PL150863B1

PL150863B1 - The method of manufacture of a new antibiotic, acid multiring ether

Info

Publication number: PL150863B1
Application number: PL1987267084A
Authority: PL
Priority date: 1986-08-01
Filing date: 1987-07-30
Publication date: 1990-07-31
Also published as: PT85463B; US4912130A; YU144387A; FI873326A; EP0255335A2; YU45093B; NO165678C; US4992466A; CS572487A2; SK278214B6; DK171134B1; IN168460B; JPH0576959B2; NO873034L; MX7556A; IE60669B1; DD280105A5; GR3001582T3; ATE60784T1; US4804680A

Description

RZECZPOSPOLITA POLSKA	OPIS PATENTOWY	150863

	Patent dodatkowy do patentu nr-
	Zgłoszono: θ7 07 30 /P. 267084/
	Pierwszeństwo.* 86 08 01 Wielka Brytania
		Int. Cl.⁵ C07H 17/04
URZĄD	Zgłoszenie ogłoszono: ^{88 09 01}
PATENTOWY
RP	Opis patentowy opublikowano: 1990 11 30

Twórcy wynalazku: Alexander Crossan Goudie, Nigel Derek Arthur Walshe

Uprawniony z patentu: Pfizer Limited, Sandwich /Wielka Brytania/

SPOSOB WYTWARZANIA NOWEGO, ANTYBIOTYCZNEGO, KWASOWEGO ETERU WIELOPIERŚCIENIOWEGO

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania nowego, antybiotycznego, kwasowego eteru wielopierścieniowego, należącego do związków, które charakteryzuje biologicznie ich wpływ na transport kationów poprzez błony komórkowe· Ta grupa antybiotyków obejmuje takie dobrze znane środki jak monensin, nigericin, grisorixin, dianemycin, maduramycin, narasin, salinomycin, lasalocid, mutalómycin, ionomycin i leuseramycin· Przeglądu tego zagadnienia dokonał Westley w Polyether Antibiotics, Adv. Appl. Microbiol. 22, 177, 1977·

Wymienione wyżej antybiotyczne etery wielopierścieniowe są aktywne przeciw bakteriom Gram dodatnim, grzybom i pierwotniakom. W szczególności antybiotyki te wykazują dużą aktywność przeciwkokcydiozową. Dlatego też stosowano je, z różnym stopniem skuteczności, do leczenia różnych zakażeń u zwierząt·

Dobrze znana choroba wywołana przez pierwotniaki, kokcydioza, jest nadal poważnym problemem, a zwalczanie jej jest ważne ekonomicznie w weterynarii, zwłaszcza dla przemysłu drobiarskiego· Kokcydioza wywoływana jest zakażeniem jednym lub kilkoma gatunkami Elimeria lub Isospora /przegląd znajduje się w pracy Lunda i Farra Diseases of Poultry, wydanie 5, Biester and Schwarte, Eds, Iowa State University, Press· Ames, la, 1965, str.1056-1096/· Jest sześć gatunków kokcydium, które u podatnych kurcząt wywołują łatwo rozpoznawalną chorobę· Eimeria tenella, E. necatrix, E.brunetti, E. acervulina, E. maxima i E· mivati powodują szkody albo bezpośrednio przez rozkład komórek nabłonkowych przewodu trawiennego, albo pośrednio przez wytwarzanie toksyn. Trzy inne gatunki pierwotniaków należące do tego samego rodzaju, uważane są za stosunkowo nieszkodliwe, jednak E. mitis, E. hagani i E. praecox mogą powodować spadek wagi, obniżenie wydajności pokarmowej i szkodliwie wpływać na produkcję Jaj· Ze względu na duże straty ekonomiczne, które wyrządza kokcydioza, trwają poszukiwania nowych środków przeciw tej chorobie·

150 863

Zapalenie Jelit jest drugą chorobą, która noże wywołać poważne straty ekonomiczna w hodowlach zwierząt domowych· Zapalenie jelit występuje u drobiu, świń, bydła i owiec, a wywołują ja bakteria beztlenowe, zwłaszcza Clostridium parfringans i wirusy· Zatrucie jelitowe u przeżuwaczy, którego przykładem Jest występująca u owiec choroba z przejedzenia, jest wywołane zakażeniem C .perfringens·

