SK354091A3 - Antibiotic on polycyclic ether base, its application and nutritional fodder mixture containing this antibiotic - Google Patents

Description

ANTIBIOTIKUM ΝΑ BÁZE POLYCYKLICKÉHO ÉTERU, JEHO POUŽITIE A NUTRIČNÁ KRMIVOVÁ ZMES OBSAHUJÚCA TOTO ANTIBIOTIKUM

Oblasť techniky

Vynález sa týka skupiny^Jantibiotík) acidickyíz^ polycyklickyé^ éterovyc/? pričom táto skupina zlúčenín je charakterizovaná svojim účinkom na katiónový transport bunečnými membránami. Do rozsahu vynálezu tiež patrí použitie tohto antibiotika k promótovaniu rastu a/alebo zvýšenia účinnosti využitia krmiva u hovädzieho dobytka alebo prasiat alebo na kontrolovanie kokcidiálnej infekcie u hydiny. Antibiotikum podlá vynálezu sa tiež pridáva do nutričnej krmivovej zmesi pre hovädzí dobytok alebo pre prasce, pričom táto nutričná krmivová zmes tiež patrí do rozsahu uvedeného vynálezu.

Doterajší stav techniky

Antibiotikum podlá vynálezu patrí do skupiny antibiotík, do ktorej patria tiež bežne známe látky monenzín, nigericín, grizorixín, dianemycín, meduramycín, narazín, salinomycín, lasalocid, mutalomycín, ionomycín a leuseramycín. Tieto látky sú bližšie popisované v Polyether Antibiotics, Adv. Appl. Microbiol., 22, 177, 1977, autor Westley.

Vyššie uvedené polycyklické éterové antibiotiká sú účinné voči gram-pozitívnym baktériám, pliesňam a prvokom (inak protozoa, jednobunečné živočíšne mikroorganizmy). Hlavne je potrebné zdôrazniť., že tieto antibiotiká sú obzvlášť účinné ako anti-kokcidiálne činidlá. Z tohto dôvodu boli tieto látky použité s rôznym úspechom pri liečení rôznych ochorení zvierat.

Velmi dobre známe protozoálne ochorenie, kokcidióza, predstavuje v súčasnej dobe stále existujúci problém, pričom veterinárna veda stále poukazuje na nevyhnutnosť riešenia tohto vážneho a stále sa vyskytujúceho problému, ktorý má značné ekonomické dôsledky, hlavne, čo sa týka c/iJjďďAJ hydiny. Táto kokcidióza pochádza z infekcie spôsobovanej jedným alebo viacerými druhmi Eimeria alebo Isospora (v tomto smere je možné poukázal na publikáciu: Lund a Farr: Diseases of Poultry, 5. vydanie, Biester and Schwarte, Eds., Iowa State University Press, Ames., Ia., 1965, str. 1056 - 1096^. Existuje šesť druhov kokcidií, ktoré vyvolávajú ľahko rozoznateľnú chorobu u kureniec náchylných na toto ochorenie. Eimeria tenella, E. necatrix, E. brunetti, E. acervulina, E. maxima a E. mivati spôsobujú poškodenie buď priamo tým, že ich účinkom dochádza k deštrukcii epiteliálnych buniek zažívacieho traktu, alebo nepriamo tým, že produkujú toxíny. Ďalšie tri druhy protozoí, ktoré patria k rovnakému kmeňu, sú pokladané za neškodné, avšak E. mitis, E. hagani a E. praecox sú schopné spôsobovať znižovanie hmotnostného prírastku, znižovanie využiteľnosti potravy a nepriaznivo pôsobiť na produkciu vajec.

Vzhľadom k veľkým ekonomickým stratám spôsobovaným kokcidiózou výskumy zamerané na objavenie nových antikokcidiálnych látok v súčasnej dobe stále pokračujú. Enteritída je ďalší druh ochorenia, ktorý môže spôsobovať obrovské ekonomické straty, hlavne u dobytka. Táto enteritída sa objavuje u kureniec, prasiat, hovädzieho dobytka

I a oviec, pričom je zapríčiňovaná hlavne anaeróbnymi baktériami, hlavne Clostridium perfringens, a vírmi. U prežúvavcov sa vyskytuje enterotoxémia, to znamená stav, ktorý je spôsobovaný infekciou C. perfringens, pričom ako príklad tejto choroby je možné uviest ochorenie prejavujúce sa prejedaním u oviec.

