CN111712509A - 作为sting激动剂的环状二核苷酸 - Google Patents
作为sting激动剂的环状二核苷酸 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111712509A CN111712509A CN201880089451.3A CN201880089451A CN111712509A CN 111712509 A CN111712509 A CN 111712509A CN 201880089451 A CN201880089451 A CN 201880089451A CN 111712509 A CN111712509 A CN 111712509A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- compound
- formula
- give
- solution
- cancer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7084—Compounds having two nucleosides or nucleotides, e.g. nicotinamide-adenine dinucleotide, flavine-adenine dinucleotide
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
- C07K16/082—Hepadnaviridae, e.g. hepatitis B virus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Virology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Physiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明公开了用于治疗受STING调制的影响的疾病、综合征或障碍的化合物、组合物和方法。此类化合物由下式(I)表示：
其中B2、X2、R2a、R2b、R2c、Z‑M‑Y、Y1‑M1Z1、B1、X1、R1a、R1b、R1c如本文所定义。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求于2017年12月15日提交的美国临时专利申请62/599,111的优先权，该临时专利申请据此全文以引用方式并入。
技术领域
本发明涉及新型化合物，这些新型化合物为STING(干扰素基因的刺激剂)激动剂，并可用于治疗受STING蛋白调制的影响的障碍。本发明还涉及包含此类化合物中的一种或多种的药物组合物、制备此类化合物和组合物的方法，以及此类化合物或药物组合物用于治疗各种疾病、综合征或障碍的用途。本发明可涉及到下游信号传导途径的激活，进一步引起第二信使和生长因子的激活，以及涉及到先天性免疫和适应性免疫的干扰素的产生。更具体地，本发明涉及此类化合物或药物组合物用于治疗各种感染、疾病、综合征和障碍的用途，该疾病、综合征和障碍包括但不限于黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和抗病毒疗法。
背景技术
STING(干扰素基因的刺激剂)也称为TMEM173、MITA、MPYS和ERIS，是位于细胞内的跨膜受体和细胞溶质核酸的关键传感器(Zhong B等人，“The Adaptor Protein MITALinks Virus-Sensing Receptors to IRF3 Transcription Factor Activation”.Immunity.2008，第29卷；538-550)。最近的研究揭示STING的生物学及其在调动先天性免疫应答中的作用，从而在小鼠模型中产生强健抗肿瘤活性。STING途径的激活引起通过IRF3(干扰素调节因子3)途径诱导的I型干扰素(主要为IFN-α和IFN-β)的产生。IRF3的激活被认为是由TBK1介导的，该TBK1招募并磷酸化IRF3，从而形成能够进入细胞核以转录I型干扰素和其它基因的IRF3同源二聚体(Liu S等人，“Phosphorylation of innate immuneadaptor proteins MAVS,STING,and TRIF induces IRF3 activation”Science.2015:2630-2637)。TBK1还激活激活的B细胞途径的核因子kappa轻链增强子，这经由致癌转录因子NF-KB引起促炎细胞因子(IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α等)的产生。此外，STING激活STAT6(信号转导子和转录激活因子6)以诱导(Th2型)、增加(IL-12)或降低(IL-10)各种细胞因子(包括趋化因子CCL2、CCL20和CCL26)的产生(ChenH等人，“Activation of STAT6 bySTING Is Critical for Antiviral Innate Immunity”Cell.2011，第14卷：433-446)。据报道，在激活时Ser366上STING的直接磷酸化也通过TBK1或ULK1发生(Corrales,L.等人，“Direct activation of STING in the tumor microenvironment leads to potent andsystemic tumor regression and immunity”Cell Reports,2015，第11卷：1-13；Konno,H.等人，“Cyclic dinucleotides trigger ULK1(ATG1)phosphorylation of STING toprevent sustained innate immune signaling”Cell,2013，第155卷：688-698)。
已阐明结合并激活STING(2',3')环鸟苷单磷酸腺苷单磷酸(2',3'-cGAMP)的天然配体和负责其合成的酶(cGAS，也称为C6orf150或MB21D1)，提供调制该途径的机会。cGAMP为在哺乳动物细胞中产生的STING的高亲和力配体，其充当内源性第二信使以激活STING途径。它是环状二核苷酸，具有独特的2’,3’连接，由cGAS在外源双链DNA(例如由侵入细菌、病毒或原生动物释放)或哺乳动物中的自身DNA的存在下产生(Wu等人，2013；Sun,L.等人，“Cyclic GMP-AMP Synthase Is a Cytosolic DNA Sensor That Activates the Type IInterferon Pathway”Science,2013，第339卷：786-791；Bhat N和Fitzgerald KA.“Recognition of Cytosolic DNA by cGAS and other STING-dependent sensors”.EarJ Immunol，2014年3月；44(3):634-40)。STING激活也可通过由侵入细菌释放的外源(3',3)环状二核苷酸(c-di-GMP、c-di-AMP和3’3’-cGAMP)的结合而发生(Zhang X等人，“CyclicGMP-AMP Containing Mixed Phosphodiester Linkages Is An Endogenous High-Affinity Ligand for STING”Molecular Cell,2013，第51卷：226-235；Danilchanka,O和Mekalanos,JJ.“Cyclic Dinucleotides and the Innate Immune Response”Cell.2013，第154卷：962-970)。
STING途径的激活触发免疫应答，该免疫应答引起生成可收缩肿瘤并提供持久免疫的特异性杀灭性T细胞，使得它们不再复发。在临床前模型中用STING激动剂获得的显著抗肿瘤活性已对该靶标生成高水平的激动，并且能够调制STING途径的小分子化合物具有治疗癌症和降低自身免疫性疾病两者的潜力。
STING途径的激活还有助于抗病毒应答。无论在细胞还是生物体水平上，功能性应答的丧失都表明在不存在STING的情况下无法控制病毒载量。STING途径的激活触发免疫应答，该免疫应答产生对抗病毒并调动免疫系统的先天和适应性臂的抗病毒和促炎细胞因子。最终，针对病原性病毒开发出持久免疫力。在临床前模型中用STING激动剂获得的显著抗病毒活性已对该靶标生成高水平的激动，并且可调制STING途径的小分子化合物具有治疗慢性病毒感染(诸如乙型肝炎)的潜力。
慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是重大的全球健康问题，影响着世界人口的超过5％(全世界超过3.50亿的人口和美国125万的个体)。尽管可获得某些HBV疫苗和疗法，但是慢性HBV感染的负担因发展中国家大部分地区的次优治疗选项和持续的新感染率而仍旧为一个重大且未能应对的世界性医学问题。目前的治疗仅受限于两类试剂：充当病毒聚合酶的抑制剂的干扰素α和核苷类似物。然而，这些疗法中没有一种提供对疾病的治愈，并且耐药性、低功效和耐受性问题限制它们的影响。HBV的低治愈率至少部分地归因于这样的事实：病毒产生的完全抑制难以用单一的抗病毒剂来实现。然而，HBV DNA的持续抑制减缓了肝脏疾病的进展，并有助于预防肝细胞癌。对于HBV感染患者的当前治疗目标旨在将血清HBVDNA降至很低或不可检出的水平，并最终减少或预防硬化症和肝细胞癌的发展。因此，本领域需要可提高对病毒产生的抑制并且可治疗、改善、或预防HBV感染的治疗剂。将此类治疗剂作为单一治疗药物施用或与其它HBV治疗或辅助治疗联合施用于HBV感染的患者，可导致病毒载量显著降低、预后改善、疾病发展减慢并且血清转化率增强。
增强先天性免疫和适应性免疫两者的潜在治疗有益效果使得STING成为有吸引力的治疗靶标，其自身表现出令人印象深刻的活性，并且也可与其它免疫疗法联合。
发明内容
本发明涉及式(I)的化合物
其中：
B1和B2独立地选自b1、b2、b3、b4、b5、b6、b7、b8、b9、b10、b11、b12、b13、b14、b15、b16、b17、b18、b19、b20、b21、b22、b23、b24、b25、b26、b27、b28、b29、b30、b31、b32和b33；
R1a独立地选自氢；羟基；氟；任选独立地被一至七个卤素取代基或甲氧基取代的C1-3烷氧基；C3-6烯氧基；C2-6炔氧基；羟基(C1-3)烷氧基；或者任选独立地被一至三个选自氟、氯、溴、碘或羟基的取代基取代的C1-3烷基；
R1b独立地选自氢、氟或羟基；前提条件是当R1b为氟时，R1a为氢或氟；
R1c独立地选自氢或甲基；
R2a独立地选自氢；羟基；氟；任选独立地被一至七个卤素取代基或甲氧基取代的C1-3烷氧基；C3-6烯氧基；C2-6炔氧基；羟基(C1-3)烷氧基；或者任选独立地被一至三个选自氟、氯、溴、碘或羟基的取代基取代的C1-3烷基；并且R3为氢；
或者，R2a为-O-并且R2c为-CH2-；使得R2a、R2c以及它们所连接的原子形成5元环；
R2b独立地选自氢、氟或羟基；前提条件是当R2b为氟时，R2a为氢或氟；
R2c独立地选自氢、氟、CH3或CH2F；
X1和X2独立地选自O、S和CH2；
Y和Y1各自独立地不存在或者选自O或NH；
Z和Z1独立地选自O和NH；
M和M1中的一者为
并且M和M1中的另一者独立地选自
使得当M为
时，Y和Z中的一者为NH，并且Y和Z中的另一者为O；
并且，使得当M1为
时，Y1和Z1中的一者为NH，并且Y1和Z1中的另一者为O；
R4独立地选自羟基、甲基、BH3和-SR5；其中R5独立地选自氢、-CH2O(O)R6、-CH2OC(O)OR6、-CH2CH2SC(O)R6和-CH2CH2S-SCH2R6；
R6独立地选自C6-10芳基，杂芳基，杂环烷基，C3-12环烷基，以及任选独立地被一至五个氟或羟基取代基取代的C1-20烷基，C1-6烷基，C6-10芳基或C3-12环烷基；
或者其对映体、非对映体或药学上可接受的盐形式；
前提条件是当B1和B2各自为b6，并且Z-M-Y为OS(O2)NH，并且Y1-M1-Z1为OP(O)(OH)O或OP(O)(SH)O时，则R1a不是OH；
前提条件是式(I)的化合物不是这样的化合物，其中B2为b6；X2为O；R2a为OCH3；R2b为H；R2c为H；Z-M-Y为OS(O)2NH；Y1-M1-Z1为OP(O)(OH)O；B1为b7；X1为O；R1a为OCH3；R1b为H；并且R1c为H；
前提条件是式(I)的化合物不是这样的化合物，其中B2为b6；X2为O；R2a为F；R2b为H；R2c为H；Z-M-Y为(*R)OP(O)(SH)O；Y1-M1-Z1为NHS(O)2O；B1为b21；X1为O；R1a为OH；R1b为H；并且R1c为H；
前提条件是式(I)的化合物不是这样的化合物，其中B2为b30；X2为O；R2a为H；R2b为H；R2c为H；Z-M-Y为OS(O)2NH；Y1-M1-Z1为OP(O)(OH)O；B1为b7；X1为O；R1a为OCH3；R1b为H；并且R1c为H。
本发明还提供了药物组合物，所述药物组合物包含以下物质、由以下物质组成和/或基本上由以下物质组成：药学上可接受的载体、药学上可接受的赋形剂和/或药学上可接受的稀释剂以及式(I)的化合物或其药学上可接受的盐形式。
本发明还提供了用于制备药物组合物的方法，所述方法包括以下步骤、由以下步骤组成和/或基本上由以下步骤组成：将式(I)的化合物与药学上可接受的载体、药学上可接受的赋形剂和/或药学上可接受的稀释剂混合。
本发明还提供了用于使用式(I)的化合物治疗或改善受试者(包括哺乳动物和/或人)中的病毒感染、疾病、综合征或病症的方法，其中病毒感染、疾病、综合征或病症受STING激动的影响。
本发明还提供了用于使用式(I)的化合物治疗或改善受试者(包括哺乳动物和/或人)中的病毒感染、疾病、综合征或病症的方法。
本发明还提供了用于使用式(I)的化合物治疗或改善受试者(包括哺乳动物和/或人)中的病毒感染、疾病、综合征或病症的方法，其中病毒感染、疾病、综合征或病症受STING激动的影响，选自黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎。
本发明还提供了用于使用式(I)的化合物治疗或改善受试者(包括哺乳动物和/或人)中的病毒感染、疾病、综合征或病症的方法，该病毒感染、疾病、综合征或病症选自黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎。
本发明还涉及本文所述化合物中的任一种在制备药物中的用途，其中该药物经制备用于治疗对其有需要的受试者中的病毒感染、疾病、综合征或病症，该病毒感染、疾病、综合征或病症受STING激动的影响，选自黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎。
本发明还涉及本文所述化合物中的任一种在制备药物中的用途，其中该药物经制备用于治疗对其有需要的受试者中的病毒感染、疾病、综合征或病症，该病毒感染、疾病、综合征或病症选自黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎。
本发明还涉及充当STING选择性激动剂的取代的环状二核苷酸衍生物的制备。
举例说明，本发明为治疗病毒感染、疾病、综合征或病症的方法，该病毒感染、疾病、综合征或病症由STING调制，选自黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎，该方法包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的上述化合物或药物组合物中的任一种。
举例说明，本发明为治疗病毒感染、疾病、综合征或病症的方法，该病毒感染、疾病、综合征或病症选自黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎，该方法包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的上述化合物或药物组合物中的任一种。
在另一个实施方案中，本发明涉及用于治疗病毒感染、疾病、综合征或病症的式(I)的化合物，该病毒感染、疾病、综合征或病症受STING激动的影响，选自黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎。
在另一个实施方案中，本发明涉及包含用于治疗病毒感染、疾病、综合征或病症的式(I)的化合物的组合物，该病毒感染、疾病、综合征或病症选自黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎。
具体实施方式
关于取代基，术语“独立地”是指当可能存在多于一个的取代基时，所述取代基可彼此相同或不同的情况。
术语“烷基”无论是单独使用或作为取代基的部分使用，均是指具有1至8个碳原子的直链或支化的碳链。因此，指定的碳原子数(例如C1-8)独立地指烷基部分中的碳原子数目或指较大的含烷基的取代基的烷基部分中的碳原子数目。在具有多个烷基的取代基如(C1-6烷基)2氨基-中，该二烷基氨基的C1-6烷基可相同或不同。
术语“烷氧基”是指-O-烷基，其中术语“烷基”如上文所定义。
术语“烯基”和“炔基”是指具有2至8个碳原子的直链和支化的碳链，其中烯基链含有至少一个双键并且炔基链含有至少一个三键。
术语“环烷基”是指具有3至14个碳原子的饱和或部分饱和的、单环的或多环的烃环。此类环的示例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和金刚烷基。
术语“杂环基”是指具有3至10个环成员的非芳族单环环系或二环环系，该环成员包含至少1个碳原子和1至4个杂原子，该1至4个杂原子独立地选自N、O和S。具有5至7个成员的非芳族环状环(其中1至2个成员为N)、或具有5至7个成员的非芳族环状环(其中0、1或2个成员为N，并且至多2个成员为O或S，并且至少一个成员必须为N、O或S)包括在术语杂环基内；其中任选地，所述环含有0至1个不饱和键，并且任选地，当所述环具有6或7个成员时，其含有至多2个不饱和键。形成杂环的碳原子环成员可以是完全饱和的或部分饱和的。
术语“杂环基”也包括桥接形成二环的两个5元单环杂环烷基。此类基团不视为是完全芳族的，并且不称它们为杂芳基基团。当杂环是二环时，杂环的两个环是非芳族的并且至少其中一个环含有杂原子环成员。杂环基的示例包括且不限于吡咯啉基(包括2H-吡咯、2-吡咯啉基或3-吡咯啉基)、吡咯烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基和哌嗪基。除非另外指明，否则杂环在可得到稳定结构的任何杂原子或碳原子上与其侧基连接。
术语“芳基”是指具有6至10个碳成员的不饱和芳族单环或二环碳环。芳环的示例包括苯基和萘基。
术语“杂芳基”是指具有5至10个环成员的芳族单环环系或二环环系，该环成员含有碳原子和1至4个杂原子，该杂原子独立地选自N、O和S。具有5或6个成员的芳族环(其中该环由碳原子组成并具有至少一个杂原子成员)包括在术语杂芳基内。合适的杂原子包括氮、氧和硫。在5元环的情况下，杂芳基环优选地含有氮、氧或硫中的一个成员，此外还含有至多3个附加的氮。在6元环的情况下，杂芳基环优选含有1至3个氮原子。对于其中6元环具有3个氮原子的情况，最多2个氮原子是相邻的。杂芳基基团的示例包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、喹啉基、异喹啉基和喹唑啉基。除非另外指明，否则杂芳基在导致稳定结构的任何杂原子或碳原子上与其侧基连接。
术语“卤素”或“卤”是指氟、氯、溴和碘原子。
当术语“烷基”或“芳基”或其前缀词根的任一者出现于取代基(例如，芳基烷基、烷基氨基)的名称中时，该名称应解释为包括上述对“烷基”和“芳基”给予的那些限制。碳原子的指定数目(如C1-C6)独立地指烷基部分、芳基部分中或其中烷基以其前缀词根出现的较大取代基的烷基部分中的碳原子的数目。对于烷基和烷氧基取代基，碳原子的指定数目包括所规定的给定范围内的所有独立成员。例如，C1-6烷基将单独地包括甲基、乙基、丙基、丁基、戊基和己基，以及它们的子组合(例如，C1-2、C1-3、C1-4、C1-5、C2-6、C3-6、C4-6、C5-6、C2-5等)。
一般来讲，在本公开全部内容中使用的标准命名法下，指定侧链的终端部分首先描述，随后是朝向连接点的邻接官能团。因此，例如，“C1-C6烷基羰基”取代基是指具有下式的基团：
在立构中心处的术语“R”指明立构中心仅具有R-构型，如本领域中所定义；同样，术语“S”意指立构中心仅具有S-构型。如本文所用，在立构中心处的术语“*R”或“*S”用于指明立构中心具有纯的但未知的构型。如本文所用，术语“RS”是指以R-构型和S-构型的混合物存在的立构中心。类似地，术语“*RS”或“*SR”是指以R-构型和S-构型的混合物存在并且相对于分子内另一个立构中心具有未知构型的立构中心。
如本文所用，术语“*”用于指明可以纯的但未知的构型或者以R-构型和S-构型的混合物存在的立构中心。
未划有立体键标号的含有一个立构中心的化合物是两种对映体的混合物。含有两个未划有立体键标号的立构中心的化合物为四种非对映体的混合物。具有均标记“RS”且划有立体键标号的两个立构中心的化合物为具有如所划的相对立体化学性的二-成分混合物。具有均标记“*RS”且划有立体键标号的两个立构中心的化合物为具有未知的相对立体化学性的二-成分混合物。未划有立体键标号的未标记立构中心为R-构型和S-构型的混合物。对于划有立体键标号的未标记立构中心，绝对立体化学性是如所叙述的。
除非另外指明，否则认为分子中特定位置处的任何取代基或变量的定义独立于其在该分子中其它位置处的定义。应当理解，本发明的化合物上的取代基和取代模式可由本领域的普通技术人员选择，以提供化学上稳定且可通过本领域已知的技术及本文所示的那些方法容易合成的化合物。
术语“受试者”是指已经是治疗、观察或实验的对象的动物，优选指哺乳动物，最优选指人。
术语“治疗有效量”指包括本发明化合物在内的活性化合物或药剂的量，该量可引起研究者、兽医、医生或其它医疗人员所追求的组织系统、动物或人的生物学或医学响应，这包括减轻或部分减轻受治疗的疾病、综合征、病症或障碍的症状。
术语“组合物”指包括治疗有效量的规定成分的产品，以及直接或间接地由规定量的规定成分的组合产生的任何产品。
术语“STING激动剂”旨在涵盖通过与STING结合并诱导下游信号转导而与STING相互作用的化合物，其特征在于与STING功能相关联的分子的激活。这包括STING、IRF3和/或NF-KB的直接磷酸化，并且还可包括STAT6。STING途径激活引起I型干扰素(主要为IFN-α和IFN-β)的产生和干扰素刺激基因的表达的增加(Chen H等人，“Activation of STAT6 bySTING Is Critical for Antiviral Innate Immunity”.Cell.2011，第14卷：433-446；以及Liu S-Y等人，“Systematic identification of type I and type II interferon-induced antiviral factors”.Proc.Natl.Acad.Sci.2012：第109卷，4239-4244)。
术语“STING调制的”用于指直接或经由STING途径受STING的影响的病症，包括但不限于病毒感染、疾病或病症，诸如黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎感染。
如本文所用，除非另有说明，否则术语“由STING调制的障碍”应意指任何病毒感染、疾病、障碍或病症，其特征在于用STING激动剂治疗后其特征性症状中的至少一种得到缓解或消除。合适的示例包括但不限于黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎。
如本文所用，除非另有说明，否则术语“影响”或“受影响的”(当涉及受STING激动的影响的病毒感染、疾病、综合征、病症或障碍时)包括所述病毒感染、疾病、综合征、病症或障碍的一种或多种症状或临床表现的频率和/或严重性的降低；并且/或者包括防止所述病毒感染、疾病、综合征、病症或障碍的一种或多种症状或临床表现的发展或者所述病毒感染、疾病、病症、综合征或障碍的发展。
本发明的化合物在用于治疗或改善受STING激动的影响的病毒感染、疾病、综合征、病症或障碍的方法中为有用的。此类方法包括下列步骤、由下列步骤组成和/或基本上由下列步骤组成：给受试者施用治疗有效量的式(I)的化合物或者其对映体、非对映体、溶剂化物或药学上可接受的盐，所述受试者包括需要此类治疗、缓解和/或预防的动物、哺乳动物和人类。
具体地，式(I)的化合物或者其对映体、非对映体、溶剂化物或药学上可接受的盐形式可用于治疗或改善疾病、综合征、病症或障碍，诸如黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎。
更具体地，式(I)的化合物或者其对映体、非对映体、溶剂化物或药学上可接受的盐形式可用于治疗或改善黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎，包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的如本文所定义的式(I)的化合物或或其对映体、非对映体、溶剂化物或药学上可接受的盐形式。
本文所公开的一些实施方案涉及改善和/或治疗病毒感染的方法，该病毒感染包括由嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)(诸如乙型肝炎病毒或HBV)引起的感染。该方法可包括向被鉴定为患有病毒感染的受试者施用有效量的一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐形式，或者包含一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐形式的药物组合物。
本文所公开的其它实施方案涉及一种改善和/或治疗病毒感染的方法，该方法可包括将感染病毒的细胞与有效量的本文所述的一种或多种化合物(例如，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐形式)，或者包含本文所述的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物接触。本文所述的其它实施方案涉及在制造用于改善和/或治疗病毒感染的药物中使用一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐形式。
本文所述的其它实施方案涉及可用于改善和/或治疗病毒感染的一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，或者包含一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐形式的药物组合物。本文所公开的一些实施方案涉及抑制病毒复制的方法，该方法可包括将感染病毒的细胞与有效量的一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐形式，或者包含本文所述的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐形式的药物组合物接触。
本文所述的其它实施方案涉及在制造用于抑制病毒复制的药物中使用一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐形式。本文所述的其它实施方案涉及可用于抑制病毒复制的本文所述的一种或多种化合物(例如，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐形式)，或者包含本文所述的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐形式的药物组合物。
在一些实施方案中，病毒感染可为乙型肝炎病毒感染。该方法可包括向被鉴定为患有HBV受试者施用有效量的一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐形式，或者包含一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐形式的药物组合物。
本文所公开的其它实施方案涉及一种改善和/或治疗病毒感染的方法，该方法可包括将感染HBV病毒的细胞与有效量的一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐形式，或者包含一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐形式的药物组合物接触。本文所述的其它实施方案涉及在制造用于改善和/或治疗HBV的药物中使用一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐形式。
本文所述的其它实施方案涉及可用于改善和/或治疗HBV的一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，或者包含一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐形式的药物组合物。本文所公开的一些实施方案涉及一种抑制HBV复制的方法，该方法可包括将感染病毒的细胞与有效量的一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐形式，或者包含一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物接触。
本文所述的其它实施方案涉及在制造用于抑制HBV复制的药物中使用一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。本文所述的其它实施方案涉及可用于抑制HBV复制的一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，或者包含一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐形式的药物组合物。
本发明的实施方案包括如本文所定义的式(I)的化合物或者其对映体、非对映体、溶剂化物或药学上可接受的盐形式，其中选自本文所定义的变量中的一者或多者(例如B2、X2、R2a、R2b、R2c、Z-M-Y、Y1-M1-Z1、B1、X1、R1a、R1b、R1c)的取代基被独立地选择为来自下表1的列表中所列举的那些取代基中的任何单个取代基或取代基的任何子集。
表1.
本发明的一个实施方案涉及式(Ia)的化合物
其中
R1a独立地选自氢；羟基；氟；任选独立地被一至七个卤素取代基或甲氧基取代的C1-3烷氧基；C3-6烯氧基；C2-6炔氧基；羟基(C1-3)烷氧基；或者任选独立地被一至三个选自氟、氯、溴、碘或羟基的取代基取代的C1-3烷基；
R1b独立地选自氢、氟或羟基；前提条件是当R1b为氟时，R1a为氢或氟；
R1c独立地选自氢或甲基；
R2a独立地选自氢；羟基；氟；任选独立地被一至七个卤素取代基或甲氧基取代的C1-3烷氧基；C3-6烯氧基；C2-6炔氧基；羟基(C1-3)烷氧基；或者任选独立地被一至三个选自氟、氯、溴、碘或羟基的取代基取代的C1-3烷基；并且R3为氢；
或者，R2a为-O-并且R2c为-CH2-；使得R2a、R2c以及它们所连接的原子形成5元环；
R2b独立地选自氢、氟或羟基；前提条件是当R2b为氟时，R2a为氢或氟；
R2c独立地选自氢、氟、CH3或CH2F；
X1和X2独立地选自O、S和CH2；
Y和Y1各自独立地不存在或者选自O或NH；
Z和Z1独立地选自O和NH；
M和M1中的一者为
并且M和M1中的另一者独立地选自
使得当M为
时，Y和Z中的一者为NH，并且Y和Z中的另一者为O；
并且，使得当M1为
时，Y1和Z1中的一者为NH，并且Y1和Z1中的另一者为O；
R4独立地选自羟基、甲基、BH3和-SR5；其中R5独立地选自氢、-CH2O(O)R6、-CH2OC(O)OR6、-CH2CH2SCi(O)R6和-CH2CH2S-SCH2R6；
R6独立地选自C6-10芳基，杂芳基，杂环烷基，C3-12环烷基，以及任选独立地被一至五个氟或羟基取代基取代的C1-20烷基，C1-6烷基，C6-10芳基或C3-12环烷基；
或者其对映体、非对映体或药学上可接受的盐形式；
前提条件是当B1和B2各自为b6，并且Z-M-Y为OS(O2)NH，并且Y1-M1-Z1为OP(O)(OH)O或OP(O)(SH)O时，则R1a不是OH。
本发明的另一个实施方案涉及选自化合物1至55的式(I)的化合物，
或其药学上可接受的盐形式。
对于在医学上的使用，式(I)的化合物的盐是指无毒性的“药学上可接受的盐。”然而，其它盐也可用于制备式(I)的化合物或其药学上可接受的盐形式。式(I)的化合物的合适药学上可接受的盐包括酸加成盐，该酸加成盐可例如通过将该化合物的溶液与诸如盐酸、硫酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、乙酸、苯甲酸、柠檬酸、酒石酸、碳酸或磷酸的药学上可接受的酸的溶液混合而形成。此外，如果式(I)的化合物含有酸性部分，则其合适的药学上可接受的盐可包括碱金属盐，诸如钠盐或钾盐；碱土金属盐，诸如钙盐或镁盐；以及与合适的有机配体形成的盐，诸如季铵盐。因此，代表性药学上可接受的盐包括乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、依地酸钙、右旋樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、克拉维酸盐、柠檬酸盐、二盐酸盐、依地酸盐、乙二磺酸盐、丙酸酯十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、对α-羟乙酰氨基苯砷酸盐、己基间苯二酚盐、海巴明、氢溴酸盐、盐酸盐、羟萘甲酸盐、碘化物、异硫代硫酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基溴化物、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、粘液酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、N-甲基葡糖胺铵盐、油酸盐、双羟萘酸盐(恩波酸盐)、棕榈酸盐、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、硫酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、茶氯酸盐、甲苯磺酸盐、三乙基碘化物和戊酸盐。
可用于制备药学上可接受的盐的代表性酸和碱包括酸，包括乙酸、2,2-二氯乙酸、酰化的氨基酸、己二酸、藻酸、抗坏血酸、L-天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、(+)-樟脑酸、樟脑磺酸、(+)-(1S)-樟脑-10-磺酸、癸酸、己酸、辛酸、肉桂酸、柠檬酸、环拉酸、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、2-羟基-乙磺酸、甲酸、富马酸、半乳糖二酸、龙胆酸、葡庚糖酸、D-葡糖酸、D-葡萄糖醛酸、L-谷氨酸、α-氧代-戊二酸、乙醇酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、(+)-L-乳酸、(±)-DL-乳酸、乳糖酸、马来酸、(-)-L-苹果酸、丙二酸、(±)-DL-扁桃酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、萘-1,5-二磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟酸、硝酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、扑酸、磷酸、L-焦谷氨酸、水杨酸、4-氨基-水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、鞣酸、(+)-L-酒石酸、硫氰酸、对甲苯磺酸和十一碳烯酸；以及碱，包括氨、L-精氨酸、苯乙苄胺、苄星、氢氧化钙、胆碱、丹醇、二乙醇胺、二乙胺、2-(二乙基氨基)-乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-甲基-葡糖胺、海巴明、1H-咪唑、L-赖氨酸、氢氧化镁、4-(2-羟乙基)-吗啉、哌嗪、氢氧化钾、1-(2-羟乙基)-吡咯烷、氢氧化钠、三乙醇胺、氨基丁三醇和氢氧化锌。
本发明的实施方案包括式(I)的化合物的前药。一般来讲，这种前药会是化合物的官能衍生物，其在体内可容易地转化成所需的化合物。因此，在本发明的治疗或预防实施方案的方法中，术语“施用”涵盖了用具体公开的化合物或未具体公开的化合物治疗或预防所述的各种疾病、病症、综合征和障碍，但所述未具体公开的化合物在施用至患者后会于体内转化成指定化合物。例如，在“Design of Prodrugs”，H.Bundgaard编辑，Elsevier,1985中描述了用于选择和制备合适的前药衍生物的常规程序。
根据本发明实施方案的化合物具有至少一个手性中心时，它们可相应地作为对映体存在。如果化合物具有两个或更多个手性中心，则它们另外可以非对映体形式存在。应当理解，所有的此类异构体及其混合物涵盖在本发明的范围内。此外，化合物的某些结晶形式可作为多晶型物存在，并因此也旨在包括在本发明内。此外，某些化合物可与水形成溶剂化物(即水合物)或与普通有机溶剂形成溶剂化物，并且这类溶剂化物也旨在涵盖于本发明的范围内。技术人员将理解，本文所使用的术语化合物旨在包括溶剂化的式(I)的化合物。
当用于制备根据本发明某些实施方案的化合物的方法产生立体异构体的混合物时，这些异构体可通过常规技术如制备性色谱法分离。所述化合物可以外消旋形式制备，或者可通过对映体特异性合成或通过拆分来制备单独的对映体。例如，可通过标准技术，诸如通过与光学活性酸(诸如(-)-二对甲苯酰-d-酒石酸和/或(+)-二对甲苯酰-l-酒石酸)形成盐来形成非对映对，然后分级结晶并再生游离碱，来将化合物拆分成它们的组分对映体。该化合物也可通过形成非对映酯或酰胺，然后进行色谱分离并除去手性助剂来拆分。另选地，可使用手性HPLC柱拆分所述化合物。
本发明的一个实施方案涉及一种组合物，包括药物组合物，其包含式(I)的化合物的(+)-对映体、由其组成和/或基本上由其组成，其中所述组合物基本上不含所述化合物的(-)-异构体。在本发明的上下文中，基本上不含意指少于约25％，优选少于约10％，更优选少于约5％，甚至更优选少于约2％，并且甚至更优选少于约1％的(-)-异构体，其计算方式如下：
本发明的另一个实施方案为一种组合物，包括药物组合物，其包含式(I)的化合物的(-)-对映体、由其组成和/或基本上由其组成，其中所述组合物基本上不含所述化合物的(+)-异构体。在本发明的上下文中，基本上不含意指少于约25％，优选少于约10％，更优选少于约5％，甚至更优选少于约2％，并且甚至更优选少于约1％的(+)-异构体，其计算方式如下：
在用于制备本发明的各个实施方案的化合物的方法中的任一种期间，可能有必要和/或期望保护所关注的分子中的任一个上的敏感性或反应性基团。这可使用常规保护基团实现，诸如在以下文献中描述的那些：Protective Groups in Organic Chemistry，第二版，J.F.W.McOmie,Plenum Press,1973；T.W.Greene和P.G.M.Wuts，Protective Groups inOrganic Synthesis,John Wiley&Sons,1991；和T.W.Greene和P.G.M.Wuts，ProtectiveGroups in Organic Synthesis，第三版，John Wiley&Sons,1999。保护基团可在方便的后续阶段使用本领域已知的方法除去。
尽管本发明实施方案的化合物(包括它们的药学上可接受的盐和药学上可接受的溶剂化物)可单独施用，但它们一般与药学上可接受的载体、药学上可接受的赋形剂和/或药学上可接受的稀释剂(根据施用途径和标准药物或兽医实践而选择)混合施用。因此，本发明的具体实施方案涉及药物组合物和兽医用组合物，其包含式(I)的化合物和至少一种药学上可接受的载体、药学上可接受的赋形剂和/或药学上可接受的稀释剂。
以举例的方式，在本发明的实施方案的药物组合物中，可将式(I)的化合物与任何合适的一种或多种粘结剂、一种或多种润滑剂、一种或多种助悬剂、一种或多种包衣剂、一种或多种增溶剂、以及它们的组合混合。
视情况而定，含有本发明化合物的固体口服剂型(如片剂或胶囊剂)可一次以至少一种剂型施用。也可按持续释放制剂的方式施用化合物。
其中可施用本发明化合物的附加口服剂型包括酏剂、溶液剂、糖浆和混悬剂；每种剂型任选地含有调味剂和着色剂。
另选地，式(I)的化合物可通过吸入(气管内或鼻内)施用或者以栓剂或阴道栓剂的形式施用，或者它们可以洗剂、溶液、霜膏、软膏剂或扑粉的形式局部施用。例如，可将它们掺入包含聚乙二醇或液体石蜡的水乳液、由其组成和/或基本上由其组成的霜膏中。它们也可以霜膏的介于约1重量％和约10重量％之间的浓度掺入软膏剂中，该软膏剂包含蜡或软石蜡基以及任何稳定剂和防腐剂(有可能需要)、由其组成和/或基本上由其组成。替代的施用手段包括通过使用皮肤贴剂或透皮贴剂来透皮施用。
本发明的药物组合物(以及单独的本发明的化合物)也可通过非肠道例如海绵体内、静脉内、肌内、皮下、皮内或鞘内注射。在这种情况下，该组合物还将包括合适的载体、合适的赋形剂和合适的稀释剂中的至少一种。
对于非肠道施用，本发明的药物组合物最好以无菌水溶液的形式使用，其可含有其它物质，例如足够的盐和单糖以制备与血液等渗的溶液。
除了上述治疗癌症的施用途径之外，药物组合物还可适于通过瘤内注射或瘤周注射施用。以这种方式激活免疫系统以杀死远程位点处的肿瘤通常称为异位效应，并且已在具有多种治疗模式的动物中得到证明(van der Jeught等人，Oncotarget,2015,6(3),1359-1381)。局部施用或瘤内施用或瘤周施用的另一个优点是能够在低得多的剂量下获得同等功效，从而最小化或消除在高得多的剂量下可观察到的不良事件(Marabelle,A.等人，Clinical Cancer Research,2014,20(7),1747-1756)。
对于颊面或舌下施用，本发明的药物组合物可以片剂或锭剂形式施用，所述片剂或锭剂可以常规方式配制。
以另一个示例的方式，含有式(I)的化合物中的至少一种作为活性成分的药物组合物可根据常规药物混合技术，通过将一种或多种化合物与药学上可接受的载体、药学上可接受的稀释剂和/或药学上可接受的赋形剂混合而制备。所述载体、赋形剂和稀释剂可采用各种各样的形式，这取决于所需施用途径(例如口服、非肠道施用等)。因此对于诸如混悬剂、糖浆、酏剂和溶液剂的液体口服制剂，合适的载体、赋形剂和稀释剂包括水、二元醇、油、醇类、调味剂、防腐剂、稳定剂、着色剂等；对于诸如散剂、胶囊剂和片剂的固体口服制剂，合适的载体、赋形剂和稀释剂包括淀粉、糖、稀释剂、造粒剂、润滑剂、粘结剂、崩解剂等。固体口服制剂也可任选地用诸如糖的物质包衣，或包肠溶衣，以便调节吸收和崩解的主要部位。对于非肠道施用，载体、赋形剂和稀释剂通常包括无菌水，并且可加入其它成分以增加组合物的溶解度和可保存性。注射用混悬剂或溶液剂也可使用含水载体与适当的添加剂(如增溶剂和防腐剂)一起制备。
在平均(70kg)的人的每日约1至约4次的给药方案中，治疗有效量的式(I)的化合物或其药物组合物包含约0.01mg至约3000mg，或其中的任何特定量或范围，具体地约0.05mg至约1000mg，或其中的任何特定量或范围，或者更具体地约0.05mg至约250mg，或其中的任何特定量或范围的剂量范围的活性成分；但是，对于本领域的技术人员显而易见的是：式(I)的化合物的治疗有效量将随着进行治疗的疾病、综合征、病症和障碍而变化。
对于口服施用，药物组合物优选以含有约1.0、约10、约50、约100、约150、约200、约250和约500毫克式(I)的化合物的片剂形式提供。
有利的是，式(I)的化合物可以单次日剂量施用，或者每日总剂量可以每日两次、三次和四次的分剂量施用。
待施用的式(I)的化合物的最佳剂量可容易地确定，并且将随着所使用的特定化合物、施用模式、制剂强度以及病毒感染、疾病、综合征、病症或障碍的进展而变化。此外，与待治疗的特定受试者相关联的因素，包括受试者性别、年龄、体重、饮食和施用时间，将导致需要调节剂量以达到适当的治疗水平和所需的治疗效果。因此，上述剂量为一般情况的示例。当然，可能会存在其中较高或较低剂量范围是有益的个别情况，并且这类情况也在本发明的范围内。
式(I)的化合物可以在上述组合物和给药方案中的任一者中施用，或者借助于本领域已确立的那些组合物和给药方案施用，只要式(I)的化合物的使用是需要它的受试者所要求的。
作为STING蛋白激动剂，式(I)的化合物在用于治疗或预防受试者(包括动物、哺乳动物和人)中病毒感染、疾病、综合征、病症或障碍的方法中为有用的，其中该病毒感染、疾病、综合征、病症或障碍受STING蛋白的调制(包括激动)的影响。此类方法包括以下步骤、由以下步骤组成和/或基本上由以下步骤组成：向受试者施用治疗有效量的式(I)的化合物、盐或溶剂化物，该受试者包括需要此类治疗或预防的动物、哺乳动物和人。
在一个实施方案中，本发明涉及用于治疗癌症、癌症疾病和病症或病毒感染的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐形式。
式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物可具有潜在有益的抗肿瘤效果的癌症疾病和病症的示例包括但不限于肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头癌、颈癌、子宫癌、卵巢癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、食道癌、小肠癌、肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、尿道癌、前列腺癌、阴茎癌、睾丸癌、输尿管癌、膀胱癌、肾癌或肝癌；直肠癌；肛门区域癌；输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、肾盂癌、肾细胞癌；软组织肉瘤；粘液瘤；横纹肌瘤；纤维瘤；脂肪瘤；畸胎瘤；胆管癌；肝母细胞瘤；血管肉瘤；血管瘤；肝细胞瘤；纤维肉瘤；软骨肉瘤；骨髓瘤；慢性或急性白血病；淋巴细胞性淋巴瘤；原发中枢神经系统淋巴瘤；中枢神经系统肿瘤；脊柱轴肿瘤；鳞状细胞癌；滑膜肉瘤；恶性胸膜间皮瘤；脑干胶质瘤；垂体腺瘤；支气管腺瘤；软骨瘤样错构瘤(chondromatous hanlartoma)；inesothelioma；霍奇金氏病或上述癌症中的一种或多种的组合。合适地，本发明涉及一种用于治疗或减轻癌症严重性的方法，该癌症选自脑(神经胶质瘤)、胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、Bannayan-Zonana综合征、考登病、小脑发育不良性节细胞瘤、肾母细胞瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、头颈部、肾、肝、黑素瘤、卵巢、胰腺、腺癌、导管腺癌(ductal madenocarcinoma)、腺鳞癌、腺泡细胞癌、胰高血糖素瘤、胰岛素瘤、前列腺、肉瘤、骨肉瘤、骨巨细胞瘤、甲状腺、淋巴细胞性T细胞白血病、慢性粒细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、急性粒细胞白血病、慢性中性粒细胞白血病、急性淋巴细胞性T细胞白血病、浆细胞瘤、免疫母细胞性大细胞白血病、套细胞白血病、多发性骨髓瘤、巨核细胞白血病、多发性骨髓瘤、急性巨核细胞白血病、箴粒细胞白血病、红白血病、恶性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、淋巴母细胞性T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、神经母细胞瘤、膀胱癌、尿路上皮癌、外阴癌、宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、间皮瘤、食道癌、唾液腺癌、肝细胞癌、胃癌、鼻咽癌、颊癌、口腔癌、GIST(胃肠道间质瘤)和睾丸癌。
在另一个实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物或其药学上可接受的盐形式，其用于治疗受选自以下的STING激动的影响的障碍：黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、纤维肉瘤和乙型肝炎。
所公开的式(I)的化合物可用于与一种或多种可用于治疗HBV感染的附加化合物组合。这些附加化合物可包括其它所公开的化合物和/或已知治疗、预防、或减轻HBV感染的症状或效应的化合物。此类化合物包括但不限于HBV聚合酶抑制剂、干扰素、病毒侵入抑制剂、病毒成熟抑制剂、文献描述的衣壳组装调制器、逆转录酶抑制剂、免疫调节剂、TLR-激动剂、以及具有影响HBV生命周期或影响HBV感染后果的不同或未知机制的其它试剂。
在非限制性示例中，所公开的化合物可与选自以下的一种或多种药物(或它们的盐)联合使用：
HBV逆转录酶抑制剂，以及DNA和RNA聚合酶抑制剂，包括但不限于：拉米夫定(3TC、Zeffix、Heptovir、Epivir和Epivir-HBV)、恩替卡韦(Baraclude、Entavir)、阿德福韦酯(Hepsara、Preveon、双-POMPMEA)、富马酸替诺福韦酯(Viread、TDF或PMPA)；
干扰素，包括但不限于干扰素α(IFN-α)、干扰素β(IFN-β)、干扰素λ(IFN-λ)和干扰素γ(IFN-γ)；
病毒侵入抑制剂；
病毒成熟抑制剂；
衣壳组装调节剂，诸如但不限于BAY 41-4109；
逆转录酶抑制剂；
免疫调节剂，诸如TLR-激动剂；以及
不同或未知机制的试剂，诸如但不限于AT-61((E)-N-(1-氯-3-氧代基-1-苯基-3-(哌啶-1-基)丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺)、AT-130((E)-N-(1-溴-1-(2-甲氧基苯基)-3-氧代基-3-(哌啶-1-基)丙-1-烯-2-基)-4-硝基苯甲酰胺)及其类似物。
在一个实施方案中，附加治疗剂是干扰素。术语“干扰素”或“IFN”是指抑制病毒复制和细胞增殖以及调节免疫应答的高度同源种特异性的蛋白质家族的任何成员。例如，人干扰素被分组成三类：I型，包括干扰素α(IFN-α)、干扰素β(IFN-β)和干扰素ω(IFN-ω)；II型，包括干扰素γ(IFN-γ)；以及III型，包括干扰素λ(IFN-λ)。如本文所用，术语“干扰素”涵盖已开发并可商购获得的重组形式的干扰素。如本文所用，术语“干扰素”还涵盖亚型干扰素，诸如化学改性或突变的干扰素。化学改性的干扰素可包括聚乙二醇化干扰素和糖基化干扰素。干扰素的示例还包括但不限于干扰素-α-2a、干扰素-α-2b、干扰素-α-n1、干扰素-β-1a、干扰素-β-1b、干扰素-λ-1、干扰素-λ-2和干扰素-λ-3。聚乙二醇化干扰素的示例包括聚乙二醇化干扰素-α-2a和乙二醇化干扰素α-2b。
因此，在一个实施方案中，式(I)的化合物可与选自以下的干扰素联合施用：干扰素α(IFN-α)、干扰素β(IFN-β)、干扰素λ(IFN-λ)和干扰素γ(IFN-γ)。在一个具体的实施方案中，干扰素为干扰素-α-2a、干扰素-α-2b或干扰素-α-n1。在另一个具体的实施方案中，干扰素-α-2a或干扰素-α-2b是聚乙二醇化的。在一个优选的实施方案中，干扰素-α-2a是聚乙二醇化干扰素-α-2a(PEGASYS)。在另一个实施方案中，附加治疗剂选自免疫调节剂或免疫刺激剂治疗剂，其包括属于干扰素类的生物制剂。
此外，附加治疗剂可为破坏一种或多种其它原发性病毒蛋白或HBV复制或持久生存所需的宿主蛋白的功能的试剂。
在另一个实施方案中，附加治疗剂为阻断病毒侵入或成熟或者靶定HBV聚合酶诸如核苷或核苷酸或非核苷类聚合酶抑制剂的抗病毒剂。在联合治疗的另一个实施方案中，逆转录酶抑制剂或DNA或RNA聚合酶抑制剂为齐多夫定、地达诺新、扎西他滨、ddA、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韦、恩曲他滨、恩替卡韦、阿立他滨、阿替韦拉平(Atevirapine)、三氮唑核苷、阿昔洛韦、泛昔洛韦、伐昔洛韦、更昔洛韦、缬更昔洛韦、替诺福韦、阿德福韦、PMPA、西多福韦、依非韦伦、奈韦拉平、地拉夫定或依曲韦林。
在一个实施方案中，附加治疗剂为诱导天然限制性免疫应答的免疫调节剂，从而导致针对无关病毒诱导免疫应答。换句话讲，免疫调节剂可影响抗原递呈细胞的成熟、T细胞的增殖和细胞因子释放(例如，IL-12、IL-18、IFN-α、IFN-β和IFN–γ以及TNF-α等等)。
在另一个实施方案中，附加治疗剂为TLR调节剂或TLR激动剂，诸如TLR-7激动剂或TLR-9激动剂。在联合治疗的另一个实施方案中，TLR-7激动剂选自SM360320(9-苄基-8-羟基-2-(2-甲氧基-乙氧基)腺嘌呤)和AZD 8848([3-({[3-(6-氨基-2-丁氧基-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)丙基][3-(4-吗啉基)丙基]氨基}甲基)苯基]乙酸甲酯)。
在本文提供的方法中的任一种中，该方法还可包括向个体施用至少一种HBV疫苗、核苷HBV抑制剂、干扰素或它们的任何组合。在一个实施方案中，HBV疫苗选自RECOMBIVAXHB、ENGERIX-B、ELOVAC B、GENEVAC-B、或SHANVAC B中的至少一种。
在一个实施方案中，本文所述的方法还包括施用至少一种选自以下的附加治疗剂：核苷酸/核苷类似物、侵入抑制剂、融合抑制剂、以及这些或其它抗病毒机制的任何组合。
在另一方面，本文提供了一种在对其有需要的个体中治疗HBV感染的方法，该方法包括通过如下方式降低HBV病毒载量：向个体单独施用治疗有效量的所公开化合物或与逆转录酶抑制剂联合施用；并且还向个体施用治疗有效量的HBV疫苗；逆转录酶抑制剂可为以下中的至少一种：齐多夫定、地达诺新、扎西他滨、ddA、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韦、恩曲他滨、恩替卡韦、阿立他滨、阿替韦拉平(Atevirapine)、三氮唑核苷、阿昔洛韦、泛昔洛韦、伐昔洛韦、更昔洛韦、缬更昔洛韦、替诺福韦、阿德福韦、PMPA、西多福韦、依非韦伦、奈韦拉平、地拉夫定或依曲韦林。
在另一方面，本文提供了一种在对其有需要的个体中治疗HBV感染的方法，该方法包括通过如下方式降低HBV病毒载量：向个体单独施用治疗有效量的所公开化合物或与靶向HBV核酸的反义寡核苷酸或RNA干扰剂联合施用；并且还向个体施用治疗有效量的HBV疫苗；反义寡核苷酸或RNA干扰剂所具有的与靶HBV核酸的互补性足以抑制病毒基因组复制、病毒RNA转录、或病毒蛋白翻译。
在另一个实施方案中，所公开的化合物和至少一种附加治疗剂是共配制的。在另一个实施方案中，所公开的化合物和至少一种附加治疗剂是共施用的。对于本文所述的任何联合治疗，可例如使用诸如以下合适的方法计算协同效应：Sigmoid-Emax公式(Holford&Scheiner,19981,Clin.Pharmacokinet.6:429-453)、Loewe相加模型公式(Loewe&Muischnek,1926,Arch.Exp.Pathol Pharmacol.114:313-326)和中值效应公式(Chou&Talalay,1984,Adv.Enzyme Regul.22:27-55)。可将以上提及的每个公式应用于实验数据来生成对应的图，以助于评估药物联合效应。与以上提及公式相关联的对应曲线图分别是浓度-效应曲线、等效应曲线图以及联合指数曲线。
在施用本文提供的联合治疗的方法中任一种的一个实施方案中，还方法还可包括监测或检测受治疗者的HBV病毒载量，其中该方法进行一定的时间段，包括直至HBV病毒不可检出的时刻。
所公开的式(I)的化合物可用于与一种或多种可用于治疗癌症的附加化合物联合。这些附加化合物可包括其它所公开的化合物和/或已知用于治疗、预防或减轻所述癌症的症状或效应的化合物。
在一个实施方案中，用激活剂或抑制剂靶向STING可能是用于治疗疾病和病症的有希望的方法，在这些疾病和病症中，对I型IFN途径的调节是有益的，包括炎性疾病、变应性疾病和自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症、癌前综合征以及用作疫苗佐剂(Dubensky等人，Therapeutic Advances in Vaccines1(2013)131-143)。
在一个实施方案中，本发明的化合物可用作采用抗癌疫苗的治疗策略中的佐剂。在一个实施方案中，抗癌疫苗包括灭活或减毒的细菌或病毒，其包含感兴趣的抗原、纯化的抗原、经工程化以表达和分泌感兴趣的抗原的活病毒递送载体。递送载体还可包括表达抗原的减毒细菌递送载体。
本发明的另一个实施方案包括通过用癌症疫苗激活免疫系统来治疗或减轻癌症严重性的方法，该癌症疫苗包括但不限于抗原疫苗、全细胞疫苗、树突状细胞激活疫苗、DNA疫苗、卡介苗(BCG)疫苗、Sipuleucel-T(Provenge)、Talimogene laherparepvec(T-Vec；ImlygicTM)、基于溶瘤病毒的疫苗和基于腺病毒的疫苗。
可与通式(I)的化合物或其药学上可接受的盐形式联合使用的抗原和佐剂包括B7共刺激分子、白介素-2、干扰素-y、GM-CSF、CTLA-4拮抗剂、OX-40/0X-40配体、CD40/CD40配体、沙莫司亭、左旋咪唑、牛痘病毒、卡介苗(BCG)、脂质体、明矾、弗氏完全或不完全佐剂、脱毒内毒素、矿物油、表面活性物质(诸如脂卵磷脂、pluronic多元醇、聚阴离子、肽以及油或烃乳液)。可加入佐剂诸如氢氧化铝或磷酸铝，以增加疫苗触发、增强或延长免疫应答的能力。单独使用或与所述组合物联合使用的附加材料，诸如细胞因子、趋化因子和细菌核酸序列如CpG、toll样受体(TLR)9激动剂以及用于TLR 2、TLR 4、TLR 5、TLR 7、TLR 8、TLR 9的附加激动剂，包括脂蛋白、LPS、单磷酰脂质A、脂磷壁酸、咪喹莫特、瑞喹莫德以及此外视黄酸诱导型基因I(RIG-I)激动剂诸如聚肌胞苷酸，也是潜在的佐剂。
CLTA-4途径和PD-I途径是免疫应答的重要负调节子。活化的T细胞上调CTLA-4，其结合在抗原递呈细胞上并抑制T细胞刺激、IL-2基因表达和T细胞增殖；已在结肠癌、转移性前列腺癌和转移性黑素瘤的小鼠模型中观察到这些抗肿瘤效应。PD-1结合活性T细胞并抑制T细胞活化；PD-1拮抗剂也已展示出抗肿瘤效应。
可与本文所公开的式(I)或式(la)的化合物或其药学上可接受的盐形式联合使用的CTLA-4和PD-1途径拮抗剂包括易普利姆玛、替西木单抗、纳武单抗、派姆单抗、CT-OII、AMP-224和MDX-II06。
“PD-1拮抗剂”或“PD-1途径拮抗剂”意指阻断在癌细胞上表达的PD-L1与在免疫细胞(T细胞、B细胞或NKT细胞)上表达的PD-1结合，并且优选地还阻断在癌细胞上表达的PD-L2与免疫细胞表达的PD-1结合的任何化合物或生物分子。针对PD-1及其配体的替代名称或同义词包括：针对PD-1为PDCD I、PD1、CD279和SLEB2；针对PD-L1为PDCDILI、PDL1、B7HI、B7-4、CD274和B7-H；以及针对PD-L2为PDCD IL2、PDL2、B7-DC、Btdc和CD273。在其中治疗人类个体的本公开的治疗方法、药物和用途中的任一者中，PD-1拮抗剂阻断人PD-L1与人PD-1的结合，并且优选地阻断人PD-L1和PD-L2两者与人PD-1的结合。人PD-1氨基酸序列可在NCBI基因座编号：NP_005009中找到。人PD-L1和PD-L2氨基酸序列可分别在NCBI基因座编号：NP_054862和NP_0795 I5中找到。
人PD-1氨基酸序列可在NCBI基因座编号：NP_305009中找到。人PD-L1和PD-L2氨基酸序列可分别在NCBI基因座编号：NP_054862和NP_1795I5中找到。
可用于本公开的治疗方法、药物和用途中的任一者中的PD-1拮抗剂包括单克隆抗体(mAh)或其抗原结合片段，其特异性地结合PD-1或PD-L1，并且优选地特异性地结合人PD-1或人PD-L1。mAb可以是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体，并且可包含人恒定区。在一些实施方案中，人恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4恒定区，并且在优选的实施方案中，人恒定区为IgG1或IgG4恒定区。在一些实施方案中，抗原结合片段选自Fab、Fab'-SH、F(ab')2、scFv和Fv片段。
结合人PD-L1并且可用于本公开的治疗方法、药物和用途中的mAb的示例在PCT国际专利申请W02013/019906和W02010/077634 A1以及美国专利US8383796中有所描述。在本公开的治疗方法、药物和用途中可用作PD-1拮抗剂的特异性抗人PD-L1 mAb包括MPDL3280A、BMS-936559、MEDI4736、MSB0010718C，以及包含分别为W02013/019906的SEQ IDN0:24和SEQ ID N0:21的重链可变区和轻链可变区的抗体。
可用于本公开的治疗方法、药物和用途中的任一者中的其它PD-1拮抗剂包括特异性地结合PD-1或PD-L1并且优选地特异性地结合人PD-1或人PD-L1的免疫粘附剂，例如含有与恒定区诸如免疫球蛋白分子的Fe区融合的PD-L1或PD-L2的细胞外或PD-1结合部分的融合蛋白。特异性地结合PD-1的免疫粘附分子的示例描述于PCT国际专利申请公布W02010/027827和W02011/066342中。在本公开的治疗方法、药物和用途中可用作PD-1拮抗剂的特异性融合蛋白包括AMP-224(也称为B7-DCig)，其为PD-L2-FC融合蛋白并结合人PD-I。
可与通式(I)的化合物或上述药学上可接受的盐联合使用的细胞毒性剂的示例包括但不限于三氧化二砷(以商品名
出售)、天冬酰胺酶(也称为L-天冬酰胺酶和欧文氏菌L-天冬酰胺酶，以商品名
和
出售)。
本文所公开的可与式(I)的化合物或上述药学上可接受的盐联合使用的化学治疗剂包括乙酸阿比特龙、六甲蜜胺、脱水长春碱、奥瑞斯他汀、贝沙罗汀、比卡鲁胺、BMS184476、2,3,4,5,6-五氟-N-(3-氟-4-甲氧基苯基)苯磺酰胺、博来霉素、N,N-二甲基-L-缬氨酰-L-缬氨酰-N-甲基-L-缬氨酰-L-脯氨酰-1-L-脯氨酸-叔丁酰胺、恶病质素、西马多丁、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、酒石酸长春瑞滨(3',4'-didehydro-4'deoxy-8'-norvin-caleukoblastine)、多西紫杉醇、多西他赛、环磷酰胺、卡铂、卡莫司汀、顺铂、念珠藻素、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪(DTIC)、更生霉素、柔红霉素、地西他滨、多拉司他汀、多柔比星(阿霉素)、依托泊苷、5-氟尿嘧啶、非那雄胺、氟他胺、羟基脲，以及羟基脲和紫杉烷、异环磷酰胺、利阿唑、氯尼达明、洛莫司汀(CCNU)、MDV3100、二氯甲基二乙胺(氮芥子气)、美法仑、(-)-(S)-N-(5-氨基-2-甲基-3-苯基-1,2-二氢吡啶并[3,4-b]吡嗪-7-基)氨基甲酸乙酯2-羟基乙基磺酸盐、根霉素、塞尼氟(sertenef)、链脲霉素、丝裂霉素、甲氨蝶呤、紫杉烷、尼鲁米特、纳武单抗、奥那斯酮、紫杉醇、派姆单抗、泼尼氮芥、丙卡巴肼、RPR109881、磷酸雌莫司汀、他莫昔芬、他索纳明、他克唑、维甲酸、长春碱、长春新碱、硫酸长春地辛和长春氟宁。
血管内皮生长因子(VEGF)受体抑制剂的示例包括但不限于贝伐单抗(以商标AVASTIN出售)、阿西替尼(描述于PCT国际专利公布WO01/002369中有)、丙氨酸布立尼布((S)-((R)-1-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-5-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基氧基)丙-2-基)-2-氨基丙酸酯，也称为BMS-582664)、莫替沙尼(N-(2,3-二氢-3,3-二甲基-1H-吲哚-6-基)-2-[(4-吡啶基甲基)氨基]-3-吡啶甲酰胺，并且描述于PCT国际专利申请公布WO02/068470中)、帕西瑞肽(也称为SO230，并且描述于PCT国际专利公布WO02/010192中)和索拉非尼(以商品名NEXAVAR出售)。
拓扑异构酶II抑制剂的示例包括但不限于依托泊苷(也称为VP-16和磷酸依托泊苷，以商品名TOPOSAR、VEPESID和ETOPOPHOS出售)和替尼泊苷(也称为VM-26，以商品名VUMON出售)。
烷基化剂的示例包括但不限于5-氮杂胞苷(以商品名VIDAZA出售)、地西他滨(以商品名DACOGEN出售)、替莫唑胺(以商品名TEMCAD、TEMODAR和TEMODAL出售)、更生霉素(也称为放线菌素-D并以商品名COSMEGEN出售)、美法仑(也称为L-PAM、L-溶肉瘤素和苯丙氨酸氮芥，以商品名ALKERAN出售)、六甲蜜胺(也称为六甲基蜜胺(HMM)，以商品名HEXALEN出售)、卡莫司汀(以商品名BCNU出售)、苯达莫司汀(以商品名TREANDA出售)、白消安(以商品名
和
出售)、卡铂(以商品名
出售)、洛莫司汀(也称为CCNU，以商品名
出售)、顺铂(也称为CDDP，以商品名
和
-AQ出售)、苯丁酸氮芥(以商品名
出售)、环磷酰胺(以商品名
和
出售)、达卡巴嗪(也称为DTIC、DIC和咪唑羧酰胺，以商品名
出售)、六甲蜜胺(也称为六甲基蜜胺(HMM)，以商品名
出售)、异环磷酰胺(以商品名
出售)、丙卡巴肼(以商品名
出售)、二氯甲基二乙胺(也称为氮芥子气、氮芥和二氯甲基二乙胺盐酸盐，以商品名
出售)、链脲霉素(以商品名
出售)、噻替哌(也称为硫代磷酰胺、TESPA和TSPA，并以商品名
出售)。
抗肿瘤抗生素的示例包括但不限于多柔比星(以商品名
和
出售)、博来霉素(以商品名
出售)、柔红霉素(也称为柔红霉素盐酸盐、道诺霉素和红比霉素盐酸盐，以商品名
出售)、柔红霉素脂质体(柠檬酸柔红霉素脂质体，以商品名
出售)、米托蒽醌(也称为DHAD，以商品名
出售)、表柔比星(以商品名ELLENCETM出售)、伊达比星(以商品名
EDAMYCIN
出售)和丝裂霉素C(以商品名
出售)。
抗代谢物的示例包括但不限于克拉屈滨(2-氯脱氧腺苷，以商品名
出售)、5-氟尿嘧啶(以商品名
出售)、6-硫鸟嘌呤(以商品名
出售)、培美曲塞(以商品名
出售)、阿糖胞苷(也称为阿拉伯糖基胞嘧啶(Ara-C)，以商品名
出售)、阿糖胞苷脂质体(也称为脂质体Ara-C，以商品名DEPOCYTTM出售)、地西他滨(以商品名
出售)、羟基脲(以商品名
DROXIATM和MYLOCELTM出售)、氟达拉滨(以商品名
出售)、氟尿苷(以商品名
出售)、克拉屈滨(也称为2-氯脱氧腺苷(2-CdA)，以商品名LEUSTATINTM出售)、甲氨蝶呤(也称为氨甲蝶呤、甲氨蝶呤钠(MTX)，以商品名
和TREXALLTM出售)和喷司他丁(以商品名
出售)。
类视色素的示例包括但不限于阿利维A酸(以商品名
出售)、维甲酸(全反式维甲酸，也称为ATRA，以商品名
出售)、异维甲酸(13-顺式维甲酸，以商品名
DECUT
和
出售)和贝沙罗汀(以商品名
出售)。
用于本说明书，特别是方案和实施例中的缩写如下：
ACN 乙腈
AcOH 冰乙酸
ADDP 偶氮二甲酰二哌啶
aq. 含水的
Ar. 氩
Bn或Bzl 苄基
Bz 苯甲酰基
BINAP 2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘
Boc 叔丁氧基羰基
CH3CN 乙腈
conc. 浓缩的
CV 柱体积
dba 二亚苄基丙酮
DBU 1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯
DCA 二氯乙酸
DCC N,N'-二环己基-碳二亚胺
DCE 1,2-二氯乙烷
DCM 二氯甲烷
DDTT 3-[(二甲基氨基亚甲基)氨基]-3H-1,2,4-二噻唑-5-硫酮
DEAD 偶氮二甲酸二乙酯
DIBAL 二异丁基氢化铝
DIPEA或DIEA 二异丙基-乙胺
DMA 二甲基苯胺
DMAP 4-二甲氨基吡啶
DME 二甲氧基乙烷
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMP Dess-Martin过碘烷
DMSO 二甲基亚砜
DMTr 4,4'-二甲氧基三苯甲基
DPPA 二苯基磷酰基叠氮化物
dppf 1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁
EA 乙酸乙酯
EDCI 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺
ESI 电喷雾电离
EtOAc或EA 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
GCMS 气相色谱-质谱联用
h或hr(s) 小时(hour或hours)
HEK 人胚肾
HPLC 高效液相色谱
LAH 氢化铝锂
LDA 二异丙基氨基锂
LHMDS 双(三甲基甲硅烷基)氨基锂
Me 甲基
MEK 甲基乙基酮
MeOH 甲醇
MeCN 乙腈
MHz 兆赫
min 分钟(minute或minutes)
MS 质谱或分子筛
Ms 甲磺酰基
NBS N-溴代琥珀酰亚胺
NIS N-碘代琥珀酰亚胺
NMM N-甲基吗啉
NMP N-甲基吡咯烷酮
NMR 核磁共振
PADS 苯乙酰二硫化物
PCC 氯铬酸吡啶盐
PE 石油醚
RP 反相
rt或RT 室温
R1 保留时间
Sec 秒(second或seconds)
SEM-Cl 2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯
TBAF 四丁基氟化铵
TBS或TBDMS 叔丁基二甲基甲硅烷基
TBP 磷酸三丁酯
TEA或Et3N 三乙胺
TEAA 三乙基乙酸铵
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TIPS 三异丙基甲硅烷基
TLC 薄层色谱法
TMS 四甲基硅烷
Ts 4-甲苯磺酰基
式(I)的某些化合物可根据下文方案1中所概述的方法制备。
一般方案1
因此，其中PG1和PG2是本领域技术人员已知的保护基团的适当取代的式(II)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物可在四丁基碘化铵和四溴化碳的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如DMF、THF、甲苯等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与三苯基膦、叠氮化钠反应以得到对应的式(III)的化合物，其中PG1可选自乙酰基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基等，并且PG2可选自酰基、苯甲酰基、异丁酰基等。另选地，适当取代的式(II)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA、DMAP等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、吡啶等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与甲磺酰氯、三氟甲基磺酰氯等反应以得到对应的甲磺酰基或三氟甲磺酰基类似物，该甲磺酰基或三氟甲磺酰基类似物可在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如DMF、THF、甲苯等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与叠氮化钠进一步反应以得到对应的式(III)的化合物。
另一种方法可涉及在合适的溶剂(诸如吡啶、DMF等)中，在约0℃至约30℃范围内的温度下，用碘、三苯基膦和咪唑的组合处理适当取代的式(II)的化合物以得到对应的碘代类似物，该碘代类似物可在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如DMF、THF、甲苯等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与叠氮化钠进一步反应以得到对应的式(III)的化合物。
然后，式(III)的化合物可在氢化条件下，在适当选择的催化剂或催化剂体系(诸如Pd/C、Pt等)的存在下，在溶剂(诸如MeOH、EtOH、EtOAc等)中，与氢源反应以得到对应的式(IV)的化合物。另选地，式(III)的化合物可在合适的溶剂(诸如THF、DMF等)中，在约20℃至约60℃范围内的温度下与三苯基膦反应，然后在相同的温度下用水处理以得到对应的式(IV)的化合物。
式(IV)的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、吡啶等)中，在约-78℃至约50℃范围内的温度下，与式(V)的化合物(诸如硫酰氯、4-硝基苯基氯硫酸盐等)反应以得到对应的式(VI)的化合物。
然后，式(VI)的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA、DMAP、Cs2CO3等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、MeCN、吡啶等)中，在约-10℃至约80℃范围内的温度下，与其中PG3和PG4是本领域技术人员已知的保护基团的适当取代的式(VII)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物反应以得到对应的式(VIII)的化合物，其中PG3可选自乙酰基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基等，并且PG2可选自酰基、苯甲酰基、异丁酰基等。
然后，式(VIII)的化合物中的醇保护基团PG1和PG3可通过本领域技术人员熟知的方法，在碱性或酸性条件的存在下裂解以得到对应的式(IX)的化合物。
然后，式(IX)的化合物可在合适的活化剂(诸如四唑、DMAP、5-乙硫基-1H-四唑等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如MeCN、CH2Cl2、THF、二氧杂环己烷等)中，在约-10℃至约60℃范围内的温度下，与其中R8为卤素、二异丙基氨基等的适当取代的式(X)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物反应以得到对应的式(XI)的亚磷酸酯化合物。
然后，式(XI)的化合物可在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、MeCN、二氧杂环己烷等)中，在约-10℃至约80℃范围内的温度下，与氧化剂(诸如碘、过氧化氢、叔丁基过氧化物、Beaucage试剂、DDTT、3-氨基-1,2,4-二噻唑-5-硫酮、PADS等，或BH3.SMe2、BH3.THF复合物等)反应以生成其中R4为O、S或BH3的式(XII)的化合物。
然后，式(XII)的化合物可使用条件碱性条件(诸如MeNH2、tBuNH2、氢氧化铵、Et3N.3HF等)、在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如EtOH、水、iPrOH等)中、在约-10℃至约120℃范围内的温度下，或通过本领域技术人员熟知的方法、在碱性或酸性条件的存在下脱保护以得到对应的式(I-a)的化合物。
另选地，式(I)的化合物可根据下文一般方案2中所概述的方法制备。
一般方案2
因此，其中PG1和PG4是本领域技术人员已知的保护基团的适当取代的式(XIII)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物可在四丁基碘化铵和四溴化碳的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如DMF、THF、甲苯等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与三苯基膦、叠氮化钠反应以得到对应的式(XIV)的化合物，PG1可选自乙酰基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基等，并且PG4可选自酰基、苯甲酰基、异丁酰基等。
另选地，适当取代的式(XIII)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA、DMAP等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、吡啶等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与甲磺酰氯、三氟甲基磺酰氯等反应以得到对应的甲磺酰基或三氟甲磺酰基类似物，然后该甲磺酰基或三氟甲磺酰基类似物可在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如DMF、THF、甲苯等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与叠氮化钠进一步反应以得到对应的式(XIV)的化合物。另一种方法可涉及在合适的溶剂(诸如吡啶、DMF等)中，在约0℃至约30℃范围内的温度下，用碘、三苯基膦和咪唑的组合处理适当取代的式(XIII)的化合物以得到对应的碘代类似物，该碘代类似物可在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如DMF、THF、甲苯等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与叠氮化钠进一步反应以得到对应的式(XIV)的化合物。
然后，式(XIV)的化合物可在氢化条件下，在适当选择的催化剂或催化剂体系(诸如Pd/C、Pt等)的存在下，在溶剂(诸如MeOH、EtOH、EtOAc等)中，与氢源反应以得到对应的式(XV)的化合物。另选地，式(XIV)的化合物可在合适的溶剂(诸如THF、DMF等)中，在约20℃至约60℃范围内的温度下与三苯基膦反应，然后在相同的温度下用水处理以得到对应的式(XV)的化合物。
式(XV)的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、吡啶等)中，在约-78℃至约50℃范围内的温度下，与式(V)的化合物(诸如硫酰氯、4-硝基苯基氯硫酸盐等)反应以得到对应的式(XVI)的化合物。
