JP6931609B2 - 抗Axlアンタゴニスト抗体 - Google Patents
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Description
一態様では、本発明は、Axlを結合し、10C9のVHドメイン(配列番号3)及び/または10C9のVLドメイン(配列番号4)で構成される単離された抗体を提供する。好ましくは、これに結合されるAxlはヒトAxlである。
10C9のVHドメイン(配列番号3)、及び配列番号7のアミノ酸配列を有するVH CDR3と、場合により配列番号6及び配列番号5から選択されるアミノ酸配列を有する1つ以上のVH CDRとを含むVHドメインからなる群から選択される抗体VHドメイン;ならびに/または
10C9のVLドメイン(配列番号4)、及び配列番号8、配列番号9及び配列番号10から選択されるアミノ酸配列を有する1つ以上のVL CDRを含むVLドメインからなる群から選択される抗体VLドメイン。
一態様では、本発明は、Axlを結合し、10G5のVHドメイン(配列番号21)及び/または10G5のVLドメイン(配列番号22)で構成される単離された抗体を提供する。好ましくは、これに結合されるAxlはヒトAxlである。非好適な代替的態様では、本発明は、Axlを結合し、10G5[Q1E]VHドメイン(配列番号45)及び/または10G5のVLドメイン(配列番号22)で構成される単離された抗体を提供する。好ましくは、これに結合されるAxlはヒトAxlである。
10G5のVHドメイン(配列番号21)、10G5[Q1E]VHドメイン(配列番号45)、及び配列番号25のアミノ酸配列を有するVH CDR3と、場合により配列番号24及び配列番号23から選択されるアミノ酸配列を有する1つ以上のCDRとを含むVHドメインからなる群から選択される抗体VHドメイン;ならびに/または
10G5のVLドメイン(配列番号22)、及び配列番号26、配列番号27及び配列番号28から選択されるアミノ酸配列を有する1つ以上のVL CDRを含むVLドメインからなる群から選択される抗体VLドメイン。
Axlに対する高親和性
本明細書に記載する10C9抗体は、高親和性でヒトAxlと結合する。実施例5及び13に記載されているように、マウス10C9抗体が0.18nMのKDを有することを特定すると同時に、キメラ型が0.10nMのKDを有することを特定した。
Axlに対する高親和性
本明細書に記載する10G5抗体は、高親和性でヒトAxlと結合する。実施例5及び13に記載されているように、マウス10G5抗体が0.53nMのKDを有することを特定すると同時に、キメラ型が0.10nMのKDを有することを特定した。
特異的結合性
一般に用語「特異的」及び「特異的に結合する」は、抗体がその特異的結合パートナー(複数可)以外の分子にいかなる有意な結合も示さない状況を指すときに使用することができる。例えば、ヒトAxlを「特異的に結合する」抗体は、マウスAxlに対していかなる有意な結合も示さない。
(1)実施例2で、10C9及び10G5は、ヒトTAM受容体チロシンキナーゼファミリーの他のメンバーであるhMer及びhTyro3由来の組み換え抗原と有意な結合性を示さない;
(2)実施例3で、10C9及び10G5は、ヒトAxlと強く結合するが、マウスAxlとの結合性は示さない(これはマウスAxlリガンドであるマウスGas6が、マウスとヒト両方のAxlと強く結合するとともに、ヒトTyro3とも(より弱く)結合することとは対照的である);
(3)実施例4で、10C9及び10G5は、カニクイザル(Macaca fascicularis)Axlと強く結合する。
本明細書に記載する10C9及び10G5抗体は、AxlとそのリガンドGas6との結合を阻害する。
本発明の抗体は、Axlの発現に有意な減少を生じさせる。
本発明の抗体が(1)Axl受容体の天然リガンド(例えばGas6)との結合を阻害する、また(2)Axl受容体の発現を下方調節するという観察と一貫して、本発明の抗体はAxl受容体のリガンドによって誘発される下流のシグナル伝達を阻害する。この観察結果を図9に示している。この図から、10C9抗体の存在が、AxlリガンドGas6添加時にAktのSerine 473がリン酸化される程度を有意に減少させることがわかる。
腫瘍成長におけるAxl及びEMT経路の役割と一貫して、本発明の抗体は、血液学的腫瘍と非血液学的腫瘍両方の成長速度を低下させる。このことを、実施例14及び15に記載されている方法によって得た、図14及び15に示すデータによって実証している。
抗体
この用語は、天然であるか、または部分合成もしくは全体合成から産生されたかを問わず、免疫グロブリンを意味する。この用語はまた、抗体抗原−結合ドメインを含んでいる、いかなるポリペプチドまたはタンパク質にも適用される。抗体抗原−結合ドメインを含む抗体断片には、全抗体(例えばカノニカル配置でVH、CH1、CH2、CH3、VL及びCLドメインを含んでいるIgG抗体)、または標的抗原に対する結合活性を保持している全抗体の断片を包含する。このような断片としては、Fv(可変断片)、Fab(抗体結合性の断片)及びF(ab’)2断片、ならびに一本鎖Fv抗体(scFv)、dsFv、ミニボディ、ダイアボディ、一本鎖ダイアボディ、直列型scFv、TandAb、バイボディ、トリボディ、カッパ(ラムダ)ボディ、BiTE、DVD−Ig、SIP、SMIPまたはDARTが挙げられる。更に、抗体及びその断片は、例えばEP239400Aに記載されているヒト化抗体であってよい。例えば、モノクローナル及びポリクローナル抗体、組み換え抗体、抗体のタンパク質分解性断片及び組み換え断片(Fab、Fv、scFv、ダイアボディ)、単一ドメイン抗体(VHH、sdAb、ナノボディ、IgNAR、VNAR)、ならびに抗体に無関係なタンパク質であり、これらは、限定されないが、以下のような抗体様特異的結合(抗体模倣体)を有するように操作されている。
アドネクチン/モノボディ ヒトフィブロネクチン(10Fn3)III型の第10ドメイン、10kDa
アフィボディ プロテインA、Zドメイン、6kDa
アフィリン ヒトγ−クリスタリン/ヒトユビキチン(10〜20kDa)
アフィチン Sac7d(Sulfolobus acidocaldarius由来)、7kDa
アンチカリン リポカリン、20kDa
アビマー 種々の細胞膜受容体のドメイン、9〜18kDa
DARPin アンキリンリピートモチーフ、14kDa
Evibody 細胞傷害性Tリンパ球抗原4(CTLA−4)、15kDa
フィノマー Fyn、SH3ドメイン、7kDa
クニッツドメインペプチド 種々のプロテアーゼ阻害剤、6kDa
本明細書で使用される場合、「サンプル」は単一細胞であっても、細胞集団であってもよい。細胞(複数可)は、通常の健康な細胞(複数可)であっても、腫瘍細胞、例えば循環癌細胞であってもよい。
これは、抗原の一部または全体を認識して、それと特異的に結合し、それに相補的である領域を含む抗体分子の一部を意味する。抗原が大きい場合、抗体は、エピトープと呼ばれる、その抗原の特定の部分のみと結合し得る。抗原結合ドメインは、1つ以上の抗体可変ドメイン(例えば、VHドメインからなる、いわゆるFd抗体断片)によって構成され得る。好ましくは、抗原結合ドメインは抗体軽鎖可変領域(VL)及び抗体重鎖可変領域(VH)を含む。
本明細書で使用される場合、「ヒトTyro3」とは、受容体チロシンキナーゼのヒトTAMファミリーのTyro3メンバーを指す。いくつかの実施形態では、ヒトTyro3ポリペプチドは、NCBIアクセッション番号NP_006284.2、GI:27597078、登録更新日:2014年11月28日12:30AM(配列番号39)に相当する。一実施形態では、ヒトTyro3ポリペプチドをコードする核酸は、NCBIアクセッション番号NM_006293.3、GI:295842183、登録更新日:2014年11月28日12:30AMに相当する。
本明細書で使用される場合、「ヒトMer」とは、受容体チロシンキナーゼのヒトTAMファミリーのMerメンバーを指す。いくつかの実施形態では、ヒトMerポリペプチドは、NCBIアクセッション番号NP_006334.2、GI:66932918、登録更新日:2014年9月6日04:03AM(配列番号40)に相当する。一実施形態では、ヒトMerポリペプチドをコードする核酸は、NCBIアクセッション番号NM_006343、バージョン番号NM_006343.2 GI:66932917、登録更新日:2014年9月6日04:03AMに相当する。
本明細書で使用される場合、「ヒトGas6」(増殖停止特異的6)とは、受容体チロシンキナーゼのTAMファミリーのリガンドを指す。いくつかの実施形態では、ヒトGas6ポリペプチドは、NCBIアクセッション番号NP_000811.1、GI:4557617、登録更新日:2014年9月6日02:44AM(配列番号42)に相当する。一実施形態では、ヒトGas6ポリペプチドをコードする核酸は、NCBIアクセッション番号NM_000820.3、GI:673038877、登録更新日:2014年9月6日02:44AMに相当する。
本明細書で使用される場合、「BSA」とはウシ血清アルブミンを指す。いくつかの実施形態では、BSAは「A9647−ウシ血清アルブミン」(Sigma Aldrich)に相当する。いくつかの実施形態では、BSAは、Genbankアクセッション番号CAA76847、バージョン番号CAA76847.1 GI3336842、登録更新日:2011年1月7日02:30PMに相当する。
