KR20230017223A - APRIL 결합 항체로 IgA 신장병증을 치료하는 방법 - Google Patents

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데 라르 퇸 반
소마예 호나만드
욘 둘로스
콕 에두아르드 데
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치누크 세라퓨틱스, 인크.
아두로 바이오테크 홀딩스, 유럽 비.브이.
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Abstract

IgA 신장병증을 비롯한, IgA 과잉 생산 또는 침착과 관련된 병태의 치료를 위한 인간 APRIL에 결합하는 항체의 제형 및 용도.

Description

APRIL 결합 항체로 IgA 신장병증을 치료하는 방법
관련 출원
본 출원은 우선권을 주장하는 2020년 5월 29일자로 출원된 미국 특허 가출원 제62/704,831호의 이익을 주장하며, 이는 모든 표, 도면 및 청구범위를 포함하여 그 전체가 참조에 의해 본 명세서에 원용된다.
발명의 분야
본 발명은 IgA 신장병증의 치료를 위한 인간 APRIL에 결합하는 이의 단편을 포함하는 단리된 항체의 용도에 관한 것이다.
APRIL은 유형-II 막관통 단백질로 발현되지만, 대부분의 다른 TNF 패밀리 구성원과 달리 주로 분비된 단백질로 처리되며 퓨린 전환효소에 의해 절단되는 골지에서 절단되어 가용성 활성 형태를 방출한다(Lopez-Fraga et al., 2001, EMBO Rep 2:945-51). APRIL은 많은 다른 TNF 패밀리 리간드에 대해 접히는 단백질에서 유사한 구조적 상동성을 갖는 비공유적으로 연결된 동형 삼량체로 조립된다(Wallweber et al., 2004, Mol Biol 343, 283-90). APRIL은 B 세포 성숙 항원(B cell maturation antigen: BCMA)과 막관통 활성인자 및 칼슘 조절인자 및 사이클로필린 리간드 상호작용인자(transmembrane activator and calcium modulator and cyclophilin ligand interactor: TACI)인 2개의 TNF 수용체에 결합한다(문헌[Kimberley et al., 2009, J Cell Physiol. 218(1):1-8]에서 검토됨). 또한, APRIL은 최근에 헤파란 설페이트 프로테오글리칸(heparan sulphate proteoglycan: HSPG)에 결합하는 것으로 나타났다(Hendriks et al., 2005, Cell Death Differ 12, 637-48). APRIL은 B 세포 신호전달에서 역할을 하며 시험관내에서 인간 및 뮤린 B 세포의 증식 및 생존 모두를 유도하는 것으로 나타났다(문헌[Kimberley et al., 2009, J Cell Physiol. 218(1):1-8]에서 검토됨).
APRIL은 주로 단핵구, 대식세포, 수지상 세포, 호중구, B-세포 및 T-세포와 같은 면역 세포 서브세트에 의해 발현되며, 이들 중 다수는 또한 BAFF를 발현한다. 또한, APRIL은 파골세포, 상피 세포와 같은 비면역 세포 및 다양한 종양 조직에 의해 발현될 수 있다(문헌[Kimberley et al., 2009, J Cell Physiol. 218(1):1-8]에서 검토됨). 사실, APRIL은 원래 암세포에서의 발현에 기초하여 확인되었다(Hahne et al., 1998, J Exp Med 188, 1185-90). APRIL mRNA의 높은 발현 수준이 종양 세포주의 패널뿐만 아니라 결장 및 림프계 암종과 같은 인간 원발성 종양에서 발견되었다.
APRIL 혈청 수준은 IgA 신장병증을 앓고 있는 환자에서 증가된 것으로 밝혀졌다(McCarthy et al., 2011, J. Clin. Invest. 121(10):3991-4002).
APRIL은 여러 B-세포 악성종양 및 잠재적으로 또한 일부 고형 종양의 생존 및 증식 능력에서 중요한 역할을 한다. APRIL은 또한 염증성 질환 또는 자가면역의 핵심 원인으로 떠오르고 있다. 따라서, APRIL을 길항하는 전략은 다수의 이러한 질환에 대한 치료 목표이다. 실제로 APRIL을 TACI-Fc(아타시셉트)로 표적화하는 임상 연구가 a여러 자가면역 질환의 치료를 위해 현재 진행 중이다. 그러나, TACI-Fc는 또한 정상적인 B-세포 유지에 관여하는 인자인 BAFF를 표적으로 한다. APRIL에 대한 항체는 WO9614328, WO2001/60397, WO2002/94192, WO9912965, WO2001/196528, WO9900518 및 WO2010/100056에 기술되어 있다. WO2010/100056은 APRIL을 특이적으로 표적화하는 항체를 기술하고 있다. WO2010/100056의 항체는 APRIL이 TACI에 결합하는 것을 완전히 차단하며, 적어도 부분적으로 BCMA에 결합하는 것을 차단한다. 항체 hAPRIL.01A는 BCMA 및 TACI 모두에 대한 결합을 완전히 차단한다. hAPRIL.01A 항체는 시험관내 및 생체내에서 B-세포 증식, 생존 및 항원-특이적 면역글로불린 분비를 저해하였다(Guadagnoli et al., 2011, Blood 117(25):6856-65). 또한, hAPRIL.01A는 인간 CLL 및 MM 질환을 나타내는 시험관내 및 생체내에서 악성 세포의 증식 및 생존을 저해하였다(Guadagnoli et al., 2011, Blood 117(25):6856-65; Lascano et al., 2013, Blood 122(24): 3960-3; Tai et al., 2014, ASH poster 2098). 마지막으로, hAPRIL.01A는 항원-특이적 IgA의 분비를 저해하였다(Guadagnoli et al., 2011, Blood 117(25):6856-65). BCMA 및 TACI 둘 다에 대한 결합을 완전히 차단하는 항체를 포함하여 항-APRIL 항체는 IgA 신장병증의 치료에 유용할 수 있으며, 이 질환을 치료하기 위한 보다 효과적인 제형 및 투여 양생법을 제공할 필요가 있다.
본 발명은 비경구 경로, 특히 정맥내 및/또는 피하 경로에 의한 전달에 적합한 항-APRIL 항체 제형에 관한 것이다. 본 명세서에 기재된 제형은 허용 가능한 점도, 항체 용해도, 단백질 분해 및 응집의 수준(특히, 장기 보관 동안) 및 제형의 소정의 불활성 성분으로 인한 투여 부위 통증을 유지하면서 고농도 투여 용액을 제공할 수 있다.
제1 양태에서, 본 발명은 다음을 포함하는 항체 제형을 제공한다:
약 20 ㎎/㎖ 내지 약 190 ㎎/㎖ 농도의 항-APRIL 항체;
약 10mM의 L-히스티딘;
약 75mM의 L-아르기닌;
약 3wt%의 소르비톨;
약 0.01wt%의 폴리소르베이트 20; 및
약 6.0 내지 약 6.6의 pH.
다양한 실시형태에서, 제형은 다음 특성 중 하나 이상, 바람직하게는 2개, 3개 또는 4개 모두를 나타낸다:
16cP 이하의 점도를 가지고,
글루탐산 또는 이의 염을 포함하지 않으며,
약 250 mOsm/㎏ 내지 약 390 mOsm/㎏의 삼투질 농도를 갖고, 그리고
330㎚에서 약 1.0 이하의 광학 밀도(OD330)를 갖는다.
소정의 실시형태에서, 제형은 제형의 제조 후 9개월 동안 2℃ 내지 8℃에서 보관한 후 항-APRIL 항체의 순도를 적어도 96% 유지하고; 또한 바람직하게는 제형의 제조 후 6개월 동안 25℃에서 보관한 후 항-APRIL 항체의 순도를 적어도 95% 유지한다.
단백질 응집은 일반적으로 2개의 불안전 계수인 형태 및 콜로이드의 결과로 인해 발생하는 것으로 여겨진다. 형태 안정성은 단백질의 접힌 상태와 펼쳐진 상태 사이의 자유 에너지의 차이이다. 에너지의 값으로 직접 측정되지는 않았지만, TM의 용융 온도 값 또는 또 다른 정도로 응집 온도 TAgg는 제형 간의 증가된 또는 감소된 형태 안정성을 정성적으로 결정할 수 있다. 콜로이드 안정성은 유인적이고(attractive) 반발적인 분자간 상호작용이 균형을 이룬 결과이며; 즉, 단백질-단백질 상호작용이 적게 일어날수록 샘플이 응집될 가능성이 줄어든다. 삼투압 상호작용 제2 비리얼 계수(virial coefficient) 제형 상태에서 단백질의 응집 성향을 예측하기 위한 도구를 제공할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 제형은 25℃에서 측정될 때 약 2.5×10-5 ㏖·㎖/g2 이상의 제2 비리얼 계수를 갖는다. 제2 비리얼 계수는 당업계에 공지된 바와 같이, 예를 들어, 정적 광 산란 또는 막 삼투법(membrane osmometry)에 의해 측정될 수 있다.
고농도 항체 제형은 종종 샘플의 탁도로부터 기인하는 특성인 "유백색"인 것으로 기술되며, 이는 항체의 자가-회합 및 응집의 전구체일 수 있다. 330㎚에서 광학 밀도의 측정은 이러한 탁도를 반영한다. 바람직한 실시형태에서, 제형은 약 0.8 이하의 OD330을 갖는다.
다양한 실시형태에서, 제형의 항-APRIL 항체는 약 7.4 이상의 계산된 등전위점(isoelectric point: pI)을 갖는다. 단백질 pI는 문헌[Bjellqvist et al., Electrophoresis 1993, 14, 1023-1031]에 기술되어 있는 아미노산의 pK 값을 사용하여 계산된다.
바람직한 실시형태에서, 항-APRIL 항체는 제형에서 약 150 ㎎/㎖의 농도이다. 특히 바람직한 실시형태, 이러한 제형은 약 290 mOsm/㎏ 내지 약 390 mOsm/㎏의 삼투질 농도를 가지며, 가장 바람직하게는 또한 약 0.8 이하의 OD330을 갖는다.
다른 바람직한 실시형태에서, 항-APRIL 항체는 제형에서 약 20 ㎎/㎖의 농도이다. 특히 바람직한 실시형태, 이러한 제형은 약 293 mOsm/㎏ 내지 약 333 mOsm/㎏의 삼투질 농도를 가지며, 가장 바람직하게는 또한 약 0.8 이하의 OD330를 갖는다.
소정의 실시형태에서, 제형은 글리신, 카보네이트, HEPES, 포스페이트, 시트레이트 및 아세테이트 중 하나 이상, 가장 바람직하게는 이들 각각이 없다.
바람직하게는, 제형의 항-APRIL 항체는 중쇄 가변 영역을 포함하는 인간화된 항체이다. 경쇄 가변 영역 쌍은 VH11.VL15, VH12.VL15, VH13.VL15, VH14.VL15, VH14_1.VL15, VH14_1C.VL15, VH14_1D.VL15, VH14_1E.VL15 및 VH14_1G.VL15로 이루어진 군으로부터 선택된다. 이러한 서열은 아래에 정의된다. VH14_1G.VL15가 가장 바람직하다.
본 문서 전반에 걸쳐 사용되는 용어 "약"은 임의의 주어진 값의 +/- 10%, 바람직하게는 임의의 주어진 값의 +/- 5%를 지칭한다.
관련된 양태에서, 본 발명의 청구범위는 본 명세서에 기재된 제형을 피하 주사에 의해 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 항-APRIL 항체를 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 방법에 관한 것이다.
또 다른 관련 양태에서, 본 발명의 청구범위는 본 명세서에 기재된 제형을 정맥내 주입에 의해 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 항-APRIL 항체를 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 방법에 관한 것이다.
다양한 투여 스케줄이 아래에 기재된 바와 같이 사용될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 방법은 여러 주기(예를 들어, 4주, 6주, 8주 등) 동안 매주("QW")의 스케줄로 주입 또는 피하 투여를 반복하는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 방법은 여러 주기(예를 들어, 4주, 6주, 8주 등) 동안 적어도 2주마다("본 명세서에 사용된 바와 같이 격주" 또는 "Q2W")의 스케줄로 주입 또는 피하 투여를 반복하는 단계를 포함한다. 대안적으로, 방법은 여러 주기(예를 들어, 8주, 12주, 16주 등) 동안 적어도 4주마다("Q4W")의 스케줄 또는 1개월에 1회("QMT")의 스케줄로 주입 또는 피하 투여를 반복하는 단계를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 프론트 로딩(frontloading) 투여 스케줄이 사용된다. 한 예에서, 최대 적어도 4주 동안 적어도 2주마다 반복되는 정맥내 주입 또는 피하 투여에 의한 투여를 포함하는 로딩 투여 스케줄에 이어 정맥내 주입 또는 피하 투여에 의한 투여를 포함하는 유지 투여 스케줄이 이어지되, 유지 투여 스케줄은 더 적은 항-APRIL 항체를 포함하는 각각의 투여에 의해 또는 로딩 투여 스케줄 동안보다 더 긴 간격으로 투여함으로써 더 적은 항-APRIL 항체의 투여를 초래한다. 또 다른 예에서, 적어도 매일, 보다 바람직하게는 최대 적어도 4일 동안 매일 2회 반복하는 정맥내 주입 또는 피하 투여에 의한 투여를 포함하는 로딩 투여 스케줄에 이어 QW, Q2W, Q4W, QM 등과 같은 스케줄로 정맥내 주입 또는 피하 투여에 의한 투여를 포함하는 유지 투여 스케줄이 이어진다. 일 실시형태에서, 로딩 투여 스케줄은 정맥내 주입에 의해 항체를 투여하는 것을 포함하고, 유지 투여 스케줄은 피하 주사에 의해 항체를 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 로딩 투여 스케줄 및 유지 투여 스케줄 모두는 피하 주사에 의해 항체를 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 로딩 투여 스케줄 및 유지 투여 스케줄 모두는 정맥내 주입에 의해 항체를 투여하는 것을 포함한다. 이는 투여 스케줄의 완전한 목록을 의미하지 않는다.
단지 예로서, 방법의 피하 주사는 약 2㎖의 항체 제형을 환자의 바람직한 주사 부위(예를 들어, 허벅지, 복부, 상완 등)에 투여하는 것을 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 제형의 항-APRIL 항체는 약 150 ㎎/㎖의 농도이며, 단일 주사로 약 300㎎의 항-APRIL 항체가 투여된다. 소정의 실시형태에서, 방법의 피하 주사는 약 4㎖(단일 주사로서 또는 2×2㎖ 주사로서)의 항-APRIL 항체의 항체 제형을 약 150 ㎎/㎖의 농도로 투여하는 것을 포함하며, 약 600㎎의 항-APRIL 항체가 투여된다. 단일 투여의 일부로서 필요한 투여 부피 및 주사 횟수는 약 10㎎ 내지 약 1350㎎의 항-APRIL 항체의 목적하는 총 용량을 달성하기 위해 필요에 따라 조정될 수 있다.
소정의 다른 실시형태에서, 방법의 정맥내 주입은 다음을 포함한다: (a) 본 발명의 제1 양태의 제형 및 이의 실시형태를 0.9% 식염수에 약 0.1 ㎎/㎖ 내지 약 10 ㎎/㎖의 농도로 희석하는 단계; 및 (b) 약 10㎎ 내지 약 1350㎎의 항-APRIL 항체의 총 용량을 약 2시간에 걸쳐 희석된 제형의 단일 정맥내 용량으로 개체에게 투여하는 단계. 다시, 단지 예로서, 약 20 ㎎/㎖의 항-APRIL 항체 농도의 약 15㎖의 제형을 약 235㎖의 0.9% 식염수에 첨가하여 약 1.2 ㎎/㎖ 농도의 정맥내 용량을 제공한다.
소정의 실시형태에서, 항-APRIL 항체를 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 방법은 로딩/유지 투여 프로토콜에 의해 본 명세서에 기재된 제형을 투여하는 단계를 포함한다. 이러한 프로토콜은 로딩/유지 투여 프로토콜의 유지 구성요소의 항-APRIL 항체 농도보다 더 높은 농도로 항-APRIL 항체의 1회 이상의 투여; 로딩/유지 투여 프로토콜의 유지 구성요소의 항-APRIL 항체의 투여 빈도보다 더 높은 빈도로 항-APRIL 항체의 1회 이상의 투여; 및/또는 로딩/유지 투여 프로토콜의 유지 구성요소의 항-APRIL 항체의 투여 경로와는 상이한 경로로 항-APRIL 항체의 1회 이상의 투여를 포함하는 프로토콜의 로딩 구성요소를 포함할 수 있다.
단지 예로서, 로딩/유지 투여 프로토콜 로딩 구성요소는 항-APRIL 항체의 1회 이상의 정맥내 투여를 포함할 수 있고, 로딩/유지 투여 프로토콜의 유지 구성요소는 항-APRIL 항체의 1회 이상의 피하 투여를 포함한다. 이러한 예에서, 로딩 투여(들)의 농도는 유지 투여(들)에서 사용되는 것보다 더 높을 수 있고/있거나 투여 빈도는 더 많을 수 있다.
또 다른 예에서, 로딩/유지 투여 프로토콜 로딩 구성요소는 항-APRIL 항체의 1회 이상의 피하 투여를 포함할 수 있고, 로딩/유지 투여 프로토콜의 유지 구성요소는 항-APRIL 항체의 1회 이상의 정맥내 투여를 포함한다. 이러한 예에서, 로딩 투여(들)의 농도는 유지 투여(들)에서 사용되는 것보다 더 높을 수 있고/있거나 투여 빈도는 더 많을 수 있다.
또 다른 예에서, 로딩/유지 투여 프로토콜 로딩 구성요소는 항-APRIL 항체의 1회 이상의 피하 투여를 포함할 수 있고, 로딩/유지 투여 프로토콜의 유지 구성요소는 항-APRIL 항체의 1회 이상의 피하 투여를 포함한다. 이러한 예에서, 로딩 투여(들)의 농도는 유지 투여(들)에서 사용되는 것보다 더 높을 수 있고/있거나 투여 빈도는 더 많을 수 있다.
일 실시형태에서, 로딩 투여는 150㎎ 내지 1350㎎의 항-APRIL 항체의 정맥내 주입을 포함하고, 제1 시간 간격으로 해당 양의 적어도 1회의 후속 주입이 이루어지며, 유지 투여는 i) 마지막 로딩 용량 주입 후 제1 시간 간격으로 투여되는 더 적은 양의 항-APRIL 항체를 투여하는 것을 포함하고, 적어도 12주 동안 더 적은 양 및 동일한 시간 간격으로 적어도 1회의 후속 투여가 이루어지거나, ii) 마지막 로딩 용량 주입 후 제2 시간 간격으로 동일한 양의 항-APRIL 항체를 투여하는 것을 포함하고, 적어도 12주 동안 동일한 양 및 제2 시간 간격으로 적어도 1회의 후속 투여가 이루어지되, 제2 시간 간격은 제1 시간 간격보다 길거나 또는 iii) 마지막 로딩 용량 주입 후 제2 시간 간격으로 더 적은 양의 항-APRIL 항체를 투여하는 것을 포함하고, 적어도 12주 동안 제2 시간 간격으로 동일한 양의 적어도 1회의 후속 투여가 이루어지는 것을 포함하되, 유지 투여는 정맥내 주입 또는 피하 주사, 바람직하게는 피하 주사에 의해 이루어질 수 있다. 일 실시형태에서, 로딩 투여는 150㎎ 내지 1350㎎의 항-APRIL 항체의 피하 주사를 포함하고, 제1 시간 간격으로 해당 양의 적어도 1회의 후속 피하 주사가 이루어지며, 유지 투여는 i) 마지막 로딩 용량 주입 후 제1 시간 간격으로 투여되는 더 적은 양의 항-APRIL 항체를 투여하는 것을 포함하고, 적어도 12주 동안 더 적은 양 및 동일한 시간 간격으로 적어도 1회의 후속 투여가 이루어지거나, ii) 마지막 로딩 용량 주입 후 제2 시간 간격으로 동일한 양의 항-APRIL 항체를 투여하는 것을 포함하고, 적어도 12주 동안 동일한 양 및 제2 시간 간격으로 적어도 1회의 후속 투여가 이루어지되, 제2 시간 간격은 제1 시간 간격보다 길거나 또는 iii) 마지막 로딩 용량 주입 후 제2 시간 간격으로 투여된 더 적은 양의 항-APRIL 항체를 투여하는 것을 포함하고, 적어도 12주 동안 제2 시간 간격으로 동일한 양의 적어도 1회의 후속 투여가 이루어지는 것을 포함하되, 유지 투여는 정맥내 주입 또는 피하 주사에 의해 이루어질 수 있다.
본 발명의 또 다른 실시형태에서, 위에 기재된 장애의 치료에 유용한 물질을 포함하는 제조 물품이 제공된다. 제조 물품은 용기, 라벨 및 패키지 삽입물을 포함한다. 적합한 용기는, 예를 들어, 병, 바이알, 주사기(투여 시 용기로부터 사전 충전되거나 또는 충전됨), 자기주사기, 주입기 펜 등을 포함한다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 물질로 형성될 수 있다. 용기는 병태를 치료하는 데 효과적인 조성물을 담고 있으며, 멸균 접근 포트를 가질 수 있다(예를 들어, 용기는 정맥내 용액 백 또는 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개가 있는 바이알일 수 있음). 제조 물품 내의 적어도 하나의 활성제는 본 발명에 따른 항-APRIL 항체 조성물을 포함하는 용기이다. 소정의 실시형태에서, 용기의 라벨 또는 이와 관련된 라벨은 조성물이 선택한 병태, 예를 들어, IgA 신장병증을 치료하는 데 사용됨을 나타낸다. 제조 물품은 인산 완충 식염수, 링거 용액 및 덱스트로스 용액과 같은 약제학적으로 허용 가능한 완충액을 포함하는 제2 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이는 다른 완충액, 희석제, 필터, 바늘 및 주사기를 포함하여 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다. 또한, 제조 물품은 사용 지침이 있는 패키지 삽입물을 포함할 수 있다. 본 발명의 제형은 항체 제형을 포함하는 일회용 또는 다회용 바이알 또는 항체 제형을 포함하는 사전 충전된 주사기, 자기주사기 또는 주입기 펜과 같은 다양한 형태로 제공될 수 있다. 이러한 용기 내 항-APRIL 항체의 농도는 약 20 ㎎/㎖ 내지 약 190 ㎎/㎖, 가장 바람직하게는 약 150 ㎎/㎖일 수 있다. 이러한 용기 내 제형의 부피는 0.5㎖ 내지 50㎖; 바람직하게는 1㎖ 내지 10㎖, 가장 바람직하게는 1㎖, 2㎖, 3㎖, 4㎖ 또는 5㎖일 수 있다.
서열의 간단한 설명
서열 목록에 제시된 서열은 본 명세서에 기재된 바람직한 항체의 바람직한 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열 및 암호화 DNA 서열을 포함하여 본 명세서에 기재된 제형 및 방법에 대한 바람직한 항체의 VH 및 VL 도메인과 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열 및 암호화 DNA 서열에 관한 것이다. 또한, 본 명세서에 기재된 항체의 중쇄 및 경쇄 모두의 CDR의 아미노산 서열이 제시된다. 아래의 표 1은 서열 번호를 각각의 서열과 연관시킨다.
Figure pct00001
Figure pct00002
도 1은 온도 스트레스, 동결/해동 및 진탕 스트레스 후 다양한 VH14_1G.VL15 항체 제형에 대한 탁도, 시각적 외관 및 pH의 표 형식의 결과를 도시한다.
도 2는 SE-UPLC에 의해 측정된 온도 스트레스, 동결/해동 및 진탕 스트레스 후 다양한 VH14_1G.VL15 항체 제형에 대한 순도 백분율의 표 형식의 결과를 도시한다.
도 3은 -70℃에서 12주 보관 후 다양한 VH14_1G.VL15 항체 제형의 피크 면적에 의해 측정된 SE-UPLC 순도 백분율의 그래프 표현을 도시한다.
도 4는 2℃ 내지 8℃에서 12주 보관 후 다양한 VH14_1G.VL15 항체 제형의 피크 면적에 의해 측정된 SE-UPLC 순도 백분율의 그래프 표현을 도시한다.
도 5는 25℃에서 12주 보관 후 다양한 VH14_1G.VL15 항체 제형의 피크 면적에 의해 측정된 SE-UPLC 순도 백분율의 그래프 표현을 도시한다.
도 6은 45℃에서 12주 보관 후 다양한 VH14_1G.VL15 항체 제형의 피크 면적에 의해 측정된 SE-UPLC 순도 백분율의 그래프 표현을 도시한다.
도 7은 CEX-UPLC에 의해 측정된 온도 스트레스, 동결/해동 및 진탕 스트레스 후 다양한 VH14_1G.VL15 항체 제형에 대한 순도 백분율의 표 형식의 결과를 도시한다.
도 8은 25℃에서 다양한 VH14_1G.VL15 항체 제형에 대한 ln 순도(%) 대 시간(일)을 도시한다.
도 9는 4개의 VH14_1G.VL15 항체 제형에 대한 2℃ 내지 8℃, 25℃ 및 45℃에서의 아레니우스 관계(Arrhenius relationship) 플롯(ln kobs 대 1/T(켈빈))을 도시한다.
도 10은 25℃에서 4개의 VH14_1G.VL15 항체 제형에 대한 ln 순도(%) 대 시간(일)을 도시한다.
도 11은 다양한 VH14_1G.VL15 항체 제형에 대한 25℃ 및 45℃에서의 아레니우스 관계 플롯(ln kobs 대 1/T(켈빈))을 도시한다.
도 12는 다양한 VH14_1G.VL15 항체 테스트 샘플에서 종의 집단의 유체학적 반경(㎚ 단위) 및 질량%를 도시한다.
도 13은 온도 스트레스 후 다양한 VH14_1G.VL15 항체 제형에 대한 탁도, 시각적 외관 및 pH의 표 형식의 결과를 도시한다.
도 14는 온도 스트레스 후 다양한 VH14_1G.VL15 항체 제형에 대한 표 형식의 HIAC 입자 계수(HIAC particle counting) 결과를 도시한다.
도 15는 SE-HPLC에 의해 측정된 온도 스트레스 후 다양한 VH14_1G.VL15 항체 제형에 대한 순도 백분율의 표 형식의 결과를 도시한다.
도 16은 CE-HPLC에 의해 측정된 온도 스트레스 후 다양한 VH14_1G.VL15 항체 제형에 대한 순도 백분율의 표 형식의 결과를 도시한다.