然后，式(XVI)的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA、DMAP、Cs2CO3等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、MeCN、吡啶等)中，在约-10℃至约80℃范围内的温度下，与其中PG2和PG3是本领域技术人员已知的保护基团的适当取代的式(XVII)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物反应以得到对应的式(XVIII)的化合物，其中PG3可选自乙酰基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基等，并且PG2可选自酰基、苯甲酰基、异丁酰基等。然后，式(XVIII)的化合物中的醇保护基团PG1和PG3可通过本领域技术人员熟知的方法，在碱性或酸性条件的存在下裂解以得到对应的式(XIX)的化合物。
然后，式(XIX)的化合物可在合适的活化剂(诸如四唑、DMAP、5-乙硫基-1H-四唑等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如MeCN、CH2Cl2、THF、二氧杂环己烷等)中，在约-10℃至约60℃范围内的温度下，与其中R8为卤素、二异丙基氨基等的适当取代的式(X)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物反应以得到对应的式(XX)的亚磷酸酯化合物。
然后，式(XX)的化合物可在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、MeCN、二氧杂环己烷等)中，在约-10℃至约80℃范围内的温度下，与氧化剂(诸如碘、过氧化氢、叔丁基过氧化物、Beaucage试剂、DDTT、3-氨基-1,2,4-二噻唑-5-硫酮、PADS等，或BH3.SMe2、BH3.THF复合物等)反应以生成其中R4为O、S或BH3的式(XXI)的化合物。
然后，式(XXI)的化合物可使用条件碱性条件(诸如MeNH2、tBuNH2、氢氧化铵、Et3N.3HF等)、在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如EtOH、水、iPrOH等)中、在约-10℃至约120℃范围内的温度下，或通过本领域技术人员熟知的方法、在碱性或酸性条件的存在下脱保护以得到对应的式(I-b)的化合物。
另选地，式(I)的化合物可根据下文一般方案3中所概述的方法制备。
一般方案3
因此，其中PG1和PG4是本领域技术人员已知的保护基团的适当取代的式(XXII)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物可在氢化条件下，在适当选择的催化剂或催化剂体系(诸如Pd/C、Pt等)的存在下，在溶剂(诸如MeOH、EtOH、EtOAc等)中，与氢源反应以得到对应的式(XXIII)的化合物，PG1可选自乙酰基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基等，并且PG4可选自酰基、苯甲酰基、异丁酰基等。另选地，式(XXII)的化合物可在合适的溶剂(诸如THF、DMF等)中，在约20℃至约60℃范围内的温度下与三苯基膦反应，然后在相同的温度下用水处理以得到对应的式(XXIII)的化合物。
式(XXIII)的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、吡啶等)中，在约-78℃至约50℃范围内的温度下，与式(V)的化合物(诸如硫酰氯、4-硝基苯基氯硫酸盐等)反应以得到对应的式(XXIV)的化合物。
然后，式(XXIV)的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA、DMAP、Cs2CO3等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、MeCN、吡啶等)中，在约-10℃至约80℃范围内的温度下，与其中PG2和PG3是本领域技术人员已知的保护基团的适当取代的式(XXV)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物反应以得到对应的式(XXVI)的化合物，其中PG3可选自乙酰基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基等，并且PG2可选自酰基、苯甲酰基、异丁酰基等。
然后，式(XXVI)的化合物中的醇保护基团PG1和PG3可通过本领域技术人员熟知的方法，在碱性或酸性条件的存在下裂解以得到对应的式(XXVII)的化合物。
然后，式(XXVII)的化合物可在合适的活化剂(诸如四唑、DMAP、5-乙硫基-1H-四唑等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如MeCN、CH2Cl2、THF、二氧杂环己烷等)中，在约-10℃至约60℃范围内的温度下，与其中R8为卤素、二异丙基氨基等的适当取代的式(X)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物反应以得到对应的式(XXVIII)的亚磷酸酯化合物。
然后，式(XXVIII)的化合物可在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、MeCN、二氧杂环己烷等)中，在约-10℃至约80℃范围内的温度下，与氧化剂(诸如碘、过氧化氢、叔丁基过氧化物、Beaucage试剂、DDTT、3-氨基-1,2,4-二噻唑-5-硫酮、PADS等，或BH3.SMe2、BH3.THF复合物等)反应以生成其中R4为O、S或BH3的式(XXIX)的化合物。
然后，式(XXIX)的化合物可使用碱性条件(诸如MeNH2、tBuNH2、氢氧化铵、Et3N.3HF等)、在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如EtOH、水、iPrOH等)中、在约-10℃至约120℃范围内的温度下，或通过本领域技术人员熟知的方法、在碱性或酸性条件的存在下脱保护以得到对应的式(I-c)化合物。
另选地，式(I)的化合物可根据下文一般方案4中所概述的方法制备。
一般方案4
因此，其中PG1和PG2是本领域技术人员已知的保护基团的适当取代的式(XXX)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物可在氢化条件下，在适当选择的催化剂或催化剂体系(诸如Pd/C、Pt等)的存在下，在溶剂(诸如MeOH、EtOH、EtOAc等)中，与氢源反应以得到对应的式(XXXI)的化合物，PG1可选自乙酰基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基等，并且PG2可选自酰基、苯甲酰基、异丁酰基等。
另选地，式(XXX)的化合物可在合适的溶剂(诸如THF、DMF等)中，在约20℃至约60℃范围内的温度下与三苯基膦反应，然后在相同的温度下用水处理以得到对应的式(XXXI)的化合物。
式(XXXI)的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、吡啶等)中，在约-78℃至约50℃范围内的温度下，与式(V)的化合物(诸如硫酰氯、4-硝基苯基氯硫酸盐等)反应以得到对应的式(XXXII)的化合物。
然后，式(XXXII)的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA、DMAP、Cs2CO3等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、MeCN、吡啶等)中，在约-10℃至约80℃范围内的温度下，与其中PG3和PG4是本领域技术人员已知的保护基团的适当取代的式(XXXIII)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物反应以得到对应的式(XXXIV)的化合物，其中PG3可选自乙酰基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基等，并且PG2可选自酰基、苯甲酰基、异丁酰基等。
然后，式(XXXIV)的化合物中的醇保护基团PG1和PG3可通过本领域技术人员熟知的方法，在碱性或酸性条件的存在下裂解以得到对应的式(XXXV)的化合物。
然后，式(XXXV)的化合物可在合适的活化剂(诸如四唑、DMAP、5-乙硫基-1H-四唑等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如MeCN、CH2Cl2、THF、二氧杂环己烷等)中，在约-10℃至约60℃范围内的温度下，与其中R8为卤素、二异丙基氨基等的适当取代的式(X)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物反应以得到对应的式(XXXVI)的亚磷酸酯化合物。
然后，式(XXXVI)的化合物可在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、MeCN、二氧杂环己烷等)中，在约-10℃至约80℃范围内的温度下，与氧化剂(诸如碘、过氧化氢、叔丁基过氧化物、Beaucage试剂、DDTT、3-氨基-1,2,4-二噻唑-5-硫酮、PADS等，或BH3.SMe2、BH3.THF复合物等)反应以生成其中R4为O、S或BH3的式(XXXVII)的化合物。
然后，式(XXXVII)的化合物可使用碱性条件(诸如MeNH2、tBuNH2、氢氧化铵、Et3N.3HF等)、在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如EtOH、水、iPrOH等)中、在约-10℃至约120℃范围内的温度下，或通过本领域技术人员熟知的方法、在碱性或酸性条件的存在下脱保护以得到对应的式(I-d)的化合物。
一般方案5
因此，其中PG1、PG2、PG3和PG4是本领域技术人员已知的保护基团的式(XVIII)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物中的醇保护基团PG3可在醇保护基团PG1的存在下，通过本领域技术人员熟知的方法，在碱性或酸性条件的存在下选择性裂解以得到对应的式(XXXVIII)的化合物，PG1和PG3可选自乙酰基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基等，并且PG2和PG4可选自酰基、苯甲酰基、异丁酰基等。
式(XXXVIII)的化合物可在四丁基碘化铵和四溴化碳的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如DMF、THF、甲苯等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与三苯基膦、叠氮化钠反应以得到对应的式(XXXIX)的化合物。另选地，适当取代的式(XVIII)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA、DMAP等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、吡啶等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与甲磺酰氯、三氟甲基磺酰氯等反应以得到对应的甲磺酰基或三氟甲磺酰基类似物，该甲磺酰基或三氟甲磺酰基类似物可在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如DMF、THF、甲苯等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与叠氮化钠进一步反应以得到对应的式(XXXIX)的化合物。
另一种方法可涉及在合适的溶剂(如吡啶或DMF等)中，在约0℃至约30℃范围内的温度下，用碘、三苯基膦和咪唑的组合处理适当取代的式(XVIII)的化合物以得到对应的碘代类似物，该碘代类似物可在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如DMF、THF、甲苯等)中，在约0℃至约130℃范围内的温度下，与叠氮化钠进一步反应以得到对应的式(XXXIX)的化合物。
然后，式(XXXIX)的化合物可在氢化条件下，在适当选择的催化剂或催化剂体系(诸如Pd/C、Pt等)的存在下，在溶剂(诸如MeOH、EtOH、EtOAc等)中，与氢源反应以得到对应的式(XXXX)的化合物。另选地，式(XXXIX)的化合物可在合适的溶剂(诸如THF、DMF等)中，在约20℃至约60℃范围内的温度下与三苯基膦反应，然后在相同的温度下用水处理以得到对应的式(XXXX)的化合物。
式(XXXX)的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、吡啶等)中，在约-78℃至约50℃范围内的温度下，与式(V)的化合物(诸如硫酰氯、4-硝基苯基氯硫酸盐等)反应以得到对应的式(XXXXI)的化合物。然后，式(XXXIV)的化合物中的醇保护基团PG1可通过本领域技术人员熟知的方法，在碱性或酸性条件的存在下裂解以得到对应的式(XXXXII)的化合物。
式(XXXXII)的化合物可在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA、DMAP、Cs2CO3等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、MeCN、吡啶等)中，在约-10℃至约80℃范围内的温度下反应以得到对应的式(XXXXIII)的化合物。
然后，式(XXXXIII)的化合物可使用碱性条件(诸如MeNH2、tBuNH2、氢氧化铵、Et3N.3HF等)、在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如EtOH、水、iPrOH等)中、在约-10℃至约120℃范围内的温度下，或通过本领域技术人员熟知的方法、在碱性或酸性条件的存在下脱保护以得到对应的式(I-e)的化合物。
一般方案6
因此，其中PG1、PG2、PG3和PG4是本领域技术人员已知的保护基团的式(VIII)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物中的醇保护基团PG2和PG4可在醇保护基团PG1和PG3的存在下，通过本领域技术人员熟知的方法，在碱性或酸性条件的存在下选择性裂解以得到对应的式(XXXXIV)的化合物，PG1和PG3可选自乙酰基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基等，并且PG2和PG4可选自酰基、苯甲酰基、异丁酰基等。
式(XXXXIV)的化合物可在适当选择的碱(诸如NaHCO3、K2CO3、Et3N、DIPEA等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、DMF等)中，在约-78℃至约80℃范围内的温度下，与式(XXXXV)的化合物(诸如碘甲烷或溴乙烷)反应以得到对应的式(XXXXVI)的化合物，其中R9为任选取代的C1-3烷基等。然后，使用本领域技术人员已知的选自酰基、苯甲酰基、异丁酰基等的保护基团、已知化合物或通过已知方法制备的化合物在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA、DMAP、Cs2CO3等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、MeCN、吡啶等)中，在约-10℃至约80℃范围内的温度下，将保护基团PG2和PG4重新引入式(XXXXVI)中以得到对应的式(XXXXVII)的化合物。
然后，式(XXXXVII)的化合物中的醇保护基团PG1和PG3可在保护基团PG2和PG4的存在下，通过本领域技术人员熟知的方法，在碱性或酸性条件的存在下选择性裂解以得到对应的式(XXXXVIII)的化合物。然后，式(XXXXVIII)的化合物可在合适的活化剂(诸如四唑、DMAP、5-乙硫基-1H-四唑等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如MeCN、CH2Cl2、THF、二氧杂环己烷等)中，在约-10℃至约60℃范围内的温度下，与其中R8为卤素、二异丙基氨基等的适当取代的式(X)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物反应以得到对应的式(XXXXIX)的亚磷酸酯化合物。
然后，式(XXXXIX)的化合物可在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、MeCN、二氧杂环己烷等)中，在约-10℃至约80℃范围内的温度下，与氧化剂(诸如碘、过氧化氢、叔丁基过氧化物、Beaucage试剂、DDTT、3-氨基-1,2,4-二噻唑-5-硫酮、PADS等，或BH3.SMe2、BH3.THF复合物等)反应以生成其中R4为O、S或BH3的式(L)的化合物。
然后，式(L)的化合物可使用碱性条件(诸如MeNH2、tBuNH2、氢氧化铵、Et3N.3HF等)、在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如EtOH、水、iPrOH等)中、在约-10℃至约120℃范围内的温度下，或通过本领域技术人员熟知的方法、在碱性或酸性条件的存在下脱保护以得到对应的式(I-f)的化合物。
另选地，式(I)的化合物可根据下文一般方案7中所概述的方法制备。
方案7
因此，其中PG1和PG2是本领域技术人员已知的保护基团的式(III)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物中的醇保护基团PG1可在醇保护基团PG2的存在下，通过本领域技术人员熟知的方法，在碱性或酸性条件的存在下选择性裂解以得到对应的式(L1)的化合物，PG1可选自乙酰基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基等，并且PG2可选自酰基、苯甲酰基、异丁酰基等。
然后，其中PG1和PG4是本领域技术人员已知的保护基团的式(XIII)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物可在合适的活化剂(诸如四唑、DMAP、5-乙硫基-1H-四唑等)的存在下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如MeCN、CH2Cl2、THF、二氧杂环己烷等)中，在约-10℃至约60℃范围内的温度下，与其中R8为卤素、二异丙基氨基等的适当取代的式(X)的化合物、已知化合物或通过已知方法制备的化合物反应以得到对应的式(LII)的亚磷酸酯化合物，PG1可选自乙酰基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苄基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基等，并且PG4可选自酰基、苯甲酰基、异丁酰基等。
然后，式(LI)的化合物可在存在或不存在合适活化剂(诸如四唑、DMAP、5-乙硫基-1H-四唑等)的情况下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如MeCN、CH2Cl2、THF、DMF、二氧杂环己烷等)中，在约-10℃至约60℃范围内的温度下，与式(LII)的化合物反应以得到对应的亚磷酸酯，该亚磷酸酯在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、MeCN、二氧杂环己烷等)中，在约-10℃至约80℃范围内的温度下，用氧化剂(诸如碘、过氧化氢、叔丁基过氧化物、Beaucage试剂、DDTT、3-氨基-1,2,4-二噻唑-5-硫酮、PADS等，或BH3.SMe2、BH3.THF复合物等)原位氧化以生成其中R4为O、S或BH3的式(LIII)的化合物。
式(LIII)的化合物中的醇保护基团PG1在醇保护基团PG2和PG4的存在下，通过本领域技术人员熟知的方法，在碱性或酸性条件的存在下选择性裂解以得到对应的式(LIV)的化合物。
然后，式(LIV)的化合物可在氢化条件下，在适当选择的催化剂或催化剂体系(诸如Pd/C、Pt等)的存在下，在溶剂(诸如MeOH、EtOH、EtOAc等)中，与氢源反应以得到对应的式(LV)的化合物。另选地，式(LIV)的化合物可在合适的溶剂(诸如THF、DMF等)中与三苯基膦反应，然后在约20℃至约60℃范围内的温度下与水反应，然后在相同的温度下用水处理以得到对应的式(LV)的化合物。
式(LV)的化合物可在存在或不存在适当选择的碱(诸如Et3N、DIPEA等)的情况下，在适当选择的溶剂或溶剂的混合物(诸如CHCl3、CH2Cl2、THF、吡啶等)中，在约-78℃至约50℃范围内的温度下，与试剂或已知试剂(诸如硫酰氯、1,1'-磺酰二咪唑、4-硝基苯基氯硫酸盐等)反应以得到对应的式(XII)的化合物。
然后，式(XII)的化合物可使用酸性或碱性条件或通过本领域技术人员熟知的方法脱保护以得到对应的式(I-a)的化合物。
具体实施例
实施例1
化合物1
步骤1：制备化合物1b
化合物1a(5.48g，14.7mmol，与无水甲苯(2x)共蒸发)溶于无水DMF(87mL)中。加入三苯基膦(5.77g，22.0mmol)、叠氮化钠(3.06g，47.1mmol)、四丁基碘化铵(1.08g，2.94mmol)和四溴化碳(7.30g，22.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后减压浓缩。所得残余物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体粉末的化合物1b(5.09g，收率：87％)。ESI-MS：m/z 399.0[M+H]+。
步骤2：制备化合物1c
将咪唑(0.51g，7.5mmol)和TBSCl(0.76g，5.0mmol)加入到化合物1b(1.0g，2.5mmol)的DMF(15mL)溶液中，将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物倒入水中并用EtOAc萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。该粗产物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-50％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到为白色固体的化合物1c(1.2g，收率：93％)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 0.18(s,6H),0.95(s,9H),3.52(dd,J＝13.6.4.3Hz,1H),3.78(dd,J＝13.6.3.0Hz,1H),4.25(m,J＝7.2.3.5,3.5Hz,1H),4.85(ddd,J＝18.8.7.5,4.5Hz,1H),5.53(ddd,J＝53.0,4.5,1.8Hz,1H),6.24(dd,J＝18.2.1.9Hz,1H),7.50-7.58(m,2H),7.59-7.67(m,1H),7.99-8.08(m,2H),8.23(s,1H),8.80(s,1H),9.04(br s,1H)；ESI-MS：m/z 513.1[M+H]+
步骤3：制备化合物1d
将化合物1c(1.15g，2.24mmol)的EtOAc(50mL)溶液在室温下和大气压下用Pd/C(碳载量20％，132mg，0.224mmol)作为催化剂进行氢化。在吸收氢后，通过过滤除去催化剂，并蒸发滤液，得到为白色固体的化合物1d(1.1g)。粗产物立即原样用于下一步骤中。ESI-MS：m/z 509.1[M+Na]+。
步骤4：制备化合物1e
将化合物1d(710mg，1.16mmol)、4-硝基苯酚(485mg，3.49mmol)和Et3N(965μL，6.98mmol)溶于DCM(30mL)中，然后加入
分子筛(500mg)。将所得混合物冷却至-78℃，然后加入4-硝基苯基氯硫酸盐(830mg，3.49mmol)的DCM(4mL)溶液。将反应混合物在-78℃下搅拌2.5h。加入NaHCO3水溶液，将水层分离并用DCM萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。该粗产物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-50％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到为白色固体的化合物1e(546mg，纯度：89％，收率：56％，起始于化合物1d)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 0.17(s,3H),0.18(s,3H),0.96(s,9H),3.64-3.75(m,2H),4.43(br s,1H),4.67-4.74(m,1H),5.51(dt,J＝51.8,5.4Hz,1H),6.14(dd,J＝13.1,5,5Hz,1H),7.41(m,J＝9.0Hz,2H),7.56(t,J＝7.8Hz,2H),7.65(t,J＝7.5Hz,1H),8.05(d,J＝7.3Hz,2H),8.09(s,1H),8.15(m,J＝9.0Hz,2H),8.54(s,1H),8.99(br s,1H),9.40(brdd,J＝6.5,2.5Hz,1H)；19F NMR(376MHz，氯仿-d)δppm-207.51(br s,1F)；ESI-MS：m/z688.1[M+H]+。
步骤5：制备化合物1f
将化合物1e(546mg(纯度92％)，0.73mmol)、5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-N2-异丁酰基-3'-O-甲基]-D-鸟苷([103285-33-2]，753mg(纯度97％)，1.09mmol)和
分子筛(500mg)在DCM(8mL)中的混合物在室温下在氮气气氛下搅拌1h。加入Et3N(503μL，3.64mmol)并继续搅拌过夜。将反应混合物减压浓缩，获得的残余物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-90％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到化合物1f，该化合物原样用于下一步骤中。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 0.14(s,3H),0.15(s,3H),0.75(d,J＝7.0Hz,3H),0.89(d,J＝6.8Hz,3H),0.93(s,9H),1.94(spt,J＝6.8Hz,1H),3.15(dd,J＝10.9.3.4Hz,1H),3.45(s,3H),3.48-3.63(m,3H),3.75(s,3H),3.76(s,3H),4.12-4.21(m,1H),4.28(t,J＝5.3Hz,1H),4.36(br s,1H),4.63-4.72(m,1H),5.49(dt,J＝52.0,5.1Hz,1H),5.75(t,J＝4.8Hz,1H),6.07(d,J＝4.5Hz,1H),6.12(dd,J＝13.4,5.1Hz,1H),6.79(m,J＝8.4,8.4Hz,4H),7.15-7.22(m,1H),7.25(t,J＝7.5Hz,2H),7.34(m,J＝8.3Hz,4H),7.43-7.55(m,4H),7.61(t,J＝7.3Hz,1H),7.72(s,1H),8.08(d,J＝8.3Hz,2H),8.09(s,1H),8.83(s,1H),9.14(m,J＝8.3Hz,2H),9.54(br s,1H),12.06(br s,1H)；19F NMR(376MHz，氯仿-d)δppm-207.07(br s,1F)；ESI-MS：m/z 1240.6[M+Na]+。
步骤6：制备化合物1g
向粗制化合物1f的MeCN(20mL)溶液中加入80％乙酸(20mL，279.5mmol)和三乙基硅烷(2mL，12.5mmol)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。加入EtOAc和Na2CO3水溶液，将有机层分离，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩滤液。将所得残余物溶于吡啶(10mL)中，向其中加入三乙胺(1.0g，10.0mmol)和Et3N.3HF(807mg，5.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌12h。随后减压浓缩，得到粗产物，该粗产物通过制备型反相HPLC(固定相：PhenomenexGemini C18，10μm，250mm×50mm；流动相：10mM碳酸氢铵水溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱：22％-52％B的A溶液，经过11.2min；流速：22mL/min)纯化，得到化合物1g(收率：27％，起始于化合物1f)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.11(d,J＝6.5Hz,6H),2.75(spt,J＝6.8Hz,1H),3.11-3.24(m,2H),3.39(s,3H),3.51-3.59(m,1H),3.59-3.69(m,1H),3.95(m,J＝3.7Hz,1H),4.09(d,J＝3.3Hz,1H),4.17(dd,J＝4.9,3.3Hz,1H),4.57(ddd,J＝19.5,7.3,4.5Hz,1H),5.22(br s,1H),5.37(t,J＝5.5Hz,1H),5.57(ddd,J＝52.5,4.5,2.4Hz,1H),6.07(d,J＝6.5Hz,1H),6.33(dd,J＝19.3,2.2Hz,1H),7.50-7.60(m,2H),7.61-7.70(m,1H),7.99-8.10(m,2H),8.22(s,1H),8.62(s,1H),8.73(s,1H)(NH&OH，在此处与D2O交换)；19F NMR(376MHz，甲醇-d4)δppm-205.32(br s,1F)；ESI-MS：m/z 802.2[M+H]+
步骤7：制备化合物1h
将化合物1g(100mg，0.12mmol)和1H-四唑(2.2mL 0.45M的MeCN溶液，0.93mmol)的1:1 MeCN/THF(14mL)溶液用
分子筛处理30min，然后加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(70mg，0.23mmol)的MeCN(6mL)溶液。将所得反应混合物搅拌2h，之后加入附加量的四唑(0.55mL 0.45M的MeCN溶液，0.25mmol)，然后再搅拌30min。加入I2(0.5M，溶于THF/吡啶/水的8:1:1混合物中，695μL，0.357mmol)并继续搅拌过夜。通过加入饱和Na2S2O3水溶液猝灭反应混合物，并且过滤，将滤液减压浓缩。残余物通过制备型反相HPLC(固定相：Phenomenex Gemini C18，10μm，250mm×50mm；流动相：10mM碳酸氢铵水溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱：20％-50％B的A溶液，经过11.2min；流速：22mL/min)纯化，得到化合物1h，该化合物原样用于后续脱保护步骤中。ESI-MS：m/z 917.4[M+H]+。
步骤8：制备化合物1，钠盐
将化合物1h在氨水(25％，9mL)和EtOH(3mL)的混合物中的溶液在50℃下搅拌过夜。减压浓缩后获得的粗产物通过制备型反相HPLC(固定相：Syneri Polar-RP，5μm，100mm×30mm；流动相：10mM碳酸氢铵水溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱：0％-25％B的A溶液，经过12min；流速：25mL/min)纯化，得到为铵盐的化合物1。通过在填充有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来将化合物1转化成钠盐，得到冻干后为白色固体的12.9mg化合物1，钠盐(收率：13％，起始于化合物1g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6，在80℃下记录的光谱)δppm3.31(dd,J＝13.2,2.2Hz,1H),3.50(s,3H),3.60(dd,J＝13.5,3.6Hz,1H),3.91-3.98(m,1H),4.20(d,J＝4.2Hz,1H),4.23-4.28(m,1H),4.28-4.31(m,1H),4.31-4.37(m,1H),5.22-5.34(m,1H),5.43(dd,J＝51.7,4.4Hz,1H),5.99(d,J＝8.3Hz,1H),6.19(br s,1H),6.33(d,J＝19.5Hz,1H),6.58(br s,2H),7.08(s,2H),7.69(s,1H),7.87(s,1H),8.34(br s,1H),9.70(br s,1H)；31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm 56.05(s,1P),94.05(br s,1P)；ESI-MS：m/z 690.2[M+H]+。
实施例2
化合物(*R)2A
步骤1：制备化合物2a
将化合物1g(230mg，0.28mmol)和1H-四唑(1.67mL的3％-4％MeCN溶液)的1:1MeCN/THF(12mL)溶液用
分子筛处理2小时，然后加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(78mg，0.26mmol)。将所得反应混合物搅拌30min，之后加入附加量的2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(8.6mg，0.03mmol)，接着再搅拌15min。加入吡啶(15mL)和苯乙酰二硫化物(PADS，217mg，0.72mmol)，并继续搅拌40min。通过过滤除去分子筛后，将EtOAc加入到反应混合物中，然后用盐水和饱和NaHCO3水溶液充分洗涤。将有机相经无水MgSO4干燥，过滤，并将滤液减压浓缩。粗产物原样用于后续脱保护步骤中。ESI-MS：m/z933.2[M+H]+。
步骤2：制备化合物(*R)2A，钠盐
将粗制化合物2a在33％甲胺的乙醇溶液(20mL)中在50℃下搅拌4h。将反应混合物减压浓缩。将所得粗产物溶于水中，用EtOAc洗涤，冻干，并通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，5μm，250mm×30mm；流动相：0.25％碳酸氢铵水溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱：0％-15％B的A溶液，经过29min，流速：30mL/min)纯化，得到为单一非对映体的化合物(*R)2A。如实施例1步骤8中所述进行向钠盐的转化(23mg，收率：10％，起始于化合物1g)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6，在80℃下记录的光谱)δppm 3.31-3.43(m,1H),3.49(s,3H),3.62-3.75(m,1H),3.92-4.00(m,1H),4.00-4.09(m,1H),4.20(br s,1H),4.31(br s,2H),5.33-5.50(m,2H),5.64(br d,J＝52.0Hz,1H),5.68(dd,J＝8.7,4.1Hz,1H),6.03(d,J＝8.6Hz,1H),6.26(s,2H),6.33(d,J＝18.4Hz,1H),7.07(s,2H),7.88(br s,1H),8.29(br s,2H),8.66(br s,1H),10.30(br s,1H)；31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm 52.18(s,1P)；ESI-MS：m/z 706.0[M+H]+。
实施例3
化合物(*R)4A和化合物(*S)4B
步骤1：制备化合物3c
在N2下于0℃下，向化合物3b(2.0g，4.99mmol，CAS#153186-10-8)的吡啶(8mL)溶液中缓慢加入MsCl(1.14g，9.99mmol)；在室温下搅拌1h后，将反应混合物用EtOAc(20mL)稀释，并用水(3×20mL)洗涤。分离水相并用EtOAc(3×15mL)萃取。
将合并的有机层相继经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到为黄色油状物的化合物3c(3.1g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.38-7.31(m,7H),7.21-7.14(m,3H),5.79(d,J＝3.8Hz,1H),4.87(d,J＝11.8Hz,1H),4.74(d,J＝12.0Hz,1H),4.67-4.62(m,1H),4.57-4.38(m,4H),4.30(d,J＝5.3Hz,1H),3.63-3.58(m,1H),3.53-3.48(m,1H),3.63-3.47(m,1H),3.07(s,3H),2.36(s,3H),1.71-1.67(m,3H),1.35(s,3H)；ESI-MS：m/z＝501.2[M+Na]+。
步骤2：制备化合物3d
将3c(1.0g，2.1mmol)的80％含水三氟乙酸(10mL)溶液在室温下搅拌1h。在减压除去溶剂后，将残余物溶于DCM(20mL)中，并用饱和NaHCO3水溶液(2×20mL)洗涤。将有机层相继经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到无色油状物(876mg)。将油与无水吡啶(2×15mL)共蒸发，溶于无水吡啶(15mL)中，并用Ac2O(815.8mg，7.99mmol)处理。在50℃下搅拌过夜后，将反应混合物用饱和NaHCO3水溶液(25mL)猝灭并用EtOAc(2×20mL)分配。将有机层合并，相继用盐水(15mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％-30％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到为无色糖浆的3d(786mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.42-7.18(m,12H),6.38(d,J＝4.5Hz,1H),6.15(s,1H),5.36(d,J＝5.0Hz,1H),5.30(s,1H),5.17(dd,J＝4.8,6.3Hz,1H),2.99(s,3H),2.96(s,1H),2.19-2.10(m,4H),2.06(d,J＝7.8Hz,1H),1.90(s,3H)。ESI-MS：m/z＝545[M+Na]+。
步骤3：制备化合物3f
向化合物3d(200mg，0.38mmol)和6-N-苯甲酰腺嘌呤(3e，109.8mg，0.46mmol)在无水1,2-二氯乙烷(5mL)中的悬浮液中加入双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(BSA，202.4mg，0.99mmol)。将混合物回流1hr，然后冷却至RT。加入TMSOTf(170mg，0.76mmol)，并且将溶液在110℃下加热16h。将反应混合物用DCM(15mL)稀释，然后倒入冰冷的饱和NaHCO3水溶液(20mL)中，搅拌0.5h，并且过滤。在分离两层后，将有机层相继用饱和NaHCO3水溶液(3×15mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(1％-1.5％v/vMeOH/CH2Cl2)纯化，得到为浅黄色固体的化合物3f(208mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.80(s,1H),8.59(s,1H),8.04(s,1H),7.87(br d,J＝7.3Hz,2H),7.54-7.44(m,1H),7.44-7.34(m,2H),7.29-7.03(m,10H),6.18(br d,J＝4.4Hz,1H),5.96-5.84(m,1H),4.70(br d,J＝5.6Hz,1H),4.56-4.29(m,1H),4.55-4.22(m,4H),4.21(s,1H),3.63-3.53(m,1H),3.46(br d,J10.0Hz,1H),2.84-2.75(m,1H),2.86-2.75(m,1H),2.87-2.71(m,1H),1.99-1.92(m,1H),1.91(br s,1H)；ESI-MS：m/z＝702[M+H]+
步骤4：制备化合物3g
在0℃下，向化合物3f(5.86g，8.35mmol)在THF(50mL)和水(35mL)的混合物中的溶液中加入LiOH.H2O(1.75g，41.8mmol)。在室温下搅拌混合物5h后，将反应混合物用EtOAc(30mL)稀释。将有机相用盐水(30mL×2)洗涤，并且将水层用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层相继用饱和NaHCO3水溶液(3×15mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(EtOAc:PE＝0％至70％)纯化，得到为淡黄色固体的化合物3g(4.25g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 9.00(br s,2H),8.74(s,2H),8.23(s,2H),8.02(br d,J＝7.3Hz,3H),7.60(br d,J＝7.3Hz,2H),7.52(br t,J＝7.5Hz,3H),7.38-7.16(m,15H),6.09(s,2H),4.79(s,2H),4.66-4.49(m,6H),4.24(s,2H),4.18-4.05(m,3H),3.99(br d,J＝7.8Hz,2H),3.90-3.70(m,3H),2.03(s,2H),1.75(br s,3H),1.24(br t,J＝7.1Hz,2H)；ESI-MS：m/z＝564.1[M+H]+。
步骤5：制备化合物3h
在0℃下向化合物3g(3.3g，5.85mmol)的DCM(50mL)搅拌溶液中加入甲磺酸(28.9g，0.3mol)。在0℃下搅拌2.5h后，将反应物与前一批料合并，并使用均压滴液漏斗加入NaHCO3(75g，0.90mol)在DCM(180mL)中的悬浮液。将反应混合物搅拌1.5h后，加入MeOH(10mL)，并且将混合物再搅拌0.5hr
将反应混合物过滤，并将滤液减压浓缩，得到浅黄色固体，该浅黄色固体通过硅胶快速柱色谱法(0％-10％MeOH的DCM溶液，25mL/min)纯化，得到为灰白色固体的化合物3h(3.75g)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.73(s,1H),8.56(s,1H),8.13-8.06(m,2H),7.71-7.62(m,1H),7.61-7.53(m,2H),6.14(s,1H),4.63(s,1H),4.38(s,1H),4.09(d,J＝7.8Hz,1H),3.97(s,2H),3.92(d,J＝7.8Hz,1H)。
步骤6：制备化合物3i
在0℃下，向化合物3h(4.3g，11.2mmol)在吡啶(50mL)中的混合物中滴加DMTrCl(4.56g，13.4mmol)的吡啶(20mL)溶液。在RT下搅拌2h后，将反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，然后相继用饱和NaHCO3水溶液(80mL×3)和盐水(80mL×2)洗涤。将有机层合并，并相继经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％-100％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到为白色固体的化合物3i(7.8g)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.74(s,1H),8.50(s,1H),8.09(d,J＝7.3Hz,2H),7.70-7.62(m,1H),7.60-7.53(m,2H),7.48(d,J＝7.5Hz,2H),7.36(dd,J＝3.0,9.0Hz,4H),7.33-7.27(m,1H),7.26-7.18(m,1H),6.87(d,J＝8.8Hz,4H),6.17(s,1H),4.65(s,1H),4.49(s,1H),4.10(q,J＝7.3Hz,1H),4.05-3.98(m,2H),3.77(s,6H),3.65-3.58(m,1H),3.54-3.48(m,1H)；ESI-MS：m/z＝686[M+H]+。
步骤7：制备化合物3k
向化合物3j(5.0g，13.61mmol，CAS#160107-07-3)、三苯基膦(4.28g，16.33mmol)、TBAI(502mg，1.36mmol)和NaN3(3.3g，50.76mmol)在DMF(60mL)中的搅拌悬浮液中一次性加入CBr4(5.41g，16.33mmol)。在20℃下搅拌12h后，将反应混合物用80mL饱和NaHCO3水溶液和DCM(100mL×3)分配。将有机层合并，并相继经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％-100％EtOAc的石油醚溶液以冲洗Ph3PO，然后切换至0％-10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的3k(4.26g)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.16(s,1H),5.96(d,J＝4.9Hz,1H),4.82(t,J＝5.3Hz,1H),4.27-4.21(m,1H),3.97(t,J＝4.9Hz,1H),3.66(d,J＝4.4Hz,2H),3.52(s,3H),2.78-2.69(m,1H),1.24(d,J＝6.8Hz,6H)；ESI-MS：m/z＝393.1[M+H]+。
步骤8：制备化合物3l
在0℃下，向3k(4.07g，10.37mmol)、2,4,6-三甲基吡啶(1.63g，13.48mmol)和AgNO3(2.29g，13.48mmol)的DCM(40mL)溶液中加入DMTrCl(4.57g，13.48mmol)。在25℃下搅拌3h后，将红色悬浮液用DCM(50mL)稀释，并通过硅藻土垫过滤。将滤液在DCM/水(50mL/30mL)之间分配并用盐水(30mL)洗涤。将有机层合并，并相继经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％-5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的3l(7.0g)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.94(s,1H),7.35-7.28(m,1H),7.22(d,J＝8.8Hz,1H),7.18-7.12(m,2H).7.09(d,J＝8.811z,1H),6.72(d,J＝8.8Hz,1H),6.61(d,J＝8.8Hz,1H),6.03(d,J＝7.7Hz,1H),4.94(br dd,J＝5.2.7.2Hz,1H),4.87(s,7H),4.16(t,J＝5.7Hz,1H),4.07(q,J＝7.1Hz,1H),3.71(d,J＝13.7Hz,4H),3.61(dd,J＝6.6,12.8Hz,1H),3.29(s,3H),3.21(s,2H),2.75(quin,J＝6.8Hz,1H),2.68(d,J＝4.6Hz,1H),1.99(s,2H),1.28-1.17(m,6H)；ESI-MS：m/z＝695.3[M+H]+。
步骤9：制备化合物3m
将3l(1.2g，1.72mmol)和10％湿Pd/C(1.0g，0.49mmol)在乙酸乙酯(100mL)中的悬浮液在20℃和15psi下氢化4h。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并且将滤液减压浓缩，得到残余物，该残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％-10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的3m(682mg)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.89(s,1H),7.33(dd,J＝1.5,7.8Hz,1H),7.30-7.29(m,1H),7.36-7.29(m,1H),7.21(d,J＝8.8Hz,2H),7.18-7.10(m,3H),7.08(d,J＝8.8Hz,2H),6.71(d,J＝8.8Hz,2H),6.59(d,J＝8.8Hz,2H),5.98(d,J＝7.5Hz,1H),5.03(dd,J＝4.8,7.5Hz,1H),4.21(dd,J＝3.4,9.9Hz,1H),3.69(d,J＝16.3Hz,6H),3.26(s,3H),3.16(dd,J＝10.0,13.1Hz,1H),2.88-2.75(m,3H),1.31-1.21(m,8H)；ESI-MS：m/z＝669.3[M+H]+。
步骤10：制备化合物3o
将4-硝基苯基氯硫酸盐3n(2.45g，10.31mmol，J.Chem.Soc.,Perkin Trans.1,2002,485-495)的无水DCM(5mL)溶液在N2下于-78℃下快速加入到3m(2.3g，3.44mmol)、4-硝基苯酚(1.43g，10.31mmol)、Et3N(2.09g，20.63mmol)和活化的
分子筛(≈4g)在无水DCM(50mL)中的混合物中。在升温至室温(12℃)并搅拌2h后，将反应混合物用DCM(20mL)稀释，并通过硅藻土垫过滤。将滤液与前两个其它批料合并，并在DCM/饱和NaHCO3水溶液(100，3×70mL)之间分配。将有机层合并，并相继经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％-100％乙酸乙酯的石油醚溶液)纯化，得到为黄色固体的3o(4.8g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.18(br s,1H),9.18(s,1H),8.32-8.26(m,3H),7.74(s,1H),7.37-7.28(m,4H),7.25-7.11(m,6H),7.08(d,J＝8.8Hz,1H),6.73(d,J＝9.0Hz,2H),6.63(d,J＝8.8Hz,2H),5.89(d,J＝8.8Hz,1H),4.99(dd,J＝5.0,8.5Hz,1H),4.29(s,1H),3.80-3.74(m,4H),3.72(s,1H),3.50-3.44(m,1H),3.38-3.29(m,1H),3.20(s,3H),2.77(d,J＝5.0Hz,1H),2.55-2.43(m,1H),1.31-1.27(m,4H),1.15(d,J＝6.8Hz,3H)。
ESI-MS：m/z＝870[M+H]+。
步骤11：制备化合物3p
在使用前，将3o和3i的混合物与THF(30mL×3)共蒸发。将3o(4.12g，4.74mmol)、3i(2.5g，3.64mmol)和活化的
分子筛(～2g)在无水THF(50mL)中的混合物在N2下于RT下搅拌1h。一次性加入DMAP(2.22g，18.22mmol)，并将反应混合物在40℃下搅拌12h。将混合物用DCM(40mL)稀释，通过硅藻土垫过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％-2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为浅黄色固体的3p(4.6g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.31(s,1H),9.25(s,1H),9.11(br s,1H),8.78(s,1H),8.52-8.29(m,2H),8.16-8.01(m,5H),7.77(s,1H),6.69(d,J＝8.8Hz,2H),6.60(d,J＝9.0Hz,2H),6.21(s,1H),5.84(d,J＝8.8Hz,1H),5.36(s,1H),5.06(s,1H),4.86(dd,J＝4.9,8.7Hz,1H),4.06-3.93(m,2H),3.73(d,J＝2.8Hz,9H),3.70(s,3H),3.67-3.58(m,1H),3.34(d,J＝11.0Hz,1H),3.15(s,3H),3.06(dd,J＝2.3,12.5Hz,1H),2.96-2.84(m,1H),2.62-2.49(m,2H),1.28-1.24(m,5H),1.18(d,J＝6.8Hz,3H)；ESI-MS：m/z＝1417[M+H]+。
步骤12：制备化合物3q
在N2下于RT下，向3p(4.6g，3.25mmol)的DCM(84mL)搅拌溶液中加入6％DCA的DCM(44mL，32.3mmol，10.0当量)溶液。在RT下搅拌30min后，将反应混合物用吡啶(2.8g，11当量)猝灭，并且将所得无色溶液减压浓缩，得到无色残余物，该无色残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％-7％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的3q(1.9g)。上述固体通过反相制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi Max-RP 250mm×50mm×10μm；流动相：水(10mMNH4HCO3)-MeCN，开始B15，结束B 45；流速：90mL/min，梯度时间：18min，然后B 100进行3min)进一步纯化，以在冻干后生成为白色固体的3q的2种级分。级分1：876mg和级分2：743mg。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.52(s,1H),8.36(s,1H),8.01(d,J＝7.1Hz,2H),7.86(s,1H),7.65(d,J＝7.3Hz,1H),7.60-7.54(m,2H),6.20(s,1H),5.71(d,J＝4.9Hz,1H),5.22(d,J＝14.4Hz,2H),4.67-4.59(m,1H),4.06(d,J＝3.7Hz,2H),4.02(br d,J＝4.6Hz,3H),4.10-3.99(m,1H),3.99-3.93(m,1H),3.51-3.44(m,4H),3.40(d,J＝4.6Hz,1H),2.73-2.65(m,1H),1.21(dd,J＝5.4,6.6Hz,6H)；ESI-MS：m/z 812.2[M+H]+。
步骤13：制备化合物3r
THF在Na/二苯甲酮上新鲜蒸馏，并且CH3CN在CaH2上新鲜蒸馏。
将真空干燥的二醇3q(300mg，0.37mmol)与CH3CN/THF(10mL/6mL×3)的混合物共蒸发，并溶于CH3CN/THF(10mL/6mL)的混合物中。向其中加入800mg活化的
分子筛和1H-四唑的CH3CN溶液(6.56mL，0.45M，其通过以下方式制备：将945mg四唑溶于30mL无水CH3CN中，接着加入800mg
分子筛，并且然后在使用前在氩气下搅拌1h)，并将混合物用氩气鼓泡15min。将白色悬浮液在氩气下于8℃下搅拌1hr后，在60min内滴加2-氰乙基-N,N,N',N'-四异丙基亚磷酰二胺的CH3CN溶液(5.62mL，0.59mmol，0.105M的CH3CN溶液，其通过以下方式制备：将759mg亚磷酰二胺试剂溶于24mLCH3CN中，接着加入800mg
分子筛，并且然后在使用前在氩气下搅拌1h)。将所得白色悬浮液在氩气下于8℃下搅拌1hr。加入更多的CH3CN(6mL)，并在30℃下搅拌1hr后，加入附加的四唑(1.64mL，0.74mmol，0.45M的CH3CN溶液)。再搅拌2hr后，快速加入DDTT(380mg，1.84mmol)的吡啶(10mL)溶液。在搅拌30min后，通过硅藻土垫过滤混合物；将滤液与另一批料合并，并减压浓缩，得到溶于DCM(8mL)中的残余物，并通过硅胶快速柱色谱法(12g，0％-6％MeOH的DCM溶液，25mL/min)纯化，得到为浅黄色固体的3r(275mg)，将其直接用于下一步骤中而无需进一步纯化。ESI-MS：m/z＝943.5[M+H]+。
步骤14：制备化合物(*R)
和(*S)4B
将化合物3r(275mg，0.292mmol)的MeNH2(27％-30％的EtOH溶液，5mL)溶液在80℃下搅拌4hr。将反应混合物与另一批料合并，并减压浓缩，得到残余物；将残余物溶于CH3CN/H2O(1mL/8mL)的混合物中并用DCM(8mL×3)洗涤。将水层冻干，得到黄色胶状物(382mg)，然后进一步溶于CH3CN/H2O(4/1)的混合物中。通过反相制备型HPLC(柱：Agela Durashell C18150×25×5μm；流动相：水(0.04％氨水+10mM NH4HCO3)-CH3CN；开始B 12，结束B 25；流速：25mL/min，梯度时间：12min，然后B 100进行3min)纯化；收集所需的级分并冻干，以生成为白色固体的化合物(*R)4A，铵盐(39.8mg，第一洗脱异构体)和为白色固体的化合物(*S)4B，铵盐(65.9mg，第二洗脱异构体)。
通过在填充有Dowex 50WX8 Na离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，以在冻干后得到为白色蓬松固体的化合物(*R)4A，钠盐和化合物(*S)4B，钠盐。
化合物(*R)4A.1H NMR(400MHz,60℃,DMSO-d6)δppm 3.34-3.44(m,1H),3.45-3.56(m,1H),3.52(s,3H),3.83(dd,J＝10.7,2.0Hz,1H),3.98(d,J＝8.3Hz,1H),4.09(br s,1H),4.16(br s,1H),4.23(d,J＝8.3Hz,1H),4.67(dd,J＝11.1,7.8Hz,1H),4.98(br s,1H),5.14(br s,1H),5.31(ddd,J＝13.4,9.0,4.4Hz,1H),5.78(d,J＝8.8Hz,1H),6.07(s,1H),6.13(br s,2H),7.15(br s,2H),7.92(s,1H),8.16(s,1H),8.17(s,1H)31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δ55.83(s,1P)；ESI-MS：m/z＝716.2[M+H]+。
化合物(*S)4B.1H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d6)δppm 3.21-3.39(m,2H),3.54(s,3H),3.87(dd,J＝11.5,4.3Hz,1H),3.92(d,J＝8.1Hz,1H),3.99(br s,1H),4.14(d,J＝8.1Hz,1H),4.30(br s,1H),4.37(dd,J＝11.6,5.0Hz,1H),4.84(br s,1H),5.06(br s,1H),5.31(ddd,J＝12.3,9.0,4.2Hz,1H),5.79(d,J＝9.0Hz,1H),6.03(s,1H),6.12(br s,2H),6.99(br s,2H),7.99(s,1H),8.18(s,1H),8.20(s,1H)；31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δ52,88(s,1P)；ESI-MS：m/z＝716.2[M+H]+。
实施例4
化合物52
步骤1：制备化合物4a
在0℃下向化合物3j(9.6g，26.13mmol，CAS#160107-07-3)的DMF(80mL)溶液中加入咪唑(3.56g，52.26mmol)和TBSCl(4.73g，31.36mmol)。将混合物在25℃下搅拌2h后，将反应物用EtOAc(200mL)和H2O(100ml)稀释；将有机层相继经无水Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的化合物4a(9.7g，76％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.12(br s,1H),9.48(br s,1H),8.05(s,1H),5.89(d,J＝4.8Hz,1H),4.56(t,J＝4.9Hz,1H),4.21(q,J＝3.4Hz,1H),3.98(t,J＝4.6Hz,1H),3.93(dd,J＝3.5,11.5Hz,1H),3.79(dd,J＝2.8,11.5Hz,1H),3.47(s,3H),2.75(td,J＝6.9,13.6Hz,1H),1.27(s,3H),1.25(s,3H),0.91(s,9H),0.10(s,6H)；ESI-MS：m/z 482 3[M+H]+。
步骤2：制备化合物4b
在0℃下，向化合物4a(10g，20.76mmol)的DCM(200mL)溶液中加入Dess Martin过碘烷(14.97g，35.29mmol)。将混合物在30℃下搅拌12小时后。将反应混合物用DCM(300mL)稀释；用饱和Na2S2O3水溶液(100mL)和饱和NaHCO3水溶液(50mL)洗涤有机层。将有机层减压浓缩，得到残余物。该残余物(与硅胶合并：15g)通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-100％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到为白色固体的化合物4b(9.0g，80％)。ESI-MS：m/z498.3[M+H7]+
步骤3：制备化合物4c
在0℃下，向化合物4b(9g，18.77mmol)的EtOH(200mL)溶液中加入NaBH4(1.06g，28.15mmol)。将溶液在0℃下搅拌0.5小时后，用EtOAc(500mL)和饱和NH4Cl水溶液(100mL)稀释该混合物。将有机层减压浓缩，得到残余物(9.0g)。该残余物(与硅胶合并：15g)通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-2％MeOH的DCM溶液，V/V)纯化，得到为白色固体的化合物4c(4.8g，53％)和为白色固体的化合物4a(1.5g，17％)。化合物4d：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.06(s,1H),11.70(s,1H),8.00(s,1H),6.05(d,J＝4.6Hz,1H),5.85(d,J＝5.5Hz,1H),4.31-4.26(m,1H),3.91-3.77(m,4H),3.39(s,3H),2.80-2.70(m,1H),1.11(d,J＝6.8Hz,6H),0.89(s,9H),0.07(s,6H)
ESI-MS：m/z＝482.3[M+H]+。
步骤4：制备化合物4d
在25℃下向化合物4c(1.8g，3.74mmol)的吡啶(20mL)溶液中加入DIEA(1.45g，11.21)和二苯基氨基甲酰氯(1.12g，4.86mmol)。将混合物在25℃下搅拌3h。将反应混合物与2个其它批料合并并后处理。将混合物在乙酸乙酯(150mL)和H2O(100mL)之间分配。将有机层用盐水(100ml)洗涤并减压蒸发，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％至100％EA/PE，V/V)纯化，得到为黄色固体的化合物4d(6g，70％来自4.8g的化合物4c)。1HNMR(400MHz，氯仿-d)δ＝8.34(s,1H),8.00(s,1H),7.44(br d,J＝7.3Hz,4H),7.37(t,J＝7.8Hz,4H),7.25(br s,2H),6.22(d,J＝3.0Hz,1H),4.38(br s,1H),4.16-4.12(m,1H),4.00-3.93(m,2H),3.83(dd,J＝2.5,11.0Hz,1H),3.51(s,3H),2.94(br s,1H),1.27(dd,J＝1.0,6,8Hz,6H),0.94(s,9H),0.14(s,6H)；ESI-MS：m/z＝677.4[M+H]+。
步骤5：制备化合物4e
在0℃下，向化合物4d(5g，7.39mmol)的吡啶(100mL)溶液中加入Tf2O(16.67g，59.1mmol)。将混合物在0℃下搅拌1.5h后，将反应物在DCM(200mL)和H2O(100mL)之间分配。将有机层分离，并且用DCM(100ml)萃取水相。然后将有机层合并，并相继用无水Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发，得到残余物。将残余物与另一批料合并，并通过硅胶快速柱色谱法(0％至30％EtOAc/石油醚，V/V)纯化，得到化合物4e(4.0g，为白色固体)。ESI-MS：m/z＝809.5[M+H]+。
步骤6：制备化合物4f
在25℃下，向化合物4e(4.0g，4.94mmol)的DMF(40mL)溶液中加入NaN3(3.5g，54.15mmol)。将反应物在25℃下搅拌12小时后，将混合物用饱和NaHCO3水溶液(30mL)稀释以将pH调节为>9，并且用乙酸乙酯(100mL×3)萃取。将有机层合并，并相继用盐水(100mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发，得到黄色固体。该残余物(与硅胶合并：10g)通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-100％乙酸乙酯的石油醚溶液)纯化，得到为黄色固体的化合物4f(1.8g，67％)。
1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ＝11.99(br s,1H),8.20(br s,1H),8.05(s,1H),5.96(br d,J＝4.4Hz,1H),4.25-4.11(m,3H),3.99(br d,J＝11.7Hz,1H),3.82(br d,J＝11.7Hz,1H),3.53(d,J＝2.4Hz,3H),2.70-2.58(m,1H),1.30(br d,J＝6.8Hz,6H),0.94(s,9H),0.13(s,6H)；ESI-MS：m/z 507.3[M+H]+。
步骤7：制备化合物4g
在25℃下，向化合物4f(1.8g，3.55mmol)的THF(20mL)溶液中加入三苯基膦(1.3g，4.97mmol)。将反应物在40℃下搅拌2小时后，在40℃下将水(10mL)加入到溶液中，并且将混合物搅拌12小时。然后将混合物用DCM(50mL)稀释并用盐水(2×50mL)洗涤。将有机层合并并在压力下浓缩，得到黄色固体(2.0g)。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的化合物4g(1.5g，81％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.15(s,1H),5.57(d,J＝8.0Hz,1H),4.07-4.00(m,1H),3.91(dd,J＝5.3,8.0Hz,1H),3.75-3.63(m,3H),3.37(s,3H),2.77-2.69(m,1H),1.10(d,J＝6.8Hz,6H),0.86(s,9H),0.04(s,6H)；ESI-MS：m/z 481.3[M+H]+
步骤8：制备化合物4h
向化合物4g(1.5g，2.81mmol)的DCM(100mL)溶液中加入4-硝基苯酚(3.12g，22.47mmol)、三乙胺(1.7g，16.8mmol)和
分子筛(2.0g)。将混合物在-78℃下搅拌0.5h后，在-78℃下将4-硝基苯基氯硫酸盐3n(2g，8.42mmol)的DCM(20mL)溶液加入到该溶液中。在-78℃下搅拌15min并在0℃下搅拌1小时后，将混合物过滤并用DCM(100ml)稀释。将有机层用饱和NaHCO3水溶液(3×50ml)洗涤，并且在压力下浓缩，得到黄色固体(2.5g)。将残余物与另一批料合并(与硅胶合并：6g)，并通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-100％乙酸乙酯的DCM溶液)纯化，得到为黄色固体的化合物4h(1.68g，75％来自2.4g化合物74)。1HNMR(400MHz,CD3CN)δ11.89(br s,1H),9.27(br s,1H),8.15(br d,J＝9.3Hz,2H),7.94-7.90(m,1H),7.23(br d,J＝9.0Hz,2H),5.80(br d,J＝8.3Hz,1H),4.81(br d,J＝7.3Hz,1H),4.24(br s,1H),3.97(br d,J＝4.5Hz,1H),3.83(br s,2H),3.48-3.39(m,3H),2.73-2.58(m,1H),1.19(br dd,J＝3.3,6.0Hz,6H),0.94(s,9H),0.12(s,6H)；ESI-MS：m/z 682.3[M+H]+。
步骤9：制备化合物4j
将化合物4h(1.68g，2.47mmol)、化合物4i(731mg，1.9mmol)和
分子筛(2.0g)的DCE(135mL)溶液在N2下于25℃下搅拌30min，然后加入DMAP(1.16g，9.49mmol)。在55℃(油温)下搅拌12小时后，将混合物过滤并用DCM(100mL)和盐水(50mL)分配溶液。将有机层用饱和NaHCO3水溶液(3×100mL)洗涤；将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发溶剂，得到粗产物(2.5g)。该粗产物(2.5g，粗制)(与硅胶合并：5g)通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为浅黄色固体的化合物4j(1.2g，52％)，ESI-MS：m/z927.4[M+H]+
步骤10：制备化合物4k
在15℃下，向化合物4j(1.2g，1.29mmol)的吡啶(24mL)溶液中加入TEA(1.31g，12.94mmol)和Et3N-3HF(1.0，6.47mmol)。将溶液在35℃下搅拌12小时后，在25℃下加入THF(20mL)和三甲基(丙氧基)硅烷(3.4g，25.89mmol)，并将反应混合物再搅拌3小时。将反应混合物在压力下浓缩，得到残余物(2g)。该残余物(与硅胶合并：4g)通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到粗制化合物4k(900mg)。该粗产物通过反相制备型HPLC(方法：柱：Waters Xbridge Prep OBD 5μm C18 150×30，条件：水(10mMNH4HCO3)-ACN B：5，结束B 35，梯度时间(min)：7，100％B保持时间(min)：1，流速(ml/min)：25)纯化，得到为白色固体的纯化合物4k(0.57g，70％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.17(d,J＝4.4Hz,2H),8.08(s,1H),6.21(d,J＝19.6Hz,1H),5.84(d,J＝8.6Hz,1H),5.51-5.26(m,1H),5.13(br s,1H),4.72(dd,J＝5.4,8.8Hz,1H),4.53-4.38(m,1H),4.22-4.16(m,1H),4.14-4.10(m,1H),4.09-4.00(m,2H),3.86(d,J＝5.4Hz,1H),3.63-3.46(m,2H),3.25(s,3H),2.75(td,J＝6.8,13.6Hz,1H),1.11(dd,J＝2.1,6.7Hz,6H)
19F NMR(376MHz,DMSO-d6)-201.424(s,1F)；ESI-MS：m/z＝699.3[M+H]+。
步骤11：制备化合物4l
在使用前，CH3CN在CaH2上新鲜蒸馏。将化合物4l(152mg，0.218mmol)溶于DMF(2mL)和CH3CN(6mL)中，向其中加入0.3g
MS(粉末)和1H-四唑溶液(3.87mL，0.45M，其通过以下方式制备：将472.5mg的四唑溶于15mL的无水CH3CN中，接着加入1g
MS，并且然后在使用前在N2下搅拌0.5hr)。在20min内将2-氰乙基N,N,N',N'-四异丙基亚磷酰二胺(131.15mg，0.43mmol)的CH3CN(0.8mL)溶液经由注射器滴加。将所得白色悬浮液在N2下于25℃下进一步搅拌2hr。然后在25℃下将TBHP(0.218mL，1.09mmol，5M癸烷溶液)加入到上述溶液中。将反应物在25℃下搅拌1h后，将混合物用DCM(20mL)和CH3OH(3mL)稀释，通过硅藻土垫过滤并真空浓缩，得到无色油状物；该油状物通过硅胶快速柱色谱法(4g，0％-11.5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的化合物4l(151mg，68％)。ESI-MS：m/z＝814.3[M+H]+。
步骤12：制备化合物52，钠盐
将化合物4l(150mg，0.18mmol)的EtOH(2mL)溶液用MeNH2(5mL，30％EtOH溶液)处理。将反应物在25℃下搅拌2h后，并且在35℃下搅拌1h后，将溶剂减压浓缩，得到无色油状物。将残余物溶于H2O(20mL)和CH3CN(5mL)中，然后用DCM(20mL×2)洗涤。然后将水相冻干，得到为浅黄色固体的粗产物(80mg，粗制)。该粗产物(80mg，粗制)通过反相制备型HPLC(方法：柱，Waters Xbridge Prep OBD 5μm C18 150×30；条件：水(10mM NH4HCO3)(A)-ACN，(B)开始B 0，结束B 25；梯度时间(min)7；100％B保持时间(min)1，流速(ml/min)25，注射12次)纯化，得到为白色固体的化合物52，铵盐(35mg，26％)。1H NMR(400MHz,D2O)δ＝8.29(s,1H),8.19(br d,J＝9.5Hz,2H),6.61(br d,J＝18.6Hz,1H),6.08(br d,J＝8.8Hz,1H),5.90-5.72(m,1H),5.39(br d,J＝19.6Hz,1H),5.20(br s,1H),4.76(br s,1H),4.72(br s,1H),4.49(br d,J＝10.3Hz,3H),4.35(br d,J4.3Hz,1H),4.17(q,J＝6.2Hz,1H),3.67(s,3H)；19F NMR(376.5MHz,D2O)-199.859；31P NMR(162MHz,D2O)-1.639；ESI-MS：m/z 691.1[M+H]+。
转化成钠盐
将Dowex 50W×8，200-400(5mL，H形式)加入到烧杯中并用去离子H2O(20mL)洗涤。然后向树脂中加入15％H2SO4的去离子H2O(20mL)溶液，并且将混合物轻轻搅拌15min，然后滗出(15mL)。将树脂转移到具有15％H2SO4的去离子H2O溶液的柱中，并且用15％H2SO4(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子H2O洗涤直至其为中性。将树脂转移回烧杯中，加入15％NaOH的去离子H2O(20mL)溶液，并且将混合物轻轻搅拌15min，然后滗出(1x)。将树脂转移到柱中并用15％NaOH的去离子H2O溶液(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子H2O洗涤直至其为中性。将CDN(化合物52，35mg，0.049mmol)溶于去离子H2O(8mL)中，加入到柱顶部中，并且用去离子H2O洗脱。将适当的级分合并在一起并冻干，得到为白色固体的钠盐形式(30mg，纯度：91％)。该盐形式(30mg)通过反相制备型HPLC(方法：柱，Waters Xbridge Prep OBD 5μmC18 150×30；条件：水(10mM NH4HCO3)(A)-ACN，(B)开始B 0，结束B 30；梯度时间(min)7；100％B保持时间(min)1，流速(ml/min)25)纯化，得到为白色固体的产物(25mg)。该产物(25mg，纯度：97.07％)通过反相制备型HPLC(方法：柱，Waters Xbridge Prep OBD 5μm C18150×30；条件：水(10mM NH4HCO3)(A)-ACN，(B)开始B 0，结束B 30；梯度时间(min)7；100％B保持时间(min)1，流速(ml/min)25)再次纯化，得到化合物52，铵盐，将其用离子交换树脂DOWEX 50W×8，200-400处理，得到为白色固体的化合物52，钠盐(16.1mg，65％)。1HNMR(400MHz,D2O)δ＝8.01(s,1H),7.93(s,1H),7.85(s,1H),6.37(br d,J＝17.3Hz,1H),5.83(d,J＝9.0Hz,1H),5.59(br d,J＝3.5Hz,0.5H),5.46(br d,J＝3.5Hz,0.5H),5.15-5.02(m,1H),4.97(br d,J＝4.5Hz,1H),4.62-4.52(m,2H),4.49(br s,1H),4.29-4.19(m,3H),4.10(br d,J＝4.5Hz,1H),3.43(s,3H)；19F NMR(376.5MHz,D2O)-200.863；31P NMR(162MHz,D2O)-1.676
ESI-MS：m/z＝691.2[M+H]+。
实施例5
步骤1：制备化合物5a
向5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-N2-异丁酰基-3'-O-甲基-D-鸟苷[CAS103285-33-2](5.2g，7.76mmol)的DMF(50mL)溶液中加入咪唑(2.38g，34.94mmol)和TBSCl(3.51g，23.29mmol)，在35℃下搅拌6h。用饱和NaHCO3水溶液猝灭反应混合物并用DCM萃取。
