TW202227099A

TW202227099A - 多功能環二核苷酸及其用途

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Publication number: TW202227099A
Application number: TW110138718A
Authority: TW
Inventors: 彥濤張; 屈粒; 樓良; 鄭普吉; 呂飛
Original assignee: 大陸商泰勵生物科技（上海）有限公司
Priority date: 2020-10-20
Filing date: 2021-10-19
Publication date: 2022-07-16
Also published as: EP4242218A1; AU2021363267A1; JP2023546278A; CA3198956A1; KR20230107586A; WO2022083584A1; US20240059729A1

Abstract

本發明係關於式(X)的多功能環二核苷酸化合物及其衍生物，其可作為細胞凋亡誘導劑或細胞毒性劑的前藥用於誘導細胞凋亡或抗病毒，又可調控免疫通路以產生有治療益處的免疫應答。本揭露進一步係關於包含本發明環二核苷酸化合物的醫藥組成物和藥物組合、用於合成其的方法以及其醫療用途。

Description

多功能環二核苷酸及其用途

本發明係關於多功能環二核苷酸化合物及其衍生物，其功能包括可作為細胞凋亡誘導劑或細胞毒性劑的前藥用於誘導腫瘤細胞凋亡或抗病毒，又作為免疫調節劑以調控免疫通路以產生有治療益處的免疫應答，特別是激活STING所介導的免疫通路。本揭露進一步關於包含本發明環二核苷酸化合物的醫藥組成物和藥物組合、用於合成其的方法以及其醫療用途。

癌症是一種以細胞分化和增殖異常、生長失去控制、浸潤性和轉移性為生物學特徵的惡性疾病，已經成為人類的重要死亡原因之一，且在世界範圍內發病率仍在持續增長；同時，病毒感染也已在世界範圍內導致數以百萬計的人類死亡。

在抗癌/抗腫瘤和抗病毒感染的治療策略中，抗代謝的核苷類似物是主要的治療手段之一。具體地，抗代謝的核苷類藥物本身並不能直接發揮作用，必須在體內經過各種細胞激酶被轉化為三磷酸化的形式，作為偽代謝物成為聚合酶的活性受質，經核酸生物合成途徑被嵌入DNA或RNA中，抑制DNA或RNA的修飾和延伸，或抑制DNA或RNA合成相關的反轉錄酶，由此誘導腫瘤細胞的凋亡或阻止病毒的複製，表現出細胞毒性，可用於癌症/腫瘤或病毒感染的治療；同時，因核苷類藥物細胞毒性產生的細胞碎片會引起宿主細胞的免疫反應，從而進一步抑制腫瘤細胞或病毒的生長和繁殖。

目前臨床上使用的抗癌性核苷類，可以列舉以下：

但是核苷類藥物分子結構上有多個羥基、胺基等活性基團，導致透膜效率低、穩定性欠缺、藥代性質差，常常需要特殊或者頻繁地給藥，給患者帶來了諸多不便。因此，尋找新的核苷類藥物改進方案一直是一個活躍的藥物研發領域。

內源性環狀二核苷酸(CDN)cGAMP是先天免疫系統的重要組成部分-cGAS-STING(環狀GMP-AMP合酶-干擾素基因刺激物)信號通路-的重要環節。具體地，cGAS與來自腫瘤細胞、瀕死細胞、病毒、細菌或線粒體的DNA相互作用，催化ATP和GTP合成環狀二核苷酸(CDN)cGAMP。所生成的內源性cGAMP進一步結合內質網膜(ER)上的STING，與cGAMP結合的STING被激活，經歷構象改變，易位至Golgi，誘導關鍵的轉錄因子IRF-3和NF-κB的活化，後者進入細胞核，誘導表達I型干擾素和促炎細胞因子如IL-6、TNF-α和IFN-γ(Jiang等人，cGAS-STING,an important pathway in cancer immunotherapy,Journal of Hematology & Oncology,2020,13：81；Xiangling Cui等人，STING modulators：Predictive significance in drug discovery,European Journal of Medicinal Chemistry 182(2019)111591)。

而本領域已熟知，I型干擾素不僅顯示出抗病毒活性，還可直接抑制人類腫瘤細胞增殖、藉由誘導適應性和先天免疫細胞的激活而顯著增強抗腫瘤免疫應答以及藉由調節與組織重塑相關的酶表達來抑制腫瘤侵襲，因此可用作抗癌劑。

鑒於內源性環狀二核苷酸(CDN)cGAMP是上述先天免疫系統響應於病毒和腫瘤、最終促成干擾素或促炎細胞因子生成並由此實現治療益處的關鍵介體，已經有一系列CDN STING激動劑被合成並經過實驗室活性驗證，其實例例如描述於WO2014/189805、WO2017/027645以及WO2018/060323中。但是，基於CDN的現有治療仍然缺乏足夠的臨床治療效果，因此也仍然需要改進的基於CDN的STING激動劑，以提供更為安全和強效的抗病毒或抗腫瘤效果。

根據本領域共識，STING通路可由外源DNA(腫瘤或病毒等)激活。如無蛋白新抗原的介導，STING通路藉由干擾素等驅動的下游促炎因子缺乏靶向性，導致自免反應耐受性差、治療窗口窄。第一代的單一STING激動劑與PD-1抗體聯用依舊聚焦在系統性免疫的激活，沒有能夠解決適應性免疫的選擇性問題以及激起腫瘤微環境的響應。

本發明的化合物一方面作為已知高活性的STING激動劑，激活信號通路，釋放干擾素及其他炎症因子，激活免疫系統；其次，它的細胞毒功能隨後被啟動，選擇性地殺死腫瘤，釋放大量腫瘤新抗原和腫瘤DNA，以建立適應性免疫的識別功能，訓練免疫系統有的放矢；再次，腫瘤新抗原和腫瘤DNA繼續激活STING通路和其他免疫系統，殺傷腫瘤細胞；最後，釋放的腫瘤新抗原被DC細胞識別，與T細胞相互作用，形成免疫記憶，達到對遠程瘤和癌細胞遷移的長期控制。

具體地，本申請在尋找新的、具有改進性質的細胞毒性核苷類藥物的過程中，將具有細胞毒性作用的核苷類藥物開創性地作為構建單元引入CDN的分子結構，即在CDN的分子水平引入隱蔽的細胞毒性藥效基團。由此形成的新型CDN藥物分子，首先能夠激活STING從而誘導I型干擾素產生，進而實現抗病毒或抗腫瘤免疫治療效果。更具創新性的是，本發明的分子在體內分解形成的產物即核苷細胞毒性藥，能夠特異性干擾核酸的代謝、阻止細胞的分裂和繁殖、導致腫瘤細胞死亡或阻止病毒複製，釋放腫瘤DNA以持續激活STING，並釋放腫瘤新抗原以建立適應性免疫的識別功能，訓練免疫系統有的放矢，克服了單獨的核苷類藥物透膜效率低、穩定性欠缺、藥物代謝性質差、常常需要特殊或者頻繁給藥的缺陷，同時也克服了持續激活STING通路需要的外源性DNA(如腫瘤DNA)的來源問題。更重要的是，本申請揭露的分子所具有的CDN結構骨架能夠激活STING、從而誘導I型干擾素產生、進而實現抗病毒或抗腫瘤免疫治療效果。另一方面，本發明新型CDN分子中隱蔽的細胞毒性藥效團會適時釋放產生細胞凋亡碎片，為免疫系統提供針對腫瘤或病毒的抗原，在免疫白細胞亞群的協同下產生抗體-抗原應答，從而提供針對所遇抗原的“免疫記憶”或持久免疫的能力。

由此，本發明提供一類新的CDN化合物，藉由亞分子水平的藥物聯用，同時實現病毒感染或腫瘤的抗代謝治療和免疫抑制，相比單獨的細胞毒性藥或者單純的CDN STING激動劑，能夠提供增強、甚至協同的效果。

需要說明的是，提供以上對發明背景的討論僅僅是為了有助於讀者理解本發明，並不承認描述或構成本發明的現有技術。

本發明的目的在於提供一組基於環狀二核苷酸結構的新的抗病毒或抗腫瘤化合物。

一方面，本發明提供一組具有以下通式的環狀二核苷酸化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽或溶劑合物，

，例如

其中X¹和X²各自獨立地選自-OH和-SH；且在成環的兩個核苷酸的兩個核苷中至少之一具有細胞毒性或抗病毒作用。該結構的化合物，一方面在體內分解後產生單獨的核苷類細胞毒性或抗病毒化合物，經細胞內核苷激酶三磷酸化活化後，藉由特異性干擾核酸的代謝，阻止細胞的分裂和繁殖，從而抑制腫瘤細胞增殖或病毒的複製。另一方面本發明的分子保留了環二核苷酸的免疫激活功能，即激活靶點STING並藉由STING信號傳導級聯最終誘導I型干擾素產生，從而產生腫瘤免疫活性，抑制腫瘤的生長和轉移，或發揮抗病毒活性；而且，細胞凋亡的組織碎片為免疫系統提供宿主中非天然表達的抗原，產生抗原-抗體應答，從而提供針對所過抗原的“記憶”或持久免疫的能力。

具體地，本發明在該方面提供式(Y)的環狀二核苷酸化合物，

其中X¹、X²、B₁、B₂、R¹、R¹’、R²、R²’如本文所定義；其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物。

更具體地，本發明在該方面提供式(I)、(II)、(III)和(IV)及其各個子通式的環狀二核苷酸化合物；更具體地，本發明在該方面提供式(I)、(II)、(III)和(IV)的各個子通式的環狀二核苷酸化合物；以及其各自具體的實施方式，如本文下文所描述。

在另一方面，本發明提供製備本文所述的本發明化合物的方法，還提供了藉由本文所述的方法可獲得的本文所述的本發明化合物。

在另一方面，本發明提供一種醫藥組成物，其包含本文所述的本發明化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物和一種或多種藥學可接受的賦形劑。

在另一方面，本發明提供本文所述的本發明化合物或本文所述的醫藥組成物，用作用於治療或預防與免疫反應相關或由其介導的疾病的活性劑，具體地用於治療或預防與STING相關或由其介導的疾病，更具體地用於治療或預防炎症、變應性或自身免疫疾病、感染性疾病或癌症，尤其是用於抗病毒或抗腫瘤，或用作疫苗佐劑。

在另一方面，本發明提供本文所述的本發明化合物或本文所述的醫藥組成物，用作用於治療或預防過度增殖性疾病的細胞毒性藥、尤其是抗腫瘤藥。

在另一方面，本發明提供本文所述的本發明化合物或本文所述的醫藥組成物，用作用於治療或預防病毒感染的細胞毒性藥。

在另一方面，本發明提供本文所述的本發明化合物或本文所述的醫藥組成物用於治療或預防與免疫反應相關或由其介導的疾病的用途，例如作為STING激動劑，具體地用於治療或預防與STING相關或由其介導的疾病，更具體地用於治療或預防炎症、變應性或自身免疫疾病、感染性疾病或癌症、尤其是腫瘤或病毒感染中的用途；或作為疫苗佐劑的用途。

在另一方面，本發明提供本文所述的本發明化合物或本文所述的醫藥組成物作為細胞毒性藥在治療或預防過度增殖性疾病、尤其是腫瘤中的用途；或作為細胞毒性藥在治療或預防病毒感染中的用途。

在另一方面，本發明提供在受試者中治療或預防與免疫反應相關或由其介導的疾病、具體地與STING相關或由其介導的疾病、更具體地炎症、變應性或自身免疫疾病、感染性疾病或癌症、尤其是腫瘤或病毒感染的方法，該方法包括向人或動物施用本文所述的本發明化合物或本文所述的醫藥組成物。

在另一方面，本發明提供在受試者中治療或預防過度增殖性疾病、尤其是腫瘤的方法，該方法包括向人或動物施用本文所述的本發明化合物或本文所述的醫藥組成物。

在另一方面，本發明提供在受試者中治療或預防病毒感染的方法，該方法包括向人或動物施用本文所述的本發明化合物或本文所述的醫藥組成物。

在另一方面，本發明提供本文所述的本發明化合物或本文所述的醫藥組成物在製備藥物中的用途，該藥物用於治療或預防與免疫反應相關或由其介導的疾病、具體地與STING相關或由其介導的疾病、更具體地炎症、變應性或自身免疫疾病、感染性疾病或癌症、尤其是腫瘤或病毒感染，或用作疫苗佐劑。

在另一方面，本發明提供本文所述的本發明化合物或本文所述的醫藥組成物在製備用於治療或預防過度增殖性疾病、尤其是腫瘤的藥物中的用途。

在另一方面，本發明提供本文所述的本發明化合物或本文所述的醫藥組成物在製備用於治療或預防病毒感染的藥物中的用途。

在另一方面，本發明提供用作多功能活性劑的本文所述的本發明化合物或本文所述的醫藥組成物，兼具免疫治療活性和細胞毒治療活性，包括用於藉由激動STING信號通路來激活免疫系統以發揮抗腫瘤和抗病毒複製的功能、藉由釋放細胞毒性劑導致腫瘤細胞死亡或阻止病毒複製、繼而藉由釋放腫瘤DNA持續激活STING以殺傷腫瘤細胞、並且藉由釋放腫瘤新抗原以產生抗體-抗原應答從而提供對腫瘤的“免疫記憶”或持久免疫的能力。在這方面，本發明還提供了本文所述的本發明化合物或本文所述的醫藥組成物用於實現上述多種功能的用途，例如具體地用於治療或預防病毒感染或腫瘤；本文所述的本發明化合物或本文所述的醫藥組成物藉由上述多種功能在受試者中治療或預防與免疫反應相關或由其介導的疾病、具體地與STING相關或由其介導的疾病、更具體地炎症、變應性或自身免疫疾病、感染性疾病或癌症、尤其是腫瘤或病毒感染的方法，該方法包括向人或動物施用本文所述的本發明化合物或本文所述的醫藥組成物；以及本文所述的本發明化合物或本文所述的醫藥組成物在製備用於實現上述多種功能的藥物中的用途，例如具體地所述藥物用於治療或預防病毒感染或腫瘤。

在另一方面，本發明提供藥物組合，包含本文所述的本發明化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽或溶劑合物、以及至少一種其他治療劑，

在另一方面，本發明提供醫藥組成物，其包含本文所述的本發明化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽或溶劑合物、至少一種其他治療劑和一種或多種藥學可接受的賦形劑。

在另一方面，本發明提供本文所述的包含本發明化合物和至少一種其他治療劑的藥物組合，用於治療或預防過度增殖性疾病、病毒感染或與STING相關或由其介導的疾病、更具體地炎症、變應性或自身免疫疾病、感染性疾病或癌症、尤其是腫瘤或病毒感染。

在另一方面，本發明提供本文所述的包含本發明化合物和至少一種其他治療劑的藥物組合的用途，用於治療或預防過度增殖性疾病、病毒感染或與STING相關或由其介導的疾病、更具體地炎症、變應性或自身免疫疾病、感染性疾病或癌症、尤其是腫瘤或病毒感染。

在另一方面，本發明提供在受試者中治療或預防過度增殖性疾病、病毒感染或與STING相關或由其介導的疾病、更具體地炎症、變應性或自身免疫疾病、感染性疾病或癌症、尤其是腫瘤或病毒感染的方法，該方法包括向人或動物施用本文所述的包含本發明化合物和至少一種其他治療劑的藥物組合。

圖1顯示本發明代表性化合物在THP-1細胞中的干擾素刺激活性。

圖2顯示本發明代表性化合物在小鼠移植CT26結腸癌模型中的腫瘤生長抑制活性。圖2A：經處置腫瘤的腫瘤體積變化；圖2B：未處置腫瘤的腫瘤體積變化；圖2C：小鼠的體重變化；圖2D：有/無免疫小鼠中的腫瘤體積變化。

圖3顯示本發明代表性化合物在有/無免疫小鼠中的免疫記憶。圖3A：對免疫健全小鼠的免疫記憶；圖3B：對無免疫小鼠的免疫記憶。

圖4顯示本發明代表性化合物的肝細胞代謝性質。圖4A：肝細胞代謝穩定性；圖4B：肝細胞代謝產物鑑定。

定義

除非另有定義，本文所用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬技術領域具有通常知識者通常理解的相同含義。

除非另有說明，本申請中使用的命名法基於IUPAC系統命名法。使用OpenEye Lexichem1.2.0版，PerkinElmer E-notebook for Chemistry或Insight for Excel 2017 R2產生IUPAC化學名。

除非另有說明，在本文結構中的碳、氧、硫或氮原子上出現的任何開放化合價表示存在氫原子。

術語“免疫系統”具有所屬技術領域具有通常知識者理解的通常含義，意指與預防體內感染、在感染或疾病期間保護機體、和/或在感染或疾病後幫助機體恢復健康有關的分子、物質(如體液)、解剖結構(如細胞、組織或器官)和生理過程的整體或任何一個或多個成分。

術語“與免疫反應相關或由其介導的疾病”意指與機體免疫系統對於異己成分或者變異的自體成分做出的防禦反應相關或由其介導的疾病。對本發明而言，“與免疫反應相關或由其介導的疾病”具體地指免疫系統的功能被削弱、失活或以其他方式被折損、或一種或多種免疫成分的功能被削弱、失活或以其他方式被折損的人或動物的狀態或由該狀態引起的疾病狀態，尤其是指藉由STING途徑誘導免疫反應可被緩解的疾病。

術語“STING”是干擾素基因刺激物(stimulator of interferon genes)的縮寫。STING是人類中的跨膜蛋白受體，環二核苷酸(CDN)對STING的激活會導致IRF3和NF-κB途徑的激活，因此分別導致I型干擾素和促炎性細胞因子的誘導。術語“STING激動劑”是指在體外或體內激活STING以引起生理反應的任何物質。

術語“與STING相關或由其介導的疾病”意指藉由STING途徑誘導免疫反應可被緩解的疾病，即激活STING將降低疾病的發生率、減少或消除疾病病狀的疾病，包括但不限於炎症、變應性或自身免疫性疾病、感染性疾病或癌症等。對於本發明而言，“與STING相關或由其介導的疾病”較佳選自腫瘤或癌症。

術語“過度增殖性疾病”、“腫瘤”或“癌症”是指受試者中以細胞生長或死亡的不受控或失調為特徵的生理狀況，包括實體瘤和血源性腫瘤，無論是惡性的或良性的，包括但不限於腦癌、皮膚癌、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、結腸癌、血癌、肺癌和骨癌。上述癌症類型的實例包括成神經細胞瘤，腸癌例如直腸癌、結腸癌、家族性腺瘤息肉病癌和遺傳性非淋巴性結腸直腸癌、食道癌、唇癌、喉癌、鼻咽癌、口腔癌、唾液腺癌、腹膜癌、軟組織肉瘤、尿道上皮癌、汗腺癌、胃癌、腺癌、甲狀腺髓樣癌、乳頭狀甲狀腺癌、腎癌、腎實質性癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮體癌、子宮內膜癌、胰腺癌、前列腺癌、睾丸癌、乳腺癌(包括HER2陰性乳腺癌)、泌尿癌、黑色素瘤，腦瘤例如成膠質細胞瘤、星形細胞瘤、腦膜瘤、成神經管瘤和外周神經外胚層瘤，霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急性淋巴細胞白血病(ALL)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CLL)和淋巴細胞癌、急性骨髓性白血病(AML)、骨髓性白血病(慢性骨髓性白血病(CML)、成人T細胞淋巴瘤、彌漫性淋巴瘤(DLBCL)、肝細胞瘤、多發性骨髓瘤、精原細胞瘤、骨肉瘤、軟骨肉瘤、肛管癌、腎上腺皮質癌、脊索瘤、輸卵管癌、胃腸道間質瘤、骨髓增生性病症、間皮瘤、膽道癌、尤因肉瘤和其它罕見的腫瘤類型。

術語“治療劑”是指一種或多種給藥於人或動物以獲得某種治療效果的物質，包括預防、治癒或減輕疾病影響、改善健康狀況的物質。本發明的治療劑不僅包括所提供的CDN化合物本身，還包括可以與所提供的CDN化合物聯合使用的治療劑，包括但不限於化療劑、免疫劑(特別是免疫腫瘤藥劑)、疫苗、佐劑以及放射療法。

術語“化療劑”是指一種或多種化學物質，其被施用於人或動物以殺死腫瘤，或減慢或阻止腫瘤的生長，和/或減慢或阻止癌細胞的分裂，和/或預防或減緩轉移。

術語“免疫劑”是指可與免疫系統的任何一個或多個成分相互作用的任何內源性或外源性物質，包括抗體、抗原、疫苗及其組成成分、核酸、合成藥物、天然或合成有機化合物、細胞因子、天然或修飾的細胞、其合成類似物和/或其片段。

術語“免疫療法”是指其中人或動物的免疫系統的一個或多個成分被故意調節以便直接或間接獲得某種治療益處的任何醫學治療，包括全身和/或局部作用以及預防性和/或治療性作用。免疫療法可藉由任何途徑、例如口服、靜脈內、皮膚、注射、吸入等單獨或以任何組合方式對人和動物受試者給藥一種或多種免疫劑，無論是全身、局部或兩者結合。

術語“疫苗”是指施用於人或動物以引起或增強特異性免疫系統響應和/或針對該人或動物中的一種或多種抗原的保護的生物製劑。

術語“佐劑”是指與主要治療物質以任何順序一起施用的次要治療物質，以實現某種互補、協同或其他有益效果，該效果是單獨使用主要治療物質無法達到的。佐劑可與疫苗、化學療法或其他治療物質一起使用，可增強主要治療物質的功效、降低主要治療物質的毒副作用或為接受主要治療物質的受試者提供某種保護，例如但不限於改善免疫系統的功能。

本文使用的術語“細胞毒性劑”或“細胞凋亡誘導劑”或類似表述指的是用於治療細胞不正常和不受控制的發展生長的活性劑。對於本發明而言，“細胞毒性劑”尤其是指核苷類抗代謝細胞毒性劑或抗病毒劑，包括但不限於阿糖胞苷、阿紮胞苷、氟脲苷、脫氧尿苷、依諾他濱、脫氧氟脲苷、噴司他丁、氟達拉濱、克拉屈濱、吉西他濱、卡培他濱、氯法拉濱、奈拉濱、三氟胸苷、8-氯腺苷、曲西立濱、呋咯地辛、5-氟脫氧胞苷、利巴韋林或阿卡地新。

本文所用的術語“多功能活性劑”是指本發明化合物分子基於其獨特的結構設計，在受試者體內能夠發揮多重功能，兼具免疫治療活性和細胞毒治療活性，包括但不限於藉由激動STING信號通路來激活免疫系統以發揮抗腫瘤和抗病毒複製的功能、藉由釋放細胞毒性劑導致腫瘤細胞死亡或阻止病毒複製、藉由釋放腫瘤DNA持續激活STING以殺傷腫瘤細胞、藉由釋放腫瘤新抗原以產生抗體-抗原應答從而提供對腫瘤的“免疫記憶”或持久免疫的能力。

術語疾病的“治療”包括抑制疾病狀態，即阻止疾病狀態或其臨床症狀的發展，或緩解疾病狀態，即引起疾病狀態或其臨床症狀的暫時或永久消退。

術語疾病的“預防”或“防止”表示使疾病狀態的臨床症狀在可能暴露於或易患疾病狀態但尚未經歷或顯示疾病狀態的症狀的受試者中不發展。

術語“治療有效量”表示本發明的化合物或分子的量，其(i)治療或預防特定疾病、病症或障礙，(ii)減輕、改善或消除特定疾病、病症或障礙的一種或多種症狀，或(iii)預防或延遲本文所述的特定疾病、病症或障礙的一種或多種症狀的發作。治療有效量將根據化合物、所治療的疾病狀態、所治療疾病的嚴重程度、受試者的年齡和相對健康狀況、給藥途徑和形式、主治醫師或獸醫的判斷和其它因素而變化。

本文所用的術語“受試者”、“個體”或“患者”是指脊椎動物。在某些實施方案中，脊椎動物為哺乳動物。哺乳動物包括但不限於農場動物(如牛)、運動動物、寵物(如豚鼠、貓、狗、兔子和馬)、靈長類動物、小鼠和大鼠。在較佳實施方案中，哺乳動物是人類。

術語“醫藥組成物”和“藥物製劑”(或“製劑”)互換使用，並且表示待施用於有需要的哺乳動物(例如人)的、包含治療有效量的活性藥物成分以及藥學可接受的賦形劑的混合物或溶液。

術語“藥物組合”是指本發明化合物可與其它活性劑組合用於實現本發明的目的。該其他活性劑可以是一種或多種另外的本發明化合物，或可以是與本發明化合物相容即不會相互不利影響、或具有互補活性的二級種或另外的(例如三級種)化合物。這類活性劑以達到預期目的有效量適宜地組合存在。該其他活性劑可以與本發明化合物在單一醫藥組成物中共同施用，或與本發明化合物處於不同的離散單元中分別施用，當分別施用時可以同時或相繼進行。

術語“藥學可接受的”表示可用於製備醫藥組成物的材料的屬性，其通常是安全、無毒的，並且在生物學上或其它方面都不是不期望的，並且對於獸醫以及人類藥物用途是可接受的。

術語“藥學可接受的賦形劑”、“藥學可接受的載體”和“治療惰性賦形劑”可互換使用，並且表示醫藥組成物中的任何藥學可接受的成分，其不具有治療活性並且對施用的受試者無毒，例如用於配製藥物產品的崩解劑、黏合劑、填充劑、溶劑、緩衝劑、張度劑、穩定劑、抗氧化劑、表面活性劑、載體、稀釋劑或潤滑劑。

本文所用的術語“藥學可接受的鹽”意指藥學上可接受且具有母體化合物所需藥理學活性的本發明化合物的鹽。具體地，此類鹽無毒，可為無機酸加成鹽或有機酸加成鹽及鹼加成鹽，包括但不限於：(1)與無機酸形成的酸加成鹽，該無機酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；或與有機酸形成的酸加成鹽，該有機酸如乙酸、丙酸、己酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、丁二酸、蘋果酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟腦磺酸、葡糖庚酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、三級丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、谷胺酸、羥基萘甲酸、水楊酸、硬脂酸、黏康酸等；或(2)當存在於母體化合物中的酸性質子經金屬離子如鹼金屬離子、鹼土金屬離子或鋁離子置換時、或與有機鹼如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、N-甲基葡糖胺等配位時形成的鹽。所屬技術領域具有通常知識者瞭解製備藥用鹽的一般原理和技術，例如Berge等，Pharm ScL,66,1-19.(1977)中所述的那些。

本文所用的術語“藥學可接受的前藥”意指具有可裂解基團且藉由溶劑分解或在生理條件下變成在體內具有藥學活性的本發明化合物的化合物，具體地，前藥包括那些可以被氧化、還原、胺化、去胺化、羥化、去羥化、水解、去水解、烷化、去烷化、醯化、去醯化、磷酸化或去磷酸化而生成活性化合物的化合物，包括本發明化合物的衍生物。各種形式的前藥在本領域眾所周知，合適的前藥部分描述於例如“Prodrugs and Targeted Delivery”,J.Rautico,Ed.,John Wiley & Sons,2011中。

本文所述的CDN化合物的前藥一般可增加化合物的活性、生物利用度或穩定性。通常，磷酸酯部分的烷化、醯化或其他親脂性修飾或使用核苷酸的其他類似物將有助於增加核苷酸的穩定性。

本文所用的術語“溶劑合物”是指包含化學計量的或非化學計量的溶劑的溶劑加成形式，包括例如與水的溶劑合物，例如水合物，或與有機溶劑、例如甲醇、乙醇或乙腈的溶劑合物，即分別作為甲醇化物、乙醇化物或乙腈化物；或為任何多晶型物的形式。應當理解的是，本發明化合物的這類溶劑合物還包括本發明化合物的藥學可接受鹽的溶劑合物。