도 17은 25℃에서 다양한 VH14_1G.VL15 항체 제형에 대한 ln 순도(%) 대 시간(일)을 도시한다.
도 18은 45℃에서 다양한 VH14_1G.VL15 항체 제형에 대한 ln 순도(%) 대 시간(일)을 도시한다.
도 19는 다양한 VH14_1G.VL15 항체 제형에 대한 25℃ 및 45℃에서의 아레니우스 관계 플롯(ln kobs 대 1/T(켈빈))을 도시한다.
도 20은 5℃에서 다양한 VH14_1G.VL15 항체 제형에 대한 ln 순도(%) 대 시간(일)을 도시한다.
도 21은 25℃에서 다양한 VH14_1G.VL15 항체 제형에 대한 ln 순도(%) 대 시간(일)을 도시한다.
도 22는 45℃에서 다양한 VH14_1G.VL15 항체 제형에 대한 ln 순도(%) 대 시간(일)을 도시한다.
도 23은 다양한 VH14_1G.VL15 항체 제형에 대한 5℃, 25℃ 및 45℃에서의 아레니우스 관계 플롯(ln kobs 대 1/T(켈빈))을 도시한다.
도 24는 VH14_1G.VL15가 IV 투여된 것의 안전성, 내약성, PK 및 PD를 평가하기 위한 임상 시험 프로토콜을 도시한다.
도 25는 다양한 용량의 BION-1301의 IV 투여 후 평균 혈청 BION-1301 농도 +/- SD 대 공칭 시간(nominal time)을 도시한다.
도 26은 초기 다양한 용량의 BION-1301의 IV 투여 후 초기 기준선 농도의 백분율로서 혈청 내 평균 유리 APRIL 농도를 도시한다.
도 27A 내지 도 27F는 다양한 용량의 BION-1301의 IV 투여 후 초기 기준선 농도의 백분율로서 혈청 내 혈청 면역글로불린 IgA, IgG 및 IgM 농도의 평균 변화를 도시한다.
도 28a는 다양한 용량의 BION-1301의 IV 투여 후 제29일에 초기 기준선 농도의 백분율로서 혈청 내 혈청 면역글로불린 IgA, IgG 및 IgM 농도의 변화 백분율을 도시한다.
도 28b는 다양한 용량의 BION-1301의 IV 투여 후 제85일에 초기 기준선 농도의 백분율로서 혈청 내 혈청 면역글로불린 IgA, IgG 및 IgM 농도의 변화 백분율을 도시한다.
도 29는 BION-1301의 IV 투여 대 SC 투여의 안전성, 내약성, PK 및 PD를 평가하기 위한 임상 시험 프로토콜을 도시한다.
도 30은 300㎎ BION-1301의 단일 IV 또는 SC 투여 후 BION-1301의 평균(±SD) 혈청 농도 대 시간을 도시한다(세미-로그 스케일).
도 31a는 300㎎ BION-1301의 단일-용량 IV 또는 SC 투여 후 평균(±SD) fAPRIL 농도를 도시한다.
도 31b는 300㎎ BION-1301의 단일-용량 IV 또는 SC 투여 후 fAPRIL의 기준선에 대한 평균(±SD) 변화 백분율을 도시한다.
도 32a 내지 도 32c는 300㎎ BION-1301의 단일-용량 IV 또는 SC 투여 후 시간 경과에 따른 혈청 면역글로불린 수준의 기준선에 대한 평균 변화율(%)을 도시한다(32a=IgA, 32b=IgG, 32c=IgM).
도 33은 건강한 인간 지원자에게 정맥내(IV) 주입에 의해 투여된 BION-1301의 단일 용량 증량(single ascending dose: SAD) 및 다중 용량 증량(multiple ascending dose: MAD) 연구에서 혈청 IgA 및 Gd-IgA1의 감소를 보여준다(ADU-CL-19; ClinicalTrials.gov 식별자: NCT03945318).
도 34는 BION-1301로 치료한 후 IgAN 환자에서의 유리 APRIL 수준, Gd-IgA1 수준, 혈관사이 세포 증식 및 단백뇨의 변화를 보여준다.
따라서, 본 발명은 IgA 신장병증을 치료하는 데 효과적인 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체, 이의 용도 및 제형에 관한 것이다. 본 명세서에 기재된 항체는 중쇄에 대해 서열번호 28 및 경쇄에 대해 서열번호 30의 아미노산 서열을 갖는 항-hAPRIL 항체(VH14_1G.VL15로도 지칭되거나 또는 임상 시험에서 사용되는 것은 BION-1301로도 지칭됨)를 사용하여 예시된다. 이 항체는 인간 APRIL의 인간 B 세포 성숙 항원(BCMA)과 막관통 활성인자 및 칼슘 조절인자 및 사이클로필린 리간드 상호작용인자(TACI)에 대한 결합을 차단하며, 건강한 지원자에서 IgA의 수준을 상당히 감소시키는 것으로 나타났다. IgA 수준의 이러한 감소는 IgA 신장병증이 있는 대상체에서 유사할 것으로 예상되며, 따라서 상당한 치료적 이점이 있을 것으로 예상된다. 본 명세서에 기재된 제형 및 방법에 유용한 항체에 대한 추가적인 특징 및 논의는 국제 특허 제WO2016110587호에서 찾을 수 있으며, 이의 개시내용은 IgA 신장병증의 치료에 유용한 항-APRIL 항체에 관한 것으로서 참조에 의해 본 명세서에 원용된다. 본 명세서에 제공된 바와 같은 제형 및 방법은 IgA 신장병증을 치료하기 위한 항-hAPRIL 항체의 안정적인 제형을 제공할 것으로 예상된다.
본 발명의 설명 내에서, 적어도 90%의 서열 유사성은 보다 바람직하게는 적어도 95%, 예컨대, 적어도 99%의 서열 유사성을 의미하는 것으로 이해되어야 한다.
당업자가 이해하는 바와 같이, "서열 유사성"은 개별 뉴클레오타이드 또는 펩타이드 서열이 유사한 정도를 지칭한다. 두 서열 사이의 유사성의 정도는 보존적 변화의 정도와 합해진 동일성의 정도를 기반으로 한다. "서열 유사성"의 백분율은 동일하거나 또는 보존적으로 변경된 아미노산 또는 뉴클레오타이드의 백분율, 즉, "서열 유사성" = (서열 동일성 %) + (보존적 변화 %)이다.
본 발명의 목적을 위해, "보존적 변화" 및 "동일성"은 더 넓은 용어 "유사성"의 종으로 간주된다. 따라서, 용어 서열 "유사성"이 사용될 때마다, 이는 서열 "동일성" 및 "보존적 변화"를 포함한다. 소정의 실시형태에 따르면, 보존적 변화는 무시되며, 서열 유사성 %는 서열 동일성 %를 지칭한다.
용어 "서열 동일성"은 당업자에게 공지되어 있다. 두 아미노산 서열 또는 두 핵산 서열에 의해 공유되는 서열 동일성의 정도를 결정하기 위해, 서열은 최적의 비교 목적을 위해 정렬된다(예를 들어, 갭이 제2 아미노산 또는 핵산 서열과 최적의 정렬을 위해 제1 아미노산 또는 핵산 서열의 서열에 도입될 수 있음). 이러한 정렬은 비교되는 서열의 전체 길이에 걸쳐 수행될 수 있다. 대안적으로, 정렬은 더 짧은 비교 길이에 걸쳐, 예를 들어, 약 20개, 약 50개, 약 100개 이상의 핵산/염기 또는 아미노산에 걸쳐 수행될 수 있다.
이어서, 상응하는 아미노산 위치 또는 뉴클레오타이드 위치에서 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드가 비교된다. 제1 서열의 위치가 제2 서열의 상응하는 위치와 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드에 의해 점유될 때, 분자는 해당 위치에서 동일하다. 서열 간에 공유되는 동일성의 정도는 전형적으로 두 서열 간의 동일성 백분율로 표현되며, 서열에서 동일한 잔기에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수이다(즉, 동일성 % = 상응하는 위치에서 동일한 잔기의 수/총 위치의 수 × 100). 바람직하게는, 비교되는 두 서열은 동일하거나 또는 실질적으로 동일한 길이이다.
"보존적 변화"의 백분율은 서열 동일성의 백분율과 유사하게 결정될 수 있다. 그러나, 이 경우 원래 잔기의 기능적 특성을 보존할 가능성이 있는 아미노산 또는 뉴클레오타이드 서열의 특정 위치에서의 변화는 변화가 발생하지 않는 것으로 점수가 매겨진다.
아미노산 서열에 대해, 관련 기능적 특성은 아미노산의 물리화학적 특성이다. 본 발명의 폴리펩타이드에서 아미노산에 대한 보존적 치환은 아미노산이 속하는 클래스의 다른 구성원으로부터 선택될 수 있다. 예를 들어, 특정 크기 또는 특성(예컨대, 전하, 소수성 및 친수성)을 갖는 아미노산 그룹에 속하는 아미노산이 특히 생물학적 활성과 직접적으로 연관되지 않은 단백질의 영역에서 단백질의 활성을 실질적으로 변경하지 않고 또 다른 아미노산으로 대체될 수 있다는 것이 단백질 생화학 분야에서 잘 알려져 있다(예를 들어, 문헌[Watson, et al., Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p. 224 (4th Edition 1987)] 참조). 예를 들어, 비극성(소수성) 아미노산은 알라닌, 류신, 아이소류신, 발린, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판 및 타이로신을 포함한다. 극성 중성 아미노산은 글리신, 세린, 트레오닌, 시스테인, 타이로신, 아스파라긴 및 글루타민을 포함한다. 양으로 하전된(염기성) 아미노산은 아르기닌, 라이신 및 히스티딘을 포함한다. 음으로 하전된(산성) 아미노산은 아스파르트산 및 글루탐산을 포함한다. 보존적 치환은, 예를 들어, 양전하를 유지하기 위해 Arg를 Lys로 그리고 그 반대의 경우; 음전하를 유지하기 위해 Asp를 Glu로 그리고 그 반대의 경우; 유리 -OH가 유지되도록 Thr을 Ser로 그리고 그 반대의 경우; 및 유리 -NH2를 유지하기 위해 Asn을 Gln으로 그리고 그 반대의 경우를 포함한다.
뉴클레오타이드 서열의 경우, 관련된 기능적 특성은 주로 소정의 뉴클레오타이드가 전사 및/또는 번역 기구와 관련하여 서열의 오픈 리딩 프레임 내에서 운반하는 생물학적 정보이다. 유전자 코드는 축퇴성(또는 중복성)을 가지며, 여러 코돈이 이들이 코딩하는 아미노산과 관련하여 동일한 정보를 전달할 수 있다는 것은 일반적인 지식이다. 예를 들어, 소정의 종에서, 아미노산 류신은 UUA, UUG, CUU, CUC, CUA, CUG 코돈(또는 DNA의 경우 TTA, TTG, CTT, CTC, CTA, CTG)에 의해 코딩되고, 아미노산 세린은 UCA, UCG, UCC, UCU, AGU, AGC(또는 DNA의 경우 TCA, TCG, TCC, TCT, AGT, AGC)로 지정된다. 번역된 정보를 변경하지 않는 뉴클레오타이드 변경은 보존적 변화로 간주된다.
본 발명의 경우, BLAST(기본 국부 정렬 도구)를 사용하여 뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열 사이의 동일성 및/또는 유사성 백분율을 결정하는 것이 가장 바람직하다.
Altschul 등(1990)의 BLASTn, BLASTp, BLASTx, tBLASTn 및 tBLASTx 프로그램을 사용한 질의는 http://www. ncbi.nlm.nih.gov를 통해 액세스할 수 있는 BLAST의 온라인 버전을 통해 게시될 수 있다. 대안적으로, NCBI 인터넷 사이트를 통해서도 다운로드할 수 있는 BLAST의 독립 실행형 버전(예를 들어, 버전 2.2.29(2014년 1월 3일 출시))이 사용될 수 있다. 바람직하게는, BLAST 질의는 다음 매개변수를 사용하여 수행된다. 아미노산 서열 간의 동일성 및/또는 유사성 백분율을 결정하기 위한 알고리즘: blastp; 단어 크기: 3; 스코어링 매트릭스: BLOSUM62; 갭 비용: 존재: 11, 확장: 1; 구성 조정: 조건부 구성 점수 매트릭스 조정; 필터: 없음; 마스킹: 없음. 뉴클레오타이드 서열 간의 동일성 및/또는 유사성 백분율을 결정하기 위한 알고리즘: blastn; 단어 크기: 11; 질의 범위의 최대 일치: 0; 일치/불일치 점수: 2, -3; 갭 비용: 존재: 5, 확장: 2; 필터: 복잡성이 낮은 영역; 마스킹: 참조 표만을 위한 마스킹.
"보존적 변화"의 백분율은 표시된 알고리즘 및 컴퓨터 프로그램의 도움으로 서열 동일성의 백분율과 유사하게 결정될 수 있다. 일부 컴퓨터 프로그램, 예를 들어, BLASTp는 양성의 수/백분율(= 유사성) 및 동일성의 수/백분율을 나타낸다. 보존적 변화의 백분율은 양성/유사성의 백분율에서 동일성 백분율을 뺌으로써 얻어질 수 있다(보존적 변화의 백분율 = 유사성 백분율 - 동일성 백분율).
추가 양태에 따르면, 본 발명은 본 발명에 따른 항체의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인, 또는 항체의 중쇄 및/또는 경쇄를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. VH 도메인을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열은 바람직하게는 서열번호 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21 및 23, 바람직하게는 서열번호 13, 15 또는 23, 보다 바람직하게는 서열번호 23으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 90%의 서열 유사성을 갖는 폴리뉴클레오타이드 서열이다. VL 도메인을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열은 바람직하게는 서열번호 25의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 90%의 서열 유사성을 갖는 폴리뉴클레오타이드 서열이다. 중쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열은 바람직하게는 서열번호 27의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 90%의 서열 유사성을 갖는 폴리뉴클레오타이드 서열이다. 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열은 바람직하게는 서열번호 29의 폴리뉴클레오타이드 서열과 적어도 90%의 서열 유사성을 갖는 폴리뉴클레오타이드 서열이다.
본 발명은 추가로 적합한 조절 서열의 제어하에 본 발명에 따른 다수의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 다수의 발현 벡터를 포함하는 발현 단위에 관한 것이되, 다수의 폴리뉴클레오타이드는 본 발명에 따른 항체의 VH 도메인 또는 중쇄 및 VL 도메인 또는 경쇄를 암호화한다. 발현 단위는 VH 도메인 또는 중쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 및 VL 도메인 또는 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열이 동일한 발현 벡터 상에 있을 수 있도록 설계될 수 있다. 따라서, 발현 단위는 단일 벡터를 포함할 수 있다. 대안적으로, VH 도메인 또는 중쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 및 VL 도메인 또는 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열은 상이한 발현 벡터 상에 있을 수 있다. 이러한 실시형태에서, 발현 단위는, 예를 들어, 2개와 같은 복수의 발현 벡터를 포함할 것이다.
본 발명의 추가의 양태는 본 발명의 다수의 폴리뉴클레오타이드 및/또는 본 발명의 발현 단위를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다. 발현 단위는 바람직하게는 VH 도메인 또는 중쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 및 VL 도메인 또는 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열 모두를 포함하는 발현 벡터를 포함하는 발현 단위이다.
요법
본 발명의 항체의 제형 및 사용 방법은 인간 APRIL과 BCMA 및/또는 TACI의 상호작용을 차단함으로써 개선될 것으로 공지되거나 또는 예상되는 병태의 치료에 적합하다. 당업계에 이미 공지된 바와 같이, 인간 APRIL과 BCMA 및/또는 TACI의 상호작용의 차단은 면역 세포 증식 및/또는 생존을 저해하므로, 이러한 면역 세포 증식 및/또는 생존의 차단이 유익한 병태, 예컨대, 염증성 질환, Ig 분비 및/또는 자가면역 질환에 의해 매개되는 질환의 치료에 가치가 있을 수 있다. 인간 APRIL과 BCMA 및/또는 TACI의 상호작용의 차단은 또한 암의 치료에 유익할 수 있다.
또한, 본 발명의 항체는 IgA1 또는 IgA2를 포함하는 IgA, IgG, IgM, Gd-IgA 수준과 같은 면역글로불린 수준의 저하가 유익한 다른 병태, 예컨대, Ig 분비, 특히 IgA 분비, Ig 과잉 생산, 예컨대, IgA1 또는 IgA2를 포함하는 IgA, IgG, IgM, Gd-IgA 과잉 생산, 특히 IgA 과잉 생산 또는 Ig 침착, 특히 IgA 침착과 관련된 병태의 치료에 유익할 수 있다. 이러한 병태의 예는 IgA 신장병증 및 기타 형태의 사구체신염, 셀리악병, 유천포창 질환, 헤노흐-쇤라인 자반증 및 Ig 침착과 관련된 다른 자가면역 질환을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 본 명세서에 기재된 바와 같은 항-hAPRIL 항체의 제형 및 사용 방법은 IgA 신장병증의 치료에 특히 적합하다.
IgA 신장병증(IgAN)은 원발성 사구체신염의 주요 원인이다(Berthelot L, et al., 2015, Kidney Int, 88:815-22). IgAN 환자의 예후예측은 다양하며, 여러 요인에 따라 달라진다. 경증 또는 중등도의 단백뇨 수준 및 생검 시 정상적인 신장 기능을 보이는 환자의 경우, 25년의 추적 조사에서 2.8%에서 말기 신장 질환(ESRD)이 발생하였으며(Knoop T, et al., 2017, Nephrol Dial Transplant 32:1841-50), 이는 투석 또는 신장 이식을 초래한다. 일반 IgAN 집단의 경우, 14% 내지 39%에서 진단으로부터 20년 이내에 ESRD가 발생하는 것으로 보고되었다(Berthoux FC, et al., 2008, Semin Nephrol 28:4-9; Manno C, et al., 2007, Am J Kidney Dis, 49:763-75). IgAN 병리학의 중요한 초기 단계는 갈락토스-결핍성 IgA1(gd-IgA1)에 대한 자가항체의 생성으로, 이는 염증, 혈관사이 세포 증식 및 신장 손상을 초래하는 보체 활성화를 유발하는 면역-복합체의 형성으로 이어진다. APRIL은 BCMA 및 TACI에 결합하여 인간 형질아세포/형질 세포의 증식 및 생존을 유도한다(O'Connor BP, et al., 2004, J Exp Med, 199:91-8; Moreaux J, et al., 2007, Haematologica, 92:803-11). APRIL은 IgA-생산 형질 세포로의 B-세포 클래스 전환을 촉진함으로써 IgAN에 기여한다(He B, et al., 2010, Nat Immunol 11:836-45). 중요하게는, 항-APRIL 항체는 IgAN 뮤린 모델에서 신장 손상, 혈청 IgA, IgA 침착 및 단백뇨를 감소시킨다.
혈청 Gd-IgA1 수준은 보고된 바에 따르면 질환 대조군 및 건강한 대조군보다 IgAN 환자에서 유의하게 더 높다. IgAN 환자에서, 혈청 Gd-IA1 수준은 추정된 사구체 여과율, 혈청 IgA 수준 및 세뇨관 위축/사이질 섬유증과 유의한 상관관계가 있었다. CKD 진행은 혈청 Gd-IgA1 수준이 낮은 환자에서보다 혈청 Gd-IgA1 수준이 높은 IgAN 환자에서 더 빈번하였다. Cox 비례 위험 모델은 여러 교란요인(confounder)을 조정한 후 높은 GdIgA1 수준이 CKD 진행에 대한 독립적인 위험 인자임을 보여주었다(Kim et al., J. Clin. Med. 2020 Nov 4;9(11):3549. doi: 10.3390/jcm9113549).
인간화된 APRIL 길항적 단일클론 항체(본 명세서에 기재된 바와 같음)는 건강한 지원자에서 임상 시험을 거쳐 IgAN의 치료를 위해 개발 중이다(ClinicalTrials.gov NCT03945318 참조). 항-hAPRIL 항체에 의한 APRIL의 차단은 건강한 사이노몰구스 원숭이에서 IgA 및 IgM을 유의하게 낮추고 IgG를 더 적은 정도로 낮추는 것으로 나타났으며, 건강한 인간 지원자에서도 유사한 결과를 보여주었다. 또한, 이러한 차단은 건강한 인간 지원자에서 Gd-IgA1을 감소시켰다. 결과적으로, IgAN 환자에서 APRIL의 차단은 IgA, IgG 및 IgM의 수준의 감소 및 gd-IgA1, gd-IgA1에 대한 자가-항체, 면역 복합체 침착 및 신장 손상에서의 상응하는 감소로 이어질 것으로 예상된다.
Myette 등(2019, Kidney International 96(1):104-116)은 IgA 신장병증에 대한 마우스 모델에서 마우스 항-APRIL 항체의 효능을 입증하였으며, 인간 항체 VIS649는 2상 임상 시험의 일부이다(ClinicalTrials.gov NCT04287985).
일반 정의
용어 "항체"는, 예컨대, 리간드가 수용체에 결합하는 것을 저해하거나 또는 수용체의 리간드-유도성 신호전달을 저해함으로써 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 임의의 형태의 항체를 지칭한다. 본 발명의 경우, 생물학적 활성은 수용체 BCMA 및/또는 TACI에 대한 APRIL의 결합을 차단하는 것을 포함한다. 따라서, "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 특히 Duobody® 기술(젠맙(Genmab)) 또는 Hexabody® 기술(젠맙) 또는 항체 단편에 기반한 것과 같은 단일클론 항체(전장 단일클론 항체 포함) 및 다중특이성 항체(예를 들어, 이중특이성 항체)를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
"항체 단편" 및 "항체 결합 단편"은 전형적으로 모 항체의 항원 결합 또는 가변 영역(예를 들어, 하나 이상의 CDR)의 적어도 일부를 포함하는 항체의 항원-결합 단편 및 유사체를 의미한다. 항체 단편은 모 항체의 결합 특이성의 적어도 일부를 유지한다. 전형적으로, 항체 단편은 활성이 몰 기준으로 발현될 때 모 결합 활성의 적어도 10%를 유지한다. 바람직하게는, 항체 단편은 표적에 대한 모 항체의 결합 친화도의 적어도 20%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 100% 이상을 유지한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편; 다이어바디; 선형 항체; 단일쇄 항체 분자, 예를 들어, sc-Fv, 유니바디(젠맙의 기술); 나노바디(아블링스(Ablynx)의 기술); 도메인 항체(도맨티스(Domantis)의 기술); 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이성 항체를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 조작된 항체 변이체는 문헌[Holliger and Hudson, 2005, Nat. Biotechnol. 23:1126-1136]에서 검토되었다.
"Fab 단편"은 하나의 경쇄 및 CH1 및 하나의 중쇄의 가변 영역으로 구성된다. Fab 분자의 중쇄는 또 다른 중쇄 분자와 이황화 결합을 형성할 수 없다.
"Fc" 영역은 항체의 CH1 및 CH2 도메인을 포함하는 2개의 중쇄 단편을 포함한다. 2개의 중쇄 단편은 2개 이상의 이황화 결합에 의해 그리고 CH3 도메인의 소수성 상호작용에 의해 함께 유지된다.
"Fab' 단편"은 2개의 Fab' 단편의 두 중쇄 사이에 사슬간 이황화 결합이 형성되어 F(ab')2 분자를 형성되도록 하나의 경쇄, 및 VH 도메인과 CH1 도메인 및 또한 CH1과 CH2 도메인 사이의 영역을 포함하는 하나의 중쇄의 일부를 포함한다.
"F(ab')2 단편"은 사슬간 이황화 결합이 두 중쇄 사이에 형성되도록 2개의 경쇄 및 CH1과 CH2 도메인 사이에 불변 영역의 일부를 포함하는 2개의 중쇄를 포함한다. 따라서, F(ab')2 단편은 두 중쇄 사이의 이황화 결합에 의해 함께 유지되는 2개의 Fab' 단편으로 구성된다.
"Fv 영역"은 중쇄 및 경쇄 둘 다로부터의 가변 영역을 포함하지만 불변 영역이 결여되어 있다.
"단일쇄 Fv 항체"(또는 "scFv 항체")는 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하는 항체 단편을 지칭하되, 이러한 도메인은 단일 폴리펩타이드 사슬로 존재한다. 일반적으로, Fv 폴리펩타이드는 VH 와 VL 도메인 사이에 폴리펩타이드 링커를 추가로 포함하며, 이는 scFv가 항원 결합을 위한 목적하는 구조를 형성할 수 있게 한다. scFv에 대한 검토에 대해, 문헌[Pluckthun, 1994, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315]을 참조한다. 또한, 국제 공개 제WO 88/01649호 및 미국 특허 제4,946,778호 및 제5,260,203호 참조.
"다이어바디"는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 작은 항체 단편이다. 단편은 동일한 폴리펩타이드 사슬(VH-VL 또는 VL-VH)에서 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 동일한 사슬 상에서 2개의 도메인 간의 페어링을 가능하게 하기에 너무 짧은 링커를 이용함으로써, 도메인은 또 다른 사슬의 상보적 도메인과 쌍을 이루고 2개의 항원-결합 부위를 생성하도록 유도된다. 다이어바디는, 예를 들어, EP 404,097; WO 93/11161; 및 문헌[Holliger et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448]에 보다 충분하게 기술되어 있다.
"듀오바디"는 정상적인 IgG 구조를 갖는 이중특이성 항체이다(Labrijn et al., 2013, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 110(13): 5145-5150).
"헥사바디"는 규칙적인 구조 및 특이성을 유지하면서 증가된 살해 능력을 갖는 항체이다(Diebolder et al., 2014, Science 343 (6176):1260-3).
"도메인 항체 단편"은 중쇄의 가변 영역 또는 경쇄의 가변 영역만을 포함하는 면역학적으로 기능적인 면역글로불린 단편이다. 일부 경우에, 2개 이상의 VH 영역은 2가 도메인 항체 단편을 생성하기 위해 펩타이드 링커와 공유적으로 연결된다. 2가 도메인 항체 단편의 2개의 VH 영역은 동일하거나 또는 상이한 항원을 표적으로 할 수 있다.
본 발명의 항체 단편은 감소된 이황화 결합 능력을 갖는 중쇄의 이량체화(또는 다량체화)를 허용하기에 충분한 불변 영역의 부분을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 중쇄간 이황화 연결에 일반적으로 관여하는 힌지 시스테인 중 적어도 하나는 본 명세서에 기재된 바와 같이 변경된다. 또 다른 실시형태에서, 항체 단편, 예를 들어, Fc 영역을 포함하는 항체 단편은 온전한 항체에 존재할 때, Fc 영역과 일반적으로 관련된 생물학적 기능 중 적어도 하나, 예컨대, FcRn 결합, 항체 반감기 조절, ADCC(antibody dependent cellular cytotoxicity: 항체 의존적 세포 세포독성) 기능 및/또는 보체 결합(예를 들어, 항체가 ADCC 기능 또는 보체 결합에 필요한 글리코실화 프로파일을 갖는 경우)을 유지한다.
