列(或與其實質上一致或類似之序列，例如與指定序列至少85%、90%、95%或更加一致之序列)。
尼沃單抗之重鏈胺基酸序列如下： (SEQ ID NO：1)
尼沃單抗之輕鏈胺基酸序列如下： (SEQ ID NO：2)
在一些實施例中，抗PD-1抗體為派立珠單抗。派立珠單抗(亦稱為拉立珠單抗(lambrolizumab)、MK-3475、MK03475、SCH-900475或KEYTRUDA®；Merck)為人類化IgG4單株抗體，其結合於PD-1。派立珠單抗及其他人類化抗PD-1抗體揭示於Hamid,O.等人(2013)New England Journal of Medicine 369(2)：134-44、US 8,354,509及WO2009/114335中。在一個實施例中，PD-1之抑制劑為派立珠單抗，且具有本文中所揭示之序列(或與其實質上一致或類似之序列，例如與指定序列至少85%、90%、95%或更加一致之序列)。
派立珠單抗之重鏈胺基酸序列如下： (SEQ ID NO：3)
派立珠單抗之輕鏈胺基酸序列如下： (SEQ ID NO：4) 218
在一些實施例中，抗PD-1抗體為皮立珠單抗。皮立珠單抗(Pidilizumab)(CT-011；Cure Tech)為結合於PD-1之人類化IgG1k單株抗體。皮立珠單抗及其他人類化抗PD-1單株抗體揭示於WO2009/101611中。
在一些實施例中，抗PD-1抗體為AMP 514(Amplimmune)，或如US 8,609,089、US 2010028330及/或US 20120114649中所揭示之抗PD-1抗體。
在一些實施例中，PD-1路徑拮抗劑為2015年7月30日公開之題為「Antibody Molecules to PD-1 and Uses Thereof」之US 2015/0210769中所揭示之抗PD-1抗體分子。
在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包括至少一個或兩個重鏈可變域(視情況包括恆定區)、至少一個或兩個輕鏈可變域(視情況包括恆定區)或其兩者，其包含BAP049-純系-A、BAP049-純系-B、BAP049-純系-C、BAP049-純系-D或BAP049-純系-E之胺基酸序列；或如US 2015/0210769之表1中所描述，或由其中表1中之核苷酸序列編碼；或與任一前述序列實質上一致(例如至少80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、99%或更加一致)之序列。抗PD-1抗體分子視情況包含來自重鏈、輕鏈或其兩者 之前導序列，如US 2015/0210769之表4中所示；或與其實質上一致之序列。
在另一實施例中，抗PD-1抗體分子包括至少一個、兩個或三個來自US 2015/0210769中所描述之抗體之重鏈可變區及/或輕鏈可變區之互補決定區(CDR)，例如選自以下中之任一者之抗體：BAP049-hum01、BAP049-hum02、BAP049-hum03、BAP049-hum04、BAP049-hum05、BAP049-hum06、BAP049-hum07、BAP049-hum08、BAP049-hum09、BAP049-hum10、BAP049-hum11、BAP049-hum12、BAP049-hum13、BAP049-hum14、BAP049-hum15、BAP049-hum16、BAP049-Clone-A、BAP049-Clone-B、BAP049-Clone-C、BAP049-Clone-D或BAP049-Clone-E；或如其中表1中所描述，或由其中表1中之核苷酸序列編碼；或與任一前述序列實質上一致(例如至少80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、99%或更加一致)之序列。
在另一實施例中，抗PD-1抗體分子包括至少一個、兩個或三個來自重鏈可變區之CDR(或總體而言所有CDR)，其包含US 2015/0210769之表1中所展示之胺基酸序列，或由其中表l中所展示之核苷酸序列編碼。在一個實施例中，CDR中之一或多者(或總體而言所有CDR)與表1中展示之胺基酸序列相比具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或更多個變化，例如胺基酸取代或缺失，或由其中表1中展示之核苷酸序列編碼。
在另一實施例中，抗PD-1抗體分子包括至少一個、兩個或三個來自輕鏈可變區之CDR(或總體而言所有CDR)，其包含US 2015/0210769之表1中所展示之胺基酸序列，或由其中表1中所展示之核苷酸序列編碼。在一個實施例中，CDR中之一或多者(或總體而言所有CDR)與表1中展示之胺 基酸序列相比具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或更多個變化，例如胺基酸取代或缺失，或由其中表1中展示之核苷酸序列編碼。在某些實施例中，抗PD-1抗體分子包括輕鏈CDR中之取代，例如輕鏈之CDR1、CDR2及/或CDR3中的一或多個取代。在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包括輕鏈可變區之位置102處的輕鏈CDR3中之取代，例如根據表1之輕鏈可變區(例如對於未經修飾之鼠類或嵌合抗體，SEQ ID NO：16或24；或對於經修飾之序列，SEQ ID NO：34、42、46、54、58、62、66、70、74或78中之任一者)之位置102處半胱胺酸對酪胺酸之取代或半胱胺酸對絲胺酸殘基之取代。
在另一實施例中，抗PD-1抗體分子包括至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個來自重鏈及輕鏈可變區之CDR(或總體而言所有CDR)，其包含US 2015/0210769之表1中所展示之胺基酸序列，或由其中表1中所展示之核苷酸序列編碼。在一個實施例中，CDR中之一或多者(或總體而言所有CDR)與表1中展示之胺基酸序列相比具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或更多個變化，例如胺基酸取代或缺失，或由其中表1中展示之核苷酸序列編碼。
在一個實施例中，抗PD-1抗體分子包括：(a)重鏈可變區(VH)，其包含SEQ ID NO：4之VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：5之VHCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO：3之VHCDR3胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL)，其包含SEQ ID NO：13之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：14之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO：33之VLCDR3胺基酸序列，各自如US 2015/0210769之表1中所揭示；(b)VH，其包含選自SEQ ID NO：1之VHCDR1胺基酸序列；SEQ ID NO：2之VHCDR2胺基酸序列；及SEQ ID NO：3之VHCDR3胺基酸序列；及VL，其包含SEQ ID NO：10之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：11之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO：32之VLCDR3胺基酸序列，各自如US 2015/0210769之表1中所揭示；(c)VH，其包含SEQ ID NO：224之VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：5之VHCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO：3之VHCDR3胺基酸序列；及VL，其包含SEQ ID NO：13之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：14之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO：33之VLCDR3胺基酸序列，各自如US 2015/0210769之表1中所揭示；或(d)VH，其包含SEQ ID NO：224之VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：2之VHCDR2胺基酸序列；及SEQ ID NO：3之VHCDR3胺基酸序列；以及VL，其包含SEQ ID NO：10之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：11之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO：32之VLCDR3胺基酸序列，各自如US 2015/0210769之表1中所揭示。
在另一實施例中，抗PD-1抗體分子包含(i)重鏈可變區(VH)，其包含選自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：224之VHCDR1胺基酸序列；SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：5之VHCDR2胺基酸序列；及SEQ ID NO：3之VHCDR3胺基酸序列；及(ii)輕鏈可變區(VL)，其包含SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：13之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：14之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO：32或SEQ ID NO：33之VLCDR3胺基酸序列，各自如US 2015/0210769之表1中所揭示。
在一些實施例中，PD-1路徑拮抗劑為免疫黏附素(例如包含與恆定區(例如免疫球蛋白序列之Fc區)融合之PD-L1或PD-L2之細胞外或PD-1結合部分之免疫黏附素)。在一些實施例中，PD-1抑制劑為AMP-224(B7- DCIg；Amplimmune；例如WO2010/027827及WO2011/066342中所揭示)，其為阻斷PD-1與B7-H1之間的相互作用之PD-L2 Fc融合可溶性受體。
在一些實施例中，PD-1路徑拮抗劑為PD-L1或PD-L2抑制劑。在一些實施例中，PD-L1或PD-L2抑制劑為抗PD-L1抗體或抗PD-L2抗體。
在一些實施例中，PD-L1抑制劑為抗PD-L1抗體。抗PD-L1抗體分子之例示性非限制性組合及用途揭示於2016年4月21日公開之題為「Antibody Molecules to PD-L1 and Uses Thereof」之US 2016/0108123中。
在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子包括至少一個或兩個重鏈可變域(視情況包括恆定區)、至少一個或兩個輕鏈可變域(視情況包括恆定區)或其兩者，其包含BAP058-hum01、BAP058-hum02、BAP058-hum03、BAP058-hum04、BAP058-hum05、BAP058-hum06、BAP058-hum07、BAP058-hum08、BAP058-hum09、BAP058-hum10、BAP058-hum11、BAP058-hum12、BAP058-hum13、BAP058-hum14、BAP058-hum15、BAP058-hum16、BAP058-hum17、BAP058-Clone-K、BAP058-Clone-L、BAP058-Clone-M、BAP058-Clone-N或BAP058-Clone-O中之任一者之胺基酸序列；或如US 2016/0108123之表1中所描述，或由其中表1中之核苷酸序列編碼；或與任一前述序列實質上一致(例如至少80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、99%或更加一致)的序列。
在另一實施例中，抗PD-L1抗體分子包括至少一個、兩個或三個來自本文中所描述之抗體之重鏈可變區及/或輕鏈可變區的互補決定區(CDR)，例如選自以下任一者之抗體：BAP058-hum01、BAP058- hum02、BAP058-hum03、BAP058-hum04、BAP058-hum05、BAP058-hum06、BAP058-hum07、BAP058-hum08、BAP058-hum09、BAP058-hum10、BAP058-hum11、BAP058-hum12、BAP058-hum13、BAP058-hum14、BAP058-hum15、BAP058-hum16、BAP058-hum17、BAP058-Clone-K、BAP058-Clone-L、BAP058-Clone-M、BAP058-Clone-N或BAP058-Clone-O；或如US 2016/0108123之表1中所描述，或由其中表1中之核苷酸序列編碼；或實質上與任一前述序列一致(例如至少80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、99%或更加一致)的序列。
在另一實施例中，抗PD-L1抗體分子包括至少一個、兩個或三個來自重鏈可變區之CDR(或總體而言所有CDR)，其包含US 2016/0108123之表1中所展示之胺基酸序列，或由其中表1中所展示之核苷酸序列編碼。在一個實施例中，CDR中之一或多者(或總體而言所有CDR)與表1中展示之胺基酸序列相比具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或更多個變化，例如胺基酸取代或缺失，或由表1中展示之核苷酸序列編碼。
在另一實施例中，抗PD-L1抗體分子包括至少一個、兩個或三個來自輕鏈可變區之CDR(或總體而言所有CDR)，其包含US 2016/0108123之表1中所展示之胺基酸序列，或由其中表1中所展示之核苷酸序列編碼。在一個實施例中，CDR中之一或多者(或總體而言所有CDR)與表1中展示之胺基酸序列相比具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或更多個變化，例如胺基酸取代或缺失，或由表1中展示之核苷酸序列編碼。在某些實施例中，抗PD-L1抗體分子包括輕鏈CDR中之取代，例如輕鏈之CDR1、CDR2及/或CDR3中的一或多個取代。
在另一實施例中，抗PD-L1抗體分子包括至少一個、兩個、三個、 四個、五個或六個來自重鏈及輕鏈可變區之CDR(或總體而言所有CDR)，其包含US 2016/0108123之表1中所展示之胺基酸序列，或由其中表1中所展示之核苷酸序列編碼。在一個實施例中，CDR中之一或多者(或總體而言所有CDR)與表1中展示之胺基酸序列相比具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或更多個變化，例如胺基酸取代或缺失，或由表1中展示之核苷酸序列編碼。
在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子包括：(i)重鏈可變區(VH)，其包括選自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：195之VHCDR1胺基酸序列；SEQ ID NO：2之VHCDR2胺基酸序列；及SEQ ID NO：3之VHCDR3胺基酸序列，各自揭示於US 2016/0108123之表1中；及(ii)輕鏈可變區(VL)，其包括SEQ ID NO：9之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：10之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO：11之VLCDR3胺基酸序列，各自揭示於US 2016/0108123之表1中。
在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子包括：(i)重鏈可變區(VH)，其包括選自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：195之VHCDR1胺基酸序列；SEQ ID NO：5之VHCDR2胺基酸序列；及SEQ ID NO：3之VHCDR3胺基酸序列，各自揭示於US 2016/0108123之表1中；及(ii)輕鏈可變區(VL)，其包括SEQ ID NO：12之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：13之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO：14之VLCDR3胺基酸序列，各自揭示於US 2016/0108123之表1中。
在一個實施例中，抗PD-L1抗體分子包含SEQ ID NO：1之VHCDR1胺基酸序列。在另一實施例中，抗PD-L1抗體分子包含SEQ ID NO：4之VHCDR1胺基酸序列。在另一實施例中，抗PD-L1抗體分子包含SEQ ID NO：195之VHCDR1胺基酸序列，各自揭示於US 2016/0108123之表1中。
在一些實施例中，抗PD-L1抑制劑係選自YW243.55.S70、MPDL3280A、MEDI-4736、MSB-0010718C或MDX-1105。在一些實施例中，PD-L1抑制劑為抗PD-L1抗體MSB0010718C。MSB0010718C(亦稱為A09-246-2；Merck Serono)為結合於PD-L1之單株抗體。MSB0010718C及其他人類化抗PD-L1抗體揭示於WO2013/079174中，且具有其中所揭示之序列(或與其實質上一致或類似的序列，例如與指定序列至少85%、90%、95%或更加一致之序列)。
MSB0010718C之重鏈胺基酸序列(如WO2013/079174中所揭示之SEQ ID NO：24)至少包括以下： (SEQ ID NO：5)。
MSB0010718C之輕鏈胺基酸序列(如WO2013/079174中所揭示之SEQ ID NO：25)至少包括以下： (SEQ ID NO：6)。
在一個實施例中，PD-L1抑制劑為YW243.55.S70。YW243.55.S70抗體為如WO 2010/077634中所描述之抗PD-L1抗體(分別為SEQ ID NO：20及21中所展示之重鏈及輕鏈可變區序列)，且具有其中所揭示之序列(或與其實質上一致或類似之序列，例如與指定序列至少85%、90%、95%或更加一致之序列)。
在一個實施例中，PD-L1抑制劑為MDX-1105。MDX-1105，亦稱為BMS-936559，為WO2007/00587-4中所描述之抗PD-L1抗體，且具有其中所揭示之序列(或與其實質上一致或類似之序列，例如與指定序列至少 85%、90%、95%或更加一致之序列)。
在一個實施例中，PD-L1抑制劑為MDPL3280A(Genentech/Roche)。MDPL3280A為人類Fc最佳化IgG1單株抗體，其結合於PD-L1。MDPL3280A及其他針對PD-L1之人類單株抗體揭示於美國專利案第7,943,743號及美國公開案第20120039906號中。
在其他實施例中，PD-L2抑制劑為AMP-224。AMP-224為PD-L2 Fc融合可溶性受體，其阻斷PD1與B7-H1(B7-DCIg；Amplimmune；例如WO2010/027827及WO2011/066342中所揭示)之間的相互作用。
如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物可與TIM-3路徑拮抗劑組合使用。在一些實施例中，該組合用於治療實體腫瘤或血液科惡性疾病。在一些實施例中，TIM-3路徑拮抗劑為抗TIM-3抗體。在一些實施例中，抗TIM-3抗體分子揭示於2015年8月6日公開之題為「Antibody Molecules to TIM-3 and Uses Thereof」之US 2015/0218274中。
在一個實施例中，抗TIM-3抗體分子包括至少一個或兩個重鏈可變域(視情況包括恆定區)、至少一個或兩個輕鏈可變域(視情況包括恆定區)或其兩者，其包含胺基酸序列ABTIM3、ABTIM3-hum01、ABTIM3-hum02、ABTIM3-hum03、ABTIM3-hum04、ABTIM3-hum05、ABTIM3-hum06、ABTIM3-hum07、ABTIM3-hum08、ABTIM3-hum09、ABTIM3-hum10、ABTIM3-hum11、ABTIM3-hum12、ABTIM3-hum13、ABTIM3-hum14、ABTIM3-hum15、ABTIM3-hum16、ABTIM3-hum17、ABTIM3-hum18、ABTIM3-hum19、ABTIM3-hum20、ABTIM3-hum21、ABTIM3-hum22、ABTIM3-hum23；或如US 2015/0218274之表1-4中所描述；或由其中表1至4中之 核苷酸序列編碼；或與任一前述序列實質上一致(例如至少80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、99%或更加一致)之序列。抗TIM-3抗體分子視情況包含來自重鏈、輕鏈或其兩者之前導序列，如US 2015/0218274中所示；或與其實質上一致之序列。
在另一實施例中，抗TIM-3抗體分子包括至少一個、兩個或三個來自US 2015/0218274中所描述之抗體之重鏈可變區及/或輕鏈可變區之互補決定區(CDR)，例如選自以下中之任一者之抗體：ABTIM3、ABTIM3-hum01、ABTIM3-hum02、ABTIM3-hum03、ABTIM3-hum04、ABTIM3-hum05、ABTIM3-hum06、ABTIM3-hum07、ABTIM3-hum08、ABTIM3-hum09、ABTIM3-hum10、ABTIM3-hum11、ABTIM3-hum12、ABTIM3-hum13、ABTIM3-hum14、ABTIM3-hum15、ABTIM3-hum16、ABTIM3-hum17、ABTIM3-hum18、ABTIM3-hum19、ABTIM3-hum20、ABTIM3-hum21、ABTIM3-hum22、ABTIM3-hum23；或如US 2015/0218274之表1-4中所描述；或由其中表1至4中之核苷酸序列編碼；或與任一前述序列實質上一致(例如至少80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、99%或更加一致)之序列。
在另一實施例中，抗TIM-3抗體分子包括至少一個、兩個或三個來自重鏈可變區之CDR(或總體而言所有CDR)，其包含US 2015/0218274之表1-4中所展示之胺基酸序列，或由其中表1-4中所展示之核苷酸序列編碼。在一個實施例中，CDR中之一或多者(或總體而言所有CDR)與表1-4中展示之胺基酸序列相比具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或更多個變化，例如胺基酸取代或缺失，或由其中表1-4中展示之核苷酸序列編 碼。
在另一實施例中，抗TIM-3抗體分子包括至少一個、兩個或三個來自輕鏈可變區之CDR(或總體而言所有CDR)，其包含US 2015/0218274之表1-4中所展示之胺基酸序列，或由其中表1-4中所展示之核苷酸序列編碼。在一個實施例中，CDR中之一或多者(或總體而言所有CDR)與表1-4中展示之胺基酸序列相比具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或更多個變化，例如胺基酸取代或缺失，或由其中表1-4中展示之核苷酸序列編碼。在某些實施例中，抗TIM-3抗體分子包括輕鏈CDR中之取代，例如輕鏈之CDR1、CDR2及/或CDR3中的一或多個取代。
在另一實施例中，抗TIM-3抗體分子包括至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個來自重鏈及輕鏈可變區之CDR(或總體上所有CDR)，其包含US 2015/0218274之表1-4中所展示之胺基酸序列，或由其中表1-4中所展示之核苷酸序列編碼。在一個實施例中，CDR中之一或多者(或總體而言所有CDR)與表1-4中展示之胺基酸序列相比具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或更多個變化，例如胺基酸取代或缺失，或由其中表1-4中展示之核苷酸序列編碼。
在一個實施例中，抗TIM-3抗體分子包括：(a)重鏈可變區(VH)，其包含選自SEQ ID NO：9之VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：10之VHCDR2胺基酸序列；及SEQ ID NO：5之VHCDR3胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL)，其包含SEQ ID NO：12之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：13之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO：14之VLCDR3胺基酸序列，各自如US 2015/0218274之表1-4中所揭示；(b)VH，其包含選自SEQ ID NO：3之VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：4之VHCDR2胺基酸序列；及 SEQ ID NO：5之VHCDR3胺基酸序列；及VL，其包含SEQ ID NO：6之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：7之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO：8之VLCDR3胺基酸序列，各自如US 2015/0218274之表1-4中所揭示；(c)VH，其包含選自SEQ ID NO：9之VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：25之VHCDR2胺基酸序列；及SEQ ID NO：5之VHCDR3胺基酸序列；及VL，其包含SEQ ID NO：12之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：13之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO：14之VLCDR3胺基酸序列，各自如US 2015/0218274之表1-4中所揭示；(d)VH，其包含選自SEQ ID NO：3之VHCDR1胺基酸序列；SEQ ID NO：24之VHCDR2胺基酸序列；及SEQ ID NO：5之VHCDR3胺基酸序列；及VL，其包含SEQ ID NO：6之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：7之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO：8之VLCDR3胺基酸序列，各自如US 2015/0218274之表1-4中所揭示；(e)VH，其包含選自SEQ ID NO：9之VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：31之VHCDR2胺基酸序列；及SEQ ID NO：5之VHCDR3胺基酸序列；及VL，其包含SEQ ID NO：12之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：13之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO：14之VLCDR3胺基酸序列，各自如US 2015/0218274之表1-4中所揭示；或(f)VH，其包含選自SEQ ID NO：3之VHCDR1胺基酸序列；SEQ ID NO：30之VHCDR2胺基酸序列；及SEQ ID NO：5之VHCDR3胺基酸序列；及VL，其包含SEQ ID NO：6之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：7之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO：8之VLCDR3胺基酸序列，各自如US 2015/0218274之表1-4中所揭示。
在一些實施例中，TIM-3路徑拮抗劑為如美國專利案第8,552,156 號、WO 2011/155607、EP 2581113或美國公開案第2014/044728號中所揭示之抗TIM-3抗體。
如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物可與LAG-3路徑拮抗劑組合使用。在一些實施例中，該組合用於治療實體腫瘤或血液科惡性疾病。在一些實施例中，LAG-3路徑拮抗劑為抗LAG-3抗體。在一些實施例中，抗LAG-3抗體分子揭示於2015年3月13日申請之題為「Antibody Molecules to LAG-3 and Uses Thereof」之US 2015/0259420中。
在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包括至少一個或兩個重鏈可變域(視情況包括恆定區)、至少一個或兩個輕鏈可變域(視情況包括恆定區)或其兩者，其包含以下中之任一者之胺基酸序列：BAP050-hum01、BAP050-hum02、BAP050-hum03、BAP050-hum04、BAP050-hum05、BAP050-hum06、BAP050-hum07、BAP050-hum08、BAP050-hum09、BAP050-hum10、BAP050-hum11、BAP050-hum12、BAP050-hum13、BAP050-hum14、BAP050-hum15、BAP050-hum16、BAP050-hum17、BAP050-hum18、BAP050-hum19、BAP050-hum20、huBAP050(Ser)(例如BAP050-hum01-Ser、BAP050-hum02-Ser、BAP050-hum03-Ser、BAP050-hum04-Ser、BAP050-hum05-Ser、BAP050-hum06-Ser、BAP050-hum07-Ser、BAP050-hum08-Ser、BAP050-hum09-Ser、BAP050-hum10-Ser、BAP050-hum11-Ser、BAP050-hum12-Ser、BAP050-hum13-Ser、BAP050-hum14-Ser、BAP050-hum15-Ser、BAP050-hum18-Ser、BAP050-hum19-Ser或BAP050-hum20-Ser)、BAP050-Clone-F、BAP050-Clone-G、BAP050-Clone-H、BAP050-Clone-I或BAP050-Clone-J；或如US 2015/0259420之表1中所描述，或由 表1中之核苷酸序列編碼；或與任一前述序列實質上一致(例如至少80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、99%或更加一致)之序列。
在另一實施例中，抗LAG-3抗體分子包括至少一個、兩個或三個來自本文中所描述之抗體之重鏈可變區及/或輕鏈可變區之互補決定區(CDR)，例如選自以下中之任一者之抗體：BAP050-hum01、BAP050-hum02、BAP050-hum03、BAP050-hum04、BAP050-hum05、BAP050-hum06、BAP050-hum07、BAP050-hum08、BAP050-hum09、BAP050-hum10、BAP050-hum11、BAP050-hum12、BAP050-hum13、BAP050-hum14、BAP050-hum15、BAP050-hum16、BAP050-hum17、BAP050-hum18、BAP050-hum19、BAP050-hum20、huBAP050(Ser)(例如BAP050-hum01-Ser、BAP050-hum02-Ser、BAP050-hum03-Ser、BAP050-hum04-Ser、BAP050-hum05-Ser、BAP050-hum06-Ser、BAP050-hum07-Ser、BAP050-hum08-Ser、BAP050-hum09-Ser、BAP050-hum10-Ser、BAP050-hum11-Ser、BAP050-hum12-Ser、BAP050-hum13-Ser、BAP050-hum14-Ser、BAP050-hum15-Ser、BAP050-hum18-Ser、BAP050-hum19-Ser或BAP050-hum20-Ser)、BAP050-Clone-F、BAP050-Clone-G、BAP050-Clone-H、BAP050-Clone-I或BAP050-Clone-J；或如US 2015/0259420之表1中所描述，或由其中表1中之核苷酸序列編碼；或與任一前述序列實質上一致(例如至少80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、99%或更加一致)之序列。
在另一實施例中，抗LAG-3抗體分子包括至少一個、兩個或三個來自重鏈可變區之CDR(或總體而言所有CDR)，其包含US 2015/0259420之表1中所展示之胺基酸序列，或由其中表1中所展示之核苷酸序列編碼。在 一個實施例中，CDR中之一或多者(或總體而言所有CDR)與表1中展示之胺基酸序列相比具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或更多個變化，例如胺基酸取代或缺失，或由其中表1中展示之核苷酸序列編碼。
在另一實施例中，抗LAG-3抗體分子包括至少一個、兩個或三個來自輕鏈可變區之CDR(或總體而言所有CDR)，其包含US 2015/0259420之表1中所展示之胺基酸序列，或由其中表1中所展示之核苷酸序列編碼。在一個實施例中，CDR中之一或多者(或總體而言所有CDR)與表1中展示之胺基酸序列相比具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或更多個變化，例如胺基酸取代或缺失，或由其中表1中展示之核苷酸序列編碼。在某些實施例中，抗PD-L1抗體分子包括輕鏈CDR中之取代，例如輕鏈之CDR1、CDR2及/或CDR3中的一或多個取代。
在另一實施例中，抗LAG-3抗體分子包括至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個來自重鏈及輕鏈可變區之CDR(或總體而言所有CDR)，其包含US 2015/0259420之表1中所展示之胺基酸序列，或由其中表1中所展示之核苷酸序列編碼。在一個實施例中，CDR中之一或多者(或總體而言所有CDR)與表1中展示之胺基酸序列相比具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或更多個變化，例如胺基酸取代或缺失，或由其中表1中展示之核苷酸序列編碼。
在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包括：(i)重鏈可變區(VH)，其包括選自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：286之VHCDR1胺基酸序列；SEQ ID NO：2之VHCDR2胺基酸序列；及SEQ ID NO：3之VHCDR3胺基酸序列，各自如US 2015/0259420之表1中所揭示；及(ii)輕鏈可變區(VL)，其包括SEQ ID NO：10之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：11之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO：12之VLCDR3胺基酸序列，各自如US 2015/0259420之表1中所揭示。
在另一實施例中，抗LAG-3抗體分子包括：(i)重鏈可變區(VH)，其包括選自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：286之VHCDR1胺基酸序列；SEQ ID NO：5之VHCDR2胺基酸序列，及SEQ ID NO：3之VHCDR3胺基酸序列，各自如US 2015/0259420之表1中所揭示；及(ii)輕鏈可變區(VL)，其包括SEQ ID NO：13之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：14之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO：15之VLCDR3胺基酸序列，各自如US 2015/0259420之表1中所揭示。
在一個實施例中，抗LAG-3抗體分子包含如US 2015/0259420之表1中所揭示之SEQ ID NO：1之VHCDR1胺基酸序列。在另一實施例中，抗LAG-3抗體分子包含如US 2015/0259420之表1中所揭示之SEQ ID NO：4之VHCDR1胺基酸序列。在另一實施例中，抗LAG-3抗體分子包含如US 2015/0259420之表1中所揭示之SEQ ID NO：286之VHCDR1胺基酸序列。
在一些實施例中，抗LAG-3抗體為BMS-986016。BMS-986016(亦稱為BMS986016；Bristol-Myers Squibb)為結合於LAG-3之單株抗體。BMS-986016及其他人類化抗LAG-3抗體揭示於US 2011/0150892、WO2010/019570及WO2014/008218中。
T細胞受體促效劑
