TW201039752A - Method and material for site activated complexing of biologic molecules - Google Patents

Description

201039752 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明一般係關於經控制地增強生物材 質鍵結親和力。更精確地，本發明關於藉動物、植物 細菌之酵素及/或其他觸媒，穩定及經控制地活化植物生 生物聚分子，以產生局部（locally)增強的氧化反應及 與蛋白質、微生物和生物組織的交聯反應。 "5 【先前技術】 〇 儘管經過數億萬年的分別演化，幾乎所有的植物、 動物和病原菌仍保有相同的生化基礎和環境防+蔓策 略。這使得植物成為提供動物有效及具相容性之化合物 以控制病原菌的豐富來源。利用植物生理機能的生I原 理是傳統草藥的基礎，並且’相較於高度純化之複雜^ 白質和聚合物’傳統上認為屬於同門(phyla)中較短遺傳 距離之物種的應用較不容易引發不良之免疫反應。 較高等之生物體的免疫系統具有不同專一程度的 防W模式以抵紫感染。最簡卓的防備系統是防止病原菌 〇 如細菌和病毒進入生物體的物理性屏障。植物和動物並 具有先天免疫系統(innate immune system)，其會對特定 病原菌產生基因解碼之反應，或對病原菌的化學生理產 生各種非特定之反應。 基本上植物具有兩種防禦體系。第一種防禦體系辨 認並藉著增加活性氧化物產生酵素（ROS generating enzymes)的表現來啟動氧化風暴(〇xidative burst)，以對 多種微生物（包含非病原菌）的分子產生反應。但是這樣 直接的氧化反應非常消耗能量，並且需要謹慎地控制以 3 201039752 避免造成自身毒性(autotoxicity)。許多致病的微生物（細 菌、真菌、原生生物）則具有過乳化酶(peroxidase)或過氧 化氫酶(catalase)以對抗這樣的活性氧化物風暴。第二種 防禦體糸即所謂的多組分傷口反應（multi-component wound response) ’其係在細胞受到損害時，由細胞中的 苯醌化合物和胺基酸之間產生的反應所引發。這些化合 物通常是隔離儲存於活體細胞中而不相互產生作用。在 植物體内，細胞結構的破壞會造成多種酚類化合物和活 性氧化物與多酚氧化酵素(polyphenol oxidases，PPO)接 觸’使得酚類化合物被氧化而生成苯醌化合物，該苯醌 化合物會激烈地與其他的苯醌化合物和細胞内的胺基 酸或任何存在的微生物產生連結。這樣的反應影響了許 多生理現象’如食物的褐變（browning)和色變 (discoloring)、蛋白質沉澱、殺菌活性（germiddal activity)、收斂性(astringency)和食物消化率的改變等。 植物體系中的多酚氧化作用會生成帶有複數個可 供共價鍵結之苯醌基團的氧化態多酚（〇xidized_ polyphenols ’或稱〇_多酚、氧化態之生物聚分子、聚苯 醌和苯醌化合物）。高親和力的〇_多酚一旦生成後，便會 自動地交聯形成細胞間和細胞内的共價鍵結，其聚集蛋 白質的程度退較未氧化之多酚的氫鍵特性來得激烈。在 植物體系中，〇-多酚會與遭受損害之細胞的蛋白質交聯 形成一隔难屏P早，以阻隔健康的組織避免遭受更進一步 的破壞。〇-多酚也藉著激烈地與病原菌的代謝途徑鍵 結、阻礙致病酵素的作用及降低病原菌的行動能力以避 免病原菌的繁殖。 同等脊椎動物具有另一層次的防護，即，適應性免 疫系統(adaptive immune system)，其係針對已遭遇過的 201039752 病原菌產生一更強烈且迅速的免疫反應。病原菌表面小 分子的聚集會產生對宿主免疫系統而言具有高度抗原 性(antigenicity)的大型複合體。每一種病原菌都會被一 種特徵抗原（signature antigen)所「記憶」。若一病原菌感 染該個體超過一次，特化的記憶細胞(memory cell)便會 迅速且有效率的殲滅它；然而，如此精細的反應需要花 上好幾天才可以完全建立。在這個期間，對抗新遭遇之 病原菌的主要防禦（尤其是在免疫不全或是免疫未成熟 的動物中）主要仍是依靠先天免疫系統和消極性的生理 0 反應如下痢（diarrhea)、π區吐(vomiting)、發燒(fever)、發 炎反應(inflammation)等。此一系列針對感染的反應需要 表現的大量免疫因子，因此會消耗大量的生理能量，同 時亦可能危害宿主本身。 其中一個最常見與先天免疫系統之失控的系統反 應相關的風險是感染性疾病或寄生蟲引發的腹瀉性脫 水(diarrheal dehydration)。腹瀉性脫水每年影響超過二 十億的人口，並且是最常造成第三世界國家的嬰兒死亡 的原因，每年有150萬個死亡人數。除了注意補充水分 〇 以外，治療腹瀉最有效的方法係著重在藉著調節全身性 免疫反應來增強人體黏膜的免疫能力，如使用降低腸道 運動藥物（intestinal motility reducing drugs)、黏膜通透性 調節劑（mucous permeability modifiers)或抗生素療法。這 些方法的療效有限，且具有引發不良副作用、病原菌= 性或生理衰退(physiologic senescence)的風險。 為了控制水、表面和食物媒介之病原菌所引發的疾 病，市面上長期需要能夠取代抗生素和化合殺菌劑的植 物性替代品。人類和家畜的抗生素濫用已引發了抗生素 抗性疾病的大幅增加。許多國家政府和國際衛生=織不 5 201039752 斷提倡逐步狀非必需的抗生素使用，特別是添加於家 畜食物中以促進生長之非f療目的的使用。截至目前為 止’人們仍普遍認為只有少數價格合理且無害於環境的 替代品得_於病原||的安純控制。數十年來，植物 性新穎抗微生物藥物的研究主要著重在萃取特殊植物 性化合物的機益與溶劑，而尚未成功地生產出具有潛 力、安全性、符合使用者需求、對環境有利及具有與現 行使用之抗生素和殺菌劑同等效果的化合物。 【發明内容】 在一觀點中，一包含經處理之流體的生化組合物係 與一活化機制結合；該經處理之流體含有具有羥基的分 子，ό亥活化機制係稭者氧化劑（oxidizing agent)和觸媒 (catalyst)來活化該分子，而活化該分子會提升其鍵結親 和力。 在一貝施悲樣中’該分子包含多盼。在一可行實施 態樣中’該分子包含聚碳水化合物分子或多醣衍生物。 在另一實施態樣中，該多酚係衍生自植物。在一實施態 樣中，該植物包含茶樹（camellia sinensis)、安石權 (punicagranatus)或其他產出多酚的植物。在另一實施態 樣中，該多酚係衍生自產出多酚之植物的根、葉、莖、 樹皮、果實或其他組織。 在一可行實施態樣中，該分子包含單寧(tannin),木 質素（lignin)、類黃酮（flavonoid)、羥基香豆素 (hydroxycoumarin)或生物驗(alkaloid)。在另一實施態樣 中，該分子至少包含人工合成區段（artificial synthetic section)。在一實施態樣中，該觸媒包含過氧化氫酶 (catalase)、過氧化酶（peroxidase)、酚氧化酶 201039752 (phenoloxidase)、酪胺酸酶(tyrosinase)或金屬觸媒(metal catalyst)。在一可行實施態樣中，該觸媒係位於一動物 細胞。在另一實施態樣中’該觸媒係由一病原菌所產 生。在一實施態樣中’該病原菌包含病毒、細菌、真菌、 真核生物體或毒蛋白。在一可行的實施態樣中，該氧化 劑包含活性氧化物(reactive oxygen species，R0S)。 在另一實施態樣中，該活性氧化物包含過氧化氫。 在另一實施態樣中，該活性氧化物包含無機或有機的過 氧化物(peroxide)。在一實施態樣中，該活性氧化物包含 Ο 臭氧（ozone)經超氧歧化酶或葡萄糖氧化酶（glucose oxidase)催化、過碳酸鹽的水合作用（hydrati〇n 〇f a

Percarbonate)、尿素過氧化氫（carbamide peroxide or urea peroxide)的水合作用或其他產生穩定活性氧化物的間接 作用所產生的還原產物。在一可行實施態樣中，該經處 理的流體係由一含多酚或多醣衍生物的乾燥混合物所 製得。在另一實施態樣中，該經處理的流體係由含有多 紛的完整植物材料製得。在另—實施態樣中，該活化機 制係起始於該多酚或該多醣衍生物與一溶液中的該觸 〇 媒和該氧化劑接觸。在-實施態樣中，賴基於活化後 轉變為錄+。在—可行實施錄巾，齡子於該經基活 化後具有笨醌基團（quinonic group)。在另一實施態樣 中，該分子於該羥基活化後具有使病原菌失去活性的功 能。f一實施態樣中，該氧化劑提供自由基。在一可行 實施態樣中，經活化之該分子提供自由基。 在=二觀點中，一組合物的製備方法，其係包含自 植物取朴-生物聚分子；及活傾生物聚分子上的經基 以提升該生物聚分子的分子鍵結親和力。 在一實施態樣中，該生物聚分子包含多酚、多醣衍 7 201039752 生物或聚分子。在一可行實施例中，該活化包含使該生 物聚分子與酵素或氧化劑接觸。在另一實施態樣中，該 方法進一步包含使活化之該生物聚分子交聯於一動物 的蛋白質（cross-linking)。在一實施態樣中，該方法進一 步包含複數個生物聚分子彼此形成交聯結構。在一可行 實施態樣中，該方法進一步包含使該生物聚分子鍵結於 一病原菌。在一可行實施態樣中，該方法包含使該生物 聚分子與細胞鍵結。在另一實施態樣中，該方法包含使 該生物聚分子鍵結於一病毒。在又一實施態樣中，該聚 分子與複數個病原菌之間的鍵結促使微生物、蛋白質或 蛋白質結構（proteinaceous structure)於溶液中團聚 (agglomeration)或自溶液中移除。在另一實施態樣中， 該鍵結抑制了病原菌的繁殖。在許多實施態樣中，經活 化之該生物聚分子得以阻礙病原菌的代謝途徑。在一可 行實施態樣中’該方法進一步包含使用活化之該生物聚 分子以治療一動物的下痢症狀。在又一實施態樣中，該 方法包含使用活化之該生物聚分子以治療一動物受傷 之組織。在另一實施態樣中，該羥基之活化係由位於一 動物體内位置的酵素所引發。在一實施態樣中，該羥基 之活化係由外源地添加一酵素而達成。在一可行實施態 樣中，該方法進一步包含移除或失活一氧化還原酶 (oxidoreductase)或一會與促氧化劑（〇xidizer)反應之還原 劑。在另一實施態樣中，該方法進一步包含使該生物聚 分子交聯於動物之蛋白質以形成一屏障，以阻隔病原菌 的入侵。在又一實施態樣中，該方法進一步包含使該生 物聚分子父聯於動物之蛋白質以促進傷口的復原。 在第三個觀點中，一種促成定位反應的方法，其係 包含將添加之活性氧化物定位於一生物聚分子之羥基 201039752 的鄰近反應區域(reactive proximity);活化該生物聚分子 之羥基；及將該生物聚分子施予一目標位置。 在一實施態樣中，該生物聚分子包含多酚或多酷衍 生物。在一可行實施態樣中，該活化係與一酵素接觸而 達成。在另一實施態樣中，該活性氧化物包含過氧化 氫。在一實施態樣中，該方法進一步包含於含有該生物 聚分子的溶液中添加過氧化氫以增加該羥基之鄰近反 應區域的過氧化氬濃度。在一可行實施態樣中，該生物 聚分子包含複數個羥基。