この用語は一般に、「include(を含む)」、すなわち1つ以上の特徴または成分の存在を許容する意味で使用される。
この用語は、本発明の抗体またはこのような抗体をコードする核酸が、一般に本発明に従っている状態を指す。抗体及び核酸は、それらが自然に会合する物質、例えば、その天然の環境中で、またはin vitroもしくはin vivoで実施される組み換えDNA技術によって調製される場合には、その調製環境(例えば、細胞培養)中で共存する他のポリペプチドまたは核酸などの物質を含まないか、または実質的に含まない。抗体及び核酸は希釈剤またはアジュバントとともに製剤化できるが、その場合でも実用目的のため単離でき、例えば、その抗体を、イムノアッセイに使用されるマイクロタイタープレートのコーティングに使用する場合には、通常ゼラチンまたは他の担体と混合し、あるいは診断または療法に使用する場合には、薬学的に許容される担体または希釈剤と混合する。抗体は、天然または異種起源の真核細胞系(例えば、CHOまたはNS0(ECACC 85110503)細胞)によってグリコシル化される場合もあれば、(例えば、原核細胞での発現により産生される場合には)非グリコシル化形態の場合もある。
「実質的に指定された」とは、本発明の関連するCDRまたはVHもしくはVLドメインが、本明細書で指定した配列を有する特定の領域と同一または極めて類似していることを意味する。「極めて類似」とは、CDR及び/またはVHもしくはVLドメイン内に、1〜5、好ましくは1〜4、例えば1〜3または1もしくは2、または3もしくは4つのアミノ酸置換が施され得ることを意味する。
本発明のCDRを保持する構造は一般に、再構成された免疫グロブリン遺伝子によりコードされる天然に存在するVH及びVL抗体可変ドメインのCDRに対応する位置にCDRが配置されている、抗体重鎖もしくは軽鎖配列またはその実質的部分である。免疫グロブリン可変ドメインの構造及び位置は、Kabat,E.A.et al,Sequences of Proteins of Immunological Interest.4th Edition.US Department of Health and Human Services.1987及びその改訂版(現在は、インターネット上で利用可能(http://immuno.bme.nwu.eduまたは検索エンジンを使用して「Kabat」を検索))を参照して特定することができる。
本発明の更なる態様はAxlエピトープに特異的な抗体を得る方法を提供する。この方法は、本明細書に指定されたVHドメインのアミノ酸配列における1つ以上のアミノ酸の付加、欠失、置換、または挿入により、VHドメインのアミノ酸変異体であるVHドメインを提供することと、場合により、このようにして提供されるVHドメインを1つ以上のVLドメインと組み合わせることと、VHドメインまたはVH/VLの組み合わせまたは複数の組み合わせを試験して、Axlに特異的な抗体分子または抗体抗原結合ドメインを同定することとを含む。前記VLドメインは、実質的に本明細書に指定されたアミノ酸配列を有し得る。
(a)CDR3が置換されているか、またはCDR3コード領域が欠失しているVHドメインをコードする核酸の出発レパートリーを提供することと;
(b)前記レパートリーを、VH CDR3について本明細書に実質的に指定されたアミノ酸配列をコードするドナー核酸と組み合わせることにより、前記ドナー核酸をレパートリー内のCDR3領域に挿入し、それによってVHドメインをコードする核酸の産物レパートリーを提供することと;
(c)前記産物レパートリーの核酸を発現させることと;
(d)Axlに特異的な抗体を選択することと;
(e)前記抗体またはそれをコードする核酸を回収することと、を含む。
本明細書で使用される場合、「キメラ」抗体または「ヒト化」抗体または「CDR移植」抗体は、非マウス、好ましくはヒト抗体由来の1種以上のタンパク質またはペプチドと組み合わせた、本明細書に記載する抗Axl抗体のいずれかの組み合わせまたはそれに由来する何らかのCDRを含む。
本発明の抗体は、検出可能または機能的標識で標識してもよい。検出可能標識には、[131I]または[99Tc]などの放射性標識を含み、放射性免疫複合体の技術分野で既知の従来の化学的方法を用いて、これら標識を本発明の抗体に結合させることができる。標識はまた、西洋ワサビペルオキシダーゼなどの酵素標識を含む。更に標識は、特異的同族の検出可能部分、例えば、標識されたアビジンまたはストレプトアビジンへの結合により検出できるビオチンなどの化学成分を含む。好ましくは、標識は蛍光標識、例えばFITCを含む。
本発明の修飾抗体及び抗原結合性断片は、抗体と直接的または間接的に共有結合される1つ以上の有機部分を含むことができる。本明細書に記載する抗体または抗原結合性断片に結合される各有機部分は、独立して親水性ポリマー基、脂肪酸基または脂肪酸エステル基であり得る。本明細書で使用される場合、用語「脂肪酸」は、モノカルボン酸及びジカルボン酸を包含する。「親水性ポリマー基」は、本明細書でこの用語が使用される場合、オクタンよりも水に溶解しやすい有機ポリマーを指す。例えば、ポリリジンは、オクタンよりも水に溶解しやすい。したがって、ポリリジンの共有結合により修飾された抗体は本開示に包含される。本明細書に記載する抗体の修飾に適した親水性ポリマーは、直鎖状でも分枝鎖状でもよく、例えば、ポリエチレングリコール(PEG)、モノメトキシ−ポリエチレングリコール(mPEG)、PPGなどのポリアルカングリコール、炭水化物(例えば、デキストラン、セルロース、オリゴ糖、多糖類など)、親水性アミノ酸のポリマー(例えば、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリアスパルテートなど)、ポリアルカン酸化物(例えば、ポリエチレンオキシド、ポリプロピレンオキシドなど)及びポリビニルピロリドンが挙げられる。好ましくは、本明細書に記載する抗体を修飾する親水性ポリマーは、独立した分子実体として約800〜約150,000ダルトンの分子量を有する。例えば、PEG5000及びPEG20,000を使用することができ、この添字がポリマー平均分子量(ダルトン)である。親水性ポリマー基は、1〜約6個のアルキル基、脂肪酸基、または脂肪酸エステル基と置換され得る。脂肪酸基または脂肪酸エステル基と置換される親水性ポリマーは、適切な方法を用いて調製することができる。例えば、アミン基を含むポリマーを、脂肪酸または脂肪酸エステルのカルボキシレートと結合することができ、脂肪酸または脂肪酸エステルの活性化カルボキシレート(例えば、N,N−カルボニルジイミダゾールで活性化されたもの)をポリマーのヒドロキシル基と結合することができる。
本発明はまた、1種以上の細胞毒性剤、例えば化学療法剤もしくは化学療法薬、成長阻害剤、毒素(例えば、タンパク質毒素、細菌性の酵素活性毒素、真菌、植物もしくは動物起源、またはそれらの断片)または放射性同位体と複合体化された、本明細書の抗Axl抗体を含んでいる免疫複合体を提供する。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供する抗体を改変して、抗体がグリコシル化される範囲が増減されている。1つ以上のグリコシル化部位が生成または削除されるようにアミノ酸配列を改変することにより、抗体に対するグリコシル化部位の付加または除去を好都合に達成することができる。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体のFc領域に1つ以上のアミノ酸改変を導入し、それによってFc領域変異体を生成することができる。Fc領域の変異体は、1つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸改変(例えば置換)を含むヒトFc領域の配列(例えば、ヒトIgG1、IgG2、IgG3またはIgG4のFc領域)を含み得る。
ある特定の実施形態では、抗体の1つ以上の残基がシステイン残基と置換されているシステイン操作抗体、例えば「thioMAb」を作製することが望ましい場合がある。
本発明の抗体は、ヒトまたは動物対象、好ましくはヒトの診断方法または治療方法に使用されるように設計される。
ヒトAxlに対して高特異性を有する抗体を使用することで、臨床的利点が得られる臨床的徴候には、Axlが過剰発現している病状、またはAxl拮抗作用が臨床的利点をもたらす病状のいずれをも含む。このような徴候としては、免疫不全、心臓血管疾患、血栓症、糖尿病、免疫チェックポイント障害、線維性障害(線維症)または増殖性疾患、例えば癌、特に転移性癌が挙げられる。更に、Axlは上皮起源の多くの癌に関与することが知られている。
本発明はまた、本明細書に開示されるいずれかの有効量の抗Axl抗体を個体に投与し、構成的Axlを阻害することを含む、構成的Axl活性の阻害方法を提供する。
本発明の抗体は通常、抗体に加えて少なくとも1つの成分を含み得る医薬組成物の形態で投与される。
本発明の医薬組成物は、経口、経直腸、経鼻、気管支内、局所(頬側、舌下を含む)、膣もしくは非経口(皮下、筋肉内、静脈内、動脈内及び皮内を含む)、腹腔内、または髄腔内投与への適合が可能である。好ましくは、製剤は静脈内または皮下投与される製剤である。
当業者は、過度の実験をすることなく、対象に投与する、本組成物の適切な用量を容易に決定することができる。通常は、医師が個々の患者に最も適する実際の投与量を決定するものであり、投与量は、用いる特定の薬剤の活性、その薬剤の代謝安定性及び作用の長さ、年齢、体重、全身の健康、性別、食事、投与様式及び投与時間、排泄率、併用薬物、特定の病状の重症度、ならびに個別の実行中の療法を含めた様々な因子に応じて異なると予想される。
