CN114832102A

CN114832102A - 一种稳定的抗egfr抗体组合物

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Publication number: CN114832102A
Application number: CN202110141918.8A
Authority: CN
Inventors: 姜晓玲; 吴崇兵; 杜雾晨; 朱彩林; 高超; 马昀; 慎伟强
Original assignee: Sunho China Biopharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Sunho China Biopharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2021-02-02
Filing date: 2021-02-02
Publication date: 2022-08-02

Abstract

本发明涉及一种可特异性结合EGFR蛋白的稳定的药物组合物。具体而言，本发明涉及一种药物组合物，包含组氨酸/盐酸组氨酸缓冲剂、含有抗EGFR抗体或其抗原结合片段、聚山梨酯80和海藻糖。本发明中的药物组合物在储存数月之后依然显示出较高的抗体稳定性。

Description

一种稳定的抗EGFR抗体组合物

技术领域

本发明涉及用于结合表皮生长因子受体(EGFR)的抗体的稳定的制剂和方法。更特别地，本发明涉及抗EGFR抗体与组氨酸/盐酸组氨酸缓冲剂、聚山梨酯80和海藻糖的制剂。

背景技术

根据抗EGFR抗体的各种体外和体内研究结果，抗EGFR抗体可抑制癌细胞增殖、减少介导肿瘤的血管生成、诱导癌细胞凋亡、增强放射治疗和传统化疗的毒性作用。因此，抗EGFR抗体可以抑制各种水平的肿瘤。

然而，用于治疗目的的包含抗EGFR抗体的液体制剂可能会存在由于抗体的聚集性质导致蛋白质多聚体形成的问题，并且也可能会由于蛋白水解反应而发生脱氨基反应。这种变性反应可以由例如在运输过程中在高温下储藏或由切应力引起。如果包含抗EGFR抗体的液体制剂由于变性反应而出现聚集，则可能出现沉淀并形成颗粒，从而引起栓塞。

在这方面，可以在将液体制剂施用于患者之前对液体制剂进行过滤(例如通过注射器注射)以防止聚集。然而，这种附加步骤可能使得给药方法复杂并且不适合于临床试验。此外，在过滤之后，颗粒可以继续形成，导致稳定性降低。

因此，仍然需要开发一种稳定的包含抗EGFR抗体的药物制剂，该药物制剂具有低浊度且在应力条件下也无聚集或无颗粒形成。

同时，常规的包含抗EGFR抗体的药物制剂通常包含氯化钠(NaCl)作为等渗剂，以减少当施用药物制剂时由渗透压引起的身体疼痛反应。然而，包含蛋白质治疗剂的药物制剂应包含适当的成分。在这方面，NaCl的相容性还需要验证。

为了实现抗体的临床潜力，必需在保存和施用期间维持所述抗体的生物学活性。化学和物理的不稳定性能够促进生物学活性的降低。由于水和温度的变化，抗体可能发生凝聚、氧化、脱酰胺或水解。保持抗体的生物学活性的一种方法是通过冻干来稳定抗体制剂。一旦重新配制，特别有用的冻干制剂可提供高的抗体浓度。需要抗EGFR抗体的稳定的冻干制剂。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含抗EGFR抗体或其抗原结合片段，其中所述抗EGFR抗体为可特异性结合EGFR的抗体；以及缓冲剂，所述缓冲剂选自醋酸盐、组氨酸盐和磷酸盐缓冲剂，优选组氨酸盐缓冲剂，更有选组氨酸/盐酸组氨酸缓冲剂；所述缓冲剂的pH为5.5至6.5。

在可选的实施方案中，缓冲剂浓度为大约5mM至30mM，优选为大约5mM至20mM，最优选为大约20mM。

在可选的实施方案中，特异性结合EGFR蛋白的抗体或其抗原结合片段浓度为大约1mg/ml至100mg/ml，优选为2mg/ml。

在可选的实施方案中，药物组合物，其还包括糖，所述糖优选为海藻糖或蔗糖或甘露醇，最优选为海藻糖。

在可选的实施方案中，糖浓度为大约50mM至250mM，优选为大约50mM至150mM，最优选为135mM。

在可选的实施方案中，药物组合物，其还包括表面活性剂，所述表面活性剂优选为聚山梨酯，更优选为聚山梨酯80。

在可选的实施方案中，其中表面活性剂的浓度为0.1mg/mL至0.4mg/mL，优选为0.2mg/mL。

在可选的实施方案中，一种药物组合物，其中包含：

(a)1mg/ml至100mg/ml的特异性结合EGFR蛋白的抗体或其抗原结合片段，

(b)5mM至30mM的组氨酸/盐酸组氨酸缓冲剂，pH为约5.0至6.5，

(c)50mg/mL至200mg/mL的海藻糖，和

(d)0.1mg/mL至0.4mg/mL的聚山梨酯80。

在可选的实施方案中，一种药物组合物，其中包含：

(a)2mg/ml的特异性结合EGFR蛋白的抗体或其抗原结合片段，

(b)20mM的组氨酸/盐酸组氨酸缓冲剂，pH为5.5，

(c)135mg/mL的海藻糖，和

(d)0.2mg/mL的聚山梨酯80。

在可选的实施方案中，一种药物组合物，其中所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4的氨基酸序列所示的重链HCDR1、HCDR2和HCDR3；和包含如SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8的氨基酸序列所示的轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3；和/或包含如SEQ ID NO:9的氨基酸序列所示的重链。

