SU1510718A3 - Способ получени полициклического эфирного антибиотика или его фармацевтически приемлемой катионной соли - Google Patents

Abstract

Изобретение касаетс  получени  гетероциклических веществ , в частности, полициклического антибиотика формулы @ или его фармацевтически приемлемой соли, про вл ющих антикоккидиальную активность, что может быть использовано дл  лечени  инфекционных заболеваний животных. Цель изобретени  - создание нового, более активного и менее токсичного соединени  указанного класса. Синтез ведут контролируемым гидролизом антибиотика ИК-58852 под действием 1,1 мол. эквивалента п-толуолсульфоновой кислоты на 1 мол. эквивалент антибиотика в среде раствор ющей смеси, содержащей 95% ацетонитрила и 5% воды. Если необходимо, свободную кислоту перевод т в нужную соль. Новый антибиотик ИК-61689 более активен, чем ИК-58852, при меньшей в 10 раз токсичности. 1 табл.

Description

мулы

ОСИ,

соон

СН,

qHbJ

СНз

Изобретение относитс  к способу получени  нового полициклического эфирного антибиотика ИК-61.689 Г(ЗК, 4S, 5S, 6R, 7S, 22S, 2S, 5S, 6R)- /22,27-дидеметокси-2,6,22-тридеметил- 5,11-ди -0-диметил-6-метокси-22-/-(тет-,. рагидро 5-метокси -6-метил-2Н-пиран-2ил )-окси-ломомицина А7, который про вл ет сильную антикоккидиальную активность и может быть использован дл  лечени  многих инфекционных болезней животных.

I Цель изобретени  - получение нового антибиотика, обладающего ценными

см

315107184

биологически активными свойствами1,25 ч. Реакционную смесь выливают в

и меньшей токсичностью.сепарационкую воронку, нижний масл Пример 1. К раствору 15,0 гный слой удал ют и смешивают с допол (0,0147 ол ) чистогр антибиотика нительным количеством смеси ацетонИК-58 .852 в смеси ацетонитрил/водаитрил/вода 95:5. Ацетонитрил-водные

() (400 мл) добавл ют 3,07 гслои объедин ют и обрабатывают насы (0,0161 мол ) п-толуолсульфоновойщей йым водным бикарбонатом (400 мл),

кислоты. Реакцию контролируют с помо-Смесь затем концентрируют до плотного

щью тонкослойной хроматографии до TextOсиропа под вакуумом, раствор ют в

пор, пока не будет достигнут оптималь-смеси диэтиловий эфир/этилацетат

ный выход целевого продукта (около3:1 (21) и промывают насыщенным вод3 ч). Реакционную смесь обрабатываютным бикарбонатом натри . Органичеизбытком твердого или водного бикарбо- ский слой высушивают над сульфатом

ната натри  и выпаривают под вакуумом 15натри  и концентрируют до полного кодо сухого остатка. Образующеес  твер-ричневого масла. Очистку обычно продое вещество раствор ют в диэтиловомвод т с помощью противоточной экстракэфире и промывают насыщенным воднымции. При экстракции используют смесь

раствором бикарбоната натри , бикар-гексан/этилацетат 1:1 в качестве небонатные промывки экстрагируют диэти- 20пол рной фазы и смесь метанол/вода

ловым эфиро и все эфирные слои объе-3:2 в качестве пол рной водной фазы.

дин ют и промывают последовательноВыпаривание органических экстрактов водой и насыщенным хлористым натрием. дает пластичное твердое вещество, коЭфирный раствор высушивают над без- торое растирают в порошок с изопропиводным сульфатом натри  и выпаривают 2$ловым эфиром, получа  ИК-61.689 в

под вакуумом до сухого остатка. Обра-форме натриевой соли, 10 г, т.пл.169зующийс  сьфой реакционный продукт170 С. Полученный продукт идентичен

содержит ИК-61.689 в качестве главно-соединению ИК-61.689, полученному

го компонента, но загр знен исходнымспособом по примеру 1, как показьшаИК-58 .852 и другими побочными продук-30ет сравнение данных тонкослойной хротами . Сырой продукт очищают хромато-матографии и ЯМР.