本発明の抗Axl抗体は単独で投与することも、他の治療薬と組み合わせて、治療すべき病状に応じて同時にまたは逐次的に投与することもできる。例えば、本発明の抗体またはその複合体を、抗癌単剤療法として、または下記のような他の癌治療薬との併用療法に使用することができる。他の治療薬には、好適な用量の鎮痛薬、例えば非ステロイド性抗炎症薬(例えばアスピリン、イブプロフェンまたはケトプロフェン)もしくはオピエート(例えばモルヒネ)、または制吐剤の投与を含むことができる。
これには、アルキル化剤(例えば、ブスルファンなどのスルホン酸アルキル);ナイトロジェンマスタード(例えばクロラムブシル、シクロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メルファラン及びウラムスチン)、エチレンイミン誘導体(例えばチオテパ);ニトロソウレア(例えばカルムスチン、ロムスチン及びストレプトゾシン)、トリアゼン(例えばダカルバジン)、プロカルバジン及びテモゾールアミド(temozolamide);白金化合物、例えばシスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン及びピコプラチン、オンナプラチン(onnaplatin)、テトラプラチン、スプリオプラチン(sprioplatin)、イプロプラチン、クロロ(ジエチレンジアミノ)−白金(II)クロリド、ジクロロ(エチレンジアミノ)−白金(II)、ジアミノ(2−エチルマロナト)白金(II)、(1,2−ジアミノシクロヘキサン)マロナト白金(II)、(4−カルボキシフタロ)−(1,2−ジアミノシクロヘキサン)白金(II)、(1,2−ジアミノシクロヘキサン)−(イソシトラト)白金(II)及び(1,2−ジアミノシクロヘキサン)−cis−(ピルバト)白金(II);抗葉酸剤(例えばメトトレキサート、ペメトレキセド(permetrexed)、ラルチトレキセド、及びトリメトレキサート)を含む代謝拮抗薬;ピリミジン類似体(例えばアザシチジン、カペシタビン、シタラビン、エダトレキサート、フロクスウリジン、フルオロウラシル、ゲムシタビン及びトロキサシタビン);プリン類似体(例えばクラドリビン、クロロデオキシアデノシン、クロファラビン、フルダラビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、チオグアニン);抗腫瘍抗生物質(例えばブレオマイシン、ダクチノマイシン、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ポルフィロマイシン)、及びアントラサイクリン(例えばダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン及びバルルビシン)を含む天然生成物;有糸分裂阻害薬(例えばビンカアルカロイド、ビンブラスチン、ビンベシル(vinvesir)、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン);
酵素(例えばL−アスパラギナーゼ及びPEG−L−アスパラギナーゼ);微小管ポリマー安定剤(例えばタキサン類のパクリタキセル及びドセタキセル);トポイソメラーゼI阻害剤(例えばカンプトテシン、イリノテカン及びトポテカン);トポイソメラーゼII阻害剤(例えばポドフィロトキシン、アムサクリン、エトポシド、テニポシド、ロソキサントロン及びアクチノマイシン);アンドロゲン(例えばフルオキシメステロン及びテストラクトン)を含むホルモン及びホルモンアンタゴニスト、抗アンドロゲン薬(例えばビカルタミド、シプロテロン、フルタミド及びニルタミド);コルチコステロイド(例えばデキサメタゾン及びプレドニゾン);アロマターゼ阻害剤(例えばアミノグルテチミド、アナストロゾール、エキセメスタン、ホルメスタン及びレトロゾール);エストロゲン(例えばジエチルスチルベストロール);抗エストロゲン薬(例えばフルベストラント、ラロキシフェン、タモキシフェン及びトレミフェン);黄体形成ホルモン放出ホルモン(LHRH)アゴニスト及びアンタゴニスト(例えばアバレリクス、ブセレリン、ゴセレリン、リュープロリド、ヒストレリン、デスロレリン(desorelin)、酢酸ナファレリン及びトリプトレリン);プロゲスチン(例えば酢酸メドロキシプロゲステロン及び酢酸メゲストロール)及び甲状腺ホルモン(例えばレボチロキシン及びリオチロニン);PKB経路阻害剤(例えばペリホシン、エンザスタウリン塩酸塩及びトリシリビン);PI3K阻害剤(例えばセマフォア(semaphore)及びSF1126);mTOR阻害剤(例えばラパマイシン及び類似体);CDK阻害剤(例えばセリシクリブ、アルボシジブ及び7−ヒドロキシスタウロスポリン);COX−2阻害剤(例えばセレコキシブ);HDAC阻害剤(例えばトリコスタチンA、スベロイルアニリドヒドロキサム酸及びクラミドシン);DNAメチラーゼ阻害剤(例えばテモゾロミド);ならびにその他の薬剤(例えばアルトレタミン、三酸化ヒ素、サリドマイド、レナリドミド、硝酸ガリウム、レバミゾール、ミトタン、ヒドロキシウレア、オクトレオチド、プロカルバジン、スラミン、光線力学的化合物(例えばメトキサレン及びポルフィマーナトリウム)、及びプロテアソーム阻害剤(例えばボルテゾミブ))が挙げられる。
CTLA−4標的抗体、例えばイピリムマブ及びトレメリムマブ。
PD−1標的抗体、例えばペムブロリズマブ、ミボルマブ(Mivolumab)及びAMP−514/MEDI0680。
BD−L1標的抗体、例えばMPDL3280A、MEDI4736、MSB0010718C及びBMS−936559。
4−1BB標的抗体、例えばウレルマブ及びPF−05082566。
OX−40標的抗体、例えばMEDI6469、MEDI6383(rOX40L)及びMOXR0916。
GITR標的抗体、例えばTRX518。
CD27標的抗体、例えばCDX−1127。
CD40標的抗体、例えばCP−870,893。
LAG3標的抗体、例えばBMS−986016。
以下の段落は、本発明の具体的に想定される多数の実施形態及び組み合わせを記載する。
10C9のVHドメイン(配列番号3)、及び配列番号7のアミノ酸配列を有するVH CDR3と、場合により配列番号6及び配列番号5から選択されるアミノ酸配列を有する1つ以上のVH CDRとを含むVHドメインからなる群から選択される抗体VHドメイン;ならびに/または
10C9のVLドメイン(配列番号4)、及び配列番号8、配列番号9及び配列番号10から選択されるアミノ酸配列を有する1つ以上のVL CDRを含むVLドメインからなる群から選択される抗体VLドメインを含む抗体。
(ii)10−3M超のKDでヒトMerを結合する;及び/または
(iii)10−3M超のKDでヒトTyro3を結合する、段階1〜14のいずれか1項による抗体。
10C9のVHドメインのアミノ酸配列(配列番号3)における1つ以上のアミノ酸の付加、欠失、置換、または挿入により、それぞれが10C9のVHドメインのアミノ酸配列変異体である1つ以上のVHドメインを提供し、場合により、このようにして提供される1つ以上のVHドメインのアミノ酸配列変異体を1つ以上のVLドメインと組み合わせ、1つ以上のVH/VLの組み合わせを提供することと;及び/または
10C9のVLドメインのアミノ酸配列(配列番号4)における1つ以上のアミノ酸の付加、欠失、置換、または挿入により、10C9のVLドメインのアミノ酸配列変異体であるVLドメインを提供し、このようにして提供される1つ以上のVLドメインのアミノ酸配列変異体を1つ以上のVHドメインと組み合わせ、1つ以上のVH/VLドメインの組み合わせを提供することと;
ならびにVHドメインのアミノ酸配列変異体またはVH/VLの組み合わせもしくは複数の組み合わせを試験して、Axlを結合する抗体を同定することと、を含む方法。
CDR3が置換されているか、もしくはCDR3コード領域が欠失している1つ以上のVHドメインをコードする出発核酸を提供し、前記出発核酸を、配列番号7であるVH CDR3のアミノ酸配列をコードするドナー核酸と組み合わせることにより、前記ドナー核酸を出発核酸内のCDR3領域に挿入し、それによってVHドメインをコードする核酸産物を提供すること;または
CDR3が置換されているか、もしくはCDR3コード領域が欠失している1つ以上のVLドメインをコードする出発核酸を提供し、前記出発核酸を、配列番号10であるVL CDR3のアミノ酸配列をコードするドナー核酸と組み合わせることにより、前記ドナー核酸を出発核酸内のCDR3領域に挿入し、それによってVLドメインをコードする核酸産物を提供することと;
VHドメインをコードする前記核酸産物の核酸を発現させ、場合により、このようにして提供されるVHドメインを1つ以上のVLドメインと組み合わせてVH/VLの組み合わせを提供すること、及び/もしくはVLドメインをコードする前記核酸産物の核酸を発現させ、このようにして提供されるVLドメインを1つ以上のVHドメインと組み合わせてVH/VLの組み合わせを提供することと;
Axlを結合するVHドメインもしくはVH/VLの組み合わせを含む抗体を選択することと;
ならびに、Axlを結合する前記抗体及び/もしくはAxlを結合する抗体をコードする核酸を回収することと、を含む方法。
以下の段落は、本発明の具体的に想定される多数の実施形態及び組み合わせを記載する。
10G5のVHドメイン(配列番号21)、及び配列番号25のアミノ酸配列を有するVH CDR3と、場合により配列番号24及び配列番号23から選択されるアミノ酸配列を有する1つ以上のVH CDRとを含むVHドメインからなる群から選択される抗体VHドメイン;ならびに/または
