CN110036001B - 作为STING激动剂的苯并[b]噻吩化合物 - Google Patents
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Abstract
提供通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物、和它们的药学可接受的盐，其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8、R9、X1、X2、和X3在本文中定义，其可以用作I型干扰素产生的诱导剂、特别是用作STING活性药剂。还提供公开的化合物的合成和用途。
Description
技术领域
本公开涉及化合物和其衍生物，其可能作为激活STING通路的STING(干扰素刺激基因)激动剂是有用的。本公开还涉及这样的化合物的合成方法和其用途。
参照电子提交的序列表
本申请的序列表经由EFS-Web而以ASCII格式的序列表形式提交，其文件名为“24170_SEQLIST-OCT2017”，生成日为2017年8月24日，大小为25KB。经由EFS-Web而提交的序列表是说明书的一部分，并且以其整体通过参照的方式被并入本文中。
背景技术
免疫系统涉及识别和中和不同类型的威胁，从而维持主体的体内平衡，并且通常被分为两类：获得性和先天性。获得性免疫系统专门将在主体内没有自然表达的那些抗原识别为外来物，并且通过许多白细胞子集的协同作用而启动反抗原应答。获得性免疫应答的标志是其对所遇到的抗原提供“记忆”或持久的免疫的能力。尽管该特异性且持久的效果对于主体健康和存活而言是至关重要的，获得性免疫应答需要时间来产生完全应答。
先天性免疫系统补偿了该时间延迟，并且专门对不同的侵犯和危险信号做出快速反应。其提供了第一线的抗细菌、病毒、寄生虫和其他感染威胁的防御，其也对与细胞或组织损伤相关的特定危险做出强烈应答。先天性免疫系统没有抗原特异性，但对许多效应机制进行应答。调理作用、吞噬作用、补体系统的激活、以及可溶性生物活性分子、如细胞因子或趋化因子的生成均是先天性免疫系统介导其应答的机制。通过应答于上述这些损伤相关的分子模式(DAMP)或病原体相关的分子模式(PAMP)，先天性免疫系统能够对主体提供对宽范围威胁的广泛保护。
这些PAMP和DAMP中，有游离的胞质DNA和RNA。近期已证明，胞质DNA的主要感觉器是CGAS(环状GMP-AMP合成酶)。在识别胞质DNA后，cGAS催化作为与ER-跨膜适配蛋白STING强结合的非典型的第二信使的环二核苷酸2'3'-cGAMP的产生。通过cGAMP-结合的STING而发生构象变化，所述STING易位至细胞核周围的区室，并诱导关键转录因子IRF-3和NF-κb的激活。这导致I型干扰素的强诱导和促炎性细胞因子、如IL-6、TNF-α和0IFN-γ的产生。
已很好地确立了I型干扰素和促炎细胞因子在免疫系统的各种细胞上的重要性。特别地，通过增强树突细胞和巨噬细胞摄取、处理、呈递和交叉呈递抗原给T细胞的能力，这些分子强烈增强T细胞激活。这些抗原呈递送细胞的T细胞刺激能力通过对临界共刺激分子、如CD80或CD86的上调而提高。最后，I型干扰素能与它们的同源受体快速结合，并触发能够显著贡献于获得性免疫细胞激活的干扰素应答基因的激活。
从治疗的观点来看，I型干扰素通过直接抑制人乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒复制，并且通过刺激对病毒感染的细胞的免疫应答，从而显示出具有抗病毒活性。能够诱导I型干扰素产生的化合物被用于疫苗，其中，它们发挥佐剂的作用，其增强了对抗原的特异性免疫应答，并通过减少剂量并拓宽免疫应答而使副作用最小化。
此外，干扰素和能诱导干扰素产生的化合物在治疗人类癌症中具有潜在的用途。这些分子潜在地用作具有多种活性途径的抗癌剂。干扰素可以直接抑制人肿瘤细胞增殖，并与各种被批准的化疗药剂协同。I型干扰素可以通过诱导获得性适应和先天性免疫细胞的激活而显著增强抗肿瘤免疫应答。最后，通过调节与组织重构相关的酶表达，可以通过干扰素来抑制肿瘤侵入。
从I型干扰素和I型干扰素诱导化合物作为抗病毒和抗癌药剂的潜力来看，还存在对能够诱导强效I型干扰素产生的新药剂的需求。随着证明该cGAS-STING胞质DNA感受途径具有显著的诱导类型I型干扰素的能力的数据增长，STING激活剂的研发在当今抗肿瘤治疗背景中快速取得重要的地位。
发明内容
本公开涉及一种新型通式(Ia)的化合物。特别地，本公开涉及一种如本文中所述的化合物，其具有结构通式(Ia)：
或其药学可接受的盐。本公开的实施方案包括通式(Ia)的化合物和其药学可接受的盐、以及通式(Ia)的化合物和其药学可接受的盐的合成和分离。还公开了通式(Ia)的化合物的用途。
本公开还涉及一种新型通式(Ia')的化合物。特别地，本公开涉及一种如本文中所述的化合物，其具有结构通式(Ia')：
或其药学可接受的盐。本公开的实施方案包括通式(Ia')的化合物和其药学可接受的盐、以及通式(Ia')的化合物和其药学可接受的盐的合成和分离。还公开了通式(Ia')的化合物的用途。
本公开还涉及一种新型通式(Ib)的化合物。特别地，本公开涉及一种如本文中所述的化合物，其具有结构通式(Ib)：
或其药学可接受的盐。本公开的实施方案包括通式(Ib)的化合物和其药学可接受的盐、以及通式(Ib)的化合物和其药学可接受的盐的合成和分离。还公开了通式(Ib)的化合物的用途。
本公开还涉及一种新型通式(Ib')的化合物。特别地，本公开涉及一种如本文中所述的化合物，其具有结构通式(Ib')：
或其药学可接受的盐。本公开的实施方案包括通式(Ib')的化合物和其药学可接受的盐、以及通式(Ib')的化合物和其药学可接受的盐的合成和分离。还公开了通式(Ib')的化合物的用途。
此外，本公开涉及如本文中所述的通式(I)的化合物：
或其药学可接受的盐的用途。
此外，本公开涉及如本文中所述的通式(I')的化合物：
或其药学可接受的盐的用途。
本公开的其他实施方案、方面和特征在随后的说明书、实施例和随附的权利要求书中进一步记载，或将根据其而显现。
具体实施方式
本公开包括通式(Ia)的化合物和其药学可接受的盐。这些化合物和它们的药学可接受的盐可以被用作用于诱导免疫应答、用于诱导STING依赖性I型干扰素产生、和/或用于治疗细胞增殖疾病的药剂。
本公开包括通式(Ia')的化合物和其药学可接受的盐。这些化合物和它们的药学可接受的盐可以被用作用于诱导免疫应答、用于诱导STING依赖性I型干扰素产生、和/或用于治疗细胞增殖疾病的药剂。
本公开还包括通式(Ib)的化合物和其药学可接受的盐。这些化合物和它们的药学可接受的盐可以被用作用于诱导免疫应答、用于诱导STING依赖性I型干扰素产生、和/或用于治疗细胞增殖疾病的药剂。
本公开还包括通式(Ib')的化合物和其药学可接受的盐。这些化合物和它们的药学可接受的盐可以被用作用于诱导免疫应答、用于诱导STING依赖性I型干扰素产生、和/或用于治疗细胞增殖疾病的药剂。
此外，本公开包括通式(I)的化合物和其药学可接受的盐的用途。通式(I)的化合物可以被用作用于诱导免疫应答、用于诱导STING依赖性I型干扰素产生、和/或用于治疗细胞增殖疾病的药剂。
此外，本公开包括通式(I')的化合物和其药学可接受的盐的用途。通式(I')的化合物可以被用作用于诱导免疫应答、用于诱导STING依赖性I型干扰素产生、和/或用于治疗细胞增殖疾病的药剂。
第一实施方案涉及通式(Ia)的化合物：
或其药学可接受的盐，其中，R1选自H、卤素、OR6、N(R6)2、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、COOR6、和C(O)N(R6)2；R2选自卤素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、被OR6取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、被OR6取代的C2-C6炔基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、和N(R6)中的环成员的3至6元杂环；R3选自卤素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、被OR6取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、被OR6取代的C2-C6炔基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、和N(R6)中的环成员的3至6元杂环；R4选自H、卤素、OR6、N(R6)2、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、COOR6、和C(O)N(R6)2；R5选自H、卤素、OR6、N(R6)2、CN、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、COOR6、和C(O)N(R6)2；各R6独立地选自H、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基；X1是C(O)；X2是(C(R8)2)(1-3)；各R8独立地选自H、卤素、C1-C6烷基、CN、OR6、N(R6)2、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、和被N(R6)2取代的C1-C6烷基；任选2个R8可以与所连接的原子一起形成3至6元稠环；任选2个R8可以与所连接的原子一起形成3至6元螺环；X3选自COOR6、C(O)SR6、C(S)OR6、SO2R6、和C(O)N(R9)2；并且，各R9独立地选自H、COOR6、和SO2R6；其中，X1-X2-X3是X1-CHR8-X3或X1-CHR8CH2-X3时，R2和R3中的至少一个不是选自卤素、OR6、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。
在第一实施方案的第一方面中，R1选自H、卤素、OR6、N(R6)2、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、COOR6、和C(O)N(R6)2。在该方面的例子中，R1选自H、F、Cl、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基。在该方面的特别的例子中，R1选自H和F。在该方面中，所有其他基团如上述第一实施方案的通式(Ia)中提供。
在第一实施方案的第二方面中，R2选自卤素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、被OR6取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、被OR6取代的C2-C6炔基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、和N(R6)中的环成员的3至6元杂环。在该方面的例子中，R2选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、C2-C3烯基、和N(R6)2。在该方面的特别的例子中，R2选自Br、Cl、CH3、CH2CH3、CH＝CH2、OCH3、和N(R6)2。在该方面中，所有其他基团如上述第一实施方案或者上述第一方面的通式(Ia)中提供。
在第一实施方案的第三方面中，R3选自卤素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、被OR6取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、被OR6取代的C2-C6炔基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、和N(R6)中的环成员的3至6元杂环。在该方面的例子中，R3选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、C2-C3烯基、和N(R6)2。在该方面的特别的例子中，R3选自Br、Cl、CH3、CH2CH3、CH＝CH2、OCH3、和N(R6)2。在该方面中，所有其他基团如上述第一实施方案或者上述第一至第二方面的通式(Ia)中提供。
在第一实施方案的第四方面中，R4选自H、卤素、OR6、N(R6)2、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、COOR6、和C(O)N(R6)2。在该方面的例子中，R4选自H、F、Cl、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基。在该方面的特别的例子中，R4选自H和F。在该方面中，所有其他基团如上述第一实施方案或者上述第一至第三方面的通式(Ia)中提供。
在第一实施方案的第五方面中，R5选自H、卤素、OR6、N(R6)2、CN、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、COOR6、和C(O)N(R6)2。在该方面的例子中，R5选自H、F、Cl、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基。在该方面的特别的例子中，R5是H。在该方面中，所有其他基团如上述第一实施方案或者上述第一至第四方面的通式(Ia)中提供。
在第一实施方案的第六方面中，各R6独立地选自H、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。在该方面的例子中，各R6独立地选自H、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基。在该方面的特别的例子中，各R6独立地选自H和CH3。在该方面中，所有其他基团如上述第一实施方案或者上述第一至第五方面的通式(Ia)中提供。
在第一实施方案的第七方面中，X3选自COOR6、C(O)SR6、C(S)OR6、SO2R6、和C(O)N(R9)2。在该方面的例子中，X3选自COOR6、SO2R6、和C(O)N(R9)2。在该方面的特别的例子中，X3是COOR6。在该方面的还更特别的例子中，X3是COOH。在该方面中，所有其他基团如上述第一实施方案或者上述第一至第六方面的通式(Ia)中提供。
在第一实施方案的第八方面中，各R9独立地选自H、COOR6、和SO2R6。在该方面的例子中，各R9独立地是H。在该方面中，所有其他基团如上述第一实施方案或者上述第一至第七方面的通式(Ia)中提供。
在第一实施方案的第九方面中，X2是(C(R8)2)(1-3)，其中，各R8独立地选自H、卤素、C1-C6烷基、CN、OR6、N(R6)2、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、和被N(R6)2取代的C1-C6烷基；任选2个R8可以与所连接的原子一起形成3至6元稠环；任选2个R8可以与所连接的原子一起形成3至6元螺环。在该方面的第一例子中，X2是CH2CHR8，其中，R8选自H、C1-C3烷基、被OH取代的C1-C3烷基、被OC1-C3烷基取代的C1-C3烷基、和C3-C6环烷基。在该第一例子的特别的情况中，X2是CH2CHR8，其中，R8选自H、CH3、CH2OH、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH(CH3)2、CH2OCH3、和环丙基。在该方面的第二例子中，X2是CHR8CHR8，其中，R8选自H、C1-C3烷基、被OH取代的C1-C3烷基、被OC1-C3烷基取代的C1-C3烷基、和C3-C6环烷基，并且任选2个R8与所连接的原子一起形成3至6元稠环。在该第二例子的特定的情况中，X2是CHR8CHR8，其中，R8选自H和C1-C3烷基，并且任选2个R8与所连接的原子一起形成3至6元稠环。在该方面的第三例子中，X2是CH2C(R8)2，其中，R8选自H、C1-C3烷基、被OH取代的C1-C3烷基、被OC1-C3烷基取代的C1-C3烷基、和C3-C6环烷基，并且任选2个R8与所连接的原子一起形成3至6元螺环。在该第三例子的特定的情况中，X2是CH2C(R8)2，其中，R8选自H和C1-C3烷基，并且任选2个R8与所连接的原子一起形成3至6元螺环。在该方面中，所有其他基团如上述第一实施方案或者上述第一至第八方面的通式(Ia)中提供。
在第一实施方案的第十方面中，R1选自H、F、Cl、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；R2选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、C2-C3烯基、和N(R6)2；R3选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、C2-C3烯基、和N(R6)2；R4选自H、F、Cl、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；R5选自H、F、Cl、OR6、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；各R6独立地选自H、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；X2是CH2CHR8；各R8选自H、C1-C3烷基、被OH取代的C1-C3烷基、被OC1-C3烷基取代的C1-C3烷基、和C3-C6环烷基；并且，X3选自COOR6、SO2R6、和C(O)N(R9)2；其中，X1-X2-X3选自
C(O)-CH2CHR8-COOR6、C(O)-CH2CHR8-SO2R6、和
C(O)-CH2CHR8-C(O)N(R9)2。在该方面的例子中，R1选自H和F；R2选自Br、Cl、CH3、CH2CH3、CH＝CH2、OCH3、和N(R6)2；R3选自Br、Cl、CH3、CH2CH3、CH＝CH2、OCH3、和N(R6)2；R4选自H和F；R5是H；各R6独立地选自H和CH3；X2是CH2CHR8；R8选自H、
CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH(CH3)2、CH2OCH3、和环丙基；并且，X3是COOH；其中，X1-X2-X3是C(O)-CH2CHR8-COOH。在该方面中，所有其他基团如上述第一实施方案的通式(Ia)中提供。
在第一实施方案的第十一方面中，R1选自H、F、Cl、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；R2选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、C2-C3烯基、和N(R6)2；R3选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、C2-C3烯基、和N(R6)2；R4选自H、F、Cl、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；R5选自H、F、Cl、OR6、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；各R6独立地选自H、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；X2是CHR8CHR8；各R8选自H、C1-C3烷基、被OH取代的C1-C3烷基、被OC1-C3烷基取代的C1-C3烷基、和C3-C6环烷基，并且其中任选2个R8与所连接的原子一起形成3至6元稠环；并且，X3选自COOR6、SO2R6、和C(O)N(R9)2；其中，X1-X2-X3选自C(O)-CHR8CHR8-COOR6、C(O)-CHR8CHR8-SO2R6、和C(O)-CHR8CHR8-C(O)N(R9)2。在该方面的例子中，R1选自H和F；R2选自Br、Cl、CH3、CH2CH3、CH＝CH2、OCH3、和N(R6)2；R3选自Br、Cl、CH3、CH2CH3、CH＝CH2、OCH3、和N(R6)2；R4选自H和F；R5是H；各R6独立地选自H和CH3；X2是CHR8CHR8；各R8选自H和C1-C3烷基，并且其中任选2个R8与所连接的原子一起形成3至6元稠环；并且，X3是COOH；其中，X1-X2-X3是C(O)-CHR8CHR8-COOH。在该方面中，所有其他基团如上述第一实施方案的通式(Ia)中提供。
在第一实施方案的第十二方面中，R1选自H、F、Cl、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；R2选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、C2-C3烯基、和N(R6)2；R3选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、C2-C3烯基、和N(R6)2；R4选自H、F、Cl、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；R5选自H、F、Cl、OR6、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；各R6独立地选自H、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；X2是CH2C(R8)2；各R8选自H、C1-C3烷基、被OH取代的C1-C3烷基、被OC1-C3烷基取代的C1-C3烷基、和C3-C6环烷基，并且其中任选2个R8与所连接的原子一起形成3至6元螺环；并且，X3选自COOR6、SO2R6、和C(O)N(R9)2；其中，X1-X2-X3选自C(O)-CH2C(R8)2-COOR6、C(O)-CH2C(R8)2-SO2R6、和C(O)-CH2C(R8)2-C(O)N(R9)2。在该方面的例子中，R1选自H和F；R2选自Br、Cl、CH3、CH2CH3、CH＝CH2、OCH3、和N(R6)2；R3选自Br、Cl、CH3、CH2CH3、CH＝CH2、OCH3、和N(R6)2；R4选自H和F；R5是H；各R6独立地选自H和CH3；X2是CH2C(R8)2；各R8选自H和C1-C3烷基，并且其中任选2个R8与所连接的原子一起形成3至6元螺环；并且，X3是COOH；其中，X1-X2-X3是C(O)-CH2C(R8)2-COOH。在该方面中，所有其他基团如上述第一实施方案的通式(Ia)中提供。
第一实施方案的第十三方面涉及一种药物组合物，所述药物组合物包含(a)根据上述第一实施方案或者上述第一至第十二方面所述的通式(Ia)的化合物或其药学可接受的盐；和，(b)药学可接受的载体。
第一实施方案的第十四方面涉及一种在受试者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第一实施方案或者上述第一至第十二方面所述的通式(Ia)的化合物或其药学可接受的盐。
第一实施方案的第十五方面涉及一种在受试者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第十三方面所述的组合物。
第一实施方案的第十六方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第一实施方案或者上述第一至第十二方面所述的通式(Ia)的化合物或其药学可接受的盐。
第一实施方案的第十七方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第十三方面所述的组合物。
第十八方面中在第一实施方案涉及一种在受试者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第一实施方案或者上述第一至第十二方面所述的通式(Ia)的化合物或其药学可接受的盐.
第十九方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第十三方面所述的组合物。
本文中记载的第一实施方案的各方面中，通式(Ia)以及其多个方面和例子的变量R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8、R9、X1、X2、和X3各自彼此独立地选择，前提是，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8、和R9中的至少一个不是H。
第二实施方案涉及通式(Ia')的化合物：
或其药学可接受的盐，其中，R1选自H、卤素、OR6、N(R6)2、SR6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、被SR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、被OR6取代的C1-C6卤代烷基、被SR6取代的C1-C6卤代烷基、和被N(R6)2取代的C1-C6卤代烷基；R2选自H、卤素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SR6、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、N和N(R6)中的环成员的3至6元杂环，其中，所述C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、和3至6元杂环基团任选被独立地选自CN、OR6、N(R6)2、和SR6中的一个或多个取代基取代，并且其中，所述C3-C6环烷基和3至6元杂环各自进一步任选被C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基中的基团取代；R3选自H、卤素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SR6、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、N和N(R6)中的环成员的3至6元杂环，其中，所述C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、和3至6元杂环基团任选被独立地选自CN、OR6、N(R6)2、和SR6中的一个或多个取代基取代，并且其中，所述C3-C6环烷基和3至6元杂环各自进一步任选被C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基中的基团取代；R4选自H、卤素、OR6、N(R6)2、SR6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、被SR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、被OR6取代的C1-C6卤代烷基、被SR6取代的C1-C6卤代烷基、和被N(R6)2取代的C1-C6卤代烷基；任选R3和R4可以与所连接的原子一起形成包括1至2个选自O、S、N和N(R6)中的环成员的5或6元杂环，其中，所述杂环任选被C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基中的一个或多个基团取代；R5选自H、卤素、OR6、N(R6)2、CN、被OR6取代的C1-C6烷基、被SR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、被OR6取代的C1-C6卤代烷基、被SR6取代的C1-C6卤代烷基、和被N(R6)2取代的C1-C6卤代烷基；各R6独立地选自H、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基，其中，所述C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基任选被OH、O(C1-C3烷基)、和O(C1-C3卤代烷基)取代；X1是C(O)；X2是(C(R8)2)(1-3)；各R8独立地选自H、卤素、CN、OR6、N(R6)2、SR6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、N和N(R6)中的环成员的3至6元杂环，其中，所述C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、和3至6元杂环基团任选被独立地选自CN、OR6、N(R6)2、和SR6中的一个或多个取代基取代，并且其中，所述C3-C6环烷基和3至6元杂环各自进一步任选被C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基中的基团取代；任选不同碳原子上的2个R8可以与所连接的原子一起形成3至6元稠环；任选单个碳原子上的2个R8可以与所连接的原子一起形成3至6元螺环；X3选自COOR6、
C(O)SR6、C(S)OR6、SO2R6、和C(O)N(R9)2；并且，各R9独立地选自H、COOR6、和SO2R6；其中，当X1-X2-X3是X1-CHR8-X3或X1-CHR8CH2-X3时，R2和R3中的至少一个不是选自卤素、OR6、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。
在第二实施方案的第一方面中，R1选自H、卤素、OR6、N(R6)2、SR6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、被SR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、被OR6取代的C1-C6卤代烷基、被SR6取代的C1-C6卤代烷基、和被N(R6)2取代的C1-C6卤代烷基。在该方面的例子中，R1选自H、F、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基。在该方面的特别的例子中，R1选自H和F。在该方面中，所有其他基团如上述第二实施方案的通式(Ia')中提供。
在第二实施方案的第二方面中，R2选自H、卤素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SR6、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、N和N(R6)中的环成员的3至6元杂环，其中，所述C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、和3至6元杂环基团任选被独立地选自CN、OR6、N(R6)2、和SR6中的一个或多个取代基取代，并且其中，所述C3-C6环烷基和3至6元杂环各自进一步任选被C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基中的基团取代。在该方面的例子中，R2选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、OC1-C3卤代烷基、OH、C2-C3烯基、C2-C3炔基、N(C1-C3烷基)2、NH(C1-C3烷基)、和SC1-C3烷基。在该方面的特别的例子中，R2选自Br、Cl、F、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH2CH2F、CH＝CH2、C≡CH、OH、OCH3、OCH2CH3、OCHF2、SCH3、和NHCH3。在该方面中，所有其他基团如上述第二实施方案的或者上述第一方面的通式(Ia')中提供。
在第二实施方案的第三方面中，R3选自H、卤素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SR6、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、N和N(R6)中的环成员的3至6元杂环，其中，所述C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、和3至6元杂环基团任选被独立地选自CN、OR6、N(R6)2、和SR6中的一个或多个取代基取代，并且其中，所述C3-C6环烷基和3至6元杂环各自进一步任选被C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基中的基团取代。在该方面的例子中，R3选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、OC1-C3卤代烷基、OH、C2-C3烯基、C2-C3炔基、N(C1-C3烷基)2、NH(C1-C3烷基)、和SC1-C3烷基。在该方面的特别的例子中，R3选自Br、Cl、F、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH2CH2F、CH＝CH2、C≡CH、OH、OCH3、OCH2CH3、OCHF2、SCH3、和NHCH3。在该方面中，所有其他基团如上述第二实施方案或者上述第一至第二方面的通式(Ia')中提供。
在第二实施方案的第四方面中，R4选自H、卤素、OR6、N(R6)2、SR6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、被SR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、被OR6取代的C1-C6卤代烷基、被SR6取代的C1-C6卤代烷基、和被N(R6)2取代的C1-C6卤代烷基。在该方面的例子中，R4选自H、F、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基。在该方面的特别的例子中，R4选自H和F。在该方面中，所有其他基团如上述第二实施方案或者上述第一至第三方面的通式(Ia')中提供。
在第二实施方案的第三和第四方面的一些例子中，R3和R4与所连接的原子一起形成包括1至2个选自O、S、N和N(R6)中的环成员的5或6元杂环，其中，所述杂环任选被C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基中的一个或多个基团取代。在第一此类例子中，R3和R4与所连接的原子一起形成包括1至2个选自O、S、和N中的环成员的稠合5元杂环，并且杂环任选被一个或多个C1-C3烷基取代。在第二此类例子中，R3和R4与所连接的原子一起形成包括1至2个选自O和N中的环成员的稠合5元杂环，并且杂环任选被CH3取代。在此类例子中，所有其他基团如上述第二实施方案的通式(Ia')中提供。
在第二实施方案的第五方面中，R5选自H、卤素、OR6、N(R6)2、CN、被OR6取代的C1-C6烷基、被SR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、被OR6取代的C1-C6卤代烷基、被SR6取代的C1-C6卤代烷基、和被N(R6)2取代的C1-C6卤代烷基。在该方面的例子中，R5选自H、F、Cl、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基。在该方面的特别的例子中，R5选自H和Cl。在该方面中，所有其他基团如上述第二实施方案或者上述第一至第四方面的通式(Ia')提供。
在第二实施方案的第六方面中，各R6独立地选自H、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基，其中，所述C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基任选被OH、O(C1-C3烷基)、O(C1-C3卤代烷基)取代。在该方面的例子中，各R6独立地选自H、C1-C4烷基、和C1-C4卤代烷基。在该方面中，所有其他基团如上述第二实施方案或者上述第一至第五方面的通式(Ia')中提供。
在第二实施方案的第七方面中，X3选自COOR6、
C(O)SR6、C(S)OR6、SO2R6、和C(O)N(R9)2。在该方面的例子中，X3选自COOR6、
SO2R6、和C(O)N(R9)2。在该方面的特别的例子中，X3选自COOR6和
在该方面的还更特别的例子中，X3选自COOH、COOC(CH3)3、和
在该方面中，所有其他基团如上述第二实施方案或者上述第一至第六方面的通式(Ia')中提供。
在第二实施方案第八方面中，各R9独立地选自H、COOR6、和SO2R6。在该方面的例子中，各R9独立地是H。在该方面中，所有其他基团如上述第二实施方案或者上述第一至第七方面的通式(Ia')中提供。
在第二实施方案的第九方面中，X2是(C(R8)2)(1-3)，其中，各R8独立地选自H、卤素、CN、OR6、N(R6)2、SR6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、N和N(R6)中的环成员的3至6元杂环，其中，所述C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、和3至6元杂环基团任选被独立地选自CN、OR6、N(R6)2、和SR6中的一个或多个取代基取代，并且其中，所述C3-C6环烷基和3至6元杂环各自进一步任选被C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基中的基团取代。在该方面的第一例子中，X2是CH2CHR8，其中，R8选自H、C1-C4烷基、被OH取代的C1-C4烷基、被OC1-C4烷基取代的C1-C4烷基、和C3-C6环烷基。在该第一例子的特别的情况中，X2是CH2CHR8，其中，R8选自H、CH3、CH2OH、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH(CH3)2、CH2OCH3、和环丙基。在该方面的第二例子中，X2是CHR8CHR8，其中，R8选自H、C1-C4烷基、被OH取代的C1-C4烷基、被OC1-C4烷基取代的C1-C4烷基、和C3-C6环烷基，并且任选2个R8与所连接的原子一起形成3至6元稠环。在该第二例子的特定的情况中，X2是CHR8CHR8，其中，R8选自H和C1-C4烷基，并且任选2个R8与所连接的原子一起形成3至6元稠环。在该第二例子的特定的情况中，X2是CHR8CHR8，其中，2个R8与所连接的原子一起形成3元稠环。在该方面的第三例子中，X2是CH2C(R8)2，其中，R8选自H、OH、C1-C4烷基、被OH取代的C1-C4烷基、被OC1-C4烷基取代的C1-C4烷基、和C3-C6环烷基，并且任选2个R8与所连接的原子一起形成3至6元螺环。在该第三例子的特定的情况中，X2是CH2C(R8)2，其中，R8选自H、OH、和CH3。在该第三例子的额外的情况中，X2是CH2C(R8)2，其中，2个R8与所连接的原子一起形成3至6元螺环。在该方面中，所有其他基团如上述第二实施方案或者上述第一至第八方面的通式(Ia')中提供。
在第二实施方案的第十方面中，R1选自H、F、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；R2选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、OC1-C3卤代烷基、OH、C2-C3烯基、C2-C3炔基、N(C1-C3烷基)2、NH(C1-C3烷基)、和SC1-C3烷基；R3选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、OC1-C3卤代烷基、OH、C2-C3烯基、C2-C3炔基、N(C1-C3烷基)2、NH(C1-C3烷基)、和SC1-C3烷基；R4选自H、F、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；R5选自H、F、Cl、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；各R6独立地选自H、C1-C4烷基、和C1-C4卤代烷基；
X1是C(O)；X2是CH2CHR8；X3选自COOR6、
SO2R6、和C(O)N(R9)2，其中，各R9独立地选自H、COOR6、和SO2R6；并且，R8选自H、C1-C4烷基、被OH取代的C1-C4烷基、被OC1-C4烷基取代的C1-C4烷基、和C3-C6环烷基。在该方面的例子中，R1选自H和F；R2选自Br、Cl、F、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH2CH2F、CH＝CH2、C≡CH、OH、OCH3、OCH2CH3、OCHF2、SCH3、和NHCH3；R3选自Br、Cl、F、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH2CH2F、CH＝CH2、C≡CH、OH、OCH3、OCH2CH3、OCHF2、SCH3、和NHCH3；R4选自H和F；R5选自H和Cl；各R6独立地选自H、C1-C4烷基、和C1-C4卤代烷基；X1是C(O)；X2是CH2CHR8；X3选自COOH、COOC(CH3)3、和
并且，R8选自H、CH3、CH2OH、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH(CH3)2、CH2OCH3、和环丙基。在该方面中，所有其他基团如上述第二实施方案的通式(Ia')中提供。
在第二实施方案的第十一方面中，R1选自H、F、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；R2选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、OC1-C3卤代烷基、OH、C2-C3烯基、C2-C3炔基、N(C1-C3烷基)2、NH(C1-C3烷基)、和SC1-C3烷基；R3选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、OC1-C3卤代烷基、OH、C2-C3烯基、C2-C3炔基、N(C1-C3烷基)2、NH(C1-C3烷基)、和SC1-C3烷基；R4选自H、F、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；R5选自H、F、Cl、OR6、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；各R6独立地选自H、C1-C4烷基、和C1-C4卤代烷基；X1是C(O)；X2是CHR8CHR8；X3选自COOR6、
SO2R6、和C(O)N(R9)2，其中，各R9独立地选自H、COOR6、和SO2R6；并且，各R8选自H、C1-C4烷基、被OH取代的C1-C4烷基、被OC1-C4烷基取代的C1-C4烷基、和C3-C6环烷基，并且其中任选2个R8与所连接的原子一起形成3至6元稠环。在该方面的例子中，R1选自H和F；R2选自Br、Cl、F、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH2CH2F、CH＝CH2、C≡CH、OH、OCH3、OCH2CH3、OCHF2、SCH3、和NHCH3；R3选自Br、Cl、F、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH2CH2F、CH＝CH2、C≡CH、OH、OCH3、OCH2CH3、OCHF2、SCH3、和NHCH3；R4选自H和F；R5选自H和Cl；各R6独立地选自H、C1-C4烷基、和C1-C4卤代烷基；X1是C(O)；X2是CHR8CHR8；X3选自COOH、COOC(CH3)3、和
并且，各R8选自H和C1-C4烷基。在该方面的额外的例子中，R1选自H和F；R2选自Br、Cl、F、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH2CH2F、CH＝CH2、C≡CH、OH、OCH3、OCH2CH3、OCHF2、SCH3、和NHCH3；R3选自Br、Cl、F、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH2CH2F、CH＝CH2、C≡CH、OH、OCH3、OCH2CH3、OCHF2、SCH3、和NHCH3；R4选自H和F；R5选自H和Cl；各R6独立地选自H、C1-C4烷基、和C1-C4卤代烷基；X1是C(O)；X2是CHR8CHR8；X3选自COOH、COOC(CH3)3、和
并且，2个R8与所连接的原子一起形成3至6元稠环。在该方面中，所有其他基团如上述第二实施方案的通式(Ia')中提供。
在第二实施方案的第十二方面中，R1选自H、F、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；R2选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、OC1-C3卤代烷基、OH、C2-C3烯基、C2-C3炔基、N(C1-C3烷基)2、NH(C1-C3烷基)、和SC1-C3烷基；R3选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、OC1-C3卤代烷基、OH、C2-C3烯基、C2-C3炔基、N(C1-C3烷基)2、NH(C1-C3烷基)、和SC1-C3烷基；R4选自H、F、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；R5选自H、F、Cl、OR6、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；各R6独立地选自H、C1-C4烷基、和C1-C4卤代烷基；X1是C(O)；X2是CH2C(R8)2；X3选自COOR6、