용어 "키메라" 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래되거나 또는 특정 항체 클래스 또는 하위클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 또는 상동인 항체를 지칭하는 반면, 사슬(들)의 나머지는 또 다른 종으로부터 유래되거나 또는 또 다른 항체 클래스 또는 하위클래스에 속하는 항체뿐만 아니라 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한 이러한 항체의 단편의 상응하는 서열과 동일하거나 또는 상동이다(예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호 및 문헌[Morrison et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855] 참조).
본 명세서에서 사용되는 용어 "인간화된 항체"는 비인간(예를 들어, 뮤린) 항체뿐만 아니라 인간 항체로부터의 서열을 포함하는 항체의 형태를 지칭한다. 이러한 항체는 비인간 면역글로불린으로부터 유래되는 최소 서열을 포함한다. 일반적으로, 인간화된 항체는 적어도 1개, 전형적으로 2개의 가변 도메인의 실질적으로 모두를 포함할 것이며, 초가변 루프의 모두 또는 실질적으로 모두는 비인간 면역글로불린의 것과 상응하고, FR 영역의 모두 또는 실질적으로 모두는 인간 면역글로불린 서열의 것이다. 인간화된 항체는 또한 선택적으로 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 면역글로불린의 것을 포함할 것이다. 소정의 아미노산 치환이 친화도를 증가시키거나, 인간화된 항체의 안정성을 증가시키거나 또는 다른 이유를 위해 포함될 수 있지만, 설치류 항체의 인간화된 형태는 모 설치류 항체의 동일한 CDR 서열을 필수적으로 포함할 것이다.
본 발명의 항체는 또한 변경된 효과기 기능을 제공하기 위해 변형된(또는 차단된) Fc 영역을 갖는 항체를 포함한다. 예를 들어, 미국 특허 제5,624,821호; WO2003/086310; WO2005/120571; WO2006/0057702; 문헌[Presta, 2006, Adv. Drug Delivery Rev. 58:640-656] 참조. 이러한 변형은 진단 및 요법에 가능한 유익한 효과와 함께 면역계의 다양한 반응을 향상 또는 억제하는 데 사용될 수 있다. Fc 영역의 변경은 아미노산 변화(치환, 결실 및 삽입), 글리코실화 또는 탈글리코실화 및 다중 Fc의 추가를 포함한다. Fc에 대한 변화는 또한 치료적 항체에서 항체의 반감기를 변경할 수 있으며, 반감기가 길어지면 투여 빈도가 줄어들 것이며, 동시에 편의성이 증가하며 물질의 사용이 감소한다. 문헌[Presta, 2005, J. Allergy Clin. Immunol.116:731 at 734-35] 참조.
본 발명의 항체는 또한 완전한 효과기 기능을 제공하는 온전한 Fc 영역을 갖는 항체, 예를 들어, 표적화된 세포에서 보체-의존적 세포독성(CDC) 또는 항체 의존적 세포 세포독성(ADCC)을 유도하는 아이소타입 IgG1의 항체를 포함한다.
항체는 또한 보관 동안 항체의 안정성을 향상시키거나 또는 생체내에서 항체의 반감기를 증가시키는 분자에 접합(예를 들어, 공유 결합)될 수 있다. 반감기를 증가시키는 분자의 예는 알부민(예를 들어, 인간 혈청 알부민) 및 폴리에틸렌 글리콜(PEG)이다. 항체의 알부민-연결 및 PEG화된 유도체는 당업계에 잘 알려진 기법을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Chapman, 2002, Adv. Drug Deliv. Rev. 54:531-545; Anderson and Tomasi, 1988, J. Immunol. Methods 109:37-42; Suzuki et al., 1984, Biochim. Biophys. Acta 788:248-255; 및 Brekke and Sandlie, 2003, Nature Rev. 2:52-62] 참조.
본 명세서에 사용되는 용어 "초가변 영역"은 항원-결합을 담당하는 항체의 아미노산 잔기를 지칭한다. 초가변 영역은 서열 정렬에 의해 정의되는 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로부터의 아미노산 잔기, 예를 들어, 경쇄 가변 도메인의 24번 내지 34번(L1), 50번 내지 56번(L2) 및 89번 내지 97번(L3) 잔기 및 중쇄 가변 도메인의 31번 내지 35번(H1), 50번 내지 65번(H2) 및 95번 내지 102번(H3) 잔기(문헌[Kabat et al., 1991, Sequences of proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.] 참조) 및/또는 구조적으로 정의되는 "초가변 루프"(HVL)로부터의 잔기, 예를 들어, 경쇄 가변 도메인의 26번 내지 32번(L1), 50번 내지 52번(L2) 및 91번 내지 96번(L3) 잔기 및 중쇄 가변 도메인의 26번 내지 32번(H1), 53번 내지 55번(H2) 및 96번 내지 101번(H3) 잔기(문헌[Chothia and Leskl, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917] 참조)를 포함한다.
"프레임워크" 또는 "FR" 잔기 또는 서열은 본 명세서에 정의된 바와 같은 CDR 잔기 이외의 해당 가변 도메인 잔기 또는 서열이다.
소정의 실시형태에 따른 본 발명의 항체는 단리된 항체일 수 있다. "단리된" 항체는 이의 천연 환경의 구성요소로부터 확인, 분리 및/또는 회수된 항체이다. 천연 환경의 오염 성분은 항체에 대해 사용되는 진단적 또는 치료적 용도를 방해할 수 있는 물질이며, 효소, 호르몬 및 다른 단백질성 또는 비-단백질성 용질을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체는 (1) Lowry 방법에 의해 결정되는 바와 같이 항체의 95중량% 초과, 가장 바람직하게는 99중량% 이상으로, (2) 스피닝 컵 서열분석기를 사용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개의 잔기를 얻기에 충분한 정도로 또는 (3) 쿠마씨 블루(Coomassie blue) 또는 바람직하게는 은 염색을 사용하여 환원 또는 비환원 조건하에 SDS-PAGE에 의해 균질하게 정제될 것이다. 단리된 항체는 항체의 천연 환경의 적어도 하나의 구성요소가 존재하지 않을 것이기 때문에 재조합 세포 내에서 인시추(in situ)로 항체를 포함한다. 그러나, 보통 단리된 항체는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.
"단리된" 핵산 분자는 항체 핵산의 천연 공급원에서 일반적으로 회합되는 적어도 하나의 오염 핵산 분자로부터 확인되고 분리되는 핵산 분자이다. 단리된 핵산 분자는 자연에서 발견되는 형태 또는 환경 이외의 것이다. 따라서, 단리된 핵산 분자는 천연 세포에 존재하는 것과 같은 핵산 분자와 구별된다. 그러나, 단리된 핵산 분자는, 예를 들어, 핵산 분자가 천연 세포와 상이한 염색체 위치에 있는 항체를 일반적으로 발현하는 세포 내에 함유된 핵산 분자를 포함한다.
용어 "단일클론 항체"는 본 명세서에서 사용될 때 실질적으로 동종의 항체 집단으로부터 얻어진 항체를 지칭하며, 즉, 집단을 포함하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생적 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 단일클론 항체는 매우 특이적이며, 단일 항원 부위에 대해 지시된다. 또한, 전형적으로 상이한 결정기(에피토프)에 대해 지시된 상이한 항체를 포함하는 종래의(다중클론) 항체 제제와 대조적으로, 각 단일클론 항체는 항원 상의 단일 결정기에 대해 지시된다. 수식어 "단일클론"은 항체의 실질적으로 동종의 집단으로부터 얻어지는 항체의 특징을 나타내며, 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 단일클론 항체는 문헌[Kohler et al., 1975, Nature 256:495]에 의해 처음 기술된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 또는 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호 참조). "단일클론 항체"는 또한, 예를 들어, 문헌[Clackson et al., 1991, Nature 352:624-628 및 Marks et al., 1991, J. Mol. Biol. 222:581-597]에 기술된 기법을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 본 명세서에서 단일클론 항체는 특히 "키메라" 항체를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "면역 세포"는 조혈 기원이며 면역 반응에서 역할을 하는 세포를 포함한다. 면역 세포는 림프구, 예컨대, B 세포 및 T 세포, 자연 살해 세포, 골수성 세포, 예컨대, 단핵구, 대식세포, 호산구, 비만 세포, 호염기구 및 과립구를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "면역접합체"는 세균 독소, 세포독성 약물 또는 방사선 독소와 같은 치료적 모이어티에 접합된 항-인간 APRIL 항체 또는 이의 단편을 지칭한다. 독성 모이어티는 당업계에서 이용 가능한 방법을 사용하여 본 발명의 항체에 접합될 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 서열 "변이체" 또는 "변이체 서열"은 하나 이상의 아미노산 잔기에서 개시된 서열과 다르지만 모 분자의 생물학적 활성을 유지하는 서열을 지칭한다. 본 발명은 다양한 서열에 의해 명시적으로 개시된 항체의 변이체를 포함한다. VH 도메인 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열의 경우, 일부 실시형태에 따르면, 변이체 서열은 함께 취해진 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열에 대해 최대 6개의 아미노산 치환, 예컨대, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. VL 도메인 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열에 대해 유사하게, 일부 실시형태에 따르면, 변이체 서열은 함께 취해진 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열에 대해 최대 6개의 아미노산 치환, 예컨대, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개의 아미노산 치환을 포함할 수 있다.
"보존적으로 변형된 변이체" 또는 "보존적 아미노산 치환"은 아미노산의 치환이 당업자에게 공지되어 있으며, 생성된 분자의 생물학적 활성을 변경하지 않고 일반적으로 이루어질 수 있음을 지칭한다. 당업자는 일반적으로 폴리펩타이드의 비필수 영역에서의 단일 아미노산 치환이 생물학적 활성을 실질적으로 변경하지 않음을 인식한다(예를 들어, 문헌[Watson, et al., Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p. 224 (4th Edition 1987)] 참조).
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약"은 당업자에 의해 결정된 바와 같이 특정 값에 대해 허용 가능한 오차 범위 내에 있는 값을 지칭하며, 이는 부분적으로 값이 측정 또는 결정되는 방법, 즉, 측정 시스템의 한계에 따라 달라질 것이다. 예를 들어, "약"은 해당 당업계의 관행에 따라 1 또는 1 이상의 표준 편차 이내를 의미할 수 있다. 대안적으로, "약" 또는 "본질적으로 포함하는"은 최대 20%의 범위를 의미할 수 있다. 또한, 특히 생물학적 시스템 또는 과정과 관련하여, 용어는 최대 10-배 또는 최대 5-배의 값을 의미할 수 있다. 본 출원 및 청구범위에 특정 값이 제공되는 경우, 달리 언급되지 않는 한, "약" 또는 "본질적으로 포함하는"의 의미는 특정 값에 대한 허용 가능한 오차 범위 내에서 추정되어야 함을 의미한다.
용어 "수"는 하나 이상을 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 사용 맥락에 따라, "수"는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10으로부터 선택되는 임의의 적합한 수를 지칭할 수 있다. 소정의 실시형태에 따르면, "수"는 "복수"의 의미를 가질 수 있다. 사용 맥락에 따라, "복수"는 2, 3, 4, 5, 6, 7 8, 9, 10으로부터 선택되는 임의의 적합한 수를 지칭할 수 있다.
리간드/수용체, 항체/항원 또는 다른 결합 쌍을 지칭할 때, "특이적으로" 결합한다는 단백질의 이종 집단 및/또는 다른 생물제제에서 단백질, 예를 들어, APRIL의 존재의 결정인자인 결합 반응을 나타낸다. 따라서, 지정된 조건하에, 특정 리간드/항원은 특정 수용체/항체에 결합하고, 샘플에 존재하는 다른 단백질에 상당량으로 결합하지 않는다.
동물, 인간, 실험 대상체, 세포, 조직, 기관 또는 생물학적 유체에 적용될 때, "투여", "요법" 및 "치료"는 동물, 인간, 대상체, 세포, 조직, 기관 또는 생물학적 유체에 대한 외인성 약제학적, 치료적, 진단적 작용제 또는 조성물의 접촉을 지칭한다. "투여", "요법" 및 "치료"는, 예를 들어, 치료적, 약동학적, 진단적, 연구 및 실험 방법을 지칭할 수 있다. 세포의 치료는 세포에 대한 시약의 접촉뿐만 아니라 유체가 세포와 접촉되는 경우 유체에 대한 시약의 접촉을 포함한다. "투여", "요법" 및 "치료"는 또한 시약, 진단, 결합 조성물에 의한 또는 또 다른 세포에 의한, 예를 들어, 세포의 시험관내 및 생체외 처리를 의미한다. 본 발명의 설명 내에서, 용어 "시험관내" 및 "생체외"는 유사한 의미를 가지며, 상호교환적으로 사용될 수 있다. 본 발명 내에서, "병태"의 치료는 항-인간 APRIL 항체의 예방적 및 치유적 용도를 포함하는 임의의 치료적 용도를 포함한다. 따라서, 용어 "병태"는 질환 상태를 지칭할 수 있지만 또한 생리학이 유해한 상태로 변경되지 않는 예방적 환경의 생리학적 상태를 지칭할 수도 있다.
항체 DNA는 또한, 예를 들어, 상동성 뮤린 서열 대신 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인에 대한 코딩 서열을 대체함으로써(미국 특허 제4,816,567호; Morrison, et al., 1984, Proc. Natl Acad. Sci. USA, 81:6851) 또는 면역글로불린 코딩 서열에 비면역글로불린 물질(예를 들어, 단백질 도메인)에 대한 코딩 서열의 전부 또는 일부를 공유적으로 결합시킴으로써 변형될 수 있다. 전형적으로, 이러한 비면역글로불린 물질은 항체의 불변 도메인으로 치환되거나, 또는 항원에 대해 특이성을 갖는 하나의 항원-조합 부위 및 상이한 항원에 대해 특이성을 갖는 또 다른 항원-조합 부위를 포함하는 키메라 2가 항체를 생성하기 위해 항체의 하나의 항원-조합 부위의 가변 도메인으로 치환된다.
본 발명의 항-인간 APRIL 항체의 아미노산 서열 변이체는 코딩 DNA에 적절한 뉴클레오타이드 변화를 도입함으로써 또는 펩타이드 합성에 의해 제조된다. 이러한 변이체는, 예를 들어, 항-APRIL 항체에 대해 나타낸 아미노산 서열 내의 잔기로부터의 결실 및/또는 잔기 내로의 삽입 및/또는 잔기의 치환을 포함한다. 결실, 삽입 및 치환의 임의의 조합은 최종 작제물에 도달하도록 이루어지되, 단 최종 작제물은 목적하는 특성을 갖는다. 아미노산 변화는 또한 항-APRIL 항체의 번역 후 과정을 변경, 예컨대, 글리코실화 부위의 수 또는 위치를 변경할 수 있다.
돌연변이유발을 위한 바람직한 위치인 항-APRIL 항체 폴리펩타이드의 소정의 잔기 또는 영역의 확인에 유용한 방법은 문헌[Cunningham and Wells, 1989, Science 244: 1081-1085]에 기술되어 있는 바와 같이 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"로 불린다. 여기서, 잔기 또는 표적 잔기기의 그룹이 확인되고(예를 들어, 하전된 잔기, 예컨대, Arg, Asp, His, Lys 및 Glu), 아미노산과 APRIL 항원의 상호작용에 영향을 미치기 위해 중성 또는 음으로 하전된 아미노산(가장 바람직하게는, 알라닌 또는 폴리알라닌)으로 대체된다. 이어서, 치환에 대한 작용 민감성을 보이는 아미노산 잔기는 치환 부위에 또는 치환 부위에 대해 추가의 또는 다른 변이체를 도입함으로써 정제된다. 따라서, 아미노산 서열 변이를 도입하기 위한 부위가 미리 결정되지만, 돌연변이 자체의 특성은 미리 결정될 필요가 없다. 예를 들어, 주어진 부위에서 돌연변이의 성능을 분석하기 위해, Ala 스캐닝 또는 무작위 돌연변이유발이 표적 코돈 또는 영역에서 수행되고, 발현된 항-APRIL 항체의 변이체가 목적하는 활성에 대해 스크리닝된다.
일반적으로, 항-APRIL 항체의 아미노산 서열 변이체는 중쇄 또는 경쇄의 원래 항체의 아미노산 서열과 적어도 75%, 보다 바람직하게는 적어도 80%, 보다 바람직하게는 적어도 85%, 보다 바람직하게는 적어도 90%, 가장 바람직하게는 적어도 95%, 98% 또는 99%의 아미노산 서열 유사성을 갖는 아미노산 서열을 가질 것이다. 이 서열에 대한 유사성 또는 상동성은 위에서 정의된 바와 같다.
본 명세서에서 바람직한 것으로 확인된 특성을 갖는 항체는 시험관내에서 증가된 생물학적 활성 또는 적합한 결합 친화도에 대해 스크리닝될 수 있다. hAPRIL.01A와 같은 인간 APRIL 상의 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 스크리닝하기 위해, 문헌[Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988)]에 기술된 바와 같은 일상적인 교차-차단 검정이 수행될 수 있다. 동일한 에피토프에 결합하는 항체는 이러한 검정에서 교차 차단될 가능성이 있지만, 교차-차단은 중첩 에피토프 또는 심지어 근처의 비중첩 에피토프에 결합한 항체에 의한 항체 결합의 입체적 방해로 인해 발생하기 때문에, 모든 교차-차단 항체가 반드시 정확히 동일한 에피토프에 결합하는 것은 아닐 것이다.
대안적으로, 항체가 관심 에피토프에 결합하는지 여부를 결정하기 위해, 예를 들어, 문헌[Champe et al., 1995, J. Biol. Chem. 270:1388-1394]에 기술되어 있는 에피토프 매핑이 수행될 수 있다. 인간 APRIL에서 아미노산 잔기의 문헌[Cunningham and Wells, 1989, Science 244: 1081-1085]에 기술된 바와 같은 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발" 또는 일부 다른 형태의 점 돌연변이유발이 또한 본 발명의 항-APRIL 항체에 대한 기능적 에피토프를 결정하는 데 사용될 수 있다.
항체의 에피토프를 매핑하는 또 다른 방법은 Slootstra 등(Slootstra et al., 1996, Mol. Diversity 1: 87-96) 및 Timmerman 등(Timmerman et al., 2007, J. Mol. Recognit. 20: 283-299)에 의해 기술된 바와 같은 신용카드 형식의 미니 PEPSCAN 카드를 사용하여 스크리닝될 수 있는 합성 선형 및 CLIPS 펩타이드에 대한 항체의 결합을 연구하는 것이다. 각 펩타이드에 대한 항체의 결합은 PEPSCAN-기반 효소-결합 면역 검정(ELISA)에서 결정된다.
hAPRIL.01A와 동일한 에피토프에 결합하는 추가적인 항체는, 예를 들어, 에피토프에 대한 결합에 대해 APRIL에 대해 생성된 항체의 스크리닝에 의해 또는 에피토프 서열을 포함하는 인간 APRIL의 단편을 포함하는 펩타이드를 이용한 동물의 면역화에 의해 얻어질 수 있다. 동일한 기능적 에피토프에 결합하는 항체는 유사한 APRIL 결합, 및 BCMA 및 TACI 차단 활성과 같은 유사한 생물학적 활성을 나타낼 것으로 예상될 수 있으며, 이러한 활성은 항체의 기능적 검정에 의해 확인될 수 있다.
항체는 IgM, IgG, IgD, IgA 및 IgE를 비롯한 임의의 클래스의 면역글로불린으로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는, 항체는 IgG 항체이다. IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 비롯한 IgG의 임의의 아이소타입이 사용될 수 있다. IgG 아이소타입의 변이체가 또한 상정된다. 항체는 하나 이상의 클래스 또는 아이소타입으로부터의 서열을 포함할 수 있다. 목적하는 생물학적 활성을 생성하기 위해 필요한 불변 도메인 서열의 최적화는 당업계에 공지되거나 또는 본 명세서에 기재된 바와 같은 생물학적 검정을 사용하여 항체를 스크리닝함으로써 쉽게 달성된다.
마찬가지로, 경쇄의 어느 클래스라도 본 명세서의 조성물 및 방법에 사용될 수 있다. 특히, 카파, 람다 또는 이의 변이체는 본 발명의 조성물 및 방법에 유용하다.
본 발명의 항체 및 항체 단편은 또한 세포독성 페이로드, 예컨대, 세포독성제 또는 방사성뉴클레오타이드, 예컨대, 99Tc,90Y, 111In, 32P, 14C, 125I, 3H, 131I, 11C, 15O, 13N, 18F, 35S, 51Cr, 57To, 226Ra, 60Co, 59Fe, 57Se, 152Eu, 67Cu, 217Ci, 211At, 212Pb, 47Sc, 109Pd, 234Th 및 40K, 157Gd, 55Mn, 52Tr 및 56Fe와 접합될 수 있다. 이러한 항체 접합체는 표면에서 표적(해당 항체에 대한 항원)을 발현하는 세포를 선택적으로 표적화하고 죽이기 위한 면역요법에 사용될 수 있다. 예시적인 세포독성제는 리신(ricin), 빈카 알칼로이드, 메토트렉세이트, 슈도모나스(Psuedomonas) 외독소, 사포린, 디프테리아 독소, 시스플라틴, 독소루비신, 아브린 독소, 겔로닌 및 미국자리공(pokeweed) 항바이러스 단백질을 포함한다.
항체 및 본 발명의 항체 단편은 또한 형광단, 예컨대, 희토류 킬레이트, 플루오레세인 및 이의 유도체, 로다민 및 이의 유도체, 아이소티오사이아네이트, 피코에리트린, 피코사이아닌, 알로피코사이아닌, o-프탈알데하이드, 플루오레사민, 152Eu, 단실, 움벨리페론, 루시페린, 루미날 라벨, 아이소루미날 라벨, 방향족 아크리디늄 에스터 라벨, 이미다졸 라벨, 아크리디늄 염 라벨, 옥살레이트 에스터 라벨, 에쿼린 라벨, 2,3-다이하이드로프탈라진다이온, 바이오틴/아비딘, 회전 라벨 및 안정적인 유리 라디칼을 포함한 형광성 또는 화학발광성 라벨과 접합될 수 있다.
문헌[Hunter et al., 1962, Nature 144:945; David et al., 1974, Biochemistry 13:1014; Pain et al., 1981, J. Immunol. Meth. 40:219; 및 Nygren, J., 1982, Histochem. and Cytochem. 30:407]에 기술된 방법들을 포함하여 본 발명의 항체 분자 또는 단백질 분자를 다양한 모이어티에 접합하기 위한 당업계에 공지된 임의의 방법이 사용될 수 있다. 항체 및 단백질을 접합하는 방법은 통상적이며, 당업계에 잘 알려져 있다.
항체 정제
재조합 기법을 사용할 때, 항체는 주변세포질 공간에서 세포내로 생산되거나 또는 배지에 직접 분비될 수 있다. 항체가 세포내로 생산되는 경우, 제1 단계로서, 미립자 찌꺼기인 숙주 세포 또는 용해된 단편이, 예를 들어, 원심분리 또는 한외여과에 의해 제거된다. 문헌[Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167]은 대장균의 주변세포질 공간에 분비된 항체를 단리하기 위한 절차를 기술하고 있다. 간략하게는, 세포 페이스트는 소듐 아세테이트(pH 3.5), EDTA 및 페닐메틸설폰일플루오라이드(PMSF)의 존재하에 약 30분에 걸쳐 해동된다. 세포 찌꺼기는 원심분리에 의해 제거될 수 있다. 항체가 배지에 분비되는 경우, 이러한 발현 시스템으로부터의 상청액은 일반적으로 상업적으로 이용 가능한 단백질 농도 필터, 예를 들어, Amicon 또는 Millipore Pellicon 한외여과 유닛을 사용하여 먼저 농축된다. PMSF와 같은 프로테이스 저해제가 단백질 분해를 저해하기 위해 임의의 전술한 단계에 포함될 수 있으며, 항생제가 우발적 오염물질의 성장을 방지하기 위해 포함될 수 있다.
세포로부터 제조된 항체 조성물은, 예를 들어, 하이드록시아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 및 친화성 크로마토그래피를 사용하여 정제될 수 있고, 친화성 크로마토그래피가 바람직한 정제 기법이다. 친화성 리간드로서 단백질 A의 적합성은 항체에 존재하는 임의의 면역글로불린 Fc 영역의 종 및 아이소타입에 의존한다. 단백질 A는 인간 Ig.감마1, Ig.감마2 또는 Ig.감마4 중쇄에 기초하여 항체를 정제하는 데 사용될 수 있다(Lindmark et al., 1983, J. Immunol. Meth. 62:1-13). 단백질 G는 모든 마우스 아이소타입 및 인간.감마.3에 대해 권장된다(Guss et al., 1986, EMBO J 5:1567-1575). 친화성 리간드가 부착되는 매트릭스는 가장 흔하게는 아가로스이지만, 다른 매트릭스도 이용 가능하다.
제어된 기공 유리 또는 폴리(스타이렌다이바이닐)벤젠과 같은 기계적으로 안정적인 매트릭스는 아가로스가 달성할 수 있는 것보다 더 빠른 유속 및 더 짧은 처리 시간을 가능하게 한다. 항체가 CH3 도메인을 포함하는 경우, Bakerbond ABX™ 수지(제이. 티. 베이커(J. T. Baker), 뉴저지주 필립스버그 소재)가 정제에 유용하다. 이온-교환 칼럼 상의 분획화, 에탄올 침전, 역상 HPLC, 실리카 상의 크로마토그래피, 음이온 또는 양이온 교환 수지(예컨대, 폴리아스파르트산 칼럼)의 헤파린 SEPHAROSE™ 크로마토그래피 상의 크로마토그래피, 크로마토포커싱, SDS-PAGE 및 암모늄 설페이트 침전과 같은 단백질 정제를 위한 다른 기법이 또한 회수될 항체에 따라 이용 가능하다.
일 실시형태에서, 당단백질이 렉틴 기질(예를 들어, 렉틴 친화도 칼럼) 상의 흡착을 사용하여 정제되어 제제로부터 푸코스-함유 당단백질이 제거되고, 이에 의해 푸코스-유리 당단백질이 농축될 수 있다.
