CN110732023B

CN110732023B - 一种her2抗体药物组合物及其用途

Info

Publication number: CN110732023B
Application number: CN201910643662.3A
Authority: CN
Inventors: 吴婷婷; 颜贞; 刘洵
Original assignee: Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd; Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd; Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2018-07-18
Filing date: 2019-07-17
Publication date: 2023-06-16
Anticipated expiration: 2039-07-17
Also published as: CN110732023A

Abstract

本公开涉及一种HER2抗体药物组合物及其用途。具体而言，本公开涉及一种药物组合物，其包含在组氨酸‑盐酸盐缓冲液中的HER2抗体或其抗原结合片段。除此之外，该药物组合物还包含糖和非离子型表面活性剂。本公开中的药物组合物在储存数月之后展现了很高的抗体稳定性。

Description

一种HER2抗体药物组合物及其用途

技术领域

本公开属于药物制剂领域，具体涉及一种包含HER2抗体或其抗原结合片段的药物组合物，以及其作为抗癌药物的用途。

背景技术

这里的陈述仅提供与本发明有关的背景信息，而不必然地构成现有技术。

人类表皮生长因子受体(human epidermal growth factor receptor，HER/ErbB)家族在细胞生长、发育及分化过程中发挥着重要作用。该家族有4个成员：EGFR/HER1、ErbB2/HER2、ErbB3/HER3和ErbB4/HER4。HER2是具有酪氨酸激酶活性的跨膜蛋白，分子量约为185kD，它没有天然配体，在单体状态下无活性。 HER2可与HER家族的其他3个成员(EGFR、ErbB3、ErbB4)形成配体非依赖或配体依赖的异源二聚体而活化，导致下游信号通路MAPK和PI3K/Akt激活，最终导致肿瘤细胞增殖和存活。HER2在许多上皮来源的肿瘤中过度表达，如乳腺癌 (25％-30％)、卵巢癌(25％-32％)、原发性肾细胞癌(30％-40％)等[Jahanzeb M等，Clinical Breast Cancer.2008,8:324-333]。免疫组化染色可见乳腺癌细胞的HER2 水平比正常乳腺细胞高10-100倍，使HER2成为理想的抗肿瘤治疗靶标。

目前，已经开发了多种靶向HER2的抗体，包曲妥珠单抗(Trastuzumab，商品名：赫赛汀)、帕妥珠单抗(Pertuzumab，商品名：Perjeta)等。其中Trastuzumab 可显著改善肿瘤患者的预后[White C等，Annual Review Medicine.2001,52:125-145]。然而，很多病人对Herceptin并不应答，在应答病人中，大部分病人在一年后发展出耐药性。Pertuzumab是另一个特异性靶向HER2的抗体药物，其识别的表位不同于赫赛汀。与赫赛汀不同的是，帕妥珠能有效抑制HER2与其家族中另一成员 ErbB3的二聚化。研究表明，共同应用赫赛汀和帕妥珠可协同抑制肿瘤细胞的生长 [Nahta R等，Cancer Research.2004,64:2343-2346]。临床试验也证实，赫赛汀和帕妥珠联合治疗是安全的，同时临床受益指数可达50％[Baselga J等，J Clin On- col.2010,28:1138-1144]。

蛋白质比传统的有机和无机药物更大和更加复杂(即除了复杂的三维结构还具有多个官能团)，这些蛋白质的制剂存在特殊的问题。为保持蛋白质的生物学活性，制剂必须至少保持蛋白质的氨基酸核心序列的整体构象完整，同时防止蛋白质的多个官能团发生降解。蛋白质的降解途径可能涉及化学不稳定性(即任何涉及蛋白质修饰的过程，通过成键或键断裂，生成新的化学实体)或物理不稳定性 (即蛋白质高级结构的改变)。化学不稳定性可产生自脱酰胺化、外消旋化、水解、氧化、β消除或二硫键交换。物理不稳定性可由变性、聚集、沉淀或吸附所导致。三个最常见的蛋白质降解途径为蛋白质聚集、脱酰胺化和氧化(Cleland等人，CriticalReviewsinTherapeuticDrug CarrierSystems10(4)：307-377(1993))。因此为了使抗体适合于给药，并且在储存及随后使用过程中能保持稳定性，发挥更好的效果，抗体药物的稳定制剂研究显得尤为重要。WO2006044908涉及在组氨酸-醋酸盐缓冲液中配制的抗HER2抗体制剂，该专利中指出，抗HER2抗体在组氨酸-盐酸盐缓冲液中似乎具有更高的浊度，不利于制剂的稳定。WO2011012637涉及在组氨酸缓冲液中配制的HER2抗体制剂，该直接成分中还包括150至16,000个U/ml 透明质酸酶，使其更适合皮下给药。CN102512384涉及一种冻干剂型蛋白组合物的制备方法。此外，下述专利中也涉及了抗体制剂相关内容：WO2007092772、 WO2014140361、WO2015057910、WO2011131787。

本公开提供一种在组氨酸-盐酸盐缓冲液中配制的包含HER2抗体或其抗原结合片段的药物制剂，该制剂更利于生产和给药，并且具有更高的稳定性。

发明内容

本公开提供一种药物组合物，其包含HER2抗体或其抗原结合片段，以及缓冲剂，所述缓冲剂选自组氨酸-醋酸盐、组氨酸-盐酸盐、琥珀酸盐和枸橼酸盐缓冲剂，优选组氨酸-盐酸盐缓冲剂。

在可选的实施方案中，药物组合物中所述缓冲剂的pH约为5.4至6.4，非限制的实施例包括约约5.4、约5.5、约5.6、约5.7、约5.8、约5.9、约6.0、约6.1、约6.2、约6.3、约6.4，优选约为5.7至6.2，更优选约为6.0。

在可选的实施方案中，药物组合物中所述缓冲剂浓度为大约5mM至40mM，优选为大约10mM至30mM，非限制性实施例包括5mM、10mM、12mM、14mM、 16mM、18mM、20mM，22mM、24mM、26mM、28mM、30mM、32mM、34mM、 36mM、38mM、40mM，最优选为大约20mM。

在可选的实施方案中，药物组合物中所述HER2抗体或其抗原结合片段浓度为大约1mg/ml至100mg/ml，优选为大约10mg/ml至50mg/ml；非限制性实施例包括12mg/ml、14mg/ml、16mg/ml、18mg/ml、20mg/ml、22mg/ml、24mg/ml、26mg/ml、 28mg/ml、30mg/ml，最优选为30mg/ml。