Dyzentéria je jednou z najčastejšie diagnostikovaných chorôb v Spojených štátoch amerických. Okrem toho je potrebné uviesť, že táto choroba bola zavlečená do mnohých iných krajín a ročne spôsobuje veľké straty u CÍ\.,C\/'Cid£-Ĺo-\/ prasiat na celom svete. V poslednej dobe bolo zistené, že organizmom, ktorý spôsobuje toto ochorenie, je veľká spirochéta. Tento organizmus Treponema hyodysenteriae bol teraz izolovaný a bolo potvrdené, že je schopný spôsobovať túto chorobu (pozri D. Harris a kol., Swine

Dysentery-1, Inoculation of Pigs with Treponema hyodysenteriae (New species) and Reproduction of the disease, Vet. Med./SAC.,

67, 61 - 64, 1972). Výsledky testov uvádzaných ďalej v tomto texte potvrdzujú doteraz vykonané testy s týmto organizmom.

V tomto bode je potrebné poznamenať, že nie je známe, či T.

hyodysenteriae je jediným organizmom, ktorý zapríčiňuje /· dyzentériu u prasiat. Z výsledkov, ktoré sú zatial k dispozícii, však vyplýva, že tento organizmus je hlavným zdrojom uvedenej infekcie.

Zlepšená efektívnosť alebo prospievanie (čo znamená zvýšená rýchlosť prírastku a/alebo zvýšená účinnosť využitia krmiva) u prežúvavcov ako je hovädzí dobytok a u monogastrických zvierat, ako sú napríklad prasce, je ďalšie vhodné ekonomické kritérium veterinárnej vedy. Čo sa týka tohto kritéria, predstavujúceho zlepšenie efektívnosti, je záujem sústredený hlavne na zlepšenie efektívnosti prostredníctvom účinnosti využitia krmiva. Tento mechanizmus využitia hlavného nutričného podielu krmiva pre prežúvavce je velmi dobre známy. Mikroorganizmy, ktoré sú prítomné v bachore zvierat, rozkladajú karbohydráty za vzniku monosacharidov a potom prevádzajú tieto monosacharidy na pyrohroznanové zlúčeniny. Tieto pyrohroznanové zlúčeniny sa metabolizujú mikrobiologickými procesmi na acetáty, butyráty alebo propionáty, ktoré sú spoločne označované ako prchavé mastné kyseliny. Ďalší detailný popis týchto procesov je možné nájsť v publikácii: Leng: Physiology of Digestion and Metabolism in the Ruminant, Phillipson a kol., Eds., Oriel Press, Newcastle-upon-Tyne, Anglicko, 1970, str. 408 - 410.

Relatívna účinnosť využitia prchavých mastných kyselín je rozobraná v publikáciách: Mc Cullough, Feedstuffs, 19. jún 1971, str. 19; Eskeland a kol., J. An. Sci., 33, 282, 1971; a Church a kol., Digestive Physiology and Nutrition of Ruminants , Vol. 2, 1971, str. 622 a 625. Napriek tomu, že acetáty a butyráty sú tiež využívané, sú propionáty využívané s väčšou účinnosťou. Okrem toho je nevyhnutné uviest, že ak je k dispozícii príliš malé množstvo propionátu, môže sa vo zvieratách vyvolať tvorba ketózy. Zlúčeniny pôsobiace vhodným spôsobom môžu z tohto dôvodu stimulovať zvieratá, aby produkovali vyšší podiel propionátov z karbohydrátov, čím sa dosiahne zvýšenie účinnosti využitia karbohydrátov, a tým sa tiež dosiahne zmenšenie pôsobenia ketózy.

Ako už bolo uvedené, je vynález zameraný na antibiotikum na báze acidického polycyklického éteru. V európskom patente EPA č. 0169011 sa uvádza acidické polycyklické éterové antibiotikum, označované ako UK-58,852, ktoré má všeobecný vzorec:

v ktorom R a R¹ predstavujú obidva atóm vodíka, pričom táto látka je produkovaná submerznou aeróbnou kultiváciou mikroorganizmu

Actinomadura roseorufa Huang sp. nov., ATCC vo vodnom živnom prostredí, pričom tento mikroorganizmus bol izolovaný zo vzoriek pôdy v Japonsku.

