CN107922501A - 抗cd40抗体用于治疗狼疮性肾炎的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及新的人源化拮抗性抗CD40抗体，和使用它来治疗和/或预防狼疮性肾炎的治疗和诊断方法以及组合物。

Description

抗CD40抗体用于治疗狼疮性肾炎的用途
发明领域
本发明概括而言涉及人源化抗CD40抗体用于治疗和/或预防狼疮性肾炎的用途。
发明背景
CD40是一种48kDa I型整合膜糖蛋白，并且是肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族成员。CD40在多种细胞类型上表达，包括正常和肿瘤性B细胞、交错突细胞、癌、上皮细胞(例如角质形成细胞)、成纤维细胞(例如滑膜细胞)和血小板。其还存在于单核细胞、巨噬细胞、某些内皮细胞和滤泡树突细胞上。CD40在B细胞个体发生早期表达，在CD10和CD19出现之后，但是在CD21、CD23、CD24表达和表面免疫球蛋白M(sIgM)出现之前出现在B细胞前体上(Uckun等，1990,Blood 15:2449)。CD40还已经在扁桃体和骨髓衍生的血浆细胞上检出(Pellat-Decounynck等，1994,Blood 84:2597)。
CD40的配体是CD40L(也称为CD154、gp39和TRAP)，一种TNF超家族成员。CD40L是主要在激活的CD4+T细胞上并在小亚组的CD8+T细胞上表达的跨膜蛋白(由Van Kooten C.andBanchereau,2000综述)。
CD40与CD40L的相互作用诱导体液和细胞介导的免疫应答。CD40调节这种配体-受体对以激活B细胞和其他抗原呈递细胞(APC)包括树突细胞(DC)(由(Toubi andShoenfeld,2004)；(Kiener,等，1995)综述)。B细胞上CD40的功能已经被广泛地研究。B细胞上CD40的激活诱导增殖、分化成抗体分泌细胞和次级淋巴器官发生中心的同种型转换。体外研究证明了CD40激活对细胞因子产生(IL-6、IL-10、TNF-α、LT-α)、粘附分子和共刺激受体(ICAM、CD23、CD80和CD86)的表达，以及通过B淋巴细胞增加的MHC I类、MHC II类和TAP转运蛋白的表达的直接影响(Liu,等，1996)。对于这些过程中的大多数而言，CD40与细胞因子或其他受体-配体相互作用一起发挥作用。
CD40在单核细胞和DC上的信号传导导致提高的存活以及细胞因子(IL-1、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、TNF-α和MIP-1α)分泌。CD40在这些APC上的连接导致共刺激分子如(ICAM-1、LFA-3、CD80和CD86)的上调。CD40受体的激活是允许DC完全成熟成有效的、驱动T细胞激活的APC的关键信号之一(Banchereau and Steinman,1998)(Van Kooten C.andBanchereau,2000)。
小鼠模型中最近的研究显示树突细胞上的CD40信号传导也在TH17细胞的生成中扮演了重要角色，所述TH17细胞被认为是疾病如关节炎和多发性硬化中自身免疫的调节剂(Iezzi,等，2009)(Perona-Wright,等，2009)。
CD40和CD40L敲除小鼠的可用性以及激动性和拮抗性抗小鼠抗体提供了在多种疾病模型中研究CD40-CD40L相互作用的功能的可能性。阻断性抗CD40L的施用已经被证明在多种自身免疫模型中是有益的，包括SNF1小鼠中的自发性疾病如狼疮性肾炎，或在NOD小鼠中的糖尿病，或实验诱发形式的疾病如胶原诱发的关节炎(CIA)或实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)(Toubi and Shoenfeld,2004)。小鼠中的CIA受到抗CD40L mAb的抑制，所述抗CD40L mAb阻断了关节炎症的形成，血清抗体相对于胶原的效价，炎性细胞除了对软骨和骨的侵蚀之外向滑膜下组织的浸润(Durie,等，1993)。对于狼疮性肾炎和EAE二者，证明了抗CD40L还能够减轻进行中的疾病，确认了CD40-CD40L在疾病的效应阶段的作用(Kalled,等，1998)；(Howard,等，1999)。
因此，临床前研究为CD40-CD40L对在驱动有效的T细胞依赖性免疫应答方面的关键作用提供了证据。因此阻断CD40信号传导被认为是一种合适且亟需的抑制疾病如狼疮性肾炎中的致病性自身免疫应答的策略。
国际肾病学会(ISN)/肾脏病理学会提供了对狼疮性肾炎的分类，其部分基于肾损伤的程度。(参见J.J.Weening等，“The classification of glomerulonephritis insystemic lupus erythematosus revisited,”J.Am.Soc.Nephrol 15:241–250,2004.)
来自患有狼疮性肾炎的SLE患者的肾脏活检样品显示了一系列血管、肾小球和小管间质病变。肾小球损伤通过在系膜、内皮和上皮细胞上的免疫-复合物定位来测定。依赖于这些变化，可以将狼疮性肾炎分为6类，从仅在系膜基质中显示出免疫复合物沉积(I类)或系膜细胞过多(hyper cellularity)(II类)的相对轻度损伤，到>90％肾小球中的全局性硬化(VI类)。患有I或II类狼疮性肾炎的患者仅显示出无症状的蛋白尿，并且没有GFR的下降。将内毛细血管变化分为局部增生性(III类)或弥漫性增生性(>50％的肾小球受到影响，IV类)。在这些患者中的临床发现是血尿、症状性蛋白尿和GFR的丧失。纯上皮损伤(V类)导致沿着肾小球基底膜的免疫复合物沉积而没有炎性病灶。这些患者主要患有肾病性蛋白尿。
对于I类和II类没有免疫抑制治疗的需要，并且在VI类中不可逆转的损害之后没有治疗效果，而狼疮性肾炎III-V是免疫抑制疗法可及的。约25％的狼疮性肾炎患者为III类，40％为IV类，而10％是V类。约1/6的III和IV类也会具有5类(重叠)。
免疫抑制性治疗应当根据肾脏活检样本来指导，并且以完全肾脏应答为目的(蛋白尿<0.5g/24h，具有正常或接近正常的肾功能)。除了糖皮质激素，尚无得到许可的狼疮性肾炎疗法，然而，环磷酰胺或霉酚酸酯(MMF)各自与糖皮质激素的组合已经显示出诱导活跃的狼疮性肾炎改善的临床症状，并降低ESRD进展的风险。约20-30％的用MMF或环磷酰胺治疗的患者显示完全肾脏应答(蛋白尿<0.5g/d，无活跃沉积，无GFR恶化)，而另外约20％显示至少部分应答(蛋白尿降低≥50％)。
因此，糖皮质激素与MMF或与环磷酰胺的组合被看做目前狼疮性肾炎看护的标准，这也由Joint European League Against Rheumatism and European RenalAssociation-European Dialysis and Transplant Association(欧洲抗风湿和欧洲肾脏协会-欧洲透析和移植协会联合会)(EULAR/ERA-EDTA)的建议所体现。这些建议还包括用于所有狼疮性肾炎患者的降低爆发数的氢氯喹和ACE抑制剂或ARB的使用。
然而，所有可用的狼疮性肾炎的治疗可能与显著的毒性(例如，不育、感染、恶性肿瘤)相伴。另外，完全应答率仍然很低，并且在响应者中高比率的复发使得长期维持疗法变得合理。近期进行的III期狼疮性肾炎试验(例如利妥昔单抗(rituximab)、阿巴西普(abatacept))未能实现它们的主要终点。总而言之，对于狼疮性肾炎的新疗法存在没有得到满足的需求。这种需求可以通过本发明和US20110243932中所述的人源化抗CD40抗体来解决，所述抗体特异性结合CD40并且显示出允许其被用在狼疮性肾炎的治疗性干预中的抗原结合特异性、亲和力，以及药代动力学和药效学性质。
发明内容
本发明提供使用人源化单克隆抗体治疗和/或预防狼疮性肾炎的方法(“本发明的方法”)。
在示例性实施方案中，本发明的方法中使用的抗体包含选自SEQ ID NO:1至SEQID NO:4中任一的重链序列选自SEQ ID NO:5至SEQ ID NO:8中任一的轻链序列。
在其他实施方案中，本发明的方法中使用的抗体是人源化抗体或抗体的抗原结合片段，其具有SEQ ID NO:1至4，SEQ ID NO:27，SEQ ID NO:28，SEQ ID NO:29，SEQ ID NO:30，SEQ ID NO:32，SEQ ID NO:33，SEQ ID NO:34，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:37，SEQ IDNO:38，SEQ ID NO:39，SEQ ID NO:40，SEQ ID NO:42，SEQ ID NO:44，SEQ ID NO:46，SEQ IDNO:48，SEQ ID NO.50SEQ ID NO:53，SEQ ID NO:57，SEQ ID NO:58，SEQ ID NO:59，SEQ IDNO:60，SEQ ID NO:61，SEQ ID NO:62，SEQ ID NO:63，SEQ ID NO:64，SEQ ID NO:65，SEQ IDNO:66，SEQ ID NO:67，SEQ ID NO:68，SEQ ID NO:69，SEQ ID NO:70，SEQ ID NO:71，SEQ IDNO:72或SEQ ID NO:73中任一的重链可变区氨基酸序列。
在其他实施方案中，本发明的方法中使用的抗体是人源化抗体或抗体的抗原结合片段，其包含SEQ ID NO:5至SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:26，SEQ ID NO:31，SEQ ID NO:36，SEQ ID NO:41，SEQ ID NO:43，SEQ ID NO:45，SEQ ID NO:47，SEQ ID NO:49，SEQ ID NO:50，SEQ ID NO:51，SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:54，SEQ ID NO:55，SEQ ID NO:56，SEQ IDNO:74，SEQ ID NO:75或SEQ ID NO:76的轻链可变域氨基酸序列。
在具体的实施方案中，本发明的方法中使用的单克隆抗体包含重链和轻链，其中所述重链CDR1序列选自由SEQ ID NO:9至SEQ ID NO:11组成的组，重链CDR2序列选自由SEQID NO:12至SEQ ID NO:15组成的组，并且重链CDR3序列选自由SEQ ID NO:16至SEQ ID NO:17组成的组；并且其中轻链CDR1序列具有选自由SEQ ID NO:18至SEQ ID NO:21组成的组的序列，轻链CDR2序列选自SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:23，并且轻链CDR3序列选自由SEQ IDNO:24至SEQ ID NO:25组成的组。
在具体的实施方案中，本发明的方法中使用的单克隆抗体包含SEQ ID NO:10的重链CDR1序列，SEQ ID NO:13的重链CDR2序列和SEQ ID NO:16的重链CDR3序列；并且其中所述抗体包含SEQ ID NO:19的轻链CDR1序列，SEQ ID NO:22的轻链CDR2序列和SEQ ID NO:24的轻链CDR3序列。
在其他具体的实施方案中，本发明的方法中使用的单克隆抗体包含SEQ ID NO:9的重链CDR1序列，SEQ ID NO:14的重链CDR2序列和SEQ ID NO:16的重链CDR3序列；并且其中所述抗体包含SEQ ID NO:20的轻链CDR1序列，SEQ ID NO:22的轻链CDR2序列和SEQ IDNO:24的轻链CDR3序列。
在另一具体的实施方案中，本发明的方法中使用的单克隆抗体包含SEQ ID NO:9的重链CDR1序列，SEQ ID NO:14的重链CDR2序列和SEQ ID NO:16的重链CDR3序列；并且其中所述抗体包含SEQ ID NO:20的轻链CDR1序列，SEQ ID NO:22的轻链CDR2序列和SEQ IDNO:24的轻链CDR3序列。
在另一具体的实施方案中，本发明的方法中使用的单克隆抗体包含SEQ ID NO:11的重链CDR1序列，SEQ ID NO:15的重链CDR2序列和SEQ ID NO:17的重链CDR3序列；并且其中所述抗体包含SEQ ID NO:21的轻链CDR1序列，SEQ ID NO:23的轻链CDR2序列和SEQ IDNO:25的轻链CDR3序列。
在另一实施方案中，本发明涉及抗CD40抗体用于治疗和/或预防狼疮的用途，所述抗CD40抗体包含SEQ ID NOs:1至4中任一项的重链可变域序列。所述抗CD40抗体的特征进一步在于包含SEQ ID NOs:5至SEQ ID NO:8中任一项的轻链可变域序列。
还考虑的是抗CD40抗体治疗和/或预防狼疮性肾炎的用途，其中所述抗CD40抗体包含人源化的抗体或抗体片段，所述抗体或抗体片段具有重链可变域和轻链可变区，其包含分别为SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:26；分别为SEQ ID NO:28和SEQID NO:26；分别为SEQID NO:29和SEQID NO:26；分别为SEQ ID NO:30和SEQID NO:26；分别为SEQ ID NO:32和SEQID NO:31；分别为SEQ ID NO:33和SEQID NO:31；分别为SEQ ID NO:34和SEQID NO:31；分别为SEQ ID NO:35和SEQID NO:31；分别为SEQ ID NO:37和SEQID NO:36；分别为SEQ IDNO:38和SEQID NO:36；分别为SEQ ID NO:39和SEQID NO:36；分别为SEQ ID NO:40和SEQIDNO:36的氨基酸序列。