进一步的，在可选的实施方案中，药物组合物还包含糖。本公开的“糖”包含常规组合物(CH₂O)_n及其衍生物，包括单糖，二糖，三糖，多糖，糖醇，还原性糖，非还原性糖等等。可选自葡萄糖，蔗糖，海藻糖，乳糖，果糖，麦芽糖，右旋糖苷，甘油，赤藻糖醇，丙三醇，阿拉伯糖醇，sylitol，山梨糖醇，甘露醇，密里二糖，松三糖，蜜三糖，甘露三糖，水苏糖，麦芽糖，乳果糖，麦芽酮糖，山梨醇，麦芽糖醇，乳糖醇，异-麦芽酮糖等等。优选的糖是非还原性二糖，更优选为海藻糖或蔗糖，最优选为蔗糖。

在可选的实施方案中，药物组合物中糖的浓度为约50mM至200mM，更优选为约100mM至140mM，非限制性实施例包括100mM、115mM、120mM、125mM、130mM、140mM，最优选为120mM。

在可选的实施方案中，药物组合物还包含表面活性剂。可选自聚山梨酯20、聚山梨酯80、聚羟亚烃、Triton、十二烷基磺酸钠、月桂基磺酸钠、辛基糖甙钠、月桂基/肉豆蔻基/亚油基/硬脂基-磺基甜菜碱、月桂基/肉豆蔻基/亚油基/硬脂基-肌氨酸、亚油基/肉豆蔻基/鲸蜡基-甜菜碱、月桂酰胺基丙基/柯卡酰胺基丙基/亚油酰胺基丙基/肉豆蔻酰胺基丙基/棕榈酰胺基丙基/异硬脂酰胺基丙基-甜菜碱、肉豆蔻酰胺基丙基/棕榈酰胺基丙基/异硬脂酰胺基丙基-二甲基胺、甲基可可酰基钠、甲基油基牛磺酸钠、聚乙二醇、聚丙二醇、乙烯与丙烯二醇的共聚物等。优选的表面活性剂是聚山梨酯80或聚山梨酯20，更优选为聚山梨酯80。

在可选的实施方案中，药物组合物中表面活性剂的浓度为约0.1mg/ml至 1.0mg/ml，更优选为0.2mg/ml至0.6mg/ml，非限制性实施例包括0.2mg/ml、0.3mg/ml、 0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml，最优选为0.4mg/ml。

在可选的实施方案中，所述药物组合物包含：

(a)1mg/ml至100mg/ml的HER2抗体或其抗原结合片段，(b)5mM至30mM 的组氨酸-盐酸盐缓冲剂，pH约为5.7至6.4，(c)50mM至200mM的蔗糖，和(d) 0.1mg/ml至1.0mg/ml的聚山梨酯80。

在可选的实施方案中，所述药物组合物包含：

(a)10mg/ml至50mg/ml的HER2抗体或其抗原结合片段，(b)10mM至30mM 的组氨酸-盐酸盐缓冲剂，pH约为5.8至6.2，(c)100mM至140mM的蔗糖，和(d) 0.2mg/ml至0.6mg/ml的聚山梨酯80。

在可选的实施方案中，所述药物组合物包含：

所述药物组合物包含：(a)30mg/ml的HER2抗体或其抗原结合片段，(b)20mM 的组氨酸-盐酸盐缓冲剂，pH约为6.0，(c)120mM的蔗糖，和(d)0.2mg/ml至 0.6mg/ml的聚山梨酯80。

在可选的实施方案中，所述药物组合物包含：

所述药物组合物包含：(a)30mg/ml的HER2抗体或其抗原结合片段，(b)20mM 的组氨酸-盐酸盐缓冲剂，pH约为6.0，(c)120mM的蔗糖，和(d)0.4mg/ml的聚山梨酯80。

在可选的实施方案中，所述药物组合物包含：

(a)1mg/ml的HER2抗体或其抗原结合片段，(b)20mM的组氨酸-醋酸盐缓冲剂，pH约为5.4至6.0，(c)120mM的蔗糖，和(d)0.2mg/ml的聚山梨酯80。

在可选实施方案中，所述药物组合物包含：

(a)30mg/ml的HER2抗体或其抗原结合片段，(b)20mM的组氨酸-醋酸盐缓冲剂，pH约为5.7至6.4，(c)120mM的蔗糖，和(d)0.2mg/ml的聚山梨酯80。

在可选在可选实施方案中，所述药物组合物包含：

(a)30mg/ml的HER2抗体或其抗原结合片段，(b)20mM的组氨酸-醋酸盐缓冲剂，pH约为5.8至6.2，优选pH为约6.0，(c)120mM的蔗糖，和(d)0.2mg/ml 的聚山梨酯80。

在可选在可选实施方案中，所述药物组合物包含：

(a)1mg/ml的HER2抗体或其抗原结合片段，(b)10mM至30mM的组氨酸-醋酸盐缓冲液，pH约为6.0，(c)120mM的蔗糖，和(d)0.2mg/ml的聚山梨酯80。

在可选在可选实施方案中，所述药物组合物包含：

(a)1mg/ml的HER2抗体或其抗原结合片段，(b)20mM的组氨酸-醋酸盐缓冲液，pH约为6.0，(c)120mM的蔗糖，和(d)0.2mg/ml的聚山梨酯80。

在可选在可选实施方案中，所述药物组合物包含：

(a)1mg/ml的HER2抗体或其抗原结合片段，(b)20mM的组氨酸-醋酸盐缓冲液，pH约为6.0，(c)100mM至140mM的蔗糖，和(d)0.2mg/ml的聚山梨酯80。

在可选在可选实施方案中，所述药物组合物包含：

(a)1mg/ml的HER2抗体或其抗原结合片段，(b)20mM的组氨酸-醋酸盐缓冲液，pH约为6.0；(c)120mM的蔗糖，和(d)0.2mg/ml的聚山梨酯80。

在可选在可选实施方案中，所述药物组合物包含：

(a)30mg/ml的HER2抗体或其抗原结合片段，(b)20mM的组氨酸-醋酸盐缓冲液，pH约为6.0，(c)120mM的蔗糖，和(d)0.2mg/ml的聚山梨酯80。

在可选在可选实施方案中，所述药物组合物包含：

(a)30mg/ml的HER2抗体或其抗原结合片段，(b)20mM的组氨酸-醋酸盐缓冲液，pH约为6.0，(c)120mM的蔗糖，和(d)0.4mg/ml的聚山梨酯80。

在可选在可选实施方案中，所述药物组合物包含：

(a)30mg/ml的HER2抗体或其抗原结合片段，(b)20mM的组氨酸-醋酸盐缓冲液，pH约为6.0，(c)120mM的蔗糖，和(d)0.6mg/ml的聚山梨酯80。