本文所使用的術語“同位素變體”是指構成該化合物的一或多個原子被具有與自然界中通常發現的原子質量或質量數不同的原子質量或質量數的原子所取代的化合物。可以摻入本發明化合物的一個或多個原子上的同位素的實例包括例如² H、 ³ H、 ¹³ C、 ¹⁴ C、 ¹⁵ N、 ¹⁷ O、 ¹⁸ O、 ³¹ P、 ³² P、 ³⁵ S和 ¹⁸ F，從而形成本發明化合物的同位素變化形式，其無論是否具有放射性，都旨在涵蓋在本發明的範圍內。在一些實施方案中，所摻入的同位素是2H(氘)；在另一些實施方案中，所摻入的同位素是3H(氚)。

本文中所用的術語“立體異構體”表示由於至少一個不對稱中心形成的異構體。在具有一個或多個(例如1個、2個、3個或4個)不對稱中心的化合物中，其可產生外消旋混合物、單一對映異構體、非對映異構體混合物和單獨的非對映異構體。類似地，本發明的化合物可以以兩種或更多種處於快速平衡的不同結構形式的混合物(通常稱作互變異構體)存在。需要理解的是，本申請的範圍涵蓋所有這樣的以任意比例(例如60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%)的異構體或其混合物。

本發明化合物可具有一或多個不對稱中心，因此可以分別以(R)-或(S)-立體異構體形式製備或以其混合物形式製備。本文化合物結構式或結構片段中使用的“

”或“

”表示不對稱中心即手性中心的構型。相應地，在本發明所提供的化合物或中間體的命名中以R和S表示關於該手性中心的構型。所屬技術領域具有通常知識者將意識到，本發明化合物中的硫代磷酸鍵是固有手性的，可各自以R構型或S構型存在，因此兩個硫代磷酸鍵呈R,R、S,S、S,R和R,S形式是可能的。本發明涵蓋呈基本上純淨形式或呈混合物形式的本發明化合物及其具體實施方式，含有兩個硫代磷酸鍵的化合物較佳呈基本上純淨形式的R,R、S,S、S,R和R,S立體異構體，特別佳呈基本上純淨的R,R立體異構體，即兩個磷原子均具有R構型。它們的絕對構型歸屬可依據文獻方法進行(Zhao et al.Nucleosides,Nucleotides and Nucleic Acids 2009,289,352-378；Knouse et al.Science 2018,361,1234)。需要指出的是，基於文獻方法失誤而導致的構型的指定錯誤並不影響本發明化合物的實際構型。

本文關於CDN所用的術語“基本上純淨的”是指某種立體構型形式相對於上圖中指示的手性中心處的其它可能的立體化學構型而言為至少75%純的。在較佳的實施方案中，基本上純的CDN為至少85%純的、至少90%純的、至少95%純的、至少97%純的以及至少99%純的。本發明的基本上純的CDN製劑為“立體化學上純的”，是指製劑內的所有CDN在這些手性中心處具有特定立體化學構型，而並非意在指示製劑內的在這些手性中心處具有特定立體化學構型的所有CDN在其它方面是相同的。例如，基本上純的CDN R,R cGAMP硫代磷酸製劑可包含R,R c-di-GMP硫代磷酸和R,R c-di-AMP硫代磷酸的組合，並且仍為基本上純的環狀嘌呤二核苷酸製劑。

本文中所有的術語“保護基”表示選擇性封閉多官能化合物中的反應性位點的基團，使得化學反應可以在合成化學中通常與其相關的含義上的另一個未保護的反應性位點選擇性進行。保護基可以在適當的時間點除去。示例性的保護基包括胺基保護基，包括但不限於TBS(三級丁基二甲基矽烷基)、DMTr(雙(4-甲氧基苯基)苯甲基)、Bz(苯甲醯基)、^i-BuCO(異丁醯基)、苄基、苄氧羰基(羰基苄基氧基，CBZ)、Fmoc(9-芴基甲氧羰基)、對甲氧基苄氧羰基、對硝基苄氧羰基、三級丁氧羰基(BOC)和三氟乙醯基；以及羥基保護基，包括但不限於形成酯和醚的基團，特別是四氫吡喃氧基、Bz(苯甲醯基)、^i-BuCO(異丁醯基)、DMTr(雙(4-甲氧基苯基)苯甲基)、乙醯氧基、胺基甲醯氧基、苄基和甲矽烷基醚如TBS(三級丁基二甲基矽烷基)、TBDPS(三級丁基二苯基矽烷基)。這些基團的其它實例見於T.W.Greene和P.G.M.Wuts，“Greene’s protective groups in organic synthesis”，第5版。John Wiley & Sons.,Inc.,Hoboken,New Jersey，2014。

術語“脫保護”或“去保護”表示在選擇性反應完成後除去保護基的過程。脫保護試劑包括酸、鹼或氫，特別是碳酸鉀或碳酸鈉、氫氧化鋰的醇溶液、鋅的甲醇溶液、乙酸、三氟乙酸、鈀催化劑或三溴化硼。

本文所用的術語“烷基”意指具有指定碳原子數目的直鏈或支鏈脂族烴基。具體地，烷基可以具有1至14個、1至12個、1至10個、1至8個、1至7個、1至6個、1至5個、1至4個、1至3個或1至2個碳原子。適合的C_1-14烷基的實例包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、正戊基、異戊基、新戊基、正己基、異己基、二甲基甲基、二丙基甲基、乙基丁基甲基、二乙基甲基、甲基乙基甲基、乙基丙基甲基、二乙基乙基、二乙基丙基、二丙基乙基等。特定的烷基具有1至7個碳原子，例如1至6個碳原子，1至4個碳原子。

本文所用的術語“鹵基”或“鹵素”意指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)及碘(I)。特定的鹵基為氟或氯。

為清楚起見，本文所用的術語“鳥嘌呤

”也可表示為“

”。本發明化合物結構式中所用的硫代磷酸酯基團可被繪製為

或

。

本發明化合物

本申請通篇使用的術语“本文所述的化合物”、“發明的化合物”和“本發明的化合物”等，除非另外指出，涵蓋本文定義的式(X)、式(Y)以及具體實施方案式(I)、(II)、(III)和(IV)化合物、其各個子通式實施方式及其具體或較佳實施方式、它們的立體異構體、互變異構體、外消旋物、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽或溶劑合物，以及藥學可接受的前藥，各自如上文定義部分所描述。本發明化合物可作為異構體的混合物或作為單獨的異構體分離，單獨的異構體可藉由例如色譜法或分步結晶法拆分外消旋物或由旋光原料而合成製得。類似地，本文中對“中間體”的稱謂，無論其本身是否被請求保護，若上下文允許，則均意欲涵蓋其游離形式以及上述各衍生形式。

較佳地，本發明化合物為游離形式或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物；最佳為游離形式或其藥學上可接受的鹽。

本發明的某些化合物可以以多晶型或無定形形式存在，它們也落入本發明的範圍內。當為固體結晶形式時，本發明化合物可以是與另一種化學實體的共晶體形式，並且本說明書包括所有這些共晶體。

具體地，一方面，本發明提供下式的環狀二核苷酸化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物：

，例如

其中X¹和X²各自獨立地選自-OH和-SH；且在成環的兩個核苷酸的兩個核苷中至少之一具有細胞毒性或抗病毒作用，較佳那些抗代謝抗癌藥即核苷類抗癌藥或其衍生物，包括但不限於臨床使用的依諾他濱(enocitabine)、氟達拉濱(fludarabine)、阿糖胞苷(cytarabine)、奈拉濱(nelarabine)、脫氧氟脲苷(doxifluridine)、卡培他濱(capecitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、噴司他丁(pentostatin)、克拉屈濱(cladribine)、吉西他濱(gemcitabine)和氯法拉濱(clofarabine)，更佳克拉屈濱、吉西他濱和氯法拉濱或其衍生物。此處所述的核苷類抗癌藥衍生物是指化合物結構中的氫原子或原子團被其他原子或原子團取代而衍生的保留抗癌細胞毒性的化合物。

在具體的實施方式中，本發明提供下式(Y)的環狀二核苷酸化合物，

其中X¹和X²各自獨立地選自-OH和-SH；

B₁為被X取代的腺嘌呤

，其中X選自Cl、F或-NHC_1-6烷基；或視需要被R^a取代的胞嘧啶

，其中R^a選自H或-C(O)-C_1-14烷基；

R₁和R₁’各自獨立地選自H、F或-OH；

B₂選自視需要被X取代的腺嘌呤

，其中X選自H、F或Cl；視需要被R^a取代的胞嘧啶

，其中R^a選自H或-C(O)-C_1-14烷基；或鳥嘌呤

，其中的OH視需要被C_1-6烷基取代；

表示磷酸鍵可連接至戊糖的2’位或3’位，二者中未與磷酸成環的位點被R₂和R₂’取代；和

R₂和R₂’各自獨立地選自H、-OH或F；

條件是，當B₁或B₂之一為視需要被R^a取代的胞嘧啶時，其所連接的戊糖環上與其相鄰的碳原子被兩個F取代；

其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物。

在具體的實施方式中，式(Y)化合物可以是

其中B₁、B₂、R₁、R₁’、R₂、R₂’具有上文對式(Y)化合物所定義的含義。

在具體的實施方式中，本發明化合物中(存在時)的兩個硫代磷酸鍵以R,R、S,S、S,R或R,S構型或其混合物形式存在。在較佳的實施方式中，本發明化合物中(存在時)的兩個硫代磷酸鍵以基本上純淨形式的R,R、S,S、S,R或R,S構型存在，特別佳以基本上純淨的R,R構型存在。

在具體的實施方式中，本發明化合物中存在的單一硫代磷酸鍵可以以R或S構型存在，較佳以R構型存在。

在一種式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物的實施方式中，B₁為被X取代的腺嘌呤

，其中X選自Cl或F，較佳Cl，或視需要被R^a取代的胞嘧啶

，其中R^a選自H或-C(O)-C_1-14烷基。

，其中X是-NHC_1-6烷基，例如-NHCH₃、-NHCH₂CH₃、- NHCH₂CH₂CH₃，較佳-NHCH₃。

在一種式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物的實施方式中，B₁為視需要被R^a取代的胞嘧啶

，其中R^a選自H或-C(O)-C_1-14烷基。

在一種式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物的實施方式中，R₁和R₁’均是H，或其中一個是H且另一個是F，或均是F。

在一種式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物的實施方式中，B₂是視需要被X取代的腺嘌呤

，其中X選自H、F或Cl，較佳H或Cl。

在一種式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物的實施方式中，B₂是視需要被R^a取代的胞嘧啶

，其中R^a選自H或-C(O)-C_1-14烷基。

在一種式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物的實施方式中，B₂是鳥嘌呤

在一種式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物的實施方式中，R₂和R₂’均是H，或其中之一是H且另一個是F，或其中之一是H且另一個是OH，或均是F。

在一種式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物的實施方式中，R^a為-C(O)C_1-14烷基時可以是例如-C(O)C_1-10烷基、-C(O)C_1-9烷基、-C(O)C_1-8烷基、-C(O)C_1-7烷基、-C(O)CH(C_1-4烷基)₂、-C(O)CH(C_1-3烷基)₂、-C(O)CH₂CH(C_1-4烷基)₂、-C(O)CH₂CH(C_1-3烷基)₂。

本發明的式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物，還涵蓋上述各個實施方式及其較佳或示例方式之間的任何組合。

在進一步具體的實施方式中，本發明提供具有以下子通式的式(Y)環狀二核苷酸化合物，

其中B₁、B₂、R₁、R₁’、R₂、R₂’具有上文對式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物及其各個具體實施方式所定義的含義。

在一種式(II-a)或式(II-b)化合物、尤其是式(II-a)化合物的實施方式中，B₁為

，且B₂為

、

或

；在一個具體的該實施方式中，R₁和R₁’均為H；在另一個具體的該實施方式中，R₁和R₁’之一為H，另一個為F。進一步地，在該各個具體的該實施方式中，R₂和R₂’均為H，或其中一個為H且另一個為F，或其中一個為H且另一個為OH。

在一種式(II-a)或式(II-b)化合物、尤其是式(II-a)化合物的實施方式中，B₁和B₂均為視需要被R^a取代的胞嘧啶

；在具體的該實施方式中， R₁、R₁’、R₂、R₂’均為F。

在一種式(II-a)或式(II-b)化合物、尤其是式(II-b)化合物的實施方式中，B₁為

，且B₂為

或

；在具體的該實施方式中，R₁和R₁’均為H；在另一個具體的該實施方式中，R₁和R₁’之一為H，另一個為F。進一步地，在該各個該實施方式中，R₂和R₂’均為H，或一個為H且另一個為F，或一個為H且另一個為OH，較佳一個為H且另一個為OH。

在一種式(II-a)或式(II-b)化合物、尤其是式(II-b)化合物的實施方式中，B₁為視需要被R^a取代的胞嘧啶

，且B₂為

；在具體的該實施方式中，R₁和R₁’均為F。進一步地，在該各個該實施方式中，R₂和R₂’均為H，或一個為H且另一個為F，或一個為H且另一個為OH，較佳一個為H且另一個為OH。

在一種式(II-a)或式(II-b)化合物的實施方式中，R^a為H，或為-C(O)C_1-10烷基，例如-C(O)C_1-9烷基、-C(O)C_1-8烷基、-C(O)C_1-7烷基、-C(O)CH(C_1-4烷基)₂、-C(O)CH(C_1-3烷基)₂、-C(O)CH₂CH(C_1-4烷基)₂、-C(O)CH₂CH(C_1-3烷基)₂。

在一種式(II-a)或式(II-b)化合物的實施方式中，B₁為

，R₁和R₁’均為H。

在一種式(II-a)或式(II-b)化合物的實施方式中，B₁為

，R₁和R₁’之一為H，另一個為F；在具體的該實施方式中，F和B₁ 位於核糖同側。

，較佳

，且R₁和R₁’均為H，或R₁和R₁’之一為H，另一個為F，較佳R₁和R₁’之一為H，另一個為F。

在一種式(II-a)或式(II-b)化合物的實施方式中，B₁為視需要被R^a 取代的胞嘧啶

，其中R^a選自H，R₁和R₁’均為F。

，其中R^a為-C(O)C_1-10烷基，較佳-C(O)CH(C_1-4烷基)₂， R₁和R₁’均為F。

在示例性實施方式中，R^a為-C(O)CH(CH₃)₂、-C(O)CH(CH₂CH₃)₂、-C(O)CH(CH₃)(CH₂CH₃)、-C(O)CH(CH₂CH₂CH₃)₂、-C(O)CH(CH₂CH₃)(CH₂CH₂CH₃)、-C(O)CH₂CH(CH₂CH₃)(CH₂CH₂CH₃)、C(O)CH₂CH(CH₂CH₂CH₃)₂，較佳R^a為C(O)CH(CH₂CH₂CH₃)₂。

在一種式(II-a)或式(II-b)化合物的實施方式中，B₂為鳥嘌呤

或腺嘌呤

，且R₂和R₂’之一為H，另一個選自-OH或F。

在一種式(II-a)化合物的實施方式中，B₂為鳥嘌呤

，R₂ 和R₂’之一為H，另一個選自-OH或F。

在一種式(II-a)化合物的實施方式中，B₂為腺嘌呤

，R₂和 R₂’之一為H，另一個選自-OH或F。

在一種式(II-a)化合物的實施方式中，B₂為被鹵素X取代的腺嘌呤

，其中X為Cl；R₂和R₂’之一為H，另一個為F，較佳F和B₂位於核糖同側。

，其中X為Cl；R₂和R₂’均為H。

在一種式(II-a)化合物的實施方式中，B₂為視需要被R^a取代的胞嘧啶

，其中R^a選自H，R₁和R₁’均為F。

在一種式(II-a)化合物的實施方式中，B₂為被R^a取代的胞嘧啶

，其中R^a為-C(O)C_1-10烷基，較佳-C(O)CH(C_1-4烷基)₂，R₁和R₁’均為 F。

在示例性實施方式中，R^a為-C(O)C(CH₃)₂、-C(O)CH(CH₂CH₃)₂、-C(O)CH(CH₃)(CH₂CH₃)、-C(O)CH(CH₂CH₂CH₃)₂、-C(O)CH(CH₂CH₃)(CH₂CH₂CH₃)、-C(O)CH₂CH(CH₂CH₃)(CH₂CH₂CH₃)、C(O)CH₂CH(CH₂CH₂CH₃)₂，較佳R^a為C(O)CH(CH₂CH₂CH₃)₂。

在一種式(II-b)化合物的實施方式中，B₂為鳥嘌呤

或腺嘌呤

，R₂和R₂’之一為H，另一個為-OH。

在上述式(II-a)或式(II-b)化合物及其各個具體實施方式中，兩個硫代磷酸鍵以R,R、S,S、S,R或R,S構型或其混合物形式存在；較佳以基本上純淨形式的R,R、S,S、S,R或R,S構型存在，特別佳以基本上純淨的R,R構型存在。

以上對於式(II-a)或式(II-b)化合物給出的具體實施方式及其較佳或示例方式，也分別適用於式(I-a)或式(I-b)化合物、式(III-a)或式(III-b)化合物、式(IV-a)或式(IV-b)化合物，即本發明也涵蓋式(I-a)或式(I-b)化合物、式(III-a)或式(III-b)化合物、式(IV-a)或式(IV-b)化合物，其中各個具體取代基分別取上述對式(II-a)或式(II-b)化合物或其具體實施方式給出的具體定義。

例如，在一種式(I-a)或式(I-b)化合物、式(III-a)或式(III-b)化合物、或式(IV-a)或式(IV-b)化合物、尤其是式(I-b)、式(III-b)或式(IV-b)化合物的實施方式中，B₁為

，且B₂為

、

或

，較佳

；在一個具體的該實施方式中，R₁和R₁’之一為H，另一個為F。進一步地，在該各個該實施方式中，R₂和R₂’之一為H，另一個為OH。

本發明的式(I-a)/(I-b)、(II-a)/(II-b)、(III-a)/(III-b)或(IV-a)/(IV-b)化合物，還涵蓋上述各個實施方式及其較佳或示例方式之間的任何組合。

在再進一步具體的實施方式中，本發明提供以下子通式的環狀二核苷酸化合物，

其中B₁、B₂、R₁、R₁’、R₂、R₂’具有上文對式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物或其各個具體實施方式所定義的含義；更具體地，具有上文對式(I-a)/(I-b)、(II-a)/(II-b)、(III-a)/(III-b)或(IV-a)/(IV-b)化合物或其各個具體實施方式所定義的含義。

在一種式(II-a’)或式(II-b’)化合物、尤其是式(II-a’)化合物的實施方式中，B₁為

，且B₂為

、

或

；在具體的該實施方式中，R₁和R₁’均為H；在另一個具體的該實施方式中，R₁為F，R₁’為H，即F與B1在核糖同側。進一步地，在該各個具體的該實施方式中，R₂和R₂’均為H，或R₂為H且R₂’為F，或R₂為F且R₂’為H，或R₂為OH且R₂’為H。

在一種式(II-a’)或式(II-b’)化合物、尤其是式(II-a’)化合物的實施方式中，B₁和B₂均為視需要被R^a取代的胞嘧啶

；在具體的該實施方式中，R₁、R₁’、R₂、R₂’均為F。

在一種式(II-a’)或式(II-b’)化合物、尤其是式(II-b’)化合物的實施方式中，B₁為

，且B₂為

或

；在具體的該實施方式中，R₁和R₁’均為H；在另一個具體的該實施方式中，R₁為F，R₁’為H，即F與B1在核糖同側。進一步地，在該各個該實施方式中，R₂和R₂’均為H，或R₂為H且R₂’為F，或R₂為F且R₂’為H，或R₂為OH且R₂’為H；較佳R₂為OH且R₂’為H。

在一種式(II-a’)或式(II-b’)化合物、尤其是式(II-b’)化合物的實施方式中，B₁為視需要被R^a取代的胞嘧啶

，且B₂為

；在具體的該實施方式中，R₁和R₁’均為F。進一步地，在該各個該實施方式中，R₂和R₂’均為H，或R₂為H且R₂’為F，或R₂為F且R₂’為H，或R₂為OH且R₂’為H；較佳R₂為OH且R₂’為H。

在一種式(II-a’)或式(II-b’)化合物的實施方式中，R^a為H，或-C(O)C_1-10烷基，例如-C(O)C_1-9烷基、-C(O)C_1-8烷基、-C(O)C_1-7烷基、-C(O)CH(C_1-4烷基)₂、-C(O)CH(C_1-3烷基)₂、-C(O)CH₂CH(C_1-4烷基)₂、-C(O)CH₂CH(C_1-3烷基)₂。

在一種式(II-a’)或式(II-b’)化合物的實施方式中，B₁為

，R₁和R₁’均為H，由此該B₁連同其所連接的核糖一起形成核苷類抗腫瘤藥克拉屈濱。

在一種式(II-a’)或式(II-b’)化合物的實施方式中，B₁為

，R₁為F，R₁’為H，即F和B₁位於核糖同側，由此該B₁連同其所連接的核糖一起形成核苷類抗腫瘤藥氯法拉濱。

，較佳

，且R₁和R₁’均為 H，或R₁為F且R₁’為H，較佳R₁為F且R₁’為H。

在一種式(II-a’)或式(II-b’)化合物的實施方式中，B₁為視需要被R^a 取代的胞嘧啶

，其中R^a選自H，R₁和R₁’均為F，由此該B₁連同其所連接的核糖一起形成核苷類抗腫瘤藥吉西他濱。

在一種式(II-a’)或式(II-b’)化合物的實施方式中，B₁為視需要被 R^a取代的胞嘧啶

，其中R^a為-C(O)C_1-10烷基，較佳-C(O)CH(C_1-4烷基)₂，R₁和R₁’均為F，由此該B₁連同其所連接的核糖一起形成核苷類抗腫瘤藥吉西他濱的烷醯化衍生物。在示例性實施方式中，R^a為-C(O)CH(CH₃)₂、-C(O)CH(CH₂CH₃)₂、-C(O)CH(CH₃)(CH₂CH₃)、-C(O)CH(CH₂CH₂CH₃)₂、-C(O)CH(CH₂CH₃)(CH₂CH₂CH₃)、-C(O)CH₂CH(CH₂CH₃)(CH₂CH₂CH₃)、C(O)CH₂CH(CH₂CH₂CH₃)₂，較佳R^a為C(O)CH(CH₂CH₂CH₃)₂。

在一種式(II-a’)化合物的實施方式中，B₂為鳥嘌呤

， R₂’為H，R₂選自-OH或F。

在一種式(II-a’)化合物的實施方式中，B₂為腺嘌呤

，R₂’ 為H，R₂選自-OH或F。

在一種式(II-a’)化合物的實施方式中，B₂為被鹵素X取代的腺嘌呤

，其中X為Cl，R₂為H，R₂’為F，且F和B₂位於核糖同側，由此該B₂連同其所連接的核糖一起形成核苷類抗腫瘤藥氯法拉濱。

，其中X為Cl，R₂和R₂’均為H，由此該B₂連同其所連接的核糖一起形成核苷類抗腫瘤藥克拉屈濱。

在一種式(II-a’)化合物的實施方式中，B₂為視需要被R^a取代的胞嘧啶

，其中R^a選自H，R₁和R₁’均為F，由此該B₂連同其所連接的核糖一起形成核苷類抗腫瘤藥吉西他濱。

在一種式(II-a’)化合物的實施方式中，B₂為被R^a取代的胞嘧啶

，其中R^a為-C(O)C_1-10烷基，較佳-C(O)CH(C_1-4烷基)₂，R₁和R₁’均為 F，由此該B₂連同其所連接的核糖一起形成核苷類抗腫瘤藥吉西他濱的烷醯化衍生物。在示例性實施方式中，R^a為-C(O)CH(CH₃)₂、-C(O)CH(CH₂CH₃)₂、-C(O)CH(CH₃)(CH₂CH₃)、-C(O)CH(CH₂CH₂CH₃)₂、-C(O)CH(CH₂CH₃)(CH₂CH₂CH₃)、-C(O)CH₂CH(CH₂CH₃)(CH₂CH₂CH₃)、C(O)CH₂CH(CH₂CH₂CH₃)₂，較佳R^a為C(O)CH(CH₂CH₂CH₃)₂。

在一種式(II-b’)化合物的實施方式中，B₂為鳥嘌呤

或腺嘌呤

，R₂’為H，R₂為-OH。

以上對於式(II-a’)或式(II-b’)化合物給出的具體實施方式及其較佳或示例方式，也分別適用於式(I-a’)或式(I-b’)化合物、式(III-a’)或式(III-b’)化合物、式(IV-a’)或式(IV-b’)化合物，即本發明也涵蓋式(I-a’)或式(I-b’)化合物、式(III- a’)或式(III-b’)化合物、式(IV-a’)或式(IV-b’)化合物，其中各個具體取代基分別取上述對式(II-a’)或式(II-b’)化合物或其具體實施方式給出的具體定義。

例如，在一種式(I-a’)或式(I-b’)化合物、式(III-a’)或式(III-b’)化合物、或式(IV-a’)或式(IV-b’)化合物、尤其是式(I-b’)、式(III-b’)或式(IV-b’)化合物的實施方式中，B₁為

，且B₂為

、

或

，較佳

；在一個具體的該實施方式中，R₁為F且R₁’ 為H。進一步地，在該各個該實施方式中，R₂為OH且R₂’為H。

需要說明的是，本發明的化合物涵蓋以上各個具體實施方式，還涵蓋上述各個具體實施方式的任何組合或亞組合構成的實施方式，也涵蓋以上任何較佳或例舉的任何組合所構成的實施方式。

本發明化合物的較佳具體實施方式包括以下化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽或溶劑合物，

本發明化合物的藥理學活性和有益效果

經研究發現，本發明提供的環二核苷酸化合物，具有下列藥理學活性和有益效果：

●有效刺激THP-1細胞分泌IFN-β，由此可以說明其對STING受體有高親和力，可有效激活STING，誘導I型干擾素產生；

●有效抑制小鼠結直腸癌細胞系CT26的體外生長，表明對腫瘤細胞具有毒性作用，阻止腫瘤細胞分裂和繁殖；

●在免疫健全CT26同基因小鼠雙側移植瘤模型中顯示出優於在免疫缺陷小鼠模型中的抗腫瘤活性，表明同時具有激活STING產生的腫瘤免疫活性和細胞毒性作用，二者產生加和、甚至協同的抗腫瘤效果；

●在CT26同基因小鼠移植瘤模型中顯示免疫記憶功能，能夠有效防止腫瘤復發；

●在肝細胞代謝研究中顯示良好的藥物代謝動力學性質，例如具有較長的t_1/2和低清除速率，從而可以加大給藥間隔，使患者具有更好的依從性；和

●局部用藥於病灶部位，作用精准，可減少用藥量，且由於分子極性高，難以擴散到病灶外，毒性有限，具有良好的安全性。

醫藥組成物

本發明的另一方面提供包含本發明化合物和一種或多種藥學可接受賦形劑的醫藥組成物，以及使用本發明化合物製備該組成物的方法。

組成物或劑型以符合良好醫療實踐的方式配製、給藥和施用。在此背景下考慮的因素包括所治療的特定病症、所治療的特定哺乳動物、個體患者的臨床狀況、病症的原因、藥劑的遞送部位、施用方法、施用時間安排以及醫學從業者已知的其他因素。

典型的醫藥組成物或劑型藉由將本發明的化合物與載體或賦形劑混合來製備。合適的載體和賦形劑是所屬技術領域具有通常知識者熟知的，並詳細描述於例如Gennaro A.R.等人，Remington：The Science and Practice of Pharmacy(2000)Lippincott,Williams & Wilkins,Philadelphia。製劑還可以包括一種或多種緩衝劑、穩定劑、表面活性劑、潤濕劑、潤滑劑、乳化劑、懸浮劑、防腐劑、抗氧化劑、遮光劑、助流劑、加工助劑、著色劑、甜味劑、芳香劑、調味劑、稀釋劑和其它已知的添加劑，以提供藥物(即本發明的化合物或其醫藥組成物)的優雅的外觀或有助於藥物產品(即藥劑)的製備。

