BR112020010941A2 - dinucleotídeos cíclicos como agonistas de sting - Google Patents

Abstract

A presente invenção refere-se aos compostos, às composições e aos métodos para o tratamento de doenças, síndromes ou distúrbios, que são afetados pela modulação de STING. Tais compostos são representados pela Fórmula (I) da seguinte forma: em que B2, X2, R2a, R2b, R2c, Z-M-Y, Y1-M1Z1, B1, X1, R1a, R1b e R1c são como definidos aqui.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "DINU- CLEOTÍDEOS CÍCLICOS COMO AGONISTAS DE STING".

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

[0001] Este pedido reivindica a prioridade para o Pedido de Patente Provisório US n° 62/599.111, depositado em 15 de dezembro de 2017, o qual está aqui incorporado a título de referência, em sua totalidade.

CAMPO DA INVENÇÃO

[0002] A presente invenção se refere a novos compostos que são agonistas de STING (Estimulador de Genes de Interferon) e são úteis para o tratamento de distúrbios que são afetados pela modulação da proteína STING. A invenção também se refere a composições farma- cêuticas que compreendem um ou mais de tais compostos, processos para preparar tais compostos e composições, e uso de tais compostos ou composições farmacêuticas para o tratamento de várias doenças, síndromes e distúrbios. A invenção pode estar envolvida na ativação da via de sinalização a jusante, resultando adicionalmente na ativação de segundos mensageiros e fatores de crescimento, e na produção de in- terferon envolvido na imunidade inata e adaptativa. Mais particular- mente, a presente invenção se refere ao uso de tais compostos ou com- posições farmacêuticas para o tratamento de várias infecções, doenças, síndromes e distúrbios incluindo, mas não se limitando a, melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pul- mão, fibrossarcoma e terapia antiviral.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[0003] STING (estimulador de genes de interferon), também co- nhecido como TMEM173, MITA, MPYS, e ERIS, é um receptor trans- membranar localizado dentro da célula e um sensor de chave de áci- dos nucleicos citossólicos (Zhong B, et al. "The Adaptor Protein MITA Links Virus-Sensing Receptors to IRF3 Transcription Factor Activa- tion". Immunity. 2008, vol. 29; 538-550). Estudos recentes revelaram a biologia de STING e seu papel na mobilização de uma resposta imune inata resultando em robusta atividade de antitumor em modelos de ca- mundongo. A ativação da via de STING resulta na produção de inter- ferons do Tipo I (principalmente IFN-α e IFN-β) induzida através da via de IRF3 (fator 3 regulador de interferon). Acredita-se que a ativação de IRF3 seja mediada por TBK1 que recruta e fosforila IRF3 formando, assim, um homodímero de IRF3 capaz de entrar no núcleo para trans- crever interferon de tipo I e outros genes (Liu S, et al. "Phosphorylation of innate immune adaptor proteins MAVS, STING, e TRIF induces IRF3 activation" Science. 2015: 2630-2637). TBK1 também ativa o intensifi- cador da cadeia leve kappa do fator nuclear da via de células B ativa- das, que leva à produção de citocinas pró-inflamatórias (IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-6, TNF-α, etc.), através do fator de transcrição oncogênico NF- KB. Além disso, STING ativa STAT6 (transdutor de sinal e ativador de transcrição 6) para induzir (tipo Th2), aumentar (IL-12) ou diminuir (IL- 10) a produção de várias citocinas, incluindo as quimiocinas CCL2, CCL20, e CCL26 (Chen H, et al. "Activation of STAT6 by STING Is Critical for Antiviral Innate Immunity" Cell. 2011, vol.14: 433-446). Tam- bém foi relatado que a fosforilação direta de STING em Ser366 após a ativação ocorre através de TBK1 ou ULK1 (Corrales, L. et al. "Direct activation of STING in the tumor microenvironment leads to potent and systemic tumor regression and immunity" Cell Reports, 2015, vol.11: 1- 13; Konno, H. et al. "Cyclic dinucleotides trigger ULK1 (ATG1) phos- phorylation of STING to prevent sustained innate immune signaling" Cell, 2013, vol. 155: 688-698).

[0004] O ligante natural que se liga e ativa STING (2',3')cíclico gua- nosina monofosfato-adenosina monofosfato (2',3'-cGAMP) e a enzima responsável por sua síntese (cGAs, também conhecida como C6orf150 ou MB21D1) foram elucidados, fornecendo uma oportunidade para mo-

dular essa via. cGAMP é um ligante de alta afinidade para STING produ- zido em células de mamíferos, que serve como um segundo mensageiro endógeno para ativar a via de STING. Ele é um dinucleotídeo cíclico com uma ligação 2’,3’ única produzida por cGAS na presença de DNA de du- pla fita exógeno (por exemplo, aquele liberado por bactérias, vírus ou pro- tozoários invasores) ou de auto-DNA em mamíferos (Wu et al., 2013; Sun, L. et al. "Cyclic GMP-AMP Synthase Is a Cytosolic DNA Sensor That Activates the Type I Interferon Pathway" Science, 2013, vol. 339: 786- 791; Bhat N e Fitzgerald KA. "Recognition of Cytosolic DNA by cGAS and other STING-dependent sensors". Ear J Immunol 2014 Mar; 44(3):634- 40). A ativação de STING pode também ocorrer através da ligação de dinucleotídeos (3',3) cíclicos exógenos (c-di-GMP, c-di-AMP e 3’3’- cGAMP) que são liberados por bactérias invasoras (Zhang X, et al. "Cy- clic GMP-AMP Containing Mixed Phosphodiester Linkages Is An Endog- enous High-Affinity Ligand for STING" Molecular Cell, 2013, vol. 51: 226- 235; Danilchanka, O and Mekalanos, JJ. "Cyclic Dinucleotides and the Innate Immune Response" Cell. 2013, vol. 154: 962-970).

[0005] A ativação da via de STING desencadeia uma resposta imune que resulta na geração de células T assassinas específicas que pode encolher os tumores e fornecer imunidade de longa duração de modo que eles não reapareçam. A impressionante atividade antitumo- ral obtida com agonistas de STING em modelos pré-clínicos gerou um alto nível de excitação para este alvo e compostos de molécula pe- quena que podem modular a via de STING têm potencial para tratar tanto o câncer quanto reduzir doenças autoimunes.

[0006] A ativação da via de STING também contribui para uma res- posta antiviral. A resposta de perda de função, seja no nível celular ou de organismo, demonstra uma incapacidade de controlar a carga viral na ausência de STING. A ativação da via de STING desencadeia uma resposta imune que resulta em citocinas antivirais e pró-inflamatórias que combatem os vírus e mobilizam os braços inatos e adaptativos do sistema imune. Por fim, a imunidade de longa duração é desenvolvida contra o vírus patogênico. A atividade antiviral surpreendente obtida com agonistas de STING em modelos pré-clínicos gerou um alto nível de excitação para este alvo, e compostos de molécula pequena que po- dem modular a via de STING têm potencial para tratar infecções virais crônicas, como hepatite B.

[0007] A infecção pelo vírus da hepatite B (HBV) é um importante pro- blema de saúde global, que afeta mais de 5% da população mundial (mais de 350 milhões de pessoas em todo o mundo e 1,25 milhão de indivíduos nos EUA). Apesar da disponibilidade de certas vacinas e terapias contra o HBV, a carga da infecção crônica por HBV continua a ser um problema médico mundial não atendido significativo devido a opções de tratamento subótimas e taxas sustentadas de novas infecções na maioria das partes do mundo em desenvolvimento. Os tratamentos atuais são limitados a apenas duas classes de agentes: interferon alfa e análogos nucleosídeos que atuam como inibidores da polimerase viral. No entanto, nenhuma des- sas terapias oferece uma cura para a doença, e os problemas de resistên- cia a fármacos, baixa eficácia e tolerabilidade limitam seu impacto. As bai- xas taxas de cura de HBV são atribuídas pelo menos em parte ao fato de que a completa supressão da produção de vírus é difícil de se obter com um único agente antiviral. No entanto, a persistente supressão de DNA do VHB desacelera a progressão da doença hepática e ajuda a evitar a car- cinoma hepatocelular. As metas de terapia atual para pacientes infectados pelo HBV são direcionadas à redução dos níveis séricos de DNA de HBV para níveis baixos ou indetectáveis, e para finalmente reduzir ou impedir o desenvolvimento de cirrose e carcinoma hepatocelular. Existe, portanto, uma necessidade na técnica por agentes terapêuticos que possam au- mentar a supressão da produção viral e que possam tratar, melhorar ou evitar a infecção por HBV. A administração de tais agentes terapêuticos a um paciente infectado por HBV, quer como monoterapia ou em combina- ção com outros tratamentos para o HBV ou tratamentos auxiliares, pode levar a uma redução significativa da carga viral, melhor prognóstico, dimi- nuição da progressão da doença e intensificação das taxas de sorocon- versão.

[0008] Os benefícios terapêuticos potenciais da intensificação da imunidade inata e adaptativa tornam o STING um alvo terapêutico atra- tivo que demonstra atividade impressionante por si só e também po- dem ser combinados com outras imunoterapias.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0009] A presente invenção se refere a compostos de Fórmula (I) em que: B1 e B2 são independentemente selecionados do grupo que consiste em b1, b2, b3, b4, b5, b6, b7, b8, b9, b10, b11, b12, b13, b14, b15, b16, b17, b18, b19, b20, b21, b22, b23, b24, b25, b26, b27, b28, b29, b30, b31, b32 e b33;

R1a é independentemente selecionado dentre hidrogênio; hidróxi; fluoro; alcóxi C1-3 opcionalmente independentemente substitu- ído com um a sete substituintes halogênio ou metóxi; alquenilóxi C3-6; alquinilóxi C2-6; hidroxialcóxi C1-3; ou alquila C1-3 opcionalmente inde- pendentemente substituída com um a três substituintes selecionados dentre fluoro, cloro, bromo, iodo ou hidróxi; R3 é independentemente selecionado dentre hidrogênio, fluoro ou hidróxi; desde que, quando R1b é fluoro, R1a é hidrogênio ou fluoro; R1c é independentemente selecionado dentre hidrogênio ou metila; R2a é independentemente selecionada dentre hidrogênio; hidróxi; fluoro; alcóxi C1-3 opcionalmente independentemente substitu- ído com um a sete substituintes halogênio ou metóxi; alquenilóxi C3-6;

alquinilóxi C2-6; hidroxialcóxi C1-3; ou alquila C1-3 opcionalmente inde- pendentemente substituída com um a três substituintes selecionados dentre fluoro, cloro, bromo, iodo ou hidróxi; e R3 é hidrogênio; ou, R2a é ‒O‒ e R2c é "CH2 -; de modo que R2a, R2c e os átomos aos quais eles estão ligados formam um anel de 5 membros; R2b é independentemente selecionado dentre hidrogênio, flu- oro ou hidróxi; desde que, quando R2b é fluoro, R2a é hidrogênio ou fluoro; R2c é independentemente selecionada dentre hidrogênio, fluoro, CH3 ou CH2F; X1 e X2 são independentemente selecionados do grupo con- sistindo em O, S e CH2; Y e Y1 estão, cada um, independentemente ausentes, ou são selecionados do grupo consistindo em O ou NH; Z e Z1 são independentemente selecionados do grupo con- sistindo em O e NH; um dentre M e M1 é e o outro de M e M1 é independentemente selecionado dentre de modo que, quando M é

, um de Y e Z é NH, e o outro de Y e Z é O; e, de modo que M1

, é um de Y1 e Z1 é NH, e o outro de Y1 e Z1 é O;

R4 é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidróxi, metila, BH3 e -SR5; em que R5 é independentemente sele- cionado do grupo consistindo em hidrogênio, -CH2O(O)R6, - CH2OC(O)OR6, -CH2CH2SC(O)R6, e -CH2CH2S-SCH2R6; R6 é independentemente selecionado do grupo consistindo em arila C6-10, heteroarila, heterocicloalquila, cicloalquila C3-12 e alquila C1-20 opcionalmente independentemente substituída com um a cinco substituintes fluoro ou hidróxi, alquila C1-6, arila C6-10 ou cicloalquila C3- 12; ou um enantiômero, um diastereômero ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; desde que, quando B1 e B2 são, cada um, b6, e Z-M-Y é OS(O2)NH, e Y1-M1-Z1 é OP(O)(OH)O ou OP(O)(SH)O, então R 1a é diferente de OH; desde que um composto da Fórmula (I) seja diferente de um composto no qual B2 é b6; X2 é O; R2a é OCH3; R2b é H; R2c é H; Z-M-Y é OS(O)2NH; Y1-M1-Z1 é OP(O)(OH)O; B1 é b7; X1 é O; R1a é OCH3; R1b é H; e R1c é H; desde que um composto da Fórmula (I) seja diferente de um composto no qual B2 é b6; X2 é O; R2a é F; R2b é H; R2c é H; Z-M-Y é (*R)OP(O)(SH)O; Y1-M1-Z1 é NHS(O)2O; B1 é b21; X1 é O; R1a é OH; R1b é H; e R1c é H; desde que um composto da Fórmula (I) seja diferente de um composto no qual B2 é b30; X2 é O; R2a é H; R2b é H; R2c é H; Z-M-Y é OS(O)2NH; Y1-M1-Z1 é OP(O)(OH)O; B1 é b7; X1 é O; R1a é OCH3; R1b é H; e R1c é H.

[0010] A presente invenção também fornece uma composição far- macêutica que compreende, que consiste em e/ou que consiste essen- cialmente em um veículo farmaceuticamente aceitável, um excipiente farmaceuticamente aceitável e/ou um diluente farmaceuticamente aceitável e um composto da fórmula (I) ou uma forma do sal farmaceu- ticamente aceitável do mesmo.

[0011] Também são fornecidos processos destinados à fabricação de uma composição farmacêutica que compreende, que consiste em e/ou que consiste essencialmente em misturar um composto da Fórmula (I) e um veículo farmaceuticamente aceitável, um excipiente farmaceu- ticamente aceitável e/ou um diluente farmaceuticamente aceitável.

[0012] A presente invenção fornece, ainda, métodos para o trata- mento ou melhora de uma infecção viral, doença, síndrome ou condi- ção em um indivíduo, incluindo um mamífero, e/ou ser humano no qual a infecção viral, doença, síndrome ou condição é afetada pelo ago- nismo de STING, com o uso de um composto da Fórmula (I).

[0013] A presente invenção fornece, ainda, métodos para trata- mento ou melhora de uma infecção viral, doença, síndrome ou condi- ção em um indivíduo, incluindo um mamífero, e/ou ser humano com o uso de um composto da Fórmula (I).

[0014] A presente invenção fornece, ainda, métodos para trata- mento ou melhora de uma infecção viral, doença, síndrome ou condi- ção em um indivíduo, incluindo um mamífero, e/ou ser humano no qual a infecção viral, doença, síndrome ou condição é afetada pelo ago- nismo de STING, selecionada do grupo que consiste em melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pul- mão, fibrossarcoma, e hepatite B, com o uso de um composto da Fór- mula (I).

[0015] A presente invenção fornece, ainda, métodos para tratamento ou melhora de uma infecção viral, doença, síndrome ou condição em um indivíduo, incluindo um mamífero, e/ou ser humano, selecionada do grupo que consiste em melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibrossarcoma, e hepatite B, com o uso de um composto da Fórmula (I).

[0016] A presente invenção também é direcionada ao uso de qual- quer um dos compostos descritos na presente invenção na preparação de um medicamento, sendo que o medicamento é preparado para tratar uma infecção viral, doença, síndrome, ou condição que é afetada pelo agonismo de STING, selecionada do grupo que consiste em melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pul- mão, fibrossarcoma, e hepatite B, em um indivíduo que precisa do mesmo.

[0017] A presente invenção é também direcionada ao uso de qual- quer um dos compostos descritos na presente invenção na preparação de um medicamento sendo que o medicamento é preparado para tratar uma infecção viral, doença, síndrome, ou condição, selecionada do grupo que consiste em melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibrossarcoma, e hepatite B, em um indivíduo que precisa do mesmo.

[0018] A presente invenção também se refere à preparação de deri- vados de dinucleotídeos cíclicos substituídos que atuam como agonistas seletivos de STING.

[0019] Para exemplificar a invenção são fornecidos métodos de tratamento de uma infecção viral, doença, síndrome ou condição mo- dulada por STING selecionada do grupo que consiste em melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pul- mão, fibrossarcoma e hepatite B, compreendendo administrar a um in- divíduo que precisa do mesmo uma quantidade terapeuticamente efi- caz de qualquer um dos compostos ou composições farmacêuticas descritas acima.

[0020] Para exemplificar a invenção são fornecidos métodos de tratamento de uma doença, síndrome ou condição selecionada do grupo que consiste em melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibrossarcoma, e hepatite B,

compreendendo administrar a um indivíduo que precisa do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer um dos compos- tos ou composições farmacêuticas descritas acima.

[0021] Em outra modalidade, a presente invenção é direcionada a um composto da Fórmula (I) para uso no tratamento de uma infecção viral, doença, síndrome ou condição afetada pelo agonismo de STING selecionado do grupo que consiste em melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibrossarcoma e hepatite B.

[0022] Em uma outra modalidade, a presente invenção se refere a uma composição que compreende um composto da Fórmula (I) para o tratamento de uma infecção viral, doença, síndrome ou condição sele- cionada do grupo que consiste em melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibrossarcoma e he- patite B.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0023] Com referência aos substituintes, o termo "independente- mente" refere-se à situação na qual mais que um substituinte é possí- vel, os substituintes podendo ser iguais ou diferentes entre si.

[0024] O termo "alquila", quer usado sozinho quer como parte de um grupo substituinte, refere-se às cadeias carbônicas lineares e ramificadas tendo 1 a 8 átomos de carbono. Portanto, os números designados de áto- mos de carbono (por exemplo C1-8) referem-se independentemente ao nú- mero de átomos de carbono em uma porção alquila ou à porção alquila de um substituinte maior contendo alquila. Em grupos substituintes com múl- tiplos grupos alquila como (alquil C1-6)2amino-, os grupos alquila C1-6 do dialquilamino podem ser iguais ou diferentes.

[0025] O termo "alcóxi" refere-se a um grupo -O-alquila, em que o termo "alquila" é conforme definido acima.

[0026] Os termos "alquenila" e "alquinila" se referem a cadeias car- bônicas retas e ramificadas que têm 2 a 8 átomos de carbono, em que uma cadeia alquenila contém ao menos uma dupla ligação e uma ca- deia de alquinila contém ao menos uma ligação tripla.

[0027] O termo "cicloalquila" refere-se aos anéis hidrocarbônicos saturados ou parcialmente saturados, monocíclicos ou policíclicos de 3 a 14 átomos de carbono. Exemplos de tais anéis incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-heptila e adamantila.

[0028] O termo "heterociclila" refere-se a um sistema de anel mo- nocíclico ou bicíclico não aromático que tem 3 a 10 membros de anel que incluem ao menos 1 átomo de carbono e de 1 a 4 heteroátomos selecionados independentemente dentre N, O e S. Estão incluídos no termo heterociclila um anel cíclico não aromático de 5 a 7 membros no qual 1 a 2 membros são N, ou um anel cíclico não aromático de 5 a 7 membros nos qual 0, 1 ou 2 membros são N e até 2 membros são O ou S, e pelo menos um membro precisa ser N, O ou S; em que, opcio- nalmente, o anel contém 0 a 1 ligação insaturada e, opcionalmente, quando o anel é de 6 ou 7 membros, contém até 2 ligações insatura- das. Os membros de anel de átomos de carbono que formam um anel heterociclo podem ser completamente saturados ou parcialmente sa- turados.

[0029] O termo "heterociclila" inclui, também, dois grupos heteroci- cloalquila monocíclicos de 5 membros ligados em ponte de modo a for- mar um anel bicíclico. Esses grupos não são considerados como sendo completamente aromáticos e não são denominados como grupos hete- roarila. Quando um heterociclo for bicíclico, ambos os anéis do heteroci- clo são não aromáticos e ao menos um dos anéis contém um membro de anel de heteroátomo. Exemplos de grupos heterociclo incluem, e não se limitam, a pirrolinila (incluindo 2H-pirrol, 2-pirrolinila ou 3-pirrolinila), pirro- lidinila, imidazolinila, imidazolidinila, pirazolinila, pirazolidinila, piperidinila,

morfolinila, tiomorfolinila e piperazinila. Exceto onde especificado em con- trário, o heterociclo é ligado a seu grupo pendente em qualquer heteroá- tomo ou átomo de carbono que resulte em uma estrutura estável.

[0030] O termo "arila" se refere a um anel carbocíclico insaturado, aromático, monocíclico ou bicíclico de 6 a 10 membros de carbono. Exemplos de anéis de arila incluem fenila e naftalenila.

[0031] O termo "heteroarila" se refere a um sistema de anel aro- mático bicíclico ou monocíclico que tem de 5 a 10 membros de anel, que contém átomos de carbono e de 1 a 4 heteroátomos selecionados independentemente do grupo que consiste em N, O e S. Incluído den- tro do termo heteroarila estão os anéis aromáticos de 5 ou 6 membros, em que o anel consiste em átomos de carbono e tem pelo menos um membro heteroátomo. Os heteroátomos adequados incluem nitrogê- nio, oxigênio e enxofre. No caso de anéis de 5 membros, o anel hete- roarila contém, de preferência, um membro de nitrogênio, oxigênio ou enxofre e, além disso, até três átomos de nitrogênio adicionais. No caso de anéis de 6 membros, o anel contém, de preferência, de um a três átomos de nitrogênio. Para o caso no qual o anel de 6 membros tem três átomos de nitrogênio, no máximo dois átomos de nitrogênio são adjacentes. Exemplos de grupos heteroarila incluem furila, tienila, pirrolila, oxazolila, tiazolila, imidazolila, pirazolila, isoxazolila, isoti- azolila, oxadiazolila, triazolila, tiadiazolila, piridinila, piridazinila, pirimi- dinila, pirazinila, indolila, isoindolila, benzofurila, benzotienila, in- dazolila, benzimidazolila, benzotiazolila, benzoxazolila, benzisoxa- zolila, benzotiadiazolila, benzotriazolila, quinolinila, isoquinolinila e qui- nazolinila. Exceto onde especificado em contrário, a heteroarila é li- gada a seu grupo pendente em qualquer heteroátomo ou átomo de carbono que resulte em uma estrutura estável.

[0032] O termo "halogênio" ou "halo" se refere a átomos de flúor, cloro, bromo e iodo.

[0033] Sempre que o termo "alquila" ou "arila" ou qualquer uma de suas raízes prefixadas aparecem em um nome de um substituinte (por exemplo, arilalquila, alquilamino) o nome é para ser interpretado como incluindo aquelas limitações apresentadas acima para "alquila" e "arila". Os números designados de átomos de carbono (por exemplo, C1-C6) referem-se, independentemente, ao número de átomos de carbono em uma porção alquila, uma porção arila ou em uma porção alquila de um substituinte maior no qual a alquila aparece como sua raiz prefixada. Para substituintes alquila e alcóxi, o número designado de átomos de carbono inclui todos os membros independentes incluídos em uma de- terminada faixa especificada. Por exemplo, alquila C1-6 incluiria metila, etila, propila, butila, pentila e hexila individualmente bem como as sub- combinações das mesmas (por exemplo, C1-2, C1-3, C1-4, C1-5, C2-6, C3-6, C4-6, C5-6, C2-5, etc.).

[0034] Em geral, sob as regras de nomenclatura padrão usadas em toda a presente descrição, descreve-se, primeiramente, a porção terminal da cadeia lateral designada seguida pela funcionalidade adja- cente relacionada ao ponto de fixação. Portanto, por exemplo, um substituinte "alquilC1-C6 carbonila" refere-se a um grupo de fórmula:

[0035] O termo "R" em um estereocentro designa que o estereocen- tro é puramente da configuração-R como definido na técnica; de modo semelhante, o termo "S" significa que o estereocentro é puramente da configuração S. Como aqui usado, os termos "*R" ou "*S" em um este- reocentro são usados para designar que o estereocentro apresenta uma configuração pura, porém, desconhecida. Como aqui usado, o termo "RS" se refere a um estereocentro que está presente como uma mistura das configurações R e S. De modo semelhante, os termos "*RS" ou

"*SR" se referem a um estereocentro que está presente como uma mis- tura das configurações R e S e é de configuração desconhecida em re- lação ao outro estereocentro na molécula.

[0036] Como aqui usado, o termo "*" é usado para designar um es- tereocentro que pode estar presente como uma configuração pura, po- rém desconhecida ou uma mistura das configurações R e S.

[0037] Os compostos que contêm um estereocentro extraído sem uma designação de ligação estéreo consistem em uma mistura de dois enantiômeros. Os compostos que contêm dois estereocentros ambos ex- traídos sem designações de ligação estéreo consistem em uma mistura de quatro diastereômeros. Os compostos com dois estereocentros ambos identificados como "RS" e extraídos com designações de ligação estéreo consistem em uma mistura de dois componentes com estereoquímica re- lativa conforme extraído. Os compostos com dois estereocentros ambos identificados como "*RS" e extraídos com designações de ligação estéreo consistem em uma mistura de dois componentes com estereoquímica re- lativa desconhecida. Os estereocentros não identificados representados sem designações de ligação estéreo consistem em uma mistura das con- figurações-R e -S. Para estereocentros não identificados representados com designações de ligação estéreo, a estereoquímica absoluta é como representada.

[0038] Exceto onde especificado em contrário, pretende-se que a definição de qualquer substituinte ou variável em um local específico em uma molécula seja independente de suas definições em qualquer lugar nesta molécula. Compreende-se que os substituintes e os padrões de substituição nos compostos desta invenção podem ser selecionados por um versado na técnica de modo a proporcionar compostos que são qui- micamente estáveis e que podem ser prontamente sintetizados por téc- nicas conhecidas na técnica, assim como os métodos aqui descritos.

[0039] O termo "indivíduo", como aqui usado, refere-se a um ani- mal, de preferência um mamífero, com a máxima preferência um ser humano, que tenha sido o objeto de tratamento, observação ou expe- rimento.

[0040] O termo "quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se a uma quantidade de um composto ativo ou agente farmacêutico, inclu- indo um composto da presente invenção, que produza uma resposta biológica ou médica em um sistema tecidual, animal ou humano que esteja sendo procurado por um pesquisador, veterinário, doutor mé- dico ou outro médico, que inclua um alívio ou um alívio parcial dos sintomas da doença, síndrome, condição, ou distúrbio sendo tratado.

[0041] O termo "composição" se refere a um produto que inclui os ingredientes específicos em quantidades terapeuticamente eficazes, assim como qualquer produto que resulte, direta ou indiretamente, das combinações dos ingredientes específicos nas quantidades especifi- cadas.

[0042] O termo "agonista de STING" pretende incluir um composto que interage com STING por ligação a ele e que induz a transdução de sinal a justante caracterizada pela ativação das moléculas associadas à função de STING. Isso inclui direcionar a fosforilação de STING, IRF3 e/ou NF-KB e poderia também incluir STAT6. A ativação da via de STING resulta no aumento da produção de interferons do tipo I (principalmente IFN-α e IFN-β) e na expressão de genes estimulados por interferon (Chen H, et al. "Activation of STAT6 by STING Is Critical for Antiviral Innate Im- munity". Cell. 2011, vol.14: 433-446; e Liu S-Y, et al. "Systematic identifi- cation of type I and type II interferon- induced antiviral factors Proc. Natl. Acad. Sci. 2012/vol.1094239-4244).

[0043] O termo "modulado por STING" é usado para se referir a uma condição afetada por STING diretamente ou através da via de STING, incluindo, mas não se limitando a, infecções virais, doenças ou condições como melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibrossarcoma e hepatite B.

[0044] Como usado aqui, exceto onde especificado em contrário, o termo "distúrbio modulado por STING" significa qualquer infecção viral, doença, distúrbio ou condição caracterizada pelo fato de que pelo me- nos um de seus sintomas característicos é aliviado ou eliminado medi- ante o tratamento com um agonista de STING. Exemplos adequados incluem, mas não se limitam a melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibrossarcoma e hepatite B.

[0045] Como usado aqui, exceto onde especificado em contrário, o termo "afetar" ou "afetado" (quando se refere a uma infecção viral, do- ença, síndrome, condição ou distúrbio que é afetado pelo agonismo de STING) inclui uma redução na frequência e/ou gravidade de um ou mais sintomas ou manifestações da dita infecção viral, doença, síndrome, condição ou distúrbio; e/ou inclui a prevenção do desenvolvimento de um ou mais sintomas ou manifestações da dita infecção viral, doença, síndrome, condição ou distúrbio ou o desenvolvimento da infecção viral, doença, condição, síndrome ou distúrbio.

[0046] Os compostos da presente invenção são úteis nos métodos para o tratamento ou melhoria de uma infecção viral, doença, uma sín- drome, uma condição ou um distúrbio que é afetado pelo agonismo de STING. Estes métodos compreendem, consistem de e/ou consistem es- sencialmente da administração a um indivíduo, incluindo um animal, um mamífero, e um ser humano precisando de tal tratamento, alívio e/ou pre- venção, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da Fórmula (I) conforme definido aqui, ou um enantiômero, diastereômero, solvato ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0047] Em particular, os compostos da Fórmula (I), ou um enantiô-

mero, um diastereômero, um solvato ou uma forma de sal farmaceuti- camente aceitável dos mesmos, são úteis para tratar ou aliviar doen- ças, síndromes, condições ou distúrbios como melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibros- sarcoma e hepatite B.

[0048] Mais particularmente, os compostos da Fórmula (I), ou um enantiômero, diastereômero, solvato ou forma de sal farmaceuticamente aceitável do mesmo são úteis para tratar ou melhorar melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibros- sarcoma e hepatite B, que compreende administrar a um indivíduo que necessita disso uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da Fórmula (I), ou um enantiômero, diastereômero, solvato ou sal farma- ceuticamente aceitável do mesmo, conforme definido aqui.

[0049] Algumas modalidades reveladas na presente invenção se re- ferem a métodos para melhorar e/ou tratar uma infecção viral, incluindo infecções causadas por Hepadnaviridae, como vírus da hepatite B ou HBV. Os métodos podem incluir a administração a um indivíduo identi- ficado como estando sofrendo de uma infecção viral de uma quantidade eficaz de um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou uma composição farma- cêutica que inclui um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

[0050] Outras modalidades aqui reveladas se referem a um método para melhorar e/ou tratar uma infecção viral, o qual podem incluir colocar uma célula infectada com o vírus em contato com uma quantidade eficaz de um ou mais compostos aqui descritos (por exemplo, um composto da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável do mesmo), ou uma composição farmacêutica que inclui um ou mais compostos aqui descritos, ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos. Ainda ou-

tras modalidades aqui descritas referem-se ao uso de um ou mais com- postos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, na fabricação de um medicamento para melhorar e/ou tratar a infecção viral.

[0051] Ainda outras modalidades aqui descritas se referem a um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceutica- mente aceitável dos mesmos, ou uma composição farmacêutica que inclui um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal far- maceuticamente aceitável dos mesmos, que podem ser usados para melhorar e/ou tratar uma infecção viral. Algumas modalidades aqui re- veladas se referem a um método para inibir a replicação de um vírus, que pode incluir colocar uma célula infectada com o vírus em contato com uma quantidade eficaz de um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou uma composição farmacêutica que inclui um ou mais compostos des- critos aqui, ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

[0052] Outras modalidades aqui descritas se referem ao uso de um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceutica- mente aceitável dos mesmos, na fabricação de um medicamento para ini- bir a replicação de um vírus. Ainda outras modalidades aqui descritas se referem a um ou mais compostos aqui descritos, (por exemplo, um com- posto da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos), ou uma composição farmacêutica que inclui um ou mais compostos aqui descritos, ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, que podem ser usados para inibir a replicação de um vírus.

[0053] Em algumas modalidades, a infecção viral pode ser uma infec- ção viral por hepatite B. Os métodos podem incluir a administração a um indivíduo identificado como estando sofrendo de HBV de uma quantidade eficaz de um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal far- maceuticamente aceitável dos mesmos, ou uma composição farmacêutica que inclui um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

[0054] Outras modalidades aqui reveladas se referem a um método para melhorar e/ou tratar a infecção viral que pode incluir colocar uma célula infectada com HBV em contato uma quantidade eficaz de um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou uma composição farmacêutica que inclui um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceutica- mente aceitável dos mesmos. Ainda outras modalidades aqui descritas referem-se ao uso de um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, na fabricação de um medicamento para melhorar e/ou tratar HBV.

[0055] Ainda outras modalidades aqui descritas se referem a um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou uma composição farmacêutica que inclui um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, que podem ser usados para melhorar e/ou tratar HBV. Algumas modalidades aqui reveladas se referem a um método para inibir a replicação de HBV que pode incluir colocar uma célula infectada com o vírus em contato uma quantidade eficaz de um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mes- mos, ou uma composição farmacêutica que inclui um ou mais compostos da Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

[0056] Outras modalidades aqui descritas se referem ao uso de um ou mais compostos da Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente acei- tável dos mesmos, na fabricação de um medicamento para inibir a re- plicação de HBV. Ainda outras modalidades aqui descritas se referem a um ou mais compostos da Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, ou uma composição farmacêutica que inclui um ou mais compostos da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceutica- mente aceitável dos mesmos, que podem ser usados para inibir a re- plicação de HBV.

[0057] As modalidades da presente invenção incluem um composto da Fórmula (I) conforme aqui definido, ou um enantiômero, diastereômero, solvato, ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, em que os substituintes selecionados a partir de um ou mais das variáveis aqui defi- nidas (por exemplo, B2, X2, R2a, R2b, R2c, Z-M-Y, Y1-M1-Z1, B1, X1, R1a, R1b, R1c) são independentemente selecionados para ser qualquer substituinte individual ou qualquer subconjunto de substituintes daqueles exemplifica- dos na listagem na Tabela 1, abaixo. Tabela 1.

Composto n° B2 X2 R2a R2b R2c Z–M–Y Y1–M1–Z1 B1 X1 R1a R1b R1c 1 b6 O F H H OP(O)(OH)O NHS(O)2O b7 O OCH3 H H 2A b6 O F H H (*R)OP(O)(SH)O NHS(O)2O b7 O OCH3 H H 3 b21 O OH H H OS(O)2NH OP(O)(OH)O b7 O OCH3 H H CH2 para formar um anel 4A b6 O O H OS(O)2NH (*R)OP(O)(SH)O b7 O OCH3 H H com R2 2 CH para formar um anel 4B b6 O O H OS(O)2NH (*S)OP(O)(SH)O b7 O OCH3 H H com R2 Composto n° B2 X2 R2a R2b R2c Z–M–Y Y1–M1–Z1 B1 X1 R1a R1b R1c 5 b6 O F H H OP(O)(OH)O OS(O)2NH b7 O OCH3 H H 6 b6 O F H H NHS(O)2O OP(O)(OH)O b7 O OCH3 H H 7A b6 O F H H (*R)OP(O)(SH)O NHS(O)2O b7 O H OCH3 H 7B b6 O F H H (*S)OP(O)(SH)O NHS(O)2O b7 O H OCH3 H 8 b5 CH2 OH H H OP(O)(OH)O NHS(O)2O b7 O OCH3 H H CH2 para formar um 9 b6 O O H OP(O)(OH)O NHS(O)2O b7 O OCH3 H H anel com R2

Composto n° B2 X2 R2a R2b R2c Z–M–Y Y1–M1–Z1 B1 X1 R1a R1b R1c CH2 para formar um anel 10A b6 O O H (*R)OP(O)(SH)O NHS(O)2O b7 O OCH3 H H com R2 11 b6 O F H H OP(O)(OH)O NHS(O)2O b7 O OH H H

12 b6 O H H H OP(O)(OH)O NHS(O)2O b7 O OCH3 H H

13A b6 O H H H (*R)OP(O)(SH)O NHS(O)2O b7 O OCH3 H H

14A b6 O F H H (*R)OP(O)(BH3)O NHS(O)2O b7 O OCH3 H H

15 b6 O F H H OP(O)(OH)O NHS(O)2O b17 O H H H

Composto n° B2 X2 R2a R2b R2c Z–M–Y Y1–M1–Z1 B1 X1 R1a R1b R1c

16A b6 O F H H (*R)OP(O)(SH)O NHS(O)2O b17 O H H H

16B b6 O F H H (*S)OP(O)(SH)O NHS(O)2O b17 O H H H

17 b6 O F H H OP(O)(OH)O NHS(O)2O b6 O OH H H

18 b6 O H H H OP(O)(OH)O NHS(O)2O b7 O OH H H

19A b6 O H H H (*R)OS(O)2NH OP(O)(SH)O b7 O OCH3 H H

19B b6 O H H H (*S)OS(O)2NH OP(O)(SH)O b7 O OCH3 H H

Composto n° B2 X2 R2a R2b R2c Z–M–Y Y1–M1–Z1 B1 X1 R1a R1b R1c

20 b6 O H H H NHS(O)2O OP(O)(OH)O b7 O OCH3 H H

21A b6 CH2 OH H H (*R)OP(O)(SH)O NHS(O)2O b7 O OCH3 H H

22 b6 O F H H OS(O)2NH OP(O)(OH)O b7 O OCH3 H H

23A b6 O F H H OS(O)2NH (*R)OP(O)(SH)O b7 O OCH3 H H

23B b6 O F H H OS(O)2NH (*S)OP(O)(SH)O b7 O OCH3 H H

24 b6 O H H H OS(O)2NH OP(O)(SH)O b7 O OCH3 H H

Composto n° B2 X2 R2a R2b R2c Z–M–Y Y1–M1–Z1 B1 X1 R1a R1b R1c CH2 para formar um anel com 25 b6 O O H OS(O)2NH OP(O)(OH)O b7 O OCH3 H H R2 26 b6 O F H H OS(O)2NH OP(O)(OH)O b7 O H H H

27 b6 O F H H OP(O)(OH)O NHS(O)2O b28 O OCH3 H H

28 b6 O H F H OP(O)(OH)O NHS(O)2O b7 O OCH3 H H

29 b6 O F F H OP(O)(OH)O NHS(O)2O b7 O F H H

30 b6 O OH H H OP(O)(OH)O NHS(O)2O b6 O OH H H

Composto n° B2 X2 R2a R2b R2c Z–M–Y Y1–M1–Z1 B1 X1 R1a R1b R1c

35 b6 O F H H OS(O)2NH OP(O)(OH)O b6 O F H H

36 b6 O H H H OP(O)(OH)O NHS(O)2O b6 O F H H

37 b6 O F H H OS(O)2NH OP(O)(OH)O b17 O F H H

38 b6 O H F H OP(O)(OH)O NHS(O)2O b7 O F H H

39 b6 O F H H OP(O)(OH)O NHS(O)2O b18 O H H H

40 b6 O H H H OP(O)(OH)O NHS(O)2O b18 O OCH3 H H

Composto n° B2 X2 R2a R2b R2c Z–M–Y Y1–M1–Z1 B1 X1 R1a R1b R1c

41 b6 O F OH H OS(O)2NH OP(O)(OH)O b6 O OH H H

42A b6 O F H H (*R)OP(O)(SH)O NHS(O)2O b6 O F H H

42B b6 O F H H (*S)OP(O)(SH)O NHS(O)2O b6 O F H H

43A b6 O F H H (*R)OP(O)(SH)O NHS(O)2O b7 CH2 OH H H

44A b6 O F H H (*R)OP(O)(SH)O NHS(O)2O b7 O H H H

44B b6 O F H H (*S)OP(O)(SH)O NHS(O)2O b7 O H H H

Composto n° B2 X2 R2a R2b R2c Z–M–Y Y1–M1–Z1 B1 X1 R1a R1b R1c

45 b6 O H F H OP(O)(OH)O OP(O)(OH)O b17 O H H H

46A b6 O F H H OS(O)2NH (*R)OP(O)(SH)O b7 O H H H

46B b6 O F H H OS(O)2NH (*S)OP(O)(SH)O b7 O H H H

47 b6 O F H H OS(O)2NH OP(O)(SH)O b7 CH2 OH H H

48 b6 O OH H H OP(O)(OH)O NHS(O)2O b2 O OH H H

49 b6 O F H H OP(O)(OH)O NHS(O)2O b21 O OH H H

Composto n° B2 X2 R2a R2b R2c Z–M–Y Y1–M1–Z1 B1 X1 R1a R1b R1c

50A b6 O H F H (*R)OP(O)(SH)O NHS(O)2O b17 O H H H

51 b6 O F H H OP(O)(OH)O NHS(O)2O b17 O OCH3 H H

52 b18 O F H H OP(O)(OH)O O(O)2ONH b7 O OCH3 H H

53 b18 O F H H OS(O)2NH OP(O)(SH)O b7 O OCH3 H H

54 b6 O F H H OP(O)(OH)O NHS(O)2O b26 O OCH3 H H

55 b6 O F H H OP(O)(OH)O NHS(O)2O b27 O OCH3 H H

[0058] Uma modalidade da presente invenção se refere a um com- posto da Fórmula (I)

em que: R1a é independentemente selecionado dentre hidrogênio; hidróxi; fluoro; alcóxi C1-3 opcionalmente independentemente substitu- ído com um a sete substituintes halogênio ou metóxi; alquenilóxi C3-6; alquinilóxi C2-6; hidroxialcóxi C1-3; ou alquila C1-3 opcionalmente inde- pendentemente substituída com um a três substituintes selecionados dentre fluoro, cloro, bromo, iodo ou hidróxi; R3 é independentemente selecionado dentre hidrogênio, fluoro ou hidróxi; desde que, quando R1b é fluoro, R1a seja hidrogênio ou fluoro; R1c é independentemente selecionado dentre hidrogênio ou metila; R2a é independentemente selecionada dentre hidrogênio; hidróxi; fluoro; alcóxi C1-3 opcionalmente independentemente substitu- ído com um a sete substituintes halogênio ou metóxi; alquenilóxi C3-6; alquinilóxi C2-6; hidroxialcóxi C1-3; ou alquila C1-3 opcionalmente inde- pendentemente substituída com um a três substituintes selecionados dentre fluoro, cloro, bromo, iodo ou hidróxi; e R3 é hidrogênio; ou, R2a é -O- e R2c é -CH2-; de modo que R2a, R2c e os áto- mos aos quais eles estão ligados formam um anel de 5 membros; R2b é independentemente selecionado dentre hidrogênio, flu- oro ou hidróxi; desde que, quando R2b é fluoro, R2a seja hidrogênio ou flu- oro; R2c é independentemente selecionada dentre hidrogênio,

fluoro, CH3 ou CH2F; X1 e X2 são independentemente selecionados do grupo con- sistindo em O, S e CH2; Y e Y1 estão, cada um, independentemente ausentes, ou são selecionados do grupo consistindo em O ou NH; Z e Z1 são independentemente selecionados do grupo con- sistindo em O e NH; um dentre M e M1 é

, e o outro de M e M1 é independentemente selecionado den- tre de modo que, quando M é

, um de Y e Z é NH, e o outro de Y e Z é O; e, de modo que M1 é um de Y1 e Z1 é NH, e o outro de Y1 e Z1 é O; R4 é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidróxi, metila, BH3 e -SR5; sendo que R5 é independentemente se- lecionado do grupo consistindo em hidrogênio, -CH2O(O)R6, - CH2OC(O)OR6, -CH2CH2SC(O)R6 e -CH2CH2S-SCH2R6; R6 é independentemente selecionado do grupo consistindo em arila C6-10, heteroarila, heterocicloalquila, cicloalquila C3-12 e alquila C1-20 opcionalmente independentemente substituída com um a cinco subs- tituintes fluoro ou hidróxi, alquila C1-6, arila C6-10 ou cicloalquila C3-12; ou um enantiômero, um diastereômero ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; desde que, quando B1 e B2 são, cada um, b6, e Z-M-Y é Os(O2)NH, e Y1-M1-Z1 é OP(O)(OH)O ou OP(O)(SH)O, então R 1a seja diferente de OH.

[0059] Em uma outra modalidade, a presente invenção é direcionada a compostos da Fórmula (I) selecionados dos compostos 1 a 55,

ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0060] Para uso em medicamentos, os sais dos compostos da Fór- mula (I) referem-se aos "sais farmaceuticamente aceitáveis" não tóxicos. No entanto, outros sais podem ser úteis na preparação de compostos de Fórmula (I) ou de suas formas de sal farmaceuticamente aceitáveis. Os sais farmaceuticamente aceitáveis adequados de compostos de Fórmula (I) incluem sais de adição ácida que podem, por exemplo, ser formados misturando-se uma solução do composto com uma solução de um ácido farmaceuticamente aceitável, como ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido succínico, ácido acético, ácido benzoico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido carbônico ou ácido fosfórico. Além disso, quando os compostos de Fórmula (I) transportam uma porção ácida, seus sais farmaceuticamente aceitáveis adequados podem incluir sais de metais alcalinos, como sais de sódio ou de potássio; sais de me- tais alcalinoterrosos como, sais de cálcio ou magnésio; e sais formados com ligantes orgânicos adequados como, sais de amônio quaternário.

Dessa forma, sais farmaceuticamente aceitáveis representativos incluem acetato, benzenossulfonato, benzoato, bicarbonato, bissulfato, bitarta- rato, borato, brometo, edetato de cálcio, camsilato, carbonato, cloreto, clavulanato, citrato, dicloridrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, fuma- rato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicollilarsanilato, hexilresorcinato, hidrabamina, hidrobrometo, cloridrato, hidroxinaftoato, iodeto, isotionato, lactato, lactobionato, laurato, malato, maleato, mandelato, mesilato, me- tilbrometo, metilnitrato, metilsulfato, mucato, napsilato, nitrato, sal de amônio N-metilglucamina, oleato, pamoato (embonato), palmitato, panto- tenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, silicilato, estearato, sulfato, subacetato, succinato, tanato, tartarato, teoclato, tosilato, trietiodeto e va- lerato.

[0061] Ácidos e bases representativos que podem ser usados na pre- paração de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem ácidos incluindo ácido acético, ácido 2,2-dicloroacético, aminoácidos acilados, ácido adí- pico, ácido algínico, ácido ascórbico, ácido L-aspártico, ácido benzenos- sulfônico, ácido benzoico, ácido 4-acetamidobenzoico, ácido (+)-canfórico, ácido canforssulfônico, ácido (+)-(1S)-canforo-10-sulfônico, ácido cáprico, ácido caproico, ácido caprílico, ácido cinâmico, ácido ciclâmico, ácido do- decilsulfúrico, ácido etano-1,2-dissulfônico, ácido etanossulfônico, ácido 2- hidroxietanossulfônico, ácido fórmico, ácido fumárico, ácido galactárico, ácido gentísico, ácido glico-heptônico, ácido D-glicônico, ácido D-glicorô- nico, ácido L-glutâmico, ácido α-oxo-glutárico, ácido glicólico, ácido hipú- rico, ácido bromídrico, ácido clorídrico, ácido (+)-L-láctico, ácido (±)-DL- láctico, ácido lactobiônico, ácido maleico, ácido (-)-L-málico, ácido malô- nico, ácido (±)-DL-mandélico, ácido metanossulfônico, ácido naftaleno-2- sulfônico, ácido naftaleno-5-dissulfônico, ácido 1-hidróxi-2-naftoico, ácido nicotínico, ácido nítrico, ácido oleico, ácido orótico, ácido oxálico, ácido pal- mítico, ácido pamoico, ácido fosfórico, ácido L-piroglutâmico, ácido salicí-

lico, ácido 4-amino-salicílico, ácido sebaico, ácido esteárico, ácido succí- nico, ácido sulfúrico, ácido tânico, ácido (+)-L-tartárico, ácido tiociânico, ácido p-toluenossulfônico e ácido undecilênico; e bases incluindo amônia, L-arginina, benetamina, benzatina, hidróxido de cálcio, colina, deanol, die- tanolamina, dietilamina, 2-(dietilamino)-etanol, etanolamina, etilenodia- mina, N-metil-glucamina, hidrabamino, 1H-imidazol, L-lisina, hidróxido de magnésio, 4-(2-hidroxietil)-morfolina, piperazina, hidróxido de potássio, 1- (2-hidroxietil)-pirrolidina, hidróxido de sódio, trietanolamina, trometamina e hidróxido de zinco.

[0062] As modalidades da presente invenção incluem profármacos dos compostos de Fórmula (I). Em geral, estes profármacos serão deri- vados funcionais dos compostos que são prontamente conversíveis in vivo em compostos necessários. Portanto, nas modalidades dos métodos de tratamento ou prevenção da presente invenção, o termo "administrar" abrange o tratamento ou a prevenção de várias doenças, condições, sín- dromes e distúrbios descritos com o composto especificamente revelado ou com um composto que pode não ser especificamente revelado, mas que se converte nos compostos especificados in vivo após a administra- ção a um paciente. Procedimentos convencionais para a seleção e pre- paração de derivados de profármacos adequados são descritos, por exemplo, em "Design of Prodrugs", ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985.

[0063] Quando os compostos de acordo com as modalidades desta invenção têm ao menos um centro quiral, eles também podem existir, consequentemente, como enantiômeros. Quando os compostos pos- suem dois ou mais centros quirais, os mesmos devem existir adicional- mente como diastereômeros. Deve ser entendido que todos esses isô- meros e misturas dos mesmos são abrangidos dentro do escopo da pre- sente invenção. Além disso, algumas das formas cristalinas dos com- postos podem existir como polimorfos e como tais estão inclusos na pre-

sente invenção. Além disso, alguns dos compostos podem formar sol- vatos com água (isto é, hidratos) ou solventes orgânicos comuns e tais solvatos estão também no escopo desta invenção. Os versados na téc- nica compreenderão que o termo composto para uso na presente inven- ção deve incluir os compostos solvatados da Fórmula (I).

[0064] Quando os processos para a preparação dos compostos de acordo com determinadas modalidades da invenção dão origem à mis- tura de estereoisômeros, esses isômeros podem ser separados por téc- nicas convencionais como por cromatografia preparativa. Os compostos podem ser preparados de forma racêmica, ou os enantiômeros individu- ais podem ser preparados por meio de uma síntese enantioespecífica ou por resolução. Os compostos podem, por exemplo, ser separados em seus enantiômeros componentes por técnicas-padrão como, a for- mação de pares diastereoméricos pela formação de sal com um ácido opticamente ativo como ácido (-)-di-p-toluoil-d-tartárico e/ou ácido (+)- di-p-toluoil-l-tartárico seguido de cristalização fracional e regeneração da base livre. Os compostos podem, também, ser resolvidos através da formação de ésteres ou amidas diastereoméricos, seguido de separa- ção cromatográfica e remoção do auxiliar quiral. Alternativamente, os compostos podem ser separados com o uso de uma coluna quiral de HPLC.

[0065] Uma modalidade da presente invenção se refere a uma composição, incluindo uma composição farmacêutica, que compre- ende, que consiste em, e/ou que consiste essencialmente em um (+)- enantiômero de um composto de Fórmula (I), em que a dita composi- ção é substancialmente isenta do (-)-isômero do dito composto. No presente contexto, substancialmente isento significa menos que cerca de 25%, de preferência, menos que cerca de 10%, com mais preferên- cia, menos que cerca de 5%, com mais preferência ainda, menos que cerca de 2% e, com mais preferência ainda, menos que cerca de 1%

do (-)-isômero calculado da seguinte forma

[0066] Uma outra modalidade da presente invenção é uma compo- sição, incluindo uma composição farmacêutica, que compreende, que consiste em, e/ou que consiste essencialmente no (-)-enantiômero de um composto de Fórmula (I), sendo que a dita composição é substanci- almente isenta do (+)-isômero do dito composto. No presente contexto, substancialmente isento de significa menos que cerca de 25 %, de pre- ferência, menos que cerca de 10 %, com mais preferência, menos que cerca de 5 %, com mais preferência ainda, menos que cerca de 2 % e, com mais preferência ainda, menos que cerca de 1 % do (+)-isômero calculado da seguinte forma

[0067] Durante qualquer um dos processos de preparação dos com- postos das várias modalidades da presente invenção, pode ser necessário e/ou desejável proteger os grupos sensíveis ou reativos em qualquer uma das moléculas relacionadas. Isto pode ser realizado por meio de grupos protetores convencionais, como aqueles descritos em Protective Groups in Organic Chemistry, segunda edição, J.F.W. McOmie, Plenum Press, 1973; T.W. Greene & P.G.M, Wilts, Protective Groups in Organic Synthe- sis, John Wiley & Sons, 1991; e TW Greene & P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, terceira edição, John Wiley & Sons, 1999. Os grupos protetores podem ser removidos em um estágio subsequente conveniente com o uso de métodos conhecidos na técnica.

[0068] Muito embora os compostos das modalidades da presente invenção (incluindo seus sais farmaceuticamente aceitáveis e solvatos farmaceuticamente aceitáveis) possam ser administrados sozinhos, os mesmos serão, em geral, administrados em uma mistura com um veí- culo farmaceuticamente aceitável, um excipiente farmaceuticamente aceitável e/ou um diluente farmaceuticamente aceitável selecionados de acordo com a via de administração pretendida e práticas padrão farmacêuticas ou veterinárias. Portanto, as modalidades específicas da presente invenção se referem a composições farmacêuticas e ve- terinárias que compreendem compostos de Fórmula (I) e ao menos um veículo farmaceuticamente aceitável, excipiente farmaceuticamente aceitável, e/ou diluente farmaceuticamente aceitável.

[0069] A título de exemplo, nas composições farmacêuticas das modalidades da presente invenção, os compostos de Fórmula (I) po- dem ser misturados com qualquer (quaisquer) aglutinante(s), lubrifi- cante(s), agente(s) de suspensão, agente(s) de revestimento, agente(s) solubilizante(s) adequado(s) e combinações dos mesmos.

[0070] As formas sólidas de dosagem oral, como comprimidos ou cáp- sulas, que contêm os compostos da presente invenção podem ser admi- nistradas em pelo menos uma forma de dosagem de cada vez, conforme for adequado. Também é possível administrar os compostos em formula- ções de liberação prolongada.

[0071] Formas orais adicionais nas quais os presentes compostos da invenção podem ser administrados incluem elixires, soluções, xaropes e suspensões; cada um contendo opcionalmente agentes flavorizantes e agentes corantes.

[0072] Alternativamente, os compostos da Fórmula (I) podem ser ad- ministrados por inalação (intratraqueal ou intranasal) ou sob a forma de um supositório ou pessário, ou eles podem ser aplicados topicamente sob a forma de uma loção, solução, creme, pomada ou pó polvilhável. Por exemplo, eles podem ser incorporados em um creme que compre- ende, que consiste em, e/ou consiste essencialmente em uma emulsão aquosa de poli(glicóis etilênicos) ou parafina líquida. Eles também podem ser incorporados, a uma concentração de entre cerca de 1% e cerca de

10%, em peso, do creme, em uma pomada que compreende, que con- siste em, e/ou consistindo essencialmente em uma cera ou base de pa- rafina macia juntamente com quaisquer estabilizantes e conservantes como pode ser necessário. Um meio alternativo de administração inclui administração transdérmica utilizando-se um emplastro dérmico ou trans- dérmico.

[0073] As composições farmacêuticas da presente invenção (bem como os compostos da presente invenção sozinhos) também podem ser injetadas parenteralmente, por exemplo, intracavernosamente, intraveno- samente, intramuscularmente, subcutaneamente, intradermicamente ou intratecamente. Nesse caso, as composições incluirão, também, ao me- nos um entre um veículo adequado, um excipiente adequado e um dilu- ente adequado.

[0074] Para administração parenteral, as composições farmacêuti- cas da presente invenção são melhor usadas na forma de uma solução estéril aquosa que possa conter outras substâncias, por exemplo, sais e monossacarídeos suficientes para constituir a solução isotônica com o sangue.

[0075] Em adição às vias de administração acima descritas para o tratamento de câncer, as composições farmacêuticas podem ser adap- tadas para administração por injeção intratumoral ou peritumoral. A ati- vação do sistema imune dessa maneira para matar os tumores em um local remoto é comumente conhecida como o efeito abscopal e foi de- monstrada em animais com múltiplas modalidades terapêuticas, (van der Jeught, et al., Oncotarget, 2015, 6(3), 1359-1381). Uma outra van- tagem da administração local ou intratumoral ou peritumoral é a capa- cidade de alcançar eficácia equivalente em doses muito menores, mi- nimizando ou eliminando, dessa forma, os eventos adversos que po- dem ser observados em doses muito mais altas (Marabelle, A., et al., Clinical Cancer Research, 2014, 20(7), 1747-1756).

[0076] Para administração bucal ou sublingual as composições far- macêuticas da presente invenção podem ser administradas sob a forma de comprimidos ou pastilhas, que podem ser formuladas de maneira convencional.

[0077] Por meio de exemplos adicionais, as composições farmacêu- ticas, que contêm ao menos um dos compostos da Fórmula (I) como o ingrediente ativo, podem ser preparadas misturando-se o(s) composto(s) com um veículo farmaceuticamente aceitável, um diluente farmaceutica- mente aceitável, e/ou um excipiente farmaceuticamente aceitável de acordo com as técnicas de composição farmacêutica convencional. O ve- ículo, o excipiente e o diluente podem assumir uma ampla variedade de formas dependendo da via de administração desejada (por exemplo, oral, parenteral, etc.). Dessa forma, para preparações orais líquidas como, suspensões, xaropes, elixires e soluções, veículos adequados, excipien- tes e diluentes incluem água, glicóis, óleos, álcoois, agentes flavorizan- tes, conservantes, estabilizantes, agentes corantes e similares; para pre- parações orais sólidas como, pós, cápsulas e tabletes, os transportado- res, excipientes e diluentes adequados incluem amidos, açúcares, dilu- entes, agentes de granulação, lubrificantes, aglutinantes, agentes de de- sintegração e similares. As preparações orais sólidas podem, também, ser opcionalmente revestidas com substâncias como, açúcares ou ser entericamente revestidas de forma a modular o sítio de absorção princi- pal e a desintegração. Para administração parenteral, o veículo, o excipi- ente e o diluente incluirão, em geral, água estéril, e outros ingredientes podem ser adicionados com a finalidade de aumentar a solubilidade e a preservação da composição. As suspensões ou soluções injetáveis po- dem também ser preparadas utilizando os veículos aquosos juntamente com aditivos adequados como solubilizadores e conservantes.

[0078] Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da Fórmula (I) ou uma composição farmacêutica do mesmo inclui uma faixa de dose de cerca de 0,01 mg a cerca de 3.000 mg, ou qualquer quantidade ou faixa específica dela, em particular de cerca de 0,05 mg a cerca de

1.000 mg, ou qualquer quantidade ou faixa específica dela, ou, mais parti- cularmente, de cerca de 0,05 mg a cerca de 250 mg ou qualquer quanti- dade ou faixa específica dela, do ingrediente ativo em um regime de cerca de 1 a cerca de 4 vezes por dia para um ser humano médio (70 kg); em- bora seja aparente para o versado na técnica que a quantidade terapeuti- camente eficaz para um composto da Fórmula (I) variará, assim como as doenças, síndromes, condições e distúrbios sendo tratados.

[0079] Para administração oral, uma composição farmacêutica é, de preferência, fornecida sob a forma de comprimidos contendo cerca de 1,0, cerca de 10, cerca de 50, cerca de 100, cerca de 150, cerca de 200, cerca de 250 e cerca de 500 miligramas de um composto da Fór- mula (I).

[0080] Vantajosamente, um composto de fórmula (I) pode ser ad- ministrado em uma única dose diária, ou a dosagem total diária pode ser administrada em doses divididas em duas, três e quatro vezes ao dia.

[0081] As dosagens ótimas de um composto da Fórmula (I) a serem administradas podem ser prontamente determinadas e irão variar com o composto específico usado, o modo de administração, a resistência da preparação e o avanço da infecção viral, doença, síndrome, condição ou distúrbio. Além disso, fatores associados ao indivíduo específico sendo tratado, incluindo o sexo do indivíduo, a idade, o peso, a dieta e o tempo de administração, irão resultar na necessidade de ajustar a do- sagem para obter um nível terapêutico adequado e o efeito terapêutico desejado. As dosagens acima mencionadas são, portanto, exemplifica- doras do caso médio. Naturalmente, podem existir casos individuais onde faixas maiores ou menores de dosagem são merecidas e estas encontram-se no escopo da presente invenção.

[0082] Os compostos de Fórmula (I) podem ser administrados em qualquer uma das composições anteriores e regimes de dosagem ou por meio dessas composições e regimes de dosagem estabelecidos na téc- nica quando o uso de um composto de Fórmula (I) for exigido para um indivíduo que precise do mesmo.

[0083] Como agonistas da proteína STING, os compostos da Fór- mula (I) são úteis nos métodos para tratamento ou prevenção de uma infecção viral, doença, uma síndrome, uma condição ou um distúrbio em um indivíduo, incluindo um animal, um mamífero e um ser humano no qual a infecção viral, doença, a síndrome, a condição ou o distúrbio é afetado pela modulação, incluindo o agonismo, da proteína STING. Esses métodos compreendem, consistem e/ou consistem essencial- mente em administrar a um indivíduo, incluindo um animal, um mamí- fero e um ser humano precisando de tal tratamento ou prevenção, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, sal, ou solvato da Fórmula (I).

[0084] Em uma modalidade, a presente invenção é direcionada a um composto da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, para o uso no tratamento de câncer, doenças e condições de câncer, ou uma infecção viral.

[0085] Exemplos de doenças e condições de câncer para as quais os compostos da Fórmula (I), ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitá- veis dos mesmos, podem ter efeitos antitumorais potencialmente benéfi- cos incluem, mas não se limitam a, cânceres do pulmão, ossos, pâncreas, pele, cabeça, pescoço, útero, ovário, estômago, cólon, mama, esôfago, intestino delgado, intestino, sistema endócrino, glândula tireoide, glândula paratireoide, glândula adrenal, uretra, próstata, pênis, testículos, ureter, bexiga, rim ou fígado; câncer retal; câncer da região anal; carcinomas dos tubos de falópio, endométrio, colo do útero, vagina, vulva, pélvis renal, cé- lula renal; sarcoma de tecido mole; mixoma; rabdomioma; fibroma; lipoma;

teratoma; colangiocarcinoma; hepatoblastoma; angiossarcoma; hema- groma; hepatoma; fibrossarcoma; condrossarcoma; mieloma leucemia crônica ou aguda; linfomas linfocíticos; linfoma do SNC primário; neopla- sias do SNC; tumores do eixo vertebral; carcinomas de células escamo- sas; sarcoma sinovial; mesotelioma pleural maligno; glioma do tronco ce- rebral; adenoma da pituitária; adenoma brônquico; hanlartoma condroma- toso; inesotelioma; doença de Hodgkin e uma combinação de um ou mais dos cânceres anteriormente mencionados.

Adequadamente, a presente invenção se refere a um método para tratar ou reduzir a gravidade de cân- ceres selecionados do grupo que consiste em câncer do cérebro (gliomas), glioblastomas, astrocitomas, glioblastoma multiforme, síndrome de Banna- yan-Zonana, doença de Cowden, doença de Lhermitte-Duclos, tumor de Wilm's, sarcoma de Ewing's, Rabdomiossarcoma, ependimomas, medulo- blastoma, cabeça e pescoço, rim, fígado, melanoma, ovário, pancreático, adenocarcinoma, madenocarcinoma ductal, carcinoma adenoescamoso, carcinoma de células acinares, glucagonoma, insulinoma, próstata, sar- coma, osteossarcoma, tumor de células gigantes do osso, tireoide, leuce- mia de células T linfoblásticas, leucemia mieloide crônica, leucemia linfo- cítica crônica, leucemia de células capilares, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mieloide aguda, leucemia neutrofílica crônica, leucemia de célu- las T linfoblásticas aguda, plasmocitoma, leucemia de células grandes imunoblásticas, leucemia de células do manto, mieloma múltiplo, leucemia magacarioblástica, mieloma múltiplo, leucemia megacariocítica aguda, leucemia pró-mielocítica, eritroleucemia, linfoma maligno, linfoma hod- gkins, linfoma não hodgkins, linfoma de células T linfoblásticas, linfoma de Burkitt, linfoma folicular, neuroblastoma, câncer de bexiga, câncer urotelial, câncer vulvar, câncer cervical, câncer endometrial, câncer renal, mesoteli- oma, câncer de esôfago, câncer de glândula salivar, câncer hepatocelular, câncer gástrico, câncer nasofaringeal, câncer bucal, câncer da boca, GIST (tumores estromais gastrointestinais) e câncer do testículo.

[0086] Em uma outra modalidade, a presente invenção é direcionada a um composto da Fórmula (I), ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso no tratamento de um distúrbio afetado pelo agonismo de STING selecionado do grupo que consiste em melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão, fibrossarcoma e hepatite B.

[0087] Os compostos apresentados da Fórmula (I) podem ser úteis em combinação com um ou mais compostos adicionais úteis para tratar infecção por HBV. Esses compostos adicionais podem compreender ou- tros compostos revelados e/ou compostos conhecidos para tratar, evitar ou reduzir os sintomas ou efeitos da infecção pelo HBV. Tais compostos incluem, mas não se limitam a, inibidores da polimerase de HBV, interfe- rons, inibidores de entrada viral, inibidores de maturação viral, modulado- res de montagem de capsídeo descritos na literatura, inibidores de trans- criptase reversa, agentes imunomoduladores, agonistas de TLR e outros agentes com mecanismos distintos ou desconhecidos que afetam o ciclo de vida de HBV ou que afetam as consequências da infecção por HBV.

[0088] Em exemplos não limitadores, os compostos revelados podem ser usados em combinação com um ou mais fármacos (ou um sal dos mesmos) selecionado a partir do grupo que compreende: inibidores da transcriptase reversa de HBV, e inibidores de DNA e RNA polimerase incluindo, mas não se limitando a, lamivudina (3TC, Zeffix, Heptovir, Epivir, e Epivir-HBV), entecavir (Baraclude, Entavir), adefovir dipivoxil (Hepsara, Preveon, bis-POM PMEA), de tenofovir diso- proxil (Viread, TDF ou PMPA); interferons incluindo, mas não se limitando a, interferon alfa (IFN-α), interferon beta (IFN-β), interferon lambda (IFN-λ), e interferon gama (IFN-γ); inibidores de entrada viral; inibidores de maturação viral;

moduladores de montagem de capsídeo, como, mas não se limitando a, BAY 41-4109; inibidores da transcriptase reversa; agentes imunomoduladores como agonistas de TLR; e agentes de mecanismos distintos ou desconhecidos, como, mas não se limitando a, AT-61 ((E)-N-(1-cloro-3-oxo-1-fenil-3-(piperidin-1- il)prop-1-en-2-il)benzamida), AT-130 ((E)-N-(1-bromo-1-(2-metóxi-fenil)-3- oxo-3-(piperidin-1-il)prop-1-en-2-il)-4-nitrobenzamida), e análogos dos mesmos.

[0089] Em uma modalidade, o agente terapêutico adicional é um interferon. O termo "interferon" ou "IFN" se refere a qualquer membro da família de proteínas altamente homólogas específicas da espécie que inibem a replicação viral e a proliferação celular e modulam a res- posta imune. Por exemplo, os interferons humanos são agrupados em três classes: Tipo I, que inclui interferon-alfa (IFN-α), interferon-beta (IFN-β), e interferon-ômega (IFN-ω), Tipo II, que inclui interferon-gama (IFN-γ), e Tipo III, que inclui interferon-lambda (IFN-λ). Formas recom- binantes de interferons que foram desenvolvidos e estão comercial- mente disponíveis são abrangidas pelo termo "interferon", como usado aqui. Os subtipos de interferons, como os interferons quimicamente modificados ou mutados, são também abrangidos pelo termo "interfe- ron", como usado aqui. Os interferons quimicamente modificados po- dem incluir interferons peguilados e interferons glicosilados. Exemplos de interferons incluem, também, mas não se limitam a, interferon-alfa- 2a, interferon-alfa-2b, interferon-alfa-n1, interferon-beta-1a, interferon- beta-1b, interferon-lambda-1, interferon-lambda-2, e interferon- lambda-3. Exemplos de interferons peguilados incluem interferon alfa- 2a peguilado e interferon alfa-2b peguilado.

[0090] Consequentemente, em uma modalidade, os compostos da Fórmula (I) podem ser administrados em combinação com um interferon selecionado do grupo que consiste em interferon alfa (IFN-α), interferon beta (IFN-β), interferon lambda (IFN-λ), e interferon gama (IFN-γ). Em uma modalidade específica, o interferon é interferon-alfa-2a, interferon- alfa-2b, ou interferon-alfa-n1. Em uma outra modalidade específica, o interferon-alfa-2a ou interferon-alfa-2b é peguilado. Em uma modalidade preferencial, o interferon-alfa-2a é interferon-alfa-2a peguilado (PE- GASYS). Em uma outra modalidade, o agente terapêutico adicional é selecionado dentre modulador imune ou terapias estimuladoras imunes, que incluem agentes biológicos pertencentes à classe dos interferons.

[0091] Além disso, o agente terapêutico adicional pode ser um agente que interrompe a função de outras proteínas virais essenciais ou proteínas hospedeiras necessárias para replicação ou persistência de HBV.

[0092] Em outra modalidade, o agente terapêutico adicional é um agente antiviral que bloqueia a entrada ou maturação viral ou direciona a polimerase de HBV como inibidores da polimerase de nucleotídeo ou nu- cleosídeo ou não nucleotídeo ou não nucleosídeo. Em uma modalidade adicional da terapia de combinação, o inibidor de transcriptase reversa ou inibidor de DNA ou RNA polimerase é Zidovudina, Didanosina, Zalcitabina, ddA, Estavudina, Lamivudina, Abacavir, Entricitabina, Entecavir, Apricita- bina, Atevirapina, ribavirina, aciclovir, fanciclovir, valaciclovir, ganciclovir, valganciclovir, Tenofovir, Adefovir, PMPA, cidofovir, Efavirenz, Nevirapina, Delavirdina ou Etravirina.

[0093] Em uma modalidade, o agente terapêutico adicional é um agente imunomodulador que induz uma resposta imune natural limitada levando à indução de respostas imunes contra vírus não relacionados. Em outras palavras, o agente imunomodulador pode afetar a maturação de células apresentadoras de antígeno, a proliferação de células T e a liberação de citocinas (por exemplo, IL-12, IL-18, IFN-alfa, -beta, e - gama e TNF-alfa entre outros).

[0094] Em uma outra modalidade, o agente terapêutico adicional é um modulador de TLR ou um agonista de TLR, como um agonista de TLR-7 ou agonista de TLR-9. Em uma modalidade adicional da terapia de combinação, o agonista de TLR-7 é selecionado do grupo que con- siste em SM360320 (9-benzil-8-hidróxi-2-(2-metóxi-etóxi)adenina) e AZD 8848 ([3-({[3-(6-amino-2-butóxi-8-oxo-7,8-di-hidro-9H-purin-9- il)propil][3-(4-morfolinil)propil]amino}metil)fenil]acetato de metila).

[0095] Em qualquer um dos métodos aqui fornecidos, o método pode compreender adicionalmente administrar ao indivíduo ao menos uma va- cina contra HBV, um inibidor nucleosídico de HBV, um interferon ou qual- quer combinação dos mesmos. Em uma modalidade, a vacina contra HBV é ao menos uma dentre RECOMBIVAX HB, ENGERIX-B, ELOVAC B, GE- NEVAC-B, ou SHANVAC B.

[0096] Em uma modalidade, os métodos aqui descritos compreen- dem, ainda, a administração de ao menos um agente terapêutico adici- onal selecionado do grupo que consiste em análogos de nucleotídeo/nu- cleosídeo, inibidores de entrada, inibidores de fusão e qualquer combi- nação desses ou outros mecanismos antivirais.

[0097] Em um outro aspecto, é aqui fornecido um método de trata- mento de uma infecção por HBV em um indivíduo que precisa do mesmo, que compreende reduzir a carga viral de HBV pela adminis- tração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto revelado sozinho ou em combinação com um inibidor de transcriptase reversa; e adicionalmente administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de vacina contra HBV. O inibidor de transcriptase reversa pode ser pelo menos um dentre Zidovudina, Didanosina, Zalcitabina, ddA, Estavudina, Lamivudina, Abacavir, Entri- citabina, Entecavir, Apricitabina, Atevirapina, ribavirina, aciclovir, fan- ciclovir, valaciclovir, ganciclovir, valganciclovir, Tenofovir, Adefovir, PMPA, cidofovir, Efavirenz, Nevirapina, Delavirdina ou Etravirina.

[0098] Em um outro aspecto, é aqui fornecido um método de trata- mento de uma infecção por HBV em um indivíduo que precisa do mesmo, que compreende a redução da carga viral de HBV pela administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto re- velado sozinho ou em combinação com um oligonucleotídeo antissenso ou agente de interferência de RNA que tem como alvo os ácidos nucleicos de HBV; e adicionalmente administrar ao indivíduo uma quantidade tera- peuticamente eficaz de vacina contra HBV. O oligonucleotídeo antissenso ou agente de interferência de RNA possui complementaridade suficiente com a ácidos nucleicos do HBV alvo para inibir a replicação do genoma viral, a transcrição de RNAs virais, ou a tradução de proteínas virais.

[0099] Em uma outra modalidade, o composto revelado e o pelo menos um agente terapêutico adicional são coformulados. Em ainda uma outra modalidade, o composto revelado e o pelo menos um agente terapêutico adicional são coadministrados. Para qualquer terapia de combinação descrita aqui, um efeito sinérgico pode ser calculado, por exemplo, com o uso de métodos adequados como a equação de Sig- moid-Emáx (Holford & Scheiner, 19981, Clin. Pharmacokinet. 6: 429- 453), a equação de aditividade de Loewe (Loewe & Muischnek, 1926, Arch. Exp. Pathol Pharmacol. 114: 313-326) e a equação do efeito me- diano (Chou & Talalay, 1984, Adv. Enzyme Regul. 22: 27-55). Cada equação mencionada acima pode ser aplicada a dados experimentais para gerar um gráfico correspondente que auxilia na avaliação dos efei- tos da combinação de fármacos. Os gráficos correspondentes associa- dos às equações mencionadas acima são a curva de concentração- efeito, a curva de isobolograma e a curva de índice de combinação, res- pectivamente.

[0100] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos de admi- nistração de terapias de combinação fornecidos na presente invenção, o método pode compreender adicionalmente monitorar ou detectar a carga viral de HBV do indivíduo, sendo que o método é executado du- rante um período de tempo incluindo até o momento em que o vírus de HBV é indetectável.

[0101] Os compostos revelados da Fórmula (I) podem ser úteis em combinação com um ou mais compostos adicionais úteis para tratar câncer. Esses compostos adicionais podem compreender outros com- postos revelados e/ou compostos conhecidos para tratar, evitar ou re- duzir os sintomas ou efeitos do dito câncer.

[0102] Em uma modalidade, o direcionamento de STING com agen- tes de ativação ou inibição pode ser uma abordagem promissora para tra- tar doenças e condições em que a modulação para a via IFN do tipo I é benéfica, incluindo doenças inflamatórias, alérgicas e autoimunes, doen- ças infecciosas, câncer, síndromes pré-cancerosas e como adjuvantes de vacina (Dubensky et al., Therapeutic Advances in Vaccines 1(2013)131- 143).

[0103] Em uma modalidade, os compostos da presente invenção po- dem ser úteis como adjuvantes em uma estratégia terapêutica que usa vacinas anticâncer. Em uma modalidade, uma vacina anticâncer inclui bactérias ou vírus inativados ou atenuados que compreendem os antíge- nos de interesse, antígenos purificados, vetores de aplicação virais vivos manipulados para expressar e secretar o antígeno de interesse. Os veto- res de aplicação podem também incluir vetores de aplicação bacterianos atenuados que expressam os antígenos.

[0104] Uma modalidade adicional da presente invenção inclui um método para tratar ou reduzir a gravidade de cânceres por ativação do sistema imunológico com uma vacina anticâncer, incluindo mas não se limitando a, vacinas de antígeno, vacinas de células completas, vaci- nas de ativação de células dendríticas, vacinas de DNA, vacina Baci- llus Calmette-Guérin (BCG), Sipuleucel-T (Provenge), Talimogene la- herparepvec (T-Vec; Imlygic™), vacinas à base de vírus oncolítico e vacinas à base de adenovírus.

[0105] Os antígenos e adjuvantes que podem ser usados em com- binação com os compostos de Fórmula geral (I), ou as formas de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, incluem molécula coestimu- latória B7, interleucina-2, interferon-y, GM-CSF, antagonistas de CTLA- 4, ligante de OX-40/0X-40, ligante de CD40/CD40, sargramostim, leva- misol, vírus de vaccinia , Bacille Calmette-Guerin (BCG), liposomas, alum, adjuvante completo ou incompleto de Freund, endotoxinas desin- toxicadas, óleos minerais, substâncias ativas de superfície como lipole- citina, polióis piurônicos, poliânions peptídeos, e emulsões de óleo ou hidrocarboneto. Os adjuvantes, como hidróxido de alumínio ou fosfato de alumínio, podem ser adicionados para aumentar a capacidade da vacina de ativar, acentuar ou prolongar uma resposta imunológica. Ma- teriais adicionais, como citocinas, quimiocinas, e sequências de ácidos nucleicos de bactérias, como CpG, um agonista 9 do receptor do tipo Toll (TLR) bem como agonistas adicionais para TLR 2, TLR 4, TLR 5, TLR 7, TLR 8, TLR9, incluindo lipoproteína, LPS, monofosforilipídeo A, ácido lipoteicoico, imiquimod, resiquimod, e além disso agonistas de gene indutível por ácido retinoico I (RIG-I) como poli I:C, usados sepa- radamente ou em combinação com as composições descritas também são adjuvantes potenciais.

[0106] As vias CLTA-4 e PD-I são importantes reguladores negati- vos da resposta imune. As células T ativadas regulam o CTLA-4, que se liga às células apresentadoras de antígeno e inibe a estimulação de células T, a expressão de gene IL-2 e a proliferação de células T; estes efeitos antitumorais foram observados em modelos de camundongo de carcinoma de cólon, câncer de próstata metastático, e melanoma me- tastático. PD-1 se liga a células de T ativas e suprime a ativação da célula T; Os agonistas de PD-1 também demonstraram efeitos antitu- morais.

[0107] Os antagonistas de via de CTLA-4 e PD-1 que podem ser usados em combinação com os compostos da Fórmula (I) ou da Fór- mula (la), ou as formas de sal farmaceuticamente aceitáveis dos mes- mos, revelados na presente invenção, incluem ipilimumabe, tremelimu- mabe, nivolumabe, pembrolizumabe, CT-OII, AMP-224, e MDX-II06.

[0108] "Antagonista de PD-1 " ou "antagonista da via PD-1" significa qualquer composto químico ou molécula biológica que bloqueia a ligação de PD-L1 expresso em uma célula de câncer ao PD-1 expresso em uma célula imune (célula de T, célula B, ou célula NKT) e, de preferência, tam- bém bloqueia a ligação de PD-L2 expresso em uma célula de câncer ao PD-1 expresso em células imunes. Nomes alternativos ou sinônimos para PD-1 e seus ligantes incluem: PDCD I, PD1, CD279, e SLEB2 para PD-1; PDCDILI, PDL1, B7HI, B7-4, CD274, e B7-H para PD-L1; e PDCD IL2, PDL2, B7-DC, Btdc, e CD273 para PD-L2. Em qualquer um dos métodos de tratamento, medicamentos e usos da presente descrição em que um indivíduo humano está sendo tratado, o antagonista de PD-1 bloqueia a ligação de PD-L1 humano ao PD-1 humano e, de preferência, bloqueia a ligação tanto do PD-L1 humano quanto do PD-1 humano ao PD-1 humano. As sequências de aminoácidos de PD-1 humano podem ser encontradas no NCBI Locus n°: NP_005009, as sequências de aminoácidos PD-L1 e PD-L2 humano podem ser encontrados no NCBI Locus n°: NP_054862 e NP_0795 I5, respectivamente.

[0109] As sequências de aminoácidos de PD-1 humano podem ser encontradas no NCBI Locus n°: NP_305009. As sequências de aminoáci- dos de PD-L1 e PD-L2 humano podem ser encontradas no Locus do NCBI n °.: NP_054862 e NP_1795/I5, respectivamente.

[0110] Os antagonistas de PD-1 úteis em qualquer dos métodos de tratamento, medicamentos e usos da presente descrição incluem um anti- corpo monoclonal (mAb), ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, que se liga especificamente a PD-1 ou PD-L 1 e, de preferência, se liga especificamente a PD-1 humano ou PD-L1 humano. O mAb pode ser um anticorpo humano, um anticorpo humanizado, ou um anticorpo quimérico e pode incluir uma região constante humana. Em algumas modalidades, a região constante humana é selecionada do grupo que consiste em regiões constantes de IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4, e em modalidades preferenciais, a região constante humana é uma região constante de IgG1 ou IgG4. Em algumas modalidades, o fragmento de ligação ao antígeno é selecionado do grupo que consiste em fragmentos Fab'-SH, F(ab')2, scFv, e Fv.

[0111] Exemplos de mAbs que se ligam ao PD-L1, e úteis no mé- todo de tratamento, medicamentos e usos da presente descrição, são descritos na Publicação de Pedido de Patente Internacional PCT n°s W02013/019906 e W02010/077634 A1 e na Patente US n° US8383796. Os mAbs PD-L1 anti-humanos específicos úteis como o antagonista de PD-1 no método de tratamento, medicamentos e usos da presente des- crição incluem MPDL3280A, BMS-936559, MEDI4736, MSB0010718C e um anticorpo que compreende as regiões variáveis de cadeia pesada e cadeia leve da SEQ ID N0:24 e SEQ ID N0:21, respectivamente W02013/019906.

[0112] Outros antagonistas de PD-1 úteis em qualquer dos métodos de tratamento, medicamentos e usos da presente descrição incluem uma adesão imune que se liga especificamente a PD-1 ou PD-L1 humano, e, de preferência, se liga especificamente ao PD-1 humano ou PD-L1 hu- mano, por exemplo, uma proteína de fusão contendo a porção de ligação extracelular ou PD-1 de PD-L1 ou PD-L2 fundida a uma região constante como uma região de Fe de uma molécula de imunoglobulina. Exemplos de moléculas de adesão imune que se ligam especificamente a PD-1 são descritos nas Publicações de Pedido de Patente Internacional n°s W02010/027827 e W02011/066342. As proteínas de fusão específicas úteis como o antagonista de PD-1 no método de tratamento, medicamen- tos e usos da presente descrição AMP-224(também conhecida como B7-

DCig), que é uma proteína de fusão de PD-L2 FC e se liga ao PD-I hu- mano.

[0113] Exemplos de agentes citotóxicos que podem ser usados em combinação com os compostos da Fórmula geral (I), ou sais farmaceu- ticamente aceitáveis dos compostos anteriormente mencionados, in- cluem, mas não se limitam a, trióxido de arsênio (vendido sob o nome comercial TRISENox®), asparaginase (também conhecido como L-as- paraginase, e Erwinia L-asparaginase, vendidos sob os nomes comer- ciais ELSPAR®e KIDROLASE®).

[0114] Os agentes quimioterápicos que podem ser usados em combi- nação com os compostos de Fórmula (I), ou sais farmaceuticamente acei- táveis dos compostos anteriormente mencionados, revelados na presente invenção incluem acetato de abiraterona, altretamina, anidrovimblastina, auristatina, bexaroteno, bicalutamida, BMS 184476, 2,3,4,5,6-pentafluoro- N-(3-fluoro-4-metoxifenil)benzeno sulfonamida, bleomicina, N,N-dimetil-L- valil-L-valil-N-metil-L-valil-L-propil-1-Lprolina-t-butilamida, caquectina, ce- madotina, clorambucila, ciclofosfamida, 3',4'-dide-hidro-4'desóxi-8'-norvin- caleucoblastina, docetaxol, doxetaxel, ciclofosfamida, carboplatina, car- mustina, Cisplatina, criptoficina, ciclofosfamida, citarabina, dacarbazina (DTIC), dactinomicina, daunonubicina, decitabina dolastatina, doxorrubi- cina (adriamicina), etoposídeo, 5-fluorouracila, finasterida, flutamida, hidro- xiureia e hidroxiureia e taxanos, ifosfamida, liarozol, lonidamina, lomustina (CCNU), MDV3100, mecloretamina (mostarda de nitrogênio), melfalano, mivobulina isetionato, rizoxina, sertenef, estreptozocina, mitomicina, meto- trexato, taxanas, nilutamida, nivolumabe, onapristona, paclitaxel, pembro- lizumabe, prednimustina, procarbazina, RPR109881, fosfato de estramus- tina, tamoxifeno, tasonermina, taxol, tretinoina, vvimblastina, vincristina, sulfato de vindesina, e vinflunina.

