CN110960490A - 一种抗egfr抗体偶联药物组合物及其用途 - Google Patents

Abstract

本公开涉及一种抗EGFR抗体偶联药物组合物及其用途。具体而言，本公开涉及一种药物组合物，其包含在缓冲液中的EGFR‑ADC抗体偶联药物。除此之外，该药物组合物还包含糖和非离子型表面活性剂。本公开中的药物组合物具备良好的稳定性。

Description

一种抗EGFR抗体偶联药物组合物及其用途

技术领域

本公开属于药物制剂领域，具体涉及一种包含抗EGFR抗体偶联药物的药物组合物，以及其作为抗癌药物的用途。

背景技术

这里的陈述仅提供与本公开有关的背景信息，而不必然地构成现有技术。

表皮生长因子受体(EGFR)是一个巨大的跨膜糖蛋白，分子量约为170KDa，属于ErbB受体家族的一个成员。EGFR是一种酪氨酸激酶，当与配体如EGF、TNF-a等结合后可形成二聚体，通过传递磷酸化作用激活下游信号通路(如MAPK，PI3K，Stat等)，从而维持细胞生长，促进细胞分裂增殖。由于ErbB家族受体的保守性，EGFR还能与家族其他蛋白(如Her2，Her3，Her4)形成异源二聚体，从而更广泛的调控细胞的生长。

EGFR的基因突变或过表达常见于多种表皮细胞起源的恶性肿瘤，如头颈癌，结直肠癌，肺癌，胰腺癌，皮肤癌等，EGFR被认为是导致这些癌症的驱动基因。因此针对EGFR靶点的抗癌药物的研发一直以来是医学界的热点。目前，EGFR的小分子酪氨酸激酶抑制剂如吉非替尼(Gefitinib)、厄洛替尼(Erlotinib)和EGFR单克隆抗体如西妥昔单抗(Cetuximab)、帕尼单抗(Panitumumab)尼妥珠单抗(Nimotuzumab)等都已经上市，并在临床上取得了显著的效果。不过，这些EGFR靶向药物也并非完美，很多只适用于较小的病人群体。比如小分子抑制剂通常只对拥有特异的EGFR突变型的肺癌患者有效，且在使用一段时间后，常出现耐药性；EGFR单抗通常只对下游KRAS、BRAF、PIK3CA等基因没有产生突变的结直肠癌、头颈癌等病人群体比较有效。不仅如此，这些药物还会部分抑制普通细胞的EGFR正常生理功能，常伴随着皮疹，腹泻等靶点相关的副作用。因此能否找到一种能更有效的针对EGFR的新型抗癌药物，来克服现有EGFR靶向治疗造成的耐药性，扩大适应症，且减少正常组织靶点相关副作用，是我们急需攻克的一个难题。

抗体药物偶联物(Antibody-Drug Conjugate，ADC)，俗称为“生物导弹”，是一种利用单克隆抗体的特异性，将ADC分子蓄积到到肿瘤微环境，并通过抗体-肿瘤抗原介导的内吞作用将毒素分子定向的输送到癌细胞内部来杀死癌细胞的革命性技术。相对于传统化疗，ADC的毒素分子使用量大大降低，且较多的聚集于病灶，对于正常组织的毒副作用更小；另外，ADC主要是利用毒素分子直接结合于微管束来抑制癌细胞的分裂和增殖，而与单克隆抗体通过抑制受体信号通路起作用的作用机理不同，因此，下游信号蛋白是否存在基因突变对ADC发挥抑制癌细胞的作用不会起到太大影响，所以从理论上讲，ADC可以有比传统疗法更广的适应症，药效也更加强大。ADC相关文献有WO2007008603、WO2013173393、WO2005081711、WO2013173391、WO2013173392、WO2013173393、WO2012010287、WO2014143765等，本公开的发明人的在先申请WO20181006785也涉及一类新的抗EGFR抗体药物偶联物。

但是，ADC具有比抗体更复杂的异质结构，其制剂更加不稳定，这对ADC制剂的开发提出了更大的挑战。

发明内容

本公开提供一种药物组合物，其包含抗EGFR抗体偶联药物，以及缓冲剂，所述缓冲剂选自组氨酸-醋酸钠缓冲剂，所述缓冲剂的pH为大约5.0至大约6.0，优选为大约5.5。

在可选的实施方案中，前述药物组合物中所述缓冲剂的pH值为5.0至6.0，非限制的实施例包括约5.0、约5.1、约5.2、约5.3、约5.4、约5.5、约5.6、约5.7、约5.8、约5.9、约6.0，优选为大约5.5，在一些可选的实施方案中，缓冲剂的pH值为5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9或6.0。

在可选的实施方案中，前述药物组合物中所述缓冲剂浓度为大约5mM至大约30mM，优选为5mM至30mM，非限制性实施例包括大约10mM、大约12mM、大约14mM、大约16mM、大约18mM、大约20mM、大约30mM，优选为大约10mM至大约20mM，更优选为10mM至20mM，更优选为大约10mM。在一些可选的实施方案中，缓冲剂浓度为10mM、12mM、14mM、16mM、18mM、20mM或30mM。

在可选的实施方案中，前述药物组合物中所述抗EGFR抗体偶联药物浓度为大约1mg/ml至大约100mg/ml，优选为1mg/ml至100mg/ml，非限制性实施例包括：大约1mg/ml、大约10mg/ml、大约20mg/ml、大约30mg/ml、大约40mg/ml、大约41mg/ml、大约42mg/ml、大约43mg/ml、大约44mg/ml、大约45mg/ml、大约46mg/ml、大约47mg/ml、大约48mg/ml、大约49mg/ml、大约50mg/ml、大约51mg/ml、大约52mg/ml、大约53mg/ml、大约54mg/ml、大约55mg/ml、大约56mg/ml、大约57mg/ml、大约58mg/ml、大约59mg/ml、大约60mg/m、大约70mg/m、大约80mg/m、大约90mg/m、大约100mg/ml，优选为大约10mg/ml至大约30mg/ml，更优选为10mg/ml至30mg/ml；最优选为大约20mg/ml。在一些可选的实施方案中，抗EGFR抗体偶联药物浓度为1mg/ml、10mg/ml、20mg/ml、30mg/ml、40mg/ml、41mg/ml、42mg/ml、43mg/ml、44mg/ml、45mg/ml、46mg/ml、47mg/ml、48mg/ml、49mg/ml、50mg/ml、51mg/ml、52mg/ml、53mg/ml、54mg/ml、55mg/ml、56mg/ml、57mg/ml、58mg/ml、59mg/ml、60mg/m、70mg/m、80mg/m、90mg/m或100mg/ml。

在可选的实施方案中，前述药物组合物还包含糖。本公开的“糖”包含常规组合物(CH₂O)_n或其衍生物，包括单糖，二糖，三糖，多糖，糖醇，还原性糖，非还原性糖等等。可选自葡萄糖，蔗糖，海藻糖，乳糖，果糖，麦芽糖，右旋糖苷，甘油，赤藻糖醇，丙三醇，阿拉伯糖醇，sylitol，山梨糖醇，甘露醇，密里二糖，松三糖，蜜三糖，甘露三糖，水苏糖，麦芽糖，乳果糖，麦芽酮糖，山梨醇，麦芽糖醇，乳糖醇，异-麦芽酮糖等等。优选的糖是非还原性二糖，更优选为海藻糖或蔗糖，最优选为蔗糖。