10G5のVLドメイン(配列番号22)、及び配列番号26、配列番号27及び配列番号28から選択されるアミノ酸配列を有する1つ以上のVL CDRを含むVLドメインからなる群から選択される抗体VLドメインを含む抗体。
10G5(Q1E)のVHドメイン(配列番号45)、及び配列番号25のアミノ酸配列を有するVH CDR3と、場合により配列番号24及び配列番号23から選択されるアミノ酸配列を有する1つ以上のVH CDRとを含むVHドメインからなる群から選択される抗体VHドメイン;ならびに/または10G5のVLドメイン(配列番号22)、及び配列番号26、配列番号27及び配列番号28から選択されるアミノ酸配列を有する1つ以上のVL CDRを含むVLドメインからなる群から選択される抗体VLドメインを含む抗体。
(ii)10−3M超のKDでヒトMerを結合する;及び/または
(iii)10−3M超のKDでヒトTyro3を結合する、段落1a〜14aのいずれか1項による抗体。
10G5のVHドメインのアミノ酸配列(配列番号3)における1つ以上のアミノ酸の付加、欠失、置換、または挿入により、それぞれが10G5のVHドメインのアミノ酸配列変異体である1つ以上のVHドメインを提供し、場合により、このようにして提供される1つ以上のVHドメインのアミノ酸配列変異体を1つ以上のVLドメインと組み合わせ、1つ以上のVH/VLの組み合わせを提供することと;及び/または
10G5のVLドメインのアミノ酸配列(配列番号4)における1つ以上のアミノ酸の付加、欠失、置換、または挿入により、10G5のVLドメインのアミノ酸配列変異体であるVLドメインを提供し、このようにして提供される1つ以上のVLドメインのアミノ酸配列変異体を1つ以上のVHドメインと組み合わせ、1つ以上のVH/VLドメインの組み合わせを提供することと;ならびに
VHドメインのアミノ酸配列変異体またはVH/VLの組み合わせもしくは複数の組み合わせを試験して、Axlを結合する抗体を同定することと、を含む方法。
CDR3が置換されているか、もしくはCDR3コード領域が欠失している1つ以上のVHドメインをコードする出発核酸を提供し、前記出発核酸を、配列番号7であるVH CDR3のアミノ酸配列をコードするドナー核酸と組み合わせることにより、前記ドナー核酸を出発核酸内のCDR3領域に挿入し、それによってVHドメインをコードする核酸産物を提供すること;または
CDR3が置換されているか、もしくはCDR3コード領域が欠失している1つ以上のVLドメインをコードする出発核酸を提供し、前記出発核酸を、配列番号10であるVL CDR3のアミノ酸配列をコードするドナー核酸と組み合わせることにより、前記ドナー核酸を出発核酸内のCDR3領域に挿入し、それによってVLドメインをコードする核酸産物を提供することと;
VHドメインをコードする前記核酸産物の核酸を発現させ、場合により、このようにして提供されるVHドメインを1つ以上のVLドメインと組み合わせてVH/VLの組み合わせを提供すること、及び/もしくはVLドメインをコードする前記核酸産物の核酸を発現させ、このようにして提供されるVLドメインを1つ以上のVHドメインと組み合わせてVH/VLの組み合わせを提供することと;
Axlを結合するVHドメインもしくはVH/VLの組み合わせを含む抗体を選択することと;
ならびに、Axlを結合する前記抗体及び/もしくはAxlを結合する抗体をコードする核酸を回収することと、を含む方法。
C末端Mycエピトープと融合させた全長ヒトAxlをコードするプラスミドを用いた、免疫応答性NMRIマウス(チャールズリバー)のDNA免疫法により、ヒトAxl受容体に対するモノクローナル抗体(MAb)を生成した。
結合実験はすべて、Biacore 3000装置(GE Healthcare)を使用して25℃で実施した。ヒトTAM受容体ファミリーのメンバーである、Axl(rhAxl−Fcキメラ;R&D Systems、カタログ番号154−AL)、Mer(rhMer−Fcキメラ;R&D Systems、カタログ番号891−MR)及びTyro3(rhTyro3/Dtk−Fcキメラ;R&D Systems、カタログ番号859−DK)の細胞外ドメインに対応する可溶性組み換え抗原を、CM5センサーチップの表面にアミンカップリングを利用して、それぞれ表面密度393.0、303.6及び364.0のレゾナンスユニット(RU)で固定化した。Biacoreの稼働は、Binding analysisウィザードを使用した自動モードで実施した。HBS−EP緩衝液(GE Healthcare)中に濃度10μg/mLのMAb 10C9またはMAb 10G5を含有しているサンプルを、固定化抗原を有する表面全体に流速30μL/分で3分間注入(会合)した後、5分間、解離させた。
結合実験は、Biacore 3000装置(GE Healthcare)を使用して25℃で実施した。ヒトAxl(rhAxl−Fcキメラ;R&D Systems、カタログ番号154−AL)、マウスAxl(rmAxl−Fcキメラ;R&D Systems、R&D Systems、カタログ番号854−AX)及びヒトTyro3(rhTyro3/Dtk−Fcキメラ;R&D Systems、カタログ番号859−DK)に対応する可溶性組み換え抗原を、CM5センサーチップの表面にアミンカップリングを利用して、それぞれ表面密度1,308.0、2,115.9及び1,429.0RUで固定化した。Biacoreの稼働は、Binding analysisウィザードを使用した自動モードで実施した。
カニクイザル由来のAxl受容体の配列(Macaca fascicularis;配列番号43)をWO2009062690A1から取得した。配列に基づいて、cyno−Axlの組み換え細胞外ドメインをCHO細胞での一時的発現によってヒトFcとの融合タンパク質として生成した。組み換えcyno−Axl−Fcを、プロテインA−セファロース(GE Healthcare)を使用して均一に精製した。結合実験は、Biacore 3000装置(GE Healthcare)を使用して25℃で実施した。ヒトAxl(rhAxl−Fcキメラ;R&D Systems、カタログ番号154−AL)及びcyno−Axlに対応する可溶性組み換え抗原を、CM5センサーチップの表面にアミンカップリングを利用して、それぞれ表面密度775及び880RUで固定化した。Biacoreの稼働は、Binding analysisウィザードを使用した自動モードで実施した。
抗Axl抗体10C9及び10G5の親和性測定は、Biacore 3000装置(GE Healthcare)を使用して表面プラズモン共鳴測定により25℃で実施した。固体の抗原コーティング面として、密度190RUでrhAxl−Fcキメラ(R&D Systems、カタログ番号154−AL)を固定化したセンサーチップCM5を使用した。
競合結合試験は、Biacore 3000装置(GE Healthcare)及びBinding Analysisウィザードを使用し、2つのサンプルを数サイクル注入して実施した。第1のサンプルとして、飽和濃度のMAb 10C9(790nM、すなわち120μg/mL)または10G5(160nM、すなわち24μg/mL)を、rhAxl−Fcでコーティング(アミンカップリング法を使用)されたCM5センサーチップの表面全体に、流速30μL/分で、3分間注入し、続いて2.5分間、安定化させた(HBS−EP緩衝液のみ)後、第2のサンプルを注入した。第2のサンプルには、組み換えヒト(rh)Gas6(R&D Systems、カタログ番号885−GS)、組み換えマウス(rm)Gas6(R&D Systems、カタログ番号986−GS/CF)ならびに抗Axl抗体のパネル、例えばMAB154(R&D Systems、カタログ番号MAB154)、10C9及び10G5を使用した。濃度はすべて25μg/mLである。第2のサンプルを3分間注入し、続いて2.5分間、安定化(緩衝液のみ)させ、更に流速50μL/分で再生溶液(10mMのHCl、1MのNaCl)を30秒間注入することにより表面を再生した。
高悪性度トリプルネガティブヒト乳癌細胞株MDA−MB−231(ATCC(登録商標)HTB−26(商標))を、10%のウシ胎児血清(FBS)、グルタミンならびにペニシリン及びストレプトマイシンを補充したダルベッコ改変イーグル培地/栄養混合物F−12ハム培地中で、推奨条件に従って培養した。培養した細胞を、細胞表面に抗体の適切な結合が確認されるまで、懸濁液中で少なくとも1時間、37℃で前処理した後、細胞外マトリックスに定置した。細胞培養液は毎日観察し、1日おきに交換処理を行った。抗体は濃度50〜100μg/mLで使用した。位相差及びホフマン光学系両方を利用したNIKON光学顕微鏡で、カバーガラス3Dイメージング分析(35mmディッシュ)を実施した。既に3日目にして、MAb 10C9またはMAb10G5で処理された細胞と、対照の無関係なIgGで処理された細胞との間に成長差が見られた。6日目で、抗体10C9または10G5で処理された細胞は、対照で処理された細胞と比較して、細胞外マトリックスでの成長と腫瘤の発現を有意に阻害したことが明らかになった(図6)。核染色により、MAb 10G5で処理された細胞は成長を阻害されたが、まだ生存していることが明らかとなった。類似の効果は抗体10C9でも観察された。この実験は、抗Axl抗体10C9及び10G5のいずれもが、器官型腫瘤の発現を阻害する見込みがあることを実証した。