在可选在可选实施方案中，所述药物组合物包含：

(a)30mg/ml的HER2抗体或其抗原结合片段，(b)20mM的组氨酸-盐酸缓冲液， pH约为6.0，(c)120mM的蔗糖，和(d)0.1mg/ml的聚山梨酯80。

在可选的实施方案中，药物组合物中的HER2抗体或其抗原结合片段包含

分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的重链HCDR1、 HCDR2和HCDR3，和/或包含分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO: 6所示的轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3。

在可选的实施方案中，药物组合物中的HER2抗体或其抗原结合片段包含：如SEQID NO：7所示的重链可变区和如SEQ ID NO：8所示的轻链可变区。

在可选的实施方案中，药物组合物中的HER2抗体或其抗原结合片段包含：如SEQID NO：9序列所示的重链或与SEQ ID NO：9所示序列具有至少85％序列同一性的重链，和如SEQ ID NO：10所示的轻链氨基酸序列或与SEQ ID NO： 10所示序列具有至少85％序列同一性的轻链。在可选的实施方案中，前述“具有至少85％序列同一性”是具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、 92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性

在可选的实施方案中，药物组合物中所述的HER2抗体或其抗原结合片段为鼠源抗体或其抗原结合片段、嵌合抗体或其抗原结合片段、人源化抗体或其抗原结合片段。

在可选的实施方案中，药物组合物在4℃至少保存18个月的情况下是稳定的。

在可选的实施方案中，药物组合物在在40℃至少保存4周的情况下是稳定的。

在可选的实施方案中，药物组合物在5℃或25℃至少保存3个月的情况下是稳定的。

本公开还提供一种制备包含HER2抗体或其抗原结合片段的冻干制剂的方法，其中包括将前述药物组合物经冷冻干燥的步骤。

在可选的实施方案中，制备包含HER2抗体或其抗原结合片段的冻干制剂的方法中所述冷冻干燥依次包括预冻、一次干燥和二次干燥的步骤。

本公开还提供一种经前述制备包含HER2抗体或其抗原结合片段的冻干制剂的方法制备的含HER2抗体或其抗原结合片段的冻干制剂。

本公开还提供一种冻干制剂，所述制剂复溶后可形成上述的药物组合物。

在一些实施方案中，该冻干制剂于2-8℃稳定至少3个月，至少6个月，至少 12个月，至少18个月或至少24个月。

在一些实施方案中，该冻干制剂于40℃稳定至少7天，至少14天或至少28 天。

本公开还提供制备含有HER2抗体或其抗原结合片段的冻干制剂的复溶溶液的方法，其中包括将前述冻干制剂经复溶的步骤，其复溶所用溶液选自但不限于注射用水、生理盐水或葡萄糖溶液。

本公开还提供一种经前述含有HER2抗体或其抗原结合片段的冻干制剂的复溶溶液的方法制备的含有HER2抗体或其抗原结合片段的冻干制剂的复溶溶液。

本公开进一步提供一种制品或试剂盒，其包含装有本文所述任何稳定的药物组合物的容器。在一些实施方案中，该容器为中性硼硅玻璃管制注射剂瓶。

本公开还提供前述的药物组合物或冻干制剂或冻干制剂的复溶溶液在制备用于治疗、抑制肿瘤细胞增殖或转移的疾病或病症的药物中的用途。在一些实施方案中，所述疾病或病症为HER2介导的疾病或病症；在一些实施方案中，所述的疾病或病症为HER2阳性的肿瘤；在一些实施方案中，所述的HER2阳性的肿瘤可选自：淋巴瘤，胚细胞瘤(包括髓母管细胞瘤和视网膜母细胞瘤)，肉瘤(包括脂肪肉瘤和滑液细胞肉瘤)，神经内分泌肿瘤(包括类癌样肿瘤，促胃泌素瘤，和胰岛细胞癌)，间皮瘤，神经鞘瘤(包括听神经瘤)，脊膜瘤、腺癌、黑素瘤，和白血病或淋巴恶性瘤。这些肿瘤的更加具体的实例包括HER2阳性的：鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)，肺癌包括小细胞肺癌，非小细胞肺癌，肺的腺癌和肺的鳞状细胞癌，腹膜癌，肝细胞癌，肠胃癌包括胃肠癌，胰腺癌，胶质母细胞瘤，颈癌，卵巢癌，肝癌，膀胱癌，肝癌，乳癌，结肠癌，直肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜或子宫癌，唾液腺癌，肾癌，前列腺癌，外阴癌，甲状腺癌，肝癌，肛门癌，阴茎癌，阴囊癌，食道癌，胆道肿瘤，以及头和颈部的癌。

本公开还提供一种治疗、抑制肿瘤细胞增殖或转移的疾病或病症的方法，包括给予所需患者治疗有效量的前述药物组合物或冻干制剂或冻干制剂的复溶溶液。

本公开的一些实施方案中，所述疾病或病症为HER2介导的疾病或病症；在一些实施方案中，所述的疾病或病症为HER2阳性的肿瘤；在一些实施方案中，所述的HER2阳性的肿瘤可选自：淋巴瘤，胚细胞瘤(包括髓母管细胞瘤和视网膜母细胞瘤)，肉瘤(包括脂肪肉瘤和滑液细胞肉瘤)，神经内分泌肿瘤(包括类癌样肿瘤，促胃泌素瘤，和胰岛细胞癌)，间皮瘤，神经鞘瘤(包括听神经瘤)，脊膜瘤、腺癌、黑素瘤，和白血病或淋巴恶性瘤。这些癌症的更加具体的实例包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)，肺癌包括小细胞肺癌，非小细胞肺癌，肺的腺癌和肺的鳞状细胞癌，腹膜癌，肝细胞癌，肠胃癌包括胃肠癌，胰腺癌，胶质母细胞瘤，颈癌，卵巢癌，肝癌，膀胱癌，肝癌，乳癌，结肠癌，直肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜或子宫癌，唾液腺癌，肾癌，前列腺癌，外阴癌，甲状腺癌，肝癌，肛门癌，阴茎癌，阴囊癌，食道癌，胆道肿瘤，以及头和颈部的癌。

本公开还提供一种制品，其包括容器，该容器中装有前述的药物组合物或冻干制剂或冻干制剂的复溶溶液。

如本领域技术人员所熟知的，本公开中所述各个实施方案的一项、一些或所有特性可以进一步组合以形成本公开的其它实施方案。本公开的以上实施方案和通过组合得到的其他实施方案通过下面的详述进一步说明。