如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物可與T細胞受體促效劑組合使用，諸如CD28促效劑、OX40促效劑、GITR促效劑、CD137促效劑、CD27促效劑或HVEM促效劑。
如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物可與CD27促效劑組合 使用。例示性CD27促效劑包括抗CD27促效抗體，例如PCT公開案第WO 2012/004367號中所描述。
如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物可與GITR促效劑組合使用。在一些實施例中，該組合用於治療實體腫瘤或血液科惡性疾病。例示性GITR促效劑包括例如GITR融合蛋白質及抗GITR抗體(例如二價抗GITR抗體)，諸如以下文獻中所描述之GITR融合蛋白質：美國專利案第6,111,090號、歐洲專利案第0920505B1號、美國專利案第8,586,023號、PCT公開案第WO 2010/003118號及第2011/090754號，或例如以下文獻中所描述之抗GITR抗體：美國專利案第7,025,962號、歐洲專利案第1947183B1號、美國專利案第7,812,135號、美國專利案第8,388,967號、美國專利案第8,591,886號、歐洲專利案第EP 1866339號、PCT公開案第WO 2011/028683號、美國專利案第8,709,424號、PCT公開案第WO 2013/039954號、國際公開案第WO2013/039954號、美國公開案第US2014/0072566號、國際公開案第WO2015/026684號、PCT公開案第WO2005/007190號、PCT公開案第WO 2007/133822號、PCT公開案第WO2005/055808號、PCT公開案第WO 99/40196號、PCT公開案第WO 2001/03720號、PCT公開案第WO99/20758號、美國專利案第6,689,607號、PCT公開案第WO2006/083289號、PCT公開案第WO 2005/115451號、美國專利案第7,618,632號、PCT公開案第WO 2011/051726號、國際公開案第WO2004060319號及國際公開案第WO2014012479號。
在一個實施例中，如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物與GITR促效劑組合使用，該GITR促效劑與PD-1抑制劑組合使用，例如WO2015/026684中所描述。
在另一實施例中，如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物與GITR促效劑組合使用，該GITR促效劑與TLR促效劑組合使用，例如WO2004()60319及國際公開案第WO2014012479號中所描述。
TLR促效劑
如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物可與類鐸受體促效劑組合使用。如本文所使用之術語「類鐸受體」(或「TLR」)係指蛋白質之類鐸受體家族之成員或其片段，其感測微生物產物及/或起始適應性免疫反應。在一個實施例中，TLR活化樹突狀細胞(DC)。類鐸受體(TLR)為模式識別受體之家族，其最初鑑別為可識別微生物病原體之先天性免疫系統之感測器。TLR包含含有富含白胺酸之重複之胞外域(一種跨膜域及細胞內TIR(Toll/-1R)結構域)之保守性跨膜分子之家族。TLR識別微生物中之不同結構，通常稱為「PAMP」(病原體相關分子模式)。結合於TLR之配位體調用框內細胞信號傳導路徑之級聯，該級聯誘導涉及炎症及免疫性之因子之產生。
在人類中，已鑑別十種TLR。表現於細胞之表面上的TLR包括TLR-1、TLR-2、TLR-4、TLR-5及TLR-6，而TLR-3、TLR-7/8及TLR-9藉由ER隔室表現。可基於不同TLR表現模式鑑別人類樹突狀細胞子集。作為實例，骨髓或DC之「習知」子集(mDC)在刺激時表現TLR1-8，且產生活化標記物(例如CD80、CD86、I類及II類MHC、CCR7)之級聯、促炎性細胞激素及趨化激素。此刺激及所得表現之結果為抗原特異性CD4+及CD8+ T細胞激活。此等DC獲取增強之能力以吸收抗原且將其以適合形式呈現至T細胞。相比之下，DC之漿細胞樣子集(pDC)在活化時僅表現TLR7及TLR9，引起NK細胞以及T細胞之活化。由於染色腫瘤細胞可不利地影響 DC功能，已提出在用於治療癌症之免疫療法方法中用TLR促效劑活化DC可對激活抗腫瘤免疫性為有益的。亦提出使用輻射及化學療法成功治療乳癌需要TLR4活化。
此項技術中已知且在本發明中使用之TLR促效劑包括(但不限於)以下：Pam3Cys，一種TLR-1/2促效劑；CFA，一種TLR-2促效劑；MALP2，一種TLR-2促效劑；Pam2Cys，一種TLR-2促效劑；FSL-1，一種TLR-2促效劑；Hib-OMPC，一種TLR-2促效劑；聚肌胞苷酸(聚I：C)，一種TLR-3促效劑；聚腺苷-聚尿苷酸(聚AU)，一種TLR-3促效劑；經聚-L-離胺酸及羧基甲基纖維素(Hiltonol®)穩定之聚肌苷酸-聚胞苷酸，一種TLR-3促效劑；單磷醯基脂質A(MPL)，一種TLR-4促效劑；LPS，一種TLR-4促效劑；細菌鞭毛蛋白，一種TLR-5促效劑；唾液酸基-Tn(STn)，一種與許多人類癌細胞上之MUC1黏蛋白相關之碳水化合物及一種TLR-4促效劑；咪喹莫特，一種TLR-7促效劑；雷西莫特，一種TLR-7/8促效劑；洛索立賓，一種TLR-7/8促效劑；及 未甲基化之CpG二核苷酸(CpG-ODN)，一種TLR-9促效劑。
由於其佐劑品質，TLR促效劑較佳與其他疫苗、佐劑及/或免疫調節劑組合使用，且可組合於多種組合中。因此，在某些實施例中，如本文中所描述，結合於STING且誘導STING依賴性TBK1活化之單-或二-F-ML-CDN化合物以及表現及分泌一或多種細胞激素(其刺激樹突狀細胞誘導、補充及/或成熟)之不活化腫瘤細胞可與一或多種TLR促效劑共同投與以用於治療目的。
抗體治療劑
如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物可與治療性抗體組合使用。在一些實施例中，治療性抗體之作用機制為抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)。ADCC為細胞介導之免疫防禦機制，藉此免疫系統之效應細胞主動溶解細胞膜表面抗原已由特異性抗體結合之目標細胞。其為抗體可用於(作為體液免疫反應之一部分)限制及制約感染之機制中之一者。經典ADCC由自然殺手(NK)細胞介導；巨噬細胞、嗜中性白血球及嗜伊紅血球亦可介導ADCC。ADCC為針對腫瘤之治療性單株抗體(包括曲妥珠單抗及利妥昔單抗)之重要作用機制。本發明之化合物可用於增強ADCC。
以下為可與本發明之單或二-F-ML-CDN化合物共同使用之抗體之例示性清單。
莫羅單抗-CD3：用於預防器官(例如腎臟)移植之急性排斥。人類化版本展示抑制1型糖尿病中β細胞之自體免疫性破壞之前景。
英利昔單抗(Remicade®)及阿達木單抗(Humira®)：結合於腫瘤壞死因子-α(TNF-α)。用於一些發炎疾病，諸如類風濕性關節炎、牛皮癬、克羅恩氏病。
奧馬珠單抗(Xolair®)。結合於IgE，因此阻止IgE結合於肥大細胞。針對過敏性哮喘使用。
達利珠單抗(Zenapax®)。結合於在經活化之T細胞之表面暴露之IL-2受體之一部分。用於預防所移植之腎臟之急性排斥。
利妥昔單抗(商標名=Rituxan®)。結合於在大部分B細胞上發現之CD20分子且用於治療B細胞淋巴瘤。
異貝莫單抗(商標名=Zevalin®)。此為針對與同位素結合之B細胞(及淋巴瘤)上之CD20分子的單株抗體。投與補充有美羅華(Rituxan)之淋巴瘤患者。
托西莫單抗(Bexxar®)。此為針對CD20之單株抗體及放射性同位素碘-131(1311)之結合物。
西妥昔單抗(Erbitux®)。阻斷HER1，HER1為在一些腫瘤細胞(一些乳癌、淋巴瘤)上發現之表皮生長因子(EGF)之受體。
曲妥珠單抗(Herceptin®)阻斷HER2，HER2為在約20%乳癌中過表現之生長因子受體。
Adcetris®。結合CD30(由一些淋巴瘤之細胞表現，但未在再生骨髓所需的正常幹細胞上發現之細胞表面分子)之單株抗體之結合物。
阿侖單抗(Campath-1H®)。結合於CD52，在淋巴細胞上發現之分子且消耗T細胞及B細胞。引起慢性淋巴球性白血病之完全緩解且展示預防腎臟移植排斥之前景。
Lym-1(Oncolym®)。結合於可在淋巴瘤細胞上大量表現之HLA-DR編碼之組織相容抗原。
伊派利單抗(Yervoy®)，其用於增強身體自身對腫瘤之免疫反應。
維他欣(Vitaxin)。結合於在腫瘤血管上而非在供應正常組織之血管上發現之血管整合素(α-v/β-3)。在II期臨床試驗中，維他欣展示一些在無有害副作用下縮小實體腫瘤之前景。
貝伐單抗(Avastin®)。結合於血管內皮生長因子(VEGF)，從而阻止其結合於其受體。用於治療結腸直腸癌。
阿昔單抗(ReoPro®)。藉由結合血小板表面上通常由血纖維蛋白原連接之受體來抑制血小板凝集。有助於預防經歷血管成形術之患者中冠狀動脈之再阻塞。
可與如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物組合使用之其他治療性抗體包括促乳素受體(PRLR)抑制劑，例如美國專利7,867,493中所揭示；HER3抑制劑，例如PCT公開案第WO 2012/022814號中所揭示；EGFR2及/或EGFR4抑制劑，例如PCT公開案第WO 2014/160160號中所揭示；M-CSF抑制劑，例如PCT公開案第WO 2004/045532號中所揭示；抗APRIL抗體，例如美國專利案8,895,705中所揭示；或抗SIRPα抗體或抗CD47抗體，例如美國專利案8,728,476及美國專利案8,562,997中所揭示。
在一個實施例中，組合(例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合)與促乳素受體(PRLR)抑制劑(一種人類單株抗體分子(化合物A26)，如美國專利案7,867,493中所揭示)組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，PRLR抑制劑為US 7,867,493中所揭示之人類單株抗體(化合物A26)。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與美國專利7,867,493中所描述之人類單株抗體分子(化合物A26)組合使用以治療病症，諸如癌症、前列腺癌或乳癌。
在另一實施例中，組合(例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合)與HER3抑制劑、化合物A31或PCT公開案第WO 2012/022814號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，HER3抑制劑為化合物A31或PCT公開案WO 2012/022814中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與化合物A31或PCT公開案WO 2012/022814中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如胃癌、食道癌、頭頸癌、鱗狀細胞癌、胃癌、乳癌(例如轉移性乳癌)或消化道/胃腸道癌症。在一些實施例中，化合物A31為人類單株抗體分子。在一個實施例中，以約3、10、20或40mg/kg之劑量(例如每週一次(QW))投與HER3抑制劑或化合物A31。在一個實施例中，該化合物係以約3-10、10-20或20-40mg/kg之劑量投與。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與FGFR2及/或FGFR4抑制劑、化合物A32或公開案PCT公開案第WO 2014/160160號中所揭示之化合物(例如針對FGFR2及/或FGFR4之抗體分子藥物結合物，例如其中所描述之mAb 12425)組合使用，以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，FGFR2及/或FGFR4抑制劑為化合物A32或公開案PCT公開案第WO 2014/160160號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與化合物A32組合使用，或在另一組合中與如表2中所描述之化合物一起使用，以治療病症，諸如癌症、胃癌、乳癌、橫紋肌肉瘤、肝癌、腎上腺癌症、肺癌、食道癌、結腸癌或子宮內膜癌。在一些實施例中，化合物A32為針對FGFR2及/或FGFR4之抗體分子藥物結合物，例如mAb 12425。
在另一實施例中，組合，例如包含本文中所描述之單-或二-F-ML- CDN化合物之組合與M-CSF抑制劑、化合物A33或PCT公開案第WO 2004/045532號中所揭示之化合物(例如針對M-CSF之抗體分子或Fab片段)組合使用，以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，M-CSF抑制劑為化合物A33或PCT公開案第WO 2004/045532號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與化合物A33或如PCT公開案第WO 2004/045532號中所描述之化合物組合使用以治療病症，諸如癌症、前列腺癌、乳癌或色素沉著性絨毛結節性滑膜炎(PVNS)。在實施例中，化合物A33為針對M-CSF或其片段(例如Fab片段)之單株抗體分子。在實施例中，M-CSF抑制劑或化合物A33係以約10mg/kg之平均劑量投與。
傳遞藥劑
脂質體為由一個(「單層」)或更多個(「多層」)磷脂層形成之囊泡。由於磷脂構築嵌段之兩性特徵，脂質體通常包含親水性層，其呈現親水性外表面及圍繞親水性核心。脂質體在親水性/疏水性組分之合併中之變通性、其無毒性、可生物降解性、生物相容性、佐劑性、細胞免疫之誘導、持續釋放性及促進巨噬細胞之吸收使其成為有吸引力的傳遞抗原之候選物。
WO2010/104833描述適合的脂質製劑。此類具有或不具有上文提及之「免疫原性多肽或碳水化合物」之脂質調配物，在本文中稱為VesiVax®(Molecular Express,Inc.)，可含有一或多種其他組分，諸如肽聚糖、脂肽、脂多糖、單磷醯基脂質A、脂磷壁酸、雷西莫特、咪喹莫特、鞭毛蛋白、含有未甲基化之CpG主結構之寡核苷酸、β-半乳糖苷基神經醯胺、胞壁醯二肽、全反式視黃酸、雙股病毒RNA、熱休克蛋白質、 二(十八烷基)二甲基銨溴化物、陽離子性界面活性劑、類鐸受體促效劑、二肉豆蔻醯基三甲基銨丙烷及nod樣受體促效劑。有利的是，此等脂質調配物可用於傳遞一或多種根據本發明在本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物及其組合物。
此外，儘管如上文所論述之脂質調配物使用「類固醇衍生物」作為用於將免疫原性多肽或碳水化合物連接至脂質體之錨，但類固醇可簡單地以未結合之類固醇(諸如膽固醇)形式提供。
用於自脂質混合物製備脂質體之適合的方法為此項技術中所熟知。參見例如Basu及Basu,Liposome Methods and Protocols(Methods in Molecular Biology),Humana Press,2002；Gregoriadis,Liposome Technology，第3版，Informa HealthCare,2006。較佳方法包括其中所描述之擠壓、均質化及音波處理方法。本發明中使用之用於製備脂質體之例示性方法描述於WO2010/104833中，其包含乾燥脂質混合物，接著在水性媒劑中進行水合作用且進行音波處理以形成脂質體。
在某些實施例中，在特定平均尺寸範圍內提供脂質體。可例如藉由擠壓包含脂質體之水性媒劑使其通過具有預先選擇之孔徑之薄膜且收集流動通過該膜之材料來選擇脂質體尺寸。在較佳實施例中，選擇脂質體使其直徑實質上介於50與500nm之間，更佳直徑實質上介於50與200nm之間且最佳直徑實質上介於50與150nm之間。如本文所使用，術語「實質上」在此情形中意謂至少75%，更佳80%且最佳至少90%脂質體在指定範圍內。
可用於本發明中之其他脂質及脂質類佐劑包括水包油(o/w)乳液(參見例如Muderhwa等人，J.Pharmaceut.Sci.88：1332-9,1999))、VesiVax® TLR(Molecular Express,Inc.)、毛地黃皂苷(參見例如美國專利案5,698,432)及葡萄哌喃糖基脂質(參見例如美國專利申請案20100310602)。
奈米粒子亦表示適用於大部分投藥途徑之藥物傳遞系統。在過去數年間，已研究多種用於製備奈米粒子之天然及合成聚合物，其中聚(乳酸)(PLA)、聚(乙醇酸)(PGA)及其共聚物(PLGA)由於其生物相容性及可生物降解性而廣泛研究。奈米粒子及其他奈米載劑充當若干類藥物之潛在載劑，諸如抗癌劑、抗高血壓劑、免疫調節劑及激素；及大分子，諸如核酸、蛋白質、肽及抗體。參見例如Crit.Rev.Ther.Drug Carrier Syst.21：387-422,2004；Nanomedicine：Nanotechnology,Biology and Medicine 1：22-30,2005。
化學治療劑
在本文所描述之方法之其他實施例中，如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物與化學治療劑(例如小分子醫藥化合物)組合使用。因此，該等方法進一步涉及投與個體有效量之一或多種化學治療劑作為額外治療或組合治療。在某些實施例中，該一或多種化學治療劑係選自由以下組成之群：乙酸阿比特龍(abiraterone acetate)、六甲蜜胺(altretamine)、脫水長春花鹼(anhydrovinblastine)、奧瑞他汀(auristatin)、貝瑟羅汀(bexarotene)、比卡魯胺(bicalutamide)、BMS 184476、2,3,4,5,6-五氟-N-(3-氟-4-甲氧苯基)苯磺醯胺、博萊黴素(bleomycin)、N,N-二甲基-L-纈胺醯基-N-甲基-L-纈胺醯基-L-脯胺醯基-1-脯胺酸-第三丁基醯胺、惡病質素、西馬多丁(cemadotin)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、環磷醯胺、3',4'-二去氫-4'-去氧-8'-諾維斯汀(3',4'-didehydro-4'-deoxy-8'-norvincaleukoblastine)、多 烯紫杉醇(docetaxol)、多西他賽(doxetaxel)、環磷醯胺、卡鉑(carboplatin)、卡莫司汀(carmustine)、順鉑(cisplatin)、克瑞托欣(cryptophycin)、環磷醯胺、阿糖胞苷(cytarabine)、達卡巴嗪(dacarbazine)(DTIC)、放線菌素D、道諾黴素(daunorubicin)、地西他濱海兔毒素(decitabine dolastatin)、多柔比星(doxorubicin)(阿德力黴素(adriamycin))、依託泊苷(etoposide)、5-氟尿嘧啶、非那雄安(finasteride)、氟他胺(flutamide)、羥基尿素(hydroxyurea)及羥基尿素紫杉烷(hydroxyureataxanes)、異環磷醯胺(ifosfamide)、利阿唑(liarozole)、氯尼達明(lonidamine)、洛莫司汀(lomustine)(CCNU)、恩雜魯胺(enzalutamide)、雙氯乙基甲胺(氮芥)、美法侖(melphalan)、羥乙基磺酸米伏布林(mivobulin isethionate)、根瘤菌素(rhizoxin)、塞尼氟(sertenef)、鏈脲菌素(streptozocin)、絲裂黴素(mitomycin)、甲胺喋呤(methotrexate)、紫杉烷(taxanes)、尼魯胺(nilutamide)、奧那司酮(onapristone)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、潑尼氮芥(prednimustine)、丙卡巴肼(procarbazine)、RPR109881、磷酸斯穆斯汀(stramustine phosphate)、他莫昔芬(tamoxifen)、他索那明(tasonermin)、紫杉醇(taxol)、維甲酸(tretinoin)、長春鹼(vinblastine)、長春新鹼(vincristine)、硫酸長春地辛(vindesine sulfate)及長春氟寧(vinflunine)。
在本文所描述之方法之其他實施例中，如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物與化學治療劑及/或其他用於治療如本文中之方法中所描述之適應症的藥劑組合使用。在一些實施例中，如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物與一或多種選自由以下組成之群的藥劑組合使用：索塔妥林(sotrastaurin)、尼羅替尼(nilotinib)、5-(2,4-二羥基-5-異丙基苯 基)-N-乙基-4-(4-((N-嗎啉基)甲基)苯基)異噁唑-3-甲醯胺、達妥昔布(dactolisib)、8-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-3-甲基-1-(4-哌嗪-1-基-3-三氟甲基-苯基)-1,3-二氫-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮、3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-(6-((4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)-1-甲基脲、布帕昔布(buparlisib)、8-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)-N-(4-((二甲基氨基)甲基)-1H-咪唑-2-基)喹喏啉-5-甲醯胺、(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯啶-1,2-二甲醯胺、(S)-1-(4-氯苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基-2-(4-(甲基(((1r,4S)-4-(4-甲基-3-側氧基哌嗪-1-基)環己基)甲基)胺基)苯基)-1,2-二氫異喹啉-3(4H)-酮、地拉羅司(deferasirox)、來曲唑(letrozole)、(4S,5R)-3-(2'-胺基-2-N-嗎啉基-4'-(三氟甲基)-[4,5'-聯嘧啶]-6-基)-4-(羥甲基)-5-甲基噁唑啶-2-酮、(S)-5-(5-氯-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-2-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-1-異丙基-5,6-二氫吡咯并[3,4-d]咪唑-4(1H)-酮、4-((2-(((1R,2R)-2-羥基環己基)胺基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)-N-甲基吡啶甲醯胺、甲磺酸伊馬替尼(imatinib mesylate)、2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪-2-基)苯甲醯胺、盧佐替尼(ruxolitinib)、帕比司他(panobinostat)、奧卓司他(osilodrostat)、(S)-N-((S)-1-環己基-2-((S)-2-(4-(4-氟苯甲醯基)噻唑-2-基)吡咯啶-1-基)-2-側氧基乙基)-2-(甲基胺基)丙醯胺、(S)-N-((S)-1-環己基-2-((S)-2-(4-(4-氟苯甲醯基)噻唑-2-基)吡咯啶-1-基)-2-側氧基乙基)-2-(甲基胺基)丙醯胺、磷酸索尼蒂吉伯(sonidegib phosphate)、色瑞替尼(ceritinib)、7-環戊基-N,N-二甲基-2-((5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺、N-(4-((1R,3S,5S)-3-胺基-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲醯胺、2- (2',3-二甲基-[2,4'-二吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙醯胺、恩拉菲尼(encorafenib)、7-環戊基-N,N-二甲基-2-((5-((1R,6S)-9-甲基-4-側氧基-3,9-二氮雙環[4.21]壬-3-基)吡啶-2-基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺、畢尼替尼(binimetinib)、米哚妥林(midostaurin)、依維莫司(everolimus)、1-甲基-5-((2-(5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)吡啶-4-基)氧基)-N-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-胺、二天冬胺酸帕瑞肽(pasireotide diaspartate)、多韋替尼(dovitinib)、(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)氮雜環庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基異菸鹼醯胺、N6-(2-異丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(異丙磺醯基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺、1,1-二氧化3-(4-(4-((5-氯-4-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-氟-2-甲基苯基)哌啶-1-基)硫雜環丁烷、5-氯-N2-(2-氟-5-甲基-4-(1-(四氫-2H-哌喃-4-基)哌啶-4-基)苯基)-N4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺、5-氯-N2-(4-(1-乙基哌啶-4-基)-2-氟-5-甲基苯基)-N4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺、伐司撲達(valspodar)及丁二酸凡塔藍尼(vatalanib succinate)。
在一個實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與PKC抑制劑、索塔妥林(化合物A1)或PCT公開案第WO 2005/039549號中所揭示之化合物組合使用，以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，PKC抑制劑為索塔妥林(化合物A1)或PCT公開案第WO 2005/039549號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與索塔妥林(化合物A1)或如PCT公開案第WO 2005/039549號中所述之化合物組合使用以治療病症，諸如癌症、黑色素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma)、發炎性腸病、移植排 斥、眼科病症或牛皮癬。在某些實施例中，以約20至600mg，例如約200至約600mg、約50mg至約450mg、約100mg至400mg、約150mg至350mg或約200mg至300mg，例如約50mg、100mg、150mg、200mg、300mg、400mg、500mg或600mg之劑量投與索塔妥林(化合物A1)。給藥時程可在例如每隔一天至每天、每天兩次或三次之範圍內變化。
在一個實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與BCR-ABL抑制劑、TASIGNA(化合物A2，尼羅替尼)或PCT公開案第WO 2004/005281號中所揭示之化合物組合使用，以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，BCR-ABL抑制劑為TASIGNA，或PCT公開案第WO 2004/005281號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與TASIGNA(化合物A2)或如PCT公開案第WO 2004/005281號中所描述之化合物組合使用，以治療病症，諸如淋巴球性白血病、帕金森氏病(Parkinson's Disease)、神經癌、黑素瘤、消化道/胃腸道癌症、結腸直腸癌、骨髓白血病、頭頸癌或肺高血壓。在一個實施例中，以約300mg(例如每日兩次，例如對於新診斷之Ph+ CML-CP)或約400mg，例如每日兩次，例如對於耐藥性或不耐受Ph+ CML-CP及CML-AP)之劑量投與BCR-ABL抑制劑或TASIGNA。BCR-ABL抑制劑或化合物A2係以約300-400mg之劑量投與。
在另一實施例中，組合(例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合)與HSP90抑制劑(諸如5-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-N-乙基-4-(4-((N-嗎啉基)甲基)苯基)異噁唑-3-甲醯胺(化合物A3))或PCT公開案第WO 2010/060937號或第WO 2004/072051號中所揭示之化合物組 合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，HSP90抑制劑為5-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-N-乙基-4-(4-((N-嗎啉基)甲基)苯基)異噁唑-3-甲醯胺(化合物A3)，或PCT公開案第WO 2010/060937號或第WO 2004/072051號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與5-(2,4-二羥基-5-異丙基苯基)-N-乙基-4-(4-((N-嗎啉基)甲基)苯基)異噁唑-3-甲醯胺(化合物A3)或PCT公開案第WO 2010/060937號或第WO 2004/072051號中所描述之化合物組合使用，以治療病症，諸如癌症、多發性骨髓瘤、非小細胞肺癌、淋巴瘤、胃癌、乳癌、消化道/胃腸道癌症、胰臟癌、結腸直腸癌、實體腫瘤或血細胞生成病症。
在另一實施例中，組合(例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合)與PI3K及/或mTOR之抑制劑、達妥昔布(化合物A4)或8-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-3-甲基-1-(4-哌嗪-1-基-3-三氟甲基-苯基)-1,3-二氫-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮(化合物A41)或PCT公開案第WO 2006/122806號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，PI3K及/或mTOR抑制劑為達妥昔布(化合物A4)、8-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-3-甲基-1-(4-哌嗪-1-基-3-三氟甲基-苯基)-1,3-二氫-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮(化合物A41)，或PCT公開案第WO 2006/122806號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與達妥昔布(化合物A4)、8-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-3-甲基-1-(4-哌嗪-1-基-3-三氟甲基-苯基)-1,3-二氫-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮(化合物A41)或PCT公開案第WO 2006/122806號中所描述之化合物組合使用，以治療病症，諸如癌症、前列腺癌、白血病(例如淋巴球性白血病)、乳癌、腦癌、膀胱癌、胰臟癌、腎癌、實體腫瘤或肝癌。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與FGFR抑制劑、3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-(6-((4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)-1-甲基脲(化合物A5)或美國專利案8,552,002中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，FGFR抑制劑為3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-(6-((4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)-1-甲基脲(化合物A5)或美國專利8,552,002中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與化合物A5或如US 8,552,002中所描述之化合物組合使用以治療病症，諸如消化道/胃腸道癌症、血液學癌症或實體腫瘤。在一個實施例中，FGFR抑制劑或3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-(6-((4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)-1-甲基脲(化合物A5)係以約100-125mg(例如每天)，例如約100mg或約125mg之劑量投與。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與PI3K抑制劑、布帕昔布(化合物A6)或PCT公開案第WO 2007/084786號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，PI3K抑制劑為布帕昔布(化合物A6)或PCT公開案第WO 2007/084786號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與布帕昔布(化合物A6)或PCT公開案第WO 2007/084786號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如前列腺癌、非小細胞肺癌、內分泌癌症、白血病、卵巢癌、黑素瘤、膀胱癌、乳癌、女性生殖系統癌症、消化道/胃腸道癌症、結腸直腸癌、多形性膠質母細胞瘤、實體腫瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、血細胞生成病症或頭頸癌。在一個實施例中，PI3K抑制劑或布帕昔布(化合物A6)係以約100mg(例如每天) 之劑量投與。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與FGFR抑制劑、8-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)-N-(4-((二甲基胺基)甲基)-1H-咪唑-2-基)喹喏啉-5-甲醯胺(化合物A7)或PCT公開案第WO 2009/141386號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，FGFR抑制劑為8-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)-N-(4-((二甲基胺基)甲基)-1H-咪唑-2-基)喹喏啉-5-甲醯胺(化合物A7)或PCT公開案第WO 2009/141386號中所揭示之化合物。在一個實施例中，FGFR抑制劑為8-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)-N-(4-((二甲基胺基)甲基)-1H-咪唑-2-基)喹喏啉-5-甲醯胺(化合物A7)。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與8-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)-N-(4-((二甲基胺基)甲基)-1H-咪唑-2-基)喹喏啉-5-甲醯胺(化合物A7)或PCT公開案第WO 2009/141386號中揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如特徵為血管生成之癌症。在一個實施例中，FGFR抑制劑或8-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)-N-(4-((二甲胺基)甲基)-1H-咪唑-2-基)喹喏啉-5-甲醯胺(化合物A7)係以例如每個人每天約3mg至約5g、更佳約10mg至約1.5g之劑量投與，此劑量視情況分成1至3個例如可具有相同大小的單次劑量。