在可选的实施方案中，一种药物组合物，其中所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段为鼠源、嵌合或人源化的抗体或其抗原结合片段。

在可选的实施方案中，一种药物组合物，其中所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段为鼠源、嵌合、人源化或全人源的抗体或其抗原结合片段。

在可选的实施方案中，一种含抗EGFR抗体或其抗原结合片段的冻干制剂，其中所述制剂通过将前述药物组合物经冷冻干燥获得。

在可选的实施方案中，一种含抗EGFR抗体或其抗原结合片段的液体制剂，其中所述液体制剂通过将前述的药物组合物无菌灌装获得。

在可选的实施方案中，上述药物组合物冻干制剂或液体制剂可用于在制备治疗、抑制肿瘤细胞增殖或转移的疾病或病症的药物，优选地，所述疾病或病症为癌症，更优选地，所述癌症选自：肾肿瘤、胰腺肿瘤、头颈部肿瘤、乳腺肿瘤、前列腺肿瘤、结肠肿瘤、胃肿瘤和卵巢肿瘤、肺肿瘤和皮肤肿瘤。

本发明的抗体的两条重链氨基酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:9所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。

有益效果

本发明提供一种更利于生产和给药，性能更稳定的包含可特异性结合EGFR蛋白的药物组合物，本发明的制剂稳定，生物相容性好，杂质少，储存数月之后展现了很高的抗体稳定性。解决了抗体药物的分子量大，结构复杂，容易降解、聚合或发生不希望发生的化学修饰等而变得不稳定的技术问题，使抗体适合于给药，发挥更好的治疗效果。

术语的详细说明

为了更容易理解本发明，以下具体定义了某些技术和科学术语。除非在本文中另有明确定义，本文使用的所有其它技术和科学术语都具有本发明所属领域的一般技术人员通常理解的含义。

“缓冲剂”指通过其酸-碱共轭组分的作用而耐受pH变化的缓冲剂。将pH控制在适当范围中的缓冲剂的例子包括醋酸盐、琥珀酸盐、葡萄糖酸盐、组氨酸盐、草酸盐、乳酸盐、磷酸盐、枸橼酸盐、酒石酸盐、延胡索酸盐、甘氨酰甘氨酸和其它有机酸缓冲剂。

“组氨酸盐缓冲剂”是包含组氨酸根离子的缓冲剂。包括组氨酸/醋酸，组氨酸/盐酸组氨酸缓冲体系。

“磷酸盐缓冲剂”是包括磷酸根离子的缓冲剂。包括磷酸氢二钠/磷酸二氢钠。

“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，所述其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是保持抗体活性成分的稳定性，促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。

本文中，“药物组合物”和“制剂”并不互相排斥。

本发明中所述药物组合物的溶液形式，若无特殊说明，其中的溶剂均为水。

“冻干制剂”表示液体或溶液形式的药物组合物或液体或溶液制剂经真空冷冻干燥步骤之后获得的制剂或药物组合物。

本文所用术语“约”是指数值在由本领域一般技术人员所测定的具体值的可接受误差范围内，所述数值部分取决于怎样测量或测定(即测量体系的限度)。例如，在本领域每一次实行中“约”可意味着在1内或超过1的标准差。或者，“约”或“基本上包含”可意味着至多20％的范围。此外，特别对于生物学系统或过程而言，该术语可意味着至多一个数量级或数值的至多5倍。除非另外说明，否则当具体值在本申请和权利要求中出现时，“约”或“基本上包含”的含义应该假定为在该具体值的可接受误差范围内。

本发明所述的药物组合物能够达到一种稳定的效果：其中的抗体在贮藏后基本上保留其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物学活性的药物组合物，优选地，药物组合物在贮藏后基本上保留其物理和化学稳定性以及其生物学活性。贮藏期一般基于药物组合物的预定保存期来选择。目前有多种测量蛋白质稳定性的分析技术，可测量在选定温度贮藏选定时间段后的稳定性。

稳定的药物抗体制剂是在下述情况下没有观察到显著变化的制剂：在冷藏温度(2-8℃)保存至少3个月、优选6个月、更优选1年，且甚至更优选地多达2年。另外，稳定的液体制剂包括这样的液体制剂：其在包括25℃的温度保存包括1个月、3个月、6个月在内的时段后表现出期望的特征。稳定性的典型的可接受的标准如下：通过SEC-HPLC测得，通常不超过约10％、优选不超过约5％的抗体单体发生降解。通过视觉分析，药物抗体制剂是淡黄色近无色澄明液体或者无色，或澄清至稍微乳白色。所述制剂的浓度、pH和重量克分子渗透压浓度具有不超过±10％变化。通常观察到不超过约10％、优选不超过约5％的减少。通常形成不超过约10％、优选不超过约5％的聚集。