графией на силикагеле с последующей Пример 3. Дистиллированна 

рекристаллизацией из изопропиловогодеионизированна  вода (200 мл) добавэфира , получа  4,2 г (32%) 1Ж-61.689л етс  в сол ную кислоту до получени 

в форме натриевой соли, т.пл.175- -35Р 2,5. Натриева  соль ИК-61 .689

176 С; ,3(c 0,5, МеОН) ;(0,3б г) раствор етс  в 100 мл дихлор

С-13 ЯМР (CDClj); М.Д.: 179,15;метана, и промываетс  нейтральной дис107 ,45; 103,18; 97,74; 96,96; 86,92;тиллированной водой и концентрирует84 ,60; 84,20; 82,27; 82,01; 80,88;с  путем сушки под вакуумом до дости80 ,20; 79,86; 74,80; 74,55; 73,07; дОжени  0,225 г (76,85%) свободной кис70 ,06; 67,71; 66,89; 39,11; 56,81;лоты в виде небелого твердого вещест45 ,40; 39,82; 38,93; 36,46; 33,81;ва (тр.133-143). Его инфракрасный

33,71; 33,54; 33,42; 33,13;спектр (КВг) показывает широкую полосу

32,44; 32,26; 30,56; 27,58; 26,90;слабой абсорбции карбоновой кислоты.

26,84; 26,11; 23,23; 18,40; 17,53; .Инфракрасный спектр натриевой соли

16,99; 12,13; 11,04; 10,42.ИК-61.689 показал резкий сильный пик

Пример 2. Неочищенный фер-в отношении карбоксилата при 1600 см. ментационный экстракт (метилизобутил- ИК-58.852:(ЗК, 4S, 5S, 6R, 7S, 22S/2S,

кетон) (11), содержащий антибиотик5S, 6R/) - 22,27-дидеметокси-2,6 22ИК-58 .852; (примерно 25 г), концент-трйдеметил-5,11-ди-0-деметш1-6-меток- рируют под вакуумом до 680 г. Плотноеси-5,22-бис/тетрагидро-5-метокси-6темное маслд добавл ют к смеси аце-метил-2Н-пиран-2-ил)окси/-лономицинА. тонитрил/вода 95:5 (5,61) и образую- Антибиотик ИК-б1.689 про вл ет инщуюс  молокообразную эмульсию обраба-гибирзтощее действие на рост большого

тывают п-толуолсульфоновой кислотойколичества грам-положительных микро (78,2 г) за один прием. По мере того, организмов. В табл,1 суммированы рекак идет реакци , эмульси  постепеннозультаты опытов in vitro. Дл  этих

раздел етс  на два четких сло , кото-опытов каждый организм инокулировали

рые энергично перемешивают в течениев р д тест-пробирок, содержащих пита-,

515

тельную среду и различные концентрации антибиотика ЙК-61.689 дл  определени  минимальной концентрации соединени  в мкг/мл, котора  ингибирует рост организма на 24 ч (МИК).

Даннные по эффиктивности антибиотика ИК-61 .689 и его солей против кок- кидиальных инфекций у цыпл т получены следующим образом. Группы из 3-5- дневных неинфицированных белых петушков леггорнов корм т рационом, содержащим антибиотик ИК-61.689 или его натриевую и/или калиевую соль, равномерно распределенные в корме. После выдерживани  на этом рационе в течение 24 ч каждого цыпленка инокулиру- ют per.OS ооцистами испытуемых видов Eimeria. Другие группы из 3-5-дневных цыпл т корм т таким же рационом, но без антибиотика ИК-61.689 или его солей . Их также инфицируют через 24 ч и. используют в качестве контрольной группы на инфекцию. Еще одну группу из 3-5-дневньгх цыпл т корм т тем же рационом без антибиотика ИК-61.689 и не инфицируют коккидиа. Они используютс  в качестве обычного контрол . Результаты обработки оценивают через п ть дней в случае E.acervulina и щесть дней дл  всех других видов.