Podstata vynálezu

Podľa uvedeného vynálezu bolo zistené, že hydrolýzou vyššie uvedenej látky UK-58,352 pri starostlivo kontrolovaných podmienkach sa dosiahne rozštiepenie ^z jedného pripojeného glykónového kruhu, pričom sa získa zlúčenina, ktorá je účinná ako antikokcidiálne činidlo so širokým spektrom účinnosti, pričom táto látka podlá vynálezu je výhodnejšia ako zlúčenina UK-58,852, lebo má lepší profil toxicity.

Podstatu uvedeného vynálezu predstavuje zlúčenina označovaná ako Antibiotikum UK-61,689, čo je antibiotikum štruktúrneho vzorca I (UK-61,689):

(I) a farmaceutický prijateľné katiónové soli odvodené od tejto zlúčeniny. Ako príklad týchto solí je možné uviesť sodnú soľ alebo draselnú sol, pričom výhodná je sodná sol.

Do rozsahu uvedeného vynálezu tiež patrí nutričná krmivová zmes pre hovädzí dobytok alebo pre prasce, pričom táto krmivová zmes obsahuje antibiotikum vyššie uvedeného všeobecného vzorca I v množstve účinnom k promotovaniu rastu a/alebo k zlepšeniu využitia krmiva týmto hovädzím dobytkom alebo prascami.

Do rozsahu vynálezu tiež patrí nutričná krmivová zmes pre hydinu, pričom táto zmes obsahuje antibiotikum všeobecného vzorca I v množstve účinnom na kontrolu kokcidiálnej infekcie u tejto hydiny.

Vo výhodnom vyhotovení obsahuje táto nutričná krmivová zmes pre hovädzí dobytok, pre prasce alebo pre hydinu 15 až 120 ppm uvedeného antibiotika.

Do rozsahu vynálezu tiež patrí použitie antibiotika vyššie uvedeného všeobecného vzorca I na prípravu liečivej zmesi pre hovädzí dobytok, prasce alebo hydinu, na promotovanie rastu a/alebo zvýšenia účinnosti využitia krmiva u hovädzieho dobytka alebo prasiaf^- alebo na kontrolovanie kokcidiálnej infekcie u hydiny.

Antibiotikum všeobecného vzorca I podľa vynálezu je možné pripraviť kontrolovanou hydrolýzou zlúčeniny všeobecného vzorca II (UK-58,852):

(II) alebo katiónovej soli odvodenej od tejto zlúčeniny a potom prípadne nasleduje prevedenie voľnej kyslej formy na farmaceutický prijateľnú katiónovú soľ odvodenú od tejto zlúčeniny.

Výhodne sa uvedená hydrolýza vykonáva s použitím /· para-toluénsulfónovej kyseliny v zmesi acetonitrilu a vody ako rozpúšťadla, pričom táto zmes acetonitrilu a vody obsahuje výhodne 5 % až 0,5 % vody.

Uvedená para-toluénsulfónová kyselina sa výhodne použije v množstve 1,1 molárneho ekvivalentu na jeden ekvivalent sodnej soli zlúčeniny vzorca II.

Pri vykonávaní tohto postupu je možné použiť i iné rozpúšťadlové systémy, ako je napríklad iba acetonitril alebo zmes t-butanolu a vody alebo zmes acetónu a vody. V alternatívnom vyhotovení je možné ako kyseliny použiť minerálne kyseliny ako je napríklad kyselina chlorovodíková, kyselina octová alebo silné kyslé živice. Všeobecne je možné uviesť, že sa vyššie uvedená reakcia vykonáva pri teplote miestnosti, pričom sa priebeh monitoruje chromatografickou metódou v tenkej vrstve, čo sa vykonáva z toho dôvodu, aby výťažok požadovaného produktu bol optimálny. Reakčný interval je v prípade použitia para-toluénsulfónovej kyseliny a hydrolýzneho systému acetonitril voda zvyčajne v rozmedzí od asi jednej hodiny do troch hodín, avšak tento časový interval sa mení v závislosti od použitej kyseliny a od použitého rozpúštadlového systému. Po úplnom dokončení tejto reakcie sa získaná reakčná zmes neutralizuje prebytkom hydrogénuhličitanu sodného, skoncentrujeýa extrahuje dietyléterom alebo dichlórmetánom, $otom sa vykoná prečistenie za použitia štandartnej chromatografickej metódy na silikagéli. Takto získaný konečný produkt je možné potom rekryštalizovať vo forme volnej kyseliny alebo vhodnej katiónovej kyseliny.