Dyzenteria świńska Jest jedną z najczęściej rozpoznawanych w Stanach Zjednoczonych Ameryki chorób świń· W dodatku Jest to choroba bardzo rozpowszechniona w wielu innych krajach i powoduje corocznie poważne straty w inwentarzu żywym w gospodarstwach hodowlanych na całym święcie. Ostatnio stwierdzono, że drobnoustrojem wywołującym tę chorobę Jest duży krętek· Drobnoustrój ten, Treponsma hyodysenteriae, został obecnie wyizolowany i wykazano, że ma zdolność do wywoływania taj choroby / Harris, D.L. i in., Swine Dysentery-1, Inoculation of Pigs with Treponema hyodysenteriae /New Species/ and Reproduction of the Disease, Vet·

Mad· /SAC, 67, 61-64, 1972 /· Podane dalej wyniki badań dotyczą testów prowadzonych z tym organizmem. Należy zaznaczyć, ża nie wiadomo czy T. hyodysenteriae jest jednym organizmem wywołującym świńską dysenterię. Jednak z dostępnych danych można wnioskować, że jest to najważniejsze źródło zakażenia.

Poprawa wydajności, czyli przyspieszenie wzrostu i/lub poprawienie wydajności wykorzystywania paszy, u przeżuwaczy, takich jak bydło i u zwierząt jednożołądkowych, takich jak świnie jest innym ważnym ekonomicznie zagadnieniem w weterynarii. Szczególnie interesujące jest poprawienie wydajności, które osiąga się przez polepszenie efektywności wykorzystania paszy. Mechanizm wykorzystywania głównej części odżywczej pasz przeżuwaczy jest dobrze znany. Drobnoustroje w pierwszym żołądku tych zwierząt rozkładają węglowodany do prostych cukrów, a następnie przekształcają je w związki pirogronowe. Pochodne pirogronowe są metabolizowane w procesach mikrobiologicznych, dając octany, maślany i propioniany, znane pod wspólną nazwą lotnych kwasów tłuszczowych. Bardziej szczegółowe omówienie tego zagadnienia znajduje się w pracy Lenga Physiology of Digestion and Metabolism in the Ruminant, Phillipson i in., Eds. Oriel Press, Newcastle-upon-Tyne, Anglia, 1970, 408-410. Względną skuteczność wykorzystania lotnych kwasów tłuszczowych omówiono w pracy McCullough, Feedstuffs , 19 czerwca 1971, strona 19, Eskeland i in. J. An. Sci. 33, 282, 1971 i Church i in., Digestive Physiology and Nutrition of Ruminants, tom 2, 1971, str.622 i 625. Chociaż wykorzystywane są octany i maślany, to z większą skutecznością utylizowane są propioniany. Poza tym, jeżeli dostępność propionianów jest zbyt mała, u zwierząt może rozwinąć się kwasica ketonowa. Dlatego więc, korzystny związek może stymulować organizmy zwierząt do wytwarzania wyższych proporcji propionianów z węglowodanów, przyczyniając się w ten sposób do poprawy wykorzystania węglowodanów, a przy tym ograniczając przypadki kwasicy ketonowej.

Sposób według wynalazku dotyczy wytwarzania nowego, antybiotycznego, kwasowego eteru wielopierścieniowego. Z europejskiego opisu patentowego nr 0169011 znany jest antybiotyczny, kwasowy eter wielopierścieniowy, oznaczony symbolem UK-58.852 o wzorze 2, wytwarzany przez podpowierzchniową hodowlę z napowietrzaniem, w środowisku wodnym pożywki, drobnoustroju Actinomadura roseorufa Hung sp. nov., ATCC 39697, wyizolowanego z próbki gleby w Japonii. Obecnie stwierdzono, że hydroliza UK-58.852, prowadzona w starannie kontrolowanych warunkach, powoduje odszczepienie jednego ze związanych z cząsteczką pierścieni glikonowych, dając nowy związek w pełni skuteczny jako środek przeciw kokcydiozie o szerokim spektrum działania, który jest korzystniejszy od związku UK-58.852 o wzorze 2, ze względu na korzystniejszy profil toksyczności·