MDA−MB−231細胞を細胞外マトリックス上で増殖させ、高悪性度の星形形態を形成させる。次に、星形の腫瘤を、実施例7に記載されているように、対照IgGならびに抗体10C9及び10G5で処理した。抗体10C9及び10G5はいずれも、細胞死とDNA断片化に伴う星形パターンの分解を引き起こした(図7)。これらの結果は、特異的モノクローナル抗体10C9及び10G5を使用したAxlの阻害が、in vitroの3Dモデルで強い抗腫瘍効果を有することを実証した。
異なる抗体で処理されたMBA−MD−231細胞でのAxl受容体タンパク質の発現を、ウェスタンブロット解析により検討した。細胞を1ウェル当たり5x105細胞の密度で6ウェルプレートに播種し、一晩培養した後、処理を開始した。細胞をアイソタイプ対照(マウスIgG2b)、濃度100μg/mLの抗Axl抗体(10C9、10G5及びMAb#3)、または濃度0.5μMのマルチキナーゼ阻害剤フォレチニブ(Met、Ron、Axl、Tie−2及びVEGFR2を標的とする)の存在下で20時間処理し、続いて1,200rpmで5分間遠心分離して採取し、滅菌PBSで洗浄した。遠心分離によって細胞を採取して、NP40溶解緩衝液で再懸濁した後、30分間、氷上でインキュベートした。細胞可溶化物を遠心分離(12,000rpm、4℃、5分)によって清澄化し、BCAタンパク質アッセイを利用してタンパク質濃度を測定した。35μgの総タンパク質を含んでいる細胞可溶化物サンプルを、還元剤(Life Technologies)の存在下で変性させ、NuPAGE10%Bis−Trisポリアクリルアミド(PAA)ゲル、1.0mmx12ウェル(Invitrogen)の各ウェルに充填した。Bis−Tris SDSランニング緩衝液を使用して、推奨条件(Life Technologies)下で電気泳動を実施し、20%メタノールを用いた転写緩衝液を使用して、XCell II(商標)Blot Module(Invitrogen)用マニュアルの2種類のゲルに関する記載のようにタンパク質をPVDF膜に転写した。5%のスキムミルクを加えたTBS/0.1%Tween20(TBST)の10mLブロッキング緩衝液中で、室温にて1時間、膜をインキュベートし、続いて抗Axl MAb154(R&D Systems)の1:1000希釈液を含有する5mLのインキュベーション緩衝液(3%のスキムミルクを加えたTBST)中で、4℃で一晩インキュベートした。膜を10mLのTBSTで5分ずつ3回洗浄し、続いて5mLのインキュベーション緩衝液中のヤギ抗マウスIgG(H+L)HRP複合体二次抗体(1:2000)とともに、室温で静かに転がしながら1時間インキュベートした。その後、膜を10mLのTBSTで5分間に3回、更に10mLのTBS緩衝液で2回洗浄した。膜を1mLのECL基質とともに室温で1分間インキュベートした。過剰な基質溶液を吸引し、ブロットをChemiDoc(商標)XRS+撮像装置(Bio Rad)及びImage labソフトウェアを使用して可視化した。負荷対照として、マウス抗アクチン抗体(1:10,000;Sigma)を用いた検出を同条件下で行った。
本実験は、ヒト子宮頸癌由来の細胞株HeLa(ATCC(登録商標)CCL−2(商標))を使用して実施した。T175フラスコにて、10%のFBS、ペニシリン−ストレプトマイシン及びLグルタミンを補充したMEM培地(Sigma)中で集密度80%まで細胞を増殖させた。細胞をPBSで洗浄し、0.25%のトリプシン/EDTA(Sigma)で処理して剥離し、続いて遠心分離して、新鮮な培地(MEM/0.5%FBS)で再懸濁した。10%のFBSを補充したMEM培地を入れたペトリ皿に細胞を播種した(1皿当たり3x106細胞)。37℃で3時間培養した後、細胞をPBSで洗浄し、飢餓培地(MEM/0.5%FBS)中で一晩保存した。濃度1μg/mlの抗Axl抗体10C9または10G5とともに、細胞を1時間プレインキュベートし、続いて濃度10μg/mLの、Axlリガンドである組み換えマウスGas6(R&D Systems)で20分間刺激した。細胞可溶化物を実施例9に記載されているように調製し、抗ホスホ−Akt(Ser473)抗体(Cell Signaling)、続いてヤギ抗ウサギ西洋ワサビペルオキシダーゼ(Jackson ImmunoResearch)を使用してウェスタンブロット解析を実施した。抗ホスホ−Aktは、AKT1、AKT2及びAKT3を区別していないため、ブロットには「ホスホ−Akt」の総レベルを示す。抗GAPDH抗体(Millipore)による検出を、負荷対照として使用した。
ハイブリドーマ細胞を標準条件下で増殖させた。5x106個のハイブリドーマ細胞を使用し、標準プロトコルに従ってmRNAの単離及びcDNA合成を行った。重鎖及び軽鎖可変領域(それぞれVH及びVL)をコードする遺伝子のPCR増幅のため、Mouse IgG Library Primer Set(Progen、Heidelberg,Germany、カタログ番号F2010)を使用した。ハイブリドーマ10C9では、異なるプライマーの組み合わせを使用したPCR増幅により、VH遺伝子に対する5種類のプライマーの組み合わせを使用したPCRから9配列を、VL遺伝子に対する2種類のプライマーの組み合わせを使用したPCRから5配列を得た。その後の作業のため、IMGTデータベースとのヌクレオチドアラインメントによって決定される、対応する生殖細胞系配列との最大相同性を基準としてクローンVH1(A7−1)及びVκ2(E2−2)の配列を選抜した。
マウスハイブリドーマ10C9及び10G5から取得したVH及びVL配列を使用して、哺乳動物細胞(GeneArt)の発現にコドンが最適化された合成遺伝子を生成した。これらのマウスVH及びVL遺伝子を、それぞれヒトIgG1重鎖及び軽鎖(C−カッパ)の定常ドメインをコードする遺伝子要素とともに、哺乳動物細胞の抗体産生に適した発現ベクターにインフレームでライゲーションした。キメラ(マウス可変/ヒト定常)IgG1抗体の産生をチャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞での一時的発現によって達成した後、プロテインAアフィニティクロマトグラフィーを使用して精製した。
キメラ抗Axl抗体c10C9及びc10G5の親和性測定は、Biacore 3000装置(GE Healthcare)を使用して表面プラズモン共鳴測定により25℃で実施した。固体の抗原コーティング面として、密度190RUでrhAxl−Fcキメラ(R&D Systems、カタログ番号154−AL)を固定化したセンサーチップCM5を使用した。
抗Axlキメラ抗体のin vivoでの抗腫瘍活性を評価するために、本発明者らは、ヒト非小細胞肺癌(NSCLC)のマウス異種移植モデルを使用した。ヒトNSCLC A549細胞(ATCC#CCL−185)A549細胞を、10%のFBS、2mMのL−グルタミン、100U/mlのペニシリン及び100μg/mlのストレプトマイシン、0.01MのHEPES緩衝液、0.45%のD−(+)−グルコース、1mMのピルビン酸ナトリウムを補充したDMEM培地中で、単層培養としてin vitroで増殖させた。ヌードマウスの側腹部に、無血清培地/マトリゲル(1:1)で再懸濁した5x106のA549細胞を皮下(s.c.)注入した。腫瘍サイズが100mm3に達したら(図14の0日目)、動物をランダム化して、4週間、週2回の腹腔内(i.p.)注入により、20mg/kgのビヒクル(滅菌PBS)または抗Axlキメラ抗体10G5のいずれかで処置した。
抗Axlキメラ抗体の血液癌モデルでの抗腫瘍活性を評価するために、本発明者らは、ヒト急性骨髄性白血病(AML)のマウス異種移植モデルを使用した。ヒトAML Mv4−11細胞(ATCC#CRL−9591)細胞を、10%のFBS、2mMのL−グルタミン、100U/mlのペニシリン及び100μg/mlのストレプトマイシンを補充したIMDM培地の懸濁液中で増殖させた。ヌードマウスの側腹部に、無血清IMDM培地とマトリゲル(1:1)との混合物で再懸濁した5x106のMv4−11細胞をs.c.注入した。腫瘍サイズが200mm3に達したら(図15の0日目)、動物をランダム化して、4週間、週2回のi.p.注入により、30mg/kgのビヒクル(滅菌PBS)または抗Axlキメラ抗体10G5のいずれかで処置した。
抗Axl裸抗体は、標定受容体に特異的なシグナル伝達経路を阻害すること、ならびに/またはそのエフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞障害(ADCC)、補体依存性細胞傷害(CDC)及び/もしくは抗体依存性細胞貪食作用(ADCP)による腫瘍細胞の殺傷のいずれによっても腫瘍成長を防止することができる。コアがフコシル化されていない抗体は、抗体依存性の細胞媒介性細胞傷害(ADCC)の有意な増強及び抗腫瘍活性作用の増加を示す。
FV1は、CDRを有し、10G5との結合特異性を有するが、Vドメインのフレームワーク領域に複数の置換を有する抗体である。抗Axl FV1のin vivoでの抗腫瘍活性を評価するために、本発明者らは、ヒト非小細胞肺癌(NSCLC)のマウス異種移植モデルを使用した。ヒトNSCLC A549細胞(ATCC#CCL−185)A549細胞を、10%のFBS、2mMのL−グルタミン、100U/mlのペニシリン及び100μg/mlのストレプトマイシン、0.01MのHEPES緩衝液、0.45%のD−(+)−グルコース、1mMのピルビン酸ナトリウムを補充したDMEM培地中で、単層培養としてin vitroで増殖させた。SCIDマウスの側腹部に、無血清培地/マトリゲル(1:1)で再懸濁した5x106のA549細胞を皮下(s.c.)注入した。腫瘍サイズが100mm3に達したら(図16の18日目)、動物をランダム化して、2週間、週2回の腹腔内(i.p.)注入により、30mg/kgのビヒクル(SYNAGIS)または抗Axl FV1のいずれかで処置した。図17に示すように、抗体FV1は、対照と比較して、A549腫瘍の成長を有意に減衰させた(P<0.051、双方向ANOVAにより決定)。2週間の処置後、約25%の阻害が観察された。