V alternatívnom vyhotovení je možné antibiotikum UK-61,689 získať zo surových ŕermentačných extraktov, ktoré obsahujú

UK-58,852. Metylizobutylketónový (MIBK) fermentačný extrakt sa koncentruje a vo výhodnom vyhotovení sa rozpustí v zmesi acetonitrilu a vody a spracuje paratoluénsulfónovou kyselinou. Výhodná zmes acetonitrilu a vody obsahuje 5 % vody, pričom pomer surového fermentačného oleja k paratoluénsulfónovej kyseline je asi 9:1. Tento pomer je iba približný a priemerný, pričom sa môže meniť podlá zloženia fermentačného extraktu. Medzi ďalšie rozpústadlové systémy, ktoré je možné pre daný účel použiť, patrí metanol a voda, ale hydrolýzu je tiež možné vykonať spracovaním surového MIBK extraktu paratoluénsulfónovou kyselinou lÄŕ I \/pridávaného rozpúšťadla. V alternatívnom vyhotovení je možné použit minerálne kyseliny, ako je napríklad kyselina chlorovodíková.

Antibiotikum UK-61,689 prejavuje inhibičný účinok voči rastu mnohých gram-pozitívnych mikroorganizmov. V tabulke 1, ktorá nasleduje ďalej, sú uvedené výsledky in vitro testov. Pri vykonávaní týchto testov bol každý mikroorganizmus naočkovaný do zostavy testovacích rúrok obsahujúcich živné prostredie a rôznu koncentráciu antibiotika UK-61,689 za účelom stanovenia minimálnej koncentrácie zlúčeniny v pg/ml, ktorá je nevyhnutná na inhibovanie rastu organizmu počas periódy 24 hodín (MIC).

Tabuľka 1 Antibakteriálna účinnosť

Mikroorganizmus	Kmeň č.	MIC ^g/ml)
Clostridium perfringens	10A006	25
	10A009	3 . 12
Actinomyces pyogenes	14D002	0.39
	14D008	0.39
	14D011	0.39
Treponema hyodysenteriae	94A001	6.25
	94A002	6.25
	94A007	3.12
	94A008	3.12

Výsledky týkajúce sa účinnosti antibiotika UK-61,689 a solí odvodených od tejto zlúčeniny voči kokcidiálnym infekciám u kureniec boli získané nasledujúcim spôsobom. Skupinám po 3 až 5 desatdenných nepatogenných bielych lenghornských kohútikov bola podávaná kašovitá potrava, ktorá obsahovala antibiotikum UK-61,689 alebo sodnú sol odvodenú od te^Zjto zlúčeniny a/alebo draselnú sol, ktoré boli rovnomerne dispergované v tejto strave. Po tom, čo im bola podávaná táto potrava počťbO ²⁴ hodín, bol každý z týchto kohútikov naočkovaný per os oocystami jednotlivých druhov Eimeria, ktoré boli testované. Ostatným skupinám po 3 až 5 desatdenných kohútikoch bola podávaná podobná kašovitá potrava, ale bez antibiotika UK-61,689 alebo soli odvodenej od tohto antibiotika. Tieto skupiny boli tiež infikované po 24 hodinách, pričom slúžili ako infikovaná kontrolná skupina. Okrem toho ďalšej skupine po 3 až 5 desatdenných kohútikoch bola podávaná podobná kašovitá potrava bez antibiotika UK-61,689 a bez solí odvodených od tejto zlúčeniny. Títo kohútikovia boli tiež infikovaní po 24 hodinách a slúžili ako infikovaná kontrolná skupina. Okrem toho ešte ďalšej skupine po 3 až 5 desatdenných kohútikoch bola podávaná rovnaká uvedená kašovitá potrava bez antibiotika UK-61,689, pričom títo kohútikovia neboli infikovaní kokcídiami. Táto skupina slúžila ako normálne kontrolné zvieratá. Výsledky tohto ošetrenia boli zhodnotené po piatich dňoch v prípade E. acervulina a šesť dní pre všetky ďalšie odozvy.