本發明的化合物可以藉由任何合適的方式給藥，包括口服、局部(包括含服和舌下)、直腸、陰道、經皮、腸胃外、皮下、腹膜內、肺內、皮內、鞘內和硬膜外和鼻內給藥，並且如果需要局部治療、病灶內給藥。腸胃外輸注包括肌內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下施用。

在較佳的實施方式中，提供了包含本發明的一種或多種化合物的醫藥組成物，其中該醫藥組成物適於靜脈內、腫瘤內、瘤周或皮下施用。本發明化合物的腫瘤內(直接進入腫瘤塊)或腫瘤周圍(腫瘤塊周圍)給藥可直接活化局部親潤性樹突狀細胞，直接促進腫瘤細胞的細胞凋亡或使腫瘤細胞對細胞毒性劑敏感。

本發明的化合物可以以任何方便的給藥形式給藥，例如片劑、粉劑、膠囊劑、無菌可注射製劑、溶液劑、分散劑、混懸劑、糖漿劑、噴霧劑、栓劑、凝膠劑、乳劑、貼劑等。這樣的組成物可以包含藥物製劑中常規的組分，例如稀釋劑、載體、pH調節劑、防腐劑、增溶劑、穩定劑、潤濕劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、矯味劑、用於改變滲透壓的鹽、緩衝劑、掩蔽劑、抗氧化劑和其它活性劑。它們還可以包含其它有治療價值的物質。各種製劑形式可以根據製劑領域中的常規方法製備，例如參見Gennaro A.R.等人，Remington：The Science and Practice of Pharmacy(2000)Lippincott,Williams & Wilkins,Philadelphia或各國藥典。

在較佳的實施方式中，提供了包含本發明的一種或多種化合物的醫藥組成物，其為胃腸外製劑形式，尤其是無菌可注射製劑形式，如在無毒且胃腸外可接受稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液或懸浮液，或製備成凍乾粉末。在可接受的媒介或溶劑中，可採用例如水、1,3-丁二醇、林格氏溶液或等滲氯化鈉溶液；此外，無菌不揮發性油可常規用作溶劑或懸浮介質，為此可採用任何溫和的不揮發油，包括例如合成單甘油酯或二甘油酯、脂肪酸等。

本發明化合物的給藥劑量可以在很寬的範圍內變化，當然，在每種具體情況下可以根據個體需要進行調整。通常，本發明化合物的全身施用的有效量為約0.1μg/kg/天至約50mg/kg/天，例如0.5μg/kg/天至約10mg/kg/天、1μg/kg/天至約1mg/kg/天。各劑量單位可以方便地含有0.001μg至10mg，例如0.01μg至1mg，例如50μg至500μg。有效量可以以一個或多個劑量給出，即可以為1次、2次或更多次施用，且可以以相等或不等的時間間隔多次施用，包括每天一次或多次，每週一次或多次，或按照每若干天/週的施用方案進行。

用途和方法

鑒於本發明的化合物能夠激活STING、誘導表達I型干擾素和促炎細胞因子如IL-6、TNF-α和IFN-γ等，同時具有細胞毒活性，本發明另一方面提供本發明化合物的治療用途和方法。

一方面，本文所述的化合物或醫藥組成物，可用作治療物質，用於治療或預防與免疫反應相關或由其介導的疾病，具體地用於治療或預防與STING相關或由其介導的疾病，包括炎症、變應性或自身免疫疾病、感染性疾病或癌症，或用作疫苗佐劑。

在較佳的實施方式中，本發明的化合物或組成物用作細胞毒性藥，用於治療或預防過度增殖性疾病，尤其是腫瘤。在另外較佳地實施方式中，本發明的化合物或組成物用於治療復發性腫瘤，或用於預防腫瘤復發。

在較佳的實施方式中，本發明的化合物或組成物用作細胞毒性藥，用於治療或預防病毒感染。

另一方面，本發明由此相應地提供在個體中誘導、刺激或輔助免疫反應的方法，包括向個體施用本發明的化合物或醫藥組成物。在一個實施方案中，本發明的化合物作為免疫療法施用於個體，以誘導體內產生對人或動物治療上有用的一種過多種細胞因子，包括I型干擾素和促炎細胞因子如IL-6、TNF-α和IFN-γ，以調節該人或動物的免疫系統以實現某些治療益處。

另一方面，本發明由此相應地提供治療或預防與免疫反應相關或由其介導的疾病、具體地與STING相關或由其介導的疾病、包括炎症、變應性或自身免疫疾病、感染性疾病或癌症的方法，包括向有需要的受試者施用治療有效量的本發明的化合物或醫藥組成物。

在較佳的實施方式中，本發明提供治療或預防過度增殖性疾病、尤其是腫瘤的方法，包括向有需要的受試者施用治療有效量的本發明的化合物或醫藥組成物。在另外較佳的實施方式中，本發明提供治療復發性腫瘤或預防腫瘤復發的方法，包括向有需要的受試者施用治療有效量的本發明的化合物或醫藥組成物。

在較佳的實施方式中，本發明提供治療或預防病毒感染的方法，包括向有需要的受試者施用治療有效量的本發明的化合物或醫藥組成物。

另一方面，本發明由此相應地提供本發明化合物或醫藥組成物在製備藥物中的用途，該藥物用於治療或預防與免疫反應相關或由其介導的疾病、具體地與STING相關或由其介導的疾病、包括炎症、變應性或自身免疫疾病、感染性疾病或癌症。

另一方面，本發明由此還相應地提供本發明化合物或醫藥組成物在製備疫苗佐劑中的用途。

在較佳的實施方式中，本發明提供本發明的化合物或醫藥組成物在製備藥物中的用途，該藥物用於治療或預防過度增殖性疾病、尤其是腫瘤。在另外較佳的實施方式中，本發明提供本發明的化合物或醫藥組成物在製備藥物中的用途，該藥物用於治療復發性腫瘤或用於預防腫瘤復發。

在較佳的實施方式中，本發明提供本發明的化合物或醫藥組成物在製備藥物中的用途，該藥物用於治療或預防病毒感染。

針對上述用途和方法的炎症可以是急性的或慢性的，關於身體任何器官或組織的炎症，包括肌肉骨骼炎症、血管炎症、神經炎症、消化系統炎症、眼部炎症、生殖系統炎症或其他炎症，當然也包括具有炎症性質的自身免疫病症及過敏性病症如接觸性皮炎、蕁麻疹和呼吸道過敏。

針對上述用途和方法的自身免疫疾病是指機體對自身抗原發生免疫反應而導致自身組織損害的疾病，包括但不限於全身性紅斑狼瘡、銀屑病、胰島素依賴性糖尿病、皮肌炎、斯耶格倫氏綜合症、慢性疲勞綜合症、再生障礙性貧血、自身免疫肝炎、多發性硬化、視神經炎、天皰瘡、類風濕性關節炎、潰瘍性結腸炎、局限性回腸炎、硬斑病、硬皮病等。

針對上述用途和方法的過度增殖性疾病是指受試者中以細胞生長或死亡的不受控或失調為特徵的生理狀況，尤其是指腫瘤或癌症，包括實體瘤和血源性腫瘤，包括但不限於腦癌、皮膚癌、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、結腸癌、血癌、肺癌和骨癌。上述癌症類型的實例包括成神經細胞瘤，腸癌例如直腸癌、結腸癌、家族性腺瘤息肉病癌和遺傳性非淋巴性結腸直腸癌、食道癌、唇癌、喉癌、鼻咽癌、口腔癌、唾液腺癌、腹膜癌、軟組織肉瘤、尿道上皮癌、汗腺癌、胃癌、腺癌、甲狀腺髓樣癌、乳頭狀甲狀腺癌、腎癌、腎實質性癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮體癌、子宮內膜癌、胰腺癌、前列腺癌、睾丸癌、乳腺癌(包括HER2陰性乳腺癌)、泌尿癌、黑色素瘤，腦瘤例如成膠質細胞瘤、星形細胞瘤、腦膜瘤、成神經管瘤和外周神經外胚層瘤，霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急性淋巴細胞白血病(ALL)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CLL)和淋巴細胞癌、急性骨髓性白血病(AML)、骨髓性白血病(慢性骨髓性白血病(CML)、成人T細胞淋巴瘤、彌漫性淋巴瘤(DLBCL)、肝細胞瘤、多發性骨髓瘤、精原細胞瘤、骨肉瘤、軟骨肉瘤、肛管癌、腎上腺皮質癌、脊索瘤、輸卵管癌、胃腸道間質瘤、骨髓增生性病症、間皮瘤、膽道癌、尤因肉瘤和其它罕見的腫瘤類型，以及上述腫瘤的復發形式。

在較佳的實施方式中，針對上述用途和方法的過度增殖性疾病為小細胞肺癌、非小細胞肺癌、結腸直腸癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌、前列腺癌、黑素瘤、腎細胞癌、頭頸癌、胰腺癌、霍奇金淋巴瘤、白血病或膀胱癌。

針對上述用途和方法的病毒感染是指病毒藉由多種途徑侵入機體並在易感的宿主細胞中增殖的過程，所涉及的病毒包括但不限於雙鏈DNA病毒和單鏈DNA病毒、單正鏈RNA病毒、單負鏈RNA病毒和雙鏈RNA病毒及逆轉錄病毒，實例有B型肝炎病毒、TTV病毒、腺病毒、乳頭瘤病毒、帶狀皰疹病毒、天花病毒和牛痘病毒、流感病毒、豬瘟病毒、A型肝炎病毒、C型肝炎病毒、D型肝炎病毒、E型肝炎病毒、F型肝炎病毒、狂犬病毒、埃博拉病毒、腸道病毒和人免疫缺陷病毒等。本發明提供的治療用途和方法可用於上述病毒感染及其導致的疾病。

針對上述本發明化合物或組成物作為疫苗佐劑的用途和在製備疫苗佐劑中的用途，是指本發明的化合物或組成物可在採用疫苗的治療或預防策略中用作佐劑，即本發明的化合物或組成物與一種或多種經選擇用於刺激對一種或多種預定抗原的免疫反應的疫苗一起使用，該疫苗包含滅活或減毒細菌或病毒，例如包含表達並分泌GM-CSF、CCL-20、CCL3、IL-12p70、FLT-3配體、細胞因子中一個或多個的滅活腫瘤細胞。

藥物組合

鑒於本發明化合物的有利藥理學活性，其除了單獨可用於上述提及的治療用途或方法外，還可以與至少一種其他治療劑或療法聯合使用以提供進一步的治療益處。

由此，本發明另一方面還提供了藥物組合，包含本文所述的環二核苷酸化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物或其醫藥組成物、以及至少一種其他治療劑，或由二者組成。

另一方面，本發明提供醫藥組成物，其包含本文所述的藥物組合和一種或多種藥學可接受的賦形劑。

另一方面，本發明提供包含本文所述的藥物組合或包含其的醫藥組成物用於治療或預防疾病的用途，或在製備用於治療或預防疾病的藥物中的用途，該疾病包括過度增殖性疾病、病毒感染或與STING相關或由其介導的疾病、更具體地炎症、變應性或自身免疫疾病、感染性疾病或癌症。在較佳的實施方案中，該用途涉及的疾病是腫瘤或病毒感染。

另一方面，本發明還提供了治療方法，其中將本發明的化合物與一種過多種其他治療劑一起施用。

針對本發明的藥物組合及包含其的醫藥組成物的用途而言的炎症、自身免疫疾病、過度增殖性疾病和病毒感染如上文對本發明的用途和方法所述。

本發明的化合物還可以與手術、輻射治療、移植(例如幹細胞移植、骨髓移植)、免疫腫瘤藥劑等聯合施用。

與本發明組合使用的其他治療劑可以與本發明的化合物藉由相同或不同的施用途徑同時、分別或依次地進行施用。該其他治療劑可以與本發明化合物在單一醫藥組成物中共同施用，或與本發明化合物處於不同的離散單元中分別施用，例如組合產品，較佳為藥盒形式，當分別施用時可以同時或相繼進行，該相繼施用在時間上可以是接近或隔遠的。它們可以由相同或不同的製造商製備和/或配製。而且，本發明的化合物和其他治療劑可以(i)在將組合產品發送給醫師之前(例如在包含本發明的化合物和另外的藥物的藥盒的情形中)；(ii)在臨施用前由醫師自身(或在醫師指導下)；(iii)由患者自身、例如在本發明的化合物和其他治療劑的依次施用期間一起加入組合治療中。

因此，另一方面，本發明還提供了藥盒，其包含兩種或多種單獨的醫藥組成物，其中至少一種包含本發明的環二核苷酸化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物，其餘共同存在的醫藥組成物包含至少一種其他治療劑，以及分別容納該組成物的裝置，如容器、分裝瓶或分立的箔包裝，例如用於包裝片劑、膠囊等的泡罩包裝。本發明的藥盒特別適用於施用不同的劑型，如口服劑型和胃腸外劑型，或者適合於以不同的劑量間隔施用不同的組成物。

該其他治療劑可以是一種或多種另外的本發明化合物，或可以是與本發明化合物相容即不會相互不利影響、或具有互補活性或另外活性的二級種或另外的(例如三級種)治療劑。

在具體的實施方案中，可以與本發明化合物組合使用的其他治療劑包括但不限於疫苗、佐劑、免疫檢查點抑制劑、T細胞受體激動劑、TLR激動劑、治療性抗體、脂質、脂質體、化療劑、免疫調節細胞系等。

在一個具體的實施方案中，與本發明化合物組合使用的佐劑由於其性質可用於刺激或以其他方式利用免疫系統對存在於腫瘤細胞上的癌症抗原起反應，包括但不限於脂質、脂質體、誘導先天免疫的滅火細菌、介導先天免疫活化的化合物等。

在一個具體的實施方案中，與本發明化合物組合使用的免疫檢查點抑制劑例如選自CTLA-4通路拮抗劑、PD-1通路拮抗劑、Tim-3通路拮抗劑、Vista通路拮抗劑、BTLA通路拮抗劑、LAG-3通路拮抗劑或TIGIT通路拮抗劑。

在一個具體的實施方案中，與本發明化合物組合使用的T細胞受體激動劑包括但不限於CD28激動劑、OX40激動劑、GITR激動劑、CD137激動劑、CD27激動劑或HVEM激動劑。

在一個具體的實施方案中，與本發明化合物組合使用的TLR激動劑包括但不限於Pam3Cys、CFA、MALP2、Pam2Cys、FSL-1、Hib-OMPC、聚腺苷-聚尿苷酸(聚AU)、LPS、細菌鞭毛蛋白、單磷醯基脂質A(MPL)、咪喹莫特、雷希莫特、洛索立賓等。

在一個具體的實施方案中，與本發明化合物組合使用的化療劑包括但不限於烷化抗腫瘤藥、基於鉑的抗腫瘤藥、抗代謝藥、抗微管劑、抗有絲分裂劑、拓撲異構酶抑制劑以及抗腫瘤抗生素等。

在一個具體的實施方案中，與本發明化合物組合使用的治療性抗體包括但不限於莫羅單抗(Muromonab)-CD3、因扶利希(Infliximab)(Remicade®) 和阿達木單抗(adalimumab)(Humira®)、歐瑪利珠單抗(Omalizumab)(Xolair®)、達利珠單抗(Daclizumab)(Zenapax®)、利妥昔單抗(Rituximab)(商標名稱=Rituxan®)、替伊莫單抗(Ibritumomab)(商標名稱=Zevalin®)、托希莫單抗(Tositumomab)(Bexxar®)、西妥昔單抗(Cetuximab)(Erbitux®)、曲妥珠單抗(Trastuzumab)(Herceptin®)、Adcetris®、阿倫妥珠單抗(Alemtuzumab)(Campath-1H®)、Lym-1(Oncolym®)、伊匹木單抗(Ipilimumab)(Yervoy®)、紫杉素(Vitaxin)、貝伐珠單抗(Bevacizumab)(Avastin®)、阿昔單抗(Abciximab)(ReoPro®)。其他可聯合使用的治療性抗體包括催乳素受體抑制劑、HER3抑制劑、EGFR2和/或EGFR4抑制劑、M-CSF抑制劑、抗APRIL抗體或抗SIRPa或抗CD47抗體。

在其他實施方案中，本發明化合物還可以與PKC抑制劑、BCR-ABL抑制劑、HSP90抑制劑、PI3K和/或mTOR的抑制劑、FGFR抑制劑、細胞色素P450的抑制劑HDM2抑制劑、芳香酶抑制劑、p53和/或p53/Mdm2相互作用抑制劑或或CSF-1R酪胺酸激酶抑制劑組合使用。

上述各類治療劑的實例以及其他可與本發明化合物聯合使用的治療劑的實例可參見WO2016/145102以及WO2018/060323，其相應內容在此併入本文。

對於上述本發明化合物、醫藥組成物、方法、用途、藥物組合及藥盒而言，較佳上文該各個較佳實施方案中的本發明環二核苷酸化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物或其醫藥組成物，更佳具體實施方案中所定義的化合物，即實施例1-26化合物，最佳在活性實施例中顯示優異活性的那些化合物。

對於上述本發明化合物、醫藥組成物、方法、用途、藥物組合及藥盒而言，較佳使用本文所定義的環二核苷酸化合物的游離形式或藥學可接受的鹽或前藥，較佳本發明所定義的基本上純的環二核苷酸化合物的游離形式或藥學可接受的鹽或前藥。

對於上述本發明的治療用途和方法，較佳使用或治療的對象為哺乳動物，較佳人。

當本文描述藥物或其藥學上可接受的鹽的劑量時，應理解，該劑量基於游離鹼的重量，不包括其任何水合物或溶劑化物，除非另有說明。

本發明化合物的製備方法

通用合成方法

本發明的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽或溶劑合物可以藉由有機合成領域眾所周知的多種方法製備，包括下文給出的方法、實施例中給出的方法或所屬技術領域具有通常知識者理解的與之類似的方法製備。

下文舉例說明合成本發明化合物的通用合成方案。對於各反應步驟而言，適當的反應條件是所屬技術領域具有通常知識者已知的或可以常規確定的。具體地，用於合成本發明的化合物的方法步驟可以在本身己知的反應條件(包括具體提及的那些條件)下、在不存在或通常在存在溶劑或稀釋劑(包括例如對所用試劑而言是惰性的且可溶解所用試劑的溶劑或稀釋劑)的情況下、在不存在或存在催化劑、縮合劑或中和劑(例如離子交換劑，如陽離子交換劑，例如H+形式)的情況下、根據反應和/或反應物的性質在降低的、正常的或升高的溫度(例如約-100℃至約190℃，包括例如約-78℃至約150℃，例如約0℃至約125℃、室溫、-20至40℃或回流溫度)下、在大氣壓力下或在密閉容器中、當適宜時在加壓下、和/或在惰性氣氛例如氧氣或氮氣氣氛下進行。

在製備這些化合物中使用的原料和試劑通常可商購獲得，或者可以藉由下文的方法、與下文給出的方法類似的方法或本領域已知的方法製得。如果需要，合成反應流程中的原料和中間體可以採用常規技術進行分離和純化，該技術包括但不限於過濾、蒸鎦、結晶、色譜法等。該材料可以採用包括物理常數和波譜數據在內的常規方法表徵。

除非在方法的描述中另有說明，否則適用於任何特定反應的溶劑包括：具體提及的那些溶劑，或者例如水；酯類，如低級脂肪酸低級烷基酯，例如乙酸乙酯；醚類，如脂肪族醚，例如乙醚，或環狀醚，例如四氫呋喃或二惡烷；液體芳族烴類，如苯或甲苯；醇類，如甲醇、乙醇或1-或2-丙醇類，如乙腈；鹵化烴類，如二氯甲烷或氯仿；醯胺類，如N,N-二甲基甲醯胺或N,N-二甲基乙醯胺；鹼類，如雜環氮鹼類，例如吡啶；羧酸酐類，如低級脂肪鏈羧酸酐，例如乙酸酐；環狀、直鏈或支鏈烴類，如環己烷、己烷或異戊烷；或這些溶劑的混合物，例如水溶液。該類溶劑混合物也可用於後處理，例如藉由色譜法或分配進行的後處理。

所屬技術領域具有通常知識者能認識到式I化合物中存在立體中心。在反應的所有階段，所形成的異構體的混合物可被分離成單個異構體，例如非對映異構體或對映異構體，或者分離成任何所需的異構體混合物，例如外消旋物或非對映異構體的混合物，參見例如E.L.Eliel,S.H.Wilen和L.N.Mander的"Stereochemistry of Organic Compounds"(Wiley-Interscience,1994)。

以下流程1舉例說明了可用於製備本文所定義的式II化合物及其各個具體實施方式的一種通用合成路線。以下流程中的通式的各變量具有與本文所定義化合物或其各個具體實施方式中相同的含義，另有說明除外。

流程1

其中P₁和P₂是合適的羥基保護基，P₃和P₄是適合的羥基或胺基保護基，包括但不限於TBS(三級丁基二甲基矽烷基)、DMTr(雙(4-甲氧基苯基)苯甲基)、Bz(苯甲醯基)、^i-BuCO(異丁醯基)。本發明化合物合成流程中所用脫保護在酸性條件(包括但不限於如醋酸/水、三氟醋酸/水等)、鹼性條件(包括但不限於如氨水、胺/甲醇溶液等)或者含氟負離子化合物(包括但不限於如四丁基氟化銨、三乙胺三氫氟酸鹽等)存在條件下進行。

流程2舉例說明流程1中的式A化合物和式C的合成路線，以及其中所進一步使用的中間體的合成。

流程2

流程3舉例說明當式H化合物是如下式H-1化合物(吉西他濱前藥LY2334737)時的合成路線。

流程3

流程4~7舉例說明流程1中的式B化合物的合成路線，以及其中所進一步使用的中間體的合成。

流程4

流程5

流程6

流程7

流程8舉例說明流程1中的式D化合物的合成路線。

流程8

具體地，本發明提供上述本發明化合物的製備方法，其包括：

將式A化合物

其中B₁、R₁、R₁’具有上文對本發明式(II)化合物或其各個具體實施方式所定義的含義；P1為適合的羥基保護基，例如但不限於TBS(三級丁基二甲基矽烷基)、DMTr(雙(4-甲氧基苯基)苯甲基)、Bz(苯甲醯基)、^i-BuCO(異丁醯基)；

與式B化合物在鹼、例如DBU存在下反應，

其中B₂、R₂、R₂’具有上文對本發明式(II)化合物或其各個具體實施方式所定義的含義；P2為適合的羥基保護基，P3和P4各自為適合的羥基或胺基保護基，例如但不限於TBS(三級丁基二甲基矽烷基)、DMTr(雙(4-甲氧基苯基)苯甲基)、Bz(苯甲醯基)、^i-BuCO(異丁醯基)；

或者將式C化合物

其中B₁、R₁、R₁’和P1如以上對式A化合物所定義；

與式D化合物在鹼、例如DBU存在下反應，

其中B₂、R₂、R₂’、P2、P3和P4如以上對式B化合物所定義；

得到式E化合物，

將以上式E化合物例如在三氟醋酸/水、四丁基氟化銨或者三乙胺三氫氟酸鹽條件下選擇性的脫保護，得到式F化合物

其中各個基團具有以上所定義的含義；

a)當R₂'=-O(H)，保護基P3為苯甲醯基時，將式F化合物與(-)-PSI試劑在鹼、例如DBU存在下關環，得到環二核苷式G化合物

然後在氨水或者胺甲醇溶液中脫苯甲醯基保護，得到環二核苷式II化合物，

其中R₂'=-O(H)，其餘各個基團具有上文對式II化合物或其各個具體實施方式所定義的含義；

或者b)當R₂'=-F或者-H的時候，將式F化合物與(-)-PSI試劑在鹼、例如DBU存在下關環，得到環二核苷式II化合物

其中R₂'=-F或者-H，其餘各個基團具有上文對式II化合物或其各個具體實施方式所定義的含義。

式A化合物和式C化合物可如下製備：

將式H化合物在鹼、例如咪唑存在下選擇性的保護一級醇，

得到式C化合物

將以上式C化合物與(+)-PSI試劑在鹼、例如DBU存在下反應，得到式A化合物，

其中B₁、R₁、R₁’以及P1如上對式A化合物所定義。

其中當式H化合物為如下式H-1化合物(吉西他濱前藥LY2334737)時，

其藉由式H-1-1化合物與2-丙基戊酸製備得到，

式B化合物可如下製備為式B-1形式：

將式H化合物在鹼、例如咪唑存在下保護兩個羥基，

得到式B-1-1化合物

將式B-1-1化合物在例如三氟醋酸/水條件下選擇性脫除一級醇上的保護基，得到式B-1化合物

其中B₂、R₂、R₂’、P2如以上對式B化合物所定義。

式B化合物還可如下製備為式B-2形式：

將式C化合物在鹼、例如DBU/吡啶存在下進一步保護二級醇，

得到式B-2-1化合物

將式B-2-1化合物在例如醋酸/水條件下選擇性脫除一級醇上的保護基，得到式B-2化合物，

其中B₂、R₂、R₂’、P1、P2如以上對式A或式B化合物所定義。

式B化合物還可如下製備為式B-3形式：

將式B-3-1化合物在鹼、例如咪唑存在下選擇性保護一級醇和一個二級醇，

得到式B-3-2化合物，

將上式B-3-2化合物在鹼、例如N-甲基咪唑存在下使用保護基、例如苯甲醯氯與其中未保護的二級醇和鹼基上的胺基反應，得到式B-3-3化合物

將式B-3-3化合物在例如三氟醋酸/水條件下選擇性脫除一級醇上的保護基，得到式B-3化合物，

其中B₂、R₂、R₂’、P1、P2和P3如上文對式A或式B化合物所定義。

式B化合物還可如下製備為式B-4形式：

將式B-4-1化合物在鹼、例如N-甲基咪唑存在下使用保護基、例如苯甲醯氯與其中未保護的二級醇反應，

得到式B-4-2化合物，

將式B-4-2化合物在例如醋酸/水條件下選擇性脫除一級醇上的保護基，得到式B-4化合物

其中B₂、R₂、R₂’、P1、P2和P4如上文對式A或式B化合物所定義。

式D化合物可如下製備：

將式B化合物與(-)-PSI試劑在鹼、例如DBU存在下反應，

得到式D化合物

其中B₂、R₂、R₂’、P₂、P₃以及P₄如上文對式B化合物所定義。

以下流程9舉例說明了可用於製備本文所定義的式(I-b)、(II-b)、(III-b)、(IV-b)化合物及其各個具體實施方式的一種通用合成路線。以下流程中的通式的各變量具有與本文所定義化合物或其各個具體實施方式中相同的含義，另有說明除外。

流程9

其中X各自獨立地為羥基或者巰基；R¹、R¹’、B₁和B₂各自如上文對式(I-b)、(II-b)、(III-b)、(IV-b)及其各個子通式及具體實施方式所定義；P₁和P₂是合適的羥基保護基，P₃和P₄是適合的羥基或胺基保護基，包括但不限於TBS(三級丁基二甲基矽烷基)、DMTr(雙(4-甲氧基苯基)苯甲基)、Bz(苯甲醯基)、^i-BuCO(異丁醯基)。P₅是適合的磷酸/磷酸酯上的羥基或巰基保護基，包括但不限於腈乙基。

本發明化合物的上述合成流程中所用脫保護在酸性條件(包括但不限於如醋酸/水、三氟醋酸/水等)、鹼性條件(包括但不限於如氨水、胺/甲醇溶液、甲胺/乙醇溶液、氫氧化鋰等)或者含氟負離子化合物(包括但不限於如四丁基氟化銨、三乙胺三氫氟酸鹽、氟化銨等)存在條件下進行。本發明化合物合成流程中所用氧化條件在包括但不限於碘存在下進行，硫化條件在包括並不限於3H-1,2-苯并二磺酚-3-酮存在下進行。

流程10舉例說明流程9中的式J化合物的合成路線，以及其中所進一步使用的中間體的合成。

流程10

流程11舉例說明式K化合物的合成路線，以及其中所進一步使用的中間體的合成。

流程11

將式J化合物

其中B₁、R₁、R₁’具有上文對本發明式(I-b)、(II-b)、(III-b)、(IV-b)化合物或其各個具體實施方式所定義的含義；P3為適合的羥基保護基，例如但不限於TBS(三級丁基二甲基矽烷基)、DMTr(雙(4-甲氧基苯基)苯甲基)、Bz(苯甲醯基)、^i-BuCO(異丁醯基)，

