KR860000217B1

KR860000217B1 - 다환식 에테르계 항생 물질의 제조 방법

Info

Publication number: KR860000217B1
Application number: KR8203197A
Authority: KR
Inventors: 다니엘 셀머 월터; 패트릭크 쿨렌 월터; 시바가와 리이치로; 톤 준수게
Original assignee: 윌리암 데이비스 헌; 화이자 인코포레이티드
Priority date: 1981-07-20
Filing date: 1982-07-19
Publication date: 1986-03-15
Also published as: ES8308360A1; AU533091B2; FI822544L; NO156653B; IE821720L; ZA825129B; KR840000642A; PT75268B; FI71950B; SU1151219A3; AR227730A1; FI822544A0; DK323482A; AU8615582A; IE53265B1; US4361649A; DD208990A5; YU42781B; ZW12582A1; IN158870B

Abstract

내용 없음.

Description

다환식 에테르계 항생 물질의 제조 방법

제1도는 폴리에테르계 항생 물질 53,607의 나트륨염의 적외선 흡수 스펙트럼도이고,

제2도는 폴리에테르계 항생 물질 53,607의 적외선 흡수 스펙트럼이다.

본 발명은 미토콘드리아(mitocondria)에 있어서 생물학적으로 양이온 이동 효과를 갖는 화합물인 신규의 다환식(多環式) 산성 에테르계 항생 물질의 제조 방법에 관한 것이다. 이 부류에 속하는 항생 물질은 모넨신[J. Amer. Chem. Soc., 89-5737(1967)], 나이제리신[Biochem. Biophys. Res. Comm., 33 : 29(1968)], 그리소릭신[J. Chem. Soc., Chem. Commun., 1421 (1970)], 다이아네마이신[J. Antibiotics, 22 : 161(1969)], 살리노아미신[J. Antibiotics, 27 : 814(1984)], X-537A[J. Chem. Soc., Chem. Commun., 967(1972)], X-206[J. Chem. Soc., Chem. Commun., 927 (1971)], A204A[J. Amer. Soc., 95 : 3399(1973)], 푸탈로마이신[J. Antibiotics, 30 : 903(1977)], 이오노마이신[J. Amer. Chem. Soc., 101 : 3344(1979)], K-41B[J. Antibiotics, 32 : 169(1979)], A-130B 및 A-130C[J. Antibiotics, 33 : 94(1980)], 류세라마이신[J. Antibiotics, 33 : 137(1980)] 및 A-28695B[J. Antibiotics, 33 : 252(1980)]등이 있다.

또한, 이 주제는 웨슬리(Westley)의 논문, 폴리에테르 항생제, Adv. Appl. Microbiol., 22 : 177(1977)에 의하여 검토된 바 있다.

위에 열거한 다환식 에테르계 항생 물질은 그람-양성균, 진균류 및 원충류에 대한 활성이 있다. 이들 항생 물질은 강력한 구충 작용을 나타낸다.

잘 알려진 원충류 질병, 포자충 질병은 심각한 문제로 남아있으며, 이에 대한 억제 방법은 수의학계, 특히 양계 산업계에 경제적으로 중요한 의의를 갖는다. 포자충 질병은 에이메리아(Eimeria) 속(屬) 또는 이소포라(Isolora) 속(屬) 주의 한 가지 또는 그 이상의 종(種)에 의한 감염으로부터 발명된다.[비스티(Biester)와 슈워트(Schwart)가 공동 편집한 룬드(Lund)와 파르(Farr)의 "가금질병(Diseases of Paultry)," 제5판, 아이오와 주립대학, Ames, Ia., 1965, pp. 1056-1096)을 참조].

감수성 병아리로부터 쉽게 분간할 수 있는 질병을 발병시키는 구충류로는 6가지 종류가 있다. 에어메리아 데넬라(Eimeria tenella), 에이메리아 네카트릭스(E. necatrix), 에이메리아 브루네티(E. brunetti), 에이메리아 아세르부리나(E. acervulina), 에이메리아 막시마(E. maxima) 및 에어메리아 미바티(E. mivati)는 소화 기관의 상피 세포를 직접 파괴하거나 독소를 생성시켜 간접적으로 손상시킨다. 같은 속(屬)에 속하는 원충류 중의 다른 3가지 종류는 비교적 무해성인 것으로 알려져 있으나, 에이메리아 미티스(E. mitis), 메이메리아 하가니(E. hagani) 및 에이메리아 프라에콕스(E. praecox)는 체중을 감소시키고, 사료의 효율을 저하시키는 동시에 산란에도 좋지 않은 영향을 끼칠 수 있다.

포자충으로 인한 많은 경제적 손실 및 공지된 수종의 구충제의 결점 때문에, 더 우수한 구충제를 얻기 위한 연구가 계속되고 있다.

장염은 축산업자에 심각한 경제적 손실을 야기시키는 또 다른 질병에 속한다. 장염은 닭, 돼지, 소 및 양에 발생하며, 혐기성균, 특히 클로스트리듐 퍼프린겐스(Clostridium perfringens) 및 바이러스에 의해서 주로 발생한다. 반추 동물의 장성 중독증, 예컨대 양의 "과식증"은 클로스트리윰 파프린겐스 감염이다.

돼지의 이질은 미합중국 내에서 발생하는 가장 보편적인 돼지의 질병 중의 하나이다. 그밖에, 이 질병은 기타 여러 나라에서도 유행하고 있으며, 전세계적으로 돼지 사육에 있어서 매년 수 많은 경제적 손실을 가져다 주고 있다. 큰 스피로헤타균이 이 질병의 병원균이라는 것이 최근에 발견되었다. 이 생물체, 즉 트레포네마 히오디센테리아에(Treponema hydysentereiae)가 현재 분리되어 있으며, 이 질병을 발병시킬 수 있다는 것이 밝혀져 있다[디. 엘. 하리스(D. L. harris)와 그의 공동 연구자의 논문, "트레포네마 히오디센테리아에(신균종)를 사용한 돼지의 돼지 이질-1 접종 및 재발(Swine Dysentery-1 Inoculation of Pigs with Treponema hyodysenteriae(New Species)," Vet. Med/SAC, 76 : 61-64 : 11972 참조].

