RU2778572C1 - Фармацевтическая композиция на основе антител к cd40 и ее применение - Google Patents
Фармацевтическая композиция на основе антител к cd40 и ее применение Download PDFInfo
- Publication number
- RU2778572C1 RU2778572C1 RU2021118876A RU2021118876A RU2778572C1 RU 2778572 C1 RU2778572 C1 RU 2778572C1 RU 2021118876 A RU2021118876 A RU 2021118876A RU 2021118876 A RU2021118876 A RU 2021118876A RU 2778572 C1 RU2778572 C1 RU 2778572C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibody
- pharmaceutical composition
- ser
- seq
- buffer
- Prior art date
Links
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 title claims abstract description 215
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 title claims abstract description 215
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 67
- 101710040446 CD40 Proteins 0.000 claims abstract description 61
- 102100013137 CD40 Human genes 0.000 claims abstract description 61
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 46
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 46
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 46
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 42
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 20
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 10
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M buffer Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 73
- 229940068968 Polysorbate 80 Drugs 0.000 claims description 71
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 claims description 71
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 71
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 71
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 49
- CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N Sucrose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)[C@@]1(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N 0.000 claims description 49
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 49
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 48
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 40
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 16
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 claims description 16
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 claims description 15
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 15
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 11
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 11
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 claims description 9
- BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M sodium acetic acid acetate Chemical group [Na+].CC(O)=O.CC([O-])=O BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 8
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 206010025650 Malignant melanoma Diseases 0.000 claims description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 4
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 claims description 4
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 4
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000005017 Glioblastoma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010024324 Leukaemias Diseases 0.000 claims description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 3
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 3
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010025310 Other lymphomas Diseases 0.000 claims description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000008443 Pancreatic Carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000011231 colorectal cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000010175 gallbladder cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000009251 multiple myeloma Diseases 0.000 claims description 3
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000009410 rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 claims description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 3
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 210000002784 Stomach Anatomy 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 28
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 24
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 99
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 52
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 52
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 52
- QZNNVYOVQUKYSC-JEDNCBNOSA-N (2S)-2-amino-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 QZNNVYOVQUKYSC-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 34
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 28
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 21
- OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 20
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 20
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 20
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 20
- 108010078144 glutaminyl-glycine Proteins 0.000 description 19
- PNMUAGGSDZXTHX-BYPYZUCNSA-N Gly-Gln Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O PNMUAGGSDZXTHX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 17
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 17
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 16
- NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 16
- XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 16
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 16
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 15
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 15
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 14
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 14
- WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N 0.000 description 14
- YQAIUOWPSUOINN-IUCAKERBSA-N Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN YQAIUOWPSUOINN-IUCAKERBSA-N 0.000 description 13
- ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 13
- LDEBVRIURYMKQS-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CO LDEBVRIURYMKQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 108091006028 chimera Proteins 0.000 description 13
- 108010044655 lysylproline Proteins 0.000 description 13
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- AIXUQKMMBQJZCU-IUCAKERBSA-N Lys-Pro Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O AIXUQKMMBQJZCU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 12
- ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N 0.000 description 12
- VEYJKJORLPYVLO-RYUDHWBXSA-N Val-Tyr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 VEYJKJORLPYVLO-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 12
- GVRKWABULJAONN-UHFFFAOYSA-N Valyl-Threonine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NC(C(C)O)C(O)=O GVRKWABULJAONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- NTQDELBZOMWXRS-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O NTQDELBZOMWXRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- VYZAGTDAHUIRQA-WHFBIAKZSA-N L-alanyl-L-glutamic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O VYZAGTDAHUIRQA-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 11
- BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)O BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 11
- CKHWEVXPLJBEOZ-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Valine Chemical compound CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)C(C)O CKHWEVXPLJBEOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 11
- -1 silitol Chemical compound 0.000 description 11
- LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N Leu-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 10
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 10
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 10
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 10
- QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N L-lysyl-L-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 9
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 9
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 9
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 9
- 239000008362 succinate buffer Substances 0.000 description 9
- IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N Ala-Ser Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 8
- JEFZIKRIDLHOIF-BYPYZUCNSA-N Gln-Gly Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JEFZIKRIDLHOIF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 8
- 210000004408 Hybridomas Anatomy 0.000 description 8
- XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 8
- JYOAXOMPIXKMKK-UHFFFAOYSA-N Leucyl-Glutamine Chemical compound CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCC(N)=O JYOAXOMPIXKMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- KAKJTZWHIUWTTD-VQVTYTSYSA-N Met-Thr Chemical compound CSCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C([O-])=O KAKJTZWHIUWTTD-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 8
- RZEQTVHJZCIUBT-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Arginine Chemical compound OCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N RZEQTVHJZCIUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N Thr-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 8
- WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N Thr-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N 0.000 description 8
- UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N Val-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 8
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N p-acetaminophenol Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- YBTCBQBIJKGSJP-BQBZGAKWSA-N Glu-Pro Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O YBTCBQBIJKGSJP-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 7
- ARPVSMCNIDAQBO-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Leucine Chemical compound CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O ARPVSMCNIDAQBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- MRVYVEQPNDSWLH-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Valine Chemical compound CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O MRVYVEQPNDSWLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N Ile-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 7
- RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N L-prolylglycine Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 7
- QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N Lys-Phe Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N 0.000 description 7
- YSZNURNVYFUEHC-BQBZGAKWSA-N Lys-Ser Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YSZNURNVYFUEHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 7
- WITCOKQIPFWQQD-FSPLSTOPSA-N Val-Asn Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O WITCOKQIPFWQQD-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 7
- JKHXYJKMNSSFFL-IUCAKERBSA-N Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN JKHXYJKMNSSFFL-IUCAKERBSA-N 0.000 description 7
- GIAZPLMMQOERPN-YUMQZZPRSA-N Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O GIAZPLMMQOERPN-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 7
- 108010086434 alanyl-seryl-glycine Proteins 0.000 description 7
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 7
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 7
- STKYPAFSDFAEPH-LURJTMIESA-N gly-val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN STKYPAFSDFAEPH-LURJTMIESA-N 0.000 description 7
- 108010010147 glycylglutamine Proteins 0.000 description 7
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 7
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 7
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 7
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 7
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 7
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 7
- UKKNTTCNGZLJEX-UHFFFAOYSA-N γ-glutamyl-Serine Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CO)C(O)=O UKKNTTCNGZLJEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- FAQVCWVVIYYWRR-WHFBIAKZSA-N (2S)-2-[[(2S)-2,5-diamino-5-oxopentanoyl]amino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O FAQVCWVVIYYWRR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 6
- SIFXMYAHXJGAFC-WDSKDSINSA-N Arg-Asp Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O SIFXMYAHXJGAFC-WDSKDSINSA-N 0.000 description 6
- PSZNHSNIGMJYOZ-WDSKDSINSA-N Asp-Arg Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PSZNHSNIGMJYOZ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 6
- YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N Asp-Phe Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 6
- NPDLYUOYAGBHFB-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Arginine Chemical compound NC(=O)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N NPDLYUOYAGBHFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VBKIFHUVGLOJKT-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O VBKIFHUVGLOJKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 6
- RGTVXXNMOGHRAY-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Arginine Chemical compound SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N RGTVXXNMOGHRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N 0.000 description 6
- DRCKHKZYDLJYFQ-UHFFFAOYSA-N Isoleucyl-Threonine Chemical compound CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(C)O)C(O)=O DRCKHKZYDLJYFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 6
- FMIIKPHLJKUXGE-GUBZILKMSA-N Lys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN FMIIKPHLJKUXGE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 6
- 210000001616 Monocytes Anatomy 0.000 description 6
- SHAQGFGGJSLLHE-BQBZGAKWSA-N Pro-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 SHAQGFGGJSLLHE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 6
- ZKQOUHVVXABNDG-IUCAKERBSA-N Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 ZKQOUHVVXABNDG-IUCAKERBSA-N 0.000 description 6
- FFOKMZOAVHEWET-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Cysteine Chemical compound OCC(N)C(=O)NC(CS)C(O)=O FFOKMZOAVHEWET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YBRHKUNWEYBZGT-UHFFFAOYSA-N Tryptophyl-Threonine Chemical compound C1=CC=C2C(CC(N)C(=O)NC(C(O)C)C(O)=O)=CNC2=C1 YBRHKUNWEYBZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XXDVDTMEVBYRPK-XPUUQOCRSA-N Val-Gln Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O XXDVDTMEVBYRPK-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 6
- 108010081404 acein-2 Proteins 0.000 description 6
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 108010085325 histidylproline Proteins 0.000 description 6
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 6
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 6
- 108010009962 valyltyrosine Proteins 0.000 description 6
- SNFUTDLOCQQRQD-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-amino-4-carboxybutanoyl)amino]-3-methylpentanoic acid Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SNFUTDLOCQQRQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NAXPHWZXEXNDIW-JTQLQIEISA-N 2-[[2-[[(2S)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]acetyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NAXPHWZXEXNDIW-JTQLQIEISA-N 0.000 description 5
- PMGDADKJMCOXHX-BQBZGAKWSA-N Arg-Gln Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O PMGDADKJMCOXHX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 5
- IIFDPDVJAHQFSR-WHFBIAKZSA-N Asn-Glu Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O IIFDPDVJAHQFSR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 5
- BSWHERGFUNMWGS-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O BSWHERGFUNMWGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Phenylalanine Chemical compound SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- LLEUXCDZPQOJMY-AAEUAGOBSA-N Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)N)C(O)=O)=CNC2=C1 LLEUXCDZPQOJMY-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 5
- SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N Gly-Asp Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- QNBYCZTZNOVDMI-HGNGGELXSA-N Ile-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 QNBYCZTZNOVDMI-HGNGGELXSA-N 0.000 description 5
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 5
- SENJXOPIZNYLHU-IUCAKERBSA-N Leu-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 5
- MYTOTTSMVMWVJN-STQMWFEESA-N Lys-Tyr Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 MYTOTTSMVMWVJN-STQMWFEESA-N 0.000 description 5
- ADHNYKZHPOEULM-BQBZGAKWSA-N Met-Glu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O ADHNYKZHPOEULM-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 5
- LAFKUZYWNCHOHT-WHFBIAKZSA-N Ser-Glu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O LAFKUZYWNCHOHT-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 5
- BXLYSRPHVMCOPS-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CO BXLYSRPHVMCOPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N Trp-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 5
- LWFWZRANSFAJDR-JSGCOSHPSA-N Trp-Val Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 LWFWZRANSFAJDR-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 5
- AOLHUMAVONBBEZ-STQMWFEESA-N Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AOLHUMAVONBBEZ-STQMWFEESA-N 0.000 description 5
- BMPPMAOOKQJYIP-WMZOPIPTSA-N Tyr-Trp Chemical compound C([C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C([O-])=O)C1=CC=C(O)C=C1 BMPPMAOOKQJYIP-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 5
- 108010069020 alanyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 description 5
- 108010008355 arginyl-glutamine Proteins 0.000 description 5
- VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N gly ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 108010000761 leucylarginine Proteins 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 108010056582 methionylglutamic acid Proteins 0.000 description 5
- 108010070409 phenylalanyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 5
- IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N val-gly Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NCC(O)=O IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- DXJZITDUDUPINW-UHFFFAOYSA-N γ-glutamyl-Asparagine Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O DXJZITDUDUPINW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102100003268 CD14 Human genes 0.000 description 4
- 101700027514 CD14 Proteins 0.000 description 4
- 102000015434 Humanized Monoclonal Antibodies Human genes 0.000 description 4
- 108010064750 Humanized Monoclonal Antibodies Proteins 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-YOLKTULGSA-N Maltose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@H]1CO)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 GUBGYTABKSRVRQ-YOLKTULGSA-N 0.000 description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 4
- 229940068977 Polysorbate 20 Drugs 0.000 description 4
- 210000001744 T-Lymphocytes Anatomy 0.000 description 4
- QJKMCQRFHJRIPU-XDTLVQLUSA-N Tyr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 QJKMCQRFHJRIPU-XDTLVQLUSA-N 0.000 description 4
- MFEVVAXTBZELLL-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 MFEVVAXTBZELLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- STTYIMSDIYISRG-WDSKDSINSA-N Val-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O STTYIMSDIYISRG-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 230000000670 limiting Effects 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 102000005614 monoclonal antibodies Human genes 0.000 description 4
- 108010045030 monoclonal antibodies Proteins 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- 108010031719 prolyl-serine Proteins 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 4
- OAMLVOVXNKILLQ-BQBZGAKWSA-N Asp-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O OAMLVOVXNKILLQ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- CPMKYMGGYUFOHS-FSPLSTOPSA-N Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CPMKYMGGYUFOHS-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 3
- 210000003719 B-Lymphocytes Anatomy 0.000 description 3
- 102100003729 CD40LG Human genes 0.000 description 3