在另一实施方案中，本发明的方法中使用的所述人源化抗体或抗体片段包含分别包含SEQ ID NO:27和SEQID NO:26的氨基酸序列的重链可变域和轻链可变区。
在另一实施方案中，本发明的方法中使用的所述人源化抗体或抗体片段包含分别包含SEQ ID NO:28和SEQID NO:26的氨基酸序列的重链可变域和轻链可变区。
在另一实施方案中，本发明的方法中使用的所述人源化抗体或抗体片段包含分别包含SEQ ID NO:29和SEQID NO:26的氨基酸序列的重链可变域和轻链可变区。
在另一实施方案中，本发明的方法中使用的所述人源化抗体或抗体片段包含分别包含SEQ ID NO:30和SEQID NO:26的氨基酸序列的重链可变域和轻链可变区。
在另一实施方案中，本发明的方法中使用的所述人源化抗体或抗体片段包含分别包含SEQ ID NO:32和SEQID NO:31的氨基酸序列的重链可变域和轻链可变区。
在另一实施方案中，本发明的方法中使用的所述人源化抗体或抗体片段包含分别包含SEQ ID NO:33和SEQID NO:31的氨基酸序列的重链可变域和轻链可变区。
在另一实施方案中，本发明的方法中使用的所述人源化抗体或抗体片段包含分别包含SEQ ID NO:34和SEQID NO:31的氨基酸序列的重链可变域和轻链可变区。
在另一实施方案中，本发明的方法中使用的所述人源化抗体或抗体片段包含分别包含SEQ ID NO:35和SEQID NO:31的氨基酸序列的重链可变域和轻链可变区。
在另一实施方案中，本发明的方法中使用的所述人源化抗体或抗体片段包含分别包含SEQ ID NO:37和SEQID NO:36的氨基酸序列的重链可变域和轻链可变区。
在另一实施方案中，本发明的方法中使用的所述人源化抗体或抗体片段包含分别包含SEQ ID NO:38和SEQID NO:36的氨基酸序列的重链可变域和轻链可变区。
在另一实施方案中，本发明的方法中使用的所述人源化抗体或抗体片段包含分别包含SEQ ID NO:39和SEQID NO:36的氨基酸序列的重链可变域和轻链可变区。
在另一实施方案中，本发明的方法中使用的所述人源化抗体或抗体片段包含分别包含SEQ ID NO:40和SEQID NO:36的氨基酸序列的重链可变域和轻链可变区。
另一个实施方案，本发明的方法涉及使用特异性结合人CD40的分离的抗体或抗原结合片段治疗和/或预防狼疮性肾炎，其中所述分离的抗体或抗原结合片段包含人源化的重链可变域，所述人源化的重链可变域包含具有与SEQ ID NO:27，SEQ ID NO:28，SEQ IDNO:29或SEQ ID NO:30的人可变域重链氨基酸序列的框架区的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的框架区，并且包含与相应的SEQ ID NO:26的轻链可变域具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列。
另一个实施方案，本发明的方法涉及使用特异性结合人CD40的分离的抗体或抗原结合片段治疗和/或预防狼疮性肾炎，其中所述分离的抗体或抗原结合片段包含人源化的重链可变域，所述人源化的重链可变域包含具有与SEQ ID NO:32，SEQ ID NO:33，SEQ IDNO:34或SEQ ID NO:35的人可变域重链氨基酸序列的框架区的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的框架区，并且包含与相应的SEQ ID NO:31的轻链可变域具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列。
另一方面，本发明的方法涉及上文刚刚描述过的实施方案中所述的分离的抗体或抗原结合片段的用途，其中所述重链氨基酸序列是SEQ ID NO:32；在另一实施方案中，所述重链氨基酸序列是SEQ ID NO:33；在另一实施方案中，所述重链氨基酸序列是SEQ ID NO:34；并且在另一实施方案中，所述重链氨基酸序列是SEQ ID NO:35。
在另一实施方案中，本发明涉及使用人源化的重链可变域治疗和/或预防狼疮性肾炎，所述人源化的重链可变域包含具有与SEQ ID NO:37，SEQ ID NO:38，SEQ ID NO:39或SEQ ID NO:40的人可变域重链氨基酸序列的框架区的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的框架区，并且包含与相应的SEQ ID NO:36的轻链可变域具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列。
另一方面，本发明的方法涉及上文刚刚描述过的实施方案中所述的分离的抗体或抗原结合片段的用途，其中所述重链氨基酸序列是SEQ ID NO:37；在另一实施方案中，所述重链氨基酸序列是SEQ ID NO:38；在另一实施方案中，所述重链氨基酸序列是SEQ ID NO:39；并且在另一实施方案中，所述重链氨基酸序列是SEQ ID NO:40。
本发明涉及本文所述的人源化单克隆抗体用于制备治疗和/或预防狼疮性肾炎(“本发明的方法”)的药物的用途。
换言之，本发明涉及本文所述的人源化单克隆抗体在制备用于治疗和/或预防狼疮性肾炎的药物组合物中的用途。
再次以不同的方式表达本发明涉及本文所述的人源化单克隆抗体，其用于在治疗和/或预防狼疮性肾炎中的用途。
附图的几种视角的简述
图1显示了CD40连接对培养基中的人内皮细胞(HUVEC)细胞的作用，所述培养基包含100ng/ml的sCD40L以及抗体B(●)或同型对照(IgG1人抗体)(▲)。
图2显示了CD40连接对培养基中的来自三位不同供体(D1，D2，D3)的人近端肾小管上皮细胞(PTEC)的作用，所述培养基含有50ng/ml的抗体B。
发明详述
CD40介导的信号传导目前被认为参与了多种靶向病症(target disorders)。尽管存在多种临床前数据显示这些病症中的干预在治疗上会是有益的，仍然需要能够用于自身免疫病如狼疮性肾炎的治疗的拮抗性抗CD40抗体。
术语“CD40”和“CD40表面抗原”指在正常和肿瘤性(neoplastic)B细胞表面表达的大约48kD的糖蛋白，其对于细胞增殖和分化中涉及的信号发挥受体的作用(Ledbetter等，1987,J.Immunol.138:788-785)。编码CD40的cDNA分子已经从制备自伯基特淋巴瘤细胞系Raji的文库中分离(Stamenkovic等，1989,EMBO J.8:1403)。
如用于本文，内源表达CD40的细胞是任何以CD40的表面表达为特征的细胞，包括但不限于正常的和肿瘤性B细胞、交错突细胞、基底上皮细胞、癌细胞、巨噬细胞、内皮细胞、滤泡树突细胞、扁桃体细胞和骨髓衍生的血浆细胞。在一些实施方案中，所述CD40分子是人CD40分子。
本发明的抗体特异性结合人重组和天然CD40。人源化单克隆抗体，其中所述抗体特异性结合人CD40，具有低于1nM的拮抗活性IC50，并且在B细胞增殖中具有高达100μg/ml的激动性，并且其中所述抗体的特征进一步在于所述抗体具有至少10天的非人灵长类动物中的体内半衰期。
概括出的抗体或免疫球蛋白的结构为本领域技术人员所熟知，这些分子是异源四聚糖蛋白，通常约150,000道尔顿，由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链组成。每条轻链与一条重链通过一个二硫键共价连接以形成异源二聚体，并且通过异源二聚体的两条相同重链之间的共价二硫键连接形成异源四聚体(heterotrameric)分子。尽管所述轻链和重链通过一个二硫键连接在一起，两条重链之间的二硫键连接数根据免疫球蛋白的同型而有所不同。每条重链和轻链还具有规律间隔开的链内二硫键桥连。每条重链具有氨基末端可变域(VH)，之后是三个或四个恒定域(CH1,CH2,CH3和CH4)，以及CH1和CH2之间的铰链区。每条轻链具有两个结构域，氨基末端的可变域(VL)和羧基末端的恒定域(CL)。VL结构域与VH结构域非共价结合，而CL结构域与CH1结构域通常经由二硫键共价连接。据信特定氨基酸残基在轻链和重链可变域之间形成界面(Chothia等，1985,J.Mol.Biol.186:651-663)。
可变域之内的某些结构域在不同抗体之间有大范围差别，即，“高变(hypervariable)”。这些高变域含有因其特异性抗原决定性而直接牵涉每种特定抗体的结合和特异性的残基。在轻链和重链可变域中，高变性均集中在称为互补性决定区(CDR)或高变环(HVL)的三个区段中。在Kabat等，1991,In:Sequences of Proteins ofImmunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,Md.中通过序列比较定义了CDR，而HVL根据可变域的三维结构从结构上定义，如Chothia and Lesk,1987,J.Mol.Biol.196:901-917中所述。当这两种方法导致稍有不同的CDR认定时，优选结构定义。如Kabat所定义的，在轻链可变域中，CDR-L1大致位于残基24-34，CDR-L2大致位于残基50-56，而CDR-L3大致位于残基89-97；在重链可变域中，CDR-H1大致位于残基31-35，CDR-H2大致位于残基50-65，而CDR-H3大致位于残基95-102。因此重链和轻链的CDR1、CDR2、CDR3限定了给定抗体所特有的独特和功能性质。
每条重链和轻链中的三个CDR被框架区(FR)分开，框架区含有倾向于不太变化的序列。从重链和轻链可变域的氨基末端到羧基末端，FR和CDR按照如下顺序排列：FR1,CDR1,FR2,CDR2,FR3,CDR3和FR4。FR大部分为β-片层构型使得每条链中的CDR彼此以及与另一链的CDR靠近相邻。所得的构型促成了抗原结合位点(参见Kabat等，1991,NIH Publ.No.91-3242,Vol.I,第647-669页)，尽管不是所有CDR残基必然直接参与抗原结合。
FR残基和Ig恒定域不直接参与抗原结合，但促成了抗原结合和/或介导了抗体效应功能。一些FR残基被认为以至少三种方式对抗原结合具有显著影响：通过与表位直接非共价结合，通过与一个或多个CDR残基相互作用，和通过影响重链和轻链之间的界面。恒定域不直接参与抗原结合，但介导了多种Ig效应功能。
脊椎动物免疫球蛋白的轻链基于恒定域的氨基酸序列被归为两种明显不同的类别kappa(κ)和lambda(λ)之一。通过比较，根据恒定域的序列，哺乳动物免疫球蛋白的重链被归为五种主要类别之一：IgA,IgD,IgE,IgG和IgM。IgG和IgA进一步分为亚类(同型)，例如，IgG1,IgG2,IgG3,IgG4,IgA1和IgA2。对应于不同免疫球蛋白类别的重链恒定域分别被称为α、δ、ε、γ和μ。天然免疫球蛋白类别的亚基结构和三维构型是公知的。
术语“抗体”、“抗CD40抗体”、“人源化抗CD40抗体”和“变体人源化抗CD40抗体”以最广义的方式用于本文，并且具体涵盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段如可变域和抗体展现出期望的生物学活性例如CD40结合的其他部分。
术语“单克隆抗体”(mAb)指基本上为均质的抗体群体；即，该群体中的单个抗体除了可能存在于少数中的自然发生的突变之外都是相同的。单克隆抗体特异性高，针对单一抗原决定簇，即“表位”。因此，形容词“单克隆”表明针对相同表位基本上为均质的抗体群体，而不应理解为要求通过任何特定方法生产抗体。应当理解单克隆抗体可以通过任何本领域已知的技术或方法制备；包括例如杂交瘤法(Kohler等，1975,Nature 256:495)，或本领域已知的重组DNA法(参见，例如美国专利号4,816,567)，或使用噬菌体抗体文库重组产生的单克隆的分离方法，使用Clackson等，1991,Nature 352:624-628,and Marks等，1991,J.Mol.Biol.222:581-597中描述的技术。
嵌合抗体由来自一个物种(例如，非人哺乳动物如小鼠)的抗体的重链和轻链可变区以及另一物种(例如，人)抗体的重链和轻链恒定区组成，并且可以通过将编码来自第一物种(例如，小鼠)的抗体的可变区的DNA与来自第二(例如，人)物种的抗体的恒定区的DNA序列连接，并且用含有所述连接的序列的表达载体转化宿主以允许其产生嵌合抗体。或者，嵌合抗体也可以是这样的一种抗体，其中重链和/或轻链的一个或多个区或域与来自另一免疫球蛋白类型或同型的单克隆抗体的对应序列相同，与之同源，或是其变体；或者来自共有序列或种系序列。嵌合抗体可以包括这些抗体的片段，只要所述抗体片段展现出其亲本抗体的期望的生物学活性，例如与相同表位结合(参见例如，美国专利号4,816,567；和Morrison等，1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6851-6855)。