在可选的实施方案中，前述药物组合物中糖的浓度为约30mg/ml至约90mg/ml，优选为30mg/ml至90mg/ml，非限制性实施例包括：大约30mg/ml、大约35mg/ml、大约40mg/ml、大约45mg/ml、大约50mg/ml、大约55mg/ml、大约60mg/ml、大约65mg/ml、大约70mg/ml、大约75mg/ml、大约80mg/ml、大约85mg/ml、大约90mg/ml，优选为约40mg/ml至约60mg/ml，更优选为40mg/ml至60mg/ml，最优选为大约50mg/ml。在一些可选的实施方案中，所述糖浓度为30mg/ml、35mg/ml、40mg/ml、45mg/ml、50mg/ml、55mg/ml、60mg/ml、65mg/ml、70mg/ml、75mg/ml、80mg/ml、85mg/ml或90mg/ml。

在可选的实施方案中，前述药物组合物还包含表面活性剂。可选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、聚羟亚烃、Triton、十二烷基磺酸钠、月桂基磺酸钠、辛基糖甙钠、月桂基-磺基甜菜碱、肉豆蔻基-磺基甜菜碱、亚油基-磺基甜菜碱、硬脂基-磺基甜菜碱、月桂基-肌氨酸、肉豆蔻基-肌氨酸、亚油基-肌氨酸、硬脂基-肌氨酸、亚油基-甜菜碱、肉豆蔻基-甜菜碱、鲸蜡基-甜菜碱、月桂酰胺基丙基-甜菜碱、柯卡酰胺基丙基-甜菜碱、亚油酰胺基丙基-甜菜碱、肉豆蔻酰胺基丙基-甜菜碱、棕榈酰胺基丙基-甜菜碱、异硬脂酰胺基丙基-甜菜碱、肉豆蔻酰胺基丙基-二甲基胺、棕榈酰胺基丙基-二甲基胺、异硬脂酰胺基丙基-二甲基胺、甲基可可酰基钠、甲基油基牛磺酸钠、聚乙二醇、聚丙二醇、乙烯与丙烯二醇的共聚物等等。优选的表面活性剂是聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯20，更优选为聚山梨醇酯20。

在可选的实施方案中，前述药物组合物中表面活性剂的浓度为约0.1mg/ml至约0.6mg/ml，优选为0.1mg/ml至0.6mg/ml，更优选为约0.35mg/ml至约0.6mg/ml，更优选为0.35mg/ml至0.6mg/ml，最优选为约0.4mg/ml，非限制性实施例包括大约0.1mg/ml、大约0.2mg/ml、大约0.3mg/ml、大约0.35mg/ml、大约0.4mg/ml、大约0.45mg/ml、大约0.5mg/ml、大约0.55mg/ml、大约0.6mg/ml。在一些可选的实施方案中，所述表面活性剂的浓度为0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.35mg/ml、0.4mg/ml、0.45mg/ml、0.5mg/ml、0.55mg/ml或0.6mg/ml。

在可选的实施方案中，前述药物组合物包含：

(a)大约1mg/ml至大约100mg/ml的抗EGFR抗体药物偶联物，(b)大约5mM至大约30mM的组氨酸-醋酸钠缓冲剂，pH为约5.0至约6.0，(c)大约30mg/ml至大约90mg/ml的糖，和(d)大约0.1mg/ml至大约0.6mg/ml的表面活性剂；优选地，所述药物组合物包含：

(a)大约10mg/ml至大约30mg/ml的抗EGFR抗体药物偶联物，(b)大约10mM至大约20mM的组氨酸-醋酸钠缓冲剂，pH为约5.0至约6.0，(c)约40mg/ml至约60mg/ml的蔗糖或海藻糖，和(d)约0.35mg/ml至约0.6mg/ml的聚山梨醇酯。

在可选的实施方案中，所述药物组合物包含：

(a)约20mg/ml的抗EGFR抗体偶联药物，(b)约10mM的组氨酸-醋酸钠缓冲剂，pH约5.5，(c)约50mg/ml的蔗糖，和(d)约0.4mg/ml的聚山梨醇酯20。

在可选的实施方案中，前述的药物组合物中的抗EGFR抗体的具有如下所示的CDR：

(i)重链HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示；和

(ii)轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO：3所示。

在可选的实施方案中，前述的药物组合物中的抗EGFR抗体药物偶联物具有如下所示的结构：

其中，y为1-8，优选2-5；Ab为抗EGFR抗体或其抗原结合片段，所述的抗EGFR抗体或其抗原结合片段包含以下所示的CDR区：

在可选的实施方案中，所述药物组合物中的抗EGFR抗体药物偶联物为ADC-9，期具有如下所示的结构：

其中，mAb002为抗EGFR抗体，其包括：氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的轻链，和如氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示的重链，y为1-8，优选2-5。

在可选实施方案中，所述药物组合物中的抗EGFR抗体选自鼠源抗体、嵌合抗体和人源化抗体，优选人源化抗体。

本公开还提供一种制备包含抗EGFR抗体偶联药物抗体的冻干制剂的方法，所述方法包括将前述药物组合物经冷冻干燥的步骤。

本公开还提供一种包含抗EGFR抗体偶联药物的冻干制剂，所述冻干制剂通过将前面任一所述的包含抗EGFR抗体药物偶联物的药物组合物经冷冻干燥获得。

在可选的实施方案中，前述制备包含抗EGFR抗体偶联药物抗体的冻干制剂的方法，其中所述冷冻干燥依次包括预冻、一次干燥和二次干燥的步骤。通过冷冻制剂和随后在适于一次干燥的温度使水升华，进行冷冻干燥。在此条件下，产物温度低于制剂的低共熔点或分解温度。在通常约50-250毫托范围的合适压力下，通常，一次干燥的存放温度范围为约-30℃至25℃(假设产物在一次干燥过程中保持冷冻)。制剂、容纳样品的容器(例如，玻璃小瓶)的大小和类型以及液体的体积决定了干燥所需的时间，所述时间的范围可为几小时至几天(例如40-60小时)。二次干燥阶段可在约0-40℃进行，这主要取决于容器的类型和大小以及采用的蛋白的类型。二次干燥时间由产物中的期望残余湿度水平决定，通常需要至少约5小时。通常，低压冻干的制剂的含水量小于约5％，优选小于约3％。压力可与在一次干燥步骤中应用的压力相同或不同，优选的，二次干燥的压力低于一次干燥。冷冻干燥条件可以随制剂和小瓶大小而变化。

在本公开的一个可选实施例中，将3mL的组合物原液进行冻干，冻干程序如下所示：预冻温度为5℃或-45℃，一次干燥的温度为-10℃，真空度为0.2mbar，二次干燥的的温度为25℃，真空度为0.2mbar或0.01mbar。

在一些实施方案中，冻干制剂于2-8℃稳定至少3个月，至少6个月，至少12个月，至少18个月或至少24个月。在一些实施方案中，该冻干制剂于40℃稳定至少7天，至少14天或至少28天。

本公开还提供一种含有抗EGFR抗体偶联药物的复溶溶液，所述复溶溶液是通过将前述冻干制剂经复溶制备获得。

本公开还提供制备上述复溶溶液的方法，其中包括将前述冻干制剂经复溶的步骤，其复溶所用溶液选自但不限于：注射用水、生理盐水或葡萄糖溶液。

在可选的实施方案中，所述的含抗EGFR抗体偶联药物的复溶溶液包含：(a)大约15mg/ml至大约45mg/ml的抗EGFR抗体偶联药物；(b)大约15mM至大约30mM的组氨酸-醋酸钠缓冲剂，pH大约5.2至大约6.2，优选pH大约5.5；(c)大约60mg/ml至大约80mg/ml的蔗糖；和(d)大约0.5mg/ml至大约0.9mg/ml的聚山梨酯20。

