TWI696629B

TWI696629B - 作為ｓｔｉｎｇ促效劑之環狀雙核苷酸化合物

Info

Publication number: TWI696629B
Application number: TW105125657A
Authority: TW
Inventors: 麥克Ｄ阿特曼; 布萊恩安德森; 溫素張; 馬修洛伊德喬得思; 傑瑞Ｎ卡門; 安德魯馬可海朵; 堤摩西Ｊ韓德森; 詹姆士Ｐ喬維爾; 盧茵賴; 鍾元林; 紅劉; 盧旻; 艾倫Ｂ紐索坡; 萊恩Ｄ奧特; 東尼蕭; 班傑明衛斯里特洛特; 進光張; 夏恩Ｐ華許; 卡克趙
Original assignee: 美商默沙東藥廠
Priority date: 2015-08-13
Filing date: 2016-08-11
Publication date: 2020-06-21
Also published as: CN108137641A; CR20180101A; DOP2018000046A; CA2995365A1; KR102271750B1; UA123701C2; EP3334745A1; MX2018001814A; AU2016304899A1; BR112018002757A2; US10738074B2; CO2018001425A2; JP6596146B2; PH12018500299A1; EA201890450A1; GEP20207182B; CL2018000385A1; WO2017027646A1; BR112018002757A8; KR20180030926A

Abstract

本發明提供一類通式(I)、通式(I')或通式(I")之多環化合物，其中鹼基¹、鹼基²、Y、Y^a、X^a、X^a1、X^b、X^b1、X^c、X^c1、X^d、X^d1、R¹、R^1a、R²、R^2a、R³、R⁴、R^4a、R⁵、R⁶、R^6a、R⁷、R^7a、R⁸及R^8a定義於本文中，該等化合物可用作I型干擾素產生之誘導劑，特別是可用作STING活性劑。本發明亦提供合成化合物之方法及化合物之用途。

Description

作為STING促效劑之環狀雙核苷酸化合物

相關申請案之交叉參考

不適用

本發明係關於可用作活化STING路徑之STING(干擾素基因刺激因子)促效劑之環狀雙核苷酸化合物及其衍生物。本發明亦係關於合成該等環狀雙核苷酸化合物之製程及其用途。

免疫系統已進化為識別且中和不同類型之威脅以維持宿主穩態，且其通常分成以下兩組：適應性及先天性。適應性免疫系統專門識別並非天然表現於宿主中之外來抗原且經由許多白血球子組之協調作用來確立抗抗原反應。適應性免疫反應之標誌在於其能夠針對所遇到抗原提供「記憶」或長效免疫性。儘管此特定及長效效應對於宿主健康及存活至關重要，但適應性免疫反應需要一定時間來生成完善反應。

先天性免疫系統補償此時間延遲且專門快速作用於不同損傷或危險信號。其提供針對細菌、病毒、寄生蟲及其他感染性威脅之第一道防線，但其亦對某些與細胞或組織損害有關之危險信號具有強烈反應。先天性免疫系統具有抗原特異性，但對各種效應物機制具有反應。補體系統之調理作用、吞噬作用、活化及可溶性生物活性分子(例如細胞介素或趨化介素)之產生係先天性免疫系統調介其反應之所有機制。藉由對該等上述損害相關分子模式(DAMP)或病原體相關分子模式(PAMP)作出反應，先天性免疫系統能夠針對宿主之各種威脅提供廣泛保護。

游離胞質DNA及RNA符合該等PAMP及DAMP。最近已證實，用於胞質DNA之主要感測物係cGAS(環狀GMP-AMP合酶)。在識別胞質DNA後，cGAS催化環狀雙核苷酸2’-3’cGAMP(強烈結合ER-跨膜轉接蛋白STING之非典型第二傳訊者)之生成。cGAMP結合之STING發生構象變化，其易位至核周隔室中且誘導關鍵轉錄因子IRF-3及NF-κB之活化。此引起I型干擾素之強烈誘導及促發炎細胞介素(例如IL-6、TNF-α及IFN-γ)之產生。

已極其充分地確定I型干擾素及促發炎細胞介素對免疫系統之各種細胞之重要性。特定而言，該等分子藉由增強樹突細胞及巨噬球攝取抗原、加以處理、呈遞且交叉呈遞至T細胞之能力來強烈強化T細胞活化。藉由上調關鍵共刺激分子(例如CD80或CD86)來增大該等抗原呈遞細胞之細胞刺激能力。最終，I型干擾素可快速接合其同源受體且觸發干擾素反應基因之活化，此可顯著有助於適應性免疫細胞活化。

自治療角度考慮，已展示，I型干擾素藉由直接抑制人類B型肝炎病毒及C型肝炎病毒複製且藉由刺激對病毒感染細胞之免疫反應而具有抗病毒活性。將可誘導I型干擾素產生之化合物用於疫苗中，其中其用作佐劑，從而藉由減小劑量且擴大免疫反應來增強對抗原之特異性免疫反應且最小化副效應。

另外，干擾素及可誘導干擾素產生之化合物具有治療人類癌症之潛在用途。該等分子可用作具有多條活性路徑之抗癌劑。干擾素可直接抑制人類腫瘤細胞增殖且可與各種已批准化學治療劑協同作用。I型干擾素可藉由誘導適應性及先天性免疫細胞之活化來顯著增強抗腫瘤免疫反應。最後，干擾素可藉由調節與組織再建模相關之酶表現來抑制腫瘤侵襲。

鑒於I型干擾素及I型干擾素誘導化合物作為抗病毒劑及抗癌劑之潛力，仍需要可誘導強效I型干擾素產生之新藥劑。隨著愈來愈多之數據顯示cGAS-STING胞質DNA感覺路徑具有誘導I型干擾素之顯著能力，STING活化劑之研發在當前抗腫瘤療法領域中正快速佔據重要位置。

本發明係關於通式(I)、通式(I')及/或通式(I")之新穎環狀雙核苷酸化合物。特定而言，本發明係關於具有一般結構式(I)之化合物：

或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥，如本文所闡述。本發明亦係關於具有一般結構式(I')之化合物：

或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥，如本文所闡述。本發明亦係關於具有一般結構式(I")之化合物：

或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥，如本文所闡述。

本發明實施例包含通式(I)化合物、通式(I’)化合物及/或通式(I”)化合物及其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥以及通式(I)化合物、通式(I’)化合物及/或通式(I”)化合物及其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥之合成及分離。亦揭示通式(I)化合物、通式(I’)化合物及/或通式(I”)化合物之用途。

本發明之其他實施例、態樣及特徵進一步闡述於隨後之說明、實例及隨附申請專利範圍中或自說明、實例及隨附申請專利範圍將顯而易見。

不適用

本發明包含上述通式(I)化合物、通式(I’)化合物及/或通式(I”)化合物及其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥。該等化合物及其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物及/或前藥可用作誘導干擾素產生之藥劑。

本發明之第一實施例係關於通式(I)之環狀雙核苷酸化合物：

或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥，其中鹼基1 及鹼基²各自獨立地選自由以下組成之群：

、

、

、

、

及

，其中鹼基¹及鹼基²各自可獨立地經0-3個取代基R¹⁰取代，其中每一R¹⁰獨立地選自由以下組成之群：F、Cl、I、Br、OH、SH、NH₂、C_1-3烷基、C_3-6環烷基、O(C_1-3烷基)、O(C_3-6環烷基)、S(C_1-3烷基)、S(C_3-6環烷基)、NH(C_1-3烷基)、NH(C_3-6環烷基)、N(C_1-3烷基)₂及N(C_3-6環烷基)₂；Y及Y^a各自獨立地選自由以下組成之群：-O-、-S-、-SO₂-、-CH₂-及-CF₂-；X^a及X^a1各自獨立地選自由以下組成之群：O、C及S；X^b及X^b1各自獨立地選自由以下組成之群：O、C及S；X^c及X^c1各自獨立地選自由以下組成之群：O^-、S^-、OR⁹及NR⁹R⁹；X^d及X^d1各自獨立地選自由O及S組成之群；R¹及R^1a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該等R¹及R^1aC₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-0-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R²及R^2a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆ 烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該等R²及R^2a C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R³係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該等R³ C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R⁴及R^4a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該等R⁴及R^4a C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R⁵係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該等R⁵ C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R⁶及R^6a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該等R⁶及R^6a C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R⁷及R^7a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該等R⁷及R^7a C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R⁸及R^8a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₂、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該等R⁸及R^8a C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；每一R⁹獨立地選自由以下組成之群：H、C₁-C₂₀烷基、

及

，其中每一R⁹ C₁-C₂₀烷基視情況經0至3個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代：OH、-O-C₁-C₂₀烷基、-S-C(O)C₁-C₆烷基及C(O)OC₁-C₆烷基；R^1a及R³視情況連結形成C₁-C₆伸烷基、C₂-C₆伸烯基、C₂-C₆伸炔基、-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R^1a及R³連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R³位置處；R^2a及R³視情況連結形成C₁-C₆伸烷基、C₂-C₆伸烯基、C₂-C₆伸炔基、-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R^2a及R³連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R³位置處；R³及R^6a視情況連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R³及R^6a連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R³位置處；R⁴及R⁵視情況連結形成C₁-C₆伸烷基、C₂-C₆伸烯基、C₂-C₆伸炔基、-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R⁴及R⁵連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R⁵位置處；R⁵及R⁶視情況連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R⁵及R⁶連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R⁵位置處；R⁷及R⁸視情況連結形成C₁-C₆伸烷基、C₂-C₆伸烯基或C₂-C₆伸炔基；且R^7a及R^8a視情況連結形成C₁-C₆伸烷基、C₂-C₆伸烯基或C₂-C₆伸炔基。

在此實施例之態樣中，在Y及Y^a各自係O，且鹼基¹及鹼基²各自選自由

及

組成之群時，R⁵及R³並不皆選自由以下組成之群：OH、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，且其中該等R⁵ -O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基及該等R³ -O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃。

在第一實施例之第一態樣中，鹼基¹及鹼基²各自獨立地選自由以下組成之群：

、

、

、

、

、

、

、

、

、

及

，其中鹼基¹及鹼基²各自可獨立地經0-3個取代基R¹⁰取代，其中每一R¹⁰ 獨立地選自由以下組成之群：F、Cl、I、Br、OH、SH、NH₂、C_1-3烷基、C_3-6環烷基、O(C_1-3烷基)、O(C_3-6環烷基)、S(C_1-3烷基)、S(C_3-6環烷基)、NH(C_1-3烷基)、NH(C_3-6環烷基)、N(C_1-3烷基)₂及N(C_3-6環烷基)₂。在特定情況下，鹼基¹及鹼基²各自獨立地選自由以下組成之群：

、

、

、

及

，其中鹼基¹及鹼基²各自可獨立地經0-3個取代基R¹⁰取代，其中每一R¹⁰獨立地選自由以下組成之群：F、Cl、I、Br、OH、SH、NH₂、C_1-3烷基、C_3-6環烷基、O(C_1-3烷基)、O(C_3-6環烷基)、S(C_1-3烷基)、S(C_3-6環烷基)、NH(C_1-3烷基)、NH(C_3-6環烷基)、N(C_1-3烷基)₂及N(C_3-6環烷基)₂。在甚至更特定情況下，鹼基¹及鹼基²各自獨立地選自由

及

組成之群，其中鹼基¹及鹼基²各自可獨立地經0-3個取代基R¹⁰取代，其中每一R¹⁰獨立地選自由以下組成之群：F、Cl、I、Br、OH、SH、NH₂、C_1-3烷基、C_3-6環烷基、O(C_1-3烷基)、O(C_3-6環烷基)、S(C_1-3烷基)、S(C_3-6環烷基)、NH(C_1-3烷基)、NH(C_3-6環烷基)、N(C_1-3烷基)₂及N(C_3-6環烷基)₂。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)中所提供。

在第一實施例之第二態樣中，Y及Y^a各自獨立地選自由-O-及-S-組成之群。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)或上述第一態樣中所提供。

在第一實施例之第三態樣中，X^a及X^a1各自獨立地選自由O及S組成之群。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)或上述第一態樣至第二態樣中所提供。

在第一實施例之第四態樣中，X^b及X^b1各自獨立地選自由O及S組成之群。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)或上述第一態樣至第三態樣中所提供。

在第一實施例之第五態樣中，X^c及X^c1各自獨立地選自由以下組成之群：O^-、S^-、OR⁹及NR⁹R⁹，其中每一R⁹獨立地選自由以下組成之群：H、C₁-C₂₀烷基、

及

，其中每一R⁹ C₁-C₂₀烷基視情況經0至3個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代：OH、-O-C₁-C₂₀烷基、-S-C(O)C₁-C₆烷基及C(O)OC₁-C₆烷基。在特定情況下，X^c及X^c1各自獨立地選自由以下組成之群：O^-、S^-、

及

。在此態樣之所有情況下，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)或上述第一態樣至第四態樣中所提供。

在第一實施例之第六態樣中，X^d及X^d1各自獨立地選自由O及S組成之群。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)或上述第一態樣至第五態樣中所提供。

在第一實施例之第七態樣中，R¹及R^1a各自係H。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)或上述第一態樣至第六態樣中所提供。

在第一實施例之第八態樣中，R²及R^2a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R²及R^2a C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃。在特定情況下，R²及R^2a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、CN、N₃、CF₃、CH₃、CH₂OH及CH₂CH₃。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)或上述第一態樣至第七態樣中所提供。

在第一實施例之第九態樣中，R³係選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R³ C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃。在特定情況下，R³各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、CN、N₃、CF₃、CH₃、CH₂OH及CH₂CH₃。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)或上述第一態樣至第八態樣中所提供。

在第一實施例之第十態樣中，R⁴及R^4a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R⁴及R^4a C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃。在特定情況下，R⁴ 及R^4a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、CN、N₃、CF₃、CH₃、CH₂OH及CH₂CH₃。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)或上述第一態樣至第九態樣中所提供。

在第一實施例之第十一態樣中，R⁵係選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R⁵ C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃。在特定情況下，R⁵各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、CN、N₃、CF₃、CH₃、CH₂OH及CH₂CH₃。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)或上述第一態樣至第十態樣中所提供。

在第一實施例之第十二態樣中，R⁶及R^6a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基及C₂-C₆炔基。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)或上述第一態樣至第十一態樣中所提供。

在第一實施例之第十三態樣中，R⁷及R^7a各自係H。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)或上述第一態樣至第十二態樣中所提供。

在第一實施例之第十四態樣中，R⁸及R^8a各自係H。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)或上述第一態樣至第十三態樣中所提供。

在第一實施例之第十五態樣中，R^1a及R³連結形成C₁-C₆伸烷基、C₂-C₆伸烯基、C₂-C₆伸炔基、-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R^1a及R³連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R³位置。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)或上述第一態樣至第十四態樣中所提供。

在第一實施例之第十六態樣中，R^2a及R³連結形成C₁-C₆伸烷基、C₂-C₆伸烯基、C₂-C₆伸炔基、-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R^2a及R³連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R³位置。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)或上述第一態樣至第十四態樣中所提供。

在第一實施例之第十七態樣中，R³及R^6a連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基及-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R³及R^6a連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R³位置。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)或上述第一態樣至第十四態樣中所提供。

在第一實施例之第十八態樣中，R⁴及R⁵連結形成C₁-C₆伸烷基、-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R⁴及R⁵連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R⁵位置。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)或上述第一態樣至第十四態樣中所提供。

在第一實施例之第十九態樣中，R⁵及R⁶連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R⁵及R⁶連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R⁵位置。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)或上述第一態樣至第十四態樣中所提供。

在第一實施例之第二十態樣中，R⁷及R⁸連結形成C₁-C₆伸烷基、C₂-C₆伸烯基或C₂-C₆伸炔基。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)或上述第一態樣至第十四態樣中所提供。

在第一實施例之第二十一態樣中，R^7a及R^8a連結形成C₁-C₆伸烷基、C₂-C₆伸烯基或C₂-C₆伸炔基。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)或上述第一態樣至第十四態樣中所提供。

在第一實施例之第二十二態樣中，鹼基¹及鹼基²各自獨立地選自由以下組成之群：

、

、

、

及

，其中鹼基¹及鹼基²各自可獨立地經0-3個取代基R¹⁰取代，其中每一R¹⁰獨立地選自由以下組成之群：F、Cl、I、Br、OH、SH、NH₂、C_1-3烷基、C_3-6環烷基、O(C_1-3烷基)、O(C_3-6環烷基)、S(C_1-3烷基)、S(C_3-6環烷基)、NH(C_1-3烷基)、NH(C_3-6環烷基)、N(C_1-3烷基)₂及N(C_3-6環烷基)₂；Y及Y^a各自獨立地選自由以下組成之群：-O-、-S-、-SO₂-、-CH₂-及-CF₂-；X^a及X^a1各自獨立地選自由O及S組成之群；X^b及X^b1各自獨立地選自由O及S組成之群；X^c及X^c1各自獨立地選自由以下組成之群：O^-、S^-、OR⁹及NR⁹R⁹；X^d及X^d1各自獨立地選自由O及S組成之群；R¹及R^1a各自係H；R²及R^2a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R²及R^2a C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R³係選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R³ C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R⁴及R^4a各自獨立地選自由以下組成之群：H、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R⁴及R^4a C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R⁵係選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R⁵ C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R⁶及R^6a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R⁶及R^6a C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R⁷及R^7a各自係H；R⁸及R^8a各自係H；每一R⁹獨立地選自由以下組成之群：H、C₂-C₃烷基、

及

，其中每一R⁹ C₂-C₃烷基視情況經1至2個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代：OH、-O-C₁-C₂₀烷基、-S-C(O)C₁-C₆烷基及C(O)OC₁-C₆烷基；R³及R^6a視情況連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基及-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R³及R^6a連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R³位置或R⁴及R⁵視情況連結形成C₁-C₆伸烷基、-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R⁴及R⁵連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R⁵位置。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)中所提供。

在第一實施例之第二十三態樣中，式(I)化合物係式(Ia)化合物：

或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥，其中鹼基¹ 及鹼基²各自獨立地選自由以下組成之群：

、

、

、

、

及

，其中鹼基¹及鹼基² 各自可獨立地經0-3個取代基R¹⁰取代，其中每一R¹⁰獨立地選自由以下組成之群：F、Cl、I、Br、OH、SH、NH₂、C_1-3烷基、C_3-6環烷基、O(C_1-3烷基)、O(C_3-6環烷基)、S(C_1-3烷基)、S(C_3-6環烷基)、NH(C_1-3烷基)、NH(C_3-6環烷基)、N(C_1-3烷基)₂及N(C_3-6環烷基)₂；X^c及X^c1各自獨立地選自由以下組成之群：O^-、S^-、OR⁹及NR⁹R⁹；R³係選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R³ C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、I、Br及OH；R⁵係選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R⁵ C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、I、Br及OH；R³及R⁵並不皆選自由以下組成之群：OH、經OH取代之C₁-C₆烷基及經OH取代之C₁-C₆鹵烷基；且每一R⁹獨立地選白由以下組成之群：H、C₂-C₃烷基、

及

，其中每一R⁹ C₂-C₃烷基視情況經1至2個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代：OH、-O-C₁-C₂₀烷基、-S-C(O)C₁-C₆烷基及C(O)OC₁-C₆烷基。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)中所提供。

在第一實施例之第二十四態樣中，式(I)化合物係式(Ib)化合物：

、

、

、

、

及

，其中鹼基¹及鹼基² 各自可獨立地經0-3個取代基R¹⁰取代，其中每一R¹⁰獨立地選自由以下組成之群：F、Cl、I、Br、OH、SH、NH₂、C_1-3烷基、C_3-6環烷基、O(C_1-3烷基)、O(C_3-6環烷基)、S(C_1-3烷基)、S(C_3-6環烷基)、NH(C_1-3烷基)、NH(C_3-6環烷基)、N(C_1-3烷基)₂及N(C_3-6環烷基)₂；X^c及X^c1各自獨立地選自由以下組成之群：O^-、S^-、OR⁹及NR⁹R⁹；R^1a係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該等R^1a C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R^2a係選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R^2a C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、I、Br及OH；R³係選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R³ C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、I、Br及OH；R⁵係選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R⁵ C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、I、Br及OH；R³及R⁵並不皆選自由以下組成之群：OH、經OH取代之C₁-C₆烷基及經OH取代之C₁-C₆鹵烷基；R^6a係選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基及C₂-C₆炔基；每一R⁹獨立地選自由以下組成之群：H、C₂-C₃烷基、

及

，其中每一R⁹ C₂-C₃烷基視情況經1至2個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代：OH、-O-C₁-C₂₀烷基、-S-C(O)C₁-C₆烷基及C(O)OC₁-C₆烷基；且R³及R^6a視情況連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基及-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R³及R^6a連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R³位置。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)中所提供。

在第一實施例之第二十五態樣中，式(I)化合物係式(Ic)化物：

或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥，其中鹼基¹及鹼基²各自獨立地選自由以下組成之群：

、

、

、

、

及

，其中鹼基¹及鹼基²各自可獨立地經0-3個取代基R¹⁰取代，其中每一R¹⁰獨立地選自由以下組成之群：F、Cl、I、Br、OH、SH、NH₂、C_1-3烷基、C_3-6環烷基、O(C_1-3烷基)、O(C_3-6環烷基)、S(C_1-3烷基)、S(C_3-6環烷基)、NH(C_1-3烷基)、NH(C_3-6環烷基)、N(C_1-3烷基)₂及N(C_3-6環烷基)₂；X^c及X^c1各自獨立地選自由以下組成之群：O^-、S^-、OR⁹及NR⁹R⁹；R³係選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R³ C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、I、Br及OH；R⁴係選自由以下組成之群：H、F、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R⁴ C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、I、Br及OH；R⁵係選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R⁵ C₁-C₆烷基或 C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、I、Br及OH；R³及R⁵並不皆選自由以下組成之群：OH、經OH取代之C₁-C₆烷基及經OH取代之C₁-C₆鹵烷基；R^6a係選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R^6a C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、I、Br及OH；每一R⁹獨立地選自由以下組成之群：H、C₂-C₃烷基、

及

，其中每一R⁹ C₂-C₃烷基視情況經1至2個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代：OH、-O-C₁-C₂₀烷基、-S-C(O)C₁-C₆烷基及C(O)OC₁-C₆烷基；且R⁴及R⁵視情況連結形成C₁-C₆伸烷基、-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R⁴及R⁵連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R⁵位置。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第一實施例之通式(I)中所提供。

第一實施例之第二十六態樣係關於一種醫藥組合物，該醫藥組合物包括(a)根據上文第一實施例之任一通式(I)或上述第一態樣至第二十五態樣中之化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥；及(b)醫藥上可接受之載劑。

第一實施例之第二十七態樣係關於誘導個體中之免疫反應之方法，其包括向該個體投與治療有效量之根據上文第一實施例之任一通式(I)或上述第一態樣至第二十五態樣中之化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥。

第一實施例之第二十八態樣係關於誘導個體中之免疫反應之方法，其包括向該個體投與治療有效量之根據上述第二十六態樣之組合物。

第一實施例之第二十九態樣係關於誘導個體中之STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包括向該個體投與治療有效量之根據上文第一實施例之任一通式(I)或上述第一態樣至第二十五態樣中之化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥。

第一實施例之第三十態樣係關於誘導個體中之STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包括向該個體投與治療有效量之根據上述第二十六態樣之組合物。

第一實施例之第三十一態樣係關於誘導個體中之STING依賴性細胞介素產生之方法，其包括向該個體投與治療有效量之根據上文第一實施例之任一通式(I)或上述第一態樣至第二十五態樣中之化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥。

第一實施例之第三十二態樣係關於誘導個體中之STING依賴性細胞介素產生之方法，其包括向該個體投與治療有效量之根據上述第二十六態樣之組合物。

本發明之第二實施例係關於通式(I’)之環狀雙核苷酸化合物：

、

、

、

、

、

、

及

，其中鹼基¹及鹼基²各自可獨立地經0-3個取代基R¹⁰取代，其中每一R¹⁰獨立地選自由以下組成之群：F、Cl、I、Br、OH、SH、NH₂、C_1-3烷基、C_3-6環烷基、O(C_1-3烷基)、O(C_3-6環烷基)、S(C_1-3烷基)、S(C_3-6環烷基)、NH(C_1-3烷基)、NH(C_3-6環烷基)、N(C_1-3烷基)₂及N(C_3-6環烷基)₂；Y及Y^a各自獨立地選自由-O-及-S-組成之群；X^a及X^a1各自獨立地選自由O及S組成之群；X^b及X^b1各自獨立地選自由O及S組成之群；X^c及X^c1各自獨立地選自由以下組成之群：OR⁹、SR⁹及NR⁹R⁹；X^d及X^d1各自獨立地選自由O及S組成之群；R¹及R^1a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該等R¹及R^1aC₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R²及R^2a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該等R²及R^2aC₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆ 炔基經O至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R³係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該等R³ C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R⁴及R^4a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該等R⁴及R^4a C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R⁵係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該等R⁵ C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN、NR⁹R⁹及N₃；R⁶及R^6a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該等R⁶及R^6a C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R⁷及R^7a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該等R⁷及R^7a C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R⁸及R^8a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該等R⁸及R^8a C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；每一R⁹獨立地選自由以下組成之群：H、C₁- C₂₀烷基、

及

，其中每一R⁹ C₁-C₂₀烷基視情況經0至3個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代：OH、-O-C₁-C₂₀烷基、-S-C(O)C₁-C₆烷基及C(O)OC₁-C₆烷基；R^1a及R³視情況連結形成C₁-C₆伸烷基、C₂-C₆伸烯基、C₂-C₆伸炔基、-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R^1a及R³連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R³位置；R^2a及R³視情況連結形成C₁-C₆伸烷基、C₂-C₆伸烯基、C₂-C₆伸炔基、-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R^2a及R³連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R³位置；R³及R^6a視情況連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R³及R^6a連結形成-O-C₁-C₆ 伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R³位置；R⁴及R⁵視情況連結形成C₁-C₆伸烷基、C₂-C₆伸烯基、C₂-C₆伸炔基、-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R⁴及R⁵連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R⁵位置；R⁵及R⁶視情況連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R⁵及R⁶連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R⁵位置；R⁷及R⁸視情況連結形成C₁-C₆伸烷基、C₂-C₆伸烯基或C₂-C₆伸炔基；且R^7a及R^8a視情況連結形成C₁-C₆伸烷基、C₂-C₆伸烯基或C₂-C₆伸炔基。

在此實施例中Y及Y^a各自係O，且鹼基¹及鹼基²各自選自由

及

組成之群之態樣中，R⁵及R³並不皆選自由以下組成之群：OH、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，且其中該等R⁵ -O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基及該等R³ -O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃。

在第二實施例之第一態樣中，鹼基¹及鹼基²各自獨立地選自由以下組成之群：

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

及

，其中鹼基¹及鹼基²各自可獨立地經0-3個取代基R¹⁰取代，其中每一R¹⁰獨立地選自由以下組成之群：F、Cl、I、Br、OH、SH、 NH₂、C_1-3烷基、C_3-6環烷基、O(C_1-3烷基)、O(C_3-6環烷基)、S(C_1-3烷基)、S(C_3-6環烷基)、NH(C_1-3烷基)、NH(C_3-6環烷基)、N(C_1-3烷基)₂及N(C_3-6環烷基)₂。在特定情況下，鹼基¹及鹼基²各自獨立地選自由以下組成之群：

、

、

、

、

及

及

組成之群，其中鹼基¹及鹼基²各自可獨立地經0-3個取代基R¹⁰取代，其中每一R¹⁰獨立地選自由以下組成之群：F、Cl、I、Br、OH、SH、NH₂、C_1-3烷基、C_3-6環烷基、O(C_1-3烷基)、O(C_3-6環烷基)、S(C_1-3烷基)、S(C_3-6環烷基)、NH(C_1-3烷基)、NH(C_3-6環烷基)、N(C_1-3烷基)₂及N(C_3-6環烷基)₂。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第二實施例之通式(I')中所提供。

在第二實施例之第二態樣中，X^c及X^c1各自獨立地選自由以下組成之群：OR⁹、SR⁹及NR⁹R⁹，其中每一R⁹獨立地選自由以下組成之群：H、C₁-C₂₀烷基、

及

及

。在此態樣之所有情況下，所有其他基團皆係如上文第二實施例之通式(I’)或上述第一態樣中所提供。

在第二實施例之第三態樣中，R¹及R^1a各自係H。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第二實施例之通式(I’)或上述第一態樣至第二態樣中所提供。

在第二實施例之第四態樣中，R²及R^2a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R²及R^2a C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃。在特定情況下，R²及R^2a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、 CN、N₃、CF₃、CH₃、CH₂OH及CH₂CH₃。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第二實施例之通式(I’)或上述第一態樣至第三態樣中所提供。

在第二實施例之第五態樣中，R³係選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R³ C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃。在特定情況下，R³各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、CN、N₃、CF₃、CH₃、CH₂OH及CH₂CH₃。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第二實施例之通式(I’)或上述第一態樣至第四態樣中所提供。

在第二實施例之第六態樣中，R⁴及R^4a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R⁴及R^4a C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃。在特定情況下，R⁴及R^4a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、CN、N₃、CF₃、CH₃、CH₂OH及CH₂CH₃。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第二實施例之通式(I’)或上述第一態樣至第五態樣中所提供。

在第二實施例之第七態樣中，R⁵係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R⁵ C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN、NR⁹R⁹及N₃。在特定情況下，R⁵各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、CN、N₃、CF₃、CH₃、CH₂OH及CH₂CH₃。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第二實施例之通式(I’)或上述第一態樣至第六態樣中所提供。

在第二實施例之第八態樣中，R⁶及R^6a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、I、Br、OH、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基及C₂-C₆炔基。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第二實施例之通式(I’)或上述第一態樣至第七態樣中所提供。

在第二實施例之第九態樣中，R⁷及R^7a各自係H。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第二實施例之通式(I’)或上述第一態樣至第八態樣中所提供。

在第二實施例之第十態樣中，R⁸及R^8a各自係H。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第二實施例之通式(I’)或上述第一態樣至第九態樣中所提供。

在第二實施例之第十一態樣中，R^1a及R³連結形成C₁-C₆伸烷基、C₂-C₆伸烯基、C₂-C₆伸炔基、-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R^1a及R³連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R³位置。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第二實施例之通式(I’)或上述第一態樣至第十態樣中所提供。

在第二實施例之第十二態樣中，R^2a及R³連結形成C₁-C₆伸烷基、C₂-C₆伸烯基、C₂-C₆伸炔基、-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R^2a及R³連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R³位置。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第二實施例之通式(I’)或上述第一態樣至第十一態樣中所提供。

在第二實施例之第十三態樣中，R³及R^6a連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基及-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R³及R^6a連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R³位置。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第二實施例之通式(I’)或上述第一態樣至第十一態樣中所提供。

在第二實施例之第十四態樣中，R⁴及R⁵連結形成C₁-C₆伸烷基、-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R⁴及R⁵連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R⁵位置。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第二實施例之通式(I’)或上述第一態樣至第十一態樣中所提供。

在第二實施例之第十五態樣中，R⁵及R⁶連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R⁵及R⁶連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R⁵位置。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第二實施例之通式(I’)或上述第一態樣至第十一態樣中所提供。

在第二實施例之第十六態樣中，R⁷及R⁸連結形成C₁-C₆伸烷基、C₂-C₆伸烯基或C₂-C₆伸炔基。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第二實施例之通式(I’)或上述第一態樣至第十一態樣中所提供。

在第二實施例之第十七態樣中，R^7a及R^8a連結形成C₁-C₆伸烷基、C₂-C₆伸烯基或C₂-C₆伸炔基。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第二實施例之通式(I’)或上述第一態樣至第十一態樣中所提供。

在第二實施例之第十八態樣中，鹼基¹及鹼基²各自獨立地選自由以下組成之群：

、

、

、

、

及

，其中鹼基¹及鹼基²各自可獨立地經0-3個取代基R¹⁰取代，其中每一R¹⁰獨立地選自由以下組成之群：F、Cl、I、Br、OH、SH、NH₂、C_1-3烷基、C_3-6環烷基、O(C_1-3烷基)、O(C_3-6環烷基)、S(C_1-3烷基)、S(C_3-6環烷基)、NH(C_1-3烷基)、NH(C_3-6環烷基)、N(C_1-3烷基)₂及N(C_3-6環烷基)₂；Y及Y^a各自獨立地選自由-O-及-S-組成之群；X^a及X^a1各自獨立地選自由O及S組成之群；X^b及X^b1各自獨立地選自由O及S組成之群；X^c及X^c1各自獨立地選自由以下組成之群：OR⁹、SR⁹及NR⁹R⁹；X^d及X^d1各自獨立地選自由O及S組成之群；R¹及R^1a各自係H；R²及R^2a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R²及R^2aC₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R³係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R³ C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R⁴及R^4a各自獨立地選自由以下組成之群：H、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R⁴及R^4a C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R⁵係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R⁵ C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN、NR⁹R⁹及N₃；R⁶及R^6a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R⁶及R^6a C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R⁷及R^7a各自係H；R⁸及R^8a各自係H；每一R⁹獨立地選自由以下組成之群：H、C₂-C₃烷基、

及

，其中每一R⁹ C₂-C₃烷基視情況經1至2個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代：OH、-O-C₁-C₂₀烷基、-S-C(O)C₁-C₆烷基及C(O)OC₁-C₆烷基； R³及R^6a視情況連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基及-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R³及R^6a連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R³位置；或R⁴及R⁵視情況連結形成C₁-C₆伸烷基、-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R⁴及R⁵連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R⁵位置。在此態樣中Y及Y^a各自係O，且鹼基¹及鹼基²各自選自由

及

組成之群之情況下，R⁵及R³並不皆係OH。在此態樣之所有情況下，所有其他基團皆係如上文第二實施例之通式(I’)中所提供。

在第二實施例之第十九態樣中，式(I')化合物係式(I'a)化合物：

、

、

、

、

、

、

及

，其中鹼基¹及鹼基²各自可獨立地經0-3個取代基R¹⁰取代，其中每一R¹⁰獨立地選自由以下組成之群：F、Cl、I、Br、OH、SH、NH₂、C_1-3烷基、C_3-6環烷基、O(C_1-3烷基)、O(C_3-6環烷基)、S(C_1-3烷基)、S(C_3-6環烷基)、NH(C_1-3烷基)、NH(C_3-6環烷基)、N(C_1-3烷基)₂及N(C_3-6環烷基)₂；X^c及X^c1各自獨立地選自由以下組成之群：OR⁹、SR⁹及NR⁹R⁹；R³係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R³ C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I及OH；R⁵係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R⁵ C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I及OH；R³及R⁵並不皆選自由以下組成之群：OH、經OH取代之R⁵C₁-C₆烷基或經OH取代之C₁-C₆鹵烷基；且每一R⁹獨立地選自由以下組成之群：H、C₂-C₃烷基、

及

，其中每一R⁹ C₂-C₃烷基視情況經1至2個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代：OH、-O-C₁-C₂₀烷基、-S-C(O)C₁-C₆烷基及C(O)OC₁-C₆烷基。在此態樣之所有情況下，所有其他基團皆係如上文第二實施例之通式(I’)中所提供。

在第二實施例之第二十態樣中，式(I’)化合物係式(I'b)化合物：

、

、

、

、

、

、

及

，其中鹼基¹及鹼基²各自可獨立地經0-3個取代基R¹⁰取代，其中每一R¹⁰獨立地選自由以下組成之群：F、Cl、I、Br、OH、SH、NH₂、C_1-3烷基、C_3-6環烷基、O(C_1-3烷基)、O(C_3-6環烷基)、S(C_1-3烷基)、S(C_3-6環烷基)、NH(C_1-3烷基)、NH(C_3-6環烷基)、N(C_1-3烷基)₂及N(C_3-6環烷基)₂；X^c及X^c1各自獨立地選自由以下組成之群：OR⁹、SR⁹及NR⁹R⁹；R^1a係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該等R^1a C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C_2-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R^2a係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R^2a C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I及OH；R³係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R³ C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I及OH；R⁵係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R⁵ C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I及OH；R³及R⁵並不皆選自由以下組成之群：OH、經OH取代之C₁-C₆烷基及經OH取代之C₁-C₆鹵烷基；R^6a係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基及C₂-C₆炔基；每一R⁹獨立地選自由以下組成之群：H、C₂-C₃烷基、

及

，其中每一R⁹ C₂-C₃烷基視情況經1至2個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代：OH、-O-C₁-C₂₀烷基、-S-C(O)C₁-C₆烷基及C(O)OC₁-C₆烷基；且R³及R^6a視情況連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基及-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R³及R^6a連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R³位置。在此態樣中Y及Y^a 各自係O，且鹼基¹及鹼基²各自選自由

及

組成之群之情況下，R⁵及R³並不皆係OH。在此態樣中，所有其他基團皆係如上文第二實施例之通式(I')中所提供。

在第二實施例之第二十一態樣中，式(I’)化合物係式(I'c)化合物：

、

、

、

、

、

、

及

，其中鹼基¹及鹼基²各自可獨立地經0-3個取代基R¹⁰取代，其中每一R¹⁰獨立地選自由以下組成之群：F、Cl、I、Br、OH、SH、NH₂、C_1-3烷基、C_3-6環烷基、O(C_1-3烷基)、O(C_3-6環烷基)、S(C_1-3烷基)、S(C_3-6環烷基)、NH(C_1-3烷基)、NH(C_3-6環烷基)、N(C_1-3烷基)₂及N(C_3-6環烷基)₂；X^c及X^c1各自獨立地選自由以下組成之群：OR⁹、SR⁹ 及NR⁹R⁹；R³係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R³ C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I及OH；R⁴係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R⁴ C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I及OH；R⁵係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R⁵ C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I及OH；R^6a係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該等R^6a C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I及OH；每一R⁹獨立地選自由以下組成之群：H、C₂-C₃烷基、

及

，其中每一R⁹ C₂-C₃烷基視情況經1至2個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代：OH、-O-C₁-C₂₀烷基、-S-C(O)C₁-C₆烷基及C(O)OC₁-C₆烷基；且R⁴及R⁵視情況連結形成C₁-C₆伸烷基、-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R⁴及R⁵連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R⁵位置。在此態樣中Y及Y^a各自係O，且鹼基¹及鹼基²各自選自由

及

第二實施例之第二十二態樣係關於一種醫藥組合物，該醫藥上可接受之組合物包括(a)根據上文第二實施例之任一通式(I')或上述第一態樣至第二十一態樣中之化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥；及(b)醫藥上可接受之載劑。

第二實施例之第二十三態樣係關於誘導個體中之免疫反應之方法，其包括向該個體投與治療有效量之根據上文第二實施例之任一通式(I')或上述第一態樣至第二十一態樣中之化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥。

第二實施例之第二十四態樣係關於誘導個體中之免疫反應之方法，其包括向該個體投與治療有效量之根據上述第二十二態樣之組合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥。

第二實施例之第二十五態樣係關於誘導個體中之STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包括向該個體投與治療有效量之根據上文第二實施例之任一通式(I')或上述第一態樣至第二十一態樣中之化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥。

第二實施例之第二十六態樣係關於誘導個體中之STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包括向該個體投與治療有效量之根據上述第二十二態樣之組合物。

第二實施例之第二十七態樣係關於誘導個體中之STING依賴性細胞介素產生之方法，其包括向該個體投與治療有效量之根據上文第二實施例之任一通式(I')或上述第一態樣至第二十一態樣中之化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥。

第二實施例之第三十三態樣係關於誘導個體中之STING依賴性細胞介素產生之方法，其包括向該個體投與治療有效量之根據上述第二十二態樣之組合物。

本發明之第三實施例係關於通式(I")之環狀雙核苷酸化合物：

、

、

、

、

、

；Y係選自由-O-及-S-組成之群；X^c及X^c1各自獨立地選自由OR⁹及SR⁹組成之群；X^d及X^d1各自獨立地選自由O及S組成之群；R^2a係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基；R³係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基；R⁴係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基；R⁵係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基；R^6a係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、 C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基；每一R⁹獨立地選自由以下組成之群：H、C₁-C₂₀烷基、

及

，其中每一R⁹ C₁-C₂₀烷基視情況經0至3個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代：OH、-O-C₁-C₂₀烷基、-S-C(O)C₁-C₆烷基及C(O)OC₁-C₆烷基；且R³及R^6a視情況連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R³及R^6a連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R³位置。

第三實施例之第一態樣係關於一種醫藥組合物，該醫藥組合物包括(a)根據第三實施例之任一通式(I")之化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥；及(b)醫藥上可接受之載劑。

第三實施例之第二態樣係關於誘導個體中之免疫反應之方法，其包括向該個體投與治療有效量之根據上文第三實施例之通式(I")之化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥。

第三實施例之第三態樣係關於誘導個體中之免疫反應之方法，其包括向該個體投與治療有效量之根據上述第一態樣之組合物。

第三實施例之第四態樣係關於誘導個體中之STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包括向該個體投與治療有效量之根據上文第三實施例之通式(I")之化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥。

第三實施例之第五態樣係關於誘導個體中之STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包括向該個體投與治療有效量之根據上述第二態樣之組合物。

第三實施例之第六態樣係關於誘導個體中之STING依賴性細胞介素產生之方法，其包括向該個體投與治療有效量之根據上文第三實施例之通式(I")之化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥。

第三實施例之第七態樣係關於誘導個體中之STING依賴性細胞介素產生之方法，其包括向該個體投與治療有效量之根據上述第二態樣之組合物。

在另一實施例中，該化合物係選自由以下組成之群：

、

及

及其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥。在特定態樣中，該化合物係選自由以下組成之群：

、

、

、

、

、及

及其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥。在更特定態樣中，該化合物係選自由以下組成之群：

及

及其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥。

在另一實施例中，對於通式(I)化合物、通式(I’)化合物及通式(I")化合物而言，變量鹼基¹、鹼基²、Y、Y^a、X^a、X^a1、X^b、X^b1、X^c、X^c1、X^d、X^d1、R¹、R^1a、R²、R^2a、R³、R⁴、R^4a、R⁵、R⁶、R^6a、R⁷、R^7a、R⁸、R^8a、R⁹及R¹⁰各自彼此獨立選擇。

在本發明之另一實施例中，本發明化合物係選自下文所展示實例1至348中所繪示之實例性物質。

本發明之其他實施例包含下列各項：

(a)一種醫藥組合物，其包括有效量之通式(I)化合物或通式(I’)化合物或通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥及醫藥上可接受之載劑。

(b)(a)之醫藥組合物，進一步包括選自由以下組成之群之第二治療劑：STING促效劑化合物、抗病毒化合物、抗原、佐劑、CTLA-4及PD-1路徑拮抗劑及其他免疫調節劑、脂質、脂質體、肽、抗癌劑及化學治療劑。

(c)一種醫藥組合，其係(i)通式(I)化合物或通式(I’)化合物或通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥，及(ii)選自由以下組成之群之第二治療劑：STING促效劑化合物、抗病毒化合物、抗原、佐劑、CTLA-4及PD-1路徑拮抗劑及其他免疫調節劑、脂質、脂質體、肽、抗癌劑及化學治療劑；其中通式(I)化合物或通式(I’)化合物或通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥，且第二治療劑各自係以致使該組合有效用於誘導患者中之免疫反應之量來採用。

(e)一種誘導患者中之免疫反應之方法，其包括向該個體投與有效量之通式(I)化合物或通式(I’)化合物或通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥。

(f)一種誘導患者中之免疫反應之方法，其包括向該個體投與有效量之組合物(a)、組合物(b)或組合(c)。

(g)一種誘導患者中之STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包括向該個體投與有效量之通式(I)化合物或通式(I’)化合物或通式(I”)化合物。

(h)一種誘導患者中之STING依賴性I型干擾素產生之方法，其包括向該個體投與有效量之組合物(a)、組合物(b)或組合(c)。

(i)一種誘導患者中之STING依賴性細胞介素產生之方法，其包括向該個體投與有效量之通式(I)化合物或通式(I’)化合物或通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥。

(j)一種誘導患者中之STING依賴性細胞介素產生之方法，其包括向該個體投與有效量之組合物(a)、組合物(b)或組合(c)。

本發明亦包含用於以下之本發明化合物：(i)(a)誘導患者中之免疫反應或(b)誘導患者中之STING依賴性細胞介素產生，(ii)作為用於(a)或(b)之藥劑，或(iii)製備用於(a)或(b)之藥劑。在該等用途中，本發明化合物可視情況與一或多種選自以下之第二治療劑組合採用：STING促效劑化合物、抗病毒化合物、抗原、佐劑、CTLA-4及PD-1路徑拮抗劑及其他免疫調節劑、脂質、脂質體、肽、抗癌劑及化學治療劑。

本發明之其他實施例包含以上(a)-(j)中所陳述之醫藥組合物、組合及方法以及前段中所陳述之用途，其中，其中所用本發明化合物係上述化合物之實施例、態樣、種類、亞類或特徵中之一者之化合物。在所有該等實施例中，若適當，化合物可視情況以醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥之形式來使用。

在上文所提供化合物之實施例中，應理解，每一實施例可與一或多個其他實施例進行組合，該組合程度應使得此一組合提供穩定化合物且與實施例之闡述一致。另外應理解，如上文(a)至(j)所提供之組合物及方法之實施例應理解為包含化合物之所有實施例，包含該等因實施例之組合而獲得之實施例。

本文所用之術語「個體」(或者本文中稱為「患者」)係指作為治療、觀察或實驗之對象之動物、較佳地哺乳動物，例如雄性或雌性人類。個體亦係指牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、兔、大鼠、小鼠、魚及鳥中之一或多者。在實施例中，個體係人類。

如本文中所使用，術語「免疫反應」係關於下列反應中之任一者或多者：特異性免疫反應、非特異性免疫反應、特異性及非特異性反應、先天性反應、初級免疫反應、適應性免疫性、二級免疫反應、記憶免疫反應、免疫細胞活化、免疫細胞增殖、免疫細胞分化及細胞介素表現。在某些實施例中，將通式(I)化合物、通式(I’)化合物或通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥與一或多種之其他治療劑聯合投與，該等其他治療劑包含意欲刺激對一或多種預定抗病毒化合物、抗原、佐劑、CTLA-4及PD-1路徑拮抗劑及其他免疫調節劑、脂質、脂質體、肽、抗癌劑及化學治療劑等之免疫反應之疫苗。在某些實施例中，將通式(I)化合物、通式(I’)化合物或通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥與一或多種其他組合物聯合投與，該等其他組合物包含意欲刺激對一或多種預定抗病毒化合物、抗原、佐劑、CTLA-4及PD-1路徑拮抗劑及其他免疫調節劑、脂質、脂質體、肽、抗癌劑及化學治療劑等之免疫反應之疫苗。

化合物

術語「烷基」係指具有指定範圍內之碳原子數之單價直鏈或具支鏈、飽和脂肪族烴基團。因此，舉例而言，「C_1-6烷基」(或「C₁-C₆烷基」)係指己基烷基及戊基烷基異構體以及正-、異-、第二-及第三丁基、正-及異丙基、乙基及甲基中之任一者。作為另一實例，「C_1-4烷基」係指正-、異-、第二-及第三丁基、正-及異丙基、乙基及甲基。

如本文中所使用，術語「伸烷基」係指具有指定範圍內之碳原子數之雙價直鏈、飽和脂肪族烴基團。

如本文中所使用，術語「烯基」係指具有指定範圍內之碳原子數且包含一或多個雙鍵之單價直鏈或具支鏈、不飽和脂肪族烴基團。

如本文中所使用，術語「伸烯基」係指具有指定範圍內之碳原子數且包含一或多個雙鍵之二價直鏈、不飽和脂肪族烴基團。

如本文中所使用，術語「炔基」係指具有指定範圍內之碳原子數且包含一或多個三鍵之單價直鏈或具支鏈、不飽和脂肪族烴基團。

如本文中所使用，術語「伸炔基」係指具有指定範圍內之碳原子數且包含一或多個三鍵之二價直鏈、不飽和脂肪族烴基團。

術語「鹵素」(或「鹵基」)係指氟、氯、溴及碘(或者稱為氟基、氯基、溴基及碘基或F、Cl、Br及I)。

術語「鹵烷基」係指如上文所定義一或多個氫原子經鹵素代替之烷基。因此，舉例而言，「C_1-6鹵烷基」(或「C₁-C₆鹵烷基」)係指如上文所定義具有一或多個鹵素取代基之C₁至C₆直鏈或具支鏈烷基。術語「氟烷基」具有類似含義，只是鹵素取代基限於氟。適宜氟烷基包含(CH₂)_0-4CF₃系列(亦即三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、3,3,3-三氟-正丙基等)。