术语“抗体片段”、“抗CD40抗体片段”、“人源化抗CD40抗体片段”、“变体人源化抗CD40抗体片段”指全长抗CD40抗体的一部分，其中可变区或功能能力得到保留，例如，特异性的CD40表位结合。抗体片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、scFv和scFv-Fc片段、双抗体、线性抗体、单链抗体、微型抗体(minibody)、由抗体片段形成的双抗体和由抗体片段形成的多特异性抗体。
可以用酶如木瓜蛋白酶或胃蛋白酶来处理全长抗体以生成有用的抗体片段。将木瓜蛋白酶消化用于产生两条相同的抗原结合抗体片段，称作“Fab”片段，各自具有单一抗原结合位点，以及残余的“Fc”片段。Fab片段还含有轻链恒定域和重链CH1域。胃蛋白酶处理生成具有两个抗原结合位点并且仍然能够交联抗原的F(ab')2片段。
Fab'片段与Fab片段的区别在于存在额外的残基，包括一个或多个来自位于CH1域的C末端的抗体铰链区的半胱氨酸。F(ab')2抗体片段是通过铰链区的半胱氨酸残基连接的Fab'片段对。抗体片段的其他化学偶联也是已知的。
"Fv"片段含有完整的抗原识别和结合位点，由一条重链和一条轻链可变域以紧密、非共价结合的方式组成的二聚体组成。在这种构型中，每个可变域的三个CDR相互作用以限定VH-VL二聚体上的抗原结合位点。六个CDR共同为抗体赋予抗原结合特异性。
“单链Fv”或“scFv”抗体片段是单链Fv变体，其包含抗体的VH和VL结构域，其中所述结构域存在于单一多肽链中。单链Fv能够识别并结合抗原。scFv多肽可以任选地也含有位于VH和VL结构域之间的多肽接头从而辅助形成期望的三维结构以供scFv的抗原结合(参见，例如，Pluckthun,1994,In The Pharmacology of monoclonal Antibodies,Vol.113,Rosenburg and Moore eds.,Springer-Verlag,New York,pp.269-315)。
其他公认的抗体片段包括包含串联Fd区段(VH-CH1-VH-CH1)对以形成抗原结合区对的那些。这些“线性抗体”可以是双特异性的或单特异性的，如例如Zapata等1995,ProteinEng.8(10):1057-1062中所述。
人源化抗体或人源化抗体片段是一种特定类型的嵌合抗体，其包括免疫球蛋白氨基酸序列变体，或其片段，其能够与预定的抗原结合，并且包含具有基本上为人免疫球蛋白的氨基酸序列的一个或多个FR，和具有基本上为非人免疫球蛋白的氨基酸序列的一个或多个CDR。这种非人氨基酸序列通常称为“输入(import)”序列，通常取自“输入”抗体结构域，特别是可变域。通常而言，人源化抗体包括非人抗体的至少CDR或HVL，其间插入人重或轻链可变域的FR。本发明描述了特定的人源化抗CD40抗体，其含有表3和4中所示的源自鼠类单克隆抗体的CDR，其插入在人种系序列重和轻链可变域的FR之间。应理解的是，某些鼠类FR残基对人源化抗体的功能可能是重要的，因此某些人种系序列重和轻链可变域残基经修饰以与对应鼠类序列的那些相同。
另一方面，人源化抗CD40抗体基本上包含至少一个并且通常为两个可变域的全部(例如，包含在Fab,Fab',F(ab')2,Fabc和Fv片段中)，其中全部或基本上全部的CDR对应于非人免疫球蛋白的那些，并且具体来说在本文中，全部CDR是如下文表1至4中详细说明的鼠类序列，并且全部或基本上全部FR是人免疫球蛋白共有或种系序列的那些。另一方面，人源化抗CD40抗体还包括至少一部分免疫球蛋白Fc区，通常是人免疫球蛋白的那些。正常来说，抗体会含有轻链以及至少重链的可变域二者。抗体还可以酌情包括重链的CH1、铰链、CH2、CH3和/或CH4区中的一个或多个。
人源化抗CD40抗体可以选自任何免疫球蛋白类别，包括IgM,IgG,IgD,IgA和IgE，和任何同型，包括IgG1,IgG2,IgG3,IgG4,IgA1和IgA2。可选的人源化抗CD40抗体可以包含来自超过一种免疫其蛋白类别或同型的序列，并且选择特定恒定域以优化期望的效应功能属于本领域普通技术。在具体的实施方案中，本发明提供是IgG1抗体的抗体，并且更具体来说是其中效应功能被敲除的IgG1抗体。
人源化抗CD40抗体的FR和CDR或HVL无需精确对应于亲本序列。例如，重要的CDR或HVL中的一个或多个残基，或共有或种系FR序列可以通过取代、插入或缺失而改变(例如，诱变)，由此使得所得氨基酸残基不再与任一亲本序列对应位置中的原始残基相同，但是所述抗体却保持了与CD40结合的功能。这些改变通常不会是广泛的，并且会是保守改变。通常，人源化抗体残基中的至少75％会对应于亲本共有或种系FR和重要CDR序列中的那些残基，更通常为至少90％，并且最频繁的情况是超过95％，或超过98％或超过99％。
影响重链和轻链可变区之间的界面的免疫球蛋白残基(“VL-VH界面”)是影响两条链相对于彼此的靠近程度或方向的那些残基。可能牵涉链间相互作用的特定残基包括VL残基34、36、38、44、46、87、89、91、96和98以及VH残基35、37、39、45、47、91、93、95、100和103(利用Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutesof Health,Bethesda,Md.,1987)中所示的编号系统)。美国专利号6,407,213还讨论了残基如VL残基43和85，以及VH残基43和60也可能牵涉这种相互作用。尽管仅针对人IgG指明了这些残基，但是它们可以跨物种适用。选择合理预期会牵涉在链间相互作用中的重要的抗体残基用于取代至共有序列中。
术语“共有序列”和“共有抗体”指包含在任何特定类型、同型或亚基结构的免疫球蛋白例如人免疫球蛋白可变域中在各个位置上最频繁出现的氨基酸残基的氨基酸序列。共有序列可以以特定物种或许多物种的免疫球蛋白为基础。“共有”序列、结构或抗体应理解为涵盖在特定实施方案中所述的共有人序列，并且指包含在任何特定类型、同型或亚基结构的全部人免疫球蛋白中在各个位置上最频繁出现的氨基酸残基的氨基酸序列。因此，共有序列含有这样的氨基酸序列，其在每个位置上具有存在于一种或多种免疫球蛋白中的一种氨基酸，但是其可能不会精确重复任何单独的免疫球蛋白的整个氨基酸序列。可变区共有序列不是从任何天然产生的抗体或免疫球蛋白获得的。Kabat等，1991,Sequences ofProteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda,Md.，及其变化形式。重链和轻链共有序列的FR，及其变体，为制备人源化抗CD40抗体提供了有用的序列。参见例如美国专利号6,037,454和6,054,297。
人种系序列天然存在于人类群体中。那些种系基因的联合生成了抗体多样性。抗体轻链的种系抗体序列来自保守的人种系κ或λv基因和j基因。类似地，重链序列来自种系v-、d-和j-基因(LeFranc,M-P,and LeFranc,G,“The Immunoglobulin Facts Book”Academic Press,2001)。
如用于本文，“变体”、“抗CD40变体”、“人源化抗CD40变体”或“变体人源化抗CD40”各自指人源化抗CD40抗体，其至少具有来自SEQ ID NO:1至4的任何序列的重链可变鼠类CDR，或源自如SEQ ID NO:5至SEQ ID NO:8中任一所示的鼠类单克隆抗体的轻链鼠类CDR序列，和源自人共有序列的FR序列。变体包括在轻链或重链可变区之一或二者中具有一个或多个氨基酸变化的那些，只要所述氨基酸变化不实质性损害抗体与CD40的结合。本文产生的示例性人源化抗体包括称作抗体A、抗体B和抗体C的那些，并且它们的不同重链和轻链序列示于SEQ ID NOs 26至SEQ ID NO:40中。
“分离的”抗体是已经从其天然环境的组分鉴定并分离和/或回收的抗体。抗体的天然环境的污染组分是可能干扰抗体的诊断或治疗用途的那些物质，并且可以是酶、激素或其他蛋白性或非蛋白性溶质。一方面，抗体会被纯化至按照抗体重量计至少超过95％分离。
分离的抗体包括在产生它的重组细胞内的原位的抗体，因为抗体的天然环境的至少一种组分不会存在。然而，正常情况下，分离的抗体会通过至少一种纯化步骤制备，在该步骤中将重组细胞物质去除。
术语“抗体性能”指对抗体识别抗原或抗体体内有效性有贡献的因素。抗体氨基酸序列中的变化会影响抗体特性如折叠，并且能够影响物理因素如抗体结合抗原的初始速率(ka)、抗体从抗原的解离常数(kd)、抗体对抗原的亲和常数(Kd)、抗体的构型、蛋白质稳定性和抗体的半衰期。
术语“带表位标记的”当在本文使用时，指抗CD40抗体与“表位标记”融合。“表位标记”是具有足够数目的氨基酸以提供用于抗体生产的表位的多肽，且经过设计从而其不干扰人源化抗CD40抗体的期望活性。表位标记通常足够独特，使得相对于该表位标记生成的抗体不与其他表位实质性交叉反应。合适的标记多肽通常含有至少6个氨基酸残基，并且通常含有约8至50个氨基酸残基，或9至30个残基。表位标记和结合表位的抗体的实例包括流感HA标记多肽及其抗体12CA5(Field等，1988Mol.Cell.Biol.8:2159-2165；c-myc标记及其8F9、3C7、6E10、G4、B7和9E10抗体(Evan等，1985,Mol.Cell.Biol.5(12):3610-3616；和单纯疱疹病毒糖蛋白D(gD)标记及其抗体(Paborsky等1990,Protein Engineering 3(6):547-553)。在某些实施方案中，表位标记是“补救受体结合表位(salvage receptor bindingepitope)”。如用于本文，术语“补救受体结合表位”指IgG分子(如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)的Fc区负责增加IgG分子的体内血清半衰期的表位。
抗体还可以与前药缀合。“前药”是药学活性物质的前体或衍生物。参见，例如，Wilman,1986,"Prodrugs in Cancer Chemotherapy",In Biochemical SocietyTransactions,14,pp.375-382,615th Meeting Belfast和Stella等，1985,"Prodrugs:AChemical Approach to Targeted Drug Delivery,In:"Directed Drug Delivery,Borchardt等，(ed.),pp.247-267,Humana Press。
为了诊断以及治疗监测目的，本发明的方法中使用的抗体还可以与标签(label)缀合，或者单独与标签，或者与标签和额外的第二种药剂(前药等)。与其他第二种药剂相区别的话，标签指作为可检测化合物或组合物的药剂，并且其可以直接或间接与本发明的人源化抗体缀合。标签本身可以是可检测的(例如，放射同位素标签或荧光标签)，或者在酶标签的情况下，可以催化可检测的底物化合物或组合物的化学变化。带标签的人源化抗CD40抗体可以在多种应用中制备并使用，包括体外和体内诊断。
本发明的方法中使用的抗体可以配制成脂质体制备物的一部分，从而实现其体内递送。“脂质体”是由多种类型的脂质、磷脂和/或表面活性剂构成的小囊泡。脂质体可用于向哺乳动物递送化合物或制剂，如本文公开的人源化抗CD40抗体，其任选地与一种或多种药学活性剂和/或标签偶联或组合。脂质体的组分通常以双层形式排列，类似于生物膜的脂质排列。
术语“哺乳动物”就治疗而言指任何归类为哺乳动物的动物，包括人、驯养的和农场动物以及动物园、运动或宠物类动物，如狗、马、猫、牛等。优选地，所述哺乳动物是人。
“病症”用于本文时指狼疮性肾炎。
术语“静脉内推注(bolus)”或“静脉内推注(push)”指向动物或人的静脉内药物施用，使得身体在大约15分钟或更短时间，通常为5分钟或更少时间内接受药物。
术语“皮下施用”指从药物容器中通过相对缓慢、持续的输送将药剂导入动物或人类患者的皮肤下，优选在皮肤和下层组织之间的口袋(pocket)内。将皮肤向上挤或拉离下层组织可以产生口袋。
术语“皮下输注”指在动物或人类患者的皮肤下，优选在皮肤和下层组织之间的口袋中，通过从药物容器相对缓慢、持续的递送一段时间，包括但不限于30分钟或更少，或者90分钟或更少，由此来引入药物。任选地，可以通过皮下植入植入在动物或人类患者皮肤下的药物递送泵来进行输注，其中该泵递送预定量的药物达预定时间段，如30分钟，90分钟，或跨越治疗方案长度的时间段。
术语“皮下推注”指在动物或人类患者的皮肤下的药物施用，其中推注药物递送少于约15分钟；另一方面，少于5分钟，并且在又另一方面少于60秒。甚至在另一方面，施用位于皮肤和下层组织之间的口袋内，其中口袋可以通过捏起或拉动皮肤向上并远离下层组织而产生。
术语“治疗有效量”用于指缓解或改善所治疗病症的一种或多种症状的活性剂的量。在这样做时，这种量具有有益的患者结果，例如生长停滞效应或引起细胞的删除。一方面，治疗有效量具有凋亡活性，或能够诱导细胞死亡。另一方面，治疗有效量指已经显示在例如减缓疾病进展中有效的目标血清浓度。取决于待治疗的病症，可以以常规方式测量效力。例如，在以表达CD40的细胞为特征的肿瘤性疾病或病症中，可以通过评估疾病进展的时间或确定应答率来测量效力。