- 210000004443 Dendritic Cells Anatomy 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N HCl Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000018358 Immunoglobulins Human genes 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulins Proteins 0.000 description 3
- HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N L-arginyl-L-glutamic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N 0.000 description 3
- ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N Lys-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 3
- NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N Phe-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N 0.000 description 3
- AFWBWPCXSWUCLB-WDSKDSINSA-N Pro-Ser Chemical compound OC[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 AFWBWPCXSWUCLB-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- YKRQRPFODDJQTC-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Lysine Chemical compound CC(O)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCCN YKRQRPFODDJQTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N Trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 3
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000003298 Tumor Necrosis Factor Receptors Human genes 0.000 description 3
- ONWMQORSVZYVNH-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Asparagine Chemical compound NC(=O)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 ONWMQORSVZYVNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SILCDLWESNHZKB-UHFFFAOYSA-L [Na+].[Na+].OC(=O)CCC([O-])=O.OC(=O)CCC([O-])=O Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CCC([O-])=O.OC(=O)CCC([O-])=O SILCDLWESNHZKB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 230000000240 adjuvant Effects 0.000 description 3
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 3
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 230000002998 immunogenetic Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 108010078274 isoleucylvaline Proteins 0.000 description 3
- 125000005645 linoleyl group Chemical group 0.000 description 3
- 239000002609 media Substances 0.000 description 3
- 230000001404 mediated Effects 0.000 description 3
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 108010070643 prolylglutamic acid Proteins 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 231100000486 side effect Toxicity 0.000 description 3
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 3
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 3
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cells Anatomy 0.000 description 3
- SITLTJHOQZFJGG-XPUUQOCRSA-N α-Glu-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 3
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N (+)-methoprene Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZJPGOXWRFNKIQL-JYJNAYRXSA-N (2S)-1-[(2S)-1-[(2S)-2-amino-3-phenylpropanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 ZJPGOXWRFNKIQL-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- XAEWTDMGFGHWFK-IMJSIDKUSA-N Ala-Asp Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O XAEWTDMGFGHWFK-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- RDIKFPRVLJLMER-BQBZGAKWSA-N Ala-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N RDIKFPRVLJLMER-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N Ala-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- FYRVDDJMNISIKJ-UWVGGRQHSA-N Asn-Tyr Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FYRVDDJMNISIKJ-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N Asp-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N Asp-Ser Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- ZARXTZFGQZBYFO-JQWIXIFHSA-N Asp-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)N)C(O)=O)=CNC2=C1 ZARXTZFGQZBYFO-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 2
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 2
- 229920002676 Complementary DNA Polymers 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 230000035693 Fab Effects 0.000 description 2
- BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N Fructose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)CO BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N 0.000 description 2
- 206010017758 Gastric cancer Diseases 0.000 description 2
- IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- XBGGUPMXALFZOT-VIFPVBQESA-N Gly-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- VHOLZZKNEBBHTH-YUMQZZPRSA-N His-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CNC=N1 VHOLZZKNEBBHTH-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- 210000000987 Immune System Anatomy 0.000 description 2
- 210000002540 Macrophages Anatomy 0.000 description 2
- VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N Maltitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N 0.000 description 2
- WEQJQNWXCSUVMA-RYUDHWBXSA-N Phe-Pro Chemical compound C([C@H]([NH3+])C(=O)N1[C@@H](CCC1)C([O-])=O)C1=CC=CC=C1 WEQJQNWXCSUVMA-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 2
- 239000007759 RPMI Media 1640 Substances 0.000 description 2
- LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N Ser-Asn Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- VBKBDLMWICBSCY-IMJSIDKUSA-N Ser-Asp Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O VBKBDLMWICBSCY-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- UJTZHGHXJKIAOS-WHFBIAKZSA-N Ser-Gln Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O UJTZHGHXJKIAOS-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- PPQRSMGDOHLTBE-UWVGGRQHSA-N Ser-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PPQRSMGDOHLTBE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 2
- 229940074404 Sodium succinate Drugs 0.000 description 2
- 210000000952 Spleen Anatomy 0.000 description 2
- WXVIGTAUZBUDPZ-DTLFHODZSA-N Thr-His Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 WXVIGTAUZBUDPZ-DTLFHODZSA-N 0.000 description 2
- CUTPSEKWUPZFLV-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Cysteine Chemical compound CC(O)C(N)C(=O)NC(CS)C(O)=O CUTPSEKWUPZFLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZSXJENBJGRHKIG-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Serine Chemical compound OCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 ZSXJENBJGRHKIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010041407 alanylaspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminum Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor Effects 0.000 description 2
- 229960000070 antineoplastic Monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 2
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 2
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L disodium butanedioate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CCC([O-])=O ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N gly pro Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 230000003899 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 2
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 230000002147 killing Effects 0.000 description 2
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 2
- 229960000060 monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 2
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 210000000056 organs Anatomy 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- QLROSWPKSBORFJ-BQBZGAKWSA-N pro glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 QLROSWPKSBORFJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- XPFJYKARVSSRHE-UHFFFAOYSA-K trisodium;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O XPFJYKARVSSRHE-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 2
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N β-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- CXRCVCURMBFFOL-FXQIFTODSA-N (2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-azaniumylpropanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carboxylate Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O CXRCVCURMBFFOL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- LQJAALCCPOTJGB-YUMQZZPRSA-N (2S)-1-[(2S)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O LQJAALCCPOTJGB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- KYPMKDGKAYQCHO-RYUDHWBXSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 KYPMKDGKAYQCHO-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- BVZABQIRMYTKCF-JSGCOSHPSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-azaniumyl-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoate Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)=CNC2=C1 BVZABQIRMYTKCF-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- HABAJMUFCIDFOT-JEDNCBNOSA-M (2S)-2-amino-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoic acid;acetate Chemical compound CC([O-])=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HABAJMUFCIDFOT-JEDNCBNOSA-M 0.000 description 1
- IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N (2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- QXRNAOYBCYVZCD-BQBZGAKWSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-aminopropanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN QXRNAOYBCYVZCD-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- PVMPDMIKUVNOBD-CIUDSAMLSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-4-[[(1S)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PVMPDMIKUVNOBD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 229920000160 (ribonucleotides)n+m Polymers 0.000 description 1
- KTGFOCFYOZQVRJ-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-amino-3-methylpentanoyl)amino]pentanedioic acid Chemical compound CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCC(O)=O KTGFOCFYOZQVRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RFCVXVPWSPOMFJ-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-azaniumyl-3-phenylpropanoyl)amino]-4-methylpentanoate Chemical compound CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 RFCVXVPWSPOMFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N 2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-azaniumyl-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetate Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- TYIOVYZMKITKRO-UHFFFAOYSA-N 2-[hexadecyl(dimethyl)azaniumyl]acetate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC([O-])=O TYIOVYZMKITKRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNQVCAOGQHOSEN-UHFFFAOYSA-N 2-[methyl(octadecyl)amino]acetic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN(C)CC(O)=O SNQVCAOGQHOSEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DIROHOMJLWMERM-UHFFFAOYSA-N 3-[dimethyl(octadecyl)azaniumyl]propane-1-sulfonate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O DIROHOMJLWMERM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MGHKSHCBDXNTHX-UHFFFAOYSA-N 4-amino-5-[(4-amino-1-carboxy-4-oxobutyl)amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O MGHKSHCBDXNTHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PVXPPJIGRGXGCY-TZLCEDOOSA-N 6-O-α-D-glucopyranosyl-D-fructofuranose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)C(O)(CO)O1 PVXPPJIGRGXGCY-TZLCEDOOSA-N 0.000 description 1
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 241000270728 Alligator Species 0.000 description 1
- 210000000612 Antigen-Presenting Cells Anatomy 0.000 description 1
- 206010059512 Apoptosis Diseases 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N Arabitol Chemical compound OC[C@@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- IJYZHIOOBGIINM-WDSKDSINSA-N Arg-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N IJYZHIOOBGIINM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- XNSKSTRGQIPTSE-UHFFFAOYSA-N Arginyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCCNC(N)=N XNSKSTRGQIPTSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N Asn-Gly Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N Asn-Ser Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- GSMPSRPMQQDRIB-WHFBIAKZSA-N Asp-Gln Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O GSMPSRPMQQDRIB-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- CKAJHWFHHFSCDT-WHFBIAKZSA-N Asp-Glu Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O CKAJHWFHHFSCDT-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- SJUXYGVRSGTPMC-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Alanine Chemical compound OC(=O)C(C)NC(=O)C(N)CC(N)=O SJUXYGVRSGTPMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MQLZLIYPFDIDMZ-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O MQLZLIYPFDIDMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OMSMPWHEGLNQOD-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Phenylalanine Chemical compound NC(=O)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OMSMPWHEGLNQOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGGVDKVXLBOLNS-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Tryptophan Chemical compound C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(CC(N)=O)N)C(O)=O)=CNC2=C1 RGGVDKVXLBOLNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGRHZPNRCLAHQA-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Asparagine Chemical compound OC(=O)CC(N)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O VGRHZPNRCLAHQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N Betaine Natural products C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 1
- HHNJQTAVFGQHBP-UHFFFAOYSA-L C(C)(=O)O.C(C)(=O)[O-].[Mg+2].C(C)(=O)[O-] Chemical compound C(C)(=O)O.C(C)(=O)[O-].[Mg+2].C(C)(=O)[O-] HHNJQTAVFGQHBP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- BMCZJPYYEFQOCO-UHFFFAOYSA-H C(CC(O)(C(=O)[O-])CC(=O)[O-])(=O)[O-].[Mg+2].C(CC(O)(C(=O)O)CC(=O)O)(=O)O.C(CC(O)(C(=O)[O-])CC(=O)[O-])(=O)[O-].[Mg+2].[Mg+2] Chemical compound C(CC(O)(C(=O)[O-])CC(=O)[O-])(=O)[O-].[Mg+2].C(CC(O)(C(=O)O)CC(=O)O)(=O)O.C(CC(O)(C(=O)[O-])CC(=O)[O-])(=O)[O-].[Mg+2].[Mg+2] BMCZJPYYEFQOCO-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 108010063916 CD40 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- YXQDRIRSAHTJKM-IMJSIDKUSA-N Cys-Ser Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YXQDRIRSAHTJKM-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- AYKQJQVWUYEZNU-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Asparagine Chemical compound SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC(N)=O AYKQJQVWUYEZNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NXTYATMDWQYLGJ-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Leucine Chemical compound CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CS NXTYATMDWQYLGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WXOFKRKAHJQKLT-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Lysine Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CS WXOFKRKAHJQKLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OOULJWDSSVOMHX-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Methionine Chemical compound CSCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CS OOULJWDSSVOMHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010052015 Cytokine release syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N D-Mannitol Natural products OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-QWWZWVQMSA-N D-Threitol Natural products OC[C@@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 108010092799 EC 2.7.7.49 Proteins 0.000 description 1
- 101710006782 EIF4G2 Proteins 0.000 description 1
- 102000033147 ERVK-25 Human genes 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N Erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 229940009714 Erythritol Drugs 0.000 description 1
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- LOJYQMFIIJVETK-WDSKDSINSA-N Gln-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O LOJYQMFIIJVETK-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- OWOFCNWTMWOOJJ-WDSKDSINSA-N Gln-Glu Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OWOFCNWTMWOOJJ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- BBBXWRGITSUJPB-YUMQZZPRSA-N Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O BBBXWRGITSUJPB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- YSWHPLCDIMUKFE-QWRGUYRKSA-N Glu-Tyr Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 YSWHPLCDIMUKFE-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- SSHIXEILTLPAQT-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Aspartate Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CC(O)=O)C(O)=O SSHIXEILTLPAQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CLSDNFWKGFJIBZ-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Lysine Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O CLSDNFWKGFJIBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HHSJMSCOLJVTCX-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O HHSJMSCOLJVTCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N Gly-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- IEFJWDNGDZAYNZ-BYPYZUCNSA-N Gly-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O IEFJWDNGDZAYNZ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- AJHCSUXXECOXOY-NSHDSACASA-N Gly-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 AJHCSUXXECOXOY-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- CZVQSYNVUHAILZ-UWVGGRQHSA-N His-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 CZVQSYNVUHAILZ-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- LNCFUHAPNTYMJB-IUCAKERBSA-N His-Pro Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CN=CN1 LNCFUHAPNTYMJB-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- FBTYOQIYBULKEH-ZFWWWQNUSA-N His-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 FBTYOQIYBULKEH-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- HTOOKGDPMXSJSY-STQMWFEESA-N His-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 HTOOKGDPMXSJSY-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- WSDOHRLQDGAOGU-UHFFFAOYSA-N Histidinyl-Asparagine Chemical compound NC(=O)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 WSDOHRLQDGAOGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CTCFZNBRZBNKAX-UHFFFAOYSA-N Histidinyl-Glutamine Chemical compound NC(=O)CCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 CTCFZNBRZBNKAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WRPDZHJNLYNFFT-UHFFFAOYSA-N Histidinyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 WRPDZHJNLYNFFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100008989 IGHV1-2 Human genes 0.000 description 1
- 101710003461 IGHV1-2 Proteins 0.000 description 1
- 229940072221 IMMUNOGLOBULINS Drugs 0.000 description 1
- HZYHBDVRCBDJJV-HAFWLYHUSA-N Ile-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O HZYHBDVRCBDJJV-HAFWLYHUSA-N 0.000 description 1
- 108090001095 Immunoglobulin G Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- JXNRXNCCROJZFB-RYUDHWBXSA-N L-tyrosyl-L-arginine Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 JXNRXNCCROJZFB-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-UUNJERMWSA-N Lactose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)O[C@@H]1CO)[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1 GUBGYTABKSRVRQ-UUNJERMWSA-N 0.000 description 1
- JCQLYHFGKNRPGE-FCVZTGTOSA-N Lactulose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 JCQLYHFGKNRPGE-FCVZTGTOSA-N 0.000 description 1
- MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- VTJUNIYRYIAIHF-IUCAKERBSA-N Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O VTJUNIYRYIAIHF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 210000004698 Lymphocytes Anatomy 0.000 description 1
- CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N Lys-Asp Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- OAPNERBWQWUPTI-YUMQZZPRSA-N Lys-Gln Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O OAPNERBWQWUPTI-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- XBZOQGHZGQLEQO-IUCAKERBSA-N Lys-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN XBZOQGHZGQLEQO-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- JPNRPAJITHRXRH-UHFFFAOYSA-N Lysyl-Asparagine Chemical compound NCCCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC(N)=O JPNRPAJITHRXRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IGRMTQMIDNDFAA-UHFFFAOYSA-N Lysyl-Histidine Chemical compound NCCCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CN=CN1 IGRMTQMIDNDFAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012515 MabSelect SuRe Substances 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-XIXRPRMCSA-N Mesotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-XIXRPRMCSA-N 0.000 description 1