[0115] Exemplos de inibidores do receptor do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) incluem, mas não se limitam a, bevacizumabe

(vendido sob a marca registrada de Avastin), axitinibe (descrito na publi- cação de patente internaconal PCI n° WO01/002369), alaninato de briva- nibe ((S)- ((R)-1-(4-(4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-ilóxi)-5-metilpirrolo[2, 1- f][1,2,4]triazin-6-ilóxi)propan-2-il)2-aminopropanoato, também conhecido como BMS-582664), motesanibe (N-(2,3- di-hidro-3,3-dimetil-1H-indol-6- il)-2-[(4-piridinilmetil)amino]-3-piridinocarboxamida e descrita na publica- ção de pedido de patente internacional PCT n° WO02/068470), pasireo- tida (também conhecida como SO 230, e descrita na publicação de pe- dido de patente internacional PCT n° WO02/010192), e sorafenibe (dis- ponível comercialmente sob o nome NEXAVAR).

[0116] Exemplos de inibidores de topoisomerase II incluem, mas não se limitam a, etoposídeo (também conhecido como VP-16 e fosfato de eto- posídeo, vendidos sob os nomes comerciais TOPOSAR, VEPESID, e ETOPOPHOS), e teniposídeo (também conhecido como a VM-26, vendido sob o nome comercial VUMON).

[0117] Exemplos de agentes alquilantes incluem, mas não se limitam a, 5-azacitidina (vendida sob o nome comercial de VIDAZA), decitabina (vendida sob o nome comercial de DACOGEN), temozolomida (vendida sob os nomes comerciais TEMCAD, TEMODAR, e TEMODAL), dactino- micina (também conhecida como actinomicina-D e vendida sob o nome comercial COSMEGEN), melfalano (também conhecido como L-PAMm L- sarcolina, e mostarda de fenilalanina (vendida sob o nome comercial AL- KERAN), altretamina (também conhecida como hexametilmelamina (HMM), vendida sob o nome comercial HEXALEN), carmustina (vendida sob o nome comercial BCNU), bendamustina (vendido sob o nome comer- cial TREANDA), busulfan (vendido sob os nomes comerciais BUSULFEx® e MYLERAN®), carboplatina (vendida sob o nome comercial PARAPLA- TIN®), lomustina (também conhecida como CCNU, vendido sob o nome comercial CEENU®), cisplatina (também conhecida como CDDP, vendida sob os nomes comerciais PLATINOL ® e PLATINOL ®-AQ), clorambucil

(vendida sob o nome comercial LEUKERAN®), ciclofosfamida® (vendida sob os nomes comerciais CYTOXAN® e NEOSAR®), dacarbazina (tam- bém conhecida como DTIC, DIC e imidazol carboxamida, vendida sob o nome comercial DT C-DoME®), altretamina (também conhecida como he- xametilmelamina (HMM) vendida sob o nome comercial HEXALEN®), ifos- famida (vendida sob a nome comercial IFEx®), procarbazina (vendida sob a nome comercial MATULANE®), Mecloretamina (também conhecida co mostarda de nitrogênio, mustina e cloridrato de mecloroetamina, vendida sob o nome comercial MUSTARGEN®), estreptozocina (vendida sob a nome comercial ZANOSAR®), tiotepa (também conhecida como tiofosfo- amida, TESPA e TSPA, e vendida sob o nome comercial THIORLEx®.

[0118] Exemplos de antibióticos antitumorais incluem, mas não se limitam a, doxorrubicina (vendidas sob os nomes comerciais ADRI- AMYCIN® e RUBEx®), bleomicina (vendida sob o nome comercial LE- NOXANE®), daunorrubicina (também conhecida como cloridrato de daunorrubicina, daunomicina, e cloridrato de rubidomicina, vendido sob o nome comercial CERUBIDINE®), daunorrubicina lipossomal (li- possoma de citrato de daunorrubicina, vendida sob o nome comercial DAUNOXoME®), mitoxantrona (também conhecida como DHAD, ven- dids sob o nome comercial NOVANIRONE®), epirrubicina (vendida sob o nome comercial ELLENCE™), idarrubicina (vendida sob os no- mes comerciais EDAMYCIN®, EDAMYCIN PFS®), e mitomicina C (vendida sob o nome comercial de MUTAMYCIN®).

[0119] Exemplos de antimetabolitos incluem, mas não se limitam a, claribinae (2-clorodesoxiadenosina, vendida sob o nome comercial de LEUSTATIN®), 5- fluorouracila (vendida sob o nome comercial ADRU- CIL®), 6-tioguanina (vendida sob a nome comercial PURINETHOL®), pe- metrexed (vendido sob o nome comercial ALIMTA®), citarabina (também conhecida como arabinosilcitosinae (Ara-C), vendida sob o nome comer-

cial CYTOSAR-U®), citarabina lipossomal (também conhecida como li- possomal Ara-C, vendida sob o nome comercial DEPOCYT™), decila- bina (vendida sob o nome comercial DACOGEN®), hidroxiureia e (ven- dida sob os nomes comerciais HYDREA®, DROXIATM e MYLOCEL™), fludarabina (vendida sob o nome comercial FLUDARA ®), floxuridina (vendida sob o nome comercial FUDR®), a cladribina (também conhe- cida como 2-clorodesoxiadenosina (2 m2) vendida sob o nome comercial LEUSTATIN™), metotrexato (também conhecida como ametopterina, metotrexato de sódio (MTX), vendidas sob os nomes comerciais RHEUMA1REX® e TREXALL™), e pentostatina (vendida sob o nome comercial NIPENT®).

[0120] Exemplos de retinoides incluem, mas não se limitam a, a alitretinoína (vendida sob o nome comercial PANRETIN®), tretinoína (ácido todo-trans-retinoico, também conhecida como ATRA, vendida sob o nome comercial VESANom®), isotretinoína (ácido13-c/s-reti- noico, vendida sob os nomes comerciais ACCUTANE®, AMNES- TEEM®, CLARAvis®, CLARus®, DECUT AN®, ISOTANE®, Izo- TEcH®, ORATANE®, ISOTRET®, e SOTRET®), e bexaroteno (ven- dido sob o nome comercial TARGRETIN®).

[0121] As abreviações usadas no relatório descritivo da presente in- venção, particularmente, nos esquemas e exemplos, são as seguintes: ACN acetonitrila AcOH ácido acético glacial ADDP dipiperidida azodicarboxílica aq aquoso Ar. Argônio Bn ou Bzl benzila Bz benzoila BINAP 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftila Boc terc-butiloxicarbonila CH3CN acetonitrila conc. concentrado CV volume da coluna dba dibenzilideneacetona DBU 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno DCA ácido dicloroacético DCC N,N'-diciclo-hexila-carbodi-imida DCE 1,2-dicloroetano DCM diclorometano DDTT 3-[(Dimetilaminometileno)amino]-3H-1,2,4-ditiazol-5-tiona DEAD azodicarboxilato de dietila DIBAL hidreto de di-isobutilalumínio DIPEA ou DIEA di-isopropiletilamina DMA dimetilanilina DMAP 4-dimetilaminopiridina DME dimetoxietano DMF N,N-dimetilformamida DMP periodinano de Dess-Martin DMSO sulfóxido de dimetila DMTr 4,4'-dimetoxitritila DPPA azida de difenilfosforilazida dppf 1,1’-bis(difenilfosfino)ferroceno EA acetato de etila EDCI 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodi-imida ESI ionização por eletroaspersão EtOAc ou EA acetato de etila EtOH etanol GCMS cromatografia gasosa com espectrometria de massa hora ou hr(s) hora ou horas HEK rins embrionários humanos HPLC cromatografia líquida de alta eficiência LAH hidreto de lítio e alumínio LDA di-isopropilamida de lítio LHMDS bis(trimetilsilil)amida de lítio Me metila MEK cetona etílica e metílica MeOH metanol MeCN acetonitrila MHz megahertz min minuto ou minutos MS espectrometria de massa ou peneiras moleculares Ms metanossulfonila

NBS N-bromossuccinimida NIS N-iodossuccinimida NMM N-metilmorfolina NMP N-metilpirrolidona RMN ressonância magnética nuclear PADS dissulfeto de fenilacetila PCC clorocromato de piridínio PE éter de petróleo RP fase reversa rt ou RT temperatura ambiente Rt tempo de retenção Sec segundo ou segundos SEM-C1 cloreto de 2-(trimetilsilil)etoximetila TBAF fluoreto de tetrabutilamônio TBS ou TBDMS t-butildimetilsilila TBP fosfato de tributila TEA ou Et3N trietilamina TEAA acetato de trietilamônio TFA ácido trifluoracético THF tetra-hidrofurano TIPS tri-isopropilsilila TLC cromatografia em camada fina TMS tetrametilsilano Ts 4-toluenossulfonila

[0122] Os compostos da Fórmula (I) podem ser preparados de acordo com o processo esquematizado no esquema 1, abaixo. Esquemas geral I

[0123] Consequentemente, um composto adequadamente substitu- ído da Fórmula (II), no qual PG1 e PG2 são grupos protetores conhecidos por uma pessoa versada na técnica, sendo PG1 pode ser selecionado dentre acetila, trimetilsilila, terc-butildimetilsilila, benzila, tritila, dimetoxi- tritila ou similares, e PG2 pode ser selecionado dentre acila, benzoíla, isobutila, ou similares, um composto conhecido ou composto preparado através de métodos conhecidos, pode ser reagido com trifenilfosfina, azida de sódio, na presença de iodeto tetrabutilamônio e tetrabrometo de carbono, em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de solventes como DMF, THF, tolueno, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de 0°C a cerca de 130°C, para produzir o composto cor- respondente de Fórmula (III). Alternativamente, um composto adequa- damente substituído da Fórmula (II), um composto conhecido ou com- posto preparado através de métodos conhecidos, pode ser reagido com cloreto de metanossulfonila, cloreto de trifluorometilsulfonila ou simila- res, na presença de uma base adequadamente selecionada como Et3N, DIPfEA, DMAP, e similares, em um solvente adequadamente selecio- nado ou mistura de solventes como CHCl3, CH2Cl2, THF, piridina, e si- milares, a uma temperatura na faixa de cerca de 0°C a cerca de 130°C, para produzir o análogo de mesila ou triflila correspondente, que pode ser adicionalmente reagido com azida de sódio em um solvente ade- quadamente selecionado ou mistura de solventes como DMF, THF, to- lueno, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de 0°C a cerca de 130°C, para produzir o composto correspondente de Fórmula (III).

[0124] Ainda um outro método pode envolver o tratamento de um composto adequadamente substituído da Fórmula (II), com uma combi- nação de iodo, trifenilfosfina e imidazol, em um solvente adequado como piridina, DMF, ou similares; a uma temperatura na faixa de cerca de 0°C a cerca de 30°C, para produzir o análogo de iodo correspondente, que pode ser adicionalmente reagido com azida de sódio em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de solventes como DMF, THF, tolueno, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de 0°C a cerca de 130°C, para produzir o composto correspondente de Fórmula (III).

[0125] O composto da Fórmula (III) pode, então, ser reagido com uma fonte de hidrogênio, sob condições de hidrogenação, na presença de um catalisador, ou sistema de catalisadores, adequadamente seleci- onado, como Pd/C, Pt, e similares, em um solvente como MeOH, EtOAc, e similares, para produzir o composto correspondente da Fórmula (IV). Alternativamente, o composto da Fórmula (III) pode ser reagido com tri- fenilfosfina, em um solvente adequado como THF, DMF, ou similares, a uma temperatura na faixa de cerca de 20°C a cerca de 60°C, seguido de tratamento com água em temperaturas iguais para produzir o com- posto correspondente de Fórmula (IV).

[0126] O composto de Fórmula (IV) pode ser reagido com um com- posto da Fórmula (V) como cloreto de sulfurila, clorossulfato de 4-ni- trofenila, ou similares, na presença de uma base adequadamente se- lecionada como Et3N, DIPEA, e similares, em um solvente adequada- mente selecionado ou mistura de solventes como CHCl 3, CH2Cl2, TH, piridina, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -78°C a cerca de 50°C, para produzir o composto correspondente de Fórmula (VI).

[0127] O composto de Fórmula (VI) pode, então, ser reagido com um composto adequadamente substituído da Fórmula (VII) em que PG3 e PG4 são grupos protetores conhecidos da pessoa versada na técnica, em que PG3 poderia ser selecionado dentre acetila, trimetilsilila, terc- butildimetilsilila, benzila, tritila, dimetoxitritila, ou similares, e PG2 poderia ser selecionado dentro acila, benzoíla, isobutirila, ou similares, um com- posto conhecido ou composto preparado por métodos conhecidos, na presença de uma base adequadamente selecionada como Et3N, DIPEA, DMAP, Cs2CO3 ou similares, em um solvente adequadamente CHCl 3,

CH2Cl2, THF, MeCN, piridina, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -10°C a cerca de 80°C, para produzir o composto corres- pondente de Fórmula (VIII).

[0128] Os grupos protetores de álcool PG1 e PG3 de um composto de Fórmula (VIII) podem, então, ser clivados através de métodos bem conhecidos no âmbito da prática pelas pessoas versadas na técnica, na presença de condições básicas ou ácidas, para produzir o composto cor- respondente de Fórmula (IX).

[0129] O composto de Fórmula (IX) pode, então, ser reagido com um composto adequadamente substituído da Fórmula (X) no qual R8 é halo- gênio, di-isopropilamino, ou similares, um composto conhecido ou com- posto preparado através de métodos conhecidos, na presença de um ati- vador adequadamente como tetrazol, DMAP, 5-etiltio-1H-tetrazol, ou simi- lares, em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de solven- tes como MeCN, CH2Cl2, THF, dioxano, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -10°C a cerca de 60°C, para produzir o composto de fosfito correspondente de Fórmula (XI).

[0130] O composto de Fórmula (XI) pode, então, ser reagido com um oxidante como iodo, peróxido de hidrogênio, peróxido de terc-butila (TBHP), reagente de Beaucage, DDTT, 3-amino-1,2,4-ditiazol-5-tiona, PADS, e similares, ou um complexo de BH3.SMe2 ou de BH3.THF, ou similares, em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de solventes como CHCl3, CH2Cl2, THF, MeCN, dioxano, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -10°C a cerca de 80°C, para gerar o composto da Fórmula (XII) em que R4 é O, S ou BH3.

[0131] O composto de Fórmula (XII) pode, então, ser desprotegido com o uso de condições básicas como MeNH2, tBuNH2, hidróxido de amô- nio, Et3N.3HF e similares, em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de solventes como EtOH, água, de iPrOH, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -10°C a cerca de 120°C, ou através de métodos bem conhecidos no âmbito da prática pelas pessoas versadas na técnica, na presença de condições básicas ou ácidas, para produzir o com- posto correspondente de Fórmula (I-a).

[0132] Alternativamente, os compostos da Fórmula (I) podem ser pre- parados de acordo com o processo esquematizado no esquema geral 2, abaixo. Esquema geral 2

[0133] Consequentemente, um composto adequadamente substitu- ído da Fórmula (XIII) em que PG1 e PG4 são grupos protetores conhecidos pela pessoa versada na técnica, PG1 pode ser selecionado dentre acetila, trimetilsilila, terc-butildimetilsilia, benzila, tritila, dimetoxitritila, ou simlares, e PG4 pode ser selecionado dentre acila, benzoíla, isobutirila, ou similares, um composto conhecido ou composto preparado através de métodos co- nhecidos, pode ser reagido com trifenilfosfina, azida de sódio, na presença de iodeto tetrabutilamônio e tetrabrometo de carbono, em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de solventes como DMF, THF, tolueno, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de 0°C a cerca de 130°C, para produzir o composto correspondente de Fórmula (III).

[0134] Alternativamente, um composto adequadamente substituído da Fórmula (XIII), um composto conhecido ou composto preparado atra- vés de métodos conhecidos, pode ser reagido com cloreto de metanos- sulfonila, cloreto de trifluorometilsulfonila ou similares, na presença de uma base adequadamente selecionada como Et3N, DIPEA, DMAP, e similares, em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de solventes como CHCl3, CH2Cl2, THF, piridina, e similares, a uma tempe- ratura na faixa de cerca de 0°C a cerca de 130°C, para produzir o aná- logo de mesila ou triflila correspondente, que pode, então, ser adicional- mente reagido com azida de sódio em um solvente adequadamente se- lecionado ou mistura de solventes como DMF, THF, tolueno, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de 0°C a cerca de 130°C, para produzir o composto correspondente de Fórmula (XIV). Ainda um outro método pode envolver tratar um composto adequadamente substituído da Fórmula (XIII), com uma combinação de iodo, trifenilfosfina e imi- dazol, em um solvente adequado como piridina, DMF, ou similares, a uma temperatura na faixa de cerca de 0°C a cerca de 30°C, para pro- duzir o análogo de iodo correspondente, que pode ser adicionalmente reagido com azida de sódio em um solvente adequadamente selecio- nado ou mistura de solventes como DMF, THF, tolueno, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de 0°C a cerca de 130°C, para pro- duzir o composto correspondente de Fórmula (XIV).

[0135] O composto da Fórmula (XIV) pode, então, ser reagido com uma fonte de hidrogênio, sob condições de hidrogenação, na presença de um catalisador, ou sistema de catalisadores, adequadamente seleci- onado, como Pd/C, Pt, e similares, em um solvente como MeOH, EtOAc, e similares, para produzir o composto correspondente da Fórmula (XV). Alternativamente, o composto da Fórmula (XIV) pode ser reagido com trifenilfosfina, em um solvente adequado como THF, DMF, ou similares, a uma temperatura na faixa de cerca de 20°C a cerca de 60°C, seguido de tratamento com água na mesma temperatura para produzir o com- posto correspondente de Fórmula (XV).

[0136] O composto de Fórmula (XV) pode ser reagido com um composto da Fórmula (V) como cloreto de sulfurila, clorossulfato de 4-ni- trofenila, ou similares, na presença de uma base adequadamente selecio- nada como Et3N, DIPEA, ou similares, em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de solventes como CHCl3, CH2Cl2, THF, piridina, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -78°C a cerca de 50°C, para produzir o composto correspondente de Fórmula (XVI).

[0137] O composto de Fórmula (XVI) pode, então, ser reagido com um composto adequadamente substituído da Fórmula (XVII) em que à PG2 e PG3 são grupos protetores conhecidos por uma pessoa versada na técnica, sendo que PG3 pode ser selecionado dentre acetila, trimetil- silila, terc-butildimetilsilila, benzila, tritila, dimetoxitritila, ou similares, e PG2 pode ser selecionado dentre acila, benzoíla isobutirila, ou similares, um composto conhecido ou composto preparado através de métodos co- nhecidos, na presença de uma base adequadamente selecionada como EtaN, DIPEA, DMAP, Cs2CO3 ou similares, em um solvente adequada- mente selecionado ou mistura de solventes como CHCl3, CH2Cl2, THF, MeCN, piridina, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de - 10°C a cerca de 80°C, para produzir o composto correspondente de Fór- mula (XVIII). Os grupos protetores de álcool PG1 e PG3 no composto de Fórmula (XVIII) podem, então, ser clivados através de métodos bem co- nhecidos no âmbito da prática pelas pessoas versadas na técnica, na presença de condições básicas ou ácidas para produzir o composto cor- respondente de Fórmula (XIX).

[0138] O composto de Fórmula (XIX) pode, então, ser reagido com um composto adequadamente substituído da Fórmula (X) no qual R8 é ha- logênio, di-isopropilamino, ou similares, um composto conhecido ou com- posto preparado através de métodos conhecidos, na presença de um ati- vador adequadamente como tetrazol, DMAP, 5-etiltio-1H-tetrazol, ou simi- lares, em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de solven- tes como MeCN, CH2Cl2, THF, dioxano, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -10°C a cerca de 60°C, para produzir o composto de fosfito correspondente de Fórmula (XX).

[0139] O composto da fórmula (XX) pode, então, ser reagido com um oxidante como iodo, peróxido de hidrogênio, peróxido de terc-butila, rea- gente de Beaucage, DDTT, 3-amino-1,2,4-ditiazol-5-tiona, PADS e simila- res, ou um complexo de BH3.SMe2 ou de BH3.THF ou similares, em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de solventes como CHCl3, CH2Cl2, THF, MeCN, dioxano, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -10°C a cerca de 80°C, para gerar O composto da Fór- mula (XXI) em que R4 é O, S ou BH3.

[0140] O composto de Fórmula (XXI) pode, então, ser desprotegido com o uso de condições básicas como MeNH2, tBuNH2, hidróxido de amônio, Et3N.3HF e similares, em um solvente adequadamente seleci- onado ou mistura de solventes como EtOH, água, iPrOH, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -10°C a cerca de 120°C, ou atra- vés de métodos bem conhecidos no âmbito da prática pelas pessoas versadas na técnica, na presença de condições básicas ou ácidas, para produzir o composto correspondente de Fórmula (I-b).

[0141] Alternativamente, os compostos da Fórmula (I) podem ser pre- parados de acordo com o processo esquematizado no esquema geral 3, abaixo. Esquemas geral 3

[0142] Consequentemente, um composto adequadamente substitu- ído da Fórmula (XXII) em que PG1 e PG4 são grupos protetores conheci- dos por um versado na técnica, PG1 pode ser selecionado dentre acetila, trimetilsilila, terc- butildimetilsilila, benzila, tritila, dimetoxitritila ou similares, e PG4 pode ser selecionado dentre acila, benzoíla isobutirila, ou similares, um composto conhecido ou composto preparado através de métodos co- nhecidos, podem ser reagidos com uma fonte de hidrogênio, sob condi- ções de hidrogenação, na presença de um catalisador adequadamente selecionado ou sistema catalisador, como Pd/C, Pt, e similares, em um solvente como MeOH, EtOH, EtOAc, e similares, para produzir o composto correspondente de Fórmula (XXIII). Alternativamente, o composto da Fór- mula (XXII) pode ser reagido com trifenilfosfina, em um solvente adequado como THF, DMF, ou similares, a uma temperatura na faixa de cerca de 20°C a cerca de 60°C, seguido de tratamento com água na mesma tem- peratura para produzir o composto correspondente de Fórmula (XXIII).

[0143] O composto de Fórmula (XXIII) pode ser reagido com um composto da Fórmula (V) como cloreto de sulfurila, clorossulfato de 4- nitrofenila, ou similares, na presença de uma base adequadamente se- lecionada como Et3N, DIPEA, e similares, em um solvente adequada- mente selecionado ou mistura de solventes como CHCl3, CH2Cl2, TH, piridina, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -78°C a cerca de 50°C, para produzir o composto correspondente de Fórmula (XXIV).

[0144] O composto de Fórmula (XXIV) pode, então, ser reagido com um composto adequadamente substituído da Fórmula (XXV) em que PG2 e PG3 são grupos protetores conhecidos da pessoa versada na técnica, em que PG3 poderia ser selecionado dentre acetila, trimetilsilila, terc-bu- tildimetila ou similares, e PG2 poderia ser selecionado dentro acila, ben- zoíla, isobutirila, ou similares, um composto conhecido ou composto pre-

parado por métodos conhecidos, na presença de uma base adequada- mente selecionada como Et3N, DIPEA, DMAP, Cs2CO3 ou similares, em um solvente adequadamente CHCl3, CH2Cl2, THF, MeCN, piridina, e si- milares, a uma temperatura na faixa de cerca de -10°C a cerca de 80°C, para produzir o composto correspondente de Fórmula (VIII).

[0145] Os grupos protetores de álcool PG1 e PG3 de um composto de Fórmula (XXVI) podem, então, ser clivados através de métodos bem co- nhecidos no âmbito da prática pelas pessoas versadas na técnica, na pre- sença de condições básicas ou ácidas, para produzir o composto corres- pondente de Fórmula (XXVII).

[0146] O composto de Fórmula (XXVII) pode, então, ser reagido com um composto adequadamente substituído da Fórmula (X) na qual R8 é halogênio, di-isopropilamino ou similares, um composto conhecido ou composto preparado através de métodos conhecidos, na presença de um ativador adequado como tetrazol, DMAP, 5-etiltio-1H-tetrazol, ou simila- res, em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de solven- tes como MeCN, CH2Cl2, THE, dioxano, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -10°C a cerca de 60°C, para produzir o composto de fosfito correspondente da Fórmula (XXVIII).

[0147] O composto de Fórmula (XXVIII) pode, então, ser reagido com um oxidante como iodo, peróxido de hidrogênio, peróxido de terc- butila, reagente de Beaucage, DDTT, 3-amino-1,2,4-ditiazol-5-tiona, PADS, ou similares, ou um complexo BH 3.SMe2, BH3.THF, ou simila- res, em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de sol- ventes como CHCl 3, CH2Cl2, THF, MeCN, dioxano, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -10°C a cerca de 80°C, para gerar o composto da Fórmula (XXIX) em que R4 é O, S ou BH3.

[0148] O composto de Fórmula (XXIX) pode, então, ser desprote- gido com o uso de condições básicas como MeNH2, tBuNH2, hidróxido de amônio, Et3N.3HF e similares, em um solvente adequadamente se- lecionado ou mistura de solventes como EtOH, água, iPrOH, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -10°C a cerca de 120°C, ou através de métodos bem conhecidos no âmbito da prática pelas pes- soas versadas na técnica, na presença de condições básicas ou ácidas, para produzir o composto correspondente de Fórmula (I-c).

[0149] Alternativamente, os compostos da Fórmula (I) podem ser pre- parados de acordo com o processo esquematizado no esquema geral 4, abaixo. Esquema geral 4

[0150] Consequentemente, um composto adequadamente substi- tuído da Fórmula (XXX) em que PG 1 e PG2 são grupos protetores co- nhecidos por uma pessoa versada na técnica, PG1 pode ser selecio- nado dentre acetila, trimetilsilila, terc-butildimetilsilila, benzila, tritila, di- metoxitritila ou similares, e PG 2 pode ser selecionado dentre, benzoíla, isobutirila, ou similares, um composto conhecido ou composto prepa- rado através de métodos conhecidos, pode ser reagido com trifenilfos- fina, azida de sódio, na presença de um catalisador adequadamente selecionado ou sistema catalisado, como Pd/C, Pt, e similares em um solvente como MeOH, EtOH, EtOAc, e similares, para produzir o com- posto correspondente de Fórmula (XXXI).

[0151] Alternativamente, o composto da Fórmula (XXX) pode ser re- agido com trifenilfosfina, em um solvente adequado como THF, DMF, ou similares, a uma temperatura na faixa de cerca de 20°C a cerca de 60°C, seguido de tratamento com água na mesma temperatura para produzir o composto correspondente de Fórmula (XXXI).

[0152] O composto de Fórmula (XXXI) pode ser reagido com um composto da Fórmula (V) como cloreto de sulfurila, clorossulfato de 4- nitrofenila, ou similares, na presença de uma base adequadamente se- lecionada como Et3N, DIPEA, ou similares, em um solvente adequada- mente selecionado ou mistura de solventes como CHCl 3, CH2Cl2, THF, piridina, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -78°C a cerca de 50°C, para produzir o composto correspondente de Fórmula (XXXII).

[0153] O composto de Fórmula (XXXII) pode, então, ser reagido com um composto adequadamente substituído da Fórmula (XXXIII) em que PG3 e PG4 são grupos protetores conhecidos por uma pessoa versada na técnica, em que PG3 pode ser selecionado dentre acetila, trimetilsilila, terc-butildimetilsilila, benzila, tritila, dimetoxitritila ou similares, e PG2 pode ser selecionado dentre acila, benzoíla isobutirila, ou similares, um com- posto conhecido ou composto preparado através de métodos conheci- dos, na presença de uma base adequadamente selecionada como Et3N, DIPEA, DMAP, Cs2CO3, ou similares, em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de solventes como CHCl3, CH2Cl2, THF, MeCN, piridina, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -10°C a cerca de 80°C, para produzir o composto correspondente de Fórmula (XXXIV).

[0154] Os grupos protetores de álcool PG1 e PG3 em um composto de Fórmula (XXXIV) podem, então, ser clivados através de métodos bem co- nhecidos no âmbito da prática pelas pessoas versadas na técnica, na pre-

sença de condições básicas ou ácidas para produzir o composto corres- pondente de Fórmula (XXXV).

[0155] O composto de Fórmula (XXXV) pode, então, ser reagido com um composto adequadamente substituído da Fórmula (X) no qual R8 é ha- logênio, di-isopropilamino, e similares, um composto conhecido ou com- posto preparado através de métodos conhecidos, na presença de um ati- vador adequadamente como tetrazol, DMAP, 5-etiltio-1H-tetrazol, ou simi- lares, em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de solven- tes como de MeCN, CH2Cl2, THF, dioxano, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -10°C a cerca de 60°C, para produzir o composto de fosfito correspondente de Fórmula (XXXVI).

[0156] O composto de Fórmula (XXXVI) pode, então, ser reagido com um oxidante como iodo, peróxido de hidrogênio, peróxido de terc-butila, reagente de Beaucage, DDTT, 3- amino-1,2,4-ditiazol-5-tiona, PADS, e si- milares, ou um complexo de BH3.SMe2, ou de BH3.THF, ou similares, em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de solventes como CHCl3, CH2Cl2, THF, MeCN, dioxano, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -10°C a cerca de 80°C, para gerar o composto da Fór- mula (XXXVII) em que R4 é O, S ou BH3.

[0157] O composto de Fórmula (XXXVII) pode, então, ser desprote- gido com o uso de condições básicas como MeNH2, tBuNH2, hidróxido de amônio, Et3N.3HF e similares, em um solvente adequadamente selecio- nado ou mistura de solventes como EtOH, água, iPrOH, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -10°C a cerca de 120°C, ou através de métodos bem conhecidos no âmbito da prática pelas pessoas versadas na técnica, na presença de condições básicas ou ácidas, para produzir o com- posto correspondente de Fórmula (I-d). Esquema geral 5

[0158] Consequentemente, o grupo protetor de álcool PG3 em um composto de Fórmula (XVIII) em que PG1, PG2, PG3 e PG4 são grupos protetores conhecidos de uma pessoa versada na técnica, PG1 e PG3 podem ser selecionados dentre acetila, trimetilsilila, terc-butildimetilsilia, benzila, tritila, dimetoxitritila, ou similares, e PG2 e PG4 podem ser seleci- onados dentre acila, benzoíla, isobutirila, ou similares, um composto co- nhecido ou composto preparado pelos métodos conhecidos, pode ser cli- vado seletivamente na presença do grupo protetor de álcool PG1 por mé- todos bem conhecidos no âmbito da prática pelas pessoas versadas na técnica, na presença de condições básicas ou ácidas, para produzir o composto correspondente de Fórmula (XXXVIII).

[0159] O composto de Fórmula (XXXVIII) pode ser reagido com tri- fenilfosfina, azida de sódio, na presença de iodeto tetrabutilamônio e tetrabrometo de carbono, em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de solventes como DMF, THF, tolueno, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de 0°C a cerca de 130°C, para produzir o composto correspondente de Fórmula (XXXIX). Alternativamente, um composto adequadamente substituído da Fórmula (II), um composto co- nhecido ou composto preparado através de métodos conhecidos, pode ser reagido com cloreto de metanossulfonila, cloreto de trifluormetilsul- fonila ou similares, na presença de uma base adequadamente selecio- nada como Et3N, DIPEA, DMAP, ou similares, em um solvente adequa- damente selecionado ou mistura de solventes como CHCl3, CH2Cl2, THF, piridina, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de 0 °C a cerca de 130°C, para produzir o análogo de mesila ou triflila corres- pondente, que pode ser adicionalmente reagido com azida de sódio em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de solventes como DMF, THF, tolueno, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de 0°C a cerca de 130°C, para produzir o composto correspondente de Fórmula (XXXIX).

[0160] Ainda um outro método pode envolver tratar um composto adequadamente substituído da Fórmula (XVIII), com uma combinação de iodo, trifenilfosfina e imidazol, em um solvente adequado como piri- dina ou DMF, ou similares, a uma temperatura na faixa de cerca de 0°C a cerca de 30°C, para produzir o análogo de iodo correspondente, que pode ser adicionalmente reagido com azida de sódio em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de solventes como DMF, THF, tolueno, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de 0°C a cerca de 130°C, para produzir o composto correspondente de Fórmula (XXXIX).

[0161] O composto da Fórmula (XXXIX) pode, então, ser reagido com uma fonte de hidrogênio, sob condições de hidrogenação, na pre- sença de um catalisador, ou sistema de catalisadores, adequadamente selecionado, como Pd/C, Pt, e similares, em um solvente como MeOH, EtOAc, ou similares, para produzir o composto correspondente da Fór- mula (XXXX). Alternativamente, o composto da Fórmula (XXXIX) pode ser reagido com trifenilfosfina, em um solvente adequado como THF, DMF, ou similares, a uma temperatura na faixa de cerca de 20°C a cerca de 60°C, seguido de tratamento com água na mesma temperatura para produzir o composto correspondente de Fórmula (XXXX).

[0162] O composto de Fórmula (XXXX) pode ser reagido com um composto da Fórmula (V) como cloreto de sulfurila, clorossulfato de 4-ni- trofenila, ou similares, na presença de uma base adequadamente selecio- nada como Et3N, DIPEA, ou similares, em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de solventes como CHCl3, CH2Cl2, THF, piridina, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -78°C a cerca de 50°C, para produzir o composto correspondente de Fórmula (XXXXI). O grupo protetor de álcool PG1 em um composto de Fórmula (XXXIV) pode, então, ser clivado através de métodos bem conhecidos no âmbito da prática pelas pessoas versadas na técnica, na presença de condições básicas ou áci- das para produzir o composto correspondente de Fórmula (XXXXII).

[0163] O composto da Fórmula (XXXXII) pode, então, ser reagido na presença de uma base adequadamente selecionada como Et 3N, DI- PEA, DMAP, Cs2CO3 ou similares, em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de solventes como CHCl3, CH2Cl2, THF, MeCN, piridina, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de - 10°C a cerca de 80°C, para produzir o composto correspondente da Fórmula (XXXXIII).

[0164] O composto de Fórmula (XXXXIII) pode, então, ser desprote- gido com o uso de condições básicas como MeNH2, tBuNH2, hidróxido de amônio, Et3N.3HF e similares, em um solvente adequadamente selecio- nado ou mistura de solventes como EtOH, água, iPrOH, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -10°C a cerca de 120°C, ou através de métodos bem conhecidos no âmbito da prática pelas pessoas versadas na técnica, na presença de condições básicas ou ácidas, para produzir o com- posto correspondente de Fórmula (I-e). Esquema geral 6

[0165] Consequentemente, os grupos protetores de álcool PG2 e PG4 em um composto de Fórmula (VIII) em que PG1, PG2, PG3 e PG4 são gru- pos protetores conhecidos por uma pessoa versada na técnica, PG1 e PG3 podem ser selecionados dentre acetila, trimetilsilila, terc-butildimetilsilia, benzila, tritila, dimetoxitritila, ou similares, e PG2 e gPG4 podem ser seleci- onados dentre acila, benzoíla, isobutirila, ou similares, um composto co- nhecido ou composto preparado pelos métodos conhecidos, pode ser cli- vado seletivamente na presença dos grupos protetores de álcool PG1 e PG3 por métodos bem conhecidos no âmbito da prática pelas pessoas ver- sadas na técnica, na presença de condições básicas ou ácidas, para pro- duzir o composto correspondente de Fórmula (XXXXIV).

[0166] O composto de Fórmula (XXXXIV) pode ser reagido com um composto da Fórmula (XXXXV) como iodometano ou bromoetano em que R9 é C1-3 opcionalmente substituída, ou similares, na presença de uma base adequadamente selecionada como NaHCO3, K2CO3, Et3N, DIPEA, ou similares, em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de solventes como CHCl3, CH2Cl2, THF, DMF, e similares, a uma temperatura na faixa de -78°C a cerca de 80°C, para produzir o composto correspon- dente de Fórmula (XXXXVI). Os grupos protetores de PG2 e PG4 são, en- tão, reintroduzidos em (XXXXVI) com o uso de grupos protetores conheci-

dos pelos versados na técnica, selecionados dentre acila, benzoíla, isobu- tirila, ou similares, um composto conhecido ou composto preparado atra- vés de métodos conhecidos, na presença de uma base adequadamente selecionada como Et3N, DIPEA, DMAP, Cs2CO3, ou similares, em um sol- vente adequadamente selecionado ou mistura de solventes como CHCl3, CH2Cl2, THF, MeCN, piridina, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -10°C a cerca de 80°C, para produzir o composto correspondente de Fórmula (XXXXVII).

[0167] Os grupos protetores de álcool PG1 e PG3 em um composto de Fórmula (XXXXVII) podem, então, ser clivados seletivamente na pre- sença dos grupos protetores PG2 e PG4 através de métodos bem conhe- cidos no âmbito da prática pelas pessoas versadas na técnica, na pre- sença de condições básicas ou ácidas para produzir o composto corres- pondente de Fórmula (XXXXVIII). O composto de Fórmula (XXXXIV) pode, então, ser reagido com um composto adequadamente substituído da Fórmula (X) na qual R8 é halogênio, di-isopropilamino ou similares, um composto conhecido ou composto preparado através de métodos conhe- cidos, na presença de um ativador adequado como tetrazol, DMAP, 5- etiltio-1H-tetrazol, ou similares, em um solvente adequadamente selecio- nado ou mistura de solventes como MeCN, CH2Cl2, THE, dioxano, e si- milares, a uma temperatura na faixa de cerca de -10°C a cerca de 60°C, para produzir o composto de fosfito correspondente da Fórmula (XXXXIX).

[0168] O composto de Fórmula (XXXXIX) pode, então, ser reagido com um oxidante como iodo, peróxido de hidrogênio, peróxido de terc- butila, reagente de Beaucage, DDTT, 3-amino-1,2,4-ditiazol-5-tiona, PADS, ou similares, ou um complexo BH 3.SMe2, BH3.THF, ou simila- res, em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de sol- ventes como CHCl 3, CH2Cl2, THF, MeCN, dioxano, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -10°C a cerca de 80°C, para gerar o composto da Fórmula (L) em que R4 é O, S ou BH3.

[0169] O composto de Fórmula ((L) pode, então, ser desprotegido com o uso de condições básicas como MeNH2, tBuNH2, hidróxido de amônio, Et3N.3HF e similares, em um solvente adequadamente seleci- onado ou mistura de solventes como EtOH, água, iPrOH, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -10°C a cerca de 120°C, ou atra- vés de métodos bem conhecidos no âmbito da prática pelas pessoas versadas na técnica, na presença de condições básicas ou ácidas, para produzir o composto correspondente de Fórmula (I-f).

[0170] Alternativamente, os compostos da Fórmula (I) podem ser pre- parados de acordo com o processo esquematizado no esquema geral 7, abaixo. Esquema 7

[0171] Consequentemente, os grupos protetores de álcool PG1 em um composto de Fórmula (III) em que PG 1 e PG2, são grupos proteto- res conhecidos de uma pessoa versada na técnica, PG 1 pode ser se- lecionado dentre acetila, trimetilsilila, terc-butildimetilsilia, silila, ben- zila, tritila, dimetoxitritila, ou similares, e PG 2 pode ser selecionado den- tre acila, benzoíla, isobutirila, ou similares, um composto conhecido ou composto preparado pelos métodos conhecidos, pode ser clivado se- letivamente na presença dos grupos protetores de álcool PG 2 por mé- todos bem conhecidos no âmbito da prática pelas pessoas versadas na técnica, na presença de condições básicas ou ácidas, para produzir o composto correspondente de Fórmula (L1).

[0172] O composto de Fórmula (XIII) em que PG1 e PG4 são grupos protetores conhecidos por um versado na técnica, PG1 pode ser selecio- nado dentre acetila, trimetilsilila, terc-butildimetilsilila, benzila, tritila, dime- toxitritila, ou similares, e PG4 pode ser selecionado dentre acila, benzoíla isobutirila, ou similares, um composto conhecido ou composto preparado através de métodos conhecidos, pode, então, ser reagido com um com- posto adequadamente substituído da Fórmula (X) no qual R8 é halogênio, di-isopropilamino, ou similares, um composto conhecido ou composto pre- parado através de métodos conhecidos, na presença de um ativador ade- quadamente como tetrazol, DMAP, 5-etiltio-1H-tetrazol, ou similares, em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de solventes como MeCN, CH2Cl2, THF, dioxano, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -10°C a cerca de 60°C, para produzir o composto de fosfito da Fórmula (LII).

[0173] O composto de Fórmula (LI) pode, então, ser reagido com o composto da Fórmula (LII) na presença ou não de um ativador adequado como tetrazol, DMAP, 5-etiltio-1H-tetrazol, ou similares, em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de solventes como MeCN, CH2Cl2, THF, DMF, dioxano, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -10°C a cerca de 60°C, para produzir o fosfito correspondente que é oxidado localmente com um oxidante como iodo, peróxido de hi- drogênio, peróxido de hidrogênio, reagente de Beaucage, DDTT, 3- amino-1,2,4-ditiazol-5-tiona, PADS, ou similares, ou um complexo de BH3.SMe2 ou de BH3.THF, ou similares, em um solvente ou mistura de solventes adequadamente selecionados como CHCl3, CH2Cl2, THF,

MeCN, dioxano, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de - 10°C a cerca de 80°C, para gerar o composto da Fórmula (LIII) em que R4 é O, S ou BH3.

[0174] O grupo protetor de álcool PG 1 no composto de Fórmula (LIII) é clivado seletivamente na presença dos grupos protetores de álcool PG2 e PG4 através de métodos bem conhecidos no âmbito da prática pelas pessoas versadas na técnica, na presença de condições básicas ou ácidas, para produzir o composto correspondente de Fór- mula (LIV).

[0175] O composto da Fórmula (LIV) pode, então, ser reagido com uma fonte de hidrogênio, sob condições de hidrogenação, na presença de um catalisador, ou sistema de catalisadores, adequadamente seleci- onado, como Pd/C, Pt, e similares, em um solvente como MeOH, EtOAc, e similares, para produzir o composto correspondente da Fórmula (LV). Alternativamente, o composto da Fórmula (LV) pode ser reagido com tri- fenilfosfina, em um solvente adequado como THF, DMF, ou similares, seguido de água a uma temperatura na faixa de cerca de 20°C a cerca de 60°C, seguido de tratamento com água na mesma temperatura para produzir o composto correspondente de Fórmula (LV).

[0176] O composto de Fórmula (LV) pode ser reagido com um re- agente ou composto conhecido como cloreto de sulfurila, 1,1'-sulfo- nildi-imidazol, clorossulfato de 4-nitrofenila, ou similares, na presença ou não de uma base adequadamente selecionada como Et3N, DIPEA, ou similares, em um solvente adequadamente selecionado ou mistura de solventes como CHCl 3, CH2Cl2, THF, piridina, e similares, a uma temperatura na faixa de cerca de -78°C a cerca de 50°C, para produzir o composto correspondente de Fórmula (XII).

[0177] O composto de Fórmula (XII) pode, então, ser desprotegido com o uso de condições ácidas ou básicas ou por métodos bem co- nhecidos no âmbito da prática pelas pessoas versadas na técnica, para produzir o composto correspondente de Fórmula (I-a). Exemplos específicos Exemplo 1 Etapa 1: preparação do composto 1b

[0178] O composto 1a (5,48 g, 14,7 mmol, coevaporado com tolu- eno anidro (2x)) foi dissolvido em DMF anidro (87 mL). Trifenilfosfina (5,77 g, 22,0 mmol), azida de sódio (3,06 g, 47,1 mmol), iodeto de te- trabutilamônio (1,08 g, 2,94 mmol) e tetrabrometo de carbono (7,30 g, 22,0 mmol) foram adicionados. A mistura reacional foi agitada à tem- peratura ambiente de um dia para o outro, seguido de concentração sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromato- grafia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 10% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 1b como um pó sólido branco (5,09 g, rendimento: 87%). ESI-MS: m/z 399,0 [M+H]+. Etapa 2: preparação do composto 1c

[0179] Imidazol (0,51 g, 7,5 mmol) e TBSCl (0,76 g, 5,0 mmol) fo- ram adicionados a uma solução do composto 1b (1,0 g, 2,5 mmol) em DMF (15 mL), a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura foi vertida em água e extraída com EtOAc, as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com sal- moura, secas com Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão redu- zida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 50% de EtOAc em éter de petró- leo) para fornecer o composto 1c como um sólido branco (1,2 g, rendi- mento: 93%). RMN 1H (400 MHz, clorofórmio-d) δ ppm 0,18 (s, 6 H), 0,95 (s, 9 H), 3,52 (dd, J=13,6, 4,3 Hz, 1H), 3,78 (dd, J=13,6, 3,0 Hz, 1H), 4,25 (m, J= 7,2, 3,5, 3,5 Hz, 1H), 4,85 (ddd, J=18,8, 7,5, 4,5 Hz, 1H), 5,53 (ddd, J=53,0, 4,5, 1,8 Hz, 1H), 6,24 (dd, J=18,2, 1,9 Hz, 1H), 7,50 - 7,58 (m, 2 H), 7,59 - 7,67 (m, 1H), 7,99 - 8,08 (m, 2 H), 8,23 (s, 1H), 8,80 (s, 1H), 9,04 (br s, 1H); ESI-MS: m/z 513,1 [M+H]+. Etapa 3: preparação do composto 1d

[0180] Uma solução do composto 1c (1,15 g, 2,24 mmol) em EtOAc (50 mL) foi hidrogenada sob pressão atmosférica à temperatura ambi- ente com Pd/C (20% em carbono, 132 mg, 0,224 mmol) como um cata- lisador. Após a absorção de hidrogênio, o catalisador foi removido por filtração, e o filtrado foi evaporado para produzir o composto 1d (1,1 g) como um sólido branco. O produto bruto foi usado diretamente como tal na etapa seguinte. ESI-MS: m/z 509,1 [M+Na]+. Etapa 4: preparação do composto 1e

[0181] O composto 1d (710 mg, 1,16 mmol), 4- nitrofenol (485 mg,

3,49 mmol) e Et3N (965 µL, 6,98 mmol) foram dissolvidos em DCM (30 mL) seguido da adição de peneiras moleculares 4 Å (500 mg). A mistura resultante foi resfriada até -78°C, seguido da adição de clorossulfato de 4-nitrofenila (830 mg, 3,49 mmol) em DCM (4 mL). A mistura de reação foi agitada durante 2,5 horas - a 78°C. NaHCO3 aquoso foi adicionado, a camada aquosa foi separada e extraída com DCM. As camadas orgâni- cas combinadas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 50% de EtOAc em éter de petróleo) para produzir o composto 1e como um sólido branco (546 mg, pureza: 89%, rendimento: 56% começando a partir do composto 1d). RMN 1H (400 MHz, CHLQROFQRM-d) δ ppm 0,17 (s, 3H), 0,18 (s, 3H), 0,96 (s, 9 H), 3,64 - 3,75 (m, 2 H), 4,43 (br s, 1H), 4,67 - 4,74 (m, 1H), 5,51 (dt, J=51,8, 5,4 Hz, 1H), 6,14 (dd, J=13,1, 5,5 Hz, 1H), 7,41 (m, J=9,0 Hz, 2 H), 7,56 (t, J=7,8 Hz, 2 H), 7,65 (t, J=7,5 Hz, 1H), 8,05 (d, J=7,3 Hz, 2 H), 8,09 (s, 1H), 8,15 (m, J=9,0 Hz, 2 H), 8,54 (s, 1H), 8,99 (br s, 1H), 9,40 (br dd, J=6,5, 2,5 Hz, 1H); RMN 19F (376 MHz, clorofórmio- d) δ ppm -207,51 (br s, 1 F); ESI-MS: m/z 688,1 [M+H]+. Etapa 5: preparação do composto 1f

[0182] A mistura de composto 1e (546 mg (pureza 92%), 0,73 mmol), 5'-O-(4,4'- dimetoxitritil)-N2-isobutiril-3'-O-meti]-D-guanosina ([103285-33-2], 753 mg (pureza 97%), 1,09 mmol) e peneiras molecu- lares de 4 Å (500 mg) em DCM (8 mL) foi agitada à temperatura ambi- ente durante 1 hora sob uma atmosfera de nitrogênio. Et 3N (503 µL, 3,64 mmol) foi adicionada e a agitação foi continuada de um dia para outro. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, o resíduo obtido foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 90% de EtOAc em éter de petróleo) para produzir o composto 1f que foi usado como tal na etapa seguinte. RMN 1H (400 MHz, clorofórmio-d) δ ppm 0,14 (s, 3H), 0,15 (s, 3H), 0,75

(d, J=7,0 Hz, 3H), 0,89 (d, J=6,8 Hz, 3H), 0,93 (s, 9 H), 1,94 (spt, J=6,8 Hz, 1H), 3,15 (dd, J=10,9, 3,4 Hz, 1H), 3,45 (s, 3H), 3,48 - 3,63 (m, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 4,12 - 4,21 (m, 1H), 4,28 (t, J=5,3 Hz, 1H), 4,36 (br s, 1H), 4,63 - 4,72 (m, 1H), 5,49 (dt, J= 52,0, 5,1 Hz, 1H), 5,75 (t, J=4,8 Hz, 1H), 6,07 (d, J=4,5 Hz, 1H), 6,12 (dd, J=13,4, 5,1 Hz, 1H), 6,79 (m, J=8,4, 8,4 Hz, 4 H), 7,15 - 7,22 (m, 1H), 7,25 (t, J=7,5 Hz, 2 H), 7,34 (m, J=8,3 Hz, 4 H), 7,43 - 7,55 (m, 4 H), 7,61 (t, J=7,3 Hz, 1H), 7,72 (s, 1H), 8,08 (d, J=8,3 Hz, 2 H), 8,09 (s, 1H), 8,83 (s, 1H), 9,14 (m, 19 J=8,3 Hz, 2 H), 9,54 (br s, 1H), 12,06 (br s, 1H); RMN F (376 MHz, clorofórmio-d) δ ppm -207,07 (br s, 1 F); ESI-MS: m/z 1240,6 [M+Na]+. Etapa 6: preparação do composto 1g

[0183] A uma solução do composto bruto 1f em MeCN (20 mL) adici- onou-se ácido acético 80% (20 mL, 279,5 mmol) e tetrametilsilano (2 mL, 12,5 mmol), a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. EtOAc e Na2CO3 aquoso foram adicionados, a camada orgânica foi separada, secada com Na2SO4, filtrada e o filtrado concen- trado sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi dissolvido em piridina (10 mL) à qual se adicionou trietilamina (1,0 g, 10,0 mmol) e Et3N.3HF (807 mg, 5,0 mmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 12 horas. A subsequente concentração sob pressão reduzida re- sultou em um produto bruto que foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (fase estacionária: Phenomenex Gemini C18, 10 µm, 250 x 50 mm; fase móvel: solução aquosa de 10 mM de bicarbonato de amônia (A) - MeCN (B); eluição gradiente 22 a 52% de B em A durante 11,2 minu- tos; taxa de fluxo: 22 mL/min) para produzir o composto 1g (rendimento: 27% a partir do composto 1f). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,11 (d, J=6,5 Hz, 6 H), 2,75 (spt, J=6,8 Hz, 1H), 3,11 - 3,24 (m, 2 H), 3,39 (s, 3H), 3,51 - 3,59 (m, 1H), 3,59 - 3,69 (m, 1H), 3,95 (m, J=3,7 Hz, 1H), 4,09 (d, J=3,3 Hz, 1H), 4,17 (dd, J=4,9, 3,3 Hz, 1H), 4,57 (ddd, J=19,5, 7,3, 4,5 Hz, 1H), 5,22 (br s, 1H), 5,37 (t, J= 5,5 Hz, 1H), 5,57 (ddd, J=52,5, 4,5, 2,4

Hz, 1H), 6,07 (d, J=6,5 Hz, 1H), 6,33 (dd, J=19,3, 2,2 Hz, 1H), 7,50 -7,60 (m, 2 H), 7,61 - 7,70 (m, 1H), 7,99 - 8,10 (m, 2 H), 8,22 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 8,73 (s, 1H) (NH & OH foram trocados com D2O); RMN 19F (376 MHz, METHANOL-d4) δ ppm -205,32 (br s, 1 F); ESI-MS: m/z 802,2 [M+H]+. Etapa 7: preparação do composto 1h

[0184] Uma solução de composto 1g (100 mg, 0,12 mmol) e 1H-te- trazol (2,2 mL de 0,45 M em MeCN, 0,93 mmol) em 1:1 de MeCN / THF (14 mL) foi tratada com peneiras moleculares de 4 Å durante 30 minutos antes da adição de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (70 mg, 0,23 mmol) em MeCN (6 mL). A mistura de reação resultante foi agitada durante 2 horas e depois disso uma quantidade adicional de te- trazol (0,55 mL de 0,45 M em MeCN, 0,25 mmol) foi adicionada seguida de um período adicional de 30 minutos de agitação. I2 (0,5 M em uma mistura de THF / piridina / água de 8:1:1, 695 µL, 0,357 mmol) foi adicio- nado e a agitação foi continuada de um dia para o outro. A mistura de reação foi resfriada bruscamente pela adição de solução aquosa satu- rada de Na2S2O3 e filtrada, o filtrado foi concentrado sob pressão redu- zida. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (co- luna: Phenomenex Gemini C18, 10 µm, 250 x 50 mm; fase móvel: solu- ção aquosa de 10 mM de bicarbonato de amônia (A) - MeCN (B); eluição gradiente 20 a 50% de B em A durante 11,2 minutos; taxa de fluxo: 22 mL/min) para produzir o composto 1h que foi usado como tal na etapa de desproteção subsequente. ESI-MS: m/z 917,4 [M+H]+. Etapa 8: preparação do composto 1, sal de sódio

[0185] Uma solução do composto 1h em uma mistura de amônia aquosa (25%, 9 mL) e EtOH (3 mL) foi agitada a 50°C de um dia para o outro. O produto bruto obtido após a concentração sob pressão reduzida foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (fase estacionária: Syneri Polar RP, 5 µm, 100 x 30 mm; fase móvel: solução aquosa de 10 mM de bicarbonato de amônia (A) - MeCN (B); eluição gradiente 0 a 25%

de B em A durante 12 minutos; taxa de fluxo: 25 mL/min) para fornecer o composto 1 como o sal de amônio. O composto 1 foi convertido no sal de sódio por eluição de uma solução aquosa em uma coluna empacotada com uma resina catiônica de troca de íons sódio que produz 12,9 mg do composto 1, sal de sódio como um sólido branco após liofilização (ren- dimento: 13% a partir do composto 1g). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, es- pectro registrado a 80 °C) δ ppm 3,31 (dd, J=13,2. 2,2 Hz, 1H), 3,50 (s, 3H), 3,60 (dd, J=13,5, 3,6 Hz, 1H), 3,91 - 3,98 (m, 1H), 4,20 (d, J=4,2 Hz, 1H), 4,23 - 4,28 (m, 1H), 4,28 - 4,31 (m, 1H), 4,31 - 4,37 (m, 1H), 5,22 - 5,34 (m, 1H), 5,43 (dd, J=51,7, 4,4 Hz, 1 H), 5,99 (d, J=8,3 Hz, 1H), 6,19 (br s, 1H), 6,33 (d, J=19,5 Hz, 1H), 6,58 (br s, 2 H), 7,08 (s, 2 H), 7,69 (s, 31 1H), 7,87 (s, 1H), 8,34 (br s, 1H), 9,70 (br s, 1H); RMN P (162 MHz, DMSO-d6) δ ppm 56,05 (s, 1 P), 94,05 (br s, 1 P); ESI-MS: m/z 690,2 [M+H]+. Exemplo 2 Etapa 1: preparação do composto 2a

[0186] Uma solução de composto 1g (230 mg, 0,28 mmol) e 1H-

tetrazol (1,67 mL de um 3 a 4% em MeCN) em 1:1 de MeCN / THF (12 mL) foi tratada com peneiras moleculares de 4 Å durante 2 horas antes da adição de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (78 mg, 0,26 mmol). A mistura de reação resultante foi agitada durante 30 minutos, depois disso uma quantidade adicional de 2-cianoetil- N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (8,6 mg, 0,03 mmol) foi adicio- nada seguida de agitação durante um período adicional de 15 minutos. Piridina (15 mL) e dissulfeto de fenilacetila (PADS, 217 mg, 0,72 mmol) foram adicionados e a agitação continuou por 40 minutos. Após a remo- ção das peneiras moleculares por filtração, EtOAc foi adicionado à mis- tura de reação seguida de lavagens extensivas com salmoura e solução aquosa saturada de NaHCO3. A fase orgânica foi secada com MgSO4 anidro, filtrada e o filtrado concentrado sob pressão reduzida. O produto bruto foi usado como tal na etapa de desproteção subsequente. ESI- MS: m/z 933,2 [M+H]+. Step 2: preparação de composto (*R) 2A, sal de sódio

[0187] O composto bruto 2a foi agitado em uma solução de metila- mina a 33% em etanol (20 mL) a 50 °C durante 4 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto resultante foi dissolvido em água, lavado com EtOAc, liofilizado e purificado por HPLC preparativa de fase reversa (fase estacionária: XBridge C18 OBD, 5 µm, 250 x 30 mm; fase móvel: solução aquosa de 0,25% de bicarbo- nato de amônia (A) - MeCN (B); eluição gradiente: 0 a 15% de B em A durante 29 minutos, taxa de fluxo: 30 mL/min) para fornecer o com- posto (*R) 2A como um diastereômero único. A conversão em sal de sódio foi realizada conforme descrito no Exemplo 1, etapa 8 (23 mg, rendimento: 10% começando a partir do composto 1 g). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, espectro registrado a 80°C) δ ppm 3,31 - 3,43 (m, 1H), 3,49 (s, 3H), 3,62 -3,75 (m, 1H), 3,92 - 4,00 (m, 1H), 4,00 - 4,09 (m, 1H), 4,20 (br s, 1H), 4,31 (br s, 2 H), 5,33 - 5,50 (m, 2 H), 5,64 (br d, J= 52,0

Hz, 1H), 5,68 (dd, J=8,7, 4,1 Hz, 1H), 6,03 (d, J=8,6 Hz, 1H), 6,26 (s, 2 H), 6,33 (d, J=18,4 Hz, 1H), 7,07 (s, 2 H), 7,88 (br s, 1H), 8,29 (br s, 2 H), 8,66 (br s, 1H), 10,30 (br s, 1H); RMN 31 P (162 MHz, DMSO-d6) δ ppm 52,18 (s, 1 P); ESI-MS: m/z 706,0 [M+H]+. Exemplo 3

Etapa 1: Preparação do composto 3c

[0188] A uma solução de composto 3b (2,0 g, 4,99 mmol) CAS n° 153186-10-8) em piridina (8 mL), adicionou-se lentamente MsCl (1,14 g, 9,99 mmol) a 0°C sob N2; após a agitação durante 1 hora à temperatura ambiente, a mistura de reação foi diluída com EtOAc (20 mL) e lavada com água (3 x 20 mL). A camada aquosa foi separada e extraída com EtOAc (3 x 15 mL).

[0189] As camadas orgânicas combinadas foram secas sucessiva- mente com Na2SO4 anidro, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir o composto 3c como um óleo amarelo (3,1 g).

[0190] RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,38 - 7,31 (m, 7H), 7,21 - 7,14 (m, 3H), 5,79 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 4,87 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 4,74 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,67 - 4,62 (m, 1H), 4,57 -4,38 (m, 4H), 4,30 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 3,63 - 3,58 (m, 1H), 3,53 - 3,48 (m, 1H), 3,63 - 3,47 (m, 1H), 3,07 (s, 3H), 2,36 (s, 3H), 1,71- 1,67 (m, 3H), 1,35 (s, 3H); ESI- MS: m/z 501,2 [M+Na]+. Etapa 2: preparação do composto 3d

[0191] Uma solução de 3c (1,0 g, 2,1 mmol) em ácido trifluoroacético aquoso 80% (10 mL) foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. Após a remoção do solvente sob pressão reduzida, o resíduo foi dissolvido em DCM (20 mL) e lavado com solução aquosa saturada de NaHCO3 (2 x 20 mL). A camada orgânica foi sucessivamente submetida à secagem com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um óleo incolor (876 mg). O óleo foi coevaporado com piridina anidra (2 x 15 mL), dissolvido em piridina anidra (15 mL) e tratado com Ac2O (815,8 mg, 7,99 mmol). Após a agitação de um dia para o outro a 50 °C, a mistura de reação foi resfriada bruscamente com solução aquosa saturada de NaHCO3 (25 mL) e particionada com EtOAc (2 x 20 mL). As camadas or- gânicas combinadas foram lavadas com salmoura (15 mL), secas com Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para produ- zir um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 30% de EtOAc em éter de petróleo) para produzir 3d como um xarope incolor (786 mg).

[0192] RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,42 - 7,18 (m, 12H), 6,38

(d, J=4,5 Hz, 1H), 6,15 (s, 1H), 5,36 (d, J=5,0 Hz, 1H), 5,30 (s, 1H), 5,17 (dd, J=4,8. 6,3 Hz, 1H), 2,99 (s, 3H), 2,96 (s, 1H), 2,19 - 2,10 (m, 4H), 2,06 (d, J=7,8 Hz, 1H), 1,90 (s, 3H). ESI-MS: m/z 545 [M+Na]+. Etapa 3: preparação do composto 3f

[0193] A uma suspensão do composto 3d (200 mg, 0,38 mmol) e 6- N-benzoiladenina (3e, 109,8 mmol (0,46 mL) em 1,2-dicloroetano anidro (0,5 mL) foi adicionado bis(trimetilsilil)acetamida (BSA, 202,4 mg, 0,99 mmol). A mistura foi refluxada durante 1 hora e resfriada até a temperatura ambiente. TMSOTf (170 mg, 0,76 mmol) foi adicionado e a solução foi aquecida a 110°C durante 16 horas. A mistura de reação foi diluída com DCM (15 mL) e, então, vertida em solução aquosa saturada de NaHCO3 gelada (20 mL), agitada durante 0,5 hora, e filtrada. Após a separação das duas camadas, a camada orgânica foi sucessivamente lavada com solu- ção aquosa saturada de NaHCO3 (3 x 15 mL), seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para resultar em um resíduo. A purificação do resíduo por cromatografia em coluna rápida com sílica- gel (1 a 1,5% v/v de MeOH/CH2Cl2) resultou no composto 3f (208 mg) como um sólido amarelo-claro. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8,80 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,87 (br d, J = 7,3 Hz, 2H), 7,54 - 7,44 (m, 1H), 7,44 - 7,34 (m, 2H), 7,29 - 7,03 (m, 10H), 6,18 (br d, J = 4,4 Hz, 1H), 5,96 - 5,84 (m, 1H), 4,70 (br d, J = 5,6 Hz, 1H), 4,56 - 4,29 (m, 1H), 4,55 - 4,22 (m, 4H), 4,21 (s,1H), 3,63 - 3,53 (m, 1H), 3,46 (br d, J 10,0 Hz, 1H), 2,84 - 2,75 (m, 1H), 2,86 - 2,75 (m, 1H), 2,87 - 2,71 (m, 1H), 1,99 -1,92 (m, 1H), 1,91 (br s,1H); ESI-MS: m/z = 702 [M+H]+. Etapa 4: preparação do composto 3g

[0194] A uma solução de 3f (5,86 g, 8,35 mmol) em uma mistura de THF (50 mL) e água (35 mL) adicionou-se LiOH.H2O (1,75 g, 41,8 mmol) a 0°C. Após a agitação da mistura durante 5 horas à temperatura ambi- ente, a mistura de reação foi diluída com EtOAc (30 mL). A fase orgânica foi lavada com salmoura (30 mLx2), e a camada aquosa foi extraída com acetato de etila (50 mLx3). As camadas orgânicas combinadas foram su- cessivamente lavadas com NaHCO3 (3 x 15 mL), secas com Na2SO4 ani- dro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para resultar em um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (EtOAc: PE = 0~70%) para produzir o composto 3g (4,25 g) com um sólido amarelo pálido. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ ppm 9,00 (br s, 2H), 8,74 (s, 2H), 8,23 (s, 2H). 8,02 (br d, J=7,3 Hz, 3H), 7,60 (br d, J=7,3 Hz, 2H), 7,52 (br t, J=7,5 Hz, 3H), 7,38 - 7,16 (m, 15H), 6,09 (s, 2H), 4,79 (s, 2H), 4,66 - 4,49 (m, 6H), 4,24 (s, 2H), 4,18 - 4,05 (m, 3H), 3,99 (br d, J=7,8 Hz, 2H), 3,90 - 3,70 (m, 3H), 2,03 (s, 2H), 1,75 (br s, 3H), 1,24 (br t, J=7,1 Hz, 2H); ESI-MS: m/z = 564,1 [M+H]+. Etapa 5: preparação do composto 3h

[0195] A uma solução agitada do composto 3g (3,3 g, 5,85 mmol) em DCM (50 mL) adicionou-se a 0°C ácido metanossulfônico (28,9 g, 0,3 mol). Após a agitação a 0°C durante 2,5 horas, a reação foi combinada com uma batelada anterior, e uma suspensão de NaHCO3 (75 g, 0,90 mol) em DCM (180 mL) foi adicionada com o uso de um funil de gotejamento com equa- lizador de pressão. Após a agitação da mistura de reação por 1,5 hora, MeOH (10 mL) foi adicionado e a mistura foi agitada durante mais 0,5 hora (pH~7 a 8). A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer um sólido amarelo-claro, purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 10% de MeOH em DCM, 25 mL/min) para fornecer o composto 3h como um sólido esbran- quiçado (3,75 g). RMN 1H (400 MHz, CD 3 OD) δ ppm 8,73 (s, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,13 - 8,06 (m, 2H), 7,71 - 7,62 (m, 1H), 7,61 - 7,53 (m, 2H), 6,14 (s, 1H), 4,63 (s, 1H), 4,38 (s, 1H), 4,09 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,97 (s, 2H), 3,92 (d, J = 7,8 Hz, 1H). Etapa 6: preparação do composto 3i

[0196] A uma solução do composto 3h (4,3 g, 11,2 mmol) em piri- dina (50 mL) adicionou-se por gotejamento uma solução de DMTrCl

(4,56 g, 13,4 mmol) em piridina (20 mL)) a 0°C. Após a agitação à tem- peratura ambiente durante 2 horas, a mistura de reação foi diluída com acetato de etila (100 mL) e, então, lavada sucessivamente com solução aquosa saturada de NaHCO3 (80 mLx3) e salmoura (80 mL x 2). As camadas orgânicas foram combinadas e sucessivamente secas com Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para for- necer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 100% de EtOAc em éter de petróleo) para produzir o composto 3i como um sólido branco (7,8 g). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,74 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 8,09 (d, J= 7,3 Hz, 2H), 7,70 - 7,62 (m, 1H), 7,60 - 7,53 (m, 2H), 7,48 (d, J=7,5 Hz,2H), 7,36 (dd, J=3,0, 9,0 Hz, 4H), 7,33 - 7,27 (m, 1H), 7,26 - 7,18 (m, 1H), 6,87 (d, J= 8,8 Hz, 4H), 6,17 (s, 1H), 4,65 (s, 1H), 4,49 (s, 1H), 4,10 (q, J= 7,3 Hz, 1H), 4,05 -3,98 (m, 2H), 3,77 (s, 6H), 3,65 - 3,58 (m, 1H), 3,54 - 3,48 (m, 1H); ESI-MS: m/z = 686 [M+H]+. Etapa 7: preparação do composto 3k

[0197] A uma suspensão agitada de composto 3j (5,0 g, 13,61 mmol, CAS n° 160107-07-3), trifenilfosfina (4,28 g, 16,33 mmol), TBAI (502 mg, 1,36 mmol) e NaN 3 (3,3 g, 50,76 mmol) em DMF (60 mL) adicionou-se CBr4 (5,41 g, 16,33 mmol) em uma porção. Após a agita- ção a 20 °C durante 12 horas, a mistura de reação foi particionada com 80 mL de solução aquosa saturada de NaHCO 3 e DCM (100 mL x 3). As camadas orgânicas foram combinadas e sucessivamente secas com Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 100% de EtOAc em éter de petró- leo para purgar Ph3PO, então mudada para 0 a 10% de MeOH em DCM) para fornecer 3k como um sólido branco (4,26 g). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,16 (s, 1H), 5,96 (d, J=4,9 Hz, 1H), 4,82 (t, J=5,3 Hz, 1H), 4,27 - 4,21 (m, 1H), 3,97 (t, J=4,9 Hz, 1H), 3,66 (d, J=4,4 Hz,

2H), 3,52 (s, 3H), 2,78 - 2,69 (m, 1H), 1,24 (d, J=6,8 Hz, 6H); ESI-MS: m/z = 393,1 [M+H] +. Etapa 8: preparação do composto 3l

[0198] A uma solução de 3k (4,07 g, 10,37 mmol), 2,4,6-trimetipiri- dina (1,63 g, 13,48 mmol) e AgNO 3 (2,29 g, 13,48 mmol)) em DCM (40 mL) adicionou-se DMTrCl (4,57 g, 13,48 mmol) a 0°C. Após a agitação a 25°C por 3 horas, a suspensão vermelha foi diluída com DCM (50 mL) e filtrada através de um bloco de terra diatomácea. O filtrado foi particionado entre DCM / água (50/30 mL) e lavado com salmoura (30 mL). As camadas orgânicas foram combinadas e sucessivamente se- cas com Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 5% de MeOH em DCM) para for- necer 3l como um sólido branco (7,0 g). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 7,94 (s, 1H), 7,35-7,28 (m, 1H), 7,22(d, J=8,8 Hz, 1H), 7,18 -7,12(m, 2H).7,09 (d, J=8,811z, 1H), 6,72 (d, J=8,8 Hz, 1H), 6,61 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 6,03(d, J=7,7 Hz, 1H), 4,94 (br dd, J=5,2,7,2 Hz, 1H), 4,87 (s, 7H), 4,16 (t, J= 5,7 Hz, 1H), 4,07 (q, J=7,1 Hz, 1H), 3,71 (d, J=13,7 Hz, 4H), 3,61 (dd, J=6,6. 12,8 Hz, 1H), 3,29(s, 3H), 3,21 (s, 2H), 2,75 (quin, J=6,8 Hz, 1H), 2,68 (d, J= 4,6 Hz, 1H), 1,99 (s, 2H), 1,28-1,17 (m, 6H); ESI-MS: m/z = 695,3 [M+H]+. Etapa 9: preparação do composto 3m

[0199] Uma suspensão de 3 l (1,2 g, 1,72 mmol) e 10% de Pd/C úmido (1,0 g, 0,49 mmol) em acetato de etila (100 mL) foi hidrogenada a 20°C sob 15 psi durante 4 horas. A mistura de reação foi filtrada através de um bloco de terra diatomácea e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer um resíduo purificado por croma- tografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 10% de MeOH em DCM) para produzir 3 m como um sólido branco (682 mg). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 7,89 (s, 1H), 7,33 (dd, J=1,5, 7,8 Hz, 1H), 7,30 - 7,29 (m,

1H), 7,36 - 7,29 (m, 1H), 7,21 (d, J=8,8 Hz, 2H), 7,18 -7,10 (m, 3H), 7,08 (d, J=8,8 Hz, 2H), 6,71 (d, J=8,8 Hz, 2H), 6,59 (d, J= 8,8 Hz, 2H), 5,98 (d J= 7,5 Hz, 1H), 5,03 (dd, J=4,8, 7,5 Hz, 1H), 4,21 (dd, J= 3,4, 9,9 Hz, 1H), 3,69 (d, J=16,3 Hz, 6H), 3,26 (s, 3H), 3,16 (dd, J=10,0, 13,1 Hz, 1H), 2,88 - 2,75 (m, 3H), 1,31 - 1,21 (m, 8H); ESI-MS: m/z = 669,3 [M+H]+. Etapa 10: preparação do composto 3o

[0200] Uma solução de clorossulfato de 4-nitrofenila 3n (2,45g 10,31 mmol, J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 2002, 485 a 495) em DCM seco (5 mL) adicionou-se rapidamente a uma mistura de 3 m (2,3 g, 3,44 mmol), 4-nitrofenol (1,43 g, 10,31 mmol), Et3N (2,09 g, 20,63 mmol) e peneiras moleculares de 4 Å ativadas (cerca de 4 g) em DCM seco (50 mL) sob N2 a -78°C. Após o aquecimento até a temperatura ambi- ente (12°C) e agitação durante 2 horas, a mistura de reação foi diluída com DCM (20 mL) e filtrada através de um bloco de terra diatomácea. O filtrado foi combinado com duas outras bateladas anteriores e partici- onado entre DCM/solução aquosa saturada de NaHCO3 (100, 3 x 70 mL). As camadas orgânicas foram combinadas e sucessivamente secas com Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em co- luna rápida com sílica-gel (0 a 100% de acetato de etila em éter de pe- tróleo) para fornecer 3o como um sólido amarelo (4,8 g). RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 12,18 (br s, 1H), 9,18 (s, 1H), 8,32 - 8,26 (m, 3H), 7,74 (s, 1H), 7,37 - 7,28 (m, 4H), 7,25 -7,11 (m, 6H), 7,08 (d, J=8,8 Hz, 1H), 6,73 (d, J= 9,0 Hz, 2H), 6,63 (d, J=8,8 Hz, 2H), 5,89 (d, J=8,8 Hz, 1H), 4,99 (dd, J=5,0, 8,5 Hz, 1H), 4,29 (s, 1H), 3,80 - 3,74 (m, 4H), 3,72 (s, 1H), 3,50 - 3,44 (m, 1H), 3,38 - 3,29 (m, 1H), 3,20 (s, 3H), 2,77 (d, J=5,0 Hz, 1H), 2,55 - 2,43 (m, 1H), 1,31 - 1,27 (m, 4H), 1,15 (d, J=6,8 Hz, 3H).

[0201] ESI-MS: m/z = 870 [M+H]+. Etapa 11: preparação do composto 3p

[0202] A mistura de 3o e 3i foi coevaporada com THF (30 mL x 3) antes do uso. Uma mistura de 3o (4,12 g, 4,74 mmol), 3i (2,5 g, 3,64 mmol) e peneiras moleculares de 4 Å ativadas (~2 g) em THF seco (50 mL) foi agitada sob N2 à temperatura ambiente durante 1 hora. DMAP (2,22 g, 18,22 mmol) foi adicionado em uma porção e a mistura de rea- ção foi agitada a 40°C durante 12 horas. A mistura foi diluída com DCM (40 mL), filtrada através de um bloco de terra diatomácea e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 2% de MeOH em DCM) para fornecer 3p como um sólido amarelo-claro (4,6 g). RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 12,31 (s, 1H), 9,25 (s, 1H), 9,11 (br s, 1H), 8,78 (s, 1H), 8,52 - 8,29 (m, 2H), 8,16 - 8,01 (m, 5H), 7,77 (s, 1H), 6,69(d, J=8,8 Hz, 2H), 6,60 (d, J=9,0 Hz, 2H), 6,21 (s, 1H), 5,84 (d, J=8,8 Hz, 1H), 5,36 (s, 1H), 5,06 (s, 1H), 4,86 (dd, J=4,9, 8,7 Hz, 1H), 4,06 - 3,93 (m, 2H), 3,73 (d, J=2,8 Hz, 9H), 3,70 (s, 3H), 3,67 - 3,58 (m, 1H), 3,34 (d, J=11,0 Hz, 1H), 3,15 (s, 3H), 3,06 (dd, J=2,3, 12,5 Hz, 1H), 2,96 - 2,84 (m, 1H), 2,62 - 2,49(m, 2H), 1,28 - 1,24 (m, 5H), 1,18 (d, J=6,8 Hz, 3H); ESI-MS: m/z = 1417 [M+H]+. Etapa 12: preparação do composto 3q

[0203] A uma solução agitada de 3p (4,6 g, 3,25 mmol) em DCM (84 mL) adicionou-se 6% de DCA em DCM (44 mL, 32,3 mmol, 10,0 eq.) à temperatura ambiente sob N2. Após a agitação à temperatura ambiente durante 30 minutos, a mistura de reação foi resfriada bruscamente com piridina (2,8 g, 11 eq.) e a solução incolor resultante foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo incolor purificado por cromato- grafia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 7% de MeOH em DCM) para fornecer 3q como um sólido branco (1,9 g). O sólido acima foi ainda purifi- cado por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: Phenomenex Synergi Max RP 250 x 50 mm x 10 µm; fase móvel: água (10 mM de NH4HCO3)- MeCN, início B 15, fim B 45; taxa de fluxo: 90 mL/min, tempo de gradiente:

18 minutos seguido de B 100 durante 3 minutos) para gerar 2 frações de 3q como um sólido branco após liofilização. Fração 1: 876 mg e fração 2: 743 mg. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 8,52 (s, 1H), 8,36 (s, 1H), 8,01 (d, J=7,1 Hz, 2H), 7,86 (s, 1H), 7,65 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,60 - 7,54 (m, 2H),6,20 (s, 1H), 5,71 (d, J= 4,9 Hz, 1H), 5,22 (d, J=14,4 Hz, 2H), 4,67 -4,59 (m, 1H), 4,06 (d, J=3,7 Hz, 2H), 4,02 (br d, J= 4,6 Hz, 3H), 4,10 - 3,99 (m,1H), 3,99 -3,93(m, 1H), 3,51 - 3,44 (m, 4H), 3,40 (d, J=4,6 Hz, 1H), 2,73 - 2,65 (m, 1H), 1,21 (dd, J= 5,4, 6,6 Hz, 6H): ESI-MS: m/z 812,2 [M+H]+. Etapa 13: preparação do composto 3r

[0204] THF foi recém-destilado sobre sódio em presença de benzofe- nona e CH3CN foi recém-destilada na presença de CaH2.

[0205] Diol seco a vácuo 3q (300 mg, 0,37 mmol) foi coevaporado com uma mistura de CH3N/THF (10/6 mLx3) e dissolvido em uma mistura de CH3CN / THF (10/6 mL). Adicionaram-se 800 mg de peneiras molecu- lares de 4 Å ativadas e uma solução de 1H-tetrazol na CH3CN (6,56 mL, 0,45M, preparada pela dissolução de 945 mg de tetrazol em 30 mL de CH3CN seca, seguida de adição de 800 mg de peneiras moleculares de 4 Å e então agitação por forma 1 hora sob argônio antes do uso) e a mistura foi borbulhada com argônio por 15 minutos. Após a agitação da suspensão branca durante 1 hora a 8°C sob argônio, uma solução de 2-cianoetil- N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita em CH3CN (5,62 mL, 0,59 mmol, 0,105M em CH3CN, preparada pela dissolução de 759 mg de reagente de fosforodiamidita em 24 de CH3CN, seguida de adição de 800 mg de pe- neiras moleculares de 4 Å e então agitação durante l hora sob argônio antes do uso) foi adicionada por gotejamento ao longo de 60 minutos. A suspensão branca resultante foi agitada por 1 hora a 8°C sob argônio. Mais CH3CN (6 mL) foi adicionada e, após a agitação durante 1 hora a 30°C, adicionou-se tetrazol (1,64 mL, 0,74 mL, 0,45 mmol em CH3CN). Após a agitação por mais 2 horas, uma solução de DDTT (380 mg, 1,84 mmol) em piridina (10 mL) foi adicionada rapidamente. Após a agitação por 30 minu- tos, a mistura foi filtrada através de um bloco de terra diatomácea; o filtrado foi combinado com uma outra batelada e concentrado sob pressão redu- zida para resultar em um resíduo dissolvido em DCM (8 mL) e purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (12 g, 0 a 6% de MeOH em DCM, 25 mL/min) para produzir 3r (275 mg) como um sólido amarelo- claro usado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional ESI- MS: m/ z= 943,5 [M+H]+. Etapa 14: preparação dos compostos (*R) 4A e (*S) 4B

[0206] Uma solução do composto 3r (275 mg, 0,292 mmol) em MeNH2 (27 a 30% em EtOH, 5 mL) foi agitada a 80°C durante 4 horas. A mistura de reação foi combinada com uma outra batelada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo; o resíduo foi dissolvido em uma mistura de CH3CN/H2O (1/8 mL) e lavado com DCM (8 mL x 3). A camada aquosa foi liofilizada para produzir uma goma amarela (382 mg) então adicionalmente dissolvida em uma mistura de CH3CN/H2O (4/1). Pu- rificação por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: Agela Durashell C18 150 x 25 x 5 µm; fase móvel: água (0,04% de NH3 água + 10 mM de NH4HCO3)- CH3CN; início B 12, fim B 25; taxa de fluxo: 25 mL/min, tempo de gradiente: 12 minutos, seguido de B 100 durante 3 minutos); as frações desejadas foram coletadas e liofilizada para gerar o composto (*R) 4A, sal de amônio (39,8 mg, o primeiro isômero de eluição) como um sólido branco e o composto (*S) 4B, sal de amônio (65,9 mg, o segundo isô- mero de eluição) como um sólido branco.

[0207] A conversão final no sal de sódio foi feita por feita por eluição de uma solução aquosa em uma coluna empacotada com resina de troca de íons de Na Dowex 50WX8 para resultar no composto (*R) 4A, sal de sódio e no composto (*S) 4B, sal de sódio como sólido branco macio após a liofilização.

[0208] Composto (*R) 4A. RMN 1H (400 MHz, 60°C, DMSO-d6) δ ppm 3,34 - 3,44 (m, 1H), 3,45 - 3,56 (m, 1H), 3,52 (s, 3H), 3,83 (dd, J= 10,7, 2,0 Hz, 1H), 3,98 (d, J=8,3 Hz, 1H), 4,09 (br s, 1H), 4,16 (br s, 1H), 4,23 (d, J=8,3 Hz, 1H), 4,67 (dd, J=11,1, 7,8 Hz, 1H), 4,98 (br s, 1H), 5,14 (br s, 1H), 5,31 (ddd, J=13,4, 9,0, 4,4 Hz, 1H), 5,78 (d, J=8,8 Hz, 1H), 6,07 (s, 1H), 6,13 (br s, 2 H), 7,15 (br s, 2 H), 7,92 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 8,17 (s, 1H) RMN 31 P (162 MHz, DMSO-d6) δ 55,83 (s, 1 P); ESI-MS: m/z = 716,2 [M+H] +.

[0209] Composto (*S) 4B. RMN 1H (400 MHz, 80 °C, DMSO-d6) δ ppm 3,21 - 3,39 (m, 2 H), 3,54 (s, 3H), 3,87 (dd, J=11,5, 4,3 Hz, 1H), 3,92 (d, J=8,1 Hz, 1H), 3,99 (br s, 1H), 4,14 (d, J=8,1 Hz, 1H), 4,30 (br s, 1H), 4,37 (dd, J=11,6, 5,0 Hz, 1H), 4,84 (br s, 1H), 5,06 (br s, 1H), 5,31 (ddd, J 12,3, 9,0, 4,2 Hz, 1H), 5,79 (d, J 9,0 Hz, 1H), 6,03 (s, 1H), 6,12 (br s, 2 H), 6,99 (br s, 2 H), 7,99 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 8,20 (s, 1H); RMN 31P (162 MHz, DMSO-d6) δ 52,88 (s, 1 P); ESI-MS: m/z = 716,2 [M+H]+. Exemplo 4

Etapa 1: Preparação do composto 4a

[0210] A uma solução do composto 3j (9,6 g, 26,13 mmol, CAS n° 160107-07-3) em DMF (80 mL) adicionou-se imidazol (3,56 g, 52,26 mmol) e TBSCL (4,73 mmol, 31,36 mmol) a 0°C. Após a agitação da mis- tura a 25°C durante 2 horas, a reação foi diluída com EtOAc (200 mL) e H2O (100 mL); a camada orgânica foi sucessivamente seca com Na2SO4 anidro, filtrada e evaporada sob pressão reduzida. O resíduo foi purifi- cado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradi- ente: 0 a 5% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 4a (9,7 g, 76%) como um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ =12,12 (br s, 1H), 9,48 (br s, 1H), 8,05 (s, 1H), 5,89 (d, J= 4,8 Hz, 1H), 4,56 (t, J= 4,9 Hz, 1H), 4,21 (q, J=3,4 Hz, 1H), 3,98 (t, J=4,6 Hz, 1H), 3,93 (dd, J=3,5, 11,5 Hz, 1H), 3,79 (dd, J=2,8, 11,5 Hz, 1H), 3,47 (s, 3H), 2,75 (td, J=6,9,

13,6 Hz, 1H), 1,27 (s, 3H), 1,25 (s, 3H), 0,91 (s, 9H), 0,10 (s, 6H); ESI- MS: m/z 482 [M+H]+. Etapa 2: Preparação do composto 4b

[0211] A uma solução do composto 4a (10 g, 20,76 mmol) em DCM (200 mL) adicionou-se periodinano de Dess-Martin (14,97 g, 35,29 mmol) a 0 °C. Após a agitação da mistura a 30 °C durante 12 horas. A mistura de reação foi diluída com DCM (300 mL); a camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de Na 2S2O3 (100 mL) e solu- ção aquosa saturada de NaHCO 3 (50 mL). A camada orgânica foi con- centrada sob pressão para produzir um resíduo. O resíduo (combinado com sílica-gel: 15 g) foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 100% de EtOAc em éter de pe- tróleo,) para produzir o composto 4b (9,0 g, 80%) como um sólido branco. ESI-MS: m/z 498,3 [M+H]+. Etapa 3: Preparação do composto 4c

[0212] A uma solução do composto 4b (9 g, 18,77 mmol) em EtOH (200 mL) adicionou-se NaBH4 (1,06 g, 28,15 mmol) a 0°C. Após a agi- tação da solução a 0°C durante 0,5 horas, a mistura foi diluída com EtOAc (500 mL) e solução aquosa saturada de NH 4Cl (100 mL). A ca- mada orgânica foi concentrada sob pressão reduzida para resultar em um resíduo (9,0 g). O resíduo (combinado com sílica-gel: 15 g) foi pu- rificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gra- diente: 0 a 2% de MeOH em DCM, V/V) para fornecer o composto 4c (4,8 g, 53%) como um sólido branco e o composto 4a (1,5 g, 17%) como um sólido branco. Composto 4d: RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ = 12,06 (s, 1H), 11,70 (s, 1H). 8,00 (s, 1H), 6,05 (d, J=4,6 Hz, 1H), 5,85 (d, J= 5,5 Hz, 1H), 4,31 - 4,26 (m, 1H), 3,91 - 3,77 (m, 4H), 3,39 (s, 3H), 2,80 - 2,70 (m, 1H), 1,11 (d, J= 6,8 Hz, 6H), 0,89 (s, 9H), 0,07 (s, 6H) ESI-MS: m/z = 482,3 [M+H]+.