术语

为了更容易理解本公开，以下具体定义了某些技术和科学术语。除非在本文中另有明确定义，本文使用的所有其它技术和科学术语都具有本公开所属领域的一般技术人员通常理解的含义。

“缓冲剂”指通过其酸-碱共轭组分的作用而耐受pH变化的缓冲剂。将pH控制在适当范围中的缓冲剂的例子包括醋酸盐、琥珀酸盐、葡萄糖酸盐、组氨酸盐、草酸盐、乳酸盐、磷酸盐、枸橼酸盐、酒石酸盐、延胡索酸盐、甘氨酰甘氨酸和其它有机酸缓冲剂。

“组氨酸盐缓冲剂”是包含组氨酸根离子的缓冲剂。组氨酸盐缓冲剂的实例包括组氨酸-盐酸盐，组氨酸-醋酸盐，组氨酸-磷酸盐，组氨酸-硫酸盐等缓冲剂，优选组氨酸-醋酸盐缓冲剂或组氨酸-盐酸缓冲剂，组氨酸-醋酸盐缓冲剂是组氨酸与醋酸配制而成，组氨酸盐缓冲剂是组氨酸与盐酸配制而成。

“枸橼酸盐缓冲剂”是包括枸橼酸根离子的缓冲剂。枸橼酸盐缓冲剂的实例包括枸橼酸-枸橼酸钠、枸橼酸-枸橼酸钾、枸橼酸-枸橼酸钙、枸橼酸-枸橼酸镁等。优选的枸橼酸盐缓冲剂是枸橼酸-枸橼酸钠。

“琥珀酸盐缓冲剂”是包括琥珀酸根离子的缓冲剂。琥珀酸盐缓冲剂的实例包括琥珀酸-琥珀酸钠、琥珀酸-琥珀酸钾、琥珀酸-琥珀酸钙盐等。优选的琥珀酸盐缓冲剂是琥珀酸-琥珀酸钠。

“醋酸盐缓冲剂”是包括醋酸根离子的缓冲剂。醋酸盐缓冲剂的实例包括醋酸-醋酸钠、醋酸组氨酸盐、醋酸-醋酸钾、醋酸醋酸钙、醋酸-醋酸镁等。优选的醋酸盐缓冲剂是醋酸-醋酸钠。

“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，所述其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是保持抗体活性成分的稳定性，促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。

本文中，“药物组合物”和“制剂”并不互相排斥。

本公开中所述药物组合物的溶液形式，若无特殊说明，其中的溶剂均为水。

“冻干制剂”表示液体或溶液形式的药物组合物或液体或溶液制剂经真空冷冻干燥步骤之后获得的制剂或药物组合物。

本公开的冷冻干燥包括预冻，一次干燥，二次干燥。预冻目的是冷冻产品，获得结晶固体。预冻温度和预冻速度是两个重要工艺参数，预冻温度设定可以为5℃ -50℃，预冻速度可设定为1℃/min。一次干燥也称为主干燥，是样品冷冻干燥的主要阶段。目的是移除产品里水的同时，保持产品形状，最小程度的减少对产品的破坏。若一次干燥的温度和真空度选择不当，会导致制品的塌陷。较高的温度和真空度均会加快冻干效率，但同时也会增加制品塌陷的风险。本公开所述一次干燥的温度可为本领域常规的温度，例如-27℃-0℃。制剂、容纳样品的容器(例如，玻璃小瓶)的大小和类型以及液体的体积决定了一次干燥所需的时间，所述时间的范围可为几小时至几天(例如40-60小时)。二次干燥也称为解析干燥，是通过抽极限真空(0.01mbar)和升高温度(20-40℃)除去制品中结合水的主要步骤。二次干燥时间由产物中的期望残余湿度水平决定，通常需要至少约5小时。冷冻干燥的时间与冷冻机，冻干制剂剂量，冻干药剂的容器有关。这种时间的调整是在本领域技术人员所熟知的。

本文所用术语“约”、“大约”或“基本上包含”是指数值在由本领域一般技术人员所测定的具体值的可接受误差范围内，所述数值部分取决于怎样测量或测定(即测量体系的限度)。例如，在本领域每一次实行中“约”可意味着在1内或超过1的标准差。或者，“约”、“大约”或“基本上包含”可意味着至多20％的范围。此外，特别对于生物学系统或过程而言，该术语可意味着至多一个数量级或数值的至多5倍。除非另外说明，否则当具体值在本申请和权利要求中出现时，“约”、“大约”或“基本上包含”的含义应该假定为在该具体值的可接受误差范围内。

本公开所述的药物组合物能够达到一种稳定的效果：其中的抗体在贮藏后基本上保留其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物学活性的药物组合物，优选地，药物组合物在贮藏后基本上保留其物理和化学稳定性以及其生物学活性。贮藏期一般基于药物组合物的预定保存期来选择。目前有多种测量蛋白质稳定性的分析技术，可测量在选定温度贮藏选定时间段后的稳定性。

稳定的药物抗体制剂是在下述情况下没有观察到显著变化的制剂：在冷藏温度(2-8℃)保存至少3个月、优选6个月、更优选1年，且甚至更优选地多达2年。另外，稳定的液体制剂包括这样的液体制剂：其在包括25℃的温度保存包括1个月、3个月、6个月在内的时段后表现出期望的特征。稳定性的典型的可接受的标准如下：通过SEC-HPLC测得，通常不超过约10％、优选不超过约5％的抗体单体发生降解。通过视觉分析，药物抗体制剂是淡黄色近无色澄明液体或者无色，或澄清至稍微乳白色。所述制剂的浓度、pH和重量克分子渗透压浓度具有不超过± 10％变化。通常观察到不超过约10％、优选不超过约5％的减少。通常形成不超过约10％、优选不超过约5％的聚集。

如果在目检颜色和/或澄清度后，或者通过UV光散射、尺寸排阻色谱法(SEC) 和动态光散射(DLS)测得，抗体没有显示出显著的聚集增加、沉淀和/或变性，那么所述抗体在药物制剂中“保留它的物理稳定性”。蛋白构象的变化可以通过荧光光谱法(其确定蛋白三级结构)和通过FTIR光谱法(其确定蛋白二级结构)来评价。

如果抗体没有显示出显著的化学改变，那么所述抗体在药物制剂中“保留它的化学稳定性”。通过检测和定量化学上改变的形式的蛋白，可以评估化学稳定性。经常改变蛋白化学结构的降解过程包括水解或截短(通过诸如尺寸排阻色谱法和 SDS-PAGE等方法来评价)、氧化(通过诸如与质谱法或MALDI/TOF/MS结合的肽谱法等方法来评价)、脱酰胺作用(通过诸如离子交换色谱法、毛细管等电聚焦、肽谱法、异天冬氨酸测量等方法来评价)和异构化(通过测量异天冬氨酸含量、肽谱法等来评价)。