- MUMXFARPYQTTSL-BQBZGAKWSA-N Met-Gln Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O MUMXFARPYQTTSL-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- OGGRSJFVXREKOR-CIUDSAMLSA-N Met-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCSC OGGRSJFVXREKOR-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M Monopotassium phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108090000143 Mouse Proteins Proteins 0.000 description 1
- NZXVYLJKFYSEPO-UHFFFAOYSA-N N-[3-(dimethylamino)propyl]-16-methylheptadecanamide Chemical compound CC(C)CCCCCCCCCCCCCCC(=O)NCCCN(C)C NZXVYLJKFYSEPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 101700030155 NAA15 Proteins 0.000 description 1
- 101700031697 NAT1 Proteins 0.000 description 1
- 229920001850 Nucleic acid sequence Polymers 0.000 description 1
- 101700077016 PCP1 Proteins 0.000 description 1
- 101710027536 PRCP Proteins 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- JWBLQDDHSDGEGR-DRZSPHRISA-N Phe-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 JWBLQDDHSDGEGR-DRZSPHRISA-N 0.000 description 1
- KLAONOISLHWJEE-UHFFFAOYSA-N Phenylalanyl-Glutamine Chemical compound NC(=O)CCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 KLAONOISLHWJEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000502 Poloxamer Drugs 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920001451 Polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229950008882 Polysorbate Drugs 0.000 description 1
- FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- JQOHKCDMINQZRV-WDSKDSINSA-N Pro-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 JQOHKCDMINQZRV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- RVQDZELMXZRSSI-IUCAKERBSA-N Pro-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 RVQDZELMXZRSSI-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- RWCOTTLHDJWHRS-YUMQZZPRSA-N Pro-Pro Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 RWCOTTLHDJWHRS-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N Raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- 101710016991 SLC38A6 Proteins 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N Ser-Pro Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- SBMNPABNWKXNBJ-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Lysine Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CO SBMNPABNWKXNBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010070144 Single-Chain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 102000005632 Single-Chain Antibodies Human genes 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UQZIYBXSHAGNOE-USOSMYMVSA-N Stachyose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO[C@@H]2[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O2)O1 UQZIYBXSHAGNOE-USOSMYMVSA-N 0.000 description 1
- UQZIYBXSHAGNOE-XNSRJBNMSA-N Stachyose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO[C@@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O3)O)O2)O)O1 UQZIYBXSHAGNOE-XNSRJBNMSA-N 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000400 T-Lymphocytes, Cytotoxic Anatomy 0.000 description 1
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N Taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BECPPKYKPSRKCP-ZDLURKLDSA-N Thr-Glu Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O BECPPKYKPSRKCP-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- UQTNIFUCMBFWEJ-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Asparagine Chemical compound CC(O)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC(N)=O UQTNIFUCMBFWEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPKOPBFLPLFWAD-UHFFFAOYSA-N Trinitrotoluene Chemical compound CC1=CC=C([N+]([O-])=O)C([N+]([O-])=O)=C1[N+]([O-])=O FPKOPBFLPLFWAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PWIQCLSQVQBOQV-AAEUAGOBSA-N Trp-Glu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 PWIQCLSQVQBOQV-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 1
- DZHDVYLBNKMLMB-ZFWWWQNUSA-N Trp-Lys Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 DZHDVYLBNKMLMB-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- GRQCSEWEPIHLBI-UHFFFAOYSA-N Tryptophyl-Asparagine Chemical compound C1=CC=C2C(CC(N)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 GRQCSEWEPIHLBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NZCPCJCJZHKFGZ-UHFFFAOYSA-N Tryptophyl-Glutamine Chemical compound C1=CC=C2C(CC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 NZCPCJCJZHKFGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PDSLRCZINIDLMU-QWRGUYRKSA-N Tyr-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 PDSLRCZINIDLMU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- AUEJLPRZGVVDNU-STQMWFEESA-N Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AUEJLPRZGVVDNU-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- OYOQKMOWUDVWCR-RYUDHWBXSA-N Tyr-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OYOQKMOWUDVWCR-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- OBTCMSPFOITUIJ-FSPLSTOPSA-N Val-Asp Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O OBTCMSPFOITUIJ-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- BNQVUHQWZGTIBX-IUCAKERBSA-N Val-His Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CN=CN1 BNQVUHQWZGTIBX-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- WPSXZFTVLIAPCN-UHFFFAOYSA-N Valyl-Cysteine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NC(CS)C(O)=O WPSXZFTVLIAPCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001793 Wilcoxon signed-rank test Methods 0.000 description 1
- URRBLVUOXIGNQR-HXUWFJFHSA-N [(1R)-1-phenylethyl] N-(2-aminoethyl)-N-[(3-methoxy-4-phenylmethoxyphenyl)methyl]carbamate Chemical compound C1([C@@H](C)OC(=O)N(CCN)CC=2C=C(C(=CC=2)OCC=2C=CC=CC=2)OC)=CC=CC=C1 URRBLVUOXIGNQR-HXUWFJFHSA-N 0.000 description 1
- SPRBJFWIUVWXBT-UHFFFAOYSA-K [K+].[K+].[K+].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O Chemical compound [K+].[K+].[K+].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O SPRBJFWIUVWXBT-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K [O-]P([O-])([O-])=O Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 108010044940 alanylglutamine Proteins 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 1
- 108010009111 arginyl-glycyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 1
- 230000000903 blocking Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000004159 blood analysis Methods 0.000 description 1
- 239000005388 borosilicate glass Substances 0.000 description 1
- 230000001488 breeding Effects 0.000 description 1
- DGPUYHMCOANORE-UHFFFAOYSA-L calcium;acetic acid;diacetate Chemical compound [Ca+2].CC(O)=O.CC([O-])=O.CC([O-])=O DGPUYHMCOANORE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- PBUBJNYXWIDFMU-UHFFFAOYSA-L calcium;butanedioate Chemical compound [Ca+2].[O-]C(=O)CCC([O-])=O PBUBJNYXWIDFMU-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000000533 capillary isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000000546 chi-square test Methods 0.000 description 1
- 238000007374 clinical diagnostic method Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive Effects 0.000 description 1
- 230000023298 conjugation with cellular fusion Effects 0.000 description 1
- 108010060199 cysteinylproline Proteins 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004059 degradation Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000037030 denaturation temperature Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 description 1
- 230000001419 dependent Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 210000003162 effector T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000534 elicitor Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 230000001586 eradicative Effects 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Substances OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N fumaric acid Chemical compound OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 108010057083 glutamyl-aspartyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 108010013768 glutamyl-aspartyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Polymers 0.000 description 1
- 108010000434 glycyl-alanyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 108010050475 glycyl-leucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- 239000007999 glycylglycine buffer Substances 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010084389 glycyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 239000001963 growth media Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 108010031614 immunorphin Proteins 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 108010027338 isoleucylcysteine Proteins 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 108010053037 kyotorphin Proteins 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000832 lactitol Substances 0.000 description 1
- 235000010448 lactitol Nutrition 0.000 description 1
- 229960003451 lactitol Drugs 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229960000511 lactulose Drugs 0.000 description 1
- 108010044311 leucyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010073472 leucyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010091871 leucylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 108010057952 lysyl-phenylalanyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 239000000845 maltitol Substances 0.000 description 1
- 235000010449 maltitol Nutrition 0.000 description 1
- 229940035436 maltitol Drugs 0.000 description 1
- JCQLYHFGKNRPGE-HFZVAGMNSA-N maltulose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JCQLYHFGKNRPGE-HFZVAGMNSA-N 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cells Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000000816 matrix-assisted laser desorption--ionisation Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000001264 neutralization Effects 0.000 description 1
- 150000002840 non-reducing disaccharides Chemical group 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 125000001117 oleyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000011017 operating method Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic Effects 0.000 description 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-L oxalate Chemical compound [O-]C(=O)C([O-])=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutic aid Substances 0.000 description 1
- 230000000275 pharmacokinetic Effects 0.000 description 1
- 108010024654 phenylalanyl-prolyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 108010073101 phenylalanylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010073025 phenylalanylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- FHUOTRMCFQTSOA-UHFFFAOYSA-M potassium;acetic acid;acetate Chemical compound [K+].CC(O)=O.CC([O-])=O FHUOTRMCFQTSOA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 229940002612 prodrugs Drugs 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 108010077112 prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 1
- 230000000644 propagated Effects 0.000 description 1
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N propylene glycol Substances CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000002829 reduced Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000004826 seaming Methods 0.000 description 1
- 108010048818 seryl-histidine Proteins 0.000 description 1
- 108010069117 seryl-lysyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010048397 seryl-lysyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008354 sodium chloride injection Substances 0.000 description 1
- DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M sodium;dodecane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCS([O-])(=O)=O DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing Effects 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 231100000803 sterility Toxicity 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 229940086735 succinate Drugs 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000005700 syncytium formation by plasma membrane fusion Effects 0.000 description 1
- 201000010874 syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 229940104261 taurate Drugs 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010071097 threonyl-lysyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 230000002588 toxic Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- SYSWJPSVYLUKCH-UHFFFAOYSA-H tricalcium;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O SYSWJPSVYLUKCH-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 1
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010079202 tyrosyl-alanyl-cysteine Proteins 0.000 description 1
- 108010071635 tyrosyl-prolyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 108010078580 tyrosylleucine Proteins 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- KJZMZIMBDAXZCX-XNRWUJQLSA-N α-D-Manp-(1->3)-[α-D-Manp-(1->6)]-α-D-Manp Chemical compound O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](O)O1 KJZMZIMBDAXZCX-XNRWUJQLSA-N 0.000 description 1
- DLRVVLDZNNYCBX-ZZFZYMBESA-N β-melibiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-ZZFZYMBESA-N 0.000 description 1
- NJMYZEJORPYOTO-UHFFFAOYSA-N γ-glutamyl-Proline Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)N1CCCC1C(O)=O NJMYZEJORPYOTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Abstract
Группа изобретений относится к биотехнологии. В настоящем изобретении представлены: фармацевтические композиции, содержащие антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент, и их применение, лиофилизированный препарат для лечения заболеваний и способ его получения, а также набор для лечения заболеваний или симптомов, связанных с CD40. Изобретение позволяет получить фармацевтические композиции, которые демонстрируют хорошую стабильность антитела и используются для эффективного лечения заболеваний или симптомов, связанных с CD40. 7 н. и 12 з.п. ф-лы, 16 табл., 15 пр.
Description
Данная заявка испрашивает приоритет по заявке на патент Китая № CN201811448238.5, поданной 30 ноября 2018 г., содержание которой включено в данный документ во всей своей полноте.
Область техники
Настоящее изобретение относится к области фармацевтических препаратов и, в частности, относится к фармацевтической композиции, содержащей антитело к CD40 и его антигенсвязывающий фрагмент, и ее применению в качестве лекарственного препарата.
Уровень техники
Будучи одним из гликопротеинов, экспрессируемых на клеточной поверхности, CD40 представляет собой характерный мембранный гликопротеин I типа с молекулярной массой 48 кДа, который принадлежит к суперсемейству рецепторов фактора некроза опухоли (TNFR) и играет важнейшую роль в иммунной системе. Он экспрессируется в различных иммунных клетках, таких как В-клетки, дендритные клетки, моноциты и макрофаги. Если передача сигнала опосредуется CD40, будут активироваться специализированные антигенпрезентирующие клетки. Природный лиганд CD40 обозначается как CD154 или CD40L и, как известно, преимущественно экспрессируется в зрелых Т-лимфоцитах. CD40L-опосредованная передача сигнала может инициировать целый ряд биологических событий в клетке, включая активацию и пролиферацию иммунных клеток, а также продуцирование цитокинов и хемокинов. Передача сигнала с помощью CD40 чрезвычайно важна для иммунных ответов, зависимых от Т-клеток, в частности, в случае опухолевого микроокружения, где дендритные клетки, стимулированные с помощью CD40, способны активировать опухолеспецифические эффекторные Т-клетки, которые потенциально способны уничтожать опухолевые клетки.
Экспрессия CD40 была обнаружена у множества нормальных клеток и опухолевых клеток, включая B-лимфоциты. Например, меланома представляет собой одну из опухолей, характеризующихся экспрессией CD40, в то же время 30% - 70% солидных опухолей также экспрессируют CD40. Известно, что активация CD40 эффективно запускает противоопухолевые ответы (Tong et al, Cancer Gene Therapy, 2003, 10: 1-13), включая иммунную активацию опухолеспецифических Т-клеточных ответов, прямой апоптоз CD40-положительных опухолей и гуморальный ответ в виде ADCC, вызванной стимуляцией. Более того, наблюдаемая эрадикация опухоли тесно ассоциирована с появлением опухолеспецифических цитотоксических Т-лимфоцитов. Между тем, также не следует игнорировать тот факт, что системное введение антител к CD40 обычно ассоциировано с различными побочными эффектами, такими как шоковый синдром и синдром высвобождения цитокинов (van Mierlo et al, Proc. Nat1. Acad. Sci. USA, 2002, 99: 5561-5566).
В настоящее время целый ряд международных фармацевтических компаний разрабатывают моноклональные антитела к CD40, описанные выше, которые специфически стимулируют иммунную активацию, повышая до максимума ответ на опухоли со стороны собственной иммунной системы пациента, за счет чего обеспечивается цель уничтожения опухолевых клеток.. Связанные с этим патенты включают CN 1198647, CN 1369015, CN 1582165, CN 100430419, CN 101014386, CN 101237882, CN 101289510, CN 101490086, CN103842382, CN104918957, WO2002028904, WO2011123489, WO2012149356, WO2013034904, WO 2015091853, WO 2016196314, WO 2017040932 и WO 2017004006 и т. д. До настоящего времени для антител к CD40 от Pfizer (соответствующие продукты использовались на основании лицензии Roche), Alligator и других компаний наблюдали хороший эффект уничтожения опухолей на доклинических моделях на животных.
В WO2018219327 (PCT/CN2018/089252) представлены антитела к CD40 с высокой аффинностью, высокой селективностью и высокой биологической активностью для применения в качестве стимулирующих антител к CD40.
Однако лекарственные средства на основе антител, характеризующиеся большой молекулярной массой и сложной структурой, могут становиться нестабильными вследствие тенденции к деградации, полимеризации или подверженности нежелательным химическим модификациям. Чтобы сделать антитела пригодными для введения и сохраняющими стабильность и превосходные характеристики во время хранения и последующего применения, большое значение имеют исследования стабильных препаратов лекарственных средств на основе антител. Примером патента, относящегося к препарату на основе антитела к CD40, является WO2005063289. В случае нового антитела к CD40 все еще существует потребность в разработке фармацевтических композиций (препаратов), содержащих CD40, которые более подходят для введения.
Содержание настоящего изобретения
В настоящем изобретении представлена фармацевтическая композиция, содержащая антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент и буфер. В некоторых вариантах осуществления буфер выбран из ацетатного буфера, гистидинового буфера, фосфатного буфера и сукцинатного буфера, предпочтительно представляет собой ацетатный буфер, более предпочтительно буфер на основе уксусной кислоты и ацетата натрия.
В альтернативном варианте осуществления антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент в фармацевтической композиции содержат LCDR1, LCDR2 и LCDR3, представленные под SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8 соответственно, и HCDR1, HCDR2 и HCDR3, представленные под SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5 соответственно.
В альтернативных вариантах осуществления концентрация антитела к CD40 или его антигенсвязывающего фрагмента в фармацевтической композиции составляет от приблизительно 1 мг/мл до 120 мг/мл, при этом она может составлять приблизительно 1 мг/мл, 2 мг/мл, 3 мг/мл, 4 мг/мл, 5 мг/мл, 6 мг/мл, 7 мг/мл, 8 мг/мл, 9 мг/мл, 10 мг/мл, 12 мг/мл, 14 мг/мл, 16 мг/мл, 18 мг/мл, 20 мг/мл, 22 мг/мл, 24 мг/мл, 26 мг/мл, 28 мг/мл, 30 мг/мл, 35 мг/мл, 40 мг/мл, 45 мг/мл, 50 мг/мл, 55 мг/мл, 60 мг/мл, 65 мг/мл, 70 мг/мл, 75 мг/мл, 80 мг/мл, 85 мг/мл, 90 мг/мл, 95 мг/мл, 100 мг/мл, 105 мг/мл, 110 мг/мл, 115 мг/мл, 120 мг/мл или любое значение между любыми двумя значениями, предпочтительно от 10 мг/мл до 40 мг/мл, наиболее предпочтительно приблизительно 25 мг/мл.
В альтернативных вариантах осуществления концентрация буфера составляет от приблизительно 5 мМ до 30 мМ, предпочтительно от приблизительно 10 мМ до 20 мМ, и в качестве неограничивающих примеров составляет приблизительно 10 мМ, 12 мМ, 14 мМ, 16 мМ, 18 мМ, 20 мМ или любое значение между любыми двумя значениями, наиболее предпочтительно приблизительно 10 мМ.