약제학적 제형
본 발명은 항-인간 APRIL 항체의 약제학적 제형을 포함한다. 약제학적 또는 멸균 조성물을 제조하기 위해, 항체, 특히 항체 또는 이의 단편은 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제와 혼합되며, 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences and U.S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, PA (1984)]을 참조한다. 치료제 및 진단제의 제형은, 예를 들어, 동결건조된 분말, 슬러리, 수성 용액 또는 현탁액의 형태로 생리학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 안정화제와 혼합함으로써 제조될 수 있다(예를 들어, 문헌[Hardman, et al., 2001, Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, NY; Gennaro, 2000, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, NY; Avis, et al. (eds.), 1993, Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.), 1990, Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.), 1990, Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY; Weiner and Kotkoskie, 2000, Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, NY] 참조).
단독으로 또는 통상적인 항암 약물과 같은 또 다른 작용제와 조합하여 투여되는 항체 조성물의 독성 및 치료적 효능은, 예를 들어, LD50(집단의 50%에 치명적인 용량) 및 ED50(집단의 50%에 치료학적 유효 용량)을 결정하기 위해 세포 배양물 또는 실험 동물에서 표준 약제학적 절차에 의해 결정될 수 있다. 독성과 치료적 효과 사이의 용량 비는 치료 지수이고, LD50과 ED50 사이의 비로서 나타낼 수 있다. 이러한 세포 배양 검정 및 동물 연구로부터 얻어진 데이터는 인간에서 사용하기 위한 투여량의 범위를 만드는 데 사용될 수 있다. 이러한 화합물의 투여량은 바람직하게는 독성이 거의 없거나 또는 전혀 없는 ED50을 포함하는 다양한 순환 농도 내에 있다. 투여량은 사용되는 투여 형태 및 이용되는 투여 경로에 따라 이러한 범위 내에서 변할 수 있다.
적합한 투여 경로는 근육내, 정맥내 또는 피하 투여와 같은 비경구 투여 및 경구 투여를 포함한다. 약제학적 조성물에 사용되거나 또는 본 발명의 방법을 실시하기 위해 사용되는 항체의 투여는 경구 섭취, 흡입, 국소 적용 또는 피부, 피하, 복강내, 비경구, 동맥내 또는 정맥내 주사와 같은 다양한 종래의 방식으로 수행될 수 있다. 일 실시형태에서, 본 발명의 항체는 정맥내로 투여된다. 또 다른 실시형태에서, 본 발명의 항체는 피하로 투여된다.
대안적으로, 예를 들어, 작용 부위에 항체의 직접적인 주사를 통해, 종종 데포 또는 지속 방출 제형으로 전신 방식보다는 국부로 항체를 투여할 수 있다. 또한, 표적화된 약물 전달 시스템에서 항체를 투여할 수 있다.
바람직한 용량 프로토콜은 상당한 바람직하지 않은 부작용을 피하면서 목적하는 치료적 효과(예를 들어, IgA 수준 감소)를 달성하는 최대 용량 또는 용량 빈도를 포함하는 것이다. 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체의 투여는 정맥내 주사 또는 피하 주사(예를 들어, 허벅지, 복부, 상완 등에)에 의해 약 매주, 약 2주마다, 약 3주마다, 약 4주마다, 약 8주마다 등일 수 있다. 주사 또는 주입당 용량은 약 10㎎ 내지 1350㎎, 예를 들어, 약 50㎎, 약 150㎎, 약 300㎎, 약 450㎎, 약 600㎎, 약 750㎎, 약 1000㎎ 또는 약 1350㎎일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 항-APRIL 항체의 투여는 투여 이벤트당(여기서 "투여 이벤트"는 투여가 개체의 동일하거나 또는 상이한 부위에 제공되는 경우, 개체에게 단일 투여를 제공하기 위한 주사와 같은 하나 이상의 전달을 지칭함) 약 600㎎의 용량으로 매주 1회 또는 2주에 1회의 투여 빈도로 피하 주사에 의해 이루어질 것이다. 정맥내 투여를 위한 바람직한 제형은 약 15 ㎎/㎖ 내지 25 ㎎/㎖ 또는 약 20㎎의 농도의 완충 수용액인 반면, 피하 투여를 위한 바람직한 제형은 약 125㎎ 내지 175㎎ 또는 약 150㎎이다. 이러한 제형은 바람직하게는 pH 6.3±0.2의 L-히스티딘, L-아르기닌, 소르비톨 및 폴리소르베이트 20을 포함한다. 바람직하게는, L-히스티딘은 약 8mM 내지 12mM 또는 약 10mM의 농도이고, L-아르기닌은 약 60mM 내지 90mM 또는 약 75mM의 농도이며, 소르비톨은 약 2.4% 내지 3.6% 또는 약 3%(w/w)의 농도이고, 폴리소르베이트 20은 약 0.008% 내지 0.012% 또는 약 0.01%(w/w)의 농도이다. 보다 바람직하게는, 완충 수용액은 pH 6.3±0.2의 10mM L-히스티딘, 75mM L-아르기닌, 3%(w/w) 소르비톨 및 0.01%(w/w) 폴리소르베이트 20을 포함하거나, 이로 필수적으로 이루어지거나 또는 이루어진다. 완충 수용액의 pH는 염산 및 소듐 하이드록사이드와 같은 적합한 멸균 산/염기를 사용하여 6.3±0.2로 조정될 수 있다. 정맥내 주입을 위한 제형은 주입하기 전에 멸균 식염수(0.9%)에 희석될 수 있으며, 예를 들어, 목적하는 양의 항-APRIL 항체는 약 250㎖의 부피로 희석될 수 있고, 예를 들어, 15㎖의 20 ㎎/㎖ 항체 제형은 300㎎ 용량을 주입하기 전에 235㎖의 멸균 식염수 용액으로 희석될 수 있다. 피하 주사를 위한 제형은 추가 희석 없이 사용될 수 있다.
항체-관련 병태를 치료하기 위해 본 명세서에 개시된 항-APRIL 항체의 치료학적 유효량 및 투여 빈도 및 이를 이용한 치료 기간은 병태의 특성 및 중증도, 항체의 효능, 투여 방식, 대상체의 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별 및 식이 및 치료에 대한 대상체의 반응을 포함하는 다양한 요인에 따라 달라질 수 있으며, 담당 의사에 의해 결정될 수 있다. 항-APRIL 항체는 1일 1회, 2일에 1회, 3일에 1회, 매주 2회, 매주 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 매월 1회, 6주에 1회, 2개월에 1회 또는 3개월에 1회 또는 담당 의사가 적절하다고 판단되는 경우 투여될 수 있다.
항-APRIL 항체는 적어도 약 1주, 2주, 1개월(4주), 6주, 2개월, 3개월, 6개월, 1년, 2년, 3년 또는 그 이상의 기간에 걸쳐 또는 담당 의사가 적절하다고 판단되는 경우 투여될 수 있다. APRIL-관련 병태는 만성 병태일 수 있다. 만성 병태는, 예를 들어, 적어도 약 6주, 2개월, 1년 또는 그 이상 동안 존재할 수 있다. 항체는 적어도 약 6주, 2개월, 3개월 또는 6개월, 1년 또는 개체의 의료 서비스에 필요한 경우 심지어 수년의 기간에 걸쳐 투여될 수 있다.
항-APRIL 항체는 또한 항체-관련 병태를 치료하기 위해 불규칙한 방식으로 투여될 수 있다. 로딩 용량으로 효과적인 표적 항체 농도(치료적 용량 수준)를 조기에 달성한 후 항체를 유지 용량으로 투여(프론트 로딩)하는 것은 종래의 요법보다 더 낮은 총 항체 용량을 필요로 하며 최대 표적 참여(target engagement)까지의 시간을 단축한다는 측면에서 더 효과적일 수 있다. 본 명세서에 사용된 바와 같은, 이러한 투여 프로토콜은 "로딩/유지 투여 프로토콜"로 지칭된다. 효과적인 표적 항체 농도는 로딩 용량을 사용하여 1일 이하를 포함하여 4주 이하, 바람직하게는 3주 이하, 보다 바람직하게는 2주 이하, 가장 바람직하게는 1주 이하에 도달할 수 있다. 그런 다음, 목표 혈청 농도는 나머지 치료 양생법 동안 또는 질환 증상의 억제가 달성될 때까지 동일하거나 또는 더 적은(또는 덜 빈번한) 유지 용량의 투여에 의해 유지된다.
약물 투여를 언급할 때 용어 "프론트 로딩"은 초기 로딩 용량에 뒤이은 유지 용량을 지칭한다. 초기 로딩 용량(단일 또는 다중)은 동물 또는 인간 환자의 혈청 약물 농도를 효과적인 목표 혈청 농도로 보다 신속하게 증가시키기 위한 것이다. 다양한 실시형태에서, 프론트 로딩은 항체가 목표 혈청 농도에 도달하도록 3주 이하에 걸쳐 전달된 초기 투여에 의해 달성된다. 바람직하게는, 로딩 용량 또는 일련의 용량은 2주 이하, 보다 바람직하게는 1주 이하, 예를 들어, 1일 이하 동안 투여된다. 가장 바람직하게는, 로딩 투여는 단일 투여이고, 그 후 적어도 1주 동안 유지 투여가 없으며, 로딩 투여는 1일 이내에 투여된다. 항체 약물에 대한 유해한 면역 반응을 피하기 위해, 정맥내 주사에 의해 투여되는 항체의 로딩 용량을 전달하는 것이 바람직할 수 있다. 본 발명은 정맥내 또는 피하 투여에 의한 로딩 및 유지 용량의 프론트 로딩 약물 전달을 포함한다.
로딩 용량의 투여는, 예를 들어, 적어도 약 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주 또는 8주 간격의 시간 간격으로 1회 이상의 투여일 수 있다. 일부 실시형태에서, 적어도 1회의 로딩 용량은 1회 이상의 정맥내 주사에 의해 투여되고, 이어서 1회 이상의 정맥내 또는 피하 투여에 의해 적어도 1회의 유지 용량이 투여된다. 다른 실시형태에서, 지침은, 예를 들어, 1회 이상의 정맥내 또는 피하 투여에 의해 적어도 1회의 로딩 용량을 투여하고, 1회 이상의 정맥내 또는 피하 투여에 의해 적어도 1회의 유지 용량을 투여하는 것에 대한 것일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 적어도 1회의 로딩 용량뿐만 아니라 적어도 1회의 유지 용량 둘 모두는 피하로 투여된다. 다른 실시형태에서, 적어도 1회의 로딩 용량이 정맥내 주입에 의해 투여된 후 적어도 1회의 유지 용량이 피하로 투여된다. 예를 들어, 치료 방법은 정맥내 주입 또는 피하 주사에 의해 항-APRIL 항체의 150㎎ 내지 1350㎎의 로딩 용량을 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 로딩 용량 후(예를 들어, 로딩 용량 후 1주, 2주, 3주 또는 4주), 항-APRIL 항체의 600㎎ 이하의 유지 용량이 4주 이하마다, 바람직하게는 3주 이하마다, 보다 바람직하게는 2주 이하마다, 실시형태에서 1주 이하마다 피하 주사에 의해 투여될 수 있다. 로딩 및 유지 투여량 및 간격의 선택은 동물 또는 인간 환자가 신체에 대한 항체의 투여를 견딜 수 있는 능력 및 달성하고자 하는 APRIL의 목적하는 혈청 수준에 따라 이루어질 수 있다.
약물의 로딩 용량은 후속 유지 용량보다 더 클 수 있다(예를 들어, 약 1.5배, 2배, 3배, 4배 또는 5배). 하나 이상의 치료적으로 효과적인 유지 용량은 본 명세서에 기재된 임의의 치료학적 유효량일 수 있다. 로딩 용량은 유지 용량보다 약 2배 또는 3배 더 클 수 있다. 항-APRIL 항체는 유지 용량 이전에 2회(또는 그 이상)의 로딩 용량으로 투여될 수 있다. 항체 또는 이의 단편의 제1 로딩 용량은 제1일에 투여될 수 있고, 제2 로딩 용량은, 예를 들어, 약 1 또는 2주 후에 투여될 수 있으며, 유지 용량은, 예를 들어, 그 후 치료 기간 동안 매주 1회 또는 2주에 1회 투여될 수 있다. 제1 로딩 용량은 유지 용량보다 약 3배 또는 4배 더 클 수 있고, 제2 로딩 용량은 유지 용량보다 약 2배, 3배, 4배, 5배 이상 더 클 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, "저해하다", 또는 "치료하다" 또는 "치료"는 질환과 관련된 증상의 발생의 지연 및/또는 상기 질환과 함께 발생하거나 또는 발생할 것으로 예상되는 이러한 증상의 중증도의 감소를 포함한다. 해당 용어는 기존의 증상을 개선하고, 추가적인 증상을 예방하며, 이러한 증상의 근본적인 원인을 개선 또는 방지하는 것을 추가로 포함한다. 따라서, 해당 용어는 질환이 있는 척추동물 대상체에게 유익한 결과가 수여되었음을 나타낸다.
치료 목적을 위한 본 발명의 항체는 치료학적 유효량으로 투여된다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "치료학적 유효량" 또는 "유효량"은 세포, 조직 또는 대상체에 단독으로 또는 추가적인 치료제와 조합하여 투여될 때 치료될 질환 또는 병태를 예방 또는 개선하는 데 효과적인 항-APRIL 항체 또는 이의 단편의 양을 지칭한다. 치료학적 유효 용량은 추가로 증상의 개선, 예를 들어, 관련 의학적 병태의 치료, 치유, 예방 또는 개선 또는 이러한 병태의 치료, 치유, 예방 또는 개선 속도의 증가를 초래하기에 충분한 화합물의 양을 지칭한다. 단독으로 투여되는 개별 활성 성분에 적용될 때, 치료학적 유효 용량은 해당 성분 단독을 지칭한다. 조합에 적용될 때, 치료학적 유효 용량은 조합하여, 연속으로 또는 동시에 투여되는지 여부에 관계없이 치료적 효과를 초래하는 활성 성분의 조합된 양을 지칭한다. 치료제의 유효량은 전형적으로 적어도 10%; 통상적으로 적어도 20%; 바람직하게는 적어도 약 30%; 보다 바람직하게는 적어도 40%, 가장 바람직하게는 적어도 50%까지 증상을 감소시킬 것이다.
제2 치료제와의 공동-투여 또는 치료 방법은 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어, 문헌[Hardman, et al. (eds.), 2001, Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th ed., McGraw-Hill, New York, NY; Poole and Peterson (eds.), 2001, Pharmacotherapeutics for Advanced Practice: A Practical Approach, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., PA; Chabner and Longo (eds.), 2001, Cancer Chemotherapy and Biotherapy, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., PA]을 참조한다.
본 발명의 약제학적 조성물은 또한 세포독성제, 화학요법제, 세포증식 억제제, 항-혈관신생제 또는 항대사물질제, 종양 표적화제, 면역 자극제 또는 면역 조절제, 또는 세포독성에 접합된 항체, 세포증식 억제제 또는 기타 독성제를 포함하지만 이들로 제한되지 않는 기타 작용제를 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 또한 수술, 화학요법 및 방사선과 같은 다른 치료 양식과 함께 사용될 수 있다.
바람직한 실시형태
다음은 본 발명의 바람직한 실시형태이다:
1. 약제학적 주입 또는 피하 주사에 적합한 항체 제형으로서,
약 20 ㎎/㎖ 내지 약 190 ㎎/㎖ 농도의 항-APRIL 항체;
약 10mM의 L-히스티딘;
약 75mM의 L-아르기닌;
약 3wt% 소르비톨;
약 0.01wt%의 폴리소르베이트 20; 및
약 6.0 내지 약 6.6의 pH
를 포함하되;
상기 제형은 (i) 16cP 이하의 점도를 가지고, (ii) 글루탐산 또는 이의 염을 포함하지 않으며, (iii) 약 250 mOsm/㎏ 내지 약 390 mOsm/㎏의 삼투질 농도를 갖고, 그리고 (iv) 약 1.0 미만의 OD330을 갖는다.
2. 실시형태 1에 있어서, 상기 제형은 제형의 제조 후 9개월 동안 2℃ 내지 8℃에서 보관한 후 항-APRIL 항체의 순도를 적어도 96% 유지하는, 항체 제형.
3. 실시형태 2에 있어서, 상기 제형은 제형의 제조 후 6개월 동안 25℃에서 보관 후 항-APRIL 항체의 순도를 적어도 95% 유지하는, 항체 제형.
4. 실시형태 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 상기 제형은 25℃에서 측정된 2.5×10-5 ㏖·㎖/g2 이상의 제2 비리얼 계수를 갖는, 항체 제형.
5. 실시형태 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, 상기 제형은 약 7.4 이상의 계산된 등전위점을 갖는, 항체 제형.
6. 실시형태 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 상기 제형 내 항-APRIL 항체는 약 150 ㎎/㎖의 농도로 존재하는, 항체 제형.
7. 실시형태 6에 있어서, 상기 제형은 약 290 mOsm/㎏ 내지 약 390 mOsm/㎏의 삼투질 농도를 갖는, 항체 제형.
8. 실시형태 6 또는 7에 있어서, 상기 제형은 약 0.8 이하의 OD330를 갖는, 항체 제형.
9. 실시형태 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-APRIL 항체는 약 20 ㎎/㎖의 농도로 존재하는, 항체 제형.
10. 실시형태 9에 있어서, 상기 제형은 약 293 mOsm/㎏ 내지 약 333 mOsm/㎏의 삼투질 농도를 갖는, 항체 제형.
11. 실시형태 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-APRIL 항체는 VH11.VL15, VH12.VL15, VH13.VL15, VH14.VL15, VH14_1.VL15, VH14_1C.VL15, VH14_1D.VL15, VH14_1E.VL15 및 VH14_1G.VL15로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 가변 영역.경쇄 가변 영역 쌍을 포함하는 인간화된 항체인, 항체 제형.
12. 실시형태 1 내지 11 중 어느 하나에 있어서, 상기 제형에는 글리신, 카보네이트, HEPES, 포스페이트, 시트레이트 및 아세테이트가 없는, 항체 제형.
13. 일회용 또는 다회용 바이알로서, 실시형태 1 내지 12 중 어느 하나의 항체 제형을 포함하는, 일회용 또는 다회용 바이알.
14. 실시형태 13에 있어서, 약 20 ㎎/㎖ 내지 약 190 ㎎/㎖의 항-APRIL 항체 농도를 갖는 제형의 0.5㎖ 내지 50㎖ 부피를 포함하는, 일회용 또는 다회용 바이알.
15. 실시형태 14에 있어서, 상기 제형은 약 20 ㎎/㎖의 항-APRIL 항체 농도를 갖는, 일회용 또는 다회용 바이알.
16. 실시형태 14에 있어서, 상기 제형은 약 150 ㎎/㎖의 항-APRIL 항체 농도를 갖는, 일회용 또는 다회용 바이알.
17. 실시형태 14 내지 16 중 어느 하나에 있어서, 제형의 5㎖ 부피를 함유하는, 일회용 또는 다회용 바이알.
18. 사전 충전된 주사기, 자기주사기 또는 주입기 펜으로서, 실시형태 1 내지 12 중 어느 하나의 항체 제형을 포함하는, 사전 충전된 주사기, 자기주사기 또는 주입기 펜.
19. 실시형태 18에 있어서, 약 20 ㎎/㎖ 내지 약 190 ㎎/㎖의 항-APRIL 항체 농도를 갖는 제형의 약 0.5㎖ 내지 약 10㎖ 부피를 포함하는, 사전 충전된 주사기, 자기주사기 또는 주입기 펜.
20. 실시형태 19에 있어서, 상기 제형은 약 20 ㎎/㎖의 항-APRIL 항체 농도를 갖는, 사전 충전된 주사기, 자기주사기 또는 주입기 펜.
21. 실시형태 19에 있어서, 상기 제형은 약 150 ㎎/㎖의 항-APRIL 항체 농도를 갖는, 사전 충전된 주사기, 자기주사기 또는 주입기 펜.
22. 실시형태 19 내지 21 중 어느 하나에 있어서, 제형의 약 2㎖ 부피를 포함하는, 사전 충전된 주사기, 자기주사기 또는 주입기 펜.
23. 항-APRIL 항체를 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 방법으로서, 피하 주사에 의해 실시형태 1 내지 12 중 어느 하나의 제형을 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
24. 실시형태 23에 있어서, 상기 방법은 적어도 2회의 투여 주기 동안 적어도 매주(QW)의 스케줄로 투여를 반복하는 단계를 포함하는, 방법.
25. 실시형태 23에 있어서, 상기 방법은 적어도 2회의 투여 주기 동안 적어도 2주마다(Q2W)의 스케줄로 투여를 반복하는 단계를 포함하는, 방법.
26. 실시형태 23에 있어서, 상기 방법은 적어도 2회의 투여 주기 동안 적어도 4주마다(Q4W) 또는 매월(QMT)의 스케줄로 투여를 반복하는 단계를 포함하는, 방법.
27. 실시형태 23 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 약 10㎎ 내지 약 1350㎎의 상기 항-APRIL 항체의 총 용량이 투여 이벤트당 투여되는, 방법.
28. 실시형태 27에 있어서, 약 150 ㎎/㎖의 상기 항-APRIL 항체 농도의 상기 제형 약 2㎖가 투여당 전달되는, 방법.
29. 실시형태 27에 있어서, 약 150 ㎎/㎖의 상기 항-APRIL 항체 농도의 상기 제형 약 4㎖가 투여당 전달되고, 각 투여 이벤트는 1회 이상의 피하 주사를 포함하는, 방법.
30. 실시형태 23 내지 29 중 어느 하나에 있어서, 상기 제형은 개체의 허벅지, 복부 또는 상완 부위에 피하로 투여되는, 방법.
31. 항-APRIL 항체를 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 방법으로서, 정맥내 주입에 의해 실시형태 1 내지 12 중 어느 하나의 제형을 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
32. 실시형태 31에 있어서, 상기 방법은 적어도 2회의 투여 주기 동안 적어도 QW 스케줄로 투여를 반복하는 단계를 포함하는, 방법.
33. 실시형태 31에 있어서, 상기 방법은 적어도 2회의 투여 주기 동안 적어도 Q2W 스케줄로 투여를 반복하는 단계를 포함하는, 방법.
34. 실시형태 31에 있어서, 상기 방법은 적어도 2회의 투여 주기 동안 적어도 Q4W 또는 매월의 스케줄로 투여를 반복하는 단계를 포함하는, 방법.
35. 실시형태 31 내지 34 중 어느 하나에 있어서, 상기 정맥내 주입은
실시형태 1 내지 12 중 어느 하나의 제형을 0.9% 식염수에 약 0.1 ㎎/㎖ 내지 약 10 ㎎/㎖의 농도로 희석하는 단계; 및
약 10㎎ 내지 약 1350㎎의 상기 항-APRIL 항체의 총 용량을 약 2시간의 기간에 걸쳐 희석된 제형의 단일 정맥내 용량으로 상기 개체에게 투여하는 단계
를 포함하는, 방법.
36. 실시형태 35에 있어서, 20 ㎎/㎖ 농도의 상기 제형 15㎖을 235㎖의 0.9% 식염수에 첨가하여 1.2 ㎎/㎖ 농도의 상기 정맥내 용량을 제공하는, 방법.
37. 항-APRIL 항체를 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 방법으로서, 로딩/유지 투여 프로토콜에 의해 항-APRIL을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
38. 실시형태 37에 있어서, 상기 로딩/유지 투여 프로토콜 로딩 구성요소는 상기 로딩/유지 투여 프로토콜의 유지 구성요소에서 상기 항-APRIL 항체 농도보다 더 높은 농도로 상기 항-APRIL 항체의 1회 이상의 투여를 포함하는, 방법.
39. 실시형태 37에 있어서, 상기 로딩/유지 투여 프로토콜 로딩 구성요소는 상기 로딩/유지 투여 프로토콜의 유지 구성요소의 상기 항-APRIL 항체의 투여 빈도보다 더 높은 빈도로 상기 항-APRIL 항체의 1회 이상의 투여를 포함하는, 방법.
40. 실시형태 37 내지 39 중 어느 하나에 있어서, 상기 로딩/유지 투여 프로토콜의 로딩 구성요소는 상기 로딩/유지 투여 프로토콜의 유지 구성요소의 상기 항-APRIL 항체의 투여 경로와는 상이한 경로로 상기 항-APRIL 항체의 1회 이상의 투여를 포함하는, 방법.
41. 실시형태 37에 있어서, 상기 로딩/유지 투여 프로토콜 로딩 구성요소는 상기 항-APRIL 항체의 1회 이상의 정맥내 투여를 포함하고, 상기 로딩/유지 투여 프로토콜의 유지 구성요소는 상기 항-APRIL 항체의 1회 이상의 피하 투여를 포함하는, 방법.
42. 실시형태 37 내지 41 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-APRIL 항체는 실시형태 1 내지 12 중 어느 하나에 따른 항체 제형인, 방법.
43. 실시형태 23 내지 41 중 어느 하나에 있어서, 이를 필요로 하는 상기 개체는 4 g/ℓ 초과의 혈청 IgA 수준을 갖는, 방법.
44. 실시형태 23 내지 41 중 어느 하나에 있어서, 이를 필요로 하는 상기 개체는 IgA 신장병증 환자인, 방법.
45. 실시형태 23 내지 41 중 어느 하나에 있어서, 상기 개체는 고면역글로불린혈증을 갖는, 방법.
본 발명은 다음의 비제한적인 실험을 참조하여 추가로 예시되고 뒷받침될 것이다.
실시예
실시예 1
하기 실시예는 16cP 미만의 점도를 갖는 고용량 항-APRIL 제형의 개발을 설명한다. 목적하는 농도에서 벌크 약물 물질 및 충전된 약물 제품에 가장 적합한 제형을 선택하기 위해 제형을 온도 스트레스(-70℃, 2℃ 내지 8℃, 25℃ 및 45℃), 동결/해동 주기 및 부드러운 진탕에 적용하였다. 5℃에서 제형에 대해 예측된 SE- 및 CEX-UPLC 안정성은 각각 대략 2년 및 6년이었다. 샘플을 다음에 대해 특성화하였다:
시각적 외관(C = 투명; O = 유백색; NC = 색상 없음; Y = 밝은 황색; NP = 눈에 보이는 미립자 없음)
농도
A330㎚의 탁도
크기 배제 초고성능 크로마토그래피(SE-UPLC)
양이온 교환 UPLC(CEX-UPLC)
동적 광산란/정적 광 산란
pH
삼투질 농도
점도
시약:
Figure pct00003
목표 농도가 150 ㎎/㎖ 초과인 6개의 제형 및 농도가 200 ㎎/㎖인 5개의 제형의 총 11개의 제형(표 2 참조)을 준비하였다. 모든 제형은 pH 6.1 및 pH 6.3의 히스티딘 완충액으로 제조하였다.