在一些可选的实施方案中，所述的含抗EGFR抗体偶联药物的复溶溶液包含：(a)15mg/ml至45mg/ml的抗EGFR抗体偶联药物；(b)15mM至30mM的组氨酸-醋酸钠缓冲剂，pH5.2至6.2，优选pH 5.5；(c)60mg/ml至80mg/ml的蔗糖；和(d)0.5mg/ml至0.9mg/ml的聚山梨酯20。

在一些实施方案中，所述的包含EGFR抗体偶联药物的复溶溶液包含如下成分：(a)大约30mg/ml的抗EGFR抗体偶联药物；(b)大约15mM的组氨酸-醋酸钠缓冲剂，pH大约5.5；(c)大约7.5％的蔗糖；和(d)大约0.06％的聚山梨酯20。

在一些实施方案中，所述的包含EGFR抗体偶联药物的复溶溶液包含如下成分：(a)30mg/ml的抗EGFR抗体偶联药物；(b)15mM的组氨酸-醋酸钠缓冲剂，pH 5.5；(c)7.5％的蔗糖；和(d)0.06％的聚山梨酯20。

本公开还提供一种制品，其包括容器，该容器中装有前述的药物组合物、冻干制剂或复溶溶液。在一些实施方案中，该容器为中性硼硅玻璃管制注射剂瓶。

本公开还提供前述的药物组合物、或冻干制剂、或复溶溶液、或制品，在制备治疗或预防疾病的药物中的应用。在一些实施方案中，所述疾病为癌症。在一些实施方案中，所述疾病为EGFR相关疾病。在一些实施方案中，其中所述EGFR相关的疾病为：高表达EGFR的癌症、EGFR有突变的癌症或在EGFR信号通路中的下游基因有突变的癌症。在一些实施方案中，所述的癌症选自：胶质母细胞瘤、鳞状细胞癌、皮肤癌、外阴癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、乳腺癌、肺癌、肠癌、肾癌、黑素瘤、非小细胞肺癌、结肠癌、直肠癌、外阴癌和头颈癌

本公开还提供一种治疗疾病的方法，包括给予患者治疗有效量的如上所述的包含抗EGFR抗体药物偶联物的药物组合物、或冻干制剂、或复溶溶液、或制品。其中所述的疾病优选为癌症，优选高表达EGFR的癌症、EGFR有突变的癌症或在EGFR信号通路中的下游基因有突变的癌症。所述的癌症可选自：胶质母细胞瘤、鳞状细胞癌、皮肤癌、外阴癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、乳腺癌、肺癌、肠癌、肾癌、黑素瘤、非小细胞肺癌、结肠癌、直肠癌、外阴癌和头颈癌。

如本领域技术人员所熟知的，本公开中所述各个实施方案的一项、一些或所有特性可以进一步组合以形成本公开的其它实施方案。本公开的以上实施方案和通过组合得到的其他实施方案通过下面的详述进一步说明。

发明详述

本公开提供一种更利于生产和给药，性能稳定的包含EGFR-ADC药物组合物。具体地，本公开所述的药物组合物包含EGFR-ADC、组氨酸-醋酸钠缓冲剂、糖和表明活性剂。

术语

为了更容易理解本公开，以下具体定义了某些技术和科学术语。除非在本文中另有明确定义，本文使用的所有其它技术和科学术语都具有本公开所属领域的一般技术人员通常理解的含义。

本公开将已公开专利文本WO 2018/006785A1的内容全部引入本申请。

“抗体药物偶联物(antibody drug conjugate，ADC)”是把单克隆抗体或者抗体片段通过稳定的化学接头与具有生物活性的细胞毒素或具有细胞杀伤活性的小分子药物相连，充分利用了抗体对肿瘤细胞特异或高表达抗原结合的特异性和细胞毒素的高效性，避免对正常细胞的毒副作用。与以往传统的化疗药物相比，抗体药物偶联物能精准地结合肿瘤细胞并降低将对正常细胞的影响。

“EGFR抗体药物偶联物”是指以EGFR为靶点的抗体经化学接头与细胞毒素或小分子药物连接形成的抗体药物偶联物(ADC)，如本公开中所述的ADC-9。

术语“抗EGFR抗体”或“EGFR抗体”为与EGFR特异性结合的抗体，包括但不限于WO2018/006785A1所公开的抗EGFR抗体。

“mAb002”为WO 2018/006785A1所公开的抗EGFR抗体mAb002，其重、轻链氨基酸序列如下所示：

mAb002轻链氨基酸序列：

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQNIVHSNGNTYLDWYQQTPGKAPKLLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCFQYSHVPWTFGQGTKLQITRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECSEQ ID NO：7；

mAb002重链氨基酸序列：

其中mAb002具有如下所示的CDR区：

“ADC-9”为mAb002经化学接头与小分子毒素连接形成的EGFR抗体药物偶联物。具有下列所示的结构

其中，y为1-8，优选2-5。

“缓冲剂”指通过其酸-碱共轭组分的作用而耐受pH变化的缓冲剂。将pH控制在适当范围中的缓冲剂的例子包括醋酸盐、琥珀酸盐、葡萄糖酸盐、组氨酸盐、草酸盐、乳酸盐、磷酸盐、枸橼酸盐、酒石酸盐、延胡索酸盐、甘氨酰甘氨酸和其它有机酸缓冲剂。

“组氨酸盐缓冲剂”是包含组氨酸根离子的缓冲剂。组氨酸盐缓冲剂的实例包括组氨酸-盐酸盐，组氨酸-醋酸盐，组氨酸-磷酸盐，组氨酸-硫酸盐等缓冲剂，优选组氨酸-醋酸盐缓冲剂，组氨酸-醋酸盐缓冲剂是组氨酸与醋酸配制而成，组氨酸盐缓冲剂是组氨酸与盐酸配制而成。

“枸橼酸盐缓冲剂”是包括枸橼酸根离子的缓冲剂。枸橼酸盐缓冲剂的实例包括枸橼酸-枸橼酸钠、枸橼酸-枸橼酸钾、枸橼酸-枸橼酸钙、枸橼酸-枸橼酸镁等。优选的枸橼酸盐缓冲剂是枸橼酸-枸橼酸钠。

“琥珀酸盐缓冲剂”是包括琥珀酸根离子的缓冲剂。琥珀酸盐缓冲剂的实例包括琥珀酸-琥珀酸钠、琥珀酸-琥珀酸钾、琥珀酸-琥珀酸钙盐等。优选的琥珀酸盐缓冲剂是琥珀酸-琥珀酸钠。

“磷酸盐缓冲剂”是包括磷酸根离子的缓冲剂。磷酸盐缓冲剂的实例包括磷酸氢二钠-磷酸二氢钠、磷酸氢二钠-磷酸二氢钾、磷酸氢二钠-枸橼酸等。优选的磷酸盐缓冲剂是磷酸氢二钠-磷酸二氢钠。