Параметр, используемый дл  измерени  антикоккидиальной активности, представл ет собой величины поражени  от О до 4 дл  E.tenella (j.E.Lyuch, NEW Method for the Primary Evaluation of Anticoccidial Activity); и от 0 до 3 дл  других видов по модификации системы подсчета, разработанной J.Jchuson U W.U.Reid (Anti- coccidial Drugs - Sesion Scoring Techuigues in Battery and Floor Pen Experiment in Chin).

Относительные величины получают делением величины поражени  каждой испытуемой группы на величину поражени  у контрольной инфекционной группы.

Антибиотик ИК-61.689 и его катион- ные соли обнаруживают высокую актив- ность против коккндиальных инфекций домашней птицы. При введении в корм цыпл т в количествах 15 - 120 ч/млн эти соединени  эффективны при контроле-инфекции , вызываемых Eimeria tenella, E.acervalina, Е.maxima, E.brunetti u E.uec atrix,

Рацион животных обычно непосредственно определ етс  при их кормлении.

Согласно методик-е , изучени  процесса переваривани  пищи у жвачных in vitr изменени , происход щие в пище под действием микроорганизмов, измер ютс  более быстро и с большей точностью дл  оценки рациона животных (Патент Великобритании № 1197826). Эта метог дика включает использование устройства , в котором пищеварительные процессы животных провод тс  и изучаютс  in vitro. Корм животных, инокулум . рубца и различные промоторы роста ввод тс , и вьшод тс  из лабораторного устройства в тщательно контролируемых услови х и происход щие изменени  непрерывно фиксируютс  в ходе потреблени  пищи микроорганизмами. Возрастание содержани  пропионовой кислоты в жидкости рубца свидетельствует, что нужный результат в процессе пережевывани  пищи вызван промотором роста, включенным в состав корма. Изменени  в содержании пропионовой кислоты выражаютс  в процентах от содержани  пропионовой кислоты в контрольной жидкости рубца. Проводились длительные исследовани  процесса кормлени  in vivo, которые показали значимую коррел цию между возрастанием содержани  пролионовой кислоты в жидкости рубца и улучшением показателей животных .

Жидкость рубца отбирают из фистулы коровы, которую корм т коммерческим рационом дл  откармливани  и сеном. }Кидкость рубца немедленно фильтруют и 10 мл добавл  лт в 50-миллиметрову1о коническую колбу, содержащую 400 мг стандартного субстрата (68 % зернового крахмала + 17% целлюлозы + 15% экстракта из соевых бобов), 10 мл буфера рН 6,8 и испытуемое соединение Колбы наполн ют азотом, не содержащим кислорода, в течение примерно 2 мин. и инкубируют во встр хиваемой вод ной бане при 39 С в течение примерно 16 ч. Все опыты повтор ют три раза.

После инкубировани  5 мл образца смешивают с 1 мл 25%. метафосфорной кислоты. Через 10 мин добавл ют 0,25 мл муравьиной кислоты и смесь центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 мин. Образцы затем анализи-; руют с помощью газожидкостной хрома-- тографии по методике D.W.Kellog.

Высоту пиков дл  уксусной, пропио-j новой и масл ной кислот определ ют

дл  образцов из необработанной и обработанной инкубационных колб.

При исследовании по данной методике in vitro антибиотик ИК-61,689 при содержании 20 микрограмм на миллиметр дает увеличение на примерно 80% производства пропионовой кислоты по сравнению с полученньм в контрольном растворе без добавки антибиотика ИК-61.689. Соединени , которые стимулируют производство ПКР (пропионовой кислоты рубца), улучшают утилизацию пищи у таких жвачных, как крупный рогатый скот и овцы, а также оказывают аналогичное действие на моногастрических животных, таких как свиньи. Антибиотик ИК-61.689 может быть введен в животное путем включев корм как в форме свободной кис- 20 количество агента в готовом корме мони 

лоты, так и в форме соли, например натриевой или калиевой соли, или их смеси. Альтернативно неочрпденный или высушенный ферментационный бульон, содержащий антибиотик ИК-61.689, мо- 25 жет быть введен в корм в нужной кон-; центрации. Антибиотик ИК-61.689 может также примен тьс  в нужной дозе при использовании соответствующего устройства длительной вьщачи препа- .30 рата, предназначенного дл  отмеривани  посто нных доз лекарств.