如果抗体在给定时间的生物活性是在制备药物制剂时表现出的生物活性的预定范围内，那么所述抗体在药物制剂中“保留它的生物活性”。抗体的生物活性可以例如通过抗原结合测定来确定。

本公开所用氨基酸三字母代码和单字母代码如J.biol.chem,243,p3558(1968)中所述。

本公开所述的“抗体”指免疫球蛋白，是由两条相同的重链和两条相同的轻链通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。

在本公开中，本公开所述的抗体轻链可进一步包含轻链恒定区，所述的轻链恒定区包含人源或鼠源的κ、λ链或其变体。

在本公开中，本公开所述的抗体重链可进一步包含重链恒定区，所述的重链恒定区包含人源或鼠源的IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体。

抗体重链和轻链靠近N端的约110个氨基酸的序列变化很大，为可变区(Fv 区)；靠近C端的其余氨基酸序列相对稳定，为恒定区。可变区包括3个高变区(HVR) 和4个序列相对保守的骨架区(FR)。3个高变区决定抗体的特异性，又称为互补性决定区(CDR)。每条轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)由3个CDR 区4个FR区组成，从氨基端到羧基端依次排列的顺序为：FR1，CDR1，FR2，CDR2， FR3，CDR3，FR4。轻链的3个CDR区指LCDR1、LCDR2、和LCDR3；重链的 3个CDR区指HCDR1、HCDR2和HCDR3。本公开所述的抗体或抗原结合片段的 LCVR区和HCVR区的CDR氨基酸残基在数量和位置符合已知的Kabat编号规则 (LCDR1-3，HCDR2-3)，或者符合kabat和chothia的编号规则(HCDR1)。

本公开的抗体包括鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体，优选人源化抗体。

本公开中所述的“抗体或其抗原结合”或“功能片段”，指具有抗原结合活性的Fab片段，Fab’片段，F(ab’)2片段，以及与抗体结合的Fv片段scFv片段。 Fv片段含有抗体重链可变区和轻链可变区，但没有恒定区，并具有全部抗原结合位点的最小抗体片段。一般地，Fv抗体还包含在VH和VL结构域之间的多肽接头，且能够形成抗原结合所需的结构。也可以用不同的连接物将两个抗体可变区连接成一条多肽链，称为单链抗体(single chainantibody)或单链Fv(sFv)。

本公开的术语“抗原结合位点”指抗原上不连续的，由本公开抗体或抗原结合片段识别的三维空间位点。

术语“鼠源抗体”在本公开中为根据本领域知识和技能制备的对人HER2的单克隆抗体。制备时用HER2抗原注射试验对象，然后分离表达具有所需序列或功能特性的抗体的杂交瘤。

术语“嵌合抗体(chimeric antibody)”，是将鼠源性抗体的可变区与人抗体的恒定区融合而成的抗体，可以减轻鼠源性抗体诱发的免疫应答反应。建立嵌合抗体，要先建立分泌鼠源性特异性单抗的杂交瘤，然后从小鼠杂交瘤细胞中克隆可变区基因，再根据需要克隆人抗体的恒定区基因，将小鼠可变区基因与人恒定区基因连接成嵌合基因后插入人载体中，最后在真核工业系统或原核工业系统中表达嵌合抗体分子。在本公开一些优选的实施方案中，所述的HER2嵌合抗体的抗体轻链进一步包含人源κ、λ链或其变体的轻链恒定区。所述的HER2嵌合抗体的抗体重链进一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体的重链恒定区。人抗体的恒定区可选自人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链恒定区，优选包含人源IgG2或IgG4重链恒定区，或者使用氨基酸突变后无ADCC (antibody-dependentcell-mediated cytotoxicity，抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用) 毒性的IgG4。

术语“人源化抗体(humanized antibody)”，也称为CDR移植抗体(CDR-graftedantibody)，是指将小鼠的CDR序列移植到人的抗体可变区框架，即不同类型的人种系抗体构架序列中产生的抗体。可以克服嵌合抗体由于携带大量小鼠蛋白成分，从而诱导的强烈的异源性反应。此类构架序列可以从包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库或公开的参考文献获得。如人重链和轻链可变区基因的种系DNA 序列可以在“VBase”人种系序列数据库(在因特网www.mrccpe.com.ac.uk/vbase可获得)，以及在Kabat，E.A.等人，1991Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版中找到。为避免免疫原性下降的同时，引起的活性下降，可对所述的人抗体可变区框架序列进行最少反向突变或回复突变，以保持活性。本公开的人源化抗体也包括进一步由噬菌体展示对CDR进行亲和力成熟后的人源化抗体。

本公开中所述的“ADCC”，即antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用，是指表达Fc受体的细胞通过识别抗体的Fc 段直接杀伤被抗体包被的靶细胞。可通过对IgG上Fc段的修饰，降低或消除抗体的ADCC效应功能。所述的修饰指在抗体的重链恒定区进行突变，如选自IgG1 的N297A、L234A、L235A；IgG2/4嵌合体，IgG4的F234A/L235A突变。

本公开中所述的“突变序列”中的“突变”包括但不限于“回复突变”、“保守修饰”或“保守置换或取代”。本公开中所述的“保守修饰”或“保守置换或取代”是指具有类似特征(例如电荷、侧链大小、疏水性/亲水性、主链构象和刚性等)的其它氨基酸置换蛋白中的氨基酸，使得可频繁进行改变而不改变蛋白的生物学活性。本领域技术人员知晓，一般而言，多肽的非必需区域中的单个氨基酸置换基本上不改变生物学活性(参见例如Watson等(1987)Molecular Biology of the Gene,The Benjamin/Cummings Pub.Co.,第224页，(第4版))。另外，结构或功能类似的氨基酸的置换不大可能破环生物学活性。

本公开所述的“突变序列”是指对本公开的核苷酸序列和氨基酸序列进行适当的替换、插入或缺失等突变修饰情况下，得到的与本公开的核苷酸序列和氨基酸序列具有不同百分比序列同一性程度的核苷酸序列和氨基酸序列。本公开中所述的序列同一性可以至少为85％、90％或95％，优选至少为95％。非限制性实施例包括85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％， 97％，98％，99％，100％。两个序列之间的序列比较和同一性百分比测定可以通过 National Center For BiotechnologyInstitute网站上可得的BLASTN/BLASTP算法的默认设置来进行。