뒤에서 설명하는 시험 데이타는 미 생물을 사용하여 행한 시험 결과이다. 트레포네마 히오디센테리아에가 돼지 이질의 병원균인가의 여부는 알려져 있지 않았다는 사실을 인식해야만 된다. 그러나, 이 데이타로부터 그 병원균이 그 감염의 일차적인 원인이 된다는 결론을 내릴 수 있다. 소와 같은 반추 동물에 있어서 반추 기능 증대(성장률 증가 및 사료 이용 효율의 증대)는 수의학에서 요망되는 또 하나의 경제적인 사항이다. 특히, 흥미있는 사실은 사료 이용 효율의 증대로 인하여 얻어진 성장 촉진이다. 반추 동물의 사료의 주영양 성분(탄수화물)의 이용 기구에 관해서는 잘 알려져 있다. 동물의 전위(前胃)내의 미생물이 탄수화물을 분해하여 일당류을 생성시키고, 이어서 이 일당류는 피루브산염 화합물로 전환된다. 피루브산염은 미생물학적 방법에 의해서 대사 작용을 일으켜 휘발성 지방산(VFA)으로 알려진 초산염, 젖산염, 또는 프로피온산염을 생성시킨다. 더 구체적인 논의를 위해서는, 필립슨(Phillipson)등이 공동 편집한 랭(Leng)의 논문, "반추동물에 있어서의 소화 및 신진 대사 생리학(Physiology od Digestion and Metabolism in the Ruminant), Oriel Press, Newcastle-upon-Tyne, England, 1970, pp408-410"을 참조하기 바란다.

VFA 이용의 상대적 효율은 맥컬라우(McCullough)의 저서인 사료(Feedstuffs), 제19면, 1971년 6월 19일, 에스켈란드와 공동 연구자의 논문, J. An. Sci. 33, 282(1971), 그리고 처치(Church)와 그의 공동 연구자의 논문, "반추 동물의 소화 생리학 및 영양(Digestion Physiology and Nutrition of Ruminants)," 제2권, 1971, 제622 및 625면에 설명되어 있다. 초산염 및 젖산염이 이용되지만, 프로피온산염이 이용 효율이 더 높다. 더우기, 프로피온산염을 너무 작게 사용하면 동물들은 케토시스(ketosis)에 걸리는 수가 있다.

그러므로, 유익한 화합물은 동물을 자극하여 탄수화합물부터 고율의 프로피온산염을 생성하게 되며, 이에 의하여 탄수화물의 이용 효율을 증대시키는 동시에 케토시스 발생률을 감소시킨다.

축산업자에게 경제적 손실을 입히는 또 다른 집병은 타일레리아(Theileria) 속의 원충류 기생충에 의해서 발생한다.

이 질병, 즉 타일레리아 감염증은 '동해안 열병(East Coast Fever)," "해안 열병(Coastal Fever)" 또는 "로데시안 참진드기 열병(Rhodesian tick fever)"으로 알려져 있다. 타일레리아 기생충은 급성 또는 만성 열성 감염을 일으키는 적혈구를 파괴하지 않고 침입한다. 소의 질병은 고열, 임파절의 팽창, 쇄약 및 무기력함 등이 특징이다. 이러한 질병은 동부 및 중앙 아프리카 지방에서 매우 심각한 문제로 대두되고 있다. 타일레리아 질병에 관한 더 상세한 사항은 시그먼트(Siegmund) 등의 편슬하여 뉴저지주 라웨이시 소재의 메르크 앤드 컴페니(Merck & Co.)에서 발행한 "메르크 수의학 편람(The Merck Veterinary Manual), 제5판, 제431-433면(1979)"을 참조하기 바란다.

본 발명은 일본국의 토양 시료에서 분리시킨 스트렙토마이세스 할스테디(Sterptomyces halstedii) ATCC 31812[이 군주는 1982년 5월 15일자로 한국과학기술원에 KCTC 8166P로 기탁되었다.]를 수성 영양 배지내에서 호기성 액내(液內) 발효 저건 아래 증식시킴으로써 새로운 다환식 산성 에테르계 항생 물질을 제조하는 방법에 관한 것이다. 이 항생 물질 및 그의 양 이온염들의 각종 미생물에 대한 활성이 있고, 또한 가금 및 반추 동물의 성장을 촉진시키는 효과가 있을 뿐만 아니라, 구충류 감염증, 장염, 소의 이질 및 타일레리아 질병(Theileriosis)의 감염을 억제하는데 효과가 있다.

본 발명의 항생 물질을 생성시키는 미생물은 일본국 히로시마에 퇴적되어 있는 토양 시료에서 분리시킨 것이다. 실험에 따라 이 미생물은 스트렙토마이세스의 생태학적 형태를 갖는다는 사실을 알게 되었다. 이것은 스트렙토마이세스 속(屬)의 분지상(分枝狀) 포자 특성을 갖는 방선균(放線菌)의 좁은 균사 및 호기성 균사를 갖는다는 것이 밝혀졌다. 일반적인 정체는 세포벽 분석에 의하여 더 동정하였다.

상기 미생물의 배양균은 사면 배지로부터 ATCC #172 액체 배지에 접종시키고 진탕시키면서 28℃에서 4일 동안 증식시켰다. 이어서, 그 배양균을 진탕기로부터 분리하여 원심 분리시키고, 살균 증류수로 3회 세척하여 방선균류의 동정(同定)에 일반적으로 사용되는 배지에서 배양시켰다.

특별히 지적되지 않는한, 배양 온도는 28℃로 하고 적절한 시간에 결과들을 기록하였다. 특별히 지적되지 않는 한 2주일 후 얻은 배양 결과를 나타낸 것이다.

배양균의 특성화에 이용되는 동정 배지와 그 조성에 대한 표시는 다음과 같다.

1. 트립톤 효모 추출액-(ISP #1 배지, 디프코).

2. 효모 추출액-맥아 추출액 한천-((ISP #2 배지, 디프코).

3. 오우트밀 한천-(ISP #3 배지, 디프코).

4. 무기염류-전분 한천-(ISP #4 배지, 디프코).

5. 글리세롤-아스파라긴 한천-(ISP #5 배지, 디프코).

6. 펩톤-효모 추출액 철 한천-(ISP #6 배지, 디프코).

7. 짜팩-수크로오즈 한천-에스.에이.워크스만(S. A. Waksman), "악티노마이세트스(Actinomycetes)." 2권, 배지 328면, 1961.

8. 글르코오스 아스파라긴 한천-상동, 배지 #2 328면.

9. 베네트 한천-상동, 배지 #30 331면.

10. 에머슨 한천-상동, 배지 #28 331면.