與式K化合物在鹼(例如DBU)存在下反應，

其中B₂具有上文對本發明式(I-b)、(II-b)、(III-b)、(IV-b)化合物或其各個具體實施方式所定義的含義；P1、P2為適合的羥基保護基，P4為適合的羥基或胺基保護基，例如但不限於TBS(三級丁基二甲基矽烷基)、DMTr(雙(4-甲氧基苯基)苯甲基)、Bz(苯甲醯基)、^i-BuCO(異丁醯基)，

或者將式J化合物與式L化合物在四唑存在下反應，並經氧化或者硫化，其中氧化條件包括但不限於使用碘、三級丁基過氧化氫等，硫化條件包括但不限於使用N,N-二甲基-N’-(3-硫代-3H-1,2,4-二噻唑-5-基)甲咪(DDTT)、3H-1,2-苯并二磺酚-3-酮等；保護基團的引入和脫除根據所屬技術領域具有通常知識者熟知的標準方法進行，

其中B₂、P1、P2和P4如以上對式K化合物所定義；

得到式M化合物，

其中X為OH或SH，P₅是適合的磷酸/磷酸酯上的羥基或巰基保護基，例如但不限於腈乙基；

將以上式M化合物例如在氫氧化鋰條件下選擇性的脫保護，得到式N化合物

其中各個基團具有以上所定義的含義；

a)將式N化合物與(+)-PSI試劑或(+)-PSI試劑在鹼、例如DBU存在下反應，得到式O化合物，

然後在醋酸/水溶液中脫P1(例如DMTr)保護，得到式P化合物，

將式P化合物在鹼、例如DBU存在下關環，得到環二核苷式Q化合物，

然後在氟化銨等條件下脫P4(例如TBS)保護，得到式(I-b)、(II-b)、(III-b)或(IV-b)的環二核苷化合物，其中R²為OH且R²’為H，

其中各個基團具有以上所定義的含義；

b)或者將式N化合物與亞磷酸二苯酯在鹼、例如DBU存在下反應，得到式R化合物，

然後在醋酸/水溶液中脫P1(例如DMTr)保護，得到式S化合物，

將式S化合物在活化試劑、例如特戊醯氯存在下閉環，並經氧化或者硫化，得到式Q環二核苷化合物

其中各個基團具有上文所定義的含義。

式J化合物可如下製備：

將式C化合物在鹼、例如N-甲基咪唑存在下保護二級醇，

得到式J-1化合物，

將以上式J-1化合物選擇性脫保護，得到式J化合物，

其中各個基團如上文所定義。

式K化合物可如下製備：

將式K-1化合物與(+)-PSI試劑在鹼、例如DBU存在下反應，

得到式K化合物

其中各個基團如上文所定義。

以上合成方法和流程中所用的實驗材料和試劑，如無特別說明，均可從市售渠道獲得、依據現有技術的方法製得或根據與本申請公開的類似的方法製得。以上合成方法和流程中所用的合成條件，如無特別說明，可由所屬技術領域具有通常知識者常規確定。

本發明還關於如下製備方法：其中將可在本文所述各製備方法和流程中的任何步驟以中間體形式獲得的化合物，用作起始材料並且進行剩餘的方法步驟，或者其中起始材料在反應條件下原位形成或以衍生物的形式例如以被保護的形式或鹽形式使用，或者可按照本發明的方法獲得的化合物在該方法條件下生成並且被進一步原位處理。

[實施例]

下面結合實施例對本發明作進一步的說明。需要說明的是，下述實施例不能作為對本發明保護範圍的限制。

除非結構式明顯存在錯誤，否則當本發明的任意化合物的化學名稱與所給出的結構式不一致時，以結構式為准。

下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照這類反應的常規條件，或按照製造廠商所建議的條件。以下實施例中所用的實驗材料和試劑如無特別說明均可從市售渠道獲得、依據現有技術的方法製得或根據與本申請公開的類似的方法製得。

除非另外說明，否則百分比和份數是重量百分比和重量份數；液體的比為體積比；除非另有說明，所有溫度皆以攝氏度給出。

在下列實施例中，¹H NMR譜³¹P NMR譜通常是用Bruker 400MHz NMR和500MHz NMR核磁共振儀記錄，化學位移以δ(ppm)表示；質譜是用Agilent 1290液相色譜+6120B質譜LCMS液質聯用儀記錄。矽膠管柱純化採用Biotage SelektSEL-2SV或者ISO-1SV進行；製備型液相色譜純化採用Gilson 281進行(管柱：waters Xbridge 19x250mm,5μm或WELCH C18,21.2 x250mm,10μm。流動相：A：水(10mM NH₄HCO₃或0.05%甲酸)，B：乙腈(或含0.05%甲酸)。流速：20-30mL/min。檢測波長：214nm/254nm)，或另有說明。

以下合成實施例中使用如下縮寫，未列出的各個縮寫具有所屬技術領域具有通常知識者通常理解的含義。

縮寫列表

合成實施例

中間體1的製備：2-氯-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷

向2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷(2.50g,8.25mmol)的DMF溶液(15mL)中依次加入咪唑(1.12g,16.5mmol)和三級丁基二甲基氯矽烷(1.31g，8.66mmol)，所得混合物在20-25℃攪拌16小時。將反應混合液倒入水(150mL)中，用乙酸乙酯萃取兩次(每次100mL)。合併有機相，飽和食鹽水洗滌兩次(每次100mL)後用無水硫酸鈉乾燥。濃縮得到的粗產品用矽膠管柱純化，石油醚：乙酸乙酯(2：3)沖提，得到白色固體(2.53g)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.18(s,1H),7.89(brs,2H),6.33(dd,J=12.0,4.8Hz,1H),6.00(d,J=4.8Hz,1H),5.28(dt,J=52,4.8Hz,1H),4.50-4.30(m,1H),3.98-3.73(m,3H),0.89(s,9H),0.07(s,6H)。

中間體2的製備：(2S,3aR,6S,7aR)-2-((2R,3R,4S,5R)-5-(6-胺基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-((三級丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基)氧基)-3a-甲基-6-(異丙基-1-烯-2-基)六氫化苯并[d][1,3,2]氧雜硫雜磷雜環戊烷2-硫化物

向0℃的中間體1(1.00g,2.40mmol)和(+)-PSI試劑(1.39g,3.12mmol)的四氫呋喃溶液(10mL)中加入1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯(474mg,3.12mmol)，所得混合物在0-5℃攪拌1小時。將反應混合液用乙酸乙酯(50mL)稀釋。有機相依次用10%磷酸二氫鈉水溶液(50mL)和飽和食鹽水(50mL)洗滌後用無水硫酸鈉乾燥。濃縮得到的粗產品用矽膠管柱純化，石油醚：乙酸乙酯(3：7)沖提，得到白色固體(1.50g)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.09(s,1H),6.52-6.40(m,1H),6.23(brs,2H),5.55-5.40(m,1H),5.30-5.06(m,2H),4.92(s,1H),4.52-4.40(m,1H),4.20-4.12(m,1H),4.08-3.90(m,2H),2.62-2.52(m,1H),2.36-2.23(m,1H),2.20-2.08(m,1H),2.02-1.80(m,3H),1.80-1.62(m,7H),0.93(s,9H),0.12(s,6H)。³¹P NMR(162MHz,CDCl₃)δ 101.9。

中間體3的製備：2-氯-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧腺苷

中間體3是採用中間體1的路線、由2’-脫氧腺苷得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.29(s,1H),7.82(brs,2H),6.26(t,J=6.4Hz,1H),5.37(d,J=4.0Hz,1H),4.45-4.32(m,1H),3.90-3.76(m,1H),3.73-3.60(m,2H),2.75-2.61(m,1H),2.37-2.25(m,1H),0.84(s,9H),0.02(s,6H)。

中間體4的製備：(2S,3aR,6S,7aR)-2-((2R,3S,5R)-5-(6-胺基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-((三級丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)四氫呋喃-3-基)氧基)-3a-甲基-6-(丙基-1-烯-2-基)六氫化苯并[d][1,3,2]氧雜硫雜磷雜環戊烷2-硫化物

中間體4是採用中間體2的路線、由中間體3和(+)-PSI試劑得到。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.65(s,1H),6.59-6.52(m,1H),5.49-5.40(m,1H),5.09(s,1H),4.92(s,1H),4.52-4.40(m,2H),4.25-4.12(m,2H),3.96(s,2H),2.90-2.81(m,1H),2.69-2.56(m,2H),2.20-2.08(m,2H),2.02-1.80(m,3H),1.80-1.62(m,7H),0.91(s,9H),0.14(s,6H)。³¹P NMR(162MHz,CDCl₃)δ 100.6。

中間體5的製備：5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷

中間體5是採用中間體1的路線、由2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 7.63(d,J=7.6Hz,1H),7.37(brs,2H),6.29(d,J=6.8Hz,1H),6.14(t,J=7.6Hz,1H),5.75(d,J=7.6Hz,1H),4.15-4.02(m,1H),3.98-3.73(m,3H),0.90(s,9H),0.09(s,6H)。MS-ESI[M+H]⁺：378.2。

中間體6的製備：4-胺基-1-((2R,4R,5R)-5-((三級丁基二甲基矽烷基(氧基)甲基)-3,3-二氟-4-(((2S,3aR,6S,7aR)-3a-甲基-6-(丙基-1-烯-2-基)-2-硫代六氫苯并[d][1,3,2]氧雜硫雜磷雜環戊烷-2-基)氧基)四氫呋喃-2-基)嘧啶-2(1H)-酮

中間體6是採用中間體2的路線、由中間體5和(+)-PSI試劑得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 7.73(d,J=8.0Hz,1H),6.34(t,J=8.0Hz,1H),6.21(d,J=8.0Hz,1H),5.36-5.24(m,1H),5.04(s,1H),4.87(s,1H),4.55-4.43(m,1H),4.17-4.06(m,1H),4.05-3.86(m,2H),2.66-2.52(m,1H),2.30-2.05(m,2H),2.02-1.80(m,3H),1.80-1.62(m,7H),0.92(s,9H),0.13(s,3H),0.12(s,3H)。 ³¹P NMR(162MHz,CDCl₃)δ 103.0。MS-ESI[M+H]⁺：624.2。

中間體7的製備：N4-(2-丙基戊醯基)-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷

向0℃的2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷鹽酸鹽(2.00g,6.67mmol)的吡啶溶液(20mL)中逐滴加入三甲基氯矽烷(3.61g,33.4mmol)，所得混合物在0-5℃攪拌2小時。同時，向2-丙基戊酸(1.06g,7.33mmol)的乙腈溶液(20mL)中分批加入羰基二咪唑(1.19g,7.33mmol)，所得混合物在25℃攪拌2小時。然後，將所得的乙腈混合液逐滴加入到之前0℃的吡啶混合液中，所得混合物在45℃攪拌16小時。向以上混合液中加入乙醇(20mL)，45℃攪拌0.5小時。然後向以上混合液中加入水(20mL)，45℃攪拌1小時。將所得反應液旋乾後用水(50mL)稀釋。用2N的鹽酸水溶液將以上混合液的pH調至2-3，用乙酸乙酯萃取兩次(每次50mL)。合併有機相，用水洗滌兩次(每次50mL)後用無水硫酸鈉乾燥。濃縮得到的粗產品用矽膠管柱純化，石油醚：乙酸乙酯(2：3)沖提，得到白色固體(1.20g)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 11.06(brs,1H),8.25(d,J=8.0Hz,1H),7.33(d,J=8.0Hz,1H),6.32(d,J=8.0Hz,1H),6.17(t,J=8.0Hz,1H),5.32-5.25(m,1H),4.25-4.10(m,1H),3.97-3.75(m,2H),3.70-3.58(m,1H),2.70-2.55(m,1H),1.56-1.42(m,2H),1.38-1.10(m,6H),0.85(t,J=7.6Hz,6H)。MS-ESI[M+H]⁺：390.2。

中間體8的製備：N4-(2-丙基戊醯基)-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷

中間體8是採用中間體1的路線、由中間體7得到。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 9.07(brs,1H),8.27(brs,1H),7.51(d,J=8.0Hz,1H),6.45-6.30(m,1H),4.46-4.33(m,1H),4.12-4.00(m,2H),3.91(dd,J=8.0,2.4Hz,1H),2.25-2.12(m,1H),1.71-1.60(m,2H),1.56-1.42(m,2H),1.40-1.25(m,4H),1.05-0.85(m,15H),0.13(s,6H)。

中間體9的製備：N-(1-((2R,4R,5R)-5-((三級丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)-3,3-二氟-4-(((2S,3aR,6S,7aR)-3a-甲基-6-(丙基-1-烯-2-基)-2-硫代六氫苯并[d][1,3,2]氧雜硫雜磷雜環戊烷-2-基)氧基四氫呋喃-2-基)-2-側氧-1,2-二氫嘧啶-4-基)-2-丙基戊醯胺

中間體9是採用中間體2的路線、由中間體8和(+)-PSI試劑得到。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 9.63(brs,1H),8.29-8.15(m,1H),7.60-7.48(m,1H),6.48-6.39(m,1H),5.40-5.25(m,1H),5.04(s,1H),4.88(s,1H),4.55-4.45(m,1H),4.28-4.05(m,1H),4.00-3.88(m,2H),2.65-2.55(m,1H),2.46-2.35(m,1H),2.33-2.23(m,1H),2.20-1.80(m,5H),1.79-1.60(m,8H),1.58-1.45(m,2H),1.45-1.25(m,4H),0.98-0.85(m,15H),0.15(d,J=4.0Hz,6H)。

中間體10的製備：N6-雙(4-甲氧基苯基)苯甲基-2-氯-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基3’-雙(4-甲氧基苯基)苯甲基-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷

向中間體1(1.53g,3.67mmol)的吡啶溶液(10mL)中加入雙(4-甲氧基苯基)苯甲基氯(1.49g,4.40mmol)，所得混合物25℃攪拌2小時。然後再依次加入雙(4-甲氧基苯基)苯甲基氯(497mg,1.47mmol)和1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯(669mg,4.40mmol)，所得混合物在20-25℃攪拌16小時。再依次加入雙(4-甲氧基苯基)苯甲基氯(1.49g,4.40mmol)和1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯(669mg,4.40mmol)，所得混合物在20-25℃攪拌24小時。將反應混合液濃縮後用乙酸乙酯(100mL)稀釋。有機相用飽和食鹽水洗滌兩次(每次100mL)後用無水硫酸鈉乾燥。濃縮得到的粗產品用矽膠管柱純化，石油醚：乙酸乙酯(5：1)沖提，得到白色固體(2.60g)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.00(s,1H),7.95(s,1H),7.50-7.10(m,18H),6.90-6.78(m,8H),6.33-6.20(m,1H),4.46-4.30(m,2H),4.25-4.15(m,1H),3.76-3.68(m,12H),3.55-3.49(m,2H),0.76(s,9H),-0.08(s,3H),-0.11(s,3H)。

中間體11的製備：N6-雙(4-甲氧基苯基)苯甲基-2-氯-3’-雙(4-甲氧基苯基)苯甲基-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷

向中間體10(2.60g,2.55mmol)的四氫呋喃溶液(15mL)中加入四丁基氟化銨(1.33g,5.10mmol)，所得混合物25℃攪拌1小時。將反應混合液濃縮後用乙酸乙酯(30mL)稀釋。有機相用水(30mL)洗滌後用無水硫酸鈉乾燥。濃縮得到的粗產品用矽膠管柱純化，石油醚：乙酸乙酯(2：3)沖提，得到白色固體(1.20g)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.17(d,J=2.4Hz,1H),7.97(s,1H),7.50-7.10(m,18H),6.90-6.78(m,8H),6.30-6.18(m,1H),4.86(t,J=6.0Hz,1H),4.30-4.10(m,3H),3.76-3.68(m,12H),3.49-3.30(m,2H)。

中間體12的製備：N6-雙(4-甲氧基苯基)苯甲基-2-氯-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基3’-雙(4-甲氧基苯基)苯甲基-2’-脫氧腺苷

向中間體3(1.80g,4.51mmol)的吡啶溶液(10mL)中依次加入雙(4-甲氧基苯基)苯甲基氯(3.81g,11.3mmol)和1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯(743mg,11.3mmol)，所得混合物在20-25℃攪拌16小時。將反應混合液濃縮後倒入水(100mL)中，用乙酸乙酯萃取兩次(每次50mL)。合併有機相，飽和食鹽水洗滌兩次(每次50mL)後用無水硫酸鈉乾燥。濃縮得到的粗產品用矽膠管柱純化，石油醚：乙酸乙酯(3：7)沖提，得到白色固體(2.50g)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.19(s,1H),7.83(s,1H),7.50-7.10(m,18H),6.95-6.78(m,8H),6.28-6.18(m,1H),4.36-4.28(m,1H),4.00-3.88(m,1H),3.80-3.65(m,12H),3.50-3.41(m,1H),3.40-3.30(m,1H),2.33-2.25(m,1H),1.88-1.76(m,1H),0.71(s,9H),-0.14(s,6H)。

中間體13的製備：N6-雙(4-甲氧基苯基)苯甲基-2-氯-3’-雙(4-甲氧基苯基)苯甲基-2’-脫氧腺苷

中間體13是採用中間體11的路線、由中間體12得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.32(s,1H),7.87(s,1H),7.50-7.10(m,18H),6.95-6.77(m,8H),6.24(t,J=6.8Hz,1H),4.83(brs,1H),4.39-4.28(m,1H),3.85-3.65(m,13H),3.22-3.12(m,1H),2.35-2.21(m,1H),1.88-1.70(m,1H)。

中間體14的製備：3’-5’-二-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷

向2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷鹽酸鹽(3.00g,10.0mmol)的DMF溶液(50mL)中依次加入咪唑(3.41g,50.0mmol)和三級丁基二甲基氯矽烷(4.53g，30.0mmol)，所得混合物在20-25℃攪拌2小時，然後60℃攪拌16小時。將反應混合液倒入乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)的混合物中。分離有機相，依次用水(100mL)和飽和食鹽水(100mL)洗滌後用無水硫酸鈉乾燥。濃縮得到的粗產品用矽膠管柱純化，用二氯甲烷：甲醇(9：2)沖提，得到白色固體(2.70g)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 7.53(d,J=7.6Hz,1H),7.40(brs,2H),6.17(t,J=8.0Hz,1H),5.78(d,J=7.6Hz,1H),4.40-4.22(m,1H),3.98-3.83(m,2H),3.78-3.70(m,1H),1.00-0.75(m,18H),0.15-0.00(m,12H)。

中間體15的製備：3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷

0℃下，將中間體14(1.00g,2.04mmol)溶於四氫呋喃溶液(10mL)、三氟乙酸(5mL)和水(5mL)的混合物中，在0-5℃攪拌2小時。將反應混合液的pH用飽和碳酸氫鈉水溶液調至約9，然後倒入乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)的混合物中。分離有機相，用飽和食鹽水(50mL)洗滌後用無水硫酸鈉乾燥。濃縮得到的粗產品用矽膠管柱純化，用乙酸乙酯：甲醇(17：3)沖提，得到白色固體(620mg)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 7.67(d,J=7.6Hz,1H),7.50-7.35(m,2H),6.14(t,J=8.0Hz,1H),5.79(d,J=7.6Hz,1H),5.26(d,J=7.6Hz,1H),4.40-4.22(m,1H),3.86-3.72(m,2H),3.68-3.50(m,1H),0.88(s,9H),0.11(s,3H),0.10(s,3H)。MS-ESI[M+H]⁺：378.2。

中間體16的製備：N4-(2-丙基-戊醯基)-3’-5’-二-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷

25℃下，向2-丙基戊酸(322mg,2.24mmol)的乙腈溶液(5mL)中加入羰基二咪唑(363mg,2.24mmol)，所得混合物在25℃攪拌2小時。所得混合物逐滴加入到0℃的中間體14(1.0g,2.03mmol)的吡啶(10ml)溶液中。所得混合物在45℃攪拌16小時，將所得反應液旋乾後用水(20mL)稀釋，用乙酸乙酯萃取兩次(每次30mL)。合併有機相，用水洗滌兩次(每次50mL)後用無水硫酸鈉乾燥。濃縮得到的粗產品用矽膠管柱純化，用石油醚：乙酸乙酯(1：1)，得到白色固體(430mg)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.09(d,J=7.6Hz,1H),7.49(d,J=7.6Hz,1H),6.33(d,J=10.0Hz,1H),4.39-4.29(m,1H),4.02(d,J=12.0Hz,1H),3.96(d,J=7.6Hz,1H),3.81(d,J=11.2Hz,1H),2.50-2.30(m,1H),1.49-1.44(m,2H),1.33(q,J=7.6Hz,6H),0.99-0.80(m,24H),0.13(s,9H),0.10(s,3H)。MS-ESI[M+H]⁺：619.4。

中間體17的製備：N4-(2-丙基-戊醯基)-3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷

中間體17是採用中間體15的路線、由中間體16得到。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.38(s,1H),8.00(d,J=7.6Hz,1H),7.50(d,J=7.6Hz,1H),6.25(t,J=7.6Hz,1H),4.49-4.40(m,1H),4.08(d,J=12.4Hz,1H),4.02-3.90(m,1H),3.88-3.75(m,1H),2.51(s,1H),2.40-2.30(m,1H),1.75-1.55(m,2H),1.52-1.41(m,2H),1.38-1.28(m,4H),0.95-0.85(m,15H),0.14(d,J=2.8Hz,6H)。MS-ESI[M+H]⁺：504.2。

中間體18：5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-三級丁基二甲基矽烷基-腺苷，和

中間體19：5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-3’-三級丁基二甲基矽烷基-腺苷

向腺苷(3.35g,12.5mmol)的四氫呋喃溶液(40mL)中在室溫(10℃)下依次加入三乙烯二胺(7.0g,62.5mmol)和硝酸銀(5.08g,28.8mmol)。此混合物在室溫(10℃)下攪拌30min，然後加入三級丁基二甲基氯矽烷(4.71g，30mmol)，所得混合物在10℃攪拌16小時。將反應混合液藉由矽藻土過濾，濾液用水(50mL)淬滅，然後乙酸乙酯萃取兩次(每次50mL)。合併有機相，飽和食鹽水洗滌兩次(每次100mL)後用無水硫酸鈉乾燥。濃縮得到的粗產品用矽膠管柱純化，用石油醚：乙酸乙酯(1：1)沖提得到中間體18(1.0g，白色固體)。用乙酸乙酯沖提，得到中間體19(4.4g，白色固體)。

中間體18：

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.35(s,1H),8.24(s,1H),6.11(d,J=4.8Hz,1H),5.72(brs,2H),4.64(t,J=4.8Hz,1H),4.31-4.26(m,1H),4.24-4.20(m,1H),4.02(dd,J=11.6,2.8Hz,1H),3.87(dd,J=11.6,2.8Hz,1H),2.76(d,J=3.6Hz,1H),0.96(s,9H),0.84(s,9H),0.18-0.11(m,6H),-0.05(s,3H),-0.12(s,3H)。

中間體19：

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.35(s,1H),8.10(s,1H),6.03(d,J=3.6Hz,1H),5.75(brs,2H),4.56(d,J=1.6Hz,1H),4.12(d,J=2.8Hz,1H),3.92(dd,J=11.6,3.6Hz,1H),3.77(dd,J=11.2,2.8Hz,1H),3.31(brs,1H),0.95(s,9H),0.90(s,9H),0.17(s,6H),0.06(s,3H),-0.01(s,3H)。

中間體20的製備：N4-苯甲醯基-2’-5’-二-O-三級丁基二甲基矽烷基-3’-苯甲醯基-腺苷

向中間體18(500mg,1.01mmol)和N-甲基咪唑(248mg,3.03mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中在室溫(25℃)下滴加入苯甲醯氯(354.4mg,2.52mmol)。所得的混合物液在室溫下反應16小時。將反應液用水(20mL)淬滅，有機相分離，水相用二氯甲烷萃取兩次(每次20mL)。有機相合併後用飽和食鹽水洗滌一次(20mL)，然後用無水硫酸鈉乾燥。濃縮得到的粗產品用矽膠管柱純化，用石油醚：乙酸乙酯(1：1)沖提，得到白色固體(400mg)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 9.36(s,1H),8.85(s,1H),8.48(s,1H),8.15-8.10(m,2H),8.08-8.05(m,2H),7.70-7.55(m,2H),7.55-7.47(m,4H),6.33(d,J=6.0Hz,1H),5.63-5.50(m,1H),4.89(d,J=1.2Hz,1H),4.48(d,J=2.4Hz,1H),4.05(d,J=2.4Hz,1H),4.00(d,J=2.4Hz,1H),0.99(s,9H),0.65(s,9H),0.19(d,J=4.4Hz,6H),-0.10(s,3H),-0.26(s,3H)。MS-ESI[M+H]⁺：704.3。

中間體21的製備：N4-苯甲醯基-2’-O-三級丁基二甲基矽烷基-3’-苯甲醯基-腺苷

中間體21是採用中間體15的路線、由中間體20得到。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ 8.86(s,1H),8.17-8.09(m,3H),8.08-8.03(m,2H),7.66-7.60(m,2H),7.55(t,J=7.6Hz,2H),7.50(t,J=7.6Hz,2H),5.97(d,J=7.6Hz, 1H),5.75(d,J=5.2Hz,1H),5.27(dd,J=7.6,5.2Hz,1H),4.51(s,1H),4.08-4.03(m,1H),3.93(d,J=12.8Hz,1H),0.62(s,9H),-0.10(s,3H),-0.43(s,3H)。MS-ESI[M+H]⁺：591.2。

中間體22的製備：N4-苯甲醯基-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-3’-三級丁基二甲基矽烷基-2’-苯甲醯基-腺苷

中間體22是採用中間體20的路線、由中間體19和苯甲醯氯得到。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 9.02(brs,1H),8.83(s,1H),8.41(s,1H),8.08-7.99(m,4H),7.64-7.49(m,4H),7.47-7.39(m,2H),6.54(d,J=6.0Hz,1H),5.81(t,J=5.6Hz,1H),4.84(dd,J=4.8,3.6Hz,1H),4.26(dd,J=6.0,3.2Hz,1H),4.02(dd,J=11.6,3.2Hz,1H),3.85(dd,J=11.6,2.8Hz,1H),0.95(s,9H),0.84(s,9H),0.18-0.11(m,6H),0.03- -0.05(m,6H)。

中間體23的製備：N4-苯甲醯基-3’-三級丁基二甲基矽烷基-2’-苯甲醯基-腺苷

中間體23是採用中間體15的路線、由中間體22得到。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 9.08(brs,1H),8.84(s,1H),8.18(s,1H),8.08-7.98(m,4H),7.67-7.41(m,6H),6.32(d,J=7.6Hz,1H),6.01(dd,J=7.6,5.2Hz,1H),4.94(d,J=5.2Hz,1H),4.35(d,J=0.8Hz,1H),4.07(dd,J=13.2,1.6Hz,1H),3.84(d,J=12.4Hz,1H),0.89(s,9H),0.11(s,3H),0.00(s,3H)。

中間體24的製備：N2-異丁醯基-5’-O-雙(4-甲氧基苯基)苯甲基-3’-O-苯甲醯基-2’-O-三級丁基二甲基矽烷基-鳥苷

中間體24是採用中間體20的路線、由N2-異丁醯基-5’-O-雙(4-甲氧基苯基)苯甲基-2’-O-三級丁基二甲基矽烷基-鳥苷得到。MS-ESI[M+H]⁺：874.3。

