DK171134B1 - Polycyclisk etherforbindelse, fremgangsmåde til fremstilling deraf, foderblandinger indeholdende forbindelsen og fremgangsmåde til fremme af vækst og/eller foderudbyttelse hos svin og kvæg - Google Patents

Description

i DK 171134 B1

Denne opfindelse angår et hidtil ukendt medlem af gruppen af sure polycycliske ethere med antibiotisk aktivitet, en klasse af forbindelser, som biologisk er karakteristiske ved deres virkning på kationtransport igennem cellemembra-5 ner. Denne familie af antibiotika inkluderer sådanne velkendte midler som monensin, nigericin, grisorixin, diane-mycin, meduramycin, narasin, salinomycin, lasalocid, mu-talomycin, ionomycin og leuseramycin. Emnet er blevet gennemgået af Westley, "Polyether Antibiotics", Adv. Appl.

10 Microbiol., 22, 177, 1977.

De ovenfor anførte polycyclisk-ether-antibiotika er aktive over for Gram-positive bakterier, svampe og protozoer. Især udviser disse antibiotika anticoccidial aktivitet. De er derfor blevet anvendt med varierende grader af succes 15 til behandling af en række forskellige dyreinfektioner.

Den velkendte protozoiske sygdom, coccidiosis, er fortsat et alvorligt problem, og bekæmpelsen af den er af økonomisk betydning for veterinærvidenskaben, især for fjerkræindustrien. Coccidiosis er resultatet af infektion med en 20 eller flere arter af Eimeria eller Isospora (med hensyn til en samlet oversigt, se Lund og Farr i "Diseases of Poultry", 5th ed., Biester and Schwarte, Eds., Iowa State University Press, Ames, la., 1965, side 1056-1096). Der er seks arter af coccidier, som frembringer let skelnelig 25 morbiditet hos modtagelige kyllinger. Eimeria tenella, E. necatrix, E. brunetti, E. acervulina, E. maxima og E. mi-vati frembringer skade enten direkte ved ødelæggelse af epithelceller i fordøjelseskanalen eller indirekte via produktion af toxiner. Tre andre arter af protozoer tilhø-30 rende den samme slægt antages at være relativt uskadelige; imidlertid er E. mitis, E. hagani og E. praecox i stand til at reducere tilvækst, nedsætte fodereffektivitet og derfor skade en produktion.

2 DK 171134 B1 I betragtning af de store økonomiske tab på grund af coc-cidiosis fortsætter eftersøgningen af nye anticoccidiale midler.

Enteritis er en anden sygdom, som kan forårsage alvorlige 5 økonomiske tab for husdyrproducenter. Enteritis forekommer hos høns, svin, kvæg og får og tilskrives hovedsageligt anaerobe bakterier, især Clostridium perfringens, og virus. Enterotoxæmia hos drøvtyggere, hvor et eksempel er "forædelsessyge" hos får, er en tilstand forårsaget af C.

10 perfringens infektion.

Svinedysenteri er en af de mest almindelige svinesygdomme diagnosticeret i USA. Desuden er sygdommen fremherskende i mange andre lande og forårsager årligt betydelige tab for svineavlere verden rundt. Det er fornylig blevet opdaget, 15 at en stor spirochæte er den kausative organisme for sygdommen. Denne organisme, Treponema hyodysenteriae, er nu blevet isoleret og vist at være i stand til at frembringe sygdommen [Harris, D. L. et al. "Swine Dysentery-1, Inoculation of Pigs with Treponema hyodysenteriae (New Species) 20 and Reproduction of the Disease", Vet. Med/SAC, £7., 61-64, 1972]. De i det følgende angivne prøvningsdata angår prøvninger gennemført med denne organisme. Det må bemærkes, at det ikke er kendt, om T. hypdysenteriae er den eneste kausative organisme for svinedysenteri. Imidlertid kan det ud 25 fra de tilgængelige data konkluderes, at den er en primær infektionskilde.