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與PI3K抑制劑、(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯啶-1,2-二甲醯胺(化合物A8)或PCT公開案第WO 2010/029082號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，PI3K抑制劑為(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯啶-1,2-二甲醯 胺(化合物A8)或PCT公開案第WO 2010/029082號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯啶-1,2-二甲醯胺(化合物A8)或PCT公開案第WO 2010/029082號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如胃癌、乳癌、胰臟癌、消化道/胃腸道癌症、實體腫瘤及頭頸癌。在一個實施例中，PI3K抑制劑或(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯啶-1,2-二甲醯胺(化合物A8)係以約150-300、200-300、200-400或300-400mg(例如每天)，例如約200、300或400mg之劑量投與。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與細胞色素P450之抑制劑(例如CYP17抑制劑)或PCT公開案第WO 2010/149755號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，細胞色素P450抑制劑(例如CYP17抑制劑)為PCT公開案第WO 2010/149755號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與PCT公開案第WO 2010/149755號中所揭示之化合物組合使用以治療前列腺癌。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與HDM2抑制劑、(S)-1-(4-氯苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基-2-(4-(甲基(((1R,4S)-4-(4-甲基-3-側氧基哌嗪-1-基)環己基)甲基)胺基)苯基)-1,2-二氫異喹啉-3(4H)-酮(化合物A10)或PCT公開案第WO 2011/076786號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，HDM2抑制劑為(S)-1-(4-氯苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基-2-(4-(甲基(((1R,4S)-4-(4-甲基-3-側氧基哌嗪-1-基)環己基) 甲基)胺基)苯基)-1,2-二氫異喹啉-3(4H)-酮(化合物A10)或PCT公開案第WO 2011/076786號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與(S)-1-(4-氯苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基-2-(4-(甲基(((1R,4S)-4-(4-甲基-3-側氧基哌嗪-1-基)環己基)甲基)胺基)苯基)-1,2-二氫異喹啉-3(4H)-酮(化合物A10)或PCT公開案第WO 2011/076786號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如實體腫瘤。在一個實施例中，HDM2抑制劑或(S)-1-(4-氯苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基-2-(4-(甲基(((1R,4S)-4-(4-甲基-3-側氧基哌嗪-1-基)環己基)甲基)胺基)苯基)-1,2-二氫異喹啉-3(4H)-酮(化合物A10)以約400至700mg之劑量投與，例如每週投與三次(連續2週投與且暫停一週)。在一些實施例中，劑量為約400、500、600或700mg；約400-500、500-600或600-700mg，例如每週投與三次。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與鐵螯合劑、地拉羅司(亦稱為EXJADE；化合物A11)或PCT公開案第WO 1997/049395號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，鐵螯合劑為地拉羅司或PCT公開案第WO 1997/049395號中所揭示之化合物。在一個實施例中，鐵螯合劑為地拉羅司(化合物A11)。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與地拉羅司(化合物A11)或PCT公開案第WO 1997/049395號中所揭示之化合物組合使用以治療鐵過載、血色素沈著症或骨髓發育不良。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與芳香酶抑制劑、來曲唑(Letrozole)(亦稱為 FEMARA；化合物A12)或US 4,978,672中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，芳香酶抑制劑為來曲唑(化合物A12)或美國專利案4,978,672中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與來曲唑(化合物A12)或美國專利案4,978,672中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如癌症、平滑肌肉瘤、子宮內膜癌、乳癌、雌性生殖系統癌症或荷爾蒙不足。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與PI3K抑制劑(例如泛PI3K抑制劑)、(4S,5R)-3-(2'-胺基-2-N-嗎啉基-4'-(三氟甲基)-[4,5'-聯嘧啶]-6-基)-4-(羥甲基)-5-甲基噁唑啶-2-酮(化合物A13)或PCT公開案第WO2013/124826號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，PI3K抑制劑為(4S,5R)-3-(2'-胺基-2-N-嗎啉基-4'-(三氟甲基)-[4,5'-聯嘧啶]-6-基)-4-(羥甲基)-5-甲基噁唑啶-2-酮(化合物A13)或PCT公開案第WO2013/124826號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與(4S,5R)-3-(2'-胺基-2-N-嗎啉基-4'-(三氟甲基)-[4,5'-聯嘧啶]-6-基)-4-(羥甲基)-5-甲基噁唑啶-2-酮(化合物A13)或PCT公開案第WO2013/124826號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如癌症或晚期實體腫瘤。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與p53及/或p53/Mdm2相互作用之抑制劑、(S)-5-(5-氯-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-2-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-1-異丙基-5,6-二氫吡咯并[3,4-d]咪唑-4(1H)-酮(化合物A14)或PCT公開案第WO2013/111105號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例 如本文中所描述之病症。在一個實施例中，p53及/或p53/Mdm2相互作用抑制劑為(S)-5-(5-氯-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-2-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-1-異丙基-5,6-二氫吡咯并[3,4-d]咪唑-4(1H)-酮(化合物A14)或PCT公開案第WO2013/111105號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與(S)-5-(5-氯-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-2-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-1-異丙基-5,6-二氫吡咯并[3,4-d]咪唑-4(1H)-酮(化合物A14)或PCT公開案第WO2013/111105號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如癌症或軟組織肉瘤。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與CSF-1R酪胺酸激酶抑制劑、4-((2-(((1R,2R)-2-羥基環己基)胺基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)-N-甲基吡啶甲醯胺(化合物A15)或PCT公開案第WO 2005/073224號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，CSF-1R酪胺酸激酶抑制劑為4-((2-(((1R,2R)-2-羥基環己基)胺基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)-N-甲基吡啶甲醯胺(化合物A15)或PCT公開案第WO 2005/073224號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與4-((2-(((1R,2R)-2-羥基環己基)胺基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)-N-甲基吡啶甲醯胺(化合物A15)或PCT公開案第WO 2005/073224號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如癌症。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與細胞凋亡誘導劑及/或血管生成抑制劑(諸如甲磺酸伊馬替尼(亦稱為GLEEVEC；化合物A16))或PCT公開案第WO1999/003854 號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如所描述之病症。在一個實施例中，細胞凋亡誘導劑及/或血管生成抑制劑為甲磺酸伊馬替尼(化合物A16)或PCT公開案第WO1999/003854號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與甲磺酸伊馬替尼(化合物A16)或PCT公開案第WO1999/003854號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如癌症、多發性骨髓瘤、前列腺癌、非小細胞肺癌、淋巴瘤、胃癌、黑素瘤、乳癌、胰臟癌、消化道/胃腸道癌症、結腸直腸癌、多形性膠質母細胞瘤、肝癌、頭頸癌、哮喘、多發性硬化、過敏、阿茲海默氏癡呆(Alzheimer's dementia)、肌肉萎縮性側索硬化或類風濕性關節炎。在某些實施例中，甲磺酸伊馬替尼(化合物A16)係以約100至1000mg之劑量投與，例如約200mg至800mg、約300mg至700mg或約400mg至600mg，例如約200mg、300mg、400mg、500mg、600mg或700mg。給藥時程可在例如每隔一天至每天、每天兩次或三次之範圍內變化。在一個實施例中，以每天約100mg至600mg，例如每天約100mg、200mg、260mg、300mg、400mg或600mg之口服劑量投與甲磺酸伊馬替尼。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與JAK抑制劑、2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪-2-基)苯甲醯胺(化合物A17)或其二鹽酸鹽或PCT公開案第WO 2007/070514號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，JAK抑制劑為2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪-2-基)苯甲醯胺(化合物A17)或其二鹽酸鹽，或PCT公開案第WO 2007/070514號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6- 基甲基)咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪-2-基)苯甲醯胺(化合物A17)或其二鹽酸鹽或PCT公開案第WO 2007/070514號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如結腸直腸癌、骨髓白血病、血液學癌症、自體免疫疾病、非霍奇金氏淋巴瘤或血小板增多症。在一個實施例中，JAK抑制劑或2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪-2-基)苯甲醯胺(化合物A17)或其二鹽酸鹽以約400-600mg(例如每天)之劑量投與，例如約400、500或600mg，或約400-500或500-600mg。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-CDN化合物之組合與JAK抑制劑、磷酸盧佐替尼(亦稱為JAKAFI；化合物A18)或PCT公開案第WO 2007/070514號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，JAK抑制劑為磷酸盧佐替尼(化合物A18)或PCT公開案第WO 2007/070514號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與磷酸盧佐替尼(化合物A18)或PCT公開案第WO 2007/070514號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如前列腺癌、淋巴球性白血病、多發性骨髓瘤、淋巴瘤、肺癌、白血病、惡病體質、乳癌、胰臟癌、類風濕性關節炎、牛皮癬、結腸直腸癌、骨髓白血病、血液學癌症、自體免疫疾病、非霍奇金氏淋巴瘤或血小板增多症。在一個實施例中，以約15-25mg，例如每天兩次之劑量投與JAK抑制劑或磷酸盧佐替尼(化合物A18)。在一些實施例中，劑量為約15、20或25mg，或約15-20或20-25mg。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與組蛋白脫乙醯基酶(HDAC)抑制劑組合使用。在一些實施例中，HDAC抑制劑係選自由以下組成之群：帕比司他、伏立諾他 (vorinostat)、羅米地辛(romidepsin)、西達本胺(chidamide)、丙戊酸、貝林諾他(belinostat)、吡咯沙敏(pyroxamide)、莫塞諾他(mocetinostat)、阿貝司他(abexinostat)、恩替諾特(entinostat)、普拉諾他(pracinostat)、雷米諾他(resminostat)、吉韋諾他(givinostat)、奎西諾他(quisinostat)、瑞科諾他(ricolinostat)、CUDC-101、AR-42、CHR-2845、CHR-3996、4SC-202及CG200745。在一些實施例中，包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與組蛋白脫乙醯基酶(HDAC)抑制劑、帕比司他(化合物A19)或PCT公開案第WO 2014/072493號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，HDAC抑制劑為帕比司他(化合物A19)或PCT公開案第WO 2014/072493號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與帕比司他(化合物A19)、PCT公開案第WO 2014/072493號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如小細胞肺癌、呼吸道/胸腺癌、前列腺癌、多發性骨髓瘤、骨髓發育不良症候群、骨癌、非小細胞肺癌、內分泌癌症、淋巴瘤、神經癌症、白血病、HIV/AIDS、免疫病症、移植排斥、胃癌、黑素瘤、乳癌、胰臟癌、結腸直腸癌、多形性膠質母細胞瘤、骨髓白血病、血液學癌症、腎癌、非霍奇金氏淋巴瘤、頭頸癌、血細胞生成病症或肝癌。在一個實施例中，HDAC抑制劑或帕比司他(化合物A19)以約20mg之劑量(例如每天)投與。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與細胞色素P450(例如11B2)、醛固酮或血管生成、奧卓司他(化合物A20)或PCT公開案第WO2007/024945號中所揭示之化合物中之一或多者之抑制劑組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。 在一個實施例中，細胞色素P450(例如11B2)、醛固酮或血管生成中之一或多者之抑制劑為奧卓司他(化合物A20)或PCT公開案第WO2007/024945號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與奧卓司他(化合物A20)或PCT公開案第WO2007/024945號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如庫欣氏症候群(Cushing's syndrome)、高血壓或心臟衰竭療法。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與IAP抑制劑、(S)-N-((S)-1-環己基-2-((S)-2-(4-(4-氟苯甲醯基)噻唑-2-基)吡咯啶-1-基)-2-側氧基乙基)-2-(甲基胺基)丙醯胺(化合物A21)或US 8,552,003中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，IAP抑制劑為(S)-N-((S)-1-環己基-2-((S)-2-(4-(4-氟苯甲醯基)噻唑-2-基)吡咯啶-1-基)-2-側氧基乙基)-2-(甲基胺基)丙醯胺(化合物A21)或美國專利案8,552,003中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與(S)-N-((S)-1-環己基-2-((S)-2-(4-(4-氟苯甲醯基)噻唑-2-基)吡咯啶-1-基)-2-側氧基乙基)-2-(甲基胺基)丙醯胺(化合物A21)或美國專利案8,552,003中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如多發性骨髓瘤、乳癌、卵巢癌、胰臟癌或血細胞生成病症。在一個實施例中，IAP抑制劑或(S)-N-((S)-1-環己基-2-((S)-2-(4-(4-氟苯甲醯基)噻唑-2-基)吡咯啶-1-基)-2-側氧基乙基)-2-(甲胺基)丙醯胺(化合物A21)或US 8,552,003中揭示之化合物係以約1800mg之劑量投與，例如每週一次。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與斯莫森德(Smoothened；SMO)抑制劑、磷酸索尼蒂 吉伯(化合物A22)、(R)-2-(5-(4-(6-苯甲基-4,5-二甲基噠嗪-3-基)-2-甲基哌嗪-1-基)吡嗪-2-基)丙-2-醇(化合物A25)或PCT公開案第WO 2007/131201號或第WO 2010/007120號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，SMO抑制劑為磷酸索尼蒂吉伯(化合物A22)、(R)-2-(5-(4-(6-苯甲基-4,5-二甲基噠嗪-3-基)-2-甲基哌嗪-1-基)吡嗪-2-基)丙-2-醇(化合物A25)或PCT公開案第WO 2007/131201號或第WO 2010/007120號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與磷酸索尼蒂吉伯(化合物A22)、(R)-2-(5-(4-(6-苯甲基-4,5-二甲基噠嗪-3-基)-2-甲基哌嗪-1-基)吡嗪-2-基)丙-2-醇(化合物A25)或PCT公開案第WO 2007/131201號或第WO 2010/007120號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如癌症、神經管胚細胞瘤、小細胞肺癌、前列腺癌、基底細胞癌、胰臟癌或炎症。在某些實施例中，磷酸索尼蒂吉(化合物A22)係以約20至500mg之劑量投與，例如約40mg至400mg、約50mg至300mg或約100mg至200mg，例如約50mg、100mg、150mg、200mg、250mg或300mg。給藥時程可在例如每隔一天至每天、每天兩次或三次之範圍內變化。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與Alk抑制劑、色瑞替尼(亦稱為ZYKADIA；化合物A23)或PCT公開案第WO 2007/131201號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，Alk抑制劑為色瑞替尼(化合物A23)或PCT公開案第WO 2007/131201號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與色瑞替尼(化合物A23)或PCT公開案第WO 2007/131201號中所揭示之化合物組合使用以治療病 症，諸如非小細胞肺癌或實體腫瘤。在一個實施例中，以約750mg，例如每天一次之劑量投與Alk抑制劑或色瑞替尼(化合物A23)。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與JAK及/或CDK4/6抑制劑、7-環戊基-N,N-二甲基-2-((5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺(化合物A24)或美國專利案8,415,355或美國專利案8,685,980中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，JAK及/或CDK4/6抑制劑為7-環戊基-N,N-二甲基-2-((5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺(化合物A24)或美國專利案8,415,355或美國專利案8,685,980中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與7-環戊基-N,N-二甲基-2-((5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺(化合物A24)或US 8,415,355或US 8,685,980中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如淋巴瘤、神經癌症、黑素瘤、乳癌或實體腫瘤。在一個實施例中，JAK及/或CDK4/6抑制劑或7-環戊基-N,N-二甲基-2-((5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺(化合物A24)以約200-600mg之劑量(例如每天)投與。在一個實施例中，以約200、300、400、500或600mg，或約200-300、300-400、400-500或500-600mg之劑量投與化合物。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與PIM激酶抑制劑、N-(4-((1R,3S,5S)-3-胺基-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲醯胺(化合物A27)或PCT公開案第WO 2010/026124號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，PIM激酶抑制劑為N-(4- ((1R,3S,5S)-3-胺基-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲醯胺(化合物A27)或PCT公開案第WO 2010/026124號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與N-(4-((1R,3S,5S)-3-胺基-5-甲基環己基)吡啶-3-基)-6-(2,6-二氟苯基)-5-氟吡啶甲醯胺(化合物A27)或PCT公開案第WO 2010/026124號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如多發性骨髓瘤、骨髓發育不良症候群、骨髓白血病或非霍奇金氏淋巴瘤。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與Wnt信號傳導抑制劑、2-(2',3-二甲基-[2,4'-二吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙醯胺(化合物A28)或PCT公開案第WO 2010/101849號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，Wnt信號傳導抑制劑為2-(2',3-二甲基-[2,4'-二吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙醯胺(化合物A28)或PCT公開案第WO 2010/101849號中所揭示之化合物。在一個實施例中，Wnt信號傳導抑制劑為2-(2',3-二甲基-[2,4'-二吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙醯胺(化合物A28)。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與2-(2',3-二甲基-[2,4'-二吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙醯胺(化合物A28)或PCT公開案第WO 2010/101849號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如實體腫瘤(例如頭頸癌、鱗狀細胞癌、乳癌、胰臟癌或結腸癌)。在某些實施例中，2-(2',3-二甲基-[2,4'-聯吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙醯胺(化合物A28)係以約1至50mg之劑量投與，例如約2mg至45mg、約3mg至40mg、約5mg至35mg、5mg至10mg，或約10mg至30mg，例如約2mg、5mg、10mg、20mg、30mg或 40mg。給藥時程可在例如每隔一天至每天、每天兩次或三次之範圍內變化。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與BRAF抑制劑、恩拉菲尼(化合物A29)或PCT公開案第WO 2011/025927號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，BRAF抑制劑為恩拉菲尼(化合物A29)或PCT公開案第WO 2011/025927號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與恩拉菲尼(化合物A29)或PCT公開案第WO 2011/025927號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如非小細胞肺癌、黑素瘤或結腸直腸癌。在一個實施例中，BRAF抑制劑或恩拉菲尼(化合物A29)以約200-300、200-400或300-400mg之劑量例如每天投與。在一個實施例中，化合物係以約200、約300或約400mg之劑量投與。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與CDK4/6抑制劑、7-環戊基-N,N-二甲基-2-((5-((1R,6S)-9-甲基-4-側氧基-3,9-二氮雙環[4.2.1]壬-3-基)吡啶-2-基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺(化合物A30)或PCT公開案第WO 2011/101409號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，CDK4/6抑制劑為7-環戊基-N,N-二甲基-2-((5-((1R,6S)-9-甲基-4-側氧基-3,9-二氮雙環[4.2.1]壬-3-基)吡啶-2-基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺(化合物A30)或PCT公開案第WO 2011/101409號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與7-環戊基-N,N-二甲基-2-((5-((1R,6S)-9-甲基-4-側氧基-3,9- 二氮雙環[4.2.1]壬-3-基)吡啶-2-基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺(化合物A30)或PCT公開案第WO 2011/101409號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如癌症、套細胞淋巴瘤、脂肪肉瘤、非小細胞肺癌、黑素瘤、鱗狀細胞食道癌或乳癌。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與MEK抑制劑、畢尼替尼(化合物A34)或PCT公開案第WO 2003/077914號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，MEK抑制劑為畢尼替尼(化合物A34)，或PCT公開案第WO 2003/077914號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與畢尼替尼(化合物A34)或PCT公開案第WO 2003/077914號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如非小細胞肺癌、多系統基因病症、黑素瘤、卵巢癌、消化道/胃腸道癌症、類風濕性關節炎或結腸直腸癌。在一個實施例中，以約45mg之劑量(例如每天兩次)投與MEK抑制劑或畢尼替尼(化合物A34)。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與c-KIT、組胺釋放、Flt3(例如FLK2/STK1)或PKC中之一或多者之抑制劑、米哚妥林(化合物A35)或PCT公開案第WO 2003/037347號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，抑制劑為米哚妥林(化合物A35)或PCT公開案第WO 2003/037347號中所揭示之化合物。在一個實施例中，c-KIT、組織胺釋放、Flt3(例如FLK2/STK1)或PKC中之一或多者之抑制劑為米哚妥林。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與米哚妥林(化合物A35)或PCT公開案第WO 2003/037347號中所揭示之化合物組合使用以 治療病症，諸如癌症、結腸直腸癌、骨髓白血病、骨髓發育不良症候群、年齡相關之黃斑變性、糖尿病併發症或皮膚病學病症。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與TOR抑制劑(例如mTOR抑制劑)、依維莫司(亦稱為AFINITOR；化合物A36)或PCT公開案第WO 2014/085318號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，TOR抑制劑為依維莫司(化合物A36)或PCT公開案第WO 2014/085318號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與依維莫司(化合物A36)組合使用以治療病症，諸如間質性肺病、小細胞肺癌、呼吸道/胸腺癌、前列腺癌、多發性骨髓瘤、肉瘤、年齡相關之黃斑變性、骨癌、結節性硬化症、非小細胞肺癌、內分泌癌症、淋巴瘤、神經病症、星形細胞瘤、子宮頸癌、神經癌症、白血病、免疫病症、移植排斥、胃癌、黑素瘤、癲癇症、乳癌或膀胱癌。在一個實施例中，以約2.5-20毫克/天之劑量投與TOR抑制劑或依維莫司(化合物A36)。在一個實施例中，該化合物係以每天約2.5、5、10或20mg之劑量投與，例如每天約2.5-5、5-10或10-20mg。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與VEGFR-2、PDGFRβ、KIT或Raf激酶C、1-甲基-5-((2-(5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)吡啶-4-基)氧基)-N-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-胺(化合物A37)或PCT公開案第WO 2007/030377號中所揭示之化合物中之一或多者之抑制劑組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，VEGFR-2、PDGFRβ、KIT或Raf激酶C中之一或多者之抑制劑為1-甲基-5-((2-(5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)吡 啶-4-基)氧基)-N-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-胺(化合物A37)或PCT公開案第WO 2007/030377號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與1-甲基-5-((2-(5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)吡啶-4-基)氧基)-N-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-胺(化合物A37)或PCT公開案第WO 2007/030377號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如癌症、黑素瘤或實體腫瘤。