SO2R6、和C(O)N(R9)2，其中，各R9独立地选自H、COOR6、和SO2R6；并且，各R8选自H、OH、C1-C4烷基、被OH取代的C1-C4烷基、被OC1-C4烷基取代的C1-C4烷基、和C3-C6环烷基，并且其中任选2个R8与所连接的原子一起形成3至6元螺环.在该方面的例子中，R1选自H和F；R2选自Br、Cl、F、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH2CH2F、CH＝CH2、C≡CH、OH、OCH3、OCH2CH3、OCHF2、SCH3、和NHCH3；R3选自Br、Cl、F、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH2CH2F、CH＝CH2、C≡CH、OH、OCH3、OCH2CH3、OCHF2、SCH3、和NHCH3；R4选自H和F；R5选自H和Cl；各R6独立地选自H、C1-C4烷基、和C1-C4卤代烷基；X1是C(O)；X2是CH2C(R8)2；X3选自COOH、COOC(CH3)3、和
并且，各R8选自H、OH、和CH3。在该方面额外的例子中，R1选自H和F；R2选自Br、Cl、F、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH2CH2F、CH＝CH2、C≡CH、OH、OCH3、OCH2CH3、OCHF2、SCH3、和NHCH3；R3选自Br、Cl、F、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH2CH2F、CH＝CH2、C≡CH、OH、OCH3、OCH2CH3、OCHF2、SCH3、和NHCH3；R4选自H和F；R5选自H和Cl；各R6独立地选自H、C1-C4烷基、和C1-C4卤代烷基；X1是C(O)；X2是CH2C(R8)2；X3选自COOH、COOC(CH3)3、和
并且，2个R8与所连接的原子一起形成3至6元螺环。在该方面中，所有其他基团如上述第二实施方案的通式(Ia')中提供。
第二实施方案的第十三方面涉及一种药物组合物，所述药物组合物包含(a)根据上述第二实施方案或者上述第一至第十二方面所述的通式(Ia')的化合物或其药学可接受的盐；和，(b)药学可接受的载体。
第二实施方案的第十四方面涉及一种在受试者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第二实施方案或者上述第一至第十二方面所述的通式(Ia')的化合物或其药学可接受的盐。
第二实施方案的第十五方面涉及一种在受试者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第十三方面所述的组合物。
第二实施方案的第十六方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第一实施方案或者上述第一至第十二方面所述的通式(Ia')的化合物或其药学可接受的盐。
第二实施方案的第十七方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第十三方面所述的组合物。
第二实施方案的第十八方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第二实施方案或者上述第一至第十二方面所述的通式(Ia')的化合物或其药学可接受的盐。
第二实施方案的第十九方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第十三方面所述的组合物。
本文中记载的第二实施方案的各方面中，通式(Ia')以及其多个方面和例子的变量R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8、R9、X1、X2、和X3各自彼此独立地选择，前提是，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8、和R9中的至少一个不是H。
第三实施方案涉及通式(Ib)的化合物：
或其药学可接受的盐，其中，R1选自H、卤素、OR6、N(R6)2、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、COOR6、和C(O)N(R6)2；R2选自卤素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、被OR6取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、被OR6取代的C2-C6炔基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、和N(R6)中的环成员的3至6元杂环；R3选自卤素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、被OR6取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、被OR6取代的C2-C6炔基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、和N(R6)中的环成员的3至6元杂环；R4选自H、卤素、OR6、N(R6)2、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、COOR6、和C(O)N(R6)2；R5选自H、卤素、OR6、N(R6)2、CN、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、COOR6、和C(O)N(R6)2；各R6独立地选自H、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基；X1是C(O)；X2是CH2CHR8；各R8独立地选自卤素、C1-C6烷基、CN、OR6、N(R6)2、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、和被N(R6)2取代的C1-C6烷基；X3选自COOR6、C(O)SR6、C(S)OR6、SO2R6、和C(O)N(R9)2；并且，各R9独立地选自H、COOR6、和SO2R6；其中，X1-X2-X3是X1-CH2CHR8-X3。
在第三实施方案的第一方面中，R1选自H、卤素、OR6、N(R6)2、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、COOR6、和C(O)N(R6)2。在该方面的例子中，R1选自H、F、Cl、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基。在该方面的特别的例子中，R1选自H和F。在该方面中，所有其他基团如上述第三实施方案的通式(Ib)中提供。
在第三实施方案的第二方面中，R2选自卤素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、被OR6取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、被OR6取代的C2-C6炔基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、和N(R6)中的环成员的3至6元杂环。在该方面的例子中，R2选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、C2-C3烯基、和N(R6)2。在该方面的特别的例子中，R2选自Br、Cl、CH3、CH2CH3、CH＝CH2、OCH3、和N(R6)2。在该方面中，所有其他基团如上述第三实施方案或者上述第一方面的通式(Ib)中提供。
在第三实施方案的第三方面中，R3选自卤素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、被OR6取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、被OR6取代的C2-C6炔基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、和N(R6)中的环成员的3至6元杂环。在该方面的例子中，R3选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、C2-C3烯基、和N(R6)2。在该方面的特别的例子中，R3选自Br、Cl、CH3、CH2CH3、CH＝CH2、OCH3、和N(R6)2。在该方面中，所有其他基团如上述第三实施方案或者上述第一至第二方面的通式(Ib)中提供。
在第三实施方案的第四方面中，R4选自H、卤素、OR6、N(R6)2、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、COOR6、和C(O)N(R6)2。在该方面的例子中，R4选自H、F、Cl、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基。在该方面的特别的例子中，R4选自H和F。在该方面中，所有其他基团如上述第三实施方案或者上述第一至第三方面的通式(Ib)中提供。
在第三实施方案的第五方面中，R5选自H、卤素、OR6、N(R6)2、CN、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、COOR6、和C(O)N(R6)2。在该方面的例子中，R5选自H、F、Cl、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基。在该方面的特别的例子中，R5是H。在该方面中，所有其他基团如上述第三实施方案或者上述第一至第四方面的通式(Ib)中提供。
在第三实施方案的第六方面中，各R6独立地选自H、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。在该方面的例子中，各R6独立地选自H、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基。在该方面的特别的例子中，各R6独立地选自H和CH3。在该方面中，所有其他基团如上述第三实施方案或者上述第一至第五方面的通式(Ib)中提供。
在第三实施方案的第七方面中，X3选自COOR6、C(O)SR6、C(S)OR6、SO2R6、和C(O)N(R9)2。在该方面的例子中，X3选自COOR6、SO2R6、和C(O)N(R9)2。在该方面的特别的例子中，X3是COOR6。在该方面的还更特别的例子中，X3是COOH。在该方面中，所有其他基团如上述第三实施方案或者上述第一至第六方面的通式(Ib)中提供。
在第三实施方案的第八方面中，各R9独立地选自H、COOR6、和SO2R6。在该方面的例子中，各R9独立地是H。在该方面中，所有其他基团如上述第三实施方案或者上述第一至第七方面的通式(Ib)中提供。
在第三实施方案的第九方面中，X2是CH2CHR8，其中，各R8独立地选自卤素、C1-C6烷基、CN、OR6、N(R6)2、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、和被N(R6)2取代的C1-C6烷基。在该方面的例子中，R8选自C1-C3烷基、被OH取代的C1-C3烷基、被OC1-C3烷基取代的C1-C3烷基、和C3-C6环烷基。在特别的例子中，R8选自CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH(CH3)2、CH2OCH3、和环丙基。在该方面中，所有其他基团如上述第三实施方案或者上述第一至第八方面的通式(Ib)中提供。
在第三实施方案的第十方面中，R1选自H、F、Cl、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；R2选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、C2-C3烯基、和N(R6)2；R3选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、C2-C3烯基、和N(R6)2；R4选自H、F、Cl、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；R5选自H、F、Cl、OR6、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；各R6独立地选自H、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；R8选自C1-C3烷基、被OH取代的C1-C3烷基、被OC1-C3烷基取代的C1-C3烷基、和C3-C6环烷基；并且，X3选自COOR6、SO2R6、和C(O)N(R9)2；其中，X1-X2-X3选自C(O)-CH2CHR8-COOR6、C(O)-CH2CHR8-SO2R6、和C(O)-CH2CHR8-C(O)N(R9)2。在该方面的例子中，R1选自H和F；R2选自Br、Cl、CH3、CH2CH3、CH＝CH2、OCH3、和N(R6)2；R3选自Br、Cl、CH3、CH2CH3、CH＝CH2、OCH3、和N(R6)2；R4选自H和F；R5是H；各R6独立地选自H和CH3；R8选自CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH(CH3)2、CH2OCH3、和环丙基；并且，X3是COOH；其中，X1-X2-X3是C(O)-CH2CHR8-COOH。在该方面中，所有其他基团如上述第三实施方案的通式(Ib)中提供。
第三实施方案的第十一方面涉及一种药物组合物，所述药物组合物包含(a)根据上述第三实施方案或者上述第一至第十一方面所述的通式(Ib)的化合物或其药学可接受的盐；和，(b)药学可接受的载体。
第三实施方案的第十二方面涉及一种在受试者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第三实施方案或者上述第一至第十方面所述的通式(Ib)的化合物或其药学可接受的盐。
第三实施方案的第十三方面涉及一种在受试者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第十一方面所述的组合物。
第三实施方案的第十四方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第三实施方案或者上述第一至第十方面所述的通式(Ib)的化合物或其药学可接受的盐。
第三实施方案的第十五方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第十一方面所述的组合物。
第三实施方案的第十六方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第三实施方案或者上述第一至第十方面所述的通式(Ib)的化合物或其药学可接受的盐。
第三实施方案的第十七方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第十一方面所述的组合物。
本文中记载的第三实施方案的各方面中，通式(Ib)以及其多个方面和例子的变量R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8、R9、X1、X2、和X3各自彼此独立地选择，前提是，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8、和R9中的至少一个不是H。
第四实施方案涉及通式(Ib')的化合物：
或其药学可接受的盐，其中，R1选自H、卤素、OR6、N(R6)2、SR6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、被SR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、被OR6取代的C1-C6卤代烷基、被SR6取代的C1-C6卤代烷基、和被N(R6)2取代的C1-C6卤代烷基；R2选自H、卤素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SR6、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、N和N(R6)中的环成员的3至6元杂环，其中，所述C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、和3至6元杂环基团任选被独立地选自CN、OR6、N(R6)2、和SR6中的一个或多个取代基取代，并且其中，所述C3-C6环烷基和3至6元杂环各自进一步任选被C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基中的基团取代；R3选自H、卤素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SR6、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、N和N(R6)中的环成员的3至6元杂环，其中，所述C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、和3至6元杂环基团任选被独立地选自CN、OR6、N(R6)2、和SR6中的一个或多个取代基取代，并且其中，所述C3-C6环烷基和3至6元杂环各自进一步任选被C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基中的基团取代；R4选自H、卤素、OR6、N(R6)2、SR6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、被SR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、被OR6取代的C1-C6卤代烷基、被SR6取代的C1-C6卤代烷基、和被N(R6)2取代的C1-C6卤代烷基；任选R3和R4可以与所连接的原子一起形成包括1至2个选自O、S、N和N(R6)中的环成员的5或6元杂环，其中，所述杂环任选被C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基中的一个或多个基团取代；R5选自H、卤素、OR6、N(R6)2、CN、被OR6取代的C1-C6烷基、被SR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、被OR6取代的C1-C6卤代烷基、被SR6取代的C1-C6卤代烷基、和被N(R6)2取代的C1-C6卤代烷基；各R6独立地选自H、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基，其中，所述C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基任选被OH、O(C1-C3烷基)、和O(C1-C3卤代烷基)取代；X1是C(O)；X2是CH2CHR8；各R8独立地选自H、卤素、CN、OR6、N(R6)2、SR6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、N和N(R6)中的环成员的3至6元杂环，其中，所述C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、和3至6元杂环基团任选被独立地选自CN、OR6、N(R6)2、和SR6中的一个或多个取代基取代，并且其中，所述C3-C6环烷基和3至6元杂环各自进一步任选被C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基中的基团取代；X3选自COOR6、
C(O)SR6、C(S)OR6、SO2R6、和C(O)N(R9)2；并且，各R9独立地选自H、COOR6、和SO2R6；其中，X1-X2-X3是C(O)-CH2CHR8-X3。
在第四实施方案的第一方面中，R1选自H、卤素、OR6、N(R6)2、SR6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、被SR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、被OR6取代的C1-C6卤代烷基、被SR6取代的C1-C6卤代烷基、和被N(R6)2取代的C1-C6卤代烷基。在该方面的例子中，R1选自H、F、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基。在该方面的特别的例子中，R1选自H和F。在该方面中，所有其他基团如根据上述第四实施方案所述的通式(Ib')中提供。
在第四实施方案的第二方面中，R2选自H、卤素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SR6、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、N和N(R6)中的环成员的3至6元杂环，其中，所述C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、和3至6元杂环基团任选被独立地选自CN、OR6、N(R6)2、和SR6中的一个或多个取代基取代，并且其中，所述C3-C6环烷基和3至6元杂环各自进一步任选被C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基中的基团取代。在该方面的例子中，R2选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、OC1-C3卤代烷基、OH、C2-C3烯基、C2-C3炔基、N(C1-C3烷基)2、NH(C1-C3烷基)、和SC1-C3烷基。在该方面的特别的例子中，R2选自Br、Cl、F、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH2CH2F、CH＝CH2、C≡CH、OH、OCH3、OCH2CH3、OCHF2、SCH3、和NHCH3。在该方面中，所有其他基团如根据上述第四实施方案或者上述第一方面所述的通式(Ib')中提供。
在第四实施方案的第三方面中，R3选自H、卤素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SR6、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、N和N(R6)中的环成员的3至6元杂环，其中，所述C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、和3至6元杂环基团任选被独立地选自CN、OR6、N(R6)2、和SR6中的一个或多个取代基取代，并且其中，所述C3-C6环烷基和3至6元杂环各自进一步任选被C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基中的基团取代。在该方面的例子中，R3选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、OC1-C3卤代烷基、OH、C2-C3烯基、C2-C3炔基、N(C1-C3烷基)2、NH(C1-C3烷基)、和SC1-C3烷基。在该方面的特别的例子中，R3选自Br、Cl、F、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH2CH2F、CH＝CH2、C≡CH、OH、OCH3、OCH2CH3、OCHF2、SCH3、和NHCH3。在该方面中，所有其他基团如根据上述第四实施方案或者上述第一至第二方面所述的通式(Ib')中提供。
在第四实施方案的第四方面中，R4选自H、卤素、OR6、N(R6)2、SR6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、被SR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、被OR6取代的C1-C6卤代烷基、被SR6取代的C1-C6卤代烷基、和被N(R6)2取代的C1-C6卤代烷基。在该方面的例子中，R4选自H、F、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基。在该方面的特别的例子中，R4选自H和F。在该方面中，所有其他基团如根据上述第四实施方案或者上述第一至第三方面所述的通式(Ib')中提供。
在第四实施方案的第三和第四方面的一些例子中，R3和R4与所连接的原子一起形成包括1至2个选自O、S、N和N(R6)中的环成员的5或6元杂环，其中，所述杂环任选被C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基中的一个或多个基团取代。在第一此类例子中，R3和R4与所连接的原子一起形成包括1至2个选自O、S、和N中的环成员的稠合5元杂环，并且杂环任选被一个或多个C1-C3烷基取代。在第二此类例子中，R3和R4与所连接的原子一起形成包括1至2个选自O和N中的环成员的稠合5元杂环，并且杂环任选被CH3取代。在此类例子中，所有其他基团如根据上述第四实施方案所述的通式(Ib')中提供。
在第四实施方案的第五方面中，R5选自H、卤素、OR6、N(R6)2、CN、被OR6取代的C1-C6烷基、被SR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、被OR6取代的C1-C6卤代烷基、被SR6取代的C1-C6卤代烷基、和被N(R6)2取代的C1-C6卤代烷基。在该方面的例子中，R5选自H、F、Cl、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基。在该方面的特别的例子中，R5选自H和Cl。在该方面中，所有其他基团如根据上述第四实施方案或者上述第一至第四方面所述的通式(Ib')中提供。
在第四实施方案的第六方面中，各R6独立地选自H、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基，其中，所述C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基任选被OH、O(C1-C3烷基)、和O(C1-C3卤代烷基)取代。在该方面的例子中，各R6独立地选自H、C1-C4烷基、和C1-C4卤代烷基。在该方面中，所有其他基团如根据上述第四实施方案或者上述第一至第五方面所述的通式(Ib')中提供。
在第四实施方案的第七方面中，X3选自COOR6、
C(O)SR6、C(S)OR6、SO2R6、和C(O)N(R9)2。在该方面的例子中，X3选自COOR6、
SO2R6、和C(O)N(R9)2。在该方面的特别的例子中，X3选自COOR6和
在该方面的还更特别的例子中，X3选自COOH、COOC(CH3)3、和
在该方面中，所有其他基团如根据上述第四实施方案或者上述第一至第六方面所述的通式(Ib')中提供。
在第四实施方案的第八方面中，各R9独立地选自H、COOR6、和SO2R6。在该方面的例子中，各R9独立地是H。在该方面中，所有其他基团如根据上述第四实施方案或者上述第一至第七方面所述的通式(Ib')中提供。
在第四实施方案的第九方面中，X2是CH2CHR8，其中，各R8独立地选自H、卤素、CN、OR6、N(R6)2、SR6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、N和N(R6)中的环成员的3至6元杂环，其中，所述C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、和3至6元杂环基团任选被独立地选自CN、OR6、N(R6)2、和SR6中的一个或多个取代基取代，并且其中，所述C3-C6环烷基和3至6元杂环各自进一步任选被C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基中的基团取代。在该方面的例子中，R8选自H、C1-C4烷基、被OH取代的C1-C4烷基、被OC1-C4烷基取代的C1-C4烷基、和C3-C6环烷基。在特别的例子中，R8选自H、CH3、CH2OH、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH(CH3)2、CH2OCH3、和环丙基。在该方面中，所有其他基团如根据上述第四实施方案或者上述第一至第八方面所述的通式(Ib')中提供。
在第四实施方案的第十方面中，R1选自H、F、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；R2选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、OC1-C3卤代烷基、OH、C2-C3烯基、C2-C3炔基、N(C1-C3烷基)2、NH(C1-C3烷基)、和SC1-C3烷基；R3选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、OC1-C3烷基、OC1-C3卤代烷基、OH、C2-C3烯基、C2-C3炔基、N(C1-C3烷基)2、NH(C1-C3烷基)、和SC1-C3烷基；R4选自H、F、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；R5选自H、F、Cl、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；各R6独立地选自H、C1-C4烷基、和C1-C4卤代烷基；X1是C(O)；X2是CH2CHR8；X3选自COOR6、
SO2R6、和C(O)N(R9)2，其中，各R9独立地选自H、COOR6、和SO2R6；并且，R8选自H、C1-C4烷基、被OH取代的C1-C4烷基、被OC1-C4烷基取代的C1-C4烷基、和C3-C6环烷基。在该方面的例子中，R1选自H和F；R2选自Br、Cl、F、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH2CH2F、CH＝CH2、C≡CH、OH、OCH3、OCH2CH3、OCHF2、SCH3、和NHCH3；R3选自Br、Cl、F、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH2CH2F、CH＝CH2、C≡CH、OH、OCH3、OCH2CH3、OCHF2、SCH3、和NHCH3；R4选自H和F；R5选自H和Cl；各R6独立地选自H、C1-C4烷基、和C1-C4卤代烷基；X1是C(O)；X2是CH2CHR8；X3选自COOH、COOC(CH3)3、和
并且，R8选自H、CH3、CH2OH、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH(CH3)2、CH2OCH3、和环丙基。在该方面中，所有其他基团如根据上述第四实施方案所述的通式(Ib')中提供。
第四实施方案的第十一方面涉及一种药物组合物，所述药物组合物包含(a)根据根据上述第四实施方案或者上述第一至第十一方面所述的通式(Ib')的化合物或其药学可接受的盐；和，(b)药学可接受的载体。
第四实施方案的第十二方面涉及一种在受试者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据根据上述第四实施方案或者上述第一至第十方面所述的通式(Ib')的化合物或其药学可接受的盐。
第四实施方案的第十三方面涉及一种在受试者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第十一方面所述的组合物。
第四实施方案的第十四方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据根据上述第四实施方案或者上述第一至第十方面所述的通式(Ib')的化合物或其药学可接受的盐。
第四实施方案的第十五方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第十一方面所述的组合物。
第四实施方案的第十六方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第四实施方案或者上述第一至第十方面所述的通式(Ib')的化合物或其药学可接受的盐。
第四实施方案的第十七方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第十一方面所述的组合物。
本文中记载的第四实施方案的各方面中，通式(Ib')以及其多个方面和例子的变量R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8、R9、X1、X2、和X3各自彼此独立地选择，前提是，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8、和R9中的至少一个不是H。
本公开的第五实施方案的方面涉及通式(I)的化合物和其药学可接受的盐的用途。通式(I)的化合物可以被用作用于诱导免疫应答、用于诱导STING依赖性I型干扰素产生、和/或用于治疗细胞增殖疾病的药剂。在第五实施方案的这些方面中，式(I)的化合物是
或其药学可接受的盐，其中，R1选自H、卤素、OR6、N(R6)2、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、COOR6、和C(O)N(R6)2；R2选自H、卤素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、被OR6取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、被OR6取代的C2-C6炔基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、和N(R6)中的环成员的3至6元杂环；R3选自H、卤素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、被OR6取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、被OR6取代的C2-C6炔基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、和N(R6)中的环成员的3至6元杂环；R4选自H、卤素、OR6、N(R6)2、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、COOR6、和C(O)N(R6)2；R5选自H、卤素、OR6、N(R6)2、CN、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、COOR6、和C(O)N(R6)2；各R6独立地选自H、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基；X1是C(O)；X2是(C(R8)2)(1-3)；各R8独立地选自H、卤素、C1-C6烷基、CN、OR6、N(R6)2、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、和被N(R6)2取代的C1-C6烷基；任选2个R8可以与所连接的原子一起形成3至6元稠环；任选2个R8可以与所连接的原子一起形成3至6元螺环；X3选自COOR6、C(O)SR6、C(S)OR6、SO2R6、和C(O)N(R9)2；并且，各R9独立地选自H、COOR6、和SO2R6。
第五实施方案的第一方面涉及一种在受试者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的上述通式(I)的化合物或其药学可接受的盐。
第五实施方案的第二方面涉及一种在受试者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的包含上述通式(I)的化合物或其药学可接受的盐的组合物。
第五实施方案的第三方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的通式(I)的化合物或其药学可接受的盐。
第五实施方案的第四方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的包含上述通式(I)的化合物或其药学可接受的盐的组合物。
第五实施方案的第五方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的上述通式(I)的化合物或其药学可接受的盐。
第五实施方案的第六方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的包含上述通式(I)的化合物或其药学可接受的盐的组合物。
本文中记载的第五实施方案的各方面中，通式(I)以及其多个方面和例子的变量R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8、R9、X1、X2、和X3各自彼此独立地选择，前提是，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8、和R9中的至少一个不是H。
本公开的第六实施方案的方面涉及通式(I')的化合物和其药学可接受的盐的用途。通式(I')的化合物可以被用作用于诱导免疫应答、用于诱导STING依赖性I型干扰素产生、和/或用于治疗细胞增殖疾病的药剂。在第五实施方案的这些方面中，式(I')的化合物是
或其药学可接受的盐，其中，R1选自H、卤素、OR6、N(R6)2、SR6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、被SR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、被OR6取代的C1-C6卤代烷基、被SR6取代的C1-C6卤代烷基、和被N(R6)2取代的C1-C6卤代烷基；R2选自H、卤素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SR6、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、N和N(R6)中的环成员的3至6元杂环，其中，所述C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、和3至6元杂环基团任选被独立地选自CN、OR6、N(R6)2、和SR6中的一个或多个取代基取代，并且其中，所述C3-C6环烷基和3至6元杂环各自进一步任选被C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基中的基团取代；R3选自H、卤素、CN、OR6、N(R6)2、COOR6、C(O)N(R6)2、SR6、SO2R6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、N和N(R6)中的环成员的3至6元杂环，其中，所述C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、和3至6元杂环基团任选被独立地选自CN、OR6、N(R6)2、和SR6中的一个或多个取代基取代，并且其中，所述C3-C6环烷基和3至6元杂环各自进一步任选被C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基中的基团取代；R4选自H、卤素、OR6、N(R6)2、SR6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、被OR6取代的C1-C6烷基、被SR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、被OR6取代的C1-C6卤代烷基、被SR6取代的C1-C6卤代烷基、和被N(R6)2取代的C1-C6卤代烷基；任选R3和R4可以与所连接的原子一起形成包括1至2个选自O、S、N和N(R6)中的环成员的5或6元杂环，其中，所述杂环任选被C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基中的一个或多个基团取代；R5选自H、卤素、OR6、N(R6)2、CN、被OR6取代的C1-C6烷基、被SR6取代的C1-C6烷基、被N(R6)2取代的C1-C6烷基、被OR6取代的C1-C6卤代烷基、被SR6取代的C1-C6卤代烷基、和被N(R6)2取代的C1-C6卤代烷基；各R6独立地选自H、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基，其中，所述C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基任选被OH、O(C1-C3烷基)、和O(C1-C3卤代烷基)取代；X1是C(O)；X2是(C(R8)2)(1-3)；各R8独立地选自H、卤素、CN、OR6、N(R6)2、SR6、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、以及包括1至2个选自O、S、N和N(R6)中的环成员的3至6元杂环，其中，所述C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基、C2-C6卤代烯基、C2-C6炔基、C2-C6卤代炔基、C3-C6环烷基、和3至6元杂环基团任选被独立地选自CN、OR6、N(R6)2、和SR6中的一个或多个取代基取代，并且其中，所述C3-C6环烷基和3至6元杂环各自进一步任选被C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基中的基团取代；任选不同碳原子上的2个R8可以与所连接的原子一起形成3至6元稠环；任选单个碳原子上的2个R8可以与所连接的原子一起形成3至6元螺环；X3选自COOR6、
C(O)SR6、C(S)OR6、SO2R6、和C(O)N(R9)2；并且，各R9独立地选自H、COOR6、和SO2R6。
第六实施方案的第一方面涉及一种在受试者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的上述通式(I')的化合物或其药学可接受的盐。
第六实施方案的第二方面涉及一种在受试者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的包含上述通式(I')的化合物或其药学可接受的盐的组合物。
第六实施方案的第三方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的通式(I')的化合物或其药学可接受的盐。
第六实施方案的第四方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的包含上述通式(I')的化合物或其药学可接受的盐的组合物。
第六实施方案的第五方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的上述通式(I')的化合物或其药学可接受的盐。
第六实施方案的第六方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的包含上述通式(I')的化合物或其药学可接受的盐的组合物。
本文中记载的第六实施方案的各方面中，通式(I')以及其多个方面和例子的变量R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8、R9、X1、X2、和X3各自彼此独立地选择，前提是，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8、和R9中的至少一个不是H。
第七实施方案涉及一种化合物，其选自
第七实施方案的第一方面涉及一种在受试者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第七实施方案所述的化合物或其药学可接受的盐。
第七实施方案的第二方面涉及一种在受试者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的包含根据上述第七实施方案所述的化合物或其药学可接受的盐的组合物。
第七实施方案的第三方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第七实施方案所述的化合物或其药学可接受的盐。
第七实施方案的第四方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的包含根据上述第七实施方案所述的化合物或其药学可接受的盐的组合物。
第七实施方案的第五方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第七实施方案所述的化合物或其药学可接受的盐。
第七实施方案的第六方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的包含根据上述第七实施方案所述的化合物或其药学可接受的盐的组合物。
第八实施方案涉及一种化合物，其选自下述实施例1至54中描述的示例物质。
第八实施方案的第一方面涉及一种在受试者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第八实施方案所述的化合物或其药学可接受的盐。
