TW200404783A

TW200404783A - Caspase inhibitors and uses thereof

Info

Publication number: TW200404783A
Application number: TW092117681A
Authority: TW
Inventors: Ronald Knegtel; Michael Mortimore; John Studley; David Millan
Original assignee: Vertex Pharma
Priority date: 2002-06-28
Filing date: 2003-06-27
Publication date: 2004-04-01
Also published as: EP1539701A1; KR20050013260A; MXPA05000069A; IL165986A0; US20090281128A1; PL374598A1; JP4616643B2; RU2005102094A; CA2493646A1; CN100503572C; AR040350A1; WO2004002961A1; JP2010143942A; JP2005533825A; BR0312232A; AU2003248758A1; CN1675184A; PE20040728A1; US8129381B2; US20040072850A1

Description

200404783 玖、發明說明：相關申請案之前後參照本申請案係請求2002年6月28日提出申請之美國臨時申請案60/392,592，與2002年12月20日提出申請之美國臨時申請案 60/435,073之權益，兩文件之全文係併於本文供參考。【發明所屬之技術領域】本發明係在醫藥化學之領域中，並關於化合物及其醫藥組合物，其係抑制會媒介細胞凋零與發炎之半胱天冬酶。本發明亦關於製備此等化合物之方法，及使用本發明之化合物與醫藥組合物以治療其中牽連半胱天冬酶活性之疾病之方法。1 【先前技術】細胞凋零或程式化細胞死亡，為生物體藉以消除不想要細胞之一種主要機制。細胞凋零之失調，無論是過度細胞凋零或未能進行之，係牽連多種疾病，譬如癌症、急性炎性與自身免疫病症、絕血性疾病及某些神經變性病症（一般性地參閱 Sd281，1283-1312 (1998); Ellis 等人，d肌办V· Ce//·及W.，7, 663 (1991))。半胱天冬酶為一種半胱胺酸蛋白酶族群，其係為關於細胞凋零與細胞分解之發出訊息途徑中之關鍵介體（Thomberry， C/zem. 5/〇/·，5, R97-8103 (1998))。此等發出訊息途徑係依細胞類型與刺激而改變，但所有細胞凋零途徑似乎會收斂在一個共同效應子途徑處，導致關键蛋白質之蛋白水解。半胱天冬酶係涉及發出訊息途徑之效應期，及在其引發處之更上 86389 200404783 游兩者。涉及引發事件之上游半胱天冬酶，會變成經活化，且依次使得涉及稍後細胞调零期之其他半胱天冬酶活化。半胱天冬酶-1為第一種經確認之半胱天冬酶，其亦被稱為間白血球活素轉化酶或”ICE”。半胱天冬酶]係藉由piL_M在 Asp-116與Ala-117間之專一分裂，使先質間白血球活素^ ^ ("PIL-M”）轉化成預發炎活性形式。除了半胱天冬酶_丨之外，亦有十一種其他已知人類半胱天冬酶，其全部均在天門冬胺醯基殘基處專一性地分裂。亦發現其具有對於至少四個胺基酸殘基在分裂位置之N-末端側上之嚴厲要求條件。半胱天冬酶已被分類成三個組群，依較佳或主要被辨識之胺基酸順序而定。包括半胱天冬酶丨、4、5及13之半胱天冬酶組群，已被証實較喜歡疏水性芳香系胺基酸類在分裂位置N-末端側上之位置4處。包括半胱天冬酶2、3及7之另一組群，係辨識出天門冬胺醯基殘基在分裂位置末端側上灸位置1與4兩處，且較佳為Asp-Glu-X_Asp之順序。包括半胱天冬酶6、8、9及1G之第三個組群，容許許多胺基酸在主要辨識順序中，但似乎較喜歡具有分枝狀脂族側鏈之殘基，譬如纈胺酸與白胺酸在位置4處。半胱天冬酶亦已根據其經察覺之功能作分類。第一亞族群包=半胱天冬酶·1(Κ：Ε)、4、5及13。此等半胱天冬酶已被証實係涉及預發炎細胞活素處理，且因此在發炎上扮演一項重要角色。半胱天冬酶]為此種類中最常被研究之酶，其係藉蛋白分解之分裂作$，使IL_1/?先質活化。因此，此酶在炎性回應、上，係扮演一項重要角&。半胱天冬酶心亦涉及 86389 200404783 干擾素-r謗發因子（igif)之處理，該因子會刺激干擾素τ之產生’其係為調制抗原呈現' Τ-細胞活化作用及細胞黏連之關鍵免疫調節劑。其餘半胱天冬酶係構成第二與第三亞族群。此等酶在導致細胞凋零之胞内發出訊息途徑中，具有中樞重要性。一種亞族群係包括在細胞凋零途徑中涉及引發事件之酶，該事件包括轉導來自漿膜之訊息。此亞族群之成員包括半胱天冬酶-2、8、9及10。另一亞族群，包括效應子半胱天冬酶3 、6及7 ’其係涉及最後下游分裂事件，其係藉由細胞凋零造成細胞之系統崩解與死亡。涉及上游訊息轉導之半胱天冬酶會使下游半胱天冬酶活化，然後其會使DNA修補機制無法使用’使DNA形成碎片，拆除細胞骨架，及最後使細胞形成碎片。主要由半胱天冬酶所辨識之四胺基酸順序之知識，已被用以設計半胱天冬酶抑制劑。可逆四肽抑制劑已被製成，具有結構 CH3C0_[P4]_[P3HP2]-CH(R)CH2C02H，其中 P2 至 P4 代表最適宜胺基酸辨識順序，且R為能夠結合至半胱天冬酶半胱胺酸氫硫基之駿、腈或酮。Rano與Thomberry，C/zem·所(?/· 4, 149-155 (1997) ; Mjalli 等人，所⑽3, 2689-2692 (1993); Nicholson等人，；Vaiwre 376, 37-43 (1995)。以類似四肽辨識順序為基礎之不可逆抑制劑已被製成，其中R為醯氧基甲基酮-COCH2 OCOR’。R’係以視情況經取代之苯基為例，譬如2,6-二氯笨甲醯氧基，且其中R為COCH2X，其中X為脫離基，譬如 F 或 C1。Thomberry 等人，7 33, 3934 (1994) ; Dolle 等人， 86389 200404783 JMed· Chem. 37, 563-564 (1994)。半胱天冬酶抑制劑治療多種與細胞凋零上之增加有關聯之哺乳動物疾病狀態之利用性，已使用肽性半胱天冬酶抑制劑証實。例如，在齧齒動物模式中，半胱天冬酶抑制劑已經t正實在心肌梗塞後，會降低梗塞大小，且抑制心肌細胞凋零，降低由於中風所造成之損傷體積與神經不足，降低外傷性腦部傷害中之外傷後細胞凋零與神經不足，有效用以治療電擊狀肝臟破壞，及在内毒素休克後改善之存活率。Yaoita 等人，CVrcw/油’洲，97, 276 (1998) ; Endres 等人，乂廢旋滅動與新陳代謝作用期刊（J Cerebral Blood Flow and Metabolism),沾， 238,（1998) ; Cheng 等人，C/z>z· /nv如·，101，1992 (1998) ; Yakovlev 等人，17, 7415 (1997) ; Rodriquez 等人，汉/·，184, 2067 (1996) ; Grobmyer 等人，Mo/· Α/βί/·，5, 585 (1999)。一般而言，上述肽性抑制劑針對一些半胱天冬酶係極有效。但是，此藥效未必總是反映在細胞凋零之細胞模式中。此外，肽抑制劑之特徵典型上為不期望之藥理學性質，譬如不良口腔吸收、不良安定性及迅速新陳代謝作用。Plattner 與 Norbeck，桌 # # 趨# 身，Clark 與 Moos 編著（Ellis Horwood， Chichester，England，1990)。在明瞭改良肽性半胱天冬酶抑制劑之藥理學性質之需求下，擬肽抑制劑已被報告。在此等抑制劑中，其中P3胺基酸已被3-胺基吡啶-2-酮與5-胺基嘧啶冬酮之衍生物取代之抑制劑，已受到極多注意（美國專利5,756,466 (Bemis等人）；Dolle等人，J· Med C/zem· 39, 2438,（1996); Golec 等人，所⑽巧· Μα/· CAem. 1^仏 7, 86389 200404783 2181，（1997) ; Semple 等人，所wg· Med CTzem· Z故· 7, 1337,（1997))，其係涉及一般結構如下之化合物：

其中Ri-f^及X為各種基團。

由於肽性抑制劑之固有問題，故仍需要小分子非肽半胱天冬酶抑制劑，其係為有效、安定，且會穿透細胞膜，以在活體内提供細胞凋零之有效抑制。此種化合物極端地可用於治療前文所提及之其中半胱天冬酶扮演一項角色之疾病上。WO 01/42216係揭示半胱天冬酶抑制劑及其用途。本發明係提供優於WO 01/42216揭示内容之一種選擇。【發明内容】本發明係提供式I化合物：

I

其中： X為CH或N ; Y為商基、三氟苯氧基或四氟基苯氧基； ^為^巧直鏈或分枝狀烷基； R3為氫、自基、〇CF3、CN或CF3 ;及 R4 為氫、鹵基、〇CF3、SR、CN、CF3、Ar 或 T-Ar ; 86389 -10- 200404783 其中： τ為0或s ; R為6直鏈或分枝狀烷基；

Ar為視情況被μ3個基團取代之苯環，取代基選自齒基、CH3、CF3、CN、OMe、〇CF3 及 NR5R6 ;且 R5與R6各獨立為只或。·6烷基，或^與尺6—起採用，形成5-7員環，視情況含有至高3個雜原子，選自〇、s、NH 及N(Cl-6烷基）；其條件是，當Y為鹵基時，則R3與R4不同時為氫。本明亦供醫樂組合物’及使用此種組合物以治療半胱天冬酶所媒介疾病之方法。發明詳述本發明係提供式I化合物：〇

其中： X為CH或Ν ; Υ為商基、三氟苯氧基或四氟基苯氧基； R2為C! _ 6直鍵或分枝狀燒基； R3 為氫、li 基、OCF3、CN 或 CF3 ;及 R4 為氫、函基、OCF3、SR、CN、CF3、Ar 或 T-Ar ; 其中： 86389 -11 - 200404783 丁為〇或S ; R為Q _ 6直鏈或分枝狀燒基；

Ar為視情況被丨-3個基團取代之苯環，取代基選自鹵基、 cn3、CF3、CN、OMe、OCF3 及 NR5R6 ;且 R與R6各獨立為H或Ci _6直鏈或分枝狀烷基，或R5與R6 一起採用，形成5-7員環，視情況含有至高3個雜原子，選自〇、S、NH及Ν((^-6-直鏈或分枝狀烷基）；其條件是，當Y為鹵基時，則圮與圮不同時為氫。於式I之另一項具體實施例中，R4為氫、_基、〇CF3、CN 、CF3或T-Ar ;其中τ、Ar及其他變數均如上文定義。本發明化合物係代表優於國際PCr公報w〇〇1/42216種屬之一種選擇，其全部揭示内容係併於本文。明確言之，本發明化合物具有抑制細胞凋零及/或抑制11-1 /3自活化細胞釋出之令人意外且令人驚訝之能力。根據較佳具體實施例，於式1中之R2為乙基、正-丙基或異丙基。根據更佳具體實施例根據較佳具體實施例根據較佳具體實施例氟基苯氧基。，於式1中之R2為乙基。，於式I中之R3為氫。，於式I中之Y為F、三氟苯氧基或四根據另一項較佳具體實施例， p3

本發明係提供式IA化合物：

〇 86389 -12- 200404783 其中： R2為乙基、正-丙基或異丙基，·且 R3與R4各獨立為氫、鹵基、OCF3、CN、CF3或Ar，其條件是R3與R4不同時為氫；

Ar為視情況被1-3個基團取代之苯環，取代基選自鹵基、、CF3、CN、〇Me、OCF3 及 NR5R6 ;且 R5與R6各獨立為Η或CV6直鏈或分枝狀烷基，或圮與” 一起採用，形成5-7員環，視情況含有至高3個雜原子，選自〇 ' S、NH及Ν((^_6-直鏈或分枝狀烷基）。根據式ΙΑ之另一項具體實施例，R3與R4各獨立為氫、_基、OCF3、CN或CF3，其條件是R3與R4不同時為氫；且仏2係如上文關於式ΙΑ之定義。根據較佳具體實施例，於式IΑ化合物中之R2為乙基。根據另一項較佳具體實施例，於式IA化合物中之R2為異丙基。根據較佳具體實施例，於式IA化合物中之R3為氫。根據較佳具體實施例，於式IA化合物中之R4為F、a、CN 、Ar 或 CF3 〇根據更佳具體實施例，於式ΙΑ化合物中之R4為α。根據另一項更佳具體實施例，於式ΙΑ化合物中之R4為CF3。根據另一項較佳具體實施例，於式IA化合物中之R3為氫，且 R4 為 F、Cl、CN、Ar 或 CF3。根據另一項較佳具體實施例，於式IA化合物中之R3為氫，且R4為α。 86389 -13- 200404783 根據另一項較佳具體實施例，於式ΙΑ化合物中之R3為氫，且R4為CF3。根據另一項較佳具體實施例，於式IA化合物中之R3為氫，且R4為Ar。根據另一項較佳具體實施例，本發明係提供式IB化合物：

其中： X為CH或N ; R2為乙基、正-丙基或異丙基； R3與R4各獨立為氫、鹵基、〇CF3、CN或CF3 ;及 Ar2為三氣苯基或四氣苯基。根據較佳具體實施例，於式IB化合物中之Ar2為2,3,5,6-四氟甘根據較佳具體實施例，於式ϋΒ化合物中之R2為乙基。根據較佳具體實施例，於式EB化合物中之X為CH。根據較佳具體實施例，於式IB化合物中之R3為氫。根據較佳具體實施例，於式®化合物中之R4為F、C1或CF3。根據更佳具體實施例，於式出化合物中之R4為C1。根據更佳具體實施例，於式®化合物中之R4為CF3。根據較佳具體實施例，於式IB化合物中之R3為氫，且R4為 F、C1 或 CF3。 86389 -14- 200404783 根據另一項較佳具體實施例，於式IB化合物中之Ar2為 2,3,5,6-四氟苯基，R3為氫，及R4為C1。根據另一項較佳具體實施例，本發明係提供式1C化合物：