В альтернативных вариантах осуществления pH буфера в фармацевтической композиции составляет приблизительно 4,5-6,5, предпочтительно приблизительно 5,0-6,0, а в одном неограничивающем варианте осуществления он также может составлять приблизительно 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0 или любое значение между любыми двумя значениями, наиболее предпочтительно приблизительно 5,0 или 5,5.
В альтернативных вариантах осуществления фармацевтическая композиция дополнительно содержит сахар. В настоящем изобретении «сахар» включает общепринятые соединения (CH2O)n и их производные, включая моносахариды, дисахариды, трисахариды, полисахариды, сахарные спирты, редуцирующие сахара, нередуцирующие сахара и т. д. В настоящем изобретении «сахар» может быть выбран из глюкозы, сахарозы, трегалозы, лактозы, фруктозы, мальтозы, декстрана, глицерина, эритрита, глицерола, арабита, силита, сорбита, маннита, мелибиозы, мелезитозы, раффинозы, маннотриозы, стахиозы, мальтозы, лактулозы, мальтулозы, сорбита, мальтита, лактита, изомальтулозы и т. д. Предпочтительный сахар представляет собой нередуцирующий дисахарид, более предпочтительно трегалозу и сахарозу.
В альтернативных вариантах осуществления концентрация сахара в фармацевтической композиции составляет от приблизительно 40 мг/мл до 95 мг/мл (например, 55 мг/мл), предпочтительно от приблизительно 60 мг/мл до 90 мг/мл. В неограничивающих примерах концентрация сахара составляет 60 мг/мл, 65 мг/мл, 70 мг/мл, 75 мг/мл, 80 мг/мл, 85 мг/мл, 90 мг/мл или любое значение между любыми двумя значениями, более предпочтительно приблизительно 80 мг/мл.
В альтернативных вариантах осуществления фармацевтическая композиция дополнительно содержит поверхностно-активное вещество, которое может быть выбрано из полисорбата 20; полисорбата 80; полоксамера; Triton; додецилсульфоната натрия; лаурилсульфоната натрия; октилгликозида натрия; лаурил-, миристил-, линолеил-, стеарилсульфобетаина; лаурил-, миристил-, линолеил-, стеарилсаркозина; линолеил-, миристил-, цетилбетаина; лауроамидопропил-, кокаамидопропил-, линолеамидопропил-, миристамидопропил-, пальмамидопропил-, изостеарамидопропилбетаина; миристамидопропил-, пальмамидопропил-, изостеарамидопропилдиметиламина; метилкокоила натрия; метилолеилтаурата натрия; сополимеров полиэтиленгликоля; сополимеров полипропиленгликоля; сополимеров этиленгликоля и сополимеров пропиленгликоля и т. д. Предпочтительное поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбаты, такие как полисорбат 80 или полисорбат 20, более предпочтительно полисорбат 80.
В альтернативных вариантах осуществления концентрация поверхностно-активного вещества в фармацевтической композиции составляет от приблизительно 0,02 мг/мл до 0,8 мг/мл (например, 0,1 мг/мл), предпочтительно от приблизительно 0,3 мг/мл до 0,6 мг/мл. В неограничивающих примерах концентрация поверхностно-активного вещества составляет 0,3 мг/мл, 0,35 мг/мл, 0,4 мг/мл, 0,45 мг/мл, 0,5 мг/мл, 0,55 мг/мл, 0,6 мг/мл или любое значение между любыми двумя значениями, более предпочтительно приблизительно 0,4 мг/мл.
В альтернативных вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит:
(а) 1-120 мг/мл антитела к CD40 или его антигенсвязывающего фрагмента, где антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат LCDR1, LCDR2 и LCDR3, представленные под SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8 соответственно, и HCDR1, HCDR2 и HCDR3, представленные под SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5 соответственно,
(b) 5-30 мМ ацетатного буфера.
В альтернативных вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит:
(а) 1-120 мг/мл антитела к CD40 или его антигенсвязывающего фрагмента, где антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат LCDR1, LCDR2 и LCDR3, представленные под SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8 соответственно, и HCDR1, HCDR2 и HCDR3, представленные под SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5 соответственно,
(b) 5-30 мМ ацетатного буфера,
(c) 40-90 мг/мл сахарозы,
(d) 0,02-0,8 мг/мл полисорбата 80, при этом предпочтительно pH фармацевтической композиции составляет 4,5-6,5, более предпочтительно 5,0-6,0, еще более предпочтительно 5,5.
В альтернативных вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит:
(а) 1-120 мг/мл антитела к CD40 или его антигенсвязывающего фрагмента, где антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат LCDR1, LCDR2 и LCDR3, представленные под SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8 соответственно, и HCDR1, HCDR2 и HCDR3, представленные под SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5 соответственно,
(b) 5-30 мМ ацетатного буфера,
(c) 40-95 мг/мл трегалозы,
(d) 0,02-0,8 мг/мл полисорбата 80, при этом предпочтительно pH фармацевтической композиции составляет 4,5-6,5, более предпочтительно 5,0-6,0, еще более предпочтительно 5,5.
Фармацевтическая композиция содержит:
(а) 1-120 мг/мл антитела к CD40 или его антигенсвязывающего фрагмента, где антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат LCDR1, LCDR2 и LCDR3, представленные под SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8 соответственно, и HCDR1, HCDR2 и HCDR3, представленные под SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5 соответственно, и
(b) 10-20 мМ ацетатного буфера, и при этом pH фармацевтической композиции составляет 5,0-5,5.
В альтернативных вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит:
(а) 10-40 мг/мл антитела к CD40 или его антигенсвязывающего фрагмента, где антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат LCDR1, LCDR2 и LCDR3, представленные под SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8 соответственно, и HCDR1, HCDR2 и HCDR3, представленные под SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5 соответственно,
(b) 10-20 мМ ацетатного буфера,
(c) 60-90 мг/мл сахарозы,
(d) 0,3-0,8 мг/мл полисорбата 80, при этом предпочтительно pH фармацевтической композиции составляет 5,0-6,0.
В альтернативных вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит:
(а) 25 мг/мл антитела к CD40 или его антигенсвязывающего фрагмента, где антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат LCDR1, LCDR2 и LCDR3, представленные под SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8 соответственно, и HCDR1, HCDR2 и HCDR3, представленные под SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5 соответственно,
(b) 10-20 мМ буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия,
(c) 60-90 мг/мл сахарозы,
(d) 0,3-0,8 мг/мл полисорбата 80, при этом предпочтительно pH фармацевтической композиции составляет 5,0-6,0.
В конкретном варианте осуществления фармацевтическая композиция содержит:
25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,6 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 5,5;
25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,6 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 5,8;
25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,6 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 6,0;
25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,4 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 5,6;
25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,4 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 5,8;
25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,4 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 6,0;
25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,4 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ буфера на основе гистидина и уксусной кислоты, pH 5,0;
25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,4 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ буфера на основе гистидина и уксусной кислоты, pH 5,5;
25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,4 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ буфера на основе гистидина и уксусной кислоты, pH 6,0;
25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,6 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ буфера на основе гистидина и уксусной кислоты, pH 5,0;
25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,6 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ буфера на основе гистидина и уксусной кислоты, pH 5,5;
25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,6 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ буфера на основе гистидина и уксусной кислоты, pH 5,8;
25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,6 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ буфера на основе гистидина и уксусной кислоты, pH 6,0;
25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,4 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия, pH 5,5;
или 25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,6 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия, pH 5,5.
В конкретных вариантах осуществления, определенных выше, антитело к CD40 содержит LCDR1, LCDR2 и LCDR3, представленные под SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8 соответственно, и HCDR1, HCDR2 и HCDR3, представленные под SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5 соответственно.
В некоторых вариантах осуществления антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи, представленную под SEQ ID NO: 1, и вариабельную область легкой цепи, представленную под SEQ ID NO: 2.
QVQLQQPGADLVKPGASVKMSCKASGYILTTYWITWVKQRPGQGLEWIGDIHPGSGSTKYNEKFKSKATLTVDTSSSTAYMQLTRLSSEDSAVYYCARRDYWGQGTTLTVSS
SEQ ID NO: 1
DVLMTQSPLSLPVSLGDQASISCRSSQNIVNSQGNTYLEWYLQKPGESPKLLIYKVTNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQASLVPWTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO: 2
В альтернативных вариантах осуществления антитела или антигенсвязывающий фрагмент в фармацевтической композиции могут быть выбраны из мышиного антитела, химерного антитела и гуманизированного антитела, предпочтительно представляют собой гуманизированное антитело.
В альтернативных вариантах осуществления FR легкой цепи в вариабельной области легкой цепи и FR тяжелой цепи в вариабельной области тяжелой цепи гуманизированного антитела в фармацевтической композиции происходят из легкой цепи и тяжелой цепи зародышевого типа человека соответственно или их мутантных последовательностей.
Кроме того, тяжелая цепь гуманизированного антитела к CD40 имеет последовательность, представленную под SEQ ID NO: 17, или ее вариант, и при этом вариант предпочтительно содержит 0-10 аминокислотных вариаций в вариабельной области тяжелой цепи, более предпочтительно мутации в аминокислотных положениях 6 и 8, где предпочтительно в результате мутаций происходит замена на аминокислоты I, A или L; легкая цепь гуманизированного антитела имеет последовательность, представленную под SEQ ID NO: 18, или ее вариант, и при этом вариант предпочтительно содержит 0-10 аминокислотных вариаций в вариабельной области легкой цепи, более предпочтительно мутации в аминокислотных положениях 2 и 3, где предпочтительно в результате мутаций происходит замена на аминокислоты I, V или L.
В альтернативных вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи гуманизированного антитела к CD40 дополнительно содержит FR тяжелой цепи из IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 человека или их вариант, предпочтительно содержит FR тяжелой цепи из IgG1, IgG2 или IgG4 человека, и более предпочтительно содержит FR тяжелой цепи из IgG1 или IgG2 человека.
В альтернативных вариантах осуществления аминокислотная последовательность легкой цепи антитела к CD40 характеризуется по меньшей мере 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью легкой цепи антитела hu9E5, аминокислотная последовательность тяжелой цепи антитела характеризуется по меньшей мере 85%, 86%, 87%, 88 %, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью тяжелой цепи антитела hu9E5, при этом последовательность легкой цепи антитела hu9E5 представлена под SEQ ID NO: 18, а последовательность тяжелой цепи антитела hu9E5 представлена под SEQ ID NO: 17.
HC hu9E5
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYILTTYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGSGSTKYNEKFKSRVTLTVDTSISTAYMELSRLRSEDTAVYYCARRDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 17
LC hu9E5
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQNIVNSQGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVTNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQASLVPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 18
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению характеризуется достаточной стабильностью лекарственного средства и может храниться в стабильном состоянии в течение длительного времени. С другой стороны, для удобства транспортировки лекарственного средства фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть дополнительно преобразована в лиофилизированный препарат.
В настоящем изобретении также представлен способ получения лиофилизированного препарата, содержащего антитело к CD40, который включает стадию лиофилизации фармацевтической композиции, определенной выше.
В альтернативных вариантах осуществления в способе получения препарата, содержащего антитело к CD40, лиофилизация включает последовательные стадии предварительной лиофилизации, первичной сушки и вторичной сушки.
В настоящем изобретении также представлен лиофилизированный препарат, содержащий антитело к CD40, который получен посредством способа получения лиофилизированного препарата, содержащего антитело к CD40, как определено выше.
В некоторых вариантах осуществления лиофилизированный препарат является стабильным при 2-8°C в течение по меньшей мере 3 месяцев, по меньшей мере 6 месяцев, по меньшей мере 12 месяцев, по меньшей мере 18 месяцев или по меньшей мере 24 месяцев.
В некоторых вариантах осуществления лиофилизированный препарат является стабильным при 25°C в течение по меньшей мере 3 месяцев, по меньшей мере 6 месяцев, по меньшей мере 12 месяцев, по меньшей мере 18 месяцев или по меньшей мере 24 месяцев.
В некоторых вариантах осуществления лиофилизированный препарат является стабильным при 40°C в течение по меньшей мере 7 дней, по меньшей мере 14 дней или по меньшей мере 28 дней.
В настоящем изобретении также представлен способ приготовления восстановленного раствора лиофилизированного препарата, содержащего антитело к CD40, который включает стадию восстановления лиофилизированного препарата, определенного выше, и при этом раствор, используемый для восстановления, без ограничения выбран из воды для инъекций, физиологического раствора или раствора глюкозы.
В настоящем изобретении также представлен восстановленный раствор лиофилизированного препарата, содержащего антитело к CD40, полученный посредством способа получения восстановленного раствора лиофилизированного препарата, содержащего антитело к CD40, определенное выше.
В настоящем изобретении дополнительно представлен продукт или набор, предусматривающие контейнер, содержащий любую стабильную фармацевтическую композицию, описанную в данном документе. В некоторых вариантах осуществления флакон для инъекций представляет собой стеклянную бутылку, изготовленную из трубки из нейтрального боросиликатного стекла.
В настоящем изобретении также представлено применение фармацевтической композиции, лиофилизированного препарата или восстановленного раствора лиофилизированного препарата, определенного выше, при получении лекарственного препарата для лечения заболеваний или симптомов, связанных с CD40, где заболевания или симптомы предпочтительно представляют собой виды рака, и виды рака выбраны из лимфомы, рака молочной железы, рака яичника, рака предстательной железы, рака поджелудочной железы, рака почки, рака легкого, рака печени, рака желудка, колоректального рака, рака мочевого пузыря, рабдомиосаркомы, рака пищевода, рака шейки матки, множественной миеломы, видов лейкоза, рака желчного пузыря, глиобластомы и меланомы.
В настоящем изобретении также представлен способ лечения и предупреждения заболеваний или симптомов, связанных с CD40, который включает введение терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, лиофилизированного препарата или восстановленного раствора лиофилизированного препарата, определенных выше, нуждающемуся в этом пациенту, где заболевания или симптомы предпочтительно представляют собой виды рака, которые выбраны из лимфомы, рака молочной железы, рака яичника, рака предстательной железы, рака поджелудочной железы, рака почки, рака легкого, рака печени, рака желудка, колоректального рака, рака мочевого пузыря, рабдомиосаркомы, рака пищевода, рака шейки матки, множественной миеломы, видов лейкоза, рака желчного пузыря, глиобластомы и меланомы.
В настоящем изобретении также представлен продукт, предусматривающий контейнер, который содержит фармацевтическую композицию, лиофилизированный препарат или восстановленный раствор лиофилизированного препарата, определенные выше.