将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。该粗产物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-15％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物5a，该化合物原样用于下一步骤中。ESI-MS：m/z 784.4[M+H]+。
步骤2：制备化合物5b
在0℃下，将TFA(2mL，26.12mmol)和Et3SiH(8mL，50.03mmol)加入到上述化合物5a的DCM(160mL)溶液中。将所得混合物在0℃下搅拌30min，之后在室温下继续搅拌4h。将反应溶液用NaHCO3水溶液猝灭并用DCM萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的化合物5b(2.9g)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 12.12(br s,1H),8.36(br s,1H),7.71(s,1H),5.72(d,J＝7.5Hz,1H),5.41(br s,1H),4.78(dd,J＝7.5,5.1Hz,1H),4.30(brs,1H),3.98(dd,J＝12.6,2.2Hz,1H),3.84(d,J＝5.1Hz,1H),3.71(br s,1H),3.54(s,3H),2.68(spt,J＝6.9Hz,1H),1.28(d,J＝6.8Hz,3H),1.29(d,J＝6.8Hz,3H),0.81(s,9H),-0,07(s,3H),-0.29(s,3H)；ESI-MS：m/z 482.1[M+H]+。
步骤3：制备化合物5d
向5c[CAS 2241580-02-7](2g，5.02mmol)的DMF(10mL)溶液中加入咪唑(1.02g，15.06mmol)和TBSCl(1.51g，10.04mmol)，在室温下搅拌2h。将反应混合物用EtOAc稀释并用水洗涤。用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-15％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为黄色固体的化合物5d(2.57g，收率：100％)。ESI-MS：m/z 513.2[M+H]+。
步骤4：制备化合物5e
使用10％Pd/C(2.95g)作为催化剂，将化合物5d(1.285g，2.51mmol)的EtOAc(150mL)溶液在室温下在大气压下氢化2h。过滤反应混合物，并将滤液减压浓缩。以相同的规模重复反应，将两个反应的粗产物合并，以用于通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的化合物5e(1.69，收率：69％)。ESI-MS：m/z 487.1[M+H]+。
步骤5：制备化合物5f
向化合物5e(1.05g，2.16mmol)的DCM(40ml)溶液中加入4-硝基苯酚(900mg，6.47mmol)、Et3N(1.79mL，12.95mmol)和活化的分子筛，在室温下搅拌30min。将混合物冷却至-78℃，之后加入4-硝基苯基氯硫酸盐(1.54g，6.47mmol)的DCM(10mL)溶液，在-78℃下继续搅拌2.5h。将反应混合物过滤并用NaHCO3水溶液洗涤，用DCM萃取含水洗涤层。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-100％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到为白色固体的化合物5f(1.24g，收率：83.5％)。ESI-MS：m/z688.2[M+H]+。
步骤6：制备化合物5g
将活化的分子筛加入到化合物5b(105mg，0.218mmol)和氨基磺酸盐5f(180mg，0.262mmol)的无水THF(2mL)溶液，将所得混合物在N2下于室温下搅拌1h。接着，加入DMAP(133mg，1.09mmol)以引发反应，将反应混合物在室温下搅拌18h。通过过滤除去分子筛，并将滤液减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为黄色固体的化合物5g(157mg，收率：70％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 12.18(s,1H),9.07(s,1H),8.78(s,1H),8.39(s,1H),8.05(d,J＝7.3Hz,2H),7.66-7.59(m,1H),7.58-7.49(m,3H),7.19(br s,1H),6.32(d,J＝17.8Hz,1H),5.60-5.42(m,2H),5.60-5.42(m,1H),4.80-4.63(m,2H),4.49(dd,J＝3.8,11.0Hz,1H),4.36-4.27(m,2H),4.17-4.02(m,2H),3.80(dd,J＝2.3,4.8Hz,1H),3.51(s,3H),2.75-2.63(m,1H),1.33(d,J＝6.8Hz,3H),1.27(d,J＝6.8Hz,3H),0.91(s,9H),0.77(s,9H),0.89(s,3H),0.91(s,3H),-0.08(s,3H),-0.28(s,3H)。ESI-MS：m/z 1030.5[M+H]+。
步骤7：制备化合物5h
将Et3N(2.62g，25.92mmol)和三乙胺三氟化氢(6.28g，51.83mmol)加入到化合物5g(890mg，0.864mmol)的吡啶(10mL)溶液中，将所得反应混合物在N2下于室温下搅拌18h。将混合物过滤并减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-10％MeOH的DCM溶液)纯化，然后通过制备型反相HPLC(固定相：Phenomenex Synergi Max-RP，10μM，250mm×50mm；流动相：水(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化，得到为白色固体的化合物5h(397mg，收率：57％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.07(s,1H),11.60(s,1H),11.20(s,1H),8.89(brd,J＝9.0Hz,1H),8.71(d,J＝22.8Hz,2H),8.14(s,1H),8.05(d,J＝7.3Hz,2H),7.60-7.72(m,1H),7.47-7.60(m,2H),6.46(d,J＝19.9Hz,1H),5.84(d,J＝5.7Hz,1H),0.00(d,J＝6.1Hz,1H),5.66(dd,J＝52.1,4.5Hz,1H),5.22(br t,J＝5.1Hz,1H),4.50-4.69(m,2H),4.22-4.42(m,3H),4.05-4.16(m,1H),3.93(t,J＝4.1Hz,1H),3.82(br dd,J＝12.2,4.4Hz,1H),3.54-3.68(m,1H),3.42(s,3H),2.75(spt,J＝6.9Hz,1H),1.12(d,J＝6.9Hz,6H)；ESI-MS：m/z 802.3[M+H]+。
步骤8：制备化合物5i
将化合物5h(200mg，0.25mmol)和1H-四唑(1.82mL的3％-4％MeCN溶液，使用前在
分子筛上干燥)的无水THF/MeCN(1:1，12mL，使用前在
分子筛上干燥)溶液在N2下用活化的
分子筛处理2h，之后一次性加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(75mg，0.25mmol)。将反应混合物振摇过夜。以2h的时间间隔分两份加入附加量的2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(22.5mg+15mg，0.075mmol+0.05mmol)，之后继续振摇90min。加入tBuOOH溶液(68μL5.5M癸烷溶液，0.37mmol)，将反应混合物振摇30min。通过过滤除去分子筛，并且用二氯甲烷冲洗。用盐水洗涤滤液并减压浓缩。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％–10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物5i(30mg，收率：13％)。ESI-MS：m/z 917.5[M+H]+。
步骤9：制备化合物6，钠盐
在室温下，将上述化合物5i(30mg，0.033mmol)在33％甲胺的乙醇溶液(1mL)中搅拌直至完全转化(约2h)。将减压浓缩后获得的粗产物在MeCN中研磨。通过在填充有阳离子Na离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到为白色蓬松固体的化合物6，钠盐(14mg，收率：60％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,61℃)δppm 10.39(br s,1H),8.32(s,1H),8.19(s,1H),7.97(s,1H),7.07(br s,2H),6.31(br s,2H),6.24(dd,J＝15.7,2.7Hz,1H),5.78(d,J＝9.0Hz,1H),5.44(br d,J＝53.9Hz,1H),5.11(td,J＝9.3,4.0Hz,1H),4.42-4.57(m,1H),4.13-4.25(m,4H),4.11(d,J＝3.9Hz,1H),3.90-4.03(m,1H),3.79-3.88(m,1H),3.53(s,3H)；
31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm-1.45(s,1P)；ESI-MS：m/z 690.3[M+H]+。
实施例6
化合物9
步骤1：制备化合物6a
将化合物3h(1.0g，2.61mmol)与无水甲苯:CH3CN(v:v＝1:1，6mL×2)共蒸发，并且接着溶于无水DMF(18.8mL)中。然后在RT下，向其中加入三苯基膦(1.02g，3.91mmol)、NaN3(0.63g，9.73mmol)、四丁基碘化铵(192.7mg，0.52mmol)和CBr4(1.3g，3.91mmol)。将反应物在RT下搅拌12h后，用盐水(10mL)猝灭反应物并用EtOAc(20mL)分配。向混合物中加入饱和NaHCO3水溶液(20mL)，然后用EtOAc(20mL×3)萃取。然后将有机层合并，并相继经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(EtOAc:石油醚＝0％至100％，之后MeOH:DCM＝0％至5％)纯化，得到为黄色粉末的6a。ESI-MS：m/z 408.9[M+H]+。
步骤2：制备化合物6b
在15℃下，向6a(1.24g，3.04mmol)的DCM(16mL)溶液中加入2,4,6-三甲基吡啶(1.4g，11.56mmol)、AgNO3(1.96g，11.56mmol)和DMTrCl(1.54g，4.56mmol)。在15℃下搅拌5hr后，将反应混合物用MeOH(20mL)猝灭并用DCM(40mL)稀释。将有机层相继用盐水(20mL×2)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(EtOAc:石油醚＝0％至100％)纯化，得到为白色固体的6b(1.99g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.17-7.00(m,6H),6.93(s,4H),6.73-6.49(m,4H),5.28(s,2H),4.10(d,J＝7.3Hz,3H),3.79-3.56(m,5H),3.47(br d,J＝4.6Hz,1H),3.37-3.11(m,2H),2.94(s,1H),2.87(s,1H),2.61(s,6H),2.31(s,3H),2.03(s,1H),1.72-1.56(m,5H),1.53-1.35(m,2H),1.24(t,J＝7.2Hz,1H),0.99(t,J＝7.3Hz,3H)。ESI-MS：m/z 711.2[M+H]+。
步骤3：制备化合物6c
将6b(1.99g，2.8mmol)与作为催化剂的10％Pd/C湿(3.3g，2.8mmol)在EtOAc(100mL)中的悬浮液在RT(～15℃)下氢化(15psi)5h。将催化剂滤出，并且将滤液减压蒸发，得到为白色固体的粗制6c(1.31g)，将其直接用于下一步骤中而无需任何进一步纯化。
ESI-MS：m/z 6852[M+H]+。
步骤4：制备化合物6d
将化合物6c(213mg，0.31mmol)与无水甲苯:CH3CN(v:v＝1:1，3×2mL)共蒸发，并溶于无水DCM(8mL)中；然后在N2下于RT(～10℃)下，向其中加入4-硝基苯酚(129.8mg，0.93mmol)、Et3N(188.8mg，1.86mmol)和活化的
分子筛(～3g)；将混合物冷却至-78℃，然后在N2下于-78℃下快速加入4-硝基苯基氯硫酸盐3n(221.74mg，0.93mmol)。在-78℃下搅拌3hr后，将反应混合物用DCM(30mL)稀释，并通过硅藻土垫过滤。将滤液在DCM/饱和NaHCO3水溶液(30mL/45mL)和用DCM(15mL×3)萃取的水层之间分配。将有机层合并，并相继用盐水(20mL×2)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(EtOAc:石油醚＝0％至90％)纯化，得到为黄色固体的6d(142mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.259.05(m,2H),8.35-8.26(m,1H),8.05-7.94(m,4H),7.76-7.64(m,1H),7.58(br t,J6.7Hz,1H),7.50(t,J＝7.5Hz,2H),7.38-7.27(m,4H),7.24(s,1H),7.20-7.10(m,7H),6.65(br d,J＝8.8Hz,2H),6.62(br d,J＝7.9Hz,2H),5.86(s,1H),4.53(s,1H),4.41(d,J＝7.6Hz,1H),4.09(q,J＝7.3Hz,2H),4.02-3.93(m,2H),3.79(br d,J＝12.5Hz,1H),3.71(s,3H),3.70(s,3H),2.88(s,1H),2.01(s,3H),1.22(t,J＝7.2Hz,3H)。ESI-MS：m/z 886.2[M+H]+。
步骤5：制备化合物6f
在使用前，将化合物6d与无水甲苯:CH3CN(1:1，6ml×2)共蒸发。将6d(699mg，0.79mmol)、6e(739.81mg，1.1mmol，CAS#103285-33-2)和活化的
分子筛(～5g)在无水THF(20mL)中的混合物在N2下于RT下搅拌1h。一次性加入DMAP(481.97mg，3.94mmol)，并且将反应混合物在N2下于40℃(油温)下搅拌5hr。将反应混合物用DCM(15mL)稀释，并通过硅藻土垫过滤。将滤液减压浓缩，得到黄色残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(MeOH:DCM＝0％至10％)纯化，得到为淡黄色固体的6f(969mg)。ESI-MS：m/z＝1416.2[M+H]+。
步骤6：制备化合物6g
在N2下将DCA(6％DCM溶液，10.8mL)加入到化合物6f(1.1g，0.78mmol)的DCM(22mL)溶液中，将所得红色溶液在RT下搅拌30min，然后用吡啶(12mL)猝灭。将澄清的反应混合物减压浓缩，得到无色残余物，该残余物通过硅胶快速柱色谱法(MeOH:DCM＝0％至10％)纯化，得到为白色固体的化合物6g(740mg)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.67(s,1H),8.40(s,1H),8.14-8.09(m,3H),7.71-7.65(m,1H),7.62-7.56(m,2H),6.19(d,J＝5.3Hz,1H),6.03(s,1H),5.53(t,J＝5.4Hz,1H),4.84(br s,1H),4.48(s,1H),4.43(s,1H),4.32(t,J＝4.8Hz,1H),4.14(br d,J＝3.8Hz,1H),3.99(d,J＝8.0Hz,1H),3.83-3.77(m,1H),3.73-3.66(m,2H),3.60(s,3H),3.54(d,J＝13.3Hz,1H),3.30-3.23(m,2H),2.67(td,J＝6.7,13.7Hz,1H),1.17(dd,J＝2.4,6.9Hz,6H)。ESI-MS：m/z 812.2[M+H]+。
步骤7：制备化合物6i
将化合物6g(105mg，0.129mmol)与无水甲苯:乙腈(1:1，v/v，3×30mL)的混合物共蒸发，然后溶于无水THF(12mL)中，加入
分子筛粉末(0.3g)和0.45M四唑的CH3CN(2.3mL，1.03mmol)溶液，并且将所得异质混合物用氩气鼓泡4min。将该混合物在RT下搅拌10min后，在RT下在30min内加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺的CH3CN(59mg，0.19mmol，3.0mLCH3CN)溶液。将反应物搅拌1.5hr后，将混合物滤出，然后用THF(15mL)洗涤。(化合物6h.MS：m/z 911[M+H]+)。所得混合物直接用于下一步骤中。加入0.5M碘溶液(在THF:水:Py＝8:1:1，v/v/v中)直至颜色持续。将反应混合物在RT下搅拌30min后，将混合物用EtOAc(30mL)稀释，并且用饱和Na2S2O3水溶液猝灭过量的碘(直至脱色)。分离层；将有机层用饱和NaHCO3水溶液(1×20mL)和盐水(1×20mL)洗涤。将水层用EtOAc(1×20mL)反萃取。将合并的有机层蒸发至干，将所得粗料通过硅胶快速柱色谱法(MeOH的DCM溶液：0％至15％，v/v)纯化，以生成化合物6i(75mg)；ESI-MS：m/z 927[M+H]+。
步骤8：制备化合物9
将化合物6i(75mg，0.08mmol)的MeNH2(33％EtOH溶液，6mL)溶液在40℃下搅拌2hr30min，减压浓缩。
将所得粗固体用DCM(15mL)洗涤，并且将沉淀物滤出并通过反相制备型HPLC(柱：Synergi 4μ，Hydro RP，250mm×30mm×10μM，流动相：缓冲液A：50mM三乙基乙酸铵的水溶液；缓冲液B：50mM三乙基乙酸铵的CH3CN溶液；梯度：0％-40％的B，经过30min，流速：24mL/min)纯化，得到为TEAA盐的化合物9(18.2mg)。通过在填充有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到化合物9，钠盐(17.3mg)。1H NMR(400MHz,D2O):δ7.96(s,1H),7.72(s,1H),7.12(s,1H),5.90-6.12(m,3H),4.97(s,1H),4.79(s,1H),4.60(m,1H),4.41(t,J＝5.6Hz,1H),4.25(d,J＝4.0Hz,1H),4.05(d,J＝8.0Hz,1H),3.90-4.01(m,1H),3.85(d,J＝8.0Hz,1H),3.55(d,J＝12.8Hz,1H),3.41(s,3H),3.31(d,J＝12.8Hz)。31P NMR(162MHz,D2O):δ-1.46(s,1P)。ESI-MSs：m/z:698[M+1]-。
实施例7
化合物(*R)14A
步骤1：制备化合物7b
将化合物1g(80mg，0.099mmol)与无水甲苯:乙腈(1:1，v/v，3×15mL)的混合物共蒸发，然后溶于无水THF(10mL)中，加入
分子筛粉末(0.3g)和0.45M四唑的CH3CN(1.3mL，0.598mmol)溶液，并且将所得异质混合物用氩气鼓泡4min。将该混合物在RT下搅拌10min后，在RT下在30min内加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺的CH3CN(48mg，0.16mmol，溶于3.0mLCH3CN中)溶液。将反应物搅拌1.5hr后，将混合物滤出，并用THF(15mL)洗涤。(化合物7a.MS：m/z901[M+H]+)。所得混合物直接用于下一步骤中。
在0℃下，在5min内非常缓慢地加入硼烷二甲基硫醚复合物溶液(2.0M的THF溶液，BH3-DMS，180μL，0.35mmol)。将反应物在RT下搅拌20min后，将反应混合物快速滤出，用EtOAc(50mL)稀释并用水(20mL)猝灭。分离层；将有机层用水(1×20mL)和盐水(1×20mL)洗涤；将水层用EtOAc(1×20mL)反萃取。然后将有机层合并并蒸发至干。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％-15％MeOH的DCM溶液，v/v)纯化，得到7b(48mg)。ESI-MS：m/z 915[M+H]+。
步骤2：制备化合物(*R)14A
将化合物7b(48mg)的MeNH2(33％EtOH溶液，6mL)溶液在40℃下搅拌2hr并减压浓缩。将所得粗固体用DCM(15mL)洗涤，并且将沉淀物滤出并通过反相制备型HPLC(柱：Synergi 4μm,Hydro RP，250mm×4.6mm，流动相：缓冲液A：50mM三乙基乙酸铵的水溶液；缓冲液B：50mM三乙基乙酸铵的CH3CN溶液，梯度：0％-40％的B，经过30min，流速24mL/min)纯化，得到为TEAA盐的化合物14(20.2mg)。通过在填充有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到化合物(*R)14A，钠盐(18.8mg)。1H NMR(400MHz,D2O)δ7.92(s,1H),7.81(s,1H),7.08(s,1H),6.17-6.24(d,J＝20.8Hz,1H),5.95(d,J＝7.2Hz,1H),5.45(s,1H),5.29(s,0.5H),5.16(s,0.5H),4.70-4.85(m,1H),4.49(s,1H),4.33(d,J＝8Hz,1H),4.27(s,1H),4.05-4.15(m,1H),3.96(d,J＝10.8Hz,1H),3.64(d,J＝12.4Hz,1H),3.44(s,1H),3.30-3.44(m,2H),0.3(br.s,3H)；31P NMR(162MHz,D2O)δ95.57ppm(s,1P)19F NMR(379MHz,D2O)δ宽峰-196.84ppm(s,1F)；ES-MS：m/z:686.8[M+H]-。
实施例8
化合物41
步骤1：制备化合物8b和8c
在-5℃下，将NaH(60％矿物油溶液，4.864g，121.61mmol)加入到腺苷8a(25g，93.549mmol)的DMF(800mL)溶液中。将混合物在-5℃下搅拌1.5h后，在2h内滴加4-甲氧基苄基氯(15.15g，112.26mmol)的DMF(50mL)溶液。在加入完成后，将反应物升温至RT并搅拌18h。将水(15mL)加入到反应物中并将混合物在15℃下搅拌10min。将所得混合物与其它反应物合并，并在高真空下蒸发DMF。将悬浮液用MeOH稀释，过滤并将滤液减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(DCM:MeOH＝100:0至20:1)纯化，得到8b和8c；通过反相制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi Max-RP 250mm×50mm×10μm；条件：水-MeCN，开始B 2％，结束B 36％；梯度时间：18min；100％B保持时间：14min；流速：100mL/min)分离混合物，得到8b(75g)和8c(15.5g)，均为白色固体(66％总收率)。
化合物8b.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.09(s,1H),7.36(s,2H),7.06(d,J＝8.4Hz,2H),6.72(d,J＝8.8Hz,2H),6.03(d,J＝6.4Hz,1H),5.51(dd,J＝4.4,7.2Hz,1H),5.32(d,J＝4.8Hz,1H),4.71-4.46(m,2H),4.43-4.30(m,2H),4.03(br d,J＝2.8Hz,1H),3.74-3.61(m,4H),3.61-3.49(m,1H)；ESI-MS：m/z＝388.1[M+H]+。
化合物8c：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.35(s,1H),8.13(s,1H),7.49-7.30(m,4H),6.93(d,J＝8.4Hz,2H),5.92(d,J＝6.4Hz,1H),5.57(d,J＝6.4Hz,1H),5.51(dd,J＝4.4,7.3Hz,1H),5.64-5.40(m,1H),5.56-5.37(m,1H),4.89-4.73(m,1H),4.72-4.62(m,1H),4.62-4.49(m,1H),4.60-4.48(m,1H),4.15-.3.98(m,2H),3.75(s,3H),3.70-3.60(m,1H),3.53(ddd,J＝3.6,7.6,11,8Hz,1H)；ESI-MS：m/z 388.1[M+H]+
步骤2：制备化合物8d
在0℃下，向化合物8e(10g，25.81mmol)的吡啶(200mL)溶液中滴加三甲基氯硅烷(14.74mL，116.162mmol)。将反应混合物搅拌2h后，将其冷却至0℃，并且在30min内在0℃下滴加苯甲酰氯(6mL)。将反应混合物在RT下搅拌过夜，并且小心地在0℃下用水(30mL)猝灭，然后在0℃下滴加氨水(60mL)。将混合物搅拌1.5h后，将反应物用DCM(800mL)稀释。将有机层相继用盐水(200mL×3)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。残余物用EtOAc(100mL)研磨，得到为白色固体的化合物8d(9.8g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.21(s,1H),8.72(d,J＝13.2Hz,2H),8.06-7.89(m,2H),7.71-7.58(m,1H),7.57-7.46(m,2H),7.31(d,J＝8.8Hz,2H),6.90(d,J＝8.8Hz,2H),6.05(d,J＝6.0Hz,1H),5.67(d,J＝6.4Hz,1H),5.18(t,J＝5.6Hz,1H),4.91-4.76(m,1H),4.73-4.59(m,1H),4.53(d,J＝11.6Hz,1H),4.17-4.04(m,2H),3.72(s,3H),3.66(td,J＝4.4,12.0Hz,1H),3.53(ddd,J＝3.6,6.0,12.0Hz,1H)；ESI-MS：m/z＝388.1[M+H]+
步骤3：制备化合物8e
在0℃下，向化合物8d(7g，14.24mmol)、三苯基膦(5.6g，21.36mmol)、TBAI(1.05g，2.85mmol)和NaN3(6.67g，102.54mmol)在DMF(90mL)中的搅拌悬浮液中分批加入CBr4(7.085g，21.363mmol)，得到黄色悬浮液。在35℃下搅拌开启后，将混合物在搅拌条件下倒入饱和NaHCO3水溶液(500mL)中。将混合物用DCM(200mL×3)萃取。然后将有机层合并，并相继经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的8e(6.4g)。ESI-MS：m/z＝517.2[M+H]+
步骤4：制备化合物8f
向8e(6.0g，11.61mmol，在使用前与吡啶共蒸发两次)的吡啶(100mL)溶液中加入DMTrCl(7.87g，23.23mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌过夜后，将其用EA(800mL)稀释并用饱和NaHCO3(200mL×2)和盐水(200mL×2)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(石油醚/EtOAc)纯化，得到为黄色固体的8f(6.8g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.21(s,1H),8.64(s,1H),8.55(s,1H),8.58-8.45(m,1H),8.04(d,J＝7.2Hz,2H),7.74-7.59(m,1H),7.58-7.47(m,2H),7.28(d,J＝8.8Hz,2H),7.22(dd,J＝2.8,6.8Hz,2H),7.15-7.07(m,5H),6.98(d,J＝8.8Hz,2H),6.91(d,J＝8.8Hz,2H),6.72(d,J＝8.8Hz,2H),6.60(d,J＝8.8Hz,2H),6.27(d,J＝7.6Hz,1H),5.24(dd,J＝4.4,7.6Hz,1H),4.30(d,J＝10.4Hz,1H),4.22(dd,J＝4.8,7.8Hz,1H),4.05-3.99(m,1H),3.80-3.58(m,10H),3.21(dd,J＝4.8,12.8Hz,1H),2.56(d,J＝4.4Hz,1H)；ESI-MS：m/z＝819.4[M+H]+。
步骤5：制备化合物8g
向8f(6.8g，8.3mmol)在THF(80mL)中的混合物中一次性加入PPh3(3.27g，12.46mmol)；在N2下于40℃下，将混合物搅拌2hr，之后加入水(30mL)，然后再进一步搅拌12hr，得到无色溶液。将混合物与另一个放大混合物合并。减压除去大部分挥发性物质，并且将残余的水层在DCM/水之间分配。收集层并用DCM(200mL×3)萃取。然后将有机层合并，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的8g(6.4g，89％总收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.74-8.65(m,1H),8.54(s,1H),8.13-8.01(m,2H),7.74-7.63(m,1H),7.62-7.51(m,2H),7.31(d,J＝8.8Hz,2H),7.24(dd,J＝3.2,6.4Hz,2H),7.19-7.07(m,5H),6.97(dd,J＝8.8,18.0Hz,4H),6.73(d,J＝8.8Hz,2H),6.62(d,J＝9.2Hz,2H),6.25(d,J＝7.6Hz,1H),5.16(dd,J＝4.4,7.6Hz,1H),4.30(d,J＝10.8Hz,1H),4.16-4.04(m,2H),4.01-3.95(m,1H),3.84-3.59(m,9H),2.72(d,J＝4.8Hz,1H),2.67-2.58(m,1H),2.67-2.58(m,1H)；ESI-MS：m/z＝794.4[M+H]+。
步骤6：制备化合物8h
在N2下于-78℃下，将4-硝基苯基氯硫酸盐(5.57g，23.46mmol)的无水DCM(5mL)溶液快速加入到8g(6.2g，7.82mmol)、4-硝基苯酚(3.26g，23.46mmol)、Et3N(4.75g，46.92mmol)在无水DCM(20mL)的混合物中，然后在1.5hr内升温至室温。将混合物转移到分液漏斗中，用饱和NaHCO3水溶液(200mL×4)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-100％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到为白色固体的8h(6.2g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.32(br s,1H),9.29(br t,J＝5.6Hz,1H),8.72(s,1H),8.33-8.24(m,2H),8.13(s,1H),8.07(d,J＝7.2Hz,2H),7.72-7.63(m,1H),7.60-7.46(m,4H),7.31(d,J＝8.4Hz,2H),7.27-7.19(m,2H),7.18-7.06(m,5H),6.95(d,J＝8.0Hz,4H),6.73(d,J＝9.2Hz,2H),6.60(d,J＝9.2Hz,2H),6.30(d,J＝7.8Hz,1H),5.11(dd,J＝4.8,7.8Hz,1H),4.39-4.22(m,2H),4.10-3.93(m,2H),3.83-3.59(m,10H),2.84(d,J＝4.8Hz,1H)；ESI-MS：m/z＝994.2[M+H]+。
步骤7：制备化合物8j
将39h(1.3g，1.92mmol)、8h(2.48g，2.5mmol)和分子筛(1.5g)在无水THF(20mL)中的悬浮液在N2下于室温下搅拌30min，然后加入DMAP(0.94g，7.7mmol)。在N2下于45℃下搅拌过夜后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并将滤液减压浓缩，得到黄色残余物；将残余物溶于DCM(300mL)中，并用饱和NaHCO3水溶液(100mL×3)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-70％EtOAc的PE溶液)纯化，得到为白色固体的8j(2.7g)。ESI-MS：m/z＝766.2[M+H]+
步骤8：制备化合物8k
向8j(2.7g，1.76mmol)在DCM(80mL)中的混合物中加入水(318mg，17.64mmol)和DCA(335mg，4.06mmol)，得到黄色溶液。将混合物在RT下搅拌1.5小时后，加入MeOH(2mL)，然后加入吡啶(558.1mg)，得到无色溶液，将其进一步搅拌15min。减压浓缩溶剂，并且该残余物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的化合物8k(1.28g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.26(br d,J＝10.8Hz,2H),9.02-8.50(m,5H),8.05(d,J＝7.6Hz,4H),7.79-7.62(m,2H),7.61-7.48(m,4H),7.36(d,J＝8.4Hz,2H),6.93(d,J＝8.4Hz,2H),6.50(dd,J＝2.4,16.8Hz,1H),6.09(d,J＝5.6Hz,1H),5.99-5.83(m,1H),5.79(br d,J＝6.4Hz,1H),5.53-5.27(m,2H),5.11-4.93(m,1H),4.79-4.53(m,2H),4.42-4.29(m,1H),4.27-4.03(m,2H),3.89-3.71(m,4H),3.68-3.56(m,1H),3.55-3.38(m,2H)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)＝-202.67(s,1F)；ESI-MS：m/z＝926.3[M+H]+
步骤9：制备化合物8l
在使用前，THF在钠/二苯甲酮上新鲜蒸馏，并且CH3CN在CaH2上新鲜蒸馏。
向8k(200mg，0.21mmol，通过冻干干燥)的THF(6mL)溶液中加入
分子筛(800mg，粉末)和1H-四唑溶液(4.8mL，0.45M，945mg四唑(通过冻干干燥)的30mL无水CH3CN溶液，然后加入
MS(1g，粉末)，在使用前在N2下搅拌1hr)。在用N2吹扫烧瓶后。在25min内将2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(117mg，0.39mmol)的THF(0.8mL)溶液经由注射器滴加；将反应混合物在RT下搅拌1.5hr后，加入TBHP溶液(0.34mL，1.73mmol，5M)。将混合物再搅拌30min后，将反应混合物减压浓缩，并且该残余物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-5％DCM的MeOH溶液)纯化，得到为白色固体的8l(153mg，0.14mmol)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.85(br s,1H),9.79-9.72(m,1H),8.89(s,1H),8.87-8.84(m,1H),8.64-8.59(m,1H),8.20-8.14(m,1H),8.10-8.04(m,4H),8.02-7.95(m,3H),7.65-7.56(m,3H),7.55-7.45(m,6H),6.05-5.94(m,1H),4.81-4.71(m,2H),4.66(br d,J＝11.6Hz,1H),4.52-4.47(m,1H),4.36-4.21(m,4H),4.01(br dd,J＝4.4,8.8Hz,1H),3.92-3.80(m,6H),2.67(t,J＝6.0Hz,1H),2.43-2.28(m,2H)；19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-196.54--197.10(m,1F)；31P NMR(162MHz,CDCl3)δ-2.49(s,1P),-4.38(s,1P)；ESI-MS：m/z＝780.2[M/2+H]+
步骤10：制备化合物8m
将8l(153mg，0.14mmol)的MeNH2/EtOH(5mL)溶液在RT下搅拌2hr。减压蒸发挥发性物质，得到溶于水(20mL)中的白色固体；用DCM(10mL×3)洗涤水层。将水层冻干，得到为白色固体的114mg的8m。
步骤11：制备化合物41，铵盐
将苯甲醚(158mg，1.46mmol)的TFA(1.57mL，20.47mmol)溶液冷却至0℃，并加入到8m(114mg)中。将反应混合物在0℃下搅拌2.5hr后，通过用氮气流在0℃下吹扫除去TFA。将剩余的反应混合物在0℃下用MeNH2(33％EtOH溶液，1.6mL)猝灭，并减压蒸发至干。将残余物在DCM/水(15mL×3/15mL)之间分配。将水层冻干，得到白色残余物，该白色残余物通过反相制备型HPLC(柱：Xbridge，150mm×30mm×10μm，条件：A：水(10mM NH4HCO3)-ACN:MeCN，开始B：5％，结束B：35％；流速(mL/min)25)进一步纯化，得到为白色固体的化合物41，铵盐(45mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.63(br s,1H),8.44-8.37(m,1H),8.25(br s,1H),8.04(br s,2H),7.38-6.89(m,2H),6.41(br d,J＝19.6Hz,1H),6.13(d,J＝8.4Hz,1H),6.01-5.83(m,1H),5.60(br s,1H),5.31(br s,1H),4.45(br d,J＝5.2Hz,1H),4.28(br s,2H),4.12-4.04(m,1H),3.99(br d,J＝11.2Hz,1H)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-198.36--200.33(m,1F)；31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm-3.40(br s,1P)；ESI-MS：m/z＝659.9[M+H]+
步骤12：制备化合物41，钠盐
将Dowex 50W×8，200-400(9mL，H形式)加入到烧杯(用于45mg的化合物41，铵盐)中并用去离子水(50mL)洗涤。然后向树脂中加入15％H2SO4的去离子水溶液，将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(50mL)。将树脂转移到具有15％H2SO4的去离子水溶液的柱中，并且用15％H2SO4(至少4CV[柱体积])洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为中性。将树脂转移回烧杯中，加入15％NaOH的去离子水溶液(20mL)，并且将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(1x)。将树脂转移到柱中并用15％NaOH的水溶液(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为中性。将化合物41，铵盐(45mg)溶于最小量的去离子水中，加入到柱顶部中，并且用去离子水洗脱。将所需的级分合并在一起并冻干，得到为白色固体的化合物41，钠盐(31.4mg)。1H NMR(D2O,400MHz)δ8.06(s,1H),8.00(s,1H),7.62-7.87(m,1H),7.28(br s,1H),6.24(br d,J＝12.8Hz,1H),6.03(br d,J＝8.0Hz,1H),5.49-5.74(m,1H),5.22-5.31(m,1H),5.11(br d,J＝16.4Hz,1H),4.53(br s,1H),4.44(br d,J＝4.4Hz,1H),4.39(brs,1H),4.34(br d,J＝10.4Hz,1H),3.98(br d,J＝8.8Hz,1H),3.71-3.79(m,1H),3.60-3.70(m,1H)；19F NMR(376MHz,D2O)δ-201.23(br s,1F),31P NMR(162MHz,D2O)δ-2.76(br s,1P)；ESI-MS：m/z＝660.1[M+H]+
实施例9
化合物8
步骤1：制备化合物9b
在0℃下，向化合物9a(8.3g，27.27mmol，CAS#2086765-82-2)的无水吡啶(160mL)溶液中滴加三甲基氯硅烷(14.8g，136.36mmol)，在0℃下搅拌1.5h。滴加苯甲酰氯(19.2g，136.36mmol)，并且在室温下继续搅拌3h。在冰浴中冷却的反应溶液通过加入水(50mL)猝灭，并且在室温下搅拌过夜。加入氨水(70mL的25％溶液)并继续再搅拌一小时。反应溶液用EtOAc萃取，将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-90％EtOAc的石油醚溶液)进行纯化，得到为黄色固体的化合物9b(9.1g，收率：80％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.11(s,1H),8.60(s,1H),8.07(d,J＝7.3Hz,2H),7.69(d,J＝3.8Hz,1H),7.66-7.61(m,1H),7.57-7.51(m,2H),6.68(d,J＝3.5Hz,1H),5.13(td,J＝6.3,12.0Hz,1H),4.92(t,J＝6.8Hz,1H),4.80(t,J＝5.3Hz,1H),4.55(dd,J＝4.4,7.2Hz,1H),3.59-3.46(m,2H),2.32-2.20(m,2H),2.16-2.03(m,1H),1.49(s,3H),1.23(s,3H)；ESI-MS：m/z 409.1[M+H]+。
步骤2：制备化合物9c
在冰冷却下，将DMAP(448mg，3.76mmol)和甲苯磺酰氯(2.80g，14.69mmol)加入到化合物9b(3.0g，7.35mmol)和Et3N(2.33g，22.04mmol)的DCM(60mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌4h。混合物用水猝灭并且用DCM萃取。将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并减压蒸发，得到甲苯磺酸化化合物。将粗产物溶于DMF(30mL)中，加入叠氮化钠(2.34g，36.00mmol)，并且将所得反应混合物在30℃下搅拌过夜。将反应溶液冷却至室温，用饱和Na2CO3水溶液稀释，并用EtOAc萃取。将有机层分离，用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并减压蒸发。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-40％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到为黄色固体的化合物9c(2.1g，收率：62％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.13(s,1H),8.60(s,1H),8.10-8.03(m,2H),7.69(d,J＝3.8Hz,1H),7.67-7.61(m,1H),7.57-7.51(m,2H),6.69(d,J＝3.8Hz,1H),5.16(td,J＝6.3,12.0Hz,1H),4.99-4.89(m,1H),4.55(dd,J＝5.1,7.2Hz,1H),3.63-3.46(m,2H),2.41-2.27(m,2H),2.20-2.07(m,1H),1.50(s,3H),1.24(s,3H)；ESI-MS：m/z 434.1[M+H]+
步骤3：制备化合物9d
将TFA(40mL)加入到化合物9c(5.4g，12.46mmol)的DCM(100mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将减压浓缩后获得的残余物重新溶于MeOH(20mL)中，然后加入饱和K2CO3水溶液(40mL)。将所得混合物搅拌20min，之后将其用DCM萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并减压蒸发，得到化合物9d，该化合物原样用于下一步骤中。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.08(s,1H),8.57(s,1H),8.07(br d,J＝7.5Hz,2H),7.67-7.61(m,2H),7.57-7.51(m,2H),6.66(d,J＝3.5Hz,1H),5.10-5.01(m,1H),4.97(d,J＝6.5Hz,1H),4.89(d,J＝4.8Hz,1H),4.27(td,J＝6.1,8.1Hz,1H),3.84-3.80(m,1H),3.60-3.48(m,2H),2.34-2.25(m,1H),2.23-2.12(m,1H),1.67-1.55(m,1H)；ESI-MS：m/z 394.0[M+H]+。
步骤4：制备化合物9e
将上述化合物9d溶于DCM(90mL)中，然后加入咪唑(2.42g，35.52mmol)和TBSCl(2.68g，17.76mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，之后将其倒入水中并用DCM萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到9e及其3’-区域异构体。通过制备型反相HPLC(固定相：Phenomenex Synergi，10μm Max-RP，250mm×50mm；流动相：水(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)完成分离，得到作为第一洗脱异构体的化合物9e(2.3g，收率：50％，来自9c)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.05(br s,1H),8.56(s,1H),8.07(d,J＝7.8Hz,2H),7.60-7.68(m,2H),7.47-7.59(m,2H),6.68(d,J＝3.5Hz,1H),5.10-5.23(m,1H),4.63(d,J＝5.5Hz,1H),4.37(dd,,J＝8.0,5.8Hz,1H),3.74-3.84(m,1H),3.48-3.62(m,2H),2.10-2.30(m,2H),1.66-1.85(m,1H),0.64(s,9H),-0.16(s,3H),-0.37(s,3H)；ESI-MS：m/z 508.1[M+H]+。
步骤5：制备化合物9f
将DMTrCl(3.87g，11.43mmol)、AgNO3(4.85g，28.56mmol)和2,4,6-三甲基吡啶(3.46g，28.56mmol)加入到化合物9e(2.9g，5.71mmol)的DCM(50mL)溶液中，将所得混合物在35℃下搅拌过夜。过滤并减压浓缩反应溶液。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-20％EtOAc的石油醚溶液)纯化，然后通过制备型反相HPLC(固定相：PhenomenexSynergi Max-RP，10μm，250mm×50mm，流动相：0.1％含水TEA(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化，得到化合物9f(3.6g，收率，78％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.04(s,1H),8.59(s,1H),8.08(d,J＝7.4Hz,2H),7.66(d,J＝3.5Hz,1H),7.61-7.65(m,1H),7.55(q,J＝7.3Hz,4H),7.40(t,J＝8.6Hz,4H),7.27-7.35(m,2H),7.18-7.26(m,1H),6.85-6.96(m,4H),6.68(d,J＝3.5Hz,1H),5.50(q,J＝9.1Hz,1H),4.42(dd,J＝9.1,4.1Hz,1H),3.74(s,3H),3.73(s,3H),3.64(br d,J＝3.9Hz,1H),3.27-3.37(m,1H),3.20(dd,J＝12.3,5.5Hz,1H),2.26-2.37(m,1H),1.71-1.84(m,1H),1.59-1.71(m,1H),0.60-0.78(m,9H),-0.27--0.18(m,3H),-0.59--0.51(m,3H)；ESI-MS：m/z 810.1[M+H]+。
步骤6：制备化合物9g
将化合物9f(2.3g，2.84mmol)的EtOAc(80mL)溶液在Pd/C(10％碳载量，2.0g)的存在下于35℃下在H2(50psi)下搅拌过夜。通过在硅藻土上过滤除去催化剂，并且用EtOAc洗涤滤饼。将滤液减压浓缩，得到化合物胺，该胺立即原样用于下一步骤中。将粗产物溶于DCM(90mL)中，然后加入4-硝基苯酚(2.81g，20.21mmol)、Et3N(1.23g，12.12mmol)和活化的分子筛。在N2下将所得混合物冷却至-78℃，之后滴加4-硝基苯基氯硫酸盐(2.88g，12.12mmol)的DCM(10mL)溶液，使反应溶液升温至室温并搅拌过夜。通过过滤除去分子筛。将滤液用饱和NaHCO3水溶液洗涤，用Na2SO4干燥，并且浓缩。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-20％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到化合物9g(1.4g，收率：80％(LCUV纯度，76％))。
ESI-MS：m/z 986.6[M+H]+。
步骤7：制备化合物9h
向反应烧瓶中装入DMAP(0.55g，4.47mmol)、无水THF(6mL)和活化的
分子筛。将所得混合物在室温下在惰性气氛下振摇2h。同时，将5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-N2-异丁酰基-3'-O-甲基-D-鸟苷[103285-33-2](0.33g，0.46mmol)的溶液和化合物9g(1.16g，0.89mmol)的溶液，各自溶于无水THF(2×6mL)中，在活化的
分子筛上干燥(约2h)。将两种溶液(分别为5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-N2-异丁酰基-2'-O-甲基鸟苷和化合物9g)相继转移到反应烧瓶中。将反应混合物在50℃下搅拌18h，之后将其冷却至室温并用DCM稀释。通过过滤除去分子筛并用DCM充分冲洗。将滤液用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物9h(1.17g，收率：86％)。ESI-MS：m/z 1515.9[M+H]+。
步骤8：制备化合物9i
将化合物9h(1.13g，0.75mmol)的DCM(20mL)溶液在水(67μL，3.73mmol)的存在下用DCA(250μL，2.98mmol)处理2.5h。通过加入吡啶(360μL，4.47mmol)猝灭反应混合物。将所得溶液残余物原样置于用于纯化的硅胶柱上(梯度洗脱：0％-10％MeOH的DCM溶液)，得到为白色固体的化合物9i(595mg，收率：87％)。
1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 12.01(br s,1H),9.70(br s,1H),8.71(br s,1H),8.53(s,1H),8.02-8.07(m,2H),7.87(s,1H),7.57-7.63(m,1H),7.49-7.57(m,2H),7.13(d,J＝3.7Hz,1H),7.00(d,J＝3.6Hz,1H),6.12(d,J＝4.0Hz,1H),5.49(t,J＝4.5Hz,1H),4.74-4.83(m,2H),4.39(br t,J＝5.3Hz,1H),4.12-4.27(m,1H),4.04-4.10(m,1H),3.97-4.04(m,1H),3.74-3.82(m,1H),3.57(s,3H),3.37-3.46(m,1H),3.17-3.26(m,1H),2.65(spt,J＝7.0Hz,1H),2.45-2.54(m,1H),2.39-2.49(m,1H),1.96-2.03(m,1H),1.17(d,J＝6.6Hz,3H),1.18(d,J＝6.6Hz,3H),0.75(s,9H),-0.23(s,3H),-0.44(s,3H)；ESI-MS：m/z911.6[M+H]+。
步骤9：制备化合物9j
将化合物9i(530mg，0.58mmol)的无水THF/MeCN(1:1，108mL，使用前在活化的
分子筛上干燥)溶液用活化的
分子筛在惰性气氛下(约2h振摇)处理，加入1H-四唑(5.0mL的3％-4％MeCN溶液，1.73mmol，使用前在活化的
分子筛上干燥)，并且将混合物在室温下振摇1h。接下来，立刻加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(180μL，0.58mmol)并继续振摇18h。最后，将两份相等的tBuOOH(2×120μL 5.5M癸烷溶液，2×0.63mmol)以30min的时间间隔加入，之后将反应混合物再振摇2h。通过过滤除去分子筛并用DCM冲洗。将滤液用饱和Na2S2O3水溶液和饱和NaHCO3水溶液与盐水的混合物洗涤，用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物9j(130mg，收率：21％)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm-0.04(br s,3H)0.11(s,3H)0.85(s,9H)0.93(br d,J＝6.9Hz,3H)1.10(d,J＝6.9Hz,3H)2.42-2.52(m,1H)2.52-2,69(m,2H)2.89(td,J＝5.9,2.8Hz,2H)2.93(br d,J＝5.7Hz,1H)3.37-3.50(m,1H)3.56-3.67(m,4H)4.35(d,J＝2.8Hz,1H)4.37-4.48(m,4H)4.53(dt,J＝5.3,3.7Hz,1H)4.80(br s,1H)4.99(ddd,J＝11.0,5.3,3.7Hz,1H)5.27-5.32(m,1H)5.95-6.02(m,2H)7.03(d,J＝3.7Hz,1H)7.12(d,J＝3.7Hz,1H)7.52-7.58(m,2H)7.58-7.65(m,1H)7.59-7.67(m,1H)8.04(s,1H)8.12(d,J＝7.3Hz,2H)8.93(br s,1H)9.10(br s,1H)10.66(br s,1H)12.10(br s,1H)；31P NMR(162MHz，氯仿-d)δppm-3.52(s,1P)；ESI-MS：m/z 1026.6[M+H]+。
步骤10：制备化合物8，钠盐
将化合物9j(118mg，0.11mmol)在33％甲胺的乙醇溶液(5.9mL)中于40℃下搅拌直至完全转化(约3h)，之后将反应溶液冷却至室温，并且减压浓缩。将残余物溶于吡啶(6mL)中，然后加入Et3N(460μL，3.31mmol)和三乙胺三氟化氢(280μL，1.66mmol)。将反应混合物在45℃下搅拌18h。加入异丙氧基三甲基硅烷(1.17mL，6.62mmol)，并且在室温下继续搅拌2天。将减压浓缩后获得的残余物在无水乙腈中研磨，获得的沉淀物通过制备型反相HPLC(固定相：RP XBridge C18 OBD，10μm，150mm×50mm，流动相：0.25％碳酸氢铵水溶液(A)-MeOH(B)；梯度洗脱)进一步纯化，得到化合物8。通过在填充有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到为白色蓬松固体的化合物8，钠盐(32mg，收率：41％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm10.31(br s,1H),8.04(s,1H),7.94(s,1H),7.76(brs,1H),7.21(d,J＝3.3Hz,1H),6.74(d,J＝3.1Hz,1H),6.48-6.60(m,5H),6.02(d,J＝8.4Hz,1H),5.92(dd,J＝8.4,4.3Hz,1H),4.80-4.93(m,1H),4.63(br s,1H),4.34-4.43(m,1H),4.30(d,J＝3.8Hz,2H),4.18(dd,J＝12.2,3.6Hz,1H),4.08(dd,J＝12.5,2.8Hz,1H),3.50(s,3H),3.16(br d,J＝6.1Hz,2H),2.25-2.37(m,2H),1.45-1.57(m,1H)；31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm 1.42(s,1P)；ESI-MS：m/z 685.3[M+H]+。
实施例10
化合物48
步骤1：制备化合物10b
向化合物10a(0.8g，2.15mmol)的DMF(6mL)溶液中加入咪唑(439.98mg，6.46mmol)和TBSCl(616.94mg，4.09mmol)。在RT下搅拌1.5h后，将混合物与另一批料合并并用EA(800mL)稀释。将有机层相继用饱和NaHCO3水溶液(200mL×2)、盐水(200mL×2)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(用0％-70％EA的PE溶液洗脱)纯化，得到为白色固体的化合物10b(5.5g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.44(br s,1H),8.66(br s,1H),8.17-7.92(m,2H),7.85(br s,1H),7.69-7.59(m,1H)7.57-7.33(m,2H),5.44-5.09(m,2H),5.02(br d,J＝5.4Hz,1H),4.30(br s,1H)4.01(brd,J＝4.0Hz,1H),3.87(br d,J＝3.6Hz,1H),3.80-3.61(m,2H),0.84(s,9H),0.01(d,J＝4.4Hz,6H)；ESI-MS：m/z＝486.2[M+H]+。
步骤2：制备化合物10c1和10c2
在使用前，将化合物10b与吡啶(10mL)共蒸发两次。向化合物10b(1.7g，0.88mmol)的吡啶(15mL)溶液中加入DMTrCl(41.78g，5.25mmol)。在RT下搅拌2h后，将混合物与另一批料合并并用EtOAc(500mL)稀释。将有机层相继用饱和NaHCO3水溶液(150mL×2)、盐水(150mL×2)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(用0％-70％EtOAc的PE溶液洗脱)纯化，得到10c1和10c2的混合物(3.9g)。ESI-MS：m/z＝788.4[M+H]+。
步骤3：制备化合物10d1和10d2
在0℃下，向10c1和10c2(2.5g，3.17mmol)的DMF(25mL)溶液中加入NaH(60％矿物油溶液，482.3mg，12.05mmol)。将混合物在0℃下搅拌1hr，并在10min内滴加4-甲氧基苄基氯(745.31mg，4.76mmol)的DMF(5mL)溶液。在RT下搅拌2h后，将混合物逐滴用水(5mL)猝灭并用EA(500mL)稀释。将有机层相继用饱和NaHCO3水溶液(150mL×2)、盐水(150mL×2)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(用0％-40％EA的PE溶液洗脱)纯化，得到10d1和10d2的混合物(1.9g)。ESI-MS：m/z＝908.4[M+H]+。
步骤3：制备化合物10e1和10e2
将10e1和10e2(1.9g，2.09mmol)的DCM(30mL)溶液用水(0.38mL，20.92mmol)和DCA(0.69mL，8.37mmol)处理。将所得黄色溶液在RT下搅拌2h。然后将其加入到MeOH(0.15mL)中，之后加入吡啶(662mg)，得到无色溶液，将其进一步搅拌15min。减压蒸发该混合物，以得到通过硅胶快速柱色谱法纯化的残余物，得到为黄色固体的化合物10e1和10e2的混合物(1.05g)。ESI-MS：m/z＝606.1[M+H]+。
步骤4：制备化合物10f1和10f2
将化合物10e1和10e2(1.2g，1.98mmol)在THF(12mL)中的混合物用TBAF(3mL，1M)一次性处理。将混合物在RT下搅拌3h，然后用饱和NaHCO3水溶液(150mL)猝灭。将有机层干燥(无水Na2SO4)，过滤并减压蒸发，得到残余物，该残余物通过硅胶快速柱色谱法(5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物10f1和10f2的混合物。将10f1和10f2的混合物与另一批料合并并用MeOH研磨；由MeOH形成沉淀；在过滤并用少量冷MeOH洗涤后，将其确定为主要纯异构体化合物10f2(659mg)；将母液浓缩并通过反相制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD10μm C18 150×30，条件：A：水(10mM NH4HCO3)-ACN:MeCN，开始B：25％，结束B：45％；流速(mL/min)25)纯化，得到更多的化合物10f2(97mg)和微量异构体化合物10f1(200mg)，各自为白色固体。
化合物10f1：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.51(s,1H),8.03(br d,J＝8.0Hz,2H),7.81(s,1H),7.67-7.63(m,1H),7.57-7.53(m,2.H),7.17(d,J＝8.0Hz,2H),6.80(d,J＝8.0Hz,2.H),5.28(d,J＝8.0Hz,1H),5.09(br d,J＝4.0Hz,1H),4.83(br t,J＝4.0Hz,1H),4.64(d,J＝12Hz,1H),4.47(d,J＝12Hz,1H),4.28(t,J＝4.0Hz,1H),4.20(q,J＝4.0Hz,1H),3.91(q,J＝4.0Hz,1H),3.70(s,3H),3.61-3.58(m,1H),3.51-3.47(m,1H)；ESI-MS：m/z＝492.2[M+H]+。
化合物10f2：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.61(br s,1H),8.03(br d,J＝8.0Hz,2H),7.92(br s,H),7.69-7.65(m,1H),7.58-7.54(m,2H),7.33(d,J＝8.0Hz,2H),6.92(d,J＝8.0Hz,2H),5.33(d,J＝8.0Hz,1H),5.21(br d,J＝8.0Hz,1H),4.87(t,J＝8.0Hz,1H),4.66(d,J＝8.0Hz,1H),4.57-4.49(m,2H),4.01(q,J＝4.0Hz,1H),3.95(t,J＝4.0Hz,1H),3.75(s,3H),3.60-3.55(m,1H),3.50-3.45(m,1H)ESI-MS：m/z＝492.3[M+H]+。
步骤5：制备化合物10g
在RT下，向N-(7-((2S,3S,4S,5R)-3-羟基-5-(羟甲基)-4-((4-甲氧基苄基)氧基)四氢呋喃-2-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)苯甲酰胺即化合物10f2(400mg，0.81mmol)的吡啶(6mL)溶液中加入DMTrCl(496mg，1.46mmol)。在RT下搅拌过夜后，将混合物与另一粗批料合并并用DCM(50mL)稀释。将有机层相继用饱和NaHCO3水溶液(50mL×3)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％-100％EtOAc的石油醚溶液和0％-10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的化合物10g(450mg)。回收为白色固体的未反应化合物10f2(160mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)11.50(brs,1H),8.67(br s,1H),7.99(br d,J＝6.0Hz,1H),7.86(br s,1H),7.65(br d,J＝6.4Hz,1H),7.54(br t,J＝7.6Hz,2H),7.29-7.35(m,2H),7.23-7.29(m,2H),7.17-7.23(m,7H),6.83(td,J＝6.0,3.2Hz,6H),5.45(br d,J＝4.8Hz,1H),5.30(br s,1H),4.63(br d,J＝11.6Hz,1H),4.43(br d,J＝12.0Hz,1H),4.12(br s,1H),4.07(br s,1H),3.72(s,9H),3.20(br d,J＝7.6Hz,1H),3.01(br d,J＝5.6Hz,1H)；ESI-MS：m/z＝794.2[M+H]+。
步骤5：制备化合物10h
将化合物10g(450mg，0.56mmol)、氨基磺酸盐17a(744.735mg，0.850mmol)和
MS(1g)在无水THF(6mL)中的搅拌悬浮液在25℃下用DMAP(277mg，2.27mmol)处理。将黄色悬浮液在N2下于45℃下搅拌18h后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并且将滤液减压浓缩，得到黄色残余物；将残余物溶于DCM(100mL)中，并用饱和NaHCO3水溶液(100mL×4)洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-100％EtOAc的PE溶液)纯化，得到为黄色固体的化合物10h(604mg)。ESI-MS：m/z＝766.8[M+H]+。
步骤6：制备化合物10i
将化合物10h(704mg，0.46mmol)在水(0.08mL)和DCM(15mL)中的溶液在室温下用DCA(118.6mg，0.92mmol)处理4h，然后用吡啶(0.5mL)猝灭。在RT下搅拌10min后，将混合物真空浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-100％EtOAc的PE溶液)纯化，得到为固体的化合物10i(370mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.46(hr s,1H),11.24(s,1H),8.70(s,1H),8.62(s,1H),8.45(br t,J＝4.0Hz,1H),8.03(br t,J＝8.0Hz,6H),7.67-7.63(m,2H),7.57-7.53(m,4H),7.30(br d,J＝8.0Hz,2H),6.91(br d,J＝8.0Hz,2H),6.38-6.33(m,1H),5.89(br d,J＝8.0Hz,1H),5.65(br s,1H),5.51(br s,1H),5.38(br s,1H),4.95(br s,1H),4.63-4.50(m,4H),4.32(br t,J＝4.0Hz,1H),4.04-3.99(m,3H),3.74(s,3H),3.59(br d,J＝12.0Hz,2H),3.29-3,22(m,1H)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-202.69(td,J＝18.8,52.6Hz,1F)；ESI-MS：m/z＝926.5[M+H]+。
步骤7：制备化合物10j
注意：在使用前，THF在Na/二苯甲酮上新鲜蒸馏，并且CH3CN在CaH2上新鲜蒸馏。向化合物10i(220mg，0.24mmol，通过冻干干燥)溶于THF(4mL)的溶液中加入
MS(粉末，800mg)和1H-四唑溶液(5.28mL，0.45M，其通过以下方式制备：将945mg四唑(通过冻干干燥)溶于30mL无水CH3CN中，接着加入1g
MS，并且然后在使用前在N2下搅拌1hr)。用N2将容器烧瓶吹扫若干次。在20min内将2-氰乙基-N,N,N',N'-四异丙基亚磷酰二胺(129mg，0.43mmol)的THF(2mL)溶液经由注射器滴加。在RT下搅拌1.5hr后，加入TBHP溶液(0.38mL，1.9mmol，5M)，并将混合物再搅拌30min，并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-10％DCM的MeOH溶液，Rf＝0.6)纯化，得到为白色固体的化合物10j(308mg)。ESI-MS：m/z 1041.4[M+H]+。
步骤8：制备化合物10k
将化合物10j(308mg)用MeNH2/EtOH(2mL)处理并在RT下搅拌2.5hr。将反应混合物减压浓缩，并且该残余物通过反相制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD 5μm C18150×30，条件：A：水(10mM NH4HCO3)-ACN:MeCN，开始B：5％，结束B：35％；流速(mL/min)25)纯化，得到为白色固体的化合物10k(32mg)。
ESI-MS：m/z＝780.3[M+H]+。
步骤9：制备化合物48，钠盐
将苯甲醚(43.43mg，0.4mmol)的TEA(0.31mL，4.02mmol)溶液冷却至0℃。将溶液加入到化合物10k(32mg，0.04mmol)中。将混合物在0℃下搅拌2.5hr后，通过用氮气流在0℃下吹扫除去大多数TFA。将剩余的反应混合物在0℃下用MeNH2(33％EtOH溶液，0.31mL)猝灭。减压蒸发反应混合物，并且将残余物在DCM/水(30mL×3/15mL)之间分配，并且将水层用DCM(30mL×2)洗涤。将水层冻干，得到残余物。该残余物通过反相制备型HPLC(Waters XbridgePrep OBD C18 5μm C18 150×30，条件：A：水(10mM NH4HCO3)-ACN:ACN，开始B：5％，结束B：35％；流速(mL/min)25)纯化，得到为白色固体的化合物48，铵盐(19.2mg)。1H NMR(400MHz,D2O)δ8.32(s,1H),8.00(d,J＝3.2Hz,2H),7.49(s,1H),6.57-6.50(m,1H),5.81-5.75(m,1H),5.73-5.65(m,2H),5.54(br d,J＝4.4Hz,1H),5.39-5.27(m,1H),4.80(d,J＝4.2Hz,1H),4.46(br s,1H),4.42-4.34(m,1H),4.24-4.17(m,1H),3.82(br dd,J＝3.2,13.4Hz,1H),3.61(br d,J＝13.2Hz,1H)；19F NMR(376MHz,D2O)δ-197.15-197.29(m,1F)；31P NMR(162MHz,D2O)δ-1.83(s,1P)；ESI-MS：m/z＝660.1[M+H]+。
钠盐转化
将Dowex 50W×8，200-400(5mL，H形式)加入到烧杯中，并且用去离子水(25mL)洗涤。然后向树脂中加入15％H2SO4的去离子水溶液，将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(25mL)。将树脂转移到具有15％H2SO4的去离子水溶液的柱中，并用15％H2SO4(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为中性。将树脂转移回烧杯中，加入15％NaOH的去离子水溶液，并且将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(1x)。将树脂转移到柱中并用15％NaOH的水溶液(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为中性。将化合物48，铵盐(19.2mg)溶于DI水(2mL)中，并且将该溶液加入到柱顶部中，并用去离子水洗脱。将适当的级分合并在一起并冻干，得到为白色固体的化合物48，钠盐(16mg)。1H NMR(400MHz,D2O)δ8.04(br s,1H),7.73(s,1H),7.56(s,1H),6.83(br s,1H),6.33-6.25(m,1H),5.68-5.60(m,1H),5.46(br d,J＝9.6Hz,1H),5.32(br d,J＝4.0Hz,1H),5.20(br d,J＝4.4Hz,1H),5.06-4.90(m,1H),4.38(br d,J＝9,2Hz,1H),4.30(br s,1H),4.17(br dd,J＝6.0,10.4Hz,1H),4.02(brd,J＝11.6Hz,1H),3.67(br d,J＝12.8Hz,1H),3.41(br d,J＝13.2Hz,1H)；31P NMR(162MHz,D2O)δ-2.02(s,1P)；19F NMR(376MHz,D2O)δ-196.74(br s,1F)；ESI-MS：m/z＝660.1[M+H]+。
实施例11
化合物11
步骤1：制备化合物11a
将TIPDSCl2(6.70g，21.23mmol)加入到SM 11，N-异丁酰基鸟苷(5.0g，14.15mmol)的吡啶(50mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌12h，之后将其减压浓缩。该残余产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色泡沫的化合物11a(5.5g，收率：65％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.12(s,1H),11.76(s,1H),8.05(s,1H),5.79(s,1H),5.71(d,J＝4.9Hz,1H),4.28-4.39(m,2H),4.13(br dd,J＝12.9,2.6Hz,1H),4.00-4.07(m,1H),3.94(br dd,J＝12.9,2.7Hz,1H),2.78(spt,J＝6.8Hz,1H),1.11(d,J＝6.6Hz,6H),0.93-1.08(m,28H)；ESI-MS：m/z 596.2[M+H]+。
步骤2：制备化合物11b
将活化的分子筛加入到化合物11a(1.28g，1.92mmol)和化合物1e(1.0g，1.28mmol)的无水THF(60mL)溶液中；将所得混合物在N2下搅拌1h。接着，加入DMAP(783mg，6.41mmol)以引发反应。将反应混合物在50℃下搅拌过夜。通过过滤除去分子筛并用DCM冲洗，用饱和NaHCO3水溶液洗涤滤液。将水相用DCM萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-100％EtOAc的石油醚溶液，之后是0％-2％MeOH的DCM溶液)纯化后，获得为黄色固体的化合物11b(520mg，收率：36％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.08(br s,1H),11.56(br s,1H),11.28(br s,1H),8.70(s,1H),8.61(s,1H),8.54(br s,1H),8.09(s,1H),8.04(s,2H),7.61-7.73(m,1H),7.49-7.59(m,2H),6.31-6.44(m,1H),6.06(d,J＝1.5Hz,1H),5.73(br d,J＝53.5Hz,1H),5.31(br d,J＝5.8Hz,1H),4.79-4.95(m,1H),4.64(t,J＝6.9Hz,1H),3.84-4.10(m,4H),3.41(m,J＝13.3Hz,1H),3.11-3.25(m,1H),2.75(spt,J＝6.5Hz,1H),0.85-1.15(m,43H),0.15(s,3H),0.14(s,3H)；ESI-MS：m/z 1144.4[M+H]+。
步骤3：制备化合物11c
将化合物11b(1.3g，0.98mmol)的无水MeOH(55mL，在分子筛上干燥)溶液用HCl(0.19mL 2M的Et2O溶液，13.7mmol)处理4h。将反应混合物通过加入饱和NaHCO3水溶液猝灭，然后用DCM萃取。将有机相用无水MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物11c(670mg，收率：65％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.01-1.08(m,28H),1.12(d,J＝6.8Hz,3H),1.67-1.75(m,1H),2.20-2.32(m,1H),2.43-2.54(m,1H),2.62(br d,J＝14.3Hz,1H),2.79(spt,J＝6.9Hz,1H),2.85-2.96(m,1H),3.51(s,3H),3.52-3.57(m,2H),3.75-3.83(m,1H),4.39-4.48(m,1H),4.50(d,J＝4.2Hz,1H),5.02(q,J＝9.6Hz,1H),5.09(t,J＝4.5Hz,1H),5.25(dd,J＝9.8,4.1Hz,1H),5.52(ddd,J＝52.4,4.4,2.6Hz,1H),5.68(br d,J＝5.9Hz,1H),6.30(dd,J＝18.5,2.6Hz,1H),7.56(t,J＝7.7Hz,2H),7.61-7.69(m,1H),8.02-8.07(m,2H),8.11(brs,1H),8.14(s,1H),8.57(s,1H),8.71(s,1H),11.22(br s,1H),11.33(br s,1H),12.09(brs,1H)；ESI-MS：m/z 1060.7[M+H]+。