Ako kritérium použité na zisťovanie antikokcidiálnej účinnosti bol aplikovaný vyhodnocovací systém zahrňujúci záznam porúch od 0 do 4 pre E. tenella podlá J. E. Lynche A New Method for the Primary Evaluation of the Anticoccidial Activity, Am. J. Vet. Res., 22, 324 - 326, 1961; a vyhodnocovací systém stavov od 0 do 3 pre ostatné prípady, založený na modifikácii vyhodnocovacieho systému vynájdeného J. Johnsonom a W. H. Reidom

Anticoccidial Drugs. Lesion Scoring Techniques in Battery and in Chicks, Exp. Parasi., 28, 30 - 36, pre záznam porúch pre každú ošetrovanú záznam porúch u infikovanej kontrolnej

Floor Pen Experiments 1970. Delením hodnôt skupinu hodnotou pre skupiny bol takto zistený konštantný pomer.

Podlá uvedeného vynálezu bolo zistené, že antibiotikum

UK-61,689 a katiónová sol odvodená od tohto antibiotika prejavujú vynikajúcu účinnosť voči kokcidiálnym infekciám u hydiny. Na kontrolovanie infekcií spôsobených Eimeria tenella, E.

/· acervulina, E. maxima, E. brunetti a E. necatrix stačí, ak je toto antibiotikum alebo katiónová sol odvodená od tejto zlúčeniny pridané do krmiva pre kurence v množstve v rozmedzí od 15 do 120 ppm.

Hodnota potravy pre zvieratá bola všeobecne stanovená priamo pri kŕmení týchto zvierat. V patente Velkej Británie č. 1 197 826 sa uvádzajú detaily metódy analyzovania procesov v bachore in vitro, pri ktorej sa merajú a vyhodnocujú zmeny prebiehajúce v krmive spôsobené mikroorganizmami, pričom tento postup je možné vykonávať lahšie a s väčšou presnosťou určovania hodnoty krmiva pre zvieratá. Pri tejto metóde sa používa zariadenie, pomocou ktorého sú procesy zažívania u vykonávané a študované in vitro. pre bachor a rôzne rastové laboratórnej jednotky a odvádzané za velmi starostlivo kontrolovaných podmienok, pričom zmeny sú v priebehu spotrebovávania krmiva mikroorganizmami starostlivo analyzované a vyhodnocované priebežne. Zvýšenie obsahu kyseliny propiónovej v kvapaline v bachore naznačuje, že požadované odozvy týkajúce sa celkovej zlepšenej účinnosti alebo prospievanie bolo dosiahnuté použitím rastového promótora v krmivovej zmesi. Zmena týkajúca sa obsahu kyseliny propiónovej je vyjadrená ako percento obsahu kyseliny propiónovej zistené v tekutine z kontrolného bachora. Vyhodnotenie testov na krmive vykonávaných in vivo vykonávaných po dlhé časové intervaly sa použije na stanovenie spoľahlivého vzájomného vzťahu medzi zvýšením obsahu kyseliny propiónovej v kvapaline v bachore a zlepšením prospievania zvierat.

zvierat

Krmivo pre zvieratá, inokulum promotory sú privádzané do z tejto laboratórnej jednotky

Kvapalina z bachora sa odoberá a zhromažďuje, pričom kravám je vyhotovený zvláštny vývod a tieto kravy sú kŕmené bežnými kŕmnymi dávkami a senom. Táto kvapalina z bachora sa okamžite filtruje tkaninou na filtrovanie sjŕra, pričom 10 mililitrov tejto kvapaliny sa pridá do 50 mililitrovej kónickej nádoby obsahujúcej

400 miligramov štandardného substrátu (68 % kukuričný škrob + 17 % celulózy +15 % extrahovanej sójovej múčky zo sóje), ďalej sa /· pridá 10 mililitrov tlmiaceho roztoku s hodnotou pH 6,8a ďalej testovaná zlúčenina. Tieto nádoby sa naplnia dusíkom neobsahujúcim kyslík pocab' dvoch minút a inkubovanie sa vykonáva na vodnom kúpeli za súčasného pretrepávania pri teplote 39 ’C ροώό asi 16 hodín. Všetky testy sa vykonajú trikrát.