При использовании дл  лечени  кок- кидиоза домашней птицы предлагаемый антибиотик примен ют орально в под-. 35 ход щем носителе. Наиболее удобно просто вводить препарат в питьевую воду или в корм птицы, так что терапевтическа  доза агента проглатываетс  с ежедневной дозой воды или 40 корма. Агент можно непосредственно отмер ть в питьевую воду, предпочтительно в форме жидкого водорастворимого концентрата (такого, как водный раствор водорастворимой соли), или пр мо добавл ть в корм в чистом виде или в форме премикса или концентрата, Премикс или концентрат терапевтического агента на носителе обычно используют дл  введени  агента в, корм. Подход щими носител ми могут быть - жидкие или твердые, как требуетс , такие как вода, различные пищевые прожет корректироватьс  путем смешивани  соответствующей пропорции премикса с кормом дл  получени  нужной концентрации терапевтического агента.

Высокоэффективные концентраты могут быть получены производителем кормов на белковых носител х, таких, как соевое масло и другие пищевые продукты дл  изготовлени  концентрирован- ных добавок, которые пригодны дл  непосредственного кормлени  птицы. В таких случа х птица получает обычный рацион. Альтернативно такие концентрированные добавки можно вносить пр мо в корм птицы ДЛЯ получени  сбалансированного готового питани ,, содержащего терапевтически эффективное количество соединени .

Смеси получают по стандартным методикам , например, в двухкорпусном смеслтеле, чтобы достичь гомогенности.

Примен емые дозы предлагаемрго антибиотика могут измен тьс  в зависимости от различных обсто тельств. 45 Посто нное применение в низкой дозе в течение периода роста, т.е. в пер-. вые 6-12 недель }кизни цыпл т,  вл етс  эффективной профилактической мерой. При лечении установленной инфекции могут быть необходимы более ззысокие дозы. Примен ема  в корме поза обычно находитс  в интервале 15-120 ч./млн. При применении в питьевой воде позы должны быть такими , чтобы обеспечить

50

Примен емые дозы предлагаемрго антибиотика могут измен тьс  в зависимости от различных обсто тельств. 45 Посто нное применение в низкой дозе в течение периода роста, т.е. в пер-. вые 6-12 недель }кизни цыпл т,  вл етс  эффективной профилактической мерой При лечении установленной инфекции могут быть необходимы более ззысокие дозы. Примен ема  в корме поза обычно находитс  в интервале 15-120 ч./млн. При применении в питьевой воде позы должны быть такими , чтобы обеспечить

дукты, например соевое масло, льн ное масло, кукулзузные.початки и мине-55ту же ежедневную дозу приема, т.е. ральные смеси, ка кие обычно исполь- 15-120 ч./млн, с учетом коэффициента, ЗУЮТ.СЯ в кормах дл  птицы. В особен-равного отношению среднего ежеднев- ности эффективным носителем  вл етс ,ного потреблени  пищи к среднему еже- сам корм птицы, т.е. ма.па  порци дневному потреблению воды.

этого корма. Носитель облегчает равномерное распределение активног о материала в корме, с которым смешиваетс  премикс. Это обсто тельство  вл етс  важным, так как требуетс  только небольша  концентраци  данного сильнодействующего агента. Существенно , чтобы соединение бьто полностью

смешано в премиксе и затем с кормом. Агент может быть диспергирован или растворен в подход щем масл ном носителе , таком как соевое масло, кукурузное масло, хлопковое масло и т.п.,

или в летучем органическом растворителе и затем смешан с носителем. Предпочтительно , чтобы пропорци  активного материала в концентрате могла изме- н тьс  в широком интервале, так как

жет корректироватьс  путем смешивани  соответствующей пропорции премикса с кормом дл  получени  нужной концентрации терапевтического агента.