〇 在第四個觀點中，一種經控制之化學藥劑輸送方 法，其係包含：製備一生物性分子，該生物性分子包含 預先挑選之化學物質（chemical substance);及依據該生 物性分子之大小、重量或其組合進行選擇，以控制該生 物性分子於一動物組織的穿透速率。 在一實施態樣中，該化學物質包含酚類化合物。在 一可行實施態樣中，該化學物質包含苯醌化合物。在另 一實施態樣中，該生物性分子包含植物萃取物。在一實 施態樣中，製備該分子包含分離該生物性分子。在一可 行實施態樣中，該選擇包含萃取。在另一實施態樣中， 該穿透速率係適度的，因此施予該生物性分子於一動物 並不會對該動物的組織產生毒性反應。在又一實施態樣 中’施予該生物性分子於一動物會減少因外部刺 發之動物系統的免疫反應。在一實施態樣中，消化^弓1 物分子會促進養分利用以供動物的生長。 邊生 【實施方式】 的 本發明包含新穎之生物活性組合物。在_觀％ 一生化系統包含：一與一穩定來源之活性氧化物鉍中 9 201039752 生物聚分子或其合成等價體(synthetic equivalent)，以及 一獨立來源的氧化還原酵素或觸媒。該物質結合可生成 具有增強之蛋白質鍵結親和力和微生物控制之活性的 氧化態生物聚分子。 本發明的一些實施態樣包含一於穩定溶液中的混 合物’該混合物含有具收斂性及/或殺菌特性的植物性材 料以及一活性化前驅物（activation precursor)。該溶液實 質上不具有任何會與溶液中其他成分反應而造成降解 作用（degradation)的酵素和具催化能力的物質。該具有 植物性殺菌材料和活性化前驅物的混合物，經由動物、 植物或微生物細胞的各式酵素催化後會釋放氧化自由 基(oxidative radicals)並生成具有增強之收斂性和殺菌特 性的活化植物性材料。該氧化自由基的釋放和活化植物 性材料的生成原則上會定位於進行該催化之生物酵素 的來源，因此得以集中活性於該激活之生物性個體或材 料的鄰近區域’而達到最大的效果。用以激活的觸媒亦 可為非生物性來源，如一金屬，其係促使該活性化前驅 物還原且進而使該植物性材料進行自身氧化 (auto-oxidation)成為其活性態。 在一可行實施態樣中，該生物活性和殺菌系統包含 一含有植物性材料，如多酚的混合物。所屬領域具有通 常知識者當可理解，任何具有多數個暴露之笨酚單元 (phenolic unit)以及活性化前驅物（即，促氧化劑，如過氧 化氫）的巨分子、聚合物、小分子之凝聚體、細胞膜結構 之片段、交聯之化合物或其組合，皆適用於本發明。 在其他貫施態樣中，活性化前驅物之材料（activator materials)包含臭氧(oz〇ne)或 per〇x〇ne(〇3/H2〇2)。在一些 實施態樣中’植物性材料可為天然的過氧化氫來源。然 201039752 而内生性過氧化氫的濃度變化很大，而且通常在處理 ^物性材料的時候就會大量流失。-較佳實施態樣卜 氧化劑的來源是外源性地添加過氧化氫、臭氧、per〇x〇ne 或其他商業可取得之促氧化劑（〇xidizer)以做為活性化 前驅物。

在二些實施態樣中，每一個苯酚單元帶有〗至3個 可氧化劑反應的羥基。因此，具有苯酚基團的巨分 f貝負上含有數百至數千個以上的羥基。如此高密度的 經，分子團提供靠近苯紛單元之鄰近反應區域的過氧 化氫分子許多其他的非共價鍵結機會、電荷相吸作用 (charge attraetion)和物質複合作用 sequestration)。本發明之實施態樣所述之複合作用 (sequestration)提供一新穎方法，其係較含等價成分但不 具有複合作用的溶液更能於低濃度溶液巾維持多紛物 質之鄰近反應區域中過氧化氫的穩定度，並提高過氧化 ，的飽合度。複合作用可以是於水中加有足夠高濃度的 ，化虱，以於多紛之官能基區域和過氧化氫之間 建立分子収引力的結果。t聚分子與合適之酵素接觸 而提升潛在高鍵結親和力位置之數目時，提高複合作用 可以有效地降減氧_於加熱、料祕曬 汗 染物和自然降解過程中的消耗。 - 在些實施fe樣中，部分植物性材料的 括富含部分降解之活性氧化物生成酵素(RQSp_ enzymes)，如過氧化氫酶㈣如咖）、過氧化酶 (ΡΤ^^^(ί1ίδΐηΐ1ΐαδ£)' « ^ ^ ^(glucose oxulase)或其組合的植物細胞片段’可做為過氧化氫進行 複合作_結構。這些活性氧化物包括魏化氫、 化物（superoxicle，〇2_)、單態氧(singlet〇xygen，丨 201039752 羥基自由基(hydroxyl radical，·〇Η)。在一可行實施態樣 中’可將〉谷解之臭氧降解或將其經活化之歧化酶轉換為 過氧化氫而獲得該活性化前驅物。在其他實施態樣中， 該活性化前驅物可由將任何超氧化物（如脂肪酸過氧化 物（fatty acid peroxide))進行酵素轉換（enZymatic conversion)而獲得。 前述組合物中提供苯酚單元的成分可包含多酚及/ 或合成、植物衍生或動物衍生之異源（heterogeneous)或 同源(homogenous)巨分子。在一些實施態樣中，該多酚 含有超過兩個酚基(phenol group)。在可行實施態樣中， 該多盼含有超過30個盼基。在其他實施態樣中，該多 酚含有100到10,000個酚基。所屬領域具有通常知識者 當可理解’只要能使該組合物具有前述所欲之特質， 如，具適度之吸收速率，該組合物可含有任何數目的酚 基。 所述之植物性材料包括，但不限於：多酚、木質素 (lignin)、多醣或其他具有大量可供形成苯醌化合物之末 端羰基(carbonyl group)的大分子材料或結構體。由於該 合適之材料係為普遍存在於自然界中，因此可自不同植 物的不同組織中取得有效之溶液。 所屬領域對於自植物性來源中取得具抗微生物活 性之化合物’主要係藉著有機物質的機械或溶劑萃取方 法’但未能提供不影響活體植物組織之傷口反應化學物 質的可行方法以供商業化運用（尤其是供動物或其他植 物之運用）。不論是工業上的處理（commercial processing)、病原菌攻擊(pathogen attack)、草食性動物 的喷食（herbivores)、環境造成的傷害（environmental damage)或自然的腐解(natural decomposition)所造成的 12 201039752 2結構破壞都會引發傷σ反應，並在很短的時間内使 付该具抗微生物活性的化合物失去利用價值。 θ構成各式各樣由植物產生的有機聚合物，並且 =植物傷口反應中重要的化學物質。這些聚合物可妳由 而，為具有抗微生物活性和些微不同 特性的化合物。多_化合物也可以藉著許多氧 轉換形成具有抗微生物和傷口修補潛力的生物性黏附 物(bioadhesives)而成為有效的苯醌類似物。 ’ Ο