Po inkubovaní sa 5 mililitrov vzorky zmieša s 1 mililitrom 25 %-ného roztoku metafosforečnej kyseliny. Po 10 minútach sa pridá 0,25 mililitra kyseliny mravčej a takto vzniknutá zmes sa odstredí pri 1 500 otáčkach za minútu, čo sa vykonáva po^⁵ 10 minút. Vzorky sa potom analyzujú plynokvapalinovou chromatografickou metódou, postupom podľa D. W. Kelloga, J. Dairy Science, 52, 1690, 1969. Piky pre kyselinu octovú, propionovú a maslovú sa stanovia y⁷v/úOKxLy v kvapalín inkubačných nádobách éžTlWČtt J<-·. ré /Λα A íc Λ ₇

Pri testovaní pomocou tejto metódy in vitro bolo zistené, že u antibiotika UK-61,689 bolo dosiahnuté pri dávkovaní 20 mikrogramov na mililiter zvýšenie asi 80 % produkovania kyseliny propiónovej v porovnaní s kontrolným roztokom, ktorý neobsahoval antibiotikum UI<-61,689. Zlúčeniny, ktoré stimulujú produkovanie RPA (propionová kyselina v bachore), sú známe ako látky, ktoré zlepšujú využitie krmiva u prežúvavcov, ako sú napríklad kravy a ovce, pričom tieto látky môžu mat podobný účinok i u monogastrických zvierat, ako sú napríklad prasce. Antibiotikum UK-61,689 je možné podávať zvieratám tak, že sa vpraví do krmivovej zmesi, a to buď ako voľná kyselina alebo ako sol, ako je napríklad sodná alebo draselná soľ, alebo ako zmes týchto foriem. V alternatívnom vyhotovení je možné pridávať do krmivovej zmesi surovú formu alebo sušené fermentačné živné médium obsahujúce antibiotikum UK-61,689 v požadovaných účinných koncentráciách. Toto antibiotikum UK-61,689 môže byt tiež podávané v požadovanej dávke tak, že sa použije vhodný prostriedok s trvalým uvoľňovaním látky, ktorý je vytvorený na dávkovanie konštantnej úrovne liečivej látky.

Ak sa zlúčenina podľa uvedeného vynálezu použije na liečenie kokcidiózy u hydiny, potom sa táto zlúčenina podáva orálnym spôsobom vo vhodnom nosičovom materiáli. V bežnom vyhotovení sa táto liečivá látka jednoducho podáva v pitnej vode alebo v krmive pre hydinu, takže terapeutická dávka lieku sa podáva s dennou dávkou vody alebo s dennou dávkou krmiva pre hydinu. Liečivá látka sa priamo nadávkuje do pitnej vody, vo výhodnom vyhotovení je táto látka vo forme kvapalného koncentrátu rozpustného vo vode (ako je napríklad vodný roztok soli rozpustnej vo vode) alebo sa tento liek pridáva priamo do krmiva, ako napríklad vo forme, v akej je alebo vo forme predbežne pripravenej zmesi alebo koncentrátu. Predbežne pripravené zmesi alebo koncentrát terapeutického činidla v nosičovom materiáli sa bežne používajú v prípadoch, kedy sa liečivá forma vpravuje do krmiva. Vhodnými nosičovými materiálmi sú podľa potreby kvapalná látka alebo pevná látka, ako je napríklad voda, rôzne krmivové formy, ako sú napríklad sójový olej, olej z ľanového semena, rozomletý kukuričný klas a ďalej minerálne zmesi, ktoré sa bežne používajú ako krmivo pre hydinu. Hlavne účinným nosičovým materiálom je pre tieto prípady samotné krmivo pre hydinu, to znamená malá dávka tohto krmiva pre hydinu. Tento nosičový materiál uľahčuje rovnomerné rozptýlenie aktívnej látky v konečnom krmive, s ktorým sa táto predbežne pripravená zmes zmiešava. To je dôležité z toho dôvodu, že iba malé podiely tohto liečivého prostriedku stačia na prípravu predzmesi. V tejto situácii je veľmi dôležité, aby sa zlúčenina starostlivo premiešavala v tejto predbežne pripravenej zmesi a potom aby sa táto predbežne pripravená zmes riadne premiešala s krmivom. Pre tieto účely je možné liečivé činidlo dispergovat alebo rozpúšťať vo vhodnom olejovom vehikule, ako je napríklad olej zo sóje, kukuričný olej, olej zo semien bavlny a podobne, alebo vo vhodnom prchavom organickom rozpúšťadle a potom túto zmes zmiešavať s nosičovým materiálom. Je veľmi vhodné, aby bolo možné v širokom rozmedzí meniť podiel aktívnej látky v koncentráte, lebo týmto spôsobom je možné upravovať množstvo tohto činidla v konečnom krmive zmiešavaním vhodného podielu predbežne pripravenej zmesi s krmivom za účelom získania krmiva s požadovanou koncentráciou terapeutického činidla.