如本文中所使用，術語「鹵烯基」係指如上文所定義一或多個氫原子經鹵素代替之烯基。

如本文中所使用，術語「鹵炔基」係指如上文所定義一或多個氫原子經鹵素代替之炔基。

如本文中所使用，術語「螺環(spirocycle或spirocyclic ring)」係指藉由單一原子上之取代基形成之側鏈環狀基團。舉例而言，在通式 (I)中，可藉由R^2a及R³形成螺環。

除非明確陳述相反之情形，本文所引用之所有範圍皆係包含性；亦即，該範圍包含範圍之上限值及下限值以及其間之所有值。作為一實例，溫度範圍、百分比、當量範圍及本文所闡述之類似術語包含範圍之上限值及下限值以及其間之任一連續值。本文所提供之數值及術語「約」之使用可包含±1%、±2%、±3%、±4%、±5%、±10%、±15%及±20%及其數值當量之變化。

如本文中所使用，術語「一或多種」物項包含選自列表之單一物項以及兩個或更多種選自列表之物項之混合物。

在通式(I)化合物、通式(I’)化合物及通式(I”)化合物中，各原子可呈現其自然同位素豐度，或者可以人工方式使一或多種原子富含具有相同原子序數但原子量或質量數不同於在自然界中主要發現之原子量或質量數的特定同位素。本發明意欲包含通式(I)化合物、通式(I’)化合物及通式(I”)化合物之所有適宜同位素變化形式。舉例而言，氫(H)之不同同位素形式包含氕(¹H)及氘(²H)。氕係發現於自然界中之主要氫同位素。富含氘可提供某些治療益處，例如，增加活體內半衰期或減少劑量需求；或可提供可用作表徵生物試樣之標準之化合物。通式(I)內同位素富集型化合物可在無需過多實驗時藉由熟習此項技術者熟知之習用技術或者藉由類似於闡述於本文反應圖及實例中者之製程使用適當之同位素富集型試劑及/或中間體來製備。

在通式(I)化合物、通式(I’)化合物及通式(I”)化合物之特定實施例中，該等化合物同位素富集氘。在該等實施例之態樣中，R¹、R^1a、R²、R^2a、R³、R⁴、R^4a、R⁵、R⁶、R^6a、R⁷、R^7a、R⁸、R^8a、R⁹及R¹⁰中之一或多者可為氘。

申請專利範圍中敘述或繪示特定化合物(亦即物質)不指示特定立體構形或此一指示針對少於所有對掌性中心意欲涵蓋化合物之外消旋物、外消旋混合物、各自個別對映異構體、非對映異構混合物及各自個別非對映異構體，其中該等形式因一或多個不對稱中心之存在係可能的。立體異構體混合物之分離可以中間體步驟在合成通式(I)化合物、通式(I’)化合物及/或通式(I”)化合物期間來實施，或其可針對最終外消旋產物來進行。絕對立體化學式可藉由結晶產物或結晶中間體(若需要，其可使用含有已知構形之立體性中心之試劑衍生而來)之X-射線晶體學分析測定。或者，可藉由振動圓二色性(VCD)光譜分析來測定絕對立體化學。本發明包含所有該等異構體以及該等外消旋物、對映異構體、非對映異構體及互變異構體鹽、溶劑合物(其包含水合物)及溶劑化鹽及其混合物。

熟習此項技術者將認識到，對掌性化合物及尤其糖可以諸多不同等效方式繪製。熟習此項技術者將進一步認識到，取代基在核糖上之身份及區域化學位置可廣泛變化且適應立體化學等效物之相同原理(不論何種取代基)。該等等效物之非限制性實例包含列示於下文中者。

鹽

可以鹽形式提供本文所闡述具有適當官能基之化合物。本文藉由參照可能之鹽來闡述該等化合物之實例。該等參考僅係闡釋性。其他實施例包含本文所闡述具有適宜基團之任一化合物之鹽。

醫藥上可接受之鹽可與化合物一起用於治療患者。然而，非醫藥鹽可用於製備中間體化合物。

醫藥上可接受之鹽適於投與患者、較佳地人類。適宜鹽包含酸加成鹽，其可藉由(例如)混合化合物之溶液與醫藥上可接受之酸(例如鹽酸、硫酸、乙酸、三氟乙酸或苯甲酸)之溶液來形成。可將攜載酸性部分之化合物與適宜醫藥上可接受之鹽混合以提供(例如)鹼金屬鹽(例如鈉鹽或鉀鹽)、鹼土金屬鹽(例如鈣鹽或鎂鹽)及與適宜有機配體形成之鹽(例如四級銨鹽)。同樣，在存在酸(-COOH)或醇基團之情形下，可採用醫藥上可接受之酯來改質化合物之溶解性或水解特性。

製備化合物之方法

製備通式(I)化合物、通式(I’)化合物及通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥之若干方法闡述於下列反應圖及實例中。起始材料及中間體係購自商業來源，自已知程序製得，或另外加以闡釋。在一些情形下，可改變反應圖步驟之實施順序以促進反應或避免不期望之反應產物。

方法1

製備本發明實例之一種方法詳述於反應圖1中。此程序係適當地修改自用於環狀雙核苷酸合成之先前所報告程序(Barbara L.Gaffney等人，One-Flask Syntheses of c-di-GMP and the[Rp,Rp]and[Rp,Sp]Thiophosphate Analogues,12 ORG.LETT.3269-3271(2010))。該序列始於經修飾核糖-核苷，其具有胺基經烷基或苯基羰基適當保護之核鹼基、在2’-O位置處具有胺基磷酸酯官能基且在5’-O位置處具有DMTr醚。使用水性TFA/吡啶條件進行處理且隨後使用第三丁基胺進行處理以將2’-胺基磷酸酯部分轉化成H-膦酸酯。然後，在酸性條件下去除DMTr醚。使所得5’-羥基與完全經保護之第二修飾核糖-核苷3’-胺基磷酸酯進行反應以得到環化化合物。立即使用第三丁基氫過氧化物進行氧化。然後，使用二氯乙酸對第二核糖-核苷之5’-羥基實施去保護。使用2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧雜磷雜環己烷2-氧化物作為偶合劑，使第一核糖-核苷之2’-O處之H-膦酸酯與第二核糖-核苷之5’-OH進行反應以得到環狀產物。立即使用碘水溶液進行氧化。使用第三丁基胺及甲胺以及氟陰離子(若實施矽烷基保護)可提供期望環狀雙核苷酸1G。

方法2

製備本發明實例之另一方法詳述於反應圖2中。此程序係修改自反應圖1。該序列始於經修飾核糖-核苷，其具有胺基經烷基或苯基羰基適當保護之核鹼基、在2’-O位置處具有胺基磷酸酯官能基且在5’-O位置處具有DMTr醚。使用水性TFA/吡啶條件進行處理且隨後使用第三丁基胺進行處理以將2’-胺基磷酸酯部分轉化成H-膦酸酯。然後，在酸性條件下去除DMTr醚。使所得5’-羥基與完全經保護之第二修飾核糖-核苷3’-胺基磷酸酯進行反應以得到環化化合物。立即使用(E)-N,N-二甲基-N'-(3-硫酮-3H-1,2,4-二噻唑-5-基)亞胺代甲醯胺實施硫代酯化。然後，使用二氯乙酸對第二核糖-核苷之5’-羥基實施去保護。使用2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧雜磷雜環己烷2-氧化物作為偶合劑，使第一核糖-核苷之2’-O處之H-膦酸酯與第二核糖-核苷之5’-OH進行反應以得到環狀產物。立即使用3H-苯并[c][1,2]二硫雜環戊烯-3-酮實施硫代酯化。使用第三丁基胺及甲胺以及氟陰離子(若實施矽烷基保護)可提供期望環狀雙核苷酸二硫代磷酸酯2G。

使用方法

可將本文所闡述具有治療應用之化合物(例如通式(I)化合物、通式(I’)化合物及通式(I”)化合物及實例1至348之化合物)投與患者以用於誘導免疫反應、誘導STING依賴性細胞介素產生及/或誘導抗腫瘤活性。術語「投與」及其變體(例如「投與」化合物)意指將化合物提供至需要治療之個體。在化合物與一或多種其他活性劑(例如可用於治療HCV感染之抗病毒劑或用於治療癌症之抗腫瘤劑)組合提供時，「投與」及其變體各自應理解為包含同時及連續提供化合物或鹽及其他藥劑。

本文所揭示之化合物係STING促效劑及病毒複製抑制劑。該等化合物潛在地可用於治療包含(但不限於)細胞增殖病症(例如癌症)之疾病或病症。

細胞增殖病症包含(但不限於)癌症。該等癌症之實例包含(但不限於)急性淋巴母細胞性白血病；急性類骨髓性白血病；腎上腺皮質癌；AIDS相關淋巴瘤；AIDS相關惡性腫瘤；肛門癌；星形細胞瘤；膽管癌；膀胱癌；骨肉瘤/惡性纖維性組織細胞瘤骨癌；腦幹膠質瘤；腦星形細胞瘤腦瘤；腦星形細胞瘤/惡性神經膠質瘤腦瘤；室管膜瘤腦瘤；髓母細胞瘤腦瘤；幕上原始神經外胚層瘤腦瘤；視通路及下丘腦神經膠質瘤腦瘤；乳癌；支氣管腺瘤/類癌；類癌腫瘤；胃腸類癌腫瘤；腎上腺皮質癌瘤；胰島細胞癌瘤；原發性中樞神經系統淋巴瘤；腦星形細胞瘤/惡性神經膠質瘤；子宮頸癌；慢性淋巴球性白血病；慢性骨髓性白血病；慢性骨髓增生性病症；腱鞘明亮細胞肉瘤；結腸癌；結腸直腸癌；皮膚T細胞淋巴瘤；子宮內膜癌；室管膜瘤；卵巢上皮癌；食管癌；食管癌；尤文氏家族腫瘤(Ewing's Family of Tumor)；顱外生殖細胞瘤；肝外膽管癌；眼內黑色素瘤眼癌；視網膜母細胞瘤眼癌；膽囊癌；胃(Gastric、Stomach)癌；胃腸類癌腫瘤；兒童期顱外生殖細胞瘤；性腺外生殖細胞瘤；卵巢生殖細胞瘤；妊娠滋養細胞腫瘤；兒童期腦幹神經膠質瘤；兒童期視通路及下丘腦神經膠質瘤；毛細胞白血病；頭頸癌；肝細胞(肝)癌；何傑金氏淋巴瘤(Hodgkin's Lymphoma)；咽下癌；下丘腦及視通路神經膠質瘤；眼內黑色素瘤；胰島細胞癌(內分泌胰臟)；卡波西氏肉瘤(Kaposi's Sarcoma)；腎癌；喉癌；急性淋巴母細胞性白血病；急性類骨髓性白血病；慢性淋巴球性白血病；慢性骨髓性白血病；毛細胞白血病；唇癌及口腔癌；肝癌；非小細胞肺癌；小細胞肺癌；淋巴母細胞性白血病；AIDS-相關淋巴瘤；中樞神經系統(原發性)淋巴瘤；皮膚T細胞淋巴瘤；何傑金氏淋巴瘤；懷孕期間之何傑金氏淋巴瘤；非何傑金氏淋巴瘤；原發性中樞神經系統淋巴瘤；沃爾登斯特倫巨球蛋白血症(Waldenstrom's Macroglobulinemia)；男性乳癌；惡性間皮瘤；惡性胸腺瘤；兒童期髓母細胞瘤；黑色素瘤；眼內黑色素瘤；默克細胞癌瘤(Merkel Cell Carcinoma)；惡性間皮瘤；潛伏之原發性轉移性鱗狀頸癌；兒童期多發性內分泌贅瘤形成症候群；多發性骨髓瘤/漿細胞贅瘤；蕈樣肉芽腫病；骨髓發育不良症候群；慢性骨髓性白血病；類骨髓性白血病；多發性骨髓瘤；慢性骨髓增生性病症；鼻腔及鼻旁竇癌；鼻咽癌；神經胚細胞瘤；非何傑金氏淋巴瘤；非小細胞肺癌；口腔癌；口腔癌及唇癌；口咽癌；骨肉瘤/骨惡性纖維性組織細胞瘤；卵巢上皮癌；卵巢生殖細胞瘤；卵巢低度潛在惡性腫瘤；胰臟癌；鼻旁竇及鼻腔癌；甲狀旁腺癌；陰莖癌；嗜鉻細胞瘤；松果體及幕上原始神經外胚層瘤；垂體瘤；漿細胞贅瘤/多發性骨髓瘤；胸膜肺母細胞瘤；妊娠期癌及乳癌；妊娠期淋巴瘤及何傑金氏淋巴瘤；妊娠期淋巴瘤及非何傑金氏淋巴瘤；原發性中樞神經系統淋巴瘤；原發性肝癌；前列腺癌；直腸癌；腎細胞(腎)癌；腎盂及輸尿管移行細胞癌症；視網膜母細胞瘤；橫紋肌肉瘤；唾液腺癌症；尤文氏家族腫瘤肉瘤；卡波西氏肉瘤；(骨肉瘤)/骨惡性纖維性組織細胞瘤肉瘤；軟組織肉瘤；塞紮萊症候群(Sezary Syndrome)；皮膚癌；皮膚癌(黑色素瘤)；默克細胞皮膚癌瘤；小細胞肺癌；小腸癌；軟組織肉瘤；潛伏之原發性轉移性鱗狀頸癌；胃(Stomach、Gastric)癌；幕上原始神經外胚層瘤；皮膚T細胞淋巴瘤；睪丸癌；惡性胸腺瘤；甲狀腺癌；腎盂及輸尿管移行細胞癌症；妊娠滋養細胞腫瘤；輸尿管及腎盂移行細胞癌症；尿道癌；子宮肉瘤；陰道癌；視通路及下丘腦神經膠質瘤；外陰癌；沃爾登斯特倫巨球蛋白血症；及維爾姆斯氏腫瘤(Wilms' Tumor)。

在一實施例中，癌症係腦癌，例如星形細胞腫瘤(例如纖維狀細胞性星形細胞瘤、室管膜下巨細胞星形細胞瘤、彌漫性星形細胞瘤、多形性黃色星形細胞瘤、間變性星形細胞瘤、星形細胞瘤、巨細胞神經膠母細胞瘤、神經膠母細胞瘤、繼發性神經膠母細胞瘤、原發性成人神經膠母細胞瘤及原發性兒科神經膠母細胞瘤)；寡樹突膠質細胞腫瘤(例如，寡樹突神經膠質瘤及間變性寡樹突神經膠質瘤)；寡樹突星形細胞腫瘤(例如寡星形細胞瘤及間變性寡星形細胞瘤)；室管膜瘤(例如黏液乳頭狀室管膜瘤及間變性室管膜瘤)；髓母細胞瘤；原始神經外胚層瘤、神經鞘瘤、腦脊髓膜瘤、梅特皮卡腦脊髓膜瘤(meatypical meningioma)、間變性腦脊髓膜瘤及垂體腺瘤。在另一實施例中，腦癌係神經膠質瘤、多形性神經膠母細胞瘤、副神經節瘤或幕上原始神經外胚層瘤(sPNET)。

在另一實施例中，癌症係白血病，例如急性類骨髓性白血病(AML)、骨髓發育不良症候群(MDS)、慢性骨髓性白血病(CML)、骨髓增殖性贅瘤(MPN)、MPN後AML、MDS後AML、del(5q)相關高風險MDS或AML、急性期慢性骨髓性白血病、血管免疫胚細胞淋巴瘤及急性淋巴母細胞性白血病。

在一實施例中，癌症係皮膚癌，包含黑色素瘤。在另一實施例中，癌症係前列腺癌、乳癌、甲狀腺癌、結腸癌或肺癌。在另一實施例中，癌症係肉瘤，包含中心性軟骨肉瘤、中心性及骨膜軟骨瘤及纖維肉瘤。在另一實施例中，癌症係膽管上皮癌。

如本文中所使用，術語「治療(treatment及treating)」係指可減緩、中斷、中止、控制或停止本文所闡述疾病或病症之進展之所有過程。該等術語未必指示完全消除所有疾病或病症症狀。

術語「投與(administration及或administering)」化合物應理解為包含提供向個體本文所闡述之化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥及前者之組合物。

投與個體之化合物之量係足以在個體中誘導免疫反應及/或誘導STING依賴性I型干擾素產生之量。在實施例中，化合物之量可為「有效量」或「治療有效量」，其中以分別在組織、系統、動物或人類中引發由研究者、獸醫、醫師或其他臨床醫師所尋求之生物或醫學(亦即意欲治療)反應之量來投與標題化合物。有效量未必包含對於與化合物投與相關之毒性及安全性之考慮。

化合物之有效量隨以下因素而有所變化：所選特定化合物(例如考慮化合物之功效、效能及/或半衰期)；所選投與途徑；所治療病狀；所治療病狀之嚴重程度；所治療個體之年齡、個頭、體重及身體狀況；所治療個體之病史；治療持續時間；並行療法之性質；期望治療效應；及類似因素；且可通常由熟習此項技術者來確定。

可藉由任一適宜途徑(包含經口及非經腸投與)來投與本文所揭示之化合物。非經腸投與通常係藉由注射或輸注來進行，且包含靜脈內、肌內及皮下注射或輸注。

本文所揭示之化合物可一次性投與或根據投藥方案來投藥，其中在給定時間段中以不同時間間隔來投與諸多劑量。舉例而言，劑量可每天投與一次、兩次、三次或四次。可投與劑量直至達成期望治療效應為止或無限投與以維持期望治療效應。用於本文所揭示化合物之適宜投藥方案取決於該化合物之藥物動力學性質，例如可由熟習此項技術者測定之吸收、分佈及半衰期。另外，本文所揭示化合物之適宜投藥方案(包含投與該等方案之持續時間)取決於所治療疾病或病狀、疾病或病狀之嚴重程度、所治療個體之年齡及身體狀況、所治療個體之病史、並行療法之性質、期望治療效應及熟習此項技術者已知及鑒定之類似因素。該等熟習此項技術者進一步將理解，適宜投藥方案可能需要根據個別個體對投藥方案之反應或隨時間變化在個別個體需要改變時進行調整。典型日劑量可端視所選特定投與途徑而有所變化。

本發明之一實施例提供治療細胞增殖病症之方法，其包括向需要治療之個體投與治療有效量之通式(I)化合物、通式(I’)化合物或通式(I”)化合物。在一實施例中，細胞增殖病症係癌症。

在一實施例中，癌症係腦癌、白血病、皮膚癌、前列腺癌、甲狀腺癌、結腸癌、肺癌或肉瘤。在另一實施例中，癌症係選自由以下組成之群：神經膠質瘤、多形性神經膠母細胞瘤、副神經節瘤、幕上原始神經外胚層瘤、急性類骨髓性白血病、骨髓發育不良症候群、慢性骨髓性白血病、黑色素瘤、乳癌、前列腺癌、甲狀腺癌、結腸癌、肺癌、中心性軟骨肉瘤、中心性及骨膜軟骨瘤腫瘤、纖維肉瘤及膽道癌。

在一實施例中，本文揭示通式(I)化合物、通式(I’)化合物及/或通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥之用途，其用於療法中。該化合物可用於在個體(例如需要該抑制之哺乳動物)中誘導免疫反應及/或誘導STING依賴性I型干擾素產生之方法中，該方法包括向該個體投與有效量之化合物。

在一實施例中，本文揭示用於潛在治療以誘導免疫反應及/或誘導STING依賴性I型干擾素產生之醫藥組合物，其包括至少一種通式(I)化合物、通式(I’)化合物及/或通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥。

在一實施例中，本文揭示通式(I)化合物、通式(I’)化合物及/或通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥之用途，其用以製造用於治療誘導免疫反應及/或誘導STING依賴性I型干擾素產生之藥劑。在一實施例中，擬治療疾病或病症係細胞增殖病症。在另一實施例中，細胞增殖病症係癌症。在另一實施例中，癌症係腦癌、白血病、皮膚癌、乳癌、前列腺癌、甲狀腺癌、結腸癌、肺癌或肉瘤。在另一實施例中，癌症係神經膠質瘤、多形性神經膠母細胞瘤、副神經節瘤、幕上原始神經外胚層瘤、急性類骨髓性白血病、骨髓發育不良症候群、慢性骨髓性白血病、黑色素瘤、乳癌、前列腺癌、甲狀腺癌、結腸癌、肺癌、中心性軟骨肉瘤、中心性及骨膜軟骨瘤腫瘤、纖維肉瘤及/或膽道癌。

組合物

本文所用之術語「組合物」意欲涵蓋以指定量包括指定化合物之劑型以及直接或間接源自指定量之指定化合物之組合的任一劑型。該術語意欲涵蓋包括通式(I)化合物、通式(I’)化合物及/或通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑之劑型。因此，本發明組合物涵蓋藉由混合本發明化合物及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑製得之任一組合物。「醫藥上可接受」意指載劑或賦形劑與本文所揭示之化合物及組合物之其他成份相容。

出於誘導免疫反應及/或誘導STING依賴性I型干擾素產生之目的，可藉由使得活性劑與藥劑之作用位點接觸之方式來投與化合物(視情況呈鹽、水合物、溶劑合物或前藥之形式)。其可藉由可與醫藥聯合使用之習用方式以個別治療劑或治療劑之組合形式投與。其可分開投與，但通常與基於所選投與途徑及標準醫藥實踐而選擇之醫藥載劑一起投與。

在一實施例中，本文揭示一種組合物，其包括通式(I)化合物、通式(I’)化合物及/或通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑。可以整體形式製備及包裝該組合物，其中可提取有效量之本發明化合物且然後(例如以粉劑或糖漿形式)給予個體。或者，可以單位劑型來製備及包裝組合物，其中每一物理離散單元含有有效量之通式(I)化合物、通式(I’)化合物及/或通式(I”)化合物。

通常將本文所揭示之化合物及醫藥上可接受之載劑或賦形劑調配成適於藉由期望投與途徑投與個體之劑型。舉例而言，劑型包含適用於以下情形者：(1)經口投與，例如錠劑、膠囊、囊片、丸劑、糖錠劑、粉劑、糖漿、酏劑、懸浮液、溶液、乳液、小藥囊及扁囊劑；及(2)非經腸投與，例如無菌溶液、懸浮液及重構用粉劑。適宜醫藥上可接受之載劑或賦形劑將端視所選特定劑型而有所變化。另外，適宜醫藥上可接受之載劑或賦形劑可經選擇以用於其可在組合物中發揮之特定功能。舉例而言，某些醫藥上可接受之載劑或賦形劑可經選擇以能夠促進均勻劑型之產生。某些醫藥上可接受之載劑或賦形劑可經選擇以能夠促進穩定劑型之產生。某些醫藥上可接受之載劑或賦形劑可經選擇以能夠促進本文所揭示化合物在投與個體後自身體之一個器官或部分至身體之另一器官或另一部分之攜載或傳輸。某些醫藥上可接受之載劑或賦形劑可經選擇以能夠增強患者順從性。

適宜醫藥上可接受之賦形劑包含下列類型之賦形劑：稀釋劑、潤滑劑、黏合劑、崩解劑、填充劑、助流劑、造粒劑、塗覆劑、潤濕劑、溶劑、共溶劑、懸浮劑、乳化劑、甜味劑、矯味劑、氣味遮蔽劑、著色劑、抗結塊劑、保濕劑、螯合劑、塑化劑、黏度增加劑、抗氧化劑、防腐劑、穩定劑、表面活性劑及緩衝劑。

熟習此項技術者熟知以適當量選擇適宜醫藥上可接受之載劑及賦形劑以用於本發明中。另外，存在諸多熟習此項技術者可用之來源，其闡述醫藥上可接受之載劑及賦形劑且可用於選擇適宜醫藥上可接受之載劑及賦形劑。實例包含Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company)、The Handbook of Pharmaceutical Additives(Gower Publishing Limited)及The Handbook of Pharmaceutical Excipients(the American Pharmaceutical Association and the Pharmaceutical Press)。

使用熟習此項技術者已知之技術及方法來製備本發明組合物。業內通常使用之一些方法闡述於Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company)中。

在一實施例中，本發明係關於包括有效量之本發明化合物及稀釋劑或填充劑之固體口服劑型，例如錠劑或膠囊。適宜稀釋劑及填充劑包含乳糖、蔗糖、右旋糖、甘露醇、山梨醇、澱粉(例如玉米澱粉、馬鈴薯澱粉及預膠化澱粉)、纖維素及其衍生物(例如微晶纖維素)、硫酸鈣及磷酸氫鈣。口服固體劑型可進一步包括黏合劑。適宜黏合劑包含澱粉(例如玉米澱粉、馬鈴薯澱粉及預膠化澱粉)、明膠、阿拉伯樹膠、海藻酸鈉、海藻酸、黃蓍膠、瓜爾膠、聚維酮(povidone)及纖維素及其衍生物(例如微晶纖維素)。口服固體劑型可進一步包括崩解劑。適宜崩解劑包含交聚維酮(crospovidone)、乙醇酸澱粉鈉、交聯羧甲基纖維素、海藻酸及羧基甲基纖維素鈉。口服固體劑型可進一步包括潤滑劑。適宜潤滑劑包含硬脂酸、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣及滑石。

若適當，則供經口投與之劑量單位調配物可經微囊化。組合物亦可如(例如)藉由將微粒材料包覆或包埋於聚合酶、蠟或諸如此類中來製備以延長或維持釋放。

本文所揭示之化合物亦可與作為可靶向藥物載劑之可溶性聚合物偶合。此等聚合物可包含經棕櫚醯殘基取代之聚乙烯基吡咯啶酮、吡喃共聚物、聚羥丙基甲基丙烯醯胺苯酚、聚羥乙基天門冬醯胺苯酚或聚環氧乙烷聚離胺酸。此外，本發明化合物可與一類可用於達成藥物受控釋放之生物可降解聚合物偶合，例如聚乳酸、聚ε己內酯、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醛、聚二氫吡喃、聚氰基丙烯酸酯及水凝膠之交聯或兩親性嵌段共聚物。

在一實施例中，本發明係關於液體口服劑型。諸如溶液、糖漿及酏劑等口服液體可以劑量單位形式製備，從而給定量含有預定量之本文所揭示化合物。糖漿可藉由將本發明化合物溶於適宜矯味之水溶液中來製備，而酏劑係經由使用無毒酒精性媒劑製備。可藉由將本文所揭示之化合物分散於非毒性媒劑中來調配懸浮液。亦可添加增溶劑及乳化劑(例如乙氧基化異硬脂醇及聚氧乙烯山梨糖醇醚)、防腐劑、矯味添加劑(例如薄荷油或其他天然甜味劑或糖精或其他人工甜味劑及諸如此類)。

在一實施例中，本發明係關於用於非經腸投與之組合物。適於非經腸投與之組合物可包含含水及無水無菌注射液，其可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑及可使調配物與預期接受者之血液等滲之溶質；以及含水及無水無菌懸浮液，其可包含懸浮劑及增稠劑。該等組合物可以單位劑量或多劑量容器(例如密封安瓿及小瓶)呈現，且可儲存於冷凍亁燥(凍亁)條件下，僅需在即將使用前添加無菌液體載劑(例如注射用水)。可自無菌粉劑、顆粒及錠劑製備臨時注射溶液及懸浮液。

組合

通式(I)化合物、通式(I’)化合物及/或通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥可與一或多種其他治療劑組合投與。在實施例中，可共投與一或多種通式(I)化合物、通式(I’)化合物或通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥及一或多種其他治療劑。可以單一劑型投與其他治療劑與通式(I)化合物、通式(I’)化合物或通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥，或可以分開劑型投與其他治療劑與含有通式(I)化合物、通式(I’)化合物或通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥之劑型。其他治療劑可為一或多種選自由以下組成之群之藥劑：STING促效劑化合物、抗病毒化合物、抗原、佐劑、抗癌劑、CTLA-4、LAG-3及PD-1路徑拮抗劑、脂質、肽、化學治療劑、免疫調節細胞系、檢查點抑制劑、血管內皮生長因子(VEGF)受體抑制劑、拓撲異構酶H抑制劑、平滑受體抑制劑、烷基化劑、抗腫瘤抗生素、抗代謝物、類視色素及免疫調節劑(包含(但不限於)抗癌疫苗)。應理解，上述其他治療劑之闡述可具有重疊性。亦應理解，治療組合易於最佳化，且應理解，基於個別患者需要來確定使用通式(I)化合物、通式(I’)化合物或通式(I”)化合物及一或多種其他治療劑之最佳組合。

本文所揭示之化合物可與一或多種其他活性劑組合使用，該等其他活性劑包含(但不限於)用於預防、治療、控制、改善特定疾病或病狀(例如細胞增殖病症)或減小其風險之其他抗癌劑。在一實施例中，將本文所揭示之化合物與一或多種其他抗癌劑進行組合，該等其他抗癌劑用於預防、治療、控制、改善本文所揭示之化合物對其有用之特定疾病或病狀或減小其風險。該等其他活性劑可藉由其常用途徑及用量與本發明化合物同時或依序投與。

在同時使用本文所揭示之化合物與一或多種其他活性劑時，涵蓋除本文所揭示之化合物外亦含有該等其他活性劑之組合物。因此，本發明組合物包含彼等除本文所揭示化合物外亦含有一或多種其他活性成份之組合物。本文所揭示之化合物可與一或多種其他治療劑同時或在其之前或之後投與。本文所揭示之化合物可藉由相同或不同投與途徑分開投與，或以相同醫藥組合物與其他藥劑一起投與。

以組合形式提供之產品可包含包括通式(I)化合物、通式(I’)化合物或通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥及一或多種其他活性劑之組合物(一起呈同一醫藥組合物形式)，或可包含包括通式(I)化合物、通式(I’)化合物或通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥之組合物及包括一或多種其他治療劑之組合物(以分開形式，例如以套組形式或以經設計以使得能夠分開投與(並行或以分開投藥時間表)之任一形式)。

本文所揭示之化合物對第二活性劑之重量比可有所變化且取決於每一藥劑之有效劑量。通常，將使用每一成份之有效劑量。本文所揭示之化合物及其他活性劑之組合通常亦在上文所提及之範圍內，但在每一情形下，應使用每一活性劑之有效劑量。在該等組合中，本文所揭示化合物與其他活性劑可分開投與或聯合投與。另外，一個要素可在其他藥劑投與之前、同時或之後投與。

在一實施例中，本發明提供包括通式(I)化合物、通式(I’)化合物或通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥及至少一種其他治療劑之組合物，其呈組合製劑形式以用於同時、分開或依序用於療法中。在一實施例中，該療法係細胞增殖病症(例如癌症)之治療。

在一實施例中，本發明提供包括兩種或更多種分開醫藥組合物之套組，該等分開醫藥組合物中之至少一者含有通式(I)化合物、通式(I’)化合物或通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥。在一實施例中，該套組包括分開保留該等組合物之構件，例如容器、分開之瓶子或分開之箔包。此一套組之實例係如通常用於包裝錠劑、膠囊及諸如此類之泡罩包。

本發明套組可用於投與不同劑型(例如口服及非經腸劑型)，以不同劑量間隔投與分開組合物，或遞增分開組合物相對於彼此之劑量。為有助於順從性，本發明套組通常包括投與說明書。

本文揭示係通式(I)化合物、通式(I’)化合物或通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥用於治療細胞增殖病症之用途，其中製備與另一活性劑一起投與之藥劑。本發明亦提供另一活性劑用於治療細胞增殖病症之用途，其中將該藥劑與通式(I)化合物一起投與。

本發明亦提供通式(I)化合物、通式(I’)化合物或通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥用於治療細胞增殖病症之用途，其中該患者先前(例如在24小時內)已使用另一活性劑進行治療。本發明亦提供另一治療劑用於治療細胞增殖病症之用途，其中該患者先前(例如在24小時內)已使用通式(I)化合物、通式(I’)化合物或通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥進行治療。可在投與本文所揭示之化合物之後一週、數週、一個月或數月施加第二藥劑。

可與本文所揭示之通式(I)化合物、通式(I’)化合物及通式(I”)化合物組合使用之STING促效劑化合物包含(但不限於)環狀雙核苷酸化合物。

可與本文所揭示之通式(I)化合物、通式(I’)化合物及通式(I”)化合物組合使用之抗病毒化合物包含B型肝炎病毒(HBV)抑制劑、C型肝炎病毒(HCV)蛋白酶抑制劑、HCV聚合酶抑制劑、HCV NS4A抑制劑、HCV NS5A抑制劑、HCV NS5b抑制劑及人類免疫缺失病毒(HIV)抑制劑。

可與本文所揭示之通式(I)化合物、通式(I’)化合物及通式(I”)化合物組合使用之抗原及佐劑包含B7共刺激分子、介白素-2、干擾素-y、GM-CSF、CTLA-4拮抗劑、OX-40/OX-40配體、CD40/CD40配體、沙格司亭(sargramostim)、左旋咪唑(levamisol)、牛痘病毒、卡介苗(Bacille Calmette-Guerin)(BCG)、脂質體、明礬、弗氏完全或不完全佐劑(Freund's complete or incomplete adjuvant)、去毒內毒素、礦物油、表面活性物質(例如脂卵磷脂、普羅尼克(pluronic)多元醇、聚陰離子、肽及油)或烴乳液。可添加佐劑(例如氫氧化鋁或磷酸鋁)以增加疫苗觸發、增強或延長免疫反應之能力。分開使用或與所述組合物組合使用之其他物質，例如細胞介素、趨化介素，及細菌核酸序列(例如CpG)、類鐸受體(TLR)9促效劑，以及用於TLR 2、TLR 4、TLR 5、TLR 7、TLR 8、TLR9之其他促效劑，包含脂蛋白、LPS、單磷醯脂質A、脂磷壁酸(lipoteichoic acid)、咪喹莫特(imiquimod)、雷西莫特(resiquimod)，及另外視黃酸可誘導基因I(RIG-I)促效劑(例如聚I：C)，亦係潛在佐劑。

CLTA-4及PD-1路徑係免疫反應之重要負調節劑。活化之T細胞上調結合於抗原呈遞細胞上且抑制T細胞刺激、IL-2基因表現及T-細胞增殖之CTLA-4；此等抗腫瘤效應已在結腸癌、轉移前列腺癌及轉移黑色素瘤之小鼠模型中觀察到。PD-1結合至活性T細胞且抑制T細胞活化；PD-1拮抗劑亦已顯示抗腫瘤效應。可與本文所揭示之通式(I)化合物組合使用之CTLA-4及PD-1路徑拮抗劑包含伊匹單抗(ipilimumab)、曲美目單抗(tremelimumab)、尼沃魯單抗(nivolumab)、派姆單抗(pembrolizumab)、CT-011、AMP-224及MDX-1106。

「PD-1拮抗劑」或「PD-1路徑拮抗劑」意指阻斷癌細胞上所表現之PD-L1結合至免疫細胞(T細胞、B細胞或NKT細胞)上所表現之PD-1且較佳地亦阻斷癌細胞上所表現之PD-L2結合至免疫細胞所表現之PD-1之任何化學化合物或生物分子。PD-1及其配體之替代名稱或同義詞包含：對於PD-1，為PDCD1、PD1、CD279及SLEB2；對於PD-L1，為PDCD1L1、PDL1、B7H1、B7-4、CD274及B7-H；及對於 PD-L2，為PDCD1L2、PDL2、B7-DC、Btdc及CD273。在本發明之治療方法、藥劑及用途之任一者中，其中治療人類個體，PD-1拮抗劑可阻斷人類PD-L1結合至人類PD-1，且較佳地阻斷人類PD-L1及PD-L2結合至人類PD-1。人類PD-1胺基酸序列可參見NCBI位點編號：NP_005009。人類PD-L1及PD-L2胺基酸序列可分別參見NCBI位點編號：NP_054862及NP_079515。

可用於本發明之治療方法、藥劑及用途中之任一者之PD-1拮抗劑包含特異性結合PD-1或PD-L1且較佳地特異性結合人類PD-1或人類PD-L1的單株抗體(mAb)或其抗原結合片段。mAb可為人類抗體、人類化抗體或嵌合抗體且可包含人類恆定區。在一些實施例中，人類恆定區係選自由以下組成之群：IgG1、IgG2、IgG3及IgG4恆定區，且在較佳實施例中，人類恆定區係IgG1或IgG4恆定區。在一些實施例中，抗原結合片段係選自由以下組成之群：Fab、Fab'-SH、F(ab')₂、scFv及Fv片段。

結合人類PD-1且可用於本發明之治療方法、藥劑及用途之mAb之實例闡述於以下案件中：美國專利第US7488802號、第US7521051號、第US8008449號、第US8354509號及第US8168757號、PCT國際專利申請案公開案第WO2004/004771號、第WO2004/072286號及第WO2004/056875號及美國專利申請案公開案第US2011/0271358號。

結合人類PD-L1且可用於本發明之治療方法、藥劑及用途之mAb之實例闡述於PCT國際專利申請案第WO2013/019906號及第W02010/077634 A1號及美國專利第US8383796號中。可用作本發明之治療方法、藥劑及用途之PD-1拮抗劑之具體抗人類PD-L1 mAb包含MPDL3280A、BMS-936559、MEDI4736、MSB0010718C及分別包括WO2013/019906中SEQ ID NO：24及SEQ ID NO：21之重鏈及輕鏈可變區的抗體。

可用於本發明之治療方法、藥劑及用途中之任一者之其他PD-1拮抗劑包含特異性結合PD-1或PD-L1且較佳地特異性結合人類PD-1或人類PD-L1的免疫黏附分子，例如含有融合至免疫球蛋白分子之恆定區(例如Fc區)之PD-L1或PD-L2之細胞外或PD-1結合部分的融合蛋白。特異性結合PD-1之免疫黏附分子之實例闡述於PCT國際專利申請案公開案第WO2010/027827號及第WO2011/066342號中。可用作本發明之治療方法、藥劑及用途中之PD-1拮抗劑之具體融合蛋白包含AMP-224(亦稱為B7-DCIg)，其係PD-L2-FC融合蛋白且結合至人類PD-1。

其他細胞素性劑之實例包含(但不限於)三氧化二砷(以商品名TRISENOX^®出售)、天門冬醯胺酶(亦稱為L-天門冬醯胺酶及歐文氏菌屬(Erwinia)L-天門冬醯胺酶，以商品名ELSPAR^®及KIDROLASE^®出售)。

可與本文所揭示之通式(I)化合物、通式(I’)化合物及通式(I”)化合物或其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物或前藥組合使用之化學治療劑包含乙酸阿比特龍(abiraterone acetate)、六甲蜜胺(altretamine)、脫水長春鹼(anhydrovinblastine)、奧裡斯他汀(auristatin)、貝沙羅汀(bexarotene)、比卡魯胺(bicalutamide)、BMS 184476、2,3,4,5,6-五氟-N-(3-氟-4-甲氧基苯基)苯磺醯胺、博來黴素(blcomycin)、N,N-二甲基-L-纈胺醯基-L-纈胺醯基-N-甲基-L-纈胺醯基-L-脯胺醯基-1-L脯胺酸-第三丁基醯胺、惡病質素(cachectin)、西馬多丁(cemadotin)、氮芥苯丁酸(chlorambucil)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、3',4'-二去氫-4'去氧-8'-諾文(norvin)-長春喊(caleukoblastine)、多西紫杉醇(docetaxol)、多西他賽(doxetaxel)、環磷醯胺、卡鉑(carboplatin)、卡莫司汀(carmustine)、順鉑(cisplatin)、念珠藻素(cryptophycin)、環磷醯胺、阿糖胞苷(cytarabine)、達卡巴嗪 (dacarbazine)(DTIC)、放線菌素(dactinomycin)、柔紅黴素(daunorubicin)、地西他濱多拉斯他汀(decitabine dolastatin)、多柔比星(doxorubicin)(阿德力黴素(adriamycin))、依託泊苷(etoposide)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、非那雄胺(finasteride)、氟他胺(flutamide)、羥基脲及羥基脲紫杉烷、異環磷醯胺(ifosfamide)、利阿唑(liarozole)、氯尼達明(lonidamine)、洛莫司汀(lomustine)(CCNU)、MDV3100、甲基二氯乙基胺(mechlorethamine)(氮芥(nitrogen mustard))、美法侖(melphalan)、羥乙基磺酸米伏布林(mivobulin isethionate)、利索新(rhizoxin)、色替納弗(sertenef)、鏈脲黴素(streptozocin)、絲裂黴素(mitomycin)、胺甲喋呤(methotrexate)、紫杉烷(taxane)、尼魯米特(nilutamide)、尼沃魯單抗、onapristone(奧那司酮)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、派姆單抗、潑尼氮芥(prednimustine)、丙卡巴肼(procarbazine)、RPR109881、磷酸雌莫司汀(stramustine phosphate)、他莫昔芬(tamoxifen)、他索那敏(tasonermin)、紫杉醇(taxol)、維甲酸(tretinoin)、長春鹼(vinblastine)、長春新鹼(vincristine)、硫酸長春地辛(vindesine sulfate)及長春氟寧(vinflunine)。

血管內皮生長因子(VEGF)受體抑制劑之實例包含(但不限於)貝伐珠單抗(bevacizumab)(以商標AVASTIN由Genentech/Roche出售)、阿西替尼(axitinib)(闡述於PCT國際專利公開案第WO01/002369號中)、丙胺酸布立尼布(Brivanib Alaninate)(2-胺基丙酸(S)-((R)-1-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-5-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基氧基)丙烷-2-基)酯，亦稱為BMS-582664)、莫替沙尼(motesanib)(N-(2,3-二氫-3,3-二甲基-1H-吲哚-6-基)-2-[(4-吡啶基甲基)胺基]-3-吡啶甲醯胺且闡述於PCT國際專利申請案公開案第WO02/068470號中)、帕瑞肽(pasireotide)(亦稱為SO 230且闡述於PCT國際專利公開案第 WO02/010192號中)及索拉菲尼(sorafenib)(以商品名NEXAVAR出售)。

拓撲異構酶II抑制劑之實例包含(但不限於)依託泊苷(亦稱為VP-16及磷酸依託泊苷(Etoposide phosphate)，以商品名TOPOSAR、VEPESID及ETOPOPHOS出售)及替尼泊苷(teniposide)(亦稱為VM-26，以商品名VUMON出售)。

烷基化劑之實例包含(但不限於)5-氮胞苷(5-azacytidine)(以商品名VIDAZA出售)、地西他濱(decitabine)(以商品名DECOGEN出售)、替莫唑胺(temozolomide)(以商品名TEMODAR及TEMODAL由Schering-Plough/Merck出售)、放線菌素(dactinomycin)(亦稱為放線菌素-D且以商品名COSMEGEN出售)、美法侖(亦稱為L-PAM、L-溶肉瘤素及苯丙胺酸氮芥，以商品名ALKERAN出售)、六甲蜜胺(altretamine)(亦稱為六甲基三聚氰胺(HMM)、以商品名HEXALEN出售)、卡莫司汀(carmustine)(以商品名BCNU出售)、苯達莫司汀(bendamustine)(以商品名TREANDA出售)、白消安(busulfan)(以商品名BUSULFEX^®及MYLERAN^®出售)、卡鉑(以商品名PARAPLATIN^®出售)、洛莫司汀(lomustine)(亦稱為CCNU，以商品名CEENU^®出售)、順鉑(亦稱為CDDP，以商品名PLATINOL^®及PLATINOL^®-AQ出售)、氮芥苯丁酸(以商品名LEUKERAN^®出售)、環磷醯胺(以商品名CYTOXAN^®及NEOSAR^®出售)、達卡巴嗪(亦稱為DTIC、DIC及咪唑甲醯胺，以商品名DTIC-DOME^®出售)、六甲蜜胺(亦稱為六甲基三聚氰胺(HMM)，以商品名HEXALEN^®出售)、異環磷醯胺(以商品名IFEX^®出售)、丙卡巴肼(以商品名MATULANE^®出售)、甲基二氯乙基胺(mechiorethamine)(亦稱為氮芥、氮芥(mustine)及鹽酸氮芥(mechloroethamine hydrochloride)，以商品名MUSTARGEN^®出售)、鏈脲黴素(以商品名ZANOSAR^®出售)、噻替派(亦稱為硫代磷醯胺、 TESPA及TSPA，且以商品名THIOPLEX^®出售)。

抗腫瘤抗生素之實例包含(但不限於)多柔比星(以商品名ADRIAMYCIN^®及RUBEX^®出售)、博來黴素(以商品名LENOXANE^®出售)、柔紅黴素(亦稱為柔紅黴素鹽酸鹽(dauorubicin hydrochloride)、道諾黴素(daunomycin)及紅比黴素鹽酸鹽(rubidomycin hydrochloride)，以商品名CERUBIDINE^®出售)、柔紅黴素脂質體(檸檬酸柔紅黴素(daunorubicin citrate)脂質體，以商品名DAUNOXOME^®出售)、米托蒽醌(mitoxantrone)(亦稱為DHAD，以商品名NOVANTRONE^®出售)、泛艾霉素(epirubicin)(以商品名ELLENCE^TM出售)、艾達比星(idarubicin)(以商品名IDAMYCIN^®、IDAMYCIN PFS^®出售)及絲裂黴素C(以商品名MUTAMYCIN^®出售)。

抗代謝劑之實例包含(但不限於)克拉屈濱(claribine)(2-氯去氧腺苷，以商品名LEUSTATIN^®出售)、5-氟尿嘧啶(以商品名ADRUCIL^®出售)、6-硫鳥嘌呤(以商品名PURINETHOL^®出售)、培美曲塞(pemetrexed)(以商品名ALIMTA^®出售)、阿糖胞苷(亦稱為阿糖胞嘧啶(Ara-C)，以商品名CYTOSAR-U^®出售)、阿糖胞苷脂質體(亦稱為脂質體Ara-C，以商品名DEPOCYT^TM出售)、地西他濱(以商品名DACOGEN^®出售)、羥基脲(以商品名HYDREA^®、DROXIA^TM及MYLOCEL^TM出售)、氟達拉濱(fludarabine)(以商品名FLUDARA^®出售)、氟尿苷(floxuridine)(以商品名FUDR®出售)、克拉屈濱(cladribine)(亦稱為2-氯去氧腺苷(2-CdA)，以商品名LEUSTATIN^TM出售)、胺甲蝶呤(亦稱為甲胺蝶呤(amethopterin)、胺甲蝶呤鈉(MTX)，以商品名RHEUMATREX^®及TREXALL^TM出售)及噴司他丁(pentostatin)(以商品名NIPENT^®出售)。

類視色素之實例包含(但不限於)阿利维A酸(alitretinoin)(以商品名PANRETIN^®出售)、維A酸(tretinoin)(全反視黃酸，亦稱為ATRA，以商品名VESANOID^®出售)、異維甲酸(Isotretinoin)(13-順式-視黃酸，以商品名ACCUTANE^®、AMNESTEEM^®、CLARAVIS^®、CLARUS^®、DECUTAN^®、ISOTANE^®、IZOTECH^®、ORATANE^®、ISOTRET^®及SOTRET^®出售)及貝沙羅汀(bexarotene)(以商品名TARGRETIN^®出售)。

活性：STING生物化學[3H]cGAMP競爭分析

藉由在STING生物化學[3H]cGAMP競爭分析中顯示以20uM或更小之EC₅₀結合至STING蛋白質且在THP1細胞分析中在20%或更大發光誘導及30uM下於INF-β分泌中顯示干擾素產生，本文實例中所闡述之個別化合物可定義為STING促效劑。

使用放射性過濾-結合分析藉由與經氚化cGAMP配體競爭人類STING受體膜之能力來量化化合物結合STING之能力。該結合分析採用自過表現內部製備之全長HAQ STING及亦內部純化之經氚化cGAMP配體之Hi-Five細胞膜獲得的STING受體。

縮寫

製備1：N-(3-((2R,3S,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)-甲 基)-3-氟-4-羥基四氫呋喃-2-基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-7-基)苯甲醯胺

步驟1：苯甲酸(2R,3R,4S,5R)-5-(7-胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-2-((苯甲醯基氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯

向3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-7-胺(2.36g,17.4mmol)於NMP(50ml)中之混合物中添加NaH(60%,0.744g,18.6mmol)。劇烈攪拌混合物且在1小時之後，氣泡生成已完全停止。將混合物一次性添加至苯甲酸((2R,3R,4S,5R)-3-(苯甲醯基氧基)-5-溴-4-氟四氫呋喃-2-基)甲基酯(純，5.25g,12.4mmol)中。將反應液攪拌18小時。LCMS展示具有期望質量之若干峰(m/e=479)。向反應中添加EtOAc(70mL)及水(70mL)。分離各層，且使用半飽和鹽水(3×10mL)及鹽水(1×10mL)洗滌有機層，乾燥(MgSO₄)，並濃縮。經由使用於己烷中之0至50% EtOAc洗脫之二氧化矽管柱純化粗製物以得到產物。LCMS(ES,m/z)：479.3[M+H]⁺。¹H-NMR(500MHz,DMSO-d₆)：δ 8.62(s,1H),8.34(s,1H),8.28(s,1H),8.10-8.04(m,2H),7.97-7.90(m,2H),7.77-7.69(m,1H),7.67-7.55(m,3H),7.49-7.42(m,2H),6.97(dd,J=6.5,3.1Hz,1H),6.49(dt,J=17.6,6.9Hz,1H),6.16(dt,J=56,6.6Hz,1H),4.76-4.62(m,3H)。

步驟2：(2R,3R,4S,5R)-5-(7-胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-氟-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-醇

向苯甲酸(2R,3R,4S,5R)-5-(7-胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-2-((苯甲醯基氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯(2.00g,4.18mmol)於吡啶(10mL)中之溶液中添加NH₃之MeOH溶液(7N,20mL,140mmol)。將其攪拌48小時。LCMS展示反應已完成(m/e=271)。濃縮並藉由使用於CH₂Cl₂中之10% MeOH洗脫之二氧化矽管柱層析純化以得到期望產物。LCMS(ES,m/z)：271.1[M+H]⁺。¹H-NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ 8.54(s,1H),8.33(s,1H),8.22(s,1H),6.73(dd,J=6.5,2.6Hz,1H),6.00(d,J=5.4Hz,1H),5.51(ddd,J=53,7.2,6.5Hz,1H),4.93(t,J=5.8Hz,1H),4.86-4.74(m,1H),3.91-3.83(m,1H),3.77-3.61(m,2H)。

步驟3：N-(3-((2R,3S,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-7-基)苯甲醯胺

在0℃下，向(2R,3R,4S,5R)-5-(7-胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-氟-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-醇(1.34g,4.96mmol)於吡啶(30mL)中之溶液中添加TMSCl(1.46mL,11.4mmol)。將其升溫至室溫並攪拌1小時。然後，將其再冷卻至0℃且逐滴添加BzCl(0.921mL,7.93mmol)。將反應液經2小時緩慢升溫至室溫。LCMS展示反應已完成(m/e=375,479)。添加水(3mL)。將其冷卻至0℃且添加NH₃之MeOH溶液(7N,2.8mL,20mmol)。在1小時之後，濃縮反應混合物。藉由使用於CH₂Cl₂中之0至10% MeOH洗脫之二氧化矽管柱層析將其純化以得到產物。LCMS(ES,m/z)：375.2[M+H]⁺。¹H-NMR(500MHz,DMSO-d₆)：δ 11.95(s,1H),8.98(s,1H),8.10(d,J=7.6Hz,2H),7.73-7.66(m,1H),7.59(t,J=7.7Hz,2H),6.91(d,J=6.2Hz,1H),6.06(d,J=5.6Hz,1H),5.59(t,J=53,6.8Hz,1H),4.90(t,J=5.8Hz,1H),4.82(dq,J=19.8,7.0Hz,1H),3.92(td,J=7.6,2.9Hz,1H),3.75(ddd,J=12.1,5.6,3.0Hz,1H),3.66(dt,J=12.0,6.6Hz,1H)。

步驟4：N-(3-((2R,3S,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-氟-4-羥基四氫呋喃-2-基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-7-基)苯甲醯胺

在0℃下，向N-(3-((2R,3S,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-四氫呋喃-2-基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-7-基)苯甲醯胺(1.25g,3.34mmol)於吡啶(15mL)中之溶液中添加DMTrCl(1.58g,4.68mmol)。將其在室溫下攪拌1小時。LCMS展示具有期望質量之峰(m/e=677)。將其部分地濃縮(至5mL)，且添加EtOAc(20mL)及水(10mL)。分離各層，且使用EtOAc(2×10mL)萃取水層。使用鹽水(5mL)洗滌合併之有機物，乾燥(MgSO₄)，濃縮並藉由使用於己烷中之0至60% EtOAc洗脫之二氧化矽管柱層析純化以得到產物。LCMS(ES,m/z)：675.5[M-H]^-。¹H-NMR(500MHz,DMSO-d₆)：δ 8.13-8.07(m,2H),7.69(t,J=7.4Hz,1H),7.59(t,J=7.6Hz,2H),7.35-7.29(m,2H),7.23-7.10(m,6H),6.97(d,J=6.5Hz,1H),6.81-6.74(m,2H),6.74-6.67(m,2H),6.07(d,J=5.7Hz,1H),5.62(dt,J=53,7.0Hz,1H),4.91-4.79(m,1H),4.15-4.07(m,1H),3.69(s,3H),3.67(s,3H),3.44(dd,J=10.4,8.0Hz,1H),3.21(dd,J=10.3,2.4Hz,1H)。

製備2：(2R,3R,4S,5R)-5-(7-苯甲醯胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基(2-氰基乙基)二異丙基亞磷醯胺(phosphoramidite)

步驟1：(2R,3R,4S,5R)-5-(7-苯甲醯胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基(2-氰基乙基)二異丙基亞磷醯胺

在室溫下，向3-((雙(二異丙基胺基)膦基)氧基)丙腈(8.02_g,26.6mmol)於ACN(90mL)中之溶液中添加2,2,2-三氟乙酸吡啶-1-鎓(3.85g,19.95mmol)及N-(3-((2R,3S,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-氟-4-羥基四氫呋喃-2-基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-7-基)苯甲醯胺(9g,13.30mmol)於ACN(90mL)中之溶液。將所得混合物攪拌1小時。然後，將其濃縮且將殘餘物溶於CH₂Cl₂(1000mL)中。使用NaHCO₃水溶液(1%,2×300mL)、水(300mL)及鹽水(300mL)將其洗滌，乾燥(Na₂SO₄)，濃縮，並藉由反相(C18)層析使用0至95% ACN之水溶液洗脫純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：877.5[M+H]⁺。¹H-NMR：(400MHz,DMSO-d ₆)：δ 12.01(s,1H),8.92(s,1H),8.11(d,J=7.6Hz,2H),7.66(dt,J=42.3,7.5Hz,3H),7.32(td J=7.2,6.6,2.9Hz,2H),7.22-7.00(m,9H),6.83-6.63(m,4H),5.86(ddt,J=52.8, 17.6,6.9Hz,1H),5.16(td,J=17.7,17.2,8.8Hz,1H),3.78-3.63(m,7H),3.59-3.35(m,5H),2.74(t,J=5.9Hz,1H),2.63(t,J=5.9Hz,1H),1.23-0.99(m,10H),0.91(d,J=6.7Hz,2H)。³¹P-NMR：(162MHz,DMSO-d ₆)：δ 150.26,149.60(2 s,1P)。

製備3.N-(9-((2R,3S,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺

步驟1：N-(9-((2R,3S,4S,5R)-4-氟-3-羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺

在0-5℃下，向2-胺基-9-((2R,3S,4S,5R)-4-氟-3-羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基)-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(Carbosynth目錄編號ND10826，1.50g,5.26mmol)於吡啶(30mL)中之懸浮液中添加TMSCl(2.86g,26.3mmol)，且將混合物在室溫下攪拌30分鐘。然後，逐滴添加異丁酸酐(2.50g,15.8mmol)，且將其再攪拌2小時。然後，添加MeOH(5.3mL)。在5分鐘之後，逐滴添加NH₄OH(10.5mL)並繼續攪拌30分鐘。在減壓下濃縮反應混合物，且向殘餘物中添加於CH₂Cl₂(18mL)中之MeOH(2mL)。過濾掉不溶物，且濃縮濾液，並藉由急速管柱層析使用於CH₂Cl₂中之2-10% MeOH純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：356.1[M+H]⁺。¹H-NMR：(400MHz,DMSO-d ₆)：δ 12.11(s,1H),11.68(s,1H),8.28(s,1H),5.98(d,J=6.1Hz,1H),5.85(d,J= 8.0Hz,1H),5.24(t,J=5.4Hz,1H),5.14(d,J=4.1Hz,0.5H),5.01(d,J=4.2Hz,0.5H),4.87-4.69(m,1H),4.26(t,J=4.4Hz,0.5H),4.19(t,J=4.4Hz,0.5H),3.61(t,J=4.9Hz,2H),2.77(hept,J=6.8Hz,1H),1.13(d,J=6.7Hz,6H)。¹⁹F-NMR：(376MHz,DMSO-d ₆)：δ -197.5(s)。

步驟2：N-(9-((2R,3S,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺

將N-(9-((2R,3S,4S,5R)-4-氟-3-羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺(1.30g,3.66mmol)與吡啶(3×10mL)共蒸發並再溶於吡啶(26mL)中。在0-5℃下，向該溶液中添加DMTrCl(1.36g,4.02mmol)。將其在室溫下攪拌3小時且然後濃縮。添加CH₂Cl₂(40mL，1% Et₃N)，且使用NaHCO₃飽和水溶液(15mL)、水(10mL)及鹽水(10mL)將其洗滌。乾燥(Na₂SO₄)有機溶液，濃縮並藉由矽膠管柱層析使用於CH₂Cl₂(1% Et₃N)中之0-10% MeOH純化以得到產物。LCMS(ES,m/z)：656.2[M-H]^-。¹H-NMR：(400MHz,DMSO-d ₆)：δ 12.10(s,1H),11.61(s,1H),8.14(s,1H),7.40-7.31(m,2H),7.31-7.19(m,7H),6.89-6.78(m,4H),6.08(d,J=6.1Hz,1H),5.87(d,J=7.3Hz,1H),5.23(dd,J=4.1,1.8Hz,0H),5.10(d,J=4.4Hz,0H),4.96(dq,J=22.4,5.9Hz,1H),4.30(dt,J=26.1,4.6Hz,1H),3.74(d,J=1.1Hz,6H),3.39(dd,J=10.6,5.7Hz,1H),3.22(dd,J=10.6,3.8Hz,1H),2.76(p,J=6.8Hz,1H),1.13(d,J=6.8Hz,6H)。¹⁹F-NMR：(376MHz,DMSO-d ₆)：δ -198.1(s,1F)。

製備4：N-(3-((2R,3S,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲 基)-4-氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)異丁醯胺

步驟1：苯甲酸((2R,3R,4S,5R)-5-(5-胺基-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-(苯甲醯基氧基)-3-氟四氫呋喃-2-基)甲基酯

在室溫下，向8-氮雜鳥嘌呤(5.14g,33.8mmol)於無水CH₃CN(100mL)中之懸浮液中逐滴添加(E)-N-(三甲基矽烷基)乙醯亞胺酸三甲基矽烷基酯(16.53mL,67.6mmol)，然後將混合物在70℃下攪拌2小時。將反應液冷卻至室溫，且添加苯甲酸((2R,3R,4S)-5-乙醯氧基-4-(苯甲醯基氧基)-3-氟四氫呋喃-2-基)甲基酯(6.8g,16.90mmol)於無水CH₃CN(20mL)中之溶液，隨後逐滴添加氯化錫(IV)(67.6mL,67.6mmol)。將均質溶液在70℃下攪拌2小時。將反應液冷卻至室溫並濃縮。將殘餘物溶於EtOAc(1000mL)中並藉由傾倒至NaHCO₃飽和水溶液(500mL)來中和。分離有機層，且使用EtOAc(4×500mL)萃取水層。合併有機層並使用水(3×700mL)、鹽水洗滌，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以未經進一步純化即提供標題化合物。LCMS(ES,m/z)：495.3[M+H]⁺。

步驟2：苯甲酸((2R,3R,4S,5R)-4-(苯甲醯基氧基)-3-氟-5-(5-異丁醯胺基-5-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)四氫呋喃-2-基)甲基酯

在室溫下，向來自步驟1之苯甲酸((2R,3R,4S,5R)-5-(5-胺基-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-(苯甲醯基氧基)-3-氟四氫呋喃-2-基)甲基酯(8g,16.18mmol)於無水DMA(40mL)中之溶液中逐滴添加異丁酸酐(4.02mL,24.27mmol)。將混合物在140℃下攪拌4小時。冷卻反應液並使用EtOAc(600mL)稀釋，使用NH₄Cl飽和水溶液(4×500mL)、鹽水洗滌，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮。藉由MPLC(220g矽膠，使用100%己烷至100%乙酸乙酯之梯度洗脫)純化粗產物以提供苯甲酸((2R,3R,4S,5R)-4-(苯甲醯基氧基)-3-氟-5-(5-異丁醯胺基-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)四氫呋喃-2-基)甲基酯。LCMS(ES,m/z)：565.3[M+H]⁺。

步驟3：N-(3-((2R,3S,4S,5R)-4-氟-3-羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基)-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)異丁醯胺

在0℃下，向苯甲酸((2R,3R,4S,5R)-4-(苯甲醯基氧基)-3-氟-5-(5-異丁醯胺基-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)四氫呋喃-2-基)甲基酯(6g,10.63mmol)於THF(20mL)、CH₃OH(16mL)及水(4mL)中之溶液中添加5N NaOH水溶液(4.89mL,24.45mmol)並攪拌1小時。使用甲酸(1.223mL,31.9mmol)中和反應液。去除溶劑，且殘餘物藉由MPLC(120g矽膠，使用100% CH₂Cl₂至20%CH₃OH/CH₂Cl₂之梯度洗脫)純化，以提供N-(3-((2R,3S,4S,5R)-4-氟-3-羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基)-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)異丁醯胺。LCMS(ES,m/z)：357.2[M+H]⁺。

步驟4：N-(3-((2R,3S,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四氫呋啶-2-基)-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)異丁醯胺

在0℃下，向N-(3-((2R,3S,4S,5R)-4-氟-3-羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基)-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)異丁醯胺(3g,8.42mmol)於無水吡啶(40mL)中之溶液中添加4,4'-二甲氧基三苯甲基氯(3.42g,10.10mmol)。去除冰浴，且使反應混合物達到室溫且攪拌2小時。使用EtOAc(400mL)稀釋混合物，使用NaHCO₃飽和水溶液(100mL)、水(3×100mL)、鹽水洗滌，並藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮。粗產物藉由MPLC(120g矽膠，使用100% CH₂Cl₂至15% CH₃OH/CH₂CH₂之梯度洗脫)純化，提供N-(3-((2R,3S,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)異丁醯胺。LCMS(ES,m/z)：659.3[M+H]⁺。

製備5：N-(3-((2R,3S,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)異丁醯胺

根據類似於彼等針對製備4所闡述程序之程序使用步驟1中之經適當取代之核糖來製備N-(3-((2R,3S,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)異丁醯胺。LCMS(ES,m/z)：659.4[M +H]⁺。

製備6：N-(3-((2R,3R,5S)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-羥基四氫呋喃-2-基)-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)異丁醯胺

根據類似於彼等針對製備4所闡述程序之程序使用步驟1中之經適當取代之核糖來製備N-(3-((2R,3R,5S)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-羥基四氫呋喃-2-基)-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)異丁醯胺。LCMS(ES,m/z)：641.2[M+H]⁺。

製備7：3-{5-O-[雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]-2-去氧-2-氟-β-D-呋喃阿拉伯糖基}-N-(苯基羰基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-胺

步驟1：3-[2-去氧-2-氟-3,5-雙-O-(苯基羰基)-β-D-呋喃阿拉伯糖基]-7-硝基-3H-咪唑并[4.5-b]吡啶

向新研磨KOH(308mg,5.48mmol)於乙腈(50mL)中之經攪拌混合物添加參(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)胺(0.070mL,0.219mmol)。將反應混合物在環境溫度下陳化15分鐘，隨後一次性添加7-硝基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(600mg,3.66mmol)。將所得混合物在環境溫度下攪拌15分鐘。逐滴添加2-去氧-2-氟-3,5-雙-O-(苯基羰基)-α-D-呋喃阿拉伯糖基溴(1700mg,4.02mmol)於乙腈(10mL)中之溶液且將所得混合物在室溫下劇烈攪拌17小時。使用氯化銨飽和水溶液(80mL)稀釋反應混合物並使用DCM(3×150mL)萃取。合併有機萃取物，藉由硫酸鈉乾燥並在減壓下濃縮。所得殘餘物藉由矽膠管柱層析(120g，預充填，0-70%乙酸乙酯/己烷)純化，提供3-[2-去氧-2-氟-3,5-雙-O-(苯基羰基)-β-D-呋喃阿拉伯糖基]-7-硝基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶。MS：507(M+H)⁺。

步驟2：3-[2-去氧-2-氟-3,5-雙-O-(苯基羰基)-β-D-呋喃阿拉伯糖基]-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-胺

在室溫下，向3-[2-去氧-2-氟-3,5-雙-O-(苯基羰基)-β-D-呋喃阿拉伯糖基]-7-硝基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(1380mg,2.72mmol)於甲醇(55mL)中之經攪拌溶液中添加氧化鉑(IV)(61.9mg,0.272mmol)。將反應混合物置於氫氣氛下並在室溫下攪拌72小時。藉由過濾經由矽藻土(CELITE)塞去除觸媒。在減壓下濃縮濾液，且所得殘餘物藉由矽膠管柱層析(80g，預充填，0-40%(3：1乙酸乙酯：乙醇)/己烷)純化，提供3-[2-去氧-2-氟-3,5-雙-O-(苯基羰基)-β-D-呋喃阿拉伯糖基]-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-胺。MS：477(M+H)⁺。

步驟3：3-(2-去氧-2-氟-β-D-呋喃阿拉伯糖基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-胺

在環境溫度下，向3-[2-去氧-2-氟-3,5-雙-O-(苯基羰基)-β-D-呋喃阿拉伯糖基]-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-胺(995mg,2.09mmol)於甲醇(36mL)中之經攪拌溶液中添加氨(7N於甲醇中，12mL，84.0mmol)。使所得溶液達到80℃並攪拌5小時。將反應混合物冷卻至室溫並在減壓下濃縮。將所得殘餘物懸浮於甲醇/二氯甲烷中並超音波處理直至自溶液沈澱出固體為止。藉由過濾經由玻璃釉料收集固體，從而提供3-(2-去氧-2-氟-β-D-呋喃阿拉伯糖基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-胺。 MS：269(M+H)⁺。

步驟4：3-(2-去氧-2-氟-β-D-呋喃阿拉伯糖基)-N-(苯基羰基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-胺

在室溫下，向3-(2-去氧-2-氟-β-D-呋喃阿拉伯糖基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-胺(550mg,2.05mmol)於吡啶(6.5mL)中之經攪拌溶液中添加TMSCl(2.62mL,20.5mmol)。將所得溶液攪拌1.5小時，隨後添加苯甲醯鋁(0.357mL,3.08mmol)。在再攪拌一小時之後，向反應混合物中添加水(2.15mL)，然後攪拌45分鐘。將反應混合物冷卻至0℃且添加氨水溶液(28% w/w)(0.370mL,4.79mmol)。使反應混合物返回室溫並攪拌45分鐘且然後在減壓下濃縮。將所得殘餘物吸收於水(20mL)中並使用乙酸乙酯(3×40mL)萃取。使用鹽水洗滌合併之有機萃取物，藉由硫酸鈉乾燥並在減壓下濃縮。所得殘餘物藉由矽膠管柱層析(120g，預充填，0-7%甲醇/二氯甲烷)純化，提供3-(2-去氧-2-氟-β-D-呋喃阿拉伯糖基)-N-(苯基羰基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-胺。MS：373(M+H)⁺。

步驟5：3-{5-O-[雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]-2-去氧-2-氟-β-D-呋喃阿拉伯糖基}-N-(苯基羰基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-胺

在0℃下，向3-(2-去氧-2-氟-β-D-呋喃阿拉伯糖基)-N-(苯基羰基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-胺(185mg,0.497mmol)及4Å分子篩於吡啶(3mL)中之經攪拌混合物中一次性添加4,4'-二甲氧基三苯甲基氯(253mg,0.745mmol)。將反應混合物升溫至室溫且攪拌18小時。藉由過濾去除篩且在減壓下濃縮濾液。將所得殘餘物吸收於甲醇/乙醚之混合物中並添加至水中。分離各相，且使用乙醚(3×)萃取水層。合併有機萃取物，使用鹽水洗滌，藉由硫酸鈉乾燥並在減壓下濃縮。所得殘餘物藉由矽膠管柱層析(40g，預充填，0-40%(3：1乙酸乙酯：乙醇)/己烷)純化，提供3-{5-O-[雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]-2-去氧-2-氟-β-D-呋喃阿拉伯糖基}-N-(苯基羰基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-胺。MS：675(M+H)⁺。

製備8：1-((2R,3S,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)-1,5-二氫-4H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-酮

步驟1：苯甲酸((2R,3S,4S)-4-乙醯氧基-3-氟-5-(4-側氧基-4,5-二氫-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)四氫呋啶-2-基)甲基酯

在0℃及Ar下，向4-(苄基氧基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶(0.795g,3.53mmol)及二乙酸(3S,4S,5R)-5-((苯甲醯基氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-2,3-二基酯(1g,2.94mmol)於ACN(20mL)及CH₂Cl₂(10mL)中之懸浮液中添加2,3,4,6,7,8,9,10-八氫嘧啶并[1,2-a]氮呯(1.34g,8.815mmol)。將所得混合物在0℃下攪拌30分鐘。然後，向溶液中添加三氟甲烷磺酸三甲基矽烷基酯(3.92g,17.65mmol)，且將其在0℃下攪拌30分鐘。然後，將其加熱至80℃保持16小時。將反應液冷卻至室溫且添加NaHCO₃飽和水溶液(10mL)及水(30mL)。使用EtOAc(3×50mL)將其萃取。使用鹽水洗滌合併之有機層，藉由(Na₂SO₄)乾燥，濃縮，且殘餘物藉由矽膠管柱層析使用1%至10% MeOH於CH₂Cl₂洗脫純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：416.3[M+H]⁺。

步驟2：1-((2R,3S,4R,5R)-4-氟-3-羥基-5-(羥甲基)四氫呋啶-2-基)-1,5-二氫-4H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-酮

向苯甲酸((2R,3S,4S)-4-乙醯氧基-3-氟-5-(4-側氧基-4,5-二氫-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)四氫呋喃-2-基)甲基酯(2.5g,5.3mmol)於MeOH(10mL)中之溶液中添加甲醇鈉(3.47g,21.2mmol)。將溶液在室溫下攪拌1小時。使用AcOH將其中和，且濃縮溶液。殘餘物藉由反相(AQ C18)層析使用0至30% ACN於NH₄HCO₃水溶液(5mM)洗脫純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：270.0[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 11.31(s,1H),8.06(s,1H),7.23(d,J=7.1Hz,1H),6.62(d,J=7.1Hz,1H),6.37(d,J=2.9Hz,1H),5.85(d,J=2.8Hz,1H),5.22-4.98(m,2H),4.54(d,J=17.7Hz,1H),4.28(dtd,J=29.6,6.0,3.1Hz,1H),3.93-3.62(m,2H)。

步驟3：1-((2R,3S,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)-1,5-二氫-4H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-酮

在室溫下，向1-((2R,3S,4R,5R)-4-氟-3-羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4(5H)-酮(340mg,1.26mmol)於吡啶(3mL)中之經攪拌溶液中添加4,4'-(氯(苯基)亞甲基)雙(甲氧基苯)(426mg,1.1mmol)。將其攪拌4小時。在減壓下濃縮混合物，且殘餘物藉由矽膠管柱層析使用1%至10% MeOH於CH₂Cl₂(0.5% Et₃N)中洗脫純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：572.3[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 11.32(d,J=5.9Hz,1H),7.95(s,1H),7.41(d,J=7.8Hz,2H),7.37-7.15(m,8H),6.86(dd,J=10.5,8.6Hz,4H),6.60(d,J=7.1Hz,1H),6.50-6.36(m,1H),5.92(d,J=2.6Hz,1H),5.77(s,1H),5.27-5.06(m,1H),4.65-4.42(m,2H),3.73(d,J=2.6Hz,6H),3.30-3.24(m,1H)。

製備9：N-(7-((2R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-羥基四氫呋喃-2-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)苯甲醯胺

步驟1：(3R,4R,5R)-2-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3,4-雙(苄基氧基)-5-((苄基氧基)甲基)四氫呋喃-2-醇

在0℃下，向7-溴咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(41g,0.19mol)於THF(0.50L)中之經攪拌混合物中逐滴添加MeMgBr(3.0M於THF中，66mL,0.19mol)以維持內部溫度低於10℃。一次性添加雙(氯二甲基矽烷基)乙烷(41g,190mmol)。然後逐滴添加MeMgBr(3.0M於二乙醚中，66mL,0.19mol)以維持內部溫度低於10℃。添加i-PrMgCl-LiCl(1.3M於THF,0.16L,0.21mol)，同時維持內部溫度低於10℃。在0℃下，逐滴添加(3R,4R,5R)-3,4-雙(苄基氧基)-5-((苄基氧基)甲基)二氫呋喃-2(3H)-酮(160g,0.38mol)於THF中之混合物，且然後將混合物升溫至室溫且攪拌12小時。使用氯化銨飽和水溶液(100mL)稀釋混合物並使用乙酸乙酯(3×1000mL)萃取。藉由硫酸鈉乾燥合併之有機層並在減壓下濃縮。所得殘餘物藉由管柱層析(管柱高度：2500mm，直徑：1000mm，於己烷中之25%至75%乙酸乙酯梯度)純化，提供(3R,4R,5R)-2-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3,4-雙(苄基氧基)-5-((苄基氧基)甲基)-四氫呋喃-2-醇。

步驟2：7-((3S,4R,5R)-3,4-雙(苄基氧基)-5-((苄基氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺

在0℃下，向(3R,4R,5R)-2-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3,4-雙(苄基氧基)-5-((苄基氧基)甲基)四氫呋喃-2-醇(64g,0.12mmol)於DCM(1.3L)中之經攪拌混合物中添加三乙基矽烷(81g,0.69mol)，且然後添加三氟化硼合二乙醚(21g,0.15mol)。然後將混合物升溫至25℃，且將混合物攪拌1小時。添加額外三氟化硼合二乙醚(57g,0.40mol)，且然後將混合物加熱至35℃保持4小時。在冷卻至室溫後，使用碳酸氫鈉飽和水溶液(200mL)將混合物驟冷且然後使用乙酸乙酯(3×300mL)萃取。藉由硫酸鈉乾燥合併之有機層並在減壓下濃縮。所得殘餘物藉由管柱層析(於己烷中之15-75%乙酸乙酯梯度)純化，提供7-((3S,4R,5R)-3,4-雙(苄基氧基)-5-((苄基氧基)甲基)四氫呋喃-2-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺。MS(ES,m/z)=538[M+H]+。

步驟3：(3R,4S,5R)-2-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-5-(羥甲基)-四氫呋喃-3,4-二醇

在-78℃下，向7-((3S,4R,5R)-3,4-雙(苄基氧基)-5-((苄基氧基)甲基)-四氫呋喃-2-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(12g,22mmol)於DCM(850mL)中之經攪拌混合物中逐滴添加三氯化硼(18g,0.16mol)。在完成後，將混合物在-78℃下攪拌3小時。在3小時之後，使用甲醇(50mL)在-78℃將混合物驟冷，且將混合物升溫至25℃。在減壓下濃縮混合物。殘餘物藉由管柱層析(於二氯甲烷中之9-25%甲醇梯度)純化，提供(3R,4S,5R)-2-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-5-(羥甲基)四氫呋喃-3,4-二醇。

步驟4：(6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜辛英-9-醇

向(2S,3R,4S,5R)-2-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-5-(羥甲基)四氫呋喃-3,4-二醇(4.0g,15mmol)於吡啶(0.10L)中之經攪拌混合物中添加1,3-二氯-1,1,3,3-四異丙基二矽氧烷(5.8mL,18mmol)。在3小時之後，使用甲苯(50mL)稀釋混合物且然後濃縮。將所得混合物吸收於DCM及甲醇中且然後添加矽膠(40g)。濃縮混合物，置於真空下保持1小時且然後藉由管柱層析(於己烷中之0-80%乙酸乙酯梯度)純化以提供(6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜辛英-9-醇。MS(ES,m/z)=510[M+H]+。

步驟5：1H-咪唑-1-硫代甲酸O-((6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜辛英-9-基)酯

向(6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜辛英-9-醇(6.45g,12.7mmol)於乙腈(63.0mL)及吡啶(63.0mL)中之混合物中添加1,1'-硫代羰基二咪唑(2.71g,15.2mmol)。在90分鐘之後，添加額外1,1'-硫代羰基二咪唑(2.71g,15.2mmol)，且將混合物攪拌過夜。在攪拌過夜之後，濃縮混合物並藉由管柱層析(於己烷中之0-100%乙酸乙酯梯度)純化以提供1H-咪唑-1-硫代甲酸O-((6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜辛英-9-基)酯。MS(ES,m/z)=620[M+H]+。

步驟6：7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜辛英-8-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺

向O-((6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-胺基咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜辛英-9-基)(5.65g,9.11mmol)於甲苯(91.0mL)中之混合物中添加2,2’-偶氮雙(2-甲基丙腈(0.300g,1.82mmol)及參(三甲基矽烷基)矽烷(4.22mL,13.7mmol)。將混合物加熱至85℃保持30分鐘。在30分鐘之後，將混合物冷卻至室溫且直接置於管柱上並純化(於己烷中之0-80%乙酸乙酯梯度)以提供7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2- f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜辛英-8-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺。MS(ES,m/z)=494[M+H]+494。

步驟7：N-苯甲醯基-N-(7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜辛英-8-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)苯甲醯胺

向7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜辛英-8-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(15.7g,31.8mmol)於吡啶(64.0mL)中之混合物中添加苯甲醯基氯(11.0mL,95.0mmol)，且將混合物加熱至50℃保持45分鐘。在45分鐘之後，將混合物冷卻至室溫。在冷卻之後，形成沈澱物且過濾掉。使用DCM(50mL)及甲苯(50mL)稀釋濾液。將混合物濃縮至約50mL。過濾混合物，並使用DCM洗滌固體。合併濾液及洗滌液，裝載於管柱上，並純化(於己烷中之0-50%乙酸乙酯梯度)以提供N-苯甲醯基-N-(7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜辛英-8-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)苯甲醯胺。MS(ES,m/z)=702[M+H]+。

步驟8：N-(7-((2R,4S,5R)-4-羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)苯甲醯胺

向N-苯甲醯基-N-(7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-呋喃并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜辛英-8-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)苯甲醯胺(10g,14mmol)於四氫呋喃(0.14L)中之混合物中添加TBAF(1.0M於THF,29mL,29mmol)，且將混合物攪拌1小時。在1小時之後，濃縮混合物並藉由管柱層析純化以提供N-(7-((2R,4S,5R)-4-羥基-5-(羥甲基)四氫-呋喃-2-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)苯甲醯胺。MS(ES,m/z)=356[M+H]+。

步驟9：N-(7-((2R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-羥基四氫呋喃-2-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)苯甲醯胺

在0℃下，向N-(7-((2R,4S,5R)-4-羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)苯甲醯胺(6.1g,17mmol)於吡啶(86mL)中之混合物中添加4,4'-(氯(苯基)亞甲基)雙(甲氧基苯)(5.8g,17mmol)，且將混合物升溫至室溫過夜。在攪拌過夜之後，使用甲苯稀釋混合物且然後在減壓下濃縮以提供粗產物。藉由矽膠層析(於己烷中之0-100%乙酸乙酯梯度)純化粗產物以提供N-(7-((2R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)-甲氧基)甲基)-4-羥基四氫呋喃-2-基)咪唑并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)苯甲醯胺。MS(ES,m/z)=658[M+H]+。

製備10：(2R,3R,4S,5R)-2-(4-胺基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-1-基)-5-(羥甲基)四氫呋喃-3,4-二醇

步驟1：二乙酸(2R,3R,4R,5R)-2-(乙醯氧基甲基)-5-(4-氯-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-1-基)四氫呋喃-3,4-二基酯

向4-氯-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶(1.0g,6.5mmol)及三乙酸(3R,4R,5R)-5-(乙醯氧基甲基)四氫呋喃-2,3,4-三基酯(3.1g,9.7mmol)於硝基甲烷(50mL)中之懸浮液中添加BF₃˙Et₂O(1.23mL,9.7mmol)，且將所得混合物在50℃下加熱2小時。將反應混合物冷卻至室溫，使用100mL DCM稀釋並使用NaHCO₃飽和水溶液(100mL)及鹽水(100mL)洗滌。藉由Na₂SO₄乾燥分離之有機層並在真空中濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱使用0-100% EtOAc：EtOH(3：1)/己烷洗脫純化。LCMS(ES,m/z)：413.07[M+H]⁺。¹H NMR(500MHz，氯仿-d)δ 8.40(d,J=5.8Hz,1H),7.56(d,J=5.8Hz,1H),6.43(d,J=4.1Hz,1H)，6.17(dd,J=5.3,4.1Hz,1H),5.74(t,J=5.3Hz,1H),5.32(s,1H),4.58(ddd,J=5.3,3.9,2.9Hz,1H),4.42(dd,J=12.5,3.0Hz,1H),4.25(dd,J=12.5,3.9Hz,1H),2.17(d,J=18.8Hz,6H),2.03(s,3H)。

步驟2：(2R,3R,4S,5R)-2-(4-胺基-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-1-基)-5-(羥甲基)四氫呋喃-3,4-二醇

向二乙酸(2R,3R,4R,5R)-2-(乙醯氧基甲基)-5-(4-氯-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶-1-基)四氫呋喃-3,4-二基酯(1.2g,2.9mmol)於MeOH(8.3mL)中之溶液中添加氨之MeOH 7N溶液(8.3mmol,58.lmmol)。將反應混合物在150℃下於密封Q-Tube^TM壓力管反應器中攪拌18小時。在減壓下去除過量溶劑，且殘餘物藉由反相矽膠管柱使用0-10%乙腈/H₂O(含有0.05% TFA)洗脫純化。LCMS(ES,m/z)：268.17[M+H]⁺。¹H NMR(500MHz,DMSO-d ₆)δ 13.87(s,2H),9.34(s,4H),7.89(d,J=7.1Hz,2H),7.51(d,J=7.0Hz,2H),7.42(s,4H),7.32(s,6H),7.22(s,5H),6.69(s,2H),6.30(d,J=4.9Hz,2H),5.72(s,2H),5.41(s,2H),4.75-4.67(m,0H),4.65(t,J=5.0Hz,2H),4.27(t,J=4.6Hz,2H),4.07(q,J=4.2Hz,2H),3.86-3.67(m,2H),3.69-3.58(m,2H),3.54 (dd,J=12.0,4.7Hz,2H),3.48-3.38(m,1H),3.28(s,1H),3.23(s,OH),1.76(d,J=0.5Hz,5H),1.11(dt,J=26.0,7.1Hz,1H)。

製備11：9-{3-疊氮基-5-O-[雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]-3-去氧-β-D-呋喃核糖基}-2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

根據公開程序(Nucleosides,Nucleotides & Nucleic Acids 2005,24(10-12),1707-1727)來製備標題化合物。

製備12：9-{5-O-[雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]-3-去氧-3-氟-β-D-呋喃木糖基}-2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

根據公開程序(Tetrahedron Letters,1989,30(24),3171-3174)來製備標題化合物。

製備13：1-{5-O-[雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]-3-去氧-3-氟-β-D-呋喃核糖基}-6-[(2-甲基丙醯基)胺基]-1,5-二氫-4H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-酮

根據公開程序(WO2002057425)來製備標題化合物。

製備14：N-(3-((2R,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3,3-二氟-4-羥基四氫呋喃-2-基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-7-基)苯甲醯胺

步驟1：苯甲酸(((2R,3R)-3-(苯甲醯基氧基)-5-((二苯氧基磷醯基)氧基)-4,4-二氟四氫呋喃-2-基)甲基酯

在0℃下，向於甲苯(150mL)中之苯甲酸((2R,3R)-3-(苯甲醯基氧基)-4,4-二氟-5-羥基四氫呋喃-2-基)甲基酯(20.0g,52.9mmol)中逐滴添加於甲苯(20mL)中之Et₃N(7.74mL,55.5mmol)及二苯基磷醯氯(12.1mL,58.2mmol)。將反應液升溫至室溫並攪拌3小時。LCMS展示反應已完成(m/e=611)。添加水(30mL)及HCl水溶液(1M,5mL)。分離各層，且使用CH₂Cl₂(2×30mL)萃取水層。使用NaHCO₃飽和水溶液(20mL)及鹽水(20mL)洗滌合併之有機溶液，乾燥(MgSO₄)，並濃縮。藉由使用於己烷中之0至30% EtOAc洗脫之二氧化矽管柱層析將其純化以得到產物。LCMS(ES,m/z)：611.3[M+H]⁺。

步驟2：苯甲酸((2R,3R,5R)-3-(苯甲醯基氧基)-5-溴-4,4-二氟四氫呋喃-2-基)甲基酯

在0℃下，向苯甲酸((2R,3R)-3-(苯甲醯基氧基)-5-((二苯氧基磷醯基)氧基)-4,4-二氟四氫呋喃-2-基)甲基酯(23.8g,39.0mmol)中添加HBr之乙酸溶液(33%,51.2mL,292mmol)。在升溫至室溫時，將其攪拌。在6小時之後，LCMS展示反應已完成(m/e=441及443)。添加CH₂Cl₂(200mL)，且使用水(2×50mL)、NaHCO₃飽和水溶液(2×50mL)及鹽水(50mL)洗滌有機層。將其乾燥(MgSO₄)並濃縮以得到粗產物。其未經純化即用於下一步驟中。LCMS(ES,m/z)：441.1,443.1[M+H]⁺。

步驟3：苯甲酸(2R,3R,5R)-5-(7-胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-2-((苯甲醯基氧基)甲基)-4,4-二氟四氫呋喃-3-基酯

向3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-7-胺(3.21g,23.6mmol)於NMP(60mL)中之混合物中添加NaH(60%,0.979g,24.5mmol)。劇烈攪拌混合物，且在1小時之後，氣泡生成已完全停止。向混合物中添加苯甲酸((2R,3R,5R)-3-(苯甲醯基氧基)-5-溴-4,4-二氟四氫呋喃-2-基)甲基酯(純，8.00g,18.1mmol)。將混合物劇烈攪拌30分鐘。然後，將其加熱至90℃保持5小時。將其冷卻至室溫，且添加CH₂Cl₂(300mL)及水(150mL)。分離各相，且使用水(8×150mL)及鹽水(50mL)洗滌有機層，乾燥(MgSO₄)並濃縮。殘餘物藉由二氧化矽管柱層析使用0%至30% EtOAc洗脫純化，得到期望產物。LCMS(ES,m/z)：497.1[M+H]⁺。¹H NMR(500MHz，氯仿-d)δ 8.44(s,1H),8.15-8.08(m,2H),8.08-7.99(m,2H),7.63(ddt,J=8.7,7.1,1.3Hz,1H),7.56-7.44(m,3H),7.40-7.32(m,2H),6.79-6.68(m,2H),6.04(bs,2H),4.92-4.84(m,1H),4.80-4.72(m,2H)。

步驟4：(2R,3R,5R)-5-(7-胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4,4-二氟-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-醇

向苯甲酸(2R,3R,5R)-5-(7-胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-2-((苯甲醯基氧基)甲基)-4,4-二氟四氫呋喃-3-基酯(1.05g,2.11mmol)中添加氨之MeOH溶液(7N,9.0mL,63mmol)，且將混合物攪拌24小時。LCMS展示反應已完成(m/e=289)。將其濃縮並藉由使用於CH₂Cl₂中之0至15% MeOH洗脫之二氧化矽管柱層析純化以得到期望產物。LCMS(ES,m/z)：289.1[M+H]⁺。¹H-NMR(500MHz,DMSO-d₆)：δ 8.65(s,1H),8.36(s,1H),8.32(s,1H),6.65(d,J=12.4Hz,1H),6.40(d,J=6.7Hz,1H),5.03(dd,J=6.4,5.3Hz,1H),4.83(dq,J=16.5,8.9Hz,1H),4.00(t,J=6.7Hz,1H),3.77(ddd,J=12.3,5.2,2.5Hz,1H),3.68(dt,J=12.5,6.3Hz,1H)。

步驟5：N-(3-((2R,4R,5R)-3,3-二氟-4-羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-7-基)苯甲醯胺

在0℃下，向(2R,3R,5R)-5-(7-胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4,4-二氟-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-醇(0.57g,2.0mmol)於吡啶(15mL)中之溶液中添加TMSCl(0.55mL,4.3mmol)。將其升溫至室溫並攪拌1小時。然後，將其再冷卻至0℃且逐滴添加BzCl(0.34mL,2.9mmol)。將反應液經2小時緩慢升溫至室溫。LCMS展示反應已完成(m/e=393,497)。將其冷卻至0℃，且添加氫氧化銨(28%,1.1mL,7.9mmol)。在30分鐘之後，將其濃縮並藉由使用於CH₂Cl₂中之0至10% MeOH洗脫之二氧化矽管柱層析純化以得到產物。LCMS(ES,m/z)：393.3[M+H]⁺。¹H-NMR(500MHz,DMSO-d₆)：δ 12.02(s,1H),9.01(s,1H),8.13-8.07(m,2H),7.73-7.66(m,1H),7.64-7.55(m,2H),6.86(d,J=11.6Hz,1H),6.46(d,J=6.7Hz,1H),5.01(dd,J=6.3,5.4Hz,1H),4.86(dt,J=16.7,8.3Hz,1H),4.04(ddd,J=8.8,6.2,2.6Hz,1H),3.78(ddd,J=12.3,5.4,2.7Hz,1H),3.68(dt,J=12.4,6.2Hz,1H)。

步驟6：N-(3-((2R,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3,3-二氟-4-羥基四氫呋喃-2-基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-7-基)苯 甲醯胺

在0℃下，向N-(3-((2R,4R,5R)-3,3-二氟-4-羥基-5-(羥甲基)-四氫呋喃-2-基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-7-基)苯甲醯胺(0.68g,1.7mmol)於吡啶(15mL)中之溶液中添加DMTrCl(0.65g,1.9mmol)。將其在室溫下攪拌1小時。LCMS展示具有期望質量之峰(m/e=695)。將其部分地濃縮(至5mL)，且添加EtOAc(20mL)及水(10mL)。分離各相，且使用EtOAc(2×10mL)萃取水層。使用鹽水洗滌合併之有機部分，乾燥(MgSO₄)，濃縮並藉由使用於己烷中之0%至60% EtOAc洗脫之二氧化矽管柱層析純化以得到產物。LCMS(ES,m/z)：695.2[M+H]⁺。¹H-NMR(500MHz,DMSO-d₆)：δ 12.05(s,1H),8.93(s,1H),8.11(d,J=7.6Hz,2H),7.70(m,1H),7.60(t,J=7.7Hz,2H),7.38-7.32(m,2H),7.25-7.13(m,7H),6.96(d,J=11.9Hz,1H),6.84-6.73(m,4H),6.48(d,J=6.9Hz,1H),4.97(dq,J=16.7,8.3Hz,1H),4.23(m,1H),3.70(s,3H),3.69(s,3H),3.42-3.36(m,1H),3.32-3.28(m,1H)。

製備15：N-(7-((2R,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3,3-二氟-4-羥基四氫呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲醯胺

步驟1：苯甲酸((2R,3R,5R)-3-(苯甲醯基氧基)-5-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4,4-二氟四氫呋喃-2-基)甲基酯

向4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(4.06g,26.4mmol)及苯甲酸((2R,3R)-3-(苯甲醯基氧基)-4,4-二氟-5-羥基四氫呋喃-2-基)甲基酯(10.0g,26.4mmol)及三苯基膦(20.80g,79mmol)於THF(100mL)中之溶液中逐滴添加(E)-二氮烯-1,2-二基雙(六氫吡啶-1-基甲酮)(20.01g,79mmol)。將其緩慢升溫至室溫。在攪拌2小時之後，濃縮混合物。殘餘物藉由矽膠管柱層析使用於石油醚中之0-20% EtOAc純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：514.3[M+H]⁺。¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆)：δ 8.71(s,1H),8.08-7.87(m,5H),7.76-7.42(m,6H),6.98(dd,J=10.3,7.9Hz,1H),6.84(d,J=3.8Hz,1H),6.29(ddd,J=10.0,6.0,3.8Hz,1H),5.44(q,J=5.5Hz,1H),4.79-4.60(m,2H)。

步驟2：(2R,3R,5R)-5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4,4-二氟-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-醇

將苯甲酸((2R,3R,5R)-3-(苯甲醯基氧基)-5-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4,4-二氟四氫呋喃-2-基)甲基酯(1.9g,3.70mmol)於NH₃/2-丙醇(在-78℃下飽和，100mL)中之溶液在90℃下攪拌16小時。將其冷卻至室溫，濃縮，並藉由矽膠管柱層析使用於CH₂Cl₂中之0-10% MeOH純化以得到產物。LCMS(ES,m/z)：287.1[M+H]⁺。¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆)：δ 8.06(s,1H),7.40-7.25(m,1H),7.14(s,2H),6.82(d,J=5.9Hz,1H),6.60(d,J=3.7Hz,1H),6.34(dd,J=16.2,2.1Hz,1H),4.88(t,J=5.7Hz,1H),4.27(ddd,J=9.9,6.2,3.6Hz,1H), 4.08(dq,J=6,8,4.1,3.5Hz,1H),3.78(dt,J=11.1,5.4Hz,1H),3.62(dt,J=11.4,5.8Hz,1H)。

步驟3：N-(7-((2R,4R,5R)-3,3-二氟-4-羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲醯胺

在0℃下，向(2R,3R,5R)-5-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4,4-二氟-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-醇(900mg,3.14mmol)於吡啶(15mL)中之溶液中添加氯三甲基矽烷(3.42g,31.4mmol)。經1小時將其升溫至室溫且逐滴添加苯甲醯基氯(663mg,4.72mmol)。在2小時之後，添加NH₄OH(28%,15.00mL)，且將其攪拌0.5小時。濃縮所得混合物，且藉由矽膠管柱層析使用於CH₂Cl₂中之0-10% MeOH純化殘餘物以得到產物。LCMS(ES,m/z)：391.1[M+H]⁺。¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆)：δ 8.61(s,1H),8.08-7.98(m,2H),7.97-7.91(m,1H),7.67-7.51(m,2H),7.50-7.47(m,1H),6.70(d,J=3.9Hz,1H),6.56(dd,J=15.6,1.5Hz,1H),4.32(dd,J=9.4,3.6Hz,1H),4.16(d,J=5.6Hz,1H),3.80(dd,J=11.5,5.2Hz,1H),3.66(dd,J=11.5,6.5Hz,1H),3.12(s,2H)。

步驟4：N-(7-((2R,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3,3-二氟-4-羥基四氫呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲醯胺

在0℃下，向N-(7-((2S,4R,5R)-3,3-二氟-4-羥基-5-(羥甲基)-四氫呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲醯胺(1.1g,2.82mmol)於吡啶(12mL)中之溶液中添加4,4'-(氯(苯基)亞甲基)-雙(甲氧基苯)(0.955g, 2.82mmol)。將其升溫至室溫並攪拌3小時。濃縮混合物。藉由矽膠管柱層析使用於CH₂Cl₂中之0-10% MeOH純化產物以得到產物。LCMS(ES,m/z)：693.3[M+H]⁺。¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆)：δ 11.25(s,1H),8.67(s,1H),8.09-8.01(m,2H),7.60-7.48(m,2H),7.47-7.36(m,3H),7.33-7.18(m,7H),6.91-6.78(m,4H),6.75-6.57(m,3H),5.76(s,1H),4.55-4.33(m,2H),3.74(s,6H),3.44(t,J=8.7Hz,1H),3.35(s,1H)。

製備16：N-(9-((2R,3S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4,4-二氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺

步驟1：苯甲酸(2R,4S)-4-(苄基氧基)-4-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基)-3,3-二氟-2-羥丁基酯

在-70℃下經50分鐘，向(2R,4S)-4-(苄基氧基)-4-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基)-3,3-二氟丁烷-1,2-二醇(3.50g,10.5mmol)於CH₂Cl₂(52mL)及吡啶(26mL)中之溶液中逐滴添加於CH₂Cl₂(11mL)中之苯甲醯基氯(1.48g,10.5mmol)。在2小時之後，添加甲醇(150mL)。將混合物在室溫下攪拌0.5小時。添加水(200ml)。分離各層，且使用乙醚(4×150mL)萃取水層。使用HCl水溶液(1N,2×150mL)、NaHCO₃飽和水溶液(2×150mL)及鹽水(2×150mL)洗滌合併之有機層。將其乾燥(Na₂SO₄)，濃縮並藉由矽膠管柱層析(EtOAc/石油醚=1/10)純化以得到產物。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)：δ 8.11-8.01(m,2 H),7.61-7.55 (m,1 H),7.48-7.31(m,7H),4.89-4.53(m,4H),4.46-4.41(m,1H),4.40-4.29(m,1H),4.17-4.02(m,2 H),3.98-3.84(m,0.5H),3.74-3.66(m,0.5H),1.46(s,3H),1.28(s,3H)。¹⁹F-NMR：(376MHz,CDCl₃)：δ -106.8(d,J=270.7Hz,1F),-119.2(d,J=270.7Hz,1F)。

步驟2：苯甲酸((2R,4S)-4-(苄基氧基)-3,3-二氟-5-羥基四氫呋喃-2-基)甲基酯

將苯甲酸(2R,4S)-4-(苄基氧基)-4-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基)-3,3-二氟-2-羥丁基酯(3.00g,6.87mmol)溶於AcOH水溶液(75%,66mL)中。將其在50℃下攪拌3小時。將其部分地濃縮。將殘餘物再溶於丙酮(33mL)中。在室溫下，向溶液中添加過碘酸鈉(1.20g,5.61mmol)之水溶液(33mL)。在1.5小時之後，過濾掉所形成固體並使用丙酮洗滌。濃縮濾液。添加水及CH₂Cl₂，且分離各層。使用CH₂Cl₂(4×150mL)萃取水層。乾燥(Na₂SO₄)合併之有機層，濃縮，並藉由矽膠管柱層析(乙酸乙酯/石油醚=1/5)純化以得到產物。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)：δ 8.05-8.01(m,2 H),7.59-7.52(m,1 H),7.46-7.35(m,7H),5.49-5.42(m,1H),4.99-4.72(m,1H),4.67-4.47(m,4H),4.11-3.80(m,1H)。¹⁹F-NMR：(376MHz,CDCl₃)：δ -117.1(d,J=240.6Hz,1F),-117.9(d,J=251.9Hz,1F)。

步驟3：苯甲酸((2R,4S)-5-乙醯氧基-4-(苄基氧基)-3,3-二氟四氫呋喃-2-基)甲基酯

在室溫下，向苯甲酸((2R,4S)-4-(苄基氧基)-3,3-二氟-5-羥基四氫呋喃-2-基)甲基酯(2.40g,6.59mmol)於CH₂Cl₂(66mL)中之溶液中逐滴添加N,N-二甲基吡啶-4-胺(0.080g,0.659mmol)及乙酸酐(4.03g,39.5mmol)。在6小時之後，藉由添加NaHCO₃飽和水溶液(30mL)來將其驟冷。分離各層，且使用CH₂Cl₂(3×150mL)萃取水層。使用水(2×150mL)及鹽水(2×100mL)洗滌合併之有機層，乾燥(Na₂SO₄)，濃縮並藉由矽膠管柱層析(乙酸乙酯/石油醚=1/7)純化以得到產物。¹H-NMR(300MHz,CDCl₃)：δ 8.08-7.89(m,2 H),7.61-7.48(m,1 H),7.47-7.25(m,7H),6.15(d,J=6.0Hz,1H),4.89-4.75(m,1H),4.73-4.40(m,4H),4.18-4.02(m,1H),1.98(s,3H)。¹⁹F-NMR：(282MHz,CDCl₃)：δ -116.5(d,J=248.2Hz,1F),-120.9(d,J=248.2Hz,1F)。

步驟4：苯甲酸((2R,4S)-5-乙醯氧基-3,3-二氟-4-羥基四氫呋喃-2-基)甲基酯

向苯甲酸((2R,4S)-5-乙醯氧基-4-(苄基氧基)-3,3-二氟四氫呋喃-2-基)甲基酯(2.50g,6.15mmol)於EtOAc(60mL)中之溶液中添加溴酸鈉(5.57g,36.9mmol)之水溶液(46mL)。攪拌劇烈混合物，且經1小時向其中逐滴添加二硫亞磺酸鈉(6.43g,36.9mmol)之水溶液(92mL)。在5小時之後，分離各層，且使用EtOAc(5×150mL)萃取水層。使用Na₂S₂O₃飽和水溶液(2×150mL)及鹽水(2×150mL)洗滌合併之有機層，乾燥(Na₂SO₄)，濃縮，並藉由矽膠管柱層析(乙酸乙酯/石油醚=1/5)純化以得到產物。¹H-NMR(300MHz,CDCl₃)：δ 8.10-7.89(m,2 H),7.63-7.50(m,1 H),7.48-7.30(m,2H),6.09(d,J=6.0Hz,1H),4.71-4.42(m,3H),4.36-4.26(m,1H),2.04(s,3H)。¹⁹F-NMR：(282MHz,CDCl₃)：δ -119.5(d,J=248.2Hz,1F),-122.0(d,J=248.2Hz,1F)。

步驟5：二乙酸(3S,5R)-5-((苯甲醯基氧基)甲基)-4,4-二氟四氫呋喃-2,3-二基酯

在室溫下，向苯甲酸((2R,4S)-5-乙醯氧基-3,3-二氟-4-羥基四氫呋喃-2-基)甲基酯(2.00g,6.32mmol)於CH₂Cl₂(84mL)中之溶液中逐滴添加DMAP(0.08g,0.632mmol)及乙酸酐(3.87g,37.9mmol)。在6小時之後，藉由添加NaHCO₃飽和水溶液(30mL)來將其驟冷。分離各層，且使用CH₂Cl₂(3×140mL)萃取水層。使用水(2×140mL)及鹽水(2×140mL)洗滌合併之有機層，乾燥(Na₂SO₄)，濃縮並藉由矽膠管柱層析(乙酸乙酯/石油醚=1/6)純化以得到產物。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)：δ 8.11-8.01(m,2 H),7.63-7.54(m,1 H),7.50-7.41(m,2H),6.20(d,J=4.0Hz,1H),5.39(d,J=8.0Hz,1H),4.69-4.48(m,3H),2.23(s,3H),2.08(s,3H)。¹⁹F-NMR：(376MHz,CDCl₃)：δ -117.6(d,J=251.9Hz,1F),-119.5(d,J=251.9Hz,1F)。

步驟6：苯甲酸((2R,4S,5R)-4-乙醯氧基-5-(6-氯-2-異丁醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-3,3-二氟四氫呋喃-2-基)甲基酯

在0℃下，向二乙酸(3S,5R)-5-((苯甲醯基氧基)甲基)-4,4-二氟四氫呋喃-2,3-二基酯(2.20g,6.14mmol)及N-(6-氯-9H-嘌呤-2-基)異丁醯胺(1.77g,7.37mmol)於ACN(80mL)中之溶液中添加2,3,4,6,7,8,9,10-八氫嘧啶并[1,2-a]氮呯(2.80mL,18.4mmol)。在0.5小時之後，在0℃下，向反應液中逐滴添加三氟甲烷磺酸三甲基矽烷基酯(6.82mL,36.8mmol)。在0.5小時之後。將其在80℃下加熱16小時。然後藉由添加水(150mL)來終止反應。分離各層，且使用EtOAc(3×150mL)萃取水層。使用NaHCO₃飽和水溶液(2×150mL)及鹽水(2×150mL)洗滌合併之有機層，乾燥(Na₂SO₄)，濃縮，並藉由矽膠管柱層析(乙酸乙酯/石油醚=1/1)純化以得到產物。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)：δ 8.10(s,1H),8.08-7.98(m,2 H),7.64-7.53(m,1 H),7.51-7.40(m,2H),6.25(d,J=4.0Hz,1H),5.98-5.93(m,1H),4.85-4.53(m,3H),2.92-2.80(m,1H),2.22(s,3H)1.28(d,J=4.0Hz,6H)。¹⁹F-NMR：(376MHz,CDCl₃)：δ -116.7(d,J=248.2Hz,1F),-118.1(d,J=248.2Hz,1F)。

步驟7：苯甲酸((2R,4S,5R)-5-(2-乙醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)-4-乙醯氧基-3,3-二氟四氫呋喃-2-基)甲基酯

向苯甲酸((2R,4S,5R)-4-乙醯氧基-5-(6-氯-2-異丁醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-3,3-二氟四氫呋喃-2-基)甲基酯(1.80g,3.35mmol)於AcOH(29mL)中之溶液中添加乙酸鈉(1.37g,16.7mmol)及乙酸酐(29mL)。將反應液在125℃下攪拌2.5小時。將其冷卻至室溫，且添加MeOH(50mL)。在減壓下濃縮混合物，且使殘餘物與乙醇(2×50mL)共蒸發。添加DCM(150mL)及水(150mL)，且分離各層。使用NaHCO₃飽和水溶液(2×150mL)洗滌有機相，乾燥(Na₂SO₄)，並濃縮以得到產物。LCMS(ES,m/z)：492.1[M+H]⁺。

步驟8：2-胺基-9-((2R,3S,5R)-4,4-二氟-3-羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基)-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

向苯甲酸((2R,4S,5R)-5-(2-乙醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)-4-乙醯氧基-3,3-二氟四氫呋喃-2-基)甲基酯(純，1.80g, 3.66mmol)中添加NH₃之MeOH溶液(7M,90mL,MeOH)。將其在室溫下攪拌60小時。將其濃縮並藉由使用於NH₄HCO₃水溶液(5mM)中之5-20% MeCN洗脫之反相(C18)層析純化以得到產物。¹H-NMR(300MHz,DMSO-d ₆)：δ 10.7(s,1H),7.95(s,1H),6.56-6.44(m,3H),5.62(d,J=6.0Hz,1H),5.32(t,J=5.4Hz,1H),4.90-4.77(m,1H),4.23-4.08(m,1H),3.68-3.52(m,2H)。¹⁹F-NMR：(282MHz,DMSO-d ₆)：δ -113.1(d,J=234.1Hz,1F),-121.8(d,J=234.1Hz,1F)。

步驟9：N-(9-((2R,3S,5R)-4,4-二氟-3-羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺

使2-胺基-9-((2R,3S,5R)-4,4-二氟-3-羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基)-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(800mg,2.64mmol)與吡啶(3×3mL)共蒸發。將其再懸浮於吡啶(13mL)中。在0℃下，向混合物中逐滴添加氯三甲基矽烷(1.686mL,13.19mmol)。將其升溫至室溫並攪拌2小時。將反應液冷卻至0℃，且逐滴添加異丁酸酐(0.656mL,3.96mmol)。將其升溫至室溫，攪拌2小時，且然後向反應液中添加水(4mL)及NH₄OH(8mL)。在30分鐘之後，將其濃縮。藉由急速管柱層析使用於CH₂Cl₂中之0-10% MeOH純化殘餘物以得到產物。LCMS(ES,m/z)：374.1[M+H]⁺。¹H-NMR：(300MHz,DMSO-d ₆)δ 12.11(s,1H),11.69(s,1H),8.30(s,1H),6.58(d,J=6.0Hz,1H),5.74(dd,J=9.0,3.0Hz,1H),5.33(t,J=6.0Hz,1H),4.96-4.83(m,1H),4.26-4.17(m,1H),3.72-3.62(m,2H),2.80-2.71(m,1H),1.11(d,J=9.0Hz,6H)。

步驟10：N-(9-((2R,3S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)- 4,4-二氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)-d-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺

使N-(9-((2R,3S,5R)-4,4-二氟-3-羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺(640mg,1.714mmol)與吡啶(3×3mL)共蒸發且然後再懸浮於吡啶(5.7mL)中。向懸浮液中添加4,4'-(氯(苯基)亞甲基)雙(甲氧基苯)(639mg,1.886mmol)，且將其攪拌16h。然後，將其濃縮且然後與甲苯(3×20mL)共蒸發。藉由使用於CH₂Cl₂(含有1% Et₃N)中之1%至30% MeOH洗脫之二氧化矽管柱層析純化粗製物以得到產物。LCMS(ES,m/z)：676.3[M+H]⁺。¹H-NMR：(300MHz,DMSO-d ₆)δ 12.11(s,1H),11.61(s,1H),8.15(s,1H),7.34(J=6.0,3.0Hz,2H),7.28-7.19(m,7H),6.85-6.80(m,4H),6.71(d,J=6.0Hz,1H),5.78(d,J=6.0Hz,1H),5.13-5.05(m,1H),4.46-4.39(m,1H),3.71(s,6H),3.46-3.40(m,1H),3.22-3.18(m,1H),2.78-2.70(m,1H),1.11(d,J=9.0Hz,6H)。

製備17：N-(9-((2R,3R,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)-甲氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺

步驟1：2-胺基-9-((4aR,6R,7R,7aR)-2,2-二-第三丁基-7-羥基四氫-4H-噻吩并[3,2-d][1,3,2]二氧雜矽烷啉基-6-基)-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

在0℃及Ar下，向2-胺基-9-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羥基-5-(羥甲基)四氫噻吩-2-基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮(15g,50.1mmol)於DMF(150mL)中之經攪拌懸浮液中注入雙(三氟甲烷磺酸)二-第三丁基矽烷二基酯(26.5g,60.1mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌1小時。其未經純化即直接用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：440.2[M+H]⁺。

步驟2：2-胺基-9-((4aR,6R,7R,7aR)-2,2-二-第三丁基-7-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫-4H-噻吩并[3,2-d][1,3,2]二氧雜矽烷啉基-6-基)-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

在0℃下，向來自先前步驟之反應混合物中一次性添加1H-咪唑(17.05g,251mmol)。將混合物在室溫下攪拌0.5小時。向混合物中添加第三丁基氯二甲基矽烷(15.10g,100mmol)，且將其在60℃下攪拌16小時。然後，在減壓下去除揮發性組份。將固體懸浮於冷甲醇(75mL)中，過濾，並使用冷甲醇(2×30mL)洗滌。將固體保持於減壓下以得到產物。LCMS(ES,m/z)：554.4[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)：δ 10.80(s,1H),7.98(s,1H),6.49(s,2H),5.53(s,1H),4.46(d,J=3.2Hz,1H),4.42(d,J=9.9Hz,1H),4.34(dd,J=9.9,4.7Hz,1H),4.21(t,J=10.5Hz,1H),3.70-3.64(m,1H),1.04(s,9H),1.00(s,9H),0.92(s,9H),0.19(s,3H),0.11(s,3H)。

步驟3：N-(9-((4aR,6R,7R,7aR)-2,2-二-第三丁基-7-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫-4H-噻吩并[3,2-d][1,3,2]二氧雜矽烷啉基-6-基)-6-側 氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺

使2-胺基-9-((4aR,6R,7R,7aS)-2,2-二-第三丁基-7-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫-4H-噻吩并[3,2-d][1,3,2]二氧雜矽烷啉基-6-基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮(29.1g,52.5mmol)與無水吡啶(3×50mL)共蒸發並再溶於吡啶(70mL)及二氯甲烷(210mL)中。向混合物中裝填Ar並冷卻至0℃。向混合物中添加異丁醯氯(11.20g,105mmol)。將其在室溫下攪拌4小時。將其在減壓下濃縮。將固體懸浮於冷甲醇(100mL)中，過濾，並使用冷甲醇(3×50mL)洗滌。將固體保持於減壓下以得到產物。LCMS(ES,m/z)：624.1[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)：δ 12.13(s,1H),11.39(s,1H),8.32(s,1H),5.61(s,1H),4.66(d,J=3.4Hz,1H),4.48(d,J=9.9Hz,1H),4.38-4.33(m,1H),4.21(t,J=9.9Hz,1H),3.76-3.70(m,1H),2.84-2.80(m,1H),1.13(d,J=6.7Hz,6H),1.06(s,9H),1.01(s,9H),0.91(s,9H),0.16(s,3H),0.11(s,3H)。

步驟4：N-(9-((2R,3R,4S,5R)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-4-羥基-5-(羥甲基)四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺

在0℃下，使用吡啶(29mL)稀釋HF-吡啶(26.6g,188mmol)。在0℃下，將所得溶液緩慢添加至N-(9-((4aR,6R,7R,7aS)-2,2-二-第三丁基-7-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫-4H-噻吩并[3,2-d][1,3,2]二氧雜矽烷啉基-6-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺(29.3g, 47.0mmol)於CH₂Cl₂(290mL)中之經攪拌懸浮液中。將其在0℃下攪拌2小時。使用CH₂Cl₂(500mL)稀釋反應混合物。使用水(500mL)及飽和水溶液NaHCO₃(500mL)將其洗滌。乾燥(Na₂SO₄)有機層並濃縮以得到產物。LCMS(ES,m/z)：484.4[M+H]⁺。1H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)：δ 12.05(s,1H),11.73(s,1H),8.43(s,1H),5.89(d,J=7.9Hz,1H),5.34(d,J=3.9Hz,1H),5.27(t,J=5.6Hz,1H),4.60(dd,J=8.1,3.2Hz,1H),4.19-4.17(m,1H),3.80-3.74(m,1H),3.66-3.60(m,1H),3.30(t,J=8.0Hz,1H),2.80-2.73(m,1H),1.12(d,J=6.7Hz,6H),0.68(s,9H),-0.06(s,3H),-0.29(s,3H)。

步驟5：N-(9-((2R,3R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-4-羥基四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺

使N-(9-((2R,3R,4S,5R)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-4-羥基-5-(羥甲基)四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺(21g,43.4mmol)與吡啶(3×50mL)共蒸發並溶於吡啶(210mL)中。添加4,4'-(氯(苯基)亞甲基)雙(甲氧基苯)(16.2g,47.8mmol)，且將其在室溫下攪拌3小時且然後在減壓下濃縮並與甲苯(3×50mL)共蒸發。藉由使用於CH₂Cl₂(含有0.1% Et₃N)中之0-40% EtOAc洗脫之矽膠層析純化粗製物以得到產物。LCMS(ES,m/z)：786.4[M+H]⁺。¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆)：δ 12.06(s,1H),11.71(s,1H),8.19(s,1H),7.44-7.42(m,2H),7.37-7.22(m,7H),6.92(d,J=8.5Hz,4H),5.87(d,J=7.2Hz,1H),5.44(d,J=4.4Hz,1H),4.40(dd,J=7.3,3.3Hz,1H),4.19(d,J=5.9Hz,1H),3.75(s,6H),3.54-3.35(m,2H),3.34-3.28(m,1H), 2.83-2.71(m,1H),1.11(d,J=6.7Hz,6H),0.70(s,9H),-0.08(s,3H),-0.29(s,3H)。

步驟6：N-(9-((2R,3R,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-4-氟四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺

在0℃下，向N-(9-((2R,3R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)-甲基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-4-羥基四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺(22g,28.0mmol)於CH₂Cl₂(220mL)中之溶液中逐滴添加吡啶(18.11mL,224mmol)及DAST(14.79mL,112mmol)。將反應液升溫至室溫並攪拌7小時。然後將其冷卻至0℃並藉由緩慢添加NaHCO₃飽和水溶液(500mL)來驟冷。添加額外CH₂Cl₂(500mL)，且分離各相。使用NaHCO₃飽和水溶液(3×200mL)及鹽水(300mL)洗滌有機相，乾燥(Na₂SO₄)，濃縮，並藉由使用於NH₄HCO₃水溶液(5mM)中之45-95% ACN洗脫之反相(C18)層析純化以得到產物。LCMS(ES,m/z)：788.2[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)：δ 12.06(s,1H),11.56(s,1H),8.02(s,1H),7.44-7.42(m,2H),7.34-7.23(m,7H),6.92-6.89(m,4H),5.71(d,J=4.9Hz,1H),5.14(dt,J=51.0,5.6Hz,1H),5.01-4.96(m,1H),3.88-3.85(m,1H),3.75(s,6H),3.57(t,J=8.8Hz,1H),3.50(dd,J=10.0,5.3Hz,1H),2.81-2.74(m,1H),1.12(d,J=6.8Hz,6H),0.77(s,9H),0.00(s,3H),-0.16(s,3H)。F-NMR：(376MHz,DMSO-d ₆,ppm)δ -193.99(s,1F)。

步驟7：N-(9-((2R,3R,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲 基)-4-氟-3-羥基四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺

在室溫下，向N-(9-((2R,3R,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)-甲氧基)甲基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-4-氟四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺(7.2g,6.85mmol)於THF(70mL)中之溶液中逐滴添加TBAF(1.0M於THF,8.22mL,8.22mmol)。將其在室溫下攪拌30分鐘，濃縮溶液，且添加CH₂Cl₂(300mL)。使用NaHCO₃(3×200mL)及鹽水(200mL)洗滌混合物，且分離有機相，乾燥(Na₂SO₄)，濃縮並藉由使用於NH₄HCO₃水溶液(5mM)中之0-95% ACN洗脫之反相(C18)層析純化以得到產物。LCMS(ES,m/z)：674.3[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)：δ 12.02(br,1H),7.85(s,1H),7.44-7.41(m,2H),7.36-7.24(m,7H),6.94-6.90(m,4H),6.33(bs,1H),5.78(d,J=2.7Hz,1H),5.19(dt,J=50.2,4.0Hz,1H),4.80-4.75(m,1H),4.10-4.02(m,1H),3.76(s,6H),3.55(dd,J=9.3,5.6Hz,1H),3.44(t,J=8.9Hz,1H),2.79-2.71(m,1H),1.12(d,J=6.8Hz,6H)。F-NMR：(376MHz,DMSO-d₆)δ -194.75(s)。

製備18：N-(9-((2R,3R,5S)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-羥基四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺

步驟1：2,4-二甲氧基苯甲酸(3R,4S,5R)-4-羥基-5-(羥甲基)四氫噻吩-3-基酯

向2,4-二甲氧基苯甲酸(6aR,9R,9aS)-2,2,4,4-四異丙基四氫-6H-噻吩并[3,2-f][1,3,5,2,4]三氧雜二矽雜辛英-9-基酯(60g,108mmol)於THF(500mL)中之溶液中添加AcOH(13.59g,226mmol)及TBAF之THF溶液(1M,226mL,226mmol)。在1小時之後，將其在減壓下濃縮並藉由使用於CH₂Cl₂中之0-20% EtOAc洗脫之矽膠管柱層析純化以得到產物。LCMS(ES,m/z)：315.1[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.87(d,J=8.7Hz,1H),6.58-6.46(m,2H),5.51(dt,J=5.0,3.7Hz,1H),4.31(td,J=6.9,3.7Hz,1H),3.88(d,J=12.0Hz,8H),3.58(dt,J=7.1,4.7Hz,1H),3.26(dd,J=12.2,5.0Hz,1H),3.15-3.01(m,2H),2.31(s,1H)。

步驟2：2,4-二甲氧基苯甲酸(3R,4S,5R)-5-(((第三丁基二苯基矽烷基)氧基)甲基)-4-羥基四氫噻吩-3-基酯

向2,4-二甲氧基苯甲酸(3R,4S,5R)-4-羥基-5-(羥甲基)四氫噻吩-3-基酯(33g,105mmol)於吡啶(300mL)中之溶液中添加第三丁基氯二苯基矽烷(43.3g,157mmol)。將其在室溫下攪拌4小時。然後，添加水(300mL)。分離各層，且使用CH₂Cl₂(3×300mL)萃取水層。使用鹽水(300mL)洗滌合併之有機層，乾燥(Na₂SO₄)，濃縮，並藉由使用於石油醚中之1%至10% EtOAc洗脫之矽膠管柱層析純化以得到產物。LCMS(ES,m/z)：575.3[M+Na]⁺。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 7.83(d,J=8.7Hz,1H),7.68(t,J=5.5Hz,5H),7.54-7.38(m,6H),6.69-6.60(m,2H),5.40(d,J=5.6Hz,1H),5.35-5.29(m,1H),4.12(s,1H),4.05(d,J=7.3Hz,1H),3.85(d,J=7.2Hz,6H),3.78-3.66(m,1H), 3.55(d,J=7.2Hz,1H),3.14(dd,J=11.0,5.0Hz,1H),2.86-2.77(m,1H),1.03(s,9H)。

步驟3：2,4-二甲氧基苯甲酸(3R,4S,5R)-4-((1H-咪唑-1-硫代甲醯基)氧基)-5-(((第三丁基二苯基矽烷基)氧基)甲基)四氫噻吩-3-基酯

向2,4-二甲氧基苯甲酸(3R,4S,5R)-5-(((第三丁基二苯基矽烷基)氧基)甲基)-4-羥基四氫噻吩-3-基酯(48g,87mmol)於二氯乙烷(500mL)中之溶液中添加二(1H-咪唑-1-基)甲烷硫酮(20.12g,113mmol)。將其於Ar下在85℃加熱1小時。然後，將其濃縮並未經純化即用於下一步驟中。LCMS(ES,m/z)：663.2[M+H]⁺。

步驟4：2,4-二甲氧基苯甲酸(3R,5S)-5-(((第三丁基二苯基矽烷基)氧基)甲基)四氫噻吩-3-基酯

向2,4-二甲氧基苯甲酸(3R,4S,5R)-4-((1H-咪唑-1-硫代甲醯基)氧基)-5-(((第三丁基二苯基矽烷基)氧基)甲基)四氫噻吩-3-基酯(粗製物，57.6g,87mmol)於THF(40mL)及甲苯(200mL)中之溶液中添加三丁基錫烷(139g,478mmol)。將其在95℃下加熱，且經30分鐘添加於甲苯(200mL)中之2,2'-(二氮烯-1,2-二基)雙(2-甲基丙腈)(1.427g,8.69mmol)。在1小時之後，濃縮所得混合物並藉由使用於石油醚中之0至10% EtOAc洗脫之矽膠管柱層析純化以得到產物。LCMS(ES,m/z)：537.3[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.88(d,J=8.6Hz,1H),7.77-7.67(m,4H),7.50-7.36(m,6H),6.58-6.48(m,2H),5.70(p,J=3.8Hz,1H),3.95-3.74(m,10H),3.28(dd,J=12.0,4.6Hz,1H),3.10- 3.02(m,1H),2.49-2.39(m,1H),1.92(ddd,J=13.3,8.6,4.1Hz,1H),1.09(s,9H)。

步驟5：2,4-二甲氧基苯甲酸(1R,3R,5S)-5-(((第三丁基二苯基矽烷基)氧基)甲基)-1-氧負離子基四氫噻吩-3-基酯

在Ar下，向Ti(OiPr)₄(23.29mL,78mmol)於CH₂Cl₂(130mL)中之溶液中逐滴添加(L)-酒石酸二乙基酯(38.3mL,224mmol)。在10分鐘之後，將混合物冷卻至-20℃，且然後逐滴添加TBHP之癸烷溶液(約5.5M，27.1mL,149mmol)。在5分鐘之後，在-20℃下，向反應液中添加2,4-二甲氧基苯甲酸(3R,5S)-5-(((第三丁基二苯基矽烷基)氧基)甲基)四氫噻吩-3-基酯(40g,74.5mmol)於CH₂Cl₂(130mL)中之溶液。將所得混合物在-20℃下攪拌16小時。藉由添加冰水(300mL)來將其驟冷並升溫至室溫。過濾掉沈澱物並使用EtOAc(3×300mL)洗滌。使用水(3×200mL)洗滌濾液。使用EtOAc(400mL)萃取水層。乾燥(Na₂SO₄)合併之有機層，濃縮並藉由使用於石油醚中之0至70% EtOAc洗脫之急速層析純化以得到產物(兩種異構體之混合物)。LCMS(ES,m/z)：553.2[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 7.81(d,J=8.7Hz,1H),7.75-7.61(m,4H),7.54-7.39(m,6H),6.67-6.56(m,2H),5.66(q,J=3.8Hz,1H),4.12(dt,J=10.5,4.4Hz,1H),3.92-3.79(m,8H),3.58-3.42(m,1H),3.20-3.09(m,1H),2.97(d,J=15.0Hz,1H),2.05(ddd,J=14.5,10.5,4.3Hz,1H),1.02(s,9H)。

步驟6：2,4-二甲氧基苯甲酸(3R,5S)-2-乙醯氧基-5-(((第三丁基二苯基矽烷基)氧基)甲基)四氫噻吩-3-基酯

在110℃下加熱2,4-二甲氧基苯甲酸(3R,5S)-2-乙醯氧基-5-(((第三丁基二苯基矽烷基)氧基)甲基)-四氫噻吩-3-基酯(21g,34.2mmol)於乙酸酐(210mL)中之溶液。在攪拌3.5小時之後，將反應混合物冷卻至室溫並濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析使用於石油醚中之0%至20% EtOAc洗脫純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：535.3[M-OAc]⁺。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 7.76-7.61(m,5H),7.46(dq,J=7.6,4.5,3.7Hz,6H),6.68-6.58(m,2H),6.22(d,J=4.3Hz,0.65H),5.94(s,0.28H),5.51-5.46(m,0.33H),5.38(ddd,J=11.1,7.2,4.3Hz,0.65H),3.96-3.61(m,9H),2.40-2.21(m,2H),2.03(d,J=1.6Hz,3H),1.01(s,9H)。

步驟7：2,4-二甲氧基苯甲酸(3R,5S)-5-(((第三丁基二苯基矽烷基)氧基)甲基)-2-(6-氯-2-異丁醯胺基-9H-嘌呤-9-基)四氫噻吩-3-基酯

在0℃下，向N-(6-氯-9H-嘌呤-2-基)異丁醯胺(10.27g,42.9mmol)於甲苯(600mL)中之溶液中添加N-(三甲基矽烷基)乙醯亞胺酸三甲基矽烷基酯(23.26g,114mmol)。將其在80℃下加熱1小時且再次冷卻至0℃。然後向反應液中添加2,4-二甲氧基苯甲酸(3R,5S)-2-乙醯氧基-5-(((第三丁基二苯基矽烷基)氧基)甲基)-四氫噻吩-3-基酯(17g,28.6mmol)於甲苯(600mL)中之溶液及三氟甲烷磺酸三甲基矽烷基酯(19.06g,86mmol)。將其加熱至80℃並在Ar下攪拌12小時。此時，將反應液冷卻至室溫，且添加飽和水溶液NaHCO₃(400mL)。分離各層，且使用EtOAc(4×1000mL)萃取水層。乾燥(Na₂SO₄)合併之有機相，濃縮並藉由使用於石油醚中之10%至40% EtOAc洗脫之矽膠管柱層析純化以得到產物(α異構體及β異構體之混合物)。LCMS(ES,m/z)： 774.3[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.48(s,0.32H),8.35(s,0.69H),7.97-7.83(m,1.67H),7.70(dq,J=8.4,1.5Hz,4H),7.54(d,J=8.7Hz,0.33H),7.49-7.36(m,6H),6.57-6.36(m,2.5H),6.18(d,J=2.4Hz,0.7H),5.87-5.80(m,0.35H),5.73(q,J=3.3Hz,0.75H),4.23-4.01(m,1.2H),3.98-3.74(m,7.8H),3.11(s,0.73H),2.95(s,0.37H),2.57-2.36(m,1.75H),2.30-2.20(m,0.34H),1.23(d,J=6.8Hz,2.19H),1.19(dd,J=6.8,3.5Hz,4.38H),1.09(d,J=1.7Hz,9H)。

步驟8：2,4-二甲氧基苯甲酸(2R,3R,5S)-2-(6-氯-2-異丁醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-(羥甲基)-四氫噻吩-3-基酯

向2,4-二甲氧基苯甲酸(3R,5S)-5-(((第三丁基二苯基矽烷基)氧基)甲基)-2-(6-氯-2-異丁醯胺基-9H-嘌呤-9-基)四氫噻吩-3-基酯(20g,25.8mmol)於THF(135mL)中之溶液中逐滴添加TBAF之THF溶液(1M,31mL,31mmol)。在1小時之後，濃縮反應混合物並藉由管柱層析使用於CH₂Cl₂中之1%至10% MeOH作為洗脫劑純化以得到兩種異構體之混合物。藉由使用於NH₄CO₃水溶液(5mM)中之10至45% ACN洗脫之反相(C18)層析將其再純化以得到產物。LCMS(ES,m/z)：536.2[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.80(s,1H),8.83(s,1H),7.72(d,J=8.7Hz,1H),6.65-6.55(m,2H),6.18(d,J=2.5Hz,1H),5.80(q,J=3.5Hz,1H),5.22(t,J=5.1Hz,1H),3.93-3.67(m,9H),2.85(p,J=6.9Hz,1H),2.70(ddd,J=13.4,8.5,4.5Hz,1H),2.36(dt,J=14.1,5.0Hz,1H),1.06(dd,J=6.8,3.3Hz,6H)。

步驟9：2-胺基-9-((2R,3R,5S)-3-羥基-5-(羥甲基)四氫噻吩-2-基)-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

向2,4-二甲氧基苯甲酸(2R,3R,5S)-2-(6-氯-2-異丁醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-(羥甲基)四氫噻吩-3-基酯(6.0g,11.19mmol)於MeOH(300mL)中之溶液中添加2-巰基乙醇(3.50g,44.8mmol)及NaOMe(10.08g,56mmol，30%於MeOH中)。將其在60℃下加熱16小時，冷卻至室溫，且添加濃HCl(4mL)。濃縮所得混合物，且添加水(100mL)及EtOAc(100mL)。分離各層，且使用EtOAc(3×100mL)萃取水層。使用NaHCO₃(固體)將水層鹼化至約pH 8並在室溫下攪拌1小時。過濾沈澱物並保持於減壓下以得到產物。LCMS(ES,m/z)：284.1[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.57(s,1H),7.98(s,1H),6.46(s,2H),5.57(dd,J=10.9,3.9Hz,2H),5.12(t,J=5.4Hz,1H),4.48(p,J=4.1Hz,1H),3.78-3.53(m,3H),2.11-1.99(m,2H)。

步驟10：N-(9-((2R,3R,5S)-3-羥基-5-(羥甲基)四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺

使2-胺基-9-((2R,3R,5S)-3-羥基-5-(羥甲基)四氫噻吩-2-基)-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(580mg,2.047mmol)與吡啶(3x20mL)共蒸發且然後再溶於吡啶(20mL)中。將混合物冷卻至0℃且然後使用氯三甲基矽烷(1557mg,14.33mmol)處理。將其升溫至室溫並攪拌2小時。然後，將反應液再次冷卻至0℃，且逐滴添加異丁酸酐(486mg,3.07mmol)。將其升溫至室溫並攪拌2小時。藉由添加甲醇(5mL)來終止反應。在5分鐘之後，添加NH₄OH(約29%，10mL)。將混合物在室溫下攪拌30分鐘。然後，將其濃縮並藉由管柱層析在使用於CH₂Cl₂中之10%至20% MeOH洗脫之矽膠上純化以得到產物。LCMS(ES,m/z)：354.1[M+H]⁺。¹H-NMR(300MHz,CD₃OD)δ：8.40(s,1H),5.83-5.82(m,1H),4.62-4.59(m,1H),3.89-3.80(m,2H),3.79-3.74(m,1H),2.73-2.64(m,1H),2.19-2.11(m,2H),1.20(d,J=6.8Hz,6H)。

步驟11：N-(9-((2R,3R,5S)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-羥基四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺

使N-(9-((2R,3R,5S)-3-羥基-5-(羥甲基)四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺(510mg,1.443mmol)與吡啶(3×5mL)共蒸發且然後再懸浮於吡啶(7mL)中。向懸浮液中添加4,4'-(氯(苯基)亞甲基)雙(甲氧基苯)(538mg,1.587mmol)，且將混合物在室溫下攪拌2小時。此時，在減壓下濃縮混合物，且殘餘物藉由矽膠管柱層析使用於CH₂Cl₂(含有1% Et₃N)中之1%至4% MeOH洗脫純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：656.0[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ：8.02(s,1H),7.51-7.43(m,2H),7.40-7.17(m,7H),6.91-6.82(m,4H),5.85-5.84(d,J=2.3Hz,1H),4.59-4.57(m,1H),4.02-3.95(m,1H),3.78(s,6H),3.52-3.34(m,3H),2.72-2.68(m,1H),1.95-191(m,1H),1.38(d,J=6.8Hz,6H)。

製備19：N-(9-((2R,3R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)-甲氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺

步驟1：苯甲酸((2R,3R,4S)-4-(苯甲醯基氧基)-3-氟-5-羥基四氫呋喃-2-基)甲基酯

向苯甲酸((2R,3R,4S)-5-乙醯氧基-4-(苯甲醯基氧基)-3-氟四氫呋喃-2-基)甲基酯(20.0g,49.7mmol)於無水1,2-二氯乙烷(200mL)中之經攪拌溶液中添加三-正丁基甲氧基錫(28.8mL,99mmol)。將所得混合物在80℃下攪拌3小時且然後在真空中濃縮。在500mL乙酸乙酯中稀釋殘餘物並使用NH₄Cl飽和水溶液(500mL)及鹽水(500mL)洗滌。藉由無水Na₂SO₄乾燥分離之有機層，過濾，並在真空中濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱使用0-40% EtOAc/己烷洗脫純化。LCMS(ES,m/z)：343.2[M+H-H₂O]⁺。¹H NMR(500MHz，氯仿-d)δ 8.18-8.00(m,7H),7.68-7.57(m,3H),7.61-7.35(m,7H),5.73(dd,J=8.3,4.6Hz,1H),5.65(dt,J=3.9,2.0Hz,1H),5.54(t,J=4.7Hz,0H),5.50-5.40(m,2H),5.36-5.24(m,1H),4.87(dtd,J=25.5,4.0,1.5Hz,1H),4.74-4.46(m,4H),4.15(q,J=7.2Hz,1H),3.39(d,J=4.1Hz,1H),3.30(dd,J=8.6,3.4Hz,1H),2.07(s,2H),1.41-1.23(m,3H)。

步驟2：二苯甲酸(2R,3R,4S)-3-氟-2-羥基-5-(甲氧基亞胺基)戊烷-1,4-二基酯

向苯甲酸((2R,3R,4S)-4-(苯甲醯基氧基)-3-氟-5-羥基四氫呋喃-2-基)甲基酯(17.9g,49.7mmol)於無水MeOH(100mL)中之經攪拌溶液中添加O-甲基羥胺鹽酸鹽(6.23g,74.6mmol)，隨後添加三乙胺(10.39mL, 74.6mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌2小時且然後在真空中濃縮。在500mL乙酸乙酯中稀釋殘餘物並使用NH₄Cl飽和水溶液(500mL)及鹽水(500mL)洗滌。藉由無水Na₂SO₄乾燥有機層，過濾，並在真空中濃縮。殘餘物未經進一步純化即直接用於下一步驟中。LCMS(ES,m/z)：390.2[M+H]⁺。

步驟3：二苯甲酸(2R,3S,4S)-3-氟-5-(甲氧基亞胺基)-2-(((4-硝基苯基)磺醯基)氧基)戊烷-1,4-二基酯

向二苯甲酸(2R,3R,4S)-3-氟-2-羥基-5-(甲氧基亞胺基)戊烷-1,4-二基酯(19.4g,49.7mmol)於無水EtOAc(100mL)中之經攪拌溶液中添加4-硝基苯磺醯基氯(16.5g,74.6mmol)，隨後添加三乙胺(10.4mL,74.6mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌18小時且然後使用200mL乙酸乙酯稀釋，使用水(300mL)及鹽水(300mL)洗滌。藉由無水Na₂SO₄乾燥分離之有機層，過濾，並在真空中濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱使用0-30% EtOAc/己烷洗脫純化。LCMS(ES,m/z)：575.3[M+H]⁺。¹H NMR(500MHz，氯仿-d)δ 8.25-7.99(m,7H),7.94-7.80(m,2H),7.68-7.55(m,2H),7.57-7.46(m,3H),7.50-7.38(m,3H),6.55(ddd,J=17.2,5.3,2.8Hz,0H),5.89(ddd,J=17.7,6.2,4.1Hz,1H),5.46-5.37(m,1H),5.40-5.28(m,1H),5.21(t,J=4.3Hz,0H),4.84(tdd,J=12.8,2.6,1.5Hz,1H),4.53(dddd,J=23.1,13.0,7.0,1.8Hz,1H),4.14(q,J=7.2Hz,1H),3.99(d,J=36.3Hz,4H),2.06(s,2H),1.44-1.23(m,2H)。

步驟4：二苯甲酸(2S,3S,4S)-2-溴-3-氟-5-(甲氧基亞胺基)戊烷-1,4-二基酯

向二苯甲酸(2R,3S,4S)-3-氟-5-(甲氧基亞胺基)-2-(((4-硝基苯基)磺醯基)氧基)戊烷-1,4-二基酯(21.3g,37.1mmol)於無水DMF(100mL)中之經攪拌溶液中添加新開溴化鋰粉末(16.1g,185mmol)。將所得混合物在60℃下攪拌18小時。在300mL乙酸乙酯中稀釋反應混合物並使用水(500mL)及鹽水(500mL)洗滌。藉由無水Na₂SO₄乾燥分離之有機層，過濾，並在真空中濃縮。藉由使用0-25% EtOAc/己烷洗脫之矽膠管柱純化殘餘物以得到產物。LCMS(ES,m/z)：452.1[M+H]⁺。¹H NMR(500MHz，氯仿-d)δ 8.15-8.03(m,11H),7.69-7.56(m,8H),7.56-7.41(m,12H),6.93-6.86(m,1H),6.45(ddd,J=14.7,5.9,4.7Hz,0H),5.93(ddd,J=11.8,6.7,5.9Hz,2H),5.32(s,1H),5.29-5.10(m,3H),4.89-4.77(m,3H),4.80-4.67(m,3H),4.60-4.40(m,3H),3.95(d,J=16.9Hz,2H),3.89(s,6H),1.32-1.22(m,1H)。

步驟5：二苯甲酸(2S,3S,4S)-2-溴-3-氟-5-側氧基戊烷-1,4-二基酯

向二苯甲酸(2S,3S,4S)-2-溴-3-氟-5-(甲氧基亞胺基)戊烷-1,4-二基酯(20.0g,44.2mmol)於THF(200mL)中之經攪拌溶液中添加甲醛(32.9mL,442mmol)及1N HCl(44.2mL,44.2mmol)之37%水溶液。將所得混合物在55℃下攪拌5小時。在真空中濃縮反應混合物以去除大部分THF。在300mL乙酸乙酯中稀釋殘餘物並使用水(300mL)及鹽水(300mL)洗滌。藉由無水Na₂SO₄乾燥分離之有機層，過濾，並在真空中濃縮。殘餘物未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS(ES,m/z)：423.2[M+H]⁺。

步驟6：苯甲酸((2R,3S,4R)-4-(苯甲醯基氧基)-3-氟-5-羥基四氫噻吩-2-基)甲基酯

在0℃下，向二苯甲酸(2S,3S,4S)-2-溴-3-氟-5-側氧基戊烷-1,4-二基酯(18.7g,44.2mmol)於NMP(150mL)中之經攪拌溶液中添加硫氫化鈉(5.0g,89.0mmol)。將所得混合物在0℃下攪拌30分鐘且然後在室溫下攪拌30分鐘。在300mL乙酸乙酯中稀釋反應混合物並使用水(300mL)及鹽水(300mL)洗滌。藉由無水Na₂SO₄乾燥有機層，過濾，並在真空中濃縮。殘餘物未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS(ES,m/z)：359.2[M+H-H₂O]⁺。

步驟6：苯甲酸((2R,3S,4R)-5-乙醯氧基-4-(苯甲醯基氧基)-3-氟四氫噻吩-2-基)甲基酯

在0℃下，向苯甲酸((2R,3S,4R)-4-(苯甲醯基氧基)-3-氟-5-羥基四氫-噻吩-2-基)甲基酯(16.6g,44.2mmol)於無水THF(150mL)中之經攪拌溶液中添加乙酸酐(8.3mL,133mmol)及三甲胺(18.5mL,133mmol)。將所得混合物在0℃下攪拌30分鐘且然後在室溫下攪拌2小時。藉由添加MeOH來終止反應，且在真空中濃縮反應混合物以去除大部分THF。在300mL乙酸乙酯中稀釋殘餘物並使用水(300mL)及鹽水(300mL)洗滌。藉由無水Na₂SO₄乾燥分離之有機層，過濾，並在真空中濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱使用0-25% EtOAc/己烷洗脫純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：441.2[M+Na]⁺。¹H NMR(500MHz，氯仿-d)δ 8.15-8.02(m,4H),7.68-7.57(m,2H),7.55-7.42(m,4H),6.02(t,J=2.4Hz,1H),5.88(ddd,J=6.1,3.6,2.4Hz,1H),5.50-5.42(m,0H),5.35(dd,J=7.3,3.6Hz,0H),5.32(s,0H),4.80-4.69(m,1H),4.56 (dd,J=11.6,5.9Hz,1H),4.26-4.10(m,2H),2.25-2.11(m,1H),2.08(d,J=10.0Hz,3H),1.29(t,J=7.1Hz,1H)。

步驟7：苯甲酸((2R,3S,4R,5R)-4-(苯甲醯基氧基)-3-氟-5-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫噻吩-2-基)甲基酯

向N-(6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺(15.86g,71.7mmol)於ClCH₂CH₂Cl(300mL)中之懸浮液中添加(Z)-N-(三甲基矽烷基)乙醯亞胺酸三甲基矽烷基酯(35.1mL,143mmol)。將懸浮液在70℃下攪拌過夜且然後冷卻至-15℃。向此混合物中添加苯甲酸((2R,3S,4R)-5-乙醯氧基-4-(苯甲醯基氧基)-3-氟四氫噻吩-2-基)甲基酯(10g,23.90mmol)，隨後添加TMS-OTf(8.64mL,47.8mmol)。將反應混合物在-15℃下攪拌2小時，然後在室溫下攪拌5小時且最後在70℃下攪拌5天。將反應混合物冷卻至室溫且然後過濾。使用飽和水溶液NaHCO₃、鹽水洗滌濾液且然後藉由Na₂SO₄乾燥並在真空中濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱使用0-60% EtOAc/己烷洗脫純化。隨後自EtOAc進行重結晶可得到產物。LCMS(ES,m/z)：580.5[M+H]⁺。¹H NMR(500MHz，氯仿-d)δ 12.19(s,0H),9.56(s,1H),8.12-8.06(m,1H),8.02-7.96(m,1H),7.66(s,0H),7.71-7.58(m,1H),7.57-7.50(m,1H),7.54-7.42(m,1H),6.59(ddd,J=25.3,7.4,3.1Hz,1H),6.20(d,J=7.4Hz,0H),5.68-5.59(m,1H),4.87(ddd,J=11.7,7.7,1.5Hz,1H),4.26-4.11(m,1H),2.96(hept,J=6.8Hz,1H),1.38(dd,J=19.0,6.9Hz,3H)。

步驟8：N-(9-((2R,3R,4S,5R)-4-氟-3-羥基-5-(羥甲基)四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺

在0℃下，向苯甲酸((2R,3S,4R,5R)-4-(苯甲醯基氧基)-3-氟-5-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫噻吩-2-基)甲基酯(0.96g,1.66mmol)於THF(5mL)/MeOH(4mL)/H₂O(1mL)中之溶液中添加2N氫氧化鈉(1.8mL,3.6mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌30分鐘且然後使用乙酸(0.38mL,6.6mmol)中和。藉由過濾收集產物且未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS(ES,m/z)：372.3[M+H]⁺。