步骤4：制备化合物11d
将化合物11c(340mg，0.32mmol)和1H-四唑(4.48ml的3％-4％MeCN溶液，使用前在
分子筛上干燥)的无水THF/MeCN(1:1，11mL，使用前在
分子筛上干燥)溶液在N2下用活化的
分子筛处理2h，之后一次性加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(96mg，0.32mmol)。将反应混合物振摇2h。加入附加量的2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(19mg，0.064mmol)，并且继续振摇2h。加入tBuOOH溶液(93μL 5.5M癸烷溶液，0.51mmol)，将反应混合物振摇30min。通过过滤除去分子筛，并且用二氯甲烷冲洗。用盐水洗涤滤液并减压浓缩。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％–5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物11d(100mg，收率：26.5％)。ESI-MS：m/z 1177.6[M+H]+。
步骤5：制备化合物11，钠盐
在室温下，将上述化合物11d(100mg，0.085mmol)在33％甲胺的乙醇溶液(2mL)中搅拌直至完全转化(约3h)，之后将反应溶液减压浓缩，并且在MeCN中研磨。将沉淀物溶于吡啶(684μL mL)和Et3N(590μL)的混合物中。加入三乙胺三氟化氢(57mg，0.34mmol)，将所得反应混合物在室温下搅拌直至完全转化(注意：观察到所需产物的沉淀物)。将减压浓缩后获得的残余物在MeCN中研磨，获得的沉淀物通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18OBD，5μm，250mm×30mm，流动相：0.25％碳酸氢铵(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)进一步纯化，得到化合物11。通过在填充有阳离子Na离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到为白色蓬松固体的化合物11，钠盐(24.5mg，收率：41％)。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 10.03(br s,1H),9.49(br s,1H),8.27(br s,1H),7.85(s,1B),7.60(br s,1H),7.25(br s,2H),6.41-6.79(m,2B),6.36(br d,J＝200Hz,1H),6.08-6.22(m,1H),6.04(br d,J＝7.9Hz,1B),5.72(br s,1H),5.43(br dd,J＝51.7,4.3Hz,1H),5.25-5.34(m,1H),4.54(br t,J＝4.0Hz,1H),4.33-4.43(m,1H),4.29-4.33(m,1B),4.11(br t,J＝3.9Hz,1H),3.85-3.94(m,1H),3.56(br dd,J＝13.0,2.6Hz,1H),3.34(br d,J＝12.6Hz,1H)；31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm-2.34(s,1P)；ESI-MS：m/z 675.1[M+H]+。
实施例12
化合物29
步骤1：制备化合物12b
将化合物12a(300mg，0.38mmol)溶于无水ACN(33mL)和无水THF(33mL)的混合物中，加入1H-四唑(3.3mL，1.13mmol)和
分子筛。将混合物在RT下振摇2h，并且然后经由注射器立刻加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四异丙基亚磷酰二胺(0.16mL，0.49mmol)。将反应混合物在RT下振摇4小时。加入附加量的2-氰乙基-N,N,N',N'-四异丙基亚磷酰二胺(0.078mL，0.25mmol)。将反应混合物在RT下振摇1小时，并且然后加入叔丁基过氧化氢的5.5M癸烷溶液(0.075mL，0.41mmol)。将反应混合物在RT下振摇30分钟，并且然后过滤。将分子筛用二氯甲烷洗涤三次。将合并的滤液用饱和Na2S2O3溶液和饱和NaHCO3溶液的混合物洗涤，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，并蒸发滤液的溶剂。使用从100％DCM至10％MeOH的DCM溶液的梯度，在SiO2柱上纯化残余物。合并含有产物的级分，并且蒸发溶剂，得到12b(47mg，12％收率)。ESI-MS：m/z 905.4[M+H]+。
步骤2：制备化合物29，钠盐
将化合物12b(47mg，0.045mmol)溶于甲胺的33％乙醇溶液(2.5mL，20.2mmol)在40℃下搅拌3h。将反应混合物减压蒸发至干。将残余物在10mL无水乙腈中研磨。沉淀物通过过滤收集，并且用无水乙腈洗涤。该残余物用反相制备型HPLC(固定相：RP XBridge Prep C18OBD-10μm，50mm×150mm，流动相：0.25％NH4HCO3水溶液，MeOH)纯化。通过冻干除去纯级分的溶剂。将残余物溶于水中，并在填充有离子交换树脂树脂的预洗涤(水)柱上纯化。通过冻干除去所得溶液的溶剂，得到为白色固体的化合物29，钠盐(27mg，87％收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 3.18-3.28(m,1H)3.29-3.40(m,1H)4.02-4.10(m,2H)4.17-4.25(m,1H)4.29-4.48(m,1H)4.36(br s,1H)5.09(br dd,J＝13.6,7.1Hz,1H)5.23-5.49(m,2H)5.86-6.00(m,2H)6.34-6.42(m,1H)6.61(br s,2H)6.96(br s,2H)7.92(s,1H)8.11(d,J＝2.4Hz,1H)8.15(s,1H)；ESI-MS：m/z 678.2[M+H]+。
实施例13
化合物15
步骤1：制备化合物13b
将化合物13a(355mg，0.46mmol)溶于无水ACN(40mL)和无水THF(40mL)的混合物中，加入1H-四唑(4.1mL，1.4mmol)和
分子筛。将混合物在RT下振摇2小时，并且然后经由注射器立刻加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四异丙基亚磷酰二胺(0.19mL，0.61mmol)。将反应混合物在RT下振摇4小时。加入附加量的2-氰乙基-N,N,N',N'-四异丙基亚磷酰二胺(0.18mL，0.57mmol)。将反应混合物在RT下振摇1小时，并且然后加入叔丁基过氧化氢的5.5M癸烷溶液(0.093mL，0.51mmol)。将反应混合物在RT下振摇30分钟。将反应混合物过滤。将分子筛用二氯甲烷洗涤三次。将合并的滤液用饱和Na2S2O3溶液和饱和NaHCO3水溶液的混合物洗涤，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，并蒸发滤液的溶剂。使用从100％DCM至10％MeOH的DCM溶液的梯度，在SiO2柱上纯化残余物。合并含有产物的级分，并且蒸发溶剂，得到13b(34mg，5％收率)。ESI-MS：m/z 888.4[M+H]+。
步骤2：制备化合物15，钠盐
将化合物13b(34mg，0.023mmol)溶于甲胺的33％乙醇溶液(2mL，16mmol)在40℃下搅拌3小时。将反应混合物减压蒸发至干。将残余物在10mL无水乙腈中研磨。将沉淀物滤出并用无水乙腈洗涤。用反相制备型HPLC(固定相：RP XBridge Prep C18 OBD-10μm，50mm×150mm，流动相：0.25％NH4HCO3的水溶液，MeOH)进行纯化。通过冻干除去纯级分的溶剂。将残余物溶于水中，并在填充有阳离子钠离子交换树脂的预洗涤(水)柱上过滤。通过冻干除去所得溶液的溶剂，得到为白色固体的化合物15，钠盐(23mg，100％收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.00-2.13(m,1H)2.49(m,J＝3.9,1.7,1.7Hz,1H)3.29-3.37(m,1H)3.57(dd,J＝13.6,2.6Hz,1H)3.85-3.97(m,1H)4.03-4.17(m,1H)4.27(br d,J＝9.0Hz,1H)4.45-4.55(m,1H)4.73-4.88(m,1H)5.10(br d,J＝22.4Hz,1H)5.42(dd,J＝51.1,4.1Hz,1H)6.11(br d,J＝4.1Hz,1H)6.32(d,J＝18.7Hz,1H)6.86-7.03(m,2H)7.07(br s,2H)7.85(br s,1H)8.15(s,1H)8.35(s,1H)8.40-8.87(m,1H)；ESI-MS：m/z 661.3[M+H]+。
实施例14
化合物30
步骤1：制备化合物14b
将化合物14a(275mg，0.26mmol)溶于无水ACN(40mL)中，加入1H-四唑(2.3mL，1.8mmol)和
分子筛。将混合物在RT下振摇1小时，并且然后经由注射器立刻加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四异丙基亚磷酰二胺(0.084mL，0.26mmol)。将反应混合物在RT下振摇4小时。加入附加量的2-氰乙基-N,N,N',N'-四异丙基亚磷酰二胺(0.084mL，0.26mmol)。将反应混合物在RT下振摇1小时，并且然后加入叔丁基过氧化氢的5.5M癸烷溶液(0.062mL，0.34mmol)。将反应混合物在RT下振摇18小时。将反应混合物过滤。将分子筛用二氯甲烷洗涤三次。将合并的滤液用饱和Na2S2O3溶液和饱和NaHCO3水溶液的混合物洗涤，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，并蒸发滤液的溶剂。使用从100％DCM至10％MeOH的DCM溶液的梯度，在SiO2柱上纯化残余物。合并含有产物的级分，并且蒸发溶剂，得到14b(30mg，5％收率)。ESI-MS：m/z 1159.6[M+H]+。
步骤2：制备化合物14c，甲铵盐
将化合物14b(30mg，0.014mmol)溶于甲胺的33％乙醇溶液(3mL，24.3mmol)在45℃下搅拌1小时。将反应混合物减压蒸发至干。将残余物在10mL无水乙腈中研磨。将沉淀物滤出，并且用无水ACN洗涤，得到为白色固体的化合物14c，甲铵盐(11mg，71％收率)。ESI-MS：m/z 898.5[M+H]+。
步骤3：制备化合物30，钠盐
将苯甲醚(0.011mL，0.1mmol)的TFA(0.076mL，1mmol)溶液冷却至0℃。将冷溶液加入到化合物14c(11mg，0.01mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌75分钟。通过用氮气流在0℃下吹扫除去大多数TFA。在0℃下，通过加入甲胺(33％乙醇溶液，0.12mL，1mmol)来猝灭剩余的反应混合物。将反应混合物蒸发至干。该残余物用反相制备型HPLC(固定相：RP XBridgePrep C18 OBD-10μm，50mm×250mm，流动相：0.25％NH4HCO3的水溶液，CH3CN)纯化。通过冻干除去纯级分的溶剂。将残余物溶于水中，并在填充有阳离子钠离子交换树脂的预洗涤(水)柱上过滤。合并含有产物的级分。通过冻干除去所得溶液的溶剂，得到为白色固体的化合物30，钠盐(3mg，45％收率)。31P NMR(162MHz,D2O)δppm-1.27(s,1P)；ES1-MS：m/z 658.3[M+H]+。
实施例15
化合物38
制备化合物15b
将二醇15a(210mg，0.272mmol)与无水甲苯:乙腈(1:1，v/v，3×30mL)的混合物共蒸发，然后溶于无水THF(20mL)中。加入
分子筛粉末(0.8g)和0.45M四唑的MeCN(4.8mL，2.17mmol)溶液。将所得异质混合物用氩气鼓泡4min。将该混合物在RT下搅拌10min后，在RT下在30min内向其中加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(131mg，0.43mmol)的MeCN(3mL)溶液。在搅拌90min后，将反应物过滤，然后用THF(15mL)洗涤。加入0.5M碘(在THF:水:Py＝8:1:1，v/v/v中)直至颜色持续。将反应物在RT下搅拌30min后，将反应混合物用EtOAc(30mL)稀释，用饱和Na2S2O3水溶液猝灭过量的碘(直至脱色)。分离各相；将有机相用饱和NaHCO3水溶液(1×20mL)、饱和NaCl水溶液(1×20mL)洗涤。将水相用EtOAc(1×20mL)反萃取。将合并的有机相蒸发至干，将所得粗料通过硅胶快速柱色谱法(0％-15％MeOH的二氯甲烷溶液)纯化，得到15b(120mg)。ESI-MS：m/z 873[M+H]+。
制备化合物38，钠盐
使化合物15b(120mg)在RT下经受33％甲胺的乙醇溶液(15mL)。将反应物在40℃下搅拌2h后，减压浓缩混合物。将所得粗固体用DCM(15mL)洗涤，并且将沉淀物通过过滤收集并通过反相制备型HPLC(柱：Synergi 4μm，Hydro RP，250mm×30mm，流动相：缓冲液A：50mM三乙基乙酸铵的水溶液；缓冲液B：50mM三乙基乙酸铵[TEAA]的CH3CN溶液，梯度：0％-40％的B，经过30min，流速24mL/min)纯化，得到为TEAA盐的化合物38(7.1mg)。ESI-MS：m/z:658[M-1]-。
盐转化：将Dowex 50W×8，200-400(5mL，H形式)加入到烧杯中并用去离子水(30mL)洗涤。然后向树脂中加入15％H2SO4的去离子水溶液，将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(30mL)。将树脂转移到具有15％H2SO4的去离子水溶液的柱中，并用15％H2SO4(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为中性。将树脂转移回烧杯中，加入15％NaOH的去离子水溶液，并且将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(1x)。将树脂转移到柱中并用15％NaOH的水溶液(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为中性。将化合物38，TEAA盐(24.2mg)溶于最小量的去离子水和CH3CN(1:1，v/v)中，加入到柱顶部中，并且用去离子水洗脱。将适当的级分合并在一起并冻干，得到为白色固体的化合物38，钠盐(6.3mg)。1H NMR(400MHz,D2O)δ7.98(s,1H),7.82(s,1H),7.49(s,1H),6.37(dd,J＝5.2Hz,11.6Hz,1H),5.75-5.90(m,2H),5.49(t,J＝4.8Hz,0.5H),5.37(t,J＝4.8Hz,0.5H),5.01-5.15(m,1H),4.51(s,1H),4.26(d,J＝3.6Hz,1H),4.00-4.10(m,2H),3.35-3.50(m,2H),2.45-2.70(m,2H)。31P NMR(162MHz,D2O)δ-1.416ppm(s,1P)；19F NMR(379MHz,D2O)δ-196ppm(宽峰，1F)；ESI-MS：m/z:658.4[M-1]-。
实施例16
化合物28
制备化合物16b
将化合物16a(140mg，0.174mmol)与无水甲苯:乙腈(1:1，v/v，3×30mL)的混合物共蒸发，然后溶于无水THF(15mL)中。加入
分子筛粉末(0.5g)和0.45M四唑的乙腈溶液(2.32mL，1.04mmol)。将所得异质混合物用Ar鼓泡4min。将该混合物在RT下搅拌10min后，在RT下在30min内向其中加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(84mg，0.28mmol，1.6当量)的CH3CN(3.0mL)溶液。
将反应物搅拌90min后，将混合物滤出，然后用THF(15mL)洗涤。将所得化合物亚磷酸盐(MS：m/z 901[M+H]+)直接用于下一步骤中。向其中加入0.5M碘(在THF:水:Py＝8:1:1，v/v/v中)直至颜色持续。将混合物在RT下搅拌30min后，将反应物用EtOAc(30mL)稀释；用饱和Na2S2O3水溶液猝灭过量的碘(直至脱色)。分离各相；将有机相用饱和NaHCO3水溶液(1×20mL)和盐水(1×20mL)洗涤。将水层用EtOAc(1×20mL)反萃取。将合并的有机层蒸发至干，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％-15％MeOH的二氯甲烷，v/v)纯化，得到化合物16b(80mg)。ESI-MS：m/z 917[M+H]+。
制备化合物28，钠盐
使化合物16b(80mg)在RT下经受33％甲胺的乙醇溶液(6mL)。将混合物在40℃下搅拌2h后，将反应物减压浓缩，得到固体。将所得粗固体用DCM(15mL)洗涤，并且将沉淀物通过过滤收集并通过反相制备型HPLC(柱：Synergi 4μ，Hydro RP，250mm×30mm，流动相：缓冲液A：50mM三乙基乙酸铵的水溶液；缓冲液B：50mM三乙基乙酸铵的CH3CN溶液，梯度：0％-40％的B，经过30min，流速24mL/min)纯化，得到为TEAA盐的化合物28(22.4mg)。通过在填充有阳离子Na离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到冻干后为白色蓬松固体的化合物28，钠盐(21.9mg)。
1H NMR(400MHz,D2O)δppm 7.87(s,1H),7.80(s,1H),7.19(s,1H),6.32(t,J＝5.6Hz,1H),5.97(d,J＝8.0Hz,1H),5.91(s,1H),5.50(s,0.5H),5.37(s,0.5H),4.98-5.10(m,1H),4.49(s,1H),4.10-4.30(m,4H),3.52(d,J＝11.6Hz,1H),3.44(s,3H),3.34(d,J＝12.4Hz)；19F NMR(379MHz,D2O)δ宽峰-196.61ppm；31P NMR(162MHz,D2O)δ-1.38ppm；ESI-MS：m/z:688.8[M-1]-。
实施例17
化合物33
步骤1：制备化合物17-1
注意：在使用前，将化合物1b与吡啶(60mL)共蒸发两次。在5℃下向化合物1b(6g，15.06mmol)的吡啶(60mL)溶液中加入DMTrCl(10.2g，30.12mmol)和DMAP(920mg，7.53mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌18hr，得到黄色溶液。将反应混合物与另一批料合并并后处理。真空除去挥发性物质，并将残余物溶于DCM(150mL)中，然后在剧烈搅拌下缓慢倒入饱和NaHCO3水溶液(100mL)中。将水层用DCM(100mL×2)萃取。将有机层合并，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到黄色残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％-100％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到为黄色固体的化合物17-1(12.6g，88％来自7.9g的化合物1b)。ESI-MS：m/z＝701.1[M+H]+。
步骤2：制备化合物17-2
将PPh3(6.6g，25.1mmol)一次性加入到化合物17-1(12.6g，17.98mmol)的THF(100mL)溶液中；将混合物在N2下于40℃下搅拌2hr，然后加入H2O(50mL)；将混合物搅拌12hr，得到无色溶液。减压浓缩溶剂，并且将残余的水层在DCM/H2O(80mL/30mL)之间分配。将水层用DCM(40mL×2)萃取。然后将有机层合并，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到白色固体，该白色固体通过硅胶快速柱色谱法(0％-5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的化合物17-2(11.6g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.93(br s,1H),8.71(s,1H),8.31(s,1H),8.01(br d,J＝7.3Hz,2H),7.33-7.19(m,4H),6.82(dd,J＝6.9,8.9Hz,4H),6.17(dd,J＝1.5,17.6Hz,1H),4.64(ddd,J＝4.4,7.6,19.4Hz,1H),4.57-4.36(m,1H),4.18-4.08(m,1H),3.77(d,J＝5.3Hz,6H),2.94(dd,J＝2.4,14.2Hz,1H),2.64(dd,J＝4.3,14.3Hz,1H)；19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-197.03(br s,1F)；ESI-MS：m/z＝675.1[M+H]+。
步骤3：制备化合物17a：
在N2下于-78℃下，将4-硝基苯基氯硫酸盐(768mg，3.23mmol)的无水CH2Cl2(5mL)溶液快速加入到化合物17-2(727mg，1.07mmol)、4-硝基苯酚(449mg，3.23mmol)、Et3N(654mg，6.46mmol)和活化的
分子筛(～1g)在无水CH2Cl2(15mL)中的混合物中。将混合物在1.5hr内逐渐升温至RT。将该反应混合物与其它批料合并，并通过硅藻土垫过滤。将滤液转移到分液漏斗中，用饱和NaHCO3水溶液(200mL×4)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到黄色残余物，该黄色残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％-100％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到为浅黄色固体的化合物17a(16g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.93-8.81(m,2H),8.41(s,1H),8.11-7.92(m,5H),7.67-7.58(m,1H),6.86(br t,J＝7.7Hz,4H),6.20(br dd,J＝5.1,13.7Hz,1H),5.34-5.23(m,2H),5.16(br t,J＝5.1Hz,1H),4.73(brs,1H),3.90(br s,1H),3.79(d,J＝6.4Hz,6H),3.23(br d,J＝13.2Hz,1H),2.89(br dd,J＝8.7,12.6Hz,1H)；19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-199.28--205.90(m,1F)；ESI-MS：m/z＝876.1[M+H]+。
步骤4：制备化合物17c
将17a(2053mg，2.34mmol)、化合物17b(1000mg，1.56mmol)和分子筛(6g)的THF(30mL)溶液在N2下于RT下搅拌30min；加入DMAP(954.8mg，7.81mmol)，并将混合物在45℃(油温)下搅拌12hr。将反应混合物过滤并向其中加入DCM(50mL)和盐水(20mL)。将有机层用饱和NaHCO3水溶液(3×50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发，得到残余物。将残余物与硅胶(6g)合并，通过硅胶快速柱色谱法(PE/EA为10％至100％，并且DCM/MeOH＝0％至5％)纯化，得到为浅黄色固体的17c(1.8g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.10(s,1H),11.46(s,1H),11.23(s,1H),11.05(s,1H),8.65(s,1H),8.47(s,1H),8.13-8.10(m,1H),8.02(d,J＝73Hz,2H),7.68-7.63(m,1H),7.58-7.46(m,4H),7.41-7.31(m,6H),7.29-7.23(m,3H),7.20-7.11(m,7H),6,91(dd,J＝6.4,8.3Hz,4H),6.75(dd,J＝8.9,12.3Hz,4H),6.39-6.30(m,1H),6.16(s,1H),5,34(br,d,J＝5.9Hz,1H),4.91(br,s,1H),4.86-4.73(m,2H),4.45(br,d,J＝5.4Hz,1H),3.69(s,12H),3.21-3.08(m,2H),2.96-2.88(m,1H),2.73(m,2H),2.07(m,1H),1.02(m,6H)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-197.64(s,1F)；ESI-MS：m/z689.1[M/2+H]+。
步骤5：制备化合物17d
向17c(1.8g，1.31mmol)的DCM(30mL)溶液中加入水(235.5mg，13.08mmol)和DCA(337.233mg，2.615mmol)，得到红色溶液。将溶液在25℃下于RT下搅拌12小时。然后加入MeOH(5mL)直至溶液澄清，接着加入吡啶(1034.4mg，13.08mmol)。将混合物在25℃下搅拌2小时后，将溶液减压浓缩，得到残余物(3.0g)。将残余物与硅胶(6.0g)合并，通过硅胶快速柱色谱法(0％-8％DCM的MeOH溶液)纯化，得到为白色固体的17d(0.9g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.12(s,1H),11.57(s,1H),11.26(s,1H),8.75(s,1H),8.60(s,1H),8.47(t,J＝5.9Hz,1H),8.21(s,1H),8.07-8.02(m,2H),7.69-7.63(m,1H),7.60-7.52(m,2H),6.33(dd,J＝2.0,19.3Hz,1H),6.08(d,J＝1.7Hz,1H),5.92(d,J＝6.4Hz,1H),5.70-5.50(m,1H),5.30(br,d,J＝6.1Hz,1H),5.02(t,J＝5.4Hz,1H),4.67-4.53(m,1H),4.27(br,d,J＝3.9Hz,1H),4.11(q,J＝5.1Hz,1H),4.05-3.99(m,1H),3.66-3.55(m,1H),3.46(td,J＝4.9,12.2Hz,1H),2.78(td,1H),2.24(td,1H),1.12(d,6H)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-202.156(s,1F)；ESI-MS：m/z＝772.1[M+H]+。
步骤5：制备化合物17e
在使用前，THF在Na/二苯甲酮上新鲜蒸馏，并且CH3CN在CaH2上新鲜蒸馏。
向17e(100mg，0.130mmol)的四氢呋喃(3mL)溶液中，加入
MS(粉末，1g)，并且将混合物搅拌20min。20min后，在25℃下加入1H-四唑溶液(0.45M乙腈溶液，2.3mL)，然后在25℃下加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(78.1mg，0.26mmol，稀释于1mL THF中)的溶液。在RT下搅拌1.5hr后，在25℃下加入叔丁基过氧化氢(0.12mL，0.65mmol)，并且将溶液搅拌1.5h。将反应混合物在压力下浓缩，得到黄色残余物。将残余物与硅胶(2g)合并，并且通过硅胶快速柱色谱法(0％-15％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为浅黄色固体的17e(80mg)。ESI-MS：m/z＝887.5[M+H]+。
步骤4：制备化合物33，钠盐
将化合物17e(80mg，0.090mmol)用MeNH2(50％EtOH溶液，5.0mL)处理。在25℃下搅拌4小时后，将溶液在压力下浓缩，得到残余物。该残余物通过反相制备型HPLC(柱：AgelaDurashell 5μm C18 150×25，条件：水(10mM NH4HCO3)-CH3CN，开始B：5，结束B 35，梯度时间(min)：9，100％B保持时间(min)：0，流速(mL/min)：25)纯化，得到为白色固体的化合物33，铵盐(15mg)。通过在填充有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到冻干后为白色蓬松固体的化合物33，钠盐(25.5mg)。
1H NMR(400MHz,D2O)δppm 8.16(br,s,1H),7.88(s,1H),7.15(br,s,1H),6.45(br,d,J＝19.8Hz,1H),6.19(br,d,J＝7.3Hz,1H),6.00(br,d,J＝7.1Hz,1H),5.43-5.29(m,1H),5.28-5.18(m,1H),4.63-4.51(m,2H),4.31-4.22(m,1H),4.16-4.04(m,1H),3.78(brd,J＝13.2Hz,1H),3.45(br,d,J＝13.2Hz,1H),2.80-2.60(m,2H)；19F NMR(376MHz,D2O)δppm-196.95(s,1F)；31P NMR(162MHz,D2O)δppm-1.422(s,1P)；ESI-MS：m/z＝660.2[M+H]+。
实施例18
化合物34
步骤1：制备化合物18b
在使用前，THF在Na/二苯甲酮上新鲜蒸馏，并且CH3CN在CaH2上新鲜蒸馏。
向18a(100mg，0.127mmol)的THF(2mL)溶液中加入
MS(粉末，0.5g)和1H-四唑溶液(2.25mL，0.45M，其通过以下方式制备：将945mg四唑溶于30mL无水CH3CN中，接着加入1g
MS，并且然后在使用前在N2下搅拌1hr)；然后用N2吹扫若干次。在5min内滴加2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(61mg，0.203mmol)的THF(0.6mL)溶液。在RT下搅拌4hr后，在N2下加入TBHP溶液(124μl，0.62mmol，5M癸烷溶液)。在搅拌30min后，将反应混合物与之前的批料合并，并通过硅藻土垫过滤，并减压浓缩滤液，得到无色油状物。该油状物通过硅胶快速柱色谱法(12g，35mL/mim，首先用50％-80％TBF的石油醚溶液洗脱，然后转换为0％-2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的18b(89mg)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ8.82(s,2H),8.60(s,1H),8.08(s,1H),7.95(br d,J＝7.5Hz,2H),7.81(br s,2H),7.60-7.50(m,1H),7.47-7.37(m,3H),7.37-7.28(m,2H),6.95(s,1H),6.36(br d,J＝17.6Hz,2H),6.23-5.80(m,2H),5.67-5.39(m,1H),4.87-4.56(m,3H),4.53-4.37(m,3H),3.84-3.67(m,2H),3.48-3.32(m,1H),2.87(br t,J＝5.9Hz,4H)；31P NMR(162MHz，氯仿-d)δ-5.30(s,1P)；ESI-MS：m/z＝923.4[M+H]+。
步骤2：制备化合物34，钠盐
化合物18b(98mg，0.096mmol)用甲胺的EtOH溶液(30％EtOH溶液，5mL)处理。在40℃下搅拌1h后，减压蒸发挥发性溶剂。将所得白色固体溶于水/CH3CN(15mL/4mL)的混合物中，然后用DCM(10mL×3)洗涤。将水层冻干，得到为白色固体的化合物34(61mg)。ESI-MS：m/z＝662.2[M+H]+。
该固体通过反相制备型HPLC(柱：Xbridge 10μm 150mm×30mm，条件：水(10mMNH4HCO3)-CH3CN，开始B：8，结束B 38，梯度时间(min)：7，100％B保持时间(min)：0，流速(mL/min)：25)纯化，得到为白色固体的化合物34，铵盐。ESI-MS：m/z＝662.3[M+H]+；1H NMR(400MHz,D2O)δ8.50-8.11(m,1H),8.08-7.86(m,1H),7.81-7.56(m,1H),6.95-6.58(m,1H),6.41-6.01(m,2H),5.76-5.05(m,4H),5.01-4.76(m,1H),4.45-3.93(m,3H),3.81-3.23(m,2H)；19F NMR(376MHz,D2O)δ-196.50-197.49,-197.63,-198.85；31P NMR(162MHz,D2O)δ-2.25(1s,1P)
制备化合物34，钠盐
盐转化：将Dowex 50W×8，200-400(6mL，H形式)加入到烧杯中并用去离子水(30mL)洗涤。然后向树脂中加入15％H2SO4的去离子水溶液，将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(30mL)。将树脂转移到具有15％H2SO4的去离子水溶液的柱中，并用15％H2SO4(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为中性。将树脂转移回烧杯中，加入15％NaOH的去离子水溶液，并且将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(1x)。将树脂转移到柱中并用15％NaOH的水溶液(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为中性。将化合物34，TEAA盐(44mg)溶于最小量的去离子水:CH3CN(4:1)的混合物中，加入到柱顶部中，并且用去离子水洗脱。将适当的级分合并在一起并冻干，得到为白色固体的化合物34，钠盐(43.5mg)。1HNMR(400MHz,D2O)δppm 8.29(s,1H),7.98(s,1H),7.68(s,1H),6.75(br s,1H),6.31-6.17(m,2H),5.73-5.58(m,1H),5.57-5.39(m,1H),5.31-5.12(m,1H),4.96-4.82(m,1H),4.68(br d,J＝2.4Hz,1H),4.33(br d,J＝9.0Hz,1H),4.25-4.06(m,2H),3.62(dd,J＝2.4,13.4Hz,1H),3.43(br d,J＝13.0Hz,1H)；31P NMR(162MHz,D2O)δppm-2.15(s,1P)；19F NMR(376MHz,D2O)δppm-196.86(s,1F),-198.50(s,1F)；ESI-MS：m/z＝662.2[M+H]+。
实施例19
化合物12
步骤1：制备化合物19b
将咪唑(31g，456.1mmol)和TBSCl(45.8g，304.0mmol)相继加入到N6-苯甲酰基-5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-2'-脱氧腺苷(19a，[64325-78-6]，50.0g，76.0mmol)的无水DMF(750mL)溶液中。将混合物在室温下搅拌直至完全转化(约3h)，之后将反应溶液用EtOAc稀释，并且用水洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。用DCM和己烷使获得的粗残余物再沉淀，得到为白色泡沫的化合物19b(68g，粗制)。ESI-MS：m/z 771.0[M+H]+。
步骤2：制备化合物19c
将化合物19b(68.0g，88.3mmol)溶于CHCl3(1564mL)中并冷却至0℃。加入pTSA一水合物(20.1g，105.9mmol)的甲醇溶液。将反应混合物搅拌30min，之后加入饱和NaHCO3水溶液进行猝灭。将水层用DCM萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-1％MeOH的DCM溶液)进行纯化，得到为灰白色泡沫的化合物19c(27g)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm:11.20(s,1H),8.75(s,1H),8.69(s,1H),8.05(d,J＝7.6Hz,2H),7.65(t,J＝7.6Hz,1H),7.55(t,J＝7.6Hz,2H),6.47(t,J＝6.9Hz,1H),5.06(t,J＝5.5Hz,1H),4.65(m,1H),3.90(q,J＝4.1Hz,1H),3.63(m,1H),3.53(m,1H),2.92(m,1H),2.36(qd,J＝6.4,2.8Hz,1H),0.92(s,9H),0.13(s,6H)；ESI-MS：m/z 470.0[M+H]+。
步骤3：制备化合物19d
在0℃下，将甲磺酰氯(5.1mL，66.7mmol)滴加到化合物19c(27.0g，57.5mmol)的无水吡啶(135mL)溶液中。将反应混合物在0℃下搅拌直至完全转化(约3h)，之后将其用甲醇猝灭并且减压浓缩。将获得的残余物溶于EtOAc中，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到甲磺酰化产物。将粗产物溶于无水DMF(256mL)中，然后加入叠氮化钠(30.5g，468.0mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌5h，之后将其冷却至室温，用EtOAc稀释，并且用饱和NaHCO3水溶液和水洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-1％MeOH的DCM溶液)进行纯化，得到为泡沫的化合物19d(24g，收率：84％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm:11.19(s,1H),8.77(s,1H),8.70(s,1H),8.05(d,J＝6.9Hz,2H),7.65(t,J＝7.2Hz,1H),7.55(t,J＝7.6Hz,2H),6.51(t,J＝6.9Hz,1H),4.71(m,1H),4.01(m,1H),3.65(q,J＝6.4Hz,1H),3.57(dd,J＝13.1,4.8Hz,1H),3.06(m,1H),2.41(qd,J＝6.7,4.0Hz,1H),0.92(s,9H),0.14(s,6H)；ESI-MS：m/z 495.0[M+H]+。
步骤4：制备化合物19e
将化合物19d(10.0g，20.2mmol)的MeOH(100mL)溶液在室温下于大气压下在Pd/C(碳载量20％，1g)上进行氢化。将反应混合物在硅藻土上过滤，用MeOH冲洗硅藻土。减压浓缩滤液，得到为白色泡沫的化合物胺(9.4g，粗制)。将粗产物(9.4g)溶于DCM(395mL)中，然后加入4-硝基苯酚(8.38g，60.2mmol)、Et3N(16.9mL，120.4mmol)和活化的分子筛。在N2下将所得混合物冷却至-78℃，之后滴加4-硝基苯基氯硫酸盐(14.28g，60.2mmol)的DCM(45mL)溶液，继续搅拌直至完全转化(约2h)。将反应混合物升温至室温并用饱和NaHCO3水溶液和水洗涤。将有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0-50％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到为泡沫的化合物19e(6.4g，收率：47％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm:11.20(s,1H),9.09(t,J＝5.9Hz,1H),8.70(d,J＝2.1Hz,2H),8.29(td,J＝6.2,3.9Hz,2H),8.05(d,J＝7.6Hz,2H),7.65(t,J＝7.2Hz,1H),7.54(m,4H),6.50(t,J＝6.9Hz,1H),4.66(m,1H),4.01(m,1H),3.51(dt,J＝14.2,5.7Hz,1H),3.39(m,1H),3.05(m,1H),2.38(qd,J＝6.7,2.8Hz,1H),0.91(s,9H),0.13(s,6H)；ESI-MS：m/z 670.0[M+H]+
步骤5：制备化合物19f
将5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-N2-异丁酰基-3'-O-甲基-D-鸟苷([103285-33-2]，2.5g，3.73mmol)、化合物19e(2.9g，4.48mmol)和DMAP(2.27g，18.6mmol)各自分别溶于无水DCM(3×10.0mL)中，并在惰性气氛下在活化的
分子筛上干燥至少2h。接下来，将5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-N2-异丁酰基-3'-O-甲基-D-鸟苷和化合物22c溶液相继转移到含有DMAP溶液的反应烧瓶中。将反应混合物搅拌22h。通过过滤除去分子筛，并且用二氯甲烷充分洗涤。将滤液用饱和NaHCO3水溶液、盐水和饱和NH4Cl水溶液洗涤。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-1％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物19f(2.04g，收率：45.5％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm:12.10(s,1H),11.54(s,1H),11.20(s,1H),8.70(s,1H),8.65(s,1H),8.18(s,1H),8.05(d,J＝6.9Hz,2H),7.65(t,J＝7.2Hz,1H),7.56(t,J＝7.6Hz,2H),7.29(d,J＝7.6Hz,2H),7.24(t,J＝7.6Hz,2H),7.18(t,J＝9.6Hz,5H),6.81(dd,J＝8.3,6.2Hz,4H),6.46(t,J＝6.9Hz,1H),6.16(d,J＝4.1Hz,1H),5.55(t,J＝4.8Hz,1H),4.63(m,1H),4.38(t,J＝5.2Hz,1H),4.12(q,J＝4.6Hz,1H),3.86(dd,J＝9.0,6.2Hz,1H),3.71(s,6H),3.37(s,3H),3.23(m,5H),2.97(m,1H),2.74(m,1H),1.09(m,6H),0.88(s,9H),0.11(s,6H)；ESI-MS：m/z 1201.0[M+H]+。
步骤6：制备化合物19g
将Et3N(11.61mL，83.3mmol)和Et3N.3HF(1.35mL，8.33mmol)加入到化合物19f(2.5g，2.08mmol)的吡啶(16.5mL)溶液中。将反应混合物在45℃下搅拌直至完全转化(约5h)，并且然后冷却至室温。加入异丙氧基三甲基硅烷(5.9mL，33.28mmol)并继续搅拌过夜。减压浓缩，得到粗制5'-脱保护的化合物，将其重新溶于DCM(59.0mL)中。加入水(0.17mL，9.65mmol)和二氯乙酸(6.3mL的10％DCM溶液，7.72mmol)，将所得反应混合物搅拌1h(完全转化)，之后通过加入吡啶(0.77mL，9.65mmol)和几滴甲醇来猝灭。减压浓缩后获得的残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-9％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物19g(1.4g，收率：86％)。1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm:12.08(s,1H),11.62(s,1H),11.19(s,1H),8.70(s,1H),8.60(s,1H),8.25(s,1H),8.05(d,J＝7.6Hz,2H),7.65(t,J＝7.2Hz,1H),7.56(t,J＝7.6Hz,2H),6.42(t,J＝6.9Hz,1H),6.08(d,J＝6.2Hz,1H),5.45(d,J＝4.1Hz,1H),5.38(dd,J＝6,5,5.2Hz,1H),5.26(t,J＝5.2Hz,1H),4.36(d,J＝2.1Hz,1H),4.18(q,J＝2.5Hz,1H),4.10(m,1H),3.79(td,J＝5.9,3.2Hz,1H),3.61(dtd,J＝37.3,8.3,3.8Hz,2H),3.41(s,3H),3.09(d,J＝15.1Hz,3H),2.83(m,1H),2.74(td,J＝13.4,6.7Hz,1H),2,33(qd,J＝6.7,3,6Hz,1H),1H(q,J＝3.4Hz,6H)；ESI-MS：m/z 784.0[M+H]+。
步骤7：制备化合物19h
在惰性气氛下，将化合物19g(500mg，0.638mmol)和1H-四唑(5.59mL的3％-4％MeCN溶液)的无水THF(26mL)溶液用
分子筛处理2h。一次性加入2-氰乙基-N,N,N'N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(250mg，0.829mmol)，将反应混合物振摇过夜。加入t-BuOOH(174μL的5.5M癸烷溶液，0.96mmol)，并且继续振摇1h。通过过滤除去分子筛，并且用DCM充分冲洗。将滤液减压浓缩，得到粗制化合物19h，该粗制化合物直接用于下一步骤中。ESI-MS：m/z899.5[M+H]+。
步骤8：制备化合物12，钠盐
将粗制化合物19h在33％甲胺的乙醇溶液(10mL)中在室温下搅拌2h。将反应混合物减压浓缩。将粗产物在MeCN中研磨，然后通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18OBD，5μm，250mm×30mm；流动相：0.25％碳酸氢铵水溶液(A)-MeOH(B)；梯度洗脱)纯化，得到化合物12，铵盐。通过在填充有IR Na离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的转化，得到冻干后为白色蓬松固体的化合物12，钠盐(43mg，收率：10％)。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6,60℃)δppm 10.36(br s,1H),8.54(br s,1H),8.33(s,1H),7.99(s,1H),7.98(s,1H),7.11(s,2H),6.76(br s,2H),6.35(t,J＝6.9Hz,1H),5.98(br s,2H),5.14(br s,1H),4.28(br s,2H),4.19(s,1H),4.09(s,1H),3.86-3.95(m,1H),3.48(s,3H),3.34-3.46(m,1H),3.09-3.26(m,1H),2.87-2.99(m,1H),2.56-2.65(m,1H)；31PNMR(162MHz,DMSO-d6)δppm-1.88(s,1P)；ESI-MS：m/z 670.2[M-H]-。
实施例20
化合物36
步骤1：制备化合物20b
向N-苯甲酰基-3'-脱氧-3'-氟-腺苷20a[CAS 129054-67-7](7.4g，18.5mmol)的无水吡啶(138mL)溶液中加入DMAP(1.13g，9.2mmol)和DMTrCl(10g，29.7mmol)(分批)，在室温下搅拌直至完全转化(5h)。用甲醇(15mL)猝灭反应混合物，并减压浓缩。将获得的残余物溶于乙酸乙酯中并用水洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-2％MeOH的DCM溶液)进行纯化，得到为白色泡沫的化合物20b(9.8g，收率：78％)。1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm:3.31(q,J＝5.0Hz,1H),3.36(t,J＝5.2Hz,1H),3.73(s,6H),4.41(dt,J＝26.4,4.6Hz,1H),5.19(m,1H),5.28(dd,J＝11.7,7.6Hz,1H),6.09(dd,J＝6.9,4.8Hz,2H),6.87(m,4H),7.24(m,7H),7.39(d,J＝6.9Hz,2H),7.56(t,J＝7.6Hz,2H),7.65(m,1H),8.06(d,J＝6.9Hz,2H),8.62(d,J＝3.4Hz,2H),11.27(s,1H)；ESI-MS：m/z 676.1[M+H]+。
步骤2：制备化合物20c
向反应烧瓶中装入DMAP(2.62g，21.4mmol)、无水DCM(50mL)和活化的
分子筛。将所得混合物在室温下于惰性气氛下搅拌至少2h。同时，将化合物20b(2.9g，4.29mmol)的溶液和化合物19e(3.4g，5.15mmol)的溶液(各自溶于无水DCM(2×50mL)中)在活化的
分子筛上干燥(约2h)。将两种溶液(分别为化合物20b和化合物19c)相继转移到反应烧瓶中。将所得反应混合物搅拌24h。通过过滤除去分子筛，并且用二氯甲烷充分冲洗。将滤液用饱和NaHCO3水溶液、盐水和饱和NH4Cl水溶液洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-1％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物20c(4.2g，收率：81％)。1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm:11.23(d,J＝36.5Hz,2H),8.70(s,1H),8.63(d,J＝20.0Hz,2H),8.53(s,1H),8.04(q,J＝3.4Hz,4H),7.65(m,2H),7.55(td,J＝7.6,4.8Hz,4H),7.35(d,J＝7.6Hz,2H),7.22(m,7H),6.83(m,4H),6.43(q,J＝7.1Hz,2H),6.05(td,J＝11.0,6.2Hz,1H),5.64(d,J＝54.4Hz,1H),4.53(m,2H),3.88(t,J＝3.1Hz,1H),3.70(s,6H),3.37(m,2H),3.20(m,2H),2.97(m,1H),0.88(s,9H),0.09(d,J＝2.1Hz,6H)；ESI-MS：m/z 1206[M+H]+。
步骤3：制备化合物20d
将Et3N(19.4mL，139.4mmol)和Et3N.3HF(2.2mL，13.9mmol)加入到化合物20d(4.2g，3.4mmol)的吡啶(70mL)溶液中。将反应混合物在45℃下搅拌直至完全转化(约5h)，并且然后冷却至室温。加入异丙氧基三甲基硅烷(9.9mL，55.7mmol)并继续搅拌过夜。最后，将反应混合物减压浓缩，并且通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％–4％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为泡沫的化合物20d(3.0g，收率：78％)。
1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm:11.21(s,1H),8.70(s,1H),8.62(d,J＝9.6Hz,2H),8.53(s,1H),8.04(m,4H),7.65(m,2H),7.55(td,J＝7.7,3.7Hz,4H),7.36(d,J＝7.6Hz,2H),7.21(m,7H),6.83(m,4H),6.43(dd,J＝16.2,6.5Hz,2H),6.04(td,J＝11.0,6.2Hz,1H),5.66(dt,J＝53.5,3.4Hz,1H),5.46(s,1H),4.49(dd,J＝24.1,2.8Hz,1H),4.39(s,1H),3.88(m,1H),3.71(s,6H),3.40(q,J＝5.3Hz,2H),3.20(m,2H),2.85(q,J＝6.9Hz,1H)；ESI-MS：m/z 1090[M+H]+。
步骤4：制备化合物20e
将化合物20d(3.0g，2.7mmol)溶于DCM(84mL)中，加入水(250μL，13.7mmol)和二氯乙酸(9.1mL的10％DCM溶液，10.9mmol)。将所得反应混合物搅拌1h(完全转化)，之后通过加入吡啶(1.1mL，13.7mmol)和几滴甲醇来猝灭。减压浓缩后获得的残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-6％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物20e(1.9g，收率：87％)。1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm:11.28(s,1H),11.21(s,1H),8.72(d,J＝4.1Hz,3H),8.62(s,1H),8.04(d,J＝8.3Hz,4H),7.64(m,2H),7.55(q,J＝6.9Hz,4H),6.40(m,2H),5.53(t,J＝5.9Hz,1H),5.42(t,J＝5.2Hz,1H),4.45(dt,.J＝26.9,3.4Hz,1H),4.35(s,1H),3.79(t,J＝7.2Hz,1H),3.68(d,J＝20.0Hz,2H),3.10(m,3H),2.84(m,1H),2.32(q,J＝3.4Hz,1H)；ESI-MS：m/z 790[M+H]+。
步骤5：制备化合物20f
将化合物20e(500mg，0.63mmol)和1H-四唑(5.54mL的3％-4％MeCN溶液)的无水THF(31mL)溶液在惰性气氛下用活化的
分子筛处理2h，之后一次性加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(210mg，0.70mmol)。之后将反应混合物振摇2h。加入附加量的2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(95mg，0.32mmol)并继续振摇过夜。加入tBuOOH(196μL的5.5M癸烷溶液，1.08mmol)，并且将反应混合物再振摇一小时。通过过滤除去分子筛并用DCM充分冲洗。将滤液用盐水和饱和NaHCO3水溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物20f(56mg，收率：10％)。ESI-MS：m/z 905.5[M+H]+。
步骤6：制备化合物36，钠盐
将化合物20f(56mg，0.062mmol)在33％甲胺的乙醇溶液(10mL)中在室温下搅拌2h。将反应混合物减压浓缩。将粗产物在MeCN中研磨，然后通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，5μm，250mm×30mm；流动相：0.25％碳酸氢铵水溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化，得到化合物36，铵盐。通过在填充有IRNa离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的转化，得到冻干后为白色蓬松固体的化合物36，钠盐(17.5mg，收率：42％)。1H NMR(600MHz,DMSO-d6,81℃)δppm 8.71(br s,1H),8.34(br s,1H),8.14(s,1H),8.07(s,1H),6.94(br s,2H),6.90(br s,2H),6.32(t,J＝7.1Hz,1H),6.22(br s,1H),5.68(br d,J＝26.8Hz,1H),5.42(br d,J＝51.9Hz,1H),5.10(br s,1H),4.46(br d,J＝25.5Hz,1H),4.10-4.19(m,1H),4.04(br s,1H),3.79(br s,1H),3.18(m,J＝11.4Hz,1H),2.92(s,1H),2.53(br s,1H)；31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm-1.74(s,1P)；ES1-MS：m/z 644.4[M+H]+。
实施例21
化合物29
步骤1：制备化合物21b
向3'-脱氧-3'-氟肌苷21a[CAS 117517-20-1](2.2g，8.14mmol)的无水吡啶(33mL)溶液中加入DMAP(0.49g，4.0mmol)和DMTrCl(4.4g，13mmol)(分批)，在室温下搅拌直至完全转化(约2.5h)。用甲醇(10mL)猝灭反应混合物，并减压浓缩。将获得的残余物溶于乙酸乙酯中并用水洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-2％MeOH的DCM溶液)进行纯化，得到为灰白色泡沫的化合物21b(3.3g，收率：71％)。1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm:8.22(d,J＝2.1Hz,1H),7.93(d,J＝1.4Hz,1H),7.36(d,J＝8.3Hz,2H),7.28(t,J＝7.6Hz,2H),7.23(m,5H),6.86(dd,J＝8.3,6.2Hz,4H),5.92(d,J＝7.6Hz,1H),5.14(dd,J＝54.1,4.5Hz,1H),5.02(dq,J＝23.2,3.9Hz,1H),4.35(dt,J＝25.9,4.3Hz,1H),3.74(s,6H),3.29(dq,J＝37.5,5.2Hz,2H)；ESI-MS：m/z 572.0[M+H]+。
步骤2：制备化合物21c
将化合物21b(0.66g，1.15mmol)、氨基磺酸盐17a(1.21g，1.38mmol)和DMAP(0.704g，5.76mmol)各自分别溶于无水DCM(3×20.0mL)中，并且在惰性气氛下在活化的
分子筛上干燥至少2h。接下来，将化合物21b和氨基磺酸盐17a溶液相继转移到含有DMAP溶液的反应烧瓶中。将所得反应混合物搅拌24h。通过过滤除去分子筛，并且用二氯甲烷充分冲洗。将滤液相继用饱和NaHCO3水溶液和饱和NH4Cl水溶液洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为灰白色泡沫的化合物21c(0.475g，收率：31％)。
1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm:12.47(s,1H),11.23(s,1H),8.66(s,1H),8.56(s,1H),8.48(s,1H),8.19(s,1H),8.03(d,J＝7.6Hz,2H),7.84(s,1H),7.65(t,J＝7.2Hz,1H),7.55(t,J＝7.6Hz,2H),7.48(d,J＝7.6Hz,2H),7.36(q,J＝4.8Hz,4H),7.32(m,4H),7.23(t,J＝7.6Hz,4H),7.19(t,J＝7.9Hz,5H),6.90(dd,J＝9.0,6.9Hz,4H),6.81(dd,J＝9.0,6.2Hz,4H),6.34(m,1H),6.23(d,J＝6.2Hz,1H),5.78(m,2H),5.50(d,J＝53.7Hz,1H),4.72(m,2H),4.43(d,J＝24.1Hz,1H),4.01(t,J＝7.9Hz,1H),3.74(s,1H),3.70(t,J＝2.4Hz,12H),3.25(dd,J＝10.7,3.8Hz,1H),2.99(d,J＝13.1Hz,1H),2.70(dd,J＝14.5,9.0Hz,1H)；ESI-MS：m/z 1310.0[M+H]+。
步骤3：制备化合物21d
向化合物21c(0.453g，0.34mmol)的DCM(12.6mL)溶液中加入DCA(1.14mL的10％DCM溶液，1.38mmol)和水(31μL，1.72mmol)，在室温下搅拌直至完全脱保护(约2h)。通过加入吡啶(0.14mL，1.72mmol)和几滴甲醇来猝灭反应混合物。将所得悬浮液搅拌20min，过滤并干燥，得到化合物21d(0.21g，收率：86％)。1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm:12.5(d,J＝3.4Hz,1H),11.25(s,1H),8.75(s,1H),8.69(t,J＝6.0Hz,1H),8.61(s,1H),8.35(s,1H),8.09(d,J＝3.4Hz,1H),8.05(d,7.6Hz,2H),7.66(t,J＝7.2Hz,1H),7.56(tJ＝7.6Hz,2H),6.32(dd,J＝20.0,2.1Hz,1H),6.21(d,J＝7.6Hz,1H),5.85(d,J＝6.2Hz,1H),5.60(m,1H),5.49(m,3H),5.34(d,J＝4.8Hz,1H),4.57(m,1H),4.40(dt,J＝26.9,3.4Hz,1H),3.92(q,J＝6.0Hz,1H),3.65(t,J＝4.1Hz,2H),3.17(t,J＝6.2Hz,2H)；ESI-MS：m/z 706.0[M+H]+。
步骤4：制备化合物21e
将化合物21d(260mg，0.37mmol)和1H-四唑(2.15mL的3％-4％MeCN溶液，在活化的
分子筛上干燥)的DMF/THF(1:2，30mL，在活化的
分子筛上干燥)溶液在惰性气氛下用活化的
分子筛处理2h，之后一次性加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(129μL，0.41mmol)。将所得反应混合物在室温下振摇过夜。加入附加量的2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(23μL，0.074mmol)，并且再继续振摇一天以获得完全转化。加入tBuOOH(134μL的5.5M癸烷溶液，0.74mmol)，并且将反应混合物再振摇一小时。通过过滤除去分子筛并用二氯甲烷冲洗。将滤液用水充分洗涤，用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-5％MeOH的DCM)纯化，得到化合物21e(20mg，收率：7％)。ESI-MS：m/z 820.4[M+H]+。
步骤5：制备化合物29，钠盐
在室温下，将化合物21e(20mg，0.024mmol)在33％甲胺的乙醇溶液(10mL)中搅拌直至完全转化(～1h)。减压浓缩反应混合物。将所得粗产物在MeCN中研磨，然后通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，5μm，250mm×30mm；流动相：0.25％碳酸氢铵水溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化，得到化合物29，铵盐。通过在填充有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到冻干后为白色蓬松固体的化合物29，钠盐(13.5mg，收率：80％)。31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm-2.06(s,1P)；ESI-MS：m/z 663.3[M+H]+。
实施例22
化合物49
步骤1：制备化合物22b
在K2CO3(9.64g，69.77mmol)的存在下，将6-氯嘌呤核苷22a(10.0g，34.88mmol，CAS#5399-87-1)的THF(200mL)溶液在室温下于大气压下在Pd/C(碳载量10％，8g)上进行氢化。将反应混合物在硅藻土上过滤，相继用THF和5:1 THF/MeOH冲洗硅藻土。将合并的滤液减压浓缩，得到粗制化合物22b(6.3g)，该粗制化合物原样用于下一步骤中。ESI-MS：m/z253.1[M+H]+。
步骤2：制备化合物22c
将粗制化合物22b(6.1g)和DMTrCl(11.93g，35.20mmol)的无水吡啶(300mL)溶液在室温下搅拌直至完全转化(约2h)。将反应混合物用DCM稀释并用盐水洗涤。将水层用DCM反萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：1％-5％MeOH的DCM溶液)进行纯化，得到为白色固体的化合物22c(11.7g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.21(s,1H),8.89(s,1H),8.74(s,1H),7.33(d,J＝6.8Hz,2H),7.15-7.26(m,7H),6.80(t,J＝9.3Hz,4H),6.07(d,J＝4.5Hz,1H),5.62(d,J＝5.6Hz,1H),5.29(d,J＝5.8Hz,1H),4.78(q,J＝5.1Hz,1H),4.34(q,J＝5.3Hz,1H),4.11(q,J＝4.8Hz,1H),3.72(s,3H),3.71(s,3H),3.21-3.25(m,2H)；ESI-MS：m/z 555.1[M+H]+。
步骤3：制备化合物22d和22e
向化合物22c(6.7g，12.1mmol)的DMF(70mL)溶液中加入咪唑(2.47g，14.5mmol)和TBSCl(2.19g，2.39mmol)，在室温下搅拌过夜。将反应混合物用EtOAc稀释并用盐水洗涤。将有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：10％-33％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到作为第一洗脱异构体的化合物22d(3.3g，收率：40％)和作为第二洗脱异构体的化合物22e(3.5g，收率：43％)。化合物22d：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.22(s,1H),8.87(s,1H),8.74(s,1H),7.38(d,J＝7.5Hz,2H),7.16-7.29(m,7H),6.83(dd,J＝8.5,4.9Hz,4H),6.09(d,J＝4.8Hz,1H),5.23(d,J＝6.0Hz,1H),4.89(t,J＝4.9Hz,1H),4.27(q,J＝5.2Hz,1H),4.14(q,J＝4.5Hz,1H),3.72(s,6H),3.29(br d,J＝4.6Hz,2H),0.72(s,10H),-0.05(s,3H),-0.17(s,3H)；ESI-MS：m/z 669.2[M+H]+。
化合物22e：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.20(s,1H),8.87(s,1H),8.80(s,1H),7.29-7.40(m,2H),7.12-7.27(m,7H),6.82(m,J＝8.8,6.8Hz,4H),6.04(d,J＝5.0Hz,1H),5.48(d,J＝6.0Hz,1H),4.92(q,J＝5.2Hz,1H),4.52(t,J＝4.6Hz,1H),4.05-4.13(m,1H),3.72(s,6H),3.36(dd,J＝10.5,4.5Hz,1H),3.15(dd,J＝10.5,5.0Hz,1H),0.84(s,9H),0.09(s,3H),0.05(s,3H)；ESI-MS：m/z 669.2[M+H]+。
步骤4：制备化合物22f
将活化的
分子筛加入到装有化合物22e(1.31g，1.96mmol)和氨基磺酸盐17a(1.88g，2.14mmol)的无水THF(85mL)溶液的反应烧瓶中；将所得混合物在室温下于惰性气氛下搅拌至少2h。同时，将DMAP(1.2g，9.82mmol)的无水THF(15mL)溶液在活化的
分子筛上干燥，之后将其转移到反应烧瓶中。将所得反应混合物在50℃下搅拌过夜。通过过滤除去分子筛并用二氯甲烷充分冲洗。将滤液用水和饱和NaHCO3水溶液洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物22f。
步骤5：制备化合物22g
向化合物22f(2.4g，1.71mmol)的DCM(80mL)溶液中加入DCA(0.563mL，6.83mmol)和水(154μL，8.54mmol)，在室温下搅拌直至完全脱保护(约1h)。通过加入吡啶(688μL，8.54mmol)的甲醇(1mL)溶液来猝灭反应混合物，并用水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物22g。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.26(s,1H),9.17(s,1H),8.89(s,1H),8.83(s,1H),8.71(s,1H),8.57(s,1H),8.44(t,J＝5.8Hz,1H),8.00-8.08(m,2H),7.61-7.75(m,1H),7.49-7.59(m,2H),6.34(d,J＝6.0Hz,1H),6.28(dd,J＝19.2,2.1Hz,1H),5.79(d,J＝6.1Hz,1H),5.39-5.61(m,2H),5.21-5.32(m,1H),4.69(dd,J＝4.8,2.8Hz,1H),4.39-4.55(m,1H),4.02(q,J＝3.5Hz,1H),3.78-3.87(m,1H),3.66-3.76(m,1H),3.54-3.62(m,1H),2.95-3.14(m,2H),0.91(s,9H),0.13(s,3H),0.13(s,3H)；ESI-MS：m/z 801.3[M+H]+。
步骤6：制备化合物22h
将化合物22g(100mg，0.129mmol)和1H-四唑(2.22mL的0.45MMeCN溶液，0.99mmol)的无水THF(3mL)溶液用
分子筛在N2下处理5min，之后在10min内经由注射器滴加2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(75mg，0.25mmol)的无水THF(1mL)溶液(注意：在使用前，THF在Na/二苯甲酮上新鲜蒸馏，并且MeCN在CaH2上新鲜蒸馏)。将所得反应混合物在室温下搅拌1h。经由注射器加入tBuOOH溶液(114μL的5M至6M癸烷溶液，0.624mmol)，并且再继续搅拌30min。将混合物用DCM(20mL)稀释，通过硅藻土垫过滤并浓缩。该粗产物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-6％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的化合物22h(66mg，57％收率)。ESI-MS：m/z＝916.3[M+H]+。
步骤7：制备化合物22i
将化合物22h(66mg，0.072mmol)在30％甲胺的乙醇溶液(5mL)中在室温下搅拌4h。将反应混合物减压浓缩。将残余物溶于水中，用DCM洗涤并冻干。该粗产物通过制备型反相HPLC(固定相：Agela Durashell C18，5μm，150mm×25mm；流动相：10mM碳酸氢铵水溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化，得到化合物22i(11.6mg，收率，14.5％)。1H NMR(400MHz,D2O)δppm9.57(d,J＝1.5Hz,1H),9.35(dd,J＝1.5,9.5Hz,2H),8.71(d,J＝1.3Hz,1H),8.09(d,J＝1.8Hz,1H),7.04(d,J＝8.3Hz,1H),6.86(br,d,J＝19.6Hz,1H),6.18-5.91(m,2H),5.84-5.65(m,1H),5.24(br,s,1H),4.88-4.80(m,3H),4.74-4.59(m,1H),4.05(br,dd,J＝5.4,14.4Hz,1H),3.96-3.81(m,1H),1.44(d,J＝1.3Hz,9H),0.73-0.60(m,6H)；19F NMR(376MHz,D2O)δppm-198.496(s,1F)；31P NMR(162MHz,D2O)δppm-198.496(s,1F)；ESI-MS：m/z＝759.2[M+H]+。
步骤8：制备化合物49，钠盐
向化合物22i(40mg，0.053mmol)的吡啶(3mL)溶液中加入Et3N(320mg，3.16mmol)和三乙胺三氟化氢(254mg，1.58mmol)，在50℃下搅拌4h。将反应混合物冷却至该温度并用THF(2mL)稀释。加入异丙氧基三乙基硅烷(697mg，5.27mmol)并在室温下继续搅拌1.5h。减压浓缩后获得的残余物通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，5μm，150mm×25mm；流动相：10mM碳酸氢铵水溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化，得到化合物49，铵盐。通过在填充有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到冻干后为白色固体的化合物49，钠盐(22.5mg，收率：58％)。
1H NMR(400MHz,D2O)δppm 8.95(s,1H),8.76(s,1H),8.53(s,1H),8.13(s,1H),6.73-6.58(m,1H),6.53(d,J＝8.0Hz,1H),6.42-6.33(m,1H),5.93(br,dd,J＝4.3,7.8Hz,1H),5.50-5.30(m,1H),5.19-5.04(m,1H),4.88-4.81(m,1B),4.55-4.44(m,2H),4.39-4.32(m,1H),4.25(ddd,J＝2.3,4.9,12.2Hz,1H),3.71(br,d,J＝13.1Hz,1H),3.46(br,d,J＝12.8Hz,1H)；19F NMR(376MHz,D2O)δppm-197,119(s,1F)；31P NMR(162MHz,D2O)δppm-1.984(s,1P)；ESI-MS：m/z＝645.2[M+H]+。
实施例23
化合物(*R)16A和化合物(*S)16B
步骤1：制备化合物23a
将化合物13a(900mg，1.16mmol)溶于无水ACN(103mL)和无水THF(103mL)的混合物中，加入1H-四唑(10.2mL，3％-4％MeCN溶液，使用前在
分子筛上干燥)和
分子筛。将混合物在RT下振摇2小时，并且然后经由注射器立刻加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四异丙基亚磷酰二胺(0.48mL，1.51mmol)。将反应混合物在RT下振摇4小时。加入附加量的2-氰乙基-N,N,N',N'-四异丙基亚磷酰二胺(0.48mL，1.51mmol)。将反应混合物在RT下振摇1小时，并且然后加入苯乙酰二硫化物(0.7g，2.33mmol)。将反应混合物在RT下振摇30分钟。将反应混合物过滤。将分子筛用二氯甲烷洗涤三次。将合并的滤液用饱和Na2S2O3溶液和饱和NaHCO3溶液的混合物洗涤，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，并蒸发滤液的溶剂。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-100％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物23a(152mg，收率：11％)。ESI-MS：m/z 904.3[M+H]+。
步骤2：制备化合物(*R)16A和化合物(*S)16B
将化合物23a(152mg，0.12mmol)溶于甲胺的33％乙醇溶液(7mL，56mmol)在40℃下搅拌3小时。将反应混合物减压蒸发至干。将残余物在10mL无水乙腈中研磨。通过过滤收集沉淀物，并且用无水乙腈洗涤。用反相制备型HPLC(固定相：RP XBridge Prep C18 OBD-10μm，50mm×150mm，流动相：0.25％NH4HCO3的水溶液，MeOH)对两种差向异构体进行纯化/分离。通过冻干除去两种纯级分的溶剂。将残余物溶于水中，并且在填充有阳离子钠离子交换树脂的预洗涤(水)柱上过滤，得到均为白色固体的化合物(*R)16A，钠盐(37mg，29％收率)和化合物(*S)16B，钠盐(5mg，6％收率)。
化合物(*R)16A，钠盐：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.58-2.69(m,1H)2.95-3.07(m,1H)3.41(dd,J＝13.2,2.6Hz,1H)3.58-3.68(m,1H)4.01(td,J＝11.8,6.5Hz,1H)4.18(ddd,J＝13.5,11.3,4.1Hz,1H)4.36(br d,J＝8.1Hz,1H)4.47-4.56(m,1H)5.18-5.29(m,1H)5.75-5.94(m,1H)5.79(m,J＝9.0,4.1Hz,1H)6.13(d,J＝3.7Hz,1H)6.37(d,J＝19.1Hz,1H)6.78(br s,2H)7.15(br s,2H)7.99(s,1H)8.38(s,1H)9.65(br s,1H)；ESI-MS：m/z677.0[M+H]+。
化合物(*S)16B，钠盐：31P NMR(162MHz,D2O)δppm 55.80(s,1P)。ESI-MS：m/z677.3[M+H]+。
实施例24
化合物(*R)13A
步骤1：制备化合物24a
将化合物19g(0.6g，0.77mmol)溶于无水ACN(55mL)和无水THF(55mL)的混合物中，加入1H-四唑(8.94mL，3％-4％MeCN溶液，使用前在
分子筛上干燥)和