Vysoko účinné koncentráty môžu byt pripravené výrobcami krmív s použitím proteínových nosičových materiálov, ako sú napríklad sójový olej a iné druhy krmivových zložiek, ktoré boli uvedené vyššie, pričom sa pripravia koncentrované krmivové prísady, ktoré sú vhodné na priame pridávanie do krmiva pre hydinu. V týchto prípadoch je hydine umožnené konzumovať bežnú potravu. V alternatívnom prípade sa tieto koncentrované prísady môžu pridať priamo do krmiva pre hydinu, čím sa pripraví nutrične vyrovnané konečné krmivo obsahujúce terapeuticky účinnú dávku zlúčeniny podľa uvedeného vynálezu. Tieto zmesi sa poriadne premiešajú . pomoc Λ ežne používaných metód a prostriedkov podía doterajšieho stavu techniky, ako je napríklad dvojplášťové miešadlo, za účelom dosiahnutia homogenity tejto zmesi.

Predpokladá sa ako samozrejmé, že použité dávky zlúčenín podľa uvedeného vynálezu sa môžu za rôznych situácií meniť. Kontinuálne podávané nízke dávky lieku počas rastového obdobia, to znamená počas prvých 6 až 12 týždňov pre kurence je pokladané za účinné profylaktické opatrenie. Pri liečení už vzniknutých infekcií sú nevyhnutné vyššie dávky na potlačenie tejto infekcie. Použitá úroveň liečivého prostriedku v krmive sa zvyčajne pohybuje v rozmedzí od 13 do 120 ppm. Pri podávaní lieku v pitnej vode bude úroveň taká, aby bola dosiahnutá rovnaká vyššie uvedená denná dávka liečivého prostriedku, to znamená, že táto dávka pre pitnú vodu bude pri asi 15 až 20 ppm a táto dávka vyplýva z faktoru predstavujúceho hmotnostný pomer priemernej dennej spotreby krmiva k priemernej dennej spotrebe vody.

Príklady

Vynález bude v ďalšom bližšie ilustrovaný pomocou príkladov praktického vyhotovenia. Vynález však nie je obmedzený na špecifické detaily uvedené v týchto príkladoch.

Príklad 1 reakcia bola tenkej vrstve,

Pri vykonávaní postupu podlá tohto príkladu bolo k roztoku, /ktorý obsahoval 15,0 gramov (čo zodpovedá 0,0147 molov) čistého antibiotika UK-58,852 (táto látka bola pripravená postupom podľa patentu EPA 0169011) v zmesi acetonitrilu a vody v pomere 95 : 5, pridaných 3,07 gramov (čo zodpovedá 0,0161 molov) p-toluénsulfónovej kyseliny. Prebiehajúca monitorovaná metódou chromatografickej analýzy v kým nebol dosiahnutý optimálny výťažok požadovaného produktu (čo trvalo asi 3 hodiny). Takto získaná reakčná zmes bola potom spracovaná prebytkovým množstvom pevného hydrogénuhličitanu sodného alebo tohto hydrogénuhličitanu sodného vo forme vodného roztoku a potom bola takto získaná reakčná zmes skoncentrovaná do sucha za použitia vákua. Týmto spôsobom bola získaná výsledná e pevná látka, ktorá bola rozpustená v dietyléteru a potom bol tento roztok premytý nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného, hydrogénuhličitanové premývacie podiely boli potom extrahované dietyléterom a potom boli všetky získané éterové vrstvy spojené a tento spojený podiel bol postupne premytý vodou a potom nasýteným roztokom chloridu sodného. Éterový roztok bol potom sušený za pomoci bezvodého síranu sodného a potom bolo vykonané odparenie do sucha s použitím vákua. Takto získaný surový reakčný produkt obsahoval zlúčeninu UK-61,689 vo forme prevažujúceho produktu, ale tento produkt bol kontaminovaný premenlivým množstvom východiskovej zlúčeniny UK-58,852 a ďalšími vedľajšími produktmi. Tento surový produkt bol prečistený r chromatografickou metódou na silikageli, pričom potom nasledovala rekryštalizácia z izopropyléteru, čím bolo získaných 4,2 gramov (čo zodpovedá výťažku 32 %) zlúčeniny UK-61,689 vo forme sodnej soli.