步驟9：N-(9-((2R,3R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺

在0℃下，向N-(9-((2R,3R,4S,5R)-4-氟-3-羥基-5-(羥甲基)-四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺(0.62g,1.66mmol)於吡啶(25mL)中之溶液中添加4,4'-二甲氧基三苯甲基氯(0.84g,2.48mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌3小時。使用H₂O(1mL)終止反應，且濃縮混合物。在100mL乙酸乙酯中稀釋殘餘物並使用NaHCO₃飽和水溶液(100mL)及鹽水(100mL)洗滌。藉由無水Na₂SO₄乾燥分離之有機層，過濾，並在真空中濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱使用0-100% EtOAc/己烷(含有0.1% Et₃N)洗脫純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：674.6[M+H]⁺。¹H NMR(500MHz，氯仿-d)δ 11.96(s,0H),8.35(s,0H),7.70(s,0H),7.63-7.56(m,1H),7.50-7.43(m,2H),7.38-7.24(m,1H),6.93-6.85(m,2H),5.92(d,J=8.3Hz,0H),5.35-5.23(m,1H),4.15(q,J=7.1Hz,1H),3.85-3.69(m,3H),3.46(dd,J=10.2, 5.4Hz,0H),3.35(dd,J=10.2,5.2Hz,0H),2.09(d,J=19.4Hz,2H),1.34-1.22(m,2H),1.01(d,J=6.8Hz,1H),0.91(d,J=6.9Hz,1H)。

製備20：N-(3-((2R,3R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)-甲氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四氫噻吩-2-基)-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)異丁醯胺

步驟1：N-(7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)異丁醯胺

向5-胺基-3,6-二氫-7H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-7-酮(5.0g,32.9mmol)於無水DMF(60mL)中之懸浮液中逐滴添加異丁酸酐(12.5mL,76.0mmol)。將反應混合物在150℃下回流1小時。使用MeOH(6.6mL,164mmol)終止反應並在真空中濃縮。將殘餘物吸收於DCM(50mL)/己烷(100mL)中且在室溫下劇烈攪拌15分鐘。藉由過濾收集產物。LCMS(ES,m/z)：223.2[M+H]⁺。¹H NMR(500MHz,DMSO-d ₆)δ 16.04(s,1H),12.19(s,1H),11.78(s,1H),2.78(hept,J=6.7Hz,1H),1.13(d,J=6.8Hz,6H)。

步驟2：苯甲酸((2R,3S,4R,5R)-4-(苯甲醯基氧基)-3-氟-5-(5-異丁醯胺基-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)四氫噻吩-2-基)甲基酯

向苯甲酸((2R,3S,4R)-5-乙醯氧基-4-(苯甲醯基氧基)-3-氟四氫噻吩-2-基)甲基酯(1.5g,3.6mmol)及N-(7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)異丁醯胺(0.96g,4.3mmol)於硝基甲烷(20mL)中之混合物中添加BF₃˙Et₂O(0.54mL,4.3mmol)且將所得混合物在100℃及微波輻照下加熱1小時。冷卻反應混合物，在100mL乙酸乙酯中稀釋並使用NaHCO₃飽和水溶液(100mL)及鹽水(100mL)洗滌。藉由Na₂SO₄乾燥有機部分並在真空中濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱使用0-35% EtOAc/己烷洗脫純化。LCMS(ES,m/z)：581.4[M+H]⁺。¹H NMR(500MHz，氯仿-d)δ 12.27(s,2H),9.73(s,2H),8.19-7.93(m,8H),7.86-7.80(m,0H),7.71-7.55(m,4H),7.57-7.39(m,8H),7.40-7.33(m,0H),6.76(d,J=6.7Hz,2H),6.62-6.48(m,2H),5.79(t,J=2.9Hz,1H),5.69(t,J=2.9Hz,1H),5.62-5.54(m,2H),4.89(ddd,J=11.6,7.8,1.3Hz,2H),4.78-4.65(m,1H),4.31-4.18(m,2H),4.15(q,J=7.1Hz,3H),2.95(hept,J=6.9Hz,2H),2.81-2.68(m,1H),2.07(s,4H),1.39(dd,J=17.5,6.9Hz,10H),1.34-1.24(m,8H)。

步驟3：N-(3-((2R,3R,4S,5R)-4-氟-3-羥基-5-(羥甲基)四氫噻吩-2-基)-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)異丁醯胺

在0℃下，向苯甲酸((2R,3S,4R,5R)-4-(苯甲醯基氧基)-3-氟-5-(5-異丁醯胺基-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)四氫噻吩-2-基)甲基酯(4.5g,7.8mmol)於THF(35mL)/MeOH(28mL)/H(7mL)中之溶液中添加2N氫氧化鈉(8.6mL,17.2mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌1小時且然後使用乙酸(2.3mL,39.0mmol)中和。藉由過濾收集產物且未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS(ES,m/z)：373.3[M+H]⁺。

步驟4：N-(3-((2R,3R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四氫噻吩-2-基)-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)異丁醯胺

在0℃下，向N-(3-((2R,3R,4S,5R)-4-氟-3-羥基-5-(羥甲基)-四氫噻吩-2-基)-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)異丁醯胺(1.8g,4.8mmol)於吡啶(30mL)中之溶液中添加4,4'-二甲氧基三苯甲基氯(1.8g,5.3mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌1小時。使用H₂O(1mL)終止反應，且濃縮混合物。在100mL乙酸乙酯中稀釋殘餘物並使用NaHCO₃飽和水溶液(100mL)及鹽水(100mL)洗滌。藉由無水Na₂SO₄乾燥分離之有機層，過濾，並在真空中濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱使用0-100% EtOAc/己烷(含有0.1% Et₃N)洗脫純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：675.5[M+H]⁺。¹H NMR(500MHz，氯仿-d)δ 12.16(s,1H),8.48(s,0H),7.57-7.50(m,1H),7.49-7.37(m,2H),7.39-7.29(m,0H),7.31(s,1H),7.32-7.14(m,1H),6.91-6.81(m,2H),6.22-6.16(m,0H),5.42-5.31(m,1H),3.77(d,J=36.0Hz,7H),3.46(dd,J=10.2,5.6Hz,0H),3.36(dd,J=10.2,5.4Hz,0H),2.17(p,J=6.9Hz,0H),1.06(dd,J=26.1,6.9Hz,3H)。

製備21：N-(3-((2R,3R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)-甲氧基)甲基)-3,4-二羥基四氫噻吩-2-基)-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)異丁醯胺

步驟1：二苯甲酸(2R,3S,4R,5R)-2-((苯甲醯基氧基)甲基)-5-(5-異丁醯胺基-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)四氫噻吩-3,4-二基酯

在環境溫度下，將BF₃‧OEt₂(3.65mL,28.8mmol)逐滴添加至二苯甲酸(2R,3R,4S,5R)-2-乙醯氧基-5-((苯甲醯基氧基)甲基)四氫噻吩-3,4-二基酯(10.0g,19.2mmol)及N-(7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5基)異丁醯胺(5.98g,26.9mmol)於MeNO₂(180mL)中之混合物中。在完成添加後，將混合物在120℃下於微波反應器中加熱45分鐘。將試樣冷卻至室溫並在真空中濃縮。殘餘物藉由急速管柱層析使用EtOAc/異己烷(10-90%)洗脫純化，得到期望產物。LCMS(ES,m/z)：683.5[M+H]⁺。¹H NMR(500MHz，氯仿-d)δ 12.24(s,1H),9.77(s,1H),8.08-7.95(m,4H),7.94-7.87(m,2H),7.70-7.35(m,9H),6.84(d,J=5.9Hz,1H),6.67(dd,J=5.9,3.9Hz,1H),6.49(t,J=3.7Hz,1H),5.52(dd,J=11.4,7.8Hz,1H),5.04(dd,J=11.4,7.8Hz,1H),4.28(m,1H),2.97(hept,J=6.9Hz,1H),1.42(dd,6.9Hz,6H)。

步驟2：N-(3-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羥基-5-(羥甲基)四氫噻吩-2-基)-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)異丁醯胺

在25℃下，向來自步驟1之溶於吡啶(8mL)及MeOH(32mL)中之產物(5.3g,7.8mmol)之經攪拌溶液中一次性添加氫氧化鈉(1.24g,31.1mmol)。將混合物在25℃下攪拌15分鐘，然後添加乙酸(1.8mL, 31.1mmol)。在真空中濃縮混合物，且殘餘物藉由急速管柱層析使用EtOAc/異己烷(70-100%)洗脫純化，得到期望產物。LCMS(ES,m/z)：371.3[M+H]⁺。¹H NMR(500MHz,DMSO-d ₆)δ 12.24(s,1H),11.96(s,1H),5.91(d,J=5.6Hz,1H),5.73(d,J=5.5Hz,1H),5.43(d,J=5.0Hz,1H),5.12(m,1H),4.81(m,br,1H),4.40(m,1H),3.89-3.77(m,1H),3.53(m,1H),3.46-3.36(m,1H),2.79(m,1H),1.14(dd,J=6.7,1.2Hz,6H)。

步驟3：N-(3-((2R,3R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3,4-二羥基四氫噻吩-2-基)-7-側氧基-6,7-二氫-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-基)異丁醯胺

在環境溫度下，向來自步驟2之產物(2.3g,6.2mmol)中添加吡啶(62mL)。向此混合物中添加DMTrCl(2.3g,6.8mmol)。在1小時之後，添加水(2mL)，且將其在真空中濃縮。添加乙酸乙酯(15mL)、水(5mL)及鹽水(1mL)。分離各層，且使用乙酸乙酯(20mL×2)萃取水層。藉由MgSO₄乾燥合併之有機物，在真空中濃縮並藉由使用於己烷中之0至80% EtOAc洗脫之急速管柱層析純化以得到期望產物。LCMS(ES,m/z)：673.4[M+H]⁺。¹H NMR(500MHz,DMSO-d ₆)δ 12.24(s,1H),11.96(s,1H),7.50-7.36(m,2H),7.35-7.10(m,9H),6.96-6.82(m,4H),5.88(d,J=4.1Hz,1H),5.83(d,J=5.1Hz,1H),5.42(d,J=5.7Hz,1H),4.66(q,J=4.1Hz,1H),4.45(td,J=5.9,3.5Hz,1H),3.81-3.69(6H),3.65(ddd,J=8.4,6.0,4.3Hz,1H),3.46-3.35(m,1H),3.19(dd,J=9.4,7.9Hz,1H),2.78(h,J=6.8Hz,1H),1.22-1.05(m,6H)。

製備22：膦酸銨(2R,3R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲 基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫噻吩-3-基酯

步驟1：N-(9-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羥基-5-(羥甲基)四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺

使2-胺基-9-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羥基-5-(羥甲基)四氫噻吩-2-基)-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(1.7g,5.7mmol)與吡啶(3×5mL)共蒸發且然後再溶於吡啶(34mL)中。在0℃下，向混合物中逐滴添加氯三甲基矽烷(4.32g,39.8mmol)。將其在室溫下攪拌1小時且然後再次冷卻至0℃。逐滴添加異丁酸酐(1.348g,8.52mmol)，且將其在室溫下攪拌3小時。藉由添加水(8.5mL)將其驟冷。在5分鐘之後，添加NH₄OH(約29%，17mL)，且將混合物攪拌30分鐘。將其濃縮並藉由使用於CH₂Cl₂中之1%至30% MeOH洗脫之管柱層析純化以得到產物。LCMS(ES,m/z)：396.9[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d ₆)：δ 9.52(br s,2 H),8.39(s,1H),5.79(d,J=7.1Hz,1H),5.59(s,1H),5.40(s,1H),5.22(s,1H),4.55(d,J=6.7Hz,1H),4.21(s,1H),3.77(t,J=9.3Hz,1H),3.61(s,1H),3.30(dt,J=6.4,3.3Hz,1H),2.78(p,J=6.9Hz,1H),1.13(d,J=6.8Hz,6H)。

步驟2：N-(9-((2R,3R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3,4-二羥基四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁 醯胺

向N-(9-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羥基-5-(羥甲基)-四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺(480mg,1.299mmol)於吡啶(10mL)中之混合物中添加4,4'-(氯(苯基)亞甲基)-雙(甲氧基苯)(484mg,1.43mmol)。將其在室溫下攪拌16小時且然後濃縮。藉由管柱層析在於CH₂Cl₂(含有1% Et₃N)中之1%至30% MeOH洗脫之矽膠上純化粗製物以得到產物。LCMS(ES,m/z)：672.2[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d ₆+D₂O)：δ 8.08(s,1H),7.39(d,J=7.2Hz,2H),7.32(t,J=7.6Hz,2H),7.26(dt,J=9.1,3.3Hz,5H),6.94-6.87(m,4H),5.75(d,J=5.9Hz,1H),4.39(dd,J=5.9,3.5Hz,1H),4.14(t,J=3.9Hz,1H),3.74(s,6H),3.49-3.37(m,2H),3.33(dd,J=14.5,7.3Hz,1H),2.87-2.67(m,1H),1.11(dd,J=6.8,1.6Hz,6H)。

步驟3：N-(9-((2R,3R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-羥基四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺及N-(9-((2R,3R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-4-羥基四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺

在室溫下，向N-(9-((2R,3R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)-甲氧基)甲基)-3,4-二羥基四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺(580mg,0.863mmol)於DMF(5mL)中之溶液中添加1H- 咪唑(147mg,2.16mmol)及第三丁基氯二甲基矽烷(156mg,1.04mmol)。在6小時之後，使用EtOAc(50mL)稀釋混合物並使用NaHCO₃飽和水溶液(2×20mL)及鹽水(20mL)洗滌。將其乾燥(Na₂SO₄)，濃縮，並藉由0至95% ACN之水溶液洗脫之反相(C18)層析純化以得到產物。LCMS(ES,m/z)：786.3[M+H]⁺。

步驟4：膦酸(2R,3R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫噻吩-3-基酯苯基酯及膦酸(2R,3S,4R,5R)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫噻吩-3-基酯苯基酯

在0℃下，向N-(9-((2R,3R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)-甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-羥基四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺及N-(9-((2R,3R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-4-羥基四氫噻吩-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺(220mg,0.280mmol)之混合物於吡啶(2mL)中之溶液中添加膦酸二苯基酯(98mg,0.420mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌20分鐘。其未經純化即用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：926.2[M+H]⁺。

步驟5：膦酸銨(2R,3R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫噻吩-3-基酯

在0℃下，向來自步驟4之反應混合物中添加Et₃N(0.28mL,2.0mmol)及水(0.28mL)。將其在室溫下攪拌30分鐘。將其濃縮，且將殘餘物分配於CH₂Cl₂(40mL)與NaHCO₃水溶液(5%,30mL)之間。使用NaHCO₃水溶液(5%,2x30mL)洗滌有機層，乾燥(Na₂SO₄)，濃縮並藉由矽膠管柱層析使用於CHCl₃(含有1% Et₃N)中之0-10% MeOH純化以得到混合物。藉由製備型HPLC(XBridge Shield RP18 OBD管柱，19×150mm)，使用於NH₄HCO₃水溶液(10mM)中之46%至79% ACN洗脫7分鐘進一步純化混合物，得到產物。LCMS(ES,m/z)：850.2[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)：δ 8.18(s,1H),7.68(s,0.5H),7.59-7.49(m,2H),7.45-7.36(m,4H),7.37-7.30(m,2H),7.28-7.22(m,1H),6.95-6.87(m,4H),6.16-6.07(m,2H),4.88-4.87(m,1H),4.69(dd,J=7.3,3.3Hz,1H),3.81(s,6H),3.51(dd,J=4.9,1.9Hz,2H),3.37(s,1H),2.67(p,J=6.9Hz,1H),1.21(dd,J=6.9,0.9Hz,6H),0.77(s,9H),0.01(s,3H),-0.28(s,3H)。³¹P-NMR(162MHz,DMSO-d ₆)：δ -0.74(s,1P)。

製備23：2-胺基-9-[5-O-(羥基{[羥基(膦醯基氧基)磷醯基]氧基}-磷醯基)-β-D-呋喃木糖基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

步驟1：2-胺基-9-[5-O-(羥基{[羥基(膦醯基氧基)磷醯基]氧基}-磷醯基)-β-D-呋喃木糖基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

向9-(2,3-二-O-乙醯基-β-D-呋喃木糖基)-2-[(2-甲基丙醯基)-胺基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(100mg,0.229mmol)於吡啶(0.25mL)及1,4-二噁烷(0.75mL)中之經攪拌溶液中添加2-氯-4H-1,3,2-苯并二氧雜磷雜苯-4-酮(50mg,0.247mmol)於1,4-二噁烷(0.25mL)中之新製溶液。將反應混合物在環境溫度下攪拌10分鐘，且然後添加三丁基焦磷酸銨(189mg,0.344mmol)於DMF(0.69mL)中之溶液，隨後在環境溫度下一次性添加三丁基胺(0.23mL,0.968mmol)。將反應混合物在環境溫度下攪拌10分鐘，且然後添加碘(29.0mg,0.114mmol)於吡啶(0.50mL)及水(0.05mL)中之溶液。將反應混合物攪拌15分鐘，使用5% NaHSO₃水溶液(3mL)將過量碘淬滅，且將反應混合物蒸發至乾燥。將殘餘物溶於10mL H₂O中，且在室溫下靜置30分鐘之後，添加28%氫氧化銨水溶液(5mL)。將反應混合物在50℃下攪拌5小時。LCMS指示完全轉化成期望產物，且過濾混合物並凍乾。使用質量導向反相HPLC(具有Waters SunFire C18 OBD Prep管柱，100Å,5μm,19mm×150mm,[Waters部件編號186002568]，使用含有MeCN及100mM三乙基乙酸銨水溶液之梯度溶劑系統)純化產物。凍乾產物分液可提供呈四-三乙胺鹽形式之2-胺基-9-[5-O-(羥基{[羥基(膦醯基氧基)磷醯基]氧基}磷醯基)-β-D-呋喃木糖基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮。LCMS(ES,m/z)：522[M-H]^-。

製備24：三磷酸四氫((2R,3S,4R,5S)-5-(7-胺基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶- 3-基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲基酯

步驟1：((3aR,4R,6S,6aS)-6-(7-胺基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲醇

在環境溫度下，向(2S,3R,4S,5R)-2-(7-胺基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)-5-(羥甲基)四氫呋喃-3,4-二醇(30mg,0.105mmol)於1,4-二噁烷(0.3mL)中之經攪拌懸浮液中一次性添加原甲酸三甲基酯(0.22mL,2.011mmol)，隨後添加單水合對-甲苯磺酸(22mg,0.116mmol)。將反應混合物在環境溫度下攪拌16小時。LCMS指示顯著轉化成期望產物，且藉由在0℃下添加三乙胺(0.05mL)來將粗製混合物小心地驟冷。在濃縮後，藉由急速管柱層析在12克矽膠上使用含有MeOH及CH₂Cl₂之梯度溶劑系統純化殘餘物。濃縮產物分液可提供((3aR,4R,6S,6aS)-6-(7-胺基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲醇。LCMS(ES,m/z)：310[M+H]⁺。

步驟2：三磷酸四氫((3aR,4R,6S,6aS)-6-(7-胺基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲基酯

向((3aR,4R,6S,6aS)-6-(7-胺基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲醇(16mg,0.052mmol)於吡啶(0.05mL)及1,4-二噁烷(0.15mL)中之經攪拌懸浮液中添加DMF(0.05mL)以形成均質溶液。在環境溫度下，向此溶液中添加2-氯-4H-1,3,2-苯并二氧雜磷雜苯-4-酮(12mg,0.059mmol)於1,4-二噁烷(0.05mL)中之新製溶液。將反應混合物在環境溫度下攪拌15分鐘，且然後添加三丁基焦磷酸銨(43mg,0.078mmol)於DMF(0.10mL)中之溶液，隨後添加三丁基胺(0.052mL,0.219mmol)。將反應混合物在環境溫度下攪拌15分鐘，且然後添加碘(6.58mg,0.026mmol)於吡啶(0.10mL)及水(0.01mL)中之溶液。將反應混合物在環境溫度下攪拌15分鐘且使用5% NaHSO₃水溶液(0.5mL)將過量碘淬滅。LCMS指示顯著轉化成期望產物，且濃縮反應混合物以得到三磷酸四氫((3aR,4R,6S,6aS)-6-(7-胺基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲基酯，其未經額外純化即直接用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：548[M-H]^-。

步驟3：三磷酸四氫((2R,3S,4R,5S)-5-(7-胺基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲基酯

向粗製三磷酸四氫((3aR,4R,6S,6aS)-6-(7-胺基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-基)甲基酯(49.4mg,0.090mmol)於水(0.15mL)及DMF(0.15mL)中之經攪拌溶液中一次性添加甲酸(0.4mL,10.60mmol)。將反應混合物在環境溫度下攪拌18小時。LCMS指示顯著轉化成期望產物，且過濾混合物並凍乾。使用質量導向反相HPLC(具有Waters SunFire C18 OBD Prep管柱，100Å,5μm,19mm×150mm,[Waters部件編號186002568]，使用含有MeCN及100mM三乙基乙酸銨水溶液之梯度溶劑系統)純化產物。凍乾產物分液可提供三磷酸四氫((2R,3S,4R,5S)-5-(7-胺基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲基酯。LCMS(ES,m/z)：506[M-H]^-。

製備25：三磷酸四氫((2R,3S,4R,5R)-5-(6-胺基-2-氟-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲基酯

步驟1：三磷酸四氫((2R,3S,4R,5R)-5-(6-胺基-2-氟-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲基酯

向2-氟腺苷(200mg,0.701mmol)於磷酸三甲酯(1.948mL,16.83mmol)中之混合物中添加三丁基胺(0.500mL,2.104mmol)，且將混合物在室溫下攪拌15分鐘且然後在冰/鹽水浴中冷卻。然後逐滴添加POCl₃(0.137mL,1.472mmol)，且維持浴溫-5℃至0℃。在1.25小時之後，添加三丁基焦磷酸銨(327mg,0.596mmol)、MeCN(2.8mL)及三丁基胺(1.000mL,4.21mmol)之0℃混合物，且將混合物升溫至室溫，隨後在室溫下攪拌16小時。藉由反相HPLC使用含有100mM三乙基乙酸銨水溶液之1-20% MeCN之梯度直接純化混合物以提供三磷酸四氫((2R,3S,4R,5R)-5-(6-胺基-2-氟-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲基酯。LCMS(ES,m/z)：524[M-H]^-。

製備26：3'-(胺基甲基)-3'-去氧鳥苷5'-(三磷酸四氫酯)

根據公開程序(WO2015161137)來製備標題化合物。

使用所展示之下述製備或經由類似於闡述於製備1-26中者之其他合成操作來進一步修改。

製備27：2-胺基-9-(β-D-呋喃木糖基)-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

根據公開程序(Journal of Medicinal Chemistry 1987,30(6),982-991)來製備標題化合物。

製備28：5-胺基-3-(β-D-呋喃核糖基)-3,6-二氫-7H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-7-酮

根據公開程序(Journal of Organic Chemistry 2007,72(1),173-179)來製備標題化合物。

製備29：9-{3-疊氮基-5-O-[雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基]-3-去氧-β-D-呋喃核糖基}-N-(苯基羰基)-9H-嘌呤-6-胺

根據公開程序(Bulletin of the Korean Chemical Society 2004,25(2),243-248 and Nucleosides,Nucleotides & Nucleic Acids 2005 24(10-12),1707-1727)來製備標題化合物。

製備30：1-(β-D-呋喃核糖基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-胺

根據公開程序(Tetrahedron 1993,49(3),557-570)來製備標題化合物。

製備31：1-(β-D-呋喃核糖基)-1,5-二氫-4H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-酮

根據公開程序(Tetrahedron 1993,49(3),557-570)來製備標題化合物

製備32：4'-硫代腺苷

根據公開程序(Journal of Medicinal Chemistry 2006,49(5),1624-1634)來製備標題化合物。

製備33：7-(β-D-呋喃核糖基)-3,7-二氫-4H-咪唑并[4,5-d][1,2,3]三嗪-4-酮

根據公開程序(Organic & Biomolecular Chemistry 2014,12(23),3813-3815)來製備標題化合物。

製備34：3-(β-D-呋喃核糖基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-胺

根據公開程序(Biochemistry 2005,44(37),12445-12453)來製備標題化合物。

製備35：7-(2-去氧-2-氟-β-D-呋喃阿拉伯糖基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺

根據公開程序(Journal of the Chemical Society,Perkin Transactions 1：Organic and Bio-Organic Chemistry 1995(12),1543-50)來製備標題化合物。

製備36：1-(3-去氧-β-D-赤-戊呋喃糖基)-1,5-二氫-4H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-酮

根據公開程序(Chemical & Pharmaceutical Bulletin 1996,44(2),288-295)來製備標題化合物。

製備37：7-(2-去氧-β-D-赤-戊呋喃糖基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺

根據公開程序(Synthesis 2006(12),2005-2012)來製備標題化合物。

製備38：(2S,3R,4S,5R)-2-(4-胺基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-8-基)-5-(羥甲基)四氫呋喃-3,4-二醇

根據公開程序(WO2015148746)來製備標題化合物。

製備39：N-(8-((2R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-羥基四氫呋喃-2-基)吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基)苯甲醯胺

根據公開程序(WO2015148746)來製備標題化合物。

製備40：7-(2-去氧-4-乙炔基-β-D-赤-戊呋喃糖基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺

根據公開程序(WO2015148746)來製備標題化合物。

製備41：9-(2-氯-2-去氧-β-D-呋喃阿拉伯糖基)-9H-嘌呤-6-胺

根據公開程序(Journal of the American Chemical Society 1996,118(46),11341-11348)來製備標題化合物。

製備42：2'-去氧-2'-甲基腺苷

根據公開程序(Synthesis 2005(17),2865-2870)來製備標題化合物。

製備43：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((R)-1-羥乙基)四氫呋喃-3,4-二醇

根據公開程序(Bioorganicheskaya Khimiya 1989,15(7),969-975)來製備標題化合物。

製備44：5-氟-7-(β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺

根據公開程序(Nucleosides,Nucleotides,& Nucleic Acids 2004,23(1-2),161-170)來製備標題化合物。

製備45：1-(β-D-呋喃核糖基)-1,5-二氫-4H-咪唑并[4,5-d]噠嗪-4-酮

根據公開程序(Journal of the Chemical Society,Perkin Transactions 1：Organic and Bio-Organic Chemistry(1972-1999),1989(10),1769-1774)來製備標題化合物。

製備46：2-胺基-9-[(2R,3R,4S,5S)-5-氟-3,4-二羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

根據公開程序(WO2014099941)來製備標題化合物

製備47：2-胺基-9-((2R,3R,5S)-3-羥基-5-(羥甲基)-4-亞甲基四氫呋喃-2-基)-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

根據公開程序(Journal of Medicinal Chemistry 1992,35,2283-2293)來製備標題化合物

製備48：(2S,3R,4S,5R)-2-(4-胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-5-(羥甲基)四氫呋喃-3,4-二醇

根據公開程序(Tetrahedron Letters 1994,35(30),5339)來製備標題化合物。

下列實驗程序詳述本發明之具體實例之製備。該等實例之化合物以其中性形式繪製於下文之程序及表中。在一些情形下，端視用於最終純化之方法及/或固有分子性質，以鹽形式分離化合物。該等實例僅用於闡釋性目的且並不意欲以任何方式限制本發明範圍。

實例

實例1：(5R,7R,8R,12aR,14R,15aS,16R)-7-(2-胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-16-羥基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10-二醇鹽2,10-二氧化物

步驟1：膦酸(2R,3R,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(2-氰基乙基)酯

向(2R,3R,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基(2-氰基乙基)二異丙基亞磷醯胺(3g,3.09mmol)於ACN(15mL)中之溶液中添加水(0.111mL,6.18mmol)及2,2,2-三氟乙酸吡啶-1-鎓(0.717,3.71mmol)。在室溫下攪拌所得混合物，且藉由LCMS/TLC監測反應進展。在胺基磷酸酯消耗之後，含有產物之反應混合物未經純化即用於下一步驟中。LCMS(ES,m/z)：887.4[M+H]⁺。

步驟2：(2R,3R,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基膦酸酯2-甲基丙-2-胺鎓(aminium)

向來自步驟1之反應混合物(假設含有3.09mmol膦酸(2R,3S,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-(第三丁基二甲基矽烷基氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫嘌呤-9-基)-四氫呋喃-3-基酯2-氰基乙基酯)中一次性添加第三丁基胺(15.0mL,142mmol)，且將所得溶液在室溫下攪拌40分鐘。將其濃縮，且使殘餘物與ACN(2×15mL)共蒸發以得到產物，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS(ES,m/z)：832.3[M-H]^-。

步驟3：(2R,3R,4R,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基膦酸酯吡啶-1-鎓

向粗製(2R,3R,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基膦酸酯2-甲基丙-2-胺鎓(約4.2g，約3.09mmol，來自步驟2)於CH₂Cl₂(37mL)中之經攪拌溶液中添加水(0.558mL,31.0mmol)及二氯乙酸之CH₂Cl₂溶液(6%,37mL,31.5mmol)。將其攪拌40分鐘。然後，添加三乙基矽烷(60mL)，且將溶液攪拌1.5小時。向反應液中添加吡啶(4.5mL)。將其濃縮。使用MTBE(50ml)及己烷(50mL)研磨殘餘物，且傾析上清液。將此過程重複兩次。將粗製混合物在減壓下於P₂O₅中保持20小時以得到含有產物之粗製混合物。LCMS(ES,m/z)：532.2[M+H]⁺。

步驟4：膦酸(2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3S,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)磷基)氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

在Ar下，向(2R,3R,4R,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃 -3-基膦酸酯吡啶-1-鎓(680mg，粗製物，約0.722mmol)於ACN(5mL)中之攪拌溶液中添加活化4Å分子篩(100mg)。將所得混合物在室溫攪拌30分鐘。使(2R,3S,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)四氫呋喃-3-基(2-氰基乙基)二異丙基亞磷醯胺(0.805g,0.939mmol)與ACN(3×1mL)共蒸發，再溶於ACN(5mL)中，並藉由添加活化4Å分子篩(100mg)乾燥。在30分鐘之後，將其添加至先前製得之含有(2R,3R,4R,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基膦酸酯吡啶-1-鎓之混合物中。將混合物在室溫攪拌1小時。含有產物之反應混合物未經純化立即用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：1288.4[M+H]⁺。

步驟5：膦酸(2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3S,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)磷醯基)氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

向含有粗製膦酸(2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3S,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)磷基)氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(約1mmol，含有過量2,2-二氯乙酸吡啶鎓)之反應混合物中逐滴添加於癸烷中之第三丁基氫過氧化物(5.5M,0.64mL,3.5mmol)。將其在室溫攪拌1小時。然後，將溶液冷卻至0℃，且緩慢添加溶於水(5mL)中之NaHSO₃(250mg)溶液。在5分鐘之後，濃縮混合物，且殘餘物藉由反相(C18)層析使用5%至45% ACN於NH₄HCO₃水溶液(0.04%)中洗脫純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：1305.6[M+H]⁺。

步驟6：膦酸(2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3S,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)磷醯基)氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

向膦酸(2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3S,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)磷醯基)氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(340mg,0.239mmol)於CH₂Cl₂(4mL)中之經攪拌溶液中添加水(44.5mg,2.468mmol)及於CH₂Cl(5ml)中之二氯乙酸(0.280g,2.17mmol)。將其在室溫下攪拌30分鐘。然後添加Et₃SiH(4mL)，且將混合物攪拌1.5小時。向反應液中添加吡啶(3mL)，且將將其濃縮以得到粗產物，其未經純化即用於下一步驟中。LCMS(ES,m/z)：1002.4[M+H]⁺。

步驟7：(5R,7R,8R,12aR,14R,15aS,16R)-16-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-2-(2-氰基乙氧基)-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6- 二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-10-醇鹽2-氧化物

使粗製膦酸(2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3S,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)磷醯基)氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(1.5g，約0.24mmol)與吡啶(3×5mL)共蒸發且然後再溶於吡啶(4mL)中。向反應液中一次性添加2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧雜磷雜環己烷2-氧化物(160mg,0.865mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌1小時。其未經純化即直接用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：984.3[M+H]⁺。

步驟8：(5R,7R,8R,12aR,14R,15aS,16R)-16-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-2-(2-氰基乙氧基)-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-10-醇鹽2,10-二氧化物

向含有(5R,7R,8R,12aR,14R,15aS,16R)-16-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-2-(2-氰基乙氧基)-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-10-醇鹽2-氧化物之經攪拌混合物中添加水(156mg,8.65mmol)及碘(81mg,0.321mmol)。在10分鐘之後，將混合物傾倒至NaHSO₃(52mg)之水溶液(36ml)中，且將其攪拌5分鐘。將其冷卻至0℃，且緩慢添加NaHCO₃(1.04g)。在5分鐘之後，添加EtOAc(50mL)及Et₂O(50ml)。分離各層，且使用EtOAc(1×30ml)萃取水層。合併有機層，濃縮，並藉由使用於CH₂Cl₂中之0-20% MeOH洗脫之矽膠管柱層析純化以得到產物。LCMS(ES,m/z)：998.3[M+H]⁺。

步驟9：(5R,7R,8R,12aR,14R,15aS,16R)-16-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10-二醇鹽2,10-二氧化物

在室溫下，向(5R,7R,8R,12aR,14R,15aS,16R)-16-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-2-(2-氰基乙氧基)-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-10-醇鹽2,10-二氧化物(160mg)於ACN(2mL)中之經攪拌溶液中添加第三丁基胺(2mL)。在30分鐘之後，將其濃縮以得到粗產物，其未經純化即用於下一步驟中。LCMS(ES,m/z)：945.2[M+H]⁺。

步驟10：(5R,7R,8R,12aR,14R,15aS,16R)-7-(2-胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-16-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10-二醇鹽2,10-二氧化物

將粗製(5R,7R,8R,12aR,14R,15aS,16R)-16-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10-二醇鹽2,10-二氧化物(220mg)溶於MeNH₂之EtOH溶液(30%,4mL)中，且將其在室溫下攪拌5小時。然後，在減壓下去除揮發性組份以得到粗產物，其未經純化即用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：773.2[M+H]⁺及771.3[M-H]^-。

步驟11：(5R,7R,8R,12aR,14R,15aS,16R)-7-(2-胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-16-羥基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10-二醇鹽2,10-二氧化物

使來自步驟10之粗製物與吡啶(2.5ml)及Et₃N(2.5mL)共蒸發三次。將其溶於吡啶(2mL)中。向溶液中逐滴添加Et₃N(1.51g,14.9mmol)及三乙胺三氫氟酸鹽(1.2g,7.45mmol)。將混合物在50℃下加熱5小時。然後，將其濃縮並藉由使用於NH₄HCO₃水溶液(50mM)中之0至10% ACN洗脫之製備型HPLC(T3 Prep管柱，100Å,5μm,19mm×250mm)純化以得到產物。LCMS(ES,m/z)：657.1[M-H]^-。¹H-NMR：(300MHz,DMSO-d ₆+D₂O)：δ 8.35(s,1H),8.16(s,1H),8.03(s,1H),6.34(dd,J=8.8,5.9Hz,1H),5.85(d,J=8.3Hz,1H),5.12-4.98(m,2H),4.36(d,J=3.9Hz,1H),4.22(t,J=7.2Hz,1H),4.09(s,1H),3.96-3.79(m,4H),3.09-2.99(m,1H),2.64-2.51(m,1H)。³¹P-NMR：(121MHz,DMSO-d ₆+D₂O)：δ -1.65(s),-2.36(s)。

根據類似於上文實例1中所概述之程序的程序使用適當核苷單體(如製備所闡述或如自商業來源所獲得)來製備下表1中所展示之實例2至19。

實例20：(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,18R)-7-(2-胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-18-氟六氫-14H-15,12a-(環氧甲烷基)-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10(12H)-二醇鹽2,10-二氧化物

步驟1：膦酸(2R,3S,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯苯基酯

在Ar下，向N-(9-((2R,3S,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺(1g,1.520mmol)於吡啶(7.6mL)中之經攪拌溶液中添加膦酸二苯基酯(1.068g,4.56mmol)，且將其在室溫下攪拌20分鐘。含有產物之反應混合物未經純化即用於下一反應步驟中。

步驟2：膦酸(2R,3S,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

向來自步驟1之反應混合物中添加水(1.5ml)及Et₃N(1.5mL)。將混合物在室溫下攪拌20分鐘。然後，將其濃縮，且將殘餘物分配於CH₂Cl₂(50mL)與NaHCO₃水溶液(5%,20mL)之間。分離各層。使用NaHCO₃水溶液(5%,2×20mL)洗滌有機層，乾燥(Na₂SO₄)，濃縮並藉由矽膠管柱層析使用於CH₂Cl₂(1% Et₃N)中之0至7% MeOH純化以得到產物。LCMS(ES,m/z)：722[M+H]⁺。³¹P-NMR：(162MHz,CD₃OD)：δ 2.73(s,1P)。

步驟3：膦酸(2R,3S,4R,5R)-4-氟-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

向步驟2產物(0.9g,0.999mmol)於CH₂Cl₂(6mL)中之經攪拌溶液中添加水(0.180g,9.99mmol)及於CH₂Cl₂(10ml)中之2,2-二氯乙酸(1.16g,8.99mmol)。將混合物在室溫下攪拌15分鐘。添加Et₃SiH(10mL)，且將其攪拌1小時。然後，添加吡啶(2mL)，且將其濃縮。殘餘物藉由反相(C18)層析使用於NH₄HCO₃水溶液(0.04%)中之0至30% ACN洗脫純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：722[M-H]^-。417.9。¹H-NMR：(400MHz,CD₃OD)：δ 8.31(s,1H),7.49(d,J=1.6Hz,0.5H),6.15(d,J=6.8Hz,1H),5.91(d,J=1.6Hz,0.5H),5.42-5.32(m,1.5H),5.21(dd,J=4.5,1.9Hz,0.5H),4.45-4.32(m,1H),3.81(d,J=3.5Hz,2H),3.20(q,J=7.4Hz,1H),2.73(p,J=6.9Hz,1H),1.30(t,J=7.3Hz,1.5H),1.23(d,J=6.9Hz,6H)。¹⁹F-NMR：(376MHz,CD₃OD)：δ -200.96(s,1F)。³¹P-NMR：(162MHz,CD₃OD)：δ 2.41(s,1P)。

步驟4：膦酸(2R,3S,4R,5R)-5-((((((1R,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-2,5-二氧雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基)氧基)(2-氰基乙氧基)磷基)氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

使膦酸(2R,3S,4R,5R)-4-氟-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(600mg,0.676mmol)與ACN(3×5mL)共蒸發，再溶於ACN(3mL)中，藉由添加活化4Å分子篩(150mg)進行乾燥並保持於Ar下。使磷酸(1R,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-2,5-二氧雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基酯(2-氰基乙基)二異丙基胺基酯(可自Exiqon獲得(EQ-0063-1000)，235.5mg,0.56mmol)與ACN(3×5mL)共蒸發及2,2,2-三氟乙酸吡啶鎓(162mg,0.84mmol)，再溶於ACN(5mL)中，並藉由添加活化4Å分子篩(150mg)進行乾燥。在30分鐘之後，將其添加至先前製得之含有膦酸(2R,3S,4R,5R)-4-氟-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯之混合物中。將混合物在室溫下攪拌1小時。含有產物之反應混合物未經純化即立即用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：1202.3[M-H]^-。

步驟5：膦酸(2R,3S,4R,5R)-5-((((((1R,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-2,5-二氧雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基)氧基)(2-氰基乙氧基)磷醯基)氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

向來自步驟4之經攪拌反應混合物中逐滴添加第三丁基氫過氧化物之癸烷溶液(5.5M,0.31mL,1.71mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌1小時。在30分鐘之後，將溶液冷卻至0℃，且緩慢添加NaHSO₃(150mg)之水溶液(5mL)。在5分鐘之後，濃縮混合物，且殘餘物藉由反相(C18)層析使用於NH₄HCO₃水溶液(5mM)中之0至75% ACN洗脫純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：1220.1[M+H]⁺。¹⁹F-NMR(376MHz,CD₃OD)：δ -200.38,-202.45(2s,1F)。³¹P-NMR：(162MHz,CD₃OD)：δ 2.57,2.49(2s,1P)；-3.52,-4.21(2s,1P)。

步驟6：膦酸(2R,3S,4R,5R)-5-((((((1S,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲醯胺基-9H- 嘌呤-9-基)-1-(羥甲基)-2,5-二氧雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基)氧基)(2-氰基乙氧基)磷醯基)氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

向膦酸(2R,3S,4R,5R)-5-((((((1R,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-2,5-二氧雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基)氧基)(2-氰基乙氧基)磷醯基)氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(190mg,0.16mmol)於CH₂Cl₂(2.5mL)中之溶液中添加水(28.8mg,1.6mmol)及二氯乙酸之CH₂Cl₂溶液(0.6M,2.5mL)。將混合物在室溫下攪拌10分鐘，且然後添加Et₃SiH(4.5mL)。在1小時之後，添加吡啶(0.5mL)。在10分鐘之後，濃縮所得混合物以得到產物，其未經純化即用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：917.9[M+H]⁺。³¹P-NMR：(162MHz,CD₃OD)：δ 2.51,2.34(2s,1P)；-3.46,-3.82(2s,1P)。

步驟7：(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,18R)-2-(2-氰基乙氧基)-18-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}六氫-14H-15,12a-(環氧甲烷基)-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-10(12H)-醇鹽2,10-二氧化物

在Ar下，向吡啶(16mL)中添加氯磷酸二苯基酯(0.66mL,3.2mmol)。將其在-40℃下冷卻且然後經20分鐘逐滴添加來自步驟6之粗製物之CH₂Cl₂溶液(16mL)。將所得混合物在-40℃下攪拌40分鐘。反應混合物未經純化即用於下一步驟中。LCMS(ES,m/z)：898.2[M-H]^-。

步驟8：(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,18R)-2-(2-氰基乙氧基)-18-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}六氫-14H-15,12a-(環氧甲烷基)-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-10(12H)-醇鹽2,10-二氧化物[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10(12H)-二醇鹽2,10-二氧化物

在0℃下，經5分鐘向來自步驟7之溶液中添加I₂之吡啶/水(9/1)溶液(3%,1.76mL)。將混合物在室溫下攪拌40分鐘。然後，使用Na₂S₂O₃．5H₂O(150mg)之水溶液(2mL)將其處理。在5分鐘之後，在減壓下濃縮混合物。殘餘物藉由反相(C18)層析使用於NH₄HCO₃水溶液(0.04%)中之0至45% ACN洗脫純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)： 915.8[M+H]⁺。¹⁹F-NMR(376MHz,CD₃OD)：δ -198.70,-203.36(2s,1F)。³¹P-NMR(162MHz,CD₃OD)：δ -0.96,-1.75(2s,1P)；-3.64,-4.71(2s,1P)。

步驟9：(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,18R)-7-(2-胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-18-氟六氫-14H-15,12a-(環氧甲烷基)-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10(12H)-二醇鹽2,10-二氧化物

將(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,18R)-2-(2-氰基乙氧基)-18-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}六氫-14H-15,12a-(環氧甲烷基)-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-10(12H)-醇鹽2,10-二氧化物(110mg,0.12mmol)溶於MeNH₂之EtOH溶液(30%,15mL)中，且將所得溶液在室溫下攪拌3小時。然後，將其濃縮，且殘餘物藉由製備型HPLC(Atlantis Prep T3管柱，19×250mm)使用於NH₄HCO₃水溶液(50mM)中之0至9% ACN洗脫純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：686.9[M-H]^-。¹H-NMR(400MHz,D₂O)：δ 8.14(s,1H),7.85(s,1H),7.80(s,1H),6.01(s,1H),5.99(d,J=8.5Hz,1H),5.84-5.66(m,1H),5.44(d,J=3.6Hz,0.5H),5.31(d,J=3.6Hz,0.5H),4.96(d,J=3.9Hz,1H),4.84(s,1H),4.65-4.53(m,1H),4.33-4.15(m,4H),4.10(d,J=8.2Hz,1H),3.96(d,J=8.2Hz,1H)。¹⁹F-NMR(376MHz,D₂O)：δ -199.02(s,1F)。³¹P-NMR(162MHz,D₂O)：δ -1.89 (s,1P),-2.49(s,1P)。

根據類似於上文實例20中所概述之程序的程序使用適當單體(如製備所闡述或如自商業來源所獲得)以偶合步驟來製備下表2中所展示之實例21至29。

實例30：2-胺基-7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,10,15,16-四羥基-2,10-二氧負離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-3,7-二氫-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮

cGAS緩衝液係由40mM pH 7.5 Tris-HCL、100uM NaCl、10mM MgCl₂組成。cGAS酶係購自Novoprotein(Novoprotein代碼：SGCAS)，其表現於大腸桿菌(E.coli)中並使用HIS標籤純化。所計算分子量為55.3kDa，且序列如下：

(SEQ.ID.NO.1)

向小瓶中添加Herring DNA(CAS編號9007-49-2,0.3mg/mL於cGAS緩衝液中；14.8mL)及cGAS酶(3.1mg/mL於cGAS緩衝液中；0.78mL)，且將混合物在室溫下培育15分鐘。添加7-去氮-GTP(TriLink目錄編號N-1044；5mM於cGAS緩衝液中，1.95mL,9.75μmol)及ATP(5mM於cGAS緩衝液中，1.95mL,9.75μmol)，且在經設定以維持37℃之Radleys Metz加熱振盪器上培育混合物，同時在250rpm下振盪16小時，然後過濾混合物並凍乾。使用質量導向反相HPLC(具有Waters SunFire C18 OBD Prep管柱，100Å,5μm,19mm×150mm,[Waters部件編號186002568]，使用含有MeCN及100mM三乙基乙酸銨水溶液之梯度溶劑系統)純化產物。凍乾產物分液可提供標題化合物。LCMS(ES,m/z)：672[M-H]^-。¹H NMR(600MHz,DMSO-d ₆)δ 10.33(s,1H),8.37(s,1H),8.10(s,1H),7.56(s,1H),7.24(s,2H),6.94(d,J=3.4Hz,1H),6.28-6.24(m,3H),6.01(d,J=8.1Hz,1H),5.86(d,J=7.9Hz,1H),5.61(s,1H),5.01-4.97(m,1H),4.86-4.83(m,1H),4.70(s,1H),4.25(s,1H),4.21(dd,J=10.4,4.8Hz,1H),4.03-3.92(4, 3H),3.80-3.75(m,1H),3.69(d,J=12.1Hz,1H),2.76(s,12H),1.02(S,18H)。

使用類似於上文針對實例30所闡述之程序的程序且使用適當核苷三磷酸單體來製備下表3中之實例31至65。視需要，根據類似於針對製備23至26所闡述之方法的方法或藉由將所需5’-OH核苷單體呈遞至NuBlocks LLC(Oceanside,CA)來形成三磷酸酯。使用ATP及α-硫代-GTP(BIOLOG Life Science Institute，目錄編號G014/G015)來製備實例38。

實例66：1-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,10,15,16-四羥基-2,10-二氧負離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,5-二氫-4H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮

cGAS緩衝液係由40mM pH 7.5 Tris-HCL、100uM NaCl、10mM MgCl₂組成。cGAS酶係購自Novoprotein(Novoprotein代碼：SGCAS)，其表現於大腸桿菌中並使用HIS標籤純化。所計算分子量為55.3kDa，且序列如下：

(SEQ.ID.NO.1)

向小瓶中添加Herring DNA(CAS編號9007-49-2,0.3mg/mL於cGAS緩衝液中；15.2mL)及cGAS酶(3.1mg/mL於cGAS緩衝液中；0.8mL)，且將混合物在室溫下培育15分鐘。添加ATP(5mM於cGAS緩衝液中，2.0mL,10μmol)、7-去氮-8-氮雜-ITP(5mM於cGAS緩衝液中，2.0mL,10μmol)及DMSO(5mL)，且在經設定以維持37℃之Radleys Metz加熱振盪器上培育混合物，同時在250rpm下振盪3天。過濾混合物，凍乾，並藉由反相HPLC(使用含有100mM TEAA改質劑之乙腈/水梯度洗脫，線性梯度)純化以提供TEA鹽形式之標題化合物。LCMS(ES,m/z)：658[M-H]^-。¹H NMR(600MHz,D₂O)：δ 8.36(s,1H),8.34(s,1H),8.13(s,1H),7.51(s,1H),6.41(d,J=8.2Hz,1H),6.24(s,1H),5.69(m,1H),5.42(m,1H),4.88(d,J=4.4Hz,1H),4.66(d,J=4.1Hz,1H),4.51(m,1H),4.43(m,2H),4.23(m,2H),4.01(m,1H)。