Q 以下所述的反應過程係根據1串複雜的化學反 應，其中可能包含多個直接和間接之酵素參與之高活性 中間產物的產生m存在活性氧化物來源的情況 下，氧化還原酶可藉由幾種形式調控此化學串級 (chemical cascade) ’如將芳香族聚合物之羥基官能基團 轉變為可藉共價鍵結形成高強度生物性結構和抗微生 物之防禦機制的羰基。羰基是含有一與氧原子雙鍵鍵結 之碳原子（C=0)的官能基。酮類化合物即含有幾基，^ 中每一羰基與另外兩個碳原子鍵結(c-c(=0)_c)。特別令 人感到有興趣的基質包括具有複數個芳香族次單元S 化合物，該複數個芳香族次單元係形成含有於任何雙鍵 結構中所形成的>c(=o)基團之完全共輛（fully conjugated)環狀二酮結構(di〇ne)的有機分子（包括多環 (polycyclic)和異環(heterocylclic)類似物），該右拖八名在 與親核性胺基酸和蛋白質形成共價鍵結。本文件^所用 「苯醌(quinonic)」一詞包括任何於其次單元具有任何數 目之羰基的化合物。 在異質聚合物（heteropolymer)或均質聚合物 (homopolymer)中經轉換或氧化之羥基次單元會呈現多 酉昆(multiple quinones)和半醌（semiquinone)基團之增強的 201039752 鍵結親和力的特性。該氧化作用可僅僅發生於一多酌分 子的部分官能基。該經氧化之多酚的典型異質特性係得 以呈現苯醌活性，並同時保持原有的多酚特性。不同的 整體結構(gross structure)、三級結構(tertiary form)和分 子量會提升整體混合物或分子間的異質性，因此對不同 的蛋白質呈現不同的親和力，而提供更廣泛的運用潛 力。 除了於許多生物交聯反應中作為短暫的輔助因子 (transient cofactor)以外，苯醌單體長久以來也被認為具 有潛在的殺菌功效。苯醌化合物除了能提供穩定的自由 基來源’也可以不可逆地複合於蛋白質中的親核性胺基 酸’其通常促使該蛋白質失去活性及喪失其相關的生理 機能。據此，苯醌化合物具有極大的抗微生物活性的潛 力。微生物細胞上可能的供苯醌化合物產生活性的標的 為裸路於細胞表面的附著蛋白（adhesion)、細胞壁的多肽 鏈、動益（motility effector)和膜結合酵素（membrane-bound enzyme) 。 苯醌 化合物 也可造 成微生 物體無 法利用 所需之基質。 和其他的植物性抗微生物藥物一樣，苯醌化合物潛 在的生物毒性也需要被詳細了解。許多苯醌化合物於 105〜106 (5〜6 log dilution)倍稀釋後的抗微生物效率已被 證實。由於苯醌單體是小分子，會輕易穿過組織而造成 毒性，因此限制了苯醌單體於醫藥上的運用；而聚苯醌 化合物則是含有大量苯醌結構的生物聚分子、複合分子 (compound molecule)或合成類似物（symhetic anal〇g)。具 有合適分子量和分子大小的聚苯醌化合物可以減少全 身性吸收(systemic absorption)而降低對高等生物的潛在 毒性。 14 201039752 早在1900年代早期便開始有關於勒昆化合物之殺 菌活性的研究，但一直到194〇年代都未能充分了解。 苯醌化合物和眾多不同蛋白質如卵白蛋白（egg albumin)、絡蛋白（casein)、馬血清蛋白（h〇rse serum)和 蛋白腺(peptone)之間的顯色反應（c〇1〇r reacti〇n)的福馬 林抑制實驗(formalin inhibition)顯示，該反應主要是發 生於本化合物與前述該等蛋白質的胺基酸之間。聚苯 醌化合物本身的殺菌機制主要有三種形式：與細菌蛋白 的共價鍵結反應、與破裂細胞的胞内蛋白交聯並黏著形 〇 成一阻隔病原菌的屏障，以及產生過氧化物和自由基以 造成病原菌外膜(pathogen envelope)之氧化損壞的氧化 還原反應循環。 多酚氧化反應形成的主要產物，鄰苯二酶 (o-diphenol) ’係於1940年由Pryor所發現。鄰苯二紛的 產生可能來自於在氧自由基(oxygen radical)存在下的自 身氧化反應或經由紛氧化酶(phenoloxidase)作用的酵素 轉換。酚氧化酶（即，左多巴氧氣氧化還原酶，L-dopa: oxygen oxidoreductase，； EC 1.14.18.1)，又稱為多酚氧 〇 化酶(polyphenol oxidase)和赂胺酸酶(tyrosinase)(即，離 胺醯氧化酶（lysyl oxidase) ; EC 1.4.3.13) ’是一種可以催 化單盼(monophenol)的氧化反應而生成鄰苯二盼以及接 續之鄰笨二紛的氧化反應而生成相對應之鄰苯酉昆 (o-quinone)的含銅蛋白（copper-containing protein)。紛氧 化酶廣泛存在於動物、植物、真菌和原核生物界。昆蟲 類生物也利用紛氧化酶進行硬化作用（sclerotization)以 加速具南強度之_囊、繭和絲結構(silk structure)的形 成。 雖然歷經數億年的分別演化，氧化酵素如：植物、 15 201039752 真菌和細菌中的過氧化酶、多酚氧化酶和漆氧化酶 (laccase)等，以及不同動物組織中的所有過氧化酶如脊 椎過氧化酶（myel〇peroxidase)和乳過氧化酶 (lactoperoxidase)等’皆具有非常相似的結構，這顯示它 們的存在是為了達到相同的基礎生理目的。這個功能上 的相似性可以被利用作為一種新賴的方法，以激發來自 不同生物界（kingdom)或門（phyla)之多酚的經控^之氧 化反應。 舉例來說，酪胺酸酶是酚氧化酶家族中催化里色素 (melanin pigment)^ ^ ^ ^ 0 酸_的功能類似於昆蟲中硬化作用、里化作用 (的神形成抗微生物胜肽的化學串級中所使用 是4形=合物的酵素反應過程中，過氧化氫 =::;;二化氫是，遍存在的 反應的重要起:=== 中進行多盼氧化 叫皆具有;二生 ㈣種物帽使 性，使得料具抗微生物潛力組織的特 量地降解於植物組織_切口附=物在數分鐘内便大 含有植物材料、促氧化叫 種工業和商業用途以產生1酵素的混合物常用於多 物，但是，使酵素失活 t的多酚和碳水化合 材料與促氧化劑穩定姓1以^移除進而使所含之植物 、〇σ ^供利用於一具有獨立酵素 16 201039752 或觸媒來源的目標位置而影響生物系統的化合物是前 所未見的。 關於運用於生物系統之含有植物性材料和促氧化 劑的組合物的文獻很少見。美國專利(US 2002/0034553) 描述一包含蘆薈膠(al〇e vera gel)和愛爾蘭青苔之加厚的 被動栽體’其係用於輸送氫或鋅的過氧化物至一皮膚傷 口’以供給加氧作用（oxygenation)而建立一個不利於厭 氧性細菌生存的環境。美國專利(US 5,260,021)揭露一含 有過氧化氫的膠態軟膏’其係用以做為氧原子的載體， 〇 而該氧原子係用以做為隱形眼鏡的殺菌劑；以及，美國 專利(US 4,696,757)亦描述一含有過氧化氫的凝膠，其係 用以治療表面切傷及用於漂白髮色。前述專利皆未提及 •結合一促氧化劑如過氧化氫和一多酚成分以促使或造 成該兩者之間的反應。 高等植物生理中，過氧化氫、多酚、蛋白質和氧化 還原酶是隔_存於活體細胞中結構分隔的細胞質、胞 器和膜結構。經感染、受傷、擠壓、粉碎、乾燥、青貯 (ensiling)或其他物理傷害而造成細腧鮭堪沾分找' a二w

植物科學對於經酵素氧化的多酚

恨仍〜工I。叫tr、j育况卜，筒存、 夕酚已有充分的了 如何達到在沒有活體 複製或加強多酚氧化 17 201039752 系統的能力以供動物生理或其他生物性運用的穩定活 體外(ex-vivo)方法或組成物。 植物界個體在與環境之接觸面和免疫上的需求在 很多方面都與動物界相似。外在植物組織如：葉表皮層 (leaf cuticle)、果實外皮(fmit rind)和種子外殼(seed husk) 是已適應於抵禦如同人類真皮組織和黏膜組織所面對 之相似的病原菌和物理壓力的活體組織。動物和植物也 具有許多類似的機制以處理受傷的情況。也就是說，這 些存在於植物體内的生化機制理應也適用於動物體中。 在本發明的另一觀點中’一穩定生化系統的製造方 法包含：於一沒有具活性之還原劑、酵素或觸媒的組合 物中萃取一穩定的多酚物質，以及使該多酚物質與一濃 縮之活性氧化物來源結合；該活性氧化物於導入或結合 至一獨立且合適的氧化還原酶或觸媒來源時，會促使氧 化作用的起始和延續。 根據本發明之一些實施態樣的組合物，係於植物性 ^物聚分=水溶液中提供足夠濃度的過氧化氫，以使經 濃縮的促氧化劑於多酚之羥基官能基團的鄰近反應區 域形成複合作用和穩定作用。具複合作用的促氧化劑可 避，於稀釋的過程中，織遠離該生物聚分+。將含有 促氧士劑.多盼之結合的組合物中的還移除或失活 可使前述促氧化劑多盼的結合實質上處於 態，直至將其與提供氧化還原酶或其他可以 直接或間接使該生物聚分子轉變為具活性狀態之觸 的表面、組織、生物體、敷層或溶液接觸。 、 於本發明的另-觀點中，該組合物包含—由動 =开Γ周控广高效率且目標專一之氧化態生物聚分 子的形成。這個機制有助於將藥學上和商#上有用的反 18 201039752 應送往動物體腔或組織中。前述反應係類似於植物體内 基礎的傷Π反應。許多相關的生化反應已有相當程 ”究’但仍J綠了解n尚未有*何絲技術提 到如何將促虱化劑和多酚的結合穩定化’以及將促氧化 劑和多酚的結合穩定地運用於動物生理和病原菌，苴中 該動物生理和該病原菌係做為酵素性活化的來源。^許 多植物、細菌和真菌中常見的苯酚複合酵素（phen°〇i complexing acting enzyme)，如漆氧化酶或酚氧化酶在功 能上與動物常見之過氧化氫酶和過氧化酶是相似的，其 〇 皆能促使笨職基圑的產生進而提升與蛋白質之胺基酸 的親和力。 在許多實施態樣中’本發明所配製之液體溶液相較 於習用的抗微生物之植物性萃取物具有眾多顯著之實 行上的優勢。這包含提高之水溶性和可輸送性、較廣的 pH值穩定性、較高的溫度穩定性、可預期之效能、低動 物毒性、對眾多格蘭氏陰性和陽性菌皆具有低的最小抑 菌濃度、幾乎無臭無味、於原料的使用上更有效率以及 不會產生有害環境的產物。 〇 本發明之部分貫施態樣係模擬已與環境中病原菌 共同消化數百萬年以上的植物防絮機制。該活化態之生 物聚分子呈現的非專一性蛋白質鍵結作用具有許多可 促使微生物失去活性的功效，其與現存的殺菌劑或抗生 素功效全然不同，也幾乎不會造成如抗生素的濫用所造 成的抗性和環境汙染問題。 該活化態之多酚具有許多生物機制的活性。單一個 聚本酿•分子就具有數以千计之阿街度且不會被削弱的 鍵結位置，因此，這樣的化合物可交聯並聚集胺基酸和 蛋白質以形成一對抗病原菌和刺激物的抵禦屏障。這個 19 201039752 化合物也可以與病原菌鍵結而顯著地造成其代謝途徑 彳致病效力的失序和失活。這個化合物可以物理性地使 病原菌團聚、黏附或失去運動能力，而得以避免病原菌 的繁殖。，g昆形態或苯㈣態皆可促使氧化自由基的釋 ^以破壞及溶解病原菌的膜結構。它們也可以阻礙負 貝痛感和發炎反應的受器。 嫁不知明之貫施態樣所製造的多酚可以是獨立 =尺溶f生聚合物、化合物分子（c〇mp〇und m〇lecuie)、巨 子聚木體（macrom〇lecular c〇ngl〇merate)或蛋白質或 2片段之聚集體。促氧化劑的穩定複合作料來自大 見模的氫原子親和力、電子共享或毛細現象的形成。 利认多情形中’活化態生物聚分子的異質混合物有 原_ 4 物活性和生物可利用性以對抗更多種病 ^。、、’口 S卒取自多種植物材料的多齡可進-步增加鍵 ΐϊϊί=Γ障況中，並非所有的苯紛次單元皆 2仃本社轉換，因_物#心 有的特性和功效’㈣又具有孩化合物的功效 或人戶 常知識者將理解許多其他的天然 inί可經氧化而形成複數縣或苯醒 月匕基而了以取代或結合至多酚。 發多ίϋ:的點中，係使用非植物性酵素來激 不活化地(passive)通過動物驊 J冷液 得以4勿腔體而使传未經反應的材料 ^輸达到以其他實施方式 ㈣ ，高有效組合物的生物可利用性 合物的形成可將該非鼻一，卜 之本酉比 榡組織的鄰近區域，據此 μ限制於最接近 錁此可以降低盘替體細继斗、么 互作用產生不良結果的風險。U，、且織或系統 20 201039752 就了=t植物界中存在著的功能性相同的酵素造 素調控之多紛反應利用於非植物之生物體 同的過;!酶例;丄巧動物的消化道具有兩種不 血酶種，由免疫系統的嗜酸性白 ^^弟一種係—種可於消化道黏膜細胞中找到 ::ί第谷酶’其僅 Ο 聚策酶基本上就是植物傷口反應中參與 以酶的功能等價體，因此得 染之=鄰近區域講發位i專傷或受感 道二ίΐ、：、f定的多酚·促氧化劑組合物於消化 的受損或發炎=二迢上或其：高等動物的黏膜表面 性。食时有軸合^液體、=具有/㈣生化活 活化iflr鈐、¥ S、◊』。 之液體/谷液時，會將該組合物不 Ο 還原酶貝:;^進：』:田胞f感染的位置’而該位置的氧化 聚隼受損之宿活性。該聚魏會交聯並 極為相關的表面;和代謝、致辦 的病原菌失去運^和結構鍵結可使眾多 會提高抗原性而引“二病原8的團聚體也 心: = = 於受影響之 咖加㈣。已知由古ί二助於減少體液流失_d 系統中產生的非度早等和其他種類之多紛於消化 收並造成侧的㉔之m效果㈣礙養分的吸 可使這樣賴轉.2,目如活化反應 201039752 在許多觀點中，該組合物包含新穎之微生物栌 組織防禦的生物活性系統。該生物活性材料和活^化= 驅物質的混合物係由動物、植物或微生物細胞的多種二 素所催化。若該用於激活的酵素絲自目標組織如^ 或感染的組織’則食用或使用該未活化的組合物可移^ 至所欲到達的組織，即便該組織深處於生物體内。於 標組織位置專一地（site-specifically)釋出氧化自由其ρ 及形成活化之植物材料，可以顯著地提高生物可利用 性，並可將增強的反應活性控制在該酵素來源的鄰近區 域’以避免與其他組織發生副作用。 在許多實施態樣中，該植物性生物活性材料可為多 酚，或任何具有數千至數以萬計的暴露之反應位置的= 物为子、合成分子、小分子的聚集體、細胞片斷或化合 物的交聯體。 σ 許多植物可用以提供價格合理且合適的多紛。茶葉 (Camilla Sinensis leaf)由於容易取得、低自然毒性和具^ 虽的水溶性多盼等因素，因此是植物性原料的優良來 源。茶葉中的多酚化合物-黃酮醇（未氧化的兒茶素 (catechin))含量最多佔乾燥茶葉重量的3〇%，使得茶葉 是一個非常經濟實惠的來源。有效之抗微生物且具收斂 性的組合物也是由眾多不同植物物種的不同結構所製 得’包括黑麥種子(rye seed)、蘿蔔皮(daikon skin)、石 榴外皮(pomegranate rind)、熊果(bearberries)、蘆蒼(ai〇e vera skin)、風琴管狀仙人掌（organ pipe cactus)、五倍子 (Chinese gall)、牛至葉(oregan〇 ieaves)、柿子(persimm〇n fruit)、小麥胚芽（wheat germ)、大麥種子（barley seeds) 和咖啡豆’顯見此植物的防禦機制係廣泛地存在植物界 中。 22 201039752 在許多觀點中，藉著取得實質上不含具活性之氧化 還原酶或其他還原劑的萃取物，以使得自植物材料中萃 取得到的多酚物質可以穩定的狀態進行製劑、儲存和輸 送的方法。本發明的許多觀點涉及以熱處理或溶劑處理 使植物原料失活，而得以取得不含具活性之多酚氧化酵 素的植物性生物聚分子成分。處理程序依據原料供應的 可取得性和不同的植物組織而有所不同。比如說，脫水 或乾燥的植物材料由於已不含過氧化氫，因此在多酚萃 取程序之後，可進行酵素失活的步驟。