Sposób według wynalazku wytwarzania nowego, antybiotycznego, kwasowego eteru wielopierścieniowego oznaczonego jako antybiotyk UK-61.689 o wzorze 1 i jego dopuszczalnej farmakologicznie, kationowej soli, takiej jak sól sodowa lub potasowa, polega na poddaniu związku o wzorze 2, oznaczonego symbolem UK-58.852, lub Jego soli kationowej, kontrolowanej hydrolizie ·

Hydrolizę UK-58.852 prowadzi się korzystnie przy użyciu kwasu para-toluenosulfonowego w rozpuszczalniku acetonitryl/woda· Korzystna kompozycja rozpuszczalnikowa acetonitryl/

150 863 woda zawiera 5-0,5% wody· Stosuje się korzystnie 1,1 równoważnika molowego kwasu paratolusnosulfonowego na 1 równoważnik soli sodowej UK-58.852.

Innymi układami rozpuszczalnikowymi, które mogę być używana sę czysty acetonitryl, IIIrzęd.butanol/woda lub aceton/woda· Alternatywnymi kwasami mogę być kwasy mineralne, takie jak kwas solny, kwas octowy lub żywica mocno kwaśna· Reakcję prowadzi się zwykle w temperaturze pokojowej, a jej postęp obserwuje się za pomocę chromatografii cienkowarstwowej, do czasu aż wydajność wytwarzanego produktu będzie optymalna· Czas reakcji jest zwykle około 1-3 godzin w przypadku hydrolizy prowadzonej kwasem para-toluenosulfonowym w układzie acetonitryl/woda, ale będzie się zmieniał w zależności od użytego kwasu 1 układu rozpuszczalnikowego· Po dojściu reakcji do praktycznego zakończenia, mieszaninę raakcyjnę zobojętnia się nadmiarem wodorowęglanu sodu, zatęża 1 ekstrahuje się eterem etylowym lub dwuchlorometanem, a następnie oczyszcza się stosujęc standardowe techniki chromatografii na żelu krzemionkowym· Produkt końcowy można następnie rekrystalizować jako wolny kwas lub odpowiednię sól kationowa·

Antybiotyk UK-61«689 może być wytwarzany z surowych wycięgów fermentacyjnych zawierajęcych antybiotyk UK-58.852. W tym przypadku ekstrakt pofermentacyjny w ketonie metylowo-izobutylowym/MIBK/ zatęża się i korzystnie po rozpuszczeniu w acetonitrylu/wodzie, zadaje się kwasem para-toluenosulfonowym· Korzystny układ acetonitryl-woda zawiera 5% wody, a stosunek surowego oleju pofermentacyjnego do kwasu para-toluenosulfonowego wynosi około 9:1· Wartości te sę przybliżone i mogę zmieniać się w zależności od składu wycięgu pofermentacyjne go· Innym układem rozpuszczalników, który może być używany, jest metanol/woda, ale hydrolizę można również prowadzić przez traktowanie surowego wycięgu MIBK kwasem para-toluenosulfonowym bez dodatku rozpuszczalnika· Alternatywnymi kwasami sę kwasy mineralne, takie jak kwas solny·

Antybiotyk UK-61.689 ma zdolność hamowania wzrostu wielu drobnoustrojów gramdodatnich. W poniższej tabeli zestawiono wyniki badań prowadzonych in vitro· W testach tych, dla oznaczenia najniższego stężenia zwięzku w ug/ml, które hamuje wzrost drobnoustroju w cięgu 24 godzin /MIC/, każdy drobnoustrój posiewa się w serii próbek testowych zawierajęcych pożywkę i różne stężenia antybiotyku UK-61.689.