Etapa 4: Preparação do composto 4d

[0213] A uma solução de 4c (1,8 g, 3,74 mmol) em piridina (20 mL) adicionou-se DIEA (1,45 g, 11,21) e cloreto de difenilcarbamato (1,12 g, 4,86 mmol) a 25°C. A mistura de reação foi agitada a 25°C durante 3 horas. A mistura de reação foi combinada com outras bateladas. A mistura foi particionada entre acetato de etila (150 mL) e H2O (100 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura (100 mL) e evaporada sob pressão re- duzida para resultar em um resíduo. O resíduo foi purificado por cromato- grafia em coluna rápida com sílica-gel (0% a 100% de EA/PE, V/V) para produzir o composto 4d (6 g, 70% de 4,8 g do composto 4c) como um sólido amarelo. RMN 1H (400 MHz, clorofórmio-d) δ= 8,34 (s, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,44 (br d, J=7,3 Hz, 4H), 7,37 (t, J=7,8 Hz, 4H), 7,25 (br s, 2H), 6,22 (d, J=3,0 Hz, 1H), 4,38 (br s, 1H), 4,16 - 4,12 (m, 1H), 4,00 - 3,93 (m, 2H), 3,83(dd, J=2,5, 11,0 Hz, 1H), 3,51 (s, 3H), 2,94 (br s, 1H), 1,27 (dd, J=1,0, 6,8 Hz, 6H), 0,94 (s, 9H), 0,14 (s, 6H); ESI-MS: m/z = 677,4 [M+H]+. Etapa 5: Preparação do composto 4e

[0214] A uma solução do composto 4d (5 g, 7,39 mmol) em piridina (100 mL) adicionou-se Tf2 (16,67 g, 59,1 mmol) a 0°C. Após a agitação da mistura a 0°C durante 1,5 hora, a reação foi particionada entre DCM (200 mL) e H2O (100 mL). A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com DCM (100 mL). As camadas orgânicas foram então combinadas e secas sucessivamente com Na2SO4 anidro, filtra- das e evaporadas sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi combinado com uma outra batelada e purificado por croma- tografia em coluna rápida com sílica-gel (0% a 30% de EtOAc / éter de petróleo, V/V) para fornecer o composto 4e (4,0 g, como um sólido branco. ESI-MS: m/z = 809,5 [M+H]+. Etapa 6: Preparação do composto 4f

[0215] A uma solução do composto 4e (4,0 g, 4,94 mmol) em DMF (40 mL) adicionou-se NaN3 (3,5 g, 54,15 mmol) a 25°C. Após agitação da reação a 25 °C durante 12 horas, a mistura foi diluída com solução aquosa saturada de NaHCO3 (30 mL) para ajustar o pH > 9 e extraída com acetato de etila (100 mL x 3). As camadas orgânicas foram combi- nadas e lavadas sucessivamente com salmoura (100 mL), secas com Na2SO4, filtradas e evaporadas sob pressão reduzida para produzir um sólido amarelo. O resíduo (combinado com sílica-gel: 10 g) foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 100% de acetato de etila em éter de petróleo) para fornecer o com- posto 4f (1,8 g, 67%) como um sólido amarelo.

[0216] RMN 1H (400 MHz, clorofórmio-d) δ = 11,99 (br s, 1H), 8,20 (br s, 1H), 8,05 (s, 1H), 5,96 (br d, J=4,4 Hz, 1H), 4,25 - 4,11 (m, 3H), 3,99 (br d, J=11,7 Hz, 1H), 3,82 (br d, J=11,7 Hz, 1H), 3,53 (d, J=2,4 Hz, 3H), 2,70 - 2,58 (m, 1H), 1,30 (br d, J=6,8 Hz, 6H), 0,94 (s, 9H), 0,13 (s, 6H); ESI-MS: m/z = 507,3 [M+H]+. Etapa 7: Preparação do composto 4g

[0217] A uma solução do composto 4f (1,8 g, 3,55 mmol) em THF (20 mL) adicionou-se trifenilfosfina (1,3 g, 4,97 mmol) a 25°C. Após a agitação da reação a 40°C durante 2 horas, água (10 mL) foi adicio- nada à solução a 40°C e a mistura foi agitada durante 12 horas. A mistura de reação foi então diluída com DCM (50 mL) e lavada com salmoura (2x50 mL). As camadas orgânicas foram combinadas e con- centradas sob pressão para produzir um sólido amarelo (2,0 g). O re- síduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0% a 10% de MeOH em DCM) para fornecer o com- posto 4 g (1,5 g, 81%) como um sólido branco.

[0218] RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8,15 (s, 1H), 5,57 (d, J=8,0 Hz, 1H), 4,07 - 4,00 (m, 1H), 3,91 (dd, J= 5,3, 8,0 Hz, 1H), 3,75 - 3,63 (m, 3H), 3,37 (s, 3H), 2,77 - 2,69 (m, 1H), 1,10 (d, J=6,8 Hz, 6H), 0,86 (s, 9H), 0,04 (s, 6H); +ESI-MS: m/z 481,3 [M+H]+. Etapa 8: Preparação do composto 4h

[0219] A uma solução do composto 4 g (1,5 g, 2,81 mmol) em DCM (100 mL) adicionou-se 4-nitrofenol (3,12 g, 22,47 mmol), trietilamina (1,7 g, 16,8 mmol) e peneiras moleculares de 4 Å (2,0 g). Após a agi- tação da mistura a -78°C durante 0,5 hora, adicionou-se clorossulfato de 4-nitrofenila 3n (2 g, 8,42 mmol) em DCM (20 mL) à solução a - 78°C. Após a agitação a -78°C por 15 minutos e a agitação a 0°C du- rante 1 hora, a mistura foi filtrada e diluída com DCM (100 mL). A ca- mada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de NaHCO 3 (3x50 mL) e concentrada sob pressão para fornecer um sólido amarelo (2,5 g). O resíduo foi combinado com uma outra batelada (combinado com sílica-gel: 6 g) e purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 100% de acetato de etila em DCM) para produzir o composto 4 h (1,68 g, 75% a partir de 2,4 g do composto 74) como um sólido amarelo. RMN 1H (400 MHz, CD3CN) δ 11,89 (br s, 1H). 9,27 (br s, 1H). 8,15 (br d, J=9,3 Hz, 2H), 7,94 - 7,90 (m, 1H), 7,23 (br d, J=9,0 Hz, 2H), 5,80 (br d, J=8,3 Hz, 1H), 4,81 (br d, J=7,3 Hz, 1H), 4,24 (br s, 1H), 3,97 (br d, J=4,5 Hz, 1H), 3,83 (br s, 2H), 3,48 - 3,39 (m, 3H), 2,73 - 2,58 (m, 1H), 1,19 (br dd, J=3,3, 6,0 Hz, 6H), 0,94 (s, 9H), 0,12 (s, 6H); ESI-MS: m/z 682,3 [M+H]+. Etapa 9: Preparação do composto 4j

[0220] Uma solução do composto 4 h (1,68 g, 2,47 mmol), composto 4i (731 mg, 1,9 mmol) e peneiras moleculares de 4 Å (2,0 g) em DCE (135 mL) foi agitada sob N2 durante 30 minutos a 25°C, seguida de adi- ção de DMAP (1,16 g, 9,49 mmol). Após a agitação a 55°C (temperatura do óleo) para 12 horas, a mistura foi filtrada e a solução foi particionada com DCM (100 mL) e salmoura (50 mL). A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de NaHCO3 (3x100 mL); a camada orgâ- nica foi seca com Na2SO4 anidro, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto (2,5 g). O produto bruto

(2,5 g, bruto) (combinado com sílica-gel: 5 g) foi purificado por cromato- grafia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 10% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 4j (1,2 g, 52%) como um sólido amarelo-claro, ESI-MS: m / 927,4 [M+H]+. Etapa 10: Preparação do composto 4k

[0221] A uma solução do composto 4j (1,2 g, 1,29 mmol) em piridina (24 mL) adicionou-se TEA (1,31 g, 12,94 mmol) e Et3N-3HF (1,0 6,47 mmol) a 15°C. Após a agitação da solução a 35°C durante 12 horas, THF (20 mL) e trimetil(propóxi)silano (3,4 g, 25,89 mmol) foram adicio- nados a 25°C e a mistura de reação foi agitada durante mais 3 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão para produzir um resíduo (2 g). O resíduo (combinado com sílica-gel: 4 g) foi purificado por cro- matografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 10% de MeOH em DCM) para produzir o composto bruto 4k (900 mg). O sólido bruto foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (mé- todo: Coluna: Waters Xbridge Prep OBD 5 µm C18 150x30, condição: água (10 mM de NH4HCO3)-ACN B: 5, fim B 35, tempo de gradiente (min): 7, 100% de B, tempo de retenção (min): 1, taxa de fluxo (mL/min): 25) para fornecer o composto 4k (0,57 g, 70%) como um sólido amarelo. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8,17 (d, J=4,4 Hz, 2H), 8,08 (s, 1H), 6,21 (d, J=19,6 Hz, 1H), 5,84 (d, J=8,6 Hz, 1H), 5,51 - 5,26 (m, 1H), 5,13 (br s, 1H), 4,72 (dd, J=5,4, 8,8 Hz, 1H), 4,53 - 4,38 (m, 1H), 4,22 - 4,16 (m, 1H), 4,14 - 4,10 (m, 1H), 4,09 - 4,00 (m, 2H), 3,86 (d, J= 5,4 Hz, 1H), 3,63 - 3,46 (m, 2H), 3,25 (s, 3H), 2,75 (td, J=6,8, 13,6 Hz, 1H), 1,11 (dd, J=2,1, 6,7 Hz, 6H) RMN l9F (376 MHz, DMSO-d6) -201,424 (s, 1F); ESI-MS: m/z 699,3 [M+H]+. Etapa 11: Preparação do composto 4l

[0222] CH3CN foi recém-destilada na presença de CaH2 antes do uso. O composto 4 l (152 mg, 0,218 mmol) foi dissolvido em DMF (2 mL)

e CH3CN (6 mL), ao qual foram adicionados 0,3 g de peneiras molecu- lares de 4 Å (pó) e uma solução de 1H-tetrazol (3,87 mL, 0,45 M, pre- parada pela dissolução de 472,5 mg de tetrazol em 15 mL de CH3CN seca, seguida de adição de 1 g de peneiras moleculares de 4 Å e então agitação durante 0,5 hora sob N2 antes do uso). Uma solução de 2-cia- noetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (131,15 mg, 0,43 mmol) em CH3CN (0,8 mL) foi adicionada por gotejamento durante 20 minutos através de uma seringa. A suspensão branca resultante foi agitada adi- cionalmente durante 2 horas a 25°C sob N2. TBHP (0,218 mL, 1,09 mmol, 5 M em decano) foi, então, adicionado à solução acima a 25°C. Após a agitação da reação a 25°C durante 1 hora, a mistura foi diluída com DCM (20 mL) e CH3OH (3 mL), filtrada através de um bloco de terra diatomácea e concentrada sob vácuo para fornecer um óleo incolor; o óleo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (4 g, 0 a 11,5% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 4 l (151 mg, 68%) como um sólido branco. ESI-MS: m/z = 814,3 [M+H]+. Etapa 12: Preparação do composto 52, sal de sódio

[0223] Uma solução do composto 4 l (150 mg, 0,18 mmol) em EtOH (2 mL) foi tratada com MeNH2 (5 mL, 30% em EtOH). Após a agitação da reação durante 2 horas a 25°C, e a 35°C durante 1 hora, o solvente foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer um óleo incolor. O resíduo foi dissolvido em H2O (20 mL) e CH3CN (5 mL), então lavado com DCM (20 mLx 2). A fase aquosa foi então liofilizada para fornecer o produto bruto (80 mg, bruto) como um sólido amarelo-claro. O produto bruto (80 mg, bruto) foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (método: coluna, Waters Xbridge Prep OBD 5 µm C18 150x30; condi- ção: água (10 mM de NH4HCO3) (A)-ACN (B), início B 0, fim B 25; tempo de gradiente (min) 7; 100% de B, tempo de retenção (min) 1, taxa de fluxo (mL/min) 25 injeções 12) para fornecer o composto 52, sal de amônio (35 mg, 26%) como um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, D2O)

δ = 8,29 (s, 1H), 8,19 (br d, J= 9,5 Hz, 2H), 6,61 (br d, J=18,6 Hz,1H), 6,08 (br d, J=8,8 Hz, 1H), 5,90 -5,72 (m, 1H), 5,39 (br d, J=19 6 Hz, 1H), 5,20 (br s, 1H), 4,76 (br s, 1H), 4,72 (br s, 1H), 4,49 (br d, J=10,3 Hz, 3H), 4,35 (br d, J 4,3 Hz, 1H), 4,17 (q, J=6,2 Hz, 1H), 3,67 (s, 3H); RMN 19 31 F (376,5 MHz, D2O) -199,859; RMN P (162 MHz, D2O) -1,639; ESI- MS: m/z 691,1 [M+H]+. Conversão em sal de sódio

[0224] Dowex 50W × 8, 200 a 400 (5 mL, forma de H) foi adicionado a um béquer e lavado com H2O desionizada (20 mL). Então, à resina adicionou-se H2SO4 a 15% em H2O desionizada (20 mL), a mistura foi gentilmente agitada durante 15 minutos e decantada (15 mL). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em H2O desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (ao menos 4 CV) e, então, com H2O desio- nizada até ficar neutra. A resina foi transferida de volta para o béquer, solução de NaOH a 15% em H2O desionizada (20 mL) foi adicionada, e a mistura foi gentilmente agitada durante 15 minutos, e decantada (1×). A resina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em H2O (ao menos 4 CV) e, então, com água desionizada até ficar neutra. O CDN (composto 52, 35 mg, 0,049 mmol)) foi dissolvido em água de- sionizada (8 mL), adicionado ao topo da coluna, e eluído com água de- sionizada. As frações adequadas foram agrupadas e liofilizadas para se obter a forma de sal sódico (30 mg, pureza: 91%) como um sólido branco. A forma de sal (30 mg) foi purificada por HPLC preparativa de fase reversa (método: coluna, Waters Xbridge Prep OBD 5 pm C18 150x30; condição: água (10 mM de NH4HCO3) (A)-ACN, início B 0, fim B 30; tempo de gradiente (min) 7: 100% B, tempo de retenção (min) 1, taxa de fluxo (mL/min) 25) para fornecer o produto (25 mg) como um sólido branco. O produto (25 mg, pureza: 97,07%) foi purificado pela segunda vez por HPLC preparativa de fase reversa (método: coluna, Waters Xbridge Prep OBD 5 µm C18 150x30; condição: água (10 mM de NH4HCO3) (A)-ACN (B), início B 0, fim B 30; tempo de gradiente (min) 7; 100% B tempo de retenção (minutos) 1, taxa de fluxo (mL/min) 25) para produzir o composto 52, sal de amônio que foi tratado com resina de troca iônica DOWEX 50W x 8, 200-400 para resultar no composto 52, sal de sódio (16,1 mg, 65%) como um sólido branco.

RMN 1H (400 MHz, D2O) δ = 8,01 (s, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,85 (s, 1H), 6,37 (br d, J=17,3 Hz, 1H), 5,83 (d, J=9,0 Hz, 1H), 5,59 (br d, J=3,5 Hz, 0,5H), 5,46 (br d, J=3,5 Hz, 0,5H), 5,15 - 5,02 (m, 1H), 4,97 (br d, J=4,5 Hz, 1H), 4,62 - 4,52 (m, 2H), 4,49 (br s, 1H), 4,29 - 4,19 (m, 3H), 4,10 (br d, J=4,5 Hz, 19 31 1H), 3,43 (s, 3H); RMN F (376,5 MHz, D2O) -200,863; RMN P (162 MHz, D2O) -1,676 ESI-MS: m/z = 691,2 [M+H]+. Exemplo 5

Etapa 1: Preparação do composto 5a

[0225] Uma solução de 5'-O-(4,4'-dimetoxitritil)-N2-isobutiril-3'-O- metil-D-guanosina [CAS 103285-33-2] (5,2 g, 7,76 mmol) em DMF (50 mL), à qual foram adicionados imidazol (2,38 g, 34,94 mmol) e TBSCl (3,51 g, 23,29 mmol), foi agitada durante 6 horas a 35°C. A mistura de reação foi resfriada bruscamente com solução aquosa de NaHCO3 sa- turada e extraída em DCM.

[0226] As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com sal- moura, secadas com Na2SO4, filtradas e concentradas. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 15% de MeOH em DCM) para resultar no composto 5a que foi usado como tal na etapa seguinte. ESI-MS: m/z 784,4 [M+H]+. Etapa 2: Preparação do composto 5b

[0227] TFA (2 mL, 26,12 mmol) e trietilsilano Et3SiH (8 mL, 50,03 mmol) foram adicionados a uma solução do composto 5a acima em DCM (160 mL) a 0°C. A mistura resultante foi agitada a 0°C por 30 mi- nutos e depois disso a agitação foi continuada à temperatura ambiente durante 4 horas. A solução de reação foi resfriada bruscamente com solução aquosa de NaHCO3 e extraída com DCM. As camadas orgâni- cas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas com Na2SO4, filtradas e concentradas. O produto bruto foi purificado por cromatogra- fia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 5% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 5b como um sólido branco (2,9 g). RMN 1H (400 MHz, clorofórmio-d) δ ppm 12,12 (br s, 1H), 8,36 (br s, 1H), 7,71 (s, 1H), 5,72 (d, J=7,5 Hz, 1H), 5,41 (br s, 1H), 4,78 (dd, J=7,5, 5,1 Hz, 1H), 4,30 (br s, 1H), 3,98 (dd, J=12,6, 2,2 Hz, 1H), 3,84 (d, J= 5,1 Hz, 1H), 3,71 (br s, 1H), 3,54 (s, 3H), 2,68 (spt, J=6,9 Hz, 1H), 1,28 (d, J=6,8 Hz, 3H), 1,29 (d, J=6,8 Hz, 3H), 0,81 (s, 9 H), -0,07 (s, 3H), - 0,29 (s, 3H); ESI-MS: m/z 482,1 [M+H]+. Etapa 3: Preparação do composto 5d

[0228] Uma solução de 5c [CAS 2241580-02-7] (2 g, 5,02 mmol) em DMF (10 mL), à qual se adicionou imidazol (1,02 g, 15,06 mmol) e TBSCl (1,51 g, 10,04 mmol), foi agitada durante 2 horas à temperatura ambi- ente. O resíduo foi diluído com EtOAc, e lavado com água. A camada aquosa foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas fo- ram lavadas com solução aquosa saturada de NaHCO3 e salmoura, se- cas em Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas. O produto bruto foi pu- rificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 15% de MeOH em DCM) para produzir o composto 5d como um sólido amarelo (2,57 g, rendimento: 100%). ESI-MS: m/z 513,2 [M+H]+. Etapa 4: Preparação do composto 5e

[0229] Uma solução do composto 5d (1,285 g, 2,51 mmol) em EtOAc (150 mL) foi hidrogenada à temperatura ambiente sob pressão atmosférica durante 2 horas com o uso de 10% de Pd/C (2,95 g) como catalisador. A mistura resultante foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. A reação foi repetida na mesma escala, o produto bruto de ambas as reações foi combinado para a purificação por croma- tografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 5% de MeOH em DCM) para produzir o composto 5e (1,69, rendimento: 69%) como um sólido branco. ESI-MS: m/z 487,1 [M+H]+. Etapa 5: Preparação do composto 5f

[0230] Uma solução do composto 5e (1,05 g, 2,16 mmol) em DCM (40 mL), à qual se adicionou 4-nitrofenol (900 mg, 6,47 mmol), Et3N (1,79 mL, 12,95 mmol) e peneiras moleculares ativadas, foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura foi resfriada até - 78°C e depois disso foi adicionado clorossulfato de 4-nitrofenila (1,54 g, 6,47 mmol) em DCM (10 mL), a agitação foi continuada por 2,5 horas a -78°C. A mistura de reação foi filtrada e lavada com solução aquosa de NaHCO3, as camadas aquosas de lavagem foram extraídas com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas com Na 2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 100% de EtOAc em éter de petróleo) para fornecer o composto 5f como um sólido branco (1,24 g, rendimento: 83,5%). ESI-MS: m/z 688,2 [M+H]+. Etapa 6: Preparação do composto 5g

[0231] Peneiras moleculares ativadas foram adicionadas a uma so- lução do composto 5b (105 mg, 0,218 mmol) e sulfamato 5f (180 mg, 0,262 mmol) em THF seco (2 mL), a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora sob N2. Em seguida, DMAP (133 mg, 1,09 mmol) foi adicionado para iniciar a reação, a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. As peneiras mo- leculares foram removidas por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 5% de MeOH em DCM) para pro- duzir o composto 5 g como um sólido amarelo (157 mg, rendimento: 70%). RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ ppm 12,18 (s, 1H), 9,07 (s, 1H), 8,78 (s, 1H), 8,39 (s, 1H), 8,05 (d, J=7,3 Hz, 2H), 7,66 - 7,59 (m, 1H), 7,58 - 7,49 (m, 3H), 7,19 (br s, 1H), 6,32 (d, J=17,8 Hz, 1H), 5,60 - 5,42 (m, 2H), 5,60 - 5,42 (m, 1H), 4,80 - 4,63 (m, 2H), 4,49 (dd, J= 3,8, 11,0 Hz, 1H), 4,36 - 4,27 (m, 2H), 4,17 - 4,02 (m, 2H), 3,80 (dd, J= 2,3, 4,8 Hz, 1H), 3,51 (s, 3H), 2,75 - 2,63 (m, 1H), 1,33 (d, J= 6,8 Hz, 3H), 1,27 (d, J=6,8 Hz, 3H), 0,91 (s, 9H), 0,77 (s, 9H), 0,89 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), -0,08 (s, 3H), -0,28 (s, 3H). ESI-MS: m/z 1030,5 [M+H]+. Etapa 7: Preparação do composto 5h

[0232] Et3N (2,62 g, 25,92 mmol) e tri-hidrofluoreto de trietilamina (6,28 g, 51,83 mmol) foram adicionados à solução do composto 5g (890 mg, 0,864 mmol) em piridina (10 mL), a mistura de reação resultante foi agitada sob N2 à temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 10% de

MeOH em DCM) seguida de purificação por HPLC preparativa em fase reversa (fase estacionária: Phenomenex Synergi Max RP, 10 µM, 250 x 50 mm; fase móvel: água (A) - MeCN (B); eluição gradiente) para render o composto 5 h como um sólido branco (397 mg, rendimento: 57%). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,07 (s, 1H), 11,60 (s, 1H), 11,20 (s, 1H), 8,89 (br d, J= 9,0 Hz, 1H), 8,71 (d, J=22,8 Hz, 2 H), 8,14 (s, 1H), 8,05 (d, J=7,3 Hz, 2 H), 7,60 - 7,72 (m, 1H), 7,47 - 7,60 (m, 2 H), 6,46 (d, J=19,9 Hz, 1H), 5,84 (d, J= 5,7 Hz, 1H), 0,00 (d, J=6,1 Hz, 1H), 5,66 (dd, J=52,1, 4,5 Hz, 1H), 5,22 (br t, J= 5,1 Hz, 1H), 4,50 - 4,69 (m, 2 H), 4,22 - 4,42 (m, 3H), 4,05 - 4,16 (m, 1H), 3,93 (t, J=4,1 Hz, 1H), 3,82 (br dd, J=12,2, 4,4 Hz, 1H), 3,54 -3,68 (m, 1H), 3,42 (s, 3H), 2,75 (spt, J=6,9 Hz, 1H), 1,12 (d, J=6,9 Hz, 6 H); ESI-MS: m/z 802,3 [M+H]+. Etapa 8: Preparação do composto 5i

[0233] Uma solução do composto 5 h (200 mg, 0,25 mmol) e 1H- tetrazol (1,82 mL de um 3 a 4% em MeCN, secos em peneiras molecu- lares de 3 Å antes do uso) em THF/MeCN secos (1:1, 12 mL, secos em peneiras moleculares de 3 Å antes do uso) foi tratada com peneiras mo- leculares de 3 Å ativadas durante 2 horas sob N2 e depois disso adicio- nou-se em uma única porção 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosfo- rodiamidita (75 mg, 0,25 mmol). A mistura de reação foi agitada de um dia para o outro. Uma quantidade adicional de 2-cianoetil-N,N,N',N'-te- tra(isopropil)fosforodiamidita (22,5 + 15 mg, 0,075 + 0,05 mmol) foi adi- cionada em duas porções com um intervalo de tempo de 2 horas e de- pois disso a agitação foi continuada por 90 minutos. Uma solução de tBuOOH (68 µL de uma solução 5,5 M em decano, 0,37 mmol) foi adici- onada, a mistura de reação foi agitada por 30 minutos. As peneiras mo- leculares foram removidas por filtração e enxaguadas com diclorome- tano. O filtrado foi lavado com salmoura e concentrado sob pressão re- duzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna rá-

pida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 10% de MeOH em DCM) for- nece composto 5i (30 mg, rendimento: 13%). ESI-MS: m/z 917,5 [M+H]+. Etapa 9: Preparação do composto 6, sal de sódio

[0234] O composto acima 5i (30 mg, 0,033 mmol) foi agitado em uma solução de metilamina a 33% em etanol (1 mL) à temperatura am- biente até a conversão completa (cerca de 2 horas). O produto bruto, obtido após a concentração sob pressão reduzida, foi triturado em MeCN. A conversão final no sal de sódio foi feita por eluição de uma solução aquosa sobre uma coluna empacotada com uma resina catiô- nica de troca de íons de Na produzindo o composto 6, sal de sódio como um sólido branco macio (14 mg, rendimento: 60%). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 61°C) δ ppm 10,39 (br s, 1H), 8,32 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,07 (br s, 2 H), 6,31 (br s, 2 H), 6,24 (dd, J=15,7, 2,7 Hz, 1H), 5,78 (d, J=9,0 Hz, 1H), 5,44 (br d, J=53,9 Hz, 1H), 5,11 (td, J=9,3. 4,0 Hz, 1H), 4,42 - 4,57 (m, 1H), 4,13 - 4,25 (m, 4 H), 4,11 (d, J=3,9 Hz, 1H), 3,90 - 4,03 (m, 1H), 3,79 - 3,88 (m, 1H), 3,53 (s, 3H); RMN 31P (162 MHz, DMSO-d6) δ ppm -1,45 (s, 1 P); ESI-MS: m/z 690,3 [M+H]+. Exemplo 6

Etapa 1: preparação do composto 6a

[0235] O composto 3 h (1,0 g, 2,61 mmol) foi coevaporado com to- lueno anidro: CH3CN (v: v=1:1, 6 mL x 2) e, em seguida, dissolvido em DMF anidro (18,8 mL). A seguir adicionou-se trifenilfosfina (1,02 g, 3,91 mmol), NaN3 (0,63 g, 9,73 mmol), iodeto de tetrabutilamônio (192,7 mg, 0,52 mmol) e CBr4 (1,3 g, 3,91 mmol) à temperatura ambiente. Após a agitação da reação à temperatura ambiente durante 12 horas, a reação foi resfriada bruscamente com salmoura (10 mL) e particionada com EtOAc (20 mL). Solução aquosa saturada de NaHCO3 (20 mL) foi adici- onada à mistura e a seguir extração com EtOAc (20 mL x 3). As cama- das orgânicas foram então combinadas e secas sucessivamente com Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para for- necer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (EtOAc: éter de petróleo = 0 a 100%, seguido de MeOH: DCM = 0 a 5%) para fornecer 6a como um pó amarelo. ESI-MS: m/z = 408,9 [M+H]+. Etapa 2: preparação do composto 6b

[0236] A uma solução de 6a (1,24 g, 3,04 mmol) em DCM (16 mL) adicionou-se 2,4,6-colidina (1,4 g, 11,56 mmol), AgNO3 (1,96 g, 11,56 mmol) e DMTrCl (1,54 g, 4,56 mmol) a 15 °C. Após a agitação a 15 °C durante 5 horas, a reação foi resfriada bruscamente com MeOH (20 mL) e diluída com DCM (40 mL). A camada orgânica foi sucessivamente la- vada com salmoura e (20 mLx2), seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzir para produzir um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (EtOAc: éter de petróleo = 0 a 100%) para fornecer 6b (1,99 g) como um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,17 - 7,00 (m, 6H), 6,93 (s, 4H), 6,73 - 6,49 (m, 4H), 5,28 (s, 2H), 4,10 (d, J= 7,3 Hz, 3H), 3,79 - 3,56 (m, 5H), 3,47 (br d, J=4,6 Hz, 1H), 3,37 - 3,11 (m, 2H), 2,94 (s, 1H), 2,87 (s, 1H), 2,61 (s, 6H), 2,31 (s, 3H), 2,03 (s, 1H), 1,72 - 1,56 (m, 5H), 1,53 - 1,35 (m, 2H), 1,24 (t, J=7,2 Hz, 1H), 0,99 (t, J= 7,3 Hz, 3H). ESI-MS: m/z 711,2 [M+H]+. Etapa 3: preparação do composto 6c

[0237] Uma suspensão de 6b (1,99 g, 2,8 mmol) com 10% de Pd/C úmido (3,3 g, 2,8 mmol) como um catalisador em EtOAc (100 mL) foi hidrogenada (15 psi) à temperatura ambiente (~15 °C) durante 5 horas.

O catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida para fornecer 6c (1,31 g) bruto como um sólido branco, usado diretamente na etapa seguinte sem qualquer purificação adicional ESI-MS: m/z 685 3 [M+H]+. Etapa 4: preparação do composto 6d

[0238] O composto 6c (213 mg, 0,31 mmol) foi coevaporado com tolueno anidro: CH3CN (v v=1:1, 3x2 mL) e dissolvido em DCM anidro (8 mL); a seguir adicionou-se 4-nitrofenol (129,8 mg, 0,93 mmol), Et3N (188,8 mg, 1,86 mmol) e peneiras moleculares de 4 Å ativadas (~3 g) sob N2 à temperatura ambiente (~10 °C); a mistura foi resfriada até - 78 °C seguido de rápida adição de clorossulfato de 4-nirofenila 3n (221,74 mg, 0,93 mmol) sob N2 a -78 °C. Após a agitação a -78 °C por 3 horas, a mistura de reação foi diluída com DCM (30 mL) e filtrada através de um bloco de terra diatomácea. O filtrado foi particionado en- tre DCM/solução aquosa saturada de NaHCO3 (30/45 mL), e a camada aquosa extraída com DCM (15 mLx3). As camadas orgânicas foram combinadas e sucessivamente lavadas com salmoura (20 mLx2), secas com Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em co- luna rápida com sílica-gel (EtOAc: éter de petróleo=0 a 90%) para for- necer 6d (142 mg) como um sólido amarelo. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ9,25 9,05 (m, 2H), 8,35 - 8,26 (m, 1H), 8,05 - 7,94 (m, 4H), 7,76 - 7,64 (m, 1H), 7,58 (br t, J 6,7 Hz, 1H), 7,50(t, J=7,5 Hz, 2H), 7,38 - 7,27 (m, 4H), 7,24 (s, 1H), 7,20 - 7,10 (m, 7H), 6,65 (br d, J=8,8 Hz, 2H), 6,62 (br d, J= 7,9 Hz, 2H), 5,86 (s, 1H), 4,53 (s, 1H), 4,41 (d, J=7,6 Hz, 1H), 4,09 (q, J=7,3 Hz, 2H). 4,02 - 3,93 (m, 2H), 3,79 (br d, J=12,5 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,70 (s, 3H), 2,88 (s, 1H), 2,01 (s, 3H), 1,22 (t, J=7,2 Hz, 3H), ESI-MS: m/z 886,2 [M+H]+. Etapa 5: preparação do composto 6f

[0239] O composto 6d foi coevaporado com tolueno anidro: CH3CN (1:1, 6 mL x 2) antes do uso. Uma mistura de 6d (699 mg, 0,79 mmol), 6e (739,81 mg, 1,1 mmol, CAS n° 103285-33-2) e peneiras moleculares de 4 Å ativadas (~5 g) em THF seco (20 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora sob N2. DMAP (481,97 mg, 3,94 mmol) foi adi- cionado em uma porção e a mistura de reação foi agitada a 40 °C (tem- peratura do óleo) durante 5 horas sob N2. A mistura de reação foi diluída com DCM (15 mL) e filtrada através de um bloco de terra diatomácea. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir um resí- duo amarelo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rá- pida com sílica-gel (MeOH:DCM=0 a 10%) para fornecer 6f (969 mg) como um sólido amarelo pálido. ESI-MS: m/z = 1416,2 [M+H]+. Etapa 6: preparação do composto 6g

[0240] DCA (6% em DCM, 10,8 mL) foi adicionado sob N2 a uma solução do composto 6f (1,1 g, 0,78 mmol) em DCM (22 mL), a solução vermelha resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 30 mi- nutos e, então, resfriada bruscamente com piridina (12 mL). A mistura de reação límpida foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo incolor que foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (MeOH: DCM = 0 a 10%) para produzir o composto 6g (740 mg) como um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ 8,67 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,14 - 8,09 (m, 3H), 7,71 - 7,65 (m, 1H), 7,62 - 7,56 (m, 2H), 6,19 (d, J=5,3 Hz, 1H), 6,03 (s, 1H), 5,53 (t, J=5,4 Hz, 1H), 4,84 (br s, 1H), 4,48 (s, 1H), 4,43 (s, 1H), 4,32 (t, J=4,8 Hz, 1H), 4,14 (br d, J=3,8 Hz, 1H), 3,99 (d, J=8,0 Hz, 1H), 3,83 - 3,77 (m, 1H), 3,73 - 3,66 (m, 2H), 3,60 (s, 3H), 3,54 (d, J= 13,3 Hz, 1H), 3,30 - 3,23 (m, 2H), 2,67 (td, J=6,7, 13,7 Hz, 1H), 1,17 (dd, J=2,4, 6,9 Hz, 6H). ESI-MS: m/z = 812,2 [M+H]+. Etapa 7: preparação do composto 6i

[0241] O composto 6 g (105 mg, 0,129 mmol) foi coevaporado com mistura de tolueno anidro: Acetonitrila (1: 1, v/v, 3 x 30 mL) foi então dissolvida em THF anidro (12 mL), peneiras moleculares de 4 Å, em pó, (0,3 g) e 0,45 M de tetrazol em CH3CN (2,3 mL, 1,03 mmol) foram adi- cionados e a mistura heterogênea resultante foi borbulhada com argônio durante 4 minutos. Após a agitação desta mistura à temperatura ambi- ente durante 10 minutos, uma solução de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(iso- propil)fosforodiamidita em CH3CN (59 mg, 0,19 mmol, 3,0 mL de CH3CN) foi adicionada à temperatura ambiente durante 30 minutos. Após a agitação da reação durante 1,5 hora, a mistura foi removida por filtração e então lavada com THF (15 mL). (Composto 6h. MS: m/z 911 [M+H]+). A mistura resultante foi usada diretamente na etapa seguinte. 0,5 M de solução de iodo (em THF: água: Py 8:1:1, v/v/v) foi adicionada até a cor persistir. Após a agitação da mistura de reação à temperatura ambiente durante 30 minutos, a mistura foi diluída com EtOAc (30 mL) e o excesso de iodo resfriado bruscamente com solução aquosa satu- rada de Na2S2O3 (até descoloração). As camadas foram separadas; a camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de NaHCO3 (1 × 20 mL) e salmoura (1 × 20 mL). A camada aquosa foi re-extraída com EtOAc (1 × 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram eva- poradas até a secura, o material bruto resultante foi purificado por cro- matografia em coluna rápida com sílica-gel (MeOH em DCM: 0 a 15%, v/v) para gerar o composto 6i (75 mg); ESI-MS: m/z 927 [M+H]+. Etapa 8: preparação do composto 9

[0242] Uma solução do composto 6i (75 mg, 0,08 mmol) em MeNH2 (33% em EtOH, 6 mL) foi agitada a 40 °C durante 2 horas e 30 minutos, concentrada sob pressão reduzida.

[0243] O sólido bruto resultante foi lavado com diclorometano (15 mL), e o precipitado foi removido por filtração e purificado por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: Synergi 4 µ, Hydro RP, 250 mm x

30 mm x 10 µM, fase móvel: Tampão A: 50 mM de acetato de trietila- mônio em água; Tampão B: 50 mM de acetato de trietilamônio em CH3CN; gradiente: 0 a 40% de B durante 30 minutos, taxa de fluxo: 24 mL/min) para fornecer o composto 9 (18,2 mg) como o sal de TEAA. A conversão final no sal de sódio foi feita por eluição de uma solução aquosa por uma coluna empacotada com uma resina catiônica de troca de íons de Na para fornecer o composto 9, sal de sódio (17,3 mg). RMN 1H (400 MHz, D2O): δ 7,96 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,12 (s, 1H), 5,90- 6,12 (m, 3H), 4,97 (s, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,41 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 4,25 (d, J=4,0 Hz, 1H), 4,05 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,90-4,01 (m, 1H), 3,85 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,55 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 3,41 (s, 3H), 3,31 (d, J = 12,8 Hz). RMN 31 P (162 MHz, D2O), δ -1,46 (s, 1P). MSs ESI: m/z: 698 [M+1]+-. Exemplo 7 Etapa 1: preparação do composto 7b

[0244] O composto 1 g (80 mg, 0,099 mmol) foi coevaporado com mistura de tolueno anidro: Acetonitrila (1:1, v/v, 3 x 15 mL) foi então dissolvida em THF anidro (10 mL), peneiras moleculares de 4 Å em pó

(0,3 g) e 0,45 M de tetrazol em CH3CN (1,3 mL, 0,598 mmol) foram adi- cionados e a mistura heterogênea resultante foi borbulhada com argônio durante 4 minutos. Após a agitação desta mistura à temperatura ambi- ente durante 10 minutos, uma solução de 2-cianoetil-N,N,N',N' -te- tra(isopropil)fosforodiamidita em CH3CN (48 mg, 0,16 mmol, em 3,0 mL de CH3CN) foi adicionada à temperatura ambiente durante 30 minutos. Após a agitação da reação durante 1,5 hora, a mistura foi removida por filtração e lavada com THF (15 mL). (Composto 7a. MS: m/z 901 [M+H]+). A mistura do resultante foi usada diretamente na etapa se- guinte.

[0245] Uma solução de complexo de borano-sulfeto de dimetila (2,0 M em THF, BH3-DMS, 180 mL, 0,35 mmol) foi adicionada muito lenta- mente durante 5 minutos a 0 °C. Após a agitação da reação durante 20 minutos à temperatura ambiente, a mistura de reação foi rapidamente filtrada, diluída com EtOAc (50 mL) e resfriada bruscamente com água (20 mL). As camadas foram separadas; a camada orgânica foi lavada com água (1 × 20 mL) e salmoura (1 × 20 mL); a camada aquosa foi re- extraída novamente com EtOAc (1 x 20 mL). As camadas orgânicas fo- ram então combinadas e evaporadas até o ressecamento. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 15% de MeOH em DCM, v/v) para fornecer 7b (48 mg). ESI-MS: m/z 915 [M+H]+. Etapa 2: preparação do composto (*R) 14A

[0246] Uma solução do composto 7b (48 mg) em MeNH2 (33% em EtOH, 6 mL) foi agitada a 40 °C durante 2 horas e concentrada sob pressão reduzida.O sólido bruto resultante foi lavado com DCM (15 mL) e o precipitado foi removido por filtração e purificado por HPLC prepa- rativa de fase reversa (coluna: Synergi 4 µm, Hydro RP, 250 mm x 4,6 mm, fase móvel: Tampão A: 50 mM de acetato de trietilamônio em água; Tampão B: 50 mM de acetato de trietilamônio em CH3CN, gradiente: 0 a 40% de B durante 30 minutos, taxa de fluxo 24 mL/minuto) para pro- duzir o composto 14 (20,2 mg) como um sal de ΊΈAA.

A conversão final no sal de sódio foi feita por eluição de uma solução aquosa por uma coluna empacotada com uma resina catiônica de troca de íons de Na para fornecer o composto (*R) 14A, sal de sódio (18,8 mg). RMN 1H (400 MHz, D2O) δ 7,92 (s, 1H), 7,81 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 6,17-6,24 (d, J = 20,8 Hz, 1H), 5,95 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 5,45 (s, 1H), 5,29 (s, 0,5H), 5,16 (s, 0,5H), 4,70-4,85 (m, 1H), 4,49 (s, 1H), 4,33 (d, J = 8 Hz, 1H), 4,27 (s, 1H), 4,05-4,15 (m, 1H), 3,96 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 3,64 (d, J = 31 12,4 Hz, 1H), 3,44 (s, 1H), 3,30-3,44 (m, 2H), 0,3 (br,s, 3H); RMN P (162 MHz, D2O) δ 95,57 ppm (s, 1 P) RMN 19 F (379 MHz, D2O) δ pico amplo -196,84 ppm (s, 1F); MS m/z: 686,8 [M-H]-. Exemplo 8

Etapa 1: preparação dos compostos 8b e 8c

[0247] NaH (60% em óleo mineral, 4,864 g, 121,61 mmol) foi adici- onado a uma solução de adenosina 8a (25 g, 93,549 mmol) em DMF (800 mL) a -5°C. Após a agitação da solução durante 1, 5 hora a -5°C, uma solução de cloreto de 4-metoxibenzila (15,15 g, 112,26 mmol) em DMF (7,84 50 mL) foi adicionada por gotejamento por um período de 2 horas. Após a adição estar completa, a reação foi aquecida até tempe- ratura ambiente e agitada por 18 horas. Água (15 mL) foi adicionada à reação e a mistura foi agitada a 15°C por 10 minutos. A mistura resul- tante foi combinada com outras reações e a DMF foi evaporada sob alto vácuo. A suspensão foi diluída com MeOH, filtrada e o filtrado concen- trado sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi pu- rificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (DCM: MeOH = 100: 0 ~ 20: 1) para fornecer 8b e 8c; o resíduo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: Phenomenex Synergi Max RP 250 x 50 mm x 10 µm; condição: água-MeCN início B 2%, fim B 36%; tempo de gradiente: 18 minutos; 100% de B de tempo de retenção: 14 mm; taxa de fluxo: 100 mL/min) para fornecer 8b (75 g) e 8c (15,5 g), ambos como sólidos brancos (66% de rendimento total).

[0248] Composto 8b. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,31 (s, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,36 (s, 2H), 7,06 (d, J= 8,4 Hz, 2H), 6,72 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,03 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 5,51 (dd, J = 4,4, 7,2 Hz, 1H), 5,32 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 4,71 - 4,46 (m, 2H), 4,43 - 4,30 (m, 2H), 4,03 (br d, J = 2,8 Hz, 1H), 3,74 - 3,61 (m, 4H), 3,61 - 3,49 (m, 1H); ESI-MS: m/z = 388,1 [M+H]+.

[0249] Composto 8c: RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ8,35 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 7,49 -7,30 (m, 4H), 6,93 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 5,92 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 5,57 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 5,51 (dd, J = 4,4, 7,3 Hz, 1H), 5,64 - 5,40 (m, 1H), 5,56 - 5,37 (m, 1H), 4,89 - 4,73 (m, 1H), 4,72 - 4,62 (m, 1H), 4,62 - 4,49 (m, 1H), 4,60 - 4,48 (m, 1H), 4,15 -,3,98 (m, 2H),3,75 (s, 3H), 3,70 - 3,60 (m, 1H), 3,53 (ddd, J = 3,6, 7,6, 11,8 Hz, 1H); ESI-MS: m/z 388,1 [M+H]+. Etapa 2: preparação do composto 8d

[0250] A uma solução do composto 8e (10 g, 25,81 mmol) em piri- dina (200 mL) adicionou-se por gotejamento clorotrimetilsilano (10,5 g, 116,162 mmol) a 0 °C. Após a agitação da mistura de reação durante 2 horas, ela foi resfriada até 0°C e cloreto de benzoíla (6 mL) foi adicio- nado por gotejamento a 0°C durante 30 minutos. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro e resfriada bruscamente com água (30 mL) cuidadosamente 0°C, amônia aquosa (60 mL) foi então adicionada por gotejamento a 0°C. Após a agitação da mistura durante 1,5 horas, a reação foi diluída com DCM (800 mL). A camada orgânica foi lavada sucessivamente com salmoura (200 mL x 3), seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão redu- zida para fornecer um resíduo. O resíduo foi triturado a partir de EtOAc (100 mL) para produzir o composto 8d (9,8 g) como um sólido branco; RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,21 (s, 1H), 8,72 (d, J = 13,2 Hz, 2H), 8,06 - 7,89 (m, 2H), 7,71 - 7,58 (m, 1H), 7,57 - 7,46 (m, 2H), 7,31 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,90 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,05 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,67 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 5,18 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 4,91 - 4,76 (m, 1H), 4,73 - 4,59 (m, 1H), 4,53 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 4,17 - 4,04 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,66 (td, J = 4,4, 12,0 Hz, 1H), 3,53 (ddd, J = 3,6, 6,0, 12,0 Hz, 1H); ESI-MS: m/z = 388,1 [M+H]+ Etapa 3: preparação do composto 8e

[0251] A uma suspensão agitada de composto 8d (7 g, 14,24 mmol), trifenilfosfina (5,6 g, 21,36 mmol), TBAI (1,05 g, 2,85 mmol) e NaN3 (6,67 g, 102,54 mmol) em DMF (90 mL) adicionou-se em porções CBr4 (7,085 g, 21,363 mmol) 0°C resultando em uma suspensão amarela. Após a agitação a 35°C, a mistura foi vertida em solução aquosa saturada de NaHCO3 (500 mL) sob condições de agitação. A mistura foi extraída com DCM (200 mLx3). As camadas orgânicas foram então combinadas e secas sucessivamente com Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 2% de MeOH em DCM) para fornecer 8e (6,4 g) como um sólido branco. ESI-MS: m/z = 517,2 [M+H]+.

Etapa 4: preparação do composto 8f

[0252] A uma solução de 8e (6,0 g, 11,61 mmol, coevaporada com piridina duas vezes antes do uso) em piridina (100 mL) adicionou-se DMTrCl (7,87 g, 23,23 mmol). Após a agitação da mistura de reação a 80 °C de um dia para outro, ela foi diluída com EA (800 mL) e lavada com solução saturada de NaHCO3 (200 mLx2) e salmoura (200 mLx2). A camada orgânica foi seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (éter de petró- leo/EtOAc) para fornecer 8f como um sólido amarelo (6,8 g).

[0253] RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ11,21 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,45 (m, 9H), 8,04 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,74 - 7,59 (m, 1H), 7,58 - 7,47 (m, 2H), 7,28 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,22 (dd, J = 2,8, 6,8 Hz, 2H), 7,15 - 7,07 (m, 5H), 6,98 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,91 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,72 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,60 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,27 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,24 (dd, J = 4,4, 7,6 Hz, 1H), 4,30 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 4,22 (dd, J = 4,8, 7,8 Hz, 1H), 4,05 - 3,99 (m, 1H), 3,80 - 3,58 (m, 10H), 3,21 (dd, J = 4,8, 12,8 Hz, 1H), 2,56 (d, J = 4,4 Hz, 1H); ESI-MS: m/z = 819,4 [M+H]+. Etapa 5: preparação do composto 8g

[0254] A uma solução de 8f (6,8 g, 8,3 mmol) em TFN (80 mL) adi- cionou-se PPh3 (3,27 g, 12,46 mmol) em uma porção; a mistura foi agi- tada a 40 °C por 2 horas sob N2, seguida de adição de água (30 mL), então adicionalmente agitada por mais de 12 horas resultando em uma solução incolor. A mistura foi combinada com uma outra escalonada. A maior parte dos voláteis foi removida sob pressão reduzida e a camada aquosa residual foi particionada entre DCM / água. A camada foi cole- tada e extraída com DCM (200 mLx3). As camadas orgânicas foram en- tão combinadas, secas com Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 5% de MeOH em DCM) para fornecer 8 g (6,4 g, 89% de rendimento total) como um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,74 - 8,65 (m, 1H), 8,54 (s, 1H), 8,13 - 8,01 (m, 2H), 7,74 - 7,63 (m, 1H), 7,62 - 7,51 (m, 2H), 7,31 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,24 (dd, J = 3,2, 6,4 Hz, 2H), 7,19 - 7,07 (m, 5H), 6,97 (dd, J = 8,8, 18,0 Hz, 4H), 6,73 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,62 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 6,25 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,16 (dd, J = 4,4, 7,6 Hz, 1H), 4,30 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 4,16 - 4,04 (m, 2H), 4,01 - 3,95 (m, 1H), 3,84 - 3,59 (m, 9H), 2,72 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 2,67 - 2,58 (m, 1H), 2,67 - 2,58 (m, 1H); ESI-MS: m/z = 794,4 [M+H]+. Etapa 6: preparação do composto 8h

[0255] Uma solução de clorossulfato de 4-nitrofenila (5,57 g, 23,46 mmol) em DCM seco (5 mL) foi adicionada rapidamente a uma mistura de 8g (6,2 g, 7,82 mmol), 4-nitrofenol (3,26 g, 23,46 mmol), Et3N (4,75 g, 46,92 mmol) em DCM seco (20 mL) sob N2 a -78 °C, então aquecida à temperatura ambiente por um período de 1,5 hora. A mistura foi trans- ferida para um funil separador, lavada com solução aquosa saturada de NaHCO3 (200 mL x 4). A camada orgânica foi seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica- gel (eluição gradiente: 0 a 100% de EtOAc em éter de petróleo) para fornecer 8 h (6,2 g) como um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, DMSO- d6) δ 11,32 (br s, 1H), 9,29 (br t, J = 5,6 Hz, 1H), 8,72 (s, 1H), 8,33 - 8,24 (m, 2H), 8,13 (s, 1H), 8,07 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,72 - 7,63 (m, 1H), 7,60 - 7,46 (m, 4H), 7,31 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,27 - 7,19 (m, 2H), 7,18 - 7,06 (m, 5H), 6,95 (d, J = 8,0 Hz, 4H), 6,73 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 6,60 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 6,30 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,11 (dd, J = 4,8, 7,8 Hz, 1H), 4,39 - 4,22 (m, 2H), 4,10 - 3,93 (m, 2H), 3,83 - 3,59 (m, 10H), 2,84 (d, J = 4,8 Hz, 1H); ESI-MS: m/z = 994,2 [M+H]+. Etapa 7: preparação do composto 8j

[0256] Uma suspensão de 39 h (1,3 g, 1,92 mmol), 8 h (2,48 g, 2,5 mmol) e peneiras moleculares (2,5 g) em THF seco (20 mL) foi agitada sob N2 durante 30 minutos à temperatura ambiente, seguida de adição de DMAP (0,94 g, 7,7 mmol). Após a agitação de um dia a 45 °C sob N2, a mistura de reação foi filtrada através de um bloco de terra diato- mácea e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer um resíduo amarelo; ela foi dissolvido em DCM (300 mL) e lavada com solução aquosa saturada de NaHCO3 (100 mL x 3). A camada orgânica foi seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão redu- zida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatogra- fia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 70% de EtOAc em PE) para fornecer 8j (2,7 g) como um sólido branco. ESI-MS: m/z = 766,2 [M+H]+. Etapa 8: preparação do composto 8k

[0257] A uma solução de 8j (2,7 g, 1,76 mmol) em DMF (80 mL) adicionou-se água (318 mg, 17,64 mmol) e DCA (335 mg, 4,06 mmol) resultando em uma solução amarela. Após a agitação da mistura à tem- peratura ambiente durante 1,5 horas, adicionou-se MeOH (2 mL), se- guido de adição de piridina (558,1 mg) resultando em solução incolor, que foi agitada adicionalmente durante 15 minutos. O solvente foi con- centrado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromato- grafia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 2% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 8k (1,28 g) como um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,26 (br d, J = 10,8 Hz, 2H), 9,02 - 8,50 (m, 5H), 8,05 (d, J = 7,6 Hz, 4H), 7,79 - 7,62 (m, 2H), 7,61 - 7,48 (m, 4H), 7,36 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,93 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,50 (dd, J = 2,4, 16,8 Hz, 1H), 6,09 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,99 - 5,83 (m, 1H), 5,79 (br d, J = 6,4 Hz, 1H), 5,53 - 5,27 (m, 2H), 5,11 - 4,93 (m, 1H), 4,79 - 4,53 (m, 2H), 4,42 - 4,29 (m, 1H), 4,27 - 4,03 (m, 2H), 3,89 - 3,71 (m, 4H), 3,68 - 3,56 (m, 1H), 3,55 - 3,38 (m, 2H); RMN 19F (376 MHz, DMSO-

d6) = -202,67 (s, 1F); ESI-MS: m/z = 926,3 [M+H]+. Etapa 9: preparação do composto 8l

[0258] THF foi recém-destilado sobre sódio em presença de benzo- fenona e CH3CN foi recém-destilada na presença de CaH2 antes do uso.

[0259] A uma solução de 8k (200 mg, 0,21 mmol, seca por liofiliza- ção) em THF (6 mL) adicionou-se peneiras moleculares de 4 Å (800 mg, pó) e uma solução de 1H-tetrazol (4,8 mL, 0,45 M, 945 mg de tetrazol (seco por liofilização) em 30 mL de CH3CN seca, seguido de adição de peneiras moleculares de 4,4 (1 g, pó), agitada durante 1 hora sob N2 antes do uso). Após a purga do frasco com N2. Uma solução de 2-cia- noetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (117 mg, 0,39 mmol) em THF (0,8 mL) foi adicionada por gotejamento em um frasco de 25 mm através de uma seringa; após a agitação da mistura de reação à tempe- ratura ambiente durante 1,5 hora, uma solução de TBHP (0,34 mL, 1,73 mmol, 5M). Após a agitação da mistura durante 30 minutos adicionais, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 5% de DCM em MeOH) para fornecer 8 l como um sólido branco (153 mg, 0,14 mmol). RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,85 (br s, 1H), 9,79 -9,72 (m, 1H). 8,89 (s, 1H), 8,87 - 8,84 (m, 1H), 8,64 - 8,59 (m, 1H), 8,20 - 8,14 (m, 1H), 8,10 - 8,04 (m, 4H), 8,02 - 7,95 (m, 3H), 7,65 - 7,56 (m, 3H), 7,55 - 7,45 (m, 6H), 6,05 -5,94 (m, 1H), 4,81 - 4,71 (m, 2H), 4,66 (br d, J = 11,6 Hz, 1H), 4,52 - 4,47 (m, 1H), 4,36 -4,21 (m, 4H), 4,01 (br dd, J = 4,4, 8,8 Hz, 1H), 3,92 - 3,80 (m, 6H), 2,67 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 2,43 - 2,28 (m, 2H); RMN 19F (376 MHz, CDCl3) δ -196,54 - -197,10 (m, 1F); RMN P (162 MHz, CDCl3) δ -2,49 (s, 1P), -4,38 (s, 1P); ESI- 31 MS: m/z = 780,2 [M+H]+. Etapa 10: preparação do composto 8m

[0260] Uma solução de 8 l (153 mg, 0,14 mmol) em MeNH2/EtOH (5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. O volátil foi evaporado sob pressão reduzida para produzir um sólido branco dissol- vido em água (20 mL); a camada aquosa foi lavada com EtOAc (10 mL x 3). A camada aquosa foi liofilizada para fornecer 114 mg de 8 m como um sólido branco. Etapa 11: preparação do composto 41, sal de amônio

[0261] Uma solução de anisol (158 mg, 1,46 mmol) em TFA (1,57 mL, 20,47 mmol) foi resfriada até 0 °C e adicionada a 8 m (114 mg). Após a agitação da mistura de reação a 0 °C durante 2,5 horas, o TFA foi removido por sopro com um fluxo de gás nitrogênio a 0 °C. O restante da mistura de reação foi resfriado bruscamente com MeNH2 (solução a 33% em EtOH, 1,6 mL) a 0°C e evaporado até a secura sob pressão reduzida. O resíduo foi particionado entre DCM e água (15 mL x 3 / 15 mL). A camada aquosa foi liofilizada para fornecer um resíduo branco adicionalmente purificado por HPLC preparativa de fase reversa (co- luna: Xbridge 150x30 mmx10 µm, condição: A: água (10 mM de NH4HCO3)-ACN: MeCN, início: B 5%, fim B: 35%; taxa de fluxo (mL/min) 25) para fornecer o composto 41 sal de amônio como um sólido branco (45 mg). RMN '1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10,63 (br s, 1H), 8,44 - 8,37 (m, 1H), 8,25 (br s, 1H), 8,04 (br s, 2H), 7,38 - 6,89 (m, 2H), 6,41 (br d, J =19,6 Hz, 1H), 6,13(d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,01 - 5,83 (m, 1H), 5,60 (br s, 1H), 5,31 (br s, 1H), 4,45 (br d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,28 (br s, 19 2H), 4,12 - 4,04 (m, 1H), 3,99 (br d, J = 11,2 Hz, 1H); RMN F (376 MHz, DMSO-d6) δ -198,36 - -200,33 (m, 1F); RMN 31 P (162 MHz, DMSO-d6) δ ppm -3,40 (br s, 1P); ESI-MS: m/z = 659,9 [M +H]+ Etapa 12: preparação do composto 41, sal de sódio

[0262] Dowex 50W x 8, 200 a 400 (9 mL, forma de H) foi adicionado a um béquer (para 45 mg do composto 41 de sal de amônio) e lavado com água desionizada (50 mL). Então, à resina adicionou-se H2SO4 a 15% em água desionizada, a mistura foi gentilmente agitada durante 5 minutos e decantada (50 mL). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H 2SO4 a 15% (pelo menos 4 CV[volume da coluna]), e então com água desionizada até ficar neutra. A resina foi transferida de volta para o béquer, NaOH a 15% em solução de água desionizada (20 mL) foi adicionado, e a mis- tura foi gentilmente agitada durante 5 minutos, e decantada (1×). A re- sina foi transferida para a coluna e lavada com 15% de NaOH em água (pelo menos 4 CV), e então com água desionizada até ficar neutra, com- posto 41 sal de amônio (45 mg) foi dissolvido em uma quantidade mí- nima de água desionizada, adicionada ao topo da coluna, e eluído com água desionizada. As frações desejadas foram agrupadas e liofilizadas para fornecer o composto 41, sal de sódio (31,4 mg) como um sólido branco. RMN 1H (D2O, 400 MHz) δ 8,06 (s, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,62-7,87 (m, 1H), 7,28 (br s, 1H), 6,24 (br d, J = 12,8 Hz, 1H), 6,03 (br d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,49-5,74 (m, 1H), 5,22-5,31 (m, 1H), 5,11 (br d, J = 16,4 Hz, 1H), 4,53 (br s, 1H), 4,44 (br d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,39 (brs, 1H), 4,34 (br δ, J = 10,4 Hz, 1H), 3,98 (br d, J = 8,8 Hz, 1H), 3,71-3,79 (m, 1H), 3,60- 3,70 (m, 1H); RMN F (376 MHz, D2O) δ -201,23 (br s, 1F), RMN 19 31

P (162 MHz, D2O) δ -2,76 (br s, 1P); ESI-MS: m/z = 660,1 [M+H]+. Exemplo 9

Etapa 1: Preparação do composto 9b

[0263] Uma solução do composto 9a (8,3 g, 27,27 mmol, CAS n° 2086765-82-2) em piridina seca (160 mL) a 0°C à qual clorotrimetilsilano (14,8 g, 136,36 mmol) foi adicionado por gotejamento, foi agitada a 0°C durante 1,5 hora. Cloreto de benzoíla (19,2 g, 136,36 mmol) foi adicio-

nado por gotejamento e a agitação foi continuada à temperatura ambi- ente durante 3 horas. A solução de reação, que foi resfriada em um ba- nho de gelo, foi resfriada bruscamente pela adição de água (50 mL) e agitada de agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Amô- nia aquosa (70 mL de solução a 25%) foi adicionada e a agitação conti- nuou por mais uma hora. A solução de reação foi extraída com EtOAc, então as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas com Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. A purificação foi feita por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 90% de EtOAc em éter de petróleo) para fornecer o com- posto 9b como um sólido amarelo (9,1 g, rendimento: 80%). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11,11 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 8,07 (d, J=7,3 Hz, 2H), 7,69 (d, J=3,8 Hz, 1H), 7,66 - 7,61 (m, 1H), 7,57 - 7,51 (m, 2H), 6,68 (d, J=3,5 Hz, 1H), 5,13 (td, J= 6,3, 12,0 Hz, 1H), 4,92 (t, J= 6,8 Hz, 1H), 4,80 (t, J=5,3 Hz, 1H), 4,55 (dd, J=4,4, 7,2 Hz, 1H), 3,59 - 3,46 (m, 2H), 2,32 - 2,20 (m, 2H), 2,16 - 2,03 (m, 1H), 1,49 (s, 3H), 1,23 (s, 3H); ESI-MS: m/z 409,1 [M+H]+. Etapa 2: Preparação do composto 9c

[0264] DMAP (448 mg, 3,76 mmol) e cloreto de tosila (2,80 g, 14,69 mmol) foram adicionados a uma solução do composto 9b (3,0 g, 7,35 mmol) e Et3N (2,33 g, 22,04 mmol) em DCM (60 mL) sob resfriamento com gelo. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente du- rante 4 horas. A mistura foi resfriada bruscamente com água e extraída com DCM. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca com Na2SO4 anidro e evaporada sob pressão reduzida para fornecer o com- posto tosilato. O produto bruto foi dissolvido em DMF (30 mL), azida de sódio (2,34 g, 36,00 mmol) foi adicionada e a mistura de reação resul- tante foi agitada a 30°C de um dia para o outro. A solução de reação foi resfriada à temperatura ambiente, diluída com solução aquosa saturada de Na2CO3 e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi separada, la- vada com salmoura, seca com Na2SO4 anidro e evaporada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica (eluição gradiente: 0 a 40% de EtOAc em éter de petróleo) para fornecer o composto 9c como um sólido amarelo (2,1 g, rendi- mento: 62%). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11,13 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 8,10 - 8,03 (m, 2H), 7,69 (d, J= 3,8 Hz, 1H), 7,67 - 7,61 (m, 1H), 7,57 - 7,51 (m, 2H), 6,69 (d, J= 3,8 Hz, 1H), 5,16 (td, J=6,3, 12,0 Hz, 1H), 4,99 - 4,89 (m, 1H), 4,55 (dd, J=5,1, 7,2 Hz, 1H), 3,63 - 3,46 (m, 2H), 2,41 - 2,27 (m, 2H), 1H (m, 1,50), 3H (s, 1,24), 3H (s,); ESI-MS: m/z 434,1 [M+H]+. Etapa 3: Preparação do composto 9d

[0265] TFA (2N, 40 mL) foi adicionado a uma solução de 9c (5,4 g, 12,46 mmol) em DCM (100 mL). A mistura resultante foi agitada à tem- peratura ambiente de um dia para o outro. O resíduo obtido após a con- centração sob pressão reduzida foi re-dissolvido em MeOH (20 mL) se- guido pela adição de solução aquosa saturada de K2CO3 (40 mL). A mistura resultante foi agitada durante 20 minutos e depois disso ela foi extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas com Na2SO4anidro e evaporados sob pressão re- duzida para resultar no composto 9d que foi usado como tal na etapa seguinte. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11,08 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 8,07 (br d, J=7,5 Hz, 2H), 7,67 - 7,61 (m, 2H), 7,57 - 7,51 (m, 2H), 6,66 (d, J= 3,5 Hz, 1H), 5,10 - 5,01 (m, 1H), 4,97 (d, J=6,5 Hz, 1H), 4,89 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,27 (td, J= 6,1, 8,1 Hz, 1H), 3,84 - 3,80 (m, 1H), 3,60 - 3,48 (m, 2H), 2,34 - 2,25 (m, 1H), 2,23 - 2,12 (m, 1H), 1,67 - 1,55 (m, 1H); ESI-MS: m/z 394,0 [M+H]+. Etapa 4: Preparação do composto 9e

[0266] O composto 9d acima foi dissolvido em DCM (90 mL), se- guido pela adição de imidazol (2,42 g, 35,52 mmol) e TBSCl (2,68 g,

17,76 mmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro e depois disso foi vertida em água e extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com sal- moura, secas com Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer 9e e seu 3’-regioisômero. A separação foi feita por HPLC preparativa em fase reversa (fase estacionária: Phenomenex Synergi, 10 µm Max-RP, 250 x 50 mm; fase móvel: água (A) - MeCN (B); eluição gradiente) para produzir o composto 9e (2,3 g, rendimento: 50% de 9c) como o primeiro isômero de eluição. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11,05 (br s, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,07 (d, J=7,8 Hz, 2H), 7,60 - 7,68 (m, 2H), 7,47 - 7,59 (m, 2 H), 6,68 (d, J=3,5 Hz, 1H), 5,10 - 5,23 (m, 1H), 4,63 (d, J= 5,5 Hz, 1H), 4,37 (dd, J=8,0, 5,8 Hz, 1H), 3,74 - 3,84 (m, 1H), 3,48 - 3,62 (m, 2H), 2,10 - 2,30 (m, 2H), 1,66 - 1,85 (m, 1H), 0,64 (s, 9H), -0,16 (s, 3H), -0,37 (s, 3H); ESI-MS: m/z 508,1 [M+H]+. Etapa 5: Preparação do composto 9f

[0267] DMTrCl (3,87 g, 11,43 mmol), AgNO3 (4,85 g, 28,56 mmol) e 2,4,6-colidina (3,46 g, 28,56 mmol) foram adicionados a uma solução do composto 9e (2,9 g, 5,71 mmol) em DCM (50 mL), a mistura resul- tante foi agitada a 35°C de um dia para o outro. A solução de reação foi então foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica (eluição gra- diente: 0 a 20% de EtOAc em éter de petróleo), seguida de purificação por HPLC preparativa em fase reversa (fase estacionária: Phenomenex Synergi Max RP, 10 µm, 250 x 50 mm, fase móvel: solução aquosa de 0,1% de TEA (A) ‒ MeCN (B); eluição gradiente) para produzir o com- posto 9f (3,6 g, rendimento, 78%).

[0268] RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11,04 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,08 (d, J=7,4 Hz, 2 H), 7,66 (d, J=3,5 Hz, 1H), 7,61 - 7,65 (m, 1H), 7,55 (q, J=7,3 Hz, 4 H), 7,40 (t, J=8,6 Hz, 4 H), 7,27 - 7,35 (m, 2 H), 7,18 - 7,26 (m, 1H), 6,85 - 6,96 (m, 4 H), 6,68 (d, J=3,5 Hz, 1H), 5,50 (q, J=

9,1 Hz, 1H), 4,42 (dd, J=9,1, 4,1 Hz, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,73 (s, 3H), 3,64 (br d, J=3,9 Hz, 1H), 3,27 - 3,37 (m, 1H), 3,20 (dd, J=12,3, 5,5 Hz, 1H), 2,26 - 2,37 (m, 1H), 1,71 - 1,84 (m, 1H), 1,59 - 1,71 (m, 1H), 0,60 - 0,78 (m, 9 H), -0,27 - -0,18 (m, 3H), -0,59 - -0,51 (m, 3H); ESI-MS: m/z 810,1 [M+H]+. Etapa 6: Preparação do composto 9g

[0269] Uma solução do composto 9f (2,3 g, 2,84 mmol) em EtOAc (80 mL) foi agitada sob H2 (50 psi) a 35 °C de um dia para o outro na presença de Pd/C (10% em carbono, 2,0 g). O catalisador foi removido por filtração em terra diatomácea e a torta do filtro foi lavada com EtOAc. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer o com- posto amina que foi imediatamente usado como tal na etapa seguinte. O produto bruto foi dissolvido em DCM (90 mL), seguido pela adição de 4-nitrofenol (2,81 g, 20,21 mmol), Et3N (1,23 g, 12,12 mmol) e peneiras moleculares ativadas. A mistura resultante foi resfriada até -78°C sob N2 e depois disso clorossulfato de 4-nitrofenila (2,88 g, 12,12 mmol) em DCM (10 mL) foi adicionado por gotejamento, a solução de reação foi deixada aquecer até a temperatura ambiente e agitada de um dia para o outro. As peneiras moleculares foram removidas por filtração. O fil- trado foi lavado com solução aquosa saturada de NaHCO3, submetido à secagem com Na2SO4 e concentrado. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica (eluição gradiente: 0 a 20% de EtOAc em éter de petróleo) para produzir o composto 9c (1,4 g, rendimento: 80% (Pureza LC-UV: 76%)).

[0270] ESI-MS: m/z 986,6 [M+H]+. Etapa 7: Preparação do composto 9h

[0271] Um frasco de reação foi carregado com DMAP (0,55 g, 4,47 mmol), THF seco (6 mL) e peneiras moleculares de 3 Å ativadas. A mis- tura resultante foi agitada à temperatura ambiente sob atmosfera inerte durante 2 horas. Simultaneamente, uma solução de 5'-O-(4,4'-dimetoxi- tritil)-N2-isobutiril-3'-O-metilD-guanosina [103285-33-2], (0,33 g, 0,46 mmol) e uma solução de um composto 9g (1,16 g, 0,89 mmol), cada uma em THF seco (2 x 6 mL), foram secas em peneiras moleculares de 3 Å ativadas (cerca de 2 horas). Ambas as soluções 5'-O-(4,4'-dimeto- xitritil)-N2-isobutiril-2'-O-metilguanosina e de composto 9g respectiva- mente) foram sucessivamente transferidas para o frasco de reação. A mistura de reação foi agitada a 50°C durante 18 horas e depois disso ela foi resfriada até a temperatura ambiente e diluída com DCM. As pe- neiras moleculares foram removidas por filtração e cuidadosamente en- xaguadas com DCM. O filtrado foi lavado com solução aquosa saturada de NaHCO3 e salmoura, seco com MgSO4, filtrado e concentrado sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica (eluição gradiente: 0 a 10% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 9 h (1,17 g, rendimento: 86%). ESI-MS: m/z 1515,9 [M+H]+. Etapa 8: Preparação do composto 9i

[0272] Uma solução do composto 9 h (1,13 g, 0,75 mmol) em DCM (20 mL) foi tratada com DCA (250 µL, 2,98 mmol) na presença de água (67 µL, 3,73 mmol) durante 2,5 horas. A mistura de reação foi resfriada bruscamente mediante a adição de piridina (360 µL, 4,47 mmol). O re- síduo da solução resultante foi trazido como tal em uma coluna com sílica para purificação (eluição gradiente: 0 a 10% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 9i como um sólido branco (595 mg, rendi- mento: 87%).

[0273] RMN 1H (400 MHz, clorofórmio-d) δ ppm 12,01 (br s, 1H), 9,70 (br s, 1H), 8,71 (br s, 1H), 8,53 (s, 1H), 8,02 - 8,07 (m, 2 H), 7,87 (s, 1H), 7,57 - 7,63 (m, 1H), 7,49 - 7,57 (m, 2 H), 7,13 (d, J= 3,7 Hz, 1H), 7,00 (d, J=3,6 Hz, 1H), 6,12 (d, J=4,0 Hz, 1H), 5,49 (t, J=4,5 Hz, 1H), 4,74 - 4,83 (m, 2 H), 4,39 (br t, J=5,3 Hz, 1H), 4,12 - 4,27 (m, 1H), 4,04

-4,10 (m, 1H), 3,97 - 4,04 (m, 1H), 3,74 - 3,82 (m, 1H), 3,57 (s, 3H), 3,37 - 3,46 (m, 1H), 3,17 - 3,26 (m, 1H), 2,65 (spt, J=7,0 Hz, 1H), 2,45 - 2,54 (m, 1H), 2,39 - 2,49 (m, 1H), 1,96 - 2,03 (m, 1H), 1,17 (d, J=6,6 Hz, 3H), 1,18 (d, J=6,6 Hz, 3H), 0,75 (s, 9 H), -0,23 (s, 3H), -0,44 (s, 3H); ESI- MS: m/z 911,6 [M+H]+. Etapa 9: Preparação do composto 9j

[0274] Uma solução do composto 9i (530 mg, 0,58 mmol) em THF /MeCN secos (1:1, 108 mL, seca em peneiras moleculares de 3 Å ativa- das antes do uso) foi tratada com peneiras moleculares de 3 Å ativada sob uma atmosfera inerte (cerca de 2 horas de agitação), 1H-tetrazol (5,0 mL de um 3 a 4% em MeCN, 1,73 mmol, seca em peneiras mole- culares de 3 Å ativadas antes do uso) foi adicionada e a mistura foi agi- tada durante 1 hora à temperatura ambiente. Em seguida, 2-cianoetil- N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (180 µL, 0,58 mmol) foi adicio- nada imediatamente e a agitação foi continuada por 18 horas. Final- mente, duas porções iguais de tBuOOH (2 x 120 µL de uma solução 5,5 M em decano, 2 x 0,63 mmol) foram adicionadas com um intervalo de tempo de 30 minutos e depois disso a mistura de reação foi agitada por mais 2 horas. As peneiras moleculares foram removidas por filtração e enxaguadas com DCM. O filtrado foi lavado com uma mistura aquosa e saturada de Na2S2O3 e solução aquosa saturada de NaHCO3 e sal- moura, seco com MgSO4, filtrado e concentrado sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica (eluição gradiente: 0 a 10% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 9j (130 mg, rendimento: 21%). RMN 1H (400 MHz, clorofór- mio-d) δ ppm -0,04 (br s, 3H) 0,11 (s, 3H) 0,85 (s, 9 H) 0,93 (br d, J=6,9 Hz, 3H) 1,10 (d, J=6,9 Hz, 3H) 2,42 - 2,52 (m, 1H) 2,52 - 2,69 (m, 2 H) 2,89 (td, J=5,9, 2,8 Hz, 2 H) 2,93 (br d, J= 5,7 Hz, 1H) 3,37 - 3,50 (m, 1H) 3,56 - 3,67 (m, 4 H) 4,35 (d, J= 2,8 Hz, 1H) 4,37 - 4,48 (m, 4 H) 4,53 (dt, J=5,3, 3,7 Hz, 1H) 4,80 (br s, 1H) 4,99 (ddd, J=11,0, 5,3, 3,7 Hz, 1H)

5,27 - 5,32 (m, 1H) 5,95 -6,02 (m, 2 H) 7,03 (d, J=3,7 Hz, 1H) 7,12 (d, J= 3,7 Hz, 1H) 7,52 - 7,58 (m, 2 H) 7,58 -7,65 (m, 1H) 7,59 - 7,67 (m, 1H) 8,04 (s, 1H) 8,12 (d, J= 7,3 Hz, 2 H) 8,93 (br s, 1H) 9,10 (br s, 1H) 10,66 (br s, 1H) 12,10 (br s, 1H); RMN 31 P (162 MHz, clorofórmio-d) δ ppm -3,52 (s, 1 P); ESI-MS: m/z 1026,6 [M+H]+. Etapa 10: Preparação do composto 8, sal de sódio

[0275] O composto 9j (118 mg, 0,11 mmol) foi agitado em uma so- lução de metilamina a 33% em etanol (5,9 mL) a 40°C até a completa conversão (cerca de 3 horas) e depois disso a solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente e concentrada sob pressão redu- zida. O resíduo foi dissolvido em piridina (6 mL), seguido pela adição de Et3N (460 µL, 3,31 mmol) e tri-hidrofluoreto de trietilamina (280 µL, 1,66 mmol). A mistura de reação foi agitada a 45°C por 18 horas. Isopropo- xitrimetilsilano (1,17 mL, 6,62 mmol) foi adicionado e a agitação foi con- tinuada à temperatura ambiente por 2 dias. O resíduo obtido após a concentração sob pressão reduzida foi triturado em acetonitrila anidra, o precipitado obtido foi adicionalmente purificado por HPLC preparativa de fase reversa (fase estacionária: RP XBridge C18 OBD, 10 µm, 150 x 50 mm, fase móvel: solução aquosa de 0,25% de bicarbonato de amônia (A)- MeOH (B); eluição gradiente) para resultar no composto 8. A con- versão final no sal de sódio foi feita por eluição de uma solução aquosa sobre uma coluna empacotada com uma resina catiônica de troca de íons de Na produzindo o composto 8, sal de sódio como um sólido branco macio (32 mg, rendimento: 41%). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10,31 (br s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,76 (br s, 1H), 7,21 (d, J= 3,3 Hz, 1H), 6,74 (d, J= 3,1 Hz, 1H), 6,48 - 6,60 (m, 5 H), 6,02 (d, J=8,4 Hz, 1H), 5,92 (dd, J=8,4, 4,3 Hz, 1H), 4,80 - 4,93 (m, 1H), 4,63 (br s, 1H), 4,34 - 4,43 (m, 1H), 4,30 (d, J= 3,8 Hz, 2 H), 4,18 (dd, J=12,2, 3,6 Hz, 1H), 4,08 (dd, J=12,5, 2,8 Hz, 1H), 3,50 (s, 3H), 3,16 (br d, J=6,1 31 Hz, 2 H), 2,25 - 2,37 (m, 2 H), 1,45 - 1,57 (m, 1H); RMN P (162 MHz,

DMSO-d6) δ ppm 1,42 (s, 1 P); ESI-MS: m/z 685,3 [M+H]+. Exemplo 10 Etapa 1: preparação do composto 10b

[0276] A uma solução de 10a (0,8 g, 2,15 mmol) em DMF (6 mL), adicionou-se imidazol (439,98 mg, 6,46 mmol) e TBSCl (616,94 mg, 4,09 mmol). Após a agitação à temperatura ambiente por 1,5 hora, a mistura foi combinada com uma outra batelada e diluída com EA (800 mL). A camada orgânica foi sucessivamente lavada com solução aquosa saturada de NaHCO3 (200 mLx2), salmoura (200 mLx2), seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para resultar em um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluído com 0 a 70% de EA em PE) para fornecer o composto 10b (5,5 g) como um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,44 (br s, 1H), 8,66 (br s, 1H), 8,17 - 7,92 (m, 2H), 7,85 (br s, 1H), 7,69 - 7,59 (m, 1H) 7,57 - 7,33 (m, 2H), 5,44 - 5,09 (m, 2H), 5,02 (br d, J = 5,4 Hz, 1H), 4,30 (br s, 1H) 4,01 (br d, J = 4,0 Hz, 1H), 3,87 (br d, J = 3,6 Hz, 1H), 3,80 - 3,61 (m, 2H), 0,84 (s, 9H), 0,01 (d, J=4,4 Hz, 6H); ESI-MS: m/z = 486,2 [M+H]+. Etapa 2: preparação do composto 10c1 e do composto 10c2

[0277] O composto 10b foi coevaporado com piridina (10 mL) duas vezes antes do uso. A uma solução do composto 10b (1,7 g, 0,88 mmol) em piridina (15 mL) adicionou-se DMTrCl (41,78 g, 5,25 mmol). Após a agitação à temperatura ambiente por 2 horas, a mistura foi combinada com uma outra batelada e diluída com EtOAc (500 mL). A camada or- gânica foi sucessivamente lavada com solução aquosa saturada de NaHCO3 (150 mLx2), salmoura (150 mLx2), seca com Na 2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para resultar em um resí- duo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluído com 0 a 70% EtOAc em PE) para produzir uma mistura de 10c1 e 10c2 (3,9 g). ESI-MS: m/z = 788,4 [M+H]+. Etapa 3: preparação do composto 10d1 e do composto 10d2

[0278] A uma solução de 10c1 e 10c2 (2,5 g, 3,17 mmol) em DMF (25 mL) adicionou-se NaH (60% em óleo mineral, 482,3 mg, 12,05 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 1 hora a 0°C e uma solução de cloreto de 4-metoxibenzila (745,31 mg, 4,76 mmol) em DMF (5 mL) foi adicionada por gotejamento durante 10 minutos. Após a agitação à temperatura ambiente durante 2 horas, a mistura foi bruscamente res- friada com água (5 mL) e diluída com EA (500 mL). A camada orgânica foi lavada sucessivamente com solução aquosa saturada de NaHCO 3 (150 mLx2), salmoura (150 mLx2), seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluído com 0 a 40% EA em PE) para produzir uma mistura de 10d1 e 10d2 (1,9 g). ESI-MS: m/z = 908,4 [M+H]+. Etapa 3: preparação dos compostos 10e1 e 10e2

[0279] Uma solução de 10e1 e 10e2 (1,9 g, 2,09 mmol) em DCM (30 mL) foi tratada com água (0,38 mL, 20,92 mmol) e DCA (0,69 mL, 8,37 mmol). A solução amarela resultante foi agitada à temperatura am- biente durante 2 horas. Em seguida foi adicionada a MeOH (0,15 mL), seguida pela adição de piridina (662 mg), resultando em uma solução incolor, que foi agitada adicionalmente durante 15 minutos. A mistura foi evaporada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel para fornecer uma mistura de compostos 10e1 e 10e2 (1,05 g) como um sólido amarelo. ESI-MS: m/z = 606,1 [M+H]+. Etapa 4: preparação do composto 10f1 e do composto 10f2

[0280] Uma mistura dos compostos 10e1 e 10e2 (1,2 g, 1,98 mmol) em THF (12 mL) foi tratada com TBAF (3 mL, 1 M) em uma porção. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas antes de ser resfriada bruscamente com uma solução aquosa saturada de NaHCO 3 (150 mL). A camada orgânica foi seca (Na2SO4 anidro), filtrada e eva- porada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo, que foi purifi- cado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (5% de MeOH em DCM) para fornecer uma mistura de compostos 10f1 e 10f2. A mis- tura de 10f1 e 10f2 foi combinada com um outra batelada e triturado com MeOH; um precipitado formado a partir de MeOH; após a filtração e lavagem com uma pequena quantidade de MeOH frio, ela foi identifi- cada como o composto de isômero puro principal 10f2 (659 mg); os lí- quidos-mãe foram concentrados e purificados por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: ]Waters Xbridge Prep OBD 10 µm C18 150x30, condição: A: água (10 mM de NH4HCO3)-ACN: MeCN, início: B 25%, fim B: 45%; taxa de fluxo (mL/min) 25) para fornecer mais composto 10f2 (97 mg) e o composto de isômero secundário 10f1 (200 mg) cada um como um sólido branco.

[0281] Composto 10f1: RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,51 (s, 1H), 8,03 (br d, J =8,0 Hz, 2H), 7,81 (s, 1H), 7,67 - 7,63 (m, 1H), 7,57 - 7,53 (m, 2,H), 7,17 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 6,80 (d, J= 8,0 Hz, 2,H), 5,28 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 5,09 (br d, J= 4,0 Hz, 1H), 4,83 (br t, J= 4,0 Hz, 1H), 4,64 (d, J= 12 Hz, 1H), 4,47 (d, J= 12 Hz, 1H), 4,28 (t, J= 4,0 Hz, 1H), 4,20 (q, J= 4,0 Hz, 1H), 3,91 (q, J= 4,0 Hz, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,61 - 3,58 (m, 1H), 3,51 - 3,47 (m, 1H); ESI-MS: m/z = 492,2 [M+H]+.