Teplota topenia: 175 - 176 “C [a] =+19,3° (c =0,5, MeOH)

C-13 NMR (CDC13	): 179,15 ppm,	107,45, 86.92,	103,18 ,
97.74, 82.27, 74.80, 66.89, 38.93, 33.42, 27.58, 18.40, 10.42.	96.96, 82.01, 74.55, 59.11, 36.46, 33.13, 26.90, 17.53,	84.60, 80.20, 70.06, 45.40, 33.71, 32.26, 26.11, 12.13,	84.20, 79.86, 67.71, 39.82, 33.54, 30.56, 23.23, 11.04,
80.88, 73.07, 56.81, 33.81, 32.44, 26.84, 16.99,	/·
Príklad 2
Pri vykonávaní postupu podlá tohto	príkladu	bol surový
fermentačný extrakt (MIBK)	(v množstve 1	liter), ktorý obsahoval
antibiotikum	UK-58,852	(v množstve	odhadom	25 gramov)
skoncentrovaný	s použitírr	i vákua	na 6	580	gramov.	Tento hustý

tmavý olej bol potom pridaný k zmesi acetonitrilu a vody v pomere : 5 (v množstve 5,6 litra) a takto získaná mliečna emulzia bola potom spracovaná p-toluénsulfónovou kyselinou (v množstve

78,2 gramov) vo forme jednorazového prídavku. S prebiehajúcou reakciou sa emulzia postupne separovala na dve oddelené vrstvy, </ ktoré boli intenzívne premiešavané por«# 1,25 hodiny.

Takto získaná reakčná zmes bola potom naliata do rozdelovacej nálevky, pričom spodná olejová vrstva bola odstránená a rozriedená ďalším podielom zmesi acetonitrilu a vody (v pomere 95 : 5). Získané vrstvy acetonitrilu a vody boli potom spojené a tento spojený podiel bol potom spracovaný nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (množstve 400 mililitrov). Takto získaná zmes bola potom skoncentrovaná na hustú sirupovitú hmotu s použitím vákua, pričom táto hmota bola potom rozpustená v zmesi dietyléteru a etylacetátu v pomere 3 : 1 (v množstve 2 litre) a táto zmes bola potom premytá nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného. Organická vrstva bola potom sušená pomocou síranu sodného a tento podiel bol skoncentrovaný na hustý hnedý olej (v množstve 432 gramov). Prečistenie bolo najvhodnejšie vykonané protiprúdovým extrakčným spôsobom. Pri tejto extrakcii bola použitá zmes hexáňu a etylesteru kyseliny octovej v pomere 1 : 1 ako nepolárna fáza a metanolu a vody v pomere 3 : 2 ako polárna vodná fáza. Odparením organických extraktov bola získaná polopevná látka, ktorá bola potom triturovaná izopropyléterom, čím bola získaná zlúčenina UK-61,689 vo forme sodnej soli v množstve 10 gramov.

Teplota topenia: 169 - 170 C. ^Z

Táto látka bola identická so zlúčeninou UK-61,689, ktorá bola pripravená postupom podľa príkladu 1, čo bolo zistené porovnaním výsledkov z chromatografickej analýzy v tenkej vrstve a NMR analýzy.

Claims (5)

1. Antibiotikum štruktúrneho vzorca I: /.

(I)

alebo farmaceutický tejto zlúčeniny. i ^{1 1} pnjatelne kationove soli odvodene od 2. Antibiotikum podlá nároku 1, ktoré je vo forme sodnej

soli .

3. Nutričná krmivová zmes pre hovädzí dobytok alebo pre prasce, vyznačujúca sa tým, že táto krmivová zmes obsahuje antibiotikum podľa nároku 1 v množstve účinnom na promotovanie rastu a/alebo na zlepšenie využitia krmiva týmto hovädzím dobytkom alebo prascami.

4. Nutričná krmivová zmes pre hydinu, vyznačujúca sa tým, že táto krmivová zmes obsahuje antibiotikum podľa nároku 1 v množstve účinnom na kontrolovanie kokcidiálnej infekcie u tejto hydiny.

5. Nutričná krmivová zmes podľa nárokov 3 alebo 4, vyznačujúca sa tým, že obsahuje 15 až 120 ppm uvedeného antibiotika.

6. Použitie antibiotika podlá nároku 1 na prípravu liečivej zmesi pre hovädzí dobytok, prasce alebo hydinu, na promotovanie rastu a/alebo zvýšenia účinnosti využitia krmiva u hovädzieho dobytka alebo prasiat, alebo na kontrolovanie kokcidiálnej infekcie u hydiny.