Tabela

Aktywność	przeciwbakteryj na	- ” T

Drobnoustrój	1	Numer szczepu	1	MIC ug/ml
Clostridium perfringens	1 1	10A006	1 1	25
	1	10A009	1	3,12
	--Γ		Γ “
Actinomyces pyogenes	1	14D002	1	0,39
	1	14D008	1	0,39
	1 _ _ L -	14D011	1 . L .	0,39
Treponema hyodysenteriae	1	94A001	1	6,25
	1	94A002	1	6,25
	1 \|	94A007	1 \|	3,12
	1	94A008	1	3,12	___1
Dane o skuteczności	antybiotyku UK-61.689 i	jego	soli wobec zakażeniom	kokcy-

dium u kurczęt otrzymano w następujęcy sposób. Grupy po 3-5 sztuk dziesięciodniowych, niezakażonych kogutków rasy biały leghorn karmiono mieszankę paszowę, zawierajęcę antybiotyk UK-61.689 albo jego sól sodowę i/lub potasowę dokładnie rozproszony w paszy. Po utrzymywaniu przez 24 godziny na takiej diecie, każde kurczę zakażono per os oocystaml poszczególnych badanych gatunków Eimerla· Inne grupy po 3-5 dziesięciodniowych kurczęt karmiono podobnę mieszankę paszowę bez dodatku antybiotyku UK-61.689 lub jego soli· Zwierzęta te również zakażono po 24 godzinach, a służyły jako grupa kontrolna. Jaszcze innę grupę po 3-5 dzieslę4

150 863 ciodnlowych kurcząt karmiono taką samą paszą bez antybiotyku UK-61.689, ale nie zakażono ich kokcydium. Zwierzęta te służyły jako kontrolna grupa normalnego wzrostu· Wyniki badania oceniano po 5 dniach w przypadku E.acarvulina, a po 6 dniach w przypadkach pozostałych zakażeń·

Kryteria użyta do pomiaru aktywności przeciw kokcydiozia polegały na punktowaniu zmian chorobowych od O do 4 dla E· tenella według 3·Ε· Lynche, A Naw Method for tha Primary Evaluation of Antlcoccidial Activity, A·· □· Vet, Ras·* 22, 324-326, 1961, a O do 3 dla Innych gatunków w oparciu o modyfikację systemu punktacji przygotowaną przez □•□ohnsona i W.H. Relda Antlcoccidial Drugs Lesion Scoring Techniquas an Battary and Floor Pan Experlments in Chicks, Exp. Parasit·, 28, 30-36, 1970· Stały wskaźnik ustalono przez podzielenie liczby punktów odpowiadających zmianom chorobowym w każdej grupie zwierząt leczonych przez liczbę tych punktów dla zakażonej grupy kontrolnej·

Stwierdzono, że antybiotyk UK-61«689 i jego sole kationowe mają doskonałą aktywność przeciw zakażeniom drobiu kokcydiozą· Wprowadzone w ilości 15-120 ppm do paszy kurcząt skutecznie niszczą zakażenia wywołana przez Eimeria tenella, E.acervulina, E.maxima, E.brunetti i E.necatrix.

Wartość karmy zwierzęcej ocenia się przez bezpośrednie karmienie zwierzęcia.

W brytyjskim opisie patentowym nr 1 197 826 podano szczegóły techniki trawienia w pierwszym żołądku in vitro i technikę tę zastosowano do prostego i dokładniejszego oceniania pasz zwierzęcych, pozwalającego na pomiar zmian następujących w paszy, do której wprowadzono drobno ustroje. Technika ta obejmuje użycie aparatu, w którym procesy trawienne u zwierząt są prowadzone i badane in vitro. Pasze zwierzęce - inokulum z pierwszego żołądka i różne promotory wzrostu wprowadza się i usuwa z aparatu laboratoryjnego w ściśle kontrolowanych warunkach i następujące zmiany bada się krytycznie i progresywnie podczas wykorzystywania paszy przez drobnoustroje. Wzrost zawartości kwasu propionowego w płynie pierwszego żołądka wskazuje, że przyrost zawartości promotora w składzie paszy powoduje korzystną reakcję ogólnej wydajności trawiennej pierwszego żołądka· Zmianę zawartości kwasu propionowego wyraża się jako procent zawartości kwasu propionowego znajdującego się w kontrolnym płynie pierwszego żołądka· Długoterminowe badania prowadzone in vivo stosowane przy karmieniu wykazały niezawodną korelację wzrostu zawartości kwasu propionowego w płynie żołądkowym z poprawą wydajności hodowlanej zwierząt·