分子筛。将混合物在RT下振摇1小时，并且然后经由注射器立刻加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四异丙基-亚磷酰二胺(0.24mL，0.77mmol)。将反应混合物在RT下振摇2.5h，并且然后加入苯乙酰二硫化物(PADS，0.46g，1.53mmol)。将反应混合物在室温下振摇18h。通过过滤除去分子筛，并用二氯甲烷冲洗。将合并的滤液用饱和Na2S2O3溶液和饱和NaHCO3溶液的混合物洗涤，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，并蒸发滤液的溶剂。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-100％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物24a(184mg，收率：26％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.13(dd,J＝6.7,1.4Hz,6H)2.69-2.87(m,2H)3.07(t,J＝5.9Hz,2H)3.25-3.30(m,1H)3.35-3.47(m,2H)3.53(s,3H)3.55-3.65(m,1H)4.31-4.48(m,4H)4.51-4.61(m,2H)5.14(dd,J＝8.5,4.1Hz,1H)5.38-5.52(m,1H)6.20(d,J＝8.5Hz,1H)6.60(dd,J＝8.5,6.1Hz,1H)7.56(t,J＝7.4Hz,2H)7.65(t,J＝7.0Hz,1H)8.05(d,J＝7.5Hz,2H)8.35(s,1H)8.44(brs,1H)8.73(s,1H)8.76(s,1H)11.22(br s,1H)11.73(s,1H)12.11(br s,1H)；31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm 65.02(s,1P)；ESI-MS：m/z 915.5[M+H]+。
步骤2：制备化合物(*R)13A，钠盐
将化合物24a(184mg，0.2mmol)溶于甲胺的33％乙醇溶液(10mL，81mmol)在45℃下搅拌1h。将反应混合物减压蒸发至干。将残余物在3mL无水乙腈中研磨。通过过滤收集沉淀物，并且用无水乙腈洗涤。用反相制备型HPLC(固定相：RP XBridge Prep C18 OBD-10μm，50mm×150mm，流动相：0.25％NH4HCO3的水溶液，MeOH)进行纯化。通过冻干除去纯级分的溶剂。将残余物溶于水中，并在填充有离子交换树脂IR120 Na+形式的预洗涤(水)柱上过滤。通过冻干除去所得溶液的溶剂，得到为白色蓬松固体的化合物(*R)13A，钠盐(93mg，66％收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.59(br s,1H),8.42(s,1H),8.37(s,1H),8.05(s,1H),7.23-7.33(m,2H),7.28(br s,2H),6.52(br s,2H),6.35(dd,J＝8.4,6.0Hz,1H),6.02(d,J＝8.5Hz,1H),5.48(br dd,J＝8.6,4.0Hz,1H),5.17(br s,1H),4.36(br s,1H),4.12(s,2H),3.95-4.04(m,1H),3.88-3.95(m,1H),3.48-3.59(m,1H),3.47(s,3H),3.18(dd,J＝14.0,4.3Hz,1H),3.06(ddd,J＝13.9,8.2,5.9Hz,1H),2.53-2.68(m,1H)；31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm 52.21(s,1P)；ESI-MS：m/z 688.3[M+H]+。
实施例25
化合物(*R)31A和化合物(*S)31B
步骤1：制备化合物25a
将化合物12a(300mg，0.38mmol)溶于无水ACN(33mL)和无水THF(33mL)的混合物中，加入1H-四唑(4.4mL，3％-4％MeCN溶液，使用前在
分子筛上干燥)和
分子筛。将混合物在RT下振摇1小时，并且然后经由注射器立刻加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四异丙基亚磷酰二胺(0.12mL，0.38mmol)。将反应混合物在室温下振摇4.5小时。加入附加量的2-氰乙基-N,N,N',N'-四异丙基亚磷酰二胺(0.06mL，0.19mmol)。将反应混合物在RT下振摇18小时，并且然后加入苯乙酰二硫化物(0.23g，0.75mmol)。将反应混合物在RT下振摇2小时。将反应混合物过滤。用二氯甲烷将分子筛洗涤三次。将合并的滤液用饱和Na2S2O3溶液和饱和NaHCO3溶液的混合物洗涤，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，并蒸发滤液的溶剂。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物25a(103mg，27％收率)。ESI-MS：m/z 921.4[M+H]+。
步骤2：制备化合物(*R)31A，钠盐和化合物(*S)31B，钠盐
将化合物25a(103mg，0.1mmol)置于甲胺的33％乙醇溶液(6mL，58.4mmol)中，在45℃下搅拌1小时。将反应混合物减压蒸发至干。将残余物在10mL无水乙腈中研磨。通过过滤收集沉淀物，并且用无水乙腈洗涤。用反相制备型HPLC(固定相：RP XBridge Prep C18OBD-10μm，50mm×150mm，流动相：0.25％NH4HCO3的水溶液，MeOH)对两种差向异构体进行纯化/分离。通过冻干除去两种纯级分的溶剂。将残余物溶于水中，并在填充有阳离子钠离子交换树脂的预洗涤(水)柱上过滤。冻干所得溶液的溶剂，得到化合物31A和31B，每一者均为白色固体。
化合物(*R)31A，钠盐(42mg，57％收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 3.36-3.51(m,2H)3.88(m,J＝9.8Hz,1H)4.12-4.23(m,2H)4.55(d,J＝1.0Hz,1H)5.19(br t,J＝13.0Hz,1H)5.26-5.61(m,3H)6.04(br d,J＝8.1Hz,1H)6.37-6.48(m,1H)6.53(br s,2H)7.35(br s,2H)8.16(s,1H)8.22(d,J＝2.8Hz,1H)8.34(s,1H)。31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm 52.43(s,1P)；ESI-MS：m/z 694.3[M+H]+。
化合物(*S)31B，钠盐(3mg，4％收率)。31P NMR(162MHz,D2O)δppm 55.20(s,1P)；ESI-MS：m/z 694.3[M+H]+。
实施例26
化合物(*R)7A和化合物(*S)7B
步骤1：制备化合物26b
在0℃下，将氯三甲基硅烷(5.53mL，43.7mmol)滴加到26a[CAS 847648-20-8](2.6g，8.74mmol)的无水吡啶(26mL)溶液中。将反应溶液在室温下搅拌30min，之后将其再次冷却至0℃。在15min的时间段内滴加异丁酰氯(4.58mL，43.7mmol)，并且在室温下继续搅拌直至完全转化。将反应冷却至0℃，加入水，20min后加入氨水(26％，18mL)，在室温下继续搅拌2h。用乙酸中和反应溶液，并且减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-7％MeOH的DCM溶液)进行纯化，得到为灰白色固体的化合物26b(1.3g，收率：40％)。1H NMR(500MHzDMSO-d6)δppm:12.10(s,1H),11.71(s,1H),7.96(s,1H),5.93(d,J＝4.1Hz,1H),4.80(t,J＝5.5Hz,1H),4.50(t,J＝2.1Hz,1H),4.23(q,J＝5.0Hz,1H),3.78(q,J＝2.1Hz,1H),3.71(m,1H),3.63(m,1H),3.37(s,3H),2.78(m,1H),1.23(d,J＝4.8Hz,1H),1.12(d,J＝6.9Hz,6H)；ESI-MS：m/z 367.9[M+H]+。
步骤2：制备化合物26c
向化合物26b(1.75g，4.76mmol)的无水吡啶(35mL)溶液中加入DMAP(0.29g，2.38mmol)和DMTrCl(2.41g，7.14mmol)(分批)，在室温下搅拌直至完全转化(约1.5h)。用甲醇(15mL)猝灭反应混合物，并减压浓缩。将获得的残余物溶于乙酸乙酯中并用水洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-2.5％MeOH的DCM溶液)进行纯化，得到为浅棕色泡沫的化合物26c(3.1g，收率：96％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm:11.89(d,J＝177.0Hz,2H),7.75(s,1H),7.39(d,J＝7.6Hz,2H),7.25(m,7H),6.86(m,4H),5.98(d,J＝4.1Hz,1H),5.83(d,J＝2.1Hz,1H),4.49(m,2H),3.82(q,J＝2.1Hz,1H),3.73(d,J＝2.8Hz,6H),3.27(s,3H),3.22(m,1H),2.78(m,1H),1.12(dd,J＝6.9,2.1Hz,6H)；ESI-MS：m/z 669[M+H]+。
步骤3：制备化合物26d
向反应烧瓶中装入DMAP(0.35g，2.9mmol)、无水DCM(10mL)和活化的
分子筛。将所得混合物在室温下于惰性气氛下搅拌至少2h。同时，将化合物26c(0.38g，0.57mmol)的溶液和氨基磺酸盐17a(0.6g，0.69mmol)的溶液(各自溶于无水DCM(2×10mL)中)在活化的
分子筛上干燥(约2h)。将两种溶液(分别为化合物26c和氨基磺酸盐17a)相继转移到反应烧瓶中。将所得反应混合物搅拌24h。通过过滤除去分子筛，并且用二氯甲烷充分冲洗。将滤液用饱和NaHCO3水溶液、盐水和饱和NH4Cl水溶液洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-1％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为泡沫的化合物26d(0.44g，收率：55％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm:12.12(s,1H),11.69(s,1H),11.22(s,1H),8.63(s,1H),8.45(s,1H),8.02(d,J＝6.9Hz,2H),7.64(q,J＝7.3Hz,2H),7.55(t,J＝7.6Hz,2H),7.49(d,J＝7.6Hz,2H),7.36(m,8H),7.23(m,8H),6.92(t,J＝9.6Hz,4H),6.84(dd,J＝13.8,9.0Hz,4H),6.28(d,J＝19.3Hz,1H),6.05(d,J＝1.0Hz,1H),5.15(s,1H),4.97(m,1H),4.85(d,J＝22.0Hz,1H),4.40(q,J＝5.0Hz,1H),3.98(m,2H),3.70(t,J＝3.1Hz,12H),3.23(d,J＝6.9Hz,2H),3.13(s,3H),2.79(m,2H),2.65(m,2H),1.10(d,J＝5.5Hz,6H)；ESI-MS：m/z 1406[M+H]+。
步骤4：制备化合物26e
向化合物26d(430mg，0.3mmol)的DCM(12mL)溶液中加入DCA(1.0mL的10％DCM溶液，1.2mmol)和水(27μL，1.5mmol)，在室温下搅拌直至完全脱保护(约1h)。通过加入吡啶(120μL，1.5mmol)和几滴甲醇来猝灭反应混合物。减压浓缩后获得的残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-8％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色粉末的化合物26e(225mg，收率：92％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm:12.11(s,1H),11.67(s,1H),11.25(s,1H),8.73(s,1H),8.57(s,1H),8.04(d,J＝6.9Hz,2H),7.87(s,1H),7.65(t,J＝7.6Hz,1H),7.55(t,J＝7.9Hz,2H),6.29(dd,J＝19.6,1.7Hz,1H),6.04(s,1H),5.92(s,1H),5.58(m,1H),5.22(s,1H),4.92(d,J＝10.3Hz,1H),4.62(m,1H),4.17(q,J＝5.0Hz,1H),4.10(t,J＝2.1Hz,1H),4.02(td,J＝7.2,2.5Hz,1H),3.70(m,1H),3.61(m,1H),3.45(m,1H),3.37(s,3H),3.06(q,J＝7.3Hz,1H),2.77(m,1H),1.12(dd,J＝6.9,2.1Hz,6H)；ESI-MS：m/z 801.0[M+H]+。
步骤5：制备化合物26f
将化合物26e(220mg，0.27mmol)和1H-四唑(3.2mL，3％-4％MeCN溶液，使用前在
分子筛上干燥)的1:1 MeCN/THF(48mL，在活化的
分子筛上预干燥，在活化的
分子筛上预干燥)溶液用活化的
分子筛处理1h，之后立刻加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(87μL，0.27mmol)。将所得反应混合物在室温下振摇22h。加入苯乙酰二硫化物(PADS，0.45g，1.5mmol)并再继续振摇1小时。通过过滤除去分子筛并用二氯甲烷冲洗。随后将合并的滤液用饱和Na2S2O3水溶液和饱和NaHCO3水溶液与盐水的1:1混合物洗涤，用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物26f(55mg，收率：21％)。ESI-MS：m/z 933.5[M+H]+。
步骤6：制备化合物(*R)7A，钠盐和化合物(*S)7B，钠盐
将化合物26e(55mg，0.059mmol)在33％甲胺的乙醇溶液(4mL)中于45℃下搅拌直至完全转化(约1h)，之后将反应溶液冷却至室温，并且减压浓缩。将粗产物在MeCN中研磨，获得的沉淀物通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，5μm，250mm×30mm；流动相：0.25％碳酸氢铵水溶液(A)-MeOH(B)；梯度洗脱)进一步纯化，从而分离出两种P-差向异构体：作为第一洗脱异构体的化合物(*R)7A，铵盐，和作为第二洗脱异构体的化合物(*S)7B，铵盐。通过在填充有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到为白色固体的化合物(*R)7A，钠盐(收率：7mg，16％)和为白色固体的化合物(*S)7B，钠盐(收率：4mg，9％)。
化合物(*R)7A，钠盐。1H NMR(400MHz,D2O)δppm 3.31(br d,J＝12.2Hz,1H),3.50(s,3H),3.52-3.57(m,1H),4.28-4.50(m,4H),4.74(s,1H),4.97-5.08(m,1H),5.29(s,1H),5.72(dd,J＝50.5,3.7Hz,1H),6.15(s,1H),6.30(d,J＝18.7Hz,1H),7.76(s,1H),8.10(s,1H),8.21(s,1H)；31P NMR(162MHz,D2O)δppm 55.05(s,1P)；ESI-MS：m/z 706.0[M+H]+。
化合物(*S)7B，钠盐。1H NMR(400MHz,D2O)δppm 8.43(br s,1H),8.18(s,1H),7.84(s,1H),6.37(d,J＝19.1Hz,1H),6.14(s,1H),5.52(dd,J＝50.7,4.3Hz,1H),5.26(br s,1H),4.87-4.99(m,2H),4.64-4.70(m,1H),4.49(ddd,J＝10.5,4.9,2.7Hz,1H),4.39(br d,J＝8.8Hz,1H),4.23(dt,J＝23.8,10.7Hz,1H),3.57(br dd,J＝14.1,3.5Hz,1H),3.47(s,3H),3.33(br d,J＝13.9Hz,1H)；31P NMR(162MHz,D2O)δppm 56.94(s,1P)；ESI-MS：m/z706.1[M+H]+。
实施例27
化合物(*R)44A和化合物(*S)44B
步骤1：制备化合物27a
注意：在使用前，THF在Na/二苯甲酮上新鲜蒸馏，并且CH3CN在CaH2上新鲜蒸馏。
向17d(400mg，0.518mmol)的四氢呋喃(14mL)溶液中，加入
分子筛(粉末，2g)，并且将混合物搅拌20min。20min后，在25℃下加入1H-四唑溶液(0.45M乙腈溶液，9.2mL)，然后在25℃下加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(0.31g，1.037mmol，稀释于2mL THF中)的溶液。在RT下搅拌1.5hr后，在25℃下加入(E)-N,N-二甲基-N'-(3-硫代-3H-1,2,4-二噻唑-5-基)甲脒(DDTT，0.453g，2.205mmol，稀释于10mL Py中)，并且将溶液搅拌1.5h。将反应混合物减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％-15％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为浅黄色固体的27a(80mg)。ESI-MS：m/z＝902.9[M+H]+。
步骤2：制备化合物(*R)44A，钠盐和化合物(*S)44B，钠盐
将化合物27a(80mg，0.09mmol)的甲胺(50％EtOH溶液，5.0mL)溶液在25℃下搅拌4小时。减压浓缩反应混合物。通过反相制备型HPLC(柱：Xbridge 150mm×30mm×10μm，条件：水(10mM NH4HCO3)-CH3CN，开始B：5，结束B：20，梯度时间(min)：7，100％B保持时间(min)：0，流速(mL/min)：25)分离，得到化合物(*R)44A，铵盐(19mg)和化合物(*S)44B，铵盐(1.5mg)，两者均为白色固体。通过在填充有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来使两种化合物最终转化成它们对应的钠盐。
化合物(*R)44A，钠盐(27mg)。
1H NMR(400MHz,D2O)δppm 8.22(br,s,1H),8.09(s,1H),7.29(br,s,1H),6.57-6.50(m,1H),6.05-5.98(m,2H),5.94-5.78(m,1H),5.31-5.13(m,1H),4.70(br,d,J＝7.5Hz,1H),4.60(br,d,J＝8.8Hz,1H),4.26(br,dd,J＝4.3,11.5Hz,1H),4.19-4.11(m,1H),3.85(br,d,J＝13.3Hz,1H),3.56(br,d,J＝13.3Hz,1H),2.81-2.63(m,2H)；19F NMR(376MHz,D2O)δ-195.872(s,1F)ppm；31P NMR(162MHz,D2O)δ52.528(s,1P)ppm；ESI-MS：m/z＝676.0[M+H]+。
化合物(*S)44B，钠盐(1.8mg)。
1H NMR(400MHz,D2O)δppm 8.20(s,1H),7.87(s,1H),7.28(s,1H),6.59-6.46(m,1H),6.22-6.14(m,1H),5.97(d,J＝7.5Hz,1H),5.53-5.34(m,2H),4.66-4.54(m,2H),4.34(br,t,J＝11.5Hz,1H),4.11(br,dd,J＝4.6,11.9Hz,1H),3.77(br,d,J＝13.3Hz,1H),3.45(br,d,J＝13.3Hz,1H),3.02(q,J＝7.3Hz,1H),2.76-2.66(m,1H),2.78-2.65(m,1H),2.58(br,dd,J＝7.8,12.5Hz,1H),1.26-1.18(m,1H),1.27-1.17(m,1H),1.22(br t,J＝7.3Hz,1H),1.32-1.10(m,1H)；19F NMR(376MHz,D2O)δppm-195.902(s,1F)；31P NMR(162MHz,D2O)δppm 56.151(s,1P)；ESI-MS：m/z＝677.0[M+H]+。
实施例28
化合物(*R)42A和化合物(*S)42B
步骤1：制备化合物28a
注意：在使用前，THF在Na/二苯甲酮上新鲜蒸馏，并且CH3CN在CaH2上新鲜蒸馏。
向18a(430mg，0.532mmol，通过冻干干燥)的四氢呋喃(9mL)溶液中加入
分子筛(粉末，2g)，并将混合物搅拌20min。20min后，在25℃下加入1H-四唑溶液(0.45M乙腈溶液，9.46mL，其通过以下方式制备：将945mg四唑(通过冻干干燥)溶于30mL无水CH3CN中，然后加入1.5g的
MS，并且然后在使用前在N2下搅拌lhr)，用N2吹扫若干次，然后在25℃下在30min内滴加3-((双(二异丙基氨基)膦基)氧基)丙腈(0.288mg，0.958mmol，稀释于2mLTHF中)的溶液以生成白色悬浮液。在RT下搅拌1.5hr后，在25℃下加入DDTT(655mg，3.19mmol)的吡啶(10mL)溶液，并且将溶液搅拌30min。将反应混合物与另一批料合并，通过硅藻土垫过滤，减压浓缩以得到黄色残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％-2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的28a(260mg)。ESI-MS：m/z＝939.1[M+H]+。
步骤2：制备化合物(*R)42A，铵盐和化合物(*S)42B，铵盐
将化合物28a(130mg，0.138mmol)的甲胺(27％至32％EtOH溶液，5.0mL)溶液在RT下搅拌2hr。将反应混合物与另一批料合并，并将混合物减压蒸发，得到白色固体；将固体溶于水(30mL)中，然后用DCM(20mL×4)洗涤。将水层冻干，得到白色固体(190mg)。该白色固体通过反相制备型HPLC(柱：Xbridge 150mm×30mm×5μm，条件：水(10mM NH4HCO3)-CH3CN，开始B：5，结束B：35，梯度时间(min)：7，100％B保持时间(min)：0，流速(mL/min)：25)纯化，得到为白色固体的化合物(*R)42A，铵盐(70mg)和为白色固体的化合物(*S)42B，铵盐(12mg)。
化合物(*R)42A，铵盐。1H NMR(400MHz,D2O)δ8.96(s,1H),8.23(d,J＝7.1Hz,2H),7.25(s,1H),6.58-6.41(m,2H),5.90-5.58(m,3H),5.33-5.12(m,1H),4.93-4.77(m,1H),4.41-4.24(m,2H),3.86(br dd,J＝2.8,13.1Hz,1H),3.66(br d,J＝13.2Hz,1H)；19F NMR(376MHz,D2O)δ7ppm-196.52(s,1F),-198.72(s,1F)；31P NMR(162MHz,D20)δppm 54.24(s,1P)；ESI-MS：m/z＝678.2[M+H]+。
化合物(*S)42B，铵盐。1H NMR(400MHz,D2O)δ8.54(br s,1H),8.15(br s,1H),7.97(br s,1H),7.14(br s,1H),6.40(br s,2H),5.95-5.71(m,1H),5.94-5.69(m,1H),5.68-5.33(m,1H),5.70-5.32(m,1H),5.19(br s,1H),4.13(br s,2H),3.72(br s,1H),3.57(br d,J＝12.7Hz,1H)；19F NMR(376MHz,D2O)δppm-195.66(s,1F),-198.44(s,1F)；31PNMR(162MHz,D2O)δppm 55.09(s,1P)；ESI-MS：m/z＝678.1[M+H]+。
钠盐转化
将Dowex 50W×8，200-400(12mL，H形式)加入到烧杯中并用去离子水(30mL)洗涤。然后向树脂中加入15％H2SO4的去离子水溶液，将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(30mL)。将树脂转移到具有15％H2SO4的去离子水溶液的柱中，并用15％H2SO4(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为pH中性。将树脂转移回烧杯中，加入15％NaOH的去离子水溶液，并且将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(1x)。将树脂转移到柱中并用15％NaOH的水溶液(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为pH中性。将化合物(*R)42A，铵盐(92mg，溶于20mL/9mL中)溶于最小量的去离子水和CH3CN(1:1，v/v)中，加入到柱顶部中，并且用去离子水洗脱。将适当的级分合并在一起并冻干，得到为白色固体的化合物(*R)42A，钠盐(72.4mg)。
1H NMR(400MHz,D2O)δppm 8.96(br s,1H),8.24(br d,J＝13.2Hz,2H),7.13(s,1H),6.62-6.41(m,2H),5.95-5.64(m,3H),5.27-5.06(m,1H),5.02-4.89(m,1H),4.63(brd,J＝8.3Hz,1H),4.39(br s,2H),3.92(br d,J＝11.5Hz,1H),3.72(br d,J＝13.2Hz,1H)；19F NMR(376MHz,D2O)δppm-196.32(s,1F),-198.94(s,1F)；31P NMR(162MHz,D2O)δppm54.05(s,1P)；ESI-MS：m/z＝678.1[M+H]+。
使用先前用于钠盐转化的程序，获得为白色固体的化合物(*S)42B，钠盐(6.9mg)。
1H NMR(400MHz,D2O)δppm 8.63(s,1H),8.23(s,1H),8.08(s,1H),7.29(s,1H),6.56-6.39(m,2H),5.95-5.77(m,1H),5.73-5.58(m,1H),5.58-5.45(m,1H),5.58-5.44(m,1H),5.36-5.22(m,1H),4.91-4.78(m,1H),4.53(br dd,J＝6.1,11.0Hz,1H),4.19(br d,J＝11.7Hz,1H),4.25-4.13(m,1H),3.79(dd,J＝4.0,13,6Hz,1H),3.71-3.70(m,1H),3.66-3.66(m,1H),3.68-3.59(m,1H)；19F NMR(376MHz,D2O)δppm-195.10-196.43(m,1F),-198.17(td,J＝25.9,52.5Hz,1F)；31P NMR(162MHz,D2O)δ55.26(s,1P)；ESI-MS：m/z＝678.1[M+H]+。
实施例29
化合物45
步骤1：制备化合物29b
在0℃下，向化合物29a(13g，49.94mmol)在吡啶(10.06mL，124.86mmol)和二氯甲烷(300mL)中的溶液中滴加三氟甲磺酸酐(10.92mL，64.93mmol)。将反应物在0℃下搅拌约1h后，将混合物用DCM(100mL)稀释，用水(200mL)、盐水(200mL)洗涤，用无水MgSO4干燥，过滤并蒸发至干，得到为黄色油状物的29b(20.4g)，将其用于下一步骤中而无需任何进一步纯化。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.07(d,J＝3.6Hz,1H),5.35(d,J＝1.6Hz,1H),4.85(d,J＝3.8Hz,1H),4.32-4.19(m,3H),4.06(dd,J＝3.90,8.8Hz,1H),1.61(s,3H),1.51(s,3H),1.42(d,J＝2.6Hz,6H)。
步骤2：制备化合物29c
在25℃下，向化合物29b(20.4g，51.99mmol)的甲苯(500mL)溶液中滴加n-Bu4NBH4(40.13g，155.98mmol)。在80℃下搅拌6h后，将反应混合物用水(200mL)、盐水(200mL)洗涤，用无水MgSO4干燥，过滤并且蒸发至干，得到黄色油状物。所得油状物通过硅胶快速柱色谱法(0％-20％EA的PE溶液)纯化，得到为无色油状物的化合物29c(6.4g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.83(d,J＝3.8Hz,1H),4.77(t,J＝4.1Hz,1H),4.23-4.08(m,3H),3.89-3.76(m,1H),2.19(dd,J＝3.9,13.4Hz,1H),1.82-1.73(m,1H),1.52(s,3H),1.43(s,3H),1.35(d,J＝15.3Hz,6H)。
步骤3：制备化合物29d
在25℃下，搅拌化合物29c(13.4g，54.85mmol)的AcOH/水(V/V，1:1，200mL)溶液12h。将反应溶液浓缩并且与甲苯(2×40mL)共蒸发，得到为无色油状物的化合物29d(11.4g)，将其直接用于下一步骤中而无需任何进一步纯化。
步骤4：制备化合物29e
向化合物29d(11.4g，8.81mmol)在MeOH(200mL)和水(100mL)中的溶液中加入高碘酸钠(17.91g，83.73mmol)。在25℃下搅拌2h后，将反应混合物过滤，并且将滤液用饱和Na2S2O3水溶液(50mL)稀释；然后浓缩混合物以除去MeOH。残余物用2-Me-THF(200mL)分配，水层用2-Me-THF(5×100mL)萃取。然后将有机层合并，用盐水洗涤，干燥(无水Na2SO4)，过滤并减压浓缩，得到为黄色油状物的化合物29e(11g)，将其直接用于下一步骤中而无需进一步纯化。
步骤5：制备化合物29f
向化合物29e(11g，9.29mmol)的MeOH(200mL)溶液中加入硼氢化钠(2.9g，76.66mmol)。在0℃下搅拌1hr后，将反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(60mL)猝灭，并浓缩混合物以除去MeOH。将残余物冻干，得到粗制29f。将粗产物与MeOH/DCM(v/v，10:1，200mL)混合，然后过滤并减压浓缩，得到残余物，该残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％-60％PE的EA溶液)纯化，得到为黄色固体的化合物29f(5.3g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.83(d,J＝3.7Hz,1H),4.77(t,J＝4.2Hz,1H),4.41-4.30(m,1H),3.90(br d,J＝12.0Hz,1H),3.57(brd,J＝12.0Hz,1H),2.01(dd,J＝4.5,13.3Hz,1H),1.89-1.81(m,2H),1.33(s,3H)。
步骤6：制备化合物29g
在0℃下，将乙酸酐(6.51mL，68.9mmol)和浓硫酸(36.91uL，0.69mmol)加入到化合物29f(1.2g，6.89mmol)的乙酸(39.4mL，688.89mmol)搅拌溶液中。在rt下搅拌1h后，用冷水(100mL)猝灭反应混合物，在rt下搅拌30min，并且然后用乙酸乙酯(3×60mL)萃取。将有机层相继用饱和碳酸氢钠水溶液(3×90mL)、盐水(2×90mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物(与硅胶合并：4g)通过硅胶快速柱色谱法(0％-40％EA的PE溶液，V/V)纯化，得到为无色油状物的化合物29g(870mg)。1H NMR(400MHz,CD3CN)δ6.03(s,1H),5.11(d,J＝4.6Hz,1H),4.49(dtd,J＝3.3,6.5,9.6Hz,1H),4.19(dd,J＝3.3,11.9Hz,1H),4.00(dd,J＝6.6,12.0Hz,1H),2.03-1.99(m,11H)。将相同的反应重复若干次，并且将所有批料合并。
步骤7：制备化合物29i
将化合物29h(0.672g，4.42mmol)和BSA(3.13g，15.37mmol)在无水CH3CN(12mL)中的溶液在85℃下搅拌1h，并且然后冷却至0℃。然后在0℃下，在搅拌下将其滴加到化合物29g(1g，3.84mmol)和SnCl4(3.003g，11.53mmol)中；将混合物在26℃下搅拌24hr后，将粗制混合物与另一批料合并、冷却并用EA(300mL)稀释。将有机层相继用饱和NaHCO3水溶液(4×200mL)、盐水(2×150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物(与硅胶合并：10g)通过硅胶快速柱色谱法(硅胶：20g)(0％-10％MeOH的DCM溶液，V/V)纯化，得到为白色泡沫的化合物29i(3.52g)。1H NMR(400MHz,CD3OD-d4)δ6.22(s,1H),5.75(br,d,J＝5.5Hz,1H),4.65(br dd,J＝3.6,9.7Hz,1H),4.31(dd,J＝3.3,12.0Hz,1H),4.12(dd,J＝5.6,11.9Hz,1H),3.35(s,3H),2.80(ddd,J＝5.8,10.0,14.1Hz,1H),2.33(br,dd,J＝6.0,13.8Hz,1H),2.12(s,3H),1.97-1.93(m,3H)；ESI-MS：m/z＝352.9[M+H]+。
步骤8：制备化合物29j
在rt下向化合物29i(2g，5.677mmol)的DCM(20mL)溶液中滴加Et3N(1.72g，17.03mmol)和异丁酰氯(1.21g，11.35mmol)。在25℃下搅拌2h后，将反应物通过水(50mL)猝灭，用盐水(2×50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到化合物29j(2.39g)，将其直接用于下一步骤中而无需进一步纯化。
步骤9：制备化合物29k
在0℃下，向化合物29j(2.39g，5.67mmol)的THF(25mL)溶液中滴加甲醇钠(1.23g，22.71mmol)。在25℃下搅拌2h后，滴加更多的甲醇钠(1.23g，22.71mmol)。在25℃下搅拌0.5h后，将混合物用饱和水/CH3COOH(1:1，4mL)稀释以调节至pH7，然后减压浓缩得到残余物。该残余物(与硅胶合并：10g)通过硅胶快速柱色谱法(0％-10％MeOH的DCM溶液，V/V)纯化，得到为白色泡沫的化合物29k(770mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.09(br s,2H),5.99(s,1H),5.75(br d,J＝2.9Hz,1H),4.80-4.70(m,2H),4.49-4.36(m,1H),3.51-3.40(m,2H),2.79(td,J＝6.8,13.6Hz,1H),2.43-2.30(m,1H),2.07(dd,J＝6.7,12.6Hz,1H),1.13(d,J＝6.6Hz,6H)；ESI-MS：m/z＝339.1[M+H]+。
步骤10：制备化合物29l
将DMTrC1(1.20g，3.54mmol)加入到化合物29k(1g，2.95mmol)的Py(10mL)溶液中。在25℃下搅拌12hr后，将混合物在EA(150mL)和水(100mL)之间分配。过滤混合物，并将有机层相继用盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干，得到粗残余物(油状物)。该残余物(与硅胶合并，5g)通过硅胶快速柱色谱法(0％-10％MeOH的DCM溶液，V/V)纯化，得到为黄色泡沫的化合物29l(1.52g)。1H NMR(400MHz,CD3CN)δ7.32(dd,J＝1.6,7.9Hz,2H),7.22-7.10(m,7H),6.73(dd,J＝8.8,13,9Hz,4H),6.13(s,1H),4.93(br s,1H),4.77-4.57(m,1H),3.77(br s,1H),3.73(d,J＝3.9Hz,6H),3.23-3.04(m,2H),2.70(spt,J＝6.9Hz,1H),2.57(ddd,J＝5.3,9.8,13.3Hz,1H),2.08(dd,J＝6.4,13.4Hz,1H),1.19(d,J＝6.8Hz,6H)。ESI-MS：m/z＝663.3[M+Na]+。
步骤11：制备化合物29n
在30℃下，将四丁基碘化铵(0.89g，2.41mmol)、三苯基膦(4.74g，18.08mmol)、四溴化碳(5.996g，18.080mmol)、NaN3(3.330g，51.223mmol)加入到化合物29m(4.5g，12.05mmol，CAS#144924-99-2cb)的DMF(70mL)溶液中。在30℃下搅拌24h后，将更多的四丁基碘化铵(0.89g，2.41mmol)、三苯基膦(4.74g，18.00mmol)和四溴化碳(5.99g，18.08mmol)加入到该溶液中。再搅拌24h后，将混合物用饱和Na2CO3水溶液(150mL)稀释，以将混合物调节至pH9，并且将混合物用乙酸乙酯(200mL×3)萃取。然后将有机层合并，并相继用盐水(100mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发，得到黄色固体。将反应重复若干次，并且将所有批料合并。该残余物(与硅胶合并：30g)通过硅胶快速柱色谱法(硅胶：120g)(梯度洗脱：0％-100％乙酸乙酯的石油醚溶液至0％-20％甲醇的乙酸乙酯溶液)纯化，得到为黄色固体的化合物29n(9.5g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.28(br,s,1H),8.78(s,1H),8.54(d,J＝2.4Hz,1H),8.08-8.02(m,2H),7.68-7.62(m,1H),7.58-7.52(m,2H),6.66-6.58(m,1H),6.18(br s,1H),5.46-5.24(m,1H),4.56(td,J＝4.4,19.1Hz,1H),4.08-4.04(m,1H),3.72-3.68(m,1H)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δppm-197.05(s,1H)；ESI-MS：m/z 398.9[M+H]+。
步骤12：制备化合物29o
在25℃下，向化合物29n(8.5g，21.33mmol)和DMAP(1.3g，10.67mmol)的吡啶(90mL)溶液中加入DMTrCl(14.46g，42.67mmol)。在80℃下搅拌14h后，将混合物在DCM(200mL)和水(50mL)之间分配。将有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发溶剂，得到粗制29o。将其与另一批料合并并纯化；该残余物通过硅胶快速柱色谱法(PE/(EA/DCM＝1/1)为10％至100％)纯化，得到为浅黄色固体的化合物29o(9.5g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.00(br,s,1H),8.84(br,s,1H),8.20(br,s,1H),8.02(br,d,J＝7.6Hz,2H),7.64-7.58(m,1H),7.54(br,t,J＝7.5Hz,2H),7.46(br,d,J＝7.1Hz,2H),7.40-7.34(m,5H),7.30(br,d,J＝7.3Hz,1H),6.94-6.84(m,4H),6.58-6.48(m,1H),4.48-4.34(m,2H),4.18-4.06(m,1H),3.38(br d,J＝13.0Hz,1H),3.18(br,dd,J＝5.9,13.9Hz,1H)；19FNMR(376MHz,CDCl3)δ-196.176(s,1F)；ESI-MS：m/z 701.2[M+H]+。
步骤13：制备化合物29p
在25℃下，向化合物29o(10.0g，14.27mmol)的THF(100mL)溶液中加入三苯基膦(5.24g，1.99mmol)。在40℃下将溶液搅拌2h后，在40℃下将水(50mL)加入到溶液中，并且将混合物搅拌12h。将反应混合物在DCM(200mL)和盐水(2×50mL)之间分配。将有机层减压浓缩，得到黄色固体(10.0g)。该黄色固体(与硅胶合并：20g)通过硅胶快速柱色谱法(DCM/MeOH＝0％至20％，V/V)纯化，得到为白色固体的化合物29p(6.6g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.74(s,1H),8.46(d,J＝2.7Hz,1H),8.06-7.98(m,2H),7.64(d,J＝7.3Hz,1H),7.58-7.50(m,2H),7.48(d,J＝7.6Hz,2H),7.38-7.32(m,6H),7.30-7.26(m,1H),6,94(dd,J＝3.4,8,8Hz,4H),6.50-6.40(m,1H),4.38-4.32(m,1H),4.24-4.08(m,2H),3.74(d,J＝2.9Hz,6H),2.68-2.54(m,2H)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δppm-195.79(s,1F)；ESI-MS：m/z675.3[M+H]+。
步骤14：制备化合物29q
将4-硝基苯酚(0.92g，6.67mmol)和三乙胺(1.35g，13.34mmol)加入到化合物29p(1.5g，2.22mmol)的DCM(40mL)溶液中。将所得溶液在-78℃下搅拌，并在-78℃下加入4-硝基苯基氯硫酸盐(1.58g，6.67mmol)的DCM(5mL)溶液。在-78℃下搅拌1h后，将反应混合物减压浓缩，得到残余物。该残余物(与硅胶合并：4g)通过硅胶快速柱色谱法(0％-100％PE的EA溶液)纯化，得到为浅黄色固体的化合物29q(1.4g)，储存在-20℃下。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.94(br,s,1H),8.64(s,1H),8.48(br,s,1H),8.18-8.08(m,2H),8.00(br,d,J＝7.8Hz,2H),7.96(s,1H),7.66-7.60(m,1H),7.58-7.52(m,2H),7.44(br,d,J＝7.8Hz,2H),7.38-7.28(m,7H),6.92-6.84(m,4H),6.40-6.26(m,1H),4.48-4.42(m,2H),4.28(br,s,1H),3.86-3.76(m,6H),3.56(br,d,J＝13.2Hz,1H),3.32(br,d,7＝13.7Hz,1H)；19F NMR(376MHz,CDCl3)δppm-193.08(s,1F)；ESI-MS：m/z 876.6[M+H]+。
步骤15：制备化合物29r
将化合物29l(800mg，1.25mmol)、化合物29q(1.64g，1.87mmol)和活化的
分子筛(3g)的THF(24mL)溶液在N2下于室温下搅拌0.5h。然后一次性加入DMAP(762.73mg，6.24mmol)。在N2下于RT下搅拌2h，然后在N2下于45℃下搅拌12h后，将该反应混合物用EA(100mL)稀释，然后通过硅藻土垫过滤。将滤液用饱和NaHCO3水溶液(6×50mL)洗涤。将有机层相继用盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物(与硅胶合并：5g)通过硅胶快速柱色谱法(0％-10％MeOH的DCM溶液，V/V)纯化，得到为白色固体的化合物29r(1.4g)。ESI-MS：m/z＝1377.1[M+H]+。
步骤16：制备化合物29s
在rt下，向化合物29r(1.4g，1.01mmol)的DCM(24mL)溶液中加入二氯乙酸(262mg，2.03mmol)和水(0.183mL)。在N2下于rt下搅拌3h后，将吡啶(0.8g，10.16mmol)加入到溶液中。搅拌2h后，将混合物减压浓缩，得到残余物。该残余物(与硅胶合并：6g)通过硅胶快速柱色谱法(MeOH/DCM＝0％至10％)纯化，得到为白色固体的化合物29s(570mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.15-11.97(m,2H),11.22(s,1H),8.78(t,J＝5.9Hz,1H),8.67(s,1H),8.41(d,J＝1.5Hz,1H),8.09-8,00(m,2H),7.69-7.61(m,1H),7.60-7.51(m,2H),6.51(dd,J＝3.8,17.6Hz,1H),6.34(s,1H),6.23(d,J＝4.0Hz,1H),5.95(s,1H),5.33-5.13(m,1H),4.76(t,J＝5.5Hz,1H),4.51-4.33(m,2H),4.18-4.02(m,2H),3.54-3.36(m,3H),2.90-2.73(m,1H),2.69-2.56(m,1H),2.40(br,dd,J＝6.0,14.3Hz,1H),1.13(dd,J＝6.9,10.2Hz,6H)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δppm-197.57(s,1F)；ESI-MS：m/z＝773.3[M+H]+。
步骤17：制备化合物29t
在使用前，THF在Na/二苯甲酮上新鲜蒸馏，并且CH3CN在CaH2上新鲜蒸馏。
将真空干燥的化合物29s(100mg，0.13mmol)与CH3CN和THF(2/2mL×3)的混合物共蒸发，然后溶于THF(5mL)的混合物中。然后加入
MS(500mg)和1H-四唑溶液(2.301mL，0.45M，其通过以下方式制备：将315mg四唑溶于10mL无水CH3CN中，接着加入500mg
MS，并且然后在使用前在N2下搅拌1h)。将所得白色悬浮液在N2下于RT下搅拌5min。在5min内将2-氰乙基四异丙基亚磷酰二胺(78.01mg，0.26mmol)的THF(1mL)溶液经由注射器滴加。将所得白色悬浮液在N2下于35℃下进一步搅拌1hr。经由注射器加入TBHP溶液(0.118mL，0.65mmol，5M至6M癸烷溶液)并再搅拌30min。将混合物用DCM(20mL)稀释，然后通过硅藻土垫过滤，并浓缩，得到为无色油状物的粗产物。该粗产物(与硅胶合并：2g)通过硅胶快速柱色谱法(0％-6％MeOH的DCM溶液，V/V)纯化，得到为白色固体的化合物29t(72mg)。ESI-MS：m/z＝887.9[M+H]+。
步骤18：制备化合物45，钠盐
将化合物29t(72mg，0.082mmol)与甲胺(5.0mL)合并；在RT下搅拌4h后，将反应混合物在压力下浓缩，得到粗产物。该粗产物通过反相制备型HPLC(柱：Xbridge 10μm 150mm×30mm，条件：水(10mM NH4HCO3)-ACN，B：0，结束B 25，梯度时间(min)：7，100％B保持时间(min)：0，流速(mL/min)：25)纯化，得到为白色固体的化合物45铵盐(6.9mg)。1H NMR(400MHz,D2O)δppm 8.12(s,1H),7.67(br,s,1H),6.52(br,dd,J＝4.9,11.7Hz,1H),6.31(br,d,J＝7.0Hz,1H),6.18-6.04(m,1H),5.64-5.43(m,1H),5.32-5.20(m,1H),4.37(br,d,J＝3.5Hz,1H),4.15-4.03(m,2H),3.57-3.46(m,2H),2.83-2.71(m,1H),2.67-2.56(m,1H)；19F NMR(376MHz,D2O)δppm-195.88(s,1F)；31P NMR(162MHz,D2O)δppm-1.513(s,1P)；ESI-MS：m/z＝661.1101[M+H]+。
钠盐转化：将Dowex 50W×8，200-400(8mL，H形式)加入到烧杯中并用去离子水(30mL)洗涤。然后向树脂中加入15％H2SO4的去离子水溶液，将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(30mL)。将树脂转移到具有15％H2SO4的去离子水溶液的柱中，并用15％H2SO4(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为pH中性。将树脂转移回烧杯中，加入15％NaOH的去离子水溶液，并且将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(1x)。将树脂转移到柱中并用15％NaOH的水溶液(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为pH中性。将化合物45，铵盐(6.9mg)溶于最小量的去离子水和CH3CN(1:1，v/v，5mL)中，加入到柱顶部中，并且用去离子水洗脱。将适当的级分合并在一起并冻干，得到为白色固体的化合物45，钠盐(2mg)。1H NMR(400MHz,D2O)δppm 8.20(s,1H),7.74(br,s,1H),6.58(dd,J＝5.1,11.7Hz,1H),6.37(d,J＝7.1Hz,1H),6.24-6.13(m,1H),5.69-5.51(m,1H),5.42-5.29(m,1H),4.85-4.83(m,1H),4.70(br,dd,J＝2.3,6.2Hz,1H),4.43(br,d,J＝3.4Hz,1H),4.23-4.10(m,2H),3.64-3.50(m,2H),2.91-2.78(m,1H),2.73-2.64(m,1H)；19F NMR(376MHz,D2O)δppm-195.902(s,1F)；31P NMR(162MHz,D2O)δppm-1.54(s,1P)；ESI-MS：m/z＝661.2[M+H]+。
实施例30
化合物(*R)50A
步骤1：制备化合物30a
注意：在使用前，THF在Na/二苯甲酮上新鲜蒸馏，并且CH3CN在CaH2上新鲜蒸馏。
将化合物29s(200mg，0.26mmol)溶于THF(6mL)和CH3CN(10mL)中，向其中加入0.3g
MS(粉末)和1H-四唑溶液(4.6mL，0.45M，使用前在活化的分子筛上干燥)。在10min内将2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(156mg，0.52mmol)的THF(0.9mL)溶液经由注射器滴加。在氩气下，将所得白色悬浮液在35℃下进一步搅拌2hr。然后在35℃下，向上述溶液中加入DDTT(264.9mg，1.29mmol)的吡啶(10mL)溶液。将反应物在35℃下搅拌1h后，将混合物用EtOAc(20mL)稀释，通过硅藻土垫过滤，该垫用EtOAc洗涤，并将滤液减压蒸发，得到粗产物。该残余物通过硅胶柱色谱法(MeOH的DCM溶液＝0％至7％)纯化，得到为白色固体的化合物30a(80mg)。ESI-MS：m/z＝904.2[M+H]+。
步骤2：制备化合物(*R)50A，钠盐
在25℃下用MeNH2(5ml，溶于EtOH中，30％)处理化合物30a(80mg)。将反应物在25℃下搅拌3h后，将溶剂减压蒸发，得到残余物。将残余物溶于H2O/CH3CN(30mL)的混合物中，并用DCM(3×15mL)洗涤。将水相冻干，得到为黄色固体的粗产物(71mg)。该残余物通过反相制备型HPLC(方法：柱，Waters Xbridge Prep OBD 5μm C18 150×30；条件：水(10mMNH4HCO3)(A)-ACN(B)，开始B 0，结束B 23；梯度时间(min)7；100％B保持时间(min)0，流速(ml/min)25)纯化，得到为白色固体的化合物(*R)50A，铵盐(8mg，9％)。1H NMR(400MHz,D2O)δ8.63(br s,1H),8.51(d,J＝1.7Hz,1H),6.94(br d,J＝18.8Hz,1H),6.65(br d,J＝3.4Hz,1H),6.39(br d,J＝2.9Hz,1H),6.20-6.00(m,1H),5.71(br t,J＝11.4Hz,1H),5.06(br s,1H),4.70-4.60(m,1H),4.56-4.47(m,1H),4.04-3.96(m,1H),3.94-3.85(m,1H),3.27-3.17(m,1H),3.16-3.03(m,1H)；19F NMR(376MHz,D2O)δppm-195.682
31P NMR(162MHz,D2O)δppm 54.318；ESI-MS：m/z 677.2[M+H]+。
转化成钠盐
将Dowex 50W×8，200-400(2mL，H形式)加入到烧杯中并用去离子水(10mL)洗涤。然后向树脂中加入15％H2SO4的去离子水溶液，将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(15mL)。将树脂转移到具有15％H2SO4的去离子水溶液的柱中，并用15％H2SO4(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为pH中性。将树脂转移回烧杯中，加入15％NaOH的去离子水溶液，并且将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(1x)。将树脂转移到柱中并用15％NaOH的水溶液(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为pH中性。将化合物(*R)50A，铵盐(4mg)溶于最小量的去离子水和CH3CN(3:1，v/v，8mL)中，加入到柱顶部中，并且用去离子水洗脱。将适当的级分合并在一起并冻干，得到为白色固体的化合物(*R)50A，钠盐(2.4mg，58％)。
1H NMR(400MHz,D2O)δppm 8.25(s,1H),7.88(s,1H),6.59(dd,J＝4.3,15.5Hz,1H),6.33(d,J＝6.8Hz,1H),6.15-6.01(m,1H),5.86-5.66(m,1H),5.54-5.41(m,1H),4.47(br d,J＝3.9Hz,1H),4.29-4.12(m,2H),3.65-3.54(m,2H),2.88-2.79(m,1H),2.76-2.69(m,1H)；19F NMR(376MHz,D2O)δppm-194.41
31P NMR(162MHz,D2O)δppm 53.83；ESI-MS：m/z＝677.1[M+H]+。
实施例31
化合物51
步骤1：制备化合物31b
在25℃下将双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(BSA，93.95g，461.9mmol)滴加到8-氮杂鸟嘌呤(11.71g，77.0mmol)在无水MeCN(340mL)中的悬浮液中。将反应混合物在80℃下搅拌3h，并且然后冷却至室温。加入1,2-二-O-乙酰基-5-苯甲酰基-3-O-甲基-D-呋喃核糖31a[CAS 10300-21-7](13.56g，38.5mmol)的无水MeCN(65mL)溶液，然后滴加SnCl4(80.21g，307.9mmol)。将均匀溶液在80℃下搅拌30min，然后冷却至室温并倒入冰冷的5％NaHCO3水溶液(800mL)中。加入EtOAc(800mL)并继续搅拌10min。将反应混合物过滤，并且将滤液转移到分液漏斗中。分离两层，并用EtOAc(200mL×2)萃取水层。将合并的有机层用5％NaHCO3水溶液(600mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空蒸发至干，得到粗制化合物31b(11.50g)。该粗产物直接用于下一反应中而无需进一步纯化。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 11.09(br s,1H),7.88(d,J＝7.2Hz,2H),7.61-7.68(m,1H),7.44-7.52(m,2H),7.04(br s,2H),6.17(d,J＝1.7Hz,1H),5.90(dd,J＝5.0,2.1Hz,1H),4.66(dd,J＝7.1,4.9Hz,1H),4.53-4.58(m,1H),4.35-4.42(m,2H),3.41(s,3H),2.14(s,3H)；ESI-MS：m/z 445.5[M+H]+。
步骤2：制备化合物31c
向上述粗制化合物31b(11.50g)的无水二甲基乙酰胺(57.5mL)溶液中滴加异丁酸酐(6.14g，38.8mmol)。将反应混合物在140℃下搅拌2h，然后冷却至室温并用EtOAc(300mL)稀释。用10％NH4Cl水溶液(300mL×3)和盐水(300mL)洗涤所得溶液。将有机层经Na2SO4干燥并真空浓缩至干，得到粗制化合物31c(13.30g)。该粗产物直接用于下一反应中而无需进一步纯化。
步骤3：制备化合物31d
在0℃下，向粗制化合物31c(11.98g，来自步骤2)在THF(42mL)、MeOH(35mL)和H2O(11mL)中的溶液中加入5N NaOH(11mL，55mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌4h。将反应混合物的pH用甲酸调节至6.5。将所得溶液真空浓缩至干，并将残余物用MeCN和H2O研磨若干次，得到化合物31d(1.55g，收率：14％，来自31b)。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 12.07(br s,2H),5.97(d,J＝4.4Hz,1H),5.68(br s,1H),4.92(br s,1H),4.84(br s,1H),4.01-4.08(m,2H),3.52-3.59(m,1H),3.44-3.50(m,1H),3.43(s,3H),2.79(spt,J＝6.8Hz,1H),1.13(d,J＝6.8Hz,6H)；ESI-MS：m/z 369.5[M+H]+。
步骤4：制备化合物31e
在0℃下，向化合物31d(1.10g，3.0mmol)的无水吡啶(20.0mL)溶液中加入DMTrCl(1.32g，3.9mmol)的吡啶(3.0mL)溶液。将所得混合物在室温下搅拌12h，之后将其用EtOAc稀释，并且用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在40℃下浓缩至干。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：20％-50％EtOAc的庚烷溶液)纯化，得到为白色固体的化合物31e(1.52g，收率：76％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 11.87(br s,1H),7.24-7.28(m,2H),7.10-7.24(m,7H),6.76-6.82(m,4H),6.06(d,J＝2.7Hz,1H),5.79(brd,J＝4.6Hz,1H),5.01(br s,1H),4.18-4.24(m,2H),3.71(s,6H),3.36(s,3H),3.15-3.20(m,1H),3.05(br dd,J＝10.0,3.9Hz,1H),2.80(spt,J＝6.8Hz,1H),1.13(d,J＝6.9Hz,6H)；ESI-MS：m/z 671.4[M+H]+。
步骤5：制备化合物31f
将化合物31e(1.30g，1.94mmol)、DMAP(546mg，4.47mmol)和氨基磺酸盐17a(1.18g，1.33mmol)分别溶于无水DCE(3×3mL)中。通过在N2下搅拌过夜，用
活化的分子筛干燥每种溶液。向氨基磺酸盐17a的DCE溶液中，分别加入DMAP的DCE溶液和化合物31e的DCE溶液(经由注射器加入)。将反应混合物在N2下于60℃下搅拌4h。将该混合物用DCM稀释并过滤，将滤液用2％乙酸水溶液、5％NaHCO3水溶液和盐水溶液连续洗涤，并且然后减压蒸发至干。将残余物溶于DCM中，并通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0.6％-1％EtOH的DCM溶液)纯化，得到为黄色固体的化合物31f(0.53g，收率：28％)。ESI-MS：m/z 1407.6[M+H]+。
步骤5：制备化合物31g
向化合物31f(480mg，0.34mmol)的DCM(5mL)溶液中加入水(30.8mg，1.71mmol)和DCA(220mg，1.71mmol)，在室温下搅拌4h。接下来，用5％NaHCO3水溶液和盐水洗涤反应混合物。将有机相经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩至干。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：1％-5％EtOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的化合物31g(150mg，收率：55％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 11.90(br s,1H),11.27(br s,1H),8.74(s,1H),8.62(s,1H),8.04(d,J＝7.6Hz,2H),7.61-7.70(m,1H),7.51-7.59(m,2H),6.38(d,J＝19.5Hz,1H),6.29(d,J＝2.3Hz,1H),5.51-5.69(m,2H),4.90(br s,1H),4.63(ddd,J＝20.4,7.6,4.6Hz,1H),4.47(br t,J＝5.5Hz,1H),4.00-4.12(m,2H),3.55-3.61(m,1H),3.42-3.47(m,2H),3.39(s,3H),3.21-3.29(m,1H),2.77(spt,J＝6.7Hz,1H),1.11(d,J＝6.9Hz,6H)；ESI-MS：m/z803.7[M+H]+。
步骤6：制备化合物31h
将化合物31g(100mg，0.125mmol)和1H-四唑(2.22mL，0.45M MeCN溶液，0.998mmol)的无水THF(2mL)溶液用
分子筛在N2下处理1h，之后在15min内滴加2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(67.5mg，0.22mmol)的无水MeCN(0.6mL)溶液(注意：在使用前，THF在Na/二苯甲酮上新鲜蒸馏，并且MeCN在CaH2上新鲜蒸馏)。将所得反应混合物在室温下搅拌90min。加入tBuOOH溶液(199μL，0.99mmol)，并且再继续搅拌30min。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的化合物31h(32mg，收率：30％)。ESI-MS：m/z 918.4[M+H]+。
步骤7：制备化合物51，钠盐
将化合物31h(32mg，0.035mmol)在33％甲胺的乙醇溶液(12mL)中在40℃下搅拌2.5h。将反应混合物减压浓缩。将残余物溶于水中，用DCM洗涤并冻干。该粗产物通过制备型反相HPLC(固定相：Xbridge OBD C18，5μm，150mm×30mm；流动相：10mM碳酸氢铵水溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化。通过在填充有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到冻干后为白色蓬松固体的化合物51，钠盐(14mg，收率：55％)。1HNMR(400MHz,D2O)δppm 8.15(br s,1H),7.10(br s,1H),6.51-6.45(m,1H),6.41(br s,1H),6.16(br s,1H),5.36-5.12(m,2H),4.61(br d,J＝2.4Hz,1H),4.52(br d,J＝8.8Hz,1H),4.38(d,J＝4.8Hz,1H),4.23(dd,J＝2.4,4.8Hz,2H),3.77(br d,J＝13.2Hz,1H),3.57(s,3H),3.42(br d,J＝12.8Hz,1H)；31P NMR(162MHz,D2O)δppm-1.81(s,1P)；19F NMR(376MHz,D2O)δppm-196.87-197.38(m,1F)；ESI-MS：m/z 691.0[M+H]+。
实施例32
化合物25
制备化合物32a
THF在Na/二苯甲酮上新鲜蒸馏，并且CH3CN在CaH2上新鲜蒸馏。
将真空干燥的二醇3q(250mg，0.307mmol)与CH3CN/THF(8mL/5mL×3)的混合物共蒸发，并溶于CH3CN/THF(7.5mL/5mL)的混合物中。加入600mg的活化
分子筛和1H-四唑的CH3CN溶液(5.47mL，0.45M，其通过以下方式制备：将630mg四唑溶于20mL无水CH3CN中，接着加入600mg
分子筛，并且然后在使用前在氩气下搅拌1hr)。将该白色悬浮液在氩气下于8℃下搅拌1hr后，在60min内滴加2-氰乙基N,N,N',N'-四异丙基亚磷酰二胺的CH3CN溶液(4.69mL，0.49mmol，0.105M的CH3CN溶液，其通过以下方式制备：将506mg的酰胺溶于16mL的CH3CN中，接着加入600mg
分子筛，并且然后在使用前在氩气下搅拌1hr)。将所得白色悬浮液在氩气下于8℃下搅拌1hr。加入更多的CH3CN(5mL)，并在30℃下搅拌1hr后，加入附加的四唑(1.36mL，0.61mmol)。再搅拌2hr后，快速加入TBHP(0.5mL，2.5mmol，5M癸烷溶液)。在搅拌30min后，通过硅藻土垫过滤混合物；将滤液与另一批料合并，并减压浓缩，得到溶于DCM(8mL)中的残余物，并通过硅胶快速柱色谱法(0％-6％MeOH的DCM溶液，25mL/min)纯化，得到为白色固体的32a(136mg)。ESI-MS：m/z＝927[M+H]+。
将上述固体与另一批料合并，并通过反相制备型HPLC(柱：Xtimate 5μm C18 150×25；流动相：水(10mM NH4HCO3)-ACN。开始B 23，结束B 53；流速：25mL/min，梯度时间：9min，然后B 100进行3min)进一步纯化；收集所需的级分并冻干，以生成为白色固体的36a。1H NMR(400MHz,CD3CN)δ9.36(td,J＝3.7,7.2Hz,2H),8.72-8.60(m,1H),8.73-8.56(m,1H),8.18(s,1H),8.12-7.96(m,3H),7.86(s,1H),7.82(s,1H),7.71-7.62(m,1H),7.62-7.51(m,2H),6.21(s,1H),6.06-5.94(m,1H),5.46-5.37(m,1H),5.37-5.29(m,1H),5.28-5.21(m,1H),4.82(dd,J＝6.2,11.1Hz,1H),4.63(dd,J＝3.9,11.2Hz,1H),4.48(dd,J＝2.8,11.4Hz,1H),4.45-4.38(m,1H),4.35-4.19(m,2H),4.17-4.07(m,2H),4.03-3.93(m,1H),3.89-3.79(m,1H),3.68-3.58(m,2H),3.59-3.50(m,1H),2.80(t,J＝5.9Hz,1H),2.54(td,J＝5.2,17.2Hz,1H),2.42-2.27(m,1H),1.10-1.02(m,3H),0.88(d,J＝6.8Hz,1H),0.83(d,J＝6.8Hz,1H)；
31P NMR(162MHz,CD3CN)＝3.07(s,1P),3.15(s,1P)；ESI-MS：m/z＝927.3[M+H]+。
制备化合物25，钠盐
将化合物32a(30.5mg，0.033mmol)的MeNH2(27％-30％EtOH溶液，5mL)溶液在5℃下搅拌4hr。将反应混合物减压浓缩，得到残余物；将残余物在DCM/水(10mL/15mL)之间分配。用DCM(8mL×3)洗涤水层并冻干。将粗制化合物悬浮于6mL乙酸乙酯中，超声处理(3min)并离心(5min)。收集上述上清液，并将之前的程序重复两次。将沉淀物在DCM/水(10mL/15mL)之间分配。用DCM(10mL×2)萃取水层并冻干，得到固体。通过在填充有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到冻干后为白色蓬松固体的化合物25，钠盐(60.1mg)。1H NMR(400MHz,D2O)δ8.15-7.90(m,1H),7.83(br s,2H),7.69(br s,1H),6.90-6.72(m,1H),6.08-5.82(m,1H),4.45-4.15(m,3H),4.16-3.88(m,1H),3.28(t,J＝6.8Hz,1H),2.87(t,J＝6.7Hz,1H),2.68-2.59(m,1H),2.46(s,4H)；31P NMR(162MHz,D2O)δ-2.4(s,1P)；ESI-MS：m/z＝700[M+H]+。
实施例33
化合物(*R)23A和化合物(*S)23B
步骤1：制备化合物33b和33c
将化合物33a(600mg，0.75mmol)和1H-四唑(8.97mL的3％-4％MeCN溶液，使用前在
分子筛上干燥)的1:1 MeCN/THF(110mL，使用前在
分子筛上干燥)溶液在N2下用活化的
分子筛处理1h，之后立刻加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(240μL，0.75mmol)。将反应混合物在室温下振摇3.5h。加入额外量的2-氰乙基-N,N,N',N'-四异丙基-亚磷酰二胺(0.12mL，0.37mmol)并继续振摇过夜。接着，加入苯乙酰二硫化物(PADS，0.45g，1.5mmol)，将反应混合物再振摇18小时。通过过滤除去分子筛并用二氯甲烷冲洗。随后将合并的滤液用饱和Na2S2O3水溶液和饱和NaHCO3水溶液与盐水的1:1混合物洗涤，用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到作为第一洗脱异构体的化合物33b(122mg，收率：17％)和作为第二洗脱异构体的化合物33c(39mg，收率：5％)。化合物33b ESI-MS：m/z 933.5[M+H]+；化合物33cESI-MS：m/z 933.6[M+H]+。
步骤2：制备化合物(R*)23A，钠盐和化合物(S*)23B，钠盐
在45℃下，将化合物33b(122mg，0.13mmol)在33％甲胺的乙醇溶液(7mL)中搅拌直至完全转化(约1h)。将反应混合物冷却至室温，并减压浓缩。将所得粗产物在MeCN中研磨，然后通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，5μm，150mm×50mm；流动相：0.25％碳酸氢铵水溶液(A)-MeOH(B)；梯度洗脱)纯化，得到化合物(R*)23A。通过在填充有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到冻干后为白色蓬松固体的化合物(R*)23A，钠盐(13mg，收率：14％)。1H NMR(400MHz,D2O)δppm 8,23(s,1H),8.19(s,1H),7.82(br s,1H),6.44(d,J＝15.5Hz,1H),5.92(d,J＝8.5Hz,1H),5.65(dd,J＝50.6,3.4Hz,1H),5.42(br s,1H),5.17(ddd,J＝21.8,9.2,3.4Hz,1H),4.66-4.71(m,1H),4.46-4.58(m,2H),4.15(br s,1H),4.00(br dd,J＝12.2,4.1Hz,1H),3.69-3.90(m,2H),3.60(s,3H)；31P NMR(162MHz,D2O)δppm 52.18(s,1P)；ESI-MS：m/z 706.4[M+H]+。
在45℃下，将化合物33c(39mg，0.035mmol)在33％甲胺的乙醇溶液(2mL)中搅拌直至完全转化(约1h)。将反应混合物冷却至室温，并减压浓缩。将所得粗产物在MeCN中研磨，然后通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，10μm，150mm×50mm；流动相：0.25％碳酸氢铵水溶液(A)-MeOH(B)；梯度洗脱)纯化，得到化合物(S*)23B。通过在填充有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到冻干后为白色蓬松固体的化合物(S*)23B，钠盐(18mg，收率：70％)。1H NMR(400MHz,D2O)δppm 8.43(s,1H),8.20(s,1H),7.88(br s,1H),6.52(d,J＝15.9Hz,1H),5.97(d,J＝8.5Hz,1H),5.81(dd,J＝50.5,3.7Hz,1H),5.45-5.60(m,1H),5.33-5.44(m,1H),4.67-4.73(m,1H),4.49-4.53(m,1H),4.43(dt,J＝11.7,3.7Hz,1H),4.17(br s,1H),4.05-4.11(m,1H),3.78(m,J＝9.8Hz,2H),3.62(s,3H)；31P NMR(162MHz,D2O)δppm 56.24(s,1P)；ESI-MS：m/z 706.4[M+H]+。
实施例34
化合物(*R)32A和化合物(*S)32B
步骤1：制备化合物34b和化合物34c
将化合物34a(0.8g，0.99mmol)溶于无水ACN(85mL)和无水THF(85mL)的混合物中，加入1H-四唑(11.5mL，3.96mmol)和
分子筛。将混合物在RT下振摇1小时，并且然后经由注射器立刻加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四异丙基亚磷酰二胺(0.31mL，0.99mmol)。将反应混合物在室温下振摇4.5小时。加入附加量的2-氰乙基-N,N,N',N'-四异丙基亚磷酰二胺(0.16mL，0.5mmol)。将反应混合物在RT下振摇2天，并且然后加入苯乙酰二硫化物(PADS，0.6g，1.98mmol)。将反应混合物在RT下振摇18小时。将反应混合物过滤。将分子筛用二氯甲烷洗涤三次。将合并的滤液用饱和Na2S2O3溶液和饱和NaHCO3溶液的混合物洗涤，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，并蒸发滤液的溶剂。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到作为第一洗脱异构体的化合物34b(224mg，收率：16％)和作为第二洗脱异构体的化合物34c(265mg，收率：11％)。
化合物34a ESI-MS：m/z 939.5[M+H]+；
化合物34b ESI-MS：m/z 939.5[M+H]+。
步骤2：制备化合物(*R)33A，钠盐和化合物33b，钠盐
在45℃下，将化合物34a(224mg，0.16mmol)在33％甲胺的乙醇溶液(6.5mL)中搅拌直至完全转化(约1h)。将反应混合物冷却至室温，并减压浓缩。将所得粗产物在MeCN中研磨，然后通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，5μm，150mm×50mm；流动相：0.25％碳酸氢铵水溶液(A)-MeOH(B)；梯度洗脱)纯化，得到化合物(*R)32A，铵盐。通过在填充有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到冻干后为白色蓬松固体的化合物(*R)32A，钠盐(31mg，收率：27％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.77(br s,1H),8.32(s,1H),8.18(s,1H),8.13(s,1H),7.34(br s,2H),7.18(br s,2H),6.22(dd,J＝15.3,2.4Hz,1H),6.01(d,J＝8.6Hz,1H),5.70-5.84(m,1H),5.59(br d,J＝51.7Hz,1H),5.30(dd,J＝54.9,3.3Hz,1H),5.03(br d,J＝17.1Hz,1H),4.15-4.29(m,3H),3.70-3.79(m,1H),3.20(d,J＝15.4Hz,1H),3.00-3.11(m,1H)；31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm 52.83(s,1P)；ESI-MS：m/z 678.4[M+H]+。
在45℃下，将化合物34b(265mg，0.11mmol)在33％甲胺的乙醇溶液(2mL)中搅拌直至完全转化(约1h)。将反应混合物冷却至室温，并减压浓缩。将所得粗产物在MeCN中研磨，然后通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，5μm，150mm×50mm；流动相：0.25％碳酸氢铵水溶液(A)-MeOH(B)；梯度洗脱)纯化，得到化合物(*S)32b，铵盐。通过在填充有阳离子Na离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到冻干后为白色蓬松固体的化合物(*S)32b，钠盐(20mg，收率：25％)。1H NMR(400MHz,D2O)δppm 8.22(s,1H),8.20(s,1H),8.04(s,1H),7.83(s,1H),6.45(br d,J＝15.7Hz,1H),6.27(br d,J＝8.2Hz,1H),5.91(br d,J＝51.3Hz,1H),5.52-5.74(m,1H),5.23-5.51(m,2H),4.50-4.80(溶剂峰重叠，4H),4.00-4.43(m,1H),3.59-3.98(m,1H)；31P NMR(162MHz,D2O)δppm 56.05(s,1P)；ESI-MS：m/z 678.1[M+H]+。
实施例35
化合物26
步骤1：制备化合物35b
在使用前，将化合物35a与吡啶(30mL)共蒸发两次。在0℃下，经由均压滴液漏斗在30min内向化合物35a(3g，11.22mmol)在吡啶(50mL)中的搅拌悬浮液中滴加TMSCl(7.2mL，56.73mmol)，得到白色悬浮液，然后在RT下进一步搅拌1hr。然后在N2下于0℃下，经由注射器在15min内将异丁酰氯(2.4g，22.52mmol)加入到反应混合物中。在N2气氛下于RT下，将所得悬浮液搅拌过夜。在0℃下将水(15mL)加入到反应混合物中，然后在0℃下在10min内经由均压滴液漏斗加入氢氧化铵(17.3mL，25％)。