11. 영양 한천-상동, 배지 #14 330면.

12. 고돈 및 스미드 티로신 한천-알.이.고든및 엠.엠.스미드(M.M. Smith), Jr. Bact. 69 : 147-150, 1955.

13. 카제인 한천-상동.

14. 능금산칼슘 한천-에스. 에이. 워크스만, Bact. Rev. 21 : 1-29, 1957.

15. 젤라틴-알. 이. 고든 및 제이. 엠. 밈(J.M. Mihm), Jr. Bact. 73 : 15-27, 1957.

16. 전분-상동.

17. 유기 질산염 브로드(broth)-상동.

18. 텍스트로오즈 질산염 브로드-에스. 에이. 워크스만, "악티노마이세테스," 2권, #1, 328면, 1961, 수크로오즈 30g을 덱스트로오즈 3g 대신 사용하였으며, 한천은 생략되었음.

19. 감자 당근 한천-엠. 피. 레케발리에르(M. P. Lechevalier), Lab. and Clin, Med. 71 : 934-944, 1968, 다만 감자 30g, 당근 2.5g 및 한천 20g 사용.

20. 수도물 한천 2%.

21. 탈지유-디프코.

22. 셀룰로오즈 이용 : a) 에이치. 엘. 젠센(H. L. Jensen), Proc. Linn. Soc. 엔. 에스. 더블유(N. S. W) 55 : 231-248, 1930. b) 엠. 레빈(M. Levin) 및 에이치. 더블유. 쇼엔라인(H. W. Schoenlein), "A Compilation of Culture Media," #2511, 1930.

23. 탄수화물-ISP #9 배지, 디프코 : 에이치. 노노무라(H. Nonomura) 및 와이. 오하라(Y. Ohara)의 논문, J. Ferment. Thchnol. 49 : 887-894, 1971에 기재된 노노무라 및 오하라 배지.

24. 온도 범위-ATCC 배지 172, "ATCC 컬취 컬렉션 카탈로그(Culture Collection Catalogue)," 14판 518면, 1980.

새로운 배양군(화이자 N393-39)은 일반 용어로 설명된 색소를 가진 여러 가지 배지상에서 다음에 기재한 것으로 설명되었으나, 적확한 색소는 컬러 하모니 메뉴얼(Color Harmony Manual), 제4판으로부터의 색소 검색표와 비교함으로써 결정하였다.

효모-추출액-맥아 추출액 한천-발육 양호, 크림색 내지 연황색(거의 2ca), 중간 정도의 부풀린 상태, 평활, 거칠거나 주림진, 비호기성 균사체, 표면과 이면이 일치, 불용성 색소, 오우티밀 한천-발육 중간 정도, 회색 내지 회갈색(2ge, 12g 내지 2ni), 얇음 내지 약간 팽창, 작은 흰 반점을 가진 평활, 비호기성의 희박한 균사체, 백색 내지 연회색, 표면과 이면이 동일함, 연황색 가용성 색소, 무기염류-전분 한천-중간 발육, 황갈색 내지 갈색(21c, 3ne 내지 3le). 엷음, 평활, 비호기성 균사체, 표면과 이면이 동일함, 불용성 색소. 글리세롤-아스파라긴 한천-발육 불량 내지 중간, 엷음, 수 개의 작은 백색 반점을 가진 평활 ; 호기성의 희박한 균사체, 백색 ; 표면과 이면이 동일함, 불용성 색소. 짜팩-수크로오즈 한천-발육불량, 무색 내지 희미한 백색, 엷음, 평활, 호기성 균사체로 된 수개의 작은 백색 반점이 있음, 표면과 이면이 동일함, 불용성 색소, 고든 및 스미드 티로신 한천-생육 불량 내지 중간 무색 내지 크림색(2ca), 엷음, 평활, 비호기성 균사체, 표면과 이면이 동일함, 불용성 색소. 글루코오즈 아스파라긴 한천-발육 중간, 황회색 내지 라벤더 회색(2ig,3ge 내지 3ig), 엷음, 가장자리 가까이에 약간의 주름을 제외하고는 평활 ; 연회색 호기성 균사체(2ge) ; 표면과 이면이 동일 ; 연황색의 가용성 색소. 능금산칼슘 한천-발육 불량, 희미한 백색 가장자리, 액내, 평활, 회색의 작은 반점을 가짐(거의 회색 계통의 2dc 내지 2fe) ; 호기성 균사체 ; 표면과 이면이 동일 ; 불용성 색소. 카제인 한천-보통 성장, 연갈색(2ne 내지 3ne), 얇음, 평활 내지 약간 거칠음, 비호기성 균사체 ; 표면과 이면이 동일함, 불용성 색소. 베네트 한천-발육 양호, 갈색(3ng 내지 3ni), 팽창, 주금, 비호기성 균사체 ; 표면과 이면이 동일 ; 연황색 가용성 색소(2ca).

에머슨 한천-발육 중간 내지 양호, 연황갈색(2ca 내지 3ca) 내지 회녹색(23ge 내지 23ig), 엷음, 내지 팽창, 평활 내지 약간 거칠음 또는 불규칙적으로 주름진 엷은 컵과 같음, 비호기성 균사체 ; 표면과 이면이 동일 ; 불용성 색소. 배양 한천-발육불량 내지 보통, 연황색(2ca), 엷음, 평활면 비호기성 균산체 ; 표면과 이면이 동일 ; 불용성 색소. 젤라틴 한천-발육 양호, 연황색(2ca), 엷음, 평활, 비호기성 균사체, 표면과 이면이 동일, 불용성 색소. 전분 한천-발육 양호, 크림색, 연황색 내지 연황갈색(2ca 내지 거의 3gc), 엷음 내지 약간 팽창, 평활면 가장자리쪽에 주름, 비호기성 균사체, 표면과 이면이 동일, 불용성 색소. 감자 당근 한천-발육 중간, 크림색(2ca), 가장자리는 회색 내지 진회색(거의 회색 계열 2fe, 2ih 내지 2ml), 엷음, 평활, 호기성 균사체, 회색 내지 진회색 ; 표면과 이면이 동일, 불용성 색소.

수도물 한천-발육 불량, 무색 내지 희미한 백색, 엷음, 평활, 호기성 균사체로 된 수개의 흰 반점 있음 ; 표면과 이면이 동일, 불용성 색소.

그 생화학적 특성은 다음과 같이 요약할 수 있다.