在另一實施例中，組合(例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合)與生長抑素促效劑及/或生長激素釋放抑制劑、二天冬胺酸帕瑞肽(亦稱為SIGNIFOR；化合物A38)或PCT公開案第WO2002/010192號或美國專利第7,473,761號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，生長抑素促效劑及/或生長激素釋放抑制劑為二天冬胺酸帕瑞肽(化合物A38)或PCT公開案第WO2002/010192號或美國專利第7,473,761號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與二天冬胺酸帕瑞肽(化合物A38)或PCT公開案第WO2002/010192號或美國專利第7,473,761號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如前列腺癌、內分泌癌、神經癌症、皮膚癌(例如黑素瘤)、胰臟癌、肝癌、庫欣氏症候群、胃腸道病症、肢端肥大症、肝管及膽管病症或肝硬化。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與信號轉導調節劑及/或血管生成抑制劑、多韋替尼(化合物A39)或PCT公開案第WO 2009/115562號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，信號轉導調節劑及/或血管生成抑制劑為多韋替尼(化合物A39)或PCT公開案第WO 2009/115562號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與多韋替尼(化合物A39)或PCT公開案第WO 2009/115562號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如癌症、呼吸道/胸腺癌、多發性骨髓瘤、前列腺癌、至小細胞肺癌、內分泌癌症或神經基因病症。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與EGFR激酶抑制劑、(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)氮雜環庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基異菸鹼醯胺(化合物A40)或PCT公開案第WO 2013/184757號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，EGFR抑制劑為(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)氮雜環庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基異菸鹼醯胺(化合物A40)或PCT公開案第WO 2013/184757號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)氮雜環庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基異菸鹼醯胺(化合物A40)或PCT公開案第WO 2013/184757號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如癌症，例如實體腫瘤。在一個實施例中，EGFR抑制劑或(R,E)-N-(7-氯-1-(1-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)氮雜環庚烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-甲基異菸鹼醯胺(化合物A40)以150-250mg之劑量(例如每天)投與。在一個實施例中，以約150、200或250mg，或約150-200或200-250mg之劑量投與化合物。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與ALK抑制劑、N6-(2-異丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(異丙磺醯基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(化 合物A42)或PCT公開案第WO 2008/073687號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，ALK抑制劑為N6-(2-異丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(異丙磺醯基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(化合物A42)或PCT公開案第WO 2008/073687號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與N6-(2-異丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(異丙磺醯基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(化合物A42)或PCT公開案第WO 2008/073687號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如癌症、多形性大細胞淋巴瘤(ALCL)、非小細胞肺癌(NSCLC)或神經母細胞瘤。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與IGF-1R抑制劑、1,1-二氧化3-(4-(4-((5-氯-4-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-氟-2-甲基苯基)哌啶-1-基)硫雜環丁烷(化合物A43)、5-氯-N2-(2-氟-5-甲基-4-(1-(四氫-2H-哌喃-4-基)哌啶-4-基)苯基)-N4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(化合物A44)或5-氯-N2-(4-(1-乙基哌啶-4-基)-2-氟-5-甲基苯基)-N4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(化合物A45)或PCT公開案第WO 2010/002655號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如所描述之病症。在一個實施例中，IGF-1R抑制劑為1,1-二氧化3-(4-(4-((5-氯-4-((5甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-氟-2-甲基苯基)哌啶-1-基)硫雜環丁烷(化合物A43)、5-氯-N2-(2-氟-5-甲基-4-(1-(四氫-2H-哌喃-4-基)哌啶-4-基)苯基)-N4-(5甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(化合物A44)、5-氯-N2-(4-(1-乙基哌啶-4-基)-2-氟-5-甲基苯基)-N4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(化合物 A45)或PCT公開案第WO 2010/002655號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與1,1-二氧化3-(4-(4-((5-氯-4-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-氟-2-甲基苯基)哌啶-1-基)硫雜環丁烷(化合物A43)、5-氯-N2-(2-氟-5-甲基-4-(1-(四氫-2H-哌喃-4-基)哌啶-4-基)苯基)-N4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(化合物A44)、5-氯-N2-(4-(1-乙基哌啶-4-基)-2-氟-5-甲基苯基)-N4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-2,4-二胺(化合物A45)或PCT公開案第WO 2010/002655號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如癌症或肉瘤。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與P-醣蛋白1抑制劑、伐司撲達(亦稱為AMDRAY；化合物A46)或EP 296122中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，P-醣蛋白1抑制劑為伐司撲達(化合物A46)或EP 296122中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與伐司撲達(化合物A46)或EP 296122中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如癌症或抗藥性腫瘤。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與VEGFR抑制劑、丁二酸凡塔藍尼(化合物A47)或WO 98/35958中所揭示之化合物中之一或多者組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，VEGFR抑制劑為丁二酸凡塔藍尼(化合物A47)或WO 98/35958中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與丁二酸凡塔藍尼(化合物A47)或EP 296122中所揭示之化合物組合使用以治療癌症。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML- CDN化合物之組合與IDH抑制劑或WO2014/141104中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，IDH抑制劑為PCT公開案第WO2014/141104號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與WO2014/141104中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如癌症。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與BCL-ABL抑制劑或PCT公開案第WO2013/171639號、第WO2013/171640號、第WO2013/171641號或第WO2013/171642號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，BCL-ABL抑制劑為PCT公開案第WO2013/171639號、第WO2013/171640號、第WO2013/171641號或第WO2013/171642號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與PCT公開案第WO2013/171639號、第WO2013/171640號、第WO2013/171641號或第WO2013/171642號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如癌症。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與c-RAF抑制劑或PCT公開案第WO2014/151616號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，c-RAF抑制劑為化合物A50或PCT公開案第WO2014/151616號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-DN化合物與PCT公開案第WO2014/151616號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如癌症。
在另一實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與ERK1/2 ATP競爭性抑制劑或PCT公開案第 WO2015/066188號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，例如本文中所描述之病症。在一個實施例中，ERK1/2 ATP競爭性抑制劑為PCT公開案第WO2015/066188號中所揭示之化合物。在一個實施例中，單-或二-F-ML-CDN化合物與化合物A51或PCT公開案第WO2015/066188號中所揭示之化合物組合使用以治療病症，諸如癌症。在一些實施例中，組合，例如包含本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合及化合物A51或PCT公開案第WO2015/066188號中所揭示之化合物與一或多種選自以下之藥劑組合投與：化合物A8、化合物A17、化合物A23、化合物A24、化合物A27、化合物A29及化合物A33。
在一些實施例中，組合，例如包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之組合與在免疫細胞分析法(例如huMLR分析法、T細胞增殖分析法及B細胞增殖分析法中之一或多者)中具有已知活性之抗癌劑組合投與，其中此類分析法為此項技術中已知且可用於證明化合物將不會抑制免疫反應(亦即證明在此類分析法中存在極少或不存在抑制)。可測定待與單-或二-F-ML-CDN化合物組合使用之化合物在此類分析法中之IC50。在實施例中，抗癌劑之IC50為例如>1μM、1-4μM或超過4μM，例如4-10μM或4-20μM，或超過20μM。在實施例中，第二治療劑選自以下中之一或多者：化合物A9、化合物A16、化合物A17、化合物A21、化合物A22、化合物A25、化合物28、化合物A48及化合物49。
在一些實施例中，以大致5-10或10-30mg之劑量投與化合物A28(或與化合物A28相關的化合物)。在一些實施例中，化合物A22(或與化合物A22相關的化合物)係以約200mg之劑量投與。在一些實施例中，以約400-600mg之劑量投與化合物A17(或與化合物A17相關的化合物)。在一 些實施例中，以每天約400-600mg之劑量經口投與化合物A16(或與化合物A16相關的化合物)。在一些實施例中，以約200-400或300-400mg之劑量投與化合物A29(或與化合物A29相關的化合物)。在一些實施例中，化合物A24(或與化合物A24相關的化合物)以約200-600mg之劑量投與。在一些實施例中，以約750mg之劑量每天一次地投與化合物A23(色瑞替尼)(或與色瑞替尼相關的化合物)。在一些實施例中，以約200-400或300-400mg之劑量投與化合物A8(或與化合物A8相關的化合物)。在一些實施例中，以約100-125mg之劑量投與化合物A5(或與化合物A5相關的化合物)。在一些實施例中，化合物A6(或與化合物A6相關的化合物)係以約100mg之劑量投與。在一些實施例中，以大致200-300或200-600mg之劑量投與化合物A1(或與化合物A1相關的化合物)。在一些實施例中，化合物A40(或與化合物A40相關的化合物)係以約150-250mg之劑量投與。在實施例中，以約400至700mg之劑量投與化合物A10(或與化合物A10相關的化合物)，例如每週投與三次(連續投與2週且暫停一週)。在實施例中，BCR-ABL抑制劑係以約20mg(每天兩次)-80mg(每天兩次)之劑量投與。
免疫調節細胞株
「不活化腫瘤細胞」意謂已經處理以防止細胞分裂之腫瘤細胞(對患者而言為「自體」或「同種異體」)。在本發明中，此類細胞保留其免疫原性及其代謝活性。此類腫瘤細胞經遺傳修飾以表現轉基因，其作為癌症療法之一部分在患者內表現。因此，本發明之組合物或疫苗包含贅生性(例如腫瘤)細胞，其對經歷治療之患者而言為自體或同種異體，且最佳為與折磨患者之腫瘤細胞具有相同一般類型。舉例而言，通常將向患有黑素瘤之患者投與來源於黑素瘤之經遺傳修飾之細胞。本發明中使用之用於不活化腫瘤細胞之方法(諸如使用輻射)為此項技術中所熟知。
在一些實施例中，本發明之不活化腫瘤細胞經修飾以表現及分泌一或多種熱休克蛋白質。舉例而言，可表現及分泌gp96-Ig融合蛋白質以刺激免疫反應(Yamazaki等人，The Journal of Immunology,1999,163：5178-5182；Strbo等人，Immunol Res.2013 Dec；57(1-3)：311-25)。在一些實施例中，不活化腫瘤細胞經修飾以表現及分泌gp96-Ig融合蛋白 質。
本發明之不活化腫瘤細胞與一或多種共刺激分子或藥劑共同投與患者。較佳共刺激藥劑包含一或多種細胞激素，其刺激樹突狀細胞誘導、補充及/或成熟。用於評估此類共刺激藥劑之方法已在文獻中熟知。通常藉由某些細胞膜分子(諸如CD80及CD86)之表現及/或促炎性細胞激素(諸如在刺激後IL-12及I型干擾素)之分泌增加來評估DC之誘導及成熟。
在較佳實施例中，不活化腫瘤細胞本身經修飾以表現及分泌一或多種細胞激素，其刺激樹突狀細胞誘導、補充及/或成熟。關於使用GM-CSF來例示性描述本發明。因此，作為實例，腫瘤細胞可表現編碼GM-CSF之轉基因，如美國專利第5,637,483號、第5,904,920號、第6,277,368號及第6,350,445號以及美國專利公開案第20100150946號中所描述。用於胰臟癌治療之表現GM-CSF之遺傳修飾癌細胞或「表現細胞激素之細胞疫苗」之形式描述於美國專利案第6,033,674號及第5,985,290號中。
可由此類不活化腫瘤細胞及/或旁鄰細胞表現之其他適合的細胞激素(代替GM-CSF或與GM-CSF一起)包括(但不限於)CD40配位體、FLT-3配位體、IL-12、CCL3、CCL20及CCL21中之一或多者。此清單不意欲為限制性。
儘管較佳投與個體之不活化腫瘤細胞表現一或多種相關細胞激素，但腫瘤細胞株可伴有不活化旁鄰細胞株，其表現及分泌一或多種細胞激素，該一或多種細胞激素刺激樹突狀細胞誘導、補充及/或成熟。旁鄰細胞株可提供所有刺激樹突狀細胞誘導、補充及/或成熟之細胞激素，或可補充可刺激由不活化腫瘤細胞表現及分泌之樹突狀細胞誘導、補充及/或成熟之細胞激素。作為實例，表現免疫調節細胞激素之旁鄰細胞株揭示於 美國專利第6,464,973號及第8,012,469號，Dessureault等人，Ann.Surg.Oncol.14：869-84,2007以及Eager及Nemunaitis,Mol.Ther.12：18-27,2005中。
「粒細胞-巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)多肽」意謂具有免疫調節活性及與GenBank寄存編號AAA52122.1具有至少約85%胺基酸序列一致性之細胞激素或其片段。
疫苗
在某些實施例中，CDN組合物與一或多種意欲刺激針對一或多種預定抗原之免疫反應的疫苗結合投與。可用於本發明中之目標抗原之實例列舉於下表中。目標抗原亦可為包含表中列舉之抗原之免疫活性部分的片段或融合多肽。此清單不意欲為限制性。
疫苗組合物可包含細菌細胞，其經轉型以表現多肽抗原或傳遞聚核苷酸，該聚核苷酸隨後在經疫苗接種之個體之細胞中作為相關抗原表現。已研究許多細菌物種用作疫苗且可用作本發明中之疫苗平台，包括(但不限於)弗氏志賀菌(Shigella flexneri)、大腸桿菌(Escherichia coli)、單核球增多性李氏菌、小腸結腸炎耶爾森氏菌(Yersinia enterocolitica)、鼠傷寒沙門桿菌(Salmonella typhimurium)、傷寒沙門桿菌(Salmonella typhi)或分枝桿菌(mycobacterium)物種。此清單不意欲為限制性。本發明涵蓋滅毒、共生及/或經殺滅但具有代謝活性之細菌菌株作為疫苗平台之用途。在較佳實施例中，細菌為單核球增多性李氏菌。
此項技術中已知的適合的抗原之其他生物體包括(但不限於)沙眼披衣菌(Chlamydia trachomatis)、化膿性鏈球菌(Streptococcus pyogenes)(A鏈球菌群)、無乳鏈球菌(Streptococcus agalactia)(B鏈球菌群)、肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumonia)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大腸桿菌(Escherichia coli)、流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)、奈瑟氏腦膜炎菌(Neisseria meningitidis)、淋病奈瑟氏菌(Neisseria gonorrheae)、霍亂弧菌(Vibrio cholerae)、沙門氏菌(Salmonella)物種(包括傷寒(typhi)、鼠傷寒(typhimurium))、腸道(包括幽門螺桿菌福氏志賀菌(Helicobactor pylori Shigella flexneri)及其他D志賀桿菌屬(shigella)物種群)、鼻疽伯克霍爾德氏菌(Burkholderia mallei)、類鼻疽伯克霍爾德氏菌(Burkholderia pseudomallei)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumonia)、梭菌(Clostridium)物種(包括艱難梭菌(C.difficile))、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)及創傷弧菌(V.vulnificus)。此清單不意欲為限制性。
醫藥組合物
如本文所使用，術語「醫藥」係指意欲用於治癒、治療或預防疾病之化學物質且其經歷美國食品藥物管理局(或其非美國等效機構)之審批過程，作為處方或非處方藥品。關於用於此類組合物之調配及投藥之技術之詳細說明可見於Remington,The Science and Practice of Pharmacy第21版(Mack Publishing Co.,Easton,PA)以及Nielloud及Marti-Mestres,Pharmaceutical Emulsions and Suspensions：第2版(Marcel Dekker,Inc,New York)中。
在本發明中，醫藥組合物可藉由多種手段投與，包括以含有醫藥學上可接受之載劑、佐劑及媒劑之調配物形式經腸、非經腸、藉由吸入噴霧、局部或經直腸進行。「腸胃外投藥」涵蓋經口、頰內、舌下、局部、經皮、經眼、經耳、經鼻、經直腸、經子宮頸、經肺、經黏膜及經陰道途徑。如此處所使用，術語非經腸包括(但不限於)藉由多種輸注技術進行之皮下、靜脈內、肌肉內、動脈內、皮內、鞘內及硬膜外注射。如本文所使用，動脈內及靜脈內注射包括經由導管投藥。亦涵蓋經由冠狀動脈內血管支架及冠狀動脈內儲集器投藥。本發明化合物之腫瘤內(直接進入腫瘤塊)或腫瘤周圍(腫瘤塊周圍)投藥可直接活化局部浸潤DC，直接促進腫瘤細胞之細胞凋亡或使腫瘤細胞對細胞毒素劑敏感。如本文所使用，術語經口包含(但不限於)口服攝取或藉由舌下或頰內途徑傳遞。經口投藥包括流體飲料、能量棒以及丸劑調配物。
醫藥組合物可呈任何適用於所欲投藥方法之形式。當用於例如經口使用時，可製備錠劑、糖衣錠、口含錠、水性或油性懸浮液、可分散粉末或顆粒、乳液、硬或軟膠囊、糖漿或酏劑。可根據製造醫藥組合物之技術中已知的任何方法製備欲用於口服使用的組合物，且該等組合物可含有一或多種試劑，包括甜味劑、調味劑、著色劑及防腐劑，以便提供可口製劑。含有藥物化合物與適用於製造錠劑之無毒性醫藥學上可接受之賦形劑之混雜物的錠劑為可接受的。此等賦形劑可為例如惰性稀釋劑，諸如碳酸鈣或碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；粒化及崩解劑，諸如玉米澱粉或褐藻酸；結合劑，諸如澱粉、明膠或阿拉伯膠；及潤滑劑，諸如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。錠劑可未包覆包衣，或可藉由已知技術經塗佈，包括腸包衣、結腸包衣或微囊封裝以延緩在胃腸道中之崩解及吸收及/或在更長週 期內提供持續作用。舉例而言，可單獨或與蠟一起使用諸如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯之時間延遲材料。
用於經口使用之調配物亦可呈硬明膠膠囊形式，其中藥物化合物與惰性固體稀釋劑(例如磷酸鈣或高嶺土)混合，或呈軟明膠膠囊形式，其中活性成分與水或油介質(諸如花生油、液體石蠟或橄欖油)混合。
醫藥組合物可與適用於製造水性懸浮液之賦形劑摻合，調配為水性懸浮液。此類賦形劑包括懸浮劑，諸如羧基甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、褐藻酸鈉、聚乙烯吡咯啶酮、膠狀黃蓍及阿拉伯膠(gum acacia)；及分散或濕潤劑，諸如天然存在之磷脂(例如卵磷脂)、環氧烷與脂肪酸之縮合產物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)、環氧乙烷與長鏈脂族醇之縮合產物(例如十七伸乙氧基鯨蠟醇)、環氧乙烷與衍生自脂肪酸之偏酯及己糖醇酐之縮合產物(例如聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯)。水性懸浮液亦可含有一或多種防腐劑，諸如對羥基苯甲酸乙酯或對羥基苯甲酸正丙酯；一或多種著色劑；一或多種調味劑及一或多種甜味劑，諸如蔗糖或糖精。
油性懸浮液可藉由使活性成分懸浮於植物油(諸如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油)中或礦物油(諸如液體石蠟)中來調配。口服懸浮液可含有增稠劑，諸如蜂蠟、硬鏈烷烴或鯨蠟基醇。可添加甜味劑(諸如上述甜味劑)及調味劑，以提供適口之經口製劑。此等組合物可藉由添加抗氧化劑(諸如抗壞血酸)來保存。
適用於藉由添加水來製備水性懸浮液之本發明之分散性散劑及粒劑提供活性成分與分散劑或濕潤劑、懸浮劑及一或多種防腐劑之摻合物。適合之分散劑或濕潤劑及懸浮劑由上文已揭示之試劑例示。亦可存在額外賦 形劑，例如甜味劑、調味劑及著色劑。
本發明之醫藥組合物亦可呈水包油乳液形式。油相可為植物油，諸如橄欖油或花生油，礦物油，諸如液體石蠟，或此等物質之混合物。適合的乳化劑包括天然存在之膠，諸如阿拉伯膠及膠狀黃蓍；天然存在之磷脂，諸如大豆卵磷脂；來源於脂肪酸及己糖醇酐之酯或偏酯，諸如脫水山梨糖醇單油酸酯；及此等偏酯與環氧乙烷之縮合產物，諸如聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯。乳液亦可含有甜味劑及調味劑。
糖漿劑及酏劑可與甜味劑(諸如丙三醇、山梨糖醇或蔗糖)一起調配。此類調配物亦可含有緩和劑、防腐劑、調味劑或著色劑。
本發明之醫藥組合物可呈無菌可注射製劑形式，諸如無菌可注射水性或油性懸浮液。此懸浮液可根據已知技術使用上文已描述之彼等適合分散劑或濕潤劑及懸浮劑調配。無菌可注射製劑亦可為於無毒非經腸可接受稀釋劑或溶劑中之無菌可注射溶液或懸浮液，諸如於1,3-丁二醇中之溶液；或製備成凍乾粉末。在可採用之可接受媒劑及溶劑中有水、林格氏溶液(Ringer's solution)及等張氯化鈉溶液。另外，無菌不揮發性油可常用作溶劑或懸浮介質。出於此目的，可使用任何溫和非揮發性油，包括合成的單甘油酯或二甘油酯。此外，諸如油酸之脂肪酸同樣可用於製備可注射劑。
可與載劑材料組合產生單一劑型之活性成分的量將視所治療之主體及特定投與模式而變化。舉例而言，欲用於向人類經口投與之時間釋放調配物可含有約20至500mg活性材料與適當且適宜量之載劑材料的混配物，該量可在總組合物之約5%至約95%範圍內變化。較佳的是，製備可提供可易於量測之投藥量的醫藥組合物。典型地，全身性投與之有效量為 約0.1mg/kg至約100mg/kg且取決於許多因素，包括例如個體(例如哺乳動物，諸如人類)之年齡及體重、需要治療之確切病狀及其嚴重度、投藥途徑，且將最終由臨床醫師或獸醫酌情處理。然而，應理解，任何特定患者之特定劑量水準將取決於多種因素，包括所使用之特定化合物之活性、所治療之個體之年齡、體重、一般健康狀況、性別及飲食；投藥時間及途徑；排泄率；先前投與之其他藥物；及經歷療法之特定病狀之嚴重度，如熟習此項技術者良好理解。
如上所述，適用於經口投藥之本發明之調配物可以離散單位形式呈現，諸如膠囊、扁囊劑或錠劑，各含有預定量之活性成分；呈粉末或顆粒形式；呈水性液體或非水性液體中之溶液或懸浮液形式；或呈水包油液體乳液或油包水液體乳液形式。醫藥組合物亦可以藥丸、舐劑或膏劑形式投與。
錠劑可藉由視情況與一或多種附屬成分一起壓縮或模製來製造。壓縮錠劑可藉由在適合的機器中壓縮呈自由流動形式之活性成分(諸如粉末或顆粒)來製備，視情況與黏結劑(例如聚維酮、明膠、羥基丙基乙基纖維素)、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(例如羥基乙酸澱粉鈉、交聯聚維酮、交聯羧甲基纖維素鈉)、表面活性劑或分散劑混合。可藉由在適合的機器中使用經惰性液體稀釋劑濕潤之粉末狀化合物之混合物來製造模製錠劑。錠劑可視情況經塗佈或刻痕，且可使用例如不同比例之羥丙基甲基纖維素調配以提供其中活性成分之緩慢或控制釋放，以提供所需釋放特徵曲線。錠劑可視情況具有腸溶性或結腸包衣以提供在除胃以外的腸之部分的釋放。此在如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物情況下(當此類化合物對酸水解敏感時)尤其有利。
適用於在口腔中局部投與之調配物包括在調味基質(通常為蔗糖及阿拉伯膠或黃蓍)中包含活性成分的口含錠；在惰性基質(諸如明膠及甘油或蔗糖及阿拉伯膠)中包含活性成分之片劑；及在適合液體載劑中包含活性成分的漱口劑。
用於經直腸投與之調配物可以具有適合基劑(包含例如可可脂或水楊酸酯)之栓劑形式呈現。
適用於經陰道投與之調配物可以子宮托、棉塞、乳膏、凝膠、糊劑、泡沫或噴霧調配物形式呈現，除了含有活性成分以外，其亦含有諸如此項技術中已知為適當之載劑。
適於非經腸投與之調配物包括可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑及使調配物與預期接受者血液等張之溶質的水性及非水性無菌注射溶液；及可包括懸浮劑及增稠劑之水性及非水性無菌懸浮液。可使調配物存於單位劑量或多劑量密封容器(例如安瓿及小瓶)中，且可在經冷凍乾燥(凍乾)條件下儲存，僅需要在即將使用之前添加無菌液體載劑(例如水)用於注射。可自上述種類之無菌散劑、顆粒及錠劑製備注射溶液及懸浮液。
當藉由結構命名或描繪所揭示之化合物或其鹽時，應理解，該化合物或鹽(包括其溶劑合物(特定言之，水合物))可以結晶形式、非結晶形式或其混合物形式存在。化合物或鹽或其溶劑合物(特定言之，水合物)亦可呈現多形現象(亦即以不同結晶形式存在之能力)。此等不同結晶形式通常稱為「多晶型物」。應理解，當藉由結構命名或描繪時，所揭示之化合物或其溶劑合物(特定言之，水合物)亦包括其所有多晶型物。多晶型物具有相同化學組成，但在填料、幾何配置及結晶固體狀態之其他描述性特性方面不同。多晶型物可具有不同物理性質，諸如密度、形狀、硬度、穩定性 及溶解特性。多晶型物通常呈現不同熔點、IR譜圖及X射線粉末繞射圖，其可用於進行鑑別。一般熟習此項技術者將瞭解，可例如藉由改變或調節在化合物之結晶或再結晶期間所使用之條件來產生不同多晶型物。
對於呈結晶形式之本發明化合物或其鹽之溶劑合物，熟習此項技術者將瞭解，可形成醫藥學上可接受之溶劑合物，其中溶劑分子在結晶期間併入結晶晶格中。溶劑合物可涉及非水性溶劑，諸如乙醇、異丙醇、二甲亞碸、乙酸、乙醇胺及乙酸乙酯，或其可涉及水作為併入結晶晶格中之溶劑。其中水為併入結晶晶格中之溶劑的溶劑合物通常稱為「水合物」。水合物包括化學計量之水合物以及含有可變量之水的組合物。本發明包括所有此類溶劑合物。
由於在醫藥中之潛在用途，本發明化合物之鹽較佳為醫藥學上可接受的。適合的醫藥學上可接受之鹽包括由P.Heinrich Stahl及Camille G.Wermuth於Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties,Selection,and Use，第2版(Wiley-VCH：2011)以及Remington's Pharmaceutical Sciences，第18版(Mack Publishing,Easton PA：1990)以及Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第19版(Mack Publishing,Easton PA：1995)中描述之鹽。術語「醫藥學上可接受之鹽」涵蓋之鹽係指本發明中化合物之無毒性鹽。
含有鹼性胺或其他鹼性官能基之本發明化合物之鹽可藉由此項技術中已知的任何適合的方法製備，包括用無機酸(諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及其類似物)或用有機酸(諸如乙酸、三氟乙酸、順丁烯二酸、丁二酸、杏仁酸、反丁烯二酸、丙二酸、甲酸、褐藻酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、柳酸、哌喃并甲矽烷基酸(諸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸)、α 羥基酸(諸如檸檬酸或酒石酸)、胺基酸(諸如天冬胺酸或麩胺酸)、芳族酸(諸如苯甲酸或肉桂酸)、磺酸(諸如對甲苯磺酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸))或其類似物處理游離鹼。醫藥學上可接受之鹽之實例包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、丁二酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、反丁烯二酸鹽、順丁烯二酸鹽、丁-1,4-二酸鹽、己-1,6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰酞酸鹽、苯乙酸鹽、苯丙酸鹽、苯基丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、乙醇酸鹽、樹脂酸鹽、乳酸鹽、右旋樟腦磺酸鹽、酒石酸鹽、扁桃酸鹽及磺酸鹽，諸如二甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、丙磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽及萘-2-磺酸鹽。
含有磷酸二酯、硫代磷酸二酯或其他酸性官能基之本發明化合物之鹽可藉由與適合的鹼反應來製備。醫藥學上可接受之鹽包括(但不限於)：乙酸鹽、吡啶、銨、哌嗪、二乙胺、菸鹼醯胺、甲酸、脲、鈉、鉀、鈣、鎂、鋅、鋰、肉桂酸、甲基胺基、甲磺酸、苦酸、酒石酸、三乙胺基、二甲基胺基及參(羥基甲基)胺基甲烷。其他醫藥學上可接受之鹽為熟習此項技術者已知的。
此類醫藥學上可接受之鹽可用具有醫藥學上可接受之陽離子的鹼製得，其包括鹼金屬鹽(尤其鈉及鉀)、鹼土金屬鹽(尤其鈣及鎂)、鋁鹽及銨鹽、鋅，以及由生理學上可接受之有機鹼製成之鹽，該等鹼為諸如二乙胺、異丙胺、乙醇胺、苯乍生(benzathine)、苯明(benethamine)、緩血酸胺(2-胺基-2-(羥基甲基)丙-1,3-二醇)、嗎啉、吡咯乙醇、哌啶、哌嗪、甲 吡啶、二環己胺、N,N'-二苯甲基乙二胺、2-羥乙胺、三-(2-羥基乙基)胺、氯普魯卡因(chloroprocaine)、膽鹼、丹醇(deanol)、咪唑、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基還原葡糖胺)、普魯卡因(procaine)、二苯甲基哌啶、去氫樅胺(dehydroabietylamine)、還原葡糖胺、三甲基吡啶、奎寧(quinine)、喹諾酮、特丁胺(erbumine)及鹼性胺基酸，諸如離胺酸及精胺酸。
如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物(包括其鹽)可由其中磷酸或硫代磷酸鍵中之-SH或-OH(例如本文中所描述之化合物之X1或X2)表示為-S-或-O-且具有相應陽離子以形成如本文中所描述之化合物之鹽的結構描述。舉例而言，如本文中所描述之第一態樣之化合物之鹽可由以下結構表示：
其中Ay+表示單價或多價鹽陽離子，且n及m為既定y之最低可能整數。舉例而言，當Ay+為單價時，亦即當y為1時，諸如Na+、K+、NH4 +、TEAH+或其類似物，n為1且m為2；當y為2時，諸如Ca2+、Mg2+及其類似物，n為1且m為1；當y為3時，例如Al3+或其類似物，n為3且m為2。舉例而言，單價或二價鹽陽離子之鹽可分別表示為 或在其中n=1之情況下，此等鹽可例如表示為(無方括號)
或者，單價鹽可描繪為具有與-S-或-O-中之每一者相鄰之A+。舉例而言，如本文中所描述之單-或二-F-ML-RR-CDN化合物之鈉鹽可描繪為
其他非醫藥學上可接受之鹽(例如三氟乙酸鹽或三乙銨)可用於例如分 離本發明之化合物，且包括於本發明之範疇內。
本發明在其範疇內包括本發明化合物之鹽之所有可能的化學計量及非化學計量形式。
若以鹽形式分離含有鹼性胺或其他鹼性官能基之本發明化合物，則該化合物之相應游離鹼形式可藉由此項技術中已知的任何適合的方法製備，包括用無機鹼或有機鹼處理鹽，宜用與化合物之游離鹼形式相比具有較高pKa之無機鹼或有機鹼。類似地，若以鹽形式分離含有磷酸二酯、硫代磷酸二酯或其他酸性官能基之本發明化合物，則可藉由此項技術中已知的任何適合的方法製備該化合物之相應游離酸形式，包括用無機酸或有機酸處理鹽，宜使用與化合物之游離酸形式相比具有較低pKa之無機酸或有機酸。
對於特定患者，如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物之有效量可視諸如所治療之病狀、患者之整體健康狀況、投藥途徑及劑量以及副作用之嚴重度而變化。可獲得治療及診斷方法之指導(參見例如Maynard等人，(1996)A Handbook of SOPs for Good Clinical Practice,Interpharm Press,Boca Raton,FL；Dent(2001)Good Laboratory and Good Clinical Practice,Urch Publ.,London,UK)。
有效量可在一次給藥中提供，但不限於一次給藥。因此，投藥可為包含如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物之醫藥組合物之兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十一次、十二次、十三次、十四次、十五次、十六次、十七次、十八次、十九次、 二十次或更多次投藥。當本發明方法中存在醫藥組合物之超過一次投藥時，各次投藥可間隔一分鐘、兩分鐘、三分鐘、四分鐘、五分鐘、六分鐘、七分鐘、八分鐘、九分鐘、十分鐘或超過十分鐘之時間間隔，間隔約一小時、兩小時、三小時、四小時、五小時、六小時、七小時、八小時、九小時、十小時、11小時、12小時、13小時、14小時、15小時、16小時、17小時、18小時、19小時、20小時、21小時、22小時、23小時、24小時等。在小時之情形下，術語「約」意謂加上或減去30分鐘內的任何時間間隔。投藥亦可間隔一天、兩天、三天、四天、五天、六天、七天、八天、九天、十天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天之時間間隔及其組合。本發明不限於等時間間隔之給藥間隔，且涵蓋非等間隔給藥。
本發明可使用例如一次/週、兩次/週、三次/週、四次/週、五次/週、六次/週、七次/週、每兩週一次、每三週一次、每四週一次、每五週一次及其類似時程之給藥時程。給藥時程涵蓋在例如一週、兩週、三週、四週、五週、六週、兩個月、三個月、四個月、五個月、六個月、七個月、八個月、九個月、十個月、十一個月及十二個月之總時間段內給藥。
提供以上給藥時程之循環。循環可例如約每七天；每14天；每21天；每28天；每35天；42天；每49天；每56天；每63天；每70天；及每類似天數重複一次。循環之間可存在非給藥間隔，其中該間隔可為約例如七天；14天；21天；28天；35天；42天；49天；56天；63天；70天；及其類似時間段。在此情形中，術語「約」意謂加上或減去一天、加上或減去兩天、加上或減去三天、加上或減去四天、加上或減去五天、加上或減去六天或加上或減去七天。