Forhøjelse af ydelse (forøget væksthastighed og/eller forøget effektivitet af foderudnyttelse) hos drøvtyggere, såsom kvæg, og hos monogastriske dyr, såsom svin, er et 30 andet økonomisk ønskeligt formål for veterinærvidenskaben.

Af særlig interesse er forbedret ydelse opnået ved forøgelse af foderudnyttelseseffektiviteten. Mekanismen for DK 171134 Bl 3 udnyttelse af hovednæringsportionen i drøvtyggerfodere er velkendt. Mikroorganismer i dyrets vom nedbryder carbonhy-drater til dannelse af monosaccharider og omdanner derpå disse monosaccharider til pyruvatforbindelser. Pyruvater 5 metaboliseres ved mikrobiologiske processer til dannelse af acetater, butyrater eller propionater, tilsammen kendt som flygtige fede syrer. Med hensyn til en mere detaljeret omtale, se Leng i "Physiology of Digestion and Metabolism in the Ruminant", Phillipson et al., Eds., Oriel Press, 10 Newcastle-upon-Tyne, England, 1970, side 408-410.

Den relative effektivitet af udnyttelsen af flygtige fedtsyrer omtales af McCullough i "Feedstuffs", 19. juni 1971, side 19; Eskeland et al. i J. An. Sci., ϋ, 282, 1971; og Church et al. i "Digestive Physiology and Nutrition of 15 Ruminants", Vol. 2, 1971, side 622 og 625. Selvom acetater og butyrater udnyttes, udnyttes propionater med større effektivitet. Endvidere kan dyrene, når der er for lidt pro-pionat til rådighed, udvikle ketosis. En gavnlig forbindelse stimulerer derfor dyrene til at producere en højere 20 andel af propionater ud fra carbonhydrater, hvorved car-bonhydratudnyttelsen forøges effektivt, og forekomsten af ketosis reduceres.

EP offentliggørelsesskrift nr. 169 011 og det tilsvarende danske fremlæggelsesskrift nr. 159 451 angiver et surt po-25 lycyclisk-ether-antibiotikum, betegnet som UK-58852, med formlen: 4 DK 171134 B1 OCH- Λ-Λ. ΓΓ ^ .0 OH 3 /-0^ CH, CH3 i_CH CT3 I OH H i Η 0 I 0/Tl °i 3

5 COOH CH3 CH3 H CH3 H HH OH

s om produceres ved submers aerob formering i vandige næringsmedier af mikroorganismen Actinomadura roseorufa Huang sp. nov., ATCC 39697, isoleret fra jordprøven fra Japan. Det har nu vist sig, at hydrolyse af UK-58852 under 10 omhyggeligt kontrollerede betingelser fører til fraspalt-ning af en af de tilknyttede glyconringe under dannelse af en hidtil ukendt forbindelse, som er fuldt effektiv som et bredspektret anticoccidialt middel, og som har fordele frem for forbindelsen UK-58852 på grund af dens forbedrede 15 toxicitetsprofil.

Den foreliggende opfindelse angår den hidtil ukendte forbindelse, betegnet UK-61689, med formlen: OCH 3 „OH oh CH3

COOH CH3 ch3 h ch3 h k H OH

og dens farmaceutisk acceptable kationsalte. Eksempler på 25 sådanne salte er natrium- og kaliumsaltene.

DK 171134 Bl 5

Ifølge opfindelsen tilvejebringes også en fremgangsmåde til fremstilling af UK-61689 eller farmaceutisk acceptable kationsalte deraf, som er særegen ved, at der foretages en kontrolleret hydrolyse af forbindelsen UK-58852 eller et 5 kationsalt deraf under anvendelse af para-toluensulfonsyre i et acetonitril/vand-opløsningsmiddel. Den foretrukne acetonitril/vand-sammensætning indeholder mellem 5 og 0,5% vand. Fortrinsvis anvendes et forhold på 1,1 molært ækvivalent para-toluensulfonsyre til 1 ækvivalent af natrium-10 saltet af UK-58852.