“Her受体”是指是人表生长因子受体(HumanEpidermal GrowthFactorRe-ceptor)，是一种受体蛋白质酪氨酸激酶，包括EGFR，HER2，Her3和Her受体以及将来鉴定的此家族的其它成员。Her受体一般将包含细胞外结构域，它可以结合 Her配体；亲脂性跨膜结构域；保守性细胞内酪氨酸激酶结构域；和具有几个酪氨酸残基的羧基末端信号结构域，它可以进行磷酸化。优选地Her受体是天然序列人Her受体。

“HER2”(HumanEpidermal GrowthFactorReceptor2，也称为HER2、neu和ErbB2) 指的是人表生长因子受体2，由1233个氨基酸组成，其结构与EGFR类似，具有一个包含4个亚结构域I-IV的胞外域：跨膜域、膜旁域、胞内胞浆酪氨酸激酶和调节性C末端域(Yamamotoetal.(1986)Nature319：230-234)。

术语“ErbB2”和“HER2”在本文中可以相互交换使用，并且称作人HER2 蛋白质，例如，在Semba等人，PNAS(USA)82：6497-6501(1985)和Yamamoto等人Nature319：230-234(1986)(Genebank编号X03363)中所述。

术语“HER2抗体”是与HER2特异性结合的抗体。在本公开中，在其中一个优选实施例中“HER2抗体”是WO2001000245专利中所述的人源化HER2抗体 rhuMAb 2C4，其制备过程参见WO2001000245专利实施例1-实施例3，该抗体具有如下所示的重、轻链序列：

人源化HER2抗体rhuMAb 2C4重链可变区序列(SEQ ID NO：7)：

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVA DVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSS

人源化HER2抗体rhuMAb 2C4轻链可变区序列(SEQ ID NO：8)：

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK 人源化HER2抗体rhuMAb 2C4重链序列(SEQID NO：9)：

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVA DVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVT VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTK VDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVD VSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNG KEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

人源化HER2抗体rhuMAb 2C4轻链序列(SEQ ID NO：10)

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKR TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQES VTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

注：下划线部分为CDR区。

生产和纯化抗体和抗原结合片段的方法在现有技术中熟知和能找到，如冷泉港的抗体实验技术指南，5-8章和15章。如，小鼠可以用人HER2或其片段免疫，所得到的抗体能被复性、纯化，并且可以用常规的方法进行氨基酸测序。抗原结合片段同样可以用常规方法制备。本公开所述的抗体或抗原结合片段用基因工程方法在非人源的CDR区加上一个或多个人FR区。人FR种系序列可以从ImMunoGeneTics(IMGT)的网站http://imgt.cines.fr得到，或者从免疫球蛋白杂志， 2001ISBN012441351上获得。

本公开工程化的抗体或抗原结合片段可用常规方法制备和纯化。比如，编码重链和轻链的cDNA序列，可以克隆并重组至GS表达载体。重组的免疫球蛋白表达载体可以稳定地转染CHO细胞。作为一种更推荐的现有技术，哺乳动物类表达系统会导致抗体的糖基化，特别是在Fc区的高度保守N端位点。通过表达与人 HER2特异性结合的抗体得到稳定的克隆。阳性的克隆在生物反应器的无血清培养基中扩大培养以生产抗体。分泌了抗体的培养液可以用常规技术纯化。比如，用含调整过的缓冲剂的A或G Sepharose FF柱进行纯化。洗去非特异性结合的组分。再用pH梯度法洗脱结合的抗体，用SDS-PAGE检测抗体片段，收集。抗体可用常规方法进行过滤浓缩。可溶的混合物和多聚体，也可以用常规方法去除，比如分子筛、离子交换。得到的产物需立即冷冻，如-70℃，或者冻干。

“任选”或“任选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如，“任选包含1-3个抗体重链可变区”意味着特定序列的抗体重链可变区可以但不必须存在。

“给予”和“处理”当应用于动物、人、实验受试者、细胞、组织、器官或生物流体时，是指外源性药物、治疗剂、诊断剂或组合物与动物、人、受试者、细胞、组织、器官或生物流体的接触。“给予”和“处理”可以指例如治疗、药物代谢动力学、诊断、研究和实验方法。细胞的处理包括试剂与细胞的接触，以及试剂与流体的接触，其中所述流体与细胞接触。“给予”和“处理”还意指通过试剂、诊断、结合组合物或通过另一种细胞体外和离体处理例如细胞。“处理”当应用于人、兽医学或研究受试者时，是指治疗处理、预防或预防性措施，研究和诊断应用。

“治疗”意指给予患者内用或外用治疗剂，例如包含本公开的任一种结合化合物的组合物，所述患者具有一种或多种疾病症状，而已知所述治疗剂对这些症状具有治疗作用。通常，在受治疗患者或群体中以有效缓解一种或多种疾病症状的量给予治疗剂，以诱导这类症状退化或抑制这类症状发展到任何临床可测量的程度。有效缓解任何具体疾病症状的治疗剂的量(也称作“治疗有效量”)可根据多种因素变化，例如患者的疾病状态、年龄和体重，以及药物在患者产生需要疗效的能力。通过医生或其它专业卫生保健人士通常用于评价该症状的严重性或进展状况的任何临床检测方法，可评价疾病症状是否已被减轻。尽管本公开的实施方案(例如治疗方法或制品)在缓解每个目标疾病症状方面可能无效，但是根据本领域已知的任何统计学检验方法如Student t检验、卡方检验、依据Mann和 Whitney的U检验、Kruskal-Wallis检验(H检验)、Jonckheere-Terpstra检验和 Wilcoxon检验确定，其在统计学显著数目的患者中应当减轻目标疾病症状。

“有效量”包含足以改善或预防医学疾病的症状或病症的量。有效量还意指足以允许或促进诊断的量。用于特定患者或兽医学受试者的有效量可依据以下因素而变化：例如，待治疗的病症、患者的总体健康情况、给药的方法途径和剂量以及副作用严重性。有效量可以是避免显著副作用或毒性作用的最大剂量或给药方案。

“Tm值”是指蛋白质热变性温度，即一半蛋白去折叠时的温度，此时蛋白的空间结构被破坏，所以Tm值越高，蛋白热稳定性越高。

“置换”是指溶解抗体蛋白的溶剂体系的置换，例如，使用稳定制剂的缓冲体系经物理操作方式将含抗体蛋白的高盐或高渗溶剂体系置换，从而使抗体蛋白存在于稳定制剂中。所称物理操作方式包括但不限于超滤、透析或离心后复溶。

“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，所述其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。