[0282] Composto 10f2: RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,61 (br s, 1H), 8,03 (br d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,92 (br s, H), 7,69 - 7,65 (m, 1H), 7,58 - 7,54 (m, 2H), 7,33 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 6,92 (d, J 8,0 Hz, 2H), 5,33 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 5,21 (br d, J= 8,0 Hz, 1H), 4,87 (t, J= 8,0 Hz, 1H), 4,66 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 4,57 - 4,49 (m, 2H), 4,01 (q, J= 4,0 Hz, 1H), 3,95 (t, J= 4,0 Hz, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,60 - 3,55 (m, 1H), 3,50 - 3,45 (m, 1H) ESI- MS: m/z = 492,3 [M+H]+. Etapa 5: preparação do composto 10g

[0283] A uma solução de N-(7-((2S,3S,4S,5R)-3-hidróxi-5-(hidroxi- metil)-4-((4-metoxibenzil)óxi)tetra-hidrofuran-2-il)imidazo[2,1-f] [1,2,4]triazin-4-il)benzamida, composto 10f2 (400 mg, 0,81 mmol) em piridina (6 mL) adicionou-se DMTrCl (496 mg, 1,46 mmol) à temperatura ambiente. Após a agitação à temperatura ambiente de um dia para ou- tro, a mistura foi combinada com uma outra batelada bruta e diluída com

DCM (50 mL). A camada orgânica foi lavada sucessivamente com solu- ção aquosa saturada de NaHCO3 (50 mL x 3), seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 100% EtOAc em éter de petróleo e 0 a 10% de MeOH em DCM) para produzir o composto 10 g (450 mg) como um sólido branco. O composto não reagido (160 mg) 10f2 foi recuperado como um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 11,50 (br s, 1H), 8,67 (br s, 1H), 7,99 (br d, J= 6,0 Hz, 1H), 7,86 (br s, 1H), 7,65 (br d, J = 6,4 Hz, 1H), 7,54 (br t, J = 7,6 Hz, 2H), 7,29-7,35 (m, 2H), 7,23-7,29 (m, 2H), 7,17-7,23 (m, 7H), 6,83 (td, J= 6,0, 3,2 Hz, 6H), 5,45 (br d, J= 4,8 Hz, 1H), 5,30 (br s, 1H), 4,63 (br d, J= 11,6 Hz, 1H), 4,43 (br d, J= 12,0 Hz, 1H), 4,12 (br s, 1H), 4,07 (br s, 1H), 3,72 (s, 9H), 3,20 (br d, J= 7,6 Hz, 1H), 3,01 (br d, J= 5,6 Hz, 1H); ESI- MS: m/z = 794,2 [M+H]+. Etapa 5: preparação do composto 10h

[0284] Uma suspensão agitada do composto 10 g (450 mg, 0,56 mmol), sulfamato 17a (744,735 mg, 0,850 mmol) e peneiras molecula- res de 4 Å (1 g) em THF seco (6 mL) foi tratada a 25 °C com DMAP (277 mg, 2,27 mmol). Após a agitação da suspensão amarela a 45 °C durante 18 horas sob N2, a mistura de reação foi filtrada através de um bloco de terra diatomácea e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer um resíduo amarelo; O resíduo foi dissolvido em DCM (100 mL) e lavado com solução aquosa saturada de NaHCO 3 (100 mL x 4). A camada orgânica foi seca em Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em co- luna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 100% de EtOAc em PE) para produzir o composto 10 h (604 mg) como um sólido amarelo. ESI-MS: m/z = 766,8 [M+H]+. Etapa 6: preparação do composto 10i

[0285] Uma solução do composto 10h (704 mg, 0,46 mmol) em água (0,08 mL) e DCM (15 mL) foi tratada com DCA (118,6 mg, 0,92 mmol) à temperatura ambiente durante 4 horas, então, bruscamente resfriada com piridina (0,5 mL). Após a agitação à temperatura ambiente por 10 minutos, a mistura foi concentrada a vácuo para resultar em um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 100% de EtOAc em PE) para for- necer o composto 10i (370 mg) como um sólido, RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,46 (hr s, 1H), 11,24 (s, 1H), 8,70 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 8,45 (br t, J=4,0 Hz, 1H), 8,03 (br t, J= 8,0 Hz, 6H), 7,67 - 7,63 (m, 2H), 7,57 -7,53 (m, 4H), 7,30 (br d, J= 8,0 Hz, 2H), 6,91 (br d, J =8,0 Hz, 2H), 6,38 - 6,33 (m, 1H), 5,89 (br d, J= 8,0 Hz, 1H), 5,65 (br s, 1H), 5,51 (br s, 1H), 5,38 (br s, 1H), 4,95 (br s, 1H), 4,63 - 4,50 (m, 4H), 4,32 (br t, J= 4,0 Hz, 1H), 4,04 - 3,99 (m, 3H), 3,74 (s, 3H), 3,59 (br d, J = 12,0 Hz, 2H), 3,29 - 3,22 (m, 1H); RMN 19 F (376 MHz, DMSO-d6;) δ -202,69 (td, J=18,8, 52,6 Hz, 1F); ESI-MS: m/z = 926,5 [M+H]+. Etapa 7: preparação do composto 10j

[0286] NOTA: THF foi recém-destilado sobre sódio em presença de benzofenona e CH3CN foi recém-destilada na presença de CaH2 antes do uso. A uma solução do composto 10i (220 mg, 0,24 mmol, seco por liofilização) dissolvido em THF (4 mL) adicionou-se peneiras molecula- res de 4 Å (pó, 800 mg) e uma solução de 1H-tetrazol (5,28 mL, 0,45 M, preparado por dissolução de 945 mg de tetrazol (seco por liofilização) em 30 mL de CH3CN seca, seguida pela adição de 1 g de peneiras mo- leculares de 4A e então agitação durante 1 hora sob N2 antes do uso). O frasco de reação foi purgado várias vezes com N2. Uma solução de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (129 mg, 0,43 mmol) em THF (2 mL) foi adicionada por gotejamento por um período de 20 minutos através de uma seringa. Após a agitação à temperatura ambiente durante 1,5 horas, uma solução de TBHP (0,38 mL, 1,9 mmol,

5M) foi adicionada e a mistura foi agitada por mais 30 minutos e con- centrada sob pressão reduzida para resultar em um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a10% de DCM em MeOH, Rf=0,6) para fornecer o composto 10j como um sólido branco (308 mg). ESI-MS: m/z 1041,4 [M+H]+. Etapa 8: preparação do composto 10k

[0287] O composto 10j (308 mg) foi tratado com MeNH 2/EtOH (2 mL) e agitado à temperatura ambiente durante 2,5 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: Waters Xbridge Prep OBD 5 µm C18 150x30, condição: A: água (10 mM de NH4HCO3)-ACN: MeCN, início: B 5%, fim B: 35%; taxa de fluxo (mL/min) 25) para fornecer o composto 10k (32 mg) como um sólido branco.

[0288] ESI-MS: m/z = 780,3 [M+H]+. Etapa 9: preparação do composto 48, sal de sódio

[0289] Uma solução de anisol (43,43 mg, 0,4 mmol) em TEA (0,31 mL, 4,02 mmol) foi resfriada até 0 °C. A solução foi adicionada ao com- posto 10k (32 mg, 0,04 mmol). Após a agitação da mistura a 0 °C du- rante 2,5 horas, a maior parte do TEA foi removida por sopro com um fluxo de gás nitrogênio a 0°C. A mistura de reação restante foi brusca- mente resfriada com uma solução de MeNH2 a 33% em EtOH (0,31 mL) a 0°C. A mistura de reação foi evaporada sob pressão reduzida e o re- síduo particionado entre DCM / água (30 mL x 3/15 mL) e a camada aquosa lavada com DCM (30 mL x 2). A camada aquosa foi liofilizada para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (Waters Xbridge Prep OBD C18 5 µm C18 150x30, con- dição: A: água (10 mM de NH4HCO3)-ACN: ACN, início: B 5%, fim B: 35%; taxa de fluxo (mL/min) 25) para fornecer o composto 48, sal de amônio (19,2 mg) como um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, D2O) δ 8,32 (s, 1H), 8,00 (d, J = 3,2 Hz, 2H), 7,49 (s, 1H), 6,57 - 6,50 (m, 1H),

5,81 - 5,75 (m, 1H), 5,73 - 5,65 (m, 2H), 5,54 (br d, J= 4,4 Hz, 1H), 5,39 - 5,27 (m, 1H), 4,80 (d, J= 4,2 Hz, 1H), 4,46 (br s, 1H), 4,42 - 4,34 (m, 1H), 4,24 - 4,17 (m, 1H), 3,82 (br dd, J= 3,2, 13,4 Hz, 1H), 3,61 (br d, J= 13,2 Hz, 1H); RMN 19F (376 MHz, D2O) δ -197,15-197,29 (m, 1F); RMN 31 P (162 MHz, D2O) δ - 1,83 (s, 1P); ESI-MS: m/z = 660,1 [M+H]+. Conversão de sal de sódio

[0290] Dowex 50W x 8, 200-400 (5 mL, forma H) foi adicionada a um béquer e lavado com água desionizada (25 mL). A seguir à resina adicionou-se H2SO4 a 15% em água desionizada, a mistura foi agitada gentilmente durante 5 minutos e decantada (25 mL). A resina foi trans- ferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e la- vada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 CV), e então com água desioni- zada até ficar neutra. A resina foi transferida de volta para o béquer, NaOH a 15% em solução de água desionizada foi adicionado, e a mis- tura foi gentilmente agitada durante 5 minutos, e decantada (1×). A re- sina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 CV) e, então, com água desionizada até ficar neutra. O composto 48, sal de amônio (19,2 mg) foi dissolvido em água desio- nizada (2 mL), e adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desi- onizada. As frações adequadas foram agrupadas e liofilizadas para o composto 48, sal de sódio (16 mg) como um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, D2O) δ 8,04 (br s, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 6,83 (br s, 1H), 6,33 - 6,25 (m, 1H), 5,68 - 5,60 (m, 1H), 5,46 (br d, J=9,6 Hz, 1H), 5,32(br d, J= 4,0 Hz, 1H), 5,20 (br d, J= 4,4 Hz, 1H), 5,06 - 4,90 (m, 1B), 4,38 (br d, J = 9,2 Hz, 1H), 4,30 (br s, 1H), 4,17 (br dd, J=6,0, 10,4 Hz, 1H), 4,02 (brd, J =11,6 Hz, 1H), 3,67 (br d, J= 12,8 Hz, 1H), 3,41 (br d, J= 13,2 Hz, 1H); RMN 31P (162 MHz, D2O) δ -2,02 (s, 1P); RMN 19F (376 MHz, D2O) δ -196,74 (br s, 1F); ESI-MS: m/z = 660,1 [M+H]+. Exemplo 11

Etapa 1: preparação do composto 11a

[0291] TIPDSCl2 (6,70 g, 21,23 mmol) foi adicionado a uma solução de SM 11, N-isobutirilguanosina (5,0 g, 14,15 mmol) em piridina (50 mL). A mistura de reação foi agitada durante 12 horas à temperatura ambi- ente e depois disso foi concentrada sob pressão reduzida. O produto resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica (eluição gradiente: 0 a 10% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 11a como uma espuma branca (5,5 g, rendimento: 65%). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,12 (s, 1H), 11,76 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 5,79 (s, 1H), 5,71 (d, J=4,9 Hz, 1H), 4,28 - 4,39 (m, 2 H), 4,13 (br dd, J=12,9, 2,6 Hz, 1H), 4,00 - 4,07 (m, 1H), 3,94 (br dd, J=12,9, 2,7 Hz, 1H), 2,78 (spt, J= 6,8 Hz, 1H), 1,11 (d, J= 6,6 Hz, 6 H), 0,93 - 1,08 (m, 28 H); ESI-MS: m/z

596,2 [M+H]+. Etapa 2: preparação do composto 11b

[0292] Peneiras moleculares ativadas foram adicionadas a uma so- lução do composto 11a (1,28 g, 1,92 mmol) e do composto 1e (1,0 g, 1,28 mmol) em THF seco (60 mL); A mistura de reação foi agitada du- rante 1 hora sob N2. Em seguida, DMAP (783 mg, 6,41 mmol) foi adici- onado para iniciar a reação. A mistura de reação foi agitada a 50°C de um dia para o outro. As peneiras moleculares foram removidas por fil- tração e enxaguadas com DCM, o filtrado foi lavado com solução aquosa saturada de NaHCO3. A fase aquosa foi extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas com Na2SCN, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O composto 11b (520 mg, rendi- mento: 36%) foi obtido como um sólido amarelo após a purificação por cromatografia em coluna com sílica (eluição gradiente: 0 a 100% de EtOAc em éter de petróleo seguida de 0 a 2% de MeOH em DCM). RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,08 (br s, 1H), 11,56 (br s, 1H), 11,28 (br s, 1H), 8,70 (s, 1H), 8,61 (s, 1H), 8,54 (br s, 1H), 8,09 (s, 1H), 8,04 (s, 2 H), 7,61 - 7,73 (m, 1H), 7,49 - 7,59 (m, 2 H), 6,31 - 6,44 (m, 1H), 6,06 (d, J=1,5 Hz, 1H), 5,73 (br d, J= 53,5 Hz, 1H), 5,31 (br d, J= 5,8 Hz, 1H), 4,79 - 4,95 (m, 1H), 4,64 (t, J= 6,9 Hz, 1H), 3,84 - 4,10 (m, 4 H), 3,41 (m, J=13,3 Hz, 1H), 3,11 - 3,25 (m, 1H), 2,75 (spt, J=6,5 Hz, 1H), 0,85 - 1,15 (m, 43 H), 0,15 (s, 3H), 0,14 (s, 3H); ESI-MS: m/z 1144,4 [M+H]+. Etapa 3: preparação do composto 11c

[0293] Uma solução do composto 11b (1,3 g, 0,98 mmol) em MeOH secp (55 mL, seco em peneiras moleculares) foi tratada com HCl (0,19 mL de 2 M em Et2O, 13,7 mmol) durante 4 horas. A mistura de reação foi bruscamente resfriada mediante a adição de solução aquosa satu- rada de NaHCO3 seguida de extração com DCM. A fase orgânica foi seca com MgSO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida.

O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica (eluição gradiente: 0 a 5% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 11c (670 mg, rendimento: 65%). RMN 1H (400 MHz, DMSO- d6) δ ppm 1,01 - 1,08 (m, 28 H), 1,12 (d, J=6,8 Hz, 3H), 1,67 - 1,75 (m, 1H), 2,20 - 2,32 (m, 1H), 2,43 - 2,54 (m, 1H), 2,62 (br d, J=14,3 Hz, 1H), 2,79 (spt, J=6,9 Hz, 1H), 2,85 - 2,96 (m, 1H), 3,51 (s, 3H), 3,52 - 3,57 (m, 2 H), 3,75 - 3,83 (m, 1H), 4,39 - 4,48 (m, 1H), 4,50 (d, J=4,2 Hz, 1H), 5,02 (q, J=9,6 Hz, 1H), 5,09 (t, J=4,5 Hz, 1H), 5,25 (dd, J=9,8, 4,1 Hz, 1H), 5,52 (ddd, J=52,4, 4,4, 2,6 Hz, 1H), 5,68 (br d, J= 5,9 Hz, 1H), 6,30 (dd, J=18,5, 2,6 Hz, 1H), 7,56 (t, J=7,7 Hz, 2 H), 7,61 - 7,69 (m, 1H), 8,02 - 8,07 (m, 2 H), 8,11 (br s, 1H), 8,14 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 11,22 (br s, 1H), 11,33 (br s, 1H), 12,09 (br s, 1H); ESI-MS: m/z 1060,7 [M+H]+. Etapa 4: preparação do composto 11d

[0294] Uma solução do composto 11c (340 mg, 0,32 mmol) e 1H- tetrazol (4,48 mL, de 3 a 4% em MeCN, seco em peneiras moleculares de 3 Å antes do uso) em THF/MeCN seco (1: 1, 11 mL, seca em penei- ras moleculares de 3 Å antes do uso) foi tratada com peneiras molecu- lares de 3 Å ativadas durante 2 horas sob N2 e depçois disso adicio- nou=se em uma única porção 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosfo- rodiamidita (96 mg, 0,32 mmol). A mistura de reação foi agitada por 2 horas. Uma quantidade adicional de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopro- pil)fosforodiamidita (19 mg, 0,064 mmol) foi adicionada e a agitação foi continuada por 2 horas. Uma solução de tBuOOH (93 µL de solução 5,5 M em decano, 0,51 mmol) foi adicionada, a mistura de reação foi agitada por 30 minutos. As peneiras moleculares foram removidas por filtração e enxaguada com diclorometano. O filtrado foi lavado com salmoura e concentrado sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a

5% de MeOH em DCM) que resultou no composto 11d (100 mg, rendi- mento: 26,5%). ESI-MS: m/z 1177,6 [M+H]+. Etapa 5: preparação do composto 11, sal de sódio

[0295] O composto acima 11d (100 mg, 0,085 mmol) foi agitado em uma solução de metilamina a 33% em etanol (2 mL) à temperatura am- biente até a completa conversão (cerca de 3 horas) e depois disso a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida e triturada em MeCN. O precipitado foi dissolvido em uma mistura de piridina (684 µL mL) e Et3N (590 µL). Tri-hidrofluoreto de trietilamina (57 mg, 0,34 mmol) foi adicionado, a mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente até a completa conversão (nota: a precipitação do produto de- sejado foi observada). O resíduo, obtido após a concentração sob pres- são reduzida, foi triturado em MeCN, o precipitado obtido foi adicional- mente purificado por HPLC preparativa de fase reversa (fase estacioná- ria: XBridge C18 OBD, 5 µm, 250 x 30 mm, fase móvel: 0,25% de bicar- bonato de amônia (A) - MeCN (B); eluição gradiente) para resultar no composto 11. A conversão final no sal de sódio foi feita por eluição de uma solução aquosa sobre uma coluna empacotada com uma resina catiônica de troca de íons de Na produzindo o composto 11, sal de sódio como um sólido branco macio (24,5 mg, rendimento: 41%). RMN 1 H (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10,03 (br s, 1H), 9,49 (br s, 1H), 8,27 (br s, 1H), 7,85 (s, 1 B), 7,60 (br s, 1H), 7,25 (br s, 2 H), 6,41 - 6,79 (m, 2 B), 6,36 (br d, J= 200 Hz, 1H), 6,08 - 6,22 (m, 1H), 6,04 (br d, J=7,9 Hz, 1 B), 5,72 (br s, 1H), 5,43 (br dd, J=51,7, 4,3 Hz, 1H), 5,25 -5,34 (m, 1H), 4,54 (br t, J=4,0 Hz, 1H), 4,33 - 4,43 (m, 1H), 4,29 - 4,33 (m, 1 B), 4,11 (br t, J= 3,9 Hz, 1H), 3,85 - 3,94 (m, 1H), 3,56 (br dd, J=13,0, 2,6 Hz, 1H), 3,34 (br d, J=12,6 Hz, 1H): RMN 31P (162 MHz, DMSO-d6) δ ppm - 2,34 (s, 1 P); ESI-MS: m/z 675,1 [M+H]+. Exemplo 12

Etapa 1: Preparação do composto 12b

[0296] O composto 12a (300 mg, 0,38 mmol) foi dissolvido em uma mistura de ACN anidro (33 mL) e THF anidro (33 mL), 1H-tetrazol (3,3 mL, 1,13 mmol) e peneiras moleculares de 3 Å foram adicionadas. A mistura foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente e, então, 2- cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (0,16 mL, 0,49 mmol) foi adicionada imediatamente através de uma seringa. A mistura reaci- onal foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas. Uma quanti- dade adicional de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (0,078 mL, 0,25 mmol) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora e então uma solução 5,5, M de hidroperóxido de terc-butila em decano (0,075 mL, 0,41 mmol) foi adici- onada. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos e então filtrada. As peneiras moleculares foram lavadas três vezes com diclorometano. O filtrado combinado foi lavado com uma mis- tura de uma solução saturada de Na2S2O3 e uma solução saturada de

NaHCO3, lavado com salmoura, seco com MgSO4, filtrado e os solven- tes do filtrado evaporados. O resíduo foi purificado em uma coluna com SiO2 com o uso de um gradiente de 100% de DCM a 10% de MeOH em DCM. As frações contendo o produto foram combinadas e os solventes foram evaporados para fornecer 12b (47 mg, 12% de rendimento), ESI- MS: m/z 905,4 [M+H]+. Etapa 2: Preparação do composto 29, sal de sódio

[0297] O composto 12b (47 mg, 0,045 mmol) em solução de metila- mina a 33% em etanol (2,5 mL, 20,2 mmol) foi agitado a 40°C durante 3 horas. A mistura de reação foi evaporada até a secura sob pressão reduzida. O resíduo foi triturado em 10 mL de acetonitrila anidra. O pre- cipitado foi coletado por filtração e lavado com acetonitrila anidra. O re- síduo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: RP XB ridge Prep C18 OBD-10 µm, 50x150 mm, fase móvel; solução de 0,25% de NH4HCO3 em água, MeOH). Os solventes da fração pura fo- ram removidos por liofilização. O resíduo foi dissolvido em água e puri- ficado em uma coluna pré-lavada (água) preenchida com uma resina de troca iônica. Os solventes da solução resultante foram removidos por liofilização para fornecer o composto 29, sal de sódio como um sólido branco (27 mg, 87% de rendimento). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3,18 - 3,28 (m, 1H) 3,29 - 3,40 (m, 1H) 4,02 - 4,10 (m, 2 H) 4,17 - 4,25 (m, 1H) 4,29 - 4,48 (m, 1H) 4,36 (br s, 1H) 5,09 (br dd, J=13,6, 7,1 Hz, 1H) 5,23 - 5,49 (m, 2 H) 5,86 - 6,00 (m, 2 H) 6,34 - 6,42 (m, 1H) 6,61 (br s, 2 H) 6,96 (br s, 2 H) 7,92 (s, 1H) 8,11 (d, J=2,4 Hz, 1H) 8,15 (s, 1H); ESI-MS: m/z 678,2 [M+H]+. Exemplo 13

Etapa 1: Preparação do composto 13b

[0298] O composto 13a (355 mg, 0, 46 mmol) foi dissolvido em uma mistura de ACN anidra (40 mL) e THF anidro (40 mL), 1H-tetrazol (4,1 mL, 1,4 mmol) e peneiras moleculares de 3 Å foram adicionadas. A mis- tura foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente e, então, 2-cia- noetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (0,19 mL, 0,61 mmol) foi adicionada imediatamente através de uma seringa. A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas. Uma quantidade adicional de 2-cianoetil-N,N,N',N'- tetra(isopropil)fosforodiamidita (0,18 mL, 0,57 mmol) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada à tem- peratura ambiente durante 1 hora e então uma solução de hidroperóxido de terc-butila 5,5 M em decano (0,093 mL, 0,51 mmol) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minu- tos. A mistura de reação foi filtrada. As peneiras moleculares foram la- vadas três vezes com diclorometano. O filtrado combinado foi lavado com uma mistura de uma solução saturada de Na 2S2O3 e solução aquosa saturada de NaHCO3, lavado com salmoura, secado com

MgSO4, filtrado e os solventes do filtrado evaporados. O resíduo foi pu- rificado em uma coluna com SiO2 com o uso de um gradiente de 100% de DCM a 10% de MeOH em DCM. As frações contendo o produto fo- ram combinadas e os solventes foram evaporados para fornecer 13b (34 mg, 5% de rendimento). ESI-MS: m/z 888,4 [M+H]+. Etapa 2: Preparação do composto 15, sal de sódio

[0299] O composto 13b (34 mg, 0,023 mmol) em solução de metila- mina a 33% em etanol (2 mL, 16 mmol) foi agitado a 40°C durante 3 horas. A mistura de reação foi evaporada até a secura sob pressão re- duzida. O resíduo foi triturado em 10 mL de acetonitrila anidra. O preci- pitado foi removido por filtração e lavado com acetonitrila anidra. Uma purificação foi realizada com HPLC preparativa de fase reversa (fase estacionária: RP XBridge Prep C18 OBD-10 µm, 30 x 150 mm, fase mó- vel: solução de 0,25% de NH4HCO3 em água, MeOH). Os solventes da fração pura foram removidos por liofilização. O resíduo foi dissolvido em água e filtrado em uma coluna pré-lavada (água) empacotada com uma resina catiônica de troca de íons de sódio. Os solventes da solução re- sultante foram removidos por liofilização para produzir o composto 15, sal de sódio (23 mg, 100% de rendimento) como um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,00 - 2,13 (m, 1H) 2,49 (m, J=3,9, 1,7, 1,7 Hz, 1H) 3,29 - 3,37 (m, 1H) 3,57 (dd, J=13,6, 2,6 Hz, 1H) 3,85 - 3,97 (m, 1H) 4,03 - 4,17 (m, 1H) 4,27 (br d, J= 9,0 Hz, 1H) 4,45 - 4,55 (m, 1H) 4,73 - 4,88 (m, 1H) 5,10 (br d, J=22,4 Hz, 1H) 5,42 (dd, J=51,1, 4,1 Hz, 1H) 6,11 (br d, J=4,1 Hz, 1H) 6,32 (d, J=18,7 Hz, 1H) 6,86 - 7,03 (m, 2 H) 7,07 (br s, 2 H) 7,85 (br s, 1H) 8,15 (s, 1H) 8,35 (s, 1H) 8,40 - 8,87 (m, 1H); ESI-MS: m/z 661,3 [M+H]+. Exemplo 14

Etapa 1: Preparação do composto 14b

[0300] O composto 14a (275 mg, 0,26 mmol) foi dissolvido em ACN anidra (40 mL), 1H-tetrazol (2,3 mL, 1,8 mmol) e peneiras moleculares de 3 Å foram adicionadas. A mistura foi agitada durante 1 hora à tem- peratura ambiente e, então, 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforo- diamidita (0,084 mL, 0,26 mmol) foi adicionada imediatamente através de uma seringa. A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas. Uma quantidade adicional de 2-cianoetil-N,N,N',N'- te- tra(isopropil)fosforodiamidita (0,084 mL, 0,26 mmol) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora e então uma solução 5,5, M de hidroperóxido de terc-butila em decano (0,062 mL, 0,34 mmol) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura de reação foi filtrada. As peneiras moleculares foram lavadas três vezes com diclorometano.

O filtrado combinado foi lavado com uma mistura de uma solução satu- rada de Na2S2O3 e solução aquosa saturada de NaHCO3, lavado com salmoura, secado com MgSO4, filtrado e os solventes do filtrado evapo- rados. O resíduo foi purificado em uma coluna com SiO2 com o uso de um gradiente de 100% de DCM a 10% de MeOH em DCM. As frações contendo o produto foram combinadas e os solventes foram evaporados para fornecer 14b (30 mg, 5% de rendimento). ESI-MS: m/z 1159,6 [M+H]+. Etapa 2: Preparação do composto 14c, sal de metilamônio

[0301] O composto 14b (30 mg, 0,014 mmol) em solução de metila- mina a 33% em etanol (3 mL, 24,3 mmol) foi agitado a 45°C durante 1 hora. A mistura de reação foi evaporada até a secura sob pressão redu- zida. O resíduo foi triturado em 10 mL de acetonitrila anidra. O precipi- tado foi removido por filtração e lavado com ACN anidra para produzir o composto 14c, sal de metilamônio como um sólido branco (11 mg, 71% de rendimento). ESI-MS: m/z 898,5 [M+H]+. Etapa 3: Preparação do composto 30, sal de sódio

[0302] Uma solução de anisol (0,011 mL, 0,1 mmol) em TFA (0,076 mL, 1 mmol) foi resfriada até 0°C. A solução fria foi adicionada ao com- posto 14c (11 mg, 0,01 mmol). A mistura reacional foi agitada a 0°C durante 75 minutos. A maior parte do TFA foi removida por sopro com um fluxo de gás nitrogênio a 0°C. A mistura de reação restante foi brus- camente resfriada pela adição de uma solução de metilamina a 33% em etanol (0,12 mL, 1 mmol) a 0°C. A mistura de reação foi evaporada até a secura. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (fase estacionária: RP XB ridge Prep C18 OBD-10 µm,50x250 mm, fase móvel: solução de 0,25% de NH4HCO3 em água, CH3CN). Os solventes da fração pura foram removidos por liofilização. O resíduo foi dissolvido em água e filtrado em uma coluna pré-lavada (água) preenchida com uma resina catiônica de troca de íons de sódio. As frações contendo o produto foram liofilizadas. Os solventes da solução resultante foram re- movidos por liofilização para fornecer o composto 30, sal de sódio como um sólido branco (3 mg, 45% de rendimento). RMN 31P (162 MHz, D2O) δ ppm -1,27 (s, 1 P); MS: m/z 658,3 [M+H]+. Exemplo 15 Preparação do composto 15b

[0303] O diol 15a (210 mg, 0,272 mmol) foi coevaporado com uma mistura de tolueno anidro:acetonitrila anidra (1:1, v/v, 3 x 30 mL) e, en- tão, dissolvido em THF anidro (20 mL), peneiras moleculares de 4 Å em pó (0,8 g) e 0,45 M de tetrazol em MeCN (4,8 mL, 2, 17 mmol) foram adicionados. A mistura heterogênea resultante foi borbulhada com ar- gônio por 4 minutos. Após a agitação desta mistura à temperatura am- biente durante 10 minutos, uma solução de 2-cianoetil-N,N,N',N'-te- tra(isopropil)fosforodiamidita (131 mg, 0,43 mmol) em MeCN (3 mL) foi adicionada durante 30 minutos à temperatura ambiente. Após a agita- ção por 90 minutos, a reação foi filtrada, então lavada com THF (15 mL). 0,5 M de iodo (em THF:água: Py 8:1:1, v/v/v) foi adicionado até a cor persistir. Após a agitação da reação durante 30 minutos à temperatura ambiente, a mistura de reação foi diluída com EtOAc (30 mL), o excesso de iodo foi bruscamente resfriado com solução aquosa saturada de Na2S2O3 (até descoloração). As fases foram separadas; a fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de NaHCO3 (1 × 20 mL), solu- ção aquosa saturada de NaCl (1 × 20 mL). A fase aquosa foi re-extraída com EtOAc (1 × 20 mL). As fases orgânicas combinadas foram evapo- radas até a secura, e o material bruto resultante foi purificado por cro- matografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 15% de MeOh em di- clorometano) para fornecer 15b (120 mg). ESI-MS: m/z 873 [M+H]+. Preparação do composto 38, sal de sódio

[0304] O composto 15b (120 mg) foi submetido a uma solução de metilamina a 33% em etanol (15 mL) à temperatura ambiente. Após a agitação da reação a 40°C durante 2 horas, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O sólido bruto resultante foi lavado com DCM (15 mL), e o precipitado foi coletado por filtração e purificado por HPLC pre- parativa de fase reversa (coluna: Synergi 4 µm, Hydro RP, 250 mm x 30 mm, fase móvel: Tampão A: 50 mM de acetato de trietilamônio em água; Tampão B: 50 mM de acetato de trietilamônio [TEAA] em CH3CN, gra- diente: 0 a 40% de B por 30 minutos, taxa de fluxo de 24 mL/min) para fornecer o composto 38 (7,1 mg) como um sal de TEAA; ESI-MS: m/z: 658 [M-1]-.

[0305] conversão de sal: Dowex 50W × 8, 200 a 400 (5 mL, forma de H) foi adicionado a um béquer e lavado com água desionizada (30 mL). Então, à resina adicionou-se H2SO4 a 15% em água desionizada, a mistura foi gentilmente agitada durante 5 minutos e decantada (30 mL). A resina foi transferida para uma coluna com H 2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 CV), e então com água desionizada até ficar neutra. A resina foi transferida de volta para o béquer, NaOH a 15% em solução de água desionizada foi adicionado, e a mistura foi gentilmente agitada durante 5 minutos, e de- cantada (1×). A resina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 CV) e, então, com água desionizada até que ficasse neutra. O composto 38, sal de TEAA (24,2 mg) foi dissol- vido em uma quantidade mínima de água desionizada e CH3CN (1:1, v/v) adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada. As frações adequadas foram agrupadas e liofilizadas para o composto 38, sal de sódio (6,3 mg) como um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, D2O) δ 7,98 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,49 (s, 1H), 6,37 (dd, J = 5,2 Hz, 11,6 Hz, 1H), 5,75- 5,90 (m, 2H), 5,49 (t, J = 4,8 Hz, 0,5H, 5,37 (t, J = 4,8 Hz, 0,5H), 5,01-5,15 (m, 1H), 4,51 (s, 1H), 4,26 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 4,00- 4,10 (m, 2H), 3,35-3,50 (m, 2H), 2,45-2,70 (m, 2H). RMN 31P (162 MHz, D2O) δ -1,416 ppm (s, 1P); RMN 19 F (379 MHz, D2O) δ -196 ppm (pico amplo, 1F); ESI-MS: m/z: 658,4 [M-1]-. Exemplo 16 Preparação do composto 16b

[0306] O composto 16a (140 mg, 0,174 mmol) foi coevaporado com uma mistura de tolueno anidro: Acetonitrila (1:1, v/v, 3 × 30 mL) então foi dissolvida no THF anidroso (15 mL). Peneiras moleculares de 4 Å em pó (0,5 g) e 0,45 M de tetrazol em acetonitrila (2,32 mL, 1,04 mmol) foram adicionadas. A mistura heterogênea resultante foi borbulhada com argônio por 4 minutos. Após a agitação da mistura à temperatura ambiente durante 10 minutos, uma solução de 2-cianoetil-N,N,N',N'-te- tra(isopropil)fosforodiamidita (84 mg, 0,28 mmol, 1,6 eq) em CH3CN (3,0 mL) foi adicionada durante 30 minutos à temperatura ambiente.

[0307] Após a agitação da reação durante 45 minutos, a mistura de reação foi filtrada e, então, lavada com THF (15 mL). O composto fosfito resultante (MS: m/z 901 [M+H]+) foi usado diretamente na etapa se- guinte. 0,5 M de iodo (em THF: água: Py 8:1:1, v/v/v) foi adicionado até a cor persistir. Após a agitação da mistura à temperatura ambiente du- rante 30 minutos, a reação foi diluída com EtOAc (30 mL); o excesso de iodo foi bruscamente resfriado com solução aquosa saturada de Na2S2O3 (até descoloração). As fases foram separadas; a fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de NaHCO3 (1 × 20 mL) e sal- moura (1 × 20 mL). A camada aquosa foi re-extraída com EtOAc (1 × 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram evaporadas até a secura para produzir um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 15% de MeOH em diclorometano, v/v) para produzir o composto 16b (80 mg). ESI-MS: m/z 917 [M+H]+. Preparação do composto 28, sal de sódio

[0308] O composto 16b (80 mg) foi submetido a uma solução de metilamina a 33% em etanol (6 mL) à temperatura ambiente. Após a agitação da mistura a 40°C durante 2 horas, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para produzir um sólido. O sólido bruto resultante foi lavado com DCM (15 mL), e o precipitado foi cole- tado por filtração e purificado por HPLC preparativa de fase reversa (co- luna: Synergi 4 µ, Hydro RP, 250 mm × 30 mm, fase móvel: Tampão A:

50 mM de acetato de trietilamônio em água; Tampão B: 50 mM de ace- tato de trietilamônio em CH3CN, gradiente: 0 a 40% de B durante 30 minutos, taxa de fluxo 24 mL/minuto) para produzir o composto 28 (22,4 mg) como um sal de ΊΈAA. A conversão final no sal de sódio foi feita por eluição de uma solução aquosa sobre uma coluna empacotada com resina catiônica de troca de íons de Na para produzir o composto 28, sal de sódio como um sólido branco macio após a liofilização (21,9 mg).

[0309] RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 7,87 (s, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,19 (s, 1H), 6,32 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 5,97 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 5,91 (s, 1H), 5,50 (s, 0,5H), 5,37 (s, 0,5H), 4,98-5,10 (m, 1H), 4,49 (s, 1H), 4,10- 4,30 (m, 4H), 3,52 (d, J= 11,6 Hz, 1H), 3,44 (s, 3H), 3,34 (d, J= 12,4 Hz); RMN 19F (379 MHz, D2O) δ pico amplo -196,61 ppm; RMN 31P (162 MHz, D2O) δ -1,38 ppm; ESI-MS: m/z: 688,8 [M-1]-. Exemplo 17

Etapa 1: preparação do composto 17-1

[0310] Nota: o composto 1b foi coevaporado com piridina (60 mL) duas vezes antes do uso. A uma solução de 1b (6 g, 15,06 mmol) em piridina (60 mL) adicionou-se DMTrCl (10,2 g, 3,5 mmol) e DMAP (920 mg, 7,53 mmol) a 5°C. A mistura de reação foi agitada a 80°C durante 18 horas resultando em uma solução amarela. A mistura de reação foi combinada com uma outra batelada O volátil foi removido sob vácuo e o resíduo foi dissolvido em DCM (150 mL) e, então, lentamente vertido em solução aquosa saturada de NaHCO3 (100 mL) com agitação vigo- rosa. A camada aquosa foi extraída com DCM (100 mL). As camadas orgânicas foram combinadas, secas com Na2SO4 anidro, filtradas e con- centradas sob pressão reduzida para fornecer um resíduo amarelo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia rápida com sílica-gel (0 a 100% de EtOAc em éter de petróleo) para resultar no composto 17-1 (12,6 g, 88% de 7,9 g do composto 1b) como um sólido amarelo. ESI- MS: m/z = 701,1 [M+H]+. Etapa 2: preparação do composto 17-2

[0311] PPh3 (6,6 g, 25,1 mmol) foi adicionado em uma única porção a uma solução do composto 17-1 (12,6 g, 17,98 mmol) em THF (100 mL); a mistura foi agitada a 40 °C durante 2 horas sob N2, seguida pela adição de H2O (50 mL); a mistura foi agitada durante 12 horas resul- tando em uma solução incolor. O solvente foi concentrado sob pressão reduzida e a camada aquosa residual foi particionada entre DCM/H2O camada (80/30 mL). A camada aquosa foi novamente extraída com DCM (mLx2). As camadas orgânicas foram então combinadas, secas com Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer um sólido branco purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 5% de MeOH em DCM) para resultar no composto 17-2 (11,6 g) como um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,93 (br s, 1H), 8,71 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,01 (br d, J=7,3 Hz, 2H), 7,33 - 7,19 (m, 4H), 6,82 (dd, J=6,9, 8,9 Hz, 4H), 6,17 (dd, J=1,5, 17,6 Hz, 1H), 4,64 (ddd, J= 4,4, 7,6, 19,4 Hz, 1H), 4,57 - 4,36 (m, 1H), 4,18 - 4,08 (m, 1H), 3,77 (d, J = 5,3 Hz, 6H), 2,94 (dd, J = 2,4, 14,2 Hz, 1H), 2,64 (dd, J = 4,3, 14,3 Hz, 1H); RMN 19 F (376 MHz, CDCl3) δ -197,03 (br s, 1F); ESI-MS: m/z = 675,1 [M+H]+. Etapa 3: preparação do composto 17a:

[0312] Uma solução de clorossulfato de 4-nitrofenila (768 mg, 3,23 mmol) en CH2Cl2 seco (5 mL) foi adicionada rapidamente a uma mistura do composto 17-2 (727 mg, 1,07 mmol), 4-nitrofenol (449 mg, 3,23 mmol), Et3N (654 mg, 6,46 mmol) e peneiras moleculares de 4 Å ativa- das (~ 1 g) em CH2Cl2 seco (15 mL) sob N2 a -78°C. A mistura foi gra- dualmente aquecida até a temperatura ambiente durante 1,5 hora. A mistura de reação foi combinada com outras bateladas e filtrada através de um bloco de terra diatomácea. O filtrado foi transferido para um funil separador, lavado com solução aquosa saturada de NaHCO3 (200 mLx4). A camada orgânica foi seca com Na2SO4 anidro, filtrada e con- centrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo amarelo puri- ficado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 100% de EtOAc em éter de petróleo) para fornecer o composto 17a (16 g) como um sólido amarelo-claro. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,93 -8,81 (m, 2H), 8,41 (s, 1H), 8,11 - 7,92 (m, 5H), 7,67 - 7,58 (m, 1H), 6,86 (br t, J= 7,7 Hz, 4H), 6,20 (br dd, J= 5,1, 13,7 Hz, 1H), 5,34 - 5,23 (m, 2H), 5,16 (br t, J= 5,1 Hz, 1H), 4,73 (br s, 1H), 3,90 (br s, 1H), 3,79 (d, J= 6,4 Hz, 6H), 3,23 (br d, J=13,2 Hz, 1H), 2,89 (br dd, J= 8,7, 12,6 Hz, 1H); RMN 19 F (376 MHz, CDCl3) δ -199,28 - -205,90 (m, 1F); ESI-MS: m/z = 876,1 [M+H]+. Etapa 4: preparação do composto 17c

[0313] Uma solução de 17a (2053 mg, 2,34 mmol), composto 17b (1000 mg, 1,56 mmol) e peneiras moleculares (6 g) em THF (30 mL) foi agitada sob N2 durante 30 minutos à temperatura ambiente; DMAP (954,8 mg, 7,81 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada a 45 °C (temperatura do óleo) por 12 horas. A mistura de reação foi filtrada e foi adicionado DCM (50 mL) e salmoura (20 mL). A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de NaHCO3 (3 x 50 mL), seca com Na2SO4 anidro, filtrada e evaporada sob pressão reduzida para resultar em um resíduo. O resíduo foi combinado com sílica-gel (6 g) foi purifi- cado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (PE/EA de 10% a 100% e DCM/MeOH=0% a 5%) para fornecer 17c (1,8 g) como um sólido amarelo-claro. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,10 (s, 1H), 11,46 (s, 1H), 11,23 (s, 1H), 11,05 (s, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,13-8,10 (m, 1H), 8,02 (d, J= 73 Hz, 2H), 7,68 -7,63 (m, 1H), 7,58-7,46 (m, 4H), 7,41-7,31 (m, 6H), 7,29-7,23 (m, 3H), 7,20-7,11 (m, 7H), 6,91 (dd, J=6,4, 8,3 Hz, 4H), 6,75 (dd, J=8,9, 12,3 Hz, 4H), 6,39-6,30 (m, 1H), 6,16 (s, 1H), 5,34 (br, d, J= 5,9 Hz, 1H), 4,91 (br, s, 1H), 4,86 -4,73 (m, 2H), 4,45 (br, d, J=5,4 Hz, 1H), 3,69 (s, 12H), 3,21-3,08 (m, 2H), 2,96- 19 2,88 (m, 1H), 2,73 (m, 2H), 2,07 (m, 1H), 1,02 (m, 6H); RMN F (376 MHz, DMSO-d6) δ -197,64 (s, 1F); ESI-MS: m/z 689,1 [M/2+H]+. Etapa 5: preparação do composto 17d

[0314] A uma solução de 17c (1,8 g, 1,31 mmol) em DCM (30 mL)

adicionou-se água (235,5 mg, 13,08 mmol) e DCA (337,233 mg, 2,615 mmol) resultando em uma solução vermelha. A solução foi agitada a 25 °C durante 12 horas à temperatura ambiente. E a seguir adicionou- se MeOH (5 mL) até que a solução se tornar límpida, seguida de adição de piridina (1034,4 mg, 13,08 mmol). Após a agitação da mistura a 25 °C durante 2 horas, a solução foi concentrada sob pressão para fornecer um resíduo (3,0 g). O resíduo foi combinado com sílica-gel (6,0 g) e purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 8% DCM em MeOH) para fornecer 17d (0,9 g) como um sólido branco. RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,12 (s, 1H), 11,57 (s, 1H), 11,26 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 8,47 (t, J= 5,9 Hz, 1H), 8,21 (s, 1H), 8,07-8,02 (m, 2H), 7,69 -7,63 (m, 1H), 7,60-7,52 (m, 2H), 6,33 (dd, J= 2,0. 19,3 Hz, 1H), 6,08 (d, J=1,7 Hz, 1H), 5,92 (d, J=6,4 Hz, 1H), 5,70-5,50 (m, 1H), 5,30 (br, d, J=6,1 Hz, 1H), 5,02 (t, J=5,4 Hz, 1H), 4,67-4,53 (m, 1H), 4,27 (br, d, J=3,9 Hz, 1H), 4,11 (q, J=5,1 Hz, 1H), 4,05-3,99 (m, 1H), 3,66- 3,55 (m, 1H), 3,46 (td, e J 4,9. 12,2 Hz, 1H), 2,78 (td, 1H), 2,24 (td, 1H), 1,12 (d, 6H); RMN 19F (376 MHz, DMSO-d6) δ -202,156 (s, 1F); ESI-MS: m/z = 772,1 [M+H]+. Etapa 5: preparação do composto 17e

[0315] THE foi recém-destilado sobre Na na presença de benzofe- nona e CH3CN foi recém-destilada sobre CaH2 antes do uso.

[0316] A uma solução de 17e (100 mg, 0,130 mmol) em tetra-hidro- furano (3 mL) adicionou-se MS 4 Å (pó, 1 g) e a mistura foi agitada du- rante 20 minutos. Após 20 minutos, uma solução de 1H-tetrazol (0,45 M em acetonitrila, 2,3 mL) foi adicionada a 25°C, que foi seguida pela adi- ção de uma solução de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodia- midita (78,1 mg, 0,26 mmol, diluída em 1 mL de THE) a 25°C. Após a agitação da durante 1,5 horas à temperatura ambiente, hidroperóxido de terc-butila (0,12 mL, 0,65 mmol) foi adicionado a 25°C e a solução foi agitada durante 1,5 hora, A mistura de reação foi concentrada sob pres- são para fornecer um resíduo amarelo. O resíduo foi combinado com sílica-gel (2 g) e purificado por cromatografia em coluna rápida com sí- lica-gel (0 a 15% de MeOH em DCM) para fornecer 17e (80 mg) como um sólido amarelo-claro.

[0317] ESI-MS: m/z = 887,5 [M+H]+. Etapa 4: Preparação do composto 33, sal de sódio

[0318] O composto 17e (80 mg, 0,090 mmol) foi tratado com MeNH2 (50% em EtOH 5,0 mL). Após a agitação a 25°C por 4 horas, a solução foi concentrada sob pressão para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: Agela Duras- hell 5 µm C18 150x25, condição: água (10 mM de NH4HCO3)-CH3CN início B: 5, fim B 35, tempo de gradiente (min): 9, 100% de B, tempo de retenção(min): 0, taxa de fluxo (mL/min): 25) para produzir o composto 33, sal de amônio (15 mg) como um sólido branco. A conversão final no sal de sódio foi feita por eluição de uma solução aquosa sobre uma co- luna empacotada com uma resina catiônica de troca de íons de Na para produzir o composto 33, sal de sódio como um sólido branco macio após a liofilização (25,5 mg).

[0319] RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,16 (br, s, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,15 (br, s, 1H), 6,45 (br, d, J= 19,8 Hz, 1H), 6,19 (br, d, J= 7,3 Hz, 1H), 6,00 (br, d, J= 7,1 Hz, 1H), 5,43-5,29 (m, 1H), 5,28-5,18 (m, 1H), 4,63- 4,51 (m, 2H), 4,31-4,22 (m, 1H), 4,16-4,04 (m, 1H), 3,78 (br d, J= 13,2 19 Hz, 1H), 3,45 (br, d, J= 13,2 Hz, 1H), 2,80-2,60 (m, 2H); RMN F (376 MHz, D2O) δ ppm -196,95 (s, 1F); RMN P (162 MHz, D2O) δ ppm - 31 1,422 (s, 1P); ESI-MS: m/z = 660,2 [M+H]+. Exemplo 18

Composto 34, sal de sódio Etapa 1: preparação do composto 18b

[0320] THF foi recém-destilado sobre sódio em presença de benzo- fenona e CH3CN foi recém-destilada na presença de CaH2 antes do uso.

[0321] A uma solução de 18a (100 mg, 0,127 mmol) em THF (2 mL), foram adicionadas peneiras moleculares de 4 Å (pó, 0,5 g) e uma solu- ção de 1H-tetrazol (2,25 mL, 0,45 M, preparada por dissolução de 945 mg de tetrazol em 30 mL de CH3CN seco, seguida de adição de 1 g de peneiras moleculares de 4A e então de agitação por 1 hora sob N2 antes do uso); que foi então purgada com N2 várias vezes. Uma solução de 2- cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (61 mg, 0,203 mmol) em THF (0,6 mL) foi adicionada por gotejamento por 5 mm. Após a agi- tação por 4 horas à temperatura ambiente, uma solução de TBHP (124 µL, 0,62 mmol, 5 M em decano) foi adicionada sob N2. Após a agitação por 30 minutos, a mistura de reação foi combinada com uma batelada anterior e filtrada através de um bloco de terra diatomácea e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer um óleo incolor. O óleo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (12 g, 35 mL/mim, primeiramente eluído com 50 a 80% de TBF em éter de petróleo e, então, mudado para 0 a 2% de MeOH em DCM) para forne- cer 18b como um sólido branco (89 mg).RMN 1H (400 MBz, clorofórmio- d) δ 8,82 (s, 2H), 8,60 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,95 (br d, J=7,5 Hz, 2H), 7,81 (br s, 2H), 7,60 -7,50 (m, 1H), 7,47 - 7,37 (m, 3H), 7,37 - 7,28 (m, 2H), 6,95 (s, 1H), 6,36 (br d, J= 17,6 Hz, 2H), 6,23 - 5,80 (m, 2H), 5,67 - 5,39 (m, 1H), 4,87 - 4,56 (m, 3H), 4,53 - 4,37 (m, 3H), 3,84 - 3,67 (m, 2H), 3,48 - 3,32 (m, 1H), 2,87 (br t, J = 5,9 Hz, 4H); RMN 31P (162 MHz, clorofórmio-d) δ -5,30 (s, 1P); ESI-MS: m/z = 923,4 [M+H]+. Etapa 2: preparação do composto 34, sal de sódio

[0322] O composto 18b (98 mg, 0,096 mmol) foi tratado com uma solução de metilamina em EtOH (30% em EtOH, 5 mL). Após a agitação a 40 °C por 1 hora, os solventes voláteis foram evaporados sob pressão reduzida. O sólido branco resultante foi dissolvido em uma mistura de água/CH3CN (15/4 mL), então lavado com DCM (10 mL de x3). A fase aquosa foi liofilizada para fornecer o composto 34 (61 mg) como um sólido branco. ESI-MS: m/z = 662,2 [M+H]+.

[0323] O resíduo foi purificado por HPLC preparativa de fase re- versa (coluna: Xbridge 10 µm 150 x 30 mm, condição: água (10 mM de NH4HCO3)-CH3 CN início B: 8, fim B 38, tempo de gradiente (min): 7, 100% de B, tempo de retenção (min): 0, taxa de fluxo (mL/min): 25) para fornecer o composto 34, sal de amônio como um sólido branco. ESI- MS: m/z = 662,3 [M+H]+. RMN 1H (400 MHz, D2O) δ 8,50 - 8,11 (m, 1H), 8,08 - 7,86 (m, 1H), 7,81 - 7,56 (m, 1H), 6,95 -6,58 (m, 1H), 6,41 - 6,01 (m, 2H), 5,76 - 5,05 (m, 4H), 5,01 - 4,76 (m, 1H), 4,45 - 3,93 (m, 3H), 3,81 - 3,23 (m, 2H); RMN F (376 MHz, D2O) δ -196,50 -197,49, - 19 197,63, -198,85; RMN 31P. (162 MHz, D2O) δ -2,25 (1s, 1P) Preparação do composto 34, sal de sódio

[0324] conversão de sal: Dowex 50W × 8, 200 a 400 (6 mL, forma de H) foi adicionado a um béquer e lavado com água desionizada (30 mL). Então, à resina adicionou-se H2SO4 a 15% em água desionizada, a mistura foi gentilmente agitada durante 5 minutos e decantada (30 mL). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 CV), e então com água desionizada até ficar neutra.

A resina foi transferida de volta para o béquer, NaOH a 15% em solução de água desionizada foi adicionado, e a mistura foi gentilmente agitada durante 5 minutos, e de- cantada (1×). A resina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 CV) e, então, com água desionizada até ficar neutra.

O composto 34, sal de TEAA (44 mg) foi dissolvido em uma mistura de água desionizada: CH3CN (4:1), adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada.

As frações adequadas foram agrupadas e liofilizadas para o composto 34, sal de sódio (43,5 mg) como um sólido branco.

RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,29 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 6,75 (br s, 1H), 6,31 - 6,17 (m, 2H), 5,73 - 5,58 (m, 1H), 5,57 - 5,39 (m, 1H), 5,31 - 5,12 (m, 1H), 4,96 - 4,82 (m, 1H), 4,68 (br d, J = 2,4 Hz, 1H), 4,33 (br d, J= 9,0 Hz, 1H), 4,25 - 4,06 (m, 2H), 3,62 (dd, J= 2,4, 13,4 Hz, 1H), 3,43 (br d, J= 13,0 Hz, 1H); RMN 31P (162 MHz, D2O) δ ppm -2,15 (s, 1P); RMN 19 F (376 MHz, CD3CN) δ - 196,86 (s, 1F), -198,50 (s, 1F); ESI-MS: m/z = 662,2 [M+H]+. Exemplo 19

Etapa 1: preparação do composto 19b

[0325] Imidazol (31 g, 456,1 mmol) e TBSCl (45,8 g, 304,0 mmol) foram sucessivamente adicionados a uma solução de N 6-benzoil-5'-O- (4,4'-dimetoxitritil)-2'-desoxiadenosina (19a, [64325-78-6], 50,0 g, 76,0 mmol) em DMF seco (750 mL). A mistura foi agitada à temperatura am- biente até a completa conversão (cerca de 3 horas) e depois disso a solução de reação foi diluída com EtOAc e lavada com água. A camada orgânica foi seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada até a se- cura sob pressão reduzida. O resíduo bruto obtido foi reprecipitado com DCM e hexano para obter o composto 19b como uma espuma branca (68 g, bruto). ESI-MS: m/z 771,0 [M+H]+. Etapa 2: preparação do composto 19c

[0326] O composto 19b (68,0 g, 88,3 mmol) foi dissolvido em CHCl3 (1564 mL) e resfriado até 0°C. Uma solução de pTSA mono-hidratado (20,1 g, 105,9 mmol) em metanol foi adicionada. A mistura de reação foi agitada durante 30 minutos e depois disso solução aquosa saturada de NaHCO3 que foi adicionada para arrefecer bruscamente. A camada aquosa foi extraída com DCM. As fases orgânicas combinadas foram secas com Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão redu- zida. A purificação foi feita por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 1% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 19c como uma espuma esbranquiçada (27 g). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 11,20 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 8,69 (s, 1H), 8,05 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,65 (t, J= 7,6 Hz, 1H), 7,55 (t, J= 7,6 Hz, 2H), 6,47 (t, J = 6,9 Hz, 1H), 5,06, (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,65 (m, 1H), 3,90 (q, J= 4,1 Hz, 1H), 3,63 (m, 1H), 3,53 (m, 1H), 2,92 (m, 1H), 2,36 (qd, J= 6,4, 2,8 Hz, 1H), 0,92 (s, 9H), 0,13 (s, 6H); ESI-MS: m/z 470,0 [M+H]+. Etapa 3: preparação do composto 19d

[0327] Cloreto de mesila (5,1 mL, 66,7 mmol) foi adicionado por go- tejamento a uma solução do composto 19c (27,0 g, 57,5 mmol) em piri- dina seca (135 mL) a 0°C. A mistura de reação foi agitada a 0°C até a completa conversão C (cerca de 3 horas) e depois disso foi brusca- mente resfriada com metanol e concentrada sob pressão reduzida. O material bruto foi dissolvido em EtOAc e lavado com solução aquosa saturada de NaHCO3. A camada orgânica foi seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer o produto me- silatado. O produto bruto foi dissolvido em DMF seco (256 mL) e a seguir azida de sódio (30,5 g, 468,0 mmol) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada a 60°C durante 5 horas e depois disso foi resfriada até a temperatura ambiente, diluída com EtOAc, e lavada com solução aquosa saturada de NaHCO3 e água. A camada orgânica foi seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada até a secura sob pressão redu- zida. A purificação foi feita por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 1% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 19d como uma espuma (24 g, rendimento: 84%). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 11,19 (s, 1H), 8,77 (s, 1H), 8,70 (s, 1H), 8,05 (d, J= 6,9 Hz, 2H), 7,65 (t, J= 7,2 Hz, 1H), 7,55 (t, J= 7,6 Hz, 2H), 6,51 (t, J= 6,9 Hz, 1H), 4,71 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 3,65 (q, J = 6,4 Hz, 1H), 3,57 (dd, J= 13,1, 4,8 Hz, 1H), 3,06 (m, 1H), 2,41 (qd, J= 6,7, 4,0 Hz, 1H), 0,92 (s, 9H), 0,14 (s, 6H); ESI-MS: m/z 495,0 [M+H]+. Etapa 4: preparação do composto 19e

[0328] Uma solução do composto 19d (10,0 g, 20,2 mmol) em MeOH (100 mL) foi hidrogenada sob pressão atmosférica à temperatura ambiente em Pd/C (20% em carbono, 1 g). A mistura de reação foi fil- trada em terra diatomácea, a terra diatomácea foi enxaguada com MeOH. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir o composto amina como um sólido amarelo (9,4 g, bruto). O produto bruto (9,4 g) foi dissolvido em DCM (395 mL) e a seguir adicionou-se 4-nitro- fenol (8,38 g, 60,2 mmol), Et3N (16,9 mL, 120,4 mmol) e peneiras mole- culares ativadas. A mistura resultante foi resfriada até - 78°C sob N2 e depois disso uma solução de clorossulfato de 4-nitrofenila (14,28 g, 60,2 mmol) em DCM (45 mL) foi adicionada por gotejamento, a agitação foi continuada até a conversão completa (cerca de 2 horas). A mistura de reação foi aquecida até a temperatura ambiente e lavada com solução aquosa saturada de NaHCO3 e água. A fase orgânica foi secada com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica (eluição gra- diente: 0 a 50% de EtOAc em hexano) para resultar n composto 19e como uma espuma (6,4 g, rendimento: 47%). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 11,20 (s, 1H), 9,09 (t, J= 5,9 Hz, 1H), 8,70 (d, J= 2,1 Hz, 2H), 8,29 (td, J= 6,2, 3,9 Hz, 2H), 8,05 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,65 (t, J= 7,2 Hz, 1H), 7,54 (m, 4H), 6,50 (t, J = 6,9 Hz, 1H), 4,66 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 3,51 (dt, J= 14,2, 5,7 Hz, 1H), 3,39 (m, 1H), 3,05 (m, 1H), 2,38 (qd, J= 6,7, 2,8 Hz, 1H), 0,91 (s, 9H), 0,13 (s, 6H); ESI-MS: m/z 670,0 [M+H]+. Etapa 5: preparação do composto 19f

[0329] 5'-O-(4,4'-Dimetoxitritil)-N2-isobutiril-3'-O-metil-D-guanosina ([103285-33-2], 2,5 g, 3,73 mmol), composto 19e (2,9 g, 4,48 mmol) e DMAP (2,27 g, 18,6 mmol) foram, cada um, separadamente dissolvidos em DCM seco (3 x 10,0 mL) e secos em peneiras moleculares de 3 Å ativadas durante pelo menos 2 horas sob uma atmosfera inerte. Em se- guida, as soluções de 5'-O-(4,4'-dimetoxitritil)-N2-isobutiril-3'-O-metil-D- guanosina e composto 22c foram sucessivamente transferidas para o frasco de reação contendo a solução de DMAP. A mistura de reação foi agitada durante 22 horas. As peneiras moleculares foram removidas por filtração e lavadas completamente com diclorometano. O filtrado foi la- vado com solução aquosa saturada de NaHCO3, salmoura e solução aquosa saturada de NH4Cl. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O re- síduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica (eluição gra- diente: 0 a 1% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 19f (2,04 g, rendimento: 45,5%). RMN '1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 12,10 (s, 3H), 11,54 (s, 3H), 11,20 (m, 1H), 8,70 (s, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 8,05 (d, J= 6,9 Hz, 2H), 7,65 (t, J= 7,2 Hz, 1H), 7,56 (t, J= 7,6 Hz, 2H), 7,29 (d, J= 7,6 Hz, 2H), 7,24 (t, J= 7,6 Hz, 2H), 7,18 (t, J= 9,6 Hz, 5H), 6,81 (dd, J= 8,3, 6,2 Hz, 4H), 6,46 (t, J= 6,9 Hz, 1H), 6,16 (d, J = 4,1 Hz,

1H), 5,55 (t, J= 4,8 Hz, 1H), 4,63 (m, 1H), 4,38 (t, J= 5,2 Hz, 1H), 4,12 (q, J= 4,6 Hz, 1H), 3,86 (dd, J= 9,0, 6,2 Hz, 1H), 3,71 (s, 6H), 3,37 (s, 3H), 3,23 (m, 5H), 2,97 (m, 1H), 2,74 (m, 1H), 1,09 (m, 6H), 0,88 (s, 9H), 0,11 (s, 6H); ESI-MS: m/z 1201,0 [M+H]+. Etapa 6: preparação do composto 19g

[0330] Et3N (11,61 mL, 83,3 mmol) e Et3N.3HF (1,35 mL, 8,33 mmol) foram adicionados a uma solução do composto 19f (2,5 g, 2,08 mmol) em piridina (16,5 mL). A mistura de reação foi agitada a 45°C até a completa conversão (cerca de 5 horas) e, então, resfriada até a tem- peratura ambiente. Isopropoxitrimetilsilano (5,9 mL, 33,28 mmol) foi adi- cionado e a agitação foi continuada de um dia para o outro. A concen- tração sob pressão reduzida resultou no composto 5’desprotegido bruto que foi redissolvido em DCM (59,0 mL). Água (0,17 mL, 9,65 mmol) e ácido dicloroacético (6,3 mL de 10% em DCM, 7,72 mmol) foram adici- onados, a mistura de reação resultante foi agitada durante 1 hora (con- versão completa) e depois disso foi bruscamente resfriada pela adição de piridina (0,77 mL, 9,65 mmol) e algumas gotas de metanol. O resíduo obtido após a concentração sob pressão reduzida foi purificado por cro- matografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 9% de MeOH em DCM) para fornecer 19 g de composto (1,4 g, rendimento: 86%). RMN 1H (500 MHz DMSO-d6) δ ppm: 12,08 (s, 3H), 11,62 (s, 3H), 11,19 (s, 1H), 8,70 (s, 1H), 8,60 (s, 1H). 8,25 (s, 1H), 8,05 (d, J= 7,6 Hz, 2H), 7,65 (t, J= 7,2 Hz, 1H), 7,56 (t, J= 7,6 Hz, 2H), 6,42 (t, J= 6,9 Hz, 1H), 6,08 (d, J = 6,2 Hz, 1H), 5,45 (d, J= 4,1 Hz, 1H), 5,38 (dd, J= 6,5, 5,2 Hz, 1H), 5,26 (t, J= 5,2 Hz, 1H), 4,36 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 4,18 (q, J= 2,5 Hz, 1H), 4,10 (m, 1H), 3,79 (td, J= 5,9, 3,2 Hz, 1H), 3,61 (dtd, J= 37,3, 8,3, 3,8 Hz, 2H), 3,41 (s, 3H), 3,09 (d, J= 15,1 Hz, 3H), 2,83 (m, 1H), 2,74 (td, J= 13,4, 6,7 Hz, 1H), 2,33 (qd, J= 6,7, 3,6 Hz, 1H), 1H (q, J= 3,4 Hz, 6H); ESI-MS: m/z 784,0 [M+H]+. Etapa 7: preparação do composto 19h

[0331] Uma solução do composto 19g (500 mg, 0,638 mmol) e 1H- tetrazol (5,59 mL de um 3 a 4% em MeCN) em THF seco (26 mL) foi tratada com peneiras moleculares de 3 Å durante 2 horas sob atmosfera inerte. 2-Cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (250 mg, 0,829 mmol) foi adicionado em uma porção e a mistura de reação foi agitada de um dia para o outro. t-BuOOH (174 µL de solução 5,5 M em decano, 0,96 mmol) foi adicionada e a agitação foi continuada por 1 hora. As peneiras moleculares foram removidas por filtração e extensi- vamente enxaguadas com DCM. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir o composto bruto 19h que foi usado diretamente na etapa seguinte. ESI-MS: m/z 899,5 [M+H]+. Etapa 8: preparação do composto 12, sal de sódio

[0332] O composto bruto 19h foi agitado em uma solução de meti- lamina a 33% em etanol (10 mL) à temperatura ambiente durante 2 ho- ras. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O pro- duto bruto foi triturado em MeCN e, em seguida, purificado por HPLC preparativa em fase reversa (fase estacionária: XBridge C18 OBD, 5 µm, 250 x 30 mm; fase móvel: solução aquosa de 0,25% de bicarbonato de amônia (A) - MeOH (B); eluição gradiente) para produzir o composto 12, sal de amônio. A conversão no sal de sódio foi feita por eluição de uma solução aquosa sobre uma coluna empacotada com resina de troca de íons Na, IR, para produzir o composto 12, sal de sódio como um sólido branco macio após liofilização (43 mg, rendimento: 10%).

[0333] RMN 1H (600 MHz, DMSO-d6, 60°C) δ ppm 10,36 (br s, 1H), 8,54 (br s, 1H), 8,33 (s, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,11 (s, 2 H), 6,76 (br s, 2 H), 6,35 (t, J=6,9 Hz, 1H), 5,98 (br s, 2 H), 5,14 (br s, 1H), 4,28 (br s, 2 H), 4,19 (s, 1H), 4,09 (s, 1H), 3,86 - 3,95 (m, 1H), 3,48 (s, 3H), 3,34 - 3,46 (m, 1H), 3,09 - 3,26 (m, 1H), 2,87 - 2,99 (m, 1H), 2,56 - 2,65 (m, 1H); RMN 31P (162 MHz, DMSO-d6) δ ppm -1,88 (s, 1 P); ESI-MS: m/z 670,2 [M+H]+.

Exemplo 20 Etapa 1: Preparação do composto 20b

[0334] Uma solução de N-benzoil-3’-desóxi-3'-fluoro-adenosina 20a [CAS 129054-67-7] (7,4 g, 18,5 mmol) em piridina seca (138 mL), à qual de DMAP (1,13 g, 9,2 mmol) e DMTrCl (10 g, 29,7 mmol) (em porções) foram adicionados, foi agitada à temperatura ambiente até a conversão completa (5 horas). A mistura de reação foi resfriada rapidamente com metanol (15 mL) e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi dissolvido em acetato de etila e lavado com água. A camada orgânica foi seca em Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. A purificação foi feita por cromatografia em coluna com sílica-gel (elui- ção gradiente: 0 a 2% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 20b como uma espuma branca (9,8 g, rendimento: 78%). RMN 1H (500 MHz DMSO-d6) δ ppm: 3,31 (q, J= 5,0 Hz, 1H), 3,36 (t, J= 5,2 Hz, 1H), 3,73 (s, 6 H), 4,41 (dt, J=26,4, 4,6 Hz, 1H), 5,19 (m, 1H), 5,28 (dd, J=11,7, 7,6 Hz, 1H), 6,09 (dd, J=6,9, 4,8 Hz, 2 H), 6,87 (m, 4 H), 7,24 (m, 7 H), 7,39 (d, J=6,9 Hz, 2 H), 7,56 (t, J=7,6 Hz, 2 H), 7,65 (m, 1H), 8,06 (d, J=6,9 Hz, 2 H), 8,62 (d, J=3,4 Hz, 2 H), 11,27 (s, 1H); ESI-MS: m/z 676,1 [M+H]+. Etapa 2: Preparação do composto 20c

[0335] Um frasco de reação foi carregado com DMAP (2,62 g, 21,4 mmol), DCM seco (50 mL) e peneiras moleculares de 3 Å ativadas. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas sob atmosfera inerte. Simultaneamente, uma solução do composto 20b (2,9 g, 4,29 mmol) e uma solução do composto 19e (3,4 g, 5,15 mmol), cada um em DCM seco (2 x 50 mL), foram secas em peneiras molecu- lares de 3 Å ativadas (cerca de 2 horas). Ambas as soluções (composto 20b e composto 19c respectivamente) foram sucessivamente transferi- das para o frasco de reação. A mistura de reação resultante foi agitada durante 24 horas. As peneiras moleculares foram removidas por filtra- ção e completamente enxaguadas com diclorometano. O filtrado foi la- vado com solução aquosa saturada de NaHCO3, salmoura e solução aquosa saturada de NH4Cl, seco com Na2SO4, filtrado e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em co- luna rápida (eluição gradiente: 0 a 1% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 20c (4,2 g, rendimento: 81%). RMN 1H (500 MHz DMSO -

d6) δ ppm: 11,23 (d, J = 36,5 Hz, 2H), 8,70 (s, 1H), 8,63 (d, J = 20,0 Hz, 2H), 8,53 (s, 1H), 8,04 (q, J= 3,4 Hz, 4H), 7,65 (m, 2H), 7,55 (td, J= 7,6, 4,8 Hz, 4H), 7,35 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,22 (m, 7H), 6,83 (m, 4H), 6,43 (q, J= 7,1 Hz, 2H), 6,05 (td, J= 11,0, 6,2 Hz, 1H), 5,64 (d, J= 54,4 Hz, 1H), 4,53 (m, 2H), 3,88 (t, J= 3,1 Hz, 1H), 3,70 (s, 6H), 3,37 (m, 2H), 3,20 (m, 2H), 2,97 (m, 1H), 0,88 (s, 9H), 0,09 (d, J= 2,1 Hz, 6H); ESI- MS: m/z = 1206 [M+H]+. Etapa 3: Preparação do composto 20d

[0336] Et3N (19,4 mL, 139,4 mmol) e Et3N.3HF (2,2 mL, 13,9 mmol) foram adicionados a uma solução do composto 20d (4,2 g, 3,4 mmol) em piridina (70 mL). A mistura de reação foi agitada a 45°C até a com- pleta conversa (cera de 5 horas) e, então, resfriada até a temperatura ambiente. Isopropoxitrimetilsilano (9,9 mL, 55,7 mmol) foi adicionado e a agitação foi continuada de um dia para o outro. Finalmente a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e purificada por croma- tografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 4% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 20d como uma espuma (3,0 g, ren- dimento: 78%).

[0337] RMN 1H (500 MHz DMSO-d6) δ ppm: 11,21 (s, 1H), 8,70 (s, 1H), 8,62 (d, J= 9,6 Hz, 2H), 8,53 (s, 1H), 8,04 (m, 4H), 7,65 (m, 2H), 7,55 (td, J= 7,7, 3,7 Hz, 4H), 7,36 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,21 (m, 7H), 6,83 (m, 4H), 6,43 (dd, J= 16,2, 6,5 Hz, 2H), 6,04 (td, J= 11,0, 6,2 Hz, 1H), 5,66 (dt, J= 53,5, 3,4 Hz, 1H), 5,46 (s, 1H), 4,49 (dd, J = 24,1, 2,8 Hz, 1H), 4,39 (s, 1H), 3,88 (m, 1H), 3,71 (s, 6H), 3,40 (q, J= 5,3 Hz, 2H), 3,20 (m, 2H), 2,85 (q, J =6,9 Hz, 1H); ESI-MS: m/z 1090 [M+H]+. Etapa 4: Preparação do composto 20e

[0338] O composto 20d (3,0 g, 2,7 mmol) foi dissolvido em DCM (84 mL), água (250 µL, 13,7 mmol) e ácido dicloroacético (9,1 mL, de 10% em DCM, 10,9 mmol) foram adicionados. A mistura de reação resultante foi agitada durante 1 hora (conversão completa) e depois disso ela foi bruscamente resfriada pela adição de piridina (1,1 mL, 13,7 mmol) e algumas gotas de metanol. O resíduo obtido após a concentração sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna com sílica- gel (eluição gradiente: 0 a 6% de MeOH em DCM) para fornecer o com- posto 20e (1,9 g, rendimento: 87%). RMN 1H (500 MHz DMSO-d6) δ ppm: 11,28 (s, 1H), 11,21 (s, 1H), 8,72 (d, J=4,1 Hz, 3H), 8,62 (s, 1H), 8,04 (d, J= 8,3 Hz, 4H), 7,64 (m, 2H), 7,55 (q, J=6,9 Hz, 4 H), 6,40 (m, 2H), 5,53 (t, J= 5,9 Hz, 1H), 5,42 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 4,45 (dt, J=26,9, 3,4 Hz, 1H), 4,35 (s, 1H), 3,79 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 3,68 (d, J= 20,0 Hz, 2H), 3,10 (m, 3H), 2,84 (m, 1H), 2,32 (q, J= 3,4 Hz, 1H); ESI-MS: m/z 790 [M+H]+. Etapa 5: Preparação do composto 20f

[0339] Uma solução do composto 20e (500 mg, 0,63 mmol) e 1H- tetrazol (5,54 mL de 3 a 4% em MeCN) em THF seco (31 mL) foi tratada com peneiras moleculares de 3 Å ativadas durante 2 horas sob uma atmosfera inerte e depois disso 2-cianoetil-N,N,N',N',-tetra(isopropil)fos- forodiamidita (210 mg, 0,70 mmol) foi adicionada em uma única porção. A mistura de reação foi agitada durante 2 horas. Uma quantidade adici- onal de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (95 mg, 0,32 mmol) foi adicionada e a agitação foi continuada de um dia para o outro. tBuOOH (196 µL de solução 5,5 M em decano, 1,08 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada por mais uma hora. As peneiras moleculares foram removidas por filtração e extensivamente enxaguadas com DCM. O filtrado foi lavado com salmoura e solução aquosa saturada de NaHCO3, seco com MgSO4, filtrado e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em co- luna rápida (eluição gradiente: 0 a 10% de MeOH em DCM) para produ- zir o composto 20f (56 mg, rendimento: 10%). ESI-MS: m/z 905,5 [M+H]+. Etapa 6: Preparação do composto 36, sal de sódio

[0340] O composto 20f (56 mg, 0,062 mmol) foi agitado em uma solução de metilamina a 33% em etanol (10 mL) à temperatura ambiente durante 2 horas.

A mistura de reação foi concentrada sob pressão redu- zida.

O produto bruto foi triturado em MeCN e, em seguida, purificado por HPLC preparativa em fase reversa (fase estacionária: XBridge C18 OBD, 5 µm, 250 x 30 mm; fase móvel: solução aquosa de 0,25% de bicarbonato de amônia (A) - MeCN (B); eluição gradiente) para produzir o composto 36, sal de amônio.

A conversão no sal de sódio foi feita por eluição de uma solução aquosa sobre uma coluna empacotada com resina de troca de íons de Na, IR, para produzir o composto 36, sal de sódio como um sólido branco macio após liofilização (17,5 mg, rendi- mento: 42%). RMN 1H (600 MHz, DMSO-d6, 81 °C) δ ppm 8,71 (br s, 1H), 8,34 (br s, 1H), 8,14 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 6,94 (br s, 2 H), 6,90 (br s, 2 H), 6,32 (t, J=7,1 Hz, 1H), 6,22 (br s, 1H), 5,68 (br d, J= 26,8 Hz, 1H), 5,42 (br d, J=51,9 Hz, 1H), 5,10 (br s, 1H), 4,46 (br d, J=25,5 Hz, 1H), 4,10 - 4,19 (m, 1H), 4,04 (br s, 1H), 3,79 (br s, 1H), 3,18 (m, J=11,4 Hz, 1H), 2,92 (s, 1H), 2,53 (br s, 1H); RMN 31 P (162 MHz, DMSO-d6) δ ppm - 1,74 (s, 1 P); ES1-MS: m/z 644,4 [M+H]+. Exemplo 21

Composto 29, sal de sódio Etapa 1: Preparação do composto 21b

[0341] Uma solução de 3'-desóxi-3'-fluoroinosina 21a [CAS 117517- 20-1] (2,2 g, 8,14 mmol) em piridina seca (33 mL), à qual foram adicio- nados (em porções) DMAP (0,49 g, 4,0 mmol) e DMTrCl (4,4 g, 13 mmol) foi agitada à temperatura ambiente até a conversão completa (cerca de 2,5 horas). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com metanol (10 mL) e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi dissolvido em acetato de etila e lavado com água. A camada orgânica foi seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada até a secura sob pressão reduzida. A purificação foi feita por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 2% de MeOH em DCM) para for- necer o composto 21b como uma espuma esbranquiçada (3,3 g, rendi- mento: 71%). RMN 1H (500 MHz DMSO-d6) δ ppm: 8,22 (d, J=2,1 Hz, 1 H), 7,93 (d, J=1,4 Hz, 1H), 7,36 (d, J=8,3 Hz, 2H), 7,28 (t, J=7,6 Hz, 2H), 7,23 (m, 5H), 6,86 (dd, J= 8,3, 6,2 Hz, 4H), 5,92 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,14 (dd, J=54,1, 4,5 Hz, 1H), 5,02 (dq, J=23,2, 3,9 Hz, 1H), 4,35 (dt, J=25,9, 4,3 Hz, 1H), 3,74 (s, 6H), 3,29 (dq, J=37,5, 5,2 Hz, 2H); ESI-MS: m/z 572,0 [M+H]+. Etapa 2: Preparação do composto 21c

[0342] O composto 21b (0,66 g, 1,15 mmol), o sulfamato 17a (1,21 g, 1,38 mmol) e o DMAP (0,704 g, 5,76 mmol) foram, cada um, separa- damente dissolvidos em DCM seco (3 x 20,0 mL) e secos em peneiras moleculares de 3 Å ativadas durante pelo menos 2 horas sob uma at- mosfera inerte. Em seguida, as soluções do composto 21b e de 17a sulfamato foram sucessivamente transferidas para o frasco de reação contendo a solução de DMAP. A mistura de reação resultante foi agitada durante 24 horas. As peneiras moleculares foram removidas por filtra- ção e completamente enxaguadas com diclorometano. O filtrado foi su- cessivamente lavado com solução aquosa saturada de NaHCO3 e solu- ção aquosa saturada de NH4Cl, seco com Na2SO4, filtrado, e concen- trado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida (eluição gradiente: 0 a 2% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 21c como uma espuma esbranquiçada (0,475 g, rendimento: 31%).

[0343] RMN 1H (500 MHz DMSO-d6) δ ppm: 12,47 (s, 1H), 11,23 (s, 1H), 8,66 (s, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,03 (d, J= 7,6 Hz, 2H), 7,84 (s, 1H), 7,65 (t, J=7,2 Hz, 1H), 7,55 (t, J=7,6 Hz, 2H), 7,48

(d, J=7,6 Hz, 2H), 7,36 (q, J= 4,8 Hz, 4H), 7,32 (m, 4H), 7,23 (t, J=7,6 Hz, 4H), 7,19 (t, J=7,9 Hz, 5H), 6,90 (dd, J= 9,0, 6,9 Hz, 4H), 6,81 (dd, J=9,0, 6,2 Hz, 4H), 6,34 (m, 1H), 6,23 (d, J=6,2 Hz, 1H), 5,78 (m, 2H), 5,50 (d, J=53,7 Hz, 1H), 4,72 (m, 2H), 4,43 (d, J=24,1 Hz, 1H), 4,01 (t, J=7,9 Hz, 1H), 3,74 (s, 1H), 3,70 (t, J=2,4 Hz, 12H), 3,25 (dd, J=10,7, 3,8 Hz, 1H), 2,99 (d, J=13,1 Hz, 1H), 2,70 (dd, J=14,5, 9,0 Hz, 1H); ESI- MS: m/z 1310,0 [M+H]+. Etapa 3: Preparação do composto 21d

[0344] Uma solução do composto 21c (0,453 g, 0,34 mmol) em DCM (12,6 mL), à qual foram adicionados DCA (1,14 mL, de 10% em DCM, 1,38 mmol) e água (31 µL, 1,72 mmol), foi agitada à temperatura ambiente até desproteção completa (cerca de 2 horas). A mistura de reação foi resfriada bruscamente mediante a adição de piridina (0,14 mL, 1,72 mmol) e algumas gotas de metanol. A suspensão resultante foi agitada durante 20 minutos, filtrada e seca para obter o composto 21d (0,21 g, rendimento: 86%). RMN 1H (500 MHz DMSO-d6) δ ppm: 12,5 (d, J=3,4 Hz, 1H), 11,25 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 8,69 (t, J=6,0 Hz, 1H), 8,61 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 8,09 (d, J=3,4 Hz, 1H), 8,05 (d, 7,6 Hz, 2H), 7,66 (t, J=7,2 Hz, 1H), 7,56 (t J=7,6 Hz, 2H), 6,32 (dd, J=20,0, 2,1 Hz, 1H), 6,21 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,85 (d, J=6,2 Hz, 1H), 5,60 (m, 1H), 5,49 (m, 3H), 5,34 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,57 (m, 1H), 4,40 (dt, J=26,9, 3,4 Hz, 1H), 3,92 (q, J=6,0 Hz, 1H), 3,65 (t, J=4,1 Hz, 2H), 3,17 (t, J=6,2 Hz, 2H); ESI-MS: m/z 706,0 [M+H]+. Etapa 4: Preparação do composto 21e

[0345] Uma solução do composto 21d (260 mg, 0,37 mmol) e 1H- tetrazol (2,15 mL de um 3 a 4% em MeCN, seco em peneiras molecula- res de 3 Å ativadas) em DMF/THF (1:2, 30 mL, secos em peneiras mo- leculares de 3 Å ativadas) foi tratada com peneiras moleculares de 3 Å durante 2 horas para sob uma atmosfera inerte e depois disso 2-ciano-

etil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (129 µL, 0,41 mmol) foi adi- cionada em uma porção. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Uma quantidade adicional de 2-ciano- etil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (23 µL, 0,074 mmol) foi adi- cionada e a agitação foi continuada por mais um dia para se obter a conversão completa. tBuOOH (134 µL de solução 5,5 M em decano, 0,74 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada por mais uma hora. As peneiras moleculares foram removidas por filtração e en- xaguadas com diclorometano. O filtrado foi lavado extensivamente com água, seco com MgSO4, filtrado e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica (eluição gradiente: 0 a 5% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 21e (20 mg, rendimento: 7%). ESI-MS: m/z 820,4 [M+H]+. Etapa 5: Preparação do composto 29, sal de sódio

[0346] O composto 21e (20 mg, 0,024 mmol) foi agitado em uma solução de metilamina a 33% em etanol (10 mL) à temperatura ambiente até conversão completa (cerca de 1 hora). A mistura de reação foi con- centrada sob pressão reduzida. O produto bruto resultante foi triturado em MeCN e, em seguida, purificado por HPLC preparativa de fase re- versa (fase estacionária: XBridge C18 OBD, 5 µm, 250 x 30 rnm; fase móvel: solução aquosa de 0,25% de bicarbonato de amônia (A) - MeCN (B); eluição gradiente) para produzir o composto 29, sal de amônio. A conversão final no sal de sódio foi feita pela eluição de uma solução aquosa sobre uma coluna empacotada com resina catiônica de troca de íons de Na para fornecer o composto 29, sal de sódio como um sólido 31 branco macio após a liofilização (13,5 mg, rendimento: 80%). RMN P (162 MHz, DMSO -d6) δ ppm -2,06 (s, 1 P); ESI-MS: m/z 663,3 [M+H]+. Exemplo 22

Etapa 1: Preparação do composto 22b

[0347] Uma solução de 6-cloropurina ribosídeo 22a (10,0 g, 34,88 mmol, CAS n° 5399-87-1) em THF (200 mL) foi hidrogenada sob pres- são atmosférica à temperatura ambiente em Pd/C (10% em carbono, 8 g) na presença de K2CO3 (9,64 g, 69,77 mmol). A mistura de reação foi filtrada em terra diatomácea, a terra diatomácea foi sucessivamente en- xaguada com THF e 5:1 de THF/MeOH. Os filtrados combinados foram concentrados sob pressão reduzida para produzir o composto bruto 22b (6,3 g) que foi usado como tal na etapa seguinte. ESI-MS: m/z 253,1 [M+H]+. Etapa 2: Preparação do composto 22c

[0348] Uma solução de composto bruto 22b (6,1 g) e DMTrCl (11,93 g, 35,20 mmol) em piridina seca (300 mL) foi agitada à temperatura am- biente até conversão completa (cerca de 2 horas). A mistura de reação foi diluída com DCM e lavada com salmoura. A camada aquosa foi re- extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas com Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. A purificação foi feita por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 1 a 5% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 22c como um sólido branco (11,7 g). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9,21 (s, 1H), 8,89 (s, 1H), 8,74 (s, 1H), 7,33 (d, J= 6,8 Hz, 2 H), 7,15 - 7,26 (m, 7 H), 6,80 (t, J=9,3 Hz, 4 H), 6,07 (d, J=4,5 Hz, 1H), 5,62 (d, J= 5,6 Hz, 1H), 5,29 (d, J= 5,8 Hz, 1H), 4,78 (q, J= 5,1 Hz, 1H), 4,34 (q, J= 5,3 Hz, 1H), 4,11 (q, J=4,8 Hz, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,21 - 3,25 (m, 2 H); ESI-MS: m/z 555,1 [M+H]+. Etapa 3: Preparação dos compostos 22d e 22e

[0349] Uma solução do composto 22c (6,7 g, 12,1 mmol) em DMF (70 mL) à qual foram adicionados imidazol (2,47 g, 14,5 mmol) e TBSCl (2,19 g, 2,39 mmol) foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura de reação foi diluída com EtOAc e lavada com sal- moura. A fase orgânica foi seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concen- trada até a secura. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica (eluição gradiente: 10 a 33% de EtOAc em éter de petróleo) para produzir o composto 22d (3,3 g, rendimento: 40%) como o primeiro isômero de eluição e o composto 22e (3,5 g, rendimento:

43%) como o segundo isômero de eluição. Composto 22d: RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9,22 (s, 1H), 8,87 (s, 1H), 8,74 (s, 1H), 7,38 (d, J=7,5 Hz, 2 H), 7,16 - 7,29 (m, 7 H), 6,83 (dd, J=8,5, 4,9 Hz, 4 H), 6,09 (d, J= 4,8 Hz, 1H), 5,23 (d, J=6,0 Hz, 1H), 4,89 (t, J=4,9 Hz, 1H), 4,27 (q, J=5,2 Hz, 1H), 4,14 (q, J=4,5 Hz, 1H), 3,72 (s, 6 H), 3,29 (br d, J=4,6 Hz, 2 H), 0,72 (s, 10 H), -0,05 (s, 3H), -0,17 (s, 3H); ESI-MS: m/z 669,2, 1 [M+H]+.