Almindeligvis udføres reaktionen ved stuetemperatur og følges ved tyndtlagskromatografi, indtil udbyttet af det ønskede produkt synes at være optimalt. Reaktionstiden er almindeligvis omkring 1-3 timer. Efter at reaktionen er 15 forløbet i det væsentlige til fuldførelse, neutraliseres reaktionsblandingen med overskud af natriumhydrogencarbo-nat, koncentreres og ekstraheres med diethylether eller dichlormethan og renses derefter under anvendelse af stan-dard-silicagel-kromatografi-teknik. Slutproduktet kan der-20 på omkrystalliseres som den frie syre eller et passende kationsalt.

Alternativt kan UK-61689 dannes ud fra rå gæringsekstrakter indeholdende UK-58852. Således koncentreres en methy-lisobutylketon-(MIBK)-gæringsekstrakt og opløses i aceto-25 nitril/vand og behandles med para-toluensulfonsyre. Den foretrukne acetonitril/vand-sammensætning indeholder 5% vand, og forholdet mellem rå gæringsolie og para-toluensulfonsyre er omkring 9:1, men disse forhold er tilnærmede og kan variere efter sammensætningen af gærekstrakten. 1

Den foreliggende opfindelse angår endvidere en foderblanding til kvæg eller svin, som er særegen ved, at den indeholder forbindelsen UK-61689 eller et farmaceutisk accep- 6 DK 171134 B1 tabelt kationsalt deraf i en mængde, som er effektiv til at fremme vækst og/eller forbedre foderudnyttelse hos kvæg eller svin, samt en fremgangsmåde til fremme af vækst og/eller forøgelse af foderudnyttelseseffektivitet hos 5 svin eller kvæg, som er særegen ved, at svinene eller kvæget indgives en vækstfremmende eller foderudnyttelseseffekt ivites fremmende mængde af forbindelsen UK-61689 eller et farmaceutisk acceptabelt kationsalt deraf.

Desuden angår opfindelsen en foderblanding til fjerkræ, 10 som er særegen ved, at den indeholder forbindelsen UK-61689 eller et farmaceutisk acceptabelt kationsalt deraf i en mængde, som er effektiv til at bekæmpe coccidiein-fektioner hos fjerkræet.

Endelig angår opfindelsen også anvendelsen af forbindelsen 15 UK-61689 eller et farmaceutisk acceptabelt kationsalt der af til fremstilling af et lægemiddel til kvæg, svin eller fjerkræ til fremme af vækst og/eller forbedring af foderudnyttelse hos kvæg eller svin eller til bekæmpelse af coccidieinfektioner hos fjerkræ. 1 2 3 4 5 6 UK-61689 udviser inhiberende virkning over for væksten af 2 et antal Gram-positive mikroorganismer. I tabel I nedenfor 3 er sammenfattet resultaterne af in vitro prøvninger. Til 4 denne prøvning indpodes hver organisme i en række reagens 5 glas indeholdende næringsmedium og forskellige koncentra- 6 tioner af UK-61689 for at bestemme den minimale koncentration af forbindelsen i pg/ml, som inhiberer væksten af organismen over et tidsrum på 24 timer (MIC).