第八实施方案的第二方面涉及一种在受试者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的包含根据上述第八实施方案所述的化合物或其药学可接受的盐的组合物。
第八实施方案的第三方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第八实施方案所述的化合物或其药学可接受的盐。
第八实施方案的第四方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的包含根据上述第八实施方案所述的化合物或其药学可接受的盐的组合物。
第八实施方案的第五方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的根据上述第八实施方案所述的化合物或其药学可接受的盐。
第八实施方案的第六方面涉及一种在受试者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的包含根据上述第八实施方案所述的化合物或其药学可接受的盐的组合物。
本公开的其他实施方案包括下述：
(a)一种药物组合物，其包含有效量的通式(Ia)的化合物或其药学可接受的盐、和药学可接受的载体。
(b)一种药物组合物，其包含有效量的通式(Ia')的化合物或其药学可接受的盐、和药学可接受的载体。
(c)一种药物组合物其包含有效量的通式(Ib)的化合物或其药学可接受的盐、和药学可接受的载体。
(d)一种药物组合物，其包含有效量的通式(Ib')的化合物或其药学可接受的盐、和药学可接受的载体。
(e)(a)的药物组合物，其还包含选自STING激动剂化合物、抗病毒化合物、抗原、佐剂、CTLA-4和PD-1通路拮抗剂和其他免疫调节剂、脂质、脂质体、肽、抗癌和化疗药剂中的活性药剂。
(f)(b)的药物组合物，其还包含选自STING激动剂化合物、抗病毒化合物、抗原、佐剂、CTLA-4和PD-1通路拮抗剂和其他免疫调节剂、脂质、脂质体、肽、抗癌和化疗药剂中的活性药剂。
(g)(c)的药物组合物，其还包含选自STING激动剂化合物、抗病毒化合物、抗原、佐剂、CTLA-4和PD-1通路拮抗剂和其他免疫调节剂、脂质、脂质体、肽、抗癌和化疗药剂中的活性药剂。
(h)(d)的药物组合物，其还包含选自STING激动剂化合物、抗病毒化合物、抗原、佐剂、CTLA-4和PD-1通路拮抗剂和其他免疫调节剂、脂质、脂质体、肽、抗癌和化疗药剂中的活性药剂。
(i)一种药物组合，其是(i)通式(Ia)的化合物或其药学可接受的盐、和(ii)选自STING激动剂化合物、抗病毒化合物、抗原、佐剂、CTLA-4和PD-1通路拮抗剂和其他免疫调节剂、脂质、脂质体、肽、抗癌和化疗药剂中的活性药剂的药物组合；其中，通式(Ia)的化合物或其药学可接受的盐、和活性药剂分别以使得所述组合对在患者中诱导免疫应答有效的量而被利用。
(j)一种药物组合，其是(i)通式(Ia')的化合物或其药学可接受的盐、和(ii)选自STING激动剂化合物、抗病毒化合物、抗原、佐剂、CTLA-4和PD-1通路拮抗剂和其他免疫调节剂、脂质、脂质体、肽、抗癌和化疗药剂中的活性药剂的药物组合；其中，通式(Ia)的化合物或其药学可接受的盐、和活性药剂分别以使得所述组合对在患者中诱导免疫应答有效的量而被利用。
(k)一种药物组合，其是(i)通式(Ib)的化合物或其药学可接受的盐、和(ii)选自STING激动剂化合物、抗病毒化合物、抗原、佐剂、CTLA-4和PD-1通路拮抗剂和其他免疫调节剂、脂质、脂质体、肽、抗癌和化疗药剂中的活性药剂的药物组合；其中，通式(Ib)的化合物或其药学可接受的盐、和活性药剂分别以使得所述组合对在患者中诱导免疫应答有效的量而被利用。
(l)一种药物组合，其是(i)通式(Ib')的化合物或其药学可接受的盐、和(ii)选自STING激动剂化合物、抗病毒化合物、抗原、佐剂、CTLA-4和PD-1通路拮抗剂和其他免疫调节剂、脂质、脂质体、肽、抗癌和化疗药剂中的活性药剂的药物组合；其中，通式(Ib')的化合物或其药学可接受的盐、和活性药剂分别以使得所述组合对在患者中诱导免疫应答有效的量而被利用。
(m)一种在患者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的通式(Ia)的化合物或其药学可接受的盐。
(n)一种在患者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的通式(Ia')的化合物或其药学可接受的盐。
(o)一种在患者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的通式(Ib)的化合物或其药学可接受的盐。
(p)一种在患者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的通式(Ib')的化合物或其药学可接受的盐。
(q)一种在患者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的通式(I)的化合物或其药学可接受的盐。
(r)一种在患者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的通式(I')的化合物或其药学可接受的盐。
(s)一种在患者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的(a)的组合物、(e)的组合物、或(i)的组合。
(t)一种在患者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的(b)的组合物、(f)的组合物、或(j)的组合。
(u)一种在患者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的(c)的组合物、(g)的组合物、或(k)的组合。
(v)一种在患者中诱导免疫应答的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的(d)的组合物、(h)的组合物、或(l)的组合。
(w)一种在患者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的通式(Ia)的化合物或其药学可接受的盐。
(x)一种在患者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的通式(Ia')的化合物或其药学可接受的盐。
(y)一种在患者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的通式(Ib)的化合物或其药学可接受的盐。
(z)一种在患者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的通式(Ib')的化合物或其药学可接受的盐。
(a1)一种在患者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的通式(I)的化合物或其药学可接受的盐。
(b1)一种在患者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的通式(I')的化合物或其药学可接受的盐。
(c1)一种在患者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的(a)的组合物、(e)的组合物、或(i)的组合。
(d1)一种在患者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的(b)的组合物、(f)的组合物、或(j)的组合。
(e1)一种在患者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的(c)的组合物、(g)的组合物、或(k)的组合。
(f1)一种在患者中诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的(d)的组合物、(h)的组合物、或(l)的组合。
(g1)一种在患者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的通式(Ia)的化合物或其药学可接受的盐。
(h1)一种在患者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的通式(Ia')的化合物或其药学可接受的盐。
(i1)一种在患者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的通式(Ib)的化合物或其药学可接受的盐。
(j1)一种在患者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的通式(Ib')的化合物或其药学可接受的盐。
(k1)一种在患者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的通式(I)的化合物或其药学可接受的盐。
(l1)一种在患者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的通式(I')的化合物或其药学可接受的盐。
(m1)一种在患者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的(a)的组合物、(e)的组合物、或(i)的组合。
(n1)一种在患者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的(b)的组合物、(f)的组合物、或(j)的组合。
(o1)一种在患者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的(c)的组合物、(g)的组合物、或(k)的组合。
(p1)一种在患者中诱导STING依赖性细胞因子产生的方法，其包括：向受试者给予治疗有效量的(d)的组合物、(h)的组合物、或(l)的组合。
(q1)一种在受试者中治疗细胞增殖疾病的方法，所述方法包括：向受试者给予治疗有效量的通式(Ia)的化合物或其药学可接受的盐。
(r1)(q1)的方法，其中，细胞增殖疾病是癌症。
(s1)一种在受试者中治疗细胞增殖疾病的方法，所述方法包括：向受试者给予治疗有效量的通式(Ia')的化合物或其药学可接受的盐。
(t1)(s1)的方法，其中，细胞增殖疾病是癌症。
(u1)一种在受试者中治疗细胞增殖疾病的方法，所述方法包括：向受试者给予治疗有效量的通式(Ib)的化合物或其药学可接受的盐。
(v1)(u1)的方法，其中，细胞增殖疾病是癌症。
(w1)一种在受试者中治疗细胞增殖疾病的方法，所述方法包括：向受试者给予治疗有效量的通式(Ib')的化合物或其药学可接受的盐。
(x1)(w1)的方法，其中，细胞增殖疾病是癌症。
(y1)一种在受试者中治疗细胞增殖疾病的方法，所述方法包括：向受试者给予治疗有效量的通式(I)的化合物或其药学可接受的盐。
(z1)(y1)的方法，其中，细胞增殖疾病是癌症。
(a2)一种在受试者中治疗细胞增殖疾病的方法，所述方法包括：向受试者给予治疗有效量的通式(I')的化合物或其药学可接受的盐。
(b2)(a2)的方法，其中，细胞增殖疾病是癌症。
(c2)一种在受试者中治疗细胞增殖疾病的方法，所述方法包括：向受试者给予治疗有效量的(a)的组合物、(e)的组合物、或(i)的组合。
(d2)(C2)的方法，其中，细胞增殖疾病是癌症。
(e2)一种在受试者中治疗细胞增殖疾病的方法，所述方法包括：向受试者给予治疗有效量的(b)的组合物、(f)的组合物、或(j)的组合。
(f2)(e2)的方法，其中，细胞增殖疾病是癌症。
(g2)一种在受试者中治疗细胞增殖疾病的方法，所述方法包括：向受试者给予治疗有效量的(c)的组合物、(g)的组合物、或(k)的组合。
(h2)(g2)的方法，其中，细胞增殖疾病是癌症。
(i2)一种在受试者中治疗细胞增殖疾病的方法，所述方法包括：向受试者给予治疗有效量的(d)的组合物、(h)的组合物、或(l)的组合。
(j2)(i2)的方法，其中，细胞增殖疾病是癌症。
本公开还包括本公开的化合物，其(i)用于下述、(ii)用作用于下述的药物、或者(iii)用于制备用于下述的药物：(a)在患者中诱导免疫应答；或(b)在患者中诱导STING依赖性细胞因子产生。在这些用途中，本公开的化合物可以任选地与选自STING激动剂化合物、抗病毒化合物、抗原、佐剂、CTLA-4和PD-1通路拮抗剂和其他免疫调节剂、脂质、脂质体、肽、抗癌药剂、和化疗药剂中的一种或多种活性药剂组合利用。
本公开的另外的实施方案包括上述(a)至(j2)所述的药物组合物、组合和方法、以及上述段落中所述的用途，其中，本文中利用的本公开的化合物是上述上述化合物的实施方案、方面、例子、情况、或特征之一的化合物。在所有这些实施方案中，化合物可任选地适当以药学可接受的盐的形式使用。
在上文提供的化合物的实施方案中，要理解每个实施方案可以与一个或多个其他实施方案组合，只要这种组合提供稳定的化合物并且与实施方案的描述一致。还要理解，作为上述(a)至(j2)提供的组合物和方法的实施方案要理解为包括化合物的所有实施方案、包括由实施方案的组合产生的这些实施方案。
如本文中使用的术语“受试者”(或“患者”)是指已成为治疗、观察或实验受试者的哺乳动物。哺乳动物可以是雄性或雌性。哺乳动物可以是选自人、牛(例如奶牛)、猪(例如家猪)、绵羊(例如绵羊)、山羊(例如山羊)、马(例如马)、犬科动物(例如家犬)、猫科动物(例如家猫)、兔形目(兔)、啮齿动物(例如大鼠或小鼠)、浣熊(Procyon lotor)(例如浣熊)中的一种或多种。在特定的实施方案中，受试者是人。
本文中使用的术语“免疫应答”涉及以下任何一种或多种：特异性免疫应答、非特异性免疫应答、特异性和非特异性应答、先天性应答、初次免疫应答、获得性免疫、二次免疫应答、记忆免疫应答、免疫细胞激活、免疫细胞增殖、免疫细胞分化和细胞因子表达。在某些实施方案中，通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物或前述的药学可接受的盐与一种或多种另外的治疗剂联合给予，所述治疗剂包括抗病毒化合物、意图刺激对一种或多种预定抗原的免疫应答的疫苗、佐剂、CTLA-4和PD-1通路拮抗剂和其他免疫调节剂、脂质、脂质体、肽、抗癌药剂和化疗药剂等。在某些实施方案中，通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物或前述的药学可接受的盐与一种或多种另外的组合物联合给予，所述组合物包括抗病毒化合物|意图刺激对一种或多种预定抗原的免疫应答的疫苗、佐剂、CTLA-4和PD-1通路拮抗剂和其他免疫调节剂、脂质、脂质体、肽、抗癌药剂和化疗药剂等。
化合物
术语“烷基”是指具有指定范围内的碳原子数的一价直链或支链饱和脂肪族烃基。因此，例如“C1-6烷基”(或“C1-C6烷基”)是指己烷基和戊烷基异构体、以及正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基、正丙基和异丙基、乙基、和甲基中的任意一种。作为另一个实例，“C1-4烷基”是指正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基、正丙基和异丙基、乙基、和甲基。
本文中使用的术语“亚烷基”是指具有指定范围内的碳原子数的二价直链饱和脂肪族烃基。
本文中使用的术语“烯基”是指一价直链或支链不饱和脂肪族烃基，其具有指定范围内的碳原子数并包括一个或多个双键。
本文中使用的术语“亚烯基”是指二价直链不饱和脂肪族烃基，其具有指定范围内的碳原子数并且包括一个或多个双键。
本文中使用的术语“炔基”是指一价直链或支链不饱和脂肪族烃基，其具有指定范围内的碳原子数并且包括一个或多个三键。
本文中使用的术语“亚炔基”是指二价直链不饱和脂肪族烃基，其具有指定范围内的碳原子数并且包括一个或多个三键。
术语“卤素”(或“卤代”)是指氟、氯、溴、和碘(也称为氟代、氯代、溴代、和碘代或F、Cl、Br、和I)。
术语“卤代烷基”是指指如上定义的烷基，其中一个或多个氢原子已被卤素替代。因此，例如“C1-6卤代烷基”(或“C1-C6卤代烷基”)是指具有一个或多个卤素取代基的如上定义的C1至C6直链或支链烷基。术语“氟烷基”具有类似含义，除了卤素取代基被限定为氟。适合的氟烷基包括(CH2)0-4CF3系列(即三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、3,3,3-三氟正丙基等)。
本文中使用的术语“卤代烯基”是指如上定义的烯基，其中一个或多个氢原子已被卤素替代。
本文中使用的术语“卤代炔基”是指如上定义的炔基，其中一个或多个氢原子已被卤素替代。
本文中使用的术语“烷氧基”单独或组合地包括包括与氧基连接原子连接的烷基。术语“烷氧基”还包括烷基醚基，其中，术语“烷基”如上定义，并且“醚”是指在其之间具有氧原子的两个烷基。适合的烷氧基的实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、甲氧基甲烷(也称为“二甲基醚”)、和甲氧基乙烷(也称为“乙基甲基醚”)。
本文中使用的术语“环烷基”是指具有指定碳原子数的含有一个环的饱和烃。环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、和环己基。
本文中使用的术语“杂环”、“杂环基”、或“杂环的”表示稳定的3至6元单环，其是饱和或不饱和的，并且由碳原子和选自N、O、和S中的一种至两种杂原子组成。杂环可以连接于任意杂原子或碳原子以产生稳定的结构。所述术语包括杂芳基部分。这样的杂环要素的实例包括但不限于氮杂环庚三烯基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并呋咱基、苯并吡喃基、苯并噻喃基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、色满基、噌啉基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并噻喃基、二氢苯并噻喃基砜、1,3-二氧杂环戊烷基、呋喃基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、吲哚啉基、吲哚基、异色满基、异吲哚啉基、异喹啉基、异噻唑烷基、异噻唑基、异噻唑烷基、吗啉基、萘啶基、噁二唑基、2-氧代氮杂环庚三烯基、噁唑基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吡啶基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹噁啉基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、硫杂吗啉基、硫杂吗啉基亚砜、噻唑基、噻唑啉基、噻吩并呋喃基、噻吩并噻吩基、三唑基和噻吩基。
本文中使用的术语“稠环”是指由直链或支链烷烃中的不同原子上的取代基形成的环状基团、或是指由另一个环中的不同原子上的取代基形成的环状基团。
本文中使用的术语“螺环”或“螺环的”是指由单个原子上的取代基形成的侧链环状基团。
除非另有明确说明，本文中所述的所有范围均包括在内；即，范围包括所述范围的上限和下限的值以及其间的所有值。作为示例，本文所述的温度范围、百分比、等同范围等包括范围的上限和下限以及其间的连续范围中的任何值。本文提供的数值以及术语“约”的使用可包括±1％、±2％、±3％、±4％、±5％、±10％、±15％和±20％的变化、以及这些数值等同物。
本文中使用的术语“一个或多个”项目包括从列表中选择的单个项目、以及从列表中选择的两个以上项目的混合。
在通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物和前述的药学可接受的盐中，原子可以表现出它们的天然同位素丰度，或者一种或多种原子可以将具有相同原子序数但原子质量或质量数不同于天然中主要发现的原子质量或质量数的同位素进行人工富集。本公开旨在包括通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物和前述的药学可接受的盐的所有适合的同位素变体。例如，氢(H)的不同同位素形式包括氕(1H)、氘(2H)和氚(3H)。氕是天然发现的主要的氢同位素。富集氘可以提供某些治疗优势，如增加体内半衰期或减少剂量需求，或者可以提供作为生物样品表征标准而言有用的化合物。同位素富集的通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物和前述的药学可接受的盐可以通过本领域技术人员熟知的常规技术或通过类似于本文中的方案和实施例中所述的方法，使用适当的同位素富集的试剂和/或中间体，而无需过度实验即可制备。
在通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物和前述的药学可接受的盐的特别的实施方案中，化合物同位素富集氘。在这些实施方案的方面中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8、和R9中的一个或多个可以包括氘。
如本文提供的一般结构式和特定化合物的结构所示，手性中心的直线包括(R)和(S)立体异构体、以及它们的混合物。此外，除非另有说明(例如100％纯化的化合物)，在某一位置提及特定的立体化学提供了具有所示立体化学的化合物，但不排除存在在指定位置具有不同立体化学的立体异构体。
对于没有特定立体构型名称或具有少于所有手性中心的名称的权利要求中的特定化合物(即物种)的叙述或描述，在这些形式由于存在一个或多个不对称中心而是可能的情况中，旨在对于这样的未指定的手性中心涵盖化合物的外消旋体、外消旋混合物、每种单独的对映异构体、非对映异构体混合物、和每种单独的非对映异构体。立体异构体的混合物的分离可以在合成通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物、或前述的药学可接受的盐的过程中在中间步骤实施，或者可以对最终外消旋产物进行。绝对立体化学可以通过结晶产物或结晶中间体的X射线晶体学确定，其根据需要用含有已知构型的立体中心的试剂衍生化。或者，可以通过振动圆二色(VCD)光谱分析确定绝对立体化学。本发明包括所有这样的异构体、以及它们的外消旋物、对映异构体、非对映异构体、互变异构体和混合物的盐、溶剂化物(包括水合物)和溶剂化盐。
本发明包括所有可能的对映异构体和非对映异构体、以及两种或更多种的立体异构体的混合物、例如对映异构体和/或非对映异构体的所有比例的混合物。因此，对映异构体是呈作为左旋体和右旋体两者的对映异构纯的形式、呈外消旋体的形式、和呈所有比例的两种对映异构体的混合物的形式的本发明的主题。在顺/反异构的情况下，本发明包括顺式和反式两种形式、以及这些形式的所有比例的混合物。根据期望，可以通过常规方法分离混合物，例如通过色谱法或结晶、通过使用立体化学一致的合成起始材料、或通过立体选择合成，从而制备单独的立体异构体。任选地，可以在分离立体异构体之前进行衍生化。立体异构体的混合物的分离可以在合成通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物、或前述的药学可接受的盐的过程中在中间步骤实施，或者可以对最终外消旋产物进行。绝对立体化学可以通过结晶产物或结晶中间体的X射线晶体学确定，其根据需要用含有已知构型的立体中心的试剂衍生化。除非指出特定的这样的外消旋体、对映异构体或非对映异构体的异构体、盐、溶剂化物(包括水合物)或溶剂化盐，本发明包括所有这样的异构体、以及它们的外消旋物、对映异构体、非对映异构体、互变异构体和混合物的盐、溶剂化物(包括水合物)和溶剂化盐。
术语“化合物”是指化合物，并且在某些实施方案中，只要稳定也是指其任意水合物或溶剂化物。水合物是与水络合的化合物，溶剂化物是与溶剂络合的化合物，所述溶剂可以是有机溶剂或无机溶剂。
“稳定的”化合物是可以制备和分离的化合物，并且其结构和特性保持或可以在足以允许将化合物用于本文所述目的(例如向受试者治疗给予)的一段时间内保持基本不变。本发明的化合物限于通式(Ia)、通式(Ia')、通式(Ib)、通式(Ib')、通式(I)和通式(I')或其药学可接受的盐所表示的稳定化合物。
盐
如上所述，本发明化合物可以以药学可接受的盐的形式使用。本领域技术人员将认识到本发明化合物可形成盐的那些例子。本文通过参考可能的盐描述了这些化合物的实例。这种参考仅用于说明。药学可接受的盐可与化合物一起用于治疗患者。然而，非药用盐在中间体化合物的制备中是有用的。
术语“药学可接受的盐”是指盐(包括内盐、如两性离子)，其具有与母体化合物类似的有效性，并且在生物学或其它方面不是不合需要的(例如对其接受者无毒性或其他有害性)。因此，本发明的一个实施方案提供了本发明化合物的药学可接受的盐。本文所用的术语“盐”表示下列任何一种：与无机和/或有机酸形成的酸性盐、以及与无机和/或有机碱形成的碱性盐。本发明化合物的盐可以通过本领域普通技术人员已知的方法形成，例如通过使本发明化合物与一定量的酸或碱(如等量)在介质(如盐在其中沉淀的介质)中或在水介质中反应，然后冻干，从而形成。
示例性的酸加成盐包括乙酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐(“甲磺酸盐”)、萘磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、磷酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、丁二酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐(也称为甲苯磺酸盐)等。适合的盐包括酸加成盐，其可以例如通过将化合物的溶液与药学可接受的酸、如盐酸、硫酸、乙酸、三氟乙酸或苯甲酸的溶液混合而形成。另外，通常认为适合于由碱性药物化合物形成药学有用的盐的酸例如在P.Stahl et al，Camille G.(eds.)，Handbookof PharmaceuticalSalts；Properties，Selection and Use.(2002)Zurich:Wiley-VCH；S.Berge et al、Journal of Pharmaceutical Sciences(1977)66(1)1-19；P.Gould，International J.ofPharmaceutics(1986)33201-217；Anderson et al，The Practice of MedicinalChemistry(1996)，Academic Press，New York；以及The Orange Book(美国食品药品监督管理局，Washington，D.C.在其网站上)中讨论。这些公开内容在此并入作为参考。
示例性的碱性盐包括铵盐、碱金属盐如钠、锂和钾盐、碱土金属盐如钙盐和镁盐、盐与有机碱(例如有机胺)如二环己胺、叔丁基胺、胆碱和与氨基酸如精氨酸、赖氨酸等的盐。碱性含氮基团可以用试剂如低级烷基卤化物(例如甲基、乙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物)、二烷基硫酸盐(例如二甲基，二乙基和二丁基硫酸盐)、长链卤化物(例如癸基、月桂基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基卤化物(例如苯甲基和苯乙基溴化物)等而季取代化。带有酸性部分的化合物可以与适合的药学可接受的盐混合，以提供例如碱金属盐(例如钠盐或钾盐)、碱土金属盐(例如钙盐或镁盐)、以及与适合的有机配体如季铵盐形成的盐。此外，在存在酸(-COOH)或醇基的情况下，可以使用药学可接受的酯来改变化合物的溶解度或水解特性。
所有这些酸式盐和碱式盐意图是本发明范围内的药学可接受的盐，并且所有酸和碱盐被认为与本发明目的的相应化合物的游离形式等同。
此外，当本发明的化合物含有碱性部分(例如但不限于脂肪族伯胺、仲胺、叔胺或环状胺；芳族或杂芳基胺、吡啶或咪唑)、和酸性部分(例如但不限于四唑或羧酸)两者时，可以形成两性离子(“内盐”)，并包括在本文所用的术语“盐”中。
要理解，本发明的某些化合物可以以在同一化合物中具有阴离子和阳离子中心以及净中性电荷的两性离子形式存在。这种两性离子包括在本发明中。
制备化合物的方法
下述方案和实施例中描述了多种制备通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物、和前述的药学可接受的盐的方法。起始材料和中间体由商业来源购买、由已知流程制造、或另有说明。在一些情况中，实施反应方案的步骤的顺序可以改变，以促进反应或者以避免不需要的反应产物。
下述方法和方案中，LG表示离去基团，其可以是卤化物基团或者三氟甲磺酸酯基团。变量R1、R2、R3、R4、R6、R8、和X2具有如上提供的相同含义。
方法1
苯并[b]噻吩2-甲酸b和其药学可接受的盐典型由邻卤代苯甲醛制备。顺序开始于在碱性条件下用α-硫代乙酸酯处理。所得化合物中的酯在碱性条件下裂解为羧酸，从而提供期望的取代的苯并[b]噻吩2-甲酸1C。
方案1
方法2
另一制备苯并[b]噻吩2-甲酸和其药学可接受的盐的方法具体在方案2中描述。顺序开始于2位被合适的1,3-二羰基、如β-酮酯取代的苯并[b]噻吩。其与α-卤代酯在碱性条件下反应从而提供2位上的烷基链取代。然后，将两个酯使用酸性或碱性条件水解；在进一步暴露于碱性条件后，对应于起始材料中的酯的羧酸经受脱羧基，从而给出期望的苯并[b]噻吩酮酸2C。
方案2
方法3
另一制备苯并[b]噻吩2-甲酸和其药学可接受的盐的方法具体在方案3中描述。顺序开始于在2位没有取代的苯并[b]噻吩。其用叔丁基锂处理，然后用环状酸酐处理，从而给出期望的4-酮羧酸产物3B。
方案3
方法4
另一制备苯并[b]噻吩2-甲酸和其药学可接受的盐的方法具体在方案4中描述。顺序开始于2位被羧酸取代的苯并[b]噻吩。其用草酰氯/二氯甲烷处理。所得酸酰氯与典型含有酯的烷基锌试剂反应，使用过渡金属、如铜或钯介导偶联。然后，酯在碱性或酸性条件下裂解，从而提供期望的苯并[b]噻吩γ-酮酸4D。
方案4
方法5
另一制备苯并[b]噻吩2-甲酸和其药学可接受的盐的方法具体在方案5中描述。顺序开始于2位被γ-酮酯取代并且在苯并[b]噻吩上具有卤化物或者三氟甲磺酸酯的苯并[b]噻吩。其用硼酸酯、酸或三氟硼酸盐、和钯催化剂在水性碱性条件下进行处理。然后，所得化合物中的酯在碱性条件下裂解为羧酸，从而提供期望的取代的苯并[b]噻吩5C。下述方案说明了R2取代基的引入，但当采用具有适当位置的LG的相关底物时，该相同的一般偶联方法也在特定的R3取代基中发生。
方案5
方法6
另一制备苯并[b]噻吩2-甲酸和其药学可接受的盐的方法涉及在亚硫酰氯的存在下将肉桂酸环化。所得酸酰氯与典型含有酯的烷基锌试剂反应，使用过渡金属、如铜或钯介导偶联。然后，酯在碱性或酸性条件下裂解，从而提供期望的苯并[b]噻吩γ-酮酸6D。
方案6
方法7
另一制备苯并[b]噻吩2-甲酸和其药学可接受的盐的方法具体在方案7中描述。顺序开始于与Weinreb酰胺7A的格氏反应，从而提供甲基酮7B。用LDA对酮脱质子，然后添加丙酮酸乙酯，给出7C。
方案7
使用方法
本文中记载的具有治疗应用的化合物、如通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物、实施例1至54的化合物、和前述的药学可接受的盐可以为了诱导免疫应答、诱导STING依赖性细胞因子产生、和/或诱导抗肿瘤活性而向患者给予。术语“给予”和其变体(例如“给予”化合物)是指将化合物提供给需要治疗的个体。化合物与一种或多种另外的活性药剂(例如对于治疗HCV感染有用的抗病毒剂、或用于治疗癌症的抗肿瘤剂)组合提供时，“给予”和其变体各自被理解为包括同时和按顺序提供所述化合物或盐与其他药剂。
本文中公开的化合物可以是STING激动剂。这些化合物潜在地在治疗包括但不限于细胞增殖疾病的疾病或病症中是有用的。细胞增殖疾病包括但不限于：癌症、良性乳头状瘤病、妊娠滋养细胞疾病和良性肿瘤疾病，如皮肤乳头状瘤(疣)和生殖器乳头状瘤。
在特定的实施方案中，要治疗的疾病或病症是细胞增殖疾病。在某些实施方案中，细胞增殖疾病是癌症。在特别的实施方案中，癌症选自脑癌和脊髓癌、头颈癌、白血病和血癌、皮肤癌、生殖系统癌症、胃肠系统癌症、肝和胆管癌、肾脏和膀胱癌、骨癌、肺癌、恶性间皮瘤、肉瘤、淋巴瘤、腺癌、甲状腺癌、心脏肿瘤、生殖细胞肿瘤、恶性神经内分泌(类癌)肿瘤、中线束癌、和未知原发癌(即其中发现转移性癌症、但原始癌症部位未知的癌症)。在特别的实施方案中，癌症存在于成年患者中；在另外的实施方案中，癌症存在于儿童患者中。在特别的实施方案中，癌症与AIDS有关。
在特定的实施方案中，癌症选自脑癌和脊髓癌。在特别的实施方案中，癌症选自间变性星形细胞瘤、成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、和成感觉神经母细胞瘤(estheosioneuroblastomas，也称为嗅觉母细胞瘤)。在特别的实施方案中，脑癌选自星形细胞肿瘤(例如毛细胞星形细胞瘤、室管膜下巨细胞星形细胞瘤、弥漫性星形细胞瘤、多形性黄色星形细胞瘤、间变性星形细胞瘤、星形细胞瘤、巨细胞胶质母细胞瘤、胶质母细胞瘤、继发性胶质母细胞瘤、原发性成人胶质母细胞瘤、和原发性小儿胶质母细胞瘤)、少突神经胶质瘤(例如，少突神经胶质瘤和间变性少突神经胶质瘤)，少突细胞肿瘤(例如少突细胞瘤和间变性少突细胞瘤)、室管膜瘤(例如粘液性室管膜瘤和间变性室管膜瘤)；成神经管细胞瘤、原始神经外胚层肿瘤、神经鞘瘤、脑膜瘤、非典型脑膜瘤、间变性脑膜瘤、垂体腺瘤、脑干胶质瘤、小脑星形细胞瘤、脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤、视觉通路和下丘脑神经胶质瘤、以及原发性中枢神经系统淋巴瘤。在这些实施方案的特定的例子中，脑癌选自神经胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、副神经节细胞瘤、和幕上原始神经外胚层肿瘤(sPNET)。
在特定的实施方案中，癌症选自头颈癌，包括鼻咽癌、鼻腔和鼻窦癌、下咽癌、口腔癌(例如鳞状细胞癌、淋巴瘤和肉瘤)、唇癌、口咽癌、唾液腺肿瘤、喉癌(例如喉鳞状细胞癌、横纹肌肉瘤)、和眼部癌症或眼癌。在特别的实施方案中，眼癌选自眼内黑素瘤和视网膜母细胞瘤。
在特别的实施方案中，癌症选自白血病和血癌。在特别的实施方案中，癌症选自骨髓增生性肿瘤、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常/骨髓增生性肿瘤、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合征(MDS)、慢性髓性白血病(CML)、骨髓增生性肿瘤(MPN)、MPN后AML\MDS后AML、del(5q)相关高危MDS或AML、急变期慢性粒细胞白血病、血管免疫母细胞性淋巴瘤、急性淋巴细胞白血病、Langerans细胞组织细胞增生症、毛细胞白血病和浆细胞肿瘤、包括浆细胞瘤和多发性骨髓瘤。本文引用的白血病可以是急性的或慢性的。
在特定的实施方案中，癌症选自皮肤癌。在特别的实施方案中，皮肤癌选自黑素瘤、鳞状细胞癌和基底细胞癌。
在特定的实施方案中，癌症选自生殖系统癌症。在特别的实施方案中，癌症选自乳腺癌、宫颈癌、阴道癌、卵巢癌、前列腺癌、阴茎癌和睾丸癌。在这些实施方案的特定的例子中，癌症是选自导管癌和叶状肿瘤中的乳腺癌。在这些实施方案的特定的例子中，乳腺癌可以是男性乳腺癌或女性乳腺癌。在这些实施方案的特定的例子中，癌症是选自鳞状细胞癌和腺癌中的宫颈癌。在这些实施方案的特定的例子中，癌症是选自上皮癌中的卵巢癌。
在特定的实施方案中，癌症选自胃肠系统癌症。在特别的实施方案中，癌症选自食道癌、胃癌(也称为胃部癌)、胃肠道类癌、胰腺癌、胆囊癌、结肠直肠癌和肛门癌。在这些实施方案的例子中，癌症选自食道鳞状细胞癌、食道腺癌、胃腺癌、胃肠道类癌、胃肠道间质瘤、胃淋巴瘤、胃肠淋巴瘤、胰腺实性假乳头状肿瘤、胰腺母细胞瘤，胰岛细胞肿瘤、胰腺癌包括腺泡细胞癌和导管腺癌、胆囊腺癌、结肠直肠腺癌和肛门鳞状细胞癌。
在特定的实施方案中，癌症选自肝和胆管癌。在特别的实施方案中，癌症是肝癌(也称为肝细胞癌)。在特别的实施方案中，癌症是胆管癌(也称为胆管癌)；在这些实施方案的例子中，胆管癌选自肝内胆管癌和肝外胆管癌。
在特定的实施方案中，癌症选自肾脏和膀胱癌。在特别的实施方案中，癌症是选自肾细胞癌、肾母细胞瘤和移行细胞癌中的肾癌。在特别的实施方案中，癌症是选自尿路上皮癌(一种移行细胞癌)、鳞状细胞癌和腺癌中的膀胱癌。
在特定的实施方案中，癌症选自骨癌。在特别的实施方案中，骨癌选自骨肉瘤、骨恶性纤维组织细胞瘤、尤文肉瘤、脊索瘤(沿着脊柱的骨癌)。
在特定的实施方案中，癌症选自肺癌。在特别的实施方案中，肺癌选自非小细胞肺癌、小细胞肺癌、支气管肿瘤和胸膜肺母细胞瘤。
在特定的实施方案中，癌症选自恶性间皮瘤。在特定的实施方案中，癌症选自上皮间皮瘤和肉瘤样。
在特定的实施方案中，癌症选自肉瘤。在特别的实施方案中，肉瘤选自中央软骨肉瘤、中央和骨膜软骨瘤、纤维肉瘤、腱鞘透明细胞肉瘤和卡波西氏肉瘤。
在特定的实施方案中，癌症选自淋巴瘤。在特定实施方案中，癌症选自霍奇金淋巴瘤(例如Reed-Sternberg细胞)、非霍奇金淋巴瘤(例如弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、蕈样真菌病、Sezary综合征、原发性中枢神经系统淋巴瘤)、皮肤T细胞淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤。
在特定的实施方案中，癌症选自腺癌。在特定的实施方案中，癌症选自肾上腺皮质癌(也称为肾上腺皮质癌或肾上腺皮质癌)、嗜铬细胞瘤、副神经节瘤、垂体瘤、胸腺瘤和胸腺癌。
在特定的实施方案中，癌症选自甲状腺癌。在特别的实施方案中，甲状腺癌选自甲状腺髓样癌、乳头状甲状腺癌和滤泡性甲状腺癌。
在特定的实施方案中，癌症选自生殖细胞肿瘤。在特定的实施方案中，癌症选自恶性颅外生殖细胞肿瘤和恶性性腺外生殖细胞肿瘤。在这些实施方案的特定的例子中，恶性性腺外生殖细胞肿瘤选自非精原细胞瘤和精原细胞瘤。
在特定的实施方案中，癌症选自心脏肿瘤。在特定实施方案中，心脏肿瘤选自恶性畸胎瘤、淋巴瘤、横纹肌肉瘤、血管肉瘤、软骨肉瘤、婴儿纤维肉瘤和滑膜肉瘤。
在特定的实施方案中，细胞增殖病症选自良性乳头状瘤病、良性肿瘤疾病和妊娠滋养细胞疾病。在特别的实施方案中，良性肿瘤疾病选自皮肤乳头状瘤(疣)和生殖器乳头状瘤。在特定的实施方案中，妊娠滋养细胞疾病选自葡萄胎和妊娠滋养细胞肿瘤(例如侵袭性痣、绒毛膜癌、胎盘部位滋养细胞肿瘤和上皮样滋养细胞肿瘤)。
如本文所用，术语“治疗”和“治疗”是指其中可能存在减缓、中断、阻滞、控制或停止本文所述疾病或病症进展的所有过程。该术语不一定表示完全消除所有疾病或病症症状。
术语“给予”和/或“给予”化合物应理解为包括向受试者提供本文所述的化合物或其药学可接受的盐、和前述的组合物。
向受试者给予的化合物的量是足以在受试者中诱导免疫应答和/或诱导STING依赖性I型干扰素产生的量。在一个实施方案中，化合物的量可以是“有效量”或“治疗有效量”，使得主题化合物以分别引发研究人员、兽医、医生或其他临床医生所寻求的生物学或医学(即意图治疗)的组织、系统、动物或人的应答的量给予。有效量不一定包括与化合物给予有关的毒性和安全性的考虑。
有效量的化合物将随所选的特定化合物而变化(例如考虑化合物的效能、药效和/或半衰期)；所选的给予途径；要治疗的病况；要治疗的病况的严重程度；被治疗受试者的年龄、体型、体重和身体状况；被治疗受试者的病史；治疗的持续时间；合并疗法的性质；期望的治疗效果等因素，并且可以由本领域技术人员常规确定。
本文公开的化合物可以通过任何合适的途径给予，包括口服和肠胃外给予。肠胃外给予典型通过注射或输注进行，包括静脉内、肌肉内和皮下注射或输注。
本文公开的化合物可以给予一次，或根据其中在给定的一段时间内以不同的时间间隔给予多个剂量的给予方案给予。例如，剂量可以每天给予一次、两次、三次或四次。可以给予剂量直至达到期望的治疗效果、或无限期地维持期望的治疗效果。本文公开的化合物的适合给予方案取决于该化合物的药代动力学特性、例如吸收、分布和半衰期，其可由本领域技术人员确定。此外，对于本文公开的化合物，包括给予这样的方案的持续时间在内的适合的给予方案取决于要治疗的疾病或病况、疾病或病况的严重程度、被治疗的受试者的年龄和身体状况、被治疗的受试者的病史、合并治疗的性质、期望的治疗效果等因素，其均落入本领域技术人员的知识和专业内。本领域技术人员将进一步理解，在个体受试者对给予方案的应答或个体受试者的需求随时间改变的情况下，可能需要调整适合的给予方案。典型的每日剂量可根据所选的特定给予途径而变化。
本公开的一个实施方案提供治疗细胞增殖病症的方法，其包括向需要其治疗的受试者给予治疗有效量的通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物)、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物和前述的药学可接受的盐。在实施方案中，要治疗的疾病或病症是细胞增殖疾病。在这些实施方案的方面中，细胞增殖疾病是癌症。在这些实施方案的另外的方面中，癌症选自脑癌和脊髓癌、头颈癌、白血病和血癌、皮肤癌、生殖系统癌症、胃肠系统癌症、肝和胆管癌、肾脏和膀胱癌、骨癌、肺癌、恶性间皮瘤、肉瘤、淋巴瘤、腺癌、甲状腺癌、心脏肿瘤、生殖细胞肿瘤、恶性神经内分泌(类癌)肿瘤、中线束癌、和未知原发癌。
在一个实施方案中，本文中公开了通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物、或前述的药学可接受的盐在治疗中的用途。化合物可用于在受试者(例如需要这种抑制的哺乳动物)中诱导免疫应答和/或诱导STING依赖性I型干扰素产生的方法，所述方法包括向受试者给予有效量的化合物。
在一个实施方案中，本文公开了一种药物组合物，其包含至少一种通式(Ia)的化合物、至少一种通式(Ia')的化合物、至少一种通式(Ib)的化合物、至少一种化合物通式(Ib')的化合物、至少一种通式(I)的化合物、至少一种通式(I')的化合物、或至少一种前述的药学可接受的盐，用于潜在治疗以诱导免疫应答和/或诱导STING依赖性I型干扰素产生。
本文公开的一个实施方案是通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物、或前述的药学可接受的盐在制造用于诱导免疫应答和/或用于诱导STING依赖性I型干扰素产生的药物中的用途。在实施方案中，要治疗的疾病或病症是细胞增殖疾病。在这些实施方案的方面中，细胞增殖疾病是癌症。在这些实施方案的另外的方面中，癌症选自脑癌和脊髓癌、头颈癌、白血病和血癌、皮肤癌、生殖系统癌症、胃肠系统癌症、肝和胆管癌、肾脏和膀胱癌、骨癌、肺癌、恶性间皮瘤、肉瘤、淋巴瘤、腺癌、甲状腺癌、心脏肿瘤、生殖细胞肿瘤、恶性神经内分泌(类癌)肿瘤、中线束癌、和未知原发癌。
组合物
本文中使用的术语“组合物”旨在涵盖包含特定量的特定化合物的剂型、以及直接或间接由特定量的特定化合物的组合得到的任何剂型。该术语旨在涵盖包含通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物、或前述的药学可接受的盐、以及一种或多种药学可接受的载体或赋形剂的剂型。因此，本公开的组合物涵盖通过混合本公开的化合物和一种或多种药学可接受的载体或赋形剂而制造的任何组合物。“药学可接受的”是指载体或赋形剂与本文公开的化合物和组合物的其他成分相容。
为了诱导免疫应答和/或诱导STING依赖性I型干扰素产生，通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物、或前述的药学可接受的盐可以通过使活性药剂与所述药剂的活性位点产生接触而给予。化合物可以通过可与药物结合的常规方法，以单独的治疗剂形式或以治疗剂的组合形式给予。化合物可以单独给予，但典型与基于所选给予途径和标准药学实践而选择的药物载体一起给予。
在一个实施方案中，本文公开了一种组合物，其包含通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物、或前述的药学可接受的盐、以及一种或多种药学可接受的载体或赋形剂。组合物可以以原料药形式制备和包装，其中可以提取治疗有效量的本公开化合物，然后将其以例如粉末或糖浆形式向受试者给予。或者，组合物可以以单位剂型形式制备和包装，其中，各物理分离的单位含有治疗有效量的通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物、或前述的药学可接受的盐。
本文公开的化合物和药学上可接受的载体或一种或多种赋形剂将典型配制成适合于通过期望给予途径给予受试者的剂型。例如，剂型包括适于(1)口服给予的剂型，例如片剂、胶囊剂、囊片剂、丸剂、锭剂、粉末剂、糖浆剂、酏剂、混悬剂、溶液剂、乳剂、小药囊剂和扁囊剂；以及(2)肠胃外给予，例如无菌溶液剂、混悬剂和用于重构的粉末剂。适合的药学可接受的载体或赋形剂将根据所选的特定剂型而变化。此外，可以为了它们在组合物中可能发挥的特定功能而选择适合的药学可接受的载体或赋形剂。例如，可以为了它们促进一致剂型生产的能力而选择某些药学可接受的载体或赋形剂。可以为了它们促进稳定剂型生产的能力而选择某些药学可接受的载体或赋形剂。可以为了它们促进本文公开的化合物从身体的一个器官或一个部分运载或输运到身体的另一个器官或另一个的能力而选择某些药学可接受的载体或赋形剂。可以为了它们增强患者依从性的能力而选择某些药学可接受的载体或赋形剂。