将所得澄清溶液在RT下进一步搅拌1hr。将反应混合物减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％至20％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为黄色固体的35b。1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δppm 12.12(s,1H),11.71(s,1H),8.30(s,1H),5.79(d,J＝1.6Hz,1H),4.46-4.50(m,1H),4.30-4.38(m,1H),3.68(br dd,J＝12.0,3.2Hz,3H),3.52(br dd,J＝12.0,3.6Hz,1H),2.73-2.84(m,1H),2.18-2.28(m,1H),1.90(ddd,J＝13.2,6.0,2.0Hz,1H),1.11(d,J＝6.8Hz,6H)；ESI-MS：m/z 338.1[M+H]+。
步骤2：制备化合物35c
在0℃下，向化合物35b(3.4g，粗制)、三苯基膦(7.93g，30.23mmol)和咪唑(2.75g，40.4mmol)的THF(35mL)搅拌溶液中加入I2(7.68g，30.26mmol)的THF(20mL)溶液。将反应物在35℃下搅拌过夜后，将混合物过滤并浓缩滤液，然后用DCM(150mL)稀释并用饱和Na2SO3水溶液(100mL×2)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(DCM:MeOH＝1:0至10:1)纯化，得到为黄色固体的化合物35c(1.55g)。1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δppm 12.11(s,1H),11.66(s,1H),8.17(s,1H),5.82(d,J＝2.4Hz,1H),5.74-5.76(m,1H),4.65-4.70(m,1H),4.30-4.39(m,1H),3.43-3.55(m,2H),2.78(quin,J＝6.8Hz,1H),2.12-2.25(m,2H),1.12(d,J＝6.8Hz,6H)；ESI-MS：m/z 447.9[M+H]+。
步骤3：制备化合物35d
在N2下，将NaN3(800mg，12.3mmol)加入到化合物35c(1.73g，3.87mmol)的DMF(25mL)搅拌溶液中。将反应物在80℃下搅拌3hr后，用DCM(100mL)稀释该混合物，并用盐水(50mL×2)洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥并减压蒸发，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(DCM:MeOH＝1:0至10:1)纯化，得到为黄色固体的化合物35d(1.27g)。ESI-MS：m/z 363.1[M+H]+。
步骤4：制备化合物35e
在使用前，将化合物35d与吡啶(20mL)共蒸发两次。在0℃下向化合物35d(1.27g)的吡啶(15mL)溶液中加入DMAP(215mg，1.76mmol)和DMTrCl(1.781g，5.257mmol)。将反应物在RT下搅拌过夜后，将混合物用CH2Cl2(80mL)稀释，然后相继用饱和NaHCO3水溶液(50mL×3)洗涤。将有机层收集，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％-85％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到为黄色固体的化合物35e(1.61g)。1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ12.05(s,1H),11.59(s,1H),7.96(s,1H),7.36(d,J＝7.2Hz,2H),7.22-7.29(m,2H),7.12-7.22(m,5H),6.76(d,J＝8.8Hz,2H),6.69(d,J＝8.8Hz,2H),5.55(d,J＝2.4Hz,1H),4.72(br d,J＝6.4Hz,1H),4.42-4.51(m,1H),3.64(d,J＝12.4Hz,6H),3.47-3.54(m,1H),3.37(br d,J＝6.4Hz,1H),2.79(quin,J＝6.8Hz,1H),2.03-2.14(m,1H),1.85-1.94(m,1H),1.13(t,J＝6.8Hz,6H)；ESI-MS：m/z 665.2[M+H]+。
步骤5：制备化合物35f
向化合物35e(1.61g，2.42mmol)的THF(16mL)溶液中一次性加入Ph3P(889mg，3.39mmol)，然后在N2下于40℃下将混合物搅拌2hr。将水(8mL)加入到混合物中，然后将其在40℃下进一步搅拌过夜。将混合物与另一粗批料合并，并且用CH2Cl2(100mL)、水(80mL)稀释，并且用CH2Cl2(100mL×2)萃取。将有机层合并，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％-8％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的化合物35f(1.5g，2.34mmol)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.92(s,1H),7.36(d,J＝7.2Hz,2H),7.13-7.28(m,7H),6.76(d,J＝8.8Hz,2H),6.70(d,J＝9.2Hz,2H),5.59(d,J＝1.6Hz,1H),4.56-4.87(m,5H),4.26(dq,J＝10.0,5.2Hz,1H),3.65(d,J＝11.6Hz,6H),2.78(spt,J＝6.8Hz,1H),2.58-2.72(m,2H),1.99-2.11(m,1H),1.73(br dd,J＝13.2,5.6Hz,1H),1.13(t,J＝6.8Hz,6H)；ESI-MS：m/z 639.2[M+H]+。
步骤6：制备化合物35g
在N2下于-78℃下，将4-硝基苯基氯硫酸盐3n(1.67g，7.04mmol)的无水CH2Cl2(3mL)溶液快速加入到化合物35f(1.5g，2.35mmol)、4-硝基苯酚(980.1mg，7.04mmol)、Et3N(1.96mL，14.14mmol)在无水CH2Cl2(27mL)中的混合物中，然后在2hr内自然升温至RT。将混合物与另一粗批料合并，用CH2C12(100mL)稀释，并用饱和NaHCO3水溶液(100mL×5)洗涤。将有机层收集，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％-90％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到为黄色固体的化合物35g(1.6g)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ12.05(s,1H),11.55(s,1H),8.91(t,J＝5.6Hz,1H),8.20-8.27(m,2H),7.93(s,1H),7.43-7.51(m,2H),7.34(d,J＝7.2Hz,2H),7.21-7.28(m,2H),7.11-7.21(m,5H),7.11-7.21(m,1H),6.75(d,J＝8.8Hz,2H),6.68(d,J＝8.8Hz,2H),5.55(d,J＝2.0Hz,1H),4.67(br d,J＝6.4Hz,1H),4.34-4.44(m,1H),3.64(d,J＝12.4Hz,6H),3.30-3.37(m,1H),3.18-3.27(m,1H),2.78(spt,J＝6.8Hz,1H),1.99-2.10(m,1H),1.89(br dd,J＝12.4,5.6Hz,1H),1.10-1.15(m,6H)；ESI-MS：m/z 840.3[M+H]+。
步骤7：制备化合物35i
将化合物35h(910mg，1.347mmol)、化合物35g(1.6g，1.905mmol)和分子筛(3g)在THF(40mL)中的悬浮液在N2下于RT下搅拌30min，接着加入DMAP(659mg，5.39mmol)，然后在N2下于45℃下搅拌过夜。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并且将滤液减压浓缩，得到黄色残余物，将其溶于DCM(60mL)中，然后用饱和NaHCO3水溶液(40mL×3)洗涤。将有机层收集，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到黄色残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(石油醚:EtOAc＝1:0至1:4)纯化，得到为白色固体的化合物35i(1.13g)，其通过LCMS确认。ESI-MS：m/z 1377.3[M+H]+。
步骤8：制备化合物35j
向化合物35i(1.13mg，0.77mmol)的DCM(30mL)搅拌溶液中加入水(140mg，7.77mmol)和DCA(220mg，1.7mmol)。将黄色混合物在RT下搅拌过夜。然后加入MeOH(5mL)，之后加入吡啶(244.5mg，4当量)，得到黄色溶液，将其进一步搅拌15min；将溶液用另一粗批料后处理，并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(DCM:MeOH＝1:0至10:1)纯化，得到为白色固体的化合物35j(630mg)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ12.11(s,1H),11.64(s,1H),11.28(s,1H),8.77(s,1H),8.70(s,1H),8.62(br t,J＝6.0Hz,1H),8.14(s,1H),8.04(d,J＝7.2Hz,2H),7.62-7.69(m,1H),7.52-7.59(m,2H),6.48(dd,J＝16.8,2.8Hz,1H),5.76-5.96(m,2H),5.72(d,J＝4.0Hz,1H),5.30-5.43(m,2H),4.60(br s,1H),4.36-4.45(m,1H),4.28-4.34(m,1H),3.74-3.84(m,1H),3.58-3.68(m,1H),3.23-3.35(m,2H),2.71-2.83(m,1H),2.17-2.28(m,1H),2.00-2.09(m,1H),1.11(dd,J＝6.8,1.6Hz,6H)；19F NMR(DMSO-d6,376MHz)δ-202.81(dt,J＝52.1,16.5Hz,1F)；ESI-MS：m/z 772.3[M+H]+。
步骤9：制备化合物35k
在使用前，THF在Na/二苯甲酮上新鲜蒸馏，并且CH3CN在CaH2上新鲜蒸馏。向化合物35j(120mg，0.15mmol)的THF(3mL)溶液中加入800mg的
MS(粉末)和1H-四唑溶液(3.45mL，0.45M，其通过以下方式制备：将945mg四唑(通过冻干干燥)溶于30mL无水CH3CN中，接着加入1g
MS，并且然后在使用前在N2下搅拌1hr)；将混合物用N2吹扫。在25min内将2-氰乙基-N,N,N',N'-四异丙基亚磷酰二胺(84.36mg，0.28mmol)的THF(0.8mL)溶液经由注射器滴加，然后在室温下搅拌1.5hr。加入TBHP溶液(0.25mL，1.24mmol，5M)并再搅拌30min。将反应混合物减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(DCM:MeOH＝1:0至10:1)纯化，得到为白色固体的39k(68mg)。ESI-MS：m/z 887.4[M+H]+。
步骤10：制备化合物26，铵盐
将化合物35k(68mg，0.077mmol)的MeNH2/EtOH(5mL)溶液在rt下搅拌2hr。将反应混合物在40℃下搅拌1h后，蒸发挥发性物质，并且将获得的白色固体溶于水(20mL)的混合物中，然后用DCM(10mL×4)萃取。将水层冻干，并通过反相制备型HPLC(柱：Xbridge，150mm×30mm×10μm，条件：A：水(10mM NH4HCO3)-ACN:MeCN，开始B：0％，结束B：30％；流速：25mL/min)纯化，得到为白色固体的化合物26，铵盐(18.8mg)。
1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δppm 10.78(br s,1H),8.84(br d,J＝6.8Hz,1H),8.45(s,1H),8.25(s,1H),7.86(s,1H),6.67(br s,1H),6.44(br d,J＝18.0Hz,1H),5.91(s,1H),5.62(br s,1H),5.49(br d,J＝3.2Hz,1H),5.30-5.16(m,2H),4.72(br s,1H),4.44(br d,J＝9.4Hz,1H),4.48-4.40(m,1H),4.29(br d,J＝12.4Hz,1H),4.21(br t,J＝10.8Hz,1H),3.89(br d,J＝12.0Hz,1H),3.45-3.33(m,1H),2.92(br d,J＝11,2Hz,1H),1.94(br t,J＝10,8Hz,1H)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δppm-198.95(br s,1F)；31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm-4.86(br s,1P)；ESI-MS：m/z 660.3[M+H]+。
转化成钠盐
将Dowex 50W×8，200-400(5mL，H形式)加入到烧杯中并用去离子水(30mL)洗涤。然后向树脂中加入15％H2SO4的去离子水溶液，将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(30mL)。将树脂转移到具有15％H2SO4的去离子水溶液的柱中，并用15％H2SO4(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为中性。将树脂转移回烧杯中，加入15％NaOH的去离子水溶液，并且将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(1x)。将树脂转移到柱中并用15％NaOH的水溶液(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为中性。将化合物26，铵盐(10mg)溶于最小量的去离子水和CH3CN(1:1，v/v，3mL)中，加入到柱顶部中，并且用去离子水洗脱。将适当的级分合并在一起并冻干，得到为白色固体的化合物26，钠盐(6.1mg)。1H NMR(400MHz,D2O)δppm8.22(br s,1H),8.11(br s,1H),7.75(s,1H),6.40(br d,J＝16.8Hz,1H),5.88(br s,1H),5.73(br s,1H),5.60(br s,1H),5.24-5.04(m,1H),4.59(br d,J＝8.8Hz,1H),4.49(br s,1H),4.42(br d,J＝12.0Hz,1H),4.13(br d,J＝11.8Hz,1H),3.69(br d,J＝13.6Hz,1H),3.41(br d,J＝8.0Hz,1H),2.76(br s,1H),2.26-2.19(m,1H),2.22(br d,J＝6.8Hz,1H)；19F NMR(376MHz,D2O)δppm-200.45(br s,1F)；31P NMR(162MHz,D2O)δppm-2.84(s,1P)；ESI-MS：m/z 660.0[M+H]+
实施例36
化合物37
步骤1：制备化合物36b
向化合物36a(4.2g，24.11mmol)的DCM(40mL)溶液中滴加TEA(4.88g，48.22mmol)和MsCl(4.97g，43.4mmol)10min。在25℃下搅拌2hr后，将混合物在DCM(100mL)和水(50mL)之间分配。
将有机层用盐水(3×50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发溶剂，得到残余物。该残余物(与硅胶合并：10g)通过硅胶快速柱色谱法(PE/EA为10％至100％，并且DCM/MeOH＝0％至5％)纯化，得到为浅黄色固体的化合物36b(5.6g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm5.84(d,J＝2.4Hz,1H),4.78(t,J＝3.4Hz,1H),4.51-4.40(m,2H),4.29-4.22(m,1H),3.09-3.05(m,3H),2.18-2.09(m,1H),1.84-1.73(m,1H),1.52(s,3H),1.33(s,3H)。
步骤2：制备化合物36c
在25℃下，向化合物36b(5.6g，22.19mmol)的DMF(55mL)溶液中加入NaN3(4.25g，65.37mmol)。在100℃下搅拌3hr后，将混合物用饱和NaHCO3水溶液(100mL)稀释并且用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。将有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发，得到黄色固体。该固体(与硅胶合并：10g)通过硅胶快速柱色谱法(硅胶：20g)(梯度洗脱：0％-100％乙酸乙酯的石油醚溶液，然后0％-20％甲醇的乙酸乙酯溶液)纯化，得到为黄色固体的化合物36c(3.8g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 5.85(d,J＝3.4Hz,1H),4.77(t,J＝4.2Hz,1H),4.45-4.35(m,1H),3.59(dd,J＝3.7,13.2Hz,1H),3.28(dd,J＝4.6,13.2Hz,1H),2.09(dd,J＝4.4,13.4Hz,1H),1.79(ddd,J＝4.8,10.7,13.4Hz,1H),1.52(s,3H),1.33(s,3H)。
步骤3：制备化合物36d
在0℃下，将乙酸酐(18.03mL，190.75mmol)和浓硫酸(0.104mL，1.91mmol)加入到化合物36c(3.8g，19.08mmol)的乙酸(109.1mL，1907.56mmol)搅拌溶液。在25℃下搅拌2h后，用冷水(100mL)猝灭反应混合物，在25℃下搅拌30min。混合物用乙酸乙酯(3×200mL)萃取。将有机层合并，并相继用饱和碳酸氢钠水溶液(3×300mL)、盐水(2×200mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物(与硅胶合并：10g)通过硅胶快速柱色谱法(0％-100％PE的EA溶液)纯化，得到为黄色油状物的化合物36d(3.2g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.21-6.14(m,1H),5.22(d,J＝5.0Hz,1H),4.58-4.50(m,1H),3.57(dd,J＝4.0,13.1Hz,1H),3.25(dd,J＝4.6,13.2Hz,1H),2.29-2.19(m,1H),2.12-2.10(m,1H),2.09(s,6H)。
步骤4：制备化合物36e
将5-氨基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(2.37g，15.6mmol)和BSA(11.041g，54.273mmol)的无水CH3CN(200mL)溶液在80℃下搅拌1h，并且然后冷却至0℃。接着加入化合物36d(3.3g，13.57mmol)的无水CH3CN(80mL)溶液，然后加入SnCl4(10.6g，40.7mmol)。在26℃下搅拌48小时后，将混合物冷却并用EtOAc(100mL)稀释，然后在0℃下滴加到饱和NaHCO3水溶液(500mL)中。将有机层用盐水(2×100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在压力下浓缩，得到残余物。该残余物(与硅胶合并：10g)通过硅胶快速柱色谱法(2％-10％MeOH的DCM溶液，V/V)纯化，得到为黄色泡沫的化合物36e(6.4g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.08(br,s,1H),7.28(br,s,1H),6.68(br,s,1H),6.10(s,1H),5.68(d,J＝5.5Hz,1H),4.61-4.50(m,1H),3.58(dd,J＝3.1,13.4Hz,1H),3.34-3.29(m,1H),2.71-2.59(m,1H),2.33-2.24(m,1H),2.09(s,3H)；ESI-MS：m/z＝336.1[M+H]+。
步骤5：制备化合物36f
在25℃下向化合物36e(4.8g，14.32mmol)的DCM(48mL)溶液中加入三乙胺(4.34g，42.95mmol)和DMAP(504.37mg，4.13mmol)。搅拌5min后，将混合物在0℃下冷却，并在10min内向溶液中加入异丁酰氯(3.05g，28.63mmol)。在25℃下搅拌2小时后，将混合物用EtOAc(100mL)稀释，用盐水(3×100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在压力下浓缩，得到为黄色固体的化合物36f(4.8g)，将其直接用于下一步骤中而无需任何进一步纯化。
步骤6：制备化合物36g
在0℃下，向化合物36f(6.5g)的THF/MeOH/水(240mL/150mL/45mL)溶液中加入NaOH(0.5M水溶液，64.14mL)。然后在0℃下，将溶液搅拌1小时。将溶液用乙酸(～2mL)酸化至pH7。将溶液在压力下浓缩，得到黄色固体(6g)。该残余物(与硅胶合并：10g)通过硅胶快速柱色谱法(硅胶：40g)(DCM/MeOH＝1/0至5/1)纯化，得到为浅黄色固体的化合物36g(4.5g)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 6.20(s,1H),4.94(d,J＝5.0Hz,1H),4.73-4.65(m,1H),3.52-3.46(m,1H),3.38-3.33(m,1H),2.78-2.61(m,2H),2.20(ddd,J＝1.3,6.0,13.3Hz,1H),1.23(d,J＝7.0Hz,6H)；ESI-MS：m/z＝364.2[M+H]+
步骤7：制备化合物36h
将化合物36g(5g，13.76mmol)的Py(50mL)溶液用DMAP(841mg，6.88mmol)在0℃下处理10min。10min后，加入DMTrCl(9.3g，27.52mmol)，并且然后将溶液在80℃下搅拌12小时。将反应混合物用EA(50mL)稀释并用盐水(3×80mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并在压力下浓缩，得到黄色固体(10g)。该黄色固体(与硅胶合并：15g)通过硅胶快速柱色谱法(0％-100％PE的EA溶液)纯化，得到为浅黄色固体的化合物36h(8.0g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 12.01(br,s,1H),8.35(br,s,1H),7.45-7.42(m,2H),7.28-7.24(m,7H),6.73-6.66(m,4H),5.10(d,J＝5.8Hz,1H),4.84-4.74(m,1H),3.83-3.77(m,1H),3.71(d,J＝6.3Hz,6H),3.43-3.35(m,1H),3.29-3.23(m,1H),2.68-2.56(m,2H),2.40(dd,J＝5.9,13.2Hz,1H),1.31(dd,J＝6.9,11.7Hz,6H)。
ESI-MS：m/z 688.1[M+Na]+。
步骤8：制备化合物36i
将化合物36h(8.0g，12.02mmol)的EA/EtOH(1/1，350mL)溶液用Pd/C(4.5g)处理；将混合物在H2气氛(15psi)下搅拌2hr后，将该溶液过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物(与硅胶合并：10g)通过硅胶快速柱色谱法(硅胶：40g)(DCM/MeOH＝1/0至5/1)纯化，得到为浅黄色固体的化合物36i(6.0g)。ESI-MS：m/z＝640.4[M+H]+
步骤9：制备化合物36j
化合物36i(6.0g，8.44mmol)的DCM(130mL)溶液用4-硝基苯酚(3.52g，25.32mmol)和三乙胺(5.12g，50.65mmol)处理。冷却至-78℃后，在-78℃下加入4-硝基苯基氯硫酸盐(6.02g，25.32mmol)的DCM(20mL)溶液。在-78℃下搅拌1h后，过滤该混合物，并且滤液用DCM(300mL)稀释。将有机层用饱和NaHCO3水溶液(3×150mL)洗涤，并且减压浓缩，得到残余物(10g)。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-100％乙酸乙酯的石油醚溶液)纯化，得到为黄色固体的化合物36j(5.9g)。1H NMR(400MHz,CD3CN)δppm 12.07(br,s,1H),9.39(br,s,1H),8.22-8.17(m,2H),7.40-7.36(m,4H),7.24-7.14(m,7H),6.76-6.66(m,4H),5.76(d,J＝3.8Hz,1H),4.97-4.90(m,1H),4.68-4.60(m,1H),3.68(d,J＝8.3Hz,6H),3.46-3.39(m,1H),3.32-3.25(m,1H),2.65(td,J＝7.0,13.7Hz,1H),2.40-2.32(m,1H),2.22-2.19(m,1H),1.22(d,J＝7.0Hz,3H),1.21-1.18(m,3H)。
ESI-MS：m/z 863.2[M+Na]+。
步骤10：制备化合物36k
将化合物36j(1.18g，1.40mmol)、化合物35h(0.73g，1.08mmol)和
MS(1g)的DCE(21mL)溶液在N2下于RT下搅拌30min，然后加入DMAP(660.41mg，5.41mmol)。将反应物在45℃(油温)下搅拌12hr后，将混合物过滤并将滤液在DCM(100mL)和盐水(100mL)之间分配。将有机层相继用饱和NaHCO3水溶液(3×100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发，得到残余物(4g)。该残余物(与硅胶合并：6g)通过硅胶快速柱色谱法(PE/EA为10％至100％，并且DCM/MeOH＝0％至5％)纯化，得到为浅黄色固体的化合物36k(1.2g)。
1H NMR(400MHz,CD3CN)δ11.88(br,s,1H),9.42(br,s,1H),9.09(br,s,1H),8.38(s,1H),8.05(s,1H),7.98-7.85(m,1H),7.76(br,d,J＝7.6Hz,1H),7.47-7.39(m,1H),7.35-7.27(m,2H),7.12(br,d,J＝7.3Hz,2H),7.07(br,d,J＝6.4Hz,2H),7.02-6.86(m,11H),6.72(br,d,J＝8.6Hz,1H),6.59-6.40(m,8H),6.13-6.03(m,1H),5.83(br,s,0.5H),5.73-5.62(m,1H),5.46(br,s,1H),4.67(br,s,1H),4.33(br,s,1H),3.99(br,s,1H),3.67-3.38(m,11H),3.25(br,d,J＝11.2Hz,1H),3.10(br,d,J＝14.4Hz,1H),3.00(br,d,J＝8.1Hz,1H),2.89(br,d,J＝6.1Hz,1H),2.51-2.41(m,1H),2.14-2.05(m,1H),1.75-1.72(m,6H)；19F NMR(376MHz,CD3CN)δppm-200.072(s,1F)；ESI-MS：m/z 1377.8[M+H]+
步骤11：制备化合物36l
将化合物36k(1.2g，0.78mmol)的DCM(30mL)溶液用水(141.25mg，7.84mmol)和DCA(202.19mg，1.57mmol)处理，得到红色溶液。在25℃下搅拌12hr后，向混合物中加入MeOH(5mL)直至变澄清，然后加入吡啶(620.19mg，7.84mmol)。将混合物在RT下搅拌2hr，然后在压力下浓缩，得到残余物。该残余物(与硅胶合并：2g)通过硅胶快速柱色谱法(0％-8％DCM的MeOH溶液)纯化，得到为白色固体的化合物36l(0.54g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.26(s,1H),11.92(s,1H),11.27(s,1H),8.77(s,1H),8.69(s,1H),8.53(br,t,J＝5.8Hz,1H),8.05(br,d,J＝7.5Hz,2H),7.69-7.63(m,1H),7.60-7.53(m,2H),6.46(dd,J＝2.6,16.7Hz,1H),6.04(s,1H),5.92(br,s,0.5H),5.86(br,d,J＝3.8Hz,1H),5.79(br,d,J＝3.3Hz,0.5H),5.37-5.26(m,2H),4.75(br,s,1H),4.60-4.49(m,1H),4.27(br,s,1H),4.10(br,s,1H),3.77(br,d,J＝12.5Hz,1H),3.60(br,dd,J＝4.8,8.0Hz,1H),2.79(td,J＝6.7,13.7Hz,1H),2.19(br,dd,J＝6.3,12.5Hz,1H),1.13(d,J＝6.8Hz,6H)。
19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δppm-202.787(s,1F)；ESI-MS：m/z 773.3[M+H]+
步骤12：制备化合物36m
注意：在使用前，THF在Na/二苯甲酮上新鲜蒸馏，并且CH3CN在CaH2上新鲜蒸馏。
将化合物36l(100mg，0.13mmol)的THF(2mL)溶液用
MS(粉末)(1g)处理；搅拌20min后，在25℃下加入1H-四唑(0.45M)的CH3CN(2.3mL)溶液。然后在25℃下加入2-氰乙基-N,N,N',N’-四(异丙基)亚磷酰二胺(0.078g，0.26mmol，稀释于2mL THF中)的溶液并将混合物搅拌1.5h，接着在25℃下加入叔丁基过氧化氢(0.12mL，0.65mmol)。搅拌1.5hr后，将混合物用DCM(20mL)稀释，通过硅藻土垫过滤并浓缩，得到为黄色固体的粗产物(1.0g)。该粗产物(与硅胶合并：2g)通过硅胶快速柱色谱法(0％-15％MeOH的CH2Cl2溶液)纯化，得到为浅黄色固体的化合物36m(50mg)。ESI-MS：m/z＝888.3[M+H]+
步骤13：制备化合物37，钠盐
将化合物36m(50mg，0.056mmol)的EtOH(2.5mL)溶液用甲胺(2.5mL，33％EtOH溶液)处理。在25℃下搅拌3hr后，将溶液减压浓缩，得到残余物。该残余物通过反相制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 5μm 150×30，条件：水(10mM NH4HCO3)-ACN，B：0，结束B 30，梯度时间(min)：7，100％B保持时间(min)：1，流速(mL/min)：25)纯化，得到为白色固体的化合物37，铵盐(12.2mg)。1H NMR(400MHz,D2O)δ8.58(s,1H),8.45(s,1H),6.66(d,J＝18.1Hz,1H),6.46(s,1H),5.94-5.75(m,1H),5.51-5.41(m,1H),5.37(br,s,1H),4.63(br,d,J＝12.5Hz,1H),4.35(br,d,J＝13.4Hz,1H),3.92(br,dd,J＝3.7,14.4Hz,1H),3.50-3.36(m,1H),3.16(br,d,J＝12.0Hz,1H),2.65-2.55(m,1H)；19F NMR(376MHz,D2O)δppm-199.359(s,1F)；31P NMR(162MHz,D2O)δppm-3.307(s,1P)；ESI-MS：m/z 661.3[M+H]+
转化成钠盐
将Dowex 50W×8，200-400(10mL，H形式)加入到烧杯中并用去离子水(30mL)洗涤。然后向树脂中加入15％H2SO4的去离子水溶液，将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(30mL)。将树脂转移到具有15％H2SO4的去离子水溶液的柱中，并用15％H2SO4(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为中性。将树脂转移回烧杯中，加入15％NaOH的去离子水溶液，并且将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(1x)。将树脂转移到柱中并用15％NaOH的水溶液(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为中性。将化合物37，铵盐(28mg)溶于去离子水/MeCN(20mL/5mL)中，加入到柱顶部中，并用去离子水洗脱。将适当的级分合并在一起并冻干，得到为白色固体的化合物37，钠盐(24.5mg)。
1H NMR(400MHz,D2O)＝8.63(br,s,1H),8.48(br,s,1H),6.71(br,d,J＝17.6Hz,1H),6.51(br,s,1H),5.97-5.79(m,1H),5.54-5.40(m,2H),4.69(br,d,J＝13.3Hz,1H),4.41(br,d,J＝13.1Hz,1H),3.97(br,d,J＝13.8Hz,1H),3.54-3.41(m,1H),3.22(br,d,J＝12.5Hz,1H),2.66(br,s,1H)；19F NMR(376MHz,D2O)ppm-199.443(s,1F)；31P NMR(162MHz,D2O)ppm-3.283(s,1P)；ESI-MS：m/z 661.2[M+H]+
实施例37
化合物47
步骤1：制备化合物37b
在0℃下，向化合物37a(10g，28.3mmol)、三苯基膦(22.27g，84.91mmol)、咪唑(7.71g，113.25mmol)的THF(100mL)搅拌溶液中加入碘(21.55g，84.91mmol)的THF(100mL)溶液。在35℃下搅拌过夜后，将反应混合物过滤，减压浓缩，并且用DCM(400mL)稀释。将有机层用饱和Na2SO3水溶液(200mL×2)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(DCM:MeOH＝1:0至10:1)纯化，得到为白色固体的化合物37b(6g)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ12.10(s,1H),11.65(s,1H),8.26(s,1H),5.83(d,J＝6.0Hz,1H),5.66(br d,J＝5.6Hz,1H),5.45(br d,J＝4.4Hz,1H),4.68(q,J＝5.6Hz,1H),4.11(br d,J＝3.2Hz,1H),3.92-4.02(m,1H),3.58(br dd,J＝10.4,6.0Hz,1H),3.43(brdd,J＝10.4,6.8Hz,1H),2.76(dt,J＝13.6,6.8Hz,1H),1.12(br d,J＝6.8Hz,6H)；ESI-MS：m/z 463.9[M+H]+。
步骤2：制备化合物37c
在N2下，将化合物37b(6g，12.95mmol)的DMF(100mL)溶液用NaN3(2.47g，37.99mmol)处理。在80℃下搅拌3hr后，该混合物用DCM(400mL)稀释，并用盐水(300mL×2)洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(DCM:MeOH＝1:0至10:1)纯化，得到为白色固体的化合物37c(4g)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ12.10(s,1H),11.64(s,1H),8.26(s,1H),5.84(d,J＝6.0Hz,1H),5.65(d,J＝6.0Hz,1H),5.38(d,J＝4.8Hz,1H),4.60(q,J＝5.6Hz,1H),4.09-4.11(m,1H),4.02(dt,J＝7.2,3.6Hz,1H),3.62-3.72(m,1H),3.52-3.60(m,1H),2.77(sept,J＝6.8Hz,1H),1.12(d,J＝6.8Hz,6H)；ESI-MS：m/z 379.0[M+H]+
步骤3：制备化合物37d
在使用前，将化合物37c与吡啶(80mL)共蒸发两次。在0℃下向化合物37c(4g，10.57mmol)的吡啶(40mL)溶液中加入DMAP(646mg，5.29mmol)和DMTrCl(5.38g，15.88mmol)。在RT下搅拌过夜后，将反应混合物用CH2Cl2(200mL)稀释。将有机层相继用饱和NaHCO3水溶液(150mL×3)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％-90％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到黄色的粗产物。该粗产物通过反相制备型HPLC(Phenomenex Synergi Max-RP 10μm 250mm×50mm；流动相：水-ACN为30％至70％；流速：100mL/min)纯化，得到为白色固体的化合物37d(4.15g)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ12.02(s,1H),11.43(br s,1H),7.97(s,1H),7.42(d,J＝6.8Hz,2H),7.28(d,J＝8.8Hz,2H),7.11-7.22(m,5H),6.71(d,J＝9.2Hz,2H),6.63(d,J＝9.2Hz,2H),5.66(d,J＝5.2Hz,1H),5.48(d,J＝5.6Hz,1H),4.80(br t,J＝4.8Hz,1H),4.05(dt,J＝7.2,4.0Hz,1H),3.65(d,J＝11.6Hz,6H),3.56(br dd,J＝13.2,7.2Hz,1H),3.44-3.51(m,1H),3.39(dd,J＝13.2,4.0Hz,1H),2.79(quin,J＝6.8Hz,1H),1.14(dd,J＝6.8,2.3Hz,6H)；ESI-MS：m/z 681.4[M+H]+
步骤4：制备化合物37e
在0℃下，将NaH(60％矿物油溶液，189.5mg，4.74mmol)加入到化合物37d(2.15g，3.16mmol)在DMF(20mL)中的悬浮液中。在0℃下搅拌0.5hr后，滴加4-甲氧基苄基氯(0.512mL，3.8mmol)的DMF(10mL)溶液。在加入完成后，将该反应混合物在0℃下搅拌1hr，并且用水(80mL)猝灭，并用EtOAc(100mL×2)萃取。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发，得到残余物。该残余物与另一批料合并，并通过反相制备型HPLC(YMC Triart C18，7μm250mm×50mm；流动相：水(10mM NH4HCO3)-ACN为55％至90％；流速：90mL/min)纯化，得到为白色固体的化合物37e(1.5g，1.83mmol)和为黄色固体的化合物37d(2.16g，3.09mmol)。1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ12.04(s,1H),11.42(br s,1H),8.11(s,1H),7.32(d,J＝8.4Hz,2H),7.22-7.28(m,2H),7.14-7.20(m,5H),7.05(d,J＝9.2Hz,2H),6.96(d,J＝8.8Hz,2H),6.74(d,J＝8.8Hz,2H),6.66(d,J＝8.8Hz,2H),6.02(d,J＝7.6Hz,1H),4.87(br s,1H),4.34(d,J＝10.4Hz,1H),4.22(dd,J＝7.2,5.2Hz,1H),4.00(br d,J＝10.4Hz,1H),3.78(s,3H),3.69(d,J＝9.6Hz,7H),3.27(dd,J＝12.8,4.8Hz,1H),2.76(spt,J＝6.8Hz,1H),2.61(br d,J＝3.6Hz,1H),1.09-1.17(m,6H)；ESI-MS：m/z 801.4[M+H]+。
步骤5：制备化合物37f
将Ph3P(673mg，2.566mmol)一次性加入到化合物37e(1.5g，1.83mmol)的THF(15mL)溶液中。将混合物在N2下于40℃下搅拌2hr，然后加入水(7.5mL)。在40℃下继续搅拌后，该混合物用DCM(50mL)、水(40mL)稀释，并用DCM(50mL×2)萃取。然后将有机层合并，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％-8％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的化合物37f(1.27g)。
1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.06(s,1H),7.31(d,J＝8.4Hz,2H),7.22-7.27(m,2H),7.13-7.22(m,5H),7.04(d,J＝8.8Hz,2H),6.96(d,J＝8.4Hz,2H),6.74(d,J＝9.2Hz,2H),6.66(d,J＝8.8Hz,2H),5.99(d,J＝7.6Hz,1H),4.78(br s,1H),4.30(d,J＝10.4Hz,1H),4.04(t,J＝5.6Hz,1H),3.96(d,J＝10.4Hz,1H),3.75-3.80(m,3H),3.69(d,J＝8.4Hz,6H),2.73-2.85(m,1H),2.66(br d,J＝4.4Hz,1H),2.62(br d,J＝6.0Hz,2H),1.12(t,J＝6.4Hz,6H)；ESI-MS：m/z 775.3[M+H]+
步骤6：制备化合物37g
在N2下于-78℃下，将4-硝基苯基氯硫酸盐(1.17g，4.92mmol)的无水DCM(3mL)溶液加入到化合物37f(1.27g，1.64mmol)、4-硝基苯酚(685mg，4.92mmol)、Et3N(1.37mL，9.88mmol)的无水DCM(27mL)溶液中，然后在2hr内自然升温至室温。将反应混合物用另一批料后处理，用DCM(100mL)稀释，并用饱和NaHCO3水溶液(100mL×5)洗涤。将有机层收集，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(0％-90％EtOAc的PE溶液)纯化，得到为黄色固体的化合物37g(1.55g，1.59mmol)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)12.05(s,1H),11.49(br s,1H),8.88(t,J＝6.0Hz,1H),8.26-8.31(m,2H),8.13(s,1H),7.47-7.53(m,2H),7.29(d,J＝8.8Hz,2H),7.20-7.25(m,2H),7.14-7.20(m,5H),7.03(d,J＝8.8Hz,2H),6.95(d,J＝8.8Hz,2H),6.74(d,J＝8.8Hz,2H),6.67(d,J＝8.8Hz,2H),5.95(d,J＝7.2Hz,1H),4.72(brs,1H),4.25(d,J＝10.4Hz,1H),4.18(br t,J＝5.6Hz,1H),3.96(br d,J＝10.4Hz,1H),3.77(s,3H),3.69(d,J＝6.8Hz,6H),3.24-3.44(m,2H),2.91(br d,J＝3.6Hz,1H),2.69-2.79(m,1H),1.12(t,J＝6.4Hz,6H)；ESI-MS：m/z＝976.3[M+H]+
步骤7：制备化合物37h
将化合物37g(766mg，1.13mmol)、化合物35h(1.55g，1.59mmol)和MS(3g)在THF(40mL)中的悬浮液在N2下于RT下搅拌30min，接着加入DMAP(554mg，4.53mmol)，然后在N2下于45℃下继续搅拌。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并将滤液减压浓缩，得到黄色残余物；将残余物溶于60mLDCM中，并用饱和NaHCO3水溶液(40mL×3)洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(PE:EtOAc＝1:0至0:1)纯化，得到为黄色固体的化合物37h(360mg)。ESI-MS：m/z＝757.4[M/2+H]+
步骤8：制备化合物37i
将化合物37h(360mg，0.24mmol)的DCM(10mL)溶液用水(43mg，2.39mmol)和DCA(67.5mg，0.52mmol)处理，得到黄色溶液。在RT下搅拌6hr后，向混合物中加入MeOH(2mL)，然后加入吡啶(75.5mg，4当量)；将所得溶液搅拌15min并浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(DCM:MeOH＝1:0至10:1)纯化，得到为白色固体的化合物37i(130mg)。ESI-MS：m/z＝908.4[M+H]+
步骤9：制备化合物37j
注意：在使用前，THF在Na/二苯甲酮上新鲜蒸馏，并且CH3CN在CaH2上新鲜蒸馏。向化合物37i(130mg，0.14mmol，通过冻干干燥)的THF(3mL)溶液中加入
MS(粉末，800mg)，接着加入1H-四唑溶液(3.18mL，0.45M，其通过以下方式制备：将945mg四唑(通过冻干干燥)溶于30mL无水CH3CN中，接着加入1g
MS，并且然后在使用前在N2下搅拌1hr)；在用N2吹扫容器若干次后，在25min内经由注射器滴加2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(77.69mg，0.26mmol)的THF(0.8mL)溶液，然后在室温下搅拌1.5hr，接着加入叔丁基过氧化氢(0.23mL，1.13mmol，5M)。再搅拌30min后，将反应混合物减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(DCM:MeOH＝1:0至10:1，Rf＝0.4)纯化，得到为白色固体的化合物37j(46mg)。ESI-MS：m/z＝1023.5和1023.4[M+H]+
步骤10：制备化合物37k
将化合物37j(46mg，0.045mmol)的溶液用MeNH2/EtOH(5mL)在40℃下处理2.5hr。将反应混合物减压浓缩，得到残余物。该残余物通过反相制备型HPLC(柱：Waters XbridgePrep OBD C18 5μm 150×30，条件：A：水(10mM NH4HCO3)-ACN:MeCN，开始B：5％，结束B：25％；流速(mL/min)25)纯化，得到为白色固体的化合物37k(12mg)。
ESI-MS：m/z＝796.3[M+H]+
步骤11：制备化合物48，钠盐
将苯甲醚(15.9mg，0.14mmol)的TFA(0.113mL，57.3mmol)溶液冷却至0℃，并加入到化合物37k(12mg，0.015mmol)中。在0℃下搅拌2.5hr后，通过用氮气流在0℃下吹扫除去TFA。将剩余的反应混合物在0℃下用甲胺的33％EtOH溶液(0.113mL)猝灭。将该反应混合物蒸发至干，并在DCM和水(20mL×3/10mL)之间分配。将水层冻干得到白色残余物，该白色残余物通过反相制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD 5μm C18 150×30，条件：A：水(10mM NH4HCO3)-ACN，开始B：5％，结束B：35％；流速(mL/min)25)纯化，得到为白色固体的化合物47，铵盐(7.1mg，0.010mmol)。1H NMR(400MHz,D2O)δ8.59(s,1H),8.47(s,1H),8.16(s,1H),6.76(d,J＝16.8Hz,1H),6.28(d,J＝8.4Hz,1H),6.07(br d,J＝3.6Hz,1H),5.94(brd,J＝4.4Hz,1H),5.63(br dd,J＝3.2,8.8Hz,1H),5.58(br dd,J＝4.4,8.8Hz,1H),5.49(br d,J＝5.6Hz,1H),4.93(br d,J＝8.8Hz,1H),4.67(br s,1H),4.39(br d,J＝15.6Hz,1H),4.13-4.07(m,1H),3.96(br d,J＝14.4Hz,1H)；31P NMR(162MHz,D2O)δppm-2.21(s,1P)；19F NMR(376MHz,D2O)δ200.3-200.4(m,1F)；ESI-MS：m/z＝676.0[M+H]+。
转化成钠盐
将Dowex 50W×8，200-400(3mL，H形式)加入到烧杯中并用去离子水(30mL)洗涤。然后向树脂中加入15％H2SO4的去离子水溶液，将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(30mL)。将树脂转移到具有15％H2SO4的去离子水溶液的柱中，并用15％H2SO4(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为中性。将树脂转移回烧杯中，加入15％NaOH的去离子水溶液，并且将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(1x)。将树脂转移到柱中并用15％NaOH的水溶液(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为中性。将化合物47，铵盐(7.1mg)溶于去离子水/MeCN(3mL/3mL)中，加入到柱顶部中，并用去离子水洗脱。将适当的级分合并在一起并冻干，得到为白色固体的化合物47，钠盐(3.4mg)。
1H NMR(400MHz,D2O)δppm 8.57(s,1H),8.44(s,1H),8.13(s,1H),6.73(d,J＝16.6Hz,1H),6.25(d,J＝8.8Hz,1H),6.04(br d,J＝3.6Hz,1H),5.91(br d,J＝4.0Hz,1H),5.60(br dd,J＝3.6,9.2Hz,1H),5.55(br dd,J＝4.0,9.2Hz,1H),5.49-5.42(m,1H),4.90(br d,J＝9.2Hz,1H),4.67-4.64(m,1H),4.39-4.33(m,1H),4.08(br d,J＝14.4Hz,1H),3.93(br d,J＝14.8Hz,1H)；31P NMR(162MHz,D2O)δppm-2.26(s,1P)；19F NMR(376MHz,D2O)δppm-200.34-200.47(m,1F)；ESI-MS：m/z＝676.1[M+H]+。
实施例38
化合物(*R)46A和化合物(*S)46B
步骤1：制备化合物38a
注意：在使用前，THF在Na/二苯甲酮上新鲜蒸馏，并且CH3CN在CaH2上新鲜蒸馏。向化合物35j(300mg，0.39mmol，通过冻干干燥)的THF(6mL)溶液中加入
MS(粉末，800mg)和1H-四唑溶液(8.64mL，0.45M，其通过以下方式制备：将945mg四唑(通过冻干干燥)溶于30mL无水CH3CN中，接着加入1g
MS，并且然后在使用前在N2下搅拌1hr)；在用N2吹扫反应烧瓶若干次后，在20min内经由注射器滴加2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(210.9mg，0.7mmol)的THF(2mL)溶液，然后在室温下搅拌1.5hr。然后加入DDTT(638.53mg，3.11mmol)并将混合物再搅拌30min。将反应混合物减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(DCM:MeOH＝1:0至10:1)纯化，得到为白色固体的化合物38a(372mg)。ESI-MS：m/z 903.2和903.4[M+H]+。
步骤2：制备化合物(*R)46A，钠盐和化合物46B(*S)，钠盐
将化合物38a(372mg)用MeNH2/EtOH(15mL)在40℃下处理2.5hr。在40℃下搅拌1h后，将反应混合物浓缩，得到与另一批料合并的白色固体。将固体溶于水(40mL)中并用DCM(20mL×4)洗涤。冻干水层并通过反相制备型HPLC(Xtimate C18 5μm 150mm×25mm，条件：A：水(10mM NH4HCO3)-ACN:MeCN，开始B：12％，结束B：42％；流速(mL/min)25)纯化，得到白色固体化合物(*R)46A，铵盐，为白色固体(18.5mg)，以及化合物(*S)46B，铵盐，为白色固体(35.2mg)。
化合物(*R)46A，铵盐：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.69(s,1H),8.30(s,1H),7,89(s,1H),6.46(d,J＝16.0Hz,1H),5.95(s,1H),5.48(br d,J＝2.8Hz,1H),5.35(br d,J＝2.8Hz,1H),5.10(br dd,J＝3.2,9.4Hz,1H),5.04(br dd,J＝3.2,9.2Hz,1H),4.67(br s,1H),4.47(br d,J＝9.2Hz,1H),4.36(br d,J＝12.8Hz,1H),4.19(brt,J＝10.8Hz,1H),3.85(br d,J＝13.6Hz,1H)3.62(br d,J＝3.6Hz,1H),3.02(br d,J＝10.4Hz,1H),1.89(brt,J＝10.8Hz,1H)；31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm 50.5(br s,1P)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δppm-199.86(td,J＝19.6,49.6Hz,IF)
化合物(*S)46B，铵盐：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.48(s,1H),8.30(s,1H),7.88(s,1H),6.45(d,J＝17.2Hz,1H),5.90(s,1H),5.58(br d,J＝3.2Hz,1H),5.45(br d,J＝3.2Hz,1H),5.17(br d,J＝6.4Hz,1H),5.12(br d,J＝9.2Hz,1H),4.75(br s,1H),4.54-4.45(m,2H),4.25-4.16(m,1H),3.78(br d,J＝13.6Hz,1H),3.38(br dd,J＝11.2,13.6Hz,1H),3.01(br d,J＝10.4Hz,1H),1.93(br t,J＝10.8Hz,1H)；31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm 52.02(br s,1P)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δppm-199.30-199.90(m,1F)。
转化成化合物(*R)46A，钠盐
将Dowex 50W×8，200-400(4mL，H形式)加入到烧杯中并用去离子水(30mL)洗涤。然后向树脂中加入15％H2SO4的去离子水溶液，将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(15mL)。将树脂转移到具有15％H2SO4的去离子水溶液的柱中，并用15％H2SO4(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为中性。将树脂转移回烧杯中，加入15％NaOH的去离子水溶液，并且将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(1x)。将树脂转移到柱中并用15％NaOH的水溶液(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为中性。将化合物(*R)46A，铵盐(18.5mg)溶于去离子水/MeCN(8mL/2mL)中，加入到柱顶部中，并用去离子水洗脱。将适当的级分合并在一起并冻干，得到为白色固体的化合物(*R)46A，钠盐(13.7mg)。1H NMR(400MHz,D2O)δppm8.27(br s,1H),7.97(br s,1H),7.72(br s,1H),6.35(br d,J＝16.4Hz,1H),5.77(br s,1H),5.70-5.49(m,1H),5.26(br s,2H),4.59-4.44(m,2H),4.36(br d,J＝11.2Hz,1H),4.05(br s,1H),3.60-3.38(m,2H),2.71(br s,1H),2.28(br s,1H)；31P NMR(162MHz,D2O)δ54.42(br s,1P)；19F NMR(376MHz,D2O)δ-200.41(br s,1F)；ESI-MS：m/z 676.0[M+H]+
转化成化合物(*S)46B，钠盐
将Dowex 50W×8，200-400(10mL，H形式)加入到烧杯中并用去离子水(30mL)洗涤。然后向树脂中加入15％H2SO4的去离子水溶液，将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(25mL)。将树脂转移到具有15％H2SO4的去离子水溶液的柱中，并用15％H2SO4(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为中性。将树脂转移回烧杯中，加入15％NaOH的去离子水溶液，并且将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(1x)。将树脂转移到柱中并用15％NaOH的水溶液(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为中性。将化合物(*S)46B，铵盐(35.2mg)溶于去离子水/MeCN(10mL/8mL)中，加入到柱顶部中，并用去离子水洗脱。
将适当的级分合并在一起并冻干，得到为白色固体的化合物(*S)46B，钠盐(33.1mg)。1H NMR(400MHz,D2O)δppm 8.72(br s,1H),8.73-8.68(m,1H),8.58(br s,1H),8.14(br s,1H),6.81(br d,J＝17.6Hz,1H),6.26(br s,1H),6.07-5.89(m,1H),5.67-5.53(m,2H),4.94(br d,J＝6.8Hz,2H),4.82(br s,1H),4.42(br d,J＝12.4Hz,1H),4.09(brd,J＝14.4Hz,1H),4.14-4.04(m,1H)3.82-3.69(m,1H),3.23(br s,1H),2.58(br s,1H),2.37(br s,1H)；31P NMR(162MHz,D2O)δppm 53.58(br s,1P)；19F NMR(376MHz,D2O)δppm-199.69(br s,1F)；ESI-MS：m/z＝676.0[M+H]+。
实施例39
化合物35
步骤1：制备化合物39b
将咪唑(2.36g，34.6mmol)和TBSCl(3.48g，23.1mmol)相继加入到化合物20b[CAS170871-87-1](7.8g，11.5mmol)的无水DCM(101mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌直至完全转化(约3h)，之后将反应溶液用DCM稀释，并且用水洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到为白色泡沫的粗制化合物39b(9.2g，粗制)。
1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm:0.20(s,3H),0.24(s,3H),0.96(s,9H),3.60(d,J＝5.5Hz,2H),3.97(d,J＝2.1Hz,6H),4.69(m,1H),5.4(dd,J＝54.4,4.1Hz,1H),5.63(dq,J＝21.3,3.9Hz,1H),6.35(d,J＝7.6Hz,1H),7.10(m,4H),7.47(q,J＝7.3Hz,1H),7.52(m,6H),7.66(d,J＝7.6Hz,2H),7.80(t,J＝7.6Hz,2H),7.89(t,J＝7.6Hz,1H),8.29(d,J＝6.9Hz,2H),8.83(s,1H)8.89(s,1H),11.49(s,1H)；ESI-MS：m/z 790.4[M+H]+。
步骤2：制备化合物39c
向粗制化合物39b(9.2g)的DCM(250mL)溶液中加入水(1mL，57.6mmol)和DCA(38mL的10％DCM溶液，46.1mmol)，在室温下搅拌直至完全转化(约1h)。将反应混合物用吡啶(4.6mL，57.6mmol)和甲醇(5mL)猝灭，并且随后减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色泡沫的化合物39c(4.4g)。1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm:-0.26(s,3H),-0.06(s,3H),0.72(s,9H),3.72(m,2H),4.36(dt,J＝26.6,4.0Hz,1H),5.10(m,2H),5.22(d,J＝4.1Hz,1H),5.39(s,1H),6.13(d,J＝7.6Hz,1H),7.55(t,J＝7.6Hz,2H),7.65(t,J＝7.6Hz,1H),8.05(d,J＝6.9Hz,2H),8,77(d,J＝9.6Hz,2H),11.24(s,1H)；ESI-MS：m/z 488.2[M+H]+。
步骤3：制备化合物39d
在0℃下，将甲磺酰氯(1.04mL，13.55mmol)滴加到化合物39c(4.4g，9.03mmol)的无水吡啶(44mL)溶液中。将反应混合物在0℃下搅拌直至完全转化(约3h)，之后将其用甲醇猝灭并且减压浓缩。将获得的残余物溶于EtOAc中，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到甲磺酰化产物。将粗产物溶于无水DMF(50mL)中，然后加入叠氮化钠(4.51g，69.38mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌5h，之后将其冷却至室温，用EtOAc稀释，并且用饱和NaHCO3水溶液和水洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-2％MeOH的DCM溶液)进行纯化，得到为白色泡沫的化合物39d(4g，收率：86.5％)。1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm:-0.25(s,3H),-0.02(s,3H),0.72(s,9H),3.65(dd,J＝13.1,4.1Hz,1H),3.92(q,J＝6.9Hz,1H),4.50(dq,J＝25.3,3.7Hz,1H),5.20(dd,J＝53.7,4.8Hz,1H),5.35(dq,J＝22.0,3.9Hz,1H),6.15(d,J＝7.6Hz,1H),7.56(t,J＝7.9Hz,2H),7.65(t,J＝7.2Hz,1H),8.05(d,J＝6.9Hz,2H),8.80(d,J＝2.4Hz,2H),11.24(s,1H)；ESI-MS：m/z 513.2[M+H]+。
步骤4：制备化合物39e
将化合物39d(4g，7.8mmol)的MeOH(40mL)溶液在室温下于大气压下在Pd/C(碳载量20％，0.4g)上进行氢化。将反应混合物在硅藻土上过滤，用MeOH冲洗硅藻土。减压蒸发滤液，得到为白色泡沫的化合物胺。将粗产物(通过与无水甲苯共蒸发干燥)溶于DCM(59mL)中，然后加入4-硝基苯酚(3.2g，24mmol)、Et3N(6.5mL，46.8mmol)和活化的分子筛。在N2下将所得混合物冷却至-78℃，之后滴加4-硝基苯基氯硫酸盐(5.5g，23.4mmol)的DCM(20mL)溶液，继续搅拌直至完全转化(约3h)。将反应混合物升温至室温并用饱和NaHCO3水溶液和水洗涤。将有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-50％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到为黄色泡沫的化合物39e(3.5g，收率：65％)。1HNMR(500MHz DMSO-d6)δppm:-0.28(d,J＝15.8Hz,3H),-0.05(d,J＝6.2Hz,3H),0.71(s,9H),3.66(t,J＝5.9Hz,2H),4.42(d,J＝26.2Hz,1H),5.29(m,2H),6.14(t,J＝7.2Hz,1H),7.55(m,4H),7.65(t,J＝7.2Hz,1H),8.05(d,J＝7.6Hz,2H),8.30(m,2H),8.69(s,1H),8.76(d,J＝7.6Hz,1H),9.22(t,J＝5.9Hz,1H),11.27(s,1H)；ESI-MS：m/z 688.29[M+H]+。
步骤5：制备化合物39g
向反应烧瓶中装入DMAP(2.59g，21.2mmol)、无水DCM(60mL)和活化的
分子筛。将所得混合物在室温下于惰性气氛下搅拌至少2h。同时，将化合物39f(2.05g，4.2mmol)的溶液和氨基磺酸盐39e(3.5g，5.1mmol)的溶液(各自溶于无水DCM(2×60mL)中)在活化的
分子筛上干燥(约2h)。将两种溶液(分别为化合物39f和氨基磺酸盐39e)相继转移到反应烧瓶中。将所得反应混合物搅拌24h。通过过滤除去分子筛，并且用二氯甲烷充分冲洗。将滤液用饱和NaHCO3水溶液和饱和NH4Cl水溶液洗涤。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为灰白色泡沫的化合物39g(2.9g，收率：66％)。
1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm:-0.26(s,3H),-0.05(t,J＝11.0Hz,9H),0.71(s,9H),0.77(s,9H),3.56(m,2H),3.85(dd,J＝12.4,3.4Hz,1H),3.98(d,J＝9.6Hz,1H),4.33(t,J＝3.4Hz,1H),4.46(dt,J＝25.2,6.0Hz,1H),5.18(d,J＝4.1Hz,1H),5.31(m,2H),5.55(dq,J＝17.9,4.1Hz,1H),5.98(dd,J＝51.0,2.8Hz,1H),6.15(d,J＝7.6Hz,1H),6.51(dd,J＝18.9,1.7Hz,1H),7.55(t,J＝7.6Hz,4H),7.65(t,J＝7.6Hz,2H),8.04(dd,J＝7.9,1.7Hz,4H),8.59(s,1H),8.75(d,J＝8.3Hz,3H),8.86(t,J＝6.2Hz,1H),11.26(d,J＝4.1Hz,2H)；ESI-MS：m/z 1036.5[M+H]+。
步骤6：制备化合物34a
向化合物39g(2.9g，2.8mmol)的吡啶(55mL)溶液中加入Et3N(19.5mL，140mmol)和Et3N.3HF(4.5mL，28mmol)，在45℃下搅拌直至完全转化(约5h)。将反应混合物冷却至室温，加入异丙氧基三甲基硅烷(19.8mL，112mmol)并继续搅拌过夜。将减压浓缩后获得的残余物悬浮于DCM中，加入几滴甲醇。将悬浮液搅拌20min，之后通过过滤收集沉淀物并在高真空下干燥，得到为灰白色粉末的化合物34a(1.8g，收率：79％)。1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm:3.51(dd,J＝46.1,13.8Hz,2H),3.65(td,J＝9.0,3.4Hz,1H),3.81(q,J＝4.1Hz,1H),4.34(t,J＝3.12Hz,1H),4.41(dt,J＝25.9,6.0Hz,1H),5.21(m,2H),5.40(m,2H),5.92(dt,J＝51.2,3.8Hz,1H),6.11(d,J＝8.3Hz,1H),6.15(d,J＝6.2Hz,1H),6.50(dd,J＝17.2,2.8Hz,1H),7.55(t,J＝7.6Hz,4H),7.65(t,J＝7.6Hz,2H),8.04(dd,J＝7.6,2.1Hz,4H),8.70(s,1H),8.76(d,J＝7.6Hz,3H),8.85(s,1H),11.27(s,2H)；ESI-MS：m/z 808.3[M+H]+。
步骤7：制备化合物39h
在N2下，将化合物34a(890mg，1.10mmol)和1H-四唑(12.86mL的3％-4％MeCN溶液，使用前在
分子筛上干燥)的无水THF(50mL)溶液用活化的
分子筛预处理2h。立刻加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(365mg，1.21mmol)。将反应混合物振摇1h，之后加入额外份的2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(166mg，0.55mmol)。继续振摇过夜。需要加入额外量的2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(33mg，0.11mmol)，然后再振摇一天以获得完全转化。加入tBuOOH(341μL的5.5M癸烷溶液，1.87mmol)，并且继续振摇1h。通过过滤除去分子筛，并且用DCM充分冲洗。将滤液用盐水、饱和NaHCO3和盐水分别洗涤，用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物39h(168mg，收率：16.5％)。ESI-MS：m/z923.4[M+H]+。
步骤8：制备化合物35，钠盐
将化合物39h(168mg，0.182mmol)在33％甲胺的乙醇溶液(10mL)中在室温下搅拌2h。将反应混合物减压浓缩。将粗产物在MeCN中研磨，然后通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，5μm，250mm×30mm；流动相：0.25％碳酸氢铵水溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化，得到化合物35，铵盐。通过在填充有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的转化，得到冻干后为白色蓬松固体的化合物35，钠盐(25mg，收率：20％)。1HNMR(600MHz,DMSO-d6,67℃)δppm 10.60(br s,1H),8.32(br s,1H),8.27(s,1H),8.14(s,1H),8.13(s,1H),7.32(br s,2H),7.14(br s,2H),6.29(dd,J＝15.4,4.4Hz,1H),6.05(d,J＝8.8Hz,1H),6.00-6.14(m,1H),5.48-5.59(m,2H),5.27(dd,J＝53.0,3.6Hz,1H),4.46-4.53(m,1H),4.42-4.46(m,1H),4.08(dt,J＝11.7,7.5Hz,1H),3.73(ddd,J＝11.7,6.0,3.3Hz,1H),3.69(br d,J＝14.7Hz,1H),3.49(br d,J＝14.4Hz,1H)；31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm-1.33(s,1P)；ESI-MS：m/z 660.3[M+H]+。
实施例40
化合物53
步骤1：制备化合物40b
向反应烧瓶中装入DMAP(1.43g，11.7mmol)、无水DCM(9mL)和活化的
分子筛。将所得混合物在室温下于惰性气氛下搅拌3h。同时，将5'-O-DMTr-2'-F-脱氧肌苷[CAS51424-83-1](1.47g，2.57mmol)的溶液和氨基磺酸盐40a(2.0g，2.34mmol)的溶液(各自溶于无水DCM(2×9mL)中)在活化的
分子筛上干燥(约3h)。将两种溶液相继转移到反应烧瓶中。将所得反应混合物在40℃下搅拌过夜。通过过滤除去分子筛并用DCM充分冲洗。用饱和NaHCO3水溶液洗涤滤液，然后用DCM萃取水相。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：1％-3％MeOH的DCM溶液)纯化，得到纯化合物40b(2.01g，65.9％)。ESI-MS：m/z 1303.8[M+H]+。
步骤2：制备化合物40c
将化合物40b(2.0g，1.53mol)溶于DCM(77mL)中，向其中加入水(140μL，7.65mmol)和DCA(490μL，5.98mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2h，之后加入吡啶(620μL，7.65mmol)和一些MeOH。将所得混合物在减压下部分浓缩，并转移到用于纯化的硅胶柱(梯度洗脱：0％-18％MeOH的DCM溶液)，得到化合物40c(0.92g，86％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 12.48(br s,1H),12.08(br s,1H),11.60(br s,1H),8.63(br t,J＝5.6Hz,1H),8.34(s,1H),8.23(s,1H),8.09(d,J＝3.2Hz,1H),6.31(dd,J＝16.4,2.9Hz,1H),5.58-5.88(m,3H),5.37(br t,J＝5.0Hz,1H),5.18-5.30(m,1H),4.65(q,J＝5.9Hz,1H),4.23-4.33(m,1H),4.05(q,J＝5.0Hz,1H),3.84(t,J＝4.1Hz,1H),3.70-3.81(m,1H),3.54-3.68(m,1H),3.42(s,3H),3.20-3.40(m,2H),2.75(spt,J＝6.9Hz,1H),1.12(br d,J＝7.0Hz,3H),1.11(br d,J＝7.0Hz,3H)；ESI-MS：m/z 699.4[M+H]+。
步骤3：制备化合物40d
将化合物40c(200mg，0.286mmol)和1H-四唑(5.09mLmL的0.45MMeCN溶液，2.29mmol)的无水MeCN(8mL)溶液用
分子筛在N2下处理1h，之后在10min内滴加2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(173mg，0.57mmol)的无水MeCN(1.0mL)溶液(注意：在使用前，THF在Na/二苯甲酮上新鲜蒸馏，并且MeCN在CaH2上新鲜蒸馏)。将所得反应混合物在室温下搅拌2h。加入tBuOOH溶液(300μL，1.5mmol)，并且再继续搅拌30min。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的化合物40d(206mg，71％)。ESI-MS：m/z 814.4[M+H]+。
步骤4：制备化合物53，钠盐
将化合物40d(206mg，0.253mmol)在33％甲胺的乙醇溶液(10mL)中在40℃下搅拌3h。将反应混合物减压浓缩。将残余物溶于水中，用DCM洗涤并冻干。该粗产物通过制备型反相HPLC(固定相：Xbridge OBD C18，5μm，150mm×30mm；流动相：10mM碳酸氢铵水溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化。通过在填充有Dowex 50W×8 Na离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到冻干后为白色蓬松固体的化合物53，钠盐(13mg，8％)。1HNMR(400MHz,D2O)δppm 8.39(s,1H),8.18(s,1H),8.06(s,1H),6.63(d,J＝19.1Hz,1H),6.12(d,J＝8.5Hz,1H),6.01-5.84(m,1H),5.66(ddd,J＝4.1,8.7,19.1Hz,1H),5.54-5.44(m,1H),4.75-4.69(m,1H),4.66(s,1H),4.51(br d,J＝11.5Hz,1H),4.26(d,J＝4.8Hz,1H),4.24-4.17(m,1H),4.03-3.94(m,1H),3.91-3.81(m,1H),3.77(s,3H)；31P NMR(162MHz,D2O)δppm-2.020(s,1P)；
19F NMR(376.5MHz,D2O)δppm-198.634(s,1F)；ESI-MS：m/z＝691.2[M+H]+。
实施例41
化合物54
步骤1：制备化合物41b
将Selectfluor(34.6g，97.7mmol)和AcOH(100mL)加入到4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶[CAS3680-69-1](41a，10.0g，65.1mmol)的无水MeCN(500mL)溶液中，将混合物在70℃下搅拌直至完全转化(约16h)。冷却至室温后，将反应混合物减压浓缩，并且与无水甲苯共蒸发。将所得固体溶于DCM/EtOAc(1:1)溶剂混合物中，将获得的溶液通过硅藻土垫过滤，将硅藻土垫充分洗涤。将合并的滤液减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-1％MeOH的DCM溶液)进行纯化，得到为灰白色固体的化合物41b(5.2g，收率：47％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 12.49(s,1H),8.63(s,1H),7.73(t,J＝2.8Hz,1H)；ESI-MS：m/z 169.8[M-H]-。
步骤2：制备化合物41c