其中： R2為乙基、正-丙基或異丙基； R3 為氫、_ 基、〇CF3、CN 或 CF3 ; R4 為鹵基、〇CF3CN、CF3、SR 或 T-Ar ; T為〇或s ; 汉為^^直鏈或分枝狀烷基； &為视情況被1-3個基團取代之苯環，取代基選自鹵基、ch3 、CF3、CN、OMe、OCF3 及 NR5R6 ;且 R5與R6各獨立為H或Ci-6直鏈或分枝狀烷基，或R5與R6 — 起採用，形成5-7員環，視情況含有至高3個雜原子，選自〇、S、NH及NCCy直鏈或分枝狀烷基）。根據式1C化合物之較佳具體實施例，圮為丁-^; 根據較佳具體實施例，於式1C化合物中之R2為乙基。根據較佳具體實施例，於式1C化合物中之R3為氫。根據較佳具體實施例，於式1C化合物中之R4為F、Cl、CN 或 CF3 〇 86389 -15- 200404783 根據更佳具體實施例，於式1C化合物中之R4為Cl 根據較佳具體實施例，於式1C化合物中之τ為〇。則视情根據較佳具體實施例，若Ar存在於式1C化合物中況被CFS或鹵基（鹵基較佳為氯基或氟基）取代。或6個於本文中使用之，，(：卜6”，係表示有i、2、3、4、碳原子（或對其作取代之選用雜原子）存在。選自下根據更佳具體貫施例，本發明係提供式〗化合物表1 :

7 Η Η

Et 2,3,5,6_四氟基苯氧基 2,3,5,6-四氟基苯氧基 2,4,6-三氟基苯氧基 Η Η

Et 2,3,6-三氟基苯氧基

86389 -16- 200404783

實例 R4 R3 R2 Y X 9 Η Η Et 2,3,5,6-四氟基苯氧基 CH 10 Cl Η Et 2,3,5,6-四氟基苯氧基 CH 11 Cl Cl Et 2,3,5,6-四氟基苯氧基 CH 12 2-氯- 苯氧基 Η Et F N 13 3-氯- 苯氧基 Η Et F N 14 3-氟- 苯氧基 Η Et F N 15 2,4,二氯- 苯氧基 Η Et F N 16 苯基硫基 Η Et F N 17 3-氣苯基硫基 Η Et F N 18 C1 Η i-Pr F CH 19 cf3 Η Et 2,3,5,6-四氟基苯氧基 CH 20 cf3 Η Et 2,3,5,6-四氣基苯氧基 N 21 苯基 Η Et F CH 22 S (n-Pr) Η Et F N 根據另一項具體實施例，本發明係提供一種醫藥組合物，其包含： a) 如上文定義之式I化合物或其藥學上可接受之鹽；與 b) 藥學上可接受之載劑、佐劑或媒劑。

86389 -17- 200404783 根據較佳具體實施例，本發明之醫藥組合物包含·· a) 式IA、式IB或式1C化合物；與 b) 藥學上可接受之載劑、佐劑或媒劑。根據更佳具體實施例，本發明之醫藥組合物係包含選自上表1之化合物。本發明化合物可以無論是開環形式1或環化半縮酮形式2 ，存在於溶液中。於本文中任一種異構形式之表示圖，係兩包括另一種。

形式2 熟諳此藝者將明瞭的是，本發明之某些化合物可以互變里構形式或水合形式存在，化合物之所有此種形式均在本發明之範圍内。除非另有述及，否則本文中所描繪之結構，亦意欲包括此結構之所有立體化學形式；意即對各不對稱中心之R與S組態。因此，本發明化合物之單—立體化學昱構物以及對掌異構物與非對映異構物混合物，均在本發明之範圍内。除非另有述 •， …、、苛〈释稱，意欲包括其差異僅在一或多個同位素上富含原子存在與之化合物。例如，具有本發明結構，惟一個氫被i或氚換，或一個碳被13C_或14C-富含碳置換之化合物，係在本明之範圍内。 1 關於類似化合本發明化合物可一般性地藉熟諳此藝者已知 86389 -18- 200404783 物之方法製成。本發明化合物之合成途徑係一般性地描述於WO 01/42216中。為達說明之目的，係提供關於本發明化合物合成之下文圖式I-IV。

圖式I

試劑=⑻ EDC/DMAP/HOBt/THF; (b) Dess-Martin 過碘烷；（c) TFA/DCM 在上文圖式I中，係使用下列縮寫：EDC為1-(3-二甲胺基丙基）-3-乙基碳化二亞胺；HOBt為1-羥基苯并三唑；THF為四氫呋喃；TFA為三氟醋酸；DCM為二氯甲烷；DMAP為4-二甲胺基吡啶。使酸A偶合至胺基醇B，獲得醯胺C。使化合物 C中之羥基氧化，獲得酮，接著是第三丁基酯之酸水解，而得Γ，為自由態酸。在氟基甲基酮類之情況中，其中CH2 Y為CH2F，胺基醇B 可根據Revesz等人，L批35, 9693 (1994)之方法獲得。在氟取代之苯氧基酮類之情況中，其中CH2 Y中之Y為2,3,5,6-四氟基苯氧基、2,4,6-三氟苯氧基或2,3,6-三氟苯氧基，胺基 86389 -19- 200404783 醇B可藉由類似Semple ψ A ? Bioorganic and Medicinal Chemistry L故7, 1337 (1997)之方法獲得（圖式II)。圖式II 〇

〇〇 i^^Ot-Bu 人 Ν^^γ^ΟΑΓ2

Η Ο E 〇 |^SDt-Bu

J^Y^^OAr2 ^ OH

F 試劑=(a)KF/DMF/Ar2OH ； (b)NaBH4/THF ； (c) H2/Pd/C/MeOH 在上文圖式II中，係使用下列縮寫：KF為氟化鉀；DMF為 N，N-二甲基甲醯胺；Ar2OH為無論是2,3,5,6-四氟基酚、2,4,6-三氟齡或2,3,6-三氟齡；THF為四氫吹喃；MeOH為甲醇。使市購可得之溴基酮D與經適當取代之氟基酚及氟化鉀反應，獲得苯氧基酮E。然後，以硼氫化鈉使該酮還原，而得醇F ，使用鈀/碳作為觸媒，使其氫化，獲得胺基醇B’（Ar2=氟基取代之苯基）。

圖式III

86389 -20- 200404783 試劑:(a)加熱；⑻濃 HCl/IPA ; (c) TFA/DCM 在上文圖式III中，係使用下列縮寫：IPA為異丙醇；TFA 為三氟醋酸，及DCM為二氯甲烷。異喹啉-1-酮酸衍生物（在式I中，X=C)可使用圖式III中所示之合成順序，以對掌性形式製成。起始異香豆素G係藉由類似Narasimhan等人，合成， 797 (1975)與 Margaretha 等人，56, 6763 (2000)之方法製成，除非另有述及。首先，將異香豆素G與市購可得之⑸-2-胺基丁酸第三-丁酯一起加熱。使所形成之化合物與濃鹽酸，在異丙醇中反應，獲得異喹啉-1-酮第三-丁酯，使用三氟醋酸，使其去除保護，以提供酸Η。然後，使此酸偶合至胺基醇Β (圖式I)。

圖式IV

試劑·· (a) Li0H/THF/H20 ; (b) (S)-2-胺基丁酸第三-丁酯 / EDC / 86389 -21 - 200404783 HOBt / DMAP / THF ; (c) SnCl2/MeOH ;⑹原甲酸三甲酯 / Ac〇h / 回流；（e)TFA/DCM ; (f)R4-TH/K2C03/DMF. 在上文圖式IV中，係使用下列縮寫：AcOH為醋酸，而R4-TH 可為2-氯紛、3-氯酚、3-氟酚或2,4-二氯酚或硫酚或3-氟硫酿。（4-酮基-4H·喹唑啉-3-基）酸衍生物A(X=N)係使用類似 Makino等人，办n/故，认167〇 (2〇〇〇)之方法，以對掌性形式製成。使用氫氧化鋰，使市購可得之5_氯基冬硝基苯甲酸甲酯j 水解成酸，並使所形成之酸偶合至市購可得之⑸4胺基丁酸第三-丁酯，獲得醯胺Κ。硝基使用氯化鍚（Π)之還原，接著是以原甲酸三甲酯之酸催化環縮合作用，獲得ρ奎唑琳，以三氟醋酸使其去除保護，而得4-酮基_411_喳唑啉各基酸L。然後’使此酸偶合至胺基醇Β (圖式乃。或者，5_氯基冬硝基笨甲酸甲酯J可經由與碳酸鉀在DMF中加熱，而與經適當取代之驗或硫紛反應，獲得其相應之6_苯氧基（γ=〇)或苯基硫基（y=s)衍生物。以氫氧化鋰處理，獲得酸Μ，其可進一步精巧地進行（圖式IV，步驟b_e)，而得4_酮基_4Η_喹唑啉_3•基酸Ν ’然後按前文所述’使其偶合至胺基醇β。2-硝基苯甲酸亦可以類似方式精巧地進行，獲得未經取代之冬酮基 pr奎嗤琳-3-基酸。因此，本發明之一方面係關於製備式〗化合物之一般方法，其包括以下步驟：使式II酸或酸衍生物， 86389 -22- 200404783 R、

R 〇

工工與式B胺基醇反應，以提供式1；[1化合物，

OH B

〇

工工工；

OR7

Y 中；R7為適當保護基，且具體實施例中所述者。適 (參閱，例如，，有機合成之使中間物III轉化成化合物I，其 Y、X、R2、R3及R4均如本文任何當保護基係為熟練執行者所已知保護基”第三版，Greene，T_W·與Wuts，RG·編著，J〇hn別㈣& s⑽， New York: 1999，其全部内容係據此併於本文供參考）。^較佳為Q _6直鏈或分枝狀院基。R7更佳為第三·丁基可使式II化合物與式B化合物在關於使胺基化合物與酸化合物偶合之任何條件下反應。此種條件係為熟練執行者所習知。較佳偶合條件係為本文圖式與實例中所述者。可使式III化合物’在關於使輕基轉化成羰基，及使經保護酸轉化成自由態酸之任何條件下，轉化成式I化合物。此種條件係為熟練執行者所習知。關於從羥基製備羰基之較佳條件，係為本文圖式與實例中所述之氧化條件。關於使經保護酸去除保護之較佳條件，當R7為第三-丁基時，係為本文圖式與實例中所述之水解條件。 86389 -23- 200404783 此万法特別可用於製備本發明之對掌性化合物，其中帶有 R取代基 < 奴係為立體化學上富含的。如下文所舉例（參閱 U噙男例1-22)，式π中間物酸或酸衍生物可以對掌性形式獲得。此處係說明喹唑啉冰酮，其中χ為氮（參閱，例如實例5 8 12-18、20及22)，與異喹啉小酮，其中X為CH (參閱 ’例如實例1_4、9_U、19及21)。II與B之偶合以提供！π，可根據任何適當方法進行。使冚轉化以提供τ，可如本文中所述或根據熟諳此藝者所熟悉之其他方法進行。 II之某些對掌性中間物可用於製備本發明化合物之方法中。此等中間物係以化合物ΙΙΑ表示：

：ΌΗ Ί 〇

其中X、R2、R3及R4均如本文任何具體實施例中所述者。根據關於式II與IIA化合物之更佳具體實施例，R2為乙基^ 異丙基。本發明化合物可被檢測其直接抑制細胞凋零、正-丨占釋^ 或半胱天冬酶活性之能力。關於各活性之檢測係為此項才: 邊中已知的’且係洋細地描述於下文眚例23_25中。若本發明化合物之藥學上可接受之鹽類被利用於此等組^ 物中，則此等鹽較佳係衍生自無機或有機酸類與鹼類。爸含在此種酸鹽之中者’係為下列：醋酸鹽、己二酸鹽'$ 藻酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、酸性硫酸屋 86389 -2仁 200404783 丁酸鹽、棹棣酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡萄糖酸鹽、十二基硫酸鹽、乙烷磺酸鹽、反丁 ^故鹽、葡萄糖庚酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2_羥基乙烷磺酸鹽、礼酸鹽、順丁烯二酸鹽、〒烷磺酸鹽、2_萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酯酸鹽、過硫酸鹽、3:苯基-丙酸鹽、苦味酸鹽、2甲基醋酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽及十一烷酸鹽鹼鹽，包括銨鹽，鹼金屬鹽，譬如鈉與鉀鹽，鹼土金屬 ^ g如舞與鍰鹽，與有機驗之鹽，譬如二環己基胺鹽、N- 甲基D葡萄糖胺鹽，以及與胺基酸譬如精胺酸、離胺酸之鹽，等等。驗:生含氮基團亦可以作用劑四級化，譬如低碳烷基鹵化物 -噙甲基〔基、丙基及丁基之氯化物、溴化物及碘化物；二規基硫酸鹽，譬如二甲基、二乙基、二丁基及二戊基硫酸鹽，長鏈齒化物，譬如癸基、月桂基、肉豆蔻基及 =脂基^氯化物、溴化物及破化物，芳燒㈣化物，譬如下基與冬乙基溴化物及其他。於是獲得水或油可溶性或可分散性產物。使用於本發明組合物與方法中之化合物，亦可經由附加適當耳能基而被修正，以加強選擇性生物學性質。此種修正 “此項技藝中已知的’且包括增加生物產品穿透至特定生物系統中（例如血潘、、城pj玄# 淋巴系、尤、中樞神經系統）、增加口服可利用性、增加溶解度以允許藉由注射投藥、改變新

86389 200404783 陳代謝作用及改變排泄速率。、人可用於此寺組合物中之藥學上可接受之載劑，包括但不限万、^子父換劑、氧化銘、硬脂酸銘、卵鱗脂，血清蛋白質 ::如亡類血清白蛋白，緩衝物質，譬如磷酸鹽、甘胺酸人化楸fe、花楸酸卸、飽和植物脂防酸類之部份甘油醋混口物、水、鹽或電解質，譬如魚精蛋白硫酸鹽、磷酸氫二鋼/粦酸氫钾、氯化鈉、鋅鹽、膠態三氧切、三石夕酸鎂、二聚乙晞基四氫吡咯酮、以纖維素為基料之物質、聚乙二醇叙甲基纖維素鈉、聚丙婦酸酉旨、壞類、聚乙缔-聚氧化丙烯-嵌段聚合體、聚乙二醇及羊毛脂。一根據較佳具體實施例，本發明之組合物係經調配，以供醫藥上投予哺乳動物，較佳為人類。、㊉本發明之此種醫藥組合物可以口服、非經腸、藉由吸入噴務、局邵、直腸、#、頰部、陰道或經由植入儲器投藥。於本文中使用之”非經腸"-詞，包括皮下、靜脈内、肌内、關節内、滑膜内、胸骨内如 ^内椎賞内、肝内、病灶内及顱内注射或灌注技術。組合物較佳係以口服方式或靜脈内方式投藥。本發明組合物之益菌可译私π』 ”，、囷了 /王射形式可為水性或油性懸浮液。此等懸浮液可根據此項技藝中已知之技術，使用適當分散或潤濕劑及懸浮劑調配而成。無菌可注射製劑亦可為益主性非經腸上可接受之稀釋劑或溶劑中之無菌可注射溶^ 懸浮液，例如在U-丁二醇中作成溶液。其中可採用之可接雙媒劑與溶劑，係為水、林格氏溶液及等渗氯化鈉溶液。 86389 -26- 200404783 此外，習用上係採用無菌不揮發油作為溶劑或懸浮媒質。對此項目的而t ’任何溫和之不揮發油均可採用，包括人成甘油單-或二-酿。脂肪酸類，譬如油酸及其甘油酷衍1 物，可用於製備可注射劑，其係為天然藥學上可接受之油類二譬如橄欖油或蓖麻油，尤其是呈其聚氧乙基化變型。此寺油溶液或懸浮液亦可含有長鏈醇稀釋劑或分散劑，孽如羧甲基纖維素’ 4常用於藥學上可接受劑量形式之配；中之類似分散劑’包括乳化液與懸浮液。其他常用界面活