表谓經潸之不具降解酵素的多酚原料的一個有效 程序的例子包含：將新鮮採集的茶樹葉快速地於高溫氣 體中脫水、’簡可能造成綠茶多崎化的多崎化酶失 活。除了過氧化氫流失、水分流失以及少數通常在採集 的過程中以極㈣速度發生㈣素性變化以外，這個程 3::::戌乎所有活體茶葉所含的組成成分。經處理 削、’〔片接著便進行粉末化的 並提高萃取效率。 制供=，紅茶則以另一個製備程序的例子進行。在 边命葉：先於保有具有活性的多酚氧化酶的 二為^ 壞其細胞結構。這個步驟促使兒茶素 亚自動地聚集形成具揮發性的化合物。經 :二二的/物性材料仍是-個有用的多紛來 ΐ較低’且需要額外的酵素失活程序， :該植物，轉料；地’ 8°識)加 去活性。缺錄自狀叫 用於植物性材料的萃取程序㈣孔^擇以 多數植物都會產出過Λ 4移除胞_素° 出虱化氣供日常生理活動及對 201039752 抗環i兄壓力所需。植物組織中的過氧 種、組織種類、環境壓力和季節的不同^度依據物 化。過氧化氫往往在採集程序的後 ^ =的變 常錢，、在實際操作上通常不會從天f 化氫，尤其在過氧化氫的合成等價^化付過氧 如此低廉的情況下。 又促虱化劑的價袼是 依據本發明之許多實施態樣的方法㈣ 外源性地添加過氧化氫，其可做為商 ^物’ W 活性氧化物來源，以促進多㈣级.貫^且穩定的 屬領域具有通常知識者當可理解，在各種^ $成。所 用其他直接提供活性氧化物者，如臭氧 =可使 氧化酶、尿素過氧化氫、過碳酸鹽、過氧化g、過氧^ 鎂、，硼酸鈉單水化合物（s〇dium 批 则n〇hydrate)。臭氧;匕4勿（〇雇ide，〇r)、超氧化物 (supercmde，〇2 )、氧化物（〇xide，〇2_)、二氧美趟 (dioxygenyl ’ 〇2+)或其他間接提供活性氧化物^，二Z 氣、分離水(disassociated water)、經酵素催化而分解之 脂肪酸、葡萄糖和多紛。 在s午多觀點中，本發明的實施態樣包括將高濃度的 活性氧化物（如過氧化氫）與多酚物質結合，以提供一穩 定且防止過氧化氫分子自苯酚次單元的鄰近反應區域 擴散遠離的環境。多酚的結構可提供過氧化氫分子眾多 的非共價鍵結的機會和電荷吸引力。過氧化氫也是多酚 自體氧化的產物’因此有助於維持溶液中的整體平衡。 穩疋的複合作用可以保§蔓過氧化氣避免因熱、曝露於紫 外線、還原劑的污染和自體降解的消耗。 第一圖係闡釋數個苯酚單元1〇2依據本發明之一實 施態樣轉換為笨醌104或半醌1〇6的反應途徑。此處所 24 201039752 述之「苯醌」係指所有的苯酿化合物，如苯醌和半醌。 過氧化氫108可為啟動氧化反應的活性氧化物來源，也 是多酚氧化的產物。多齡溶液的穩定平衡便可因此而建 立。一旦整個反應被啟動，即便缺乏直接的酵素調控， 活性氧化物來源仍會經由多酚物質促使苯醌有效率的 增生。因此，水中高濃度的過氧化氫是效果優異的促氧 化劑成分。然而，過氧化氫可以間接地經其他反應獲 得’如臭氧、脂肪酸或過碳酸鹽的分解(僅列出少數反應 Ο ❹ 以供參考）。細胞内氧化還原酶也可參與於氧化反應串級 之啟動或延續中的含氧物質（〇xygen species)的間接產 生。舉例來說，保護動物細胞和許多病原菌以避免R〇s 攻擊的過氧化氫酶會將過氧化氫分解為水和活性氧化 ，三植物和動物細胞本身即會產生過氧化氫，但其濃度 奴著物種、季節、壓力和組織種類會有極大的變化。雖 =些植物如乡肉植物（succulent)於其組織中可儲存足 二：的過氧化氫，但實務上要將該過氧化氫自植物來源 來是不可行的’因為植物纽織中的還原醉素係 =耆易破壞的胞内結構與過氧化氫及/或多酚隔離儲 t而這麵⑽構在現行的萃取程料姉不謂免 破壞；而破壞所造成胞内物質混合的結果會激發 虱化傷π反應，並快絲、;肖_氧 紛、酵素和其他不相_植物性化合2。^大⑼夕 的活多觀點包括使用獨立製造或獨立產生 =之貫有蹄之還原劑或 減ί許多實施態樣中，該促氧化劑·生物聚分子之組合 =;=。在可行的實施態樣中，可以纖維、水凝膠、 舰性基質、微胞、乳液和其他物理 該 25 201039752 促氧化劑-生物聚分子之組合物。在另一些實施態樣中， 乾燥粉末、顆粒或其他非液態之多酚產生材料結合乾燥 之促氧化劑（如過礙酸鹽）的混合物可做為套組使用，再 進一步水合以產生有用的多酚-促氧化劑(oxidizer)溶液。 在許多實施態樣中，該觸媒是以液體、喷劑的形 式，或器具、敷料或清潔工具之表面塗層的方式獨立施 予目標位置。其中一個例子是一個充滿還原劑如過氧化 氫S#或銅的吸附性海、綿，當它與多盼_促氧化劑(〇xidizer) 組合物接觸時，可迅速地促使氧氣自由基釋放和苯醌形 成’其可用於產生強力的殺菌活性，尤其是摧毁非生物 性表面上的病毒或消毒沒有表現具前述催化能力之酵 素的健康組織。舉例來說，病毒的套膜一般來說不會具 有酵素，但具有非常多可與聚笨艇鍵結的蛋白質。因 t施予之觸媒或酵素便得以用於激發這個病毒弓丨 發的/殺菌的反應。 八在許多觀點中，本發明實施態樣之聚苯醌化合物 3作為微生物凝聚劑（flocculant)的用途。 此 :::加:受汗染的水中可以促使其中的微以 除。將聚苯醌化合物設置於機械過濾組件上ί ^捕捉蛋白質和微生物體，並同時提供殺菌之 j 之聚笨酿使用於一過據用咖 =)中，以形成聚苯醌之組合物以達成前述運用二 方法可運用於多種循環式或一次式的 u 之釋-根據本發明之-些“態:所製得 物2〇〇。該組合物2〇〇包含生物聚分子2 二 匕含具經基之分子綱。該具輕基之分子咖於圖中係 26 201039752 以多酚的形態呈現，但其可以為苯酚、多酚、多醣或其 組合。在可行實施態樣中，該具羥基之分子2〇4為單寧二 木質素和類黃酮。所屬領域具有通常知識者當可理 該生物聚分子202可為任何短鏈結分子（sh(m nnkage molecules ’如具有2〜100個重複的單元，或ι〇〇〜ι〇〇〇 個重複的單元）、巨分子、長鏈分子、環狀結構分子、兀 electron stacking)^/,! # # (stmctural stackmg)分子。甚之，該生物聚分子2〇2亦可為自植物 衍生或取狀㈣或人工合齡子。 ο 子202亦可取自多種植物的組合，例如’具有高含= 酚之植物A卒取物和具有高含量多 而該生物聚分子202可取自植物 卒取物 物的混你在這個情況中二植物Β萃取 :: ? 該生物聚分子202係來自植物 Β，如此一來，相較於多醣的化學性 ❹ 較接近多酚的化學性質。棱此，孩山、邊、、且s物200 的植物Α和植物Β，得以完康成呈由配比不㈤比例混合 活性和反應速率）的該組合物2〇〇。《反應特性(如反應 該組合物200可包含一氧化劑2〇6 208。在許多實施態樣中，該氧化 ^ 在許多實施態樣中，該氧化劑2 , 3雜軋化物 如濃度為>60%、20%〜6〇%和、=用市售產品210 ’ 水溶液。在可行的實施態樣〜2〇%的過氧化氫 為卜观小於1〇%的^:氮工巧劑遍包含濃度 樣中，該氧化劑裹係經°在許多實施態 i#a 91^ ^ ★ 六礼Ζ12、脂肪酸214或過碳 -文I 216反應而侍。在許多實施態樣 如過氧化氫，係由該生物聚分 μ氧化4 206 生。在可行實施態樣中，該氣㈣气，植物内源性地產 ~ Μ 2〇6係外源性地加入 27 201039752 該系統中，如，將商業可取得之過氧化氫加入生物聚分 子202和酵素208之混合溶液中。 _在許多實施態樣中，該酵素208係内源性地產生或 經外源性地添加。例如，用以活化或促使反應進行的該 酵素208係由一動物218之組織上的病原菌23〇所產 生。可行地，該酵素2〇8係由動物218及/或植物232的 細胞/組織所產生。此外，於該組合物200施予一動物或 一植物之前，該酵素可經添加至含有該生物聚分子2〇2 和5亥氧化劑206的混合溶液中。 〇 在許多實施態樣中，該具羥基之分子2〇4形成苯醌 化合物234及/或246。該苯醌化合物234、242、244、 2日46、羥基團236、238、24〇和該具羥基之分子2〇4可 提供交互作用如共價鍵結力、氫鍵交互作用或電子堆疊 作用（electron stacking interactions)以將活性氡化物定 於鄰^應區域。該活性氧化物可做為氧化劑。疋 第二圖呈現依據本發明之一實施態樣以製備一植 物性組合物的方法300的步驟。在步驟中失活戋 移除具活性的還原劑和觸媒。在步驟3〇4中，萃取得到 實質上不包含具活性之還原劑和觸媒的多盼基質 驟306中’該多酚基質與一活性氧化物及/或一觸媒來源 混合為-混合物，以祕並延續氧化反應。如前所述， 該活性氧化物(如過氧化氫）的來源可為外祕地添加或 内源性地由植物萃取物所產生。相似地，制以起始該 氧化反應的觸媒也可由外源性地添加或由被施予之位 置（如經病原菌感染的位置、組織受傷的區域}產生 步驟308中，該混合物係施予目標位置，如一動物的一 受傷區域。前述方法3〇0僅為本發明之—實施 有的步驟皆為可選擇性的，並可視情況增加額外的步 28 201039752 驟，亦可視情況改變該步驟的先後順序。根據前 所做的其他變化也都是可行的。舉例來說，—實挤凌 含，原觸媒且含有自植物萃取之多酚的溶液，：二： 化氫混合。該溶液於後續活化步驟之前，可儲存 中。於輸送至-動物體遭受病原菌感染且產生觸媒: 该反應活化的位置後，該溶液會經一活化機制活化在、 其他例子中，於施予目標之前，—含有㈣和過氧化^ 的溶液係以一外源性添加之觸媒活化；其中巫 動物或一植物之位置。 知係— 〇 第四圖顯示根據本發明之一實施態樣，以溶劑使、矛 原劑/酵素失活的程序400的步驟。在步驟4〇2中，選^ 用以製備該植物性組合物的植物。在步驟4〇4中，= 一溶液以將多酚組合物自該植物萃取出來。在步驟4恥 中，將該溶液於80〜11〇。(：之間加熱以進行將該酵素失活 的漂白程序(blanch)。在步驟408中，使用一蛋白質失活 /谷劑，如酒精，以摧毀或移除該植物所含的胞内酵素。 ^第五圖顯示根據本發明之一實施態樣，以熱處理使 還原劑/酵素失活的程序500的步驟。在步驟5〇2中，選 〇 擇用以製備該植物性組合物的植物。在步驟504中，= 速地將整個茶樹葉以高溫氣體脫水以使該植物中的多 酚氧化酶失活。在步驟506中，將水溶性胞内酵素 cellular enzyme)移除或失活。在步驟5〇8中，將該葉子 粉碎。在步驟510中，加入溶劑以萃取多酚。 第六圖闡釋依據本發明許多實施態樣之植物性組 合物的多種運用。該運用包括，但不限於：動物營養補 給、動物組織的癒合(coagulati〇n)、形成防禦病原菌之屏 障、目標激活反應、外源性添加氧化酵素以提供殺菌運 用、過氧化氫之複合作用、時效輸送(timed delivery)、 29 201039752 停止病原菌的新陳代謝、醫藥用飲品、受器拮抗_ (receptor antagonist)、 微生物凝聚劑、保存生物柯料、 抗微生物清洗劑（antimicrobial wash)、農業運用、池水 衛生、醫用設備之表面處理和藥物輸送載體。 根據本發明之實施態樣的許多反應模式，包括—位 於一相對大之生物分子材料上具高親和力及低專—性 的高密度鍵結位置群體之目標活化功能。在許多實施能 樣中，使用全植物萃取物（whole plant extract)。在許多 實施態樣中，使用一具多種植物之混合物是有利的，其 中該混合物係混合有不同種類且不同分子量而具此微 不同蛋白質親和力的苯酚化合物，因此具有更大之:既太 的活性範圍。 胃 典型地’習用藥物的設計概念係著重於高專—性的 分子交互作用。相對來說，本發明的許多實施態樣係藉 助不具選擇性的活性(non-selective activity)達到優異的 效果，並由於位置專一的活化方式而更為安全。在本發 明的許多實施態樣中，該分子複合物係於一水性溶液^ 通過消化系統，於該水性溶液中，多種必要的活性成分 係複合（sequestered)於彼此的鄰近反應區域，以避免於大 量稀釋中形成擴散之濃度梯度(diffusion gradient)。如此 一來’得以保持該分子複合物完整的生物可利用性，直 至其抵達受損害的黏膜組織或與病原菌接觸，其中該受 才貝害的黏膜組織和病原菌表現有適合供該複合物活化 的酵素。位置活化作用催化一高度定位的轉換作用，使 不具活性的分子複合物轉換為具有上百個或上千個潛 在活性位置之具侵略性的蛋白質鍵結物（protein binder) ’此蛋白質鍵結物的侵略性遠勝於僅具有兩個鍵 結位置的抗體。高度位置專一的活化作用以及大型「黏 201039752 性」聚分子無法被吸收的本質，造就了一個效力強大且 精準定ί的活性反應，而得以使潛在的不良系統性副作 用，，最低。這些「黏性」植物性生物聚分子的累積使 其私疋地固定在目標區域，並啟動—模擬植物體傷口處 所誘發的高效免疫反應。 、在許夕貫鉍態樣中，前述植物免疫生理中的機制係 運：於動，中。5亥機制包括⑴非專-性地鍵結於感染之 細菌^真㈣生理频’ #著阻礙其代謝與增生以殺死 該細菌或真菌；（2)與存在於目標位置的毒素(toxin’通 〇 料由蛋白質所組成）鍵結’及/或阻礙病表現更多 酵素性的致^因子；（3)限制或降低病原菌的運動能力， 或促使病原菌團聚以避免其繁殖及藏匿；（4)與受損害之 細胞的蛋白質交聯形成一物理性屏障以降低進一步感 染或文攻擊的可能；（5)鍵結於發炎反應的訊號受器而作 為多種生理反應的結抗劑；（6)使細胞穿透機制無效、捕 捉病毒及/或避免其繁殖和藏匿；及(7)利用定位之收斂 功效和屏障效果以降低組織液自受損組織流失。 在許多實施態樣中，相較於習用以治療腹瀉的生理 Ο 收斂劑，本發明組合物的有效量非常的低，並立判斷不 足以造成如單寧因其收斂效果所引發的消化道損壞或 養分吸收障礙。 以本發明實施態樣所製得之複合物進行數個實 驗。經持續觀察發現，餵食以本發明實施態樣之複合物 的實驗豬的生長狀況有所提升，顯示該複合物的效用 (effectiveness)。該複合物對稀釋的不敏感性 (insensitivity)、於健康黏膜上不具活性的本質以及對# 病原菌具有最小化之活性，係本發明複合物適合且有政 於以低濃度於水性溶液輸送的幾個原因。 31 201039752 依據本發明數個實施態樣所製備之混合物係有助 於高等動物消化道、呼吸道、尿道、生殖道或其他黏膜 表面的組織損害或黏膜發炎。這些組織和感染之細菌可 做為氧化酵素的來源，以催化多酚物質轉換至其活化狀 恶。在許多實施態樣中，食用前述之多酚/促氧化劑 (oxidizer)組合物可直接及/或間接將該多酚轉換為聚苯 醌化合物（或〇-多紛）’其係藉由酵素直接轉換或經酵素 產生之過氧化氫參與的羥基單元的自體氧化而達成。該 聚苯覼分子接著便可與受損之組織細胞的蛋白質或病 原菌的表面蛋白形成共價鍵結以使其失去活動力、失去 活性及/或凝集。或鍵結之蛋白質可形成一防禦性基質， 該防禦性基質可降低病原菌增生（e〇l〇nize)的能力以及 提供一強大的收斂效果，以閉合傷口並減少體液流失。 依據特定酵素、該多酚分子的結構與種類、促氧化劑的 相對濃度和稀釋環境等的不同，該根本之反應會以不同 的途徑進行。非直接參與笨醌單元之酵素性合成的促氧 化劑可釋放直接損壞病原菌之細胞結構的氧化自由 基。經該自由基所引發且定位於失去活動力之病原菌的 周圍的氧化風暴會產生一個聚焦之殺菌反應，該殺菌反 應遠較於一自由溶液(free solution)中經擴散執行其效果 的殺菌劑來的有效率。使用超過一種的植物材料作為基 質或結合多種未氧化之已知具有殺菌活性的植物作為 添加成分可提升抗微生物活性的潛力和廣度，因此是有 利的。 在其他實施態樣中，該具氧化力的酵素可獨立地輸 送至反應位置。舉例來說，本發明之一個實施態樣包含 於沒有受感染之組織或細菌存在的情況下，藉著提供— 催化酵素之來源以對抗病毒。病毒的膜套通常不包含該 32 201039752 ;==口蛋被轉換 ，聚苯破分子細，尚 本發明之許多實施態樣可運用於溶液 =劑；在謝其他植物或動物、w情況下：二 生物，如細囷和真菌所產生的酵素激活。於物體 Ο