FV2−GLYMAXXは、CDRを有し、10G5との結合特異性を有するが、Vドメインのフレームワーク領域に複数の置換を有する抗体である。抗FV2−GLYMAXXのin vivoでの抗腫瘍活性を評価するために、本発明者らは、ヒト非小細胞肺癌(NSCLC)のマウス異種移植モデルを使用した。ヒトNSCLC A549細胞(ATCC#CCL−185)A549細胞を、10%のFBS、2mMのL−グルタミン、100U/mlのペニシリン及び100μg/mlのストレプトマイシン、0.01MのHEPES緩衝液、0.45%のD−(+)−グルコース、1mMのピルビン酸ナトリウムを補充したDMEM培地中で、単層培養としてin vitroで増殖させた。ヌードマウスの側腹部に、無血清培地/マトリゲル(1:1)で再懸濁した5x106のA549細胞を皮下(s.c.)注入した。腫瘍サイズが100mm3に達したら(図18の0日目)、動物をランダム化して、ビヒクル(SYNAGIS)、Erbitux(20mg/kg)またはFV2−GLYMAXX(15または30mg/kg)のいずれかを単独でもしくは組み合わせて処置した。抗体は、3週間、週2回の腹腔内(i.p.)注入により投与した。
配列番号1[10C9 VHドメイン(nt)]
CAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATATCCTGCAAGACTTCTGACTACAATTTCACACGCTACTATATACACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAGGGACTTGAGTGGATTGGATGGATTTATCCTGGAACTGGTGATTCTAAATACAATGAGAAGTTCAAGGGCAGGGCCACACTGACGGCAGACACATCCTCCAGCACTGCCTACATGCAGCTCAGCTCCCAAACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGGAATGGTAACTACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCGCGGTCACCGTCTCCTCAGCCAAAACGACACCC
配列番号2[10C9 VLドメイン(nt)]
GATATTGTGATGACGCAGGCTGCACCCTCTGGACCTGTCACTCCTGGAGAGTCAGTATCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTGCATAGCAATGGCAACACTTACTTATATTGGTTCCTGCAGAGGCCAGGCCAGTCTCCTCAACTCCTGATATATCGGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTATCTATTACTGTATGCAACATCGAGAATATCCTTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAAACTGGAAATAAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCC
配列番号3[10C9 VHドメイン(aa)]
QVQLQQPGPELVKPGASVKISCKTSDYNFTRYYIHWVKQRPGQGLEWIGWIYPGTGDSKYNEKFKGRATLTADTSSSTAYMQLSSQTSEDSAVYFCARNGNYWYFDVWGAGTAVTVSS
配列番号4[10C9 VLドメイン(aa)]
DIVMTQAAPSGPVTPGESVSISCRSSKSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGIYYCMQHREYPFTFGGGTKLEIK
配列番号5[10C9重鎖CDR1]
DYNFTRYYIH
配列番号6[10C9重鎖CDR2]
WIYPGTGDSKYNEKFKG
配列番号7[10C9重鎖CDR3]
NGNYWYFDV
配列番号8[10C9軽鎖CDR1]
RSSKSLLHSNGNTYLY
配列番号9[10C9軽鎖CDR2]
RMSNLAS
配列番号10[10C9軽鎖CDR3]
MQHREYPFT
配列番号11[10C9重鎖FR1]
QVQLQQPGPELVKPGASVKISCKTS
配列番号12[10C9重鎖FR2]
WVKQRPGQGLEWIG
配列番号13[10C9重鎖FR3]
RATLTADTSSSTAYMQLSSQTSEDSAVYFCAR
配列番号14[10C9重鎖FR4]
WGAGTAVTVSS
配列番号15[10C9軽鎖FR1]
DIVMTQAAPSGPVTPGESVSISC
配列番号16[10C9軽鎖FR2]
WFLQRPGQSPQLLIY
配列番号17[10C9軽鎖FR3]
GVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGIYYC
配列番号18[10C9軽鎖FR4]
FGGGTKLEIK
配列番号19[10G5 VHドメイン(nt)]
CAGGTCCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCTGAGCTGGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACAGTTTCACTGACTTCTATATAAACTGGGTGAGGCAGAGGCCTGGACAGGGACTTGAGTGGATTGCAAGGATTTTTCCTGGAGGTGATAATACTTACTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGAAGAATCCTCCAGCACTGCCTACATACAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCTGTCTATTTCTGTGCAAGACGGGGACTTTACTATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAATCTCAGTCACCGTCTCCTCAGCCAAAACGACACCC
配列番号20[10G5 VLドメイン(nt)]
GATGTTTTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCCTTGTGCACAGTAATGGAATCCCCTATTTACATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAGAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACGCTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTTCTGTTCTCAAGGTACACATGTTCCTCCGACGTTCGGTGGTGGCACCAAGCTGGAAATCAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCC
配列番号21[10G5 VHドメイン(aa)]
QVQLQQSGAELVRPGASVKLSCKASGYSFTDFYINWVRQRPGQGLEWIARIFPGGDNTYYNEKFKGKATLTAEESSSTAYIQLSSLTSEDSAVYFCARRGLYYAMDYWGQGISVTVSS
配列番号22[10G5 VLドメイン(aa)]
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGIPYLHWYLQKPGQSPKLLIYRVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQGTHVPPTFGGGTKLEIK
配列番号23[10G5重鎖CDR1]
GYSFTDFYIN
配列番号24[10G5重鎖CDR2]
RIFPGGDNTYYNEKFKG
配列番号25[10G5重鎖CDR3]
RGLYYAMDY
配列番号26[10G5軽鎖CDR1]
RSSQSLVHSNGIPYLH
配列番号27[10G5軽鎖CDR2]
RVSNRFS
配列番号28[10G5軽鎖CDR3]
SQGTHVPPT
配列番号29[10G5重鎖FR1]
QVQLQQSGAELVRPGASVKLSCKAS
配列番号30[10G5重鎖FR2]
WVRQRPGQGLEWIA
配列番号31[10G5重鎖FR3]
KATLTAEESSSTAYIQLSSLTSEDSAVYFCAR
配列番号32[10G5重鎖FR4]
WGQGISVTVSS
配列番号33[10G5軽鎖FR1]
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISC
配列番号34[10G5軽鎖FR2]
WYLQKPGQSPKLLIY
配列番号35[10G5軽鎖FR3]
GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFC
配列番号36[10G5軽鎖FR4]
FGGGTKLEIK
配列番号37[ヒトAxl]