中間體25的製備：N2-異丁醯基-3’-O-苯甲醯基-2’-O-三級丁基二甲基矽烷基-鳥苷

將中間體24(5.50g,6.30mmol)溶於冰醋酸(60mL)和水(10mL)的混合物中，在25℃攪拌2小時。反應混合液旋乾後用乙酸乙酯共蒸兩次(每次25mL)。粗產品用矽膠管柱純化，乙酸乙酯沖提，得到白色固體(2.2g)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 12.15(brs,1H),8.35(s,1H),8.15-8.02(m,2H),7.74(s,1H),7.68-7.56(m,1H),7.55-7.42(m,2H),5.80(d,J=7.6Hz,1H),5.66(dd,J= 5.6,1.2Hz,1H),5.52(d,J=9.2Hz,1H),4.98(dd,J=7.2,5.6Hz,1H),4.45(d,J=1.2Hz,1H),4.06-3.82(m,2H),2.78-2.62(m,1H),1.35-1.25(m,6H),0.66(s,9H),-0.09(s,3H),-0.33(s,3H)。MS-ESI[M+H]⁺：572.3。

中間體26的製備：N2-異丁醯基-5’-O-雙(4-甲氧基苯基)苯甲基-3’-三級丁基二甲基矽烷基-2’-苯甲醯基-鳥苷

中間體26是採用中間體20的路線、由N2-異丁醯基-5’-O-雙(4-甲氧基苯基)苯甲基-3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-鳥苷得到。MS-ESI[M+H]⁺：874.3。

中間體27的製備：N2-異丁醯基-3’-三級丁基二甲基矽烷基-2’-苯甲醯基-鳥苷

中間體27是採用中間體25的路線、由中間體26得到。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 12.06(brs,1H),8.24(brs,1H),8.01-7.96(m,2H),7.83(s,1H),7.62-7.55(m,1H),7.43(d,J=8.0Hz,2H),6.13(d,J=7.2Hz,1H),5.81(dd,J=7.2,5.6Hz,1H),4.80(dd,J=4.8,1.6Hz,1H),4.30-4.25(m,1H),4.02(dd,J=12.8,2.0Hz,1H),3.78(d,J=12.4Hz,1H),2.71-2.60(m,1H),1.30-1.28(m,6H),0.83(s,9H),0.07(s,3H),0.00(s,3H)。

中間體28的製備：2’-5’-二-O-三級丁基二甲基矽烷基-鳥苷

中間體28是採用中間體18的路線、由鳥嘌呤核苷得到。MS-ESI[M+H]⁺：513.3。

中間體29的製備：2’-5’-二-O-三級丁基二甲基矽烷基-3’-苯甲醯基-鳥苷

中間體29是採用中間體20的路線、由中間體28得到。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 12.04(brs,1H),8.14-8.09(m,2H),7.94(s,1H),7.61(t,J=7.6Hz,1H),7.49(t,J=7.6Hz,2H),6.09(s,2H),6.00(d,J=6.0Hz,1H),5.53(s,1H),4.76(t,J=5.6Hz,1H),4.41(d,J=2.8Hz,1H),4.01(d,J=11.6Hz,1H),3.93(dd,J=11.6,2.4Hz,1H),0.97(s,9H),0.70(s,9H),0.16(d,J=3.2Hz,6H),-0.09(s,3H),-0.16(s,3H)。MS-ESI[M-H]^-：615.3。

中間體30的製備：2’-O-三級丁基二甲基矽烷基-3’-苯甲醯基-鳥苷

中間體30是採用中間體15的路線、由中間體29得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.71(brs,1H),8.05(d,J=7.2Hz,3H),7.75-7.68(m,1H),7.59(t,J=7.6Hz,2H),6.51(s,2H),5.84(d,J=7.6Hz,1H),5.58(dd,J=5.6,1.6Hz,1H),5.42(t,J=5.6Hz,1H),4.96(dd,J=7.6,5.2Hz,1H),4.39-4.25(m,1H),4.20-4.00(m,1H),0.57(s,9H),-0.12(s,3H),-0.29(s,3H)。MS-ESI[M-H]^-：501.3。

中間體31的製備：3’-5’-二-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’-氟腺苷

向2’-脫氧-2’-氟腺苷(1.10g,4.09mmol)的DMF溶液(10mL)中加入咪唑(1.81g,26.6mmol)和4-二甲胺基吡啶(50mg,0.41mmol)，然後加入三級丁基二甲基氯矽烷(2.16g，14.3mmol)，所得混合物在15-20℃攪拌16小時。將反應混合液倒入水(100mL)中，用乙酸乙酯萃取兩次(每次100mL)。合併有機相，用飽和食鹽水(100mL)洗滌兩次後用無水硫酸鈉乾燥。濃縮得到的粗產品用矽膠管柱純化，用石油醚：乙酸乙酯(3：2)沖提，得到白色固體(1.90g)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.35(s,1H),8.12(s,1H),6.25(dd,J=16.0,2.4Hz,1H),5.66(brs,2H),5.48-5.20(m,1H),4.79-4.62(m,1H),4.18-3.95(m,2H),3.85-3.72(m,1H),1.00-0.80(m,18H),-0.05-0.18(m,12H).MS-ESI[M+H]⁺：498.4。

中間體32的製備：3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’-氟腺苷

中間體31是採用中間體15的路線、由中間體31得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.37(s,1H),8.14(s,1H),7.38(brs,2H),6.22(dd,J=16.4,3.6Hz,1H),5.70-5.40(m,1H),5.29(t,J=5.6Hz,1H),4.80-4.62(m,1H),4.02-3.90(m,1H),3.79-3.68(m,1H),3.63-3.48(m,1H),0.90(s,9H),0.14(s,3H),0.13(s,3H)。

中間體33的製備：(2R,3aS,6R,7aS)-2-((2R,3R,4R,5R)-5-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-3-((三級丁基二甲基矽烷基)氧基)-4-氟四氫呋喃-2-基)甲氧基)-3a-甲基-6-(丙基-1-烯-2-基)六氫化苯并[d][1,3,2]氧雜硫雜磷雜環戊烷2-硫化物

中間體33是採用中間體2的路線、由中間體32和(-)-PSI試劑得到。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.36(s,1H),8.05(s,1H),6.30-6.18(m,1H),5.58(brs,2H),5.50-5.22(m,1H),4.80-4.62(m,3H),4.50-4.25(m,4H),2.59-2.48(m,1H),2.33-2.20(m,1H),2.15-2.02(m,1H),1.99-1.76(m,3H),1.75-1.55(m,7H),0.93(s,9H),0.19(s,3H),0.15(s,3H)。

中間體34的製備：3’-5’-二-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’-氟-鳥苷

中間體34是採用中間體31的路線、由2’-脫氧-2’-氟鳥苷得到。

1H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.69(brs,1H),7.84(s,1H),6.52(brs,2H),6.00(d,J=16.8Hz,1H),5.36(d,J=52.0Hz,1H),4.62-4.45(m,1H),3.98-3.86(m,2H),3.74(d,J=11.6Hz,1H),0.93-0.85(m,18H),0.20-0.00(m,12H)。MS-ESI[M+H]⁺：515.3。

中間體35的製備：3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’-氟-鳥苷

中間體35是採用中間體15的路線、由中間體34得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.71(brs,1H),7.97(s,1H),6.56(s,2H),5.36(dd,J=52.5,5.0Hz,1H),5.20(s,1H),4.52(dd,J=12.6,6.4Hz,1H),3.96-3.89(m,1H),3.70(d,J=12.0Hz,1H),0.89(s,9H),0.12(s,6H)。MS-ESI[M+H]⁺：401.2。

中間體36的製備：2-胺基-9-((2R,3R,4R,5R)-4-((三級丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-氟-5-((((2R,3aS,6R,7aS)-3a-甲基-6-(丙基-1-烯-2-基)-2-硫代六氫苯并[d][1,3,2]氧雜硫雜磷雜環戊烷-2-基)氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

中間體36是採用中間體2的路線、由中間體35和(-)-PSI試劑在DMF中得到。MS-ESI[M+H]⁺：646.4。

中間體37的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]-(3’,5’)-[N6-雙(4-甲氧基苯基)苯甲基-2-氯-3’-雙(4-甲氧基苯基)苯甲基-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]

向中間體2(280mg,0.422mmol)和中間體11(383mg,0.422mmol)的乙腈溶液(3mL)中加入1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯(192mg,1.27mmol)，所得混合物在25℃攪拌1小時。將反應混合液用乙酸乙酯(25mL)稀釋。有機相依次用水(25mL)和飽和食鹽水(25mL)洗滌後用無水硫酸鈉乾燥。濃縮得到的粗產品用矽膠管柱純化，用乙酸乙酯：甲醇(7：3)沖提，得到白色固體(260mg)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.26(s,1H),8.08(s,1H),7.91(brs,3H),7.45-7.10(m,18H),6.95-6.76(m,8H),6.32-6.15(m,2H),5.40-5.18(m,2H),5.00-4.80(m,2H),4.40-4.02(m,3H),3.85-3.62(m,15H),0.84(s,9H),0.01(s,6H)。

中間體38的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧腺苷]-(3’,5’)-[N6-雙(4-甲氧基苯基)苯甲基-2-氯-3’-雙(4-甲氧基苯基)苯甲基-2’-脫氧腺苷]

中間體38是採用中間體37的路線、由中間體4和中間體13在四氫呋喃和乙腈的混合溶液中得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.68(s,1H),8.22(s,1H),7.82(brs,2H),7.75(s,1H),7.42(d,J=8.0Hz,2H),7.39-7.10(m,16H),6.95-6.78(m,8H),6.32-6.10(m,2H),4.90-4.80(m,1H),4.43-4.36(m,1H),4.15-4.08(m,1H),3.85-3.40(m,17H),2.50-2.20(m,4H),0.81(s,9H),0.00(s,3H),-0.02(s,3H)。

中間體39的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷]-(3’,5’)-[3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷]

中間體39是採用中間體37的路線、由中間體6和中間體15在四氫呋喃和乙腈的混合溶液中得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 9.58(brs,1H),7.79-7.60(m,2H),7.48-7.25(m,4H),6.28-6.05(m,2H),5.76(dd,J=7.6,1.6Hz,2H),5.00-4.85(m,1H),4.38-4.25(m,1H),4.15-3.80(m,6H),0.95-0.80(m,18H),0.18-0.00(m,12H)。

中間體40的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-N4-(2-丙基戊醯基)-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷]-(3’,5’)-[N4-(2-丙基戊醯基)-3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷]

中間體40是採用中間體37的路線、由中間體17和中間體9得到。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d ₆)δ 11.07(brs,1H),11.02(brs,1H),8.32(d,J=7.6Hz,1H),8.24(d,J=7.6Hz,1H),7.36-7.30(m,2H),6.28-6.15(m,2H),4.97(t,J=10.4Hz,1H),4.40-4.30(m,1H),4.17(s,1H),4.08(q,J=9.1,8.5Hz,2H),4.04*3.99(m,2H),3.93(t,J=7.8Hz,1H),2.62(d,J=3.2Hz,2H),1.60-1.45(m,4H),1.42-1.27(m,4H),1.25-1.20(m,9H),1.00-0.75(m,30H),0.11(d,J=3.0Hz,6H),0.05(s,3H),0.02(s,3H)。

中間體41的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]-(3’,5’)-[N6-苯甲醯基-2’-O-三級丁基二甲基矽烷基-3’-O-苯甲醯基-腺苷]

中間體41是採用中間體37的路線、由中間體21和中間體2得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 11.19(brs,1H),9.10(brs,1H),8.76(s,1H),8.12(d,J=2.4Hz,1H),8.05(dd,J=7.6,2.0Hz,4H),7.89(s,2H),7.75-7.61(m,2H),7.60-7.45(m,4H),6.33(dd,J=18.0,4.0Hz,1H),6.23(d,J=7.2Hz,1H),5.77(d,J=5.2Hz,1H),5.30(dd,J=7.6,5.2Hz,1H),5.04(s,1H),4.53(s,1H),4.21(t,J=10.0Hz,1H),4.18-4.08(m,3H),4.00-3.92(m,1H),3.92-3.85(m,1H),0.85(s,9H),0.49(s,9H),0.05(s,6H),-0.12(s,3H),-0.42(s,3H)。MS-ESI[(M+2H)/2]⁺：543.7。

中間體42的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧腺苷]-(3’,5’)-[N6-苯甲醯基-2’-O-三級丁基二甲基矽烷基-3’-O-苯甲醯基-腺苷]

中間體42是採用中間體37的路線、由中間體21和中間體4得到。MS-ESI[(M+H)]⁺：1067.2。

中間體43的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]-(3’,5’)-[N6-苯甲醯基-3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-O-苯甲醯基-腺苷]

中間體43是採用中間體37的路線、由中間體23和中間體2在N,N’-二甲基甲醯胺溶液中得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 11.23(brs,1H),8.96(s,1H),8.76(s,1H),8.11(d,J=2.4Hz,1H),8.02(d,J=7.6Hz,2H),7.88(d,J=7.6Hz,4H),7.64(dd,J=6.8,6.0Hz,2H),7.65-7.45(m,4H),6.51(d,J=5.6Hz,1H),6.32(dd,J=18.8,3.6Hz,1H),5.92(t,J=5.6Hz,1H),5.55-5.30(m,1H),5.11-4.98(m,1H),4.83(t,J=4.0Hz,1H),4.29(s,1H),4.28-4.15(m,1H),4.15-4.05(m,1H),4.00-3.89(m,2H),3.87-.80(m,1H),0.85(s,9H),0.76(s,9H),0.08(s,3H),0.04(s,6H),-0.09(s,3H)。MS-ESI[M+H]⁺：1085.3。

中間體44的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]-(3’,5’)-[N2-異丁醯基-3’-O-苯甲醯基-2’-O-三級丁基二甲基矽烷基-鳥苷]

中間體44是採用中間體37的路線、由中間體2和中間體25在DMF溶液中得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 12.59(brs,1H),12.11(brs,1H),8.37(s,1H),8.14(d,J=2.8Hz,1H),8.08-7.85(m,4H),7.80-7.50(m,3H),6.35(dd,J=18.0,4.0Hz,1H),5.92(d,J=8.0Hz,1H),5.68(d,J=5.2Hz,1H),5.55-5.38(m,2H),5.15-4.98(m,1H),4.52-4.40(m,1H),4.20-3.95(m,5H),2.90-2.80(m,1H),1.25-1.05(m,6H),0.87(s,9H),0.53(s,9H),0.07(s,6H),-0.13(s,3H),-0.38(s,3H)。MS-ESI[(M-2H)/2]^-：532.2。

中間體45的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧腺苷]-(3’,5’)-[N2-異丁醯基-3’-O-苯甲醯基-2’-O-三級丁基二甲基矽烷基-鳥苷]

中間體45是採用中間體37的路線、由中間體4和中間體25在DMF溶液中得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 12.76(brs,1H),12.12(brs,1H),8.37(s,1H),8.27(s,1H),8.03(d,J=7.6Hz,2H),7.81(brs,2H),7.70-7.50(m,3H),6.29(t,J=6.8Hz,1H),5.92(d,J=7.6Hz,1H),5.76-5.65(m,1H),5.55-5.45(m,1H),5.10-4.96(m,1H),4.47(s,1H),4.30-4.20(m,1H),4.10-3.75(m,3H),2.98-2.83(m,1H),2.81-2.55(m,2H),1.20-1.05(m,6H),0.84(s,9H),0.54(s,9H),0.03(s,6H),-0.11(s,3H),-0.36(s,3H)。MS-ESI[(M+2H)/2]⁺：525.3。

中間體46的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷]-(3’,5’)-[N2-異丁醯基-3’-O-苯甲醯基-2’-O-三級丁基二甲基矽烷基-鳥苷]

中間體46是採用中間體37的路線、由中間體6和中間體25在DMF溶液中得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 12.49(brs,1H),12.09(brs,1H),8.39(brs,1H),8.05(d,J=7.2Hz,2H),7.78-7.50(m,4H),7.40(brs,2H),6.19(t,J=8.4Hz,1H),5.91(d,J=8.0Hz,1H),5.78(d,J=7.6Hz,1H),5.66(d,J=4.8Hz,1H),5.49-5.35(m,1H),5.10-4.90(m,1H),4.45(s,1H),4.20-3.80(m,5H),2.95-2.77(m,1H),1.12(d,J=6.8Hz,6H),0.89(s,9H),0.54(s,9H),0.15-0.05(m,6H),-0.10(s,3H),-0.37(s,3H)。MS-ESI[(M+2H)/2]⁺：514.3。

中間體47的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-N4-(2-丙基戊醯基)-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷]-(3’,5’)-[2’-O-三級丁基二甲基矽烷基-3’-O-苯甲醯基-鳥苷]

中間體47是採用中間體37的路線、由中間體30和中間體9在DMF溶液中得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 11.10(brs,1H),10.60(brs,1H),8.22(d,J=7.6Hz,1H),8.16(s,1H),8.02(d,J=7.6Hz,2H),7.68(t,J=7.6Hz,1H),7.56(t,J=7.6Hz,2H),7.35(d,J=7.6Hz,1H),6.51(brs,2H),6.23(t,J=7.6Hz,1H),5.82(d,J=7.6Hz,1H),5.67(d,J=5.2Hz,1H),5.09(dd,J=7.6,5.2Hz,1H),5.02-4.95(m,1H),4.41(d,J=3.6Hz,1H),4.18-3.92(m,4H),2.70-2.55(m,1H),1.65-1.50(m,2H),1.45-1.30(m,2H),1.28-1.15(m,4H),0.96-0.88(m,12H),0.87-0.80(m,9H),0.53(s,9H),-0.11(s,3H),-0.31(s,3H)。MS-ESI[(M-2H)/2]^-：540.3。

中間體48的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]-(3’,5’)-[N2-異丁醯基-3’-三級丁基二甲基矽烷基-2’-苯甲醯基-鳥苷]

中間體48是採用中間體37的路線、由中間體27和中間體2在DMF溶液中得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 12.53(brs,1H),12.13(brs,1H),8.36(s,1H),8.14(d,J=2.8Hz,1H),7.98-7.80(m,4H),7.64(t,J=7.6Hz,1H),7.48(t,J=8.0Hz,2H),6.36(dd,J=18.0,4.0Hz,1H),6.22(d,J=7.2Hz,1H),5.88(dd,J=7.2,5.2Hz,1H),5.60--5.43(m,1H),5.19-5.05(m,1H),4.72(d,J=4.8Hz,1H),4.29-4.22(m,1H),4.22-4.09(m,2H),4.08-3.91(m,3H),2.96-2.86(m,1H),1.18-1.09(m,6H),0.87(s,9H),0.72(s,9H),0.07(s,6H),0.00(s,3H),-0.02(s,3H)。

中間體49的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-腺苷]-(3’,5’)-[N2-異丁醯基-3’-三級丁基二甲基矽烷基-2’-苯甲醯基-鳥苷]

中間體49是採用中間體37的路線、由中間體27和中間體4在-DMF溶液中得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 12.55(brs,1H),12.14(brs,1H),8.37(s,1H),8.28(s,1H),7.94-7.76(m,4H),7.65(t,J=7.6Hz,1H),7.49(t,J=8.0Hz,2H),6.33-6.21 (m,2H),5.95-5.85(m,1H),5.10-5.02(m,1H),4.75(d,J=4.8Hz,1H),4.31-4.23(m,2H),4.22-4.15(m,1H),4.14-4.09(m,1H),3.91-3.78(m,2H),2.93-2.86(m,1H),2.76-2.71(m,1H),2.68-2.60(m,1H),1.20-1.10(m,6H),0.84(s,9H),0.74(s,9H),0.07-0.00(m,9H),-0.10(s,3H)。

中間體50的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]-(3’,5’)-[3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’-氟腺苷]

中間體50是採用中間體37的路線、由中間體32和中間體2在DMF溶液中得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.49(s,1H),8.18-8.08(m,2H),7.92(brs,2H),7.34(brs,2H),6.32-6.20(m,2H),5.50(dt,J=52.0,4.4Hz,1H),5.30(d,J=52.0Hz,1H),5.05-4.94(m,1H),4.78-4.65(m,1H),4.14-4.06(m,3H),3.95-3.70(m,3H),0.90-0.75(m,18H),0.10(d,J=8.8Hz,6H),0.04(s,6H)。

中間體51的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧腺苷]-(3’,5’)-[3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’-氟腺苷]

中間體51是採用中間體37的路線、由中間體3和中間體33得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.51(s,1H),8.25(s,1H),8.13(s,1H),7.82(brs,2H),7.31(brs,2H),6.30-6.15(m,2H),5.69(dt,J=52.4,4.0Hz,1H),5.00-4.86(m,1H),4.80-4.65(m,1H),4.19-4.00(m,3H),3.99-3.85(m,1H),3.78-3.62(m,2H),2.75-2.62(m,1H),2.60-2.50(m,1H),0.88(s,9H),0.81(s,9H),0.14(s,3H),0.11(s,3H),0.00(s,3H),-0.01(s,3H)。

中間體52的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]-(3’,5’)-[3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’-氟鳥苷]

中間體52是採用中間體37的路線、由中間體1和中間體36在DMF溶液中得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.64(brs,1H),8.12(s,1H),8.05(s,1H),7.93-7.82(m,3H),6.54(brs,2H),6.36-6.25(m,1H),6.00(dd,J=14.8,4.8Hz,1H),5.58-5.28 (m,2H),5.15-4.98(m,1H),4.60-4.50(m,1H),4.15-4.00(m,3H),3.98-3.88(m,3H),0.86(s,18H),0.10-0.04(m,12H)。

中間體53的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧腺苷]-(3’,5’)-[3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-2’-脫氧-2’-氟鳥苷]

中間體53是採用中間體37的路線、由中間體3和中間體36在DMF溶液中得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.65(brs,1H),8.25(s,1H),8.05(s,1H),7.80(brs,2H),6.55(brs,2H),6.25(t,J=7.2Hz,1H),6.03-5.95(m,1H),5.47(d,J=52.0Hz,1H),4.97(s,1H),4.65-4.50(m,1H),4.19(s,1H),4.15-4.00(m,3H),3.99-3.85(m,1H),3.82(d,J=11.2Hz,1H),3.76-3.69(m,1H),2.75-2.60(m,1H),0.88(s,9H),0.80(s,9H),0.11(s,3H),0.10(s,3H),0.02(s,6H)。MS-ESI[(M-H)]^-：875.4。

中間體54的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]-(3’,5’)-[2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]

將中間體37(260mg,0.188mmol)溶於四氫呋喃(2mL)、三氟乙酸(2mL)和水(1mL)的混合物中，在25℃攪拌2小時。將反應混合液旋乾後用甲醇 (5mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液將以上混合液的pH調至約8-9。旋乾後再次用甲醇(5mL)稀釋，過濾。濃縮濾液，得到的粗產品用矽膠管柱純化，用乙酸乙酯：甲醇(7：3)沖提，得到白色固體(120mg)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.30(s,1H),8.23(s,1H),7.88(brs,4H),6.40-6.18(m,2H),6.06(d,J=5.2Hz,1H),5.45-5.12(m,2H),5.04(t,J=6.0Hz,1H),5.00-4.85(m,1H),4.50-4.40(m,1H),4.18-3.90(m,4H),3.75-3.58(m,2H)。MS-ESI[M-H]^-：682.8。

中間體55的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧腺苷]-(3’,5’)-[2-氯-2’-脫氧腺苷]

向中間體38(150mg,0.110mmol)的四氫呋喃溶液(5mL)中加入四丁基氟化銨(34mg,0.132mmol)，所得混合液在25℃攪拌3小時。將反應混合液旋乾後溶於冰醋酸(2mL)和水(0.5mL)的混合溶液，在25℃攪拌0.5小時。將反應混合液旋乾，得到的粗產品用矽膠管柱純化，用乙酸乙酯：甲醇(3：1)沖提，得到白色固體(45mg)。MS-ESI[M-H]^-：647.0。

中間體56的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷]-(3’,5’)-[2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷]

向中間體39(350mg,0.421mmol)的四氫呋喃溶液(5mL)中加入四丁基氟化銨(329mg,1.26mmol)，所得混合液在25℃攪拌2小時。將反應混合液旋乾，得到的粗產品用矽膠管柱純化，用乙酸乙酯：甲醇(3：1)沖提，得到白色固體(130mg)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 7.77(d,J=7.2Hz,1H),7.65(d,J=7.6Hz,1H),7.45-7.25(m,4H),6.30(d,J=6.4Hz,1H),6.20-6.05(m,2H),5.89-5.70(m,2H),5.13(t,J=6.0Hz,1H),4.90-4.75(m,1H),4.20-4.00(m,2H),4.00-3.60(m,5H)。

中間體57的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-N4-(2-丙基戊醯基)-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷]-(3’,5’)-[N4-(2-丙基戊醯基)-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷]

中間體57是採用中間體56的路線、由中間體40得到。MS-ESI[M+H]⁺：858.2,[(M+2H)/2]⁺：429.1。

中間體58的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]-(3’,5’)-[N6-苯甲醯基-3’-O-苯甲醯基-腺苷]

中間體58是採用中間體56的路線、由中間體41得到。MS-ESI[M+H]⁺：857.0。

中間體59的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧腺苷]-(3’,5’)-[N6-苯甲醯基-3’-O-苯甲醯基-腺苷]

中間體59是採用中間體56的路線、由中間體42得到。MS-ESI[M+H]⁺：839.0。

中間體60的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]-(3’,5’)-[N6-苯甲醯基-2’-O-苯甲醯基-腺苷]

向中間體43(250mg,0.23mmol)的四氫呋喃溶液(5mL)中加入三乙胺三氫氟酸鹽(223mg,1.38mmol)，在30℃攪拌16小時。將反應混合液用三乙胺中和至pH 7-8。將所得混合液旋乾，得到的粗產品用矽膠管柱純化，乙酸乙酯：甲醇(8：2)得到白色固體(160mg)。MS-ESI[M+H]⁺：857.1。

中間體61的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]-(3’,5’)-[N2-異丁醯基-3’-O-苯甲醯基-鳥苷]

中間體61是採用中間體60的路線、由中間體44得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 12.56(brs,1H),12.11(brs,1H),8.35-8.20(m,2H),8.10-8.00(m,2H),7.91(brs,2H),7.75-7.45(m,3H),6.38-6.18(m,1H),6.00-5.75(m,2H),5.70-5.21(m,2H),5.16-4.90(m,2H),4.50-4.36(m,1H),4.28-4.00(m,2H),3.90-3.58(m,2H),3.00-2.82(m,1H),1.36-1.05(m,6H)。MS-ESI[M-H]^-：837.0。

中間體62的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧腺苷]-(3’,5’)-[N2-異丁醯基-3’-O-苯甲醯基-鳥苷]

中間體62是採用中間體60的路線、由中間體45得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 12.72(brs,1H),12.13(brs,1H),8.34(s,1H),8.32(s,1H),8.03(d,J=7.6Hz,1H),7.98-7.81(m,3H),7.71-7.62(m,1H),7.60-7.43(m,1H),6.38-6.20(m,1H),5.99-5.70(m,2H),5.70-5.57(m,1H),5.40-5.28(m,1H),5.18- 4.93(m,2H),4.42(s,1H),4.32-4.00(m,3H),3.75-3.52(m,2H),2.93-2.81(m,1H),2.80-2.62(m,1H),1.20-1.05(m,6H)。MS-ESI[M+H]⁺：821.2。

中間體63的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷]-(3’,5’)-[N2-異丁醯基-3’-O-苯甲醯基-鳥苷]

中間體63是採用中間體60的路線、由中間體46得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 12.42(brs,1H),12.12(brs,1H),8.35(s,1H),8.08(d,J=7.6Hz,2H),7.80-7.53(m,4H),7.48-7.34(m,2H),6.24-6.12(m,1H),5.97-5.87(m,1H),5.86-5.76(m,1H),5.57(d,J=5.2Hz,1H),5.30-5.18(m,1H),5.17-5.05(m,1H),4.95-4.75(m,1H),4.41(s,1H),4.25-3.70(m,6H),2.90-2.77(m,1H),1.20-1.05(m,6H)。

中間體64的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-N4-(2-丙基戊醯基)-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷]-(3’,5’)-[3’-O-苯甲醯基-鳥苷]

中間體64是採用中間體56的路線、由中間體47得到。MS-ESI[(M+2H)/2]⁺：428.0。

中間體65的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]-(3’,5’)-[N2-異丁醯基-2’-苯甲醯基-鳥苷]