适合的药学可接受的赋形剂包括以下类型的赋形剂：稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、填充剂、助流剂、造粒剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、共溶剂、混悬剂、乳化剂、甜味剂、矫味剂、味道掩蔽剂、着色剂、抗结块剂、保湿剂、螯合剂、增塑剂、增粘剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂。
本领域技术人员具有本领域的知识和技能，以适当的量选择适合的药学可接受的载体和赋形剂用于本公开的组合物中。此外，本领域技术人员可获得许多资源，其描述了药学可接受的载体和赋形剂，并且可用于选择适合的药学可接受的载体和赋形剂。实例包括Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company)、The Handbook ofPharmaceutical Additives(Gower Publishing Limited)、和The Handbook ofPharmaceutical Excipients(the American Pharmaceutical Association and thePharmaceutical Press)。
本公开的组合物使用本领域技术人员已知的技术和方法制备。本领域常用的一些方法被描述于Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company)中。
在一个实施方案中，本公开内容涉及固体口服剂型，例如片剂或胶囊剂，其包含治疗有效量的通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物、或前述的药学可接受的盐、以及稀释剂或填充剂。适合的稀释剂和填充剂包括乳糖、蔗糖、右旋糖、甘露醇、山梨糖醇、淀粉(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉和预糊化淀粉)、纤维素和其衍生物(例如微晶纤维素)、硫酸钙和磷酸氢钙。固体口服剂型可进一步包含粘合剂。适合的粘合剂包括淀粉(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉和预糊化淀粉)、明胶、阿拉伯胶、藻酸钠、藻酸、黄蓍胶、瓜尔胶、聚维酮和纤维素和其衍生物(例如微晶纤维素)。固体口服剂型可进一步包含崩解剂。适合的崩解剂包括交聚维酮、淀粉乙醇酸钠、交联羧甲基纤维素、藻酸和羧甲基纤维素钠。固体口服剂型可进一步包含润滑剂。适合的润滑剂包括硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙和滑石。
适当时，可以将用于口服给予的剂量单位制剂微囊化。还可以制备组合物以延长或缓慢释放，例如通过将颗粒材料包衣或包埋在聚合物、蜡等中。
本文公开的化合物还可以与作为靶向药物载体的可溶性聚合物偶联。这些聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺苯酚、聚羟乙基天冬酰胺苯酚、或被棕榈酰残基取代的聚环氧乙烷聚赖氨酸。此外，本发明的化合物可以与一类可生物降解的聚合物偶联，所述聚合物可用于实现药物的受控释放，例如聚乳酸、聚ε-己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯、和交联或两亲性水凝胶嵌段共聚物。
在一个实施方案中，本公开涉及液体口服剂型。口服液体如溶液剂、糖浆剂和酏剂可以以剂量单位形式制备，使得给定量含有预定量的本文公开的化合物或其药学可接受的盐。糖浆剂可以通过将本发明的化合物溶解在适当调味的水溶液中来制备；酏剂通过使用无毒的酒精载体来制备。混悬剂可以通过将本文公开的化合物分散在无毒载体中来配制。还可加入增溶剂和乳化剂(如乙氧基化异硬脂醇和聚氧乙烯山梨糖醇醚)、防腐剂、调味添加剂(如薄荷油)、或其它天然甜味剂或糖精、或其它人造甜味剂等。
在一个实施方案中，本公开涉及用于肠胃外给予的组合物。适合于胃肠外给予的组合物包括：水性和非水性无菌注射溶液，其可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和溶质，其使制剂与意图接受者的血液等渗；以及，水性和非水性无菌混悬剂，其可以包括混悬剂和增稠剂。组合物可以存在于单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿和小瓶中，并且可以以冷冻干燥(冻干)状态储存，仅需要在即将使用前添加无菌液体载体、例如水以用于注射。临配注射溶液和混悬剂可由无菌粉末、颗粒剂和片剂制备。
组合
通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物、和/或前述的药学可接受的盐可以与一种或多种另外的活性药剂组合给予。在实施方案中，可以将一种或多种通式(Ia)的化合物、一种或多种通式(Ia')的化合物、一种或多种通式(Ib)的化合物、一种或多种通式(Ib')的化合物、一种或多种通式(I)的化合物、一种或多种通式(I')的化合物、或一种或多种前述的药学可接受的盐、与一种或多种另外的活性药剂共同给予。一种或多种另外的活性药剂可以以与通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物、或前述的药学可接受的盐形成的单一剂型给予，或者一种或多种另外的活性药剂可以以与含有通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物、或前述的药学可接受的盐相分离的一个或多个剂型给予。
一种或多种另外的活性药剂可以适当以药学可接受的盐形式提供。
一种或多种另外的活性药剂可以是选自STING激动剂化合物、抗病毒化合物、抗原、佐剂、抗癌剂、CTLA-4、LAG-3和PD-1途径拮抗剂、脂质、脂质体、肽、细胞毒性剂、化疗药剂、免疫调节细胞系、检查点抑制剂、血管内皮生长因子(VEGF)受体抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、平滑抑制剂、烷化剂、抗肿瘤抗生素、抗代谢物、维甲酸和免疫调节剂包括但不限于抗癌疫苗中的一种或多种药剂。将要理解的是，这样的一种或多种另外的活性药剂可以以药学可接受的盐形式提供。将要理解的是，上述另外的活性药剂的描述可能是重叠的。还将要理解的是，会对治疗组合进行优化，并且要理解的是，使用通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物或前述的药学可接受的盐、以及一种或多种另外的活性药剂的最佳组合将基于个体患者的需求而确定。
本文公开的化合物可以与一种或多种其他活性药剂组合使用，所述其他活性药剂包括但不限于用于预防、治疗、控制、改善或降低特定疾病或病况风险(例如细胞增殖疾病)的其他抗癌剂。在一个实施方案中，本文公开的化合物与一种或多种其他抗癌剂组合，用于预防、治疗、控制、改善或降低可使用本文公开的化合物的特定疾病或病况的风险。这样的其他活性药剂可以通过其通常使用的途径和量，与本公开的化合物同时或相继给予。
当本文公开的化合物与一种或多种其他活性药剂同时使用时，预想除了本文公开的化合物之外还含有这样的其他活性药剂的组合物。因此，本公开的组合物还包括除了本文公开的化合物之外还含有一种或多种其他活性成分的那些。本文公开的化合物可以与一种或多种其他活性药剂同时或在其之前或之后给予。本文公开的化合物可以通过相同或不同的给予途径分开给予，或者与一种或多种其他药剂在同一药物组合物中一起给予。
以组合形式提供的产品可以包括包含通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物或前述的药学可接受的盐、以及一种或多种其它活性药剂一起存在于同一药物组合物中的组合物；或者可以以分离的形式包括包含通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I)的化合物(I')、或前述的药学可接受的盐的组合物、以及包含一种或多种其他活性药剂的组合物，所述分离的形式例如以试剂盒的形式、或以设计为能够同时或以单独的给予方案进行分别给予的任何形式。
通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物、或前述的药学可接受的盐与第二活性药剂的重量比可以改变，并且取决于每种药物的治疗有效剂量。通常，将使用各自的治疗有效剂量。本文公开的化合物与其他活性药剂的组合通常也在上述范围内，但在各情况中，应当使用治疗有效剂量的每种活性药剂。在这样的组合中，本文公开的化合物和其他活性药剂可以分开给予或联合给予。另外，一种要素的给予可以在给予一种或多种其他药剂之前、同时或之后进行。
在一个实施方案中，本发明提供一种组合物，其包含通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物、或前述的药学可接受的盐、以及至少一种其它活性药剂作为在治疗中用于同时、分别或依次使用的联合制剂。在一个实施方案中，该疗法是治疗细胞增殖疾病，例如癌症。
在一个实施方案中，本公开提供了包含两种或更多种单独的药物组合物的试剂盒，其中至少一种包含通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物、或前述的药学可接受的盐。在一个实施方案中，试剂盒包含用于分别保留所述组合物的装置，例如容器、分开的瓶子或分开的箔包。这样的试剂盒的一个例子是泡罩包装，典型用于包装片剂、胶囊剂等。
本公开的试剂盒可用于给予例如口服和肠胃外的不同剂型，用于以不同剂量间隔给予单独的组合物，或用于对相互分离单独的组合物进行滴定。为了有助于依从性，本公开的试剂盒典型包含给予指导。
本文公开了通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物或前述的药学可接受的盐用于治疗细胞增殖疾病的用途，其中，药物被制备用于与另一种活性药剂一起给予。本公开还提供了另一种活性药剂用于治疗细胞增殖疾病的用途，其中药物与通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物或前述的药学可接受的盐一起给予。
本公开还提供通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物或前述的药学可接受的盐用于治疗细胞增殖疾病的用途，其中患者先前(例如在24小时内)用另一种活性药剂治疗。本公开还提供了另一种活性药剂用于治疗细胞增殖疾病的用途，其中患者先前(例如在24小时内)用通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物或前述的药学可接受的盐进行了治疗。第二药剂可在给予本文公开的化合物后一周、数周、一个月或数月给予。
可与本文公开的通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物或前述的药学可接受的盐组合使用的STING激动剂化合物包括但不限于环状二核苷酸化合物。
可与本文公开的通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物或前述的药学可接受的盐组合使用的抗病毒化合物包括乙型肝炎病毒(HBV)抑制剂、丙型肝炎病毒(HCV)蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂，HCV NS4A抑制剂、HCV NS5A抑制剂、HCV NS5b抑制剂和人免疫缺陷病毒(HIV)抑制剂。这样的抗病毒化合物可以适当以药学可接受的盐形式提供。
可与通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物或前述的药学可接受的盐组合使用的抗原和佐剂包括B7共刺激分子、白细胞介素-2、干扰素-γ、GM-CSF、CTLA-4拮抗剂、OX-40/0X-40配体、CD40/CD40配体、沙格司酮、左旋咪唑、痘苗病毒、卡介苗(BCG)、脂质体、明矾、弗氏完全或不完全佐剂、解毒内毒素、矿物油、表面活性物质如脂质蛋白、Pluronic多元醇、多阴离子、肽和油、或烃乳液。可加入佐剂、例如氢氧化铝或磷酸铝，以增加疫苗触发、增强或延长免疫应答的能力。具有潜力佐剂还有其他材料、例如细胞因子、趋化因子和细菌核酸序列如CpG、Toll样受体(TLR)9激动剂以及TLR2、TLR 4、TLR 5、TLR 7、TLR 8、TLR 9的另外的激动剂包括脂蛋白、LPS、单磷酸脂质A、脂磷壁酸、咪喹莫特、瑞喹莫德；以及还有视黄酸诱导基因I(RIG-I)激动剂、例如Poly I:C，其单独使用或与所述组合物组合使用。这样的抗原和佐剂可以适当以药学可接受的盐形式提供。
CLTA-4和PD-1途径是免疫应答的重要负调节剂。激活的T细胞上调CTLA-4，其结合抗原呈递细胞并抑制T细胞刺激、IL-2基因表达和T细胞增殖；已经在结肠癌、转移性前列腺癌和转移性黑素瘤的小鼠模型中观察到这些抗肿瘤作用。PD-1与活性T细胞结合并抑制T细胞激活；PD-1拮抗剂也显示出抗肿瘤作用。CTLA-4和PD-1通路拮抗剂可与本文公开的通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物或前述的药学可接受的盐组合使用，其包括伊匹单抗、tremelimumab、纳武单抗、帕博利珠单抗、CT-011、AMP-224和MDX-1106。
“PD-1拮抗剂”或“PD-1通路拮抗剂”是指阻断癌细胞上表达的PD-L1与免疫细胞(T细胞、B细胞或NKT细胞)上表达的PD-1结合、并且优选还阻断癌细胞上表达的PD-L2与免疫细胞表达的PD-1的结合的任何化合物或生物分子。PD-1和其配体的替代名称或同义词包括：对于PD-1而言的PDCD1、PD1、CD279和SLEB2；对于PD-L1而言的PDCD1L1、PDL1、B7H1、B7-4、CD274和B7-H；以及对于PD-L2而言的PDCD1L2、PDL2、B7-DC、Btdc和CD273。在其中治疗人类个体的本公开的任何治疗方法\药物和用途中，PD-1拮抗剂阻断人PD-L1与人PD-1的结合，并且优选阻断人PD-L1和PD-L2两者人PD-1的结合。人PD-1氨基酸序列可以在NCBILocus No.：NP_005009中找到。人PD-L1和PD-L2氨基酸序列可以分别在NCBILocus No.：NP_054862和NP_079515中找到。
可用于本公开的任何治疗方法、药物和用途的PD-1拮抗剂包括单克隆抗体(mAb)或其抗原结合片段，其特异性地结合于PD-1或PD-L1，并且优选特异性结合于人PD-1或人PD-L1。mAb可以是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体，并且可以包括人恒定区。在一些实施方案中，人恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4恒定区，并且在优选的实施方案中，人恒定区是IgG1或IgG4恒定区。在一些实施方案中，抗原结合片段选自Fab、Fab'-SH、F(ab')2、scFv和Fv片段。
结合于人PD-1并且可用于本公开的治疗方法、药物和用途的mAb的实例描述于美国专利号US7488802、US7521051、US8008449、US8354509和US8168757、PCT国际专利申请公开号中WO2004/004771、WO2004/072286和WO2004/056875、以及美国专利申请公开号US2011/0271358中。
结合于人PD-L1并且可用于本公开的治疗方法、药物和用途的mAb的实例描述于PCT国际专利申请号WO2013/019906和WO2010/077634A1、以及美国专利号US8383796中。在本公开的治疗方法、药物和用途中可用作PD-1拮抗剂的特异性抗人PD-L1mAb包括MPDL3280A、BMS-936559、MEDI4736、MSB0010718C、以及分别包含WO2013/019906的SEQ IDNO：24和SEQ ID NO：21的重链和轻链可变区域的抗体。
可用于本公开的任何治疗方法、药物和用途的其他PD-1拮抗剂包括特异性结合于PD-1或PD-L1、并且优选特异性结合于人PD-1或人PD-L1的免疫粘附，例如含有融合于恒定区(例如免疫球蛋白分子的Fc区)的PD-L1或PD-L2的细胞外或PD-1结合部分的融合蛋白。特异性结合于PD-1的免疫粘附分子的实例描述于PCT国际专利申请公开号WO2010/027827和WO2011/066342中。在本公开的治疗方法、药物和用途中可用作PD-1拮抗剂的特异性融合蛋白包括AMP-224(也称为B7-DCIg)，其是PD-L2-FC融合蛋白并且与结合于人PD-1。
可与通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物或前述的药学可接受的盐组合使用的细胞毒性剂的实例包括但不限于三氧化二砷(以商品名
销售)、天冬酰胺酶(也称为L-天冬酰胺酶和欧文氏菌L-天冬酰胺酶，以商品名
和
销售)。
可与本文公开的通式(Ia)的化合物、通式(Ia')的化合物、通式(Ib)的化合物、通式(Ib')的化合物、通式(I)的化合物、通式(I')的化合物或前述的药学可接受的盐组合使用的化疗药剂包括醋酸阿比特龙、六甲蜜胺、脱水长春碱、auristatin、蓓萨罗丁、比卡鲁胺、BMS 184476、2,3,4,5,6-五氟-N-(3-氟-4-甲氧基苯基)苯磺酰胺、博来霉素、N,N-二甲基-L-缬氨酰基-L-缬氨酰基-N-甲基-L-缬氨酰基-L-脯氨酰基-1-脯氨酸-叔丁酰胺、cachesetin、cemadotin、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、3',4'-二脱氢-4'脱氧-8'-去甲-长春碱、多西紫杉醇、doxetaxel、环磷酰胺、卡铂、卡莫司汀、顺铂、cryptophycin、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪(DTIC)、放线菌素、柔红霉素、地西他滨、海兔毒素、多柔比星(阿霉素)、依托泊苷、5-氟尿嘧啶、非那雄胺、氟他胺、羟基脲和羟基脲紫杉烷、异环磷酰胺、利阿唑、氯尼达明、洛莫司汀(CCNU)、MDV3100、二氯甲基二乙胺(氮芥)、美法仑、米伏布林羟乙基磺酸盐、根瘤菌素、sertenef、链脲霉素、丝裂霉素、甲氨蝶呤、紫衫烷、尼鲁米特、纳武单抗、奥那司酮、紫杉醇、帕博丽珠单抗、泼尼莫司汀、丙卡巴肼、RPR109881、磷酸斯莫司汀、他莫昔芬、他索纳明、紫杉醇、维甲酸、长春碱、长春新碱、硫酸长春地辛和长春氟宁。这样的化疗药剂可以适当以药学可接受的盐形式提供。
血管内皮生长因子(VEGF)受体抑制剂的实例包括但不限于贝伐单抗(由Genentech/Roche以商标AVASTIN销售)、阿西替尼(在PCT国际专利公开号WO01/002369中描述)、丙氨酸布立尼布((S)-((R)-1-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-5-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基氧基)丙-2-基)2-氨基丙酸酯，也称为BMS-582664)、莫特塞尼(N-(2,3-二氢-3,3-二甲基-1H-吲哚-6-基)-2-[(4-吡啶基甲基)氨基]-3-吡啶甲酰胺，并描述于PCT国际专利申请公开号WO02/068470)、帕西瑞肽(也称为SO 230，并描述于PCT国际专利公开号WO02/010192)、和索拉非尼(以商品名NEXAVAR销售)。这样的抑制剂可以适当以药学可接受的盐形式提供。
拓扑异构酶II抑制剂的实例包括但不限于依托泊苷(也称为VP-16和依托泊苷磷酸盐，以商品名TOPOSAR、VEPESID和ETOPOPHOS销售)、和替尼泊苷(也称为VM-26，以商品名VUMON销售)。这样的抑制剂可以适当以药学可接受的盐形式提供。
烷基化剂的实例包括但不限于5-氮杂胞苷(以商品名VIDAZA销售)、地西他滨(以商品名DECOGEN销售)、替莫唑胺(以商品名TEMODAR和TEMODAL由Schering-Plough/Merck销售)、更生霉素(也称为放线菌素-D，并以商品名COSMEGEN销售)、美法仑(也称为L-PAM、L-溶细胞素和苯丙氨酸芥，以商品名ALKERAN销售)、六甲蜜胺(也称为六甲基三聚氰胺(HMM)，以商品名HEXALEN销售)、卡莫司汀(以商品名BCNU销售)、苯达莫司汀(以商品名TREANDA销售)、白消安(以商品名
和
销售)，卡铂(以商品名
销售)、洛莫司汀(也称为CCNU，以商品名
销售)、顺铂(也称为CDDP，以商品名
和
-AQ销售)、苯丁酸氮芥(以商品名
销售)、环磷酰胺(以下商品名
和
销售)、达卡巴嗪(也称为DTIC、DIC和咪唑甲酰胺，以商品名
销售)，altretamine(也称为六甲基三聚氰胺(HMM)，以商品名HEXALEN销售)、异环磷酰胺(以商品名出售)
)、丙卡巴肼(以商品名
销售)、二氯甲基二乙胺(也称为氮芥、芥子碱和盐酸甲氯乙胺，以商品名
销售)、链脲霉素(以商品名
销售)、噻替派(也称为硫代磷酰胺、TESPA和TSPA，并以商品名
销售)。这样的烷基化剂可以适当以药学可接受的盐形式提供。
抗肿瘤抗生素的实例包括但不限于多柔比星(以商品名
和
销售)、博来霉素(以商品名
销售)、道诺霉素(也称为盐酸道诺霉素、正定霉素和盐酸柔红霉素，以商品名
销售)、道诺霉素脂质体(柠檬酸道诺霉素，以商品名
销售)、米托蒽醌(也称为DHAD，以商品名
销售)、表柔比星(以商品名ELLENCETM销售)、伊达比星(以商品名
IDAMYCIN
销售)、和丝裂霉素C(以商品名
销售)。这样的抗肿瘤抗生素可以适当以药学可接受的盐形式提供。
抗代谢物的实例包括但不限于克拉宾(2-氯脱氧腺苷，以商品名
销售)、5-氟尿嘧啶(以商品名
销售)、6-硫鸟嘌呤(以商品名
销售)、培美曲塞(以商品名
销售)、阿糖胞苷(也称为阿拉伯糖基胞嘧啶(Ara-C)，以商品名
销售)、阿糖胞苷脂质体(也称为脂质体Ara-C，以商品名DEPOCYTTM销售)、地西他滨(以商品名
出售)、羟基脲(以商品名
DROXIATM和MYLOCELTM销售)、氟达拉滨(以商品名
销售)、氟尿苷(以商品名
销售)、克拉屈滨(也称为2-氯脱氧腺苷(2-CdA)，以商品名LEUSTATINTM销售)、甲氨蝶呤(也称为甲氨蝶呤、甲氨蝶呤钠(MTX)，以商品名
和TREXALLTM销售)、和喷司他丁(以商品名
销售)。这样的抗代谢物可以适当以药学可接受的盐形式提供。
类视黄醇的实例包括但不限于阿利维A酸(以商品名
销售)、维甲酸(全反式视黄酸，也称为ATRA，以商品名
销售)、异维A酸(13-c/s-视黄酸，以商品名
和
销售)、和贝沙罗汀(以商品名
销售)。这样的化合物可以适当以药学可接受的盐形式提供。
活性：STING生物化学[3H]cGAMP竞争测定
本文实施例中描述的各个化合物被定义为STING激动剂，其通过(i)结合于STING蛋白，如通过STING生物化学[3H]cGAMP竞争测定中，在20uM(受试化合物的浓度)下氚标记的cGAMP配体与STING蛋白的结合降低至少20％所证明的；和(ii)证明干扰素产生在THP1细胞测定中以30uM诱导IFN-β分泌6％或更多(其中，将cGAMP在30uM引起的诱导设为100％)。
化合物结合于STING的能力使用放射性过滤膜结合测定，通过对于人STING受体膜而言与氚标记的cGAMP配体竞争的能力来定量。结合测定利用从过表达内部制备的全长HAQSTING的Hi-Five细胞膜获得的STING受体、和也在内部纯化的氚标记的cGAMP配体。
以下实验流程详述了本公开的特定实施例的制备。实施例的化合物在下面的流程和表格中以中性形式取出。在一些情况下，取决于用于其最终纯化的方法和/或内在分子特性，化合物被分离为盐。这些实施例仅用于说明目的，并不旨在以任何方式限制本公开的范围。
实施例
缩写
(COCl)2 草酰氯
19F NMR 19F核磁共振光谱
1H NMR 1H(质子)核磁共振光谱
2',3'cGAMP、cGAMP 2',3'-单磷酸环鸟苷-单磷酸腺苷
ACN、MeCN、CH3CN 乙腈
AcOH、HOAc 乙酸
AlCl3 三氯化铝
AMP 单磷酸腺苷
aq 水性
Ar 氩气
ATP 5'-三磷酸腺苷
BIIC 杆状病毒感染的昆虫细胞
br 宽峰
Br2 溴
cat 目录号
CD3OD 氘富集的甲醇，氘代甲醇
CDCl3 氘代三氯甲烷
cGAMP 环GMP-AMP合成酶
CH2I2 二碘甲烷
CH3Cl 氯甲烷，甲基氯
CHCl3 三氯甲烷
Ci 居里，非标准放射性活度单位；1Ci＝3.7×1010Bq，其中，Bq是贝克勒尔，SI放射性活度单位，等于每秒1次衰变(dps)
CO2 二氧化碳
CPhos Pd G4 2-氨基联苯甲磺酸钯钯CPhos预催化剂(第四代预催化剂)
Cs2CO3 碳酸铯
Cu-Cl 氯化亚铜(I)
Cu-I 碘化亚铜(I)
Cy 环己基
d 双重峰
DCE 1,2-二氯乙烷
DCM、CH2Cl2 二氯甲烷
ddd 双重双重双重峰
ddt 双重双重三重峰
DMAP 4-二甲基氨基吡啶
DMEA N,N-二甲基乙基胺
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
DMTr 4,4'-二甲氧基三苯甲基
DMTrCl 4,4'-二甲氧基三苯甲基氯
dq 双重四重峰
EC50 半最大有效浓度；在指定暴露时间后诱导极限与最大值之间的一半应答的药物、抗体或有毒物的浓度
EDC 二氯乙烷
eq 当量
ES 电喷雾
Et 乙基
Et2O 二乙基醚
Et2Z 二乙基锌
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙基醇，乙醇
g 克
GMP 5'-单磷酸鸟苷
GTP 5'-三磷酸鸟苷
h 小时
H2 氢(气)
H2SO4 硫酸
HAQ STING 含有三种突变体R71H-G230A-R293Q的常规STING变体(本文中使用的DNA结构：STING(1-379)R71H,G230A,H232R,R293Q-GG-AviTag-GS-HRV3C-HIS 8/pBAC1)
HCl 盐酸
HEPES 2-[4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基]乙磺酸，一种两性离子有机缓冲剂
hept 七重峰
Hex 己烷
HNO3 硝酸
HPLC 高效液相色谱
Hz 赫兹
IC50 半最大抑制浓度；50％应答或结合抑制所要求的药物、抗体或有毒物的浓度
Inh 抑制
J NMR耦合常数
K2CO3 碳酸钾
KCl 氯化钾
KOH 氢氧化钾
LCMS 液相色谱-质谱
LDA 二异丙基胺化锂
LiOH 氢氧化锂
LiOH·H2O 氢氧化锂一水合物
m 多重峰
M 摩尔浓度，摩尔每升
m/z 质荷比
M+H 质子化质量，由质谱产生的质量度量
mCi 毫居里
Me 甲基
MeB(OH)2 甲基硼酸
MeMgBr 甲基溴化镁
MeOH、CH3OH 甲醇
mg 毫克
MgCl2 氯化镁
MgSO4 硫酸镁
MHz 兆赫兹
min 分钟
mL，ml 毫升
mM 毫摩尔每升
mmol 毫摩尔
MOI 感染复数
N2 氮(气)
Na2CO3 碳酸钠
Na2SO4 硫酸钠
NaCl 氯化钠
NaHCO3 碳酸氢钠
NaHSO3 亚硫酸氢钠
NaHSO4 硫酸氢钠，硫酸氢钠
NaOH 氢氧化钠
ng 纳克
NH3 氨
NH4Cl 氯化铵
NH4OH 氢氧化铵
nL 纳升
nm 纳米
nM 纳摩尔浓度
NMP N-甲基-2-吡咯烷酮
Pd(Ph3P)4 四(三苯基膦)钯(0)
Pd/C 钯碳
Pd2(dba)3 三(二苯甲叉基丙酮)二钯(0)
PE 石油醚
pfu 噬菌斑形成单位
Prep-HPLC 制备型高效液相色谱
Prep-TLC 制备型薄层液相色谱
PSI 磅每平方英寸
Py、py 吡啶
q 四重峰
RPM、rpm 转每分钟
RT、rt 室温，约25℃
s 单峰
sat 饱和
SFC 超临界流体色谱
SiO2 氧化硅，二氧化硅
SO2Cl2 硫酰氯
SOCl2 亚硫酰氯
t 三重峰
t-BuLi 叔丁基锂，叔丁醇锂
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱
TMSCl 三甲基甲硅烷基氯
Tr 保留时间
TrisCl 三(羟基甲基)氨基甲烷盐酸盐
v/v 体积/体积
WT STING 人中的STING野生型(丰度最高)变体(本文中使用的DNA结构：STING(1-379)H232R-gg-AviTag-gs-HRV3C-HIS8/pBAC1)
X-Phos 2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基联苯
λem 发射波长
λex 激发波长
μg，ug 微克
μL、uL，μl、ul 微升
μM、uM 微摩尔浓度
μm、um 微米
制备1：CPhos Pd G4
步骤1：CPhos Pd G4
将(2'-甲基氨基-1,1'-联苯-2-基)甲磺酸根合钯(II)二聚体(439mg，0.573mmol)和2'-(二环己基膦基)-N2,N2,N6,N6-四甲基-[1,1'-联苯]-2,6-二胺(500mg，1.15mmol)在DCM(6mL)中的混合物在室温下搅拌2h。然后将溶液用Et2O(30mL)稀释。将溶液过滤并减压浓缩。然后将残留物在戊烷中浆化，并再次减压浓缩，从而提供CPhos Pd G4。参见Bruno，N.C.；NiljianskuL，N.；Buchwald，S.L.J.Org.Chem.2014，79，4161。
制备2：5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸甲酯
向搅拌的2-氟-4,5-二甲氧基苯甲醛(18.7g，102mmol)在DMF(600mL)中的溶液，加入2-巯基乙酸甲酯(11.9g，112mmol)和K2CO3(42.1g，305mmol)。然后，将所得混合物在60℃下加热15h。冷却至后，将反应混合物减压浓缩。将所得残留物用H2O(500mL)稀释，并用DCM(600mL)萃取。将有机相用Na2SO4干燥、过滤、并减压浓缩，从而提供5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸甲酯。
LCMS(C12H13O4S)(ES，m/z)：253[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.03(s，1H)、7.60(s，1H)、7.49(s，1H)、3.85(s，6H)、3.82(s，3H)。
制备3：5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸
向来自制备2的5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸甲酯(23g，91mmol)在MeOH(200mL)、THF(200mL)和H2O(200mL)中的悬浮液，加入KOH(51g，910mmol)。将所得悬浮液加热至60℃30min。冷却至后，将反应混合物减压浓缩。将H2O(600mL)加入所得残留物，然后将柠檬酸加入溶液，以调节至pH 6。经由过滤收集沉淀的材料，从而提供5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.94(s，1H)、7.58(s，1H)、7.48(s，1H)、3.85(s，3H)、3.82(s，3H)。
实施例1：4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-乙基-4-氧代丁酸
步骤1：2-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)-3-乙基丁二酸1-乙基4-甲基酯
向搅拌的3-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-3-氧代丙酸酯(市售自Specs，0.10g，0.32mmol)在DMF(1.6mL)中的溶液，在室温下加入2-溴丁酸甲酯(37uL，0.32mmol)和K2CO3(54mg，0.39mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后用H2O(3mL)和DCM(6ml)稀释。将相分离，并将水层用另外的DCM(3x6mL)清洗。将合并的有机层减压浓缩，并在高真空下干燥过夜。将所得残留物通过硅胶柱色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而给出2-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)-3-乙基丁二酸1-乙基4-甲基酯，其不经进一步纯化而使用。LCMS(C20H25O7S)(ES，m/z)：409[M+H]+。
步骤2：4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-乙基-4-氧代丁酸
向2-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)-3-乙基丁二酸1-乙基4-甲基酯(83mg，0.20mmol)在THF(1.8mL)和H2O(0.18mL)中的混合物，加入LiOH(39mg，1.6mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后用2M HCl水溶液(0.30mL，0.59mmol)淬灭混合物，然后用EtOAc和H2O稀释。将有机层分离、用MgSO4干燥、过滤、并减压浓缩。将所得残留物通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而提供4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-乙基-4-氧代丁酸。将外消旋混合物通过手性SFC(Chiracel OJ-H(250mm*21mm)，25％MeOH(+0.25％DMEA)在CO2中)拆分，给出保留时间为3.65min和5.26min的两种化合物。浓缩第一洗脱峰提供产物。
LCMS(C16H19O5S)(ES，m/z)：323[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ8.15(s，1H)、7.52(s，1H)、7.40(s，1H)、3.79(s，3H)、3.77(s，3H)、3.35-3.27(m，1H)、3.00-2.94(m，1H)、2.73-2.67(m，1H)、1.58-1.50(m，2H)、0.85(t，J＝7.3Hz，3H)。
实施例2:4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-异丙基-4-氧代丁酸
步骤1：2-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)-3-异丙基丁二酸1-乙基4-甲基
酯
向搅拌的3-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-3-氧代丙酸乙酯(Specs，0.15g，0.49mmol)在DMF(2.4mL)中的混合物，在室温下加入2-溴异戊酸甲酯(73uL，0.49mmol)和K2CO3(81mg，0.58mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后用H2O(3.0mL)和DCM(6.0ml)稀释。将相分离，并将水层用另外的DCM(3x6.0mL)清洗。将合并的有机层减压浓缩，并在高真空下干燥过夜。将所得残留物通过硅胶柱色谱(EtOAc在己烷中)纯化，从而提供2-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)-3-异丙基丁二酸1-乙基4-甲基酯，其不经进一步纯化而用于下一反应。LCMS(C21H27O7S)(ES，m/z)：423[M+H]+。
步骤2：4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-异丙基-4-氧代丁酸
向2-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)-3-异丙基丁二酸1-乙基4-甲基酯(68mg，0.16mmol)在THF(0.80mL)、MeOH(0.40mL)、和H2O(0.18mL)中的混合物，加入LiOH(19mg，0.80mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2h，然后用2M HCl水溶液(0.40mL，0.80mmol)淬灭混合物，然后用EtOAc和H2O稀释。将有机层分离、用MgSO4干燥、过滤、并减压浓缩。将所得残留物通过硅胶柱色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而提供4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-异丙基-4-氧代丁酸。将外消旋混合物通过手性SFC(Chiralpak IC(250mm*21mm)，40％MeOH(+0.25％DMEA)在CO2中)拆分，给出保留时间为5.70min和7.05min的两种化合物。浓缩第二洗脱峰提供产物。
LCMS(C17H21O5S)(ES，m/z)：337[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ8.17(1H，s)、7.49(s，1H)、7.37(s，1H)、3.76(s，3H)、3.74(s，3H)、3.35-3.25(m，1H)、3.05-2.85(m，1H)、2.67-2.61(m，1H)、1.95-1.87(m，1H)、0.88-0.82(m，6H)。
实施例3：2-环丙基-4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
步骤1：2-环丙基-3-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)丁二酸二乙酯
向搅拌的3-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-3-氧代丙酸乙酯(Specs，0.30g，0.97mmol)在DMF(4.9mL)中的混合物，在室温下加入2-溴-2-环丙基乙酸乙酯(0.20g，0.97mmol)，然后加入K2CO3(0.16g，1.2mmol)。使混合物搅拌过夜，然后用H2O(3.0mL)和DCM(6.0mL)稀释。将相分离，并将水层用DCM(3x6mL)清洗。将合并的有机物减压浓缩，并在高真空下干燥过夜。将所得残留物通过硅胶柱色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而提供2-环丙基-3-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)丁二酸二乙酯。LCMS(C22H27O7S)(ES，m/z)：435[M+H]+。
步骤2：2-环丙基-4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
向2-环丙基-3-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)丁二酸二乙酯(90mg，0.21mmol)在THF(1.0mL)、MeOH(0.50mL)和H2O(0.50mL)中的混合物，加入LiOH(25mg，1.0mmol)，并使混合物在室温下搅拌2h。2h后，将混合物用1N HCl(0.50mL，1.0mmol)酸化，然后用EtOAc和H2O稀释。将有机层分离、用MgSO4干燥、过滤、并减压浓缩。将所得残留物通过硅胶柱色谱(EtOAc在己烷中)纯化，从而提供外消旋混合物形式的2-环丙基-4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸。将外消旋混合物通过手性SFC(OJ-H柱，25％MeOH(+0.25％DMEA)在CO2中)拆分，给出保留时间为5.3min和6.9min的两种化合物。浓缩第一洗脱峰提供产物。LCMS(C17H19O5S)(ES，m/z)：335[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.23(s，1H)、7.58(s，1H)、7.46(s，1H)、3.85(s，3H)、3.83(s，3H)、3.51-3.43(m，2H)、2.13-2.08(m，1H)、0.99-0.87(m，1H)、0.54-0.34(m，4H)。
实施例4：2-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)环丙烷甲酸
步骤1：5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩
向搅拌的5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸(制备3，2.00g，8.39mmol)在喹啉(20mL)中的溶液，加入铜(0.907g，14.3mmol)，然后将混合物在190℃下加热2h。冷却至室温后，将混合物用EtOAc稀释，然后连续用HCl水溶液(2M)、H2O、饱和NaHCO3水溶液、和食盐水清洗。将有机层用MgSO4干燥、过滤、并减压浓缩。将残留物通过硅胶柱色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而给出5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩。LCMS(C10H11O2S)(ES，m/z)：195[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ7.54(s，1H)、7.51(d，J＝5.3Hz，1H)、7.38(s，1H)、7.29(d，J＝5.3Hz，1H)、3.81(s，3H)、3.80(s，3H)。
步骤2：2-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)环丙烷甲酸
向搅拌的5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩(500mg，2.57mmol)在THF(12mL)中的溶液，在-78℃下，在N2氛围下耗费5min滴加t-BuLi(3.0mL，3.9mmol)(1.3M在正戊烷中)。
将混合物在-78℃下搅拌1h，然后耗费10min滴加3-氧杂双环[3.1.0]己-2,4-二酮(577mg，5.15mmol)在THF(10mL)中的溶液。使混合物升温至室温，然后在室温下、N2氛围下搅拌12h。将H2O(15mL)加入混合物，然后将混合物用EtOAc(10mL)萃取。将水层用另外的EtOAc(10mL)萃取，然后用HCl水溶液(1.0M)调整至pH＝5-6，并进一步用EtOAc(3x30mL)萃取。将合并的有机层用食盐水(20mL)清洗、用MgSO4干燥、过滤、并减压浓缩。将所得残留物通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而给出2-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)环丙烷甲酸。将外消旋混合物通过手性SFC(Column AD(250mm*30mm)，40％(1:1H2O(+0.1％NH3)和EtOH))拆分，给出保留时间为5.61min和6.22min的两种化合物。浓缩第一洗脱峰提供产物。LCMS(C15H15O5S)(ES，m/z)：307[M+H]+。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)：δ11.35(s，1H)、7.37(s，1H)、6.74(s，1H)、6.67(s，1H)、3.01(s，3H)、3.00(s，3H)、2.20(m，1H)、1.46-1.38(m，1H)、0.72-0.63(m，1H)、0.51-0.43(m，1H)。
如下述表1所示的实施例5和6是已经或者可以根据在上述实施例4中概述的那些的类似流程，使用如制备中记载的或由商业来源获得的适当起始材料而制备。
表1
实施例7：4-(5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
步骤1：5-氯-2-氟-4-甲氧基苯甲醛
向搅拌的2-氟-4-甲氧基苯甲醛(1.00g，6.49mmol)在AcOH(2mL)中的溶液，加入SO2Cl2(1.05mL，13.0mmol)。在室温下搅拌12h后，完成反应。将反应混合物倒入冰水(50mL)中。将所得沉淀通过真空过滤收集，用H2O(3x20mL)清洗、并空气干燥，从而提供5-氯-2-氟-4-甲氧基苯甲醛。LCMS(C8H7ClFO2)(ES，m/z)：189[M+H]+。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ10.18(s，1H)、7.88(d，J＝7.28Hz，1H)、6.72(d，J＝11.69Hz，1H)、3.99(s，3H).19F NMR(376MHz，CDCl3)：δ-119.91(dd，J＝7.15、11.32Hz)。
步骤2：5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸甲酯