“醋酸盐缓冲剂”是包括醋酸根离子的缓冲剂。醋酸盐缓冲剂的实例包括醋酸-醋酸钠、醋酸组氨酸盐、醋酸-醋酸钾、醋酸醋酸钙、醋酸-醋酸镁等。优选的醋酸盐缓冲剂是醋酸-醋酸钠。

“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，所述其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是保持抗体活性成分的稳定性，促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。

本文中，“药物组合物”和“制剂”并不互相排斥。

本公开中所述药物组合物的溶液形式，若无特殊说明，其中的溶剂均为水。

“冻干制剂”表示液体或溶液形式的药物组合物或液体或溶液制剂经真空冷冻干燥步骤之后获得的制剂或药物组合物。

本文所用术语“约”、“大约”是指数值在由本领域一般技术人员所测定的具体值的可接受误差范围内，所述数值部分取决于怎样测量或测定(即测量体系的限度)。例如，在本领域每一次实行中“约”可意味着在1内或超过1的标准差。或者，“约”或“大约”或“基本上包含”可意味着至多20％的范围。此外，特别对于生物学系统或过程而言，该术语可意味着至多一个数量级或数值的至多5倍。本公开中，除非另外说明，“约XX”或“大约XX”或“基本上包含XX”(“XX”指代某一具体数值)的含义是该具体值的可接受误差范围内的所有数值(包括数值“XX”本身，以及本领域一般技术人员测定该数值的可接受误差范围内的数值)。

本公开所述的药物组合物能够达到一种稳定的效果：其中的EGFR-ADC在贮藏后基本上保留其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物学活性的药物组合物，优选地，药物组合物在贮藏后基本上保留其物理和化学稳定性以及其生物学活性。贮藏期一般基于药物组合物的预定保存期来选择。目前有多种测量蛋白质稳定性的分析技术，可测量在选定温度贮藏选定时间段后的稳定性。

稳定的药物抗体制剂是在下述情况下没有观察到显著变化的制剂：在冷藏温度(2-8℃)保存至少3个月，优选6个月，更优选1年，且甚至更优选地多达2年。另外，稳定的液体制剂包括这样的液体制剂：其在包括25℃的温度保存包括1个月、3个月、6个月在内的时段后表现出期望的特征。稳定性的典型的可接受的标准如下：通过SEC-HPLC测得，通常不超过约10％、优选不超过约5％的抗体单体发生降解。通过视觉分析，药物抗体制剂是淡黄色近无色澄明液体或者无色，或澄清至稍微乳白色。所述制剂的浓度、pH和重量克分子渗透压浓度具有不超过±10％变化。通常观察到不超过约10％，优选不超过约5％的减少。通常形成不超过约10％，优选不超过约5％的聚集。

如果在目检颜色和/或澄清度后，或者通过UV光散射、尺寸排阻色谱法(SEC)和动态光散射(DLS)测得，抗体没有显示出显著的聚集增加、沉淀和/或变性，那么所述抗体在药物制剂中“保留它的物理稳定性”。蛋白构象的变化可以通过荧光光谱法(其确定蛋白三级结构)和通过FTIR光谱法(其确定蛋白二级结构)来评价。

如果抗体没有显示出显著的化学改变，那么所述抗体在药物制剂中“保留它的化学稳定性”。通过检测和定量化学上改变的形式的蛋白，可以评估化学稳定性。经常改变蛋白化学结构的降解过程包括水解或截短(通过诸如尺寸排阻色谱法和SDS-PAGE等方法来评价)、氧化(通过诸如与质谱法或MALDI/TOF/MS结合的肽谱法等方法来评价)、脱酰胺作用(通过诸如离子交换色谱法、毛细管等电聚焦、肽谱法、异天冬氨酸测量等方法来评价)和异构化(通过测量异天冬氨酸含量、肽谱法等来评价)。

如果抗体在给定时间的生物活性是在制备药物制剂时表现出的生物活性的预定范围内，那么所述抗体在药物制剂中“保留它的生物活性”。抗体的生物活性可以例如通过抗原结合测定来确定。

本公开所用氨基酸三字母代码和单字母代码如J.biol.chem，243，p3558(1968)中所述。

本公开所述的“抗体”指免疫球蛋白，是由两条相同的重链和两条相同的轻链通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。

在本公开中，本公开所述的抗体轻链可进一步包含轻链恒定区，所述的轻链恒定区包含人源或鼠源的κ、λ链或其变体。

在本公开中，本公开所述的抗体重链可进一步包含重链恒定区，所述的重链恒定区包含人源或鼠源的IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体。

抗体重链和轻链靠近N端的约110个氨基酸的序列变化很大，为可变区(Fv区)；靠近C端的其余氨基酸序列相对稳定，为恒定区。可变区包括3个高变区(HVR)和4个序列相对保守的骨架区(FR)。3个高变区决定抗体的特异性，又称为互补性决定区(CDR)。每条轻链可变区(LCVR或VL)和重链可变区(HCVR或VH)由3个CDR区4个FR区组成，从氨基端到羧基端依次排列的顺序为：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。轻链的3个CDR区指LCDR1、LCDR2、和LCDR3；重链的3个CDR区指HCDR1、HCDR2和HCDR3。本公开所述的抗体或抗原结合片段的LCVR区和HCVR区的CDR氨基酸残基在数量和位置符合已知的Kabat编号规则(LCDR1-3，HCDR1-3)。

本公开的抗体包括鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体，优选人源化抗体。

术语“鼠源抗体”在本公开中为根据本领域知识和技能制备的对人抗EGFR抗体偶联药物的单克隆抗体。制备时用抗EGFR抗体偶联药物抗原注射试验对象，然后分离表达具有所需序列或功能特性的抗体的杂交瘤。

术语“嵌合抗体(chimeric antibody)”，是将鼠源性抗体的可变区与人抗体的恒定区融合而成的抗体，可以减轻鼠源性抗体诱发的免疫应答反应。建立嵌合抗体，要先建立分泌鼠源性特异性单抗的杂交瘤，然后从小鼠杂交瘤细胞中克隆可变区基因，再根据需要克隆人抗体的恒定区基因，将小鼠可变区基因与人恒定区基因连接成嵌合基因后插入人载体中，最后在真核工业系统或原核工业系统中表达嵌合抗体分子。在本公开一个优选的实施方案中，所述的抗EGFR抗体偶联药物嵌合抗体的抗体轻链进一步包含人源κ、λ链或其变体的轻链恒定区。所述的抗EGFR抗体偶联药物嵌合抗体的抗体重链进一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体的重链恒定区。人抗体的恒定区可选自人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链恒定区，优选包含人源IgG2或IgG4重链恒定区，或者使用氨基酸突变后无ADCC(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用)毒性的IgG4。

术语“人源化抗体(humanized antibody)”，也称为CDR移植抗体(CDR-graftedantibody)，是指将小鼠的CDR序列移植到人的抗体可变区框架，即不同类型的人种系抗体构架序列中产生的抗体。可以克服嵌合抗体由于携带大量小鼠蛋白成分，从而诱导的强烈的异源性反应。此类构架序列可以从包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库或公开的参考文献获得。如人重链和轻链可变区基因的种系DNA序列可以在“VBase”人种系序列数据库(在因特网www.mrccpe.com.ac.uk/vbase可获得)，以及在Kabat，E.A.等人，1991Sequencesof Proteins of Immunological Interest，第5版中找到。为避免免疫原性下降的时，引起的活性下降，可对所述的人抗体可变区框架序列进行最少反向突变或回复突变，以保持活性。本公开的人源化抗体也包括进一步由噬菌体展示对CDR进行亲和力成熟后的人源化抗体。