7 DK 171134 B1 TABEL 1

Antibakteriel aktivitet

Organisme Stamme nr. MIC ua/ml

Clostridium perfringens 10A006 25 10A009 3/12

Actinomyces pyogens 14D002 0,39 14D008 0,39 14D011 0,39

Treponema hyodysenteriae 94A001 6,25 94A002 6,25 94A007 3,12 94A008 3,12

Effektivitetsdata for UK-61689 og dens salte over for coc-cidieinfektioner hos kyllinger blev opnået på følgende må-5 de. Grupper på 3-5 ti dage gamle patogenfrie hvide Leghorn hanekyllinger blev fodret med et blandfoder indeholdende UK-61689 eller dens natrium- og/eller kaliumsalt ensartet dispergeret deri. Efter at have været på denne kost i 24 timer blev hver kylling indpodet per os med oocyster af 10 den bestemte art af Eimeria, som skulle prøves. Andre grupper på 3-5 ti dage gamle kyllinger blev fodret med et lignende blandfoder uden UK-61689 eller dens salte. De blev også inficeret efter 24 timer og tjente som inficere- DK 171134 Bl 8 de kontroller. Endnu en anden gruppe på 3-5 ti dage gamle kyllinger blev fodret med det samme blandfoder uden UK-61689 eller dets salte og blev ikke inficeret med coc-cidier. Disse tjente som normale kontroller. Resultaterne 5 af behandlingen blev bedømt efter fem dage i tilfælde af E. acervulina og seks dage for alle andre prøvede mikroorganismer .

De kriterier, der blev anvendt til at måle anticoccidial aktivitet, bestod af læsionstal på 0-4 for E. tenella ef-10 ter J. E. Lynch, "A New Method for the Primary Evaluation of Anticoccidial Activity", Am. J. Vet. Res., 22.· 324-326, 1961; og 0-3 for de andre arter baseret på modifikation af det pointsystem, som er foreskrevet af J. Johnson and W.

H. Reid, "Anticoccidial Drugs. Lesion Scoring Techniques 15 in Battery and Floor Pen Experiments in Chicks", Exp. Parasit., 23 30-36, 1970. Et konstant forhold blev etableret ved at dividere læsionstallet for hver behandlet gruppe med læsionstallet for den inficerede kontrol.

Det blev fundet, at UK-61689 og dens kationsalte udviser 20 udmærket aktivitet over for coccidieinfektioner hos fjerkræ. Når de inkorporeres i kyllingernes kost i niveauer på 15-120 ppm, er disse forbindelser effektive til bekæmpelse af infektioner på grund af Eimeria tenella, E. acervulina, E. maxima, E. brunetti og E. necatrix. 1 2 3 4 5 6 Værdien af dyrefoder er almindeligvis blevet bestemt di 2 rekte ved fodring af dyret. GB patent skrift nr. 1 197 826 3 angiver detaljeret en in vitro vom-teknik, hvorved de æn 4 dringer i det tilførte foder, som frembringes af mikroor 5 ganismer, måltes lettere og med større nøjagtighed ved be- 6 dømmelsen af dyrefodere. Denne teknik involverer anvendelsen af et apparat, hvori dyrenes fordøjelsesprocesser gennemføres og undersøges in vitro. Dyrefoderne, vom-inoculura 9 DK 171134 B1 og forskellige vækstfremmende midler indføres i og udtages fra en laboratorieenhed under omhyggeligt styrede betingelser, og de stedfundne ændringer undersøges kritisk og fremadskridende under mikroorganismernes forbrug af fode-5 ret. En forøgelse i vomvæskens propionsyreindhold viser, at der er blevet fremkaldt et ønskeligt respons i samlet vomydelse af det vækstfremmende middel i fodersammensætningen. Ændringen i propionsyreindhold udtrykkes som procent af det propionsyreindhold, som findes i kontrolvæ-10 sken. Langvarige in vivo fodringsundersøgelser anvendes til at vise en pålidelig korrelation mellem propionsyre-forøgelse i vomvæsken og forbedret dyreydelse.

Vomvæsken opsamles fra en fistuleret ko, som fodres på en kommerciel opfedningsration plus hø. Vomvæsken filtreres 15 øjeblikkeligt igennem osteklæde, og 10 ml sættes til en 50 ml konisk kolbe indeholdende 400 mg standardsubstrat (68% majsstivelse + 17% cellulose + 15% ekstraheret sojabønnemel), 10 ml af en pH 6,8 puffer og prøveforbindelsen. Kolberne gasses med oxygenfrit nitrogen i omkring 2 minutter 20 og inkuberes i et rystevandbad ved 39 °C i omkring 16 timer. Alle prøvninger gennemføres tredobbelt.