用於與其他治療劑共同投藥之方法為此項技術中所熟知(Hardman等人(編)(2001)Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics，第10版，McGraw-Hill,New York,NY；Poole及Peterson(編)(2001)Pharmacotherapeutics for Advanced Practice：A Practical Approach,Lippincott,Williams & Wilkins,Phila.,PA；Chabner及Longo(編)(2001)Cancer Chemotherapy and Biotherapy,Lippincott,Williams & Wilkins,Phila.,PA)。通常，共同投藥或一起投藥表示用兩種或更多種藥劑治療個體，其中該等藥劑可同時或在不同時間投與。舉例而言，此類藥劑可以單獨投藥形式傳遞至單一個體，該等單獨投藥可在實質上相同時間或不同時間進行，且其可藉由相同投藥途徑或不同投藥途徑進行。此類藥劑可在同一次投藥(例如同一調配物)中傳遞至單一個體，使得其同時藉由相同投藥途徑投與。
如所述，本發明之組合物較佳調配為用於非經腸或經腸傳遞之醫藥組合物。用於向動物個體投藥之典型醫藥組合物包含醫藥學上可接受之媒劑，諸如水溶液、無毒性賦形劑，包括鹽、防腐劑、緩衝劑及其類似物。參見例如Remington's Pharmaceutical Sciences，第15版，Easton編，Mack Publishing Co.，第1405-1412頁及第1461-1487頁(1975)；The National Formulary XIV，第14版，American Pharmaceutical Association,Washington,DC(1975)。非水性溶劑之實例為丙二醇、聚乙二醇、植物油及可注射有機酯，諸如乙基油酸酯。水性載劑包括水、醇性/水性溶液、生理食鹽水溶液、非經腸媒劑，諸如氯化鈉、林格氏右旋糖等。靜脈內媒劑包括流體及營養補充劑。防腐劑包括抗菌劑、抗氧化劑、螯合劑及惰性氣體。根據此項技術中之常規技術調節醫藥組合物中各 種組分之pH值及精確濃度。
已證實特定疫苗之重複投藥(同源強化)對強化體液反應有效。此類方法在強化細胞免疫時可能無效，因為針對載體之先前免疫性傾向於減弱穩固的抗原呈現及適合的發炎性信號之產生。一種避免此問題之方法為依序投與使用不同抗原傳遞系統之疫苗(異源強化)。在異源強化療程中，至少一個裝填或強化傳遞包含傳遞本文中所描述之不活化腫瘤細胞/單-或二-F-ML-CDN化合物或其組合物。療程之異源臂可包含使用以下策略中之一或多者傳遞抗原：包含相關抗原之不活化或滅毒細菌或病毒，其為已用某種變性條件處理以使其在安裝病原性侵襲中無效或低效之粒子；經純化之抗原，其為自病原體或含有病原體之組織樣品之細胞培養物純化之典型地天然產生之抗原，或其重組型版本；活病毒或細菌傳遞載體，其以重組方式經工程改造以在個體之宿主細胞中表現及/或分泌抗原。此等策略依賴於將病毒或細菌載體滅毒(例如經由基因工程改造)使其成為非病原性及無毒性；抗原呈現細胞(APC)載體，諸如樹突狀細胞(DC)載體，其包含負載有抗原或經包含編碼抗原之核酸之組合物(例如Provenge®(Dendreon Corporation))轉染的細胞，其用於治療抗去勢性轉移性前列腺癌；脂質抗原傳遞媒劑；及裸DNA載體及裸RNA載體，其可藉由基因槍、電致孔、細菌菌蛻、微粒、微米粒子、脂質體、聚陽離子奈米粒子及其類似物投與。
引發疫苗及強化疫苗可藉由以下途徑中之任一種或組合投與。在一個態樣中，引發疫苗及強化疫苗藉由相同途徑投與。在另一態樣中，引發 疫苗及強化疫苗藉由不同途徑投與。術語「不同途徑」涵蓋(但不限於)身體上之不同位點，例如口腔、非口腔、腸內、腸胃外、直腸、節結內(淋巴結)、靜脈內、動脈、皮下、肌肉內、腫瘤周圍、腫瘤內、輸注、黏膜、鼻、腦脊髓空間或腦脊髓液中之位點等，以及藉由不同模式，例如經口、靜脈內及肌肉內。
引發或強化疫苗之有效量可在一次給藥中提供，但不限於一次給藥。因此，投藥可為疫苗之兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十一次、十二次、十三次、十四次、十五次、十六次、十七次、十八次、十九次、二十次或更多次投藥。當存在疫苗之一次以上投藥時，各次投藥可間隔一分鐘、兩分鐘、三分鐘、四分鐘、五分鐘、六分鐘、七分鐘、八分鐘、九分鐘、十分鐘或超過十分鐘之時間間隔，間隔約一小時、兩小時、三小時、四小時、五小時、六小時、七小時、八小時、九小時、十小時、11小時、12小時、13小時、14小時、15小時、16小時、17小時、18小時、19小時、20小時、21小時、22小時、23小時、24小時等。在小時之情形下，術語「約」意謂加上或減去30分鐘內的任何時間間隔。投藥亦可間隔一天、兩天、三天、四天、五天、六天、七天、八天、九天、十天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天之時間間隔及其組合。本發明不限於等時間間隔之給藥間隔，且涵蓋非等間隔給藥，諸如由在第1天、第4天、第7天及第25天投藥組成之引發時程，僅為了提供非限制性實例。
實例
以下實例用於說明本發明。此等實例不意欲限制本發明之範疇。
一般方法
適用於溶液相寡核苷酸合成之無水溶劑及試劑購自商業供應商(Aldrich,ChemGenes Corporation,Wilmington,MA,USA)且使用無水技術在乾燥氬氣或氮氣下操作。胺基磷酸酯偶合反應及H-膦酸酯環化反應在氬氣或氮氣下，在無水乙腈或吡啶中進行。除非另外規定，否則乾燥吡啶中所有反應之起始物質藉由自吡啶濃縮(三次)來乾燥。除非以下實例中另外規定，否則層析條件如下。使用甲醇/二氯甲烷之梯度，在Combiflash Rf+ UV-Vis(Teledyne Isco)上使用RediSep Rf二氧化矽管柱(Teledyne Isco,Lincoln,NE)，在中壓層析(MPLC)下進行製備型矽膠急驟層析。使用乙腈於10mM TEAA水溶液中之梯度，在Combiflash Rf+ UV-Vis上使用RediSep Rf C18 Aq管柱(Teledyne Isco)在MPLC條件下進行逆相製備型層析。使用Microsorb 10μ C18 250×4.6mm或Thermo Scientific AcclaimTM 120 5μm C18 100×4.6mm管柱及10mM TEAA及乙腈之梯度，在光電二極體陣列檢測器在254nm下監測之情況下，在Shimadzu Prominence HPLC上進行分析型高壓液相層析(HPLC)。在50mL/min之流動速率下使用10mM TEAA及乙腈之梯度，在配備有在Varian Microsorb 60-8 C-18 41.6×250mm管柱上在254nm下監測之SPD-20A UV/Vis檢測器的Shimadzu製備型LC20-AP HPLC系統上進行製備型HPLC。在3%(重量/重量)負載下進行使用C-18 Sep-Pak(Waters)之固相萃取。對於實例2-12之化合物，使用電噴霧電離源(ESI)，使用具有與島津LCMS-2020單四極質譜儀偶合之Prominence HPLC的Shimadzu LCMS系統記錄分析型LCMS。對於中間化合物之合成，如實例1中所描述記錄LCMS資料。
最終化合物可以TEAH鹽之形式存在，其中可使用標準離子交換技術 或其他熟知方法轉化成其他鹽形式(包括(但不限於)Na及NH4)。
與文獻方法(Zhao等人Nucleosides,Nucleotides,and Nucleic Acid 289：352-378,2009)類似或如以下實例中所論述進行磷處立體化學之指派。
使用可自CambridgeSoft Corporation,100 CambridgePark Drive,Cambridge,MA 02140 USA(http：//www.cambridgesoft.com)購得之軟體程式ChemBioDraw Ultra V 14.0產生化合物名稱。名稱可能並非由ChemBioDraw產生之化合物或實例中所使用之參考化合物之簡略名稱提供於以下表3中。如PCT公開案第WO2014/189805號中所描述製備參考化合物2'3'-RR-(G)(A)及2'3'-RR-(A)(A)，關於此類合成以引用的方式併入。實例中之結構亦可表示為鹽，例如-O-A+或-S-A+，其中A+為鹽陽離子。
縮寫及字首語。SalPCl=氯磷酸柳酯。DCA=二氯乙酸。DDTT=3-((N,N-二甲基-胺基亞甲基)胺基)-3H-1,2,4-二噻唑-5-硫酮。DAST=三氟化二乙基胺基硫。NaHCO3=碳酸氫鈉。DCM=CH2Cl2=二氯甲烷。EtOH=乙醇。EtOAc=乙酸乙酯。KOAc=乙酸鉀。MeCN=乙腈。MeOH=甲醇。DMAP=N,N-二甲基吡啶-4-胺。DMOCP=2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧磷雜環己烷-2-氧化物。DMTCl=4,4'-二甲氧基三苯甲基氯。DMT=4,4-二甲氧基三苯甲基。N-苯基三氟甲磺醯胺=1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺醯基)甲磺醯胺。TBAF=氟化四丁銨。TBS=第三丁基二甲基矽烷基。 TEAA=乙酸三乙銨。TEA=三甲胺。TEAH=三乙銨。TEAB=碳酸氫三乙銨。TFA=三氟乙酸。TMSCl=氯化三甲基矽烷。HF=氫氟酸。THF=四氫呋喃。G=鳥嘌呤。Gib=異丁醯基鳥嘌呤。A=腺嘌呤。ABz=苯甲醯基腺嘌呤。AMA=氫氧化銨/40%甲胺水溶液。
實例1：合成中間化合物
對於流程1A之中間化合物，使用Waters System(Micromass ZQ質譜儀；管柱：Sunfire C18 3.5μ，3.0×30mm；梯度：2.0分鐘週期內40-98%乙腈/水(具有0.05% TFA)；流動速率2mL/min；管柱溫度40℃)記錄LCMS，稱為方法A。對於流程1B之中間化合物，方法B-D，使用Waters System(Micromass SQ質譜儀；管柱：Acquity UPLC BEH C18 1.7μ，2.1×50mm)記錄LCMS。方法B：梯度：1.76分鐘週期內等度2-98%乙腈/水+5mM氫氧化銨，保持0.3分鐘，接著在2.5分鐘恢復2%乙腈，總操作時間5.2分鐘；流動速率1mL/min；管柱溫度50℃。方法C：梯度：4.40分鐘週期內等度2-98%乙腈/水+5mM氫氧化銨，保持0.65分鐘，接著在5.19分鐘恢復2%乙腈，總操作時間5.2分鐘；流動速率1mL/min；管柱溫度50℃。方法D：在3.20分鐘，梯度1%至30%乙腈，接著梯度：在5.2分鐘週期內30-98%乙腈/水(具有0.1%甲酸)；流動速率1mL/min；管柱溫度50℃。對於流程1B，方法E，使用Waters System(Acquity G2 Xevo QTof質譜儀；管柱：Acquity BEH 1.7μ，2.1×50mm；梯度：3.4分鐘週期內40-98%乙腈/水(具有0.1%甲酸)，等度98%乙腈保持1.75分鐘，在5.2分鐘恢復40%；流動速率1mL/min；管柱溫度50℃)。除非另外規定，否則所有報導之質量為質子化母離子之質量。
根據以下流程1A製備中間物i6(實例2及5中使用)及i7(實例7中使 用)：
步驟1：製備三氟甲烷磺酸(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-3-基酯(i2)：N-(9-((2R,3R,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-4-羥基四氫呋喃 -2-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲醯胺(i1，5.6g，7.11mmol，ChemGenes)及DMAP(0.174g，1.42mmol)之混合物懸浮於無水THF(35mL)中，添加DIPEA(6.21mL，35.5mmol)產生溶液，向其中添加N-苯基三氟甲磺醯胺(5.08g，14.21mmol)。在室溫下攪拌混合物3.5小時，此時將其倒入5%鹽水(100mL)中且用EtOAc(2×100mL)萃取。乾燥(Na2SO4)合併之有機相，濾出乾燥劑且在真空中在矽膠(10g)上濃縮。藉由矽膠層析(梯度溶離25-100% EtOAc/庚烷)純化粗物質，得到呈茶色固體狀之所需化合物i2；5.53g；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.05(s,1H),8.68(s,1H),8.18(s,1H),8.06(d,J=7.5Hz,2H),7.66(t,J=7.4Hz,1H),7.61-7.48(m,4H),7.48-7.25(m,7H),6.88(d,J=8.8Hz,4H),6.04(d,J=7.6Hz,1H),5.50(dd,J=7.5,4.7Hz,1H),5.32(d,J=4.5Hz,1H),4.50(t,J=4.1Hz,1H),3.82(s,6H),3.77(dt,J=10.8,5.2Hz,1H),3.41(dd,J=10.8,3.7Hz,1H),0.77(s,9H),-0.01(s,3H),-0.46(s,3H)；LCMS(方法A)Rt=1.65min；m/z 920.5[M+H]+。
步驟2：製備乙酸(2R,3S,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-3-基酯(i3)：化合物i2(5.5g，5.98mmol)、KOAc(2.93g，29.9mmol)及18-冠-6(1,4,7,10,13,16-六氧雜環十八烷，0.79g，2.99mmol)於甲苯(40mL)中之混合物在110℃下加熱4小時。接著反應混合物冷卻至室溫且添加矽膠(10g)，且在真空中移除溶劑。藉由矽膠層析(梯度溶離25-100% EtOAc/庚烷)純化粗物質，得到呈茶色固體狀之所需化合物i3：3.3g；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.70(s,1H),8.58(s,1H),7.93(s,1H),7.84(d,J=7.5Hz,2H),7.44(t,J=7.4Hz,1H),7.35(t,J= 7.6Hz,2H),7.28(d,J=7.2Hz,2H),7.21-7.02(m,7H),6.67(dd,J=8.9,2.1Hz,4H),5.98(s,1H),4.97(dd,J=3.6,1.4Hz,1H),4.61-4.52(m,1H),4.35(s,1H),3.62(s,6H),3.41(dd,J=9.8,6.2Hz,1H),3.18(dd,J=9.8,5.6Hz,1H),1.53(s,3H),0.77(s,9H),0.03(s,3H),0.0(s,3H)。LCMS(方法A)Rt 1.68min；m/z 830.2[M+H]+。
步驟3：製備N-(9-((2R,3R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-4-羥基四氫呋喃-2-基)-9H-瞟呤-6-基)苯甲醯胺(i4)：化合物i3(6.78g，8.17mmol)溶解於MeOH(120mL)中且添加2.0M二甲胺之MeOH溶液(20.4mL，40.8mmol)。反應混合物在室溫下攪拌17小時。添加矽膠(12g)且在真空中移除溶劑。藉由矽膠層析(梯度溶離25-75% EtOAc/庚烷)純化粗物質，得到呈茶色固體狀之所需化合物i4：3.9g；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.94(s,1H),8.65(s,1H),8.16(s,1H),7.97-7.90(m,2H),7.58-7.38(m,3H),7.38-7.32(m,2H),7.32-7.00(m,7H),6.80-6.65(m,4H),5.83(d,J=1.2Hz,1H),5.38(d,J=8.0Hz,1H),4.42(s,1H),4.29(t,J=4.6Hz,1H),4.02-3.95(m,1H),3.75-3.61(m,6H),3.53(d,J=5.0Hz,2H),0.81(s,9H),0.0(s,6H)。LCMS(方法A)Rt 1.57min；m/z 788.2[M+H]+。
步驟4：製備N-(9-((2R,3S,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-4-氟四氫呋喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲醯胺(i5a)及N-(9-((2R,3S,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-4-氟四氫呋喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲醯胺(i5b)：化合物i4(750mg，0.952mmol)在惰性氮氣氛圍下溶解於無水DCM(7mL)中且溶液冷卻至0℃。添加1.0M DAST溶液 (1.90mL，1.90mmol)且接著在-5℃下攪拌反應物17小時，使用低溫冷卻以控制反應溫度。容器升溫至0℃且添加飽和NaHCO3(2mL)。在攪拌30分鐘後，混合物用5%鹽水(20mL)稀釋且用EtOAc(2×20mL)萃取。乾燥(Na2SO4)合併之有機物，濾出乾燥劑，向濾液中添加矽膠(2g)且在真空中移除溶劑。藉由矽膠層析(梯度溶離10-75% EtOAc/庚烷)純化粗物質，得到呈茶色固體狀之非對映異構體i5a及i5b之混合物：193mg；主要(2R,3S,4S,5R)非對映異構體LCMS(方法A)Rt 1.53min；m/z 790.4(M+H)+；次要(2R,3S,4R,5R)非對映異構體Rt 1.58min；m/z 790.4[M+H]+。
步驟5：製備N-(9-((2R,3S,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲醯胺(i6)：i5a及i5b(2.0g，2.53mmol)之非對映異構混合物溶解於無水THF(100mL)中且在惰性氮氣氛圍下冷卻至-42℃，隨後添加1.0M TBAF(3.80mL，3.80mmol)。攪拌反應物2.5小時，接著用飽和NaHCO3(20mL)淬滅。移除冷浴，且攪拌漿料10分鐘，隨後混合物用5%鹽水(150mL)稀釋且用DCM(2×100mL)萃取。乾燥(Na2SO4)合併之有機相，濾出乾燥劑，向濾液中添加矽膠(4g)且在真空中移除溶劑。藉由矽膠層析(梯度溶離25-100% EtOAc/庚烷)純化粗物質，得到呈白色固體狀之所需化合物i6：355mg；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.16(s,1H),8.64(s,1H),8.23(s,1H),7.99(d,J=7.5Hz,2H),7.59(t,J=7.4Hz,1H),7.48(t,J=7.6Hz,2H),7.41-7.31(m,3H),7.31-7.11(m,7H),6.79(d,J=8.9Hz,4H),6.16(d,J=7.3Hz,1H),5.77(br s,1H),5.27-5.10(m,2H),4.53(dt,J=28.0Hz,3.4Hz,1H),3.77(s,6H),3.51(dd,J=10.7,3.7Hz, 1H),3.34(dd,J=10.7,3.3Hz,1H)；19F NMR(376.4MHz,CDCl3)δ -197.5；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ 164.66,158.64,158.62,152.60,151.43,149.34,144.22,141.66,135.29,135.13,133.40,132.93,129.96,128.87,127.99,127.93,127.86,127.07,122.65,113.26,93.85,92.02,87.56(d,J=144Hz),83.56(d,J=23Hz),77.30,74.63(d,J=16Hz),62.82(d,J=11Hz),55.26；LCMS(方法A)Rt 0.89min；m/z 676.3[M+H]+。
步驟6：製備(2-氰基乙基)二異丙基胺基磷酸(2R,3S,4R,5R)-2-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯(i7)：向i6(830mg，1.4mmole，1eq)於於THF(5.0mL)中之無水溶液中添加DMAP(18mg，0.15mmole，0.1eq)及DIPEA(0.9mL，5.5mmole，4eq)。緩慢添加N,N-二異丙基胺基氯磷酸2-氰基乙酯(340μL，1.5mmole，1.1eq)且反應進行16小時。反應混合物用EtOAc(預先用5% NaHCO3水溶液洗滌)稀釋且用鹽水溶液(5×100mL)洗滌。合併之水層用EtOAc萃取且合併所有有機層，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。MPLC-SiO2(DCM：Hex：TEA 50：44：6)在磷立構中心處產生810mg呈非對映異構體之混合物形式之i7。LCMS(在1mL/min下，50-100% MeCN/10mm TEAA保持10分鐘，接著100% MeCN保持14分鐘)Rt 12.3及13.0min；m/z 877.15[M+H]+。
根據以下流程1B製備中間物i13(實例3中使用)：
步驟1：製備(2R,3R,4R,5R)-5-(6-(三苯甲基胺基)-9H-嘌呤-9-基)-4-(三苯甲基氧基)-2-((三苯甲基氧基)甲基)四氫呋喃-3-醇(i9)：在室溫下，向腺苷(i8，5.0g，18.7mmol)於吡啶(250mL，3.09mol)中之溶液中相繼添加DMAP(1.943g，15.9mmol)及三苯甲基氯(17.47g，62.7mmol)。在80℃下攪拌所得混合物，在24小時之後，再添加三苯甲基氯(6.2g，22.3mmol)且繼續在80℃下攪拌。在48小時之後，再添加三苯甲基氯(5.2g，18.7mmol)且再繼續攪拌48小時，此時使反應物冷卻至室溫且藉由添加EtOH(50mL)淬滅。反應混合物在真空中濃縮且所得殘餘物接著懸浮於甲苯(35mL)中，過濾以移除固體且在真空中濃縮。所得粗物質藉由矽膠層析(梯度溶離0-10% B/A，其中A=8：1 CH2Cl2：庚烷，B=EtOAc)純化，得到所需化合物i9：3.27g；1H NMR(400MHz, CDCl3)δ 7.94(s,1H),7.90(s,1H),7.39-7.45(m,6H),7.14-7.35(m,36H),7.06-7.12(m,6H),7.02(br s,1H),6.35(d,J=7.5Hz,1H),5.15(dd,J=7.4,4.6Hz,1H),4.07(t,J=3.0Hz,1H),3.28(dd,J=10.5,3.5Hz,1H),3.01(dd,J=10.4,3.3Hz,1H),2.85(d,J=4.5Hz,1H),2.26(s,1 H)；LCMS(方法B)Rt 4.22min；m/z 995.5[M+H]+。
步驟2：製備9-((2R,3S,4S,5R)-4-氟-3-(三苯甲基氧基)-5-((三苯甲基氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-N-三苯甲基-9H-嘌呤-6-胺(i10)：在室溫下，向化合物i9(5.72g，5.75mmol)於CHCl3(145mL)中之溶液中相繼添加吡啶(11.6mL，144mmol)及三氟化二乙基胺基硫(3.80mL，28.8mmol)。在室溫下攪拌所得混合物24小時，隨後藉由添加飽和NaHCO3水溶液(150mL)淬滅反應物。混合物用CH2Cl2(150mL)進一步稀釋，分離各層且有機層進一步用水(2×150mL)洗滌且乾燥(Na2SO4)。在濾出乾燥劑之後，在真空中濃縮濾液。所得粗物質藉由矽膠層析(梯度溶離0-45% EtOAc/庚烷)純化，得到所需化合物i10：2.91g；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.05(s,1H),7.57(s,1H),7.27-7.36(m,18H),7.07-7.25(m,28H),6.81(br s,1H),6.40(d,J=1.3Hz,1H),4.31(dd,J=14.0,1.3Hz,1H),4.02-4.23(m,1H),3.63,(dd,J=50.2,1.8Hz,1H),3.40(dd,J=8.9,7.2Hz,1H),3.20(dd,J=9.7,6.4Hz,1H)；19F NMR(376.4MHz,CDCl3)δ -199.59；HRMS(方法E)Rt 3.28min；m/z 996.4261[M+H]+。
步驟3：製備(2R,3S,4R,5R)-2-(6-胺基-9H-瞟呤-9-基)-4-氟-5-(羥基甲基)四氫呋喃-3-醇(i11)：化合物i10(3.92g，3.94mmol)於CH2Cl2(40mL)中之溶液冷卻至0℃，隨後逐滴添加三氟乙酸(3.94mL，51.2mmol)。在0℃下攪拌所得深黃色混合物10分鐘且接著升溫至室溫，且攪拌16小 時。在完成後，藉由添加水(20mL)來淬滅反應物且用CH2Cl2(50mL)稀釋。合併之層凍乾隔夜。來自凍乾之所得粗物質藉由矽膠層析(等度溶離10%MeOH/CH2Cl2)純化，得到所需化合物i11：858mg；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.17(s,1H),8.10(s,1H),7.35(br s,2H),6.29(d,J=4.6Hz,1H),5.94(d,J=2.5Hz,1H),4.97-5.24(m,2H),4.71-4.80(m,1H),4.20-4.43(m,1H),3.64-3.84(m,2H)；19F NMR(376.4MHz,DMSO-d 6)δ -200.84；LCMS(方法C)Rt 0.44min；m/z 270.0[M+H]+。
步驟4：製備N-(9-((2R,3S,4R,5R)-4-氟-3-羥基-5-(羥基甲基)四氫呋喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲醯胺(i12)：在室溫下，向化合物i11(488mg，1.27mmol)於吡啶(6.0mL)中之溶液中添加TMSCl(0.81mL，6.37mmol)。在室溫下攪拌所得混合物15分鐘，隨後添加苯甲醯氯(0.74mL，6.37mmol)且繼續在室溫下攪拌。在3小時之後，使反應物冷卻至0℃且藉由添加水(1.5mL)淬滅。攪拌混合物10分鐘，隨後添加濃氨水(3.0mL)且使反應物升溫至室溫。再過30分鐘之後，反應物用水(10mL)稀釋且用EtOAc(3×50mL)萃取。乾燥(Na2SO4)合併之有機層，濾出乾燥劑且在真空中濃縮濾液。由乙醚濕磨所得粗物質，得到所需化合物i12：240mg；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.22(br s,1H),8.78(s,1H),8.43(s,1H),8.02-8.08(m,2H),7.62-7.68(m,1H),7.52-7.59(m,2H),6.38(d,J=4.8Hz,1H),6.1(d,J=2.3Hz,1H),5.04-5.22(m,2H),4.80-4.88(m,1H),4.31-4.44(m,1H),3.70-3.84(m,2H)；19F NMR(376.4MHz,DMSO-d 6)δ -200.61；LCMS(方法D)Rt 1.47min；m/z 374.3[M+H]+。
步驟5：製備N-(9-((2R,3S,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲醯胺(i13)：在 室溫下，向化合物i12(720mg，1.93mmol)於吡啶(3.5mL)中之溶液中添加4,4'-二甲氧基三苯基甲基氯(686mg，2.03mmol)。在室溫下攪拌所得混合物16小時，隨後添加MeOH(5mL)且在真空中濃縮混合物。藉由矽膠層析(梯度溶離0-10% MeOH/CH2Cl2)純化所得粗物質，得到所需化合物i13：885mg；1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ 11.24(s,1H),8.78(s,1H),8.24(s,1H),8.04(d,J=7.6Hz,2H),7.63-7.67(m,1H),7.53-7.58(m,2H),7.38-7.46(m,4H),7.25-7.31(m,6H),7.20-7.24(m,1H),6.86(dd,J=12.1,8.7Hz,4H),6.44(d,J=4.5Hz,1H),6.14(d,J=1.9Hz,1H),5.20(dd,J=51.4,2.3Hz,1H),4.88(br d,J=15.5Hz,1H),4.54-4.63(m,1H),3.72(d,J=3.8Hz,6H),3.38-3.43(m,2H)；19F NMR(376.4MHz,DMSO-d6)δ -199.41；HRMS(方法E)Rt 1.23mins；m/z 676.2561[M+H]+。
根據以下流程1C製備中間物i16 N-(9-((2R,3S,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺(實例12中使用)：
步驟1：製備N-(9-((2R,3S,4S,5R)-4-氟-3-羥基-5-(羥基甲基)四氫呋喃-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺異丁酸鹽(i15)：在室溫下，經5分鐘向2-胺基-9-((2R,3S,4S,5R)-4-氟-3-羥基-5-(羥基甲基)四氫呋喃-2-基)-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(i14，1.69g，5.91mmol，Carbosynth,San Diego,CA)於吡啶(27.0，334mmol)中之溶液中逐滴添加氯三甲基矽烷(5.67mL，44.4mmol)。在室溫下攪拌反應物2小時，隨後使溶液冷卻至0℃且經10分鐘逐滴添加異丁醯氯(1.86mL，17.74mmol)。在0℃下攪拌混合物5分鐘且接著升溫至室溫保持3.5小時。接著使反應物冷卻至0℃且藉由添加水(9.0mL)淬滅，在0℃下攪拌10分鐘且接著升溫至室溫。在攪拌5分鐘之後，添加濃氨水(28% NH4OH水溶液，18mL)且攪拌混合物35分鐘，接著混合物用水(80mL)稀釋且用DCM(40mL)洗滌。分離水層且與所得粗物質一起在真空中濃縮，接著藉由矽膠層析(梯度溶離0-50% MeOH/CH2Cl2)純化，得到化合物i15(1.32g)：1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 8.27(s,1H),6.01(d,J 7.6Hz,1H),5.02-5.20(m,1H),4.76-4.84(m,1H),4.29-4.41(m,1H),3.79(d,J=3.3Hz,2H),2.72(hept,J 6.8Hz,1H),2.47(hept,J 6.8Hz,1H),1.23(d,J 6.8Hz,6H),1.12(d,J 6.8Hz,6H)；19F NMR(376MHz,CD3OD)δ -200.84；LCMS(方法F)Rt 0.66min；m/z 356.2(M+H+)。
步驟2：製備N-(9-((2R,3S,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺(i16)：在室溫下，向化合物i15(2.18g，6.14mmol)於1：1 THF：CHCl3(400mL)中之懸浮液中相繼一次性添加N-甲基嗎啉(2.70mL，24.54mmol)及4,4'-二甲氧基三苯甲基氯(8.32g，24.54mmol)。在室溫下攪拌混合物35分鐘，隨後藉由添加飽和NaHCO3水溶液(250mL)淬滅反應物。有機層為所分離之層且水層用DCM(2×150mL)進一步萃取。乾燥(MgSO4)合併之有機層，接著濾出乾燥劑且在真空中濃縮濾液，得到油。藉由矽膠層析(梯度0-60% EtOAc/庚烷以移除N-甲基嗎啉，接著0-60% MeOH/DCM)純化所得粗物質，得到化合物i16(3.57g)：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.04(s,1H),7.36-7.42(m,2H),7.17-7.31(m,7H),6.78-6.85(m,4H),6.00(d,J 7.1Hz,1H),5.00-5.25(m,2H),4.41(m,1H),3.76(s,6H),3.46(dd,J 10.6,4.3Hz,1H),3.37(dd,J 10.6,3.0Hz,1H),2.57(hept,J 6.8Hz,1H),1.19(d,J 6.8Hz,3H),1.16(d,J 6.8Hz,3H)；19F NMR(376MHz,CD3OD)δ -200.35；LCMS(方法C)Rt 2.16min；m/z 658.3(M+H+)。
實例2：合成2'3'-RR-(3'F-A)(2'F-A)(5)及2'3'-RS-(3'F-A)(2'F-A)(5a)根據以下流程2製備2'3'-RR-(3'F-A)(2'F-A)(5)，亦稱為二硫基- [R P ,R P ]-環-[3'F-A(2',5')p-2'F-A(3',5')p]：
步驟1：製備膦酸氫(2R,3S,4R,5R)-2-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-5-(羥基甲基)四氫呋喃-3-基酯(1)：向N-(9-((2R,3S,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲醯胺(i6，實例1流程1A，0.75g，1.1mmol)於1,4-二噁烷(8mL)及吡啶(2.5mL)中之溶液中添加SalPCl(0.27g，1.3mmol)於1,4-二噁烷 (4mL)中之溶液。在45分鐘之後，在室溫下向攪拌反應混合物中引入水(1mL)，且將混合物倒入1N NaHCO3水溶液(40mL)中。此水性混合物用EtOAc(3×40mL)萃取且分配各層。合併EtOAc萃取物且濃縮至乾燥，得到無色發泡體。藉由矽膠層析(0%至50% MeOH(具有0.5%吡啶)/CH2Cl2)純化所得泡沫體，得到呈無色發泡體狀之中間物膦酸氫(2R,3S,4R,5R)-2-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-四氫呋喃-3-基酯(220mg，27%)。向此中間物(220mg，0.3mmol)於CH2Cl2(4mL)中之溶液中添加水(0.05mL)及DCA於CH2Cl2中之6%(v/v)溶液(3.8mL)。在十分鐘之後，向紅色溶液中裝入吡啶(0.4mL)，其產生白色混合物。白色混合物在真空中濃縮且在與MeCN(20mL)一起濃縮之後以共沸物形式移除水。用MeCN(20mL)再重複此共沸過程兩次。在最後一次蒸發後，化合物1之白色漿料保存於MeCN(5mL)中。
步驟2：製備膦酸氫(2R,3S,4R,5R)-2-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)偶磷醯基)氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯(3)：(2-氰基乙基)二異丙基胺基磷酸(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯(2，0.31g，0.36mmol，ChemGenes)於MeCN(20mL)中之溶液在真空中經由濃縮乾燥。再重複此過程兩次以便以共沸物形式移除水。在最後一次共沸後，將十個3Å分子篩引入化合物2於MeCN(1.5mL)中之溶液且溶液儲存在氮氣氛圍下。向具有殘餘二氯乙酸吡錠之化合物1於MeCN中之攪拌混合物(5mL)中添加化合物2於MeCN中之溶液(1.5mL)。在五分鐘之後，向攪拌混合物中 添加DDTT(68mg，0.33mmol)，其產生黃色混合物。在30分鐘後，在真空中濃縮黃色混合物，得到呈黃色油狀之所需化合物3。
步驟3：製備受保護之2'3'-二硫基-(3'F-A)(2'F-A)(4)：向化合物3(約371mg，0.3mmol)於CH2Cl2(4mL)中之溶液中添加水(0.04mL)及DCA於CH2Cl2中之6%(v/v)溶液(4mL)。在十分鐘之後，向紅色溶液中引入吡啶(5mL)，其使紅色溶液變成黃色混合物。在真空中濃縮黃色混合物直至殘留約3mL黃色混合物。向黃色混合物中引入吡啶(5mL)且蒸發混合物直至殘留約3mL黃色混合物，且重複添加吡啶且蒸發至3mL。向含攪拌黃色混合物之吡啶(3mL)中添加DMOCP(0.165g，0.9mmol)。在七分鐘之後，向深橙色溶液中添加水(0.15mL)，接著立即引入3H-1,2-苯并二硫醇-3-酮(75mg，0.45mmol)。在五分鐘之後，將深橙色溶液倒入1N NaHCO3水溶液(40mL)中。在十五分鐘之後，兩相混合物用EtOAc(50mL)萃取。在分離各層之後，水層用EtOAc(50mL)反萃取兩次。合併且濃縮有機萃取物。向經濃縮之黃色油中添加甲苯(20mL)且蒸發混合物以移除殘餘吡啶。用甲苯(20mL)重複此程序兩次。藉由矽膠層析(0%至10% MeOH/CH2Cl2)純化所得油，得到呈白色固體狀之化合物4(20mg，7%)。