本公开中所述的“抗体或其抗原结合”或“功能片段”，指具有抗原结合活性的Fab片段，Fab’片段，F(ab’)2片段，以及与抗体结合的Fv片段scFv片段。Fv片段含有抗体重链可变区和轻链可变区，但没有恒定区，并具有全部抗原结合位点的最小抗体片段。一般地，Fv抗体还包含在VH和VL结构域之间的多肽接头，且能够形成抗原结合所需的结构。也可以用不同的连接物将两个抗体可变区连接成一条多肽链，称为单链抗体(single chainantibody)或单链Fv(sFv)。

本公开的术语“抗原结合位点”指抗原上连续或不连续的，由本公开抗体或抗原结合片段识别的三维空间位点。

本公开中所述的“ADCC”，即antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用，是指表达Fc受体的细胞通过识别抗体的Fc段直接杀伤被抗体包被的靶细胞。可通过对IgG上Fc段的修饰，降低或消除抗体的ADCC效应功能。所述的修饰指在抗体的重链恒定区进行突变，如选自IgG1的N297A、L234A、L235A；IgG2/4嵌合体，IgG4的F234A/L235A突变。

本公开中所述的突变序列中的“突变”包括但不限于“回复突变”、“保守修饰”或“保守置换或取代”。本公开中所述的“保守修饰”或“保守置换或取代”是指具有类似特征(例如电荷、侧链大小、疏水性/亲水性、主链构象和刚性等)的其它氨基酸置换蛋白中的氨基酸，使得可频繁进行改变而不改变蛋白的生物学活性。本领域技术人员知晓，一般而言，多肽的非必需区域中的单个氨基酸置换基本上不改变生物学活性(参见例如Watson等(1987)Molecular Biology of theGene，The Benjamin/Cummings Pub.Co.，第224页，(第4版))。另外，结构或功能类似的氨基酸的置换不大可能破环生物学活性。

本公开所述的“突变序列”是指对本公开的核苷酸序列和/或氨基酸序列进行适当的替换、插入或缺失等突变修饰情况下，得到的与本公开的核苷酸序列和/或氨基酸序列具有不同百分比序列同一性程度的核苷酸序列和/或氨基酸序列。本公开中所述的序列同一性可以至少为85％、90％或95％，优选至少为95％。非限制性实施例包括85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，100％。两个序列之间的序列比较和同一性百分比测定可以通过National Center For BiotechnologyInstitute网站上可得的BLASTN/BLASTP算法的默认设置来进行。

生产和纯化抗体和抗原结合片段的方法在现有技术中熟知和能找到，如冷泉港实验室出版的《抗体实验技术指南》第5-8章和15章。小鼠可以用人抗EGFR抗体偶联药物或其片段免疫，所得到的抗体能被复性、纯化，并且可以用常规的方法进行氨基酸测序。抗原结合片段同样可以用常规方法制备。本公开所述的抗体或抗原结合片段用基因工程方法在非人源的CDR区加上一个或多个人FR区。人FR种系序列可以从ImMunoGeneTics(IMGT)的网站http://imgt.cines.fr得到，或者从免疫球蛋白杂志，2001ISBN012441351上获得。

本公开工程化的抗体或抗原结合片段可用常规方法制备和纯化。比如，编码重链和轻链的cDNA序列，可以克隆并重组至GS表达载体。重组的免疫球蛋白表达载体可以稳定地转染CHO细胞。作为一种更推荐的现有技术，哺乳动物类表达系统会导致抗体的糖基化，特别是在Fc区的高度保守N端位点。通过表达与人抗EGFR抗体偶联药物特异性结合的抗体得到稳定的克隆。阳性的克隆在生物反应器的无血清培养基中扩大培养以生产抗体。分泌了抗体的培养液可以用常规技术纯化。比如，用含调整过的缓冲剂的A或G Sepharose FF柱进行纯化。洗去非特异性结合的组分。再用pH梯度法洗脱结合的抗体，用SDS-PAGE检测抗体片段，收集。抗体可用常规方法进行过滤浓缩。可溶的混合物和多聚体，也可以用常规方法去除，比如分子筛、离子交换。得到的产物需立即冷冻，如-70℃，或者冻干。

“任选”或“任选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如，“任选包含1-3个抗体重链可变区”意味着特定序列的抗体重链可变区可以但不必须存在。

“给予”和“处理”当应用于动物、人、实验受试者、细胞、组织、器官或生物流体时，是指外源性药物、治疗剂、诊断剂或组合物与动物、人、受试者、细胞、组织、器官或生物流体的接触。“给予”和“处理”可以指例如治疗、药物代谢动力学、诊断、研究和实验方法。细胞的处理包括试剂与细胞的接触，以及试剂与流体的接触，其中所述流体与细胞接触。“给予”和“处理”还意指通过试剂、诊断、结合组合物或通过另一种细胞体外和离体处理例如细胞。“处理”当应用于人、兽医学或研究受试者时，是指治疗处理、预防或预防性措施，研究和诊断应用。

“治疗”意指给予患者内用或外用治疗剂，例如包含本公开的任一种结合化合物的组合物，所述患者具有一种或多种疾病症状，而已知所述治疗剂对这些症状具有治疗作用。通常，在受治疗患者或群体中以有效缓解一种或多种疾病症状的量给予治疗剂，以诱导这类症状退化或抑制这类症状发展到任何临床可测量的程度。有效缓解任何具体疾病症状的治疗剂的量(也称作“治疗有效量”)可根据多种因素变化，例如患者的疾病状态、年龄和体重，以及药物在患者产生需要疗效的能力。通过医生或其它专业卫生保健人士通常用于评价该症状的严重性或进展状况的任何临床检测方法，可评价疾病症状是否已被减轻。尽管本公开的实施方案(例如治疗方法或制品)在缓解每个目标疾病症状方面可能无效，但是根据本领域已知的任何统计学检验方法如Student t检验、卡方检验、依据Mann和Whitney的U检验、Kruskal-Wallis检验(H检验)、Jonckheere-Terpstra检验和Wilcoxon检验确定，其在统计学显著数目的患者中应当减轻目标疾病症状。

“有效量”包含足以改善或预防医学疾病的症状或病症的量。有效量还意指足以允许或促进诊断的量。用于特定患者或兽医学受试者的有效量可依据以下因素而变化：例如，待治疗的病症、患者的总体健康情况、给药的方法途径和剂量以及副作用严重性。有效量可以是避免显著副作用或毒性作用的最大剂量或给药方案。

“置换”是指溶解抗体蛋白的溶剂体系的置换，例如，使用稳定制剂的缓冲体系经物理操作方式将含抗体蛋白的高盐或高渗溶剂体系置换，从而使抗体蛋白存在于稳定制剂中。所称物理操作方式包括但不限于超滤、透析或离心后复溶。

“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，所述其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。

附图说明

图1.EGFR-ADC处方DOE筛选等高线刻画器显示结果。

具体实施方式

以下结合实施例进一步描述本公开，但这些实施例并非是对本公开范围的限制。本公开实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，如参照冷泉港实验室出版的《抗体技术实验手册》，《分子克隆手册》；或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。