1. 멜라닌 성분이 생성되지 않음.

2. 황화수소가 생성되지 않음.

3. 젤라틴이 액화됨

4. 전분이 가수 분해됨.

5. 질산염이 환원당하여 아질산염으로 됨.

6. 젠센 셀룰로오즈에서는 발육이 불량함.

7. 레빈 및 쇼엔라인 배지에서 분해되지 않음.

8. 양쪽 셀룰로오즈 배지에서 분해되지 않음.

9. 밀크에서 응결되지 않음.

10. 밀크에서 펩톤화가 일어나지 않음.

11. 카제인, 능금산칼슘 및 티로신을 소화시키지 못함.

12. 탄수화물 이용성 : I. 노노무라 배지에서 글루코오즈, 아라미노오즈 및 크실로오즈가 이용되며, 라피로오즈의 이용은 의심스럽고, 수크로오즈, 이노시톨, 만니톨, 프룩토오즈 및 람노오즈는 이용되지 않음. II. ISP #9 배지에서, 글루코오즈, 아라비노오즈, 크실로오즈 및 수크로오즈가 이용되며, 프룩토오즈, 이노시톨, 만니톨, 라피노오즈 및 람노오즈는 이용되지 않음.

다음의 형태학적 관찰은 배양 15일 후에 감자 당근 한천에서 실시된 것이다.

회색 계열의 포자균 ; 포자의 가지는 곧은 가지, 굽은 가지, 불규칙적으로 굴곡되기 쉽거나 또는 좀체로 굴곡되지 않는 파상형 가지임. 매 포자 가지당 포자수 10-30, 매 포자 가지 포자수가 10 미만인 것은 거의 없음. 난형(卵形), 타원형 내지 막대형 포자, 1-1.8×0.8-0.9㎛, 전자 현미경 주사에 의하여 나타나타 바와 같이, 평활면임.

온도 변화와 발육도와 관계는 다음과 같이 관찰되었다.

위에 나타낸 바와 같이, 세포벽 분석 결과는 그 배양균의 일반적인 동일성이 스트렙마이세스 종이라는 것을 지지하였다. 전체 세포 분석 결과는 LL-디아미노피멜산 글리신의 존재, 그러나 병리학적 당류의 부재를 나타내었다. 전체 세포 아미노산 및 당류 분석에 사용된 방법은 비. 백커(B. Backer)와 그의 공동 연구자의 논문, 응용 미생물학(Appl. Microbiol)., 12 : 421-423, 1964 및 엠. 피. 레체발리에르(M. P. Lechevalier)의 논문, Lab. Clin. Med., 17 : 934-944, 1968에 설명되어 있다.

배양균 N393-39의 특징은 포자균의 가지가 연회색 내지 회색의 곧은 가지 내지 굴곡되기 쉬운 가지를 갖는 평활면 포자이고, 멜라닌 생성능이 없다는 것이다. 전체 세포 가수 분해물 중의 LL-디아미노피멜산이 존재 및 병리학적 당류의 부재는 그것이 스트렙토마이세스 속(屬)에 분류시키는 토대가 된다. 그 배양균은 이. 비. 셔얼링(E. B. Shirling)과 디. 고틀비브(D. Gottlieb)의 논문, 1968, Int. J. Syst. Bacteriol., 18 : 69-89에 기재된 스트렙토마이세스 할스테디(Streptomyces halstedii) 균주와 유사하며, 따라서 스트렙토마이세스 할스테디 ATCC 10897의 기본 균주를 사용하여 비교하였다. 두 가지 배양균은 각각 포자 가지의 형태학, 포자 표면의 형태학, 음성 메라닌 생성 및 대부분의 생화학적 특성에 있어서 서로 일치한다.

배양균 N 393-39는 여러 가지 배지에서의 호기성 균사체의 부재, ISP #2, ISP #3 및 ISP #4 배지에서의 회색 내지 흑색 이면보다 오히려 갈색이고, 음성 H₂S 생성 및 프룩토오즈 이용능이 없다는 점에서 스트렙토마이세스 할스테디와 차이가 있다. 이러한 차이점은 스트렙토마이세스 종의 균주들 간에 있는 단지 미소한 변이일 뿐이며, 배양균 N393-39는 워크스만 및 헨리치의 스트렙토마이세스 할스테디(워크스만 및 커티스)의 해로운 균주라고 생각된다.

새로운 배양균(화이자 N393-39)은 1981년 2월 23일에 미합중국 매릴랜드주, 록크빌시에 소재하는 아메리칸 타입 컬춰 콜렉션(American Type Culture Collection)에 기탁되어 스트렙토마이세스 할스테디 ATCC 31812라는 기탁번호가 주어졌으며, 1982년 5월 15일에 대한민국 서울특별시 성북구 하월곡동에 소재하는 한국과학기술원에 기탁되어 기탁번호 KTCC 8166P를 부여받았다. 이 배양균은 이 출원이 특허 등록된 후 그 존속 기간 동안 공중의 열람에 제공된다. 이 배양균의 분양은 미합중국 규정 CFR 1.14 및 35 USC 112로 신청하거나, 대한민국 특허법 시행규칙 제31조 2의 제2항 각호의 규정에 따른 요건이 보장되는 범위내에서 분양될 수 있다.

배양균 스트렙토마이세스 할스테디 KCTC 8166P(ATCC 31812)의 배양은 폴리에테르 항생 물질을 생성시키는 예비 발효에 채용된 것과 유사한 조건하에서 진행시킬 수 있다.

예컨대, 미합중국 특허 제4,195,079호를 참조하기 바란다. 배양은 액내 호기성 조건 아래 24℃ 내지 36℃ 온도에서 교반하면서 수성 영양 배지에서 일으키는 것이 좋다. 배양에 유용한 영양 배지로서는 당류, 전분 및 글리세롤과 같은 동화성 탄소원과, 카제인 효모 소화물, 대두분, 면실분, 땅콩분, 밀 글루텐, 콩가루, 육분 및 어분 등과 같은 유기 질소원 등이 있다.