Следует понимать, что одна, несколько или все характеристики различных вариантов осуществления, описанных в данном документе, могут быть объединены для образования других вариантов осуществления настоящего изобретения. Эти и другие аспекты настоящего изобретения будут очевидны специалистам в данной области техники. Эти и другие варианты осуществления настоящего изобретения дополнительно описаны в следующем подробном описании.
Подробное описание предпочтительного варианта осуществления
1. Определения
Чтобы облегчить специалистам в данной области техники понимание настоящего изобретения, определенные технические и научные термины специально определены ниже. Если иное четко не определено где-либо в другом месте в данном документе, все остальные технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют значение, обычно понятное специалисту в области техники, к которой относится настоящее изобретение.
«Буфер» относится к буферу, который может противостоять изменениям pH благодаря действию его сопряженных компонентов, представляющих собой кислоту и основание. Примеры буферов, которые контролируют pH в соответствующем диапазоне, включают ацетатные буферы, сукцинатные буферы, глюконатные буферы, гистидиновые буферы, оксалатные буферы, лактатные буферы, фосфатные буферы, цитратные буферы, тартратные буферы, фумаратные буферы, глицилглициновые буферы и буферы на основе других органических кислот.
«Гистидиновый буфер» представляет собой буфер, содержащий ионы гистидина. Примеры гистидинового буфера включают гистидин-гидрохлоридный буфер, гистидин-ацетатный буфер, гистидин-фосфатный буфер, гистидин-сульфатный буфер и т. д., предпочтительно гистидин-гидрохлоридный буфер. Гистидин-гидрохлоридный буфер получают из гистидина и соляной кислоты или гистидина и гидрохлорида гистидина.
«Цитратный буфер» представляет собой буфер, содержащий цитрат-ионы. Примеры цитратного буфера включают буфер на основе лимонной кислоты и цитрата натрия, лимонной кислоты и цитрата калия, лимонной кислоты-цитрата кальция, лимонной кислоты и цитрата магния и т. д. Предпочтительный цитратный буфер представляет собой буфер на основе лимонной кислоты и цитрата натрия.
«Сукцинатный буфер» представляет собой буфер, содержащий сукцинат-ионы. Примеры сукцинатного буфера включают буфер на основе сукцината и сукцината натрия, буфер на основе сукцината и сукцината калия, буфер на основе сукцината и сукцината кальция и т. д. Предпочтительный сукцинатный буфером представляет собой буфер на основе сукцината и сукцината натрия.
«Фосфатный буфер» представляет собой буфер, содержащий фосфат-ионы. Примеры фосфатного буфера включают буфер на основе гидрофосфата динатрия и дигидрофосфата натрия, буфер на основе гидрофосфата динатрия и дигидрофосфата калия и т. д. Предпочтительный фосфатный буфер представляет собой буфер на основе гидрофосфата динатрия и дигидрофосфата натрия.
«Ацетатный буфер» представляет собой буфер, содержащий ацетат-ионы. Примеры ацетатного буфера включают буфер на основе уксусной кислоты и ацетата натрия, буфер на основе уксусной кислоты и гистидина, буфер на основе уксусной кислоты и ацетата калия, буфер на основе уксусной кислоты и ацетата кальция, буфер на основе уксусной кислоты и ацетата магния и т. д. Предпочтительный ацетатный буфер представляет собой буфер на основе уксусной кислоты и ацетата натрия.
«Фармацевтическая композиция» означает смесь, содержащую одно или более из соединений, описанных в данном документе, или их физиологически/фармацевтически приемлемых солей или пролекарств и других химических компонентов, таких как физиологически/фармацевтически приемлемые носители и вспомогательные вещества. Функция фармацевтической композиции заключается в том, чтобы содействовать введению в организм и облегчать всасывание активных ингредиентов для проявления их биологической активности. В данном контексте «фармацевтическая композиция» и «препарат» не являются взаимоисключающими.
Если не указано иное, фармацевтическая композиция, описанная в настоящем изобретении, находится в форме раствора, при этом растворителем в нем является вода.
«Лиофилизированный препарат» относится к препарату или фармацевтической композиции, полученным путем вакуумной лиофилизации фармацевтической композиции или препарата в виде раствора в форме жидкости или раствора.
Используемый в данном документе термин «приблизительно» означает, что указанное значение находится в пределах допустимого диапазона ошибок для конкретного значения, определенного специалистом в данной области техники, и значение частично зависит от того, как его измеряют или определяют (т. е. предела измерительной системы). Например, «приблизительно» может означать в пределах 1 или более 1 стандартного отклонения, как принято в данной области техники. В качестве альтернативы «приблизительно» или «по существу предусматривает» может означать диапазон не более 20%. Кроме того, в частности в случае биологических систем или процессов, термин может означать не более чем на порядок или не более чем в 5 раз больше значения. Если конкретное значение приведено в настоящей заявке и формуле изобретения, если не указано иное, следует предполагать, что значение «приблизительно» или «по существу предусматривает» находится в пределах допустимого диапазона ошибок для конкретного значения.
Фармацевтическая композиция, описанная в настоящем изобретении, может обеспечивать стабильный эффект: содержащееся в ней антитело по существу сохраняет свою физическую стабильность, и/или химическую стабильность, и/или биологическую активность после хранения. Предпочтительно фармацевтическая композиция сохраняет свою физическую стабильность, химическую стабильность и биологическую активность после хранения. Период хранения обычно выбирают на основе заранее определенного срока годности фармацевтической композиции. Существует множество доступных аналитических методик для измерения стабильности белка, с помощью которых можно измерить стабильность после хранения при выбранной температуре в течение выбранного периода времени.
Стабильный фармацевтический препарат на основе антитела представляет собой препарат, в котором не наблюдается значительных изменений при следующих условиях: хранение при температуре холодильного хранения (2-8°C) в течение по меньшей мере 3 месяцев, предпочтительно 6 месяцев, более предпочтительно 1 года и даже более предпочтительно не более 2 лет. Кроме того, стабильные жидкие препараты включают жидкие препараты, которые проявляют требуемые характеристики после некоторого периода времени, включая хранение при 25°C в течение 1 месяца, 3 месяцев или 6 месяцев или хранение при 40°C в течение 1 месяца. Типичный критерий приемлемости для стабильности является следующим: деградируют обычно не более приблизительно 10%, предпочтительно не более приблизительно 5% мономеров антитела, как измерено с помощью SEC-HPLC. Как определено посредством визуального анализа, фармацевтический препарат на основе антитела является бесцветным или имеет цвет от прозрачного до слегка молочно-белого. Концентрация, pH и осмоляльность препаратов меняются не более чем на ±10%. Обычно наблюдают усечения, составляющие не более чем приблизительно 10%, предпочтительно не более чем приблизительно 5%, и обычно образуются агрегаты, составляющие не более чем приблизительно 10%, предпочтительно не более чем приблизительно 5%.
После визуальной проверки цвета и/или прозрачности или измерения посредством светорассеяния УФ-излучения, эксклюзионной хроматографии (SEC) и динамического светорассеяния (DLS), если для антитела не показано значительное увеличение агрегации, осаждения и/или денатурации, то антитело «сохраняет свою физическую стабильность» в фармацевтическом препарате. Изменения конформации белка можно оценить посредством флуоресцентной спектроскопии (которая определяет третичную структуру белка) и FTIR-спектроскопии (которая определяет вторичную структуру белка).
Если для антитела не показано значительного химического изменения, то антитело «сохраняет свою химическую стабильность» в фармацевтическом препарате. Химическую стабильность можно оценить путем выявления и количественного определения белков с химически измененной формой. Процессы деградации, которые зачастую изменяют химическую структуру белков, включают гидролиз или усечение (оценивают посредством таких методов, как эксклюзионная хроматография и SDS-PAGE), окисление (оценивают посредством таких методов, как пептидное картирование в сочетании с масс-спектрометрией или MALDI/TOF/MS и т. д.), дезаминирование (оценивают посредством таких методов, как ионообменная хроматография, капиллярное изоэлектрическое фокусирование, пептидное картирование, измерение содержания изоаспарагиновой кислоты и т. д.) и изомеризацию (оценивают посредством измерения содержания изоаспарагиновой кислоты, пептидного картирования и т. д.).
Если биологическая активность антитела в данный момент времени находится в пределах заранее определенного диапазона биологической активности, проявляемой в момент получения фармацевтического препарата, то антитело «сохраняет свою биологическую активность» в фармацевтическом препарате. Биологическую активность антитела можно определять, например, с помощью анализа связывания антигена.
Термин «CD40» относится к рецептору клеточной поверхности, который является представителем суперсемейства рецепторов TNF, также известным как TNFRSF5. CD40 повсеместно экспрессируется на поверхности дендритных клеток, В-клеток и макрофагов и представляет собой молекулу, необходимую для выработки и поддержания Т-клеточного иммунитета. Термин «CD40» включает любой вариант или изоформу CD40, которая естественным образом экспрессируется клеткой. Антитела по настоящему изобретению могут быть перекрестно реактивными в отношении CD40 от видов, отличных от человека. В качестве альтернативы антитело может быть специфическим в отношении CD40 человека и может не проявлять перекрестную реактивность в отношении другими видов. CD40 или любой его вариант или изоформа могут быть выделены из клеток или тканей, в которых они экспрессируются естественным путем, или продуцироваться с помощью рекомбинантных методик с применением методик, общеизвестных в данной области техники и описанных в данном документе. Предпочтительно антитело к CD40 нацеливается на CD40 человека с нормальным профилем гликозилирования.
Трехбуквенный код и однобуквенный код аминокислот, используемые в настоящем изобретении, описаны в J. Biol. Chem, 243, p3558 (1968).
Упомянутое в настоящем изобретении «антитело» относится к иммуноглобулину, у которого в состав структуры на основе тетрапептидных цепей входит две идентичные тяжелые цепи и две идентичные легкие цепи, соединенные межцепочечными дисульфидными связями.
В настоящем изобретении легкая цепь антитела может дополнительно содержать константную область легкой цепи, которая предусматривает κ-, λ-цепь человека или мыши или их варианты.
В настоящем изобретении тяжелая цепь антитела может дополнительно содержать константную область тяжелой цепи, которая предусматривает IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 человека или мыши или их варианты.
Вариабельный фрагмент (Fv-область), в состав которого входит приблизительно 110 аминокислот, расположенных вблизи N-конца тяжелых цепей и легких цепей антитела, значительно отличается своей аминокислотной последовательностью. Константная область, в состав которой входит остальная аминокислотная последовательность, расположенная вблизи С-конца антитела, является относительно стабильной. Вариабельная область содержит три гипервариабельные области (HVR) и четыре относительно консервативные каркасные области (FR). Три гипервариабельные области, которые определяют специфичность антитела, также называют определяющей комплементарность областью (CDR). Каждая из вариабельной области легкой цепи (LCVR) и вариабельной области тяжелой цепи (HCVR) состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных от аминоконца до карбокси-конца в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. Три CDR легкой цепи обозначаются LCDR1, LCDR2 и LCDR3; а три CDR тяжелой цепи обозначаются HCDR1, HCDR2 и HCDR3. Количество и положение аминокислотных остатков, составляющих CDR, в LCVR и HCVR антител или антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению соответствуют известным критериям нумерации согласно Kabat (LCDR1-3, HCDR2-3) или системе нумерации согласно Kabat и Chothia (HCDR1).
Антитела по настоящему изобретению включают мышиные антитела, химерные антитела и гуманизированные антитела, предпочтительно представляют собой гуманизированные антитела.
В настоящем изобретении термин «мышиное антитело» означает моноклональное антитело, нацеливающееся на CD40 человека, полученное в соответствии со знаниями и навыками в данной области техники. Во время получения подопытному животному вводят инъекцией антиген CD40, а затем выделяют гибридому, экспрессирующую антитело с требуемой последовательностью или функциональными характеристиками.
Термин «химерное антитело» представляет собой антитело, образованное путем слияния вариабельной области мышиного антитела с константной областью человеческого антитела, что может ослаблять иммунный ответ, индуцируемый мышиным антителом. Для конструирования химерного антитела сначала получают гибридому, которая секретирует специфическое моноклональное мышиное антитело, а затем ген вариабельной области клонируют из клетки гибридомы мыши. Затем, при необходимости, клонируют ген константной области человеческого антитела. Ген вариабельной области мыши и ген константной области человека лигируют в химерный ген и затем встраивают в вектор для экспрессии человеческих последовательностей, и, наконец, обеспечивают экспрессию молекулы химерного антитела в производственной системе на основе эукариотических или прокариотических клеток. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения легкая цепь химерного антитела к CD40 или его антигенсвязывающего фрагмента может дополнительно содержать константную область легкой цепи из κ-, λ-цепи человека или их вариантов. Тяжелая цепь химерного антитела к CD40 дополнительно содержит константную область тяжелой цепи из IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 человека или их вариантов.
Термин «гуманизированное антитело», также известное как антитело с привитой CDR, относится к антителу, полученному путем прививания последовательностей CDR мыши в каркасные области вариабельной области человеческого антитела, т. е. каркасные последовательности антитела другого зародышевого типа человека. Это может преодолеть интенсивный иммунный ответ, вызванный химерным антителом, несущим большое количество компонентов мышиного белка. Такие каркасные последовательности могут быть получены из общедоступных баз данных ДНК или опубликованных источников, которые включают последовательности генов антител зародышевого типа. Например, последовательности ДНК зародышевого типа для генов вариабельной области тяжелой и легкой цепи человека можно найти в базе данных последовательностей зародышевого типа человека "VBase" (доступна на веб-сайте www.mrccpe.com.ac.uk/vbase), также в Kabat, EA, etc., Human, 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th edition. Чтобы избежать снижения активности, вызванного снижением иммуногенности, вариабельную область человеческого антитела можно подвергать минимальной обратной мутации с целью сохранения активности. Гуманизированные антитела по настоящему изобретению также предусматривают гуманизированные антитела, в которых CDR дополнительно подвергают созреванию аффинности посредством фагового дисплея.
В настоящем изобретении термин «связывание с CD40» относится к способности взаимодействовать с CD40 человека.
Термин «специфическое связывание» относится к определяемому с помощью методик, доступных в данной области техники, таких как конкурентный ELISA, анализ BIACORE® или анализ KINEXA®. Этот термин также применим, например, если антигенсвязывающий домен антитела по настоящему изобретению является специфичным в отношении конкретного эпитопа, который несут многие антигены, и в этом случае антитело, несущее антигенсвязывающий домен, может специфически связываться с несколькими антигенами, которые несут данный эпитоп.