性劑，譬如Wn、Span，及常用於製造藥學上可接受之固體、液體或其他劑量形式之其他乳化劑或生物利用率增強劑’亦可用於調配目的。

本發明之醫藥組合物可以任何口服上可接受之劑量形式口投予’包括但不㈣膠囊、片劑、含水懸浮液或溶液在供口服利用之片劑情況中，常用之載劑包括乳糖與玉 «。典型上亦添加潤滑劑’譬如硬脂酸鎂。對於以膠形式供口服投藥而言，可使用之稀釋劑包括乳糖與乾燥玉米殿粉。當需要含水懸浮液以供口服使用時，係將活成份與乳化及懸浮劑合併。若需要，亦可添加某些增甜矯味或著色劑。或者，本發明之醫藥組八物一木、、且口物可以供直腸投藥之栓劑形式樂。其可經由將藥劑盘適合益制，、通田操刺激性賦形劑混合而製成其在室溫下為固體，但在直腸溫度下為液體，因此將溶直腸中謂出樂物。此種物質包括可可豆脂、蜂蠕聚乙二醇。 86389 -27- 200404783 本發明之醫藥組合物亦可以局部方式投藥，尤其是當治療標的包括可容易地藉由局部塗敷接近之區域或器官時，包括眼晴、皮膚或下方腸迢之疾病。適當局部配方係容易地針對各此等區域或器官製成。供下方腸道用之局部塗敷，可以直腸栓劑配方（參閱上文）或以適當灌腸劑配方達成。亦可使用局部經皮貼藥。對局部應用而言，可將醫藥組合物調配在適當軟膏中，其含有被懸浮或溶解於一或多種載劑中之活性成份。供本發明化合物局邵投藥用之載劑，包括但不限於礦油、液體石蠟油、白色石蠟油、丙二醇、聚氧化乙缔、聚氧化丙晞化合物、乳化用蠟及水。或者，可將醫藥組合物調配在適當洗劑或乳膏中，其含有被懸浮或溶於一或多種藥學上可接雙載劑中之活性成份。適當載劑，包括但不限於礦油、單硬脂酸花楸聚糖酯、聚花楸酸義、料基㈣、絲犧硬脂基醇、2-辛基十二醇、苄醇及水。對眼科用途而言，醫藥組合物可被調配成在等滲、經pH 調整之無菌鹽水中之微粉化懸浮》，或較佳為在等渗、經阳調整，無菌鹽水中之溶液’無論是具有或未具有防腐劑，譬如氯化苄烷氧銨。或者，對眼科用途而言，可將醫藥組合物調配在軟膏中，譬如石蠟油。本發明之醫藥组合物亦可藉由鼻氣溶膠或吸入投藥。此種组合物係才艮據醫藥調配技藝中戶斤習知之技術製&，且可採用羊醇或其他適當防腐劑、為加強生物制率之吸收促進劑、氟石炭類及/或其他習用促溶或分散劑，被製成在鹽水中 86389 -28 - 200404783 之溶液。係制可料治㈣时，其㈣祕所媒 ^疾病、細胞;周零所媒介疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病、破壞性骨頭病症、增生病症、傳染病、變性疾病、與細胞死：有關聯之疾病、過量飲食醇攝入疾病、病毒所媒介疾病、視網膜病症、薪老替一 - 关两鉦匍匈艇炎、炎性腹膜炎、骨關節炎、胰腺炎、氣嗔、成人呼吸困難徵候簇、絲球體性腎炎、風濕性關節炎、令身祕々、占士人王身性紅斑狼瘡、硬皮病、慢性甲狀腺炎、格雷武司氏症、自身免疫胃炎、糖尿病、自身免疫溶血性貧血、自身免疫嗜中性白血球減少症、血小板減少症、慢性活性肝炎、重症肌無力、炎性腸疾病、克隆氏病、牛皮癖、異位性皮炎、傷痕、移植物對宿主疾病、器官移植排斥、燒傷後之器官細胞凋零、骨質疏鬆症 '白血病及相關病症、脊髓發育不良徵候簇、多發性骨髓瘤相關骨頭病症、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、轉移性黑色素瘤、卡波西氏肉瘤、多發性骨髓瘤、出血性休克、敗血病、敗血性休克、灼傷、志賀桿菌病、阿耳滋海默氏疾病、巴金生氏病、亨丁頓氏疾病、Kennedy氏疾病、Prion疾病、大腦絕血、癲癇、心肌絕血、急性與慢性心臟疾病、心肌梗塞、鬱血性心衰竭、動脈粥瘤硬化、琴狀動脈分流

移植、脊柱肌肉萎縮、肌萎縮性側索硬化、多發性硬化、HIV 相關之腦炎、老化、禿髮、由於中風所致之神經病傷害、潰瘍性結腸炎、外傷性腦部傷害、脊髓損傷、肝炎_B、肝炎-C、肝炎-G、黃熱病、革登熱或日本腦炎、各種形式之 86389 -29- 200404783 =、腎病、多囊腎臟疾病、與幽門螺旋桿菌有關聯興十-指腸潰瘍疾病、mv感染、結核病，治療各種n 癌症 '器官衰竭及腦膜炎之免疫療法。此化合物與租：：亦可用於治療與冠狀動脈分流移植有關聯之併發症。化八物存在於上述組合物中之量，當藉由此項技藝中已知: 何檢測以時，應足以造成疾病之嚴錄或半胱天冬酶活性及/或細胞細胞凋零上之可測得降低。根據另-項具體實施例’本發明組合物可進一步包含另— 種治療劑。此種藥劑包括但不限於溶解血栓劑，譬：組織血纖維蛋白溶酶原活化劑與鏈激酶。當使用第二種藥劑= ’第二種藥劑可無論是以個別劑量形式，或以具有本:明化合物或組合物之單一為|景带々士、早釗里形式又一邵份投藥。化合物與另一種藥劑，兩者應以1〇至1〇〇%間之劑量程度存在，且更佳為通$在單—治療服用法中投予之劑量之約⑺至嶋之間。亦尤明瞭的疋，對於任何特定病患之特定劑量與治療服用法，係依多種因素而^，包括所採用特定化合物之活性、年齡、If、一般健康狀態、性別、飲食、投藥時間、排 ;世速率、樂物組合及治療醫師之判斷，以及被治療特定疾病《厭重性。活性成份之量亦依組合物中之特定化合物及其他治療劑（若存在時）而定。 ^某些具體實施例中，本發明化合物可以口服方式或以非、工腸方式在劑I程度為每天約〇·〇1毫克/公斤至約5〇毫克 / A斤且車乂佳為約i毫克/公斤至約25毫克/公斤病患體重下’-天投藥-或多；欠’以獲得所要之治療效果。 86389 -30- 200404783 在頁較佳具體貫施例中，本發明係提供一種治療具有其中一個别文所提及疾病之哺乳動物之方法，其包括對該哺乳動物投予上述藥學上可接受組合物之步驟。在此具體實施例中’若病患亦被投予另一種治療劑或半胱天冬酶抑制劑，則其可與本發明化合物一起，以單一劑量形式或以個別劑量形式傳輸。當以個別劑量形式投予時，另一種半胱天冬酶抑制劑或藥劑可在投予包含本發明化合物之藥學上可接受之組合物之前、同時或之後投藥。本發明化合物或其藥學上可接受之組合物，亦可掺入供塗覆可植入醫療裝置用之組合物中，譬如假器、人造瓣膜、血管移植物、支架及導管。因此，於另一方面，本發明係包括一種供塗覆可植入裝置用之組合物，其包含如上文一般性地及在本文種類與亞組中描述之本發明化合物，與適用於&覆該可植入裝置之載劑。於又另一方面，本發明包括已塗覆組合物之可植入裝置，該組合物包含如上文一般性地及在本文種類與亞組中描述之本發明化合物，與適用於塗覆該可植入裝置之載劑。本發明之另一方面係關於在生物試樣或病患中抑制半胱天冬酶活性’此方法包括對該病患投予或使該生物試樣接觸式I化合物，或包含該化合物之組合物。於本文中使用之，，生物試樣’’ 一詞，係包括但不限於細胞培養物或其萃取物；仔自哺乳動物或其萃取物之活體組織檢查物質；及血液、唾液、尿液、糞便、精液、眼淚或其他體液或其萃取物。半胱天冬酶活性在生物試樣中之抑制可用於熟諳此藝者已 21Θ- 86389 -31 - 200404783 知之多種目的。此種目的之實例，包括但不限於輸血、器官移植、生物學試樣儲存及生物學檢測。本發明化合物可用於保存細胞（譬如可能為器官移植所需要）或保存血液產物之方法中。關於半胱天冬酶抑制劑之類似用途，已被報告（Schierle等人，倫如re施咖/狀，5, 97 (1999))。此方法係涉及處理欲被以包含半耽天冬酶抑制劑之溶液保存之細胞或組織。所需要之半胱天冬酶抑制劑之量，係依對特定細胞類型之抑制劑之有效性’及保存細胞免於細胞调零之細胞死亡所需要之時間長度而定。解，故提出下文製備與測試實例，而非欲被解釋為以任何方式限為使本發明更充分地被瞭。此等實例僅為說明目的制本發明之範圍。【實施方式】 ⑻-3-「2-(7-氯基小酮& 基-戍酸實例1 -1H-異 4

方法A : jiJIL基-2 (2-甲氧基乙烯基笨甲酸

〇 86389 -32· 200404783 於氯化甲氧基甲基三苯基鱗（39克）在乙醚（200毫升）與第三 -丁醇（50毫升）混合物中之經冷卻（〇°c )漿液内，分次添加第三-丁醇鉀（12.8克）。將所形成之混合物於0°C下攪拌1小時，然後於15分鐘内，逐滴添加2-甲醯基-5-氯苯甲酸（按Org. aem. 61，3402 (1996)中所述製成）（1〇克）在乙醚（50毫升）中之溶液。將所形成之混合物在〇°C下攪拌1小時，然後溫熱至環境溫度 ’並再攪拌90分鐘。以水（200毫升）稀釋此混合物，並移除有機相。以1M HC1使水相酸化至pH 1，並以醋酸乙酯（3x50毫升）萃取。將合併之萃液以鹽水洗滌，脫水乾燥（硫酸鍰），過濾，及濃縮。使殘留物藉急驟式層析純化（50%醋酸乙酯 /己烷），而得次標題化合物，為黃色固體（9.13克，80% )。 1H NMR (400 MHz, CDC13) 5 3·70-3·81 (3H，s)，6·20 (0.3H，d，順式烯烴）， 6·30 (0.3H，d，順式稀烴），6.80 (0·7Η，d，反式烯烴），7.01 (0·7Η，d，反式稀烴），7·30-8·15 (3H，m) ppm· 方法B : 7-氯-異啖埽小酮

〇於〇°C下，將濃硫酸（15毫升）添加至5-氯基-2 (2-甲氧基乙烯基）-苯甲酸（4.43克）中。將混合物攪拌2小時，然後以冰/水稀釋。以醋酸乙酯（3x15毫升）萃取產物，並將合併之萃液以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌。使溶液脫水乾燥（硫酸鑊），過漉，及濃縮。使殘留物藉急騾式層析純化（0-5%醋酸乙酯/己烷），而得次標題化合物，為白色固體（3.04克，81% )。熔點 86389 -33- 200404783 109.8-110.9°C 〇1HNMR(400MHz?CDC13) 5 6.51 (1H? d)5 7.28-7.32 (1H5 m), 7.41 (1H，d)，7.64-7.70 (1H，m)，8·28 (1H，m) ppm· 方法C : 弟二-丁氣羧基-丙月安基）-7-鼠基-1-酉同基-3,4-二胤-1H-共 ♦ U-基1-丁酸第芏·丁酯

將7-氯-異咣晞小酮（1〇克）與（s)-2-胺基丁酸第三丁酯（22克）之混合物，於85°C下，加熱24小時。然後，使混合物冷卻，並藉急·驟式層析純化（5-25%醋酸乙酯/己烷），而得次標題化合物，為黃色油（17.1 克，64%)。iHNMRGOOMHACDCU) 5 0.68-1.32 (6H，m)，1·50 (21H，m)，1·92 (1H，m)，2·15 (1H，m)，2.82-3.40 (3H， m)，4·41 (1H，m)，4·68 (1H，m)，7.11 (1H，m)，7.35-7.52 (1H，m)，8·05 (1H，m) ppm. 方法D : ⑻-2-(7-氣基-1-嗣基-1H-異邊淋-2-基V丁酸第三丁酉旨

於2-[3-(1-第三-丁氧羰基-丙胺基）-7-氯基-1-酮基-3,4-二氫-1H-異p奎17林-2-基]-丁酸第三-丁酯（8.58克）在異丙醇（180毫升）中之經攪拌溶液内，在0°C下，添加濃鹽酸（2〇毫升）。使所形成之混合物溫熱至室溫，並攪拌18小時。然後，以醋酸乙酯（500 86389 -34- 200404783 毫升）與水（150毫升）稀釋混合物。分離有機相，並以水，接著以鹽水洗滌，脫水乾燥（硫酸鎂），過滤，及濃縮。獲得次標題產物，為黃色固體（5.57克，97% )。熔點111.3-111.8°C ; [a]25D-52.3°(c=l?CHCl3) ； IR(固體）1731.4, 1649.5, 1593.2, 1229.6, 1152.8, 901·9 公分-1; 1H NMR (400 MHz，CDC13) 6 〇·95 (3H，t)，1.48 (9H， s)，1.95 (1H，m)，2·30 (1H，m)，5·55 (1H，m)，6.40 (1H，m)，7·15 (1H，m)，7.49 (1H，m)，7·61 (1H，m)，8·40 (1H，m) ppm ; 13 C NMR (100 MHz，CDC13) 5 10.9, 24,85 28.1，59·2, 82,8, 105.7, 127.3, 127.8, 128.1，129.5, 133.1，133.2， 135.4, 161.8, 170.2 ; MS ES (+) 322.4 (M+H)· 方法E : (S)-2-(7_氯某小酮基-1H_異崦啉-2-某V丁酸