步驟4：製備2'3'-RR-(3'F-A)(2'F-A)(5)：向化合物4(20mg，0.02mmol)於MeOH(1.0mL)中之攪拌溶液中添加氫氧化銨水溶液(0.5mL)且橙色漿料加熱至50℃。在九十分鐘之後，使黃色溶液冷卻且隨後在真空中濃縮。藉由逆相矽膠層析(0%至20% MeCN/10mM TEAA水溶液)純化黃色殘餘物，在凍乾之後得到呈白色雙三乙銨鹽形式之化合物5(5.3mg，76%，純度99%)。LCMS-ESI：694[M-H]-(C20H22F2N10O8P2S2之計算 值：693.30)；Rt：8.372min。1H NMR(400MHz,45℃,D2O)δ 8.61(s,1H),8.43(s,1H),8.23(s,1H),8.14(s,1H),6.57(d,J=16.4Hz,1H),6.44(d,J=8.8Hz,1H),5.90(dd,J=30.0,3.5Hz,1H),5.75(dd,J=28.0,3.5Hz,1H),5.67(td,J=8.0,3.5Hz,1H),5.47-5.38(m,1H),4.93(d,J=25.0Hz,1H),4.74-4.59(m,3H),4.46(dd,J=12.0,3.5Hz,1H),4.28(d,J=12.0Hz,1H),3.34(q,J=7.0Hz,12H),1.43(t,J=7.0Hz,18H)。19F NMR(400MHz,45℃,D2O)δ -197.95至-198.23(m),-200.24至-200.35(m)。31P NMR(45℃,D2O)δ 54.98,52.70。
在最終純化步驟中以雙三乙銨鹽形式分離2'3'-RS-(3'F-A)(2'F-A)(5a)。LCMS-ESI：694[M-H]-(C20H22F2N10O8P2S2之計算值：693.30)；Rt：7.973min。在此反應之按比例擴大模型中，亦分離SR及SS異構體：2'3'-SR-(3'F-A)(2'F-A)(5b)；LCMS-ESI：693.65[M-H]-(C20H22F2N10O8P2S2之計算值：694.05)；Rt：7.057'min，及2'3'-SS-(3'F-A)(2'F-A)(5c)；LCMS-ESI：695.65[M+H]+；693.65[M-H]-(C20H22F2N10O8P2S2之計算值：694.05)；Rt：6.327'min。所有四種異構體之LCMS使用2%至50% MeCN/20mM NH4OAc水溶液之10分鐘梯度。
實質上純化合物5(2'3'-RR-(3'F-A)(2'F-A))與野生型STING蛋白質共結晶，且此化合物之X射線結構結合於STING證實如流程2化合物5中所描繪之立體化學。自化合物5分離在A-3'-5'-A磷上具有S配置之相應立體異構體，其中S異構體之滯留時間為8.128分鐘。儘管以下其他化合物尚未共結晶，但此等化合物之經歷表明Rp,Rp異構體與相應Rp,Sp異構體或SP,Rp異構體相比始終具有較長滯留時間。儘管Rp,Rp及Rp,Sp或SP,Rp異構體相對於二-OH類似物通常顯示STING結合方面的改良，但在以下實例中， Rp,Rp異構體之一致性進一步驗證為與Rp,Sp或Sp,Rp異構體相比具有改良的生物活性(例如結合於STING、IFNβ之誘導)。
實例3：合成2'3'-RR-(3'βF-A)(2'F-A)(10)及2'3'-RS-(3'βF-A)(2'F-A)(10a)
根據以下流程3製備2'3'-RR-(3'βF-A)(2'F-A)(10)，亦稱為二硫基-[R P,R P]-環-[3'βF-A(2',5')p-2'F-A(3',5')p]：
步驟1：製備膦酸氫(2R,3S,4S,5R)-2-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯(6)：向N-(9-((2R,3S,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲醯胺(i13，實例1，流程1B；630mg，0.92mmole，1eq)於二噁烷(7.1mL)中之溶液中相繼添加吡啶(1.9mL，24mmole，26eq)及2-氯-4H-1,3,2-苯并二氧雜磷-4-酮(225g，1.10mmole，1.2eq)。攪拌反應混合物30分鐘。混合物相繼用5mL水及含1.9g NaHCO3之52mL水淬滅。在用EtOAc(3×62mL)及DCM(1×50mL)萃取之後，合併之有機層經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮，得到0.92g粗化合物6。進行製備型MPLC-SiO2(99% DCM：1%(99.5% MeOH，0.5%吡啶)至50：50)得到460mg化合物6。
步驟2：製備膦酸氫(2R,3S,4S,5R)-2-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)偶磷醯基)氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯(8)：化合物2(參見實例2，流程2，步驟2，750mg，0.86mmole，1.3eq)與無水乙腈(3×10mL)共蒸發，殘留4mL乙腈。(步驟2a)向化合物6(490mg，0.67mmole，1eq)於DCM (8.0mL)中之溶液中相繼添加水(0.12mL)及8.0mL 6% DCA之DCM溶液。攪拌反應混合物10分鐘，接著用吡啶(93μL)淬滅且在真空中濃縮。混合物與無水乙腈(3×5mL)共蒸發，殘留1.8mL含化合物7之乙腈。添加化合物2(750mg)於無水乙腈(4mL)中之溶液且攪拌3分鐘。在添加DDTT(150mg)之後，攪拌反應混合物30分鐘接著在真空中濃縮，得到2.1g粗化合物8。
步驟3：製備受保護之2'3'-二硫基-(3'βF-A)(2'F-A)(9)：向粗化合物8(2.1g)於DCM(16mL)中之溶液中相繼添加水(120μL)及16mL 6% DCA之DCM溶液。攪拌反應混合物10分鐘，接著用吡啶(6.6mL)淬滅。濃縮混合物以移除DCM，接著與無水吡啶(1×20mL)共蒸發，殘留13mL。添加DMOCP(370mg，2.0mmole，3eq)且攪拌3分鐘，接著添加水(0.37mL，20mmole，30eq)且隨後立即添加3H-1,2-苯并二硫醇-3-酮(170mg，1.0mmole，1.5eq)。使反應進行5分鐘且用3%NaHCO3溶液(100mL)稀釋，且相繼用100mL乙醚與EtOAc之1：1溶液及100mL DCM萃取。濃縮合併之有機層，得到1g粗化合物9。進行製備型MPLC-SiO2(100%DCM至15% DCM/MeOH)得到170mg呈非對映異構體之混合物形式之9。
步驟4：製備2'3'-RR-(3'βF-A)(2'F-A)(10)：向9(170mg，0.17mmole，1eq)於EtOH(3mL)中之溶液中添加濃NH4OH(3mL)。混合物用蓋子及封口膜密封，且加熱至50℃保持3小時。接著使混合物冷卻至室溫，用Ar氣體充氣10分鐘且在真空中濃縮。進行製備型MPLC-C18(100% 10mM TEAA至20%乙腈/10mM TEAA)得到7.0mg化合物10(Rt：7.94min，94%純度)及4.1mg R,S非對映異構體(Rt：7.00min)。 LCMS-ESI：693.7[M-H]-(C20H22F2N10O8P2S2之計算值：694.05)；1H NMR(400MHz,45℃,D2O)δ 8.49(s,1H),8.44(s,2H),8.36(s,1H),6.62(d,J=18.4Hz,1H),6.54(s,1H),5.99-5.94(m,1H),5.87-5.81(m,1H),5.36(m.1H),5.25-5.10(m,1H),5.07-4.95(m,1H),4.85-4.60(m,3H),4.32(d,J=14.4Hz,1H),3.34(q,J=6.8Hz,12H),2.11(s,0.73H),1.43(t,J=7.2Hz,18H),5.25-5.10。19F NMR(376MHz,45℃,D2O)δ -199.1；-203.1(td,J=56.0,24.0Hz),200.1(td,J=56.0,24.0,20.0Hz),31P NMR(162MHz,45℃,D2O)δ 57.2；54.6。
在最終純化步驟中以雙三乙銨鹽形式分離2'3'-RS-(3'βF-A)(2'F-A)(10a)。
實例4：合成2'3'-RR-(A)(2'F-A)(16)及2'3'-SR-(A)(2'F-A)(16a)
根據以下流程4製備2'3'-RR-(A)(2'F-A)(16)，亦稱為二硫基-[R P,R P]-環-[A(2',5')p-2'F-A(3',5')p]：
步驟1：製備膦酸氫(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-2-(羥基甲基)四氫呋喃-3-基酯(12)：向N-(9-((2R,3R,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-氟-4-羥基四氫呋喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲醯胺(11，1.5g，2.3mmol，ChemGenes)於1,4-二噁烷(20mL)及吡啶(6.7mL)中之攪拌溶液中添加SalPCl(0.45g，2.3mmol)於1,4-二噁烷(10mL)中之溶液。在30分鐘之後，在室溫下向攪拌反應混合物中引入水(3mL)，且將混合物倒入1N NaHCO3水溶液(60mL)中。此水性混合物用EtOAc(2×120mL)萃取且分離各層。合併EtOAc萃取物且濃縮至乾燥，得到無色發泡體。無色發泡體溶解於CH2Cl2(25mL)中，得到無色溶液。向此溶液中添加水(0.4mL)及DCA於CH2Cl2中之6%(v/v)溶液(23mL)。在十分鐘之後，向紅色溶液中裝入吡啶(3.0mL)，其使紅色溶液變成白色混合物。在真空中濃縮此白色混合物且在與MeCN(33mL)一起濃縮之後以共沸物形式移除水。用MeCN(33mL)再重複此共沸過程兩次。在最後一次蒸發後，化合物12之白色漿料保存於MeCN(10mL)中。
步驟2：製備膦酸氫(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-2-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)偶磷醯基)氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯(14)： (2-氰基乙基)二異丙基胺基磷酸(2R,3R,4R,5R)-2-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-3-基酯(13，1.0g，2.3mmol，ChemGenes)於MeCN(15mL)中之溶液在真空中經由濃縮乾燥。再重複此過程三次以便以共沸物形式移除水。在最後一次共沸後，將十個3Å分子篩引入化合物13於MeCN(8mL)中之溶液且此溶液儲存在氮氣氛圍下。向具有殘餘二氯乙酸吡錠之化合物12於MeCN(10mL)中之攪拌混合物中添加化合物13於MeCN中之溶液(8mL)。在五分鐘之後，向攪拌混合物中添加DDTT(520mg，2.6mmol)，其產生黃色混合物。在30分鐘後，在真空中濃縮黃色混合物，得到呈黃色油狀之化合物14。
步驟3：製備受保護之2'3'-二硫基-(A)(2'F-A)(15)：向化合物14於CH2Cl2(30mL)中之溶液中添加水(0.2mL)及DCA於CH2Cl2中之6%(v/v)溶液(30mL)。在十分鐘之後，向紅色溶液中引入吡啶(10mL)，其使紅色溶液變成黃色混合物。在真空中濃縮黃色混合物直至殘留約10mL黃色混合物。向黃色混合物中引入吡啶(40mL)且蒸發混合物直至殘留約20mL黃色混合物，且重複添加吡啶且蒸發至20mL。向含攪拌黃色混合物之吡啶(20mL)中添加DMOCP(0.9g，4.8mmol)。在七分鐘之後，向深橙色溶液中添加水(0.8mL)，接著立即引入3H-1,2-苯并二硫醇-3-酮(0.4g，2.4mmol)。在五分鐘之後，將深橙色溶液倒入1N NaHCO3水溶液(200mL)中，其產生兩相混合物。在攪拌十分鐘之後，兩相混合物用EtOAc(100mL)及乙醚(100mL)萃取。在分離各層之後，水層用200mL EtOAc/乙醚(1：1)反萃取兩次。合併且濃縮有機萃取物。向經濃縮之黃色油中添加甲苯(75mL)且蒸發混合物以移除殘餘吡啶。用甲苯(75mL)重複此程序 兩次。所得油藉由矽膠層析(0%至10% MeOH/CH2Cl2)純化，得到呈橙色油狀之化合物15(90mg，10%)。
步驟4：製備2'3'-RR-(A)(2'F-A)(16)：向化合物15(90mg，0.08mmol)於甲醇(1.0mL)中之攪拌溶液中添加氫氧化銨水溶液(1.0mL)且橙色漿料加熱至50℃。在兩小時之後，使橙色溶液冷卻且在真空中濃縮。向殘餘固體中引入三氫氟化三乙胺(0.6mL)且黃色溶液加熱至40℃。在兩小時之後，使黃色溶液冷卻至室溫。此黃色溶液緩慢添加至1M TEAB(3mL)及TEA(0.5mL)之經冷卻溶液中。攪拌黃色混合物30分鐘。藉由逆相矽膠層析(0%至20% MeCN/10mM TEAA水溶液)純化黃色混合物，在凍乾之後得到自R,S非對映異構體(Rt：11.927min)分離之呈白色雙三乙銨鹽形式之化合物16(14mg，27%，純度89%)。LCMS-ESI：692[M-H]-(C20H23FN10O9P2S2之計算值：691.25)；Rt：14.712min。1H NMR(400MHz,45℃,D2O)δ 8.62(s,1H),8.42(s,1H),8.26(s,1H),8.17(s,1H),6.57(d,J=16.4Hz,1H),6.40(d,J=8.0Hz,1H),5.81(dd,J=50.0,4.0Hz,1H),5.58(td,J=8.8,4.0Hz,1H),5.42-5.35(m,1H),5.05(d,J=4.4Hz,1H),4.77-4.59(m,4H),4.43(dd,J=12,4.0Hz,1H),4.28(dd,J=12.0,4.0Hz,1H),3.34(q,J=7.0Hz,12H),1.43(t,J=7.0Hz,18H)。19F NMR(400MHz,45℃,D2O)δ -200.17至-200.41(m)。31P NMR(45℃,D2O)δ 55.16,52.19。
在最終純化步驟中以雙三乙銨鹽形式分離2'3'-SR-(A)(2'F-A)(16a)。LCMS-ESI：692[M-H]-(C20H23FN10O9P2S2之計算值：691.25)；Rt：11.977min。
實例5：合成2'3'-RR-(3'F-A)(A)(20)及2'3'-RS-(3'F-A)(A)(20a)
根據以下流程5製備2'3'-RR-(3'F-A)(A)(20)，亦稱為二硫基-[R P,R P]-環-[3'F-A(2',5')p-A(3',5')p]：
步驟1：製備膦酸氫(2R,3S,4R,5R)-2-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-5-(羥基甲基)四氫呋喃-3-基酯(1)：使N-(9-((2R,3S,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲醯胺i6(實例1流程1A)根據流程2步驟1(實例2)之方法反應以提供化合物1。
步驟2：製備膦酸氫(2R,3S,4R,5R)-2-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)偶磷醯基)氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯(18)：(2-氰基乙基)二異丙基胺基磷酸(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-3-基酯(17，0.811g，0.82mmol，ChemGenes)於MeCN(20mL)中之溶液在真空中經由濃縮乾燥。再重複此過程兩次以便以共沸物形式移除水。在最後一次共沸後，將十個3Å分子篩引入化合物17於MeCN(2.5mL)中之溶液且溶液儲存在氮氣氛圍下。向具有殘餘二氯乙酸吡錠之化合物1於MeCN(10mL)中之攪拌混合物中添加化合物17於MeCN(2.5mL)中之溶液。在五分鐘之後，向攪拌混合物中添加DDTT(145mg，0.71mmol)。在30分鐘後，在真空中濃縮黃色混合物，得到呈黃色油狀之化合物18。
步驟3：製備受保護之2'3'-二硫基-(3'F-A)(A)(19)：向化合物18(約855mg，0.6mmol)與CH2Cl2(10mL)中之溶液中添加水(0.08mL)及DCA於CH2Cl2中之6%(v/v)溶液(10mL)。在十分鐘之後，向紅色溶液中引入吡啶(3mL)，其使紅色溶液變成黃色混合物。在真空中濃縮黃色混合物直至殘留約10mL黃色混合物。向黃色混合物中引入吡啶(15mL)且蒸發混合物直至殘留約10mL黃色混合物，且重複添加吡啶且蒸發至10mL。向含攪拌黃色混合物之吡啶(10mL)中添加DMOCP(0.350g，1.9mmol)。在七分鐘之後，向深橙色溶液中添加水(0.3mL)，接著立即引入3H-1,2-苯并二硫醇-3-酮(160mg，0.95mmol)。在五分鐘之後，將深橙 色溶液倒入1N NaHCO3水溶液(100mL)中。在攪拌十五分鐘之後，兩相混合物用EtOAc(50mL)萃取。在分離各層之後，水層用EtOAc(50mL)反萃取三次。合併且濃縮有機萃取物。向經濃縮之黃色油中添加甲苯(50mL)且蒸發混合物以移除殘餘吡啶。用甲苯(50mL)重複此程序兩次。藉由矽膠層析(0%至10% MeOH/CH2Cl2)純化所得油，得到呈白色固體狀之化合物19(37mg，11%)。
步驟4：製備2'3'-RR-(3'F-A)(A)(20)：向化合物19(37mg，0.03mmol)於甲醇(1.0mL)中之攪拌溶液中添加氫氧化銨水溶液(0.5mL)且橙色漿料加熱至50℃。在三小時之後，使橙色溶液冷卻且在真空中濃縮。向殘餘固體中引入三氫氟化三乙胺(0.5mL)且黃色溶液加熱至40℃。在四小時之後，使黃色溶液冷卻至室溫。黃色溶液緩慢添加至1M TEAB(3mL)及TEA(0.5mL)之經冷卻溶液中。攪拌黃色混合物30分鐘。藉由逆相矽膠層析(0%至20% MeCN/10mM TEAA水溶液)純化黃色混合物，在凍乾之後得到自R,S非對映異構體(Rt：6.546分鐘)以白色雙三乙銨鹽形式分離之化合物20(9.4mg，39%，純度99%)。LCMS-ESI：693[M-H]-(C20H23FN10O9P2S2之計算值：692.00)；Rt：8.397min。1H NMR(400MHz,45℃,D2O)δ 8.65(s,1H),8.44(s,1H),8.28(s,1H),8.21(s,1H),6.45(d,J=8.4Hz,1H),6.29(d,J=3.0Hz,1H),5.90(dd,J=52.0,4.0Hz,1H),5.69(td,J=8.0,4.0Hz,1H),5.39-5.29(m,1H),5.04(m,1H),4.95(d,J=25.0Hz,1H),4.77-4.50(m,3H),4.49(m,1H),4.30(m,1H),3.29(q,J=7.0Hz,12H),1.41(t,J=7.0Hz,18H)。19F NMR(400MHz,45℃,D2O)δ -198.10至-198.38(m)。31P NMR(45℃,D2O)δ 54.7,52.9。
在最終純化步驟中以雙三乙銨鹽形式分離2'3'-RS-(3'F-A)(A)(20a)。LCMS-ESI：693[M-H]-(C20H23FN10O9P2S2之計算值：692.00)；Rt：6.546min。
實例6：合成2'3'-RR-(G)(2'F-A)(26)及2'3'-SR-(G)(2'F-A)(26a)
根據以下流程6製備2'3'-RR-(G)(2'F-A)(26)，亦稱為二硫基-[R P,R P]-環-[G(2',5')p-2'F-A(3',5')p]：
步驟1：製備膦酸氫(2R,3S,4R,5R)-2-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯(21)：向N-(9-((2R,3R,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-氟-4-羥基四氫呋喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲醯胺11(5.0g，7.4mmole，1eq，ChemGenes)於二噁烷(45mL)中之溶液中相繼添加吡啶(13mL)及2-氯-4H-1,3,2-苯并二氧雜磷-4-酮(1.05g，5.18mmole，0.7eq)。攪拌反應混合物1小時且再添加2-氯-4H-1,3,2-苯并二氧雜磷-4-酮(2.0g，9.8mmole，1.3eq)。混合物相繼用7.5mL水及300mL NaHCO3飽和溶液淬滅。在用EtOAc萃取之後，合併之有機層經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮，得到5.8g粗化合物21。進行3.2g粗物質之製備型MPLC-C18(100% 10mM TEAA至60%乙腈/10mM TEAA)，得到1.3g化合物21。
步驟2：製備膦酸氫(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)偶磷醯基)氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯(23)：(2-氰基乙基)二異丙基胺基磷酸(2R,3R,4R,5R)-5-((雙(4- 甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(22，2.2g，2.3mmole，1.3eq，ChemGenes)與無水乙腈(3×10mL)共蒸發，殘留7mL乙腈。(步驟2a)向化合物21(1.3g，1.75mmole，1eq)於DCM(21mL)中之溶液中相繼添加水(0.32mL)及22.3mL 6% DCA之DCM溶液。攪拌反應混合物10分鐘，接著用吡啶(2.4mL)淬滅且在真空中濃縮，得到具有殘餘二氯乙酸吡錠之化合物12。化合物12之粗混合物與無水乙腈(3×10mL)共蒸發，殘留2.4mL乙腈。添加化合物22(2.2g)於無水乙腈(7mL)中之溶液且攪拌3分鐘。在添加DDTT(0.4g)之後，攪拌反應混合物30分鐘，接著在真空中濃縮，得到化合物23。
步驟3：製備受保護之2'3'-二硫基-(G)(2'F-A)(24)：向化合物23於DCM中之溶液(42mL)中相繼添加水(1.7mL)及42mL 6% DCA之DCM溶液。攪拌反應混合物10分鐘，接著用吡啶(17.6mL)淬滅。濃縮混合物以移除DCM，接著與無水吡啶(1×50mL)共蒸發，殘留35mL。添加DMOCP(1g，2.6mmole，1.5eq)且攪拌3分鐘，接著添加水(0.92mL，51mmole，29eq)且接著立即添加3H-1,2-苯并二硫醇-3-酮(0.45g，2.7mmole，1.5eq)。使反應進行5分鐘且用3% NaHCO3溶液(250mL)稀釋且相繼用250mL乙醚與EtOAc之1：1溶液及250mL DCM萃取。濃縮合併之有機層，得到3g粗化合物24。進行製備型MPLC-SiO2(100%DCM至15% DCM/MeOH)，得到70mg呈非對映異構體之混合物形式之化合物24。
步驟4：製備受保護之2'3'-二硫基-(G)(2'F-A)(25)：向化合物24(70mg，0.067mmole，1eq)於EtOH(0.2mL)中之溶液中添加AMA(0.5mL)。混合物用蓋子及封口膜密封且加熱至50℃保持90分鐘。接著使混合 物冷卻至室溫，用Ar氣體充氣10分鐘且在真空中濃縮，得到37mg呈非對映異構體之混合物形式之粗化合物25。
步驟5：製備2'3'-RR-(G)(2'F-A)(26)：向化合物25(37mg，0.045mmole，1eq)之粗混合物中添加TEA 3HF(0.4mL)。使反應物加熱至50℃保持2.5小時。將混合物倒入TEA(0.8mL)及TEAB(2.1mL)之0℃溶液中且升溫至室溫同時攪拌。將一半溶液去鹽且使用製備型MPLC-C18(100% 20mM NH4OAc至20%乙腈/20mM NH4OAc)純化(第1管柱)，得到1mg化合物26(80%純度，藉由HPLC)。藉由擴展梯度純化(第2管柱)另一半溶液，引起最小分離。來自第1管柱之含有R,S異構體之溶離份與來自第2管柱之溶離份組合且經2個夜晚凍乾。經由製備型HPLC(6-18%乙腈/10mM TEAA)純化經組合之溶離份塊狀物，得到呈TEAH鹽形式之1mg化合物26(>95%純度，Rt：9.84分鐘)及2mg R,S異構體(85%純度，Rt：8.8分鐘)。LCMS-ESI：708.8.[M-H]-(C20H23FN10O10P2S2之計算值：708.53)；1H NMR(400MHz,45℃,D2O)δ 8.46(s,1H),8.43(s,1H),8.03(s,1H),6.63(d,J=13.2Hz,1H),6.09(d,J=7.2Hz,1H),5.93(m,1H),5.83-5.67(m,2H),5.46-5.39(m,1H),4.85(s,1H),4.61(s,2H),4.33(d,J=11.2Hz,1H),4.26(d,J=12.4Hz,1H),3.37-3.34(m,12H),1.45-1.42(t,J=6.0Hz,18H).19F NMR(376MHz,45℃,D2O)δ -201.3--201.7,31P NMR(162MHz,45℃,D2O)δ 55.7；51.4。
在最終純化步驟中以雙三乙銨鹽形式分離2'3'-SR-(G)(2'F-A)(26a)。1H NMR(400MHz,45℃,D2O)δ 8.68(s,1H),8.45(s,1H),8.03(s,1H),6.64(d,J=14,1H),6.14-6.11(m,1H),6.00-5.90(m,1H),5.70(d,J=52,1H),5.55-5.40(m,1H),4.60(d,J=18.8,4H),4.32-4.25 (m,3H),3.35-3.34(m,12H),1.43(t,J=6.8,18H)；13P NMR(162MHz,45℃,(D2O)δ 55.9,54.2；HRMS(FT-ICR)m/z C20H23FN10O10P2S2之計算值：(M+H)+709.05，實驗值709.75；HPLC(2-50%乙腈/20mM NH4OAC緩衝液-20min)8.79min。
化合物2'3'-RR-(G)(2'F-A)26根據以下流程6a進一步反應：
其中1.1mL無水吡啶添加至化合物26(50mg，0.071mmol，1eq)於無水DMF(2.2mL)中之溶液中，接著添加癸醯基氯(36μL，0.176mmol，2.5eq)及DMAP(20mg)。在50℃向攪拌反應混合物11天，接著用MeOH(10mL)淬滅且在真空中濃縮。所得物質藉由製備型MPLC(15.5g-C18管柱，0-100%乙腈/TEAA(10mM)之梯度：0%保持2.25分鐘，經4.5分鐘0-20%，20%保持2.25分鐘，經27分鐘20-60%，60%保持2.25分鐘，經2.25分鐘60-100%，100%保持4.5分鐘)純化，得到呈三乙銨鹽形式之5.2mg 2'3'-RR-(3'癸醯基-O-G)(2'F-A)化合物50。LCMS：經10分鐘2-80% MeCN/10mM TEAA水溶液，Rt：9.57分鐘，>95%純度。LCMS-ESI：863.9[M+H]+(C30H41FN10O11P2S2之計算值：862.19)。
實例7：合成3'2'-RR-(2'F-G)(3'F-A)(32)、3'2'-RS-(2'F-G)(3'F-A)(32a) 及3'2'-SS-(2'F-G)(3'F-A)(32b)
根據以下流程7製備3'2'-RR-(2'F-G)(3'F-A)(32)，亦稱為二硫基-[R P,R P]-環-[2'F-G(3',5')p-3'F-A(2',5')p]：
步驟1：製備膦酸氫(2R,3R,4R,5R)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-5-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(28)：向(2-氰基乙基)二異丙基胺基磷酸(2R,3R,4R,5R)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-5-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(27，2.1g，2.5mmole，1eq，ChemGenes)於乙腈(12mL)中之溶液中相繼添加水(0.087mL)及三氟乙酸吡錠(0.57g，3.0mmole，1.2eq)。攪拌反應物7分鐘且添加第三丁基胺(12.1mL，0.12mol，47eq)。在攪拌10分鐘之後，濃縮反應物得到2.95g粗化合物28。進行製備型MPLC-SiO2(99%DCM：1%(MeOH，0.5%吡啶)至60：40)，得到1.84g化合物28。
步驟2：製備膦酸氫(2R,3R,4R,5R)-2-((((((2R,3S,4R,5R)-2-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)偶磷醯基)氧基)甲基)-4-氟-5-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(30)：化合物i7(實例1，流程1A，810mg，0.93mmole，1eq)與無水乙腈(3×10mL)共蒸發，殘留3mL乙腈。(步驟2a)向化合物28(670mg，0.93mmole，1eq)於DCM(9.4mL)中之溶液中相繼添加水(0.16mL)及9.5mL 6% DCA之 DCM溶液。攪拌反應混合物10分鐘，接著用吡啶(1.4mL)淬滅且在真空中濃縮，得到膦酸氫(2R,3R,4R,5R)-4-氟-2-(羥基甲基)-5-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯化合物29。化合物29之粗混合物與無水乙腈(3×10mL)共蒸發，殘留5.0mL乙腈。化合物i7(810mg)於無水乙腈(3mL)中之溶液添加至化合物29於乙腈中之溶液中且攪拌5分鐘。在添加DDTT(0.22g)之後，攪拌反應混合物30分鐘，接著在真空中濃縮，得到2.8g粗化合物30。
步驟3：製備受保護之3'2'-二硫基-(2'F-G)(3'F-A)(31)：向粗化合物30(2.8g)於DCM(19mL)中之溶液中相繼添加水(0.11mL)及19mL 6% DCA之DCM溶液。攪拌反應混合物10分鐘，接著用吡啶(8mL)淬滅。在真空中稠合混合物以移除DCM，接著與無水吡啶(1×3mL及1×5mL)共蒸發兩次，殘留5mL。添加DMOCP(0.5g，2.7mmole)且攪拌7分鐘，接著添加水(0.44mL，24mmole)且接著立即添加3H-1,2-苯并二硫醇-3-酮(0.20g，1.2mmole)。使反應進行5分鐘且用1M NaHCO3溶液(44mL)稀釋且用EtOAc(3×33mL)萃取。在真空中濃縮合併之有機層，接著與甲苯(3×10mL)共蒸發，得到2.1g粗化合物31。進行製備型MPLC-SiO2(100% DCM至50% DCM/MeOH)，得到30mg呈立體異構體之混合物形式的化合物31。
步驟4：製備3'2'-RR-(2'F-G)(3'F-A)(32)：向化合物31(30mg，0.032mmole，1eq)於EtOH(0.3mL)中之溶液中添加AMA(0.5mL)。混合物用蓋子及封口膜密封，攪拌，且加熱至50℃保持90分鐘。接著混合物冷卻至室溫且在真空中濃縮，得到27mg呈立體異構體之混合物形式的粗化合物32。反應物使用製備型MPLC-C18(100% 10mM TEAA至25% 乙腈/10mM TEAA)純化，得到呈TEAH鹽形式之2mg化合物32(>95%純度，Rt：7.78分鐘)及0.2mg R,S異構體(Rt：7.10分鐘)。LCMS-ESI：710.7[M-H]-(C20H22F2N10O9P2S2之計算值：710.05)；1H NMR(400MHz,45℃,D2O)δ 8.62(s,1H),8.29(s,1H),7.94(s,1H),6.47(d,J=8.8Hz,1H),6.40(d,J=18.0Hz,1H),5.93(m,1H),5.82(d,J=12.0Hz,1H),5.70-5.59(m,2H),4.97(s,1H),4.91(s,1H),4.51(d,J=9.6Hz,1H),4.40(d,J=10.4Hz,1H),4.31-4.27(m,1H),3.37-3.32(q,J=5.6Hz,10H),1.43(t,J=6.0Hz,15H)。19F NMR(376MHz,45℃,D2O)δ -197.6--197.9；-198.6--198.8,31P NMR(162MHz,45℃,D2O)δ 55.1；53.7。
亦在最終純化步驟中以雙三乙銨鹽形式分離化合物3'2'-RS-(2'F-G)(3'F-A)(32a)。1H NMR(400MHz,45℃,D2O)δ 8.62(s,1H),8.29(s,1H),6.47(d,J=8.8Hz,1H),6.12(d,J=18Hz,1H),5.93-5.59(m,4H),4.98(d,J=25.6Hz,1H),4.52-4.27(m,3H),3.34(q,J=5.6Hz,10H),1.43(t,J=6Hz,15H)。
亦在最終純化步驟中以雙三乙銨鹽形式分離化合物3'2'-SS-(2'F-G)(3'F-A)(32b)。1H NMR(400MHz,45℃,D2O)δ 9.02(s,1H),8.38(s,1H),8.04(s,1H),6.48(d,J=8.0Hz,1H),6.40(d,J=18.8Hz,1H),6.08-5.55(m,4H),4.90(d,J=25.2Hz,1H),4.67-4.25(m,3H),3.33(q,J=5.6Hz,14H),1.42(t,J=6.0Hz,22H)。
實例8：合成3'2'-RR-(2'F-G)(A)(35)及3'2'-RS-(2'F-G)(A)(35a)
根據以下流程8製備3'2'-RR-(2'F-G)(A)(35)，亦稱為二硫基-[R P,R P]-環-[2'F-G(3',5')p-A(2',5')p]：
步驟1：製備膦酸氫(2R,3R,4R,5R)-4-氟-2-(羥基甲基)-5-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(29)：向化合物27(2.0g，2.3mmol)於MeCN(14mL)及H2O(0.09mL)中之溶液中添加三氟乙酸吡錠(587mg，3.03mmol)。在十分鐘之後，向無色反應溶液中引入第三丁基胺(11.5mL)。在五分鐘之後，在減壓下濃縮無色溶液且在與 MeCN(20mL)一起濃縮之後以共沸物形式移除水。用MeCN(15mL)再重複此共沸過程兩次，得到無色發泡體，其含有N-(9-((2R,3R,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-氟-4-羥基四氫呋喃-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺及化合物28之混合物(參見實例7)。向含此混合物之1,4-二噁烷(20mL)中添加SalPCl(0.197g，1.0mmol)於1,4-二噁烷(10mL)中之溶液。在五分鐘之後，向桃色反應混合物中添加吡啶(6.5mL)。在35分鐘之後，在室溫下向反應混合物中引入水(4mL)，且在十分鐘之後，將反應混合物倒入1N NaHCO3水溶液(100mL)中。此水性混合物用EtOAc(3×100mL)萃取。合併EtOAc萃取物且濃縮至乾燥，得到無色發泡體。無色發泡體溶解於CH2Cl2(25mL)中，得到無色溶液。向此無色溶液中添加水(0.3mL)及DCA於CH2Cl2中之6%(v/v)溶液(25mL)。在室溫下攪拌十分鐘之後，向橙色溶液中裝入吡啶(3.0mL)，其使橙色溶液變成白色混合物。在真空中濃縮此白色混合物且在與MeCN(30mL)一起濃縮之後以共沸物形式移除水。用MeCN(30mL)再重複此共沸過程一次。在最後一次蒸發後，所得化合物29之桃色溶液留存於MeCN(6mL)中。
步驟2：製備膦酸氫(2R,3R,4R,5R)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-2-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)偶磷醯基)氧基)甲基)-4-氟-5-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(33)：化合物13(參見實例4，3.3g，3.4mmol)於MeCN(15mL)中之溶液在真空中經由濃縮乾燥，直至殘留5mL溶液。向此5mL溶液中添加MeCN(10mL)且在真空中濃縮溶液直至殘留5mL溶液。再重複 此過程兩次以便以共沸物形式移除水。在最後一次共沸後，將十個3Å分子篩引入化合物13於MeCN(5mL)中之溶液且此溶液儲存在氮氣氛圍下。向具有殘餘二氯乙酸吡啶-1-鎓之化合物29於MeCN(6mL)中之攪拌混合物中添加化合物13於MeCN(5mL)中之溶液。在五分鐘之後，向攪拌混合物中添加DDTT(530mg，2.6mmol)，其產生黃色溶液。在1小時之後，在減壓下濃縮黃色混合物，得到呈黃色油狀之化合物33。
步驟3：製備受保護之3'2'-二硫基-(2'F-G)(A)(34)：向化合物33於CH2Cl2(55mL)中之溶液中添加水(0.4mL)及DCA於CH2Cl2中之6%(v/v)溶液(50mL)。在室溫下攪拌十分鐘之後，向橙色溶液中裝入吡啶(20mL)，其使橙色溶液變成黃色混合物。在真空中濃縮黃色混合物直至殘留約15mL黃色混合物。向黃色混合物中引入吡啶(33mL)且蒸發混合物直至殘留約15mL黃色混合物。向黃色混合物中添加吡啶(50mL)且濃縮混合物直至殘留約15mL黃色混合物，且重複添加吡啶及蒸發至20mL。向混合物中添加額外量的吡啶(50mL)。向含攪拌黃色混合物之吡啶(70mL)中添加DMOCP(1.4g，7.5mmol)。在五分鐘之後，向深橙色溶液中添加水(1.4mL)，接著立即引入3H-1,2-苯并二硫醇-3-酮(0.6g，3.5mmol)。在八分鐘之後，將深橙色溶液倒入1N NaHCO3水溶液(400mL)中。在十五分鐘之後，兩相混合物用EtOAc(250mL)萃取。在分離各層之後，水層用EtOAc(250mL且接著150mL)反萃取兩次。合併且濃縮有機萃取物。向經濃縮之黃色油中添加甲苯(75mL)且蒸發混合物以移除殘餘吡啶。用甲苯(75mL)重複此程序一次。藉由矽膠層析(0%至10% MeOH/CH2Cl2)純化所得油，得到呈黃色油狀之化合物34(1.0g，43%)。