示例性ADC的稳定制剂制备工艺如下：

第一步：ADC-9原液过滤后中控取样检测无菌。将原液过0.22μm PVDF滤芯，收集滤液。

第二步：调节装量至3.3ml，将滤液灌装于6ml西林瓶中，半加塞，分别于灌装开始、灌装中间、灌装结束时取样中控检测装量差异。

第三步：将灌装加塞后的药液装入冻干箱中，进行冷冻干燥工艺。冷冻干燥依次包括预冻、一次干燥和二次干燥的步骤。冻干程序结束后，真空加塞。

表8.制剂的冻干工艺

第四步：开启轧盖机，加铝盖，进行轧盖。

第五步：目检，确认产品无塌陷、装量不准等缺陷。打印、粘贴西林瓶标签；打印纸盒标签，折叠纸盒，装盒，贴纸盒标签。

以ADC-9制剂的缓冲体系、缓冲剂浓度、pH值、糖种类以及糖浓度进行实验设计，利用DSC技术测定样品的Tm值，初步筛选制剂的处方。

以蛋白浓度、pH值、糖浓度、聚山梨醇酯20浓度为因子，以各处方下SEC单体纯度以及冻干样品40℃一个月下的颗粒数为响应值设计实验，生成设计表并进行试验，评估最优处方。

实施例中冷冻干燥使用东富龙LYO-3(SIP、CIP)真空冷冻干燥机。SE-HPLC的检测使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Waters Xbridge Protein BEH SEC

色谱柱)。CE-SDS的检测使用贝克曼PA800plus毛细管电泳仪(SDS-Gel MW Analysis Kit)。蛋白热变性温度(Tm)的测定使用GE公司MicroCal VP-Capillary DSC差示扫描热量计。DLS(DynamicLight Scattering)平均粒径的测定用马尔文Zetasizer Nano ZS纳米粒度电位仪。

实施例1.EGFR-ADC制剂缓冲体系pH值的筛选

用下列缓冲剂，配制蛋白含量为20mg/ml的EGFR-ADC(示例性的为ADC-9)制剂：

1)10mM磷酸氢二钠-枸橼酸，pH 4.5

2)10mM磷酸氢二钠-枸橼酸，pH 5.0

3)10mM磷酸氢二钠-枸橼酸，pH 5.5

4)10mM磷酸氢二钠-枸橼酸，pH 6.0

5)10mM磷酸氢二钠-枸橼酸，pH 6.5

6)10mM磷酸氢二钠-枸橼酸，pH 7.0

7)10mM磷酸氢二钠-枸橼酸，pH 7.5

8)10mM磷酸氢二钠-枸橼酸，pH 8.0

取样品进行高温(40℃)稳定性研究，结果表明(见表1)，随着pH值的升高SEC单体下降，CE主峰下降，但0时的Tmonset(热变性起始温度)值随着pH的上升而上升。因此，综合SEC、CE和DSC的结果，pH值的进一步筛选的范围选在5.0-6.0范围内。

表1.EGFR-ADC pH值筛选结果

注：D表示天，N/A表示未检测。

实施例2.EGFR-ADC制剂缓冲体系筛选

用下列缓冲剂，配制蛋白含量为20mg/ml的EGFR-ADC(ADC-9)制剂：

1)10mM柠檬酸-柠檬酸钠，pH 5.0

2)10mM柠檬酸-柠檬酸钠，pH 5.5

3)10mM琥珀酸-琥珀酸钠，pH 5.0

4)10mM琥珀酸-琥珀酸钠，pH 5.5

5)10mM组氨酸-盐酸，pH 5.5

6)10mM组氨酸-盐酸，pH 6.0

取样品进行高温(40℃)稳定性研究，结果表明(见表2)，选择10mM的组氨酸(盐酸)作为初步的缓冲体系。其中柠檬酸(钠)和琥珀酸(钠)缓冲体系40℃SEC单体明显低于其余几组。

表2.EGFR-ADC不同pH缓冲体系筛选试验结果

注：D表示天。

实施例3.EGFR-ADC制剂中稳定剂的筛选

用下列不同糖种类的缓冲剂，制备蛋白含量为20mg/ml的EGFR-ADC(ADC-9)制剂：

1)10mM组氨酸-盐酸pH5.5，70mg/ml蔗糖；

2)10mM组氨酸-盐酸pH5.5，70mg/ml海藻糖。

取样品分别进行高温(40℃)、冻融循环(cycle，-20～25℃)、振摇(25℃/300rpm)、光照(4500Lx 5℃)稳定性研究。试验结果见表3，结果表明蔗糖与海藻糖对EGFR-ADC均具有良好的稳定性作用。

表3.糖种类筛选实验结果

注：D表示天。

实施例4.EGFR-ADC制剂中表面活性剂的筛选

用下列不同种类表面活性剂的缓冲剂，制备蛋白含量为20mg/ml的EGFR-ADC(ADC-9)制剂：

1)10mM组氨酸-盐酸盐pH 5.5，0.4mg/ml聚山梨醇酯20；

2)10mM组氨酸-盐酸盐pH 5.5，0.4mg/ml聚山梨醇酯80。

取样品分别进行冻融循环(cycle(循环)，-20～25℃)和振摇(25℃/300rpm)稳定性研究。试验结果见表4，从振摇结果可以看出，聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80均可以改善EGFR-ADC溶液振摇外观，虽纯度项均略下降，但组间无明显差异；冻融循环外观结果显示，聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80均对样品冻融外观有改善作用。

表4.EGFR-ADC制剂中表面活性剂的筛选

注：D表示天，例如D7表示第7天。

实施例5.制剂成分的综合筛选

本领域技术人员公知，组氨酸-盐酸盐(His-HCl)体系缓冲剂的pH范围为5.5～6.5，组氨酸-醋酸(His-AA)体系缓冲剂的pH为范围3.7～6.5，His-AA的缓冲范围更宽，考虑到EGFR-ADC的较适pH范围为5.0-6.0，因而后续采用His-AA体系进行筛选。为了进一步对蛋白浓度、缓冲体系种类、pH进行优化，运用JMP软件进行DOE实验设计，应用RSM模型得到一系列处方(如下1～16处方)，在不同pH的10mM组氨酸-醋酸的缓冲体系中，制备含不同浓度蛋白，不同浓度蔗糖和不同浓度聚山梨醇酯20的EGFR-ADC(ADC-9)制剂：