또한, 가용성 곡물과 같은 발육 성분원과 효오 추출액 및 염화나트륨과 탄산칼슘 등의 염과 철, 마그네슘, 아연, 코발트 및 망간과 같은 미량 원소들을 사용하면 좋은 결과가 얻어진다. 만약, 발효 도중에 과량의 기포가 발생되며, 식물유 또는 실리콘과 같은 소포제를 발효 배지에 첨가시킬 수 있다. 액면 발육조내의 배지에 대한 공기 공급은 매분 발효액의 단위 부피에 대하여 무균 공기 약 1/2 내지 2부피 비율로 유지시키고 스파거(sparger)를 통하여 강제 도입시키는 것이 바람직하다. 교반은 발효 기술 분야에 숙련된 사람들에게 익숙한 교반기에 의하여 유지시킬 수 있다. 교반 속도는 사용된 교반기의 종류에 따라 달라진다. 진탕 플라스크는 통상 매분 150-200사이클로 동작하지만, 발효기는 보통 매분 300-600회 회전한다.

물론, 무균 조건은 세균의 이동에 의하여, 그리고 그 발육 기간을 통하여 유지되어야 한다.

본 발명 방법에 따른 항생 물질을 제조하기 위한 접종 재료는 사면 배양 증식법을 사용하여 얻을 수 있다. 그 증식법을 사용하여 진탕 플라스크 또는 접종 재료조의 어느 하나를 접종시키거나 접종물 또는 접종 재료조를 진탕 플라스크로부터 접종시킬 수도 있다. 진탕 플라스크 내에서의 증식은 일반적으로 2-4일 내에 극대에 달하게 되나, 액면 접종 재료조 내에 있는 접종 재료는 통상 1 1/2-3일 이내가 가장 유리한 기간에 있게 된다.

발효 중의 항생 물질의 생성 및 발효액의 생물학적 활성은 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococus aureus) 또는 바실루스 수브틸리스(Bacillus subtilis)의 감수성 균주를 사용하는 발효액의 생물학적 분석에 의하여 검토할 수 있다. 스타필로코쿠스 아우레우스 ATCC 6538 및 바실루스 수브틸리스 ATCC 6538은 이러한 목적에 부합되는 균주이다. 그 발효액으로 포화시킨 여과지판을 주위의 억제 대역이 항생 물질의 역가의 척도로 사용하는 표준 평판 분석법이 이용된다. 또한, 실리카 겔을 이용한 박층 크로마토그라피(TLC)는 발효 배지에서 생성된 항생 물질과 발효액으로 부터 추출시킨 조물질 및 정제 물질의 조성물을 분석하는데 유용한 도구이다. 아날테크(Analtech) 실리카 겔 GF 크로마토그람은 초산에틸/메탄올(9 : 1) 또는 클로로포름/메탄올(9 : 1)로 전개시킨다. 항생 물질은 에탄올성 황산 붕에 바닐린(에탄올 97ml 및 진한 황산 3ml 중에 바닐린 3g)을 살포하여, 80℃까지 그 TLC 판을 가열함으로써 선명하게 나타난다.

항생 물질은 연분홍 반점으로 나타난다. 또한, 이 평판을 스타필로코쿠스 아우레우스 또는 바실루스 수브틸리스로 접종시킨 한천으로 덮어 씌우고, 16 시간 동안 37℃에서 배양(보온) 시킴으로써 항상 물질을 현출시킬 수 있다.

스트렙토마이세스 할스터디 KCTC 8166P(또한, ATCC 31812)의 발효에 의하여 생성된 항생 물질은 저절로 형성된 pH에서 클로로포름, 초산에틸, 메틸이소부틸케톤 또는 부탄올과 같은 유기 용매를 사용하여 전체의 여과하지 않은 발효액을 추출하여 분리 및 회수할 수 있다. 이어서, 용매 추출액을 진공 농축하여 묽은 시럽을 얻을 수 있다.

본 발명의 항생 물질(이하, "항생 물질 53,607"이라고 부릅니다)을 분리 및 회수하는 대표적인 방법은 다음과 같다. 스트렙토마이세스 할스테디 KCTC 8166P(ATCC 31812)의 발효로부터 얻은 전체 발효액을 메틸이소부틸케톤으로 추출하였다. 용매 추출액은 진공 용매 증발시 진한 오일을 생성시켰다. 이 오일을 클로로포름 중에 용해시켜서 실리카 겔층에 주가하였다. 이 실리카 겔층을 클로로륨, 초산에틸 및 아세톤으로 순차적으로 세척하였다. 이 세척액을 박층 크로마토그라피로 시험한 결과 항생 물질 53,607이 초산에틸 유분에 거의 전부 포함되어 있었다. 이 건식 초산에틸 분획을 초산에틸에 취하여 컬럼 크로마토그라피함으로써 더 정제시키고, 초산에틸 중에 슬러리화시킨 실리카 겔로써 채운 칼럼에 가하여 초산에틸로 용출시켰다. 항생 물질 53,607을 함유하는 칼럼 분획(박층 크로마토그라피에 의하여 측정함)을 한데 모으고 증발시켜서 용량을 줄였다. 이어서, 이 물질을 메탄올 중에서 세파덱스 LH-20 이 채워진 칼럼에서 크로마토그라피하여 항생 물질 53,607을 함유하는 분획들을 한데 모으고 증발시켜서 용량을 줄이고 클로로포름에 용해시켰다. 이 클로로포름 용액을 인산으로 pH4.5로 조절된 5% 인산일나트륨 완충액으로 세척하였다.

이어서, 그 용매계를 수산화나트륨 용액을 사용하여 pH9.0으로 조절된 5%w/v 인산이나트륨으로 세척하였다. 이어서, 그 용매계를 무수 황산나트륨 상에서 건조하여 증발시켰다. 잔류물을 아세톤에 취하여 냉장고에 넣어 두면, 항생 물질 53,607이 나트륨염으로 결정화된다. pH4.5로 조절된 물로 그 나트륨염의 초산에틸 용액을 세척하면 유리산을 얻을 수 있었다. 용매를 증발시켜 항생 물질 53,607의 유리산의 결정을 얻었다. 항생 물질 53,607의 분석 결과는 다음의 구조를 나타낸다.

항생 물질 53,607은 수 많은 그람 양성균의 발육 억제 작용을 나타낸다. 다음의 표 I에는 시험관 내 MIC 시험 결과가 요약되어 있다. 이 시험을 위하여, 각 미생물을 영양 배지와 다양한 농도의 항생 물질 53,607을 함유하는 일련의 시험과에 접종하여, 24시간에 걸쳐 미생물의 발육을 억제하는 항생 물질의 최저 농도(MIC)를 mcg/ml 단위로 측정하였다.