将双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(BSA，3.15mL，12.8mmol)加入到化合物41b(2.0g，11.6mmol)在无水MeCN(80mL)中的悬浮液中。搅拌10min后，相继加入1,2-二-O-乙酰基-3-O-甲基-5-O-苯甲酰基-D-呋喃核糖([10300-21-7]，4.53g，12.8mmol)和三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(TMSOTf，2.34mL，12.8mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15min，并且然后转移到80℃的预热油浴中，继续搅拌90min。冷却至室温后，将反应混合物用EtOAc稀释，并依次用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。
通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-10％EtOAc的己烷溶液)进行纯化，得到为灰白色粉末的化合物41c(1.6g，收率：30％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.66(s,1H),7.99(d,J＝1.4Hz,1H),7.95(d,J＝7.6Hz,2H),7.65-7.71(m,1H),7.47-7.56(m,2H),6.42(d,J＝4.1Hz,1H),5.78(t,J＝4.8Hz,1H),4.65(dd,J＝12.2,3.5Hz,1H),4.51(dd,J＝12.2,5.1Hz,1H),4.41-4.45(m,1H),4.35-4.40(m,1H),3.41(s,3H),2.09(s,3H)；ESI-MS：m/z464.0[M+H]+。
步骤3：制备化合物41d
将2M NaOH水溶液(16mL)加入到化合物41c(1.6g，3.4mmol)的二氧杂环己烷(16mL)溶液中。将反应混合物在110℃下搅拌直至完全转化(约3h)，之后将其冷却至室温并用1M HCl水溶液中和。减压浓缩后获得的残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-7％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为灰白色粉末的化合物41d(0.32g，收率：45％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 12.11(br s,1H),7.92(s,1H),7.34(d,J＝2.1Hz,1H),6.04(dd,J＝6.2,1.4Hz,1H),5.42(d,J＝6.2Hz,1H),5.08(br t,J＝5.2Hz,1H),4.33-4.43(m,1H),3.96(q,J＝3.8Hz,1H),3.77(dd,J＝5.0,3.4Hz,1H),3.56-3.65(m,1H),3.49-3.55(m,1H),3.39(s,3H)；ESI-MS：m/z 299.9[M+H]+。
步骤4：制备化合物41e
向化合物41d(0.51g，1.7mmol)的无水吡啶(8mL)溶液中加入DMAP(0.1g，0.8mmol)和DMTrCl(0.92g，2.7mmol)(分批)，在室温下搅拌16h。用甲醇(5mL)猝灭反应混合物，并减压浓缩。将获得的残余物溶于EtOAc中并用水洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-2％MeOH的DCM溶液)进行纯化，得到为灰白色泡沫的化合物41e(0.75g，收率：74％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 12.13(br s,1H),7.93(s,1H),7.35-7.41(m,2H),7.26-7.32(m,2H),7.22-7.26(m,5H),7.18(d,J＝2.1Hz,1H),6.83-6.90(m,4H),6.06(dd,J＝4.8,1.4Hz,1H),5.54(d,J＝6.2Hz,1H),4.47(q,J＝5.4Hz,1H),4.05(q,J＝4.4Hz,1H),3.87(t,J＝5.2Hz,1H),3.74(s,6H),3.33(s,3H),3.20(d,J＝4.1Hz,2H)；ESI-MS：m/z 602.3[M+H]+。
步骤5：制备化合物41f
将化合物41e(1.2g，2.03mmol)、氨基磺酸盐17a(2.1g，2.43mmol)和DMAP(1.2g，10.14mmol)各自分别溶于无水DCM(3×30.0mL)中。通过在N2下搅拌至少2h，用
活化的分子筛干燥每种溶液。向DMAP溶液中分别加入化合物41e的DCM溶液和氨基磺酸盐17a的DCM溶液。将所得反应混合物搅拌36h。
通过过滤除去分子筛并用二氯甲烷充分冲洗。将滤液用饱和NaHCO3水溶液、盐水和饱和NH4Cl水溶液洗涤。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-1％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物41f(1.3g，收率：49％)。ESI-MS：m/z 1338.77[M+H]+。
步骤6：制备化合物41g
向化合物41f(1.3g，0.9mmol)的DCM(36.5mL)溶液中加入DCA(3.2mL的10％DCM溶液，3.8mmol)和水(90μL，4.8mmol)，在室温下搅拌直至完全脱保护。通过加入吡啶(0.4mL，4.8mmol)和几滴甲醇来猝灭反应混合物。将减压浓缩后获得的残余物悬浮于二氯甲烷中，过滤并干燥，得到为灰白色粉末的化合物41g(0.56g，收率：78％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 12.18(br s,1H),11.26(br s,1H),8.75(s,1H),8.62(s,1H),8.49(br t,J＝5.9Hz,1H),8.06(d,J＝7.6Hz,2H),7.93(br d,J＝2.1Hz,1H),7.63-7.70(m,1H),7.53-7.60(m,2H),7.34(s,1H),6.37(br d,J＝19.3Hz,1H),6.31(br d,J＝5.5Hz,1H),5.86(br s,1H),5.59(br d,J＝53.7Hz,1H),5.25(br s,1H),5.20(br t,J＝5.5Hz,1H),4.59(br d,J＝18.6Hz,1H),4.03-4.15(m,2H),3.98(m,J＝2.1Hz,1H),3.60-3.67(m,1H),3.53-3.59(m,1H),3.38(s,3H),3.11-3.27(m,2H)；ESI-MS：m/z 734.2[M+H]+。
步骤7：制备化合物41h
将化合物41g(100mg，0.136mmol)的无水MeCN/DMF(4mL，1:3)溶液用
分子筛在N2下处理20min，之后加入1H-四唑(2.42mL的0.45M MeCN溶液，1.09mmol)和2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)-亚磷酰二胺(82mg，0.27mmol)的无水MeCN(1.0mL)溶液(注意：在使用前，MeCN在CaH2上新鲜蒸馏)。将所得反应混合物在室温下搅拌1.5h。加入tBuOOH溶液(126μL，0.69mmol)，并且再继续搅拌30min。将反应混合物用DCM稀释，然后通过硅藻土垫过滤并浓缩。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物41h(50mg，纯度77％)。
ESI-MS：m/z 849.3[M+H]+。
步骤8：制备化合物54，钠盐
将上述化合物41h在30％甲胺的乙醇溶液(5mL)中在室温下搅拌3h。将反应混合物减压浓缩。将残余物溶于水中，用DCM洗涤并冻干。该粗产物通过制备型反相HPLC(固定相：Xbridge OBD C18，5μm，150mm×30mm；流动相：10mM碳酸氢铵水溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化。通过在填充有Dowex 50W×8 Na离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到冻干后为白色蓬松固体的化合物54，钠盐(24mg，收率：25％，来自41g)。1HNMR(400MHz,D2O)δppm 8.22(br s,1H),7.94(s,1H),7.40(s,1H),7.30(br s,1H),6.46-6.34(m,2H),5.39(br dd,J＝4.6,8.1Hz,2H),5.23(br s,1H),5.08-4.93(m,1H),4.63(brs,1H),4.48(br d,J＝8.6Hz,1H),4.41(br d,J＝3.9Hz,1H),4.32-4.25(m,1H),4.25-4.18(m,1H),3.77(br d,J＝11.7Hz,1H),3.59(s,3H),3.54(br d,J＝13.0Hz,1H)；19F NMR(376MHz,D2O)δppm-164.506(s,1F),-197.262(s,1F)；31P NMR(162MHz,D2O)δppm-1.850(s,1P)；ESI-MS：m/z 692.1[M+H]+。
实施例42
化合物5
步骤1：制备化合物42b
将化合物4h(520mg，0.76mmol)、化合物42a(372mg，0.76mmol)和
MS(1g)在THF(20mL)中的混合物在N2下于20℃下搅拌1h。然后加入DMAP(466mg，3.81mmol)。在N2下于20℃下搅拌所得黄色悬浮液17h。将反应混合物过滤并减压浓缩(<40℃)，得到残余物，该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：石油醚/乙酸乙酯为100/0至0/100，然后二氯甲烷/甲醇为100/0至100/10)纯化，得到为淡黄色固体的化合物42b(460mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.69(s,1H)8.40(s,1H)8.08-8.13(m,3H)7.64-7.71(m,1H)7.54-7.62(m,2H)6.28(dd,J＝19.07,1.47Hz,1H)5.94(d,J＝8.07Hz,1H)5.57(d,J＝4.40Hz,1H)5.44(d,J＝2.93Hz,1H)4.92-5.00(m,1H)4.61(dd,J＝8.07,5.38Hz,1H)4.22(br dd,J＝8.19,2.81Hz,2H)4.13-4.17(m,1H)4.06(br dd,J＝7.09,3.18Hz,1H)3,84-3.91(m,2H)3,77-3.82(m,1H)3.37(s,3H)2.69(dt,J＝13.69,6.85Hz,1H)1.20(t,J＝6.60Hz,6H)0.87-0.96(m,17H)0.17-0.21(m,6H)0.08(d,J＝11.00Hz,6H)；ESI-MS：m/z＝1031.2[M+H]+。
步骤2：制备化合物42c
将化合物42b(660mg，0.64mmol)、三乙胺(648.2mg，6.4mmol)和三乙胺三氟化氢(516.3mg，3.20mmol)的吡啶(20mL)溶液在10℃下搅拌17小时。将反应混合物过滤并在30℃下减压浓缩，得到粗制油状物，该粗制油状物通过反相制备型HPLC(柱：Agela DuraShell 5μm，150mm×25mm；流动相：A：水(10mM NH4HCO3)-B：MeCN；梯度洗脱：A(93％):B(7％)至A(63％)和B(37％)，经过9min；流速25ml/min)纯化。将纯级分收集并冻干至干，得到为白色固体的化合物42c(230mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.08(s,1H)11.63(s,1H)11.26(s,1H)8.69-8.81(m,2H)8.56(s,1H)8.18(s,1H)8.05(d,J＝7.28Hz,2H)7.62-7.71(m,1H)7.50,-7.61(m,2H)6.38(d,J＝19.83Hz,1H)5.99(d,J＝6.53Hz,1H)5.84(d,J＝8.78Hz,1H)5.46-5.68(m,1H)5.15(t,J＝5.27Hz,1H)4.59-4.79(m,2H)4.21-4.32(m,1H)4.13-4.19(m,1H)4.03-4.11(m,2H)3.85(d,J＝5.52Hz,1H)3.55-3.63(m,1H)3.45-3.53(m,1H)3.19(s,3H)2.75(quin,J＝6.71Hz,1H)1.11(dd,J＝6.78,2.76Hz,5H)1.08-1.14(m,1H)；ESI-MS：m/z＝801.9[M+H]+。
步骤3：制备化合物42d
向化合物42c(310mg，0.38mmol)的CH3CN/THF(1:1，v/v，18mL)溶液中加入
分子筛(1g)和1H-四唑的CH3CN溶液(7mL，3.15mmol，0.45M CH3CN溶液)。将混合物在25℃下搅拌0.5h后，将2-氰乙基N,N,N',N'-四异丙基亚磷酰二胺(190mg，0.63mmol)的CH3CN溶液加入到该混合物中。将混合物在30℃下搅拌2h后，将1H-四唑的CH3CN溶液(1.8mL，0.81mmol，0.45M CH3CN溶液)加入到该混合物中。将混合物在30℃下搅拌0.5h后，将TBHP(0.4mL，2mmol，5M癸烷溶液)加入到反应物中。将混合物在30℃下搅拌2h后，将反应物过滤并减压浓缩，得到粗制化合物42d(850mg)；ESI-MS：m/z＝917.1[M+H]+
步骤3：制备化合物5，铵盐
在RT下将化合物42d(1000mg，粗制)用甲胺的EtOH(33％)溶液(10mL)处理。将反应混合物在20℃下搅拌2h后，过滤并减压浓缩该混合物。将残余物溶于水(30mL)中，并用乙酸乙酯(10mL×2)萃取。将水相冻干至干，得到残余物，该残余物通过反相制备型HPLC(柱：Agela DuraShell 5μm，150mm×25mm；流动相：A：水(0.04％NH3-H2O+10mMNH4HCO3)-B：MeCN；梯度洗脱：A(100％):B(0％)至A(90％)和B(10％)，经过10min；流速25ml/min)纯化。将纯级分收集并冻干至干，得到化合物5，铵盐(111mg)。
1H NMR(400MHz,D2O)δppm 7.98(s,1H)7.56-7.70(m,2H)6.20(br d,J＝14.92Hz,1H)5.71(br d,J＝9.05Hz,1H)5.18-5.40(m,2H)4.98(br s,1H)4.85(br d,J＝4.89Hz,1H)4.55(br d,J＝10.27Hz,1H)4.44-4.52(m,1H)4.39(br s,1H)4.19(br d,J＝11.25Hz,1H)4.05-4.16(m,2H)4.01(br d,J＝4.40Hz,1H)3.34-3.43(m,1H)3.35(s,3H)；31P NMR(162MHz,D2O))δppm-2.37--0.06(m,1P)；19F NMR(376MHz,D2O)δppm-202.54(br s,1F)；ESI-MS：m/z＝689.9[M+H]+。
实施例43
化合物20
步骤1：制备化合物43c
将5-[3,5-双(三氟甲基)苯基]四唑(9.65mL的0.25M MeCN溶液，2.41mmol，使用前在分子筛上干燥的溶液)加入到L-苯甲酰基-2',3'-二脱氧-3'-[(三苯基甲基)氨基]-腺苷43a[CAS 195375-63-4](720mg，1.21mmol)的MeCN(8mL)溶液中。加入活化的分子筛，并将所得混合物在N2下搅拌1h。接下来，将在活化的分子筛上干燥的5'-O-(4,4-二甲氧基三苯甲基)-N2-异丁酰基-3'-O-甲基鸟苷-2'-(2-氰乙基-N,N-二异丙基-亚磷酰胺)43b[CAS179479-04-0](2201mg，2.53mmol)的MeCN(25mL)溶液转移到上述混合物中。将所得反应溶液在室温下搅拌1h，之后加入tBuOOH(1.10mL的5.5M癸烷溶液，6.03mmol)，再继续搅拌一小时。过滤并减压浓缩反应混合物。加入水和乙酸乙酯，分离出水相并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机相用无水Na2SO4干燥并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-100％EtOAc的石油醚溶液，之后是0％-10％MeOH的EtOAc溶液)进行纯化，得到化合物43c(2.3g)。
ESI-MS：m/z 1381.4[M+H]+。
步骤2：制备化合物43d
向上述化合物43e(1.3g，不纯)的MeCN(15mL)溶液中加入AcOH(80％水溶液，15mL)和三乙基硅烷(4.8mL，30.22mmol)，在室温下搅拌过夜。减压浓缩反应混合物。该残余物通过制备型反相HPLC(固定相：Xtimate C18，5μm，150mm×25mm；流动相：10mM碳酸氢铵水溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化，得到化合物43d及其氰乙基脱保护类似物的产物混合物(260mg)。ESI-MS：m/z 838.2[M+H]+和784.2[M+H]+(氰乙基脱保护的化合物)。
步骤3：制备化合物43e
将化合物43d及其氰乙基脱保护类似物(400mg，～0.49mmol)的混合物溶于吡啶/DCM(1:1，mL)中，然后加入Et3N(403mg，3.98mmol)、4-硝基苯酚(346mg，2.49mmol)和活化的
分子筛。将所得溶液冷却至-78℃并在惰性气氛下搅拌1h。向其中加入4-硝基苯基氯硫酸盐(592mg，2.49mmol)的DCM(5mL)溶液，该溶液在使用前在活化的
分子筛上干燥(1h)。将反应混合物在-78℃下搅拌2h，之后将其升温至室温并再搅拌1.5h。减压除去溶剂。加入水和乙酸乙酯，分离出水相并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-100％EtOAc的石油醚溶液，之后是0％-10％MeOH的EtOAc)进行纯化，得到不纯的化合物43e，该不纯的化合物原样使用而无需任何进一步纯化。。ESI-MS：m/z 899.3[M+H]+。
步骤4：制备化合物43f
将叔丁胺(200μL，1.88mmol)加入到化合物43e(100mg，不纯)的乙醇(1mL)溶液。将反应混合物减压浓缩，并且该粗产物通过制备型反相HPLC(固定相：Agela Durashell C18，5μm，150mm×25mm，流动相：10mM碳酸氢氨水溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化，得到纯化合物43f(7mg)。
ESI-MS：m/z 846.2[M+H]+。
步骤5：制备化合物20
将化合物43f(6mg，7.09μmol)在33％甲胺的乙醇溶液(1mL)中在室温下搅拌1h。将反应混合物减压浓缩并将残余物在MeCN中研磨，得到化合物20(2mg，收率：33％)。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 8.37(s,1H),8.17(s,1B),7.89(s,1H),7.29(br s,2H),6.53(brs,2H),6.36(dd,J＝9.7,5.4Hz,1H),5.76(d,J＝9.1Hz,1H),5.08(td,J＝9.7,4.3Hz,1H),4.73(brd,J＝5.1Hz,1H),4.37(d,J＝11.2Hz,1H),4.29(s,1H),4.16-4.22(m,2H),4.15(brdd,J＝11.8,2.1Hz,1H),3.94(d,J＝4.1Hz,1H),3.52-3.57(m,1H),3.50(s,3H),3.12-3.19(m,1H),2.44-2.49(m,1H)；31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm 0.97(s,1P)；ESI-MS：m/z 672.3[M+H]+。
实施例44
化合物(*R)10A
步骤1：制备化合物44a
将化合物6g(95mg，0.117mmol)与无水甲苯:乙腈(1:1，v/v，3×30mL)的混合物共蒸发，然后溶于无水THF(10mL)中，加入
分子筛粉末(0.3g)和0.45M四唑的CH3CN溶液(2.0mL，0.936mmol)，并且将所得异质混合物用氩气鼓泡4min。将该混合物在RT下搅拌10min后，在RT下在30min内加入2-氰乙基N,N-二异丙基-氯代亚磷酰胺的CH3CN(57mg，0.18mmol，溶于3.0mLCH3CN中)溶液。将反应物搅拌1.5hr后，通过过滤除去分子筛，并用THF(15mL)洗涤。滤液直接用于下一步骤中。加入DDTT溶液(119mg，0.585mmol，溶于5mL吡啶中)。将反应混合物在RT下搅拌30min后，将混合物用EtOAc(30mL)稀释并用饱和NaHCO3水溶液(1×20mL)和盐水(1×20mL)洗涤。将水层用EtOAc(1×40mL)反萃取。将合并的有机层蒸发至干，所得粗料通过硅胶快速柱色谱法(MeOH的DCM溶液：0％至15％，v/v)纯化，以生成化合物44a(58mg)；ESI-MS：m/z 943[M+H]+。
步骤2：制备化合物(*R)10A，钠盐
将化合物44a(58mg，0.06mmol)的MeNH2(33％EtOH溶液，10mL)溶液在40℃下搅拌2hr 30min，减压浓缩。
将所得粗固体用DCM(15mL)洗涤，将沉淀物滤出并通过反相制备型HPLC(柱：Synergi 4μm，Hydro RP，250mm×4.6mm，流动相：缓冲液A：50mM三乙基乙酸铵的水溶液；缓冲液B：50mM三乙基乙酸铵的CH3CN溶液；梯度：0％-40％的B，经过30min，流速：24mL/min)纯化，得到为TEAA盐的化合物(*R)10A(15.9mg)。通过在填充有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到
步骤3：制备化合物(*R)10A，钠盐
将Dowex 50W×8，200-400(5mL，H形式)加入到烧杯中，并且用去离子水(30mL)洗涤，向树脂中加入15％H2SO4的去离子水溶液；将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(30mL)。将树脂转移到具有15％H2SO4的去离子水溶液的柱中，并且用15％H2SO4(至少4CV[柱体积])洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至中性pH(试纸pH)。将树脂转移回烧杯中，加入15％NaOH的去离子水溶液，并且将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(1x)。将树脂转移到柱中并用15％NaOH的水溶液(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至中性pH。将化合物16(15.9mg)溶于最小量的去离子水中，加入到柱顶部中，并且用去离子水洗脱。将适当的级分合并在一起(UV)并冻干，得到化合物(*R)10A，钠盐(15.1mg)。
1H NMR(400MHz,D2O):δ8.33(s,1H),7.99(s,1H),7.71(s,1H),6.30-6.42(m,2H),6.22(d,J＝8.0Hz,1H),5.43(s,1H),5.27(s,1H),4.84-4.98(m,1H),4.60-4.70(m,1H),4.56(d,J＝3.6Hz,1H),4.32(d,J＝8.4Hz,1H),4.12(d,J＝8.0Hz,1H),4.01-4.11(m,1H),3.81(d,J＝11.6Hz,1H),3.69(s,3H),3.55(d,J＝11.6Hz,1H)；31P NMR(162MHz,D2O):δ54.07(s,1P)；ESI-MS：m/z:714.7[M-1]-。
实施例45
化合物17
制备化合物45b
将化合物45a(200mg，0.216mmol)与无水甲苯:MeCN(1:1，v/v，3×30mL)的混合物共蒸发，然后溶于无水THF(20mL)中。加入
分子筛粉末(0.8g)和0.45M四唑的MeCN(3.8mL，1.72mmol)溶液。将所得异质混合物用氩气鼓泡4min。将该混合物在RT下搅拌10min后，在RT下在30min内向其中加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(105mg，0.345mmol)的MeCN(3mL)溶液。将反应物搅拌90min后，滤出，然后用THF(15mL)洗涤。将所得混合物(MS：m/z 1007[M+H]+)直接用于下一步骤中。向其中加入0.5M碘(在THF:水:Py＝8:1:1，v/v/v中)直至颜色持续。在RT下搅拌30min后，将反应混合物用EtOAc(30mL)稀释，并且用饱和Na2S2O3水溶液猝灭过量的碘(直至脱色)。分离各相；将有机相用饱和NaHCO3水溶液(1×20mL)、饱和NaCl水溶液(1×20mL)洗涤。将水相用EtOAc(1×20mL)反萃取。将合并的有机相蒸发至干，将所得粗料通过硅胶快速柱色谱法(0％-15％MeOH的DCM溶液，v/v)纯化，得到45b(135mg)。ESI-MS：m/z 1023[M+H]+。
制备化合物45c
使化合物45b(135mg)在RT下经受33％甲胺的乙醇溶液(10mL)。在40℃下搅拌2hr后，减压浓缩反应混合物。用DCM(15mL)洗涤所得粗固体并将沉淀物滤出，得到为固体的45c(98mg)。ESI-MS：m/z 796[M+H]+。
制备化合物17，钠盐
使化合物45c(98mg)在0℃下经受80％TEA水溶液(4mL)。在0℃下搅拌1hr后，将反应混合物真空浓缩，得到为无色油状物的粗产物。该粗产物通过反相制备型HPLC(柱：Synergi 4μm，Hydro RP，250mm×30mm，流动相：缓冲液A：50mM三乙基乙酸铵的水溶液；缓冲液B：50mM三乙基乙酸铵的CH3CN溶液，梯度：0％-40％的B，经过30min，流速24mL/min)纯化，得到为TEAA盐的化合物17(24.2mg)。ESI-MS：m/z:674[M-1]-。
制备钠盐
将Dowex 50W×8，200-400(5mL，H形式)加入到烧杯中并用去离子水(30mL)洗涤。然后向树脂中加入15％H2SO4的去离子水溶液，将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(30mL)。将树脂转移到具有15％H2SO4的去离子水溶液的柱中，并用15％H2SO4(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为中性。将树脂转移回烧杯中，加入15％NaOH的去离子水溶液，并且将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(1x)。将树脂转移到柱中并用15％NaOH的水溶液(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为中性。
将化合物17，TEAA盐(1:1，v/v)溶于最小量的去离子水和MeCN(1:1，v/v)中，加入到柱顶部中，并且用去离子水洗脱。
将适当的级分合并在一起并冻干，得到化合物17，钠盐(22.9mg)。
1H NMR(400MHz,D2O)δppm 8.31(s,1H),7.95(s,1H),7.76(s,1H),6.74(s,1H),6.15-6.25(m,2H),5.45-5.55(m,1H),5.25(d,J＝4.8Hz,0.5H),5.13(d,J＝4.8Hz,0.5H),4.75-4.90(m,1H)4.65(s,1H),4.35-4.45(m,1H),4.33(d,J＝9.6Hz,1H)4.10-4.25(m,2H),3.55-3.70(dd,J＝3.2,13.2Hz,1H),3.38(d,J＝12Hz,1H)。31P NMR(162MHz,D2O)δ-1.895ppm(s,1P)；19F NMR(379MHz,D2O)δ-196.91ppm(宽峰，1F)；ESI-MS：m/z:658.5[M-1]-。
实施例46
化合物18
制备化合物46b
将化合物46a(110mg，0.123mmol)与无水甲苯:乙腈(1:1，v/v，3×30mL)的混合物共蒸发，然后溶于无水THF(14mL)中。向其中加入
分子筛粉末(0.5g)和0.45M四唑的MeCN(2.1mL，0.989mmol)溶液。将所得异质混合物用氩气鼓泡4min。将该混合物在RT下搅拌10min后，在RT下在30min内向其中加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(60mg，0.197mmol)的MeCN(3.0mL)溶液。在RT下搅拌90min后，将反应混合物滤出，然后用THF(15mL)洗涤。将所得混合物(MS：m/z 989[M+H]+)直接用于下一步骤中。向其中加入0.5M碘(在THF:水:Py＝8:1:1，v/v/v中)直至颜色持续。在RT下搅拌30min后，将反应混合物用EtOAc(30mL)稀释，并且用饱和Na2S2O3水溶液猝灭过量的碘(直至脱色)。分离各相；用饱和Na2S2O3水溶液洗涤有机相(直至脱色)。分离各相；将有机相用饱和NaHCO3水溶液(1×20mL)、饱和NaCl水溶液(1×20mL)洗涤。将水相用EtOAc(1×20mL)反萃取。将合并的有机相蒸发至干，将所得粗料通过硅胶快速柱色谱法(0％-15％MeOH的二氯甲烷溶液，v/v)纯化，得到化合物46b(77mg)。ESI-MS：m/z 1005.8[M+H]+。
制备化合物46c
使化合物46b(77mg)在RT下经受33％甲胺的乙醇溶液(6mL)。在40℃下搅拌2hr后，减压浓缩反应混合物。用DCM(15mL)洗涤所得粗固体并将沉淀物滤出，得到化合物46c(43mg)。ESI-MS：m/z 778[M+H]+。
制备化合物18，钠盐
使化合物46c(43mg)经受80％TEA水溶液(2mL)。在RT下搅拌1hr后，将反应混合物真空浓缩，得到为无色油状物的残余物。该残余物通过反相制备型HPLC(柱：Synergi 4μm，Hydro RP，250mm×30mm，流动相：缓冲液A：50mM三乙基乙酸铵的水溶液；缓冲液B：50mM三乙基乙酸铵的CH3CN溶液，梯度：0％-40％的B，经过30min，流速24mL/min)纯化，得到为TEAA盐的化合物18(6.4mg)。
将Dowex 50W×8，200-400(5mL，H形式)加入到烧杯中并用去离子水(30mL)洗涤。然后向树脂中加入15％H2SO4的去离子水溶液，将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(30mL)。将树脂转移到具有15％H2SO4的去离子水溶液的柱中，并用15％H2SO4(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为中性。将树脂转移回烧杯中，加入15％NaOH的去离子水溶液，并且将混合物轻轻搅拌5min，然后滗出(1x)。将树脂转移到柱中并用15％NaOH的水溶液(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子水洗涤直至其为中性。将化合物18(6.4mg)TEAA盐溶于最小量的去离子水和MeCN(1:1，v/v)中，加入到柱顶部中，并且用去离子水洗脱。将适当的级分合并在一起并冻干，得到化合物18，钠盐(5.9mg)。
1H NMR(400MHz,D2O)δppm 7.93(s,1H),7.84(s,1H),7.21(s,1H),6.32(dd,J＝2.8；4.8Hz,1H),6.05(d,J＝8.4Hz,1H),5.92-6.01(m,1H),5.15-5.25(m,1H),4.61(d,J＝12Hz,1H),4.30-4.36(m,1H),3.90-4.20(m,3H),3.50-3.58(dd,J＝3.2,13.2Hz,1H),3.20-3,33(dd,J＝2,13.2Hz,1H),2.60-2.75(m,2H)。31P NMR(162MHz,D2O)δppm-0.838(s,1P)；ESI-MS：m/z:656.8[M-1]-。
实施例47
化合物(*R)21A
步骤1：制备化合物47b
在0℃下，将氯三甲基硅烷(2.08mL，16.38mmol)滴加到化合物47a[CAS 174171-97-2](1g，3.28mmol)的无水吡啶(60mL)溶液中。将反应混合物在0℃下搅拌2h，之后滴加苯甲酰氯(1.89mL，16.38mmol)。在室温下继续搅拌3h。将反应溶液冷却至0℃，加入水(30mL)，然后加入氨水(30mL的25％溶液)，在0℃下继续搅拌90min。反应溶液用EtOAc萃取，将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：50％-100％EtOAc的石油醚溶液)进行纯化，得到为白色固体的化合物47b(1.1g，收率：82％)。
1H NMR(400MHz,DMSO–d6)δppm 11.17(s,1H),8.75(s,1H),8.64(s,1H),8.05(d,J＝7.3Hz,2H),7.61-7.68(m,1H),7.46-7.59(m,2H),5,02-5.09(m,1H),4.90-5.01(m,1H),4.83(t,J＝5.3Hz,1H),4.59(dd,J＝7.2,3.9Hz,1H),3.53(br t,J＝5.0Hz,2H),2.17-2.41(m,3H),1.50(s,3H),1.25(s,3H)；ES1-MS：m/z 410.2[M+H]+。
步骤2：制备化合物47c
在冰冷却下，将DMAP(448mg，3.66mmol)和甲苯磺酰氯(2.79g，14.65mmol)加入到化合物47b(3g，7.32mmol)和Et3N(3.07mL，21.98mmol)的DCM(6mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌4h。混合物用水猝灭并且用DCM萃取。将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并减压蒸发，得到甲苯磺酸化产物。将粗产物溶于DMF(15mL)中，然后加入叠氮化钠(1.88g，28.91mmol)，将所得反应混合物在35℃下搅拌16h。接着，将反应混合物冷却至室温，用饱和Na2CO3水溶液稀释，并且用EtOAc萃取。将有机层分离，用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并减压蒸发。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-25％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到为黄色固体的化合物47c(2.1g，收率：61％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.25(s,3H),1.51(s,3H),2.24-2.48(m,3H),3.53(dd,J＝12.3,6.3Hz,1H),3.60(dd,J＝12.3,5.3Hz,1H),4.02(q,J＝7.2Hz,1H),4.58(dd,J＝7.2,4.6Hz,1H),4.93-5.03(m,1H),5.03-5.11(m,1H),7.51-7.59(m,2H),7.60-7.71(m,1H),8.04(d,J＝7.5Hz,2H),8,64(s,1H),8.75(s,1H),11.19(br s,1H)；
ESI-MS：m/z 435.1[M+H]+。
步骤3：制备化合物47d
将TFA(100mL，75％水溶液)加入到化合物47c(3.47g，7.99mmol)的DCM(20mL)溶液中，将所得混合物在室温下搅拌1h。将反应物减压浓缩，将获得的残余物溶于EtOAc中并用饱和K2CO3水溶液洗涤，将水层分离并用EtOAc萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，并真空蒸发，得到为白色固体的化合物47d(3.25g，粗制)，该化合物原样用于下一步骤中。
ESI-MS：m/z 395.0[M+H]+。
步骤4：制备化合物47e
将化合物47d(3.25g)溶于DMF(22mL)中，然后加入咪唑(1.57g，23.0mmol)和TBSCl(1.39g，9.20mmol)。以相同的规模平行进行第二反应。将两种反应混合物在室温下搅拌过夜，之后加入EtOAc和盐水。分离有机相，并用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发，得到粗制区域异构混合物。通过制备型反相HPLC(固定相：Phenomenex Synergi，10μm Max-RP，250mm×50mm；流动相：水(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)进行分离，得到作为第一洗脱异构体的化合物47e(2.0g，收率：24％)和作为第二洗脱异构体的3'-TBS-保护的区域异构体(47ea，结构未示出，2.5g，收率：31％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.13(s,1H),8.72(s,1H),8.61(s,1H),8.04(brd,J＝7.5Hz,2H),7.61-7.68(m,1H),7.51-7.58(m,2H),4.91-5.01(m,1H),4.78(d,J＝5.3Hz,1H),4.52(dd,J＝8.5,5.5Hz,1H),3.79-3.86(m,1H),3.54-3.64(m,2H),2.34(dt,J＝12.6,8.5Hz,1H),2.16-2.28(m,1H),1.94-2.04(m,1H),0.64(s,9H),-0.16(s,3H),-0.38(s,3H)；
ESI-MS：m/z 509.2[M+H]+。
步骤5：制备化合物47f
将DMTrCl(394mg，1.16mmol)、AgNO3(492mg，2.90mmol)和2,4,6-三甲基吡啶(351mg，2.90mmol)加入到化合物47e(300mg，0.59mmol)的DCM(6mL)溶液中，将所得混合物在室温下搅拌过夜。将反应物用盐水猝灭，将水层分离并用DCM萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并真空蒸发。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-100％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到为黄色固体的化合物47f(430mg，收率：90％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm-0.68(s,3H),-0.22(s,3H),0.67-0.75(m,9H),0.80-0.89(m,1H),1.54-1.66(m,1H),2.00-2.08(m,1H),2.29-2.39(m,1H),3.21(dd,J＝12.0,5.9Hz,1H),0.00(br dd,J＝3.9,1.0Hz,1H),3.74(s,3H),3.75(s,3H),4.58(dd,J＝9.3,3.9Hz,1H),5.37(q,J＝9.3Hz,1H),6.83-6.96(m,4H),7.20-7.27(m,1H),7.28-7.35(m,2H),7.36-7.44(m,4H),7.50-7.60(m,4H),7.61-7.67(m,1H),8.05(br d,J＝7.6Hz,2H),8.62-8.69(m,1H),8.71(s,1H),11.12(br s,1H)；
ESI-MS：m/z 811.3[M+H]+。
步骤6：制备化合物47g
将化合物47f(3.23g，3.98mmol)在EtOAc(150mL)中的悬浮液在Pd/C(10％碳载量，3.0g)的存在下于30℃下在H2(15psi)下搅拌过夜。通过在硅藻土上过滤除去催化剂，将滤液减压浓缩，得到化合物胺，该胺立即原样用于下一步骤中。将粗产物溶于DCM(110mL)中，然后加入4-硝基苯酚(3.53g，25.38mmol)、Et3N(2.12mL，15.23mmol)和活化的分子筛。在N2气氛下将所得混合物冷却至-78℃，之后滴加4-硝基苯基氯硫酸盐(3.62g，15.23mmol)的DCM(20mL)溶液，使反应溶液升温至室温并搅拌过夜。将混合物用DCM稀释，并通过硅藻土垫过滤。将滤液用饱和NaHCO3水溶液洗涤，用Na2SO4干燥，并且浓缩。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-50％EtOAc的石油醚溶液)纯化，得到化合物47g(2.6g，收率：67％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm-0.62(s,3H),-0.30(s,3H),0.65(s,9H),1.92-2.11＝1(m,2H),2.44(br dd,J＝9.9,3.5Hz,1H),2.85-3.01(m,1H),3.04-3.15(m,1H),3.45(brd,J＝3.9Hz,1H),3.72(s,3H),3.72(s,3H),4.68(br dd,J＝9.5,3.9Hz,1H),5.47(q,J＝9.5Hz,1H),6.87(s,3H),7.19-7.25(m,1H),7.26-7.34(m,2H),7.35-7.48(m,5H),7.51-7.60(m,3H),7.62-7.70(m,1H),8.05(br d,J＝7.3Hz,2H),8.33(d,J＝9.0Hz,2H),8.67(d,J＝7.1Hz,1H),8.80(br t,J＝5.7Hz,1H),11.15(s,1H)；ESI-MS：m/z 986.6[M+H]+。
步骤7：制备化合物47h
将活化的分子筛加入到化合物47g(1g，1.07mmol)和5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-N2-异丁酰基-3'-O-甲基-D-鸟苷[CAS 103285-33-2](717mg，1.01mmol)的无水THF(25mL)溶液中，将所得混合物在氮气下于室温下搅拌2h。接着，加入DMAP(619mg，5.07mmol)的THF(10mL)溶液以引发反应，该溶液通过在活化的分子筛的存在下搅拌2h而预干燥。将所得反应混合物在50℃下搅拌过夜。通过过滤除去分子筛，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤滤液。将水相用DCM萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物47h(875mg，收率：54％)。ESI-MS：m/z 759.2[M+2H]/2+。
步骤8：制备化合物47i
将化合物47h(875mg，0.56mmol)的DCM(40mL)溶液在水(0.05mL，2.81mmol)的存在下用DCA(0.19mL，2.25mmol)处理1h。通过加入吡啶(0.23mL，2.81mmol)的甲醇(2mL)溶液猝灭反应混合物，然后减压浓缩。将所得残余物溶于DCM中，将获得的溶液用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的化合物47i(465mg，收率：91％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.11(br s,1H),11.58(br s,1H),11.09(br s,1H),8.70(s,1H),8.57(s,1H),8.44(br s,1H),8.29(s,1H),8.05(d,J＝7.3Hz,2H),7.59-7.70(m,1H),7.47-7.58(m,2H),6.10(d,J＝6.5Hz,1H),5.41(dd,J＝6.5,5.3Hz,1H),5.29(t,J＝5.3Hz,1H),4.91(q,J＝9.3Hz,1H),4.54(br d,J＝3.7Hz,1H),4.48(dd,J＝8.7,5.5Hz,1H),4.22(dd,J＝4.9,2.4Hz,1H),4.15(q,J＝3.3Hz,1H),3.76(br s,1H),3.54-3.73(m,2H),3.49(s,3H),2.97(dd,J＝13.4,7.7Hz,1H),2.81-2.90(m,1H),2.75(spt,J＝6.8Hz,1H),2.18-2.29(m,1H),2.02-2.15(m,1H),1.74-1.87(m,1H),1.11(d,J＝6.5Hz,3H),1.08(d,J＝6.9Hz,3H),0.63(s,9H),-0.17(s,3H),-0.41(s,3H)；ESI-MS：m/z 912.7[M+H]+。
步骤9：制备化合物47j
将化合物47i(280mg，0.31mmol)和1H-四唑(3.58mL的3％-4％MeCN溶液，在活化的
分子筛上预干燥)的MeCN/THF(1:1，44mL，在活化的
分子筛上预干燥)溶液在N2下用活化的
分子筛处理2h，之后立刻加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(97μL，0.31mmol)。将所得反应混合物在室温下振摇3h。加入PADS(0.19g，0.61mmol)并再继续振摇1小时。通过过滤除去分子筛并用二氯甲烷冲洗。将合并的滤液用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为单个非对映体的化合物47j(91mg，收率：26％)。
31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm 66.65(s,1P)；
ESI-MS：m/z 1043.7[M+H]+。
步骤10：制备化合物(*R)21A，钠盐
将化合物47j(86mg，0.077mmol)在33％甲胺的乙醇溶液(4mL)中于45℃下搅拌直至完全转化(约1h)，之后将反应溶液冷却至室温，并且减压浓缩。将残余物溶于吡啶(4mL)中，然后加入Et3N(320μL，2.32mmol)和三乙胺三氟化氢(200μL，1.16mmol)。将反应混合物在45℃下搅拌18h。加入异丙氧基三甲基硅烷(0.82mL，4.65mmol)，并且在室温下继续搅拌18h。将减压浓缩后获得的残余物在无水乙腈中研磨，获得的沉淀物通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，10μm，150mm×50mm，流动相：0.25％碳酸氢铵水溶液(A)-MeOH(B)；梯度洗脱)进一步纯化，得到为单一非对映体的化合物(*R)21A。通过在填充有阳离子Na离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到为白色蓬松固体的化合物(*R)21A，钠盐(27mg，收率：46％)。
1H NMR(400MHz,D2O)δppm 8.36(s,1H),8,18(s,1H),7.87(s,1H),6.10(d,J＝8.1Hz,1H),5.68(dd,J＝8.3,4.3Hz,1H),4.83-4.95(m,2H),4.67-4.72(m,1H),4.61(m,J＝2.0Hz,1H),4.39(d,J＝4.5Hz,1H),4.27(ddd,J＝11.8,6.5,2.4Hz,1H),4.18(ddd,J＝12.2,4.5,1.6Hz,1H),3.55(s,3H),3.36(br d,J＝4.8Hz,2H),2.55-2.65(m,2H),1.92-2.03(m,1H)；
31P NMR(162MHz,D2O)δppm 54.55(s,1P)；
ESI-MS：m/z 702.4[M+H]+。
实施例48
化合物(*R)43A
步骤1：制备化合物48b
将TIPDSCl2(765μL，2.39mmol)加入到化合物48a[CAS 1834500-50-3](0.6g，1.71mmol)的吡啶(25mL)溶液中。将反应混合物搅拌2h，之后将其倒入饱和NaHCO3水溶液中并用EtOAc萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥并减压浓缩。残余产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-100％EtOAc的石油醚溶液，之后是0％-10％MeOH的EtOAc)纯化，得到为白色固体的化合物48b(550mg，收率：54％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.06(br s,1H),11.56(br s,1H),8.05(s,1H),4.85(d,J＝7.3Hz,1H),4.51-4.64(m,1H),4.29(q,J＝7.2Hz,1H),4.14-4.23(m,1H),3.90(dd,J＝11.5,3.0Hz,1H),3.76(dd,J＝11.6,8.1Hz,1H),2.78(spt,J＝6.7Hz,1H),2.10-2.29(m,2H),1.42-1.58(m,1H),1.13(d,J＝7.0Hz,6H),0.99-1.10(m,28H)；ESI-MS：m/z 594.4[M+H]+。
步骤2：制备化合物48c
将活化的分子筛加入到化合物48b(350mg，0.59mmol)和氨基磺酸盐17a(745mg，0.85mmol)的无水THF(20mL)溶液中，将所得混合物在氮气下于室温下搅拌2h。接着，加入DMAP(347mg，2.84mmol)的THF(5mL)溶液以引发反应，该溶液通过在活化的分子筛的存在下搅拌而预干燥。将反应混合物在50℃下搅拌过夜。通过过滤除去分子筛，并且用饱和NaHCO3水溶液洗涤滤液。用DCM萃取水相。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。在通过硅胶柱色谱法进行两轮纯化(第1轮：梯度洗脱：0％-2％MeOH的DCM溶液，第2轮：0％-100％EtOAc的石油醚溶液，然后是0％-10％MeOH的EtOAc溶液)后，获得为黄色固体的化合物48c(401mg，收率：51％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.00(s,1H),11.44(s,1H),11.25(s,1H),8.59(s,1H),8.51(s,1H),8.20(br t,J＝5.4Hz,1H),8.03(d,J＝7.3Hz,2H),8.00(s,1H),7.62-7.70(m,1H),7.55(t,J＝7.5Hz,2H),7.46(d,J＝7.5Hz,2H),7.28-7.39(m,6H),7.18-7.26(m,1H),6.84-6.92(m,4H),6.30(dd,J＝17.9,3.0Hz,1H),4.98-5.04(m,1H),4.84-4.95(m,1H),4.56-4.72(m,1H),4.55(br s,1H),4.39(t,J＝5.5Hz,1H),3.73-3.93(m,3H),3.71(s,3H),3.70(s,3H),2.88-3.00(m,1H),2.73(spt,J＝6.8Hz,1H),2.57-2.68(m,1H),2.20-2.34(m,2H),1.54-1.66(m,1H),1.09(d,J＝6.8Hz,6H),0.86-1.07(m,28H)；ESI-MS：m/z1329.8[M+2H]/2+
步骤3：制备化合物48d
将化合物48c(1.3g，0.98mmol)的无水MeOH(55mL，在分子筛上干燥)溶液用HCl(0.19mL的2M Et2O溶液，13.7mmol)处理4h。将反应混合物通过加入饱和NaHCO3水溶液猝灭，然后用DCM萃取。将有机相用无水MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物48d(670mg，收率：65％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.01-1.08(m,28H),1.12(d,J＝6.8Hz,3H),1.67-1.75(m,1H),2.20-2.32(m,1H),2.43-2.54(m,1H),2.62(br d,J＝14.3Hz,1H),2.79(spt,J＝6.9Hz,1H),2.85-2.96(m,1H),3.51(s,3H),3.52-3.57(m,2H),3.75-3.83(m,1H),4.39-4.48(m,1H),4.50(d,J＝4.2Hz,1H),5.02(q,J＝9.6Hz,1H),5.09(t,J＝4.5Hz,1H),5.25(dd,J＝9.8,4.1Hz,1H),5.52(ddd,J＝52.4,4.4,2.6Hz,1H),5.68(br d,J＝5.9Hz,1H),6.30(dd,J＝18.5,2.6Hz,1H),7.56(t,J＝7.7Hz,2H),7.61-7.69(m,1H),8.02-8.07(m,2H),8.11(br s,1H),8.14(s,1H),8.57(s,1H),8.71(s,1H),11.22(br s,1H),11.33(br s,1H),12.09(br s,1H)；ESI-MS：m/z 1060.7[M+H]+
步骤4：制备化合物48e
将化合物48d(640mg，0.60mmol)和1H-四唑(7.05mL的3％-4％MeCN溶液，使用前在
分子筛上干燥)的无水THF(47.5mL，使用前在
分子筛上干燥)溶液在N2下用活化的
分子筛处理2h，之后一次性加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(200mg，0.66mmol)。将反应混合物振摇3h。加入附加量的2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(73mg，0.24mmol)并继续振摇过夜。加入吡啶(19.5mL)和PADS(456mg，1.53mmol)，将反应混合物再振摇一小时。通过过滤除去分子筛并用二氯甲烷冲洗。用盐水洗涤滤液并减压浓缩。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％–15％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物48e(250mg，收率：35％)。ESI-MS：m/z 1138.7[M+H]+。
步骤5：制备化合物(*R)43A，钠盐
在室温下，将化合物48e(250mg，0.21mmol)在33％甲胺的乙醇溶液(10mL)中搅拌直至完全转化(约4h)，之后将反应溶液减压浓缩，并且在MeCN中研磨。将沉淀物溶于吡啶(1.7mL)和Et3N(1.5mL)的混合物中。
加入三乙胺三氟化氢(141μL，0.84mmol)，将所得反应混合物在室温下搅拌直至完全转化(注意：观察到所需产物的沉淀物)。加入异丙氧基三甲基硅烷(596μL，3.36mmol)并搅拌过夜。将减压浓缩后获得的残余物在MeCN中研磨，获得的沉淀物通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，10μm，150mm×50mm，流动相：0.25％碳酸氢铵(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)进一步纯化，得到作为单一P-差向异构体的化合物(*R)43A，铵盐。通过在填充有阳离子Na离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到为白色蓬松固体的化合物(*R)43A，钠盐(56mg，收率：37.5％)。1H NMR(600MHz,DMSO-d6,61℃)δppm 10.24(brs,1H),8.34(br s,1H),8.07(s,1H),7.87(s,1H),7.26(s,3H),6.34(dd,J＝18.6,2.2Hz,1H),6.23(br s,2H),5.69(d,J＝51.8Hz,1H),5.44-5.54(m,1H),5.39(dddd,J＝17.3,9.8,7.2,4.7Hz,1H),5.18(br s,1H),5.06(q,J＝9.8Hz,1H),4.30-4.38(m,1H),4.29(br s,1H),3.99-4.10(m,1H),3.86(dt,J＝11.0,4.0Hz,1H),3.63(dd,J＝13.2,4.5Hz,1H),3.36(dd,J＝13.6,3.7Hz,1H),2.45(dt,J＝13.5,10.2Hz,1H),2.20(m,J＝9.1,4.5Hz,1H),1.80-1.91(m,1H)；
3lP NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm 51.63(s,1P)；ES1-MS：m/z 690.1[M+H]+。
实施例49
化合物24
步骤1：制备化合物49a
向N2-异丁酰基-3'-O-甲基-鸟苷3j(50g，136mmol)的无水吡啶(500mL)溶液中加入咪唑(18.52g，272mmol)、三苯基膦(53.51g，204mmol)和碘(51.78g，204mmol)。在N2下于0℃至5℃下搅拌反应混合物3h。然后将溶剂蒸发至干，并将残余物溶于DCM(500mL)中。加入饱和NaHCO3水溶液，并且将混合物搅拌30min。将沉淀物过滤并且真空干燥，得到为白色粉末的化合物49a(56g，收率：86％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.94(br s,2H),8.24(s,1H),5.82(d,J＝6.5Hz,1H),5.69(br s,1H),4.84(dd,J＝5.0,6.5Hz,1H),4.10(m,1H),3.83(dd,J＝3.0,4.5Hz,1H),3.58(dd,J＝7.0,10.5Hz,1H),3.47(dd,J＝7.0,10.5Hz,1H),3.46(s,3H),2.74(spt,J＝6.5Hz,1H),1.12(d,J＝6.5Hz,6H)；ESI-MS：m/z 477.8[M+H]+。
步骤2：制备化合物3k
将叠氮化钠(22.48g，345.8mmol)加入到化合物49a(55g，115.2mmol)的无水DMF(100mL)溶液中，并且在N2下于85℃下搅拌4h。然后将反应溶液冷却至25℃，倒入水(2L)中，并且搅拌30min。通过过滤收集沉淀物并干燥，得到化合物3k(41g，收率：91％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.09(br s,1H),11.63(br s,1H),8.26(s,1H),5.84(d,J＝6.0Hz,1H),5.68(d,J＝5.0Hz,1H),4.76(m,1H),4.14(m,1H),3.84(t,J＝4.5Hz,1H),3.69(dd,J＝8.0,13.0Hz,1H),3.57(dd,J＝4.0,13.0Hz,1H),3.43(s,3H),2.77(spt,J＝7.0Hz,1H),1.13(d,J＝7.0Hz,6H)；ESI-MS：m/z 393.0[M+H]+。
步骤3：制备化合物49b
将化合物3k(40.00g，101.94mmol)、咪唑(10.41g，152.9mmol)和TBSCl(18.44g，122.4mmol)在无水DMF(100mL)中的混合物在N2下于25℃下搅拌17h。将反应溶液在55℃下减压蒸发至干。将残余物溶于EtOAc中并用水洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩滤液。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：20％-40％EtOAc的庚烷溶液)纯化，得到化合物49b(45g，收率：87％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 12.08(br s,1H),11.59(br s,1H),8.29(s,1H),5.87(d,J＝7.5Hz,1H),4.86(dd,J＝4.5,7.5Hz,1H),4.17(m,1H),3.84-3.79(m,2H),3.56(dd,J＝4.5,13.0Hz,1H),3.45(s,3H),2.77(spt,J＝7.0Hz 1H),1.12(d,J＝6.5Hz,6H),0.74(s,9H),-0.02(s,3H),-0.23(s,3H)；ESI-MS：m/z 507.6[M+H]+。
步骤4：制备化合物49c
将三苯基膦(31.06g，118.4mmol)加入到化合物49b(40g，78.95mmol)的THF(400mL)溶液中。将反应混合物在25℃下搅拌10min，之后在30min内滴加水(5.68g，315.2mmol)。加入TsOH(27.19g，157.9mmol)并继续搅拌10min。减压蒸发反应溶液。将残余物溶于DCM(400mL)中并用水(3×400mL)洗涤。用Na2SO4干燥有机相，过滤并蒸发。粗料通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：1％-5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为甲苯磺酸盐的化合物49c(35g，收率：68％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.38(br s,5H),8.33(s,1H),7.49(d,J＝8.5Hz,2H),7.12(d,J＝8.5Hz,2H),5.88(d,J＝7.0Hz,1H),4.85(dd,J＝5.0 and 7.0Hz,1H),4.20(m,1H),3.92(dd,J＝2.0 and 4.5Hz,1H),3.46(s,3H),3.31-3.17(m,2H),2.77(spt,J＝7.0Hz,1H),2.29(s,3H),1.12(d,J＝7.0Hz,6H),0.74(s,9H),-0.01(s,3H),-0.25(s,3H)；ESI-MS：m/z 481.6[M+H]+。
步骤5：制备化合物49d
将化合物49c(TsOH盐，34g，52.1mmol)、4-硝基苯酚(72.48g，521mmol)和Et3N(63.21g，625mmol)溶于DCM(800ml)中并冷却至-78℃。在30min内滴加4-硝基苯基氯硫酸盐(24.76g，104.2mmol)的DCM(50mL)溶液。将反应混合物升温至0℃，用DCM(800mL)稀释，并用1M NaH2PO4水溶液(3×800mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。粗料通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：1％-5％DCM的MTBE溶液)纯化，得到化合物49d(19g，收率：53.5％)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 9.49(br s,1H),8.32(d,J＝9.0Hz,2H),7.63(s,1H),7.47(d,J＝9.0Hz,2H),5.64(d,J＝8.0Hz,1H),4.95(dd,J＝5.5,8.0Hz,1H),4.38(s,1H),3.84(d,J＝5.5Hz,1H),3.64(s,2H),3.55(s,3H),2.51(spt,J＝7.0Hz,1H),1.18(d,J＝7.0Hz,3H),1.12(d,J＝7.0Hz,1H),0.77(s,9H),-0.10(s,3H),-0.31(s,3H)；ESI-MS：m/z682.7([M+H]+。
步骤6：制备化合物49e
将化合物49d(18g，26.4mmol)、N6-苯甲酰基-5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-2'-脱氧腺苷(34.56g，52.55mmol)和Et3N(13.32g，131.6mmol)分别溶于无水DCM(3×72mL)中。通过在N2下搅拌4h，将每种溶液在
活化的分子筛上干燥。接着，将Et3N溶液加入到N6-苯甲酰基-5'-O-(4,4’-二甲氧基三苯甲基)-2'-脱氧腺苷(49d1)溶液中，然后加入氨基磺酸盐49d溶液(经由注射器转移)。将所得反应混合物在25℃下搅拌17h。通过过滤除去分子筛，减压蒸发滤液。粗产物49e原样用于下一步骤中。
步骤7：制备化合物49f
将上述粗产物49e溶于THF(190mL)中并用TBAF(14.57g，55.73mmol)在25℃下处理16h。将反应混合物减压蒸发至干。将残余物溶于DCM中，用2％乙酸水溶液(3×190mL)洗涤并蒸发。将粗产物溶于DCM(190mL)中并用DCA(17.97g，139.4mmol)和水(2.5mL，138.7mmol)处理。将反应混合物在25℃下搅拌直至完全脱保护，并且然后用5％NaHCO3水溶液洗涤。使用MeOH和水作为洗脱液，通过反相色谱法纯化减压蒸发后获得的残余物，得到为灰白色固体的化合物49f(4g)。
1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm)12.07(s,1H),11.59(s,1H),11.19(s,1H),8.75(s,1H),8.68(s,1H),8.47(t,J＝5.5Hz,1H),8.26(s,1H),8.05(d,J＝7.5Hz,2H),7.65(t,J＝7.0Hz,1H),7.55(t,J＝7.5Hz,2H),6.51(t,J＝6.5Hz,1H),5.83(d,J＝6.0Hz,1H),5.64(d,J＝6.0Hz,1H),5.27-5.23(m,2H),4.67(q,J＝5.5Hz,1H),4.24(m,1H),4.08(m,1H),3.87(m,1H),3.60(m,2H),3.44(s,3H),3.44-3.28(m,2H),3.10(m,1H),2.76(m,2H),1.12(d,J＝3.0Hz,6H)；ESI-MS：m/z 784.1[M+H]+。
步骤8：制备化合物49g
将化合物49f(387mg，0.49mmol)的无水MeCN/THF(1:1，24mL，使用前在
分子筛上干燥)溶液用
分子筛处理2h，之后将其转移到反应烧瓶中，加入1H-四唑(4.32mL的3％-4％MeCN溶液，使用前在
分子筛上干燥)，然后加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(172μL，0.54mmol)。将所得反应混合物搅拌2h，之后加入附加量的2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(78μL，0.25mmol)，继续振摇过夜。加入tBuOOH(161μL的5.5M癸烷溶液，0.89mmol)，将反应溶液再搅拌90min，之后将其过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-7.5％MeOH的DCM溶液)进行纯化，得到化合物49g(158mg，收率：31％)。ESI-MS：m/z 899.5[M+H]+。
步骤9：制备化合物24，钠盐
在室温下，将化合物49g(158mg，0.155mmol)在33％甲胺的乙醇溶液(2mL)中搅拌直至完全转化(约2h)。减压浓缩反应混合物。将所得粗产物在MeCN中研磨，然后通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，10μm，150mm×50mm；流动相：0.25％碳酸氢铵水溶液(A)-MeOH(B)；梯度洗脱)纯化。通过在填充有阳离子Na离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到冻干后为白色蓬松固体的化合物24，钠盐。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,81℃)δppm 10.19(br s,1H),8.24(s,1H),8.17(s,1H),8.19(br s,1H),6.92(s,1H),6.33(dd,J＝9.4,5.6Hz,1H),6.19(br s,2H),5.74(d,J＝8.8Hz,1H),5.36-5.60(m,2H),4.05-4.24(m,3H),3.82(d,J＝4.4Hz,1H),3.53-3.63(m,1H),3.50(s,3H),3,26(br s,2H),3.01-3.11(m,1H，水峰以下的信号),2.87(dd,J＝14.1,5.5Hz,1H)；
31P NMR(126MHz,DMSO-d6)δppm 0.84(s,1P)；ESI-MS：m/z 672.3[M+H]+
实施例50
化合物(*R)19A和化合物(*S)19B
步骤1：制备化合物50a
将49f(1g，1.3mmol)和1H-四唑(0.2g，3.1mmol)的无水DCM(40mL)溶液用
分子筛预处理3h，然后一次性加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(0.4g，1.3mmol)。将所得反应混合物在35℃下搅拌1h。加入氢化黄原素(0.22g，1.43mmol)，并且继续搅拌30min。将反应溶液用DCM稀释并用盐水、5％NaHCO3水溶液和水洗涤。将有机相用Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压蒸发至干。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：5％-10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到600mg的化合物50a及其氰乙基脱保护产物的混合物。ESI-MS：m/z 916.0[M+H]+。
步骤2：制备化合物(*R)19A，钠盐和化合物(*S)19B，钠盐
在室温下，将上述产物50a在33％甲胺的乙醇溶液(13mL)中搅拌直至完全转化。减压浓缩反应混合物。该粗产物通过反相C18柱，使用MeOH和水作为流动相来纯化，得到P-差向异构体混合物(60mg，收率：7％，来自化合物50a)。两种异构体通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，10μm，250mm×50mm；流动相：0.25％碳酸氢铵水溶液(A)-MeOH(B)；梯度洗脱)分离，得到作为第一洗脱异构体的化合物(*R)19A，铵盐，和作为第二洗脱异构体的化合物(*S)19B，铵盐。通过在填充有阳离子Na离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化。
化合物(*R)19A，钠盐：
1H NMR(600MHz,DMSO-d6,81℃)δppm 9.17(br s,1H),8.24(s,1H),8.16(s,1H),7.96(br s,1H),6.97(s,2H),6.38(dd,J＝9.1,5.4Hz,1H),6.20(br s,2H),5.77(d,J＝8.9Hz,2H),5.51(br s,1H),4.44-4.51(m,1H),4.26(br s,1H),4.18(br s,1H),3.78(d,J＝4.6Hz,1H),3.56-3.62(m,1H),3.53(s,3H),3.20-3.50(m,3H),2.90(dd,J＝14.5,5.4Hz,1H)；ESI-MS：m/z 687.1[M+H]+。
化合物(*S)19B，钠盐：
1H NMR(600MHz,DMSO-d6,81℃)δppm 10.03(br s,1H),8.29(s,1H),8.18(s,1H),8.00(br s,1H),6.97(br s,2H),6.38(dd,J＝9.4,5.4Hz,1H),6.26(br s,2H),5.78(d,J＝8.9Hz,1H),5.50(br s,1H),5.48(br s,1H),4.22-4.34(m,1H),4.15(br s,1H),4.09(q,J＝11.2Hz,1H),3.85(d,J＝4.5Hz,1H),3.60-3.71(m,1H),3.55(s,3H),3.41-3.48(m,1H),3.34-3.40(m,1H),3.23-3,34(m,1H),2.87(dd,J＝14.5,5.4Hz,1H)；31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm 55.50(s,1P)；ESI-MS：m/z 678.1.1[M+H]+。
实施例51
化合物22
步骤1：制备化合物51a
在0℃下将咪唑(3.94g，57mmol)和TBSCl(7.18g，470mmol)加入到N6-苯甲酰基-2'-脱氧-2'-氟腺苷1a[CAS 136834-20-3](12.7g，34.0mmol)的DMF(105mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌直至完全转化(2h)。将反应混合物用EtOAc稀释并用饱和NH4Cl水溶液和水洗涤。将有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-1％MeOH的DCM溶液)进行纯化，得到为白色固体的化合物51a(12g，收率：71％)。1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm-0.04(s,3H),-0.02(s,3H),0.82(s,9H),3.81(dd,J＝11.7,4.1Hz,1H),3.99(m,2H),4.62(ddd,J＝21.7,11.7,6.9Hz,1H),5.54(dq,J＝52.8,2.0Hz,1H),5.77(m,1H),6.38(dd,J＝18.6,1.4Hz,1H),7.55(t,J＝7.9Hz,2H),7.65(t,J＝7.2Hz,1H),8.04(d,J＝6.9Hz,2H),8.57(s,1H),8.75(s1H)；ESI-MS：m/z 488.0[M+H]+。
步骤2：制备化合物51c
向反应烧瓶中装入DMAP(2.03g，16.6mmol)、无水DCM(40mL)和活化的
分子筛。将所得混合物在室温下于惰性气氛下搅拌至少2h。同时，将化合物51a(1.6g，3.3mmol)的溶液和氨基磺酸盐51b(2.5g，3.66mmol)的溶液(各自溶于无水DCM(2×40mL)中)在活化的
分子筛上干燥(约2h)。将两种溶液(分别为化合物51a和氨基磺酸盐51b)相继转移到反应烧瓶中。将所得反应混合物搅拌36h。通过过滤除去分子筛，并且用二氯甲烷充分冲洗。将滤液用饱和NaHCO3水溶液、盐水和饱和NH4Cl水溶液洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-1％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为灰白色泡沫的化合物51c(1.8g，收率：53％)。
1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm-0.25(s,3H),-0.050(s,3H),-0.015(d,J＝2.8Hz,6H),0.73(s,9H),0.79(s,9H),1.11(dd,J＝6.9,1.4Hz,6H),2.75(m,1H),3.40(q,J＝6.9Hz,1H),3.45(s,3H),3.48(q,J＝6.9Hz,1H),3.85(dd,J＝11.7,3.4Hz,2H),3.98(dd,J＝12.4,2.1Hz,1H),4.13(m,1H),4.33(t,J＝3.4Hz,1H),4.71(dd,J＝6.9,4.8Hz,1H),5.49(dq,J＝17.6,3.9Hz,1H),5.86(d,J＝6.9Hz,1H),6.51(dd,J＝18.6,2.1Hz,1H),7.56(t,J＝7.6Hz,2H),7.66(t,J＝7.2Hz,1H),8.05(d,J＝7.6Hz,2H),8.30(s,1H),8.59(s,1H),8.71(t,J＝6.2Hz,1H),8.75(s,1H),11.26(s,1H),11.65(s,1H),12.08(s,1H)；ESI-MS：m/z1030.4[M+H]+。
步骤3：制备化合物33a
将Et3N(12.1mL，87.37mmol)和Et3N.3HF(2.84mL，17.4mmol)加入到化合物51c(1.8g，1.74mmol)的吡啶(34mL)溶液中。将反应混合物在45℃下搅拌直至完全转化(约5h)，并且然后冷却至室温。加入异丙氧基三甲基硅烷(12.4mL，69.9mmol)并继续搅拌过夜。减压浓缩后获得的粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-7％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为灰白色泡沫的化合物33a(1.2g，收率：86％)。
1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm 1.11(q,J＝3.2Hz,6H),2.75(m,1H),3.40(s,1H),3.43(s,3H),3.64(d,J＝12.4Hz,1H),3.80(d,J＝12.4Hz,1H),3.86(t,J＝4.5Hz,1H),4.07(m,1H),4.32(t,J＝3.1Hz,1H),4.67(q,J＝5.7Hz,1H),5.36(td,J＝10.7,4.6Hz,2H),5.66(d,J＝6.2Hz,1H),5.88(m,2H),6.49(dd,J＝16.5,2.8Hz,1H),7.56(t,J＝7.9Hz,2H),7.66(t,J＝7.6Hz,1H),8.05(d,J＝7.6Hz,2H),8.25(s,1H),8.66(s,1H),8.74(d,J＝32.4Hz,2H),11.27(s,1H),11.62(s,1H),12.08(s,1H)；ESI-MS：m/z 802.1[M+H]+。
步骤4：制备化合物51d
将化合物33a(500mg，0.624mmol)和1H-四唑(5.46mL的3％-4％MeCN溶液，使用前在
分子筛上干燥)的无水THF(25mL，使用前在
分子筛上干燥)溶液用
分子筛处理2h，之后一次性加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(206mg，0.686mmol)。将所得反应混合物振摇过夜。以5h的时间间隔分两份加入附加量的2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(94mg+38mg，0.312mmol+0.125mmol)，再继续振摇一天以获得完全转化。加入tBuOOH(227μL的5.5M癸烷溶液，1.25mmol)，并且将反应混合物再振摇一小时。通过过滤除去分子筛并用DCM充分冲洗。将滤液浓缩，并且获得的残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-7.5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物51d(110mg，收率：19％)。ESI-MS：m/z 917.5[M+H]+。