1)50mg/ml蔗糖，0.1mg/ml聚山梨醇酯20，pH 5.5，30mg/ml EGFR-ADC；

2)50mg/ml蔗糖，0.35mg/ml聚山梨醇酯20，pH 6.0，20mg/ml EGFR-ADC；

3)50mg/ml蔗糖，0.1mg/ml聚山梨醇酯20，pH 6.0，10mg/ml EGFR-ADC；

4)70mg/ml蔗糖，0.35mg/ml聚山梨醇酯20，pH 5.5，20mg/ml EGFR-ADC；

5)70mg/ml蔗糖，0.6mg/ml聚山梨醇酯20，pH 6.0，30mg/ml EGFR-ADC；

6)90mg/ml蔗糖，0.6mg/ml聚山梨醇酯20，pH 5.5，20mg/ml EGFR-ADC；

7)50mg/ml蔗糖，0.6mg/ml聚山梨醇酯20，pH 6.0，10mg/ml EGFR-ADC；

8)90mg/ml蔗糖，0.35mg/ml聚山梨醇酯20，pH 6.0，10mg/ml EGFR-ADC；

9)70mg/ml蔗糖，0.1mg/ml聚山梨醇酯20，pH 5.5，20mg/ml EGFR-ADC；

10)90mg/ml蔗糖，0.1mg/ml聚山梨醇酯20，pH 6.0，30mg/ml EGFR-ADC；

11)90mg/ml蔗糖，0.1mg/ml聚山梨醇酯20，pH 5.0，10mg/ml EGFR-ADC；

12)50mg/ml蔗糖，0.1mg/ml聚山梨醇酯20，pH 5.0，20mg/ml EGFR-ADC；

13)50mg/ml蔗糖，0.35mg/ml聚山梨醇酯20，pH 5.5，10mg/ml EGFR-ADC；

14)70mg/ml蔗糖，0.6mg/ml聚山梨醇酯20，pH 5.0，10mg/ml EGFR-ADC；

15)90mg/ml蔗糖，0.35mg/ml聚山梨醇酯20，pH 5.0，30mg/ml EGFR-ADC；

16)50mg/ml蔗糖，0.6mg/ml聚山梨醇酯20，pH 5.0，30mg/ml EGFR-ADC。

将样品置于40℃条件和25℃300rpm振摇进行稳定性分析，同时取冻干后样品在40℃条件下放置1个月，试验结果见表5。将40℃D7的SEC单体纯度差值、25℃Shaking(振摇)D7的SEC单体纯度差值以及40℃M1的MFI颗粒数，对结果进行拟合(见图1)，得出最终处方为10mM组氨酸(-醋酸)pH 5.5，20mg/mL蛋白含量，50mg/ml蔗糖，0.4mg/ml聚山梨醇酯20。EGFR-ADC复溶液采用3ml原液冻干：2ml注射用水的比例进行复溶，复溶后最终处方为15mM组氨酸(醋酸)pH 5.5，30mg/mL蛋白含量，75mg/ml蔗糖，0.6mg/ml聚山梨醇酯20。

表5.EGFR-ADC溶液剂DOE结果

注：D表示天；FD表示冻干；M1表示一个月，N/A表示不适用。

实施例6.EGFR-ADC制剂的冻干

用pH5.5的10mM组氨酸-醋酸钠的缓冲剂，制备EGFR-ADC(ADC-9)浓度为20mg/ml，含50mg/ml蔗糖，0.4mg/ml聚山梨醇酯20的EGFR-ADC制剂。将EGFR-ADC以3mL/瓶填充入6mL西林瓶中，装入冻干箱中，冻干。冻干程序为预冻、一次干燥和二次干燥。冻干程序结束后，真空加塞。综合考虑样品渗透压和冻干效率，复溶的EGFR-ADC制剂采用每3ml原液冻干，用2ml注射用水进行复溶，复溶液最终处方为：15mM组氨酸-醋酸pH 5.5，30mg/mL蛋白含量，75mg/ml蔗糖，0.6mg/ml聚山梨醇酯20。取复溶样品进行稳定性测试，试验结果见表7，结果表明，复溶溶液可保持液体制剂良好的性能。

表6.制剂的冻干步骤

注：N/A表示不适用。

表7.复溶液稳定性结果

注：h表示小时，D表示天。

实施例7.其它可选择制剂配方

此外，本发明还提供其它制剂配方的抗EGFR抗体偶联药物抗体药物制剂，包含处方：

(1)20mg/ml抗EGFR抗体偶联药物(ADC-9)，50mg/ml蔗糖，0.4mg/ml的聚山梨醇酯20，和pH5.5的5mM组氨酸-醋酸钠缓冲剂；

(2)20mg/ml抗EGFR抗体偶联药物(ADC-9)，50mg/ml蔗糖，0.4mg/ml的聚山梨醇酯20，和pH5.5的30mM组氨酸-醋酸钠缓冲剂；

(3)100mg/ml抗EGFR抗体偶联药物(ADC-9)，50mg/ml蔗糖，0.4mg/ml的聚山梨醇酯20，和pH5.5的10mM组氨酸-醋酸钠缓冲剂；

(4)1mg/ml抗EGFR抗体偶联药物(ADC-9)，50mg/ml蔗糖，0.4mg/ml的聚山梨醇酯20，和pH5.5的10mM组氨酸-醋酸钠缓冲剂；

(5)100mg/ml抗EGFR抗体偶联药物(ADC-9)，50mg/ml蔗糖，0.4mg/ml的聚山梨醇酯20，和pH5.5的10mM组氨酸-醋酸钠缓冲剂；

(6)20mg/ml抗EGFR抗体偶联药物(ADC-9)，50mg/ml蔗糖，0.5mg/ml的聚山梨醇酯20，和pH5.5的10mM组氨酸-醋酸钠缓冲剂；

(7)50mg/ml抗EGFR抗体偶联药物(ADC-9)，80mg/ml蔗糖，0.4mg/ml的聚山梨醇酯20，和pH5.5的5mM组氨酸-醋酸钠缓冲剂；

(8)80mg/ml抗EGFR抗体偶联药物(ADC-9)，50mg/ml蔗糖，0.4mg/ml的聚山梨醇酯20，和pH5.0的10mM组氨酸-醋酸钠缓冲剂；

(9)20mg/ml抗EGFR抗体偶联药物(ADC-9)，50mg/ml蔗糖，0.4mg/ml的聚山梨醇酯20，和pH6.0的10mM组氨酸-醋酸钠缓冲剂；

(10)20mg/ml抗EGFR抗体偶联药物(ADC-9)，50mg/ml蔗糖，0.4mg/ml的聚山梨醇酯20，和pH5.0的10mM组氨酸-醋酸钠缓冲剂；

(11)20mg/ml抗EGFR抗体偶联药物(ADC-9)，90mg/ml海藻糖，0.4mg/ml的聚山梨醇酯20，和pH5.5的10mM组氨酸-醋酸钠缓冲剂；

(12)20mg/ml抗EGFR抗体偶联药物(ADC-9)，40mg/ml海藻糖，0.4mg/ml的聚山梨醇酯20，和pH5.5的10mM组氨酸-醋酸钠缓冲剂；

(13)20mg/ml抗EGFR抗体偶联药物(ADC-9)，60mg/ml海藻糖，0.4mg/ml的聚山梨醇酯20，和pH5.5的10mM组氨酸-醋酸钠缓冲剂；

(14)30mg/ml抗EGFR抗体偶联药物(ADC-9)，50mg/ml海藻糖，0.4mg/ml的聚山梨醇酯20，和pH5.5的10mM组氨酸-醋酸钠缓冲剂。

(15)15mg/ml抗EGFR抗体偶联药物(ADC-9)，60mg/ml海藻糖，0.5mg/ml的聚山梨醇酯20，和pH 5.2的15mM组氨酸-醋酸钠缓冲剂。

(16)45mg/ml抗EGFR抗体偶联药物(ADC-9)，80mg/ml海藻糖，0.9mg/ml的聚山梨醇酯20，和pH 6.2的30mM组氨酸-醋酸钠缓冲剂。

(17)15mg/ml抗EGFR抗体偶联药物(ADC-9)，80mg/ml海藻糖，0.9mg/ml的聚山梨醇酯20，和pH 5.2的15mM组氨酸-醋酸钠缓冲剂。

(18)30mg/ml抗EGFR抗体偶联药物(ADC-9)，70mg/ml海藻糖，0.8mg/ml的聚山梨醇酯20，和pH 5.2的20mM组氨酸-醋酸钠缓冲剂。