[0350] Composto 22e: RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9,20 (s, 1H), 8,87 (s, 1H), 8,80 (s, 1H), 7,29 - 7,40 (m, 2 H), 7,12 - 7,27 (m, 7 H), 6,82 (m, J=8,8, 6,8 Hz, 4 H), 6,04 (d, J=5,0 Hz, 1H), 5,48 (d, J=6,0 Hz, 1H), 4,92 (q, J= 5,2 Hz, 1H), 4,52 (t, J=4,6 Hz, 1H), 4,05 -4,13 (m, 1H), 3,72 (s, 6 H), 3,36 (dd, J=10,5, 4,5 Hz, 1H), 3,15 (dd, J=10,5, 5,0 Hz, 1H), 0,84 (s, 9 H), 0,09 (s, 3H), 0,05 (s, 3H); ESI-MS: m/z 669,2 [M+H]+. Etapa 4: Preparação do composto 22f

[0351] Peneiras moleculares de 3 Å ativadas foram adicionadas a um frasco de reação carregado com o composto 22e (1,31 g, 1,96 mmol) e sulfamato 17a (1,88 g, 2,14 mmol) em THF seco (85 mL). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas sob at- mosfera inerte. Simultaneamente, uma solução de DMAP (1,2 g, 9,82 mmol) em THF seco (15 mL) foi seca em peneiras moleculares de 3 Å ativadas e depois disso foi transferida para o frasco de reação. A mistura de reação foi agitada a 50°C de um dia para o outro. As peneiras mole- culares foram removidas por filtração e completamente enxaguadas com diclorometano. O filtrado foi lavado com água e solução aquosa saturada de NaHCO3 e água, seco com Na2SO4, filtrado, e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em co- luna rápida (eluição gradiente: 0 a 2% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 22f. Etapa 5: Preparação do composto 22 g

[0352] Uma solução do composto 22f (2,4 g, 1,71 mmol) em DCM

(80 mL), à qual forma adicionados DCA (0,563 mL, 6,83 mmol) e água (154 µL, 8,54 mmol) foi agitada à temperatura ambiente até desproteção completa (cerca de 1 hora). A mistura de reação foi bruscamente resfri- ada mediante a adição de piridina (688 µL, 8,54 mmol) em metanol (1 mL) e lavada com água. A camada orgânica foi submetida à secagem com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida (eluição gra- diente: 0 a 10% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 22g. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11,26 (s, 1H), 9,17 (s, 1H), 8,89 (s, 1H), 8,83 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 8,57 (s, 1 H), 8,44 (t, J= 5,8 Hz, 1H), 8,00 - 8,08 (m, 2 H), 7,61 - 7,75 (m, 1H), 7,49 - 7,59 (m, 2 H), 6,34 (d, J= 6,0 Hz, 1H), 6,28 (dd, J=19,2, 2,1 Hz, 1H), 5,79 (d, J=6,1 Hz, 1H), 5,39 - 5,61 (m, 2 H), 5,21 - 5,32 (m, 1H), 4,69 (dd, J=4,8, 2,8 Hz, 1H), 4,39 - 4,55 (m, 1H), 4,02 (q, J=3,5 Hz, 1H), 3,78 - 3,87 (m, 1H), 3,66 - 3,76 (m, 1H), 3,54 - 3,62 (m, 1H), 2,95 - 3,14 (m, 2 H), 0,91 (s, 9 H), 0,13 (s, 3H), 0,13 (s, 3H); ESI-MS: m/z 801,3 [M+H]+. Etapa 6: Preparação do composto 22h

[0353] Uma solução do composto 22g (100 mg, 0,129 mmol) e1H- tetrazol (2,22 mL de uma solução 0,45 M em MeCN, 0,99 mmol) em THF seco (3 mL) foi tratada com peneiras moleculares de 4 Å durate 5 minu- tos sob N2 e depois disso 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodi- amidita (75 mg, 0,25 mmol) em THF seco (1 mL) foi adicionada por go- tejamento por 10 minutos através de uma seringa (nota: o THF foi re- cém-destilado sobre sódio em presença de benzofenona e a MeCN foi recém-destilada na presença de CaH2 antes do uso). A mistura de rea- ção resultante foi agitada por 1 hora à temperatura ambiente. Uma so- lução de tBuOOH (114 µL de solução 5~6 M em decano, 0,624 mmol) foi adicionada através de uma seringa e a agitação foi continuada du- rante mais 30 minutos. A mistura foi diluída com DCM (20 mL), filtrada através de um bloco de terra diatomácea e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 6% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 22 h (66 mg, 57% de rendimento) como um sólido branco. ESI-MS: m/z 916,3 [M+H]+. Etapa 7: Preparação do composto 22i

[0354] O composto 22 h (66 mg, 0,072 mmol) foi agitado em uma solução de metilamina a 30% em etanol (5 mL) à temperatura ambiente durante 4 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão redu- zida. O resíduo foi dissolvido em água, lavado com DCM e liofilizado. O produto buto foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa (fase estacionária: Agela Durashell C18, 5 µm, 150 x 25 mm; fase móvel: so- lução aquosa de 10 mM de bicarbonato de amônia (A) - MeCN (B); elui- ção gradiente) para produzir o composto 22i (11,6 mg, rendimento: 14,5%). RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 9,57 (d, J=1,5 Hz, 1H), 9,35 (dd, J=1,5, 9,5 Hz, 2H), 8,71 (d, J=1,3 Hz, 1H). 8,09 (d, J=1,8 Hz, 1H), 7,04 (d, J=8,3 Hz, 1H), 6,86 (br, d, J=19,6 Hz, 1H), 6,18 - 5,91 (m, 2H), 5,84-5,65 (m, 1H), 5,24 (br, s, 1H), 4,88-4,80 (m, 3H), 4,74 -4,59 (m, 1H), 4,05 (br, dd, J=5,4, 14,4 Hz, 1H), 3,96-3,81 (m, 1H), 1,44 (d, J=1,3 Hz, 9H), 0,73-0,60 (m, 6H); RMN 19 F (376 MHz, D2O) δ ppm -198,496 (s, 1F); RMN P (162 MHz, D2O) δ ppm -198,496 (s, 1F); ESI-MS: m/z 31 759,2 [M+H]+. Etapa 8: Preparação do composto 49, sal de sódio

[0355] Uma solução do composto 22i (40 mg, 0,053 mmol) em piri- dina (3 mL), à qual foram adicionados Et3N (320 mg, 3,16 mmol) e tri- hidrofluoreto de trietilamina (254 mg, 1,58 mmol), foi agitada a 50°C du- rante 4 horas. A mistura de reação foi resfriada até a temperatura e di- luída com THF (2 mL). Isopropoxitrietilsilano (697 mg, 5,27 mmol) foi adicionado e a agitação foi continuada à temperatura ambiente durante 1,5 hpra. O resíduo, obtido após a concentração sob pressão reduzida, foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (fase estacionária:

XBridge C18 OBD, 5 µm, 150 x 25 mm; fase móvel: solução aquosa de 10 mM de bicarbonato de amônia (A) - MeCN (B); eluição gradiente) para produzir o composto 49, sal de amônio. A conversão final no sal de sódio foi feita pela eluição de uma solução aquosa sobre uma coluna empacotada com resina catiônica de troca de íons de Na para fornecer o composto 49, sal de sódio como um sólido branco macio após a liofilização (22,5 mg, rendimento: 58%).

[0356] RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,95 (s, 1H), 8,76 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 6,73-6,58 (m, 1H), 6,53 (d, J=8,0 Hz, 1H), 6,42-6,33 (m, 1H), 5,93 (br, dd, J=4,3, 7,8 Hz, 1H), 5,50-5,30 (m, 1H), 5,19-5,04 (m, 1H), 4,88-4,81 (m, 1B), 4,55-4,44 (m, 2H), 4,39 - 4,32 (m, 1H), 4,25 (ddd, J=2,3, 4,9, 12,2 Hz, 1H), 3,71 (br, d, J=13,1 Hz, 1H), 3,46 (br, d, J=12,8 Hz, 1H); RMN F (376 MHz, D2O) δ ppm -197, 119 19 (s, 1F); RMN P (162 MHz, D2O) δ ppm -1,984 (s, 1P); ESI-MS: m/z = 31 645,2 [M+H]+. Exemplo 23

Etapa 1: Preparação do composto 23a

[0357] O composto 13a (900 mg, 1,16 mmol) foi dissolvido em uma mistura de ACN anidra (103 mL) e THF anidro (103 mL), 1H-tetrazol (10,2 mL, 3 a 4% em MeCN, seco em peneiras moleculares de 3 Å antes do uso) e peneiras moleculares de 3 Å foram adicionadas. A mistura foi agitada por 2 horas à temperatura ambiente e então 2-cianoetil- N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (0,48 mL, 1,51 mmol) foi adici- onada imediatamente por intermédio de uma seringa. A mistura reacio- nal foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas. Uma quantidade adicional de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (0,48 mL, 1,51 mmol) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada à tem- peratura ambiente durante 1 hora e, então, dissulfeto de fenilacetila (0,7 g, 2,33 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada à tempe- ratura ambiente durante 30 minutos. A mistura de reação foi filtrada. As peneiras moleculares foram lavadas três vezes com diclorometano. O filtrado combinado foi lavado com uma mistura de uma solução saturada de Na2S2O3 e uma solução saturada de NaHCO3, lavado com salmoura, seco com MgSO4, filtrado e os solventes do filtrado evaporados. O resí- duo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 100% de MeOH em DCM) para fornecer o com- posto 23a (152 mg, rendimento: 11%). ESI-MS: m/z 904,3 [M+H]+. Etapa 2: Preparação do composto (*R) 16A e composto (*S) 16B

[0358] O composto 23a (152 mg, 0,12 mmol) em uma solução de metilamina a 33% em etanol (7 mL, 56 mmol) foi agitado a 40°C durante 3 horas. A mistura de reação foi evaporada até a secura sob pressão reduzida. O resíduo foi triturado em 10 mL de acetonitrila anidra. O pre- cipitado foi coletado por filtração e lavado com acetonitrila anidra. Uma purificação/separação dos dois epímeros foi realizada com HPLC pre- parativa de fase reversa (fase estacionária: RP XBridge Prep C18 OBD- 10 µm, 50x150 mm, fase móvel: solução de 0,25% de NH4HCO3 em água, MeOH). Os solventes das duas frações puras foram removidos por liofilização. Os resíduos foram dissolvidos em água e filtrados em um coluna pré-lavada (água) empacotada com uma resina catiônica de troca de íons de sódio para fornecer o composto (*R) 16A, sal de sódio (37 mg, 29% de rendimento) e o composto (*S) 16B, sal de sódio (5 mg, 6% de rendimento), ambos como sólidos brancos.

[0359] Composto (*R) 16A, sal de sódio: RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,58 - 2,69 (m, 1H) 2,95 - 3,07 (m, 1H) 3,41 (dd, J=13,2, 2,6 Hz, 1H) 3,58 - 3,68 (m, 1H) 4,01 (td, J=11,8, 6,5 Hz, 1H) 4,18 (ddd, J=13,5, 11,3, 4,1 Hz, 1H) 4,36 (br d, J=8,1 Hz, 1H) 4,47 - 4,56 (m, 1H) 5,18 - 5,29 (m, 1H) 5,75 - 5,94 (m, 1H) 5,79 (m, J=9,0, 4,1 Hz, 1H) 6,13 (d, J= 3,7 Hz, 1H) 6,37 (d, J=19,1 Hz, 1H) 6,78 (br s, 2 H) 7,15 (br s, 2 H) 7,99 (s, 1H) 8,38 (s, 1H) 9,65 (br s, 1H); ESI-MS: m/z = 677,0 [M+H]+. 31

[0360] Composto (*S) 16B, sal de sódio: RMN P (162 MHz, D2O) δ ppm 55,80 (s, 1 P). ESI-MS: m/z 677,3 M+H]+. Exemplo 24

Etapa 1: Preparação do composto 24a

[0361] O composto 19 g (0,6 g, 0,77 mmol) foi dissolvido em uma mistura de ACN anidra (55 mL) e THF anidro (55 mL), 1H- tetrazol (8,94 mL, 3 a 4% em MeCN, seco em peneiras moleculares de 3 Å antes do uso) e peneiras moleculares de 3 Å foram adicionadas. A mistura foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente e, então, 2-cianoetil- N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (0,24 mL, 0, 77 mmol) foi adi- cionada imediatamente através de seringa. A mistura de reação foi agi- tada à temperatura ambiente durante 2,5 horas e, então, resfriada dis- sulfeto de fenilacetila (PADS, 0,46 g, 1,53 mmol) foi adicionado. A mis- tura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. As peneiras moleculares foram removidas por filtração e enxaguadas com diclorometano. O filtrado combinado foi lavado com uma mistura de uma solução saturada de Na2S2O3 e uma solução saturada de NaHCO3, la- vado com salmoura, seco com MgSO4, filtrado e os solventes do filtrado evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 100% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 24a (184 mg, rendimento: 26%). RMN 1H (400 MHz, DMSO- d6) δ ppm 1,13 (dd, J=6,7, 1,4 Hz, 6 H) 2,69 - 2,87 (m, 2 H) 3,07 (t, J=5,9 Hz, 2 H) 3,25 - 3,30 (m, 1H) 3,35 - 3,47 (m, 2 H) 3,53 (s, 3H) 3,55 - 3,65 (m, 1H) 4,31 - 4,48 (m, 4 H) 4,51 - 4,61 (m, 2 H) 5,14 (dd, J=8,5, 4,1 Hz, 1H) 5,38 - 5,52 (m, 1H) 6,20 (d, J=8,5 Hz, 1H) 6,60 (dd, J=8,5, 6,1 Hz, 1H) 7,56 (t, J=7,4 Hz, 2 H) 7,65 (t, J=7,0 Hz, 1H) 8,05 (d, J=7,5 Hz, 2 H) 8,35 (s, 1H) 8,44 (br s, 1H) 8,73 (s, 1H) 8,76 (s, 1H) 11,22 (br s, 1H) 11,73 (s, 1H) 12,11 (br s, 1H); RMN 31 P (162 MHz, DMSO-d6) δ ppm 65,02 (s, 1 P); ESI-MS: m/z = 915,5 [M+H]+. Etapa 2: Preparação do composto (*R) 13 A, sal de sódio

[0362] O composto 24a (184 mg, 0,2 mmol) em uma solução de me- tilamina a 33% em etanol (10 mL, 81 mmol) foi agitado a 45°C durante 1 hora. A mistura de reação foi evaporada até a secura sob pressão reduzida.

O resíduo foi triturado em 3 mL de acetonitrila anidra.

O pre- cipitado foi coletado por filtração e lavado com acetonitrila anidra.

Uma purificação foi realizada com HPLC preparativa de fase reversa (fase estacionária: RP XBridge Prep C18 OBD-10 µm, 50 x 150 mm, fase mó- vel: solução de 0,25% de NH4HCO3 em água, MeOH). Os solventes das frações puras foram removidos por liofilização.

O resíduo foi dissolvido em água e filtrado em uma coluna pré-lavada (água) preenchida com resina de troca iônica IR120 na forma Na+. Os solventes da solução re- sultante foram removidos por liofilização para produzir o composto (*R) 13a, sal de sódio (93 mg, 66% de rendimento) como um sólido branco.

RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10,59 (br s, 1H), 8,42 (s, 1H), 8,37 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,23 - 7,33 (m, 2 H), 7,28 (br s, 2 H), 6,52 (br s, 2 H), 6,35 (dd, J=8,4, 6,0 Hz, 1H), 6,02 (d, J=8,5 Hz, 1H), 5,48 (br dd, J=8,6, 4,0 Hz, 1H), 5,17 (br s, 1H), 4,36 (br s, 1H), 4,12 (s, 2 H), 3,95 - 4,04 (m, 1H), 3,88 - 3,95 (m, 1H), 3,48 - 3,59 (m, 1H), 3,47 (s, 3H), 3,18 (dd, J=14,0, 4,3 Hz, 1H), 3,06 (ddd, J=13,9, 8,2, 5,9 Hz, 1H), 2,53 - 2,68 (m, 1H); RMN P (162 MHz, DMSO-d6) δ ppm 52,21 (s, 1 P); ESI-MS: 31 m/z 688,3 [M+H]+. Exemplo 25

Etapa 1: Preparação do composto 25a

[0363] O composto 12a (300 mg, 0,38 mmol) foi dissolvido em uma mistura de ACN anidro (33 mL) e THF anidro (33 mL), 1H-tetrazol (4,4 mL, 3 a 4% em MeCN, seco em peneiras moleculares de 3 Å antes do uso) e peneiras moleculares de 3 Å foram adicionadas. A mistura foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente e, então, 2-cianoetil- N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (0,12 mL, 0,38 mmol) foi adici- onada imediatamente através de seringa. A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente por 4,5 horas. Uma quantidade adicional de 2- cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (0,06 mL, 0,19 mmol) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas e então dissulfeto de fenilacetila (0,23 g, 0,75 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada a 90°C durante 2 horas. A mistura de reação foi filtrada. As peneiras moleculares foram lavadas três vezes com diclorometano. O filtrado combinado foi lavado com uma mistura de uma solução saturada de Na2S2O3 e uma solução saturada de NaHCO3, lavado com salmoura, seco com MgSO4, filtrado e os sol- ventes do filtrado evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 10% de MeOH em DCM) para fornecer 25a (103 mg, 27% de rendimento). ESI-MS: m/z 921,4 [M+H]+. Etapa 2: preparação do composto (*R) 31A, sal de sódio e do com- posto (*S) 31B, sal de sódio

[0364] O composto 25a (103 mg, 0,1 mmol) foi colocado em solução de metilamina a 33% em etanol (6 mL, 58,4 mmol) foi agitada a 45°C durante 1 hora. A mistura de reação foi evaporada até a secura sob pressão reduzida. O resíduo foi triturado em 10 mL de acetonitrila ani- dra. O precipitado foi coletado por filtração e lavado com acetonitrila ani- dra. Uma purificação/separação dos dois epímeros foi realizada com HPLC preparativa de fase reversa (fase estacionária: RP XBridge Prep

C18 OBD-10 µm, 30 50x150 mm, fase móvel: solução de 0,25% de NH4HCO3 em água, MeOH). Os solventes das duas frações puras foram removidos por liofilização. Os resíduos foram dissolvidos em água e fil- trados em uma coluna pré-lavada (água) preenchida com uma resina catiônica de troca de íons de sódio. Os solventes das soluções resultan- tes foram liofilizados para resultar nos compostos 31A e 31B, cada um como um sólido branco.

[0365] Composto (*R) 31A, sal de sódio (42 mg, 57% rendimento). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3,36 - 3,51 (m, 2 H) 3,88 (m, J= 9,8 Hz, 1H) 4,12 - 4,23 (m, 2 H) 4,55 (d, J=1,0 Hz, 1H) 5,19 (br t, J=13,0 Hz, 1H) 5,26 - 5,61 (m, 3H) 6,04 (br d, J= 8,1 Hz, 1H) 6,37 - 6,48 (m, 1H) 6,53 (br s, 2 H) 7,35 (br s, 2 H) 8,16 (s, 1H) 8,22 (d, J=2,8 Hz, 1 H) 8,34 (s, 1H), RMN 31P (162 MHz, DMSO-d6) δ ppm 52,43 (s, 1 P); +ESI-MS: m/z 694,3 [M+H]+.

[0366] Composto (*S) 31B, sal de sódio (3 mg, 4% de rendi- mento). RMN P (162 MHz, D2O) δ ppm 55,20 (s, 1 P); ESI-MS: m/z 31 694,3 [M+H]+. Exemplo 26

Etapa 1: Preparação do composto 26b

[0367] Clorotrimetilsilano (5,53 mL, 43,7 mmol) foi adicionado por gotejamento a uma solução de 26a [CAS 847648-20-8] (2,6 g, 8,74 mmol) em piridina seca (26 mL) a 0°C. A solução de reação foi agitada à temperatura ambiente por 30 minutos e depois disso ela foi resfriada novamente até 0°C. Cloreto de isobutirila (4,58 mL, 43,7 mmol) foi adi- cionado por gotejamento durante um período de 15 minutos e a agitação foi continuada à temperatura ambiente até a completa conversão. A re- ação foi resfriada até 0°C, água foi adicionada, seguida pela adição de amônia aquosa (26%, 18 mL) após 20 minutos, a agitação foi continu- ada à temperatura ambiente durante 2 horas. A solução de reação foi neutralizada com ácido acético e concentrada sob pressão reduzida. A purificação foi realizada por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 7% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 26b como um sólido esbranquiçado (1,3 g, rendimento: 40%). RMN 1H (500 MHz DMSO-d6) δ ppm: 12,10 (s, 1H), 11,71 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 5,93 (d, J=4,1 Hz, 1H), 4,80 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,50 (t, J=2,1 Hz, 1H), 4,23 (q, J= 5,0 Hz, 1H), 3,78 (q, J= 2,1 Hz, 1H), 3,71 (m, 1H), 3,63 (m,

1H), 3,37 (s, 3H), 2,78 (m, 1H), 1,23 (d, J= 4,8 Hz, 1H), 1,12 (d, J= 6,9 Hz, 6H); ESI-MS: m/z 367,9 [M+H]+. Etapa 2: Preparação do composto 26c

[0368] Uma solução do composto 26b (1,75 g, 4,76 mmol) em piri- dina seca (35 mL), à qual foram adicionados (em porções) DMAP (0,29 g, 2,38 mmol) e DMTrCl (2,41 g, 7,14 mmol) foi agitada à temperatura ambiente até conversão completa (cerca de 1,5 hora). A mistura de re- ação foi resfriada rapidamente com metanol (15 mL) e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi dissolvido em acetato de etila e lavado com água. A camada orgânica foi seca com Na2SO4 anidro, fil- trada e concentrada até a secura sob pressão reduzida. A purificação foi realizada por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradi- ente: 0 a 2,5% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 26c como uma espuma marrom pálida (3,1 g, rendimento: 96%). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 11,89 (d, J= 177,0 Hz, 2H), 7,75 (s, 1H), 7,39 (d, J= 7,6 Hz, 2H), 7,25 (m, 7H), 6,86 (m, 4H), 5,98 (d, J= 4,1 Hz, 1H), 5,83 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 4,49 (m, 2H), 3,82 (q, J= 2,1 Hz, 1H), 3,73 (d, J= 2,8 Hz, 6H), 3,27 (s, 3H), 3,22 (m, 1H), 2,78 (m, 1H), 1,12 (dd, J= 6,9, 2,1 Hz, 6H); ESI-MS: m/z 669 [M+H]+. Etapa 3: Preparação do composto 26d

[0369] Um frasco de reação foi carregado com DMAP (0,35 g, 2,9 mmol), DCM seco (10 mL) e peneiras moleculares de 3 Å ativadas. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas sob atmosfera inerte. Simultaneamente, uma solução do composto 26c (0,38 g, 0,57 mmol) e uma solução de sulfamato 17a (0,6 g, 0,69 mmol), cada uma em DCM seco (2 x 10 mL), foram secas em peneiras molecu- lares de 3 Å ativadas (cerca de 2 horas). Ambas as soluções (composto 26c e sulfamato 17a respectivamente) foram sucessivamente transferi- das para o frasco de reação. A mistura de reação resultante foi agitada durante 24 horas. As peneiras moleculares foram removidas por filtra- ção e completamente enxaguadas com diclorometano. O filtrado foi la- vado com solução aquosa saturada de NaHCO3, salmoura e solução aquosa saturada de NH4Cl, seco com Na2SO4, filtrado e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em co- luna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 1% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 26d como uma espuma (0,44 g, rendimento: 55%). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 12,12 (s, 1H), 11,69 (s, 1H), 11,22 (s, 1H), 8,63 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 8,02 (d, J= 6,9 Hz, 2H), 7,64 (q, J = 7,3 Hz, 2H), 7,55 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 7,49 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,36 (m, 8H), 7,23 (m, 8H), 6,92 (t, J = 9,6 Hz, 4H), 6,84 (dd, J= 13,8, 9,0 Hz, 4H), 6,28 (d, J= 19,3 Hz, 1H), 6,05 (d, J= 1,0 Hz, 1H), 5,15 (s, 1H), 4,97 (m, 1H), 4,85 (d, J = 22,0 Hz, 1H), 4,40 (q, J =5,0 Hz, 1H), 3,98 (m, 2H), 3,70 (t, J= 3,1 Hz, 12H), 3,23 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 3,13 (s, 3H), 2,79 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 1,10 (d, J= 5,5 Hz, 6H); ESI-MS: m/z 1406 [M+H]+. Etapa 4: Preparação do composto 26e

[0370] Uma solução do composto 26d (430 mg, 0,3 mmol) em DCM (12 mL), à qual se adicionou DCA (1,0 mL de 10% em DCM, 1,2 mmol) e água (27 µL, 1,5 mmol), foi agitada à temperatura ambiente até com- pleta desproteção (cerca de 1 hora). A mistura de reação foi brusca- mente resfriada mediante a adição de piridina (120 µL, 1,5 mmol) e al- gumas gotas de metanol. O resíduo obtido após a concentração sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna com sílica (eluição gradiente: 0 a 8% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 26e como um pó branco (225 mg, rendimento: 92%). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 12,11 (s, 1H), 11,67 (s, 1H), 11,25 (s, 1H), 8,73 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 8,04 (d, J= 6,9 Hz, 2H), 7,87 (s, 1H), 7,65 (t, J= 7,6 Hz, 1H), 7,55 (t, J= 7,9 Hz, 2H), 6,29 (dd, J= 19,6, 1,7 Hz, 1H), 6,04 (s, 1H), 5,92 (s, 1H), 5,58 (m, 1H), 5,22 (s, 1H), 4,92 (d, J= 10,3 Hz, 1H), 4,62 (m, 1H), 4,17 (q, J= 5,0 Hz, 1H), 4,10 (t, J=2,1 Hz, 1H), 4,02 (td, J=

7,2, 2,5 Hz, 1H), 3,70 (m, 1H), 3,61 (m, 1H), 3,45 (m, 1H), 3,37 (s, 3H), 3,06 (q, J= 7,3 Hz, 1H), 2,77 (m, 1H), 1,12 (dd, J= 6,9, 2,1 Hz, 6H): ESI- MS: m/z 801,0 [M+H]+. Etapa 5: Preparação do composto 26f

[0371] Uma solução do composto 26e (220 mg, 0,27 mmol) e 1H- tetrazol (3,2 mL, 3 a 4% em MeCN, seco com peneiras moleculares de 3 Å antes do uso) em 1:1 de MeCN / THF (48 mL, pré-secos em peneiras moleculares de 3 Å ativadas) foi tratada com peneiras moleculares de 3 Å ativadas durante 1 hora e depois disso 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(iso- propil)fosforodiamidita (87 µL, 0,27 mmol) foi adicionada imediatamente. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente du- rante 22 horas. Dissulfeto de fenilacetila (PADS, 0,45 g, 1,5 mmol) foi adicionado e a agitação foi continuada por mais uma hora. As peneiras moleculares foram removidas por filtração e enxaguadas com dicloro- metano. Os filtrados combinados foram subsequentemente lavados com uma mistura 1:1 de uma solução aquosa saturada de Na2S2O3 e solução aquosa saturada de NaHCO3, e salmoura, secos com MgSO4, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 10% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 26f (55 mg, rendimento: 21%). ESI-MS: m/z 933,5 [M+H]+. Etapa 6: Preparação do composto (*R) 7A, sal de sódio e do composto (*S) 7B, sal de sódio

[0372] O composto 26e (55 mg, 0,059 mmol) foi agitado em uma solução de metilamina a 33% em etanol (4 mL) em 45°C até a completa conversão (cerca de 1 horas) e depois disso a solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente e concentrada sob pressão redu- zida. O produto bruto foi triturado em MeCN, o precipitado obtido foi adi- cionalmente purificado por HPLC preparativa de fase reversa (fase es- tacionária: XBridge C18 OBD, 5 µm, 250 x 30 mm; fase móvel: solução aquosa de 0,25% de bicarbonato de amônia (A) - MeOH (B); eluição gradiente) resultando na separação de ambos os epímeros P: com- posto (*R) 7A, sal de amônio como o primeiro isômero que eluiu e o composto (* S) 7B, sal de amônio como o segundo isômero de elui- ção. A conversão final no sal de sódio foi feita por eluição de uma solu- ção aquosa por uma coluna empacotada com uma resina catiônica de troca de íons de Na para fornecer o composto (*R) 7A, sal de sódio (rendimento: 7 mg, 16%) como um sólido branco e o composto (*S) 7B, sal de sódio (rendimento: 4 mg, 9%) como um sólido branco.

[0373] Composto (*R) 7A, sal de sódio. RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 3,31 (br d, J=112,2 Hz, 1H), 3,50 (s, 3H), 3,52 - 3,57 (m, 1H), 4,28 - 4,50 (m, 4 H), 4,74 (s, 1H), 4,97 - 5,08 (m, 1H), 5,29 (s, 1H), 5,72 (dd, J=50,5, 3,7 Hz, 1H), 6,15 (s, 1H), 6,30 (d, J=18,7 Hz, 1H), 7,76 (s, 1H), 8,10 (s, 1H), 8,21 (s, 1H); RMN 31 P (162 MHz, D2O) δ ppm 55,05 (s, 1 P); ESI-MS: m/z 706,0 [M+H]+.

[0374] Composto (*S) 7B, sal de sódio. RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,43 (br s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), 6,37 (d, J=19,1 Hz, 1H), 6,14 (s, 1H), 5,52 (dd, J=50,7, 4,3 Hz, 1H), 5,26 (br s, 1H), 4,87 - 4,99 (m, 2 H), 4,64 - 4,70 (m, 1H), 4,49 (ddd, J=10,5, 4,9, 2,7 Hz, 1H), 4,39 (br d, J=8,8 Hz, 1H), 4,23 (dt, J=23,8, 10,7 Hz, 1H), 3,57 (br dd, J=14,1, 3,5 Hz, 1H), 3,47 (s, 3H), 3,33 (br d, J=13,9 Hz, 1H); RMN 31P (162 MHz, D2O) δ ppm 56,4 (s, 1 P); ESI-MS: m/z 706,1 [M+H]+. Exemplo 27

Etapa 1: Preparação do composto 27a

[0375] Nota: o THF foi recém-destilado sobre sódio em presença de benzofenona e a CH3CN foi recém-destilada na presença de CaH2 antes do uso.

[0376] A uma solução de 17d (400 mg, 0,518 mmol) em tetra-hidro- furano (14 mL) adicionou-se peneiras moleculares de 4 Å (pó, 2g) e a mistura foi agitada durante 20 minutos. Após 20 minutos, uma solução de 1H-tetrazol (0,45 M em acetonitrila, 9,2 mL) foi adicionada a 25°C, seguida pela adição de uma solução de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(iso- propil)fosforodiamidita (0,31 g, 1,037 mmol, diluída em 2 mL de THE) a 25 °C. Após a agitação durante 1,5 hora à temperatura ambiente, (E)- N,N-dimetilN'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (DDTT, 0,453 g, 2,205 mmol, diluído em 10 mL de Py) foi adicionada a 25°C e a solução foi agitada durante 1,5 hora. A mistura de reação foi concen- trada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi pu- rificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 15% de MeOH em DCM) para fornecer 27a (80 mg) como um sólido amarelo- claro. ESI-MS: m/z = 902,9 [M+H]+.

Etapa 2: Preparação do composto (*R) 44A, sal de sódio e do com- posto (*S) 44B, sal de sódio

[0377] Uma solução do composto 3r (80 mg, 0,09 mmol) em metila- mina (50% em EtOH, 5,0 mL) foi agitada a 25°C durante 4 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. Separação por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: Xbridge 150 x 30 mMµx 10 m, condição: água (10 mM de NH4HCO3)VCH3CN início B: 5, fim B 20, tempo de gradiente (min): 7, 100% de B, tempo de retenção(min): 0, taxa de fluxo (mL/min): 25) fornecido o composto (*R) 44A, sal de amô- nio (19 mg) e o composto (*S) 44B, sal de amônio (1,5 mg), ambos como um sólido branco. A conversão final de ambos os compostos em seu sal de sódio correspondente foi feita por eluição de uma solução aquosa por uma coluna empacotada com uma resina catiônica de troca de íons de Na.

[0378] Composto (*R) 44A, sal de sódio (27 mg).

[0379] RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,22 (br, s, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,29 (br, s, 1H), 6,57 -6,50 (m, 1H), 6,05-5,98 (m, 2H), 5,94-5,78 (m, 1H), 5,31-5,13 (m, 1H), 4,70 (br, d, J = 7,5 Hz, 1H), 4,60 (br, d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,26 (br, dd, J= 4,3, 11,5 Hz, 1H), 4,19 - 4,11 (m, 1H), 3,85 (br, d, J = 13,3 Hz, 1H), 3,56 (br, d, J= 13,3 Hz, 1H), 2,81 - 2,63 (m, 2H); RMN 19 F (376 MHz, D2O) δ -195,872 (s, 1F) ppm; RMN 31 P (162 MHz, D2O) δ 52,528 (s, 1P) ppm; ESI-MS: m/z 676,0 [M+H]+.

[0380] Composto (*S), 44B, sal de sódio (1,8 mg).

[0381] RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,20 (s, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,28 (s, 1H), 6,59-6,46 (m, 1H), 6,22-6,14 (m, 1H), 5,97 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 5,53-5,34 (m, 2H), 4,66-4,54 (m, 2H), 4,34 (br, t, J = 11,5 Hz, 1H), 4,11 (br, dd, J = 4,6, 11,9 Hz, 1H), 3,77 (br, d, J = 13,3 Hz, 1H), 3,45 (br, d, J = 13,3 Hz, 1H), 3,02 (q, J = 7,3 Hz, 1H), 2,76-2,66 (m, 1H), 2,78 - 2,65 (m, 1H), 2,58 (br, dd, J= 7,8, 12,5 Hz, 1H), 1,26-1,h18 (m, 1H), 1,27- 19 1,17 (m, 1H), 1,22 (br t, J= 7,3 Hz, 1H), 1,32 - 1,10 (m, 1H); RMN F

(376 MHz, D2O) δ ppm -195,902 (s, 1F); RMN 31 P (162 MHz, D2O) δ ppm 56,151 (s, 1P); ESI-MS: m/z = 677,0 [M+H]+. Exemplo 28 Etapa 1: preparação do composto 28a

[0382] Nota: o THF foi recém-destilado sobre sódio em presença de benzofenona e a CH3CN foi recém-destilada na presença de CaH2 antes do uso.

[0383] A uma solução de 18a (430 mg, 0,532 mmol, seca por liofili- zação) em tetra-hidrofurano (9 mL) adicionou-se peneiras moleculares de 4 Å (pó, 2 g) e a mistura foi agitada durante 20 minutos. Após 20 minutos, uma solução de 1H-tetrazol (0,45 M em acetonitrila, 9,46 mL, preparada pela dissolução de 945 mg de tetrazol (seco por liofilização) em 30 mL de CH3CN seco, seguida pela adição de 1,5 g de peneiras moleculares de 4 Å e então agitação durante l hora sob N2 antes do uso) foi adicionada a 25°C, purgada várias vezes com N 2, seguida pela adi- ção por gotejamento de uma solução de 3- ((bis(di-isopropilamino)fos- fino)óxi) propanonitrila (0288 mg, 0,958 mmol, diluída em 2 mL de THF) por 30 minutos a 25°C para gerar uma suspensão branca. Após a agi- tação durante 1,5 horas à temperatura ambiente, uma solução de DDTT (655 mg, 3,19 mmol) em piridina (10 mL) foi adicionada a 25°C e a so- lução foi agitada durante 30 minutos. A mistura de reação foi combinada com uma outra batelada, filtrada através de um bloco de terra diatomá- cea, concentrada sob pressão reduzida para resultar em um resíduo amarelo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida (0 a 2% de MeOH em DCM) para fornecer 28a (260 mg) como um sólido branco. ESI-MS: m/z 939,1 [M+H]+. Etapa 2: preparação do composto (*R) 42A, sal de amônio e do com- posto (*S) 42B, sal de amônio

[0384] Uma solução do composto 28a (130 mg, 0,138 mmol) em metilamina (27 a 32% em EtOH, 5,0 mL) foi agitada à temperatura am- biente durante 2 horas. A mistura de reação foi combinada com uma outra batelada e a mistura foi evaporada sob pressão reduzida para for- necer um sólido branco; o sólido foi dissolvido em água (30 mL) e, então, lavado com DCM (20 mL x 4). A camada aquosa foi liofilizada para pro- duzir um sólido branco (190 mg). O sólido branco foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: Xbridge 150 x 30 mm x 5 pm, condição: água (10 mM de NH4HCO3)-CH3CN início B: 5, fim B 35, tempo de gradiente(min): 7, 100% de B, tempo de retenção(min): 0, taxa de fluxo (mL/min): 25) para fornecer o composto (*R) 42A, sal de amô- nio (70 mg) como um sólido branco e o composto (*S) 42B, sal de amônio (12 mg) como um sólido branco.

[0385] Composto (*R) 42A, sal de amônio. RMN 1H (400 MHz, D2O) δ 8,96 (s, 1H), 8,23 (d, J= 7,1 Hz, 2H), 7,25 (s, 1H), 6,58 - 6,41 (m, 2H), 5,90 - 5,58 (m, 3H), 5,33 - 5,12 (m, 1H), 4,93 - 4,77 (m, 1H), 4,41 - 4,24 (m, 2H), 3,86 (br dd, J=2,8. 13,1 Hz, 1H), 3,66 (br d, J=13,2 Hz, 1H); RMN 19 F (376 MHz, D2O) δ7 ppm -196,52 (s, 1F), -198,72 (s, 1F); RMN 31 P. (162 MHz, D20) δ ppm 54,24 (s, 1P); ESI-MS: m/z = 678,2 [M+H]+.

[0386] Composto (*S) 42B, sal de amônio. RMN 1H (400 MHz, D2O) δ8,54 (br s, 1H), 8,15 (br s, 1H), 7,97 (br s, 1H), 7,14 (br s, 1H), 6,40 (br s, 2H), 5,95 - 5,71 (m, 1H), 5,94 - 5,69 (m, 1H), 5,68 - 5,33 (m, 1H), 5,70 - 5,32 (m, 1H), 5,19 (br s, 1H), 4,13 (br s, 2H), 3,72 (br s, 1H), 3,57 (br d, J=12,7 Hz, 1H); RMN 19F (376 MHz, D2O) δ ppm -195,66 (s, 1F), -198,44 (s, 1F); RMN 31P (162 MHz, D2O) δ ppm 55,09 (s, 1P); ESI- MS: m/z 678,1 [M+H]+. Conversão de sal de sódio

[0387] Dowex 50W × 8, 200 a 400 (12 mL, forma de H) foi adicio- nado a um béquer e lavado com água desionizada (30 mL). Então, à resina adicionou-se H2SO4 a 15% em água desionizada, a mistura foi gentilmente agitada durante 5 minutos e decantada (30 mL). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 CV), e então com água desio- nizada até ficar com um pH neutro. A resina foi transferida de volta para o béquer, NaOH a 15% em solução de água desionizada foi adicionado, e a mistura foi gentilmente agitada durante 5 minutos, e decantada (1×). A resina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 CV) e, então, com água desionizada até ficar com um pH neutro. O composto (*R) 42A, sal de amônio (92 mg em 20 mL/9 mL) foi dissolvido em uma quantidade mínima de água desionizada e CH3CN (1:1, v/v), adicionado ao topo da coluna, e eluído com água de- sionizada. As frações adequadas foram agrupadas e liofilizadas para fornecer o composto (*R) 42A, sal de sódio (72,4 mg) como um sólido branco.

[0388] RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,96 (br s, 1H), 8,24 (br d, J=13,2 Hz, 2H), 7,13 (s, 1H), 6,62 - 6,41 (m, 2H), 5,95 - 5,64 (m, 3H), 5,27 - 5,06 (m, 1H), 5,02 - 4,89 (m, 1H), 4,63 (br d, J= 8,3 Hz, 1H), 4,39 (br s, 2H), 3,92 (br d, J=11,5 Hz, 1H), 3,72 (br d, J=13,2 Hz, 1H); RMN 19 F (376 MHz, D2O) δ ppm -196,32 (s, 1F), -198,94 (s, 1F); RMN 31

P (162 MHz, D2O) δ ppm 54,05 (s, 1P); ESI-MS: m/z = 678,1 [M+H]+.

[0389] Usando-se o procedimento anterior para conversão de sal de sódio, o composto (*S) 42B, sal de sódio (6,9 mg) foi obtido como um sólido branco.

[0390] RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,63 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 6,56 - 6,39 (m, 2H), 5,95 - 5,77 (m, 1H), 5,73 - 5,58 (m, 1H), 5,58 - 5,45 (m, 1H), 5,58 -5,44 (m, 1H), 5,36 - 5,22 (m, 1H), 4,91 - 4,78 (m, 1H), 4,53 (br dd, J=6,1, 11,0 Hz, 1H), 4,19 (br d, J=11,7 Hz, 1H), 4,25 - 4,13 (m, 1H), 3,79 (dd, J=4,0, 13,6 Hz, 1H), 3,71 19 - 3,70 (m, 1H), 3,66 - 3,66 (m, 1H), 3,68 - 3,59 (m, 1H); RMN F (376 MHz, D2O) δ ppm -195,10 - 196,43 (m, 1F), -198,17 (td, J=25,9, 52,5 Hz, 1F); RMN 31P (162 MHz, D2O) δ 55,26 (s, 1P); ESI-MS: m/z = 678,1 [M+H]+. Exemplo 29

Etapa 1: preparação do composto 29b

[0391] A uma solução do composto 29a (13 g, 49,94 mmol) em piri- dina (10,06 mL, 124,86 mmol) e diclorometano (300 mL) adicionou-se por gotejamento anidrido triflico (10,92 mL, 64,93 mmol) a 0°C. Após a agitação da reação a 0°C durante cerca de 1 hora, a mistura foi diluída com DCM (100 mL), lavada com água (200 mL), salmoura (200 mL), submetida à secagem com MgSO4 anidro, filtrada e evaporada até a secura para fornecer 29b (20,4 g) como um óleo amarelo, usado na etapa seguinte sem qualquer purificação adicional. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 6,07 (d, J= 3,6 Hz, 1H), 5,35 (d, J= 1,6 Hz, 1H), 4,85 (d, J= 3,8 Hz, 1H), 4,32 - 4,19 (m, 3H), 4,06 (dd, J= 3,90, 8,8 Hz, 1H), 1,61 (s, 3H),

1,51 (s, 3H), 1,42 (d, J= 2,6 Hz, 6H). Etapa 2: Preparação do composto 29c

[0392] A uma solução do composto 29b (20,4 g, 51,99 mmol) em tolueno (500 mL) adicionou-se por gotejamento n-BU4NBH4 (40,13 g, 155,98 mmol) a 25°C. Após a agitação a 80°C por 6 horas, a mistura de reação foi lavada com água (200 mL), salmoura (200 mL), submetida à secagem com MgSO4 anidro, filtrada e evaporada até a secura para produzir um óleo amarelo. O óleo resultante foi purificado por cromato- grafia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 20% de EA em PE) para produzir o composto 29c (6,4 g) como um óleo incolor. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 5,83 (d, J= 3,8 Hz, 1H), 4,77 (t, J= 4,1 Hz, 1H), 4,23 - 4,08 (m, 3H), 3,89-3,76 (m, 1H), 2,19 (dd, J= 3,9, 13,4 Hz, 1H), 1,82- 1,73 (m, 1H), 1,52 (s, 3H), 1,43 (s, 3H), 1,35 (d, J= 15,3 Hz, 6H). Etapa 3: Preparação do composto 29d

[0393] Uma solução do composto 29c (13,4 g, 54,85 mmol) em AcOH / água (V/V, 1:1, 200 mL) foi agitada durante 12 horas a 25°C. A solução de reação foi concentrada e coevaporada com tolueno (2 x 40 mL) para produzir o composto 29d (11,4 g) como um óleo incolor, usado diretamente para a etapa seguinte sem qualquer purificação adicional. Etapa 4: Preparação do composto 29e

[0394] A uma solução de 29d (11,4 g, 8,81 mmol) em MeOH (200 mL) e água (100 mL) adicionou-se periodato de sódio (17,91 g, 83,73 mmol). Após a agitação por 2 h a 25°C, a mistura de reação foi filtrada e o filtrado diluído com solução aquosa saturada de Na2S2O3 (50 mL); a mistura foi, então, concentrada para remover MeOH. O resíduo foi par- ticionado com 2-Me-THF (200 mL), a camada aquosa foi extraída com 2-Me-THF (5 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram la- vadas com salmoura, secas (Na2SO4 anidro), filtradas e concentradas até a secura para fornecer o composto 29e (11 g) como um óleo ama- relo, que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.

Etapa 5: Preparação do composto 29f

[0395] A uma solução de 29e (11 g, 9,29 mmol) em MeOH (200 mL) adicionou-se boro-hidrato de sódio (2,9 g, 76,66 mmol). Após a agitação durante 1 hora a 0°C, a mistura de reação foi bruscamente resfriada com solução aquosa saturada de NH4Cl (60 mL), e a mistura foi concen- trada para remover o MeOH. O resíduo foi liofilizado para fornecer o bruto 29f. O produto bruto foi misturado com MeOH/DCM (v/v, 10:1, 200 mL), então filtrado e concentrado sob pressão reduzida para fornecer um resíduo purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica- gel (0 a 60% de PE em EA) para produzir o composto 29f (5,3 g) como um sólido amarelo. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 5,83 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 4,77 (t, J= 4,2 Hz, 1H), 4,41 - 4,30 (m, 1H), 3,90 (br d, J= 12,0 Hz, 1H), 3,57 (br d, J= 12,0 Hz, 1H), 2,01 (dd, J= 4,5, 13,3 Hz, 1H), 1,89 - 1,81 (m, 2H), 1,33 (s, 3H). Etapa 6: Preparação do composto 29 g

[0396] Anidrido acético (6,51 mL, 68,9 mmol) e ácido sulfúrico con- centrado (36,91 uL, 0,69 mmol) foram adicionados a uma solução agi- tada do composto 29f (1,2 g, 6,89 mmol) em ácido acético (39,4 mL, 688,89 mmol) a 0°C. Após agitação durante 1 hora à temperatura ambi- ente, a mistura de reação foi bruscamente resfriada com água fria (100 mL), agitada por 30 minutos à temperatura ambiente e extraída com acetato de etila (3x60 mL). A camada orgânica foi sucessivamente la- vada com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (3 x 90 mL), solução de salmoura (2 x 90 mL), seca com sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para resultar em um resí- duo. O resíduo (combinado com sílica-gel: 4 g) foi purificado por croma- tografia em coluna rápida sobre sílica (0% a 40% de EA em PE, V/V) para produzir o composto 29 g (870 mg) como um óleo incolor. RMN 1H (400 MHz, CD3CN) δ 6,03 (s, 1H), 5,11 (d, J= 4,6 Hz, 1H), 4,49 (dtd, J= 3,3, 6,5, 9,6 Hz, 1H), 4,19 (dd, J= 3,3, 11,9 Hz, 1H), 4,00 (dd, J= 6,6,

12,0 Hz, 1H), 2,03 - 1,99 (m, 11H).

[0397] A mesma reação foi repetida várias vezes e todas as batela- das combinadas. Etapa 7: Preparação do composto 29i

[0398] Uma solução do composto 29 h (0,672 g, 4,42 mmol) e BSA (3,13 g, 15,37 mmol) em CH3CN anidro (12 mL) foi agitada a 85 °C du- rante 1 hora e, então, resfriada até 0°C. A seguir foi adicionada por go- tejamento a 0°C para compor 29g (1 g, 3,84 mmol) e SnCl4 (3,003 g, 11,53 mmol) sob agitação; após a agitação da mistura a 26°C durante 24 horas, a mistura bruta foi combinada com uma outra batelada, resfri- ada e diluída com EA (300 mL). A camada orgânica foi sucessivamente lavada com solução aquosa saturada de NaHCO3 (4 x 200 mL), sal- moura (2 x 150 mL), seca com sulfato de sódio anidro, filtrada e concen- trada sob pressão reduzida para resultar em um resíduo. O resíduo (combinado com sílica-gel: 10 g) foi purificado por cromatografia em co- luna rápida com sílica: 20 g) (0% a 10% de MeOH em DCM, V/V) para fornecer o composto 29i (3,52 g) como uma espuma branca. RMN 1H (400 MHz, CD3OD-d4) δ 6,22 (s, 1H), 5,75 (br, d, J= 5,5 Hz, 1H), 4,65 (br dd, J= 3,6, 9,7 Hz, 1H), 4,31 (dd, J=3,3, 12,0 Hz, 1H), 4,12 (dd, J= 5,6, 11,9 Hz, 1H), 3,35 (s, 3H), 2,80 (ddd, J= 5,8, 10,0, 14,1 Hz, 1H), 2,33 (br, dd, J= 6,0, 13,8 Hz, 1H), 2,12 (s, 3H), 1,97 - 1,93 (m, 3H); ESI- MS: m/z = 352,9 [M+H]+. Etapa 8: Preparação do composto 29j

[0399] A uma solução do composto 29i (2 g, 5,677 mmol) em DCM (20 mL) adicionou-se por gotejamento Et3N (1,72 g, 17,03 mmol) e clo- reto de isobutirato (1,21 g, 11,35 mmol) à temperatura ambiente. Após a agitação a 25°C durante 2 horas, a reação foi bruscamente resfriada por água (50 mL), lavada com salmoura (2 x 50 mL), seca com Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para produzir o composto 29j (2,39 g), usado diretamente para a etapa seguinte sem purificação adicional. Etapa 9: Preparação do composto 29k

[0400] A uma solução do composto 29j (2,39 g, 5,67 mmol) em THF (25 mL) adicionou-se por gotejamento metanolato de sódio (1,23 g, 22,71 mmol) a 0°C. Após a agitação a 25°C durante 2 horas, mais me- tanolato de sódio foi adicionado por gotejamento (1,23 g, 22,71 mmol). Após a agitação a 25°C durante 0,5 hora, a mistura foi diluída com água saturada/CH3COOH (1:1, 4 mL) para ajustar para pH 7 e, então, con- centrada sob pressão reduzida para resultar em um resíduo. O resíduo (combinado com sílica-gel: 10 g) foi purificado por cromatografia em co- luna rápida com sílica (0% a 10% de MeOH em DCM, V/V) para fornecer o composto 29k (770 mg) como uma espuma branca. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,09 (br s, 2H), 5,99 (s, 1H), 5,75 (br d, J= 2,9 Hz, 1H), 4,80 - 4,70 (m, 2H), 4,49 - 4,36 (m, 1H), 3,51 - 3,40 (m, 2H),2,79 (td, J= 6,8, 13,6 Hz, 1H), 2,43 -2,30 (m, 1H), 2,07 (dd, J= 6,7, 12,6 Hz, 1H), 1,13 (d, J= 6,6 Hz, 6H); +ESI-MS: m/z 339,1 [M+H]+. Etapa 10: Preparação do composto 29l

[0401] DMTrCl (1,20 g, 3,54 mmol) foi adicionado a uma solução do composto 29k (1 g, 2,95 mmol) em piridina (10 mL). Após a agitação a 25 °C durante 12 horas, a reação foi particionada entre EA (150 mL) e água (100 mL). A mistura foi filtrada e a camada orgânica foi lavada sucessivamente com salmoura (100 mL), seca com Na2SO4 anidro, fil- trada e concentrada até a secura para obter o resíduo bruto (óleo). O resíduo (combinado com sílica-gel, 5 g) foi purificado por cromatografia em coluna rápida csílica (0% a 10% de MeOH em DCM, V/V) para pro- duzir o composto 29 l (1,52 g) como uma espuma amarela, RMN 1H (400 MHz, CD3CN) δ7,32 (dd, J=1,6, 7,9 Hz, 2H), 7,22 - 7,10 (m, 7H), 6,73 (dd, J=8,8, 13,9 Hz, 4H), 6,13 (s, 1H), 4,93 (br s, 1H), 4,77 - 4,57 (m, 1H), 3,77 (br s, 1H), 3,73 (d, J=3,9 Hz, 6H), 3,23 - 3,04 (m, 2H), 2,70 (spt, J= 6,9 Hz, 1H), 2,57 (ddd, J=5,3, 9,8, 13,3 Hz, 1H), 2,08 (dd, J=6,4.

13,4 Hz, 1H), 1,19 (d, J=6,8 Hz, 6H).

[0402] ESI -MS: m/z = 663,3 [M + Na] +. Etapa 11: Preparação do composto 29n

[0403] Iodeto de tetrabutilamônio (0,89 g, 2,41 mmol), trifenilfosfina (4,74 g, 18,08 mmol), tetrabrometo de carbono (5,996 g, 18,080 mmol), NaN3 (3,330 g, 51,223 mmol) foram adicionados a uma solução do com- posto 29 m (4,5 g, 12,05 mmol, CAS n° 144924-99-2cb) em DMF (70 mL) a 30 °C. Após agitação a 30°C durante 24 hora, mais iodeto de tetrabutil-amônio (0,89 g, 2,41 mmol), trifenilfosfina (4,74 g, 18,00 mmol) e tetrabrometo de carbono (5,99 g, 18,08 mmol) foram adicionados à solução. Após a agitação durante mais 24 horas, a mistura foi diluída com solução aquosa saturada de Na2CO3 (150 mL) para ajustar a mis- tura para pH 9, e a mistura foi extraída com acetato de etila (200 mL x 3). As camadas orgânicas foram combinadas e lavadas sucessivamente com salmoura (100 mL), secas com Na2SO4 anidro, filtradas e evapora- das sob pressão reduzida para produzir um sólido amarelo. A reação foi repetida várias vezes e todas as bateladas foram combinados. O resí- duo (combinado com sílica-gel: 30 g) foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 120 g) (eluição gradi- ente: 0 a 100% de acetato de etila em petróleo para 0 a 20% de metanol em acetato de etila) para produzir o composto 29n (9,5 g) como um só- lido amarelo. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11,28 (br, s, 1H), 8,78 (s, 1H), 8,54 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 8,08 - 8,02 (m, 2H), 7,68 -7,62 (m, 1H), 7,58 - 7,52 (m, 2H), 6,66 - 6,58 (m, 1H), 6,18 (br s, 1H), 5,46 - 5,24 (m, 1H), 4,56 (td, J= 4,4, 19,1 Hz, 1H), 4,08 - 4,04 (m, 1H), 3,72 - 3,68 (m, 1H); RMN 19F (376 MHz, DMSO-d6) δ ppm -197,05 (s, 1H); ESI-MS: m/z 398,9 [M+H]+. Etapa 12: Preparação do composto 29o

[0404] A uma solução do composto 29n (8,5 g, 21,33 mmol) e DMAP (1,3 g, 10,67 mmol) em piridina (90 mL) adicionou-se DMTrCl

(14,46 g, 42,67 mmol) a 25°C. Após a agitação a 80°C durante 14 horas, a mistura foi particionada entre DCM (200 mL) e água (50 mL). A ca- mada orgânica foi lavada com água (100 mL), seca com Na2SO4 anidro, filtrada, e o solvente evaporado sob pressão reduzida para fornecer o bruto 29o. Ela foi combinada com uma outra batelada e purificada; o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (PE/ (EA/DCM=1/1) de 10% para 100%) para produzir o composto 29o (9,5 g) como um sólido amarelo-claro. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ9,00 (s, 1H), 8,84 (s, 1H), 8,20 (br s, 1H), 8,02 (br, d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,64- 7,58 (m, 1H), 7,54 (br, t, J= 7,5 Hz, 2H), 7,46 (br, d, J = 7,1 Hz, 2H), 7,40 - 7,34 (m, 5H), 7,30 (br, d, J= 7,3 Hz, 1H), 6,94 - 6,84 (m, 4H), 6,58 - 6,48 (m, 1H), 4,48 - 4,34 (m, 2H), 4,18 - 4,06 (m, 1H), 3,38 (br d, J = 19 13,0 Hz, 1H), 3,18 (br, dd, J = 5,9, 13,9 Hz, 1H); RMN F (376 MHz, CDCl3) δ -196,176 (s, 1F); ESI-MS: m/z 701,2 [M+H]+. Etapa 13: Preparação do composto 29p

[0405] A uma solução do composto 29o (10,0 g, 14,27 mmol) em THF (100 mL) adicionou-se trifenilfosfina (5,24 g, 1,99 mmol) a 25°C. Após a agitação da solução a 40°C por 2 horas, água (50 mL) foi adici- onado à solução a 40°C e a mistura foi agitada durante 12 horas. A mistura de reação foi particionada entre DCM (200 mL) e salmoura (2 x 50 mL). A camada orgânica foi concentrada sob pressão reduzida para produzir um sólido amarelo (10,0 g). O sólido amarelo (combinado com sílica-gel: 20 g) foi purificado por cromatografia em coluna rápida sobre sílica (DCM/MeOH=0% a 20%) para fornecer o composto 29p (6,6 g) como um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,74 (s, 1H), 8,46 (d, J= 2,7 Hz, 1H), 8,06 - 7,98 (m, 2H), 7,64 (d, J= 7,3 Hz, 1H), 7,58 - 7,50 (m, 2H), 7,48 (d, J= 7,6 Hz, 2H), 7,38 - 7,32 (m, 6H), 7,30 - 7,26 (m, 1H), 6,94 (dd, J= 3,4, 8,8 Hz, 4H), 6,50 - 6,40 (m, 1H), 4,38 - 4,32 (m, 1H), 4,24 - 4,08 (m, 2H), 3,74 (d, J= 2,9 Hz, 6H), 2,68 - 2,54 (m, 2H); RMN 19F (376 MHz, DMSO-d6) δ ppm -195,79 (s, 1F); ESI-MS: m/z

675,3 [M+H]+. Etapa 14: Preparação do composto 29q

[0406] 4-Nitrofenol (0,92 g, 6,67 mmol) e trietilamina (1,35, 13,34 mmol) foram adicionados à solução do composto 29p (1,5 g, 2,22 mmol) em DCM (40 mL). A solução resultante foi agitada a -78°C e uma solu- ção de clorossulfato de 4-nitrofenila (1,58 g, 6,67 mmol) em DCM (5 mL) foi adicionada a -78°C. Após a agitação a -78°C durante 1 hora, a mis- tura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para produzir um resíduo. O resíduo (combinado com sílica-gel: 4 g) foi purificado por cro- matografia em coluna rápida sobre sílica (0 a 100% de PE em EA) para produzir o composto 29q (1,4 g) como um sólido amarelo-claro, arma- zenado a -20 °C, RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8,94 (br, s, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,48 (br, s, 1H), 8,18 - 8,08 (m, 2H), 8,00 (br, d, J= 7,8 Hz, 2H), 7,96 (s, 1H), 7,66-7,60 (m, 1H), 7,58 -7,52 (m, 2H), 7,44 (br, d, J= 7,8 Hz, 2H), 7,38-7,28 (m, 7H), 6,92-6,84 (m, 4H), 6,40- 6,26 (m, 1H), 4,48- 4,42 (m, 2H), 4,28 (br, s, 1H), 3,86-3,76 (m, 6H), 3,56 (br, d, J= 13,2 Hz, 1H), 3,32 (br, d, 7= 13,7 Hz, 1H); RMN F (376 MHz, CDCl3) δ ppm - 19 193,08 (s, 1F); ESI-MS: m/z 876,6 [M+H]+. Etapa 15: Preparação do composto 29r

[0407] Uma solução do composto 29 l (800 mg, 1,25 mmol), com- posto 29q (1,64 g, 1,87 mmol) e peneiras moleculares de 4 Å ativadas (3 g) em THF (24 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 0,5 hora sob N2. DMAP (762,73 mg, 6,24 mmol) foi, então, adicionado em uma porção. Após a agitação à temperatura ambiente durante 2 horas sob N2, então 45°C durante 12 horas sob N2, a mistura de reação foi diluída com EA (100 mL) então filtrada através de um bloco de terra diatomácea. O filtrado foi lavado com solução aquosa saturada de NaHCO3 (6 x 50 mL) A camada orgânica foi sucessivamente lavada com salmoura (50 mL), secada em Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada até a secura para render um resíduo. O resíduo (combinado com sílica-gel:

5 g) foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica (0% a 0% de MeOH em DCM, V/V) para fornecer o composto 29r (1,4 g) como um sólido branco. ESI-MS: m/z = 1377,1 [M+H]+. Etapa 16: Preparação do composto 29s

[0408] A uma solução de 29r (1,4 g, 1,01 mmol) em DCM (24 mL), adicionou-se ácido dicloroacético (262 mg, 2,03 mmol) e água (0,183 mL) à temperatura ambiente. Após a agitação à temperatura ambiente durante 3 horas sob N2, piridina (0,8 g, 10,16 mmol) foi adicionada à solução. Após a agitação durante 2 horas, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida para produzir um resíduo. O resíduo (combinado com sílica-gel: 6 g) foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica (MeOH/DCM=0 a 10%) para fornecer o composto 29s (570 mg) como um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,15- 11,97 (m, 2H), 11,22 (s, 1H), 8,78 (t, J= 5,9 Hz, 1H), 8,67 (s, 1H), 8,41 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 8,09-8,00 (m, 2H), 7,69-7,61 (m, 1H), 7,60-7,51 (m, 2H), 6,51 (dd, J= 3,8, 17,6 Hz, 1H), 6,34 (s, 1H), 6,23 (d, J= 4,0 Hz, 1H), 5,95 (s, 1H), 5,33- 5,13 (m, 1H), 4,76 (t, J= 5,5 Hz, 1H), 4,51-4,33 (m, 2H), 4,18-4,02 (m, 2H), 3,54-3,36 (m, 3H), 2,90-2,73 (m, 1H), 2,69-2,56 (m, 1H), 2,40 (br, dd, J= 6,0, 14,3 Hz, 1H), 1,13 (dd, J = 6,9, 10,2 Hz, 6H); RMN 19F (376 MHz, DMSO-d6) δ ppm -197,57 (s, 1F); ESI-MS: m/z = 773,3 [M+H]+. Etapa 17: Preparação do composto 29t

[0409] THF foi recém-destilado sobre sódio em presença de benzo- fenona e CH3CN foi recém-destilada na presença de CaH2 antes do uso.

[0410] O composto seco a vácuo 29s (100 mg, 0,13 mmol) foi coe- vaporado com uma mistura de CH3CN e THF (2/2 mL x 3) e, então, dissolvido em uma mistura de THF (5 mL). Foram, então, adicionadas peneiras moleculares de 4 Å (500 mg) e uma solução de 1H-tetrazol (2,301 mL, 0,45M, preparada pela dissolução de 315 mg de tetrazol em 10 mL de CH3CN seca, adição de 500 mg de peneiras moleculares de

4 Å, seguida de agitação durante 1 hora sob N2 antes do uso). A sus- pensão branca resultante foi agitada por 5 minutos à temperatura ambi- ente sob N2. Uma solução de 2-cianoetil-tetra(isopropil)fosforodiamidita (78,01 mg, 0,26 mmol) em THF (1 mL) foi, então, adicionada por gote- jamento por 5 minutos através de uma seringa. A suspensão branca resultante foi agitada adicionalmente durante 1 hora a 35°C sob N2. Uma solução de TBHP (0,118 mL, 0,65 mmol, 5~6M em decano) foi adicio- nada através de uma seringa e agitada por mais 30 minutos. A mistura foi diluída com DCM (20 mL), então filtrada através de um bloco de terra diatomácea e concentrada para fornecer o produto bruto como um óleo incolor. O produto bruto (combinado com sílica-gel: 2 g) foi purificado por cromatografia em coluna rápida sobre sílica (0% a 6% de MeOH em DCM, V/V) para fornecer o composto 29t (72 mg) como um sólido branco. ESI-MS: m/z = 887,9 [M+H]+. Etapa 18: Preparação do composto 45, sal de sódio

[0411] O composto 29t (72 mg, 0,082 mmol) foi combinado com me- tilamina (5,0 mL); após a agitação à temperatura ambiente durante 4 horas, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para produzir um resíduo bruto. O produto bruto foi purificado por HPLC pre- parativa de fase reversa (coluna: Xbridge 10 µm 150 x 30 mm, condi- ção:água (10 mM de NH4HCO3)-ACN B: 0, fim B 25, tempo de gradiente (min): 7, 100% de B, tempo de retenção (min): 0, taxa de fluxo (mL/min): 25) para produzir o composto 45, sal de amônio (6,9 mg) como um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,12 (s, 1H), 7,67 (br, s, 1H), 6,52 (br, dd, J= 4,9, 11,7 Hz, 1H), 6,31 (br, d, J= 7,0 Hz, 1H), 6,18- 6,04 (m, 1H), 5,64-5,43 (m, 1H), 5,32 -5,20 (m, 1H), 4,37 (br, d, J = 3,5 Hz, 1H), 4,15-4,03 (m, 2H), 3,57-3,46 (m, 2H), 2,83 - 2,71 (m, 1H), 2,67- 2,56 (m, 1H); RMN 19F (376 MHz, D2O) δ ppm -195,88 (s, 1F); RMN 31P (162 MHz, D2O) δ ppm -1,513 (s, 1P); ESI-MS: m/z = 661,1101 [M + H]+.

[0412] Conversão de sal de sódio: Dowex 50W × 8, 200 a 400 (8 mL, forma de H) foi adicionado a um béquer e lavado com água desio- nizada (30 mL). Então, à resina adicionou-se H2SO4 a 15% em água desionizada, a mistura foi gentilmente agitada durante 5 minutos e de- cantada (30 mL). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 CV), e então com água desionizada até ficar com um pH neutro.

A resina foi transferida de volta para o béquer, NaOH a 15% em solução de água desionizada foi adicionado, e a mistura foi gentilmente agitada durante 5 minutos, e decantada (1x). A resina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 CV) e, então, com água desionizada até ficar com um pH neutro.

O composto 45, sal de amô- nio (6,9 mg) foi dissolvido em uma quantidade mínima de água desioni- zada e CH3CN (1:1, v/v, 5 mL) adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada.

As frações adequadas foram agrupadas e liofili- zadas para fornecer o composto 45, sal de sódio (2 mg) como um sólido branco.

RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,20 (s, 1H), 7,74 (br, s, 1H), 6,58 (dd, J= 5,1, 11,7 Hz, 1H), 6,37 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 6,24-6,13 (m, 1H), 5,69-5,51 (m, 1H), 5,42-5,29 (m, 1H), 4,85-4,83 (m, 1H), 4,70 (br, dd, J= 2,3, 6,2 Hz, 1H), 4,43 (br, d, J= 3,4 Hz, 1H), 4,23- 4,10 (m, 19 2H), 3,64-3,50 (m, 2H), 2,91-2,78 (m, 1H), 2,73-2,64 (m, 1H); RMN F (376 MHz, D2O) δ ppm -195,902 (s, 1F); RMN 31 P (162 MHz, D2O) δ ppm -1,54 (s, 1P); ESI-MS: m/z = 661,2 [M+H]+. Exemplo 30

Etapa 1: Preparação do composto 30a

[0413] Nota: o THF foi recém-destilado sobre sódio em presença de benzofenona e a CH3CN foi recém-destilada na presença de CaH2 antes do uso.

[0414] O composto 29s (200 mg, 0,26 mmol) foi dissolvido em THF (6 mL) e CH3CN (10 mL), aos quais foram adicionados 0,3 g de peneiras moleculares de 4 Å (pó) e uma solução de 1H-tetrazol (4,6 mL, 0,45 M, seca em peneiras moleculares ativadas antes do uso). Uma solução de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (156 mg, 0,52 mmol) em THF (0,9 mL) foi adicionada por gotejamento durante 10 mi- nutos através de uma seringa. A suspensão branca resultante foi agi- tada adicionalmente durante 2 horas a 35°C sob argônio. Uma solução de DDTT (264,9 mg, 1,29 mmol) em piridina (10 mL) foi, então, adicio- nada à solução acima a 35°C. Após a agitação da reação a 35°C du- rante 1 hora, a mistura foi diluída com EtOAc (20 mL), filtrada através de um bloco de terra diatomácea, o bloco lavado com EtOAc e o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (MeOH em DCM=0% a 7%) para fornecer o composto 30a (80 mg) como um sólido branco. ESI-MS: m/z = 904,2 [M+H]+. Etapa 2: Preparação do composto (*R) 50A, sal de sódio O composto 30a (80 mg) foi tratado com MeNH2 (5 mL, em EtOH, 30%) a 25°C. Após a agitação da reação a 25°C por 3 horas, o solvente foi evaporado sob pressão reduzida para produzir um resíduo. O resíduo foi dissolvido em uma mistura de H2O/CH3CN (30 mL) e lavado com DCM (3x15 mL). A fase aquosa foi então liofilizada para fornecer o pro- duto bruto (71 mg), como um sólido amarelo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: coluna, Waters Xbridge Prep OBD 5 µm C18 150x30; Condição:e água (10 mm de NH4HCO3)(A)-ACN(B) início B 0, fim B 23; tempo de gradiente (min) 7; 100% de B, tempo de retenção(min) 0, taxa de fluxo (mL/min) 25) para fornecer o composto (*R) 50A, sal de amônio (8 mg, 9%) como um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, D2O) δ 8,63 (br s, 1H), 8,51 (d, J=1,7 Hz, 1H), 6,94 (br d, J=18,8 Hz, 1H), 6,65 (br d, J=3,4 Hz, 1H), 6,39 (br d, J=2,9 Hz, 1H), 6,20 -6,00 (m, 1H), 5,71 (br t, J=11,4 Hz, 1H), 5,06 (br s, 1H), 4,70 - 4,60 (m, 1H), 4,56 - 4,47 (m, 1H), 4,04 - 3,96 (m, 1H), 3,94 19 - 3,85 (m, 1H), 3,27 - 3,17 (m, 1H), 3,16 - 3,03 (m, 1H); RMN F (376 MHz, D2O) δ ppm -195,682

[0415] RMN 31 P (162 MHz, D2O) δ ppm 54,318; +ESI-MS: m/z 677,2 [M+H]+. Conversão em sal de sódio

[0416] Dowex 50W × 8, 200 a 400 (2 mL, forma de H) foi adicionado a um béquer e lavado com água desionizada (10 mL). Então, à resina adicionou-se H2SO4 a 15% em água desionizada, a mistura foi gentil- mente agitada durante 5 minutos e decantada (15 mL). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 CV), e então com água desio- nizada até ficar neutra. A resina foi transferida de volta para o béquer, NaOH a 15% em solução de água desionizada foi adicionado, e a mis- tura foi gentilmente agitada durante 5 minutos, e decantada (1×). A re- sina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 CV) e, então, com água desionizada até ficar com um pH neutro. Composto (*R) 50A, sal de amônio (4 mg) foi dissolvido m uma quantidade mínima de água desionizada: CH3CN (3:1, v/v, 8 mL), adici- onado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada. As frações adequadas foram agrupadas e liofilizadas para fornecer o composto (*R) 5QA, sal de sódio (2,4 mg, 58%) como um sólido branco.

[0417] RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,25 (s, 1H), 7,88 (s, 1H), 6,59 (dd, J=4,3, 15,5 Hz, 1H), 6,33 (d, J=6,8 Hz, 1H), 6,15 - 6,01 (m, 1H), 5,86 - 5,66 (m, 1H), 5,54 - 5,41 (m, 1H), 4,47 (br d, J= 3,9 Hz, 1H), 4,29 - 4,12 (m, 2H), 3,65 - 3,54 (m, 2H), 2,88 - 2,79 (m, 1H), 2,76 - 2,69 (m, 1H): RMN 19F (376 MHz, D2O) δ ppm -194,41 RMN 31P. (162 MHz, D2O) δ ppm 53,83; ESI-MS: m/z = 677,1 [M+H]+. Exemplo 31

Etapa 1: Preparação do composto 31b

[0418] Bis(trimetilsil)acetamida (BSA, 93,95 g, 461,9 mmol) foi adi- cionada por gotejamento a uma suspensão de 8-azaguanina (11,71 g, 77,0 mmol) em MeCN anidro (340 mL) a 25°C. A mistura de reação foi agitada a 80°C por 3 horase, então, resfriada até a temperatura ambi- ente. Uma solução de 1,2-di-O-acetil-5-benzoil-3-O-metilD-ribofuranose 31a [CAS 10300-21-7] (13,56 g, 38,5 mmol) em MeCN anidro (65 mL) foi adicionada e, em seguida, SnCU (80,21 g, 307,9 mmol) foi adicio- nado por gotejamento. A solução homogênea foi agitada a 80°C por 30 minutos, então resfriada até a temperatura ambiente e vertida em uma solução aquosa gelada de NaHCO3 a 5% (800 mL). EtOAc (800 mL) foi adicionado e a agitação foi continuada por 10 minutos. A mistura de re- ação foi filtrada e o filtrado foi transferido para um funil separador. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (200 mL x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa de NaHCO3 a 5% (600 mL x 2), secas com Na2SO4, e evaporadas a vácuo até a secura para fornecer o composto bruto 31b (11,50 g). O produto bruto foi usado diretamente na reação seguinte sem purificação adicional. RMN 1H (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11,09 (br s, 1H), 7,88 (d, J= 7,2 Hz, 2 H), 7,61 - 7,68 (m, 1H), 7,44 - 7,52 (m, 2 H), 7,04 (br s, 2 H), 6,17 (d, J=1,7 Hz, 1H), 5,90 (dd, J=5,0, 2,1 Hz, 1H), 4,66 (dd, J=7, 1, 4,9 Hz, 1H), 4,53 - 4,58 (m, 1H), 4,35 - 4,42 (m, 2 H), 3,41 (s, 3H), 2,14 (s, 3H); ESI-MS: m/z 445,5 [M+H]+. Etapa 2: preparação do composto 31c

[0419] A uma solução do composto bruto acima 31b (11,50 g) em dimetilacetamid anidra (57,5 mL) adicionou-se anidrido isobutírico por gotejamento (6,14 g, 38,8 mmol). A mistura de reação foi agitada a 140°C por 2 horas, resfriada até a temperatura ambiente e diluída com EtOAc (300 mL). A solução resultante foi lavada com solução aquosa de NH4Cl a 10% (300 mL x 3) e salmoura (300 mL). A camada orgânica foi seca com Na2SO4 e concentrada a vácuo até a secura para fornecer o composto bruto 31c (13,30 g). O produto bruto foi usado diretamente na reação seguinte sem purificação adicional. Etapa 3: preparação do composto 31d

[0420] A uma solução do composto bruto 31c (11,98 g, da etapa 2) em THF (42 mL), MeOH (35 mL) e H2O (11 mL), foi adicionado NaOH 5N (11 mL, 55 mmol 0) a °C. A mistura de reação foi agitada a 0°C durante 4 h. O pH da mistura de reação foi ajustado para 6,5 com ácido fórmico. A solução resultante foi concentrada a vácuo até a decura e o resíduo foi triturado com MeCN e H2O várias vezes para produzir o com- posto 31d (1,55 g, rendimento: 14% a partir de 31b). RMN 1H (600 MHz,

DMSO-d6) δ ppm 12,07 (br s, 2 H), 5,97 (d, J=4,4 Hz, 1H), 5,68 (br s, 1H), 4,92 (br s, 1H), 4,84 (br s, 1H), 4,01 - 4,08 (m, 2 H), 3,52 - 3,59 (m, 1H), 3,44 - 3,50 (m, 1H), 3,43 (s, 3H), 2,79 (spt, J= 6,8 Hz, 1H), 1,13 (d, J=6,8 Hz, 6 H); ESI-MS: m/z = 369,5 [M+H]+. Etapa 4: preparação do composto 31e

[0421] A uma solução do composto 31d (1,10 g, 3,0 mmol) em piri- dina anidra (20,0 mL) adicionou-se uma solução de DMTrCl (1,32 g, 3,9 mmol) em piridina (3,0 mL) a 0°C. A mistura reacional foi agitada à tem- peratura ambiente durante 12 horas e depois disso foi diluída com EtOAc e lavada com solução saturada de NaHCO3, água e salmoura. A camada orgânica foi seca com Na2SO4, filtrada e concentrada até a se- cura a 40°C. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 20 a 50% de EtOAc em heptano) para for- necer o composto 31e como um sólido branco (1,52 g, rendimento: 76%). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11,87 (br s, 1H), 7,24 - 7,28 (m, 2 H), 7,10 - 7,24 (m, 7 H), 6,76 - 6,82 (m, 4 H), 6,06 (d, J=12,7 Hz, 1H), 5,79 (br d, J=14,6 Hz, 1H), 5,01 (br s, 1H), 4,18 - 4,24 (m, 2 H), 3,71 (s, 6 H), 3,36 (s, 3H), 3,15 - 3,20 (m, 1H), 3,05 (br dd, J=110,0, 3,9 Hz, 1H), 2,80 (spt, J=16,8 Hz, 1H), 1,13 (d, J=16,9 Hz, 6 H); ESI-MS: m/z 671,4 [M+H]+. Etapa 5: preparação do composto 31f

[0422] O composto 31e (1,30 g, 1,94 mmol), DMAP (546 mg, 4,47 mmol) e sulfamato 17a (1,18 g, 1,33 mmol) foram dissolvidos separada- mente em DCE seco (3 x 3 mL). Cada solução foi seca com peneiras moleculares de 3 Å ativadas por agitação sob N2 de um dia para o outro. À solução de sulfamato 17a em DCE, foram respectivamente adiciona- das a solução de DMAP em DCE e a solução do composto 31e em DCE (adicionada através de uma seringa). A mistura de reação foi agitada a 60°C por 4 horas sob N2. Essa mistura foi diluída com DCM e filtrada, o filtrado foi lavado com solução aquosa de ácido acético a 2%, solução aquosa de NaHCO3 a 5%, e solução de salmoura consecutivamente, e então evaporada até a secura sob pressão reduzida. O resíduo foi dis- solvido em DCM e purificado por cromatografia em coluna com sílica- gel (eluição gradiente: 0,6 a 1% de EtOH em DCM) para fornecer o com- posto 31f como um sólido amarelo (0,53 g, rendimento: 28%). ESI-MS: m/z 1407,6 [M+H]+. Etapa 5: preparação do composto 31g

[0423] Um composto de solução 31f (480 mg, 0,34 mmol) em DCM (5 mL) ao qual foram adicionados água (30,8 mg, 1,71 mmol) e DC A (220 mg, 1,71 mmol), foi agitado por 4 horas à temperatura ambiente. Em seguida, a mistura de reação foi lavada com solução aquosa de NaHCO3 a 5% e salmoura. A camada orgânica foi seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada até a secura sob pressão reduzida. O re- síduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 1 a 5% EtOH em DCM) para produzir o composto 31 g como um sólido branco (150 mg, rendimento: 55%). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11,90 (br s, 1H), 11,27 (br s, 1H), 8,74 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 8,04 (d, J= 7,6 Hz, 2 H), 7,61 - 7,70 (m, 1H), 7,51 - 7,59 (m, 2 H), 6,38 (d, J=19,5 Hz, 1H), 6,29 (d, J=2,3 Hz, 1H), 5,51 - 5,69 (m, 2 H), 4,90 (br s, 1H), 4,63 (ddd, J=20,4, 7,6, 4,6 Hz, 1H), 4,47 (br t, J= 5,5 Hz, 1H), 4,00 - 4,12 (m, 2 H), 3,55 - 3,61 (m, 1H), 3,42 - 3,47 (m, 2 H), 3,39 (s, 3H), 3,21 - 3,29 (m, 1H), 2,77 (spt, J=6,7 Hz, 1H), 1,11 (d, J=6,9 Hz, 6 H); ESI-MS: m/z 803,7 [M+H]+. Etapa 6: preparação do composto 31h

[0424] Uma solução do composto 31g (100 mg, 0,125 mmol) e 1H- tetrazol (2,22 mL, solução 0,45 M em MeCN, 0,998 mmol) em THF seco (2 mL) foi tratado com peneiras moleculares de 4 Å durante 1 hora sob N2 e depois 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (67,5 mg, 0,22 mmol) em MeCN (0,6 mL) foi adicionada por gotejamento por 15 minutos (nota: o THF foi recém-destilado sobre sódio em presença de benzofenona e a MeCN foi recém-destilada na presença de CaH2 antes do uso). A mistura de reação resultante foi agitada durante 90 minutos à temperatura ambiente. Uma solução de tBuOOH (199 µL, 0,99 mmol) foi adicionada e a agitação foi continuou por mais 30 minu- tos. A mistura de reação foi filtrada através de um bloco de terra diato- mácea e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em co- luna rápida (eluição gradiente: 0 a 10% de MeOH em DCM) para forne- cer o composto 31 h como um sólido branco (32 mg, rendimento: 30%). ESI-MS: m/z 918,4 [M+H]+. Etapa 7: preparação do composto 51, sal de sódio

[0425] O composto 31 h (32 mg, 0,035 mmol) foi agitado em uma solução de metilamina a 33% em etanol (12 mL) a 40°C durante 2,5 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em água, lavado com DCM e liofilizado. O produto buto foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa (fase estacio- nária: Xbridge OBD C18 µ5 m, 150 x 30 mm; fase móvel: solução aquosa de 10 mM de bicarbonato de amônia (A) - MeCN (B); eluição gradiente). A conversão final no sal de sódio foi feita pela eluição de uma solução aquosa sobre uma coluna recheada de uma resina de troca iônica de sódio catiônica para produzir o composto 51, sal de sódio como um sólido branco macio após liofilização (14 mg, rendi- mento: 55%). RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,15 (br s, 1H), 7,10 (br s, 1H), 6,51 - 6,45 (m, 1H), 6,41 (br s, 1H), 6,16 (br s, 1H), 5,36 - 5,12 (m, 2H), 4,61 (br d, J= 2,4 Hz,1H), 4,52 (br d, J= 8,8 Hz, 1H), 4,38 (d, J= 4,8 Hz, 1H), 4,23 (dd, J =2,4, 4,8 Hz, 2H), 3,77 (br d, J= 13,2 Hz, 1H), 3,57 (s, 3H), 3,42 (br d, J= 12,8 Hz, 1H); RMN 31P (162 MHz, D2O) δ ppm -1,81 (s, 1P); RMN 19F (376 MHz, D2O) δ ppm - 196,87-197,38 (m, 1F); ESI-MS: m/z 691,0 [M+H]+. Exemplo 32

Preparação do composto 32a

[0426] THF foi recém-destilado sobre sódio em presença de benzo- fenona e CH3CN foi recém-destilada na presença de CaH2.