将5-氯-2-氟-4-甲氧基苯甲醛(1.04g，5.51mmol)、2-巯基乙酸甲酯(0.740mL，8.27mmol)、K2CO3(2.29g，16.5mmol)和DMF(50mL)的混合物在80℃下搅拌12h。将反应混合物冷却至室温，并倒入500mL冰水中。加入HCl水溶液(1M)以将混合物调整至pH 5。将沉淀通过过滤收集、用H2O(3x100mL)清洗、并减压干燥，从而给出5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸甲酯，其直接用于下一步骤。
LCMS(C11H10ClO3S)(ES，m/z)：257[M+H]+。
步骤3：5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸
向搅拌的5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸甲酯(1.15g，4.46mmol)在H2O(10mL)、THF(10mL)、和MeOH(10mL)中的悬浮液，加入LiOH·H2O(0.562g，13.4mmol)。将所得混合物加热至50℃3h。然后将反应混合物冷却至室温，并通过减压蒸馏去除有机溶剂。残留物用H2O(20mL)稀释，并用DCM(3x10mL)清洗。将水层用1M HCl水溶液酸化至pH 5，并将所得沉淀用H2O(3x10mL)清洗。将残留固体减压干燥，从而给出5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸。
LCMS(C10H8ClO3S)(ES，m/z)：243[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.43(br、1H)、8.10(s，1H)、7.99(s，1H)、7.83(s，1H)、3.94(s，3H)。
步骤4：5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯
向5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸(215mg，0.886mmol)和THF(10mL)的混合物，在0℃下加入(COCl)2(0.4mL，4.73mmol)和DMF(4uL，0.055mmol)。将所得混合物在80℃下搅拌16h，然后冷却至室温。将混合物用甲苯(20mL)稀释，并减压浓缩。然后将浓缩的反应混合物进行两次复溶于甲苯(20mL)中并减压浓缩。将所得浓缩反应混合物在50℃-80℃下真空干燥1h，然后用Ar气回填用于储存。所得5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯直接用于下一步骤。
步骤5：4-(5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯
在Ar气球下，烘箱干燥的Schlenk瓶装入搅拌棒和((噻吩-2-甲酰基)氧基)铜(500mg，2.62mmol)。将烧瓶在通过用加热枪加热3min从而连接于高真空源的同时，进行干燥。冷却至0℃后，将(3-乙氧基-3-氧代丙基)溴化锌(II)(5.0mL，0.5M在THF中，2.5mmol)经由注射器加入烧瓶，从而形成混合物。在0℃下搅拌40min后，将5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯(272mg，0.885mmol)在THF(5mL)中的溶液加入混合物。将所得混合物逐渐升温至室温并搅拌16h。将反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(20mL)淬灭，并用EtOAc(3x30mL)萃取。将合并的有机层用饱和Na2CO3水溶液(2x15mL)和食盐水(10mL)清洗，用无水Na2SO4干燥、过滤、并减压浓缩。将残留物通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而给出4-(5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯。LCMS(C15H16ClO4S)(ES，m/z)：327[M+H]+。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.87(s，1H)、7.86(s，1H)、7.32(s，1H)、4.16(q，J＝7.0Hz，2H)、3.99(s，3H)、3.32(t，J＝6.8Hz，2H)、2.78(t，J＝6.8Hz，2H)、1.27(t，J＝7.0Hz，5H)。
步骤6：4-(5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
向搅拌的4-(5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯(62mg，0.19mmol)在MeOH(6mL)和H2O(3mL)中的溶液，加入LiOH·H2O(0.12g，5.0mmol)。将混合物在45℃下搅拌2h，并减压去除溶剂。残留物溶解于H2O(15mL)中，并用DCM(2x15mL)清洗。将水层用浓HCl水溶液酸化至pH～2，然后用DCM(5x10mL)萃取。将合并的有机相用无水Na2SO4干燥、过滤、并减压浓缩。将残留物通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而给出4-(5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸。LCMS(C13H12ClO4S)(ES，m/z)：299[M+H]+。1H NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ8.10(s，1H)、7.98(s，1H)、7.60(s，1H)、3.98(s，3H)、3.37-3.33(m，2H)、2.73(t，J＝6.5Hz，2H)。
实施例8：4-(5-甲氧基-6-乙烯基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
步骤1：6-溴-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸甲酯
向搅拌的4-溴-2-氟-5-甲氧基苯甲醛(5.00g，21.5mmol)在DMF(100mL)中的溶液，加入2-巯基乙酸甲酯(2.51g，23.6mmol)和K2CO3(8.90g，64.4mmol)。将反应混合物用N2脱气3次。然后，将所得混合物在室温下搅拌15h。将EtOAc(500mL)和H2O(1200mL)加入反应混合物。将有机层分离，并用食盐水(2x200mL)清洗、用无水Na2SO4干燥、过滤、并减压浓缩。将残留物通过硅胶柱色谱(EtOAc在PE中)纯化，从而给出6-溴-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸甲酯。
LCMS(C11H10BrO3S)(ES，m/z)：301、303[M+H]+。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝8.01(s，1H)、7.93(s，1H)、7.26(s，1H)、3.96(s，3H)、3.94(s，3H)。
步骤2：6-溴-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸
向6-溴-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸甲酯(1.45g，4.81mmol)在MeOH(20mL)、THF(20mL)、和H2O(20mL)中的悬浮液，加入NaOH(1.93g，48.1mmol)。将所得悬浮液加热至50℃0.5h。将反应混合物减压浓缩，以去除溶剂。将H2O(200mL)加入残留物，并加入柠檬酸从而将溶液调节至pH＝6。将残留水性悬浮液用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机层用食盐水(100mL)清洗、用Na2SO4干燥、过滤、并减压浓缩，从而给出6-溴-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸，其不经纯化直接用于下一步骤。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝13.52(br s、1H)、8.35(s，1H)、8.01(s，1H)、7.65(s，1H)、3.90(s，3H)。
步骤3：6-溴-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯
向搅拌的6-溴-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸(800mg，2.79mmol)在无水THF(6mL)中的溶液，在0℃下滴加(COCl)2(1.06g，8.36mmol)。然后将混合物在75℃下加热15h，然后冷却至室温。减压去除溶剂，从而给出粗6-溴-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯，其不经进一步提纯直接用于下一步骤。
步骤4：4-(6-溴-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯
在0℃下，在Ar氛围下，将(3-乙氧基-3-氧代丙基)溴化锌(II)的溶液(19.6mL，0.5M在THF中，9.82mmol)添加至烘箱干燥的含有((噻吩-2-甲酰基)氧基)铜(1.87g，9.82mmol)的烧瓶中。将反应混合物在0℃下，在Ar氛围下搅拌20min。然后，在0℃下，将Ar脱气的6-溴-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯(1.00g，3.27mmol)在THF(20mL)中的溶液加入至反应混合物。使将所得悬浮液升温至室温，并且搅拌另外3h。然后将反应混合物冷却至0℃，并用饱和NH4Cl水溶液(50mL)淬灭。将混合物升温至室温，并搅拌10min。然后将混合物过滤以去除任何沉淀固体，并将滤液用EtOAc(50mL)和食盐水(20mL)稀释。将有机层分离，用另外的食盐水(50mL)清洗、用MgSO4干燥、过滤、并减压浓缩，从而提供粗产品残留物。将残留物通过硅胶柱色谱(DCM在PE中)纯化，从而给出4-(6-溴-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯。LCMS(C15H16BrO4S)(ES，m/z)：371、373[M+H]+。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ＝8.05(s，1H)、7.92(s，1H)、7.30(s，1H)、4.18(q，J＝7.2Hz，2H)、3.98(s，3H)、3.34(t，J＝6.7Hz，2H)、2.80(t，J＝6.7Hz，2H)、1.28(t，J＝7.1Hz，3H)。
步骤5：4-(5-甲氧基-6-乙烯基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯
向搅拌的4-(6-溴-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯(40.0mg，0.108mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(33.2mg，0.215mmol)、和Cs2CO3(105mg，0.323mmol)在1,4-二氧杂环己烷(1.0mL)和H2O(0.2mL)中的混合物，加入1,1'-双(二苯基膦基)二氯二茂铁(12mg，0.022mmol)。将反应混合物通过减压下置换而脱气，并用N2回填3次。将反应混合物在90℃下、在N2氛围下搅拌2h，冷却至室温，并过滤以去除任何固体。将滤液用EtOAc(5mL)和食盐水(5mL)稀释。将有机层分离，用另外的食盐水(5mL)清洗、用无水Na2SO4干燥、过滤、并减压浓缩，从而给出4-(5-甲氧基-6-乙烯基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯，其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。LCMS(C17H19O4S)(ES，m/z)：319[M+H]+。
步骤6：4-(5-甲氧基-6-乙烯基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
向搅拌的4-(5-甲氧基-6-乙烯基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯(25mg，0.079mmol)在MeOH(0.5mL)、THF(0.5mL)、和H2O(0.5mL)中的悬浮液，加入LiOH(18.8mg，0.785mmol)。将所得悬浮液加热至50℃2h，然后冷却至室温。将反应混合物减压浓缩以去除溶剂，并且将残留物通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而给出4-(5-甲氧基-6-乙烯基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸。
LCMS(C15H15O4S)(ES，m/z)：291[M+H]+。1H NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ＝8.10(s，1H)、7.98(s，1H)、7.44(s，1H)、7.09(dd，J＝11.3、17.8Hz，1H)、5.87(br d，J＝17.4Hz，1H)、5.32(br d，J＝11.2Hz，1H)、3.91(s，3H)、3.37-3.32(m，2H)、2.71(br t、J＝6.5Hz，2H)。
实施例9：4-(6-溴-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
向来自实施例8、步骤4的4-(6-溴-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯(20mg，0.054mmol)在MeOH(0.5mL)、THF(0.5mL)、和H2O(0.5mL)中的悬浮液，加入LiOH(1.3mg，0.054mmol)。将所得悬浮液加热至50℃2h，然后冷却至室温。将反应混合物减压浓缩以去除溶剂，并且将残留物通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而给出4-(6-溴-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸。
LCMS(C13H12BrO4S)(ES，m/z)：343、345[M+H]+。1H NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ＝8.12(s，1H)、8.11(s，1H)、7.53(s，1H)、3.95(s，3H)、3.36(t，J＝6.4Hz，2H)、2.74(t，J＝6.4Hz，2H)。
实施例10：4-(6-甲氧基-5-(甲基氨基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
步骤1：2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯甲醛
向搅拌的2-氟-4-甲氧基苯甲醛(1.00g，6.49mmol)在浓H2SO4(5.88mL，110mmol)中的溶液，在-15℃下，耗费5min滴加在浓H2SO4(0.795mL，14.9mmol)中的浓HNO3(0.414mL，6.49mmol)。在低于-10℃下1h的搅拌后，将反应混合物倒入50mL的冰水中。将沉淀通过过滤收集。将滤饼用H2O(3x100mL)清洗，并减压干燥，从而给出2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯甲醛，其直接用于下一步骤。
LCMS(C8H7FNO4)(ES，m/z)：200[M+H]+。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ10.22(s，1H)、8.47(d，J＝7.24Hz，1H)、6.88(d，J＝11.54Hz，1H)、4.07(s，3H)。
步骤2：6-甲氧基-5-硝基苯并[b]噻吩-2-甲酸甲酯
将2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯甲醛(1.14g，5.72mmol)、2-巯基乙酸甲酯(0.77mL，8.6mmol)、和K2CO3(2.37g，17.2mmol)在DMF(50mL)中的混合物在60℃下搅拌12h。将反应混合物冷却至室温，然后倒入500mL的冰水中。加入HCl水溶液(1M)以调整至pH 5。将沉淀通过过滤收集、用H2O(3x100mL)清洗、并减压干燥，从而给出6-甲氧基-5-硝基苯并[b]噻吩-2-甲酸甲酯，其直接用于下一步骤。
LCMS(C11H10NO5S)(ES，m/z)：268[M+H]+。
步骤3：6-甲氧基-5-硝基苯并[b]噻吩-2-甲酸
向6-甲氧基-5-硝基苯并[b]噻吩-2-甲酸甲酯(1.50g，5.61mmol)在H2O(10mL)、THF(10mL)、和MeOH(10mL)中的悬浮液，加入LiOH·H2O(0.707g，16.8mmol)。将所得混合物加热至50℃5h，然后冷却至室温。减压去除有机溶剂，将残留物用20mL H2O稀释，并将混合物用DCM(3x10mL)萃取。将水层用HCl水溶液(1M)酸化至pH 5。将沉淀通过过滤手机，然后用H2O(3x10mL)清洗。将所得固体减压干燥，从而给出6-甲氧基-5-硝基苯并[b]噻吩-2-甲酸，其直接用于下一步骤。LCMS(C10H8NO5S)(ES，m/z)：254[M+H]+。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.93-13.26(s，1H)、8.58(s，1H)、8.12(s，1H)、8.05(s，1H)、3.98(s，3H)。
步骤4：6-甲氧基-5-硝基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯
向搅拌的6-甲氧基-5-硝基苯并[b]噻吩-2-甲酸(400mg，1.58mmol)在无水THF(15mL)中的溶液，在0℃下滴加(COCl)2(1.20g，9.48mmol)。将混合物在75℃下加热15h，然后冷却至室温。减压去除溶剂，从而给出粗6-甲氧基-5-硝基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯，其不经进一步纯化而用于下一步骤。
步骤5：4-(6-甲氧基-5-硝基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯
在0℃下，在Ar氛围下，将(3-乙氧基-3-氧代丙基)溴化锌(II)的溶液(17.7mL，0.5M在THF中，8.83mmol)添加至烘箱干燥的含有((噻吩-2-甲酰基)氧基)铜(1.69g，8.83mmol)的烧瓶中。将反应混合物在0℃下，在Ar氛围下搅拌20min。然后，在0℃下，将Ar脱气的6-甲氧基-5-硝基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯(800mg，2.94mmol)在THF(10mL)中的溶液加入至反应混合物。将所得悬浮液升温至室温，并且搅拌另外8h。然后将反应混合物冷却至0℃，并用饱和NH4Cl水溶液(30mL)淬灭。将混合物升温至室温，并搅拌10min。将混合物过滤，并将滤液用EtOAc(50mL)和食盐水(30mL)稀释。将有机层分离，用另外的食盐水(50mL)清洗、用MgSO4干燥、过滤、并减压浓缩，从而提供粗产品残留物。将残留物通过制备型TLC(SiO2，DCM在PE中)纯化，从而给出4-(6-甲氧基-5-硝基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯。
LCMS(C15H16NO6S)(ES，m/z)：338[M+H]+。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝8.36(s，1H)、7.99(s，1H)、7.47(s，1H)、4.24-4.16(m，2H)、4.05(s，3H)、3.34(t，J＝6.6Hz，2H)、2.81(t，J＝6.5Hz，2H)、1.33-1.27(m，3H)。
步骤6：4-(5-氨基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯
向4-(6-甲氧基-5-硝基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯(140mg，0.415mmol)在EtOH(2mL)、THF(2mL)、和H2O(2mL)中的溶液，加入Fe(116mg，2.08mmol)和NH4Cl(222mg，4.15mmol)。将混合物加热至80℃1h，冷却至室温，并过滤。将H2O(10mL)加入滤液，并将水层用EtOAc(3x5mL)萃取。将合并的有机层用食盐水(5mL)清洗、用MgSO4干燥、并过滤。将滤液在减压下浓缩，从而给出4-(5-氨基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯，其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。LCMS(C15H18NO4S)(ES，m/z)：308[M+H]+。
步骤7：4-(6-甲氧基-5-(甲基氨基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯
向搅拌的4-(5-氨基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯(55mg，0.18mmol)、MeB(OH)2(16.1mg，0.268mmol)、和py(56.6mg，0.716mmol)在1,4-二氧杂环己烷(2.0mL)中的溶液，加入二乙酰氧基铜(48.8mg，0.268mmol)。将反应混合物在120℃下搅拌2h，然后冷却至室温。将混合物过滤，并将滤液用EtOAc(5.0mL)和食盐水(5.0mL)稀释。将有机层分离，用另外的食盐水(5mL)清洗、用无水Na2SO4干燥、并减压浓缩，从而给出4-(6-甲氧基-5-(甲基氨基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯，其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
LCMS(C16H20NO4S)(ES，m/z)：322[M+H]+。
步骤8：4-(6-甲氧基-5-(甲基氨基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
向4-(6-甲氧基-5-(甲基氨基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯(30mg，0.093mmol)在MeOH(0.5mL)、THF(0.5mL)、和H2O(0.5mL)中的悬浮液，加入LiOH(44.7mg，1.87mmol)。将所得悬浮液加热至50℃2h，然后冷却至室温。将反应混合物减压浓缩以去除溶剂，并且将残留物通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而给出4-(6-甲氧基-5-(甲基氨基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸。
LCMS(C14H16NO4S)(ES，m/z)：294[M+H]+。1H NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ8.07(s，1H)、7.44(s，1H)、7.27(s，1H)、3.99(s，3H)、3.36-3.33(m，2H)、2.94(s，3H)、2.73(t，J＝6.4Hz，2H)。
实施例11：(S)-4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
步骤1:5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯
向搅拌的来自制备3的5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸(5.0g，21mmol)在THF(200mL)中的溶液，在0℃下在Ar下加入(COCl)2(5.5mL，63mmol)，接着加入DMF(0.1mL，1.3mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌1h，然后升温至室温，并搅拌过夜。将反应混合物减压浓缩，并将所得5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯不经纯化而用于下一步骤。1H NMR(600MHz，CH3CN-d3)：δ8.25(s，1H)、7.46(s，1H)、7.45(s，1H)、3.92(s，3H)、3.88(s，3H)。
步骤2：(S)-4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯
向烘箱干燥且Ar吹扫的含有噻吩-2-甲酸铜(I)(797mg，4.2mmol)的圆底烧瓶，在0℃下滴加(R)-(3-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)溴化锌(II)(7.8mL，0.5M在THF中，3.9mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌20min。将5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯(777mg，3.0mmol)在THF(15mL)中的悬浮液滴加至反应混合物。将反应混合物升温至室温，并搅拌6h。将反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(15mL)稀释，接着用DCM(30mL)稀释。在萃取前，通过过滤去除沉淀。将层分离，并将水层用DCM(3x30mL)萃取。将合并的有机层减压浓缩。将残留物通过硅胶柱色谱((25％EtOH在EtOAc中)在Hex中)纯化，从而提供(S)-4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯。
LCMS(C16H19O5S)(ES，m/z)：323[M+H]+。1H NMR(500MHz，CHCl3-d)：δ7.89(s，1H)、7.26(s，2H)、4.00(s，3H)、3.97(s，3H)、3.72(s，3H)、3.48(dd，J＝16.9、7.6Hz，1H)、3.22-3.16(m，1H)、3.05(dd，J＝16.9、6.0Hz，1H)、1.31(d，J＝7.2Hz，3H)。
步骤3:(S)-4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
向(S)-4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯(200mg，0.62mmol)在H2O(1.2mL)和THF(5mL)中的溶液，加入LiOH(59mg，2.5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物使用另外的1M HCl水溶液调整至～pH 2。将DCM(15mL)加入反应混合物，并将层分离。将有机层减压浓缩。将所得残留物通过硅胶柱色谱((25％EtOH在EtOAc中)在Hex中)纯化，从而提供(S)-4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸。
LCMS(C15H17O5S)(ES，m/z)：309[M+H]+。1H NMR(600MHz，CH3OH-d4,)：δ8.06(s，1H)、7.41(s，2H)、3.90(s，3H)、3.88(s，3H)、3.46(dd，J＝17.1、8.3Hz，1H)、3.08(dd，J＝17.2、5.3Hz，1H)、3.04-2.98(m，1H)、1.26(d，J＝7.1Hz，3H)。
如下述表2所示的实施例12至16是已经或者可以根据在上述实施例11中概述的那些的类似流程，使用如制备中记载的或由商业来源获得的适当起始材料而制备。
表2
实施例17：4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-(甲氧基甲基)-4-氧代丁酸
步骤1:2-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)-3-(甲氧基甲基)丁二酸1-乙基
4-甲基酯
向搅拌3-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-3-氧代丙酸乙酯(Specs，231mg，0.75mmol)在DMF(2.5mL)中的溶液，在室温下加入2-溴-3-甲氧基丙酸甲酯(125μl、0.93mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。然后，将反应混合物用H2O(3mL)和DCM(6ml)稀释。将相分离，并将水层用DCM(3x6mL)清洗。将合并的有机物减压浓缩并真空干燥过夜。将产物通过硅胶柱色谱((25％EtOH在EtOAc中)在Hex中)纯化，从而给出2-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)-3-(甲氧基甲基)丁二酸1-乙基4-甲基酯，其不经进一步纯化而使用。
LCMS(C20H25O8S)(ES，m/z)：425[M+H]+。
步骤2:4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-(甲氧基甲基)-4-氧代丁酸
向搅拌的2-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)-3-(甲氧基甲基)丁二酸1-乙基4-甲基酯(200mg，0.5mmol)在EtOH(3ml)中的溶液，在室温下加入HCl水溶液(490μl、6M、2.9mmol)。将反应混合物在密封的微波小瓶中加热至100℃2h。冷却后，将KOH水溶液(490μl，10M，4.9mmol)加入搅拌的反应混合物，并将反应混合物返回在100℃下加热1h。将反应混合物的pH用HCl水溶液(1M)如通过pH测试条所示地调整至～2。将反应混合物减压浓缩，从而去除EtOH，然后用DCM(10mL)稀释。将层分离，并将水层用DCM(3x10mL)萃取。将合并的有机层减压浓缩，并将残留物通过硅胶柱色谱((25％EtOH在EtOAc中)在Hex中)纯化。将含产物级分减压浓缩，从而给出4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-(甲氧基甲基)-4-氧代丁酸。将外消旋混合物通过手性SFC(Chiracel OJ-H(250mm*21mm)，25％MeOH(+0.25％DMEA)在CO2中)拆分，给出保留时间为3.12min和3.96min的两种化合物。浓缩第一洗脱峰提供产物。LCMS(C16H19O6S)(ES，m/z)：339[M+H]+。1H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ12.32(1H，br s)、8.18(1H，s)、7.56(1H，s)、7.44(1H，s)、3.83(3H，s)、3.80(3H，s)、3.58-3.51(2H，m)、3.46-3.40(1H，m)、3.22(3H，s)、3.09-3.07(2H，m)。
实施例18：4-(6-甲氧基-5-乙烯基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
步骤1：5-溴-2-氟-4-甲氧基苯甲醛
将2-氟-4-甲氧基苯甲醛(9.0g，58mmol)缓慢(分批)在0℃下加入Br2(6.0mL，120mmol)在MeOH(40mL)中的溶液。将反应混合物在0℃下搅拌2h。将NaHSO3(24.3g，234mmol)在H2O(300mL)中的溶液在0℃下缓慢加入反应混合物。然后将所得悬浮液在0℃下搅拌30min。将反应混合物过滤，并将滤液用另外的H2O(3x25mL)清洗。然后将滤液减压干燥，从而提供5-溴-2-氟-4-甲氧基苯甲醛。产物不经纯化而使用。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ10.02(s，1H)、7.98(d，J＝7.5Hz，1H)、7.26(d，J＝13.0Hz，1H)、3.97(s，3H)。
步骤2：5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸叔丁酯
将K2CO3(19.0g，137mmol)在20℃下，在Ar氛围下缓慢(分批)加入5-溴-2-氟-4-甲氧基苯甲醛(10.7g，45.8mmol)和2-巯基乙酸叔丁酯(6.65mL，45.8mmol)在DMF(50mL)中的溶液。将反应混合物搅拌并加热至100℃16h。然后将反应混合物冷却至室温，并用Et2O(1000mL)稀释。然后将混合物用H2O(500mL，然后2x250mL)清洗，并将合并的水层用Et2O(2x200mL)萃取。然后，将有机层合并，并用食盐水(50mL)清洗。将有机层分离，用MgSO4干燥、过滤、并减压浓缩，从而提供5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸叔丁酯。产物不经纯化而使用。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ8.26(s，1H)、7.96(s，1H)、7.78(s，1H)、3.92(s，3H)、1.55(s，9H)。
步骤3：5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸
将HCl(56mL，4.0M in 1,4-二氧杂环己烷、230mmol)在20℃下加入5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸叔丁酯(15.5g，45.0mmol)在DCM(200mL)中的溶液。将反应混合物在20℃下搅拌3天。然后，将反应混合物通过滴加Hex(500mL)而稀释。将所得悬浮液在室温下在加入后搅拌另外的2h。将反应混合物过滤，并将收集的固体用Hex(2x50mL)清洗，并减压干燥，从而提供5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸，其不经纯化而使用。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ13.42(s，1H)、8.26(s，1H)、7.98(s，1H)、7.80(s，1H)、3.93(s，3H)。
步骤4：5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯
将DMF(0.049mL，0.63mmol)在0℃下，在Ar氛围下缓慢(滴加)加入5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸(6.0g，21mmol)和(COCl)2(5.5mL，63mmol)在THF(100mL)中的溶液。将反应混合物在0℃下搅拌2h，然后升温至室温。将反应混合物在室温下搅拌18h。然后，将反应混合物减压浓缩，从而提供5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯。产物不经纯化而使用。
步骤5：4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯
在0℃下，在Ar氛围下，将(3-乙氧基-3-氧代丙基)溴化锌(II)的溶液(13.8mL，0.50M在THF中，6.9mmol)添加至烘箱干燥的含有((噻吩-2-甲酰基)氧基)铜(1.31g，6.87mmol)的烧瓶中。将反应混合物在0℃下，在Ar氛围下搅拌20min。然后，在0℃下，将Ar脱气的5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯(1.52g，4.98mmol)在THF(25.0mL)中的溶液经由套管加入至反应混合物；将所得悬浮液升温至室温，并且搅拌另外3h。将反应混合物冷却至0℃，并用饱和NH4Cl水溶液(50mL)淬灭。将混合物升温至室温，并搅拌另外10min。将混合物过滤，并将滤液用EtOAc(500mL)和食盐水(50mL)稀释。将有机层分离，用另外的食盐水(25mL)清洗、用MgSO4干燥、过滤、并减压浓缩。残留物通过硅胶柱色谱(EtOAc在DCM中)纯化，从而提供4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯。LCMS(C15H16BrO4S)(ES，m/z)：371、373[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ8.27(s，1H)、8.26(s，1H)、7.81(s，1H)、4.07-4.02(m，2H)、3.94(s，3H)、3.35-3.25(m，2H)、2.68-2.64(m，2H)、1.20-1.14(m，3H)。
步骤6：4-(6-甲氧基-5-乙烯基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯
向Ar脱气的4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯(100mg，0.269mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(50mg，0.32mmol)、Pd2(dba)3(12mg，0.013mmol)、X-phos(13mg，0.027mmol)、和Cs2CO3(263mg，0.808mmol)的混合物，在室温下添加1,4-二氧杂环己烷(3mL)和H2O(0.3mL)，同时用Ar脱气。将反应混合物搅拌5min同时用Ar脱气(表面下喷雾)，其后将混合物在Ar氛围下加热至90℃2h。然后将反应混合物冷却至室温，并用EtOAc(20mL)稀释。将所得悬浮液通过含有MgSO4的玻璃料过滤。将有机层(滤液)减压浓缩。将粗产品残留物通过硅胶柱色谱(EtOAc在DCM中)纯化，从而提供4-(6-甲氧基-5-乙烯基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯。
LCMS(C17H19O4S)(ES，m/z)：319[M+H]+。
步骤7：4-(6-甲氧基-5-乙烯基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
将NaOH水溶液(0.33mL，1.0M、0.33mmol)加入4-(6-甲氧基-5-乙烯基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯(21mg，0.066mmol)在MeOH(4.0mL)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌18h。将反应混合物用HCl水溶液(0.33mL，1.0M、0.33mmol)淬灭，然后减压浓缩。粗产品残留物通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而提供4-(6-甲氧基-5-乙烯基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸。
LCMS(C15H15O4S)(ES，m/z)：291[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ12.21(s，1H)、8.27(s，1H)、8.11(s，1H)、7.65(s，1H)、7.00(dd，J＝17.5、11.5Hz，1H)、5.87(d，J＝17.5Hz，1H)、5.33(d，J＝11.5Hz，1H)、3.91(s，3H)、3.30-3.24(m，2H)、2.63-2.56(m，2H)。
实施例19：4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
将NaOH水溶液(0.54mL，1.0M、0.54mmol)添加至来自实施例17、步骤5的4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯(40mg，0.11mmol)在MeOH(2.0mL)中的溶液。将反应混合物在20℃下搅拌24h。将反应混合物用HCl水溶液(0.54mL，1.0M、0.54mmol)淬灭。然后将混合物减压浓缩，从而提供粗产品残留物。粗产品残留物通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而提供4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸。LCMS(C13H12BrO4S)(ES，m/z)：343、345[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ12.23(s，1H)、8.27(s，1H)、8.25(s，1H)、7.81(s，1H)、3.94(s，3H)、3.29-3.24(m，2H)、2.62-2.57(m，2H)。
实施例20：4-((S)-4-(5,6-二氯苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
步骤1：5,6-二氯苯并[b]噻吩-2-甲酸
向4,5-二氯-2-氟苯甲醛(V-Pharma，386mg，2.00mmol)、2-巯基乙酸叔丁基酯(356mg，2.40mmol)和甲苯(5ml)的溶液，加入Cs2CO3(1.30g，4.00mmol)，并将反应在回流下加热2h。然后将反应混合物过滤，并将滤液用甲苯(5mL)清洗。然后将TFA(10mL)加入滤液，并将混合物搅拌1h。将反应混合物过滤，用甲苯和己烷清洗，并减压干燥，从而提供5,6-二氯苯并[b]噻吩-2-甲酸。
LCMS(C9H3Cl2O2S)(ES，m/z)：245[M-H]-.
步骤2：(S)-4-(5,6-二氯苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
向5,6-二氯苯并[b]噻吩-2-甲酸(0.049g，0.20mmol)和DCM(2ml)的混合物，加入DMF(4uL，0.055mmol)。然后加入(COCl)2(0.175mL，2.00mmol)，并将反应在室温下搅拌1h。减压去除溶剂。将残留物复溶于THF(2.0ml)中，添加来自制备1的CPhos Pd G4(0.033g，0.040mmol)，并将混合物搅拌，同时一次性全部添加(R)-(3-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)溴化锌(II)(0.40mL，0.5M在THF中，0.20mmol)。将反应搅拌2h，然后加入LiOH(0.048g，2.0mmol)、H2O(1mL)、和MeOH(1mL)。将反应混合物搅拌另外2h，然后减压去除溶剂。将残留物通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而提供(S)-4-(5,6-二氯苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸。
LCMS(C13H11Cl2O3S)(ES，m/z)：317[M+H]+。1H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ8.45(s，1H)、8.31(s，1H)、8.28(s，1H)、3.38(dd，J＝17.4、8.5Hz，1H)、3.10(dd，J＝17.6、5.0Hz，1H)、2.90-2.84(m，1H)、1.16(d，3H)。
实施例21：(S)-4-(6-乙基-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
步骤1：6-乙基-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸
向搅拌的4-乙基-2-氟-5-甲氧基苯甲醛(Biogene Organics，364mg，2.00mmol)、2-巯基乙酸叔丁酯(356mg，2.40mmol)、和甲苯(5ml)的溶液，加入Cs2CO3(1.30g，4.00mmol)，并将反应在回流下加热2h。然后将反应混合物过滤，并将滤液用甲苯(5mL)清洗。然后将TFA(10mL)加入滤液，并将混合物搅拌1h。将反应混合物过滤，用甲苯和Hex清洗，并减压干燥，从而提供6-乙基-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸。
LCMS(C12H11O3S)(ES，m/z)：236[M-H]-.