Efter inkubationen blandes 5 ml af prøven med 1 ml 25% me-taphosphorsyre. Efter 10 minutter tilsættes 0,25 ml myresyre, og blandingen centrifugeres ved 1500 omdr./min i 10 25 minutter. Prøver analyseres derpå ved gas-væskekromatografi ved metoden beskrevet af D. W. Kellog, J. Dairy Science, $2., 1690, 1969. Maksimumshøjder for eddikesyre, propionsyre og smørsyre bestemmes for prøver fra ubehandlede og behandlede inkubationskolber. 1 Når den blev prøvet ved denne in vitro procedure, gav UK-61689 i niveauet 20 Mg/ml anledning til en forøgelse på omkring 80% i produktionen af propionsyre i forhold til 10 DK 171134 B1 den, der produceres i kontrolopløsningen uden tilsat UK-61689. Forbindelser, som stimulerer produktionen af RPA (vompropionsyre) vides at forbedre foderudnyttelsen hos drøvtyggere, såsom kvæg og får, og kan også have en lig-5 nende virkning på monogastriske dyr, såsom svin. UK-61689 kan indgives dyret ved inkorporering i fodersammensætninger, enten som den frie syre eller som et salt, f.eks. natrium- eller kaliumsaltet, eller en blanding deraf. Alternativt kan en rå form eller tørret gæringsvæske indehol-10 dende UK-61689 inkorporeres i fodersammensætningen i de ønskede styrkekoncentrationer. UK-61689 kan også indgives i den ønskede dosering under anvendelse af en passende indretning til forlænget afgivning, udformet til at udmåle konstante niveauer af midlet.

15 Til anvendelse ved behandling af coccidiosis hos fjerkræ indgives forbindelsen ifølge opfindelsen oralt i en egnet bærer. Hensigtsmæssigt udføres lægemiddelindgivelsen simpelthen i drikkevandet eller i fjerkræfoderet, således at en terapeutisk dosering af midlet indtages med den daglige 20 vand- eller fjerkræfoderration. Midlet kan udmåles direkte i drikkevand, fortrinsvis i form af et flydende vandopløseligt koncentrat (såsom en vandig opløsning af et vandopløseligt salt) eller sættes direkte til foderet, som sådant eller i form af en forblanding eller et koncentrat.

25 En forblanding eller et koncentrat af midlet i en bærer anvendes almindeligvis til inklusion af midlet i foderet. Egnede bærere er flydende eller faste efter ønske, såsom vand, forskellige melarter, f.eks. sojabønneoliemel, hør-frøoliemel, majskolbemel og mineralblandinger, som dem der 30 almindeligvis anvendes i fjerkræfoderet selv; dvs. en lille portion af fjerkræfoder. Bæreren letter ensartet fordeling af de aktive materialer i det færdige foder, hvormed forblandingen sammenblandes. Dette er vigtigt, fordi der DK 171134 Bl 11 kun kræves små mængdeforhold af de omhandlede kraftige midler. Det er vigtigt, at forbindelsen blandes grundigt i forblandingen og derefter i foderet. I denne henseende kan midlet dispergeres eller opløses i et egnet olieagtigt me-5 dium, såsom sojabønneolie, majsolie, bomuldsfrøolie og lignende, eller i et flygtigt organisk opløsningsmiddel og derpå blandes med bæreren. Det vil indses, at mængdeforholdet af aktivt materiale i koncentratet kan varieres bredt, eftersom mængden af middel i det færdige foder kan 10 indstilles ved blanding af den passende mængde forblanding med foderet til opnåelse af et ønsket niveau af det terapeutiske middel.