使用類似於上文針對實例66所闡述之程序的程序且使用適當核苷三磷酸單體來製備下表4中之實例67至74。視需要，根據類似於針對製備23至26所闡述之方法的方法或藉由將所需5’-OH核苷單體呈遞至NuBlocks LLC(Oceanside,CA)來形成三磷酸酯。

表4

實例75：2-胺基-9-[(5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-16-胺基-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,10,15-三羥基-2,10-二氧負離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

步驟1：2-胺基-9-[(5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-16-胺基-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,10,15-三羥基-2,10-二氧負離子基八氫-12H-5,8- 甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

在Ar及室溫下，向2-胺基-9-[(5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-16-疊氮基-2,10,15-三羥基-2,10-二氧負離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(實例14，4.0mg,0.0055mmol)於無水EtOH(1.0mL)及去離子水(1.0mL)中之經攪拌溶液中一次性添加碳載鈀(1.0mg，10wt.%載量)。然後使用氫氣沖洗反應器皿並附接至氫氣氣囊。將反應混合物攪拌48小時，過濾，並濃縮以提供標題化合物。LCMS(ES,m/z)：672[M-H]^-。(600MHz,DMSO-d ₆)δ 10.70(s,1H),8.42(s,1H),8.12(s,1H),7.96(s,1H),7.70(s,1H),7.29(br,2H),6.56(br,2H),6.00(d,J=8.3Hz,1H),5.89(d,J=8.5Hz,1H),5.21(s,1H),5.04(t,J=6.0Hz,1H),4.16(s,1H),4.05(dd,J=10.5,5.0Hz,1H),4.00(s,1H),3.77(d,J=4.1Hz,1H),3.67(m,2H)。³¹P NMR：(202MHz,DMSO-d ₆)：δ -0.4(s),2.0(s)。

或者，可根據類似於上文針對實例30所闡述之方法的方法自所需單體來製備實例75。

實例76：9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(2-胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)-2,10,15,16-四羥基-2,10-二氧負離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-14-基]-9H-嘌呤-6-甲醯胺

在Ar及室溫下，向2-胺基-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-氯-9H-嘌呤-9-基)-2,10,15,16-四羥基-2,10-二氧負離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(實例3216mg,0.018mmol)於DMSO(1.7mL)中之經攪拌溶液中一次性添加氰化鈉(8.0mg,0.16mmol)。將反應混合物加熱至80℃並在同一溫度下攪拌3小時，冷卻至環境溫度，然後使用冷乙酸(15uL)驟冷。過濾混合物並凍乾。使用質量導向反相HPLC(具有Waters SunFire C18 OBD Prep管柱，100Å,5μm,19mm×150mm,[Waters部件編號186002568]，使用含有MeCN及100mM三乙基乙酸銨水溶液之梯度溶劑系統)純化產物。凍乾產物分液可提供9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(2-胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)-2,10,15,16-四羥基-2,10-二氧負離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-14-基]-9H-嘌呤-6-甲腈。LCMS(ES,m/z)：683[M-H]^-。

向9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(2-胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)-2,10,15,16-四羥基-2,10-二氧負離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-14-基]-9H-嘌呤-6-甲腈(3.0mg,0.003mmol)於去離子水(338uL)中之經攪拌懸浮液中添加氫(二甲基膦酸-kP)[氫雙(二甲基磷基-kP)]鉑(II)(1.0mg,0.002mmol)。將反應混合物加熱至85℃並在同一溫度下攪拌6小時，冷卻至環境溫度，過濾並凍乾。使用質量導向反相HPLC(具有Waters SunFire C18 OBD Prep管柱，100Å,5μm,19mm×150mm,[Waters部件編號186002568]，使用含有MeCN及100mM三乙基乙酸銨水溶液之梯度溶劑系統)純化產物。凍乾產物分液可提供9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(2-胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)-2,10,15,16-四羥基-2,10-二氧負離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-14-基]-9H-嘌呤-6-甲醯胺。LCMS(ES,m/z)：701[M-H]^-。¹H NMR(500MHz,DMSO)：δ 10.58(s,1H),9.06(s,1H),8.36(s,1H),8.05(s,1H),7.91(s,1H),7.74(s,1H),6.55(br,4 H),6.07(d,J=7.7Hz,1H),5.81(d,J=6.0Hz,1H),5.77(m,1H),5.04(m,1H),4.96(d,J=4.5Hz,1H),4.60(m,1H),4.27(m,1H),4.07-4.04(m,2H),3.99-3.75(m,2H)。³¹P NMR：(202MHz,DMSO)：δ 1.9(s),-0.8(s)。

實例77、78、79、80：2-胺基-9-[(5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS)-14-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-15-羥基-2,10-二氧負離子基-2,10-二硫基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體1-4)

步驟1：膦酸氫(2R,3R)-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

向燒瓶中添加(2R,3R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基(2^-氰基乙基)二異丙基亞磷醯胺(4.00g,4.76mmol)、MeCN(23.65ml)及水(0.158ml)。添加吡啶三氟乙酸酯(1.104g,5.71mmol)，且將反應液在室溫下攪拌1小時。然後添加第三丁基胺(20.02ml,190mmol)，並在室溫下繼續攪拌1小時，然後將反應液分配於己烷與乙腈之間。收集乙腈層並在真空下濃縮。添加DCM(39.9ml)及水(0.798ml)，隨後添加二氯乙酸(55.1ml,33.3mmol)，且將溶液在室溫下攪拌20分鐘，然後添加三乙基矽烷(133ml,833mmol)，且將反應液在室溫下進一步攪拌2小時。將反應液冷卻至0℃，且添加吡啶(5.39mL 66.6mmol)。然後在減壓下濃縮混合物以得到標題化合物，其並不進一步純化。LCMS(ES,m/z)：400[M-H]^-。

步驟2：酸代磷酸O-氫O-((2R,3R,4R,5R)-5-(4-苯甲醯胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-3-基)酯O-(((2S,4R,5R)-4-((羥基氫 磷醯基)氧基)-5-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-2-基)甲基)酯

向燒瓶中添加膦酸氫(2R,3R,5S)-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(335mg,0.836mmol)及MeCN(20mL)，且然後在減壓下濃縮溶液。重複此過程2次，且然後添加MeCN(8mL)，隨後添加活化4Å篩。將混合物在室溫下攪拌20分鐘。將(2R,3R,4R,5R)-5-(4-苯甲醯胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-3-基(2-氰基乙基)二異丙基亞磷醯胺(825mg,0.836mmol)溶於MeCN(5mL)中。添加分子篩(4Å)，且將混合物在室溫下攪拌30分鐘，然後將此溶液轉移至膦酸氫酯溶液中且使用2×1.5mLMeCN部分完成轉移。在室溫下攪拌30分鐘之後，添加((二甲基胺基-次甲基)胺基)-3H-1,2,4-二噻唑啉-3-硫酮(189mg,0.919mmol)。在室溫下攪拌5分鐘之後，在減壓下濃縮混合物並使用反相HPLC利用MeCN及100mM三乙基乙酸銨水溶液之10-100%梯度純化。收集含產物分液並凍乾，在此期間裂解氰基乙基保護基團以提供O-氫硫代磷酸O-((2R,3R,4R,5R)-5-(4-苯甲醯胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-3-基)酯O-(((2S,4R,5R)-4-((羥基氫磷醯基)氧基)-5-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-2-基) 甲基)酯。LCMS(ES,m/z)：1264[M-H]^-。

步驟3：N-{7-[(5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR)-15-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-2,10-二氧負離子基-2,10-二硫基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-14-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}苯甲醯胺(非對映異構體1-4)

向含有硫代磷酸O-氫O-((2R,3R,4R,5R)-5-(4-苯甲醯胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)四氫呋喃-3-基)酯-(((2S,4R,5R)-4-((羥基氫磷醯基)氧基)-5-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-2-基)甲基)酯(581mg,0.440mmol)之燒瓶中添加DCM(8.81mL)、水(0.079mL,4.40mmol)且然後添加二氯乙酸(8.74mL,5.28mmol)。將混合物在室溫下攪拌15分鐘，且然後添加三乙基矽烷(10.97mL,68.7mmol)。將混合物在室溫下攪拌1.5小時且然後在減壓下濃縮。將混合物溶於吡啶(10mL)中且然後在減壓下濃縮。重複此過程2次，且然後將所得試樣溶於吡啶(17ml)中且在室溫下一次性添加2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧雜磷雜環己烷-2-酮(81mg,0.440mmol)。在室溫下攪拌30分鐘之後，添加額外2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧雜磷雜環己烷-2-酮(81mg,0.440mmol)。重複此序列兩次，且然後添加水(238μl,13.19mmol)及3H-1,2-苯并二硫雜環戊烯-3-酮(111mg,0.660mmol)。將混合物在室溫下攪拌1小時且然後分配於水(10mL)與1：1 EtOAc/乙醚(10mL)之間。分離各層，且使用1：1 EtOAc/乙醚(3×10mL)萃取水相。乾燥(MgSO₄)合併之有機相，過濾，並在減壓下濃縮。反相HPLC純化(30-100% MeCN及100mM三乙基乙酸銨水溶液之梯度)可提供N-{7-[(5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR)-15-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-2,10-二氧負離子基-2,10-二醯基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-14-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}苯甲醯胺之4種非對映異構體，其皆展示LCMS(ES,m/z)：976[M-H]^-。

步驟4：2-胺基-9-[(5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS)-14-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-15-羥基-2,10-二氧負醯子基-2,10-二硫基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體1-4)

向含有N-{7-[(5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR)-15-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-2,10-二氧負離子基-2,10-二硫基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-14-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}苯甲醯胺(最快洗脫峰，7.4mg,7.57μmol)之燒瓶中添加甲胺(33%於EtOH中)(1mL,8.03mmol)，且將混合物在室溫下攪拌4小時，然後在減壓下濃縮混合物。添加吡啶(1mL)，且在減壓下濃縮混合物。然後，添加吡啶(0.5ml)、三乙胺(0.104ml,0.746mmol)及三乙胺三氫氟酸鹽(0.030ml,0.187mmol)，且將混合物在50℃下攪拌16小時，然後將混合物冷卻至室溫並在減壓下濃縮。藉由反相HPLC(乙腈及100mM三乙基乙酸銨水溶液之梯度)純化可提供實例77，2-胺基-9-[(5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS)-14-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-15-羥基-2,10-二氧負離子基-2,10-二硫基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體1)。LCMS(ES,m/z)：688[M-H]^-。¹H NMR(600MHz，氧化氘)δ 8.06(s,1H),8.03(s,1H),7.41(d,J=3.8Hz,1H),6.25(d,J=3.7Hz,1H),6.17(d,J=2.6Hz,1H),5.68(d,J=7.5Hz,1H),5.42-5.36(m,2H),5.10-5.06(m,1H),4.83-4.81(m,1H),4.51-4.48(m,1H),4.36-4.33(m,1H),4.28(dt,J=10.1,4.9Hz,1H),4.06-3.94(m,2H),3.03(q,J=7.3Hz,12H),2.44-2.40(m,2H),1.11(t,J=7.3Hz,18H)。

以類似方式個別地處理來自步驟3之其他非對映異構體以提供三種其他非對映異構體產物：

實例78：2-胺基-9-[(5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS)-14-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-15-羥基-2,10-二氧負離子基-2,10-二硫基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體2)。LCMS(ES,m/z)：688[M-H]^-。¹H NMR(600MHz，氧化氘)δ 8.04(s,1H),7.75(s,1H),7.50(d,J=3.6Hz,1H),6.19-6.17(m,1H),6.16(d,J=3.7Hz,1H),5.65(d,J=7.4Hz,1H),5.63-5.57(m,1H),5.14(td,J=7.8,4.4Hz,1H),4.54(d,J=4.2Hz,1H),4.52-4.46(m,1H),4.33(d,J=8.9Hz,1H),4.27(dd,J=11.9,3.1Hz,1H),4.18-4.15(m,1H),3.96(dd,J= 11.4,3.6Hz,2H),3.04(q,J=7.3Hz,12H),2.44-2.36(m,2H),1.11(t,J=7.3Hz,18H)。

實例79：2-胺基-9-[(5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS)-14-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-15-羥基-2,10-二氧負離子基-2,10-二硫基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體3)。LCMS(ES,m/z)：688[M-H]^-。¹H NMR(600MHz，氧化氘)δ 8.00(s,1H),7.97(s,1H),7.19(d,J=3.8Hz,1H),6.15(d,J=3.8Hz,2H),5.66(d,J=7.3Hz,1H),5.32(dq,J=9.9,7.2Hz,1H),4.95(td,J=8.6,4.6Hz,1H),4.81(d,J=4.4Hz,1H),4.50(d,J=8.0Hz,1H),4.32(d,J=7.8Hz,1H),4.25(dt,J=12.0,3.6Hz,1H),4.05-3.97(m,3H),3.03(q,J=7.3Hz,12H),2.51-2.41(m,2H),1.11(t,J=7.3Hz,18H)。

實例80：2-胺基-9-[(5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS)-14-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-15-羥基-2,10-二氧負離子基-2,10-二硫基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體4)。LCMS(ES,m/z)：688[M-H]^-。¹H NMR(600MHz，氧化氘)δ 8.00(s,1H),7.72(s,1H),7.23(d,J=3.8Hz,1H),6.14(s,1H),6.12(d,J=3.7Hz,1H),5.64(d,J=6.9Hz,1H),5.47(dq,J=14.2,7.0Hz,1H),5.05(td,J=8.0,4.5Hz,1H),4.52(d,J=4.4Hz,1H),4.49(dt,J=7.4,2.7Hz,1H),4.33-4.27(m,2H),4.19(ddd,J=11.5,8.5,3.0Hz,1H),4.00(dd,J=11.5,3.9Hz,1H),3.94(ddd,J=11.6,5.6,2.2Hz,1H),3.01(q,J=7.3Hz,12H),2.49-2.40(m,2H),1.10(t,J=7.3Hz,18H)。

實例81：2-胺基-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-2,10,16-三羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9- 二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體1)

步驟1：膦酸(2R,3R,4R,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

在25℃下，向(2R,3R,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基(2-氰基乙基)二異丙基亞磷醯胺(3g,3.09mmol)於MeCN(15mL)中之經攪拌溶液中添加H₂O(0.111mL,6.18mmol)及2,2,2-三氟乙酸吡啶-1-鎓(0.717g,3.71mmol)。將所得混合物在25℃下攪拌20分鐘。藉由LCMS/TLC監測反應進展。在胺基磷酸酯起始材料消耗之後，含有期望產物(主要)之反應混合物未經任一後處理即用於下一步驟中。LCMS(ES,m/z)：887.4[M+H]⁺。

步驟2：膦酸(2R,3R,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

向來自先前反應之步驟1產物(15.0mL,142mmol)之經攪拌溶液中一次性添加第三丁基胺，且將其在25℃下攪拌40分鐘。在真空中濃縮所得溶液。使殘餘物與無水MeCN(兩次，各15mL)共蒸發，其未經純化即用於下一步驟中。LCMS(ES,m/z)：832.3[M-H]^-。

步驟3：膦酸(2R,3R,4R,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

向步驟2產物於CH₂Cl₂(37mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加H₂O(0.558mL,31.0mmol)及6% DCA之CH₂Cl₂溶液(37mL,31.5mmol)。將所得混合物在25℃下攪拌40分鐘，然後添加Et₃SiH(60mL)，且將反應混合物攪拌1.5小時。向反應液中添加吡啶(4.5mL，2當量，相對於DCA)。將所得溶液在25℃下攪拌5分鐘且然後在真空中濃縮。使用MTBE/己烷(100mL,v/v,1/1)研磨殘餘物，且傾析上清液。將此過程再重複兩次。在減壓下濃縮最終殘餘物且未經純化即用於下一步驟中。LCMS(ES,m/z)：532.18[M+H]⁺。

步驟4：膦酸(2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)磷基)氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋 喃-3-基酯

在Ar下，向步驟3產物(0.704g,0.722mmol)於MeCN(5mL)中之經攪拌溶液中添加活化4Å分子篩(200mg)，且將混合物在室溫下攪拌30分鐘。使二異丙基-胺基磷酸(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯(2-氰基乙基)酯(0.822g,0.939mmol)與無水MeCN(3mL)共蒸發兩次。添加活化4Å分子篩(200mg)。在30分鐘之後，藉由注射器將胺基磷酸酯溶液轉移至步驟3產物之溶液中。將所得混合物在室溫下攪拌20分鐘。藉由TLC/LCMS檢測期望產物，且反應溶液未經純化即用於下一反應中。LCMS(ES,m/z)：1306.7[M+H]⁺。

步驟5：膦酸(2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)硫代磷醯基)氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

在Ar下，向含有步驟4產物(約0.722mmol)之反應混合物中一次性添加(E)-N,N-二甲基-N'-(3-硫酮-3H-12,4-二噻唑-5-基)亞胺代甲醯胺(163mg,0.794mmol)，且將混合物在室溫下攪拌30分鐘。藉由TLC/LCMS監測反應進展。在起始亞磷酸酯消耗之後，在真空中濃縮反應混合物，且殘餘物藉由反相層析(X-Bridge BEH130 Prep C18)使用於H₂O(0.04% NH₄HCO₃)中之5%至95% MeCN洗脫純化。合併含產物分液並在減壓下濃縮至2/3體積。添加NaCl(10g)，且使用EtOAc/Et₂O(v/v,1/1,3×80mL)萃取水性混合物。乾燥(Na₂SO₄)合併之有機層並濃縮。LCMS(ES,m/z)：1339.5[M+H]⁺。³¹P-NMR(162MHz,CD₃OD)：δ 67.83(d,J=43.9Hz),2.81(d,J=15.7Hz)。

步驟6：膦酸(2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)硫代磷醯基)氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

向步驟5產物(180mg,0.128mmol)於CH₂Cl₂(7mL)中之經攪拌溶液中添加2,2-二氯乙酸之CH₂Cl₂溶液(2.47mg,1.15mmol)及H₂O(22.97mg,1.28mmol)。在室溫下攪拌20分鐘之後，添加Et₃SiH(4.5mL)。在2小時之後，添加吡啶(1mL)，且將混合物攪拌10分鐘。在去除揮發物之後，產物未經純化即用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：1036.4[M+H]⁺。

步驟7：(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-2-(2-氰基乙氧基)-15-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側 氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-10-醇鹽2-硫化物

使步驟6產物(570mg)與無水吡啶(每次1mL，三次)共蒸發。在室溫及Ar下，向於無水吡啶(4mL)中之混合物中一次性添加2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧雜磷雜環己烷2-氧化物(71mg,0.384mmol)。將所得混合物攪拌40分鐘。藉由TLC/LCMS監測反應進展。觀察到呈非對映異構體混合物形式之期望產物，且將產物直接用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：1018.5[M+H]⁺。

步驟8：非對映異構體混合物(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-2-(2-氰基乙氧基)-15-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-10-硫醇鹽10-氧化物2-硫化物(A1)及(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-2-(2-氰基乙氧基)-15-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-10-硫醇鹽10-氧化物2-硫化物(A2)

向步驟7產物之經攪拌混合物中添加H₂O(69.2mg,3.84mmol)及3H-苯并[c][1,2]二硫雜環戊烯-3-酮(32.3mg,0.192mmol)。將混合物在室溫下攪拌40分鐘。藉由TLC/LCMS監測反應進展。在反應完成之後，將反應混合物傾倒至NaHCO₃水溶液(0.14g NaHCO₃於5mL H₂O中)中並攪拌5分鐘。使用EtOAc/乙醚(v/v,1/1,3×15mL)萃取所得混合物。乾燥(Na₂SO₄)合併之有機層，並藉由使用於CH₂Cl₂中之0至15% MeOH洗脫之矽膠層析純化以得到產物：非對呋異構體A1混合物(在於CH₂Cl₂中之5.5% MeOH下洗脫出)；非對映異構體A2混合物(在於CH₂Cl₂中之9.8% MeOH下洗脫出)；膦酸(2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)硫代磷醯基)氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(在於CH₂Cl₂中之12.6%MeOH下洗脫出)。混合物A1：LCMS(ES,m/z)：1050.30[M+H]⁺。³¹P-NMR(162MHz,CD₃OD)：δ 66.34(s),64.63(s)。混合物A2：LCMS(ES,m/z)：1050.30[M+H]⁺。³¹P-NMR(162MHz,CD₃OD)：δ 65.94,64.17,62.55,61.28。

步驟9：非對映異構體(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-15-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10-雙(硫醇鹽)2,10-二氧化物(B1)及(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-15-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10-雙(硫醇鹽)2,10-二氧化物(B2)

在室溫及Ar下，向來自先前步驟之粗製A1(95mg，約0.09mmol)於MeCN(1mL)中之經攪拌懸浮液中添加第三丁基胺(1.5mL)。在30分鐘之後，在真空中去除揮發性組份。殘餘物藉由反相製備型HPLC(X-Bridge BEH130 Prep C18)使用於NH₄HCO₃水溶液(10mM)中之25%至45% MeCN洗脫8分鐘純化，得到呈單一非對映異構體形式之化合物B2(T_R=5.97min)。LCMS(ES,m/z)：891.4[M-H]^-。H-NMR(300MHz,CD₃OD)：δ 8.44(s,1H),8.22(s,1H),8.09(s,1H),6.37(d,J=14.0Hz,1H),5.95(d,J=8.0Hz,1H),5.65-5.54(m,1H),5.26-5.10(m,2H),4.57-4.41(m,4H),4.24(s,1H),4.01(d,J=11.5Hz,1H),3.89(d,J=11.8Hz,1H),2.75-2.63(m,1H),1.04-0.91(m,15H),0.28-0.24(m,6H)。³¹P-NMR(121MHz,CD₃OD)：δ 57.10(s),53.1(s)。

步驟10：(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(2-胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-16-{[基三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-15-氟八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10-雙(硫醇鹽)2,10-二氧化物

向來自先前步驟之化合物B2(13mg,0.013mmol)之經攪拌溶液中添加MeNH₂之EtOH溶液(0.6mL，30重量%)。將混合物在室溫下攪拌12小時。在減壓下去除揮發性組份，且含有產物化合物之殘餘物未經純化即用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：823.15[M+H]⁺。

步驟11：2-胺基-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-2,10,16-三羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體1)

使來自步驟10之粗產物(25mg)與吡啶/Et₃N(v/v,3/1，每次1mL，三次)共蒸發且然後溶於吡啶(0.15mL)中。向混合物中裝填Ar及Et₃N(0.20mL)且添加三乙胺三氫氟酸鹽(56.4mg,0.350mmol)。將所得溶液在50℃下升溫6小時。藉由TLC/LCMS監測反應進展。在完成反應之後，在真空中濃縮混合物且然後與MeCN(三次，每次1mL)共蒸發。殘餘物藉由反相製備型HPLC(X-Bridge BEH130 Prep C18)使用於NH₄HCO₃水溶液(50mM)中之0至22% MeCN洗脫15分鐘純化，得到產物化合物(T_R=8.3min)。LCMS(ES,m/z)：708.95[M+H]⁺。¹H-NMR (400MHz,D₂O)：δ 8.18(s,1H),8.16(s,1H),7.77(s,1H),6.37(d,J=14.3Hz,1H),5.86(d,J=8.4Hz,1H),5.61-5.54(m,1.5H),5.43(s,0.5H),5.27-5.12(m,2H),4.59(d,J=3.6Hz,1H),4.47(t,J=12.9Hz,2H),4.36(d,J=4.8Hz,1H),4.04(dd,J=23.2,12.0Hz,2H)。³¹P-NMR(162MHz,D₂O)：δ 55.63(s),51.55(s)。

實例82：2-胺基-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-2,10,16-三羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體2)

步驟1：非對映異構體(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-15-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10-雙(硫醇鹽)2,10-二氧化物(B3)及(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-15-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10-雙(硫醇鹽)2,10-二氧化物(B4)

在Ar下，向來自實例81步驟8之粗製A2(105mg，約0.1mmol)於MeCN(1mL)中之經攪拌懸浮液中添加第三丁基胺(1.5mL)，且將混合物在室溫下攪拌30分鐘。在真空中去除揮發性組份。殘餘物藉由反相製備型HPLC(X-Bridge BEH130 Prep C18)使用於NH₄HCO₃水溶液(10mM)中之25%至40% MeCN洗脫10分鐘純化，得到兩種非對映異構體化合物B3(T_R=6.12min,0.025mmol)及B4(T_R=7.45min,0.021mmol)。

化合物B3：LCMS(ES,m/z)：995.3[M-H]^-。H-NMR(300MHz,CD₃OD)：δ 8.82(s,1H),8.72(s,1H),8.65(s,1H),8.20-8.13(m,2H),7.66-7.54(m,3H),6.47(d,J=14.0Hz,1H),6.09(d,J=8.4Hz,1H),5.96-5.95(m,0.5H),5.81-5.78(m,0.5H),5.52-5.36(m,2H),4.64-4.56(m,2H),4.48-4.43(m,1H),4.37-4.30(m,1H),4.25-4.22(m,1H),4.17-4.10(m,1H),3.98(d,J=11.7Hz,1H),2.65(p,J=6.8Hz,1H),1.12(d,J=6.8Hz,3H),0.98-0.95(m,12H),0.22(d,J=8.0Hz,6H)。³¹P-NMR(121MHz,CD₃OD)：δ 56.96(s),55.90(s)。

化合物B4：LCMS(ES,m/z)：995.4[M-H]^-。H-NMR(300MHz,CD₃OD)：δ 8.97(s,1H),8.68(s,1H),8.24-8.22(m,3H),7.59(ddd,J=14.5,7.9,6.2Hz,3H),6.46(d,J=13.0Hz,1H),5.99(d,J=8.3Hz,1H),5.67-5.57(m,1H),5.45-5.33(m,2H),4.56(dd,J=13.5,4.9Hz,2H),4.47-4.38(m,2H),4.25(t,J=3.5Hz,1H),4.07(d,J=11.3Hz,1H),3.94(d,J=11.0Hz,1H),2.75(p,J=6.8Hz,1H),1.04(d,J=6.8Hz,3H),0.95(s,12H),0.23(d,J=5.2Hz,6H)。³¹P-NMR(121MHz, CD₃OD)：δ 56.81(s),54.76(s)。

步驟2：(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,161R)-7-(2-胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-16-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-15-氟八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2.10-雙(硫醇鹽)2,10-二氧化物

將來自步驟1之化合物B3(25mg,0.025mmol)溶於MeNH₂之EtOH溶液(1mL，30重量%)中，且將混合物在室溫下攪拌12小時。藉由TLC/LCMS監測反應進展。在完成反應之後，在真空中去除揮發性組份，且含有粗產物之殘餘物未經純化即用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：823.25[M+H]⁺。

步驟3：2-胺基-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-2,10,16-三羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體2)

使共蒸發步驟2之粗產物(35mg)與吡啶/Et₃N(v/v,3/1，每次1mL，三次)且然後再溶於吡啶(0.4mL)中。向混合物中裝填Ar及Et₃N (0.34mL,2.4mmol)，且添加三乙胺三氫氟酸鹽(97mg,0.6mmol)。將所得溶液在50℃下升溫6小時。然後，在減壓下濃縮混合物且然後與MeCN(3×1mL)共蒸發。殘餘物藉由反相製備型HPLC(X-Bridge BEH130 Prep C18)使用於NH₄HCO₃水溶液(50mM)中之0至10% MeCN洗脫14分鐘純化，得到產物化合物(T_R=9.2min)。LCMS(ES,m/z)：709.00[M+H]⁺。H-NMR(400MHz,DMF-d ₇+D₂O)：δ 8.68(s,1H),8.61(s,1H),8.45(s,1H),6.57(d,J=14.8Hz,1H),6.27-6.25(m,1.5H),6.15-6.13(m,0.5H),5.72-5.68(m,1H),5.56-5.54(m,1H),4.85-4.83(m,1H),4.71-4.69(m,1H),4.52-4.43(m,4H),4.27-4.24(m,1H)。³¹P-NMR(162MHz,DMF-d ₇+D₂O)：δ 56.03(s),53.37(s)。¹⁹F-NMR(376MHz,DMF-d ₇+D₂O)：δ -205.44(s)。

實例83：2-胺基-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-2,10,16-三羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體3)

步驟1：(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(2-胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-16-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-15-氟八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10-雙(硫醇鹽)2,10-二氧化物

將來自實例82步驟1之化合物B4((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(2-胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-16-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-15-氟八氰-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10-雙(硫醇鹽)2,10-二氧化物，21mg,0.021mmol)溶於MeNH₂之EtOH溶液(1mL，30重量%)中，且將混合物在室溫下攪拌12h。藉由TLC/LCMS監測反應進展。在完成反應之後，在真空中去除揮發性組份，且產物未經純化即用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：823.25[M+H]⁺。

步驟2：2-胺基-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15-氟-2,10,16-三羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體3)

使步驟1粗產物(31mg)與吡啶/Et₃N(v/v,3/1,3×1mL)共蒸發且然後再溶於吡啶(0.4mL)中。向混合物中裝填Ar及Et₃N(0.28mL,2.0mmol)且添加三乙胺三氫氟酸鹽(81mg,0.5mmol)。將所得溶液在50℃下升溫6小時。在減壓下濃縮混合物且然後與MeCN(3×1mL)共蒸發。殘餘物藉由反相製備型HPLC(X-Bridge BEH130 Prep C18)使用於NH₄HCO₃水溶液(50mM)中之0至10% MeCN洗脫14分鐘純化，得到產物化合物(T_R=10.1min)。LCMS(ES,m/z)：709.00[M+H]⁺。H-NMR(400MHz,DMF-d ₇+D₂O)：δ 8.73(s,1H),8.28-8.20(m,2H),6.55(d,J=14.8Hz,1H),6.25-5.85(m,3H),5.62-5.56(m,1H),4.76(s,1H),4.62-4.60(m,2H),4.49-4.41(m,3H),4.18-4.15(m,1H)。³¹P-NMR(162MHz,DMF-d ₇+D₂O)：δ 56.09(s),54.75(s)。¹⁹F-NMR(376MHz,DMF-d ₇+D₂O)：δ -203.33(s)。

根據類似於上文實例77至83中所概述之程序的程序使用適當單體(如製備所闡述或如自商業來源所獲得)以偶合步驟來製備下表5中所展示之實例84至116。

實例117及118：2-胺基-9-[(2R,5R,7R,8S,10R,12aR,14R,15aS,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-16-氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體1)及2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-16-氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體2)

步驟1：膦酸(2R,3S,4R,5R)-5-((((((2R,3S,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)磷基)氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

使((2R,3S,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)四氫呋喃-3-基(2-氰基乙基)二異丙基亞磷醯胺(1058mg,1.234mmol)與無水ACN(3×5mL)共蒸發，在Ar下再溶於ACN(10mL)中，並藉由添加活化4Å分子篩(200mg)進行乾燥。使膦酸(2R,3S,4R,5R)-4-氟-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(430mg,1.03mmol)及2,2,2-三氟乙酸吡啶鎓(298mg,1.54mmol)與ACN(3×5mL)共蒸發且然後再溶於ACN(10mL)中，並藉由添加活化4A分子篩(200mg)進行乾燥。在30分鐘之後，將其添加至先前製得含有((2R,3S,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)四氫呋喃-3-基(2-氰基乙基)二異丙基亞磷醯胺之混合物中。將其在室溫下攪拌30分鐘。反應混合物未經純化即用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：1173.8 [M-H]^-。

步驟2：膦酸(2R,3S,4R,5R)-5-((((((2R,3S,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)硫代磷醯基)氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

向來自步驟1之反應混合物中一次性添加(E)-N,N-二甲基-N'-(3-硫酮-3H-1,2,4-二噻唑-5-基)亞胺代甲醯胺(DDTT,0.232g,1.13mmol)。將混合物在室溫下攪拌1小時。將其濃縮以得到含有產物之粗製試樣，其未經純化即用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：1205.8[M-H]^-。

步驟3：膦酸(2R,3S,4R,5R)-5-((((((2R,3S,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)硫代磷醯基)氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

向來自步驟2之粗製物於CH₂Cl₂(15mL)之溶液中添加水(0.2mL,10mmol)及2,2-二氯乙酸之CH₂Cl₂溶液(0.6M,15mL,9mmol)。在30分鐘之後，添加三乙基矽烷(28mL)，且將其攪拌1.5小時。然後，添加吡啶(1.4mL)。將其濃縮，且殘餘物藉由反相(C18)層析使用於NH₄HCO₃水溶液(5mM)中之0至43% ACN洗脫純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：905.8[M+H]⁺。¹H-NMR(300MHz,CD₃OD)：δ 8.71-8.44(m,2H),8.21-8.03(m,3H),7.80(d,J=10.4Hz,0.5H),7.66-7.61(m,1H),7.54(t,J=7.6Hz,2H),6.61-6.42(m,1H),6.14(dd,J=13.2,6.0Hz,1H),5.68(d,J=9.9Hz,0.5H),5.60-5.19(m,3H),4.69-4.36(m,3H),4.36-4.17(m,3H),3.92-3.64(m,2H),3.13-2.55(m,5H),1.19(dd,J=6.9,2.1Hz,6H)。¹⁹F-NMR(282MHz,CD₃OD)：δ -202.55,-202.75(d,1F)。³¹P-NMR(121MHz,CD₃OD)：δ 66.91,66.69(2s,1P)；2.66,2.60(2s,1P)。

步驟4：(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-2-(2-氰基乙氧基)-16-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-10-醇鹽2-硫化物

在-30℃下，將磷氯酸二苯基酯(2375mg,8.84mmol)添加至吡啶(45ml)中。經20分鐘向-30℃溶液中逐滴添加於CH₂Cl₂(45mL)中之膦酸(2R,3S,4R,5R)-5-((((((2R,3S,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)硫代磷醯基)氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(400mg,0.44mmol)。將所得混合物在-30℃下攪拌40分鐘。反應混合物未經純化即立即用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：887.8[M+H]⁺。

步驟5：(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-2-(2-氰基乙氧基)-16-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-10-醇鹽2,10-二硫化物

向來自步驟4之-30℃混合物中添加3H-苯并[c][1,2]二硫雜環戊烯-3-酮(112mg,0.663mmol)及水(279μL,15.5mmol)。在室溫下攪拌1小時之後，將混合物在0℃下傾倒至Na₂S₂O₃．5H₂O(280mg)於水(10mL)中之溶液中。將其在室溫下攪拌5分鐘，且在減壓下濃縮混合物。殘餘物藉由反相(C18)層析使用於NH₄HCO₃水溶液(5mM)中之0至28% ACN洗脫純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：919.8[M+H]⁺。¹⁹F-NMR(376MHz,CD₃OD)：δ -198.51,-198.98,-200.16(3s,1F)。]⁺。³¹P-NMR(162MHz,CD₃OD)：δ 65.90,65.09,63.64,62.95,57.26,56.50(6s,2P)。

步驟6：非對映異構體(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-16-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10-二醇鹽2,10-二硫化物(28-6-A)、(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-16-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10-二醇鹽2,10-二硫化物(28-6-B)及(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-16-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基1-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10-二醇鹽2,10-二硫化物(28-6-C)

在室溫下，向(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-2-(2-氰基乙氧基)-16-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-10-醇鹽2,10-二硫化物(265mg,0.288mmol)於ACN(5mL)中之溶液中添加第三丁基胺(5mL,0.29mmol)。將反應混合物攪拌10分鐘。然後，在減壓下去除揮發性組份。殘餘物藉由製備型HPLC(T3 Prep管柱，19mm×250mm)使用於NH₄HCO₃水溶液(50mM)中之5至20% ACN洗脫21分鐘純化。

第一分液(T_R：8.95min)得到(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-16-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10-二醇鹽2,10-二硫化物(28-6-A)。LCMS(ES,m/z)：866.7[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d ₆)：δ 8.74(s,1H),8.71(s,1H),8.26(s,1H),8.07(d,J=7.5Hz,1H),7.65(d,J=7.7Hz,1H),7.57(t,J=7.5Hz,2H),6.60-6.34(m,1H), 5.94(d,J=8.6Hz,1H),5.91-5.66(m,1H),5.46-5.16(m,2H),4.50(d,J=27.0Hz,1H),4.27(d,J=9.8Hz,1H),4.16(t,J=10.1Hz,1H),3.98(q,J=11.0Hz,1H),3.86(d,J=11.9Hz,1H),3.72-3.69(m,1H),3.10-3.06(m,1H),3.00-2.82(m,1H),2.74-2.70(m,1H),1.06(dd,J=27.2,6.8Hz,6H)。³¹P-NMR(162MHz,DMSO-d ₆)：δ 53.92(s,1P),52.99(s,1P)。

第二分液(T_R：10.00min)得到(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-16-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10-二醇鹽2,10-二硫化物(28-6-B)。LCMS(ES,m/z)：866.7[M+H]⁺。

第三分液(T_R：11.27-12.16min)得到(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-16-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10-二醇鹽2,10-二硫化物(28-6-C，兩種非對映異構體之混合物)，其用於下一步驟中。LCMS(ES,m/z)：866.7[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d ₆)：δ 8.77(s,1H),8.74(s,1H),8.72(s,1H),8.12-8.02(m,2H),7.66-7.64(m,1H),7.56(t,J=7.5Hz,2H),6.47-6.44(m,1H),5.99(d,J=8.6Hz,1H),5.55-5.33(m,2H),5.22(d,J=11.6Hz,1H),4.47(d,J=25.7Hz,1H),4.43-4.40(m,1H),4.03-3.98(m,2H),3.84(d,J=11.8Hz,1H),3.75-3.72(m,1H),3.18-3.15(m,1H),2.82-2.73(m,2H),1.13(dd,J=6.9,2.5Hz,6H)。³¹P-NMR(162MHz,DMSO)：δ 53.42(s,1P),52.16(s,1P)。

步驟7：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-16-氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃 并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體1及2)

將(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-16-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10-二醇鹽2,10-二硫化物(28-6-C)(180mg,0.208mmol)溶於MeNH₂之EtOH溶液(30%,5.0mL,42mmol)中，且將所得溶液在室溫下攪拌1小時。在減壓下去除揮發性組份以得到粗製試樣，藉由使用於NH₄HCO₃水溶液(50mM)中之5%至19.5% ACN洗脫之製備型HPLC(Atlantis Prep T3 OBD管柱，19mm×250mm)經19分鐘純化以在濃縮之後得到以下產物：

實例117(T_R：14.82min)：2-胺基-9-[(2R,5R,7R,8S,10R,12aR,14R,15aS,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-16-氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體1)。LCMS(ES,m/z)：690.8[M-H]^-。¹H-NMR(400MHz,D₂O)：δ 8.14(s,1H),8.13(s,1H),8.11(s,1H),6.37(t,J=5.5Hz,1H),5.99(d,J=8.7Hz,1H),5.54(d,J=3.3Hz,0.5H),5.48-5.30(m,1.5H),5.12(dd,J=10.2,5.5Hz,1H),4.66(d,J=34.1Hz,1H),4.36(s,1H),4.24-4.01(m,4H),3.04(dt,J=14.1,5.6Hz,1H),2.79(dt,J=13.5,6.4Hz,1H)。¹⁹F-NMR(376MHz,D₂O)：δ -198.66(s,1F)。³¹P- NMR(162MHz,D₂O)：δ 53.97(s,1P),53.46(s,1P)。

實例118(T_R：15.93min)：2-胺基-9-[5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-16-氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-,8-甲烷基呋喃并[3,2-1][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體2)。LCMS(ES,m/z)：690.8[M-H]^-。¹H-NMR(400MHz,D₂O)：δ 8.16(s,1H),8.11(s,1H),7.83(s,1H),6.34(dd,J=6.5,3.0Hz,1H),5.95(d,J=8.6Hz,1H),5.69-5.53(m,1H),5.47(d,J=3.4Hz,0.5H),5.33(d,J=3.4Hz,0.5H),5.23(p,J=7.3Hz,1H),4.64(d,J=26.7Hz,1H),4.35(ddd,J=10.6,6.9,3.2Hz,1H),4.31-4.17(m,2H),4.05-3.95(m,2H),2.94-2.85(m,1H),2.74(dt,J=14.0,7.2Hz,1H)。¹⁹F-NMR(376MHz,D₂O)：δ -198.74(s,1F)。³¹P-NMR(162MHz,D₂O)：δ 55.05(s,1P),52.87(s,1P)。

實例119：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-16-氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體3)

步驟1：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-16-氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌 呤-6-酮

將(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-16-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[（苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10-二醇鹽2,10-二硫化物(28-6-B)(45mg,0.053mmol)溶於MeNH₂之EtOH溶液(30%,1.5mL,11mmol)中，且將所得溶液在室溫下攪拌1小時。在減壓下去除揮發性組份，且殘餘物藉由製備型HPLC(Atlantis Prep T3 OBD管柱，19mm×250mm)使用於NH₄HCO₃水溶液(50mM)中之18%至19.5% ACN洗脫16分鐘純化，得到產物(T_R：11.22min)。LCMS(ES,m/z)：690.8[M-H]^-。¹H-NMR(400MHz,D₂O)：δ 8.32(s,1H),8.15(s,1H),7.96(s,1H),6.41(t,J=5.7Hz,1H),6.00(d,J=8.6Hz,1H),5.56(dt,J=22.9,10.4Hz,1H),5.40-5.30(m,1.5H),5.19(d,J=3.6Hz,0.5H),4.64(d,J=28.3Hz,1H),4.40-4.27(m,2H),4.27-4.17(m,1H),4.02(d,J=11.9Hz,1H),3.95-3.85(m,1H),2.92(dt,J=14.1,5.6Hz,1H),2.79(td,J=13.8,13.1,6.1Hz,1H)。¹⁹F-NMR(376MHz,D₂O)：δ -198.02(s,1F)。³¹P-NMR(162MHz,D₂O)：δ 57.89(s,1P),55.05(s,1P)。

實例120：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-16-氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫- 6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體4)

步驟1：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-16-氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9.11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

將(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-16-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10-二醇鹽2,10-二硫化物(28-6-A)(45mg,0.053mmol)溶於MeNH₂之EtOH溶液(30%,1.5mL,11mmol)中，且將所得溶液在室溫下攪拌1小時。在減壓下去除揮發性組份，且殘餘物藉由製備型HPLC(Atlantis Prep T3 OBD管柱，19mm×250mm)使用於NH₄HCO₃水溶液(50mM)中之4%至11% ACN洗脫17分鐘純化，得到產物(T_R：11.72min)。LCMS(ES,m/z)：690.8[M-H]^-。¹H-NMR(400MHz,D₂O)：δ 8.33(s,1H),8.29(s,1H),8.16(s,1H),6.41(t,J=6.5Hz,1H), 6.05(d,J=8.6Hz,1H),5.49-5.32(m,1.5H),5.23(d,J=3.5Hz,0.5H),4.79-4.73(m,1H),4.69-4.59(m,1H),4.40-4.32(m,1H),4.23(q,J=8.9,7.5Hz,2H),4.07(d,J=11.8Hz,1H),3.94-3.84(m,1H),3.00(dt,J=12.7,6.2Hz,1H),2.94-2.84(m,1H)。¹⁹F-NMR(376MHz,D₂O)：δ -197.92(s,1F)。³¹P-NMR(162MHz,D₂O)：δ 59.46(s,1P),54.42(s,1P)。

實例121、122、123：2-胺基-9-[(2R,5S,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS)-14-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,10-二氧負離子基-2,10-二硫基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體1)及2-胺基-9-[(5S,7R,8R,12aR,14R,15aS)-14-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,10-二氧負離子基-2,10-二硫基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體2及3)

步驟1：膦酸氫(2R,3R,5S)-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

向燒瓶中添加(2R,3R,5S)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基(2-氰基乙基)二異丙基亞磷醯胺(4g,4.76mmol)、MeCN(23.65ml)及水(0.158ml)。然後添加吡啶三氟乙酸酯(1.104g,5.71mmol)，且將混合物在室溫下攪拌1小時，然後添加第三丁基胺(20.02ml,190mmol)。在攪拌1小時之後，在減壓下濃縮混合物。將所得混合物溶於DCM(39.9ml)中，且然後添加水(0.798ml)，隨後添加二氯乙酸(2.75ml,33.3mmol)。將溶液在室溫下攪拌20分鐘，且然後添加三乙基矽烷(133ml,833mmol)，且將反應液在室溫下進一步攪拌2小時。在冷卻至0℃之後，添加吡啶，且在減壓下濃縮混合物。將所得試樣分配於己烷(100mL)與水(20mL)之間。分離各層，且藉由反相HPLC使用於0.04%碳酸氫銨水溶液中之0-35% MeCN之梯度溶劑系統純化水相。收集含產物分液並凍乾以得到膦酸氫(2R,3R,5S)-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯。LCMS(ES,m/z)：400[M-H]^-。

步驟2：(2R,3S,5R)-5-(4-苯甲醯胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)四氫呋喃-3-基(2-氰基乙基)二異丙基亞磷醯胺

向燒瓶中添加N-(7-((2R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-羥基四氫呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲醯胺(4g,6.09mmol)、DCM(71.7ml)及4,5-二氰基咪唑(2.158g,18.27mmol)，且將溶液冷卻至0℃。添加N,N,N',N'-四異丙基二胺基磷酸2-氰基乙基酯(6.77ml,21.32mmol)’且將混合物在0℃下攪拌15分鐘，然後在減壓下濃縮混合物並藉由矽膠層析使用於己烷中之30-100% EtOAc之梯度純化以得到(2R,3S,5R)-5-(4-苯甲醯胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)四氫呋喃-3-基(2-氰基乙基)二異丙基亞磷醯胺。LCMS(ES,m/z)：857[M+H]⁺。

步驟3：膦酸氫(2R,3R,5S)-5-((((((2R,3S,5R)-5-(4-苯甲醯胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)硫代磷醯基)氧基)甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

向含有膦酸氫(2R,3R,5S)-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(1.62g,2.81mmol)之燒瓶中添加吡啶三氟乙酸鹽(0.543g,2.81mmol)、活化4Å篩及MeCN(10mL)，且將混合物在室溫下攪拌20分鐘。向含有(2R,3S,5R)-5-(4-苯甲醯胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)四氫呋喃-3-基(2-氰基乙基)二異丙基亞磷醯胺(2.408g,2.81mmol)之單獨燒瓶中添加MeCN(10mL)及活化4Å篩，且將混合物在室溫下攪拌20分鐘，然後添加膦酸氫酯溶液，且使用MeCN(2×4mL)完成轉移。將混合物在室溫下攪拌1小時，且然後添加((二甲基胺基-亞甲基)胺基)-3H-1,2,4-二噻唑啉-3-硫酮(0.634g,3.09mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌30分鐘且然後在減壓下濃縮。使用於0.04%碳酸氫銨水溶液中之5-100% MeCN之梯度溶劑系統之反相HPLC純化得到膦酸氫(2R,3R,5S)-5-((((((2R,3S,5R)-5-(4-苯甲醯胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)硫代磷醯基)氧基)甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯。LCMS(ES,m/z)：1187[M-H]^-。

步驟4：N-{7-[(5S,7R,8R,12aR,14R,15aS)-2-(2-氰基乙氧基)-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-10-氧離子基-10-硫基-2-硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-14-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}苯甲醯胺

向含有膦酸氫(2R,3R,5S)-5-((((((2R,3S,5R)-5-(4-苯甲醯胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)硫代磷醯基)氧基)甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1H-嘌呤-9(6H)-基)四氫呋喃-3-基酯(1.34g,1.127mmol)之燒瓶中添加DCM(22.54ml)及水(0.203ml,11.27mmol)，且然後添加二氯乙酸(1.116ml,13.52mmol)。將溶液在室溫下攪拌20分鐘，且然後添加三乙基矽烷(28.1ml,176mmol)。在室溫下攪拌3小時之後，在減壓下濃縮混合物。添加吡啶(50mL)，且然後在減壓下濃縮混合物。重複此過程2次，且然後添加吡啶(37.6ml)，隨後添加2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧雜磷雜環己烷2-氧化物(0.624g,3.38mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌1小時，然後添加水(610μl,33.8mmol)，隨後添加3H-1,2-苯并二硫雜環戊烯-3-酮(285mg,1.692mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌30分鐘且然後在減壓下濃縮。使用於100mM三乙基乙酸銨水溶液中之MeCN之梯度溶劑系統之HPLC純化在凍乾之後得到N-{7-[(5S,7R,8R,12aR,14R,15aS)-2-(2-氰基乙氧基)-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-10-氧離子基-10-硫基-2-硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-14-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}苯甲醯胺之3種單獨非對呋異構體，其皆展示LCMS(ES,m/z)：899[M-H]^-。