如用于本文，术语“治疗”和“疗法”等意在包括导致任何临床期望或有益效果的疾病或病症的治疗性以及预防性或抑制性措施，包括但不限于减轻或缓解疾病或病症的一种或多种症状，疾病或病症的退化，减缓或进展停止。因此，例如，术语治疗包括在疾病或病症发作之前或之后施用药剂，从而预防或消除疾病或病症的一种或多种指征。作为另一个实例，该术语包括在疾病的临床表现之后施用药剂以对抗疾病的症状。此外，在发作之后以及在临床症状已经形成之后施用药剂，其中施用影响疾病或病症的临床参数，例如组织损伤的程度或转移的量或程度，那么无论治疗是否导致疾病的改善，都包括了如本文所用的“治疗”或“疗法”。此外，只要本发明的组合物单独或与另一种治疗剂组合与不使用人源化CD40抗体组合物时的症状相比缓解或改善待治疗病症的至少一种症状，无论疾病的所有症状是否得到缓解，结果都应该被认为是对潜在疾病的有效治疗。
术语“包装插页”用于指通常包含在治疗产品的商业包装中的说明书，其包含关于使用此类治疗产品的适应症，用法，施用，禁忌症和/或警告的信息。
除非在此另外定义，否则术语“药物组合物”，“药物制剂”和“制剂”可以互换使用。
抗体
所述人源化抗CD40抗体和结合剂可以用于多种疾病或病症的治疗和/或预防中，所述疾病或病症的特征在于表达CD40表面抗原的细胞的增殖，例如狼疮性肾炎。人源化抗CD40抗体和CD40结合剂各自包括至少一个特异性识别CD40表位的部分(即，抗原结合片段)。
用于制备抗CD40抗体的方法之前已经记载在US20110243932中，将其全部内容通过提述并入本文。
如先前在US20110243932中所述，基于CD40结合特征选择了初始表征的鼠类抗体。
从这些初始研究选择了具有以下表1所示的重链可变区和表2所示的轻链可变区的鼠类抗体：
表1:CD40鼠类先导抗体(lead)–VH序列
表2:CD40鼠类先导抗体-VK序列
基于框架同源性、CDR结构、保守典型残基、保守界面包装残基和其他参数选择人框架序列用于每种小鼠先导抗体。
多种鼠类抗体选择的抗体的鼠类重链和轻链CDR分别示于表3和表4：
表3:
重链CDR序列
以上所列的H-CDR1使用的是用Chothia编号系统的序列(Al-Lazikani等，(1997)JMB273,927-948)。在有关CDR1和CDR2的上表中，用于序列的Kabats编号以粗斜体文字的残基标识，IMGT编号通过下划线文字的残基显示。2H11、10F2和19B10中每一个的H-CDR3的序列为TTSYYVGTYGY(SEQ ID NO:77)，且20E2的H-CDR3的序列为ARQDGYRYAMDY(SEQ ID NO:78)。
表4:
轻链CDR序列
同样，在表4中使用Chothia编号系统，其中序列的Kabats编号以粗斜体文字标识，IMGT编号通过下划线文字显示。
与嵌合亲本Fab相比显示出更好或相等结合的Fab被选择用于转化成IgG。来自20E2系列的克隆被转化成两种IgG形式：a)IgG4DM(双突变(double mutant))具有两个在Fc/铰链区的突变，降低半分子形成的Ser228Pro和进一步降低FcγR结合的Leu235Glu。b)IgG1KO(效应功能功能敲除(knock-out of effector functions))具有两个在Fc区的突变，Leu234Ala和Leu235Ala，其降低效应功能如FcγR和补体结合。两种IgG形式在文献中有所记载。实施例1进一步详细描述了三种候选者的人源化。这些人源化的结果产生人源化抗体序列，其具有下文所示的重链和轻链序列：
在一些实施方案中，所述人源化抗CD40抗体，包括其抗原结合片段，如重链和轻链可变域，包含源自上文描述的抗体A(重链序列＝SEQ ID NO:27；SEQ ID NO:28；SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:30；轻链序列＝SEQ ID NO:26)、抗体B(重链序列＝SEQ ID NO:32；SEQ IDNO:33；SEQ ID NO:34；或SEQ ID NO:35；轻链序列＝SEQ ID NO:31)和抗体C(重链序列＝SEQ ID NO:37；SEQ ID NO:38；SEQ ID NO:39或SEQ ID NO:40；轻链序列＝SEQ ID NO:36)的CDR的残基的氨基酸序列，和源自人免疫球蛋白框架区的氨基酸残基。所述人源化抗CD40抗体任选在共有或种系框架区中包括特定氨基酸取代。
在这些框架位置中的氨基酸残基的特定取代能够相对于在通过将CDR或HVL“直接交换”成人种系框架区形成的人源化抗体中所展现的改善多个方面的抗体性能，包括结合亲和力和/或稳定性，如下文实施例中所示。
在一些实施方案中，本发明描述了其他单克隆抗体，其具有SEQ ID NO:1至SEQ IDNO:4的重链(VH)序列和SEQ ID NO:5至SEQ ID NO:8的轻链(VL)序列(参见上文表1和2)。这些鼠类抗体的CDR序列示于表3和4中，将这些CDR置于人共有重链和轻链可变域的FR中会生成有用的本发明的人源化抗体。
在一些特定的实施方案中，本文公开的人源化抗CD40抗体包含至少一个重链或轻链可变域，所述重链或轻链可变域包含如上文表1至4中所示的鼠类单克隆抗体的CDR或HVL以及人种系重链和轻链可变域的FR。在示例性实施方案中，本文发明的人源化抗体是：抗体A、抗体B和抗体C，并且它们的多种重链和轻链序列示于SEQ ID NOs 26至SEQ ID NO:40。
在具体的实施方案中，预期抗体具有SEQ ID NO:27，SEQ ID NO:28，SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:30中任一的重链序列，连同SEQ ID NO:26的轻链序列。另外的抗体包括具有SEQ ID NO:32，SEQ ID NO:33，SEQ ID NO:34或SEQ ID NO SEQ ID NO:35的重链序列连同SEQ ID NO:31的轻链序列的那些。在又是另外的实施方案中，提供具有SEQ ID NO:37，SEQID NO:38；SEQ ID NO:39或SEQ ID NO:40的重链序列，连同SEQ ID NO:36的轻链序列的人源化抗体。
这些序列的CDR示于表3和4中。在具体的实施方案中，预期具有在这些示例性免疫球蛋白之间交换的CDR区的嵌合抗体(即，例如，将抗体A的一个或两个CDR与来自抗体C的类似CDR交换)可能生成有用的抗体。
在某些实施方案中，人源化抗CD40抗体是抗体片段。多种抗体片段已经在上文概括性描述，并且已经开发了用于生产抗体片段的技术。片段可以经由对完整抗体的蛋白水解消化来衍生(参见，例如，Morimoto等，1992,Journal of Biochemical and BiophysicalMethods 24:107-117；和Brennan等，1985,Science 229:81)。或者，片段可以在重组宿主细胞中直接产生。例如，Fab'-SH片段可以直接从大肠杆菌回收，并且以化学方法偶联以形成F(ab')2片段(参见，例如，Carter等，1992,Bio/Technology 10:163-167)。通过另一种方法，可以直接从重组宿主细胞培养物分离F(ab')2片段。其他用于产生抗体片段的技术对于本领域技术人员是显而易见的。
某些实施方案包括包含SEQ ID NO:27，SEQ ID NO:28，SEQ ID NO:29或SEQ IDNO:30中任意的重链序列连同SEQ ID NO:26的轻链序列的人源化抗CD40抗体的F(ab')2片段。另外的抗体包括具有SEQ ID NO:32，SEQ ID NO:33，SEQ ID NO:34或SEQ ID NO:35的重链序列连同SEQ ID NO:31的轻链序列的那些。在又是另外的实施方案中，提供具有SEQ IDNO:37，SEQ ID NO:38；SEQ ID NO:39或SEQ ID NO:40的重链序列连同SEQ ID NO:36的轻链序列的人源化抗体。这些实施方案可以包括包含这样的F(ab')2的完整抗体。
抗体的效应结构域可以来自任何合适的脊椎动物物种和同型。来自不同动物物种的同型在介导效应功能的能力上有所不同。例如，人免疫球蛋白介导CDC和ADCC/ADCP的能力的通常顺序分别是IgM≈IgG1≈IgG3>IgG2>IgG4和IgG1≈IgG3>IgG2/IgM/IgG4。鼠类免疫球蛋白介导CDC和ADCC/ADCP的能力的通常顺序分别是IgM≈IgG3>>IgG2b>IgG2a>>IgG1和IgG2b>IgG2a>IgG1>>IgG3。在另一实例中，鼠类IgG2a介导ADCC，而鼠类IgG2a和IgM二者均介导CDC。
抗体修饰
人源化抗CD40抗体和药剂可以包括对人源化抗CD40抗体或其抗原结合片段的修饰。
人源化抗CD40抗体的缀合物可以通过已知方法使用多种双官能蛋白偶联剂制备，所述双官能蛋白偶联剂如N-琥珀酰亚胺-3-(2-吡啶二硫代)丙酸酯(SPDP)、亚氨基硫烷(iminothiolane)(IT)、亚氨酸酯的双官能衍生物(如二甲基己二酰亚胺盐酸盐)、活性酯(如双琥珀酰亚胺辛二酸酯)、醛(如戊二醛)、双叠氮基化合物(如双(对叠氮苯甲酰基)己二胺)、双重氮衍生物(如双(对双重氮苯甲酰基)乙二胺)、二异氰酸酯(如甲苯2,6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(如1,5-二氟-2,4-硝基苯)。例如，蓖麻毒素免疫毒素可以如Vitetta等,1987,Science 238:1098中所述制备。碳14标记的1-异硫氰基苄基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(1-isothiocyanatobenzyl-3-methyldiethylene triaminepentaacetic acid；MX-DTPA)是一种示例性螯合剂，用于将放射性核苷酸缀合至抗体。缀合物还可以使用可切割接头形成。
本文公开的人源化抗CD40抗体还可以配制成免疫脂质体。含有抗体的脂质体通过本领域已知的方法制备，如Epstein等，1985,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82:3688；Hwang等，1980,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4030；和美国专利号4,485,045和4,544,545中所述。具有提高的循环时间的脂质体公开于例如美国专利号5,013,556。
特别有用的脂质体可以通过反向蒸发法使用包含磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG衍生的磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂质组合物生成。脂质体通过限定孔径的过滤器挤出以生成具有期望的直径的脂质体。本文公开的抗体的Fab’片段可以与脂质体经由二硫化物交换反应缀合，如Martin等，1982,J.Biol.Chem.257:286-28中所述。
在其他实施方案中，还包括对人源化抗CD40抗体的共价修饰。共价修饰包括对半胱氨酰残基、组氨酰残基、赖氨酰和氨基末端残基、精氨酰残基、酪氨酰残基、羧基侧基(天冬氨酰或谷氨酰基)、谷氨酰胺酰和天冬酰胺酰残基，或丝氨酰或苏氨酰残基。另一种类型的共价修饰涉及将糖苷化学或酶促偶联至抗体。如果适用的话，这样的修饰可以通过化学合成或通过酶促或化学切割抗体来进行。抗体的其他类型的共价偶联可以通过使抗体中被靶向的氨基酸残基与有机衍生化剂反应来引入分子中，所述有机衍生化剂能够与选定的侧链或氨基-或羧基-末端残基反应。
存在于抗体上的任何糖类部分的去除可以通过化学或酶促方式完成。化学去糖基化由Hakimuddin等，1987,Arch.Biochem.Biophys.259:52和Edge等，1981,Anal.Biochem.,118:131描述。抗体上糖类部分的酶促切割可以通过使用多种内切和外切糖苷酶实现，如Thotakura等，1987,Meth.Enzymol 138:350所述
另一种类型的有用的共价修饰包含将抗体与多种非蛋白类聚合物例如聚乙二醇、聚丙二醇或聚氧化烯之一以美国专利号4,640,835、美国专利号4,496,689、美国专利号4,301,144、美国专利号4,670,417、美国专利号4,791,192和美国专利号4,179,337中一篇或多篇中所列的方式连接。
人源化和氨基酸序列变体
抗CD40抗体的氨基酸序列变体可以通过将合适的核苷酸变化引入抗CD40抗体DNA或通过肽合成来制备。这些变体包括，例如，从本文实施例的抗CD40抗体的氨基酸序列之内的残基缺失，向其中插入和/或对其取代。进行缺失、插入和取代的任何组合以获得最终的构建体，只要所述最终的构建体拥有期望的特征。所述氨基酸变化还可以改变人源化或变体抗CD40抗体的翻译后过程，如改变糖基化位点的数目和位置。
用于鉴定作为优选进行诱变的位置的抗CD40抗体中特定残基或区域的有用的方法被称为“丙氨酸扫描诱变”，如Cunningham and Wells(Science,244:1081-1085(1989))所述。在本文中，鉴定一个残基或一组靶残基(例如，荷电残基如arg、asp、his、lys和glu)并通过电中性或荷负电的氨基酸(通常为丙氨酸)替代以影响所述氨基酸与CD40抗原的相互作用。然后那些展现出对取代的功能性敏感的氨基酸位置通过在或对于取代位点引入进一步或其他变体来提炼。因此，尽管用于引入氨基酸序列变化的位点是预先确定的，但是突变的性质本身不需要预先确定。例如，为了分析给定位点突变的性能，在靶密码子或区域进行丙氨酸扫描或随机诱变，并且针对表达的抗CD40抗体变体筛选期望的活性。