使（S)-2-(7-氯基-1-酮基_1H_異喳啉-2_基）-丁酸第三-丁酯（322毫克）在二氯甲烷（14毫升）中之溶液，冷卻至0°C。添加三氟醋酸（3.5晕升），並使所形成之混合物溫熱至室溫，及授拌2小時。然後，在減壓下濃縮混合物，並使殘留物再溶於二氯甲烷中。將此程序重複數次，以移除過量三氟醋酸。將所形成之固體在乙醚中配成漿液，過滤，並以更多乙醚洗務。接著，使固體於真空下乾燥至恒重。這獲得次標題產物 ’為白色固體（236 毫克，89% )。熔點 159·6-160·Γ(： ; [a]24D-47.0〇 (c=1.01，CHC13) ; IR(固體）1731.4, 1639.3, 1577.8, 1209.1，1168.1 公分-1 ;1H NMR (400 MHz，d6 -DMSO) δ 0·82 (3H，t)，2.00-2.25 (2H，m)，5·20 (1H， m)，6·70 (1H，d)，7_49 (1H，d)，7.70-7.81 (2H，m)，8.18 (1H，s) ppm; 13 C NMR 86389 -35- 200404783 (100 MHz，d6-DMSO) 510.8, 22·7, 60.8, 104.9, 126·5, 126.6, 128.8, 131.6， 132.5, 133·1，135.8, 160.5, 171.7 ; MS ES (+) 266.27 (M+H). 方法F : (g)_3-「2-(7-氯基小酮某-1H-異4:啉_2-基V丁醯某胺基1-5-氟基士幾基-戊酸第三-丁酯

使（S)-2-(7_氯基小酮基-1H-異喳啉-2-基）-丁酸（15克）、3-胺基-5-敦基-4-#呈基-戊酸第三-丁酯（按L批35, 9693 (1994)中所述製成）（12.9 克）、HOBt(8.4克）、DMAP(7.2 克）及THF(450 毫升）之經攪拌混合物，冷卻至〇°C，然後添加EDC(11.9克）。於 16小時期間，使混合物溫熱至室溫，接著在減壓下濃縮。使殘留物藉急騾式層析純化（30-60%醋酸乙酯/己烷），而得次標題化合物，為白色泡沫物（24.6克，96% )。iHNMR^OO MHz， CDCl3)5 0.92(3H，m)，1.13-1.50(9H，m)，1.95(lH，m)，2.25(lH，m)，2.45-2·78 (2H，m)，3.68-4.60 (5H，m)，5.50 (1H，m)，6·60 (1H，m)，7.21-7.60 (4H，m)， 8.20-8.31 (1H，m) ppm ; 19 F NMR (376 MHz，CDC13)(質子去偶合）5 -229·6, ·229·7, _230·5, -230.6. 方法G : (SV3-「2-(7-氯基小酮基-1Η-Ι 4啉-2-基）-丁醯基胺基1_5-氤某冰酮基戊酸第三-丁酉旨

〇〇 CI* 86389 -36- 200404783 於〇°C下，將3-[2-(7-氯基小酮基-1H-異喹啉冬基）_丁酸基胺基 ]-5-氟基-4-¾基-戊酸第三-丁酯（47.8克）在無水dcm (1.2升）中之經攪拌溶液，以1，U-三乙醯氧基-1，1·二氫-1，苯并碘氧伍圜-3(1H)_S同（53.5克）處理。將所形成之混合物在〇。〇下保持2小時，以醋酸乙酯稀釋，然後倒入碳酸氫鈉飽和水溶液與硫代硫酸鋼飽和水溶液之1 ·· 1混合物中。移除有機層，並將水層以醋酸乙酯再萃取。使合併之有機萃液脫水乾燥（硫酸鎂），過濾，及濃縮。使殘留物藉急·驟式層析純化（20-40%醋酸乙酯/己燒），而得次標題化合物，為白色固體（41.9克，88 % )。1H NMR (400 MHz，CDC13) 5 1.00 (3H，t)，1.29 (5H，s)，1.41 (4H，s)， 2.01 (1H，m)，2.29 (1H，m)，2.61-3.05 (2H5 m)，4.77 (3H，m)，5.50 (1H, m)，6·60 (1H，m)，7·20-7·34 (2H，m)，7·51 (1H，m)，7·62 (1H，m)，8·41 (1H，m) ppm ; 19 F NMR (376 MHz，CDC13)(質子去偶合）5 -231.89, -232.30· ⑸-3_「2-(7·氯基-1-酮基-1H-異邊淋·2·基V丁酸基胺基1-5-氟基-4-酮基-戊酸

其係使用類似方法Ε中所述之程序製成。分離產物，為白色固體（98% )。IR (固體）1782_7, 1741.7, 1644.4, 1593.2, 1536.8, 1209.1， 1168·1，1055·5,840·4 公分―1 ; iHNMRGOOMHA^-DMSCOcJO.SSpH， m)，1.81-2.25 (2H，m)，2.25-3.11 (2H，m)，4.15-5.60 (4H，m)，6.70 (1H，m)， 7·55 (1H，m)，7·78 (2H，m)，8.15 (1H，s)，8.35-9.00 (1H，brm) ppm ; 13 C NMR (100 MHz，d6-DMSO) 5 10.6, 23.0, 24.0, 24.6, 32.9, 34.6, 34.7, 47.7, 52.2， 200404783 52.3, 58.2, 58.23, 58.7, 59.1，83.4, 83_5, 85.2, 85.3, 103.9, 104.5, 104.7, 104.8, 126.5, 126.6, 128.8, 131.3, 131.4, 131” 133.1，135.7, 135.73, 160.8, 170.2， 170.3, 170.4, 172.0, 173·1，202.6, 202.7 ; 19FNMR (376 MHz，d6-DMSO) (質子去偶合）5 -226.70, -226.75, -227.51，-230.5, -231.16, -232.61， -232.67, -233.37 ； MS ES (-) 395.33 (M-H). 實例2 (SV342-(7-三氟甲基小酮某-1H-異4啉-2-基V丁醯基胺基1-5•氣某 -4-酉同基-戍酸

其係使用類似方法A-G中所述之程序製成（2-甲醯基-5-三氟甲基苯甲酸係使用類似J· Og. CAem. 61，3402 (1996)中所述之程序製成）。分離產物，為白色固體（93%，最後步騾）。IR(固體）1782.6, 1746_8, 1644.4, 1629.0, 1603.4, 1321.8, 1275.7, 1168.1，1127.2， 927·5 公分—1 ; 1H NMR (400 MHz，d6 -DMS0) 6 0·82 (3H，m)，1.85-2.21 (2H，m)，2.35-3.21 (2H，m)，4.20-5.75 (4H，m)，6·80 (1H，m)，7·68 (1H，m)， 7.92 (1H，m)，8·04 (1H，m)，8·49 (1H，s)，8.56-8.95 (1H，brm) ppm ; 19F NMR (376 MHz，d6-DMS0)(質子去偶合）5 -61.32, -61.38, -226.70, -226.76， -230.47, -231.06, -232.61，-232.67 ; MS ES (-) 429.30 (M-H). 實例3 (S)-3-『2-(6-氣基-1-酮基-1H-異崦啉-2-基）-丁醯基胺基1-5-氟某-4-酿1 200404783

ΛηrVi 〇方法Η : 4-氣-N-甲基-笨甲醯胺

於氯化4-氣基苯甲醯（4.50克）在二氯甲烷（10毫升）中之〇°C 溶液内，逐滴添加甲胺在乙醇中之8M溶液。將溶液揽拌W 小時，然後蒸發至乾涸。將殘留物以飽和碳酸氫鈉溶液（10 毫升）稀釋，並以醋酸乙酯（3x20毫升）萃取三次，將有機物質以鹽水洗滌（10毫升），脫水乾燥（MgS04)，及在真空中濃縮，而得次標題化合物，為白色固體（4.33克；97% )。iHNMR (400 MHz，CDC13) 5 3.00 (3H，s)，7.40 (1H，br) 7·40 (1H，d)，7·70 (1H，d) ppm. 方法I : 2-甲酸基-4-氯_N-甲基茉甲醯脖

於4-氯-N-甲基-苯甲醯胺（3·1克）在THF (30毫升）中之溶液内，添加正-丁基鋰（30·1毫升，2_5M己烷溶液），並使溶液回流 45分鐘。然後，使溶液冷卻至〇°c，並於2分鐘内，逐滴添加 N-甲基甲驗苯胺（9.27毫升）。接著使溶液回流2小時，然後 86389 -39- 200404783

冷卻至環境溫度，添加水（80毫升），並以2M HC1使溶液酸化至pH 1。接著，將溶液以醋酸乙酯（3x50毫升）萃取三次，以鹽水（20毫升）洗滌，脫水乾燥（MgS04)，及在真空中濃縮。使所形成之褐色油於矽膠上藉急騾式層析純化，而得次標題產物，為淡黃色固體（2,13克；59% )。iHNMRGOOMHACDCU) δ 2·90 (3H，s)，4·25 (1H，d，J) 5.60 (1H，d，J)，7.35 (2H，s)，7.60 (1H，s) ppm. 方法J 2-甲醯基-4-氯笨甲酸

將2-甲醯基-4-氯-N-甲基苯甲醯胺（3·19克）與10M鹽酸（30毫升）之混合物，於回流下加熱18小時。使混合物冷卻，並以飽和碳酸氫鈉溶液鹼化。然後，以醋酸乙酯洗滌溶液，接著以2M鹽酸酸化。將產物以醋酸乙酯萃取，並以硫酸鎂使合併之萃液脫水乾燥。然後過濾溶液，並濃縮。這獲得2-甲醯基-4-氯苯甲酸，為黃色固體（2.22克，75%)。WNMR (400 MHz， CDC13) 5 6.65 (0·5Η，brs)，7.50 (2H，m)，7·65 (1H，m)，7·85 (0.5H，brm)，8.05 (1H，m) ppm· (S)-3-「2-(6-氯基-1-嗣基-1H-異p奎淋-2_基）-丁驗基胺基1-5-Mi基-4-酬基-戊酸

86389 -40- 200404783 其係使用類似方法A-G中所述之程序，製自2_甲醯基斗氯苯甲酸（按方法H-J中所述製成），將標題化合物藉預備之 HPLC分離，並以白色固體獲得。1HNMR(400MHz，CDC13) 5 0.97 (3H，m)，1.90_2·31 (2H，m)，2.65-3.30 (2H，m)，4·20-5·75 (4H，m)，6·65 (1H，m)， 7·40_7·60 (3H，m)，8·29 (1H，m)，9.20 (1H，br) ppm ; 19 F NMR (376 MHz， CDC13)(質子去偶合）5 -229.80, -232.07, -232·43, _232·58, -232.78 ; MS ES (-) 395.26 (M-H). ΨΜΑ (SV342-(6-三氟甲基小酮甚-1H-異喹啉-2-基）-丁醯基胺某1-5-華其 -4-酮基-戊酸

其係使用類似方法A-G中所述之程序，製自2-甲醯基-4-三氟甲基苯甲酸（使用類似H-J中所述之方法，製自4-三氟甲基苯甲酸），將標題化合物分離，為白色固體（95%，最後步.驟）。1H NMR (400 MHz，CDC13) 5 〇·99 (3H，m)，L90-2.30 (2H，m)，2.60-3.50 (2H，m)，4.20-5.75 (4H，m)，6·80 (1H，m)，7.50-7.90 (3H，m)，7·92 (1H，m)，8.40 -δ·60 (1H，m) ppm ; 19 F NMR (376 MHz，d6 -DMSO)(質子去偶合）δ -63.60, -63·61，-63.65, -231.67, -231.80, -232.06, -232.18 ; MS ES ⑴ 431.26 (M+H). 實例5 (S，SV3-「2-(6·氯基-4-酮基-4H-4唑啉-3-基丁醯基胺墓1-4-酮基_5-(2,3,5,6-四氟-笨氣基）戊酸 86389 -41 - 200404783

於5-氯基冬硝基-苯甲酸（4·68克）在無水四氫呋喃（1〇〇毫升）中之經攪拌落液内，在〇°c下，添加⑻_2_胺基·丁酸-第三-丁酯鹽酸鹽（5 克）、HOBt (3.45 克）、DMAP (2.98 克），接著是 EDC (4.88

克）與二異丙基乙胺（3.30克）。將反應混合物攪拌1〇分鐘，然後溫熱至室溫，並攪拌16小時，接著於減壓下濃縮。使所形成之殘留物於EtOAc (100毫升）與飽和碳酸氫鈉溶液（1〇〇毫升）之間作分液處理，分離有機層，及進一步以鹽酸與飽和鹽水溶液洗滌，脫水乾燥（MgS04)，過濾，及濃縮，而得次標題化合物，為淡黃色油（6.82克，68%產率）。iHNMR (400MHz，CDC13) 5 8.05(lH，d)，7.55(2H，m)，6_4(lH，m)4.7(lH，m)，2.1 (1H，m)，1.95 (1H，m)，1_5 (9H，s)，1.0 (3H，t) ppm. 方法L : (SV2-(2-胺某-5-氣-笨甲醯胺篡V丁酸-第三-丁酯

86389 -42- 200404783 於（S)-2-(5-氯基冬硝基-苯甲醯胺基）-丁酸_第= ^乙酵_升）中之經攪拌溶液内，在環境:度下^ 氯化錫（II)雙-水合物（18.8克）。將混合物於環境下攪拌16小時。於減壓下，使體積降至大約50毫升，然後，將反應混合物以1M NaOH稀釋，直到使所形成之沉殿物再溶解(4⑻毫升）為止。接著，以乙醚（3χΐ〇〇毫升）萃取水溶液。將有機萃液合併，並以鹽水洗滌，脫水乾燥（MgS〇4)，及濃縮，而得次標題化合物，為黃色固體（4.60克，88%產率）。1H NMR (400 MHz， CDC13) 5 7.4 (1H，s)，7·2 (1H，d)，6·6 (2H，m)，5_5 (2H，m)，4·6 (1H，m)，2·0 (1H，m)，1·85 (1H，m)，1.5 (9H，s)，0.95 (3H，t) ppm. 方法M : (S)-2-(6-氯基_4-酮基-4H-p奎唆啦 -3_基丁酸-第三_丁酉匕