步驟5：2-胺基-9-[(5S,7R,8R,12aR,14R,15aS)-14-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,10-二氧負離子基-2,10-二硫基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

向含有N-{7-[(5S,7R,8R,12aR,14R,15aS)-2-(2-氰基乙氧基)-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-10-氧離子基-10-硫基-2-硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-14-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}苯甲醯胺(122mg,0.135mmol)之一種非對映異構體(最慢洗脫)之小瓶中添加甲胺(33%於EtOH中)(2mL,16.07mmol)且將所得溶液在室溫下攪拌4小時，然後將其在減壓下濃縮。藉由反相HPLC使用於100mM三乙基乙酸銨水溶液中之MeCN之梯度溶劑系統進行純化可得到實例121：2-胺基-9-[(2R,5S,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS)-14-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,10-二氧負離子基-2,10-二硫基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體1)。LCMS(ES,m/z)：672[M-H]^-。¹H NMR(600MHz,DMSO-d ₆)δ 10.54(s,1H),8.01(s,1H),7.86(s,1H),7.29(d,J=2.7Hz,1H),6.97(s,2H),6.60-6.53(m,3H),6.44(t,J=6.9Hz,1H),5.73(d,J=2.7Hz,1H),4.95(s,1H),4.80(s,1H),4.38-4.27(m,2H),3.97-3.91(m,2H),3.90-3.82(m,1H),3.64(dt,J=16.1,9.3Hz,1H),2.69-2.63(m,1H),2.63(s,12H),2.60-2.54(m,3H),2.22-2.13(m,1H),1.01-0.94(m,18H)。

以類似方式處理來自步驟4之其他非對映異構體可產生of 2-胺基-9-[(5S,7R,8R,12aR,14R,15aS)-14-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,10-二氧負離子基-2,10-二硫基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮之兩種其他非對映異構體：

實例122(非對映異構體2：LCMS(ES,m/z)：672[M-H]^-。¹H NMR(600MHz,DMSO-d ₆)δ 10.57(s,1H),9.55(s,2H),8.10(s,1H),7.95(s,1H),7.47(s,1H),7.42(d,J=3.2Hz,1H),6.66(d,J=3.4Hz,1H),6.51(s,2H),6.49-6.44(m,1H),5.73(d,J=4.0Hz,1H),5.08-5.00(m,2H),4.31-4.27(m,1H),4.22(t,J=11.3Hz,1H),4.07(q,J=10.6Hz,1H),4.00-3.95(m,1H),3.76-3.71(m,1H),3.65(td,J=11.6,6.1Hz,1H),3.02(d,J=4.2Hz,12H),2.67-2.61(m,1H),2.61-2.53(m,2H),2.18(dt,J=11.7,5.3Hz,1H),1.12(t,J=7.3Hz,18H)。

實例123(非對映異構體2：LCMS(ES,m/z)：672[M-H]^-。¹H NMR(600MHz,DMSO-d ₆)δ 10.53(s,1H),8.01(s,3H),7.28(d,J=3.4Hz,1H),6.97(s,2H),6.56(d,J=3.5Hz,1H),6.49(s,2H),6.44(dd, J=8.6,5.8Hz,1H),5.70(d,J=3.9Hz,1H),5.00-4.92(m,1H),4.90-4.83(m,1H),4.33-4.27(m,1H),4.12-3.96(m,4H),3.81(q,J=12.8,11.6Hz,1H),3.69(dd,J=12.0,6.0Hz,2H),2.83-2.77(m,1H),2.64(d,J=37.6Hz,12H),2.23(dt,J=12.8,6.7Hz,1H),1.03-0.92(m,18H)。

實例124、125及126：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,18S)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-18-氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基六氫-14H-15,12a-(環氧甲烷基)-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7(12H)-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體1-3)

步驟1：膦酸(2R,3S,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯苯基酯

在Ar下，向N-(9-((2R,3S,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺(630mg,0.96mmol)於吡啶(5mL)在之溶液中添加膦酸二苯基酯(1.07g,4.56mmol)，且將混合物在室溫下攪拌20分鐘。其未經純化即用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：798.3[M+H]⁺。

步驟2：膦酸(2R,3S,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

在0℃下，向來自步驟1之反應混合物添加水(1mL)、三乙胺(1mL)。將所得混合物在室溫下攪拌20分鐘。然後，將其濃縮，且將殘餘物分配於CH₂Cl₂(50mL)與NaHCO₃水溶液(5%,20mL)之間。使用NaHCO₃水溶液(5%,20mL)洗滌有機層，乾燥(Na₂S₂O₄)，濃縮並藉由矽膠管柱層析使用於CH₂Cl₂(1% Et₃N)中之0-7% MeOH純化以得到產物。LCMS(ES,m/z)：722.2[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)：δ 7.76(s,1H),7.74(s,0.5H),7.51(d,J=1.5Hz,1H),7.48(q,J=2.4,1.9Hz,1H),7.41-7.34(m,4H),7.34-7.27(m,2H),7.26-7.21(m,1H),6.92-6.85(m,4H),6.22(s,1H),6.15(s,0.5H),5.37(d,J=2.7Hz,0.5H),5.28-5.19(m,1.5H),4.73-4.69(m,0.5H),4.66-4.62(m,1H),3.80(s,6H),3.65-3.55(m,1H),3.53-3.44(m,1H),3.12(q,J=7.3Hz,8H),2.75(p,J=6.8Hz,1H),1.33-1.22(m,18H)。³¹P-NMR：(162MHz,CD₃OD)：δ 2.67(s,1P)。

步驟3：膦酸(2R,3S,4S,5R)-4-氟-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

在室溫下，向膦酸(2R,3S,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(540mg,0.64mmol)於CH₂Cl₂(7mL)中之經攪拌溶液中添加水(0.115g,6.4mmol)及2,2-二氯乙酸之CH₂Cl₂溶液(6%,7mL,5.76mmol)。將混合物在室溫下攪拌15分鐘，且然後添加Et₃SiH(15mL)。在40分鐘之後，添加吡啶(0.90mL)，且將混合物攪拌5分鐘。將其濃縮，且殘餘物未經純化即用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：419.9[M+H]⁺。

步驟4：膦酸(2R,3S,4S,5R)-5-((((((1R,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-2,5-二氧雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基)氧基)(2-氰基乙氧基)磷基)氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

使來自步驟3之粗製物與ACN(3×5mL)共蒸發，在Ar下再溶於ACN(3mL)中，並藉由添加活化4Å分子篩(100mg)進行乾燥。使(1R,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-2,5-二氧雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基(2-氰基乙基)二異丙基亞磷醯胺(684.84mg,0.774mmol)與ACN(3×5mL)共蒸發，再溶於ACN(3mL)中，並藉由添加活化4Å分子篩(100mg)進行乾燥。在30分鐘之後，將其添加至先前製得之含有(2R,3S,4S,5R)-4-氟-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基膦酸酯吡啶-1-鎓之混合物中。將所得混合物在室溫下攪拌30分鐘。其然後未經純化即用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：1202.1[M+H]⁺。

步驟5：膦酸(2R,3S,4S,5R)-5-((((((1R,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-2,5-二氧雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基)氧基)(2-氰基乙氧基)硫代磷醯基)氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

向來自步驟4之混合物中添加(E)-N,N-二甲基-N'-(3-硫酮-3H-1,2,4-二噻唑-5-基)亞胺代甲醯胺(144.32mg,0.704mmol)，且將混合物在室溫下攪拌30分鐘。然後，將其濃縮，且粗製物未經純化即用於下一步驟中。LCMS(ES,m/z)：1234.3[M+H]⁺。

步驟6：膦酸(2R,3S,4S,5R)-5-((((((1S,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-(羥甲基)-2,5-二氧雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基)氧基)(2-氰基乙氧基)硫代磷醯基)氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

在室溫下，向來自步驟5之粗製物於CH₂Cl₂(7mL)中之溶液中添加水(120mg,6.4mmol)及2,2-二氯乙酸之CH₂Cl₂溶液(6%,7mL,6mmol)。在5分鐘之後，添加三乙基矽烷(15mL)，且將其再攪拌2小時。然後，添加吡啶(0.9mL)，且將其濃縮。殘餘物藉由反相(C18)層析使用於NH₄HCO₃水溶液(0.04%)中之0至95% ACN洗脫純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：933.9[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)：δ 8.74-8.64(m,1H),8.58-8.52(m,1H),8.16-8.06(m,2H),7.98-7.88(m,1H),7.75(d,J=4.6Hz,0.5H),7.67(t,J=7.3Hz,1H),7.60-7.56(m,2H),6.25-6.22(m,1H),6.19-6.10(m,1H),5.91(s,0.5H),5.46-5.22(m,3H),5.12(d,J=12.4Hz,1H),4.84-4.49(m,3H),4.35(tdd,J=13.2,6.1,3.0Hz,2H),4.14(d,J=8.5Hz,1H),4.11-3.96(m,3H),2.91(dt,J=16.4,6.0Hz,2H),2.81-2.68(m,1H),1.29-1.21(m,6H)。³¹P-NMR：(162MHz,CD₃OD)：δ 67.84,66.33(2 s,1P)；2.65,2.52(2 s,1P)。

步驟7：(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,18S)-2-(2-氰基乙氧基)-18-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}六氫-14H-15,12a-(環氧甲烷基)-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-10(12H)-醇鹽2-硫化物

在-40℃及Ar下，向吡啶(30mL)中添加磷氯酸二苯基酯(1783.7mg,6.64mmol)且然後經20分鐘添加膦酸(2R,3S,4S,5R)-5-((((((1S,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-(羥甲基)-2,5-二氧雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基)氧基)(2-氰基乙氧基)硫代磷醯基)氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(310mg,0.33mmol，與吡啶3×5mL共蒸發)於CH₂Cl₂(30mL)中之溶液。將所得混合物在-40℃下攪拌20分鐘。其未經純化即立即用於下一步驟中。LCMS(ES,m/z)：916.1[M+H]⁺。

步驟8：(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,18S)-2-(2-氰基乙氧基)-18-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}六氫-14H-15,12a-(環氧甲烷基)-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-10(12H)-酯鹽2,10-二硫化物

在-40℃下，向來自步驟7之溶液中添加3H-苯并[c][1,2]二硫雜環戊烯-3-酮(83.6mg,0.498mmol)及水(179mg,9.92mmol)。將混合物在室溫下攪拌40分鐘。然後，將其濃縮，且殘餘物藉由反相(C18)層析使用於NH₄HCO₃水溶液(0.04%)中之0至95% ACN洗脫純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：947.8[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)：δ 8.79-8.58(m,2H),8.18-8.06(m,2H),7.92(d,J=13.5Hz,1H),7.69-7.66(m,1H),7.63-7.54(m,2H),6.40-6.14(m,2H),6.03-5.56(m,1.5H),5.39-5.10(m,2.5H),4.93-4.85(m,2H),4.84-4.43(m,3H),4.43-3.98(m,3H),2.95(t,J=5.9Hz,1H),2.84-2.66(m,2H),1.30-1.19(m,6H)。³¹P-NMR(162MHz,CD₃OD)：δ 66.60-64.98(m,1P),56.95-55.65(m,1P)。

步驟9：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,18S)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-18-氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基六氫-14H-15,12a-(環 氧甲烷基)-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7(12H)-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體1-3)

將(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,18S)-2-(2-氰基乙氧基)-18-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}六氫-14H-15,12a-(環氧甲烷基)-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-10(12H)-醇鹽2,10-二硫化物(260mg,0.27mmol)溶於MeNH₂之EtOH溶液(30%,20mL)中，且將所得溶液在室溫下攪拌3小時。然後，將其濃縮，且殘餘物藉由製備型HPLC(Atlantis Prep RP C18 OBD管柱，19mm×250mm)使用於NH₄HCO₃水溶液(50mM)中之0至14% ACN洗脫25分鐘純化，提供2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aS,18S)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-18-氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基六氫-14H-15,12a-(環氧甲烷基)-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7(12H)-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮之三種非對映異構體：

實例124(T_R：22.52min)：LCMS(ES,m/z)：719.0[M-H]^-。¹H- NMR：(400MHz,D₂O+DCl)：δ 8.71(s,1H),8.26(s,1H),8.09(s,1H),5.73(s,1H),5.65(s,1H),5.22-5.10(m,1H),4.74-4.72(m,2H),4.45(d,J=4.1Hz,1H),4.21-4.11(m,1H),4.05-3.94(m,2H),3.83-3.56(m,2H),3.46(s,2H)。³¹P-NMR：(162MHz,D₂O+DCl)：δ 60.35(s,1P),56.87(s,1P)。

實例125(T_R：15.75min)：LCMS(ES,m/z)：719.0[M-H]^-。¹H-NMR：(400MHz,D₂O)：δ 8.31(s,1H),8.14(s,1H),7.74(s,1H),6.11(s,1H),6.06(s,1H),5.61-5.49(m,1H),5.35(s,1H),5.10(d,J=9.8Hz,1H),4.71-4.55(m,1H),4.51-4.20(m,3H),4.18-3.95(m,4H)。³¹P-NMR：(162MHz,D₂O)：δ 54.87-51.81(m,2P)。

實例126(T_R：13.17min)：LCMS(ES,m/z)：718.8[M-H]^-。¹H-NMR：(300MHz,D₂O+DCl)：δ 8.89(s,1H),8.46(s,1H),8.29(s,1H),5.95(s,1H),5.88(s,1H),5.30-5.14(m,1H),4.98(t,J=5.2Hz,1H),4.89(s,1H),4.60(s,1H),4.35-4.14(m,2H),4.07(d,J=11.4Hz,1H),4.01-3.85(m,2H),3.68-3.62(m,2H)。³¹P-NMR：(121MHz,D₂O+DCl)：δ 60.15(s,1P),56.60(s,1P)。

實例127及128：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15S,15aR,16R)-14-(7-胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體1)及2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15S,15aR,16R)-14-(7-胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體2)

步驟1：膦酸(2R,3R,4S,5R)-5-(7-苯甲醯胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯苯基酯

在0℃及Ar下，經2分鐘向N-(3-((2R,3S,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-氟-4-羥基四氫呋喃-2-基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-7-基)苯甲醯胺(770mg,1.138mmol)於吡啶(5ml)中之經攪拌溶液中添加膦酸二苯基酯(1.33g,5.69mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌20分鐘。其未經純化即直接用於下一反應步驟中。

步驟2：膦酸(2R,3R,4S,5R)-5-(7-苯甲醯胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯

在0℃下，經5分鐘向來自步驟1之反應混合物中添加Et₃N(0.56mL)之水溶液(0.56mL)。將所得混合物在室溫下攪拌30分鐘。將其濃縮，且將殘餘物分配於CH₂Cl₂(60mL)與NaHCO₃水溶液(5%, 24mL)之間。使用NaHCO₃水溶液(5%,2x24mL)洗滌有機層，乾燥(Na₂SO₄)，濃縮，並藉由層析在矽膠上使用於CH₂Cl₂(0.5% Et₃N)中之0-10% MeOH純化以得到產物。LCMS(ES,m/z)：741.2[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)：δ 8.79(s,1H),8.21-8.11(m,2H),7.71(t,J=7.4Hz,1H),7.67-7.58(m,2.5H),7.46-7.37(m,2H),7.30-7.23(m,4H),7.18-7.13(m,2H),7.03(dd,J=6.4,2.8Hz,1H),6.76-6.73(m,2H),6.69-6.65(m,2H),6.04(s,0.5H),5.85(t,J=6.4Hz,0.5H),5.72(t,J=6.4Hz,0.5H),5.60(td,J=16.9,6.9Hz,1H),4.44-4.40(m,1H),3.77-3.68(m,8H),3.57(dd,J=10.6,2.9Hz,1H),2.91(q,J=7.3Hz,18H),1.20(t,J=7.3Hz,27H)。³¹P-NMR：(162MHz,CD₃OD)：δ 2.48(s,1P)。

步驟3：膦酸(2R,3R,4S,5R)-5-(7-苯甲醯胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-氟-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-基酯

向膦酸(2R,3R,4S,5R)-5-(7-苯甲醯胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯(610mg,0.65mmol)於CH₂Cl₂(9.8mL)中之溶液中添加水(0.12g,6.5mmol)及二氯乙酸之CH₂Cl₂溶液(0.6M,9.8mL,5.9mmol)。在30分鐘之後，添加三乙基矽烷(20mL)且再繼續攪拌2小時。然後，添加吡啶(5mL)，且將其濃縮。粗製物未經純化即用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：439.1[M+H]⁺。

步驟4：膦酸(2R,3R,4S,5R)-5-(7-苯甲醯胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-2-((((2-氰基乙氧基)(((2R,3S,4R,5R)-4-氟-5-(羥甲基)-2-(2- 異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基)氧基)磷基)氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯

使共蒸發步驟3之粗產物與無水ACN(3×3mL)，再溶於ACN(3mL)中，並藉由添加活化4Å分子篩(200mg)進行乾燥。使(2R,3S,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基(2-氰基乙基)二異丙基亞磷醯胺(0.824g,0.960mmol)與無水ACN(3×3mL)共蒸發，再溶於ACN(5mL)中，並藉由添加活化4Å分子篩(200mg)進行乾燥。在30分鐘之後，將其添加至先前製得之含有(2R,3R,4S,5R)-5-(7-苯甲醯胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-氟-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-基膦酸酯吡啶-1-鎓之混合物中。將其在室溫下攪拌30分鐘，且反應混合物未經純化即直接用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：893.2[M+H]⁺。

步驟5：非對映異構體膦酸(2R,3R,4S,5R)-5-(7-苯甲醯胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-2-((((2-氰基乙氧基)(((2R,3S,4R,5R)-4-氟-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基)氧基)硫代磷醯基)氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯(116-5-A)及膦酸(2R,3R,4S,5R)-5-(7-苯甲醯胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-2-((((2-氰基乙氧基)(((2R,3S,4R,5R)-4-氟-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基)氧基)硫代磷醯 基)氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯(116-5-B)

在室溫下，向來自步驟4之反應混合物中添加(E)-N,N-二甲基-N'-(3-硫酮-3H-1,2,4-二噻唑-5-基)亞胺代甲醯胺(181mg,0.880mmol)，且將混合物攪拌1小時。然後，將其濃縮，且殘餘物藉由反相(AQ-C18)層析使用於NH₄HCO₃水溶液(5mM)中之0至28% ACN洗脫88分鐘純化。

具有期望質量(T_R=50min)之第一分液得到膦酸(2R,3R,4S,5R)-5-(7-苯甲醯胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-2-((((2-氰基乙氧基)(((2R,3S,4R,5R)-4-氟-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基)氧基)硫代磷醯基)氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯(116-5-A)。LCMS(ES,m/z)：924.9[M+H]⁺。¹H-NMR：(400MHz,CD₃OD)：δ 8.90(s,1H),8.31(s,1H),8.10(d,J=7.8Hz,2H),7.75(s,0.5H),7.69(t,J=7.4Hz,1H),7.57(t,J=7.7Hz,2H),7.02(dd,J=6.5,2.6Hz,1H),6.27-6.13(m,1.5H),5.79-5.51(m,3H),5.47-5.21(m,12H),4.58(dd,J=15.4,7.6Hz,2H),4.50-4.25(m,3H),4.05(ddd,J=24.7,13.2,6.1Hz,2H),3.90-3.76(m,4H),2.85-2.56(m,3H),1.34(d,J=6.5Hz,3H),1.25-1.19(m,3H)。³¹P-NMR(162MHz,CD₃OD)：δ 67.56(s,1P),3.09(s,1P)。

具有期望質量(T_R=55min)之第二分液得到膦酸(2R,3R,4S,5R)-5-(7-苯甲醯胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-2-((((2-氰基乙氧基)(((2R,3S,4R,5R)-4-氟-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基)氧基)硫代磷醯基)氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯(116-5-B)。LCMS(ES,m/z)：925.1[M+H]⁺。¹H-NMR：(400MHz,CD₃OD)：δ 8.87(s,1H),8.33(s,1H),8.16(d,J=7.8Hz,2H),7.75(s,0.5H),7.70(t,J=7.4Hz,1H),7.61(t,J=7.7Hz,2H),6.91(dd,J=6.2,3.4Hz,1H),6.23(d,J=7.1Hz,1H),6.17(s,0.5H),5.74-5.54(m,3H),5.46(d,J=4.6Hz,0.5H),5.33(d,J=4.6Hz,0.5H),4.65-4.24(m,4H),4.15(dt,J=13.0,5.8Hz,2H),3.95-3.75(m,2H),2.90-2.67(m,3H),1.36-1.31(m,3H),1.19(d,J=6.8Hz,3H)。³¹P-NMR：(162MHz,CD₃OD)：δ 67.29(s,1P),3.07(s,1P)。

步驟6：(5R,7R,8S,12aR,14R,15S,15aR,16R)-10-(2-氰基乙氧基)-15,16-二氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{7-[(苯基羰基)胺基]-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2-醇鹽10-硫化物

在-40℃及Ar下，向吡啶(10mL)中添加磷氯酸二苯基酯(628mg,2.34mmol)，且然後經20分鐘添加膦酸(2R,3R,4S,5R)-5-(7-苯甲醯胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-2-((((2-氰基乙氧基)(((2R,3S,4R,5R)-4-氟-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基)氧基)硫代磷醯基)-氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基酯(116-5-B)(110mg,0.105mmol，與吡啶(3×5mL)共蒸發)於CH₂Cl₂(10mL)中之溶液。將其在-40℃下攪拌20分鐘。反應混合物未經純化即立即用於下一步驟中。

步驟7：(5R,7R,8S,12aR,14R,15S,15aR,16R)-10-(2-氰基乙氧基)-15,16-二氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{7-[(苯基羰基)胺基]-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2-醇鹽2,10-二硫化物

在-20℃下，向來自步驟6之混合物中添加3H-苯并[c][1,2]二硫雜環戊烯-3-酮(27.8mg,0.165mmol)及水(42mg,2.3mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌30分鐘。將其濃縮，且殘餘物藉由反相(AQ-C18)層析使用於NH₄HCO₃水溶液(5mM)中之0至28% ACN洗脫純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：938.9[M+H]⁺。¹H-NMR：(400MHz,CD₃OD)：δ 8.94-8.71(m,2H),8.23-8.06(m,2H),7.75-7.67(m,1H),7.64(t,J=7.5Hz,2H),7.11-6.97(m,1H),6.32-6.17(m,2H),6.02-5.73(m,2H),5.68-5.38(m,1H),4.73(d,J=24.3Hz,1H),4.68-4.42(m,4H),4.39-4.19(m,2H),4.06-3.66(m,2H),2.99-2.62(m,2H),2.61-2.37(m,1H),1.20(d,J=6.8Hz,3H),1.12(d,J=6.7Hz,3H)。³¹P-NMR：(162MHz,CD₃OD)：δ 64.05,63.79(2 s,1P)；56.67,56.27(2 s,1P)。

步驟8：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15S,15aR,16R)-14-(7-胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體1及2)

在-60℃，向鋼罐(150mL)中之(5R,7R,8S,12aR,14R,15S,15aR,16R)-10-(2-氰基乙氧基)-15,16-二氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{7-[(苯基羰基)胺基]-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2-醇鹽2,10-二硫化物吡啶鎓中添加氨之異丙醇溶液(50mL)。將反應器緊密密封且然後在50℃下加熱16小時。然後，在減壓下去除揮發性組份，且殘餘物藉由製備型HPLC(Atlantis Prep T3 OBD管柱，19×250mm)使用於NH₄HCO₃水溶液(50mM)中之0至5% ACN洗脫25分鐘純化。

實例127(T_R=17.32min)：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15S,15aR,16R)-14-(7-胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜-環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體1)。LCMS(ES,m/z)：709.8[M-H]^-。¹H-NMR：(400MHz,D₂O)：δ 8.32(s,1H),8.27(s,1H),6.78(dd,J=11.1,4.9Hz,1H),6.07(d,J=8.6Hz,1H),5.81(t,J=4.6Hz,0.5H),5.68(t,J=4.7Hz,0.5H),5.63(dq,J=9.8,5.0Hz,1H),5.58(d,J=3.5Hz,0.5H),5.45(d,J=3.4Hz,0.5H),5.43-5.26(m,1H),4.65-4.63(m,1H),4.56(q,J=5.6Hz,1H),4.31-4.23(m,3H),4.12-4.05(m,1H)。³¹P-NMR：(162MHz,D₂O)：δ 55.76(s,1P),54.26(s,1P)。

實例128(T_R=21.10min)：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15S,15aR,16R)-14-(7-胺基-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜-環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體2)。LCMS(ES,m/z)：709.8[M-H]^-。¹H-NMR：(400MHz,D₂O)：δ 8.26(s,1H),8.01(s,1H),6.79(dd,J=9.4,5.3Hz,1H),6.05(d,J=8.6Hz,1H),5.85(t,J=5.0Hz,0.5H),5.72(t,J=5.0Hz,0.5H),5.65-5.35(m,3H),4.69-4.62(m,1H).4.48(d,J=5.5Hz,1H),4.42(t,J=11.1Hz,1H),4.18(t,J=6.2Hz,2H),4.09-406(m,1H)。³¹P-NMR(162MHz,D₂O)：δ 54.74(s,1P),53.84(s,1P)。

根據類似於上文實例116至127中所概述之程序的程序使用適當單體(如製備所闡述或如自商業來源所獲得)以偶合步驟來製備如下表6中所展示之實例129至243。

實例244、245、246及247：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15S,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體1-3)及2-胺基-9-[(2R,5R,7R,8S,10R,12aR,14R,15S,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體4)

步驟1：膦酸氫(2R,3S,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4S,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)磷基)氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

在氬氣氛及0℃下，將吡咯(0.087mL,1.2mmol)添加至膦酸氫(2R,3S,4R,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯三乙胺鹽(1：2)(0.34g,0.41mmol)於乙腈(3.0mL)中之溶液中。在5分鐘之後，添加TFA(0.096mL,0.14mmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌30分鐘。在0℃下，逐滴添加吡啶(0.13mL,1.7mmol)。然後將反應混合物在0℃下攪拌10分鐘。此時，在氬氣氛及0℃下，經5分鐘向反應混合物中逐滴添加(2R,3R,4S,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基(2-氰基乙基)二異丙基亞磷醯胺(0.48g,0.55mmol)於乙腈(3.0mL)中之混合物。將反應混合物在0℃下攪拌20分鐘且未經進一步處理即立即用於下一步驟中。

步驟2：膦酸氫(2R,3S,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4S,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)硫代磷醯基)氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

在氬氣氛及0℃下，向來自步驟1之粗製反應混合物中添加(E)-N,N-二甲基-N'-(3-硫酮-3H-1,2,4-二噻唑-5-基)亞胺代甲醯胺(0.10g,0.50mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌45分鐘。此時，在氬氣氛及0℃下，向反應混合物中添加1-丙醇(0.31mL,4.13mmol)。然後將反應混合物升溫至環境溫度並攪拌10分鐘。向反應混合物中添加TFA(0.32mL,4.1mmol)，且將反應混合物在環境溫度下攪拌30分鐘。在環境溫度下添加吡啶(0.37mL,4.6mmol)，且將反應混合物攪拌10分鐘。將反應混合物在減壓下濃縮至大約一半體積。然後使用乙酸異丙基酯(20mL)稀釋混合物並在環境溫度下攪拌30分鐘。過濾所得懸浮液。在高真空下過夜乾燥所收集固體以提供膦酸氫(2R,3S,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4S,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)硫代磷醯基)氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯。LCMS(ES,m/z)：922[M-H]^-。

步驟3：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15S,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二 氫-6H-嘌呤-6-酮

使用無水吡啶(2×10mL)將膦酸氫(2R,3S,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4S,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)硫代磷醯基)氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(0.30g,0.33mmol)共沸且然後在高真空下乾燥1小時。在單獨燒瓶中，將磷氯酸二苯基酯(0.34mL,1.6mmol)添加至乙腈(15mL)及吡啶(1.0mL)之混合物中。然後將所得溶液冷卻至-20℃。在-20℃下，經5分鐘時段向此混合物中逐滴添加膦酸氫(2R,3S,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4S,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)硫代磷醯基)氧基)-甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(0.30g,0.33mmol)於吡啶(4.0mL)中之混合物。然後將反應混合物在-20℃下攪拌以用於15分鐘後添加。在-20℃下，然後向反應混合物中添加3H-苯并[c][1,2]二硫雜環戊烯-3-酮(0.066g,0.39mmol)及水(0.12mL,6.5mmol)。將反應混合物逐漸升溫至環境溫度。將反應混合物在環境溫度下攪拌30分鐘。然後將反應混合物在減壓下濃縮至大約四分之一體積。將反應混合物冷卻至0℃，且逐滴添加甲胺(33%於乙醇中)(2.63mL,24mmol)。在完成添加之後，將反應混合物升溫至環境溫度。將反應混合物在環境溫度下攪拌18小時。在減壓下濃縮反應混合物以提供粗產物殘餘物。將粗產物殘餘物共沸(3×30mL乙醇)以提供粗產物。將此材料溶於水(5mL) 及乙腈(1mL)中。藉由質量導向反相HPLC(Waters Sunfire 19×250mm,UV 215/254nm，藉由SIM負MS監測質量709進行餾分觸發；移動相=100mM三乙基乙酸銨水溶液/乙腈梯度，2-30%乙腈，經40分鐘)純化所得混合物以提供2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15S,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮之4種非對映異構體。

實例244：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15S,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體1)T_R=17.7min。LCMS(ES,m/z)：709[M-H]^-。

實例245：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15S,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體2)：T_R=21.9min。LCMS(ES,m/z)：709[M-H]^-。1H NMR(500MHz,DMSO-d ₆)δ 8.32(s,1H),8.21-8.09(m,2H),7.46-7.29(m,2H),6.59-6.43(m,2H),6.40-6.29(m,1H),5.88(d,J=8.8Hz,1H),5.49-5.19(m,4H),4.45-4.32(m,2H),4.10-3.93(m,2H),3.94-3.82(m,1H),3.80-3.68(m,1H)。

實例246：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15S,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體3)：T_R=23.8min。LCMS(ES,m/z)：709[M-H]^-。1H NMR(500MHz,DMSO-d ₆)δ 8.18-8.08(m, 3H),7.41-7.33(m,2H),6.59-6.47(m,2H),6.37-6.27(m,1H),5.84(d,J=8.7Hz,1H),5.52-5.26(m,2H),5.21-5.11(m,1H),4.46-4.35(m,2H),4.19-4.02(m,2H),3.83-3.65(m,2H)。

實例247：2-胺基-9-[(2R,5R,7R,8S,10R,12aR,14R,15S,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體4)：T_R=26.4min。LCMS(ES,m/z)：709[M-H]^-。¹H NMR(500MHz,DMSO-d ₆)δ 8.19-8.07(m,3H),7.41-7.32(m,2H),6.70-6.50(m,2H),6.40-6.29(m,1H),5.85(d,J=8.7Hz,1H),5.33-5.25(m,2H),5.23-5.12(m,1H),4.48-4.35(m,1H),4.33-4.24(m,1H),4.09-3.93(m,2H),3.92-3.81(m,1H),3.83-3.70(m,1H)。

根據類似於上文實例244至247中所概述之程序的程序使用適當單體(如製備所闡述或如自商業來源所獲得)以偶合步驟來製備如下表7中所展示之實例248至256。

根據類似於上文針對實例244至247所闡述之程序的程序使用適當單體核苷(如製備所闡述或如自商業來源所獲得)來製備表8中之實例257至259，其中使用下列額外代表性處理作為最終步驟：將試樣(0.12mmol)溶於水(6mL)中，且將所得混合物施加至管柱中之離子交換樹脂上(DOWEX 50WX2氫形式，100-200網目，1.5g，使用10mL水預洗滌，且然後充填於管柱中，隨後裝載化合物)。在所裝載混合物已完全吸收至管柱上之後，然後使用額外水(10mL)洗滌管柱。凍乾洗脫液以提供產物。

表8

或者，使用類似於上文針對實例81至83所闡述之程序的程序來製備之上文實例117-142、144-152、172、174及244-247。

實例260：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-胺基- 9H-嘌呤-9-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

步驟1：((2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-3-((三乙基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲基(2-氰基乙基)二異丙基亞磷醯胺

在0℃下，向N-(9-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲醯胺(780mg,2.089mmol)於DMF(8mL)及DIPEA(1.116mL,6.39mmol)中之溶液中添加200mg活化分子篩4Å及於1ml無水CH₃CN中之N,N-二異丙基氯胺基磷酸2-氰基乙基酯(572mg,2.343mmol)。將所得混合物在0℃下攪拌5小時；逐滴添加氯三乙基矽烷(401mg,2.66mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌過夜。反應液直接用於下一步驟中。LCMS(ES,m/z)：686[M-H]^-

步驟2：硫代磷酸O-(((2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-3-((三乙基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲基)酯O-((2R,3S,4R,5R)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基)酯O-(2-氰基乙基)酯

向步驟1產物之溶液中添加N-(9-((2R,3S,4S,5R)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)-4-氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺(500mg,1.065mmol)及1H-四唑(895mg,12.78mmol)。將混合物在室溫下攪拌2小時，且添加DDTT(568g,2.77mmol)。將混合物攪拌1小時，然後分配於乙酸乙酯與H₂O之間，藉由Na₂SO₄乾燥，過濾並在真空中濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析使用0-6% MeOH/DCM洗脫純化，得到硫代磷酸O-(((2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-3-((三乙基矽烷基)氧基)四氫呋喃-2-基)甲基)酯O-((2R,3S,4R,5R)-5-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基)酯O-(2-氰基乙基)酯。LCMS(ES,m/z)：1088[M+H]⁺

步驟3：硫代磷酸O-氫O-(((2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)甲基酯O-((2R,3S,4R,5R)-4-氟-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基)酯

向來自步驟3之混合物(520mg)於THF(5mL)中之溶液中添加 TBAF(1.0M於THF中)(1.140mL,1.140mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌2小時且在真空中濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析使用0-8% MeOH/DCM洗脫純化，得到硫代磷酸O-氫O-(((2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)甲基)酯O-((2R,3S,4R,5R)-4-氟-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1H-嘌呤-9(6H)-基)四氫呋喃-3-基)酯。LCMS(ES,m/z)：807[M+H]⁺

步驟4：N-{9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-二氟-2,10-二羥基-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-14-基]-9H-嘌呤-6-基}苯甲醯胺

使用無水CH₃CN(3×10ml)將硫代磷酸O-氫O-(((2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)甲基)酯O-((2R,3S,4R,5R)-4-氟-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1H-嘌呤-9(6H)-基)四氫呋喃-3-基)酯(250mg,0.310mmol)及二異丙基四唑銨(80mg,0.465mmol)共沸並在高真空下乾燥30分鐘。

將上述混合物溶於DMF(1mL)及乙腈(7mL)中並添加200mg活化分子篩4Å及N,N,N',N'-四異丙基二胺基磷酸2-氰基乙基酯(128mg,0.403mmol)於1ml無水CH₃CN中之溶液。將所得混合物在室溫下攪拌30分鐘，隨後添加1H-四唑(109mg,1.550mmol)。將反應置於室溫下保持1小時並添加DDTT(95mg,0.465mmol)。繼續攪拌1小時並在真空中濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析使用0-10% MeOH/含有1% ET₃N之 DCM洗脫純化，得到期望產物。LCMS(ES,m/z)：883[M-H]^-。

步驟5：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

將N-{9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-二氟-2,10-二羥基-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-14-基]-9H-嘌呤-6-基}苯甲醯胺(120mg,0.136mmol)及氨(7.0M，於MeOH)(2ml,14.00mmol)密封於微波管中。將反應混合物加熱至50℃並攪拌4小時。濃縮反應混合物，並使用質量導向反相HPLC(X-Bridge BEH 150 Prep C18)使用含有MeCN及100mM三乙基乙酸銨水溶液之梯度溶劑系統純化以得到期望產物。凍乾產物分液可提供2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]-五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮。LCMS(ES,m/z)：709[M-H]^-。¹H NMR(H₂O-d2,500MHz)：δ_H 8.23(1H,s),8.17(1H,s),7.93(1H,s),6.43(1H,d,J=15.0Hz),6.00(1H,d,J=8.7Hz),5.75(1H,m),5.58(2H,m),5.15(1H,m),4.65(2H,m),4.54(1H,m),4.15-4.30(3H,m)。³¹P NMR：(H₂O-d₂,202MHz)：δ 52.1,52.2。

實例261、262、263：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-14-(4-胺基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-12a-乙炔基-16-氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-1][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體1-3)

步驟1：((2R,3R,4S,5R)-4-(((2-氰基乙氧基)(二異丙基胺基)磷基)氧基)-3-氟-5-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-2-基)甲基(2-氰基乙基)二異丙基亞磷醯胺

向N-(9-((2R,3R,4S,5R)-4-氟-3-羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基)-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-2-基)異丁醯胺(190mg,0.535mmol)及3-((雙(二異丙基胺基)膦基)氧基)丙腈(95%)(373mg,1.176mmol)於DMF(5ml)中之溶液中添加二異丙基四唑銨(137mg,0.802mmol)。將混合物在室溫下攪拌2小時，然後添加1H-四唑(15.77mg,0.225mmol)並繼續攪拌2小時。添加300mg活化分子篩4A且在室溫下繼續攪拌2小時。反應液直接用於下一步驟中。LCMS(ES,m/z)：754[M-H]^-

步驟2：N-{7-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-2,10-雙(2-氰基乙氧基)-12a-乙炔基-16-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-14-基]-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}苯甲醯胺

在-78℃下，向N-(7-((2R,4S,5R)-5-乙炔基-4-羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基)-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲醯胺(180mg,0.454mmol)及Et₃N(0.114mL,0.817mmol)於DMF(4mL)中之溶液中逐滴添加TMS-Cl(0.070mL,0.545mmol)於CH₂Cl₂(1mL)中之溶液。將混合物在-78℃下攪拌20分鐘並在1小時內升溫至0℃，然後添加200mg活化分子篩4Å並在室溫下繼續攪拌2小時。將混合物冷卻至0℃並轉移至步驟1產物(394mg,0.454mmol)(預冷卻至-0℃)之經攪拌溶液中，隨後添加1H-四唑(191mg,2.72mmol)。將混合物逐漸升溫至室溫並在室溫下攪拌2小時。過濾以去除固體。在使用3ml DMF洗滌之後，向合併之濾液中添加額外1H-四唑(191mg,2.72mmol)並在室溫下攪拌過夜。

在完成反應之後，使用乙酸乙酯稀釋反應混合物並連續使用H₂O及鹽水洗滌。藉由無水Na₂SO₄乾燥有機層並藉由使用0-8% MeOH/DCM洗脫之矽膠層析純化以得到具有相同分子量之兩個期望分液。LCMS(ES,m/z)：1014[M+H]⁺

步驟3：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-14-(4-胺基-5-氟- 7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-12a-乙炔基-16-氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

將N-{7-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-2,10-雙(2-氰基乙氧基)-12a-乙炔基-16-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-14-基]-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}苯甲醯胺(來自步驟2之較快分液)(30mg,0.030mmol)及7.0M氨之MeOH溶液(2ml,14.00mmol)密封於微波管中。將混合物加熱至50℃並攪拌8小時。濃縮反應混合物，且使用質量導向反相HPLC(X-Bridge BEH 150 Prep C18)使用含有MeCN及100mM三乙基乙酸銨水溶液之梯度溶劑系統純化產物。凍乾產物分液可提供呈雙-三乙胺鹽形式之2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-14-(4-胺基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-12a-乙炔基-16-氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮。

實例261(非對映異構體1)：LCMS(ES,m/z)：732[M-H]^-。¹H NMR(H₂O-d₂,500MHz)：δ_H 8.32(1H,s),8.08(1H,s),7.05(1H,s),6.70(1H,t,J=6.1Hz),6.08(1H,d,J=8.7Hz),5.71(1H,d,J=53.2Hz),5.47-5.40(1H,m),5.14-5.10(1H,m),4.65(2H,m),4.28(1H, t,J=8.7Hz),4.14-4.02(3H,m),2.85(2H,d,J=6.4Hz)。³¹P NMR：(H₂O-d₂,202MHz)：δ 53.7,54.0。

步驟4：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-14-(4-胺基-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-12a-乙炔基-16-氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

將N-{7-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15aS,16R)-2,10-雙(2-氰基乙氧基)-12a-乙炔基-16-氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-14-基]-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基}苯甲醯胺(來自步驟2之緩慢分液，65mg,0.064mmol)及7.0M氨之MeOH溶液(2ml,14.00mmol)密封於微波管中且加熱至50℃並攪拌8小時。濃縮反應混合物並使用質量導向反相HPLC(X-Bridge BEH 150 Prep C18)使用含有MeCN及100mM三乙基乙酸銨水溶液之梯度溶劑系統純化以在凍乾產物分液之後得到兩種其他非對映異構體。

實例262(非對映異構體2)：LCMS(ES,m/z)：732[M-H]^-。¹H NMR(H₂O-d₂,500MHz)：δ_H 8.09(2H,d,J=3.0Hz),7.19(1H,s),6.74(1H,s),6.08(1H,d,J=8.3Hz),5.63(1H,s),5.53(1H,s),5.35-5.33(1H,m),4.65(2H,m),4.34(1H,d,J=8.8Hz),4.28(1H,t,J=10.3Hz),4.11(1H,d,J=12.1Hz),3.89(1H,dd,J=10.6,4.0Hz),2.85(2H,d,J= 6.4Hz)。³¹P NMR：(H₂O-d₂,202MHz)：δ 54.7,59.8。

實例263(非對映異構體3)：LCMS(ES,m/z)：732[M-H]^-。¹H NMR(H₂O-d₂,500MHz)：δ_H 8.08(1H,s),7.94(1H,s),7.04(1H,s),6.68(1H,s),6.04(1H,d,J=8.6Hz),5.64(1H,s),5.54(1H,d,J=3.3Hz),5.24(1H,d,J=7.7Hz),4.65(2H,m),4.40(1H,d,J=8.2Hz),4.18(1H,dd,J=11.0,5.5Hz),4.09-4.00(2H,m),2.93-2.89(1H,m),2.82(1H,d,J=7.1Hz)。³¹P NMR：(H₂O-d₂,202MHz)：δ 53.1,54.9。

實例264及265：2-胺基-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18S)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,10,18-三羥基-2-氧離子基-10-硫離子基六氫-14H-15,12a-(環氧甲烷基)-5,8-甲烷基映喃并[3,2-l][1,3,9,11,6,2,10]四氧雜硫雜二磷雜環十四炔-7(12H)-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體1)及2-胺基-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18S)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,10,18-三羥基-2-氧離子基-10-硫離子基六氫-14H-15,12a-(環氧甲烷基)-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,9,11,6,2,10]四氧雜硫雜二磷雜環十四炔-7(12H)-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體2)

步驟1：膦酸(2R,3R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫噻吩-3-基酯

向膦酸(2R,3R,4S,5R)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫噻吩-3-基酯(750mg,0.865mmol)於CH₂Cl₂(9mL)中之溶液中添加水(156mg,8.65mmol)及2,2-二氯乙酸之CH₂Cl₂溶液(0.6M,11mL,6.6mmol)。將混合物在室溫下攪拌15分鐘，且然後添加Et₃SiH(4.00mL)。在1小時之後，添加吡啶(1232mg,15.57mmol)，且將其濃縮以得到粗製試樣，其未經純化即用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：548.1[M+H]⁺。

步驟2：膦酸(2R,3R,4S,5R)-5-((((((1R,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-2,5-二氧雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基)氧基)(2-氰基乙氧基)磷基)氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫噻吩-3-基酯

使來自步驟1之粗製試樣與ACN(3×2mL)共蒸發，再溶於ACN(3mL)中，並藉由添加活化4Å分子篩(150mg)進行乾燥。亦使共蒸發(1R,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-2,5-二氧雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基(2-氰基乙基)二異丙基亞磷醯胺(0.843g,0.952mmol)與ACN(3×1mL)，再溶於ACN (3mL)中，並藉由添加活化4Å分子篩(150mg)進行乾燥。在30分鐘之後，將其添加至先前製得之含有(2R,3R,4S,5R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫噻吩-3-基膦酸酯吡啶-1-鎓之混合物中。反應混合物未經純化即用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：1332.1[M+H]⁺。

步驟3：膦酸(2R,3R,4S,5R)-5-((((((1R,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-2,5-二氧雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基)氧基)(2-氰基乙氧基)磷醯基)氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫噻吩-3-基酯

在室溫下，向來自步驟2之反應混合物中添加2-氫過氧基-2-甲基丙烷(0.234g,2.60mmol)，且將其攪拌40分鐘。將其濃縮以得到粗產物，其未經純化即用於下一步驟中。LCMS(ES,m/z)：1347.1[M+H]⁺。

步驟4：膦酸(2R,3R,4S,5R)-5-((((((1S,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-(羥甲基)-2,5-二氧雜雙環[2.2.1]庚烷-7-基)氧基)(2-氰基乙氧基)磷醯基)氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫噻吩-3-基酯

向於CH₂Cl₂(9mL)中之來自步驟3之粗製物中添加水(156mg,8.65mmol)及2,2-二氯乙酸之CH₂Cl₂溶液(0.6N,10mL,6mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌15分鐘。然後，添加三乙基矽烷(4mL,0.21mmol)，且繼續攪拌40分鐘。添加吡啶(1232mg,15.57mmol)。濃縮混合物，且殘餘物藉由反相(C18)層析使用於NH₄HCO₃水溶液(5mM)中之0至95% ACN洗脫純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：1046.3[M+H]⁺。

步驟5：(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18S)-18-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-2-(2-氰基乙氧基)-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}六氫-14H-15,12a-(環氧甲烷基)-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,9,11,6,2,10]四氧雜硫雜二磷雜環十四炔-10(12H)-醇鹽2-氧化物

在-40℃及Ar下，經5分鐘向吡啶(20mL)中添加磷氯酸二苯基酯(1.28g,4.78mmol)。向-40℃溶液中逐滴添加膦酸(2R,3R,4S,5R)-5-((((((1S,3R,4R,7S)-3-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-(羥甲基)-2,5-二氧雜二環[2.2.1]庚烷-7-基)氧基)(2-氰基乙氧基)磷醯基)氧基)甲基)-4- ((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫噻吩-3-基酯(250mg,0.239mmol，與吡啶(3×10mL)共蒸發)於CH₂Cl₂(20mL)中之溶液。將所得混合物在-40℃下攪拌30分鐘。反應混合物未經純化即立即用於下一反應步驟中。LCMS(ES,m/z)：1028.4[M+H]⁺。

步驟6：(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18S)-18-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-2-(2-氰基乙氧基)-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}六氫-14H-15,12a-(環氧甲烷基)-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,9,11,6,2,10]四氧雜硫雜二磷雜環十四炔-10(12H)-醇鹽2-氧化物10-硫化物

在室溫下，向來自步驟5之反應混合物中添加3H-苯并[c][1,2]二硫雜環戊烯-3-酮(121mg,0.717mmol)。在25℃下攪拌40分鐘之後，添加水(431mg,23.9mmol)。在減壓下濃縮反應混合物，且殘餘物藉由反相(C18)層析使用於NH₄HCO₃水溶液(5mM)中之0至95% ACN洗脫純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：1060.3[M+H]⁺。³¹P-NMR：(121MHz,D₂O)δ 54.91,54.61(m,1P),δ-6.08,-6.48(m,1P)。

步驟7：(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18S)-7-(2-胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-18-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}六氫-14H-15,12a-(環氧甲烷基)-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,9,11,6,2,10]四氧雜硫雜二磷雜環十四炔-2,10(12H)-二醇鹽2-氧化物10-硫化物

將(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18S)-18-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-2-(2-氰基乙氧基)-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}六氫-14H-15,12a-(環氧甲烷基)-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,9,11,6,2,10]四氧雜硫雜二磷雜環十四炔-10(12H)-醇鹽2-氧化物10-硫化物(190mg,0.178mmol)溶於甲胺之EtOH溶液(30%,1mL)中，且將所得溶液在室溫下攪拌2小時。然後，將其濃縮以得到含有產物之粗製試樣。LCMS(ES,m/z)：833.2[M+H]⁺。