如果在目检颜色和/或澄清度后，或者通过UV光散射、尺寸排阻色谱法(SEC)和动态光散射(DLS)测得，抗体没有显示出显著的聚集增加、沉淀和/或变性，那么所述抗体在药物制剂中“保留它的物理稳定性”。蛋白构象的变化可以通过荧光光谱法(其确定蛋白三级结构)和通过FTIR光谱法(其确定蛋白二级结构)来评价。

如果抗体没有显示出显著的化学改变，那么所述抗体在药物制剂中“保留它的化学稳定性”。

本发明所述的“抗体”指免疫球蛋白，是由两条相同的重链和两条相同的轻链通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。

抗体重链和轻链靠近N端的约110个氨基酸的序列变化很大，为可变区(Fv区)；靠近C端的其余氨基酸序列相对稳定，为恒定区。可变区包括3个高变区(HVR)和4个序列相对保守的骨架区(FR)。3个高变区决定抗体的特异性，又称为互补性决定区(CDR)。每条轻链可变区(LCVR或VL)和重链可变区(HCVR或VH)由3个CDR区4个FR区组成，从氨基端到羧基端依次排列的顺序为：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。轻链的3个CDR区指LCDR1、LCDR2、和LCDR3；重链的3个CDR区指HCDR1、HCDR2和HCDR3。本发明所述的抗体或抗原结合片段的LCVR区和HCVR区的CDR氨基酸残基在数量和位置符合已知的Kabat编号规则(LCDR1-3，HCDR1-3)。

本发明中所述的“抗体或其抗原结合”或“功能片段”，指具有抗原结合活性的Fab片段，Fab’片段，F(ab’)2片段，以及与抗体结合的Fv片段scFv片段。Fv片段含有抗体重链可变区和轻链可变区，但没有恒定区，并具有全部抗原结合位点的最小抗体片段。一般地，Fv抗体还包含在VH和VL结构域之间的多肽接头，且能够形成抗原结合所需的结构。也可以用不同的连接物将两个抗体可变区连接成一条多肽链，称为单链抗体(single chainantibody)或单链Fv(sFv)。

本发明的术语“抗原结合位点”指抗原上不连续的，由本发明抗体或抗原结合片段识别的三维空间位点。

术语“鼠源抗体”在本发明中为根据本领域知识和技能制备的单克隆抗体。制备时用抗原注射试验对象，然后分离表达具有所需序列或功能特性的抗体的杂交瘤。

术语“嵌合抗体(chimeric antibody)”，是将鼠源性抗体的可变区与人抗体的恒定区融合而成的抗体，可以减轻鼠源性抗体诱发的免疫应答反应。建立嵌合抗体，要先建立分泌鼠源性特异性单抗的杂交瘤，然后从小鼠杂交瘤细胞中克隆可变区基因，再根据需要克隆人抗体的恒定区基因，将小鼠可变区基因与人恒定区基因连接成嵌合基因后插入人载体中，最后在真核工业系统或原核工业系统中表达嵌合抗体分子。

术语“人源化抗体(humanized antibody)”，也称为CDR移植抗体(CDR-graftedantibody)，是指将小鼠的CDR序列移植到人的抗体可变区框架，即不同类型的人种系抗体构架序列中产生的抗体。可以克服嵌合抗体由于携带大量小鼠蛋白成分，从而诱导的强烈的异源性反应。

具体实施方式

本发明的融合蛋白制剂处方开发过程包括缓冲体系筛选、添加物筛选、表面活性剂筛选及初步原辅料相容性，稳定性研究。以下SEC-HPLC(size exclusion-highperformance liquid chromatography)表示体积排阻-高效液相色谱，其中HMW，LMW分别表示高分子量、低分子量。CEX-HPLC(cation exchange-high performance liquidchromatography)表示高效液相离子交换色谱。以下不溶性微粒和可见异物的参照标准符合药典的相关规定。

实施例1：核苷酸序列

将目标氨基酸序列转化为核苷酸序列，获得核苷酸序列分别为：SEQ ID NO:10(EGFR重链)、SEQ ID NO:11(EGFR轻链)、SEQ ID NO:12((IL10)2-Fc)。

实施例2：基因合成与表达载体的构建

分别采用pcDNA3.4-G418和pcDNA3.1-G418载体作为表达所述多功能抗体的轻链和重链的专用载体。pcDNA3.4-G418含有轻链所使用的启动子CMVPromoter、真核筛选标记G418标签和原核筛选标签Ampicilline。pcDNA3.1-G418载体含有重链所使用的启动子CMVPromoter、真核筛选标记G418标签和原核筛选标签Ampicilline。基因合成得到抗体表达轻链和重链的核苷酸序列，用HindIII和XhoI对载体和目的片段进行双酶切，回收后通过DNA连接酶进行酶连，并转化大肠杆菌感受态细胞DH5α，挑选出阳性克隆并进行质粒提取和酶切验证，获得含所述抗体第一重链、第二重链、第一轻链重组质粒，分别为pcDNA3.1-G418-1、pcDNA3.1-G418-2和pcDNA3.4-G418-3。