步驟4：製備3'2'-RR-(2'F-G)(A)(35)：向化合物34(816mg，0.08 mmol)於EtOH(4.0mL)中之攪拌溶液中添加AMA(12.0mL)且黃色漿料加熱至50℃。在三小時之後，使橙色溶液冷卻且在真空中濃縮。向殘餘米色固體中引入三氫氟化三乙胺(5.1mL)且黃色溶液加熱至40℃。在兩小時之後，使黃色溶液冷卻至室溫。此黃色溶液緩慢添加至1M TEAB(31mL)及TEA(5mL)之經冷卻溶液中。攪拌黃色混合物30分鐘，接著藉由逆相矽膠層析(0%至20% MeCN/10mM TEAA水溶液)純化，在凍乾之後得到自R,S非對映異構體(Rt：6.11分鐘)以白色雙三乙銨鹽形式分離之化合物35(104mg，38%，純度95%)。LCMS-ESI：707.80[M-H]-(C20H23FN10O10P2S2之計算值：708.53)；Rt：6.67分鐘，藉由LCMS條件(經10分鐘2%至50% MeCN/20mM NH4OAc水溶液)。1H NMR(400MHz,45℃,D2O)δ 8.64(s,1H),8.30(s,1H),7.94(s,1H),7.90(d,J=6.8Hz,1H),7.68(t,J=6.8Hz,1H),6.41(s,1H),6.40(d,J=24.8Hz,1H),5.85(d,J=51.0Hz,1H),5.52(m,2H),4.92(br s,1H),4.77-4.62(m,4H),4.50(m,1H),4.36(m,1H),4.27(m,1H),3.34(q,J=7.0Hz,12H),1.42(t,J=7.0Hz,18H)。19F NMR(400MHz,45℃,D2O)δ 198.71,198.82.31P NMR(45℃,D2O)δ 55.19,53.07。
在最終純化步驟中以雙三乙銨鹽形式分離3'2'-RS-(2'F-G)(A)(35a)。LCMS-ESI：707.80[M-H]-(C20H23FN10O10P2S2之計算值：708.53)；Rt：6.15min，藉由LCMS條件(經10分鐘2%至50% MeCN/20mM NH4OAc水溶液)。1H NMR.(400MHz,45℃,D2O)δ 8.76(s,1H),8.35(s,1H),8.05(s,1H),6.45-6.37(m,2H),6.05(s,1H),65.91(s,1H),5.7-5.6(m,1H),5.51-5.48(m,1H),4.75-4.54(m,4H),4.31-4.20(m,2H),3.33(q,J=6.8Hz,6H),2.05(s,8H),1.41(t,J=6.8Hz,6H)。19P NMR(400MHz,45℃,D2O)δ 58.10。
在此反應之按比例擴大模型中，以化合物27(5.0g，5.9mmol)替代化合物29為起始物質且使用化合物13(7.5g，7.7mmol)，且根據上文進行至純化步驟，在凍乾之後以白色三乙銨鹽形式分離3'2'-SR-(2'F-G)(A)(35b，90.3mg，2%)：LCMS-ESI：709.70[M+H]-(C20H23FN10O10P2S2之計算值：708.53)；Rt：5.13min，藉由LCMS條件(經10分鐘2%至80% MeCN/20mM NH4OAc水溶液)。1H NMR.(400MHz,D2O)δ 8.79(s,1H),8.08(s,1H),7.76(s,1H),6.16-6.09(m,2H),5.77-5.65(d,J=40Hz,1H),5.45-5.56(m,1H),5.58-5.45(m,2H),5.31-5.23(m,1H),4.51(s,1H),4.39-4.30(m,3H),4.25-4.20(m,1H),4.03-4.00(m,1H),3.96-3.93(m,1H),3.05(q,J=8.8Hz,18H),1.81(s,4H),1.12(t,J=8.8Hz,27H)。19F NMR(400MHz,D2O)δ -200.98至-201.21。31P NMR(400MHz,D2O)δ 58.06,53.35。
實例9：酶促合成2'3'-(G)(2'F-A)(38)
根據以下流程9以酶促方式製備2'3'-(G)(2'F-A)(38)，亦稱為環-[G(2',5')p-2'F-A(3',5')p]：
一式兩份地平行進行反應：向100mM水性2'F-dATP(36，250μL， 0.025mmol；N-1007，TriLink Biotechnologies,San Diego,CA,USA)、100mM水性GTP(37，250μL，0.025mmol，Sigma目錄號51120)、鯡魚精子DNA溶液(250μL，10mg/mL水溶液；#9605-5-D，Trevigen Inc.,Gaithersburg,MD,USA)及人類cGAS(1500μL，2.1mg/mL，如下一段中所描述製備)中添加反應緩衝液(50mM TRIS、2.5mM乙酸鎂、10mM KCl，pH值用5M NaOH水溶液調節至8.2；25mL)。反應物在定軌振盪器上在37℃及150rpm下培育16小時。經由對反應混合物之等分試樣(100μL)之分析確認反應完成，用乙腈(100μL)稀釋，離心且藉由UV分析測定所需化合物形成。反應物與乙腈(20mL)混合，在定軌振盪器上在室溫下培育10分鐘且在後續離心(7000g保持5分鐘)之後，經由紙過濾器過濾上清液。濾液與乙酸(100μL)混合且直接裝載至20×250mm Inertsil Amide 5μm管柱上(流動速率30mL/min；溶劑A：10mM乙酸銨水溶液、2mM乙酸，溶劑B：乙腈；使用等度溶離，使用26%相A/74%相B，溶離尺寸50mL)。合併含有所需化合物38之溶離份且在真空中蒸發溶劑至約10mL之最終體積。來自第一次層析之經濃縮之化合物38溶液藉由直接注射至1×50cm Sephadex G10 HPLC管柱上(流動速率1.0mL/min；含有0.25mM氫氧化銨及25%乙腈之移動相)再純化，且在250nm下進行UV偵測。合併所有含有所需化合物38之溶離份且藉由凍乾乾燥，得到4.5mg呈雙銨鹽形式之化合物38；1H NMR(600.1MHz,D2O)δ 8.35(br s,1H),8.06(br s,1H),7.77(s,1H),6.31(d,J=12.8Hz,1H),5.86(s,1H),5.62(s,1H),5.35(d,J=50.8Hz,1H),4.97(d,J=19.0Hz,1H),4.46(s,1H),4.42(s,1H),4.33(s,1H),4.24(s,1H),4.21(s,2H),3.97(s,1H)；MS m/z 677.2[M+H]+。
藉由人類及小鼠cGAS之選殖及表現來製備此實例及實例10中使用之cGAS。將包含胺基酸155-522(人類)及胺基酸147-507(小鼠)之人類或小鼠cGAS之編碼區選殖至基於pET之表現載體中。所得表現構築體含有N端6x-His標籤，隨後為ZZ標籤及經工程改造之HRV3C蛋白酶裂解側，從而可產生具有Gly-Pro之N端擴展之人類cGAS 155-522及小鼠cGas 147-507。兩種質體在大腸桿菌菌株BL21(DE3)噬菌體耐受性細胞(C2527H，New England BioLabs,Ipswich,MA)中經轉型以用於細菌表現。具有cGas表現質體之噬菌體耐受性大腸桿菌細胞BL21(DE3)在Infors生物反應器中以1.5L規模表現。預先培養物在LB培養基中生長。
含有卡那黴素(Kanamycin)(50μg/mL)之1.5L自誘導培養基(Studier，Protein Expr Purif.2005 May；41(1)：207-34)用100mL預先培養物接種且在以下條件下培育至約10之OD：溫度37℃；攪拌器(經由pO2進行級聯調節)500；pH 7.0；pO2(級聯調節開啟)5%；流動速率2.5L/min；及氣體混合物(經由pO2進行級聯調節)0。接著溫度降低至18℃且進行表現隔夜。藉由離心收集細胞且使用Avestin EmulsiFlex French壓機溶解。使用Ni親和層析(一種用於移除DNA之肝素純化步驟)及最終尺寸排阻層析，根據Kato等人(PLoS One,2013,8(10)e76983)之公開方案進行純化。cGAS溶離成均質溶離份且濃縮至至少5mg/mL。
人類cGAS：GPDAAPGASK LRAVLEKLKL SRDDISTAAG MVKGVVDHLL LRLKCDSAFR GVGLLNTGSY YEHVKISAPN EFDVMFKLEV PRIQLEEYSN TRAYYFVKFK RNPKENPLSQ FLEGEILSAS KMLSKFRKII KEEINDIKDT DVIMKRKRGG SPAVTLLISE KISVDITLAL ESKSSWPAST QEGLRIQNWL SAKVRKQLRL KPFYLVPKHA KEGNGFQEET WRLSF-SHIEK EILNNHGKSK TCCENKEEKC CRKDCLKLMK YLLEQLKERF KDKKHLDKFS SYHVKTAFFH VCTQNPQDSQ WDRKDLGLCF DNCVTYFLQC LRTEKLENYF IPEFNLFSSN LIDKRSKEFL TKQIEYERNN EFPVFDEF(SEQ ID NO：7)
實例10：酶促合成2'3'-(3'F-G)(2'F-A)(40)
根據以下流程10以酶促方式製備2'3'-(3'F-G)(2'F-A)(41)，亦稱為環-[3'F-G(2',5')p-2'F-A(3',5')p]：
反應平行進行四次，各自以26mL規模進行：向100mM 2'F-dATP水溶液(36，250μL，0.025mmol)、100mM 3'F-d GTP水溶液(39，250μL，0.025mmol；N-3002，TriLink Biotechnologies)、鯡魚精子DNA溶液(800μL，10mg/mL水溶液；#9605-5-D，Trevigen Inc.)及小鼠cGAS製劑(250μL，6.5mg/mL，如上文關於人類cGAS所描述製備)中添加反應緩衝液(50mM TRIS、2.5mM乙酸鎂，pH值用5M NaOH水溶液調節至8.2；25mL)。反應物在定軌振盪器上在37℃及150rpm下培育16小時。反應物與乙腈(20mL)混合且在定軌振盪器上在室溫下培育10分鐘。在後續離心(7000g保持5分鐘)之後，合併所有四次反應之上清液且經由 紙過濾器過濾。濾液在真空中蒸發至約20mL之殘餘體積且與0.5mL乙酸(0.5mL)及1.0M乙酸三乙銨水溶液(5mL)混合。粗物質直接注射至Chromolith RP18e 2.1×10cm管柱上。進行層析(流動速率80mL/min；等度移動相10mM乙酸三乙銨及1體積%乙腈)產生所需化合物40溶離份，將其合併，與25%氨水溶液(20μL)混合且藉由凍乾乾燥。獲得呈雙三乙銨鹽形式之化合物40；39.8mg；1H NMR(600.1MHz,D2O)δ 8.16(s,1H),8.13(s,1H),7.73(s,1H),6.33(d,J=13.9Hz,1H),5.91(d,J=8.6Hz,1H),5.61(m,1H),5.40(dd,J=51.5,2.6Hz,1H),5.30(dd,J=53.3,3.2Hz,1H),4.98(m,1H),4.56(d,J=25.8Hz,1H),4.44(d,J=9.0Hz,1H),4.39(d,J=11.8Hz,1H),4.20(m,1H),4.08(d,J=12.4Hz,1H),4.04(d,J=11.8Hz,1H),3.06(q,J=7.3Hz,12H),1.13(t,J=7.3Hz,18H)；31P NMR(376.4MHz,D2O)δ -1.68,-2.77；19F NMR(376.4MHz,D2O)δ -199.72,-203.23；MS 677.2[M-1]-。
小鼠cGAS：GPDKLKKVLD KLRLKRKDIS EAAETVNKVV ERLLRRMQKR ESEFKGVEQL NTGSYYEHVK ISAPNEFDVM FKLEVPRIEL QEYYETGAFY LVKFKRIPRG NPL-SHFLEGE VLSATKMLSK FRKIIKEEVK EIKDIDVSVE KEKPGSPAVT LLIRNPEEIS VDIILALESK GSWPISTKEG LPIQGWLGTK VRTNLRREPF YLVPKNAKDG NSFQGETWRL SF-SHTEKYIL NNHGIEKTCC ESSGAKCCRK ECLKLMKYLL EQLKKEFQEL DAFCSYHVKT AIFHMWTQDP QDSQWDPRNL SSCFDKLLAF FLECLRTEKL DHYFIPKFNL FSQELIDRKS KEFLSKKIEY ERNNGFPIFD KL(SEQ ID NO：8)
實例11：合成2'3'-RR-(3'H-A)(2'F-A)(45)及2'3'-RS-(3'H-A)(2'F-A)(45a)
根據以下流程11製備2'3'-RR-(3'H-A)(2'F-A)(45)，亦稱為二硫基-[R P,R P]-環-[3'H-A(2',5')p-2'F-A(3',5')p]，及2'3'-RS-(3'H-A)(2'F-A)(45a)，亦稱為二硫基-[R P,S P]-環-[3'H-A(2',5')p-2'F-A(3',5')p]：
步驟1：製備膦酸氫(2R,3R,5S)-2-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-(羥基甲基)四氫呋喃-3-基酯(42)：向N-(9-((2R,3R,5S)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-羥基四氫呋喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲醯胺(41，1.0g，1.5mmol，Berry & Associates,Dexter,MI)於1,4-二噁烷(16mL)及吡啶(6mL)中之溶液中添加SalPCl(462mg，2.3mmol)於1,4-二噁烷(8mL)中之溶液。在室溫下30分鐘之後，將反應混合物倒入1N NaHCO3水溶液(100mL)中。此水性混合物用EtOAc(3×100mL)萃取且分配各層。合併EtOAc萃取物且在真空中濃縮至乾燥，得到呈無色固體狀之中間物。使無色固體溶解於CH2Cl2(15mL)中，得到無色溶液。向此溶液中添加水(270μL)及DCA於CH2Cl2中之6%(v/v)溶液(15mL)。在室溫下攪拌10分鐘之後，向紅色溶液中添加吡啶(2mL)。所得白色混合物在真空中濃縮且在與MeCN(50mL)一起濃縮之後以共沸物形式移除水。用MeCN(50mL)再重複此共沸過程兩次。在最後一次蒸發後，所得化合物42之淺桃色油留存於MeCN(20mL)中。
步驟2：製備膦酸氫(2R,3R,5S)-5-2-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)偶磷醯基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基酯(43)：在真空中乾燥(2-氰基乙基)二異丙基胺基磷酸(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯(2，1.7g，2.0mmol，ChemGenes)於MeCN(20mL)中之溶液。再重複此過程兩次以便以共沸物形式移除水，在最後一次共沸之後留下化合物2於MeCN中之溶液(10mL)。引入十個3Å分子篩且溶液儲存在氮氣氛圍下。向化合物42與殘餘 二氯乙酸吡啶-1-鎓於MeCN(20mL)中之攪拌混合物中添加化合物2於MeCN(10mL)中之溶液。在8分鐘之後，向攪拌混合物中添加DDTT(350mg，1.7mmol)。在1小時之後，在真空中濃縮黃色混合物，得到呈黃色油狀之化合物43。
步驟3：製備受保護之2'3'-二硫基-(3'H-A)(2'F-A)(44)：向化合物43於CH2Cl2中之黃色溶液(28mL)中添加水(190μL)及DCA於CH2Cl2中之6%(v/v)溶液(26mL)。在室溫下10分鐘之後，將吡啶(6mL)引入紅色溶液。在真空中濃縮所得黃色溶液直至殘留約8mL黃色混合物。向黃色混合物中引入吡啶(30mL)且在真空中濃縮混合物直至殘留約15mL黃色混合物。向黃色混合物中添加吡啶(20mL)且在真空中濃縮混合物，直至殘留約15mL黃色混合物。向殘餘溶液(15mL)中添加吡啶(25mL)且在真空中濃縮混合物，直至殘留約24mL黃色混合物。向含攪拌黃色混合物之吡啶(24mL)中添加DMOCP(845mg，4.6mmol)。在5分鐘之後，向淺棕黃色溶液中添加水(0.8mL)，接著立即引入3H-1,2-苯并二硫醇-3-酮(385mg，2.3mmol)。在20分鐘之後，將淺棕黃色溶液倒入1N NaHCO3水溶液(100mL)中。在20分鐘之後，用EtOAc(400mL)萃取兩相混合物。在分離之後，水層用EtOAc(400mL)反萃取。合併有機萃取物且在真空中濃縮。向經濃縮之黃色油中添加甲苯(30mL)且在真空中蒸發混合物以移除殘餘吡啶。用甲苯(30mL)再重複此程序兩次。藉由矽膠層析(0%至10% MeOH/CH2Cl2)純化所得油，得到呈橙色發泡體狀之化合物44(323mg)。
步驟4：製備2'3'-RR-(3'H-A)(2'F-A)(45)及2'3'-RS-(3'H-A)(2'F-A)(45a)：向化合物44(323mg，0.36mmol)於MeOH(3.5mL)中之混合物 之攪拌溶液中添加30% NH4OH水溶液(2mL)且乳白色漿料在50℃下加熱。在2小時之後，使橙色溶液冷卻至室溫。在1小時之後，在真空中濃縮橙色溶液。藉由逆相矽膠層析(0%至20% MeCN/10mM TEAA水溶液)純化橙色殘餘物，在凍乾之後得到呈白色參-三乙銨形式之化合物45(68.0mg，57%產率)。LCMS-ESI：677.05[M+H]+(C20H23FN10O8P2S2之計算值：676.06)Rt：2.111min，藉由UPLC條件(經10分鐘2%至20% MeCN/20mM NH4OAc水溶液)。1H NMR(400MHz,45℃,D2O)δ 8.49(s,1H),8.43(s,1H),8.41(s,1H),8.32(s,1H),6.60(d,J=17Hz,1H),6.33(s,1H),5.84(dd,J=51,1Hz,1H),5.49(t,J=3.6Hz,1H),5.40-5.22(m,1H),4.85-4.65(m,4H),4.45-4.37(m,1H),4.31-4.18(m,1H),3.33(q,J=7.2Hz,18H),3.05-2.95(m,1H),2.75-2.65(m,1H),1.42(t,J=7.2Hz,27H)。31P NMR(45℃,D2O)δ 56.19,53.18。
在凍乾之後，亦在逆相層析步驟中純化之後以白色雙三乙銨鹽形式分離化合物2'3'-RS-(3'H-A)(2'F-A)(45a)(22mg，18%)。LCMS-ESI：677.05[M+H]+(C20H23FN10O8P2S2之計算值：670.06)；Rt：1.880min，藉由相同UPLC條件。1H NMR.(400MHz,45℃,D2O)δ 8.77(s,1H),8.38(s,1H),8.35(s,1H),8.27(s,1H),6.59(d,J=16Hz,1H),6.23(br s,1H),6.11(d,J=49Hz,1H),5.51(br s,1H),5.41-5.24(m,1H),4.78-4.63(m,3H),4.35-4.29(m,3H),3.33(q,J=7.2Hz,12H),2.84(br s,2H),1.42(t,J=7.2Hz,18H)。31P NMR(45℃,D2O)δ 54.10,52.27。
實例12：合成2'3'-RR-(3'F-G)(2'F-A)(49)及2'3'-RS-(3'F-G)(2'F-A)(49a)
根據以下流程12製備2'3'-RR-(3'F-G)(2'F-A)(49)，亦稱為二硫基- [R P,R P]-環-[3'F-G(2',5')p-2'F-A(3',5')p]，及2'3'-RS-(3'F-G)(2'F-A)(49a)，亦稱為二硫基-[R P,S P]-環-[3'F-G(2',5')p-2'F-A(3',5')p]：
步驟1：製備膦酸氫(2R,3S,4R,5R)-4-氟-5-(羥基甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(46)：向N-(9-((2R,3S,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四 氫呋喃-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺(i16，501mg，1.2mmol)於1,4-二噁烷(7mL)及吡啶(2.3mL)中之溶液中添加SalPCl(207mg，1.0mmol)於1,4-二噁烷(5mL)中之溶液。在1小時之後，在室溫下向攪拌反應混合物中引入水(1.2mL)，且在30分鐘之後，將所得混合物倒入1N NaHCO3水溶液(50mL)中。此水性混合物用EtOAc(3×40mL)萃取且分配各層。合併EtOAc萃取物且在真空中濃縮至乾燥。殘餘物藉由正相矽膠層析(1%至50% MeOH(具有0.5%吡啶)/DCM)純化，得到呈無色油狀之中間物。使無色油溶解於CH2Cl2(15mL)中，得到無色溶液。向此溶液中添加水(150μL)及DCA於CH2Cl2中之7%(v/v)溶液(10mL)。在室溫下攪拌10分鐘之後，向紅色溶液中添加吡啶(1.2mL)。所得白色混合物在真空中濃縮且在與MeCN(30mL)一起濃縮之後以共沸物形式移除水。用MeCN(20mL)再重複此共沸過程兩次。在最後一次蒸發後，所得化合物46之淺桃色油留存於MeCN(15mL)中。
步驟2：製備膦酸氫(2R,3S,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)偶磷醯基)氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(47)：(2-氰基乙基)二異丙基胺基磷酸(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯(2，629mg，0.7mmol，ChemGenes)於MeCN(20mL)中之溶液在真空中經由濃縮乾燥。再重複此過程兩次以便以共沸物形式移除水。在最後一次共沸後，將十個3Å分子篩引入化合物2於MeCN(15mL)中之溶液且溶液儲存在氮氣氛圍下。向化合物46與殘餘二氯乙酸吡啶-1-鎓於MeCN(15mL)中之攪拌 混合物中添加化合物2於MeCN(15mL)中之溶液。在20分鐘之後，向攪拌混合物中添加DDTT(138mg，0.67mmol)。在1小時之後，在真空中濃縮黃色混合物，得到呈黃色漿料狀之化合物47。
步驟3：製備受保護之2'3'-二硫基-(3'F-G)(2'F-A)(48)：向化合物47於CH2Cl2中之溶液(20mL)中添加水(100μL)及DCA於CH2Cl2中之6%(v/v)溶液(20mL)。在室溫下15分鐘之後，向紅色溶液中添加吡啶(10mL)，產生黃色溶液，其在真空中濃縮至約10mL。向黃色混合物中添加吡啶(25mL)且混合物在真空中濃縮至約5mL。向黃色混合物中添加吡啶(20mL)且混合物在真空中濃縮至約5mL，接著添加吡啶(45mL)。向含攪拌黃色混合物之吡啶(50mL)中添加DMOCP(361mg，2.0mmol)。在10分鐘之後，向淺棕黃色溶液中添加水(0.7mL)，接著立即引入3H-1,2-苯并二硫醇-3-酮(158mg，0.9mmol)。在30分鐘之後，將淺棕黃色溶液倒入1N NaHCO3水溶液(100mL)中。在二十分鐘之後，兩相混合物用EtOAc(250mL)萃取。在分離之後，水層用EtOAc(2×100mL)反萃取。合併有機萃取物且在真空中濃縮。向經濃縮之黃色油中添加甲苯(30mL)且在真空中蒸發混合物以移除殘餘吡啶。用甲苯(30mL)再次重複此程序。藉由矽膠層析(0%至40% MeOH/CH2Cl2)純化所得油，得到呈黃色漿料狀之具有雜質之化合物48(259mg，56%產率)。
步驟4：製備2'3'-RR-(3'F-G)(2'F-A)(49)及2'3'-RS-(3'F-G)(2'F-A)(49a)：向化合物48(259mg，0.27mmol)於EtOH(2.5mL)中之混合物之攪拌溶液中添加AMA水溶液(4.8mL)且黃色溶液在50℃下加熱。在2小時之後，使無色溶液冷卻且在真空中濃縮。藉由逆相矽膠層析(0%至20% MeCN/10mM TEAA水溶液)純化無色漿料殘餘物，在凍乾之後得到呈白 色雙三乙銨鹽形式之化合物49(32.0mg，17%產率)。LCMS-ESI：708.85[M-H]-(C20H22F2N10O9P2S2之計算值：710.05)Rt：1.531min，藉由UPLC條件(經10分鐘2%至20% MeCN/20mM NH4OAc水溶液)。1H NMR(400MHz,45℃,D2O)δ 8.44(dd,J=16,1.6Hz,2H),8.03(s,1H),6.60(dd,J=14,1.2Hz,1H),6.17(d,J=9.6Hz,1H),6.09-5.85(m,1H),5.73(d,J=13Hz,1H),5.60(d,J=16Hz,1H),5.49-5.35(m,1H),4.87(d,J=24.8Hz,1H),4.80-4.65(m,2H),4.32-4.30(m,3H),3.33(q,J=7.2Hz,12H),1.42(t,J=7.2Hz,18H)。19F NMR(400MHz,45℃,D2O)δ -198.34至-198.55。31P NMR(45℃,D2O)δ 55.69,52.08。
在凍乾之後，在逆相層析步驟中純化之後以白色半三乙銨鹽形式分離化合物2'3'-RS-(3'F-G)(2'F-A)(49a)(7.35mg，4%)。LCMS-ESI：708.95[M-H]-(C20H22F2N10O9P2S2之計算值：710.5)；Rt：1.298min，藉由相同UPLC條件。1H NMR.(400MHz,45℃,D2O)δ 8.45(s,1H),8.37(s,1H),8.16(s,1H),6.62(d,J=15Hz,1H),6.19(s,1H),6.03(d,J=49Hz,1H),5.79-5.65(m,2H),5.40-5.28(m,1H),4.94(d,J=24Hz,1H),4.75-4.67(m,2H),4.46(s,1H),4.35(s,2H),3.33(s,3H),1.41(s,5H)。19F NMR(400MHz,45℃,D2O)δ -198.63至-198.70,-201.57。
實例13：合成二硫基--2'3'-(3'βF-A)(A)(53)
根據以下流程13製備二硫基-2'3'-(3'βF-A)(A)(53)，亦稱為二硫基-環-[3'βF-A(2',5')p-A(3',5')p]：
步驟1：在11mL無水二噁烷中藉由化合物i13(1.0g，1.5mmol)與如實例3中所描述類似地製備化合物6，相繼添加吡啶(6mL)及含2-氯-4H- 1,3,2-苯并二氧雜磷-4-酮(390mg，1.92mmol，Sigma Aldrich)之1.5mL二噁烷，攪拌16小時。添加水(3.0mL)且將反應混合物分配於1N NaHCO3水溶液/EtOAc之間，且用EtOAc(×3)萃取。合併有機層且乾燥(Na2SO4)，在真空中移除溶劑且藉由矽膠層析(梯度溶離0%至30% MeOH/CH2Cl2)純化所得油，得到呈白色固體狀之化合物6(418mg，38%產率)。開始回收未反應之起始物質且再經歷反應條件，得到額外50mg(27%)化合物6：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.25(s,1H),8.77(s,1H),8.25(s,1H),8.05(d,J=7.1Hz,2H),7.65(t,J=7.4Hz,1H),7.55(t,J=7.6Hz,2H),7.46-7.37(m,2H),7.33-7.15(m,7H),6.86(t,J=9.3Hz,4H),6.24(s,1H),5.98(s,1H),5.39(d,J=54.2Hz,1H),5.26-5.11(m,1H),4.72-4.40(m,1H),3.72(s,6H),3.30(s,2H)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ -199.22；31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δ 0.08；LCMS(方法F)Rt：1.72min；m/z 740.1[M+H]+。
步驟2：製備膦酸氫(2R,3S,4S,5R)-2-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)偶磷醯基)氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯(51)：(步驟2a)向化合物6(468mg，0.63mmol)於DCM(5mL)中之溶液中相繼添加水(0.100mL)及6mL 6% DCA之DCM溶液。攪拌反應混合物10分鐘，接著用吡啶(0.700mL)淬滅且在真空中濃縮。所得油使用無水MeCN(3×10mL)共沸，得到呈澄清黃色油狀之粗化合物7(277mg，0.63毫莫耳，粗物質)：LCMS(方法G)Rt：0.38min；m/z 438.1[M+H]+。藉由在真空中與MeCN(3×10mL)共沸來乾燥胺基磷酸酯17(613mg，0.62 mmol，0.9eq，Chemgenes)，隨後使其與3A烘乾分子篩一起溶解於無水MeCN(3mL)中。此溶液經由滴管添加至粗化合物7於MeCN中之攪拌溶液(5mL)中。在室溫下攪拌反應混合物一小時，接著添加DDTT(169mg，0.82mmol，1.3eq)；再過45分鐘之後，在真空中濃縮反應混合物得到呈非對映異構體之粗混合物形式之化合物51(859mg，0.63mmol)：LCMS(方法F)Rt 2.31及2.34min；m/z 1357.3[M+H]+。
步驟3：受保護之二硫基-2'3'-(3'βF-A)(A)(52)：向化合物51(859mg，0.63mmol)於DCM(10mL)中之溶液中相繼添加水(80μL)及含6% v/v DCA之DCM(6mL)。攪拌反應混合物10分鐘且用吡啶(2mL)淬滅。在真空中濃縮混合物以移除DCM，接著在真空中相繼與MeCN(2×10mL)及無水吡啶(2×30mL)一起共沸。使後一種溶液減少至20mL，隨後相繼添加吡啶(20mL)及DMOCP(351mg，1.9mmol，3.0eq)。接著攪拌反應混合物一小時，隨後添加水(80μL)，接著立即添加3H-1,2-苯并二硫醇-3-酮(160mg，0.95mmol，1.5eq)。攪拌反應物2小時，接著分配於1N NaHCO3(100mL)/EtOAc之間且用EtOAc(3×20mL)萃取。在真空中濃縮合併之有機層，得到黏稠的琥珀色油。此物質在真空中與MeCN(4×100mL)一起共沸且藉由矽膠層析(梯度溶離0%至20% MeOH/CH2Cl2)純化所得半固體化合物52，接著進行HPLC純化(X-bridge 30×50mm 5μm管柱；MeCN/H2O(具有5mM NH4OH))，得到兩種非對映異構體：52a(10mg,1.5%)LCMS(方法F)Rt：1.70min；m/z 1068.3[M+H]+；及52b(35mg,5%)1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.20(d,J=17.7Hz,2H),8.87-8.65(m,3H),8.36(s,1H),8.05(d,J=7.6Hz,7H),7.70-7.41(m,8H),6.35(s,1H),6.14(s,2H),5.97(d,J=51.4Hz,1H),5.17- 4.98(m,3H),4.58(t,J=5.6Hz,1H),4.36-4.06(m,1H),3.88(d,J=13.2Hz,1H),2.89(d,J=12.9Hz,2H),0.88(s,9H),0.13(s,3H),0.11(s,3H)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ -203.48；31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δ 65.09,53.10；LCMS(方法F)Rt：1.82min；m/z 1068.3[M+H]+。
步驟4：製備二硫基-2'3'-(3'βF-A)(A)(53)：向主要非對映異構體化合物52b(35mg，0.03mmole，1eq)於MeOH(600μL)中之溶液中添加濃NH4OH(255μL)且溶液加熱至50℃保持5小時。接著混合物冷卻至室溫，在真空中濃縮以移除MeOH，且使用HPLC-C18(X-bridge 30×50mm 5μm管柱MeCN/H2O(具有5mM NH4OH))純化，在凍乾之後得到2'-OTBS中間物(13mg，0.01mmol，49%)：1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ 8.65(s,1H),8.36(d,J=15.1Hz,2H),8.21(s,2H),6.19(s,1H),5.97(d,J=6.0Hz,1H),5.72(d,J=50.5Hz,1H),5.06(dd,J=9.2,3.9Hz,1H),4.97-4.88(m,1H),4.83(d,J=11.4Hz,1H),4.74(s,1H),4.53-4.40(m,1H),4.28-4.02(m,4H),0.88(s,9H),0.00(s,6H)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ -202.66；31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δ 59.85,53.98；LCMS(方法F)Rt：1.53min；m/z 807.1[M+H]+。使此物質(13mg，0.016mmol)溶解於三氫氟化三乙胺(200μL)中且在40℃下加熱3小時。反應物冷卻至室溫且此溶液緩慢添加至1M TEAB(3mL)及三乙胺(0.5mL)之經冷卻之溶液中。攪拌混合物1小時，隨後添加MeCN且溶劑在真空中蒸發至乾燥。使化合物溶解於去離子水(1mL)及MeCN(1mL)中且溶液添加至經預先調節之GE-MiniTrap G-10重力管柱上。在凍乾之後分離呈白色固體狀之粗化合物53(9.2mg，6μmol，37%)，具有過量三 乙銨鹽。在C18矽膠藉由層析(梯度溶離劑0至80% MeCN/水)純化，得到呈其雙三乙銨鹽形式之含有約0.5eq三乙銨鹽之53(未命名之立體化學之立體化學純非對映異構體)：1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.44(s,1H),8.17(d,J=9.4Hz,2H),8.00(s,1H),7.34(d,J=14.0Hz,4H),7.13(s,1H),6.94(s,1H),6.10(s,1H),5.88(d,J=6.5Hz,1H),5.66(d,J=51.3Hz,1H),5.00(s,1H),4.93(s,1H),4.77(s,1H),4.69(s,1H),4.44(s,1H),4.19(s,1H),4.13-3.95(m,3H),3.06(s,15H),1.16(t,J=7.2Hz,23H)；19F NMR(376MHz,DMSO)δ -202.86；31P NMR(162MHz,DMSO)δ 60.06,54.06；C20H23FN10O9P2S2之HRMS計算值693.0627，實驗值693.0629[M+H]+。
藉由各樣品指示在此實例中使用之HPLC方法。方法F：使用Waters System記錄LCMS資料(Micromass SQ質譜儀；管柱：Acquity UPLC BEH C18 1.7μ，2.1×30mm；梯度1%至30%乙腈至3.20分鐘，接著梯度：1.55分鐘週期內30-98%乙腈/水(具有5mM氫氧化銨)，隨後在5.19分鐘恢復1%乙腈-總運行時間5.2分鐘；流動速率1mL/min；管柱溫度50℃)。方法G：使用Waters System記錄LCMS資料(Micromass SQ質譜儀；管柱：Acquity UPLC BEH C18 1.7μ，2.1×30mm；梯度1%至30%乙腈至1.20分鐘，接著梯度：0.55分鐘週期內30-98%乙腈/水(具有5mM氫氧化銨)，隨後在2.19分鐘恢復1%乙腈-總運行時間2.2分鐘；流動速率1mL/min；管柱溫度50℃)。
實例14：單及二-F-ML-CDN化合物與經純化之STING蛋白質之活體外結合分析
經由與以下引子之聚合酶鏈反應，自含有人類STING對偶基因之全長序 列擴增編碼胺基酸140-379之DNA(胺基酸編號對應於Swiss Prot Q86WV6)：正向TACTTCCAATCCAATGCAGCCCCAGCTGAGATCTCTG(SEQ ID NO：9)及反向TTATCCACTTCCAATGTTATTATTATCAAGAGAAATCCGTGCGGAG(SEQ ID NO：10)。STING變異體對偶基因係根據Yi等人，(2013),PLoS One,8(10),e77846(DOI：10.1371/journal.pone.0077846指定。使用非接合依賴性選殖(Aslanidis等人，(1990)Nucleic acids research,18.20,6069-6074)將PCR產物選殖至編碼N端己組胺酸親和力標籤(6×HIS)之細菌表現載體中，接著選殖至小型泛素類調節子(SUMO)可溶性序列(Butt等人，(2005)Protein expression and purification 43.1,1-9)及菸草蝕刻病毒蛋白酶裂解位點(TEV)中。