Figure pct00004
항-APRIL 항체를 40 ㎖/분의 최대 유속에서 접선 유동 여과(tangential flow 여과: TFF)에 의해 50 ㎎/㎖로 농축하였다. 그런 다음, 농축된 물질을 회수하고, 8500rcf에서 5분 동안 원심분리하고, 0.22㎛ PVDF 막을 통해 여과하였다. 미리 수화된 10kDa MWCO 투석 카세트를 물질로 채우고, 2℃ 내지 8℃에서 200㎖의 완충액(200㎖의 3회 변경)에 대해 투석하였다. 총 투석 시간은 이틀이었다. 그런 다음, 회수된 단백질 샘플을 목표 값에 도달하기 위해 몇 시간 동안 10kDa MWCO 원심분리 필터 유닛에서 3750rcf로 회전 농축하였다. 농축된 제형을 과농축된 샘플(예를 들어, 150 ㎎/㎖ 초과)로 분석하거나 또는 상응하는 완충액을 사용하여 특정 목표 농도(예를 들어, 200 ㎎/㎖)로 희석하였다. 상응하는 완충액으로 제조한 폴리소르베이트-20(PS20)를 각 제형에 0.01%(w/v)의 최종 농도로 첨가하였다.
회수율 계산 및 시각적 외관에 대한 관찰은 다음 표 3에 나타내었다. After TFF 단계 후, 단백질 함량으로부터 98.2%의 회수율을 계산하였다. 백색의 탁한 용액이 관찰되었다. 따라서, 이 단백질 용액의 원심분리 및 여과를 투석 단계 전에 수행하여 입자를 제거하였다. 여과 단계는 단백질 농도에 거의 또는 전혀 영향을 미치지 않았다. 회전 농축 단계 동안, 이 스크리닝에서 평가된 모든 예상 제형에 대해 150 ㎎/㎖ 초과의 목표 농도에 도달하였다.
Figure pct00005
다음 표 4는 이 연구에서 얻은 분석을 요약한다. 이 단계에서, 회수율%는 카세트에 로딩된 초기 물질의 양과 비교할 때 70.2% 내지 87.1% 범위였다. 점도는 7.7cP 내지 15.4cP의 범위였고, 제형 1은 점도가 낮고 농도가 가장 높았다. 제형 3과 제형 11의 비교는 소르비톨의 존재하에, 아르기닌과 글루탐산의 조합이 아르기닌 단독보다 더 낮은 점도를 산출함을 시사한다. 전반적으로, 이 제1 스크리닝 실험은 점도를 낮게 유지하기 위해 염을 피해야 함을 시사한다. 제형 3과 제형 5의 비교는 이러한 발견을 강조한다. 전반적으로, 콜로이드 안정성은 A2 값이 양성이고 유사한 범위 내에 있는 모든 테스트된 제형에 대해 허용 가능하다.
Figure pct00006
실시예 2
200 ㎎/㎖를 초과하는 단백질 농도를 얻을 가능성을 평가하기 위해, 출발 항-APRIL 항체로부터 새로운 샘플을 제조하였다. 염은 점도를 더 낮은 값으로 유지하는 데 유해하므로, 소듐 클로라이드를 포함하는 제형은 제거하였다. 샘플을 회전 농축 단계 동안 239 ㎎/㎖ 내지 252 ㎎/㎖로 과농축시켰다. 참고로, A280에 의한 단백질 정량화로부터 계산된 회수율 데이터는 이전에 관찰된 것보다 더 낮았으며, 값은 42.7% 내지 69.4% 범위였다. 그런 다음, PS20 함량을 0.01%의 최종 농도로 조정하면서 샘플을 상응하는 제형 완충액으로 200 ㎎/㎖로 희석하였다. 점도 측정값은 26.2cP 내지 47.0cP 범위의 값으로 높았다. 참고로, 155 ㎎/㎖ 내지 190 ㎎/㎖로 농축된 샘플에서 측정한 점도는 200 ㎎/㎖의 샘플에서 관찰된 점도보다 훨씬 더 낮았다. 이러한 점도 값의 증가는 극단적인 단백질 과농축 동안 발생하는 일종의 유해한 단백질-단백질 상호작용을 시사한다. 원심분리 장치는 소량의 샘플 부피를 농축할 수 있지만, 테스트 샘플은 원심분리 과정 동안 g-힘에 의해 생성된 높은 막관통 압력을 경험하여 단백질 변성의 추가적인 원인이 될 수 있다. 결과는 아래 표 5 및 표 6에 제공되어 있다.
Figure pct00007
Figure pct00008
190 ㎎/㎖ 내지 200 ㎎/㎖의 샘플 점도를 면밀하게 모니터링하고 점도에 대한 계면활성제의 영향을 평가하기 위해, 출발 항-APRIL 항체로부터 새로운 샘플의 제3 세트를 준비하였다. 이 설정에서, 제형 1 및 제형 6을 제조하였다. 단백질은 TFF에 이어 12㎖의 TFF 후 물질의 투석에 의해 28.8 ㎎/㎖가 되었다. 회전 농축 과정 동안, 약 180 ㎎/㎖의 농도에서 점도의 정성적 증가가 관찰되었으며, 달성된 최종 농도는 약 200 ㎎/㎖였다. 샘플의 절반을 최종 농도로 유지한 반면, 나머지 절반은 PS20이 없는 상응하는 제형 완충액을 사용하여 190 ㎎/㎖로 유지하였다. 두 농도 모두에서 점도를 측정하고, 결과를 다음 표 7에 나타내었다. 농도가 200 ㎎/㎖를 초과하는 샘플에서 높은 점도가 관찰되었으며, 제형 1 및 제형 6은 각각 46.9cP 및 33.0cP의 값을 나타내었다. 샘플 농도가 희석에 의해 190 ㎎/㎖가 되었을 때, 점도는 34.2cP 및 22.5 cP로 더 낮아졌다. 0.01% PS20을 포함한 샘플의 제조는 제형 6에 대해 20cP의 점도를 초래하였다.
Figure pct00009
실시예 3
pH 6.1 및 pH 6.3의 히스티딘 완충액을 포함하는 총 4개의 150 ㎎/㎖ 항-APRIL(VH14_1G.VL15) 항체 제형(아래 표 8)을 제조하였다. 0.6㎖ 부피의 테스트 샘플을 2㎖ 유리 바이알에 무균 상태로 넣은 후 마개를 막았다. 사용된 안정성 테스트 조건 및 검정은 표 9에 제공되어 있다.
Figure pct00010
Figure pct00011
해동된 항-APRIL 항체를 3000rcf에서 20분 동안 원심분리한 다음, 0.22㎛ 막에서 여과하여 관찰된 소수의 입자를 제거하였다. 여과된 물질을 2일에 걸쳐 TFF에 의해 농축시켜 37.9 ㎎/㎖의 최종 농도에 도달하였다. 그런 다음, 농축된 물질을 미리 수화된 10kDa MWCO 70㎖ 용량 투석 카세트에 넣고, 2℃ 내지 8℃에서 2ℓ 완충액(2ℓ의 3회 변경)에 대해 2일의 기간에 걸쳐 투석하였다. 그런 다음, 회수된 단백질 샘플을 15℃에서 몇 시간에 걸쳐 Amicon Ultra-15 튜브(재생 셀룰로스 10kDa MWCO)에서 2300rcf에서 회전 농축시켜 150 ㎎/㎖ 초과의 목표 농도에 도달하였다. 농축시킬 물질을 반으로 나누고, 처리할 대용량을 처리하기 위해 2개의 회전 농축기에서 농축시켰다. 분석 전에 목표 부피에 도달하면 농축 단계 직후에 절반을 풀링하였다. 과농축된 단백질 용액을 계면활성제를 첨가하기 전에 점도 테스트를 위해 따로 보관하였다. 농축된 제형을 상응하는 완충액을 사용하여 150 ㎎/㎖의 목표로 희석하였다. 150 ㎎/㎖ VH14_1G.VL15를 목표로 상응하는 완충액으로 제조된 PS20을 0.01%(w/v)의 최종 농도로 제형에 첨가하였다. 무균 조건하에서, VH14_1G.VL15 제형을 0.22㎛ PVDF 막을 통해 여과한 다음, 발열원이 제거된(depyrogenated) 붕규산 바이알에 분배하고, 마개를 닫고, 알루미늄 씰로 크림핑하였다. 그런 다음, 바이알을 표 9에 따른 안정성 테스트를 위해 스트레스 조건하에 두었다. 각 필요한 각 시점에서, 샘플을 조건으로부터 꺼내고, 원래 바이알에서 시각적 외관을 관찰하였다. 삼투질 농도, 점도, A330, pH 및 DLS 검정은 희석되지 않은 샘플에서 수행한 반면, A280, SE-UPLC 및 CEX-UPLC는 각각의 방법 사양에 따라 희석된 샘플에서 수행하였다. 삼투질 농도 및 점도는 T=0 시점에서만 수행하였다. 임의의 나머지 샘플 부피는 백업 테스트를 위해 -70℃에서 유지하였다.
다양한 적용 스트레스 조건에 따라, 시각적 외관, A330을 통한 샘플 탁도, pH 및 농도를 결정하였다. 1.0 ㎎/㎖ = 1.4 AU의 흡광 계수를 사용하여 280㎚에서 흡광도 측정에 의해 샘플의 농도를 결정하였다. 보고된 최종 단백질 농도는 산란((A280-A330)/ε280 = 수정된 단백질 농도)에 대해 수정하였다. 공정 중 과농축된 샘플(PS20의 첨가 전)뿐만 아니라 T=0 샘플에 대해 샘플 점도 값을 결정하였다. 삼투질 농도 값은 T=0 샘플에 대해서만 결정하였다.
샘플 준비 단계 동안, 과농축된 샘플의 분취량을 점도 측정을 위해 따로 보관하였다. 점도는 12.5cP 내지 15.6cP 범위였다. 참고로, 제형 스크리닝에서의 약 190 ㎎/㎖의 샘플 및 12주 제형 연구를 위한 샘플 제제에서 점도의 차이가 관찰되었다. 이러한 차이는 회전 농축 단계 동안 처리된 샘플의 부피 차이 또는 이 연구에서 사용된 출발 물질의 차이 때문일 수 있다. 0.01% PS20의 최종 농도로 계면활성제를 도입하면서 희석 단계 동안 150 ㎎/㎖의 표적 항체 농도가 모든 테스트 제형에 대해 달성되었다. 생성된 150 ㎎/㎖ 제형은 6.3cP 내지 7.8cP의 점도 및 324 mOsm/㎏ 내지 358 mOsm/㎏의 삼투질 농도를 나타내었다. 중요한 점은, 제조 정보를 검토한 결과, 제형 11에 해당하는 완충액이 목표 pH 6.3이 아닌 pH 6.1으로 제조되었다는 점을 나타내었으며, 따라서 이 제형에 대한 목표 pH와의 불일치를 설명하였다. 측정된 pH 값은 모든 관찰된 시점에 대해 시작 값의 0.1 단위 이내로 유지되었다.
스트레스 인큐베이션 후, 샘플의 시각적 외관, 단백질 농도, 탁도 및 pH를 기록하였다(도 1). 다양한 스트레스 조건에 따른 pH와 관련하여 명확한 차이는 관찰되지 않았다. 시각적 외관은 25℃에서 12주의 인큐베이션(제형 6) 및 45℃에서 3주의 인큐베이션(제형 3 및 제형 6) 후 약간의 입자가 나타난 것을 제외하고는 다양한 스트레스 조건에 따라 모든 제형에 대해 투명하고, 밝은 황색을 띄며 눈에 보이는 미립자가 없었다. 탁도 값은 일반적으로 제형 1 및 제형 3에서 더 낮았다. 5개의 동결/해동 주기 또는 2℃ 내지 8℃에서 3일 진탕 후에 어떠한 제형에서도 식별 가능한 분석적 변화가 명백하지 않았다.
150 ㎎/㎖의 표적 항체 농도는 모든 테스트 제형에서 근사화하였다. 샘플 pH 값은 투석 완충액의 0.1 단위 이내였다. 참고로, 제형 11은 목표 pH 6.30이 아닌 pH 6.14으로 제조되었다. 시각적 외관은 25℃에서 12주의 인큐베이션(제형 6) 및 45℃에서 3주의 인큐베이션(제형 3 및 제형 6) 후 약간의 입자가 나타난 것을 제외하고는 다양한 스트레스 조건에 따라 모든 제형에 대해 투명하고, 밝은 황색을 띄며 눈에 보이는 미립자가 없었다. A330으로부터 측정된 탁도는 일반적으로 제형 1 및 제형 3에서 더 낮았다. 결과는 다음 표 10 및 표 11에 제공되어 있다.
Figure pct00012
Figure pct00013
실시예 4
크기 배제 크로마토그래피(겔 여과 크로마토그래피로도 알려져 있음)는 크기에 기초하여 단백질의 분자 형태를 분리한다. 이 방법에서, 더 큰 분자 종(예를 들어, 응집체, IgG 이량체 및 올리고머)은 목적하는(단량체) IgG 종보다 먼저 프리 피크(pre-peak)로 용리된다. 더 작은 분자 종(예를 들어, 분해 산물 및 단편)은 포스트-피크(post-peak)로 나중에 용리된다. 항체 안정성 샘플에 대해 SE-UPLC를 수행하였다. 간략하게는, 샘플을 이동상으로 0.5 ㎖/분으로 희석하고, 2.5㎍을 Waters Acquity UPLC BEH 200 SEC, 1.7㎛, 4.6×300㎜ 칼럼에 주입하였다. 크로마토그래피 분리는 주위 온도에서 이동상 10mM 포스페이트, 0.4M NaCl, pH 7.0±0.1의 0.2 ㎖/분의 흐름 속도로 발생하였다.
SE-UPLC에 의해 얻은 표 형식의 데이터는 도 2에 도시되어 있으며, 상대적인 주요 피크에 대한 그래픽 표현은 도 3 내지 도 6에 도시되어 있다. 2℃ 내지 8℃에서 12주의 인큐베이션 후, 주요 피크는 모든 제형에 대해 0.1% 내지 0.3% 감소하였다. 5 주기의 동결/해동 및 2℃ 내지 8℃ 진탕 스트레스 조건에 노출되었을 때 임의의 테스트 제형 간에 식별 가능한 차이가 관찰되지 않았으며, 이는 결과 데이터가 t=0 결과에 필적하고 검정 변동성 내에 있기 때문이다.
2℃ 내지 8℃에서 12주의 인큐베이션 후, 각 제형은 초기 값의 0.2% 내지 0.4% 이내의 주요 피크와 함께 강력한 안정성을 나타내었다. 동결/해동 안정성뿐만 아니라 2℃ 내지 8℃ 진탕 스트레스 안정성은 테스트된 모든 제형에 대해 동일하였다. 25℃에서 12주의 인큐베이션은 다른 제형에 비해 제형 1(10mM 히스티딘, 150mM 아르기닌, 150mM 글루탐산, 0.01% PS20, pH 6.1)에서 약간 더 높은 순도를 나타내었지만, 이는 45℃에서 3주 후 주요 피크 면적에서 1.3% 내지 1.6%의 감소가 관찰된 경우가 아니다.
실시예 5
이온 교환 크로마토그래피는 접근 가능한 표면 전하의 차이에 기초하여 분자를 분리한다. 결합은 반대 전하의 분자 사이의 이온 인력에 따라 달라진다. 본 명세서에 적용된 분석은 약한 양이온 교환(CEX-UPLC) 칼럼을 사용하였다. 용리는 pH 증가의 구배로 달성된다. pH 구배 분리는 280㎚(A280)에서 모니터링하는 UV 검출기 및 통합소프트웨어(Chromeleon ver. 7.2)가 장착된 초고성능 액체 크로마토그래피 시스템(써모 뱅퀴시(Thermo Vanquish))을 사용하여 수행하였다. 본 명세서에 기재된 안정성 연구 동안 항체 하전된 종의 측정 가능한 집단의 프로파일을 분석하고 제공하기 위해 이 적용에 Dionex ProPac WCX-10 칼럼(4.0×250㎜)을 사용하였다. CEX-UPLC를 항-APRIL 항체 안정성 샘플 acco에서 수행하였다. 샘플을 1 ㎎/㎖로 희석하고, 25㎍을 칼럼에 주입하였다.
CEX-UPLC에 의해 얻은 표 형식의 데이터는 도 7에 도시되어 있다. 2℃ 내지 8℃뿐만 아니라 -70℃에서 12주의 인큐베이션 후, CEX-UPLC는 주요 피크가 0.1% 내지 0.3% 변경되었음을 보여주었으며, 4개의 제형 내에서 식별할 수 있는 차이 또는 경향은 관찰되지 않았다. 25℃ 및 45℃에서 인큐베이션 후, 주요 피크 및 염기성 피크 수준은 안정성 연구 기간 동안 감소하는 것으로 관찰되어 모든 제형에 대한 산성 피크의 증가를 초래하였다. 이러한 차이는 pH 6.3보다 pH 6.1의 제형에서 더 낮은 것으로 관찰되었다. 제형 11(10mM 히스티딘, 75mM 아르기닌, 3% 소르비톨, 0.01% PS20, pH 6.1)은 CEX-UPLC에 의해 최고의 안정성을 나타내었다. 5 주기의 동결/해동 후 또는 2℃ 내지 8℃ 진탕 스트레스 후 4개의 제형 내에서 명확한 차이는 관찰되지 않았다.
-70℃ 및 2℃ 내지 8℃에서 12주의 보관 후 또는 동결/해동 및 2℃ 내지 8℃ 진탕 스트레스 조건에 노출 시 임의의 테스트 제형 간의 어떠한 유의한 변화도 관찰되지 않았으며, 이는 결과 데이터가 t=0 결과에 필적하고 검정 변동성 내에 있기 때문이다. 25℃ 및 45℃에서 인큐베이션 후, 주요 피크 및 염기성 피크 수준은 안정성 연구 기간 동안 감소하는 것으로 관찰되어 모든 제형에 대한 산성 피크의 증가를 초래하였다. 이러한 차이는 VH14_1G.VL15 제형의 경우 pH 6.3보다 pH 6.1에서 더 낮은 것으로 관찰되었다. 제형 11(10mM 히스티딘, 75mM 아르기닌, 3% 소르비톨, 0.01% PS20, pH 6.1)이 CEX-UPLC에 의해 최고의 안정성을 보였다.
실시예 6
안정성 데이터의 정성적 검토는 SEC 샘플 순도에 의해 측정된 바와 같이 더 큰 VH14_1G.VL15 안정성이 샘플 제형 1(10mM 히스티딘, 150mM 아르기닌, 150mM 글루탐산, 0.01% PS20, pH 6.1)에서 유지되었음을 나타내며, 이는 25℃ 및 45℃ 테스트 조건에서만 관찰할 수 있었다. 반응 속도와 온도 사이의 관계는 아레니우스 방정식으로 설명된다.
방정식 1
ln kobs =(-Ea/R)T + ln A
여기서, k는 속도 계수이고, 사전 지수 인자 A는 통상적으로 충돌 빈도 및 이의 배향과 같은 변수를 포함하는 작은 온도 범위에 걸쳐 상수이며, Ea는 활성화 에너지이고, R은 범용 가스 상수이며, T는 절대 온도이다. 이 방정식은 분해가 본질적으로 열적이며(예를 들어, 광-유도와 반대) 분해 메커니즘이 온도에 따라 변하지 않는다는 가정하에 주어진 온도에서 분해와 같은 반응 속도를 추정할 수 있게 한다. 이러한 기준이 충족되면, 활성화 에너지 Ea 및 사전 지수 인자 A는 작은 온도 범위에서 변하지 않아 다른(종종 더 낮은) 온도로의 외삽을 용이하게 한다.
이러한 상황하에, 승온(가속된) 조건하에 수행된 실험은 실시간 분해 모니터링이 엄청나게 느리고 비용이 많이 드는 저온에서의 분해 속도에 대한 귀중한 정보를 산출한다. 가속화 연구는 안정성 문제에 대한 빠른 통찰력을 제공하지만, 실시간 안정성 연구를 대체할 수는 없다.
보다 엄밀한 방식으로 데이터 분석에 접근하기 위해, 각 제형에 대한 항-APRIL(VH14_1G.VL15) 항체 순도의 손실 및 대략적인 1차 분해 동역학에 대한 온도 조건에 대한 속도 상수를 결정하였다. 2℃ 내지 8℃, 25℃ 및 45℃ 테스트 조건의 경우, SE-UPLC 분석에서 발견된 항체 순도 백분율 값을 사용하여 ln 순도 대 시간의 플롯을 작성하였다. 결과는 도 8에 그래프로 표시되어 있다. 데이터로부터, 기울기는 분해에 대한 속도 상수(-kobs)와 상관관계가 있다. kobs에 대한 비히클 및 온도 의존성 결과는 다음 표 12에 나타나 있다.
Figure pct00014
표 12로부터의 데이터를 사용하여, 3개의 안정성 온도에서 각각의 항-APRIL 항체 제형에 대해 아레니우스 플롯(ln kobs 대 1/T)을 생성하였다(도 9). 이 분석으로부터, 선의 피팅된 매개변수를 얻었다(표 13). ln kobs 대 1/T의 양호한 선형 피팅은 테스트된 온도 범위 내에서 작동하는 유사한 분해 메커니즘을 나타낸다. 또한, 이는 분해가 아레니우스 거동을 따름을 의미한다.
Figure pct00015
이어서, 기울기 = -Ea/R 및 절편(intercept) = ln A인 방정식 1의 아레니우스 관계로부터, 데이터를 사용하여 5℃ 및 25℃에서 각 비히클에 대한 ln kobs를 계산하였다. 또한, 5℃에서의 kobs로부터 k가 관찰된 속도 상수(kobs)이고, 순도0 및 순도t가 각각 시간 0 및 t에서의 순도인 방정식 2에 표시된 1차 동역학에 대한 속도 방정식의 선형 형태를 사용하여, VH14_1G.VL15 용액 순도가 전체 샘플 조성의 95%(또는 원래 순도의 98.1%)에 근접할 때까지의 인큐베이션 일수에 해당하는 t95%를 계산하였다. 용액 안정성은 5℃에서 1.55년 내지 3.06년 또는 25℃에서 0.35년 내지 0.47년 범위로 계산되었다. 결과는 표 14에 제공되어 있다.
방정식 2
ln(순도t/순도0) = kobst
Figure pct00016
실시예 7
동일한 정량적 접근법에 따라, 수집된 CEX-UPLC 데이터를 사용하여 원래 값의 95%까지 샘플 순도를 추정할 수 있다. CEX-UPLC 데이터를 사용하여 도 10에 표시된 ln 순도 대 시간을 플로팅하였다. 데이터를 사용하여 생성된 선은 적어도 45℃ 및 25℃ 테스트 샘플에 대해 다음 표 15에 표시된 바와 같이 의사(pseudo) 1차 분해 동역학을 나타내며, 이로부터 기울기는 분해에 대한 속도 상수(-kobs)와 관련이 있다. 45℃ 및 25℃에서 각각의 VH14_1G.VL15 제형에 대해 아레니우스 플롯을 생성하였다(도 11). 2℃ 내지 8℃ 데이터는 비의사(non-pseudo) 1차 변화가 관찰되었기 때문에 AR 계산에 포함시키지 않았다.
Figure pct00017
아레니우스 관계로부터, 표 15로부터의 데이터를 사용하여 5℃ 및 25℃에서 각 비히클에 대한 ln kobs를 계산하였다. 또한, kobs로부터 k가 관찰된 속도 상수(kobs)이고 순도0 및 순도t인 1차 동역학에 대한 속도 방정식의 선형 형태를 사용하여, VH14_1G.VL15 용액 순도가 원래 샘플 순도의 95%에 근접할 때까지의 인큐베이션 연수에 해당하는 t95%를 계산하였다(표 16 및 표 17 참조). 용액 안정성은 5℃에서 2.83년 내지 5.95년 및 25℃에서 0.12년 내지 0.19년 범위로 계산되었다.
Figure pct00018
Figure pct00019
실시예 8
동적 광산란(DLS)을 사용하여 분자의 유체학적 반경을 결정하였다. 이는 분자의 브라운 운동(Brownian motion)으로 인한 산란광 강도 변동을 포착함으로써 용액 내 분자의 병진 확산을 측정한다. 분자가 균일한 구형이라고 가정하면, 스톡스-아인슈타인(Stokes-Einstein) 관계에 의해 확산 계수를 분자의 유체학적 반경으로 변환할 수 있다. DLS 분석을 각 시점에 대해 VH14_1G.VL15 안정성 샘플에서 수행하였다. 간략하게는, 완충액 블랭크를 초기에 수행하여 각 제형으로부터의 산란을 측정한 다음; 이 값을 테스트 샘플 판독값으로부터 빼서 완충액 효과를 최소화하였다. 희석되지 않고 여과되지 않은 각 테스트 샘플의 10㎕ 부피를 깨끗한 1㎕ NanoStar 석영 큐벳에 로딩하고, 25℃에서 각각 5초 동안 50초 수집의 측정 기간 동안 분석하였다. 이 연구에서, 확산 계수 결정을 위한 DLS 강도 자기상관 데이터를 용액에 존재하는 모든 종의 반경 및 상대적 존재비의 추정치를 제공하는 정규화 방법에 의해 분석하였다. Wyatt Technology DYNAMIC 7.1.9에 기술된 바와 같이, 허용 가능한 DLS 데이터는 최대 강도 상관관계 값 2에서 값 1로 기하급수적으로 감소하는 매끄럽고 연속적인 자동-상관관계 기능을 가져야 한다. 모든 테스트 샘플은 허용 가능한 감소를 나타내었다.
관찰 가능한 입자 종의 유체학적 반경은 도 12에 요약되어 있다. 요약 표의 데이터는 10회 획득을 포함하는 첫 번째 측정에 대해 얻은 값이다. 각 측정에 대한 주요 집단의 상세한 결과는 아래 표 18 내지 표 21에 나타나 있다.