使2-(2-胺基-5-氯-苯甲醯胺基）-丁酸-第三-丁酯（之82克）溶於原甲酸三甲酯（50毫升）中。添加醋酸（1〇毫升），並使反應混合物回流48小時。在此段時間後，移除溶劑，並使殘留物於醋酸乙酯與飽和碳酸氫鈉溶液之間作分液處理。將水層進一步以酷酸乙酯萃取’並將合併之有機萃液以鹽水洗滌 ’脫水乾燥（MgS04)，及在減壓下濃縮，而得黃色油。使其藉急驟式層析純化（20% EtOAc :石油），獲得次標題化合物，為油狀物（1.23 克，42% 產率）。1H NMR (400 MHz，CDC13) 5 8.25 (1H， s)，8.05 (1H，s)，7·7 (2H，m)，5.3 (1H，m)，2·3 (1H，m)，2.0 (1H，m)，1·5 (9H，s)， 86389 -43- 200404783 1.0 (3H? t)ppm. 圣(6_氯某_4-酮某-4Η-ρ杏岫说-3-基）-丁酸

其係使用類似方法E中所述之程序製成。獲得次標題化合物，為灰白色固體。1HNMR(400 MHz，MeOD) ά 8·3 (1H，s)，8.15 (1H， s)5 7.8 (1Η, d)5 7.7 (1H3 d)? 5.2 (1H5 m), 2.4 (1H9 m)5 2.2 (1H5 m)5 0.95 (3H51) ppm. 方法N : (S)-3_字氧魏某脖基_4-酮基-5-(2,3,5,6-四氣-笨氧基戍酸第三-丁醋

於氮氣及室溫下，將氟化鉀（2.8克）分次添加至⑻-3-苄氧羰基胺基-5-溴基-4-酮基-戊酸第三-丁酯（18.6克）與2,3,5,6-四氟基酚（9.3克）在無水DMF (250毫升）中之經攪拌溶液内。然後，在以醋酸乙酯與水使反應淬滅之前，將混合物攪拌丨8小時。移除有機層，並以碳酸氫鈉溶液洗滌，脫水乾燥（硫酸鎂）及濃縮，而得次標題產物，為灰白色固體（21.1克，96% )。 1HNMR(400MHz5CDC13) 5 1.43 (9H5 s)5 2.76 (1H? dd)5 3.06 (1H5 dd)? 4.67-4.71 (1H，m)，5.12 (1H，d)，5.22 (1H，d)，5·86 (1H，d)，7·35-7·38 (5H，m) ppm ; 19F NMR (376 MHz，CDC13)(質子去偶合）5 -139·98, -140.00, -140.04， 86389 -44- 200404783 -140.06, -157.05, -157.07, 157.11，-157.13 ; MS ES (+) 486.23 (M+H). 方法O : (38)-3-芊氧羰基胺基-4-羥基-5-(2,3,5,6-四氟-笨氣基）-戊酸第三- 丁酉旨

於-20°C及氮氣下，將NaBH4(1.65克）分次添加至3-苄氧羰基胺基-4_嗣基-5-(2,3,5,6-四氣-苯氧基）_戊酸第三_丁 S旨（21.1克）在無水THF (220毫升）中之經攪拌溶液内。在此溫度下攪拌3小時後，藉由添加飽和氯化銨溶液使反應淬滅，並以DCM稀釋。移除有機層，並以DCM再萃取水層。將合併之有機萃液以鹽水洗滌，脫水乾燥（硫酸鍰），及濃縮。使殘留物藉管柱層析純化（10% -20%醋酸乙酯/己烷）。獲得次標題化合物，為白色固體（14.6 克，73%)。iHNMRGOOMHACDC^) 51_45 (9H，s)，2.61-2.77(2H，m)，3.16-3_36(lH，2xbrdd)，4_12-4_22(2H，m)，4.30-4.33 (1H，m)，5_44-5·69 (1H，2 x d)，6·78-6·86 (1H，m)，7·35-7·36 (5H，m) ppm ;19FNMR(346MHz，CDC13)(質子去偶合）5-139·87，-139·89，-139.93, -139.95, -139.98, -157.02, -157.05, -157.06, -157.08, -157.09, 157.10, -157.12 ；ES (+) 488.27 (M+H). 方法P : (3SV3-胺基斗羥基-5-(2,3,5,6-四氟-笨氣基）-戊酸第三-丁酉旨 86389 -45- 200404783

將10% Pd/碳（2.92克）分次添加至3-苄氧羰基胺基-4-羥基-5-(2,3,5,6-四氟-苯氧基）-戊酸第三-丁酯（14.6克）在氮氣下脫氣（5乂）之無水MeOH (350毫升）中之溶液内。使反應物進一步於氮（3x) 與氫（5x)氣下脫氣，並在室溫下攪拌20分鐘。藉過濾移除鈀觸媒，並使濾液濃縮，獲得次標題化合物，為白色固體（9.5 克，90% )。1H NMR (400 MHz，CDC13) (5 1·49 (9H，s)，2.35-2.43 (1H，m)， 5.67-5.64 (1Η，m)，3.37-3.43 (1Η，m)，3.77-3.87 (1Η，m)，4.28-4.63 (2Η，m)， 6.77-6.86 (1H，m) ppm ; 19 F NMR (346 MHz，CDC13)(質子去偶合）δ -139.95, -139.97, -140.00, -140.03, -140.05, -140.08, -140.11, -140.13, -157.15, -157.18, -157.21，-157.23, -157.27, -157.29· (S，S)-3-「2-(6-氯基-4-酮基-4H-喹唑啉_3-基）-丁醯基胺基1-4-酮基-5-(2,3,5,6-四氟基笨氣基）戊酸

此化合物係使用類似方法F、G及E中所述之程序製成。獲得標題化合物，為白色固體（TFA鹽）（94%，最後步騾）。IR( 固體）3298.7, 1741.4, 1691.4, 1660.3, 1601.1，1517.4, 1490.8, 1320.6, 1244.7, 1174.5, 1104.4, 939.2, 836.5, 715.5, 666.8 及 656.0 公分―1 ; iHNMR 86389 -46- 200404783 (400 MHz，DMSO-d6) 5 9.05 (1H，m)，8·4 (1H，s)，8·05-7·5 (4H，m)，5.45-5.15 (3H，m)，4·6 (1H，m), 2·25_2_0 (2H，m)及 0.9-0.75 (3H，m)ppm ; 19 F NMR (376 MHz，DMSO-d6)(質子去偶合）5 -140.57, -140.59, -140.63, -140.65, 141.02, -141.04, -141.08, -14U0, -156.75, -156/77, -156.81，-156.83, -156.94, -156.96, -157.00, -157.02 ; MS ES (+) 544.2 (M+H). 實例6 (S，SV4-酮基 _3-『2-(4-酮基-4H-4 唑啉-3-基 V丁醯基胺基 l-5-(2,3,5,6- 四氟_笨氣基）戊酸

此化合物係使用類似方法F、G及E中所述之程序，使用2-(4-酮基-4H-喹唑啉-3-基）-丁酸（使用類似方法K-M與E中所述之程序，自2-硝基苯甲酸合成）與（3S)-3-胺基-4-羥基_5·(2,3,5,6-四氟-苯氧基）-戊酸第三-丁酯（按方法Ν-Ρ中所述製成）製成。獲得標題化合物，為白色固體（TFA鹽）（85%，最後步驟）。IR (固體）1792.8, 1726.3, 1669.9, 1521.4, 1485.6, 1183.5, 1142.5, 1091.3 及 932·5 公分-1 ; 1H NMR (400 MHz，DMSO-d6) 5 9.0-8.65 (1Η，m)，8.35 (1Η，s)， 8·1 (1H，m)，7.8 (1H，m)，7·65 (1H，m)，7.55 (2H，m)，5·4-4·3 (4H，m)，2.8-2.5 (2H，m)，2.2-2.0 (2H，m)及 0.9-0.7 (3H，m) ppm ; 19 F NMR (376 MHz， DMSO-d6)(質子去偶合）5 -140.57, -140.60, -140.63, -140.66, -141.03， -141.05, -141.09, -14U1，-156.77, -156.80, -156.83, -156.86, -156.94, -156.97, -157.00,-157.03 ; MS ES (+) 510.26 (M+H). 200404783 實例7 (^)-4_酮^羞二3-『2-(4_酮羞-4Η^奎唑啉_3_某V丁醯基胺基1-5-Γ2Α6- ^ 氟-笨氣基戌醢

此化合物係使用類似方法F、G及E中所述之程序，使用2-(4-酮基-4H-4；唑啉各基）-丁酸（使用類似方法κ·Μ與E中所述之程序’自2-硝基苯甲酸合成）與（3S)_3_胺基_4_羥基_5·(2,4,6-三氟-苯氧基）-戊酸第三-丁酯（使用類似方法Ν-Ρ中所述之程序，製自 2,4,6-三氟酚）製成。獲得標題化合物，為白色固體（TFA鹽）（71 %，最後步驟）。IR (固體）3308.9, 3075.4, 2928.4, 1803.1，1726.9, 1672.7, 1612·1，1510.0, 1478.7, 1452.8, 1407.6, 1231.3, 1199.3, 1121.0, 1040.4, 997.6， 933.1，839.7, 772.9, 720.3 及 698.4 公分-1 ; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 0.84-0.86 (3H，m)，2.04-2.95 (4H)，4.05-5.48 (5H，6)，7·13-7·21 (2H，m)，7.54 -7.57 (1H，m)，7.69-7.72 (1H，m)，7·84_7.88 (1H，m)，8·07_8·13 (1H，m)，8·38 (1H，s)，8.60-8.97 (1H, 2 x dd) ppm ; 19 F NMR (376 MHz，DMSO-d6)(質子去偶合）δ -115.4, -115.6, -124.9, -125.0, -125.6 ; MS ES (+) ·· 492.3 (M+H). 實例8 (S,S)-4-酮基-342-(4-酮基-4H-4 唑啉-3-基）-丁醯某胺基 1-5-(2,5,6-三氟-苯氧基V戊酸 86389 -48- 200404783

此化合物係使用類似方法F、G及E中所述之程序，使用2-(4-酮基-4H-喹唑啉各基）-丁酸（使用類似方法K-M與E中所述之程序’自2-硝基苯甲酸合成）與（3S)_3-胺基_4_羥基_5_(2,3,卜三氟_苯氧基）-戊酸第三-丁酯（使用類似方法N-P中所述之程序，製自 2,3,6-三氟酚）製成。獲得標題化合物，為白色固體（TFA鹽）（87 %，最後步騾）。IR (固體）3308.9, 3075.4, 2928_4, 1803.1，1726.9, 1672.7, 1612.1，1510·0，1478·7, 1452.8, 1407.6, 1231.3, 1199.3, 1121.0, 1040.4, 997.6， 933.1，839.7, 772.9, 720.3 及 698.4 公分-1 ; iHNMR(400 MHz，DMSO-d6) (5 0.84-0.86 (3H，m)，2.04-2.95 (4H，3m)，4.05-5.48 (5H，6 x m)，7.13-7.21 (2H， m)，7·54-7·57 (1H，m)，7.69-7.72 (1H，m)，7·84-7·88 (1H，m)，8·07-8·13 (1H，m)， 8·38 (1H，s)，8·60-8_97 (1H，2) ppm ; 19F NMR (376 MHz，DMSO)(質子去偶合）5 _115·4, -115.6, -124.9, -125.0, -125.6 ; MS ES (+) : 492·3 (M+H). 實例9 (S，S)-3-|"2-(l-S同基-1H-異邊琳 _2-基丁酸基胺基 1-4-嗣基-5-(2,3,5,6- 四氟 -苯氧基）-戊酸

此化合物係使用類似方法F、G及E中所述之程序，使用 86389 -49- 200404783 ⑸-2-(1-酮基-1H-異喳啉-2-基）-丁酸（使用類似方法A-E中所述之程序，製自2-甲醯苯甲酸）與（3S)-3-胺基-4-羥基_5-(2,3,5,6·四氟-苯氧基）-戊酸第三-丁酯（按方法N-P中所述製成）製成。將標題化合物藉預備之HPLC分離。IR (固體）2960.2, 1780.1，1746.2, 1646.6, 1619.0, 1589.1，1517_4, 1490.3, 1427.8, 1260.3, 1206.2, 1176.3, 1098.9, 938.4, 788.1，748.3, 714.2, 692.5, 665·3 及 655·8 公分·1; 1H NMR (400 MHz， DMSO-d6) δ 0.78-0.83 (3Η? m), 1.89-1.96 (1Η, m), 2.08-2.13 (1H, m), 2.50- 2.78 (2¾ m)，4·35_5·45 (4H，3 x m)，6·64-6·69 (1H，m)，7·74-7·73 (5H, m)， 8.18-8.20 (1H，m)，8.81 & 8.90 (1H，d) ppm ; 19F NMR (376 MHz，DMSO) (質子去偶合）5 -141.01，-141.03, -141.07, -141.09, -156.80, -156.82， -156.86, -156.88 ； MS ES (+) 509.2 (M+H). 實例10 (S,SV3-「2-r7-氣某-1-酮基-1H-異4啉·2-基V丁醯基胺基1-4·酮基-5-(2,3,5,6-四氟氫某y戊酸

此化合物係使用類似方法F、G及E中所述之程序，使用 (S)-2-(7·氯基小酮基-1H-異喹啉-2-基）-丁酸（按方法A-E中所述製成）與（3S)_3-胺基-4-羥基-5-(2,3,5,6-四氟-苯氧基)-戊酸第三丁酯（按方法N-P中所述製成）製成。分離產物，為白色固體（94% ，最後步驟）；IR (固體）1639.3,1618.8, 1593.2, 1516.4, 1485.6,1219.4, 1168.1，1106.7, 932.6, 830·2 公分.1; iHNMRGOO MHz，DMSO-d6) 5 0.80 86389 -50- 200404783 (3H，t)，1.94-2.12 (2H，m)，2.55-2.61 (1H，m)，2_74·2·80 (1H，m)，4·58-4·63 (1H， m)，5.12-5.76(3H，m)，6.70(lH，d)，7.51-7.78(4H，m)，8.11-8.12(lH，m)，8_60· 8.95(lH，2xd)ppm ; 13C NMR(100 MHz, d6-DMSO) δ 23.8,24.5,32.9, 34.6, 47.8, 52.8, 55.2, 58.2, 58.9, 74.4, 75.6, 100.1，100.3, 100.5, 101.0, 101.2， 104.6, 126.5, 136.6, 131.3, 131.4, 133.0, 135_6, 135.6, 139.0, 139.1，141.4， 141.6, 144.6, 144.8, 144.9, 147·1，147.1，160.7, 170.4, 172.0, 173_0, 202.2 ; 19 F NMR (376 MHz，d6 -DMSO)(質子去偶合）5 -140.57, -140.60， -140.64, -140.66, -141.00, -141.03, -141.06, -141.09, -156.78, -156.80, -156.84, •156.86, -156.96, -156.98, -157.02, -157.04 ; MS ES (+) 543.20 (M+H). 實例11 (S，S)-3-f2-(6,7-二氯小酮基-1H-異4啉_2_基丁醯基胺基1-4-酮某_ 5-(2,3,5,6-四氟-苯氣基戍酸