Płyn żołądkowy zbierano od krowy przez przetokę przy żywieniu zwierzęcia porcją handlowej paszy i sianem· Płyn żołądkowy sączy się natychmiast przez gazę i 10 ml tego płynu nalewa się do stożkowej kolby zawierającej 400 mg standardowego substratu /68% skrobi kukurydzianej * 17% celulozy * 15% ekstrahowanej mączki sojowej/, 10 ml buforu o pH 6,8 i badany związek· Kolby przemywa się azotem nie zawierającym tlenu przez około 10 minut i inkubuje się w łaźni wodnej o temperaturze 39°C na trzęeawca przez około 16 godzin· Każde badanie przeprowadzano trzykrotnie·

Po inkubacji 5 ml próbki mieszano z 1 ml 25% kwasu metafosforowego· Po 10 minutach dodano 0,25 ml kwasu mrówkowego i mieszaninę wirowano 10 minut przy 1500 obrotach na minutę· Próbki analizowano następnie metodą chromatografii gazowo-cieczowej, według D.W· Kelloga, □ · Dairy Science, 52, 1690, 1969· Dla prób z nietTaktowanych i traktowanych kolb inkubacyjnych określano wysokości pików dla kwasu octowego, propionowego i masłowego.

Badany tą metodą in vitro antybiotyk UK-61.689 przy stężeniu 20 ug/ml dawał wzrost do około 80% wytwarzania kwasu propionowego ponad zawartość w roztworze kontrolnym, bez dodatku antybiotyku UK-61.689. Wiadomo, że związki stymulujące wytwarzanie żołądkowego kwasu propionowego poprawiają wykorzystanie paszy przez przeżuwacze, takie jak bydło i owce, jak również mogą mieć podobny wpływ na takie zwierzęta jadnożołądkowa jak świnie. Antybiotyk UK-61«689 można podawać zwierzęciu przez dodanie go do zestawu paszowego, albo jako kwas lub jako sól, np· sól sodową lub potasową, bądź jako ich mieszaninę· Alternatywnie do paszy można dodawać antybiotyk w stężeniach zawierających pożądane działanie w postaci surowej lub suszonej brzeczki fermentacyjnej zawierającej UK-61.689. Antybiotyk ten można również podawać w wymaganych dawkach, stosując odpowiedni dozownik o długotrwałym działaniu, tak zbudowany, żeby mógł odmierzać stałe porcje leku·

150 Θ63 ‘ 5

Do użytku w leczeniu kokcydlozy u drobiu zwlęzek wytwarzany sposobem według wynalazku podaje się doustnie w odpowiednim nośniku· Zwykle lek podaje eię w wodzie do picia lub w paszy dla drobiu w taki sposób, żeby dawka lecznicza środka była przyjmowana w dziennej racji wody lub paszy dla drobiu· Lek może być odmierzany bezpośrednio do wody pitnej, korzystnie w postaci ciekłej, koncentratu rozpuszczalnego w wodzie /takiego jak wodny roztwór rozpuszczalnej w wodzie soli/ lub dodawany bezpośrednio do paszy jako taki, albo w postaci przedmieszki lub koncentratu·