編碼6×HIS-SUMO-TEV-STING胺基酸140-379之質體轉型成Rosetta2(DE3)大腸桿菌細胞(EMD Millipore)以用於蛋白質表現。細胞在潛溶型培養液中在37℃下生長直至600nM吸光度達到0.6。接著細胞轉移至18℃且藉由以0.25mM之濃度向培養基中添加異丙基β-D-1-硫代半乳糖苷來誘導蛋白質表現隔夜。藉由在6,000倍重力下離心10分鐘來收集細胞。細胞集結粒在含有50mM Tris鹽酸鹽(Tris-HCl)pH 7.5、500mM氯化鈉(NaCl)、20mM咪唑、10%丙三醇、1mM參(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽(TCEP)及蛋白酶抑制劑錠劑(Pierce)之緩衝液(緩衝液A)中再懸浮於冰上。使用S-450D細胞破碎儀(Emmerson industrial)在冰上溶解細胞。細胞溶解物在4℃下在15,000倍重力下離心30分鐘。可溶性材料施用於鎳-氮基三乙酸(Ni-NTA)偶合之Sepharose CL-6B(Qiagen)1小時，同時在4℃下平緩搖盪。在轉移至重力流多製備型管柱(Bio-Rad)中之後，在緩衝液A中澈底洗滌樹脂。蛋白質自管柱在含有20mM Tris-HCl pH 7.5、150mM NaCl、300mM咪唑、10%丙三醇及0.5mM TCEP之緩衝液中溶離。為了移除6×HIS-SUMO標籤，溶離之蛋白質與TEV蛋白酶(Sigma)以1：250(w：w)之比率混合，且針對含有20mM Tris-HCl pH 7.5、150mM NaCl、5mM咪唑、10%丙三醇及0.5mM TCEP之緩衝液透析隔夜。藉由向樣品中添加Ni-NTA樹脂(Qiagen)來耗盡TEV蛋白酶及6×HIS-SUMO標籤，藉由使用多製備型管柱移除樹脂來收集經純化之STING胺基酸140-379。STING AA140-379用10,000道爾頓分子量截斷離心濃縮器(EMD Millipore)濃縮至約10mg/ml之最終濃度。將蛋白質等分，在液氮中快速冷凍且在-80℃下儲存直至使用。
差示掃描螢光測定法(DSF)為量測配位體結合於且穩定經純化之蛋白質之能力的技術(Niesen等人，(2007)Nature protocols 2.9,2212-2221)。蛋白質在所結合且在疏水性環境中發螢光之染料存在下加熱。藉由加熱使蛋白質熱變性，引起結合於未摺疊之蛋白質之染料及螢光增加。藉由計算變性曲線之半最大值來確定蛋白質變性之溫度中點(Tm)。在配位體存在下，蛋白質之溫度中點與蛋白質之配位體之親和力直接相關，且因此與其在較高溫度下使蛋白質穩定之能力相關。
在包含20mM Tris-HCl pH 7.5、150mM NaCl、SYPRO Orange(Life Technologies)之1：500稀釋物、1mg/ml經純化之STING AA140-379蛋白質及濃度為1mM之配位體的20μL反應物中進行DSF。野生型hSTING、HAQ對偶基因hSTING及REF對偶基因hSTING中之每一者與如表4中列舉之參考化合物及本發明化合物中之每一者一起使用。圖1至3中亦比較磷酸二酯化合物及具有RR配置之二硫代磷酸酯化合物之結果。將樣品放入硬殼PCR盤(Bio-Rad)中。在CFX 96即時PCR機器(Bio-Rad)中以 溫度之函數形式記錄螢光，在HEX通道上讀取，激勵波長450-490，發射波長560-580nm。溫度梯度為自15℃以每15秒0.5℃速率上升至80℃且每隔0.5℃記錄一次。在自不含蛋白質及配位體之樣品減去背景信號之後。藉由針對Boltzmann S形功能(Graph Pad Prism)以溫度之函數形式擬合螢光曲線來計算中點溫度(Tm)。藉由自Tm(僅蛋白質)減去Tm(蛋白質及配位體)來計算在配位體存在下，STING AA140-379之熱穩定性之變化(Tm偏移)。
圖1A(hSTING(WT))、1B(hSTING(HAQ))及1C(hSTING(REF))展 示所測試之多種二硫代磷酸酯連接之RR異構體化合物以及兩種磷酸二酯連接之化合物之Tm偏移。此等圖展示對於野生型及HAQ對偶基因，經氟取代之化合物皆具有大於或等於2'3'-RR-(A)(A)參考化合物(其已證實在小鼠腫瘤模型中有效(Corrales等人，Cell Reports 2015,11：1018-1031))之Tm偏移。參看如表4中所示之所有測試化合物、二-腺嘌呤RR異構體之結果，關於與REF對偶基因之結合，僅2'3'-RR-(3'βF-A)(2'F-A)化合物展示小於2'3'-RR-(A)(A)之Tm偏移。除如上所述之2'3'-RR-(3'βF-A)(2'F-A)以外，對於WT、HAQ對偶基因及REF對偶基因中之每一者，單-或二-經F取代之二-腺嘌呤RR異構體化合物與2'3'-RR-(A)(A)二-OH參考化合物相比具有更大或約相同之Tm偏移。對於RS或SR異構體，儘管此等異構體與相應RR異構體相比皆具有較低Tm偏移，但對於WT、HAQ對偶基因及REF對偶基因中之每一者，化合物2'3'-RS-(3'F-A)(2'F-A)及2'3'-SR-(A)(2'F-A)與二-OH參考物2'3'-SR-(A)(A)相比展示較高Tm偏移。對於腺嘌呤-鳥嘌呤化合物，磷酸二酯連接之2'3'-(G)(2'F-A)及2'3'-(3'F-G)(2'F-A)化合物與二-OH參考化合物2'3'-(G)(A)相比皆具有較高Tm偏移。對於二硫代磷酸酯連接之RR異構體化合物，對於WT、HAQ對偶基因及REF對偶基因中之每一者，2'3'-RR-(G)(2'F-A)及2'3'-RR-(3'F-G)(2'F-A)與二-OH參考物2'3'-RR-(G)(A)相比具有較高Tm偏移。3'2'-RR-(2'F-G)(3'F-A)及3'2'-RR-(2'F-G)(A)化合物展示與所有對偶基因之良好結合。對於鳥嘌呤-腺嘌呤化合物之RS或SR異構體，參考化合物不可用。基於Tm偏移，如本文中所描述之單-及二-F-ML-CDN化合物展示與STING之良好結合，其中對於WT、HAQ對偶基因及REF對偶基因中之每一者，許多測試化合物與二-OH參考化合物相比展示較高Tm偏移。
實例15：hPBMC中由單-及二-F-ML-CDN化合物進行之I型干擾素之誘導
在人類原發性血液單核細胞(hPBMC)中量測I型干擾素之誘導，以評估如本文中所描述之單-或二-F-ML-CDN化合物之效能。使用來自三種獨特供體之hPBMC：一種供體為野生型(WT)STING對偶基因(STINGWT/WT)之同型接合子，一種供體為所謂的參考物(REF)(R232H)STING對偶基因(STINGREF/REF)之同型接合子，且第三種供體為HAQ(R71H、G230A、R293Q)STING對偶基因(STINGHAQ/HAQ)之同型接合子。藉由PCR擴增及測序來測定此等供體之STING基因型：使用Quick Extract DNA提取溶液(Epicentre)自hPBMC分離基因體DNA且用於擴增人類STING基因之外顯子3、6及7之區域。用於擴增及測序之引子為：hSTING外顯子3F GCTGAGACAGGAGCTTTGG(SEQ ID NO：11)、hSTING外顯子3R AGCCAGAGAGGTTCAAGGA(SEQ ID NO：12)、hSTING外顯子6F GGCCAATGACCTGGGTCTCA(SEQ ID NO：13)、hSTING外顯子6R CACCCAGAATAGCATCCAGC(SEQ ID NO：14)、hSTING外顯子7F TCAGAGTTGGGTATCAGAGGC(SEQ ID NO：15)、hSTING外顯子7R ATCTGGTGTGCTGGGAAGAGG(SEQ ID NO：16)。根據Yi等人，2013,PLoS One,8(10),e77846(DOI：10.1371/journal.pone.0077846)指定STING變異體對偶基因。
將冷凍保存之hPBMC解凍且106個細胞保持未經處理或在補充有10%胎牛血清及1%青黴素/鏈黴素之RMPI培養基中用10μM二-腺嘌呤化合物2'3'-RR-(A)(A)(二-OH參考物)、2'3'-RR-(A)(2'F-A)(實例4，化合物16)、2'3'-RR-(3'F-A)(A)(實例5，化合物20)、2'3'-RR-(3'F-A)(2'F-A)(實例2，化合物5)及2'3'-RR-(3'βF-A)(2'F-A)(實例3，化合物10)或腺嘌呤-鳥嘌呤 化合物2'3'-(G)(A)(二-OH參考物)、2'3'-(G)(2'F-A)(實例9，化合物38)、2'3'-RR-(G)(A)(二-OH參考物)、2'3'-RR-(G)(2'F-A)(實例6，化合物26)、3'2'-RR-(2'F-G)(A)(實例8，化合物35)及3'2'-RR-(2'F-G)(3'F-A)(實例7，化合物32)處理。在2小時刺激之後，藉由離心收集細胞且在磷酸鹽緩衝生理食鹽水中洗滌一次。使用Aurum Total RNA 96套組分離細胞RNA且使用iScript cDNA合成套組合成cDNA。使用PrimePCR探針分析及CFX96基因循環器(所有試劑及設備皆來自BioRad)，藉由即時qRT-PCR評估目標(IFN-β)及參考物(HSP90AB1及GUSB)基因表現。與未經處理之細胞比較相關IFN-β表現且針對參考基因正規化(2-△△Ct方法)。
圖2(二-腺嘌呤化合物)及圖3(鳥嘌呤-腺嘌呤化合物)展示由WT STING、HAQ STING對偶基因及REF STING對偶基因之hPBMC同型接合子進行之IFN-β轉錄物之相關表現。曲線中之點線指示2'3'-RR-(A)(A)或2'3'-RR-(G)(A)之相關表現值。
對於hSTING之WT、HAQ對偶基因及REF對偶基因中之每一者，二-腺嘌呤化合物2'3'-RR-(A)(2'F-A)(化合物16)、2'3'-RR-(3'F-A)(A)(化合物20)、2'3'-RR-(3'F-A)(2'F-A)(化合物5)及2'3'-RR-(3'βF-A)(2'F-A)(化合物10)與二-OH參考化合物2'3'-RR-(A)(A)相比皆刺激較高含量之IFN-β轉錄物。對於hSTING REF對偶基因，2'3'-RR-(A)(2'F-A)及2'3'-RR-(3'F-A)(2'F-A)與2'3'-RR-(A)(A)相比展示實質上較高含量(高>80倍)。
對於鳥嘌呤-腺嘌呤化合物，對於hSTING之WT、HAQ對偶基因及REF對偶基因中之每一者，化合物2'3'-(G)(2'F-A)(化合物38)與2'3'-(G)(A)二-OH參考化合物相比展示實質上較高含量(高>100倍)，甚至與2'3'-RR-(G)(A)化合物相比展示較高含量。對於hSTING之WT、HAQ對偶 基因及REF對偶基因中之每一者，化合物2'3'-RR-(G)(2'F-A)(化合物26)與2'3'-RR-(G)(A)二-OH參考化合物相比展示較高含量，其中對於hSTING REF對偶基因，比2'3'-RR-(G)(A)二-OH參考化合物高>4倍含量。對於hSTING WT及hSTING HAQ對偶基因，化合物3'2'-RR-(2'F-G)(A)(化合物35)及3'2'-RR-(2'F-G)(3'F-A)(化合物32)亦具有極高活性，且與二-OH化合物2'3'-RR-(G)(A)相比刺激較高含量之IFN-β轉錄物，而對於hSTING REF對偶基因，3'2'-RR-(2'F-G)(3'F-A)與二-OH化合物2'3'-RR-(G)(A)相比刺激約相同含量。
與2'3'-RR-(A)(A)及2'3'-RR-(G)(A)相比，類似地分析2'3'-RR-(3'H-A)(2'F-A)(實例11，化合物45)及(2'3'-RR-(3'F-G)(2'F-A)(實例12，化合物49)，其中在10μM及100μM下測試化合物，且在刺激後第2小時或第6小時收集細胞。相對於未經處理之細胞表示IFNβ表現。除IFNβ以外，目標基因包括Th1相關細胞激素(IFNγ，IL-12p35)及NF-kB依賴性發炎性細胞激素(TNFα，IL-6)。對於hSTING之WT、HAQ對偶基因及REF對偶基因，結果展示於圖4A(IFNβ)、4B(TNFα)、4C(IFNγ)、4D(IL-6)及4E(IL-12p35)中。此等結果證明化合物45及49皆為強效STING活化劑。
實例16：單-及二-F-ML-CDN化合物有效活化THP1細胞中之人類STING訊號傳導
為了以佐劑效能之特徵形式測定由單-或二-F-ML-CDN中之每一者在人類細胞中誘導之I型干擾素之相關含量，100,000個THP1-Dual細胞(含有經IRF-3誘導性分泌螢光素酶報導基因(Invivogen)轉染之hSTING HAQ對偶基因的人類單核球細胞株，其在包含五個IFN刺激之反應元素之啟動子控制下表現所分泌之螢光素酶)在96孔盤中用30ng/ml佛波醇12-豆蔻酸 酯13-乙酸酯活化隔夜。細胞用新鮮培養基洗滌且在37℃及5% CO2下與化合物一起在PB緩衝液(50mM 4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸、100mM KCl、3mM MgCl2、0.1mM二硫蘇糖醇、85mM蔗糖、1mM ATP、0.1mM GTP及0.2%牛血清白蛋白)中以2,000至0.0338μM之3倍滴定步驟培育30分鐘。為了量測在均勻化合物細胞滲透下之I型干擾素活化，細胞用化合物在含有10μg/mL毛地黃皂苷之PB緩衝液中以12至0.00001μM之4倍滴定步驟刺激。在30分鐘後，洗滌細胞且添加含有10% FBS之新鮮RPMI培養基，且細胞在37℃及5% CO2下培育。收集來自各樣品之細胞培養物上清液，隨後培育隔夜，且將10μL細胞培養物上清液添加至50μL QUANTI-Luc試劑(Invivogen)中。藉由用SpectraMax M3分光光度計(Molecular Devices)量測所分泌之螢光素酶含量來測定I型干擾素活化。自如表5中列舉之此分析法中測試之參考化合物及本發明化合物之連續稀釋物，由劑量-反應曲線測定10種濃度之EC50值，展示不存在毛地黃皂苷及(可用時)存在毛地黃皂苷之結果(「-」指示未在存在毛地黃皂苷之情況下測試之化合物)。
單-及二-F二-腺嘌呤化合物2'3'-RR-(A)(2'F-A)、2'3'-RR-(3'F-A)(A)、2'3'-RR-(3'F-A)(2'F-A)、2'3'-RR-(3'βF-A)(2'F-A)及2'3'-RR-(3'H-A)(2'F-A)在不存在毛地黃皂苷滲透之THP1分析法中與二-OH參考化合物2'3'-RR-(A)(A)相比皆展示改良之活性，皆具有小於20μM之EC50。此表明單-或二-F腺嘌呤化合物與參考化合物相比具有增強之細胞滲透性。具有約5μM之EC50之二-F化合物2'3'-RR-(3'F-A)(2'F-A)及2'3'-RR-(3'βF-A)(2'F-A)與2'3'-RR-(A)(A)參考化合物相比具有8倍改良，但此等化合物在存在毛地黃皂苷之分析法中之結果為最佳改良僅2倍。
對於鳥嘌呤-腺嘌呤化合物，磷酸二酯連接之化合物2'3'-(G)(2'F-A)及2'3'-(3'F-G)(2'F-A)在不存在毛地黃皂苷之EC50分析法中顯示改良，而2'3'-(G)(2'F-A)在存在毛地黃皂苷之分析法中展示活性低約5倍。對於二硫代磷酸酯連接之類似物，與二-OH參考化合物2'3'-RR-(G)(A)相比，2'3'-RR-(G)(2'F-A)在存在毛地黃皂苷之分析法中展示活性之約1.5倍改良，而在不存在毛地黃皂苷之情況下活性約相同。單-F化合物3'2'-RR- (2'F-G)(A)在不存在毛地黃皂苷之分析法中與2'3'-RR-(G)(A)化合物相比展示約3倍活性改良，而在存在毛地黃皂苷之分析法中之活性低約5倍。二-F化合物2'3'-RR-(3'F-G)(2'F-A)及3'2'-RR-(2'F-G)(3'F-A)在不存在毛地黃皂苷之分析法中與參考化合物2'3'-RR-(G)(A)相比活性分別高約2倍及7倍。單-及二-F-ML-CDN化合物，尤其二硫代磷酸酯連接之化合物之RR異構體，傾向於在THP1分析法中，在不存在毛地黃皂苷之情況下具有改良之活性，因此與二-OH參考化合物相比顯示優良細胞吸收特性。
實例17：單-F-ML-CDN化合物26及35之活體內功效
為了評估單-及二-F-ML-CDN化合物在侵襲性鼠類腫瘤模型中抑制腫瘤生長及誘導抗腫瘤免疫反應之能力，在6-8週齡雌性C57BL/6小鼠(8隻小鼠/組)之側腹植入B16.SIY黑素瘤細胞(含1×106個細胞之100μL PBS)。相比於參考化合物2'3'-RR-(A)(A)進行研究，其中小鼠用2'3'-RR-(G)(2'F-A)(實例6，化合物26)或3'2'-RR-(2'F-G)(A)(實例8，化合物35)處理。各化合物在40μL HBSS之總體積中以1、10及100μg給藥，且與在40μL HBSS之總體積中之10μg及100μg 2'3'-RR-(A)(A)或HBSS媒劑對照物比較。在腫瘤移植後第9天，在腫瘤達到約100mm3之體積時開始處理。使用27號標準尺寸針頭，藉由皮下注射向腫瘤中心(IT)投與化合物，在一週內進行總共三次注射。每週量測腫瘤兩次。在腫瘤移植後第45天之後，對存活小鼠進行再攻擊且監測排斥腫瘤外生長之能力，如與未經處理(未經攻擊)之小鼠中之腫瘤生長相比較。
如圖5A中所示，化合物26在所有測試劑量下顯示強效腫瘤抑制，與參考化合物2'3'-RR-(A)(A)類似，其中在100μg劑量下顯示完全腫瘤排斥。對於參考化合物及化合物26，100μg劑量組中之存活小鼠在第45天 用B16-SIY(含1×106個細胞之100μL PBS)再攻擊，且在大部分小鼠中發現排斥腫瘤移植，與參考化合物類似(圖5B)。類似地，化合物35在所有測試劑量下顯示強效腫瘤抑制，其中在100μg劑量下顯示完全腫瘤排斥(圖5C)。在第56天對100μg劑量組中之存活小鼠進行再攻擊，且大部分小鼠亦排斥腫瘤攻擊，與參考化合物2'3'-RR-(A)(A)類似(圖5D)。此等資料證實鳥嘌呤-腺嘌呤單-F-ML-CDN化合物在侵襲性鼠類腫瘤模型中之強效及持久的抗腫瘤作用。
為了證明抗腫瘤作用係由適應性T細胞免疫反應介導，在第3次IT注射後第7天對如上文所述處理之小鼠抽血，且藉由SIY特異性五聚物流式細胞測量術(FACS)評估針對SIY腫瘤抗原之免疫反應。藉由Ficoll梯度製備PBMC(2×105)且與抗CD16/32單株抗體一起預先培育以阻斷潛在非特異性結合，接著用由鼠類H-2Kb與SIYRYYGL(SIY)肽之複合物、抗TCRβ-AF700(H57-597)、抗CD8-Pacific Blue(53-6.7)、抗CD4-Pacific Orange(RM4-5)(所有抗體皆來自BioLegend,San Diego,CA)及Fixable Viability染料eFluor 450(eBioscience,San Diego,CA)組成的I類PE-MHC五聚物(Proimmune,Sarasota,FL)標記。使用具有FACSDiva軟體之FACS Versa細胞計數器(BD Biosciences,San Jose,CA)分析經染色之細胞。用FlowJo軟體(Tree Star,Ashland,OR)進行資料分析。
如圖6A中所示，與HBSS相比，2'3'-RR-(G)(2'F-A)(化合物26)在1μg劑量下引起顯著更高的回應於SIY肽刺激之IFNγ之T細胞產生，且在10μg下引起與參考化合物2'3'-RR-(A)(A)類似的T細胞反應(*P<0.05，史都登氏測試(student's t-test))如圖6B中所示，與未經處理、未經攻擊之小鼠相比，3'2'-RR-(2'F-G)(A)(化合物35)在1μg劑量下顯示可量測之T細胞反 應，但反應整體上低於參考化合物2'3'-RR-(A)(A)。此等資料說明此等鳥嘌呤-腺嘌呤單-F-ML-CDN化合物之強效抗腫瘤作用為抗原特異性及T細胞介導的。
實例18：單-或二-F-ML-CDN化合物5、10、20、49及50之活體內功效
與參考化合物2'3'-RR-(A)(A)相比，亦對一系列單-及二-F-ML-CDN化合物進行研究以評估抗腫瘤免疫反應。小鼠用2'3'-RR-(3'F-A)(2'F-A)(實例2，化合物5)、2'3'-RR-(3'βF-A)(2'F-A)(實例3，化合物10)、2'3'-RR-(3'F-A)(A)(實例5，化合物20)、2'3'-RR-(3'F-G)(2'F-A)(實例12，化合物49)或2'3'-RR-(3'癸醯基-O-G)(2'F-A)(實例6，化合物50)處理，其中各化合物在40μL HBSS之總體積中以0.1、1、10及100μg給藥，且與在40μL HBSS之總體積中之1μg 2'3'-RR-(A)(A)或HBSS媒劑對照物比較。在腫瘤移植後第9天，在腫瘤達到約100mm3之體積時開始處理。使用27號標準尺寸針頭，藉由單次皮下注射向腫瘤中心(IT)投與化合物。每週量測腫瘤兩次。在IT注射後第7天處死小鼠且收集脾臟且製備脾細胞。脾細胞(2×105個)與抗CD16/32單株抗體一起預先培育以阻斷潛在非特異性結合，且用由鼠類H-2Kb與SIYRYYGL(SIY)肽之複合物、抗TCRβ-AF700(H57-597)、抗CD8-Pacific Blue(53-6.7)、抗CD4-Pacific Orange(RM4-5)(所有抗體皆來自BioLegend)及Fixable Viability染料eFluor 450(eBioscience)組成之I類PE-MHC五聚物(Proimmune)標記。使用具有FACSDiva軟體之FACS Versa細胞計數器(BD Biosciences)分析經染色之細胞。用FlowJo軟體(Tree Star)進行資料分析。此外，脾細胞在IFNγ ELISPOT分析法中用單獨的培養基或1μM SIYRYYGL(SIY)肽刺激隔夜。使用CTL盤讀取器及ImmunoSpot軟體對IFN-γ ELISPOT培養盤進行 研究及定量。
為了評估作為安全性及耐受性之量度之由單-及二-F-ML-CDN化合物進行之全身性血清細胞激素之相關誘導，在第一次IT注射後第六小時對小鼠抽血且藉由小鼠炎症細胞學珠粒陣列(Mouse Inflammation Cytometric Bead Array)(CBA,BD Biosciences)評估其血清。如圖7A-D(7A-化合物5，7B-化合物10，7C-化合物20，7D-化合物49)中所示，在1μg劑量下，促炎性細胞激素(TNF-α、IL-6、MCP-1及IFN-γ)之濃度在2'3'-RR-(A)(A)及單-及二-F-ML-CDN化合物5、10、20及49之間類似。如圖7E中所示，化合物50與2'3'-RR-(A)(A)相比顯示顯著較低的全身性細胞激素(*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，史都登氏測試)。與參考化合物2'3'-RR-(A)(A)相比，此等資料說明化合物5、10、20及49之類似的安全概況，及化合物50之優良安全概況。
在收集時，與1μg劑量之參考化合物2'3'-RR-(A)(A)及HBSS對照物相比，所有化合物以劑量依賴性方式顯示可量測之抗腫瘤反應，其中化合物10在100μg劑量下展示完全腫瘤抑制(圖8)。藉由SIY特異性CD8+ T細胞之FACS五聚物染色以及回應於由ELISPOT進行之SIY肽刺激之IFNγ產生來量測針對SIY腫瘤抗原之免疫反應。如圖9A中所示，化合物5、10、20及49與HBSS對照物相比皆顯示SIY+CD8+ T細胞之顯著較高出現頻率，且除化合物20以外，皆顯示在1μg劑量下與2'3'-RR-(A)(A)類似的反應。此外，與參考化合物相比，化合物50在10μg劑量下顯示顯著較高的T細胞反應(*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，史都登氏測試)。作為抗原特異性T細胞功能性之量度，此等T細胞在ELISPOT分析法中能夠以與在FACS分析法中之傾向成鏡像的方式、回應於SIY肽刺激而分泌IFNγ(圖 9B)。此等資料說明此等單-及二-F-ML-CDN化合物以抗原特異性方式引起功能性T細胞介導之抗腫瘤免疫性的能力。
熟習此項技術者將易於瞭解本發明極其適合於實施目標及獲得所提及之目的及優點，以及其中固有之目的及優點。本文中提供之實例表示較佳實施例、為例示性且不意欲限制本發明之範疇。
應理解，本發明在其應用中並不限制於以下描述中所闡述之或圖式中所說明之構造之細節及組件的配置。本發明包含除所描述之實施例以外的實施例且可以多種方式實踐及進行。又，應理解，本文中使用之措詞及術語以及摘要係出於說明目的且不應視為限制性。
因此，熟習此項技術者將瞭解，本發明所基於的概念可易於用作設計用於實現本發明之若干目的的其他結構、方法以及系統的基礎。因此，在申請專利範圍並不脫離本發明之精神及範疇的範圍內，申請專利範圍被視為包括此類等效構造是至關重要的。
儘管對於熟習此項技術者已足夠詳細地描述及例示本發明以便製造及使用本發明，但在不脫離本發明之精神及範疇的情況下，多種替代物、變化及改良應為顯而易見的。本文中提供之實例表示較佳實施例、為例示性且不意欲限制本發明之範疇。熟習此項技術者將知曉其中之變化及其他用途。此等變化涵蓋於本發明之精神內且由申請專利範圍之範疇定義。
熟習此項技術者將顯而易見，可在不脫離本發明之範疇及精神的情況下對本文所揭示之本發明進行多種取代及修改。
本說明書中提及之所有專利案及公開案表明熟習本發明所關於之此項技術者之水準。
本文中所說明性地描述之本發明可在不存在本文中未特定揭示之任 何元件或多個元件、限制或多個限制之情況下合適地實踐。因此，舉例而言，在本文中之各種情況下，術語「包含」、「基本上由……組成」及「由……組成」中之任一者可由另外兩個術語中之任一者置換。已採用之術語及表述係用作描述而非限制之術語，且在使用該等術語及表達中不意欲排除所顯示及描述之任何等效特徵或其部分，但應認識到在本發明主張範疇內，各種改良為可能的。因此，應理解儘管本發明已由較佳實施例及視情況選用之特徵特定揭示，但熟習此項技術者可次用本文所揭示之概念的修改及變化，且該等修改及變化視為處於由隨附申請專利範圍所界定的本發明之範疇內。
在以下申請專利範圍內闡述其他實施例。
<110> 美商艾杜諾生物科技公司 瑞士商諾華公司
<120> 用於活化「干擾素基因刺激子」依賴性訊號之組合物及方法
<130> ANZ-1005-PCT
<150> US 62/247,658
<151> 2015-10-28
<150> US 62/379,611
<151> 2016-08-25
<160> 17
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 440
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：尼沃單抗之重鏈胺基酸序列
<400> 1
<210> 2
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：尼沃單抗之輕鏈胺基酸序列
<400> 2
<210> 3
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：派立珠單抗之重鏈胺基酸序列
<400> 3
<210> 4
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：派立珠單抗之輕鏈胺基酸序列
<400> 4
<210> 5
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：MSB0010718C之重鏈胺基酸序列
<400> 5
<210> 6
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：MSB0010718C之輕鏈胺基酸序列
<400> 6
<210> 7
<211> 368
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(368)
<223> 人類cGAS
<400> 7
<210> 8
<211> 362
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(362)
<223> 小鼠cGAS
<400> 8
<210> 9
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：正向引子
<400> 9
<210> 10
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：反向引子
<400> 10
<210> 11
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：hSTING外顯子3F
<400> 11
<210> 12
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：hSTING外顯子3R
<400> 12
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：hSTING外顯子6F
<400> 13
<210> 14
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：hSTING外顯子6R
<400> 14
<210> 15
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：hSTING外顯子7F
<400> 15
<210> 16
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：hSTING外顯子7R
<400> 16
<210> 17
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：肽
<400> 17

Claims (38)

  1. 一種化合物，其具有式I之結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中：R1及R2獨立地為經由N9位置結合於該結構之鳥嘌呤或腺嘌呤，限制條件為R1及R2不皆為鳥嘌呤；R3及R4獨立地為-H、-OH、-O-C(=O)-C1-14烷基或-F，限制條件為R3及R4中之至少一者為-F；及X1及X2獨立地為-OH或-SH。
  2. 如請求項1之化合物，其中該化合物為式I-c之化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
  3. 如請求項1或2之化合物，其中R3及R4獨立地為-OH或-F，限制條件為R3及R4中之至少一者為-F。
  4. 一種化合物，其具有式IA之結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中：R3a及R4a獨立地為-H、-OH、-O-C(=O)-C1-14烷基或-F，限制條件為R3a及R4a中之至少一者為-F；及X1a及X2a獨立地為-OH或-SH。
  5. 如請求項4之化合物，其中該化合物為式IA-c之化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
  6. 如請求項4或5之化合物，其中R3a及R4a獨立地為-OH或-F，限制條件為R3a及R4a中之至少一者為-F。
  7. 一種化合物，其具有式IB之結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中：R1b及R2b中之一者為經由N9位置結合於該結構之鳥嘌呤，且R1b及R2b中之另一者為經由該N9位置結合於該結構之腺嘌呤；R3b及R4b獨立地為-H、-OH、-O-C(=O)-C1-14烷基或-F，限制條件為R3b及R4b中之至少一者為-F；及X1b及X2b獨立地為-OH或-SH。
  8. 如請求項7之化合物，其中該化合物為式IB-g之化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
  9. 如請求項7之化合物，其中該化合物為式IB-n之化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
  10. 如請求項7至9中任一項之化合物，其中R3b及R4b獨立地為-OH或-F，限制條件為R3b及R4b中之至少一者為-F。
  11. 如請求項1之化合物，其中該化合物為式IC之化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中：R1c及R2c獨立地為經由N9位置結合於該結構之鳥嘌呤或腺嘌呤，限制條件為R1c及R2c不皆為鳥瞟呤；R4c為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基；及X1c及X2c獨立地為-OH或-SH。
  12. 如請求項1之化合物，其中該化合物為式ID之化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中：R1d及R2d獨立地為經由N9位置結合於該結構之鳥嘌呤或腺嘌呤，限制條件為R1d及R2d不皆為鳥嘌呤；R3d為-H、-OH或-O-C(=O)-C1-14烷基；及X1d及X2d獨立地為-OH或-SH。
  13. 如請求項1之化合物，其中該化合物為式IE之化合物： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物，其中：R1e及R2e獨立地為經由N9位置結合於該結構之鳥嘌呤或腺嘌呤，限制條件為R1e及R2e不皆為鳥嘌呤；及X1e及X2e獨立地為-OH或-SH。
  14. 如請求項1之化合物，其中該化合物為2'3'-RR-(3'F-A)(2'F-A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
  15. 如請求項1之化合物，其中該化合物為2'3'-RR-(3'βF-A)(2'F-A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
  16. 如請求項1之化合物，其中該化合物為2'3'-RR-(A)(2'F-A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
  17. 如請求項1之化合物，其中該化合物為2'3'-RR-(3'F-A)(A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
  18. 如請求項1之化合物，其中該化合物為2'3'-RR-(3'H-A)(2'F-A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
  19. 如請求項1之化合物，其中該化合物為2'3'-RR-(G)(2'F-A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
  20. 如請求項1之化合物，其中該化合物為2'3'-RR-(3'癸醯基-O-G)(2'F-A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
  21. 如請求項1之化合物，其中該化合物為2'3'-RR-(3'F-G)(2'F-A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
  22. 如請求項1之化合物，其中該化合物為3'2'-RR-(2'F-G)(3'F-A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
  23. 如請求項1之化合物，其中該化合物為3'2'-RR-(2'F-G)(A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
  24. 如請求項1之化合物，其中該化合物為2'3'-(G)(2'F-A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
  25. 如請求項1之化合物，其中該化合物為2'3'-(3'F-G)(2'F-A)，其具有以下結構： 或其前藥、醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之水合物。
  26. 一種組合物，其包含一或多種如請求項1至25中任一項之化合物及醫藥學上可接受之賦形劑。
  27. 如請求項26之組合物，其中該組合物不包括可增強該一或多種化合物之細胞滲透性的試劑或可增強細胞對該一或多種化合物之吸收的試劑。
  28. 一種組合物，其包含一或多種如請求項1至25中任一項之化合物及增強該化合物之細胞吸收及/或穩定性之傳遞媒劑。
  29. 如請求項28之組合物，其中該傳遞媒劑包含一或多種選自由以下組成之群的試劑：脂質、脂質體、雙層間交聯多層微脂粒、基於生物可降解聚(D,L-乳酸-共-乙醇酸)[PLGA]或基於聚酐之奈米粒子或微米粒子，及奈米多孔粒子負載型脂質雙層。
  30. 一種組合物，其包含一或多種如請求項1至25中任一項之化合物及一或多種選自由以下組成之群的試劑：免疫檢查點抑制劑；類鐸受體(Toll-like Receptor,TLR)促效劑；經由TLR、經由(NOD)樣受體(NLR)、經由基於視黃酸誘導性基因之(RIG)-I樣受體(RLR)、經由C型凝集素受體(CLR)或經由病原體相關分子模式(「PAMP」)介導先天性免疫活化之組合物；及化學治療劑。
  31. 如請求項30之組合物，其中該一或多種試劑為免疫檢查點抑制劑。
  32. 如請求項30之組合物，其中該一或多種試劑為組蛋白脫乙醯基酶抑制劑。
  33. 如請求項26至32中任一項之組合物，其進一步包含一或多種抗原，該一或多種抗原經選擇以用於在該組合物投與個體時誘導針對該(該等)抗原之免疫反應，其中該抗原視情況可為一或多種重組蛋白抗原，其中該重組蛋白抗原與感染性疾病、惡性疾病或過敏原(allergan)有關。
  34. 一種如請求項1至25中任一項之化合物或如請求項26至33中任一項之組合物之用途，其係用於製造用以治療患有癌症之個體的藥劑。
  35. 如請求項34之用途，其中該藥劑之投藥為靜脈內、皮下、肌肉內、皮內、經口、經黏膜、經陰道、經子宮頸、瘤周、瘤內或直接投與腫瘤引流淋巴結中。
  36. 如請求項34或35之用途，其中該藥劑進一步包含一或多種針對該個體之其他癌症療法。
  37. 一種如請求項1至25中任一項之化合物或如請求項26至33中任一項之組合物之用途，其係用於製造在用以治療選自由以下組成之群的疾病之組合療法中使用的藥劑：癌症、急性器官移植排斥、I型糖尿病、類風濕性關節炎、牛皮癬、克羅恩氏病(Crohn's disease)、再狹窄及過敏性哮喘，其中該藥劑與一或多種誘導抗體依賴性細胞毒性之治療性抗體組合投與。
  38. 如請求項37之用途，其中該藥劑之投藥為靜脈內、皮下、肌肉內、皮內、經口、經黏膜、經陰道、經子宮頸、瘤周、瘤內或直接投與腫瘤引流淋巴結中。
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