实施例3：质粒抽提

根据《分子克隆实验指南》(2002年，科学出版社)所述方法将含有上述各目的基因的重组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α中，将转化细菌涂布在含100μg/ml氨苄青霉素的LB平板上培养，挑选质粒克隆至液体LB培养基中培养，260rpm摇菌14小时，由无内毒素质粒大抽试剂盒抽提质粒，用无菌水溶解并用核酸蛋白定量仪进行浓度测定。

实施例4：质粒转染、瞬转表达与抗体纯化

在37℃、8％CO₂、100rpm下培养ExpiCHO至细胞密度6×10⁶cells/ml。使用脂质体分别将构建的载体PCDNA3.1-G418-6-1、PCDNA3.1-G418-6-2、PCDNA3.4-G418-6-3转染到上述细胞中，转染质粒浓度为1μg/ml，脂质体浓度参照ExpiCHO^TMExpression System试剂盒确定，在32℃、5％CO₂，100rpm下培养7-10天。转染18-22h之后和5-8天之间分别补料一次。4000rpm离心上述培养产物，0.22μm滤膜过滤并收集培养基上清液，采用ProteinA、离子柱纯化所得的抗体蛋白并收集洗脱液。

ProteinA、离子柱纯化的具体操作步骤为：细胞培养液经过高速离心后取上清，利用GE的ProteinA层析柱进行亲和层析。层析使用平衡缓冲液为1×PBS(pH7.4)，细胞上清上样结合后利用PBS洗涤至紫外线回到基线，然后利用洗脱缓冲液0.1M甘氨酸(pH3.0)洗脱目的蛋白，利用Tris调节pH至中性保存。将亲和层析所得产物调节pH至低于或者高于pI1-2个pH单位，适当稀释以控制样本电导在5ms/cm以下。利用合适的对应pH缓冲液如磷酸缓冲液、醋酸缓冲液等条件，利用本领域内常规的离子交换层析方法如阴离子交换或者阳离子交换进行对应pH条件下NaCl梯度洗脱，根据SDS-PAGE及SEC-HPLC选择目的蛋白所在的收集管合并保存。

实施例5：缓冲体系筛选

用抗体制剂常用的缓冲盐设计2组不同pH值的缓冲溶液。将本发明涉及的抗体原液经过超滤换液至不同pH值的缓冲溶液、进行除菌过滤、无菌分装。用分装的样品进行25℃加速稳定性实验，定期取样，进行性状、分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)等检测。比较稳定性所获得的数据，总结数据之间的关联性，选择有利于本发明涉及的抗体稳定性的pH值的缓冲溶液。

表1缓冲体系筛选研究方案

对7组缓冲体系在两个不同考察条件下不同取样点进行取样检测分析，结果见表2。

表2缓冲体系筛选检测结果

注:25为考察条件为25±2℃；W为考察周期，1W＝1周。

从外观结果可以看出，各缓冲体系下的样品在不同取样点检测数据几乎不发生变化。结果表明这项评价指标均较稳定，不是缓冲体系筛选的关键评价标准。

纯度考察项中SEC-HPLC的评价结果显示，组氨酸-盐酸组氨酸缓冲体系对应的F5、F6和F7的本发明涉及的样品在25℃放置4周后，主峰比例仍能保持在99％以上。表明该缓冲体系下本发明涉及的样品能在宽泛的pH范围内保持稳定的状态。

综上所述，选择pH值为6.0的20mM组氨酸/盐酸组氨酸缓冲体系作为本发明涉及的项目制剂处方的缓冲体系。

实施例6：辅料(糖)筛选

用20mM组氨酸/盐酸组氨酸，pH值为6.0的缓冲溶液，添加不同辅料，如海藻糖、精氨酸、氯化钠等制成不同处方的样品，将抗体蛋白换液至相应处方中，进行除菌过滤、无菌分装。用分装的样品进行40℃高温稳定性实验，在1周、3周、4周取样进行外观、蛋白质含量、pH值、分子排阻高效液相色谱(SEC—HPLC)等检测。比较稳定性检测数据，选择有利于抗体稳定性的处方。

制剂处方筛选方案及7组制剂处方评价数据统计表见表3和表4。

表3制剂处方筛选方案

表4处方筛选检测结果汇总表

注：25、37为考察条件为25℃、37℃；W为考察周期，1W＝1周。

从外观检测结果可以看出，各缓冲体系下的样品在该考察条件和不同取样点的检测数据几乎不发生变化，结果表明这项评价指标均较稳定，不是添加物筛选的关键评价标准。

纯度考察项中SEC-HPLC的评价结果显示，样品在25℃条件下放置4周，随着时间的增加，F10和F11中的本发明涉及的样品的聚体和小分子片段的含量呈现逐渐增加的趋势，主峰比例明显下降，表明本发明涉及的样品在添加了精氨酸的缓冲液中不稳定；F12、F13和F14的本发明涉及的样品的氯化钠添加的量不同，聚体和小分子片段的含量均未发生明显的变化，结果表明氯化钠对本发明涉及的样品无影响；样品在37℃条件下放置3周，F8和F9的本发明涉及的样品在添加了海藻糖的缓冲液中更稳定，纯度下降幅度最小，结果显示样品在添加了海藻糖的缓冲液中较为稳定，表明抗体制剂的稳定剂为海藻糖。