MGIQAGEPDPPEEPLTSQASVPPHQLRLGSLHPHTPYHIRVACTSSQGPSSWTHWLPVETPEGVPLGPPENISATRNGSQAFVHWQEPRAPLQGTLLGYRLAYQGQDTPEVLMDIGLRQEVTLELQGDGSVSNLTVCVAAYTAAGDGPWSLPVPLEAWRPGQAQPVHQLVKEPSTPAFSWPWWYVLLGAVVAAACVLILALFLVHRRKKETRYGEVFEPTVERGELVVRYRVRKSYSRRTTEATLNSLGISEELKEKLRDVMVDRHKVALGKTLGEGEFGAVMEGQLNQDDSILKVAVKTMKIAICTRSELEDFLSEAVCMKEFDHPNVMRLIGVCFQGSERESFPAPVVILPFMKHGDLHSFLLYSRLGDQPVYLPTQMLVKFMADIASGMEYLSTKRFIHRDLAARNCMLNENMSVCVADFGLSKKIYNGDYYRQGRIAKMPVKWIAIESLADRVYTSKSDVWSFGVTMWEIATRGQTPYPGVENSEIYDYLRQGNRLKQPADCLDGLYALMSRCWELNPQDRPSFTELREDLENTLKALPPAQEPDEILYVNMDEGGGYPEPPGAAGGADPPTQPDPKDSCSCLTAAEVHPAGRYVLCPSTTPSPAQPADRGSPAAPGQEDGA
配列番号38[マウスAxl]
MGRVPLAWWLALCCWGCAAHKDTQTEAGSPFVGNPGNITGARGLTGTLRCELQVQGEPPEVVWLRDGQILELADNTQTQVPLGEDWQDEWKVVSQLRISALQLSDAGEYQCMVHLEGRTFVSQPGFVGLEGLPYFLEEPEDKAVPANTPFNLSCQAQGPPEPVTLLWLQDAVPLAPVTGHSSQHSLQTPGLNKTSSFSCEAHNAKGVTTSRTATITVLPQRPHHLHVVSRQPTELEVAWTPGLSGIYPLTHCNLQAVLSDDGVGIWLGKSDPPEDPLTLQVSVPPHQLRLEKLLPHTPYHIRISCSSSQGPSPWTHWLPVETTEGVPLGPPENVSAMRNGSQVLVRWQEPRVPLQGTLLGYRLAYRGQDTPEVLMDIGLTREVTLELRGDRPVANLTVSVTAYTSAGDGPWSLPVPLEPWRPVSEPPPRAFSWPWWYVLLGALVAAACVLILALFLVHRRKKETRYGEVFEPTVERGELVVRYRVRKSYSRRTTEATLNSLGISEELKEKLRDVMVDRHKVALGKTLGEGEFGAVMEGQLNQDDSILKVAVKTMKIAICTRSELEDFLSEAVCMKEFDHPNVMRLIGVCFQGSDREGFPEPVVILPFMKHGDLHSFLLYSRLGDQPVFLPTQMLVKFMADIASGMEYLSTKRFIHRDLAARNCMLNENMSVCVADFGLSKKIYNGDYYRQGRIAKMPVKWIAIESLADRVYTSKSDVWSFGVTMWEIATRGQTPYPGVENSEIYDYLRQGNRLKQPVDCLDGLYALMSRCWELNPRDRPSFAELREDLENTLKALPPAQEPDEILYVNMDEGGSHLEPRGAAGGADPPTQPDPKDSCSCLTAADVHSAGRYVLCPSTAPGPTLSADRGCPAPPGQEDGA
配列番号39[ヒトTyro3]
MALRRSMGRPGLPPLPLPPPPRLGLLLAALASLLLPESAAAGLKLMGAPVKLTVSQGQPVKLNCSVEGMEEPDIQWVKDGAVVQNLDQLYIPVSEQHWIGFLSLKSVERSDAGRYWCQVEDGGETEISQPVWLTVEGVPFFTVEPKDLAVPPNAPFQLSCEAVGPPEPVTIVWWRGTTKIGGPAPSPSVLNVTGVTQSTMFSCEAHNLKGLASSRTATVHLQALPAAPFNITVTKLSSSNASVAWMPGADGRALLQSCTVQVTQAPGGWEVLAVVVPVPPFTCLLRDLVPATNYSLRVRCANALGPSPYADWVPFQTKGLAPASAPQNLHAIRTDSGLILEWEEVIPEAPLEGPLGPYKLSWVQDNGTQDELTVEGTRANLTGWDPQKDLIVRVCVSNAVGCGPWSQPLVVSSHDRAGQQGPPHSRTSWVPVVLGVLTALVTAAALALILLRKRRKETRFGQAFDSVMARGEPAVHFRAARSFNRERPERIEATLDSLGISDELKEKLEDVLIPEQQFTLGRMLGKGEFGSVREAQLKQEDGSFVKVAVKMLKADIIASSDIEEFLREAACMKEFDHPHVAKLVGVSLRSRAKGRLPIPMVILPFMKHGDLHAFLLASRIGENPFNLPLQTLIRFMVDIACGMEYLSSRNFIHRDLAARNCMLAEDMTVCVADFGLSRKIYSGDYYRQGCASKLPVKWLALESLADNLYTVQSDVWAFGVTMWEIMTRGQTPYAGIENAEIYNYLIGGNRLKQPPECMEDVYDLMYQCWSADPKQRPSFTCLRMELENILGQLSVLSASQDPLYINIERAEEPTAGGSLELPGRDQPYSGAGDGSGMGAVGGTPSDCRYILTPGGLAEQPGQAEHQPESPLNETQRLLLLQQGLLPHSSC
配列番号40[ヒトMer]
MGPAPLPLLLGLFLPALWRRAITEAREEAKPYPLFPGPFPGSLQTDHTPLLSLPHASGYQPALMFSPTQPGRPHTGNVAIPQVTSVESKPLPPLAFKHTVGHIILSEHKGVKFNCSISVPNIYQDTTISWWKDGKELLGAHHAITQFYPDDEVTAIIASFSITSVQRSDNGSYICKMKINNEEIVSDPIYIEVQGLPHFTKQPESMNVTRNTAFNLTCQAVGPPEPVNIFWVQNSSRVNEQPEKSPSVLTVPGLTEMAVFSCEAHNDKGLTVSKGVQINIKAIPSPPTEVSIRNSTAHSILISWVPGFDGYSPFRNCSIQVKEADPLSNGSVMIFNTSALPHLYQIKQLQALANYSIGVSCMNEIGWSAVSPWILASTTEGAPSVAPLNVTVFLNESSDNVDIRWMKPPTKQQDGELVGYRISHVWQSAGISKELLEEVGQNGSRARISVQVHNATCTVRIAAVTRGGVGPFSDPVKIFIPAHGWVDYAPSSTPAPGNADPVLIIFGCFCGFILIGLILYISLAIRKRVQETKFGNAFTEEDSELVVNYIAKKSFCRRAIELTLHSLGVSEELQNKLEDVVIDRNLLILGKILGEGEFGSVMEGNLKQEDGTSLKVAVKTMKLDNSSQREIEEFLSEAACMKDFSHPNVIRLLGVCIEMSSQGIPKPMVILPFMKYGDLHTYLLYSRLETGPKHIPLQTLLKFMVDIALGMEYLSNRNFLHRDLAARNCMLRDDMTVCVADFGLSKKIYSGDYYRQGRIAKMPVKWIAIESLADRVYTSKSDVWAFGVTMWEIATRGMTPYPGVQNHEMYDYLLHGHRLKQPEDCLDELYEIMYSCWRTDPLDRPTFSVLRLQLEKLLESLPDVRNQADVIYVNTQLLESSEGLAQGSTLAPLDLNIDPDSIIASCTPRAAISVVTAEVHDSKPHEGRYILNGGSEEWEDLTSAPSAAVTAEKNSVLPGERLVRNGVSWSHSSMLPLGSSLPDELLFADDSSEGSEVLM
配列番号41[ヒトAkt3]
MSDVTIVKEGWVQKRGEYIKNWRPRYFLLKTDGSFIGYKEKPQDVDLPYPLNNFSVAKCQLMKTERPKPNTFIIRCLQWTTVIERTFHVDTPEEREEWTEAIQAVADRLQRQEEERMNCSPTSQIDNIGEEEMDASTTHHKRKTMNDFDYLKLLGKGTFGKVILVREKASGKYYAMKILKKEVIIAKDEVAHTLTESRVLKNTRHPFLTSLKYSFQTKDRLCFVMEYVNGGELFFHLSRERVFSEDRTRFYGAEIVSALDYLHSGKIVYRDLKLENLMLDKDGHIKITDFGLCKEGITDAATMKTFCGTPEYLAPEVLEDNDYGRAVDWWGLGVVMYEMMCGRLPFYNQDHEKLFELILMEDIKFPRTLSSDAKSLLSGLLIKDPNKRLGGGPDDAKEIMRHSFFSGVNWQDVYDKKLVPPFKPQVTSETDTRYFDEEFTAQTITITPPEKCQQSDCGMLGNWKK
配列番号42[ヒトGas6]
MAPSLSPGPAALRRAPQLLLLLLAAECALAALLPAREATQFLRPRQRRAFQVFEEAKQGHLERECVEELCSREEAREVFENDPETDYFYPRYLDCINKYGSPYTKNSGFATCVQNLPDQCTPNPCDRKGTQACQDLMGNFFCLCKAGWGGRLCDKDVNECSQENGGCLQICHNKPGSFHCSCHSGFELSSDGRTCQDIDECADSEACGEARCKNLPGSYSCLCDEGFAYSSQEKACRDVDECLQGRCEQVCVNSPGSYTCHCDGRGGLKLSQDMDTCEDILPCVPFSVAKSVKSLYLGRMFSGTPVIRLRFKRLQPTRLVAEFDFRTFDPEGILLFAGGHQDSTWIVLALRAGRLELQLRYNGVGRVTSSGPVINHGMWQTISVEELARNLVIKVNRDAVMKIAVAGDLFQPERGLYHLNLTV