В настоящем изобретении «антигенсвязывающий фрагмент» относится к Fab-фрагменту, Fab'-фрагменту, F(ab')2-фрагменту и scFv-фрагменту, которые связываются с CD40 человека, а также другим фрагментам, которые могут связываться с CD40 человека, образованным с использованием VH- и VL-областей антител, которые могут связываться с CD40 человека. Он содержит одну или более CDR антител, описанных в настоящем изобретении, выбранных из SEQ ID NO: 7, 13, 9, 10, 11 и 12. Fv-фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи антитела, но не содержит константную область и представляет собой самый маленький фрагмент антитела со всеми антигенсвязывающими сайтами. Обычно Fv-антитело также содержит полипептидный линкер между доменами VH и VL, который может образовывать структуру, необходимую для связывания антигена. Различные линкеры также можно использовать для соединения двух вариабельных областей антител в полипептидную цепь, которая называется одноцепочечным антителом или одноцепочечным Fv (sFv).
Термин «эпитоп» относится к части молекулы, которая может распознаваться и связываться антителом с одной или более антигенсвязывающими областями антитела.
«Консервативная модификация» или «консервативная замена или замещение» относятся к замене аминокислот в белках другой аминокислотой со сходными характеристиками (например, зарядом, размером боковой цепи, гидрофобностью/гидрофильностью, конформацией и жесткостью остова и т. п.), так что изменения зачастую можно осуществлять без изменения биологической активности белка. Специалистам в данной области техники известно, что обычно замена одной аминокислоты в несущественной области полипептида не изменяет существенно его биологическую активность (см., например, Watson et al. (1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., стр. 224, (4-е издание)). Кроме того, при заменах на структурно или функционально подобные аминокислоты нарушение их биологической активности является маловероятным.
«Идентичность» или «гомология» аминокислотной последовательности относится к сходству последовательностей между двумя полипептидными последовательностями. Когда оба положения в двух сравниваемых последовательностях заняты одним и тем же аминокислотным остатком, например, если одно и то же положение каждого из двух полипептидов занято одной и той же аминокислотой, тогда молекулы являются идентичными по этому положению. Примерами алгоритмов, подходящих для определения процента идентичности последовательностей и процента сходства последовательностей, являются алгоритмы BLAST и BLAST2.0, которые описаны в Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410 and Altschul et al. (1977) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402. Программное обеспечение для выполнения анализа BLAST общедоступно в Национальном центре биотехнологической информации (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/).
Способы получения и очистки антител и антигенсвязывающих фрагментов хорошо известны из предшествующего уровня техники, как, например, из разделов 5-8 и 15, «Using Antibodies A Laboratory Manual, опубликованного Cold Spring Harbor. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент, определенные в настоящем изобретении, подвергнуты генной инженерии для добавления одной или более FR человека в CDR от организма, отличного от человека. Последовательность FR зародышевого типа человека можно получить путем выравнивания в базе данных генов вариабельных областей антител зародышевого типа человека IMGT с помощью программного обеспечения MOE на сайте ImMunoGeneTics (IMGT) http://imgt.cines.fr или из Journal of Immunoglobulins, 2001ISBN012441351.
Сконструированные антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению могут быть получены и очищены с помощью традиционных способов. Например, последовательность кДНК, кодирующая тяжелую цепь и легкую цепь, может быть клонирована и рекомбинирована в вектор экспрессии GS. Клетки СНО могут быть стабильно трансфицированы рекомбинантным вектором экспрессии иммуноглобулина. В качестве более рекомендуемого способа, хорошо известного в данной области техники, системы экспрессии на основе клеток млекопитающих приводят к гликозилированию антител, в частности, на высококонсервативном N-конце Fc. Стабильные клоны получают путем экспрессии антител, которые специфически связываются с антигенами человека. Для получения антител позитивные клоны размножают в бессывороточной среде в биореакторе. Культуральную среду, в которую секретируется антитело, можно очищать и собирать с помощью традиционных методик. Например, для очистки применяют колонку с белком A или G-сефарозой FF с подобранным буфером для вымывания неспецифически связанных компонентов. Затем связанные антитела элюируют за счет градиента pH и фрагменты антител выявляют с помощью SDS-PAGE, а затем собирают. Антитела можно концентрировать путем фильтрации традиционным способом. Растворимые смеси и мультимеры также можно удалить традиционными способами, такими как молекулярные сита и ионный обмен. Полученный продукт необходимо немедленно заморозить, как, например, при температуре -70°, или лиофилизировать.
При применении в отношении животного, человека, экспериментального субъекта, клетки, ткани, органа или биологической жидкости термин «введение» и «лечение» относится к приведению экзогенного лекарственного средства, терапевтического средства, диагностического средства или композиции в контакт с животным, человеком, субъектом, клеткой, тканью, органом или биологической жидкостью. «Введение» и «лечение» могут относиться, например, к терапевтическим, фармакокинетическим, диагностическим, исследовательским и экспериментальным способам. Обработка клеток включает приведение реагентов в контакт с клетками, а также приведение реагентов в контакт с жидкостью, при этом жидкости находятся в контакте с клетками. «Введение» и «лечение» также означает обработку, например, клеток in vitro и ex vivo с помощью реагентов, средств диагностики, связывающих композиций или другого типа клеток. «Лечение», при применении к человеку, ветеринарному или исследовательскому субъекту, относится к терапевтическому лечению, профилактическим или превентивным мерам, к исследовательским и диагностическим путям применения.
«Терапия» означает введение терапевтического средства для внутреннего или наружного применения, содержащего, например, любую композицию, которая может связывать соединения по настоящему изобретению, пациенту, имеющему один или более симптомов заболевания, в отношении которого, как известно, терапевтическое средство обладает терапевтическим эффектом. Обычно терапевтическое средство вводят в количестве, которое эффективно облегчает симптомы одного или более заболеваний у субъекта или популяции, подлежащих лечению, для индукции ослабления таких симптомов или подавления прогрессирования таких симптомов до любой клинически неизмеряемой степени. Количество терапевтического средства (также называемого «терапевтически эффективным количеством»), эффективного для ослабления симптомов какого-либо конкретного заболевания, может варьироваться в зависимости от множества факторов, таких как стадия заболевания, возраст и вес пациента, а также способности лекарственного средства вызывать требуемый эффект у пациента. Насколько были ослаблены симптомы заболевания, можно оценить с помощью любого способа клинического теста, обычно применяемого врачом или другими специалистами в области здравоохранения для оценки тяжести или прогрессирования состояния. Хотя варианты осуществления настоящего изобретения (например, терапевтические способы или препараты) могут не быть эффективными в ослаблении симптомов заболевания у каждого целевого объекта, они будут облегчать симптомы заболевания целевых объектов у статистически значимого числа пациентов, что определяется с помощью любых методов статистического анализа, известных в данной области техники, таких как t-критерий Стьюдента, критерий хи-квадрат, U-критерий Манна-Уитни, критерий Крускала-Уоллиса (H-критерий), критерий Джонкхира-Терпстры и критерий Уилкоксона.
«Эффективное количество» включает количество, достаточное для уменьшения интенсивности или предупреждения симптома или состояния при медицинском заболевании. Эффективное количество также означает количество, достаточное для того, чтобы обеспечивать или облегчать диагностику. Эффективное количество для конкретного пациента или ветеринарного субъекта может варьироваться в зависимости от следующих факторов: например, состояния, подлежащего лечению, общего состояния здоровья пациента, пути и дозировки введения, а также тяжести побочных эффектов. Эффективное количество может представлять собой максимальную дозу или схему введения дозы, позволяющие избежать значительных побочных эффектов или токсических эффектов.
«Значение Tm» относится к температуре термической денатурации белка, то есть температуре, при которой половина белковой молекулы разворачивается, когда пространственная структура белка разрушается. Следовательно, чем выше значение Tm, тем выше термическая стабильность белка.
2. Примеры и тестовые примеры
Настоящее изобретение дополнительно подробно поясняется следующими примерами. Эти примеры служат только для иллюстративных целей и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.
Экспериментальные методы, для которых конкретные условия не указаны в примерах по настоящему изобретению, обычно соответствуют стандартным условиям; или соответствуют условиям, предполагаемым производителями сырья или товаров. Реагенты, для которых не указаны конкретные источники, представляют собой коммерчески приобретенные стандартные реагенты.
Способы получения и очистки антигена и антитела к CD40 для настоящей заявки были описаны в патентном документе под номером заявки WO2018219327, содержание которого может быть включено в данный документ во всей своей полноте.
Пример 1. Иммунные антигены, последовательности антигенов для скрининга и их получение
Меченный гистидином рекомбинантный белок CD40 человека (h-CD40-his), Fc-меченный рекомбинантный белок CD40 человека (h-CD40-Fc), меченный гистидином рекомбинантный белок CD40 мыши (m-CD40-his) и меченный гистидином рекомбинантный белок CD40 макака-резуса (rhesus-CD40-his) (№CD0-C52H7) представляли собой очищенные коммерческие белковые реагенты, приобретенные в Acrobiosystems. Источник для каждой последовательности показан в таблице 1. Белок может применяться в каждом эксперименте следующих примеров.
Пример 2. Получение гибридомы, вырабатывающей антитела
Моноклональные антитела к CD40 человека получали путем иммунизации мышей, которые представляли собой экспериментальных мышей C57BL/6, самок возрастом 6-8 недель [Zhao Yan (Suzhou) New Drug Research Center Co., Ltd., номер лицензии на производство животных: 201503259]. Кормовая среда: уровень SPF. Мышей приобретали и кормили в лабораторных условиях в течение 1 недели регуляцией цикла 12/12 часов свет/темнота при температуре 20-25° и влажности 40-60%. Мышей, которые адаптировались к среде, разделили на 2 клетки по 5 мышей в каждой клетке.
Иммунный антиген представлял собой Fc-меченный модифицированный рекомбинантный белок CD40 человека (h-CD40-Fc, составленный в фосфатном буфере при концентрации 1 мкг/мкл). Адъювант Фрейнда (Sigma, № партии: F5881/F5506) применяли для эмульгирования, при этом полный адъювант Фрейнда (CFA) применяли для первичной иммунизации, а адъювант на основе нуклеиновой кислоты (CpG, Sangon Biotech) и алюминий для инъекций (Imject Alum), Thermo, № партии: PH203866) для оставшейся бустерной иммунизации. Иммунизацию проводили в день 0, день 14, день 28, день 42, день 56 и день 70. Кровь собирали в день 21, 35, 49, 63 и 77 для проведения анализа крови, и сыворотку крови мышей подвергали ELISA для определения титра антител в сыворотке крови мышей.
После четвертой иммунизации для мышей, у которых титр антител был высоким и демонстрировал тенденцию к стабильности в сыворотке крови, выполняли слияние клеток селезенки. Бустерную иммунизацию проводили за 3 дня до слияния и 10 мкг раствора антигена, составленного с фосфатным буфером, вводили внутрибрюшинной (IP) инъекцией каждой мыши. Лимфоциты селезенки сливали с клетками Sp2/0, представляющими собой клетки миеломы (ATCC® CRL-8287TM), с применением оптимизированного PEG-опосредованного слияния для получения клеток гибридомы, и отбирали моноклональные линии клеток гибридомы с надлежащей активностью in vitro.
Пример 3. Клонирование и секвенирование антитела к CD40
Отбирали субклоны гибридом, продуцирующих антитела, которые прошли вышеописанный скрининг и идентификацию, и собирали клетки гибридомы, находящиеся в логарифмической фазе роста. РНК экстрагировали с применением тризола (Invitrogen, 15596-018) в соответствии с инструкцией из набора и осуществляли обратную транскрипцию (обратная транскриптаза PrimeScript™, Takara, № по кат. 2680A). Затем полученную кДНК амплифицировали с помощью ПЦР с применением набора праймеров для Ig мыши (Novagen, TB326 Rev. B 0503) и отправили для секвенирования в компанию, осуществляющую секвенирование. Наконец, получили последовательность мышиного антитела.
Последовательности вариабельной области тяжелой цепи и вариабельной области легкой цепи 9E5 являются следующими:
HCVR 9E5
QVQLQQPGADLVKPGASVKMSCKASGYILTTYWITWVKQRPGQGLEWIGDIHPGSGSTKYNEKFKSKATLTVDTSSSTAYMQLTRLSSEDSAVYYCARRDYWGQGTTLTVSS
SEQ ID NO: 1
LCVR 9E5
DVLMTQSPLSLPVSLGDQASISCRSSQNIVNSQGNTYLEWYLQKPGESPKLLIYKVTNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQASLVPWTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO: 2
Последовательности CDR 9E5 показаны в таблице 2 ниже.
Полученные последовательности вариабельной области прививали на последовательности константной области человеческого антитела IgG1 соответственно с получением последовательности химерного человеческого-мышиного антитела, и последовательность химерного антитела встраивали в вектор экспрессии pCP (приобретенный у MabSpace biology Co., Ltd.) с помощью методики молекулярного клонирования. Эти последовательности секвенировали и идентифицировали после амплификации с помощью ПЦР (молекулярно-биологические операционные методы, такие как молекулярное клонирование, выполняют в соответствии со стандартными операционными условиями и, в частности, можно сослаться на « Molecular Cloning: A Laboratory Manual»), и систему экспрессии на основе клеток HEK293 можно применять для получения химерного человеческого-мышиного антитела 9E5-C. Выполняли различные анализы активности in vitro для определения характеристик химерных антител, очищенных с помощью аффинной хроматографии MabSelect SuRe (GE Lifesciences). Данные приведены в таблице 3.
Пример 4. Гуманизация мышиного антитела
Основываясь на типичной структуре CDR VH/VL полученного мышиного антитела 9E5, последовательности вариабельной области тяжелой и легкой цепей сравнивали с базой данных антител зародышевого типа для получения матриц зародышевого типа человека с высокой гомологией. Среди них каркасная область легкой цепи зародышевого типа человека получена из гена легкой κ-цепи человека, а каркасная область легкой цепи антитела по настоящему изобретению предпочтительно представляет собой матрицу легкой цепи зародышевого типа человека Vk2-28/JK4 (9E5). Каркасная область тяжелой цепи зародышевого типа человека получена из тяжелой цепи человека, и каркасная область тяжелой цепи антитела по настоящему изобретению предпочтительно представляет собой матрицу тяжелой цепи зародышевого типа человека VH1-2/JH6 (9E5), показанную ниже.
Каркасная область тяжелой цепи 9E5 предпочтительно представляет собой матрицу тяжелой цепи зародышевого типа человека IGHV1-2 (SEQ ID NO: 9):
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAR.
Каркасная область легкой цепи 9E5 предпочтительно представляет собой матрицу легкой цепи зародышевого типа человека IGkV2-28 (SEQ ID NO: 10):
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTP.