方法0 : 二氣-3H-異苯并咬喃-1-酉同

於〇°C及氮氣下，在1小時内，將NaBH4(5.2克）以少量分次添加至4,5-二氯鄰苯二甲酸酐（2〇克）在無水DMF (100毫升）中之經攪拌溶液内。使反應物溫熱至室溫，再歷經2小時，並倒入冰/ 1MHC1中。藉過濾收集所形成之白色沉澱物（4,5_二 86389 -51- 200404783 氯-2-羥甲基-苯甲酸），並於真空下乾燥。使沉澱物與催化用之對-甲苯續酸，一起懸浮於甲苯（2〇〇毫升）中，並在Dean-Stark 條件下（沉澱物係在加熱時溶解），加熱至回流，歷經18小時。使反應物冷卻至室溫，並藉過濾收集所形成之白色沉澱物，而得次標題化合物，為白色固體（14.0克，75% )。WNMR (400 MHz，d6 -DMSO)占 5·40 (2H，s)，8·05 (1H，s)，8.15 (1H，s) ppm· 方法R : 3-溴基-5,6-二氯-3H-異笨并咬喃-1-酉同

將5,6-二氯-3H-異苯并呋喃-1-酮（1.45克）、N-溴基琥珀醯胺 (1.27克）及催化用之過氧化二苯甲醯在氯仿（3〇毫升）中之懸浮液，加熱至回流，歷經1小時。於冷卻後，將反應混合物以水、鹽水洗滌，脫水乾燥（硫酸鎂），過濾，及濃縮，而得次標題化合物，為白色固體（1.82克，91%)。WNMR(400MHz， CDC13) 5 7·36 (1H，s)，7_77 (1H，s)，8·03 (1H，s) ppm. 方法S : 4,5_二氯冬甲醯基笨甲酸

將3-溴基_5,6-二氯-3H-異苯并呋喃小酮（2.0克）在5% HC1水溶液（10毫升）與80%二氧陸圜水溶液（25毫升）中之懸浮液，加熱至回流，歷經2小時。移除溶劑，並使所形成之殘留物再 86389 -52· 200404783 溶於醋酸乙酯中，脫水乾燥（硫酸鎂），及濃縮。使所形成之黃色固體自DCM /己烷再結晶，獲得次標題化合物，為白色固體（U3 克，73%)。4^11(4001^1^0003)56.66(0.81^), 7·95 (0.16H，s)，8·05 (0·84Η)，8·12 (0.16H，s)，8·14 (0.84H，s)，8.41 (0.84H)， 10·41 (0.16Η，s)，11.07 (0.16Η，brd s) ppm· (8,8)-3-「2-(6,7_二氟-1-6同基_111-異0奎淋-2-基）-丁酸基胺基1-4-嗣基-5-(2,3,5,6-四氟-笨氧基）戊酸

此化合物係使用類似方法F、G及E中所述之程序，使用 (S)-2-(6,7-二氯·1_酮基-1H-異喳啉-2-基）-丁酸（使用類似方法A_E 中所述之程序，自4,5-二氯-2-甲醯基苯甲酸[按方法Q-S中所述製成]合成）與（3S)-3_胺基-4-羥基-5-(2,3,5,6-四氟-苯氧基）-戊酸第三-丁酯（按方法N-P中所述製成）製成。分離標題化合物，為白色固體（94%，最後步驟）。IR(固體）1784.5, 1734.7, 1650.1， 1610.2, 1585.4, 1515_7, 1490.8, 1426.0, 1216.9, 1172.1，1092.5, 933.1 公分-1; 1H NMR (400 MHz, d6 -DMSO) 5 0.80 (3H，t)，1·90-1·98 (1H，m)，2.04-2.12 (1H，m)，2.55-2.79 (2H，m)，4·56-4·71 (1H，m)，5.08- 5.41 (3H，m)，6·67 (1H，d)， 7.56-7.59 (2H，m)，8.07 (1H，brd，s)，8·25 (1H，d)，8.85-8.95 (1H，2 x d)，12.73 (1H，brd，s) ppm ; 19 F NMR (376 MHz, d6 -DMSO)(質子去偶合）5 -140.93, ·140·95, -140.99, -141.01，-141.04, -141.07, -141.10, -156.76, -156.79, -156.82,-156·85,-156.89,-156.91; MS ES (+): 577.14 (M+H). 200404783 實例12 l"f(2SV2-「6-(2-氣-苯氧基）-4-g同基-4H_p奎吨啦·3_基）-丁驢基胺基~]-5- 氪基-4-酮某-戍_

方法T : 硝基-5-(2-氯基笨氣基）笨甲醢甲酿

於5-氯基-2-硝基苯甲酸甲酯（1克，4·6毫莫耳）在二甲基甲酿胺（15毫升）中之經攪拌溶液内，添加碳酸鉀（〇_96克）與2-氯紛（0.66克）。將反應混合物於9〇。(3下攪拌16小時。在此段時間後’將反應混合物倒入醋酸乙酯（5〇毫升）中，並以水（5〇耄升）、鹽水（50毫升）洗滌，脫水乾燥（MgS〇4)，及蒸發。使殘留物藉急騾式層析純化（1 : 9醋酸乙酯·· PET醚），而得次標題化合物，為黃色油（1·22克，85%產率）。iHNMR(400MHz， CDC13) ά 8.05 (1H? m\ 7.6-7.0 (6H? m)? 3.95 (3H5 s) ppm. 方法U : 2-硝基-5_(2_氣基苯氣篡焊甲鴯

86389 -54- 200404783 於2-硝基-5-(2-氯基苯氧基）苯甲酸甲酯（1·22克）在THF (8毫升）中之經攪拌溶液内，添加水（2毫升）中之氫氧化鋰（0.333克）。將反應混合物於環境溫度下攪拌16小時。在此段時間後，以1M HC1水溶液使反應混合物酸化。以醋酸乙酯（2 X 50毫升）萃取水層。將有機物質合併，並以飽和鹽水溶液洗滌，及脫水乾燥（MgS04)。於真空下移除溶劑，獲得次標題化合物，為灰白色固體（0.63克，54%產率）。iHNMRGOOMHAMeOD) δ 8.05-7.0 (7Η, m) ppm. 3-「(2SV2-「6-(2-氯-笨氧基V4-酮基-4H-崦唑啉-3-基）-丁醯基胺基l-5_ 氟基-4-酮基-戊酸

此化合物係使用類似方法F、G及E中所述之程序，製自2-(6-[2-氯基苯氧基]-4-酮基-4H-喹唑啉-3-基）-丁酸（按方法T-U、K-M及E中所述，自5-氯基-2-硝基苯甲酸甲酯與2-氯酚合成）。獲得標題化合物，為白色固體（TFA鹽）（82%，最後步騾）。IR( 固體）1783.38, 1721.55, 1664.48, 1550.32, 1498.00, 1474.22, 1264.94, 1193.60, 1136.52, 1055.66 公分.1 ; iHNMRGOOMHz，DMSO-d6) 5 0.81 (3H，m)， 1.95-2.26 (2H，m)，2.50-2.96 (2H，m)，4.20-4.70 (1·5Η，m)，5·04-5·46 (2.5H，m)， 7.26-7.39 (3H，m)，7·45 (1H，m)，7.57-7.70 (2H，m)，7.78 (1H，m)，8.35 (1H，m)， 8.63-8.98 (1H，brm) ppm; 19 F NMR (376 MHz，DMSO-d6)(質子去偶合） (5 -226.73, -226.78, -230.43, -230.90, -232.64, -232.55 ; MS ES (+) 490.40 200404783 實例13 3-「(2S)-2-f6-(3-氣基苯氧基）-4-S同基奎吵成基）_丁酸基胺基1_ 5-氟基-4-酮基-戊酸

此化合物係使用類似方法F、G及E中所述之程序’製自2_ (6-[3-氯基苯氧基]-4-酮基-4H-喹唑啉-3-基）-丁酸（使用類似T-U 、K-M及E中所述之方法，自5-氯基-2-硝基笨甲酸甲酯與3-氯酚合成）。獲得產物，為白色固體（TFA鹽）（85%，最後步騾）。IR(固體）1716.79, 1673.99, 1583.62, 1469.46, 1279.21，1198.35, 1136.52 公分-1 ; 1H NMR (400 MHz，DMSO-d6) 5 0.75-0.9 (3H，m)，1.95-2.2 (2H， m)，2.5-2.9 (2H，m)，4.2-4.7 (2H，m)，5.05-5·45 (2H，m)，7·1 (1H，m)，7·25 (1H， m)，7.3 (1H，tn)，7.45 (1H，m)，7·55 (1H，m)，7·6 (1H，m)，7.8 (1H，m)，8·35 (1H， m)，及 8.65-9.0 (lH,m)ppm ; 13CNMR(100MHz?DMSO-d6) δ 202.6, 202.5, 173.1，172.0, 172.0, 170.0, 169.8, 169.8, 160.2, 160.1，158.8, 157.4， 155.3,144.1，134.5, 132.1，130.1，126.6, 124.6, 122.6, 122.5, 119.7, 118.2,113.7, 85.3, 85.2, 83.5, 83.4, 82.9, 58.2, 57.8, 57.5, 53.0, 52.3, 52.2, 47.8, 34.6, 33.0， 24.4, 23.8 及 10.66 ; 19 F NMR (376 MHz，DMSO-d6)(質子去偶合）5 -226.72, -226.78, -230.90 及-232.65 ; MS ES ⑴ 490.25 (M+H). 實例14 5_氟基-3-U2SV2「6-(3_氟基苯氧基M-酮基_4H_4唑啉-3-某1-丁醯基胺基丨-4-酮基-戊酸 86389 -56- 200404783

此化合物係使用類似方法F、G及E中所述之程序，製自2-[6-(3-氟基苯氧基）-4-酮基-4H-喹唑啉各基]-丁酸（使用類似T-U 、K-M及E中所述之方法，自5-氯基-2-硝基苯甲酸甲酯與3-氟基酚合成）。獲得產物，為白色固體（TFA鹽）（95%，最後步騾）。IR (固體）1598.20, 1274.17, 1178.86, 1159.80, 1116.92 及 954.90 公分-1 ; 1H NMR (400 MHz，DMSO-d6) δ 0.8-0.95 (3H，m)，1.95-2.2 (2H，m)， 2.55-2.95 (2H，m)，4.2-4.7 (2H，m)，5.05-5.5 (2H，m)，6.95 (1H，m)，7·05 (1H， m)，7.45(lH，m)57.55(lH，m)，7.6(lH，m)，7_8(lH，m)，8.4(lH，m)，及8.65-9·0 (1H，m) ppm ; 13 C NMR (100 MHz，DMSO-d6) δ 172.0, 169.9, 169.8, 164.5, 162.1，160.2, 155·3, 144.1，132.0, 131.9, 130.0, 126.9, 122.6, 115.5， 113.7, 111.5, 111.3, 107.4, 107.1，85.3, 58.2, 57.8, 52.4, 52.2, 34.6, 23.8,及 10·7 ;19 F NMR (376 ΜΗζ，DMSO-d6)(質子去偶合）（5 -110.84, -226.73， -226.79, -230.41，-230.91，-232.64 及-232.66 ; MS ES (+) 474.29 (M+H). 實例15 3-{(2SV2-f6-a4-二氢_笨氧基V4-酮基-4H-4唑啉-3-某1-丁醯基胺基亂基-4-酉同基-戍fei

86389 -57 200404783 此化合物係使用類似方法F、G及E中所述之程序，製自2-[6-(2,4-二氯苯氧基酮基-4H-喳唑啉-3-基]-丁酸（使用類似U、 K-M及E中所述之方法，自2-硝基-5-2,4-二氯苯氧基苯甲酸甲酯合成）。獲得產物，為白色固體（TFA鹽）（96%，最後步驟）。IR (固體）1778.63, 1716.79, 1669.23, 1493.25, 1469.46, 1264.94, 1198.35, 1150.79, 1098.47 及 1055.66 公分-1 ; 1HNMR(400MHz，DMSO-d6) 5 0·60-1·05 (3H，m)，1.94-2.26 (2H，m)，2·26-2·95 (2H，m)，4·15-4·75 (2H，m)， 4.76-5.95 (2H，m)，7.25-7.45 (2H，m)，7.50 (1H，m)，7.65 (1H，m)，7,80 (1H，m)， 7·87 (1H，m)，8.36 (1H，s)，8·60_9·01 (1H，brm) ppm ; 19 F NMR (376 MHz， DMSO-d6)(質子去偶合）3 -226.72, -226.77, -230.41，-230.88, -232.65 ; MS ES (+) 524.34 (M+H). 實例16 5-氣基-4-i同基-3-「(2S)-2-(4-酬基-6·苯基硫基-4H-峻吐淋-3-基）-丁醯基胺基1-戊酸

此化合物係使用類似方法F、G及E中所述之程序，製自 (S)-2 (4-嗣基-6-苯基硫基-4Η_ρ奎吨淋-3_基）-丁酸（使用類似T-U、 Κ-Μ及Ε中所述之方法，自5-氯基-2-硝基苯甲酸甲酯與硫酚合成）。獲得產物，為白色固體（TFA鹽）（81%，最後步騾）。 IR(固體）1791.61，1720.53, 1668.40, 1602.06, 1545.20, 1474.12, 1194.53， 1142.41 及 1057.11 公分iHNMRGOOMHADMSOA) 5 9.6-8.6 (1Η， 86389 -58- 200404783 m)，8.3 (1H，s)，7·85 (1H，s)，7.75-7.6 (2H，m)，7.45-7.35 (5H，m)，5.4-5.0 (2H， m)，4.6-4.15 (2H，m)，2.85-2.35 (2H，m)，2.2-1.95 (2H，m)及 0.85-0.7 (3H，m) ppm ; 13 C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 202.6, 202.5, 173.1，172.0, 172.0, 169.9, 169.8, 160.0, 146.5, 136·1，135·4, 133.6, 133.3, 130.3, 128.8, 128.7， 126.7, 126.6, 122.2, 122.2, 104.0, 85·3, 85.2, 83.5, 83.4, 58·3, 57.9, 57.4, 52·3， 52.2, 47.8, 34.6, 33.0, 24.4, 23.9, 23·8 及 10·6 ; 19FNMR(376 ΜΗζ，DMSO-d6)(質子去偶合）5 -226.72, -226.78, -230.41，-231.92, -232.65 及-232.68 ；MS ES (+) 472.27 (M+H). 實例17 5-氣基-3丨(2SV2「6-(3-氟笨基硫基V4-酮基-4H-p奎唑啉-3-基1-丁醯基胺基丨-4-酮基-戊酸