[0427] Diol seco a vácuo 3q (250 mg, 0,307 mmol) foi coevaporado com uma mistura de CH3N/THF (8/5 mLx3) e dissolvido em uma mistura de CH3CN / THF (7,5/5 mL). Adicionou-se 600 mg de peneiras molecu- lares de 4 Å ativadas e uma solução de 1H-tetrazol em CH3CN (5,47 mL, 0,45M, preparada pela dissolução de 630 mg de tetrazol em 20 mL de CH3CN seca, seguida pela adição de 600 mg de peneiras molecula- res de 4 Å e agitação durante l hora sob argônio antes do uso). Após a agitação da suspensão branca por 1 hora a 8°C sob argônio l hora, uma solução de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita em CH3CN (4,69 mL, 0,49 mmol, 0,105M em CH3CN, preparada pela dis- solução de 506 mg de amidita emn 16 mL de CH3CN, seguida pela adi- ção de 600 mg de peneiras moleculares de 4 Å e então agitação por 1 hora sob argônio antes do uso) foi adicionada por gotejamento por 60 minutos. A suspensão branca resultante foi agitada por 1 hora a 8°C sob argônio. Mais CH3CN (5 mL) foi adicionado e após a agitação durante 1 hora a 30°C, adicionou-se mai tetrazol (1,36 mL, 0,61 mmol). Após a agitação por mais 2 horas, TBHP (0,5 mL, 2,5 mmol, 5M em decano) foi adicionado rapidamente. Após a agitação por 30 minutos, a mistura foi filtrada através de um bloco de terra diatomácea; o filtrado foi combinado com uma outra batelada e concentrado sob pressão reduzida para re- sultar em um resíduo dissolvido em DCM (8 mL) e purificado por croma- tografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 6% de MeOH em DCM, 25 mL/min) para produzir 32a (136 mg) como um sólido branco, ESI-MS: m/z = 927 [M+H]+.

[0428] O sólido acima foi combinado com uma outra batelada e pu- rificado adicionalmente por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: Xtimate 5 µm C18 150 x 25; fase móvel: água (10 mM de NH4HCO3)- ACN. início B 23, fim B 53; taxa fluxo: 25 mL/min de tempo de gradiente: 9 mm seguido de B 100 por 3 min); as frações desejadas foram coleta- das e liofilizadas para gerar 36a como um sólido branco, RMN 1H (400 MHz, CD3CN) δ 9,36 (td, J= 3,7, 7,2 Hz, 2H), 8,728,60 (m, 1H), 8,738,56 (m, 1H), 8,18 (s, 1H), 8,12 - 7,96 (m, 3H) 7,86 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,71 - 7,62 (m, 1H), 7,62 - 7,51 (m, 2H), 6,21 (s, GH), 6,06 - 5,94 (m, 1H), 5,46 - 5,37 (m, 1H), 5,37 - 5,29 (m, 1H), 5,28- 5,21 (m, 1H), 4,82 (dd, J=6,2, 11,1 Hz, 1H), 4,63 (dd, J=3,0, 11,2 Hz, 1H), 4,48 (dd, J=2,8, 11,4 Hz, 1H), 4,45 - 4,38 (m, 1H), 4,35 - 4,19 (m, 2H), 4,17 - 4,07 (m, 2H), 4,03 - 3,93 (m, 1H), 3,89 - 3,79 (m, 1H), 3,68 - 3,58 (m, 2H), 3,59 - 3,50 (m, 1H), 2,80 (t,J= 5,9 Hz, 1H), 2,54 (td, J=5,2. 17,2 Hz, 1H), 2,42 -2,27 (m, 1H), 1,10 - 1,02 (m, 3H), 0,88 (d, J=6,8 Hz, 1H), 0,83 (d, J=6,8 Hz, 1H);

[0429] RMN 31P (162 MHz, CD3CN) = 3,07 (s, 1P), 3,15 (s, 1P); ESI- MS: m/z = 927,3 [M+H]+. Preparação do composto 25, sal de sódio

[0430] Uma solução do composto 32a (30,5 mg, 0,033 mmol) em

MeNH2 (27 a 30% em EtOH, 5 mL) foi agitada a 5°C durante 4 horas.

A misturação de reação foi concentrada sob pressão para produzir um re- síduo. o resíduo foi particionado entre DCM / água (10/15 mL). A ca- mada aquosa foi lavada com DCM (8 mL x 3) e liofilizada.

O composto bruto foi suspenso em 6 mL de acetato de etila, sonicado (3min) e cen- trifugado (5 minutos). O sobrenadante acima foi coletado e o procedi- mento anterior repetido duas vezes.

O precipitado foi particionado entre DCM / água (10/15 mL). A camada aquosa foi extraída com DCM (10 mL x 2) e liofilizada para fornecer um sólido.

A conversão final no sal de sódio foi feita pela eluição de uma solução aquosa em uma coluna em- pacotada com uma resina catiônica de troca de íons de Na para fornecer o composto 25, sal de sódio como um sólido branco macio após a liofilização (60,1 mg). RMN 1H (400 MHz, D2O) δ 8,15 - 7,90 (m, 1H), 7,83 (br s, 2H), 7,69 (br s, 1H), 6,90 - 6,72 (m, 1H), 6,08 - 5,82 (m, 1H), 4,45 - 4,15(m, 3H), 4,16 - 3,88 (m, 1H), 3,28 (t, J=6,8 Hz, 1H), 2,87 (t, 31 J=6,7 Hz, 1H), 2,68 - 2,59 (m, 1H), 2,46 (s, 4H); RMN P (162 MHz, D2O) δ-2,4 (s, 1P); ESI-MS: m/z = 700 [M+H]+. Exemplo 33

Etapa 1: Preparação dos compostos 33b e 33c

[0431] Uma solução do composto 33a (600 mg, 0,75 mmol) e 1H- tetrazol (8,97 mL de um 3 a 4% em MeCN, seco em peneiras molecula- res de 3 Å antes do uso) em 1:1 de MeCN/ THF (110 mL, secos em peneiras moleculares de 3 Å antes do uso) foi tratada com peneiras mo- leculares de 3 Å ativadas sob N2 durante 1 hora e depois disso 2-ciano- etil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (240 µL, 0,75 mmol) foi adi- cionada imediatamente. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3,5 horas. Uma quantidade extra de 2-cianoetil- N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (0,12 mL, 0,37 mmol) foi adici- onada e a agitação foi continuada de um dia para o outro. Em seguida, dissulfeto de fenilacetila (PADS, 0,45 g, 1,5 mmol) foi adicionado, a mis- tura de reação foi agitada por mais 18 horas. As peneiras moleculares foram removidas por filtração e enxaguadas com diclorometano. Os fil- trados combinados foram subsequentemente lavados com uma mistura 1:1 de uma solução aquosa saturada de Na2S2O3 e solução aquosa sa- turada de NaHCO3, e salmoura, secos com MgSO4, filtrados e concen- trados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida (eluição gradiente: 0 a 10% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 33b (122 mg, rendimento: 17%) como o primeiro isômero de eluição e o composto 33c (39 mg, rendimento: 5%) como o segundo isômero de eluição. Composto 33b ESI-MS: m/z 933,5 [M+H]+. Composto 33c ESI-MS: m/z 933,6 [M+H]+. Etapa 2: Preparação do composto (R*) 23A, sal de sódio e do com- posto (5'*) 23B, sal de sódio

[0432] O composto 33b (122 mg, 0,13 mmol) foi agitado em uma solução de metilamina a 33% em etanol (7 mL) a 45°C até a conversão completa (cerca de 1 hora). A mistura de reação foi esfriada até a tem- peratura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto resultante foi triturado em MeCN e, em seguida, purificado por HPLC preparativa de fase reversa (fase estacionária: XBridge C18 OBD, 5 P.M., 150 x 50 mm; fase móvel: solução aquosa de 0,25% de bicarbo- nato de amônia (A) - MeOH (B); eluição gradiente) para resultar no com- posto (R*) 23A. A conversão final no sal de sódio foi feita por eluição de uma solução aquosa em uma coluna empacotada com uma resina catiônica de troca de íons de sódio para produzir o composto (R*) 23A, sal de sódio como um sólido branco macio após liofilização (13 mg, ren- dimento: 14%). RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,23 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,82 (br s, 1H), 6,44 (d, J=15,5 Hz, 1H), 5,92 (d, J=8,5 Hz, 1H), 5,65 (dd, J=50,6, 3,4 Hz, 1H), 5,42 (br s, 1H), 5,17 (ddd, J=21,8, 9,2, 3,4 Hz, 1H), 4,66 - 4,71 (m, 1H), 4,46 - 4,58 (m, 2 H), 4,15 (br s, 1H), 4,00 (br dd, J=12,2, 4,1 Hz, 1H), 3,69 - 3,90 (m, 2 H), 3,60 (s, 3H); RMN 31P (162 MHz, D2O) δ ppm 52,18 (s, 1 P); ESI-MS: m/z 706,4 1 [M+H]+.

[0433] O composto 33c (39 mg, 0,035 mmol) foi agitado em uma solução de metilamina a 33% em etanol (2 mL) a 45°C até a conversão completa (cerca de 1 hora). A mistura de reação foi esfriada até a tem- peratura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto resultante foi triturado em MeCN e, em seguida, purificado por HPLC preparativa de fase reversa (fase estacionária: XBridge C18 OBD, 10 P.M., 150 x 50 mm; fase móvel: solução aquosa de 0,25% de bicarbo- nato de amônia (A) - MeOH (B); eluição gradiente) para resultar no com- posto (S*) 23B. A conversão final no sal de sódio foi feita por eluição de uma solução aquosa em uma coluna empacotada com uma resina catiônica de troca de íons de sódio para produzir o composto (S*) 23B, sal de sódio como um sólido branco macio após liofilização (18 mg, rendimento: 70%). RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,43 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,88 (br s, 1H), 6,52 (d, J=15,9 Hz, 1H), 5,97 (d, J=8,5 Hz, 1H), 5,81 (dd, J=50,5, 3,7 Hz, 1H), 5,45 - 5,60 (m, 1H), 5,33 - 5,44 (m, 1H), 4,67 - 4,73 (m, 1H), 4,49 - 4,53 (m, 1H), 4,43 (dt, J=11,7, 3,7 Hz, 1H), 4,17 (br s, 1H), 4,05 - 4,11 (m, 1H). 3,78 (m, J=9,8 Hz, 2 H), 3,62 (s, 3H); RMN

P (162 MHz, D2O) δ ppm 56,24 (s, 1 P); ESI-MS: m/z 706,4 [M+H]+. Exemplo 34 Etapa 1: Preparação do composto 34b e do composto 34c

[0434] O composto 34a (0,8 g, 0,99 mmol) foi dissolvido em uma mistura de ACN anidra (85 mL) e THF anidro (85 mL), 1H-tetrazol (11,5 mL, 3,96 mmol) e peneiras moleculares de 3 Å foram adicionadas. A mistura foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente e, então, 2- cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (0,31 mL, 0,99 mmol) foi adicionada imediatamente através de uma seringa. A mistura reaci- onal foi agitada à temperatura ambiente por 4,5 horas. Uma quantidade adicional de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (0,16 mL, 0,5 mmol) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada à tempe- ratura ambiente durante 2 dias e então dissulfeto de fenilacetila (PADS, 0,6 g, 1,98 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada à tem- peratura ambiente durante 18 horas. A mistura de reação foi filtrada. As peneiras moleculares foram lavadas três vezes com diclorometano. O filtrado combinado foi lavado com uma mistura de uma solução saturada de Na2S2O3 e uma solução saturada de NaHCO3, lavado com salmoura,

seco com MgSO4, filtrado e os solventes do filtrado evaporados. O resí- duo foi purificado por cromatografia em coluna rápida (eluição gradiente: 0 a 10% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 34b (224 mg, rendimento: 16%) como o primeiro isômero que eluiu e o composto 34c (265 mg, rendimento: 11%) como o segundo isômero de eluição.

[0435] Composto 34a ESI-MS: m/z 939,5 [M+H]+;

[0436] Composto 34b ESI-MS: m/z 939,5 [M+H]+.

[0437] Etapa 2: Preparação do composto (*R), 33A sal de sódio e do composto 33b, composto de sal de sódio 34a (224 mg, 0,16 mmol) foi agitado em uma solução de metilamina a 33% em etanol (6,5 mL) a 45 °C até a conversão completa (cerca de 1 hora). A mistura de reação foi esfriada até a temperatura ambiente e concentrada sob pres- são reduzida. O produto bruto resultante foi triturado em MeCN e, em seguida, purificado por HPLC preparativa de fase reversa (fase estacio- nária: XBridge C18 OBD, 5 µm, 150 x 50 mm; fase móvel: solução aquosa de 0,25% de bicarbonato de amônia (A) - MeOH (B); eluição gradiente) para produzir o composto (*R), 32A, sal de amônio. A con- versão final no sal de sódio foi feita por eluição de uma solução aquosa em uma coluna empacotada com uma resina catiônica de troca de íons de sódio para produzir o composto (*R), 32A sal de sódio como um sólido branco macio após liofilização (31 mg, rendimento: 27%). RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,77 (br s, 1H), 8,32 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 7,34 (br s, 2 H), 7,18 (br s, 2 H), 6,22 (dd, J=15,3, 2,4 Hz, 1H), 6,01 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 5,70 - 5,84 (m, 1H), 5,59 (br d, J=51,7 Hz, 1H), 5,30 (dd, J=54,9, 3,3 Hz, 1H), 5,03 (br d, J=17,1 Hz, 1H), 4,15 - 4,29 (m, 3H), 3,70 - 3,79 (m, 1H), 3,20 (d, J=15,4 Hz, 1H), 3,00 - 3,11 (m, 1H); RMN P (162 MHz, DMSO-d6) δ ppm 52,83 (s, 1 P); ESI-MS: 31 m/z 678,4 [M+H]+.

[0438] O composto 34b (265 mg, 0,11 mmol) foi agitado em uma solução de metilamina a 33% em etanol (2 mL) a 45oC até a completa conversão (cerca de 1 hora). A mistura de reação foi esfriada até a tem- peratura ambiente e concentrada sob pressão reduzida.

O produto bruto resultante foi triturado em MeCN e, em seguida, purificado por HPLC preparativa de fase reversa (fase estacionária: XBridge C18 OBD, 5 µm, 150 x 50 mm; fase móvel: solução aquosa de 0,25% de bicarbonato de amônia (A) - MeOH (B); eluição gradiente) para fornecer o composto (*S) 32b, sal de amônio.

A conversão final no sal de sódio foi feita por eluição de uma solução aquosa em uma coluna empacotada com uma resina catiônica de troca de íons de sódio para produzir o composto (*S) 32b, sal de sódio como um sólido branco macio após liofilização (20 mg, rendimento: 25%). RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,22 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 6,45 (br d, J=15,7 Hz, 1H), 6,27 (br d, J=8,2 Hz, 1H), 5,91 (br d, J= 51,3 Hz, 1H), 5,52 -5,74 (m, 1H), 5,23 - 5,51 (m, 2 H), 4,50 ‒ 4,80 (sobreposição dos picos do solvente, 4 H), 4,00 - 4,43 (m, 1H), 3,59 - 3,98 (m, 1H); RMN 31P (162 MHz, D2O) 6 ppm 56,05 (s, 1 P); ESI-MS: m/z 678,1 [M+H]+. Exemplo 35

Etapa 1: preparação do composto 35b

[0439] O composto 35a foi coevaporada com piridina (30 mL) duas vezes antes do uso. A uma suspensão agitada do composto 35a (3 g, 11,22 mmol) em piridina (50 mL) adicionou-se por gotejamento através de um funil de gotejamento equalizador de pressão a 0°C TMSCl (7,2 mL, 56,73 mmol) por 30 minutos resultando em uma suspensão branca que foi agitada adicionalmente à temperatura ambiente durante 1 hora. Cloreto de isobutirila (2,4 g, 22,52 mmol) foi, então, adicionado à mistura de reação através de uma seringa a 0°C sob N2 durante 15 minutos. A suspensão resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro sob atmosfera de N2. Água (15 mL) foi adicionada à mistura de reação a 0°Ca, então hidróxido de amônio (17,3 mL, 25%) foi adicionado através de um funil de gotejamento com equalizador de pressão 0°C por 10 minutos.

[0440] A solução límpida resultante foi adicionalmente agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura de reação foi concen- trada sob pressão reduzida para produzir um resíduo. O resíduo foi pu- rificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (0% a 20% de MeOH em DCM) para fornecer 35b como um sólido amarelo, RMN 1 H (DMSO-d6, 400 MHz) δ7 ppm 12,12 (s, 1H), 11,71 (s, 1H). 8,30 (s, 1H), 5,79 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 4,46-4,50 (m, 1H), 4,30-4,38 (m, 1H), 3,68 (br dd, J= 12,0, 3,2 Hz, 3H), 3,52 (br dd, J = 12,0, 3,6 Hz, 1H), 2,73-2,84 (m, 1H), 2,18-2,28 (m, 1H), 1,90 (ddd, J=13,2, 6,0, 2,0 Hz, 1H), 1,11 (d, J=6,8 Hz, 6H); ESI-MS: m/z 338,1 [M+H]+. Etapa 2: preparação do composto 35c

[0441] A uma solução agitada do composto 35b (3,4 g, bruto), adi- cionou-se trifenilfosfina (7,93 g, 30,23 mmol) e imidazol (2,75 g, 40,4 mmol) em THF (35 mL) a 0°C em uma solução de I2 (7,68 g, 30,26 mmol) em THF (20 mL). Após a agitação da reação de um dia para outro a 35°C, a mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado, então diluída com DCM (150 mL) e lavada com solução aquosa saturada de Na2SO3 (100 mL x 2). A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (DCM:MeOH = 1:0 ~ 10: 1) para produzir o composto 35c (1,55 g) como um sólido amarelo. RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm 12,11 (s, 1H), 11,66 (s, 1H). 8,17 (s, 1H), 5,82 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 5,74-5,76 (m, 1H), 4,65-4,70 (m, 1H), 4,30-4,39 (m, 1H), 3,43-3,55 (m, 2H), 2,78 (quin, J = 6,8 Hz, 1H), 2,12- 2,25 (m, 2H), 1,12 (d, J = 6,8 Hz, 6H); ESI-MS: m/z 447,9 [M+H]+. Etapa 3: preparação do composto 35d

[0442] NaN3 (800 mg, 12,3 mmol) foi adicionado a uma solução agi- tada do composto 35c (1,73 g, 3,87 mmol) em DMF (25 mL) sob N2. A mistura foi agitada a 80°C durante 3 horas. A mistura foi diluída com água DCM (100 mL) e lavada com salmoura (50 mL x 2). A camada orgânica foi seca com Na2SO4 anidro e evaporada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (CH2Cl2/MeOH = 1:0 a 10:1) para produzir o composto 35d (1,27 g) como um sólido amarelo.

[0443] ESI-MS: m/z 363,1 [M+H]+. Etapa 4: preparação do composto 35e

[0444] O composto 35d foi coevaporado com piridina (20 mL) duas vezes antes do uso. A uma solução do composto 35d (1,27 g) em piri- dina (15 mL) adicionou-se DMAP (215 mg, 1,76 mmol) e DMTrCl (1,781 g, 5,257 mmol) a 0°C. Após a agitação da reação à temperatura ambi- ente de um dia para o outro, a mistura foi diluída com CH2Cl2 (80 mL) e, então, lavada sucessivamente com solução aquosa saturada de NaHCO3 (50 mL x 3). A camada orgânica foi coletada, seca com Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 85% de EtOAc em éter de petróleo) para fornecer o composto 35e (1,61 g) como um sólido amarelo. RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12,05 (s, 1H), 11,59 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,36 (d, J = 7,2

Hz, 2H), 7,22-7,29 (m, 2H), 7,12-7,22 (m, 5H), 6,76 (d, J =8,8 Hz, 2H), 6,69 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 5,55 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 4,72 (br d, J = 6,4 Hz, 1H), 4,42-4,51 (m, 1H), 3,64 (d, J = 12,4 Hz, 6H), 3,47-3,54 (m, 1H), 3,37 (br d, J = 6,4 Hz, 1H), 2,79 (quin, J = 6,8 Hz, 1H), 2,03-2,14 (m, 1H), 1,85-1,94 (m, 1H), 1,13 (t, J = 6,8 Hz, 6H); ESI-MS: m/z 665,2 [M+H]+. Etapa 5: preparação do composto 35f

[0445] A uma solução do composto 35e (1,61 g, 2,42 mmol) em THF (16 mL) foi adicionado Ph3P (889 mg, 3,39 mmol) em uma porção, então a mistura foi agitada a 40°C durante 2 horas sob N2. Água (8 mL) foi adicionada à mistura, então ela foi adicionalmente agitada a 40°C de um dia para outro em. A mistura foi combinada com uma outra batelada bruta e diluída com CH2Cl2 (100 mL), água (80 mL), e extraída com CH2Cl2 (100 mL x 2). As camadas orgânicas foram combinadas, secas com Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para forne- cer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 8% de MeOH em DCM) para produzir o com- posto 35f (1,5 g. 2,34 mmol) como um sólido branco. RMN 1H (DMSO- d6, 400 MHz) δ7,92 (s, 1H), 7,36 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,13-7,28 (m, 7H), 6,76 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,70 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 5,59 (d, J =1,6 Hz, 1H), 4,56-4,87 (m, 5H), 4,26 (dq, J = 10,0, 5,2 Hz, 1H), 3,65 (d, J = 11,6 Hz, 6H), 2,78 (spt, J = 6,8 Hz, 1H), 2,58-2,72 (m, 2H), 1,99-2,11 (m, 1H), 1,73 (br dd, J = 13,2, 5,6 Hz, 1H), 1,13 (t, J = 6,8 Hz, 6H); ESI-MS: m/z 639,2 [M+H]+. Etapa 6: preparação do composto 35g

[0446] Uma solução de clorossulfato de 4-nitrofenila 3n (1,67 g, 7,04 mmol) em CH2Cl2 seco (3 mL) foi adicionada rapidamente a uma mistura do composto 35f (1,5 g, 2,35 mmol), 4-nitrofenol (980,1 mg, 7,04 mmol), Et3N (1,96 mL, 14,14 mmol) em CH2Cl2 seco (27 mL) sob N2 a - 78 °C, então aquecida à temperatura ambiente por um período de 2 ho- ras. A mistura foi combinada com uma outra batelada bruta, diluída com

CH2C12 (100 mL) e lavada com solução aquosa saturada de NaHCO 3 (100 mLx5). A camada orgânica foi coletada, seca com Na 2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica- gel (0 a 90% de EtOAc em éter de petróleo) para fornecer o composto 35 g (1,6 g) como um sólido amarelo. RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ12,05 (s, 1H), 11,55 (s, 1H), 8,91 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 8,20-8,27 (m, 2H), 7,93 (s, 1H), 7,43-7,51 (m, 2H), 7,34 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,21-7,28 (m, 2H), 7,11-7,21 (m, 5H), 7,11-7,21 (m, 1H), 6,75 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,68 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 5,55 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 4,67 (br d, J = 6,4 Hz, 1H), 4,34-4,44 (m, 1H), 3,64 (d, J = 12,4 Hz, 6H), 3,30-3,37 (m, 1H), 3,18- 3,27 (m, 1H), 2,78 (spt, J = 6,8 Hz, 1H), 1,99-2,10 (m, 1H), 1,89 (br dd, J = 12,4, 5,6 Hz, 1H), 1,10-1,15 (m, 6H); ESI-MS: m/z 840,3 [M+H]+. Etapa 7: preparação do composto 35i

[0447] Uma suspensão do composto 35h (910 mg, 1,347 mmol), composto de 35g (1,6 g, 1,905 mmol) e peneiras moleculares (3 g) em THF (40 mL) foi agitada sob N2 por 30 minutos à temperatura ambiente, seguida pela adição de DMAP (659 mg, 5,39 mmol) e, então, agitação a 45 °C de um dia para outro sob N2. A mistura de reação foi filtrada através de um bloco de terra diatomácea e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para resultar em um resíduo amarelo, o qual foi dis- solvido em DCM (60 mL), então lavado com solução aquosa saturada de NaHCO3 (40 mLx3). A fase orgânica foi coleta, seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo amarelo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (éter de petróleo/EtOAc=1:0~1:4) para produzir o composto 35i (1,13 g) como um sólido branco, o que foi confirmado por LCMS, ESI-MS: m/z 1377,3 [M+H]+. Etapa 8: preparação do composto 35j

[0448] A uma solução agitada do composto 35i (1,13 g, 3,5 mmol)

em DMF (30 mL) adicionou-se água (140 mg, 7,77 mmol) e DCA (220 mg, 1,7 mmol). A mistura amarela foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Em seguida, adicionou-se MeOH (5 mL) e piri- dina (244,5 mg, 4 eq) o que resuloltu em solução amarela, que foi agi- tada adicionalmente durante 15 minutos; a solução foi agitada com uma outra batelada bruta e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (DCM:MeOH= 1:0 a 10:1) para produzir o composto 35j (630 mg) como um sólido branco. RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12,11 (s, 1H), 11,64 (s, 1H), 11,28 (s, 1H), 8,77 (s, 1H), 8,70 (s, 1H). 8,62 (br t, J = 6,0 Hz, 1H), 8,14 (s, 1H), 8,04 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,62-7,69 (m, 1H), 7,52-7,59 (m, 2H), 6,48 (dd, J = 16,8, 2,8 Hz, 1H), 5,76-5,96 (m, 2H), 5,72 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 5,30-5,43 (m, 2H), 4,60 (br s, 1H), 4,36- 4,45 (m, 1H), 4,28-4,34 (m, 1H), 3,74-3,84 (m, 1H), 3,58-3,68 (m, 1H), 3,23-3,35 (m, 2H), 2,71-2,83 (m, 1H), 2,17-2,28 (m, 1H), 2,00-2,09 (m, 1H), 1,11 (dd, J = 6,8, 1,6 Hz, 6H); RMN F (DMSO-d6, 376 MHz) δ- 19 202,81 (dt, J= 52,1. 16,5 Hz, 1F); ESI-MS: m/z 772,3 [M+H]+. Etapa 9: preparação do composto 35k

[0449] THF foi recém-destilado sobre sódio em presença de benzo- fenona e CH3CN foi recém-destilada na presença de CaH2 antes do uso. A uma solução do composto 35j (120 mg, 0,15 mmol) em THF (3 mL) adicionou-se 800 mg de peneiras moleculares de 4A (pó, 800 mg) e uma solução de 1H-tetrazol (3,45 mL, 0,45 M, preparado por dissolução de 945 mg de tetrazol (seco por liofilização) em 30 mL de CH 3CN seca, seguida pela adição de 1 g de peneiras moleculares de 4A e então agi- tação durante 1 hora sob N2 antes do uso); a mistura foi purgada com N2. Uma solução de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiami- dita (84,36 mg, 0,28 mmol) em THF (0,8 mL) foi adicionada por goteja- mento por 25 minutos através de um seringa, e então agitada à tempe- ratura ambiente por 1,5 hora. Uma solução de TBHP (0,25 mL, 1,24 mmol, 5M) foi adicionada e agitada por mais 30 minutos. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica- gel (DCM:MeOH = 1:0~10:1) para produzir 39k como um sólido branco. (68 mg). ESI-MS: m/z 887,4 [M+H]+. Etapa 10: preparação do composto 26, sal de amônio

[0450] Uma solução do composto 35k (68 mg, 0,077 mmol) em MeNH2/EtOH (5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2 ho- ras. Após a agitação da mistura de reação a 40°C por 1 hora, o volátil evaporar e o sólido branco obtido foi dissolvido em uma mistura de água (20 mL), então extraída com DCM (10 mL x 4). A camada aquosa foi liofilizada e purificada por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: Xbridge 150x30 mmx10 µm, condição: A: água (10 mM de NH 4HCO3)- ACN: MeCN, início: B 0%, fim B:30%; taxa de fluxo 25 mL/min.) para produzir o composto 26, sal de amônio como um sólido branco (18,8 mg).

[0451] RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm 10,78 (br s, 1H), 8,84 (br d, J= 6,8 Hz, 1H), 8,45 (s, 1H). 8,25 (s, 1H), 7,86 (s, 1H), 6,67 (br s, 1H), 6,44 (br d, J= 18,0 Hz, 1H), 5,91 (s, 1H), 5,62 (br s, 1H), 5,49 (br d, J = 3,2 Hz, 1H), 5,30 - 5,16 (m, 2H), 4,72 (br s, 1H), 4,44 (br d, J 9,4 Hz, 1H), 4,48 - 4,40 (m, 1H), 4,29 (br d, J= 12,4 Hz, 1H), 4,21 (br t, J= 10,8 Hz, 1H), 3,89 (br d, J= 12,0 Hz, 1H), 3,45 - 3,33 (m, 1H), 2,92 (br d, J= 19 11,2 Hz, 1H), 1,94 (br t, J = 10,8 Hz, 1H); RMN F (376 MHz, DMSO- d6) δ ppm -198,95 (br s, 1F); RMN 31P (162 MHz, DMSO-d6) δ ppm -4,86 (br s, 1P); ESI-MS: m/z 660,3 [M+H]+. Conversão em sal de sódio

[0452] Dowex 50W × 8, 200 a 400 (5 mL, forma de H) foi adicionado a um béquer e lavado com água desionizada (30 mL). Então, à resina adicionou-se H2SO4 a 15% em água desionizada, a mistura foi gentil- mente agitada durante 5 minutos e decantada (30 mL). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (ao menos 4 CV), e então com água desioni- zada até ficar neutra.

A resina foi transferida de volta para o béquer, NaOH a 15% em solução de água desionizada foi adicionado, e a mis- tura foi gentilmente agitada durante 5 minutos, e decantada (1×). A re- sina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 CV) e, então, com água desionizada até que ficasse neutra.

O composto 26 sal de amônio (10 mg) foi dissolvido em quantidade mínima de água desionizada e CH3CN (1: 1, v/v, 3 mL), adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada.

As frações adequadas foram agrupadas e liofilizadas para o composto 26, sal de sódio (6,1 mg) como um sólido branco.

RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,22 (br s, 1H), 8,11 (br s, 1H), 7,75 (s, 1H), 6,40 (br d, J= 16,8 Hz, 1H), 5,88 (br s, 1H), 5,73 (br s, 1H), 5,60 (br s, 1H), 5,24 -5,04 (m, 1H), 4,59 (br d, J= 8,8 Hz, 1H), 4,49 (br s, 1H), 4,42 (br d, J= 12,0 Hz, 1H), 4,13 (br d, J= 11,8 Hz, 1H), 3,69 (br d, J= 13,6 Hz, 1H), 3,41 (br d, J= 8,0 Hz, 1H), 2,76 (br s, 1H), 2,26 - 2,19 (m, 1H), 2,22 (br d, J= 6,8 Hz, 1H); RMN 19F (376 MHz, D2O) δ ppm -200,45 (br s, 1F); RMN 31 P (162 MHz, D2O) δ ppm - 2,84 (s, 1P); ESI-MS: m/z 660,0 [M+H]+. Exemplo 36

Etapa 1: preparação do composto 36b

[0453] A uma solução de 36a (4,2 g, 24,11 mmol) em DMF (40 mL), adicionou-se por gotejamento TEA (4,88 g, 48,22 mmol) e MsCl (4,97 g, 43,4 mmol) durante 10 minutos. Após a agitação a 25°C durante 2 ho- ras, a mistura foi particionada entre DCM (100 mL) e água (50 mL).

[0454] A camada orgânica foi lavada com salmoura (3 x 50 mL),

seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada até a secura para for- necer um resíduo. O resíduo (combinado com sílica-gel: 10 g) foi purifi- cado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (PE/E A de 10% a 100% e DCM/MeOH=0% a 5%) para fornecer o composto 36b (5,6 g) como um sólido amarelo-claro. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5,84 (d, J=2,4 Hz, 1H), 4,78 (t, J=3,4 Hz, 1H), 4,51 -4,40 (m, 2H), 4,29-4,22 (m, 1H), 3,09-3,05 (m, 3H), 2,18-2,09 (m, 1H), 1,84-1,73 (m, 1H), 1,52 (s, 3H), 1,33 (s, 3H). Etapa 2: preparação do composto 36c

[0455] A uma solução do composto 36b (5,6 g, 22,19 mmol) em DMF (55 mL) adicionou-se NaN3 ((4,25 g, 65,37 mmol) a 25°C. Após a agitação a 100°C durante 3 horas, a mistura foi diluída com solução aquosa saturada de NaHCO3 (100 mL) e extraída com acetato de etila (3 x 100 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura (100 mL), seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada até a secura para for- necer um sólido amarelo. O sólido (combinado com sílica-gel: 10 g) foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (sílica-gel: 20 g) (eluição gradiente: 0 a 100% de acetato de etila em petróleo então 0 a 20% de metanol em acetato de etila) para fornecer o composto 36c (3,8 g) como um sólido amarelo. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5,85 (d, J=3,4 Hz, 1H), 4,77 (t, J=4,2 Hz, 1H), 4,45 - 4,35 (m, 1H), 3,59 (dd, J=3,7, 13,2 Hz, 1H), 3,28 (dd, J=4,6. 13,2 Hz, 1H), 2,09 (dd, J= 4,4, 13,4 Hz, 1H), 1,79 (ddd, J=4,8, 10,7, 13,4 Hz, 1H), 1,52 (s, 3H), 1,33 (s, 3H). Etapa 3: preparação do composto 36d

[0456] Anidrido acético (18,03 mL, 190,75 mmol) e ácido sulfúrico concentrado (0,104 mL, 1,91 mmol) foram adicionados a uma solução agitada do composto 36c (3,8 g, 19,08 mmol) em ácido acético (109,1 mL, 1907,56 mmol) a 0°C. Após a agitação durante 2 horas a 25°C, a mistura de reação foi bruscamente resfriada com água fria (100 mL) e agitada por 30 minutos à temperatura ambiente. A mistura foi extraída com acetato de etila (3 x 200 mL). As camadas orgânicas foram combi- nadas e sucessivamente lavadas com solução aquosa saturada de bi- carbonato de sódio (3 x 300 mL), salmoura (2 x 200 mL), secas com Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para re- sultar em um resíduo. O resíduo (combinado com sílica-gel: 10 g) foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 100% de PE em EA) para fornecer o composto 36d (3,2 g) como um óleo ama- relo. RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 6,21 - 6,14 (m, 1H), 5,22 (d, J=5,0 Hz, 1H), 4,58- 4,50 (m, 1H), 3,57 (dd, J=4,0, 13,1 Hz, 1H), 3,25 (dd, J=4,6, 13,2 Hz, 1H), 2,29-2,19 (m, 1H), 2,12-2,10 (m, 1H), 2,09 (s, 6H). Etapa 4: preparação do composto 36e

[0457] Uma solução de 5-amino-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pirimidin- 7(6H)-ona (2,37 g, 15,6 mmol) e BSA (11,041 g, 54,273 mmol) em CH3CN anidro (200 mL) foi agitada a 80°C durante 1 hora e, então, res- friada até 0°C. Então adicionou-se uma solução do composto 36d (3,3 g, 13,57 mmol) em CH3CN (80 mL) seguindo-se de adição de SnCl4 (10,6 g, 40,7 mmol). Após a agitação durante 26 horas a 48°C, a mistura foi resfriada e diluída com EtOAc (100 mL) e, então, adicionada por go- tejamento em solução aquosa saturada de NaHCO3 (500 mL) a 0°C. A camada orgânica foi lavada com salmoura (2 x 100 mL), seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão para fornecer um re- síduo. O resíduo (combinado com sílica-gel: 10 g) foi purificado por cro- matografia em coluna rápida com sílica-gel (2% a 10% de MeOH em DCM, V/V) para fornecer o composto 36e (6,4 g) como uma espuma amarela. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11,08 (br, s, 1H), 7,28 (br, s, 1H), 6,68 (br, s, 1H), 6,10 (s, 1H), 5,68 (d, J=5,5 Hz, 1H), 4,61- 4,50 (m, 1H), 3,58 (dd, J=3,1, 13,4 Hz, 1H), 3,34-3,29 (m, 1H), 2,71-2,59 (m, 1H), 2,33-2,24 (m, 1H), 2,09 (s, 3H); ESI-MS: m/z=336,1 [M+H]+. Etapa 5: preparação do composto 36f

[0458] A uma solução de 36e (4,8 g, 14,32 mmol) em DMF (48 mL)

adicionou-se trietilamina (4,34 g, 42,95 mmol) e DMAP (504,37 mg, 4,13 mmol) a 25°C. Após a agitação por 5 minutos, a mistura foi resfriada até 0°C e cloreto de isobutirila (3,05 g, 28,63 mmol) foi adicionado à solução em 10 minutos. Após a agitação a 25°C por 2 horas, a mistura foi diluída com EtOAc (100 mL), lavada com salmoura (3 x 100 mL), seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão para produzir o com- posto 36f (4,8 g) como um sólido amarelo que foi usado diretamente na etapa seguinte sem qualquer purificação adicional. Etapa 6: preparação do composto 36g

[0459] A uma solução do composto 36f (6,5 g) em THF/MeOH/água (240/150/45 mL) foi adicionado NaOH (0,5M em água, 64,14 mL) a 0°C. A mistura reacional foi agitada a 0°C durante 1 hora. A solução foi aci- dificada com ácido acético (~2 mL) até pH 7. A solução foi concentrada sob pressão para produzir um sólido amarelo (6 g). O resíduo (combi- nado com sílica-gel: 10 g) foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (sílica-gel: 40 g) (DCM/MeOH=1/0 a 5/1) para pro- duzir o composto 36 g (4,5 g) como um sólido amarelo-claro.

[0460] RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 6,20 (s, 1H), 4,94 (d, J=5,0 Hz, 111;·. 4,73 - 4,65 (m, 1H), 3,52-3,46 (m, 1H), 3,38-3,33 (m, 1H), 2,78-2,61 (m, 211), 2,20 (ddd, J=1,3, 6,0, 13,3 Hz, 1H), 1,23 (d, J=7,0 Hz, 6H). ESI-MS: m/z=364,2 [M+H]+. Etapa 7: preparação do composto 36h

[0461] Uma solução do composto 36g (5 g, 13,76 mmol) em Py (50 mL) foi tratada com DMAP (841 mg, 6,88 mmol) a 0°C durante 10 minu- tos. Após 10 minutos, DMTrCl (9,3 g, 27,52 mmol) foi adicionado e a solução foi então agitada a 80°C por 12 horas. A mistura de reação foi diluída com EA (50 mL) e lavada com salmoura (3 x 80 mL). A camada orgânica foi seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pres- são para fornecer um sólido marrom (10 g). O sólido amarelo (combi- nado com sílica-gel: 15 g) foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 100% de PE em EA) para fornecer o composto 36 h (8,0 g) como um sólido amarelo-claro. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ ppm 12,01 (br, s, 1H), 8,35 (br, s, 1H), 7,45-7,42 (m, 2H), 7,28-7,24 (m, 7H), 6,73-6,66 (m, 4H), 5,10 (d, J=5,8 Hz, 1H), 4,84-4,74 (m, 1H), 3,83 -3,77 (m, 1H), 3,71 (d, J=6,3 Hz, 6H), 3,43-3,35 (m, 1H), 3,29-3,23 (m, 1H). 2,68- 2,56 (m, 2H), 2,40 (dd, J=5,9, 13,2 Hz, 1H) 1,31 (dd, J=6,9, 11,7 Hz, 6H).

[0462] ESI-MS: m/z 688,1 [M+Na]+. Etapa 8: preparação do composto 36i

[0463] Uma solução do composto 36h (8,0 g, 12,02 mmol) em EA/EtOH (1/1, 350 mL) foi tratada com Pd/C (4,5 g); após a agitação da mistura sob atmosfera de H2 (15 psi) por 2 horas, a solução foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo (combinado com sílica-gel: 10 g) foi purificado por cromatografia em co- luna rápida com sílica-gel (sílica-gel: 40 g) (DCM-MeQHM/O to 5/1) para fornecer o composto 36i (6,0 g) como um sólido amarelo-claro. ESI-MS: m/z = 640,4 [M+H]+. Etapa 9: preparação do composto 36j

[0464] Uma solução do composto 36i (6,0 g, 8,44 mmol) em DCM (130 mL) foi tratada com 4-nitrofenol (3,52 g, 25,32 mmol) e trietilamina (5,12 g, 50,65 mmol). Após o resfriamento até -78°C, uma solução de clorossulfato 4-nitrofenila (6,02 g, 25,32 mmol) em DCM (20 mL) foi adi- cionada a -78°C. Após a agitação a -78 °C durante 1 hora, a mistura foi filtrada e o filtrado diluído com DCM (300 mL). A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de NaHCO3 (3 x 150 mL) e con- centrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo (10 g). O resí- duo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 100% de acetato de etila em petróleo) para pro- duzir o composto 36j (5,9 g) como um sólido amarelo. RMN 1H (400 MHz, CD3CN) δ ppm 12,07 (br, s, 1H), 9,39 (br, s, 1H), 8,22-8,17 (m,

2H), 7,40-7,36 (m, 4H), 7,24-7,14 (m, 7H), 6,76-6,66 (m, 4H), 5,76 (d, J= 3,8 Hz, 1H), 4,97-4,90 (m, 1H), 4,68-4,60 (m, 1H), 3,68 (d, J=8,3 Hz, 6H), 3,46-3,39 (m, 1H), 3,32 -3,25 (m, 1H), 2,65 (td, J=7,0, 13,7 Hz, 1H), 2,40-2,32 (m, 1H), 2,22-2,19 (m, 1H), 1,22 (d, J=7,0 Hz, 3H), 1,21-1,18 (m, 3H).

[0465] ESI-MS: m/z 863,2 [M+Na]+. Etapa 10: preparação do composto 36k

[0466] Uma solução do composto 36j (1,18 g, 1,40 mmol), com- posto 35 h (0,73 g, 1,08 mmol) e peneiras moleculares de 4A (1 g) em DCE (21 mL) foi agitada sob N2 durante 30 minutos à temperatura am- biente e em seguida adicionou-se DMAP (660,41 mg, 5,41 mmol). Após a agitação da reação a 45°C (temperatura do óeo) por 12 horas, a mis- tura foi filtrada e o filtrado foi particionado entre DCM (100 mL) e sal- moura (100 mL). A camada orgânica foi sucessivamente lavada com solução aquosa saturada de NaHCO3 (3 x 100 mL), seca com Na2SO4 anidro, filtrada e evaporada sob pressão reduzida para fornecer um re- síduo (4 g). O resíduo (combinado com sílica-gel: 6 g) foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (PE/EA de 10% a 100% e DCM/MeOH=0% a 5%) para fornecer o composto 36k (1,2 g) como um sólido amarelo-claro.

[0467] RMN 1H (400 MHz, CD3CN) δ 11,88 (br, s, 1H). 9,42 (br, s, 1H). 9,09 (br, s, 1H). 8,38 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,98-7,85 (m, 1H), 7,76 (br, d, J=7,6 Hz, 1H), 7,47 -7,39 (m, 1H), 7,35- 7,27 (m, 2H), 7,12 (br, d, J=7,3 Hz, 2H), 7,07 (br, d, J=6,4 Hz, 2H), 7,02 - 6,86 (m, 11 H), 6,72 (br, d, J=8,6 Hz, 1H), 6,59 - 6,40 (m, 8H), 6,13 - 6,03 (m, 1H), 5,83 (br, s, 0,5H), 5,73-5,62 (m, 1H), 5,46 (br, s, 1H), 4,67 (br, s, 1H), 4,33 (br, s, 1H), 3,99 (br, s, 1H), 3,67-3,38 (m, 11H), 3,25 (br, d, J= 11,2 Hz, 1H), 3,10 (br, d, J=14,4 Hz, 1H), 3,00 (br, d, J=8,1 Hz, 1H), 2,89 (br, d, J=6,1 Hz, 1H), 2,51-2,41 (m, 1H), 2,14 -2,05 (m, 1H), 1,75-1,72 (m, 6H); RMN 19 F (376 MHz, CD3CN) δ ppm -200,072 (s, 1F); ESI-MS: m/z 1377,8

[M+H]+. Etapa 11: preparação do composto 36l

[0468] Uma solução do composto 36k (1,2 g, 0,78 mmol) em DCM (30 mL) foi tratada com água (141,25 mg, 7,84 mmol) e DCA (202,19 mg, 1,57 mmol) resultando em uma solução vermelha. Após a agitação a 25°C durante 12 horas, MeOH (5 mL) foi adicionado à mistura até a solução se tornar transparente seguida pela adição de piridina (620,19 mg, 7,84 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas, então, concentrada sob pressão para fornecer um resíduo. O resíduo (combinado com sílica-gel: 2 g) foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 8% DCM em MeOH) para produzir o composto 36l (0,54 g) como um sólido branco, RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,26 (s, 1H), 11,92 (s, 1H), 11,27 (s, 1H), 8,77 (s, 1H), 8,69 (s, 1H), 8,53 (br, t, J= 5,8 Hz, 1H), 8,05 (br, d, J=7,5 Hz, 2H), 7,69- 7,63 (m, 1H), 7,60-7,53 (m, 2,H). 6,46 (dd, J= 2,6, 16,7 Hz, 1H), 6,04 (s, 1H), 5,92 (br, s, 0,5H), 5,86 (br, d, J=3,8 Hz, 1H), 5,79 (br, d, J=3,3 Hz, 0,5H), 5,37-5,26 (m, 2H), 4,75 (br, s, 1H), 4,60-4,49 (m, 1H), 4,27 (br, s, 1H), 4,10 (br, s, 1H), 3,77 (br, d, J=12,5 Hz, 1H), 3,60 (br, dd, J=4,8, 8,0 Hz, 1H), 2,79 (td, J=6,7, 13,7 Hz, 1H), 2,19 (br, dd, J=6,3, 12,5 Hz, 1H), 1,13 (d, J=6,8 Hz, 6H).

[0469] RMN 19F (376 MHz, DMSO-d6) δ ppm -202,787 (s, 1F); ESI- MS: m/z 773,3 [M+H]+. Etapa 12: preparação do composto 3a

[0470] Nota: o THF foi recém-destilado sobre sódio em presença de benzofenona e a CH3CN foi recém-destilada na presença de CaH2 antes do uso.

[0471] Uma solução do composto 36l (100 mg, 0, 13 mmol) em THF (2 mL) foi tratada com peneira molecular de 4A (pó) (1 g); após a agita- ção durante 20 minutos, uma solução de 1H-tetrazol (0,45 M) em

CH3CN (2,3 mL) foi adicionada a 25°C. Foi, então, adicionada uma so- lução de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (0,078 g, 0,26 mmol, diluída em 2 mL de THF) a 25°C e a mistura agitada durante 1,5 hora, seguida pela adição de hidroperóxido de terc-butila (0,12 mL, 0,65 mmol) a 25°C. Após a agitação por 1,5 hora, a mistura foi diluída com DCM (20 mL), filtrada através de um bloco de terra diatomácea e concentrada para fornecer o produto bruto como um sólido amarelo (1,0 g). O produto bruto (combinado com sílica-gel: 2 g) foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 15% de MeOH em CH2Cl2) para produzir o composto 36 m (50 mg) como um sólido ama- relo-claro. ESI-MS: m/z = 888,3 [M+H]+. Etapa 13: preparação do composto 37, sal de sódio

[0472] Uma solução do composto 36m (50 mg, 0,056 mmol) em EtOH (2,5 mL) foi tratada com metilamina (2,5 mL, 33% em EtOH). Após a agitação a 25°C por 3 horas, a solução foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: Waters Xbridge Prep OBD C18 5 µm 150x30, condição: água (10 mM de NH4HCO3)-ACN B: 0, fim B 30, tempo de gradiente (min): 7, 100% de B, tempo de retenção (min): 1, taxa de fluxo (mL/min): 25) para produzir o composto 37, sal de amô- nio (12,2 mg) como um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, D2O) δ 8,58 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 6,66 (d, J=18,1 Hz, 1H), 6,46 (s, 1H), 5,94-5,75 (m, 1H), 5,51-5,41 (m, 1H), 5,37 (br, s, 1H), 4,63 (br, d, J=12,5 Hz, 1H), 4,35 (br, d, J=13,4 Hz, 1H), 3,92 (br, dd, J=3,7, 14,4 Hz, 1H), 3,50 -3,36 (m, 1H), 3,16 (br, d, J=12,0 Hz, 1H), 2,65-2,55 (m, 1H); RMN 19F (376 MHz, D2O) δ ppm -199,359 (s, 1F); RMN 31P (162 MHz, D2O) δ ppm -3,307 (s, 1P); ESI-MS: m/z 661,3 [M+H]+. Conversão em sal de sódio

[0473] Dowex 50W × 8, 200 a 400 (10 mL, forma de H) foi adicio- nado a um béquer e lavado com água desionizada (30 mL). Então, à resina adicionou-se H2SO4 a 15% em água desionizada, a mistura foi gentilmente agitada durante 5 minutos e decantada (30 mL). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 CV), e então com água desio- nizada até ficar neutra. A resina foi transferida de volta para o béquer, NaOH a 15% em solução de água desionizada foi adicionado, e a mis- tura foi gentilmente agitada durante 5 minutos, e decantada (1×). A re- sina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 CV) e, então, com água desionizada até ficar neutra. O composto 37, sal de amônio (28 mg), foi dissolvido em água desioni- zada/MeCN (20 mL/5 mL), adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada. As frações adequadas foram agrupadas e liofilizadas para o composto 37, sal de sódio (24,5 mg) como um sólido branco.

[0474] RMN 1H (400 MHz, D2O) = 8,63 (br, s, 1H), 8,48 (br, s, 1H), 6,71 (br, d, J= 17,6 Hz, 1H), 6,51 (br, s, 1H), 5,97 - 5,79 (m, 1H), 5,54 - 5,40 (m, 2H), 4,69 (br, d, J=13,3 Hz, 1H), 4,41 (br, d, J=13,1 Hz, 1H), 3,97 (br, d, J=13,8 Hz, 1H), 3,54-3,41 (m, 1H), 3,22 (br, d, J=12,5 Hz, 19 1H), 2,66 (br, s, 1H); RMN F (376 MHz, D2O) ppm -199,443 (s, 1F); RMN 31P (162 MHz, D2O) ppm -3,283 (s, 1P); ESI-MS: m/z 661,2 [M+H]+. Exemplo 37

Etapa 1: preparação do composto 37b

[0475] A uma solução agitada do composto 37a (10 g, 28,3 mmol),

trifenilfosfina (22,27 g, 84,91 mmol), imidazol (7,71 g, 113,25 mmol) em THF (100 mL), foi adicionada uma solução de iodo (21,55 g, 84,91 mmol) em THF (100 mL) a 0°C. Após a agitação a 35°C de um dia para o outro, a mistura de rea;'ao foi filtrada, concentrada sob pressão redu- zida e diluída com DCM (400 mL). A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de Na2SO3 (200 mL x 2), seca com NanSCL anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (DCM: MeOH = 1:0 a 10:1) para fornecer o composto 37b (6 g) como um sólido branco. RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12,10 (s, 1H), 11,65 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 5,83 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,66 (br d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,45 (br d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,68 (q, J = 5,6 Hz, 1H), 4,11 (br d, J= 3,2 Hz, 1H), 3,92-4,02 (m, 1H), 3,58 (br dd, J = 10,4, 6,0 Hz, 1H), 3,43 (br dd, J = 10,4, 6,8 Hz, 1H), 2,76 (dt, J = 13,6, 6,8 Hz, 1H), 1,12 (br d, J = 6,8 Hz, 6H); ESI-MS: m/z 463,9 [M+H]+. Etapa 2: preparação do composto 37c

[0476] Uma solução do composto 37b (6 g, 12,95 mmol) em DMF (100 mL) foi tratada com NaN3 (2,47 g, 37,99 mmol) sob N2. A mistura foi agitada a 80°C durante 3 horas. A mistura foi diluída com DCM (400 mL) e lavada com salmoura (300 mL x 2). A camada orgânica foi seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em co- luna rápida com sílica-gel (DCM:MeOH = 1:0 a 10:1) para fornecer o composto 37c (4 g) como um sólido branco. RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12,10 (s, 1H), 11,64 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 5,84 (d, J= 6,0 Hz, 1H), 5,65 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,38 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 4,60 (q, J = 5,6 Hz, 1H), 4,09-4,11 (m, 1H), 4,02 (dt, J = 7,2, 3,6 Hz, 1H), 3,62-3,72 (m, 1H), 3,52-3,60 (m, 1H), 2,77 (sept, J = 6,8 Hz, 1H), 1,12 (d, J = 6,8 Hz, 6H); ESI-MS: m/z 379,0 [M+H]+. Etapa 3: preparação do composto 37d

[0477] O composto 37c foi coevaporado com piridina (80 mL) duas vezes antes do uso. A uma solução de 37c (4 g, 10,57 mmol) em piridina (40 mL), adicionou-se DMAP (646 mg, 5,29 mmol), e DMTrCl (5,38 g, 15,88 mmol) a 0°C. Após a agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro, a reação foi diluída com CH2Cl2 (200 mL). A camada orgâ- nica foi sucessivamente lavada com solução aquosa saturada de NaHCO3 (150 mL x 3), seca com Na2SO4anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para resultar em um resíduo. O resíduo foi purifi- cado por cromatografia de coluna rápida com sílica-gel (0 a 90% de EtOAc em éter de petróleo) para fornecer o produto bruto como um pro- duto amarelo. O produto bruto foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (Phenomenex Synergi Max RP 10 µm 250 x 50 mm; fase móvel: Água - ACN de 30% a 70%; taxa de fluxo: 100 mL/min) para fornecer o composto 37d (4,15 g) como um sólido branco. RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12,02 (s, 1H), 11,43 (br s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,42 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 7,28 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,11-7,22 (m, 5H), 6,71 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 6,63 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 5,66 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 5,48 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 4,80 (br t, J = 4,8 Hz, 1H), 4,05 (dt, J = 7,2, 4,0 Hz, 1H), 3,65 (d, J = 11,6 Hz, 6H), 3,56 (br dd, J = 13,2, 7,2 Hz, 1H), 3,44- 3,51 (m, 1H), 3,39 (dd, J = 13,2, 4,0 Hz, 1H), 2,79 (quin, J = 6,8 Hz, 1H), 1,14 (dd, J = 6,8, 2,3 Hz, 6H); ESI-MS: m/z 681,4 [M+H]+. Etapa 4: preparação do composto 37e

[0478] NaH (60% em óleo mineral, 189,5 mg, 4,74 mmol) foi adicio- nado a uma suspensão do composto 37d (2,15 g, 3,16 mmol) em DMF (20 mL) a 0°C. Após a agitação a 0°C durante 0,5 hora, uma solução de cloreto de 4-metoxibenzila (0,512 mL, 3,8 mmol) em DMF (10 mL) foi adicionada por gotejamento. Após a adição estar completa, a mistura de reação foi agitada a 0°C durante 1 hora e bruscamente resfriada com água (80 mL) e extraída com EtOAc (100 mL x 2). A camada orgânica foi seca com Na2SO4 anidro, filtrada e evaporada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi combinado com uma outra ba- telada e purificado por HPLC preparativa de fase reversa (YMC Triart C18, 7 µm 250x50 mm; fase móvel: água (10 mM de NH4HCO3)-ACN de 55% a 90%; taxa de fluxo: 90 mL/min) para fornecer o composto 37e (1,5 g, 1,83 mmol) como um sólido branco e o composto 37d (2,16 g, 3,09 mmol) como um sólido amarelo. RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12,04 (s, 1H), 11,42 (br s, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,32 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,22-7,28 (m, 2H), 7,14-7,20 (m, 5H), 7,05 (d, J =9,2 Hz, 2H), 6,96 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,74 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,66 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,02 (d, J = 76, Hz, 1H) 4,87 (br s, 1H), 4,34 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 4,22 (dd, J = 7,2, 5,2 Hz, 1H), 4,00 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,69 (d, J = 9,6 Hz, 7H), 3,27 (dd, J = 12,8, 4,8 Hz, 1H), 2,76 (spt, J = 6,8 Hz, 1H), 2,61 (br d, J = 3,6 Hz, 1H), 1,09-1,17 (m, 6H). ESI-MS: m/z 801,4 [M+H]+. Etapa 5: preparação do composto 37f

[0479] Ph3P (673 mg, 2,566 mmol) foi adicionado em uma única por- ção a uma solução do composto 37e (1,5 g, 1,83 mmol) em THF (15 mL). A mistura foi agitada a 40°C durante 2 horas sob N2 seguida de adição de água (7,5 mL). Após agitação a 40°C ON, a mistura foi diluída com DCM (50 mL), água (40 mL) e extraída com DCM (50 mL x 2). As camadas orgânicas foram então combinadas, secas com Na2SO4 ani- dro, filtradas e evaporadas sob pressão reduzida para fornecer um resí- duo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 8% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 37f (1,27 g) como um sólido branco. RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,06 (s, 1H), 7,31 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,22-7,27 (m, 2H), 7,13-7,22 (m, 5H), 7,04 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,96 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,74 (d, J= 9,2 Hz, 2H), 6,66 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 5,99 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,78 (br s, 1H), 4,30 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 4,04 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 3,96 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 3,75-3,80 (m, 3H), 3,69 (d, J = 8,4 Hz, 6H), 2,73-2,85 (m, 1H), 2,66 (br d, J = 4,4 Hz, 1H), 2,62 (br d, J = 6,0 Hz, 2H), 1,12 (t, J = 6,4 Hz, 6H);

ESI-MS: m/z = 775,3 [M+H]+. Etapa 6: preparação do composto 37g

[0480] Uma solução de clorossulfato de 4-nitrofenila (1,17 g, 4,92 mmol) em DCM seco (3 mL) foi adicionada rapidamente a uma mistura do composto 37f (1,27 g, 1,64 mmol), 4-nitrofenol (685 mg, 4,92 mmol), Et3N (4,75 g, 9,88 mmol) em DCM seco (27 mL) sob N2 a -78°C, então aquecida à temperatura ambiente por um período de 2 horas. A mistura de reação foi combinada com uma outra batelada bruta, diluída com DCM (100 mL) e lavada com solução aquosa saturada de NaHCO3 (100 mLx5). A camada orgânica foi coletada, seca em Na2SO4 anidro, filtrada e evaporada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 90% EtOAc em PE) para fornecer o composto 37 g (1,55 g, 1,59 mmol) como um sólido amarelo. RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) 12,05 (s, 1H), 11,49 (br s, 1H), 8,88 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 8,26-8,31 (m, 2H). 8,13 (s, 1H), 7,47-7,53 (m, 2H), 7,29 (d, J=8,8 Hz, 2H), 7,20-7,25 (m, 2H), 7,14-7,20 (m, 5H), 7,03 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,95 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,74 (d, J = 8,8 Hz, 2H) 6,67 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 5,95 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,72 (br s, 1H), 4,25 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 4,18 (br t, J = 5,6 Hz, 1H), 3,96 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,69 (d, J = 6,8 Hz, 6B), 3,24-3,44 (m, 2H), 2,91 (br d, J = 3,6 Hz, 1H), 2,69-2,79 (m, 1H), 1,12 (t, J = 6,4 Hz, 6H); ESI-MS: m/z=976,3 M+H]+. Etapa 7: preparação do composto 37h

[0481] Uma suspensão do composto 37g (766 mg, 1,13 mmol), composto 35 h (1,55 g, 1,59 mmol) e peneiras moleculares (3g) in THF (40 mL) foi agitada sob N2 durante 30 minutos à temperatura ambiente, seguida pela adição de DMAP (554 mg, 4,53 mmol) e, então, agitada a 45°C ON sob N2. A mistura de reação foi filtrada através de um bloco de terra diatomácea e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir um resíduo amarelo; O resíduo foi dissolvido em 60 mL de DCM e lavado com solução aquosa saturada de NaHCO3 (40 mL x 3). A ca- mada orgânica foi seca com Na2SO4 anidro, filtrada e evaporada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (PE:EtOAc = 1:0~0:1) para produzir o composto 37 h (360 mg) como um sólido amarelo. ESI- MS: m/z= 757,4 [M/2 +H]+. Etapa 8: preparação do composto 37i

[0482] Uma solução do composto 37h (360 mg, 0,24 mmol) em DCM (10 mL) foi tratada com água (43 mg, 2,39 mmol) e DCA (67,5 mg, 0,52 mmol) resultando em uma solução amarela. Após a agitação à tem- peratura ambiente durante 6 horas, MeOH (2 mL) foi adicionado à mis- tura, seguida pela adição de piridina (75,5 mg, 4 eq); a solução resul- tante foi agitada por 15 minutos e concentrada para fornecer um resí- duo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (DCM: MeOH = 1:0~10:1) para produzir o composto 37i (130 mg) como um sólido branco. ESI-MS: m/z= 908,4 [M+H]+. Etapa 9: preparação do composto 37j

[0483] NOTA: o THF foi recém-destilado sobre sódio em presença de benzofenona e a CH3CN foi recém-destilada na presença de CaH2 antes do uso. A uma solução do composto 37i (130 mg, 0,14 mmol, seco por liofilização) em THF (3 mL) adicionou-se peneiras moleculares de 4A (pó, 800 mg) seguida de uma solução de 1H-tetrazol (3,18 mL, 0,45 M, preparada por dissolução de 945 mg de tetrazol (seco por liofilização) em 30 mL de CH3CN seca, seguida pela adição de 1 g de peneiras mo- leculares de 4A e então agitação durante 1 hora sob N2 antes do uso); depois de várias purgas do vaso com N2, uma solução de 2-cianoetil- N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (77,69 mg, 0,26 mmol) em THF (0,8 mL) foi adicionada por gotejamento durante 25 minutos através de uma seringa, então agitada à temperatura ambiente durante 1,5 hora, seguida de adição de hidroperóxido de terc-butila (0,23 mL, 1,13 mmol,

5 M). Após a agitação por mais 30 minutos, a mistura de reação foi con- centrada sob pressão reduzida para produzir um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (DCM: MeOH = 1:0～10:1, Rf = 0,4) para fornecer o composto 37j (46 mg) como um sólido branco. ESI-MS: m/z= 1023,5 e 1023,4 [M+H]+. Etapa 10: preparação do composto 37k

[0484] Uma solução do composto 37j (46 mg, 0,045 mmol) foi tra- tada com MeNH2/EtOH (5 mL) a 40°C durante 2,5 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para produzir um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: Waters Xbridge Prep OBD C18 5 µm 150x30, condição: A: água (10 m de MNH4HCO3)-ACN: MeCN, início: B 5%, fim B: 25%; taxa de fluxo (mL/min) 25) para fornecer o composto 37k (12 mg) como um sólido branco.

[0485] ESI-MS: m/z = 796,3 [M+H]+. Etapa 11: preparação do composto 48, sal de sódio

[0486] Uma solução de amsol (15,9 mg, 0,14 mmol) em TFA (0,113 mL, 57,3 mmol) foi resfriada até 0°C e adicionada ao composto 37k (12 mg, 0,015 mmol). Após a agitação a 0°C durante 2,5 horas, a TEA foi removida por sopro do fluxo de gás nitrogênio a 0°C. A mistura de rea- ção restante foi bruscamente resfriada com solução de metilamina a 33% em EtOH (0,113 mL) em 0°C. A mistura de reação foi evaporada até a secura e particionada entre DCM e água (20 mL x 3/10 mL). A camada aquosa foi liofilizada para fornecer um resíduo branco purifi- cado por HPLC preparativa reversa (coluna: Waters Xbridge Prep OBD 5 µm C18 150x30, condição: A: água (10 m de MNH4HCO3)-ACN: MeCN, início: B 5%, fim B: 35%; taxa de fluxo (mL/min) 25.) para forne- cer o composto 47, sal de amônio (7,1 mg, 0,010 mmol) como um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, D2O) δ 8,59 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 6,76 (d, J = 16,8 Hz, 1H), 6,28 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,07 (br d, J=

3,6 Hz, 1H), 5,94 (br d, J = 4,4 Hz, 1H), 5,63 (br dd, J = 3,2, 8,8 Hz, 1H), 5,58 (br dd, J= 4,4, 8,8 Hz, 1H), 5,49 (br d, J= 5,6 Hz, 1H), 4,93 (br d, J= 8,8 Hz, 1H), 4,67 (br s, 1H), 4,39(br d, J = 15,6 Hz, 1H), 4,13 - 4,07 (m, 1H), 3,96 (br d, J= 14,4 Hz, 1H); RMN 31 P (162 MHz, D2O) δ ppm -2,21 (s, 1P); RMN F (376 MHz, D2O) δ 200,3-200,4 (m, 1F); ESI-MS: m/z= 19 676,0 [M+H]+. Conversão em sal de sódio

[0487] Dowex 50W × 8, 200 a 400 (3 mL, forma de H) foi adicionado a um béquer e lavado com água desionizada (30 mL). Então, à resina adicionou-se H2SO4 a 15% em água desionizada, a mistura foi gentil- mente agitada durante 5 minutos e decantada (30 mL). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 CV), e então com água desio- nizada até ficar neutra. A resina foi transferida de volta para o béquer, NaOH a 15% em solução de água desionizada foi adicionado, e a mis- tura foi gentilmente agitada durante 5 minutos, e decantada (1×). A re- sina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 CV) e, então, com água desionizada até que ficasse neutra. O composto 47, sal de amônio (7,1 mg) foi dissolvido em água desio- nizada/MeCN (3 mL/3 mL), adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada. As frações adequadas foram agrupadas e liofilizadas a o composto 47, sal de sódio (3,4 mg) como um sólido branco.

[0488] RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,57 (s, 1H), 8,44 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 6,73 (d, J= 16,6 Hz, 1H), 6,25 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,04 (br d, J= 3,6 Hz, 1H), 5,91 (br d, J= 4,0 Hz, 1H), 5,60 (br dd, J= 3,6, 9,2 Hz, 1H), 5,55 (br dd, J = 4,0, 9,2 Hz, 1H), 5,49 - 5,42 (m, 1H), 4,90 (br d, J = 9,2 Hz, 1H), 4,67 - 4,64 (m, 1H), 4,39 -4,33 (m, 1H), 4,08 (br d, J= 14,4 Hz, 1H), 3,93 (br d, J= 14,8 Hz, 1H); RMN P (162 MHz, D2O) δ ppm - 31 2,26 (s, 1P); RMN 19 F (376 MHz, D2O) δ ppm -200,34-200,47 (m,1F); ESI-MS: m/z =676,1 [M+H]+.

Exemplo 38 Etapa 1: preparação do composto 38a

[0489] NOTA: o THF foi recém-destilado sobre sódio em presença de benzofenona e a CH3CN foi recém-destilada na presença de CaH2 antes do uso. A uma solução do composto 35j (300 mg, 0,39 mmol, seco por liofilização) em THF (6 mL) adicionou-se peneiras moleculares de 4A (pó, 800 mg) e uma solução de 1H-tetrazol (8,64 mL, 0,45 M, prepa- rada por dissolução de 945 mg de tetrazol (seco por liofilização) em 30 mL de CH3CN seca, seguida pela adição de 1 g de peneiras moleculares de 4A e então agitação durante 1 hora sob N2 antes do uso); depois de várias purgas do frasco de reação com N2, uma solução de 2-cianoetil- N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (210,9 mg, 0,7 mmol) em THF (2 mL) foi adicionada por gotejamento durante 20 minutos através de uma seringa e então agitada à temperatura ambiente durante 1,5 hora). Foi então adicionado DDTT (638,53 mg, 3,11 mmol) e a mistura foi agi- tada por mais 30 minutos. A mistura de reação foi concentrada sob pres- são reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cro- matografia em coluna rápida com sílica-gel (DCM: MeOH = 1:0 a 10:1)

para fornecer o composto 38a como um sólido branco. (372 mg). ESI- MS: m/z 903,2 e 903,4 [M+H]+. Etapa 2: preparação do composto (*R) 46A, sal de sódio e do com- posto 46B (*S), sal de sódio

[0490] O composto 38a (372 mg) foi tratado com MeNH2/EtOH (15 mL) a 40°C durante 2,5 horas. Após a agitação a 40°C por 1h, a mistura de reação foi concentrada para fornecer um sólido branco combinado com uma outra batelada. O sólido foi dissolvido em água (40 mL) e la- vado com DCM (20 mL x 4). A camada aquosa foi liofilizada e purificada por HPLC preparativa de fase reversa (Xtimate C18 5 µm 150x25 mm, condição: A: água (10 mM de NH4HCO3)-ACN: MeCN, início B: 12%, fim B, 42%; taxa de fluxo (mL/min) 25.) para produzir o sólido branco com- posto (*R) 46A, sal de amônio como um sólido branco (18,5 mg) e o composto (*S), 46B sal de amônio como um sólido branco (35,2 mg).

[0491] Composto (*R) 46A, sal de amônio: RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,69 (s, 1H). 8,30 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 6,46 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 5,95 (s, 1H), 5,48 (br d, J = 2,8 Hz, 1H), 5,35 (br d, J= 2,8 Hz, 1H), 5,10 (br dd, J= 3,2, 9,4 Hz, 1H), 5,04 (br dd, J= 3,2, 9,2 Hz, 1H), 4,67 (br s, 1H), 4,47 (br d, J= 9,2 Hz, 1H), 4,36 (br d, J= 12,8 Hz, 1H), 4,19 (brt, J= 10,8 Hz, 1H), 3,85 (br d, J = 13,6 Hz, 1H) 3,62 (br d, J = 3,6 Hz, 1H), 3,02 (br d, J = 10,4 Hz, 1H), 1,89 (br t, J = 10,8 Hz, 1H); RMN 31 P (162 MHz, DMSO-d6) δ ppm 50,5 (br s, 1P); RMN 19 F (376 MHz, DMSO-d6) δ ppm -199,86 (td, J= 19,6, 49,6 Hz, IF)

[0492] Composto (*S) 46B, sal de amônio: RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,48 (s, 1H), 8,30 (s, 1H), 7,88 (s, 1H), 6,45 (d, J= 17,2 Hz, 1H), 5,90 (s, 1H), 5,58 (br d, J = 3,2 Hz, 1H), 5,45 (br d, J= 3,2 Hz, 1H), 5,17 (br d, J = 6,4 Hz, 1H), 5,12 (br d, J= 9,2 Hz, 1H), 4,75 (br s, 1H), 4,54 - 4,45 (m, 2H), 4,25 - 4,16 (m, 1H), 3,78 (br d, J= 13,6 Hz, 1H), 3,38(br dd, J= 11,2, 13,6 Hz, 1H), 3,01 (br d, J= 10,4 Hz, 1H), 1,93 (br t, J= 10,8 Hz, 1H); RMN 31P (162 MHz, DMSO-d6) δ ppm 52,02 (br s, 1P);

RMN 19F (376 MHz, DMSO-d6) δ ppm -199,30-199,90 (m, 1 F). Conversão em composto (*R) 46A, sal de sódio

[0493] Dowex 50W × 8, 200 a 400 (4 mL, forma de H) foi adicionado a um béquer e lavado com água desionizada (30 mL). Então, à resina adicionou-se H2SO4 a 15% em água desionizada, a mistura foi gentil- mente agitada durante 5 minutos e decantada (15 mL). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 CV), e então com água desio- nizada até ficar neutra. A resina foi transferida de volta para o béquer, NaOH a 15% em solução de água desionizada foi adicionado, e a mis- tura foi gentilmente agitada durante 5 minutos, e decantada (1×). A re- sina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 CV) e, então, com água desionizada até que ficasse neutra. O composto (*R) 46A, sal de amônio (18,5 mg), foi dissolvido em água desionizada/MeCN (8 mL/2 mL), adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada. As frações adequadas foram agrupadas e liofili- zadas para o composto (*R) 46A, sal de sódio (13,7 mg) como um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,27 (br s, 1H), 7,97 (br s, 1H), 7,72 (br s, 1H), 6,35 (br d, J= 16,4 Hz, 1H), 5,77 (br s, 1H), 5,70 - 5,49 (m, 1H), 5,26 (br s, 2H), 4,59 - 4,44 (m, 2H), 4,36 (br d, J= 11,2 Hz, 1H), 4,05 (br s, 1H), 3,60 - 3,38 (m, 2H), 2,71 (br s, 1H), 2,28 (br s, 1H); RMN 31 P (162 MHz, D2O) δ 54,42 (br s, 1P); RMN 19 F (376 MHz, D2O) δ -200,41 (br s, 1F); ESI-MS: m/z 676,0 [M+H]+. Conversão ao composto (*S) 46B, sal de sódio

[0494] Dowex 50W × 8, 200 a 400 (10 mL, forma de H) foi adicio- nado a um béquer e lavado com água desionizada (30 mL). Então, à resina adicionou-se H2SO4 a 15% em água desionizada, a mistura foi gentilmente agitada durante 5 minutos e decantada (25 mL). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 CV), e então com água desio- nizada até ficar neutra. A resina foi transferida de volta para o béquer, NaOH a 15% em solução de água desionizada foi adicionado, e a mis- tura foi gentilmente agitada durante 5 minutos, e decantada (1×). A re- sina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 CV) e, então, com água desionizada até que ficasse neutra. O composto (*S) 46A, sal de amônio (35,2 mg), foi dissolvido em água desionizada/MeCN (10 mL/8 mL), adicionado ao topo da coluna, e elu- ído com água desionizada.

[0495] As frações adequadas foram agrupadas e liofilizadas para o composto (*S) 46B, sal de sódio (33,1 mg) como um sólido branco. RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,72 (br s, 1H), 8,73 - 8,68 (m, 1H), 8,58 (br s, 1H), 8,14 (br s, 1H), 6,81 (br d, J = 17,6 Hz, 1H), 6,26 (br s, 1H), 6,07 - 5,89 (ns,1H), 5,67 - 5,53 (m, 2H), 4,94 (br d, J= 6,8 Hz, 2H), 4,82 (br s, 1H), 4,42 (br d, J= 12,4 Hz, 1H), 4,09 (br d, J = 14,4 Hz, 1H), 4,14 - 4,04 (m, 1H) 3,82 -3,69 (m, 1H), 3,23 (br s, 1H), 2,58 (br s, 1H), 2,37 (br s, 1H); RMN 31 P (162 MHz, D2O) δ ppm 53,58 (br s, 1P); RMN 19

F (376 MHz, D2O) δ ppm -199,69 (br s, 1F); ESI-MS: m/z= 676,0 [M+H]+. Exemplo 39

Etapa 1: Preparação do composto 39b

[0496] Imidazol (2,36 g, 34,6 mmol) e TBSCl (3,48 g, 23,1 mmol) foram sucessivamente adicionados a uma solução do composto 20b [CAS 170871 -87-1] (7,8 g, 11,5 mmol) em DCM seco (101 mL). A mis- tura de reação foi agitada à temperatura ambiente até a completa con- versão (cerca de 3 horas) e depois disso a solução de reação foi diluída com DCM e lavada com água. A camada orgânica foi separada, seca com Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer o composto bruto 39b como uma espuma branca (9,2 g, bruta).

[0497] RMN 1H (500 MHz DMSO-d6) δ ppm: 0,20 (s, 3H), 0,24 (s, 3H), 0,96 (s, 9 H), 3,60 (d, J= 5,5 Hz, 2 H), 3,97 (d, J= 2,1 Hz, 6 H), 4,69 (m, 1H), 5,4 (dd, J= 54,4, 4,1 Hz, 1H), 5,63 (dq, J=21,3, 3,9 Hz, 1H), 6,35 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 7,10 (m, 4 H), 7,47 (q, J=7,3 Hz, 1H), 7,52 (m, 6 H), 7,66 (d, J= 7,6 Hz, 2 H), 7,80 (t, J=7,6 Hz, 2 H), 7,89 (t, J=7,6 Hz, 1H), 8,29 (d, J=6,9 Hz, 2 H), 8,83 (s, 1H) 8,89 (s, 1H), 11,49 (s, 1H); ESI- MS: m/z 790,4 [M+H]+. Etapa 2: Preparação do composto 39c

[0498] Uma solução de composto bruto 39b (9,2 g) em DCM (250 mL), à qual água (1 mL, 57,6 mmol) e DCA (38 mL de uma solução 10% em DCM, 46,1 mmol) foram adicionados, foi agitada à temperatura am- biente até a completa conversão (cerca de 1 hora). A mistura de reação foi bruscamente resfriada com piridina (4,6 mL, 57,6 mmol) e metanol (5 mL), e subsequentemente concentrada sob pressão reduzida. O resí- duo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 5% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 39c como uma espuma branca (4,4 g). RMN 1H (500 MHz DMSO-d6) δ ppm: -0,26 (s, 3H), -0,06 (s, 3H), 0,72 (s, 9 H), 3,72 (m, 2 H), 4,36 (dt, J=26,6, 4,0 Hz, 1H), 5,10 (m, 2 H), 5,22 (d, J=4,1 Hz, 1H), 5,39 (s, 1H), 6,13 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,55 (t, J=7,6 Hz, 2 H), 7,65 (t, J=7,6 Hz, 1H), 8,05 (d, J=6,9 Hz, 2 H), 8,77 (d, J=9,6 Hz, 2 H), 11,24 (s, 1H); ESI-MS: m/z 488,2[M+H]+. Etapa 3: Preparação do composto 39d

[0499] Cloreto de mesila (1,04 mL, 13,55 mmol) foi adicionado por gotejamento a uma solução do composto 39c (4,4 g, 9,03 mmol) em piridina seca (44 mL) a 0°C. A mistura de reação foi agitada a 0°C até a completa conversão (cerca de 3 horas) e depois disso ela foi brusca- mente resfriada com metanol e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi dissolvido em EtOAc e lavado com solução aquosa saturada de NaHCO3. A camada orgânica foi seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer o produto me- silatado. O procuto bruto foi dissolvido em DMF seco (50 mL) e, em se- guida, azida de sódio (4,51 g, 69,38 mmol) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada a 60°C durante 5 horas e depois disso foi resfriada até a temperatura ambiente, diluída com EtOAc, e lavada com solução aquosa saturada de NaHCO3 e água. A camada orgânica foi seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada até a secura sob pressão redu- zida. A purificação foi feita por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 2% de MeOH em DCM) para fornecer o composto

39d como uma espuma branca (4 g, rendimento: 86,5%). RMN 1H (500 MHz DMSO-d6) δ ppm: -0,25 (s, 3H), -0,02 (s, 3H), 0,72 (s, 9 H), 3,65 (dd, J=13,1, 4,1 Hz, 1H), 3,92 (q, J=6,9 Hz, 1H), 4,50 (dq, J=25,3, 3,7 Hz, 1H), 5,20 (dd, J= 53,7, 4,8 Hz, 1H), 5,35 (dq, J=22,0, 3,9 Hz, 1H), 6,15 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,56 (t, J=7,9 Hz, 2 H), 7,65 (t, J=7,2 Hz, 1H), 8,05 (d, J=6,9 Hz, 2 H), 8,80 (d, J=2,4 Hz, 2 H), 11,24 (s, 1H); ESI-MS: m/z 513,2 [M+H]+. Etapa 4: Preparação do composto 39e

[0500] Uma solução do composto 39d (4 g, 7,8 mmol) em MeOH (40 mL) foi hidrogenada sob pressão atmosférica à temperatura ambi- ente em Pd/C (20% em carbono, 0,4 g). A mistura de reação foi filtrada em terra diatomácea, a terra diatomácea foi enxaguada com MeOH. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer o composto de amina como uma espuma branca. O produto bruto (seco por coeva- poração com tolueno anidro) foi dissolvido em DCM (59 mL) e, em se- guida, 4-nitrofenol (3,2 g, 24 mmol), Et3N (6,5 mL, 46,8 mmol) e peneiras moleculares ativadas foram adicionados. A mistura resultante foi resfri- ada até -78°C sob N2 após o que uma solução de clorossulfato de 4- nitrofenila (5,5 g, 23,4 mmol) em DCM (20 mL) foi adicionada por gote- jamento, a agitação foi continuada até a completa conversão (cerca de 3 horas). A mistura de reação foi aquecida até a temperatura ambiente e lavada com solução aquosa saturada de NaHCO3 e água. A fase or- gânica foi secada com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pres- são reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica (eluição gradiente: 0 a 50% de EtOAc em hexano) para re- sultar no composto 39e como uma espuma amarela (3,5 g, rendimento: 65%). RMN 1H (500 MHz DMSO-d6) δ ppm: -0,28 (d, J=15,8 Hz, 3H), - 0,05 (d, J=6,2 Hz, 3H), 0,71 (s, 9 H), 3,66 (t, J= 5,9 Hz, 2 H), 4,42 (d, J=26,2 Hz, 1H), 5,29 (m, 2 H), 6,14 (t, J=7,2 Hz, 1H), 7,55 (m, 4 H), 7,65 (t, J=7,2 Hz, 1H), 8,05 (d, J=7,6 Hz, 2 H), 8,30 (m, 2 H), 8,69 (s, 1H),

8,76 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 9,22 (t, J=5,9 Hz, 1H), 11,27 (s, 1H); ESI-MS: m/z 688,29 [M+H]+. Etapa 5: Preparação do composto 39g

[0501] Um frasco de reação foi carregado com DMAP (2,59 g, 21,2 mmol), DCM seco (60 mL) e peneiras moleculares de 3 Å ativadas. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas sob atmosfera inerte. Simultaneamente, uma solução do composto 39f (2,05 g, 4,2 mmol) e uma solução de sulfamato 39e (3,5 g, 5,1 mmol) cada uma em DCM seco (2 x 60 mL) foram secas em peneiras molecu- lares de 3 Å ativadas (cerca de 2 horas). Ambas as soluções (composto 39f e sulfamato 39e respectivamente) foram sucessivamente transferi- das para o frasco de reação. A mistura de reação resultante foi agitada durante 24 horas. As peneiras moleculares foram removidas por filtra- ção e completamente enxaguadas com diclorometano. O filtrado foi la- vado com solução aquosa saturada de NaHCO3 e solução aquosa sa- turada de NH4Cl. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica (eluição gradiente: 0 a 2% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 39g como uma espuma esbranquiçada (2,9 g, rendimento: 66%).