步骤5：制备化合物22，钠盐
在室温下，将化合物51d(110mg，0.12mmol)在33％甲胺的乙醇溶液(10mL)中搅拌直至完全转化(约2h)。减压浓缩反应混合物。将所得粗产物在MeCN中研磨，然后通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，5μm，250mm×30mm；流动相：0.25％碳酸氢铵水溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化，得到化合物22，铵盐。通过在填充有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的转化，得到冻干后为白色蓬松固体的化合物22，钠盐(52mg，收率：60％)。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6,60℃)δppm 10.67(br s,1H),9.13(br s,1H),8.37(s,1H),8.18(s,1H),7.99(br s,1H),7.24(br s,2H),6.33(dd,J＝15.9,3.3Hz,1H),6.29(brs,2H),5.95(br d,J＝50.9Hz,1H),5.76(d,J＝8.9Hz,1H),5.59(br s,1H),5.18-5.25(m,1H),4.47(br s,1H),4.20(dt,J＝11.9,6.1Hz,1H),4.14(br s,1H),3.94(br d,J＝4.4Hz,1H),3.75-3.81(m,1H),3.52(s,3H),3.47-3.55(m,1H),3.42(s,1H)；31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm-1.28(s,1P)；ESI-MS：m/z 690.3[M+H]+。
实施例52
化合物55
步骤1：制备化合物52a
将碳酸钾(0.32g，2.3mmol)加入到化合物41d(0.55g，1.8mmol)的无水DMF(6mL)溶液中。将所得悬浮液冷却至0℃，之后加入碘代乙烷(0.15mL，2.3mmol)。将反应混合物升温至室温并搅拌直至完全转化(约2.5h)。减压浓缩后获得的残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-4％MeOH的溶液DCM)纯化，得到为白色粉末的化合物52a(0.45g，收率：79％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.25(s,1H),7.36(s,1H),6.02(d,J＝5.5Hz,1H),5.43(d,J＝6.9Hz,1H),5.09(t,J＝5.5Hz,1H),4.39(q,J＝6.0Hz,1H),3.97(q,J＝3.4Hz,1H),3.73-3.80(m,1H),3.57-3.64(m,1H),3.50-3.55(m,1H),3.45(s,3H),3.40(s,3H)；ESI-MS：m/z 314[M+H]+。
步骤2：制备化合物52b
向化合物52a(0.85g，2.7mmol)的无水吡啶(12.7mL)溶液中加入DMAP(0.16g，1.3mmol)和DMTrCl(1.46g，4.3mmol)(分批)，在室温下搅拌4h。用甲醇(9mL)猝灭反应混合物，并减压浓缩。将获得的残余物溶于EtOAc中并用水洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-0.2％MeOH的DCM溶液)进行纯化，得到为灰白色泡沫的化合物52b(1.4g，收率：85％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm:8.24(s,1H),7.37(d,J＝7.6Hz,2H),7.29(t,J7.6Hz,2H),7.22(m,6H),6.87(dd,J＝9.0,2.1Hz,4H),6.04(d,J＝4.8Hz,1H),5.53(d,J＝6.2Hz,1H),4.47(q,J＝5.5Hz,1H),4.05(q,J＝4.4Hz,1H),3.85(t,J＝4.8Hz,1H),3.72(d,J＝9.6Hz,6H),3.45(s,3H),3.35(s,3H),3.20(d,J＝4.8Hz,2H)；ESI-MS：m/z 638.2[M+Na]+。
步骤3：制备化合物52c
将化合物52b(0.9g，1.46mmol)、氨基磺酸盐17a(1.53g，1.75mmol)和DMAP(0.9g，7.31mmol)各自分别溶于无水DCM(3×25.0mL)中。通过在N2下搅拌至少2h，用
活化的分子筛干燥每种溶液。向DMAP溶液中分别加入化合物52b的DCM溶液和氨基磺酸盐17a的DCM溶液。将所得反应混合物搅拌36h。通过过滤除去分子筛，并且用二氯甲烷充分冲洗。将滤液用饱和NaHCO3水溶液、盐水和饱和NH4Cl水溶液洗涤。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-0.4％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物52c(0.38g，收率：19％)以及含有单和二DMTr-脱保护产物的极性较大的级分(0.8g)。
步骤4：制备化合物52d
向化合物52c(0.38g，0.28mmol)的DCM(10.6mL)溶液中加入DCA(0.9mL的10％DCM溶液，1.1mmol)和水(30μL，1.4mmol)，在室温下搅拌直至完全脱保护。通过加入吡啶(0.1ml，1.4mmol)和几滴甲醇来猝灭反应混合物，并且减压浓缩。将类似的反应方案应用于上述0.8g极性级分。将两个反应的残余物合并以用于通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-6％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色粉末的化合物52d(0.4g，收率：62％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 11.27(br s,1H),8.74(s,1H),8.62(s,1H),8.54(br t,J＝5.9Hz,1H),8.23(s,1H),8.06(d,J＝7.6Hz,2H),7.64-7.70(m,1H),7.52-7.59(m,2H),7.36(br s,1H),6.36(dd,J＝19.3,2.1Hz,1H),6.28(d,J＝6.2Hz,1H),5.90(br s,1H),5.58(br d,J＝52.7Hz,1H),5.22(t,J＝5.5Hz,1H),4.52-4.64(m,1H),4.07-4.14(m,2H),3.95-4.01(m,1H),3.64(dd,J＝12.4,3.4Hz,1H),3.56(dd,J＝11.7,2.8Hz,1H),3.43(s,3H),3.38(s,3H),3.12-3.24(m,2H)；ESI-MS：m/z 748.5[M+H]+
步骤5：制备化合物52e
将化合物52d(100mg，0.134mmol)和1H-四唑(2.38mL的0.45MMeCN溶液，1.14mmol)在无水MeCN/DMF(5mL，4:1)混合物中的溶液用
分子筛在N2下处理10min，之后加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)-亚磷酰二胺(80mg，0.27mmol)的无水MeCN(1.0mL)溶液(注意：在使用前MeCN在CaH2上新鲜蒸馏)。将所得反应混合物在室温下搅拌1.5h。接下来，加入tBuOOH溶液(126μL的5M至6M癸烷溶液，0.67mmol)，并且再继续搅拌30min。将反应混合物用DCM稀释，然后通过硅藻土垫过滤并浓缩。该残余物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：0％-7％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物52e。
ESI-MS：m/z 863.1[M+H]+。
步骤6：制备化合物55，钠盐
将上述化合物52e在30％甲胺的乙醇溶液(10mL)中在室温下搅拌2.5h。将反应混合物减压浓缩。将残余物溶于水/MeCN(4:1)混合物中，用DCM洗涤并浓缩。该粗产物通过制备型反相HPLC(固定相：Xbridge OBD C18，5μm，150mm×30mm；流动相：10mM碳酸氢铵水溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化，得到化合物55，铵盐(25mg，收率：26％，来自52d)。通过在填充有Dowex 50W×8 Na离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化。
1H NMR(400MHz,D2O)δ8.13(br s,1H),8.00(br d,J＝5.6Hz,1H),7.42(br s,1H),7.06(br s,1H),6.42-6.33(m,2H),5.41(br s,1H),5.35-5.16(m,1H),5.05-4.88(m,1H),4.65(br s,1H),4.53-4.40(m,2H),4.33-4.20(m,2H),3.88-3.76(m,1H),3.60(s,4H),3.48(s,3H)
19F NMR(376MHz,D2O)δ-165.090(s,1F),-196.605(s,1F)；31P NMR(162MHz,D2O)δ-1.899(s,1P)；ESI-MS：m/z 706.0[M+H]+。
实施例53
化合物27
步骤1：制备化合物53b
将装有5-(二乙氧基甲基)-1H-咪唑-4-甲酸甲酯53a[CAS 85109-99-5](3.24g，14.1mmol)和无水MeCN(120mL)的反应烧瓶在冰浴中冷却。加入氢化钠(1.23g55％矿物油分散液，28.5mmol)，将所得混合物在rt下搅拌45min。
在单独的烧瓶中，将碘代三甲基硅烷(3.23mL，22.6mmol)加入到1,2-二-O-乙酰基-3-O-甲基-5-O-苯甲酰基-D-呋喃核糖([10300-21-7]，5g，14.1mmol)的无水甲苯(50mL)溶液中。将所得溶液在rt下搅拌20min，之后将其缓慢转移到在冰浴中冷却的上述反应烧瓶中。将所得反应混合物在50℃下搅拌直至完全转化(约3.5h)。冷却至rt后，加入EtOAc。用水和盐水洗涤有机相，用无水Na2SO4干燥，并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-40％EtOAc的己烷溶液)进行纯化，得到为无色胶状物的化合物53b(4.3g，收率：58％)。
1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm 8.0(m,3H),7.70(t,J＝7.6Hz,1H,),7.56(m,2H),6.36(m,1H),6.23(s,1H),5.49(dd,J＝4.1,2.8Hz,1H),4.63(m,2H),4.26(m,2H),3.78(s,3H),3.68(m,1H),3.47(m,1H)2.11(s,2H)1.11(m,6H)；
ESI-MS：m/z 521.2[M+H]+。
步骤2：制备化合物53c
将化合物53b(4.3g，8.25mmol)在80％AcOH(50mL)水溶液中的溶液在rt下搅拌16h。接下来，将反应溶液倒入冰冷的水中并用DCM萃取。将有机层用水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-30％EtOAc的己烷溶液)进行纯化，得到为白色固体的化合物58c(1.7g，收率：52％)。
1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm-10.27(s,1H),8.34(s,1H),8.00(m,2H),7.70(m,1H),7.55(t,J＝7.9Hz,2H),6.40(d,J＝2.1Hz,1H),5.54(q,J＝2.3Hz,1H),4.65(t,J＝4.1Hz,2H),4.34(m,1H),4.19(dd,J＝7.9,5.2Hz,1H),3.87(s,1H)。
步骤3：制备化合物53d
将酰肼(1M THF溶液，362mL，362mmol))加入到化合物53c(8.1g，18.12mmol)的无水EtOH(200mL)溶液中。在回流温度下搅拌反应混合物，使THF完全蒸发(在THF的存在下反应非常缓慢)。反应完成后(约72h)，减压除去溶剂。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-10％MeOH的DCM溶液)纯化。将获得的产物溶于水中，并且通过加入
IR120氢形式将pH调节至5。通过过滤除去树脂并用水冲洗，蒸发滤液并在高真空下干燥，得到为淡黄色固体的化合物53d(3.5g，68％)。
1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm 12.75(s,1H),8.65(s,1H),8.54(s,1H),5.92(d,J＝6.9Hz,1H),5.75(s,1H)4.39(t,J＝5.9Hz,1H),4.11(q,J＝3.0Hz,1H),3.83(q,J＝2.8Hz,2H),3.69(dd,J＝12.1,3.1Hz,2H),3.64(dd,J＝12.1,3.1Hz,2H),3.42(s,3H),3.16(s,1H)；ESI-MS：m/z 283.1[M+H]+。
步骤4：制备化合物53e
将DMAP(0.75g，6.18mmol)和DMTrCl(6.6g，19.7mmol)(分批)加入到化合物53d(3.5g，12.3mmol，通过与无水甲苯和无水吡啶共蒸发干燥)的无水吡啶(52mL)溶液中。将所得反应混合物搅拌4h，之后通过加入甲醇(10mL)猝灭，并且减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为浅粉色泡沫的化合物53e(4.8g，收率：67％)。1H NMR(500MHz DMSO-d6,)δppm:12.76(s,1H),8.50(d,J＝16.5Hz,2H),7.28(m,4H),7.20(m,5H)6.84(d,J＝9.0Hz,4H),5.99(d,J＝4.8Hz,1H),5.82(d,J＝5.5Hz,1H),4.67(d,J＝5.5Hz,1H)4.19(q,J＝4.1Hz,1H),3.94(t,J＝4.8Hz,1H),3.73(s,6H),3.37(s,3H),3.23(q,J＝3.4Hz,2H)；ESI-MS：m/z 585.3[M+H]+。
步骤5：制备化合物53f
将化合物53e(0.53g，0.9mmol)、氨基磺酸盐17a(0.876g，1.08mmol)和DMAP(0.55g，4.5mmol)分别溶于无水DCM(3×20mL)中。通过在N2下搅拌，用
活化的分子筛干燥每种溶液至少2h。分别向DMAP溶液中加入化合物53e的溶液和氨基磺酸盐17a的溶液。将所得反应混合物搅拌36h。通过过滤除去分子筛，并且用DCM充分冲洗。将滤液用饱和NaHCO3水溶液和饱和NH4Cl水溶液洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为淡黄色泡沫的化合物53f(0.45g，收率：38％)。
ESI-MS：m/z 1321.5[M+H]+。
步骤5：制备化合物53g
向化合物53f(0.75g，0.52mmol)的DCM(20mL)溶液中加入DCA(1.75mL的10％DCM溶液，2.1mmol)和水(47μL，2.6mmol)，在rt下搅拌直至完全脱保护(约2h)。通过加入吡啶(0.2mL，2.6mmol)和几滴甲醇来猝灭反应混合物，并且减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-7％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为灰白色粉末的化合物53g(0.33g，收率：82％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 12.77(s,1H),11.24(s,1H),8.75(s,1H),8.60-8.64(m,3H),8.60(s,1H),8.04(d,J＝7.6Hz,2H),7.63-7.67(m,1H),7.53-7.58(m,2H),6.34(d,J＝4.8Hz,1H),6.37(dd,J＝20.0,2.1Hz,1H),5.89(d,J＝6.2Hz,1H),5.59(ddd,J＝52.3,4.8,2.1Hz,1H),5.46(t,J＝4.8Hz,1H),5.18(t,J＝4.8Hz,1H),4.56-4.65(m,1H),4.13-4.18(m,2H),4.00(td,J＝7.4,3.1Hz,1H),3.76(s,1H),3.60-3.69(m,1H),3.36(s,3H),3.26-3.31(m,1H),3.15-3.23(m,1H)；ESI-MS：m/z 717.3[M+H]+。
步骤6：制备化合物53h
注意：在使用前，THF在Na/二苯甲酮上新鲜蒸馏，并且MeCN在CaH2上新鲜蒸馏。
在N2下，将化合物53g(100mg，0.14mmol)和1H-四唑(2.48mL的0.45MMeCN溶液，1.12mmol)的无水DMF(7mL)溶液用
分子筛处理30min。然后滴加2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(75mg，0.25mmol)的无水THF(1.0mL)溶液。将混合物在rt下搅拌3h后，再加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(21mg，0.07mmol)的无水THF(0.5mL)溶液。将所得悬浮液进一步搅拌16h。加入tBuOOH(140μL的5M至6M癸烷溶液，0.70mmol)，并将反应物再搅拌30min。将混合物在减压下部分浓缩。将残余物过滤，并且在搅拌下将滤液倒入H2O(20mL)中得到悬浮液。收集固体，溶于DCM/MeOH(3mL/1mL)中，并通过制备型薄层色谱法(DCM:MeOH＝8:1)纯化。收集所需的级分，并在MeCN/DMSO(10mL/2mL)中研磨2h，得到悬浮液。过滤后，将滤液蒸发至干，得到粗制化合物53h，为直接用于下一步骤中的DMSO(2mL)溶液。
ESI-MS：m/z＝832.1[M+H]+。
步骤7：制备化合物27，钠盐
将化合物53h在DMSO(2mL)中的先前溶液用MeNH2(30％EtOH溶液，3mL)处理并在rt下搅拌2hr。将混合物蒸发至干，与另一批料合并，并通过反相制备型HPLC(柱WatersXbridge Prep OBD 5μm C18 150×30；条件：水(10mM NH4HCO3)(A)-ACN，(B)开始B 0，结束B30；梯度时间(min)7，100％B保持时间(min)1，流速(ml/min)25)，冻干后得到为白色固体的化合物27，铵盐(5mg)。
1H NMR(400MHz,D2O)δppm 8.63(s,1H),8.45(s,1H),7.98(s,1H),6.77(s,1H),6.24-6.33(m,2H),5.11-5.34(m,3H),4.55(br s,1H),4.28-4.42(m,2H),4.23(br s,1H),4.08-4.20(m,1H),3.61(br d,J＝12.96Hz,1H),3.44(s,3H),3.33(br d,J＝13.69Hz,1H)
19F NMR(376MHz,D2O)δppm-198.29--197.44(m,1F)
31P NMR(162MHz,D2O)δppm-2.34(s,1P)
ESI-MS：m/z＝675.3[M+H]+
转化成钠盐
将Dowex 50W×8，200-400(10mL，H形式)加入到烧杯中并用去离子H2O(30mL)洗涤。然后向树脂中加入15％H2SO4的去离子H2O(30mL)溶液，并且将混合物轻轻搅拌15min，然后滗出(30mL)。将树脂转移到具有15％H2SO4的去离子H2O溶液的柱中，并且用15％H2SO4(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子H2O洗涤直至其为中性。将树脂转移回烧杯中，并且加入15％NaOH的去离子H2O(30mL)溶液，然后将混合物轻轻搅拌15min，然后滗出(1x)。将树脂转移到柱中，并且用15％NaOH的H2O溶液(至少4CV)洗涤，并且然后用去离子H2O洗涤直至其为中性，将化合物27，铵盐(5mg)溶于去离子H2O(3mL)中，加入到柱顶部中，并且用去离子H2O洗脱。将所需的级分合并在一起并冻干，得到为白色固体的化合物27，钠盐(2.1mg)。
1H NMR(400MHz,D2O)δppm 8.75(s,1H),8.52(br s,1H),7.84-8.36(m,1H),6.65-7.24(m,1H),6.38(br d,J＝19.07Hz,2H),5.28-5.46(m,1H),5.26(br dd,J＝8.53,4.77Hz,1H),4.81-4.93(m,1H),4.63(br s,1H),4.42(br dd,J＝10.54,7.78Hz,2H),4.19-4.34(m,2H),3.58-3.75(m,1H),3.54(s,3H),3.30-3.48(m,1H)
19F NMR(377MHz,D2O)δppm-197.75(br s,1F)
31P NMR(162MHz,D2O)δppm-2.15(br s,1P)
ESI-MS：m/z＝675.2[M+H]+
实施例54
化合物3
步骤1：制备化合物54b
将化合物54a(1g，1.5mmol)和氨基磺酸盐3o(1.3g，1.5mmol)溶于DCE(10mL)中。加入
分子筛(粉末)，并且将反应混合物在N2下于室温下搅拌2h。在N2下于室温下，将DMAP(913mg，7.5mmol)和
分子筛粉末(0.5g)在DCE(2mL)中的混合物搅拌6h，并且然后加入到上述混合物中。(注意：在使用前将DCE在活化的
分子筛上干燥。)将反应混合物在50℃下搅拌过夜。通过过滤除去分子筛并用DCM冲洗。用饱和NaHCO3水溶液洗涤滤液，用DCM萃取水相。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并真空蒸发。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：1％-2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到1.8g(收率：83％)化合物54b及其2'-偶联的区域异构体的混合物(结构未示出)，后者是化合物54a部分经历2'→3'TBS移位的结果。
ESI-MS：m/z 1097.5[M-DMTr+H]+。
步骤2：制备化合物54c
将上述产物混合物(2.6g，1.84mmol)溶于DCM(30mL)中，向其中加入DCA(610μL，7.40mmol)和水(330μL，1.84mmol)。将反应混合物在室温下搅拌直至完全脱保护(约1h)，之后通过加入吡啶(1.5mL，18.4mmol)的甲醇(4mL)溶液猝灭，并且随后用水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。该残余物通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18OBD，5μm，150mm×30mm；流动相：H2O(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化，得到为白色固体的纯化合物54c(600mg，收率：40％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.09(br s,1H),11.62(br s,1H),9.26(s,1H),8.99(s,1H),8.89(s,1H),8.45(br s,1H),8.24(s,1H),6.10(d,J＝6.0Hz,1H),5.82(d,J＝6.0Hz,1H),5.71(d,J＝6.3Hz,1H),5.48(br s,1H),4.91-5.00(m,2H),4.72(q,J＝5.8Hz,1H),4.29-4.40(m,1H),4.03-4.12(m,1H),3.87(br t,J＝4.3Hz,1H),3.60-3.74(m,2H),3.44(s,3H),3.35-3.42(m,1H),3.29(dd,J＝14.1,7.8Hz,1H),2.75(spt,J＝6.8Hz,1H),1.11(d,J＝6.8Hz,3H),1.09(d,J＝6.9Hz,3H),0.63(s,9H),-0.08(s,3H),-0.34(s,3H)；
ESI-MS：m/z 795.4[M+H]+。
步骤3：制备化合物54d
将化合物54c(400mg，0.5mmol)和1H-四唑(8.9mL的0.45MMeCN溶液，4.03mmol)在无水THF(48mL)和无水DMF(4mL)的混合物中的溶液用
分子筛在N2下处理30min，之后在10min内滴加2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(273mg，0.91mmol)的无水THF(4mL)溶液(注意：在使用前，THF在Na/二苯甲酮上新鲜蒸馏，并且MeCN在CaH2上新鲜蒸馏)。将所得反应混合物在室温下搅拌3h。接下来，加入tBuOOH溶液(500μL的5M至6M癸烷溶液，2.5mmol)，并且再继续搅拌30min。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并浓缩。将残余物溶于DCM中并用水洗涤。将有机层在Na2SO4上干燥，过滤并减压浓缩。该粗产物通过硅胶快速柱色谱法(梯度洗脱：1％-10％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的化合物54d(130mg，23％收率)。
ESI-MS：m/z 910.5[M+H]+。
步骤3：制备化合物3，铵盐
将化合物54d(58mg)在30％甲胺的乙醇溶液(2mL)中在室温下搅拌2h。将反应混合物减压浓缩。将残余物溶于吡啶(2mL)中，之后加入Et3N(30mg，0.27mmol)和三乙胺三氟化氢(21.7mg，0.13mmol)，将所得混合物在50℃下搅拌1天。将反应溶液冷却至室温，加入异丙氧基三乙基硅烷(0.1mL，0.54mmol)并继续搅拌过夜。减压浓缩后获得的残余物通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，5μm，150mm×25mm；流动相：10mM碳酸氢铵水溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化，得到化合物3，铵盐(4mg)。
1H NMR(400MHz,D2O)δppm 9.26(s,1H),9.02(s,1H),8.74(s,1H),7.94(s,1H),6.40(d,J＝1.5Hz,1H),6.01(d,J＝8.5Hz,1H),5.39(td,J＝9.1,5.3Hz,1H),5.25(dd,J＝7.9,4.5Hz,1H),5.06-5.11(m,1H),4.55(s,1H),4.48(br d,J＝12.0Hz,1H),4.09-4.18(m,2H),3.86(br d,J＝14.6Hz,1H),3.72(br d,J＝14.3Hz,1H),3.65(s,3H)；
31P NMR(162MHz,D2O)δppm-2.22(s,1P)；ESI-MS：m/z 673.2[M+H]+。
实施例55
化合物39
步骤1：制备化合物55b
向3'-脱氧-3'-氟肌苷55a[CAS 117517-20-1](2.2g，8.14mmol)的无水吡啶(33mL)溶液中加入DMAP(0.49g，4.0mmol)和DMTrCl(4.4g，13mmol)(分批)，在室温下搅拌直至完全转化(约2.5h)。用甲醇(10mL)猝灭反应混合物，并减压浓缩。将获得的残余物溶于乙酸乙酯中并用水洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-2％MeOH的DCM溶液)进行纯化，得到为灰白色泡沫的化合物55b(3.3g，收率：71％)。
1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm:8.22(d,J＝2.1Hz,1H),7.93(d,J＝1.4Hz,1H),7.36(d,J＝8.3Hz,2H),7.28(t,J＝7.6Hz,2H),7.23(m,5H),6.86(dd,J＝8.3,6.2Hz,4H),5.92(d,J＝7.6Hz,1H),5.14(dd,J＝54.1,4.5Hz,1H),5.02(dq,J＝23.2,3.9Hz,1H),4.35(dt,J＝25.9,4.3Hz,1H),3.74(s,6H),3.29(dq,J＝37.5,5.2Hz,2H)；ESI-MS：m/z 572.0[M+H]+。
步骤2：制备化合物55c
将化合物55b(0.66g，1.15mmol)、氨基磺酸盐17a(1.21g，1.38mmol)和DMAP(0.704g，5.76mmol)各自分别溶于无水DCM(3×20.0mL)中，并且在惰性气氛下在活化的
分子筛上干燥至少2h。接下来，将化合物55b和氨基磺酸盐17a溶液相继转移到含有DMAP溶液的反应烧瓶中。将所得反应混合物搅拌24h。通过过滤除去分子筛，并且用二氯甲烷充分冲洗。将滤液相继用饱和NaHCO3水溶液和饱和NH4Cl水溶液洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为灰白色泡沫的化合物55c(0.475g，收率：31％)。
1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm:12.47(s,1H),11.23(s,1H),8.66(s,1H),8.56(s,1H),8.48(s,1H),8.19(s,1H),8.03(d,J＝7.6Hz,2H),7.84(s,1H),7.65(t,J＝7.2Hz,1H),7.55(t,J＝7.6Hz,2H),7.48(d,J＝7.6Hz,2H),7.36(q,J＝4.8Hz,4H),7.32(m,4H),7.23(t,J＝7.6Hz,4H),7,19(t,J＝7.9Hz,5H),6.90(dd,J＝9.0,6.9Hz,4H),6,81(dd,J＝9.0,6.2Hz,4H),6.34(m,1H),6.23(d,J＝6.2Hz,1H),5.78(m,2H),5.50(d,J＝53.7Hz,1H),4.72(m,2H),4.43(d,J＝24.1Hz,1H)4.01(t,J＝7.9Hz,1H),3.74(s,1H),3.70(t,J＝2.4Hz,12H),3.25(dd,J＝10.7,3.8Hz,1H),2.99(d,J13.1Hz,1H),2.70(dd,J＝14.5,9.0Hz,1H)；ESI-MS：m/z 1310.0[M+H]+。
步骤3：制备化合物55d
向化合物55c(0.453g，0.34mmol)的DCM(12.6mL)溶液中加入DCA(1.14mL的10％DCM溶液，1.38mmol)和水(31μL，1.72mmol)，在室温下搅拌直至完全脱保护(约2h)。通过加入吡啶(0.14mL，1.72mmol)和几滴甲醇来猝灭反应混合物。将所得悬浮液搅拌20min，过滤并干燥，得到化合物55d(0.21g，收率：86％)。
1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm:12.5(d,J＝3.4Hz,1H),11.25(s,1H),8.75(s,1H),8.69(t,J＝6.0Hz,1H),8.61(s,1H),8.35(s,1H),8.09(d,J＝3.4Hz,1H),8.05(d,7.6Hz,2H),7.66(t,J＝7.2Hz,1H),7.56(t,J＝7.6Hz,2H),6.32(dd,J＝20.0,2.1Hz,1H),6.21(d,J＝7.6Hz,1H),5.85(d,J＝6.2Hz,1H),5.60(m,1H),5.49(m,3H),5.34(d,J＝4.8Hz,1H),4.57(m,1H),4.40(dt,J＝26.9,3.4Hz,1H),3.92(q,J＝6.0Hz,1H),3.65(t,J＝4.1Hz,2H),3.17(t,J＝6.2Hz,2H)；ESI-MS：m/z 706.0[M+H]+。
步骤4：制备化合物55e
将化合物55d(260mg，0.37mmol)和1H-四唑(2.15mL的3％-4％MeCN溶液，在活化的
分子筛上干燥)的DMF/THF(1:2，30mL，在活化的
分子筛上干燥)溶液在惰性气氛下用
分子筛处理2h，之后一次性加入2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(129μL，0.41mmol)。将所得反应混合物在室温下振摇过夜。加入附加量的2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(23μL，0.074mmol)，并且再继续振摇一天以获得完全转化。加入tBuOOH(134μL的5.5M癸烷溶液，0.74mmol)，并且将反应混合物再振摇一小时。通过过滤除去分子筛并用二氯甲烷冲洗。将滤液用水充分洗涤，用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物55e(20mg，收率：7％)。ESI-MS：m/z 820.4[M+H]+。
步骤5：制备化合物39，钠盐
在室温下，将化合物55e(20mg，0.024mmol)在33％甲胺的乙醇溶液(10mL)中搅拌直至完全转化(～1h)。减压浓缩反应混合物。将所得粗产物在MeCN中研磨，然后通过制备型反相HPLC(固定相：XBridge C18 OBD，5μm，250mm×30mm；流动相：0.25％碳酸氢铵水溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化，得到化合物39，铵盐。通过在填充有阳离子Na离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到冻干后为白色蓬松固体的化合物39，钠盐(13.5mg，收率：80％)。
31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δppm-2.06(s,1P)；ESI-MS：m/z 663.3[M+H]+。
实施例56
化合物40
步骤1：制备化合物56b
向3'-(O-甲基)肌苷(56a，1.5g，5.31mmol，CAS#75479-64-0)的吡啶(30mL)溶液中加入DMAP(0.32g，2.65mmol)和DMTrCl(2.69g，7.97mmol)(分批)，在室温下搅拌直至完全转化。用甲醇(15mL)猝灭反应混合物，并减压浓缩。将获得的残余物溶于乙酸乙酯中并用水洗涤。将有机层用水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-2.5％MeOH的DCM溶液)进行纯化，得到为浅棕色泡沫的化合物56b(2.19g，收率：71％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm:12.35(s,1H),8.22(s,1H),8.00(s,1H),7.34(d,J＝7.6Hz,2H),7.27(t,J＝7.6Hz,2H),7.21(m,5H),6.84(m,4H),5.89(d,J＝4.8Hz,1H),5.62(d,J＝6.2Hz,1H),4.78(q,J＝5.3Hz,1H),4.13(q,J＝4.6Hz,1H),3.99(t,J＝5.2Hz,1H),3.73(s,6H),3.37(s,3H),3.22(d,J＝4.1Hz,2H)；ESI-MS：m/z 585[M+H]+。
步骤2：制备化合物56d
向反应烧瓶中装入DMAP(0.76g，6.2mmol)、无水DCM(25mL)和活化的
分子筛。将所得混合物在室温下于惰性气氛下搅拌至少2h。同时，将化合物56b(0.73g，1.24mmol)的溶液和化合物56c(1.0g，1.49mmol)的溶液(各自溶于无水DCM(2×25mL)中)在活化的
分子筛上干燥(约2h)。将两种溶液(分别为化合物56b和化合物56c)相继转移到反应烧瓶中。将所得反应混合物搅拌24h。通过过滤除去分子筛，并且用二氯甲烷充分冲洗。将滤液用饱和NaHCO3水溶液、盐水和饱和NH4Cl水溶液洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。该残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物56d(0.54g，收率：39％)。1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm:8.72(s,1H),8.66(s,1H),8.27(s,1H),8.09(m,1H),8.05(m,2H),7.99(s,1H),7.65(m,1H),7.56(t,J＝7.6Hz,2H),7.29(d,J＝6.9Hz,2H),7.24(t,J＝7.6Hz,2H),7.18(m,5H),6.87(d,J＝9.0Hz,1H),6.81(dd,J＝9.0,4.1Hz,4H),6.46(m,1H),6.24(d,J＝3.4Hz,1H),5.66(m,1H),4.63(t,J＝2.8Hz,1H),4.54(m,1H),4.11(m,1H),3.93(m,1H),3.71(s,6H),3.32(d,J＝8.3Hz,13H),3.26(m,3H),3.19(m,3H),2.99(m,1H),2.58(m,4H),2.35(m,1H),0.89(s,9H),0.11(s,6H)；ESI-MS：m/z 1116[M+H]+。
步骤3：制备化合物56e
将Et3N(2.65mL，19.0mmol)和Et3N.3HF(0.31mL，1.9mmol)加入到化合物56d(0.53g，0.47mmol)的吡啶(9.5mL)溶液中。将反应混合物在45℃下搅拌直至完全转化(约5h)，并且然后冷却至室温。加入异丙氧基三甲基硅烷(1.34mL，7.6mmol)并继续搅拌过夜。减压浓缩，得到粗制5'-脱保护的化合物，将其重新溶于DCM(13.3mL)中。加入水(40μL，2.37mmol)和二氯乙酸(1.57mL的10％DCM溶液，1.9mmol)，将所得反应混合物搅拌1h(完全转化)，之后通过加入吡啶(200μL，2.37mmol)和几滴甲醇来猝灭。减压浓缩后获得的残余物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-9％MeOH的DCM溶液)纯化，得到化合物56e(220mg，收率：66.6％，两步)。1H NMR(500MHz DMSO-d6)δppm:12.43(br s,1H),11.20(br s,1H),8.72(s,1H),8.63(s,1H),8.57(br t,J＝5.5Hz,1H),8.33(s,1H),8.04(m,3H),7.65(t,J＝7.2Hz,1H),7.56(t,J＝7.9Hz,2H),6.43(t,J＝6.9Hz,1H),6.17(d,J＝5.5Hz,1H),5.45(m,2H),5.26(t,J＝5.5Hz,1H),4.38(m,1H),4.23(t,J＝4.1Hz,1H),4.12(q,J＝3.7Hz,1H),3.84(m,1H),3.68(m,1H),3.57(m,1H),3.40(s,3H),3.12(m,2H),2.84(m,1H),2.33(m,1H)；ESI-MS：m/z 699[M+H]+。
步骤4：制备化合物56f
将化合物56e(200mg，0.286mmol)和1H-四唑(5.09mL的0.45MMeCN溶液，0.99mmol，使用前在
分子筛上干燥)的无水MeCN/THF(1:2，9mL)溶液用
分子筛在N2下处理30min，之后在10min内滴加2-氰乙基-N,N,N',N'-四(异丙基)亚磷酰二胺(155mg，0.52mmol)的无水MeCN(2mL)溶液(注意：在使用前，THF在Na/二苯甲酮上新鲜蒸馏，并且MeCN在CaH2上新鲜蒸馏)。将所得反应混合物在室温下搅拌30min。加入tBuOOH溶液(286μL的5M至6M癸烷溶液，1.43mmol)，并且再继续搅拌30min。将混合物用DCM(20mL)稀释，通过硅藻土垫过滤并浓缩。该粗产物通过硅胶柱色谱法(梯度洗脱：0％-8％MeOH的DCM溶液)纯化，得到为白色固体的化合物56f(130mg，收率：44％(纯度：～80％LCUV))。ESI-MS：m/z＝814.3[M+H]+。
步骤5：制备化合物40，钠盐
将上述化合物22f(130mg，0.072mmol)在30％甲胺的乙醇溶液(15mL)中在室温下搅拌2h。将反应混合物减压浓缩。将残余物溶于水中，用DCM洗涤并冻干。该粗产物通过制备型反相HPLC(固定相：Xbridge OBD C18，5μm，150mm×30mm；流动相：10mM碳酸氢铵水溶液(A)-MeCN(B)；梯度洗脱)纯化。通过在填充有阳离子钠离子交换树脂的柱上洗脱水溶液来完成向钠盐的最终转化，得到冻干后为白色蓬松固体的化合物40，钠盐(5.8mg，收率：3％，来自22f)。1H NMR(400MHz,D2O)δppm 8.39(s,1H),7.91(br d,J＝13.2Hz,2H),7.24(br s,1H),6.26(br s,1H),6.18(br d,J＝8.3Hz,1H),5.49(br s,1H),4.87-5.06(m,1H),4.51(br s,1H),4.30(br d,J＝3.7Hz,1H),4.10(br s,3H),3.42(s,3H),3.38(br s,2H),2.53-2.75(m,2H)；
31P NMR(162MHz,D2O))δppm-1.23(s,1P)；ESI-MS：m/z＝657.0[M+H]+。
生物学实施例
体外测试
实施例1
STING SPA结合测定
人STINGSPA结合测定法测量标记为2',3'cGAMP(环状(鸟苷-(2'—>5')-单磷酸-腺苷-(3'—>5')-单磷酸)的氚向生物素化STING蛋白的位移。重组STING的可溶性型式在缺乏四个跨膜结构域的大肠杆菌(E.coli)中表达，并且含有在232位(H232R)处具有R的Q86WV6的残基139-379。基于58％的群体的等位基因频率，H232R被认为是野生型(Yi等人的“人STING的单核苷酸多态性可影响对环状二核苷酸的先天性免疫应答(SingleNucleotide Polymorphisms of Human STING can affect innate immune response tocyclic dinucleotides)”《公共科学图书馆(PLOSONE)》，2013,8(10),e77846)。STING构建体具有N末端HIS标签，随后为TEV蛋白酶裂解位点和AVI标签，以允许通过BirA生物素连接酶进行定向生物素酰化(Beckett等人，A minimal peptide substrate in biotinholoenzyme synthetase-catalyzed biotinylation.(1999)Protein Science 8,921-929)。在纯化之后和在生物素酰化之前裂解HIS标签。
通过在测定缓冲液[25mM HEPES(Corning 25-060-C1)pH 7.5，150mM NaCl(SigmaS5150)，0.5mg/mL BSA(Gibco 15260-037)，0.001％Tween-20(Sigma P7949)，分子级水(Corning 46-000-CM)]中加入8nM[3H]-2’3’-cGAMP和40nM生物素-STING蛋白，在1536孔板中以每孔8μL的总体积进行测定。用声学分配器(EDC生物系统)在100％DMSO中加入测试化合物(80mL)，最终测定浓度为1％DMSO。将平板离心1分钟，并且在室温下温育60分钟。最后，加入(2μL)聚苯乙烯链霉亲和素SPA珠粒(PerkinElmer RPNQ0306)，并且密封平板并在室温下离心1min。使平板暗适应2小时，并且在ViewLux(Perkin Elmer)上读取12分钟/平板。[3H]-2’3’-cGAMP的饱和结合曲线显示与STING结合的KD为3.6nM±0.3nM，与天然配体的报告值相当(Zhang等人的“含有混合磷酸二酯键的环状GMP-AMP为STING的内源性高亲和力配体(Cyclic GMP-AMP containing mixed phosphodiester linkages is an endogenoushigh-affinity ligand for STING)”)。
包括环状di-GMP的其它天然配体也在该测定中返回预期范围内的值。参考化合物为cGAMP，结果以抑制百分比和IC50值报告。与小鼠STING的结合使用一种类似于上述含有Q3TBT3的残基138-378的的构建体。
全长人STING结合测定
在HEK293-EXPI细胞中重组表达来自在232位(H232R)处具有R的Q86WV6的残基1-379的人STING，该232位具有N末端6HIS标签，随后为FLAG标签、TEV蛋白酶裂解位点和用于生物素酰化的AVI标签。由这些细胞制备纯化的膜，并通过免疫印迹确认和定量STING表达。将含有STING的膜与测试化合物在Greiner 384孔测定板中组合，并且在室温下在用于STING SPA结合测定的同一测定缓冲液中温育一小时。接着，加入[3H]-2’3’-cGAMP，并且将平板在室温下温育30分钟。将反应转移到预洗涤的Pall 5073滤板上，并且将每个孔用50μL测定缓冲液洗涤3次。将滤板在50℃下干燥1小时。向每个孔中加入10μL Microscint闪烁流体，并且密封平板并在TopCount(Perkin Elmer)上读取1分钟/孔。
STING SPR结合测定
在S200 biacore SPR仪器(GE Healthcare)上分析化合物。经由生物素捕获(GEHealthcare#BR100531)将大肠杆菌产生的截短的STING蛋白固定在S系列链霉亲和素芯片上。在运行缓冲液(10mM HEPES，pH 7.4，150mM NaCl，0.005％P20，1mM TECEP)中以100μM至0.195μM的1:2稀释度筛选化合物。使用1:1结合模型进行稳态亲和力和动力学评估(STING被视为二聚体)。运行参数如下：IFM化合物60秒开，300秒关，环状di-GMP(60秒开/60秒关)，硫醇异构体1(60秒开/300秒关)和cGAMP(60秒开/1200秒关)，其中流速为50μL/min且数据采集频率为40Hz，温度为25℃。
STING人细胞报告基因测定
通过干扰素调节因子(IRF)诱导型SEAP报告构建体的稳定整合，在来源于人THP1单核细胞系的THP1-ISG细胞(Invivogen,cat#thp-isg)中评估人STING途径的激动。THP1-Blue ISG细胞在ISG54最小启动子的控制下与五个干扰素(IFN)刺激的应答元件联合表达分泌的胚胎碱性磷酸酶(SEAP)报告基因。因此，THP1-Blue ISG细胞允许通过确定SEAP的活性来监测IRF活化。用碱性磷酸酶检测介质(即SEAP检测试剂)容易地评估细胞培养上清液中IRF诱导的SEAP的水平。这些细胞对Zeocin具有抗性。2’3’cGAMP在本测定中用作阳性对照。为了进行测定，将60,000个细胞以30μL/孔分配到白色不透明的底部组织培养物处理过的384孔板中。
以10μL(1％DMSO最终浓度)的体积加入测试化合物。最初在100％DMSO中制备化合物，点样在化合物稀释板上，并且然后化合物在转移前在培养基中稀释。将分析物在37℃、5％CO2下温育24h，然后将平板以1200rpm(120xg)离心5min。在最终温育后，将90μL碱性磷酸酶检测培养基-底物加入到新的384孔透明板的每个孔中，并且使用Biomek FX将10μL细胞上清液从测定板转移到新的碱性磷酸酶检测培养基板上，并混合4次。将平板在RT下温育20分钟，然后在Tecan Safire2上测定655nm处的吸光度。
STING小鼠细胞报告基因测定
通过稳定整合干扰素诱导型Lucia荧光素酶报告构建体，在来源于小鼠RAW-264.7巨噬细胞系的RAW Lucia细胞(Invivogen,cat#rawl-isg)中评估小鼠STING途径的激动。RAW Lucia细胞在ISG54最小启动子的控制下与五种干扰素(IFN)刺激的应答元件联合表达分泌的荧光素酶报告基因。因此，RAW Lucia细胞允许通过确定荧光素酶的活性来监测IRF活化。用荧光素酶检测试剂QUANTI-LucTM容易地评估细胞培养上清液中IRF诱导的荧光素酶水平。这些细胞对Zeocin具有抗性。2’3’cGAMP在本测定中用作阳性对照。为了进行测定，将100,000个细胞以90μL/孔分配到透明平底组织培养物处理过的96孔板中。以10μL的体积加入测试化合物。将该测定在37℃、5％CO2下温育24小时和48小时。温育后，将来自测定板的20μL细胞上清液转移到新的96孔白板上，并且加入50μL QUANTI-Luc底物。将平板在RT下温育，摇动5分钟，然后在EnVision 2104上以0.1秒的积分时间读取发光。
人干扰素β诱导测定
THP1-BlueISG细胞用于测量在STING途径激活后IFN-β向培养上清液中的分泌。为了进行该测定，将抗IFN-β捕获抗体涂在96孔多阵列板(Mesoscale Discovery)上。温育一小时后，洗涤平板，并且将来自STING人细胞报告基因测定板或IFN-β标准物的50μL上清液与涂布板中的20μL磺基标签缀合检测抗体混合。将平板温育，振荡2小时，洗涤，并且施用读缓冲液。在SectorImager上测量电化学发光。
STING细胞信号传导途径评估
通过磷酸化STING(S366)、磷酸化TBK1(S172)和磷酸化IRF3(S396)的蛋白质印迹在THP1 BLUE ISG细胞中测量STING途径的激动。简而言之，将90μL核转染缓冲液中的500万个细胞与10μL测试化合物混合。将这些混合物使用程序V-001在Amaxa Nucleofector(Lonza)上电穿孔。将细胞转移到具有新鲜培养基的12孔板中，并使其在37℃、5％CO2下回收一小时。然后将细胞在冷HBSS中洗涤并溶于RIPA缓冲液中。将样品进行总蛋白归一化，并且在蛋白质简单样品缓冲液或LDS加载缓冲液中稀释。样品在95℃下热变性5min，然后使用PeggySue(ProteinSimple)测量磷酸化STING和总STING和IRF3，同时使用NuPAGE(Invitrogen)系统测量TBK1。分别使用Compass或Licor Odsey软件分析数据。
STING体内活性
就所有研究而言，雌性Balb/c小鼠得自查尔斯河实验室(Charles River Labs)(马萨诸塞州威尔明顿(Wilmington，MA))，并且当它们在6至8周龄时使用且体重大约20g。在实验使用之前，允许所有动物适应环境并从任何与运输相关的压力中恢复至少5天。随意提供反渗透氯化水和经照射的食物(实验室可高压消毒的啮齿动物饮食5010，实验室饮食)，并且将动物在12h光照和黑暗循环中保持不变。使用前对笼子和寝具进行高压消毒，标签每周更换一次。所有实验都根据《实验室动物护理和使用指南(The Guide for the Careand Use of Laboratory Animals)》进行，并得到了宾夕法尼亚州春天之家Janssen R&D机构动物护理和使用委员会(Institutional Animal Care and Use Committee of JanssenR&D,Spring House,PA)的批准。每个实验组含有8只小鼠。通过将500,000个CT26结肠癌肿瘤细胞皮下植入Balb/c小鼠并使肿瘤建立到100mm3至300mm3来确定小鼠CT26肿瘤模型的体内功效。
将化合物以0.1mL/注射的体积在磷酸盐缓冲盐水中在瘤内注射配制。每三天给小鼠施用0.05mg，总共三剂。当所有对照动物仍在研究时，如根据下式：((C-T)/(C))*100，通过治疗肿瘤体积(T)相对于对照肿瘤体积(C)的尺寸减小而计算出的肿瘤生长抑制百分比(TGI)来测量功效。将治愈定义为在施用最后一剂后，检测到在10个肿瘤体积倍增时间(TVDT)下没有可测量肿瘤的动物数量。
所得数据示于表2中。
表2.
通过在24小时暴露后在THP-1细胞中测试的剂量范围(0.78μM至50μM)内
以pg/ml计的总累积IFN-β诱导来确定人IFN-β排序值
*IC50和EC50为至少三个值的平均值。
**每组8只小鼠
(-)未完成。
生物学实施例2
STING原代人PBMC细胞因子诱导测定
在来源于人全血的原代人外周血单核细胞(PBMC)中评估人STING途径的激动，将1品脱(大约420mL)的新鲜供体血液(AllCells Inc.，Alameda，CA)在淋巴细胞分离培养基(1.077g/mL-1.080g/mL，Corning，Manassas，VA)上层化，然后在RT下以500g离心20min而不进行破碎。收获在血清和淋巴细胞分离培养基之间的界面处收集的PBMC，洗涤，然后计数。PBMC由淋巴细胞和单核细胞(诸如B细胞、T细胞等)的亚型构成，并且这些亚型已在文献中表征为表达不同水平的STING蛋白。响应于STING激动剂，诸如2’3’-cGAMP，这些细胞被激活并且被诱导以表达多种促炎和抗病毒细胞因子。另外，在用STING激动剂刺激时，这些细胞上调激活标记。细胞因子诱导水平可通过多种方法测量，包括ELISA、Luminex和MSD。激活标记上调的水平可通过流式细胞术测量。
为了进行测定，可将1,000,000个细胞分配到225μL/孔的平底组织培养物处理过的96孔板中。可在10x浓度下以25μL的体积加入测试化合物。可将一些化合物溶于100％DMSO中，并且在接受这些化合物的培养物中DMSO的最终浓度可为1％。可将测定在37℃、5％CO2下温育48h。可收获200μL上清液，而不干扰平板的底部上的细胞，然后在-20℃下冷冻直至Luminex测量的时间。按照制造商的方案，可使用来自MILLIPLEX MAP人细胞因子/趋化因子磁珠面板-免疫多重测定试剂盒的G-CSF、IFNα2、IFNγ、IL-1b、IL-6、IL-10、IL-12(p40)、IL-12(p70)、TNFa以及来自MILLIPLEX MAP人细胞因子/趋化因子磁珠面板IV试剂盒(EMDMillipore,Billerica,MA)的IFNβ1分析物进行Luminex测定。可使用Luminex FlexMAP
仪器(Luminex Corporation,Radnor,PA)测量细胞因子诱导。可使用MILLIPLEX Analyst软件(EMD Millipore)对收集的Luminex数据进行分析。
使用来自STING激活的原代人PBMC的条件培养基抑制PHH细胞中的HBV病毒
原代人肝细胞可被乙型肝炎病毒感染，并且在已建立的感染期间，将产生可通过ELISA检测的病毒蛋白诸如HBsAg和HBeAg。用化合物诸如恩替卡韦进行的治疗处理可抑制HBV繁殖，这可通过降低的病毒蛋白产量来测量。可将(细胞数)4×105个细胞/孔原代人肝细胞(BioReclamation,Westbury,NY)分配到500μL/孔的平底组织培养物处理过的24孔板中。24h后，用30moi至75moi的HBV感染细胞。第二天，可将PHH洗涤3次，并可将新鲜的维持培养基加入到细胞中。同时，可如前所述分离PBMC。为了刺激PBMC，可将10,000,000个细胞分配到400μL/孔的平底组织培养物处理过的24孔板中。可以100μL的体积加入测试化合物，然后可将培养物在37℃、5％CO2下温育48h。可收获上清液。可使用流式细胞术测量细胞的激活标记上调。简而言之，细胞可用针对CD56、CD19、CD3、CD8a、CD14、CD69、CD54、CD161、CD4和CD80的荧光标记抗体进行染色。可在Attune NxT流式细胞计((Thermo Fisher,Carlsbad,CA)上分析样品
如前文所述，从受刺激的PBMC培养物中，可保留一部分上清液用于Luminex的细胞因子检测。可将剩余的上清液分成两半，并且可将一份等分试样储存在4℃下以用于测定的d8上。可将另一份上清液等分试样用2XPHH培养基以1:1稀释，然后可加入到d4感染的PHH细胞中。96h后，可更换用过的培养基，并可用2X PHH培养基以1:1的稀释度加入上清液。此时，可使用HBsAg ELISA试剂盒(Wantai Bio-pharm,Beijing,China)进行HBsAg的临时测量。96h后，可收集培养基并可测量HBsAg。
尽管上述说明通过提供的实施例用于说明目的来指出了本发明的原理，但应当理解，本发明的实践涵盖以下权利要求书及其等同形式的范围内的一般变型形式、改变形式和/或修改形式。
Claims (25)
1.一种式(I)的化合物
其中：
B1和B2独立地选自b1、b2、b3、b4、b5、b6、b7、b8、b9、b10、b11、b12、b13、b14、b15、b16、b17、b18、b19、b20、b21、b22、b23、b24、b25、b26、b27、b28、b29、b30、b31、b32和b33；
R1a独立地选自氢；羟基；氟；任选独立地被一至七个卤素取代基或甲氧基取代的C1-3烷氧基；C3-6烯氧基；C2-6炔氧基；羟基(C1-3)烷氧基；或者任选独立地被一至三个选自氟、氯、溴、碘或羟基的取代基取代的C1-3烷基；
R1b独立地选自氢、氟或羟基；前提条件是当R1b为氟时，R1a为氢或氟；
R1c独立地选自氢或甲基；
R2a独立地选自氢；羟基；氟；任选独立地被一至七个卤素取代基或甲氧基取代的C1-3烷氧基；C3-6烯氧基；C2-6炔氧基；羟基(C1-3)烷氧基；或者任选独立地被一至三个选自氟、氯、溴、碘或羟基的取代基取代的C1-3烷基；并且R3为氢；
或者，R2a为-O-并且R2c为-CH2-；使得R2a、R2c以及它们所连接的原子形成5元环；
R2b独立地选自氢、氟或羟基；前提条件是当R2b为氟时，R2a为氢或氟；
R2c独立地选自氢、氟、CH3或CH2F；
X1和X2独立地选自O、S和CH2；
Y和Y1各自独立地不存在或者选自O或NH；
Z和Z1独立地选自O和NH；
M和M1中的一者为
并且M和M1中的另一者独立地选自
使得当M为
时，Y和Z中的一者为NH，并且Y和Z中的另一者为O；
并且，使得当M1为
时，Y1和Z1中的一者为NH，并且Y1和Z1中的另一者为O；
R4独立地选自羟基、甲基、BH3和-SR5；其中R5独立地选自氢、-CH2O(O)R6、-CH2OC(O)OR6、-CH2CH2SC(O)R6和-CH2CH2S-SCH2R6；
R6独立地选自C6-10芳基，杂芳基，杂环烷基，C3-12环烷基，以及任选独立地被一至五个氟或羟基取代基取代的C1-20烷基，C1-6烷基，C6-10芳基或C3-12环烷基；
或者其对映体、非对映体或药学上可接受的盐形式；
前提条件是当B1和B2各自为b6，并且Z-M-Y为OS(O2)NH，并且Y1-M1-Z1为OP(O)(OH)O或OP(O)(SH)O时，则R1a不是OH；
前提条件是式(I)的化合物不是这样的化合物，其中B2为b6；X2为O；R2a为OCH3；R2b为H；R2c为H；Z-M-Y为OS(O)2NH；Y1-M1-Z1为OP(O)(OH)O；B1为b7；Xl为O；R1a为OCH3；R1b为H；并且R1c为H；
前提条件是式(I)的化合物不是这样的化合物，其中B2为b6；X2为O；R2a为F；R2b为H；R2c为H；Z-M-Y为(*R)OP(O)(SH)O；Y1-M1-Z1为NHS(O)2O；B1为b21；X1为O；R1a为OH；R1b为H；并且R1c为H；
前提条件是式(I)的化合物不是这样的化合物，其中B2为b30；X2为O；R2a为H；R2b为H；R2c为H；Z-M-Y为OS(O)2NH；Y1-M1-Z1为OP(O)(OH)O；B1为b7；X1为O；R1a为OCH3；R1b为H；并且R1c为H。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中R1a独立地选自氢；羟基；氟；甲氧基；羟基(C1-3)烷氧基；或任选独立地被一至七个氟取代基取代的C1-3烷基。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中B1和B2各自为b6
4.根据权利要求1所述的化合物，其中B1为b6并且B2为b7。
5.根据权利要求1所述的化合物，其中Z-M-Y为OSO2NH，并且Y1–M1–Z1为OP(O)(OH)O或OP(O)(SH)O。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中Z-M-Y为OP(O)(OH)O或OP(O)(SH)O，并且Y1-M1-Z1为NHSO2O。
7.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物选自化合物1至55
或其药学上可接受的盐形式。
8.根据权利要求7所述的化合物，所述化合物选自
或其药学上可接受的盐形式。
9.一种药物组合物，所述药物组合物包含药学上可接受的载体、药学上可接受的赋形剂和药学上可接受的稀释剂中的至少一种，以及根据权利要求1至8中任一项所述的化合物。
10.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述组合物为固体口服剂型。
11.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述组合物为糖浆、酏剂或悬浮液。
12.一种药物组合物，所述药物组合物包含药学上可接受的载体、药学上可接受的赋形剂和药学上可接受的稀释剂中的至少一种，以及根据权利要求7所述的化合物。
13.一种治疗由STING调制的疾病、综合征或病症的方法，所述方法包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1所述的化合物。
14.一种治疗疾病、综合征或病症的方法，其中所述疾病、综合征或病症受STING激动的影响，所述方法包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1所述的化合物。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述疾病、综合征或病症为癌症。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述癌症选自黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌和纤维肉瘤。
17.根据权利要求14所述的方法，其中所述疾病、综合征或病症为病毒感染。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述病毒感染为乙型肝炎。
19.一种治疗疾病、综合征或病症的方法，所述疾病、综合征或病症选自病毒感染、黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌和纤维肉瘤，所述方法包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的根据权利要求9所述的组合物。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述病毒感染为乙型肝炎。
21.一种治疗疾病、综合征、病症或障碍的方法，其中所述疾病、综合征、病症或障碍受STING激动的影响，所述方法包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的(a)式(I)的化合物或其药学上可接受的盐形式；以及(b)溶瘤病毒或抗癌疫苗。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述抗癌疫苗独立地选自抗原疫苗、全细胞疫苗、树突状细胞激活疫苗、DNA疫苗、卡介苗(BCG)疫苗、Sipuleucel-T(Provenge)、Talimogene laherparepvec(T-Vec；ImlygicTM)、基于溶瘤病毒的疫苗和基于腺病毒的疫苗。
23.根据权利要求1所述的化合物在制备用于治疗对其有需要的受试者中的疾病、综合征或病症的药物中的用途，所述疾病、综合征或病症选自病毒感染、黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌和纤维肉瘤。
24.根据权利要求1所述的化合物的用途，用于治疗对其有需要的受试者中的疾病、综合征或病症的方法中，所述疾病、综合征或病症选自病毒感染、黑素瘤、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌和纤维肉瘤。
25.一种能够用于制备式(I)的某些化合物的化合物17a
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201762599111P | 2017-12-15 | 2017-12-15 | |
| US62/599,111 | 2017-12-15 | ||
| PCT/US2018/065677 WO2019118839A1 (en) | 2017-12-15 | 2018-12-14 | Cyclic dinucleotides as sting agonists |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111712509A true CN111712509A (zh) | 2020-09-25 |
Family
ID=65003521
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201880089451.3A Pending CN111712509A (zh) | 2017-12-15 | 2018-12-14 | 作为sting激动剂的环状二核苷酸 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20210009630A1 (zh) |
| EP (1) | EP3724205B1 (zh) |
| JP (1) | JP7317014B2 (zh) |
| KR (1) | KR20200099178A (zh) |
| CN (1) | CN111712509A (zh) |
| AU (1) | AU2018386222B2 (zh) |
| BR (1) | BR112020010941A2 (zh) |
| CA (1) | CA3085337A1 (zh) |
| ES (1) | ES2927194T3 (zh) |
| MX (1) | MX2020006290A (zh) |
| WO (1) | WO2019118839A1 (zh) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111511754B (zh) | 2017-12-20 | 2023-09-12 | 捷克共和国有机化学与生物化学研究所 | 活化sting转接蛋白的具有膦酸酯键的2’3’环状二核苷酸 |
| EP3728283B1 (en) | 2017-12-20 | 2023-11-22 | Institute of Organic Chemistry and Biochemistry ASCR, V.V.I. | 3'3' cyclic dinucleotides with phosphonate bond activating the sting adaptor protein |
| EP4242212A3 (en) * | 2018-03-23 | 2023-11-15 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Sting modulator compounds with sulfamate linkages, and methods of making and using |
| TWI818007B (zh) | 2018-04-06 | 2023-10-11 | 捷克科學院有機化學與生物化學研究所 | 2'3'-環二核苷酸 |
| KR20200140867A (ko) | 2018-04-06 | 2020-12-16 | 인스티튜트 오브 오가닉 케미스트리 앤드 바이오케미스트리 에이에스 씨알 브이.브이.아이. | 3'3'-사이클릭 다이뉴클레오티드 |
| WO2020092127A1 (en) | 2018-10-29 | 2020-05-07 | Venenum Biodesign, LLC | Novel sting agonists |
| US11110106B2 (en) | 2018-10-29 | 2021-09-07 | Venenum Biodesign, LLC | Sting agonists for treating bladder cancer and solid tumors |
| JP2022538690A (ja) | 2019-07-05 | 2022-09-05 | タンボ・インコーポレイテッド | トランス－シクロオクテン生体直交型薬剤並びに癌及び免疫療法における使用 |
| WO2021206158A1 (ja) | 2020-04-10 | 2021-10-14 | 小野薬品工業株式会社 | がん治療方法 |
| CN116056765A (zh) | 2020-08-07 | 2023-05-02 | 坦伯公司 | 反式环辛烯生物正交剂及在癌症和免疫疗法中的用途 |
| TW202321275A (zh) * | 2021-07-14 | 2023-06-01 | 美商健生生物科技公司 | 介白素—２３受體之雙環肽抑制劑 |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5470967A (en) * | 1990-04-10 | 1995-11-28 | The Dupont Merck Pharmaceutical Company | Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages |
| GB0018891D0 (en) | 2000-08-01 | 2000-09-20 | Novartis Ag | Organic compounds |
| AU2002234755A1 (en) | 2001-02-26 | 2002-09-12 | Pharma Pacific Pty Ltd | Interferon-alpha induced gene |
| MX2007015942A (es) | 2005-07-01 | 2008-03-07 | Medarex Inc | Anticuerpos monoclonales humanos para ligandos 1 (pd-l1) de muerte programada. |
| AU2009288289B2 (en) | 2008-08-25 | 2012-11-08 | Amplimmune, Inc. | PD-1 antagonists and methods of use thereof |
| TWI686405B (zh) | 2008-12-09 | 2020-03-01 | 建南德克公司 | 抗ｐｄ-ｌ１抗體及其於增進ｔ細胞功能之用途 |
| JP2012521359A (ja) * | 2009-03-20 | 2012-09-13 | アリオス バイオファーマ インク． | 置換されたヌクレオシドアナログおよびヌクレオチドアナログ |
| EP2504028A4 (en) | 2009-11-24 | 2014-04-09 | Amplimmune Inc | SIMULTANEOUS INHIBITION OF PD-L1 / PD-L2 |
| KR102049817B1 (ko) | 2011-08-01 | 2019-12-02 | 제넨테크, 인크. | Pd-1 축 결합 길항제 및 mek 억제제를 사용하는 암 치료 방법 |
| RU2722019C2 (ru) * | 2015-12-03 | 2020-05-26 | Глэксосмитклайн Интеллекчуал Проперти Дивелопмент Лимитед | Циклические пуриновые динуклеотиды в качестве модуляторов sting |
| CA3017524A1 (en) * | 2016-03-18 | 2017-09-21 | Immune Sensor, Llc | Cyclic di-nucleotide compounds and methods of use |
| TW202030199A (zh) * | 2018-07-17 | 2020-08-16 | 美商健生生物科技公司 | 作為ｓｔｉｎｇ促效劑之環狀二核苷酸 |
-
2018
- 2018-12-14 WO PCT/US2018/065677 patent/WO2019118839A1/en unknown
- 2018-12-14 CN CN201880089451.3A patent/CN111712509A/zh active Pending
- 2018-12-14 KR KR1020207020280A patent/KR20200099178A/ko not_active Application Discontinuation
- 2018-12-14 ES ES18830620T patent/ES2927194T3/es active Active
- 2018-12-14 BR BR112020010941-0A patent/BR112020010941A2/pt unknown
- 2018-12-14 US US16/771,480 patent/US20210009630A1/en not_active Abandoned
- 2018-12-14 JP JP2020532731A patent/JP7317014B2/ja active Active
- 2018-12-14 EP EP18830620.3A patent/EP3724205B1/en active Active
- 2018-12-14 CA CA3085337A patent/CA3085337A1/en active Pending
- 2018-12-14 MX MX2020006290A patent/MX2020006290A/es unknown
- 2018-12-14 AU AU2018386222A patent/AU2018386222B2/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2019118839A1 (en) | 2019-06-20 |
| JP2021506803A (ja) | 2021-02-22 |
| AU2018386222B2 (en) | 2023-04-20 |
| KR20200099178A (ko) | 2020-08-21 |
| CA3085337A1 (en) | 2019-06-20 |
| US20210009630A1 (en) | 2021-01-14 |
| JP7317014B2 (ja) | 2023-07-28 |
| EP3724205B1 (en) | 2022-06-22 |
| ES2927194T3 (es) | 2022-11-03 |
| MX2020006290A (es) | 2020-12-03 |
| AU2018386222A1 (en) | 2020-06-04 |
| EP3724205A1 (en) | 2020-10-21 |
| RU2020123259A (ru) | 2022-01-17 |
| RU2020123259A3 (zh) | 2022-01-17 |
| BR112020010941A2 (pt) | 2020-11-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111712509A (zh) | 作为sting激动剂的环状二核苷酸 | |
| JP7275031B2 (ja) | Ｓｔｉｎｇアゴニストとしての環状ジヌクレオチド | |
| TWI696629B (zh) | 作為ｓｔｉｎｇ促效劑之環狀雙核苷酸化合物 | |
| KR20190085107A (ko) | Sting 작용제로서의 환상 다이뉴클레오티드 | |
| CN110997691A (zh) | 作为抗癌剂的环二核苷酸 | |
| CN111344297B (zh) | 作为抗癌剂的环二核苷酸 | |
| EP3752516B1 (en) | Cyclic dinucleotides as anticancer agents | |
| AU2005313912A1 (en) | 2' and 3' - substituted cyclobutyl nucleoside analogs for the treatment of viral infections and abnormal cellular proliferation | |
| EP3727401A1 (en) | Cyclic di-nucleotide compounds as sting agonists | |
| CN111032672A (zh) | 作为抗癌剂的环二核苷酸 | |
| CN112888696A (zh) | 外核苷酸酶抑制剂及其使用方法 | |
| CN115175907A (zh) | 可用作t细胞激活剂的经取代的哌嗪衍生物 | |
| CN112424212A (zh) | 作为sting激动剂的环状二核苷酸 | |
| JP7250808B2 (ja) | 抗がん剤としての環状ジヌクレオチド | |
| RU2776060C2 (ru) | Циклические динуклеотиды в качестве агонистов sting | |
| WO2022083584A1 (zh) | 多功能环二核苷酸及其用途 | |
| EA044559B1 (ru) | Циклические динуклеотиды в качестве агонистов sting | |
| CN117015383A (zh) | 多功能环二核苷酸及其用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: DE Ref document number: 40036615 Country of ref document: HK |