Høj-styrke-koncentrater kan af foderfremstilleren blandes med proteinholdig bærer, såsom sojabønneoliemel og andre 15 melarter, som beskrevet ovenfor, til dannelse af koncentrerede supplementer, som er egnede til direkte fodring af fjerkræ. I sådanne tilfælde får fjerkræet lov til at indtage den sædvanlige kost. Alternativt kan sådanne koncentrerede supplementer sættes direkte til fjerkræfoderet til 20 dannelse af et næringsmæssigt afbalanceret færdigfoder indeholdende et terapeutisk effektivt niveau af forbindelsen ifølge opfindelsen. Blandingerne sammenblandes ved standardprocedurer, såsom i en dobbeltskåls blander, for at sikre homogenitet. 1 2 3 4 5 6

Det vil selvfølgelig være indlysende for fagfolk, at an 2 vendelsesniveauerne af forbindelsen ifølge opfindelsen vil 3 variere under forskellige omstændigheder. Kontinuert læge 4 middeltilførsel på lavt niveau under vækstperioden, dvs.

5 under de første 6-12 uger for kyllinger, er en effektiv 6 profylaktisk foranstaltning. Ved behandlingen af etablerede infektioner kan højere niveauer være nødvendige for at overvinde infektionen. Anvendelsesniveauet i foder vil almindeligvis være i området 15-120 ppm. Når forbindelsen 12 DK 171134 B1 indgives i drikkevand, vil niveauet være det, som vil tilvejebringe den samme daglige dosis af lægemiddel, dvs. 15-120 ppm, ganget med vægtforholdet mellem det gennemsnitlige daglige forbrug af foder og det gennemsnitlige daglige 5 forbrug af vand.

Opfindelsen belyses nærmere ved de følgende eksempler. EKSEMPEL 1

Til en opløsning af 15,0 g (0,0147 mol) rent antibiotikum UK-58852 (fremstillet som beskrevet i EP-A-0169011) i ace-10 tonitril/vand (95:5) (499 ml) blev tilsat 3,07 g (0,0161 mol) p-toluensulfonsyre. Reaktionen blev kontrolleret ved tyndtlagskromatografi, indtil udbyttet af det ønskede produkt syntes at være optimalt (ca. 3 timer). Reaktionsblandingen blev behandlet med overskud af fast eller vandigt 15 natriumhydrogencarbonat og koncentreret til tørhed under vakuum. Det resulterende faste stof blev opløst i diethy-lether og vasket med en mættet vandig opløsning af natriumhydrogencarbonat. Hydrogencarbonat-vaskevæskerne blev ekstraheret med diethylether, og alle etherlagene blev 20 kombineret og vasket successivt med vand og mættet natri-umchloridopløsning. Etheropløsningen blev tørret over vandfrit natriumsulfat og inddampet til tørhed under vakuum. Det resulterende rå reaktionsprodukt indeholdt UK-61689 som det overvejende produkt, men var forurenet 25 med varierende mængder af udgangs-UK-58852 og andre biprodukter. Det rå produkt blev renset ved silicagel-kromato-grafi efterfulgt af omkrystallisation fra isopropylether, hvilket gav 4,2 g (32%) UK-61689 som natriumsaltet, smp. 175-176 °C; [α]^ = +19,3° (c = 0,5, MeOH); 13C-NMR (CDC13) 30 ppm: 179,15, 107,45, 103,18, 97,74, 96,96, 86,92, 84,60, 84,20, 82,27, 82,01, 80,88, 80,20, 79,86, 74,80, 74,55, 73,07, 70,06, 67,71, 66,89, 59,11, 56,81, 45,40, 39,82, 13 DK 171134 B1 38,93, 36,46, 33,81, 33,71, 33,54, 33,42, 33,13, 32,44, 32,26, 30,56, 27,58, 26,90, 26,84, 26,11, 23,23, 18,40, 17,53, 16,99, 12,13, 11,04, 10,42.