步骤2：(S)-4-(6-乙基-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
向6-乙基-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸(0.047g，0.20mmol)、和DCM(2ml)的混合物，添加DMF(4uL，0.055mmol)。然后加入(COCl)2(0.175mL，2.00mmol)，并将反应在室温下搅拌1h。减压去除溶剂。将残留物复溶于THF(2.0ml)中，添加来自制备1的CPhos PdG4(0.033g，0.040mmol)，并将混合物搅拌，同时一次性全部添加(R)-(3-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)溴化锌(II)(0.40mL，0.5M在THF中，0.20mmol)。将反应搅拌2h，然后加入LiOH(48mg，2.0mmol)、H2O(1mL)、和MeOH(1mL)。将反应混合物搅拌另外2h，然后减压去除溶剂。然后将残留物通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而提供(S)-4-(6-乙基-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸。LCMS(C16H19O4S)(ES，m/z)：307[M+H]+。1HNMR(600MHz，DMSO-d6)：δ8.21(s，1H)、7.75(s，1H)、7.43(s，1H)、3.83(s，3H)、3.38(dd，J＝17.4、8.5Hz，1H)、3.07(dd，J＝17.4、5.1Hz，1H)、2.87-2.84(m，1H)、2.65(q，J＝7.5Hz，2H)、1.16-1.14(m，6H)。
实施例22：(S)-4-(5-甲氧基-6-甲基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
步骤1：5-甲氧基-6-甲基苯并[b]噻吩-2-甲酸
向搅拌的2-氟-5-甲氧基-4-甲基苯甲醛(Biogene Organics，336mg，2.00mmol)、2-巯基乙酸叔丁酯(356mg，2.40mmol)、和甲苯(5ml)的溶液，加入Cs2CO3(1.30g，4.00mmol)，并将反应在回流下加热2h。将反应混合物过滤，并将滤液用甲苯(5mL)清洗。然后将TFA(10mL)加入滤液，并将混合物搅拌1h。将反应混合物过滤，用甲苯和Hex清洗，并减压干燥，从而提供5-甲氧基-6-甲基苯并[b]噻吩-2-甲酸。
LCMS(C11H9O3S)(ES，m/z)：221[M-H]-。
步骤2：(S)-4-(5-甲氧基-6-甲基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
向5-甲氧基-6-甲基苯并[b]噻吩-2-甲酸(0.044g，0.20mmol)和DCM(2ml)的混合物，加入DMF(4uL，0.055mmol)。然后加入(COCl)2(0.175mL，2.00mmol)，并将反应在室温下搅拌1h。减压去除溶剂。将残留物复溶于THF(2.0ml)中，添加CPhos Pd G4(0.033g，0.040mmol)，并将混合物搅拌，同时一次性全部添加(R)-(3-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)溴化锌(II)(0.40mL，0.5M在THF中，0.20mmol)。将反应搅拌2h，然后加入LiOH(48mg，2.0mmol)、H2O(1mL)、和MeOH(1mL)。将反应混合物搅拌另外2h，然后减压去除溶剂。然后将残留物通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而提供(S)-4-(5-甲氧基-6-甲基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸。
LCMS(C15H17O4S)(ES，m/z)：293[M+H]+。1H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ8.21(s，1H)、7.75(s，1H)、7.42(s，1H)、3.83(s，3H)、3.38(dd，J＝17.4，8.5Hz，1H)、3.06(dd，J＝17.4，5.2Hz，1H)、2.88-2.83(m，1H)、2.24(s，3H)、1.15(d，J＝7.2Hz，3H)。
实施例23：4-(6-氯-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
步骤1：6-氯-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸
向搅拌4-氯-2-氟-5-甲氧基苯甲醛(38mg，0.20mmol)、2-巯基乙酸叔丁酯(54mg，0.30mmol)和1,4-二氧杂环己烷(2ml)的溶液，添加Cs2CO3(326mg，1.00mmol)，并将反应在回流下加热4h。然后将反应混合物过滤，用1,4-二氧杂环己烷(2mL)清洗，并减压浓缩。将浓缩物在DCM(1mL)中浆化，并加入TFA(1mL)。然后，将反应在室温下搅拌2h。减压去除溶剂，从而提供6-氯-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸。LCMS(C10H6ClO3S)(ES，m/z)：241[M-H]-。
步骤2:4-(6-氯-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
向6-氯-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸(0.045g，0.20mmol)和DCM(2ml)的混合物，加入DMF(4uL，0.055mmol)。然后加入(COCl)2(0.175mL，2.00mmol)。将反应在室温下搅拌1h，并减压去除溶剂。将残留物复溶于THF(2.0ml)中，添加来自制备1的CPhos PdG4(0.033g，0.040mmol)，并将混合物搅拌，同时一次性全部添加3-叔丁氧基-3-氧代丙基氯化锌(0.40mL，0.5M在THF中，0.20mmol)。将反应搅拌2h，然后减压去除溶剂。然后，加入DCM(1mL)和TFA(1mL)。将反应混合物搅拌另外2h，然后减压去除溶剂。然后将残留物通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而提供4-(6-氯-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸。
LCMS(C13H12ClO4S)(ES，m/z)：299[M+H]+。1H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ8.23(s，1H)、8.18(s，1H)、7.65(s，1H)、3.89(s，3H)、3.23(t，J＝6.6Hz，2H)、2.52(t，J＝6.4Hz，2H)。
实施例24：(S)-4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
步骤1：(S)-4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯
将(R)-(3-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)溴化锌(II)(57.7mL，0.50M)在THF(28.9mmol)中的溶液在0℃下，在Ar氛围下加入烘箱干燥的含((噻吩-2-甲酰基)氧基)铜(5.50g，28.9mmol)的烧瓶。将反应混合物在0℃下，在Ar氛围下搅拌20min。然后，在0℃下，将Ar脱气的来自实施例18、步骤4的5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯(6.39g，20.9mmol)在THF(100mL)中的溶液经由套管加入至反应混合物。将所得悬浮液升温至室温，并且搅拌另外3h。将反应混合物冷却至0℃。并通过套管加入至搅拌的饱和NH4Cl水溶液(300mL)和EtOAc(500mL)的混合物。将混合物升温至室温，并搅拌另外16h。将混合物过滤，并将滤液用EtOAc(1000mL)和食盐水(100mL)稀释。将有机层分离，用另外的食盐水(50mL)清洗、用MgSO4干燥、过滤、并减压浓缩。将残留物通过硅胶柱色谱(EtOAc在DCM中)纯化，从而提供(S)-4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯。
LCMS(C15H16BrO4S)(ES，m/z)：371、373[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ8.27-8.24(m，2H)、7.80(s，1H)、3.94(s，3H)、3.59(s，3H)、3.46-3.39(m，1H)、3.23-3.16(m，1H)、3.01-2.93(m，1H)、1.19(d，J＝7.0Hz，3H)。
步骤2：(S)-4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
将NaOH水溶液(0.61mL，1.0M、0.61mmol)加入(S)-4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯(50mg，0.14mmol)在THF(4.0mL)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌18h。将反应混合物用HCl水溶液(0.61mL，1.0M、0.61mmol)淬灭。然后将混合物减压浓缩，从而提供粗产品残留物，其通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而提供(S)-4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸。LCMS(C14H14BrO4S)(ES，m/z)：357、359[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ12.22(s，1H)、8.27-8.24(m，2H)、7.81(s，1H)、3.93(s，3H)、3.44-3.35(m，1H)、3.14-3.06(m，1H)、2.94-2.85(m，1H)、1.18(d，J＝7.5Hz，3H)。
实施例25：4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
步骤1：4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸甲酯
将1-氯甲基-4-氟-1,4-二氮杂环[2.2.2]辛烷双(四氟硼酸盐)(SelectfluorTM，77mg，0.22mmol)在室温下加入来自制备2的5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸甲酯(50mg，0.20mmol)在ACN(1ml)中的混合物。将所得混合物在45℃下搅拌15h。将混合物冷却至室温，用饱和NaHCO3水溶液(10mL)稀释，并用EtOAc(3x10mL)萃取。将合并的有机层用食盐水(10mL)清洗、用无水Na2SO4干燥、过滤、并减压浓缩。将残留物通过制备型TLC(SiO2，EtOAc在PE中)纯化，从而给出4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸甲酯。
LCMS(C12H12FO4S)(ES，m/z)：293[M+H]+。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.05(s，1H)、7.08(s，1H)、3.99(s，3H)、3.97(s，3H)、3.94(s，3H)。
步骤2：4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸
将LiOH·H2O(71.4mg，1.70mmol)在室温下分批加入4-氟-5、6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸甲酯(46mg，0.170mmol)在THF(3ml)、MeOH(1ml)、和H2O(1ml)的混合物。然后，将混合物搅拌15h。将混合物用1N HCl调整至pH＝5，并用EtOAc(3x10ml)萃取。将合并的有机层用食盐水(10mL)清洗、用无水Na2SO4干燥、过滤、并减压浓缩。将残留物通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而给出4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸。LCMS(C11H9FO4S)(ES，m/z)：257[M+H]+。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.12(s，1H)、7.09(s，1H)、3.99(s，3H)、3.97(s，3H)。
步骤3：4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯
向搅拌4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸(153mg，0.60mmol)在无水THF(5mL)中的溶液，在0℃下滴加(COCl)2(0.21mL，2.40mmol)。将混合物在0℃下搅拌1h，然后在室温下搅拌1h。减压去除溶剂，从而给4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯，其不经进一步纯化而使用。
步骤4：4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯
将噻吩-2-甲酸铜(I)(125mg，0.65mmol)的悬浮液用N2喷雾5min，然后冷却至0℃。将(3-乙氧基-3-氧代丙基)溴化锌(II)(17.7mL，0.5M inTHF、8.83mmol)的溶液在0℃下，在N2氛围下加入，并且将反应混合物在0℃下搅拌20min。然后将N2喷雾的4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯(130mg，0.47mmol)在THF(3mL)中的溶液在0℃下加入反应混合物。将所得悬浮液升温至室温，并搅拌另外的8h。将反应混合物在搅拌下倒入饱和NH4Cl水溶液(20mL)。将混合物用EtOAc(2x20mL)萃取。将合并的有机层用H2O和食盐水清洗、用MgSO4干燥、过滤、并减压浓缩。将残留物通过硅胶柱色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而给出4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯。LCMS(C16H18FO5S)(ES，m/z)：341[M+H]+。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ8.02(d，J＝0.7Hz，1H)、7.10(t，J＝1.0Hz，1H)、4.19(q，J＝7.2Hz，2H)、4.05-3.97(m，6H)、3.36(t，J＝6.7Hz，2H)、2.81(t，J＝6.7Hz，2H)、1.29(t，J＝7.2Hz，3H)。
步骤5：4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
向4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯(124mg，0.36mmol)在MeOH(1.5mL)和THF(1.5mL)中的溶液，加入1N LiOH水溶液(1.5mL，1.5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1h，然后加入1N HCl水溶液(1.5mL，1.5mmol)。将所得沉淀通过抽滤收集，并通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而提供4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸。
LCMS(C14H14FO5S)(ES，m/z)：313[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.19(s，1H)、8.33(d，J＝0.7Hz，1H)、7.59(d，J＝1.2Hz，1H)、3.93(s，3H)、3.87(s，3H)、3.35-3.28(m，2H)、2.64-2.57(m，2H)。
实施例26：(S)-4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
步骤1：(S)-4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯
将噻吩-2-甲酸铜(I)(125mg，0.65mmol)的悬浮液用N2喷雾5min，然后冷却至0℃。将(R)-(3-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)溴化锌(II)(1.21mL，0.5M在THF中，0.606mmol)的溶液在N2氛围下加入，并且将反应混合物在0℃下搅拌20min。然后加入N2喷雾的来自实施例25、步骤3的4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯(130mg，0.47mmol)在THF(3mL)，并将所得悬浮液升温至室温，并搅拌另外的8h。将反应混合物在搅拌下倒入饱和NH4Cl水溶液(20mL)，然后用EtOAc(2x20mL)萃取。将合并的有机层用H2O和食盐水清洗、用Na2SO4干燥、过滤、并减压浓缩。将残留物通过硅胶柱色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而给出(S)-4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯。LCMS(C16H18FO5S)(ES，m/z)：341[M+H]+。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.98(d，J＝0.7Hz，1H)、7.09(t，J＝1.0Hz，1H)、4.04-3.95(m，6H)、3.72(s，3H)、3.50(dd，J＝17.0、7.9Hz，1H)、3.23-3.12(m，1H)、3.06(dd，J＝17.0、5.7Hz，1H)、1.32(d，J＝7.2Hz，3H)。
步骤2：(S)-4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
向(S)-4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯(90mg，0.26mmol)在MeOH(1.5mL)、和THF(1.5mL)中的溶液，加入1N aq LiOH(1.5mL，1.5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1h，然后加入1N HCl水溶液(1.5mL，1.5mmol)。将所得沉淀通过抽滤收集，并通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而提供(S)-4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸。
LCMS(C15H16FO5S)(ES，m/z)：327[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.21(s，1H)、8.33(d，J＝0.7Hz，1H)、7.59(d，J＝1.1Hz，1H)、3.93(s，3H)、3.87(s，3H)、3.48(dd，J＝17.6、8.7Hz，1H)、3.14(dd，J＝17.6、5.0Hz，1H)、2.95-2.84(m，1H)、1.19(d，J＝7.3Hz，3H)。
实施例27：4-(3-氯-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
步骤1：3-氯-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯
向(E)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙烯酸(5.7g，27mmol)在氯苯(40mL)中的反应混合物，缓慢加入SOCl2(9.0mL，120mmol)。在室温下30min后，缓慢加入py(0.58mL，7.1mmol)。然后，将混合物加热至回流24h。冷却至室温后，将混合物减压浓缩，从而提供3-氯-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯，其不经进一步纯化而用于下一步骤。
步骤2：4-(3-氯-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯
向烘箱干燥的圆底烧瓶，加入Cu-Cl(510mg，5.2mmol)。将反应烧瓶用Ar吹扫。在室温下加入(3-乙氧基-3-氧代丙基)溴化锌(II)(0.5M在THF中，12mL，6.2mmol)。在室温下30min后，加入3-氯-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯(1.5g，5.2mmol)在THF(10mL)中的混合物。30min后，将混合物用饱和NH4Cl(6.0mL)淬灭，并用EtOAc稀释。将有机层分离，然后减压浓缩，从而提供残留物，所述残留物通过硅胶柱色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而给出4-(3-氯-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯。LCMS(C16H18ClO5S)(ES，m/z)：357[M+H]+。1H NMR(500MHz，Acetone-d6)δ7.56(s，1H)、7.36(s，1H)、4.13(q，J＝7.1Hz，2H)、3.98(s，3H)、3.97(s，3H)、3.47(t，J＝6.3Hz，2H)、2.75(t，J＝6.3Hz，2H)、1.24(t，J＝7.1Hz，3H)。
步骤3：4-(3-氯-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
将4-(3-氯-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯(58mg，0.16mmol)和LiOH(23mg，0.98mmol)在THF(1.5mL)、H2O(0.40mL)和MeOH(1.0mL)中的混合物在室温下搅拌1.5h。将反应混合物用HCl(1.0N在H2O中)调整至pH为3与4之间，然后用DCM稀释。将有机层分离，然后将H2O层用DCM(2X20mL)重复萃取。将合并的有机层减压浓缩，从而提供粗产品。粗产品通过制备型HPLC(ACN/H2O在0.1％TFA中)纯化。将含纯产品的液体级分合并，然后用冻干器冷冻干燥，从而生成4-(3-氯-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸。LCMS(C14H14ClO5S)(ES，m/z)：329[M+H]+。1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.22(s，1H)、7.67(s，1H)、7.29(s，1H)、3.90(s，3H)、3.88(s，3H)、3.34(t，J＝5.0Hz，2H)、2.62(t，J＝6.2Hz，2H)。
实施例28：(S)-4-(5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
步骤1：5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸叔丁酯
向5-氯-2-氟-4-甲氧基苯甲醛(0.055g，0.3mmol)、Cs2CO3(0.49g，1.5mmol)、和二氧杂环己烷(1.5mL)的混合物，加入2-巯基乙酸叔丁酯(0.053g，0.36mmol)。将反应在回流下加热6h。6h后，将混合物冷却至室温，然后用二氧杂环己烷(2.0mL)稀释。加入大孔聚苯乙烯结合的异氰酸酯(1.59mmol/g-0.50g)，并将反应在室温下振荡1h。1h后，将混合物过滤，用二氧杂环己烷清洗并减压浓缩，从而提供含5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸叔丁酯的粗混合物，其不经进一步纯化或表征而用于下一步骤。
步骤2：5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸
向含5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸叔丁酯的粗残留物，加入DCM(1.0mL)和TFA(1.0mL)。1h后，将混合物用Hex(2.0mL)稀释，然后减压浓缩，从而提供5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸，其不经进一步纯化或表征而用于下一步骤。
步骤3：5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯
向含5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸的粗残留物，加入DMF在DCM中的混合物(0.05M DMF在DCM中，1.5mL)。将(COCl)2(0.13mL，1.5mmol)缓慢加入反应混合物，并将混合物搅拌1h。1h后，将混合物用Hex稀释，然后减压浓缩，从而提供5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯，其不经进一步纯化或表征而用于下一步骤。
步骤4：(S)-4-(5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯
向含5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰氯的粗残留物和(R)-(3-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)溴化锌(II)(0.5M在THF中，1.2mL，0.60mmol)，加入结合于有机二氧化硅基质(([O3Si]n(CH2)yDPP-Pd)(可以以
DPP-Pd R390-100而从Silicycle商业获得，0.25mmol/g，0.23g，0.060mmol)的二苯基膦-Pd(II)催化剂，并将反应在室温下搅拌18h。然后将混合物用THF(4mL)稀释，并加入N,N-二乙醇氨基甲基聚苯乙烯(1.6mmol/g，0.50g)。将混合物搅拌1h。1h后，将混合物过滤，将固体用THF(3.5mL)清洗，并将滤液减压浓缩，从而提供(S)-4-(5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯，其不经进一步纯化或表征而用于下一步骤。
步骤5：(S)-4-(5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
向含(S)-4-(5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯的粗反应混合物，加入THF(1.0mL)、MeOH(0.30mL)和LiOH水溶液(1.0M在H2O中，1.0mL，1.0mmol)。在室温下3h后，将混合物用AcOH(0.20mL)淬灭，并将混合物减压浓缩。将残留物加入DMSO(1.5mL)中，并将混合物通过反相HPLC(ACN/H2O 0.1％TFA)纯化，从而提供(S)-4-(5-氯-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸。LCMS(C14H13ClO4S)(ES，m/z)：313[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.26(s，1H)、8.11(s，1H)、7.84(s，1H)、3.95(s，3H)、3.41(dd，J＝17.2、8.4Hz，1H)、3.09(dd，J＝17.4、5.0Hz，1H)、2.94–2.85(m，1H)、1.19(d，J＝7.2Hz，3H)。
如下述表3所示的实施例29至34是已经或者可以根据在上述实施例28中概述的那些的类似流程，使用如制备中记载的或由商业来源获得的适当起始材料而制备。
表3
实施例35：4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
步骤1：3-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-3-氧代丙酸叔丁酯
向含THF(10mL)的烧瓶中，在-78℃下加入LDA(2.0M在THF/庚烷/苯中，4.2mL，8.4mmol)。滴加乙酸叔丁酯(1.1mL，8.3mmol)。加入结束后，将混合物在-78℃下搅拌15min。滴加N,5,6-三甲氧基正甲基苯并[b]噻吩-2-甲酰胺(1.9g，6.9mmol)在THF(15mL)中的混合物。加入结束后，将混合物在
-78℃下搅拌1h。将混合物升温至室温。升温至室温后，将混合物冷却至5℃，然后用HCl水溶液(1N)淬灭直至pH＝2。将混合物用乙酸异丙酯(2x20mL)萃取。将合并的有机物用饱和NaHCO3水溶液和食盐水清洗、用干燥MgSO4、过滤并减压浓缩。粗残留物通过硅胶色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而提供3-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-3-氧代丙酸叔丁酯。LCMS(C17H21O5S–C4H8)(ES，m/z)：281[M+H]+。1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ8.12(s，1H)、7.57(s，1H)、7.44(s，1H)、4.00(s，2H)、3.82(s，3H)、3.79(s，3H)、1.36(s，9H)。
步骤2：4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
将Et2Zn(1.0M在Hex中，6.0mL，6.0mmol)在0℃下，在N2氛围下加入DCM(20mL)。然后滴加CH2I2(0.50mL，6.0mmol)。将混合物在0℃下搅拌10min后，加入3-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-3-氧代丙酸叔丁酯(0.50g，1.5mmol)，接着加入TMSCl(20μL，0.15mmol)。将混合物升温至室温，然后搅拌18h。然后将反应混合物用饱和NH4Cl水溶液淬灭，并用DCM(3x20mL)萃取。将合并的有机物减压浓缩。将残留物在DCM(30mL)中重构，并加入TFA(0.50mL，6.0mmol)。将反应混合物搅拌20min后，将反应混合物减压浓缩。产物通过反相制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而提供4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸。LCMS(C15H16O5S)(ES，m/z)：309[M+H]+。1H NMR(CD3OD，600MHz)：δ8.06(s，1H)、7.43-7.40(m，2H)、3.90(s，3H)、3.88(s，3H)、3.46(dd，J＝17、8Hz，1H)、3.08(dd，J＝17、5Hz，1H)、3.02(sextet、J＝7.0Hz，1H)、1.26(d，J＝7Hz，3H)
实施例36：4-(5-乙炔基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
步骤1：4-(6-甲氧基-5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代
丁酸乙酯
向Ar脱气的4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯(100mg，0.269mmol)、Pd(Ph3P)4(78mg，0.067mmol)、和Cu-I(51mg，0.27mmol)的混合物，在室温下，在用Ar脱气的同时，加入DMF(1.0mL)，接着加入三乙基胺(0.188mL，1.35mmol)和乙炔基三甲基硅烷(0.192L，1.35mmol)。将混合物在用Ar脱气(表面下喷雾)的同时搅拌5min，该时间后将混合物在Ar下，在20℃下搅拌18h。将反应混合物用EtOAc(50mL)稀释，并通过硅藻土过滤。将滤液减压浓缩，从而提供粗产品残留物。粗产品残留物通过硅胶色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而提供4-(6-甲氧基-5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯。LCMS(C20H25O4SSi)(ES，m/z)：389[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ8.25(s，1H)、8.06(s，1H)、7.72(s，1H)、4.06(q，J＝7.0Hz，2H)、3.90(s，3H)、3.34–3.30(m，2H)、2.68–2.64(m，2H)、1.17(t，J＝7.0Hz，3H)、0.24(s，9H)。
步骤2：4-(5-乙炔基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
将NaOH(1.0M在H2O中，1.0mL，1.0mmol)加入4-(6-甲氧基-5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯(61mg，0.16mmol)在MeOH(5.0mL)中的悬浮液。将所得悬浮液在20℃下搅拌2.5h。将反应混合物用HCl(37％在H2O中，0.083mL，1.0mmol)淬灭。然后将混合物减压浓缩，从而提供粗产品残留物。粗产品残留物通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而提供4-(5-乙炔基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸。
LCMS(C15H13O4S)(ES，m/z)：289[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ12.22(s，1H)、8.27(s，1H)、8.08(s，1H)、7.73(s，1H)、4.33(s，1H)、3.91(s，3H)、3.30–3.24(m，2H)、2.63–2.57(m，2H)。
实施例37：(S)-4-(5-甲氧基-6-(甲基氨基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代
丁酸
步骤1：(S)-4-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-
2-甲基-4-氧代丁酸甲酯
向Ar脱气的(S)-4-(6-溴-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯(40mg，0.11mmol)、甲基氨基甲酸叔丁酯(21mg，0.16mmol)、Pd2(dba)3(5mg，5μmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基氧杂蒽(XantPhos，9mg，0.02mmol)、和Cs2CO3(70mg，0.22mmol)的混合物，在室温下，在用Ar脱气的同时加入二氧杂环己烷(0.50mL)。将混合物搅拌5min同时用Ar脱气(表面下喷雾)，该时间后将混合物在Ar氛围下加热至95℃12h。将反应混合物冷却至室温，并用EtOAc(20mL)稀释。将所得悬浮液通过含硅藻土的玻璃料过滤。将滤液减压浓缩，从而提供粗产品残留物。粗产品残留物通过硅胶色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而提供(S)-4-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯。
LCMS(C21H28NO6S)(ES，m/z)：422[M+H]+。
步骤2：(S)-4-(5-甲氧基-6-(甲基氨基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
甲酯
将TFA(0.34mL，4.4mmol)在20℃下加入(S)-4-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯(37mg，0.088mmol)在DCM(2.0mL)中的混合物。将反应混合物在20℃下搅拌2h。将反应混合物减压浓缩，从而提供(S)-4-(5-甲氧基-6-(甲基氨基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯作为粗产品残留物。将粗产品残留物不进行加工或纯化而用于后续步骤。
LCMS(C16H20NO4S)(ES，m/z)：322[M+H]+。
步骤3：(S)-4-(5-甲氧基-6-(甲基氨基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
将NaOH(2.0M在H2O中，0.35mL，0.70mmol)在20℃下加入(S)-4-(5-甲氧基-6-(甲基氨基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯(28mg，0.087mmol)在DMSO(0.50mL)和MeOH(2.0mL)的混合物。将反应混合物在20℃下搅拌18h。将反应混合物用HCl(0.057mL，37％在H2O中，0.70mmol)淬灭，然后用另外的DMSO(1.0mL)稀释。粗产品残留物通过反相制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而提供(S)-4-(5-甲氧基-6-(甲基氨基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸。LCMS(C15H18NO4S)(ES，m/z)：308[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ8.07(s，1H)、7.27(s，1H)、6.89(s，1H)、3.86(s，3H)、3.34–3.29(m，1H)、3.04–2.96(m，1H)、2.90–2.82(m，1H)、2.79(s，3H)、1.16(d，J＝7.0Hz，3H)。
实施例38：(S)-4-(5-甲氧基-6-(甲硫基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁
酸
步骤1：(S)-4-(5-甲氧基-6-(甲硫基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲
酯
将DMSO(1.00mL)加入(S)-4-(6-溴-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯(95mg，0.26mmol)、Cu-I(12mg，0.064mmol)、和乙酸锌(94mg，0.51mmol)的混合物。将所得混合物在N2下加热至120℃20h。将反应混合物冷却至室温，并用EtOAc(50mL)稀释，然后通过硅藻土过滤。将滤液减压浓缩，从而提供粗产品残留物。粗产品残留物通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而提供(S)-4-(5-甲氧基-6-(甲硫基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯。LCMS(C16H19O4S2)(ES，m/z)：339[M+H]+。
步骤2：(S)-4-(5-甲氧基-6-(甲硫基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
将NaOH(2.0M在H2O中，0.19mL，0.38mmol)在20℃下加入(S)-4-(5-甲氧基-6-(甲硫基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯(32mg，0.095mmol)在DMSO(1.00mL)中的溶液。将所得混合物在20℃下，在N2下搅拌15min。然后将反应混合物用HCl(0.035mL，37％在H2O中，0.43mmol)淬灭。将反应混合物过滤，并通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而提供(S)-4-(5-甲氧基-6-(甲硫基)苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸。LCMS(C15H17O4S2)(ES，m/z)：325[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ8.23(s，1H)、7.75(s，1H)、7.47(s，1H)、3.89(s，3H)、3.45–3.37(m，1H)、3.13–3.07(m，1H)、2.91–2.88(m，1H)、2.47(s，3H)、1.18(d，J＝7.0Hz，3H)。
实施例39：(1S,2R)-2-(6-甲氧基-5-乙烯基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)环丙烷-1-甲
酸
步骤1：(1S,2R)-2-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)环丙烷甲酸甲酯
将TMS-重氮甲烷(2.0M在Hex中，1.4mL，2.8mmol)在0℃下加入(1S,2R)-2-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)环丙烷甲酸(891mg，2.51mmol)在DCM(20mL)和MeOH(20mL)中的混合物。将反应混合物在0℃下搅拌1h。将反应混合物减压浓缩，从而提供粗产品残留物。粗产品残留物通过硅胶色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而提供(1S,2R)-2-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)环丙烷甲酸甲酯。
LCMS(C15H14BrO4S)(ES，m/z)：369、371[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ8.30(s，1H)、8.28(s，1H)、7.81(s，1H)、3.94(s，3H)、3.47(s，3H)、3.18–3.12(m，1H)、2.44–2.39(m，1H)、1.60–1.57(m，1H)、1.42–1.39(m，1H)。
步骤2：(1S,2R)-2-(6-甲氧基-5-乙烯基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)环丙烷甲酸甲酯
向Ar脱气的(1S,2R)-2-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)环丙烷甲酸甲酯(100mg，0.271mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(50mg，0.33mmol)、Pd2(dba)3(12mg，0.014mmol)、X-Phos(12mg，0.027mmol)、和Cs2CO3(176mg，0.542mmol)的混合物，在室温下，在用Ar脱气的同时加入二氧杂环己烷(1.50ml)和H2O(0.2ml)。将混合物搅拌5min同时用Ar脱气(表面下喷雾)，该时间后将混合物在Ar氛围下加热至90℃16h。将反应混合物冷却至室温，并用EtOAc(20mL)稀释。将所得悬浮液通过含有MgSO4的玻璃料过滤。将滤液减压浓缩，从而提供粗产品残留物。粗产品残留物通过硅胶色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而提供(1S,2R)-2-(6-甲氧基-5-乙烯基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)环丙烷甲酸甲酯。LCMS(C17H17O4S)(ES，m/z)：317[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ8.31(s，1H)、8.14(s，1H)、7.66(s，1H)、7.05–6.97(m，1H)、5.88(d，J＝17.5Hz，1H)、5.34(d，J＝11.5Hz，1H)、3.91(s，3H)、3.47(s，3H)、3.20–3.13(m，1H)、2.46–2.38(m，1H)、1.62–1.56(m，1H)、1.44–1.36(m，1H)。
步骤3：(1S,2R)-2-(6-甲氧基-5-乙烯基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)环丙烷-1-甲酸