Przedmieszka lub koncentrat środka leczniczego w nośniku sę stosowane zwykle do wprowadzania środka do paszy· Odpowiednie nośniki sę ciekłe lub stałe, w zależności od potrzeby i sę to woda, różne męczki, np· męczka z soi oleistej, wytłoki siemienia lnianego, zmielone kaczany kukurydzy i mieszanki mineralne, takie jak zwykle stosowane w paszach drobiowych. Szczególnie właściwym nośnikiem jest pasza dla drobiu jako taka, czyli mała porcja paszy dla drobiu, z którę miesza się substancję leczniczę· Nośnik ułatwia równomierne rozmieszczenie substancji czynnych w gotowej paszy, z którę miesza się ten premiks· Jest to ważne, ponieważ tylko małe porcje silnych środków powinny być podawane· Ważne jest dokładne zmieszanie zwięzku z przedmieszkę, a następnie z paszę· Z tego względu środek leczniczy może być zdyspergowany lub rozpuszczony w odpowiednim nośniku oleistym takim jak olej sojowy, olej kukurydziany, olej z nasion bawełny lub podobny, albo w lotnym rozpuszczalniku organicznym, a następnie mieszany z nośnikiem· Winno być oczywiste, że udziały składnika czynnego w koncentracie mogę się zmieniać, ponieważ ilość środka w gotowej paszy jest regulowana podczas mieszania odpowiedniej części przemieszki z paszę, żeby otrzymać wymagane stężenie środka leczniczego·

Koncentraty o dużym stężeniu mogę być mieszane przez producenta paszy z takim nośnikiem białkowym, jak męczka z soi oleistej i inne podane wyżej męczki,w celu otrzymania stężonych dodatków, które nadaję się do bezpośredniego karmienia drobiu· W takich przypadkach pozwala się, żeby drób otrzymywał zwykłę karmę· Alternatywnie, takie stężone dodatki mogę być wprowadzane bezpośrednio do paszy dla drobiu, w celu otrzymania paszy gotowej o zrównoważonej zawartości składników pokarmowych, zawierajęcej skutecznę ilość zwięzku wytwarzanego sposobem według wynalazku· Pasze te miesza się starannie znanymi sposobami, takimi jak mieszanie w dwuwarstwowym blenderze, w celu zapewnienia jednorodności mieszanki paszowej· Oczywiście znaw com przedmiotu będzie wiadomo, że ilości zwięzków wytwarzanych sposobem według wynalazku, które należy zastosować, będę zmieniać się w zależności od wielu czynników· Właściwę metodę profilaktycznę jest cięgłe stosowanie niskich dawek podczas okresu wzrostu, czyli w cięgu pierwszych 6-12 tygodni życia kurczęt· Do leczenia ustalonych zakażeń konieczne sę wyższe poziomy dawkowania· Zawartość leku w paszy będzie zwykle w zakresie 15 - 120 ppm· Przy podawaniu w wodzie do picia dawka powinna być tak dobrana, żeby w cięgu dnia wynosiła tyle samo, czyli 15 - 120 ppm, przy czym ilość wagowę wylicza ze współczynnika odpowiadajęcego średniemu, dziennemu zapotrzebowaniu na paszę do średniego, dziennego spożycia wody· Sposób według wynalazku ilustruję następujęce przykłady·

Przykład I· Do roztworu 15,0 g /0,0147 mola/ czystego antybiotyku UK-58.852 /otrzymanego w sposób opisany w europejskim opisie patentowym nr 0169011 /w acetonitrylu/ wodzie /95:5/ /400 ml/ dodano 3,07 g /0,0161 mola/ kwasu p-toluenosulfonowego· Reakcję kontrolowano metodę chromatografii cienkowarstwowej aż wydajność produktu wydała się optymalna /około 3 godzin/· Mieszaninę reakcyjnę zadano nadmiarem stałego wodorowęglanu sodu lub jego roztworu i zatężono w próżni do sucha· Otrzymane ciało stałe rozpuszczono w eterze etylowym i przemyto nasyconym, wodnym roztworem wodorowęglanu sodu· Popłuczki wodorowęglanowe ekstrahowano eterem etylowym i wszystkie wycięgi eterowe połęczono 1 kolejno przemyto wodę i nasyconym roztworem chlorku sodu· Roztwór eterowy suszono bezwodnym siarczanem 9odu 1 odparowano do sucha w próżni· Otrzymany surowy produkt reakcji zawierał jako główny składnik UK-61.689, który był zanieczyszczony różnymi ilościami wyjściowego UK-58.852 i innymi produktami ubocznymi·