[0502] RMN 1H (500 MHz DMSO-d6) δ ppm: -0,26 (s, 3H), -0,05 (t, J=11,0 Hz, 9 H), 0,71 (s, 9 H), 0,77 (s, 9 H), 3,56 (m, 2 H), 3,85 (dd, J=12,4, 3,4 Hz, 1H), 3,98 (d, J=9,6 Hz, 1H), 4,33 (t, J= 3,4 Hz, 1H), 4,46 (dt, J= 25,2, 6,0 Hz, 1H), 5,18 (d, J= 4,1 Hz, 1H), 5,31 (m, 2 H), 5,55 (dq, J=17,9, 4,1 Hz, 1H), 5,98 (dd, J= 51,0, 2,8 Hz, 1H), 6,15 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 6,51 (dd, J=18,9, 1,7 Hz, 1H), 7,55 (t, J=7,6 Hz, 4 H), 7,65 (t, J=7,6 Hz, 2H), 8,04 (dd, J=7,9, 1,7 Hz, 4 H), 8,59 (s, 1H), 8,75 (d, J=8,3 Hz, 3H), 8,86 (t, J=6,2 Hz, 1H), 11,26 (d, J=4,1 Hz, 2 H); ESI-MS: m/z 1036,5 [M+H]+. Etapa 6: Preparação do composto 34a

[0503] Uma solução do composto 39g (2,9 g, 2,8 mmol) em piridina (55 mL) à qual Et3N (19,5 mL, 140 mmol) e Et3N.3HF (4,5 mL, 28 mmol) foram adicionados, foi agitada a 45°C até a completa conversão (cerca de 5 horas). A mistura de reação foi resfriada até a temperatura ambi- ente, isopropoxilmetilsilano (19,8 mL, 112 mmol) foi adicionado e a agi- tação foi continuada de um dia para o outro. O resíduo obtido após a concentração sob pressão reduzida foi suspenso em m DCM, algumas gotas de metanol foram adicionadas. A suspensão foi agitada durante 20 minutos, após o que o precipitado foi coletado por filtração e seco sob alto vácuo para produzir o composto 34a como um pó esbranqui- çado (1,8 g, rendimento: 79%). RMN 1H (500 MHz DMSO-d6) δ ppm: 3,51 (dd, J=46,1, 13,8 Hz, 2 H), 3,65 (td, J=9,0, 3,4 Hz, 1H), 3,81 (q, J=4,1 Hz, 1H), 4,34 (t, J=3,12 Hz, 1H), 4,41 (dt, J=25,9, 6,0 Hz, 1H), 5,21 (m, 2 H), 5,40 (m, 2 H), 5,92 (dt, J=51,2, 3,8 Hz, 1H), 6,11 (d, J=8,3 Hz, 1H), 6,15 (d, J=6,2 Hz, 1H), 6,50 (dd, J=17,2, 2,8 Hz, 1H), 7,55 (t, J=7,6 Hz, 4 H), 7,65 (t, J=7,6 Hz, 2 H), 8,04 (dd, J=7,6, 2,1 Hz, 4 H), 8,70 (s, 1H), 8,76 (d, J=7,6 Hz, 3H), 8,85 (s, 1H), 11,27 (s, 2 H); ESI- MS: m/z 808,3 [M+H]+. Etapa 7: Preparação do composto 39h

[0504] Uma solução do composto 34a (890 mg, 1,10 mmol) e 1H- tetrazol (12m86 mL, de 3 a 4% em MeCN, seco em peneiras molecula- res de 3 Å antes do uso) em THF seco (50 mL) foi pré-tratada com pe- neiras moleculares de 3 Å ativadas durante 2 horas sob N2. 2-Cianoetil- N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (365 mg, 1,21 mmol) foi adici- onada imediatamente. A mistura de reação foi agitada por 1 hora e de- pois disso uma porção extra de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fos- forodiamidita (166 mg, 0,55 mmol) foi adicionada. A agitação foi conti- nuada de um dia para o outro. A adição de uma quantidade extra de 2- cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (33 mg, 0,11 mmol) seguida de agitação por um dia adicional foi necessária para obter a conversão completa. tBuOOH (341 µL de solução 5,5 M em decano, 1,87 mmol) foi adicionado e a agitação foi continuada por 1 hora. As peneiras moleculares foram removidas por filtração e extensivamente enxaguadas com DCM. O filtrado foi lavado com salmoura, solução sa- turada de NaHCO3 e osso respectivamente, seco com MgSC4, filtrado e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por croma- tografia em coluna rápida (eluição gradiente: 0 a 5% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 39 h (168 mg, rendimento: 16,5%). ESI-MS: m/z 923,4 [M+H]+. Etapa 8: Preparação do composto 35, sal de sódio

[0505] O composto 39 h (168 mg, 0,182 mmol) foi agitado em uma solução de metilamina 33% em etanol (10 mL) à temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão redu- zida. O produto bruto foi triturado em MeCN e, em seguida, purificado por HPLC preparativa em fase reversa (fase estacionária: XBridge C18 OBD, 5 µm, 250 x 30 mm; fase móvel: solução aquosa de 0,25% de bicarbonato de amônia (A) - MeCN (B): eluição gradiente) para produzir o composto 35, sal de amônio. A conversão no sal de sódio foi feita pela eluição de uma solução aquosa em uma coluna empacotada com resina catiônica de troca de íons de Na para fornecer o composto 35, sal de sódio como um sólido branco macio após a liofilização (25 mg, rendimento: 20%). RMN 1H (600 MHz, DMSO-d6, 67 °C) δ ppm 10,60 (br s, 1H), 8,32 (br s, 1H), 8,27 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 7,32 (br s, 2 H), 7,14 (br s, 2 H), 6,29 (dd, J=15,4, 4,4 Hz, 1H), 6,05 (d, J=8,8 Hz, 1H), 6,00 - 6,14 (m, 1H), 5,48 - 5,59 (m, 2 H), 5,27 (dd, J= 53,0, 3,6 Hz, 1H), 4,46 - 4,53 (m, 1H), 4,42 - 4,46 (m, 1H), 4,08 (dt, J=11,7, 7,5 Hz, 1H), 3,73 (ddd, J=11,7, 6,0, 3,3 Hz, 1H), 3,69 (br d, J=14,7 Hz, 1H), 3,49 (br d, J=14,4 Hz, 1H); RMN P (162 MHz, DMSO-d6) δ ppm -1,33 31 (s, 1 P); ESI-MS: m/z 660,3 [M+H]+.

Exemplo 40 Composto 53 Etapa 1: preparação do composto 40b

[0506] Um frasco de reação foi carregado com DMAP (1,43 g, 11,7 mmol), DCM seco (9 mL) e peneiras moleculares de 4 Å ativadas. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas sob atmosfera inerte. Simultaneamente, uma solução de 5'-O-DMTr-2'- F-desóxi-inosina [CAS 51424-83-1] (1,47 g, 2,57 mmol) e uma solução de sulfamato 40a (2,0 g, 2,34 mmol), cada uma em DCM seco (2 x 9 mL), foram secas em peneiras moleculares de 4 Å ativadas (cerca de 3 horas). Ambas as soluções foram transferidas sucessivamente para o frasco de reação. A mistura de reação foi agitada a 40°C de um dia para o outro. As peneiras moleculares foram removidas por filtração e cuida- dosamente enxaguadas com DCM. O filtrado foi lavado com solução aquosa saturada de NaHCO3, a fase aquosa foi então extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, fil- tradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida (eluição gradiente: 1 a 3% de MeOH em DCM) para fornecer o composto puro 40b (2,01 g, 65,9%). ESI-MS: m/z 1303,8 [M+H]+. Etapa 2: preparação do composto 40c

[0507] O composto 40b (2,0 g, 1,53 mol) foi dissolvido em DCM (77 mL) ao qual água (140 µL, 7,65 mmol) e DCA (490 µL, 5,98 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas depois que piridina (620 µL, 7,65 mmol) e MeOH foram adicionados. A mistura resultante foi parcialmente concentrada sob pressão reduzida e transferida para uma coluna com sílica para purifi- cação (eluição gradiente: 0 a 18% de MeOH em DCM) para produzir o composto 40c (0,92 g, 86%).

[0508] RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,48 (br s, 1H), 12,08 (br s, 1H), 11,60 (br s, 1H), 8,63 (br t, J= 5,6 Hz, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,09 (d, J=3,2 Hz, 1H), 6,31 (dd, J=16,4, 2,9 Hz, 1H), 5,58 - 5,88 (m, 3H), 5,37 (br t, J= 5,0 Hz, 1H), 5,18 - 5,30 (m, 1H), 4,65 (q, J= 5,9 Hz, 1H), 4,23 - 4,33 (m, 1H), 4,05 (q, J= 5,0 Hz, 1H), 3,84 (t, J=4,1 Hz, 1H), 3,70 - 3,81 (m, 1H), 3,54 - 3,68 (m, 1H), 3,42 (s, 3H), 3,20 - 3,40 (m, 2 H), 2,75 (spt, J=6,9 Hz, 1H), 1,12 (br d, J=7,0 Hz, 3H), 1,11 (br d, J=7,0 Hz, 3H); ESI-MS: m/z 699,4 [M+H]+. Etapa 3: preparação do composto 40d

[0509] Uma solução do composto 40c (200 mg, 0,286 mmol) e 1H- tetrazol (5,09 mL de uma solução 0,45 M em MeCN, 2,29 mmol) em MeCN seca (8 mL) foi tratada com peneiras moleculares de 4 Å durante 1 hora sob N2 e depois disso 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosfo- rodiamidita (173 mg, 0,57 mmol) em MeCN seca (1,0 mL) foi adicionada por gotejamento durante 10 minutos (nota: o THF foi recém-destilado sobre sódio em presença de benzofenona e a MeCN foi recém-destilada na presença de CaH2 antes do uso). A mistura resultante foi agitada por 2 horas à temperatura ambiente. Uma solução de tBuOOH (300 µL, 1,5 mmol) foi adicionada e a agitação foi continuada por mais 30 minutos. A mistura de reação foi filtrada através de um bloco de terra diatomácea e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rá- pida (eluição gradiente: 0 a 10% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 40d como um sólido branco (206 mg, 71%). ESI-MS: m/z 814,4 [M+H]+. Etapa 4: preparação do composto 53, sal de sódio

[0510] O composto 40d (206 mg, 0,253 mmol) foi agitado em uma solução de metilamina a 33% em etanol (10 mL) a 40°C durante 3 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em água, lavado com DCM e liofilizado. O produto buto foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa (fase estacionária: Xbridge OBD C18 µ5 m, 150 x 30 mm; fase móvel: solução aquosa de10 mM de bicarbonato de amônia (A) - MeCN (B); eluição gradiente). A conversão final no sal de sódio foi feita por eluição de uma solução aquosa em uma coluna empacotada com resina de troca iônica de Na, Dowex 50WX8 para fornecer o composto 53, sal de sódio como um sólido branco macio após a liofilização (13 mg, 8%). RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,39 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 6,63 (d, J=19,1 Hz, 1H), 6,12 (d, J=8,5 Hz, 1H), 6,01 - 5,84 (m, 1H), 5,66 (ddd, J=4,1, 8,7, 19,1 Hz, 1H), 5,54 - 5,44 (m, 1H), 4,75 - 4,69 (m, 1H), 4,66 (s, 1H), 4,51 (br d, J=11,5 Hz, 1H), 4,26 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,24 - 4,17 (m, 1H), 4,03 - 3,94 (m, 1H), 3,91 - 3,81 (m, 1H), 3,77 (s, 3H); RMN 31P (162 MHz, D2O) δ ppm -2,020 (s, 1P);

[0511] RMN 19F (376,5 MHz, D2O) δ ppm -198,634 (s, 1F); ESI-MS: m/z = 691,2 [M+H]+.

Exemplo 41 Etapa 1: preparação do composto 41b

[0512] Selectfluor (34,6 g, 97,7 mmol) e AcOH (100 mL) foram adi- cionados a uma solução de 4-cloro- 7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina [CAS 3680-69-1] (41a, 10,0 g, 65,1 mmol) em MeCN seco (500 mL), a mistura foi agitada a 70°C até a completa conversão (cerca de 16 horas). Após o resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura de reação foi con- centrada sob pressão reduzida e co evaporada com tolueno anidro. O sólido resultante foi dissolvido em uma mistura de solventes de DCM/EtOAc (1:1), a solução obtida foi filtrada através de um bloco de terra diatomácea que foi completamente lavada. Os filtrados combina- dos foram concentrados sob pressão reduzida. A purificação foi feita por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 1% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 41b como um sólido esbran- quiçado (5,2 g, rendimento: 47%). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,49 (s, 1H), 8,63 (s, 1H), 7,73 (t, J= 2,8 Hz, 1H); ESI-MS: m/z 169,8 [M+H]+. Etapa 2: preparação do composto 41c

[0513] Bis(trimetilsilil)acetamida (BSA, 3,15 mL, 12,8 mmol) foi adi- cionado à suspensão do composto 41b (2,0 g, 11,6 mmol) em MeCN seca (80 mL). Após a agitação durante 10 minutos, 1,2-di-O-acetil-3-O- metil5-O-benzoil-D-ribofuranose ([10300-21-7], 4,53 g, 12,8 mmol) e 2,34 trifluorometanossulfonato de trimetilsilila (TMSOTf, mL, 12,8 mmol) foram sucessivamente adicionados. A mistura de reação foi agitada 15 minutos à temperatura ambiente e então transferida para um banho de óleo preaquecido a 80°C, a agitação foi continuada por 90 mig2011nu- tos. Após o resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura de rea- ção foi diluída com EtOAc e lavada sequencialmente com solução aquosa saturada de NaHCO3 e salmoura. A camada orgânica foi seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada até a secura sob pressão reduzida.

[0514] A purificação foi feita por cromatografia em coluna com sí- lica-gel (eluição gradiente: 0 a 10% de EtOAc em hexano) para fornecer o composto 41c como um pó esbranquiçado (1,6 g, rendimento: 30%). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,66 (s, 1H), 7,99 (d, J=1,4 Hz, 1H), 7,95 (d, J=7,6 Hz, 2 H), 7,65 - 7,71 (m, 1H), 7,47 - 7,56 (m, 2 H), 6,42 (d, J=4,1 Hz, 1H), 5,78 (t, J=4,8 Hz, 1H), 4,65 (dd, J=12,2, 3,5 Hz, 1H), 4,51 (dd, J=12,2, 5,1 Hz, 1H), 4,41 - 4,45 (m, 1H), 4,35 - 4,40 (m,

1H), 3,41 (s, 3H), 2,09 (s, 3H); ESI-MS: m/z 464,0 [M+H]+. Etapa 3: preparação do composto 41d

[0515] Uma solução aquosa de NaOH 2M (16 mL) foi adicionada a uma solução do composto 41c (1,6 g, 3,4 mmol) em dioxano (16 mL). A mistura de reação foi agitada a 110°C até a completa conversão (cerca de 3 horas) e depois disso foi resfriada até a temperatura ambiente e neutralizada com solução aquosa de HCl 1M. O resíduo obtido após a concentração sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 7% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 41d como um pó esbranquiçado (0,32 g, ren- dimento: 45%). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,11 (br s, 1H), 7,92 (s, 1H), 7,34 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 6,04 (dd, J=6,2, 1,4 Hz, 1H), 5,42 (d, J= 6,2 Hz, 1H), 5,08 (br t, J= 5,2 Hz, 1H), 4,33 - 4,43 (m, 1H), 3,96 (q, J= 3,8 Hz, 1H), 3,77 (dd, J= 5,0, 3,4 Hz, 1H), 3,56 - 3,65 (m, 1H), 3,49 - 3,55 (m, 1H), 3,39 (s, 3H); ESI-MS: m/z 299,9 [M+H]+. Etapa 4: preparação do composto 41e

[0516] Uma solução do composto 41d (0,51 g, 1,7 mmol) em piri- dina seca (8 mL), à qual foram adicionados (em porções) DMAP (0,1 g, 0,8 mmol) e DMTrCl (0,92 g, 2,7 mmol), foi agitada à temperatura ambi- ente durante 16 horas. A mistura de reação foi bruscamente resfriada com metanol (5 mL) e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi dissolvido em EtOAc e lavado com água. A camada orgânica foi seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada até a secura sob pressão reduzida. A purificação foi feita por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 2% de MeOH em DCM) para for- necer o composto 41e como uma espuma esbranquiçada (0,75 g, ren- dimento: 74%). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,13 (br s, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,35 - 7,41 (m, 2 H), 7,26 - 7,32 (m, 2 H), 7,22 - 7,26 (m, 5 H), 7,18 (d, J=2,1 Hz, 1H), 6,83 - 6,90 (m, 4 H), 6,06 (dd, J=4,8, 1,4 Hz, 1H), 5,54 (d, J=6,2 Hz, 1H), 4,47 (q, J= 5,4 Hz, 1H), 4,05 (q, J=4,4 Hz,

1H), 3,87 (t, J= 5,2 Hz, 1H), 3,74 (s, 6 H), 3,33 (s, 3H), 3,20 (d, J=4,1 Hz, 2 H); ESI-MS: m/z 602,3 [M+H]+. Etapa 5: preparação do composto 41f

[0517] O composto 41e (1,2 g, 2,03 mmol), o sulfamato 17a (2,1 g, 2,43 rnmol) e o DMAP (1,2 g, 10,14 mmol) foram, cada um, dissolvidos separadamente em DCM seco (3 x 30,0 mL). Cada solução foi seca com peneiras moleculares de 3 Å ativadas por agitação sob N2 durante ao menos 2 horas. À solução de DMAP foram adicionados, respectiva- mente, a solução do composto 41e em DCM e a solução de sulfamato 17a em DCM. A mistura de reação resultante foi agitada por 36 horas.

[0518] As peneiras moleculares foram removidas por filtração e completamente enxaguadas com diclorometano. O filtrado foi lavado com solução aquosa saturada de NaHCO3, salmoura e solução aquosa saturada de NH4Cl. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida (eluição gradiente: 0 a 1% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 41f (1,3 g, rendi- mento: 49%). ESI-MS: m/z 1338,77 [M+H]+. Etapa 6: preparação do composto 41g

[0519] Uma solução do composto 41f (1,3 g, 0,9 mmol) em DCM (36,5 mL), à qual DCA (3,2 mL de 10% em DCM, 3,8 mmol) e água (90 µL, 4,8 mmol) foram adicionados, foi agitada à temperatura ambiente até a completa desproteção. A mistura de reação foi bruscamente res- friada mediante a adição de piridina (0,4 mL, 4,8 mmol) e algumas gotas de metanol. O resíduo obtido após a concentração sob pressão reduzida foi suspenso em diclorometano, filtrada e seco para obter o composto 41 g como um pó branco esbranquiçado (0,56 g, rendimento: 78%).

[0520] RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,18 (br s, 1H), 11,26 (br s, 1H), 8,75 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 8,49 (br t, J= 5,9 Hz, 1H), 8,06 (d, J=7,6 Hz, 2 H), 7,93 (br d, J= 2,1 Hz, 1H), 7,63 - 7,70 (m, 1H), 7,53 -

7,60 (m, 2 H), 7,34 (s, 1H), 6,37 (br d, J=19,3 Hz, 1H), 6,31 (br d, J= 5,5 Hz, 1H), 5,86 (br s, 1H), 5,59 (br d, J=53,7 Hz, 1H), 5,25 (br s, 1H), 5,20 (br t, J= 5,5 Hz, 1H), 4,59 (br d, J=18,6 Hz, 1H), 4,03 - 4,15 (m, 2 H), 3,98 (m, J= 2,1 Hz, 1H), 3,60 - 3,67 (m, 1H), 3,53 - 3,59 (m, 1H), 3,38 (s, 3H), 3,11 - 3,27 (m, 2 H); ESI-MS: m/z 734,2 [M+H]+. Etapa 7: preparação do composto 41h

[0521] Uma solução do composto 41g (100 mg, 0,136 mmol) em MeCN/DMF seco (4 mL, 1:3) foi tratada com peneiras moleculares de 4 Å durante 20 minutos sob N2 e depois disso 1H-tetrazol (2,42 mL de uma solução 0,45 M em MeCN, 1,09 mmol) e 2-cianoetil-N,N,N',N'-te- tra(isopropil)fosforodiamidita (82 mg, 0,27 mmol) em MeCN seco (1,0 mL) foram adicionados (nota: a MeCN foi recém-destilada na presença de CaH2 antes do uso). A mistura de reação resultante foi agitada du- rante 1,5 h à temperatura ambiente. Uma solução de tBuOOH (126 µL, 0,69 mmol) foi adicionada e a agitação foi continuada por mais 30 minu- tos. A mistura de reação foi diluída com DCM, então filtrada através de um bloco de terra diatomácea e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 10% de MeOH em DCM) para produzir o composto 41h (50 mg, pu- reza 77%).

[0522] ESI-MS: m/z 849,3 [M+H]+. Etapa 8: preparação do composto 54, sal de sódio

[0523] O composto acima 41h foi agitado em uma solução de meti- lamina a 33% em etanol (5 mL) à temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em água, lavado com DCM e liofilizado. O produto bruto foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa (fase estacionária: Xbridge OBD C18 µ5 m, 150 x 30 mm; fase móvel: solução aquosa de 10 mM de bicarbonato de amônia (A) - MeCN (B); eluição gradiente). A conversão final no sal de sódio foi feita pela eluição de uma solução aquosa em uma coluna empacotada com resina de troca de íons de Na Dowex 50WX8 para produzir o composto 54, sal de sódio como um sólido branco macio após a liofilização (24 mg, rendimento: 25% de 41 g). RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,22 (br s, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,30 (br s, 1H), 6,46 - 6,34 (m, 2H), 5,39 (br dd, J=4,6, 8,1 Hz, 2H), 5,23 (br s, 1H), 5,08 - 4,93 (m, 1H), 4,63 (br s, 1H), 4,48 (br d, J=8 6 Hz, 1H), 4,41 (br d, J= 3,9 Hz, 1H), 4,32 - 4,25 (m, 1H), 4,25 - 4,18 (m, 1H), 3,77 (br d, J=11,7 Hz, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,54 (br d, J=13,0 Hz, 1H); RMN 19 F (376 MHz, D2O) δ ppm -164,506 (s, 1F), -197,262 (s, 1F); RMN 31P (162 MHz, D2O) δ ppm -1,850 (s, 1P); ESI-MS: m/z 692,1 [M+H]+. Exemplo 42

Etapa 1: preparação do composto 42b

[0524] Uma mistura do composto 4 h (520 mg, 0,76 mmol), com- posto 42a (372 mg, 0,76 mmol) e peneiras moleculares de 4 Å (1 g) em THF (20 mL) foi agitada a 20°C durante 1 hora sob N2. Então, DMAP (466 mg, 3,81 mmol) foi adicionado. A suspensão amarela resultante foi agitada a 20°C durante 17 horas sob N2. A mistura de reação foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida (<40°C) para render um resíduo purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradi- ente: éter de petróleo/acetato de etila de 100/0 para 0/100 então diclo- rometano/metanol de 100/0 para 100/10) para produzir o composto 42b (460 mg) como um sólido amarelo pálido.

[0525] RMN 1H (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,69 (s, 1H) 8,40 (s, 1H) 8,08 - 8,13 (m, 3H) 7,64 - 7,71 (m, 1H) 7,54 - 7,62 (m, 2 H) 6,28 (dd, J=19,07, 1,47 Hz, 1H) 5,94 (d, J=8,07 Hz, 1H) 5,57 (d, J=4,40 Hz, 1H) 5,44 (d, J=2,93 Hz, 1H) 4,92 - 5,00 (m, 1H) 4,61 (dd, J=8,07, 5,38 Hz, 1H) 4,22 (br dd, J=8,19, 2,81 Hz, 2 H) 4,13 - 4,17 (m, 1H) 4,06 (br dd, J=7,09, 3,18 Hz, 1H) 3,84 - 3,91 (m, 2 H) 3,77 - 3,82 (m, 1H) 3,37 (s, 3H) 2,69 (dt, J=13,69, 6,85 Hz, 1H) 1,20 (t, J=6,60 Hz, 6 H) 0,87 - 0,96 (m, 17 H) 0,17 - 0,21 (m, 6 H) 0,08 (d, J=11,00 Hz, 6 H); ESI-MS: m/z=1031,2 [M+H]+. Etapa 2: preparação do composto 42c

[0526] Uma solução do composto 42b (660 mg, 0,64 mmol), trietila- mina (648,2 mg, 6,4 mmol) e tri-hidrofluoreto de trietilamina (516,3 mg, 3,20 mmol) em piridina (20 mL) foi agitada a 10°C durante 17 horas. A mistura de reação foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida a 30°C para fornecer um óleo cru purificado por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: Agela DuraShell 5 µm, 150 mm x 25 mm; fase móvel: A: água (10 mM NH4HCO3) - B: MeCN; eluição gradiente: A (93%): B (7%) a A (63%) e B (37%) durante 9 minutos; taxa de fluxo 25 mL/min).

As frações puras foram coletadas e liofilizadas até a secura para produ- zir o composto 42c (230 mg) como um sólido branco.

[0527] RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,08 (s, 1H) 11,63 (s, 1H) 11,26 (s, 1H) 8,69 -8,81 (m, 2 H) 8,56 (s, 1H) 8,18 (s, 1H) 8,05 (d, J=7,28 Hz, 2 H) 7,62 - 7,71 (m, 1H) 7,50, - 7,61 (m, 2 H) 6,38 (d, J 19,83 Hz, 1H) 5,99 (d, J=6,53 Hz, 1H) 5,84 (d, J=8,78 Hz, 1H) 5,46 - 5,68 (m, 1H) 5,15 (t, J= 5,27 Hz, 1H) 4,59 - 4,79 (m, 2 H) 4,21 - 4,32 (m, 1H) 4,13- 4,19 (m, 1H) 4,03 - 4,11 (m, 2 H) 3,85 (d, J=5,52 Hz, 1H) 3,55 - 3,63 (m, 1H) 3,45 -3,53 (m, 1H) 3,19 (s, 3H) 2,75 (quin, J=6,71 Hz, 1H) 1,11 (dd, J=6,78, 2,76 Hz, 5 H) 1,08 - 1,14 (m, 1H); ESI-MS: m/z = 801,9 [M+H]+. Etapa 3: preparação do composto 42d

[0528] A uma solução de 42c (310 mg, 0,38 mmol) em CH3CN/THF (1:1, v/v, 18 mL) adicionou-se peneiras moleculares de 4 Å (1 g) e 1H- tetrazol em CH3CN (7 mL, 3,15 mmol, 0,45M em CH3CH). Após a agi- tação a mistura a 25 °C durante 0,5 hora, 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(iso- propil)fosforodiamidita (190 mg, 0,63 mmol) em CH3CN foi adicionada à mistura. Após a agitação da mistura a 30°C durante 2 horas, 1H-tetrazol em CH3CN (1,8 mL, 0,81 mmol, 0,45M em CH3CN) foi adicionado à mis- tura. Após a agitação da mistura a 30°C durante 0,5 hora, TBHP (0,4 mL, 2 mmol, 5M em decano) foi adicionado rapidamente. Após a agita- ção da mistura a 30°C durante 2 horas, a reação foi filtrada e concen- trada sob pressão reduzida para produzir um composto bruto 42d (850 mg); ESI-MS: m/z = 917,1 [M+H]+. Etapa 3: preparação do composto 5, sal de amônio

[0529] O composto 42d (1000 mg, bruto) foi tratado com metana- mina em EtOH (33%) (10 mL) à temperatura ambiente. Após a agitação da mistura de reação em a 20°C por 2 horas, a mistura foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em água (30 mL) e extraído com acetato de etila (10 mL x 2). A fase aquosa foi liofi-

lizada até a secura para fornecer um resíduo purificado por HPLC pre- parativa de fase reversa (coluna: Agela DuraShell 5 µm, 150 mm x 25 mm; fase móvel: A: água (0,04% de NH3 -H2O+10 mM de NH4HCO3) - B:MeCN; eluição gradiente: A (100%): B (0%) a A (90%) e B (10%) du- rante 10 minutos; taxa de fluxo 25 mL/min). As frações puras foram co- letadas e liofilizadas até a secura para fornecer o composto 5, sal de amônio (111 mg).

[0530] RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 7,98 (s, 1H) 7,56 - 7,70 (m, 2 H) 6,20 (br d, J=14,92 Hz, 1H) 5,71 (br d, J=9,05 Hz, 1H) 5,18 - 5,40 (m, 2 H) 4,98 (br s, 1H) 4,85 (br d, J=4,89 Hz, 1H) 4,55 (br d, J=10,27 Hz, 1H) 4,44 - 4,52 (m, 1H) 4,39 (br s, 1H) 4,19 (br d, J=11,25 Hz, 1H) 4,05 - 4,16 (m, 2 H) 4,01 (br d, J=4,40 Hz, 1H) 3,34 - 3,43 (m, 1H) 3,35 (s, 3H); RMN P (162 MHz, D2O)) δ ppm -2,37 - -0,06 (m, 1 P); RMN 31 19 F (376 MHz, D2O) δ ppm -202,54 (br s, 1 F); ESI-MS: m/z= 689,9 [M+H]+. Exemplo 43 Composto 20

Etapa 1: Preparação do composto 43c

[0531] 5-[3,5-Bis(trifluorometil)fenil]tetrazol (9,65 mL de uma solu- ção de 0,25M em MeCN, 2,41 mmol, solução seca em peneiras mole- culares antes do uso) foi adicionado a uma solução de L- benzoil-2',3'- didesóxi-3'-[(trifenilmetil)amino]-adenosina 43a [CAS 195375-63-4] (720 mg, 1,21 mmol) in MeCN (8 mL). As peneiras moleculares ativadas fo- ram adicionadas e a mistura resultante foi agitada durante 1 hora sob N2. Em seguida, uma solução de 5'-O-(4,4- dimetoxitritil)-N2-isobutiril-3'- O-metilguanosina-2'-(2-cianoetil-N,N-di(isopropil)fosforodiamidita) 43b [CAS 179479-04-0 ] (2201 mg, 2,53 mmol) in MeCN (25 mL), seca em peneiras moleculares ativadas, foi transferido para a mistura acima. A solução de reação resultante foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente e depois disso /BuOOH (1,10 mL de uma solução 5,5 M em decano, 6,03 mmol) foi adicionado, a agitação foi continuada por mais uma hora. A mistura de reação foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida. Água e acetato de etila foram adicionados, a fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etila. As fases orgânicas combina- das foram secas com Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão redu- zida. A purificação foi feita por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 100% de EtOAc em éter de petróleo seguido de 0 a 10% de MeOH em EtOAc) para fornecer o composto 43c (2,3 g).

[0532] ESI-MS: m/z 1381,4 [M+H]+. Etapa 2: Preparação do composto 43d

[0533] Uma solução do composto cima 43e (1,3 g, impuro) acima em MeCN (15 mL), à qual AcOH (80% em água, 15 mL) e trietilsilano (4,8 mL, 30,22 mmol) foram adicionados, foi agitada à temperatura am- biente de um dia para o outro. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (fase estacionária: Xtimate C18, 5 µm, 150 x 25 mm; fase móvel: solução de 10 mM de bicarbonato de amônia (A) - MeCN (B); eluição gradiente) para produzir uma mistura de produto (260 mg) do composto 43d e seu análogo de cianoetila-desprotegido. ESI-MS: m/z 838,2 [M+H]+ & 784,2 [M+H]+ (composto de cianoetila desprotegido). Etapa 3: Preparação do composto 43e

[0534] Uma mistura do composto 43d e seu análogo de cianoetila desprotegido (400 mg, ~0,49 mmol) foi dissolvida em piridina/DCM (1:1, mL), seguida pela adição de Et3N (403 mg, 3,98 mmol), 4- nitrofenol (346 mg, 2,49 mmol) e peneiras moleculares de 4 Å ativadas. A solução resultante foi resfriada até -78°C e agitada durante 1 hora sob uma at- mosfera inerte. A isso, adicionou-se uma solução de clorossulfato de 4- nitrofenila (592 mg, 2,49 mmol) em DCM (5 mL), seca em peneiras mo- leculares de 4 Å ativadas (1 hora) antes do uso. A mistura de reação foi agitada a 78°C por 2 horas e depois disso foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada por mais 1,5 horas. O solvente foi removido sob pressão reduzida. Água e acetato de etila foram adicionados, a fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etila. As camadas orgâ- nicas combinadas foram secas com Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida. A purificação foi feita por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 100% de EtOAc em éter de petró- leo, seguido de 0 a 10% de MeOH em EtOAc) para fornecer o composto 43e impuro que foi usado como tal sem qualquer purificação adicional. ESI-MS: m/z 899,3 [M+H]+. Etapa 4: Preparação do composto 43f

[0535] Terc-butilamina (200 µL, 1,88 mmol) foi adicionada a uma solução do composto 43e (100 mg, impura) em etanol (1 mL). A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o produto bruto puri- ficado por HPLC preparativa em fase reversa (fase estacionária: Agela Durashell C18, 5 µm, 150 x 25 mm, fase móvel: solução aquosa de 10 mM de bicarbonato de amônia (A) - MeCN (B); eluição gradiente) para produzir o composto puro 43f (7 mg).

[0536] ESI-MS: m/z = 846,2 [M+H]+. Etapa 5: Preparação do composto 20

[0537] O composto 43f (6 mg, 7,09 µmol) foi agitado em uma solu- ção de metilamina a 33% em etanol (1 mL) à temperatura ambiente du- rante 1 hora. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo triturado em MeCN para produzir o composto 20 (2 mg, rendimento: 33%). RMN 1H (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,37 (s, 1H), 8,17 (s, 1 B), 7,89 (s, 1H), 7,29 (br s, 2 H), 6,53 (br s, 2 H), 6,36 (dd, J=9,7, 5,4 Hz, 1H), 5,76 (d, J=9,1 Hz, 1H), 5,08 (td. J=9,7, 4,3 Hz, 1H), 4,73 (br d, J= 5,1 Hz, 1H), 4,37 (d, J=11,2 Hz, 1H), 4,29 (s, 1H), 4,16 - 4,22 (m, 2 H), 4,15 (br dd, J= 11,8, 2.) Hz, 1H), 3,94 (d, J=4,1 Hz, 1H), 3,52 - 3,57 (m, 1H), 3,50 (s, 3H), 3,12 - 3,19 (m, 1H), 2,44 - 2,49 (m, 1H); RMN 31P (162 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,97 (s, 1 P); ESI-MS: m/z 672,3 [M+H]+. Exemplo 44 Composto (*R) 10A Etapa 1: preparação do composto 44a

[0538] O composto 6 g (95 mg, 0,117 mmol) foi coevaporado com mistura de tolueno anidro: acetonitrila (1:1, v/v, 3 x 30 mL) foi então dis- solvida em THF anidro (10 mL), peneiras moleculares de 4 Å em pó (0,3 g) e 0,45M de tetrazol em CH3CN (2,0 mL, 0,936 mmol) foram adiciona- dos e a mistura heterogênea resultante foi borbulhada com argônio du- rante 4 minutos. Após a agitação desta mistura à temperatura ambiente durante 10 minutos, uma solução de 2-cianoetil- N,N-di(isopropil)cloro- fosforodiamidita em CH3CN (57 mg, 0,18 mmol, em 3,0 mL de CH3CN) foi adicionada durante 4- minutos à temperatura ambiente. Após a agi- tação da reação durante 1,5 hora, as peneiras moleculares foram remo- vidas por filtração e lavadas com THF (15 mL). O filtrado foi usado dire- tamente na etapa seguinte. Uma solução de DDTT (119 mg, 0,585 mmol dissolvida em 5 mL de piridina) foi adicionada. Após a agitação da mis- tura de reação à temperatura ambiente durante 30 min, a mistura foi diluída com EtOAc (30 mL) e lavada com solução aquosa saturada de NaHCO3 (1 × 20 mL) e salmoura (1 × 20 mL). A camada aquosa foi re- extraída com EtOAc (1 × 40 mL). As camadas orgânicas combinadas foram evaporadas até a secura, o material bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (MeOH em DCM: 0 a 15%, v/v) para gerar o composto 44a (58 mg); ESI-MS: m/z 943 [M+H]+. Etapa 2: preparação do composto (*R) 10A, sal de sódio

[0539] Uma solução do composto 44a (58 mg, 0,06 mmol) em MeNH2 (33% em EtOH, 10 mL) foi agitada a 40°C durante 2 horas por 30 minutos, concentrada sob pressão reduzida. O sólido bruto resultante foi lavado com DCM (15 mL) e o precipitado foi removido por filtração e purificado por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: Synergi 4 µm, Hydro RP, 250 mm x 4,6 mm, fase móvel: Tampão A: 50 mM de acetato de trietilamônio em água; Tampão B: 50 mM de acetato de trietilamônio em CH3CN; gradiente: 0 a 40% de B durante 30 minutos, taxa de fluxo: 24 mL/min) para produzir o composto (*R) 10A (15,9 mg) como um sal de TEAA. A conversão final no sal de sódio foi feita por eluição de uma solução aquosa por uma coluna empacotada com uma resina catiônica de troca de íons de Na para fornecer Etapa 3: preparação do composto (*R) 10A, sal de sódio

[0540] Dowex 50W x 8, 200-400 (5 mL, forma de H) foi adicionado a um béquer e lavado com água desionizada (30 mL), H2SO4 a 15% em água desionizada foi adicionada à resina; A mistura foi agitada durante 15 minutos e decantada (30 mL). A resina foi transferida para uma co- luna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 volumes de coluna), e então com água desionizada até ficar com um pH neutro (papel pH). A resina foi transferida de volta para o béquer, NaOH a 15% em solução de água desionizada foi adici- onado, e a mistura foi gentilmente agitada durante 5 minutos, e decan- tada (1×). A resina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 CV) e, então, com água desionizada até ficar com um pH neutro. O composto 16 (15,9 mg) foi dissolvido em uma quantidade mínima de água desionizada, adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada. As frações adequadas foram agrupadas (UV) e liofilizadas para resultar no composto (*R) 10A, sal de sódio (15,1 mg).

[0541] RMN H1 (400 MHz, D2O): δ 8,33 (s, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,30-6,42 (m, 2H), 6,22 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,43 (s, 1H), 5,27 (s, 1H), 4,84-4,98 (m, 1H), 4,60-4,70 (m, 1H), 4,56 (d, J= 3,6 Hz, 1H), 4,32 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 4,12 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 4,01-4,11 (m, 1H), 3,81 (d, J 31 = 11,6 Hz, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,55 (d, J = 11,6 Hz, 1H); RMN P (162 MHz, D2O): δ 54,07 (s, 1P); ESI-MS: m/z: 714,7 [M-1]-. Exemplo 45

Preparação do composto 45b

[0542] O composto 45a (200 mg, 0,216 mmol) foi coevaporado com mistura de tolueno anidro: MeCN (1:1, v/v, 3 x 30 mL) então dissolvida em THF anidro (20 mL), peneiras moleculares de 4 Å em pó (0,8 g) e 0,45 M de tetrazol em MeCN (3,8 mL, 1,72 mmol) foram adicionados. A mistura heterogênea resultante foi borbulhada com argônio por 4 minu- tos. Após a agitação desta mistura à temperatura ambiente durante 10 minutos, uma solução de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodi- amidita (105 mg, 0,345 mmol) em MeCN (3 mL) foi adicionada durante 30 minutos à temperatura ambiente. Após a agitação da reação durante 90 minutos, filtração e então lavagem com THF (15 mL). A mistura re- sultante (MS: m/z 1007 [M+H]+) foi usada diretamente na etapa se- guinte. 0,5 M de iodo (em THF:água:Py 8:1:1, v/v/v) foi adicionado até a cor persistir. Após a agitação à temperatura ambiente durante 30 minu- tos, a mistura de reação foi diluída com EtOAc (30 mL), o excesso de iodo foi bruscamente resfriado com solução aquosa saturada de Na2S2O3 (até descoloração). As fases foram separadas; a fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada. NaHCO3 (1 × 20 mL), solução aquosa saturada de NaCl (1 × 20 mL). A fase aquosa foi re-extraída com EtOAc (1 × 20 mL). As fases orgânicas combinadas foram evaporadas até a secura, e o material bruto resultante foi purificado por cromatogra- fia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 15% de MeOH em DCM, v/v) para fornecer 45b (135 mg). ESI-MS: m/z 1023 [M+H]+. Preparação do composto 45c

[0543] O composto 45b (135 mg) foi submetido a uma solução de metilamina a 33% em etanol (10 mL) à temperatura ambiente. Após a agitação a 40°C durante 2 horas, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O sólido bruto resultante foi lavado com DCM (15 mL) e o precipitado foi removido por filtração para fornecer 45c (98 mg) como um sólido. ESI-MS: m/z 796 [M+H]+. Preparação do composto 17, sal de sódio

[0544] O composto 45c (98 mg) foi submetido a TEA 80% aquoso (4 mL) a 0°C. Após a agitação por 1 hora a 0 C, a mistura de reação foi concentrada sob vácuo para fornecer o produto bruto como um óleo in- color. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (co- luna: Synergi 4 µm, Hydro RP, 250 mm × 30 mm, fase móvel: Tampão A: 50 mM de acetato de trietilamônio em água; Tampão B: 50 mM de acetato de trietilamônio em CH3CN, gradiente: 0 a 40% de B durante 30 minutos, taxa de fluxo 24 mL/min) para produzir o composto 17 (24,2 mg) como um sal de TEAA. ESI-MS: m/z: 674 [M-1]-. Preparação de sal de sódio

[0545] Dowex 50W × 8, 200 a 400 (5 mL, forma de H) foi adicionado a um béquer e lavado com água desionizada (30 mL). Então, à resina adicionou-se H2SO4 a 15% em água desionizada, a mistura foi gentil- mente agitada durante 5 minutos e decantada (30 mL). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (ao menos 4 CV), e então com água desioni- zada até ficar neutra. A resina foi transferida de volta para o béquer,

NaOH a 15% em solução de água desionizada foi adicionado, e a mis- tura foi gentilmente agitada durante 5 minutos, e decantada (1×). A re- sina foi transferida para a coluna e lavada com NaOH a 15% em água (ao menos 4 CV) e, então, com água desionizada até que ficar neutra.

[0546] O composto 17, sal de TEAA (1:1, v/v) foi dissolvido em uma quantidade mínima de água desionizada e MeCN (1:1, v/v), adicionado ao topo da coluna, e eluído com água desionizada.

[0547] As frações adequadas foram agrupadas e liofilizadas para produzir o composto 17, sal de sódio (22,9 mg).

[0548] RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,31 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,76 (s, 1H), 6,74 (s, 1H), 6,15-6,25 (m, 2H), 5,45-5,55 (m, 1H), 5,25 (d, J = 4,8 Hz, 0,5H), 5,13 (d, J = 4,8 Hz, 0,5H), 4,75-4,90 (m, 1H) 4,65 (s, 1H), 4,35-4,45 (m, 1H), 4,33 (d, J = 9,6 Hz, 1H) 4,10- 4,25 (m, 2H), 3,55- 31 3,70 (dd, J = 3,2, 13,2 Hz, 1H), 3,38 (d, J = 12 Hz, 1H). RMN P (162 MHz, D2O) δ -1,895 ppm (s, 1P); RMN 19 F (379 MHz, D2O) δ -196,91 ppm (pico amplo, 1F); ESI-MS: m/z: 658,5 [M-1]-. Exemplo 46 Preparação do composto 46b

[0549] O composto 46a (110 mg, 0,123 mmol) foi coevaporado com mistura de tolueno anidro: acetonitrila (1:1, v/v, 3 x 30 mL) foi então dis- solvido em THF anidro (14 mL), e a seguir forma adicionados peneiras moleculares de 4 Å em pó (0,5 g) e 0,45 M de tetrazol em MeCN (2,1 mL, 0,989 mmol). A mistura heterogênea resultante foi borbulhada com argônio por 4 minutos. Após a agitação desta mistura à temperatura am- biente durante 10 minutos, uma solução de 2-cianoetil-N,N,N',N'- te- tra(isopropil)fosforodiamidita (60 mg, 0,197 mmol) em MeCN (3,0 mL) foi adicionada durante 30 minutos à temperatura ambiente. Após a agi- tação por 90 minutos à temperatura ambiente, a mistura de reação foi filtrada, então lavada com THF (15 mL). A mistura resultante (MS: m/z 989 [M+H]+) foi usada diretamente na etapa seguinte. 0,5M de iodo (em THF: água: Py 8:1:1, v/v/v) foi adicionado a isso até a cor persistir. Após a agitação à temperatura ambiente durante 30 minutos, a mistura de reação foi diluída com EtOAc (30 mL), o excesso de iodo foi brusca- mente resfriado com solução aquosa saturada de Na2S2O3 (até desco- loração). As fases foram separadas; A fase orgânica foi lavada com so- lução aquosa saturada de Na2S2O3 (até descoloração). As fases foram separadas; a fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada. NaHCO3 (1 × 20 mL), solução aquosa saturada de NaCl (1 × 20 mL). A fase aquosa foi re-extraída com EtOAc (1 × 20 mL). As fases orgânicas combinadas foram evaporadas até a secura, e o material bruto resul- tante foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (0 a 15% de MeOH em diclorometano, v/v) para fornecer o composto 46b (77 mg). ESI-MS: m/z 1005,8 [M+H]+. Preparação do composto 46c

[0550] O composto 46b (77 mg) foi submetido a uma solução de metilamina a 33% em etanol (6 mL) à temperatura ambiente. Após a agitação a 40 °C durante 2 horas, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O sólido bruto resultante foi lavado com DCM (15 mL) e o precipitado foi removido por filtração para fornecer 46c (43 mg).

ESI-MS: m/z 778 [M+H]+. Preparação do composto 18, sal de sódio

[0551] O composto 46c (43 mg) foi submetido a solução aquosa de TEA 80% (2 mL). Após a agitação à temperatura ambiente durante 1 hora, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para produzir um resíduo como um óleo incolor. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: Synergi 4 µm, Hydro RP, 250 mm x 30 mm, fase móvel: Tampão A: 50 mM de acetato de trietilamônio em água; Tampão B: 50 mM de acetato de trietilamônio em CH 3CN, gradiente: 0 a 40% de B durante 30 minutos, taxa de fluxo 24 mL/min) para produzir o composto 18 (6,4 mg) como um sal de TEAA.

[0552] Dowex 50W × 8, 200 a 400 (5 mL, forma de H) foi adicionado a um béquer e lavado com água desionizada (30 mL). Então, à resina adicionou-se H2SO4 a 15% em água desionizada, a mistura foi gentil- mente agitada durante 5 minutos e decantada (30 mL). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em água desionizada e lavada com H2SO4 a 15% (pelo menos 4 CV), e então com água desio- nizada até ficar neutra. A resina foi transferida de volta para o béquer, NaOH a 15% em solução de água desionizada foi adicionado, e a mis- tura foi gentilmente agitada durante 5 minutos, e decantada (1×). A re- sina foi transferida para a coluna e lavada com 15% de NaOH em água (pelo menos 4 CV), e então com água desionizada até ficar neutra, o composto 18 (6,4 mg) sal de TEAA foi dissolvido em uma quantidade mínima de água desionizada e MeCN (1:1, v/v) adicionada ao topo da coluna, e eluído com água desionizada. As frações adequadas foram agrupadas e liofilizadas para produzir o composto 18, sal de sódio (5,9 mg).

[0553] RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 7,93 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 6,32 (dd, J = 2,8; 4,8 Hz, 1H), 6,05 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,92- 6,01 (m, 1H), 5,15-5,25 (m, 1H), 4,61 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,30-4,36 (m,

1H), 3,90-4,20 (m, 3H), 3,50-3,58 (dd, J = 3,2, 13,2 Hz, 1H), 3,20- 3,33 (dd, J = 2, 13,2 Hz, 1H), 2,60-2,75 (m, 2H). RMN P (162 MHz, D2O) δ 31 ppm -0,838 (s, 1P); ESI-MS: m/z: 656,8 [M-1]-. Exemplo 47

Etapa 1: Preparação do composto 47b

[0554] Clorotrimetilsilano (2,08 mL, 16,38 mmol) foi adicionado por gotejamento a uma solução do composto 47a [CAS 174171-97-2] (1 g, 3,28 mmol) em piridina seca (60 mL) a 0°C. A mistura de reação foi agitada a 0°C durante 2 horas após o que cloreto de benzoíla (1,89 mL, 16,38 mmol) foi adicionado por gotejamento. A agitação foi continuada à temperatura ambiente durante 3 horas. A solução de reação foi resfri- ada até 0°C e, em seguida, água (30 mL) e amônia aquosa (30 mL de solução a 25%) foram adicionadas, e a agitação foi continuada por 90 minutos a 0°C. A solução de reação foi extraída com EtOAc, as cama- das orgânicas combinadas foram secas com Na2SO4, filtradas e con- centradas sob pressão reduzida. A purificação foi feita por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 50 a 100% de EtOAc em éter de petróleo) para fornecer o composto 47b como um sólido branco (1,1 g, rendimento: 82%).

[0555] RMN 1H (400 MHz, DMSO –d6) δ ppm 11,17 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,05 (d, J=7,3 Hz, 2 H), 7,61 - 7,68 (m, 1H), 7,46 - 7,59 (m, 2 H), 5,02 - 5,09 (m, 1H), 4,90 - 5,01 (m, 1H), 4,83 (t, J= 5,3 Hz, 1H), 4,59 (dd, J=7,2, 3,9 Hz, 1H), 3,53 (br t, J= 5,0 Hz, 2 H), 2,17 - 2,41 (m, 3H), 1,50 (s, 3H), 1,25 (s, 3H); ES1-MS: m/z 410,2 [M+H]+. Etapa 2: Preparação do composto 47c

[0556] DMAP (448 mg, 3,66 mmol) e cloreto de tosila (2,79 g, 14,65 mmol) foram adicionados a uma solução do composto 47b (3 g, 7,32 mmol) e Et3N (3,07 mL, 21,98 mmol) em DCM (6 mL) sob resfriamento de gelo. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas. A mistura foi resfriada bruscamente com água e extraída com DCM. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca com Na 2SO4 anidro e evaporada sob pressão reduzida para fornecer o produto tosi- lado. O produto bruto foi dissolvido em DMF (15 mL) seguida pela adi-

ção de azida de sódio (1,88 g, 28,91 mmol), a mistura de reação resul- tante foi agitada a 35°C durante 16 horas. A seguir, a mistura de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, diluída com solução aquosa saturada de Na2CO3, e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi se- parada, lavada com salmoura, seca com Na2SO4 anidro, filtrada e eva- porada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por croma- tografia em coluna com sílica (eluição gradiente: 0 a 25% de EtOAc em éter de petróleo) para fornecer o composto 47c como um sólido amarelo (2, 1 g, rendimento: 61%).

[0557] RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,25 (s, 3H), 1,51 (s, 3H), 2,24 - 2,48 (m, 3H), 3,53 (dd, J=12,3, 6,3 Hz, 1H), 3,60 (dd, J=12,3, 5,3 Hz, 1H), 4,02 (q, J=7,2 Hz, 1H), 4,58 (dd, J=7,2, 4,6 Hz, 1H), 4,93 - 5,03 (m, 1H), 5,03 - 5,11 (m, 1H), 7,51 - 7,59 (m, 2 H), 7,60 - 7,71 (m, 1H), 8,04 (d, J=7,5 Hz, 2 H), 8,64 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 11,19 (br s, 1H); ESI-MS: m/z 435,1 [M+H]+. Etapa 3: Preparação do composto 47d

[0558] TFA (100 mL, 75% em água) foi adicionado a uma solução do composto 47c (3,47 g, 7,99 mmol) em DCM (20 mL), a mistura resul- tante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A reação foi concentrada sob pressão reduzida, o resíduo obtido foi dissolvido em EtOAc e lavado com solução aquosa saturada de K2CO3, a camada aquosa foi separada e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas com- binadas foram secas com Na2SO4 anidro e evaporadas sob vácuo para fornecer o composto 47d como um sólido branco (3,25 g, bruto) que foi usado como tal na etapa seguinte.

[0559] ESI-MS: m/z 395,0 [M+H]+. Etapa 4: Preparação do composto 47e

[0560] O composto 47d (3,25 g) foi dissolvido em DMF (22 mL) e, em seguida, imidazol (1,57 g, 23,0 mmol) e TBSCl (1,39 g, 9,20 mmol) foram adicionados. A segunda reação foi realizada em paralelo na mesma escala. Ambas as misturas de reação foram agitadas à tempe- ratura ambiente de um dia para o outro e depois disso EtOAc e salmoura foram adicionados. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram se- cas com Na2SO4 anidro, filtradas e evaporadas sob pressão reduzida para fornecer a mistura regioisomérica bruta. A separação foi feita por HPLC preparativa em fase reversa (fase estacionária: Phenomenex Synergi, 10 µm Max RP, 250 x 50 mm; fase móvel: água (A) - MeCN (B); eluição gradiente) para produzir o composto 47e (2,0 g, rendimento: 24%) como o primeiro isômero de eluição e o regioisômero 3'-TBS-pro- tegido (47ea, estrutura não mostrada, 2,5 g, rendimento: 31%) como o segundo isômero de eluição.

[0561] RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11,13 (s, 1H), 8,72 (s, 1H), 8,61 (s, 1H), 8,04 (br d, J= 7,5 Hz, 2 H), 7,61 - 7,68 (m, 1H), 7,51 - 7,58 (m, 2 H), 4,91 - 5,01 (m, 1H), 4,78 (d, J= 5,3 Hz, 1H), 4,52 (dd, J=8,5, 5,5 Hz, 1H), 3,79 - 3,86 (m, 1H), 3,54 - 3,64 (m, 2 H), 2,34 (dt, J=12,6, 8,5 Hz, 1H), 2,16 - 2,28 (m, 1H), 1,94 - 2,04 (m, 1H), 0,64 (s, 9 H), -0,16 (s, 3H), -0,38 (s, 3H); ESI-MS: m/z = 509,2 [M+H]+. Etapa 5: Preparação do composto 47f

[0562] DMTrCl (394 mg, 1,16 mmol), AgNO 3 (492 mg, 2,90 mmol) e 2,4,6-colidina (351 mg, 2,90 mmol) foram adicionados a uma solução do composto 47e (300 mg, 0,59 mmol) em DCM (6 mL), a mistura resul- tante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A rea- ção foi bruscamente resfriada com salmoura, a camada aquosa foi se- parada e extraída com DCM. Os extratos orgânicos combinados foram secos com Na2SO4 anidro, filtrados e evaporados sob vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica (eluição gra- diente: 10 a 100% de EtOAc em éter de petróleo) para produzir o com- posto 47f (430 mg, rendimento: 90%) como um sólido amarelo.

[0563] RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm -0,68 (s, 3H), -0,22 (s, 3H), 0,67 - 0,75 (m, 9 H), 0,80 - 0,89 (m, 1H), 1,54 - 1,66 (m, 1H), 2,00 - 2,08 (m, 1H), 2,29 - 2,39 (m, 1H), 3,21 (dd, J= 12,0, 5,9 Hz, 1H), 0,00 (br dd, J= 3,9, 1,0 Hz, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 4,58 (dd, J=9,3, 3,9 Hz, 1H), 5,37 (q, J=9,3 Hz, 1H), 6,83 - 6,96 (m, 4 H), 7,20 - 7,27 (m, 1H), 7,28 - 7,35 (m, 2 H), 7,36 - 7,44 (m, 4 H), 7,50 - 7,60 (m, 4 H), 7,61 - 7,67 (m, 1H), 8,05 (br d, J=7,6 Hz, 2 H), 8,62 - 8,69 (m, 1H), 8,71 (s, 1H), 11,12 (br s, 1H); ESI-MS: m/z 811,3 [M+H]+. Etapa 6: Preparação do composto 47 g

[0564] Uma suspensão do composto 47f (3,23 g, 3,98 mmol) em EtOAc (150 mL) foi agitada sob H2 (15 psi) a 30°C de um dia para o outro na presença de Pd/C (10% em carbono, 3,0 g). O catalisador foi removido por filtração sobre terra diatomácea, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer o composto amina que foi imedia- tamente usado como tal na etapa seguinte. O produto bruto foi dissol- vido em DCM (110 mL) e, em seguida, adicionou-se 4-nitrofenol (3,53 g, 25,38 mmol), EtsN (2,12 mL, 15,23 mmol) e peneiras moleculares ativadas. A mistura resultante foi resfriada até -78°C sob atmosfera de N2 e depois disso clorossulfato de 4-nitrofenila (3,62 g, 15,23 mmol) em DCM (20 mL) foi adicionado por gotejamento, a solução de reação foi deixada aquecer até a temperatura ambiente e agitada de um dia para o outro. A mistura foi diluída com DCM e filtrada através de um bloco de terra diatomácea. O filtrado foi lavado com solução aquosa saturada de NaHCO3, submetido à secagem com Na2SO4 e concentrado. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica (eluição gra- diente: 0 a 50% de EtOAc em éter de petróleo) para produzir o composto 47g (2,6 g, rendimento: 67%).

[0565] RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm -0,62 (s, 3H), -0,30 (s, 3H), 0,65 (s, 9 H), 1,92 -2,11=1 (m, 2 H), 2,44 (br dd, J=9,9, 3,5 Hz, 1H),

2,85 - 3,01 (m, 1H), 3,04 - 3,15 (m, 1H), 3,45 (br d, J= 3,9 Hz, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,72 (s, 3H), 4,68 (br dd, J=9,5, 3,9 Hz, 1H), 5,47 (q, J=9,5 Hz, 1H), 6,87 (s, 3H), 7,19 - 7,25 (m, 1H), 7,26 - 7,34 (m, 2 H), 7,35 - 7,48 (m, 5 H), 7,51 - 7,60 (m, 3H), 7,62 - 7,70 (m, 1H), 8,05 (br d, J=7,3 Hz, 2 H), 8,33 (d, J=9,0 Hz, 2 H), 8,67 (d, J=7,1 Hz, 1H), 8,80 (br t, J= 5,7 Hz, 1H), 11,15 (s, 1H); ESI-MS: m/z 986,6 [M+H]+. Etapa 7: Preparação do composto 47h

[0566] As peneiras moleculares ativadas foram adicionadas a uma solução do composto 47g (1 g, 1,07 mmol) e 5'-O-(4,4'-dimetoxitritil)-N2- isobutiril-3'-O-metil-D-guanosina [CAS 103285-33-2] (717 mg, 1,01 mmol) em THF seco (25 mL), a mistura resultante foi agitada à tempe- ratura ambiente durante 2 horas sob nitrogênio. A seguir, uma solução de DMAP (619 mg, 5,07 mmol) em THF (10 mL), pré-seca por agitação durante 2 horas na presença de peneiras moleculares ativadas, foi adi- cionada para iniciar a reação. A mistura de reação foi agitada a 50°C de um dia para o outro. As peneiras moleculares foram removidas por fil- tração e o filtrado foi lavado com solução aquosa saturada de NaHCO3. A camada aquosa foi extraída com DCM. As camadas orgânicas com- binadas foram secas com Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica (eluição gradiente: 0 a 2% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 47 h (875 mg, rendimento: 54%). ESI-MS: m/z 759,2 [2H]-. Etapa 8: Preparação do composto 47i

[0567] Uma solução do composto 47 h (875 mg, 0,56 mmol) em DCM (40 mL) foi tratada com DCA (0,19 mL, 2,25 mmol) na presença de água (0,05 mL, 2,81 mmol) durante 1 hora. A mistura de reação foi bruscamente resfriada mediante a adição de piridina (0,23 mL, 2,81 mmol) em metanol (2 mL) e, em seguida, foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi dissolvido em DCM, a solução obtida foi lavada com água e salmoura, seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica (eluição gradiente: 0 a 5% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 47i como um sólido branco (465 mg, rendimento: 91%).

[0568] RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,11 (br s, 1H), 11,58 (br s, 1H), 11,09 (br s, 1H), 8,70 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 8,44 (br s, 1H), 8,29 (s, 1H), 8,05 (d, J=7,3 Hz, 2 H), 7,59 - 7,70 (m, 1H), 7,47 - 7,58 (m, 2 H), 6,10 (d, J=6,5 Hz, 1H), 5,41 (dd, J=6,5, 5,3 Hz, 1H), 5,29 (t, J= 5,3 Hz, 1H), 4,91 (q, J= 9,3 Hz, 1H), 4,54 (br d, J=3,7 Hz, 1H), 4,48 (dd, J=8,7, 5,5 Hz, 1H), 4,22 (dd, J=4,9, 2,4 Hz, 1H), 4,15 (q, J=3,3 Hz, 1H), 3,76 (br s, 1H), 3,54 - 3,73 (m, 2 H), 3,49 (s, 3H), 2,97 (dd, J=13,4, 7,7 Hz, 1H), 2,81 - 2,90 (m, 1H), 2,75 (spt, J= 6,8 Hz, 1H), 2,18 - 2,29 (m, 1H), 2,02 - 2,15 (m, 1H), 1,74 - 1,87 (m, 1H), 1,11 (d, J=6,5 Hz, 3H), 1,08 (d, J= 6,9 Hz, 3H), 0,63 (s, 9 H), -0,17 (s, 3H), -0,41 (s, 3H); ESI-MS: m/z 912,7 [M+H]+. Etapa 9: Preparação do composto 47j

[0569] Uma solução do composto 47i (280 mg, 0, 371 mmol) e 1H- tetrazol (3,58 mL de um 3 a 4% em MeCN, seca em peneiras molecula- res de 3A ativadas) em DMF/THF (1:1, 44 mL, pré-secas em peneiras moleculares de 3A ativadas) foi tratada com peneiras moleculares de 3 Å durante 2 horas para sob N2 e depois disso adicionou-se em uma única porção 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (97 µL, 0,31 mmol). A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. PADS (0,19 g, 0,61 mmol) foi adicionado e a agitação foi continuada por mais uma hora. As peneiras moleculares foram removidas por filtração e enxaguadas com diclorometano. Os fil- trados combinados foram lavados com solução aquosa saturada de NaHCO3 e salmoura, secos com MgSO4, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida (eluição gradiente: 0 a 10% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 47j (91 mg, rendimento: 26%) como um único diastereômero.

[0570] RMN 31P (162 MHz, DMSO-d6) δ ppm 66,65 (s, 1 P); ESI-MS: m/z 1043,7 [M+H]+. Etapa 10: Preparação do composto (*R) 21A, sal de sódio

[0571] O composto 47j (86 mg, 0,077 mmol) foi agitada em uma so- lução de metilamina a 33% em etanol (4 mL) a 45°C até a completa conversão (cerca de 1 hora), e depois disso a solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente e concentrada sob pressão redu- zida. O resíduo foi dissolvido em piridina (4 mL), seguida pela adição de Et3 N (320 µL, 2,32 mmol) e tri-hidrofluoreto de trietilamina (200 µL, 1,16 mmol). A mistura de reação foi agitada a 45°C por 18 horas. Isopropo- xitrimetilsilano (0,82 mL, 4,65 mmol) foi adicionado e a agitação foi con- tinuada à temperatura ambiente durante 18 horas. O resíduo obtido após a concentração sob pressão reduzida foi triturado em acetonitrila anidra, o precipitado obtido foi adicionalmente purificado por HPLC pre- parativa de fase reversa (fase estacionária: RP XBridge Prep C18 OBD- 10 µm, 150 x 50 mm, fase móvel: solução aquosa de 0,25% de bicarbo- nato de amônia (A)- MeOH (B); eluição gradiente) para resultar no com- posto (*R) 21A como um único diastereômero. A conversão final no sal de sódio foi feita por eluição de uma solução aquosa em uma coluna empacotada com uma resina catiônica de troca de íons de Na produ- zindo o composto (*R) 21 A, sal de sódio como um sólido branco ma- cio (27 mg, rendimento: 46%).

[0572] RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,36 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,87 (s, 1H), 6,10 (d, J=8,1 Hz, 1H), 5,68 (dd, J=8,3, 4,3 Hz, 1H), 4,83 - 4,95 (m, 2 H), 4,67 - 4,72 (m, 1H), 4,61 (m, J= 2,0 Hz, 1H), 4,39 (d, J=4,5 Hz, 1H), 4,27 (ddd, J=11,8, 6,5, 2,4 Hz, 1H), 4,18 (ddd, J=12,2, 4,5, 1,6 Hz, 1H), 3,55 (s, 3H), 3,36 (br d, J=4,8 Hz, 2 H), 2,55 - 2,65 (m, 2 H), 1,92 - 2,03 (m, 1H); RMN 31P (162 MHz, D2O) δ ppm 54,55 (s, 1 P);

ESI-MS: m/z 702,4 [M+H]+. Exemplo 48 Etapa 1: Preparação do composto 48b

[0573] TEPDSCb (765 µL, 2,39 mmol) foi adicionado a uma solução de composto 48a [CAS 1834500-50-3] (0,6 g, 1,71 mmol) em piridina

(25 mL). A mistura de reação foi agitada durante 2 horas e depois disso foi vertida em solução aquosa saturada de NaHCO3 e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secas com Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida. O produto resíduo foi pu- rificado por cromatografia em coluna com sílica (eluição gradiente: 0 a 100% de EtOAc em éter de petróleo seguido de 0 a 10% de MeOH em EtOAc) para fornecer o composto 48b como um sólido branco (550 mg, rendimento: 54%). RMN 1H (400 MHz, DXlSO-d6) δ ppm 12,06 (br s, 1H), 11,56 (br s, 1H), 8,05 (s, 1H), 4,85 (d, J=7,3 Hz, 1H), 4,51 - 4,64 (m, 1H), 4,29 (q, J=7,2 Hz, 1H), 4,14 - 4,23 (m, 1H), 3,90 (dd, J= 11,5, 3,0 Hz, 1H), 3,76 (dd, J= 11,6, 8,1 Hz, 1H), 2,78 (spt, J=6,7 Hz, 1H), 2,10 - 2,29 (m, 2 H), 1,42 - 1,58 (m, 1H), 1,13 (d, J= 7,0 Hz, 6 H), 0,99 - 1,10 (m, 28 H); ESI-MS: m/z 594,4 [M+H]+. Etapa 2: Preparação do composto 48c

[0574] Peneiras moleculares ativadas foram adicionadas a uma so- lução do composto 48b (350 mg, 0,59 mmol) e sulfamato 17a (745 mg, 0,85 mmol) em THF seco (20 mL), a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas sob nitrogênio. A seguir, uma so- lução de DMAP (347 mg, 2,84 mmol) em THF (5 mL), pré-seca por agi- tação na presença de peneiras moleculares ativadas, foi adicionada para iniciar a reação. A mistura de reação foi agitada a 50°C de um dia para o outro. As peneiras moleculares foram removidas por filtração e o filtrado foi lavado com solução aquosa saturada de NaHCO 3. A fase aquosa foi extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas fo- ram secas com Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. Composto 48c (401 mg, rendimento: 51%) foi obtido como um sólido amarelo após dois rodadas de purificação por cromatografia em coluna com sílica (rodada 1: eluição gradiente: 0 a 2% de Mde eOH em DCM, rodada 2: 0 a 100% de EtOAc em éter de petróleo seguido de 0 a 10% de MeOH em EtOAc).

[0575] RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,00 (s, 1H), 11,44 (s, 1H), 11,25 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 8,20 (br t, J= 5,4 Hz, 1H), 8,03 (d, J=7,3 Hz, 2 H), 8,00 (s, 1H), 7,62 - 7,70 (m, 1H), 7,55 (t, J=7,5 Hz, 2 H), 7,46 (d, J=7,5 Hz, 2 H), 7,28 - 7,39 (m, 6 H), 7,18 - 7,26 (m, 1H), 6,84 - 6,92 (m, 4 H), 6,30 (dd, J=17,9, 3,0 Hz, 1H), 4,98 - 5,04 (m, 1H), 4,84 - 4,95 (m, 1H), 4,56 - 4,72 (m, 1H), 4,55 (br s, 1H), 4,39 (t, J= 5,5 Hz, 1H), 3,73 - 3,93 (m, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,70 (s, 3H), 2,88 - 3,00 (m, 1H), 2,73 (spt, J= 6,8 Hz, 1H), 2,57 - 2,68 (m, 1H), 2,20 - 2,34 (m, 2 H), 1,54 - 1,66 (m, 1H), 1,09 (d, J=6,8 Hz, 6 H), 0,86 - 1,07 (m, 28 H); ESI-MS: m/z 1329,8 [M+2H]/2+ Etapa 3: Preparação do composto 48d

[0576] Uma solução do composto 48c (1,3 g, 0,98 mmol) em MeOH seco (55 mL, seca em peneiras moleculares) foi tratada com HCl (0,19 mL de 2 M em Et2O, (13,7 mmol) durante 4 horas. A mistura de reação foi bruscamente resfriada mediante a adição de solução aquosa satu- rada de NaHCO3 seguida de extração com DCM. A fase orgânica foi seca com MgSO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica (eluição gradiente: 0 a 5% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 48d (670 mg, rendimento: 65%).

[0577] RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,01 - 1,08 (m, 28 H), 1,12 (d, J=6,8 Hz, 3H), 1,67 - 1,75 (m, 1H), 2,20 - 2,32 (m, 1H), 2,43 - 2,54 (m, 1H), 2,62 (br d, J=14,3 Hz, 1H), 2,79 (spt, J=6,9 Hz, 1H), 2,85 - 2,96 (m, 1H), 3,51 (s, 3H), 3,52 - 3,57 (m, 2 H), 3,75 -3,83 (m, 1H), 4,39 - 4,48 (m, 1H), 4,50 (d, J=4,2 Hz, 1H), 5,02 (q, J=9,6 Hz, 1H), 5,09 (t, J=4,5 Hz, 1H), 5,25 (dd, J=9,8, 4,1 Hz, 1H), 5,52 (ddd, J=52,4, 4,4, 2,6 Hz, 1H), 5,68 (br d, J=5,9 Hz, 1H), 6,30 (dd, J=18,5, 2,6 Hz, 1H), 7,56 (t, J=7,7 Hz, 2 H), 7,61 - 7,69 (m, 1H), 8,02 - 8,07 (m, 2 H), 8,11 (br s, 1H), 8,14 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 11,22 (br s, 1H), 11,33 (br s, 1H), 12,09 (br s, 1H); ESI-MS: m/z 1060,7 [M+H]+.

Etapa 4: Preparação do composto 48e

[0578] Uma solução do composto 48d (640 mg, mol, 0,60 nnik) e 1H-tetrazol (7,05 mL de um 3 a 4% em MeCN, seco em peneiras mole- culares de 3 Å antes do uso) em THF seco (47,5 mL, seco em peneiras moleculares de 3 Å antes do uso) foi tratada com peneiras moleculares de 3 Å ativadas durante 2 horas sob N2 e depois disso 2-cianoetil- N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (200 mg, 0,66 mmol) foi adici- onada em uma única porção. A mistura de reação foi agitada por 3 ho- ras. Uma quantidade adicional de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopro- pil)fosforodiamidita (73 mg, 0,24 mmol) foi adicionada e a agitação foi continuada de um dia para o outro. Piridina (19,5 mL) e PADS (456 mg, 1,53 mmol) foram adicionados, a mistura de reação foi agitada por mais uma hora. As peneiras moleculares foram removidas por filtração e en- xaguada com diclorometano. O filtrado foi lavado com salmoura e con- centrado sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cro- matografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 15% de MeOH em DCM) fornece composto 48e (250 mg, rendimento: 35%). ESI-MS: m/z 1138,7 [M+H]+. Etapa 5: Preparação do composto (*R) 43 A, sal de sódio

[0579] O composto 48e (250 mg, 0,21 mmol) foi agitado em uma solução de metilamina a 33% em etanol (10 mL) à temperatura ambiente até a completa conversão (cerca de 4 horas) e depois disso a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida e triturada em MeCN. O precipitado foi dissolvido em uma mistura de piridina (1,7 mL) e EtsN (1,5 mL).

[0580] Tri-hidrofluoreto de trietilamina (141 µL, 0,84 mmol) foi adici- onado, a mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambi- ente até a completa conversão (nota: precipitação do produto desejado observada). Isopropoxitrimetilsilano (596 µL, 3,36 mmol) foi adicionado e a agitação foi de um dia para o outro.

O resíduo, obtido após a con- centração sob pressão reduzida, foi triturado em MeCN, o precipitado obtido foi adicionalmente purificado por HPLC preparativa de fase re- versa (fase estacionária: XBridge C18 OBD, 10 µm, 150 x 50 mm, fase móvel: 0,25% de bicarbonato de amônia (A) - MeCN (B); eluição gradi- ente) para o composto (*R) 43A, sal de amônio como um único epí- mero.

A conversão final no sal de sódio foi feita por eluição de uma so- lução aquosa em uma coluna empacotada com uma resina catiônica de troca de íons de Na produzindo o composto (*R) 43A, sal de sódio como um sólido branco macio (56 mg, rendimento: 37,5%). RMN 1H (600 MHz, DMSO-d6, 61 °C) δ ppm 10,24 (br s, 1H), 8,34 (br s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,26 (s, 3H), 6,34 (dd, J=18,6, 2,2 Hz, 1H), 6,23 (br s, 2 H), 5,69 (d, J=51,8 Hz, 1H), 5,44 - 5,54 (m, 1H), 5,39 (dddd, J=17,3, 9,8, 7,2, 4,7 Hz, 1H), 5,18 (br s, 1H), 5,06 (q, J=9,8 Hz, 1H), 4,30 - 4,38 (m, 1H), 4,29 (br s, 1H), 3,99 - 4,10 (m, 1H), 3,86 (dt, J= 11,0, 4,0 Hz, 1H), 3,63 (dd, J=13,2, 4,5 Hz, 1H), 3,36 (dd, J=13,6, 3,7 Hz, 1H), 2,45 (dt, J=13,5, 10,2 Hz, 1H), 2,20 (m, J=9,1, 4,5 Hz, 1H), 1,80 - 1,91 (m, 1H); RMN 3lP (162 MHz, DMSO-d6) δ ppm 51,63 (s, 1 P); ES1-MS: m/z 690,1 [M+H]+. Exemplo 49 Composto 24

Etapa 1: Preparação do composto 49a

[0581] A uma solução deN2-isobutiril-3'-O-metilguanosina 3j (50 g, 136 mmol) em piridina anidra (500 mL) adicionou-se imidazol (18,52 g, 272 mmol), trifenilfosfina (53,51 g, 204 mmol) e iodo (51,78 g, 204 mmol). A mistura de reação foi agitada sob N2 a 0~5°C durante 3 horas. A solução foi então evaporada até a secura e o resíduo foi dissolvido em DCM (500 mL). Uma solução aquosa saturada de NaHCO foi adici- onada e a mistura foi agitada por 30 minutos. O precipitado foi filtrado e seco sob vácuo para produzir o composto 49a como um pó branco (56 g, rendimento: 86%).

[0582] RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11,94 (br s, 2 H), 8,24 (s, 1H), 5,82 (d, J=6,5 Hz, 1H), 5,69 (br s, 1H), 4,84 (dd, J = 5,0, 6,5 Hz, 1H), 4,10 (m, 1H), 3,83 (dd, J = 3,0, 4,5 Hz, 1H), 3,58 (dd, J= 7,0, 10,5 Hz, 1H), 3,47 (dd, J= 7,0, 10,5 Hz, 1H), 3,46 (s, 3H), 2,74 (spt, J = 6,5 Hz, 1H), 1,12 (d, J= 6,5 Hz, 6 H); ESI-MS: m/z 477,8 [M+H]+. Etapa 2: Preparação do composto 3k

[0583] Azida de sódio (22,48 g, 345,8 mmol) foi adicionada a uma solução do composto 49a (55 g, 115,2 mmol) em DMF anidro (100 mL) e agitada a 85 °C durante 4 horas sob N2. A solução de reação foi então resfriada até 25 °C, vertida em água (2 L), e agitada durante 30 minutos. O precipitado foi coletado por filtração e seco para produzir o composto 3k (41 g, rendimento: 91%).

[0584] RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,09 (br s, 1H), 11,63 (br s, 1H), 8,26 (s, 1H), 5,84 (d, J= 6,0 Hz, 1H), 5,68 (d, J= 5,0 Hz, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,14 (m, 1H), 3,84 (t, J = 4,5 Hz, 1H), 3,69 (dd, J= 8,0, 13,0 Hz, 1H), 3,57 (dd, J= 4,0, 13,0 Hz, 1H), 3,43 (s, 3H), 2,77 (spt, J = 7,0 Hz, 1H), 1,13 (d, J = 7,0 Hz, 6 H); ESI-MS: m/z 393,0 [M+H]+. Etapa 3: Preparação do composto 49b

[0585] Uma mistura do compsoto 3k (40,00 g, 101,94 mmol), imi- dazol (10,41 g, 152,9 mmol) e TBSCl (18,44 g, 122,4 mmol) em DMF anidro (100 mL) foi agitada a 25°C durante 17 hora sob N2. A solução de reação foi evaporada até a secura a 55°C sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com EtOAc, e lavado com água. A camada orgânica foi seca com Na2SO4, filtrada e o filtrado foi evaporado. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica (eluição gradiente: 20 a 40% de EtOAc em heptano) para fornecer o composto 49b (45 g,

rendimento: 87%).

[0586] RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,08 (br s, 1H), 11,59 (br s, 1H), 8,29 (s, 1H), 5,87 (d, J= 7,5 Hz, 1H), 4,86 (dd, J= 4,5, 7,5 Hz, 1H), 4,17 (m, 1H), 3,84 - 3,79 (m, 2 H), 3,56 (dd, J= 4,5, 13,0 Hz, 1H), 3,45 (s, 3H), 2,77 (spt, J= 7,0 Hz 1H), 1,12 (d, J = 6,5 Hz, 6 H), 0,74 (s, 9 H), -0,02 (s, 3H), -0,23 (s, 3H); ESI-MS: m/z 507,6 [M+H]+. Etapa 4: Preparação do composto 49c

[0587] Trifenilfosfina (31,06 g, 118,4 mmol) foi adicionada a uma so- lução do composto 49b (40 g, 78,95 mmol) em THF (400 mL). A mistura de reação foi agitada a 25°C durante 10 minutos e depois disso água (5,68 g, 315,2 mmol) foi adicionada por gotejamento durante 30 minutos. TsOH (27,19 g, 157,9 mmol) foi adicionado e a agitação foi continuada por 10 minutos. A solução de reação foi evaporada sob pressão redu- zida. O resíduo foi dissolvido em DCM (400 mL) e lavado com água (3 x 400 mL). A fase orgânica foi seca com Na2SO4, filtrada e concentrada. O material bruto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica- gel (eluição gradiente: 1% a 5% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 49c como o sal de tosilato (35 g, rendimento: 68%).

[0588] RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9,38 (br s, 5 H), 8,33 (s, 1H), 7,49 (d, J= 8,5 Hz, 2H), 7,12 (d,J = 8,5 Hz, 2 H), 5,88 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 4,85 (dd, J =5,0 e 7,0 Hz, 1H), 4,20 (m, 1H), 3,92 (dd, J = 2,0 e 4,5 Hz, 1H), 3,46 (s, 3H), 3,31-3,17 (m, 2 H), 2,77 (spt, J = 7,0 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 1,12 (d, J= 7,0 Hz, 6 H), 0,74 (s, 9H), -0,01 (s, 3H), -0,25 (s, 3H); ESI-MS: m/z 481,6 [M+H]+. Etapa 5: Preparação do composto 49d

[0589] O composto 49c (sal de TsOH, 34 g, 52,1 mmol), 4-nitrofenol (72,48 g, 521 mmol) e Et3N (63,21 g, 625 mmol) foram dissolvidos em DCM (800 mL) e resfriados até -78°C. Uma solução de clorossulfato de 4-nitrofenila (24,76 g, 104,2 mmol) em DCM (50 mL) foi adicionada por gotejamento durante 30 minutos. A mistura de reação foi aquecida até

0°C, diluída com DCM (800 mL), e lavada com solução aquosa NaH2PO4 1M (3 x 800 mL). A camada orgânica foi seca com Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O material bruto foi purifi- cado por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 1 a 5% de DCM em MTBE) para fornecer o composto 49d (19 g, rendi- mento: 53,5%).

[0590] RMN 1H (500 MHz, CDCl3) δ ppm 9,49 (br s, 1H), 8,32 (d, J= 9,0 Hz, 2 H), 7,63 (s, 1H), 7,47 (d, J= 9,0 Hz, 2 H), 5,64 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,95 (dd, J= 5,5, 8,0 Hz, 1H), 4,38 (s, 1H), 3,84 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 3,64 (s, 2 H), 3,55 (s, 3H), 2,51 (spt, J= 7,0 Hz, 1H), 1,18 (d, J= 7,0 Hz, 3H), 1,12 (d, J= 7,0 Hz, 1H), 0,77 (s, 9 H), -0,10 (s, 3H), -0,31 (s, 3H); ESI-MS: m/z 682,7 [M+H]+. Etapa 6: Preparação do composto 49e

[0591] O composto 49d (18 g, 26,4 mmol), N6-benzoil-5'-O-(4,4'-di- metoxitritil)-2'-desoxiadenosina (34,56 g, 52,55 mmol), e Et3N (13,32 g, 131,6 mmol) foram separadamente dissolvidos em DCM (3 x 72 mL). Cada solução foi seca em peneiras moleculares de 3 Å ativada por agi- tação sob N2 por 4 horas. Em seguida, a solução de Et3N foi adicionada à solução de N6-benzoil-5'-O-(4,4'-dimetoxitritil)-2'-desoiadenosina (49d1), seguida da adição da solução de sulfamato 49d (transferida por meio de uma seringa). A mistura de reação resultante foi agitada a 25 °C por 17 horas. As peneiras moleculares foram removidas por filtração, o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida. O produto bruto 49e foi usado como tal na etapa seguinte. Etapa 7: Preparação do composto 49f

[0592] O produto bruto acima 49e foi dissolvido em THF (190 mL) e tratado com TBAF (14,57 g, 55,73 mmol) a 25°C durante 16 horas. A mistura de reação foi evaporada até a secura sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em DCM, lavado com 2% de ácido acético aquoso (3 x 190 mL) e evaporado. O produto bruto foi dissolvido em DCM (190 mL) e tratado com DCA (17,97 g, 139,4 mmol) e água (2,5 mL, 138,7 mmol). A mistura de reação foi agitada a 25°C até a completa desprote- ção e então lavada com solução aquosa de 5% de NaHCO3. O resíduo obtido após a evaporação sob pressão reduzida foi purificado por cro- matógrafo de fase reversa com o uso de MeOH e água como eluentes para fornecer o composto 49f (4 g) como um sólido esbranquiçado.

[0593] RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ (ppm) 12,07 (s, 1H), 11,59 (s, 1H), 11,19 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 8,68 (s, 1H), 8,47 (t, J= 5,5 Hz, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,05 (d, J= 7,5 Hz, 2H), 7,65 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 7,55 (t, J= 7,5 Hz, 2H), 6,51 (t, J= 6,5 Hz, 1H), 5,83 (d, J= 6,0 Hz, 1H), 5,64 (d, J= 6,0 Hz, 1H), 5,27-5,23 (m, 2H), 4,67 (q, J= 5,5 Hz, 1H), 4,24 (m, 1H), 4,08 (m, 1H), 3,87 (m, 1H), 3,60 (m, 2H), 3,44 (s, 3H), 3,44-3,28 (m, 2H), 3,10 (m, 1H), 2,76 (m, 2H), 1,12 (d, J = 3,0 Hz, 6H); t SI -MS: m/z 784,1 [M+H]+. Etapa 8: Preparação do composto 49 g

[0594] Uma solução do composto 49f (387 mg, 0,49 mmol) em MeCN/THF secos (1:1, 24 mL, secos em peneiras moleculares de 3 Å antes do uso) foi tratada com peneiras moleculares de 3 Å durante 2 horas e depois disso foi transferida para um frasco de reação, 1H-tetra- zol (4,32 mL, de uma solução 3 a 4% em MeCN, seco em peneiras mo- leculares de 3 Å antes do uso) foi adicionado, seguida da adição de 2- cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (172 µL, 0,54 mmol). A mistura de reação resultante foi agitada durante 2 horas e depois disso uma quantidade adicional de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopro- pil)fosforodiamidita (78 µL, 0,25 mmol) foi adicionada, a agitação foi con- tinuada de um dia para o outro. tBuOOH (161 µL de solução 5,5 M em decano, 0,89 mmol) foi adicionado, a solução de reação foi agitada du- rante mais 90 minutos e depois disso foi filtrada e concentrada sob pres- são reduzida. A purificação foi realizada por cromatografia em coluna com sílica (eluição gradiente: 0 a 7,5% de MeOH em DCM) para forne- cer 49g (158 mg, rendimento: 31%). ESI-MS: m/z 899,5 [M+H]+.

Etapa 9: Preparação do composto 24, sal de sódio

[0595] O composto 49g (158 mg, 0,155 mmol) foi agitado em uma solução de metilamina a 33% em etanol (2 mL) à temperatura ambiente até a completa conversão (cerca de 2 horas). A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto resultante foi tritu- rado em MeCN e, em seguida, purificado por HPLC preparativa de fase reversa (fase estacionária: XBridge C18 OBD, 10 µm, 150 x 50 mm; fase móvel: solução aquosa de 0,25% de bicarbonato de amônia (A) - MeOH (B); eluição gradiente). A conversão final no sal de sódio foi feita por eluição de uma solução aquosa em uma coluna empacotada com uma resina catiônica de troca de íons de Na para produzir o composto 24, sal de sódio como um sólido branco macio após a liofilização.

[0596] RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 81°C) δ ppm 10,19 (br s, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 8,19 (br s, 1H), 6,92 (s, 1H), 6,33 (dd, J= 94, 5,6 Hz, 1H), 6,19 (br s, 2 H), 5,74 (d, J=8,8 Hz, 1H), 5,36 - 5,60 (m, 2 H), 4,05 - 4,24 (m, 3H), 3,82 (d, J=4,4 Hz, 1H), 3,53 - 3,63 (m, 1H), 3,50 (s, 3H), 3,26 (br s, 2 H), 3,01 - 3,11 (m, 1H, sinal sob o pico de água) 2,87 (dd, J=14,1, 5,5 Hz, 1H); RMN 31P (126 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,84 (s, 1 P); ESI-MS: m/z 672,3 [M+H]+. Exemplo 50

Etapa 1: Preparação do composto 50a

[0597] Uma solução de 1g (1 g, 1,3 mmol) e 1H-tetrazol (0,2 mL, 3,1 mmol) em DCM seco (40 mL) foi pré-tratad com peneiras moleculares de 3 Å durantes 3 horas antes da adição de 2-cianoetil-N,N,N',N'-te- tra(isopropil)fosforodiamidita (0,4 g, 1,3 mmol) em uma porção. A mis- tura de reação resultante foi agitada a 35°C por 1 hora. Hidreto de xan- tano (0,22 g, 1,43 mmol) foi adicionado e a agitação foi continuada du- rante 30 minutos. A solução de reação foi diluída com DCM e lavada com salmoura, solução aquosa de 5% de NaHCO3 e água. A fase orgâ- nica foi seca com Na2SO4 anidro e filtrada. O filtrado foi evaporado até a secura sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatogra- fia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 5 a 10% de MeOH em DCM) para dar 600 mg de uma mistura do composto 50a e seu pro- duto de desproteção de cianoetila. ESI-MS: m/z 916,0 [M+H]+. Etapa 2: Preparação do composto (*R) 19 A, sal de sódio e o com- posto (*S) 19B, sal de sódio

[0598] O produto 50a acima foi agitado em uma solução de metila- mina a 33% em etanol (13 mL) à temperatura ambiente até a conversão completa. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por coluna C18 de fase reversa usando MeOH e água como fase móvel para fornecer a mistura epimérica P (60 mg, rendimento: 7% do composto 50a). Ambos os isômeros foram se- parados por HPLC preparativa de fase reversa (fase estacionária: XBridge C18 OBD, 10 µm, 250 x 50 mm; fase móvel: solução aquosa de 0,25% de bicarbonato de amônia (A) - MeOH (B); eluição gradiente) para resultar no composto (*R) 19A, sal de amônio como o primeiro isômero que eluiu e o composto (*S) 19B, sal de amônio como o se- gundo isômero de eluição. A conversão final no sal de sódio foi feita por eluição de uma solução aquosa em uma coluna empacotada com uma resina catiônica de troca de íons de Na.