[표 I]

아세리키아 콜리, 수도모나스 아에루기노사, 클레브시엘라 뉴우모니아에, 제라티아 마르케스센스 및 앤티로박테리아세스 아에로게네와 같은 그람 음성균에 대한 MIC 값은 각 경구에 ＞50 이었다. 항생 물질 53,607 및 그의 양이온 염은 가금의 구충류감염에 대하여 우수 효과를 나타낸다. 닭의 모이에 50 내지 200ppm 정도 혼합할)때, 이들 화합물은 에이메리아 레넬라, 에이메리아 아세르블리나, 에이매리아 막시마, 에이매리아아 브루네티 및 에이매리아 네카트릭스에 의한 감염을 억제하는 데효과가 있다.

닭에 있어서의 구충류 감염에 대한 항생 물질 53,607 및 그 염류의 효능 시험 데이타는 다음과 같은 방식으로 얻었다. 3-5마리의 10일 자란 SPF 백색 레그혼 숫병아리군에 항생 물질 53,607 또는 그의 나트륨염을 균일하게 분산시킨 것을 함유하는 가는 모이를 급여하였다. 24 시간 동안 이 급식량으로 한 후에 특수종의 피검 에이매리아 난모 세포를 각 닭에 경구로 접종시켰다. 다른 3-5마리의 10일 째자란 병아리군에는 항생 물질 53,607 또는 그 염류를 함유하지 않는 비숫한 가는 모이를 급여하였다. 또한, 이들을 24 시간 후에 감염시켜서 감염된 대조군으로 남았다. 또 다른 3-5마리의 10일 자란 병아리군에 항생 물질 53,607가 함유되지 않은 가는 모이를 급여하였는데 구충류에 감염시키지 않았다. 이들은 정규의 대조군으로 삼았다. 처리 결과들은 에이매리아 아세르블리나의 경우에, 5일 후에 평가하였고, 기타 모든 공격에 대해서는 5일 후에 평가하였다. 표 II에 그 결과들이 요약되어 있다.

[표 II]

주 : 1) 구충 활성을 측정하는데 사용된 기준은 제이. 이. 린치(J.E. Lynch)의 논문, "구충 활성에 대한 일차 평가를 위한 새로운 방법(A New Method for the Primay Evaluation of Anticoccidial Activity), "Am. J. Vew. Res. 22 : 324-326(1961)에 의하여 에이매리아 레넬라에 대한 병변(病變) 평점은 0-4로 나타내고, 제이. 존스(J. Johnson)과 더블유. 에이치. 레이드(W.H. Reid)의 논문["Anticoccidial Drugs. Lesion Scoring Techniques in Battery and Floor Pen Experiments in Chicks," Exp. Parasit. 28 : 30-36(1970)]에서 고안된 평정법의 변형법에 의한 다른 군종에 대한 병변 평점은 0-3이었다. 감염시킨 대조군의 병변 평정에 의하여 각 처리군의 병변 평점을 구분함으로써 일정한 비율이 설정된다.

일반적으로, 가축 사료의 가치는 직접 가축에 급여함으로써 측정되어 왔다. 영국 특허 제1,197,826호 명세서에서 시험관 내 전위(前胃) 기법을 상세히 설명하고 있는데, 이에 의하여 미생물이 초래하는 사료내에서 일어나는 변화가 보다 쉽게 측정되며, 가축 사료의 평가에 보다 정확을 기할 수 있다. 이 기법은 가축의 소화 과정이 진행되고 시험관 내에서 연구하는 장치의 사용을 포함한다. 가축 사료, 전위(前胃) 접종 재료 및 여러 가지 성장 촉진제는 세심한 조건 아래 실험실 내에 도입하고 실험실로부터 제거되며, 일어나는 변화들은 미생물에 의한 사료의 소모 도중에 엄격히 그리고 점진적으로 검토된다. 전위액(前胃液)의 프로피온산 함량의 증가는 모든 반추 기능에 있어서의 바람직한 응답은 사료 조성물 중의 성장 촉진제에 기인된다는 것을 나타내는 것이다. 프로피온산 함량의 변화는 대조 전위액 중에서 발견되는 프로피온산의 함량의 백분율로 나타낸다. 장기간의 생체 내 급식 연구는 전위액 내에서의 프로피온산의 증가와 개선된 동물 기능 간의 신뢰할 수 있는 상호 관계를 나타내는 데 이용된다.

전위액은 상업용 비육 사료와 건초를 급식시켜 누관을 삽입시킨 소에서 채취하였다. 그 위액을 즉시 치이즈 천을 통하여 여과하고 10ml를 표준 물질(옥수수 전분 68%＋셀룰로오즈 17%＋탈지 대두 가루 15%) 400mg, pH6.8의 완층액 10ml 및 시험화합물 10ml를 함유하는 50ml들이 원추형의 플라스크에 첨가하였다. 이 플라스크에 약 2분 동안 무산소 질소를 통과시키고 약 16시간 동안 39℃의 교반 수조 내에서 배양하였다. 모든 시험을 3회 실시하였다.

배양 후에, 시료 5ml를 25% 메타인산 1ml와 혼합하였다. 10분 후에 포름산 0.25ml를 가하고 그 혼합물을 10분 동안 1500rpm으로 원심분리시켰다. 이어서 시료들을 디. 더블유. 켈로그(D.W. Kellog)의 방법 [J. Diary Science, 52, 1690(1969)]에 의한 기액(氣液) 크로마토그라피에 따라 분석하였다. 아세토산, 프로피온산 및 젖산에 관한 피이크 높이들은 미처리 배양 플라스크 및 처리 배양 플라스크로부터의 시료에 대하여 측정하였다.

이 시험관 내 방법에 의해서 시험할 때, 항생 물질 53,607을 20㎍/ml의 농도로 첨가하면, 항생 물질 53,607을 첨가하지 않은 대조 용액 내에서의 생성물에 대하여 약 57%의 트로피온산 증가가 나타났다. 비교에 의하여 시판 중인 농도가 10㎍/ml인 모넨신(Monensin)(또 하나의 다환식 에테르게 항생 물질)은 대조 물질에 대하여 프로피온산 생성량을 약 20% 증가시킨다. [J. Amer. Chem. Soc., 82, 5737(1967)].

살리노마이신(Salinomycin)[J. Antibiotics, 27 : 814, (1974)]과 비교할때, 항생 물질 53,607은 20㎍/ml의 농도에서 프로피온산 생성량을 약 43% 중가시키며, 5㎍/ml 농도에서의 약 40%의 증가는 5㎍/ml 농도의 살리노마이신에 대해서 약 52%의 증가와 비교되었다.