将三甲基氢氧化锡(34mg，0.19mmol)在20℃下加入(1S,2R)-2-(6-甲氧基-5-乙烯基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)环丙烷甲酸甲酯(30mg，0.095mmol)在1,2-二氯乙烷(2.0mL)中的混合物。将反应混合物搅拌并加热至85℃2天。将反应混合物冷却至室温，并用NaHSO4(2.0M在H2O中，0.19mL，0.378mmol)淬灭，然后用EtOAc(100mL)和H2O(25mL)稀释。将有机层分离，用食盐水(10mL)清洗、用MgSO4干燥、过滤、并减压浓缩，从而提供粗产品残留物。粗产品残留物通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而提供(1S,2R)-2-(6-甲氧基-5-乙烯基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)环丙烷-1-甲酸。
LCMS(C16H15O4S)(ES，m/z)：303[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ12.22(s，1H)、8.28(s，1H)、8.15(s，1H)、7.65(s，1H)、7.05–6.96(m，1H)、5.88(d，J＝17.5Hz，1H)、5.33(d，J＝11.5Hz，1H)、3.90(s，3H)、3.10–3.02(m，1H)、2.30–2.25(m，1H)、1.56–1.50(m，1H)、1.34–1.30(m，1H)。
如下述表4所示的实施例40是已经或者可以根据在上述实施例39中概述的那些的类似流程，使用如制备中记载的或由商业来源获得的适当起始材料而制备。
表4
实施例41：(S)-4-(6-甲氧基-5-乙烯基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
步骤1：(S)-4-(6-甲氧基-5-乙烯基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯
向Ar脱气的(S)-4-(5-溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯(122mg，0.329mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(61mg，0.39mmol)、Pd2(dba)3(15mg，0.016mmol)、X-Phos(15mg，0.033mmol)、和Cs2CO3(321mg，0.986mmol)的混合物，在室温下，在用Ar脱气的同时加入二氧杂环己烷(3.0mL)和H2O(0.30mL)。将混合物搅拌5min同时用Ar脱气(表面下喷雾)，该时间后将混合物在Ar氛围下加热至90℃2h。将反应混合物冷却至室温，并用EtOAc(20mL)稀释。将所得悬浮液通过含有MgSO4的玻璃料过滤。将滤液减压浓缩，从而提供粗产品残留物。粗产品残留物通过硅胶色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而提供(S)-4-(6-甲氧基-5-乙烯基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯。
LCMS(C17H19O4S)(ES，m/z)：319[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ8.28(s，1H)、8.10(s，1H)、7.66(s，1H)、7.05–6.96(m，1H)、5.86(d，J＝17.5Hz，1H)、5.34(d，J＝11.5Hz，1H)、3.91(s，3H)、3.59(s，3H)、3.47–3.40(m，1H)、3.24–3.16(m，1H)、3.00–2.93(m，1H)、1.19(d，J＝6.5Hz，3H)。
步骤2：(S)-4-(6-甲氧基-5-乙烯基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
将NaOH(1.0M在H2O中，0.41mL，0.41mmol)加入(S)-4-(6-甲氧基-5-乙烯基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯(26mg，0.082mmol)在THF(3.0mL)中的溶液。将所得悬浮液在20℃下搅拌18h。将反应混合物用HCl(1.0M在H2O中，0.41mL，0.41mmol)淬灭。然后将反应混合物减压浓缩，从而提供粗产品残留物。粗产品残留物通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而提供(S)-4-(6-甲氧基-5-乙烯基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸。
LCMS(C16H17O4S)(ES，m/z)：305[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ12.21(s，1H)、8.27(s，1H)、8.10(s，1H)、7.65(s，1H)、7.06–6.96(m，1H)、5.92–5.81(m，1H)、5.38–5.30(m，1H)、3.90(s，3H)、3.44–3.36(m，1H)、3.14–3.05(m，1H)、2.93–2.85(m，1H)、1.18(bs、3H)。
实施例42：(S)-4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸(4R,
5R)-5-羟基-1,2-二噻烷-4-基酯
向搅拌的(S)-4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸(81mg，0.26mmol)和EDC(50mg，0.26mmol)在DCM(2.0mL)中的溶液，加入(4R,5R)-1,2-二噻烷-4,5-二醇(30mg，0.20mmol)和DMAP(1.6mg，0.013mmol)。将溶液搅拌3天，并通过硅胶柱色谱(EtOAc在Hex中)纯化。将期望的级分合并，浓缩，并通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)再次纯化，从而提供(S)-4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸(4R,5R)-5-羟基-1,2-二噻烷-4-基酯。LCMS(C19H23O6S3)(ES，m/z)：443[M+H]+。1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ8.22(s，1H)、7.60(s，1H)、7.46(s，1H)、5.49(d，J＝5.6Hz，1H)、4.66(m，1H)、3.86(s，3H)、3.83(s，3H)、3.60(m，1H)、3.40(dd，J＝17.3、8.3Hz，1H)、3.22(dd，J＝17.3、5.1Hz，1H)、3.15–3.09(m，2H)、2.98(m，1H)、2.89–2.83(m，2H)、1.21(d，J＝7.1Hz，3H)。
实施例43：(S)-4-(6-羟基-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
步骤1：(S)-4-(6-羟基-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
向搅拌的(S)-4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸(47mg，0.15mmol)在DCM(2.0mL)中的溶液，加入AlCl3(140mg，1.10mmol)。将反应混合物搅拌2h，浓缩，并通过制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化。将(S)-4-(6-羟基-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸和(S)-4-(5-羟基-6-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸的混合物通过手性SFC(柱AD-H(21x250mm)，40％MeOH，具有0.25％DMEA，在CO2中)再纯化，从而提供DMEA盐形式的产品(保留时间6.2min)。将盐溶解于H2O中，并用1N HCl酸化至pH为2。将沉淀过滤、用H2O清洗、并在高真空下干燥，从而提供产物。LCMS(C14H15O5S)(ES，m/z)：295[M+H]+。1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ12.19(s，1H)、9.88(s，1H)、8.16(s，1H)、7.44(s，1H)、7.30(s，1H)、3.85(s，3H)、3.37(m，1H)、3.05(dd，J＝17.1、5.1Hz，1H)、2.88(m，1H)、1.17(d，J＝7.1Hz，3H)。
实施例44：(2S)-4-(5-甲氧基-6-丙基-1-苯并噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
步骤1：(2S)-4-(5-甲氧基-6-丙基-1-苯并噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯
在使用前，将无水Na2CO3(16mg，0.15mmol)在高真空下，在加盖的微波小瓶中加热至125℃1h。将该小瓶移入手套箱内。在手套箱内，将脱气的二甲氧基乙烷(7.0mL)加入含氯化镍(II)乙二醇二甲基醚络合物(5.8mg)和4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶(8.0mg)的2-dram小瓶中。将所得混合物在室温下搅拌25min，从而制备溶液A。
向第二小瓶，将脱气的二甲氧基乙烷(2.4mL)加入Ir(2-(2,4-二氟苯基)-5-(三氟甲基)吡啶)2(4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶)PF6(7.2mg)。将所得混合物在室温下搅拌10min，从而制备溶液B。
向第三小瓶，将脱气的二甲氧基乙烷(0.38mL)加入(2S)-4-(6-溴-5-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯(28mg，0.075mmol)、和三(三甲基甲硅烷基)硅烷(23μL、0.075mmol)的混合物。向该小瓶，加入溶液A(101μL)、溶液B(280μL)、1-溴丙烷(28mg，0.23mmol)、和Na2CO3(16mg，0.15mmol)。将小瓶加盖并用石蜡膜(Parafilm)密封。将反应混合物取出手套箱，搅拌并用两台34W蓝色LED灯照射4h。要注意，灯位于举例反应容器适当的距离，以提供照射而不将反应混合物加热至显著高于室温。将含(2S)-4-(5-甲氧基-6-丙基-1-苯并噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯的粗反应混合物不经进一步纯化或表征而用于下一步骤。
步骤2：(2S)-4-(5-甲氧基-6-丙基-1-苯并噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸
向(2S)-4-(5-甲氧基-6-丙基-1-苯并噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯在二甲氧基乙烷(0.76mL)中的粗混合物，在室温下加入MeOH(0.76mL)、H2O(0.19mL)、和LiOH(22mg，0.91mmol)。将所得混合物在室温下搅拌1.5h，然后用HCl水溶液(2.0N)调整至pH＝5，并过滤。将滤液通过反相制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而提供(2S)-4-(5-甲氧基-6-丙基-1-苯并噻吩-2-基)-2-甲基-4-氧代丁酸。LCMS(C17H21O4S)(ES，m/z)：321[M+H]+。1HNMR(500MHz，DMSO-d6)：δ8.25(s，1H)、7.77(s，1H)、7.47(s，1H)、3.86(s，3H)、3.45-3.39(m，1H)、3.12-3.07(m，1H)、2.92-2.87(m，1H)、2.65(t，J＝7.5Hz，2H)、1.60(sextet、J＝7.4Hz，2H)、1.18(d，J＝7.5Hz，3H)、0.91(t，J＝7.3Hz，3H)。
如下述表5所示的实施例45至47是已经或者可以根据在上述实施例44中概述的那些的类似流程，使用如制备中记载的或由商业来源获得的适当起始材料而制备。
表5
实施例48：4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-羟基-2-甲基-4-氧代丁酸乙
酯
步骤1：N,5,6-三甲氧基正甲基苯并[b]噻吩-2-甲酰胺
向5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸(2.0g，8.4mmol)在THF(17mL)中的混合物，在0℃下加入N,O-二甲基羟基胺盐酸盐(1.6g，17mmol)、EDC(3.2g，17mmol)，然后加入Hunig碱(5.9mL，34mmol)。将混合物升温至室温，搅拌18h。然后将混合物用EtOAc和H2O稀释。将有机层分离、用MgSO4干燥、过滤、并减压浓缩。粗残留物通过硅胶柱色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而提供期望的产物。LCMS(C13H16NO4S)(ES，m/z)：282[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.05(s，1H)、7.55(s，1H)、7.49(s，1H)、3.84(s，3H)、3.81(s，3H)、3.80(s，3H)、3.30(s，3H)。
步骤2：1-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)乙-1-酮
向N,5,6-三甲氧基正甲基苯并[b]噻吩-2-甲酰胺(0.20g，0.71mmol)在THF(3.6mL)中的混合物，在0℃下缓慢加入MeMgBr(3.0M在THF中，0.36mL，1.1mmol)。0℃下30min后，加入更多的MeMgBr(3.0M在THF中，0.10mL，0.28mmol)。0℃下15min后，加入更多的MeMgBr(3.0M在THF中，0.19mL，0.57mmol)。0℃下45min后，将混合物缓慢用饱和NH4Cl水溶液萃取，然后用EtOAc稀释。将有机层分离、用MgSO4干燥、过滤、并减压浓缩。粗残留物通过硅胶柱色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而提供期望的产物。
LCMS(C12H13O3S)(ES，m/z)：237[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.15(s，1H)、7.59(s，1H)、7.46(s，1H)、3.85(s，3H)、3.83(s，3H)、2.58(s，3H)。
步骤3：4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-羟基-2-甲基-4-氧代丁酸乙酯
向1-(56-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)乙酮(50mg，0.21mmol)在THF(4.2mL)中的混合物，在-78℃下加入LDA(2.0M在THF/庚烷/苯中，0.50mL，1.0mmol)。-78℃下45min后，加入丙酮酸乙酯(78μl，0.70mmol)，并将混合物在-78℃下搅拌30min。30min后，将混合物用饱和NH4Cl水溶液淬灭，并升温至室温。加入EtOAc，并将有机层分离，用干燥MgSO4、过滤并减压浓缩。将残留物通过硅胶柱色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而提供外消旋混合物形式的期望产物。将纯化的外消旋混合物通过手性SFC(ES Industries，ChromegaChiralCCC，21x250mm柱，40％MeOH(+0.25％DMEA)在CO2中)纯化，从而提供保留时间为3.9min和6.3min的两种化合物。浓缩第一洗脱峰提供产物。LCMS(C17H21O6S)(ES，m/z)：353[M+H]+。1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.16(s，1H)、7.59(s，1H)、7.46(s，1H)、5.39(s，1H)、4.08(q，J＝6.8Hz，2H)、3.85(s，3H)、3.83(s，3H)、3.47(d，J＝16.0Hz，1H)、3.35(d，J＝15.0Hz，1H)、1.40(s，3H)、1.16(t，J＝7.1Hz，3H)。
实施例49：2-(2-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-氧代乙基)戊酸
步骤1：2-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)-3-丙基丁二酸1-(叔丁基)4-甲
基酯
向3-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-3-氧代丙酸叔丁酯(0.15g，0.45mmol)在DMF(4.5mL)中的混合物，加入Cs2CO3(0.29g，0.89mmol)，并将混合物搅拌20min。20min后，加入2-溴戊酸甲酯(0.17g，0.89mmol)，并将混合物搅拌30min。30min后，将混合物用EtOAc和食盐水稀释。将有机层分离、用MgSO4干燥、过滤、并减压浓缩。残留物通过硅胶柱色谱纯化，从而提供异构体混合物形式的2-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)-3-丙基丁二酸1-(叔丁基)4-甲基酯。LCMS(C23H31O7S)(ES，m/z)：451[M+H]+。
步骤2：2-(2-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-氧代乙基)戊酸甲酯
向2-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)-3-丙基丁二酸1-叔丁基4-甲基酯(0.16g，0.35mmol)在CH2Cl2(0.94mL)中，加入TFA(0.47mL)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用EtOAc和饱和NaHCO3稀释。将有机层分离、用MgSO4干燥、过滤、并减压浓缩。残留物纯化硅胶柱色谱通过，从而提供2-(2-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-氧代乙基)戊酸甲酯。LCMS(C18H23O5S)(ES，m/z)：351[M+H]+。
步骤3：2-(2-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-氧代乙基)戊酸
向2-(2-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-氧代乙基)戊酸甲酯(69mg，0.20mmol)在THF(1.0mL)、MeOH(0.50mL)和H2O(0.50mL)中的混合物，加入LiOH(24mg，0.99mmol)，并将混合物在室温下搅拌2h。2h后，将混合物用HCl水溶液(2.0N，0.50mL，1.0mmol)淬灭，然后用EtOAc和H2O稀释。将有机层分离、用MgSO4干燥、过滤、并减压浓缩。残留物通过手性SFC(Chiralcel，OJ-H，21X250mm，20％MeOH(+0.25％DMEA)在CO2中)纯化，从而提供保留时间为4.2min和6.7min的分离的对映异构体。将含第一峰的级分合并，并减压浓缩。然后将残留物加入H2O中，并通过冷干冷冻干燥，从而提供2-(2-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-2-氧代乙基)戊酸。
LCMS(C17H21O5S)(ES，m/z)：337[M+H]+。1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ12.02(s，1H)、8.18(s，1H)、7.55(s，1H)、7.42(s，1H)、3.82(s，3H)、3.79(s，3H)、3.36–3.31(m，1H)、3.04(dd，J＝17.2、4.3Hz，1H)、2.82–2.76(m，1H)、1.59–1.51(m，1H)、1.51–1.42(m，1H)、1.36–1.26(m，2H)、0.85(t，J＝7.2Hz，3H)。
实施例50：2-乙基-4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
步骤1：3-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-3-氧代丙酸叔丁酯
向4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸(290mg，1.1mmol)在7.5mL的THF中的混合物，加入1,1'-羰基二咪唑(220mg，1.4mmol)。2h后，加入3-(叔丁氧基)-3-氧代丙酸镁(0.58g，1.7mmol)，并将反应混合物搅拌18h。然后将混合物用EtOAc和H2O稀释。将有机层分离、用MgSO4干燥、过滤、并减压浓缩。粗残留物通过硅胶柱色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而提供3-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-3-氧代丙酸叔丁酯。LCMS(C17H20FO5S–C4H8)(ES，m/z)：299[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.32(s，1H)、7.60(s，1H)、4.13(s，2H)、3.92(s，3H)、3.85(s，3H)、1.40(s，9H)。
步骤2：2-乙基-4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸甲酯
向3-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-3-氧代丙酸叔丁酯(0.12g，0.34mmol)在DMF(1.0mL)中的混合物，加入Cs2CO3(0.22g，0.68mmol)，并将混合物搅拌20min。然后加入2-溴丁酸甲酯(78μl、0.68mmol)，并将混合物在室温下搅拌3h。3h后，将混合物用EtOAc和H2O稀释。将有机层分离、用MgSO4干燥、过滤、并减压浓缩。向粗残留物，加入CH2Cl2(1.7mL)和TFA(0.85mL)，并将混合物加热至50℃4h。冷却至室温后，将混合物用EtOAc和饱和NaHCO3水溶液稀释。将有机层分离、用MgSO4干燥、过滤、并减压浓缩。粗残留物通过硅胶柱色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而提供2-乙基-4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸甲酯。
LCMS(C17H20FO5S)(ES，m/z)：355[M+H]+。
步骤3：2-乙基-4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
向2-乙基-4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸甲酯(57mg，0.16mmol)在THF(1.0mL)、MeOH(0.50mL)、和H2O(0.50mL)中的混合物，加入LiOH(19mg，0.80mmol)，并将混合物在40℃下搅拌2h。2h后，将混合物冷却至室温，然后用HCl水溶液(2.0M，0.40mL，0.80mmol)淬灭，然后用EtOAc和H2O稀释。将有机层分离、用MgSO4干燥、过滤、并减压浓缩。将残留物通过手性SFC(Lux-4，21x250mm，45％MeOH(+0.25％DMEA)在CO2中)纯化，从而提供保留时间为2.8min和5.3min的分离的对映异构体。将含第二峰的级分合并并浓缩。将残留物加入H2O中，并通过冻干而冷冻干燥，从而提供2-乙基-4-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸。
LCMS(C16H18FO5S)(ES，m/z)：341[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ11.97(s，1H)、8.35(s，1H)、7.57(s，1H)、3.91(s，3H)、3.85(s，3H)、3.52–3.42(m，1H)、3.15–3.07(m，1H)、2.81–2.71(m，1H)、1.68–1.55(m，2H)、0.92(t，J＝7.3Hz，3H)。
实施例51和52：(1R,2S)-2-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)环丙烷-
1-甲酸和(1S,2R)-2-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)环丙烷-1-甲酸
步骤1：4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩
向4-氟-56-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酸(0.090g，0.35mmol)在喹啉(0.83mL，7.0mmol)中的混合物，添加铜(0.038g，0.60mmol)，并将混合物加热至190℃2h。2h后，将混合物冷却至室温，然后用EtOAc和2N HCl稀释。将混合物过滤，然后将有机层分离。然后将有机层用H2O、饱和NaHCO3水溶液和食盐水接续清洗。将有机层用MgSO4干燥、过滤并减压浓缩。将混合物通过硅胶柱色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而提供4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩。
LCMS(C10H10FO2S)(ES，m/z)：213[M+H]+。1H NMR(500MHz，氯form-d)δ7.33(d，J＝5.4Hz，1H)、7.27(d，J＝5.2Hz，1H)、7.14(s，1H)、3.99(s，3H)、3.95(s，3H)。
步骤2：2-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)环丙烷-1-甲酸
向4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩(45mg，0.21mmol)在CH2Cl2(2.0mL)中的混合物，在0℃下加入AlCl3(37mg，0.28mmol)，然后加入3-氧杂双环[3.1.0]己-2,4-二酮(48mg，0.42mmol)。将混合物在0℃下搅拌1h，然后升温至室温，搅拌18h。18h后，将混合物用EtOAc和H2O稀释。将有机层分离、用MgSO4干燥、过滤、并减压浓缩。将所得残留物通过硅胶柱色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而提供期望产物的外消旋混合物。然后将对映异构体通过手性SFC(Lux-4，21x250mm、45％MeOH(+0.25％DMEA)在CO2中)分离，从而提供保留时间为4.0min和4.9min的(1R,2S)-2-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)环丙烷-1-甲酸和(1S,2R)-2-(4-氟-5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-甲酰基)环丙烷-1-甲酸。将含第一峰(保留时间4.0min)的级分合并并浓缩。将残留物加入H2O中，并通过冻干而冷冻干燥，从而提供一种纯的对映异构体。LCMS(C15H14FO5S)(ES，m/z)：325[M+H]+。1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.31(s，1H)、7.58(s，1H)、3.92(s，3H)、3.85(s，3H)、3.15(q，J＝8.0Hz，1H)、2.33–2.28(m，1H)、1.58–1.48(m，1H)、1.34–1.27(m，1H)。将含第二峰(保留时间4.9min)的级分合并并浓缩。将残留物加入H2O中，并通过冻干而冷冻干燥，从而提供一种纯的对映异构体。LCMS(C15H14FO5S)(ES，m/z)：325[M+H]+。1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.18(s，1H)、8.31(s，1H)、7.58(s，1H)、3.91(s，3H)、3.85(s，3H)、3.14(q，J＝7.9Hz，1H)、2.29(q，J＝8.0Hz，1H)、1.57–1.49(m，1H)、1.34–1.27(m，1H)。
实施例53：4-(6-(二氟甲氧基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
步骤1：4-(6-羟基-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯
向4-(5,6-二甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯(0.45g，1.4mmol)和DCM(12mL)的混合物，在25℃下加入AlCl3(0.56g，4.2mmol)。将混合物在25℃下搅拌15h。15h后，将更多的AlCl3(1.0g，7.5mmol)加入混合物。将所得混合物在25℃下搅拌16h。16h后，将混合物用HCl水溶液(1.0N，20mL，20mm)淬灭，并用DCM(3x30mL)萃取。将合并的有机相用食盐水(20mL)清洗，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将所得残留物通过硅胶柱色谱(EtOAc在PE中)纯化，从而给出粗4-(6-羟基-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯。然后，将粗产品通过手性SFC纯化，从而提供4-(6-羟基-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯。LCMS(C15H17O5S)(ES，m/z)：309。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝7.88(s，1H)、7.34(s，1H)、7.24(s，1H)、6.08(s，1H)、4.17(q，J＝7.3Hz，2H)、3.99(s，3H)、3.31(t，J＝6.7Hz，2H)、2.78(t，J＝6.8Hz，2H)、1.27(t，J＝7.0Hz，3H)。
步骤2：4-(6-(二氟甲氧基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯
向4-(6-羟基-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯(25mg，0.081mmol)在DMF(1.5ml)中的混合物，在30℃下加入2-溴-2,2-二氟乙酸钠(48mg，0.24mmol)和Cs2CO3(79mg，0.24mmol)。将所得混合物加热至100℃3h。冷却至室温后，将混合物用H2O(10mL)稀释，并用EtOAc(3x10mL)萃取。将合并的有机层用H2O(20mL)和食盐水(20mL)清洗，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，从而给出粗产品。粗品通过反相制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而提供4-(6-(二氟甲氧基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯。LCMS(C16H17F2O5S)(ES，m/z)：359[M+H]+。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.90(s，1H)、7.61(s，1H)、7.34(s，1H)、6.60(t，J＝74Hz，1H)、4.15(q，J＝7.2Hz，2H)、3.93(s，3H)、3.31(t，J＝6.4Hz，2H)、2.77(t，J＝6.4Hz，2H)、1.25(t，J＝7.2Hz，3H)。
步骤3：4-(6-(二氟甲氧基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸
向4-(6-(二氟甲氧基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸乙酯(5.0mg，0.014mmol)在MeOH(0.50mL)、THF(0.50mL)和H2O(0.50mL)中的混合物，加入LiOH(3.3mg，0.14mmol)。将混合物加热至50℃2h。2h后，将混合物冷却至室温，并加入HCl水溶液(1.0M)直至混合物具有pH＝6。将混合物减压浓缩。将所得残留物溶解于DMF(2mL)中，并通过反相制备型HPLC(ACN/H2O，具有0.1％TFA)纯化，从而提供4-(6-(二氟甲氧基)-5-甲氧基苯并[b]噻吩-2-基)-4-氧代丁酸。
LCMS(C14H13F2O5S)(ES，m/z)：331[M+H]+。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.15(s，1H)、7.69(s，1H)、7.61(s，1H)、6.83(t，J＝75Hz，1H)、3.96(s，3H)、3.36(t，J＝6.0Hz，2H)、2.73(t，J＝6.0Hz，2H)。
实施例54：(S)-4-(4-甲氧基-2-甲基噻吩并[2',3':5,6]苯并[1,2-d]噁唑-7-
基)-2-甲基-4-氧代丁酸
步骤1：4-氟-2-甲氧基-6-硝基苯酚
向50mL圆底烧瓶，加入4-氟-2-甲氧基苯酚(3.7mL，32mmol)和EtOAc(90mL)。将混合物冷却至0℃，并搅拌。向搅拌的混合物，耗费5min滴加硝酸(2.1mL，33mmol)。将反应在该温度下搅拌30min。将混合物用EtOAc(30mL)稀释、用H2O(100mL)清洗、用无水Na2SO4干燥、过滤并减压蒸发。将所得残留物通过硅胶柱色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而给出4-氟-2-甲氧基-6-硝基苯酚。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ10.60(s，1H)、7.41(dd，J＝8.4、2.7Hz，1H)、6.94(dd，J＝9.2、2.4Hz，1H)、3.97(s，3H)。
步骤2：2-氨基-4-氟-6-甲氧基苯酚
向100mL圆底烧瓶，加入4-氟-2-甲氧基-6-硝基苯酚(826mg，4.41mmol)、Pd/C(235mg，0.221mmol)、和EtOAc(30mL)。搅拌混合物。将混合物用N2脱气，然后置于H2下。搅拌16h后，将反应通过硅藻土过滤，并将滤饼用EtOAc清洗。将合并滤液减压浓缩，从而提供2-氨基-4-氟-6-甲氧基苯酚，其不经进一步纯化而用于下一步骤。LCMS(C7H9FNO2)(ES，m/z)：158[M+H]+。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ6.23-6.01(m，2H)、3.85(s，3H)。
步骤3：5-氟-7-甲氧基-2-甲基苯并[d]噁唑
向20mL小瓶，加入2-氨基-4-氟-6-甲氧基苯酚(0.58g，3.7mmol)和1,1,1-三甲氧基乙烷(4.0mL，31mmol)。将混合物搅拌并加热至70℃。10min后，将混合物冷却至室温，并将溶剂减压蒸发，从而提供粗残留物，其通过硅胶色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而提供5-氟-7-甲氧基-2-甲基苯并[d]噁唑。LCMS(C9H9FNO2)(ES，m/z)：182[M+H]+。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ7.05–6.90(m，1H)、6.61(d，J＝11.1Hz，1H)、4.01(s，3H)、2.66(s，3H)。
步骤4：5-氟-7-甲氧基-2-甲基苯并[d]噁唑-4-甲醛
向20mL小瓶，加入5-氟-7-甲氧基-2-甲基苯并[d]噁唑(423mg，2.33mmol)、1,3,5,7-四氮杂金刚烷(556mg，3.97mmol)、和TFA(0.50mL)。将混合物搅拌并加热至90℃3h。将反应冷却至室温，用EtOAc(40mL)稀释，并用饱和NaHCO3水溶液(100mL)分级。有机层用无水Na2SO4干燥、过滤、并减压浓缩，从而提供粗残留物，其通过硅胶色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而提供5-氟-7-甲氧基-2-甲基苯并[d]噁唑-4-甲醛。LCMS(C10H9FNO3)(ES，m/z)：210[M+H]+。1HNMR(500MHz，CDCl3)：δ10.42(s，1H)、6.60(d，J＝12.7Hz，1H)、4.05(s，3H)、2.68(s，3H)。
步骤5：4-甲氧基-2-甲基噻吩并[2',3':5,6]苯并[1,2-d]噁唑-7-甲酸
向4mL小瓶，加入5-氟-7-甲氧基-2-甲基苯并[d]噁唑-4-甲醛(185mg，0.884mmol)和DMSO(4.0mL)。搅拌混合物。向混合物，加入Et3N(1.2mL，8.8mmol)和2-巯基乙酸甲酯(0.79mL，8.8mmol)。混合物加热至100℃15min。将混合物冷却至室温。加入KOH水溶液(10M，1.8mL，18mmol)，并将混合物搅拌10min。将反应用HCl水溶液(6M)酸化至pH 3。将沉淀通过过滤收集，用H2O(2x20mL)清洗，然后用MeOH(2x2mL)清洗，从而生成4-甲氧基-2-甲基噻吩并[2',3':5,6]苯并[1,2-d]噁唑-7-甲酸。LCMS(C12H10NO4S)(ES，m/z)：264[M+H]+。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ8.05(s，1H)、7.05(s，1H)、3.82(s，3H)、2.47(s，3H)。
步骤6：4-甲氧基-2-甲基噻吩并[2',3':5,6]苯并[1,2-d]噁唑-7-甲酰氯
向20ml小瓶，加入4-甲氧基-2-甲基噻吩并[2',3':5,6]苯并[1,2-d]噁唑-7-甲酸(106mg，0.404mmol)、CH2Cl2(1.0mL)、和DMF(6.3μL、0.081mmol)。将混合物搅拌并冷却至0℃。加入(COCl)2(0.074mL，0.85mmol)。5min后，将反应升温至室温，并搅拌35min。将反应减压浓缩，从而提供粗4-甲氧基-2-甲基噻吩并[2',3':5,6]苯并[1,2-d]噁唑-7-甲酰氯，其不经进一步纯化而用于下一步骤。
步骤7：(S)-4-(4-甲氧基-2-甲基噻吩并[2',3':5,6]苯并[1,2-d]噁唑-7-基)-2-
甲基-4-氧代丁酸甲酯
向20mL小瓶，加入Cu-Cl(14mg，0.15mmol)。将小瓶抽真空，然后用N2回填3次。向小瓶，加入THF(0.25mL)。将混合物冷却至0℃。向搅拌的混合物，滴加(R)-(3-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)溴化锌(II)(0.5M在THF中，1.5mL，0.73mmol)2min。然后将混合物搅拌10min。向混合物，以NMP中的溶液形式，耗费2min滴加4-甲氧基-2-甲基噻吩并[2',3':5,6]苯并[1,2-d]噁唑-7-甲酰氯(41mg，0.15mmol)(2.0mL)。将混合物搅拌20min。将反应用EtOAc(15mL)稀释，并用NH4OH水溶液(3M，30mL，90mmol)清洗。将有机层用无水Na2SO4干燥、过滤、并减压浓缩。将所得残留物通过硅胶色谱(EtOAc在Hex中)纯化，从而提供(S)-4-(4-甲氧基-2-甲基噻吩并[2',3':5,6]苯并[1,2-d]噁唑-7-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯。
LCMS(C17H18NO5S)(ES，m/z)：348[M+H]+。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ8.36(s，1H)、7.24(s，1H)、4.11(s，3H)、3.73(s，3H)、3.54(dd，J＝16.6、7.5Hz，1H)、3.20-3.09(m，2H)、2.78(s，3H)、1.32(d，J＝7.0Hz，3H)。
步骤8：(S)-4-(4-甲氧基-2-甲基噻吩并[2',3':5,6]苯并[1,2-d]噁唑-7-基)-2-
甲基-4-氧代丁酸
向4mL小瓶，在室温下加入(S)-4-(4-甲氧基-2-甲基噻吩并[2',3':5,6]苯并[1,2-d]噁唑-7-基)-2-甲基-4-氧代丁酸甲酯(48mg，0.14mmol)、KOH水溶液(0.5M，0.55mL，0.28mmol)、和2-丙醇(1.4mL)。30min后，将混合物用HCl水溶液酸化至pH 3。将沉淀通过过滤收集，并用H2O(2x5mL)和MeOH(2mL)清洗。将沉淀进一步通过硅胶色谱(MeOH在DCM中)纯化，从而提供(S)-4-(4-甲氧基-2-甲基噻吩并[2',3':5,6]苯并[1,2-d]噁唑-7-基)-2-甲基-4-氧代丁酸。
LCMS(C16H16NO5S)(ES，m/z)：334[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ12.20(s，1H)、8.51(s，1H)、7.70(s，1H)、4.04(s，3H)、3.51(dd，J＝17.4、8.6Hz，1H)、3.18(dd，J＝17.5、4.9Hz，1H)、2.95-2.85(m，1H)、2.71(s，3H)、1.20(d，J＝7.2Hz，3H)。
生物分析
本文实施例中描述的各个化合物被定义为STING激动剂，其通过(i)结合于STING蛋白，如通过STING生物化学[3H]cGAMP竞争测定中，在20uM(受试化合物的浓度)下氚标记的cGAMP配体与STING蛋白的结合降低至少20％所证明的；和(ii)证明干扰素产生在THP1细胞测定中以30uM诱导IFN-β分泌6％或更多(其中，将cGAMP在30uM引起的诱导设为100％)。
[3H]-cGAMP合成
将2.3mL含有80mM TrisCl、200mM MgCl2和20mM NaCl的缓冲溶液、然后将0.32mL的10mM GTP水溶液加入塑料50mL AMICON管中。然后加入[3H]ATP(21Ci/mmol，45mCi)在0.5mL H2O中的溶液，接着加入1mL的1mg/mL DNA溶液(Herring测试激活剂DNA，Sigma，#D6898)和53μ的cGAS酶的47mM溶液。加入另外的H2O使总体积达到10mL。
将反应在37℃下搅拌2小时，然后直接加入Amicon Ultra-1510K离心管中，并以4,000g离心1小时。然后使用以下流动相在半制备型Mono Q柱上纯化所收集的溶液：
A:0.05M TrisCl pH 8.5，用1M NaOH调整
B:0.05M TrisCl，0.5M NaCl pH 8.5，用1M NaOH调整
梯度：100％A 5min，接着耗费25min线性梯度至50:50(A:B)，3mL/min，254nm。
合并收集的产物级分并用缓冲液A调节至总体积为30mL。在21.5Ci/mmol的比活度下，以98.0％的放射化学纯度分离总收量为15.5mCi的[3H]cGAMP。
cGAS酶
化学合成重组DNA载体以表达截短的人cGAS酶(残基161-522)。为了帮助表达和纯化，氨基末端含有六组氨酸标签、SUMO标签和TEV切割位点。重组酶在ROSETTATM2(DE3)Single CompetentCells(Novagen)中过表达。使用HIS-Select HF镍亲和凝胶(Sigma)进行亲和纯化，然后使用Hi-Load 26/60SUPERDEX200制备级柱(GEHealthcare)进行尺寸排阻色谱。合并级分，浓缩，在液氮中快速冷冻并储存于-80℃直至需要。
实施例55：3H-cGAMP过滤结合测定(HAQSTING)
化合物结合于STING的能力使用放射性过滤结合测定，通过与氚标记的cGAMP配体竞争人STING受体膜的能力来定量。结合测定使用从过表达全长HAQ STING和氚标记的cGAMP配体的粉纹夜蛾细胞膜(T.ni；Expression Systems、cat#94-002F、www.expressionsystems.com)获得的STING受体。
基本的HAQ STING过滤测定方案如下：
使用1:3十点剂量应答形式，通过Hamilton STARPlus CORE在96孔板(Greiner，#651201)中连续滴定化合物。在化合物制备后，通过将浓缩的膜稀释于测定缓冲液(1x PBS；Invitrogen#SH30028.02)中，并使用手动组织均化器(Wheaton、#357546)振荡7x来制备2.2ug/ml的工作浓度的STING膜(SEQ.ID.No.1)。然后将148μL的所制备的膜手动加入到96孔深孔聚丙烯板(Fisher Scientific，#12-566-121)的每个孔中。加入膜后，使用BIOMEKFX将2uL的滴定的受试化合物、DMSO对照(Sigma#276855)或冷cGAMP对照加入适当的孔中。然后将化合物和膜在室温下预孵育60分钟以使化合物结合平衡。平衡后，通过稀释于测定缓冲液中，制备8nM[3H]c-GAMP配体，然后将50uL的该工作原液手动加入测定板的每个孔中。然后将板在室温下孵育60分钟，然后使用配备有20mM HEPES缓冲液(FisherScientific,#BP299500)的TOMTEC MACH III细胞收集器，通过96孔GF/B滤板(PerkinElmer，#6005250)过滤每个测定板的内容物)。然后使用加压烘箱将滤板在55℃下干燥30分钟，然后向每个孔中加入30uL ULTIMA GOLD F闪烁体。然后使用PerkinElmerTopCount读板仪测量每个反应孔的氚水平。