Composto (*R) 19A, sal de sódio:

[0599] RMN 1H (600 MHz, DMSO -d6, 81°C) δ ppm 9,17 (br s, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,96 (br s, 1H), 6,97 (s, 2 H), 6,38 (dd, J=9,1, 5,4 Hz, 1H), 6,20 (br s, 2 H), 5,77 (d, J= 8,9 Hz, 2 H), 5,51 (br s, 1H), 4,44 - 4,51 (m, 1H), 4,26 (br s, 1H), 4,18 (br s, 1H), 3,78 (d, J= 4,6 Hz, 1H), 3,56 - 3,62 (m, 1H), 3,53 (s, 3H), 3,20 - 3,50 (m, 3H), 2,90 (dd, J=14,5, 5,4 Hz, 1H); ESI-MS: m/z 687,1 [M+H]+. Composto (*S) 19B, sal de sódio:

[0600] RMN 1H (600 MHz, DMSO-d6, 81°C) δ ppm 10,03 (br s, 1H), 8,29 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 8,00 (br s, 1H), 6,97 (br s, 2 H), 6,38 (dd, J=9,4, 5,4 Hz, 1H), 6,26 (br s, 2 H), 5,78 (d, J=8,9 Hz, 1H), 5,50 (br s, 1H), 5,48 (br s, 1H), 4,22 - 4,34 (m, 1H), 4,15 (br s, 1H), 4,09 (q, J=11,2 Hz, 1H), 3,85 (d, J=4,5 Hz, 1H), 3,60 - 3,71 (m, 1H), 3,55 (s, 3H), 3,41 - 3,48 (m, 1H), 3,34 - 3,40 (m, 1H), 3,23 - 3,34 (m, 1H), 2,87 (dd, J=14,5, 5,4 Hz, 1H); RMN 31 P (162 MHz, DMSO-d6) δ ppm 55,50 (s, 1 P); ESI- MS: m/z 678,1 [M+H]+. Exemplo 51

Etapa 1: Preparação do composto 51a

[0601] Imidazol (3,94 g, 57 mmol) e TBSCl (7,18 g, 470 mmol) foram adicionados a uma solução de N6-benzoil-2'-desóxi-2'-fluoroadenosina 1a [CAS 136834-20-3] (12,7 g, 34,0 mmol) em DMF (105 mL) a 0°C. A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente até a completa conversão (2 horas). A mistura de reação foi diluída com EtOAc e lavada com solução aquosa saturada de NaHCO4 e água. A fase orgânica foi secada com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão redu- zida. A purificação foi feita por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 1% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 51a como um sólido branco (12 g, rendimento: 71%). RMN 1H (500 MHz DMSO-d6) δ ppm - 0,04 (s, 3H), -0,02 (s, 3H), 0,82 (s, 9 H), 3,81 (dd, J= 11,7, 4,1 Hz, 1H), 3,99 (m, 2 H), 4,62 (ddd, J=21,7, 11,7, 6,9 Hz, 1H), 5,54 (dq, J=52,8, 2,0 Hz, 1H), 5,77 (m, 1H), 6,38 (dd, J=18,6, 1,4 Hz, 1H), 7,55 (t, J=7,9 Hz, 2 H), 7,65 (t, J=7,2 Hz, 1H), 8,04 (d, J=6,9 Hz, 2 H), 8,57 (s, 1H), 8,75 (s 1H); ESI-MS: m/z 488,0 [M+H]+. Etapa 2: Preparação do composto 51c

[0602] Um frasco de reação foi carregado com DMAP (2,03 g, 16,6 mmol), DCM seco (40 mL) e peneiras moleculares de 3 Å ativadas. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas sob atmosfera inerte. Simultaneamente, uma solução do composto 51a (1,6 g, 3,3 mmol) e uma solução de sulfamato 51b (2,5 g, 3,66 mmol), cada uma em DCM seco (2 x 40 mL), foram secas em peneiras molecu- lares de 3 Å ativadas (cerca de 2 horas). Ambas as soluções (composto

51a e sulfamato 51b respectivamente) foram sucessivamente transferi- das para o frasco de reação. A mistura de reação resultante foi agitada durante 36 horas. As peneiras moleculares foram removidas por filtra- ção e cuidadosamente enxaguadas com diclorometano. O filtrado foi la- vado com solução aquosa saturada de NaHCO3, salmoura e solução aquosa saturada de NH4Cl, seco com Na2SO4, filtrado e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em co- luna rápida (eluição gradiente: 0 a 1% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 51c como uma espuma esbranquiçada (1,8 g, rendimento: 53%).

[0603] RMN 1H (500 MHz DMSO-d6) δ ppm -0,25 (s, 3H), -0,050 (s, 3H), -0,015 (d, J= 2,8 Hz, 6 H), 0,73 (s, 9 H), 0,79 (s, 9 H), 1,11 (dd, J= 6,9, 1,4 Hz, 6 H), 2,75 (m, 1H), 3,40 (q, J= 6,9 Hz, 1H), 3,45 (s, 3H), 3,48 (q, J=6,9 Hz, 1H), 3,85 (dd, J=11,7, 3,4 Hz, 2 H), 3,98 (dd, J=12,4, 2,1 Hz, 1H), 4,13 (m, 1H), 4,33 (t, J=3,4 Hz, 1H), 4,71 (dd, J=6,9, 4,8 Hz, 1H), 5,49 (dq, J=17,6, 3,9 Hz, 1H), 5,86 (d, J=6,9 Hz, 1H), 6,51 (dd, J=18,6, 2,1 Hz, 1H), 7,56 (t, J=7,6 Hz, 2 H), 7,66 (t, J=7,2 Hz, 1H), 8,05 (d, J=7,6 Hz, 2 H), 8,30 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,71 (t, J=6,2 Hz, 1H), 8,75 (s, 1H), 11,26 (s, 1H), 11,65 (s, 1H), 12,08 (s, 1H); ESI-MS: m/z 1030,4 [M+H]+. Etapa 3: Preparação do composto 33a

[0604] Et3N (12,1 mL, 87,37 mmol) e Et3N.3HF (2,84 mL, 17,4 mmol) foram adicionados a uma solução do composto 51c (1,8 g, 1,74 mmol) em piridina (34 mL). A mistura de reação foi agitada a 45°C até a completa conversão (cerca de 5 horas) e então resfriada até a tempe- ratura ambiente. Isopropoxitrimetilsilano (12,4 mL, 69,9 mmol) foi adici- onado e a agitação foi continuada de um dia para o outro. O produto bruto obtido após a concentração sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna com sílica (eluição gradiente: 0 a 7% de

MeOH em DCM) para fornecer o composto 33a como uma espuma es- branquiçada (1,2 g, rendimento: 86%).

[0605] RMN 1H (500 MHz DMSO-d6) δ ppm 1,11 (q, J=3,2 Hz, 6 H), 2,75 (m, 1H), 3,40 (s, 1H), 3,43 (s, 3H), 3,64 (d, J=12,4 Hz, 1H), 3,80 (d, J=12,4 Hz, 1H), 3,86 (t, J=4,5 Hz, 1H), 4,07 (m, 1H), 4,32 (t, J=3,1 Hz, 1H), 4,67 (q, J=5,7 Hz, 1H), 5,36 (td, J=10,7, 4,6 Hz, 2 H), 5,66 (d, J= 6,2 Hz, 1H), 5,88 (m, 2 H), 6,49 (dd, J= 16,5, 2,8 Hz, 1H), 7,56 (t, J=7,9 Hz, 2 H), 7,66 (t, J= 7,6 Hz, 1H), 8,05 (d, J= 7,6 Hz, 2 H), 8,25 (s, 1H), 8,66 (s, 1 H), 8,74 (d, J=32,4 Hz, 2 H), 11,27 (s, 1H), 11,62 (s, 1H), 12,08 (s, 1H); ESI-MS: m/z 802,1 [M+H]+. Etapa 4: Preparação do composto 51d

[0606] Uma solução do composto 33a (500 mg, 0,624 mmol) e 1H- tetrazol (5,46 mL de 3 a 4% em MeCN, seco em peneiras moleculares de 3 Å antes do uso) em THF seco (25 mL, seco em peneiras molecu- lares de 3 Å antes do uso) foi tratada com peneiras moleculares de 3 Å ativadas durante 2 horas e depois disso adicionou-se em uma única porção 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (206 mg, 0,686 mmol) foi adicionada em uma porção. A mistura de reação resul- tante foiagitada de um dia para o outro. Uma quantidade adicional de 2- cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (94 mg + 38 mg, 0,312 mmol + 0,125 mmol) foi adicionada em duas porções com um intervalo de tempo de 5 horas, a agitação foi continuada por mais um dia para obter a conversão completa. tBuOOH (227 µL de solução 5,5 M em decano, 1,25 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agi- tada por mais uma hora. As peneiras moleculares foram removidas por filtração e extensivamente enxaguadas com DCM. O filtrado foi concen- trado e o resíduo obtido purificado por cromatografia em coluna com sílica (eluição gradiente: 0 a 7,5% de MeOH em DCM) para produzir o composto 51d (110 mg, rendimento: 19%). ESI-MS: m/z 917,5 [M+H]+. Etapa 5: Preparação do composto 22, sal de sódio

[0607] O composto 51d (110 mg, 0, 12 mmol) foi agitado em uma solução de metilamina a 33% em etanol (10 mL) à temperatura ambiente até conversão completa (cerca de 2 horas). A mistura de reação foi con- centrada sob pressão reduzida. O produto bruto resultante foi triturado em MeCN e, em seguida, purificado por HPLC preparativa de fase re- versa (fase estacionária: XBridge C18 OBD, 5 µm, 250 x 30 mm; fase móvel: solução aquosa de 0,25% de bicarbonato de amônia (A) - MeCN (B); eluição gradiente) para produzir o composto 22, sal de amônio. A conversão no sal de sódio foi feita pela eluição de uma solução aquosa em uma coluna empacotada com uma resina catiônica de troca de íons de Na para fornecer o composto 22, sal de sódio como um sólido branco macio após a liofilização (52 mg, rendimento: 60%).

[0608] RMN 1H (600 MHz, DMSO-d6, 60 °C) δ ppm 10,67 (br s, 1H), 9,13 (br s, 1H), 8,37 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,99 (br s, 1H), 7,24 (br s, 2 H), 6,33 (dd, J=15,9, 3,3 Hz, 1H), 6,29 (br s, 2 H), 5,95 (br d, J=50,9 Hz, 1H), 5,76 (d, J= 8,9 Hz, 1H), 5,59 (br s, 1H), 5,18 - 5,25 (m, 1H), 4,47 (br s, 1H), 4,20 (dt, J=11,9, 6,1 Hz, 1H), 4,14 (br s, 1H), 3,94 (br d, J=4,4 Hz, 1H), 3,75 - 3,81 (m, 1H), 3,52 (s, 3H), 3,47 - 3,55 (m, 1H), 3,42 (s, 1H); RMN 31P (162 MHz, DMSO-d6) δ ppm -1,28 (s, 1 P); ESI-MS: m/z 690,3 [M+H]+. Exemplo 52

Etapa 1: preparação do composto 52a

[0609] Carbonato de potássio (0,32 g, 2,3 mmol) foi adicionado a uma solução do composto 41d (0,55 g, 1,8 mmol) em DMF seco (6 mL). A suspensão resultante foi resfriada até 0°C, e depois disso iodometano (0,15 mL, 2,3 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada até completar a conversão (cerca de 2,5 horas). O resíduo obtido após a concentração sob pressão redu- zida foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 4% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 52a como um pó branco (0,45 g, rendimento: 79%).

[0610] RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,25 (s, 1H), 7,36 (s, 1H), 6,02 (d, J= 5,5 Hz, 1H), 5,43 (d, J=6,9 Hz, 1H), 5,09 (t, J=5,5 Hz, 1H), 4,39 (q, J=6,0 Hz, 1H), 3,97 (q, J=3,4 Hz, 1H), 3,73 - 3,80 (m, 1H),

3,57 - 3,64 (m, 1H), 3,50 - 3,55 (m, 1H), 3,45 (s, 3H), 3,40 (s, 3H); ESI- MS: m/z 314 [M+H]+. Etapa 2: preparação do composto 52b

[0611] Uma solução do composto 52a (0,85 g, 2,7 mmol) em piridina seca (12,7 mL), à qual foram adicionados (em porções) DMAP (0,16 g, 1,3 mmol) e DMTrCl (1,46 g, 4,3 mmol), foi agitada à temperatura ambi- ente durante 4 horas. A mistura de reação foi bruscamente resfriada com metanol (9 mL) e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi dissolvido em EtOAc, e lavado com água. A camada orgânica foi seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada até a secura sob pressão reduzida. A purificação foi feita por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 0,2% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 52b como uma espuma esbranquiçada (1,4 g, ren- dimento: 85%).

[0612] RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 8,24 (s, 1H), 7,37 (d, J= 7,6 Hz, 2H), 7,29 (t, J 7,6 Hz, 2H), 7,22 (m, 6H), 6,87 (dd, J = 9,0, 2,1 Hz, 4H), 6,04 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 5,53 (d, J= 6,2 Hz, 1H), 4,47 (q, J= 5,5 Hz, 1H), 4,05 (q, J = 4,4 Hz, 1H), 3,85 (t, J= 4,8 Hz, 1H), 3,72 (d, J = 9,6 Hz, 6H), 3,45 (s, 3H), 3,35 (s, 3H), 3,20 (d, J= 4,8 Hz, 2H); ESI-MS: m/z 638,2 [M+Na]+. Etapa 3: preparação do composto 52c

[0613] O composto 52b (0,9 g, 1,46 mmol), o sulfamato 17a (1,53 g, 1,75 mmol) e o DMAP (0,9 g, 7,31 mmol) foram, cada um, dissolvidos separadamente em DCM seco (3 x 25,0 mL). Cada solução foi seca com peneiras moleculares de 3 Å ativadas por agitação sob N2 durante ao menos 2 horas. À solução de DMAP foram adicionados, respectiva- mente, a solução do composto 52b em DCM e a solução de sulfamato 17a em DCM. A mistura de reação resultante foi agitada durante 36 ho- ras. As peneiras moleculares foram removidas por filtração e completa-

mente enxaguadas com diclorometano. O filtrado foi lavado com solu- ção aquosa saturada de NaHCO3, salmoura e solução aquosa saturada de NH4Cl. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida (eluição gradiente: 0 a 0,4% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 52c (0,38 g, rendimento: 19%) e uma fração mais polar (0,8 g) contendo produto mono e di DMTr- desprotegido. Etapa 4: preparação do composto 52d

[0614] Uma solução do composto 52c (0,38 g, 0,28 mmol) em DCM (10,6 mL), à qual DCA (0,9 mL, de 10% em DCM, 1,1 mmol) e água (30 µL, 1,4 mmol) foram adicionados, foi agitada à temperatura ambiente até a completa desproteção. A mistura de reação foi bruscamente res- friada mediante a adição de piridina (0,1 mL, 1,4 mmol) e algumas gotas de metanol, e concentrada sob pressão reduzida. Um protocolo de rea- ção similar foi aplicado na fração polar de 0,8 g acima. Os resíduos de ambas as reações foram combinados por purificação por cromatografia em coluna com sílica (eluição gradiente: 0 a 6% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 52d como um pó branco (0,4 g, rendimento: 62%).

[0615] RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11,27 (br s, 1H), 8,74 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 8,54 (br t, J= 5,9 Hz, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,06 (d, J=7,6 Hz, 2 H), 7,64 - 7,70 (m, 1H), 7,52 -7,59 (m, 2 H), 7,36 (br s, 1H), 6,36 (dd, J=19,3, 2,1 Hz, 1H), 6,28 (d, J= 6,2 Hz, 1H), 5,90 (br s, 1H), 5,58 (br d, J=52,7 Hz, 1H), 5,22 (t, J=5,5 Hz, 1H), 4,52 - 4,64 (m, 1H), 4,07 - 4,14 (m, 2 H), 3,95 - 4,01 (m, 1H), 3,64 (dd, J=12,4, 3,4 Hz, 1H), 3,56 (dd, J=11,7, 2,8 Hz, 1H), 3,43 (s, 3H), 3,38 (s, 3H), 3,12 - 3,24 (m, 2 H); ESI-MS: m/z = 748,5 [M+H]+. Etapa 5: preparação do composto 52e

[0616] Uma solução do composto 52d (100 mg, 0,134 mmol) e 1H-

tetrazol (2,38 mL de uma solução 0,45 M em MeCN, 1,14 mmol) em mistura de MeCN/DMF secos (5 mL, 4: 1) foi tratada com peneiras mo- leculares de 4 Å durante 10 minutos sob N2 e depois disso adicionou-se uma solução de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (80 mg, 0,27 mmol) em MeCN seca (1,0 mL) (nota: a MeCN foi recém-des- tilada na presença de CaH2 antes do uso). A mistura de reação resul- tante foi agitada durante 1,5 h à temperatura ambiente. Em seguida, uma solução de tBuOOH (126 µL de 5~6 M em decano, 0,67 mmol) foi adicionada e a agitação foi continuada por mais 30 minutos. A mistura de reação foi diluída com DCM, filtrada através de um bloco de terra diatomácea e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 7% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 52e.

[0617] ESI-MS: m/z 863,1 [M+H]+. Etapa 6: preparação do composto 55, sal de sódio

[0618] O composto acima 52e foi agitado em uma solução de meti- lamina a 30% em etanol (10 mL) à temperatura ambiente durante 2,5 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em uma mistura de água/MeCN (4:1), lavado com DCM e concentrado. O produto buto foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa (fase estacionária: Xbridge OBD C18 µ5 m, 150 x 30 mm; fase móvel: solução aquosa de 10 mM de bicarbonato de amônia (A) - MeCN (B); eluição gradiente) para produzir o composto 55, sal de amônio (25 mg, rendimento: 26% a partir de 52d). A conversão final no sal de sódio foi feita por eluição de uma solução aquosa em uma coluna empacotada com uma resina catiônica de troca de íons de Na, tipo Do- wex 50WX8).

[0619] RMN 1H (400 MHz, D2O) δ 8,13 (br s, 1H). 8,00 (br d, J= 5,6 Hz, 1H), 7,42 (br s, 1H), 7,06 (br s, 1H), 6,42 - 6,33 (m, 2H), 5,41 (br s, 1H), 5,35 - 5,16 (m, 1H), 5,05 - 4,88 (m, 1H), 4,65 (br s, 1H), 4,53 - 4,40

(m, 2H), 4,33 - 4,20 (m, 2H), 3,88 - 3,76 (m, 1H), 3,60 (s, 4H), 3,48 (s, 3H) RMN 19F (376 MHz, D2O) δ -165,090 (s, 1F), -196,605 (s, 1F); RMN 31P (162 MHz, D2O) δ -1,899 (s, 1P); ESI-MS: m/z 706,0 [M+H]+. Exemplo 53

Etapa 1: preparação do composto 53b

[0620] Um frasco de reação carregado com 5-(dietoximetil)-1H-imi- dazol-4-carbóxito de metila 53a [CAS 85109-99-5] (3,24 g, 14,1 mmol) e MeCN seca (120 mL) foi resfriado em um banho de gelo. O hidreto de sódio (1,23 g de uma dispersão 55% em óleo mineral, 28,5 mmol) foi adicionado, a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente du- rante 45 minutos.

[0621] Em um frasco separado, iodotrimetilsilano (3,23 mL, 22,6 mmol) foi adicionado a uma solução de 1,2-di-O-acetil-3-O-metil5-O- benzoil-D-ribofuranose ([10300-21-7], 5 g, 14,1 mmol) e tolueno seco (50 mL). A solução resultante foi agitada por 20 minutos à temperatura ambiente e depois disso foi transferida para o frasco acima lentamente frasco resfriado em um banho de gelo. A mistura reacional resultante foi agitada a 50°C até a completa conversão (cerca de 3,5 horas). Após resfriamento até a temperatura ambiente, EtOAc foi adicionado. A fase orgânica foi lavada com água e salmoura, seca com Na 2SO4 anidro, fil- trada e concentrada sob pressão reduzida. A purificação foi realizada por cromatografia em coluna com sílica (eluição gradiente: 0 a 40% de EtOAc em hexano) para fornecer o composto 53b como goma incolor (4,3 g, rendimento: 58%) RMN 1H (500 MHz DMSO -d6) δ ppm 8,0 (m, 3H), 7,70 (t, J=7,6 Hz, 1H,), 7,56 (m, 2H), 6,36 (m, 1H), 6,23 (s, 1H), 5,49 (dd, J=4,1, 2,8 Hz, 1H), 4,63 (m, 2H), 4,26(m, 2H), 3,78 (s, 3H), 3,68 (m, 1H), 3,47 (m, 1H) 2,11 (s, 2H) 1,11 (m, 6H); ESI-MS: m/z 521,2 [M+H]+. Etapa 2: preparação do composto 53c

[0622] Uma solução do composto 53b (4,3 g, 8,25 mmol) em AcOH aquoso a 80% (50 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 16 hora. Em seguida, a solução de reação foi vertida em água gelada e extraída com DCM. A fase orgânica foi lavada com água, seca com

Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. A purifica- ção foi realizada por cromatografia em coluna com sílica (eluição gradi- ente: 0 a 30% de EtOAc em hexano) para fornecer o composto 58c como um sólido branco (1,7 g, rendimento: 52%).

[0623] RMN 1H (500 MHz DMSO-d6) δ ppm -10,27 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,00 (m, 2H), 7,70 (m, 1H), 7,55 (t, J=7,9 Hz, 2H), 6,40 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 5,54 (q, J= 2,3 Hz, 1H), 4,65 (t, J=4,1 Hz, 2H), 4,34 (m, 1H), 4,19 (dd, J =7,9, 5,2 Hz, 1H), 3,87 (s, 1H). Etapa 3: preparação do composto 53d

[0624] Hidrazina (1 M emTHF, 362 mL, 362 mmol) foi adicionada a uma solução do composto53c (8,1 g, 18,12 mmol) em EtOH anidro (200 mL). A mistura de reação foi agitada em temperatura de refluxo permi- tindo a completa evaporação do THF (a reação foi muito lenta na pre- sença de THF). Após a conclusão da reação (cerca de 72 hora), o sol- vente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 10% de MeOH em DCM). O produto obtido foi dissolvido em água e o pH ajustado para 5 mediante a adição de uma forma de hidrogênio Am- berlite®IR120. A resina foi removida por filtração e enxaguada com água, o filtrado foi evaporado e seco sob alto vácuo para produzir o composto 53d como um sólido amarelo pálido (3,5 g, 68%).

[0625] RMN 1H (500 MHz DMSO-d6) δ ppm 12,75 (s, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,54 (s, 1H), 5,92 (d, J= 6,9 Hz, 1H), 5,75 (s, 1H) 4,39 (t, J= 5,9 Hz, 1H), 4,11 (q, J= 3,0 Hz, 1H), 3,83 (q, J= 2,8 Hz, 2H), 3,69 (dd, J=12,1, 3,1 Hz, 2H), 3,64 (dd, J=12,1, 3,1 Hz, 2H), 3,42 (s, 3H), 3,16 (s, 1H); ESI-MS: m/z 283,1 [M+H]+. Etapa 4: preparação do composto 53e

[0626] DMAP (0,75 g, 6, 18 mmol) e DMTrCl (6,6 g, 19,7 mmol) (em porções) foram adicionados a uma solução do composto 53d (3,5 g, 12,3 mmol, secos por coevaporação com tolueno anidro e piridina seca)

em piridina seca (52 mL). A mistura de reação resultante foi agitada du- rante 4 horas e depois disso foi bruscamente resfriada mediante a adi- ção de metanol (10 mL) e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 2% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 53e como espuma rosa pálida (4,8 g, rendimento: 67%). RMN 1H (500 MHz DMSO-d6,) δ ppm: 12,76 (s, 1H), 8,50 (d, J=16,5 Hz, 2H), 7,28 (m, 4H), 7,20 (m, 5H) 6,84 (d, J=9,0 Hz, 4H), 5,99 (d, J=4,8 Hz, 1H), 5,82 (d, J=5,5 Hz, 1H), 4,67 (d, J= 5,5 Hz, 1H) 4,19 (q, J=4,1 Hz, 1H), 3,94 (t, J=4,8 Hz, 1H), 3,73 (s, 6H), 3,37 (s, 3H), 3,23 (q, J=3,4 Hz, 2H); ESI- MS: m/z 585,3 [M+H]+. Etapa 5: preparação do composto 53f

[0627] O composto 53e (0,53 g, 0,9 mmol), sulfamato 17a (0,876 g, 1,08 mmol) e DMAP (0,55 g, 4,5 mmol) foram dissolvidos separada- mente em DCM seco (3 x 20 mL). Cada solução foi seca com peneiras moleculares de 3 Å ativadas por agitação sob N2 durante ao menos 2 horas. À solução de DMAP foram adicionados, respectivamente, a so- lução do composto 53e e a solução de sulfamato 17a. A mistura de re- ação resultante foi agitada durante 36 horas. As peneiras moleculares foram removidas por filtração e cuidadosamente enxaguadas com DCM. O filtrado foi lavado com solução aquosa saturada de NaHCO3 e solução aquosa saturada de NH4Cl, seco com Na2SO4, filtrado, e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em co- luna rápida (eluição gradiente: 0 a 2% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 53f como uma espuma amarelo pálida (0,45 g, rendimento: 38%).

[0628] ESI-MS: m/z 1321,5 [M+H]+. Etapa 5: preparação do composto 53g

[0629] Uma solução do composto 53f (0,75 g, 0,52 mmol) em DCM (20 mL), à qual DCA (1,75 mL de 10% em DCM, 2,1 mmol) e água (47 µL, 2,6 mmol) foram adicionados, foi agitada à temperatura ambiente até desproteção completa (cerca de 2 horas). A mistura de reação foi bruscamente resfriada mediante a adição de piridina (0,2 mL, 2,6 mmol) e algumas gotas de metanol, e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna rápida (eluição gra- diente: 0 a 7% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 53g como um pó esbranquiçado (0,33 g, rendimento: 82%).

[0630] RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,77 (s, 1H), 11,24 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 8,60 -8,64 (m, 3H), 8,60 (s, 1H), 8,04 (d, J=7,6 Hz, 2 H), 7,63 - 7,67 (m, 1H), 7,53 - 7,58 (m, 2 H), 6,34 (d, J=4,8 Hz, 1H), 6,37 (dd, J=20,0, 2,1 Hz, 1H), 5,89 (d, J= 6,2 Hz, 1H), 5,59 (ddd, J=52,3, 4,8, 2,1 Hz, 1H), 5,46 (t, J=4,8 Hz, 1H), 5,18 (t, J=4,8 Hz, 1H), 4,56 - 4,65 (m, 1H), 4,13 - 4,18 (m, 2 H), 4,00 (td, J=7,4, 3,1 Hz, 1H), 3,76 (s, 1H), 3,60 - 3,69 (m, 1H), 3,36 (s, 3H), 3,26 - 3,31 (m, 1H), 3,15 - 3,23 (m, 1H); ESI-MS: m/z 717,3 [M+H]+. Etapa 6: preparação do composto 53h

[0631] Nota: o THF foi recém-destilado sobre sódio em presença de benzofenona e a MeCN foi recém-destilada na presença de CaH2 antes do uso.

[0632] Uma solução do composto 53g (100 mg, 0,14 mmol) e 1H- tetrazol (2,48 mL de uma solução 0,45M em MeCN, 1,12 mmol) em DMF seco (7 mL) foi tratada com peneiras moleculares de 4 Å durante 30 minutos sob N2. A seguir foi adicionado por gotejamento a uma solução de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (75 mg, 0,25 mmol) em THF seco (1,0 mL). Após a agitação da mistura à temperatura ambiente durante 3 horas, solução adicional de 2-cianoetil-N,N,N',N'-te- tra(isopropil)fosforodiamidita (21 mg, 0,07 mmol) em THF seco (0,5 mL) foi adicionada. A suspensão resultante foi agitada adicionalmente du- rante 16 horas. tBuOOH (140 µL de 5~6 M em decano, 0,70 mmol) foi adicionado e a reação foi agitada por mais 30 minutos. A mistura foi parcialmente concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi filtrado e o filtrado foi vertido sob agitação em H2O (20 mL) para produzir uma suspensão. O sólido foi coletado, dissolvido em DCM/MeOH (3 mL/1 mL) e purificado por cromatografia preparativa de camada fina (DCM: MeOH = 8:1). As frações desejadas foram coletadas e trituradas em MeCN/DMSO (10 mL/2 mL) durante 2 horas para fornecer uma suspen- são. Após a filtração, o filtrado foi evaporado até a secura para produzir o composto bruto 53 h como uma solução em DMSO (2 mL) usada di- retamente na próxima etapa.

[0633] ESI-MS: m/z=832,1 [M+H]+. Etapa 7: preparação do composto 27, sal de sódio

[0634] A solução anterior do composto 53 h em DMSO (2 mL) foi tratada com MeNH2 (30% em EtOH, 3 mL) e agitada à temperatura am- biente durante 2 horas. A mistura foi evaporada até a secura, combinada com uma outra batelada e purificada por HPLC preparativa de fase re- versa (coluna Waters Xbridge Prep OBD 5 µm C18 150x30; condição: água (10 mM de NH4HCO3) (A)-ACN (B) início B 0, fim B 30; tempo de gradiente(min) 7, 100% de B, tempo de retenção(min) 1, taxa de fluxo (mL/min) 25) para fornecer, após a liofilização, o composto 27, sal de amônio (5 mg) como um sólido branco.

[0635] RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,63 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 6,77 (s, 1H), 6,24 - 6,33 (m, 2 H), 5,11 - 5,34 (m, 3H), 4,55 (br s, 1H), 4,28 - 4,42 (m, 2 H), 4,23 (br s, 1H), 4,08 - 4,20 (m, 1H), 3,61 (br d, J=12,96 Hz, 1H), 3,44 (s, 3H), 3,33 (br d, J=13,69 Hz, 1H) RMN 19F (376 MHz, D2O) δ ppm -198,29 - -197,44 (m, 1 F) RMN 31P. (162 MHz, D2O) δ ppm -2,34 (s, 1 P) ESI-MS: m/z 6153 [M+H]+. Conversão para sodinm sal

[0636] Dowex 50W × 8, 200 a 400 (10 mL, forma de H) foi adicio- nado a um béquer e lavado com água desionizada (30 mL). Então, à resina adicionou-se H2SO4 a 15% em H2O desionizada (30 mL), a mis- tura foi gentilmente agitada durante 15 minutos e decantada (30 mL). A resina foi transferida para uma coluna com H2SO4 a 15% em H2O desi- onizada e lavada com H2SO4 a 15% (ao menos 4 CV), e então com H2O desionizada até ficar neutra. A resina foi transferida de volta para o bé- quer, NaOH a 15% em solução de água desionizada (30 mL) foi adicio- nada, e a mistura foi gentilmente agitada durante 15 minutos, e decan- tada (1×). A resina foi transferida para a coluna e lavada com 15% de NaOH em H2O (pelo menos 4 CV), e então com H2O desionizada até ficar neutra, o composto 27, sal de amônio (5 mg) foi dissolvido em H2O desionizada (3 mL), adicionado ao topo da coluna, e eluído H2O desionizada. As frações desejadas foram agrupadas e liofilizadas para produzir o composto 27, sal de sódio (2,1 mg) como um sólido branco.

[0637] RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,75 (s, 1H), 8,52 (br s, 1H), 7,84 - 8,36 (m, 1H), 6,65 - 7,24 (m, 1H), 6,38 (br d, J=19,07 Hz, 2 H), 5,28 - 5,46 (m, 1H), 5,26 (br dd, J=8,53, 4,77 Hz, 1H), 4,81 - 4,93 (m, 1H), 4,63 (br s, 1H), 4,42 (br dd, J =10,54, 7,78 Hz, 2 H), 4,19 - 4,34 (m, 2 H), 3,58 - 3,75 (m, 1H), 3,54 (s, 3H), 3,30 - 3,48 (m, 1H) RMN 19F (377 MHz, D2O) δ ppm -197,75 (br s, 1 F) RMN 31P (162 MHz, D2O) δ ppm -2,15 (br s, 1 P) ESI-MS: m/z 675,2 [M+H]+. Exemplo 54

Etapa 1: preparação do composto 54b

[0638] O composto 54a (1 g, 1,5 mmol) e o sulfamato 3o (1,3 g, 1,5 mmol) foram dissolvidos em DCE (10 mL), peneiras moleculares de 4 Å (pó) foram adicionadas e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas sob N2. Uma mistura de DMAP (913 mg, 7,5 mmol) e peneiras moleculares 4 Å em pó (0,5 g) em DCE (2 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 6 horas sob N2 e então adicio- nada à mistura acima. (Nota: O DCE foi seco em peneiras moleculares de 3 Å ativadas antes do uso). A mistura de reação foi agitada a 50°C de um dia para o outro. As peneiras moleculares foram removidas por filtração e enxaguadas com DCM. O filtrado foi lavado com solução aquosa saturada de NaHCO3, a fase aquosa foi extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas com Na2SO4, filtradas e evaporadas sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (eluição gradiente: 1 a 2% de MeOH em DCM) para fornecer 1,8 g (rendimento: 83%) uma mistura do composto 54b e seu regioisômero 2'-acoplado (estrutura não mostrada), sendo este último o resultado do composto 54a parcialmente submetido a um deslocamento TBS 2'→3' ESI-MS: m/z 1097,5 [M-DMTr+H]+. Etapa 2: preparação do composto 54c

[0639] A mistura de produto acima (2,6 g, 1,84 mmol) foi dissolvida em DCM (30 mL), à qual foram adicionados DCA (610 µL, 7,40 mmol) e água (330 µL, 1,84 mmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente até a completa desproteção (cerca de 1 hora) após o qual a mesma foi bruscamente resfriada mediante a adição de piridina (1,5 mL, 18,4 mmol) em metanol (4 mL) e subsequentemente lavada com água. A camada orgânica foi seca em Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (coluna: XBridge C18 OBD, 5 µm, 150 x 30 mm; fase mó- vel: (A) - MeCN (B); eluição gradiente) para produzir o composto puro 54c como um sólido branco (600 mg, rendimento: 40%).

[0640] RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,09 (br s, 1H), 11,62 (br s, 1H), 9,26 (s, 1H), 8,99 (s, 1H), 8,89 (s, 1H), 8,45 (br s, 1H), 8,24 (s, 1H), 6,10 (d, J= 6,0 Hz, 1H), 5,82 (d, J= 6,0 Hz, 1H), 5,71 (d, J= 6,3 Hz, 1H), 5,48 (br s, 1H), 4,91 - 5,00 (m, 2 H), 4,72 (q, J=5,8 Hz, 1H), 4,29 - 4,40 (m, 1H), 4,03 - 4,12 (m, 1H), 3,87 (br t, J=4,3 Hz, 1H), 3,60 - 3,74 (m, 2 H), 3,44 (s, 3H), 3,35 - 3,42 (m, 1H), 3,29 (dd, J =14,1, 7,8 Hz, 1H), 2,75 (spt, J =6,8 Hz, 1H), 1,11 (d, J =6,8 Hz, 3H), 1,09 (d, J=6,9 Hz, 3H), 0,63 (s, 9 H), -0,08 (s, 3H), -0,34 (s, 3H);

ESI-MS: m/z 795,4 [M+H]+. Etapa 3: preparação do composto 54d

[0641] Uma solução do composto 54c (400 mg, 0,5 mmol) e 1H- tetrazol (8,9 mL de uma solução 0,45 M em de MeCN, 4,03 mmol) em uma mistura de THF seco (48 mL) e DMF seco (4 mL) foi tratada com peneiras moleculares de 4 Å durante 30 minutos sob N2 e depois disso 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (273 mg, 0,91 mmol) em THF seco (4 mL) foi adicionada por gotejamento durante 10 minutos. (Nota: o THF foi recém-destilado sobre Na/benzofenona e a MeCN foi recém-destilada sobre CaH2 antes do uso). A mistura de rea- ção resultante foi agitada por 3 horas à temperatura ambiente. Em se- guida, uma solução de tBuGOH (500 µL de solução 5~6 M em decano, 2,5 mmol) foi adicionada e a agitação foi continuada durante mais 30 minutos. A mistura de reação foi filtrada através de um bloco de Celite e concentrada. A reação foi diluída com DCM e lavada com água. A camada orgânica foi seca com Na2SO4, filtrada e concentrada sob pres- são reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna rápida com sílica-gel (eluição gradiente: 1 a 10% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 54d (130 mg, 23% de rendimento) como um sólido branco.

[0642] ESI-MS: m/z 910,5 [M+H]+. Etapa 3: preparação do composto 3, sal de amônio

[0643] O composto 54d (58 mg) foi agitado em uma solução de me- tilamina a 30% em etanol (2 mL) à temperatura ambiente durante 2 ho- ras. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resí- duo foi dissolvido em piridina (2 mL) e depois disso foram adicionados Et3N (30 mg, 0,27 mmol) e tri-hidrofluoreto de trietilamina (21,7 mg, 0,13 mmol), a mistura resultante foi agitada a 50 °C por 1 dia. A solução de reação foi resfriada até a temperatura ambiente, isopropoxilmetilsilano (0,1 mL, 0,54 mmol) foi adicionado e a agitação foi continuada de um dia para o outro. O resíduo, obtido após a concentração sob pressão reduzida, foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (fase es- tacionária: XBridge C18 OBD, 5 P.M., 150 x 25 mm; fase móvel: solução aquosa de 10 mM de bicarbonato de amônia (A) - MeCN (B); eluição gradiente) para produzir o composto 3, sal de amônio (4 mg).

[0644] RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 9,26 (s, 1H), 9,02 (s, 1H), 8,74 (s, 1H), 7,94 (s, 1H), 6,40 (d, J=1,5 Hz, 1H), 6,01 (d, J=8,5 Hz, 1H), 5,39 (td, J=9,1, 5,3 Hz, 1H), 5,25 (dd, J=7,9, 4,5 Hz, 1H), 5,06 - 5,11 (m, 1H), 4,55 (s, 1H), 4,48 (br d, J=12,0 Hz, 1H), 4,09 - 4,18 (m, 2 H), 3,86 (br d, J=14,6 Hz, 1H), 3,72 (br d, J=14,3 Hz, 1H), 3,65 (s, 3H); RMN 31 P (162 MHz, D2O) δ ppm -2,22 (s, 1 P); ESI-MS: m/z 673,2 [M+H]+. Exemplo 55

Etapa 1: Preparação do composto 55b

[0645] Uma solução de 3'-desóxi-3'-fluoroinosina 55a [CAS 117517- 20-1] (2,2 g, 8,14 mmol) em piridina seca (33 mL), à qual foram adicio- nados (em porções) DMAP (0,49 g, 4,0 mmol) e DMTrCl (4,4 g, 13 mmol) foi agitada à temperatura ambiente até a conversão completa (cerca de 2,5 horas). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com metanol (10 mL) e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi dissolvido em acetato de etila e lavado com água. A camada orgânica foi seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada até a secura sob pressão reduzida. A purificação foi feita por cromatografia em coluna com sílica-gel (eluição gradiente: 0 a 2% de MeOH em DCM) para re- sultar no composto 55b como uma espuma esbranquiçada (3,3 g, ren- dimento: 71%).

[0646] RMN 1H (500 MHz DMSO-d6) δ ppm: 8,22 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,93 (d, J=1,4 Hz, 1H), 7,36 (d, J=8,3 Hz, 2H), 7,28 (t, J=7,6 Hz, 2H), 7,23 (m, 5H), 6,86 (dd, J=8,3. 6,2 Hz, 4H), 5,92 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,14 (dd, J =54,1, 4,5 Hz, 1H), 5,02 (dq, J =23,2, 3,9 Hz, 1H), 4,35 (dt, J =25,9, 4,3 Hz, 1H), 3,74 (s, 6H), 3,29 (dq, J =37,5, 5,2 Hz, 2H): ESI-MS: m/z 572,0 [M+H]+. Etapa 2: Preparação do composto 55c

[0647] O composto 55b (0,66 g, 1,15 mmol), o sulfamato 17a (1,21 g, 1,38 mmol) e o DMAP (0,704 g, 5,76 mmol) foram, cada um, separa- damente dissolvidos em DCM seco (3 x 20,0 mL) e secos em peneiras moleculares de 3 Å ativadas durante pelo menos 2 horas sob uma at- mosfera inerte. Em seguida, as soluções do composto 55b e do sulfa- mato 17a foram sucessivamente transferidas para o frasco de reação contendo a solução de DMAP. A mistura de reação resultante foi agitada durante 24 horas. As peneiras moleculares foram removidas por filtra- ção e cuidadosamente enxaguadas com diclorometano. O filtrado foi su-

cessivamente lavado com solução aquosa saturada de NaHCO3 e solu- ção aquosa saturada de NH4Cl, seco com Na2SO4, filtrado, e concen- trado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica (eluição gradiente: 0 a 2% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 55c como uma espuma esbranquiçada (0,475 g, rendimento: 31%).

[0648] RMN 1H (500 MHz DMSO-d6) δ ppm: 12,47 (s, 1H), 11,23 (s, 1H), 8,66 (s, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,03 (d, J= 7,6 Hz, 2H), 7,84 (s, 1H), 7,65 (t, J=7,2 Hz, H 1), 7,55 (t, J=7,6 Hz, 2H), 7,48 (d, J= 7 6 Hz, 2H), 7,36 (q, J= 4,8 Hz, 4H), 7,32 (m, 4H), 7,23 (t, J=7,6 Hz, 4H), 7,19 (t, J=7,9 Hz, 5H), 6,90 (dd, J= 9,0, 6,9 Hz, 4H), 6,81 (dd, J= 9,0, 6,2 Hz, 4H), 6,34 (m, 1H), 6,23 (d, J=6,2 Hz, 1H), 5,78 (m, 2H), 5,50 (d, J=53,7 Hz, 1H), 4,72 (m, 2H), 4,43 (d, J =24,1 Hz, 1H) 4,01 (t, J=7,9 Hz, 1H), 3,74 (s, 1H), 3,70 (t, J= 2,4 Hz, 12H), 3,25 (dd, J=10,7, 3,8 Hz, 1H), 2,99 (d, J 13,1 Hz, 1H), 2,70 (dd, J=14,5 9,0 Hz, 1H); ESI- MS: m/z 1310,0 [M+H]+. Etapa 3: Preparação do composto 55d

[0649] Uma solução do composto 55c (0,453 g, 0,34 mmol) em DCM (12,6 mL), à qual foram adicionados DCA (1,14 mL de 10% em DCM, 1,38 mmol) e água (31 µL, 1,72 mmol) foi agitada à temperatura ambiente até desproteção completa (cerca de 2 horas). A mistura de reação foi resfriada bruscamente mediante a adição de piridina (0,14 mL, 1,72 mmol) e algumas gotas de metanol. A suspensão resultante foi agitada durante 20 minutos, filtrada e seca para obter o composto 55d (0,21 g, rendimento: 86%).

[0650] RMN 1H (500 MHz DMSO-d6) δ ppm: 12,5 (d, J= 3,4 Hz, 1H), 11,25 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 8,69 (t, J= 6,0 Hz, 1H), 8,61 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 8,09 (d, J= 3,4 Hz, 1H), 8,05 (d, 7,6 Hz, 2H), 7,66 (t, J= 7,2 Hz, 1H), 7,56 (t, J=7,6 Hz, 2H), 6,32 (dd, J= 20,0, 2,1 Hz, 1H), 6,21 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 5,85 (d, J=6,2 Hz, 1H), 5,60 (m, 1H), 5,49 (m, 3H), 5,34 (d, J=4,8

Hz, 1H), 4,57 (m, 1H), 4,40 (dt, J=26,9, 3,4 Hz, 1H), 3,92 (q, J=6,0 Hz, 1H), 3,65 (t, J=4,1 Hz, 2H), 3,17 (t, J=6,2 Hz, 2H); ESI-MS: m/z 706,0 [M+H]+. Etapa 4: Preparação do composto 55e

[0651] Uma solução do composto 55d (260 mg, 0, 37 mmol) e 1H- tetrazol (2,15 mL de um 3 a 4% em de MeCN, seco em peneiras mole- culares de 3A ativadas) em DMF/THF (1:2, 30 mLe, secas em peneiras moleculares de 3A ativadas) foi tratada com peneiras moleculares de 3 Å durante 2 horas para sob uma atmosfera inerte e depois disso adicio- nou-se em uma única porção 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosfo- rodiamidita (129 µL, 0,41 mmol). A mistura resultante foi agitada à tem- peratura ambiente de um dia para o outro. Uma quantidade adicional de 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforodiamidita (23 µL, 0,074 mmol) foi adicionada e a agitação foi continuada por mais um dia para se obter a conversão completa. tBuOOH (134 µL de solução 5,5 M em decano, 0,74 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada por mais uma hora. As peneiras moleculares foram removidas por filtração e enxaguadas com diclorometano. O filtrado foi lavado extensivamente com água, seco com MgSO4, filtrado e concentrado sob pressão redu- zida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com sílica (eluição gradiente: 0 a 5% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 55e (20 mg, rendimento: 7%). ESI-MS: m/z 820,4 [M+H]+. Etapa 5: Preparação do composto 39, sal de sódio

[0652] O composto 55e (20 mg, 0,024 mmol) foi agitado em uma solução de metilamina a 33% em etanol (10 mL) à temperatura ambiente até a conversão completa (cerca de 1 hora). A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto resultante foi tritu- rado em MeCN e, em seguida, purificado por HPLC preparativa de fase reversa (fase estacionária: XBridge C18 OBD, 5 µm, 250 x 30 mm; fase móvel: solução aquosa de 0,25% de bicarbonato de amônia (A) - MeCN

(B); eluição gradiente) para produzir o composto 39, sal de amônio. A conversão final no sal de sódio foi feita pela eluição de uma solução aquosa sobre uma coluna empacotada com resina catiônica de troca de íons de Na para produzir o composto 39, sal de sódio como um sólido branco macio após a liofilização (13,5 mg, rendimento: 80%).

[0653] RMN 31P (162 MHz, DMSO-d6) δ ppm -2,06 (s, 1 P); ESI-MS: m/z 663,3 [M+H]+. Exemplo 56 Etapa 1: preparação do composto 56b

[0654] Uma solução de 3’-(O-metil)inosina (56a, 1,5 g, 5,31 mmol,

CAS#75479-64-0) em piridina seca (30 mL) à qual DMAP (0,32 g, 2,65 mmol) e DMTrCl (2,65 g, 7,97 mmol) (em porções) foram adicionados, foi agitada à temperatura ambiente até a completa conversão. A mistura de reação foi resfriada rapidamente com metanol (15 mL) e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi dissolvido em acetato de etila e lavado com água. A camada orgânica foi lavada com água, submetida à secagem com Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. A purificação foi feita por cromatografia em colune de sílica-gel (eluição de gradiente: 0 a 2,5% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 56b como uma espuma marrom pálida (2,19 g, rendimento: 71%). RMN 1 H (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 12,35 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,34 (d, J= 7,6 Hz, 2H), 7,27 (t, J=7,6 Hz, 2H), 7,21 (m, 5H), 6,84 (m, 4H), 5,89 (d, J= 4,8 Hz, 1H), 5,62 (d, J= 6,2 Hz, 1H), 4,78 (q, J= 5,3 Hz, 1H), 4,13 (q, J= 4,6 Hz, 1H), 3,99 (t, J= 5,2 Hz, 1H), 3,73 (s, 6H), 3,37 (s, 3H), 3,22 (d, J= 4,1 Hz, 2H); ESI-MS: m/z 585 [M+H]+. Etapa 2: preparação do composto 56d

[0655] Um frasco de reação foi carregado com DMAP (0,76 g, 6,2 mmol), DCM seco (25 mL) e peneiras moleculares de 3 Å ativadas. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas sob atmosfera inerte. Simultaneamente, uma solução do composto 56b (0,73 g, 1,24 mmol) e uma solução do composto 56c (1,0 g, 1,49 mmol), cada uma em DCM seco (2 x 25 mL), foram secas em peneiras molecu- lares de 3 Å ativadas (cerca de 2 horas). Ambas as soluções (composto 56b e composto 56c respectivamente) foram sucessivamente transferi- das para o frasco de reação. A mistura de reação resultante foi agitada durante 24 horas. As peneiras moleculares foram removidas por filtra- ção e completamente enxaguadas com diclorometano. O filtrado foi la- vado com solução aquosa saturada de NaHCO3, salmoura e solução aquosa saturada de NH4Cl, seco com Na2SO4, filtrado e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em co- luna com sílica (eluição gradiente: 0 a 2% de MeOH em DCM) para for- necer o composto 56d (0,54 g, rendimento: 39%). RMN 1H (500 MHz DMSO -d6) δ ppm: 8,72 (s, 1H), 8,66 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 8,09 (m, 1H), 8,05 (m, 2H), 7,99 (s, 1H), 7,65 (m, 1H), 7,56 (t, J= 7,6 Hz, 2H), 7,29 (d, J= 6,9 Hz, 2H), 7,24 (t, J= 7,6 Hz, 2H), 7,18 (m, 5H), 6,87 (d, J= 9,0 Hz, 1H), 6,81 (dd, J= 9,0, 4,1 Hz, 4H), 6,46 (m, 1H), 6,24 (d, J= 3,4 Hz, 1H), 5,66 (m, 1H), 4,63 (t, J= 2,8 Hz, 1H), 4,54 (m, 1H), 4,11 (m, 1H), 3,93 (m, 1H), 3,71 (s, 6H), 3,32 (d, J = 8,3 Hz, 13H), 3,26 (m, 3H), 3,19 (m, 3H), 2,99 (m, 1H), 2,58 (m, 4H), 2,35 (m, 1H), 0,89 (s, 9H), 0,11 (s, 6H); ESI-MS: m/z 1116 [M+H]+. Etapa 3: preparação do composto 56e

[0656] Et3N (2,65 mL, 19,0 mmol) e Et3N.3HF (0,31 mL, 1,9 mmol) foram adicionados a uma solução do composto 56d (0,53 g, 0,47 mmol) em piridina (9,5 mL). A mistura de reação foi agitada a 45°C até a com- pleta conversa (cerca de 5 horas) e, então, resfriada até a temperatura ambiente. Isopropoxitrimetilsilano (1,34 mL, 7,6 mmol) foi adicionado e a agitação foi continuada de um dia para o outro. A concentração sob pressão reduzida resultou no composto 5’-desprotegido bruto que foi redissolvido em DCM (13,3 mL). Água (40 mL, 2,37 mmol) e ácido di- cloroacético (1,57 mL de 10% em DCM, 1,9 mmol) foram adicionados, a mistura de reação resultante foi agitada durante 1 hora (conversão completa) e depois disso foi bruscamente resfriada pela adição de piri- dina (200 mL, 2,37 mmol) e algumas gotas de metanol. O resíduo obtido após a concentração sob pressão reduzida foi purificado por cromato- grafia em coluna com sílica (eluição gradiente: 0 a 9% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 56e (220 mg, rendimento: 66,6% duas etapas). RMN 1H (500 MHz DMSO-d6) δ ppm: 12,43 (br s, 1H), 11,20 (br s, 1H), 8,72 (s, 1H), 8,63 (s, 1H), 8,57 (br t, J= 5,5 Hz, 1H), 8,33 (s, 1H), 8,04 (m, 3H), 7,65 (t, J= 7,2 Hz, 1H), 7,56 (t, J= 7,9 Hz, 2H), 6,43 (t, J=

6,9 Hz, 1H), 6,17 (d, J= 5,5 Hz, 1H), 5,45 (m, 2H), 5,26 (t, J= 5,5 Hz, 1H), 4,38 (m, 1H), 4,23 (t, J= 4,1 Hz, 1H), 4,12 (q, J= 3,7 Hz, 1H), 3,84 (m, 1H), 3,68 (m, 1H), 3,57 (m, 1H), 3,40 (s, 3H), 3,12 (m, 2H), 2,84 (m, 1H), 2,33 (m, 1H): ESI-MS: m/z 699 [M+H]+. Etapa 4: preparação do composto 56f

[0657] Uma solução do composto 56e (200 mg, 0,286 mmol) e 1H- tetrazol (5,09 mL de uma solução 0,45 M em de MeCN, 0,99 mmol, seca em peneiras moleculares de 4 Å antes do uso) em MeCN/THF secos (1:2, 9 mL) foi tratado com peneiras moleculares de 4 Å durante 30 mi- nutos sob N2 e depois disso 2-cianoetil-N,N,N',N'-tetra(isopropil)fosforo- diamidita (155 mg, 0,52 mmol) em MeCN seco (2 mL) foi adicionada por gotejamento por de 10 minutos (nota: o THF foi recém-destilado sobre sódio em presença de benzofenona e a MeCN foi recém-destilada na presença de CaH2 antes do uso). A mistura de reação resultante foi agi- tada durante 90 minutos à temperatura ambiente. Uma solução de tBu- OOH (286 µL da solução 5 a 6 M em decano, 1,43 mmol) foi adicionada e a agitação foi continuada por mais 30 minutos. A mistura foi diluída com DCM (20 mL), filtrada através de um bloco de terra diatomácea e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna com sílica (eluição gradiente: 0 a 8% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 56f (130 mg, rendimento: 44% (pureza: ~80% LCUV)) como um sólido branco. ESI-MS: m/z = 814,3 [M+H]+. Etapa 5: preparação do composto 40, sal de sódio

[0658] O composto 22f (130 mg, 0,072 mmol) foi agitado em uma solução de metilamina a 30% em etanol (15 mL) à temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão redu- zida. O resíduo foi dissolvido em água, lavado com DCM e liofilizado. O produto buto foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa (fase estacionária: Xbridge OBD C18 µ5 m, 150 x 30 mm; fase móvel: solução aquosa de 10 mM de bicarbonato de amônia (A) - MeCN (B); eluição gradiente). A conversão final no sal de sódio foi feita pela eluição de uma solução aquosa sobre uma coluna empacotada com uma resina catiônica de troca de íons de Na para fornecer o composto 40, sal de sódio como um sólido branco macio após a liofilização (5,8 mg, rendi- mento: 3% a partir de 22f). RMN 1H (400 MHz, D2O) δ ppm 8,39 (s, 1H), 7,91 (br d, J=13,2 Hz, 2 H), 7,24 (br s, 1H), 6,26 (br s, 1H), 6,18 (br d, J=8,3 Hz, 1H), 5,49 (br s, 1H), 4,87 - 5,06 (m, 1H), 4,51 (br s, 1H), 4,30 (br d, J=3,7 Hz, 1H), 4,10 (br s, 3H), 3,42 (s, 3H), 3,38 (br s, 2 H), 2,53 - 2,75 (m, 2 H); 31

[0659] RMN P (162 MHz, D2O) ppm -1,23 (s, 1 P); ESI-MS: m/z 657,0 [M+H]+. Exemplos biológicos Testes in vitro Exemplo 1 Ensaio de ligação a SPA STING

[0660] O ensaio de ligação a SPA STING humana mede o desloca- mento de trítio marcado com 2’,3’cGAMP (guanosina-(2' −> 5')-mono- fosfato-adenosina-(3' −> 5')-monofosfato cíclico) à proteína STING bio- tinilada. Um versão solúvel de STING recombinante foi expressa em E. coli que não apresenta os quatro domínios transmembranares e contém os resíduos 139 a 379 de Q86WV6 com R na posição 232 (H232R). Com base na frequência de alelo de 58% da população, H232R é con- siderado ser do tipo selvagem (Yi, et. al., "Single Nucleotide Polymor- phisms of Human STING can affect innate immune response to cyclic dinucleotides" PLOS ONE. 2013, 8(10), e77846). O construto de STING tem um terminal de N de etiqueta HIS, seguido por um sítio de clivagem de TEV protease e uma etiqueta AVI para permitir a biotinilação direci- onada por biotina ligase BirA (Beckett et al., A minimal peptide substrate in biotin holoenzyme synthetase-catalyzed biotinylation. (1999) Protein Science 8, 921-929). A etiqueta HIS é clivada após a purificação e antes da biotinilação.

[0661] O ensaio foi executado em 1536 placas de poços em um vo- lume total de 8 µL por mediante a adição de 8 nM de [3H] -2’ 3 ’-cGAMP e 40 nM de proteína biotina-STING em tampão para testes [25 mM HEPES (Corning 25-060-C1) pH 7,5, 150 mM de NaCl (Sigma S5150), 0,5 mg/mL BSA (Gibco 15260-037), 0,001% Tween-20 (Sigma P7949), água de grau molecular (Corning 46-000-CM)]. Os compostos de teste (80 nL) foram adicionados com um dispensador acústico (EDC Biosys- tems) em 100% de DMSO para uma concentração de ensaio final de DMSO a 1%. As placas foram centrifugadas durante 1 minuto e incuba- das durante 60 minutos à temperatura ambiente. Finalmente, cápsulas de poliestireno estreptavidina SPA (2 µL) (PerkinElmer RPNQ0306) fo- ram adicionadas e as placas foram seladas e centrifugadas durante 1 minuto à temperatura ambiente. As placas foram adaptadas ao escuro durante 2 h e lidas em um ViewLux (Perkin Elmer) durante 12 minutos por placa. Uma curva de ligação por saturação para [3H]-2’3’-cGAMP mostrou um KD de 3,6 ± 0,3 nM para ligação a STING, comparável aos valores relatados para o ligante natural (Zhang et al., Cyclic GMP-AMP containing mixed phosphodiester linkages is an endogenous high-affi- nity ligand for STING).

[0662] Outros ligantes naturais incluindo di-GMP cíclico também voltaram aos valores neste ensaio dentro da faixa esperada. O com- posto de referência é cGAMP e os resultados são relatados como por- centagem de inibição e valores de IC50. A ligação à STING de camun- dongo usou um construto similar ao descrito acima contendo os resí- duos 138 a 378 de Q3TBT3. Ensaio de ligação de STING humano de comprimento total

[0663] O STING humano dos resíduos 1 a 379 de Q86WV6 com um R na posição 232 (H232R) com uma etiqueta 6HIS N-terminal seguida de uma etiqueta FLAG, um sítio de clivagem de protease TEV e uma etiqueta AVI para biotinilação foi recombinantemente expresso em cé- lulas HEK293-EXPI. As membranas purificadas foram preparadas a par- tir dessas células e a expressão de STING foi confirmada e quantificada por membranas immunoblot contendo STING foram combinadas com o composto de teste em uma placa de ensaio Greiner de 384 poços e incubadas à temperatura ambiente durante uma hora no mesmo tampão de ensaio utilizado para o ensaio de ligação de STING SPA. Em se- guida, [3H]-2’3’-cGAMP foi adicionado e as placas foram incubadas du- rante 30 minutos à temperatura ambiente. As reações foram transferi- das para uma placa de filtro Pall 5073 pré-lavada e cada poço foi lavado 3 vezes com 50 µL de tampão de ensaio. As placas de filtro foram secas a 50C durante 1 hora. Para cada poço, 10 µL de fluido de cintilação Microscint foram adicionados e as placas foram vedadas e lidas em um TopCount (Perkin Elmer) durante 1 minuto por poço. Ensaio de ligação de STING SPR

[0664] Os compostos foram analisados em um instrumento S200 biacore SPR (GE Healthcare). A proteína STING truncada produzida por E. coli foi imobilizada em um chip de série S de estreptavidina através de captura de biotina (GE Healthcare #BR100531). Os compostos foram rastreados em diluições de 1:2 de 100 uM para 0,195 uM em tampão de corrida (HEPES 10 mM, pH 7,4, NaCl 150 mM, P20 a 0,005%, TECEP 1 mM). As avaliações de cinética e afinidade em estado estacionário foram realizadas com o uso do modelo de ligação de 1:1 (STING foi tratado como um dímero). Os parâmetros de teste foram os seguintes: 60 segundos ativo, 300 segundos desativado para os compostos de IFM, di-GMP cíclico (60 s ativo/60 s desativado), isômero de tiol 1 (60 s ativo/300 s desativado) e cGAMP (60 s ativo/1200 s desativado) com uma taxa de fluxo de 50 µL/min e coleta de dados a 40 Hz a 25 C. Ensaio de repórter de célula de STING humano

[0665] O agonismo da via de STING humano é avaliado em células

THP1-ISG (Invivogen, cat #thp-isg) derivadas de linhagem celular de monócitos de THP1 humano por integração estável de um construto de repórter de SEAT induzível por fator regulador de interferon (IRF). As células THP1-Blue ISG expressam um gene repórter de fosfatase alca- lina embrionária secretada (SEAP) sob o controle de um promotor mí- nimo ISG54 em conjunto com cinco elementos de resposta estimulada por interferon (IFN). Como resultado, as células THP1-Blue ISG permi- tem o controle de ativação de IRF por determinação da atividade de SEAP. Os níveis de SEAP induzidos por IRF no sobrenadante de cultura celular são prontamente avaliados com meio de detecção de fosfatase alcalina, um reagente de detecção de SEAP. Estas células são resisten- tes à Zeocina. 2’3’cGAMP foi usado como controle positivo no ensaio. Para executar o ensaio, 60.000 células foram dispensadas em uma placa de 384 poços, branca, de fundo opaco, tratada com cultura de tecido, de 30 µL/poço.

[0666] Os compostos de teste foram adicionados em um volume de 10 µL (concentração fim de DMSO a 1%). Os compostos são inicial- mente preparados em DMSO a 100%, depositados em uma placa de diluição de composto e então diluídos no meio antes da transferência. O ensaio foi incubado por 24 horas a 37°C, 5% de CO2 então as placas foram centrifugadas a 1200 rpm (120x g) durante 5 minutos. Após a in- cubação final, 90 µL de substrato de meio de detecção de fosfatase al- calina foram adicionados a cada poço de uma nova placa transparente de 384 poços e 10 µL do sobrenadante celular foram transferidos da placa de ensaio para a nova placa de meio de detecção de fosfatase alcalina com o uso de um Biomek FX e misturada 4 vezes. As placas foram incubadas à temperatura ambiente durante 20 minutos e então a absorbância a 655 nm foi determinada com Tecan Safire2. Ensaio de repórter de células de STING de camundongo

[0667] O agonismo da via de STING de camundongo é avaliado em células RAW Lucia (Invivogen,cat # rawl-isg) derivadas da linhagem ce- lular de macrófago RAW-264.7 de camundongo por integração estável de um construto de repórter de luciferase de Lucia induzível por interfe- ron. As células RAW Lucia expressam um gene repórter de luciferase secretada sob o controle de um promotor mínimo ISG54 em conjunto com cinco elementos de resposta estimulada por interferon (IFN). Como resultado, as células RAW Lucia permitem o monitoramento da ativação de IRF pela determinação da atividade de luciferase. Os níveis de luci- ferase induzida por IRF no sobrenadante de cultura celular são pronta- mente avaliados com QUANTI-Luc™, um reagente de detecção de luci- ferase. Estas células são resistentes à Zeocina. 2’3’cGAMP é usado como controle positivo neste ensaio. Para executar o ensaio, 100.000 células foram dispensadas em uma placa de 96 poços com fundo plano, transparente, tratada com cultura de tecido, de 90 µL/poço. Os compos- tos de teste foram adicionados em um volume de 10 µL. O ensaio foi incubado durante 24 horas a 37°C e 48 horas, a 5% de CO2. Após a incubação, 20 µL do sobrenadante celular da placa de ensaio foram transferidos para uma nova placa branca de 96 poços e 50uL de subs- trato QUANTI-Luc foram adicionados. A placa foi incubada, com agita- ção, à temperatura ambiente durante 5 minutos então a luminescência foi lida em um equipamento EnVision 2104 com tempo de integração de 0,1s. Ensaio de indução de interferon-β humano

[0668] As células THP1-Blue ISG são usadas para medir a secre- ção de IFN-β no sobrenadante da cultura após a ativação da via de STING. Para executar o ensaio, os anticorpos de captura de anti-IFN-β foram revestidos em placas MultiArray de 96 poços (Mesoscale Disco- very). Após uma incubação de uma hora, as placas foram lavadas e 50 µL de sobrenadante das placas de ensaio de repórter de células de STING humano ou padrões de IFN-β foram misturados com 20 µL de anticorpo de detecção conjugado a Sulfotag nas placas revestidas. As placas foram incubadas, agitadas durante 2 horas, lavadas e o tampão de leitura foi aplicado. A eletroquimioluminescência foi medida no equi- pamento SectorImager. Avaliação da via de sinalização celular de STING.

[0669] O agonismo da via de STING foi medido em células THP1 BLUE ISG por western blot de fosfo-STING(S366), fosfo-TBK1(S172) e fosfo-IRF3(S396). Resumidamente, 5 milhões de células em e 90 µL de tampão de nucleofecção foram misturados com 10 µL de compostos de teste. Essas misturas foram eletroporadas com o uso de programa V- 001 em um equipamento Amaxa Nucleofector (Lonza). As células foram transferidas para placas de 12 poços com meio fresco e deixadas recu- perar por uma hora a 37°C, 5% de CO2. As células foram então lavadas em BBSS frio e lisadas em tampão de RIPA. As amostras foram norma- lizadas por proteína total e diluídas em tampão de amostra ProteinSim- ple ou em tampão de carregamento de LDS. As amostras foram desna- turadas por calor a 95°C durante 5 minutos, então PeggySue (Protein- Simple) foi usado para medir fosfo-STING e STING total e IRF3 en- quanto o sistema NuPAGE (Invitrogen) foi usado para medir TBK1. Os dados foram analisados com o uso do software Compass ou Licor Odys- sey, respectivamente. Atividade de STING in vivo

[0670] Para todos os estudos, camundongos Balb/c fêmeas foram obtidos junto à Charles River Labs (Wilmington, MA, EUA) e usados quando tinham 6 a 8 semanas de idade e pesavam aproximadamente 20 g. Todos os animais foram deixados aclimar e se recuperar de qual- quer estresse relacionado ao transporte por um mínimo de 5 dias antes do uso experimental. Água clorada por osmose reversa e alimento irra- diado (Laboratory Autoclavable Rodent Diet 5010, Lab Diet) foram for- necidos ad libitum (à vontade), e os animais foram mantidos em um ciclo de claro e escuro de 12 horas. As gaiolas e leitos foram autoclavados antes do uso e trocados semanalmente. Todos os experimentos foram realizados de acordo com The Guide for the Care and Use of Laboratory Animals e forma aprovados pelo Institutional Animal Care and Use Committee of Janssen R & D, Spring House, PA, EUA. Cada grupo ex- perimental continha 8 camundongos. A eficácia in vivo em um modelo de tumor CT26 de camundongo foi determinada pela implantação de

500.000 células de tumor de carcinoma de cólon de CT26 subcutanea- mente em camundongos Balb/c e deixou-se que os tumores se estabe- lecessem de 100 a 300 mm3.

[0671] Os compostos foram injetados por via intratumoral e formu- lados em solução salina tamponada com fosfato em um volume de 0,1 mL por injeção. Os camundongos foram administrados com 0,05 mg a cada três dias para um total de três doses. A eficácia foi medida como a porcentagem de inibição de crescimento de tumor (TGI) calculada pela redução do tamanho do volume de tumor Tratado (T) em relação ao volume de tumor de Controle (C) de acordo com a seguinte Fórmula: ((C-T)/(C))*100 quando todos os animais de controle ainda estavam em estudo. As curas foram definidas como o número de animais sem tumor mensurável detectados em 10 tempos de duplicação do volume de tu- mor (TVDT) após a última dose ter sido administrada.

[0672] Os dados resultantes são apresentados na Tabela 2. Tabela 2. Composto n° hSTING SPA IC 50 Células repórter humanas SPR humano STING IFN-β humano (valor Atividade in vivo Atividade in vivo (µM)* 50 EC (µM)* KD (µM) de classificação) (% TGI) (curas)** c-GAMP 0,024 0,53 0,0055 - - - 3’,3’c-GAMP 8,62 8,7 3,97 - - - 3’,3’c-GAMP 73,06 17,83 5,99 539 - - 1 0,0046 0,077 0,0012 7930 108,9 6 6 0,011 0,99 0,0012 6762 - - 8 11,68 2,38 - 5539 - - 9 2,79 0,11 0,28 8104 - - 11 0,015 0,03 0,0065 14896 - - 12 0,22 0,14 - - - - 15 0,36 0,043 - 15611 - 17 21,58 0,25 5,14 17298 - -

18 1,14 0,11 - 15249 - - 20 0,047 ~ 0,22 0,0082 6045 - - 22 0,092 0,026 - - - - 24 5 0,011 - 11534 - - 25 29,2 0,1 3,48 6595 88,9 - 26 28,41 1,02 - - - - 28 0,19 0,099 - 12969 - - 29 0,29 0,053 16254 - - 30 > 100 13,05 - - - - 33 0,39 0,17 - - - - 34 4,26 0,025 - - - - 35 > 100 7,08 - - - - 36 > 100 2,46 - - - - 37 12,36 1,35 - - - - 39 0,021 0,065 - - - - 40 0,066 0,038 - - - - 41 > 100 22,53 - - - - 45 76,17 1,84 - - - - 47 1,3 ~ 0,039 - - - - 48 > 100 6,66 - - - - 49 37,09 0,26 - - - - 51 0,011 - - - - - 52 0,32 - - 18191 - - 53 4,01 - - 11036 - - 54 0,75 - - 18578 - - 55 0,22 - - 25628 - - O valor de classificação de IFN-β humano foi determinado pela indução cumulativa de IFN-β em pg/mL ao longo da faixa de dose testada (0,78 a 50 uM) em células THP-1 após uma exposição de 24 horas * IC50 e EC50 são médias de ao menos três valores. ** 8 camundongos por grupo (-) não fez. Exemplo biológico 2 Ensaio de indução de citocina de CMSP humana primária com STING

[0673] O agonismo da via de STING humano é avaliado em células primárias humanas mononucleares do sangue periférico (CMSP) deri- vadas de sangue total humano, 1 pint (aproximadamente 420 mL) de sangue doado fresco (AliCells Inc, Alameda, CA, EUA) é colocado em camadas sobre o meio de separação de linfócitos (1,077-1,080 g/mL, Corning, Manassas, VA, EUA) e, então, centrifugado a 500 g durante 20 minutos à temperatura ambiente sem aplicar ruptura. As CMSPs cole-

tadas na interface entre soro e meio de separação de linfócitos são co- lhidas, lavadas, e então contadas. As CMSPs são compostas de subti- pos de linfócitos e monócitos, como células B, células T, etc., e esses subtipos têm sido caracterizados na literatura para expressar diferentes níveis da proteína STING. Em resposta aos agonistas de STING, como 2’3’-cGAMP, essas células se tornam ativadas e são induzidas a se ex- pressar uma variedade de citocinas antivirais e pró-inflamatórias. Além disso, mediante a estimulação com agonistas de STING, essas células fazem a regulação positiva de marcadores de ativação. Os níveis de indução de citocina podem ser medidos por uma variedade de métodos incluindo ELISA, Luminex e MSD. Os níveis de regulação positiva do marcador de ativação podem ser medidos por citometria de fluxo.

[0674] Para executar o ensaio, 1.000.000 células podem ser dispen- sadas em placas de 96 poços de fundo plano, tratadas com cultura de tecido, de 225 µL/poço. Os compostos de teste podem ser adicionados em um volume de 25 µL a uma concentração de 10x. Alguns compostos podem ser solubilizados em DMSO a 100% e a concentração fim de DMSO nas culturas que recebem esses compostos pode ser 1%. O en- saio pode ser incubado durante 48 horas a 37°C, 5% de CO2. 200 µL de sobrenadantes podem ser colhidos sem perturbar as células sobre o fundo da placa, congeladas a -20°C até o tempo de medição com Lumi- nex. Os ensaios com Luminex foram realizados com o uso de G-CSF, IFNα2, IFNγ, IL-1b, IL-6, IL-10, IL-12 (p40), IL-12 (p70), TNFa junto à MILLIPLEX MAP Human Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel - Immunology Multiplex Kit de ensaio e analito de ITNβ junto à MILLIPLEX MAP Human Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel IV kit (EMD Mil- lipore, Billerica, MA, EUA), seguindo o protocolo dos fabricantes. A in- dução de citocinas pode ser medida com o uso de um instrumento Lu- minex FlexMAP 3D®(Luminex Corporation, Radnor, PA, EUA). A aná- lise de dados de Luminex coletados pode ser realizada com o uso de software Analista MILLIPLEX (EMD Millipore). Supressão de vírus HBV em células PHH com o uso de meios condici- onados a partir de CMSP humanas primárias ativadas por STING

[0675] Hepatócitos humanos primários podem ser infectados com vírus de hepatite B e durante uma infecção estabelecida, irão produzir proteínas virais como HBsAg e HBeAg que podem ser detectadas por ELISA. Tratamento terapêutico com compostos, como entecavir, podem suprimir a reprodução de HBV, que pode ser medida pela diminuição da produção de proteínas virais. (# de células) 4x105 células/poço de he- patócitos humanos primários (BioReclamation, Westbury, NY, EUA) po- dem ser dispensadas em placas de 24 poços, de 500 µL/poço, de fundo redonda, tratadas com cultura de tecido. 24 horas depois, as células podem ser infectadas com HBV, com moi (multiplicidade de infecção) de 30 a 75. No dia seguinte, as células PHH podem ser lavadas 3x e meio de manutenção fresco pode ser adicionado às células. Conse- quentemente, as CMSPs foram isoladas conforme descrito acima. Para estimular as CMSPs, 10.000.000 de células podoem ser dispensadas em placas de 24 poços de fundo plano, tratadas com cultura de tecido de 400 µL/poço. Os compostos de teste foram adicionados em um vo- lume de 100 µL, então as culturas foram incubadas durante 48 horas a 37°C, 5% de CO2. Os sobrenadantes podem ser colhidos. As células podem ser medidas quanto a ativação de regulação positiva de marca- dor com o uso de citometria de fluxo. Resumidamente, as células podem ser coradas com anticorpos marcados fluorescentemente direcionados a CD 56, CD 19, CD3, CD8a, CD 14, CD69, CD54, CD161, CD4 e CD80. As amostras podem ser analisadas em um citômetro de fluxo Attune NxT (Thermo Fisher, Carlsbad, CA, EUA)

[0676] A partir das culturas de CMSP estimuladas, uma porção do sobrenadante pode ser reservada para detecção de citocinas por Lumi- nex, conforme descrito anteriormente. O resto do sobrenadante pode ser dividido ao meio, e uma alíquota pode ser armazenada a 4°C para uso no dia 8 do ensaio. A outra alíquota do sobrenadante pode ser dilu- ída 1:1 com meio PHH 2X, então pode ser adicionada às células infec- tadas com PHH do dia 4. Após 96 horas, o meio gasto pode ser mudado e o sobrenadante pode ser adicionado em uma diluição de 1:1 com meio de PHH 2X. Neste ponto, uma medição interina de HBsAg pode ser re- alizada com o uso de um kit ELISA HBsAg (Wantai Bio-pharm, Beijing, China). Após 96 horas, o meio pode ser coletado e o HBsAg pode ser medido.

[0677] Embora o relatório descritivo anteriormente mencionado en- sine os princípios da presente invenção, com os exemplos fornecidos com o propósito de ilustração, ficará compreendido que a prática da in- venção abrange as variações, adaptações e/ou modificações usuais, de acordo com o escopo das reivindicações a seguir e seus equivalentes.

Claims (25)

REIVINDICAÇÕES

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula (I) em que; B1 e B2 são independentemente selecionados do grupo consis- tindo em b1, b2, b3, b4, b5, b6, b7, b8, b9, b10, b11, b12, b13, b14, b15, b16, b17, b18, b19, b20, b21, b22, b23, b24, b25, b26, b27, b28, b29, b30, b31, b32 e b33; R1a é independentemente selecionado dentre hidrogênio; hi- dróxi; flúor; alcóxi C1-3 opcionalmente independentemente substituído com um a sete substituintes halogênio ou metóxi; alquenilóxi C3-6; al- quinilóxi C2-6; hidroxialcóxi C1-3; ou alquila C1-3 opcionalmente indepen- dentemente substituída com um a três substituintes selecionados dentre flúor, cloro, bromo, iodo ou hidróxi; R1b é independentemente selecionado dentre hidrogênio, flúor ou hidróxi; desde que quando R1b é flúor, R1a é hidrogênio ou flúor; R1c é independentemente selecionado dentre hidrogênio ou metila; R2a é independentemente selecionada dentre hidrogênio; hidróxi; flúor; alcóxi C1-3 opcionalmente independentemente substitu- ído com um a sete substituintes halogênio ou metóxi; alquenilóxi C 3-6; alquinilóxi C2-6; hidroxialcóxi C1-3; ou alquila C1-3 opcionalmente inde- pendentemente substituída com um a três substituintes selecionados dentre flúor, cloro, bromo, iodo ou hidróxi; e R3 é hidrogênio; ou R2a é e R2c é -CH2-; de modo que R2a, R2c e os átomos aos quais eles estão ligados formam um anel de 5 membros; R2b é independentemente selecionado dentre hidrogênio, flúor ou hidróxi; desde que quando R2b é flúor, R2a é hidrogênio ou flúor; R2c é independentemente selecionada dentre hidrogênio, flúor, CH3 ou CH2F; X1 e X2 são independentemente selecionados do grupo con- sistindo em O, S e CH2; Y e Y1 estão, cada um, independentemente ausentes, ou são selecionados do grupo consistindo em O ou NH; Z e Z1 são independentemente selecionados do grupo con- sistindo em O e NH; um de M e M1 é e o outro de M e M1 é independentemente selecionado dentre de modo que, quando M é um de Y e Z é NH, e o outro de Y e Z é O; e, de modo que M1 é um de Y1 e Z1 é NH, e o outro de Y1 e Z1 é O; R4 é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidróxi, metila, BH3 e -SR5; em que R5 é independentemente seleci- onado do grupo consistindo em hidrogênio, -CH2O(O)R6, - CH2OC(O)OR6, -CH2CH2SC(O)R6 e -CH2CH2S-SCH2R6; R6 é independentemente selecionado do grupo consistindo em arila C6-10, heteroarila, heterocicloalquila, cicloalquila C3-12 e alquila C1-20 opcionalmente independentemente substituída com um a cinco substituintes flúor ou hidróxi, alquila C1-6, arila C6-10 ou cicloalquila C3-12; ou um enantiômero, um diastereômero ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; desde que quando B1 e B2 são, cada um, b6, e Z-M-Y é OS(O2)NH, e Y1-M1-Z1 é OP(O)(OH)O ou OP(O)(SH)O, então R 1a é diferente de OH; desde que um composto da Fórmula (I) seja diferente de um composto no qual B2 é b6; X2 é O; R2a é OCH3; R2b é H; R2c é H; Z-M-Y é OS(O)2NH; Y1-M1- Z1 é OP(O)(OH)O; B1 é b7; X1 é O; R1a é OCH3; R1b é H; e R1c é H; desde que um composto da Fórmula (I) seja diferente de um composto no qual B2 é b6; X2 é O; R2a é F; R2b é H; R2c é H; Z-M-Y é

(*R)OP(O)(SH)O; Y1-M1-Z1 é NHS(O)2O; B1 é b21; X1 é O; R1a é OH; R1b é H; e R1c é H; desde que um composto da Fórmula (I) seja diferente de um composto no qual B2 é b30; X2 é O; R2a é H; R2b é H; R2c é H; Z-M-Y é OS(O)2NH; Y1-M1-Z1 é OP(O)(OH)O; B1 é b7; X1 é O; R1a é OCH3; R1b é H; e R1c é H.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracteri- zado pelo fato de que R1a é independentemente selecionado dentre hidrogênio; hidróxi; flúor; metóxi; hidroxialcóxi C 1-3; ou alquila C1-3 in- dependentemente opcionalmente substituída com um a sete substi- tuintes flúor.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracteri- zado pelo fato de que B1 e B2 são, cada um, b6

4. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracteri- zado pelo fato de que B1 é b6 e B2 ser b7.

5. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que Z-M-Y é OSO2NH e Y1–M1–Z1 é OP(O)(OH)O ou OP(O)(SH)O.

6. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que Z-M-Y é OP(O)(OH)O ou OP(O)(SH)O, e Y1-M1-Z1 é NHSO2O.

7. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracteri- zado pelo fato de que é selecionado do grupo consistindo nos compos- tos 1 a 55 ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável do mes- mo.

8. Composto, de acordo com a reivindicação 7, caracteri- zado pelo fato de que é selecionado do grupo consistindo em ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

9. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto como definido em qualquer uma das reivindi- cações 1 a 8, e pelo menos um dentre um veículo farmaceuticamente acei- tável, um excipiente farmaceuticamente aceitável e um diluente farmaceu- ticamente aceitável.

10. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindica- ção 9, caracterizada pelo fato de que a composição é uma forma de dosagem oral sólida.

11. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que a composição é um xarope, um elixir ou uma suspensão.

12. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto como definido na reivindicação 7, e pelo menos um dentre um veículo farmaceuticamente aceitável, um excipiente farmaceuticamente aceitável e um diluente farmaceutica- mente aceitável.

13. Método de tratamento de uma doença, síndrome ou condição modulada por STING, caracterizado pelo fato de que com- preende administrar a um indivíduo, que necessita da mesma, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto como definido na reivindicação 1.

14. Método de tratamento de uma doença, síndrome ou con- dição, em que a dita doença, síndrome ou condição é afetada pelo ago- nismo de STING, caracterizado pelo fato de que compreende adminis- trar a um indivíduo, que necessita do mesmo, uma quantidade terapeu- ticamente eficaz do composto como definido na reivindicação 1.

15. Método, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a dita doença, síndrome ou condição é câncer.

16. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o dito câncer é selecionado do grupo consistindo em melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, cân- cer de pulmão e fibrossarcoma.

17. Método, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a dita doença, síndrome ou condição é uma infecção viral.

18. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a infecção viral é hepatite B.

19. Método de tratamento de uma doença, síndrome ou condição selecionada do grupo consistindo em infecção viral, mela- noma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão e fibrossarcoma, caracterizado pelo fato de que compre- ende administrar a um indivíduo, que necessita do mesmo, uma quan- tidade terapeuticamente eficaz da composição como definida na reivin- dicação 9.

20. Método, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que a infecção viral é hepatite B.

21. Método de tratamento de um(a) doença, síndrome, condi- ção ou distúrbio, em que a(o) dita(o) doença, síndrome, condição ou dis- túrbio é afetada(o) pelo agonismo de STING, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um indivíduo, que necessita do mesmo, uma quantidade terapeuticamente eficaz de (a) um composto de Fórmula (I) ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e (b) um vírus oncolítico ou uma vacina anticâncer.

22. Método, de acordo com a reivindicação 21, caracteri- zado pelo fato de que a vacina anticâncer ser independentemente se- lecionada do grupo consistindo em vacinas antigênicas, vacinas de cé- lulas inteiras, vacinas de ativação de células dendríticas, vacinas de DNA, vacina do bacilo Calmette-Guérin (BCG), Sipuleucel-T (Pro- venge), Talimogene laherparepvec (T-Vec; Imlygic™), vacinas basea- das em vírus oncolíticos, e vacinas baseadas em adenovírus.

23. Uso de um composto, como definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que se destina para a preparação de um medicamento para tratamento de uma doença, síndrome ou condição selecionada do grupo consistindo em infecção viral, melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão e fibrossarcoma, em um indivíduo que necessita do mesmo.

24. Uso de um composto, como definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que se destina para o uso em um método para tratamento de uma doença, síndrome ou condição selecionada do grupo consistindo em infecção viral, melanoma, câncer de cólon, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pulmão e fibrossarcoma, em um indivíduo que necessita do mesmo.

25. Composto 17a, caracterizado pelo fato de que é útil para a preparação de certos compostos da Fórmula (I).