이 데이타를 근거로 하여, 항생 물질 53,607은 소와 양과 같은 반추 동물 및 돼지와 토끼와 같이 위(胃)가 한 개뿐인 동물 사료 이용도를 개선시키는 것을 계획할 수 있다. 항생 물질 53,607은 유리산, 나트륨염, 칼륨염 또는 이들 화합물의 혼합물 형태로 조성물에 혼합시킬 수 있다. 항생 물질 53,607의 조품 또는 이 항생 물질을 함유하는 건조 발효액은 소정의 역가 농도로 하여 사료 조성물에 혼합하여도 좋다. 다음의 실시예들은 본 발명의 작용을 충분히 예시하겠지만, 이들 실시예에 의하여 본 발명이 제한되는 것은 아니라는 사실을 이해하여야 한다.

[실시예 1]

접종재료

다음의 조성물을 가진 무균의 수성 배지를 조제하였다.

스트렙토마이세스 할스테디의 사면에서 얻은 세포를 이 무균 배지 40ml를 함유하는 여러 개의 300ml들이 플라스크에 각각 옮겨서 3-4일 동안 28-36℃에서 회전 교반기에서 교반시켰다.

발효

상기 증식된 배양균을 2%v/v 접종 재료를 제공하는데 충분한 분량으로 나누어서 다음의 무군 배지 2ℓ를 함유하는 4ℓ들이 발효기에 옮겼다.

주 : * 카제인의 효소 소화물에 대한 등록 상표, 험코 쉐필드 컴페니, 인코포레이티드(Humko Sheffield Chemicl Co., Inc.).

상당한 활성이 관찰될 때까지(바실루스 수브틸리스 ATCC 6633**에 대한 물질 디스크 분석에 기초함), 통상 3-5일간 1700rpm으로 교반하면서 그리고 매분 발효액의 단위 부피당 1부피의 양으로 공기를 주입하면서 30℃에서 발효를 진행시켰다. 전체 발효액을 여과 보조구 [수퍼-셀(Supei-Cel) 또는 셀라이트(Celite)]를 사용하여 중성 pH에서 여과하였다. 여과액을 메틸이소부틸 케톤 또는 n-부탄올 중의 어느 한 가지로 추출시켰다.

유기층은 흡입 방법에 의해 수층으로부터 분리하고, 이어서 여과를, 행하여 현탁 물질을 제거하였다. 여과 케이크를 메탄올을 사용하여 슬러리화시켜 여과하고 메탄올을 증발시킨 다음, 그 잔류물을 여과액을 추출에 사용된 것과 동일한 용매로 추출시켰다. 이 추출물을 한데 모으고 진공 증발시켜서 점질성 오일을 얻었다. 이 오일을 헵탄에 현탁시켜 실리카 겔과 함께 교반하고 여과하였다. 여과 케이크를 헵탄으로 반복하여 세척하고 생성물을 클로로포름 단독, 클로로포름과 초산에틸 혼합물 및 마지막으로 초산에틸 단독을 사용하여 단계적으로 용출시켰다. 분획의 박층크로마토그라피(TLC) 및 생물학적 분석을 실시한 후 활성 부분을 혼합하여 진공 증발시키고, 그 잔류물을 다시 크로마토그라피하여 고체의 항생 물질 53,607을 얻었다. 적외선 스펙트럼 (KBr 디스크) 마이크론 : 2.95, 3.42, 6.00, 6.37, 6.85, 7.14, 7.30, 7.65, 7.90, 8.10, 9.05, 9.15, 9.67, 10.00, 10.18, 11.15, 11.40, 11.75, 13.25. 클로로포름, 초산에틸, 메탄올 및 메틸이소부틸 케톤에는 가용성이지만 물에는 불용성이라는 것을 알았다.

주 : ** 발효액의 생물 활성과 후속되는 회수 공정은 바실루스 수브틸리스 ATCC 6633 또는 스타필라코쿠스 아우레우스 ATCC 6538의 감수성 균주의 사용이 뒤따른다. 발효액 및 회수 공정에 있어서의 성분들은 다음의 계, 즉 초산에틸/메탄올(9 : 1) 또는 클로로포름/메탄올(9 : 1)과 바닐린(에탄올 97.0ml 및 진한 황산 3.0ml중에 바닐린 3g)을 살포하여 80℃로 가열한 평판을 실리카겔 평판을 사용하여 현출시켰다. 항생 물질 53,607은 핑크색 반점으로 나타난다. 별법으로, 상기 평판을 한천으로 덮어 씌우고 스타필로코쿠스 아우레우스 또는 바실루스 수브틸리스의 어느 한 가지 균주로 접종시키고, 여기에 1% 테트라졸륨 용액 1.0ml를 첨가하여 16 시간 동안 37℃에서 배양하여 항생 물질을 현출시켰다(핑크색 바탕에 대하여 맑은 부위).

[실시예 2]

접종 재료는 각 플라스크 마다 700ml의 배지를 사용하는 것을 제외하고는, 앞의 실시예와 같은 방법으로 조제하고, 그 교반 플라스크 접종 재료는 28℃에서 3-4일 동안 발효 시키고, 두 개의 사이드 암(side-arm)이 있는 병에서 혼성시켰다. 아래의 무균 배지 1200 갈론(4542.36ℓ)을 함유하는 1700 갈론(6435.01ℓ)들이 발효기를 상기 접종 재료 9ℓ(0.1%)로 접종시켰다.