在归一化至对照后，通过测量剩余放射活度的量来计算每种化合物浓度的百分比活性。将活性百分比对化合物浓度对数的曲线用4-参数剂量应答方程拟合，从而计算EC50值。
最终的反应条件是：
所测试的化合物浓度是20.000、637.00、2.200、0.740、0.247、0.082、0.027、0.009、0.003、和0.001μM，具有1.0％的残留DMSO。
全长STING(HAQ)病毒产生
使用昆虫细胞杆状病毒系统产生STING病毒。将秋行军虫Sf21细胞(Kempbio，Inc.)在不含抗生素的Sf-900II SFM培养基(LifeTechnologies#10902088)中稀释至5e5细胞/ml。将细胞悬浮液加入到经处理的6孔板的每个孔中(每孔2mL，总共1e6个细胞)，并使细胞粘附至少30分钟。同时，通过组合500ng HAQ STING[STING(1-379)R71H,G230A,H232R,R293Q-GG-AviTag-GS-HRV3C-HIS8/pBAC1]DNA(Genewiz定制合成)与1mL含有10μL
II试剂(Invitrogen#10362100)和100ng病毒骨架BestBac 2.0，v-cath/chiA缺失的线性化杆状病毒DNA(表达系统#91-002)的Sf-900II SFM培养基，组装1mL共转染混合物。将转染混合物孵育30分钟。孵育后，从6孔板中粘附的细胞中轻轻去除培养基，加入1mL转染混合物(每孔1mL)，并将板置于27℃的加湿培养箱中。第二天，向6孔板的每个孔中加入1mL Sf-900II SFM培养基(无抗生素)。加入培养基后，使细胞与DNA(SEQ.ID.No.2)在27℃下孵育5-7天，以产生P0病毒原液。为了产生P1病毒原液，在含有5μg/s的庆大霉素的Sf-900II SFM培养基中(Invitrogen#15710072)，将0.5mL P0病毒上清液加入到50mL的未感染的Sf21细胞(在感染前一天接种，密度为5×105细胞/mL，允许一次过夜加倍)。然后将感染的细胞在27℃下孵育3天，同时以110rpm振荡(ATR Biotech Multitron Infors HT#AJ118)。在第3天，使用ViCell XR(Beckman Coulter Life Sciences#383556)对P1培养物计数，从而确认已发生感染(细胞大小比未感染细胞大≥3μm，活力大约为85-95％)。在50mL锥形管中收获培养物，并在4℃下以2000xg离心10分钟。将P1病毒上清液倒入干净的50ml离心管中，并将剩余的P1细胞沉淀用于产生杆状病毒感染的昆虫细胞(BIIC)。准备含有Sf-900II SFM培养基的冷冻保存培养基(其具有10％热灭活的FBS、10％DMSO(Sigma#D2650)和5μg/ml庆大霉素)，并在使用前立即通过0.22μM过滤器灭菌。将P1细胞沉淀重悬浮至2e7细胞/ml的密度，并等分到冷冻瓶中(每瓶1mL)。将冷冻瓶在-80℃下置于Mr.FrostyTM细胞冷冻机O/N中，转移到液氮中，第二天长期储存。为了产生P2病毒原液，在含有5μg的庆大霉素的Sf-900II SFM培养基中，将0.5mL P1病毒上清液加入50mL未感染的Sf21细胞(在感染前一天接种，密度为5×105细胞/mL，允许一次过夜加倍)。将这些细胞在27℃下孵育3天，同时以110rpm振荡，然后在4℃下以2000xg离心10分钟而收获P2原液。倒出并弃去P2病毒上清液，同时按照上述相同的方案使用P2细胞沉淀产生P2BIIC。已证实杆状病毒生成方案一致地有效产生具有2e9pfu/mL(2e7细胞/mL×100pfu/细胞)滴度的P1/P2BIIC。
全长STING(HAQ)表达
为了产生STING膜，通过将解冻的BIIC添加到以1.0×106个细胞/mL的密度接种的Sf21细胞中，将P1/P2BIIC扩增过夜。使用2e9pfu/ml的假定BIIC滴度计算用于感染培养物的BIIC的体积，以在过夜扩增中实现10的MOI。培养过夜后，在ViCell XR上对细胞计数以确认已发生感染(细胞大小比未感染细胞大≥3μm，活力大约为80-90％)。来自过夜扩增的感染的Sf21细胞用于感染大规模表达的粉纹夜蛾(T.ni；表达系统，cat#94-002F，www.expressionsystems.com)，其在细胞培养基(ESF921SFM，含有5μg/mL庆大霉素)中以1.0x106的密度，以MOI＝2.0接种，所述细胞的体积基于(100pfu/感染的Sf21细胞)来计算。使细胞在27℃下表达48小时，然后在4℃下以3,400xg离心10分钟，收获细胞沉淀。在ViCellXR上对T.ni细胞计数以确认在收获之前已经发生感染(细胞大小比未感染细胞大≥3μm，并且活力为大约80-90％)。
全长STING(HAQ)膜产生
缓冲原液试剂：
1)1M HEPES pH 7.5，Teknova，Cat#H1035
2)5M NaCl，Sigma Aldrich，Cat#S5150-1L
3)KCl，Sigma Aldrich，Cat#319309-500ML
4)完整的无EDTA蛋白酶抑制剂片剂，Roche Diagnostics，Cat#11873580001
5)Benzonase，Universal Nuclease，Pierce，Cat#88702
将裂解缓冲液[25mM HEPES pH 7.5,10mM MgCl2,20mM KCl，(Benzonase 1:5000，完全蛋白酶抑制剂标签/50mL)]以5mL裂解缓冲液每g细胞沉淀，加入到上述制备的表达全长STING(HAQ)的细胞沉淀中。使用Wheaton Dounce均化器，将沉淀重悬，并振荡20次以破坏细胞膜。然后将均化的裂解物在接近5000PSI的压力下通过EMULSIFLEX-C5微流化器。将重悬的沉淀物在36,000rpm(100,000×g)下，在45Ti转子超高速离心机中，在4℃下离心45min。去除上清液。然后将沉淀以50mL沉淀/离心管的体积，重悬于清晰缓冲液[(25mMHEPES pH7.5,1mM MgCl2,20mM KCl，1M NaCl(完全蛋白酶抑制剂标签/50mL)]中。然后将沉淀/洗涤缓冲液混合物使用玻璃匀浆器在冰上均化(20次)，然后在4℃下以36,000rpm离心45min。去除上清液。再次重复清晰步骤。将所得膜重悬于20mM HEPES pH 7.5，500mM NaCl，10％甘油，不含EDTA的蛋白酶抑制剂(1片/50mL)中。通过Bradford测定(Bio-Rad蛋白测定，Cat#500-0006)测量蛋白质浓度，并通过SDS-PAGE测定蛋白质富集，并通过蛋白质印迹确认。重悬的膜在-80℃下储存。
全长HAQ STING
[STING(1-379)R71H,G230A,H232R,R293Q-GG-AviTag-GS-HRV3C-HIS8]氨基酸序列:
MPHSSLHPSIPCPRGHGAQKAALVLLSACLVTLWGLGEPPEHTLRYLVLHLASLQLGLLLNGVCSLAEELHHIHSRYRGSYWRTVRACLGCPLRRGALLLLSIYFYYSLPNAVGPPFTWMLALLGLSQALNILLGLKGLAPAEISAVCEKGNFNVAHGLAWSYYIGYLRLILPELQARIRTYNQHYNNLLRGAVSQRLYILLPLDCGVPDNLSMADPNIRFLDKLPQQTADRAGIKDRVYSNSIYELLENGQRAGTCVLEYATPLQTLFAMSQYSQAGFSREDRLEQAKLFCQTLEDILADAPESQNNCRLIAYQEPADDSSFSLSQEVLRHLRQEEKEEVTVGSLKTSAVPSTSTMSQEPELLISGMEKPLPLRTDFSGGGLNDIFEAQKIEWHEGSLEVLFQGPHHHHHHHH(SEQ.ID.No.1)
全长HAQ
[STING(1-379)R71H,G230A,H232R,R293Q-GG-AviTag-GS-HRV3C-HIS8/pBAC1]质粒DNA序列：
GGAACGGCTCCGCCCACTATTAATGAAATTAAAAATTCCAATTTTAAAAAACGCAGCAAGAGAAACATTTGTATGAAAGAATGCGTAGAAGGAAAGAAAAATGTCGTCGACATGCTGAACAACAAGATTAATATGCCTCCGTGTATAAAAAAAATATTGAACGATTTGAAAGAAAACAATGTACCGCGCGGCGGTATGTACAGGAAGAGGTTTATACTAAACTGTTACATTGCAAACGTGGTTTCGTGTGCCAAGTGTGAAAACCGATGTTTAATCAAGGCTCTGACGCATTTCTACAACCACGACTCCAAGTGTGTGGGTGAAGTCATGCATCTTTTAATCAAATCCCAAGATGTGTATAAACCACCAAACTGCCAAAAAATGAAAACTGTCGACAAGCTCTGTCCGTTTGCTGGCAACTGCAAGGGTCTCAATCCTATTTGTAATTATTGAATAATAAAACAATTATAAATGCTAAATTTGTTTTTTATTAACGATACAAACCAAACGCAACAAGAACATTTGTAGTATTATCTATAATTGAAAACGCGTAGTTATAATCGCTGAGGTAATATTTAAAATCATTTTCAAATGATTCACAGTTAATTTGCGACAATATAATTTTATTTTCACATAAACTAGACGCCTTGTCGTCTTCTTCTTCGTATTCCTTCTCTTTTTCATTTTTCTCTTCATAAAAATTAACATAGTTATTATCGTATCCATATATGTATCTATCGTATAGAGTAAATTTTTTGTTGTCATAAATATATATGTCTTTTTTAATGGGGTGTATAGTACCGCTGCGCATAGTTTTTCTGTAATTTACAACAGTGCTATTTTCTGGTAGTTCTTCGGAGTGTGTTGCTTTAATTATTAAATTTATATAATCAATGAATTTGGGATCGTCGGTTTTGTACAATATGTTGCCGGCATAGTACGCAGCTTCTTCTAGTTCAATTACACCATTTTTTAGCAGCACCGGATTAACATAACTTTCCAAAATGTTGTACGAACCGTTAAACAAAAACAGTTCACCTCCCTTTTCTATACTATTGTCTGCGAGCAGTTGTTTGTTGTTAAAAATAACAGCCATTGTAATGAGACGCACAAACTAATATCACAAACTGGAAATGTCTATCAATATATAGTTGCTGATCAGATCTGATCATGGAGATAATTAAAATGATAACCATCTCGCAAATAAATAAGTATTTTACTGTTTTCGTAACAGTTTTGTAATAAAAAAACCTATAAATATAGGATCCATGCCCCACTCCAGCCTGCATCCATCCATCCCGTGTCCCAGGGGTCACGGGGCCCAGAAGGCAGCCTTGGTTCTGCTGAGTGCCTGCCTGGTGACCCTTTGGGGGCTAGGAGAGCCACCAGAGCACACTCTCCGGTACCTGGTGCTCCACCTAGCCTCCCTGCAGCTGGGACTGCTGTTAAACGGGGTCTGCAGCCTGGCTGAGGAGCTGCACCACATCCACTCCAGGTACCGGGGCAGCTACTGGAGGACTGTGCGGGCCTGCCTGGGCTGCCCCCTCCGCCGTGGGGCCCTGTTGCTGCTGTCCATCTATTTCTACTACTCCCTCCCAAATGCGGTCGGCCCGCCCTTCACTTGGATGCTTGCCCTCCTGGGCCTCTCGCAGGCACTGAACATCCTCCTGGGCCTCAAGGGCCTGGCCCCAGCTGAGATCTCTGCAGTGTGTGAAAAAGGGAATTTCAACGTGGCCCATGGGCTGGCATGGTCATATTACATCGGATATCTGCGGCTGATCCTGCCAGAGCTCCAGGCCCGGATTCGAACTTACAATCAGCATTACAACAACCTGCTACGGGGTGCAGTGAGCCAGCGGCTGTATATTCTCCTCCCATTGGACTGTGGGGTGCCTGATAACCTGAGTATGGCTGACCCCAACATTCGCTTCCTGGATAAACTGCCCCAGCAGACCGCTGACCGTGCTGGCATCAAGGATCGGGTTTACAGCAACAGCATCTATGAGCTTCTGGAGAACGGGCAGCGGGCGGGCACCTGTGTCCTGGAGTACGCCACCCCCTTGCAGACTTTGTTTGCCATGTCACAATACAGTCAAGCTGGCTTTAGCCGGGAGGATAGGCTTGAGCAGGCCAAACTCTTCTGCCAGACACTTGAGGACATCCTGGCAGATGCCCCTGAGTCTCAGAACAACTGCCGCCTCATTGCCTACCAGGAACCTGCAGATGACAGCAGCTTCTCGCTGTCCCAGGAGGTTCTCCGGCACCTGCGGCAGGAGGAAAAGGAAGAGGTTACTGTGGGCAGCTTGAAGACCTCAGCGGTGCCCAGTACCTCCACGATGTCCCAAGAGCCTGAGCTCCTCATCAGTGGAATGGAAAAGCCCCTCCCTCTCCGCACGGATTTCTCTGGCGGTGGCCTGAACGACATCTTCGAAGCCCAGAAAATCGAATGGCATGAAGGCAGCCTGGAAGTGCTGTTCCAGGGCCCACACCACCATCATCACCATCACCATTAATGAGCGGCCGCACTCGAGCACCACCACCACCACCACTAACCTAGGTAGCTGAGCGCATGCAAGCTGATCCGGGTTATTAGTACATTTATTAAGCGCTAGATTCTGTGCGTTGTTGATTTACAGACAATTGTTGTACGTATTTTAATAATTCATTAAATTTATAATCTTTAGGGTGGTATGTTAGAGCGAAAATCAAATGATTTTCAGCGTCTTTATATCTGAATTTAAATATTAAATCCTCAATAGATTTGTAAAATAGGTTTCGATTAGTTTCAAACAAGGGTTGTTTTTCCGAACCGATGGCTGGACTATCTAATGGATTTTCGCTCAACGCCACAAAACTTGCCAAATCTTGTAGCAGCAATCTAGCTTTGTCGATATTCGTTTGTGTTTTGTTTTGTAATAAAGGTTCGACGTCGTTCAAAATATTATGCGCTTTTGTATTTCTTTCATCACTGTCGTTAGTGTACAATTGACTCGACGTAAACACGTTAAATAGAGCTTGGACATATTTAACATCGGGCGTGTTAGCTTTATTAGGCCGATTATCGTCGTCGTCCCAACCCTCGTCGTTAGAAGTTGCTTCCGAAGACGATTTTGCCATAGCCACACGACGCCTATTAATTGTGTCGGCTAACACGTCCGCGATCAAATTTGTAGTTGAGCTTTTTGGAATTATTTCTGATTGCGGGCGTTTTTGGGCGGGTTTCAATCTAACTGTGCCCGATTTTAATTCAGACAACACGTTAGAAAGCGATGGTGCAGGCGGTGGTAACATTTCAGACGGCAAATCTACTAATGGCGGCGGTGGTGGAGCTGATGATAAATCTACCATCGGTGGAGGCGCAGGCGGGGCTGGCGGCGGAGGCGGAGGCGGAGGTGGTGGCGGTGATGCAGACGGCGGTTTAGGCTCAAATGTCTCTTTAGGCAACACAGTCGGCACCTCAACTATTGTACTGGTTTCGGGCGCCGTTTTTGGTTTGACCGGTCTGAGACGAGTGCGATTTTTTTCGTTTCTAATAGCTTCCAACAATTGTTGTCTGTCGTCTAAAGGTGCAGCGGGTTGAGGTTCCGTCGGCATTGGTGGAGCGGGCGGCAATTCAGACATCGATGGTGGTGGTGGTGGTGGAGGCGCTGGAATGTTAGGCACGGGAGAAGGTGGTGGCGGCGGTGCCGCCGGTATAATTTGTTCTGGTTTAGTTTGTTCGCGCACGATTGTGGGCACCGGCGCAGGCGCCGCTGGCTGCACAACGGAAGGTCGTCTGCTTCGAGGCAGCGCTTGGGGTGGTGGCAATTCAATATTATAATTGGAATACAAATCGTAAAAATCTGCTATAAGCATTGTAATTTCGCTATCGTTTACCGTGCCGATATTTAACAACCGCTCAATGTAAGCAATTGTATTGTAAAGAGATTGTCTCAAGCTCGGATCGATCCCGCACGCCGATAACAAGCCTTTTCATTTTTACTACAGCATTGTAGTGGCGAGACACTTCGCTGTCGTCGAGGTTTAAACGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGGACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCACCTGACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTCCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCA
(SEQ.ID.No.2)
公开的特定化合物在上述HAQ STING体外结合测定中进行评价。下述表格以EC50值列出这些化合物的生物数据。
表6:对HAQ STING的3H-cGAMP过滤结合测定
实施例56：3H-cGAMP过滤结合测定(WT STING)
化合物结合于STING的能力使用放射性过滤结合测定，通过与氚标记的cGAMP配体竞争人STING受体膜的能力来定量。结合测定使用从过表达全长WT STING和氚标记的cGAMP配体的粉纹夜蛾细胞膜(T.ni；Expression Systems、cat#94-002F、www.expressionsystems.com)获得的STING受体。
基本的WT STING过滤测定方案如下：
通过稀释于测定缓冲液中，制备16nM[3H]c-GAMP配体，将50uL的该工作原液手动加入测定板的每个孔中。加入配体后，使用BIOMEK FX将2uL的滴定的受试化合物、DMSO对照(Sigma#276855)或冷cGAMP对照加入适当的孔中。使用1:3十点剂量应答形式，通过Hamilton STARPlus CORE在96孔板(Greiner，#651201)中制备连续滴定化合物。在加入化合物后，通过将浓缩的膜稀释于测定缓冲液(1x PBS；Invitrogen#SH30028.02)中，并使用手动组织均化器(Wheaton、#357546)振荡7x来制备2.2ug/ml的工作浓度的STING膜(SEQ.ID.No.3)。然后将148μL的该制备的膜手动加入到96孔深孔聚丙烯板(FisherScientific，#12-566-121)的每个孔中。将化合物、配体和膜在室温下孵育60分钟，然后使用配备有20mM HEPES缓冲液(Fisher Scientific,#BP299500)的TOMTEC MACH III细胞收集器，通过96孔GF/B滤板(PerkinElmer，#6005250)过滤每个测定板的内容物)。然后使用加压VWR烘箱将滤板在55℃下干燥30分钟，然后向每个孔中加入30uL ULTIMA GOLD F闪烁体。然后使用PerkinElmer TopCount读板仪测量每个反应孔的氚水平。
在归一化至对照后，通过测量剩余放射活度的量来计算每种化合物浓度的百分比活性。将活性百分比对化合物浓度对数的曲线用4-参数剂量应答方程拟合，从而计算EC50值。
最终的反应条件是：
所测试的化合物浓度是20.000、637.00、2.200、0.740、0.247、0.082、0.027、0.009、0.003、和0.001μM，具有1.0％的残留DMSO。
全长STING(WT)病毒产生
使用昆虫细胞杆状病毒系统产生STING病毒。将秋行军虫Sf21细胞(Kempbio，Inc.)在不含抗生素的Sf-900II SFM培养基(LifeTechnologies#10902088)中稀释至5e5细胞/ml。将细胞悬浮液加入到经处理的6孔板的每个孔中(每孔2mL，总共1e6个细胞)，并使细胞粘附至少30分钟。同时，通过组合500ng of WTSTING[STING(1-379)H232R-gg-AviTag-gs-HRV3C-HIS8/pBAC1](Genewiz定制合成)与1mL含有10μL
II试剂(Invitrogen#10362100)和100ng病毒骨架BestBac 2.0，v-cath/chiA缺失的线性化杆状病毒DNA(表达系统#91-002)的Sf-900II SFM培养基，组装1mL共转染混合物。将转染混合物孵育30分钟。孵育后，从6孔板中粘附的细胞中轻轻去除培养基，加入1mL转染混合物(每孔1mL)，并将板置于27℃的加湿培养箱中。第二天，向6孔板的每个孔中加入1mL Sf-900IISFM培养基(无抗生素)。加入培养基后，使细胞与DNA[(SEQ.ID.No.4)和直链病毒骨架BestBac 2.0]在27℃下孵育5-7天，以产生P0病毒原液。为了产生P1病毒原液，在含有5μg/s的庆大霉素的Sf-900II SFM培养基中(Invitrogen#15710072)，将0.5mLP0病毒上清液加入到50mL的未感染的Sf21细胞(在感染前一天接种，密度为5×105细胞/mL，允许一次过夜加倍)。然后将感染的细胞在27℃下孵育3天，同时以110rpm振荡(ATR Biotech MultitronInfors HT#AJ118)。在第3天，使用ViCell XR(Beckman Coulter Life Sciences#383556)对P1培养物计数，从而确认已发生感染(细胞大小比未感染细胞大≥3μm，活力大约为85-95％)。在50mL锥形管中收获培养物，并在4℃下以2000xg离心10分钟。将P1病毒上清液倒入干净的50ml离心管中，并将剩余的P1细胞沉淀用于产生杆状病毒感染的昆虫细胞(BIIC)。准备含有Sf-900II SFM培养基的冷冻保存培养基(其具有10％热灭活的FBS、10％DMSO(Sigma#D2650)和5μg/ml庆大霉素)，并在使用前立即通过0.22μM过滤器灭菌。将P1细胞沉淀重悬浮至2e7细胞/ml的密度，并等分到冷冻瓶中(每瓶1mL)。将冷冻瓶在-80℃下置于Mr.FrostyTM细胞冷冻机O/N中，转移到液氮中，第二天长期储存。为了产生P2病毒原液，在含有5μg的庆大霉素的Sf-900II SFM培养基中，将0.5mL P1病毒上清液加入50mL未感染的Sf21细胞(在感染前一天接种，密度为5×105细胞/mL，允许一次过夜加倍)。将这些细胞在27℃下孵育3天，同时以110rpm振荡，然后在4℃下以2000xg离心10分钟而收获P2原液。倒出并弃去P2病毒上清液，同时按照上述相同的方案使用P2细胞沉淀产生P2BIIC。已证实杆状病毒生成方案一致地有效产生具有2e9pfu/mL(2e7细胞/mL×100pfu/细胞)滴度的P1/P2BIIC。
全长STING(WT)表达
为了产生STING膜，通过将解冻的BIIC添加到以1.0×106个细胞/mL的密度接种的Sf21细胞中，将P1/P2BIIC扩增过夜。使用2e9pfu/ml的假定BIIC滴度计算用于感染培养物的BIIC的体积，以在过夜扩增中实现10的MOI。培养过夜后，在ViCell XR上对细胞计数以确认已发生感染(细胞大小比未感染细胞大≥3μm，活力大约为80-90％)。来自过夜扩增的感染的Sf21细胞用于感染大规模表达的粉纹夜蛾(T.ni；表达系统，cat#94-002F，www.expressionsystems.com)，其在细胞培养基(ESF921SFM，含有5μg/mL庆大霉素)中以1.0x106的密度，以MOI＝2.0接种，所述细胞的体积基于(100pfu/感染的Sf21细胞)来计算。使细胞在27℃下表达48小时，然后在4℃下以3,400xg离心10分钟，收获细胞沉淀。在ViCellXR上对T.ni细胞计数以确认在收获之前已经发生感染(细胞大小比未感染细胞大≥3μm，并且活力为大约80-90％)。
全长STING(WT)膜产生
缓冲原液试剂：
1)1M HEPES pH 7.5，Teknova，Cat#H1035
2)5M NaCl，Sigma Aldrich，Cat#S5150-1L
3)KCl，Sigma Aldrich，Cat#319309-500ML
4)完整的无EDTA蛋白酶抑制剂片剂，Roche Diagnostics，Cat#11873580001
5)Benzonase，Universal Nuclease，Pierce，Cat#88702
将裂解缓冲液[25mM HEPES pH 7.5,10mM MgCl2,20mM KCl，(Benzonase 1:5000，完全蛋白酶抑制剂标签/50mL)]以5mL裂解缓冲液每g细胞沉淀，加入到上述制备的表达全长STING(WT)的细胞沉淀中。使用Wheaton Dounce均化器，将沉淀重悬，并振荡20次以破坏细胞膜。然后将均化的裂解物在接近5000PSI的压力下通过EMULSIFLEX-C5微流化器。将重悬的沉淀物在36,000rpm(100,000×g)下，在45Ti转子超高速离心机中，在4℃下离心45min。去除上清液。然后将沉淀以50mL沉淀/离心管的体积，重悬于清晰缓冲液[(25mMHEPES 7.5,1mM MgCl2,20mM KCl，1M NaCl(完全蛋白酶抑制剂标签/50mL)]中。然后将沉淀/洗涤缓冲液混合物使用玻璃匀浆器在冰上均化(20次)，然后在4℃下以36,000rpm离心45min。去除上清液。再次重复清晰步骤。将所得膜重悬于20mM HEPES pH 7.5，500mM NaCl，10％甘油，不含EDTA的蛋白酶抑制剂(1片/50mL)中。通过Bradford测定(Bio-Rad蛋白测定，Cat#500-0006)测量蛋白质浓度，并通过SDS-PAGE测定蛋白质富集，并通过蛋白质印迹确认。重悬的膜在-80℃下储存。
全长STING WT
[STING(1-379)H232R-gg-AviTag-gs-HRV3C-HIS8]氨基酸序列:
MPHSSLHPSIPCPRGHGAQKAALVLLSACLVTLWGLGEPPEHTLRYLVLHLASLQLGLLLNGVCSLAEELRHIHSRYRGSYWRTVRACLGCPLRRGALLLLSIYFYYSLPNAVGPPFTWMLALLGLSQALNILLGLKGLAPAEISAVCEKGNFNVAHGLAWSYYIGYLRLILPELQARIRTYNQHYNNLLRGAVSQRLYILLPLDCGVPDNLSMADPNIRFLDKLPQQTGDRAGIKDRVYSNSIYELLENGQRAGTCVLEYATPLQTLFAMSQYSQAGFSREDRLEQAKLFCRTLEDILADAPESQNNCRLIAYQEPADDSSFSLSQEVLRHLRQEEKEEVTVGSLKTSAVPSTSTMSQEPELLISGMEKPLPLRTDFSGGGLNDIFEAQKIEWHEGSLEVLFQGPHHHHHHHH
(SEQ.ID.No.3)
全长WT STING
[STING(1-379)H232R-gg-AviTag-gs-HRV3C-HIS8/pBAC1]质粒序列:
GGAACGGCTCCGCCCACTATTAATGAAATTAAAAATTCCAATTTTAAAAAACGCAGCAAGAGAAACATTTGTATGAAAGAATGCGTAGAAGGAAAGAAAAATGTCGTCGACATGCTGAACAACAAGATTAATATGCCTCCGTGTATAAAAAAAATATTGAACGATTTGAAAGAAAACAATGTACCGCGCGGCGGTATGTACAGGAAGAGGTTTATACTAAACTGTTACATTGCAAACGTGGTTTCGTGTGCCAAGTGTGAAAACCGATGTTTAATCAAGGCTCTGACGCATTTCTACAACCACGACTCCAAGTGTGTGGGTGAAGTCATGCATCTTTTAATCAAATCCCAAGATGTGTATAAACCACCAAACTGCCAAAAAATGAAAACTGTCGACAAGCTCTGTCCGTTTGCTGGCAACTGCAAGGGTCTCAATCCTATTTGTAATTATTGAATAATAAAACAATTATAAATGTCAAATTTGTTTTTTATTAACGATACAAACCAAACGCAACAAGAACATTTGTAGTATTATCTATAATTGAAAACGCGTAGTTATAATCGCTGAGGTAATATTTAAAATCATTTTCAAATGATTCACAGTTAATTTGCGACAATATAATTTTATTTTCACATAAACTAGACGCCTTGTCGTCTTCTTCTTCGTATTCCTTCTCTTTTTCATTTTTCTCTTCATAAAAATTAACATAGTTATTATCGTATCCATATATGTATCTATCGTATAGAGTAAATTTTTTGTTGTCATAAATATATATGTCTTTTTTAATGGGGTGTATAGTACCGCTGCGCATAGTTTTTCTGTAATTTACAACAGTGCTATTTTCTGGTAGTTCTTCGGAGTGTGTTGCTTTAATTATTAAATTTATATAATCAATGAATTTGGGATCGTCGGTTTTGTACAATATGTTGCCGGCATAGTACGCAGCTTCTTCTAGTTCAATTACACCATTTTTTAGCAGCACCGGATTAACATAACTTTCCAAAATGTTGTACGAACCGTTAAACAAAAACAGTTCACCTCCCTTTTCTATACTATTGTCTGCGAGCAGTTGTTTGTTGTTAAAAATAACAGCCATTGTAATGAGACGCACAAACTAATATCACAAACTGGAAATGTCTATCAATATATAGTTGCTGATCAGATCTGATCATGGAGATAATTAAAATGATAACCATCTCGCAAATAAATAAGTATTTTACTGTTTTCGTAACAGTTTTGTAATAAAAAAACCTATAAATATAGGATCCATGCCCCACTCCAGCCTGCATCCATCCATCCCGTGTCCCAGGGGTCACGGGGCCCAGAAGGCAGCCTTGGTTCTGCTGAGTGCCTGCCTGGTGACCCTTTGGGGGCTAGGAGAGCCACCAGAGCACACTCTCCGGTACCTGGTGCTCCACCTAGCCTCCCTGCAGCTGGGACTGCTGTTAAACGGGGTCTGCAGCCTGGCTGAGGAGCTGCGCCACATCCACTCCAGGTACCGGGGCAGCTACTGGAGGACTGTGCGGGCCTGCCTGGGCTGCCCCCTCCGCCGTGGGGCCCTGTTGCTGCTGTCCATCTATTTCTACTACTCCCTCCCAAATGCGGTCGGCCCGCCCTTCACTTGGATGCTTGCCCTCCTGGGCCTCTCGCAGGCACTGAACATCCTCCTGGGCCTCAAGGGCCTGGCCCCAGCTGAGATCTCTGCAGTGTGTGAAAAAGGGAATTTCAACGTGGCCCATGGGCTGGCATGGTCATATTACATCGGATATCTGCGGCTGATCCTGCCAGAGCTCCAGGCCCGGATTCGAACTTACAATCAGCATTACAACAACCTGCTACGGGGTGCAGTGAGCCAGCGGCTGTATATTCTCCTCCCATTGGACTGTGGGGTGCCTGATAACCTGAGTATGGCTGACCCCAACATTCGCTTCCTGGATAAACTGCCCCAGCAGACCGGTGACCGTGCTGGCATCAAGGATCGGGTTTACAGCAACAGCATCTATGAGCTTCTGGAGAACGGGCAGCGGGCGGGCACCTGTGTCCTGGAGTACGCCACCCCCTTGCAGACTTTGTTTGCCATGTCACAATACAGTCAAGCTGGCTTTAGCCGGGAGGATAGGCTTGAGCAGGCCAAACTCTTCTGCCGGACACTTGAGGACATCCTGGCAGATGCCCCTGAGTCTCAGAACAACTGCCGCCTCATTGCCTACCAGGAACCTGCAGATGACAGCAGCTTCTCGCTGTCCCAGGAGGTTCTCCGGCACCTGCGGCAGGAGGAAAAGGAAGAGGTTACTGTGGGCAGCTTGAAGACCTCAGCGGTGCCCAGTACCTCCACGATGTCCCAAGAGCCTGAGCTCCTCATCAGTGGAATGGAAAAGCCCCTCCCTCTCCGCACGGATTTCTCTGGCGGTGGCCTGAACGACATCTTCGAAGCCCAGAAAATCGAATGGCATGAAGGCAGCCTGGAAGTGCTGTTCCAGGGCCCACACCACCATCATCACCATCACCATTAATGAGCGGCCGCACTCGAGCACCACCACCACCACCACTAACCTAGGTAGCTGAGCGCATGCAAGCTGATCCGGGTTATTAGTACATTTATTAAGCGCTAGATTCTGTGCGTTGTTGATTTACAGACAATTGTTGTACGTATTTTAATAATTCATTAAATTTATAATCTTTAGGGTGGTATGTTAGAGCGAAAATCAAATGATTTTCAGCGTCTTTATATCTGAATTTAAATATTAAATCCTCAATAGATTTGTAAAATAGGTTTCGATTAGTTTCAAACAAGGGTTGTTTTTCCGAACCGATGGCTGGACTATCTAATGGATTTTCGCTCAACGCCACAAAACTTGCCAAATCTTGTAGCAGCAATCTAGCTTTGTCGATATTCGTTTGTGTTTTGTTTTGTAATAAAGGTTCGACGTCGTTCAAAATATTATGCGCTTTTGTATTTCTTTCATCACTGTCGTTAGTGTACAATTGACTCGACGTAAACACGTTAAATAGAGCTTGGACATATTTAACATCGGGCGTGTTAGCTTTATTAGGCCGATTATCGTCGTCGTCCCAACCCTCGTCGTTAGAAGTTGCTTCCGAAGACGATTTTGCCATAGCCACACGACGCCTATTAATTGTGTCGGCTAACACGTCCGCGATCAAATTTGTAGTTGAGCTTTTTGGAATTATTTCTGATTGCGGGCGTTTTTGGGCGGGTTTCAATCTAACTGTGCCCGATTTTAATTCAGACAACACGTTAGAAAGCGATGGTGCAGGCGGTGGTAACATTTCAGACGGCAAATCTACTAATGGCGGCGGTGGTGGAGCTGATGATAAATCTACCATCGGTGGAGGCGCAGGCGGGGCTGGCGGCGGAGGCGGAGGCGGAGGTGGTGGCGGTGATGCAGACGGCGGTTTAGGCTCAAATGTCTCTTTAGGCAACACAGTCGGCACCTCAACTATTGTACTGGTTTCGGGCGCCGTTTTTGGTTTGACCGGTCTGAGACGAGTGCGATTTTTTTCGTTTCTAATAGCTTCCAACAATTGTTGTCTGTCGTCTAAAGGTGCAGCGGGTTGAGGTTCCGTCGGCATTGGTGGAGCGGGCGGCAATTCAGACATCGATGGTGGTGGTGGTGGTGGAGGCGCTGGAATGTTAGGCACGGGAGAAGGTGGTGGCGGCGGTGCCGCCGGTATAATTTGTTCTGGTTTAGTTTGTTCGCGCACGATTGTGGGCACCGGCGCAGGCGCCGCTGGCTGCACAACGGAAGGTCGTCTGCTTCGAGGCAGCGCTTGGGGTGGTGGCAATTCAATATTATAATTGGAATACAAATCGTAAAAATCTGCTATAAGCATTGTAATTTCGCTATCGTTTACCGTGCCGATATTTAACAACCGCTCAATGTAAGCAATTGTATTGTAAAGAGATTGTCTCAAGCTCGGATCGATCCCGCACGCCGATAACAAGCCTTTTCATTTTTACTACAGCATTGTAGTGGCGAGACACTTCGCTGTCGTCGAGGTTTAAACGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGGACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCACCTGACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTCCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCA
(SEQ.ID.No.4)
公开的特定化合物在上述WT STING体外结合测定中进行评价。下述表格以EC50值列出这些化合物的生物数据。
表7:对WT STING的3H-cGAMP过滤结合测定
实施例57：THP1细胞系中的IFN-β分泌(5h)
使用人IFN-βALALLISA试剂盒(Perkin Elmer，目录号AL265F)测量化合物刺激THP1细胞分泌干扰素-β的能力。基本方案如下：
使用Labcyte Echo 550声学分配器将溶解在DMSO中的120nL化合物转移到空的无菌384孔微孔板(Corning，目录号3712)的孔中。将先前在回收培养基(Life Technologies，目录号12648-010)中冷冻的THP1细胞(美国典型培养物保藏中心，目录号TIB202)解冻，并立即稀释10倍于37℃测定培养基(RPMI 1640+L)-谷氨酰胺&苯酚红，Life Technologies，目录号11875-085；0.5％热灭活的胎牛血清，Sigma Aldrich，目录号F4135；1mM丙酮酸钠，Life Technologies，目录号11360-070；1x非必需氨基酸；Life Technologies，目录号11140-050)中。使用Beckman Coulter V-Cell XR细胞计数器确定细胞活力和计数。将细胞悬浮液在室温下以200xg离心5分钟。将细胞在37℃测定培养基中重悬浮至密度为0.8×106/mL。使用Matrix电子多通道移液器或Agilent Bravo自动化液体处理平台进行后续液体转移。
通过将40μL先前制备的细胞悬浮液分配到含有化合物的板的孔中，开始测定。在37℃、5％CO2的湿润氛围中孵育5小时后，将细胞和化合物的板在室温下以200xg离心5min。从每个孔中，将5μL上清液转移到白色384孔板(Perkin Elmer，目录号6005620)的相应孔中。向这些含上清液的孔中加入10μL的5x抗分析物受体珠(50μg/mL AlphaLISA HiBlock缓冲液)，并在室温下，在轨道板振荡器上振荡的同时孵育30分钟。向每个孔，加入10μL的5x生物素化抗体抗分析物(5nM在AlphaLISA HiBlock缓冲液中)，并在轨道平板振荡器上，在室温下孵育60分钟，或在4℃下孵育过夜。向每个孔，加入25μL的2xSA-供体珠(在AlphaLISAHiBlock缓冲液中80μg/mL)，并在室温下在黑暗中，在轨道板振荡器上振荡的同时孵育30-45min。然后在Perkin Elmer Envision(λex＝680nm，λem＝570nm)上读板。基于30uM cGAMP阳性对照和0.3％DMSO阴性对照，计算各化合物浓度下AlphaLISA信号的百分比效应。将百分比效应对化合物浓度对数的曲线用4-参数浓度应答方程拟合，从而计算EC50值。受试化合物在浓度30000、10000、3333、1113、370.4、123.4、41.2、13.7、4.6和1.5nM下具有0.3％的残留DMSO，进行测试。对照化合物cGAMP在浓度100000、33333、11111、3704、1235、412、137、46和15nM下具有0.3％的残留DMSO，进行测试。
如上所述，对THP1细胞培养物中的IFN-β分泌，评价本发明化合物。下表将这些化合物的生物学数据列为相对于30μM浓度的2'3'-cGAMP的活度百分比。
表8:THP1细胞系中的IFN-β分泌(5h)
要领会的是，可以期望地将各种上述讨论的和其他特征和功能或其替代方案组合到许多其他不同的系统或应用中。还将领会的是，本领域技术人员可能会在后续进行各种目前在本文中未预测或未预期到的替代、修改、变化或改进，其也旨在被所附权利要求书涵盖。
Claims (23)
1.式(Ia')的化合物：
或其药学可接受的盐，其中
R1选自H、F、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；
R2选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、O(C1-C3烷基)、O(C1-C3卤代烷基)、OH、C2-C3烯基、C2-C3炔基、N(C1-C3烷基)2、NH(C1-C3烷基)、S(C1-C3烷基)；
R3选自卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、O(C1-C3烷基)、O(C1-C3卤代烷基)、OH、C2-C3烯基、C2-C3炔基、N(C1-C3烷基)2、NH(C1-C3烷基)、S(C1-C3烷基)；
R4选自H、F、C1-C4烷基、和C1-C3卤代烷基；
R5选自H、F、Cl、OR6、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基；
各R6独立地选自H、C1-C4烷基、和C1-C4卤代烷基；
X1是C(O)；
X2是CHR8CHR8；
X3选自COOR6和
各R8独立地选自H、C1-C4烷基、被OH取代的C1-C4烷基、被O(C1-C3烷基)取代的C1-C4烷基、和C3-C6环烷基；且任选2个R8与所连接的原子一起形成3元稠环，其中所述稠环是指由直链或支链烷烃中的不同原子上的取代基形成的环状基团；
当X1-X2-X3是X1-CHR8CH2-X3时，R2和R3中的至少一个不是选自卤素、O(C1-C3烷基)、O(C1-C3卤代烷基)、OH、C1-C3烷基、和C1-C3卤代烷基。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学可接受的盐，其中，
R1选自H和F；
R2选自Br、Cl、F、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH2CH2F、CH＝CH2、C≡CH、OH、OCH3、OCH2CH3、OCHF2、SCH3、和NHCH3；
R3选自Br、Cl、F、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH2CH2F、CH＝CH2、C≡CH、OH、OCH3、OCH2CH3、OCHF2、SCH3、和NHCH3；
R4选自H和F；
R5选自H和Cl；
各R6独立地选自H、C1-C4烷基、和C1-C4卤代烷基；
X1是C(O)；
X2是CHR8CHR8；
X3选自COOH、COOC(CH3)3、和
且
各R8选自H和C1-C4烷基。
3.根据权利要求1所述的化合物或其药学可接受的盐，其中，
R1选自H和F；
R2选自Br、Cl、F、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH2CH2F、CH＝CH2、C≡CH、OH、OCH3、OCH2CH3、OCHF2、SCH3、和NHCH3；
R3选自Br、Cl、F、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH2CH2F、CH＝CH2、C≡CH、OH、OCH3、OCH2CH3、OCHF2、SCH3、和NHCH3；
R4选自H和F；
R5选自H和Cl；
各R6独立地选自H、C1-C4烷基、和C1-C4卤代烷基；
X1是C(O)；
X2是CHR8CHR8；
X3选自COOH、COOC(CH3)3、和
且
2个R8与所连接的原子一起形成3元稠环。
4.化合物，其选自：
5.根据权利要求4所述的化合物，其中，化合物选自：
6.根据权利要求5所述的化合物，其中，化合物选自：
和其药学可接受的盐。
7.根据权利要求6所述的化合物，其中，化合物是：
8.根据权利要求5所述的化合物，其中，化合物选自：
和其药学可接受的盐。
9.根据权利要求8所述的化合物，其中，化合物是：
10.根据权利要求5所述的化合物，其中，化合物选自：
和其药学可接受的盐。
11.根据权利要求10所述的化合物，其中，化合物是：
12.根据权利要求5所述的化合物，其中，化合物选自：
和其药学可接受的盐。
13.根据权利要求12所述的化合物，其中，化合物是：
14.根据权利要求5所述的化合物，其中，化合物选自：
和其药学可接受的盐。
15.根据权利要求14所述的化合物，其中，化合物是：
16.根据权利要求5所述的化合物，其中，化合物选自：
和其药学可接受的盐。
17.根据权利要求16所述的化合物，其中，化合物是：
18.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1至5中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐、以及药学可接受的载体。
19.权利要求1至5中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗STING激动剂相关疾病。
20.权利要求1至5中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐在制备药物中的用途，所述药物用于在受试者中治疗细胞增殖疾病。
21.根据权利要求20所述的用途，其中，细胞增殖疾病是癌症。
22.权利要求18所述的组合物在制备药物中的用途，所述药物用于在受试者中治疗细胞增殖疾病。
23.根据权利要求22所述的用途，其中，细胞增殖疾病是癌症。
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