Высокоэффективные концентраты могут быть получены производителем кормов на белковых носител х, таких, как соевое масло и другие пищевые продукты дл  изготовлени  концентрирован- ных добавок, которые пригодны дл  непосредственного кормлени  птицы. В таких случа х птица получает обычный рацион. Альтернативно такие концентрированные добавки можно вносить пр мо в корм птицы ДЛЯ получени  сбалансированного готового питани ,, содержащего терапевтически эффективное количество соединени .

Смеси получают по стандартным методикам , например, в двухкорпусном смеслтеле, чтобы достичь гомогенности

Примен емые дозы предлагаемрго антибиотика могут измен тьс  в зависимости от различных обсто тельств. Посто нное применение в низкой дозе в течение периода роста, т.е. в пер-. вые 6-12 недель }кизни цыпл т,  вл етс  эффективной профилактической мерой. При лечении установленной инфекции могут быть необходимы более ззысокие дозы. Примен ема  в корме поза обычно находитс  в интервале 15-120 ч./млн. При применении в питьевой воде позы олжны быть такими , чтобы обеспечить

ту же ежедневную дозу приема, т.е. 15-120 ч./млн, с учетом коэффициента, равного отношению среднего ежеднев- ,ного потреблени  пищи к среднему еже- дневному потреблению воды.

9 пгн Q

СНо. д.

соон

или его фармацевтически приемлемой катионной- соли, отличаю s o OCHj

ОСНз

соон CHj

подвергают контролируемому кислотно-,с содержащей 95 мас.% ацетонитрила и му гидролизу действием 1,1 мол.экви- 5 мас.% воды, и, если необходимо, валента п-толуолсульфоновой кислоты перевод т свободную кислоту в ее фар- на 1 мол.эквивалент соединени  фор- мацевтически приемлемую катионную .мулы II в среде раствор ющей смеси, соль.

..ОСНз

о снз:С з

r xj /,,CHl

)Н СН, СНз

3

щ и и с   тем, что соединение формулы II

..ОСНз

H-iC

ii- CH-i

О

I j и г г LT - л,,

сн,н сн, н н н он

3

.Таблица 2

Claims (1)

1. Формула изобретения сичности каждого компонента.

   Эти величины LDy^ показывают, что

   ИК-61«689 примерно в. 10.раз менее

   Способ получения полициклического эфирного антибиотика'формулы I:

   или его фармацевтически приемлемой катионной· соли, отличаю щийся тем, что соединение формулы II подвергают контролируемому кислотному гидролизу действием 1,1 мол.эквивалента п-толуолсульфоновой кислоты на 1 мол.эквивалент соединения формулы II в среде растворяющей смеси, эд содержащей 95 мас.% ацетонитрила и

   5 мас.% воды, и, если необходимо, переводят свободную кислоту в ее фар· мацевтически приемлемую катионную соль.

   Таблица 1

   Организм | Штамм № | МИК, мкг/мл Clostridium perfringens 10A006 25 10A009 3,12 Actinomycu pyogenes 14 002 0,39 14 008 0,39 14 011 0,39 Tuponema hyodysenterial 94A001 6,25 94A002 6,25 94A007 3,12 ’ 94A008 3,12

   Il

   . Т а блица 2 Грызуны | Метод введения I мг Г”ЙК-587852~ /кг Гйк=б17б89 Мышь-самец Орально 2-5 25 - 50 Мышь-самец, Внутрибрюшинно 2-5 15 - 30 Крысы-самцы Орально 1 - 2 50 - 100 Крысы-самцы Внутрибрюшинно 0,2 - 1 >10

   Составитель И,Дьяченко