因此，综合考虑选择135mM海藻糖为本发明涉及的制剂处方的添加物。

实施例7：表面活性剂筛选

用10mM磷酸氢二钠-磷酸二氢钠、135mM海藻糖、pH值为6.0的缓冲溶液，不同种类的表面活性剂(聚山梨酯80、聚山梨酯20)制成不同处方的样品，将抗体蛋白换液至相应处方中，进行除菌过滤、无菌分装。用分装的样品进行反复冻融(循环温度：-80～4℃)和振荡7天(250rpm，25℃)取样进行外观、分子排阻高效液相色谱(SEC—HPLC)等检测。比较稳定性检测数据，选择有利于抗体稳定性的活性剂及其含量。

表面活性剂筛选方案及6组表面活性剂评价数据统计表见下表5和6。

表5表面活性剂筛选方案

注：抗体浓度为5mg/ml。

表6表面活性剂筛选结果

实验数据表明，外观随着条件的改变并没有显著变化，表明这项评价指标均较稳定，均不是关键评价指标。

纯度考察项中SEC-HPLC的评价结果显示，冻融2次和5次后，F1、F5和F6中本发明涉及的样品的聚体含量增加较为缓慢。

因此，综合考虑优选0.2g/L聚山梨酯80作为本发明涉及的项目制剂处方的表面活性剂。

通过以上的研究结果可确定本发明涉及的抗体的制剂处方为pH值6.0，20mM组氨酸/盐酸组氨酸，135mM海藻糖，0.2g/L聚山梨酯80，后续稳定性实验也选用该处方。

实施例8：原液稳定性实验之光破坏试验

通过长期稳定性试验及加速稳定性试验来评估候选制剂处方的原辅料相容性，在不同环境条件下是否能维持原液的稳定性。

将纯化后的本发明涉及的超滤换液至20mM His-His/HCl+150mM海藻糖+0.02％聚山梨酯80(pH5.5)的制剂缓冲液中，进行除菌过滤、无菌分装，用分装的样品在5天日光+紫外的照射下的稳定性研究，进行SEC-HPLC检测。

试验方案及结果见表7、表8，结果显示：本发明涉及的抗体在5天日光+紫外的照射下，样品纯度有所下降，聚体增加，抗体出现一定程度的聚集；光照试验结果表明日光光照对本发明涉及的抗体影响较大，会导致抗体破碎，稳定性下降。

表7光破坏试验设计

注：1、日光光照强度为4500Lx±500Lx，紫外照度为250μW/cm2。

表8光破坏试验结果

实施例9：原液稳定性实验之抗体冻融稳定性研究

一般抗体应保存于低温条件下，须注意避免因停电等造成的反复冻融，反复冻融所产生的机械剪切力将对抗体蛋白分子产生破坏作用，而中试生产或其他后续保存又不可避免的或多或少的会出现反复冻融现象，故设置此次实验判断本发明抗体是否能够反复冻融。使用时冷冻的抗体溶液应置于室温中缓慢地解冻，应绝对避免用高温快速解冻。此外混匀时也不要进行剧烈振荡，反复颠倒混匀即可。

结果如表9，表明抗体浓度为2mg/ml左右时，-80℃冷冻2到5次、室温下融化,不会影响抗体的SEC-HPLC结果，抗体能较稳定的进行反复冻融。

表9本发明抗体反复冻融试验

注：DR0、DR2、DR5分别为-80℃冷冻，25℃融化0次、2次、5次；；NA为未测出。

实施例10：液体制剂稳定性实验

稳定性试验对于医药产品的发展有着极其重要的作用，不同药物稳定性试验方法的目的不同，但是均能为药物生产、运输和保存等提供依据，最大程度地保障药物有效性和用药安全性。

建立药品有效期，必须以该药品的稳定性数据为依据，在正常贮存条件下的药品稳定性试验数据是有效期确定最可靠的依据。长期稳定性试验的主要目的是确定药品保存的有效期限，其以加速试验的结果作为依据，营造药品贮存的实际情况，观察多长时间内药品会完全失效，而这时间则为药品的有效期。

样品来源：

实验方案：将样品配制成制剂处方：20mM His-His/HCl，135MM海藻糖，0.02％聚山梨酯80，pH6.0；进行除菌过滤、无菌分装；用分装的样品进行-80℃稳定性、4℃稳定性和25℃稳定性实验，放样1M、3M、6M，进行外观、分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)等检测。