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
연구 시작 시, T=0에서 샘플에 대해 바이모달 분포가 관찰되었으며, 102㎚ 초과의 범위에서 유체학적 반경을 나타내는 추가적인 집단이 있다. 표 18 내지 표 21에 제시된 다분산성은 T=0에서 샘플에 대해 7.8% 내지 25.2% 범위였다. 연구 시작 시, 주요 집단은 질량%가 99.3% 이상인 주요 종을 나타내었다. 전반적으로, 주요 집단의 입자 크기 및 상대적 존재비는 보관 조건에 관계없이 연구 전반에 걸쳐 유사하게 유지되었다. DLS 측정은 제형 조성에 따라 유체학적 입자 크기가 6.8㎚ 내지 7.9㎚ 범위임을 나타내었다. T=0에서 샘플에 대해 바이모달 분포가 관찰되었으며, 102㎚ 초과의 범위에서 유체학적 반경을 나타내는 추가적인 집단이 있다. 연구 시작 시, 주요 집단은 질량%가 99.3% 이상인 주요 종을 나타내었다. 전반적으로, 주요 집단의 입자 크기 및 상대적 존재비는 보관 조건에 관계없이 연구 전반에 걸쳐 유사하게 유지되었다.
실시예 9
pH 6.0 내지 6.5 범위에 걸친 히스티딘 완충액을 포함하는 20 ㎎/㎖ 4개 및 50 ㎎/㎖ 1개의 총 5개의 항-APRIL(VH14_1G.VL15) 항체 제형을 제조하였다(표 22). 테스트 샘플 1.2㎖ 부피를 2㎖ 유리 바이알에 무균 상태로 넣고 이어서 마개를 막았다. 각각의 필요한 시점에서, 조건으로부터 샘플을 채취하고 원래 바이알에서 시각적 외관 관찰을 수행하였다. A330 및 pH는 여과되지 않은 샘플에서 분석한 반면, A280, SEC 및 CEX는 분석을 방해할 수 있는 입자를 제거하기 위해 0.2㎛ 여과된 샘플을 사용하여 수행하였다. HIAC 분석을 위해, 0.75㎖ 부피의 안정성 샘플을 상응하는 완충액으로 1:1로 희석하여 분석에 충분한 부피를 얻었다. 삼투질 농도 및 점도는 T=0 시점에서만 수행하였다. 임의의 나머지 샘플 부피는 백업 테스트를 위해 -70℃에서 유지하였다.
Figure pct00024
제조 후 테스트 샘플 pH, 농도, 점도 및 삼투질 농도를 기록하였다. 점도는 20 ㎎/㎖에서 4개의 제형 모두에 대해 1.2cP였다. 50 ㎎/㎖ 제형은 점도가 1.5cP로 약간 더 높았다. 삼투질 농도 값은 293mOsm 내지 377mOsm 범위였다. 결과는 다음 표 23에 제공되어 있다.
Figure pct00025
스트레스 인큐베이션 후, 샘플 시각적 외관, 단백질 농도, 탁도 및 pH를 도 13에서와 같이 기록하였다. 상이한 스트레스 조건에 따른 단백질 농도 및 pH에 관한 차이는 관찰되지 않았다. 시각적 외관은 상이한 스트레스 조건에 따른 모든 제형에 대해 투명하고 무색이며 눈에 보이는 미립자가 없었다. 전반적으로, 25℃ 및 45℃ 인큐베이션 후 탁도 값은 pH 6.3의 아르기닌 및 소르비톨이 포함된 제형의 가장 큰 안정성을 나타내었다. 5 X F/T 또는 2℃ 내지 8℃에서 3일 진탕 후 어떠한 제형에서도 식별할 수 있는 분석적 변화는 없었다(표 24).
Figure pct00026
실시예 10
이 절차는 HIAC 9703 액체 입자 계수 시스템을 사용하여 분석 및 제형 개발(Analytical and Formulation Development: AFD) 실험실에서 입자 크기 측정 및 계수 테스트를 수행해야 하는 모든 액체 샘플에 적용할 수 있다. HIAC는 샘플러, 입자 계수기 및 Royco 센서(HRLD 400 센서)로 이루어진다. Royco 센서는 2㎛ 내지 100㎛의 입자 크기를 측정하고 계수할 수 있다. 기기는 10,000 개수/㎖ 이하의 입자를 계수할 수 있다. 이 방법은 검증되지 않았으며, 개발 목적으로만 사용하였다.
간략하게는, 샘플 및 대조군은 환경으로부터 입자가 추가되는 것을 방지하기 위해 생물학적으로 안전한 캐비닛에서 제조하였다. 0.75㎖ 부피의 안정성 샘플을 상응하는 완충액으로 1:1로 희석하여 분석에 충분한 부피를 얻었다. 대조군은 시스템 적합성 샘플로 사용되는 정제수(제조 중에 입자가 도입되지 않았는지 확인하는 데 사용됨) 및 본질적으로 완충액 조건에 놓인 위약 샘플로 이루어진다.
샘플 및 대조군을 2시간 동안 탈기시킨 다음, HIAC 시스템을 사용하여 분석하였다. HIAC 방법은 각 샘플로부터 0.2㎖ 부피의 6회 연속 실행으로 이루어진다. 처음 3회 실행은 센서를 평형화하는 데 사용되므로 무시하고, 마지막 삼(3)회 실행의 평균 입자 수를 평균하여 입자 수를 개수/㎖로 얻었다.
HIAC에 의해 측정된 입자 크기 및 개수는 도 14에 보고되어 있다. 임의의 테스트 항-APRIL(VH14_1G.VL15) 항체 제형 간에 어떠한 유의한 변화도 관찰되지 않았고, 이는 결과 데이터가 t=0 결과에 필적하고 검정 변동성 내에 있기 때문이며; 따라서 이들은 모두 동일하게 안정적이었다. 동결/해동 및 2℃ 내지 8℃ 진탕 스트레스 조건에 노출되었을 때 임의의 테스트 제형 간에 어떠한 유의한 변화도 관찰되지 않았으며, 이는 결과 데이터가 t=0 결과에 필적하고 검정 변동성 내에 있기 때문이다(표 25).
Figure pct00027
실시예 11
크기 배제 크로마토그래피(겔 여과 크로마토그래피로도 알려져 있음)는 크기에 기초하여 단백질의 분자 형태를 분리한다. 이 방법에서, 더 큰 분자 종(예를 들어, 응집체, IgG 이량체 및 올리고머)은 목적하는(단량체) IgG 종보다 먼저 프리 피크로 용리된다. 더 작은 분자 종(예를 들어, 분해 산물 및 단편)은 포스트 피크로 나중에 용리된다. Waters Acquity UPLC BEH 200 SEC, 1.7㎛, 4.6×300㎜ 칼럼 및 10mM 포스페이트, 0.4M NaCl, pH 7.0 이동상을 사용하여 SE-UPLC 방법에 의해 항목 #5-0091의 CMC13415 순도에 따라 항-APRIL(VH14_1G.VL15) 항체 안정성 샘플에서 SE-UPLC를 수행하였다.
45℃에서 1주, 2주 및 4주 동안 보관한 후, 순도 결과는 20 ㎎/㎖의 동일한 농도를 갖는 다른 3개의 제형과 비교하여 pH 6.0의 아르기닌/소르비톨을 포함하는 제형의 가장 낮은 안정성을 보여주었다(도 15). 25℃ 및 45℃ 인큐베이션 후, 아르기닌/소르비톨(pH 6.5)을 포함하는 20 ㎎/㎖ 또는 50 ㎎/㎖ 항-APRIL 항체의 2개의 제형 간의 비교는 농도 의존적 안정성을 나타내었고, 50 ㎎/㎖의 고농도 제형은 안정성이 더 낮았다. -70℃ 및 2℃ 내지 8℃에서 12주 동안 보관 후 임의의 테스트 제형 간에 어떠한 유의한 변화도 관찰되지 않았다.
동결/해동 및 2℃ 내지 8℃ 진탕 스트레스 조건에 노출 시 임의의 테스트 제형 간에 어떠한 유의한 변화도 관찰되지 않았으며, 이는 결과 데이터가 t=0 결과에 필적하고 검정 변동성 내에 있기 때문이다(표 26).
Figure pct00028
실시예 12
이온 교환 크로마토그래피는 접근 가능한 표면 전하의 차이에 기초하여 분자를 분리한다. 결합은 반대 전하의 분자 사이의 이온 인력에 따라 달라진다. 본 명세서에 적용된 분석은 약한 양이온 교환(CE-HPLC) 칼럼을 사용하였다. 용리는 pH 증가의 구배로 달성된다. pH 구배 분리는 280㎚(A280)에서 모니터링하는 UV 검출기 및 통합 소프트웨어(Chemstation ver. C.01.07 소프트웨어 패키지)가 장착된 고성능 액체 크로마토그래피 시스템(Agilent 1260)을 사용하여 수행하였다. 본 명세서에 기재된 안정성 연구 동안 항체 하전된 종의 측정 가능한 집단의 프로파일을 분석하고 제공하기 위해 이 적용에 Dionex ProPac WCX-10 칼럼(4.0×250㎜)을 사용하였다.
25℃ 및 45℃에서 인큐베이션 후, 주요 피크 및 염기성 피크 수준은 안정성 연구 동안 감소하는 것으로 관찰되어 모든 제형에 대한 산성 피크의 증가를 초래하였다. 이러한 차이는 제형에 대해 더 높은 pH 6.5보다 pH 6.0 및 pH 6.3에서 더 낮은 것으로 관찰되었다. 25℃ 및 45℃에서 인큐베이션 후, 20 ㎎/㎖ 항-APRIL(VH14_1G.VL15) 항체를 포함하는 동일한 제형과 비교하여 50 ㎎/㎖ 제형에 대해 더 큰 안정성이 관찰되는 농도 의존적 안정성이 관찰되었다. 이는 흥미롭게도 SE-UPLC에 의해 결정된 결과와 상이하다. -70℃ 및 2℃ 내지 8℃에서 12주 동안 보관한 후 또는 동결/해동 및 2℃ 내지 8℃ 진탕 스트레스 조건에 노출 시 임의의 테스트 제형 간에 어떠한 유의한 변화도 관찰되지 않았으며, 이는 결과 데이터가 t=0 결과에 필적하고 검정 변동성 내에 있기 때문이다(표 27).
Figure pct00029
실시예 13
보다 엄밀한 방식으로 데이터 분석에 접근하기 위해, 각 제형에 대한 항-APRIL(VH14_1G.VL15) 항체 순도의 손실 및 대략적인 1차 분해 동역학에 대한 온도 조건에 대한 속도 상수를 결정하였다. 25℃ 및 45℃ 테스트 조건의 경우, SEC-HPLC 분석에서 발견된 VH14_1G.VL15 순도 백분율 값을 사용하여 ln 순도 대 시간의 플롯을 작성하였다. 결과는 도 17 및 도 18에 그래프로 표시되어 있다. 데이터를 사용하여 생성된 직선은 의사 1차 분해 동역학을 나타내며, 이로부터 기울기는 분해에 대한 속도 상수(-kobs)와 상관관계가 있다(표 28).
Figure pct00030
이러한 데이터를 사용하여, 3개의 안정성 온도에서 각각의 항-APRIL(VH14_1G.VL15) 항체 제형에 대해 아레니우스 플롯(ln kobs 대 1/T)을 생성하였다(도 19). 선의 피팅된 매개변수를 얻었다(표 29). 통상적으로 아레니우스 플롯에는 적어도 3개의 온도가 사용되지만, 2℃ 내지 8℃에서 12주 후에도 순도의 손실이 관찰되지 않았으므로 이 경우에는 불가능함에 유의한다. ln kobs 대 1/T의 양호한 선형 피팅은 테스트된 온도 범위 내에서 작동하는 유사한 분해 메커니즘을 나타낸다. 또한, 이는 분해가 아레니우스 거동을 따름을 의미한다.
Figure pct00031
방정식 1의 아레니우스 관계로부터, 데이터를 사용하여 5℃에서 각 비히클에 대한 ln kobs를 계산하고, 항-APRIL(VH14_1G.VL15) 항체 순도가 총 샘플 조성의 95%에 근접할 때까지의 인큐베이션 일수에 해당하는 t95%를 계산하였다(표 30). 용액 안정성은 5℃에서 보관하였을 때 모든 제형에 대해 약 4600일 초과 또는 약 12년 초과인 것으로 계산되었다.
Figure pct00032
실시예 14
동일한 접근법을 사용하여, 수집된 CE-HPLC 데이터를 사용하여 원래 값의 95%까지 샘플 순도를 추정할 수 있다. 각 테스트 조건에 대해, 플롯 CECHPLC 분석에서 발견된 항-APRIL(VH14_1G.VL15) 항체 순도 백분율 값을 사용하여 ln 순도 대 시간의 플롯을 작성하였다. 도 20 내지 도 22의 데이터를 사용하여 생성된 직선은 의사 1차 분해 동역학을 나타내며, 적어도 45℃ 및 25℃ 테스트 샘플의 경우, 이로부터 기울기는 분해에 대한 속도 상수(-kobs)와 상관관계가 있다(표 31).
Figure pct00033
이러한 데이터를 사용하여, 3개의 안정성 온도에서 각각의 제형에 대해 아레니우스 플롯(ln kobs 대 1/T)을 생성하였다(도 23). 이 분석으로부터, 선의 피팅된 매개변수를 얻었고, 데이터 내에서 양호한 정도의 상관관계를 나타내며, 즉, R2 값은 0.95 이상이었다. ln kobs 대 1/T의 양호한 선형 피팅은 테스트된 온도 범위 내에서 작동하는 유사한 분해 메커니즘을 나타낸다(표 32). 또한, 이는 분해가 아레니우스 거동을 따름을 의미한다.
Figure pct00034
이어서, 기울기 = -Ea/R 및 절편 = ln A인 아레니우스 관계로부터, 표 32로부터의 데이터를 사용하여 5℃에서 각 비히클에 대한 ln kobs를 계산하였다. 또한, 5℃에서의 kobs로부터 k가 관찰된 속도 상수(kobs)이고, 순도0 및 순도t가 각각 시간 0 및 t에서의 순도인 1차 동역학에 대한 속도 방정식의 선형 형태를 사용하여, 항체 순도가 원래 샘플 순도의 95%에 근접할 때까지의 인큐베이션 일수에 해당하는 t95%를 계산하였다(표 33). 항체 안정성은 pH 6.3의 제형에서 약 1200일 초과 또는 대략 3년 초과이고, pH 6.0에서는 훨씬 더 긴 것으로 계산되었다.
Figure pct00035
모든 테스트 항-APRIL(VH14_1G.VL15) 항체 제형에서 20 ㎎/㎖ 또는 50 ㎎/㎖의 목표 농도가 얻어져 연구 기간 전반에 걸쳐 투명하고 무색이며 미립자가 없는 제형이 되었다. -70℃ 및 2℃ 내지 8℃, 동결/해동 또는 2℃ 내지 8℃ 진탕 스트레스 조건에서 12주 동안 보관한 후 임의의 테스트 제형 사이에서 어떠한 단량체 또는 하전된 종의 유의한 변화도 관찰되지 않았으며, 이는 결과 데이터가 t=0 결과에 필적하고 검정 변동성 내에 있기 때문이다. 25℃ 및 45℃ 인큐베이션 후 탁도 값은 pH 6.3의 아르기닌 및 소르비톨을 포함한 제형의 가장 큰 안정성을 나타낸다. SE-HPLC에 의해 결정된 바와 같이, 더 높은 VH14_1G.VL15 안정성은 pH 6.0과 비교하여 pH 6.3 내지 6.5의 범위로 제형화된 샘플에서 유지되었으며, 이는 45℃ 테스트 조건에서만 명백하게 관찰할 수 있었다. 50 ㎎/㎖ 항-APRIL(VH14_1G.VL15) 항체에서 동일한 제형에 비해 20 ㎎/㎖ 단백질 농도에서 더 큰 안정성이 관찰되었다. 25℃ 및 45℃에서 인큐베이션 후, 하전된 종에 대한 CE-HPLC 평가는 모든 하전된 종의 더 작은 변화를 나타내는 pH 6.0 또는 pH 6.3을 갖는 제형에 대한 선호도를 나타내었다. 아레니우스 관계를 사용하여 계산된 분해 속도에 기초하여, 10mM 히스티딘, 75mM 아르기닌, 3% 소르비톨, 0.01%(w/v) PS20, pH 6.3 제형에 대한 예측된 단량체 및 하전된 종 안정성은 5℃에서 대략 적어도 3년이다.
실시예 15
임상 연구(PCT/IB2020/000020 참조)에서, 다발성 골수종이 있는 피험자에게 항-APRIL 항체 BION-1301(본 명세서에서 VH14_1G.VL15로도 지칭됨)을 주당 1회 최대 1350㎎의 IV 용량 또는 2주에 1회 최대 2700㎎의 IV 용량으로 투여하였다. BION-1301은 50㎎ 내지 2700㎎의 용량에서 용량-의존적 방식으로 APRIL의 혈청 수준을 저해하였다. 450㎎에서, 95% 표적 참여(target engagement: TE)는 대략 피크 노출 수준에서 달성되었고; 1350㎎에서, 95% TE는 투여 간격 전반에 걸쳐 유지되었다. 노출은 평가된 용량 범위에 걸쳐 대략 용량-선형적이었고, 항-약물 항체의 발생률은 낮았다. 전반적으로, 항체는 보고된 용량 제한 독성 없이 내약성이 양호하였으며, 최대 내약 용량은 결정되지 않았다. 50㎎ 용량을 투여한 환자에서 1건의 중대한 이상 반응(serious adverse reaction: SAR)(쌕쌕거림)이 보고되어 치료를 중단하였다.
다음은 정맥내로 투여한 BION-1301의 안전성, 내약성, PK 및 PD를 평가하기 위해 BION-1301을 단일 용량 최대 1350㎎ IV 및 다중 용량 최대 450㎎ IV로 투여받은 지원자에서의 1상 연구이다. 연구는 HV에서 시작하였으며, 또한 IgAN이 있는 성인에서도 수행될 것이다. 이 연구 설계는 연구 개요에 묘사된 바와 같이 3개 파트를 포함한다(도 24). BION-1301은 정맥내(IV) 투여용 용액으로 공급하였다. BION-1301은 대략 2시간에 걸쳐 IV 주입에 의해 할당된 용량 수준으로 희석 및 투여될 것이다. BION-1301은 적어도 5㎖의 용액 중 20 ㎎/㎖의 바이알로 공급되며, 이는 주입 전에 0.9% 식염수 용액으로 희석될 것이다. 예를 들어, 특정 용량에 필요한 바이알의 수는 필요한 부피 = ㎎ 용량/20 ㎎/㎖으로 결정되고, 이 부피를 5㎖/바이알로 나누어 필요한 바이알의 총 수를 결정한다. 희석을 위해 250㎖ 0.9% 식염수 백을 사용하는 경우, 항체 용액을 추가하기 전에 투여에 필요한 항체 용액의 양과 동일한 부피가 식염수 백으로부터 꺼내어질 것이다. 필요한 양의 항체 용액을 각 바이알(일회용 바이알, 각 바이알에 대한 새로운 주사기 포함)로부터 꺼내어 식염수 백에 첨가하였다. 파트 3에 대해: 초기 투여 후, 조사자가 평가한 바와 같이 내약성 문제가 없는 경우 후속 투여를 위해 주입 시간은 1시간 단축될 수 있다. 위약은 IV 투여를 위한 0.9% 생리 식염수이다. 위약은 대략 2시간에 걸쳐 IV 주입에 의해 투여될 것이다(파트 1 및 2에만 적용 가능함).
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
파트 1(SAD-HV)은 HV에서 이중-맹검, 무작위 배정, 위약-대조군 단일 용량 증량(SAD) 설계였다. 최대 5개의 용량 코호트를 평가할 수 있으며; 용량 수준은 10㎎, 50㎎, 150㎎, 450㎎ 및 1350㎎이었다. 각 코호트 내의 HV는 각각 BION-1301 또는 위약을 투여하기 위해 3:1의 비로 무작위 배정하였다. 각 코호트 내에서 감시 투여(Sentinel dosing)를 사용하여 코호트의 나머지 HV에서 투약을 중단하게 만드는 임의의 안전성 문제가 있는지 여부를 확인하였다.
파트 2(MAD-HV)는 HV에서 수행된 이중-맹검, 무작위 배정, 위약-대조군 다중 용량 증량(MAD) 설계였다. 각 코호트 내의 HV는 각각 BION-1301 또는 위약을 투여하기 위해 2:1의 비로 무작위 배정하였다. 각각의 HV에 총 3회 투여(즉, 제1일, 제15일 및 제29일) 동안 2주에 1회(Q2W) IV 주입에 의해 BION-1301 또는 위약을 투여하였다. 최대 4개의 용량 코호트를 평가할 수 있으며; 용량당 예상되는 수준은 50㎎, 150㎎, 450㎎ 및 1350㎎이다.
파트 1 및 파트 2에서, 용량 증량은 임의의 다음 기준 중 하나라도 충족되면 중단하였다:
코호트에서 1명 이상의 피험자가 BION-1301과 관련하여 조사자가 평가한 SAE를 나타냄;
코호트에서 2명 이상의 피험자가 BION-1301과 관련하여 조사자가 평가한 중증의 중대하지 않은 AE(이상 사례에 대한 국립 암 연구소 공통 용어 기준[NCI- CTCAE] 버전 5.0에 따라 3등급 이상)를 경험함;
연구 약물을 투여받은 코호트에서 2명 이상의 피험자가 동일한 기관 분류에서 유사한 임상적으로 유의한 실험실, ECG 또는 활력 징후 이상을 나타내어, 용량-제한 불내성(intolerance)을 나타냄;
사이노몰구스 원숭이에서 NOAEL로 확립된 평균 AUC(24,000㎍*일/㎖) 또는 평균 Cmax(5720 ㎍/㎖)를 초과하는 개별 AUC(0-168h) 및/또는 Cmax; 또는
동일한 코호트에서 2명 이상의 피험자가 세균 감염의 징후와 함께 지속적으로 1.5 g/ℓ 미만 또는 3.0 g/ℓ 미만의 IgG 수준을 나타냄.
파트 3(MD-IgAN)은 IgAN이 있는 성인 피험자에서 진행 중인 개방형 다중 용량 설계이다. MD-IgAN은 안전성 검토 팀(Safety Review Team: SRT)이 마지막 MAD-HV 코호트를 평가한 후 시작될 것이다. 파트 3은 대체 용량 또는 투여 스케줄이 탐색되는 경우 추가적인 코호트를 추가할 수 있는 옵션이 있는 적어도 2개의 코호트로 이루어질 것이다. 코호트 1, 2 및 그 이상의(해당되는 경우) 투여의 총 기간은 최대 2년이다. 코호트 1의 샘플 크기는 대략 10명의 IgAN 환자가 될 것이다. 코호트 2 및 추가되는 임의의 추가적인 코호트의 경우, 샘플 크기는 총 대략 40명의 IgAN 환자를 초과하지 않을 것이다.
제1 코호트는 최대 1년 동안 2주마다 IV 주입으로 제공될 450㎎ 용량 수준의 BION-1301을 투여받을 것이다. 제2 코호트는 SRT 권장 후 등록을 시작할 것이며, MD-IgAN 코호트 1에서 최소 5명의 피험자로부터 이용 가능한 데이터의 검토는 적절한 안전성 및 내약성을 입증한다. SRT가 코호트 2를 시작할 것을 권장할 때, 모든 환자는 SC 주사를 통해 BION-1301(10mM L-히스티딘, 75mM L-아르기닌, 3% 소르비톨 및 0.01%(w/w) 폴리소르베이트 20, pH 6.3 중 150 ㎎/㎖로 제형화됨)을 최대 1년 동안 투여받을 것이다. MD-IgAN 코호트 2에 대한 용량 및 투여 양생법의 선택은 MD-IgAN 코호트 1로부터의 피험자를 포함하여 모든 이전 피험자로부터의 모든 이용 가능한 안전성, PK 및 PD 데이터를 기반으로 할 것이다. SRT가 다음 피험자에 대한 용량 또는 스케줄의 변경을 권장하는 경우, 새로운 코호트가 형성될 것이다. 하나 이상의 추가적인 코호트는 코호트 1 및 코호트 2 이상으로 탐색될 것이다. 파트 3에서 BION-1301의 최대 용량은 1350㎎을 초과하지 않을 것이며, 투여 간격 동안 BION-1301의 최대 노출은 다발성 골수종(ADU-CL-16; NCT03340883)이 있는 피험자에서 수행된 1상 용량 증량 시험에서 관찰된 것을 초과하지 않을 것이다. SC 주사를 통해 BION-1301을 투여받는 피험자의 경우, 용량은 600㎎ QW를 초과하지 않을 것이다. IV 주입을 통해 BION-1301을 투여받는 모든 환자는 IV 투여 적어도 24주 후 SC 투여 경로로 전환해야 할 것이다. IV에서 SC로 전환하는 환자의 용량 또는 스케줄은 투여 경로 간의 생체이용률 차이를 고려하여 수정될 수 있으며, SRT가 모든 이용 가능한 데이터를 기반으로 의뢰자와 협력하여 결정할 것이다.
파트 3에서 용량 증량의 경우, 코호트에서 2명 이상의 피험자가 용량 증량은 연구 집단에 대해 허용 가능한 위험으로 간주될 수 있는 약물-관련 독성 또는 SRT의 의견에 따라 피험자의 추가 투여를 배제하는 TEAE를 경험하는 경우 중단될 것이다.