氨基酸序列插入包括氨基-和/或羧基-末端融合，长度范围从一个残基至含有上百或更多残基的多肽，以及序列内插入单个或多个氨基酸残基。末端插入的实例包括与表位标记融合的抗CD40抗体。抗CD40抗体分子的其他插入变体包括向抗CD40抗体的N-或C-末端融合增加抗体的血清半衰期的酶或多肽。
变体的另一种类型是氨基酸取代变体。这些变体在抗CD40抗体分子中去除了至少一个氨基酸残基，并且在其位置插入了不同的残基。最感兴趣的取代诱变的位点包括高变区，但是也考虑FR变化。保守取代示于表5中“优选取代”表头之下。如果这些取代导致生物活性的变化，那么可以引入更实质性的变化，其命名为“示例性取代”或如下参照氨基酸类别进一步表述的并筛选产物。
表5：
在蛋白质化学中，通常认为抗体的生物学特性可以通过选择取代来实现，所述取代在其对维持(a)取代区域中的多肽骨架结构，例如，作为片层或螺旋构象，(b)分子在靶位点处的电荷或疏水性，或(c)侧链的体积(bulk)的效果方面有显著差异。天然存在的残基基于常见的侧链性质被分成几组：
(1)疏水性：正亮氨酸,met,ala,val,leu,ile；
(2)中性亲水性：cys,ser,thr；
(3)酸性：asp,glu；
(4)碱性：asn,gin,his,lys,arg；
(5)影响链取向的残基：gly,pro；和
(6)芳族：trp,tyr,phe。
非保守性取代指将这些类别之一的成员交换为另一类别。
不参与维持人源化或变体抗CD40抗体的恰当构象的任何半胱氨酸残基也可以被取代，通常用丝氨酸取代，以改善分子的氧化稳定性，防止异常交联，或提供确定的缀合至目标化合物的点。反之，可以将半胱氨酸键添加到抗体中以提高其稳定性(特别是在抗体是抗体片段如Fv片段的情况下)。
一类取代变体包括取代亲代抗体(例如人源化或人抗体)的一个或多个高变区残基。一般而言，选择用于进一步开发的所得变体相对于产生它们的亲代抗体将具有改善的生物学性质。产生这种取代变体的便利方式是使用噬菌体展示的亲和力成熟。简而言之，将几个高变区位点(例如6-7个位点)突变以在每个位点产生所有可能的氨基酸取代。如此产生的抗体变体以单价方式从丝状噬菌体颗粒展示，作为与每个颗粒内包装的M13的基因III产物的融合物。然后筛选噬菌体展示的变体的生物学活性(例如结合亲和力)。为了鉴定用于修饰的候选高变区位点，可进行丙氨酸扫描诱变以鉴定对抗原结合显着作出贡献的高变区残基。或者，或另外，分析抗原-抗体复合物的晶体结构以鉴定抗体与人CD40之间的接触点可能是有益的。根据本文阐述的技术，这种接触残基和相邻残基是用于取代的候选者。一旦产生了这样的变体，就如本文所述对变体组进行筛选，并且可以选择在一个或多个相关测定中具有优异性质的抗体用于进一步的开发。
抗体的另一类型的氨基酸变体改变抗体的原始糖基化模式。“改变”是指删除抗体中发现的一个或多个糖部分，和/或添加抗体中不存在的一个或多个糖基化位点。
在一些实施方案中，可能期望修饰本发明的抗体以添加糖基化位点。抗体的糖基化通常是N-联或O-联的。N-联是指糖部分与天冬酰胺残基侧链的连接。三肽序列的天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸(其中X是除脯氨酸以外的任何氨基酸)是用于将糖部分酶促附着至天冬酰胺侧链的识别序列。因此，多肽中这些三肽序列中任一个的存在产生潜在的糖基化位点。O-联糖基化是指将糖N-乙酰半乳糖胺，半乳糖或木糖之一连接至羟基氨基酸，最常见的是丝氨酸或苏氨酸，尽管也可以使用5-羟基脯氨酸或5-羟基赖氨酸。因此，为了使给定蛋白质(例如抗体)糖基化，蛋白质的氨基酸序列被工程化改造为含有一个或多个上述三肽序列(用于N-联糖基化位点)。该改变还可以通过向原始抗体的序列添加一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基或用一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基取代来进行(对于O-联糖基化位点)。
通过本领域已知的多种方法制备编码抗CD40抗体的氨基酸序列变体的核酸分子。这些方法包括但不限于从天然来源分离(在天然存在的氨基酸序列变体的情况下)或通过对先前制备的变体或非变体形式的抗CD40抗体进行寡核苷酸介导的(或定点)诱变，PCR诱变和盒诱变来制备。
如本文所用，术语“相同”或“百分比同一性”在两个或更多个核酸或多肽序列的上下文中是指当以最大对应性比较和对齐时，两个或更多个序列或亚序列是相同的或具有特定百分比的核苷酸或氨基酸残基相同。为了确定百分比同一性，将序列为了最佳比较的目的对齐(例如，可以将空位引入第一氨基酸或核酸序列的序列中以与第二氨基酸或核酸序列进行最佳对齐)。然后比较相应氨基酸位置或核苷酸位置上的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中的位置被与第二序列中相应的位置相同的氨基酸残基或核苷酸占据时，则该分子在该位置是相同的。两序列之间的百分比同一性是序列所共享的相同位置的数量的函数(即，％同一性＝相同位置的数量/位置(例如重叠位置)的总数量×100)。在一些实施方案中，在适当的情况下(例如，排除延伸超出被比较的序列之外的附加序列)，在序列之内引入空位之后，比较的两个序列长度相同。例如，比较可变区序列时，不考虑先导序列和/或恒定域序列。对于两个序列之间的序列比较，“对应”CDR是指两个序列中相同位置的CDR(例如，每个序列的CDR-H1)。
可以使用数学算法来完成两个序列之间的百分比同一性或百分比相似性的确定。用于比较两个序列的数学算法的优选的非限制性实例是Karlin and Altschul,1990,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:2264-2268，如Karlin and Altschul,1993,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5873-5877所修改。这种算法被纳入到Altschul等，1990,J.Mol.Biol.215:403-410的NBLAST和XBLAST程序中。可以用NBLAST程序进行BLAST核苷酸搜索，得分＝100，字长＝12，以获得与编码感兴趣蛋白质的核酸同源的核苷酸序列。可以用XBLAST程序进行BLAST蛋白质搜索，得分＝50，字长＝3，以获得与感兴趣的蛋白质同源的氨基酸序列。为了获得用于比较目的的带空位的对齐，可以使用Gapped BLAST，如Altschul等，1997,Nucleic Acids Res.25:3389-3402中所述。或者，可以使用PSI-Blast来执行检测分子间远缘关系的迭代搜索(同上)。当使用BLAST，Gapped BLAST和PSI-Blast程序时，可以使用各个程序(例如，XBLAST和NBLAST)的默认参数。用于比较序列的数学算法的另一个优选的非限制性实例是Myers和Miller，CABIOS(1989)的算法。这种算法被纳入作为GCG序列比对软件包一部分的ALIGN程序(版本2.0)。当使用ALIGN程序比较氨基酸序列时，可以使用PAM120权重残基表，空位长度罚分为12，空位罚分为4。用于序列分析的其他算法在本领域中是已知的，并且包括如Torellis and Robotti,1994,Comput.Appl.Biosci.10:3-5中所述的ADVANCE和ADAM；以及Pearson and Lipman,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:2444-8中所述的FASTA。在FASTA中，ktup是一个控制选项，其设置搜索的灵敏度和速度。如果ktup＝2，则通过查看对齐的残基对来发现所比较的两个序列中的相似区域；如果ktup＝1，则检查单个对齐的氨基酸。对于蛋白质序列，ktup可设为2或1，或者对于DNA序列，ktup可设为1至6。如果未指定ktup，则缺省值对于蛋白质为2，对于DNA为6。或者，可以使用CLUSTAL W算法进行蛋白质序列比对，如Higgins等，1996,Methods Enzymol.266:383-402所述。
治疗用途
人源化抗CD40抗体或药剂通过任何合适的手段施用，包括肠胃外，皮下，腹膜内，肺内和鼻内，并且如果期望用于局部免疫抑制治疗，则病灶内施用(包括灌注或以其他方式使移植物在移植前与抗体接触)。人源化抗CD40抗体或药剂可以例如作为输注或作为推注来施用。肠胃外输注包括肌内，静脉内，动脉内，腹膜内或皮下施用。另外，人源化抗CD40抗体适宜通过脉冲输注施用，特别是在抗体的剂量下降的情况下。在一个方面，给药通过注射给予，最优选静脉内或皮下注射，部分取决于施用是短暂的还是慢性的。
对于疾病的预防或治疗，抗体的合适剂量将取决于多种因素，如如上所定义的待治疗疾病的类型，疾病的严重程度和病程，抗体是否被施用用于预防或治疗目的，先前的治疗，患者的临床病史和对抗体的响应，以及主治医师的判断。抗体一次或通过一系列处理适当地施用于患者。
取决于疾病的类型和严重性，约1μg/kg至20mg/kg(例如0.1-15mg/kg)的抗体是用于施用于患者的初始候选剂量，不论是例如，由一次或多次单独的施用或通过连续输注。取决于上述因素，典型的每日剂量可以在约1μg/kg至100mg/kg或更多的范围内。对于几天或更长时间的重复施用，取决于状况，治疗持续直到发生期望的对疾病症状的抑制。但是，其他剂量方案可能是有用的。这种疗法的进展很容易通过常规技术和测定进行监测。示例性给药方案是WO 94/04188中公开的。
本文在与“改善”和“缓解”相同的上下文中使用术语“抑制”来表示减轻疾病的一个或多个特征。
抗体组合物将以与良好医疗实践一致的方式配制，给药和施用。在这种情况下考虑的因素包括被治疗的具体病症，被治疗的具体哺乳动物，个体患者的临床状况，病症的原因，药剂的递送部位，施用方法，施用时间表以及医药从业者已知的其他因素。要施用的抗体的“治疗有效量”将受这些考虑因素支配，并且是预防，改善或治疗与CD40表达相关的病症所必需的最小量。
抗体不一定是，但是任选地是用当前用于预防或治疗狼疮性肾炎的一种或多种药剂配制。此类其他药剂的有效量取决于制剂中存在的人源化抗CD40抗体的量和上文讨论的其他因素。这些通常以与上文所用相同的剂量和施用途径使用，或者为迄今所用剂量的约1至99％。
根据本文所述的方法治疗或预防狼疮性肾炎通过向需要这种治疗或预防的受试者施用有效量的抗CD40抗体或药剂来实现，由此抗体(i)结合至激活的表达CD40并与疾病状态相关的免疫细胞，并(ii)对激活的免疫细胞施加免疫抑制作用。
药物组合物及其施用
可将包含CD40结合剂(例如抗CD40抗体)的组合物施用于患有狼疮性肾炎或的风险的受试者。本发明进一步提供了CD40结合剂(例如抗CD40抗体)在制备用于预防或治疗狼疮性肾炎的药物中的用途。如本文所用的术语“受试者”是指可以向其施用CD40结合剂的任何哺乳动物患者，包括例如人和非人哺乳动物，例如灵长类动物，啮齿类动物和狗。专门用于使用本文所述方法治疗的受试者包括人。抗体或药剂可以单独或与其他组合物一起施用以预防或治疗狼疮性肾炎。
用于在这样的药物组合物中使用的优选抗体是包含具有SEQ ID NO:1至4，SEQ IDNO:27，SEQ ID NO:28，SEQ ID NO:29，SEQ ID NO:30，SEQ ID NO:32，SEQ ID NO:33，SEQ IDNO:34，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:37，SEQ ID NO:38，SEQ ID NO:39或SEQ ID NO:40中任一的重链可变区氨基酸序列的人源化抗体或抗体片段。
在具体的实施方案中，CD40结合剂组合物通过注射，借助于导管，借助栓剂或通过植入物施用，所述植入物是多孔的，无孔的或凝胶状的材料，包括膜，例如sialastic膜或纤维。通常，当施用所述组合物时，使用抗CD40抗体或药剂不吸收的材料。
在其他实施方案中，抗CD40抗体或药剂以受控释放系统递送。在一个实施例中，可以使用泵(参见，例如，Langer,1990,Science 249:1527-1533；Sefton,1989,CRCCrit.Ref.Biomed.Eng.14:201；Buchwald等，1980,Surgery 88:507；Saudek等，1989,N.Engl.J.Med.321:574)。在另一实施方案中，可以使用聚合材料。(参见，例如，MedicalApplications of Controlled Release(Langer and Wise eds.,CRC Press,Boca Raton,Fla.,1974)；Controlled Drug Bioavailability,Drug Product Design andPerformance(Smolen and Ball eds.,Wiley,New York,1984)；Ranger and Peppas,1983,Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.23:61.还参见Levy等，1985,Science 228:190；During等，1989,Ann.Neurol.25:351；Howard等，1989,J.Neurosurg.71:105.)。例如，在Langer(见上文)中讨论了其他控制释放系统。