此化合物係使用類似方法F、G及E中所述之程序，製自 (S)-2[6-(3-氟苯基硫基）-4-酮基-4H-喹唑啉-3-基]-丁酸（使用類似T-U、K-M及E中所述之方法，自5-氯基-2-硝基苯甲酸甲酯與3-氟基硫酚合成）。獲得產物，為白色固體（TFA鹽）(95%，最後步騾）。IR (固體）1779.2, 1722.0, 1660.1，1602.9, 1574.3, 1474.3, 1178.8 及 1059.7 &*_1;1HNMR(400MHz，DMSO-d6)(5 0.80(3H，m)，1.92-2·25 (2H，m)，2.41-2.92 (2H，m)，4.20A85 (1·5Η，m)，5.01-5.50 (2.5H，m)， 7.12-7.27 (3H，m)，7_40_7·50 (1H，m)，7.70-7.86 (2H，m)，8·03 (1H，m)，8.43 (1H，m)，8.65-9.02 (1H，brm) ppm ; 19 F NMR (376 MHz，DMSO-d6)(質子 86389 -59- 200404783 去偶合）（5 -111.83, _226·73,-226.79,-230.40,-230.91，-232.65,-232.67 ; MS ES (+) 490.35 (M+H). 會例18 (S)-3-「2-(7-氯基-1-嗣基-1H-異邊淋-2-基）_3-甲基丁酸基胺基1-5-氣基-4-酮基·戊酸

其係使用類似方法A-G(於方法C中使用S-纈胺酸第三-丁酯）中所述之程序製成。分離產物，為白色固體（91 %，最後步騾）。IR (固體）1777.5, 1644.4, 1608.5, 1588.1，1541.9, 1198.9, 1168.1， 1045.2, 830.2 &*-1;1HNMR(400MHz，d6-DMSO)5 0.70(3H，m)，0.89-1·14 (3H，m)，2·31 (1H，m)，2·45_2·98 (2H，m)，4.05-4.75 (1.6H，m)，4.97-5.40 (2_4H，m)，6·70 (1H，m)，7.60-7.95 (3H，m)，8.18 (1H，m)，8.75-9.21 (1H，m) ppm; 19 F NMR (376 MHz, d6 -DMSO)(質子去偶合）5 -226.28, -226.71， -230.58, -230.64, -231.75, -232.32 ; MS ES (+) 411.36 (M+H)· 實例19 _dS)-3-[2-(7-三氟甲基-μ酮基-1H-異4 4-2-某V丁醯基胺基1-4-酮基-四氟-苯氲基V戊酸

此化合物係使用類似方法F、G及E中所述之程序，使用 86389 -60- 200404783 (S)-2-(7-三氟甲基小酮基·1Η-異喹啉-2-基）-丁酸（按方法A-E中所述製成，參閱實例2)與（3S)-3-胺基_4_羥基-5-(2,3,5,6-四氟·苯氧基）-戊酸第三-丁酯（按方法N-P中所述製成）製成。分離產物，為白色固體（90%，最後步驟）。IR (固體）1791.6, 1649.5, 1516.8， 1493.1，1322.5 &*-1;1HNMR(400MHz，d6-DMSO)50.85(3H，t)，1.90-2.20 (2H，2 X m)，2·50-2·90 (2H，2 X m)，4.70 (1H，m)，5.25 (2H，dd)，5·45 (1H， m)，6·80 (1H，d)，7·65 (1H，m)，7.70 (1H，d)，7·95 (1H，d)，8.05 (1H，d)，8_45 (1H， s)，9.00 (1H，d) ppm ; 19 F NMR (376 MHz，d6 -DMSO)(質子去偶合）5 -56·60,-70.15,-136.38,-152.08. 實例20 (g，S)-3_「2-(7-三氟i甲基-4-酮基奎峻琳-3-基）-丁酸基胺基1-4-酮基-5-(2,3,5,6-四氟-笨氣基）戊酸

方法V : ⑸·2-(2-宇胺基-5-三氟甲基-苯甲疏胺基V丁酸第三-丁西导

於（S)-2-(2-氯基-5-三氟甲基-苯甲酸胺基）-丁酸第三_丁酉旨（以類似方法F中所述之程序，製自2-氯基5-三氟甲基苯甲酸與 -61- 24& 86389 200404783

(S)-2-胺基丁酸第三丁酯）（3克）與苄胺（u毫升）在n-甲基四氫外匕洛(40毫升）中之溶液内，添加碳酸鉀（16克）、銅（3〇毫克）及銅（I)溴化物（15毫克）。將混合物於16〇〇c下加熱3小時，然後冷卻至室溫’並以飽和氯化銨溶液稀釋。以醋酸乙酯萃取混合物，並使有機溶液脫水乾燥（硫酸鎂），過濾，及濃縮。使殘留物於矽膠上純化，以15%醋酸乙酯/己烷溶離。獲得次標題產物，為白色固體（950毫克，27% )。iHNMR (400 MHz，CDC13) 51.04 (3H，t)，1·50 (9H，s)，2·86 (1H，m)，2·02 (1H，m)， 4·50 (2Η，d)，4·65 (1Η，m)，6·69 (2Η，m)，7.21-7.70 (7Η，m)，8·42 (1Η，m) ppm ;MSES ㈠ 435.32(M-H). (S)-2-(6-三氟甲基-4_酉同基-4H_p奎吐淋-3-基V丁酸

此化合物係使用類似方法P、Μ及E中所述之程序，製自 (S)-2-(2-苄胺基_5_三氟甲基-苯甲醯胺基）-丁酸第三-丁酯。次標題化合物為白色固體。1 H NMR (400 MHz，d6 -DMSO) 5 0.88 (3H，t)， 2.22 (2H，m)，5.15 (1H，m)5 7.95 (1H，m)，8.20 (1H，m)，8.40 (1H，s)，8·60 (1H，s) ppm； MS ES (+) 301.15 (M+H). (S，S)-3-「2-(7-三氟甲基-4-酮基-4H_4唑啉各基V丁醯基胺基M-酮基-5-(2,3,5,6-四氣某苯氧某、成酩

F 86389 -62- 200404783 此化合物係使用類似方法F、G及E中所述之程序，製自2-(6_ 三氟甲基-4-酮基-4Η-ρ奎峻琳-3-基）-丁酸與（3S)-3-胺基-4-經基-5_ (2,3,5,6-四氟-苯氧基）-戊酸第三-丁酯（按方法N-P中所述製成）。獲得標題化合物，為白色固體（TFA鹽）（90%，最後步驟）。

IR(固體）1690, 1518, 1490, 1317, 1254, 1170,1128 公分-1 ; iHNMR (400 MHz，d6 -DMSO) 5 0.8-0.9 (3H，m)，2.05-2.2 (2H，m)，2·57-2·80 (2H，m)， 4·55_4·62 (2H，m)，5·20·5·35 (3H，m)，7·50_7·62 (1H，m)，7.95 (1H，d)，8.20 (1H， d)，8.38 (1H，m)，8·52 (1H，s)，9·04 (1H，d) ppm ; MS ES ⑴ 578_2 (M+H). 實例21 ⑻_3-f2-(7-苯基-1-i同基-1H-異p奎淋-2-基V丁驗基胺基1-5-氟某·4_ΒΡΙ 基-戊酸

/oh

ifSr^F 〇方法W :

(SV2_(7-苯基-1-酮基-1H-異喹啉-2-基V丁酸

OH 於⑸-2-(7-氯基小酮基-1H-異p奎淋_2_基）-丁酸（按方法A-E中所述製成）(200毫克）與苯基二羥基硼烷(276毫克）在THF (2毫升）中之溶液内，添加醋酸鈀(11)(1.7毫克）、2-(二-第三-丁基膦基）聯苯（4·5毫克）及氟化鉀（262毫克）。將所形成之混合物，於回流下加熱18小時，然後冷卻，並以1M HC1 (5毫升）與醋酸 86389 -63- 200404783 乙酯（15 φ升）稀釋。分離有機相，並以醋酸乙酯卩χΐ5毫升）萃取水溶液。使合併之有機物質乾燥（硫酸鎂），過濾，及 k縮。使殘留物經過矽膠充填柱純化，接著藉徑向展開層析法進一步純化，以醋酸乙酯中之1%醋酸溶離。這獲得次標題產物，為褐色固體（153毫克，66% )。iHNMRGOOMHACDClJ 5 1·00 (3H，t)，2.15 (1H，m)，2.40 (1H，m)，5·37 (1H，m)，6.70 (1H，d)，7·15 (1H， d)，7_45 (1H，m)，7·55 (2H，m)，7·68 (1H，m)，7.75 (¾ m)，7.99 (1H，d)，8.7〇 (1H，s) ppm. •⑻-3也二(7-苯基小酮基-1H-異4啉·2-某V丁醯基胺基1-5-氟基-4-酮基-戊酸

此化合物係使用類似方法F、G及Ε中所述之程序，製自 ⑸-2-(7-苯基-1-酮基-1Η-異ρ奎淋-2-基）-丁酸。獲得標題化合物，為白色固體（58%，最後步·驟）。iHNMRGOOMHii^-DMSO) δ 8.95-8.5 (1Η，m)，8·45 (1Η，s), 8·05 (1Η，m)，7.8-7.7 (2Η，m)，7.65-7.35 (4Η，m)， 6.7-6.65 (1H，m)，5.6-5.0 (2.4H，m)，4.7-4.2 (1.6H，m)，2.9-2.3 (H，m)，2.15-1.85 (2H，m)，0.8-0.7 (3H，m)ppm ; 13CNMR(100MHz5DMSO-d6) δ 202.8, 202.6.173.2. 172.0, 170.6, 170.5, 161.7, 139.7, 138.7, 138.7, 136.1，136.1， 131.0,130.9,130.8, 127.3, 125.8, 125.8, 125.7, 125.1，105.1，105.0, 104.8, 85.3, 85.2, 83.5, 83.4, 58.9, 58.5, 58.0, 52.3, 52.2, 47.6, 34.7, 34.6, 33.0, 32.9, 24.6， 24.1，23·9 ; 19 F NMR (376 MHz，d6 -DMSO)(質子去偶合）（5 -226.68， -226.72, -230.50, -231.17, -232.60, -232.66 ; MS ES (+) 439.0 (M+H). 86389 -64- 200404783 實例22 5-藏,基-4-酮基-3-「(2SV2_i4-酮某-6-丙基硫基_4H^杳唑呲-V筝V丁醯基胺基1-戊酸

(S)-2-(4-i同基-6-丙基硫基-4H-p奎吐琳-3-基）-丁酸第三-丁酉旨

此化合物係使用類似方法τ-u與K-M中所述之程序，製自5-氯基-2-硝基苯甲酸甲酯與丙烷硫醇。次標題化合物為固體 ° 1H NMR (400 MHz，CDC13) 5 1·00 (3H，t)，1.10 (3H，t)，1.51 (9H，s)，1.75 (2H，m)，2·01 (ih，m)，2,31 (1H，m)，3·03 (2H，m)，5·30 (1H，m)，7·60-7·70 (2H， m)，8.05 (1H，s)，8·13 (1H，s) ppm ; MS ES (+) 363.29 (M+H).

86389 L虱基_3_「(2S)-2_(4_酮基-6-丙基硫基_4H-p奎峻说-3-基V 丁酸基胺某1- 赠

此化合物係使用類似方法F中所述之程序，製自⑻-2-(4-酮基-6-丙基瓴基-4H_喹唑啉！基）·丁酸（使用，自第三_ 丁酉曰口成）。使用過釕酸四_正-丙基銨（VII) / N-甲基嗎福啉-N-氧化物（合減，639(1994))使所形成之醇氧化，並按方法E中所 -65- 200404783 述，使第三-丁酯去除保護。獲得標題化合物，為白色固體（90 %，最後步驟）（TFA 鹽）。IR (固體）2963.9, 1786_2, 1739.4, 1666.8, 1195.2 公分-1 ; iHNMRGOOMHiCDClO 5 1.02 (3H，t)，l_08(3H，t)， 1J0-1.80 (2H，m)，2·02-2·09 (1H，m)，2·29_2·36 (1H，m)，2.72-2.92 (1H，m)， 3.00-3.15 (1H? m\ 3.03 (2H51)? 4.50-5.20 (3H, m)? 5.40-5.60 (1H? m), 7.69-7·75 (2H，m)，8.06-8.07 (1H，m)，8·60·8_64 (1H，m) ppm; 1 9 F NMR (376 MHz， CDC13)(質子去偶合)-76.23, -231.5 ; MS ES (+) 436·3 (M+H). 實例23 酶檢測 , 對半胱天冬酶抑制之檢測，係以螢光原受質被重組純化人類半胱天冬酶-1、-3、-7或-8之分裂為基礎。檢測基本上係按照由 Garcia-Calvo 等人，J·及·〇/· 273, 32608-32613 (1998))所報告之相同方式，使用對各酶專一之受質進行。對半胱天冬酶-1之受質為乙醯基-Tyr-Val-Ala-Asp-胺基-4-甲基香豆素，而半胱天冬酶-3、-7及-8之受質為乙醯基-Asp-Glu-Val-Asp-胺基斗甲基香豆素，兩者均如 Garcia-Calvo 等人〇/·及b/· C/iem· 273 (1998)， 32608-32613)中所揭示者。於特定抑制劑濃度下，酶失活之發現速率kQbs，係藉由數據之直接吻合至由 Thomberry 等人，吵，33, 3943-3939 (1994) 所導出之方程式中，使用非線性最小平方分析電腦程式 (PRISM2.0; GraphPad軟體）計算而得。為獲得第二級速率常數 Kinact，將值對其個別抑制劑濃度作圖，接著藉由電腦化線性回歸，計算khd值。表2顯示半胱天冬酶-1、-3及-8活性，當藉上述方法測定 86389 -66- 200404783 時，闕於所選定之本發明化合物、 >500000之化合物係列示為”A”。^卩制作用。具有與5〇〇〇〇〇間之化合物，係列示為:，有介於looooo 之化合物，係列示為”C”。、、、β”。具有kinactOVI-V1) < 100000