中間體65是採用中間體56的路線、由中間體48得到。MS-ESI[M-H]^-：837.0。

中間體66的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-腺苷]-(3’,5’)-[N2-異丁醯基-2’-苯甲醯基-鳥苷]

中間體66是採用中間體56的路線、由中間體49得到。MS+ESI[M+H]⁺：821.1。

中間體67的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]-(3’,5’)-[2’-脫氧-2’-氟腺苷]

中間體67是採用中間體60的路線、由中間體50得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.47(s,1H),8.24(s,1H),8.15(s,1H),7.91(brs,2H),7.35(brs,2H),6.32-6.20(m,2H),5.88(brs,1H),5.55-5.30(m,2H),5.18-4.87(m,2H),4.53(d,J=16.4Hz,1H),4.18-4.08(m,2H),4.10-4.02(m,1H),4.01-3.92(m,1H),3.75-3.59(m,2H)。MS-ESI[M+H]⁺：651.0。

中間體68的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧腺苷]-(3’,5’)-[2’-脫氧-2’-氟腺苷]

中間體68是採用中間體56的路線、由中間體51得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.50(s,1H),8.34(s,1H),8.15(s,1H),7.84(brs,2H),7.31(brs,2H),6.30-6.18(m,2H),5.90(d,J=5.6Hz,1H),5.45(dt,J=52.0,3.6Hz,1H),5.12-4.90(m,2H),4.60-4.45(m,1H),4.18-4.00(m,3H),3.99-3.85(m,1H),3.65-3.50(m,2H),2.70-2.55(m,1H),2.50-2.40(m,1H)。

中間體69的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]-(3’,5’)-[2’-脫氧-2’-氟鳥苷]

中間體69是採用中間體60的路線、由中間體52得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.64(s,1H),8.24(s,1H),8.00(s,1H),7.88(brs,2H),6.54(brs,2H),6.28(dd,J=18.0,3.6Hz,1H),6.02(dd,J=16.0,3.6Hz,1H),5.80(d,J=5.4Hz,1H),5.44(d,J=4.4Hz,1H),5.30(d,J=7.6Hz,1H),5.04(d,J=6.0Hz,1H),4.95(t,J=14.8Hz,1H),4.42(dt,J=10.4,5.6Hz,1H),4.11-3.99(m,3H),3.98-3.89(m,1H),3.77-3.60(m,2H)。MS-ESI[M+H]⁺：667.2。

中間體70的製備：[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧腺苷]-(3’,5’)-[2’-脫氧-2’-氟鳥苷]

中間體69是採用中間體60的路線、由中間體53得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.67(brs,1H),8.37(s,1H),8.04(s,1H),7.85(brs,2H),6.58(brs,2H),6.26(t,J=7.2Hz,1H),6.03(d,J=15.6Hz,1H),5.85(d,J=5.6Hz,1H),5.38(d,J=52.8Hz,1H),5.10(s,1H),4.97(s,1H),4.46(d,J=14.8Hz,1H),4.20-4.00(m,4H),4.00-3.90(m,1H),3.70-3.50(m,2H),2.78-2.60(m,1H)。MS-ESI[M-H]^-：647.2。

中間體71的製備：(2’,3’)-環-[2’-O-硫代磷酸二酯-N6-苯甲醯基-3’-苯甲醯基-腺苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]

向中間體58(95mg,0.11mmol)和(-)-PSI試劑(150mg,0.33mmol)的DMF溶液(10mL)中加入1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯(253mg,1.66mmol)，所得混合物在25℃攪拌1小時。將反應混合液旋乾後用乙酸乙酯(20mL)重沉澱，所得固體用乙酸乙酯(20mL)打漿、過濾乾燥後得到粗產物(200mg)，直接用作下一步反應。MS-ESI[M+2+H]⁺：937.0。

中間體72的製備：(2’,3’)-環-[2’-O-硫代磷酸二酯-N6-苯甲醯基-3’-O-苯甲醯基-腺苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧腺苷]

向中間體59(210mg,0.25mmol)和(-)-PSI試劑(335mg,0.75mmol)的DMF溶液(10mL)中加入1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯(570mg,3.75mmol)，所得混合物在25℃攪拌1小時。將反應混合液旋乾後用乙酸乙酯(20mL)重沉澱，所得固體用乙酸乙酯(20mL)打漿、過濾乾燥後得到粗產物。粗產品用製備液相色譜(10mM碳酸氫銨作為添加劑)純化，凍乾後得到白色固體(15.8mg)，直接用作下一步反應。MS-ESI[M+H]⁺：917.0。

中間體73的製備：(3’,3’)-環-二-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-N6-苯甲醯基-2’-O-苯甲醯基-腺苷]

中間體73是採用中間體71的路線、由中間體60和(-)-PSI試劑得到。MS-ESI[M-H]^-：932.8。

中間體74：(2’,3’)-環-[2’-O-硫代磷酸二酯-3’-O-苯甲醯基-鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]-異構體1和中間體75：(2’,3’)-環-[2’-O-硫代磷酸二酯-3’-O-苯甲醯基-鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]-異構體2的製備

中間體74和中間體75採用中間體72的路線、由中間體61和(-)-PSI試劑得到。

中間體74：MS-ESI[M-H]^-：844.8，保留時間：4.96min；

中間體75：MS-ESI[M-H]^-：844.9，保留時間：5.20min。分析LCMS：Agilent 1100+G1946D LCMS，4.6x150mm Waters XBridge C18 3.5μm分析管柱，流動相A為10mM NH₄HCO₃水溶液，B為乙腈，流速1.0ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-0.1min，5%B；0.1-8min，5-95%B；8-15min，95%B。

中間體76：(2’,3’)-環-[2’-O-硫代磷酸二酯-N2-異丁醯基-3’-O-苯甲醯基-鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-腺苷]-異構體1，和

中間體77：(2’,3’)-環-[2’-O-硫代磷酸二酯-N2-異丁醯基-3’-O-苯甲醯基-鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-腺苷]-異構體2的製備

中間體76和中間體77採用中間體72的路線、由中間體62和(-)-PSI試劑得到。

中間體76：MS-ESI[M-H]^-：897.2，保留時間：1.69min；

中間體77：MS-ESI[M-H]^-：897.2，保留時間：1.74min。分析LCMS：Agilent 1100+G1946D LCMS，4.6x50mm Waters XBridge C18 3.5μm分析管柱，流動相A為10mM NH₄HCO₃水溶液，B為乙腈，流速1.8min/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-0.1min，5%B；0.1-2.5min，5-95%B；2.5-5min，95%B。

中間體78的製備：(2’,3’)-環-[2’-O-硫代磷酸二酯-N2-異丁醯基-3’-O-苯甲醯基-鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷]

中間體78採用中間體72的路線、由中間體63和(-)-PSI試劑得到。中間體78：MS-ESI[(M-2H)/2]^-：437.0。

中間體79的製備：(2’,3’)-環-[2’-O-硫代磷酸二酯-3’-O-苯甲醯基-鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-N4-(2-丙基戊醯基)-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷]

中間體79是採用中間體72的路線、由中間體64和(-)-PSI試劑得到。MS-ESI[M-H]^-：931.0。

中間體80：(3’,3’)-環-[3’-O-硫代磷酸二酯-N2-異丁醯基-2’-苯甲醯基-鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]-異構體1，和

中間體81：(3’,3’)-環-[3’-O-硫代磷酸二酯-N2-異丁醯基-2’-苯甲醯基-鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]-異構體2

中間體80和81是採用中間體72的路線，由中間體65和(-)-PSI試劑得到。

中間體80：MS-ESI[M-H]^-：915.0，保留時間：1.50min；

中間體81：MS-ESI[M-H]^-：915.0，保留時間：1.53min。分析LCMS：Agilent 1100+G1946D LCMS，4.6x50mm Waters XBridge C18 3.5μm分析管柱，流動相A為10mM NH₄HCO₃水溶液，B為乙腈，流速1.8ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-0.2min，5%B；0.2-1.5min，5-95%B；1.5-3min，95%B。

中間體82的製備：(3’,3’)-環-[3’-O-硫代磷酸二酯-N2-異丁醯基-2’-苯甲醯基-鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-腺苷]

中間體82採用中間體72的路線，由中間體66和(-)-PSI試劑得到。MS-ESI[M-H]^-：896.8。

中間體83的製備：2-氯-5’-O-三級丁基二甲基矽烷基-3’-O-苯甲醯基-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷

中間體83是採用中間體20的路線、由中間體1得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.21(d,J=2.4Hz,1H),8.08(d,J=7.2Hz,2H),7.95(brs,2H),7.72(t,J=7.6Hz,1H),7.58(t,J=7.6Hz,2H),6.50(dd,J=16.6,4.0Hz,1H),5.80-5.77(m,1H),5.75-5.66(m,1H),4.32(q,J=4.8Hz,1H),3.97(d,J=4.4Hz,2H),0.86(s,9H),0.06(s,6H)。

中間體84的製備：2-氯-3’-O-苯甲醯基-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷

中間體84是採用中間體60的路線、由中間體83得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.40(d,J=2.4Hz,1H),8.12(d,J=7.6Hz,2H),7.99(brs,2H),7.74(t,J=7.2Hz,1H),7.60(t,J=7.6Hz,2H),6.55(dd,J=18.2,3.6Hz,1H),5.81-5.78(m,1H),5.77-5.66(m,1H),4.35(q,J=4.4Hz,1H),3.89-3.80(m,2H)。

中間體85的製備：N-(9-((2R,3R,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-3-((2S,3aR,6S,7aR)-3a-甲基-6-(丙-1-烯-2-基)-2-硫代六氫苯并[d][1,3,2]氧雜硫雜磷雜環戊烷-2-基)氧基)四氫呋喃-2-基)-6-氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺

中間體85是採用中間體2的路線、由N2-異丁醯基-5’-O-雙(4-甲氧基苯基)苯甲基-3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-鳥苷和(+)-PSI試劑得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 12.11(s,1H),11.62(s,1H),8.14(s,1H),7.38(d,J=8.0Hz,2H),7.31-7.22(m,7H),6.86(d,J=8.4Hz,4H),6.00(d,J=6.8Hz,1H),5.67-5.59(m,1H),4.89(s,1H),4.75(s,1H),4.42(d,J=4.0Hz,1H),4.22(d,J=12.0Hz,1H),4.06-4.02(m,1H),3.73(s,6H),3.41-3.35(m,2H),3.24(dd,J=12.0Hz,1H),2.82-2.73(m,1H),2.07(d,J=12.0Hz,1H),1.93-1.83(m,2H),1.76-1.65(mf,6H),1.54(s,3H),1.12(d,J=6.8Hz,6H),0.83(s,9H),0.08(s,3H),0.04(s,3H)。

中間體86的製備：[2’-O-Rp-硫代磷酸二酯-N2-異丁醯基-5’-O-雙(4-甲氧基苯基)苯甲基-3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-鳥苷]-(2’,5’)-[2-氯-3’-O-苯甲醯基-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]

中間體86是採用中間體37的路線、由中間體84和中間體85在DMF溶液中得到。

MS-ESI[M+H]⁺：1255.0。

中間體87的製備：[2’-O-Rp-硫代磷酸二酯-N2-異丁醯基-5’-O-雙(4-甲氧基苯基)苯甲基-3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-鳥苷]-(2’,5’)-[2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]

將中間體86(1.0g,0.8mmol)加入到四氫呋喃/水/甲醇為8：4：1的混合溶液(10mL)中，冷卻至0℃，加入氫氧化鋰一水合物(54mg,1.6mmol)，所得混合物在0℃攪拌20min。將反應混合液倒入水(50mL)中，用乙酸乙酯萃取兩次(每次50mL)。合併有機相，飽和食鹽水洗滌兩次(每次100mL)後用無水硫酸鈉乾燥。濃縮得到的粗產品用矽膠管柱純化，乙酸乙酯：甲醇(10：1)沖提，得到白色固體(733mg)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 12.02(s,1H),11.67(s,1H),8.21(t,J=5.2Hz,1H),8.14(s,1H),7.84(s,2H),7.37(d,J=7.6Hz,2H),7.29-7.14(m,7H),6.87-6.77(m, 4H),6.23(dd,J=13.9,4.5Hz,1H),6.08-5.98(m,2H),5.49-5.38(m,1H),5.23-5.04(m,1H),4.66-4.59(m,1H),4.35-4.24(m,1H),3.99-3.95(m,1H),3.77-3.71(m,2H),3.71-3.63(m,7H),3.22-3.00(m,2H),2.79-2.68(m,1H),1.12-1.07(m,6H),0.82(s,9H),0.13(d,J=13.4Hz,6H)。

中間體88的製備：O-((2R,3R,4S,5R)-5-(6-胺基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-3-((2R,3aS,6R,7aS)-3a-甲基-6-(丙-1-烯-2-基)-2-硫代六氫苯并[d][1,3,2]氧雜硫雜磷雜環戊烷-2-基)甲基)-O-((2R,3R,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-2-(2-異丁胺基-6-氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基)-(R)-硫代磷酸二酯

中間體88是採用中間體2的路線、由中間體87和(-)-PSI試劑在四氫呋喃中製得粗品，直接用於下一步反應。MS-ESI[M+H-DMTr]⁺：1095.0。

中間體89的製備：O-((2R,3R,4S,5R)-5-(6-胺基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-3-((2R,3aS,6R,7aS)-3a-甲基-6-(丙-1-烯-2-基)-2-硫代六氫苯并[d][1,3,2]氧雜硫雜磷雜環戊烷-2-基)甲基)-O-((2R,3R,4R,5R)-4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-2-(2-異丁胺基-6-氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基)-(R)-硫代磷酸二酯

中間體89是採用中間體25的路線、由中間體88得到。

MS-ESI[M+H]⁺：1095.0。

中間體90的製備：(2’,3’)-環-(Rp,Sp)-[2’-O-硫代磷酸二酯-N2-異丁醯基-3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]

將中間體89(90mg，0.082mmol)溶於無水DMF(7mL)中，加入4A分子篩(90mg)，室溫(28℃)氮氣保護下攪拌乾燥0.5小時。然後用注射器加入DBU(75.0mg，0.492mmol)，室溫(28℃)攪拌0.5小時後，加矽藻土過濾，濾液旋乾得到粗產物中間體90(100mg，粗品)直接用於下一步反應。

MS-ESI[M+H]⁺：926.8。

中間體91的製備：(2R,3R,4S,5R)-5-(6-胺基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-(((((((2R,3R,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-2-(2-異丁胺基-6-氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)磷醯基)氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基苯甲酸酯

將中間體84(500mg，1.23mmol)和(2R,3R,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((三級丁基二甲基矽基)氧基)-2-(2-異丁胺基-6-氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基(2-氰乙基)二異丙基磷醯胺(1.78g，1.84mmol)溶於乙腈/四氫呋喃(8mL/8mL)的混合溶液中，加入4A分子篩(500mg)，室溫(28℃)氮氣保護下攪拌0.5小時。然後用注射器加入四唑的乙腈溶液(8.17mL，0.45M)；室溫(28℃)攪拌2小時後，加入70%的過氧化三級丁醇(520.9mg，4.05mmol，0.544mL)，室溫(28℃)攪拌20min後，用50%的五水硫代硫酸鈉水溶液(5mL)淬滅；加矽藻土過濾，濾液用乙酸乙酯(30mL)稀釋，並用水洗滌(20mL，兩次)，有機相用無水硫酸鈉乾燥。濃縮得到的粗產品用矽膠管柱純化，用石油醚：乙酸乙酯(10：1-1：10)沖提，得到混合物(1.9g)直接用於下一步。

MS-ESI[M+H]⁺：1296.0。

中間體92的製備：[2’-O-磷酸二酯-5’-O-雙(4-甲氧基苯基)苯甲基-3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-鳥苷]-(2’,5’)-[2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]

向中間體91(1g,0.775mmol)加入33%的甲胺乙醇溶液(8mL)，並在室溫下攪拌3小時。將反應液旋乾後用C18反相管柱純化，用水(含0.1%碳酸氫銨)：乙腈(3：2)沖提，凍乾後得到粉色固體(550mg)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.65(s,1H),8.18(d,J=2.0Hz,1H),7.93-7.77(m,2H),7.38-7.15(m,10H),7.13-6.92(m,2H),6.90-6.77(m,4H),6.49-6.20(m,4H),5.92(d,J=5.6Hz,1H),5.26-5.09(m,2H),4.61-4.24(m,3H),3.98-3.82(m,3H),3.79-3.67(m,7H),0.79(s,9H),0.14-0.02(m,6H)。MS-ESI[M+H]⁺：1064.8。

中間體93的製備：[2’-O-磷酸二酯-5’-O-雙(4-甲氧基苯基)苯甲基-3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-鳥苷]-(2’,5’)-[2-氯-3’-O-亞磷酸單酯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]

將亞磷酸二苯酯(137mg,0.47mmol)在0℃，氮氣保護下加入中間體92(250mg,0.235mmol)，DBU(143mg,0.94mmol)和4A分子篩的吡啶(8mL)溶液，所得混合物在室溫下攪拌2小時。將反應液過濾後旋乾，直接用作下一步反應。

MS-ESI[M+H]⁺：1129.8。

中間體94的製備：[2’-O-磷酸二酯-3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-鳥苷]-(2’,5’)-[2-氯-3’-O-亞磷酸單酯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]

中間體94是採用中間體25的路線、由中間體93得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.26(s,1H),7.99(s,1H),7.88(s,2H),6.55(s,2H),6.27(dd,J=17.2,4.0Hz,1H),6.00-5.70(m,3H),5.44-5.21(m,1H),5.09-4.98(m,1H),4.87-4.71(m,1H),4.47(d,J=4.0Hz,1H),4.07-3.97(m,1H),3.91-3.73(m,3H),3.56-3.49(m,5H),0.89(s,9H),0.14(s,6H)。³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 1.72,-1.58。MS-ESI[M+H]⁺：826.8。

中間體95的製備：(2’,3’)-環-[2’-O-磷酸二酯-3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-鳥苷]-[3’-O-磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]

在0℃下，向中間體94(55mg,0.067mmol)的吡啶溶液(15mL)中加入特戊醯氯(48mg,0.40mmol)，所得反應液在室溫下攪拌3小時。然後向其中加入碘單質(26mg,0.10mmol)的乙腈(0.5mL)和水(0.1mL)的混合溶液，所得反應液在室溫下攪拌16小時。將反應液用10%的硫代硫酸鈉水溶液(5mL)淬滅後旋乾，用C18反相管柱純化，用水(含0.1%碳酸氫銨)：乙腈(4：1)沖提，凍乾後得到白色固體(20mg)。MS-ESI[M+H]⁺：825.0。

中間體96的製備：(2’,3’)-環-[2’-O-Rp-硫代磷酸二酯-N2-異丁醯基-3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-鳥苷]-[3’-O-磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]

中間體96是採用中間體95的路線、由[2’-O-磷酸二酯-N2-異丁醯基-3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-鳥苷]-(2’,5’)-[N6-苯甲醯基-2-氯-3’-O-亞磷酸單酯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 12.92(s,1H),12.12(s,1H),11.54(s,1H),8.55(d,J=2.0Hz,1H),8.23(s,1H),8.06(d,J=7.2Hz,2H),7.71-7.61(m,1H),7.59-7.51(m,3H),6.47(dd,J=21.6,2.4Hz,1H),5.97-5.74(m,2H),5.60-5.40(m,1H),5.12-5.00(m,1H),4.41(d,J=3.2Hz,1H),4.27-4.15(m,1H),4.13-3.94(m,5H),2.97-2.84(m,1H),1.65-1.54(m,1H),1.09(d,J=7.2Hz,3H),0.98(d,J=6.8Hz,3H),0.93(s,9H),0.20(d,J=8.6Hz,6H)。

中間體97的製備：(2’,3’)-環-[2’-O-磷酸二酯-3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-鳥苷]-[3’-O-Rp-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]

中間體97是採用中間體95的合成路線，由中間體92和(+)-PSI試劑反應，經脫保護和環化反應，用製備液相色譜(Gilson 281製備HPLC，19x250 mm Waters XBridge C18 10μm製備管柱，流動相A為10mM碳酸氫銨水溶液，B為乙腈，流速25ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-2min，20%B；2-14min，20-40%B；14-14.2min，40-95%B；14.2-18min，95%B。該化合物保留時間12.5min)純化得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.59(s,1H),8.18(d,J=2.4Hz,1H),8.11(s,1H),7.45-6.98(m,5H),6.33-6.23(m,1H),5.82(d,J=8.6Hz,1H),5.42(s,1H),5.32-5.23(m,2H),4.33(d,J=4.0Hz,1H),4.19-3.70(m,9H),0.91(s,9H),0.15(s,6H)。¹⁹F NMR(376MHz,DMSO)δ -196.51(s)。³¹P NMR(162MHz,DMSO)δ 53.76(s),-0.49(s)。MS-ESI[M+H]⁺：841.0。

中間體98的製備：(2’,3’)-環-(Rp,Rp)-[2’-O-硫代磷酸二酯-N2-異丁醯基-3’-O-三級丁基二甲基矽烷基-鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]

中間體98是採用中間體90的合成路線，由中間體87和(+)-PSI試劑反應，經脫保護和環化反應得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 12.41(brs,1H),11.90(s,1H),11.31(s,1H),8.35(d,J=2.0Hz,1H),8.03(s,1H),7.85(d,J=7.2Hz,2H),7.45(t,J=7.2Hz,1H),7.35(t,J=7.6Hz,2H),6.88(t,J=48Hz,6H),6.25(dd,J=20.0,4.0Hz,1H),5.65(d,J=8.4Hz,1H),5.59-5.46(m,1H),5.32(d,J=50.0Hz,1H),5.02(t,J=11.2Hz,1H),4.15(d,J=4.0Hz,1H),4.07-4.01(m,1H),3.97-3.64(m,5H),2.74-2.62(m,1H),0.86 (d,J=6.4Hz,3H),0.81-0.66(m,12H),-0.01(d,J=9.6Hz,6H)。MS+ESI--[M+H]：1030.8。

實施例1：(3’,3’)-環-(Rp,Rp)-二-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]1.5-銨-0.5-1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯-鹽

向中間體54(120mg,0.150mmol)和(-)-PSI試劑(201mg,0.450mmol)的DMF溶液(8mL)中加入1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯(342mg,2.25mmol)，所得混合物在25℃攪拌1小時。將反應混合液旋乾後用乙酸乙酯(20mL)重沉澱。收集固體，得到的粗產品用製備液相色譜(Gilson 281製備HPLC，19x250mm Welch 10μm製備管柱，流動相A為10mM碳酸氫銨水溶液，B為乙腈，流速25ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-3min，0-3%B；3-14min，3-30%B；14-14.3min，30-95%B；14.3-20min，95%B。該化合物保留時間為13.5min)純化，凍乾後得到白色固體(20mg)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.37(s,1H),8.22(s,1H),7.90(brs,4H),7.12(brs,6H),6.33-6.20(m,2H),5.56-5.30(m,2H),5.20-5.00(m,2H),4.22-3.85(m,6H),3.55-3.40(m,2H),3.35-3.15(m,1H),2.70-2.55(m,1H),1.96-1.85(m,1H),1.73-1.52(m,3H)。³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 53.47。MS-ESI[M-H]^-：760.9。

實施例2：(3’,3’)-環-(Rp,Rp)-二-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧腺苷]

實施例2是採用實施例1的路線、由中間體55和(-)-PSI試劑反應後，用製備液相色譜(Gilson 281製備HPLC，19x250mm Welch 10μm製備管柱，流動相A為0.05%甲酸水溶液，B為0.05%甲酸的乙腈溶液，流速25ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-3min，0-5%B；3-14min，5-50%B；14-14.3min，50-95%B；14.3-20min，95%B。該化合物保留時間為12min)純化得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.53(s,1H),8.38(s,1H),7.84(brs,4H),6.33-6.18(m,2H),5.20-4.75(m,2H),4.30-3.75(m,6H),3.00-2.70(m,2H),2.70-2.50(m,2H).³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 53.68,52.69。MS-ESI[M-H]^-：724.9。

實施例3：(3’,3’)-環-(Rp,Rp)-二-[3’-O-硫代磷酸二酯-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷]

實施例3是採用實施例1的路線、由中間體56和(-)-PSI試劑反應後，用製備液相色譜(Gilson 281製備HPLC，19x250mm Welch 10μm製備管柱，流動相A為0.05%甲酸水溶液，B為0.05%甲酸的乙腈溶液，流速25ml/min， 214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-3min，0-5%B；3-14min，5-30%B；14-14.3min，30-95%B；14.3-20min，95%B。該化合物保留時間為18min)純化得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 9.20-8.80(m,2H),8.31(d,J=6.4Hz,1H),8.28-8.00(m,2H),7.90(d,J=6.0Hz,1H),6.20-6.05(m,3H),6.00(d,J=6.4Hz,1H),4.95-4.68(m,2H),4.30-4.05(m,4H),3.90-3.70(m,2H)。³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 53.27,52.67。MS-ESI[M+H]⁺：683.0。

實施例4：(3’,3’)-環-(Rp,Rp)-二-[3’-O-硫代磷酸二酯-N4-(2-丙基戊醯基)-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷]二銨鹽

實施例4是採用實施例1的路線、由中間體57和(-)-PSI試劑反應後，用製備液相色譜(Gilson 281製備HPLC，19x250mm Welch 10μm製備管柱，流動相A為10mM碳酸氫銨水溶液，B為乙腈，流速25ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-3min，0-35%B；3-14min，35-70%B；14-14.3min，70-95%B；14.3-20min，95%B。該化合物保留時間為14min。)純化得到。

1H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 11.05(s,1H),11.00(s,1H),8.39(d,J=7.6Hz,1H),8.16(d,J=7.6Hz,1H),7.40(d,J=7.6Hz,1H),7.34(d,J=7.6Hz,1H),7.12 (t,J=52.0Hz,8H),6.30-6.18(m,2H),5.02-4.75(m,2H),4.35-4.10(m,4H),3.83(t,J=11.2Hz,2H),2.70-2.52(m,2H),1.62-1.45(m,4H),1.40-1.17(m,12H),0.85(t,J=7.2Hz,12H)。31P NMR(162MHz,DMSO)δ 54.54,53.29。MS-ESI[M+H]⁺：935.1。

實施例5：(2’,3’)-環-(Rp,Rp)-[2’-O-硫代磷酸二酯-腺苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]二銨鹽

向中間體71(200mg,0.214mmol)中加入7M的胺甲醇溶液(2mL)，所得混合物在25℃攪拌6小時。將反應混合液旋乾後得到粗產品。所得粗產品用製備液相色譜(Gilson 281製備HPLC，19x250mm Welch 10μm製備管柱，流動相A為0.05%甲酸水溶液，B為0.05%甲酸的乙腈溶液，流速25ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-3min，0-5%B；3-14min，5-30%B；14-14.3min，30-95%B；14.3-20min，95%B。該化合物保留時間為14min)純化，凍乾後得到白色固體(4.0mg)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d ₆)δ 8.63(s,1H),8.23(s,1H),8.17(s,1H),7.92(brs,2H),7.29(brs,2H),6.33-6.28(m,1H),6.12(d,J=8.5Hz,1H),5.40-5.15(m,2H),5.05-4.95(m,1H),4.55(t,J=3.5Hz,1H),4.36-4.24(m,2H),4.19(s,1H),4.10-3.95(m,2H),3.90-3.78(m,1H),3.72(d,J=12.0Hz,1H)。³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 53.08,48.81。MS-ESI[M-H]^-：724.8。

實施例6：(2’,3’)-環-(Rp,Rp)-[2’-O-硫代磷酸二酯-腺苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧腺苷]二銨鹽