CD40结合剂(例如抗CD40抗体)可作为药物组合物施用，所述药物组合物包含治疗有效量的结合剂和一种或多种药学上相容的成分。
在典型的实施方案中，根据常规程序将药物组合物配制成适合静脉内或皮下施用于人类的药物组合物。通常，通过注射施用的组合物是无菌等渗水性缓冲液中的溶液。必要时，药物还可包含增溶剂和局部麻醉剂如利多卡因以缓解注射部位的疼痛。通常，成分以单位剂量形式单独提供或混合在一起提供，例如作为干燥冻干粉末或无水浓缩物在指示活性剂的量的密封容器如安瓿或小药囊中。在通过输液施用药物的情况下，其可以用含有无菌药用级别的水或盐水的输液瓶来分配。在通过注射施用药物的情况下，可以提供用于注射的无菌水或盐水的安瓿瓶，以便可以在施用之前混合成分。
此外，药物组合物可作为药物试剂盒提供，其包含(a)含有冻干形式的CD40结合剂(例如抗CD40抗体)的容器和(b)含有用于注射的药学上可接受的稀释剂(例如无菌水)的容器。药学上可接受的稀释剂可用于冻干的抗CD40抗体或药剂的重构或稀释。任选地与这样的容器相关联的可以是由政府机构规定的形式的通知，该政府机构规定药品或生物制品的制造、使用或销售，该通知反映该机构批准制造、使用或销售用于人的施用。
在一个实施方案中，药物组合物包含水性组合物，所述水性组合物所具有的抗CD40抗体浓度为约10mg/ml至约200mg/ml；或从约100mg/ml至约200mg/ml；或从约120mg/ml至约180mg/ml；或约120mg/ml、130mg/ml、140mg/ml、150mg/ml、160mg/ml、170mg/ml、180mg/ml、190mg/ml或200mg/ml。
除抗CD40抗体外，药物组合物可进一步包含缓冲剂，稳定剂和任选的pH调节剂。缓冲剂的非限制性实例包括一种或多种盐如氯化钠，精氨酸盐酸盐，硫氰酸钠，硫氰酸铵，硫酸铵，氯化铵，氯化钙，氯化锌和乙酸钠；或合适酸如乙酸和氨基酸的盐。缓冲剂以足以提供适于将制剂施用(例如通过注射)至患者的粘度的量添加。药物组合物可以包含约100mM至约200mM的盐或缓冲液，或约120mM至约180mM的盐或缓冲液。在一个实施方案中，药物组合物包含含有浓度为约20mM至约30mM的乙酸钠和浓度为约120mM至约140mM的氯化钠的缓冲液。在另一实施方案中，药物组合物包含含有浓度约25mM的乙酸钠和浓度约130mM的氯化钠的缓冲液。
合适的稳定剂的非限制性实例是聚山梨酸酯20(吐温20)。稳定剂以足以维持药物组合物的化学和物理稳定性的量存在。所述药物组合物可以包含约0.001％至约0.1％(w/v)的稳定剂；或约0.0015％至约0.015％(w/v)的稳定剂；或约0.01％(w/v)的稳定剂。
在一个实施方案中，药物组合物包含约120mg/ml至约180mg/ml的量的抗CD40抗体；包含浓度为约20mM至约30mM的乙酸钠和浓度为约120mM至约140mM的氯化钠的缓冲液；以及浓度为约0.0015至约0.015％(w/v)的聚山梨醇酯20的表面活性剂。在另一实施方案中，抗CD40抗体制剂包含抗CD40抗体，其量为约120mg/ml、130mg/ml、140mg/ml、150mg/ml、160mg/ml、170mg/ml、180mg/ml、190mg/ml或200mg/ml；包含浓度为约25mM的乙酸钠和浓度为约130mM的氯化钠的缓冲液；以及表面活性剂，其为浓度约为0.01％(w/v)的聚山梨酸酯20。
在另一实施方案中，上述每种药物组合物可包含约70mg至约250mg的抗CD40抗体；或约80至240mg的抗CD40抗体。在另一实施方案中，上述药物组合物包含70mg，80mg，90mg，100mg，110mg，120mg，130mg，140mg，150mg，160mg，170mg，180mg，190mg，200mg，210mg，220mg，230mg，240mg或250mg的抗CD40抗体。
上述每种药物组合物具有约4.0至约12.0；或约5至约6.0；或约5.5的pH。可以通过加入足够量的合适的pH调节剂例如酸(例如盐酸)或碱(例如氢氧化钠)来调节pH。
在另一实施方案中，本发明涉及使用本文所述的任何一种抗-CD40抗体药物组合物治疗或预防狼疮性肾炎的方法。
可以通过标准临床技术确定有效治疗或预防狼疮性肾炎的CD40结合剂(例如抗CD40抗体)的量。另外，可以任选地采用体外测定来帮助鉴定最佳剂量范围。配方中使用的精确剂量还取决于施用途径和狼疮性肾炎的阶段，并且应根据医师的判断和每位患者的情况来决定。有效剂量可以从体外或动物模型测试系统得到的剂量-反应曲线外推。
例如，抗CD40抗体或药剂的毒性和治疗功效可以通过用于确定ED50(群体中的50％治疗有效的剂量)的标准药物程序在细胞培养物或实验动物中测定。表现出大治疗指数的CD40结合剂(例如抗CD40抗体)是优选的。在CD40结合剂表现出毒副作用的情况下，将CD40结合剂靶向受影响组织的递送系统可用于最小化不表达CD40的细胞的潜在损伤，从而减少副作用。
从细胞培养测定和动物研究获得的数据可以用于配制用于人的剂量范围。CD40结合剂的剂量通常位于循环浓度范围内，包括几乎没有或没有毒性的ED50。剂量可以在该范围内变化，这取决于所使用的剂型和使用的施用途径。对于该方法中使用的任何CD40结合剂，治疗有效剂量最初可以从细胞培养测定估计。可以在动物模型中配制剂量以实现包括在细胞培养物中测定的IC50(即达到症状的半数最大抑制的测试化合物的浓度)的循环血浆浓度范围。这些信息可以用来更准确地确定人体中有用的剂量。例如，可以通过高效液相色谱法，ELISA等来测量血浆中的水平。
通常，施用于患有狼疮性肾炎的患者的抗CD40抗体或CD40结合剂的剂量通常为约0.1mg/kg至约100mg/kg受试者体重。施用至受试者的剂量为约0.1mg/kg至约50mg/kg，约1mg/kg至约30mg/kg，约1mg/kg至约20mg/kg，约1mg/kg至约15mg/kg或约1mg/kg至约10mg/kg受试者体重。
示例性剂量包括但不限于1ng/kg至100mg/kg。在一些实施方案中，剂量为约0.5mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg或约16mg/kg。所述剂量可以例如每日、每周一次(每周)、每周两次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次、每两周或每月、没两个月或每三个月施用。在具体的实施方案中，所述剂量为约0.5mg/kg/周、约1mg/kg/周、约2mg/kg/周、约3mg/kg/周、约4mg/kg/周、约5mg/kg/周、约6mg/kg/周、约7mg/kg/周、约8mg/kg/周、约9mg/kg/周、约10mg/kg/周、约11mg/kg/周、约12mg/kg/周、约13mg/kg/周、约14mg/kg/周、约15mg/kg/周或约16mg/kg/周。在一些实施方案中，所述剂量范围从约1mg/kg/周至约15mg/kg/周。
在另一实施方案中，所述剂量为每周约70mg至约250mg；或每周约80至240mg。在另一实施方案中，剂量为每周约80mg，每周120mg，每周130mg，每周140mg，每周160mg，每周170mg，每周180mg，每周200mg，每周210mg，每周220mg，每周230mg，每周240mg，或每周250mg。
在一些实施方案中，包含CD40结合剂的药物组合物可以进一步包含缀合或未缀合至结合剂的治疗剂。抗CD40抗体或CD40结合剂可以与一种或多种治疗剂共同施用以治疗或预防狼疮性肾炎。
这样的组合疗法施用可以对疾病参数(例如，症状的严重程度，症状的数量或复发的频率)具有加合或协同效应。
关于组合施用的治疗方案，在具体的实施方案中，抗CD40抗体或CD40结合剂与治疗剂同时施用。在另一具体的实施方案中，治疗剂在施用抗CD40抗体或CD40结合剂之前或之后施用至少1小时多至数月，例如在施用抗CD40抗体或CD40结合剂之前或之后至少1小时，5小时，12小时，一天，一周，一个月或三个月。
在一些实施方案中，另外的治疗剂是免疫抑制剂。免疫抑制剂可以是例如更昔洛韦(gancyclovir)，依那西普(etanercept)，他克莫司(tacrolimus)，环孢菌素(cyclosporine)，雷帕霉素(rapamycin)，霉酚酸酯(MMF)，环磷酰胺(CyP)，硫唑嘌呤(azathioprine)，羟氯喹(hydroxychloroquine)，咪唑立宾(mizoribine)，霉酚酸莫啡酯(mycophenolate mofetil)或甲氨蝶呤。或者，免疫抑制剂可以是例如糖皮质激素(例如皮质醇或醛固酮)或糖皮质激素类似物(例如泼尼松或地塞米松)。在另一个实施方案中，免疫抑制剂可以是血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂(例如卡托普利(captopril)，喹那普利(quinapril)或依那普利(enalapril))或血管紧张素II受体阻断剂(ARB)(例如氯沙坦(losartan)或坎地沙坦(candesartan))。
在另一实施方案中，选自霉酚酸酯(MMF)，环磷酰胺(CyP)，糖皮质激素(GC)和皮质类固醇的另外的治疗剂或其任何组合。
在一个实施方案中，另外的治疗剂是霉酚酸酯(MMF)。
在一个实施方案中，另外的治疗剂是环磷酰胺(CyP)。
在另一实施方案中，另外的治疗剂是糖皮质激素(GC)。
在另一实施方案中，另外的治疗剂是皮质类固醇。
制品
另一方面，包括含有用于治疗上述病症的材料的制品。该制品包括容器和标签。合适的容器包括例如瓶子，小瓶，注射器和试管。容器可以由各种材料形成，例如玻璃或塑料。容器容纳有效治疗病症的组合物，并且可以具有无菌进入端口。例如，容器可以是静脉内溶液袋或具有可被皮下注射针刺穿的塞子的小瓶。组合物中的活性剂是人源化抗CD40抗体。容器上或与容器相关的标签表明该组合物用于治疗所选择的病症。所述制品可以进一步包含第二容器，所述第二容器包含药学上可接受的缓冲液，例如磷酸盐缓冲盐水，林格氏溶液和葡萄糖溶液。它可以进一步包括从商业和用户角度所需的其他材料，包括其他缓冲液，稀释剂，过滤器，针头，注射器和带有使用说明书的包装插页。
在以下实施例中进一步描述了本发明，这些实施例并非意图限制本发明的范围。
实施例
实施例1：人源化抗CD40抗体的产生
根据US20110243932中描述的程序制备本发明的人源化抗-CD4抗体。抗体A，抗体B和抗体C是来自克隆到人IgG1-KO(KO＝敲除)/κ骨架的小鼠抗体20E2(抗体A和抗体B)或2H11(抗体C)的人源化抗体。IgG1-KO在Fc区具有两个突变，Leu234Ala和Leu235Ala以降低FcγR和补体结合。
这种人源化的结果产生如下所示的各种人源化重链和轻链可变序列：
SEQ ID NO:41(可变轻链序列):DIVMTQSPDSLAVSLGERVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWHQQKPGQPPKLLIYWTSTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYTYPLTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:42(可变重链序列):EVQLVKSGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSGNRIIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARQDGYRYAMDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:43(可变轻链序列)DIVMTQSPDSLAVSLGERATMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWHQQKPGQPPKLLIYWTSTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYTYPLTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:44(可变重链序列)EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSGNRIIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARQDGYRYAMDYWAQGTLVTVSS
SEQ ID NO:45(可变轻链序列)DIVMTQSPDSLAVSLGEKVTMNCKSSQSLLNSGNQKNYLTWHQQKPGQPPKLLIYWTSTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYTYPLTFGAGTKVEIK
SEQ ID NO:46(可变重链序列)EVQLVESGGGLVKPGGSRRLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSGNRIIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARQDGYRYAMDYWGQGTLVTVSS.