86389 -67- 200404783 實例24 IL-1石自全血液分之抑制人類血液係剛自健康供應者抽出，並在PBS中以1 : 2稀釋。於500微升經稀釋血液中，添加RpMI培養基中之5〇毫升預稀釋待測化合物與10毫升LPS (5毫微克/毫升，於板上之最後濃度）(LPS，血清型〇111 : B4·，Sigma，L3012)。刺激18小時後，收集上層清液，並使用適當ELISA套件（R&D系統）檢測IL-1 0 含量。下表3顯示IL-1 Θ自人類全血液之分泌，當藉上述方法測定時，關於所選定之本發明化合物之抑制作用。具有IC5〇> 10 之化合物係列示為"Απ。具有IQo介於1 與10 “Μ間之化合物，係列示為"B"。具有1C5〇< 1 之化合物，係列示為，’C，，〇表3· IL-1万分泌之抑制

— 化合，編^— 1 _ IC5〇( βΜ) c 2 c 3 B 4 ... B 5 B 6 B 7 A 8 B 9 — A 10 . B 11 ..... A 12 B -68- 247 86389 200404783

化合物編號 IC5〇(/zM) 13 B 14 C 15 B 16 B 17 B 18 B 19 B 20 A 21 B 22 C 實例25 大白鼠皮質神經元之缺氣所引致之細胞凋零藉由 Rogers 等人，5raz>z 44 : 131 (1998)程序之修正方法，使皮質神經元自Wistar大白鼠胎兒（E17)解離。簡言之，係將大腦皮質以無菌方式自15-20隻Wistar大白鼠胎兒分離。經由將大腦皮質剁碎，並將其與木瓜蛋白酶一起煮解，製備細胞懸浮液。將細胞以卵類黏蛋白酶抑制劑與DNasel洗滌，並覆蓋於經聚D離胺酸塗覆之板上，在含有10%熱失活牛胎兒血清、L-麩醯胺、青黴素及鏈黴素之高葡萄糖DMEM中。神經元之產量為每胎兒10x7，當藉錐藍排除進行評估時，其係為80_90%可用。於缺氧實驗之前，使神經元在完全培養基中，於37°C下，在正常大氣中，培養48小時。為形成缺氧，將正常細胞培養基以氧耗乏之不含血清培養基置換。使細胞在95% N2/5% C02大氣下，培養不同時間。使化合物，在l〇〇mM下，溶於DMS0 86389 -69- 200404783 中’然後在培養基中稀釋，並從時間=〇起，添加至培養物中。細胞洞零之程度係使用細胞死亡偵測ELISA套件（R〇che) 度量’其係價測DNA碎裂。板係在405毫微米下讀取。對照組包括在需氧條件中，於含血清之培養基（+血清）中培養之細胞’與在需氧條件中，於剥奪血清之培養基（_血清）中培養之細胞。表4頜示大白鼠皮質神經元之缺氧所引致細胞凋零中，本發明所選足化合物之活性之結果。具有ICw〉〇·5 “Μ之化合物係列示為”A”。具有IC5 〇介於0.1 與〇·5 //Μ間之化合物，係列示為ηΒπ。具有κ：5〇< 〇·1 —之化合物，係列示為"c，，。表4·在缺氧所引致細胞凋零檢測中之活料化合物編號了， 1 " .ic50( βΜ) 1 Β 2 A 3 Β 4 A 5 Β 6 Β 7 A 8 Β 9 Β 10 C 11 Β 12 A 13 Β 14 A 15 Β 16 Β 86389 -70- 200404783

化合物編號 ic5〇um) 17 B 18 B 19 C 20 B 21 B 22 A 雖然吾人已描述本發明之許多具體實施例，但顯而易見的是，吾人之基本實例可以改變，以提供利用本發明化合物與方法之其他具體實施例。因此，應明瞭的是，本發明之範圍係欲被隨文所附之申請專利範圍界定，而非被已藉由上文實例所代表之特殊具體實施例所界定。 86389 71-

Claims

200404783 拾、申請專利範園·· 1.-種式I化合物·

〇

Y I X為CH或N ; Y為函基、三氟苯氧基或四氟基苯氧基； R2為q_6直鏈或分枝狀燒基； R3為氫、鹵基、OCF3、CN或CF3 ;及 R4 為氫、i 基、〇CF3、SR、CN、CF3、Ar 或 T_Ar ; 其中： τ為Ο或s ; R為- 6直鍵或分枝狀燒基； Ar為視情況被1-3個基團取代之苯環，取代基選自_基、CH3、CF3、CN、OMe、〇CF3 及 NR5R6 ;且 R與R6各獨立為H或C〗-6直鏈或分枝狀燒基，或R5與r6 一起採用，形成5-7員環，視情況含有至高3個雜原子， k自Ο、S、NH及NCCi - 6 直鏈或分枝狀燒基）；其條件是，當γ為鹵基時，則R3與r4不同時為氫。 2·根據中請專利範圍“項之化合物，其中r2為乙基、正_ 丙基或異丙基。 3·根據申請專利範圍第1或2項之化合物，其中Y4F、” 86389 200404783 苯氧基或四氟基苯氧基。 4.根據申請專利範圍第1項之化合物，其具有式IA : 〇

Η OR2 Ο ΙΑ 其中： R2為乙基、正-丙基或異丙基；且 R3與R4各獨立為氫、鹵基、〇CF3、CN、CF3或Ar，其條件是R3與R4不同時為氫。 5. 根據申請專利範圍第4項之化合物，其中R2為乙基。 6. 根據申請專利範圍第4或5項之化合物，其中R3為氫。 7. 根據申請專利範圍第4或5項之化合物，其中R3為Η，且R4 為 F、Cl、CN、Ar 或 CF3。 8. 根據申請專利範圍第4或5項之化合物，其中R4為C1或CF3。 9. 根據申請專利範圍第1項之化合物，其具有式IB : 〇 86389

IB X為CH或N ; ΌΗ OAr2 〇 200404783 R2為乙基、正_丙基或異丙基；汉3與&4各獨立為氫、鹵基、OCF3、CN或CF3 ;及 Ar為二氟苯基或四氟苯基。 10·根據申請專利範圍第9項之化合物，其中&2為2,3,5,6_四氟本基。 U·根據申請專利範圍第9或1〇項之化合物，其中R2為乙基。 12·根據申請專利範圍第9或1〇項之化合物，其中X為CH。 13·根據申請專利範圍第9或1〇項之化合物，其中R3為η，且 R 為 F、C1 或 CF3。 14·根據申請專利範圍第9或1〇項之化合物，其中R4為C1或Cf3。 15·根據申請專利範圍第1項之化合物，其具有式IC : 〇、〇H O R2 IC 其中： R2為乙基、正-丙基或異丙基； R3 為氫、® 基、OCF3、CN 或 CF3 ; R4 為鹵基、OCF3、CN、CF3、SR 或 T-Ar ; T為Ο或S ; 尺為(^-6直鏈或分枝狀垸基； Ar為視情況被1-3個基團取代之苯環，取代基選自鹵基、CH3、CF3、CN、OMe、〇CF3 及 NR5R6 ;及 86389 200404783 〜1、R各獨互為11或(：1-6直鏈或分枝狀烷基，或R5與％ ⑽I知用’形成5-7員環，视情況含有至高3個雜原子，選白η 。、、顺及N(Cl-6·直鏈或分枝狀烷基）。 .根據申請專利範圍第15項之化合物，其中r24乙基。 17·根據中請專利範圍第15或16項之化合物，其中r3為氯。 A根據申請專利範圍第15或16項之化合物，其中丁為〇。

19·根據申請專利範圍第15或16項之化合物，其中r4為τ-Ar。 20·根據申請專利範圍第1項之化合物，其係選自：

86389 -4- 200404783

86389 200404783

21·—種醫藥組合物，其包含： a) 根據申請專利範圍第1或2項之化合物；與 b) 藥學上可接受之載劑、佐劑或媒劑。 22·根據申請專利範圍第21項之醫藥組合物，其可在病患中用於治療疾病，其中該疾病係選自IL-1所媒介疾病、細胞凋零所媒介疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病、破壞性月 >員病症、增生病症、傳染病、變性疾病、與細胞死亡有關聯之疾病、過量飲食醇攝入疾病、病毒所媒介疾病、視網膜病症、葡萄膜炎、炎性腹膜炎、骨關節炎、胰腺炎、氣喘、成人呼吸困難徵候簇、絲球體性腎炎、風濕性關節炎、全身性紅斑狼瘡、硬皮病、慢性甲狀腺炎格田武司氏症、自身免疫胃炎、糖尿病、自身免疫溶血性貧血、自身免疫嗜中性白血球減少症、血小板減少症、慢性活性肝炎、重症肌無力、炎性腸疾病、克隆氏病、牛皮癬、異位性皮炎、傷痕、移植物對宿主疾病、器官移植排斥、燒傷後器官細胞调零、骨質疏鬆症、白血病及相關病症、脊髓發育不良徵候簇、多發性骨髓細胞瘤相關骨頭病症、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白病轉和性黑色素瘤、卡波西氏肉瘤、多發性骨髓瘤、出血性休克、敗血病、敗血性休克、灼傷、志贺桿菌 86389 200404783 病、阿耳滋海默氏疾病、巴金生氏病、亨丁頓氏疾病、 Kennedy氏疾病、Prion疾病、大腦絕血、癲癇、心肌絕血、急性與慢性心臟疾病、心肌梗塞、鬱血性心衰竭、動脈粥瘤硬化、冠狀動脈分流移植、脊柱肌肉萎縮、肌萎縮性側索硬化、多發性硬化、HIV相關之腦炎、老化、禿髮、由於中風所致之神經病傷害、潰瘍性結腸炎、外傷性腦部傷害、脊髓損傷、肝炎-Β、肝炎-C、肝炎_G、黃二病革i熱或曰本腦炎、各種形式之肝病、腎病、多囊腎臟疾病、與幽門螺旋桿菌有關聯之胃與十二指腸潰瘍疾病、HIV感染、結核病、腦膜炎、器官衰竭，治療與冠狀動脈分流移植物有關聯之併發症，及治療各種癌症形式之免疫療法。 23·根據申請專利範圍第22項之醫藥組合物，其中疾病係為、、田胞凋零所媒介疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病、破壞性骨頭病症、增生病症、傳染病、變性疾病、與細胞纪亡有關聯之疾病、過量飲食賴人疾病、病毒所媒介疾病火性腹膜炎、骨關節炎、絲球體性腎炎、風濕性關即炎、糖尿病、自身免疫溶血性貧血、自身免疫嗜中求減V症、血小板減少症、慢性活性肝炎、傷痕植物對佰主疾病、器官移植排斥、燒傷後之器胞凋零、骨皙徒 &、、、田貝迟K症、白血病及相關病症、脊髓良徵候簇、鹩欲α爾a 士、 Λ 不 ^ '二色素瘤、出血性休克、敗血病、目合血性休多、、％ & 次、伶、志贺桿菌病、阿耳滋海默氏疾病、金生庆政一 Cl 、矛丁頓氏疾病、Kennedy氏疾病、柯㈤疾病、 86389 200404783 大腦絕血、癲癇、心肌絕血、急性與慢性心臟疾病、心肌梗塞、鬱血性心衰竭、動脈粥瘤硬化、冠狀動脈分流移植、脊柱肌肉萎縮、肌萎縮性側索硬化、多發性硬化广相關之腦炎、老化、禿髮、由於中風所致之神經病傷害、外傷性腦部傷害、脊髓損傷、肝炎_β、肝炎_c、肝炎-G、各種形式之肝病、腎病、多囊腎臟疾病、與幽門螺旋桿菌有關聯之胃與十二指腸潰瘍疾病、Hiv感染、結核病、腦膜炎，治療與冠狀動脈分流移植物有關聯之併發症’及治療各種癌症形式之免疫療法。 24·根據申請專利範圍第23項之醫藥組合物，其中該疾病係為與冠狀動脈分流移植物有關聯之併發症。 25. 根據中請專利範圍第21項之醫藥組合物，其可在病患中用以抑制半胱天冬酶所媒介之功能。 26. 根據申請專利範圍第21項之醫藥組合物，其可在病患中用以降低IGIF或IFN- 7生產。 27. -種用於保存細胞之組合物’其包含根據中請專利範圍第1或2項之化合物，或其藥學上可接受之衍生物。 28. 根據申請專利範圍第27項之組合物，其中該細胞係在： a) 欲供移植之器官中；或 b) 血液產物中。 29. -種用於治療癌症之免疫治療組合物，其一種成份係包含根據申請專利範圍第1或2項之化合物。 3〇·根據申請專利範圍第21項之醫藥組合物，其中組合物包含另一種治療劑。 86389 200404783 31.根據申請專利範圍第27項之組合物，其中組合物包含另一種治療劑。 32·根據申請專利範圍第29項之免疫治療組合物，其中組合物包含另一種治療劑。 33. —種製備式I化合物之方法

Η 〇 R2 〇 Y I 該方法包括：使式II酸或酸衍生物，

與式B胺基醇反應，以提供式III化合物，

使中間物III轉化成化合物I，其中； X為CH或N ; Y為函基、三氟苯氧基或四氟基苯氧基； 86389 -9- 200404783 R2為Q - 6直鏈或分枝狀燒基； R3為氫、鹵基、〇CF3、CN或CF3 ;及 R4 為氫、鹵基、〇CF3、SR、CN、CF3、Ar 或 T-Ar ; 其中： T為Ο或s ; 1^為<^-6直鏈或分枝狀烷基； Ar為視情況被1-3個基團取代之苯環，取代基選自鹵基、CH3、CF3、CN、OMe、OCF3 及 NR5R6 ; R5與R6各獨立為H或Ci-6直鏈或分枝狀烷基，或R5與R6 一起採用，形成5-7員環，視情況含有至高3個雜原子，選自Ο、S、NH及NCCi-6•直鏈或分枝狀烷基）；及 R7為適當保護基；其條件是，當Y為鹵基時，則R3與R4不同時為氫。 34.—種式IIA化合物：

(S)-工工A 其中； X為CH或N ; R2為Ci - 6直鍵或分枝狀燒基， R3為氫、鹵基、〇CF3、CN或CF3 ;及 R4 為氫、函基、〇CF3、SR、CN、CF3、Ar 或 T-Ar ; 其中= 86389 -10- 200404783 T為Ο或s ; 尺為心-6直鏈或分枝狀烷基； Αχ為視情況被1-3個基團取代之苯環，取代基選自鹵基、CH3、CF3、CN、OMe、〇CF3 及 NR5R6 ;及 R5與R6各獨立為H或C! —6直鏈或分枝狀燒基，或R5與R6 起採用，形成5-7員環，視情況含有至高3個雜原子，選自〇、S、NH及Ν((^_6-直鏈或分枝狀烷基）0 35·根據申請專利範圍第32項之化合物，其中R2為乙基或星丙基。 86389 -11 - 200404783 柒、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：第（）圖。 (二) 本代表圖之元件代表符號簡單說明：捌、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式:

86389