CDR мышиного антитела прививали к выбранным гуманизированным матрицам для замены гуманизированных вариабельных областей, а затем рекомбинировали с соответствующей константной областью IgG человека (предпочтительно тяжелая цепь представляет собой IgG1, а легкая цепь представляет собой κ-цепь). Затем, основываясь на трехмерной структуре мышиного антитела, встроенные остатки, остатки, которые прямо взаимодействуют с CDR, и остатки, которые оказывают значительное влияние на конформацию VL и VH, подвергали обратной мутации, а химически лабильные аминокислотные остатки CDR оптимизировали для получения конечных гуманизированных молекул.
hu9E5-H1a (SEQ ID NO: 11):
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTTYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGSGSTKYNEKFKSRVTMTVDTSISTAYMELSRLRSEDTAVYYCARRDYWGQGTTVTVSS
hu9E5-H1b (SEQ ID NO: 12):
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTTYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGSGSTKYNEKFKSRVTLTVDTSISTAYMELSRLRSEDTAVYYCARRDYWGQGTTVTVSS
hu9E5-H1c (SEQ ID NO: 13):
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYILTTYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGSGSTKYNEKFKSRVTLTVDTSISTAYMELSRLRSEDTAVYYCARRDYWGQGTTVTVSS
hu9E5-L1a (SEQ ID NO: 14):
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQNIVNSQGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVTNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQASLVPWTFGGGTKVEIK
hu9E5-L1b (SEQ ID NO: 15):
DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQNIVNSQGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVTNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQASLVPWTFGGGTKVEIK
hu9E5-L1c (SEQ ID NO: 16):
DVLMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQNIVNSQGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVTNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQASLVPWTFGGGTKVEIK
Конечные молекулы гуманизированного антитела hu9E5 (содержащие тяжелую цепь H1c и легкую цепь L1a) отбирали с помощью вышеуказанных тестов экспрессии и сравнения количества обратных мутаций в комбинациях легких цепей и тяжелых цепей, а также полных последовательностей легких цепей и тяжелых цепей, которые представлены под SEQ ID NO: 17-18 соответственно.
HC hu9E5
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYILTTYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGSGSTKYNEKFKSRVTLTVDTSISTAYMELSRLRSEDTAVYYCARRDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 17
LC hu9E5
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQNIVNSQGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVTNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQASLVPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 18
Пример 5. Данные тестирования гуманизированного антитела
Активность связывания, активность блокирования и подобные характеристики гуманизированных антител hu9E5 по настоящему изобретению в отношении CD40 человека и макака-резуса показаны в таблице 4.
Пример 6. Подавление роста опухоли у мышей с помощью антитела к CD40
Отбирали нормальную периферическую кровь человека и выделяли с помощью центрифугирования в градиенте плотности PBMC здорового человека. Моноциты сортировали с применением набора микрогранул для CD14+ клеток, и CD14+ моноциты выделяли в соответствии с протоколом, прилагаемым к набору, т. е. 20 мкл микрогранул с антителом к CD14 добавляли на каждые 107 клеток и инкубировали при 4°C в течение 15 минут. Затем клетки вносили в магнитную колонку и промывали трижды. Собирали клетки из магнитной колонки, то есть CD14+ моноциты. К CD14+ моноцитам добавляли среду RPMI 1640, содержащую 10 нг/мл IL4 и 100 нг/мл GM-CSF, при этом моноциты культивировали в течение 6 дней (метод культивирования является традиционным методом в данной области техники) для осуществления индуцирования культуры клеток MoDC. К оставшимся клеткам добавляли RPMI 1640, содержащую IL-2, и суспендированные клетки собирали после культивирования (метод культивирования и метод сбора клеток являются традиционными в данной области техники). Т-клетки сортировали с применением набора микрогранул для CD3+ клеток. Через шесть дней собирали клетки MoDC и CD3+ Т-клетки соответственно и смешивали с клетками Raji (клеточный банк Шанхайского института биотехнологии, культивировали в среде RPMI1640, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки) при соотношении 1:5:20, и инокулировали каждой мыши NOG (Nanjing Galaxy Biopharma, адаптивное кормление в течение 5 дней) подкожно. Экспериментальных животных содержали в отдельном вентилируемом боксе с постоянными температурой и влажностью. Температура в помещении для разведения составляла 18,0-26,0°C, влажность составляла 40-70%, вентиляцию проводили 10-20 раз/час, а режим смены дня и ночи составлял 12 ч/12 ч.
Экспериментальные группы включали контрольную группу с антителом IgG1, hu9E5 и эталонным антителом G12, все из которых вводили в дозе 3 мг/кг. Пяти мышам в каждой группе клетки вводили один раз в неделю в течение шести недель с помощью трех последовательных введений. На протяжении всего эксперимента диаметр продольной оси и диаметр поперечной оси опухоли измеряли дважды в неделю с применением штангенциркуля и рассчитывали объем опухоли (мм3) = 0,5 × (диаметр продольной оси опухоли × диаметр поперечной оси опухоли 2). Относительную степень подавления опухоли TGI (%) рассчитывали с помощью следующего уравнения: TGI% = (1-T/C) × 100%. T/C% - относительная скорость роста опухоли, то есть процент относительного объема опухоли или вес опухоли в группе обработки и контрольной группе в определенный момент времени. Т и С - объем опухоли (TV) или вес опухоли (TW) в определенный момент времени в группе обработки и контрольной группе с IgG1 соответственно.
Результаты показали, что гуманизированное антитело к CD40 hu9E5 продемонстрировало очень значительный противоопухолевый эффект по сравнению с контрольным IgG1, при этом происходила почти полная элиминация опухоли после 21 дня введения.
Иллюстративный способ получения фармацевтической композиции на основе антитела (получение)
Первая стадия: антитело к CD40 (такое как hu9E5) и стабильный препарат получали в виде нерасфасованного препарата, содержащего антитело к CD40.
После фильтрации из нерасфасованного продукта отбирали пробу для теста на стерильность. Затем нерасфасованный продукт фильтровали через фильтрующий элемент из PVDF с размером пор 0,22 мкм и фильтрат собирали.
Вторая стадия: объем заполнения доводили до 1,1 мл и фильтратом заполняли флакон на 2 мл с пробками. Образцы отбирали в начале, середине и конце заполнения для измерения разницы в объеме заполнения.
Третья стадия: включали закаточную машину для выполнения закатки алюминиевой крышки.
Четвертая стадия: с помощью визуального осмотра подтверждали, что товар не имеет дефектов, таких как неправильное заполнение. Следующим шагом печатали и помещали этикетку на флакон. Затем печатали этикетку для картонной коробки, пока выполняли сворачивание картонной коробки. Продукт упаковывали. Наконец, на коробку наклеили этикетку для коробки.
Пример 7. Скрининг значения pH буферной системы для препарата на основе антитела к CD40
Следующие буферы составляли для получения препарата на основе антитела с концентрацией антитела к CD40, составляющей 50 мг/мл, и отбирали образцы для исследования стабильности при высокой температуре (40°C):
1) 10 мМ уксусной кислоты и ацетата натрия, pH 5,0;
2) 10 мМ уксусной кислоты и ацетата натрия, pH 5,5;
3) 10 мМ янтарной кислоты-сукцината натрия, pH 5,0;
4) 10 мМ янтарной кислоты-сукцината натрия, pH 5,5;
5) 10 мМ янтарной кислоты-сукцината натрия, pH 6,0;
6) 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 5,5;
7) 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 6,0;
8) 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 6,5.
Результаты показывают, что оптимальный диапазон pH для антител к CD40 составляет 5,0-6,0. В данном диапазоне pH отличия по каждой из SEC и CE между тремя буферными системами являются небольшими, а разброс по ICE находится в диапазоне 14,0% - 24,1%, что является более стабильным, чем в случае буферной системы (буфера) с pH 6,5.
Пример 8. Скрининг поверхностно-активных веществ для препаратов на основе антитела к CD40
Буферные системы на основе 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 5,5, и 10 мМ уксусной кислоты и ацетата натрия, pH 5,5, выбирали для получения препаратов на основе антитела к CD40, содержащих 50 мг/мл белка, 75 мг/мл сахарозы и различные типы поверхностно-активных веществ. Исследовали стабильность внешнего вида при 25°C следующих составов:
1) 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 5,5, содержащий 0,4 мг/мл полисорбата 80;
2) 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 5,5, содержащий 0,4 мг/мл полисорбата 20;
3) 10 мМ уксусной кислоты и ацетата натрия, pH 5,5, содержащий 0,4 мг/мл полисорбата 80;
4) 10 мМ уксусной кислоты и ацетата натрия, pH 5,5, содержащий 0,4 мг/мл полисорбата 20.
Результаты показывают, что полисорбат 80 является предпочтительным поверхностно-активным веществом.
Пример 9. Скрининг концентрации сурфактанта для препаратов на основе антитела к CD40
Буферную систему, содержащую 10 мМ уксусной кислоты и ацетата натрия, pH 5,5, выбирали для получения препаратов на основе антитела к CD40, содержащих 50 мг/мл белка, 75 мг/мл сахарозы и полисорбат 80 в различных концентрациях:
1) 10 мМ уксусной кислоты и ацетата натрия, pH 5,5, содержащий 0,1 мг/мл полисорбата 80;
2) 10 мМ уксусной кислоты и ацетата натрия, pH 5,5, содержащий 0,2 мг/мл полисорбата 80;
3) 10 мМ уксусной кислоты и ацетата натрия, pH 5,5, содержащий 0,4 мг/мл полисорбата 80;
4) 10 мМ уксусной кислоты и ацетата натрия, pH 5,5, содержащий 0,6 мг/мл полисорбата 80;
5) 10 мМ уксусной кислоты и ацетата натрия, pH 5,5, содержащий 0,8 мг/мл полисорбата 80.
Образцы разбавляли с помощью 0,9% раствора хлорида натрия для инъекций до концентрации белка, составляющей 0,5 мг/мл, соответственно,. Результаты по наличию нерастворимых частиц показали (см. таблицу 3), что при концентрации полисорбата 80, составляющей 0,1 мг/мл - 0,8 мг/мл, белок антитела к CD40 характеризовался хорошей совместимостью с хлоридом натрия, что свидетельствует о том, что вышеописанная концентрация полисорбата 80 характеризуется хорошим стабилизирующим действием; а затем вышеописанный образец помещали в инкубатор-встряхиватель (25°C, 300 об/мин) на 5 дней. Исходя из внешнего вида, выбрали концентрацию полисорбата 80, составляющую 0,4-0,8 мг/мл, предпочтительно 0,4 мг/мл.
Пример 10. Скрининг концентрации сахара для препаратов на основе антитела к CD40
Буферную систему, содержащую 10 мМ уксусной кислоты и ацетата натрия, pH 5,5, выбирали для получения препаратов на основе антитела к CD40, содержащих 50 мг/мл белка, 0,4 мг/мл полисорбата 80 в различных концентрациях:
1) 10 мМ уксусной кислоты и ацетата натрия, pH 5,5, содержащий 55 мг/мл сахарозы;
2) 10 мМ уксусной кислоты и ацетата натрия, pH 5,5, содержащий 65 мг/мл сахарозы;
3) 10 мМ уксусной кислоты и ацетата натрия, pH 5,5, содержащий 70 мг/мл сахарозы;
4) 10 мМ уксусной кислоты и ацетата натрия, pH 5,5, содержащий 75 мг/мл сахарозы;
5) 10 мМ уксусной кислоты и ацетата натрия, pH 5,5, содержащий 80 мг/мл сахарозы;
Результаты по осмотическому давлению для каждого образца показывают (см. таблицу 8), что препарат является изотоническим, когда концентрация сахарозы составляет 80 мг/мл.
Пример 11. Стабильность различных буферных систем для антитела к CD40
Следующие буферные системы применяли для получения препаратов на основе антитела к CD40, содержащих 50 мг/мл белка, 80 мг/мл сахарозы и 0,4 мг/мл полисорбата 80 и исследовали их стабильность при 25°C и 2-8°C.
1) 10 мМ уксусной кислоты и ацетата натрия, pH 5,5;
2) 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 5,5.
3) 10 мМ гистидина и уксусной кислоты, pH 5,5.
Результаты показали, что после 6 месяцев хранения при 25℃ буферная система на основе 10 мМ уксусной кислоты и ацетата натрия немного превосходила другие буферные системы, в то время как отличие между буферными системами на основе 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида и 10 мМ гистидина и уксусной кислоты было незначительным; после 6 месяцев хранения при 2-8℃ значительное отличие по качеству трех систем отсутствовало.
Пример 12. Влияние концентрации белка в препарате на стабильность
Буферную систему, содержащую 10 мМ гистидина и гидрохлорида, pH 5,5, выбирали для получения препаратов на основе антитела к CD40, содержащих 80 мг/мл сахарозы, 0,4 мг/мл полисорбата 80 и белок в различных концентрациях, составляющих 50 мг/мл, 25 мг/мл и 1 мг/мл. Исследовали высокотемпературную стабильность при 40°C для следующих составов:
1) 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 5,5, при концентрации белка, составляющей 50 мг/мл;
2) 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 5,5, при концентрации белка, составляющей 25 мг/мл;
3) 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 5,5, при концентрации белка, составляющей 1 мг/мл.
Результаты показывают, что концентрация белка в препаратах будет воздействовать на чистоту, при этом концентрации белка, составляющие 50 мг/мл и 25 мг/мл, характеризуются небольшим эффектом на чистоту, а стабильность препарата с концентрацией белка, составляющей 1 мг/мл, очевидно является низкой.
Пример 13. Полный скрининг ингредиентов препарата
Чтобы дополнительно оптимизировать концентрацию белка, концентрацию полисорбата 80 и pH, для дизайна DOE использовали программное обеспечение JMP, а модель RSM применяли для получения серии рецептур (см. ниже). Поскольку не было особо значительного отличия между данными о стабильности буферных систем на основе гистидина и гистидина гидрохлорида (His-HCl) и гистидина и уксусной кислоты (His-AA), а диапазон pH буфера на основе His-HCl превышает 5,5, His-AA выбирали в качестве буфера для DOE-эксперимента по скринингу. В буферной системе, содержащей 10 мМ гистидина и уксусной кислоты (His-AA), получали препараты на основе антитела к CD40 с различными концентрациями белка, различными концентрациями полисорбата 80 и 80 мг/мл сахарозы, и образцы для анализа стабильности хранили при 40°C:
(1) 0,4 мг/мл полисорбата 80, pH 5,0, содержащий 40 мг/мл CD40;
(2) 0,2 мг/мл полисорбата 80, pH 5,5, содержащий 10 мг/мл CD40;
(3) 0,4 мг/мл полисорбата 80, pH 5,5, содержащий 25 мг/мл CD40;
(4) 0,4 мг/мл полисорбата 80, pH 5,5, содержащий 25 мг/мл CD40;
(5) 0,4 мг/мл полисорбата 80, pH 5,0, содержащий 10 мг/мл CD40;
(6) 0,6 мг/мл полисорбата 80, pH 6,0, содержащий 40 мг/мл CD40;
(7) 0,2 мг/мл полисорбата 80, pH 5,0, содержащий 25 мг/мл CD40;
(8) 0,2 мг/мл полисорбата 80, pH 6,0, содержащий 40 мг/мл CD40;
(9) 0,6 мг/мл полисорбата 80, pH 5,0, содержащий 25 мг/мл CD40;
(10) 0,4 мг/мл полисорбата 80, pH 5,5, содержащий 40 мг/мл CD40;
(11) 0,6 мг/мл полисорбата 80, pH 5,5, содержащего 10 мг/мл CD40;
(12) 0,4 мг/мл полисорбата 80, pH 6,0, содержащий 10 мг/мл CD40.