结果如表10、11、12所示，本发明涉及的抗体在-80℃(3个月)条件下，聚体及小分子片段未产生明显变化；在4℃(1个月)条件下保持稳定，4℃(3个月)条件下聚体及小分子片段增加明显；在25℃(1个月)条件下，聚体轻微增加，在25℃(3个月)条件下，聚体明显增加。

长期稳定性实验数据可以看出本发明涉及的抗体在20mM组氨酸/盐酸组氨酸+135mM海藻糖+0.2g/L聚山梨酯80(pH6.0)的处方中低温保存效果较好，但常温2-8℃保藏效果不佳。因此可用作原液储藏制剂处方(-80℃)，但如需2～8℃低温保存或常温保存，需尝试冻干工艺，并验证冻干后的稳定性。

表10本发明涉及的抗体-80℃稳定性试验结果

注：NA为未测出。

表11本发明涉及的抗体4℃稳定性试验结果

注：NA为未测出。

表12本发明涉及的抗体25℃稳定性试验结果

注：NA为样品未检出。

实施例11：冻干制剂的制备

配制如表13所示浓度的冻干前溶液，并冻干成成品。

表13冻干前溶液组分

成分	浓度
		本发明涉及的抗体	5mg/ml
组氨酸	1.7178g/L
		盐酸组氨酸	1.8717g/L
海藻糖	51.345g/L
		聚山梨酯-80	0.2g/L

将纯化后的抗体用超滤膜包进行超滤置换浓缩，超滤至组氨酸-盐酸组氨酸缓冲液中，再与含一定比例的海藻糖、聚山梨酯-80，pH6.0组氨酸-盐酸组氨酸缓冲液混合，使得混合后各组分的浓度如表13所示。充分混匀后，分装至冻干用注射剂瓶中，按2mL/瓶分装，进行冷冻干燥。冷冻干燥程序如下：

(1)预冻阶段∶0℃保持60min；-45℃预冻保持2h；

(2)升华阶段∶设置真空度在10Pa，程序升温，升温至-10℃，保持1h；升温至-5℃，保持26h；升温至0℃，保持5h；升温至5℃，保持2h；

(3)解析干燥∶升温至25℃，10Pa压力下保持4h，5Pa压力下再保持2h；

(4)冻干结束，压塞出箱，再手动轧盖，4℃保存。

实施例12：成品冻干制剂稳定性实验

冷冻干燥(冻干)是指把药品溶液在低温下冻结，然后在真空条件下升华干燥，出去冰晶，待升华结束后再进行解析干燥，除去部分结合水的干燥方法。由于冻干药品呈多孔状、能长时间稳定贮存、并易重新复溶于水而恢复活性，因此冷冻干燥技术广泛应用于制备固体蛋白质类药物、口服速溶药物及药物包埋剂脂质体等药品。冻干制剂相比液体制剂能显著的提高蛋白质药物的稳定性。目前新上市的单克隆抗体药物也逐渐开始采用冻干制剂，如Xolair、KADCYLA等。

结果如图表14-18所示，本发明涉及的抗体在4℃(2个月)条件下保持稳定，聚体增加约0.9％；在25℃(2个月)条件下，聚体增加约0.9％；在40℃(1个月)条件下，聚体增加约0.9％；均在质量标准范围内(SEC主峰含量大于95％)。

综上所述，本发明涉及的抗体的冻干成品在20mM组氨酸/盐酸组氨酸+135mM海藻糖+0.2g/L聚山梨酯80(pH6.0)处方中较稳定，可作为最终剂型并为制剂工艺提供数据支持。

表14光破坏试验设计

注：1、日光光照强度为4500Lx±500Lx，紫外照度为250μW/cm2。

表15光破坏试验结果

主要探究冻干成品在4℃、25℃及40℃下的稳定性，观察样品复溶后纯度及外观变化，考察温度是否对成品稳定性的影响。

表16冻干成品4℃稳定性结果

表17冻干成品25℃稳定性结果

表18冻干成品40℃稳定性结果

序列表

<120> 一种稳定的抗 EGFR 抗体组合物

<160> 12

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 2

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Thr Pro Phe Thr

50 55 60

Ser Arg Leu Ser Ile Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe

65 70 75 80

Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Asn Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Leu Thr Tyr Tyr Asp Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asn

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp

355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

Lys

<210> 2

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr Gly Val His

1 5 10

<210> 3

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Thr Pro Phe Thr Ser

1 5 10 15

<210> 4

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

Ala Leu Thr Tyr Tyr Asp Tyr Glu Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 5

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Val Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Asn

20 25 30

Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 6

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Asn Ile His

1 5 10

<210> 7

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser

1 5

<210> 8

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

Gln Gln Asn Asn Asn Trp Pro Thr Thr

1 5

<210> 9

<211> 569

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe Pro

1 5 10 15

Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg

20 25 30

Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu

35 40 45

Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala

50 55 60

Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu

85 90 95

Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu

100 105 110

Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe

115 120 125

Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp

130 135 140

Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn

145 150 155 160

Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

165 170 175

Ser Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His Phe

180 185 190

Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser

195 200 205

Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu

210 215 220

Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln

225 230 235 240

Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln

245 250 255

Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly

260 265 270

Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe

275 280 285

Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala

290 295 300

Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe

305 310 315 320

Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg

325 330 335

Asn Gly Ser Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

340 345 350

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

355 360 365

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

370 375 380

Val Val Asp Val Ser His Glu Asn Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