SEQ ID NO:47(可变轻链序列)DIVMTQSPDSLAVSLGERVTMNCKSSQSLLNSGNQKNYLTWHQQKPGQPPKLLIYWTSTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYTYPLTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:48(可变重链序列)EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSGNRIIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARQDGYRYAMDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:49(可变轻链序列)DIVMTQSPDSLAVSLGERVTMNCKSSQSLLNSGNQKNYLTWHQQKPGQPPKLLIYWTSTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYTYPLTFGAGTKVEIK
SEQ ID NO:50(可变轻链序列)EVQLVESGGGLVKPGGSRRLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSGNRIIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQDGYRYAMDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:51(可变轻链序列)DIVMTQSPDSLAVSLGEKVTMNCKSSQSLLNSGNQKNYLTWHQQKPGQPPKLLIYWTSTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDLAVYYCQNDYTYPLTFGAGTKVEIK.
SEQ ID NO:52(可变轻链序列)DIVMTQSPDSLAVSLGEKVTINCKSSQSLLNSGNQKNYLTWHQQKPGQPPKLLIYWTSTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYTYPLTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:53(可变重链序列)EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSGNRIIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQDGYRYAMDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:54(可变轻链序列)QIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMLWFQQKPGKAPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRTFYPYTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:55(可变轻链序列)DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMLWFQQKPGKAPKLLIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRTFYPYTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:56(可变轻链序列)DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMLWFQQKPGKAPKLLIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRTFYPYTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:57(可变重链序列)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCTASGFNITDYYVHWVKQRPGQGLEWMGRIDPEDGDSKYAPKFQGKATMTADTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTTSYYVGTYGYWGQGTLVTVSS.
SEQ ID NO:58(可变重链序列)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCTASGFNIKDYYVHWVKQAPGQGLEWMGRIDPEDGDSKYAPKFQGKATMTADTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTTSYYVGTYGYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:59(可变重链序列)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCTASGFNITDYYVHWVKQRPGQGLEWMGRIDPEDGDSKYAPKFQGKVTMTADTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTTSYYVGTYGYWGQGTLVTVSS.
SEQ ID NO:60(可变重链序列)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCTASGFNIKDYYVHWVKQAPGQGLEWIGRIDPEDGDSKYAPKFQGKATMTADTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTTSYYVGTYGYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:61(可变重链序列)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCTASGFNITDYYVHWVKQAPGQGLEWMGRIDPEDGDSKYAPKFQGKATMTADTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTTSYYVGTYGYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:62(可变重链序列):QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCTASGFNITDYYVHWVKQRPGQGLEWMGRIDPEDGDTKFAPKFQGKATMTADTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTTSYYVGTYGYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:63(可变重链序列)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCTASGFNITDYYVHWVKQRPGQGLEWMGRIDPEDGDTKFAPKFQGKVTMTADTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTTSYYVGTYGYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:64(可变重链序列)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCTASGFNIKDYYVHWVKQAPGQGLEWIGRIDPEDGDTKFAPKFQGKATMTADTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTTSYYVGTYGYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:65(可变重链序列)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCTASGFNIKDYYVHWVKQAPGQGLEWMGRIDPEDGDTKFAPKFQGKATMTADTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTTSYYVGTYGYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:66(可变重链序列)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCTASGFNITDYYVHWVKQAPGQGLEWMGRIDPEDGDTKFAPKFQGKATMTADTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTTSYYVGTYGYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:67(可变重链序列)EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKVSGFNIKDYYIHWVKQRPGKGLEWMGRIDPEDGDTKYDPKFQGRVTMTADTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCTTSYYVGTYGYWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:68(可变重链序列)EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCTVSGFNIKDYYIHWVKQRPGKGLEWMGRIDPEDGDTKYDPKFQGRVTMTADTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCTTSYYVGTYGYWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:69(可变重链序列)EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCTVSGFNIKDYYIHWVKQRPGKGLEWMGRIDPEDGDTKYDPKFQGKVTMTADTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCTTSYYVGTYGYWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:70(可变重链序列)EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCTVSGFNIKDYYIHWVKQAPGKGLEWMGRIDPEDGDTKYDPKFQGKATMTADTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCTTSYYVGTYGYWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:71(可变重链序列)EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCTVSGFNIKDYYIHWVKQRPGKGLEWMGRIDPEDGDTKYDPKFQGKATMTADTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCTTSYYVGTYGYWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:72(可变重链序列)EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCTVSGFNIKDYYIHWVKQAPGKGLEWIGRIDPEDGDTKYDPKFQGKATMTADTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCTTSYYVGTYGYWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:73(可变重链序列)EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKVSGFNIKDYYIHWVQQAPGKGLEWMGRIDPEDGDTKYDPKFQGRVTMTADTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCTTSYYVGTYGYWGQGTTVTVSS
来自抗体10F2Hum的SEQ ID NO:74(可变轻链序列)1:DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSATSSVSYILWFQQKPGKAPKLLIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRTFYPYTFGGGTKVEIK
来自抗体10F2Hum的SEQ ID NO:75(可变轻链序列)2:DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSATSSVSYILWFQQKPGKAPKLLIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRTFYPYTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:76(可变轻链序列)QIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSATSSVSYILWFQQKPGKAPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRTFYPYTFGGGTKVEIK
本发明的示例性人源化抗体是具有下表中列出的重链和轻链序列的那些。下表中的粗体下划线序列是可变域，而正常的非下划线序列是恒定域：
将可变区亚克隆到一个或两个不同合适的IgG表达载体中：
A)Fc区中具有Leu234Ala，Leu235Ala双重突变的人IgG1-KO(敲除)/κ形式以减少效应功能，例如FcγR和补体结合
B)在铰链区中具有Ser228Pro突变的人IgG4-DM(双突变体)/κ形式以减少IgG4半分子的出现和Leu235Glu突变以进一步降低FcγR结合
通过以下标准对抗体A和抗体B进行纯化和评估：
-CCF的出现(浊度)Appearance of CCF(turbidity)
-CCF的过滤特性
-rProteinA的产量
-洗脱和中和时的浊度
-可溶性聚集体(SEC)
-纯度/污染模式(SDS)
-电荷模式(IEF)
实施例2:
SLE是一种全身性自身免疫病，其特征在于B细胞对各种自身抗原特别是核酸及其结合蛋白的耐受性丧失。这些自身抗体形成免疫复合物，其沉积在全身各种组织中，部分与其他因素一起，促使肾脏中炎性细胞和介导物(mediator)的募集，从而导致狼疮性肾炎。自身抗体的产生依赖于淋巴结内的T细胞-B细胞相互作用，并且需要CD40-CD40L驱动B细胞增殖和生发中心的形成。在生发中心内，CD40-CD40L相互作用通过Ig同型转换，体细胞突变，高亲和力B细胞的克隆扩增和向浆细胞的末端分化来介导B细胞成熟(Tarlington，1998)。CD40L在狼疮患者中的T细胞和血小板上的异常表达(Koshy等，1996和Manea等，2009)也可以用作驱动自体反应性B细胞的机制。最后，CD40L在SLE B细胞中的表达增加以T细胞非依赖性的方式导致自发的自身抗体产生(Grammer等，2003)。也参见US20110243932，其全部内容通过提述并入本文。
涉及狼疮性肾炎中CD40途径的进一步证据是通过增加患病患者中CD40和CD40L的水平和表达。随着膜结合CD40L的增加，可溶性CD40L在患有SLE的患者的循环中增加(Goules等，2006)，并且这种增加与疾病活性相关。单核细胞上CD40表达的增加也与狼疮性肾炎中的疾病活性相关(Kuroiwa等，2003)。除了CD40途径在肾中产生自身抗体和炎症中的作用外，数据还暗示该途径在调节狼疮性肾炎中驱动炎症的非免疫细胞中起作用。例如，通过CD40-CD154相互作用激活内皮细胞触发促炎细胞因子和趋化因子产生，基质金属蛋白酶和组织因子表达以及白细胞粘附分子CD62E，CD106和CD54密度的增加(Pulivenet等人，2008)。这些事件在促进活化的T细胞在炎症部位的外渗和积聚中起重要作用。人肾系膜细胞表达低水平的CD40并且响应于IFN-γ治疗和从SLE患者激活的CD154+血小板而上调这种受体(Delams等，2005)。同样，在近端肾小管上皮细胞(PTEC)中，观察到CD40L介导的对细胞因子如IL-6，IL-8的诱导。
CD40连接对人内皮细胞(HUVEC)和人近端肾小管上皮细胞(PTEC)的影响可以通过用CD40L刺激细胞来评估。HUVEC购自Lonza Allendale，NJ HUVEC P901(目录号C2519A，批号0000220212)。将细胞在HUVEC培养基(具有单个小球补充物(singlebullet supplement)的Lonza EBM-2培养基)和传代培养试剂(Lonza Allendale，NJ目录号CC-3156，批次号0000243756)中培养。细胞在BD Biocoat胶原I T75烧瓶(BD Biosciences San Jose，CA目录号356485，批次1108951)中生长。按照制造商的说明使用Lonza传代培养试剂盒对细胞进行传代培养。
图1显示示例性抗体B(●)或同型对照(IgG1人抗体)(▲)剂量依赖性方式有效阻断可溶性CD40L在HUVEC中诱导炎性细胞因子例如MCP-1。
图2显示来自三种不同人类供体的PTEC中对sCD40L的应答。PTECS购自Lonza，目录号CC-2553，并且包括三种不同的供体(D1，D2，D3)。将细胞在含有50ng/ml sCD40L(重组人类巨型CD40L，Alexis Biochemical-Enzo Life Science Farmingdale，NY目录号522-110-C010，批号26945,10μg/ml)的肾细胞生长培养基(REGM)中培养。REGM SingleQuot试剂盒(Lonza，目录号CC-4127，批号0000193027)提供了包含0.5％胎牛血清(FBS)，氢化可的松，人表皮生长因子(hEGF)，肾上腺素，胰岛素，三碘甲状腺原氨酸，转铁蛋白，庆大霉素/两性霉素-B的培养基。图2中的结果显示来自三种不同人供体的PTEC响应CD40L刺激而产生IL-6，并且该响应可以被抗体B剂量依赖性地抑制(抗体A的浓度从0ng/ml到2000ng/ml)。
申请人相信，本文所述的结果和其他公开内容为在狼疮性肾炎的发病机理中起中心作用的CD40途径建立了强有力的基本原理。
序列表
<110> Brodeur, Scott
<120> 抗CD40抗体用于治疗狼疮性肾炎的用途
<130> 09-0643-WO-1
<160> 78
<170> PatentIn 版本3.5
<210> 1
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD40鼠类先导抗体VH序列，属于2H11
<400> 1
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Val His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Ser Lys Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 2
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD40鼠类先导抗体VH序列，属于10F2
<400> 2
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 3
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD40鼠类先导抗体VH序列，属于19B10
<400> 3
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Gln Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Val His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Thr Lys Phe Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 4
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD40鼠类先导抗体VH序列，属于20E2
<400> 4
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Asn Arg Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Gly Tyr Arg Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 5
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD40鼠类先导抗体VK序列，属于2H11
<400> 5
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Leu Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Gly Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Thr Phe Tyr Pro Tyr Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 6
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD40鼠类先导抗体VK序列，属于10F2
<400> 6
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Ile Ile Thr Cys Ser Ala Thr Ser Ser Val Ser Tyr Ile
20 25 30
Leu Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ala Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Thr Phe Tyr Pro Tyr Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 7
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD40鼠类先导抗体VK序列，属于19B10
<400> 7
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Leu Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Thr Phe Tyr Pro Tyr Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 8
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD40鼠类先导抗体VK序列，属于20E2
<400> 8
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Asn Leu Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Thr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 9
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR1重链，属于2H11和19B10
<400> 9
Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr Tyr Val His
1 5 10
<210> 10
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR1重链，属于10F2
<400> 10
Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr Tyr Ile His
1 5 10
<210> 11
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR1重链，属于20E2
<400> 11
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Gly Met His
1 5 10
<210> 12
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR2重链，属于2H11
<400> 12
Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Ser Lys Tyr Ala Pro Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 13
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR2重链，属于10F2
<400> 13
Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 14
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR2重链，属于19B10
<400> 14
Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Thr Lys Phe Ala Pro Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 15
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR2重链，属于20E2
<400> 15
Tyr Ile Ser Ser Gly Asn Arg Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 16
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR3重链，属于2H11, 10F2和19B10
<400> 16
Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr
1 5
<210> 17
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR3重链，属于20E2
<400> 17
Gln Asp Gly Tyr Arg Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 18
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR1轻链，属于2H11
<400> 18
Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Leu
1 5 10
<210> 19
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR1轻链，属于10F2
<400> 19
Ser Ala Thr Ser Ser Val Ser Tyr Ile Leu
1 5 10
<210> 20
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR1轻链，属于19B10
<400> 20
Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Leu
1 5 10
<210> 21
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR1轻链，属于20E2
<400> 21
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Thr
<210> 22
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR2轻链，属于2H11, 10F2和19B10
<400> 22
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 23
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR2轻链，属于20E2
<400> 23
Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 24
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR3轻链，属于2H11, 10F2,和19B10
<400> 24
Gln Gln Arg Thr Phe Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 25
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR3轻链，属于20E2
<400> 25
Gln Asn Asp Tyr Thr Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 26
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链，属于抗体A
<400> 26
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Thr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 27
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链IgG1K0，属于抗体A
<400> 27
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Asn Arg Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Gly Tyr Arg Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Ala Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
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290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 28
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链IgG1，属于抗体A
<400> 28
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Asn Arg Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Gly Tyr Arg Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Ala Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 29
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链IgG4DM，属于抗体A
<400> 29
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Asn Arg Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Gly Tyr Arg Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Ala Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