150 863

Surowy produkt oczyszczono chromatograficznie na żalu krzemionkowym, a następnie krystalizowano z eteru izopropylowego, otrzymujęc 4,2 g /y&J υκ-61·689 w postaci soli sodowoj w temperaturze topnienie 175-176°C. /bC/§⁵ +19,3° /C - 0,5, CHgOH/, C-13 NMR /CDC1₃/j 179,15 ppm, 107,45, 103,18, 97,74, 96,96, 66,92, 84,60, 84,20, 82,27, 82,01, 80,88, 80,20, 79,86, 74,80, 74,55,73,07, 70,06, 67,71, 66,89, 59,11, 56,81, 45,40, 39,82, 38,93, 36,46, 33,81, 33,71 33,54, 33,42, 33,13, 32,44, 32,26, 30,56, 27,58, 26,90, 26,84, 26,11, 23,23, 18,40, 17,53, 16,99, 12,13, 11,04, 10,42.

Przykład II· Surowy wycięg fermentacyjny /1 1/ zawlerajęcy antybiotyk UK-58.852 /wyliczono 25 g/ zatężono w próżni do 680 g· Gęsty, ciemny olej dodano do acetonitrylu/wody /95:5/ /5,6 1/ i otrzymanę mlecznę emulsję zadano kwasem p-toluenosulfonowym /78,2 g/ w jednej porcji· W miarę postępu reakcji emulsja stopniowo rozdzielała się na dwie oddzielne warstwy, które energicznie mieszano przez ogółem 1,25 godziny· Mieszaninę reakcyjnę wylano do rozdzielacza i usunięto oleistę warstwę dolnę i zawieszono ję w dodatkowej ilości acetonitrylu /wody/ /95:5/· Warstwy w acetonitrylu/wodzie połęczono i zadano nasyconym wodnym roztworem wodorowęglanu /400 ml/· Mieszaninę następnie zatężono do postaci gęstego syropu pod próżnię, rozpuszczono w eterze etylowym/octanie etylu /3:1/ /2 1/ i przemyto nasyconym roztworem wodnym wodorowęglanu· Warstwę organicznę suszono siarczanem sodu i zatężono do postaci gęstego, bręzowego oleju /432 g/· Oczyszczanie przeprowadzano najdogodniej stosujęc technikę ekstrakcji przeciwprędowej· Do ekstrakcji stosowano heksan :octan etylu /1:1/ jako fazę niepolarnę i metanol:wodę /3:2/ jako polarnę fazę wodnę· Odparowanie wycięgów organicznych dało ciało półstałe, które roztarto z eterem izopropylowym, otrzymujęc UK-61.689 jako sól sodowę, 10 g, temperatura topnienia 160-170°C. Otrzymana substancja była identyczna za zwięzkiem UK-61,689 uzyskanym w przykładzie I, co potwierdziło porównanie wyników chromatografii cienkowarstwowej i widma NMR·

Claims

Zastrzeżenia patentowe

1· Sposób wytwarzania nowego, antybiotycznego, kwasowego eteru wielopierścieniowego o wzorze 1 i jego dopuszczalnej farmakologicznie soli, znamienny tym, że zwięzek o wzorze 2 lub jego sól kationowę poddaje się kontrolowanej hydrolizie i otrzymany zwięzek w postaci kwasu ewentualnie przekształca się w dopuszczalnę farmakologicznie sól kationowę·
2· Sposób według zastrzel, znamienny tym, że hydrolizę prowadzi się kwasem p-toluenosulfonowym w acetonitrylu/wodzie jako rozpuszczalniku·
3· Sposób według zastrz«2, znamienny tym, że stosuje się rozpuszczalnik acetonitryl/woda, zawierajęcy 5-0,5% wody·
4· Sposób według zastrz«2, znamienny tym, że stosuje się 1,1 równoważników molowych kwasu p-toluenosulfonowego na 1 równoważnik soli sodowej zwięzku o wzorze 2·

150 863 ? ,00¾¹ <^l'»'0CH₃ i¹ CH·,

OH