GGIPFHEKDLVQPINPRLDGCMRSWNWLNGEDTTIQETVKVNTRMQCFSVTERGSFYPGSGFAFYSLDYMRTPLDVGTESTWEVEVVAHIRPAADTGVLFALWAPDLRAVPLSVALVDYHSTKKLKKQLVVLAVEHTALALMEIKVCDGQEHVVTVSLRDGEATLEVDGTRGQSEVSAAQLQERLAVLERHLRSPVLTFAGGLPDVPVTSAPVTAFYRGCMTLEVNRRLLDLDEAAYKHSDITAHSCPPVEPAAA
配列番号43[Macaca fascicularis由来Axl;本明細書での別称「Cyno Axl」]
MAWRCPRMGRVPLAWCLALCGWVCMAPRGTQAEESPFVGNPGNITGARGLTGTLRCQLQVQGEPPEVHWLRDGQILELADSTQTQVPLGEDEQDDWIVVSQLRIASLQLSDAGQYQCLVFLGHQNFVSQPGYVGLEGLPYFLEEPEDRTVAANTPFNLSCQAQGPPEPVDLLWLQDAVPLATAPGHGPQRNLHVPGLNKTSSFSCEAHNAKGVTTSRTATITVLPQQPRNLHLVSRQPTELEVAWTPGLSGIYPLTHCTLQAVLSDDGMGIQAGEPDPPEEPLTLQASVPPHQLRLGSLHPHTPYHIRVACTSSQGPSSWTHWLPVETPEGVPLGPPENISATRNGSQAFVHWQEPRAPLQGTLLGYRLAYQGQDTPEVLMDIGLRQEVTLELQGDGSVSNLTVCVAAYTAAGDGPWSLPVPLEAWRPGQAQPVHQLVKETSAPAFSWPWWYILLGAVVAAACVLILALFLVHRRKKETRYGEVFEPTVERGELVVRYRVRKSYSRRTTEATLNSLGISEELKEKLRDVMVDRHKVALGKTLGEGEFGAVMEGQLNQDDSILKVAVKTMKIAICTRSELEDFLSEAVCMKEFDHPNVMRLIGVCFQGSERESFPAPVVILPFMKHGDLHSFLLYSRLGDQPVYLPTQMLVKFMADIASGMEYLSTKRFIHRDLAARNCMLNENMSVCVADFGLSKKIYNGDYYRQGRIAKMPVKWIAIESLADRVYTSKSDVWSFGVTMWEIATRGQTPYPGVENSEIYDYLRQGNRLKQPADCLDGLYALMSRCWELNPQDRPSFTELREDLENTLKALPPAQEPDEILYVNMDEGGGYPEPPGAAGGADPPTQLDPKDSCSCLTSAEVHPAGRYVLCPSTAPSPAQPADRGSPAAPGQEDGA
配列番号44[リンカー]
GGGGS
配列番号45[10G5(Q1E)VHドメイン(aa)]
QVQLQQSGAELVRPGASVKLSCKASGYSFTDFYINWVRQRPGQGLEWIARIFPGGDNTYYNEKFKGKATLTAEESSSTAYIQLSSLTSEDSAVYFCARRGLYYAMDYWGQGISVTVSS
本開示は2種類のハイブリドーマ細胞株に関する。「特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約」に従って、2つのハイブリドーマ細胞株を寄託した。詳細を以下に示す。
受託機関→European Collection of Cell Cultures(ECACC)
Public Health England
Porton Down
Salisbury
Wiltshire
SP4 OJG
United Kingdom
寄託日→2015年12月16日
アクセッション番号→15121601
特徴→ハイブリドーマ−Bリンパ球;種−M.musculus(マウス);形態−リンパ芽球;免疫原−ヒトAxl細胞外ドメイン;免疫細胞供与体−NMRIマウス;無限分裂パートナーX63.Ag8.653;産物のIgクラス/サブクラス−IgG2b
受託機関→European Collection of Cell Cultures(ECACC)
Public Health England
Porton Down
Salisbury
Wiltshire
SP4 OJG
United Kingdom
寄託日→2015年12月16日
アクセッション番号→15121602
特徴→ハイブリドーマ−Bリンパ球;種−M.musculus(マウス);形態−リンパ芽球;免疫原−ヒトAxl細胞外ドメイン;免疫細胞供与体−NMRIマウス;無限分裂パートナーX63.Ag8.653;産物のIgクラス/サブクラス−IgG1
Claims (22)
- Axlと結合する抗体であって、以下の:
A)配列番号23のアミノ酸配列を有するVH CDR1、配列番号24のアミノ酸配列を有するVH CDR2、及び配列番号25のアミノ酸配列を有するVH CDR3を含む抗体VHドメイン;及び、
配列番号26のアミノ酸配列を有するVL CDR1、配列番号27のアミノ酸配列を有するVL CDR2、及び配列番号28のアミノ酸配列を有するVL CDR3を含む抗体VLドメイン;又は
B)配列番号5のアミノ酸配列を有するVH CDR1、配列番号6のアミノ酸配列を有するVH CDR2、及び配列番号7のアミノ酸配列を有するVH CDR3を含む抗体VHドメイン;及び
配列番号8のアミノ酸配列を有するVL CDR1、配列番号9のアミノ酸配列を有するVL CDR2、及び配列番号10のアミノ酸配列を有するVL CDR3を含む抗体VLドメイン;を含む、抗体。 - 以下の:
i)配列番号21のアミノ酸配列を有するVHドメインを含むA)に記載の抗体;又は
ii)配列番号3のアミノ酸配列を有するVHドメインを含むB)に記載の抗体;
である、請求項1に記載の抗体。 - 以下の:
i)配列番号22のアミノ酸配列を有するVLドメインを含むA)に記載の抗体;又は
ii)配列番号4のアミノ酸配列を有するVLドメインを含むB)に記載の抗体;
である、請求項2に記載の抗体。 - 当該抗体が、
(i)抗体の重鎖定常領域及び/若しくは抗体の軽鎖定常領域の全て若しくは部分;
(ii)全抗体であって、場合によっては、前記全抗体はIgG抗体である全抗体;又は
(iii)抗原結合性抗体断片であって、場合によっては、前記抗原結合性抗体断片は、Fv、scFv、dsFV、Fd、Fab、F(ab’)2、ミニボディ、ダイアボディ、一本鎖ダイアボディ、直列型scFv、TandAb、バイボディ、トリボディ、カッパ(ラムダ)ボディ、BiTE、DVD−Ig、SIP、SMIP又はDARTである抗原結合性抗体断片;
を含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗体。 - 前記抗体がヒト化抗体又はキメラ抗体である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗体。
- 前記AxlがヒトAxlである、請求項1〜5のいずれか一項に記載の抗体。
- 6×10−10M以下のKDでAxlを結合する、請求項1〜6のいずれか一項に記載の抗体。
- 8×105M−1s−1以上のkonでAxlを結合する、請求項1〜7のいずれか一項に記載の抗体。
- (i)10−3M超のKDでマウスAxlを結合する;
(ii)10−3M超のKDでヒトMerを結合する;及び/又は
(iii)10−3M超のKDでヒトTyro3を結合する;
請求項1〜8のいずれか一項に記載の抗体。 - AxlのGas6への結合を阻害する、請求項1〜9のいずれか一項に記載の抗体。
- 前記抗体が、Axl受容体の下流シグナル伝達を阻害する、請求項1〜10のいずれか一項に記載の抗体。
- 細胞死率を増加させる、請求項1〜11のいずれか一項に記載の抗体。
- 腫瘍成長を阻害する、請求項1〜12のいずれか一項に記載の抗体。
- 検出可能標識、酵素又は毒素と、場合によりペプチジル結合又はリンカーを介して複合体化された、請求項1〜13のいずれか一項に記載の抗体。
- 以下のいずれかから得られる抗体:
A)ハイブリドーマUT−10C9−B9;又は
B)ハイブリドーマWR−10G5−E5。 - 請求項1〜15のいずれか一項に記載の抗体の、抗体又は抗体のVH及びVLドメインをコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸。
- 請求項16に記載の核酸で形質転換された宿主細胞。
- 抗体又は抗体のVH及びVLドメインの作製方法であって、前記抗体又は抗体のVH及びVLドメインの作製条件下で、請求項17に記載の宿主細胞を培養することを含む、前記方法。
- 請求項1〜14のいずれか一項に記載の抗体、又はその免疫複合体を、薬学的に許容される賦形剤とともに含む組成物。
- 免疫チェックポイントモジュレーター及び/又はAxl以外の標的に特異的な抗腫瘍抗体を更に含む、請求項19に記載の組成物。
- 治療方法における使用のための、請求項1〜14のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項19若しくは20のいずれか一項に記載の組成物。
- 増殖性疾患の治療方法における使用のための、請求項21に記載の抗体又は組成物であって、
場合によっては、前記増殖性疾患ががん又は線維症である、抗体又は組成物。
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