G $中添加酵素或其他觸媒，或將本發明之組合物運用 ^事先經料化效权酵相_處理 =率器具或導管，可提升於該物體表面或溶液中的殺^ 龍ί發明之許多實施雜可作為—微生物凝聚劑，以 =生物團聚為可沉殿或被機械方賴除的細胞團。微 、數發ϊ ί 質的凝聚體可提高潛在的抗原性而 激發免疫反應。由於以下效果使得收斂活性 ::病毒的行動能力。前述兩種活性皆V::::; 、殺菌試驗指出，細菌於16個小時内 : ΐ”依據本發明實施態樣所“:組 ，化的該植物性材料不具有任何殺菌的效力 容=的驗物被轉換為聚苯觀二 步提升。經轉殖而帶有L 過乳化騎（clnmeric tobacco ani〇nic 33 201039752 peroxidase)的菸草可以產出大量的過 其傷口癒療的速度較未轉殖之菸=匕辦實驗顯不 轉換效率的提升傾向於來自顯著提相;辛 受質（substrate)含量。 J畔京3里，而非 本發明的許多觀點包括與蛋 單寧具有優異的蛋白質鍵結能力，然：單3蛋Γ; 礎，並且傾向於與富含脯胺酸的蛋 白貝鍵、-，口，其通$存在於唾液和消 顯=白蛋白形成聚集體二 刀鈿内：王Μ又。在只含有植物性材料的情況 要 3天的時間才能達到一樣的沉澱結 八 的情況下，則完全沒有任何㈣的現t =^化^ 本發明的實施態樣具有增強之蛋白質交聯 許多實施態樣包括具植物性殺菌劑及蛋白質交聯