(19)35mg/ml抗EGFR抗体偶联药物(ADC-9)，82mg/ml海藻糖，0.7mg/ml的聚山梨醇酯20，和pH 5.5的20mM组氨酸-醋酸钠缓冲剂。

实验结果表明，上述制剂配方的抗EGFR抗体偶联药物制剂均具有良好的稳定性，可应用于抗EGFR抗体偶联药物抗体药物的配制。

序列表

<110> 江苏恒瑞医药股份有限公司

上海恒瑞医药有限公司

<120> 一种抗EGFR抗体偶联药物组合物及其用途

<150> 201811139167.0

<151> 2018-09-28

<160> 8

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> LCDR1

<400> 1

Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asp

1 5 10 15

<210> 2

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> LCDR2

<400> 2

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 3

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> LCDR3

<400> 3

Phe Gln Tyr Ser His Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 4

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> HCDR1

<400> 4

Asn Tyr Tyr Ile Tyr

1 5

<210> 5

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> HCDR2

<400> 5

Gly Ile Asn Pro Thr Ser Gly Gly Ser Asn Phe Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Thr

<210> 6

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> HCDR3

<400> 6

Gln Gly Leu Trp Phe Asp Ser Asp Gly Arg Gly Phe Asp Phe

1 5 10

<210> 7

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> CHAIN

<223> 轻链

<400> 7

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile

65 70 75 80

Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Tyr

85 90 95

Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 8

<211> 453

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> CHAIN

<223> 重链

<400> 8

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Ile Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Thr Ser Gly Gly Ser Asn Phe Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Ser Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Phe Tyr Phe Cys

85 90 95

Thr Arg Gln Gly Leu Trp Phe Asp Ser Asp Gly Arg Gly Phe Asp Phe

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly

115 120 125

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly

130 135 140

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val

145 150 155 160

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe

165 170 175

Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val

180 185 190

Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val

195 200 205

Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys

210 215 220

Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu

225 230 235 240

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

245 250 255

Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

260 265 270

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

275 280 285

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

290 295 300

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

305 310 315 320

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

325 330 335

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

340 345 350

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln

355 360 365

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

370 375 380

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

385 390 395 400

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu

405 410 415

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

420 425 430

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

435 440 445

Leu Ser Pro Gly Lys

450

Claims (14)

1.一种药物组合物，包含抗EGFR抗体药物偶联物，以及缓冲剂，所述缓冲剂选自组氨酸-醋酸缓冲剂，所述缓冲剂的pH为大约5.0至大约6.0，优选为大约5.5。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述缓冲剂浓度为大约5mM至大约30mM，优选为大约10mM至大约20mM，最优选为大约10mM。

3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其中所述抗EGFR抗体药物偶联物浓度为大约1mg/ml至大约100mg/ml，优选为大约10mg/ml至大约30mg/ml，最优选为大约20mg/ml。

4.根据权利要求1至3中任一所述的药物组合物，其还包括糖，所述糖为海藻糖或蔗糖，优选为蔗糖；更优选地，其中所述糖浓度为大约30mg/ml至大约90mg/ml，选为大约40mg/ml至大约60mg/ml，最优选为大约50mg/ml。

5.根据权利要求1至4中任一所述的药物组合物，其中还包括表面活性剂，所述表面活性剂为聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80；优选地，所述表面活性剂的浓度为大约0.1mg/ml至大约0.6mg/ml，优选为大约0.35mg/ml至大约0.6mg/ml，最优选为大约0.4mg/ml。

6.根据权利要求1至5中任一所述的药物组合物，其包含：

(a)大约1mg/ml至大约100mg/ml的抗EGFR抗体药物偶联物，(b)大约5mM至大约30mM的组氨酸-醋酸钠缓冲剂，pH为约5.0至约6.0，(c)大约30mg/ml至大约90mg/ml的糖，和(d)大约0.1mg/ml至大约0.6mg/ml的表面活性剂；优选地，所述药物组合物包含：(a)大约10mg/ml至大约30mg/ml的抗EGFR抗体药物偶联物，(b)大约10mM至大约20mM的组氨酸-醋酸钠缓冲剂，pH为约5.0至约6.0，(c)大约40mg/ml至大约60mg/ml的蔗糖或海藻糖，和(d)大约0.35mg/ml至大约0.6mg/ml的聚山梨醇酯；更优选地，所述组合物包含：(a)大约20mg/ml的抗EGFR抗体偶联药物，(b)大约10mM的组氨酸-醋酸钠缓冲剂，pH约5.5，(c)大约50mg/ml的蔗糖，和(d)大约0.4mg/ml的聚山梨醇酯20。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的药物组合物，其中所述的抗EGFR抗体药物偶联物具有如下所示的结构：

其中，y为1-8，优选2-5；Ab为抗EGFR抗体或其抗原结合片段，所述的抗EGFR抗体或其抗原结合片段包含以下所示的CDR区：

8.根据权利要求1至7中任一项所述的药物组合物，其中所述的抗EGFR抗体药物偶联物为ADC-9，其具有如下所示的结构：

其中，mAb002为抗EGFR抗体，其包含：氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的轻链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示的重链。

9.一种含有抗EGFR抗体偶联药物的冻干制剂，所述冻干制剂复溶后可形成权利要求1至8中任一项所述的药物组合物。

10.一种含有抗EGFR抗体偶联药物的冻干制剂，所述冻干制剂通过将权利要求1至8中任一项所述的药物组合物经冷冻干燥获得。

11.一种制备含抗EGFR抗体偶联药物的冻干制剂的方法，其中，所述方法包括将权利要求1至8中任一项所述的药物组合物经冷冻干燥的步骤；优选的，其中所述冷冻干燥依次包括预冻、一次干燥和二次干燥的步骤。

12.一种含有抗EGFR抗体偶联药物的复溶溶液，其中所述复溶溶液是通过将权利要求9或10所述的冻干制剂经复溶制备获得；优选地，所述的复溶溶液包含：(a)大约15mg/ml至大约45mg/ml的抗EGFR抗体偶联药物；(b)大约15mM至大约30mM的组氨酸-醋酸钠缓冲剂，pH大约5.2至大约6.2，优选pH大约5.5；(c)大约60mg/ml至大约80mg/ml的蔗糖；和(d)大约0.5mg/ml至大约0.9mg/ml的聚山梨酯20；更优选地，所述复溶溶液包含：(a)大约30mg/ml的抗EGFR抗体偶联药物；(b)大约15mM的组氨酸-醋酸钠缓冲剂，pH大约5.5；(c)大约75mg/ml的蔗糖；和(d)大约0.6mg/ml的聚山梨酯20。

13.一种制品，其包括容器，所述容器中装有：如权利要求1至8中任一项所述的药物组合物，或如权利要求9或10所述的冻干制剂，或如权利要求12所述的复溶溶液。

14.根据权利要求1至8中任一项所述的药物组合物，或权利要求9或10所述的冻干制剂，或权利要求12所述的复溶溶液，或权利要求13所述的制品，在制备用于治疗疾病的药物中的应用；优选的，其中所述疾病为EGFR相关的疾病，优选为：高表达EGFR的癌症、EGFR有突变的癌症或在EGFR信号通路中的下游基因有突变的癌症；更优选的，所述癌症选自：胶质母细胞瘤、鳞状细胞癌、皮肤癌、外阴癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、乳腺癌、肺癌、肠癌、肾癌、黑素瘤、非小细胞肺癌、结肠癌、直肠癌、外阴癌和头颈癌。

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