포함 기준: 건강한 지원자
1. 스크리닝 시 18세에서 55세 사이의 건강한 남성 또는 여성 지원자 포함
2. 여성은 임신 가능성이 없어야 함(CTFG 2014에 따름)
3. 남성은 프로토콜에 명시된 피임 지침을 따르는 데 동의해야 함
4. 적어도 50㎏의 체중과 스크리닝 시 18 ㎏/㎡ 내지 35 ㎏/㎡의 체질량 지수(Body mass index: BMI)
5. 병력으로 확인된, 스크리닝 방문 전 적어도 3개월 이전에 흡연 경험이 없고/없거나 흡연 또는 니코틴/니코틴-함유 제품(코담배, 전자 담배 및 유사 제품 포함)의 사용을 중단한 개인으로 정의된 비흡연자
6. 병력, 신체 검사, 활력 징후 평가, 12-유도 심전도(ECG) 및 정상 참조 범위 내(또는 조사자가 임상적으로 관련이 없는 것으로 간주하는 정상 참조 범위 밖) 임상 실험실 평가에 의해 결정된 양호한 건강상태
7. 스크리닝 시 10 g/ℓ 초과의 총 IgG
8. 피험자 동의서(informed consent form: ICF)에 열거된 요구사항 및 제한사항을 준수하는 것을 포함하는 서명된 피험자 동의서를 제공할 수 있음
제외 기준: 건강한 지원자
임의의 다음 제외 기준을 충족하는 건강한 지원자는 참여할 수 없을 것이다:
1. BION-1301의 임의의 성분에 대한 알레르기 또는 과민증이 알려져 있거나 또는 의심되는 경우 또는 임의의 단일클론 항체에 대한 심각한 과민 반응의 병력
2. 스크리닝 전 6개월 이내에 정기적인 알코올 소비(여성의 경우 7잔/주 초과, 남성의 경우 14잔/주 초과, 여기서 1잔 = 와인 5온스[150㎖] 또는 맥주 12온스[360㎖] 또는 증류주 1.5온스[45㎖]임), 또는 스크리닝 방문 전 3개월 이내에 중독성이 없는 마약(soft drug)(예컨대, 대마초) 또는 스크리닝 방문 전 1년 이내에 중독성 마약(hard drug)(예컨대, 코카인 및 펜사이클리딘)의 사용 및/또는 스크리닝 방문 또는 입원 시 약물 남용 또는 알코올에 대한 양성 혈액 또는 소변 테스트 결과
3. 연구 약물의 첫 투여 전 3개월 내 혈액 헌혈, 연구 약물의 첫 투여 전 7일 내 혈장 헌혈 또는 연구 약물의 첫 투여 전 6주 내 혈소판 헌혈
4. 연구 약물의 첫 투여 전 7일 동안 최종 추적 조사 방문시까지 격렬한 운동을 금할 수 없는 자
5. 연구 약물의 첫 투여 28일 또는 5 반감기(둘 중 더 긴 기간) 이내 임의의 처방되지 않은 전신 또는 국소 약물, 치료 또는 보조제, 임의의 처방된 전신 또는 국소 약물(1일 최대 2g의 파라세타몰 또는 1일 최대 800㎎의 이부프로펜 또는 호르몬 대체 요법[HRT] 제외)의 사용
6. 조사자가 판단한 다수의 채혈 및 연구 약물 투여를 위한 정맥 투여의 어려움
7. 본 연구에서 연구 약물의 첫 투여 28일 또는 5 반감기(둘 중 더 긴 기간) 이내에 연구용 신약 또는 연구용 장치를 인수한 임의의 다른 연구에 참여함
8. 본 연구에서 연구 약물의 첫 투여 전 28일 또는 5 반감기(둘 중 더 긴 기간) 이내에 승인된 단일클론 항체 약물을 투여받았음
9. 1일 전 6개월 이내 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 감염 또는 비장결손을 포함하여 임의의 확인되거나 또는 의심되는 면역억제성 또는 면역-결핍성 상태; 재발성, 중증 감염 및 만성 면역억제제 투약(흡입/국소 코르티코스테로이드의 경우 28일 초과 및 전신 면역억제성 또는 코르티코스테로이드 요법의 경우 1주 초과)
10. 스크리닝 시 A형 간염 바이러스 IgM 항체(항-HAV IgM), B형 간염 표면 항원(HBsAg), C형 간염 바이러스(HCV) 항체 또는 HIV-1 및/또는 HIV-2에 대한 항체에 대한 양성 혈청 테스트
11. 연구 약물의 첫 투여 전 28일 이내에 발생한 대수술 또는 심각한 외상성 손상. 대수술이 연구 약물의 첫 투여 전 28일 초과시에 발생한 경우, 개인은 연구 약물의 첫 투여 전에 중재로 인한 임의의 독성 및/또는 합병증으로부터 적절하게 회복되어야 함.
12. 피험자 안전에 위험을 초래하거나 또는 연구를 방해할 수 있거나 또는 피험자를 참여에 부적합하게 만들 수 있는 임상적으로 유의한 장애, 병태 또는 질환, 예를 들어, 호흡기, 신장, 간, 위장관, 혈액학적, 림프계, 신경계, 심혈관계 또는 정신 질환의 병력 또는 증거
13. 스크리닝 시 양성 QuantiFERON-TB Gold Plus 테스트
14. 스크리닝 전 3개월 이내에 생백신을 투여받았거나 또는 연구 약물의 마지막 투여 후 3개월 이내에 생백신을 투여받을 계획이 있음
15. 모유 수유 중이거나 또는 스크리닝 시 양성 혈청 임신 테스트 또는 -1일에 양성 소변 임신 테스트를 받은 여성
16. 조사자 또는 메디컬 모니터의 의견에 따라 참여자를 포함하기에 적합하지 않게 하거나 또는 참여자의 연구 완료 능력을 방해할 수 있는 임의의 기타 조건
IgAN 환자에 대한 포함 기준
참여 자격이 있는 개인은 다음 기준을 모두 충족해야 한다:
1. 스크리닝 시 18세 이상의 남성 또는 여성
2. 가임 여성(WOCBP; CTFG 2014에 따름)은 연구 전반에 걸쳐(스크리닝으로부터 연구 약물의 최종 투여 후 대략 5 반감기(165일)까지) 프로토콜에 명시된 피임 지침을 따르는 데 동의해야 함
3. 남성은 연구 기간에 걸쳐(스크리닝으로부터 연구 약물의 최종 투여 후 대략 5 반감기(165일)까지) 프로토콜에 명시된 피임 지침을 따르는 데 동의해야 함
4. 적어도 50㎏의 체중과 스크리닝 시 18 ㎏/㎡ 내지 40 ㎏/㎡의 BMI 포함
5. 병력, 신체 검사, 활력 징후 평가, 12-유도 ECG 및 정상 참조 범위 내 또는 IgAN과 일치하는 임상 실험실 평가(또는 조사자가 임상적으로 관련이 없는 것으로 간주한 정상 참조 범위를 벗어나는 경우)에 의해 결정된 바와 같이 본 연구에 적격한 것으로 간주됨
6. 지난 10년 이내에 실시한 생검에 의해 검증된 IgAN의 진단
7. 스크리닝 시 수집된 24시간 소변 평가를 기준으로 0.5 g/24h 이상의 소변 단백질; 또는 0.5 g/g 이상(또는 50 ㎎/m㏖ 이상)의 UPCR.
8. eGFR(만성 신장 질환 역학 공동작업[CKD-EPI] 공식에 따라) 또는 측정된 GFR이 1.73㎡당 45 ㎖/분; 또는 1일 전 2년 이내에 수행된 신장 생검이 사구체 섬유증의 증거(예를 들어, Oxford 분류에 의한 S1)를 제공하지 않는 경우 1.73㎡당 30 ㎖/분 내지 45 ㎖/분을 초과함.
9. 스크리닝 전 적어도 3개월 동안 안지오텐신 전환 효소(ACE) 저해제 및/또는 안지오텐신-수용체 차단제(ARB)의 최적화된 용량에 안정적이거나 또는 ACE/ARB에 대해 불내성임.
10. ICF에 열거된 요구사항 및 제한사항의 준수를 포함하는 서명된 피험자 동의서를 제공할 수 있음
11. 스크리닝 방문 시 혈압 140/90 ㎜Hg(수축기/이완기) 미만
IgAN 환자에 대한 제외 기준
임의의 다음 제외 기준을 충족하는 개인은 참여할 자격이 없을 것이다:
1. BION-1301의 임의의 성분에 대한 알레르기 또는 과민증이 알려져 있거나 또는 의심되는 경우 또는 임의의 단일클론 항체에 대한 심각한 과민 반응의 병력
2. 연구 약물의 첫 투여 전 3개월 내 혈액 헌혈, 연구 약물의 첫 투여 전 7일 내 혈장 헌혈 또는 연구 약물의 첫 투여 전 6주 내 혈소판 헌혈
3. 조사자가 판단한 다수의 채혈 및 연구 약물 투여를 위한 정맥 투여의 어려움
4. 본 연구에서 연구 약물의 첫 투여 28일 또는 5 반감기(둘 중 더 긴 기간) 이내에 연구용 신약 또는 연구용 장치를 인수한 임의의 다른 연구에 참여함
5. 1일 전 3개월 이내 HIV 감염 또는 비장결손을 포함하여 임의의 확인되거나 또는 의심되는 면역억제성 또는 면역-결핍성 상태; 재발성, 중증 감염 및 만성 면역억제제(흡입/국소 코르티코스테로이드의 경우 28일 초과 및 전신 면역억제성 또는 코르티코스테로이드 요법의 경우 1주 초과)
6. 스크리닝 시 항-HAV IgM, HBsAg, HCV 항체(HCV에 대해 적절하게 치료되지 않은 경우) 또는 HIV-1 및/또는 HIV-2에 대한 항체에 대한 양성 혈청 테스트
7. 연구 약물의 첫 투여 전 28일 이내에 발생한 대수술 또는 심각한 외상성 손상. 대수술이 연구 약물의 첫 투여 전 28일 초과시에 발생한 경우, 개인은 연구 약물의 첫 투여 전에 중재로 인한 임의의 독성 및/또는 합병증으로부터 적절하게 회복되어야 함.
8. 조사자가 판단한 피험자 안전에 위험을 초래하거나 또는 연구를 방해할 수 있거나 또는 피험자를 참여에 부적합하게 만들 수 있는 임상적으로 유의한 장애, 조건, 질환 또는 실험실 소견의 병력 또는 증거
9. 본 연구에서 연구 약물의 첫 투여 전 28일 또는 5 반감기(둘 중 더 긴 기간) 이내에 단일클론 항체를 포함하여 임의의 승인된 생물학적 작용제의 사전 사용
10. 담당 의사가 정의한 2차 형태의 IgAN(예를 들어, IgA 혈관염 및 관련 알코올성 간경변증)
11. 급속 진행성 사구체신염(rapidly progressive glomerulonephritis: RPGN)의 임상적 의심.
12. 연구 동안 투석 치료 또는 임의의 계획된 신장 이식의 필요성을 포함하여 조사자가 즉각적인 치료가 필요하다고 생각하는 임의의 신장 증상
13. 연구 약물의 첫 투여 전 3개월 이내에 전신 코르티코스테로이드 요법(적어도 10일 동안 10 ㎎/일 초과의 프레드니손 또는 동등물) 또는 임의의 다른 형태의 면역억제성 요법을 받음
14. 1형 또는 2형 당뇨병
15. 조사자가 판단한 조절되지 않는 심혈관계 질환
16. 다음을 제외한 현재의 악성 종양 또는 지난 3년 동안 악성 종양의 병력:
Figure pct00039
적절하게 치료된 기저 세포 암종
Figure pct00040
피부의 편평 세포 암종 또는 제자리 자궁경부암
Figure pct00041
저위험 전립선암(즉, 7 미만의 Gleason 점수 및 10 ng/㎖ 미만의 전립선 특이 항원)
17. 생명을 위협하거나, 또는 연구 요구사항의 준수를 제한할 수 있거나 또는 조사자의 평가에서 연구 참여에 대해 허용할 수 없는 위험에 놓이게 할 정도로 임상적으로 중요한 병발성 질병(활성 감염 포함)
18. 스크리닝 시 양성 QuantiFERON-TB Gold Plus 테스트
19. 연구 약물의 마지막 투여 후 3개월 동안 스크리닝 전 3개월 이내에 생백신을 투여받았음. 비복제성 바이러스 벡터 백신은 허용 가능함.
20. 모유 수유 중이거나 또는 스크리닝 시 양성 혈청 임신 테스트 또는 투여 1일 전에 양성 소변 임신 테스트를 받은 여성
BION-1301의 약리학적 활성 용량(pharmacologically active dose: PAD)은 최대 24시간 동안 유리 혈청 APRIL 농도의 95% 감소 및 면역 글로불린의 최소 감소(IgG의 경우 대략 6%, IgA의 경우 대략 15%)를 초래하는 것으로 예측되는 단일 용량으로 정의된다. 사이노몰구스 원숭이에서의 단일-용량 및 다중-용량 독성 연구로부터의 데이터의 PK-PD 모델링을 기반으로 추정된 PAD는 50㎎이다. 이 모델은 사이노몰구스 원숭이와 인간 사이의 APRIL 농도의 차이를 설명하며, 속도 상수(PK 및 PD) 및 종 사이의 부피(PK)를 변환하기 위해 상대성장 스케일링(allometric scaling)을 적용하였다.
임상 연구(ADU-CL-16)에서 다발성 골수종 환자에게서 아직 나타나지 않은 잠재적인 독성을 설명하고, HV와 환자 사이에서 위험 혜택 프로파일이 다르다는 사실을 설명하기 위해 PAD에 안전 계수(safety factor) 5를 적용하였다. 현재 연구의 파트 1에서, 제1 코호트는 10㎎에서 시작하였고, 4명의 HV로 이루어진다: (후속 코호트에서는 BION-1301을 투여받은 6명, 위약을 투여받은 2명에 비해) BION-1301을 투여받은 3명 및 위약을 투여받은 1명. SAD-HV-1에 대한 감소된 HV의 수는 면역 글로불린 농도와 관련하여 예상되는 경미한 약리학적 효과의 가정을 기반으로 하며; 따라서, 이 데이터는 BION-1301의 용량-노출-효과 관계의 특성화에 대한 유용성이 제한적이다.
위에 기재된 PAD-기반 고려사항 외에도, 10㎎의 시작 용량은 사이노몰구스 원숭이에서 100 ㎎/㎏의 최대 무독성 용량(no observed adverse effect level: NOAEL)보다 600-배 내지 2383-배 더 낮다. 따라서, 건강한 성인에서 BION-1301의 초기 용량을 뒷받침할 수 있는 적절한 안전 계수가 존재한다.
Figure pct00042
파트 1 및 파트 2를 수행하였으며, 파트 1(SAD) 및 파트 2(MAD)의 기준선 인구 통계는 다음 표 36에 나타나 있다:
Figure pct00043
BION-1301은 HV에서 내약성이 좋았다. SAE, 치료 중단 또는 중단 기준을 충족하는 사례는 보고되지 않았다. 모든 환자는 첫 주입 전에 사전 투약을 받았으며, MAD 150㎎ 코호트에서 첫 주입 관련 반응이 보고되었다. MAD 코호트 피험자의 10% 이상에서 발생한 가장 흔한 AE는 두통, 사지 통증, 상승된 AST 및 비인두염이었다. SAD 코호트 피험자의 10% 이상에서 발생한 가장 흔한 AE는 비인두염이었다. 투여는 항-약물 항체 및 중화 항체의 낮은 발생률과 관련이 있었다.
도 25는 표시된 투여량에서 평균 BION-1301 혈청 농도(+/- SD) 대 공칭 시간을 보여준다. 농도는 코호트 내에서 유사하였으며, 개인차는 약물 배치(disposition)에 영향을 미치는 고정 용량 및 가변적인 체중의 결과일 수 있다. 평균 BION-1301 혈청 농도는 일반적으로 저용량에서 용량-비례적이었지만, 더 높은 용량에서는 용량-비례보다 약간 더 컸다.
도 26은 표시된 투여량에서 평균 유리 APRIL(fAPRIL) 혈청 농도 +/- SD 대 공칭 시간을 보여준다. 도시된 바와 같이, BION-1301은 더 높은 용량에서 1개월 이상 지속되는 지속적인 용량-의존적 표적 점유율의 증가를 보여준다.
도 27은 투여 1일 전에 취한 기준선 샘플에 대한 혈청 내 면역글로불린 수준의 평균 변화 백분율(+/- SD)를 보여준다. 패널 A 내지 패널 C는 시간(일) 경과에 따른 기준선에 대한 단일 용량 코호트를 나타내고, 패널 D 내지 패널 F는 다중 용량 코호트를 나타낸다. BION-1301은 용량 의존적이고, IgA 및 IgM을 지속적으로 감소시키며, IgG는 덜 감소시킨다. 이 데이터는 환자의 월간 투여 가능성과 일치한다. 1350㎎의 단일 또는 450㎎의 다중 용량 수준에서, BION-1301은 IgM 수준을 낮은 실험실 값 범위로 억제하였지만, 치료와 관련된 감염에 대한 보고는 없었다. BION-1301-매개성 면역글로불린 감소는 IgA:IgG 면역 복합체의 화학량론을 방해할 가능성이 있다. 도 28a 및 도 28b에 도시된 바와 같이, BION-1301은 IgG에 대한 영향을 완화하면서 IgA 감소를 이용하기 위한 약력학적 창(window)을 제공한다.
도 33은 건강한 인간 지원자에서 정맥내(IV) 주입에 의해 투여된 BION-1301의 단일 용량 증량(SAD) 및 다중 용량 증량(MAD) 연구에서의 혈청 IgA 및 Gd-IgA1의 감소를 보여준다. 도시된 바와 같이, BION-1301은 혈청 IgA 및 Gd-IgA1 수준 모두에서 용량-의존적 비례 감소를 제공하였다.
파트 3으로부터의 예비 데이터에서, 5명의 환자가 12주 동안 IV 주입에 의해 450㎎의 BION-1301을 Q2W로 투여받았다. SAE의 이상 사례로 인한 조기 종료 없이 치료의 내약성이 좋았다. 빠르고 지속적인 유리 APRIL 감소가 관찰되었으며, Gd-IgA1, IgA 및 IgM의 지속적인 감소와 IgG의 더 작은 감소가 관찰되었다. 임상적으로 의미가 있는 단백뇨(24시간 UPCR) 감소가 관찰되었다. 예비 데이터는 BION-1301이 병원성 Gd-IgA1을 고갈시키고, 최적화된 SOC 치료에도 불구하고 잔류 단백뇨로 진행될 위험이 있는 IgA 신장병증 환자에서 단백뇨를 감소시키는 질환 변형 가능성(disease modifying potential)에 대한 초기 개념 증명(early proof-of-concept)을 보여준다.
순환계 내 병원성 IgA-함유 면역 복합체의 존재에 대한 대용물로서, 생체외 혈관사이 세포 활성화 검정을 생물학적 검정으로 사용하였다. BION-1301 투여 전 및 BION-1301 치료 제29일 및 제85일에 기준선에서 연구에 등록된 처음 2명의 IgAN 환자의 혈장으로부터 칼럼 크로마토그래피에 의해 IgA 분획을 단리하였다. 그런 다음, 배양 시 원발성 인간 혈관사이 세포를 72시간 동안 이러한 환자 유래 IgA 함유 분획으로 자극하고, 혈관사이 세포 증식을 Brdu 통합에 의해 3회 반복 측정하였다. 도 34에 도시된 바와 같이, BION-1301은 이들 IgAN 환자에서 급속한 APRIL 중화를 초래하고, 이어서 Gd-IgA1 고갈 및 혈관사이 세포 활성화 감소를 초래하였으며, 후속적으로 단백뇨 감소를 초래하였다.
실시예 16
다음은 성인 건강한 성인 지원자에게 정맥내(IV) 또는 피하(SC) 투여한 BION-1301의 1상 단일 용량, 병용 그룹 안전성 및 생체이용률 연구이다. 이 연구는 제안된 IgAN의 치료 적응증에 대한 SC 장기 투여를 가능하게 할 권장된 2상 용량(RP2D)을 정의하는 데 도움을 주기 위해 SC 주사로 투여될 때 BION-1301의 생체이용률을 정의하기 위해 수행하였다.
Figure pct00044
Figure pct00045
연구는 건강한 성인 지원자에게 IV 및 SC 경로로 투여한 BION-1301의 I상, 공개 라벨, 무작위 배정, 단일 용량, 병용 그룹 안전성 및 생체이용률 연구였다. 연구는 최대 대략 34명의 피험자(군당 17명)를 등록하여 2개 군, 병용 그룹, 3-기간 설계에서 총 30명의 PK 평가 가능한 피험자를 달성하였다. 피험자는 BION-1301을 IV 투여(치료군 A)하거나 또는 BION-1301을 SC 투여(치료군 B)하기 위해 1:1로 무작위 배정하였다. 두 치료군에서, 피험자는 300㎎의 단일 용량의 BION-1301을 투여받을 것이다. 다음 3가지의 정의된 연구 기간으로 연구를 수행하였다: 스크리닝 기간, 치료 기간 및 안전성 추적 조사 기간. 임의의 연구-관련 절차 또는 평가를 수행하기 전에 연구 참여에 대한 피험자 서면 동의서를 얻었다. 투여(SC 또는 IV)는 제1일에 자격을 갖춘 직원의 감독하에 치료소에서 실시하였다. 제1일에 투여 후 처음 24시간 동안 및 8일째까지 병원 입원 동안 피험자를 면밀히 모니터링하였다. 연구는 마지막 피험자가 57일째에 최종 방문을 완료하면 완료하였다. 임의의 개별 피험자에 대한 연구 기간은 최대 14주였으며, 6주의 스크리닝 기간과 8주의 치료(1일) 및 안전성 추적 조사 기간을 포함하였다. 피험자는 IV 또는 SC의 2가지 투여 경로 중 하나에 의해 단일 300㎎ 용량의 BION-1301을 투여받았다. IV 투여는 실시예 15에 기재된 바와 같이 제조하였으며, 여기서 20 ㎎/㎖의 항체 제형은 0.9% 식염수에 희석하였고, 이 경우 3×5㎖ 바이알을 사용하여 235㎖의 식염수 용액에 희석된 15㎖의 항체 용액을 얻었다. SC 투여는 150 ㎎/㎖ 제형의 바이알로 제공하였으며, 목적하는 2.0㎖ 부피를 주사기로 빼어 복부에 직접 주사하였다.
스크리닝 기간: 피험자 동의서(ICF)에 서명하면 시작하였다. 이 기간 동안, 피험자는 연구 참여에 대한 적격성을 결정하기 위한 평가를 받았다. 스크리닝 기간은 최대 6주였다. 모든 적격성 기준을 충족하는 피험자를 연구에 등록하였다.
입원/치료 기간: 임상 시설에 입원하여 -1일에 시작하여 임상 시설에서 퇴원하여 제8일에 종료하였다. 투여(SC 또는 IV)는 제1일에 자격을 갖춘 직원의 감독하에 치료소에서 실시하였다. 제1일에 투여 후 처음 24시간 동안 피험자를 집중적으로 모니터링한 다음, 제8일에 퇴원할 때까지 면밀히 모니터링하였다. 치료 기간 동안, 피험자는 PK 및 PD의 안전성 모니터링 및 평가를 받았다. 제8일에 최종 PK 및 PD 샘플 수집 및 안전성 평가를 완료한 후, 피험자는 추적 조사 기간에 들어갔다.
추적 조사 기간: 임상 시설에서 퇴원할 때 시작하여 SOE에 기재된 바와 같이 연구 종료(EOS) 방문으로 제57일에 종료하였다.
연구에 포함될 자격이 있는 참여자는 다음 기준을 모두 충족하였다:
참여자는 피험자 동의서에 서명할 당시 18세 내지 60세여야 한다.
1) 47㎏ 이상의 체중과 스크리닝 시 18 ㎏/㎡ 내지 30 ㎏/㎡의 체질량 지수(BMI) 포함.
2) 병력 및 음성 코티닌 수준으로 확인된, 스크리닝 방문 전 적어도 3개월 이전에 흡연 경험이 없고/없거나 흡연 또는 니코틴/니코틴-함유 제품(코담배, 전자 담배 및 유사 제품 포함)의 사용을 중단한 개인으로 정의된 비흡연자.
3) 병력, 신체 검사(PE), 활력 징후 평가, 12-유도 심전도(ECG) 및 정상 참조 범위 내(또는 조사자가 임상적으로 관련이 없는 것으로 간주하는 정상 참조 범위 밖) 임상 실험실 평가에 의해 결정된 양호한 건강상태.
4) 피험자가 연구 참여 동안 프로토콜을 준수할 가능성이 있다는 조사자의 판단.
5) 조사자 및 의뢰자/메디컬 모니터의 재량에 따라 적합하다고 판단되지 않는 한 식이 보조제를 포함하여 현재 처방약 또는 일반 약물(over-the-counter medication)을 복용하고 있지 않음.
6) 참여자는 남성 또는 여성일 수 있음.
남성 참여자는 연구 약물의 마지막 투여 후 10주 동안 스크리닝에서 피임 지침에 따르기로 동의한 경우 참여할 자격이 있음:
Figure pct00046
3개월 정관수술 후 3개월 초과 또는
Figure pct00047
연구 약물의 마지막 투여 후 10주 동안 스크리닝에서 정자 기증 자제
추가로:
Figure pct00048
이성 교제의 자제
또는
Figure pct00049
성교시 매우 효과적인 추가 여성 기구 피임 방법과 함께 남성 콘돔을 사용하는 데 동의함.
여성 참여자는 연구 약물의 마지막 투여 후 10주 동안 스크리닝에서 피임 지침에 따르기로 동의한 경우 참여할 자격이 있음:
Figure pct00050
가임 여성이 아님(WOCBP) 또는
Figure pct00051
WOCBP이며, 연구 치료의 마지막 투여 후 10주 동안 스크리닝에서 매우 효과적인 피임법을 사용하고 있으며, 이 기간 동안 생식 목적으로 난자(난자, 난모세포)를 기증하지 않는 데 동의함. 매우 효과적인 피임 방법이 호르몬인 경우, 남성 파트너도 또한 기구 방법(즉, 남성 콘돔)을 사용하여야 함. 조사자는 연구 치료의 시작과 관련하여 피임 방법의 효과를 평가해야 함.
Figure pct00052
WOCBP는 연구 치료제 투여 전 24시간 이내에 매우 민감한 임신 테스트(현지 규정에서 요구하는 혈청)에 음성이어야 함.
7) 서명된 피험자 동의서를 제공하고 이해할 수 있으며, 연구에 참여할 의향이 있음.
임의의 다음 기준이 충족되면 참여자를 연구에서 제외하였다:
1) 스크리닝 전 6개월 이내에 정기적인 알코올 소비(여성의 경우 7잔/주 초과, 남성의 경우 14잔/주 초과, 여기서 1잔 = 와인 5온스[150㎖] 또는 맥주 12온스[360㎖] 또는 증류주 1.5온스[45㎖]임), 또는 스크리닝 방문 전 3개월 이내에 중독성이 없는 마약(예컨대, 대마초) 또는 스크리닝 방문 전 1년 이내에 중독성 마약(예컨대, 코카인 및 펜사이클리딘)의 사용 및/또는 스크리닝 방문 또는 입원 시 약물 남용 또는 알코올에 대한 양성 혈액 또는 소변 테스트 결과
2) 연구 약물의 단일 투여 전 3개월 내 혈액의 헌혈, 연구 약물의 단일 투여 전 7일 내에 혈장의 헌혈 또는 연구 약물의 단일 투여 전 6주 내에 혈소판의 헌혈 또는 단일 용량의 연구 약물의 단일 투여 8주 이내에 혈액 또는 혈액 제품을 투여받음.