Q _S lin㈣的組合物和促氧化劑所構 合物。該具植物性殺_及蛋白f交聯義組合物可具 有-含有大量多紛化合物的植物。該促氧化劑可為過氧 化氫。標題為「植物性殺菌材料及其系統(ρι_Β— Buxndal Material and Systems)」且於西元 2_ 年 12 月 23_曰提出申請的美國專利申請案（申請號為12/317,638) 揭示了多種可用於製備該組合物的方法，因此，本發明 於此併入該專利的全部内容以做為本說明書之參考内 容。 本發明的許多實施態樣可運用於植物多酚化合物 的氧化還原反應及/或自由基反應。該植物多酚化合物可 包括笨酚、多酚、羥基香豆素、類黃酮、生物鹼和任何 化合物其化學結構次單元係類似於單酚或二酚，而可被 氧化、還原或與微生物、植物或動物體内或表面的分子 34 201039752 交聯，並據此於各種目標生物體或 物、抗病毒、收斂性質以及瘉療傷^、、、”B 生抗微生 ^ 〜、蜃傷D的效果。本發明所 述「本醌」和「聚苯醌」包括具有一 之氧原子的笨環結構的任何單4有雙鍵鍵結 該組合物和方法可利用於促進皮膚上°受損傷口的 癒療或運麟消mx治療消化％統的錢情況。該 組合物和方法也可湘於多種標乾環境之運用（targeted environmental application)，如活體外和活體内的使用。

在許多實施態樣中，本發明的運用包括抗微生物 劑、驅蟲劑（anthelmintic)、止瀉/止下痢劑、止痛劑 (analgesic)、消炎藥、化妝品成分、角質溶解劑 (keratolytic)、工業製程所需之促氧化劑、金屬螯合劑和 有機接著劑(organic adhesive)。在可行的實施態樣中， 生理上的運用包括防腐劑、消毒劑、殺病毒劑 (virucide)、殺真菌劑、收斂劑、組織接著劑、傷口保護 劑、防生物膜生成劑、消炎藥、止痛劑、凝血劑 (haemostasis)、產品防護劑（product preservative)、凝結 劑（coagulant)、凝聚劑（flocculant)、漱口水(oral rinse)、 沖洗液（irrigant)、清瘡劑（debriding agent)、胃用補劑 (gastric tonic)、止下痢劑、潰瘍處理、硬化劑（sclerotizing agent)、用水消毒劑、用水保存劑、氧化清潔劑（oxidizing cleaner)和除臭劑。在可行的實施態樣中，該運用包括使 人或動物食用該組合物以治療或避免病原菌或致病分 子感染、損害或被其消化系統之組織所吸收。在其他實 施態樣中，該運用包括藉著收斂效力、消炎效力或抗微 生物效力以減少體液流失而預防或治療動物下痢。在許 多實施態樣中，該運用包括治療胃液逆流所造成之侵 蝕、消化性潰瘍或其他消化系統的病變。在可行的實施 35 201039752 態樣中，該運用包括治療鼻腔或耳道（nasal时如㈤ cavity)的發炎或感染現象。在其他實施態樣中，該運用 包括使用於呼吸道的抗微生物喷劑，以降低病原菌的個 數及避免呼吸道内壁被病原菌如細菌、病毒和真菌入 侵。在許多實施態樣中，該運用包括呼吸道噴劑和鼻竇 洗劑（sinus rinse)以沖除接觸之過敏原。在可行的實 樣中，該運用包括供抗感染或消炎處理的泌尿^ = ^ (urinary tract rinse)，或供裝設尿道導管或洗腎之患者^ 用的常規消毒洗劑。在其他實施態樣中，該運用&括器 官保存及消毒，以供器官移植。 在許多實施態樣中，該運用包括一抗微生物清洗 劑’其係針對正常或受損之皮膚、表面傷口或任何黏膜 腔道中的細菌、病毒和真菌感染。在可行的實施態樣 中，該運用包括一組織接著劑，其係用於加速外科手術 的切口或傷口的治療、癒合或凝血。在其他實施態樣 中，該運用包括供外科手術加或局部傷口之處理以減 少疤痕。在許多實施態樣中，該運用包括供局部切傷、 燒傷或擦傷的急救處理(first aid treatment)。在可行的實 施態樣中，該運用包括供口腔黏膜損害處理和牙醫操作 程序使用的消毒軟貧、軟膏洗劑（〇intment rinse)或沖洗 液。在其他實施態樣巾，該運用包減牙周病處理和敏 感I*生牙isf處理，如牙齒微裂痕（t〇〇th micr〇_crack)的修 補。在許多實施態樣中，該運用包括供減知臭之用的 漱口水。在可行的實施態樣中，該運用包括供皮膚炎 (dermatitis)、溝癣(j0ck itch)、陰道感染和香港腳 foot)使用之浸泡液。在其他實施態樣中，該運用包括 傷、慢性傷口和潰瘍的抗微生物和治療處理。在許多實 施態樣中，該運用包括避免或減少組織絲面的生物膜 36 201039752 形成 在可行的實施態樣中， 舉例來說’藉著向植物喷二運，括農業上的運用。 劑組合物之中，可減，丨、矣或使之浸泡於該多酚-促氧化 傷口癒合。此外，藉以及使細微的 狀況因為增強表面結構或^升。生’ d:植物的健康 精進。 杈幵生長或發育狀況而有所 在其他實施態樣中，兮

G 劑或液體喷劑，苴俜作〜:2用匕括含該組合物之噴霧 全抗菌劑。在許使用的生物安 滅菌之用。二中，5亥運用包括供動物飼料 -：： ^樣:灑2 植物、新鮮水果和蔬菜的清洗: ，死二：丨：而/ - 3有此處揭露之組合物的溶液可以 权死或抑制表面細B、延長貨架壽命(shelf胳)以及保護 =阻止榖物或農產品表面遭受有害物質的侵入。在許多 實施態樣中，該運用包括植物種子於發芽前的抗感染處 理和衛生清潔處理以供儲存。在可行的實施態樣中，該 運用包括一用於處理新鮮剪切的花朵的保存嘴劑或水 質處理劑（water treatment)。在其他實施態樣中，該運用 包括一組織接著劑，其係用於地下水復育以及植物嫁 接。 在許多實施態樣中，該運用包括一保存喷劑，其係 供使用於肉類或海鮮以減少細菌’並形成抗分解薄膜 (thin anti-digestive layer)以避免微生物入侵。可行的實 施態樣包括使用於肉類處理過程中的殺菌劑’以避免微 生物汙染。在可行實施態樣中’該運用包括池水殺菌， 以供如魚、蝦、牡蠣、鮑魚和貝類之漁場使用。在其他 37 201039752 實施態樣中，該運用包括治療水生植物和動物之疾病。 在許多實施紐巾，賴肖包括水族箱殺s劑、含有液 體之產品的保存添加劑、表面清潔劑的抗感染成分、用 於’肖毋醫療器材、服裝和食物製作設備、醫院環境和儀 器的笨酿還原循環塗料（quin〇ne RED〇X eycling coatings)、使用於具親水性塗層之醫療器材的抗微生物 水合溶液(hydrating solution)以及使用於金屬之有機抗 腐钱劑。 在可行實施態樣中，該運用包括工業之水震波 (water shock)、防腐劑或聚合抑制劑（antifoulant)。在其 他實施態樣中，該運用包括溫水按摩池(hot tub)和游泳 池水的殺菌。在許多實施態樣中，該運用包括小分子治 療化合物的載劑。在可行的實施態樣中，該運用包括供 促氧化劑（oxidizer)、食物風味調整(modification of food flavors)、以及癌細胞和囊胞注射（injection into tumors and cysts)使用的穩定劑。 在許多實施態樣中，該組合物可為乾燥粉末的形 式。該組合物可以乾燥粉末的形式，或佐以至少一液體 的形式供一動物食用。為乾燥形式之該組合物可包含多 酚或聚合分子、活性氧化物、觸媒或其組合。該活性氧 化物可包含過碳酸鹽、過碳酸鉀及/或其他任何可以活化 該多酚及/或該聚合分子的物質。該活性氧化物、該包含 多酚或聚合分子的材料、觸媒或其組合可一同或獨立供 動物食用。 在許多實施態樣中，此處所述「多酚」的每一分子 包含一個以上的苯盼單元或苯紛區塊（building block)。 在可行實施態樣中，所述「多酚」的每一分子包含一個 苯酚單元。在其他實施態樣中，所述「多酚」包括水解 38 201039752 型單寧（hydrolysable tannin，沒食子酸與葡萄糖或其他 醣類形成之酯類結構）以及笨基類丙燒'醇 (phenylpropanoid)，如木 質素、類黃酮和縮合型單寧 (condensed tannin) ° 在許多實施態樣中，該過氧化氫添加至一含多紛之 溶液的比例為1〜2%。在可行實施態樣中，該過氧化氣 添加至一含多紛之溶液的比例少於10%。所屬領域具有 通常知識者當可理解，只要該過氧化氫的濃度不過高而 導致溶液内的多酚過度反應’任何濃度的過氧化氫皆適 Ο 用。該過度反應包括提供一浪度之過氧化氫而使得活化 之多酚無法呈現本發明所描述的功效。 在許多實施態樣中，所述「流體」包括液體、氣體、 超臨界流體、可流動之固態形式的物質（mobile solid form)或其組合。在許多實施態樣中，所述「病原菌」包 括任何具感染性的媒介物、病菌（germ)、細菌、病毒或 其組合。在許多實施態樣中，所述「病原菌」包括任何 具有對宿主造成疾病、不適、損害、傷害或負面影響的 生物性物質，該宿主為一動物或另一生物性物質。在許 ◎ 多實施態樣中’所述「生物聚分子」包括任何自一植物、 之動物或生物性物質所衍生或取得之物質。在可行的實 施態樣中，所述「生物聚分子」包括任何由一生物個體， 如一活體植物’所產生的聚合分子。更進一步的說，所 述「生物聚分子」可包括纖維質和澱粉、蛋白質和胜肽、 DNA和RNA。在許多實施態樣中，所述r生物聚分子」 包括複數單元之醣類、氨基酸和核苷酸。在許多實施態 樣中，所述「鍵結親和力」包括任何分子間或分子内的 父互作用及/或鍵結形成（b〇n(jings)。舉例來說，共價 鍵、離子鍵、虱鍵、偶極矩（dip〇ie moments)、感應偶極 39 201039752 矩（induced dipole moments)和靜電力。在终多實施態樣 中，所述「鄰近反應區域」係指一區域’其中存在於該 區域中的兩個或多個分子/原子之間的任何交互作用， 使得該兩個或多個分子並非隨機且自由地於一溶液中 移動。 在許多實施態樣中，所述「使病原菌失去活性」包 括阻礙病原菌進入動物/植物組織、抑制病原菌的代謝 途徑、與病毒性因子（viral factor)鍵結、使病原菌團聚/ 失去活動力及/或對病原菌造成氧化損害。在許多實施 態樣中，活性氧化物及/或過氧化氫4自天然和人工來 源獲得，如新鮮的蘆薈及/或香菜葉（cilantro)。在許多 實施態樣中，活化之多紛包括〇-多酴、氧化態多紛、多 盼酮（polyphenone)和聚苯職。 所述「經處理之流體」可包含一經人工處理及/或 生物性處理的流體。所述「生物性處理」可指所添加的 組合物經一生物性物質（如一動物）處理。所述「人工處 理」可包含過濾、脫水、分離、萃取或其他生產或化學 /生物之實驗室程序。舉例來說，所述「經處理之流體」 可包括將乾燥粉末形式的物質經口服施予動物，接著，y 藉著該動物體内之流體或外加之流體將該乾燥粉末溶 〜 解或分散’因此形成一經處理之流體。該乾燥粉末可包 含多盼和活性氧化物，如過破酸納和過峻酸鉀，以供動 物食用。可行地，該乾燥粉末可主要包含多酚。該活性 氧化物可以一液體形式與該乾燥粉末一同或分開供該 動物食用。在另一可行實施態樣中，該乾燥粉末形式主 要含有活性氧化物。該多酚或含羥基之分子可以一液體 形式與該乾燥粉末一同或單獨供該動物食用。 以下實驗顯示依據本發明許多實施態樣所製備之 40 201039752 組合物的效力。 實驗1 檨太將之粉末狀牛血清白蛋白製備為三個水溶液 樣描僅含有牛4清白蛋白。樣本#2含有牛血 j蛋白和多紛氧化酶。樣本#3含有牛血清白蛋白、多 ^ ^和過氧化氫。於製備完成3G分鐘後，經分光 =计（sPectr〇photometer)測得每一個樣本具有相似且 二疋的/ttw蜀度。將一自五倍子（Chinese Gaii)取得之單寧 〇 ίΪΪί人各樣本中。—個小時之後，樣本#1顯現輕微 、11 7、’*化。樣本#2的粒子大小增加而呈現混濁度增加 的現象，顯示微量的蛋白質凝聚現象正在發生 ^於試驗練底料有大量的沉澱，且不再具有混濁 度，顯示蛋白質凝聚現象因為多酚和活性氧化物的酵素 反應而大量的發生。 實驗2