具体实施方式

实施例

以下结合实施例进一步描述本公开，但这些实施例并非限制本公开的范围。本公开实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，如冷泉港的抗体技术实验手册，分子克隆手册；或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。

示例性抗体药物组合物(制剂)制备工艺

第一步：处方组成rhuMAb 2C4原液过滤后中控取样检测无菌。将原液过 0.22μmPVDF滤芯，收集滤液。

第二步：调节装量至14.7ml，将滤液灌装于20ml西林瓶中，加塞，分别于灌装开始、灌装中间、灌装结束时取样中控检测装量差异。

第三步：开启轧盖机，加铝盖，进行轧盖。

第四步：目检，确认产品无装量不准等缺陷。打印、粘贴西林瓶标签；打印纸盒标签，折叠纸盒，装盒，贴纸盒标签。

实施例1.缓冲体系pH值的筛选

在pH5.4-6.4一系列组氨酸-醋酸盐缓冲液中，配制蛋白浓度为约30mg/mL，含120mM蔗糖、0.2mg/mL聚山梨酯20的rhuMAb 2C4制剂，将每种制剂过滤灌装，加塞，轧盖，封口。将样品进行40℃高温强制降解实验考察稳定性，以pH、蛋白含量、SEC(分子排阻色谱)、DLS(动态光散射)、IEC(离子交换色谱)为评价指标，结果表明，pH在5.4-6.4的范围内，各个处方间没有显著性差异，pH5.7，6.0、6.2处方组中中性峰略高，优选缓冲液的pH范围为5.7-6.2，最优选pH为 6.0。

表1.pH5.4-6.0范围的rhuMAb 2C4注射液40℃稳定性结果

注：D0表示第0天，D28表示第28天。

表2.pH6.0-6.4的rhuMAb 2C4注射液40℃稳定性结果

注：D0表示第0天，D28表示第28天。

实施例2.缓冲液浓度的筛选

在不同离子强度的组氨酸-醋酸盐缓冲液中，制备蛋白浓度为1mg/mL，120 mM蔗糖，0.2mg/ml聚山梨酯20的rhuMAb 2C4制剂：

1)10mM组氨酸-醋酸盐，pH 6.0；

2)20mM组氨酸-醋酸盐，pH 6.0；

3)30mM组氨酸-醋酸盐，pH 6.0。

采用DSC技术测定Tm值，实验结果见表3，实验结果表明，当组氨酸-醋酸盐缓冲液离子强度在10-30mM范围内，rhuMAb 2C4单抗的Tm值无显著性变化。所以组氨酸-醋酸盐缓冲液离子强度范围可以为10-30mM，优选20mM。

表3.不同离子强度的处方组成和处方筛选实验结果

实施例3.糖浓度的筛选

在20mM组氨酸-醋酸盐缓冲液中制备蛋白浓度为1mg/ml，含下列不同浓度蔗糖的rhuMAb 2C4制剂：

1)100mM蔗糖

2)120mM蔗糖

3)140mM蔗糖

采用DSC技术测定Tm值，实验结果见表4，实验结果表明，当蔗糖浓度在 100-140mM范围内，rhuMAb 2C4单抗的T_m值无显著性变化。所以糖浓度范围定为100-140mM，优选120mM(41mg/ml)。

表4.不同蔗糖浓度的处方组成和处方筛选实验结果

实施例4.表面活性剂的筛选

在含下列不同浓度表面活性剂的缓冲液中，制备蛋白浓度为30mg/mL，含20 mM组氨酸-醋酸盐，pH6.0，120mM蔗糖的rhuMAb 2C4制剂：

1)0.2mg/mL聚山梨酯20(PS20)

2)0.4mg/mL聚山梨酯20(PS20)

3)0.6mg/mL聚山梨酯20(PS20)

4)0.2mg/mL聚山梨酯80(PS80)

5)0.4mg/mL聚山梨酯80(PS80)

6)0.6mg/mL聚山梨酯80(PS80)

将每种制剂过滤灌装，加塞，轧盖，封口。将样品进行4℃长期放置实验，实验结果见表5，结果表明，4℃放置18个月后0.2、0.4mg/ml PS20组出现颗粒，PS80 组均澄明，其他数据组间无差异；因此表面活性剂辅料优选聚山梨酯80。

表5.不同辅料对rhuMAb 2C4稳定性影响

注：N/A表示未检测，M表示月。

实施例5.缓冲体系的筛选

在下列不同缓冲液中，制备蛋白浓度为30mg/mL，含120mM蔗糖，0.1mg/mL 聚山梨酯80的rhuMAb 2C4制剂：

1)20mM His-AA(组氨酸-醋酸盐)，pH6.0

2)20mM His-HCl(组氨酸-盐酸盐)，pH6.0

3)20mM SA(琥珀酸钠盐)，pH6.0

4)20mM CA(枸橼酸钠盐)，pH6.0

将每种制剂过滤灌装，加塞，轧盖，封口。样品制备完成后进行强制降解实验，考察稳定性。检测项为外观、SEC、IEC、CE-SDS(非还原)。结果显示SA及 CA体系稳定性相对较差，冻融循环及40℃存放1个月后，外观出现微乳光；40 度条件下His-HCl组IEC优于His-AA组，其他数据间无差异。因此缓冲体系可选择20mM His-HCl pH6.0。

表6.rhuMAb 2C4强制降解实验结果

注：D表示天，M1表示1个月，N/A表示未检测。

实施例6.制剂成分的稳定性检测

在20mM His-HCl pH6.0缓冲体系中，制备蛋白浓度为30mg/mL，含120mM 蔗糖，分别含0.2mg/mL、0.4mg/mL和0.6mg/mL的聚山梨酯80的rhuMAb 2C4 制剂，将制剂过滤灌装，加塞，轧盖，封口。放于4℃考察稳定性。检测项为外观、SEC、IEC、CE-SDS(非还原)。结果显示4℃放置3个月，各检测项与0时相比均无明显变化，制剂稳定。

表7.rhuMAb 2C4稳定性实验(4℃)结果

注：D0表示第0天，M3表示第3个月。

实施例7.rhuMAb 2C4抗体制剂的冻干

用pH6.0的20mM组氨酸-盐酸盐缓冲剂，制备抗rhuMAb 2C4抗体浓度为 30mg/ml，含120mM蔗糖，0.4mg/ml聚山梨酯80的抗体制剂。将抗体以2.15mL/ 瓶填充入6mL西林瓶中，装入冻干箱中，冻干。冻干程序为预冻、一次干燥和二次干燥。冻干程序结束后，真空加塞。复溶样品进行冻干前后对比。结果表明，复溶溶液可保持液体制剂良好的性能。