3) 조사자 및 메디컬 모니터가 허용 가능한 것으로 간주되지 않는 한 연구 약물 투여 28일 또는 5 반감기(둘 중 더 긴 기간) 이내 임의의 처방 약물, 처방되지 않은 전신 또는 국소 약물, 치료 또는 보조제, 임의의 처방된 전신 또는 국소 약물(1일 최대 2g의 파라세타몰 또는 1일 최대 800㎎의 이부프로펜 또는 호르몬 대체 요법[HRT] 제외) 사용.
4) 조사자가 판단한 다수의 채혈 및 연구 약물 투여를 위한 정맥 투여의 어려움.
5) 본 연구에서 연구 약물의 단일 투여 전 28일 또는 5 반감기(둘 중 더 긴 기간) 이내에 단일클론 항체를 포함하여 임의의 승인된 생물학적 작용제의 사용.
6) 스크리닝 전 3개월 이내에 생백신을 투여받았거나 또는 연구 약물의 투여 후 3개월 이내에 생백신을 투여받을 계획이 있음.
7) 1일 전 8주 이내에 임의의 확인되거나 또는 의심되는 면역결핍성 상태 또는 재발성, 중증 감염 또는 만성 전신 면역억제제 사용의 존재.
8) B형 간염(HBsAg)의 표면 항원, C형 간염(HCV) 항체(HCV에 대해 적절하게 치료되지 않은 경우) 또는 (인간 면역결핍 바이러스) HIV-1 및/또는 HIV-2에 대한 항체에 대한 양성 혈청 테스트.
9) 피험자 안전에 위험을 초래하거나 또는 연구를 방해할 수 있거나 또는 피험자를 참여에 부적합하게 만들 수 있는 임상적으로 유의한 장애, 병태 또는 질환, 예를 들어, 임상적으로 유의한 호흡기, 신장, 간, 위장관, 혈액학적, 림프계, 신경계, 심혈관계, 정신 질환의 병력 또는 증거.
10) 스크리닝 시 양성 QuantiFERON-TB Gold Plus 테스트.
11) 모유 수유 중이거나 또는 스크리닝 시 양성 혈청 임신 테스트 또는 -1일에 양성 혈청 임신 테스트를 받은 여성.
12) 남성의 경우 450 msec 초과 및 여성의 경우 470 msec 초과의 QTcF 또는 조사자가 결정한 임상적으로 유의한 ECG 소견.
13) 다음을 포함하는 활력 징후 측정(1회 반복 측정하였음):
a. 140 ㎜/Hg 초과의 수축기 혈압(BP) 또는 90 ㎜/Hg 초과의 이완기 BP.
b. 90 ㎜/Hg 미만의 수축기 BP 또는 50 ㎜/Hg 미만의 이완기 BP.
c. 분당 100회 초과의 맥박(bpm) 또는 40회 미만의 bpm.
14) 본 연구에서 연구 약물 투여 28일 또는 5 반감기(둘 중 더 긴 기간) 이내에 연구용 약품 또는 장치를 인수한 임의의 다른 연구에 참여함.
15) BION-1301의 임의의 성분에 대한 알레르기 또는 과민증이 알려져 있거나 또는 의심되는 경우 또는 임의의 단일클론 항체에 대한 심각한 과민 반응의 병력.
분석을 위해, 다음 분석 집단이 표 37에 정의되어 있다.
Figure pct00053
피험자가 모든 포함 및 제외 기준을 통과하고 치료군 중 하나에 무작위 배정되면, 피험자는 등록된 것으로 간주하였다.
평가 가능한 피험자는 적어도 1회의 연구 치료제를 투여받았으며, 최대 15일까지 기준선 후 PK 샘플을 제공한 등록된 피험자로 정의하였다.
통계적 분석 계획(statistical analysis plan: SAP)을 데이터베이스 락(database lock) 이전에 개발하고 확정하였으며, 이는 분석에 포함할 피험자 집단 및 누락, 사용되지 않은 가짜 데이터를 설명하기 위한 절차에 대해 보다 자세히 설명한다.
모든 약동학적 분석은 Phoenix® WinNonlin®(버전 8.1)을 사용하여 PK 집단에서 수행하였다. 모든 PK 종점에 대한 분석은 각 치료군에 대해 개별적으로 제공하였다. PK 매개변수는 다음을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 비구획 분석에 의해 추정하였다:
Figure pct00054
PK 매개변수에 대한 측정 및 추정치를 기술 통계(평균, 표준 편차[SD], 변동 계수(CV%), 중앙값, 최소값 및 최대값)를 사용하여 군별로 표로 작성하고 요약하였다. PK 요약 통계는 적절하게 CV%, 기하 평균 및 기하 CV%의 보고를 포함할 수 있다. 그래프적 표현은 가능한 경우 PK 샘플링 시간에 대한 평균(±SD) 혈청 농도-시간 곡선 및 개별 피험자 농도-시간 곡선을 포함할 것이다.
분석을 위한 PK 매개변수의 사양; 및 사용된 통계적 유의 수준, 누락되고, 사용되지 않은 데이터를 설명하기 위한 절차, 편차 보고 절차 및 분석 집단에 포함할 피험자의 선택이 SAP에 적절하게 제시되어 있다. 각 치료군 내의 PK 매개변수의 비교를 수행하였다.
암리 글래소(AMRI Glasgow)의 BION-1301 20 ㎎/㎖ 용액 로트 번호 P197673-0004L001/P02919 및 150 ㎎/㎖ 용액 로트 번호 P217955-0001L001/P04819를 사용하여 이 연구를 완료하였다. 피험자로부터 PK 및 PD에 대해 샘플을 수집하고, 투여 전, 및 주입/주사 종료 후 0.25시간, 2시간, 4시간, 8시간 및 투여 후 24시간(2일), 48시간(3일), 72시간(4일), 168시간(8일), 336시간(15일), 672시간(29일), 1008시간(43일) 및 1344시간(57일)에 수집하였다. IV 투여에 의해 300㎎의 IV 용량을 투여받은 17명의 피험자 중 2명은 연구를 완료하지 못한 반면, SC 투여에 의해 300㎎의 용량을 투여받은 17명의 피험자 중 3명이 연구를 완료하지 못하였으며, 이는 추적 조사를 할 수 없는 것으로 간주하였다. 어느 경로로든 300㎎의 용량은 안전하고 내약성이 좋은 것으로 밝혀졌다. BION-1301 혈청 수준, 유리 APRIL 수준 및 IgA, IgG 및 IgM 항체 수준을 측정하였다.
평균(±SD) BION-1301 혈청 농도 수준은 도 30에 도시되어 있으며, 여기서 시간 0은 BION-1301의 투여 시간이다. 다음 표 38은 IV 대 SC 용량 투여에 대한 BION-1301의 약동학적 매개변수를 제공한다.
Figure pct00055
ANOVA를 사용하여 IV BION-1301(참조)과 SC BION-1301(테스트) 치료 사이의 상대적 생체이용률을 평가하고, 결과를 다음 표 39에 나타내었으며, 여기서 테스트 치료제는 SC 투여된 300㎎ BION-1301이고, 참조 치료제는 정맥내로 투여된 300㎎ BION-1301이며, CI = 신뢰 구간, CV = 변동 계수, LSM = 최소 평균 제곱 및 N = 관찰 횟수.
Figure pct00056
APRIL 농도의 측정을 위해, 단일-용량 IV 또는 SC 투여 후 평균(±SD) fAPRIL 농도는 도 31a에 도시되어 있고, 단일-용량 IV 또는 SC 투여 후 fAPRIL의 기준선에 대한 평균(±SD) 변화 백분율은 도 31b에 도시되어 있으며, 여기서 시간 0은 BION-1301의 투여 시간이다. 다음 표 40은 IV 대 SC 용량 투여 후 fAPRIL에 대한 약력학적 매개변수를 제공하며, 여기서 B0-t 미만의 AUEC는 선형 사다리꼴 보간 규칙을 사용하는 시점 0에서 시점 t까지 기준선 효과 값 미만인 반응 곡선의 면적이고, Rmin은 투여 후 관찰된 최소 반응 값이고, PBRmin은 (Rmin-B)/B × 100으로 계산된 투여 후 기준선 반응 값으로부터의 최소 변화 백분율이며, tmin은 Rmin의 시간이다.
Figure pct00057
면역글로불린 수준의 측정을 위해, BION-1301의 IV 대 SC 투여에 대한 시간 경과에 따른 혈청 면역글로불린 수준의 기준선에 대한 평균 변화 %는 도 32a(IgA), 도 32b(IgG) 및 도 32c(IgM)에 도시되어 있다.
당업자는 본 발명의 목적을 수행하고 언급된 목적 및 장점뿐만 아니라 본 명세서에 내제된 목적 및 장점을 얻기에 적합하다는 것을 쉽게 이해할 것이다. 본 명세서에 제공된 예는 바람직한 실시형태를 대표하고 예시적이며 본 발명의 범위를 제한하려는 의도가 아니다.
본 발명은 다음 설명에 제시되거나 또는 도면에 도시된 구성의 세부사항 및 구성요소의 배열에 대한 적용에 제한되지 않음을 이해하여야 한다. 본 발명은 설명된 것 이외의 실시형태가 가능하며, 다양한 방식으로 실시되고 수행될 수 있다. 또한, 본 명세서에 사용된 어구 및 전문 용어뿐만 아니라 요약은 설명의 목적을 위한 것이며 제한하는 것으로 간주되어서는 안 됨을 이해하여야 한다.
이와 같이, 당업자는 본 개시내용이 기반으로 하는 개념이 본 발명의 여러 목적을 수행하기 위한 다른 구조, 방법 및 시스템의 설계를 위한 기초로서 쉽게 이용될 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, 청구범위가 본 발명의 사상 및 범주를 벗어나지 않는 한 이러한 동등한 구성을 포함하는 것으로 간주되는 것이 중요하다.
본 발명은 당업자가 그것을 만들고 사용할 수 있도록 충분히 상세하게 설명되고 예시되었지만, 본 발명의 정신 및 범주를 벗어나지 않고 다양한 대안, 수정 및 개선이 명백해야 한다. 본 명세서에 제공된 예는 바람직한 실시형태를 대표하고 예시적이며 본 발명의 범위를 제한하려는 의도가 아니다. 이의 수정 및 다른 용도는 당업자에 의해 이루어질 것이다. 이러한 수정은 본 발명의 정신에 포함되며 청구 범위에 의해 정의된다.
본 발명의 범위 및 정신을 벗어나지 않고 본 명세서에 개시된 발명에 다양한 대체 및 수정이 이루어질 수 있음이 당업자에게 명백할 것이다.
본 명세서에 언급된 모든 특허 출원, 특허, 간행물 및 기타 참고문헌은 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자의 수준을 나타내며 각각 참조에 의해 본 명세서에 원용된다. 본 명세서에 인용된 참고문헌은 청구된 발명에 대한 선행 기술로 인정되지 않는다.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 상충하는 경우 정의를 포함한 본 명세서가 우선한다.
명세서 및 청구범위 모두에서 단수의 사용은 본 명세서에서 달리 나타내거나 문맥에 의해 명백히 모순되지 않는 한 단수 및 복수를 모두 포함하는 것으로 해석되어야 한다. "화학식의 존재(being of a chemical formula)", "포함하는(including)" 및 "함유하는(containing)"의 경우와 같이 용어 "포함하는(comprising)", "갖는(having)", "존재(being of)"는 달리 명시되지 않는 한 개방 용어(즉, 의미 "포함하지만 이들로 제한되지 않는")으로 해석되어야 한다. 추가적으로, "포함하는" 또는 또 다른 개방형 용어가 실시형태에서 사용될 때마다, 동일한 실시형태는 중간 용어 "본질적으로 이루어지는(consisting essentially of)" 또는 폐쇄형 용어 "이루어지는(consisting of)"을 사용하여 보다 좁게 청구될 수 있음을 이해하여야 한다.
용어 "약", "대략" 또는 "대략적인"은, 숫자 값과 관련하여 사용될 때 값의 집합 또는 범위가 포함됨을 의미한다. 예를 들어, "약 X"는 X의 ±20%, ±10%, ±5%, ±2%, ±1%, ±0.5%, ±0.2% 또는 ±0.1%인 값의 범위를 포함하되, X는 숫자 값이다. 일 실시형태에서, 용어 "약"은 명시된 값보다 10% 더 많거나 또는 적은 값의 범위를 지칭한다. 또 다른 실시형태에서, 용어 "약"은 명시된 값보다 5% 더 많거나 또는 적은 값의 범위를 지칭한다. 또 다른 실시형태에서, 용어 "약"은 명시된 값보다 1% 더 많거나 또는 적은 값의 범위를 지칭한다.
값 범위의 인용은 본 명세서에서 달리 나타내지 않는 한 범위 내에 속하는 각각의 별개의 값을 개별적으로 언급하는 속기 방법으로서의 역할을 할 뿐이며, 각각의 별개의 값은 본 명세서에서 개별적으로 인용된 것처럼 명세서에 원용된다. 본 명세서에서 사용되는 범위는 달리 명시되지 않는 한 범위의 두 가지 한계를 포함한다. 예를 들어, 용어 "X와 Y 사이" 및 "X 내지 Y의 범위"는 X와 Y 및 그 사이의 정수를 포함한다. 한편, 본 개시내용에서 일련의 개별 값을 언급하는 경우, 본 개시내용에서는 두 개의 개별 값 중 임의의 값을 두 끝점으로 포함하는 임의의 범위도 또한 구상된다. 예를 들어, 표현 "약 100㎎, 200㎎ 또는 400㎎의 용량"은 또한 "100㎎ 내지 200㎎ 범위의 용량", "200㎎ 내지 400㎎ 범위의 용량" 또는 "100㎎ 내지 400㎎ 범위의 용량"을 의미할 수 있다.
본 명세서에 예시적으로 설명된 본 발명은 본 명세서에 구체적으로 개시되지 않은 임의의 요소 또는 요소들, 제한 또는 제한들 없이 실시될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 본 명세서의 각각의 경우에서 용어 "포함하는", "본질적으로 이루어지는" 및 "이루어지는"은 다른 두 용어 중 하나로 대체될 수 있다. 사용된 용어 및 표현은 제한이 아닌 설명의 용어로 사용되었으며, 이러한 용어 및 표현의 사용에서 표시 및 설명된 기능 또는 그 일부의 등가물을 배제하려는 의도는 없지만 청구된 발명의 범위 내에서 다양한 수정이 가능함을 인정한다.
따라서, 본 발명이 바람직한 실시형태 및 선택적인 특징에 의해 구체적으로 개시되었지만, 본 명세서에 개시된 개념의 수정 및 변형은 당업자에 의해 이루어질 수 있으며, 이러한 수정 및 변형은 첨부된 청구범위에 의해 정의된 바와 같이 본 발명의 범위 내에 있어야 한다.
다른 실시형태는 다음의 청구범위 내에서 제시된다.
SEQUENCE LISTING <110> CHINOOK THERAPEUTICS, INC. ADURO BIOTECH HOLDINGS, EUROPE B.V. <120> METHODS OF TREATING IgA NEPHROPATHY WITH AN APRIL BINDING ANTIBODY <130> WO 2021/243298 <140> PCT/US2021/035011 <141> 2021-05-28 <150> US 62/704,831 <151> 2020-05-29 <160> 34 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 8 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> SITE <222> (1)..(8) <223> anti-hAPRIL heavy chain CDR1 (AA) <400> 1 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Val 1 5 <210> 2 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> SITE <222> (1)..(16) <223> anti-hAPRIL heavy chain CDR2 (AA) <400> 2 Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Ala Pro Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 <210> 3 <211> 12 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> SITE <222> (1)..(12) <223> anti-hAPRIL heavy chain CDR3 (AA) <400> 3 Gly Leu Gly Tyr Ala Leu Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> SITE <222> (1)..(11) <223> anti-hAPRIL light chain CDR1 (AA) <400> 4 Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Asn Asn Val Ala 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> 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Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 29 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: VL15 light chain (DNA) <400> 29 gacattgtga tgacccagtc tccttccact ctctctgcat ctgtgggaga cagagtaacc 60 atcacttgca aggccagtca gaatgtgggt aataatgtag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctact gatctcttcc gcatccaacc gggacagtgg tgtgccctca 180 aggtttagcg gcagtggatc agggacagag ttcacattga ccatatccag cctgcagcct 240 gatgattttg ctacttattt ctgccaacaa tataacattt 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Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 31 <211> 57 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(57) <223> Heavy chain secretion leader sequence (DNA) <400> 31 atggactgga cctggaggat cctctttttg gtggcagcag ccacaggtgc ccactcc 57 <210> 32 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> SITE <222> (1)..(19) <223> Heavy chain secretion leader sequence (AA) <400> 32 Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Ala His Ser <210> 33 <211> 66 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(66) <223> Light chain secretion leader sequence (DNA) <400> 33 atggacatga gagtcctcgc tcagctcctg gggctcctgc tgctctgttt cccaggtgcc 60 agatgt 66 <210> 34 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> SITE <222> (1)..(22) <223> Light chain secretion leader sequence (AA) <400> 34 Met Asp Met Arg Val Leu Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys 1 5 10 15 Phe Pro Gly Ala Arg Cys 20

Claims (45)

  1. 약제학적 주입 또는 피하 주사에 적합한 항체 제형으로서,
    약 20 ㎎/㎖ 내지 약 190 ㎎/㎖ 농도의 항-APRIL 항체;
    약 10mM의 L-히스티딘;
    약 75mM의 L-아르기닌;
    약 3wt%의 소르비톨;
    약 0.01wt%의 폴리소르베이트 20; 및
    약 6.0 내지 약 6.6의 pH
    를 포함하되;
    상기 제형은 (i) 16cP 이하의 점도를 가지고, (ii) 글루탐산 또는 이의 염을 포함하지 않으며, (iii) 약 250 mOsm/㎏ 내지 약 390 mOsm/㎏의 삼투질 농도를 갖고, 그리고 (iv) 약 1.0 미만의 OD330을 갖는, 항체 제형.
  2. 제1항에 있어서, 상기 제형은 상기 제형의 제조 후 9개월 동안 2℃ 내지 8℃에서 보관한 후 상기 항-APRIL 항체의 순도를 적어도 96% 유지하는, 항체 제형.
  3. 제2항에 있어서, 상기 제형은 상기 제형의 제조 후 6개월 동안 25℃에서 보관 후 상기 항-APRIL 항체의 순도를 적어도 95% 유지하는, 항체 제형.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형은 25℃에서 측정된 2.5×10-5 ㏖·㎖/g2 이상의 제2 비리얼 계수(virial coefficient)를 갖는, 항체 제형.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형은 약 7.4 이상의 계산된 등전위점을 갖는, 항체 제형.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형 내 상기 항-APRIL 항체는 약 150 ㎎/㎖의 농도로 존재하는, 항체 제형.
  7. 제6항에 있어서, 상기 제형은 약 290 mOsm/㎏ 내지 약 390 mOsm/㎏의 삼투질 농도를 갖는, 항체 제형.
  8. 제6항 또는 제7항에 있어서, 상기 제형은 약 0.8 이하의 OD330를 갖는, 항체 제형.
  9. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-APRIL 항체는 약 20 ㎎/㎖의 농도로 존재하는, 항체 제형.
  10. 제9항에 있어서, 상기 제형은 약 293 mOsm/㎏ 내지 약 333 mOsm/㎏의 삼투질 농도를 갖는, 항체 제형.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-APRIL 항체는 VH11.VL15, VH12.VL15, VH13.VL15, VH14.VL15, VH14_1.VL15, VH14_1C.VL15, VH14_1D.VL15, VH14_1E.VL15 및 VH14_1G.VL15로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 가변 영역.경쇄 가변 영역 쌍을 포함하는 인간화된 항체인, 항체 제형.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형에는 글리신, 카보네이트, HEPES, 포스페이트, 시트레이트 및 아세테이트가 없는, 항체 제형.
  13. 일회용 또는 다회용 바이알로서, 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 제형을 포함하는, 일회용 또는 다회용 바이알.
  14. 제13항에 있어서, 약 20 ㎎/㎖ 내지 약 190 ㎎/㎖의 항-APRIL 항체 농도를 갖는 상기 제형의 0.5㎖ 내지 50㎖ 부피를 포함하는, 일회용 또는 다회용 바이알.
  15. 제14항에 있어서, 상기 제형은 약 20 ㎎/㎖의 항-APRIL 항체 농도를 갖는, 일회용 또는 다회용 바이알.
  16. 제14항에 있어서, 상기 제형은 약 150 ㎎/㎖의 항-APRIL 항체 농도를 갖는, 일회용 또는 다회용 바이알.
  17. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형의 5㎖ 부피를 함유하는, 일회용 또는 다회용 바이알.
  18. 사전 충전된 주사기, 자기주사기 또는 주입기 펜으로서, 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 항체 제형을 포함하는, 사전 충전된 주사기, 자기주사기 또는 주입기 펜.
  19. 제18항에 있어서, 약 20 ㎎/㎖ 내지 약 190 ㎎/㎖의 항-APRIL 항체 농도를 갖는 상기 제형의 약 0.5㎖ 내지 약 10㎖ 부피를 포함하는, 사전 충전된 주사기, 자기주사기 또는 주입기 펜.
  20. 제19항에 있어서, 상기 제형은 약 20 ㎎/㎖의 항-APRIL 항체 농도를 갖는, 사전 충전된 주사기, 자기주사기 또는 주입기 펜.
  21. 제19항에 있어서, 상기 제형은 약 150 ㎎/㎖의 항-APRIL 항체 농도를 갖는, 사전 충전된 주사기, 자기주사기 또는 주입기 펜.
  22. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형의 약 2㎖ 부피를 포함하는, 사전 충전된 주사기, 자기주사기 또는 주입기 펜.
  23. 항-APRIL 항체를 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 방법으로서, 피하 주사에 의해 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 제형을 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  24. 제23항에 있어서, 상기 방법은 적어도 2회의 투여 주기 동안 적어도 매주(QW) 스케줄로 투여를 반복하는 단계를 포함하는, 방법.
  25. 제23항에 있어서, 상기 방법은 적어도 2회의 투여 주기 동안 적어도 2주마다(Q2W)의 스케줄로 투여를 반복하는 단계를 포함하는, 방법.
  26. 제23항에 있어서, 상기 방법은 적어도 2회의 투여 주기 동안 적어도 4주마다(Q4W) 또는 매월(QMT)의 스케줄로 투여를 반복하는 단계를 포함하는, 방법.
  27. 제23항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 약 10㎎ 내지 약 1350㎎의 상기 항-APRIL 항체의 총 용량이 투여 이벤트당 투여되는, 방법.
  28. 제27항에 있어서, 약 150 ㎎/㎖의 상기 항-APRIL 항체 농도의 상기 제형 약 2㎖가 투여당 전달되고, 각 투여 이벤트는 1회 이상의 상기 투여를 포함하는, 방법.
  29. 제27항에 있어서, 약 150 ㎎/㎖의 상기 항-APRIL 항체 농도의 상기 제형 약 4㎖가 투여당 전달되고, 각 투여 이벤트는 1회 이상의 상기 투여를 포함하는, 방법.
  30. 제23항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형은 상기 개체의 허벅지, 복부 또는 상완 부위에 피하로 투여되는, 방법.
  31. 항-APRIL 항체를 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 방법으로서, 정맥내 주입에 의해 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 제형을 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  32. 제31항에 있어서, 상기 방법은 적어도 2회의 투여 주기 동안 적어도 QW 스케줄로 투여를 반복하는 단계를 포함하는, 방법.
  33. 제31항에 있어서, 상기 방법은 적어도 2회의 투여 주기 동안 적어도 Q2W 스케줄로 투여를 반복하는 단계를 포함하는, 방법.
  34. 제31항에 있어서, 상기 방법은 적어도 2회의 투여 주기 동안 적어도 Q4W 또는 매월의 스케줄로 투여를 반복하는 단계를 포함하는, 방법.
  35. 제31항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 정맥내 주입은,
    제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 제형을 0.9% 식염수에 약 0.1 ㎎/㎖ 내지 약 10 ㎎/㎖의 농도로 희석하는 단계; 및
    약 10㎎ 내지 약 1350㎎의 상기 항-APRIL 항체의 총 용량을 약 2시간의 기간에 걸쳐 희석된 제형의 단일 정맥내 용량으로 상기 개체에게 투여하는 단계
    를 포함하는, 방법.
  36. 제35항에 있어서, 20 ㎎/㎖ 농도의 상기 제형 15㎖을 235㎖의 0.9% 식염수에 첨가하여 1.2 ㎎/㎖ 농도의 상기 정맥내 용량을 제공하는, 방법.
  37. 항-APRIL 항체를 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 방법으로서, 로딩/유지 투여 프로토콜(loading/maintenance administration protocol)에 의해 항-APRIL을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  38. 제37항에 있어서, 상기 로딩/유지 투여 프로토콜 로딩 구성요소는 상기 로딩/유지 투여 프로토콜의 유지 구성요소에서 상기 항-APRIL 항체 농도보다 더 높은 농도로 상기 항-APRIL 항체의 1회 이상의 투여를 포함하는, 방법.
  39. 제37항에 있어서, 상기 로딩/유지 투여 프로토콜 로딩 구성요소는 상기 로딩/유지 투여 프로토콜의 유지 구성요소의 상기 항-APRIL 항체의 투여 빈도보다 더 높은 빈도로 상기 항-APRIL 항체의 1회 이상의 투여를 포함하는, 방법.
  40. 제37항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 로딩/유지 투여 프로토콜 로딩 구성요소는 상기 로딩/유지 투여 프로토콜의 유지 구성요소의 상기 항-APRIL 항체의 투여 경로와는 상이한 경로로 상기 항-APRIL 항체의 1회 이상의 투여를 포함하는, 방법.
  41. 제37항에 있어서, 상기 로딩/유지 투여 프로토콜 로딩 구성요소는 상기 항-APRIL 항체의 1회 이상의 정맥내 투여를 포함하고, 상기 로딩/유지 투여 프로토콜의 유지 구성요소는 상기 항-APRIL 항체의 1회 이상의 피하 투여를 포함하는, 방법.
  42. 제37항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-APRIL 항체는 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 항체 제형인, 방법.
  43. 제23항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 이를 필요로 하는 상기 개체는 4 g/ℓ 초과의 혈청 IgA 수준을 갖는, 방법.
  44. 제23항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 이를 필요로 하는 상기 개체는 IgA 신장병증 환자인, 방법.
  45. 제23항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 고면역글로불린혈증을 갖는, 방법.
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