將一含有五倍子（Chinese Gall)和過氧化氫的溶液分 別加入（1)一含有回溶於水之雞卵白粉末（該雞卵白 的脫水程序會使其中的酵素失去活性）的試管；和” 含有溶於水之新鮮雞㈣蛋自之試管。在含有新鮮 白蛋白的樣本中可觀察到更明顯的沉澱現象，顯示植 性多酚可被動物來源的酵素催化，而增加類似於j直 口之苯醌形成的蛋白質鍵結現象。 ' 實驗3 根據下述方法製備配方A。於裝有一公升去離子水 的耐熱燒杯（Pyrex beaker，1 liter)中加入一克的市隹^ 命粉末，並使其於室溫中萃取6個小時。接著再將35^ 41 201039752 之食品級過氧化氫加入該溶液中，使其混合4個小 後，再以具2微米之篩孔的基質或濾網過濾。所得之= 存液進一步用水（電阻為18M歐姆）以1〇〇〇 :丨、&〇 ,# 和刚：1的倍率稀釋。分別將15毫升的稀釋溶入1 具10個野生株大腸桿菌（Ecoli)的等量培養液中， 其於37°c中培養。經培養2小時、4小時、6小時和 小時後，自每一測試組培養液中取出樣本塗盤並培養，8 然後再進行菌落計數。丨00:丨稀釋溶液之培養4 ^的 樣本的殺菌率達1〇〇〇/。； 200 : 1稀釋溶液之培養6小睹 的樣本的殺菌率達1〇0%; 1000:丨稀釋溶液的樣本則^ 有制菌效果(bacteriostatic)。此結果顯示以較預期少 料和能量消耗製備-具有高殺菌力的植物性組合的 开杆神。 將一培養之野生株大腸桿菌加入 本=樣本A含有溶於水之25ppm的過氧化氫Τ = 稀釋至具有25ppm之過氧化氫的前述配方樣本 樣=g有與配方八相同濃度之綠茶萃取物，但巧 ^虱。在柄化氫溶液(樣本A)巾的細陳量^ 呈現被抑制的現象，但在16個小時制呈現，始 濁度’顯示其巾抗微生物效 ^之混 =難本C)展現低程生 .«!«樣*本)則展現了持續的殺菌力，並且在3天狳 細痛仍未有恢復线的跡象，㈣Μ 及之抗微生物效率，其顯“茶萃取二的 過乳化風的組合顯著地提升了殺菌效果。 午取物和 42 201039752 實驗5 本實驗之樣本#2是以前述配方A所製備，並稀釋至 3有與本實驗之樣本#1所含相同的多盼濃度。本實驗之 樣^#3係結合多酚和稀釋之過氧化氫，以使該多酚和該 過氧化氫的比值相同於樣本#2中多酚/過氧化氫的比 值。將每一樣本進行序列稀釋，然後靜置24個小時。 將含有野生株大腸桿菌的溶液（105/ml)加入各樣本 中’然後於培養後，塗佈於培養盤上以供計數菌落。濃 度<、、、員著較樣本#3之稀釋液低的多酚-促氧化劑溶液樣本 亦持續展現高效殺菌效果，顯示若一多酚物質_促氧化 合物於稀釋前是以高濃度製備（不含有任何具活性 化還原酶或其他還原劑），於較低濃度時會具有增強 果’此結果支持分子間作用力的複合作用會提升穩 疋度的概念。 實驗6 ❹ 的从下1係一配方B的製備方法，以及展示一多酚物質 rind、取私，使用30克之乾燥的石權皮(pomegranate 缺;^其係於l5Gt：乾燥1個小時後，磨碎為細粉末。 德，、1〇公升的去離子水混合，並於80〇C加熱20分鐘 於至酿=冷部2個小時。接著將35%食品級過氧化 ^JO ’ f靜置6個小時。然後以具5微米之篩孔的基 少^rw “添加之過氧化氫於添加至該溶液後的漢度係 iiiH % ^ ,百 0個細菌的液體培養液中， 不’此濁度(+表示混濁；-表示清澈)代表存活的細菌。 43 201039752 表一 濃度（ml/ml) 對照組 細菌種類 500 250 125 62.5 31.3 15.6 7.81 3.9 1.95 0.98 0.49 Escherichia coli - - - - + + + + Salmonella enteric St. Typh. - - + + + + + Staphlococcus aureus - + + + + Pseudomonas aeruginosa - - + + + + + Listeria monocytogenes - - + + + + + + Pasteurella multocida - + + + + + Proteus vulgaris - - - - - + + + + + 十 + Klebsiella pneumonia - - + + + + Bacillus cereus - - + + + + Bordetella brochiseptica - + + + + 實驗7 將配方A的200 : 1稀釋液運用於處理實驗鼠的體 側兩側對應之切除傷口，實驗結果顯示經該稀釋液處理 之傷口的大小約為以生理實驗水處理之對照組或以抗 生素軟膏處理之組別的三分之一。 實驗8 將經配方A之200 : 1稀釋液濕潤後的棉花棒擦抹 於發炎之口腔黏膜10分鐘。於一個小時之内，三個自 願受測者皆感受到疼痛減輕和腫脹舒緩；於兩個小時之 内，感染的情況已完全解除。此結果顯示該稀釋液於黏 44 201039752 膜組織的抗發炎和抗感染效力。 實驗9 將5耄升之配方B的40 : 1稀釋液混合於毫升 的水中，施予10位現有或曾有急性或慢性下痢症狀病 史的人類自願者5天的時間。於一週或一週以上之後， 9位自願者表達不適感和症狀皆有顯著地舒緩。 實驗10 〇 將〇.5毫升之配方A和配方B的100 : 1稀釋液滴 在一於表面預先培養大腸桿菌的羊血培養盤（Sheep blood infused agar plate)上的紙鍵(punch well)。該紙錠:的 周圍迅速地形成一血液蛋白交聯而呈不透明之區域，此 區域會限制PP-O複合物的穿透，因此在該紙錠的周圍 未產生抑菌圈（bacterial suppression zone)。相較之下， 在沒有血液蛋白的基礎營養培養盤（minimal nutrient agar)上，則具有因ρρ-ο擴散於培養基中而形成之明顯 的抑菌圈。這樣的結果顯示該組合物的低組織穿透特 〇 性，且因此降低其具生物毒性的風險。 實驗11 將一商業農場中的5歲亞洲藍瑞斯雜種豬(Asian Landrace hybrid pigs)分為各13隻的測試組和對照組， 其皆餵以相同種類和份量的飼料3個月。每三天便於測 試組的豬隻的飲用水中施予5微克(指配方A中植物材 料的乾燥重量）的配方A，以及當觀察到下痢症狀時，以 同樣劑量使測試組的豬隻天天服用。控制組的豬隻則接 受抗生素注射以治療下痛1。在第21天日τ，測減組較沒 45 201039752 有"^痛j的症狀且平均而言就控制組重了 1公斤。在3個 月0^根據肚圍的測量(girth measure)，測試組的平均體 於控制組25〜3〇%，顯示配方a作為抗生素替代品 員防性用藥和生長促進劑的可行性。 實殮12 〇 的生k峨並„平估99隻純種藍瑞斯仔豬(Lancjrace pigiet) 豬長情況。將配方B之促氧化劑_多酚組合物添加於 戈用奶中以施予該仔豬。21天大的離乳仔豬 day-〇ld starters)有約一週的時間容易因遭受環境變 ^壓力而增加下病發生率。在這段時間内，實驗組的 =重健做成長了料18%，顯示本發明組合物 業價^佳化生長狀況和作為代㈣之營養補充品的商