발효기는 공기를 주입하면서 28℃로 유지시키고 1700rpm으로 교반하였다. 120 시간 후에 발효 물질을 수확하였다. 전체 발효액 [1200 갈론(4542.36ℓ)을 메틸이소부틸 케톤 250 갈론(757.06ℓ)으로 추출하고, 추출기[Podbielniak]에서 층분리를 행하여, 유기층은 진공 농축시켜 오일 8 갈론(30.2824ℓ)을 얻었다. 이 오일을 회전 증발기에서 더 진공 농축시켰다. 잔류하는 시럽을 헵탄 중에 현탁시켜서 실리카 겔과 함께 여과하고 헵탄으로 수회 세척하였다. 세척한 여과 케이크를 실시예 I에서와 같이 처리하여 오일 300g을 얻었다. 이 오일을 소량의 클로로포름에 용해시킨 다음 이 용액을 실리카 겔(Merck, 60 등급) 3.5kg을 함유하는 여과기(Lapp)에 주가하여 실리카 겔층을 클로로포름, 초산에틸 및 아세톤 각각 5 갈론(18.93ℓ)으로 순차적으로 세척하였다. 분획들을 박층 크로마토그라피법에 의하여 시험하였다. 생성물은 거의 전부가 초산에틸 분획 중에 존재한다는 사실을 알았다. 다른 분획들은 버리고, 초산에틸 분획은 진공에서 증발 건고(乾固)시켜서 농축물 150g을 얻었다. 이 농축물을 초산 에틸로 슬러리 상태로 하여 실리카 겔(Merck, 60 등급)로 채워 넣은 8.0×1000cm 칼럼에서 크로마토그라피 하여 더 정제시켰다. 이 칼럼을 초산에틸로 용출시켜서 60ml/분의 비율로 분획 1ℓ를 취하였다. 생성물을 함유하는 분획들을 한데 모으고 진공 증발시켜서 생성물 85g을 얻었다.

이 생성물을 세파덱스 LH-20 1kg을 함유하는 칼럼에 통과시키고 메탄올을 사용하여 25ml/분의 비율로 용출시켰다. 분획들을 각각 3000ml씩 취하였다. 생성물을 함유하는 분획을 한데 모으고, 용매를 증발시켜서 고체 30g을 얻었다. 이것을 클로로포름 500ml 중에 용해시키고, 그 용액을 85% 염산을 사용하여 pH 4.5로 조절시킨 동량의 5% NaH₂PO₄완충액으로 세척하였다. 유기층은 분리시켜서 1N 수산화나트륨으로 pH9.0으로 조절시킨 5% Na₂HPO₄500ml로 세척하였다. 그 추출액을 무수 황산나트륨 상에서 건조하고 진공 증발 건고시켰다. 잔류물은 아세톤에 취하여 냉장고에 방치하여 결정화시켰다. 결정들을 여과하여 수집하고 실온에서 고진공 상태에서 건조시켜 항생 물질 53,607의 나트륨염 14g을 얻었다. 융점 199-204℃.

선광도 : [α]_D＋44°(c=1, 클로로포름). [α]_D＋37°(c=1, 메탄올).

자외선 스펙트럼 : λ_max, 233nm(메탄올)

자외선 스펙트럼(KBr 디스크) 미크론 : 2.95, 3.42, 6.00, 6.37, 6.85, 7.14, 7.30, 7.65, 7.90, 8.10, 9.05, 9.15, 9.67, 10.00, 10.18, 10.53, 11.40, 11.75, 13.25.

적외선 스펙트럼은 제1도에 도시하였다.

원소 분석 값 : C, 57.54 ; H, 7.74 ; n, 0.0.

전술한 방법에서 KH₂PO₄(pH 4.5) 및 1N 수산화칼륨에 의하여 pH9.0으로 조절된 K₂HPO₄를 사용하여 동일한 방법으로 항생 물질 53,607의 칼륨염을 얻었다. 이와 비슷한 방법으로, 위의 방법에서(NH₄)H₂PO₄및 (NH₄)₂HPO₄를 사용하여 암모늄염을 얻었다.

[실시예 3]

항생 물질 53,607의 상기 나트륨염의 일부를 초산에틸에 용해시키고 물을 첨가하여얻은 그 수층을 85%인산을 사용하여 pH 4.5로 조절하였다. 유기층을 분리시켜 Na₂SO₄상에서 건조시킨 다음 진공 증발시켜서 항생 물질 53,607의 유리산을 얻었다. 융점 84-94℃. 실온에서 고공진 상태에서 철야 건조시켜 다음의 원소 분석 값을 얻었다. C, 64.69 ; H, 8.91 ; N, 0.0.

이 산은 물에 불용성이고, 클로로포름, 초산에틸, 메탄올 및 메틸이소부틸 케톤에는 가용성이라는 사실을 알았다.

선광도 : [α]_D＋74.5°(c=1, 클로로포름). [α]_D＋49.7°(c=1, 메탄올).

자외선 스펙트럼 : λ_max, 233nm(메탄올)

적외선 스펙트럼(KBr 디스크) 미크론 : 2.95, 3.45, 6.00, 6.85, 7.28, 8.13, 9.05, 9.67, 10.20, 10.55, 11.18, 11.48. 이 스펙트럼은 제2도에 도시하였다.

바륨염은 초산에틸 80ml에 용해시킨 유리산 2.0g을 Ba(OH)₂·8H₂O, 2.4g이 함유된 등량의 물과 함께 교반시킴으로써 제조된다. 층분리를 행하고 유기층을 Ba(OH)₂·8H₂O의 새로운 용액으로 세척하고 건조(Na₂SO₄)시킨 다음 진공 증발시켜 항생 물질 53,607의 소정의 염을 얻는다.

칼슘염은 Ba(OH)₂8H₂O 대신에 Ca(OH)₂를 사용하여 위의 방법으로 제조된다.

[실시예 4]

다음의 무균 배지가 각각 2ℓ씩 들어있는 4ℓ들이 발효기 내에서 4%v/v접종 재료를 사용하여 실시예 1과 같은 방법으로 실시하였다.

1700rpm의 회전 속도로 교반하고 매분 발효액의 부피에 대하여 2부피의 비율로 공기를 유입시키면서 36℃에서 2일 동안 발효를 행하였다. 전체 발효액을 로클로포름으로 추출하고 실시예 1에서와 같이 처리하여 항생 물질 53,607을 나트륨염, 칼륨염 및 칼슘염의 혼합물 상태로 얻었다.

세렐로오즈 대신에 글리세롤, 그리고 옥수수 발효성 고형분 대신에 어분 또는 면실분을 함유하는 발효배지를 사용하여 전술한 방법을 반복 실시하여 6일 동안 28℃, pH 8.0에서 발효시킬 경우, 그 결과는 실질적으로 변화가 없다.

Claims

호기성 액내(液內) 발효 조건 아래 동화성 탄소원, 질소 및 무기염을 함유하는 수성하는 수성배지 내에서스렙토마이세스 할스테디(Streptomyces halstedii) KCTC 8166P를 배양시키는 것이 특징인 다음 구조식의 항생 물질의 제조 방법.
제1항에 있어서, 항생 물질을 상기 발효 배지로부터 분리시키는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 발효 배지를 취하여 건고(乾固)시키는 것을 특징으로 하는 방법.