385 390 395 400

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

405 410 415

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

420 425 430

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

435 440 445

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

450 455 460

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

465 470 475 480

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

485 490 495

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

500 505 510

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

515 520 525

Ala Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

530 535 540

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

545 550 555 560

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

565

<210> 10

<211> 1404

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

atgggctgga gctgcatcat cctgttcctg gtggccaccg ctacaggcgt gcactctcag 60

gtgcagctga agcagtccgg accaggactg gtgcagcctt cccagagcct gtctatcacc 120

tgtacagtgt ccggcttcag cctgaccaac tacggagtgc attgggtgag gcagtcccca 180

ggcaagggac tggagtggct gggcgtgatc tggagcggag gcaacacaga ctataatacc 240

ccttttacat ctcggctgtc catcaacaag gataattcca agagccaggt gttctttaag 300

atgaacagcc tgcagtctaa tgacaccgcc atctactatt gcgccagagc tctgacatac 360

tatgattacg agttcgctta ttggggacag ggcaccctgg tgacagtgtc cgccgctagc 420

accaagggac cttccgtgtt cccactggct ccctccagca agtctacctc cggaggaaca 480

gccgctctgg gatgtctggt gaaggactac ttcccagagc ccgtgaccgt gtcttggaac 540

tccggcgccc tgacctccgg agtgcacaca tttcctgctg tgctgcagtc ttccggcctg 600

tacagcctga gctctgtggt gaccgtgcca tccagctctc tgggcaccca gacatatatc 660

tgcaacgtga atcacaagcc tagcaataca aaggtggaca agaaggtgga gccaaagtct 720

tgtgataaga cccatacatg ccccccttgt cctgctccag agctgctggg aggaccatcc 780

gtgttcctgt ttccacccaa gcccaaggac accctgatga tctctcgcac cccagaggtg 840

acatgcgtgg tggtggacgt gtcccacgag aaccccgagg tgaagttcaa ttggtacgtg 900

gatggcgtgg aggtgcataa cgctaagacc aagccaaggg aggagcagta caattccacc 960

tatcgggtgg tgagcgtgct gacagtgctg caccaggatt ggctgaacgg caaggagtat 1020

aagtgcaagg tgagcaataa ggccctgccc gctcctatcg agaagaccat ctctaaggcc 1080

aagggccagc ctagagagcc acaggtgtac acactgcctc catctcgcaa ggagatgacc 1140

aagaaccagg tgtccctgac atgtctggtg aagggctttt atccctccga catcgctgtg 1200

gagtgggaga gcaatggcca gcctgagaac aattacaaga ccacaccccc tgtgctggac 1260

agcgatggct ctttcaagct gtatagcaag ctgaccgtgg ataagtctag gtggcagcag 1320

ggcaacgtgt ttagctgttc tgtgatgcat gaggctctgc acaatcatta cacacagaag 1380

tccctgagcc tgtctcccgg caag 1404

<210> 11

<211> 642

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

gatatcctgc tgacccagag ccctgtgatt ttgtctgtga gccctggcga gcgcgtatcc 60

tttagctgca gggcttctca gtccatcggg accaacattc actggtatca gcagcgcacc 120

aacgggtctc caagactcct gatcaagtac gcaagcgagt ccatatctgg cattccaagc 180

aggttttccg gtagcggaag cggtacagac ttcacattgt ccatcaactc cgtcgagagt 240

gaagacatcg ccgattacta ctgtcagcag aacaataact ggcccacaac ctttggagct 300

ggcaccaagt tggagctgaa aaggaccgtg gccgcaccta gcgttttcat cttccccccc 360

agcgacgagc agctgaagag cggaactgct agcgtcgtgt gtctccttaa caatttttac 420

cccagagagg ccaaagtcca gtggaaggtc gacaacgccc tgcagtccgg caacagccag 480

gaatccgtca ccgagcagga ctccaaagac tccacatata gcctgagctc aacacttacg 540

ctgagcaagg ctgattatga gaaacacaag gtctacgcat gcgaagtgac ccaccagggg 600

ctgtcttctc ccgtgaccaa gtcctttaat cggggtgagt gc 642