實施例6是採用實施例5的路線、由中間體72和28%氨水反應後，用製備液相色譜(10mM碳酸氫銨作為添加劑)純化得到。分析LCMS：Agilent 1100+G1946D LCMS，4.6x50mm Waters XBridge C18 3.5μm分析管柱，流動相A為10mM碳酸氫銨水溶液，B為乙腈，流速1.8ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-1.5min，5-95%B；1.5-3min，95%B。該化合物保留時間為0.35min。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.61(s,1H),8.40(s,1H),8.17(s,1H),7.86(brs,2H),7.41-7.06(m,10H),6.30-6.18(m,1H),6.09(d,J=8.4Hz,1H),5.42-5.30(m,2H),5.30-5.20(m,1H),4.27(d,J=4.4Hz,1H),4.20-4.05(m,2H),4.04-3.90(m,2H),3.72-3.62(m,2H),2.85-2.55(m,2H)。31P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 56.62,53.65。MS-ESI[M-H]^-：707.0。

實施例7：(3’,3’)-環-(Rp,Rp)-[3’-O-硫代磷酸二酯-腺苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]二銨鹽

實施例7是採用實施例5的路線、由中間體73和28%氨水反應後，用製備液相色譜(10mM碳酸氫銨作為添加劑)純化得到。分析LCMS：Agilent 1100+G1946D LCMS，4.6x150mm Waters XBridge C18 3.5μm分析管柱，流動相A為10mM碳酸氫銨水溶液，B為乙腈，流速1ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-8min，5-95%B；8-15min，95%B。該化合物保留時間為4.1min。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.62(s,1H),8.23(s,1H),8.19(s,1H),7.95(brs,2H),7.65(brs,2H),7.14(t,J=52.0Hz,8H),6.30-6.22(m,1H),6.12(d,J=8.4Hz,1H),5.50-5.32(m,2H),5.30-5.15(m,1H),5.08-4.92(m,1H),4.30-4.00(m,5H),3.95-3.86(m,1H),3.68(d,J=12.0Hz,1H)。³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 57.14,54.13。MS-ESI[(M-2H)/2]^-：362.0。

實施例8：(2’,3’)-環-(Sp,Rp)-[2’-O-硫代磷酸二酯-鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]二銨鹽，和

實施例9：(2’,3’)-環-(Sp,Sp)-[2’-O-硫代磷酸二酯-鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]二銨鹽

實施例8和實施例9是採用實施例5的路線、由中間體74和28%氨水反應後，用製備液相色譜(Gilson 281製備HPLC，19x250mm Welch 10μm製備管柱，流動相A為10mM碳酸氫銨水溶液，B為乙腈，流速25ml/min，214和254nm 雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-3min，0-2%B；3-14min，2-37%B；14-14.3min，37-95%B；14.3-20min，95%B。化合物8保留時間為13min，化合物9保留時間為15min)純化得到。

實施例8：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.62(brs,1H),8.19(s,1H),8.11(s,1H),7.94(brs,2H),7.10(t,J=50.8Hz,8H),6.63(brs,2H),6.25(dd,J=24.0,2.8Hz,1H),5.85(d,J=8.8Hz,1H),5.50-5.15(m,4H),4.30-4.13(m,2H),4.12-3.92(m,4H),3.72(d,J=12.0Hz,1H)。³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 56.84,54.05。MS-ESI[M-H]^-：741.0。

實施例9：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.67(brs,1H),8.23(s,1H),8.08(s,1H),7.93(brs,2H),7.10(t,J=51.2Hz,8H),6.67(brs,2H),6.30(dd,J=18.8,3.6Hz,1H),5.77(d,J=8.0Hz,1H),5.58-5.38(m,1H),5.02-4.92(m,1H),4.86-4.78(m,1H),4.69-4.60(m,1H),4.33-3.75(m,7H)。³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 59.03,54.74。MS-ESI[M-H]^-：740.9。

實施例10：(2’,3’)-環-(Rp,Rp)-[2’-O-硫代磷酸二酯-鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]二銨鹽

實施例10是採用實施例5的路線、由中間體75和28%氨水反應後，用製備液相色譜(Gilson 281製備HPLC，19x250mm Welch 10μm製備管柱，流動相A為10mM碳酸氫銨水溶液，B為乙腈，流速25ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-3min，0-3%B；3-14min，3-38%B；14-14.3min，38-95%B；14.3-20min，95%B。該化合物保留時間為13min)純化得到。實施例10還採用實施例25的路線、經中間體98脫保護後，用製備液相色譜純化得到。兩條不同的合成路線得到完全相同的產物。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.63(brs,1H),8.22(s,1H),8.18(s,1H),7.93(brs,2H),7.12(t,J=51.2Hz,8H),6.69(brs,2H),6.28(dd,J=24.0,2.4Hz,1H),5.88(d,J=8.4Hz,1H),5.42-4.80(m,4H),4.45(d,J=4.0Hz,1H),4.39-4.10(m,3H),4.08-3.94(m,1H),3.93-3.70(m,2H)。³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 54.07,50.13。MS-ESI[M-H]^-：741.0。

實施例11：(2’,3’)-環-(Sp,Rp)-[2’-O-硫代磷酸二酯-鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-腺苷]二銨鹽

實施例11是採用實施例5的路線、由中間體76和7M的胺甲醇溶液反應後，用製備液相色譜(10mM碳酸氫銨作為添加劑)純化得到。分析LCNS：Agilent 1100+G1946D LCMS，4.6x150mm Waters XBridge C18 3.5μm分析管柱，流動相A為10mM碳酸氫銨水溶液，B為乙腈，流速1ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-8min，5-95%B；8-15min，95%B。該化合物保留時間為3.3min。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.63(brs,1H),8.39(s,1H),8.21(s,1H),7.83(brs,2H),7.10(t,J=50.8Hz,8H),6.67(brs,2H),6.30-6.18(m,1H),5.87(d,J=8.4Hz,1H),5.35-5.20(m,2H),4.28(d,J=4.0Hz,1H),4.21-3.92(m,4H),3.80-3.60(m,2H),2.92-2.70(m,1H),2.69-2.55(m,1H)。³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 56.96,54.34。MS-ESI[M-H]^-：722.9。

實施例12：(2’,3’)-環-(Rp,Rp)-[2’-O-硫代磷酸二酯-鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-腺苷]二銨鹽

實施例12是採用實施例5的路線、由中間體77和7M的胺甲醇溶液反應後，用製備液相色譜(10mM碳酸氫銨作為添加劑)純化得到。分析 LCMS：Agilent 1100+G1946D LCMS，4.6x150mm Waters XBridge C18 3.5μm分析管柱，流動相A為10mM碳酸氫銨水溶液，B為乙腈，流速1ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-8min，5-95%B；8-15min，95%B。該化合物保留時間為3.3min。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.61(brs,1H),8.39(s,1H),8.20(s,1H),7.82(brs,2H),7.11(t,J=51.2Hz,8H),6.70(brs,2H),6.30-6.18(m,1H),5.87(d,J=8.4Hz,1H),5.25-5.13(m,2H),4.96(s,1H),4.50(d,J=4.4Hz,1H),4.31-3.71(m,6H),3.03-2.82(m,1H),2.65-2.50(m,1H)。³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 54.26,49.51。MS-ESI[M-H]^-：722.8。

實施例13：(2’,3’)-環-(Rp,Rp)-[2’-O-硫代磷酸二酯-鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷]二銨鹽

實施例13是採用實施例5的路線、由中間體78和28%氨水反應後，用製備液相色譜(Gilson 281製備HPLC，19x250mm Welch 10μm製備管柱，流動相A為10mM碳酸氫銨水溶液，B為乙腈，流速25ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-3min，0-3%B；3-14min，3-25%B；14-14.3min，25-95%B；14.3-20min，95%B。該化合物保留時間為2min)純化得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.16(s,1H),7.60-6.70(m,11H),6.58(brs,2H),6.35-6.20(m,1H),5.90-5.70(m,2H),5.22-5.10(m,1H),5.00-4.80(m,2H),4.52(s, 1H),4.32-4.15(m,2H),4.11(s,1H),4.00-3.82(m,2H),3.78-3.65(m,1H)。³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 53.24,48.05。MS-ESI[(M-2H)/2]^-：350.0。

實施例14：(2’,3’)-環-(Rp,Rp)-[2’-O-硫代磷酸二酯-鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-N4-(2-丙基戊醯基)-2’-脫氧-2’,2’-二氟胞苷]二銨鹽

實施例14和是採用實施例5的路線、由中間體79和7M的胺甲醇溶液反應後，用製備液相色譜(Gilson 281製備HPLC，19x250mm Welch 10μm製備管柱，流動相A為10mM碳酸氫銨水溶液，B為乙腈，流速25ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-3min，0-10%B；3-14min，10-55%B；14-14.3min，55-95%B；14.3-20min，95%B。該化合物保留時間為11min)純化得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 11.07(brs,1H),10.62(s,1H),8.68-7.97(m,2H),7.40-6.97(m,9H),6.59(brs,2H),6.34-6.20(m,1H),5.90-5.70(m,1H),5.47-5.09(m,2H),5.05-4.74(m,1H),4.29(d,J=4.4Hz,1H),4.20(d,J=9.6Hz,1H),4.13-3.99(m,2H),3.95-3.80(m,1H),3.85-3.65(m,1H),2.70-2.55(m,1H),1.60-1.46(m,2H),1.45-1.10(m,6H),0.86(t,J=7.2Hz,6H)。³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 56.16,53.39。MS-ESI[M-H]^-：827.0。

實施例15：(3’,3’)-環-(Sp,Rp)-[3’-O-硫代磷酸二酯-鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]二銨鹽

實施例15是採用實施例5的路線、由中間體80和7M的胺甲醇溶液反應後，用製備液相色譜(Gilson 281製備HPLC，19x250mm Welch 10μm製備管柱，流動相A為10mM碳酸氫銨水溶液，B為乙腈，流速25ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-3min，0-3%B；3-14min，3-33%B；14-14.3min，33-95%B；14.3-20min，95%B。該化合物保留時間為11min)純化得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.20(d,J=2.8Hz,1H),8.04(s,1H),8.03-6.87(m,10H),6.60(brs,2H),6.22(dd,J=24.0,2.0Hz,1H),5.85(d,J=8.8Hz,1H),5.51-5.15(m,3H),4.35-3.89(m,6H),3.72(d,J=12.4Hz,1H)。³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 56.65,54.03。MS-ESI[M-H]^-：741.0。

實施例16：(3’,3’)-環-(Rp,Rp)-[3’-O-硫代磷酸二酯-鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]二銨鹽

實施例16是採用實施例5的路線、由中間體81和7M的胺甲醇溶液反應後，用製備液相色譜(Gilson 281製備HPLC，19x250mm Welch 10μm 製備管柱，流動相A為10mM碳酸氫銨水溶液，B為乙腈，流速25ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-3min，0-3%B；3-14min，3-33%B；14-14.3min，33-95%B；14.3-20min，95%B。該化合物保留時間為13min)純化得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.63(brs,1H),8.22(s,1H),8.09(s,1H),7.94(brs,2H),7.38-6.94(m,8H),6.65(brs,2H),6.28(dd,J=24.0,2.4Hz,1H),5.87(d,J=8.8Hz,1H),5.42-5.11(m,3H),5.00(s,1H),4.56-4.42(m,1H),4.39-4.21(m,2H),4.13(s,1H),4.05-3.94(m,1H),3.89-3.71(m,2H)。³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 53.97,49.08。MS-ESI[M-H]^-：740.9。

實施例17：(3’,3’)-環-(Rp,Rp)-[3’-O-硫代磷酸二酯-鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-腺苷]二銨鹽

實施例17採用實施例5的路線，由中間體82和7M的胺甲醇溶液反應後，用製備液相色譜(Gilson 281製備HPLC，19x250mm Welch 10μm製備管柱，流動相A為10mM碳酸氫銨水溶液，B為乙腈，流速25ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-3min，0-3%B；3-14min，3-33%B；14-14.3min，33-95%B；14.3-20min，95%B。該化合物保留時間為11min)純化得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.59(brs,1H),8.41(s,1H),8.11(s,1H),7.85(brs,2H),7.15(brs,8H),6.66(brs,2H),6.25(dd,J=12.8,6.0Hz,1H),5.85(d,J=8.8Hz,1H),5.35-5.11(m,2H),4.91(s,1H),4.59-4.50(m,1H),4.31-3.71(m,6H),3.03-2.87(m,1H)。³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 53.46,47.84。MS-ESI[M-H]^-：740.9。

實施例18：(3’,3’)-環-(Rp,Rp)-[3’-O-硫代磷酸二酯-2’-脫氧-2’-氟腺苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β腺苷]-0.5-銨-1.5-1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯-鹽

實施例18是採用實施例1的路線、由中間體67和(-)-PSI試劑反應後，用製備液相色譜(Gilson 281製備HPLC，19x250mm Welch 10μm製備管柱，流動相A為10mM碳酸氫銨水溶液，B為乙腈，流速25ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-3min，0-5%B；3-14min，5-33%B；14-14.3min，33-95%B；14.3-20min，95%B。該化合物保留時間為11min)純化得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 9.62(brs,2H),8.39(s,1H),8.26(d,J=2.0Hz,1H),8.18(s,1H),7.36(brs,2H),7.15(t,J=52.0Hz,2H),6.31-6.20(m,2H),5.46-5.25(m,2H),5.15-5.00(m,1H),4.95-4.83(m,1H),4.42-4.25(m,1H),4.10-3.98(m,2H),3.80-3.60(m,2H),3.60-3.40(m,6H),3.30-3.20(m,3H),2.70-2.55(m,3H),1.96-1.85(m, 3H),1.73-1.50(m,9H)。³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 53.37,52.10。MS-ESI[M+H]⁺：729.0。

實施例19：(3’,3’)-環-(Rp,Rp)-[3’-O-硫代磷酸二酯-2’-脫氧-2’-氟腺苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧腺苷]0.5-1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯-鹽

實施例19是採用實施例1的路線、由中間體68和(-)-PSI試劑反應後，用製備液相色譜(Gilson 281製備HPLC，19x250mm Welch 10μm製備管柱，流動相A為0.05%甲酸水溶液，B為0.05%甲酸的乙腈溶液，流速25ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-3min，0-10%B；3-14min，10-50%B；14-14.3min，50-95%B；14.3-20min，95%B。該化合物保留時間為10min)純化得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 9.56(s,1H),8.60(s,1H),8.50-8.35(m,1H),8.28(s,1H),7.85(brs,2H),6.40-6.20(m,2H),5.70-5.40(m,1H),5.18-4.80(m,2H),4.60-3.95(m,6H),3.65-3.45(m,2H),3.30-3.20(m,1H),2.85-2.71(m,1H),2.70-2.55(m,2H),1.96-1.85(m,1H),1.73-1.50(m,3H)。³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 54.78,54.00。MS-ESI[M+H]⁺：710.8。

實施例20：(3’,3’)-環-(Rp,Rp)-[3’-O-硫代磷酸二酯-2’-脫氧-2’-氟鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β腺苷]二銨鹽

實施例20是採用實施例1的路線、由中間體69和(-)-PSI試劑反應後，用製備液相色譜(Gilson 281製備HPLC，19x250mm Waters XBridge C18 10μm製備管柱，流動相A為10mM碳酸氫銨水溶液，B為乙腈，流速25ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-2min，5%B；2-9min，5-15%B；9-19min，15-25%B；19-19.5min，25-95%B；19.5-22.5min，95%B。該化合物保留時間9min)純化得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.69(brs,1H),8.26(s,1H),7.98(s,1H),7.92(brs,2H),7.15(t,J=52.0Hz,6H),6.64(brs,2H),6.26(dd,J=17.2,3.6Hz,1H),6.08(d,J=16.8Hz,1H),5.43-5.35(m,1H),5.31-5.22(m,1H),5.18-5.02(m,1H),4.99-4.85(m,1H),4.42-4.30(m,1H),4.26(d,J=8.8Hz,1H),4.15-4.00(m,2H),3.90-3.70(m,2H)。³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 54.20,53.14。MS-ESI[M-H]^-：743.2。

實施例21：(3’,3’)-環-(Rp,Rp)-[3’-O-硫代磷酸二酯-2’-脫氧-2’-氟鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧腺苷]二銨鹽

實施例21是採用實施例1的路線、由中間體70和(-)-PSI試劑反應後，用製備液相色譜(Gilson 281製備HPLC，19x250mm Waters XBridge C18 10μm製備管柱，流動相A為10mM碳酸氫銨水溶液，B為乙腈，流速25ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-2min，5%B；2-10min，5-20%B；10-10.6min，20-95%B；10.6-12.6min，95%B。該化合物保留時間7.3min)純化得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.67(brs,1H),8.49(s,1H),7.92(s,1H),7.82(brs,2H),7.14(t,J=52.0Hz,6H),6.62(s,2H),6.25(dd,J=6.4,4.8Hz,1H),6.05(d,J=16.8Hz,1H),5.44(dd,J=52.0,4.0Hz,1H),5.05-4.85(m,2H),4.33(d,J=12.4Hz,1H),4.23(d,J=9.2Hz,1H),4.10-3.92(m,2H),3.98-3.50(m,2H),2.78-2.54(m,2H)。³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 52.56,52.51。MS-ESI[M-H]^-：725.2。

實施例22：(2’,3’)-環-[2’-O-磷酸二酯-鳥苷]-[3’-O-磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]

實施例22是採用實施例9的路線、由中間體95和氟化銨在甲醇溶液中反應後，用製備液相色譜(Gilson 281製備HPLC，19x250mm Waters XBridge C18 10μm製備管柱，流動相A為10mM碳酸氫銨水溶液，B為乙腈，流速25ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-2min，5%B；2-15.6min，5-20%B；15.6-15.8min，20-95%B；15.8-18min，95%B。該化合物保留時間6.6min)純化得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.77(s,1H),8.20(d,J=2.8Hz,1H),7.99(s,1H),7.93(brs,2H),6.71(brs,2H),6.33(dd,J=24.0,2.4Hz,1H),5.90(d,J=8.0Hz,1H),5.40(d,J=49.6Hz,1H),5.20-5.00(m,2H),4.42-4.30(m,2H),4.20-3.80(m,6H)。³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 1.61,-0.07。MS-ESI[M+H]⁺：710.9。

實施例23：(2’,3’)-環-[2’-O-Rp-硫代磷酸二酯-鳥苷]-[3’-O-磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]二銨鹽

向中間體96(75mg,0.074mmol)加入33%的甲胺乙醇溶液(3mL)，並在室溫下攪拌3小時。將反應液旋乾後加入氟化銨(82mg,2.2mmol)和甲醇(3mL)在60℃攪拌16小時。用製備液相色譜(Gilson 281製備HPLC，19x250mm Waters XBridge C18 10μm製備管柱，流動相A為10mM碳酸氫銨水溶液，B為乙腈，流速25ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-2min，5%B；2-18.9min，5-15%B；18.9-19.4min，15-95%B；19.4-22.4min，95%B。該化合物保留時間8.5min)純化，凍乾後得到白色固體(30.3mg)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.60(s,1H),8.21(d,J=2.8Hz,1H),8.01(s,1H),7.91(s,2H),7.35-6.94(m,6H),6.63(s,2H),6.29(dd,J=24.4,1.6Hz,1H),5.86(d,J=8.0Hz,1H),5.42-5.17(m,2H),5.09-4.90(m,2H),4.48(d,J=4.0Hz,1H),4.36(dd,J=10.8,5.2Hz,1H),4.28-4.17(m,1H),4.09(s,1H),3.98-3.73(m,3H)。³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 48.92,-2.42。MS-ESI[M+H]⁺：726.8。

實施例24：(2’,3’)-環-[2’-O-磷酸二酯-鳥苷]-[3’-O-Rp-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]

實施例24是採用實施例9的路線、由中間體97和氟化銨在甲醇溶液中反應後，用製備液相色譜(Gilson 281製備HPLC，19x250mm Waters XBridge C18 10μm製備管柱，流動相A為10mM碳酸氫銨水溶液，B為乙腈，流速25ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-2min，20%B；2-14min，20-40%B；14-14.2min，40-95%B；14.2-18min，95%B。該化合物保留時間2min)純化得到。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.58(s,1H),8.19(d,J=2.8Hz,1H),8.04-7.82(m,2H),7.37-7.00(m,4H),6.73-6.53(m,1H),6.27(dd,J=24.0,2.4Hz,1H),5.83(d,J=8.3Hz,1H),5.44-5.19(m,2H),5.18-5.06(m,1H),5.04-4.95(m,1H),4.36-4.27(m,2H),4.12(s,1H),4.09-3.96(m,2H),3.79-3.65(m,2H).³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 53.89(s),-1.20(s)。¹⁹F NMR(376MHz,DMSO-d ₆)δ -195.45(s)。MS-ESI[M+H]⁺：726。

實施例25：(2’,3’)-環-(Rp,Sp)-[2’-O-硫代磷酸二酯-鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-氯-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]二銨鹽

將中間體90(100mg，粗品)溶於7M的胺甲醇溶液(3mL)中，室溫(28℃)攪拌4小時後旋乾。所得殘留物溶於甲醇(1mL)，加入氟化銨(60.5mg，1.63mmol)，加熱(60℃)攪拌20小時，LCMS和HPLC監測反應完全後，反應液用製備液相色譜(Gilson 281製備HPLC，19x250mm Waters XBridge C18 10μm製備管柱，流動相A為10mM碳酸氫銨水溶液，B為乙腈，流速25ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-2min，5%B；2-18.9min，5-15%B；18.9-19.4min，15-95%B；19.4-22.4min，95%B。該化合物保留時間10min)純化，凍乾後得到白色固體(21mg)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.71(s,1H),8.44(s,1H),8.23(s,1H),7.92(s,2H),7.11(t,J=52Hz,6H),6.56(s,2H),6.29(d,J=28Hz,1H),5.95(d,J=8.4Hz,1H),5.35(d,J=50.4Hz,1H),5.20(t,J=11.8Hz,1H),5.11-5.05(m,1H),4.48(d,J=3.6Hz,1H),4.39-4.28(m,2H),4.14(s,1H),4.02-3.96(m,1H),3.88-3.83(m,1H),3.81-3.76(m,1H)。³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 53.30,50.07。¹⁹F NMR(376MHz,DMSO-d ₆)δ -196.87。MS-ESI[M+H]⁺：742.8。

實施例26：(2’,3’)-環-(Rp,Rp)-[2’-O-硫代磷酸二酯-鳥苷]-[3’-O-硫代磷酸二酯-2-甲胺基-2’-脫氧-2’-氟-β-腺苷]二銨鹽

實施例26是採用實施例25的路線、由中間體98與甲胺的乙醇溶液進行脫保護反應產生的副產物，用製備液相色譜反應液用製備液相色譜(Gilson 281製備HPLC，19x250mm Waters XBridge C18 10μm製備管柱，流動相A為10mM碳酸氫銨水溶液，B為乙腈，流速25ml/min，214和254nm雙波長紫外吸收監測，梯度沖提：0-2min，5%B；2-15.6min，5-15%B；15.6-15.8min，15-95%B；15.8-18min，95%B。該化合物保留時間14.1min)純化，凍乾後得到白色固體。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.69(brs,1H),8.27(s,1H),8.02(s,1H),7.34-6.97(m,3H),6.31(brs,1H),6.28(d,J=2.4Hz,1H),5.90(d,J=0.8Hz,1H),5.44-5.15(m,3H),4.44(d,J=0.4Hz,1H),4.35-4.27(m,1H),4.24-4.12(m,2H),4.03-3.94(m,1H),3.93-3.79(m,2H)，2.85(s,3H)。³¹P NMR(162MHz,DMSO-d ₆)δ 54.02,51.06。MS+ESI--[M+H]：738.0。

活性實施例

實施例1：本發明化合物對THP-1細胞分泌IFN-β的激活作用

THP-1細胞是一種人單核細胞白血病細胞系，其STING表型為HAQ型，即R71H-G230A-R293Q。本實驗使用R&D公司的Human IFN-β DuoSet ELISA試劑盒(R&D公司，貨號#DY814-05)和DuoSet ELISA Ancillary Reagent Kit 2(R&D 公司，貨號#DY008)評估代表性本發明化合物對THP-1細胞分泌IFN-β的激活作用。

復蘇THP-1細胞(ATCC #TIB-202)時，細胞凍存管於37℃水浴中快速搖動使其在1min內融解。取融解後的細胞懸液與含10%FBS(Lifetechnology公司，貨號#10099-141)的RPMI1640培養基(Hyclone公司，貨號#SH30027.01)混勻，1000轉/min離心5min，棄上清。取5mL完全培養基(含10%FBS的RPMI1640培養基)重新懸浮細胞沉澱，置於底面積25cm²的細胞培養瓶中，放入37℃、5% CO₂、95%濕度的細胞培養箱中培養。細胞匯合率達到80%左右時進行細胞傳代。細胞傳代時，將培養瓶內所有細胞轉至15mL離心管中，1000轉/min離心5min，棄上清。加入5mL新的完全培養基重新懸浮細胞沉澱，取1mL置於底面積25cm²的細胞培養瓶中，補入4mL新鮮的完全培養基繼續培養。細胞匯合率再次達到80%左右時進行鋪板。鋪板時參照細胞傳代方法，保留1/5細胞懸液繼續培養，將剩餘4/5細胞懸液置於15mL離心管中。離心，棄去舊培養基，使用RPMI1640培養基(不添加血清)洗滌細胞一次，離心去上清。用RPMI1640培養基(不添加血清)重新懸浮細胞。台盼藍排斥法檢測細胞活率，確保細胞活率95%以上時鋪板。使用RPMI1640培養基(不添加血清)配製密度為1.1×10⁶個活細胞/mL的細胞懸液，添加180μL細胞懸液至96孔細胞培養板孔(NUNC公司，貨號#167008)中，使得培養板中細胞密度為2×10⁵個活細胞/孔。

首先使用DMSO(Sigma公司，貨號#D2650)連續稀釋10mM化合物的DMSO儲備液，稀釋倍數為3.16倍，稀釋至第5個濃度，並設置第6個濃度不含化合物的DMSO對照。然後使用PBS稀釋含不同濃度化合物的DMSO溶液，稀釋倍數為10倍，使各濃度化合物溶液中DMSO含量為10%。最後加20 μL上述溶液至對應的細胞培養板中，使化合物起始濃度為100μM，相鄰濃度稀釋倍數為3.16倍，細胞培養板中DMSO含量為1%。細胞板置於細胞培養箱中繼續培養24小時。

ELISA檢測過程參照R&D System,Cat#DY814-05說明書進行。

ELISA板包被：使用PBS(R & D System Cat#DY006)稀釋捕獲抗體(小鼠抗人IFN-β捕獲抗體PART#844508)配製成工作濃度，加100μL捕獲抗體工作液至96孔ELISA板中，封板並放置在室溫孵育過夜。棄去捕獲抗體工作液，使用洗滌緩衝液(0.05% Tween-20的PBS溶液pH 7.2-7.4，R & D System Cat#WA126)洗滌細胞板3次，每孔使用400μL洗滌緩衝液，每次洗滌充分移除洗滌緩衝液，最後一次洗滌在乾淨的紙上倒置拍板以完全移除洗滌緩衝液。每孔加入300μL封閉緩衝液(1% BSA的PBS溶液pH 7.2-7.4，R & D System Cat#DY995)，放置在室溫孵育1~2小時。重複以上洗滌步驟，準備各板以用於樣品添加。

樣品檢測：每孔加入100μL樣品或者標準品(重組人IFN-β標準品，PART#844510)，封板並放置室溫孵育2小時，並重複以上板包被方法的洗滌步驟。然後，每孔加入100μL檢測抗體(生物素化鼠抗人IFN-β檢測抗體，PART#844509)，封板並放置在室溫孵育2小時，並重複以上板包被方法的洗滌步驟。隨後，每孔加入100μL Streptavidin-HRP(PART#893975)工作液，封板並放置在室溫孵育20min，此過程避光，重複以上板包被方法的洗滌步驟。然後，每孔加入100μL受質溶液(Colar Reagent A(H₂O₂)和Color Reagent B(四甲基聯苯胺)的1：1混合物，R & D System Cat#DY999)，封板並放置在室溫孵育20min，此過程避光。最後，每孔加入50μL終止溶液(2N H₂SO₄，R & D System Cat#DY994)，輕敲細胞板以確保充分混勻。