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370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 30
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链IgG1K0b，属于抗体A
<400> 30
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Asn Arg Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Gly Tyr Arg Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Ala Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 31
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链，属于抗体B
<400> 31
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Thr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 32
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链IgG1K0，属于抗体B
<400> 32
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Asn Arg Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Gly Tyr Arg Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 33
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链IgG1，属于抗体B
<400> 33
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Asn Arg Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Gln Asp Gly Tyr Arg Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
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Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
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435 440 445
Lys
<210> 34
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链IgG4DM，属于抗体B
<400> 34
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
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130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 35
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链IgG1K0b，属于抗体B
<400> 35
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Gly Tyr Arg Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 36
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链，属于抗体C
<400> 36
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Leu Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Thr Phe Tyr Pro Tyr Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 37
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链IgG1K0，属于抗体C
<400> 37
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Val His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Ser Lys Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 38
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链IgG1，属于抗体C
<400> 38
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Val His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Ser Lys Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 39
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链IgG4DM，属于抗体C
<400> 39
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Val His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Ser Lys Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 40
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链IgG1K0b，属于抗体C
<400> 40
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Val His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Ser Lys Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 41
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 可变轻链
<400> 41
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Thr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 42
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 可变重链
<400> 42
Glu Val Gln Leu Val Lys Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Asn Arg Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Gly Tyr Arg Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 43
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体A中的可变轻链
<400> 43
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Thr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 44
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 可变重链抗体A
<400> 44
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Asn Arg Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Gly Tyr Arg Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Ala Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 45
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 可变轻链
<400> 45
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Thr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 46
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 可变重链
<400> 46
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Asn Arg Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Gly Tyr Arg Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 47
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 可变轻链
<400> 47
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Thr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 48
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 可变重链
<400> 48
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Asn Arg Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Gly Tyr Arg Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 49
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 可变轻链
<400> 49
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Thr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 50
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 可变轻链
<400> 50
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Asn Arg Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Gly Tyr Arg Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 51
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 可变轻链
<400> 51
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Thr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 52
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体B中的可变轻链
<400> 52
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Thr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 53
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 可变重链
<400> 53
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Asn Arg Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Gly Tyr Arg Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 54
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 可变轻链
<400> 54
Gln Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Leu Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Thr Phe Tyr Pro Tyr Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 55
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 可变轻链
<400> 55
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Leu Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Thr Phe Tyr Pro Tyr Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 56
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 可变轻链
<400> 56
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Leu Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Thr Phe Tyr Pro Tyr Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 57
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 可变重链
<400> 57
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Val His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Ser Lys Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 58
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体C中的可变重链
<400> 58
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Val His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Ser Lys Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 59
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 可变重链
<400> 59
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Val His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Ser Lys Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 60
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 可变重链
<400> 60
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Val His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Ser Lys Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 61
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 可变重链
<400> 61
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Val His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Ser Lys Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 62
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自抗体19B10-Hum 的可变重链序列版本1
<400> 62
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Val His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Thr Lys Phe Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 63
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自抗体19B10-Hum 的可变重链序列版本2
<400> 63
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Val His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Thr Lys Phe Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 64
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自抗体19B10-Hum 的可变重链序列版本3
<400> 64
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Val His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Thr Lys Phe Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 65
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自抗体19B10-Hum 的可变重链序列版本4
<400> 65
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Val His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Thr Lys Phe Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 66
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自抗体19B10-Hum 的可变重链序列版本5
<400> 66
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Val His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Thr Lys Phe Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 67
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自抗体10F2Hum的可变重链序列版本1
<400> 67
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 68
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自抗体10F2Hum的可变重链序列版本2
<400> 68
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Thr Val Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 69
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自抗体10F2Hum的可变重链序列版本3
<400> 69
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Thr Val Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 70
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自抗体10F2Hum的可变重链序列版本4
<400> 70
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Thr Val Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 71
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自抗体10F2Hum的可变重链序列版本5
<400> 71
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Thr Val Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 72
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自抗体10F2Hum的可变重链序列版本6
<400> 72
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Thr Val Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 73
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自抗体10F2Hum的可变重链序列版本7
<400> 73
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 74
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自抗体10F2Hum的可变轻链序列版本1
<400> 74
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Thr Ser Ser Val Ser Tyr Ile
20 25 30
Leu Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Thr Phe Tyr Pro Tyr Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 75
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自抗体10F2Hum的可变轻链序列版本2
<400> 75
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Thr Ser Ser Val Ser Tyr Ile
20 25 30
Leu Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Thr Phe Tyr Pro Tyr Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 76
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自抗体10F2Hum的可变轻链序列版本3
<400> 76
Gln Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Thr Ser Ser Val Ser Tyr Ile
20 25 30
Leu Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Thr Phe Tyr Pro Tyr Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 77
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链CDR3，用于2H11, 10F2和19B10
<400> 77
Thr Thr Ser Tyr Tyr Val Gly Thr Tyr Gly Tyr
1 5 10
<210> 78
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链CDR3，用于20E2
<400> 78
Ala Arg Gln Asp Gly Tyr Arg Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10

Claims (13)

1.一种治疗或预防狼疮性肾炎的方法，所述方法包括对有需要的人类患者施用治疗有效量的特异性结合人CD40的人源化抗体，其中所述抗体包含重链和轻链，其中所述重链序列和轻链序列选自下组：
a)选自SEQ ID NO:9至SEQ ID NO:11的重链CDR1序列，选自SEQ ID NO:12至SEQ IDNO:15的重链CDR2序列，和选自SEQ ID NO:16至SEQ ID NO:17的重链CDR3序列；和
b)具有选自SEQ ID NO:18至SEQ ID NO:21的序列的轻链CDR1序列，SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:23的轻链CDR2序列，和选自SEQ ID NO:24至SEQ ID NO:25的轻链CDR3序列。
2.权利要求1的方法，其中所述抗体包含SEQ ID NO:10的重链CDR1序列，SEQ ID NO:13的重链CDR2序列和SEQ ID NO:16的重链CDR3序列；并且其中所述抗体包含SEQ ID NO:19的轻链CDR1序列，SEQ ID NO:22的轻链CDR2序列和SEQ ID NO:24的轻链CDR3序列。
3.权利要求1的方法，其中所述抗体包含SEQ ID NO:9的重链CDR1序列，SEQ ID NO:14的重链CDR2序列和SEQ ID NO:16的重链CDR3序列；并且其中所述抗体包含SEQ ID NO:20的轻链CDR1序列，SEQ ID NO:22的轻链CDR2序列和SEQ ID NO:24的轻链CDR3序列。
4.权利要求1的方法，其中所述抗体包含SEQ ID NO:11的重链CDR1序列，SEQ ID NO:15的重链CDR2序列和SEQ ID NO:17的重链CDR3序列；并且其中所述抗体包含SEQ ID NO:21的轻链CDR1序列，SEQ ID NO:23的轻链CDR2序列和SEQ ID NO:25的轻链CDR3序列。
5.一种治疗或预防狼疮性肾炎的方法，所述方法包括对有需要的人类患者施用治疗有效量的特异性结合人CD40的人源化单克隆抗体或抗体片段，所述抗体或抗体片段具有重链可变域和轻链可变区，其包含分别为SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:26；分别为SEQ ID NO:28和SEQID NO:26；分别为SEQ ID NO:29和SEQID NO:26；分别为SEQ ID NO:30和SEQID NO:26；分别为SEQ ID NO:32和SEQID NO:31；分别为SEQ ID NO:33和SEQID NO:31；分别为SEQID NO:34和SEQID NO:31；分别为SEQ ID NO:35和SEQID NO:31；分别为SEQ ID NO:37和SEQID NO:36；分别为SEQ ID NO:38和SEQID NO:36；分别为SEQ ID NO:39和SEQID NO:36；分别为SEQ ID NO:40和SEQID NO:36的氨基酸序列。
6.一种治疗或预防狼疮性肾炎的方法，所述方法包括对有需要的人类患者施用特异性结合人CD40的人源化抗体，其中所述抗体包含：
SEQ ID NO:44的重链可变区和SEQ ID NO:43的轻链可变区；
SEQ ID NO:53的重链可变区和SEQ ID NO:52轻链可变区；或
SEQ ID NO:58的重链可变区和SEQ ID NO:56的轻链可变区。
7.一种治疗或预防狼疮性肾炎的方法，所述方法包括对有需要的人类患者施用特异性结合人CD40的人源化单克隆抗体或抗体片段，其包含：
SEQ ID NO:30的重链和SEQ ID NO:26的轻链；
SEQ ID NO:35的重链和SEQ ID NO:31的轻链；或
SEQ ID NO:40的重链和SEQ ID NO:36的轻链。
8.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述抗体通过胃肠外途径、静脉内途径或皮下途径的施用来施用。
9.特异性结合人CD40的人源化单克隆抗体用于制备用于预防或治疗狼疮性肾炎的药物的用途，其中所述抗体包含重链和轻链，其中所述重链序列和轻链序列选自下组：
a)选自SEQ ID NO:9至SEQ ID NO:11的重链CDR1序列，选自SEQ ID NO:12至SEQ IDNO:15的重链CDR2序列，和选自SEQ ID NO:16至SEQ ID NO:17的重链CDR3序列；和
b)具有选自SEQ ID NO:18至SEQ ID NO:21的序列的轻链CDR1序列，SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:23的轻链CDR2序列，和选自SEQ ID NO:24至SEQ ID NO:25的轻链CDR3序列。
10.权利要求9的用途，其中所述抗体包含SEQ ID NO:10的重链CDR1序列，SEQ ID NO:13的重链CDR2序列和SEQ ID NO:16的重链CDR3序列；并且其中所述抗体包含SEQ ID NO:19的轻链CDR1序列，SEQ ID NO:22的轻链CDR2序列和SEQ ID NO:24的轻链CDR3序列。
11.权利要求9的用途，其中所述抗体包含SEQ ID NO:9的重链CDR1序列，SEQ ID NO:14的重链CDR2序列和SEQ ID NO:16的重链CDR3序列；并且其中所述抗体包含SEQ ID NO:20的轻链CDR1序列，SEQ ID NO:22的轻链CDR2序列和SEQ ID NO:24的轻链CDR3序列。
12.权利要求1的用途，其中所述抗体包含SEQ ID NO:11的重链CDR1序列，SEQ ID NO:15的重链CDR2序列和SEQ ID NO:17的重链CDR3序列；并且其中所述抗体包含SEQ ID NO:21的轻链CDR1序列，SEQ ID NO:23的轻链CDR2序列和SEQ ID NO:25的轻链CDR3序列。
13.一种药物组合物，其包含
(a)特异性结合人CD40的人源化抗体，其中所述抗体包含重链和轻链，其中所述重链序列和轻链序列选自下组：
i)选自SEQ ID NO:9至SEQ ID NO:11的重链CDR1序列，选自SEQ ID NO:12至SEQ IDNO:15的重链CDR2序列，和选自SEQ ID NO:16至SEQ ID NO:17的重链CDR3序列；和
ii)选自SEQ ID NO:18至SEQ ID NO:21的序列的轻链CDR1序列，SEQ ID NO:22至SEQID NO:23的轻链CDR2序列，和选自SEQ ID NO:24至SEQ ID NO:25的轻链CDR3序列；和
(b)缓冲液、稳定剂和任选的pH调节剂。
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