仔豬數量 劑量 1驗組 53 7,5 控制組 46 〇 Kg

無 8天 7.255公斤 8.76公斤 1.535公斤 用藥頻率 測試時程 實驗初平均體重 實驗後平均體重 平均增加體重 (乾燥植物重量） ~天一次 8天 7·〇0公斤 8·81公斤 斤 實驗13 使用10隻23歲且細& &I%特別篩選未受病原菌感染的純 safety) 46 201039752 該豬隻分=經施予250微克或25〇〇微克之日劑量一共 45天。監測其血液學生理(hemat〇1〇g幻和生長情況並進 行組織切片，觀察結果顯示組織和器官皆未有任何負面 反應。 實驗14 將50隻斷奶之離乳仔豬分為5個組別，每一個組 別每3天被施予12微克的劑量丨次，共維持5周的時 間。統計分析顯示實驗組增加了較多的體重。前述實驗 〇 證明該組合物有效於控制病原菌，並展現了在眾多商業 和醫藥上之運用的價值。雖然前述實驗證明該組合物對 於農業動物生產具有直接促進生長的利益，但習知實驗 所用的豬與人類具有兩度生理和免疫相似度，因此被廣 泛地運用於作為預測用之實驗體以瞭解於人體中的藥 效和安全性。據此’可預期並主張於人體同樣具有前述 潛在的藥效。對偶發消化不良和未知原因之下痢症狀迅 速達到療效的實驗可支持這樣的說法。20〜250微克(指 組合物中植物材料的乾燥重量，dry wt. equiv.)之單劑量 〇 被觀察到係足以有效地治療人體下痢的症狀，其中係於 1個小時内便觀察到症狀的舒緩。 製備 本發明之許多實施態樣係根據此處所載的方法製 備。製備程序係採用經國家統一有機規晝（Nati〇nai Organic Program ’ NOP)認證及 GRAS 安全可靠（GeneraUy recognized as Safe)認定之食品級材料。該製備程序係於 符合 GMP 標準（Good Manufacturing Practice)的乾淨實 驗室中進行。 47 201039752 製備中的許多方法包括植物性材料之前處理、蛋白 質之變性（denaturization)和萃取、反應物之分子間複合 作用以形成亞穩態（meta-stable)的多酚複合物、後處理以 及以額外成分稀釋或調整配方。 於此揭露的製程可廣泛運用於不同之植物種類和 組織類型’因為本發明所利用的化學特性係廣泛存在於 自然界。植物的來源可依據農業栽種的可取得性、主要 所含成分以及可能提供或造成所欲或所不欲之特性（如 毒性和自體降解）的次要組成來挑選。 所述組合物的製備可合併數個標準化之品管方 法’以直接測量物質組成、起始劑潛力（initiat〇r P〇tency)、微生物學上之效力（microbiologic performance) 和分子鍵結能力。該組合物的製備已於室溫中測試一 年。以留存之樣本測試的結果顯示增強之穩定度。該化 合物於微生物學上之穩定度的稀釋閾值經測定係高於 其自我保存(self-preserving)的程度。 許多實施態樣係以多種不同的植物性材料成功地 製造。較佳的結果係由採用不具爭議性、已充分了解且 長期使用於補充品和醫藥替代品的食用植物所獲得。所 屬領域具有通常知識者當可理解，只要其工作機制 (working mechanism)係功能上地、結構上地、化學上地、 生物性上地或物質上地等同於所屬實施態樣，則眾多植 物、植物組織或其組合係可使用以製備供不同市場需 的不同配方。 本發明係以特定實施態樣的觀點，並結合其細節以 =於瞭解本發明的操作和組成原理。該參考之特定實施 =樣及其細節並非用於限縮所附之申請專利範圍的範 疇。所屬領域具有通常知識者針對選以呈向之實施態樣 48 201039752 進行各式修改，而不違背如申請專利範圍所請之發明的 精神和範疇。 【圖式簡單說明】 第一圖闡釋數個依據本發明之一實施態樣以將苯 酚單元轉換為苯醌的反應途徑。 第二圖闡釋依據本發明之一實施態樣所製備之組 合物。 第三圖闡釋依據本發明之一實施態樣以製備一植 Q 物性組合物之方法的流程圖。 第四圖闡釋依據本發明之一實施態樣以一溶劑使 還原劑/還原酵素失活之方法的流程圖。 第五圖闡釋依據本發明之一實施態樣以使還原劑/ 還原酵素熱失活之方法的流程圖。 第六圖闡釋依據本發明許多實施態樣之植物性組 合物的運用。 【主要元件符號說明】 〇 102…苯酚單元 104……苯醌 106……半醌 108-----過氧化氫 200.....組合物 202…生物聚分子 204…具羥基之分子 206.....氧化劑 208……酵素 49 201039752 210……市售產品 212…臭氧 214……脂肪酸 216……過碳酸鹽 218…動物 230……病原菌 232……植物 234……苯醌化合物 236、238、240……羥基團 242、244、246……苯醌化合物 300-----製備一植物性組合物的方法 302-…-失活或移除具活性的還原劑和觸媒 304……萃取出實質上不含具活性之還原劑或觸媒 的多酚基質 306……使該多酚基質與一活性氧化物及/或一觸媒 來源混合以起始並延續氧化反應 308……將該混合物施予目標位置，如一動物受傷之 區域 400……以溶劑使還原劑/酵素失活的程序 402……選擇植物 404……使用一溶液以自植物萃取多酚組合物 406-----將該溶液於80〜110°C之間加熱以進行將該 酵素失活的漂白程序 408--…使用一蛋白質失活溶劑，如酒精，以摧毀或 移除該植物所含的胞内酵素 500-----以熱處理使還原劑/酵素失活的程序 502…選擇植物 504-----快速地將整個茶樹葉以高溫氣體脫水以使 50 201039752

該植物中的多紛氧化酶失活 506.....移除水溶性胞内酵素 508-----將該葉子粉碎 510.....加入溶劑以萃取多紛 51

Claims (1)

1. 201039752 七、申請專利範圍： 1. 一種組合物，其係包含： 一經處理之流體，其包含具羥基之分子；及 .活化機制，其藉著氧化劑和觸媒氧化前述羥 土以活化前述分子，其中，活化前述分子會提 升該分子之鍵結親和力。 2. 如申明專利範圍第1項所述之組合物，其中前述分子 包含聚分子或化合物。 3. 如申明專利範圍第1項所述之組合物，其中前述分子 包含多盼。 4. 如申凊專利範圍第3項所述之組合物，其中前述多酚 係衍生自植物。 5. 如申請專利範圍第4項所述之組合物’其中前述植物 包含茶樹葉（camellia sinensis leaves)、安石榴的果殼 (punica granatus husks)或其組合。 6. 如申請專利範圍第3項所述之組合物，其中前述分子 包含單寧(tannin)、木質素(lignin)、類黃 S同(flavonoid)、 經基香豆素(hydroxycoumarin)、生物驗(alkaloids)或其 組合。 7. 如申請專利範圍第1項所述之組合物，其中前述分子 包含至少一人工合成區段(artificial synthetic section)。 8. 如申請專利範圍第1項所述之組合物，其中前述觸媒 包含氧化還原酶。 9. 如申請專利範圍第1項所述之組合物，其中前述觸媒 包含過氧化氫酶(catalase)、過氧化酶(Peroxidase)、酚 氧化酶(phenoloxidase)、路胺酸酶(tyrosinase)、金屬觸 媒（metal catalyst)或其組合。 10. 如申請專利範圍第1項所述之組合物，其中前述觸媒 係位於一動物細胞。 11. 如申請專利範圍第1項所述之組合物’其中前述觸媒 52 201039752 係由一病原菌所產生。 12.^申請專利範圍第n項所述之組合物，其中前述病原 菌包含病毒、細菌、真菌、真核生物體、毒蛋白或其 組合。 13·如申請專利範圍第1項所述之組合物，其中前述氧化 劑包含活性氧化物(reactive oxygen species，ROS)。 14·，申凊專利範圍第項所述之組合物，其中前述活性 氧化物包含過氧化氫。 15·^°申請專利範圍第13項所述之組合物，其中前述活性 氧化物包含臭氧之還原產物。 16.如申請專利範圍第1項所述之組合物，其中前述流體 係由一包含多酚、多醣或其組合之乾燥混合物所製得。 7. 如申請專利範圍第16項所述之組合物，其中前述活化 機制係起始於該多盼、該多_或其組合與一溶液中的 該觸媒和該氧化劑接觸。 8. 如申凊專利範圍第1項所述之組合物，其中前述經基 於該活化後轉變為羰基。 19. 如申請專利範圍第1項所述之組合物，其中前述分子 於。亥髮基活化後具有笨酿基團（quinonic group)。 20. 如申請專利範圍第1項所述之組合物，其中前述分子 於該羥基活化後具有使病原菌失去活性的功能。 L如申請專利範圍第1項所述之組合物，其中前述氧化 劑提供自由基。 22.如申請專利範圍第1項所述之組合物，其中活化之前 述分子提供自由基。 23·一種組合物的製備方法，其係包含： a•自植物取得一個或多個生物聚分子；及 b ·活化該一個或多個生物聚分子上的羥基以提升 該一個或多個生物聚分子的分子鍵結親和力。 24.如申請專利範圍第23項所述之方法，其中前述一個或 53 201039752 夕個生物聚分子包含多盼、多 5·ΐ:請專利範圍第23項所述之方2法、，：：。 1-個或多個生物聚分子以實巧：步包含將 一動物。 只為上乾燥的形式施予 26. ^申請專利範圍第23項所述 ，該-個或多個生物聚分子斑酵去辛其，述活化包 合接觸。 ，、酵素、氧化劑或其組 27. ，，清專利範圍第26項所述之 該氧化劑以實質上乾燥的#彳‘，，、進一步包含將 28. 如申請專利之施二-2。 —動物的蛋白ί 77子父聯（⑽ss•脑ing)於 前述-個或 二所二巧個步包含使 31·如申請專利範㈣30項所述 個病η 二或多個生物聚分子鍵結於—個^多個以使該-32，;原菌團聚形成可被遽除的沉^個病原固’造成 〇 制了病原菌的繁殖。 去，其中前述鍵結抑 幻.如申請專利範圍第23項所述之 :個或多個生物聚分子得以阻礙病〜之前述 途或生理機能。 ’、囷或病毒的代謝 34.如申請專利範圍第23項所述之方 用經活化之該一個或多個生物聚分子:一 v包含使 痢症狀。 刀子/α療一動物的下 5.如申請專利範圍第23項所述之 4利23項所述之m巾前述該經基 54 36 201039752 之活化係由外源地添加一酵素而達成。 37. 如申請專利範圍第23項所述之方法，其進一步包含移 除、失活或其組合之一氧化還原酶或一會與促氧化劑 (oxidizer)反應之還原劑。 38. 如申請專利範圍第23項所述之方法，其進一步包含使 該一個或多個生物聚分子交聯於一動物之蛋白質而形 成一阻隔病原菌入侵之屏障。 39. —種促成定位反應的方法，其係包含： a.將添加之活性氧化物定位於一生物聚分子之經 基的鄰近反應區域； 〇 b.活化該生物聚分子之羥基；及 c.將該生物聚分子施予一目標位置。 40. 如申請專利範圍第39項所述之方法，其中前述生物聚 分子包含多酌、多醣或其組合。 41. 如申請專利範圍第39項所述之方法，其中前述活化包 含與一酵素接觸。 42. 如申請專利範圍第39項所述之方法，其中前述活性氧 化物包含過氧化氫。 43. 如申請專利範圍第42項所述之方法，其進一步包含於 f 含有該生物聚分子的溶液中添加過氧化氫以增加該羥 U 基之鄰近反應區域的過氧化氫濃度。 44. 如申請專利範圍第39項所述之方法，其中前述生物聚 分子含有複數個羥基。 45. —種經控制之化學藥劑輸送方法，其係包含： a. 製備一個或多個生物性分子，該生物性分子包 含預先挑選之化學物質；及 b. 依據該一個或多個生物性分子之大小、重量或 其組合進行選擇，以控制該一個或多個生物性 分子於一動物組織的穿透速率。 46. 如申請專利範圍第45項所述之方法，其中前述化學物 55 201039752 質包含紛類化合物。 47. 如申請專利範圍第45項所述之方法，其中前述化學物 質包含苯醌化合物。 48. 如申請專利範圍第45項所述之方法，其中前述生物性 分子包含植物萃取物。 49. 如申請專利範圍第45項所述之方法，其中前述製備包 含分離該生物性分子。 50. 如申請專利範圍第45項所述之方法，其中前述進行選 擇包含萃取該生物性分子。 51. 如申請專利範圍第45項所述之方法，其中前述穿透速 率係適度的，因此施予該生物性分子於該動物組織並 不會對該動物組織產生毒性反應。 56