表8.制剂的冻干步骤

注：N/A表示未检测

实施例8.其它可选择制剂配方

此外，本公开还提供其它制剂配方的抗rhuMAb 2C4抗体药物制剂，包含但不限于：

(1)30mg/ml rhuMAb 2C4抗体，120mM蔗糖，0.4mg/ml的聚山梨酯80，和 pH 5.4的20mM组氨酸-盐酸盐缓冲剂；

(2)30mg/ml rhuMAb 2C4抗体，140mM蔗糖，0.4mg/ml的聚山梨酯80，和 pH 5.8的20mM组氨酸-盐酸盐缓冲剂；

(3)30mg/ml rhuMAb 2C4抗体，120mM蔗糖，0.4mg/ml的聚山梨酯80，和 pH 6.4的20mM组氨酸-盐酸盐缓冲剂；

(4)10mg/ml rhuMAb 2C4抗体，100mM蔗糖，0.4mg/ml的聚山梨酯80，和 pH 6.0的20mM组氨酸-盐酸盐缓冲剂；

(5)50mg/ml rhuMAb 2C4抗体，120mM蔗糖，0.4mg/ml的聚山梨酯80，和pH 6.0的20mM组氨酸-盐酸盐缓冲剂；

(6)100mg/ml rhuMAb 2C4抗体，120mM蔗糖，0.4mg/ml的聚山梨酯80，和pH 6.0的20mM组氨酸-盐酸盐缓冲剂；

(7)30mg/ml rhuMAb 2C4抗体，50mM蔗糖，0.4mg/ml的聚山梨酯80，和 pH 6.0的20mM组氨酸-盐酸盐缓冲剂；

(8)30mg/ml rhuMAb 2C4抗体，200mM蔗糖，0.4mg/ml的聚山梨酯80，和 pH 6.0的20mM组氨酸-盐酸盐缓冲剂；

(9)30mg/ml rhuMAb 2C4抗体，50mM蔗糖，1.0mg/ml的聚山梨酯80，和 pH 6.0的20mM组氨酸-盐酸盐缓冲剂；

(10)30mg/ml rhuMAb 2C4抗体，50mM蔗糖，1.0mg/ml的聚山梨酯80，和 pH 6.3的20mM组氨酸-盐酸盐缓冲剂；

(11)5mg/ml rhuMAb 2C4抗体，160mM蔗糖，0.4mg/ml的聚山梨酯80，和 pH 5.9的20mM组氨酸-盐酸盐缓冲剂；

(12)40mg/ml rhuMAb 2C4抗体，110mM蔗糖，0.3mg/ml的聚山梨酯80，和pH 6.1的20mM组氨酸-盐酸盐缓冲剂；

(13)30mg/ml rhuMAb 2C4抗体，140mM蔗糖，0.4mg/ml的聚山梨酯80，和pH 6.0的40mM组氨酸-盐酸盐缓冲剂；

(14)1mg/ml rhuMAb 2C4抗体，120mM蔗糖，0.4mg/ml的聚山梨酯80，和 pH 6.0的20mM组氨酸-盐酸盐缓冲剂；

(15)30mg/ml rhuMAb 2C4抗体，120mM蔗糖，0.1mg/ml的聚山梨酯80，和pH 6.4的20mM组氨酸-盐酸盐缓冲剂。

序列表

<110> 江苏恒瑞医药股份有限公司

上海恒瑞医药有限公司

<120> 一种HER2抗体药物组合物及其用途

<150> 201810790356.8

<151> 2018-07-18

<160> 10

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> 人源化HER2抗体rhuMAb 2C4重链HCDR1序列

<400> 1

Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Thr Met Asp

1 5 10

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> 人源化HER2抗体rhuMAb 2C4重链HCDR2序列

<400> 2

Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 3

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> 人源化HER2抗体rhuMAb 2C4重链HCDR3序列

<400> 3

Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 4

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> 人源化HER2抗体rhuMAb 2C4轻链LCDR1序列

<400> 4

Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly Val Ala

1 5 10

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> 人源化HER2抗体rhuMAb 2C4轻链LCDR2序列

<400> 5

Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr

1 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> 人源化HER2抗体rhuMAb 2C4轻链LCDR3序列

<400> 6

Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 7

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> 人源化HER2抗体rhuMAb 2C4重链可变区序列

<400> 7

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 8

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> DOMAIN

<223> 人源化HER2抗体rhuMAb 2C4轻链可变区序列

<400> 8

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 9

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> CHAIN

<223> 人源化HER2抗体rhuMAb 2C4重链序列

<400> 9

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

Lys

<210> 10

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> CHAIN

<223> 人源化HER2抗体rhuMAb 2C4轻链序列

<400> 10

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

Claims

1.一种药物组合物，由以下成分组成：

(a)10mg/ml至50mg/ml的抗HER2抗体，

(b)10mM至30mM的组氨酸-盐酸盐缓冲剂，pH为5.7至6.2，

(c)100mM至140mM的蔗糖，和

(d)0.2mg/ml至0.6mg/ml的聚山梨酯80；

其中所述抗HER2抗体包含如SEQ ID NO：9所示的重链，和如SEQ ID NO：10所示的轻链。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中缓冲剂的pH为6.0。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述缓冲剂浓度为20mM。

4.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述HER2抗体或其抗原结合片段浓度为30mg/ml。

5.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述蔗糖浓度为为120mM。

6.根据权利要求1所述的药物组合物，其中聚山梨酯80的浓度为0.4mg/ml。

7.根据权利要求1所述的药物组合物，由以下成分组成：

(a)30mg/ml的抗HER2抗体或其抗原结合片段，

(b)20mM的组氨酸-盐酸盐缓冲剂，pH为6.0，

(c)120mM的蔗糖，和

(d)0.2mg/ml至0.6mg/ml的聚山梨酯80；

8.一种含HER2抗体或其抗原结合片段的冻干制剂，其特征在于所述制剂通过将权利要求1至7任一项所述的药物组合物经冷冻干燥获得。

9.一种含有HER2抗体或其抗原结合片段的复溶溶液，其特征在于所述复溶溶液是通过将权利要求8所述的冻干制剂经复溶制备获得。

10.根据权利要求1至7任一项所述的药物组合物，或根据权利要求8所述的冻干制剂，或根据权利要求9所述的复溶溶液，在制备用于治疗、抑制肿瘤细胞增殖或转移的疾病或病症的药物中的用途，所述疾病或病症为HER2介导的疾病或病症。

11.一种制品，其包括容器，该容器中装有如权利要求1至7任一项所述的药物组合物，或如权利要求8所述的冻干制剂，或如权利要求9所述的复溶溶液。