EKSEMPEL 2 5 En rå MIBK-gæringsekstrakt (1 liter) indeholdende antibiotikum UK-58852 (anslået 25 g) blev koncentreret under vakuum til 680 g. Den tykke mørke olie blev tilsat til ace-tonitril/vand (95:5) (5,6 liter), og den resulterende mælkede emulsion blev behandlet med p-toluensulfonsyre (78,2 10 g) i én portion. Efterhånden som reaktionen skred frem, skiltes emulsionen gradvis i to adskilte lag, som blev omrørt kraftigt i i alt 1,25 time. Reaktionsblandingen blev hældt i en skilletragt, og det olieagtige bundlag blev udtaget og opslæmmet med yderligere acetonitril/vand (95:5).

15 Acetonitril/vandlagene blev kombineret og behandlet med mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning (400 ml). Blandingen blev derpå koncentreret til en tyk sirup under vakuum, opløst i diethylether/ethylacetat (3:1) (2 liter) og vasket med mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløs-20 ning. Det organiske lag blev tørret over natriumsulfat og koncentreret til en tyk brun olie (432 g). Rensning gennemførtes mest hensigtsmæssigt under anvendelse af mod-strøms-ekstraktions-teknik. Til ekstraktionen anvendtes hexan/ethylacetat (1:1) som den ikke-polære fase og metha-25 nol/vand (3:2) som den polære vandige fase. Inddampning af de organiske ekstrakter gav et halvfast stof, som blev udrevet med isopropylether, hvilket gav UK-61689 som natriumsaltet, 10 g, smp. 169-170 °C. Dette materiale var identisk med den forbindelse UK-61689, som blev produceret i 30 eksempel 1, ved sammenligninger af TLC og NMR.

Claims (10)

1. Polycyclisk ether-forbindelse, betegnet UK-61689, med formlen * OCHj

0. OH CH3 0,3 \ >^/] ° > ___I / \ ^V--L CH^ COOH CH3 CH3 H CH3 H HH OH 10 og farmaceutisk acceptable kationsalte deraf.

2. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den har form af natriumsaltet.

3. Foderblanding til kvæg eller svin, kendetegnet ved, at den indeholder en forbindelse ifølge krav 1 15 eller 2 i en mængde, som er effektiv til at fremme vækst og/eller forbedre foderudnyttelse hos kvæg eller svin.

4. Fremgangsmåde til fremme af vækst og/eller forøgelse af foderudnyttelseseffektivitet hos svin eller kvæg, kendetegnet ved, at svinene eller kvæget indgives en 20 vækstfremmende eller foderudnyttelseseffektivitetsfremmende mængde af en forbindelse ifølge krav 1 eller 2. 1 Fremgangsmåde ifølge krav 4, kendetegnet ved, at forbindelsen indgives svinene eller kvæget ved tilsætning af forbindelsen til foder, som indtages af dis- 25 se. 15 DK 171134 B1

6. Foderblanding til fjerkræ, kendetegnet ved, at den indeholder en forbindelse ifølge krav 1 eller 2 i en mængde, som er effektiv til at bekæmpe coccidieinfekti-oner hos fjerkræet.

7. Foderblanding ifølge krav 3 eller 6, kendeteg net ved, at den indeholder 15-120 ppm af forbindelsen ifølge krav 1 eller 2.

8. Anvendelse af en forbindelse ifølge krav 1 eller 2 til fremstilling af et lægemiddel til kvæg, svin eller fjerkræ 10 til fremme af vækst og/eller forbedring af foderudnyttelse hos kvæg eller svin eller til bekæmpelse af coccidieinfek-tioner hos fjerkræ.

9. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at der foretages en 15 kontrolleret hydrolyse af en forbindelse med formlen: /a„, nc- j) oh 3 y*° CH3 o V f L \ I OH Η 1 Η 0 I IN)-'! foil k

20 COOH CH3 CH3 H C«3 η HH OH eller et kationsalt deraf under anvendelse af para-toluen-sulfonsyre i et acetonitril/vand-opløsningsmiddel, hvorpå et dannet kationsalt, om nødvendigt, omdannes til den frie syre eller et farmaceutisk acceptabelt kationsalt deraf 25 ifølge krav 1.