<210> 12

<211> 1757

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

atgcactcca gcgccctgct gtgctgtctg gtgctgctga ccggcgtgag ggcttctcca 60

ggacagggca cccagtctga gaactcctgc acacatttcc caggcaacct gcccaatatg 120

ctgagggacc tgcgggatgc cttttcccgg gtgaagacat tctttcagat gaaggaccag 180

ctggataatc tgctgctgaa ggagagcctg ctggaggact tcaagggcta cctgggctgt 240

caggctctgt ctgagatgat ccagttttat ctggaggaag tgatgcccca ggccgagaac 300

caggaccctg atatcaaggc tcacgtgaac agcctgggcg agaatctgaa gaccctgagg 360

ctgaggctga ggcggtgcca taggttcctg ccttgtgaga ataagagcaa ggccgtggag 420

caggtgaaga acgcttttaa taagctgcag gagaagggca tctacaaggc catgtctgag 480

ttcgacatct ttatcaacta catcgaggct tatatgacaa tgaagatccg gaattcttcc 540

ggcggcggcg gctctggagg aggaggatcc ggaggaggag gcagctctcc aggccagggc 600

acccagagcg agaactcttg cacacacttc cctggcaacc tgccaaatat gctgagagac 660

ctgcgcgatg ccttttctag agtgaagacc ttctttcaga tgaaagatca gctggataac 720

ctgctgctga aggagtccct gctggaggat ttcaagggtt acctgggttg tcaggctctg 780

agcgaaatga ttcagtttta tctggaggaa gtgatgccgc aggctgaaaa ccaggacccc 840

gacatcaagg cccacgtgaa ctctctgggt gaaaatctga agaccctgag actgcgcctg 900

agacgctgcc atcgcttcct gccctgcgaa aataagtcta aagctgtcga acaggtcaaa 960

aatgctttta ataagctgca agagaagggc atctataaag ctatgtccga atttgatatc 1020

tttatcaatt atatcgaggc ttatatgacc atgaagatca gaaatggctc cggcggcggc 1080

gataagaccc acacatgccc accttgtcca gctccagagc tgctgggagg accttccgtg 1140

ttcctgtttc cacccaagcc aaaggacacc ctgatgatct cccgcacccc agaggtgaca 1200

tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgagaac cccgaggtga agttcaattg gtacgtggat 1260

ggcgtggagg tgcataacgc taagacaaag cctagggagg agcagtacaa tagcacctat 1320

cgggtggtgt ctgtgctgac agtgctgcat caggattggc tgaacggcaa ggagtataag 1380

tgcaaggtgt ctaataaggc cctgcctgct ccaatcgaga agaccatctc caaggccaag 1440

ggccagccca gagagcctca ggtgtacaca ctgcctccaa gccgcgagga gatgaccaag 1500

aaccaggtgt ctctgacatg tctggtgaag ggcttctatc cctctgatat cgctgtggag 1560

tgggagtcca atggccagcc tgagaacaat tacaagacca caccccctgt gctggactcc 1620

gatggcagct tctttctgta ttccaagctg accgtggaca agagcaggtg gcagcagggc 1680

aacgtgtttt cctgtagcgt gatgcatgag gccctgcaca atcattacac acaggattct 1740

ctgtccctga gccctgg 1757

Claims

1.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含抗EGFR抗体或其抗原结合片段，其中所述抗EGFR抗体为可特异性结合EGFR的抗体；以及缓冲剂，所述缓冲剂选自醋酸盐、组氨酸盐缓冲剂，优选组氨酸盐缓冲剂，更优选的为组氨酸/盐酸组氨酸缓冲剂；所述缓冲剂的pH为5.5至6.5，优选为6.0。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述缓冲剂浓度为大约5mM至30mM，优选为大约5mM至20mM，最优选为大约20mM。

3.根据权利要求1至2任一项所述的药物组合物，其中所述特异性结合EGFR蛋白的抗体或其抗原结合片段浓度为大约1mg/ml至100mg/ml，优选为2mg/ml。

4.根据权利要求1至3任一项所述的药物组合物，其还包括糖，所述糖优选为海藻糖或蔗糖或甘露醇，最优选为海藻糖。

5.根据权利要求4所述的药物组合物，其中所述糖浓度为大约50mM至250mM，优选为大约50mM至150mM，最优选为135mM。

6.根据权利要求1至5任一项所述的药物组合物，其还包括表面活性剂，所述表面活性剂优选为聚山梨酯，更优选为聚山梨酯80。

7.根据权利要求6所述的药物组合物，其中表面活性剂的浓度为0.1mg/mL至0.4mg/mL，优选为0.2mg/mL。

8.一种药物组合物，其中包含：

(b)5mM至30mM的组氨酸/盐酸组氨酸缓冲剂，pH为约5.5至6.5，

(c)50mg/mL至200mg/mL的海藻糖，和

(d)0.1mg/mL至0.4mg/mL的聚山梨酯80。

9.一种药物组合物，其中包含：

(a)2mg/ml的特异性结合EGFR蛋白的抗体或其抗原结合片段，

(b)20mM的组氨酸/盐酸组氨酸缓冲剂，pH为6.0，

(c)135mg/mL的海藻糖，和

(d)0.2mg/mL的聚山梨酯80。

10.根据权利要求1至9任一项所述的药物组合物，其中所述抗EGFR抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4的氨基酸序列所示的重链HCDR1、HCDR2和HCDR3；和包含如SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8的氨基酸序列所示的轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3；和/或包含如SEQ ID NO:9的氨基酸序列所示的重链。