步驟8：2-胺基-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18S)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,10,18-三羥基-2-氧離子基-10-硫離子基六氫-14H-15,12a-(環氧甲烷基)-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,9,11,6,2,10]四氧雜硫雜二磷雜環十四炔-7(12H)-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

在Ar下，將來自步驟7之粗製物懸浮於吡啶(5mL)中。向混合物中逐滴添加Et₃N(1864mg,18.42mmol)及三乙胺三氫氟酸鹽(742mg,4.60mmol)。將混合物加熱至50℃保持16小時。然後，將其濃縮，且殘餘物藉由製備型HPLC(XBridge Shield RP18 OBD管柱，19×150mm) 使用於NH₄HCO₃水溶液(10mM)中之0至14% ACN洗脫16分鐘純化，以在濃縮之後得到兩種產物。

實例264：2-胺基-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18S)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,10,18-三羥基-2-氧離子基-10-硫離子基六氫-14H-15,12a-(環氧甲烷基)-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,9,11,6,2,10]四氧雜硫雜二磷雜環十四炔-7(12H)-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體1)：T_R：11.00min。LCMS(ES,m/z)：719.0[M+H]⁺。¹H-NMR：(300MHz,D₂O)：δ 8.13(s,1H),7.94(s,1H),7.64(s,1H),6.11-5.97(m,2H),5.92-5.85(m,1H),5.25-5.05(m,1H),4.87(s,1H),4.75(s,2H),4.30-4.21(m,1H),4.12-3.78(m,4H),3.50-3.45(m,1H)。³¹P-NMR：(121MHz,D₂O)δ 52.06(s,1P),δ-0.86(s,1P)

實例265：2-胺基-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18S)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,10,18-三羥基-2-氧離子基-10-硫離子基六氫-14H-15,12a-(環氧甲烷基)-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,9,11,6,2,10]四氧雜硫雜二磷雜環十四炔-7(12H)-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體2)：T_R：12.32min。LCMS(ES,m/z)：719.0[M+H]⁺。¹H-NMR：(300MHz,D₂O)：δ 8.13-8.03(m,2H),7.64(s,1H),6.11-5.97(m,2H),5.92-5.90(m,1H),5.20-5.15(m,1H),4.87-4.75(m,3H),4.33-4.20(m,1H),4.12-4.00(m,2H),3.90-3.78(m,2H),3.45-3.40(m,1H)。³¹P-NMR：(121MHz,D₂O)δ 54.88(s,1P),δ-0.97(s,1P)。

根據類似於上文針對實例264及265所概述之程序的程序使用適當單體核苷(如製備所闡述或如自商業來源所獲得)來製備如下表9中所展示之實例266至272。

實例273及274：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15S,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2-氧離子基-10-硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體1)及2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15S,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2-氧離子基-10-硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體2)

步驟1：膦酸(2R,3S,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4S,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)磷醯基)氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

向含有粗製膦酸(2R,3S,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4S,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)磷基)氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯(步驟1產物，實例244-247，粗製物，假設0.75mmol)之混合物中逐滴添加第三丁基氫過氧化物之癸烷溶液(5.5M,0.48mL,2.6mmol)，且將混合物在室溫下攪拌1小時。然後，將其冷卻至0℃，且緩慢添加Na₂S₂O₃(553mg)之水溶液(2mL)。將混合物在室溫下攪拌5分鐘且然後濃縮以得到產物。LCMS(ES,m/z)：1208.5[M-H]^-。

步驟2：膦酸(2R,3S,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4S,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)磷醯基)氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃-3-基酯

向來自步驟1之粗製物於CH₂Cl₂(10mL)中之溶液中添加水(130mg,7.5mmol)及2,2-二氯乙酸(0.77g,6mmol)之CH₂Cl₂溶液 (10mL)。在20分鐘之後，添加三乙基矽烷(20mL)，且繼續攪拌2小時。添加吡啶(1mL)，且濃縮反應混合物。殘餘物藉由反相(C18)層析使用於NH₄HCO₃水溶液(0.04%)中之0至95% ACN洗脫純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：908.2[M+H]⁺。¹H-NMR：(400MHz,CD₃OD)δ 8.76(d,J=7.7Hz,2H),8.65(s,1H),8.56(s,1H),8.21-8.08(m,6H),7.69(t,J=7.4Hz,2H),7.64-7.50(m,5H),6.67(ddd,J=32.7,14.9,4,4Hz,2H),6,21-6.10(m,2H),5.99-5.91(m,1H),5.64-5.57(m,1H),5.56-5.45(m,3H),5.38(s,3H),4.71-4.54(m,6H),4.47-4.23(m,5H),3.92(d,J=3.8Hz,1H),3.89-3.80(m,2H),2.94(dt,J=31.1,5.9Hz,4H),2.83-2.74(m,2H),1.36-1.19(m,13H),1.12(s,2H)。³¹P-NMR：(162MHz,CD₃OD)δ 2.55,-1.33,-3.09,-3.11,-155.89。

步驟3：(5R,7R,8S,12aR,14R,15S,15aR,16R)-2-(2-氰基乙氧基)-15,16-二氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-10-醇鹽2-氧化物

在Ar下，向吡啶(50mL)中添加二苯基氯磷酸酯(2.66g,9.92mmol)。將其在-40℃下冷卻，且然後經20分鐘逐滴添加膦酸(2R,3S,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4S,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-基)氧基)(2-氰基乙氧基)磷醯基)氧基)甲基)-4-氟-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)四氫呋喃- 3-基酯(450mg,496mmol，與吡啶(3×5mL)共蒸發)於CH₂Cl₂(50mL)中之溶液。將所得混合物在-40℃下攪拌20分鐘。反應混合物未經純化即立即用於下一步驟中。LCMS(ES,m/z)：891.1[M+H]⁺。

步驟4：(5R,7R,8S,12aR,14R,15S,15aR,16R)-2-(2-氰基乙氧基)-15,16-二氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-10-醇鹽2-氧化物10-硫化物

在-40℃下，向步驟3之反應混合物中添加3H-苯并[c][1,2]二硫雜環戊烯-3-酮(32.76mg,0.195mmol)及水(125mg,0.744mmol)。在室溫下攪拌40分鐘之後，在減壓下濃縮反應混合物。殘餘物藉由反相(C18)層析使用於NH₄HCO₃水溶液(0.04%)中之0至95% ACN洗脫純化，得到產物。LCMS(ES,m/z)：922.1[M+H]⁺。¹H-NMR：(400MHz,CD₃OD)δ 8.81-8.73(m,2H),8.63-8.48(m,2H),8.24(s,1H),8.21-8.10(m,5H),7.73-7.56(m,7H),6.83-6.72(m,2H),6.28(d,J=8.6Hz,1H),6.14(d,J=8.5Hz,1H),5.83-5.56(m,4H),5.49(d,J=11.1Hz,1H),4.76-4.46(m,11H),4.37(s,1H),4.29(d,J=6.8Hz,1H),4.18(d,J=10.2Hz,1H),3.04(dd,J=6.5,5.1Hz,4H),2.83-2.68(m,1H),2.06(s,2H),1.23(dd,J=22.5,6.9Hz,9H),1.14-1.05(m,3H)。³¹P-NMR：(162MHz,CD₃OD)δ 62.41,56.84,56.29,-3.14,-3.35,-4.77,-5.06,-60.84。

步驟5：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15S,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2-氧離子基-10-硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體1及2)

將(5R,7R,8S,12aR,14R,15S,15aR,16R)-2-(2-氰基乙氧基)-15,16-二氟-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-14-{6-[(苯基羰基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-10-醇鹽2-氧化物10-硫化物(380mg,0.377mmol)溶於MeNH₂之EtOH溶液(30%,30mL)中，且將所得溶液在室溫下攪拌2小時。然後，將其濃縮，且殘餘物藉由製備型HPLC(XBridge Shield RP18 OBD管柱，19×150mm)使用於NH₄HCO₃水溶液(10mM)中之4至10% ACN洗脫20分鐘純化。

實例273：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15S,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2-氧離子基-10-硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體1)：T_R=10.10min。LCMS(ES,m/z)：693.0[M-H]^-。¹H-NMR：(400MHz,CDCl₃)δ 10.84(d,J=2.4Hz,1H),10.72(s,1H),10.59(d,J=3.9Hz,1H),9.01(dd,J=19.4,3.0Hz,1H),8.56(d,J=8.5Hz,1H),8.14-7.96(m,2H),7.93-7.82(m,1H),7.73(dd,J=12.0,6.5Hz,2H),7.31-7.19(m,2H),7.15(d,J=2.8Hz,1H),6.94-6.74(m,3H),6.71-6.53(m,2H)。³¹P-NMR： (162MHz,D₂O)：δ 62.301(s,1P),0.976(s,1P)。

實例274：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15S,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2-氧離子基-10-硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(非對映異構體2)：T_R：14.27min。LCMS(ES,m/z)：692.9[M-H]^-。¹H-NMR：(400MHz,DMSO-d6)δ 8.31(d,J=11.0Hz,2H),8.18(s,1H),6.40(dd,J=22.6,2.6Hz,1H),5.88(d,J=8.8Hz,1H),5.44(d,J=33.7Hz,2H),5.35-5.23(m,1H),5.24-5.05(m,2H),4.48-4.34(m,1H),4.31(dd,J=10.6,4.5Hz,1H),4.16-3.87(m,3H)。³¹P-NMR：(162MHz,DMSO-d6)：δ 55.096(s,1P),-2.731(s,1P)。

根據類似於上文實例274及275中所概述之程序的程序使用適當單體核苷(如製備所闡述或如自商業來源所獲得)來製備如下表10中所展示之實例275至288。

實例289：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2,10-二硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

步驟1：N-{9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-2-(2-氰基乙氧基)-15,16-二氟-10-羥基-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-2-氧離子基-10-硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-14-基]-9H-嘌呤-6-基}苯甲醯胺

使用無水CH₃CN(3×10ml)將硫代磷酸O-氫O-(((2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-3-羥基四氫呋喃-2-基)甲基)酯O-((2R,3S,4R,5R)-4-氟-5-(羥甲基)-2-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1H-嘌呤-9(6H)-基)四氫呋喃-3-基)酯(步驟3產物，實例261，100mg,0.124mmol)及二異丙基四唑銨(31.8mg,0.186mmol)共沸並在高真空下乾燥30分鐘。

將上述混合物溶於DMF(1mL)及乙腈(7mL)中並添加200mg活性MS 4A及N,N,N',N'-四異丙基二胺基磷酸2-氰基乙基酯(51.1mg,0.161mmol)於1ml無水CH₃CN中之溶液。將所得混合物在室溫下攪拌30分鐘，隨後添加1H-四唑(43.4mg,0.620mmol)。將反應液置於室溫下保持1小時並添加第三丁基氫過氧化物(5.0M於癸烷中)(0.074mL, 0.372mmol)。繼續攪拌1小時並在真空中濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析使用0-8% MeOH/DCM洗脫純化，得到期望產物。LCMS(ES,m/z)：922[M+H]⁺

步驟2：2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2-氧離子基-10-硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

將N-{9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-2-(2-氰基乙氧基)-15,16-二氟-10-羥基-7-{2-[(2-甲基丙醯基)胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基}-2-氧離子基-10-硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-14-基]-9H-嘌呤-6-基}苯甲醯胺(90mg,0.098mmol)及氨(7.0M於MeOH中)(2ml,14.00mmol)密封於微波管中。將混合物加熱至50℃並攪拌4小時。濃縮反應混合物，並使用質量導向反相HPLC(X-Bridge BEH 150 Prep C18)使用含有MeCN及100mM三乙基乙酸銨水溶液之梯度溶劑系統純化以得到三種期望非對映異構體。凍乾產物分液可提供2-胺基-9-[(5R,7R,8S,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15,16-二氟-2,10-二羥基-2-氧離子基-10-硫離子基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮。LCMS(ES,m/z)：693[M-H]^-。¹H NMR(H2O-d2,500MHz)：δ_H 8.23(2H,d,J=5.2Hz),7.81(1H,s),6.42(1H,d,J=14.2Hz),5.99 (1H,d,J=8.6Hz),5.70(1H,m),5.40(2H,m),5.20(1H,m),4.62(2H,m),4.54(1H,s),4.15-4.30(3H,m)。³¹P NMR：(H₂O-d₂,202MHz)：δ-1.6,52.1。

實例290：2-胺基-9-[(2R,5S,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aS)-15-羥基-2,10-二氧負離子基-14-(6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)-2,10-二硫基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-7-基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮

向(2R,5S,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aS)-7-(2-胺基-6-側氧基-1,6-二氫-9H-嘌呤-9-基)-14-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-15-羥基八氫-12H-5,8-甲烷基呋喃并[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]五氧雜二磷雜環十四炔-2,10-雙(硫醇鹽)2,10-二氧化物(實例86，5.0mg,0.0071mmol)中添加磷酸鈉緩衝液(pH 6.8,50mM,0.5mL)及單磷酸腺苷去胺酶(3mg)。將反應混合物攪拌過夜，過濾，並藉由反相HPLC(於NH₄HCO₃水溶液(100mM)中之1-10% MeCN)純化以提供二銨鹽形式在標題化合物。LCMS(ES,m/z)：690[M-H]^-。¹H NMR(500MHz,D₂O)：δ 8.30(s,1H),8.20(s,1H),7.95(s,1H),6.19(s,1H),5.82(d,J=6.0Hz,1H),5.64(m,1H),5.15(m,1H),4.86(d,J=4.5Hz,1H),4.60(m,1H),4.48-4.53(m,2H),4.38(m,1H),4.11(dd,J=11.5,4.0Hz,1H),4.05(m,1H),2.63(m,1H),2.52(m,1H)。³¹P NMR：(202MHz,D₂O)：δ 55.78(s),52.44(s)。

根據類似於上文實例290中所概述之程序的程序自所指示起始化合物(「St.Cmpd.」)來製備如下表11中所展示之實例291至348。

生物評估

藉由在STING生物化學[³H]cGAMP競爭分析(使用HAQ或野生型(WT)STING)中顯示以20uM或更小之EC₅₀結合至STING蛋白質且在THP1細胞分析中在5%或更大發光誘導及30uM下於INF-β分泌中顯示干擾素產生，實例中所闡述之個別化合物可定義為STING促效劑。下述方法闡述該等分析中之每一者。

[ ³ H]-cGAMP合成

向塑膠50mL AMICON管中添加2.3mL含有80mM tris Cl、200mM MgCl₂及20mM NaCl之緩衝溶液，隨後添加0.32mL 10mM GTP水溶液。然後添加[³H]ATP(21Ci/mmol,45mCi)之0.5mL H₂O溶液，隨後添加1mL 1mg/mL DNA溶液(Herring testes活化劑DNA，Sigma，編號D6898)及53uL 47mM cGAS酶溶液。添加額外H₂O以使總體積達到10mL。

將反應液在37℃下攪拌2小時且然後直接添加至Amicon Ultra-15 10K離心管中並在4,000g下旋轉1小時。然後在半製備型Mono Q管柱上使用下列移動相純化所收集溶液：

A：0.05M TrisCl，pH 8.5，使用1M NaOH調節

B：0.05M TrisCl、0.5M pH 8.5 NaCl，使用1M NaOH調節

梯度：在5分鐘內100% A，隨後係在25分鐘內至50：50(A：B)之線性梯度，3mL/min，254nm。

彙集所收集產物分液且使用緩衝液A調節至30mL之總體積。以98.0%之放射化學純度在21.5Ci/mmol之比活性下分離出總產量為15.5mCi之[³H]cGAMP。

cGAS酶

以化學方式合成重組體DNA載體以表現截短之人類cGAS酶(殘基161-522)。為幫助表現及純化，胺基末端含有六組胺酸標籤、SUMO 標籤及TEV裂解位點。使重組體酶過表現於ROSETTA^TM 2(DE3)單一勝任細胞(Novagen)中。使用HIS-Select HF鎳親和凝膠(Sigma)實施親和純化，隨後使用Hi-Load 26/60 SUPERDEX200製備級管柱(GE Healthcare)實施粒徑篩析層析。彙集各分液，濃縮，在液氮中急速冷凍且儲存於-80℃下直至研究應用需要為止。

實例349： ³ H-cGAMP過濾結合分析(HAQ STING)

使用放射性過濾-結合分析藉由與經氚化cGAMP配體競爭人類STING受體膜之能力來量化化合物結合STING之能力。該結合分析採用自過表現內部製備之全長HAQ STING及亦內部純化之經氚化cGAMP配體之粉紋夜蛾(Trichoplusia ni)細胞膜(T.ni；Expression Systems，目標編號94-002F，www.expressionsystems.com)獲得的STING受體。

基本HAQ STING過濾分析方案如下所述：

藉由Hamilton STARPlus CORE在96孔板(Greiner,651201號)中使用1：3十點劑量反應格式連續滴定化合物。在化合物製備之後，藉由在分析緩衝液(1× PBS；Invitrogen SH30028.02號)中稀釋濃縮膜且使用人工組織均質器(Wheaton,357546號)均質化處理7次來製備STING膜(SEQ.ID.No.2)之2.2ug/ml工作濃度。然後將148uL所製備膜人工添加至96孔深孔聚丙烯板(Fisher Scientific,12-566-121號)之每一孔中。在添加膜後，使用Biomek FX向適當孔中添加2uL經滴定測試化合物、DMSO對照(Sigma 276855號)或冷cGAMP對照(內部製備)。然後將化合物及膜在室溫下預培育60分鐘以便化合物結合達到平衡。在平衡後，藉由稀釋至分析緩衝液中來製備8nM[³H]c-GAMP配體，且然後將50uL此工作儲備液人工添加至分析板之每一孔中。然後將板在室溫下培育60分鐘，且然後經由96孔GF/B過濾板(PerkinElmer,6005250號)使用配備有20mM HEPES緩衝液(Fisher Scientific, BP299500號)之TomTec MachIII細胞收穫器過濾每一分析板之內容物。然後使用加壓VWR烘箱將過濾板在55℃下乾燥30分鐘，隨後向每一孔中添加30uL Ultima GoldF閃爍液。然後使用PerkinElmer TopCount讀板儀量測每一反應孔之氚含量。

在正規化至對照之後，藉由量測剩餘放射性之量來計算每一化合物濃度之活性百分比。使用4參數劑量反應方程式擬合活性百分比對log化合物濃度之繪圖以計算EC₅₀值。

最終反應條件如下：

所測試化合物濃度為含有1.0%殘餘DMSO之20.000μM、637.00μM、2.200μM、0.740μM、0.247μM、0.082μM、0.027μM、0.009μM、0.003μM及0.001μM。

全長STING(HAQ)病毒生成

使用昆蟲細胞桿狀病毒系統生成STING病毒。將草地貪夜蛾(Spodoptera frugiperda)Sf21細胞(Kempbio,Inc.)在不含抗生素之Sf-900II SFM培養基(LifeTechnologies 10902088號)中稀釋至5e5個細胞/ml。將細胞懸浮液添加至經處理6孔板之每一孔中(2mL/孔，總共1e6個細胞)，且使細胞黏附至少30分鐘。同時，藉由組合500ng HAQ STING[STING(1-379)R71H,G230A,H232R,R293Q-GG-AviTag-GS-HRV3C-HIS8/pBAC1]DNA(Genewiz custom synthesis)與1mL含有10μL Cellfectin® II試劑(Invitrogen 10362100號)及100ng病毒主鏈RestBac 2.0,v-cath/chiA缺失線性化桿狀病毒DNA(Expression Systems 91-002號)之Sf-900II SFM培養基來彙集1mL共轉染混合物。將轉染混合物培育30分鐘。在培育之後，自6孔板中之黏附細胞輕柔去除培養基，添加1mL轉染混合物(1mL/孔)，且將板置於27℃下之加濕培育器中。第二天，將1mL Sf-900II SFM培養基(無抗生素)添加至6孔板之每一孔中。在添加培養基之後，將細胞與DNA(SEQ.ID.No.3)在27℃下一起培育5-7天以生成P0病毒儲備液。為生成P1病毒儲備液，將0.5mL of P0病毒上清液添加至含有5μg/mL慶大黴素(gentamicin)(Invitrogen 15710072號)之Sf-900II SFM培養基中之50mL未感染Sf21細胞(在感染前一天以5×10⁵個細胞/mL之密度接種以進行一個過夜倍增)中。然後將感染細胞在27℃下培育3天，同時在110rpm下振盪(ATR Biotech Multitron Infors HT AJ118號)。在第3天，使用ViCell XR(Beckman Coulter Life Sciences 383556號)對P1培養液進行計數以證實已發生感染(細胞大小大於未感染細胞

3μm且存活率大約為85-95%)。在50mL圓錐形管中收穫培養液且在4℃下以2000×g離心10分鐘。將P1病毒上清液傾倒至清潔50ml離心管中，且使用剩餘P1細胞糰粒根據內部驗證SOP來生成桿狀病毒感染之昆蟲細胞(BIIC)。內部製備含有Sf-900II SFM培養基(含有10%熱滅活FBS、10% DMSO(Sigma D2650號)及5μg/ml慶大黴素)之冷凍保藏培養基且在即將使用之前經由0.22μM過濾器滅菌。將P1細胞糰粒再懸浮至密度為2e7個細胞/ml且等分至冷凍小瓶中(1mL/小瓶)。將冷凍小瓶置於-80℃下之Mr.Frosty細胞冷凍器O/N中且在第二天轉移至液氮中以用於長期儲存。為生成P2病毒儲備液，將0.5mL的P1病毒上清液添加至含有5μg/mL慶大黴素之Sf-900II SFM培養基中之50mL未感染Sf21細胞(在感染前一天以5×10⁵個細胞/mL之密度接種以進行一個過夜倍增)中。將該等在27℃下培育3天，同時在110rpm下振盪，然後收穫P2儲備液並在4℃下以2000×g離心10分鐘。傾倒掉P2病毒上清液且棄除，同時使用P2 細胞糰粒遵循上述相同方案來生成P2 BIIC。驗證桿狀病毒生成方案以始終以2e9pfu/mL(2e7個細胞/mL×100pfu/細胞)之效價產生P1/P2 BIIC。

全長STING(HAQ)表現

為生成STING膜，藉由將解凍BIIC添加至以1.0×10⁶個細胞/mL之密度接種之Sf21細胞中來過夜擴增P1/P2 BIIC。使用2e9pfu/ml之假設BIIC效價計算用於感染培養液之BIIC之體積以在過夜擴增中達成MOI 10。在過夜培養之後，在ViCell XR上對細胞進行計數以證實已發生感染(細胞大小大於未感染細胞

3μm且存活率大約為80-90%)。基於(100pfu/經感染Sf21細胞)來計算來自過夜擴增且用於感染大規模表現之粉紋夜蛾(T.ni；Expression Systems，目錄號94-002F,www.expressionsystems.com，以1.0×10⁶之密度在MOI=2.0下接種於細胞培養基(ESF921 SFM，含有5μg/mL慶大黴素)中)之經感染Sf21細胞之體積。使細胞在27℃下表現48h，然後，藉由在4℃下以3,400×g離心10分鐘來收穫細胞糰粒。在ViCell XR上對T.ni細胞進行計數以證實已發生感染(細胞大小大於未感染細胞

3μm且存活率大約為80-90%)，然後進行收穫。

全長STING(HAQ)膜生成

緩衝儲備液試劑：

1)1M pH 7.5 HEPES,Teknova，目錄號H1035

2)5M NaCl,Sigma Aldrich，目錄號S5150-1L

3)KCl,Sigma Aldrich，目錄號319309-500ML

4)完全無EDTA蛋白酶抑制劑錠劑，Roche Diagnostics，目錄號11873580001

5)Benzonase,Universal Nuclease,Pierce，目錄號88702

將裂解緩衝液[25mM pH 7.5 HEPES、10mM MgCl₂、20mM KCl, (Benzonase 1：5000，完全蛋白酶抑制劑錠劑/50mL)]以5mL裂解緩衝液/g細胞糰粒添加至表現上文製得之全長STING(HAQ)之細胞糰粒中。再懸浮糰粒且使用Wheaton Dounce均質器均質化處理20次以破壞細胞膜。然後使均質化裂解物通過壓力接近5000PSI之emulsiflex-C5微射流均質機。將再懸浮糰粒在4℃下以36,000rpm(100,000×g)於超高速離心機中之45Ti轉子中離心45分鐘。去除上清液。然後將糰粒以50mL糰粒/離心管之體積再懸浮於洗滌緩衝液[(25mM pH7.5 HEPES、1mM MgCl₂、20mM KCl、1M NaCl(全蛋白酶抑制劑錠劑/50mL)]中。然後在冰上使用玻璃均質器(拍擊20次)將糰粒/洗滌緩衝液混合物均質化，隨後在4℃下以36,000rpm離心45分鐘。去除上清液。再重複洗滌步驟一次。將所得膜再懸浮於20mM pH 7.5 HEPES、500mM NaCl、10%甘油、無EDTA蛋白酶抑制劑(1錠劑/50mL)中。藉由Bradford分析(Bio-Rad Protein Assay，目錄號500-0006)量測蛋白質濃度，且藉由SDS-PAGE測定蛋白質富集並藉由西方印跡(Western blot)予以證實。將再懸浮膜儲存於-80℃下。

全長HAQ STING[STING(1-379)R71H,G230A,H232R,R293Q-GG-AviTag-GS-HRV3C-HIS8]胺基酸序列：

(SEQ.ID. No.2)

全長HAQ[STING(1-379)R71H,G230A,H232R,R293Q-GG-AviTag-GS-HRV3C-HIS8/pBAC1]質體DNA序列：

(SEQ.ID.No.3)

在如上文所闡述之HAQ STING活體外結合分析中評估本發明之某些化合物。下表製表該等化合物之生物數據(以EC₅₀值形式)。

實例350： ³ H-cGAMP過濾結合分析(WT STING)

使用放射性過濾-結合分析藉由與經氚化cGAMP配體競爭人類STING受體膜之能力來量化化合物結合STING之能力。該結合分析採用自過表現內部製備之全長WT STING及亦內部純化之經氚化cGAMP配體之粉紋夜蛾細胞膜(T.ni；Expression Systems，目標編號94- 002F，www.expressionsystems.com)獲得的STING受體。

基本WT STING過濾分析方案如下所述：

藉由稀釋至分析緩衝液中來製備16nM[³H]c-GAMP配體，且將50uL此工作儲備液人工添加至分析板之每一孔中。在添加配體之後，使用Biomek FX向適當孔中添加2uL經滴定測試化合物、DMSO對照(Sigma 276855號)或冷cGAMP對照(內部製備)。在Hamilton STARPlus CORE上於96孔板(Greiner,651201號)中使用1：3十點劑量反應格式來製備連續滴定之化合物。在添加化合物後，藉由在分析緩衝液(1× PBS；Invitrogen SH30028.02號)中稀釋濃縮膜且使用人工組織均質器(Wheaton,357546號)均質化7次來製備STING膜(SEQ.ID.No.4)之2.2ug/ml工作濃度。然後將148uL此製備膜人工添加至96孔深孔聚丙烯板(Fisher Scientific,12-566-121號)之每一孔中。然後將化合物、配體及膜在室溫下培育60分鐘，隨後經由96孔GF/B過濾板(PerkinElmer,6005250號)使用配備有20mM HEPES緩衝液(Fisher Scientific,BP299500號)之TomTec MachIII細胞收穫器過濾每一分析板之內容物。然後使用加壓VWR烘箱將過濾板在55℃下乾燥30分鐘，隨後向每一孔中添加30uL Ultima GoldF閃爍液。然後使用PerkinElmer TopCount讀板儀量測每一反應孔之氚含量。

最終反應條件如下：

測試化合物/DMSO 2 10uM

全長STING(WT)病毒生成

使用昆蟲細胞桿狀病毒系統生成STING病毒。將草地貪夜蛾Sf21細胞(Kempbio,Inc.)在不含抗生素之Sf-900II SFM培養基(LifeTechnologies 10902088號)中稀釋至5e5個細胞/ml。將細胞懸浮液添加至經處理6孔板之每一孔中(2mL/孔，總共1e6個細胞)，且使細胞黏附至少30分鐘。同時，藉由組合500ng WT STING[STING(1-379)H232R-gg-AviTag-gs-HRV3C-HIS8/pBAC1](Genewiz custom synthesis)與1mL含有10μL Cellfectin® II試劑(Invitrogen 10362100號)及100ng病毒主鏈BestBac 2.0,v-cath/chiA缺失線性化桿狀病毒DNA(Expression Systems 91-002號)之Sf-900II SFM培養基來彙集1mL共轉染混合物。將轉染混合物培育30分鐘。在培育之後，自6孔板中之黏附細胞輕柔去除培養基，添加1mL轉染混合物(1mL/孔)，且將板置於27℃下之加濕培育器中。第二天，將1mL Sf-900II SFM培養基(無抗生素)添加至6孔板之每一孔中。在添加培養基之後，將細胞與DNA[(SEQ.ID.No.5)及線性化病毒主鏈BestBac 2.0]在27℃下一起培育5-7天以生成P0病毒儲備液。為生成P1病毒儲備液，將0.5mL of P0病毒上清液添加至含有5μg/mL慶大黴素(Invitrogen 15710072號)之Sf-900II SFM培養基中之50mL未感染Sf21細胞(在感染前一天以5×10⁵個細胞/mL之密度接種以進行一個過夜倍增)中。然後將感染細胞在27℃下培育3天，同時在110rpm下振盪(ATR Biotech Multitron Infors HT AJ118號)。在第3天，使用ViCell XR(Beckman Coulter Life Sciences 383556號)對P1培養液進行計數以證實已發生感染(細胞大小大於未感染細胞

3μm且存活率大約為85-95%)。在50mL圓錐形管中收穫培養液且在4℃下以2000×g離心10分鐘。將P1病毒上清液傾倒至清潔50ml離心管中，且使用剩餘P1細胞糰粒根據內部驗證SOP來生成桿狀病毒感染之昆蟲細胞(BIIC)。內部製備含有Sf-900II SFM培養基(含有10%熱滅活FBS、10% DMSO(Sigma D2650號)及5μg/ml慶大黴素)之冷凍保藏培養基且在即將使用之前經由0.22μM過濾器滅菌。將P1細胞糰粒再懸浮至密度為2e7個細胞/ml且等分至冷凍小瓶中(1mL/小瓶)。將冷凍小瓶置於-80℃下之Mr.Frosty細胞冷凍器O/N中且在第二天轉移至液氮中以用於長期儲存。為生成P2病毒儲備液，將0.5mL of P1病毒上清液添加至含有5μg/mL慶大黴素之Sf-900II SFM培養基中之50mL未感染Sf21細胞(在感染前一天以5×10⁵個細胞/mL之密度接種以進行一個過夜倍增)中。將該等在27℃下培育3天，同時在110rpm下振盪，然後收穫P2儲備液並在4℃下以2000×g離心10分鐘。傾倒掉P2病毒上清液且棄除，同時使用P2細胞糰粒遵循上述相同方案來生成P2 BIIC。驗證桿狀病毒生成方案以始終以2e9pfu/mL(2e7個細胞/mL×100pfu/細胞)之效價產生P1/P2 BIIC。

全長STING(WT)表現

3μm且存活率大約為80-90%)。基於(100pfu/經感染Sf21細胞)來計算來自過夜擴增且用於感染大規模表現之粉紋夜蛾(T.ni；Expression Systems，目錄號94-002F,www.expressionsystems.com，以1.0×10⁶之密度在MOI=2.0下接種於細胞培養基(ESF921 SFM，含有5μg/mL慶大黴素)中)之經感染Sf21細胞之體積。使細胞在27℃下表現48小時，然後，藉由在4℃下以3,400×g離心10分鐘來收穫細胞糰粒。在ViCell XR上對T.ni細胞進行計數以證實已發生感染(細胞大小大於未感染細胞

3μm且存活率大約為80-90%)，然後進行收穫。

全長STING(WT)膜生成

緩衝儲備液試劑：

1)1M pH 7.5 HEPES,Teknova，目錄號H1035

2)5M NaCl,Sigma Aldrich，目錄號S5150-1L

3)KCl,Sigma Aldrich，目錄號319309-500ML

5)Benzonase,Universal Nuclease,Pierce，目錄號88702

將裂解緩衝液[25mM pH 7.5 HEPES、10mM MgCl₂、20mM KCl,(Benzonase 1：5000，完全蛋白酶抑制劑錠劑/50mL)]以5mL裂解緩衝液/g細胞糰粒添加至表現上文製得之全長STING(WT)之細胞糰粒中。再懸浮糰粒且使用Wheaton Dounce均質器均質化處理20次以破壞細胞膜。然後使均質化裂解物通過壓力接近5000PSI之emulsiflex-C5微射流均質機。將再懸浮糰粒在4℃下以36,000rpm(100,000×g)於超高速離心機中之45Ti轉子中離心45分鐘。去除上清液。然後將糰粒以50mL糰粒/離心管之體積再懸浮於洗滌緩衝液[(25mM pH 7.5 HEPES、1mM MgCl₂、20mM KCl、1M NaCl(全蛋白酶抑制劑錠劑/50mL)]中。然後在冰上使用玻璃均質器(拍擊20次)將糰粒/洗滌緩衝液混合物均質化，隨後在4℃下以36,000rpm離心45分鐘。去除上清液。再重複洗滌步驟一次。將所得膜再懸浮於20mM pH 7.5 HEPES、500mM NaCl、10%甘油、無EDTA蛋白酶抑制劑(1錠劑/50mL)中。藉由Bradford分析(Bio-Rad Protein Assay，目錄號500-0006)量測蛋白質濃度，且藉由SDS-PAGE測定蛋白質富集並藉由西方印跡予以證實。將再懸浮膜儲存於-80℃下。

全長STING WT[STING(1-379)H232R-gg-AviTag-gs-HRV3C-HIS8]胺基酸序列：

(SEQ.ID.No.4)

全長WT STING[STING(1-379)H232R-gg-AviTag-gs-HRV3C-HIS8/pBAC1]質體序列：

(SEQ.ID.No.5)

在如上文所闡述之WT STING活體外結合分析中評估本發明之某些化合物。下表製表該等化合物之生物數據(以EC₅₀值形式)。

實例351：THP1細胞培養中之IFN-β分泌(5h)

使用人類IFN-β AlphaLISA套組(Perkin Elmer，目錄編號AL265F)量測化合物刺激干擾素-β自THP1細胞之分泌之能力。基本方案如下所述：

使用Labcyte Echo 550聲學分配器將溶於DMSO中之120nL化合物轉移至空無菌384孔微量板(Corning，目錄編號3712)之孔中。將先前冷凍於恢復培養基(Life Technologies，目錄編號12648-010)中之THP1細胞(美國模式培養物保藏所(American Type Culture Collection)，目錄編號TIB202)解凍且立即在37℃分析培養基(RPMI 1640+L-麩醯胺酸及酚紅，Life Technologies，目錄編號11875-085；0.5%熱滅活胎牛血清，Sigma Aldrich，目錄編號F4135；1mM丙酮酸鈉，Life Technologies，目錄編號11360-070；1×非必需胺基酸；Life Technologies，目錄編號11140-050)稀釋10倍。使用Beckman Coulter V-Cell XR細胞計數器來確定細胞存活率及計數。將細胞懸浮液在室溫下以200×g離心5分鐘。將細胞以0.8×10⁶/mL之密度再懸浮於37℃分析培養基中。隨後使用Matrix電子多通道吸量管或Agilent Bravo自動化液體處理平臺實施液體轉移。

藉由將40μL先前製得之細胞懸浮液分配至含有化合物之板孔中來開始分析。在37℃、5% CO₂下於加濕氣氛中培育5小時之後，將細胞及化合物之板在室溫下200×g離心5分鐘。自每一孔將5μL上清液轉移至白色384孔板(Perkin Elmer，目錄編號6005620)之相應孔中。向該等含上清液孔中添加10μL 5×抗分析物受體珠粒(50μg/mL AlphaLISA HiBlock緩衝液)且在室溫下培育30分鐘，同時在定軌板式振盪器上振盪。向每一孔中添加10μL 5×生物素化抗分析物抗體(5nM於AlphaLISA HiBlock緩衝液中)且於定軌板式振盪器上在室溫下培育60分鐘或在4℃下培育過夜。向每一孔中添加25μL 2× SA-供體珠粒(80μg/mL於AlphaLISA HiBlock緩衝液中)且在室溫下於暗處培育30-45分鐘，同時在定軌板式振盪器上振盪。然後在Perkin Elmer Envision(λ_ex=680nm,λ_em=570nm)上讀取板。基於30uM cGAMP陽性對照及0.3% DMSO陰性對照來計算在每一化合物濃度下AlphaLISA信號之效應百分比。使用4參數濃度反應方程式擬合效應百分比對log化合物濃度之繪圖以計算EC₅₀值。在含有0.3%殘餘DMSO之濃度30000nM、10000nM、3333nM、1111nM、370.4nM、123.4nM、41.2nM、13.7nM、4.6nM及1.5nM下測試測試化合物。在含有0.3%殘餘DMSO之濃度100000nM、33333nM、11111nM、3704nM、1235nM、412nM、137nM、46nM、及15nM下測試對照化合物cGAMP。

如上文所闡述評估本發明化合物之THP1細胞培養液中之IFN-β分泌。下表製表該等化合物之生物數據(以在30μM濃度下相對於2’3’-cGAMP之活化百分比形式)。

應瞭解，各種上文所論述及其他特徵及功能或其替代物可被可期望地組合至諸多其他不同系統或應用中。同樣，熟習此項技術者可隨後作出亦意欲由以下申請專利範圍涵蓋之其中各種目前無法預測或未預料到之替代、修改、變化或改良。

<110> 美商默沙東藥廠

<120> 作為sTING促效劑之環狀雙核苷酸化合物

<130> 24164

<150> 62/204,677

<151> 2015-08-13

<150> 62/268,723

<151> 2015-12-17

<150> 62/356,125

<151> 2016-06-29

<160> 5

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 475

<212> PRT

<213> 未知

<220>

<223> cGAS酶

<400> 1

<210> 2

<211> 414

<212> PRT

<213> 智人

<400> 2

<210> 3

<211> 6482

<212> DNA

<213> 智人

<400> 3

<210> 4

<211> 414

<212> PRT

<213> 智人

<400> 4

<210> 5

<211> 6482

<212> DNA

<213> 智人

<400> 5

Claims

一種式(I')化合物或其醫藥上可接受之鹽，
其中鹼基¹及鹼基²各自獨立地選自由以下組成之群：
、

及
，其中鹼基¹及鹼基²各自可獨立地經0至3個取代基R¹⁰取代，其中各R¹⁰獨立地選自由以下組成之群：F、Cl、I、Br、OH、SH、NH₂、C_1-3烷基、C_3-6環烷基、O(C_1-3烷基)、O(C_3-6環烷基)、S(C_1-3烷基)、S(C_3-6環烷基)、NH(C_1-3烷基)、NH(C_3-6環烷基)、N(C_1-3烷基)₂及N(C_3-6環烷基)₂；Y及Y^a各自獨立地選自由-O-及-S-組成之群；X^a及X^a1各自獨立地選自由O及S組成之群；X^b及X^b1各自獨立地選自由O及S組成之群；X^c及X^c1各自獨立地選自由以下組成之群：OR⁹、SR⁹及NR⁹R⁹；X^d及X^d1各自獨立地選自由O及S組成之群；R¹及R^1a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該R¹及R^1a之C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R²及R^2a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該R²及R^2a之C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、- O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R³係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該R³之C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R⁴及R^4a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該R⁴及R^4a之C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R⁵係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該R⁵之C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN、NR⁹R⁹及N₃；R⁶及R^6a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂- C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該R⁶及R^6a之C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R⁷及R^7a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該R⁷及R^7a之C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R⁸及R^8a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該R⁸及R^8a之C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；各R⁹獨立地選自由以下組成之群：H、C₁-C₂₀烷基、
及
，其中各R⁹之C₁-C₂₀烷基視情況經0至3個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代：OH、-O-C₁-C₂₀烷基、-S-C(O)C₁-C₆烷基及C(O)OC₁-C₆烷基；R^1a及R³視情況連結形成C₁-C₆伸烷基、C₂-C₆伸烯基、C₂-C₆ 伸炔基、-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R^1a及R³連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R³位置；R^2a及R³視情況連結形成C₁-C₆伸烷基、C₂-C₆伸烯基、C₂-C₆伸炔基、-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R^2a及R³連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R³位置；R³及R^6a視情況連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R³及R^6a連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R³位置；R⁴及R⁵視情況連結形成C₁-C₆伸烷基、C₂-C₆伸烯基、C₂-C₆伸炔基、-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R⁴及R⁵連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R⁵位置；R⁵及R⁶視情況連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R⁵及R⁶連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R⁵位置；R⁷及R⁸視情況連結形成C₁-C₆伸烷基、C₂-C₆伸烯基或C₂-C₆伸炔基；且R^7a及R^8a視情況連結形成C₁-C₆伸烷基、C₂-C₆伸烯基或C₂-C₆伸炔基；且限制條件係在Y及Y^a各自係O，且鹼基¹及鹼基²各自選自由
及
組成之群時，R⁵及R³不皆選自由以下組成之群：OH、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，且其中該R⁵之-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基及該R³之-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃。
如請求項1之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中鹼基¹及鹼基²各自獨立地選自由以下組成之群：
、
、
、
、
及
，其中鹼基¹及鹼基²各自可獨立地經0至3個取代基R¹⁰取代，其中各R¹⁰獨立地選自由以下組成之群：F、Cl、I、Br、OH、SH、NH₂、C_1-3烷基、C_3-6環烷基、O(C_1-3烷基)、O(C_3-6環烷基)、S(C_1-3烷基)、S(C_3-6環烷基)、NH(C_1-3烷基)、NH(C_3-6環烷基)、N(C_1-3烷基)₂及N(C_3-6環烷基)₂；Y及Y^a各自獨立地選自由-O-及-S-組成之群；X^a及X^a1各自獨立地選自由O及S組成之群；X^b及X^b1各自獨立地選自由O及S組成之群；X^c及X^c1各自獨立地選自由以下組成之群：OR⁹、SR⁹及NR⁹R⁹；X^d及X^d1各自獨立地選自由O及S組成之群；R¹及R^1a各自係H；R²及R^2a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該R²及R^2a之C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、 Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R³係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該R³之C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R⁴及R^4a各自獨立地選自由以下組成之群：H、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該R⁴及R^4a之C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N3；R⁵係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該R⁵之C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN、NR⁹R⁹及N₃；R³及R⁵不皆選自由以下組成之群：OH、經OH取代之C₁-C₆烷基及經OH取代之C₁-C₆鹵烷基；R⁶及R^6a各自獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基及C₁-C₆鹵烷基，其中該R⁶及R^6a之C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R⁷及R^7a各自係H；R⁸及R^8a各自係H；各R⁹獨立地選自由以下組成之群：H、C₂-C₃烷基、
及
，其中各R⁹之C₂-C₃烷基視情況經1至2個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代： OH、-O-C₁-C₂₀烷基、-S-C(O)C₁-C₆烷基及C(O)OC₁-C₆烷基；R³及R^6a視情況連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基及-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R³及R^6a連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R³位置；且R⁴及R⁵視情況連結形成C₁-C₆伸烷基、-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R⁴及R⁵連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R⁵位置；且限制條件係在Y及Y^a各自係O，且鹼基¹及鹼基²各自選自由
及
組成之群時，R⁵及R³不皆係OH。
如請求項1之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該式(I’)化合物係式(I'b)化合物：
其中鹼基¹及鹼基²各自獨立地選自由以下組成之群：
、

，其中鹼基¹及鹼基²各自可獨立地經0至3個取代基R¹⁰取代，其中各R¹⁰獨立地選自由以下組成之群：F、Cl、I、Br、OH、SH、NH₂、C_1-3烷基、C_3-6環烷基、O(C_1-3烷基)、O(C_3-6環烷基)、S(C_1-3烷基)、S(C_3-6環烷基)、NH(C_1-3烷基)、NH(C_3-6環烷基)、N(C_1-3烷基)₂及N(C_3-6環烷基)₂；X^c及X^c1各自獨立地選自由以下組成之群：OR⁹、SR⁹及NR⁹R⁹；R^1a係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基，其中該R^1a之C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、CN及N₃；R^2a係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、 N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該R^2a之C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I及OH；R³係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該R³之C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I及OH；R⁵係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該R⁵之C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I及OH；R³及R⁵不皆選自由以下組成之群：OH、經OH取代之C₁-C₆烷基及經OH取代之C₁-C₆鹵烷基；R^6a係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基及C₂-C₆炔基；各R⁹獨立地選自由以下組成之群：H、C₂-C₃烷基、
及
，其中各R⁹之C₂-C₃烷基視情況經1至2個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代：OH、-O-C₁-C₂₀烷基、-S-C(O)C₁-C₆烷基及C(O)OC₁-C₆烷基；且R³及R^6a視情況連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基及-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R³及R^6a連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R³位置；且限制條件係在Y及Y^a各自係O，且鹼基¹及鹼基²各自選自由
及
組成之群時，R⁵及R³不皆係OH。
如請求項1之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該式(I’)化合物係式(I'c)化合物：
其中鹼基¹及鹼基²各自獨立地選自由以下組成之群：
、

及
，其中鹼基¹及鹼基²各自可獨立地經0至3個取代基R¹⁰取代，其中各R¹⁰獨立地選自由以下組成之群：F、 Cl、I、Br、OH、SH、NH₂、C_1-3烷基、C_3-6環烷基、O(C_1-3烷基)、O(C_3-6環烷基)、S(C_1-3烷基)、S(C_3-6環烷基)、NH(C_1-3烷基)、NH(C_3-6環烷基)、N(C_1-3烷基)₂及N(C_3-6環烷基)₂；X^c及X^c1各自獨立地選自由以下組成之群：OR⁹、SR⁹及NR⁹R⁹；R³係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該R³之C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I及OH；R⁴係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該R⁴之C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I及OH；R⁵係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該R⁵之C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I及OH；R^6a係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基及C₁-C₆鹵烷基，其中該R^6a之C₁-C₆烷基或C₁-C₆鹵烷基經0至3個選自由以下組成之群之取代基取代：F、Cl、Br、I及OH；各R⁹獨立地選自由以下組成之群：H、C₂-C₃烷基、
及
，其中各R⁹之C₂-C₃烷基視情況經1至2個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代： OH、-O-C₁-C₂₀烷基、-S-C(O)C₁-C₆烷基及C(O)OC₁-C₆烷基；且R⁴及R⁵視情況連結形成C₁-C₆伸烷基、-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，從而若R⁴及R⁵連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，則該O結合於R⁵位置；且限制條件係在Y及Y^a各自係O，且鹼基¹及鹼基²各自選自由
及
組成之群時，R⁵及R³不皆係OH。
一種式(I")化合物或其醫藥上可接受之鹽，
其中鹼基¹及鹼基²各自獨立地選自由以下組成之群：
、
Y係選自由-O-及-S-組成之群；X^c及X^c1各自獨立地選自由OR⁹及SR⁹組成之群；X^d及X^d1各自獨立地選自由O及S組成之群；R^2a係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂- C₆炔基；R³係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基；R⁴係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基；R⁵係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基；R^6a係選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、CN、N₃、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆鹵烷基、C₂-C₆鹵烯基、C₂-C₆鹵炔基、-O-C₁-C₆烷基、-O-C₂-C₆烯基及-O-C₂-C₆炔基；各R⁹獨立地選自由以下組成之群：H、C₁-C₂₀烷基、
及
，其中各R⁹之C₁-C₂₀烷基視情況經0至3個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代：OH、-O-C₁-C₂₀烷基、-S-C(O)C₁-C₆烷基及C(O)OC₁-C₆烷基；且R³及R^6a視情況連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O-C₂-C₆伸烯基及-O-C₂-C₆伸炔基，從而R³及R^6a連結形成-O-C₁-C₆伸烷基、-O- C₂-C₆伸烯基或-O-C₂-C₆伸炔基，該O結合於R³位置。
如請求項1之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係選自由以下組成之群：

及其醫藥上可接受之鹽。
如請求項1之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係選自由以下組成之群：

及其醫藥上可接受之鹽。
如請求項1之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係選自由以下組成之群：

及
，及其醫藥上可接受之鹽。
一種醫藥組合物，該醫藥組合物包括：(a)如請求項1至8中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽；及(b)醫藥上可接受之載劑。