Результаты показывают, что при значении pH от 5,0 до 6,0, концентрации полисорбата 80 от 0,2 до 0,6 мг/мл и концентрация белка от 10 до 40 мг/мл, колебания вышеуказанных параметров не оказывали большого влияния на стабильность. Диапазон pH, указанный в рецептуре, составлял 5,0-6,0, поэтому среднее значение, составляющее 5,5, приняли за конечное значение pH, а 0,4 мг/мл за конечную концентрацию полисорбата 80 с общим учетом результатов предыдущего скрининга, и концентрацию белка установили как 25 мг/мл.
Пример 14. Стабильность антитела к CD40 в различных буферных системах при лиофилизации
Поскольку буферная система на основе уксусной кислоты (ацетата натрия) может сдвигать значение pH после восстановления из-за испарения во время лиофилизации, она не подходит для применения в качестве буферной системы для лиофилизированных препаратов. Два типа буферов, как, например, на основе 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида (His-HCl), pH 5,5, и 10 мМ гистидина и уксусной кислоты (His-AA), pH 5,5 выбрали для получения препаратов на основе антитела к CD40, содержащих 50 мг/мл белка, 80 мг/мл сахарозы и 0,4 мг/мл полисорбата 80. Объем заполнения составлял 1,2 мл/бутыль, а процесс лиофилизации является таким, как показано в таблице 13.
1) 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 5,5;
2) 10 мМ гистидина и уксусной кислоты, pH 5,5.
Лиофилизированный продукт имел надлежащую форму лепешки, после восстановления внешний вид был прозрачным, и не наблюдали никаких явных изменений pH и чистоты, это свидетельствует о том, что процесс лиофилизации прошел хорошо. Результаты показывают, что два типа буферов, такие как буферы на основе 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 5,5, и 10 мМ гистидина и уксусной кислоты, pH 5,5, оба подходят для использования в качестве буферных систем для препаратов на основе антитела к CD40.
Пример 15. Другие альтернативные препараты
Кроме того, в настоящем изобретении также представлены фармацевтические препараты на основе антитела к CD40 с другими препаратами, включая без ограничения:
(1) 25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,6 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 5,5;
(2) 25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,6 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 5,8;
(3) 25 мг/мл антител к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,6 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 6,0;
(4) 25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,4 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 5,6;
(5) 25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,4 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 5,8;
(6) 25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,4 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ гистидина и гистидина гидрохлорида, pH 6,0;
(7) 25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,4 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ буфера на основе гистидина и уксусной кислоты, pH 5,0;
(8) 25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,4 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ буфера на основе гистидина и уксусной кислоты, pH 5,5;
(9) 25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,4 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ буфера на основе гистидина и уксусной кислоты, pH 6,0;
(10) 25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,6 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ буфера на основе гистидина и уксусной кислоты, pH 5,0;
(11) 25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,6 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ буфера на основе гистидина и уксусной кислоты, pH 5,5;
(12) 25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,6 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ буфера на основе гистидина и уксусной кислоты, pH 5,8;
(13) 25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,6 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ буфера на основе гистидина и уксусной кислоты, pH 6,0;
(14) 25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,4 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия, pH 5,5;
(15) 25 мг/мл антитела к CD40, 80 мг/мл сахарозы, 0,6 мг/мл полисорбата 80 и 10 мМ буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия, pH 5,5.
Результаты экспериментов показывают, что препараты на основе антитела к CD40 с препаратами, определенными выше, характеризуются надлежащей стабильностью и могут применяться для получения лекарственных препаратов на основе антитела к CD40.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> ЦЗЯНСУ ХЭНЖУЙ МЕДИСИН КО., ЛТД;
ШАНХАЙ ХЭНЖУЙ ФАРМАСЬЮТИКАЛ КО., ЛТД
<120> ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ОСНОВЕ АНТИТЕЛ К CD40 И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ
<130> P19404528C
<150> CN201811448238.5
<151> 2018-11-30
<160> 18
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 112
<212> БЕЛОК
<213> Домовая мышь (Mus musculus)
<400> 1
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Leu Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Ile Thr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile His Pro Gly Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Thr Arg Leu Ser Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 2
<211> 112
<212> БЕЛОК
<213> Домовая мышь (Mus musculus)
<400> 2
Asp Val Leu Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val Asn Ser
20 25 30
Gln Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Glu Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Thr Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 3
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Домовая мышь (Mus musculus)
<400> 3
Gly Tyr Ile Leu Thr Thr Tyr Trp Ile Thr
1 5 10
<210> 4
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Домовая мышь (Mus musculus)
<400> 4
Asp Ile His Pro Gly Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Ser
<210> 5
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Домовая мышь (Mus musculus)
<400> 5
Arg Asp Tyr
1
<210> 6
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Домовая мышь (Mus musculus)
<400> 6
Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val Asn Ser Gln Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
<210> 7
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Домовая мышь (Mus musculus)
<400> 7
Lys Val Thr Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 8
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Домовая мышь (Mus musculus)
<400> 8
Phe Gln Ala Ser Leu Val Pro Trp Thr
1 5
<210> 9
<211> 98
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<400> 9
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg
<210> 10
<211> 100
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<400> 10
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Thr Pro
100
<210> 11
<211> 112
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<400> 11
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile His Pro Gly Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 12
<211> 112
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<400> 12
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile His Pro Gly Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 13
<211> 112
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<400> 13
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Leu Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile His Pro Gly Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 14
<211> 112
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<400> 14
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val Asn Ser
20 25 30
Gln Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Thr Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 15
<211> 112
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<400> 15
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val Asn Ser
20 25 30
Gln Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Thr Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 16
<211> 112
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<400> 16
Asp Val Leu Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val Asn Ser
20 25 30
Gln Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Thr Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 17
<211> 442
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<400> 17
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Leu Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile His Pro Gly Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
115 120 125
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
130 135 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
180 185 190
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
195 200 205
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
210 215 220
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
225 230 235 240
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
245 250 255
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
260 265 270
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
275 280 285
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
290 295 300
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
305 310 315 320
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
325 330 335
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
340 345 350
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
355 360 365
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
370 375 380
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
385 390 395 400
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
405 410 415
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
420 425 430
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 18
<211> 219
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<400> 18
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val Asn Ser
20 25 30
Gln Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Thr Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<---
Claims (21)
1. Фармацевтическая композиция для лечения заболеваний или симптомов, связанных с CD40, содержащая антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент и буфер, где антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат LCDR1, LCDR2 и LCDR3, представленные под SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8 соответственно, и HCDR1, HCDR2 и HCDR3, представленные под SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5 соответственно; при этом буфер выбран из ацетатного буфера, гистидинового буфера; где концентрация антитела к CD40 или его антигенсвязывающего фрагмента составляет от 10 мг/мл до 40 мг/мл; pH фармацевтической композиции составляет 5,0-6,0; концентрация буфера составляет от 10 мМ до 20 мМ; которая содержит дисахарид, который представляет собой сахарозу, где концентрация дисахарида составляет от 60 мг/мл до 90 мг/мл; которая содержит поверхностно-активное вещество, которое представляет собой полисорбат 80; где концентрация поверхностно-активного вещества составляет от 0,3 мг/мл до 0,8 мг/мл.
2. Фармацевтическая композиция по п.1, где буфер представляет собой ацетатный буфер.
3. Фармацевтическая композиция по п.1, где буфер представляет собой буфер на основе уксусной кислоты и ацетата натрия.
4. Фармацевтическая композиция по п.1, где концентрация антитела к CD40 или его антигенсвязывающего фрагмента составляет 25 мг/мл.
5. Фармацевтическая композиция по п.1, где pH фармацевтической композиции составляет 5,0 или 5,5.
6. Фармацевтическая композиция по п.1, где концентрация буфера составляет 10 мМ.
7. Фармацевтическая композиция по п.1, где концентрация дисахарида составляет 80 мг/мл.
8. Фармацевтическая композиция по п.1, где концентрация поверхностно-активного вещества составляет 0,4 мг/мл или 0,6 мг/мл.
9. Фармацевтическая композиция для лечения заболеваний или симптомов, связанных с CD40, содержащая:
(а) 10-40 мг/мл антитела к CD40 или его антигенсвязывающего фрагмента, где антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат LCDR1, LCDR2 и LCDR3, представленные под SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8 соответственно, и HCDR1, HCDR2 и HCDR3, представленные под SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5 соответственно, и
(b) 10-20 мМ ацетатного буфера, и при этом фармацевтическая композиция содержит 60-90 мг/мл сахарозы, 0,3-0,8 мг/мл полисорбата 80, и при этом pH фармацевтической композиции составляет 5,0-5,5.
10. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-9, где антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи, представленную под SEQ ID NO:1, и вариабельную область легкой цепи, представленную под SEQ ID NO: 2.
11. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-9, где антитело к CD40 или его антигенсвязывающий фрагмент представляют собой гуманизированное антитело.
12. Фармацевтическая композиция по п.11, где последовательности FR легкой цепи в вариабельной области легкой цепи и последовательности FR тяжелой цепи в вариабельной области тяжелой цепи гуманизированного антитела происходят из легкой цепи и тяжелой цепи зародышевого типа человека соответственно или их мутантных последовательностей.
13. Фармацевтическая композиция по п.11 или 12, где тяжелая цепь гуманизированного антитела имеет последовательность, представленную под SEQ ID NO: 17, или ее вариант, и при этом вариант предпочтительно содержит 0-10 аминокислотных вариаций в вариабельной области тяжелой цепи, более предпочтительно мутации в аминокислотных положениях 6 и 8, где предпочтительно в результате мутаций происходит замена на аминокислоты I, A или L; легкая цепь гуманизированного антитела имеет последовательность, представленную под SEQ ID NO: 18, или ее вариант, и при этом вариант предпочтительно содержит 0-10 аминокислотных вариаций в вариабельной области легкой цепи, более предпочтительно мутации в аминокислотных положениях 2 и 3, где предпочтительно в результате мутаций происходит замена на аминокислоты I, V или L.
14. Фармацевтическая композиция по любому из пп.11 или 12, где вариабельная область тяжелой цепи гуманизированного антитела дополнительно содержит FR тяжелой цепи из IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 человека или их вариант, предпочтительно содержит FR тяжелой цепи из IgG1, IgG2 или IgG4 человека, а более предпочтительно содержит FR тяжелой цепи из IgG1 или IgG2 человека.
15. Способ получения лиофилизированного препарата, содержащего антитело к CD40, который включает стадию лиофилизации фармацевтической композиции по любому из пп.1-14.
16. Лиофилизированный препарат для лечения заболеваний или симптомов, связанных с CD40, содержащий антитело к CD40, полученный посредством способа по п.15.
17. Применение фармацевтической композиции по любому из пп.1-12 или лиофилизированного препарата по п.16 при получении лекарственного препарата для лечения заболеваний или симптомов, связанных с CD40.
18. Применение по п.17, где заболевания или симптомы представляют собой виды рака, при этом виды рака выбраны из лимфомы, рака молочной железы, рака яичника, рака предстательной железы, рака поджелудочной железы, рака почки, рака легкого, рака печени, рака желудка, колоректального рака, рака мочевого пузыря, рабдомиосаркомы, рака пищевода, рака шейки матки, множественной миеломы, видов лейкоза, рака желчного пузыря, глиобластомы и меланомы.
19. Набор для лечения заболеваний или симптомов, связанных с CD40, предусматривающий контейнер, где контейнер содержит фармацевтическую композицию по любому из пп.1-14 или лиофилизированный препарат по п.16.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811448238.5 | 2018-11-30 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2778572C1 true RU2778572C1 (ru) | 2022-08-22 |
Family
ID=
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1897971A (zh) * | 2003-12-22 | 2007-01-17 | 辉瑞产品公司 | Cd40抗体制剂和方法 |
RU2442605C2 (ru) * | 2005-11-01 | 2012-02-20 | Новартис Аг | Применения антител против cd40 |
WO2016115475A1 (en) * | 2015-01-18 | 2016-07-21 | Biogen Ma Inc. | Anti-cd40 antibody formulations |
CN107922501A (zh) * | 2015-09-01 | 2018-04-17 | 勃林格殷格翰国际有限公司 | 抗cd40抗体用于治疗狼疮性肾炎的用途 |
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1897971A (zh) * | 2003-12-22 | 2007-01-17 | 辉瑞产品公司 | Cd40抗体制剂和方法 |
RU2442605C2 (ru) * | 2005-11-01 | 2012-02-20 | Новартис Аг | Применения антител против cd40 |
WO2016115475A1 (en) * | 2015-01-18 | 2016-07-21 | Biogen Ma Inc. | Anti-cd40 antibody formulations |
CN107922501A (zh) * | 2015-09-01 | 2018-04-17 | 勃林格殷格翰国际有限公司 | 抗cd40抗体用于治疗狼疮性肾炎的用途 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
TWI829799B (zh) | 一種TGF-β受體融合蛋白醫藥組成物及其用途 | |
CN111744007B (zh) | 一种抗tigit抗体药物组合物及其用途 | |
TWI699376B (zh) | 抗cd40抗體、其抗原結合片段及其醫藥用途 | |
RU2771384C2 (ru) | Фармацевтическая композиция, содержащая антитело к lag-3, и ее применение | |
TWI745670B (zh) | 抗cd27抗體、其抗原結合片段及其醫藥用途 | |
CN110960490A (zh) | 一种抗egfr抗体偶联药物组合物及其用途 | |
CN111375059B (zh) | 一种抗gitr抗体药物组合物及其用途 | |
JP2020528411A (ja) | Sost抗体医薬組成物およびその使用 | |
KR20230044448A (ko) | 항-pd-1 항체 약학적 조성물 및 이의 용도 | |
US20210261663A1 (en) | Anti-tim3 antibody pharmaceutical composition and use thereof | |
CN112839961B (zh) | 一种cd40抗体药物组合物及其用途 | |
WO2021190582A1 (zh) | 一种抗ox40抗体药物组合物及其用途 | |
RU2778572C1 (ru) | Фармацевтическая композиция на основе антител к cd40 и ее применение | |
US20230088052A1 (en) | Pharmaceutical composition containing anti-il-4r antibody and use thereof | |
JP2024500308A (ja) | 抗tslp抗体医薬組成物及びその使用 | |
KR20240035835A (ko) | 항-angptl3 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 약학적 조성물 및 이의 응용 |