使用多功能酶標儀(Molecular Devices公司，Spectramax M3)測定每孔的OD450。如果波長校準功能可用，設置為540nm或570nm。如果波長校準功能不可用，使用OD450減去OD540或者OD570。此過程在加入終止溶液後30min內完成。

使用2'3'-cGAMP(Invivogen公司，貨號#tlrl-nacga23)作為陽性對照化合物，使用ADU-S100(MCE，貨號#HY12885A)作為對比化合物：

使用GraphPad Prism 7.0軟體分析數據，利用雙對數作圖求得ELISA IFN-β含量的標準曲線。將各樣品孔檢測所得OD值代入標準曲線方程中求出相應IFN-β濃度。以非線性S曲線回歸擬合數據得出IFN-β濃度與化合物濃度的劑量-效應曲線，計算EC50值。

實驗結果表明，實施例化合物對THP-1細胞IFN-β的分泌具有激活的作用。由表1和圖1可知，實施例10、12、16、17和26化合物尤其具有顯著的STING激動劑活性：它們的EC50強於2',3'-cGAMP，都和ADU-S100相當；其中，實施例10、16和17化合物刺激THP-1細胞分泌IFN-β的最高濃度均高於ADU-S100。

實施例2：本發明化合物對CT26細胞增殖的抑制活性

CT26細胞是一種小鼠結直腸癌細胞系。本實驗使用Promega公司的CellTiter-Glo Luminescence Cell Viability Assay試劑盒評估化合物對CT26細胞增殖的抑制活性。

復蘇CT26細胞(ATCC #CRL-2638)時，細胞凍存管於37℃水浴中快速搖動使其在1min內融解。取融解後的細胞懸液與含10%FBS(GIBCO，貨號#10099-141)的DMEM培養基(GE公司，貨號#SH30243.01)混勻，1000轉/min離心5min，棄上清。取5mL完全培養基(含10%FBS的DMEM培養基)重新懸浮細胞沉澱，置於底面積25cm²的細胞培養瓶中，放入37℃、5% CO₂、95%濕度的細胞培養箱中培養。細胞匯合率達到70%~80%時進行細胞傳代。細胞傳代時，將培養瓶內所有細胞轉至15mL離心管中，1000轉/min離心5min，棄上清。加入5mL新的完全培養基重新懸浮細胞沉澱，取1mL置於底面積25cm²的細胞培養瓶中，補入4mL新鮮的完全培養基繼續培養。細胞匯合率再次達到70%~80%時進行鋪板。鋪板時參照細胞傳代方法，保留1/5細胞懸液繼續培養，將剩餘4/5細胞懸液置於15mL離心管中。離心，棄去舊培養基，使用DMEM培養基(不添加血清)洗滌細胞一次，離心去上清。用DMEM培養基(不添加血清)重新懸浮細胞。台盼藍排斥法檢測細胞活率，確保細胞活率95%以上時鋪板。使用DMEM培養基(不添加血清)配製密度為1.1×10⁴個活細胞/mL的細胞懸液，加90μL細胞懸液至96孔透明平底黑壁細胞培養板孔(Corning，貨號#3603)中，使得培養板中細胞密度為1000個活細胞/孔。設置不含細胞、不含化合物、僅含完全培養基的對照組(即培養液對照)，並設置不含化合物、含細胞的對照組(即細胞對照)。細胞板置於細胞培養箱中培養過夜。

首先使用DMSO(Sigma公司，貨號#D2650)連續稀釋10mM化合物DMSO儲備液，稀釋倍數為3.16倍，稀釋至第9個濃度，並設置第10個濃度不含化合物的DMSO對照。然後使用PBS(Solarbio公司，貨號#P1020)稀釋含不同濃度化合物的DMSO溶液，稀釋倍數為10倍，使各濃度化合物溶液中DMSO 含量為10%。最後加10μL上述溶液至對應的細胞培養板中，使化合物起始濃度為100μM，相鄰濃度稀釋倍數為3.16倍，細胞培養板中DMSO含量為1%。細胞板置於細胞培養箱中繼續培養120小時。

120小時後，融化CellTiter-Glo試劑(Promega，貨號#G7572)並將細胞板移至室溫平衡30min，加100uL的CellTiter-Glo至細胞板每個孔中，在定軌搖床上振動5min使細胞充分裂解，將細胞板放置於室溫20min以穩定冷光信號，用多功能酶標儀(Molecular Devices公司，Spectramax M3)全波長掃描各孔的冷光值。

採用以下化合物和ADU-S100(MCE，貨號#HY12885A)作為對照：氯法拉濱(Clofarabine；蕪湖華仁科技，貨號#HR-00701002)、克拉屈濱(Cladribine；CSNpharm，貨號#CSN10004)、鹽酸吉西他濱(Gemcitabine Hydrochloride；韶遠，貨號#SY014538)、吉西他濱前藥LY2334737(自製，中間體7)。

使用下列公式計算各濃度化合物作用下的細胞存活率：

細胞存活率(%)=(Lum_待測藥-Lum_{培養液對照})/(Lum_細胞對照-Lum_{培養液對照})×100%。

使用GraphPad Prism 7.0軟體分析數據，利用非線性S曲線回歸來擬合數據得出劑量-效應曲線，並由此計算IC50值。

實驗結果表明，代表性實施例化合物能夠抑制CT26腫瘤細胞的體外生長；其中，實施例3、10和13化合物的抑制能力尤其顯著，而ADU-S100無明顯的腫瘤細胞抑制能力。結合活性實施例1的結果，該結果表明了實施例化合物具有多功能抗腫瘤屬性，即STING激動劑的腫瘤免疫活性和抗代謝抗癌藥的細胞毒性作用。

實施例3：本發明化合物在CT26同基因小鼠雙側移植瘤模型中的抗腫瘤活性

將6~8週BALB/c小鼠(購自上海靈暢生物科技有限公司)分別於左右後側背部皮下接種5×10⁵個CT26細胞(太倉澤鑫生物科技有限公司提供，ATCC#CRL-2638)，接種體積為0.1mL/側。當腫瘤生長至平均體積100mm³時，根據腫瘤大小和小鼠體重隨機分組並開始給藥。第一次給藥當天為第0天。共給藥兩次，在第0、第4天，右側瘤內注射給藥50ug化合物/鼠(即2.5mg/kg)，以同體積PBS(Hyclone公司，貨號#SH30258.01)作為對照。左側腫瘤不做任何處理。給藥13天後處死對照組小鼠，21天後處死治療組小鼠。實驗期間，每週3次測量左、右測腫瘤體積和體重，腫瘤體積計算公式為V=D×d×d/2(其中D表示腫瘤長徑，d表示腫瘤短徑)。

給藥後第13天的數據表明，所測試的本發明實施例化合物均能夠明顯抑制雙側腫瘤生長。右側給藥組效果更為顯著，大部分腫瘤消褪(圖2A)。其中，ADU-S100治療組的腫瘤生長抑制率為99.1%，實施例17為99.5%，其餘各組腫瘤100%抑制，未觸摸到腫瘤。同時，未經治療的左側腫瘤生長減緩(圖2B)。在給藥後第13天，左側腫瘤各組生長抑制率分別為：ADU-S100，64.2%；實施例10，91.2%；實施例12，75.3%；實施例16，71.7%；實施例17，67.4%。另外，本實驗中觀察到給藥後個別小鼠體重下降，在15%以內，停止給藥後體重恢復(圖2C)。以上結果表明，本發明的化合物在CT26同基因雙側瘤模型中均表現出了相當或優於ADU-S100的腫瘤抑制能力。

實施例4：本發明化合物在CT26裸鼠移植瘤模型中的抗腫瘤活性

將6~8週BALB/c裸鼠(購自上海靈暢生物科技有限公司)分別於右後側背部皮下接種5×10⁵個CT26細胞(由太倉澤鑫生物科技有限公司提供，ATCC # CRL-2638)，接種體積為0.1mL。當腫瘤生長至平均體積100mm³時，根據腫瘤大小和小鼠體重隨機分組進行給藥。第一次給藥當天為第0天。共給藥兩次，在第0天和第4天，右側瘤內注射50ug化合物/鼠(即2.5mg/kg)，以同體積PBS(Hyclone 公司，貨號#SH30258.01)作為對照。給藥9天後處死對照組小鼠，14天、16天後相繼處死ADU-S100和實施例10化合物治療組小鼠。實驗期間，每週3次測量腫瘤體積和體重，腫瘤體積計算公式為V=D×d×d/2(同上)。

給藥後第9天的數據表明，所測試的本發明實施例10化合物在T細胞免疫缺陷的裸鼠中能夠明顯抑制腫瘤生長，抑制率為94.4%。與之相比，ADU-S100僅表現出部分腫瘤抑制能力，其抑制率為61.4%，可能由於其殘存的免疫活性或其他未知原因。而無論是實施例10還是ADU-S100，它們對免疫健全鼠的腫瘤生長抑制效果均比裸鼠更好(圖2D)。該實驗驗證了ADU-S100以激活T細胞介導免疫為主要作用機制；而本實施例10化合物因其多功能機制抑瘤活性，在本案例中證明了其具有優於STING激動劑ADU-S100的抑瘤能力。

實施例5：本發明化合物在CT26同基因小鼠或裸鼠移植瘤模型中的免疫記憶功能

將6~8週BALB/c免疫健全小鼠或裸鼠(購自上海靈暢生物科技有限公司)於右後側背部皮下接種5×10⁵個CT26細胞(由太倉澤鑫生物科技有限公司提供，ATCC # CRL-2638)，接種體積為0.1mL。當腫瘤生長至平均體積100mm³時，根據腫瘤大小和小鼠體重隨機分組並開始給藥。第一次給藥當天為第0天。給藥兩次，在第0、第4天，瘤內注射50ug化合物/鼠(即2.5mg/kg)。以同體積PBS(Hyclone公司，貨號#SH30258.01)作為對照。給藥9天或13天後分別處死裸鼠或BALB/c鼠實驗中的對照組小鼠。於21天後，再次在小鼠左後側背後皮下接種5×10⁵個CT26細胞，接種體積為0.1mL。同時接種無任何處理的空白BALB/c或裸鼠作為對照。實驗期間，每週3次測量左、右測腫瘤體積和體重，腫瘤體積計算公式為V=D×d×d/2(同上)。

結果表明，不管是在免疫健全還是免疫缺陷小鼠上，所測試的本發明實施例10化合物均能顯著抑制CT26腫瘤生長。免疫健全鼠上的藥效更為突出(圖3A)。在給藥後第5天，實施例10治療組小鼠腫瘤全部消失。第21天分別在實施例10化合物處理組重新接種CT26細胞。經過7天後(第30天)，未經免疫的空白BALB/c小鼠平均腫瘤體積為75mm³，而前期經過實施例10治療的小鼠平均腫瘤體積為29mm³。至第33天實驗結束，對照組與實施例10免疫組的小鼠平均腫瘤體積分別為648mm³和101mm³。該實驗說明，給與實施例10化合物治療後，免疫健全小鼠產生免疫記憶，對再次接種的同種細胞產生強烈免疫排斥，有效防止腫瘤復發。

另一方面，在免疫缺陷的裸鼠中，停止給藥後，個別小鼠出現腫瘤繼續生長現象(圖3B)。最終選擇腫瘤體積較小的3隻鼠在第21天再次接種CT26細胞。結果顯示重新接種的CT26腫瘤細胞與空白鼠腫瘤細胞生長速度相近。該結果說明該裸鼠實驗中沒有免疫記憶產生，同時進一步驗證了該模型中無免疫系統參與下實施例10化合物亦具有細胞毒性作用的抑瘤能力。

實施例6：本發明化合物的肝細胞代謝穩定性試驗

根據本領域常規的體外代謝穩定性研究的標準方法，例如(Kerns,Edward H.and Di Li(2008).Drug-like Properties：Concepts,Structure Design and Methods：From ADME to Toxicity optimization.San Diego：Academic Press；Di,Li等人，Optimization of a Higher Throughput Microsomal Stability Screening Assay for Profiling Drug Discovery Candidates,J Biomol.Screen.2003,8(4),453.)中所述的方法，類似地如下進行本發明化合物在5個物種(小鼠、大鼠、狗、猴、人)的肝細胞代謝穩定性試驗。

實驗所用肝細胞為：人肝細胞(SHQY,lot#HEP190006)；狗肝細胞(IVT,lot#ZMB)；猴肝細胞(Xenotech,lot#2010022)；大鼠肝細胞(SHQY,lot#HEP134045)；小鼠肝細胞(BioIVT,Cat.# M005052,Lot.# MEO)。

從液氮罐中取出冷凍保存的凍存管肝細胞，並立即置於37±1℃的振盪水浴中，持續2分鐘±15秒。將肝細胞轉移至50mL肝細胞解凍培養基(組成：Williams E培養基，35mL，Invitrogen公司，貨號#A1217601；等滲Percoll溶液，13.5mL，通用公司，貨號#17-0891-01；杜氏磷酸鹽緩衝液，1.5mL，Invitrogen公司，貨號#14200-075；Glutamax,500μL，Invitrogen公司，貨號#35050061；HEPES，750μL，Invitrogen公司，貨號#15630106；胎牛血清，2.5mL，Invitrogen公司，貨號#10091130；重組人胰島素，50μL，Invitrogen公司，貨號#12585014；地塞米松(配成10mM DMSO溶液)，5μL，Sigma公司，貨號#D1756)中，輕輕混勻，以500轉/分離心3min。離心後，小心吸走上清液(不要干擾細胞沉澱)，添加10×體積的預熱KHB緩衝液(Krebs-Henseleit緩衝液，Sigma，Cat#K3753-10X1L)和5.6g/L HEPES，重新懸浮細胞沉澱，輕輕混勻，以500轉/分離心3min。吸棄上清液，勿觸及細胞沉澱，測定細胞活力和數量。計數肝細胞，然後將細胞懸浮液KHB緩衝液稀釋至適當密度(活細胞密度=2×10⁶個細胞/mL)。把肝細胞溶液放在冰上直到使用。

在預熱的KHB(1%二甲基亞碸)中製備2×加藥溶液，在5594g下離心15min(Thermo Multifuge×3R)，其中，200μM加標溶液：在980μL二甲基亞碸中加入20μL化合物儲存液(10mM，DMSO溶液)；2×加藥溶液：在990μL KHB中加入10μL 200μM加標溶液(稀釋後2μM)。

向指定的不同時間點的孔中添加50μL預熱的2×加藥溶液。將50μL預熱的肝細胞溶液(2×10⁶個細胞/mL)加入指定的孔中，用於15min、30min、60min和120min檢測，然後開始計時，將反應板置於37℃培養箱中。

將100μL含IS(柳胺酚或丙咪嗪)的乙腈(Merck,Cat.# CN34854-4L)加入設計為0min的孔中，輕輕混合，然後添加50μL預熱的肝細胞溶液(2×10⁶個細胞/mL)，封閉孔板。在15min、30min、60min和120min，分別向孔中添加100μL含IS的乙腈，然後封閉。淬火後，在振動器(IKA，MTS2/4)上搖動平板10min(600rpm)。將板超聲處理2min，然後在5594g下離心15min(Thermo Multifuge×3R)。將每孔50μL上清液轉移到含有50μL超純水(milipore，ZMQS50F01)的96孔樣品板中，用於LC/MS分析。

將T0時間點待測化合物濃度(C0)作為100%，其他孵育時間點的濃度轉換為百分剩餘量，將各時間點的百分剩餘量的自然對數對孵育時間作線性回歸，得斜率K，然後按照下面公式計算肝細胞清除速率(Cl _int)和體外半衰期(T1/2)：

T1/2=1n2/K=0.693/K

Cl _int =(0.693/T1/2)×(1/肝細胞密度)×比例因子

其中，肝細胞密度為本次實驗孵育體系中肝細胞的終濃度：1×10⁶個/mL。比例因子=肝細胞數×肝重(對於5個物種的肝細胞，分別為：小鼠11812.5×10⁶個/kg，大鼠4680×10⁶個/kg，狗6880×10⁶個/kg，猴3900×10⁶個/kg，人2544.3×10⁶個/kg)。

由圖4A可知，本發明化合物如實施例10化合物在5個物種的肝細胞中均表現出了較好的代謝穩定性；它具有較長的代謝半衰期和低的清除速率。

實施例7：本發明化合物的代謝產物的發現與鑑定

根據本領域常規的體外代謝穩定性研究的標準方法，例如(Kerns,Edward H.and Di Li(2008).Drug-like Properties：Concepts,Structure Design and Methods：From ADME to Toxicity optimization.San Diego：Academic Press；Di,Li等人，Optimization of a Higher Throughput Microsomal Stability Screening Assay for Profiling Drug Discovery Candidates,J Biomol.Screen.2003,8(4),453.)中所述的方法，類似地鑑定本發明化合物在5個物種(小鼠、大鼠、狗、猴、人)肝細胞的主要代謝產物。

實驗所用肝細胞為：人肝細胞(SHQY,Cat.# BQHPCH10,Lot.# HEP190006-TA05)；狗肝細胞(BioIVT,Cat.# M00205,Lot.# ZMB)；猴肝細胞(XENOTECH,Cat.# PPCH2000,Lot.# 2010022)；大鼠肝細胞(SHQY,Cat.# BQR1000．H15,Lot.# HEP134049)；小鼠肝細胞(BioIVT,Cat.# M005052,Lot.# MEO)。

預熱HI肝細胞維持培養基(BIOIVT,Cat.# Z99009；Lot.# C02060C)至37℃。從液氮罐中取出冷凍保存的凍存管肝細胞，並立即置於37±1℃的振盪水浴中2min±15秒。將肝細胞轉移至50ml的HI培養基中，輕輕混勻，以500轉/分離心3min。離心後，小心吸走上清液(不要干擾細胞沉澱)。加入10×體積的預熱HI培養基，重新懸浮細胞沉澱，輕輕混勻，以500轉/分離心3min。吸棄上清液，勿觸及細胞沉澱。計數肝細胞，然後將細胞懸浮液用HI培養基稀釋至適當密度(活細胞密度=2×10⁶個細胞/mL)，把肝細胞溶液放在冰上直到使用。

在預熱HI培養基中製備2×加藥溶液。如下配製2×加藥溶液(20μM)：向3992μL HI培養基中加入8μL 10mM化合物儲存液(20μM，即稀釋後的0.2%二甲基亞碸)。

預熱肝細胞溶液和2×加藥溶液，向指定用於T₂₄₀和T_240-w/o的孔中添加200μL預熱的2×加藥溶液。對於T0，向孔中添加1200μL乙腈(Merck,Cat.# CN34854-4L)和200μL肝細胞溶液(2×10⁶個細胞/mL)，然後添加200μL預熱的2×加藥溶液，封閉孔板。將200μL預熱的肝細胞溶液(2×10⁶個細胞/mL)添加到指定用於T₂₄₀的孔中；向指定用於T_240-w/o的孔中添加200μL預熱的HI培養基，並開始計時；將反應板置於37℃的CO₂培養箱中。

240min時，分別向指定的孔中添加1200μL乙腈，然後封閉孔板。淬火後，對板進行超聲波處理2min，然後在1400轉/分下離心5min。在氮氣流下蒸發1200μL的上清液，直至乾燥。然後用200μL乙腈：水(1：3 v/v)將乾燥的提取物重新溶解，渦旋振盪2min，在14000轉/分下離心5min。將2/5μL上清液注入LC-UV-MS進行分析。

由圖4B可知，本發明化合物如實施例10化合物在5個物種的肝細胞中均可以檢測到其分解生成的細胞毒性小分子氯法拉濱(Clofarabine)，並且這是實施例10化合物的主要代謝產物。結合活性實施例6的結果，在進入體內一段時間內，極有可能同時存在具有STING激動活性的CDN分子和細胞毒性的小分子，從而實現分子水平的聯用，提供一種增強、甚至協同的抗腫瘤效果。該結果也從機理上解釋了其在小鼠抑瘤實驗中效果良好的原因。

實施例8：本發明化合物與單純的CDN STING激動劑和細胞毒性藥聯用在CT26同基因小鼠雙側移植瘤模型中的抗腫瘤活性的藥效對比

將6~8週BALB/c小鼠(購自上海靈暢生物科技有限公司)分別於左右後側背部皮下接種5×10⁵個CT26細胞(太倉澤鑫生物科技有限公司提供，ATCC #CRL-2638)，接種體積為0.1mL/側。當腫瘤生長至平均體積100mm³時，根據腫瘤大小和小鼠體重隨機分組(本發明化合物組；單純的CDN STING激動劑單藥組；細胞毒性藥單藥組；單純的CDN STING激動劑和細胞毒性藥聯用組)並開始給藥。第一次給藥當天為第0天。共給藥三次，在第0、第4、第7天，右側瘤內注射給藥，以同體積PBS(Hyclone公司，貨號#SH30258.01)作為對照。左側腫瘤不做任何處理。給藥13天後處死對照組小鼠，21天後處死治療組小鼠。實驗期間，每週3次測量左、右測腫瘤體積和體重，腫瘤體積計算公式為V=D×d×d/2(同上)。

實驗結果顯示，本發明化合物組的腫瘤生長抑制率，顯著高於CDN STING單藥組和細胞毒性藥單藥組的抑制率，其活性與後兩者的活性加合相當，甚至更高，產生了提高的、甚至是協同的抑制腫瘤活性。

本發明的各種枚舉的實施方式中指定特徵的一般或較佳定義可以與其它指定特徵的一般或較佳組合，得到本發明另外的實施方式。就如同在本文中具體地且逐一地列出了這些相互組合而得到的方案一樣，除非上下文清楚地顯示並非如此。

在本說明書中，引用了若干在先出版物。這些出版物，不被認為與本發明的可專利性相關，但以引用方式將其全部內容結合於本文。本說明書中對任何在先出版物(或從其衍生出的信息)的引用不是、也不應當被視為確認或承認或任何形式的啟示，即相應的先前出版物(或從其衍生出的信息)構成本說明書涉及的技術領域中的公知常識。

Claims

一種式(II)的環狀二核苷酸化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物，

其中

B₁為被X取代的腺嘌呤
，其中X選自Cl、F或NHC_1-6烷基；或視需要被R^a取代的胞嘧啶
，其中R^a選自H或-C(O)-C_1-14烷基；

R₁和R₁’各自獨立地選自H、F或-OH；

B₂選自視需要被X取代的腺嘌呤
，其中X選自H、F或Cl；視需要被R^a取代的胞嘧啶
，其中R^a選自H或-C(O)-C_1-14烷基；或鳥嘌呤
，其中的OH視需要被C_1-6烷基取代；

表示磷酸鍵可連接至戊糖的2‘位或3‘位，二者中未與磷酸成環的位點被R₂和R₂’取代；和

R₂和R₂’各自獨立地選自H、-OH或F；

條件是，當B₁或B₂之一為視需要被R^a取代的胞嘧啶時，其所連接的戊糖環上與其相鄰的碳原子被兩個F取代。
如請求項1所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物，其中
表示磷酸鍵連接至戊糖的3’位，式(II)具有
如請求項2所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物，其中B₁為
， R₁和R₁’均為H，或R₁和R₁’之一為H，另一個為F。
如請求項2所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物，其中B₁為被X取代的腺嘌呤
，其中X選自NHC_1-6烷基，較佳NHCH₃，R₁和R₁’均為H，或 R₁和R₁’之一為H，另一個為F。
如請求項2所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物，其中B₁為視需要被R^a取代的胞嘧啶
，其中R^a選自H或-C(O)-C_1-14烷基，R₁和R₁’均為F。
如請求項2至5中任一項所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物，其中B₂為鳥嘌呤
或腺嘌呤
，R₂和R₂’之一為H，另一個選自-OH或 F。
如請求項2至5中任一項所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物，其中B₂為被X取代的腺嘌呤
，其中X為Cl，R₂和R₂’之一為H，另一個為F，或R₂和R₂’均為H。
如請求項2至5中任一項所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物，其中B₂是視需要被R^a取代的胞嘧啶
，其中R^a選自H或-C(O)-C_1-14烷基，R₂和 R₂’均為F。
如請求項1所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物，其中
表示磷酸鍵連接至戊糖的2‘位，式(II)具有
如請求項9所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物，其中B₁為
， R₁和R₁’均為H，或R₁和R₁’之一為H，另一個為F。
如請求項9所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物，其中B₁為被X取代的腺嘌呤
，其中X為NHC_1-6烷基，較佳NHCH₃，R₁和R₁’均為H，或R₁ 和R₁’之一為H，另一個為F。
如請求項9所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物，其中B₁為視需要被R^a取代的胞嘧啶
，其中R^a選自H或-C(O)-C_1-14烷基，R₁和R₁’均為F。
如請求項9至12中任一項所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物，其中B₂ 為鳥嘌呤
或腺嘌呤
，R₂和R₂’之一為H，另一個為-OH。
如請求項1、2或9所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物，其為

或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物。
如請求項14所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物，其中B₁為
， R₁和R₁'均為H，或R₁為F且R₁’為H。
如請求項14所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物，其中B₁為被X取代的腺嘌呤
，其中X為NHC_1-6烷基，較佳NHCH₃，R₁和R₁’均為H，或 R₁為F且R₁’為H。
如請求項14所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物，其中B₁為視需要被R^a 取代的胞嘧啶
，其中R^a選自H或-C(O)-C_1-14烷基，R₁和R₁’均為F。
如請求項14至17中任一項所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物，其中在式 (II-a’)中，B₂為鳥嘌呤
或腺嘌呤
，R₂’為H，R₂選自-OH 或F。
如請求項14至17中任一項所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物，其中在式 (II-a’)中，B₂為被X取代的腺嘌呤
，其中X為Cl，R₂為H，另一個 R₂’為F，或R₂和R₂’均為H。
如請求項14至17中任一項所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物，其中在式 (II-b’)中，B₂為鳥嘌呤
或腺嘌呤
，R₂’為H，R₂為-OH。
一種環二核苷酸化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物，其中該化合物選自

或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物。
一種醫藥組成物，其包含治療有效量的如請求項1至21任一項所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物以及藥學上可接受的賦形劑。
如請求項22所述的醫藥組成物，其為局部施用形式。
一種用於在哺乳動物、特別是人中預防或治療與STING相關或由其介導的疾病、尤其是病毒感染或腫瘤的方法，該方法包括施用有效量的如請求項1至21中任一項所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物或如請求項22或23所述的醫藥組成物。
一種如請求項1至21中任一項所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物或如請求項22或23所述的醫藥組成物作為STING激動劑用於治療或預防與STING相關或由其介導的疾病、尤其是病毒感染或腫瘤的用途。
一種如請求項1至21中任一項所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物或如請求項22或23所述的醫藥組成物作為細胞毒性劑用於治療或預防病毒感染或腫瘤的用途。
一種如請求項1至21中任一項所述的化合物或如請求項22或23所述的醫藥組成物用作免疫治療和細胞毒治療的多功能活性劑的用途。
如請求項27所述的用途，其中的多功能活性劑用於激活STING信號通路來激活免疫系統以發揮抗腫瘤和抗病毒複製的功能、藉由釋放細胞毒性劑導致腫瘤細胞死亡或阻止病毒複製、繼而藉由釋放腫瘤DNA持續激活STING以殺傷腫瘤細胞、並藉由釋放腫瘤新抗原以產生抗體-抗原應答從而提供對腫瘤的“免疫記憶”或持久免疫的能力。
一種如請求項1至21中任一項所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物或如請求項22或23所述的醫藥組成物在製備用於治療或預防與STING相關或由其介導的疾病、尤其是病毒感染或腫瘤的藥物中的用途。
一種如請求項1至21中任一項所述的化合物、其立體異構體、互變異構體、穩定的同位素變體、藥學上可接受的鹽、前藥或溶劑合物或如請求項22或23所述的醫藥組成物在製備用於治療或預防病毒感染或腫瘤的細胞毒性劑中的用途。
如請求項24至26和28至30中任一項所述的方法或用途，其中的腫瘤選自腦癌、頭頸癌、皮膚癌、黑色素瘤、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、結腸癌、血癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、骨癌、結腸直腸癌、肝癌、腎細胞癌、胰腺癌、霍奇金淋巴瘤或白血病。